JPH01104189A - 発酵法によるオロット酸の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は発酵法によるオロット酸の製造法に関する。 オロット酸は核酸構成成分であるピリミジン化合物の前
駆物質であり、強肝剤としての用途の他、ウラシル、シ
トシン、チミンなどのピリミジン系化合物の原料物質と
して有用である。 従来の技術 種々の微生物のウラシル要求性変異株がオロット酸を蓄
積する事実は古くから知れており〔（アミノ酸・核酸集
談合編、核酸発酵、Ｐ　１７８　、講談社すイエンステ
ィフイク、（１９７６）：］　、さらにコリネバクテリ
ウム属の細菌に関しては、コリネバクテリウム・グルタ
ミクム（旧ミクロコツカス・グルタミクム）　（ウラシ
ル要求性）を用いる方法が知られている（特公昭３Ｂ−
９９５０号公報）。 発明が解決しようとする問題点 オロット酸を、より収率よく安価に製造する方法が求め
られている。 問題点を解決するための手段 本発明方法によると、コリネバクテリウム属に属し、ピ
リミジンアナログ耐性またはピリミジンアナログ耐性右
よびサルファ剤耐性を有し、かつオロット酸生産能を有
する微生物を用いることにより高収率でオロット酸を得
ることができる。 ピリミジンアナログとしては、５−フルオロウラシル、
６−アブウラシル、２−チオウラシル、５−ヒドロキシ
ウラシル、トリメトプリムなどがあげられる。 サルファ剤としてはサルファグアニジン、サルファチア
ゾール、サルファピリジン、サルファピリジンなどがあ
げられる。 本発明に使用する微生物としては、コリネバクテリウム
属に属し、ピリミジンアナログ耐性または該耐性および
サルファ剤耐性を有し、かつオロット酸生産能を有する
、微生物であればいずれも用いられる。具体的には、コ
リネバクテリウム・グルタミクム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ　ｇｌｕｔａｍｉｕｍ）　Ｔ　−２６（ｉ
ｉａ工研条寄第１４８７号）（５−フルオロウラシル耐
性）（以下、Ｔ−２６という）、　Ｔ−２９（微工研条
寄第１４８８号）　（５−フルオロウラシル耐性、トリ
メトプリム耐性）（以下、Ｔ−２９という）およびＴ−
３０（微工研条寄第１４８９号）（５−フルオロウラシ
ル耐性、サルファグアニジン耐性）　（以下、Ｔ−３０
という）があげられる。 以下に、前記菌株の取得方法の具体例を示す。 グルコース、酵母エキス、ブイヨン培地（グルコース１
．０％、酵母エキス０．５％、ペプトン１．０％、肉エ
キス０．７％、塩化ナトリウム０．３％、ｐ　Ｈ７，２
）で３０℃、１６時間培養したコリネバクテリウム、グ
ルタミクムＡＴＣＣ１４２７５（以下、ＡＴＣＣ１４２
７５という）をさらに同じ培地にて３０℃、４時間培養
し、採取した菌体を洗浄後ｐ　Ｈ６，０のＭ／２０）リ
ス・マレート緩衝液に懸濁し、菌体濃度１０’／ｍｌの
菌体懸濁液に２５０　μｇ／ｍｌのＮ−メチル−Ｎ’−
＝トｏ　−Ｎ−ニトロソグアニジンを加え、３０℃に２
０分間保持した。ついで遠心分離して菌体を集め、Ｍ／
２０トリス・マレート緩衝液で良く洗浄した後、５−フ
ルオロウラシル１００μｇ／ｍ！を含有する最少培地平
板（培地組成ニ ゲルコース　　　　　１．０％ 硫酸アンモニウム　　０．１％ 尿　　　　素　　　　　　　０．１％ リン酸二カリウム　　０．１％ 硫酸マグネシウム　　０．０４％ 塩化ナトリウム　　　０．０２％ 硫酸第一鉄　　　　　０．００１％ 硫酸マンガン　　　　ｏ、ｏｏｉ％ ビオチン　　　　５０■／１ チアミン　　　　２００μＱ／Ｉ２ ｐＨ７，０） に塗抹して３０℃で４日間培養した。出現したコロニー
をグルコース−酵母エキス−ブイヨン斜面培地に植菌、
培養し、三角フラスコを用いたスクリーニング培養の結
果、オロット酸生産性優良株としてＴ−２６を選択した
。薬剤に対する耐性度を第１表に示す。さらに、Ｔ−２
６を親株として、前記操作において、５−フルオロウラ
シル１００■／ｍｌを含有する最少培地の代わりにトリ
メトプリム１００■／ｍｌまたはサルファグアニジン５
００Ｊ１ｇ／　ｔｎ　ｌを含有する最少培地を用いて、
トリメトプリム耐性株Ｔ−２９またはサルファグアニジ
ン耐性株Ｔ−３０を選択した。薬剤に対する耐性度を第
１表に示す。 第　　　１　　　表 ＋：生育、　　　−：非生育 前記微生物を培養する本発明に用いる培地としては、炭
素源、窒素源、無機物、ウラシル、ウラシル含有物など
の栄養物を含有する培地ならば、合成培地又は天然物培
地いずれも使用できる。 炭素源としては、グルコース、シュクロース、マルトー
ス、廃糖蜜、各種でん粉糖化液、セルローズ糖化液など
が使用できる。窒素源としては、アンモニア、硫酸アン
モニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、リン
酸アンモニウム、炭酸アンモニウムなどのアンモニウム
塩、尿素、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーンス
チーブリカ、大豆粉、カゼイン加水分解物などの天然窒
素源などが使用できる。無機塩としては、リン酸−カリ
ウム、リン酸二カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸第一
鉄、硫酸マンガン、塩化ナトリウム、塩化カルシウムな
どが使用できる。使用する菌体がウラシル要求性である
場合はウラシル又はウラシル含有物を適量（ウラシル換
算で３０〜２００ｍｇ／β）培地に添加しておく必要が
ある。ウラシル含有物としては、ウリジン、酵母エキス
、酵母菌体、リボ核酸などが使用できる。 その他、微量要素として各種のビタミン、例えばビオチ
ン、チアミン、ニコチン酸、パントテン酸なども場合に
より必要である。 培養は振盪培養、通気撹拌培養等の好気的条件下で行う
。培養は温度２５〜３７℃、好ましくは２８〜３４℃、
ｐＨ５〜９、好ましくは６．０〜７．５で２〜５日間行
う。中和剤としては、炭酸カルシウム、アンモニア水、
水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウムな
どが用いられる。 培養物からオロット酸を分離、採取するには、例えば、
培養液を８０〜１００℃に加熱して、培養液中に析出し
ているオロット酸を溶解させた後、菌体を分離し、ｐ液
を濃縮、冷却させることによって容易にオロフト酸の粗
結晶を得ることができる。 以下に実施例を示す。 実施例Ｉ Ｔ−２６を下記組成の種培養培地１０ｍ１を入れた大型
試験管に植菌し、３０℃で２４時間培養したちの１ｍｌ
を、下記組成の生産培地２０ｍ１を入れた３（１０ｍｌ
三角フラスコに植菌して３０℃で３又は５日間培養した
。その結果を第２表に示す。 一方、対照として、ＡＴＣＣ１４２７５を用い前記と同
様に培養した。その結果を第２表に示す。 グルコース　　　５．０％ ベ　　プ　　ト　　ン　　　　　　　　　１．０　％酵
母エキス　　　１．０％ 硫酸アンモニウム　　　　０．５％ 尿　　　　　　　素　　　　　　　０．３％塩化ナトリ
ウム　　　　　０．２５％ ビ　　オ　　チ　　ン　　　　　　　　　５０■／ｌウ
　　ラ　　シ　　ル　　　　　　　　　　１５０ｍｇ／
ｊｌ’炭酸カルシウム　　　　　２％ １）　Ｈ７，０ 生　　産　　培　　地 廃　　　糖　　　蜜　　　　　　　２０％硫酸アンモニ
ム　　　　　０．５％ 尿　　　　　　素　　　　　　　１．０％リン酸−カリ
ウム　　　　０．０５％ リン酸二カリウム　　　　０．０５％ 硫酸マグネシウム　　　　０．０５％ ウ　　ラ　　シ　　ル　　　　　　５０又は１００ｍｇ
／Ｊ炭素カルシウム　　　　　２％ ｐ　Ｈ７，０％ 第２表 実施例２ 種間としてＴ−２６の代わりにＴ−２９及びＴ−３０を
用いる以外は実施例１と同様に培養した。 その結果を第３表に示す。　　　　 第　　　　３　　　　表 実施例３ 実施例１に示した種培養培地２００ｍ１を入れた２１三
角フラスコに第４表に示す菌株をそれぞれ１白金耳植菌
し、３０℃で２４時間培養した。 この培養液を実施例１に示した生産培地２βを入れた５
βジヤー・ファーメンタ−に植菌し、３３℃、６００ｒ
ｐｍ　、　ｌｖｖｍの条件で培養した。 培養開始２４時間目に殺菌した廃糖蜜の５０％溶液５０
０ｍ１を添加し、さらに培養液のｐＨが７．２以上にな
るように濃アンモニア水で調節しながら培養を続けた。 そ結果を第４表に示す。 第　　　　４　　　　表 発明の効果 本発明方法により収率よくオロフト酸を得ることができ
る。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. コリネバクテリウム属に属し、ピリミジンアナログ耐性
   またはピリミジンアナログ耐性およびサルファ剤耐性を
   有し、かつオロット酸生産能を有する微生物を培地に培
   養し、培養物中にオロット酸を生成蓄積させ、該培養物
   よりオロット酸を採取することを特徴とする発酵法によ
   るオロット酸の製造法。