BR112020026052A2 - forma de cristal do composto para a inibição da atividade de cdk4/6 e seu uso - Google Patents

Abstract

A presente invenção refere-se a uma forma de sal de (R)-N-(5-((4-etilpiperazin-1-il)metil)piridin-2-il)-5-fluoro-4-(6-fluoro-1-metil-1,2,3,4-tetraidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]piridin-8-il)pirimidin-2-amina (composto I) como mostrado na fórmula estrutural (I) ou uma forma de cristal da mesma, e também se refere a um método para a preparação da forma de sal do composto I e/ou da forma de cristal do mesmo, uma composição farmacêutica contendo a forma de sal e/ou a forma de cristal e o seu uso na preparação de fármacos para o tratamento de doenças, enfermidades ou condições, ou um método para tratar doenças, enfermidades ou condições.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "FORMA

DE CRISTAL DO COMPOSTO PARA A INIBIÇÃO DA ATIVIDADE DE CDK4/6 E SEU USO".

CAMPO DA INVENÇÃO

[0001] A presente invenção refere-se aos sais e formas de cristal de (R)-N-(5-((4-etilpiperazin-1-il)metil)piridin-2-il)-5-fluoro-4-(6-fluoro-1- metil-1,2,3,4-tetraidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]piridin-8-il)pirimidin-2- amina; a presente invenção também se refere ao método de prepara- ção do composto e da sua forma de cristal e um composto intermediá- rio relacionado, uma composição farmacêutica do mesmo e seu uso na inibição da atividade de CDK 4/6. A presente invenção também se refere aos métodos de tratamento de doenças, distúrbios ou condições associadas com a modulação de CDK 4/6 utilizando pelo menos um dos compostos ou formas de cristal e composições farmacêuticas aci- ma.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[0002] As cinases dependentes de ciclina (CDKs), uma classe das proteínas cinases serina/treonina, estão envolvidas na regulação do ciclo celular, na iniciação da transcrição e no controle de certas casca- tas metabólicas. Os complexos CDK-ciclina são formados por diferen- tes CDKs e ciclinas e, se a atividade de CDK não for regulada, a proli- feração celular está fora de controle, a instabilidade do genoma (au- mento da mutação de DNA, supressão de cromossomos e similares) e instabilidade do cromossomo (alteração do número de cromossomos) podem ser provocados direta ou indiretamente.

[0003] As CDKs possuem mais de 20 subtipos, CDK1, CDK2, CDK4, CDK6 e similares, envolvidos na regulação do ciclo celular; CDK7, CDK8, CDK9, CDK11 e similares, envolvidos na regulação da transcrição; e outras cinases incluindo CDK3, CDK5 e similares. A CDK4/6 (cinases dependentes de ciclina 4 e 6) é um fator fundamental para regular o ciclo celular, as mutações do ciclo celular associadas ao câncer existem principalmente em processos de transformação G1 e G1/S, CDK4/6 e CiclinD combinam para formar um complexo de ci- nase ativa, através da fosforilação do produto Rb do gene supressor de tumor pRb, o fator de transcrição ligado a E2F é liberado; a trans- crição de genes associados com a fase S é iniciada, fazendo com que as células passem pelo ponto de verificação e sejam transferidas da fase G 1 para a fase S. A ativação específica de CDK4/6 está intima- mente relacionada à proliferação de alguns tumores. Aproximadamen- te 80% dos tumores humanos apresentam anormalidades na via da ciclina D-CDK4/6-INK4-Rb. Os inibidores de CDK4/6 bloqueiam o ciclo celular na fase G1 e, portanto, atuam para inibir a proliferação tumoral.

[0004] O desenvolvimento de um fármaco de direcionamento da cinase CDK4/6 é um campo significativo, e o alvo antitumoral possui as vantagens de: (1) A maioria das células em proliferação é depen- dente da proliferação de CDK2 ou CDK4/6, mas os inibidores de CDK4/6 não apresentam a citotoxicidade de "inibidores de pan-CDK", tal como mielossupressão e respostas intestinais; (2) Os experimentos pré-clínicos mostram que se o nível de ciclina D for aumentado ou P 16 INK 4a for inativado, a sensibilidade das células aos fármacos pode ser aumentada, e o direcionamento dos fármacos pode ser aumentado até certo ponto devido ao fenômeno de células tumorais em relação às células normais.

[0005] O pedido internacional PCT PCT/CN2017/117950 descreve uma classe de derivados de benzimidazol úteis como inibidores das proteínas cinases CDK 4/6, a maior parte dos quais são eficazes na inibição de CDK 4 e CDK 6. Visto que permanece uma necessidade não atendida de opções terapêuticas para doenças mediadas pela ci- nase, rastreamos ainda mais as formas de sal de derivados de benzi- midazol e suas formas de cristal para atender as necessidades médi-

cas do paciente.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0006] A presente invenção refere-se a um sal e uma forma de cristal de (R)-N-(5-((4-etilpiperazin-1-il)metil)piridin-2-il)-5-fluoro-4-(6- fluoro-1-metil-1,2,3,4-tetraidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]piridin-8- il)pirimidin-2-amina como mostrado na Fórmula I: Fórmula I (composto I) Sais de Fórmula I

[0007] Em algumas modalidades, o sal é formado por um ácido e composto I. O sal pode existir em várias formas físicas. Tal como, o sal pode estar presente como uma solução, suspensão ou como um sóli- do. Em algumas modalidades, o sal do composto é um sólido. Quando o composto é um sólido, o composto pode ser amorfo, cristal ou uma mistura dos mesmos. Os sais do Composto I com os dois ácidos são exemplificados abaixo. Os sais são sal de ácido tartárico e sal de ácido metanossulfônico, respectivamente. Em algumas modalidades, o sal de ácido tartárico é o sal de ácido L-tartárico. A estrutura do sal de ácido L-tartárico e do sal de ácido metanossulfônico do composto I é mostrada como na Fórmula II e Fórmula III: Sal de ácido L-tartárico do composto I (o composto de Fórmula II, composto II) Fórmula II (composto II) Sal de ácido metanossulfônico do composto I (o composto de

Fórmula III, composto III) Fórmula III (composto III)

[0008] A presente invenção também fornece várias formas de cris- tal do composto II e do composto III descritos acima. Tal como, Forma de cristal forma A do composto II

[0009] A presente invenção fornece uma forma de cristal A do composto II.

[0010] Em algumas modalidades, a forma de cristal A do composto II pode ser identificada por raios-X por difração de pó. Em algumas modalidades, o padrão de raios-X por difração de pó da forma de cris- tal A do composto II possui picos característicos no ângulo de difração 2θ de 4,4 ± 0,2°, 23,6 ± 0,2° e 26,9 ± 0,2°. Por conveniência, a presen- te invenção é chamada forma de cristal A.

[0011] Em algumas modalidades, o padrão de raios-X por difração de pó da forma de cristal A possui picos característicos no ângulo de difração 2θ de 4,4 ± 0,2°, 8,7 ± 0,2°, 10,8 ± 0,2°, 18,4 ± 0,2°, 23,6 ± 0,2° e 26,9 ± 0,2°.

[0012] Em algumas modalidades, o padrão de raios-X por difração de pó da forma de cristal A possui picos característicos no ângulo de difração 2θ de 4,4 ± 0,2°, 8,7 ± 0,2°, 10,8 ± 0,2°, 15,9 ± 0,2°, 18,4 ± 0,2°, 23,6 ± 0,2° e 26,9 ± 0,2°.

[0013] Em algumas modalidades, a forma de cristal A do composto II na presente invenção pode ser identificada utilizando varredura dife- rencial de calorimetria. Em algumas modalidades, a forma de cristal A possui um padrão de varredura diferencial de calorimetria substanci- almente mostrado em 11. No padrão de DSC, a forma de cristal A possui um pico endotérmico ao redor de 230,1 ~ 233,1 oC. Os resulta-

dos da varredura diferencial de calorimetria são determinados por DSC 200F3 240-20-0954-L da NETZSCH (purga de gás: nitrogênio; taxa de fluxo: 60 ml/min; taxa de aquecimento: 10 oC/min, faixa de ensaio: 30 o C a 300 oC).

[0014] Em algumas modalidades, a forma de cristal A do composto II na presente invenção possui um teor de ácido L-tartárico ao redor de 12,01% a 13,27%, que pode ser identificado utilizando a cromatografia de íons, detecção de condutividade e cálculo do teor de componente principal utilizando um método padrão externo.

[0015] Em algumas modalidades, a forma de cristal A do composto II na presente invenção pode ser identificada por 1HNMR, os resulta- dos de 1HNMR como se segue: 1HNMR (500 MHz, CDCl3) δppm: 1,01 - 1,04 (t, 3H, CH3, J = 5,3Hz), 1,50 - 1,52 (d, 3H, CH3, J = 6,5Hz), 1,93 - 1,95 (m, 2H, CH2), 2,03 - 2,06 (m, 1H, CH2), 2,16 - 2,19 (m, 1H, CH2), 2,50 (s, 8H, CH2), 2,57 (s, 2H,CH2), 2,93 - 3,09 (m, 2H,CH2), 3,47 (s, 1H, CH2), 4,02 (s, 1H, CH), 4,79 (s, 1H, CH), 7,68 - 7,70 (d, 1H, CH, J = 10,5), 7,71 - 7,73 (d, 1H, Ar-H, J = 12,5), 8,12 (s, 1H, Ar- H), 8,20 (s, 1H, Ar-H), 8,21 (s, 1H, Ar-H), 8,68 - 8,69 (d, 1H, Ar-H, J=3,5), 10,03 (s, 1H, N-H).

[0016] De preferência, a pureza da forma de cristal A é ≥ 85%.

[0017] De preferência, a pureza da forma de cristal A é ≥ 95%.

[0018] De preferência, a pureza da forma de cristal A é ≥ 99%.

[0019] De preferência, a pureza da forma de cristal A é ≥ 99,5%.

[0020] De preferência, a forma de cristal A é um anidrato.

[0021] A forma de cristal A do composto II fornecida pela presente invenção possui as características de boa cristalinidade, higroscopici- dade fraca e boa estabilidade e possui biodisponibilidade oral aceitá- vel. Forma de cristal B do composto II

[0022] A presente invenção também fornece outra forma de cristal do composto II, por conveniência, que é referida como forma de cristal B na presente invenção. A forma de cristal B possui aproximadamente um padrão de raios-X por difração de pó como mostrado na Fig. 2.

[0023] De preferência, a pureza da forma de cristal B é ≥ 85%.

[0024] De preferência, a pureza da forma de cristal B é ≥ 95%.

[0025] De preferência, a pureza da forma de cristal B é ≥ 99%.

[0026] De preferência, a pureza da forma de cristal B é ≥ 99,5%.

[0027] De preferência, a forma de cristal B é um anidrato. Forma de cristal do composto II

[0028] A presente invenção também fornece outra forma de cristal do composto II, por conveniência, que é referida como forma de cristal C na presente invenção. A forma de cristal C possui aproximadamente um padrão de raios-X por difração de pó como mostrado na Fig. 3.

[0029] De preferência, a pureza da forma de cristal C é ≥ 85%.

[0030] De preferência, a pureza da forma de cristal C é ≥ 95%.

[0031] De preferência, a pureza da forma de cristal C é ≥ 99%.

[0032] De preferência, a pureza da forma de cristal C é ≥ 99,5%.

[0033] A presente invenção fornece uma forma amorfa do compos- to II ou solvato do mesmo, a forma amorfa possui aproximadamente um padrão de raios-X por difração de pó como mostrado na Fig. 4.

[0034] A presente invenção também fornece uma composição far- macêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz da forma de cristal A, da forma de cristal B e/ou da forma de cristal C do composto II.

[0035] A presente invenção fornece, adicionalmente, as modalida- des preferidas da composição farmacêutica descrita acima:

[0036] De preferência, a composição farmacêutica compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz da forma de cristal A, da for- ma de cristal B e/ou da forma de cristal C do composto II, e excipien- tes, auxiliares ou veículos farmaceuticamente aceitáveis.

[0037] De preferência, a composição farmacêutica compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz da forma de cristal A do composto II e excipientes, auxiliares ou veículos farmaceuticamente aceitáveis.

[0038] De preferência, a composição farmacêutica compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz da forma de cristal A, da for- ma de cristal B e/ou da forma de cristal C do composto II, e pelo me- nos um outro ingrediente ativo.

[0039] De preferência, a composição farmacêutica compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz da forma de cristal A do composto II e pelo menos um outro ingrediente ativo.

[0040] De preferência, a composição farmacêutica é uma formula- ção oral.

[0041] De preferência, a composição farmacêutica é um comprimi- do ou cápsula.

[0042] A presente invenção também fornece o uso da forma de cristal A, da forma de cristal B e/ou da forma de cristal C do composto II na fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doen- ça, distúrbio ou condição em um paciente, em que, a doença, distúrbio ou condição é mediado por CDK, tal como CDK4 e/ou CDK6.

[0043] A presente invenção também fornece modalidades preferi- das da forma de cristal A, da forma de cristal B e/ou da forma de cristal C do composto II.

[0044] Preferivelmente, a doença, distúrbio ou condição é um cân- cer e/ou doença proliferativa.

[0045] Preferivelmente, a doença, distúrbio ou condição é câncer de cólon, câncer retal, linfoma de células do manto, mieloma múltiplo, câncer de mama, câncer de próstata, glioblastoma, câncer de esôfago de células escamosas, lipossarcoma, linfoma de células T, melanoma, câncer pancreático, câncer cerebral ou câncer de pulmão.

[0046] Preferivelmente, a doença, distúrbio ou condição é o câncer de mama.

[0047] A presente invenção também fornece um método de trata- mento de uma doença, distúrbio ou condição em um paciente através da administração da forma de cristal A, da forma de cristal B e/ou da forma de cristal C do composto II ao paciente.

[0048] A presente invenção fornece ainda modalidades preferidas do método de tratamento de uma doença, distúrbio ou condição em um paciente com a forma de cristal A, forma de cristal B e/ou forma de cristal C do composto II.

[0049] De preferência, a doença, distúrbio ou condição é mediada pela CDK, tal como CDK4 e/ou CDK6.

[0050] De preferência, a doença, distúrbio ou condição é um cân- cer e/ou doença proliferativa.

[0051] De preferência, a doença, distúrbio ou condição é câncer de cólon, câncer retal, linfoma de células do manto, mieloma múltiplo, câncer de mama, câncer de próstata, glioblastoma, câncer de esôfago de células escamosas, lipossarcoma, linfoma de células T, melanoma, câncer pancreático, câncer cerebral ou câncer de pulmão.

[0052] De preferência, a doença, distúrbio ou condição é câncer de mama. Forma de cristal D do composto III

[0053] A presente invenção fornece uma forma de cristal do com- posto III e/ou solvato do mesmo, por conveniência, a presente inven- ção é referida como a forma de cristal D. A forma de cristal D possui aproximadamente um padrão de raios-X por difração de pó como mos- trado na Fig. 5.

[0054] De preferência, a pureza da forma de cristal D é ≥ 85%.

[0055] De preferência, a pureza da forma de cristal D é ≥ 95%.

[0056] De preferência, a pureza da forma de cristal D é ≥ 99%.

[0057] De preferência, a pureza da forma de cristal D é ≥ 99,5%.

[0058] De preferência, a forma de cristal D é um anidrato. Forma de cristal E do composto III

[0059] A presente invenção fornece uma forma de cristal do com- posto III e/ou solvato do mesmo, por conveniência, a presente inven- ção é referida como a forma de cristal E. A forma de cristal E possui aproximadamente um padrão de raios-X por difração de pó como mos- trado na Fig. 6.

[0060] De preferência, a pureza da forma de cristal E é ≥ 85%.

[0061] De preferência, a pureza da forma de cristal E é ≥ 95%.

[0062] De preferência, a pureza da forma de cristal E é ≥ 99%.

[0063] De preferência, a pureza da forma de cristal E é ≥ 99,5%.

[0064] De preferência, a forma de cristal E é um di-hidrato. Forma de cristal F do composto III

[0065] A presente invenção fornece uma forma de cristal do com- posto III e/ou solvato do mesmo, por conveniência, a presente inven- ção é referida como a forma de cristal F. A forma de cristal F possui aproximadamente um padrão de raios-X por difração de pó como mos- trado na Fig. 7.

[0066] De preferência, a pureza da forma de cristal F é ≥ 85%.

[0067] De preferência, a pureza da forma de cristal F é ≥ 95%.

[0068] De preferência, a pureza da forma de cristal F é ≥ 99%.

[0069] De preferência, a pureza da forma de cristal F é ≥ 99,5%.

[0070] De preferência, a forma de cristal F é um hidrato 1,5. Forma de cristal G do composto III

[0071] A presente invenção fornece um composto de forma de cris- tal III e/ou solvato do mesmo, por conveniência, a presente invenção é referida como a forma de cristal G. A forma de cristal G possui aproxi- madamente um padrão de raios-X por difração de pó como mostrado na Fig. 8.

[0072] De preferência, a pureza da forma de cristal G é ≥ 85%.

[0073] De preferência, a pureza da forma de cristal G é ≥ 95%.

[0074] De preferência, a pureza da forma de cristal G é ≥ 99%.

[0075] De preferência, a pureza da forma de cristal G é ≥ 99,5%.

[0076] De preferência, a forma de cristal G é um hidrato 2,5.

[0077] A presente invenção também fornece o composto III de forma amorfa e/ou solvato do mesmo, a forma amorfa possui aproxi- madamente um padrão de raios-X por difração de pó como mostrado na Fig. 9.

[0078] A presente invenção fornece ainda uma composição farma- cêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz da forma de cristal D, forma de cristal E, forma de cristal F e/ou forma de cristal G do composto III.

[0079] A presente invenção também fornece modalidades preferi- das da composição farmacêutica.

[0080] De preferência, a composição farmacêutica compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz da forma de cristal D, forma de cristal E, forma de cristal F e forma de cristal G do composto III e excipientes, auxiliares ou veículos farmaceuticamente aceitáveis.

[0081] De preferência, a composição farmacêutica compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz da forma de cristal D, forma de cristal E, forma de cristal F e forma de cristal G do composto III, e pelo menos outro ingrediente ativo.

[0082] De preferência, a composição farmacêutica é uma formula- ção oral.

[0083] De preferência, a composição farmacêutica é um comprimi- do ou cápsula.

[0084] A presente invenção também fornece o uso da forma de cristal D, da forma de cristal E, da forma de cristal F e/ou da forma de cristal G do composto III na fabricação de um medicamento para o tra-

tamento de uma doença, distúrbio ou condição em um paciente, em que, doença, distúrbio ou condição é mediada pela CDK, tal como CDK4 e/ou CDK6.

[0085] A presente invenção também fornece modalidades preferi- das de uso da forma de cristal D, da forma de cristal E, da forma de cristal F e/ou da forma de cristal G do composto III.

[0086] De preferência, a doença, distúrbio ou condição é câncer e/ou doença proliferativa.

[0087] De preferência, a doença, distúrbio ou condição é câncer de cólon, câncer retal, linfoma de células do manto, mieloma múltiplo, câncer de mama, câncer de próstata, glioblastoma, câncer de esôfago de células escamosas, lipossarcoma, linfoma de células T, melanoma, câncer pancreático, câncer cerebral ou câncer de pulmão.

[0088] De preferência, a doença, distúrbio ou condição é o câncer de mama.

[0089] A presente invenção também fornece um método de trata- mento de uma doença, distúrbio ou condição em um paciente através da administração ao paciente da forma de cristal D, da forma de cristal E, da forma de cristal F e/ou da forma de cristal G do composto III.

[0090] A presente invenção ainda fornece as modalidades preferi- das de um método de tratamento de uma doença, distúrbio ou condi- ção em um paciente através da administração ao paciente da forma de cristal D, forma de cristal E, forma de cristal F e/ou forma de cristal G do composto III:

[0091] De preferência, a doença, distúrbio ou condição é mediada pela CDK, tal como CDK4 e/ou CDK6.

[0092] Preferivelmente, a doença, distúrbio ou condição é câncer e/ou doença proliferativa.

[0093] Preferivelmente, a doença, distúrbio ou condição é câncer de cólon, câncer retal, linfoma de células do manto, mieloma múltiplo,

câncer de mama, câncer de próstata, glioblastoma, câncer de esôfago de células escamosas, lipossarcoma, linfoma de células T, melanoma, câncer pancreático, câncer cerebral ou câncer de pulmão.

[0094] De preferência, a doença, distúrbio ou condição é o câncer de mama.

[0095] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece uma forma de cristal do sal do composto I, a forma de cristal é prepa- rada pelas seguintes etapas: 1) colocar em suspensão (R)-N-(5-((4-etilpiperazin-1- il)metil)piridin-2-il)-5-fluoro-4-(6-fluoro-1-metil-1,2,3,4- tetraidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]piridin-8-il)pirimidin-2-amina (o com- posto I) em água e/ou um solvente orgânico solúvel em água, obtendo uma suspensão; 2) aquecer a suspensão para 50 oC ou mais; 3) manter a temperatura em 50 oC ou mais, adicionar o áci- do à suspensão e realizar um tratamento de acidificação, obtendo-se uma solução límpida; 4) esfriar a solução límpida para a temperatura ambiente, filtrar enquanto se agita, secar a torta do filtro, obter a forma de cristal do sal do composto I.

[0096] Tal como, o ácido é o ácido L-tartárico na etapa 3), a forma de cristal na etapa 4) é a forma de cristal do sal de ácido L-tartárico do composto I.

[0097] Tal como, o ácido é o ácido metanossulfônico na etapa 3), a forma de cristal na etapa 4) é a forma de cristal de ácido metanossul- fônico do composto I.

[0098] Em algumas modalidades, a forma de cristal A do composto II é preparada pelas seguintes etapas: Dissolver o composto I em metanol em 50 a 70 oC para obter uma so- lução límpida, dissolver o ácido L-tartárico em metanol, adicionar a so-

lução de ácido L-tartárico em metanol por gotejamento à solução do composto I em metanol, filtrar após agitação, secar uma torta do filtro em 40 a 70 oC, obter a forma de cristal A do composto II.

[0099] Em algumas modalidades, um método para a preparação da forma de cristal B do composto II, compreendendo: Adicionar água e acetona à forma de cristal A do composto II, obter uma solução límpida, agitar após filtração, depois agitar em 0 a 20 oC, precipitar o sólido, secar após centrifugação, obtendo a forma de cris- tal B do composto II.

[00100] Em algumas modalidades, um método para a preparação da forma de cristal C do composto II, compreendendo: Sob agitação, 1 a 03 (100 g) de metanol anidro (1 L) são adicionados à caldeira de reação de 2 L, subsequentemente, aquecida para 65 oC. Após a mistura de reação ser clarificada durante 0,5 h, uma solução de ácido L-tartárico em metanol (uma solução de 30,09 g de ácido tar- tárico em 100 ml de metanol anidro) é adicionada por gotejamento. O tempo de gotejamento é controlado durante 45 a 60 min. Após a con- clusão do gotejamento, a solução é tratada a 65 oC durante 4 h. Em seguida, uma solução de ácido L-tartárico em metanol (uma solução de 7,48 g de ácido tartárico em 100 ml de metanol anidro) é adiciona- da. O tempo de gotejamento é controlado durante 30 a 45 min. Após a conclusão do gotejamento, a solução é tratada a 65 oC durante 1,5 h. Depois, uma solução de ácido L-tartárico em metanol (uma solução de 8,55 g de ácido tartárico em 100 ml de metanol anidro) é adicionada. O tempo de gotejamento é controlado durante 30 a 45 min. Após a con- clusão do gotejamento, a solução é tratada a 65 oC durante 1,5 h. A solução é esfriada abaixo de 10 oC, filtrada, a torta do filtro é lavada com metanol (100 ml × 2), depois secada em vácuo a 45 oC durante 36 h, 109,4 g de pó de cristal amarelo claro é obtido, o qual é o sal de ácido L-tartárico do composto II. O pó é identificado através de raios X por difração de pó. O resultado mostra que a forma de cristal é a forma de cristal C do sal de ácido L-tartárico do composto II.

[00101] Em algumas modalidades, um método de preparação da forma amorfa do composto II, compreendendo: trifluoroetanol é adicionado à forma de cristal A do composto II, a solu- ção límpida é obtida, depois a solução límpida é concentrada sob pressão reduzida e a forma amorfa do composto II é obtida.

[00102] A forma amorfa do Composto II facilmente forma a Forma B do Composto II sob a influência de umidade em um ambiente na tem- peratura ambiente.

[00103] A forma amorfa do composto II é facilmente convertida na forma de cristal B do composto II sob a influência de água na tempera- tura ambiente.

[00104] De forma exemplar, a presente invenção também fornece um método de preparação de sal de ácido L-tartárico (composto II) de (R)-N-(5-((4-etilpiperazin-1-il)metil)piridin-2-il)-5-fluoro-4-(6-fluoro-1- metil-1,2,3,4-tetraidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]piridin-8-il)pirimidin-2- amina, compreendendo:

(legenda da figura = etapa – tolueno – 1,4-dioxano – Xantphos – ácido L-tartárico – composto II)

[00105] Em algumas modalidades, um método de preparação da forma de cristal D do composto III, que compreende: o Composto I é dissolvido em metanol em 50 a 70 oC, o ácido meta-

nossulfónico é dissolvido em metanol. A solução de ácido metanossul- fônico em metanol é adicionada por gotejamento à solução do com- posto I. Após agitação, éter isopropílico é adicionado por gotejamento, um sólido é precipitado lentamente, filtrado, a torta de filtro é secada em 40 a 70 oC, um sólido é obtido. Éter isopropílico é adicionado por gotejamento ao líquido-mãe, filtrado após agitação, a torta de filtro é secada em 40 a 70 oC, um sólido é obtido. O sólido obtido acima é continuamente secado, a forma de cristal D do composto III é obtida.

[00106] Em algumas modalidades, o método de preparação da for- ma de cristal E do composto III, que compreende:

[00107] A forma de cristal D do composto III é colocada na tempera- tura ambiente sob umidade RH 52% durante 1 a 4 dias, a forma de cristal E do composto III é obtida.

[00108] Em algumas modalidades, o método de preparação da for- ma de cristal F do composto III, que compreende:

[00109] A forma de cristal E do composto III é colocada na tempera- tura ambiente sob umidade RH 44% durante 1 a 14 dias, a forma de cristal F do composto III é obtida.

[00110] Em algumas modalidades, o método de preparação da for- ma de cristal G do composto III, que compreende:

[00111] A forma de cristal D do composto III é colocada na tempera- tura ambiente sob umidade RH 97% durante 1 a 4 dias, a forma de cristal G do composto III é obtida.

[00112] Em algumas modalidades, o método de preparação da for- ma amorfa do composto III, que compreende:

[00113] A forma de cristal D do composto III é dissolvida em água, depois a mistura foi concentrada sob pressão reduzida, é obtido um sólido viscoso, o qual é a forma amorfa do composto III.

[00114] A forma amorfa do composto III é instável quando ampliada para 50 mg, que se converte em uma forma de cristal.

[00115] Todas as formas de cristal da invenção são substancial- mente puras.

[00116] O termo "substancialmente puro", como aqui utilizado, signi- fica que pelo menos 85% em peso, de preferência pelo menos 95% em peso, mais preferivelmente pelo menos 99% em peso, o mais pre- ferível pelo menos 99,5% em peso da forma de cristal no composto de fórmula I está presente na presente invenção, especialmente na forma A, forma B e/ou forma C.

[00117] Conforme descrito nesta invenção, novas formas de cristal podem ser identificadas pelo padrão de raios-X por difração de pó, no entanto, aqueles versados na técnica reconhecerão que as intensida- des máximas e/ou condições máximas de raios-X por difração de pó podem variar de condição experimental para condição experimental, tais como diferentes condições de teste de difração e/ou orientação preferencial, etc. Ao mesmo tempo, o valor medido de 2θ terá um erro de cerca de ± 0,2° devido à precisão diferente dos diferentes instru- mentos. No entanto, sabe-se que o valor de intensidade relativa do pico é mais dependente do que a posição do pico em certas proprie- dades da amostra a ser medida, tal como o tamanho dos cristais na amostra, a orientação dos cristais e a pureza do material que está sendo analisado. Portanto, é possível mostrar desvios de intensidade de pico na faixa ao redor de ± 20% ou mais. No entanto, a despeito do erro experimental, erro instrumental e preferência de orientação, uma pessoa versada na técnica também pode obter informações suficientes para identificar a forma do cristal a partir dos dados de XRD fornecidos nesta patente.

[00118] Na presente invenção, "tendo um padrão de raios-X por di- fração de pó como mostrado na FIG. 1" ou "tendo um padrão de raios- X por difração de pó como mostrado na FIG. 2" significa que o padrão de raios-X por difração de pó mostra um pico principal como mostrado na FIG. 1 ou FIG. 2, em que o pico principal é comparado ao pico mais elevado na FIG. 1 ou FIG. 2 cuja intensidade relativa é designada co- mo 100%. Esses picos possuem valores de intensidade relativa supe- riores a 10%, de preferência superiores a 30%.

[00119] Na presente invenção, referência à "adição de meta- nol/acetona" e similar no método de preparação da forma de cristal significa que o metanol é adicionado em primeiro lugar e, em seguida, a acetona é adicionada e, da mesma forma, "etanol/água" significa que o etanol é adicionado em primeiro lugar e depois a água é adicionada; adicionalmente, "trifluoroetanol/acetato de etilo" significa que o trifluo- roetanol é adicionado em primeiro lugar e depois acetato de etila é adicionado. De forma similar, por exemplo, "solvente 1/solvente 2" sig- nifica que o solvente 1 é adicionado em primeiro lugar e depois o sol- vente 2 é adicionado; por "solvente 2/solvente 1" entende-se que o solvente 2 é adicionado em primeiro lugar seguido pelo solvente 1.

[00120] Na presente invenção, o termo "quantidade terapeuticamen- te eficaz" refere-se a uma quantidade de um composto/forma de cris- tal, quando administrado a um indivíduo, é suficiente para efetuar tal tratamento de uma doença, distúrbio ou sintoma no tratamento de uma doença, ou pelo menos um sintoma clínico de uma doença ou distúr- bio. "Quantidade terapeuticamente eficaz" pode variar com o compos- to, a doença, o distúrbio e/ou o sintoma da doença ou distúrbio, a gra- vidade da doença, distúrbio e/ou sintoma da doença ou distúrbio, a idade do paciente a ser tratado, e/ou o peso do paciente a ser tratado, etc. qualquer caso particular, uma quantidade apropriada será eviden- te para aqueles versados na técnica. Também pode ser determinado por experimentação rotineira. "Quantidade terapeuticamente eficaz" no caso de terapia de combinação refere-se à quantidade total do objeto de combinação eficaz para tratar a doença, distúrbio ou condição.

[00121] Todas as formas de dosagem das composições farmacêuti-

cas da presente invenção podem ser preparadas por métodos conven- cionais na técnica farmacêutica, por exemplo, através de mistura do ingrediente ativo com um ou mais ingredientes acessórios e, em se- guida, preparação da forma de dosagem desejada.

[00122] "Veículo farmaceuticamente aceitável" refere-se a um veí- culo farmacêutico convencional adequado para a formulação farma- cêutica desejada, por exemplo: diluentes, excipientes tais como água, vários solventes orgânicos e similares; cargas, tais como amido, saca- rose e similares; aglutinantes, tais como derivados de celulose, algina- tos, gelatina e polivinilpirrolidona (PVP); umectantes tais como glicerol; desintegrantes tais como agar-agar, carbonato de cálcio e bicarbonato de sódio; promotores de absorção tais como compostos de amônio quaternário; um tensoativo tal como álcool cetílico; veículos absorven- tes tais como caulim e bentonita; lubrificantes, tais como talco, estea- rato de cálcio, estearato de magnésio, polietileno glicol e similares, po- dem ser adicionalmente acrescentados às composições farmacêuticas com outros adjuvantes farmaceuticamente aceitáveis, tais como agen- tes dispersantes, agentes estabilizantes, agentes espessantes, agen- tes complexantes, agentes tamponantes, intensificadores de penetra- ção, polímeros, agentes aromatizantes, agentes adoçantes e corantes. Adjuvantes apropriados para a forma de dosagem desejada e o modo de administração desejado são preferivelmente usados.

[00123] O termo "doença, distúrbio" ou "condição" refere-se a qual- quer doença, distúrbio, doença, sintoma ou indicação. Descrição dos desenhos

[00124] FIG. 1: Padrão de XRD da forma de cristal A do composto II (pequena amostra, número do lote: 1072P04-A14S01).

[00125] FIG. 2: padrão de XRD da forma de cristal B.

[00126] FIG. 3: padrão de XRD da forma de cristal C do composto II.

[00127] FIG. 4: padrão de XRD da forma amorfa do composto II.

[00128] FIG. 5: padrão de XRD da forma de cristal D do composto III.

[00129] FIG. 6: padrão de XRD da forma de cristal E do composto III.

[00130] FIG. 7: padrão de XRD da forma de cristal F do composto III.

[00131] FIG. 8: padrão de XRD da forma de cristal G do composto III.

[00132] FIG. 9: padrão de XRD da forma amorfa do composto III.

[00133] FIG. 10: padrão de XRD da forma de cristal A do composto II (pequena amostra, número do lote: 1072P04-A14S01) em diferentes condições de estabilidade. De baixo para cima, a média das linhas ① a ④ respectivamente é representada da seguinte forma: ① Padrão de XRD da forma de cristal A do composto II para o dia 0; ② Padrão de XRD da forma de cristal A do composto II a 25 oC, sob umidade de 60% durante 10 dias; ③ Padrão de XRD da forma de cristal A do composto II a 40 oC, sob umidade de 75% durante 10 dias; ④ Padrão de XRD da forma de cristal A do composto II a 80 oC, sob condição de secagem durante 24 h.

[00134] FIG. 11: padrão de DSC da forma de cristal A do composto II. A abscissa (eixo X) representa a temperatura em unidades de oC; a ordenada (eixo Y) representa o fluxo de calor nas unidades de w/g.

[00135] FIG. 12: padrão de XRD da forma de cristal A do composto II (a amostra piloto, número do lote: 20170903).

[00136] Na FIG. 1 a FIG. 10 e FIG. 12 acima, as abscissas (eixo X)

representam o ângulo de difração 2θ em unidades de "°"; as ordena- das (eixo Y) representam a intensidade de difração em unidade de "contagens".

EXEMPLOS

[00137] A presente invenção será ainda ilustrada pelos seguintes exemplos, mas não deve ser interpretado que a presente invenção se limita ao escopo dos exemplos. Nas técnicas ou métodos dos seguin- tes exemplos, onde as condições específicas não foram especifica- mente descritas, elas podem ser selecionadas a partir de métodos e condições convencionais. Abreviações: Cbz-Cl: Cloroformiato de benzila; DCM: Diclorometano; DMF: N,N-Dimetilformamida; DMSO: Dimetilsulfóxido; DSC: Varredura diferencial de calorimetria; DVS: Adsorção dinâmica de vapor; EtOH: Etanol; EtOAc: Acetato de etila; KOAc: Potássio de ácido acético; KO-t-Bu: Terc-butóxido de potássio; MeOH: metanol; P(Cy)3: Tricicloexilfosfina; Pd(OAc)2: Acetato de paládio; Pd(dppf)Cl2: dicloreto de [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno] paládio; RT: temperatura ambiente; RH: Umidade relativa; TGA: Análise termogravimétrica; TEA: Trietanolamina; THF: Tetraidrofurano;

Xantphos: 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno; XRD: padrão de raios-X por difração de pó. Exemplo 1 - Síntese da forma de cristal A do composto II (legenda da figura = etapa – tolueno – 1,4-dioxano – Xantphos – ácido L-tartárico – composto II) Síntese de 1-A1-01 (etapa 1)

[00138] DCM (20 L), 1-A1-S1 (300 g) e Et3N (390 g) foram adicio-

nados à caldeira de reação de 50 L e esfriados abaixo de -5 oC, em seguida, à mistura acima foi adicionada por gotejamento Cbz-Cl (570 g) durante 5. Após o gotejamento estar completo, a mistura de reação foi aquecida para a temperatura ambiente e reagida, TLC (EtOAc: he- xano = 1:3) monitorada até a reação ser concluída. À mistura de rea- ção foi adicionada água (1,5 L), depois ácido clorídrico concentrado (80 ml) foi adicionado lentamente por gotejamento, o pH foi ajustado para 1 a 2. A fase orgânica foi separada e depois lavada com 15 L de água, secada por Na2SO4 anidro durante 0,5 h, filtrada para remover o agente de secagem, o filtrado foi coletado e concentrado. 730 g de 1- A1-01 (bruto) foram obtidos como um líquido oleoso amarelo claro com 95,4% de rendimento. Síntese de 1-A1-02 (etapa 2)

[00139] A um frasco de reação de 20 L foram adicionados 720 ml de DCM, DMSO (90g), a mistura foi agitada e esfriada abaixo de -65 oC sob nitrogênio, em seguida, COCl 2 foi adicionado por gotejamento du- rante 2 h. Após o gotejamento estar completo, a mistura foi agitada durante 20 min abaixo de -65 oC; depois uma solução de 1-A1-01 em DCM (143 g/500 ml DCM) foi adicionada por gotejamento durante 40 min. Após o gotejamento estar completo, a mistura reagiu durante 15 min abaixo de -65 oC. Abaixo de -65 oC, à mistura foi adicionado por gotejamento TEA durante 2 h. Após o gotejamento estar completo, a mistura de reação foi aquecida para -20 oC, em seguida, 250 L de água foram adicionados, o pH foi ajustado para 1 a 2 com HCl. A fase orgânica foi separada e depois lavada com água (1 L × 2), secada por Na2SO4 anidro, filtrada para remover o agente de secagem, o filtrado foi coletado e concentrado. 432 g de 1-A1-02 bruto foram obtidos co- mo um líquido oleoso amarelo. O produto bruto foi utilizado diretamen- te na próxima etapa. Síntese de 1-A1-03 (etapa 3)

[00140] 400 ml de THF, KOt-Bu (215 g) foram adicionados à caldei- ra de reação de 1 L e esfriados para 5 a 15 oC, à mistura foi adiciona- do por gotejamento fosfonoacetato de trietila (430 g) durante 50 min. Depois, o gotejamento é concluído. Uma solução de 1-A1-02 em THF (431 g/100 ml THF) foi gotejada durante 1 h abaixo de 15 oC. Após o gotejamento ter sido concluído, a TLC (EtOAc: hexano = 1:3) monito- rou até que a reação fosse concluída. À mistura de reação foi adicio- nado NaCl saturado (1,5 L), a fase de THF foi coletada. A fase aquosa foi extraída com DCM (2 L), então a fase orgânica foi secada por Na2SO4 anidro durante 0,5 h, filtrada para remover o agente de seca- gem, o filtrado foi coletado e concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna. 390 g de 1-A1-03 foram obtidos como um líquido oleoso amarelo claro. Síntese de 1-A1-041 (etapa 4)

[00141] Solução aquosa de NaOH (301 g de NaOH / 1,5 L de água) foi adicionada a uma solução de 1-A1-03 em THF (601 g/2,3 L de THF), e aquecida em refluxo durante 3 a 4 h em uma caldeira de rea- ção de 5 L. A mistura resultante foi esfriada para 40 a 50 oC, mantida e separada, a fase orgânica (THF) foi coletada e concentrada para for- necer um sólido. O sólido foi dissolvido em água (20 L), a fase aquosa foi extraída com éter metil terc-butílico (2 L), EtOAc (2 L), éter metil terc-butílico (2 L) sequencialmente. Em seguida, a fase aquosa foi ajustada para pH 1 a 2 com HCl concentrado e extraída com EtOAc (1,5 L, 3 L) por duas vezes. A fase orgânica foi combinada e secada por Na2SO4 anidro durante 0,5 h, filtrada para remover o agente de secagem, o filtrado foi recolhido e concentrado para fornecer um sóli- do. O sólido foi misturado com éter isopropílico (3 L) durante 2 h, filtra- do para fornecer um sólido. O sólido foi lavado com éter isopropílico (1 L). O sólido é secado durante 3 a 4 h a 50 oC por sopro de ar. 331 g de 1-A1-041 foram obtidos como um sólido amarelo claro com rendimento de 52,7%. Síntese de 1-051 (etapa 5)

[00142] 1-A1-041 (600 g), metanol (25 L), H2SO4 concentrado foram adicionados à caldeira de reação de 50 L e aquecidos em refluxo du- rante 3 a 4 h. Após reação ser finalizada, a mistura de reação foi esfri- ada para a temperatura ambiente. Em seguida, a mistura foi concen- trada, ao resíduo obtido foi adicionado DCM (15 L), depois a mistura foi ajustada para pH = 9 a 10 com K2CO3. A fase orgânica foi coletada, secada por Na2SO4 anidro durante 0,5 h, filtrada para remover o agen- te de secagem, o filtrado foi coletado e concentrado. 6,37 kg de 1-A1- 051 foram obtidos como um sólido esbranquiçado com 97,3% de ren- dimento. Síntese de 1-A1 (etapa 6)

[00143] 1-A1-051 (500 g), metanol (1,8 L) e Pd/C foram adicionados a uma caldeira de reação de 2 L, o sistema foi substituído ar com ni- trogênio e substituído nitrogênio com hidrogênio três vezes sucessi- vamente. A mistura foi aquecida para 85 oC e reagida em 3,0 MPa sob atmosfera de hidrogênio durante 3 h. A mistura resultante foi esfriada para a temperatura ambiente, filtrada para remover Pd/C, coletada a fase orgânica e a fase orgânica foi concentrada para fornecer um sóli- do amarelo claro. Ao sólido foi adicionado éter isopropílico (3 L) e cris- talizado a -20 oC durante 1 h, filtrado para fornecer um sólido, o sólido foi lavado com éter isopropílico (500 ml). 234 g de 1-A1 foram obtidos como um sólido amarelo claro com 90,5% de rendimento. Síntese de 1-A2 (etapa 7)

[00144] POCl3 (413 g) foi adicionado por gotejamento a uma mistura de 1-A1 (200 g) e 4-bromo-2,6-difluroanilina (410 g) tolueno (1,2 L) em uma caldeira de reação de 50 L durante 1 h. Após o gotejamento estar completo, Et3N foi adicionado por gotejamento em um banho de gelo durante 1 h. Após o gotejamento ter sido concluído, a mistura foi aquecida para 110 oC e reagida durante 1 h. Em seguida, a mistura de reação foi esfriada em 2 a 10 oC, 1 L de água foi adicionado, e a mistu- ra foi ajustada para pH = 9 a 10 com K2CO3 saturado, e extraída com EtOAc (1,5 L, 1 L) por duas vezes, combinada com a fase orgânica. Depois, a fase orgânica foi extraída com 2 L de NaCl saturado e seca- da por Na2SO4 anidro durante 0,5 h, filtrada para remover o agente de secagem, o filtrado foi coletado e concentrado para fornecer um sólido. O sólido foi misturado com éter isopropílico (1 L) durante 10 min, filtra- do. 460 g de 1-A2 foram obtidos como um sólido amarelo. Síntese de 1-A3 (etapa 8)

[00145] Uma mistura de 1-A2 (450g), DMF (2 L), Cs2CO3 (700 g) foi agitada a 110 oC durante 24 h em uma caldeira de reação. A TLC mo- nitorou até a reação estar concluída. À mistura resultante foi adiciona- do EtOAc (3 L), filtrada para remover impurezas sólidas, o filtrado foi extraído com NaCl saturado (1 L × 5), e a fase orgânica foi secada por Na2SO4 anidro durante 0,5 h, concentrada para dar um sólido, depois o sólido foi misturado com éter metil terc-butílico (1 L × 2) durante 30 min, filtrado. 382 g de 1-A3 foram obtidos como um sólido amarelo cla- ro com 90,10% de rendimento. Síntese de 1-01 (etapa 9)

[00146] 1-A3 (380 g), Bis(pinacolato)diboro (400 g), KOAc (340 g), Pd(OAc)2 (6 g), P(Cy)3 (7g), 1,4-dioxano foram adicionados a uma cal- deira de reação, a mistura foi aquecida para 90 oC e reagida durante 2 h sob nitrogênio. A TLC monitorou até que a reação foi concluída. A mistura resultante foi esfriada para a temperatura ambiente, filtrada, o filtrado foi concentrado para remover 1,4-dioxano, o resíduo foi purifi- cado por cromatografia em coluna com n-hexano e DCM, então o pro- duto resultante foi misturado com n-hexano (1,2 L) durante 1 h. 334 g de 1-01 foram obtidos como um sólido rey? em 70,10% de rendimento. Síntese de 1-02 (etapa 10)

[00147] Uma mistura de 1-01 (128 g), 1,4-dioxano (1 L), 1-S3 (85 g), K2CO3 (110 g), Pd(dppf)Cl2.DCM foi aquecida para 60 oC e reagida durante 4 h sob nitrogênio em uma garrafa de 2 L com três gargalos. A mistura de reação foi esfriada para a temperatura ambiente e concen- trada sob pressão reduzida para remover 1,4-dioxano. Ao resíduo foi adicionado DCM (1,5 L) e água (1,1 L), misturado, mantido e separa- do. A fase aquosa foi extraída com DCM (10 L). A fase orgânica com- binada foi extraída com HCl 0,5% (1 L × 2) e NaCl saturado subse- quentemente. A fase orgânica foi secada por Na2SO4 anidro (500 g), filtrada para remover o agente de secagem, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. Ao resíduo foi adicionado EtOAc (0,5 L) e agita- do durante 30 minutos para precipitar um sólido, filtrado. O sólido foi lavado com EtOAc (0,5 L), depois secado a 45 oC durante 3 h em vá- cuo, um sólido amarelo (120 g) foi obtido. Síntese de 1-03 (etapa 11)

[00148] Uma mistura de 1-02 (100 g), 1,4-dioxano (1 L), 1-C2 (80 g), Cs2CO3 (163 g), Pd(OAc)2 (2 g) e 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9- dimetilxanteno (Xantphos) (4 g) foi agitada a 85 oC em uma garrafa de três gargalos de 2 L sob nitrogênio. Após o término da reação, a solu- ção resultante foi esfriada para a temperatura ambiente, filtrada para fornecer um sólido, o sólido foi lavado com EtOAc. Em seguida, o sóli- do foi adicionado a uma mistura de DCM (1,5 L) e água (1,1 L), agita- do, mantido em repouso, e a camada orgânica foi separada. Depois, a fase aquosa foi extraída com DCM (700 ml). E a fase orgânica foi combinada, depois foi lavada com água (700 ml × 2). A fase orgânica foi secada por Na2SO4 anidro (700 g). O Na2SO4 foi removido por fil- tração, o filtrado foi concentrado. Ao resíduo foi adicionado metanol (0,5 L) e aquecido para 55 ~ 65 oC durante 0,5 h, em seguida esfriado para a temperatura ambiente, filtrado para fornecer um sólido, o sólido foi lavado com EtOAc 500 ml. O sólido foi secado a 45 oC sob vácuo durante 8 h. 111,79 g de 1-03 foram obtidos como um sólido amarelo claro. Síntese do composto II (etapa 12)

[00149] 1-03 (500 g), metanol anidro (3,8 L) foi adicionado à caldei- ra de reação de 10 L e aquecido a 65 oC. Após a mistura ter sido agi- tada até uma solução límpida durante 0,5 h, uma solução de ácido L- tartárico em metanol (150,89 g de ácido tartárico foram dissolvidos em 500 ml de metanol anidro) foi adicionada por gotejamento. O tempo de gotejamento é controlado na faixa de 45 a 60 min. Após o gotejamento estar completo, a mistura foi agitada a 65 oC durante 4 h, uma solução de ácido L-tartárico em metanol (35,58 g de ácido tartárico foram dis- solvidos em 250 ml de metanol anidro) foi continuamente adicionada por gotejamento. O tempo de gotejamento é controlado na faixa de 30 a 45 min. Após o gotejamento estar completo, a mistura foi agitada a 65 oC durante mais 1 h, uma solução de ácido L-tartárico em metanol (36,55 g de ácido tartárico foram dissolvidos em 250 ml de metanol anidro) foi continuamente adicionada por gotejamento. O tempo de go- tejamento é controlado na faixa de 30 a 45min. Após o gotejamento estar completo, a mistura foi agitada a 65 oC durante mais 1,5 h. A mistura foi esfriada para 20 a 30 oC, filtrada, a torta de filtro foi lavada com metanol (400 ml x 2), depois secada a 45 oC durante 36 h em vá- cuo. 530,64 g de composto II foram obtidos como um pó de cristal amarelo claro. Ele mostrou que a forma de cristal era a forma de cristal A do composto II através de raios-X por difração de pó. Exemplo 2, o resultado da detecção de XRD

[00150] Uma pequena amostra do composto II (número do lote: 1072 P 04-A 14 S 01) e uma amostra piloto do composto II (número do lote: 20170903) foi sintetizada de acordo com o método do exemplo 1, depois a pequena amostra e a amostra piloto foram então caracteriza- das por XRD.

[00151] Em uma modalidade da invenção, a análise por XRD da pequena amostra (número do lote: 1072P04-A14S01) foi executada por SoliPharmausing Bruker D8 Advance Diffractometer.

Os instru- mentos de detecção e os parâmetros de detecção foram apresentados na tabela 1, os dados do padrão de XRD foram apresentados na tabe- la 2. Tabela 1. Instrumentos de detecção de XRD e parâmetros de de- tecção da pequena amostra Raios-X por difração de pó de (XRD) & Estágio Dispositivo de aquecimento por XRD Instrumentos Difratômetro Bruker D8 Advance Comprimento de onda do alvo de cobre: Kα = Índice técnico 1,54Å radiação (40kV, 40mA), goniômetro θ-2θ, monocromador Mo, detector Lynxeye Material de cali- Al2O3 bração Software de aqui- Diffrac Plus XRD Commander sição Software de análi- MDI Jade 6 se Especificação da 24,6 mm de diâmetro × 1,0 placa de amostra mm de espessura sem reflexão Placa de amostra da Parâmetro do mesa de aquecimen- placa de cobre método to com temperatura variável Ângulo de detecção 3~40° Extensão da etapa 0,02°/etapa Velocidade 0,2 s/etapa

Tabela 2. Dados de XRD da pequena amostra Pico# 2θ(°) Intensidade relativa (1%) 1 4,4 100,0 2 8,8 19,3 3 10,9 24,3 4 16,0 25,1 5 18,5 25,4 6 23,7 32,0 7 27,0 44,5

[00152] Em outra modalidade, a análise por XRD da amostra piloto (número do lote: 20170903) foi executada pelo Beijing Center for Physical & Chemical Analysis utilizando o difratômetro de radiação D8- Advance X, o método de referência foi JY/T 009-1996 《Regras gerais para difratometria policristalina de raios X》. O instrumento de detecção e o parâmetro de detecção foram apresentados na tabela 3, os dados do padrão de XRD foram apresentados na tabela 4. Tabela 3. Instrumentos de detecção por XRD e parâmetros de de- tecção da amostra piloto Instrumentos Difratômetro de radiação D8-Advance X Comprimento de onda alvo de cobre: 1.5406 nm Indicador Técnico Voltagem de operação: 40kV Corrente de operação: 40mA Área mapeada 3~40° 2θ Condição do ex- Extensão da eta- 0,02°/etapa perimento pa Tempo de per- 0,1s/etapa manência

Tabela 4. Dados de XRD da amostra piloto Pico# 2θ(°) Intensidade relativa (1%) 1 4,4 100,0 2 8,7 20,9 3 10,8 19,8 4 15,9 14,0 5 18,4 17,5 6 23,6 22,6 7 26,9 34,6

[00153] Será observado por aqueles versados na técnica que du- rante a aquisição de padrões de XRD, os dados relevantes podem ser submetidos a processamento científico apropriado, tal como proces- samento de correção de linha de base, para reduzir erros. Também será observado por aqueles versados na técnica que pode haver al- guma variação no ângulo 2θ ou grau de separação, etc., do padrão de XRD resultante quando operado em diferentes condições de laborató- rio. Deve ficar entendido que o padrão de XRD da forma de cristal A do Composto II fornecido pela presente invenção não está limitado ao padrão de raios-X por difração de pó mostrado na FIG. 1 ou FIG. 12, e cristais tendo substancialmente o mesmo padrão de raios-X por difra- ção de pó como mostrado na FIG. 1 ou FIG. 12 estão dentro do esco- po da presente invenção. Exemplo 3 - A estabilidade da forma de cristal

[00154] Os instrumentos e métodos de detecção do padrão de rai- os-X por difração de pó na presente invenção foram mostrados na ta- bela 1. A forma de cristal A do composto II, a forma de cristal D do composto III e a forma de cristal F do composto III foram secas a 80 oC durante 24 h, ou 25 oC, 60% RH durante 10 dias, ou 40 oC, 75% RH durante 10 dias e o padrão de XRD mostrado na FIG. 10, o resultado foi mostrado na tabela 5.

Tabela 5. Resultados do teste de estabilidade de diferentes for- mas de cristal do composto II Forma de cristal 25 °C, 60% 40 °C, 75% RH, é 80 °C, 24 h do composto RH, 10 dias colocada 10 dias Forma de cristal A XRD inalte- XRD inaltera- XRD inalterado do composto II rado do Forma de cristal D XRD inalte- XRD alterado XRD alterado do composto III rado Forma de cristal F XRD alte- XRD alterado XRD alterado do composto III rado

[00155] O padrão de XRD da forma de cristal A do composto II em diferentes condições foi mostrado na Fig. 10. Como mostrado nesta figura, a forma de cristal A do composto II foi secada a 80 oC durante 24 h, 25 oC ou 60% RH durante 10 dias, 40 oC, 75% RH durante 10 dias, a forma do cristal não foi alterada, o que mostrou que a forma do cristal A do composto II tinha uma boa estabilidade.

[00156] Além disso, a forma de cristal B do composto II era uma forma de cristal metaestável que era pouco cristalina e a forma de cris- tal B foi aquecida a 180 oC, que pode ser convertida na forma de cristal A. Exemplo 4 - determinação da estabilidade de longo prazo da for- ma de cristal

[00157] As amostras da forma de cristal A do composto I e do com- posto II foram colocadas a 25 oC ± 2 oC e uma umidade relativa de 60% ± 10% durante 18 meses, respectivamente. E as amostras foram detectadas por HPLC em 0 mês, 3 meses e 18 meses, respectivamen- te, e os resultados foram conforme mostrado na tabela 6.

Tabela 6 - Os resultados da forma de cristal A do composto I e do composto II em 0 mês, 3 meses e 18 meses detectados por HPLC Amostras Item de detecção Tempo Composto Forma de cristal A I do composto II 0 mês 0,04% 0,05% 3 me- Teor máximo de impureza 0,10% 0,05% ses isolada (%) 18 me- 0,22% 0,06% ses 0 mês 0,11% 0,10% 3 me- 0,17% 0,13% Teor total de impureza (%) ses 18 me- 1,0% 0,21% ses 0 mês 0 0 3 me- Teor > 0,1% Número de 0 0 ses impurezas desconhecido 18 me- 4 0 ses

[00158] Como mostrado na Tabela 6, pode ser visto que após 18 meses, tanto o teor máximo de impureza isolada quanto o teor de im- pureza total do Composto I eram mais de 3 vezes aquele da forma de cristal A do Composto II. A forma de cristal A do Composto II produz impurezas em uma quantidade menor do que 0,1% após 18 meses, enquanto que o composto I produziu quatro impurezas em uma quan- tidade maior do que 0,1%. A estabilidade da forma de cristal A do composto II foi significativamente melhorada em comparação com o Composto I. Exemplo 5 - Determinação da absorção de umidade dinâmica

(DVS)

[00159] Os instrumentos e métodos de adsorção dinâmica de umi- dade na presente invenção foram mostrados na tabela 7, os resultados de DVS foram mostrados na tabela 8. Tabela 7 - instrumentos e métodos de adsorção dinâmica de umi- dade Instrumento de adsorção dinâmica da umi- Dispositivo dade (DVS) Instrumentos TA Instruments Q5000TGA Software de controle Thermal Adventage Software de análise Universal Analysis Bandeja de amostra Cadinho de platina Quantidade de detec- 1 a 10 mg ção de amostra Gás de proteção Nitrogênio Taxa de Vazão 10 ml/min Não mais do que Sem higroscópico 0,2% Mas do que 0,2%, Leve absorção de mas não mas do que umidade Critério de avaliação 2,0% Fácil absorção de Mais do que 2%, mas umidade não mais do que 15% Absorção extrema Mais do que 15% de umidade Tabela 8 - Os resultados de DVS Alteração de peso na faixa de 0% RH a 80% Forma de cristal do composto

RH Forma de cristal A do composto 5,3%

II

Forma de cristal B do composto 5,5%

II Forma de cristal D do composto 17,2%

III Forma de cristal F do composto 16,6%

III

[00160] A forma de cristal A e a forma de cristal B do composto II: alterações de peso na faixa de 0% RH a 80% RH foram ao redor de 5,3% e 5,5%, enquanto que a forma de cristal D e a forma de cristal F do composto III: alterações de peso na faixa de 0% RH a 80% RH fo- ram ao redor de 17,2% e 16,6%. Pode ser visto a partir daí que a for- ma de cristal do composto II é menos higroscópica do que a forma de cristal do composto III e é mais adequada para a preparação de formu- lações sólidas. Exemplo 6 - Determinação da solubilidade

[00161] Os testes de solubilidade foram executados na forma de cristal A do composto II, na forma de cristal D do composto III e no composto I. Os resultados da solubilidade em água na temperatura ambiente foram mostrados na Tabela 9. Pode ser visto que diferentes formas de cristal do composto II possuem diferentes propriedades de melhora na solubilidade, e a forma de cristal A do composto II apre- senta excelentes propriedades de dissolução. Tabela 9 - Resultados de solubilidade de diferentes formas de cristal do composto II Forma de cristal do Solubilidade na tempera- Classificação da composto tura ambiente em água solubilidade Forma de cristal A 100 a 200 mg/ml Facilmente solúvel do composto II Forma de cristal D 50 a 100 mg/ml Solúvel do composto III

Muito pouco solú- Composto I ＜ 1 mg/ml vel Nota: o padrão de classificação de solubilidade segue as disposições relevantes nos quatro casos gerais da 《Pharmacopoeia of the peo- ple’s replublic of China (2015)》.

Exemplo 7 - Experimento farmacocinético

[00162] Um total de 12 ratos SD foram divididos em dois grupos, 6 em cada grupo, cada metade de macho e fêmea. 30 mg/kg da forma de cristal A do composto II e do composto I foram administrados por via oral por alimentação forçada uma vez por dia separadamente.

[00163] Na amostra de plasma acima, a proteína foi precipitada por acetonitrila, o sobrenadante foi diluído 3 vezes com água e 5 μl foram detectados por LC-MS/MS, os resultados do experimento foram mos- trados na tabela 10. Tabela 10 - Os resultados do experimento farmacocinético Modo de admi- Doses Composto AUClast(h*ng/ml) nistração (mg/kg) Composto I PO 30 27670 Forma de cristal A do composto II PO 30 47032

[00164] Como mostrado na tabela acima, em comparação com o composto I, a forma de cristal A do composto II foi melhor absorvida in vivo. Exemplo 8 - Ensaio de inibição de CDK4/6 do composto I

[00165] Para demonstrar que os compostos apresentam afinidade para cinases CDK (CDK4 / CycD3, CDK6 / cycD3), ensaios de cinases CDK foram executados.

[00166] Os tampões de reação foram preparados como se segue: tampão de base de cinase para CDK6 (HEPES 50 mM, pH 7,5; Brij-35 0,0015%; MgCl2 10 mM; DTT 2 mM); Tampão de base cinase para CDK4 (HEPES 20 mM, pH 7,5; Triton X-100 0,01%; MgCl2 10 mM;

DTT 2 mM); Tampão de parada (HEPES 100 mM, pH 7,5; Brij-35 0,015%; Reagente de Revestimento 0,2% ＃3; EDTA 50 mM).

Protocolo de reação enzimática: 1) Diluir o composto em 50X da concentração final deseja- da mais elevada na reação por DMSO 100%. Transferir 100 μl desta diluição de composto para uma cavidade em uma placa de 96 cavida- des. Em seguida, diluir em série o composto através da transferência de 30 μl a 60 μl de DMSO 100% na próxima cavidade e assim por di- ante para um total de 10 concentrações. Adicionar 100 μl de DMSO 100% a duas cavidades vazias para nenhum controle de composto e nenhum controle de enzima na mesma placa de 96 cavidades. Marcar a placa como placa de origem. 2) Preparar a placa intermediária através da transferência de 10 μl do composto da placa de origem para uma nova placa de 96 cavidades contendo 90 μl de tampão de cinase como a placa interme- diária. 3) Transferir 5 μl de composto da placa intermediária de 96 cavidades para uma placa de 384 cavidades em duplicatas. 4) Adicionar 10 μl de solução de enzima 2,5x a cada cavi- dade da placa de ensaio de 384 cavidades. 5) Incubar na temperatura ambiente durante 10 minutos. 6) Adicionar 10 μl de solução de substrato 2,5x preparada pela adição de peptídeo marcado com FAM e ATP no tampão de base de cinase. Concentrações de reação para enzimas e substratos con- forme tabela a seguir (tabela 11): Tabela 11 - Concentração de reação de enzima e substrato Enzima ATP Concentração de peptídeo Enzima Peptídeo (nM) (μM) (μM) CDK4 10 280 P8 3 CDK6 15 800 P8 3

7) Incubar a 28 oC durante um período de tempo especifi- cado. 8) Adicionar 25 μl de tampão de parada para interromper a reação. 9) Coletar dados no Caliper. Em seguida, converter os valo- res de conversão em valores de inibição. Inibição percentual = (conversão máx.) / (Mín. Máx.) * 100 “max” significa controle de DMSO; “min” significa baixo controle nessa invenção. 10) Ajuste de curva utilizando inibição percentual em XLFit Excel add-in versão 4.3.1 para obter valores de IC50. A equação utili- zada é: Y = Bottom + (Top-Bottom) / (1+ (IC50 / X) ^ HillSlope).

[00167] Os resultados são expressos como valor de IC50, que é mostrado na tabela 12. Tabela 12 - Resultados do ensaio de atividade inibitória de CDK4/6 Amostra IC50(CDK4)/nΜ IC50(CDK6)/nΜ LY2835219 2 22 Composto I 1,9 22 Exemplo 9 – Teste inibidor de atividade e seletividade em outros subtipos de cinase CDK em nível molecular

[00168] O Composto I foi utilizado como um composto de teste e comparado com o fármaco de controle positivo (Abemaciclib) para comparar a atividade inibidora e a especificidade seletiva da cinase CDK entre eles.

[00169] O mecanismo desse método é mostrado na fórmula (IV). A cinase catalisa a fosforilação do substrato de proteína para marcar o 33 33 P no ATP marcado com P (γ-33P- ATP) para o substrato de proteína no sistema de reação, o sistema de reação foi localizado na membra- na de troca iônica P81, e a membrana foi lavada extensivamente com tampão de fosfato 0,75%; o substrato fosforilado radioativamente foi deixado na membrana, e a atividade da cinase foi refletida através do registro da intensidade da radiomarcação da proteína do substrato. Substrato +[γ=33P]-ATP Enzima 33 P-Substrato + ADP →→→ Fórmula (IV)

[00170] Os dados foram processados com o software Prism4 (Gra- phPad), e a fórmula de ajuste da curva foi: Y= Bottom + (Top-Bottom)/(1+10^ ((LogIC50-X)* HillSlope));

[00171] em que Y é a inibição percentual (%); X é o logaritmo da concentração do inibidor.

[00172] Resultados: Por meio de varredura de várias cinases CDK, foi descoberto que o composto I possui uma IC50 maior do que 0,4 μM para inibir a CDK1/2/7/9, que é dezenas a milhares de vezes maior do que aquela de CDK4/6 (Ver a tabela 13). Tabela 13 - Atividade inibidora da CDK cinase IC50 (nM) Cinases LY2835219 Composto 2b CDK1/ciclina B 308 1683 CDK2/ciclina E 90 441 CDK7/ciclina H 2071 664 CDK9/ciclina T1 111 649

[00173] Conclusão: No nível molecular, o composto I da presente invenção mostrou forte efeito inibidor na CDK4/6 e fraco efeito inibidor na CDK1/2/7/9, indicando que o composto I é um inibidor da cinase CDK4/6 com excelente seletividade. Além disso, a seletividade do composto I entre CDK1/2/9 e CDK4/6 foi significativamente maior do que aquela de LY2835219 (Abemaciclib). Exemplo 10 - Efeito de regressão tumoral no modelo animal de xenoenxerto JeKo-1

[00174] As células JeKo-1 foram cultivadas em meio RPMI 1640 contendo 20% de soro bovino fetal. Células JeKo-1 em crescimento exponencial foram coletadas e colocadas novamente em suspensão em PBS em uma concentração adequada para inoculação de tumor subcutâneo em camundongos NOD/SCID. 70 camundongos fêmeas foram inoculados por via subcutânea à direita com 5 × 106 células JeKo-1, colocadas novamente em suspensão em PBS e matrigel (1:1). Quando o volume médio do tumor atingiu 134 mm3, os camundongos foram agrupados aleatoriamente de acordo com o tamanho do tumor e foram administrados. 48 camundongos foram divididos no grupo expe- rimental, e os 22 camundongos remanescentes não foram utilizados para o experimento. O volume do tumor é calculado como: diâmetro longo × diâmetro curto2 / 2. O teste foi dividido em grupo de controle de solvente, composto representativo do fármaco de teste I (10 mg/kg), composto representativo do fármaco de teste I (25 mg/kg), composto representativo do fármaco de teste I (50 mg/kg), composto representativo do fármaco de teste I (100 mg/kg), um total de 6 grupos com cada um dos 8 camundongos, e os camundongos foram adminis- trados por via oral por alimentação forçada uma vez ao dia e, em se- guida, administração contínua durante 19 dias. A eficácia é avaliada de acordo com a taxa de inibição do crescimento tumoral relativo de TGI, os resultados foram mostrados na tabela 14.

[00175] A fórmula de cálculo é como se segue: TGI(%) = (C- T)/C×100% (Cand T são o peso médio do tumor do grupo de controle de solvente e o peso médio do tumor do grupo de tratamento, respec- tivamente). Quanto mais alto o valor de TGI (%), tanto melhor é a po- tência; e vice-versa.

[00176] Resultados: o composto I demonstra excelente atividade antitumoral. Tabela 14 - Avaliação da eficácia antitumoral do composto I re-

presentativo no modelo de xenoenxerto JeKo-1 Taxa de inibição do cres- Dose Grupo cimento tumoral relativa pValora (mg/kg) TGI(%) Controle de solvente -- -- -- composto I 10 42,7 0,087 composto I 25 73,8 0,003 composto I 50 98,3 0,001 composto I 100 104,5 0,001 Nota: a: o valor de p é a análise comparativa do volume do tumor para o grupo de tratamento e para o grupo de controle de solvente.

Claims (28)

REIVINDICAÇÕES

1. Sal de um composto, caracterizado pelo fato de que é como mostrado na Fórmula I ou uma forma de cristal do sal: Fórmula I.

2. Sal, ou a forma de cristal do sal, de acordo com a reivin- dicação 1, caracterizado pelo fato de que o sal é o sal de ácido tartári- co, em que o sal de ácido tartárico é o sal de ácido L-tartárico.

3. Sal, ou a forma de cristal do sal, de acordo com a reivin- dicação 2, caracterizado pelo fato de que o sal de ácido tartárico pos- sui uma estrutura como mostrada na Fórmula II: Fórmula II.

4. Forma de cristal de um composto, caracterizada pelo fato de que é como mostrada na Fórmula II.

5. Forma de cristal, de acordo com a reivindicação 4, carac- terizada pelo fato de que o padrão de raios-X por difração de pó da forma de cristal possui picos característicos no ângulo de difração 2θ de 4,4 ± 0,2°, 23,6 ± 0,2° e 26,9 ± 0,2°.

6. Forma de cristal, de acordo com a reivindicação 5, carac- terizada pelo fato de que o padrão de raios-X por difração de pó da forma de cristal possui picos característicos no ângulo de difração 2θ de 4,4 ± 0,2°, 8,7 ± 0,2°, 10,8 ± 0,2°, 18,4 ± 0,2°, 23,6 ± 0,2° e 26,9 ± 0,2°.

7. Forma de cristal, de acordo com a reivindicação 6, carac- terizada pelo fato de que o padrão de raios-X por difração de pó da forma de cristal possui picos característicos no ângulo de difração 2θ de 4,4 ± 0,2°, 8,7 ± 0,2°, 10,8 ± 0,2°, 15,9 ± 0,2°, 18,4 ± 0,2°, 23,6 ± 0,2° e 26,9 ± 0,2°.

8. Forma de cristal, de acordo com a reivindicação 4, carac- terizada pelo fato de que a forma de cristal possui aproximadamente um padrão de raios-X por difração de pó como mostrado na Fig. 1.

9. Forma de cristal, de acordo com a reivindicação 4, carac- terizada pelo fato de que a forma de cristal possui aproximadamente um padrão de raios-X por difração de pó como mostrado na Fig. 12.

10. Forma de cristal, de acordo com a reivindicação 4, ca- racterizada pelo fato de que a forma de cristal é preparada pelas se- guintes etapas: 1) colocar em suspensão (R)-N-(5-((4-etilpiperazin-1- il)metil)piridin-2-il)-5-fluoro-4-(6-fluoro-1-metil-1,2,3,4- tetraidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]piridin-8-il)pirimidin-2-amina (o com- posto como mostrado na Fórmula I) em água e/ou um solvente orgâni- co solúvel em água, obtendo uma suspensão; 2) aquecer a suspensão para 50 oC ou mais; 3) manter a temperatura em 50 oC ou mais, adicionar ácido L-tartárico à suspensão e realizar um tratamento de acidificação, ob- tendo-se uma solução límpida; 4) esfriar a solução límpida para a temperatura ambiente, filtrar enquanto se agita, secar a torta do filtro, obter a forma de cristal, de acordo com a reivindicação 4.

11. Forma de cristal, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações de 4 a 10, caracterizada pelo fato de que é preparada pe- las seguintes etapas: dissolver o composto como mostrado na Fórmula I em me- tanol a 50 a 70 oC para obter uma solução límpida, dissolver o ácido L- tartárico em metanol, adicionar a solução de ácido L-tartárico em me-

tanol por gotejamento à solução do composto como mostrado na Fór- mula I em metanol, filtrar após agitação, secar uma torta do filtro a 40 a 70 oC, obter a forma de cristal, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações de 4 a 10.

12. Forma de cristal do sal de ácido L-tartárico do composto como mostrado na Fórmula I, caracterizada pelo fato de que a forma de cristal possui aproximadamente um padrão de raios-X por difração de pó como mostrado na Fig. 3.

13. Composto, caracterizado pelo fato de que é da Fórmula III ou uma forma de cristal do mesmo: Fórmula III.

14. Forma de cristal, como definido na reivindicação 13, ca- racterizada pelo fato de que a forma de cristal é preparada pelas se- guintes etapas: 1) colocar em suspensão (R)-N-(5-((4-etilpiperazin-1- il)metil)piridin-2-il)-5-fluoro-4-(6-fluoro-1-metil-1,2,3,4- tetraidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]piridin-8-il)pirimidin-2-amina (o com- posto como mostrado na Fórmula I) em água e/ou um solvente orgâni- co solúvel em água, obtendo uma suspensão; 2) aquecer a suspensão para 50 oC ou mais; 3) manter a temperatura em 50 oC ou mais, adicionar ácido L-tartárico à suspensão e realizar um tratamento de acidificação, ob- tendo-se uma solução límpida; 4) esfriar a solução límpida para a temperatura ambiente, filtrar enquanto se agita, secar a torta do filtro, obter a forma de cristal, como definido na reivindicação 13.

15. Forma de cristal, como definido na reivindicação 13, ca-

racterizada pelo fato de que a forma de cristal possui aproximadamen- te um padrão de raios-X por difração de pó como mostrado na Fig. 5.

16. Forma de cristal, como definido na reivindicação 13, ca- racterizada pelo fato de que a forma de cristal possui aproximadamen- te um padrão de raios-X por difração de pó como mostrado na Fig. 6.

17. Forma de cristal, como definido na reivindicação 13, caracterizada pelo fato de que a forma de cristal possui aproximada- mente um padrão de raios-X por difração de pó como mostrado na Fig.

7.

18. Forma de cristal, como definido na reivindicação 13, ca- racterizada pelo fato de que a forma de cristal possui aproximadamen- te um padrão de raios-X por difração de pó como mostrado na Fig. 8.

19. Método para a preparação do sal de ácido L-tartárico de (R)-N-(5-((4-etilpiperazin-1-il)metil)piridin-2-il)-5-fluoro-4-(6-fluoro-1- metil-1,2,3,4-tetraidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]piridin-8-il)pirimidin-2- amina (o composto como mostrado na Fórmula II), caracterizado pelo fato de que compreende:

.

20. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz da forma de cristal, como definido emqualquer uma das reivindicações de 4 a 12, e excipientes, auxiliares e/ou veículos farmaceuticamente aceitáveis.

21. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz do compos- to e/ou da sua forma de cristal, como definido em qualquer uma das reivindicações de 13 a 18, e excipientes, auxiliares e/ou veículos far- maceuticamente aceitáveis.

22. Uso do sal e/ou da forma de cristal, como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 18, ou da composição farma- cêutica, como definido em qualquer uma das reivindicações de 20 e 21, caracterizado pelo fato de que tal uso é na fabricação de um medi- camento para o tratamento de uma doença, distúrbio ou condição em um paciente, em que a doença, distúrbio ou condição é mediada pela CDK, tal como CDK4 e/ou CDK6.

23. Uso, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que a doença, distúrbio ou condição é um câncer e/ou uma doença proliferativa.

24. Uso, de acordo com a reivindicação 22 ou 23, caracteri- zado pelo fato de que a doença, distúrbio ou condição é câncer de mama, câncer de pulmão, melanoma, câncer de cólon, câncer de fíga- do, câncer de pâncreas, câncer de cérebro, câncer de rim, câncer de ovário, câncer gástrico, câncer de pele, câncer ósseo, glioma, linfoma, neuroblastoma, carcinoma hepatocelular, carcinoma de células renais papilares e/ou carcinoma de células escamosas da cabeça e pescoço.

25. Método de tratamento de uma doença mediada pela CDK, tal como CDK4 e/ou CDK6, caracterizado pelo fato de que com- preende a administração do sal e/ou da forma de cristal, como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 18, ou a composição far- macêutica, como definido em qualquer uma das reivindicações de 20 a 21, a um indivíduo.

26. Método, de acordo com a reivindicação 25, caracteriza- do pelo fato de que a doença é um câncer e/ou uma doença prolifera- tiva.

27. Método, de acordo com a reivindicação 25 ou 26, carac- terizado pelo fato de que a doença é câncer de mama, câncer de pul-

mão, melanoma, câncer de cólon, câncer de fígado, câncer de pân- creas, câncer de cérebro, câncer de rim, câncer de ovário, câncer gás- trico, câncer de pele, câncer ósseo, glioma, linfoma, neuroblastoma, carcinoma hepatocelular, carcinoma de células renais papilares e/ou carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço.

28. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções de 25 a 27, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é um ser humano.