CN111601791B - Ezh2抑制剂及其药学上可接受的盐和多晶型物及其应用 - Google Patents

Ezh2抑制剂及其药学上可接受的盐和多晶型物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种EZH2抑制剂及其药学上可接受的盐和多晶型物及其应用。具体地，本发明提供了N‑((4,6‑二甲基‑2‑氧代‑1,2‑二氢吡啶‑3‑基)甲基)‑5‑乙基‑4‑(乙基((1S,4S)‑4‑(3‑甲基氮杂环丁烷嗪‑1‑基)环己基)氨基)‑1‑甲基‑1H‑吲唑‑6‑甲酰胺或其药学上可接受盐的多晶型物及其应用。此外，本发明还公开了含该抑制剂的药物组合物及其应用。

Description

EZH2抑制剂及其药学上可接受的盐和多晶型物及其应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体地说，本发明涉及一种EZH2抑制剂及其药学上可接受的盐和多晶型物及其应用，该抑制剂为N-((4，6-二甲基-2-氧代-1，2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-乙基-4-(乙基((1S，4S)-4-(3-甲基氮杂环丁烷嗪-1-基)环己基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-6-甲酰胺。
背景技术
组蛋白-赖氨酸-N-甲基转移酶EZH2参与DNA的甲基化和最终的转录抑制；通过辅因子S-腺苷-L-甲硫氨酸催化赖氨酸27位的甲基转移至组氨酸H3。这种甲基化促进异染色质的形成，从而引发基因沉默。
EZH2是PRC2功能酶的部分，是通过表观遗传学维持控制调节发育和分化的基因，从而保证胚胎健康发育。EZH2的突变或过表达与许多癌症的形成相关。EZH2控制基因控制肿瘤发展，抑制EZH2的活性会减慢肿瘤的生长速度。作为靶向抑制剂，EZH2能调控多种癌症包括，乳腺癌，前列腺癌，黑色素瘤和膀胱癌。
PCT申请WO2011140324A1和WO2012075080A1披露了吲哚类化合物作为EZH2抑制剂用于治疗癌症。PCT申请WO2012118812A2公开了双环杂环化合物作为EZH2抑制剂用于癌症的治疗。
因此，抑制EZH2活性将有效降低细胞增殖和侵袭，从而为EZH2介导的疾病或病症提供有益的治疗。本发明化合物作为FZH2抑制剂为疾病或由EZH2介导的肿瘤治疗提供解决方案。本发明在前述工作的基础上开发了EZH2抑制剂的多种盐型和晶型，有助于进一步的药物开发。
发明内容
本发明的目的在于提供一种EZH2抑制剂的药学上可接受的盐和多晶型物及其应用。
在本发明的第一方面，提供了一种式X化合物药学上可接受的盐或式X化合物及其药学上可接受盐的多晶型物：
Figure GPA0000289897440000031
在另一优选例中，所述药学上可接受的盐选自下组：盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、马来酸盐、富马酸盐、L-酒石酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐和氢溴酸盐。
在另一优选例中，所述式X化合物药学上可接受的盐或式X化合物及其药学上可接受盐的多晶型物为无水形式、水合物形式或溶剂合物形式。
在另一优选例中，所述药学上可接受的盐选自下组：盐酸盐、马来酸盐。
在另一优选例中，所述药学上可接受盐为盐酸盐，并且盐酸与式X化合物的摩尔比为(0.8-2.1)∶1，较佳地(0.9-1.1)∶1。
在另一优选例中，所述药学上可接受盐为马来酸盐，并且马来酸与式X化合物的摩尔比为(0.8-1.2)∶1，较佳地(0.9-1.1)∶1，更佳地1∶1。
在另一优选例中，所述多晶型物为式X化合物盐酸盐的A型结晶，即晶型A，其X射线粉末衍射图在下组A1的衍射角2θ(°)值处具有峰：4.64±0.20、9.31±0.20、12.11±0.20、12.45±0.20、13.24±0.20、14.44±0.20、15.28±0.20、16.24±0.20、16.42±0.20、22.63±0.20、37.87±0.20。
在另一优选例中，所述晶型A的X射线粉末衍射图还包含在2个或2个以上选自下组A2的衍射角2θ(°)值处的峰：24.10±0.20、24.23±0.20、26.86±0.20、27.13±0.20、38.32±0.20、44.08±0.20。
在另一优选例中，所述晶型A的X射线粉末衍射图还包含在2个或2个以上选自下组A3的衍射角2θ(°)值处的峰：1.06±0.20、1.30±0.20、8.84±0.20、11.24±0.20、13.68±0.20、20.80±0.20、21.86±0.20、24.58±0.20、25.12±0.20、25.39±0.20、29.42±0.20、30.65±0.20、33.23±0.20。
在另一优选例中，所述晶型A的X射线粉末衍射图在选自组A1、A2和A3中的6个或更多个或全部(如6、7、8、9、10、11、12、13、14、15等)的2θ(°)值处具有峰。
在另一优选例中，所述晶型A的X射线粉末衍射图在表A1所示的2θ(°)值处具有峰，各峰相对强度如表A1所示：
表A1
2θ(°) I/I<sub>0</sub> 2θ(°) I/I<sub>0</sub> 2θ(°) I/I<sub>0</sub>
1.06 W 1.30 W 4.64 S
8.84 W 9.31 VS 11.24 W
12.11 VS 12.45 S 13.24 S
13.68 W 14.44 S 15.28 S
16.24 S 16.42 S 20.80 W
21.86 W 22.63 S 24.10 M
24.23 M 24.58 W 25.12 W
25.39 W 26.86 M 27.13 M
29.42 W 30.65 W 33.23 W
37.87 S 38.32 M 44.08 M
在另一优选例中，所述晶型A的X射线粉末衍射图基本如图1所表征。
在另一优选例中，所述晶型A中，盐酸与式X化合物的摩尔比为(0.8-2.1)∶1，较佳地(0.9-1.1)∶1，更佳地0.9∶1。
在另一优选例中，所述晶型A的放热峰峰值温度为198.15℃(如图2)，TGA结果显示在100℃前失重5.471％，从100-295.2℃失重27.259％(如图3)。
在另一优选例中，所述多晶型物为式X化合物马来酸盐的B型结晶，即晶型B，其X射线粉末衍射图在下组B1的衍射角2θ(°)值处具有峰：5.95±0.20、13.96±0.20、16.09±0.20、16.42±0.20、17.77±0.20、19.03±0.20、20.29±0.20、20.65±0.20、21.73±0.20。
在另一优选例中，所述晶型B的X射线粉末衍射图还包含在2个或2个以上选自下组B2的衍射角2θ(°)值处的峰：10.30±0.20、11.98±0.20、22.21±0.20、23.38±0.20、24.04±0.20、27.43±0.20、37.93±0.20。
在另一优选例中，所述晶型B的X射线粉末衍射图还包含在2个或2个以上选自下组B3的衍射角2θ(°)值处的峰：1.07±0.20、8.86±0.20、9.43±0.20、11.02±0.20、12.48±0.20、14.91±0.20、15.25±0.20、18.47±0.20、21.03±0.20、25.14±0.20、25.72±0.20、26.81±0.20、28.30±0.20、28.53±0.20、29.06±0.20、29.38±0.20、30.22±0.20、34.45±0.20、34.78±0.20、36.41±0.20、38.40±0.20、39.66±0.20、40.20±0.20、44.07±0.20、45.79±0.20。
在另一优选例中，所述晶型B的X射线粉末衍射图在选自组B1、B2和B3中的6个或更多个或全部(如6、7、8、9、10、11、12、13、14、15等)的2θ(°)值处具有峰。
在另一优选例中，所述晶型B的X射线粉末衍射图在表B1所示的2θ(°)值处具有峰，各峰相对强度如表B1所示：
表B1
2θ(°) I/I<sub>0</sub> 2θ(°) I/I<sub>0</sub> 2θ(°) I/I<sub>0</sub>
1.07 W 5.95 S 8.86 W
9.43 W 10.30 M 11.02 W
11.98 M 12.48 W 13.96 VS
14.91 W 15.25 W 16.09 S
16.42 VS 17.77 S 18.47 W
19.03 S 20.29 S 20.65 S
21.03 W 21.73 S 22.21 M
23.38 M 24.04 M 25.14 W
25.72 W 26.81 W 27.43 M
28.30 W 28.53 W 29.06 W
29.38 W 30.22 W 34.45 W
34.78 W 36.41 W 37.93 M
38.40 W 39.66 W 40.20 W
44.07 W 45.79 W
在另一优选例中，所述晶型B的X射线粉末衍射图基本如图4所表征。
在另一优选例中，所述晶型B中，马来酸与式X化合物的摩尔比为(0.8-1.2)∶1，较佳地(0.9-1.1)∶1，更佳地1∶1。
在另一优选例中，所述晶型B无明显吸热放热峰(如图5)。TGA结果显示，该晶型在100℃前失重2.941％，从111.97-165.04℃失重1.214％，从165.04-295.43℃失重6.395％(如图6)。
在另一优选例中，所述多晶型物为式X化合物硫酸盐的C型结晶，即晶型C，其X射线粉末衍射图在下组C1的衍射角2θ(°)值处具有峰：7.00±0.20、13.18±0.20、14.14±0.20、14.44±0.20、14.62±0.20、17.65±0.20、17.81±0.20、18.11±0.20、20.44±0.20、21.85±0.20、23.89±0.20。
在另一优选例中，所述晶型C的X射线粉末衍射图还包含在下组C2的衍射角2θ(°)值处的峰：22.15±0.20、25.40±0.20、27.23±0.20。
在另一优选例中，所述晶型C的X射线粉末衍射图还包含在2个或2个以上选自下组C3的衍射角2θ(°)值处的峰：1.12±0.20、1.54±0.20、1.87±0.20、37.96±0.20。
在另一优选例中，所述晶型C的X射线粉末衍射图在选自组C1、C2和C3中的6个或更多个或全部(如6、7、8、9、10、11、12、13、14、15等)的2θ(°)值处具有峰。
在另一优选例中，所述晶型C的X射线粉末衍射图在表C1所示的2θ(°)值处具有峰，各峰相对强度如表C1所示：
表C1
2θ(°) I/I<sub>0</sub> 2θ(°) I/I<sub>0</sub> 2θ(°) I/I<sub>0</sub>
1.12 W 1.54 W 1.87 W
7.00 S 13.18 VS 14.14 S
14.44 VS 14.62 S 17.65 S
17.81 S 18.11 S 20.44 S
21.85 S 22.15 M 23.89 S
25.40 M 27.23 M 37.96 W
在另一优选例中，所述晶型C的X射线粉末衍射图基本如图7所表征。
在另一优选例中，所述多晶型物为式X化合物氢溴酸盐的D型结晶，即晶型D，其X射线粉末衍射图在下组D1的衍射角2θ(°)值处具有峰：14.65±0.20、16.47±±0.20、17.62±0.20、17.92±0.20、21.91±0.20、22.99±0.20、23.12±0.20、24.88±0.20。
在另一优选例中，所述晶型D的X射线粉末衍射图还包含在下组D2的衍射角2θ(°)值处的峰：14.08±0.20、16.18±0.20、19.16±0.20、19.34±0.20、19.51±0.20、21.53±0.20、26.41±0.20。
在另一优选例中，所述晶型D的X射线粉末衍射图还包含在2个或2个以上选自下组D3的衍射角2θ(°)值处的峰：1.04±0.20、1.24±0.20、7.96±0.20、8.80±0.20、19.73±0.20、22.09±0.20、23.35±0.20、25.92±0.20、26.24±0.20、28.16±0.20、28.46±0.20、28.63±0.20、30.48±0.20、30.62±0.20。
在另一优选例中，所述晶型D的X射线粉末衍射图在选自组D1、D2和D3中的6个或更多个或全部(如6、7、8、9、10、11、12、13、14、15等)的2θ(°)值处具有峰。
在另一优选例中，所述晶型D的X射线粉末衍射图在表D1所示的2θ(°)值处具有峰，各峰相对强度如表D1所示：
表D1
2θ(°) I/I<sub>0</sub> 2θ(°) I/I<sub>0</sub> 2θ(°) I/I<sub>0</sub>
1.04 W 1.24 W 7.96 W
8.80 W 14.08 M 14.65 VS
16.18 M 16.47 S 17.62 S
17.92 S 19.16 M 19.34 M
19.51 M 19.73 W 21.53 M
21.91 S 22.09 W 22.99 S
23.12 S 23.35 W 24.88 VS
25.92 W 26.24 W 26.41 M
28.16 W 28.46 W 28.63 W
30.48 W 30.62 W
在另一优选例中，所述晶型D的X射线粉末衍射图基本如图8所表征。
在另一优选例中，所述多晶型物为式X化合物甲磺酸盐的E型结晶，即晶型E，其X射线粉末衍射图在下组E1的衍射角2θ(°)值处具有峰：9.48±0.20、10.30±0.20、12.03±0.20、12.79±0.20、13.90±0.20、16.09±0.20、16.39±0.20、17.76±0.20、18.97±0.20、19.11±0.20、20.08±0.20、20.39±0.20、20.59±0.20、21.73±0.20、21.91±0.20、22.14±0.20、22.99±0.20、23.14±0.20、23.57±0.20、25.67±0.20。
在另一优选例中，所述晶型E的X射线粉末衍射图还包含在2个或2个以上选自下组E2的衍射角2θ(°)值处的峰：5.48±0.20、5.81±0.20、8.78±0.20、14.54±0.20、24.69±0.20、27.28±0.20、38.03±0.20。
在另一优选例中，所述晶型E的X射线粉末衍射图还包含在2个或2个以上选自下组E3的衍射角2θ(°)值处的峰：1.15±0.20、1.27±0.20、1.75±0.20、36.53±0.20。
在另一优选例中，所述晶型E的X射线粉末衍射图在选自组E1、E2和E3中的6个或更多个或全部(如6、7、8、9、10、11、12、13、14、15等)的2θ(°)值处具有峰。
在另一优选例中，所述晶型E的X射线粉末衍射图在表E1所示的2θ(°)值处具有峰，各峰相对强度如表E1所示：
表E1
Figure GPA0000289897440000061
Figure GPA0000289897440000071
在另一优选例中，所述晶型E的X射线粉末衍射图基本如图9所表征。
在另一优选例中，所述多晶型物为式X化合物L-酒石酸盐的F型结晶，即晶型F，其X射线粉末衍射图在下组F1的衍射角2θ(°)值处具有峰：10.92±0.20、11.11±0.20、11.26±0.20、15.31±0.20、16.96±0.20、17.11±0.20、18.16±0.20、18.46±0.20、20.45±0.20、23.55±0.20、25.30±0.20。
在另一优选例中，所述晶型F的X射线粉末衍射图还包含在2个或2个以上选自下组F2的衍射角2θ(°)值处的峰：9.46±0.20、12.02±0.20、16.70±0.20、19.71±0.20、23.34±0.20、25.77±0.20、37.94±0.20。
在另一优选例中，所述晶型F的X射线粉末衍射图还包含在2个或2个以上选自下组F3的衍射角2θ(°)值处的峰：1.04±0.20、1.84±0.20、6.19±0.20。
在另一优选例中，所述晶型F的X射线粉末衍射图在选自组F1、F2和F3中的6个或更多个或全部(如6、7、8、9、10、11、12、13、14、15等)的2θ(°)值处具有峰。
在另一优选例中，所述晶型F的X射线粉末衍射图在表F1所示的2θ(°)值处具有峰，各峰相对强度如表F1所示：
表F1
2θ(°) I/I<sub>0</sub> 2θ(°) I/I<sub>0</sub> 2θ(°) I/I<sub>0</sub>
1.04 W 1.84 W 6.19 W
9.46 M 1092 S 11.11 VS
11.26 VS 1202 M 15.31 VS
16.70 M 1696 S 17.11 S
18.16 S 1846 S 19.71 M
20.45 S 2334 M 23.55 S
25.30 S 2577 M 37.94 M
在另一优选例中，所述晶型F的X射线粉末衍射图基本如图10所表征。
在另一优选例中，所述多晶型物为式X化合物柠檬酸盐的G型结晶，即晶型G，其X射线粉末衍射图在下组G1的衍射角2θ(°)值处具有峰：11.11±0.20、15.22±0.20、16.99±0.20、18.16±0.20、20.47±0.20、23.26±0.20、23.44±0.20。
在另一优选例中，所述晶型G的X射线粉末衍射图还包含在2个或2个以上选自下组G2的衍射角2θ(°)值处的峰：6.01±0.20、7.75±0.20、9.49±0.20、9.64±0.20、12.04±0.20、14.71±0.20、19.06±0.20、19.45±0.20、19.57±0.20、20.24±0.20、23.83±0.20。
在另一优选例中，所述晶型G的X射线粉末衍射图还包含在2个或2个以上选自下组G3的衍射角2θ(°)值处的峰：1.06±0.20、1.50±0.20、8.41±0.20、9.17±0.20、17.53±0.20、21.91±0.20、26.34±0.20、28.78±0.20、29.21±0.20、30.84±0.20、33.95±0.20、37.96±0.20、38.38±0.20。
在另一优选例中，所述晶型G的X射线粉末衍射图在选自组G1、G2和G3中的6个或更多个或全部(如6、7、8、9、10、11、12、13、14、15等)的2θ(°)值处具有峰。
在另一优选例中，所述晶型G的X射线粉末衍射图在表G1所示的2θ(°)值处具有峰，各峰相对强度如表G1所示：
表G1
2θ(°) I/I<sub>0</sub> 2θ(°) I/I<sub>0</sub> 2θ(°) I/I<sub>0</sub>
1.06 W 1.50 W 6.01 M
7.75 M 8.41 W 9.17 W
9.49 M 9.64 M 11.11 VS
12.04 M 14.71 M 15.22 VS
16.99 S 17.53 W 18.16 S
19.06 M 19.45 M 19>57 M
20.24 M 20.47 S 21.91 W
23.26 S 23.44 S 23.83 M
26.34 W 28.78 W 29.21 W
30.84 W 33.95 W 37.96 W
38.38 W
在另一优选例中，所述晶型G的X射线粉末衍射图基本如图11所表征。
在另一优选例中，所述多晶型物为式X化合物的晶型I，其X射线粉末衍射图在组I-1的衍射角2θ(°)值处具有峰：7.09±0.20、9.58±0.20、11.17±0.20、13.40±0.20、14.02±0.20、14.65±0.20、16.51±0.20、17.59±0.20。
在另一优选例中，所述晶型I的X射线粉末衍射图还包含在2个或2个以上选自下组I-2的衍射角2θ(°)值处的峰：18.49±0.20、19.27±0.20、20.80±0.20、22.00±0.20、24.64±0.20、24.88±0.20、25.57±0.20、25.71±0.20、28.09±0.20。
在另一优选例中，所述晶型I的X射线粉末衍射图还包含在2个或2个以上选自下组I-3的衍射角2θ(°)值处的峰：1.09±0.20、1.72±0.20、8.14±0.20、11.52±0.20、15.28±0.20、22.42±0.20、22.96±0.20、26.53±0.20、27.55±0.20、28.24±0.20、29.19±0.20、30.44±0.20、30.70±0.20、34.51±0.20、36.62±0.20、37.96±0.20、38.31±0.20、47.84±0.20。
在另一优选例中，所述晶型I的X射线粉末衍射图在选自组I-1、I-2和I-3中的6个或更多个或全部(如6、7、8、9、10、11、12、13、14、15等)的2θ(°)值处具有峰。
在另一优选例中，所述晶型I的X射线粉末衍射图在表I1所示的2θ(°)值处具有峰，各峰相对强度如表I1所示：
表I1
2θ(°) I/I<sub>0</sub> 2θ(°) I/I<sub>0</sub> 2θ(°) I/I<sub>0</sub>
1.09 W 1.72 W 7.09 VS
8.14 W 9.58 S 11.17 S
11.52 W 13.40 VS 14.02 S
14.65 VS 15.28 W 16.51 S
17.59 VS 18.49 M 19.27 M
20.80 M 22.00 M 22.42 W
22.96 W 24.64 M 24.88 M
25.57 M 25.71 M 26.53 W
27.55 W 28.09 M 28.24 W
29.19 W 30.44 W 30.70 W
34.51 W 36.62 W 37.96 W
38.31 W 47.84 W
在另一优选例中，所述晶型I的X射线粉末衍射图基本如图12所表征。
在另一优选例中，所述晶型I在242.01℃处有一个放热峰(如图13)；晶型I从100℃到228.72℃失重0.3671％，从228.72℃到295.25℃失重0.2984％(如图14)。
在另一优选例中，所述多晶型物为式X化合物的晶型II，其X射线粉末衍射图在组II-1的衍射角2θ(°)值处具有峰：5.32±0.20、7.11±0.20、9.16±0.20、9.56±0.20、11.15±0.20、11.62±0.20、13.45±0.20、14.02±0.20、14.65±0.20、16.54±±0.20、17.62±0.20、21.91±0.20、37.96±0.20、38.38±0.20、44.20±0.20。
在另一优选例中，所述晶型II的X射线粉末衍射图还包含在2个或2个以上选自下组II-2的衍射角2θ(°)值处的峰：15.94±0.20、17.03±0.20、18.49±0.20、18.85±0.20、19.18±0.20、20.35±0.20、20.77±0.20、21.80±0.20、25.60±0.20、44.67±0.20。
在另一优选例中，所述晶型II的X射线粉末衍射图还包含在2个或2个以上选自下组II-3的衍射角2θ(°)值处的峰：1.09±0.20、1.30±0.20、1.66±0.20、1.84±0.20、8.17±0.20、15.28±0.20、22.57±0.20、24.44±0.20、24.64±0.20、24.87±0.20、25.18±0.20、27.29±0.20、28.01±0.20、29.05±0.20、29.42±0.20。
在另一优选例中，所述晶型II的X射线粉末衍射图在选自组II-1、II-2、II-3、中的6个或更多个或全部(如6、7、8、9、10、11、12、13、14、15等)的2θ(°)值处具有峰。
在另一优选例中，所述晶型II的X射线粉末衍射图在表II1所示的2θ(°)值处具有峰，各峰相对强度如表II1所示：
表II1
2θ(°) I/I<sub>0</sub> 2θ(°) I/I<sub>0</sub> 2θ(°) I/I<sub>0</sub>
1.09 W 1.30 W 1.66 W
1.84 W 5.32 S 7.11 VS
8.17 W 9.16 S 9.56 S
11.15 S 11.62 S 13.45 VS
14.02 S 14.65 VS 15.28 W
15.94 M 16.54 S 17.03 M
17.62 VS 18.49 M 18.85 M
19.18 M 20.35 M 20.77 M
21.80 M 21.91 S 22.57 W
24.44 W 24.64 W 24.87 W
25.18 W 25.60 M 27.29 W
28.01 W 29.05 W 29.42 W
37.96 VS 38.38 S 44.20 S
44.67 M
在另一优选例中，所述晶型II的X射线粉末衍射图基本如图16所表征。
在另一优选例中，所述晶型II无明显吸热放热峰(如图17)。
在另一优选例中，所述多晶型物为式X化合物的晶型III，其X射线粉末衍射图在组III-1的衍射角2θ(°)值处具有峰：6.97±0.20、9.01±0.20、9.21±0.20、12.46±0.20、14.86±0.20、15.28±0.20、15.46±0.20、20.92±0.20、22.90±0.20。
在另一优选例中，所述晶型III的X射线粉末衍射图还包含在2个或2个以上选自下组III-2的衍射角2θ(°)值处的峰：12.17±0.20、13.89±0.20、16.21±0.20、18.10±0.20、19.30±0.20、20.14±0.20、24.56±0.20、24.76±0.20、27.49±0.20。
在另一优选例中，所述晶型III的X射线粉末衍射图还包含在2个或2个以上选自下组III-3的衍射角2θ(°)值处的峰：1.30±0.20、1.51±0.20、9.66±0.20、10.15±0.20、17.10±0.20、22.00±0.20、23.31±0.20、25.18±0.20、26.03±0.20、26.74±0.20、28.03±0.20、29.53±0.20、31.30±0.20、31.46±0.20、33.79±0.20、34.01±0.20、35.98±0.20、37.96±0.20、38.38±0.20、42.10±0.20、42.25±0.20、44.23±0.20、44.66±0.20。
在另一优选例中，所述晶型III的X射线粉末衍射图在选自组III-1、III-2和III-3中的6个或更多个或全部(如6、7、8、9、10、11、12、13、14、15等)的2θ(°)值处具有峰。
在另一优选例中，所述晶型III的X射线粉末衍射图在表III1所示的2θ(°)值处具有峰，各峰相对强度如表III1所示：
表III1
2θ(°) I/I<sub>0</sub> 2θ(°) I/I<sub>0</sub> 2θ(°) I/I<sub>0</sub>
1.30 W 1.51 W 6.97 VS
9.01 S 9.21 S 9.66 W
10.15 W 12.17 M 12.46 VS
1389 M 14.86 S 15.28 S
15.46 S 16.21 M 17.10 W
18.10 M 19.30 M 20.14 M
20.92 S 22.00 W 22.90 S
23.31 W 24.56 M 24.76 M
25.18 W 26.03 W 26.74 W
27.49 M 28.03 W 29.53 W
31.30 W 31.46 W 33.79 W
34.01 W 35.98 W 37.96 W
38.38 W 42.10 W 42.25 W
44.23 W 44.66 W
在另一优选例中，所述晶型III的X射线粉末衍射图基本如图19所表征。
在另一优选例中，所述晶型III无明显吸热放热峰(如图20)。
在另一优选例中，所述多晶型物为式X化合物的晶型IV，其X射线粉末衍射图在组IV-1的衍射角2θ(°)值处具有峰：5.26±0.20、6.94±0.20、8.98±0.20、9.52±0.20、11.62±0.20、12.40±0.20、13.42±0.20、14.62±0.20、16.51±0.20、17.62±0.20、18.01±0.20、19.18±0.20、21.85±0.20、27.31±0.20。
在另一优选例中，所述晶型IV的X射线粉末衍射图还包含在2个或2个以上选自下组IV-2的衍射角2θ(°)值处的峰：15.35±0.20、15.99±0.20、20.86±0.20、22.81±0.20、22.96±0.20、24.72±0.20、25.15±0.20、25.41±0.20、25.63±0.20、37.92±0.20。
在另一优选例中，所述晶型IV的X射线粉末衍射图还包含在2个或2个以上选自下组IV-3的衍射角2θ(°)值处的峰：1.16±0.20、1.57±0.20、10.07±0.20、11.11±0.20、13.93±0.20、16.90±0.20、18.49±0.20、18.82±0.20、20.11±0.20、22.50±0.20、24.43±0.20、26.44±0.20、26.65±0.20、28.00±0.20、29.30±0.20、29.66±0.20、34.45±0.20、34.66±0.20、36.83±0.20、38.35±0.20、44.17±0.20、44.71±0.20、47.94±0.20、48.21±0.20。
在另一优选例中，所述晶型IV的X射线粉末衍射图在选自组IV-1、IV-2、IV-3中4个或更多个或全部(如4、5、6、7、8、9、10、11、12、13等)的2θ(°)值处具有峰。
在另一优选例中，所述晶型IV的X射线粉末衍射图在表IV1所示的2θ(°)值处具有峰，各峰相对强度如表IV1所示：
表IV1
Figure GPA0000289897440000101
Figure GPA0000289897440000111
在另一优选例中，所述晶型IV的X射线粉末衍射图基本如图22所表征。
在另一优选例中，所述多晶型物为式X化合物的晶型V，其X射线粉末衍射图在组V-1的衍射角2θ(°)值处具有峰：7.00±0.20、8.98±0.20、9.55±0.20、11.11±0.20、12.46±0.20、13.42±0.20、14.68±0.20、15.25±0.20、15.45±0.20、17.59±0.20、19.30±0.20、20.86±0.20、21.88±0.20、22.99±0.20、27.49±0.20、37.90±0.20。
在另一优选例中，所述晶型V的X射线粉末衍射图还包含在2个或2个以上选自下组V-2的衍射角2θ(°)值处的峰：14.05±0.20、16.15±0.20、16.54±0.20、16.90±0.20、18.06±0.20、18.49±0.20、20.05±0.20、20.20±0.20、22.06±0.20、23.23±0.20、24.55±0.20、24.79±0.20、25.36±0.20、25.51±0.20、25.68±0.20、27.34±0.20、28.12±0.20。
在另一优选例中，所述晶型V的X射线粉末衍射图还包含在2个或2个以上选自下组V-3的衍射角2θ(°)值处的峰：1.06±0.20、11.41±0.20、22.51±0.20、29.09±0.20、34.31±0.20、34.70±0.20、36.85±0.20、38.29±0.20、44.05±0.20、44.61±0.20。
在另一优选例中，所述晶型V的X射线粉末衍射图在选自组V-1、V-2、V-3中的6个或更多个或全部(如6、7、8、9、10、11、12、13、14、15等)的2θ(°)值处具有峰。
在另一优选例中，所述晶型V的X射线粉末衍射图在表V1所示的2θ(°)值处具有峰，各峰相对强度如表V1所示：
表V1
2θ(°) I/I<sub>0</sub> 2θ(°) I/I<sub>0</sub> 2θ(°) I/I<sub>0</sub>
1.06 W 7.00 VS 8.98 S
9.55 S 11.11 S 11.41 W
12.46 VS 13.42 VS 14.05 M
14.68 VS 15.25 S 15.45 S
16.15 M 16.54 M 16.90 M
17.59 S 18.06 M 18.49 M
19.30 S 20.05 M 20.20 M
20.86 S 21.88 S 22.06 M
22.51 W 22.99 S 23.23 M
24.55 M 24.79 M 25.36 M
25.51 M 25.68 M 27.34 M
27.49 S 28.12 M 29.09 W
34.31 W 34.70 W 36.85 W
37.90 S 38.29 W 44.05 W
44.61 W
在另一优选例中，所述晶型V的X射线粉末衍射图基本如图24所表征。
在另一优选例中，所述晶型V在238.92℃处有一个放热峰(如图25)。
在本发明的第二方面，提供了一种制备本发明第一方面所述的式X化合物药学上可接受盐、或式X化合物或其药学上可接受盐的多晶型物的方法，包括步骤：
(1)在溶剂中，将化合物5a与化合物1a进行反应，从而形成式X化合物；和
Figure GPA0000289897440000121
(2)任选地将式X化合物与酸进行成盐反应，从而形成药学上可接受的盐；
(3)任选地将步骤(1)或(2)所形成的式X化合物或其药学上可接受的盐进行结晶处理，从而获得多晶型物。
在另一优选例中，所述方法包括以下子方法(A)-(G)以及(I)-(V)中任一子方法：
(A)所述多晶型物为式X化合物盐酸盐的A型结晶，即晶型A，并且在步骤(3)中包括：在溶剂中，在盐酸存在下，对式X化合物进行结晶处理，从而形成晶型A；
在另一优选例中，步骤(A)中，所述溶剂选自下组：甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、丙酮、乙腈、四氢呋喃、乙酸乙酯、丙二醇，或其混合物，较佳地，所述有机溶剂为四氢呋喃或乙酸乙酯。
在另一优选例中，步骤(A)中，盐酸与式X化合物的摩尔比为(0.8-2.1)∶1，较佳地(0.9-1.1)∶1。
在另一优选例中，步骤(A)中，结晶处理方式为缓慢降温。
在另一优选例中，步骤(A)中，结晶处理温度为0-60℃，较佳地为4-50℃。
在另一优选例中，步骤(A)中，结晶处理时间为1-72小时，较佳地为10-50小时。
(B)所述多晶型物为式X化合物马来酸盐的B型结晶，即晶型B，并且在步骤(3)中包括：在溶剂中，在马来酸存在下，对式X化合物进行结晶处理，从而形成晶型B；
在另一优选例中，步骤(B)中，所述溶剂选自下组：甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、丙酮、乙腈、四氢呋喃、乙酸乙酯、丙二醇，或其混合物，较佳地，所述有机溶剂为乙醇、四氢呋喃、乙酸乙酯或丙酮。
在另一优选例中，步骤(B)中，马来酸与式X化合物的摩尔比为(0.8-1.2)∶1，较佳地(0.9-1.1)∶1，更佳地1∶1。
在另一优选例中，步骤(B)中，结晶处理方式为缓慢降温或反溶剂添加。
在另一优选例中，步骤(B)中，结晶处理温度为0-60℃，较佳地为4-50℃。
在另一优选例中，步骤(B)中，结晶处理时间为1-72小时，较佳地为10-50小时。
(C)所述多晶型物为式X化合物硫酸盐的C型结晶，即晶型C，并且在步骤(3)中包括：在溶剂中，在硫酸存在下，对式X化合物进行结晶处理，从而形成晶型C。
在另一优选例中，步骤(C)中，所述溶剂选自下组：甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、丙酮、乙腈、四氢呋喃、乙酸乙酯、丙二醇，或其混合物，较佳地，所述有机溶剂为丙酮。
在另一优选例中，步骤(C)中，结晶处理方式为缓慢降温。
在另一优选例中，步骤(C)中，结晶处理温度为0-60℃，较佳地为4-50℃。
在另一优选例中，步骤(C)中，结晶处理时间为1-72小时，较佳地为10-50小时。
(D)所述多晶型物为式X化合物氢溴酸盐的D型结晶，即晶型D，并且在步骤(3)中包括：在溶剂中，在氢溴酸存在下，对式X化合物进行结晶处理，从而形成晶型D；
在另一优选例中，步骤(D)中，所述溶剂选自下组：甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、丙酮、乙腈、四氢呋喃、乙酸乙酯、丙二醇，或其混合物，较佳地，所述有机溶剂为四氢呋喃或乙酸乙酯。
在另一优选例中，步骤(D)中，结晶处理方式为缓慢降温。
在另一优选例中，步骤(D)中，结晶处理温度为0-60℃，较佳地为4-50℃。
在另一优选例中，步骤(D)中，结晶处理时间为1-72小时，较佳地为10-50小时。
(E)所述多晶型物为式X化合物甲磺酸盐的E型结晶，即晶型E，并且在步骤(3)中包括：在溶剂中，在甲磺酸存在下，对式X化合物进行结晶处理，从而形成晶型E；
在另一优选例中，步骤(E)中，所述溶剂选自下组：甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、丙酮、乙腈、四氢呋喃、乙酸乙酯、丙二醇，或其混合物，较佳地，所述有机溶剂为丙酮或乙酸乙酯。
在另一优选例中，步骤(E)中，结晶处理方式为缓慢降温。
在另一优选例中，步骤(E)中，结晶处理温度为0-60℃，较佳地为4-50℃。
在另一优选例中，步骤(E)中，结晶处理时间为1-72小时，较佳地为10-50小时。
(F)所述多晶型物为式X化合物L-酒石酸盐的F型结晶，即晶型F，并且在步骤(3)中包括：在溶剂中，在L-酒石酸存在下，对式X化合物进行结晶处理，从而形成晶型F；
在另一优选例中，步骤(F)中，所述溶剂选自下组：甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、丙酮、乙腈、四氢呋喃、乙酸乙酯、丙二醇，或其混合物，较佳地，所述有机溶剂为乙酸乙酯。
在另一优选例中，步骤(F)中，结晶处理方式为缓慢降温。
在另一优选例中，步骤(F)中，结晶处理温度为0-60℃，较佳地为4-50℃。
在另一优选例中，步骤(F)中，结晶处理时间为1-72小时，较佳地为10-50小时。
(G)所述多晶型物为式X化合物柠檬酸盐的G型结晶，即晶型G，并且在步骤(3)中包括：在溶剂中，在柠檬酸存在下，对式X化合物进行结晶处理，从而形成晶型G；
在另一优选例中，步骤(G)中，所述溶剂选自下组：甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、丙酮、乙腈、四氢呋喃、乙酸乙酯、丙二醇，或其混合物，较佳地，所述有机溶剂为丙酮或乙酸乙酯。
在另一优选例中，步骤(G)中，结晶处理方式为缓慢降温。
在另一优选例中，步骤(G)中，结晶处理温度为0-60℃，较佳地为4-50℃。
在另一优选例中，步骤(G)中，结晶处理时间为1-72小时，较佳地为10-50小时。
(I)所述多晶型物为式X化合物的晶型I，并且在步骤(3)中包括：在溶剂中，对式X化合物进行结晶处理，从而形成晶型I；
在另一优选例中，步骤(I)中，所述溶剂选自下组：水、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、丙酮、乙腈、四氢呋喃、乙腈、丙二醇、乙酸乙酯、甲基异丁基酮、乙酸异丙酯、2-甲基四氢呋喃、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、二甲基亚砜、甲苯、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮，或其混合。
在另一优选例中，步骤(I)中，结晶处理方式为缓慢挥发、缓慢降温或混悬震摇。
在另一优选例中，步骤(I)中，结晶处理温度为0-60℃。
在另一优选例中，步骤(I)中，结晶处理时间为2小时-10天。
(II)所述多晶型物为式X化合物的晶型II，并且在步骤(3)中包括：在溶剂中，对式X化合物进行结晶处理，从而形成晶型II；
在另一优选例中，步骤(II)中，所述溶剂选自下组：水、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、丙酮、乙腈、四氢呋喃、丙二醇、乙酸乙酯、甲基异丁基酮、乙酸异丙酯、2-甲基四氢呋喃、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、二甲基亚砜、甲苯、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮，或其混合。优选为水和乙腈的混合。
在另一优选例中，步骤(II)中，结晶处理方式为缓慢挥发或混悬震摇。
在另一优选例中，步骤(II)中，结晶处理温度为0-60℃。
在另一优选例中，步骤(II)中，结晶处理时间为2小时-10天。
(III)所述多晶型物为式X化合物的晶型III，并且在步骤(3)中包括：在溶剂中，对式X化合物进行结晶处理，从而形成晶型III；
在另一优选例中，步骤(III)中，所述溶剂选自下组：水、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、丙酮、乙腈、四氢呋喃、丙二醇、乙酸乙酯、甲基异丁基酮、乙酸异丙酯、2-甲基四氢呋喃、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、二甲基亚砜、甲苯、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮，或其混合。优选乙醇或异丙醇。
在另一优选例中，步骤(III)中，结晶处理方式为缓慢挥发或混悬震摇。
在另一优选例中，步骤(III)中，结晶处理温度为0-60℃。
在另一优选例中，步骤(III)中，结晶处理时间为2小时-10天。
(IV)所述多晶型物为式X化合物的晶型IV，并且在步骤(3)中包括：在溶剂中，对式X化合物的晶型I、晶型II和晶型III的混合物进行结晶处理，从而形成晶型IV；
在另一优选例中，步骤(IV)中，所述溶剂选自下组：水、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、丙酮、乙腈、四氢呋喃、丙二醇、乙酸乙酯、1，4-二氧六环、2-甲基四氢呋喃，或其混合物。优选为水。
在另一优选例中，步骤(IV)中，结晶处理方式为混合震摇。
在另一优选例中，步骤(IV)中，结晶处理温度为0-60℃。
在另一优选例中，步骤(IV)中，结晶处理时间为2小时-10天。
(V)所述多晶型物为式X化合物的晶型V，并且在步骤(3)中包括：在溶剂中，对式X化合物的晶型I、晶型II和晶型III的混合物进行结晶处理，从而形成晶型V；
在另一优选例中，步骤(V)中，所述溶剂选自下组：甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、丙酮、乙腈、四氢呋喃、丙二醇、乙酸乙酯、1，4-二氧六环、2-甲基四氢呋喃，或其混合物。优选为丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙腈或甲基叔丁基醚。
在另一优选例中，步骤(V)中，结晶处理方式为混合震摇。
在另一优选例中，步骤(V)中，结晶处理温度为0-60℃。
在另一优选例中，步骤(V)中，结晶处理时间为2小时-10天。
本发明第三方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括：
(a)本发明第一方面中任一所述的式X化合物药学上可接受盐、或式X化合物或其药学上可接受盐的多晶型物；以及(b)药学可接受的载体。
本发明第四方面提供了如本发明第一方面所述的式X化合物药学上可接受盐、或式X化合物或其药学上可接受盐的多晶型物、或如本发明第三方面所述药物组合物在制备EZH2抑制剂的应用。
本发明第五方面提供了如本发明第一方面所述的式X化合物药学上可接受盐、或式X化合物或其药学上可接受盐的多晶型物、或如本发明第三方面所述药物组合物在制备由EZH2介导的疾病或病症的药物中的应用。
本发明第六方面提供了一种治疗由EZH2介导的疾病或病症的方法，包括给予所需患者治疗有效量的本发明第一方面所述的式X化合物药学上可接受盐、或式X化合物或其药学上可接受盐的多晶型物，或如本发明第三方面所述药物组合物。
本发明第七方面提供了一种治疗由EZH2介导的疾病或病症的方法，包括给予所需患者治疗有效量的本发明第一方面所述的式X化合物药学上可接受盐、或式X化合物或其药学上可接受盐的多晶型物，以及另一种治疗活性试剂。
在另一优选例中，由EZH2介导的疾病或病症选自：癌症、肺动脉高压、骨髓纤维化、人类免疫缺陷病毒(HIV)疾病、移植物抗宿主病(GVHD)、韦弗综合征、寻常性银屑病或肝纤维化。
在另一优选例中，由EZH2介导的疾病或病症为癌症。
在另一优选例中，由EZH2介导的癌症包括但不是限于，甲状腺癌、心脏肉瘤、肺癌、胃肠道癌、泌尿生殖道肿瘤、肝癌、套细胞淋巴瘤、骨肉瘤，神经系统肉瘤、妇科癌、血液系统肿瘤、肾上腺神经母细胞瘤、皮肤癌、星形细胞肿瘤、乳腺癌、大肠癌、子宫内膜癌，头颈部癌、口腔癌。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1显示了晶型A的XRPD图。
图2显示了晶型A的DSC图。
图3显示了晶型A的TGA图。
图4显示了晶型B的XRPD图。
图5显示了晶型B的DSC图。
图6显示了晶型B的TGA图。
图7显示了晶型C的XRPD图。
图8显示了晶型D的XRPD图。
图9显示了晶型E的XRPD图。
图10显示了晶型F的XRPD图。
图11显示了晶型G的XRPD图。
图12显示了晶型I的XRPD图。
图13显示了晶型I的DSC图。
图14显示了晶型I的TGA图。
图15显示了晶型I的显微镜图谱。
图16显示了晶型II的XRPD图。
图17显示了晶型II的DSC图。
图18显示了晶型II的显微镜图谱。
图19显示了晶型III的XRPD图。
图20显示了晶型III的DSC图。
图21显示了晶型III的显微镜图谱。
图22显示了晶型IV的XRPD图。
图23显示了晶型IV的显微镜图谱。
图24显示了晶型V的XRPD图。
图25显示了晶型V的DSC图。
图26显示了晶型V的显微镜图谱。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究，意外地发现了这类4，5，6-三取代吲唑类衍生物，特别是吲唑7位无取代的4，5，6-三取代吲唑类衍生物对EZH2 Y641F等酶以及SU-DHL-6和SU-DHL-10等细胞具有较高的抑制活性。研究还发现，式X化合物的一系列游离碱多晶型物、其盐以及盐的多晶型物不仅具有较好的物理化学稳定性，还具有较好的体内、体外相关药理活性，因此具有进一步开发成为药物的可能。
术语
如本发明所用，“本发明的晶体”、“本发明的晶型”、“本发明的多晶型物”等可互换使用。
式X化合物
在本发明中，式X化合物为N-((4，6-二甲基-2-氧代-1，2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-乙基-4-(乙基((1S，4S)-4-(3-甲基氮杂环丁烷嗪-1-基)环己基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-6-甲酰胺，其对EZH2 Y641F等酶以及SU-DHL-6和SU-DHL-10等细胞具有较高的抑制活性。
本发明还包括式X化合物药学上可接受盐、或式X化合物游离碱或其药学上可接受盐的多晶型物。
在本发明中，所述的药学上可接受的盐选自下组：盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、马来酸盐、富马酸盐、L-酒石酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐和氢溴酸盐。
多晶型物
固体不是以无定形的形式就是以结晶的形式存在。在结晶形式的情况下，分子定位于三维晶格格位内。当化合物从溶液或浆液中结晶出来时，它可以不同的空间点阵排列结晶(这种性质被称作“多晶型现象”)，形成具有不同的结晶形式的晶体，这各种结晶形式被称作“多晶型物”。给定物质的不同多晶型物可在一个或多个物理属性方面(如溶解度和溶解速率、真比重、晶形、堆积方式、流动性和/或固态稳定性)彼此不同。
结晶
可以通过操作溶液，使得感兴趣化合物的溶解度极限被超过，从而完成生产规模的结晶。这可以通过多种方法来完成，例如，在相对高的温度下溶解化合物，然后冷却溶液至饱和极限以下。或者通过沸腾、常压蒸发、真空干燥或通过其它的一些方法来减小液体体积。可通过加入抗溶剂或化合物在其中具有低的溶解度的溶剂或这样的溶剂的混合物，来降低感兴趣化合物的溶解度。另一种可选方法是调节pH值以降低溶解度。有关结晶方面的详细描述请参见Crystallization，第三版，J W Mullens，Butterworth-Heineman Ltd.，1993，ISBN 0750611294。
本发明所述的“悬浮搅拌”是指将式X化合物和相应的酸或相应酸的溶液在合适的溶剂中混合形成浑浊液，或者将式X化合物与合适的溶剂混合形成浑浊液后搅拌得到晶体的一种方法。合适的溶剂可以为水或有机溶剂。
本发明所述的“缓慢挥发”是指将式X化合物的溶液或含式X化合物和相应酸的溶液置于一定温度下缓慢挥发掉溶剂，得到晶体的一种方法。
本发明所述的“反溶剂添加”是指向式X化合物的一种溶液中加入另一种合适溶剂后析出得到晶体的一种方法。
假如期望盐的形成与结晶同时发生，如果盐在反应介质中比原料溶解度小，那么加入适当的酸或碱可导致所需盐的直接结晶。同样，在最终想要的形式比反应物溶解度小的介质中，合成反应的完成可使最终产物直接结晶。
结晶的优化可包括用所需形式的晶体作为晶种接种于结晶介质中。另外，许多结晶方法使用上述策略的组合。一个实施例是在高温下将感兴趣的化合物溶解在溶剂中，随后通过受控方式加入适当体积的抗溶剂，以使体系正好在饱和水平之下。此时，可加入所需形式的晶种(并保持晶种的完整性)，将体系冷却以完成结晶。
如本文所用，术语“室温”一般指4-30℃，较佳地指20±5℃。
本发明的多晶型物
如本文所用，术语“本发明的多晶型物”包括式X化合物或其药学上可接受盐(如盐酸盐、马来酸盐)，或其各种溶剂合物的多晶型物，还包括相同的盐或溶剂合物的不同多晶型物。
“式X化合物的多晶型物”与“式X化合物游离碱的多晶型物”可互换使用。
优选的本发明多晶型物包括(但并不限于)：
(i)晶型A、B、C、D、E、F、G(盐的晶型)；
(ii)晶型I、II、III、IV、V(式X化合物游离碱的晶型)。
在本发明中，某些晶型可以互相转化，因此本发明还提供了部分晶型互相转化的方法。
多晶型物的鉴定和性质
在制备本发明的多晶型物后，采用如下多种方式和仪器对其性质进行了研究。
X射线粉末衍射
测定晶型的X射线粉末衍射的方法在本领域中是已知的。例如使X射线粉末衍射仪，以2°每分钟的扫描速度，采用铜辐射靶获取图谱。
本发明的式X化合物或其药学上可接受的盐的多晶型物，具有特定的晶型形态，在X-射线粉末衍射(XRPD)图中具有特定的特征峰。
示差扫描量热分析
又称“差示量热扫描分析”(DSC)，是在加热过程中，测量被测物质与参比物之间的能量差与温度之间关系的一种技术。DSC图谱上的峰位置、形状和峰数目与物质的性质有关，故可以定性地用来鉴定物质。本领域常用该方法来检测物质的相变温度、玻璃化转变温度、反应热等多种参数。
式X化合物的药物组合物及其应用
通常，本发明式X化合物或其药学可接受盐的多晶型物可以与一种或多种药用载体形成适合的剂型施用。这些剂型适用于口服、直肠给药、局部给药、口内给药以及其他非胃肠道施用(例如，皮下、肌肉、静脉等)。例如，适合口服给药的剂型包括胶囊、片剂、颗粒剂以及糖浆等。这些制剂中包含的本发明的化合物可以是固体粉末或颗粒；水性或非水性液体中的溶液或是混悬液；油包水或水包油的乳剂等。上述剂型可由活性化合物与一种或多种载体或辅料经由通用的药剂学方法制成。上述的载体需要与活性化合物或其他辅料兼容。对于固体制剂，常用的无毒载体包括但不限于甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、纤维素、葡萄糖、蔗糖等。用于液体制剂的载体包括水、生理盐水、葡萄糖水溶液、乙二醇和聚乙二醇等。活性化合物可与上述载体形成溶液或是混悬液。
本发明的组合物以符合医学实践规范的方式配制，定量和给药。给予化合物的“有效量”由要治疗的具体病症、治疗的个体、病症的起因、药物的靶点以及给药方式等因素决定。
本发明提供了本发明第一方面所述的式X化合物药学上可接受盐、或式X化合物或其药学上可接受盐的多晶型物可用于EZH2抑制剂的制备，或由EZH2介导的疾病或病症的药物的制备。
在另一优选例中，由EZH2介导的疾病或病症选自：癌症、肺动脉高压、骨髓纤维化、人类免疫缺陷病毒(HIV)疾病、移植物抗宿主病(GVHD)、韦弗综合征、寻常性银屑病或肝纤维化。
在另一优选例中，由EZH2介导的疾病或病症为癌症。
在另一优选例中，由EZH2介导的癌症包括但不是限于，甲状腺癌、心脏肉瘤、肺癌、胃肠道癌、泌尿生殖道肿瘤、肝癌、套细胞淋巴瘤、骨肉瘤，神经系统肉瘤、妇科癌、血液系统肿瘤、肾上腺神经母细胞瘤、皮肤癌、星形细胞肿瘤、乳腺癌、大肠癌、子宫内膜癌，头颈部癌、口腔癌。
如本文所用，“治疗有效量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。
本发明的药物组合物或所述药用组合物中含有的式X化合物药学上可接受盐、或式X化合物或其药学上可接受盐的多晶型物的治疗有效量优选为0.1mg-5g/kg(体重)。
本发明的主要优点在于：
本发明人发现，N-((4，6-二甲基-2-氧代-1，2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-乙基-4-(乙基((1S，4S)-4-(3-甲基氮杂环丁烷嗪-1-基)环己基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-6-甲酰胺游离碱和盐的多晶型物以及盐也具有较好的物理化学稳定性和突出的相关药理活性。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
试剂与仪器
本发明中，化合物的结构和纯度通过核磁共振(1HNMR)和/或液质联用质谱(LC-MS)来确定。1HNMR：BrukerAVANCE-400核磁仪，内标为四甲基硅烷(TMS)。LC-MS：Agilent1200 HPLC System/6140 MS液质联用质谱仪(购自安捷伦)，柱子WatersX-Bridge，150×4.6mm，3.5μm。制备高效液相色谱(pre-HPLC)：用Waters PHW007，柱子XBridge C18，4.6*150mm，3.5um。
采用ISCO Combiflash-Rf75或Rf200型自动过柱仪，Agela4g、12g、20g、40g、80g、120g一次性硅胶柱。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)，检测反应使用的硅胶板采用的规格是0.15mm-0.2mm，薄层色谱法分离纯化产品使用的硅胶板采用的规格是0.4mm-0.5mm。硅胶一般使用烟台黄海硅胶200-300目硅胶为载体。碱性氧化铝柱一般使用国药层析用FCP200-300目碱性氧化铝为载体。
实施例中无特殊说明，反应均在氮气或氩气氛下进行。实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
如本文所用，DMF表示二甲基甲酰胺，DMSO表示二甲基亚砜，THF表示四氢呋喃，DIEA表示N，N-二异丙基乙胺，EA表示乙酸乙酯，PE表示石油醚。BINAP表示(2R，3S)-2，2’-双二苯膦基-1，1’-联萘，NBS表示N-溴代丁二酰亚胺，NCS表示N-氯代丁二酰亚胺，Pd2(dba)3表示三(二亚苄基丙酮)二钯，Pd(dppf)Cl2表示[1，1’-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯。
乙腈ACN，甲醇MeOH，乙醇EtOH，异丙醇 IPA，丙酮ACE，乙酸乙酯EA，甲基叔丁基醚
MTBE，四氢呋喃THF，水H2O，50％乙腈50％ACN。
如本文所用，室温指的是约20±5℃。
通用方法
X射线粉末衍射：本发明中，上述晶型的粉末X衍射图谱是通过本领域的已知方法，使用PANalytacal Empyrean X射线粉末衍射分析仪获得。仪器测试条件如下表所示：
Figure GPA0000289897440000181
在粉末X衍射图中，各峰的位置由2θ(°)确定。可以理解，不同的仪器和/或条件可导致产生的数据会略有不同，各峰的位置和相对强度会有变化。峰的强度划分仅仅反映了各位置上峰的近似大小。在本发明中，各晶型均以其峰高最高的衍射峰作为基峰，定义其相对强度为100％，作为I0(如晶型I的2θ(°)值为7.09的峰为基峰，晶型II的2θ(°)值为7.112的峰为基峰，晶型III的2θ(°)值为6.969的峰为基峰，晶型IV的2θ(°)值为8.978的峰为基峰，晶型V的2θ(°)值为7的峰为基峰，晶型A的2θ(°)值为9.311的峰为基峰，晶型B的2θ(°)值为13.958的峰为基峰，晶型C的2θ(°)值为14.436的峰为基峰，晶型D的2θ(°)值为14.653的峰为基峰，晶型E的2θ(°)值为13.899的峰为基峰，晶型F的2θ(°)值为15.309的峰为基峰，晶型G的2θ(°)值为15.22的峰为基峰)，其它各峰以其峰高与基峰峰高的比值作为其相对强度I/I0，各峰相对强度的划分定义如下表所示：
相对强度I/I<sub>0</sub>(％) 定义
50～100 VS(很强)
25～50 S(强)
10～25 M(中等)
1～10 W(弱)
本发明的盐或其晶型通过HPLC/IC或1H NMR确定酸碱摩尔比。
高效液相色谱：本发明中，高效液相色谱(HPLC)在Agilent 1100/1260 HPLC上采集。
TGA和DSC图谱：TGA和DSC图谱分别在TA Q500/5000热重分析仪和TA Q200/2000差示扫描量热仪上采集。仪器测试条件如下表所示：
参数 TGA DSC
方法 线性升温 线性升温
样品盘 铂金盘，敞开 铝盘，压盖
温度范围 室温-设定温度 25℃-设定温度
扫描速率(℃/分钟) 10 10
保护气体 氮气 氮气
动态水分吸附(DVS)曲线：在SMS(Surface Measurement Systems)的DVSIntrinsic上采集。在25℃时的相对湿度用LiCl，Mg(NO3)2和KCl的潮解点校正。仪器测试条件如下表所示：
Figure GPA0000289897440000191
含水量：使用万通870卡氏水分测定仪测试，使用滴定试液规格为市售Sigma-aldrich的
Figure GPA0000289897440000192
(34805-1L-R，Batch#SZBD3330V)，使用分析纯的MeOH作溶剂。水分测定前用高纯水进行校正。
可以理解的是，使用与上述仪器作用相同的其他类型的仪器或使用不同与本发明中使用的测试条件时，可能会得到另外的数值，因此，所引用的数值不应视为绝对的数值。
由于仪器的误差或操作人员的区别，本领域技术人员能理解，以上用于表征晶体的物理性质的参数可能有微小的差别，所以上述的参数仅用于辅助表征本发明提供的多晶型物，而不能视为是对本发明的多晶型物的限制。
中间体的制备
化合物1a的制备
Figure GPA0000289897440000201
化合物1a-1(22.5g，152mmol)的四氢呋喃(500mL)溶液在冰浴下缓慢加入四氢铝锂(11.5g，0.3mol)，混合物室温搅拌过夜。分别向体系加15mL水，30mL氢氧化钠溶液(15％)，过滤，浓缩滤液得白色固体化合物1a。MS m/z(ESI)：N/A。
化合物2a的制备
Figure GPA0000289897440000202
步骤1：化合物2a-1(8g，35.3mmol)的无水甲醇(100mL)溶液中加入二氯亚砜(7.7mL，106.1mmol)，混合物室温搅拌回流20小时。TLC跟踪至反应结束。反应液冷却后浓缩去掉大部分溶剂，过滤，滤饼减压干燥得7.5g化合物2a-2。MS m/z(ESI)：241[M+H]+。
步骤2：化合物2a-2(7.6g，31.64mmol)的乙酸(150mL)溶液分批加入铁粉(14g，253mmol)，加完后反应液过滤，滤液倒入水中，乙酸乙酯萃取，有机层浓缩，经combiflash纯化得黄色固体化合物2a-3(3.5g，52.6％)。MS m/z(ESI)：211[M+H]+。
步骤3：化合物2a-3(1g，4.76mmol)的DMSO(20mL)溶液逐滴加入NBS(931mg，5.23mmol)的DMSO(1.5mL)溶液，混合物室温搅拌2小时。LC-MS跟踪至反应结束。反应液倒入水中，过滤，滤饼减压干燥得700mg黄色固体化合物2a-4。MS m/z(ESI)：290.8[M+H]+。
步骤4：化合物2a-4(2.36g，8.16mmol)的乙酸(30mL)溶液在40℃下逐滴加入亚硝酸钠(619mg，8.98mmol)的水(5mL)溶液，混合物40℃搅拌1小时。LC-MS跟踪至反应完全。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取，干燥浓缩得2g固体化合物2a-5。MS m/z(ESI)：299.8[M+H]+。
步骤5：化合物2a-5(88.5mg，0.296mmol)的N，N-二甲基甲酰胺5mL溶液在冰浴下加入钠氢(24mg，0.591mmol)，冰浴下搅拌30分钟，加入碘甲烷(84mg，0.591mmol)，混合物再搅拌2小时。LC-MS跟踪至反应完全。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取后干燥，浓缩得60mg化合物2a-6。MS m/z(ESI)：315.8[M+H]+。
步骤6：化合物2a-6(904mg，2.87mmol)，化合物16.1(774mg，5.73mmol)，Pd(dppf)Cl2(210mg，0.286mmol)，碳酸钠(607mg，5.73mmol)，1，4-二氧六环(20mL)和2mL水的混合物在氩气氛围下100℃微波反应8小时。LC-MS跟踪至反应完全。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取浓缩后经combiflash纯化得黄色固体化合物2a-7(300mg，20％)。MS m/z(ESI)：262.1[M+H]+。
步骤7：化合物2a-7(52.2mg，0.2mmol)的甲醇(5mL)和1mL四氢呋喃溶液加入钯炭(15mg)，混合物在氢气氛围下室温搅拌过夜。LC-MS跟踪至反应完全。反应液经过滤，浓缩得化合物2a。MS m/z(ESI)：234.2[M+H]+。
实施例1式X化合物的制备
Figure GPA0000289897440000211
步骤1：化合物2a(828mg，3.54mmol)，化合物18.1(1.3g，7.08mmol)，与三氟乙酸5mL的1，4-二氧六环(50mL)溶液室温搅拌2小时，加入三乙酰氧基硼氢化钠(2.25mg，10.62mmol)，再室温搅拌4小时。LC-MS跟踪至反应完全。反应液倒入水中，用碳酸氢钠溶液调pH至8，乙酸乙酯萃取后干燥，浓缩得1g化合物3a。MS m/z(ESI)：401[M+H]+。
步骤2：化合物3a(1.29g，3.22mmol)，乙醛(710mg，16.12mmol)，与乙酸3mL的1，4-二氧六环(30mL)溶液室温搅拌2小时，加入三乙酰氧基硼氢化钠(2.05g，9.67mmol)，再室温搅拌过夜。LC-MS跟踪至反应完全。反应液倒入水中，用碳酸氢钠溶液调pH至8，乙酸乙酯萃取后浓缩，combiflash纯化得红色化合物4a(280mg，26％)。MS m/z(ESI)：429.3[M+H]+。
步骤3：化合物4a(310mg，0.724mmol)的THF(10mL)溶液中加入甲醇(4mL)和氢氧化钠(4mL，3M)，混合物室温搅拌过夜。LC-MS跟踪至反应结束。反应液调pH至6，乙酸乙酯萃取除杂，水层浓缩，残留物经DCM∶MeOH＝10∶1洗涤，过滤后浓缩滤液，得200mg化合物5a。MS m/z(ESI)：415[M+H]+。
步骤4：化合物5a(92mg，0.223mmol)的DMF(3mL)溶液中加入HATU(127mg，0.335mmol)，DIPEA(115mg，0.892mmol)和化合物1a(84mg，0.446mmol)，混合物在室温下搅拌过夜。LC-MS跟踪至反应结束。反应液经乙酸乙酯/水体系萃取，有机层浓缩，经Prep-HPLC纯化得化合物X的游离碱(15mg，13.5％)，为白色固体。
1H NMR(400MHz，DMSO)δ11.46(s，1H)，8.13(t，1H)，8.05(s，1H)，7.29(s，1H)，5.87(s，1H)，4.30(d，2H)，3.97(s，3H)，3.93-3.89(m，1H)，3.43(s，2H)，3.13(s，3H)，3.08-2.90(m，4H)，2.64-2.59(m，2H)，2.24(s，3H)，2.11(s，3H)，2.08(s，1H)，1.76-1.43(m，6H)，1.20(s，3H)，0.97(t，3H)，0.79(t，3H).MS m/z(ESI)：549[M+H]+。将所得固体送XRD检测，其粉末X衍射图显示无特征峰，为无定形形式。
对比例
对比例1：N-((4，6-二甲基-2-氧代-1，2-二氢吡啶-3-基)甲基)-4-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-1，7-二甲基-1H-吲唑-6-甲酰胺(D1)的制备
Figure GPA0000289897440000212
步骤1：化合物6a(90mg，0.408mmol)，四氢吡喃酮(86.6mg，0.857mmol)的二氧六环/三氟乙酸(10ml/2ml)混合溶液在室温下搅拌2h，加入醋酸硼氢化钠(272mg，1.29mmol)，混合物在室温下继续搅拌1h，LC-MS跟踪至反应结束。反应用饱和碳酸氢钠溶液淬灭，并将PH调至8，用乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得棕色油状化合物7a(150mg)，MS m/z(ESI)：304.2[M+H]+。
步骤2：化合物7a(127mg，0.418mmol)，乙醛(92mg，2.07mmol)的二氧六环/乙酸(20ml/2ml)的混合溶液在室温下搅拌1h，加入醋酸硼氢化钠(443mg，2.09mmol)，混合物在室温下搅拌1h，LC-MS跟踪至反应结束。反应用饱和碳酸氢钠溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得棕色油状化合物8a(150mg)，MS m/z(ESI)：332.8[M+H]+。
步骤3：向化合物8a(129mg，0.388mmol)的甲醇溶液中加入氢氧化钠溶液(4M，2ml)，混合物在50℃下搅拌5h，LC-MS跟踪至反应结束。反应液减压浓缩除去甲醇后加水稀释，用乙酸乙酯萃取除去杂质，水相用盐酸(3M)将PH调至4，用乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得黑色油状物9a(150mg)，MS m/z(ESI)：318.3[M+H]+。
步骤4：向化合物9a(182.6mg，0.576mmol)的DMF溶液中加入化合物1a(83.5mg，0.564mmol)，HATU(214mg，0.564mmol)，DIPEA(194mg，1.50mmol)，混合物在室温下搅拌5h，LC-MS跟踪至反应结束。将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取，有机相用食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，经Pre-HPLC纯化得白色固体化合物D1(6mg，3％)，MS m/z(ESI)：452[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO)δ11.49(s，1H)，8.05(t，J＝4.0Hz，1H)，7.88(s，1H)，6.36(s，1H)，5.87(s，1H)，4.28(d，J＝4.0Hz，2H)，4.24(d，J＝4.0Hz，3H)，3.88-3.85(m，2H)，3.64-3.63(m，1H)，3.29-3.23(m，4H)，2.56(s，3H)，2.21(s，3H)，2.11(s，3H)，1.68-1.66(m，4H)，0.96(t，J＝8.0Hz，3H)。
对比化合物D2至D4参照对比化合物D1的方法制备
Figure GPA0000289897440000221
实施例2式X化合物晶型A的制备
称取200mg按实施例1方法制得的游离碱起始样品加至30ml玻璃样品瓶中，加入10ml乙酸乙酯，50℃条件下，边搅拌边缓慢滴加440μL 1M盐酸溶液，保温反应4h，溶液为浑浊状态；4h后，缓慢降温至0℃，固体沉淀增多；离心分离得固体，挥干溶剂即得固体产物。所得结晶的粉末X衍射图如图1所示(2θ角已标出)，在本申请中定义该晶型为晶型A。其DSC和TGA图谱见图2和3，该晶型的放热峰峰值温度为198.15℃，TGA结果显示在100℃前失重5.471％，从100-295.2℃失重27.259％。
实施例3式X化合物晶型B的制备
称取200mg按实施例1方法制得的游离碱起始样品加至30ml玻璃样品瓶中，加入10ml乙酸乙酯，50℃条件下，边搅拌边缓慢滴加440μL 1M马来酸溶液，保温反应4h，溶液为浑浊状态；4h后，缓慢降温至0℃，固体沉淀增多；离心分离得固体，挥干溶剂即得固体产物。所得结晶的粉末X衍射图如图4所示，在本申请中定义该晶型为晶型B。其DSC和TGA图谱见图5和6，该晶型无明显吸热放热峰。TGA结果显示，该晶型在100℃前失重2.941％，从111.97-165.04℃失重1.214％，从165.04-295.43℃失重6.395％。
实施例4式X化合物晶型A至晶型G的制备
将20mg按实施例1方法制得的游离碱起始样品溶于一定体积的相应溶剂中，相应的酸按照与游离碱1.2∶1的摩尔比加入5ml样品瓶中。50℃保温反应4h，后缓慢降温至4℃使析出固体，离心收集固体。若仍为澄清溶液则尝试通过反溶剂(MTBE)添加的方法诱导析晶。所得固体均在50℃干燥过夜后用于XRPD测试。试验过程及结果见表1和2。
表1
Figure GPA0000289897440000231
表2
Figure GPA0000289897440000232
Figure GPA0000289897440000241
N/A：未得到固体。
实施例5缓慢挥发法制备晶型I至晶型III
称取5mg按实施例1方法制得的游离碱起始样品至玻璃小瓶中，分别加入适量的表3中的溶剂，超声使其充分溶解后，放置在室温下缓慢挥发。当溶剂完全挥干后，收集所得固体并进行XRPD测试。各类晶型相应的溶剂如下表3所示：
表3
Figure GPA0000289897440000242
实施例6缓慢降温法制备晶型I
分别称取5mg按实施例1方法制得的游离碱起始样品至玻璃小瓶中，在60℃水浴条件分别加入适量表4中溶剂，搅拌使其溶解得到近饱和溶液，关闭加热按钮，使其缓慢降温，待降至室温后，置于冰浴条件下继续降温至4℃左右，收集混悬液于10000r/min条件下离心10min，倾倒上清液，将固体置于室温条件下缓慢挥发过夜，收集所得固体并进行XRPD测试。试验结果如下表4所示：
表4
Figure GPA0000289897440000243
实施例7混悬震摇法制备晶型I、晶型III
采用不同的溶剂体系在室温下混悬震摇试验。分别称取5mg按实施例1方法制得的游离碱起始样品至玻璃小瓶中，加入适量表5中有机试剂，盖紧瓶盖，用封口膜封口防止液体挥发，置于25℃，25r/min条件下分别震摇24小时和7天后取出，于10000r/min条件下离心10min，倾倒上清液，将固体置于50C烘箱里烘干，收集所得固体并进行XRPD测试。试验结果如表5所示。
表5
Figure GPA0000289897440000244
Figure GPA0000289897440000251
N/A：未得到固体。
实施例8混合震摇法多晶筛选
采用不同的溶剂体系进行混合震摇试验。将晶型I至晶型III的每种晶型分别称取2mg至玻璃小瓶中，得到混合晶体，加入适量表6中有机试剂，盖紧瓶盖，用封口膜封口防止液体挥发，置于室温下，25r/min条件下震摇一天。后取出，于4℃，10000/min条件下离心10min，倾倒上清液，将固体置于50℃下烘干，收集所得固体并进行XRPD测试。试验结果如表6所示，从结果观察，晶型V为稳定晶型。
表6
溶剂 震摇1天固体晶型
EtOH 晶型III
IPA 晶型III
ACE 晶型V
EtOAc 晶型V
MTBE 晶型V
THF 晶型V
ACN 晶型V
H<sub>2</sub>O 晶型IV
50％ACN 晶型II
实施例9固态稳定性实验
分别称取20mg晶型A和晶型B在60℃条件下以及40℃/75％RH放置，同时将另一组样品在4℃条件下密封保存作为对照，于4天和7天分别检测晶型和纯度变化。结果如表7所示，其中晶型B在60℃条件下以及40℃/75％RH条件下稳定性良好，晶型未发生改变。晶型A在40℃/75％RH条件下稳定性良好，在60℃条件下杂质增长明显，晶型未发生改变。
表7
Figure GPA0000289897440000252
实施例10动态溶解度实验
为了比较游离碱成盐前后的溶解度是否发生变化，室温下对晶型A和晶型B以及游离碱样品在0.1M HCl、pH4.5、pH6.8的缓冲液及水中的溶解度进行测试。试验中，分别绘制了游离碱样品与两种晶型的标曲。随后，分别称取约5mg按实施例1方法制得的游离碱样品及两种晶型固体样品，缓慢滴加溶媒(如溶媒滴加至1ml溶液仍未澄清则停止滴加)，室温振摇24h后离心，取上清液，0.45μm滤膜过滤进样，测定溶解度，结果如表8所示(浓度的单位为mg/ml)，两种晶型在pH4.5，pH6.8和水中的溶解性与游离碱样品具有显著性差异，说明成盐后溶解度具有明显的提高。
表8
Figure GPA0000289897440000261
NA溶液量太少不能检测
实施例11体外甲基转移酶活性测试
重组PRC2(EZH2-Y641F)购自Active motif司司，S-甲硫腺苷氨酸(SAM)和L-多聚赖氨酸(PLL)购自Sigma-Aldrich公司，H3(1-50)K27mel多肽购自Cisbio公司。检测体系采用Perkinelmer公司的LANCEUltra系统。酶活实验中，将待测化合物按1∶3的比例进行8个梯度点稀释后，加入反应板中并加100ng的重组酶。随后加入含有2.5μM SAM/250nM H3(1-50)K27mel预混物的缓冲液[20mM Tris pH8.5，2mM MgCl2，0.01％Tween-20，1mM TCEP]，室温下开始酶反应。反应3小时后，加入预混有PLL、检测抗体和Ulight的检测液，室温反应1小时后，在Tecan infinite pro上读取荧光值。IC50通过XLfit软件中的四因素模型拟合进行计算。结果如表9所示：
表9化合物对EZH2Y641F的抑制活性
Figure GPA0000289897440000262
实施例12细胞增殖测试
使用的细胞株Pfeiffer(CRL-2632)、suDHL-6(CRL-2959)、suDHL-10(CRL-2963)均购自美国菌种保藏库(ATCC)。所有细胞株以含10％胎牛血清(Gibco)的RPMI-1640培养基(Gbico)进行培养。培养细胞通过离心收集，并在CounterStar计数仪上测定细胞密度。随后在96孔板中种入合适数量的细胞并孵育过夜。待测化合物以1∶3的比例进行8个梯度点稀释后，加入对应孔中。继续培养6天后，以Cell counting kit-8检测活细胞数，在Tecaninfinite pro上读取吸光度值。IC50通过XLfit软件中的四参数模型拟合进行计算。结果如表10所示：
表10化合物对Pfeiffer细胞的抑制活性
Figure GPA0000289897440000271
从表9和表10可以看出，本发明游离碱对EZH2的酶和细胞具有较高的抑制活性。研究发现，游离碱结构中5和7位取代基的种类对化合物的酶抑制活性有很大影响，当7位取代基为氢，5位为烷基时(如游离碱)，对酶有很好的抑制活性，而当7位取代基为烷基，5位为氢(如D1一D4)时，对酶的抑制活性大大降低。
实施例13药物组合物
由以下组分制备晶型B的片剂：
Figure GPA0000289897440000272
按常规方法，将晶型B、淀粉混合过筛，再与上述其它组分混合均匀，直接压片。
实施例14药物组合物
由以下组分制备晶型V的胶囊：
Figure GPA0000289897440000273
按常规方法，将晶型V、淀粉混合过筛，再与上述其它组分混合均匀，装入普通明胶胶囊。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (21)

1.一种式X化合物的药学上可接受盐，
Figure FDA0003790336750000011
其特征在于，所述药学上可接受盐为：盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、马来酸盐、富马酸盐、L-酒石酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐或氢溴酸盐。
2.如权利要求1所述的式X化合物的药学上可接受盐，其特征在于，所述药学上可接受盐为：盐酸盐、硫酸盐、马来酸盐、L-酒石酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐或氢溴酸盐。
3.如权利要求1所述的式X化合物的药学上可接受盐，其特征在于，所述式X化合物的药学上可接受盐为多晶型物，所述多晶型物选自下组任一晶型：
式X化合物盐酸盐的A型结晶，即晶型A，其X射线粉末衍射图在下组A1的衍射角2θ(°)值处具有峰：4.64±0.20、9.31±0.20、12.11±0.20、12.45±0.20、13.24±0.20、14.44±0.20、15.28±0.20、16.24±0.20、16.42±0.20、22.63±0.20、37.87±0.20；
式X化合物马来酸盐的B型结晶，即晶型B，其X射线粉末衍射图在下组B1的衍射角2θ(°)值处具有峰：5.95±0.20、13.96±0.20、16.09±0.20、16.42±0.20、17.77±0.20、19.03±0.20、20.29±0.20、20.65±0.20、21.73±0.20；
式X化合物硫酸盐的C型结晶，即晶型C，其X射线粉末衍射图在下组C1的衍射角2θ(°)值处具有峰：7.00±0.20、13.18±0.20、14.14±0.20、14.44±0.20、14.62±0.20、17.65±0.20、17.81±0.20、18.11±0.20、20.44±0.20、21.85±0.20、23.89±0.20；
式X化合物氢溴酸盐的D型结晶，即晶型D，其X射线粉末衍射图在下组D1的衍射角2θ(°)值处具有峰：14.65±0.20、16.47±0.20、17.62±0.20、17.92±0.20、21.91±0.20、22.99±0.20、23.12±0.20、24.88±0.20；
式X化合物甲磺酸盐的E型结晶，即晶型E，其X射线粉末衍射图在下组E1的衍射角2θ(°)值处具有峰：9.48±0.20、10.30±0.20、12.03±0.20、12.79±0.20、13.90±0.20、16.09±0.20、16.39±0.20、17.76±0.20、18.97±0.20、19.11±0.20、20.08±0.20、20.39±0.20、20.59±0.20、21.73±0.20、21.91±0.20、22.14±0.20、22.99±0.20、23.14±0.20、23.57±0.20、25.67±0.20；
式X化合物L-酒石酸盐的F型结晶，即晶型F，其X射线粉末衍射图在下组F1的衍射角2θ(°)值处具有峰：10.92±0.20、11.11±0.20、11.26±0.20、15.31±0.20、16.96±0.20、17.11±0.20、18.16±0.20、18.46±0.20、20.45±0.20、23.55±0.20、25.30±0.20；
式X化合物柠檬酸盐的G型结晶，即晶型G，其X射线粉末衍射图在下组G1的衍射角2θ(°)值处具有峰：11.11±0.20、15.22±0.20、16.99±0.20、18.16±0.20、20.47±0.20、23.26±0.20、23.44±0.20。
4.如权利要求3所述的式X化合物的药学上可接受盐，其特征在于，所述晶型A的X射线粉末衍射图在以下的衍射角2θ(°)值处具有峰：1.06±0.20、1.30±0.20、4.64±0.20、8.84±0.20、9.31±0.20、11.24±0.20、12.11±0.20、12.45±0.20、13.24±0.20、13.68±0.20、14.44±0.20、15.28±0.20、16.24±0.20、16.42±0.20、20.80±0.20、21.86±0.20、22.63±0.20、24.10±0.20、24.23±0.20、24.58±0.20、25.12±0.20、25.39±0.20、26.86±0.20、27.13±0.20、29.42±0.20、30.65±0.20、33.23±0.20、37.87±0.20、38.32±0.20、44.08±0.20；
所述晶型B的X射线粉末衍射图在以下的衍射角2θ(°)值处具有峰：1.07±0.20、5.95±0.20、8.86±0.20、9.43±0.20、10.30±0.20、11.02±0.20、11.98±0.20、12.48±0.20、13.96±0.20、14.91±0.20、15.25±0.20、16.09±0.20、16.42±0.20、17.77±0.20、18.47±0.20、19.03±0.20、20.29±0.20、20.65±0.20、21.03±0.20、21.73±0.20、22.21±0.20、23.38±0.20、24.04±0.20、25.14±0.20、25.72±0.20、26.81±0.20、27.43±0.20、28.30±0.20、28.53±0.20、29.06±0.20、29.38±0.20、30.22±0.20、34.45±0.20、34.78±0.20、36.41±0.20、37.93±0.20、38.40±0.20、39.66±0.20、40.20±0.20、44.07±0.20、45.79±0.20；
所述晶型C的X射线粉末衍射图在以下的衍射角2θ(°)值处具有峰：1.12±0.20、1.54±0.20、1.87±0.20、7.00±0.20、13.18±0.20、14.14±0.20、14.44±0.20、14.62±0.20、17.65±0.20、17.81±0.20、18.11±0.20、20.44±0.20、21.85±0.20、22.15±0.20、23.89±0.20、25.40±0.20、27.23±0.20、37.96±0.20；
所述晶型D的X射线粉末衍射图在以下的衍射角2θ(°)值处具有峰：1.04±0.20、1.24±0.20、7.96±0.20、8.80±0.20、14.08±0.20、14.65±0.20、16.18±0.20、16.47±0.20、17.62±0.20、17.92±0.20、19.16±0.20、19.34±0.20、19.51±0.20、19.73±0.20、21.53±0.20、21.91±0.20、22.09±0.20、22.99±0.20、23.12±0.20、23.35±0.20、24.88±0.20、25.92±0.20、26.24±0.20、26.41±0.20、28.16±0.20、28.46±0.20、28.63±0.20、30.48±0.20、30.62±0.20；
所述晶型E的X射线粉末衍射图在以下的衍射角2θ(°)值处具有峰：1.15±0.20、1.27±0.20、1.75±0.20、5.48±0.20、5.81±0.20、8.78±0.20、9.48±0.20、10.30±0.20、12.03±0.20、12.79±0.20、13.90±0.20、14.54±0.20、16.09±0.20、16.39±0.20、17.76±0.20、18.97±0.20、19.11±0.20、20.08±0.20、20.39±0.20、20.59±0.20、21.73±0.20、21.91±0.20、22.14±0.20、22.99±0.20、23.14±0.20、23.57±0.20、24.69±0.20、25.67±0.20、27.28±0.20、36.53±0.20、38.03±0.20；
所述晶型F的X射线粉末衍射图在以下的衍射角2θ(°)值处具有峰：1.04±0.20、1.84±0.20、6.19±0.20、9.46±0.20、10.92±0.20、11.11±0.20、11.26±0.20、12.02±0.20、15.31±0.20、16.70±0.20、16.96±0.20、17.11±0.20、18.16±0.20、18.46±0.20、19.71±0.20、20.45±0.20、23.34±0.20、23.55±0.20、25.30±0.20、25.77±0.20、37.94±0.20；
所述晶型G的X射线粉末衍射图在以下的衍射角2θ(°)值处具有峰：1.06±0.20、1.50±0.20、6.01±0.20、7.75±0.20、8.41±0.20、9.17±0.20、9.49±0.20、9.64±0.20、11.11±0.20、12.04±0.20、14.71±0.20、15.22±0.20、16.99±0.20、17.53±0.20、18.16±0.20、19.06±0.20、19.45±0.20、19.57±0.20、20.24±0.20、20.47±0.20、21.91±0.20、23.26±0.20、23.44±0.20、23.83±0.20、26.34±0.20、28.78±0.20、29.21±0.20、30.84±0.20、33.95±0.20、37.96±0.20、38.38±0.20。
5.如权利要求3所述的式X化合物的药学上可接受盐，其特征在于：
所述晶型A的X射线粉末衍射图基本如图1所表征；
所述晶型B的X射线粉末衍射图基本如图4所表征；
所述晶型C的X射线粉末衍射图基本如图7所表征；
所述晶型D的X射线粉末衍射图基本如图8所表征；
所述晶型E的X射线粉末衍射图基本如图9所表征；
所述晶型F的X射线粉末衍射图基本如图10所表征；
所述晶型G的X射线粉末衍射图基本如图11所表征。
6.一种式X化合物游离碱的多晶型物，其特征在于，选自以下任一晶型：
Figure FDA0003790336750000031
式X化合物的晶型Ⅰ，其X射线粉末衍射图在组I-1的衍射角2θ(°)值处具有峰：7.09±0.20、9.58±0.20、11.17±0.20、13.40±0.20、14.02±0.20、14.65±0.20、16.51±0.20、17.59±0.20；
式X化合物的晶型II，其X射线粉末衍射图在组II-1的衍射角2θ(°)值处具有峰：5.32±0.20、7.11±0.20、9.16±0.20、9.56±0.20、11.15±0.20、11.62±0.20、13.45±0.20、14.02±0.20、14.65±0.20、16.54±0.20、17.62±0.20、21.91±0.20、37.96±0.20、38.38±0.20、44.20±0.20；
式X化合物的晶型Ⅲ，其X射线粉末衍射图在组III-1的衍射角2θ(°)值处具有峰：6.97±0.20、9.01±0.20、9.21±0.20、12.46±0.20、14.86±0.20、15.28±0.20、15.46±0.20、20.92±0.20、22.90±0.20；
式X化合物的晶型Ⅳ，其X射线粉末衍射图在组IV-1的衍射角2θ(°)值处具有峰：5.26±0.20、6.94±0.20、8.98±0.20、9.52±0.20、11.62±0.20、12.40±0.20、13.42±0.20、14.62±0.20、16.51±0.20、17.62±0.20、18.01±0.20、19.18±0.20、21.85±0.20、27.31±0.20；或
式X化合物的晶型V，其X射线粉末衍射图在组V-1的衍射角2θ(°)值处具有峰：7.00±0.20、8.98±0.20、9.55±0.20、11.11±0.20、12.46±0.20、13.42±0.20、14.68±0.20、15.25±0.20、15.45±0.20、17.59±0.20、19.30±0.20、20.86±0.20、21.88±0.20、22.99±0.20、27.49±0.20、37.90±0.20。
7.如权利要求6所述的式X化合物游离碱的多晶型物，其特征在于，所述晶型Ⅰ的X射线粉末衍射图在以下的衍射角2θ(°)值处具有峰：1.09±0.20、1.72±0.20、7.09±0.20、8.14±0.20、9.58±0.20、11.17±0.20、11.52±0.20、13.40±0.20、14.02±0.20、14.65±0.20、15.28±0.20、16.51±0.20、17.59±0.20、18.49±0.20、19.27±0.20、20.80±0.20、22.00±0.20、22.42±0.20、22.96±0.20、24.64±0.20、24.88±0.20、25.57±0.20、25.71±0.20、26.53±0.20、27.55±0.20、28.09±0.20、28.24±0.20、29.19±0.20、30.44±0.20、30.70±0.20、34.51±0.20、36.62±0.20、37.96±0.20、38.31±0.20、47.84±0.20；
所述晶型II的X射线粉末衍射图在以下的衍射角2θ(°)值处具有峰：1.09±0.20、1.30±0.20、1.66±0.20、1.84±0.20、5.32±0.20、7.11±0.20、8.17±0.20、9.16±0.20、9.56±0.20、11.15±0.20、11.62±0.20、13.45±0.20、14.02±0.20、14.65±0.20、15.28±0.20、15.94±0.20、16.54±0.20、17.03±0.20、17.62±0.20、18.49±0.20、18.85±0.20、19.18±0.20、20.35±0.20、20.77±0.20、21.80±0.20、21.91±0.20、22.57±0.20、24.44±0.20、24.64±0.20、24.87±0.20、25.18±0.20、25.60±0.20、27.29±0.20、28.01±0.20、29.05±0.20、29.42±0.20、37.96±0.20、38.38±0.20、44.20±0.20、44.67±0.20；
所述晶型Ⅲ的X射线粉末衍射图在以下的衍射角2θ(°)值处具有峰：1.30±0.20、1.51±0.20、6.97±0.20、9.01±0.20、9.21±0.20、9.66±0.20、10.15±0.20、12.17±0.20、12.46±0.20、13.89±0.20、14.86±0.20、15.28±0.20、15.46±0.20、16.21±0.20、17.10±0.20、18.10±0.20、19.30±0.20、20.14±0.20、20.92±0.20、22.00±0.20、22.90±0.20、23.31±0.20、24.56±0.20、24.76±0.20、25.18±0.20、26.03±0.20、26.74±0.20、27.49±0.20、28.03±0.20、29.53±0.20、31.30±0.20、31.46±0.20、33.79±0.20、34.01±0.20、35.98±0.20、37.96±0.20、38.38±0.20、42.10±0.20、42.25±0.20、44.23±0.20、44.66±0.20；
所述晶型Ⅳ的X射线粉末衍射图在以下的衍射角2θ(°)值处具有峰：1.16±0.20、1.57±0.20、5.26±0.20、6.94±0.20、8.98±0.20、9.52±0.20、10.07±0.20、11.11±0.20、11.62±0.20、12.40±0.20、13.42±0.20、13.93±0.20、14.62±0.20、15.35±0.20、15.99±0.20、16.51±0.20、16.90±0.20、17.62±0.20、18.01±0.20、18.49±0.20、18.82±0.20、19.18±0.20、20.11±0.20、20.86±0.20、21.85±0.20、22.50±0.20、22.81±0.20、22.96±0.20、24.43±0.20、24.72±0.20、25.15±0.20、25.41±0.20、25.63±0.20、26.44±0.20、26.65±0.20、27.31±0.20、28.00±0.20、29.30±0.20、29.66±0.20、34.45±0.20、34.66±0.20、36.83±0.20、37.92±0.20、38.35±0.20、44.17±0.20、44.71±0.20、47.94±0.20、48.21±0.20；
所述晶型V的X射线粉末衍射图在以下的衍射角2θ(°)值处具有峰：1.06±0.20、7.00±0.20、8.98±0.20、9.55±0.20、11.11±0.20、11.41±0.20、12.46±0.20、13.42±0.20、14.05±0.20、14.68±0.20、15.25±0.20、15.45±0.20、16.15±0.20、16.54±0.20、16.90±0.20、17.59±0.20、18.06±0.20、18.49±0.20、19.30±0.20、20.05±0.20、20.20±0.20、20.86±0.20、21.88±0.20、22.06±0.20、22.51±0.20、22.99±0.20、23.23±0.20、24.55±0.20、24.79±0.20、25.36±0.20、25.51±0.20、25.68±0.20、27.34±0.20、27.49±0.20、28.12±0.20、29.09±0.20、34.31±0.20、34.70±0.20、36.85±0.20、37.90±0.20、38.29±0.20、44.05±0.20、44.61±0.20。
8.如权利要求6所述的式X化合物游离碱的多晶型物，其特征在于：
所述晶型I的X射线粉末衍射图基本如图12所表征；
所述晶型II的X射线粉末衍射图基本如图16所表征；
所述晶型Ⅲ的X射线粉末衍射图基本如图19所表征；
所述晶型Ⅳ的X射线粉末衍射图基本如图22所表征；
所述晶型V的X射线粉末衍射图基本如图24所表征。
9.一种式X化合物的药学上可接受盐的制备方法，其特征在于，包括步骤：
(1)在溶剂中，将化合物5a与化合物1a进行反应，获得式X化合物；和
Figure FDA0003790336750000041
(2)将式X化合物与酸进行成盐反应，获得式X化合物药学上可接受的盐，所述式X化合物药学上可接受的盐为：盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、马来酸盐、富马酸盐、L-酒石酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐或氢溴酸盐。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述X化合物的药学上可接受的盐为多晶型物，所述多晶型物为晶型A，采用以下方法制备晶型A：在溶剂中，在盐酸存在下，对式X化合物进行结晶处理，获得晶型A，其中所述溶剂为四氢呋喃或乙酸乙酯；或
所述多晶型物为晶型B，采用以下方法制备晶型B：在溶剂中，在马来酸存在下，对式X化合物进行结晶处理，获得晶型B，其中，所述溶剂为乙醇、四氢呋喃、乙酸乙酯或丙酮；或
所述多晶型物为晶型C，采用以下方法制备晶型C：在溶剂中，在硫酸存在下，对式X化合物进行结晶处理，获得晶型C；其中，所述溶剂为丙酮；或
所述多晶型物为晶型D，采用以下方法制备晶型D：在溶剂中，在氢溴酸存在下，对式X化合物进行结晶处理，获得晶型D；其中，所述溶剂为四氢呋喃或乙酸乙酯；或
所述多晶型物为晶型E，采用以下方法制备晶型E：在溶剂中，在甲磺酸存在下，对式X化合物进行结晶处理，获得晶型E；其中，所述溶剂为丙酮或乙酸乙酯；或
所述多晶型物为晶型F，采用以下方法制备晶型F：在溶剂中，在L-酒石酸存在下，对式X化合物进行结晶处理，获得晶型F；其中，所述溶剂为乙酸乙酯；或
所述多晶型物为晶型G，采用以下方法制备晶型G：在溶剂中，在柠檬酸存在下，对式X化合物进行结晶处理，获得晶型G；其中，所述溶剂为丙酮或乙酸乙酯；
其中，所述晶型A的X射线粉末衍射图在下组A1的衍射角2θ(°)值处具有峰：4.64±0.20、9.31±0.20、12.11±0.20、12.45±0.20、13.24±0.20、14.44±0.20、15.28±0.20、16.24±0.20、16.42±0.20、22.63±0.20、37.87±0.20；
所述晶型B的X射线粉末衍射图在下组B1的衍射角2θ(°)值处具有峰：5.95±0.20、13.96±0.20、16.09±0.20、16.42±0.20、17.77±0.20、19.03±0.20、20.29±0.20、20.65±0.20、21.73±0.20；
所述晶型C的X射线粉末衍射图在下组C1的衍射角2θ(°)值处具有峰：7.00±0.20、13.18±0.20、14.14±0.20、14.44±0.20、14.62±0.20、17.65±0.20、17.81±0.20、18.11±0.20、20.44±0.20、21.85±0.20、23.89±0.20；
所述晶型D的X射线粉末衍射图在下组D1的衍射角2θ(°)值处具有峰：14.65±0.20、16.47±0.20、17.62±0.20、17.92±0.20、21.91±0.20、22.99±0.20、23.12±0.20、24.88±0.20；
所述晶型E的X射线粉末衍射图在下组E1的衍射角2θ(°)值处具有峰：9.48±0.20、10.30±0.20、12.03±0.20、12.79±0.20、13.90±0.20、16.09±0.20、16.39±0.20、17.76±0.20、18.97±0.20、19.11±0.20、20.08±0.20、20.39±0.20、20.59±0.20、21.73±0.20、21.91±0.20、22.14±0.20、22.99±0.20、23.14±0.20、23.57±0.20、25.67±0.20；
所述晶型F的X射线粉末衍射图在下组F1的衍射角2θ(°)值处具有峰：10.92±0.20、11.11±0.20、11.26±0.20、15.31±0.20、16.96±0.20、17.11±0.20、18.16±0.20、18.46±0.20、20.45±0.20、23.55±0.20、25.30±0.20；
所述晶型G的X射线粉末衍射图在下组G1的衍射角2θ(°)值处具有峰：11.11±0.20、15.22±0.20、16.99±0.20、18.16±0.20、20.47±0.20、23.26±0.20、23.44±0.20。
11.一种式X化合物的游离碱的多晶型物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)在溶剂中，将化合物5a与化合物1a进行反应，获得式X化合物；和
Figure FDA0003790336750000051
(2)将式X化合物进行结晶处理，获得式X化合物的游离碱的多晶型物。
12.根据权利要求11所述的制备方法，其特征在于，所述多晶型物为晶型I，采用以下方法制备晶型I：在溶剂中，对式X化合物进行结晶处理，获得晶型I；其中，结晶处理方式为缓慢挥发、缓慢降温或混悬震摇；其中，当结晶处理方式为缓慢挥发时，所述溶剂为水、甲醇、异丙醇、四氢呋喃、丙酮或乙酸乙酯；当结晶处理方式为缓慢降温时，所述溶剂为丙酮或乙酸乙酯，当结晶处理方式为混悬震摇时，所述溶剂为水、乙腈、水和乙腈的混合、四氢呋喃、乙酸乙酯、丙酮、甲基叔丁基醚或正庚烷；或
所述多晶型物为晶型II，采用以下方法制备晶型II：在溶剂中，对式X化合物进行结晶处理，获得晶型II；其中，结晶处理方式为缓慢挥发，所述溶剂为水和乙腈的混合；或采用以下方法制备晶型II：在溶剂中，对式X化合物的晶型I、晶型II和晶型Ⅲ的混合物进行结晶处理，获得晶型II；其中，结晶处理方式为混合震摇，所述溶剂为水和乙腈的混合；或
所述多晶型物为晶型Ⅲ，采用以下方法制备晶型Ⅲ：在溶剂中，对式X化合物进行结晶处理，获得晶型Ⅲ；其中，结晶处理方式为缓慢挥发或混悬震摇，所述溶剂为乙醇；或采用以下方法制备晶型Ⅲ：在溶剂中，对式X化合物的晶型I、晶型II和晶型Ⅲ的混合物进行结晶处理，获得晶型Ⅲ；其中，结晶处理方式为混合震摇，所述溶剂为乙醇或异丙醇；或
所述多晶型物为晶型IV，采用以下方法制备晶型IV：对式X化合物的晶型I、晶型II和晶型Ⅲ的混合物进行结晶处理，获得晶型IV；其中，结晶处理方式为混合震摇，所述溶剂为水；或
所述多晶型物为晶型V，采用以下方法制备晶型V：在溶剂中，对式X化合物的晶型I、晶型II和晶型Ⅲ的混合物进行结晶处理，获得晶型V；其中，结晶处理方式为混合震摇，所述溶剂为丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙腈或甲基叔丁基醚
其中，所述晶型Ⅰ其的X射线粉末衍射图在组I-1的衍射角2θ(°)值处具有峰：7.09±0.20、9.58±0.20、11.17±0.20、13.40±0.20、14.02±0.20、14.65±0.20、16.51±0.20、17.59±0.20；
所述晶型II的X射线粉末衍射图在组II-1的衍射角2θ(°)值处具有峰：5.32±0.20、7.11±0.20、9.16±0.20、9.56±0.20、11.15±0.20、11.62±0.20、13.45±0.20、14.02±0.20、14.65±0.20、16.54±0.20、17.62±0.20、21.91±0.20、37.96±0.20、38.38±0.20、44.20±0.20；
所述晶型Ⅲ的X射线粉末衍射图在组III-1的衍射角2θ(°)值处具有峰：6.97±0.20、9.01±0.20、9.21±0.20、12.46±0.20、14.86±0.20、15.28±0.20、15.46±0.20、20.92±0.20、22.90±0.20；
所述晶型Ⅳ的X射线粉末衍射图在组IV-1的衍射角2θ(°)值处具有峰：5.26±0.20、6.94±0.20、8.98±0.20、9.52±0.20、11.62±0.20、12.40±0.20、13.42±0.20、14.62±0.20、16.51±0.20、17.62±0.20、18.01±0.20、19.18±0.20、21.85±0.20、27.31±0.20；
所述晶型V的X射线粉末衍射图在组V-1的衍射角2θ(°)值处具有峰：7.00±0.20、8.98±0.20、9.55±0.20、11.11±0.20、12.46±0.20、13.42±0.20、14.68±0.20、15.25±0.20、15.45±0.20、17.59±0.20、19.30±0.20、20.86±0.20、21.88±0.20、22.99±0.20、27.49±0.20、37.90±0.20。
13.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括：
(a)权利要求1-5任一项所述的式X化合物的药学上可接受盐；以及
(b)药学可接受的载体。
14.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括：
(a)权利要求6-8任一项所述的式X化合物游离碱的多晶型物；以及
(b)药学可接受的载体。
15.权利要求1-5任一项所述的式X化合物的药学上可接受盐在制备由EZH2介导的疾病或病症的药物的用途。
16.如权利要求15所述的用途，其特征在于，所述由EZH2介导的疾病或病症选自：癌症、肺动脉高压、骨髓纤维化、人类免疫缺陷病毒疾病、移植物抗宿主病、韦弗综合征、寻常性银屑病或肝纤维化。
17.权利要求6-8任一项所述的式X化合物游离碱的多晶型物在制备由EZH2介导的疾病或病症的药物的用途。
18.根据权利要求17所述的用途，其特征在于，所述由EZH2介导的疾病或病症选自：癌症、肺动脉高压、骨髓纤维化、人类免疫缺陷病毒疾病、移植物抗宿主病、韦弗综合征、寻常性银屑病或肝纤维化。
19.权利要求13所述的药物组合物在制备由EZH2介导的疾病或病症的药物的用途。
20.权利要求14所述的药物组合物在制备由EZH2介导的疾病或病症的药物的用途。
21.根据权利要求19或20所述的用途，其特征在于，所述由EZH2介导的疾病或病症选自：癌症、肺动脉高压、骨髓纤维化、人类免疫缺陷病毒疾病、移植物抗宿主病、韦弗综合征、寻常性银屑病或肝纤维化。
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