JPH0710235B2 - 発酵法によるオロット酸の製造法 - Google Patents
発酵法によるオロット酸の製造法Info
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- JPH0710235B2 JPH0710235B2 JP62261775A JP26177587A JPH0710235B2 JP H0710235 B2 JPH0710235 B2 JP H0710235B2 JP 62261775 A JP62261775 A JP 62261775A JP 26177587 A JP26177587 A JP 26177587A JP H0710235 B2 JPH0710235 B2 JP H0710235B2
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Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は発酵法によるオロット酸の製造法に関する。
オロット酸は核酸構成成分であるピリミジン化合物の前
駆物質であり、強肝剤としての用途の他、ウラシル、シ
トシン、チミンなどのピルミジン系化合物の原料物質と
して有用である。
駆物質であり、強肝剤としての用途の他、ウラシル、シ
トシン、チミンなどのピルミジン系化合物の原料物質と
して有用である。
従来の技術 種々の微生物のウラシル要求性変異株がオロット酸を蓄
積する事実は古くから知られており〔（アミノ酸・核酸
集談会編、核酸発酵、P178、講談社サイエンスティフイ
ク、（1976）〕、さらにコリネバクテリウム属の細菌に
関しては、コリネバクテリウム・グルタミクム（旧ミク
ロコッカス・グルタミクス）（ウラシル要求性）を用い
る方法が知らてれいる（特公昭38−9950号公報）。
積する事実は古くから知られており〔（アミノ酸・核酸
集談会編、核酸発酵、P178、講談社サイエンスティフイ
ク、（1976）〕、さらにコリネバクテリウム属の細菌に
関しては、コリネバクテリウム・グルタミクム（旧ミク
ロコッカス・グルタミクス）（ウラシル要求性）を用い
る方法が知らてれいる（特公昭38−9950号公報）。
発明が解決しようとする問題点 オロット酸が、より収率よく安価に製造する方法が求め
られている。
られている。
問題点を解決するための手段 本発明方法によると、コリネバクテリウム属に属し、ピ
リミジンアナログ耐性またはピリミジンアナログ耐性お
よびサルファ剤耐性を有し、かつオロット酸生産能を有
する微生物を用いることにより高収率でオロット酸を得
ることができる。
リミジンアナログ耐性またはピリミジンアナログ耐性お
よびサルファ剤耐性を有し、かつオロット酸生産能を有
する微生物を用いることにより高収率でオロット酸を得
ることができる。
ピリミジンアナログとしては、５−フルオロウラシル、
６−アザウラシル、２−チオウラシル、５−ヒドロキシ
ウラシル、トリメトプリムなどがあげられる。
６−アザウラシル、２−チオウラシル、５−ヒドロキシ
ウラシル、トリメトプリムなどがあげられる。
サルファ剤としてはサルフアグァニジン、サルファチア
ゾール、サルファピリジン、サルファメラジンなどがあ
げられる。
ゾール、サルファピリジン、サルファメラジンなどがあ
げられる。
本発明に使用する微生物としては、コリネバクテリウム
属に属し、ピリミジンアナログ耐性または該耐性および
サルファ剤耐性を有し、かつオロット酸生産能を有す
る、微生物であればいずれも用いられる。具体的には、
コリネバクテリウム・グルタミクム（Corynebacterium
glutamium）Ｔ−26（微工研条寄第1487号）、（５−フ
ルオロウラシル耐性）（以下、Ｔ−26という）、Ｔ−29
（微工研条寄第1488号）、（５−フルオロウラシル耐
性、トリメトプリム耐性）（以下、Ｔ−29という）およ
びＴ−30（微工研条寄第1489号）（５−フルオロウラシ
ル耐性、サルファグアニジン耐性）（以下、Ｔ−30とい
う）があげられる。
属に属し、ピリミジンアナログ耐性または該耐性および
サルファ剤耐性を有し、かつオロット酸生産能を有す
る、微生物であればいずれも用いられる。具体的には、
コリネバクテリウム・グルタミクム（Corynebacterium
glutamium）Ｔ−26（微工研条寄第1487号）、（５−フ
ルオロウラシル耐性）（以下、Ｔ−26という）、Ｔ−29
（微工研条寄第1488号）、（５−フルオロウラシル耐
性、トリメトプリム耐性）（以下、Ｔ−29という）およ
びＴ−30（微工研条寄第1489号）（５−フルオロウラシ
ル耐性、サルファグアニジン耐性）（以下、Ｔ−30とい
う）があげられる。
以下に、前記菌株の取得方法の具体例を示す。
グルコース、酵母エキス、ブイヨン培地（グルコース1.
0％、酵母エキス0.5％、ペプトン1.0％、肉エキス0.7
％、塩化ナトリウム0.3％、pH7.2）で30℃、16時間培養
したコリネバクテリウム、グルタミクムATCC14275（以
下、ATCC14275という）をさらに同じ培地にて30℃、４
時間培養し、採取した菌体を洗浄後pH6.0のM/20トリス
・マレート緩衝液に懸濁し、菌体濃度108/mlの菌体懸濁
液に250μg/mlのＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニト
ロソグアニジンを加え、30℃に20分間保持した。ついで
遠心分離して菌体を集め、M/20トリス・マレート緩衝液
で良く洗浄した後、５−フルオロウラシル100μg/mlを
含有する最少培地平板（培地組成： グルコース 1.0％ 硫酸アンモニウム 0.1％ 尿 素 0.1％ リン酸二カリウム 0.1％ 硫酸マグネシウム 0.04％ 塩化ナトリウム 0.02％ 硫酸第一鉄 0.001％ 硫酸マンガン 0.001％ ビオチン 50μg/ チアミン 200μ／ pH 7.0 ） に塗抹して30℃で４日間培養した。出現したコロニーを
グルコース−酵母エキス−ブイヨン斜面培地に植菌、培
養し、三角フラスコを用いたスクリーニング培養の結
果、オロット酸生産性優良株としてＴ−26を選択した。
薬剤に対する耐性度を第１表に示す。さらに、Ｔ−26を
親株として、前記操作において、５−フルオロウラシル
100μg/mlを含有する最少培地の代わりにトリメトプリ
ム100μg/mlまたはサルファグアニジン500μg/mlを含有
する最少培地を用いて、トリメトプリム耐性株Ｔ−29ま
たはサルファグアニジン耐性株Ｔ−30を選択した。薬剤
に対する耐性度を第１表に示す。
0％、酵母エキス0.5％、ペプトン1.0％、肉エキス0.7
％、塩化ナトリウム0.3％、pH7.2）で30℃、16時間培養
したコリネバクテリウム、グルタミクムATCC14275（以
下、ATCC14275という）をさらに同じ培地にて30℃、４
時間培養し、採取した菌体を洗浄後pH6.0のM/20トリス
・マレート緩衝液に懸濁し、菌体濃度108/mlの菌体懸濁
液に250μg/mlのＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニト
ロソグアニジンを加え、30℃に20分間保持した。ついで
遠心分離して菌体を集め、M/20トリス・マレート緩衝液
で良く洗浄した後、５−フルオロウラシル100μg/mlを
含有する最少培地平板（培地組成： グルコース 1.0％ 硫酸アンモニウム 0.1％ 尿 素 0.1％ リン酸二カリウム 0.1％ 硫酸マグネシウム 0.04％ 塩化ナトリウム 0.02％ 硫酸第一鉄 0.001％ 硫酸マンガン 0.001％ ビオチン 50μg/ チアミン 200μ／ pH 7.0 ） に塗抹して30℃で４日間培養した。出現したコロニーを
グルコース−酵母エキス−ブイヨン斜面培地に植菌、培
養し、三角フラスコを用いたスクリーニング培養の結
果、オロット酸生産性優良株としてＴ−26を選択した。
薬剤に対する耐性度を第１表に示す。さらに、Ｔ−26を
親株として、前記操作において、５−フルオロウラシル
100μg/mlを含有する最少培地の代わりにトリメトプリ
ム100μg/mlまたはサルファグアニジン500μg/mlを含有
する最少培地を用いて、トリメトプリム耐性株Ｔ−29ま
たはサルファグアニジン耐性株Ｔ−30を選択した。薬剤
に対する耐性度を第１表に示す。
前記微生物を培養する本発明に用いる培地としては、炭
素源、窒素源、無機物、ウラシル、ウラシル含有物など
の栄養物を含有する培地ならば、合成培地又は天然物培
地いずれも使用できる。
素源、窒素源、無機物、ウラシル、ウラシル含有物など
の栄養物を含有する培地ならば、合成培地又は天然物培
地いずれも使用できる。
炭素源としては、グルコース、シュクロース、マルトー
ス、廃糖蜜、各種でん粉糖化液、セルロース糖化液など
が使用できる。窒素源としては、アンモニア、硫酸アン
モニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、リン
酸アンモニウム、炭酸アンモニウムなどのアンモニウム
塩、尿素、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーンス
チープリカ、大豆粉、カゼイン加水分解物などの天然窒
素源などが使用できる。無機塩としては、リン酸一カリ
ウム、リン酸二カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸第一
鉄、硫酸マンガン、塩化ナトリウム、塩化カルシウムな
どが使用できる。使用する菌体がウラシル要求性である
場合はウラシル又はウラシル含有物を適量（ウラシル換
算で30〜200mg/）培地に添加しておく必要がある。ウ
ラシル含有物としては、ウリジン、酵母エキス、酵母菌
体、リボ核酸などが使用できる。
ス、廃糖蜜、各種でん粉糖化液、セルロース糖化液など
が使用できる。窒素源としては、アンモニア、硫酸アン
モニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、リン
酸アンモニウム、炭酸アンモニウムなどのアンモニウム
塩、尿素、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーンス
チープリカ、大豆粉、カゼイン加水分解物などの天然窒
素源などが使用できる。無機塩としては、リン酸一カリ
ウム、リン酸二カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸第一
鉄、硫酸マンガン、塩化ナトリウム、塩化カルシウムな
どが使用できる。使用する菌体がウラシル要求性である
場合はウラシル又はウラシル含有物を適量（ウラシル換
算で30〜200mg/）培地に添加しておく必要がある。ウ
ラシル含有物としては、ウリジン、酵母エキス、酵母菌
体、リボ核酸などが使用できる。
その他、微量要素として各種のビタミン、例えばビオチ
ン、チアミン、ニコチン酸、パントテン酸なども場合に
より必要である。
ン、チアミン、ニコチン酸、パントテン酸なども場合に
より必要である。
培養は振盪培養、通気攪拌培養等の好気的条件下で行
う。培養は温度25〜37℃、好ましくは28〜34℃、pH5〜
９、好ましくは6.0〜7.5で２〜５日間行う。中和剤とし
ては、炭酸カルシウム、アンモニア水、水酸化ナトリウ
ム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウムなどが用いられ
る。
う。培養は温度25〜37℃、好ましくは28〜34℃、pH5〜
９、好ましくは6.0〜7.5で２〜５日間行う。中和剤とし
ては、炭酸カルシウム、アンモニア水、水酸化ナトリウ
ム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウムなどが用いられ
る。
培養物からオロット酸を分離、採取するには、例えば、
培養液を80〜100℃に加熱して、培養液中に析出してい
るオロット酸を溶解させた後、菌体を分離し、液を濃
縮、冷却させることによって容易にオロット酸の粗結晶
を得ることができる。
培養液を80〜100℃に加熱して、培養液中に析出してい
るオロット酸を溶解させた後、菌体を分離し、液を濃
縮、冷却させることによって容易にオロット酸の粗結晶
を得ることができる。
以下に実施例を示す。
実施例１ Ｔ−26を下記組成の種培養培地10mlを入れた太型試験管
に植菌し、30℃で24時間培養したもの1mlを、下記組成
の生産培地20mlを入れた300ml三角フラスコに植菌して3
0℃で３又は５日間培養した。その結果を第２表に示
す。
に植菌し、30℃で24時間培養したもの1mlを、下記組成
の生産培地20mlを入れた300ml三角フラスコに植菌して3
0℃で３又は５日間培養した。その結果を第２表に示
す。
一方、対照として、ATCC14275を用い前記と同様に培養
した。その結果を第２表に示す。 種培養培地 グルコース 5.0％ ペプトン 1.0％ 酵母エキス 1.0％ 硫酸アンモニウム 0.5％ 尿 素 0.3％ 塩化ナトリウム 0.25％ ピオチン 50μg/ ウラシル 150mg/ 炭酸カルシウム ２％ pH 7.0 生産培地 廃 糖 蜜 20％ 硫酸アンモニム 0.5％ 尿 素 1.0％ リン酸一カリウム 0.05％ リン酸二カリウム 0.05％ 硫酸マグネシウム 0.05％ ウ ラ シ ル 50又は100mg/ 炭酸カルシウム 2％ pH 7.0 実施例２ 種菌としてＴ−26の代わりにＴ−29及びＴ−30を用いる
以外は実施例１と同様に培養した。
した。その結果を第２表に示す。 種培養培地 グルコース 5.0％ ペプトン 1.0％ 酵母エキス 1.0％ 硫酸アンモニウム 0.5％ 尿 素 0.3％ 塩化ナトリウム 0.25％ ピオチン 50μg/ ウラシル 150mg/ 炭酸カルシウム ２％ pH 7.0 生産培地 廃 糖 蜜 20％ 硫酸アンモニム 0.5％ 尿 素 1.0％ リン酸一カリウム 0.05％ リン酸二カリウム 0.05％ 硫酸マグネシウム 0.05％ ウ ラ シ ル 50又は100mg/ 炭酸カルシウム 2％ pH 7.0 実施例２ 種菌としてＴ−26の代わりにＴ−29及びＴ−30を用いる
以外は実施例１と同様に培養した。
その結果を第３表に示す。
実施例３ 実施例１に示した種培養培地200mlを入れた２三角フ
ラスコに第４表に示す菌株をそれぞれ１白金耳植菌し、
30℃で24時間培養した。
ラスコに第４表に示す菌株をそれぞれ１白金耳植菌し、
30℃で24時間培養した。
この培養液を実施例１に示した生産培地２を入れた５
ジャー・ファーメンターに植菌し、33℃、600rpm、1v
vmの条件で培養した。
ジャー・ファーメンターに植菌し、33℃、600rpm、1v
vmの条件で培養した。
培養開始24時間目に殺菌した廃糖蜜の50％溶液500mlを
添加し、さらに培養液のpHが7.2以上になるように濃ア
ンモニア水で調節しながら培養を設けた。そ結果を第４
表に示す。
添加し、さらに培養液のpHが7.2以上になるように濃ア
ンモニア水で調節しながら培養を設けた。そ結果を第４
表に示す。
発明の効果 本発明方法により収率よくオロット酸を得ることができ
る。
る。
Claims (1)
- 【請求項１】コリネバクテリウム属に属し、ピリミジン
アナログ耐性またはピリミジンアナログ耐性およびサル
ファ剤耐性を有し、かつオロット酸生産能を有する微生
物を培地に培養し、培養物中にオロット酸を生産蓄積さ
せ、該培養物によりオロット酸を採取することを特徴と
する発酵法によるオロット酸の製造法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62261775A JPH0710235B2 (ja) | 1987-10-19 | 1987-10-19 | 発酵法によるオロット酸の製造法 |
| US07/256,458 US5013656A (en) | 1987-10-19 | 1988-10-12 | Process for producing orotic acid by fermentation |
| EP88117017A EP0312912B1 (en) | 1987-10-19 | 1988-10-13 | Process for producing orotic acid by fermentation |
| DE88117017T DE3883911T2 (de) | 1987-10-19 | 1988-10-13 | Verfahren zur Herstellung von Orotsäure durch Fermentierung. |
| KR1019880013584A KR910005630B1 (ko) | 1987-10-19 | 1988-10-18 | 발효법에 의한 오로트산의 제조방법 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62261775A JPH0710235B2 (ja) | 1987-10-19 | 1987-10-19 | 発酵法によるオロット酸の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01104189A JPH01104189A (ja) | 1989-04-21 |
| JPH0710235B2 true JPH0710235B2 (ja) | 1995-02-08 |
Family
ID=17366525
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62261775A Expired - Lifetime JPH0710235B2 (ja) | 1987-10-19 | 1987-10-19 | 発酵法によるオロット酸の製造法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5013656A (ja) |
| EP (1) | EP0312912B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0710235B2 (ja) |
| KR (1) | KR910005630B1 (ja) |
| DE (1) | DE3883911T2 (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5264361A (en) * | 1991-03-18 | 1993-11-23 | Lonza Ltd. | Microbiological process for the production of 6-hydroxypicolinic acid |
| KR0177841B1 (ko) | 1992-01-30 | 1999-04-01 | 나까무라 간노스께 | 시티딘 디인산 콜린의 제조방법 |
| US5270203A (en) * | 1992-03-13 | 1993-12-14 | Lonza Ltd. | Biologically pure culture of Alcaligenes faecalis DSM 6335 |
| DE19929364A1 (de) * | 1999-06-25 | 2000-12-28 | Basf Lynx Bioscience Ag | Die Sequenz der Dihydroorotat-Dehydrogenase aus Corynebacterium glutamicum und deren Einsatz bei der mikrobiellen Produktion von Pyrimidinen und/oder mit Pyrimidin verwandten Verbindungen |
| JPWO2003095660A1 (ja) * | 2002-05-08 | 2005-09-15 | 協和醗酵工業株式会社 | シチジン５’−ジリン酸コリンの製造法 |
| WO2010005123A1 (en) * | 2008-07-07 | 2010-01-14 | Mazence Inc. | Composition for enhancing biosynthesis of hyaluronic acid or glycosaminoglycan comprising orotic acid, a salt thereof, or a derivative thereof |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB922359A (ja) * | 1960-06-15 | |||
| DE1767294C3 (de) * | 1967-05-15 | 1975-01-09 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd., Tokio | Verfahren zur fermentativen Gewinnung von Orotidin |
-
1987
- 1987-10-19 JP JP62261775A patent/JPH0710235B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1988
- 1988-10-12 US US07/256,458 patent/US5013656A/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-13 EP EP88117017A patent/EP0312912B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-13 DE DE88117017T patent/DE3883911T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-18 KR KR1019880013584A patent/KR910005630B1/ko not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR890006827A (ko) | 1989-06-16 |
| KR910005630B1 (ko) | 1991-08-01 |
| EP0312912A3 (en) | 1990-05-16 |
| DE3883911D1 (de) | 1993-10-14 |
| US5013656A (en) | 1991-05-07 |
| EP0312912B1 (en) | 1993-09-08 |
| EP0312912A2 (en) | 1989-04-26 |
| DE3883911T2 (de) | 1994-01-27 |
| JPH01104189A (ja) | 1989-04-21 |
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