JPH01171567A

JPH01171567A - イムノグロブリンの分離精製方法

Info

Publication number: JPH01171567A
Application number: JP62330178A
Authority: JP
Inventors: Hideki Aoki; 秀希青木; Shigeru Tsukagoshi; 塚越　茂; Miharu Hata; 美治秦; Shunpei Yamaguchi; 俊平山口
Original assignee: Advance Co Ltd
Current assignee: Advance Co Ltd
Priority date: 1987-12-28
Filing date: 1987-12-28
Publication date: 1989-07-06
Anticipated expiration: 2013-04-15
Also published as: JP2739579B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、血液中の免疫関連物質を吸着除去する血漿交
換法または血液浄化法に用いる吸着剤に関する。

ＣａとＰのモル比が１．５ないし２．０であるリン酸カ
ルシウム、特にＣａ／Ｐ比が１．６７であるハイドロキ
シアパタイトやＣａ／Ｐ比が１．５０であるリン酸三カ
ルシウムは、生体親和性にすぐれたインブラント材料と
して人工歯根や骨充填材料として実用化している。ハイ
ドロキシアパタイトはまた、タンパクの吸着能にもすぐ
れ、液体クロマトグラフィー用吸着カラムとして広く用
いられている。しかし、どういう種類のタンパクに対し
吸着力があるかについてはあまり明らかではなく、まし
て膠原病やアミロイド−シスなど変性タンパクあるいは
炎症性タンパクに起因すると言われている重篤な疾患に
有効とされる血液浄化法やプラズマフェレーシス（血漿
交換法）にハイドロキシアパタイト等のリン酸カルシウ
ムを応用した例は皆無である。

我々はＣａ、！＝Ｐのモル比が１．５ないし２．０のリ
ン酸カルシウム、特に１．６７のハイドロキシアパタイ
トに対するイムノグロブリンや補体あるいはＣＲＰなど
免疫関連タンパクとの板管性をみたところ、ハイドロキ
ンアパタイトは変性したイムノグロブリンや感染や炎症
時に血中に多く存在するＣ　ＲＰ　（Ｃ−ｒｅａｃｔｉ
ｖｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ）及びα２分画に対し著しい吸着
能を示すことを知見するに至った。

現在、血液浄化法やプラズマフェレーシス用吸着材とし
ては、活性炭が臨床に用いられている。しかし、活性炭
は比表面積か大きく、また選択的な吸着特性もないため
、血液中の有用な免疫タンパクをも吸着除去してしまう
恐れがあり、一部の極めてハイリスクな劇症肝炎患者な
どへの応用に限られているのが現状である。また、キュ
プロファン膜、セルロースアセテート膜、ポリアクリル
ニトリル膜、ＰＭＭＡ膜などのポリマー中空糸を用いた
濾過除去法も盛んに行なわれている。しかし、これらは
分子サイズによる物理的な濾別であるために、同程度の
サイズをもつ他物質をも除去してしまう恐れかある。ま
た、ポリマー中に残留している微量のモノマーが体内に
流入し、逆に炎症の原因となることか危惧されている。

これに対し、ハイドロキシアパタイトは最も生体親和性
にすぐれた生体材料として広く用いられており、人体の
害のない、しかし変性したタンパクや炎症性タンパクに
対する吸着能にすぐれた全く新しい吸着材であることを
知見し、本発明に至った。

本発明に於けるＣａ／Ｐモル比が１．５〜２．０である
リン酸カルシウム化合物は、例えばハイドロキシアパタ
イト、リン酸三カルシウム、リン酸四カルンウム等が具
体的に例示され、その製法は、例えば湿式法等で合成し
たスラリーを噴霧乾燥し、０．１〜１５０μの粒径をも
つ球状微粒子としたしのを３００〜１３００°Ｃで焼成
した方法が提示される。

噴霧乾燥粉以外にボールミルや°゛ンプルミルジェット
ミル、アトマイザ−などの種々の粉砕法による粉砕粉や
造粒粉、あるいは熱分解法、アルコキンド法、乾式法な
どの別な合成法による造粒粉を用いてもよい。また、牛
骨や魚骨など天然の骨や１暫を高温で焼結した焼成粉を
用いることもできる。

また、Ｍｇ、　Ｚｒ、　Ｆｅ、　Ｔｉ、　Ｓｉ、　　Ｓ
ｒなどの陽イオンや、ＣＱ−、Ｆ−１Ｉ−、ＣＯ３’−
などの陰イオンを０〜ｌＯ％程度含むものを用いてもよ
い。

本発明に於ける血液中の免疫関連物質とは主にグロブリ
ン類、ＣＲＰ　（Ｃ−ｒｅａｃｔｉｖｅ　ｐｒｏｔｅｉ
ｎ）等を示し、特にイムノグロブリン（ＩｇＧ）及びα
２−ミクログロブリン、ＣＲＰ等の吸着能は非常に高い
。

ＣＲＰとは、肺炎球菌の莢膜のＣ多糖体と反応する血清
中のβ−グロブリン。正常人には５μｇ／ｍＱ以下であ
るが、組織破壊を伴うような炎症性疾患の時は増量する
急性期反応性物質の一種である。

ＩｇＧとは、免疫グロブリンの略称。ヒト血清中に最も
高濃度（８〜１５ｍｇ／ｍ１２）に含まれろ免疫グロブ
リンクラスで、多くの抗体活性をもつ。

血管外体液中濃度ら高く、また、胎盤を通して母体から
胎児に移行し、新生児の感染防御にもかかイつっている
。分子量は１５万、沈降定数は６５〜７．Ｏ８である。

ヒトではＩｇＧＩ〜ｒｇＧ４の四つのサブクラスがあり
、ＩｇＧ４以外はｈ１ｉ体結合性を有する。

α３分画は主としてα２−ミクログロブリンを含む電気
泳動の分画をいう。

α２−ミクログロブリンは、ＲＢＰと略され、ビタミン
Δ（レヂノール）を輸送するタンパク質で肝細胞で合成
される。約１８１個のアミノ酸から成る１本のポリペブ
ヂド類で、分子ｆｉ２１，０００、沈降定ｒ１１．２．
３ｓの低分子タンパク質で、糖質を含まない。電気泳動
ではα、−グロブリン領域に泳動されろ。α２−ミクロ
グロブリンはアミロイド−ジスの物質とされている。

また、本発明に於いては次の様な使用例を提示し得る。

（１）血液浄化法や血漿交換法のカラムに用いる。

この時、リン酸カルシウムはＣａとＰの比か１．５ない
し２．０、特に１，６ないし１．７のハイドロギンアパ
タイト相のものが望ましい。噴霧乾燥し、０．１ないし
１５０μ、望ましくは２０ないし１００μの球状粒子を
３００ないし１３００℃、望ましくは７００ないし９０
０℃で焼成する。

これを例えば直径３ないし１０ｃｍ、高さ２０ないし６
０ｃｍ程度の大きさのカラムに充填する。

体内から流れ出た血液は血球分離された後、血漿のみカ
ラム内を通過、余分に吸着されたＣａイオンなどを添加
した後、血球と混ぜ体内に帰すシステムが考えられる。

（２）ＣＲＰに対する吸着能を用いて、炎症の程度を測
る検査や診断に使用することもできる。

また、イムノグロブリンなどの免疫タンパクの分離精製
に用いることもできる。

以下、本発明を実験例により詳細に説明する。

実験例！ハイドロキシアパタイトは湿式法で合成し、脱水乾燥を
行った後、サンプルミルで粉砕し、さらに８００℃で焼
結した粉末を用いた。

上記ハイドロキシアパタイトをグロブリン溶液に浸し、
室温で、約２分間反応させた後、上清液のイムノグロブ
リン量を測定した。イムノグロブリン等の蛋白液の濃度
は、光電比色計（日立Ｍ　−、１００−２０）を用い、
主として２８０ｎｍで吸光度を測定した。結果を第１表
に示す。

第　　１　　表さらにこれを電気泳動した所、吸着前のグロブリンの方
か変性したイムノグロブリンのパターンが見られた。

このことから、ハイドロキシアパタイトにより変性した
グロブリンが吸着除去されている二とが知見された。

実験例２上記と同様生成されたハイドロキシアパタイトにヒト血
清を加えて振盪した後、上清液のＣＲＰの測定を、行っ
た。

結果は第２表、第３表に示す。

このことから、ＣＲＰの吸着除去量が大きいことかわか
った。

第２表　　　　　第３表実験例３ヒト全血にハイドロキシアパタイトを添加し、約２分間
振盪した後、上清中の血液成分を測定した。

その結果、α２分画が他成分に比べ有意に低下している
ことが確認された。また、リン酸バッファーによりｐＨ
６，４に調整した血液にハイドロキシアパタイトを添加
し、振盪した後、上清中の成分を測定した所、α２分画
は他成分と比べ有意に低下した。また、コレステロール
竹が６色に低下する知見も”得られた。

特許出願人　株式会社アドバンス

Claims

【特許請求の範囲】

（１）血液中の免疫関連物質を吸着するための吸着材が
、ＣａとＰのモル比が１．５ないし２．０であるリン酸
カルシウム化合物であることを特徴とするリン酸カルシ
ウム免疫吸着材。