JPS62253074A - 血液浄化用吸着剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、血液浄化用吸着剤、とくに血液中の免疫抑制
因子、Ｂ型肝炎抗原等を吸着除去する血液浄化用吸着剤
に関する。

（従来の技術） 従来から、患者の血液を遠心分離または膜濾過により血
球と血漿に分離し、得られた血漿をさらに分離膜または
吸着剤で処理して血漿中の有害物質を除去する方法（そ
れぞれ二重膜濾過法、血漿吸着法と呼ばれている）はよ
く知られている（特開昭５６−１１０６２５号、特公昭
５５−２２１０７号）。

血液中に存在する病因物質は数多くあシ、従来から種々
の分離膜、吸着剤を用いてこれらの除去が、試みられて
いる。例えば、ガ／患者においては、α−７エトプロラ
イｙ（ＡＦＰ　）、ガン胎児性抗原（ＣＥＡ）、′ｌ−
ア／チドリプシン（αｌ−ＡＴ）、αｌ−酸性糖蛋白質
（α１−ＡＧＰ）、免疫抑制性酸性蛋白質（ＩＡＰ）、
免疫複合体などの免疫抑制因子がガンに対する免疫機能
を阻害しているといわれておシ、これらの免疫抑制因子
を除去することが、免疫機能の正常化のために求められ
ているが、このために上記の二重膜濾過法により免疫抑
制因子を除去し、アルブミ７などの比較的低分子清の有
用な蛋白質を患者に返そうとする試みがある。また、同
じ目的で坑ＩＡＰ抗体をセルロース、デキストラン、ヒ
ドロキクアパタイトなどの各種の担体に担持させた吸着
剤を用いて、血液中の免疫抑制因子だけを除去すること
も知られている（特公昭５７−３５９７８号）。

また、Ｂ型肝炎患者を治療するための方法として、血液
（血漿）中に放出されているＢ型肝炎抗原（ＨＢ抗原）
を除去することが有効であると言われており、除去方法
として膜による方法（人工臓器、１４巻、１７６２−１
７６５頁、１９８５年）、表面に抗体を固定した吸着剤
を用い、抗原抗体反応を利用する方法（人工臓器、１４
巻、６０８−６１１頁、１９８５年）などが知られてい
る。

（発明が解決しようとする問題点） しかしながら、膜分離により免疫抑制因子を除去しよう
とすると、ＡＦＰ（分子量７万）、α１−ＡＴ（分子量
５．４万）、α１−ＡＧＰ（分子量４，４万）、ＩＡＰ
（分子ｔ５万）などの低分子量の免疫抑制因子を除去す
ることができないという問題があシ、また、膜分離によ
りＢ型肝炎抗原を除去しようとすると、血漿中のフイプ
リノーゲ７．ＩｆＭなどの大分子量物質の損失を伴うと
いう問題があった。

さらにまた、免疫抑制因子やＢ型肝炎抗原を、抗体を固
定化した吸着剤で除去しようとすると、特殊な抗体が多
食に必要となシ、かかる抗体の入手が困難であるので、
かかる抗体を用いる方法は実用的なものとはなシにくい
。このような抗体を固定化した吸ノａ剤ではなく、多孔
性の吸着剤で上記の免疫抑制因子、Ｂ型肝炎抗原を除去
することが考えられるが、このような吸着剤はいまだ知
られていない。

したがって、本発明が解決しようとする問題点は、免疫
抑制因子、Ｂ型肝炎抗原などの有害物質を選択的に除去
すると共に１アルプミ／、免疫グロブリンなどの有用物
質を除去しない、実用的な血液浄化用吸着剤を得ること
である。

（問題点を解決するための手段） 上記の問題点は、Ｃａ／Ｐ比が１．５０〜ｌ　７５　Ｏ
範囲にあるリン酸カル７ウムを主成分とする多孔体であ
って、１０〜７　Ｑ　ｎｍの孔径範囲にある細孔の容積
が０．２ｃｃ／ｆ以上であシ、かつ全細孔容積の８０％
以上をしめる多孔体からなる血液浄化用吸着剤を用いて
血液浄化を行うことによ！２解決される。

本発明においては、前記のようにＣａ／Ｐ比が１．５０
〜１．７５の範囲にあるリン酸カルシウムが用いられる
が、かかる１１ノ酸カルシウムとしてはヒドロキシアバ
タイ）　ＣＣａ（ＯＲ）２−３Ｃａｓ（ＰＯ４）、　：
］（Ｃａ／Ｐ原子比１．６７）、第三リン酸カルシウム
（Ｃａｓ（ＰＯ４）２）　（Ｃａ／Ｐ原子比１．５）ま
たはこれらの混合物があげられる。Ｃａ／Ｐ比が上記の
範囲外であると、本発明の目的とする血液中の免疫抑制
因子、Ｂ型肝炎抗原などの吸着能が著しく低下する。本
発明において、Ｃａ／Ｐ比は好ましくは、１．６０〜１
．７５である。

本発明の血液浄化剤は、上記の如きリン酸カル７ウムを
主成分とする多孔体であって、かかる多孔体は１０−７
０　ｎｍの孔径範囲にある細孔の容積が０．２ｃｃ／Ｖ
以上（好ましくは、０゜３ｃｃ／Ｐ以上）であシ、かつ
全細孔容積の８０％以上をしめる構造を有している。孔
径は水銀ポロシメーターを用いて得られる値であシ、全
細孔容積は直径２μｍ以下の細孔について求められるも
のである。

上記孔径範囲にある細孔の容積が０．２（！ｅ／ｒ以下
では、免疫抑制因子、Ｂ型肝炎抗原等の除去すべき物質
の効果的な除去が行われず、また、上記孔径範囲にある
細孔の容積が全細孔容積の８０％以下では、孔径分布が
広すぎて、除去すべき物質の選択的吸着が行われにくく
なる。

本発明において用いられるリン酸カルシウム多孔体は、
いずれの製法で得られたものでもよいがなかでもカルシ
ウムイオンとホスフェートイオン（ＰＩえば、水酸化カ
ルシウムとリン酸、硝酸カルシウムとリン酸水素アンモ
ニウム）とを水性媒質巾約１０〜１２０ＰＨで反応させ
て、Ｃａ／Ｐ比が１．５０〜１．７５の範囲にあるリン
酸カルシウムのゼラチン状沈殿物を生成させ、この沈殿
物を浴液から分離し、乾燥後４００〜９００℃で数時間
焼成することにより得られたものが好ましい。

かかるリン酸カルシウム多孔体の製法はＨａｙｅｋ等に
よりインオルガニック　シ／セ７ス（Ｉｎｏｒｇａｎｉ
ｃＳｙｎｔｈｅｓｅｓ　）　７．６３　　（１９６３）
に開示されている。

この方法において、１．５０〜１．７５　ｔＤ　Ｃａ／
Ｐ比が高いほどまた、焼成温度が低温である程、孔径の
小さいものが得られ、Ｃａ／Ｐ比が小さくなる程、また
、焼成温度が９００℃の如き高温である程孔径の大きい
ものが得られる。この方法によｐ得られた多孔体は、直
径１００〜１０００人の一次粒子が結合したもので、細
孔は結合した一次粒子の間隙に形成されている。かかる
多孔体の構造の一例（Ｃａ／Ｐ比１．６６）を第１図に
示す。また、第１図に示された構造の多孔体について、
水銀ポロシメーターで測定した孔径分布図を第２図に示
した〔中心孔径（最大ピークを示す孔径）２４０人、１
０〜７０　ｎｍの孔径範囲にある細孔の容積０．４５ｃ
ｃ／ｒ、ｌ。第２図に示されている如く、上記の方法に
より得られた多孔体の孔径分布は非常にシャープであり
、１０〜７０　ｎｍの孔径範囲にある細孔の容積が全細
孔容積の８０％以上をしめることは勿論、多孔体の細孔
の中心孔径をＤとするとき０、　ｓ　Ｄ　−１，ｓ　Ｄ
の範囲にある細孔の容積の割合が通常全細孔容積の８０
チ以上を占めている。それゆえ、上記の方法によシ得ら
れた多孔体は本発明の血液浄化用吸着剤の丸めの多孔体
として特に好ましい。

本発明において用いられる多孔体は通常大きさ０、１　
＝　１．０　ｘｇの粒子状として用いられる。前述のホ
ス７エートイオンとカルシウムイオンとを反応させて得
られるゼラチン状沈殿物を一旦乾燥させ、これをラバー
プレス法等により成形した上粉砕し、これを焼成するこ
とによシ、また、ゼラチン状沈殿物を一体塊のまま乾燥
後焼成し、焼成後粉砕することによシ得られる。

血液（ま九は血漿）が多孔体に直結接触することから、
血球を損傷したり、血液中に多孔体微粉が混入したシし
ないように、粒状物にはとがった角がないようにしてお
くことが望ましく、そのた樗 めに、粉砕径粒状物を回転体中に入れ共凍りによる研摩
等の処理を行なって使用するのが好ましい。

以上のようにして得られたリン酸カルシウム多孔体に血
液を直接接触させるか、遠心分離または膜濾過により分
離された血漿を接触させることＫよシ、血液中のＡＦＰ
、　ＣＥＡ、α１−ＡＴ、α１−　Ａ　Ｇ　ＰおよびＩ
ＡＰなどの免疫抑制因子、　ＨＢｓ抗原〔約２０　ｎｍ
の大きさを有する球状粒子、球状粒子と球状粒子が融合
した管状粒子および直径２７　ｎｍの芯を有する直径４
２　ｎｍの大形球状粒子（Ｄａｎｅ粒子）の３種類があ
るといわれている）、ＨＩ３ｅ抗原（分子艦数十万を有
する）等のＢ型肝炎抗原等の有害物質は吸着されるが、
アルブミン、グロブリン等のＭ層物質はほとんど成層さ
ｎない。本発明におい−Ｃ血液浄化なる川崎は、血液か
ら直接これら有害物質を除去するだけですく、血漿・血
清などから血液中の有害物質を除去することも包含する
用語として用いられている。

本発明のリン酸カルシウム多孔体からなる血液浄化用吸
着剤で血液を処理する具体的方法としては、従来から活
性炭、多孔質ガラス等の吸着剤による血液浄化法（体外
血液遣環法）がそのまま用いられる。かかる方法は、前
述の特公昭５５−２２１０７号の他特公昭５６−２７０
９０号、特開昭６０−２４１４５０号等に開示されてい
る。通常、粒状のリン酸カルシウム多孔体はカラムに充
填されて使用される。カラムは、多孔体層の両側に血液
回路と容易に接続し得る形状の入口部と出口部を有する
本体と、多孔体層と出入口部との間に血液または血漿は
通過するが多孔体は通過しない８゜−１８０メツシユの
網目を持つフィルターを備えているものが好ましいが、
他の形状であっても実質的に同様の機能を持つカラムで
あれば本目的に使用し得る。カラムの材質はガラス、ポ
リエチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネート、ポリ
スチレ／、ポリメチルメタクリレート等が使用できるが
オートクレーブ滅菌が可能なポリプロピレンやポリカー
ボネート等が特に好ましい。フィルターは生理学的に不
活性で強度の高いものであれば良いが、特にポリエステ
ル製のものが好ましく使用される。第３図は多孔体を充
填したカラム１の一例についての断百図であ夛、血液ま
たは血漿は入口２よシ導入され、多孔体５で処理された
後出口３よシ導出される。多孔体はフィルター４にょシ
カラム内に保持されている。

ガン患者、Ｂ型肝炎患者から取り出された血液は通常血
球成分と血漿成分に分離され、分離された血漿成分が上
記カラムに導入され、処理が行われる。そして、処理さ
れた血漿成分は、カラム出口から取り出され、血球成分
を混合されて、患者に戻される。その−例を第４図に示
した。血液はカテーテル７によシ患者から採取され、ポ
ンプ８を通って、血漿分離装置６へ供給され、血球と血
漿に分離される。分離された血漿はポンプ９を通って本
発明の吸着剤を充填したカラムＩＫ供給され、吸着処理
された後血漿・血球混合装置１０で血球と混合されて血
液導出口１１より患者にもどされる。

（実施例） 実施例１および比較例１ １）す／酸カルシウム多孔体の作成 硝酸カルシウム（Ｃａ（ＮＯ３）２・４Ｈ２０）２５０
ｔを水１ノに溶解し、２８チアンモニア水７９０ｄを加
えて混合した。これにリン酸−水素アンモニウム（（Ｎ
Ｈ５）２ＨＰＯ４）８３．２ｆと水２ノと２８チアンモ
ニア水４８０ｄの混合溶液を５００　ｒｐｍで攪拌しな
がら２０分かけて室温（１２〜２０℃）で滴下した。滴
下完了後５００　ｒｐｍで２０分攪拌、サラにマントル
ヒーターで加温して２０分還流した。加熱を止め、２０
分攪拌後室温で一夜放置、遠心脱水し、水で洗浄、乾燥
した。同様の反応において硝酸カルシウムの址を一定に
し、リンｍ　−水素アンモニウムの量を変化させること
によｐＣａ／Ｐ比の異なる反応生成物を得た。

これらの反応生成物を電気炉にて４００℃〜９００℃で
３時間熱処理した後、粉砕することによシ粒径１５０〜
５　Ｑ　Ｑ　ｎｍの無定形のリン酸カルシウム多孔体を
得た。得られた多孔体はいずれも第１図に示すような一
次粒子の結合したものであシ、細孔は粒子間の間隙く形
成されていた。

１ｉ）　　ガン患者血漿中のαｌ−Ａ　Ｇ　ＰおよびＩ
ＡＰの吸着弊ガン患者血漿（二重テ過プラズマフエレー
シスの二次フィルターの戸液）０．５ｄとリン酸力、Ｉ
！／シウム多孔体０．１２を混合、３７℃、１２０　ｅ
ｐｍで３時間振とうした。上清中のαｌ−Ａ　Ｇ　Ｐ残
存濃度をネ７エロメトリーで、ＩＡＰを免疫拡散法で、
それぞれ測定し、多孔体を加えない対照との濃度差から
αｌ−Ａ　Ｇ　Ｐ及びＩＡＰの吸着率を求めた。

第１表に結果を示す。

（注１）リン酸カルシウム多孔体の中心孔径は、水銀ポ
ロシメーター法によって求めた孔径分布図において最大
ピークを示す孔径を意味し、全細孔容積は孔径２虜以下
の細孔の容積を意味する。

以下の測定においても同じ。

（注２）　（Ｂ）は中心孔径をＤとするとき、ｏ、ｓＩ
）〜１．５Ｄの範囲にある細孔容積を意味する。以下の
表においても同じ。

ｉｎ　　ガン患者血漿中のα１−ＡＧＰの吸着種りのガ
ン患者血漿０．５　ｒｒｔｌと、リン酸カルシウム多孔
体（Ｃａ／Ｐ　１．６ｇ、中心孔径（Ｄ）　２３　ｎｍ
、直径１０〜７０ｎｍの細孔容積（Ａ）　０．４８　ｃ
ｃ／Ｐ、（ａ）Ｏ全細孔容積との比８９チ、０．５Ｄ〜
１．５Ｄの細孔容積／全細孔容積８５％〕０．１ｆをそ
れぞれ混合し、３７℃ｓ　　１２０　ｃｐｍで３時間振
とうした。上清中のα１−ＡＧＰ濃度を測定し、吸着率
を求めた（実施例１−４）。

結果を第２表に示した。

第　　２　　表 比較の為にＣａ／Ｐ　１．７８、中心孔径（Ｄｉ　１３
　ｎｍ　、直径１０〜７０ｎｍの細孔容積（Ａ）　０．
３５　ｃｃ／り、（５）の全細孔容積との比８２％、ｏ
、ｓＩ）〜１．５Ｄの細孔容積／全細孔８按８７％の多
孔体を用いて同様の実験を行なつ喪（比較例１−２）が
、α１−ＡＧＰはいずれの血漿でも全く吸着されなかっ
た。

清Ｑ、５　ｍｌにリン酸カルシウム多孔体０．ＩＰを加
え、３７℃で３時間振とうし、α１−ＡＧＰ及びＩＰＧ
の吸着率を測定した。第３表に結果を示す。

■）ガン血漿２久Ｆ液中のＩＡＰの吸着とリンパ球幼若
化反応 ガン患者血漿（二重濾過プラズマ７エレーシスの二次フ
ィルターＦ液）１ｄにリン酸カルシウム多孔体０．２ｆ
を加え、３７℃で１時間振とうし、。

その上清をリンパ球幼若化反応（ＰＨＡ反応）液に添加
して、リンパ球で増殖抑制率を測定した。

即ち、健康ヒト末梢血リンパ球を牛脂児血清加ＲＰＭ１
１６４０培地に浮遊し、上記処理血漿を培地の１５％に
なるように加え、マイクロタイタープレートに分注し、
各ウェルに１％のフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）を添
加、３７℃、５チＣＯ２で２日間培養し、１μＣｉ／ウ
エルの３Ｈ−サイミジ／を加え、さらに１日培養　３Ｈ
−サイミジンの取込み量を測定した。リンパ球増殖抑制
率は次式で定義した。

また上記リン酸カルシウム多孔体処理血漿中の工ＡＰ濃
度を５ＲＩＤ法で測定した。第４表に結果を示す。

Ｖｌ）　　α１−ＡＧＰ、α１−ＡＴ、　ｙ　ル←；亨
５オ！　ヒｍ　’１８　白５Ｍの吸着性の比較 ガン患者自消数例を混合し、０．５　ｍ／／Ｑ、　Ｉ　
Ｐの割合でリン酸カルシウム多孔体を加え、３７℃で３
時間振とうして、上清中のα１−ＡＧＰ及びα１−ＡＴ
をネフエロメトリーで、アルブミン及び総蛋白質を比色
法でそれぞれ測定し、吸着率を求め念。結果を第５表に
示す。

以下余白 ■ＩＤ　　孔径分布の広い多孔体のα！−ＡＧＰ、アル
プミ／および総蛋白質の吸着 ガン患者血清数例を混合し、０．５ｄ１０．１　ｆの割
合でリン酸カルシウム多孔体（いずれもＣａ／Ｐ１．６
６７　）を加え、３７℃、１２０　ｅｐｍで３時間振と
うして、上清中のα１−ＡＧＰをネ７エロメトリーで、
アルプミ／及び総蛋白質を比色法でそれぞれ測定し、吸
着率を求めた。結果を第６表に示す。

以下余白 直径１０〜７　Ｑ　ｎｍの細孔容積（Ａ）がノドさいも
のではα１−　Ａ　Ｇ　Ｐの吸着率が低く、（Ａ）が大
きくても分布が広いものではα１−　Ａ　Ｇ　Ｐの吸着
は起るがアルブミンの吸着も起り、選択性が低いことが
わかる。

実施例２ ＨＢｓ抗原値４８．７、ＨＢｅＢｅ抗原値７、Ａ／Ｇ［
１，４０，アルブミン濃度４．２５　ｆ／ｄｌおよびグ
ロブリン濃度３．１０　ｆ／ｄｉの血清３ｄに、実施例
１と同様の方法によシ作成した種々のリン酸カルシウム
多孔体１１をそれぞれ添加して２４時間室温で放置した
。その後、遠心分離して上清を採取し、上清のＨＢｓ抗
原値、ＨＢｅ抗原値、Ａ／Ｇ値、アルブミン濃度および
グロブリン濃度を測定した。結果を第７表に示した。々
お、ＨＢｓ抗原値およびＨＢｅ抗原値はいずれも放射同
位体イミュノアツセイ（ＲＩＡ）法によって測定した値
（ｔｉｔｅｒ）であシ、Ａ／Ｇ値は和光純薬■製アルブ
ミン・グロブリン比測定用［Ａ　／　Ｇ　Ｂ　−Ｔｅ５
ｔ　ＷＡＫＯＪを用いて、アルブミン量はブロムクレゾ
ールグリーン法、総蛋白量はビューレット法によシ測定
し、下記によシ算出した。

総蛋白量−アルブミン量 以下余白 （発明の効果） 本発明のリン酸カルシウム多孔体からなる血液浄化用吸
着剤によシ、血液中のアルブミン、グロブリン等の有用
成分を除去することなく免疫抑制因子、Ｂ型肝炎抗原等
を吸着除去することができる０

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の血液浄化用吸着剤の粒子構造の一例を
示す電子顕微鏡写真（倍率；３６０００倍）である。第
２図は本発明の血液浄化用吸着剤の孔径分布の一例を示
す図である。第３図は本発明の血液浄化用吸着剤が充填
され九カラムの一例を示す断面図である。第４図は本発
明の血液浄化用吸着剤を用いて血液浄化を行うフローシ
ートを示す図である０

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. Ｃａ／Ｐ比が１．５０〜１．７５の範囲にあるリン酸カ
   ルシウムを主成分とする多孔体であつて、１０〜７０ｎ
   ｍの孔径範囲にある細孔の容積が０．２ｃｃ／ｇ以上で
   あり、かつ全細孔容積の８０％以上をしめる多孔体から
   なる血液浄化用吸着剤。