JP7492513B2 - フェロシアン化物の酸化還元電位を大きくするプロテアーゼの安定化剤を含む糖化タンパク質測定試薬、糖化タンパク質の測定方法、糖化タンパク質測定試薬の保存方法、及び糖化タンパク質測定試薬の安定化方法 - Google Patents

フェロシアン化物の酸化還元電位を大きくするプロテアーゼの安定化剤を含む糖化タンパク質測定試薬、糖化タンパク質の測定方法、糖化タンパク質測定試薬の保存方法、及び糖化タンパク質測定試薬の安定化方法 Download PDF

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Description

本発明は臨床検査薬に関し、糖化タンパク質測定試薬、糖化タンパク質の測定方法、糖化タンパク質測定試薬の保存方法、及び糖化タンパク質測定試薬の安定化方法に関する。
糖尿病の診断及び管理を行う上で、糖化タンパク質の測定は重要であり、過去約１～２ヶ月の平均血糖値を反映する糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ等）、過去約２週間の平均血糖値を反映する糖化アルブミン（ＧＡ）、及び血清中の糖化タンパク質の総称であるフルクトサミン（ＦＲＡ）等が日常的に測定されている。
精度が高く、安価で、簡便に糖化タンパク質を測定する方法として、酵素法が挙げられる。例えば特許文献１、２、３は、糖化タンパク質にプロテアーゼを作用させ、生じた糖化アミノ酸又は糖化ペプチドに作用するケトアミンオキシダーゼを用いて過酸化水素を発生させ、さらにペルオキシダーゼ、トリンダー試薬、４－アミノアンチピリンを用いて比色定量することで血清中の糖化タンパク質を測定できることを記載している。特許文献４は、糖化タンパク質にプロテアーゼを作用させ、生じた糖化アミノ酸又は糖化ペプチドに作用するケトアミンオキシダーゼを用いた際の酸素の消費量を発色反応又は酸素電極で測定することで血清中の糖化タンパク質を測定できることを記載している。特許文献５、６は、糖化ヘモグロビンや糖化アルブミンにプロテアーゼを作用させ、生じた糖化アミノ酸又は糖化ペプチドに作用するケトアミンオキシダーゼを用いて過酸化水素を発生させ、さらにペルオキシダーゼ、トリンダー試薬、及び４－アミノアンチピリンを用いて比色定量することで糖化ヘモグロビンや糖化アルブミンを測定できることを記載している。
これらの糖化タンパク質測定試薬には、試薬の安定性を改善するためにプロテアーゼ安定化剤が含まれている。例えば、特許文献６は、ジメチルスルホキシド、アルコール、水溶性カルシウム塩、食塩、第四級アンモニウム塩、又は第四級アンモニウム塩型陽イオン界面活性剤をプロテアーゼ安定化剤として開示している。また、測定試薬に関する言及はないものの、特許文献７は、プロテアーゼ阻害剤としてホウ酸、ボロン酸、フェニルボロン酸を含有することで液体洗剤中のプロテアーゼの貯蔵安定性を改善できると記載している。特許文献８は、油中水エマルジョン中の酵素としてのプロテアーゼを安定化させるために、ポリオールが有効であることを記載している。特許文献９、１０は、液体洗剤組成物中のペプチドアルデヒド、カルシウムイオン、ホウ素組成物、ポリオール、及び塩酸ベンズアミジンが、プロテアーゼの安定化剤として用いられることができると記載している。
一方、トリンダー試薬、及び４－アミノアンチピリンなどの色素を使用して過酸化水素を比色定量する試薬において、試薬中や検体中の測定成分以外の成分によって、トリンダー試薬と４－アミノアンチピリンが非特異的に縮合発色することがあり、試薬ブランクと呼ばれている。この試薬ブランクが大きいと、検体中の測定成分（シグナル）に対する試薬ブランク（ノイズ）の割合が大きくなり測定誤差の原因となるため、試薬ブランクは低い方が好ましい。例えば特許文献１１は、糖化タンパク質測定試薬において、プロテアーゼ含有試薬にカタラーゼを共存させ、試薬中の過酸化物を消去することで試薬ブランクを抑制する方法を記載している。特許文献１２では、フェロシアン化物とトリンダー試薬などの水素供与体とを含む試薬に、両性界面活性剤を配合することで試薬ブランクを抑制できることを記載している。
特開平６－４６８４６号公報 特開平５－１９２１９３号公報 国際公開第９６／３４９７７号 特開平２－１９５９００号公報 国際公開第１９９７／１３８７２号 国際公開第２００２／０６１１１９号 国際公開第１９９６／０４１８５９号 国際公開第１９９５／０２８０９２号 国際公開第９８／１３４６２号 国際公開第９８／１３４５９号 特開２００４－４９０６３号公報 特開２００６－１０７１１号公報
上述したように、様々な試薬ブランク抑制方法が提案されているが、トリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、前記プロテアーゼの安定化剤、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬において、試薬ブランクを十分に抑制する方法は開示されていない。そこで、本発明は、試薬ブランクを抑制した糖化タンパク質測定試薬、糖化タンパク質の測定方法、糖化タンパク質測定試薬の保存方法、及び糖化タンパク質測定試薬の安定化方法を提供することを課題の一部とする。
本発明者らの知見によれば、ビリルビン等の還元性物質による測定誤差を防止する目的でフェロシアン化物を糖化タンパク質測定試薬に含めると、試薬中のフェロシアン化物が保存中にフェリシアン化物に酸化され、試薬ブランクの原因となることがある。これに対し、本発明者は鋭意研究を行った結果、トリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、前記プロテアーゼの安定化剤、及びフェロシアン化物を含む試薬において、プロテアーゼの安定化剤とフェロシアン化物が混合した場合にフェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくするプロテアーゼの安定化剤を用いることにより、試薬ブランクを顕著に抑制できることを見出し、本発明を完成するに至った。
［１］少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、前記プロテアーゼの安定化剤、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬であって、
少なくとも前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
前記プロテアーゼの安定化剤が、当該プロテアーゼの安定化剤と混合した場合の前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする安定化剤であり、
前記酸化還元電位が、前記プロテアーゼの安定化剤及び前記フェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系における酸化還元電位である、
糖化タンパク質測定試薬。
［２］前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物の少なくとも一方が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤をさらに含む、
［１］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［３］前記トリンダー試薬含有部分組成物が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤をさらに含む、［２］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［４］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼをさらに含む、［１］から［３］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［５］前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物の少なくとも一方が、前記フェロシアン化物を含む、［１］から［４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［６］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤をさらに含む、［２］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［７］前記トリンダー試薬含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼをさらに含む、［１］から［３］及び［６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［８］前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物の少なくとも一方が、前記フェロシアン化物を含む、［６］又は［７］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［９］前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方が、前記プロテアーゼ、前記プロテアーゼの安定化剤及び前記フェロシアン化物をさらに含む、［１］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［１０］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、前記プロテアーゼ、前記プロテアーゼの安定化剤、及び前記フェロシアン化物をさらに含む、［１］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［１１］前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記プロテアーゼの安定化剤と前記フェロシアン化物を混合した場合の前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［１］から［１０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［１２］前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤と前記フェロシアン化物を含み、前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［１］から［５］及び［９］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［１３］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤と前記フェロシアン化物を含み、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物における前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［１］、［２］、［６］から［１０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［１４］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、キレート剤をさらに含む、［１］から［１３］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［１５］前記キレート剤が、エチレンジアミン四酢酸、グリコールエーテルジアミン四酢酸、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸、ニトリロトリス（メチルホスホン酸）、ニトリロ三酢酸、トランス－１，２－ジアミノシクロヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－四酢酸、イミノジ酢酸、ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”－五酢酸、１，３－ジアミノ－２－プロパノール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸、グルコン酸、りんご酸、こはく酸、クエン酸、サリチル酸、酒石酸、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシン、及びその塩からなる群より選択される、［１４］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［１６］前記キレート剤がクエン酸又はその塩である、［１４］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［１７］前記キレート剤の濃度が５μｍｏｌ／Ｌ以上１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［１４］から［１６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［１８］前記キレート剤の濃度が１０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［１７］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［１９］前記キレート剤の濃度が５０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［１７］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［２０］前記キレート剤の濃度が１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［１７］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［２１］前記キレート剤の濃度が２５ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［１７］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［２２］少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、前記プロテアーゼの安定化剤、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬であって、
少なくとも前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、
前記プロテアーゼの安定化剤が、当該プロテアーゼの安定化剤と混合した場合の前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくするプロテアーゼの安定化剤であり、
前記酸化還元電位が、前記プロテアーゼの安定化剤及び前記フェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系における酸化還元電位である、
糖化タンパク質測定試薬。
［２３］前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物のいずれかが、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤をさらに含む、［２２］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［２４］前記トリンダー試薬含有部分組成物が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤をさらに含む、［２３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［２５］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼをさらに含む、［２２］から［２４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［２６］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤をさらに含む、［２３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［２７］前記トリンダー試薬含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼをさらに含む、［２２］から［２４］、及び［２６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［２８］前記フェロシアン化物含有部分組成物が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤をさらに含む、［２３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［２９］前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記プロテアーゼの安定化剤と前記フェロシアン化物を混合した場合の前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［２２］から［２８］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［３０］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物と前記フェロシアン化物含有部分組成物を混合した場合の前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［２２］、［２３］及び［２６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［３１］前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記トリンダー試薬含有部分組成物と前記フェロシアン化物含有部分組成物を混合した場合の前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［２２］から［２５］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［３２］前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［２２］、［２３］及び［２８］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［３３］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物及び／又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が、キレート剤をさらに含む、［２２］から［３２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［３４］前記キレート剤が、エチレンジアミン四酢酸、グリコールエーテルジアミン四酢酸、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸、ニトリロトリス（メチルホスホン酸）、ニトリロ三酢酸、トランス－１，２－ジアミノシクロヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－四酢酸、イミノジ酢酸、ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”－五酢酸、１，３－ジアミノ－２－プロパノール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸、グルコン酸、りんご酸、こはく酸、クエン酸、サリチル酸、酒石酸、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシン、及びその塩からなる群より選択される、［３３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［３５］前記キレート剤がクエン酸又はその塩である、［３３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［３６］前記キレート剤の濃度が５μｍｏｌ／Ｌ以上１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［３３］から［３５］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［３７］前記キレート剤の濃度が１０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［３６］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［３８］前記キレート剤の濃度が５０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［３６］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［３９］前記キレート剤の濃度が１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［３６］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［４０］前記キレート剤の濃度が２５ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［３６］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［４１］前記プロテアーゼの安定化剤及び前記フェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系が、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸と、塩化ナトリウムと、をさらに含む、［１］から［４０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［４２］前記酸化還元電位が、銀／塩化銀電極を参照電極として用いて測定された酸化還元電位である、［１］から［４１］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［４３］前記酸化還元電位が、０．０５８Ｖより大きく０．４００Ｖ以下である、［１］から［４２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［４４］前記酸化還元電位が、０．０７０Ｖ以上である、［４３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［４５］前記酸化還元電位が、０．０８４Ｖ以上である、［４３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［４６］前記酸化還元電位が、０．１１２Ｖ以上である、［４３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［４７］前記酸化還元電位が、０．３００Ｖ以下である、［４３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［４８］前記酸化還元電位が、０．２５０Ｖ以下である、［４３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［４９］前記酸化還元電位が、０．２３５Ｖ以下である、［４３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［５０］前記プロテアーゼの安定化剤が、プロピレングリコール、トリメチレングリコール、エチレングリコール及びカルボキシフェニルボロン酸からなる群から選択される、［１］から［４９］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［５１］前記プロテアーゼの安定化剤がプロピレングリコールである、［１］から［４９］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［５２］前記カルボキシフェニルボロン酸が２－カルボキシフェニルボロン酸である、［５０］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［５３］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がプロピレングリコールであり、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１］から［５１］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［５４］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が２０ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［５３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［５５］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が２５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［５３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［５６］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が６２．５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［５３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［５７］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が６０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［５３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［５８］前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がプロピレングリコールであり、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２２］から［４０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［５９］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が２０ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［５８］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［６０］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が２５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［５８］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［６１］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が６２．５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［５８］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［６２］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が６０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［５８］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［６３］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がトリメチレングリコールであり、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１］から［５０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［６４］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［６３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［６５］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［６３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［６６］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が７５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［６３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［６７］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［６３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［６８］前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がトリメチレングリコールであり、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２２］から［４０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［６９］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［６８］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［７０］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［６８］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［７１］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が７５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［６８］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［７２］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［６８］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［７３］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がエチレングリコールであり、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１］から［５０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［７４］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［７３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［７５］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［７３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［７６］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が７５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［７３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［７７］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［７３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［７８］前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がエチレングリコールであり、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２２］から［４０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［７９］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［７８］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［８０］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［７８］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［８１］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が７５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［７８］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［８２］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［７８］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［８３］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸であり、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖоｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１］から［５０］及び［５２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［８４］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［８３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［８５］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［８３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［８６］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が７．５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［８３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［８７］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［８３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［８８］前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸であり、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖоｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２２］から［４０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［８９］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［８８］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［９０］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［８８］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［９１］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が７．５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［８８］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［９２］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［８８］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［９３］前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が液状である、［１］から［９２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［９４］前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物が液状である、［２２］から［４０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［９５］前記フェロシアン化物がフェロシアン化カリウムである、［１］から［９４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［９６］前記トリンダー試薬がＮ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリンである、［１］から［９５］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［９７］前記糖化タンパク質が糖化アルブミンである、［１］から［９６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［９８］２℃以上１０℃以下で保存される、［１］から［９７］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［９９］前記プロテアーゼの安定化剤がジメチルスルホキシドを除く、［１］から［９８］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［１００］前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方が、ペルオキシダーゼをさらに含む、［１］から［９９］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
［１０１］
糖化タンパク質の測定方法であって、
検体に、トリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、前記プロテアーゼの安定化剤、及びフェロシアン化物を接触させることと、
検体中に存在する糖化タンパク質に依存する発色を検出することと、
を含み、
少なくとも前記接触させることの前に、前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記接触させることの前に、前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤を含み、
前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方が、前記フェロシアン化物を含み、
前記プロテアーゼの安定化剤が、当該プロテアーゼの安定化剤と混合した場合の前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする安定化剤であり、
前記酸化還元電位が、前記プロテアーゼの安定化剤及び前記フェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系における酸化還元電位である、
糖化タンパク質の測定方法。
［１０２］前記トリンダー試薬含有部分組成物が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤を含む、［１０１］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１０３］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼを含む、［１０１］又は［１０２］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１０４］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤を含む、［１０１］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１０５］前記トリンダー試薬含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼを含む、［１０１］、［１０２］及び［１０４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１０６］前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方が、前記プロテアーゼ、前記プロテアーゼの安定化剤、及び前記フェロシアン化物を含む、［１０１］に記載の糖化タンパク質測定試薬の測定方法。
［１０７］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、前記プロテアーゼ、前記プロテアーゼの安定化剤、及び前記フェロシアン化物を含む、［１０１］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１０８］前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記プロテアーゼの安定化剤と前記フェロシアン化物を混合した場合の前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［１０１］から［１０７］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１０９］前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤と前記フェロシアン化物を含み、前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［１０１］から［１０３］及び［１０６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１１０］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤と前記フェロシアン化物を含み、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物における前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［１０１］、［１０４］、［１０６］及び［１０７］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１１１］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、キレート剤をさらに含む、［１０１］から［１１０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１１２］前記キレート剤が、エチレンジアミン四酢酸、グリコールエーテルジアミン四酢酸、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸、ニトリロトリス（メチルホスホン酸）、ニトリロ三酢酸、トランス－１，２－ジアミノシクロヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－四酢酸、イミノジ酢酸、ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”－五酢酸、１，３－ジアミノ－２－プロパノール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸、グルコン酸、りんご酸、こはく酸、クエン酸、サリチル酸、酒石酸、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシン、及びその塩からなる群より選択される、［１１１］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１１３］前記キレート剤がクエン酸又はその塩である、［１１１］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１１４］前記キレート剤の濃度が５μｍｏｌ／Ｌ以上１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［１１１］から［１１３］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１１５］前記キレート剤の濃度が１０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［１１４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１１６］前記キレート剤の濃度が５０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［１１４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１１７］前記キレート剤の濃度が１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［１１４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１１８］前記キレート剤の濃度が２５ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［１１４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１１９］
糖化タンパク質の測定方法であって、
検体に、トリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、前記プロテアーゼの安定化剤、及びフェロシアン化物を接触させることと、
検体中に存在する糖化タンパク質に依存する発色を検出することと、
を含み、
少なくとも前記接触させることの前に、前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記接触させることの前に、前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記接触させることの前に、前記フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、
前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物のいずれかが、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤を含み、
前記プロテアーゼの安定化剤が、当該プロテアーゼの安定化剤と混合した場合の前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする安定化剤であり、
前記酸化還元電位が、前記プロテアーゼの安定化剤及び前記フェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系における酸化還元電位である、
糖化タンパク質の測定方法。
［１２０］前記トリンダー試薬含有部分組成物が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤を含む、［１１９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１２１］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼを含む、［１１９］又は［１２０］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１２２］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤を含む、［１１９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１２３］前記トリンダー試薬含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼを含む、［１１９］、［１２０］及び［１２２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１２４］前記フェロシアン化物含有部分組成物が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤を含む、［１１９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１２５］前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記プロテアーゼの安定化剤と前記フェロシアン化物を混合した場合の前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［１１９］から［１２４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１２６］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物と前記フェロシアン化物含有部分組成物を混合した場合の前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［１１９］又は［１２２］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１２７］前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記トリンダー試薬含有部分組成物と前記フェロシアン化物含有部分組成物を混合した場合の前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［１１９］から［１２１］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１２８］前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［１１９］又は［１２４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１２９］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物及び／又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が、キレート剤をさらに含む、［１１９］から［１２８］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１３０］前記キレート剤が、エチレンジアミン四酢酸、グリコールエーテルジアミン四酢酸、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸、ニトリロトリス（メチルホスホン酸）、ニトリロ三酢酸、トランス－１，２－ジアミノシクロヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－四酢酸、イミノジ酢酸、ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”－五酢酸、１，３－ジアミノ－２－プロパノール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸、グルコン酸、りんご酸、こはく酸、クエン酸、サリチル酸、酒石酸、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシン、及びその塩からなる群より選択される、［１２９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１３１］前記キレート剤がクエン酸又はその塩である、［１２９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１３２］前記キレート剤の濃度が５μｍｏｌ／Ｌ以上１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［１２９］から［１３１］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１３３］前記キレート剤の濃度が１０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［１３２］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１３４］前記キレート剤の濃度が５０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［１３２］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１３５］前記キレート剤の濃度が１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［１３２］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１３６］前記キレート剤の濃度が２５ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［１３２］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１３７］前記プロテアーゼの安定化剤及び前記フェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系が、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸と、塩化ナトリウムと、をさらに含む、［１０１］から［１３６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１３８］前記酸化還元電位が、銀／塩化銀電極を参照電極として用いて測定された酸化還元電位である、［１０１］から［１３７］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１３９］前記酸化還元電位が、０．０５８Ｖより大きく０．４００Ｖ以下である、［１０１］から［１３８］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１４０］前記酸化還元電位が、０．０７０Ｖ以上である、［１３９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１４１］前記酸化還元電位が、０．０８４Ｖ以上である、［１３９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１４２］前記酸化還元電位が、０．１１２Ｖ以上である、［１３９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１４３］前記酸化還元電位が、０．３００Ｖ以下である、［１３９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１４４］前記酸化還元電位が、０．２５０Ｖ以下である、［１３９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１４５］前記酸化還元電位が、０．２３５Ｖ以下である、［１３９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１４６］前記プロテアーゼの安定化剤が、プロピレングリコール、トリメチレングリコール、エチレングリコール及びカルボキシフェニルボロン酸からなる群から選択される、［１０１］から［１４５］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１４７］前記プロテアーゼの安定化剤がプロピレングリコールである、［１０１］から［１４５］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１４８］前記カルボキシフェニルボロン酸が２－カルボキシフェニルボロン酸である、［１４６］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１４９］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がプロピレングリコールであり、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１０１］から［１４７］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１５０］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が２０ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［１４９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１５１］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が２５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［１４９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１５２］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が６２．５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［１４９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１５３］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が６０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［１４９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１５４］前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がプロピレングリコールであり、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１１９］から［１３６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１５５］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が２０ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［１５４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１５６］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が２５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［１５４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１５７］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が６２．５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［１５４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１５８］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が６０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［１５４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１５９］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がトリメチレングリコールであり、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１０１］から［１４６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１６０］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［１５９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１６１］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［１５９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１６２］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が７５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［１５９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１６３］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［１５９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１６４］前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がトリメチレングリコールであり、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１１９］から［１３６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１６５］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［１６４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１６６］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［１６４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１６７］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が７５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［１６４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１６８］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［１６４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１６９］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がエチレングリコールであり、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１０１］から［１４６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１７０］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［１６９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１７１］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［１６９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１７２］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が７５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［１６９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１７３］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［１６９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１７４］前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がエチレングリコールであり、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１１９］から［１３６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１７５］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［１７４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１７６］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［１７４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１７７］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が７５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［１７４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１７８］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［１７４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１７９］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸であり、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖоｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１０１］から［１４６］及び［１４８］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１８０］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［１７９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１８１］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［１７９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１８２］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が７．５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［１７９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１８３］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［１７９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１８４］前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸であり、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖоｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１１９］から［１３６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１８５］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［１８４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１８６］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［１８４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１８７］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が７．５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［１８４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１８８］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［１８４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１８９］前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が液状である、［１０１］から［１８８］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１９０］前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物が液状である、［１１９］から［１３６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１９１］前記フェロシアン化物がフェロシアン化カリウムである、［１０１］から［１９０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１９２］前記トリンダー試薬がＮ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリンである、［１０１］から［１９１］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１９３］前記糖化タンパク質が糖化アルブミンである、［１０１］から［１９２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１９４］前記トリンダー試薬含有部分組成物が２℃以上１０℃以下で保存される、［１０１］から［１９３］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１９５］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が２℃以上１０℃以下で保存される、［１０１］から［１９４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１９６］前記フェロシアン化物含有部分組成物が２℃以上１０℃以下で保存される、［１１９］から［１３６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１９７］前記プロテアーゼの安定化剤がジメチルスルホキシドを除く、［１０１］から［１９６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１９８］前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方が、ペルオキシダーゼをさらに含む、［１０１］から［１９７］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
［１９９］
糖化タンパク質測定試薬の保存方法であって、
少なくともトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
前記トリンダー試薬含有部分組成物を保存することと、
少なくとも４－アミノアンチピリンを含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物を保存することと、
を含み、
前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方が、プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤をさらに含み、
前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方が、フェロシアン化物をさらに含み、
前記プロテアーゼの安定化剤が、当該プロテアーゼの安定化剤と混合した場合の前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする安定化剤であり、
前記酸化還元電位が、前記プロテアーゼの安定化剤及び前記フェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系における酸化還元電位である、
糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２００］前記トリンダー試薬含有部分組成物が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤を含む、［１９９］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２０１］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼを含む、［１９９］又は［２００］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２０２］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤を含む、［１９９］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２０３］前記トリンダー試薬含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼを含む、［１９９］、［２００］、及び［２０２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２０４］前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方が、前記プロテアーゼ、前記プロテアーゼの安定化剤、及び前記フェロシアン化物を含む、［１９９］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２０５］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、前記プロテアーゼ、前記プロテアーゼの安定化剤、及び前記フェロシアン化物を含む、［１９９］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２０６］前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記プロテアーゼの安定化剤と前記フェロシアン化物を混合した場合の前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［１９９］から［２０５］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２０７］前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤と前記フェロシアン化物を含み、前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［１９９］から［２０１］及び［２０４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２０８］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤と前記フェロシアン化物を含み、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物における前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［１９９］、［２０２］、［２０４］及び［２０５］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２０９］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、キレート剤をさらに含む、［１９９］から［２０８］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２１０］前記キレート剤が、エチレンジアミン四酢酸、グリコールエーテルジアミン四酢酸、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸、ニトリロトリス（メチルホスホン酸）、ニトリロ三酢酸、トランス－１，２－ジアミノシクロヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－四酢酸、イミノジ酢酸、ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”－五酢酸、１，３－ジアミノ－２－プロパノール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸、グルコン酸、りんご酸、こはく酸、クエン酸、サリチル酸、酒石酸、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシン、及びその塩からなる群より選択される、［２０９］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２１１］前記キレート剤がクエン酸又はその塩である、［２０９］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２１２］前記キレート剤の濃度が５μｍｏｌ／Ｌ以上１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［２０９］から［２１１］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２１３］前記キレート剤の濃度が１０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［２１２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２１４］前記キレート剤の濃度が５０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［２１２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２１５］前記キレート剤の濃度が１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［２１２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２１６］前記キレート剤の濃度が２５ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［２１２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２１７］
糖化タンパク質測定試薬の保存方法であって、
少なくともトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
前記トリンダー試薬含有部分組成物を保存することと、
少なくとも４－アミノアンチピリンを含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物を保存することと、
少なくともフェロシアン化物を含むフェロシアン化物含有部分組成物を調製することと、
前記フェロシアン化物含有部分組成物を保存することと、
を含み、
前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物のいずれかが、プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤を含み、
前記プロテアーゼの安定化剤が、当該プロテアーゼの安定化剤と混合した場合の前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする安定化剤であり、
前記酸化還元電位が、前記プロテアーゼの安定化剤及び前記フェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系における酸化還元電位である、
糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２１８］前記トリンダー試薬含有部分組成物が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤を含む、［２１７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２１９］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼを含む、［２１７］又は［２１８］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２２０］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤を含む、［２１７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２２１］前記トリンダー試薬含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼを含む、［２１７］、［２１８］、及び［２２０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２２２］前記フェロシアン化物含有部分組成物が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤を含む、［２１７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２２３］前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記プロテアーゼの安定化剤と前記フェロシアン化物を混合した場合の前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［２１７］から［２２２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２２４］前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記トリンダー試薬含有部分組成物と前記フェロシアン化物含有部分組成物を混合した場合の前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［２１７］から［２１９］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２２５］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物と前記フェロシアン化物含有部分組成物を混合した場合の前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［２１７］又は［２２０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２２６］前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［２１７］又は［２２２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２２７］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物及び／又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が、キレート剤をさらに含む、［２１７］から［２２６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２２８］前記キレート剤が、エチレンジアミン四酢酸、グリコールエーテルジアミン四酢酸、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸、ニトリロトリス（メチルホスホン酸）、ニトリロ三酢酸、トランス－１，２－ジアミノシクロヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－四酢酸、イミノジ酢酸、ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”－五酢酸、１，３－ジアミノ－２－プロパノール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸、グルコン酸、りんご酸、こはく酸、クエン酸、サリチル酸、酒石酸、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシン、及びその塩からなる群より選択される、［２２７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２２９］前記キレート剤がクエン酸又はその塩である、［２２７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２３０］前記キレート剤の濃度が５μｍｏｌ／Ｌ以上１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［２２７］から［２２９］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２３１］前記キレート剤の濃度が１０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［２３０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２３２］前記キレート剤の濃度が５０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［２３０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２３３］前記キレート剤の濃度が１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［２３０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２３４］前記キレート剤の濃度が２５ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［２３０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２３５］前記プロテアーゼの安定化剤及び前記フェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系が、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸と、塩化ナトリウムと、をさらに含む、［１９９］から［２３４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２３６］前記酸化還元電位が、銀／塩化銀電極を参照電極として用いて測定された酸化還元電位である、［１９９］から［２３５］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２３７］前記酸化還元電位が、０．０５８Ｖより大きく０．４００Ｖ以下である、［１９９］から［２３６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２３８］前記酸化還元電位が、０．０７０Ｖ以上である、［２３７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２３９］前記酸化還元電位が、０．０８４Ｖ以上である、［２３７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２４０］前記酸化還元電位が、０．１１２Ｖ以上である、［２３７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２４１］前記酸化還元電位が、０．３００Ｖ以下である、［２３７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２４２］前記酸化還元電位が、０．２５０Ｖ以下である、［２３７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２４３］前記酸化還元電位が、０．２３５Ｖ以下である、［２３７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２４４］前記プロテアーゼの安定化剤が、プロピレングリコール、トリメチレングリコール、エチレングリコール及びカルボキシフェニルボロン酸からなる群から選択される、［１９９］から［２４３］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２４５］前記プロテアーゼの安定化剤がプロピレングリコールである、［１９９］から［２４３］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２４６］前記カルボキシフェニルボロン酸が２－カルボキシフェニルボロン酸である、［２４４］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２４７］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がプロピレングリコールであり、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１９９］から［２４５］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２４８］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が２０ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［２４７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２４９］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が２５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［２４７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２５０］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が６２．５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［２４７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２５１］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が６０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［２４７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２５２］前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がプロピレングリコールであり、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２１７］から［２３４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２５３］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が２０ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［２５２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２５４］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が２５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［２５２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２５５］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が６２．５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［２５２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２５６］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が６０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［２５２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２５７］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がトリメチレングリコールであり、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１９９］から［２４４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２５８］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［２５７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２５９］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［２５７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２６０］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が７５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［２５７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２６１］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［２５７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２６２］前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がトリメチレングリコールであり、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２１７］から［２３４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２６３］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［２６２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２６４］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［２６２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２６５］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が７５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［２６２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２６６］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［２６２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２６７］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がエチレングリコールであり、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１９９］から［２４４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２６８］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［２６７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２６９］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［２６７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２７０］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が７５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［２６７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２７１］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［２６７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２７２］前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がエチレングリコールであり、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２１７］から［２３４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２７３］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［２７２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２７４］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［２７２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２７５］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が７５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［２７２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２７６］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［２７２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２７７］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸であり、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖоｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１９９］から［２４４］及び［２４６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２７８］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［２７７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２７９］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［２７７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２８０］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が７．５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［２７７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２８１］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［２７７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２８２］前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸であり、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖоｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２１７］から［２３４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２８３］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［２８２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２８４］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［２８２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２８５］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が７．５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［２８２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２８６］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［２８２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２８７］前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が液状である、［１９９］から［２８６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２８８］前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物が液状である、［２１７］から［２３４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２８９］前記フェロシアン化物がフェロシアン化カリウムである、［１９９］から［２８８］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２９０］前記トリンダー試薬がＮ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリンである、［１９９］から［２８９］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２９１］前記糖化タンパク質が糖化アルブミンである、［１９９］から［２９０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２９２］前記トリンダー試薬含有部分組成物が２℃以上１０℃以下で保存される、［１９９］から［２９１］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２９３］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が２℃以上１０℃以下で保存される、［１９９］から［２９２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２９４］前記フェロシアン化物含有部分組成物が２℃以上１０℃以下で保存される、［２１７］から［２３４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２９５］前記プロテアーゼの安定化剤がジメチルスルホキシドを除く、［１９９］から［２９４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２９６］前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方が、ペルオキシダーゼをさらに含む、［１９９］から［２９５］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
［２９７］
糖化タンパク質測定試薬の安定化方法であって、
少なくともトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
少なくとも４－アミノアンチピリンを含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
を含み、
前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方に、プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤を含ませ、
前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方に、フェロシアン化物を含ませ、
前記プロテアーゼの安定化剤が、当該プロテアーゼの安定化剤と混合した場合の前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする安定化剤であり、
前記酸化還元電位が、前記プロテアーゼの安定化剤及び前記フェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系における酸化還元電位である、
糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［２９８］前記トリンダー試薬含有部分組成物に、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤を含ませる、［２９７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［２９９］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物に、糖化アミノ酸オキシダーゼを含ませる、［２９７］又は［２９８］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３００］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物に、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤を含ませる、［２９７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３０１］前記トリンダー試薬含有部分組成物に、糖化アミノ酸オキシダーゼを含ませる、［２９７］、［２９８］、及び［３００］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３０２］前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方に、前記プロテアーゼ、前記プロテアーゼの安定化剤、及び前記フェロシアン化物を含ませる、［２９７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３０３］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物に、前記プロテアーゼ、前記プロテアーゼの安定化剤、及び前記フェロシアン化物を含ませる、［２９７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３０４］前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記プロテアーゼの安定化剤と前記フェロシアン化物を混合した場合の前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［２９７］から［３０３］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３０５］前記トリンダー試薬含有部分組成物に前記プロテアーゼの安定化剤と前記フェロシアン化物を含ませ、前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［２９７］から［２９９］及び［３０２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３０６］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物に前記プロテアーゼの安定化剤と前記フェロシアン化物を含ませ、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物における前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［２９７］、［３００］、［３０２］及び［３０３］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３０７］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物に、キレート剤をさらに含ませる、［２９７］から［３０６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３０８］前記キレート剤が、エチレンジアミン四酢酸、グリコールエーテルジアミン四酢酸、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸、ニトリロトリス（メチルホスホン酸）、ニトリロ三酢酸、トランス－１，２－ジアミノシクロヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－四酢酸、イミノジ酢酸、ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”－五酢酸、１，３－ジアミノ－２－プロパノール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸、グルコン酸、りんご酸、こはく酸、クエン酸、サリチル酸、酒石酸、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシン、及びその塩からなる群より選択される、［３０７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３０９］前記キレート剤がクエン酸又はその塩である、［３０７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３１０］前記キレート剤の濃度が５μｍｏｌ／Ｌ以上１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［３０７］から［３０９］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３１１］前記キレート剤の濃度が１０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［３１０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３１２］前記キレート剤の濃度が５０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［３１０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３１３］前記キレート剤の濃度が１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［３１０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３１４］前記キレート剤の濃度が２５ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［３１０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３１５］
糖化タンパク質測定試薬の安定化方法であって、
少なくともトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
少なくとも４－アミノアンチピリンを含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
少なくともフェロシアン化物を含むフェロシアン化物含有部分組成物を調製することと、
を含み、
前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物のいずれかに、プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤を含ませ、
前記プロテアーゼの安定化剤が、当該プロテアーゼの安定化剤と混合した場合の前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする安定化剤であり、
前記酸化還元電位が、前記プロテアーゼの安定化剤及び前記フェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系における酸化還元電位である、
糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３１６］前記トリンダー試薬含有部分組成物に、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤を含ませる、［３１５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３１７］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物に、糖化アミノ酸オキシダーゼを含ませる、［３１５］又は［３１６］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３１８］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物に、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤を含ませる、［３１５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３１９］前記トリンダー試薬含有部分組成物に、糖化アミノ酸オキシダーゼを含ませる、［３１５］、［３１６］、及び［３１８］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３２０］前記フェロシアン化物含有部分組成物に、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤を含ませる、［３１５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３２１］前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記プロテアーゼの安定化剤と前記フェロシアン化物を混合した場合の前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［３１５］から［３２０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３２２］前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記トリンダー試薬含有部分組成物と前記フェロシアン化物含有部分組成物を混合した場合の前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［３１５］から［３１７］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３２３］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物と前記フェロシアン化物含有部分組成物を混合した場合の前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［３１５］及び［３１８］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３２４］前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度である、［３１５］及び［３２０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３２５］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物及び／又は前記フェロシアン化物含有部分組成物に、キレート剤をさらに含ませる、［３１５］から［３２４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３２６］前記キレート剤が、エチレンジアミン四酢酸、グリコールエーテルジアミン四酢酸、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸、ニトリロトリス（メチルホスホン酸）、ニトリロ三酢酸、トランス－１，２－ジアミノシクロヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－四酢酸、イミノジ酢酸、ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”－五酢酸、１，３－ジアミノ－２－プロパノール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸、グルコン酸、りんご酸、こはく酸、クエン酸、サリチル酸、酒石酸、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシン、及びその塩からなる群より選択される、［３２５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３２７］前記キレート剤がクエン酸又はその塩である、［３２５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３２８］前記キレート剤の濃度が５μｍｏｌ／Ｌ以上１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［３２５］から［３２７］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３２９］前記キレート剤の濃度が１０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［３２８］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３３０］前記キレート剤の濃度が５０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［３２８］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３３１］前記キレート剤の濃度が１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［３２８］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３３２］前記キレート剤の濃度が２５ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［３２８］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３３３］前記プロテアーゼの安定化剤及び前記フェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系が、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸と、塩化ナトリウムと、をさらに含む、［２９７］から［３３２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３３４］前記酸化還元電位が、銀／塩化銀電極を参照電極として用いて測定された酸化還元電位である、［２９７］から［３３３］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３３５］前記酸化還元電位が、０．０５８Ｖより大きく０．４００Ｖ以下である、［２９７］から［３３４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３３６］前記酸化還元電位が、０．０７０Ｖ以上である、［３３５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３３７］前記酸化還元電位が、０．０８４Ｖ以上である、［３３５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３３８］前記酸化還元電位が、０．１１２Ｖ以上である、［３３５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３３９］前記酸化還元電位が、０．３００Ｖ以下である、［３３５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３４０］前記酸化還元電位が、０．２５０Ｖ以下である、［３３５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３４１］前記酸化還元電位が、０．２３５Ｖ以下である、［３３５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３４２］前記プロテアーゼの安定化剤が、プロピレングリコール、トリメチレングリコール、エチレングリコール及びカルボキシフェニルボロン酸からなる群から選択される、［２９７］から［３４１］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３４３］前記プロテアーゼの安定化剤がプロピレングリコールである、［２９７］から［３４１］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３４４］前記カルボキシフェニルボロン酸が２－カルボキシフェニルボロン酸である、［３４２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３４５］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がプロピレングリコールであり、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２９７］から［３４３］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３４６］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が２０ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［３４５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３４７］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が２５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［３４５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３４８］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が６２．５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［３４５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３４９］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が６０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［３４５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３５０］前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がプロピレングリコールであり、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［３１５］から［３３２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３５１］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が２０ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［３５０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３５２］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が２５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［３５０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３５３］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が６２．５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［３５０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３５４］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が６０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［３５０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３５５］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がトリメチレングリコールであり、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２９７］から［３４２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３５６］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［３５５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３５７］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［３５５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３５８］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が７５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［３５５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３５９］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［３５５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３６０］前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がトリメチレングリコールであり、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［３１５］から［３３２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３６１］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［３６０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３６２］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［３６０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３６３］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が７５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［３６０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３６４］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［３６０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３６５］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がエチレングリコールであり、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２９７］から［３４２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３６６］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［３６５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３６７］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［３６５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３６８］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が７５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［３６５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３６９］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［３６５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３７０］前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がエチレングリコールであり、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［３１５］から［３３２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３７１］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［３７０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３７２］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［３７０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３７３］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が７５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［３７０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３７４］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［３７０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３７５］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸であり、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖоｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２９７］から［３４２］及び［３４４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３７６］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［３７５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３７７］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［３７５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３７８］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が７．５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［３７５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３７９］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［３７５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３８０］前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸であり、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖоｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［３１５］から［３３２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３８１］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．４５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［３８０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３８２］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［３８０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３８３］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が７．５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［３８０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３８４］前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［３８０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３８５］前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が液状である、［２９７］から［３８４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３８６］前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物が液状である、［３１５］から［３３２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３８７］前記フェロシアン化物がフェロシアン化カリウムである、［２９７］から［３８６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３８８］前記トリンダー試薬がＮ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリンである、［２９７］から［３８７］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３８９］前記糖化タンパク質が糖化アルブミンである、［２９７］から［３８８］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３９０］前記トリンダー試薬含有部分組成物が２℃以上１０℃以下で保存される、［２９７］から［３８９］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３９１］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が２℃以上１０℃以下で保存される、［２９７］から［３９０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３９２］前記フェロシアン化物含有部分組成物が２℃以上１０℃以下で保存される、［３１５］から［３３２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３９３］前記プロテアーゼの安定化剤がジメチルスルホキシドを除く、［２９７］から［３９２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３９４］前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方が、ペルオキシダーゼをさらに含む、［２９７］から［３９３］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３９５］トリンダー試薬含有部分組成物と４－アミノアンチピリン含有部分組成物を５℃で２８日保存した後の測定感度に対する、トリンダー試薬含有部分組成物と４－アミノアンチピリン含有部分組成物を５℃で１年保存した後の測定感度の割合が８０％以上１１０％以下である、［２９７］から［３９４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
［３９６］トリンダー試薬含有部分組成物、４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及びフェロシアン化物含有部分組成物を５℃で２８日保存した後の測定感度に対する、トリンダー試薬含有部分組成物、４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及びフェロシアン化物含有部分組成物を５℃で１年保存した後の測定感度の割合が８０％以上１１０％以下である、［３１５］から［３３２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
本発明によれば、試薬ブランク上昇を抑制した、糖化タンパク質測定試薬、糖化タンパク質の測定方法、糖化タンパク質測定試薬の保存方法、及び糖化タンパク質測定試薬の安定化方法を提供することが可能である。
実施例２に係る部分組成物を１４日保存した後の試薬ブランクと、フェロシアン化物の酸化還元電位と、の関係を示すグラフである。 実施例４に係るフェロシアン化物含有液状部分組成物のｐＨ、及びフェロシアン化物含有液状部分組成物へ添加されたキレート剤と、試薬ブランクと、の関係を示すグラフである。 実施例７に係る部分組成物を１年保存した後の試薬ブランクと、フェロシアン化物の酸化還元電位の関係を示すグラフである。 実施例９に係るフェロシアン化物含有液状部分組成物のｐＨ、及びフェロシアン化物含有液状部分組成物へ添加されたキレート剤と、試薬ブランクと、の関係を示すグラフである。
以下、本発明の好適な実施の形態（以下において、「実施形態」という。）について詳細に説明する。なお以下に示す実施形態は、この発明の技術的思想を具体化するための装置や方法を例示するものであって、この発明の技術的思想は構成部材の組み合わせ等を下記のものに特定するものではない。この発明の技術的思想は、特許請求の範囲において種々の変更を加えることができる。
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬は、少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、前記プロテアーゼの安定化剤、及びフェロシアン化物を含み、少なくともトリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、少なくとも４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、安定化剤が、当該安定化剤と混合した場合のフェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする安定化剤であって、酸化還元電位が、安定化剤及びフェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系における酸化還元電位である。
本開示において、試薬とは、測定対象を測定する試薬であり、例えば部分組成物の集合体である。試薬は、それのみで測定対象を検出可能である。部分組成物とは、試薬の一部を構成する組成物である。部分組成物は、それのみでは測定対象を測定することができない。
フェロシアン化物は、トリンダー試薬含有部分組成物及び４－アミノアンチピリン含有部分組成物の少なくともいずれかに含まれていてもよい。あるいは、フェロシアン化物は、トリンダー試薬含有部分組成物及び４－アミノアンチピリン含有部分組成物とは異なるフェロシアン化物含有部分組成物に含まれていてもよい。
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬は、キットの形態で保存、流通及び使用されてもよい。キットの形態としては、例えば２試薬系キット、３試薬系キット等が挙げられる。例えば２試薬系キットの場合、フェロシアン化物は、トリンダー試薬含有部分組成物及び４－アミノアンチピリン含有部分組成物の少なくともいずれかに含まれる。例えば３試薬系キットの場合、フェロシアン化物は、トリンダー試薬含有部分組成物及び４－アミノアンチピリン含有部分組成物とは異なるフェロシアン化物含有部分組成物に含まれる。トリンダー試薬と、４－アミノアンチピリンと、フェロシアン化物と、を別保存する形態である３試薬系キットは、２試薬系キットより感度低下が抑制されているため、検体感度残存率が高い傾向にある。ただし、実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬が２試薬系であることを妨げない。
糖化タンパク質は、例えば糖化アルブミン（ＧＡ）、糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ等）である。
トリンダー試薬含有部分組成物は、糖化アミノ酸オキシダーゼ、フェロシアン化物、プロテアーゼ、プロテアーゼの安定化剤、及びペルオキシダーゼの少なくともいずれかをさらに含んでいてもよい。またはトリンダー試薬含有部分組成物は、糖化アミノ酸オキシダーゼ、フェロシアン化物、及びペルオキシダーゼの少なくともいずれかをさらに含んでいてもよい。この場合、４－アミノアンチピリン含有部分組成物及びフェロシアン化物含有部分組成物の少なくともいずれかが、プロテアーゼ及びプロテアーゼの安定化剤をさらに含み得る。４－アミノアンチピリン含有部分組成物は、フェロシアン化物をさらに含んでいてもよい。また、４－アミノアンチピリン含有部分組成物及びフェロシアン化物含有部分組成物の少なくともいずれかは、糖化アミノ酸オキシダーゼまたはペルオキシダーゼをさらに含んでいてもよい。
４－アミノアンチピリン含有部分組成物は、糖化アミノ酸オキシダーゼ、フェロシアン化物、プロテアーゼ、プロテアーゼの安定化剤、及びペルオキシダーゼの少なくともいずれかをさらに含んでいてもよい。または４－アミノアンチピリン含有部分組成物は、糖化アミノ酸オキシダーゼ、フェロシアン化物、及びペルオキシダーゼの少なくともいずれかをさらに含んでいてもよい。この場合、トリンダー試薬含有部分組成物及びフェロシアン化物含有部分組成物の少なくともいずれかが、プロテアーゼ及びプロテアーゼの安定化剤をさらに含み得る。トリンダー試薬含有部分組成物は、フェロシアン化物をさらに含んでいてもよい。また、トリンダー試薬含有部分組成物及びフェロシアン化物含有部分組成物の少なくともいずれかは、糖化アミノ酸オキシダーゼまたはペルオキシダーゼをさらに含んでいてもよい。
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬と、測定対象の検体（サンプル検体）に含まれるグルコースが結合したタンパク質（糖化タンパク質）と、を接触させると、糖化タンパク質がプロテアーゼにより糖化アミノ酸あるいは糖化ペプチドに分解される。糖化アミノ酸あるいは糖化ペプチドは、糖化アミノ酸オキシダーゼによりアミノ酸あるいはペプチドとグルコソンに分解される。また、この際、糖化アミノ酸オキシダーゼにより、水と酸素が反応して、過酸化水素が生じる。トリンダー試薬と、４－アミノアンチピリンと、は、過酸化水素及びペルオキシダーゼの存在下、酸化縮合反応し呈色する。例えばトリンダー試薬として、Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン（ＴＯＤＢ）を用いた場合、青紫色に呈色する発色反応が生じる。青紫色の呈色は、波長５４６ｎｍにおける吸光度の測定により検出される。波長５４６ｎｍにおける吸光度に基づき、検体に含まれる糖化タンパク質の濃度が定量される。
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、フェロシアン化物がトリンダー試薬含有部分組成物及び４－アミノアンチピリン含有部分組成物の少なくともいずれかに含まれている場合、実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬の通常の使用方法においては、サンプル検体に最初にトリンダー試薬含有部分組成物を添加し、数分、例えば５分から１０分程度、サンプル検体とトリンダー試薬含有部分組成物の混合物を放置して、その後、当該混合物に４－アミノアンチピリン含有部分組成物を添加し、発色の程度を測定することによって、糖化タンパク質が測定できる。ただし、場合によっては、サンプル検体に添加する際に、トリンダー試薬含有部分組成物と４－アミノアンチピリン含有部分組成物とを同時に添加混合してもよいし、トリンダー試薬含有部分組成物と４－アミノアンチピリン含有部分組成物を予め混合して直ぐに使用してもよいし、先ず４－アミノアンチピリン含有部分組成物をサンプル検体に添加し、その後、トリンダー試薬含有部分組成物を添加してもよい。
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれる場合、例えば、予め、４－アミノアンチピリン含有部分組成物とフェロシアン化物含有部分組成物とが混合され、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有部分組成物が用意される。その場合、サンプル検体に最初にトリンダー試薬含有部分組成物を添加し、数分、例えば５分から１０分程度、サンプル検体とトリンダー試薬含有部分組成物の混合物を放置して、その後、当該混合物に４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有部分組成物を添加し、発色の程度を測定することによって、糖化タンパク質が測定できる。ただし、場合によっては、サンプル検体に添加する際に、トリンダー試薬含有部分組成物と４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有部分組成物とを同時に添加混合してもよいし、トリンダー試薬含有部分組成物と４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有部分組成物を予め混合して直ぐに使用してもよいし、先ず４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有部分組成物をサンプル検体に添加し、その後、トリンダー試薬含有部分組成物を添加してもよい。または、予め、トリンダー試薬含有部分組成物とフェロシアン化物含有部分組成物とが混合され、トリンダー試薬及びフェロシアン化物含有部分組成物を用意してもよい。その場合、サンプル検体に最初に４－アミノアンチピリン含有部分組成物を添加し、数分、例えば５分から１０分程度、サンプル検体と４－アミノアンチピリン含有部分組成物の混合物を放置して、その後、当該混合物にトリンダー試薬及びフェロシアン化物含有部分組成物を添加し、発色の程度を測定することによって、糖化タンパク質が測定できる。ただし、場合によっては、サンプル検体に添加する際に、４－アミノアンチピリン含有部分組成物とトリンダー試薬及びフェロシアン化物含有部分組成物とを同時に添加混合してもよいし、４－アミノアンチピリン含有部分組成物とトリンダー試薬及びフェロシアン化物含有部分組成物を予め混合して直ぐに使用してもよいし、先ずトリンダー試薬及びフェロシアン化物含有部分組成物をサンプル検体に添加し、その後、４－アミノアンチピリン含有部分組成物を添加してもよい。または、トリンダー試薬含有部分組成物と４－アミノアンチピリン含有部分組成物を予め混合し、トリンダー試薬及び４－アミノアンチピリン含有部分組成物としても良い。その場合、まずフェロシアン化物含有部分組成物とサンプル検体を混合し、数分、例えば５分から１０分程度、サンプル検体とフェロシアン化物含有部分組成物の混合物を放置して、その後、トリンダー試薬及び４－アミノアンチピリン含有部分組成物を混合してもよい。また場合によってはサンプル検体に添加する際に、フェロシアン化物含有部分組成物とトリンダー試薬及び４－アミノアンチピリン含有部分組成物とを同時に添加混合してもよいし、フェロシアン化物含有部分組成物とトリンダー試薬及び４－アミノアンチピリン含有部分組成物を予め混合し添加してもよいし、まずトリンダー試薬及び４－アミノアンチピリン含有部分組成物をサンプル検体と混合してから、フェロシアン化物含有部分組成物を添加しても良い。あるいは、サンプル検体とトリンダー試薬含有部分組成物と４－アミノアンチピリン含有部分組成物とフェロシアン化物含有部分組成物を同時に添加混合してもよいし、トリンダー試薬含有部分組成物と４－アミノアンチピリン含有部分組成物とフェロシアン化物含有部分組成物を予め混合し、サンプル検体に添加してもよい。
糖化タンパク質を定量するためには、通常、糖化タンパク質濃度が既知である１つ以上の検量用物質（キャリブレーター）を測定し、キャリブレーションを行うことが多い。キャリブレーターの作製方法やキャリブレーション方法としては公知情報に基づき当業者は実施することができるが、例えば、国際公開第２００１／０９４６１８号や特開２００５－２６１３８３号公報等の記載を参考に適宜実施することができる。また、測定試薬保存中の感度低下による測定値の変動を補正するために、例えば１カ月に１回等定期的にキャリブレーションを行うのが通常である。一方、感度低下が抑制された試薬であれば、初回のみキャリブレーションを行えば、その後の測定ではキャリブレーションを行わなくても長期に渡って安定した測定値を得ることができ、ノンキャリブレーション測定が可能となることが知られている。
プロテアーゼはトリンダー試薬含有部分組成物、４－アミノアンチピリン含有部分組成物及びフェロシアン化物含有部分組成物の少なくともいずれかに含まれ得る。プロテアーゼは、糖化タンパク質を分解して糖化アミノ酸又は糖化ペプチドを有効に生成するものであればよい。プロテアーゼは、例えば、エンドペプチダーゼである。エンドペプチダーゼの例としては、セリンエンドペプチダーゼが挙げられる。プロテアーゼは、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属、トリチラチウム（Ｔｒｉｔｉｒａｃｈｉｕｍ）属、及びアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属等の微生物由来プロテアーゼ並びにその遺伝子組み換え型プロテアーゼが挙げられる。バチルス属由来プロテアーゼの例としては、アルカラーゼ、ニュートラーゼ、エスペラーゼ、サビナーゼ（以上、ノボザイムズ社製）、ビオプラーゼ ＯＰ、ビオプラーゼ ＳＰ－２０ＦＧ、ビオプラーゼ ３０Ｌ、ビオプラーゼ ３０Ｇ、ビオプラーゼ ＡＬ－１５ＦＧ、ビオプラーゼ ＡＰＬ－３０、プロテアーゼＣＬ－１５（以上、ナガセケムテックス社製）、プロチン ＳＤ ＰＣ－１０ＣＦ、サモアーゼ ＰＣ－１０Ｆ、プロチン ＳＤ－ＡＹ１０、プロチン ＳＤ－ＮＹ１０（以上、天野エンザイム社製）、Ｍｕｌｔｉｆｅｃｔ ＰＲ６Ｌ、Ｏｐｔｉｍａｓｅ ＰＲ４０Ｌ、Ｏｐｔｉｍａｓｅ ＰＲ４０Ｘ、Ｏｐｔｉｍａｓｅ ＰＲ４０Ｅ（以上、ダニスコジャパン社製）、オリエンターゼ ２２ＢＦ、ヌクレイシン、オリエンターゼ１０ＮＬ、オリエンターゼ９０Ｎ（以上、エイチビイアイ社製）、アロアーゼ ＡＰ－１０、アロアーゼ ＮＰ－１０、アロアーゼ ＸＡ－１０（以上、ヤクルト薬品工業社製）、サブチリシン、細菌プロテイナーゼ タイプ ＸＸＩＶ、プロテアーゼ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ由来 タイプ ＶＩＩＩ、プロテアーゼ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ由来 タイプ ＩＸ、サーモリシン Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ Ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ由来 タイプ Ｘ、プロテアーゼ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ由来 タイプ ＸＶ、プロテアーゼ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．由来 タイプ ＸＸＶＩＩ、プロテアーゼ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ由来 タイプ ＸＸＸＩ（以上、シグマ社製）、サーモリシン（富士フイルム和光純薬社製）、ディスパーゼＩ、ディスパーゼＩＩ（以上、合同酒精社製）、Ｎｅｕｔｒａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ（ＴＯＹＯＢＯ ＵＳＡ社製）等が挙げられる。ストレプトマイセス属由来プロテアーゼの例としては、プロナーゼ、プロテアーゼ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｒｉｓｅｕｓ由来 タイプ ＸＩＶ（以上、シグマ社製）、Ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ（ＴＯＹＯＢＯ ＵＳＡ社製）、デナチーム ＰＭＣ ＳＯＦＴＥＲ（ナガセケムテックス社製）等が挙げられる。トリチラチウム属由来プロテアーゼの例としては、プロテイナーゼＫ（シグマ社製）等が挙げられる。アスペルギルス属由来プロテアーゼの例としては、プロテアーゼ Ｐ「アマノ」３ＳＤ、プロテアーゼ Ａ「アマノ」ＳＤ、プロテアーゼ Ｍ「アマノ」ＳＤ（以上、天野エンザイム社製）、スミチーム ＭＰ、スミチーム ＬＰＬ－Ｇ、スミチーム ＬＰ５０Ｄ、スミチーム ＡＰ（以上、新日本化学工業社製）、オリエンターゼ ＯＰ、オリエンターゼ ＡＹ（以上、エイチビイアイ社製）、プロテアーゼ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓａｉｔｏｉ由来 タイプ ＸＩＩＩ、プロテアーゼ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｏｊａｅ由来 タイプ ＸＩＸ、プロテアーゼ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｍｅｌｌｅｕｓ由来 タイプ ＸＸＩＩＩ、プロテアーゼ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ由来（以上、シグマ社製）、デナチーム ＡＰ、デナプシン ２Ｐ（以上、ナガセケムテックス社製）、パンチダーゼ ＮＰ－２、パンチダーゼ ＭＰ、パンチダーゼ Ｐ（以上、ヤクルト薬品工業社製）等が挙げられる。これらのうち、アルカラーゼ、ビオプラーゼ ＳＰ－２０ＦＧ、プロチン ＳＤ－ＡＹ１０、Ｍｕｌｔｉｆｅｃｔ ＰＲ６Ｌ、Ｏｐｔｉｍａｓｅ ＰＲ４０Ｌ、アロアーゼ ＸＡ－１０、サブチリシン、プロナーゼ、プロテイナーゼＫ、ＰＲ“Ａｍａｎｏ”Ｋが好適である。
また別の観点からプロテアーゼとしては、例えば、酵素番号がＥＣ：３．４、又はＥＣ：３．４．２１のプロテアーゼが好ましい例として挙げられる。またＥＣ：３．４．２１．６２のプロテアーゼもさらに好ましい例として挙げられる。
本実施形態に係るプロテアーゼの安定化剤は、トリンダー試薬含有部分組成物、４－アミノアンチピリン含有部分組成物及びフェロシアン化物含有部分組成物の少なくともいずれかに含まれ得る。本実施形態に係るプロテアーゼの安定化剤は、当該プロテアーゼの安定化剤と、フェロシアン化物と、を混合した場合のフェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする。なお、当該酸化還元電位は、プロテアーゼの安定化剤及びフェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系において測定される酸化還元電位である。当該反応系は、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸と、塩化ナトリウムと、をさらに含んでいてもよい。酸化還元電位は、銀／塩化銀電極を参照電極として用いて測定されてもよい。酸化還元電位を測定する反応系は、より具体的には実施例１で後述する。
酸化還元電位の下限は、例えば０．０５８Ｖより大きく、０．０７０Ｖ以上、０．０８４Ｖ以上、あるいは０．１１２Ｖ以上であってもよい。酸化還元電位の上限は、例えば０．４００Ｖ以下、０．３００Ｖ以下、０．２５０Ｖ以下、あるいは０．２３５Ｖ以下であってもよい。
プロテアーゼの安定化剤の例としては、例えば、プロピレングリコール、トリメチレングリコール、エチレングリコール、及びカルボキシフェニルボロン酸、並びにそれらの組み合わせが挙げられる。カルボキシフェニルボロン酸の例としては、２－カルボキシフェニルボロン酸が挙げられる。安定化剤は、有効濃度、溶解度、及びコスト等の観点から、好ましくは、プロピレングリコールである。なお、本実施形態において、プロテアーゼの安定化剤は、ジメチルスルホキシドを含まない。プロテアーゼの安定化剤と、フェロシアン化物と、を混合した場合のフェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくしない安定化剤は、本実施形態に係るプロテアーゼの安定化剤から除外される。
フェロシアン化物は、トリンダー試薬含有部分組成物、４－アミノアンチピリン含有部分組成物及びフェロシアン化物含有部分組成物の少なくともいずれかに含まれ得る。フェロシアン化物は、検体に含まれるビリルビンが糖化タンパク質の測定に影響を与えることを抑制する。フェロシアン化物の例としてはフェロシアンイオンを含有するいずれの化合物であってもよく、例えばフェロシアン化カリウム（Ｆｅ（ＣＮ）6Ｋ4）及びフェロシアン化ナトリウム（Ｆｅ（ＣＮ）6Ｎａ4）が挙げられる。
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、フェロシアン化物がトリンダー試薬含有部分組成物及び４－アミノアンチピリン含有部分組成物の少なくともいずれかに含まれている場合、プロテアーゼ及びプロテアーゼの安定化剤は、例えば、トリンダー試薬含有部分組成物及び４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方に含まれる。あるいは、プロテアーゼ、プロテアーゼの安定化剤及びフェロシアン化物は、例えば、トリンダー試薬含有部分組成物及び４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方に含まれる。好ましくは、プロテアーゼ、プロテアーゼの安定化剤、及びフェロシアン化物は、４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれる。
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれている場合、プロテアーゼ及びプロテアーゼの安定化剤は、例えば、トリンダー試薬含有部分組成物、４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及びフェロシアン化物含有部分組成物のいずれかに含まれる。例えば、プロテアーゼ及びプロテアーゼの安定化剤は、トリンダー試薬含有部分組成物に含まれる。あるいは、プロテアーゼ及びプロテアーゼの安定化剤は、４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれる。またあるいは、プロテアーゼ及びプロテアーゼの安定化剤は、フェロシアン化物含有部分組成物に含まれる。
トリンダー試薬含有部分組成物、４－アミノアンチピリン含有部分組成物及びフェロシアン化物含有部分組成物の少なくともいずれかに含まれる糖化アミノ酸オキシダーゼとしてはヒトタンパク質由来の糖化アミノ酸あるいは糖化ペプチドに有効に作用する糖化アミノ酸オキシダーゼであればよく、その例としては、ジベレラ（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ）属、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属、アクレモニウム（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）属、デバリオマイゼス（Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ）属、及びコリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属由来の糖化アミノ酸オキシダーゼ、並びにその遺伝子組み換え型糖化アミノ酸オキシダーゼ変異体等が挙げられる。さらに具体的には、ケトアミンオキシダーゼ（ＫＡＯＤ、旭化成ファーマ社製、Ｃｌｉｎｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ、２００２年、３２４、ｐ．６１－７１に記載）、変異型ＫＡＯＤ（ＫＡＯＤ－Ｖ、旭化成ファーマ社製、特許文献１に記載）、及びＦＡＯＤ－Ｅ（キッコーマン社製）等が挙げられる。
トリンダー試薬含有部分組成物に含まれるトリンダー試薬の例としては、具体的にはＮ－（３－スルホプロピル）アニリン（ＨＡＬＰＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（３－スルホプロピル）－３－メチルアニリン（ＴＯＰＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３，５－ジメチルアニリン（ＭＡＯＳ）、Ｎ－（３－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリン（ＨＤＡＰＳ）、Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリン（ＨＤＡＯＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（３－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリン（ＤＡＰＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリン（ＤＡＯＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（３－スルホプロピル）アニリン（ＡＬＰＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（３－スルホプロピル）－３－メトキシアニリン（ＡＤＰＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３－メトキシアニリン（ＡＤＯＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３－メチルアニリン（ＴＯＯＳ）、Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン（ＴＯＤＢ）、及び３－ヒドロキシ－２，４，６－トリヨード安息香酸（ＨＴＩＢ）、並びにそれらの塩等が挙げられる。これらのうち、ＴＯＰＳ、ＡＬＰＳ、ＴＯＯＳ、及びＴＯＤＢが好適である。
ＴＯＰＳを用いた場合の発色波長は５５０ｎｍである。ＡＬＰＳを用いた場合の発色波長は５６１ｎｍである。ＴＯＯＳを用いた場合の発色波長は５５５ｎｍである。ＴＯＤＢを用いた場合の発色波長は５５０ｎｍである。ただし、吸光度を測定する装置が測定する波長は、発色波長と厳密に一致している必要はない。例えば、波長５４６ｎｍにおける吸光度を測定する装置で、ＴＯＰＳ、ＡＬＰＳ、ＴＯＯＳ、及びＴＯＤＢのそれぞれを用いた場合の発色反応を測定することが可能である。
なお、トリンダー試薬と４－アミノアンチピリンとを同一試薬中に含めると、自然に酸化縮合反応して保存中に呈色するため、トリンダー試薬はトリンダー試薬含有部分組成物に含有され、４－アミノアンチピリンは４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含有される。
従来、測定試薬や検体などに由来する過酸化物によって非特異的な発色反応が起こり、この吸光度が測定精度を低下させることがある。これら非特異的な発色を試薬ブランクという。これに対し、トリンダー試薬含有部分組成物、４－アミノアンチピリン含有部分組成物、またはフェロシアン化物含有部分組成物のいずれかに含まれるペルオキシダーゼは、トリンダー試薬と４－アミノアンチピリンの酸化縮合反応を促進するとともに、過酸化水素を消去して、試薬ブランクを低減する機能を有する。ペルオキシダーゼはいずれの由来のものも使用でき、その例としては、西洋わさび由来等の植物由来のペルオキシダーゼ、及び細菌由来、カビ由来などの微生物由来のペルオキシダーゼ等が挙げられる。具体的には、Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｆｒｏｍ ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ（Ｓｉｇｍａ社製）、ペルオキシダーゼ、西洋わさび由来（富士フイルム和光純薬社製）、ＰＯ”ＡＭＡＮＯ”３（天野エンザイム社製）等が挙げられる。
４－アミノアンチピリン含有部分組成物及びフェロシアン化物含有部分組成物の少なくとも一方は、キレート剤をさらに含んでいてもよい。キレート剤の塩を使用すると、ｐＨ変動が抑制されるため好ましい。
キレート剤の例としては、エチレンジアミン四酢酸、グリコールエーテルジアミン四酢酸、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸、ニトリロトリス（メチルホスホン酸）、ニトリロ三酢酸、トランス－１，２－ジアミノシクロヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－四酢酸、イミノジ酢酸、ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”－五酢酸、１，３－ジアミノ－２－プロパノール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸、グルコン酸、りんご酸、こはく酸、クエン酸、サリチル酸、酒石酸、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシン、及びそれらの塩が挙げられる。好ましいキレート剤は、例えば、クエン酸及びその塩である。
キレート剤の塩としては、塩を形成するものであればその種類は特に限定されず、酸付加塩又は塩基付加塩のいずれであってもよく、双性イオンの形態をとっていてもよい。塩基付加塩としては、例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウム等の無機塩基との塩基付加塩、あるいはメチルアミン、２－アミノエタノール、アルギニン、リジン、若しくはオルニチン等の有機塩基との塩基付加塩などが含まれる。これらのうち無機塩基との塩基付加塩が好適である。なお、代表的な塩基付加塩としては、ナトリウム塩が例示される。
４－アミノアンチピリン含有部分組成物、トリンダー試薬含有部分組成物、及びフェロシアン化物含有部分組成物のそれぞれは、溶媒として、水及び有機溶媒等をさらに含んでいてもよい。有機溶媒の例としては、アルコール系溶媒（炭素数１～１８のアルコールが挙げられ、具体的には、メタノール、ブタノール、エチレングリコール、及びグリセリン等）、ケトン系溶媒（アセトン、及びメチルエチルケトン等）、並びにエーテル系溶媒等（ジエチルエーテル、エチレングリコールモノアルキルエーテル、及びテトラヒドロフランに代表される環状エーテル等）が挙げられる。
また、４－アミノアンチピリン含有部分組成物、トリンダー試薬含有部分組成物、及びフェロシアン化物含有部分組成物のそれぞれは、緩衝剤を含んでいてもよい。緩衝剤の例としては、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、３－［４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジニル］プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳ）、２－［４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジニル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、２－ヒドロキシ－３－［４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジニル］プロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、Ｎ－（２－アセトアミド）イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）－２－アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシン（Ｂｉｃｉｎｅ）、ビス（２－ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ）、Ｎ－シクロヘキシル－３－アミノプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）、Ｎ－シクロヘキシル－２－ヒドロキシ－３－アミノプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）、Ｎ－シクロヘキシル－２－アミノエタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、３－［Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）アミノ］－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）、２－モルホリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ）、３－モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、２－ヒドロキシ－３－モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、ピペラジン－１，４－ビス（２－エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、ピペラジン－１，４－ビス（２－ヒドロキシ－３－プロパンスルホン酸）（ＰＯＰＳＯ）、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、２－ヒドロキシ－Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン（Ｔｒｉｃｉｎｅ）、及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）、等を用いた緩衝剤、又はホウ酸、アンモニア、グリシン、炭酸、酢酸、リン酸、ジエタノールアミン、ｐ－フェノールスルホン酸、２－アミノ－２－メチルプロパン－１，３－ジオール、カコジル酸、マレイン酸、ベロナール及び３，３－ジメチルグルタル酸等が挙げられる。
また、４－アミノアンチピリン含有部分組成物、トリンダー試薬含有部分組成物、及びフェロシアン化物含有部分組成物のそれぞれは、その他の添加物として防腐剤、酵素の安定化剤、界面活性剤、及びその他の酵素等をさらに含んでいてもよい。防腐剤の例としては、アジ化ナトリウム、及びプロクリン（ＰｒｏＣｌｉｎ）等が挙げられる。酵素の安定化剤としては、保存中に酵素を安定化させる安定化剤であればいずれも利用可能であるが、例えば、シクロデキストリン、スクロース、マンノース、フルクトース、ラクトース、ガラクトース及びトレハロース等の糖、ソルビトール、マンニトール等の糖アルコールが挙げられる。界面活性剤としては、陽イオン性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤、両性界面活性剤、及び非イオン性界面活性剤のいずれを用いてもよく、例えば非イオン性界面活性剤の例としては、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、及びポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックポリマー等が挙げられる。また、両性界面活性剤の例としては、アルキルベタイン、酢酸ベタイン、スルホベタイン、及びアルキルアミンオキサイド等が挙げられる。その他の酵素としては、例えばアスコルビン酸オキシダーゼ、ビリルビンオキシダーゼ、カタラーゼ等が挙げられ、これは検体中に含まれるアスコルビン酸やビリルビン、または内在性の過酸化物が測定値に影響を与えるのを抑制するために用いられる。
４－アミノアンチピリン含有部分組成物における４－アミノアンチピリンの濃度は、生じた過酸化水素と反応するのに十分な濃度であればよく、下限としては、０．０１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは０．１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、さらに好ましくは０．５ｍｍｏｌ／Ｌ以上が例示される。また、上限としては、コストの観点から、１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、好ましくは５０ｍｍｏｌ／Ｌ以下、さらに好ましくは３０ｍｍｏｌ／Ｌ以下が例示される。
４－アミノアンチピリン含有部分組成物、トリンダー試薬含有部分組成物、又はフェロシアン化物含有部分組成物におけるプロテアーゼの濃度は、適当な時間内に糖化タンパク質を分解できる濃度であればよく、下限としては、１００Ｕ／ｍＬ以上、好ましくは１ｋＵ／ｍＬ以上、より好ましくは１０ｋＵ／ｍＬ以上が例示される。また、上限としては、コストの観点から、１０００ｋＵ／ｍＬ以下、好ましくは２００ｋＵ／ｍＬ以下、より好ましくは１００ｋＵ／ｍＬ以下が例示される。
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬におけるプロテアーゼの安定化剤の濃度は、プロテアーゼの安定化剤及びフェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系において、プロテアーゼの安定化剤とフェロシアン化物を混合した場合のフェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくすることができる濃度である。
例えば、実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、トリンダー試薬含有部分組成物がプロテアーゼの安定化剤とフェロシアン化物を含む場合、トリンダー試薬含有部分組成物におけるプロテアーゼの安定化剤の濃度が、プロテアーゼの安定化剤及びフェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系において、プロテアーゼの安定化剤とフェロシアン化物を混合した場合のフェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくすることができるプロテアーゼの安定化剤の濃度と同じになるよう調整される。
例えば、４－アミノアンチピリン含有部分組成物がプロテアーゼの安定化剤とフェロシアン化物を含む場合、４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるプロテアーゼの安定化剤の濃度が、プロテアーゼの安定化剤及びフェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系において、プロテアーゼの安定化剤とフェロシアン化物を混合した場合のフェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくすることができるプロテアーゼの安定化剤の濃度と同じになるよう調整される。
例えば、トリンダー試薬含有部分組成物がプロテアーゼの安定化剤を含み、４－アミノアンチピリン含有部分組成物がフェロシアン化物を含む場合、トリンダー試薬含有部分組成物と４－アミノアンチピリン含有部分組成物を混合した際の濃度が、プロテアーゼの安定化剤及びフェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系において、プロテアーゼの安定化剤とフェロシアン化物を混合した場合のフェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくすることができるプロテアーゼの安定化剤の濃度と同じになるよう調整される。
例えば、４－アミノアンチピリン含有部分組成物がプロテアーゼの安定化剤を含み、トリンダー試薬含有部分組成物がフェロシアン化物を含む場合、４－アミノアンチピリン含有部分組成物とトリンダー試薬含有部分組成物を混合した際の濃度が、プロテアーゼの安定化剤及びフェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系において、プロテアーゼの安定化剤とフェロシアン化物を混合した場合のフェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくすることができるプロテアーゼの安定化剤の濃度と同じになるよう調整される。
例えば、４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はトリンダー試薬含有部分組成物がプロテアーゼの安定化剤を含み、フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれる場合、トリンダー試薬含有部分組成物又は４－アミノアンチピリン含有部分組成物のうちプロテアーゼ安定化剤を含むいずれか一方とフェロシアン化物含有部分組成物を混合した際のプロテアーゼの安定化剤の濃度が、プロテアーゼの安定化剤及びフェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系において、プロテアーゼの安定化剤とフェロシアン化物を混合した場合のフェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくすることができるプロテアーゼの安定化剤の濃度と同じになるよう調整される。
例えば、フェロシアン化物含有部分組成物がフェロシアン化物とプロテアーゼの安定化剤を含む場合、フェロシアン化物含有部分組成物におけるプロテアーゼの安定化剤の濃度が、プロテアーゼの安定化剤及びフェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系において、プロテアーゼの安定化剤とフェロシアン化物を混合した場合のフェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくすることができるプロテアーゼの安定化剤の濃度と同じになるよう調整される。
４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はトリンダー試薬含有部分組成物がプロテアーゼの安定化剤を含み、プロテアーゼの安定化剤がプロピレングリコールである場合、４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はトリンダー試薬含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度の下限は、例えば７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上、１０ｗｔ／ｖоｌ％以上、１５ｗｔ／ｖоｌ％以上、２０ｗｔ／ｖоｌ％以上、２２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上、２５ｗｔ／ｖоｌ％以上、２７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上、３０ｗｔ／ｖоｌ％以上、３５ｗｔ／ｖоｌ％以上、あるいは３７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である。また、４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はトリンダー試薬含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度の上限は、例えば８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下、６２．５ｗｔ／ｖоｌ％以下、６０ｗｔ／ｖоｌ％以下、５７．５ｗｔ／ｖоｌ％以下、５５ｗｔ／ｖоｌ％以下、５２．５ｗｔ／ｖоｌ％以下、あるいは５０ｗｔ／ｖоｌ％以下である。
４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はトリンダー試薬含有部分組成物がプロテアーゼの安定化剤を含み、プロテアーゼの安定化剤がトリメチレングリコールである場合、４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はトリンダー試薬含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度の下限は、例えば４０ｗｔ／ｖоｌ％以上、４２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上、４５ｗｔ／ｖоｌ％以上、４７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上、５０ｗｔ／ｖоｌ％以上、５２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上、５５ｗｔ／ｖоｌ％以上、５７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上、６０ｗｔ／ｖоｌ％以上、あるいは６２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である。４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はトリンダー試薬含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度の上限は、例えば８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下、７５ｗｔ／ｖоｌ％以下、あるいは７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である。
４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はトリンダー試薬含有部分組成物がプロテアーゼの安定化剤を含み、プロテアーゼの安定化剤がエチレングリコールである場合、４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はトリンダー試薬含有部分組成物におけるエチレングリコールの濃度の下限は、例えば４０ｗｔ／ｖоｌ％以上、４２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上、４５ｗｔ／ｖоｌ％以上、４７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上、５０ｗｔ／ｖоｌ％以上、５２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上、５５ｗｔ／ｖоｌ％以上、５７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上、６０ｗｔ／ｖоｌ％以上、あるいは６２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である。４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はトリンダー試薬含有部分組成物におけるエチレングリコールの濃度の上限は、例えば８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下、７５ｗｔ／ｖоｌ％以下、あるいは７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である。
４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はトリンダー試薬含有部分組成物がプロテアーゼの安定化剤を含み、プロテアーゼの安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸である場合、４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はトリンダー試薬含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度の下限は、例えば０．２ｗｔ／ｖоｌ％以上、０．４５ｗｔ／ｖоｌ％以上、０．５ｗｔ／ｖоｌ％以上、０．５５ｗｔ／ｖоｌ％以上、０．６ｗｔ／ｖоｌ％以上、０．７５ｗｔ／ｖоｌ％以上である。４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はトリンダー試薬含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度の上限は、例えば１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下、７．５ｗｔ／ｖоｌ％以下、５ｗｔ／ｖоｌ％以下である。
フェロシアン化物含有部分組成物がプロテアーゼの安定化剤を含み、プロテアーゼの安定化剤がプロピレングリコールである場合、フェロシアン化物含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度の下限は、例えば７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上、１０ｗｔ／ｖоｌ％以上、１５ｗｔ／ｖоｌ％以上、２０ｗｔ／ｖоｌ％以上、２２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上、２５ｗｔ／ｖоｌ％以上、２７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上、３０ｗｔ／ｖоｌ％以上、３５ｗｔ／ｖоｌ％以上、あるいは３７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である。また、フェロシアン化物含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度の上限は、例えば８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下、６２．５ｗｔ／ｖоｌ％以下、６０ｗｔ／ｖоｌ％以下、５７．５ｗｔ／ｖоｌ％以下、５５ｗｔ／ｖоｌ％以下、５２．５ｗｔ／ｖоｌ％以下、あるいは５０ｗｔ／ｖоｌ％以下である。
フェロシアン化物含有部分組成物がプロテアーゼの安定化剤を含み、プロテアーゼの安定化剤がトリメチレングリコールである場合、フェロシアン化物含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度の下限は、例えば４０ｗｔ／ｖоｌ％以上、４２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上、４５ｗｔ／ｖоｌ％以上、４７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上、５０ｗｔ／ｖоｌ％以上、５２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上、５５ｗｔ／ｖоｌ％以上、５７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上、６０ｗｔ／ｖоｌ％以上、あるいは６２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である。フェロシアン化物含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度の上限は、例えば８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下、７５ｗｔ／ｖоｌ％以下、あるいは７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である。
フェロシアン化物含有部分組成物がプロテアーゼの安定化剤を含み、プロテアーゼの安定化剤がエチレングリコールである場合、フェロシアン化物含有部分組成物におけるエチレングリコールの濃度の下限は、例えば４０ｗｔ／ｖоｌ％以上、４２．５ｗｔ／ｖｏｌ％以上、４５ｗｔ／ｖｏｌ％以上、４７．５ｗｔ／ｖｏｌ％以上、５０ｗｔ／ｖоｌ％以上、５２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上、５５ｗｔ／ｖоｌ％以上、５７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上、６０ｗｔ／ｖоｌ％以上、あるいは６２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である。フェロシアン化物含有部分組成物におけるエチレングリコールの濃度の上限は、例えば８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下、７５ｗｔ／ｖоｌ％以下、あるいは７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である。
フェロシアン化物含有部分組成物がプロテアーゼの安定化剤を含み、プロテアーゼの安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸である場合、フェロシアン化物含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度の下限は、例えば０．２ｗｔ／ｖоｌ％以上、０．４５ｗｔ／ｖоｌ％以上、０．５ｗｔ／ｖоｌ％以上、０．５５ｗｔ／ｖоｌ％以上、０．６ｗｔ／ｖоｌ％以上、あるいは０．７５ｗｔ／ｖоｌ％以上である。フェロシアン化物含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度の上限は、例えば１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下、７．５ｗｔ／ｖоｌ％以下、あるいは５ｗｔ／ｖоｌ％以下である。
トリンダー試薬含有部分組成物、４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はフェロシアン化物含有部分組成物におけるフェロシアン化物の濃度は、検体に含まれるビリルビンが糖化タンパク質の測定に与える影響を抑制するのに十分な濃度であればよく、下限としては、０．００１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは０．０１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、より好ましくは０．０２ｍｍｏｌ／Ｌ以上が例示される。また、コストの観点から、上限としては、１０ｍｍｏｌ／Ｌ以下、好ましくは１ｍｍｏｌ／Ｌ以下、０．９ｍｍｏｌ／Ｌ以下、０．８ｍｍｏｌ／Ｌ以下、０．７ｍｍｏｌ／Ｌ以下、０．６ｍｍｏｌ／Ｌ以下、より好ましくは０．５ｍｍｏｌ／Ｌ以下が例示される。
トリンダー試薬含有部分組成物又は４－アミノアンチピリン含有部分組成物、あるいはフェロシアン化物含有部分組成物における糖化アミノ酸オキシダーゼの濃度は、生じた糖化アミノ酸と反応するのに十分な濃度であればよく、下限としては、０．１Ｕ／ｍＬ以上、好ましくは１Ｕ／ｍＬ以上、さらに好ましくは１０Ｕ／ｍＬ以上が例示される。また、コストの観点から、上限としては、１０００Ｕ／ｍＬ以下、好ましくは２００Ｕ／ｍＬ以下、さらに好ましくは１００Ｕ／ｍＬ以下が例示される。
トリンダー試薬含有部分組成物におけるトリンダー試薬の濃度は、生じた過酸化水素と反応するのに十分な濃度であればよく、下限としては、０．０１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは０．１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、さらに好ましくは０．５ｍｍｏｌ／Ｌ以上が例示される。また、上限としては、コストの観点から、１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、好ましくは１０ｍｍｏｌ／Ｌ以下、さらに好ましくは５ｍｍｏｌ／Ｌ以下が例示される。
トリンダー試薬含有部分組成物又は４－アミノアンチピリン含有部分組成物、あるいはフェロシアン化物含有部分組成物におけるペルオキシダーゼの濃度は、生じた過酸化水素と反応するのに十分な濃度であればよく、下限としては、０．０１Ｕ／ｍＬ以上、好ましくは０．１Ｕ／ｍＬ以上、さらに好ましくは１Ｕ／ｍＬ以上が例示される。また、コストの観点から、上限としては、５００Ｕ／ｍＬ以下、好ましくは１００Ｕ／ｍＬ以下、さらに好ましくは５０Ｕ／ｍＬ以下が例示される。
４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はフェロシアン化物含有部分組成物におけるキレート剤の濃度の下限としては、５μｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは１０μｍｏｌ／Ｌ以上、５０μｍｏｌ／Ｌ以上、７５μｍｏｌ／Ｌ以上、１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、さらに好ましくは１.２５ｍｍｏｌ／Ｌ以上が例示される。また、例えば、４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はフェロシアン化物含有部分組成物におけるキレート剤の濃度の上限としては、１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、好ましくは１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、２５ｍｍｏｌ／Ｌ以下、１５ｍｍｏｌ／ｌ以下、１０ｍｍｏｌ／ｌ以下、さらに好ましくは５ｍｍｏｌ／Ｌ以下が例示される。
トリンダー試薬含有部分組成物は液状であってもよく、４－アミノアンチピリン含有部分組成物と混合されるまで保存されてもよい。トリンダー試薬含有部分組成物において、含有物は混合されている。４－アミノアンチピリン含有部分組成物は液状であってもよく、トリンダー試薬含有部分組成物と混合されるまで保存されてもよい。４－アミノアンチピリン含有部分組成物において、含有物は混合されている。４－アミノアンチピリン含有部分組成物と、トリンダー試薬含有部分組成物とは、それぞれ、別個に包装されてもよい。
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬がフェロシアン化物含有部分組成物を含む場合、フェロシアン化物含有部分組成物は液状であってもよく、トリンダー試薬含有部分組成物及び４－アミノアンチピリン含有部分組成物と混合されるまで保存されてもよい。フェロシアン化物含有部分組成物において、含有物は合されている。フェロシアン化物含有部分組成物と、４－アミノアンチピリン含有部分組成物と、トリンダー試薬含有部分組成物とは、それぞれ、別個に包装されてもよい。
４－アミノアンチピリン含有部分組成物及び／又はフェロシアン化物含有部分組成物のｐＨの下限は、例えば５以上、５．５以上、６以上、６．５以上、あるいは７以上である。４－アミノアンチピリン含有部分組成物及び／又はフェロシアン化物含有部分組成物のｐＨは、例えば７より大であってもよい。４－アミノアンチピリン含有部分組成物及び／又はフェロシアン化物含有部分組成物のｐＨの上限は、例えば１０以下、９．５以下、あるいは９以下である。
プロテアーゼの安定化剤を含んでいない、糖化タンパク質測定試薬は、保存安定性に問題が生じ得る。これに対し、実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬は、プロテアーゼの安定化剤を含んでいるため、長期にわたって保存安定性が良好である。そのため、長期にわたって、糖化タンパク質を正確に測定することが可能である。
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬は、例えば、流通に要する実用的な期間の間、安定的に保存することが可能である。例えば、実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬は、少なくとも１か月間、保存可能である。実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬の保存期間の下限としては、１日以上、１カ月以上、６カ月あるいは１年以上が例示される。また、実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬の保存期間の上限としては、５年以下、２年以下、１年６カ月以下、１年３カ月以下、６カ月以下、あるいは７日以下が例示される。
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬の保存温度の下限としては、２℃以上、４℃以上、あるいは５℃以上が例示される。また、実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬の保存温度の上限としては、１０℃以下、８℃以下、あるいは５℃以下が例示される。
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、フェロシアン化物がトリンダー試薬含有部分組成物及び４－アミノアンチピリン含有部分組成物の少なくともいずれかに含まれている場合、５℃で１４日保存されたトリンダー試薬含有部分組成物または４－アミノアンチピリン含有部分組成物と、３０℃で１４日保存された４－アミノアンチピリン含有部分組成物またはトリンダー試薬含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度に対する、５℃で２８日保存されたトリンダー試薬含有部分組成物または４－アミノアンチピリン含有部分組成物と、３０℃で２８日保存された４－アミノアンチピリン含有部分組成物またはトリンダー試薬含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度の比を、感度残存率という。感度残存率の下限としては、８０％以上、８５％以上、８８％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、あるいは９５％以上が例示される。上限としては、１２０％以下、１１０％以下、あるいは１０５％以下が例示される。
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、フェロシアン化物が４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれている場合、５℃で１４日保存されたトリンダー試薬含有部分組成物と、３０℃で１４日保存された４－アミノアンチピリン含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度に対する、５℃で２８日保存されたトリンダー試薬含有部分組成物と、３０℃で２８日保存された４－アミノアンチピリン含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度の比を、感度残存率という。感度残存率の下限としては、８０％以上、８５％以上、８８％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、あるいは９５％以上が例示される。上限としては、１２０％以下、１１０％以下、あるいは１０５％以下が例示される。
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、フェロシアン化物がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれている場合、５℃で１４日保存された４－アミノアンチピリン含有部分組成物と、３０℃で１４日保存されたトリンダー試薬含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度に対する、５℃で２８日保存された４－アミノアンチピリン含有部分組成物と、３０℃で２８日保存されたトリンダー試薬含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度の比を、感度残存率という。感度残存率の下限としては、８０％以上、８５％以上、８８％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、あるいは９５％以上が例示される。上限としては、１２０％以下、１１０％以下、あるいは１０５％以下が例示される。
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれている場合、５℃で１４日保存されたトリンダー試薬含有部分組成物又は４－アミノアンチピリン含有部分組成物と、３０℃で１４日保存された４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はトリンダー試薬含有部分組成物及びフェロシアン化物含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度に対する、５℃で２８日保存されたトリンダー試薬含有部分組成物又は４－アミノアンチピリン含有部分組成物と、３０℃で２８日保存された４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はトリンダー試薬含有部分組成物及びフェロシアン化物含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度の比を、感度残存率という。感度残存率の下限としては、８０％以上、８５％以上、８８％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、あるいは９５％以上が例示される。上限としては、１２０％以下、１１０％以下、あるいは１０５％以下が例示される。
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれている場合、５℃で１４日保存されたトリンダー試薬含有部分組成物と、３０℃で１４日保存された４－アミノアンチピリン含有部分組成物及びフェロシアン化物含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度に対する、５℃で２８日保存されたトリンダー試薬含有部分組成物と、３０℃で２８日保存された４－アミノアンチピリン含有部分組成物及びフェロシアン化物含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度の比を、感度残存率という。感度残存率の下限としては、８０％以上、８５％以上、８８％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、あるいは９５％以上が例示される。上限としては、１２０％以下、１１０％以下、あるいは１０５％以下が例示される。
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、糖化タンパク質測定試薬がトリンダー試薬含有部分組成物及び４－アミノアンチピリン含有部分組成物を備える場合、５℃で２８日保存されたトリンダー試薬含有部分組成物と４－アミノアンチピリン含有部分組成物とを組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度に対する、５℃で１年保存されたトリンダー試薬含有部分組成物と４－アミノアンチピリン含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度の比を、長期の感度残存率という。あるいは糖化タンパク質測定試薬がトリンダー試薬含有部分組成物、４－アミノアンチピリン含有部分組成物及びフェロシアン化物含有部分組成物を備える場合、５℃で２８日保存されたトリンダー試薬含有部分組成物と４－アミノアンチピリン含有部分組成物とフェロシアン化物含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度に対する、５℃で１年保存されたトリンダー試薬含有部分組成物と４－アミノアンチピリン含有部分組成物とフェロシアン化物含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度の比を、長期の感度残存率という。長期の感度残存率の下限としては、８０％以上、８５％以上、８８％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、あるいは９５％以上が例示される。上限としては、１２０％以下、１１０％以下、あるいは１０５％以下が例示される。
次に、本発明の実施例を説明するが、本発明は以下の実施例に何ら限定されるものではないことはもちろんである。
実施例における吸光度の測定には、７１７０形日立自動分析装置（日立ハイテクノロジーズ社製）を用いた。装置において、主波長を５４６ｎｍ、副波長を７００ｎｍと設定した。検体の吸光度Ａｂｓは、波長５４６ｎｍにおける吸光度をＡｂｓ546、波長７００ｎｍにおける吸光度をＡｂｓ700として、下記（１）式を用いて算出した。
Ａｂｓ＝Ａｂｓ546－Ａｂｓ700 （１）
［参考例１：試薬ブランクの発生メカニズム］
（トリンダー試薬含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．６に調整して、トリンダー試薬含有液状部分組成物を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（同仁化学社製）
２ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン，二ナトリウム塩（同仁化学社製）
（４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を調製した。
２００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
後述する濃度の安定化剤
後述する濃度のフェロシアン化物又はフェロシアン化物とフェリシアン化物の混合物
（４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物に添加した安定化剤）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ エタノール（関東化学社製）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ エチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
（４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物に添加したフェロシアン化物又はフェロシアン化物とフェリシアン化物の混合物）
０．１ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
０．０９ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）及び０．０１ｍｍｏｌ／Ｌ フェリシアン化カリウム（富士フイルム和光純薬社製）
０．０７ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）及び０．０３ｍｍｏｌ／Ｌ フェリシアン化カリウム（富士フイルム和光純薬社製）
（サンプル）
以下のサンプルを用意した。
精製水
（測定手順）
トリンダー試薬含有液状部分組成物１８０μＬに精製水４．５μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物４５μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。トリンダー試薬含有液状部分組成物に精製水を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ１からトリンダー試薬含有液状部分組成物と精製水の混合液に４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ２までの吸光度変化を測定した。吸光度変化ＡCは下記（２）式で与えられる。
ＡC＝（Ａｂｓ２）－（Ａｂｓ１）×１８０／２２５ （２）
ここで１８０とはトリンダー試薬含有液状部分組成物の液量を、２２５とはトリンダー試薬含有液状部分組成物と４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の総液量を意味する。
サンプルとして精製水を用いたときの吸光度変化を試薬ブランクＡｃｂとして、結果を表１に示す。
Figure 0007492513000001
表１から明らかなように、フェリシアン化物が添加されることによって、試薬ブランクが上昇する傾向にあった。よってフェリシアン化物が試薬ブランクの発生に寄与することが示唆された。また、安定化剤にジメチルスルホキシドを添加した場合にはフェロシアン化物であっても１ｍＡｂｓ以上の試薬ブランクが生じており、ジメチルスルホキシドがフェロシアン化物を試薬ブランクの原因となるフェリシアン化物に変化させている可能性が示唆された。
［参考例２：試薬配置を変更したときの試薬ブランク］
（トリンダー試薬含有液状部分組成物（１）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．６に調整して、トリンダー試薬含有液状部分組成物（１）を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（同仁化学社製）
２ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン，二ナトリウム塩（同仁化学社製）
（トリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．６に調整して、トリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（同仁化学社製）
２ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン，二ナトリウム塩（同仁化学社製）
０．０２５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
（４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．６に調整して、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（同仁化学社製）
１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
（４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．６に調整して、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（同仁化学社製）
１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
０．０２５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
（４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）を調製した。
２００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
０．１ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
後述する濃度の安定化剤
（４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）に添加した安定化剤）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
（４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（２）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（２）を調製した。
２００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
後述する濃度の安定化剤
（４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（２）に添加した安定化剤）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
（トリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、トリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）を調製した。
２００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
８ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン，二ナトリウム塩（同仁化学社製）
０．１ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
後述する濃度の安定化剤
（トリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）に添加した安定化剤）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
（トリンダー試薬含有液状部分組成物（２）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、トリンダー試薬含有液状部分組成物（２）を調製した。
２００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
８ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン，二ナトリウム塩（同仁化学社製）
後述する濃度の安定化剤
（トリンダー試薬含有液状部分組成物（２）に添加した安定化剤）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
（サンプル）
以下のサンプルを用意した。
精製水
（測定手順）
トリンダー試薬含有液状部分組成物（１）１８０μＬに精製水４．５μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）４５μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。トリンダー試薬含有液状部分組成物（１）に精製水を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ１からトリンダー試薬含有液状部分組成物（１）と精製水の混合液に４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ２までの吸光度変化を測定した。吸光度変化ＡCは下記（３）式で与えられる。
ＡC＝（Ａｂｓ２）－（Ａｂｓ１）×１８０／２２５ （３）
ここで１８０とはトリンダー試薬含有液状部分組成物（１）の液量を、２２５とはトリンダー試薬含有液状部分組成物（１）と４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）の総液量を意味する。
トリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）１８０μＬに精製水４．５μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（２）４５μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。トリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）に精製水を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ１からトリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）と精製水の混合液に４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（２）を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ２までの吸光度変化を測定した。吸光度変化ＡCは下記（４）式で与えられる。
ＡC＝（Ａｂｓ２）－（Ａｂｓ１）×１８０／２２５ （４）
ここで１８０とはトリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）の液量を、２２５とはトリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）と４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（２）の総液量を意味する。
４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）１８０μＬに精製水４．５μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、トリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）４５μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）に精製水を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ１から４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）と精製水の混合液にトリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ２までの吸光度変化を測定した。吸光度変化ＡCは下記（５）式で与えられる。
ＡC＝（Ａｂｓ２）－（Ａｂｓ１）×１８０／２２５ （５）
ここで１８０とは４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）の液量を、２２５とは４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）とトリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）の総液量を意味する。
４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）１８０μＬに精製水４．５μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、トリンダー試薬含有液状部分組成物（２）４５μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）に精製水を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ１から４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）と精製水の混合液にトリンダー試薬含有液状部分組成物（２）を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ２までの吸光度変化を測定した。吸光度変化ＡCは下記（６）式で与えられる。
ＡC＝（Ａｂｓ２）－（Ａｂｓ１）×１８０／２２５ （６）
ここで１８０とは４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）の液量を、２２５とは４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）とトリンダー試薬含有液状部分組成物（２）の総液量を意味する。
４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）１８０μＬに精製水４．５μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、トリンダー試薬含有液状部分組成物（１）４５μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）に精製水を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ１から４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）と精製水の混合液にトリンダー試薬含有液状部分組成物（１）を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ２までの吸光度変化を測定した。吸光度変化ＡCは下記（７）式で与えられる。
ＡC＝（Ａｂｓ２）－（Ａｂｓ１）×１８０／２２５ （７）
ここで１８０とは４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）の液量を、２２５とは４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）とトリンダー試薬含有液状部分組成物（１）の総液量を意味する。
トリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）１８０μＬに精製水４．５μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）４５μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。トリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）に精製水を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ１からトリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）と精製水の混合液に４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ２までの吸光度変化を測定した。吸光度変化ＡCは下記（８）式で与えられる。
ＡC＝（Ａｂｓ２）－（Ａｂｓ１）×１８０／２２５ （８）
ここで１８０とはトリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）の液量を、２２５とはトリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）と４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）の総液量を意味する。
サンプルとして精製水を用いたときの吸光度変化を試薬ブランクＡｃｂとして、結果を表２に示す。
Figure 0007492513000002
表２に示すように、サンプルと１番目に反応させる液状部分組成物がトリンダー試薬を含む場合と、サンプルと１番目に反応させる液状部分組成物が４－アミノアンチピリンを含む場合のいずれの場合においても、安定化剤としてジメチルスルホキシドを用いるほうが、安定化剤としてプロピレングリコールを用いるよりも試薬ブランクが大きくなった。また、試薬ブランクの抑制効果は、試薬の添加順序やフェロシアン化物との組み合わせ方には大きく依存しないことが明らかとなった。
［実施例１：安定化剤存在下のフェロシアン化物の酸化還元電位測定］
（フェロシアン化物含有液状組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、フェロシアン化物含有液状組成物を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（同仁化学社製）
１ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
１５０ｍｍｏｌ／Ｌ 塩化ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
後述する濃度の安定化剤
（フェロシアン化物含有液状組成物に添加した安定化剤）
６ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
１０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
４０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
５０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
６２．５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ トリメチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ トリメチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
５０ｗｔ／ｖｏｌ％ トリメチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
６２．５ｗｔ／ｖｏｌ％ トリメチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ エチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ エチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
５０ｗｔ／ｖｏｌ％ エチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
６２．５ｗｔ／ｖｏｌ％ エチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ エタノール（富士フイルム和光純薬社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ １－プロパノール（富士フイルム和光純薬社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ グリセリン（富士フイルム和光純薬社製）
０．６ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）
０．７５ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）
１ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）
１ｗｔ／ｖｏｌ％ ラウリルトリメチルアンモニウムクロリド（富士フイルム和光純薬社製）
１ｗｔ／ｖｏｌ％ ベンジルトリエチルアンモニウムクロリド（富士フイルム和光純薬社製）
１ｗｔ／ｖｏｌ％ ベンジルトリブチルアンモニウムクロリド（富士フイルム和光純薬社製）
１ｗｔ／ｖｏｌ％ 塩化カルシウム（富士フイルム和光純薬社製）
１ｗｔ／ｖｏｌ％ ほう酸（富士フイルム和光純薬社製）
１５０ｍｍｏｌ／Ｌ 塩化ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）（上記の１５０ｍｍｏｌ／Ｌ 塩化ナトリウムとあわせて合計３００ｍｍｏｌ／Ｌ 塩化ナトリウム）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
５０ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
６２．５ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
（測定手順）
フェロシアン化物含有液状組成物１０ｍＬをボルタンメトリー用セル（ＢＡＳ社）に添加し、下記電極と装置を使用して、サイクリックボルタンメトリーを行った
作用極：ＧＣＥガラス状カーボン電極 外径６ｍｍ×内径３ｍｍ（ＢＡＳ社）
対極：Ｐｔカウンター電極２３ｃｍ（コイル状）長さ２３ｃｍ×電極部直径０．５ｍｍ（ＢＡＳ社）
参照電極：ＲＥ－１Ｂ水系参照電極（Ａｇ／ＡｇＣｌ）（ＢＡＳ社）
装置：ＡＵＴＯＭＡＴＩＣ ＰＯＬＡＲＩＺＡＴＩＯＮ ＳＹＳＴＥＭ ＨＺ－７０００（北斗電工社）
サイクリックボルタンメトリー測定の際には、作用極に印加する電位を時間に対して変化させた。掃引速度は０．１Ｖ／秒に設定した。初期電位を自然電位として、第１の設定電位まで電位を正側に掃引した。続いて、第１の設定電位から第２の設定電位まで電極電位を負側に折り返す掃引を行った。さらに第２の設定電位から第１の設定電位まで電極電位を正側に折り返す掃引を行った。第１の設定電位及び第２の設定電位は、０．５Ｖ及び－０．５Ｖであった。また、サイクリックボルタンメトリー測定は２５℃で実施した。
酸化還元電位（Ｅ´０）は、酸化電流がピークを示すときの電位値（Ｅｏｘ）と還元電流がピークを示すときの電位値（Ｅｒｅｄ）との平均値［（Ｅｒｅｄ＋Ｅｏｘ）／２］として算出された。測定結果を表３に示す。
Figure 0007492513000003
Figure 0007492513000004
表３から明らかなように、安定化剤の種類や濃度によってフェロシアン化物の酸化還元電位が変動し、ジメチルスルホキシド、プロピレングリコール、トリメチレングリコール及びエチレングリコールでは濃度依存的に酸化還元電位を低下させることが判明した。一方、２－カルボキシフェニルボロン酸では酸化還元電位はほぼ変化しなかった。特にジメチルスルホキシドはプロピレングリコール、トリメチレングリコール及びエチレングリコールと比較して顕著に酸化還元電位を低下させることが判明した。一般的に酸化還元電位が低下すると酸化されやすくなるので、フェロシアン化物を特定の安定化剤と混合することによりフェリシアン化物が発生しやすくなることが示唆された。
［実施例２：プロテアーゼ安定化剤の種類による試薬ブランクの変化と検体感度安定性］
（トリンダー試薬含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．６に調整して、トリンダー試薬含有液状部分組成物を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（同仁化学社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ アジ化ナトリウム（メルク社製）
１ｍｍｏｌ／Ｌ エチレンジアミン四酢酸ナトリウム（国産化学社製）
６ｗｔ／ｖｏｌ％ Ｄ（－）－ソルビトール（富士フイルム和光純薬社製）
２ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン，二ナトリウム塩（同仁化学社製）
１０Ｕ／ｍＬ ペルオキシダーゼ（天野エンザイム社製）
３０Ｕ／ｍＬ ケトアミンオキシダーゼ（旭化成ファーマ社製）
（２試薬系：４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤を含有する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を調製した。
２００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
０．１ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
５００Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
４０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
後述する濃度の安定化剤
（２試薬系：４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物に含有させた安定化剤）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
５０ｗｔ／ｖｏｌ％ トリメチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
６２．５ｗｔ／ｖｏｌ％ トリメチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
５０ｗｔ／ｖｏｌ％ エチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
６２．５ｗｔ／ｖｏｌ％ エチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
０．６ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）
０．７５ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
（３試薬系：４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤を含有する４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）を調製した。
２５０ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
６．２５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
６２５Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
５０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
後述する濃度の安定化剤
（３試薬系：４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）に含有させた安定化剤）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
５０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
６２．５ｗｔ／ｖｏｌ％ トリメチレングリコール（富士フィル和光純薬社製）
６２．５ｗｔ／ｖｏｌ％ エチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
０．７５ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
（３試薬系：フェロシアン化物含有液状部分組成物（１）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．０に調整して、フェロシアン化物含有液状部分組成物（１）を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
（３試薬系：４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（２）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．０に調整し、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（２）を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
２５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
（３試薬系：フェロシアン化物含有液状部分組成物（２）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤を含有するフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）を調製した。
２５０ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．１２５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
６２５Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
５０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
後述する濃度の安定化剤
（３試薬系：フェロシアン化物含有液状部分組成物（２）に含有させた安定化剤）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
（サンプル検体）
以下のサンプル検体を用意した。
管理血清Ｌ（旭化成ファーマ社製）
管理血清Ｈ（旭化成ファーマ社製）
（試薬保存）
調製したトリンダー試薬含有液状部分組成物を５℃で１４日又は２８日保存した。また、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有部分組成物と、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物と、フェロシアン化物含有液状部分組成物と、を３０℃で１４日又は２８日保存した。
（測定準備）
３試薬系の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）とフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）を容量比４：１で混合して、測定に使用する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）を調製した。
３試薬系の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（２）とフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）を容量比１：４で混合して、測定に使用する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）を調製した。
（測定手順）
トリンダー試薬含有液状部分組成物１８０μＬにサンプル検体４．５μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物４５μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。トリンダー試薬含有液状部分組成物にサンプル検体を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ１からトリンダー試薬含有液状部分組成物とサンプル検体の混合液に４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ２までの吸光度変化を測定した。吸光度変化ＡCは下記（９）式で与えられる。
ＡC＝（Ａｂｓ２）－（Ａｂｓ１）×１８０／２２５ （９）
ここで１８０とはトリンダー試薬含有液状部分組成物の液量を、２２５とはトリンダー試薬含有液状部分組成物と４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の総液量を意味する。
サンプル検体を用いて測定された吸光度変化Ａｃｓ、サンプル検体の代わりに精製水を用いて測定された吸光度変化を試薬ブランクＡｃｂとし、下記（１０）式に示すように、サンプル検体を用いて測定された吸光度変化Ａｃｓから試薬ブランクの吸光度変化Ａｃｂを引いた値を感度ΔＡｂｓとして算出した。
ΔＡｂｓ＝ Ａｃｓ － Ａｃｂ （１０）
部分組成物を１４日保存した後の感度をΔＡｂｓ１４、部分組成物を２８日保存した後の感度をΔＡｂｓ２８として、下記（１１）式に示すように感度残存率をΔＡｂｓ１４とΔＡｂｓ２８の割合として算出した。部分組成物を１４日保存した後の試薬ブランクＡｃｂの結果と合わせて、感度残存率を表４に示す。
感度残存率（％）＝ ΔＡｂｓ２８ ÷ ΔＡｂｓ１４×１００ （１１）
また、部分組成物を１４日保存した後の試薬ブランクと、フェロシアン化物の酸化還元電位の関係を表５と図１に示す。フェロシアン化物の酸化還元電位は、安定化剤とフェロシアン化物とを混合した場合の濃度における酸化還元電位値を使用した。例えば、安定化剤とフェロシアン化物が同じ部分組成物に含有される場合（２試薬系の４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物、及び３試薬系のフェロシアン化物含有液状部分組成物（２））では、部分組成物中の安定化剤濃度における酸化還元電位値を使用した。また、安定化剤とフェロシアン化物が別の部分組成物に含有される場合（３試薬系の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）とフェロシアン化物含有液状部分組成物（１））では、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）と、フェロシアン化物含有液状部分組成物（１）と、を混合した際の安定化剤濃度における酸化還元電位値を使用した。
Figure 0007492513000005
Figure 0007492513000006
Figure 0007492513000007
Figure 0007492513000008
Figure 0007492513000009
Figure 0007492513000010
Figure 0007492513000011
表４、表５、及び図１から明らかなように、２試薬系、３試薬系のいずれにおいても、試薬ブランクを抑制する効果は、フェロシアン化物と混合された際に、フェロシアン化物の酸化還元電位（０．０５８Ｖ）より大きい酸化還元電位を与える安定化剤で顕著であることが示された。またいずれの安定化剤においても、２試薬系から３試薬系にすることで検体感度残存率が向上することが示された。さらに、安定化剤濃度が高いほど検体感度安定化効果が高いことが示された。
［実施例３：キレート剤添加の効果］
（トリンダー試薬含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．６に調整して、トリンダー試薬含有液状部分組成物を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（同仁化学社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ アジ化ナトリウム（メルク社製）
１ｍｍｏｌ／Ｌ エチレンジアミン四酢酸ナトリウム（国産化学社製）
６ｗｔ／ｖｏｌ％ Ｄ（－）－ソルビトール（富士フイルム和光純薬社製）
２ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン，二ナトリウム塩（同仁化学社製）
１０Ｕ／ｍＬ ペルオキシダーゼ（天野エンザイム社製）
３０Ｕ／ｍＬ ケトアミンオキシダーゼ（旭化成ファーマ社製）
（２試薬系：４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤としてプロピレングリコールを含有する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物であって、クエン酸三ナトリウムを含有する部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない部分組成物と、を調製した。
２００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
０．１ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
５００Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
４０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
１ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
後述する濃度の安定化剤
（２試薬系：４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物に含有させた安定化剤）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
（３試薬系：４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤を含有する４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）であって、クエン酸三ナトリウムを含有する部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない部分組成物と、を調製した。
２５０ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
６．２５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
６２５Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
５０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
後述する濃度の安定化剤
（３試薬系：４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）に含有させた安定化剤）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
６２．５ｗｔ／ｖｏｌ％ トリメチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
６２．５ｗｔ／ｖｏｌ％ エチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
０．７５ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）
（３試薬系：フェロシアン化物含有液状部分組成物（１）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．０に調整したフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）であって、クエン酸三ナトリウムを含有する部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない部分組成物と、を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
（３試薬系：４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（２）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．０に調整した４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（２）を含有する部分組成物を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
２５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
（３試薬系：フェロシアン化物含有液状部分組成物（２）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤としてプロピレングリコールを含有するフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）であって、クエン酸三ナトリウムを含有する部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない部分組成物と、を調製した。
２５０ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．１２５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
６２５Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
５０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
（サンプル検体）
以下のサンプル検体を用意した。
管理血清Ｌ（旭化成ファーマ社製）
管理血清Ｈ（旭化成ファーマ社製）
（試薬保存）
調製したトリンダー試薬含有液状部分組成物を５℃で１４日又は２８日保存した。また、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物と、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物と、フェロシアン化物含有液状部分組成物と、を３０℃で１４日又は２８日保存した。
（測定準備）
３試薬系の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）とフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）を容量比４：１で混合して、測定に使用する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）を調製した。
３試薬系の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（２）とフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）を容量比１：４で混合して、測定に使用する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）を調製した。
（測定手順）
トリンダー試薬含有液状部分組成物１８０μＬにサンプル検体４．５μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物４５μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。トリンダー試薬含有液状部分組成物にサンプル検体を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ１からトリンダー試薬含有液状部分組成物とサンプル検体の混合液に４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ２までの吸光度変化を測定した。吸光度変化ＡCは下記（１２）式で与えられる。
ＡC＝（Ａｂｓ２）－（Ａｂｓ１）×１８０／２２５ （１２）
ここで１８０とはトリンダー試薬含有液状部分組成物の液量を、２２５とはトリンダー試薬含有液状部分組成物と４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の総液量を意味する。
サンプル検体を用いて測定された吸光度変化Ａｃｓ、サンプル検体の代わりに精製水を用いて測定された吸光度変化を試薬ブランクＡｃｂとし、下記（１３）式に示すように、サンプル検体を用いて測定された吸光度変化Ａｃｓから試薬ブランクの吸光度変化Ａｃｂを引いた値を感度ΔＡｂｓとして算出した。
ΔＡｂｓ＝ Ａｃｓ － Ａｃｂ （１３）
部分組成物を１４日保存した後の感度をΔＡｂｓ１４、部分組成物を２８日保存した後の感度をΔＡｂｓ２８として、下記（１４）式に示すように感度残存率をΔＡｂｓ１４とΔＡｂｓ２８の割合として算出した。部分組成物を１４日保存した後の試薬ブランクＡｃｂの結果と合わせて、感度残存率を表６に示す。
感度残存率（％）＝ ΔＡｂｓ２８ ÷ ΔＡｂｓ１４×１００ （１４）
Figure 0007492513000012
Figure 0007492513000013
Figure 0007492513000014
Figure 0007492513000015
表６から明らかなように、フェロシアン化物と混合された際に、０．０５８Ｖより大きいフェロシアン化物の酸化還元電位を与える安定化剤を用いると、キレート剤（クエン酸三ナトリウム）を添加していない場合の試薬ブランクと、キレート剤（クエン酸三ナトリウム）を添加した場合の試薬ブランクと、は、ほぼ同じであった。
［実施例４：ｐＨ及びキレート剤種類の効果］
（トリンダー試薬含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．６に調整して、トリンダー試薬含有液状部分組成物を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（同仁化学社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ アジ化ナトリウム（メルク社製）
１ｍｍｏｌ／Ｌ エチレンジアミン四酢酸ナトリウム（国産化学社製）
６ｗｔ／ｖｏｌ％ Ｄ（－）－ソルビトール（富士フイルム和光純薬社製）
２ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン，二ナトリウム塩（同仁化学社製）
１０Ｕ／ｍＬ ペルオキシダーゼ（天野エンザイム社製）
３０Ｕ／ｍＬ ケトアミンオキシダーゼ（旭化成ファーマ社製）
（３試薬系：４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤としてプロピレングリコールを含有する４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を調製した。
２５０ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
６．２５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
６２５Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
５０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
５０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
（３試薬系：フェロシアン化物含有液状部分組成物（１）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨを調整して、異なるｐＨのフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
後述する濃度のｐＨに調整
（フェロシアン化物含有液状部分組成物（１）のｐＨ）
ｐＨ６．５
ｐＨ７．０
ｐＨ７．５
ｐＨ８．０
（３試薬系：フェロシアン化物含有液状部分組成物（２）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．０に調整して、キレート剤を含有するフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
後述する濃度のキレート剤
（フェロシアン化物含有液状部分組成物（２）に含有させたキレート剤）
５ｍｍｏｌ／Ｌ エチレンジアミン四酢酸ナトリウム（国産化学社製，略称ＥＤＴＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ グリコールエーテルジアミン四酢酸（同仁化学社製，略称ＥＧＴＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸（同仁化学社製，略称ＨＩＤＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ニトリロトリス（メチルホスホン酸），三ナトリウム塩（同仁化学社製，略称ＮＴＰＯ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ニトリロ三酢酸（同仁化学社製，略称ＮＴＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ トランス－１，２－ジアミノシクロヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－四酢酸，１水和物（同仁化学社製，略称ＣｙＤＴＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ イミノジ酢酸（同仁化学社製，略称ＩＤＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”－五酢酸（同仁化学社製，略称ＤＴＰＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ １，３－ジアミノ－２－プロパノール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（同仁化学社製，略称ＤＰＴＡ－ＯＨ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ グルコン酸ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｌ（－）－りんご酸ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ こはく酸（関東化学社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ サリチル酸（ナカライテスク社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ （＋）－酒石酸カリウム（富士フイルム和光純薬社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン（同仁化学社製，略称Ｔｒｉｃｉｎｅ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシン（同仁化学社製，略称Ｂｉｃｉｎｅ）
（サンプル）
以下のサンプル検体を用意した。
管理血清Ｌ（旭化成ファーマ社製）
管理血清Ｈ（旭化成ファーマ社製）
（試薬保存）
調製したトリンダー試薬含有液状部分組成物を５℃で１４日又は２８日保存した。また、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物とフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）及び（２）を３０℃で１４日又は２８日保存した。
（測定準備）
３試薬系の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物とフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）又は（２）を容量比４：１で混合して、測定に使用する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を調製した。
（測定手順）
トリンダー試薬含有液状部分組成物１８０μＬにサンプル検体４．５μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物４５μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。トリンダー試薬含有液状部分組成物にサンプル検体を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ１からトリンダー試薬含有液状部分組成物とサンプル検体の混合液に４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ２までの吸光度変化を測定した。吸光度変化ＡCは下記（１５）式で与えられる。
ＡC＝（Ａｂｓ２）－（Ａｂｓ１）×１８０／２２５ （１５）
ここで１８０とはトリンダー試薬含有液状部分組成物の液量を、２２５とはトリンダー試薬含有液状部分組成物と４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の総液量を意味する。
サンプル検体を用いて測定された吸光度変化Ａｃｓ、サンプル検体の代わりに精製水を用いて測定された吸光度変化を試薬ブランクＡｃｂとし、下記（１６）式に示すように、サンプル検体を用いて測定された吸光度変化Ａｃｓから試薬ブランクの吸光度変化Ａｃｂを引いた値を感度ΔＡｂｓとして算出した。
ΔＡｂｓ＝ Ａｃｓ － Ａｃｂ （１６）
部分組成物を１４日保存した後の感度をΔＡｂｓ１４、部分組成物を２８日保存した後の感度をΔＡｂｓ２８として、下記（１７）式に示すように感度残存率をΔＡｂｓ１４とΔＡｂｓ２８の割合として算出した。部分組成物を１４日保存した後の試薬ブランクＡｃｂの結果と合わせて、感度残存率を表７及び図２に示す。
感度残存率（％）＝ ΔＡｂｓ２８ ÷ ΔＡｂｓ１４×１００ （１７）
Figure 0007492513000016
Figure 0007492513000017
表７及び図２から明らかなように、フェロシアン化物含有液状部分組成物のｐＨを変化させても、試薬ブランクの変化は小さかった。また、フェロシアン化物含有液状部分組成物へ添加されたキレート剤の種類を変化させても、試薬ブランクの変化は小さかった。
［実施例５：ｐＨの効果］
（トリンダー試薬含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．６に調整して、トリンダー試薬含有液状部分組成物を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（同仁化学社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ アジ化ナトリウム（メルク社製）
１ｍｍｏｌ／Ｌ エチレンジアミン四酢酸ナトリウム（国産化学社製）
６ｗｔ／ｖｏｌ％ Ｄ（－）－ソルビトール（富士フイルム和光純薬社製）
２ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン，二ナトリウム塩（同仁化学社製）
１０Ｕ／ｍＬ ペルオキシダーゼ（天野エンザイム社製）
３０Ｕ／ｍＬ ケトアミンオキシダーゼ（旭化成ファーマ社製）
（３試薬系：４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤を含有する４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）であって、クエン酸三ナトリウムを含有する部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない部分組成物と、を調製した。
２５０ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
６．２５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
６２５Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
５０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
後述する濃度の安定化剤
（３試薬系：４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）に含有させた安定化剤）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
６２．５ｗｔ／ｖｏｌ％ トリメチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
６２．５ｗｔ／ｖｏｌ％ エチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
０．７５ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）
（３試薬系：フェロシアン化物含有液状部分組成物（１）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、ｐＨ７．０又はｐＨ８．０に調整してフェロシアン化物含有液状部分組成物を調製した。また、ｐＨ８．０のフェロシアン化物含有液状部分組成物であって、クエン酸三ナトリウムを含有する部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない部分組成物と、を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
（３試薬系：４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（２）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．０又はｐＨ８．０に調整して４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を調製した。また、ｐＨ８．０に調整した４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物であって、クエン酸三ナトリウムを含有する部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない部分組成物と、を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
２５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
２５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）（ｐＨ８．０に調整した場合にのみ添加した）
（３試薬系：フェロシアン化物含有液状部分組成物（２）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤としてプロピレングリコールを含有したフェロシアン化物含有液状部分組成物であって、クエン酸三ナトリウムを含有する部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない部分組成物と、を調製した。
２５０ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．１２５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
６２５Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
５０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
（サンプル検体）
以下のサンプル検体を用意した。
管理血清Ｌ（旭化成ファーマ社製）
管理血清Ｈ（旭化成ファーマ社製）
（試薬保存）
調製したトリンダー試薬含有液状部分組成物を５℃で１４日又は２８日保存した。また、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物とフェロシアン化物含有液状部分組成物を３０℃で１４日又は２８日保存した。
（測定準備）
３試薬系の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）とフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）を容量比４：１で混合して、測定に使用する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）を調製した。
３試薬系の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（２）とフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）を容量比１：４で混合して、測定に使用する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）を調製した。
（測定手順）
トリンダー試薬含有液状部分組成物１８０μＬにサンプル検体４．５μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物４５μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。トリンダー試薬含有液状部分組成物にサンプル検体を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ１からトリンダー試薬含有液状部分組成物とサンプル検体の混合液に４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ２までの吸光度変化を測定した。吸光度変化ＡCは下記（１８）式で与えられる。
ＡC＝（Ａｂｓ２）－（Ａｂｓ１）×１８０／２２５ （１８）
ここで１８０とはトリンダー試薬含有液状部分組成物の液量を、２２５とはトリンダー試薬含有液状部分組成物と４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の総液量を意味する。
サンプル検体を用いて測定された吸光度変化Ａｃｓ、サンプル検体の代わりに精製水を用いて測定された吸光度変化を試薬ブランクＡｃｂとし、下記（１９）式に示すように、サンプル検体を用いて測定された吸光度変化Ａｃｓから試薬ブランクの吸光度変化Ａｃｂを引いた値を感度ΔＡｂｓとして算出した。
ΔＡｂｓ＝ Ａｃｓ － Ａｃｂ （１９）
部分組成物を１４日保存した後の感度をΔＡｂｓ１４、部分組成物を２８日保存した後の感度をΔＡｂｓ２８として、下記（２０）式に示すように感度残存率をΔＡｂｓ１４とΔＡｂｓ２８の割合として算出した。部分組成物を１４日保存した後の試薬ブランクＡｃｂの結果と合わせて、感度残存率を表８に示す。
感度残存率（％）＝ ΔＡｂｓ２８ ÷ ΔＡｂｓ１４×１００ （２０）
Figure 0007492513000018
Figure 0007492513000019
Figure 0007492513000020
Figure 0007492513000021
Figure 0007492513000022
表８から明らかなように、フェロシアン化物と混合された際に、０．０５８Ｖより大きいフェロシアン化物の酸化還元電位を与える安定化剤を用いると、ｐＨを７より大きくしても、試薬ブランクの変化は小さかった。また、フェロシアン化物と混合された際に、０．０５８Ｖより大きいフェロシアン化物の酸化還元電位を与える安定化剤を用いると、キレート剤を添加しても、試薬ブランクの変化は小さかった。
［実施例６：試薬配置の変更］
（４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．０に調整して、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を調製した。
５０ｍｍｏｌ／Ｌ トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（富士フイルム和光純薬社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ アジ化ナトリウム（メルク社製）
８ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
１０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
１０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
（トリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、トリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を調製した。
５０ｍｍｏｌ／Ｌ トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（富士フイルム和光純薬社製）
５ｗｔ／ｖｏｌ％ Ｄ（－）－ソルビトール（富士フイルム和光純薬社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ アジ化ナトリウム（メルク社製）
１０ｍｍｏｌ／Ｌ ＴＯＯＳ（同仁化学社製）
５Ｕ／ｍＬ ペルオキシダーゼ（天野エンザイム社製）
２０Ｕ／ｍＬ ケトアミンオキシダーゼ（旭化成ファーマ社製）
０．０８ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
（サンプル検体）
以下のサンプル検体を用意した。
管理血清Ｈ（旭化成ファーマ社製）
（試薬保存）
調製した調製したトリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を３０℃で１４日又は２８日保存し、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を５℃で１４日又は２８日保存した。
（測定手順）
４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物１８０μＬにサンプル検体６μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、トリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物６０μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物にサンプル検体を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ１から４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物とサンプル検体の混合液にトリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ２までの吸光度変化を測定した。吸光度変化ＡCは下記（２１）式で与えられる。
ＡC＝（Ａｂｓ２）－（Ａｂｓ１）×１８０／２４０ （２１）
ここで１８０とは４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の液量を、２４０とは４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物とトリンダー試薬及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の総液量を意味する。
サンプル検体を用いて測定された吸光度変化Ａｃｓ、サンプル検体の代わりに精製水を用いて測定された吸光度変化を試薬ブランクＡｃｂとし、下記（２２）式に示すように、サンプル検体を用いて測定された吸光度変化Ａｃｓから試薬ブランクの吸光度変化Ａｃｂを引いた値を感度ΔＡｂｓとして算出した。
ΔＡｂｓ＝ Ａｃｓ － Ａｃｂ （２２）
部分組成物を１４日保存した後の感度をΔＡｂｓ１４、部分組成物を２８日保存した後の感度をΔＡｂｓ２８として、下記（２３）式に示すように感度残存率をΔＡｂｓ１４とΔＡｂｓ２８の割合として算出した。部分組成物を１４日保存した後の試薬ブランクＡｃｂの結果と合わせて、感度残存率を表９に示す。
感度残存率（％）＝ ΔＡｂｓ２８ ÷ ΔＡｂｓ１４×１００ （２３）
Figure 0007492513000023
表９から明らかなように、フェロシアン化物と混合された際に、０．０５８Ｖより大きいフェロシアン化物の酸化還元電位を与える濃度の安定化剤を用いると、試薬ブランクが低いことが明らかとなった。
［実施例７：プロテアーゼ安定化剤の種類による試薬ブランクの変化と検体感度安定性の長期安定性の検証］
（トリンダー試薬含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．６に調整して、トリンダー試薬含有液状部分組成物を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（同仁化学社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ アジ化ナトリウム（メルク社製）
１ｍｍｏｌ／Ｌ エチレンジアミン四酢酸ナトリウム（国産化学社製）
６ｗｔ／ｖｏｌ％ Ｄ（－）－ソルビトール（富士フイルム和光純薬社製）
２ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン，二ナトリウム塩（同仁化学社製）
１０Ｕ／ｍＬ ペルオキシダーゼ（天野エンザイム社製）
３０Ｕ／ｍＬ ケトアミンオキシダーゼ（旭化成ファーマ社製）
（２試薬系：４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤を含有する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を調製した。
２００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
０．１ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
５００Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
４０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
後述する濃度の安定化剤
（２試薬系：４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物に含有させた安定化剤）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
５０ｗｔ／ｖｏｌ％ トリメチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
６２．５ｗｔ／ｖｏｌ％ トリメチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
５０ｗｔ／ｖｏｌ％ エチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
６２．５ｗｔ／ｖｏｌ％ エチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
０．６ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）
０．７５ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
（３試薬系：４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤を含有する４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）を調製した。
２５０ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
６．２５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
６２５Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
５０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
後述する濃度の安定化剤
（３試薬系：４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）に含有させた安定化剤）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
５０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
６２．５ｗｔ／ｖｏｌ％ トリメチレングリコール（富士フィル和光純薬社製）
６２．５ｗｔ／ｖｏｌ％ エチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
０．７５ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
（３試薬系：フェロシアン化物含有液状部分組成物（１）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．０に調整して、フェロシアン化物含有液状部分組成物（１）を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
（３試薬系：４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（２）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．０に調整し、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（２）を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
２５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
（３試薬系：フェロシアン化物含有液状部分組成物（２）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤を含有するフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）を調製した。
２５０ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．１２５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
６２５Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
５０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
後述する濃度の安定化剤
（３試薬系：フェロシアン化物含有液状部分組成物（２）に含有させた安定化剤）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
（サンプル検体）
以下のサンプル検体を用意した。
管理血清Ｌ（旭化成ファーマ社製）
管理血清Ｈ（旭化成ファーマ社製）
（試薬保存）
調製したトリンダー試薬含有液状部分組成物、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有部分組成物、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物、フェロシアン化物含有液状部分組成物を５℃で２８日又は１年保存した。
（測定準備）
３試薬系の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）とフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）を容量比４：１で混合して、測定に使用する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）を調製した。
３試薬系の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（２）とフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）を容量比１：４で混合して、測定に使用する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）を調製した。
（測定手順）
トリンダー試薬含有液状部分組成物１８０μＬにサンプル検体４．５μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物４５μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。トリンダー試薬含有液状部分組成物にサンプル検体を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ１からトリンダー試薬含有液状部分組成物とサンプル検体の混合液に４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ２までの吸光度変化を測定した。吸光度変化ＡCは下記（２４）式で与えられる。
ＡC＝（Ａｂｓ２）－（Ａｂｓ１）×１８０／２２５ （２４）
ここで１８０とはトリンダー試薬含有液状部分組成物の液量を、２２５とはトリンダー試薬含有液状部分組成物と４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の総液量を意味する。
サンプル検体を用いて測定された吸光度変化Ａｃｓ、サンプル検体の代わりに精製水を用いて測定された吸光度変化を試薬ブランクＡｃｂとし、下記（２５）式に示すように、サンプル検体を用いて測定された吸光度変化Ａｃｓから試薬ブランクの吸光度変化Ａｃｂを引いた値を感度ΔＡｂｓとして算出した。
ΔＡｂｓ＝ Ａｃｓ － Ａｃｂ （２５）
部分組成物を２８日保存した後の感度をΔＡｂｓ２８、部分組成物を１年保存した後の感度をΔＡｂｓ３６５として、下記（２６）式に示すように長期の感度残存率をΔＡｂｓ２８とΔＡｂｓ３６５の割合として算出した。部分組成物を１年保存した後の試薬ブランクの結果と合わせて、長期の感度残存率を表１０に示す。
長期の感度残存率（％）＝ ΔＡｂｓ３６５ ÷ ΔＡｂｓ２８×１００ （２６）
また、部分組成物を１年保存した後の試薬ブランクと、フェロシアン化物の酸化還元電位の関係を表１１と図３に示す。フェロシアン化物の酸化還元電位は、安定化剤とフェロシアン化物とを混合した場合の濃度における酸化還元電位値を使用した。例えば、安定化剤とフェロシアン化物が同じ部分組成物に含有される場合（２試薬系の４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物、及び３試薬系のフェロシアン化物含有液状部分組成物（２））では、部分組成物中の安定化剤濃度における酸化還元電位値を使用した。また、安定化剤とフェロシアン化物が別の部分組成物に含有される場合（３試薬系の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）とフェロシアン化物含有液状部分組成物（１））では、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）と、フェロシアン化物含有液状部分組成物（１）と、を混合した際の安定化剤濃度における酸化還元電位値を使用した。
Figure 0007492513000024
Figure 0007492513000025
Figure 0007492513000026
Figure 0007492513000027
Figure 0007492513000028
Figure 0007492513000029
Figure 0007492513000030
Figure 0007492513000031
長期保存した試薬も実施例２と同様の結果を示した。すなわち表１０、表１１、及び図３から明らかなように、２試薬系、３試薬系のいずれにおいても、試薬ブランクを抑制する効果は、フェロシアン化物と混合された際に、フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする安定化剤で表れることが示された。またいずれの安定化剤においても、２試薬系から３試薬系にすることで検体感度残存率が向上することが示された。安定化剤としてジメチルスルホキシドを使用した２試薬系は、感度残存率が８０％以下まで低下した。よって感度残存率の観点からも安定化剤としてジメチルスルホキシド以外を用いることがより好ましいことが示された。
［実施例８：キレート剤添加の効果の長期安定性の検証］
（トリンダー試薬含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．６に調整して、トリンダー試薬含有液状部分組成物を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（同仁化学社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ アジ化ナトリウム（メルク社製）
１ｍｍｏｌ／Ｌ エチレンジアミン四酢酸ナトリウム（国産化学社製）
６ｗｔ／ｖｏｌ％ Ｄ（－）－ソルビトール（富士フイルム和光純薬社製）
２ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン，二ナトリウム塩（同仁化学社製）
１０Ｕ／ｍＬ ペルオキシダーゼ（天野エンザイム社製）
３０Ｕ／ｍＬ ケトアミンオキシダーゼ（旭化成ファーマ社製）
（２試薬系：４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤としてプロピレングリコールを含有する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物であって、クエン酸三ナトリウムを含有する部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない部分組成物と、を調製した。
２００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
０．１ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
５００Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
４０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
１ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
後述する濃度の安定化剤
（２試薬系：４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物に含有させた安定化剤）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
（３試薬系：４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤を含有する４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）であって、クエン酸三ナトリウムを含有する部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない部分組成物と、を調製した。
２５０ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
６．２５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
６２５Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
５０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
後述する濃度の安定化剤
（３試薬系：４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）に含有させた安定化剤）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
６２．５ｗｔ／ｖｏｌ％ トリメチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
６２．５ｗｔ／ｖｏｌ％ エチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
０．７５ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）
（３試薬系：フェロシアン化物含有液状部分組成物（１）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．０に調整したフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）であって、クエン酸三ナトリウムを含有する部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない部分組成物と、を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
（３試薬系：４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（２）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．０に調整した４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（２）を含有する部分組成物を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
２５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
（３試薬系：フェロシアン化物含有液状部分組成物（２）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤としてプロピレングリコールを含有するフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）であって、クエン酸三ナトリウムを含有する部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない部分組成物と、を調製した。
２５０ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．１２５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
６２５Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
５０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
（サンプル検体）
以下のサンプル検体を用意した。
管理血清Ｌ（旭化成ファーマ社製）
管理血清Ｈ（旭化成ファーマ社製）
（試薬保存）
調製したトリンダー試薬含有液状部分組成物、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物、フェロシアン化物含有液状部分組成物を５℃で２８日又は１年保存した。
（測定準備）
３試薬系の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）とフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）を容量比４：１で混合して、測定に使用する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）を調製した。
３試薬系の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（２）とフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）を容量比１：４で混合して、測定に使用する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）を調製した。
（測定手順）
トリンダー試薬含有液状部分組成物１８０μＬにサンプル検体４．５μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物４５μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。トリンダー試薬含有液状部分組成物にサンプル検体を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ１からトリンダー試薬含有液状部分組成物とサンプル検体の混合液に４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ２までの吸光度変化を測定した。吸光度変化ＡCは下記（２７）式で与えられる。
ＡC＝（Ａｂｓ２）－（Ａｂｓ１）×１８０／２２５ （２７）
ここで１８０とはトリンダー試薬含有液状部分組成物の液量を、２２５とはトリンダー試薬含有液状部分組成物と４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の総液量を意味する。
サンプル検体を用いて測定された吸光度変化Ａｃｓ、サンプル検体の代わりに精製水を用いて測定された吸光度変化を試薬ブランクＡｃｂとし、下記（２８）式に示すように、サンプル検体を用いて測定された吸光度変化Ａｃｓから試薬ブランクの吸光度変化Ａｃｂを引いた値を感度ΔＡｂｓとして算出した。
ΔＡｂｓ＝ Ａｃｓ － Ａｃｂ （２８）
部分組成物を２８日保存した後の感度をΔＡｂｓ２８、部分組成物を１年保存した後の感度をΔＡｂｓ３６５として、下記（２９）式に示すように長期の感度残存率をΔＡｂｓ２８とΔＡｂｓ３６５の割合として算出した。部分組成物を１年保存した後の試薬ブランクの結果と合わせて、長期の感度残存率を表１２に示す。
長期の感度残存率（％）＝ ΔＡｂｓ３６５ ÷ ΔＡｂｓ２８×１００ （２９）
Figure 0007492513000032
Figure 0007492513000033
Figure 0007492513000034
Figure 0007492513000035
表１２から明らかなように、フェロシアン化物と混合された際に、０．０５８Ｖより大きいフェロシアン化物の酸化還元電位を与える安定化剤を用いると、キレート剤（クエン酸三ナトリウム）を添加していない場合の試薬ブランクと、キレート剤（クエン酸三ナトリウム）を添加した場合の試薬ブランクは、ほぼ同じであった。
［実施例９：ｐＨ及びキレート剤種類の効果の長期安定性の検証］
（トリンダー試薬含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．６に調整して、トリンダー試薬含有液状部分組成物を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（同仁化学社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ アジ化ナトリウム（メルク社製）
１ｍｍｏｌ／Ｌ エチレンジアミン四酢酸ナトリウム（国産化学社製）
６ｗｔ／ｖｏｌ％ Ｄ（－）－ソルビトール（富士フイルム和光純薬社製）
２ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン，二ナトリウム塩（同仁化学社製）
１０Ｕ／ｍＬ ペルオキシダーゼ（天野エンザイム社製）
３０Ｕ／ｍＬ ケトアミンオキシダーゼ（旭化成ファーマ社製）
（３試薬系：４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤としてプロピレングリコールを含有する４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を調製した。
２５０ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
６．２５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
６２５Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
５０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
５０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
（３試薬系：フェロシアン化物含有液状部分組成物（１）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨを調整して、異なるｐＨのフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
後述する濃度のｐＨに調整
（フェロシアン化物含有液状部分組成物（１）のｐＨ）
ｐＨ６．５
ｐＨ７．０
ｐＨ７．５
ｐＨ８．０
（３試薬系：フェロシアン化物含有液状部分組成物（２）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．０に調整して、キレート剤を含有するフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
後述する濃度のキレート剤
（フェロシアン化物含有液状部分組成物（２）に含有させたキレート剤）
５ｍｍｏｌ／Ｌ エチレンジアミン四酢酸ナトリウム（国産化学社製，略称ＥＤＴＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ グリコールエーテルジアミン四酢酸（同仁化学社製，略称ＥＧＴＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸（同仁化学社製，略称ＨＩＤＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ニトリロトリス（メチルホスホン酸），三ナトリウム塩（同仁化学社製，略称ＮＴＰＯ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ニトリロ三酢酸（同仁化学社製，略称ＮＴＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ トランス－１，２－ジアミノシクロヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－四酢酸，１水和物（同仁化学社製，略称ＣｙＤＴＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ イミノジ酢酸（同仁化学社製，略称ＩＤＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”－五酢酸（同仁化学社製，略称ＤＴＰＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ １，３－ジアミノ－２－プロパノール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（同仁化学社製，略称ＤＰＴＡ－ＯＨ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ グルコン酸ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｌ（－）－りんご酸ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ こはく酸（関東化学社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ サリチル酸（ナカライテスク社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ （＋）－酒石酸カリウム（富士フイルム和光純薬社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン（同仁化学社製，略称Ｔｒｉｃｉｎｅ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシン（同仁化学社製，略称Ｂｉｃｉｎｅ）
（サンプル）
以下のサンプル検体を用意した。
管理血清Ｌ（旭化成ファーマ社製）
管理血清Ｈ（旭化成ファーマ社製）
（試薬保存）
調製したトリンダー試薬含有液状部分組成物、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物、フェロシアン化物含有液状部分組成物（１）及び（２）を５℃で２８日又は１年保存した。
（測定準備）
３試薬系の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物とフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）又は（２）を容量比４：１で混合して、測定に使用する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を調製した。
（測定手順）
トリンダー試薬含有液状部分組成物１８０μＬにサンプル検体４．５μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物４５μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。トリンダー試薬含有液状部分組成物にサンプル検体を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ１からトリンダー試薬含有液状部分組成物とサンプル検体の混合液に４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ２までの吸光度変化を測定した。吸光度変化ＡCは下記（３０）式で与えられる。
ＡC＝（Ａｂｓ２）－（Ａｂｓ１）×１８０／２２５ （３０）
ここで１８０とはトリンダー試薬含有液状部分組成物の液量を、２２５とはトリンダー試薬含有液状部分組成物と４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の総液量を意味する。
サンプル検体を用いて測定された吸光度変化Ａｃｓ、サンプル検体の代わりに精製水を用いて測定された吸光度変化を試薬ブランクＡｃｂとし、下記（３１）式に示すように、サンプル検体を用いて測定された吸光度変化Ａｃｓから試薬ブランクの吸光度変化Ａｃｂを引いた値を感度ΔＡｂｓとして算出した。
ΔＡｂｓ＝ Ａｃｓ － Ａｃｂ （３１）
部分組成物を２８日保存した後の感度をΔＡｂｓ２８、部分組成物を１年保存した後の感度をΔＡｂｓ３６５として、下記（３２）式に示すように長期の感度残存率をΔＡｂｓ２８とΔＡｂｓ３６５の割合として算出した。部分組成物を１年保存した後の試薬ブランクの結果と合わせて、長期の感度残存率を表１３と図４示す。
長期の感度残存率（％）＝ ΔＡｂｓ３６５ ÷ ΔＡｂｓ２８×１００ （３２）
Figure 0007492513000036
Figure 0007492513000037
表１３及び図４から明らかなように、フェロシアン化物含有液状部分組成物のｐＨを変化させても、試薬ブランクの変化は小さかった。また、フェロシアン化物含有液状部分組成物へ添加されたキレート剤の種類を変化させても、試薬ブランクの変化は小さかった。
［実施例１０：ｐＨの効果の長期安定性の検証］
（トリンダー試薬含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．６に調整して、トリンダー試薬含有液状部分組成物を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（同仁化学社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ アジ化ナトリウム（メルク社製）
１ｍｍｏｌ／Ｌ エチレンジアミン四酢酸ナトリウム（国産化学社製）
６ｗｔ／ｖｏｌ％ Ｄ（－）－ソルビトール（富士フイルム和光純薬社製）
２ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン，二ナトリウム塩（同仁化学社製）
１０Ｕ／ｍＬ ペルオキシダーゼ（天野エンザイム社製）
３０Ｕ／ｍＬ ケトアミンオキシダーゼ（旭化成ファーマ社製）
（３試薬系：４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤を含有する４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）であって、クエン酸三ナトリウムを含有する部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない部分組成物と、を調製した。
２５０ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
６．２５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
６２５Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
５０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
後述する濃度の安定化剤
（３試薬系：４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）に含有させた安定化剤）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
６２．５ｗｔ／ｖｏｌ％ トリメチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
６２．５ｗｔ／ｖｏｌ％ エチレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
０．７５ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）
（３試薬系：フェロシアン化物含有液状部分組成物（１）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、ｐＨ７．０又はｐＨ８．０に調整してフェロシアン化物含有液状部分組成物を調製した。また、ｐＨ８．０のフェロシアン化物含有液状部分組成物であって、クエン酸三ナトリウムを含有する部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない部分組成物と、を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
（３試薬系：４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（２）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．０又はｐＨ８．０に調整して４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を調製した。また、ｐＨ８．０に調整した４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物であって、クエン酸三ナトリウムを含有する部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない部分組成物と、を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
２５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
２５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）（ｐＨ８．０に調整した場合にのみ添加した）
（３試薬系：フェロシアン化物含有液状部分組成物（２）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤としてプロピレングリコールを含有したフェロシアン化物含有液状部分組成物であって、クエン酸三ナトリウムを含有する部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない部分組成物と、を調製した。
２５０ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．１２５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
６２５Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
５０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（富士フイルム和光純薬社製）
（サンプル検体）
以下のサンプル検体を用意した。
管理血清Ｌ（旭化成ファーマ社製）
管理血清Ｈ（旭化成ファーマ社製）
（試薬保存）
調製したトリンダー試薬含有液状部分組成物、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物、フェロシアン化物含有液状部分組成物を５℃で２８日又は１年保存した。
（測定準備）
３試薬系の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（１）とフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）を容量比４：１で混合して、測定に使用する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）を調製した。
３試薬系の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物（２）とフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）を容量比１：４で混合して、測定に使用する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）を調製した。
（測定手順）
トリンダー試薬含有液状部分組成物１８０μＬにサンプル検体４．５μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物４５μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。トリンダー試薬含有液状部分組成物にサンプル検体を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ１からトリンダー試薬含有液状部分組成物とサンプル検体の混合液に４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ２までの吸光度変化を測定した。吸光度変化ＡCは下記（３３）式で与えられる。
ＡC＝（Ａｂｓ２）－（Ａｂｓ１）×１８０／２２５ （３３）
ここで１８０とはトリンダー試薬含有液状部分組成物の液量を、２２５とはトリンダー試薬含有液状部分組成物と４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の総液量を意味する。
サンプル検体を用いて測定された吸光度変化Ａｃｓ、サンプル検体の代わりに精製水を用いて測定された吸光度変化を試薬ブランクＡｃｂとし、下記（３４）式に示すように、サンプル検体を用いて測定された吸光度変化Ａｃｓから試薬ブランクの吸光度変化Ａｃｂを引いた値を感度ΔＡｂｓとして算出した。
ΔＡｂｓ＝ Ａｃｓ － Ａｃｂ （３４）
部分組成物を２８日保存した後の感度をΔＡｂｓ２８、部分組成物を１年保存した後の感度をΔＡｂｓ３６５として、下記（３５）式に示すように長期の感度残存率をΔＡｂｓ２８とΔＡｂｓ３６５の割合として算出した。部分組成物を１年保存した後の試薬ブランクの結果と合わせて、長期の感度残存率を表１４に示す。
長期の感度残存率（％）＝ ΔＡｂｓ３６５ ÷ ΔＡｂｓ２８×１００ （３５）
Figure 0007492513000038
Figure 0007492513000039
Figure 0007492513000040
Figure 0007492513000041
Figure 0007492513000042
表１４から明らかなように、フェロシアン化物と混合された際に、０．０５８Ｖより大きいフェロシアン化物の酸化還元電位を与える安定化剤を用いると、ｐＨを７より大きくしても、試薬ブランクの変化は小さかった。また、フェロシアン化物と混合された際に、０．０５８Ｖより大きいフェロシアン化物の酸化還元電位を与える安定化剤を用いると、キレート剤を添加しても、試薬ブランクの変化は小さかった。

Claims (40)

  1. 少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、前記プロテアーゼの安定化剤、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬であって、
    少なくとも前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
    少なくとも前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
    前記プロテアーゼの安定化剤が、プロピレングリコール、トリメチレングリコール、エチレングリコール及びカルボキシフェニルボロン酸からなる群から選択される、
    糖化タンパク質測定試薬。
  2. 前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤をさらに含む、請求項１に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  3. 前記トリンダー試薬含有部分組成物が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤をさらに含む、請求項２に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  4. 前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼをさらに含む、請求項１から３のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  5. 前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤をさらに含む、請求項２に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  6. 前記トリンダー試薬含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼをさらに含む、請求項１から３及び５のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  7. 前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物の少なくとも一方が、前記フェロシアン化物を含む、請求項１から６のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  8. 前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方が、前記プロテアーゼ、前記プロテアーゼの安定化剤及び前記フェロシアン化物をさらに含む、請求項１に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  9. 前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、前記プロテアーゼ、前記プロテアーゼの安定化剤、及び前記フェロシアン化物をさらに含む、請求項１に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  10. 前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記プロテアーゼの安定化剤と前記フェロシアン化物を混合した場合の前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度であり、前記酸化還元電位が、前記プロテアーゼの安定化剤及び前記フェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系における酸化還元電位である、請求項１から９のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  11. 少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、前記プロテアーゼの安定化剤、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬であって、
    少なくとも前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
    少なくとも前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
    少なくとも前記フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、
    前記プロテアーゼの安定化剤が、プロピレングリコール、トリメチレングリコール、エチレングリコール及びカルボキシフェニルボロン酸からなる群から選択される、
    糖化タンパク質測定試薬。
  12. 前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物のいずれか一方が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤をさらに含む、請求項１１に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  13. 前記トリンダー試薬含有部分組成物が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤をさらに含む、請求項１２に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  14. 前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼをさらに含む、請求項１１から１３のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  15. 前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤をさらに含む、請求項１２に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  16. 前記トリンダー試薬含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼをさらに含む、請求項１１から１３及び１５のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  17. 前記フェロシアン化物含有部分組成物が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤をさらに含む、請求項１２に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  18. 前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記プロテアーゼの安定化剤と前記フェロシアン化物を混合した場合の前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度であり、前記酸化還元電位が、前記プロテアーゼの安定化剤及び前記フェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系における酸化還元電位である、請求項１１から１７のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  19. 前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物と前記フェロシアン化物含有部分組成物を混合した場合の前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度であり、前記酸化還元電位が、前記プロテアーゼの安定化剤及び前記フェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系における酸化還元電位である、請求項１１、１２、及び１５のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  20. 前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記トリンダー試薬含有部分組成物と前記フェロシアン化物含有部分組成物を混合した場合の前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度であり、前記酸化還元電位が、前記プロテアーゼの安定化剤及び前記フェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系における酸化還元電位である、請求項１１から１４のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  21. 前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロテアーゼの安定化剤の濃度が、前記フェロシアン化物の酸化還元電位を０．０５８Ｖより大きくする濃度であり、前記酸化還元電位が、前記プロテアーゼの安定化剤及び前記フェロシアン化物を含み、糖化タンパク質を含まない反応系における酸化還元電位である、請求項１１、１２、及び１７のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  22. 前記酸化還元電位が、０．０５８Ｖより大きく０．４００Ｖ以下である、請求項１０及び１８から２１のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  23. 前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がプロピレングリコールであり、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、請求項１から１６、１９及び２０のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  24. 前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がプロピレングリコールであり、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記プロピレングリコールの濃度が７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、請求項１１、１２、１７及び２１のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  25. 前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がトリメチレングリコールであり、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、請求項１から１６、１９及び２０のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  26. 前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がトリメチレングリコールであり、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記トリメチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、請求項１１、１２、１７及び２１のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  27. 前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がエチレングリコールであり、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、請求項１から１６、１９及び２０のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  28. 前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤がエチレングリコールであり、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記エチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、請求項１１、１２、１７及び２１のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  29. 前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸であり、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記トリンダー試薬含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖоｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、請求項１から１６、１９及び２０のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  30. 前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼの安定化剤を含み、前記プロテアーゼの安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸であり、前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖоｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、請求項１１、１２、１７及び２１のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  31. 前記糖化タンパク質が糖化アルブミンである、請求項１から３０のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  32. ２℃以上１０℃以下で保存される、請求項１から３１のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  33. 前記プロテアーゼの安定化剤がジメチルスルホキシドを除く、請求項１から３２のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  34. 前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方が、ペルオキシダーゼをさらに含む、請求項１から３３のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
  35. 糖化タンパク質の測定方法であって、
    検体に、トリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、プロテアーゼの安定化剤、及びフェロシアン化物を接触させることと、
    検体中に存在する糖化タンパク質に依存する発色を検出することと、
    を含み、
    少なくとも前記接触させることの前に、前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
    少なくとも前記接触させることの前に、前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
    前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方が、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤を含み、
    前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方が、前記フェロシアン化物を含み、
    前記プロテアーゼの安定化剤が、プロピレングリコール、トリメチレングリコール、エチレングリコール及びカルボキシフェニルボロン酸からなる群から選択される、
    糖化タンパク質の測定方法。
  36. 糖化タンパク質の測定方法であって、
    検体に、トリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、プロテアーゼの安定化剤、及びフェロシアン化物を接触させることと、
    検体中に存在する糖化タンパク質に依存する発色を検出することと、
    を含み、
    少なくとも前記接触させることの前に、前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
    少なくとも前記接触させることの前に、前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
    少なくとも前記接触させることの前に、前記フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、
    前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及びフェロシアン化物含有部分組成物のいずれかが、前記プロテアーゼ及び前記プロテアーゼの安定化剤を含み、
    前記プロテアーゼの安定化剤が、プロピレングリコール、トリメチレングリコール、エチレングリコール及びカルボキシフェニルボロン酸からなる群から選択される、
    糖化タンパク質の測定方法。
  37. 糖化タンパク質測定試薬の保存方法であって、
    少なくともトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
    前記トリンダー試薬含有部分組成物を保存することと、
    少なくとも４－アミノアンチピリンを含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
    前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物を保存することと、
    を含み、
    前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方が、プロテアーゼ及びプロテアーゼの安定化剤をさらに含み、
    前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方が、フェロシアン化物をさらに含み、
    前記プロテアーゼの安定化剤が、プロピレングリコール、トリメチレングリコール、エチレングリコール及びカルボキシフェニルボロン酸からなる群から選択される、
    糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
  38. 糖化タンパク質測定試薬の保存方法であって、
    少なくともトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
    前記トリンダー試薬含有部分組成物を保存することと、
    少なくとも４－アミノアンチピリンを含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
    前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物を保存することと、
    少なくともフェロシアン化物を含むフェロシアン化物含有部分組成物を調製することと、
    前記フェロシアン化物含有部分組成物を保存することと、
    を含み、
    前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物のいずれかが、プロテアーゼ及びプロテアーゼの安定化剤を含み、
    前記プロテアーゼの安定化剤が、プロピレングリコール、トリメチレングリコール、エチレングリコール及びカルボキシフェニルボロン酸からなる群から選択される、
    糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
  39. 糖化タンパク質測定試薬の安定化方法であって、
    少なくともトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
    少なくとも４－アミノアンチピリンを含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
    を含み、
    前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方に、プロテアーゼ及びプロテアーゼの安定化剤を含ませ、
    前記トリンダー試薬含有部分組成物及び前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物のいずれか一方に、フェロシアン化物を含ませ、
    前記プロテアーゼの安定化剤が、プロピレングリコール、トリメチレングリコール、エチレングリコール及びカルボキシフェニルボロン酸からなる群から選択される、
    糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
  40. 糖化タンパク質測定試薬の安定化方法であって、
    少なくともトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
    少なくとも４－アミノアンチピリンを含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
    少なくともフェロシアン化物を含むフェロシアン化物含有部分組成物を調製することと、
    を含み、
    前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物のいずれかに、プロテアーゼ及びプロテアーゼの安定化剤を含ませ、
    前記プロテアーゼの安定化剤が、プロピレングリコール、トリメチレングリコール、エチレングリコール及びカルボキシフェニルボロン酸からなる群から選択される、
    糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
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