JPH01104197A - 試料中の過酸化水素の測定試薬、その測定方法及び測定装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 Ａ、産業上の利用分野 本発明は、試料中の過酸化水素の測定試薬、その測定方
法及び測定装置に関する。

Ｂ１発明の概要 本発明は、発光試薬をカタラーゼ又は固定化カタラーゼ
を作用させて、発光試薬中に含まれる過酸化水素を分解
除去して、過酸化水素の測定に適した試薬を生成し、測
定対象である試料中の過酸化水素の濃度が比較的低い場
合でも定量することができるようにする。

Ｃ１従来の技術 過酸化水素の定量は、特に臨床検査の分野においては、
重要な役割を果たしている。生体中のグルコース、コレ
ステロール、アミノ酸、ポリアミン等の成分の分析には
、これらの成分を酸化酵素等と酵素反応させ、その際に
生成した過酸化水素を定量することにより、上記生体中
の成分を分析する方法が採用されている。

近年、臨床検査における免疫分析法の１つとして注目さ
れている酵素免疫分析法（ＥｎｚｙｍｅＩｍｍｕｎｏａ
ｓｓａｙ　　Ｍｅｔｈｏｄ、　Ｅ　Ｉ　Ａ法）において
は、ホルモンや蛋白質等の抗原又は抗体にグルコースオ
キシデーゼ等の酸化酵素を標識し、それを基質（酵素が
グルコースオキシデーゼの場合はグルコース）と酵素反
応させ、発生する過酸化水素濃度を４−アミノアンチピ
リン等の色素を用いて吸光度により定量することにより
、抗原又は抗体の分析が行われる。

また、色素の変わりに過酸化水素と反応して酸化触媒存
在下で発光するルミノールやルシゲニン等の化学発光物
質を用いるＥＩＡ法の改良性場合、高感度に過酸化水素
を測定できるので、生体中の成分の分析には特に有効な
方法である。

このような方法により生体中の成分の分析を行う場合に
は、試料中の過酸化水素を正確に定量することが極めて
重要である。

上記の分析方法では、一般に、測定対象物質を加えない
で、発光試薬、触媒及び過酸化水素を混合して発光試薬
を発光させ、過酸化水素と発光量の関係を示す検量線を
予め作成し、それに基づいて、測定対象物質の酵素反応
によって発生した過酸化水素の定量が行われる。

Ｄ９発明が解決しようとする課題 しかしながら、上記のように発光物質を触媒存在下で発
光させて過酸化水素を定量する場合、発光物質及び触媒
の水溶液中に微量の過酸化水素が存在しているため、過
酸化水素濃度が１０−６ｍｏＱ／Ｑ以下の領域では、発
光物質に含まれる過酸化水素が発光に関与する割合が大
きく、実際に酵素反応によって生成された過酸化水素の
定量を正確に行うことが困難である。

従って、本発明は、測定対象である過酸化水素が低濃度
であっても精度よく測定できる過酸化水素の測定試薬及
び測定方法を提供することを目的とする。

Ｅ１課題を解決するための手段及び作用上記目的を達成
するため、第１の発明によれば、発光試薬を測定試料に
添加して測定試料中の過酸化水素を測定する方法は、発
光試薬水溶液にカタラーゼを添加して発光試薬水溶液中
に含まれる過酸化水素を分解除去し、カタラーゼの過酸
化水素分解能を抑制するカタラーゼ阻害剤を添加する操
作を行うことにより、過酸化水素の測定に適した試薬を
生成し、その試薬を測定試料に添加して測定試料中の過
酸化水素を測定することにより構成される。

また、第２の発明によれば、発光試薬を測定試料に添加
して測定試料中の過酸化水素を測定する方法は、予めカ
タラーゼを１０乃至２００　Ｕ／ｍｌの濃度になるよう
に発光試薬水溶液に添加して、発光試薬水溶液中の過酸
化水素を分解除去することにより、過酸化水素の測定に
適した試薬を生成し、その試薬を測定試料に添加して測
定試料中の過酸化水素を測定することにより構成される
。

また、第３及び第４の発明によれば、発光試薬を測定試
料に添加して測定試料中の過酸化水素を測定する方法は
、固定化カタラーゼを充填したカラムに発光試薬水溶液
を通すことにより、又は固定化カタラーゼを発光試薬水
溶液に添加することにより、発光試薬水溶液中の過酸化
水素を分解除去して、過酸化水素の測定に適した試薬を
生成し、その試薬を測定試料に添加して測定試料中の過
酸化水素を測定することにより構成される。

また、第５の発咀によれば、測定試料に添加されて測定
試料中の過酸化水素の測定に使用される過酸化水素の測
定試薬は、発光試薬と全量に対してＩＯ乃至２００Ｕ／
ｍ（２の濃度のカタラーゼから成る。

また、第６の発明によれば、測定試料に添加されて測定
試料中の過酸化水素の測定に使用される過酸化水素の測
定試薬は、固定化カタラーゼが添加された発光試薬水溶
液から成る。

また、第７の発明によれば、触媒存在下における発光試
薬と測定試料中の過酸化水素との反応による発光を検知
して測定試料中の過酸化水素を測定する装置は、発光試
薬水溶液を貯蔵する第１のタンクと、触媒水溶液を貯蔵
する第２のタンクと、外光の入射を遮断可能な密閉構造
から成りセルを収納する測定室と、固定化カタラーゼを
充填したカラムと、発光試薬水溶液及び触媒水溶液を第
１及び第２のタンクからカラムを介して測定室内のセル
に導入する第１の手段と、測定室内のセル内で生じた光
の発光量を測定する第２の手段により構成される。

さらに、第８の発明によれば、触媒存在下における発光
試薬と測定試料中の過酸化水素との反応による発光を検
知して測定試料中の過酸化水素を測定する装置は、発光
試薬水溶液と固定化カタラーゼを貯蔵する第１のタンク
と、触媒水溶液と固定化カタラーゼを貯蔵する第２のタ
ンクと、外光の入射を遮断可能な密閉構造から成りセル
を収納する測定室と、発光試薬水溶液及び触媒水溶液を
第１及び第２のタンクからカラムを介して測定室内のセ
ルに導入する第１の手段と、測定室内のセル内で生じた
光の発光量を測定する第２の手段により構成される。

上記のように、予め発光試薬水溶液をカタラーゼ又は固
定化カタラーゼと作用させ、発光試薬中に含まれる過酸
化水素を分解除去しておき、この試薬を用いて測定対象
である過酸化水素の定量を行うことにより、低濃度の過
酸化水素の場合であっても、精度よ（測定できるように
なる。

カタラーゼを使用する場合には、発光試薬水溶液中に存
在する過酸化水素を十分に分解除去できるとともに、測
定対象となる過酸化水素を分解除去しないように必要が
ある。そのため、本発明によれば、発光試薬水溶液にカ
タラーゼを添加した後に、カタラーゼの過酸化水素分解
能を抑制するカタラーゼ阻害剤を添加するか、又は予め
カタラーゼを全量に対して１０乃至２００Ｕ／ｒｒｌの
濃度になるように発光試薬水溶液に添加ことにより、測
定対象となる過酸化水素の分解除去を防止することがで
きる。カタラーゼ阻害剤としては、アジ化ナトリウム等
を使用することができる。

また、固定化カタラーゼを使用する場合には、上記操作
を行う必要はない。この場合、固定化カタラーゼは、水
不溶性担体を多官能性試薬と反応させて担体を官能化さ
せ、これにカタラーゼを固定化させることにより生成す
ることができる。水不溶性担体として、アミノプロピル
−ＣＰＧ等の多孔性ガラス、セラミックボール等を使用
することができ、多官能性試薬としてグルタルアルデヒ
ドを使用することができる。

本発明による過酸化水素の測定試薬は、例えば、ルミノ
ール、イソルミノール、ルシゲニン、ロフィン、ピロガ
ロール、ガーリック酸、アリルシュウ酸エステル、アク
リジニウム塩などのような、触媒存在下で過酸化水素と
反応して発光する発光試薬から生成することができる。

また、上記のような発光試薬を使用した場合には、触媒
として、フェリシアン化カリウム、マイクロペルオキシ
ダーゼ、ペルオキシダーゼなどのＦｌを含むヘム構造を
有するもの、あるいはＣｕ’°イーオン、ｃｏ！□イオ
ン等を含むものを使用することができる。

本発明の過酸化水素の測定試薬は、生体中のグルコース
、コレステロール、アミノ酸、ポリアミン等の成分のよ
うに、酸化酵素等と反応して過酸化水素を生成する成分
の分析に使用することができる。また、ホルモンや蛋白
質等の抗原又は抗体にグルコースオキシダーゼ等の酸化
酵素を標識し、それを基質と酵素反応させることにより
生成した過酸化水素を定虫する場合にも用いることがで
きる。

尚、本発明による発光試薬は、測定対象となる過酸化水
素に直接添加して使用することができ、長期間の保存が
可能である。

Ｆ、実施例 以下、本発明の実施例について説明する。

［実施例１］ ２Ｘ１０−’ｍｏ１２／σのルミノール（発光試薬）（
０，２Ｍ　　炭酸緩衝液　ｐＨ９，８）に、カタラーゼ
をその濃度が１００　Ｕ／ｍ１２になるように添加し、
室温で１時間反応させた。その後、この反応液にアジ化
ナトリウム（ＮａＮｓ）をその濃度が０　、　０１　ｍ
ｏＱ／Ｉ２になるように添加した。

この溶液を以下において溶液Ａという。この溶液Ａ０．
５ｍｆｆと５ｘ　１０−”ｍｏ１２　／Ｑのマイクロペ
ルオキシダーゼ（触媒）０．５ｍ１２を、１０−３〜１
０”’ｍｏσ／Ｑの過酸化水素水溶液（測定試料）０．
１ｍ１２に添加し、反応により生ずる発光の１〜１５秒
間の発光量を、ルミノメータＵＰＤ−８０００（明電舎
製）により測定した。

比較例として、１０−３〜１０−’ｍ　ｏ　１２　／Ｑ
の過酸化水素溶液０．１ｍ１２に、カタラーゼによる処
理を行わない２　Ｘ　１０−７ｍｏＱ　／Ｑのルミノー
ル０．５ｍ１２と５ＸｌＯ−＠ｍｏ１２／Ｑのマイクロ
ペルオキシダーゼ０．５ｍｆｆを加え、同様の方法によ
り、発光量を測定した（比較例１）。

これらの測定結果を第１図に示す。第１図に示すように
、比較例Ｉの場合、過酸化水素濃度が１０−’ｍ　ｏ　
Ｑ　／Ｑ以下の低濃度領域においては、ルミノール中の
過酸化水素が発光に関与する割合が大きいため、実際に
加えた過酸化水素による発光よりも発光量が増大し、バ
ックグラウンドの影響が大きく現れて、測定が困難であ
ることがわかる。一方、本実施例の場合は、過酸化水素
濃度が１０−”ｍ　ｏ　Ｑ　／Ｑ程度までバックグラウ
ンドの影響が比較的小さいものとなっており、このよう
な低濃度の領域まで測定可能であることがわかる。

［実施例２］ １０−’〜ｌ　Ｏ−”ｍ　ｏ　Ｑ　／Ｑの過酸化水素水
溶液０．１ｍ１２に、実施例１の溶液Ａ０．５ｍ１２と
６ｘ　１０−’ｍｏ１２　／Ｑのフェリシアン化カリウ
ム０．５ｍ１２を添加し、添加後１５秒後からの発光量
を１６〜４５秒間の積分値としてルミノメータＵＰＤ−
８０００で測定し、添加後一定時間（添加してからセル
を測定位置にセットする時間に対応）経過後においても
上記実施例１と同様の効果が得られるかどうかを調べた
。

比較例として、１０−’〜１０−”ｍ　ｏ　（１／Ｑの
過酸化水素溶液０．１ｍＱの各々に、カタラーゼによる
処理を行わないルミノール０．５ｍＱとフエリシアン化
カリウム０．５ｍ１２を加え、同様の方法により、発光
量を測定した（比較例２）。

これらの測定結果を第２図に示す。第２図に示すように
、過酸化水素水溶液に溶液Ａを添加した後一定時間を経
過しても上記実施例１の場合と同様の効果が得られるこ
とがわ゛かる。従って、本発明による過酸化水素測定用
試薬が、自動分注装置を使用した場合（実施例１）のみ
ならず、手動により分注した場合にも適用できることが
わかった。

［実施例３］ ２Ｘ　１０−７ｍｏＱ　／Ｑのルミノールと５×１０−
”ｍ　ｏ　（２／ｆ２のマイクロペルオキシダーゼを混
合し、この混合物にカタラーゼをその濃度が５０ＱＵ／
ｍ１２、ｌ　００　Ｕ／ｍｆｆ、１０７ｍ１２となるよ
うに添加し、１時間放置した。これらの溶液各０．５ｍ
Ｑを１０−３〜１０−”ｍ　ｏ　１２　／Ｑの過酸化水
素水溶液０．１ｍｆｆに添加し、その発光量をルミノメ
ータＵＰＤ−８０００で測定して、最適なカタラーゼ濃
度を決定した。

比較例として、２Ｘ　１０−’ｍｏ１２　／（ｌのルミ
ノールと５Ｘ１０−’ｍｏ＆／Ｑのマイクロペルオキシ
ダーゼ各０．５ｍ１２をＩ　Ｏ−３〜Ｉ　Ｏ−９ｍｏ１
２　／Ｑの過酸化水素水溶液に添加し、同様の方法によ
り、発光量を測定した（比較例３）。

これらの結果を第３図に示す。第３図に示すように、カ
タラーゼ濃度５００Ｕ／ｍｆ２の場合、ブランク値は低
下するが、溶液中のカタラーゼが過剰となり、測定試料
である過酸化水素まで分解して、測定値を全体的に低下
させた。一方、カタラーゼ濃度ＩＵ／ｍｌの場合、カタ
ラーゼ濃度が低すぎて、ルミノール中の過酸化水素を充
分に分解させることができず、ブランク値を低下させる
ことができなかった。この場合、最適な濃度は１００Ｕ
／ｍ１２であることがわかる。

［実施例４］ 試薬に添加するカタラーゼの最適濃度をさらに具体的に
決定するために、２ｘ　１０−７ｍｏＱ　／Ｑのルミノ
ールと５　Ｘ　１０−”ｍｏ１２　／（ｌのマイクロペ
ルオキシダーゼの混合液に、カタラーゼをその濃度が２
００Ｕ／ｍ１２，１００Ｕ／ｍ１２．ＩＯＵ／　ｍ　Ｑ
となるように添加し、１時間放置した。これらの溶液各
０．５ｍｆｆを１０−’〜１０−”ｍｏ１２／（２の過
酸化水素水溶液０．１ｍ４に添加し、その発光量をルミ
ノメータＵＰＤ−８０００で測定した。

比較例として、２ｘ　１０−７ｍｏＱ　／Ｑのルミノー
ルと５Ｘ１０−”ｍｏσ／１２のマイクロペルオキシダ
ーゼの混合液に、カタラーゼをその濃度が２５０　Ｕ／
ｍ（２（比較例４−１）及び５Ｕ／ｍ４（比較例４−２
）となるように添加し、１時間放置した。これらの試薬
各０．５ｍ１２を１Ｏ−３〜１０−”ｍ　ｏ　Ｑ　／Ｑ
の過酸化水素水溶液０．１ｍ（２に添加し、同様の方法
により、発光量を測定した。

これらの結果を第４図に示す。第４図に示されるように
、カタラーゼ濃度が２００Ｕ／ｍ１２．１００　Ｕ／ｍ
１２、ＩＯＵ／ｍｆｆの場合は、ブランク値を低下させ
て、測定感度を向上させることができるとともに、試薬
中のカタラーゼが測定試料である過酸化水素を分解する
こともなかった。しかし、それ以上の濃度（２５０Ｕ／
ｍｌ）では、ブランク値は低下するが、溶液中のカタラ
ーゼが過剰となり、測定試料である過酸化水素まで分解
して、測定値を全体的に低下させた。一方、カタラーゼ
濃度５Ｕ／ｍ４の場合、カタラーゼ濃度が低すぎて、ル
ミノール中の過酸化水素を充分に分解させることができ
ず、ブランク値を低下させることができなかった。従っ
て、カタラーゼの最適な濃度はｌＯ乃至２００Ｕ／ｍ１
２であることがわかった。

［実施例５］ 上記の条件を満たす試薬を自動分注システムに用いた場
合の測定時間について検討した。

２Ｘ　１　（Ｉ’ｍｏ１２　／Ｑのルミノールと５×１
０−”ｍ　ｏ　１２　／Ｑのマイクロペルオキシダーゼ
の混合液にカタラーゼをその濃度が１００Ｕ／ｒｎ２と
なるように添加し、室温で１時間放置した。この試薬０
．５ｍ１２と１０−’〜１０−＠ｍ　ｏ　Ｑ　／Ｑの過
酸化水素水溶液０．１ｍＱを自動分注システムにより測
定セルに注いで混合し、混合後１〜１５秒の１５秒間の
発光量をルミノメータＵＰＤ−８０００により積分値と
して測定した。

比較例として、上記と同様の方法により、混合後１６〜
３０秒の１５秒間の発光量の積分値を求めた（比較例５
）。

これらの結果を第５図に示す。参考のため、第７図には
上記比較例３の結果゛も示している。第５図に示される
ように、比較例５の場合、ブランク値は低下するが、各
濃度の過酸化水素における測定値が全体的に低下してい
るのがわかる。これは、過酸化水素による発光を測定す
る場合、その発光のピーク値は試薬を試料に添加してか
ら２〜３秒後であるので（第６図）、実施例５の場合は
ピーク値を含めて測定しているのに対し、比較例５はピ
ーク値を過ぎて発光の減衰状態において測定しているた
めである。従って、本発明の過酸化水素測定試薬は、手
動により試薬を添加した後にセルをセットして測定する
場合よりも、自動分注装置を用いて１〜１５秒間の積分
値として発光量を測定した方が、より効果的であること
がわかる。

［実施例６］ カタラーゼを添加した２　Ｘ　ｌ　Ｏ−７ｍｏｆ２　／
Ｑ、のルミノールと６　Ｘ　ｌ　Ｏ−３ｍｏｆ２　／ｆ
２のフェリシアン化カリウムを混合し、混合直後、３０
分後、１時間後、５時間後、１０時間後、１５時間後、
２０時間後、及び２４時間後の発光量（１〜１５秒間の
積分値）をルミノメータＵＰＤ−８０００で測定し、本
発明の試薬のブランク値の安定性を調べた。その結果を
第７図に示す。第７図に示すように、本発明による試薬
は、混合後３０経過後では、時間の経過にかかわらず一
定であとことがわかった。

また、同様の混合物を、混合した日、１週間後、及び１
箇月後の発光量についても測定した。この結果を第８図
に示す。第８図に示すように、ブランク値は１箇月経過
後でも一定であることがわかった。

［実施例７コ 水不溶性担体を多官能性試薬と反応させて担体を官能化
させ、これにカタラーゼを固定化させて、固定化カタラ
ーゼを生成した。水不溶性担体としてアミノプロピル−
〇ＰＧ　（多孔性ガラスの一種であり、修飾型）（孔径
　１５６（））、１２０〜２００ｍｅｓｈ。

ＥＬＥＣＴＲＯ−ＮＵＣＬＥＯＮＩＣ３ＩＮＣ製）を使
用し、多官能性試薬としてグルタルアルデヒドを使用し
た。本実施例では、アミノプロピルＣＰＧｌｙをグルタ
ルアルデヒドの２．５％溶液（０，０１％リン酸緩衝液
）２５ｍ１２を室温で３時間反応させて、アルデヒドＣ
ＰＧを生成し、これにカタラーゼ１００゜０００Ｕ／ｍ
ｆｆ溶液（０，０１％リン酸緩衝液２ｍ＋２　）　２　
ｍＱを室温で３時間反応させて、固定化カタラーゼを生
成した。

次に、固定化カタラーゼを充填したカラムに、発光試薬
であるルミノールを通した。この溶液０．５ｍｆｆとマ
イクロペルオキシダーゼ０．５ｍＱを、それぞれ１０−
’〜ｌ　Ｏ−”ｍ　ｏ　１２　／Ｑの過酸化水素０．１
ｍ１２に添加し、添加後１〜１５秒間の積分値としてそ
れぞれの反応による発光量をルミノメータで測定。

比較例として、過酸化水素０．１ｍ４に、固定化カタラ
ーゼを作用させないルミノールを使用して、同様の方法
により、発光量を測定した（比較例７）。

これらの測定結果を第９図に示す。第９図に示すように
、比較例７では、過酸化水素濃度が１０−’ｍ　ｏ　Ｑ
　／Ｑ以下の低濃度領域においては、ルミノール中の過
酸化水素が発光に関与する割合が大きく、実際に加えた
過酸化水素の定量を正確に行うことが出来ない。即ち、
１　（Ｉ’ｍｏＱ／Ｑ以下では、バックグラウンドの影
響が大きく現れ、測定が困難である。一方、本実施例の
場合は、過酸化水素濃度が１０−＠ｍ　ｏ　Ｑ　／（ｌ
程度までバックグラウンドの影響が比較的小さいものと
なっており、このような低濃度の領域まで測定可能であ
ることがわかる。

また、本実施例による測定方法は、第１０図に示す装置
によって行うことが出来る。第１Ｏ図において、試薬タ
ンク１はルミノール等の発光試薬を導入するタンクであ
り、試薬タンク２はマイクロペルオキシダーゼ等の触媒
を導入するタンクである。発光試薬及び触媒は、それぞ
れポンプ３及び固定化カタラーゼ充填カラム４を介して
、暗箱５内に設けられたセル６内で混合され、反応によ
る試料７からの発光は、光電子増倍管８により検知され
る。

Ｕ実施例８］ 実施例７において生成した固定化カタラーゼをナイロン
網の袋に入れ、それをルミノール１００ｍ（２とマイク
ロペルオキシダーゼ１００ｍ１２のそれぞれに予め添加
しておいた。

このルミノール０．５ｍｆｆとマイクロペルオキシダー
ゼ０．５ｍ（２を、それぞれ１０−’　〜１０−ｇｍｏ
Ｑ／Ｑの過酸化水素０．１ｍ１２に添加し、反応により
生ずる発光の発光量をルミノメータＵＰＤ−８０００で
測定した。

比較例として、固定化カタラーゼを添加しないルミノー
ルとマイクロペルオキシダーゼを使用して、同様の方法
により、過酸化水素による発光の発光量を測定した。

これらの結果を第１１図に示す。第１１図に示すように
、本実施例も実施例７と同様の結果が得られた。

また、本実施例による測定方法は、第１２図に示す装置
によって行うことが出来る。第１２図において、試薬タ
ンク１１はルミノール等の発光試薬を導入するタンクで
あり、試薬タンク１２はマイクロペルオキシダーゼ等の
触媒を導入するタンクである。試薬タンク１１及び１２
には、ナイロン網に充填した固定化カタラーゼ１３が入
っている。発光試薬及び触媒は、それぞれポンプ１４を
介して、暗箱１５内に設けられたセル１６内で混合され
、反応による試料！７からの発光は、光電゛子増倍管１
８により検知される。

Ｇ６発明の効果 本発明は、以上のように構成したので、以下のような効
果を奏する。

請求項１項記載の方法によれば、発光試薬にカタラーゼ
を添加することにより、発光試薬中の過酸化水素を予め
分解除去しているので、測定対象である過酸化水素の定
量を正確に行うことができ、特に過酸化水素の低濃度領
域における測定精度を従来よりも向上させることが出来
る。また、発光試薬中の過酸化水素を分解除去した後に
カタラーゼを除去する操作又はカタラーゼの過酸化水素
分解能を抑制するカタラーゼ阻害剤を添加する操作を行
っているので、発光試薬を測定試料に添加した後に測定
試料中の過酸化水素を分解してしまうことがない。

請求項２項記載の方法によれば、予め発光試薬中の過酸
化水素の分解除去に適する量のカタラーゼを発光試薬に
添加するので、発光試薬中に残存するカタラーゼを除去
する操作及びカタラーゼの過酸化水素分解能を抑制する
カタラーゼ阻害剤を添加する操作を行う必要がない。

請求項３項乃至４項記載の方法によれば、発光試薬中の
過酸化水素の分解除去に固定化カタラーゼを使用してい
るので、請求項２項の場合と同様に発光試薬中に残存す
るカタラーゼを除去する操作及びカタラーゼの過酸化水
素分解能を抑制するカタラーゼ阻害剤を添加する操作を
行う必要がない。

請求項５項及び６項記載の測定試料によれば、請求項２
項乃至４項と同様な効果が得られる。

請求項７項及び８項の装置によれば、請求項３項乃至４
項と同様な効果を得るための装置を提供することができ
る。

【図面の簡単な説明】

第１図は第１実施例及びその比較例における過酸化水素
濃度と発光量との関係を示す検量線図、第２図は第２実
施例とその比較例における過酸化水素濃度と発光量との
関係を示す検量線図、第３図は第３実施例及びその比較
例にお□ける過酸化水素濃度と発光量との関係を示す検
量線図、第４図は本発明の第４実施例及びその比較例に
おける過酸化水素濃度と発光量との関係を示す検量線図
、第５図は本発明の第５実施例及びその比較例における
過酸化水素濃度と発光量との関係を示す検量線図、第６
図は時間の経過に対する過酸化水素による発光の発光量
を示す図、第７図及び第８は本発明の第６実施例におけ
る過酸化水素による発光の発光量と経過時間との関係を
示す図、第９図は第７実施例及びその比較例における過
酸化水素濃度と発光量との関係を示す図、第１０図は第
７実施例による測定方法を行うための装置の該略図、第
１！図は本発明の第８実施例及びその比較例における過
酸化水素濃度と発光量との関係を示す図、第１２図は第
８実施例による測定方法を行うための装置の該略図であ
る。 ３、Ｉ４・・・ポンプ ４・・・固定化カタラーゼ充填カラム　　　　　　　　
沫５．１５・・・暗箱、　６．１６・・・セルフ、１７
・・・試料 ８．１８・・・光電子増倍管 Ｉ３・−・ナイロン網に充填した固定化カタラーゼ第８
図 ＋Ｃ０ＵＮＴ／１５５ＥＣＩ Ｑ　−二 手続相↑正書（方式） 昭和６３年ｌθ月２４日 ２、発明の名称 試料中の過酸化水素の測定試薬、その測定方法及び測定
装置 ３、補正をする者 事件との関係　　　　出願人 株式会社　明　電　舎 ４、代理人　〒１０４ 明細書の「図面の簡単な説明」の欄において、「第７図
及び第８」を「第７図及び第８図」に補正する。

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. （１）発光試薬を測定試料に添加して測定試料中の過酸
   化水素を測定する方法において、前記発光試薬水溶液に
   カタラーゼを添加して発光試薬水溶液中に存在する過酸
   化水素を分解除去し、カタラーゼの過酸化水素分解能を
   抑制するカタラーゼ阻害剤を添加する操作を行った後に
   、発光試薬を測定試料に添加することを特徴とする過酸
   化水素の測定方法。
2. （２）発光試薬を測定試料に添加して測定試料中の過酸
   化水素を測定する方法において、予めカタラーゼを１０
   乃至２００Ｕ／ｍｌの濃度になるように前記発光試薬水
   溶液に添加して、発光試薬水溶液中の過酸化水素を分解
   除去した後に、発光試薬を測定試料中に添加することを
   特徴とする過酸化水素の測定方法。
3. （３）発光試薬を測定試料に添加して測定試料中の過酸
   化水素を測定する方法において、固定化カタラーゼを充
   填したカラムに前記発光試薬水溶液を通すことにより、
   発光試薬水溶液中に存在する過酸化水素を予め分解除去
   した後に、発光試薬を測定試料中に添加することを特徴
   とする過酸化水素の測定方法。
4. （４）発光試薬を測定試料に添加して測定試料中の過酸
   化水素を測定する方法において、予め固定化カタラーゼ
   を発光試薬水溶液に添加して発光試薬水溶液中の過酸化
   水素を分解除去した後に、発光試薬を測定試料に添加す
   ることを特徴とする過酸化水素の測定方法。
5. （５）発光試薬と全量に対して１０乃至２００Ｕ／ｍｌ
   の濃度のカタラーゼの水溶液から成り、測定試料に添加
   されて測定試料中の過酸化水素の測定に使用される過酸
   化水素の測定試薬。
6. （６）固定化カタラーゼが添加された発光試薬水溶液か
   ら成り、測定試料に添加されて測定試料中の過酸化水素
   の測定に使用される過酸化水素の測定試薬。
7. （７）触媒存在下における発光試薬と測定試料中の過酸
   化水素との反応による発光を検知して測定試料中の過酸
   化水素を測定する装置において、前記発光試薬の水溶液
   を貯蔵する第１のタンクと、前記触媒の水溶液を貯蔵す
   る第２のタンクと、外光の入射を遮断可能な密閉構造か
   ら成りセルを収納する測定室と、固定化カタラーゼを充
   填したカラムと、前記発光試薬及び触媒の水溶液を前記
   第１及び第２のタンクから前記カラムを介して前記測定
   室内のセルに導入する第１の手段と、前記測定室内のセ
   ル内で生じた光の発光量を測定する第２の手段から成る
   ことを特徴とする、過酸化水素の測定装置。
8. （８）触媒存在下における発光試薬と測定試料中の過酸
   化水素との反応による発光を検知して測定試料中の過酸
   化水素を測定する装置において、前記発光試薬の水溶液
   と固定化カタラーゼを貯蔵する第１のタンクと、前記触
   媒の水溶液と固定化カタラーゼを貯蔵する第２のタンク
   と、外光の入射を遮断可能な密閉構造から成りセルを収
   納する測定室と、前記発光試薬及び触媒の水溶液を前記
   第１及び第２のタンクから前記測定室内のセルに導入す
   る第１の手段と、前記測定室内のセル内で生じた光の発
   光量を測定する第２の手段から成ることを特徴とする、
   過酸化水素の測定装置。