JP7472391B2 - ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジノン誘導体の塩及び結晶形 - Google Patents

Description

本発明は、２０２０年７月２２日に中国国家知識産権局に提出された、出願番号が２０２０１０７０９８３７．９で、発明の名称が「ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジノン誘導体の塩及び結晶形」である中国特許出願に基づく優先権を主張する。当該出願に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。

本発明は、医薬品化学の分野に属し、具体的に、ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジノン誘導体の塩、その結晶形、その調製方法及び医薬的用途に関する。

ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、その下流にあるタンパク質ＡＫＴ（プロテインキナーゼＢ、ＰＫＢとも呼ばれる）及び哺乳類ラパマイシン標的タンパク質（ｍＴＯＲ）で構成されるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路は、細胞内の極めて重要なシグナル伝達経路として、細胞の成長、生存、増殖、アポトーシス、血管新生、オートファジーなどの過程において極めて重要な生物学的機能を発揮している。当該経路の異常な活性化は、がん、神経障害、自己免疫疾患及び血液リンパ系疾患を含む一連の疾患を引き起こす。

ＡＫＴは、セリン／トレオニンキナーゼであり、その下流にある多くのエフェクターによって細胞の生存、成長、代謝、増殖、移動及び分化に影響を与える。５０％を超えるヒト腫瘍、特に前立腺がん、膵がん、膀胱がん、卵巣がん、乳がんにおいて、ＡＫＴの過剰な活性化が起きている。ＡＫＴの過剰な活性化は、腫瘍の形成、転移及び薬剤耐性をもたらす。

ＡＫＴには、ＡＫＴ１、ＡＫＴ２、ＡＫＴ３の３つのサブタイプがある。典型的なプロテインキナーゼとして、各サブタイプは、いずれもアミノ末端のＰＨドメイン（Ｐｌｅｃｋｓｔｒｉｎ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｄｏｍａｉｎ）、中間のＡＴＰ結合キナーゼドメイン及びカルボキシ末端の調節ドメインで構成されている。この３つのサブタイプでは約８０％のアミノ酸配列が相同であり、ただＰＨドメイン及びキナーゼドメインの接続領域では大きな違いがある。

現在、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲシグナル伝達経路に対する標的薬物は、主にＰＩ３Ｋ阻害剤及びｍＴＯＲ阻害剤である。しかしながら、ＡＫＴは、当該シグナル伝達経路のコアにある。ＡＫＴの活性を阻害することで、上流のＰＩ３Ｋへの阻害による激しい副作用を避けしつつ、下流のｍＴＯＲへの阻害によるネガティブフィードバック機構の有効性への影響を避けることもできる。例えば、ＣＮ１０１６３１７７８Ａには、シクロペンタ［Ｄ］ピリミジン誘導体が、ＣＮ１０１５７８２７３Ａには水酸基化及びメトキシ化されたシクロペンタ［Ｄ］ピリミジン誘導体が、ＣＮ１０１５１１８４２Ａにはジヒドロフロピリミジン誘導体が、ＣＮ１０１９７０４１５Ａには５Ｈ－シクロペンタ［d］ピリミジン誘導体がそれぞれ開示され、これら化合物は１０μＭ未満のＡＫＴ１阻害ＩＣ_５０を有する。しかしながら、効果的かつ選択的なＡＫＴ阻害剤を見つけることは、現在の腫瘍標的薬の開発にとって重要な方向である。

第１態様において、本発明は、下記の構造を有するフマル酸塩水和物の結晶形を提供し（以下、結晶形Ａと略称する）、

式中、Ｘは、２．０～３．０であり、
ＣｕＫα線を用い、２θ角度で示されるＸ線粉末回折パターンにおいて、２θ値：９．２８°±０．２°及び３．６３°±０．２°に特徴的なピークを有する。

前記フマル酸塩水和物は、化合物１のフマル酸塩水和物であり、化合物１は、下記の構造を有する：
。

いくつかの実施形態において、前記結晶形Ａの２θ角度で示されるＸ線粉末回折パターンにおいて、２θ値：９．２８°±０．２°、１９．４５°±０．２°、２１．６０°±０．２°及び２３．６３°±０．２°に特徴的なピークを有する。

いくつかの実施形態において、前記結晶形Ａの２θ角度で示されるＸ線粉末回折パターンにおいて、２θ値：９．２８°±０．２°、１４．２２°±０．２°、１９．４５°±０．２°、２１．６０°±０．２°及び２３．６３°±０．２°に特徴的なピークを有する。

いくつかの実施形態において、前記結晶形Ａの２θ角度で示されるＸ線粉末回折パターンにおいて、２θ値：９．２８°±０．２°、１０．７２°±０．２°、１４．２２°±０．２°、１９．４５°±０．２°、２１．６０°±０．２°、２３．６３°±０．２°、２４．５０°±０．２°、２４．８３°±０．２°、２５．０８°±０．２°及び３０．３３°±０．２°に特徴的なピークを有する。

いくつかの実施形態において、前記結晶形Ａの２θ角度で示されるＸ線粉末回折パターンにおいて、２θ値：５．２９°±０．２°、９．２８°±０．２°、１０．７２°±０．２°、１１．２４°±０．２°、１２．１３°±０．２°、１２．５１°±０．２°、１３．６０°±０．２°、１４．２２°±０．２°、１５．６４±０．２°、１６．１４°±０．２°、１６．５２°±０．２°、１７．３８°±０．２°、１７．９９°±０．２°、１８．６８°±０．２°、１９．００°±０．２°、１９．４５°±０．２°、１９．８０°±０．２°、２０．５３°±０．２°、２１．６０°±０．２°、２１．８９°±０．２°、２２．５８°±０．２°、２３．６３°±０．２°、２４．５０°±０．２°、２４．８３°±０．２°、２５．０８°±０．２°、２５．６６°±０．２°、２６．０９°±０．２°、２６．８４°±０．２°、２７．４３°±０．２°、２７．９４°±０．２°、２８．８１°±０．２°、２９．５２°±０．２°、２９．９８°±０．２°、３０．３３°±０．２°、３０．９２°±０．２°、３２．０３°±０．２°、３２．８０°±０．２°、３３．３４°±０．２°、３４．１４°±０．２°、３４．７２°±０．２°、３５．８３°±０．２°、３６．５５°±０．２°、３７．３５°±０．２°、３８．１１°±０．２°及び３８．９３°±０．２°に特徴的なピークを有する。

いくつかの実施形態において、前記結晶形Ａの２θ角度で示されるＸ線粉末回折パターンは、図４に示されるパターンを有する。

いくつかの実施形態において、前記結晶形Ａの２θ角度で示されるＸ線粉末回折パターンは、図８に示されるパターンを有する。

いくつかの実施形態において、前記結晶形Ａの２θ角度で示されるＸ線回粉末折パターンは、図１０に示されるパターンを有する。

いくつかの実施形態において、前記結晶形Ａの示差走査熱量測定により得られる熱分析曲線において、初期温度：１１８～１２８℃で吸熱ピークを有する。

いくつかの実施形態において、前記結晶形Ａの示差走査熱量測定により得られる熱分析曲線において、初期温度：１２０～１２５℃で吸熱ピークを有する。

いくつかの実施形態において、前記結晶形Ａの示差走査熱量測定により得られる熱分析曲線において、初期温度：１２３℃で吸熱ピークを有する。

いくつかの典型的な実施形態において、前記結晶形Ａは、図５に示されるＤＳＣプロファイルを有する。

いくつかの実施形態において、前記結晶形Ａの減衰全反射フーリエ変換赤外分光法により測定されるスペクトルは、波長の逆数（ｃｍ^－１）で示される吸収帯：３４５１±２、２９８１±２、２９５３±２、２８８２±２、２８２４±２、２４７７±２、１６９８±２、１６３１±２、１５９６±２、１５４４±２、１４９０±２、１４６５±２、１４４１±２、１３９０±２、１３６２±２、１３２０±２、１３０２±２、１２８３±２、１２５４±２、１１９７±２、１１３５±２、１０９１±２、１０５８±２、１０１４±２、９８３±２、９２９±２、８９４±２、８６７±２、８３４±２、８０２±２、７８４±２、７６１±２、７３９±２、７１８±２、６６３±２、６４７±２、６４０±２、５８４±２、５６０±２及び４９７±２を有する。

いくつかの実施形態において、前記結晶形Ａのフーリエ変換ラマン分光法により測定されるスペクトルは、波長の逆数（ｃｍ^－１）で示される吸収帯：１６９９±２、１６６４±２、１６０２±２、１３４０±２、８６７±２、８２９±２、８０９±２、７４７±２及び６６９±２を有する。

いくつかの実施形態において、前記結晶形Ａは、図６に示されるＴＧＡプロファイルを有する。

いくつかの実施形態において、前記結晶形Ａは、図７に示されるＴＧＡプロファイルを有する。

いくつかの実施形態において、前記結晶形Ａは、図９に示されるＴＧＡプロファイルを有する。

いくつかの典型的な実施形態において、前記結晶形Ａは、２．０～２．５個の水分子を含む水和物であり、即ち、構造式でＸは、２．０～２．５である。

別の態様において、本発明は、結晶形Ａの結晶形組成物であって、前記結晶形Ａの重量は、結晶形組成物の重量に対して、５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、最も好ましくは９８％である、結晶形組成物を提供する。

別の態様において、本発明は、前記結晶形Ａ又は結晶形組成物を含む医薬組成物をさらに提供する。

いくつかの実施形態において、前記医薬組成物は、１つ又は複数の薬学的に許容可能な担体をさらに含む。

いくつかの実施形態において、前記医薬組成物は、経口投与に適する固体医薬製剤であり、好ましくは、錠剤又はカプセルである。

別の態様において、本発明は、薬物として用いられる結晶形Ａ又は結晶形組成物又は医薬組成物をさらに提供する。

別の態様において、本発明は、前記結晶形Ａ又はその医薬組成物の、ＡＫＴプロテインキナーゼに媒介された疾患又は病状を予防及び／又は治療するための薬物の調製における用途をさらに提供する。

別の態様において、本発明は、前記結晶形組成物の、ＡＫＴプロテインキナーゼに媒介された疾患又は病状を予防及び／又は治療するための薬物の調製における用途をさらに提供する。

別の態様において、本発明は、前記結晶形Ａ又はその医薬組成物の、ＡＫＴプロテインキナーゼに媒介された疾患又は病状を予防及び／又は治療するための用途をさらに提供する。

別の態様において、本発明は、前記結晶形組成物の、ＡＫＴプロテインキナーゼに媒介された疾患又は病状を予防及び／又は治療するための用途をさらに提供する。

別の態様において、本発明は、必要がある個体に本発明に係る結晶形Ａ又はその医薬組成物を投与することを含む、ＡＫＴプロテインキナーゼに媒介された疾患又は病状を予防及び／又は治療するための方法をさらに提供する。

別の態様において、本発明は、必要がある個体に本発明に係る結晶形組成物を投与することを含む、ＡＫＴプロテインキナーゼに媒介された疾患又は病状を予防及び／又は治療するための方法をさらに提供する。

別の態様において、本発明は、ＡＫＴプロテインキナーゼに媒介された疾患又は病状を予防及び／又は治療するための、本発明に係る結晶形Ａ又はその医薬組成物をさらに提供する。

別の態様において、本発明は、ＡＫＴプロテインキナーゼに媒介された疾患又は病状を予防及び／又は治療するための、本発明に係る結晶形組成物をさらに提供する。

いくつかの実施形態において、前記ＡＫＴプロテインキナーゼに媒介された疾患又は病状は、がんである。

いくつかの典型的な実施形態において、前記がんは、乳がん、前立腺がん又は卵巣がんである。

いくつかの典型的な実施形態において、前記がんは、前立腺がんである。

「関連の定義」
特に断らない限り、明細書及び特許請求の範囲で使用する以下の用語は、下記の意味を有する。
「薬学的に許容可能な担体」という用語は、生体に顕著な刺激がなく、しかも当該活性化合物の生物活性及び性能を損なわないものを指す。担体は、中国国家食品医薬品監督管理局に許可されたいずれのヒト又は動物に用いられる希釈剤、崩壊剤、粘着剤、流動化剤、濡れ剤を含むが、これらに限定されない。

本願で「Ｘ線粉末回折パターン」は、ＣｕＫα線を用いて測定されるものである。

本願で「２θ」又は「２θ角」とは、回折角を指し、θは、ブラッグ角であり、単位は、°又は度であり、各特徴的なピークの２θの誤差範囲は、±０．２０°である。

なお、Ｘ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）において、結晶性化合物から得られる回折パターンは、特定の結晶に対して一般に特徴的であり、バンドの（特に、低角度での）相対強度は、結晶化条件、粒径及び他の測定条件の違いから生じる支配的な配向性で変化する可能性がある。従って、回折ピークの相対強度は、対象となる結晶に対して特徴的ではない。既知の結晶と同じであるかどうかを判断する場合、相対強度よりもピークの相対位置に注目すべきである。また、任意の確定した結晶について、ピークの位置にはわずかな誤差がある可能性があり、これは結晶学分野で周知されることである。例えば、サンプルを分析する時の温度の変化、サンプルの変位、又は装置の較正などにより、ピークの位置が変動する可能性があり、２θ値の測定誤差は、場合によって約±０．２°である。従って、各結晶構造を確定する場合、当該誤差を考慮すべきである。ＸＲＰＤパターンでは一般に２θ角又は面間隔ｄでピーク位置を表し、両者が単純な変換関係：ｄ＝λ／２ｓｉｎθを有し、ｄは、面間隔であり、λは、入射するＸ線の波長であり、θは、回折角である。同一の化合物の同一の結晶について、そのＸＲＰＤパターンのピーク位置は、全体的に類似性を有するが、相対強度誤差は、大きいという可能性がある。なお、混合物の同定では、含有量の低下などの要因で一部の回折線が欠失するという可能性があり、この場合、高純度サンプルから観察される全バンドを必要とせず、１本のバンドでも特定の結晶には特徴的である。

示差走査熱量測定（ＤＳＣ）は、結晶がその結晶構造が変化し又は結晶が融解して熱を吸収又は放出する時の変換温度を測定するものである。同一の化合物の同一の結晶形の場合、連続的な分析において、熱変換温度及び融点の誤差は、典型的には約５℃以内であり、一般に約３℃以内である。ある化合物がある確定したＤＳＣピーク又は融点を有すると記載されている場合、当該ＤＳＣピーク又は融点±５℃を指す。ＤＳＣは、異なる結晶形を区分するための補助的な方法を提供する。異なる結晶形は、その異なる変換温度という特徴により認識することができる。なお、混合物について、そのＤＳＣピーク又は融点はより大きな範囲において変動する可能性がある。また、物質が融解する過程では分解を伴うことから、融解温度は、昇温速度に関係している。

熱重量分析（ＴＧＡ）とは、プログラムでの温度制御をしながら被検サンプルの質量と温度変化との関係を測定する熱分析技術を指す。被検物質を加熱する過程で昇華又は気化の現象がある場合、ガスとして分解され、又は、結晶水が失われる場合に、被検物質の量が変化する。この場合に、熱重量曲線は、直線ではなく低下する形となる。熱重量曲線を分析することで、被検物質は、どの温度で変化が生じたかを知ることができ、失われる重量からどれだけ物質の量が失われるかを算出することができる。

ＸＲＰＤパターン、ＤＳＣプロファイル又はＴＧＡプロファイルなどを言及すると、「…に示される」という用語を用いる場合、本明細書に記載されるものと同じでなくても、試験の誤差範囲内に該当するパターンであると当業者に考えらる。

特に断らない限り、本願の略語は、以下の意味を有する。
Ｍ：ｍｏｌ／Ｌ、ｍＭ：ｍｍｏｌ／Ｌ、ｎＭ：ｎｍｏｌ／Ｌ、Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ＤＣＭ：ジクロロメタン、ＤＥＡ：ジエチルアミン、ＤＩＥＡ：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＨＡＴＵ：（２－（７－アザベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート）、ＲＴ：保持時間、ＳＦＣ：超臨界流体クロマトグラフィー、ｈ：時間、ｍｉｎ：分間、ＴＫ：チロシンキナーゼ、ＳＥＢ：蛍光シグナルエンハンサー、ＨＴＲＦ：均一時間分解蛍光、ＤＴＴ：ジチオトレイトール。

本発明の実施例及び従来技術の技術案をより明確的に説明するために、以下、実施例及び従来技術に使用される必要な図面を簡単に解釈する。自明的に、以下に記載の図面は、ただ本発明のいくつかの実施例に過ぎず、当業者であれば、これら図面に基づき、他の図面を得ることもできる。
図１は、実施例１の化合物１の分子模式図である。 図２は、実施例１の化合物１のシュウ酸塩単結晶の非対称構造単位の模式図である。 図３は、実施例２の方法Ａで得られるフマル酸塩非晶質のＸＲＰＤパターンである。 図４は、実施例２の方法Ｂで得られる結晶形ＡのＸＲＰＤパターンである。 図５は、実施例２の方法Ｂで得られる結晶形ＡのＤＳＣプロファイルである。 図６は、実施例２の方法Ｂで得られる結晶形ＡのＴＧＡプロファイルである。 図７は、実施例２の方法Ａで得られる結晶形ＡのＴＧＡプロファイルである。 図８は、実施例２の方法Ａで得られる結晶形ＡのＸＲＰＤパターンである。 図９は、実施例３の結晶形ＡのＴＧＡプロファイルである。 図１０は、実施例３の結晶形ＡのＸＲＰＤパターンである。

以下、実施例で本発明をより詳しくに記載する。これら具体的な記載は、本発明の技術的解決手段を説明するためのものに過ぎず、本発明は、こられ具体な記載に一切限定されない。

各装置の試験条件は、次のとおりである。
（１）Ｘ線粉末回折計（Ｘ－ｒａｙ Ｐｏｗｄｅｒ Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ、ＸＲＰＤ）
装置型番：Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ２ Ｐｈａｓｅｒ ２^ｎｄ
Ｘ線：ＣｕＫα、λ＝１．５４０６
スリット構成：発射スリット＝０．４°、受光スリット＝０．０７５ｍｍ
Ｘ線管球構成：管電圧：３０ｋＶ、管電流：１０ｍＡ。
走査方式：連続走査、ステップサイズ（°２θ）０．０４３°、走査範囲（°２θ）３～４０°
（２）熱重量分析装置（Ｔｈｅｒｍｏｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ、ＴＧＡ）
装置型番：ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ＴＧＡ５５
パージガス：窒素
昇温速度：１０℃／分
昇温範囲：室温～３００℃
（３）示差走査熱量計（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒ、ＤＳＣ）
装置型番：ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ＤＳＣ２５
パージガス：窒素
昇温速度：１０℃／分
昇温範囲：２０～２５０℃
（４）フーリエ変換赤外分光法（ＦＴ－ＩＲ）
装置型番：Ｔｈｅｒｍｏフーリエ変換赤外分光光度計ＩＳ５
装置較正：ポリスチレンフィルム
試験条件：ＫＢｒ錠剤法
（５）フーリエ変換ラマン分光法（ＦＴ－Ｒａｍａｎ）
装置型番：Ｎｉｃｏｌｅｔフーリエ変換ラマン分光装置ＤＸＲ７８０
露光時間：２０秒
露光回数：１０回
バックグラウンド露光回数：５１２回
光源：７８０ｎｍ
スリット：４００ライン／ｍｍ
レーザー強度：１４ｍＷ
走査範囲：５０～３０００ｃｍ^－１

実施例１：化合物１の調製
調製例１中間体（Ｒ）－４－クロロ－５－メチル－５，８－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの調製

ａ）２－メチルプロパン－１，１，３－トリカルボン酸トリメチル
窒素雰囲気で、２０℃でナトリウムメトキシドのメタノール溶液（３０％ｗｔ、５０．３２ｇ）をメタノール（９００ｍＬ）に加えた後、７０℃に昇温し、マロン酸ジメチル（４６１．１２ｇ）及びクロトン酸エチル（３４９．４６ｇ）を均一に混合し、上記ナトリウムメトキシドのメタノール溶液に滴下し、７０℃で３時間反応させた。完全に反応させた後、減圧蒸留により溶媒を除去して、酢酸エチル（１Ｌ）を加え、４Ｍの塩酸でｐＨ７－８に調整し、そして水（５００ｍＬ）を加え、分液して、有機相を減圧蒸留により除去し、黄色の液体７７７．６８ｇを得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ（ｐｐｍ）３．６７（ｓ，３Ｈ），３．６５（ｓ，３Ｈ），３．５９（ｓ，３Ｈ），３．５６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），２．４５－２．５８（ｍ，２Ｈ），２．２３－２．２９（ｍ，１Ｈ），０．９３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。

ｂ）（Ｒ）－２－メチルプロパン－１，１，３－トリカルボン酸トリメチル
２５℃でリン酸水素二ナトリウム（４．５ｇ）を脱イオン水１．５Ｌに溶解し、２Ｎの塩酸でｐＨ７．０５に調整し、２－メチルプロパン－１，１，３－トリカルボン酸トリメチル（１５０．４６ｇ）及びリパーゼ（カンジダ・ルゴサ、６日間にかけて４０ｇを加えた）を入れ、２Ｎの水酸化ナトリウムでｐＨ７．０－７．６に調整し、３５℃で６日間反応させ、キラリティー測定ｅｅ％＞９８％、キラリティー測定条件は、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＣ、４．６×２５０ｍｍ、５μｍ、ｎ－ヘキサン：エタノール＝９：１（体積比）である。反応液を１０℃に冷却し、３Ｍの塩酸でｐＨ３－４に調整し、酢酸エチル５００ｍＬを加え、吸引濾過し、フィルターケーキを酢酸エチル（６００ｍＬ）で洗浄して分液し、飽和重曹水（１００ｍＬ）で洗浄して分液し、有機相を濃縮して、淡黄色の液体２６．８９ｇを得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）３．７４（ｓ，６Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），３．４６（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），２．７１－２．７９（ｍ，１Ｈ），２．５４（ｄｄ，Ｊ＝１５．６、４．８Ｈｚ，１Ｈ），２．３２（ｄｄ，Ｊ＝１６．０、８．４Ｈｚ，１Ｈ），１．０６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。

ｃ）（Ｒ）－３－（４，６－ジヒドロキシピリミジン－５－イル）酪酸メチル
窒素雰囲気で、２０℃で酢酸ホルムアミジン（１１．３３ｇ）をメタノール（２００ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液（３０ｗｔ％，５５．６２ｇ）を滴下し、０℃で６０ｍｉｎ反応させて、（Ｒ）－２－メチルプロパン－１，１，３－トリカルボン酸トリメチル（２４．０７ｇ）のメタノール（６０ｍＬ）溶液を滴下し、２０℃に自然昇温して、１０時間反応させた。完全に反応させた後、反応液を０℃に冷却し、３Ｎの塩酸を加えてｐＨ５－６になるように調整し、減圧蒸留により溶媒を除去し、その後０℃に冷却し、３Ｎの塩酸を加えてｐＨ３になるように調整し、固体が析出し、吸引濾過で固体を集め、フィルターケーキを氷水（１００ｍＬ）で洗浄した後、真空乾燥させ、白色の固体１８．７９ｇを得て、そのまま次のステップに用いた。

ｄ）（Ｒ）－３－（４，６－ジクロロピリミジン－５－イル）酪酸メチル
窒素雰囲気で、２２℃で（Ｒ）－３－（４，６－ジヒドロキシピリミジン－５－イル）酪酸メチル（１４．６３ｇ）をアセトニトリル（７０ｍＬ）に分散し、塩化ホスホリル（２６．４２ｇ）及びジイソプロピルエチルアミン（１２．５１ｇ）を順に滴下し、反応系は激しく発熱し、そして６０℃に昇温し、固体が徐々に完全に溶けていき、反応を１８時間続けた。完全に反応させた後、反応液を０℃に冷却し、酢酸エチル１００ｍＬを加え、飽和重曹水でｐＨ７－８に調整し、酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を減圧蒸留により除去し、黄色の固体１３．８９ｇを得、そのまま次のステップに用いた。

ｅ）（Ｒ）－４－クロロ－５－メチル－５，８－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン
２０℃で（Ｒ）－３－（４，６－ジクロロピリミジン－５－イル）酪酸メチル（１３．８９ｇ）及びアンモニア水（２５－２８ｗｔ％、７０ｍＬ）を１００ｍＬのオートクレーブに入れ、５０℃に昇温し、１８時間反応させた。完全に反応させた後、反応液を０℃に冷却し、吸引濾過して、フィルターケーキを（石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１（体積比））３０ｍＬでパルプ化し、淡黄色の固体７．３２ｇを得た。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１９８（Ｍ＋Ｈ）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）１．３０（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），２．６５－２．６９（ｍ，１Ｈ），２．８６－２．９２（ｍ，１Ｈ），３．４７－３．５４（ｍ，１Ｈ），８．６４（ｓ，１Ｈ），１０．１０（ｓ，１Ｈ）。

調製例２：（Ｒ）－４－（（１Ｓ，６Ｒ）－５－（（Ｓ）－２－（４－クロロフェニル）－３－（イソプロピルアミノ）プロピオニル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－５－メチル－５，８－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（化合物１）の調製

反応条件：ａ）２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル、Ｎ－メチルピロリドン、４－ジメチルアミノピリジン、ｂ）塩化水素／１，４－ジオキサン（４．０Ｍ）、ジクロロメタン、ｃ）（Ｓ）－３－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（イソプロピル）アミノ）－２－（４－クロロフェニル）プロピオン酸、２－（７－ベンゾトリアゾールオキシド）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、４－ジメチルアミノピリジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、ｄ）トリフルオロ酢酸、ジクロロメタン。

ａ）５－（（Ｒ）－５－メチル－７－オキソ－５，６，７，８－テトラヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
窒素雰囲気で、２２℃で（Ｒ）－４－クロロ－５－メチル－５，８－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン（０．２１ｇ）、２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（０．３１ｇ）及び４－ジメチルアミノピリジン（０．３９ｇ）をＮ－メチルピロリドン（５ｍＬ）に溶解し、そして、１４０℃に加熱し、３時間反応させた。完全に反応させた後、反応液を２０℃に冷却して氷水２０ｍＬに注ぎ、酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で抽出し、飽和食塩水（１０ｍＬ×３）で洗浄し、溶媒を減圧蒸留により除去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝３：１～１：１）により分離し、淡黄色の液体０．２８ｇを得た。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３６０（Ｍ＋Ｈ）。

ｂ）（５Ｒ）－４－（２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－５－メチル－５，８－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン塩酸塩
２０℃で５－（（Ｒ）－５－メチル－７－オキソ－５，６，７，８－テトラヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（０．２８ｇ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解し、塩化水素／１，４－ジオキサン（４．０ｍＬ）を加えて１時間反応させた。完全に反応した後、反応液から減圧蒸発で溶媒を除去して、０．２３ｇの黄色い固体を得、そのまま次のステップに使用した。

ｃ）（２Ｓ）－２－（４－クロロフェニル）－３－（５－（（Ｒ）－５－メチル－７－オキソ－５，６，７，８－テトラヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－３－オキソプロピル）（イソプロピル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル
窒素雰囲気で、２０℃で（５Ｒ）－４－（２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－５－メチル－５，８－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オンの塩酸塩（０．２０ｇ）及び（Ｓ）－３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（イソプロピル）アミノ）－２－（４－クロロフェニル）－プロピオン酸（０．２２ｇ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解し、２－（７－ベンゾトリアゾールオキシド）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（０．５９ｇ）及び４－ジメチルアミノピリジン（０．４８ｇ）を加え、２５℃で４時間反応させた。完全に反応させた後、反応液に水２０ｍｌを加え、酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を飽和食塩水（１０ｍＬ×２）で洗浄し、有機相を減圧蒸留により除去し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝５０：１）で分離し、黄色の固体０．１８ｇを得た。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：５８３（Ｍ＋Ｈ）。

ｄ）（Ｒ）－４－（（１Ｓ，６Ｒ）－５－（（Ｓ）－２－（４－クロロフェニル）－３－（イソプロピルアミノ）プロピオニル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－５－メチル－５，８－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（６Ｈ）－オン
２０℃で（２Ｓ）－２－（４－クロロフェニル）－３－（５－（（Ｒ）－５－メチル－７－オキソ－５，６，７，８－テトラヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－２，５－ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン－２－イル）－３－オキソプロピル）（イソプロピル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（０．１８ｇ）を、ジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．８６ｍＬ）を加え、３時間反応させた。完全に反応させた後、反応液にジクロロメタン（１０ｍＬ）を加え、０℃で２Ｍの水酸化ナトリウム溶液を滴下し、ｐＨ１２になるように調整し、分液して、有機相を飽和食塩水（５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、有機相を減圧蒸留により除去し、黄色の固体０．１０ｇを得た。高速分取液体クロマトグラフィーで光学分割し、異性体１（３ｍｇ）及び異性体２（１２ｍｇ）を得た。高速分取液体クロマトグラフィーの条件：カラム：Ａｇｌｉｅｎｔ ５μｍ ｐｒｅｐ－Ｃ１８５０×２１．２ｍｍ、移動相Ａ：水（０．１％のアンモニア水を含む（２５－２８ｗｔ％））、移動相Ｂ：メタノール。勾配：時間０－１０ｍｉｎ、Ｂ相６０－７０％（体積比）。

異性体１：ＲＴ_１＝５．３ｍｉｎ、ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４８３（Ｍ＋Ｈ）。

異性体２：ＲＴ＝５．９ｍｉｎ、ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４８３（Ｍ＋Ｈ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）８．２７（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．９２（ｓ，１Ｈ），７．２７－７．３０（ｍ，４Ｈ），４．２３－４．２９（ｍ，１Ｈ），３．９０－３．９５（ｍ，１Ｈ），３．８１－３．８５（ｍ，１Ｈ），３．６９－３．７２（ｍ，１Ｈ），３．４４－３．５９（ｍ，１Ｈ），３．２０－３．３８（ｍ，３Ｈ），３．０１－３．０５（ｍ，１Ｈ），２．７０－２．８５（ｍ，３Ｈ），２．４７－２．５７（ｍ，１Ｈ），２．２１－２．２５（ｍ，１Ｈ），１．２５－１．２８（ｍ，３Ｈ），１．０３－１．１１（ｍ，６Ｈ），０．８２－０．９０（ｍ，２Ｈ）。

単結晶回折により実施例１の化合物の構造を測定し、異性体２が本発明の化合物１であると確認される。
単結晶の調製：異性体２ ３０．０ｍｇ、イソプロパノール２．０ｍＬを５ｍＬのスクリュートップガラス瓶に入れ、５ｍｉｎ撹拌し、固体が完全に溶解した。シュウ酸二水和物３．９ｍｇを秤量し、前記ガラス瓶に入れ、ガラス瓶において徐々に白い固体が析出し、室温で３時間撹拌し、ガラス瓶に大量の白い固体が析出した。ガラス瓶にメタノール１．０ｍＬを加え、白い固体が徐々に消え、溶液が透明になり、続いて１時間撹拌した。溶液は、０．２２μｍの微多孔フィルター膜を通過し、３ｍＬのスクリュートップガラス瓶に濾過し、ガラス瓶の口をラップフィルムで覆った。針で瓶の口に８つの穴を開けて、室温で７日間放置し、異性体２化合物のシュウ酸塩の単結晶を得た。

単結晶回折試験：
単結晶Ｘ線回折装置：ＢＲＵＫＥＲ Ｄ８ ＶＥＮＴＵＲＥ ＰＨＯＴＯＮ ＩＩ
波長：ＧａＫα（λ＝１．３４１３９Å）
試験温度：１９０Ｋ
構造解析用コンピュータプログラム：ＳＨＥＬＸＬ－２０１８
単結晶データ：分子式：Ｃ_５５Ｈ_７２Ｃｌ_２Ｎ_１２Ｏ_９、分子量：１１１６．１４、結晶系：六方晶系、空間群：Ｐ６１、格子定数：ａ＝２５．８４０６（１５）Å、ｂ＝２５．８４０６（１５）Å、ｃ＝４５．９１６（３）Å、α＝９０°、β＝９０°、γ＝１２０°、単位格子の体積：Ｖ＝２６５５２（４）Å^３、単位格子に含まれる分子式の数：Ｚ＝１２、計算密度：Ｄ_ｃａｌｃ＝０．８３８ｇ／ｃｍ^３、Ｒ（Ｆ_ｏ）：０．０７３０、Ｒ_Ｗ（Ｆ_ｏ ^２）：０．２０６９、適合度（Ｓ）：１．０３４、フラックパラメータ：０．０６６（９）。

構造の説明：単結晶Ｘ線回折及び構造分析は、得られた単結晶が異性体２のシュウ酸塩のイソプロパノール溶媒和物であることを示す。結晶体の非対称構造単位に四つの異性体２分子、二つのシュウ酸分子及び二つのイソプロパノール分子が含まれ、異性体２及びシュウ酸は、シュウ酸塩を形成した。異性体２の単分子の模式図を図１に示し、シュウ酸塩単結晶の非対称構造単位を図２に示す。構造式を以下に示す：

試験例１：ＡＫＴキナーゼ阻害活性の測定
１．材料及び試薬
Ｅｎｖｉｓｉｏｎマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）、白色３８４ウェルプレート（カタログ番号＃２６４７０６、Ｔｈｅｒｍｏ）、ＨＴＲＦ ｋｉｎＥＡＳＥ ＴＫキットの含む主な試薬（カタログ番号＃６２ＴＫＯＰＥＣ、Ｃｉｓｂｉｏ）、ＴＫ－ビオチン基質、ストレプトアビジン－ＸＬ６６５、ユウロピウム標識チロシンキナーゼ基質抗体、５×酵素反応バッファー、ＳＥＢ、ＨＴＲＦアッセイバッファー、ＡＫＴ１（カタログ番号＃０１－１０１、Ｃａｒｎａ）、ＡＫＴ２（カタログ番号＃０１－１０２、Ｃａｒｎａ）ＡＫＴ３（カタログ番号＃ＰＶ３１８５、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＡＴＰ１０ｍＭ（カタログ番号＃ＰＶ３２２７、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＤＴＴ １Ｍ（カタログ番号＃Ｄ５５４５、Ｓｉｇｍａ）、ＭｇＣｌ_２ １Ｍ（カタログ番号＃Ｍ８２６６、Ｓｉｇｍａ）、本願の実施例１の異性体１及び異性体２、陽性対照物質：ＧＤＣ－００６８。

２．試験手順
２．１ 試薬の調製

１×キナーゼ反応バッファー
１ｍＬのキナーゼＡＫＴ１、２、３の１×キナーゼ反応バッファーには、２００μＬの５×キナーゼ反応バッファー、５μＬの１Ｍ ＭｇＣｌ_２、１μＬの１Ｍ ＤＴＴ及び７９４μＬの超純水が含まれている。

５×ＴＫ－ビオチン基質及びＡＴＰ作業溶液
ＴＫ－ビオチン基質及びＡＴＰの具体的な濃度は、表１を参照する。
１×キナーゼ反応バッファーで基質及びＡＴＰを反応濃度の５倍に希釈した。

５×キナーゼ作業溶液
酵素のスクリーニング時に適用する濃度は、表１を参照する。１×キナーゼ反応バッファーで５×酵素作業溶液を調製した。

４×ストレプトアビジン－ＸＬ６６５作業溶液
ストレプトアビジン－ＸＬ６６５の反応中の濃度は、表１を参照する。検出バッファーで４×ストレプトアビジン－ＸＬ６６５作業溶液を調製した。

４×ユウロピウム標識チロシンキナーゼ基質抗体作業溶液
検出反応バッファーでユウロピウム標識チロシンキナーゼ基質抗体を１００倍希釈したものを作業溶液とした。

２．２ 試験プロセス
前記方法で全ての試薬を調製した後、酵素を除いて室温に平衡化させてから、サンプル注入を開始した。

ａ）まず、ＤＭＳＯで化合物ストック溶液（１０ｍＭのＤＭＳＯ溶液）を１００μＭの化合物溶液に希釈し、次に１×キナーゼ反応バッファーで２．５μＭの化合物作業溶液（ＤＭＳＯを２．５％含む）に希釈した。１×キナーゼ反応バッファーで２．５％のＤＭＳＯ溶液を調製し、次に２．５％のＤＭＳＯ溶液で２．５μＭの化合物作業溶液を希釈し、４倍の比率で７回段階希釈して、合計で８つの濃度（２５００ｎＭ、６２５ｎＭ、１５６ｎＭ、３９ｎＭ、９．８ｎＭ、２．４ｎＭ、０．６ｎＭ、０．１５ｎＭ）の化合物作業溶液を得た。対照ウェルを除いて、全ての反応ウェルに４μＬの希釈した化合物作業溶液を加え、対照ウェルには４μＬの予めて調製した２．５％ＤＭＳＯ／キナーゼバッファーを加えた。

ｂ）全ての反応ウェルには、予めて調製したＴＫ－ビオチン基質溶液２μＬを加えた（酵素スクリーニング時の基質濃度は、表１を参照する）。

ｃ）陰性ウェルを除く他の反応ウェルに、予めて調製した酵素溶液２μＬを加え（酵素濃度は、表１を参照する）、陰性ウェルは、酵素２μＬで１×キナーゼ反応バッファーに対応して体積を補足した。シーリングフィルムでプレートをカバーし、均一に混合した後、室温で１０分間インキュベートして、化合物を酵素と十分に作用して結合させた。

ｄ）全ての反応ウェルにＡＴＰ溶液２μＬを加えてキナーゼ反応を開始した（酵素スクリーニング時のＡＴＰ濃度及び反応時間は、表１を参照する）。

ｅ）キナーゼ反応終了前５分間で検出溶液の調製を開始した。キット中の検出バッファーでストレプトアビジン－ＸＬ６６５及びユウロピウム標識チロシンキナーゼ基質抗体（１：１００）の検出溶液を調製した（酵素スクリーニング時の検出試薬濃度は、表１を参照する）。

ｆ）キナーゼ反応が終了した後、全ての反応ウェルに５μＬの希釈したストレプトアビジン－ＸＬ６６５を加え、均一に混合した後、直ちに、希釈したユウロピウム標識チロシンキナーゼ基質抗体検出溶液を加えた。

ｇ）プレートをカバーし、均一に混合し、室温で１時間反応した後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎｅｌｍｅｒ）装置で蛍光シグナル（励起波長：３２０ｎｍ、発光波長：６６５ｎｍ、６１５ｎｍ）を検出した。フルアクティブウェル及びバックグラウンドシグナルウェルから各ウェルの阻害率を計算し、重複したウェルの平均値を算出し、同時に、製図解析ソフトウェアＰＲＩＳＭ ６．０で各被験化合物の半数阻害濃度（ＩＣ_５０）をフィッティングした。

２．３ データ分析
ＥＲ＝６６５ｎｍの蛍光値／６１５ｎｍの蛍光値
阻害率＝（ＥＲ_陽性対照－ＥＲ_サンプル）／（ＥＲ_陽性対照－ＥＲ_陰性対照）×１００％

３．試験結果
試験結果を表３に示す。

実施例２：結晶形Ａの調製
（１）方法Ａ：化合物１のフマル酸塩の非晶質からの結晶形Ａの調製
化合物１のフマル酸塩非晶質の調製：
３ｍＬのガラス製バイアルに化合物１（２５ｍｇ）及びイソプロパノール（１ｍＬ）を加え、室温で磁気撹拌して、溶解して清澄化した。３ｍＬのガラス製バイアルに固体フマル酸（６．３１ｍｇ）を加え、室温で磁気撹拌して反応させた。１８時間撹拌した後、３ｍＬのガラス製バイアルにｎ－ヘプタン（２ｍＬ）を加え、引き続いて１８時間撹拌した。吸引濾過し、湿ったフィルターケーキを真空下４０℃で３時間乾燥して、白い固体粉末状の化合物１のフマル酸塩非晶質を得、^１Ｈ ＮＭＲ、ＸＲＰＤで構造解析を行い、ＸＲＰＤパターンを図３に示す。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：１０．４９（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｓ，１Ｈ），７．３４－７．４８（ｍ，４Ｈ），６．５２（ｓ，２Ｈ），４．３７－４．７６（ｍ，１Ｈ），３．８８－４．１８（ｍ，１Ｈ），３．７０－３．８１（ｍ，２Ｈ），３．３４－３．５４（ｍ，２Ｈ），３．０３－３．２１（ｍ，４Ｈ），２．９０（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），２．７６（ｄｄ，Ｊ＝１６．４，６．０Ｈｚ，１Ｈ），２．２２－２．３０（ｍ，１Ｈ），１．０４－１．３２（ｍ，８Ｈ），０．８５－０．９３（ｍ，４Ｈ），０．０８（ｑ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）。

結晶形Ａの調製：
３ｍＬのガラス製バイアルに化合物１のフマル酸塩非晶質（１００ｍｇ）及び水（２ｍＬ）を加え、室温で磁気撹拌して、溶解して清澄化した。１８時間撹拌した後、吸引濾過し、湿ったフィルターケーキを真空下４０℃で５時間乾燥して、白い固体粉末状の結晶形Ａを得た。

ＴＧＡプロファイルを図７に示し、１５０℃に加熱した時に、重量損失の質量パーセントは、約６．１％であることを示す。

ＸＲＰＤパターンは、図８に示す。

（２）方法Ｂ：種結晶を加える結晶形Ａの調製
１００ｍＬの二重ジャケットガラス反応器に化合物１（２ｇ）及びアセトン（１０ｍＬ）を加え、室温で機械的に撹拌した。１０ｍＬのガラス製バイアルに固体フマル酸（０．５０ｇ）、エタノール／水（９５：５、Ｖ／Ｖ）（７ｍＬ）を順に加え、６０℃に上昇させて振盪し、溶解して清澄化し、保温し使用に供する。前記フマル酸溶液を反応器に加え、室温に低下させる。反応器にフマル酸塩の結晶形Ａの種結晶（５．０ｍｇ）を加え、種結晶を溶解して清澄化した。２０℃に低下した後、反応器にフマル酸塩の結晶形Ａの種結晶（５．０ｍｇ）を加え、晶析を誘導し、１．５時間保温した。保温が完了した後、１０℃に低下し、１．５時間熟成させた。熟成が完了した後、２℃に低下した。熟成が完了した後、２０℃に上昇させて、保温して一晩撹拌した。吸引濾過し、湿ったフィルターケーキを真空下４５℃で６時間乾燥して、白い針状結晶形Ａ（０．７ｇ）を得た。

母液を反応器に戻し、ｎ－ヘプタン（２０ｍＬ）を加え、室温で撹拌して熟成させた。吸引濾過し、湿ったフィルターケーキを真空下４５℃で６時間乾燥して、白い固体粉末状の結晶形Ａ（１．１ｇ）を得た。

^１Ｈ ＮＭＲ、ＸＲＰＤ、ＤＳＣ、ＴＧＡ、ＦＴ－ＩＲ及びＦＴ－Ｒａｍａｎで構造解析をそれぞれ行った。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：１０．４９（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｓ，１Ｈ），７．３４－７．４８（ｍ，４Ｈ），６．５２（ｓ，２Ｈ），４．４０－４．７７（ｍ，１Ｈ），３．８８－４．１８（ｍ，１Ｈ），３．６９－３．８０（ｍ，２Ｈ），３．３５－３．５４（ｍ，２Ｈ），３．０８－３．２１（ｍ，４Ｈ），２．９１（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，４．４Ｈｚ，１Ｈ），２．７６（ｄｄ，Ｊ＝１６．０，６．０Ｈｚ，１Ｈ），２．２２－２．３０（ｍ，１Ｈ），１．０６－１．３０（ｍ，８Ｈ），０．７６－０．９９（ｍ，４Ｈ），０．０８（ｑ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ）。

結晶形ＡのＸＲＰＤ回折の特徴的なピークは、表４及び図４に示す。

結晶形ＡのＤＳＣプロファイルを図５に示し、吸熱ピークの初期温度及びピークトップ温度は、それぞれ、１２３℃、１２８℃である。

結晶形Ａの減衰全反射フーリエ変換赤外分光法（ＦＴ－ＩＲ）で測定される赤外スペクトルは、波長の逆数（ｃｍ^－１）で示される吸収帯：３４５１±２、２９８１±２、２９５３±２、２８８２±２、２８２４±２、２４７７±２、１６９８±２、１６３１±２、１５９６±２、１５４４±２、１４９０±２、１４６５±２、１４４１±２、１３９０±２、１３６２±２、１３２０±２、１３０２±２、１２８３±２、１２５４±２、１１９７±２、１１３５±２、１０９１±２、１０５８±２、１０１４±２、９８３±２、９２９±２、８９４±２、８６７±２、８３４±２、８０２±２、７８４±２、７６１±２、７３９±２、７１８±２、６６３±２、６４７±２、６４０±２、５８４±２、５６０±２及び４９７±２を有する。

フーリエ変換ラマン分光法（ＦＴ－Ｒａｍａｎ）で測定されるラマンスペクトルは、波長の逆数（ｃｍ^－１）で示される吸収帯：１６９９±２、１６６４±２、１６０２±２、１３４０±２、８６７±２、８２９±２、８０９±２、７４７±２及び６６９±２を有する。

ＴＧＡプロファイルを図６に示し、１５０℃に加熱した時に、重量損失の質量パーセントは、約５．９％である。

方法Ａ及び方法Ｂで得られた化合物１のフマル酸塩の結晶形は、同じであることが分かった。

実施例３：種結晶を加える方法で結晶形Ａの調製
１００ｍＬの二重ジャケットガラス反応器に化合物１（５ｇ）及びアセトン（２５ｍＬ）を順に加え、４５℃に上昇させ、機械的に撹拌し、溶解して清澄化した。２０ｍＬのガラス製バイアルに固体フマル酸（１．２６ｇ）、エタノール／水二成分溶媒（９５：５，Ｖ／Ｖ）（１７．５ｍＬ）を順に加え、６０℃に上昇させて振盪し、溶解して清澄化し、保温して使用に供する。前記フマル酸溶液を反応器に加え、４５℃に低下させた。反応器にｎ－ヘプタン（１２．５ｍＬ）及び結晶形Ａの種結晶（５ｍｇ）を順に加え、３０分間撹拌した。反応器にｎ－ヘプタン（１０．０ｍＬ）、フマル酸塩の結晶形Ａの種結晶（５ｍｇ）を順に加え、晶析を誘導し、保温して１時間熟成させた。反応器にｎ－ヘプタン（２７．５ｍＬ）を加え、自然に室温に低下し、一晩撹拌した。吸引濾過し、湿ったフィルターケーキを真空下４５℃で４時間乾燥して、白い固体粉末状の結晶形Ａ（２．８ｇ）を得た。

ＴＧＡプロファイルを図９に示し、１５０℃に加熱した時に、重量損失の質量パーセントは、約６．７％である。

ＸＲＰＤパターンは図１０に示すとおりである。

実施例４：結晶形Ａの安定性試験
下記の保存条件で、実施例３で調製された結晶形Ａの固体安定性を測定する。
ａ．湿熱条件（温度：４０℃、相対湿度：７５％）で、２０日開放静置した。
ｂ．高温条件（温度：６０℃）で、２０日開放静置した。
下記のＨＰＬＣ法で結晶形Ａの化学的純度を測定する。
カラム：ＡＣＥ Ｅｘｃｅｌ ５ Ｓｕｐｅｒ Ｃ１８（４．６×１５０ｍｍ、５μｍ）、検出波長：２３０ｎｍ、カラム温度：３０℃、流速：１．０ｍＬ／分、移動相：リン酸水素二アンモニウム１．３２ｇを秤量し、水１０００ｍＬを加え、溶解し、リン酸でｐＨ７．２に調整し、濾過して、Ａ相を得、Ｂ相は、アセトニトリルである。

測定結果を下記の表に示す。

本願では、試験例１に証明されているように、本願の化合物１は、ＡＫＴキナーゼに対する活性阻害効果を有するため、本願の化合物１のフマル酸塩水和物の結晶形も同様にＡＫＴキナーゼへの活性阻害効果を有し、また、本願の化合物１のフマル酸塩水和物の結晶形及びそれを含む結晶形組成物及び医薬組成物は、ＡＫＴプロテインキナーゼに媒介された疾患又は病状を予防及び／又は治療するために利用することができ、さらに、ＡＫＴプロテインキナーゼに媒介された疾患又は病状を予防及び／又は治療するための薬物を調製するために利用することができる。より一層、本願の化合物１のフマル酸塩水和物の結晶形は、より高い安定性を有し、化合物１の物理的及び化学的特性が向上し、並びにより優れた生物学的利用能を有することから、生産及び使用に役立っている。

上述したのは、本発明の好ましい実施例に過ぎず、本発明を限定するものではない。本発明の趣旨及び原則において、修正、同等な置換、改良などを行うものであれば、いずれも本発明の保護範囲に含まれるものである。

Claims (18)

1. 下記の構造を有するフマル酸塩水和物の結晶であって、前記結晶の結晶形は、結晶形Ａであり、
   
   式中、Ｘは、２．０～３．０であり、
   前記結晶形Ａは、ＣｕＫα線を用い、２θ角度で示されるＸ線粉末回折パターンにおいて、２θ値：９．２８°±０．２°及び２３．６３°±０．２°に特徴的なピークを有する、結晶。
2. 前記結晶形Ａは、２θ角度で示されるＸ線粉末回折パターンにおいて、２θ値：９．２８°±０．２°、１９．４５°±０．２°、２１．６０°±０．２°及び２３．６３°±０．２°に特徴的なピークを有する、請求項１に記載の結晶。
3. 前記結晶形Ａは、２θ角度で示されるＸ線粉末回折パターンにおいて、２θ値：９．２８°±０．２°、１４．２２°±０．２°、１９．４５°±０．２°、２１．６０°±０．２°及び２３．６３°±０．２°に特徴的なピークを有する、請求項１に記載の結晶。
4. 前記結晶形Ａは、２θ角度で示されるＸ線粉末回折パターンにおいて、２θ値：９．２８°±０．２°、１０．７２°±０．２°、１４．２２°±０．２°、１９．４５°±０．２°、２１．６０°±０．２°、２３．６３°±０．２°、２４．５０°±０．２°、２４．８３°±０．２°、２５．０８°±０．２°及び３０．３３°±０．２°に特徴的なピークを有する、請求項１に記載の結晶。
5. 前記結晶形Ａは、２θ角度で示されるＸ線粉末回折パターンにおいて、２θ値：５．２９°±０．２°、９．２８°±０．２°、１０．７２°±０．２°、１１．２４°±０．２°、１２．１３°±０．２°、１２．５１°±０．２°、１３．６０°±０．２°、１４．２２°±０．２°、１５．６４±０．２°、１６．１４°±０．２°、１６．５２°±０．２°、１７．３８°±０．２°、１７．９９°±０．２°、１８．６８°±０．２°、１９．００°±０．２°、１９．４５°±０．２°、１９．８０°±０．２°、２０．５３°±０．２°、２１．６０°±０．２°、２１．８９°±０．２°、２２．５８°±０．２°、２３．６３°±０．２°、２４．５０°±０．２°、２４．８３°±０．２°、２５．０８°±０．２°、２５．６６°±０．２°、２６．０９°±０．２°、２６．８４°±０．２°、２７．４３°±０．２°、２７．９４°±０．２°、２８．８１°±０．２°、２９．５２°±０．２°、２９．９８°±０．２°、３０．３３°±０．２°、３０．９２°±０．２°、３２．０３°±０．２°、３２．８０°±０．２°、３３．３４°±０．２°、３４．１４°±０．２°、３４．７２°±０．２°、３５．８３°±０．２°、３６．５５°±０．２°、３７．３５°±０．２°、３８．１１°±０．２°及び３８．９３°±０．２°に特徴的なピークを有する、請求項１に記載の結晶。
6. 構造式におけるＸが２．０～２．５である、請求項１に記載の結晶。
7. 前記結晶形Ａの示差走査熱量測定により得られた熱分析曲線は、初期温度１１８～１２８℃で吸熱ピークを有する、請求項１に記載の結晶。
8. 前記結晶形Ａの示差走査熱量測定により得られた熱分析曲線は、初期温度１２０～１２５℃で吸熱ピークを有する、請求項７に記載の結晶。
9. 前記結晶形Ａの減衰全反射フーリエ変換赤外分光法により測定されるスペクトルは、波長の逆数（ｃｍ^－１）で示される吸収帯：３４５１±２、２９８１±２、２９５３±２、２８８２±２、２８２４±２、２４７７±２、１６９８±２、１６３１±２、１５９６±２、１５４４±２、１４９０±２、１４６５±２、１４４１±２、１３９０±２、１３６２±２、１３２０±２、１３０２±２、１２８３±２、１２５４±２、１１９７±２、１１３５±２、１０９１±２、１０５８±２、１０１４±２、９８３±２、９２９±２、８９４±２、８６７±２、８３４±２、８０２±２、７８４±２、７６１±２、７３９±２、７１８±２、６６３±２、６４７±２、６４０±２、５８４±２、５６０±２、４９７±２を有する、請求項１に記載の結晶。
10. 前記結晶形Ａのフーリエ変換ラマン分光法により測定されるスペクトルは、波長の逆数（ｃｍ^－１）で示される吸収帯：１６９９±２、１６６４±２、１６０２±２、１３４０±２、８６７±２、８２９±２、８０９±２、７４７±２、６６９±２を有する、請求項１に記載の結晶。
11. 前記結晶形Ａは、熱重量分析において１５０℃に加熱したとき、重量損失の質量パーセントが５．９～６．７％の範囲である、請求項１に記載の結晶。
12. 下記の構造を有する化合物１とフマル酸との塩形成反応において、前記結晶の結晶形Ａの種結晶を加え、結晶形が得られること、又は、下記の構造を有する化合物１のフマル酸塩非晶質を水に溶解した後、吸引濾過し、真空乾燥し、結晶形が得られることを含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載の結晶の調製方法。
    
13. 請求項１～１１のいずれか１項に記載の結晶を含む結晶形組成物であって、前記結晶の重量は、結晶形組成物の重量に対して、５０％以上である、結晶形組成物。
14. 請求項１～１１のいずれか１項に記載の結晶又は請求項１３に記載の結晶形組成物を含む、医薬組成物。
15. 薬物として用いられる、請求項１～１１のいずれか１項に記載の結晶、又は請求項１３に記載の結晶形組成物、又は請求項１４に記載の医薬組成物。
16. 請求項１～１１のいずれか１項に記載の結晶、又は請求項１３に記載の結晶形組成物、又は請求項１４に記載の医薬組成物の、ＡＫＴプロテインキナーゼに媒介された疾患又は病状を予防及び／又は治療するための薬物の調製における使用。
17. 前記ＡＫＴプロテインキナーゼに媒介された疾患又は病状は、乳がん、前立腺がん又は卵巣がんである、請求項１６に記載の使用。
18. ＡＫＴプロテインキナーゼに媒介された疾患又は病状を予防及び／又は治療するための、請求項１４に記載の医薬組成物。