CN107922434A - Ezh2抑制剂 - Google Patents

Ezh2抑制剂 Download PDF

Info

Publication number
CN107922434A
CN107922434A CN201680049957.2A CN201680049957A CN107922434A CN 107922434 A CN107922434 A CN 107922434A CN 201680049957 A CN201680049957 A CN 201680049957A CN 107922434 A CN107922434 A CN 107922434A
Authority
CN
China
Prior art keywords
methyl
bases
compound
mmol
cancer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201680049957.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107922434B (zh
Inventor
E.多明格斯
郭德其
M.M.玛德
A-Q.H.阮
M.F.德尔普拉多
M.E.里彻特
M.J.罗德里格斯
Y.Y.M.叶
游国龙
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Eli Lilly and Co
Original Assignee
Eli Lilly and Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Eli Lilly and Co filed Critical Eli Lilly and Co
Publication of CN107922434A publication Critical patent/CN107922434A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107922434B publication Critical patent/CN107922434B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/28—Compounds containing heavy metals
    • A61K31/282—Platinum compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D495/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/444—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring heteroatom, e.g. amrinone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4745—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/243—Platinum; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Epoxy Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

本发明涉及抑制组蛋白赖氨酸甲基转移酶（Zeste增强子同源物2(EZH2)）的活性的化合物，包含该化合物的组合物和使用该化合物治疗癌症例如血液肿瘤和实体瘤的方法。

Description

EZH2抑制剂
本发明涉及抑制组蛋白赖氨酸甲基转移酶（Zeste增强子同源物2(EZH2)）的活性的化合物，包含该化合物的药物组合物和使用该化合物治疗癌症例如血液肿瘤和实体瘤的方法。
EZH2由EZH2基因编码，并为多梳抑制复合物2(PRC2)内造成染色质上的组蛋白3的赖氨酸27(H3K27)甲基化的催化组分。据认为，EZH2过度表达会促进癌症，这由于使肿瘤抑制基因的表达沉默的组蛋白甲基化增加。EZH2的催化活性由130个氨基酸Su(var)3-9、Zeste增强子和三空腔结构蛋白质(trithorax) (SET)域介导，其为S-腺苷甲硫胺酸(SAM)辅因子和赖氨酸底物残基提供结合口袋。核心PRC2复合物由EZH2和蛋白质EED (胚胎外胚层发育)、SUZ12 (Zeste 12同源物抑制剂)和RbAp46/48 (也称为RBBP7/4)组成，也可包括其他蛋白质，例如JARID2、AEBP2和类多梳(Polycomblike) (PCL) 1/2/3。
除了EZH2的过度表达之外，增加的H3K27甲基化也可因会提高EZH2催化效率的突变例如Y641N、A677G和A678V所引起。此外，也据报道，可在实体瘤中通过不同信号传导路径例如此类涉及VEGFR2和PI3K/AKT的那些来调节H3K27甲基化的水平。
SWI/SNF和PRC2复合物分别在转录的活化和抑制中发挥拮抗作用。缺少或缺乏SWI/SNF蛋白质SNF5 (也称作SMARCB1/INI1)的肿瘤可证实异常性甲基化和由PRC2的抑制作用及在经EZH2小分子抑制剂处理后生长受到抑制。另外，缺少或缺乏SWI/SNF蛋白质ARID1A (也称为BAF250)组合PI3K路径的组分中的组成性活化突变诸如PIK3CA的肿瘤也在经EZH2小分子抑制剂处理后生长受到抑制。此外，同时缺少或缺乏SMARCA2 (也称为BRM)和SMARCA4 (也称为BRG1)的肿瘤也在经EZH2小分子抑制剂处理后生长受到抑制。
H3K4甲基转移酶(也称为MLL或COMPASS)复合物与SWI/SNF复合物在拮抗PRC2的抑制作用方面配合 (在Van der Meulen, J. et al. (2014) Epigenetics 9:658-68, Xu,B. et al. (2015) Exp. Hematol. 43:698-712中评判)。仅缺少或缺乏H3K4甲基转移酶复合物组分，包括但不限于MLL2 (本文显示的数据针对源自患者的胃癌异种移植模型中EZH2 抑制剂加上标准护理化学疗法的组合治疗)、MLL3 (本文显示的数据针对源自患者的肺癌 异种移植模型中EZH2抑制剂加上标准护理化学疗法的组合治疗)、赖氨酸特异性去甲基化酶6A，也称为泛转录三角形四肽重复、X染色体(UTX，也称为KDM6A [Ezponda, T. et al.(2014) Blood 124:611])的肿瘤或组合缺少或缺乏上述SWI/SNF复合物中的组分，包括但不限于ARID1A (本文显示的数据针对源自患者的胃癌异种移植模型中EZH2抑制剂加上标 准护理化学疗法的组合治疗)的肿瘤在经EZH2小分子抑制剂作为单一试剂或组合标准护理(SOC)化疗剂治疗后生长受到抑制。具有生发中心B-细胞源的淋巴瘤经在EZH2方面的扰动生长受抑制 (Beguelin et al. (2013) Cancer Cell 23:677-92; Velichutina, I. et al. (2010) Blood 116:5247-5255)及也具有高频率的MLL2、CREBBP、EP300、ARID1A和SMARCA4中的突变 (Lunning, M.A. and Green, M.R. (2015) Blood Cancer Journal 5,e361; Carbone, A. et al. (2014) Ann. Hematol. 93:1263-1277)。
文献中已知一些EZH2抑制剂。参见例如WO2012/142504、WO2012/142513、WO2013/120104、WO2013/173441、WO2013/075083、WO2014/177982、WO2014/097041和WO2016/066697。
仍需要提供用于治疗癌症的替代EZH2抑制剂。因此，本发明提供可以用于治疗癌症的某些EZH2抑制剂。
本发明提供下式化合物：
其中：
X为-CH2-或-CH2-CH2-；
Y’为-NR4R5、CH(CH3)-环己-4-基-二甲基氨基、CH(CH3)-环己-4-基-N-甲基-N-甲氧基乙基氨基或–CH(CH3)-环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基任选地被甲氧基、2-丙氧基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基、环丙氧基、环丙基甲氧基、N-三唑基、N-吡咯烷基、吗啉基、四氢呋喃-3-基氧基或任选地被甲基取代的N-吡唑基取代；
R4为被二甲基氨基、N-甲基-N-甲氧基乙基氨基、N-甲基-N-环丙基氨基或氮杂环丁烷-1-基取代的哌啶-4-基或环己-4-基，其中氮杂环丁烷-1-基被甲氧基、乙氧基、甲氧基乙氧基、环丙氧基或任选地被甲基取代的N-吡唑基取代；
R5为甲基或乙基；和
R6为甲基或氯；或
其药学上可接受的盐。
本发明还提供下式化合物：
其中：
X为-CH2-或-CH2-CH2-；
Y’为–NR4R5、-CH(CH3)-环己基-4-基-N-甲基-N-甲氧基乙基或-CH(CH3)-环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基任选地被甲氧基、2-丙氧基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基、环丙氧基、环丙基甲氧基、吡唑基、甲基吡唑基、三唑基、吡咯烷基、四氢呋喃基氧基或吗啉基取代；
R4为被N-甲基-N-甲氧基乙基氨基、N-甲基-N-环丙基氨基或氮杂环丁烷-1-基取代的环己-4-基，其中氮杂环丁烷-1-基被甲氧基、乙氧基、甲氧基乙氧基、环丙氧基或吡唑基取代；
R5为甲基或乙基；和
R6为甲基或氯；或
其药学上可接受的盐。
本发明还提供下式化合物：
其中：
X为-CH2-；
Y’为-NR4R5、CH(CH3)-环己-4-基-二甲基氨基、CH(CH3)-环己-4-基-N-甲基-N-甲氧基乙基氨基或–CH(CH3)-环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基任选地被甲氧基、2-丙氧基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基、环丙氧基、环丙基甲氧基、N-三唑基、N-吡咯烷基、吗啉基、四氢呋喃-3-基氧基或任选地被甲基取代的N-吡唑基取代；
R4为被二甲基氨基、N-甲基-N-甲氧基乙基氨基、N-甲基-N-环丙基氨基或氮杂环丁烷-1-基取代的环己-4-基，其中氮杂环丁烷-1-基被甲氧基、乙氧基、甲氧基乙氧基、环丙氧基或任选地被甲基取代的N-吡唑基取代；
R5为甲基或乙基；和
R6为甲基或氯；或
其药学上可接受的盐。
本发明还提供下式化合物：
其中：
X为-CH2-；
Y’为-NR4R5、CH(CH3)-环己-4-基-N-甲基-N-甲氧基乙基氨基或–CH(CH3)-环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基任选地被甲氧基、2-丙氧基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基、环丙氧基、环丙基甲氧基、N-三唑基、N-吡咯烷基、吗啉基、四氢呋喃-3-基氧基或任选地被甲基取代的N-吡唑基取代；
R4为被N-甲基-N-甲氧基乙基氨基、N-甲基-N-环丙基氨基或氮杂环丁烷-1-基取代的环己-4-基，其中氮杂环丁烷-1-基被甲氧基、乙氧基、甲氧基乙氧基、环丙氧基或任选地被甲基取代的N-吡唑基取代；
R5为甲基或乙基；和
R6为甲基或氯；或
其药学上可接受的盐。
本发明还提供下式化合物：
其中：
X为-CH2-或-CH2-CH2-；
Y’为–CH(CH3)-环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基任选地被甲氧基、丙氧基、甲基甲氧基、甲氧基乙氧基、环丙氧基、环丙基甲氧基、吗啉基、N-三唑基、N-吡咯烷基、四氢呋喃-3-基氧基或任选地被甲基取代的N-吡唑基取代；和
R6为甲基；或
其药学上可接受的盐。
本发明还提供下式化合物：
其中：
X为-CH2-；
Y为–CH(CH3)-环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基任选地被甲氧基、丙氧基、甲基甲氧基、甲氧基乙氧基、环丙氧基、环丙基甲氧基、吗啉基、N-三唑基、N-吡咯烷基、四氢呋喃-3-基氧基或任选地被甲基取代的N-吡唑基取代；和
R6为甲基；或
其药学上可接受的盐。
本发明还提供下式化合物：
其中：
X为-CH2-CH2-；
Y’为–CH(CH3)-环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基任选地被甲氧基、丙氧基、甲基甲氧基、甲氧基乙氧基、环丙氧基、环丙基甲氧基、吗啉基、N-三唑基、N-吡咯烷基、四氢呋喃-3-基氧基或任选地被甲基取代的N-吡唑基取代；和
R6为甲基；或
其药学上可接受的盐。
本发明还提供下式化合物：
其中：
X为-CH2-或-CH2-CH2-；
Y’为-NR4R5；
R4为环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基被甲氧基、乙氧基、甲氧基乙氧基、环丙氧基或任选地被甲基取代的N-吡唑基取代；和
R5为甲基或乙基；和
R6为甲基或氯；或
其药学上可接受的盐。
本发明还提供下式化合物：
其中：
X为-CH2-；
Y’为-NR4R5；
R4为环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基被甲氧基、乙氧基、甲氧基乙氧基、环丙氧基或任选地被甲基取代的N-吡唑基取代；
R5为甲基或乙基；和
R6为甲基或氯；或
其药学上可接受的盐。
本发明还提供下式化合物：
其中：
X为-CH2-CH2-；
Y’为-NR4R5；
R4为环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基被甲氧基、乙氧基、甲氧基乙氧基、环丙氧基或任选地被甲基取代的N-吡唑基取代；
R5为甲基或乙基；和
R6为甲基；或
其药学上可接受的盐。
本发明还提供下式化合物：
其中：
X为-CH2-或-CH2-CH2-；
Y’为–CH(CH3)-环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基任选地被甲氧基、丙氧基、甲基甲氧基、甲氧基乙氧基、环丙氧基、环丙基甲氧基、吗啉基, N-三唑基、N-吡咯烷基、四氢呋喃-3-基氧基或任选地被甲基取代的N-吡唑基取代；和
R6为甲基或氯；或
或其药学上可接受的盐；其中在6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮的2位连接的碳为 (R)构型。
本发明还提供下式化合物：
其中：
X为-CH2-或-CH2-CH2-；
Y’为–CH[CH3]-环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基任选地被甲氧基、丙氧基、甲基甲氧基、甲氧基乙氧基、环丙氧基、环丙基甲氧基、吗啉基, N-三唑基、N-吡咯烷基、四氢呋喃-3-基氧基或任选地被甲基取代的N-吡唑基取代；和
R6为甲基或氯；或
或其药学上可接受的盐；其中在6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮的2位连接的碳为(R)构型，环己烷环为反式构型。
本发明还提供下式化合物：
其中：
X为–CH2-或-CH2-CH2-；
Y’为-NR4R5；
R4为环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基被甲氧基、乙氧基、甲氧基乙氧基、环丙氧基或任选地被甲基取代的N-吡唑基取代；
R5为甲基或乙基；和
R6为甲基或氯；或
或其药学上可接受的盐；其中环己烷环为反式构型。
本发明还提供下式化合物：
其中：
X为-CH2-或-CH2-CH2-；和
Y为CHCH3、N(CH3)或N(CH2CH3)；或
其药学上可接受的盐。
本发明还提供下式化合物：
其中：
X为-CH2-或-CH2-CH2-；和
Y为CHCH3、N(CH3)或N(CH2CH3)；和
R7为氢、甲氧基、乙氧基、丙氧基、甲基甲氧基、甲氧基乙氧基、环丙氧基、环丙基甲氧基、吗啉基、N-三唑基、N-吡咯烷基、四氢呋喃-3-基氧基或任选地被甲基取代的N-吡唑基；或
其药学上可接受的盐。
本发明还提供下式化合物：
其中：
X为-CH2-或-CH2-CH2-；
Y为CHCH3、N(CH3)或N(CH2CH3)；和
R7为氢、甲氧基、乙氧基、丙氧基、甲基甲氧基、甲氧基乙氧基、环丙氧基、环丙基甲氧基、吗啉基, N-三唑基、N-吡咯烷基、四氢呋喃-3-基氧基或任选地被甲基取代的N-吡唑基；或
其药学上可接受的盐。
本发明还提供下式化合物：
其中：
X为-CH2-或-CH2-CH2-；和
Y为CHCH3、N(CH3)或N(CH2CH3)；或
其药学上可接受的盐。
本发明提供一种化合物，其为
,
或其药学上可接受的盐。
本发明提供一种化合物，其为
,
或其药学上可接受的盐。
本发明提供一种化合物，其为
,
或其药学上可接受的盐。
本发明提供一种化合物，其为
,
或其药学上可接受的盐。
本发明提供一种化合物，其为
,
或其药学上可接受的盐。
本发明提供一种化合物，其为
,
或其药学上可接受的盐。
本发明提供一种化合物，其为
,
或其药学上可接受的盐。
本发明提供一种化合物，其为
,
或其药学上可接受的盐。
本发明提供一种化合物，其为
,
或其药学上可接受的盐。
本发明提供一种化合物，其为
,
或其药学上可接受的盐。
本发明提供一种化合物，其为
,
或其药学上可接受的盐。
本发明提供一种化合物，其为
,
或其药学上可接受的盐。
本发明提供一种化合物，其为
,
或其药学上可接受的盐。
本发明提供一种治疗患者的癌症的方法，其中该癌症选自淋巴瘤、横纹肌样瘤、缺少或缺乏SWI/SNF复合物(例如SNF5)、MLL复合物及组成性活性PI3K路径之一或多种组分的肿瘤、肉瘤、多发性骨髓瘤、黑色素瘤、胃癌、结肠直肠癌、肺癌、肾癌、乳癌、卵巢癌及前列腺癌，该方法包括对患者给予有效量的本发明化合物或其盐。优选地，该癌症为弥漫性大B细胞淋巴瘤或滤泡淋巴瘤。优选地，该癌症为弥漫性大B细胞淋巴瘤。优选地，该癌症为胃癌。优选地，该癌症为卵巢癌。优选地，该癌症为多发性骨髓瘤。优选地，该癌症为肺癌。优选地，该癌症为结肠直肠癌。优选地，该癌症为具有野生型(WT) EZH2的实体瘤或血液肿瘤以及具有突变体EZH2的实体瘤或血液肿瘤。优选地，该癌症为具有WT EZH2的实体瘤或血液肿瘤。优选地，该癌症为具有突变体EZH2的实体瘤或血液肿瘤。
本发明还提供一种治疗患者的卵巢癌的方法，该方法包括对患者给予本发明的化合物或其盐与卡铂和紫杉醇的组合。
本发明还提供一种治疗患者的胃癌的方法，该方法包括对患者给予本发明的化合物或其盐与奥沙利铂和紫杉醇的组合。
本发明还提供一种治疗患者的肺癌的方法，其包括对患者给予本发明的化合物或其盐与吉西他滨和顺铂的组合。
本发明还提供一种治疗患者的结肠直肠癌的方法，其包括对患者给予本发明的化合物或其盐与伊立替康和奥沙利铂的组合。
本发明还提供一种包含本发明的化合物或其盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂的药物组合物。
根据本发明的另一方面，提供用于治疗卵巢癌的包含本发明的化合物或其盐和卡铂和紫杉醇的试剂盒。
根据本发明的另一方面，提供用于治疗卵巢癌的包含本发明的化合物或其盐与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，和卡铂与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，和紫杉醇与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的试剂盒。
根据本发明的另一方面，提供用于治疗胃癌的包含本发明的化合物或其盐和奥沙利铂和紫杉醇的试剂盒。
根据本发明的另一方面，提供用于治疗胃癌的包含本发明的化合物或其盐与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，和奥沙利铂与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，和紫杉醇与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的试剂盒。
根据本发明的另一方面，提供用于治疗肺癌的包含本发明的化合物或其盐和吉西他滨和顺铂的试剂盒。
根据本发明的另一方面，提供用于治疗肺癌的包含本发明的化合物或其盐与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，和吉西他滨与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，和顺铂与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的试剂盒。
根据本发明的另一方面，提供用于治疗结肠直肠癌的包含本发明的化合物或其盐和伊立替康和奥沙利铂的试剂盒。
根据本发明的另一方面，提供用于治疗结肠直肠癌的包含本发明的化合物或其盐与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，和伊立替康与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，和奥沙利铂与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的试剂盒。
本发明还提供一种用于治疗的本发明化合物或其盐。另外，本发明提供一种用于治疗癌症的本发明化合物或其盐，其中该癌症选自淋巴瘤、横纹肌样瘤、缺少或缺乏SWI/SNF复合物(例如SNF5)、MLL复合物和组成性活性PI3K路径之一或多种组分的肿瘤、肉瘤、多发性骨髓瘤、黑色素瘤、胃肠癌、结肠直肠癌、肺癌、肾癌、乳癌、卵巢癌和前列腺癌。优选地，该癌症为弥漫性大B细胞淋巴瘤或滤泡淋巴瘤。优选地，该癌症为弥漫性大B细胞淋巴瘤。优选地，该癌症为胃癌。优选地，该癌症为卵巢癌。优选地，该癌症为多发性骨髓瘤。优选地，该癌症为肺癌。优选地，该癌症为结肠直肠癌。优选地，该癌症为具有野生型(WT) EZH2的实体瘤或血液肿瘤以及具有突变体EZH2的实体瘤或血液肿瘤。优选地，该癌症为具有WT EZH2的实体瘤或血液肿瘤。优选地，该癌症为具有突变体EZH2的实体瘤或血液肿瘤。
此外，本发明提供一种本发明化合物或其盐在制备用于治疗癌症的药物中的用途，其中该癌症选自淋巴瘤、横纹肌样瘤、缺少或缺乏SWI/SNF复合物(例如SNF5)、MLL复合物和组成性活性PI3K路径之一或多种组分的肿瘤、肉瘤、多发性骨髓瘤、黑色素瘤、胃肠癌、结肠直肠癌、肺癌、肾癌、乳癌、卵巢癌和前列腺癌。优选地，该癌症为弥漫性大B细胞淋巴瘤或滤泡淋巴瘤。优选地，该癌症为弥漫性大B细胞淋巴瘤。优选地，该癌症为胃癌。优选地，该癌症为卵巢癌。优选地，该癌症为多发性骨髓瘤。优选地，该癌症为肺癌。优选地，该癌症为结肠直肠癌。优选地，该癌症为具有野生型(WT) EZH2的实体瘤或血液肿瘤以及具有突变体EZH2的实体瘤或血液肿瘤。优选地，该癌症为具有WT EZH2的实体瘤或血液肿瘤。优选地，该癌症为具有突变体EZH2的实体瘤或血液肿瘤。
根据本发明的另一方面，提出一种组合，其包含本发明的化合物或其盐和卡铂和紫杉醇，在治疗卵巢癌中同时、分开或顺序地使用。
根据本发明的另一方面，提出本发明的化合物或其盐，其在治疗卵巢癌中与卡铂和紫杉醇同时、分开或顺序地组合使用。
根据本发明的另一方面，提出在治疗卵巢癌中与本发明的化合物或其盐以及紫杉醇同时、分开或顺序地组合使用的卡铂。
根据本发明的另一方面，提出在治疗卵巢癌中与本发明的化合物或其盐以及卡铂同时、分开或顺序地组合使用的紫杉醇。
本发明还提供本发明的化合物或其盐在制备用于治疗卵巢癌的药物中的用途，其中本发明的化合物或其盐与卡铂和紫杉醇同时、分开或顺序地组合给药。
本发明还提供卡铂在制备用于治疗卵巢癌的药物中的用途，其中卡铂与本发明的化合物或其盐与紫杉醇同时、分开或顺序地组合给药。
本发明还提供紫杉醇在制备用于治疗卵巢癌的药物中的用途，其中紫杉醇与本发明的化合物或其盐与卡铂同时、分开或顺序地组合给药。
根据本发明的另一方面，提出一种组合，其包含本发明的化合物或其盐和奥沙利铂和紫杉醇，在治疗胃癌中同时、分开或顺序地使用。
根据本发明的另一方面，提出本发明的化合物或其盐，其在治疗胃癌中与奥沙利铂和紫杉醇同时、分开或顺序地组合使用。
根据本发明的另一方面，提出在治疗胃癌中与本发明的化合物或其盐以及紫杉醇同时、分开或顺序地组合使用的奥沙利铂。
根据本发明的另一方面，提出在治疗胃癌中与本发明的化合物或其盐以及奥沙利铂同时、分开或顺序地组合使用的紫杉醇。
本发明还提供本发明的化合物或其盐在制备用于治疗胃癌的药物中的用途，其中本发明的化合物或其盐与奥沙利铂和紫杉醇同时、分开或顺序地组合给药。
本发明还提供奥沙利铂在制备用于治疗胃癌的药物中的用途，其中奥沙利铂与本发明的化合物或其盐与紫杉醇同时、分开或顺序地组合给药。
本发明还提供紫杉醇在制备用于治疗胃癌的药物中的用途，其中紫杉醇与本发明的化合物或其盐与奥沙利铂同时、分开或顺序地组合给药。
根据本发明的另一方面，提出一种组合，其包含本发明的化合物或其盐和吉西他滨和顺铂，在治疗肺癌中同时、分开或顺序地使用。
根据本发明的另一方面，提出本发明的化合物或其盐，其在治疗肺癌中与吉西他滨和顺铂同时、分开或顺序地组合使用。
根据本发明的另一方面，提出在治疗肺癌中与本发明的化合物或其盐以及顺铂同时、分开或顺序地组合使用的吉西他滨。
根据本发明的另一方面，提出在治疗肺癌中与本发明的化合物或其盐以及吉西他滨同时、分开或顺序地组合使用的顺铂。
本发明还提供本发明的化合物或其盐在制备用于治疗肺癌的药物中的用途，其中本发明的化合物或其盐与吉西他滨和顺铂同时、分开或顺序地组合给药。
本发明还提供吉西他滨在制备用于治疗肺癌的药物中的用途，其中吉西他滨与本发明的化合物或其盐与顺铂同时、分开或顺序地组合给药。
本发明还提供顺铂在制备用于治疗肺癌的药物中的用途，其中顺铂与本发明的化合物或其盐与吉西他滨同时、分开或顺序地组合给药。
根据本发明的另一方面，提出一种组合，其包含本发明的化合物或其盐和伊立替康和奥沙利铂，在治疗结肠直肠癌中同时、分开或顺序地使用。
根据本发明的另一方面，提出本发明的化合物或其盐，其在治疗结肠直肠癌中与伊立替康和奥沙利铂同时、分开或顺序地组合使用。
根据本发明的另一方面，提出在治疗结肠直肠癌中与本发明的化合物或其盐以及奥沙利铂同时、分开或顺序地组合使用的伊立替康。
根据本发明的另一方面，提出在治疗结肠直肠癌中与本发明的化合物或其盐以及伊立替康同时、分开或顺序地组合使用的奥沙利铂。
本发明还提供本发明的化合物或其盐在制备用于治疗结肠直肠癌的药物中的用途，其中本发明的化合物或其盐与伊立替康和奥沙利铂同时、分开或顺序地组合给药。
本发明还提供吉西他滨在制备用于治疗结肠直肠癌的药物中的用途，其中伊立替康与本发明的化合物或其盐与奥沙利铂同时、分开或顺序地组合给药。
本发明还提供奥沙利铂在制备用于治疗结肠直肠癌的药物中的用途，其中奥沙利铂与本发明的化合物或其盐与伊立替康同时、分开或顺序地组合给药。
以下段落描述本发明的优选类型：
a) X为-CH2-
b) X为–CH2-CH2-；
c) Y’为–CH(CH3)-环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基任选地被甲氧基、环丙氧基或四氢呋喃-3-基氧基取代；
d) Y’为NR4R5；
e) R4为环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基被甲氧基或甲氧基乙氧基取代；
f) R5为乙基；
g) R6为甲基；
h) X为-CH2-，Y’为–CH(CH3)-环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基被甲氧基取代，R6为甲基；
i) X为-CH2-，Y’为–CH(CH3)-环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基被环丙氧基取代；和R6为甲基；
j) X为-CH2-，Y’为–CH(CH3)-环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基被四氢呋喃-3-基氧基取代，R6为甲基；
k) X为-CH2-，Y’为NR4R5，R4为环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基被甲氧基取代，R5为乙基，R6为甲基；
l) X为–CH2-CH2-，Y’为NR4R5，R4为环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基被甲氧基乙氧基取代，R5为乙基，R6为甲基；和
m) X为–CH2-CH2-，Y’为–CH(CH3)-环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基被甲氧基取代，R6为甲基。
本领域普通技术人员应该理解，术语 “反式-”如下文所述，其中在环己基周围1,4位的取代基相对彼此为反式-。
,
其中R选自二甲基氨基、N-甲基-N-甲氧基乙基氨基、N-环丙基-N-甲基氨基或氮杂环丁烷-1-基，任选地被甲氧基、乙氧基、丙氧基、甲基甲氧基、甲氧基乙氧基、环丙氧基、环丙基甲氧基、吗啉基, N -三唑基、吡咯烷-4-基、四氢呋喃-3-基氧基或任选地被甲基取代的N-吡唑基取代，X和Y如上文定义。
技术读者应该理解，本发明化合物能够形成盐。本发明化合物为碱，并因此与一定量的无机和有机酸中的任一者反应形成药学上可接受的盐。此类药学上可接受的酸加成盐和其常见制备方法是本领域所熟知的。参见例如P. Stahl, et al., HANDBOOK OFPHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION AND USE, (VCHA/Wiley-VCH, 2008);S.M. Berge, et al., “Pharmaceutical Salts”, Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol 66, No. 1, 1977年1月。
可通过本领域中已知的各种程序来制备本发明化合物或其盐，其中一些在下文的制备例和实施例中示例。可将所述的具体合成步骤以不同方式组合来制备本发明化合物或盐。可通过本领域中熟知的常规方法，包括萃取、蒸发、沉淀、层析、过滤、研磨和结晶来回收此类合成步骤的产物。本领域普通技术人员很容易获得试剂和起始原料。
本发明的一些中间体或化合物可具有一个或多个手性中心。本发明涵盖此类化合物的所有个别对映异构体或非对映异构体以及对映异构体及非对映异构体的混合物（包括外消旋体）。优选地，本发明的包含至少一个手性中心的化合物作为单一对映异构体或非对映异构体存在。可以对手性试剂开始或通过立体选择性或立体特异性合成技术来制备该单一对映异构体或非对映异构体。或者，可通过标准手性层析或结晶技术从混合物分离该单一对映异构体或非对映异构体。技术人员会理解，在一些情况下，由于不同层析柱和流动相，对映异构体或非对映异构体的洗脱顺序可能不同。
某些立体化学中心尚未确定及出于清楚起见某些取代基已在下文方案中省去而非意欲以任何方式限制方案的教导。另外，可由本领域普通技术人员在合成本发明化合物中的任意合适点通过方法诸如选择性结晶技术或手性层析分离或拆分各个异构体、对映异构体或非对映异构体（参见例如J. Jacques, et al., "Enantiomers, Racemates, and Resolutions", John Wiley and Sons, Inc., 1981, and E.L. Eliel and S.H.Wilen,” Stereochemistry of Organic Compounds”, Wiley-Interscience, 1994）。另外，以下方案中所述的中间体包含多个氮保护基。该可变保护基在各次出现时根据特定反应条件和待进行的特定转化可相同或可不同。保护及去保护条件为技术人员所熟知且述于文献(参见例如“Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis”, FourthEdition, by Peter G.M. Wuts and Theodora W. Greene, John Wiley and Sons, Inc.2007)中。
某些缩写如下定义：“AcOH”是指乙酸或冰醋酸；“ACN”是指乙腈；“AdoMet”是指S-腺苷-L-甲硫氨酸；“AEBP”是指脂肪细胞增强子结合蛋白；“AUC”是指曲线下方的面积；“BOC”是指叔丁氧基羰基；“bid”是指每日两次给药；“bm”是指宽多峰；“Bn”是指苄基；“BSA”是指牛血清白蛋白；“c”是指以克/毫升计的浓度；“CAT. #”是指目录号；“CDI”是指羰基二咪唑；“CO2”是指二氧化碳；“CV”是指柱体积；“Ci”是指居里；“CPM”是指每百万计数；“cPr”是指环丙基；“DCE”是指1,2-二氯乙烷；“DCM”是指二氯甲烷；“DIBAL-H”是指二异丁基氢化铝；“DIPEA”是指二异丙基乙胺；“dm”是指分米或10厘米；“DMA”是指二甲基乙酰胺；“DMEA”是指N, N-二甲基乙胺；“DMF”是指二甲基甲酰胺或N,N-二甲基甲酰胺；“DMSO”是指二甲亚砜；“DNase”是指脱氧核糖核酸酶；“DTT”是指二硫苏糖醇；“EED”是指胚胎外胚层发育；“Et2O”是指二乙醚；“EtOAc”是指乙酸乙酯；“ES/MS”是指电喷雾质谱；“EtOH”是指乙醇；“Ex”是指实施例；“GAPDH”是指3-磷酸甘油醛脱氢酶；“hr”是指小时；“HEC”是指羟乙基纤维素；“HOAt”是指羟基氮杂苯并三唑；“HOBt”是指羟基苯并三唑；“HSQC”是指异核单量子相干；“IPAm”是指异丙胺、丙-2-胺或2-氨基丙烷；“iPr”是指异丙基或1-甲基乙基； “IrMeO(COD)2”是指(1,5-环辛二烯)(甲氧基)铱(I)二聚物或双(1,5-环辛二烯)二-μ-甲氧基二铱(I)；“kPa”是指千帕斯卡；“KHMDS”是指双(三甲基甲硅烷基)氨基钾；“KOtBu”是指叔丁醇钾；“LAH”是指氢化铝锂；“LiBH4”是指硼氢化锂；“LC”是指液相色谱法；“LiHMDS”是指双(三甲基甲硅烷基)氨基锂；“LOF”是指功能缺失；“3H-SAM”是指腺苷-L-甲硫氨酸，S[甲基-3H]；“IC50”是指产生试剂能够产生的最大抑制响应的50%的试剂浓度；“Me”是指甲基；“MgSO4”是指硫酸镁；“mpk”是指毫克/千克；“min”是指分钟；“NaH”是指氢化钠；“NBS”是指N-溴代琥珀酰亚胺；“NH3”是指氨；“nm”是指纳米；“MeOH”是指甲醇；“MsOH”是指甲磺酸；“MTBE”是指甲基叔丁基醚；“mut”是指突变体；“OAc”是指乙酸酯；“PBS”是指磷酸盐缓冲盐水；“PCR”是指聚合酶链反应；“PDX”是指源自患者的异种移植；“PRC2”是指多梳抑制络合物2”；“Prep”是指制备例；“psi”是指磅/平方英寸；“PTSA”是指对甲苯磺酸；“定量收率”是指基本上大于99%的收率；“RBBP4”是指成视网膜细胞瘤结合蛋白4；“RNase”是指核糖核酸酶；“rpm”是指每分钟转数；“RT”是指室温；“Rt”是指以分钟计的保留时间；“RuPhos-G3-Palladacycle”是指(2-二环己基膦-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II) 甲磺酸盐；“SCX”是指选择性阳离子交换；“SFC”是指超临界流体色谱法；“SPA”是指邻近闪烁分析法；“NaHCO3”是指碳酸氢钠；“Na2SO4”是指硫酸钠；“SoC”是指标准护理；“THF”是指四氢呋喃；“TEA”是指三乙胺；“Tris”是指三(羟基甲基)-氨基甲烷；“WT”是指野生型；“XPhos PdGen 2”是指氯(2-二环己基膦-2′,4′,6′-三异丙基-1,1′-联苯)-[2-(2′-氨基-1,1′-联苯)]-钯(II)；“Å”是指埃；“λ”是指波长；和“[α]D 20”是指使用偏光计中钠灯的D线（波长589.3 nm）旋转平面偏振光的化合物的旋光度，其中采用观察到的偏振测量α在合适的溶剂例如MeOH中在20℃下以限定浓度c、体积2 mL和路径长度1 dm测量。
在下文的方案中，除非另外指明，否则全部取代基如上文定义。试剂和起始材料是本领域普通技术人员容易获得的。下文的方案、制备例、实施例和分析进一步示例本发明，但不应该理解为以任何方式限定本发明范围。
制备例和实施例
下文的制备例和实施例进一步示例本发明并代表本发明化合物的典型合成。试剂和起始材料是本领域普通技术人员容易获得的或可以容易合成的。应该理解为，制备例和实施例以示例的方式描述并且不受限制，并且本领域普通技术人员可以做出各种改变。
可以通过标准技术例如X射线分析测定本发明化合物的R-或S-构型。如果已知一个中心，则1H NMR、手性HPLC和与手性-HPLC保留时间的相关性可用于进一步阐明立体异构现象。
LC-ES/MS在Agilent HP1100液相色谱系统上进行。电喷雾质谱测量 (以正和/或负模式获取)在接合至HP1100 HPLC的质量选择性检测器四极质谱上进行。LC-MS条件(低pH)：柱：Phenomenex GEMINI® NX C-18 2.1 × 50 mm 3.0 μm；梯度：在3 min 内5-100%B，然后100% B持续0.75 min；柱温：50℃ +/-10℃；流速：1.2 mL/min；溶剂A：含0.1% HCOOH的去离子水；溶剂B：含0.1%甲酸的ACN；波长214 nm。替代的LC-MS条件(高pH)：柱：WATERSTMXTERRA® MS C-18柱2.1 × 50 mm, 3.5 μm；梯度：5%的溶剂A持续0.25 min，在3 min 内从5%至100%的溶剂B的梯度和100%的溶剂B持续0.5 min或在3 min 内10%至100%的溶剂B和100%的溶剂B持续0.75 min；柱温：50℃ +/-10℃；流速：1.2 mL/min；溶剂A：10 mM NH4HCO3pH 9；溶剂B：ACN；波长：214 nm。
制备型反相层析在配备质量选择性检测器质谱和Leap 自动取样器/级分收集器的Agilent 1200 LC-ES/MS上进行。高pH方法在具有10 X 20 mm保护的75 X 30 mmPhenomenex GEMINI®-NX, 5 µm粒度柱上进行。流速为85 mL/min。洗脱液为10 mM碳酸氢铵(pH 10)/ACN。
NMR谱在Bruker AVIII HD 400 MHz NMR谱仪上进行，使用残余溶剂 [CDCl3,7.26 ppm; (CD3)2SO, 2.50 ppm]作为对照标准作为以ppm计报道的CDCl3或(CD3)2SO溶液获得。当报道峰多重性时，可以使用以下缩写：s (单峰)、d (双峰)、t (三峰)、q (四重峰)、m(多重峰)、br-s (宽单峰)、dd (双重双峰)、dt (双重三峰)。当报道时，耦合常数(J)以赫兹(Hz)报道。
方案1示例由经保护的4-氧代环己烷甲酸酯(化合物1)起始形成取代的1,4-二氧杂螺[4,5]癸烷(化合物5)。可以采用溶剂例如EtOH中的对甲苯磺酸、原甲酸三乙酯和乙二醇处理经保护的4-氧代环己烷甲酸酯以提供经保护的1,4-二氧杂螺[4,5]癸烷-8-甲酸酯，其然后通过本领域熟知的程序脱保护，例如通过使用含水碱，以经两步提供1,4-二氧杂螺[4,5]癸烷-8-甲酸(化合物2，方案1，步骤A)。可以采用分小份添加偶联剂例如CDI或HOBt然后分小份添加N-甲氧基甲胺盐酸盐由步骤A的酸产物制备The Weinreb酰胺(化合物3) (方案1，步骤B)。所述Weinreb酰胺(化合物3)可以使用有机金属试剂例如格氏试剂或有机锂试剂转化成酮 (化合物4) (方案1，步骤C)。更具体地，可以将甲基溴化镁添加至合适的溶剂例如Et2O和/或THF以提供甲基酮(化合物4)。所述甲基酮(化合物4)可以采用滴加非亲核碱例如LiHMDS在溶剂例如THF中采用添加氯磷酸二苯酯转化成磷酸乙烯酯(化合物5)(方案1，步骤D)。
方案2和3示例取代的氮杂环丁烷的合成。N-保护的乙烯基氧基氮杂环丁烷 (化合物7a, R1 = 烯丙基)可以通过采用烷基卤化物和非亲核碱例如DIPEA烷基化合适的取代的3-羟基氮杂环丁烷 (化合物6)或通过在二元配体例如1,10-邻二氮杂菲存在下在非亲核碱例如DIPEA或TEA存在下使用不对称乙烯醚作为溶剂采用钯(II)源进行金属参与的醚化来制备。本领域技术人员意识到可以采用大量保护基例如烷基、取代烷基、芳烷基、酰胺或氨基甲酸烷基酯保护氮杂环丁烷。更具体地，可以在正丁基乙烯醚中的TEA和4,7-二苯基-1,10-邻二氮杂菲存在下采用乙酸钯(II)处理N-BOC-3-羟基氮杂环丁烷溶液以提供N-保护的乙烯氧基氮杂环丁烷 (化合物7a, R1 = 烯丙基，方案2，步骤A)。乙烯基可以通过Simmons-Smith反应或类似的生成碳烯的条件例如使用DCE中的氯碘甲烷和烷基锌试剂转化成经保护的3-环丙氧基氮杂环丁烷 (化合物8)，如方案2步骤B所示。在本领域熟知的那些标准条件下进行经保护的3-环丙氧基氮杂环丁烷 (化合物8)的脱保护，然后采用有机溶剂中的无机酸溶液例如二乙醚或1,4-二氧六环中的HCl处理游离碱可以提供稳定的氮杂环丁烷盐(化合物9a)。更具体地，当保护基为BOC时，本领域技术人员会意识到采用酸例如1,4-二氧六环中的HCl 处理经保护的3-环丙氧基氮杂环丁烷 (化合物8)，然后溶剂蒸发可以提供粗3-环丙氧基氮杂环丁烷盐酸盐(化合物9a，方案2，步骤C)。另外，环丙基甲氧基氮杂环丁烷(化合物7b, R1 = 环丙基甲基，方案2，步骤A)可以通过在强碱性去质子化条件下，例如采用极性溶剂例如DMF或DMSO中的NaH采用溴甲基环丙烷烷基化适当取代的3-羟基氮杂环丁烷 (化合物6)制备，随后将经保护的环丙基甲氧基氮杂环丁烷 (化合物7b, R1 = 环丙基甲基)脱保护以提供粗环丙基甲氧基氮杂环丁烷盐酸盐(化合物9b，方案2，步骤D)。
其他取代的氮杂环丁烷可以通过采用大量含N、O、C和S的亲核试剂在亲核取代条件下使用适当的碱例如NaHCO3、K2CO3、DIPEA或TEA和微波加热处理或通过采用在极性有机溶剂例如DMF或DMSO中的强碱例如NaH、KOtBu或LHMDS和加热处理由商购的二苯甲基氮杂环丁烷甲磺酸盐(化合物10)制备以提供取代的二苯甲基氮杂环丁烷 (化合物11，方案3，步骤A)。随后在催化氢化下的脱保护(方案3，步骤B)可以提供期望的取代的氮杂环丁烷 (化合物12)。
方案4描述2-烷氧基-3-氯甲基-4,6-二甲基-吡啶(化合物17，其中Ra为CH3、CH2CH3或Bn)的制备，其可以从商购的3-氰基-4,6-二甲基吡啶酮(化合物13)制备。在本领域技术人员已知的标准文献条件下采用适当的烷基卤化物进行的3-氰基-4,6-二甲基吡啶酮(化合物13)的烷基化可以提供期望的2-烷氧基-3-氰基-4,6-二甲基吡啶(化合物14)。具体地，采用在非质子溶剂例如1,4-二氧六环、DMF、甲苯或CHCl3中含AgCO3或Ag2O的碘甲烷或苄氯处理3-氰基-4,6-二甲基吡啶酮(化合物13)随后加热可以提供必需的2-甲氧基-或2-苄氧基-3-氰基-4,6-二甲基吡啶(化合物14，方案4，步骤A)。随后在本领域技术人员在文献中熟知的标准条件下例如在非质子溶剂例如DCM中在0℃或RT下采用还原剂例如DIBAL-H缓慢处理来还原2-烷氧基-3-氰基-4,6-二甲基吡啶(化合物14)中的氰基可以提供相应的吡啶醛(化合物15，方案4，步骤B)。可以通过本领域技术人员熟知的标准条件实现对甲醇(化合物16，方案4，步骤C)的进一步还原；具体地，在0℃或低温下采用常规还原剂例如NaBH4逐滴处理吡啶醛(化合物15)以获得甲醇(化合物16)。随后，在非质子溶剂例如DCM 中在低温例如-40℃至-60℃下采用典型的氯化剂例如SOCl2或POCl3氯化甲醇(化合物16)可以提供必需的氯甲基吡啶 (化合物17，方案4，步骤D)。
方案5示例4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噻吩-3-甲酸甲酯(化合物20)的合成。如本领域中熟知的，使用各种钯(II)催化剂和各种各样的合适膦配体，特别是乙酸钯和1,1’-双(二苯基膦)二茂铁在醇例如MeOH存在下在极性溶剂例如含或不含非亲核有机碱例如DIPEA或TEA的DMF或DMA中在一氧化碳的加压气氛下羰基化芳基溴(化合物18)以获得酯(化合物19，方案5，步骤A)。随后可以通过采用烷基金属化试剂例如正丁基、异丁基或叔丁基锂去质子化采用硼酸酯淬灭芳基阴离子或使用钯(II)、铱(I)或铁(III)通过过渡金属配位络合物实现硼烷酯化以获得期望的硼酸酯。具体地，可以伴随加热采用非极性溶剂例如环己烷中的双(1,5-环辛二烯)二-μ-甲氧基二铱(I)和4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷逐份处理酯(化合物19)以获得4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噻吩-3-甲酸甲酯(化合物20，方案5，步骤B)。
2-乙氧基吡啶(化合物27)可以根据方案6中所述的路线，在适当的极性有机溶剂中的碱性条件下例如氢化钠和THF采用乙酰基烯酮进行的丙二腈的缩合起始制备以获得2-氨基-3-氰基吡喃酮(化合物21，方案6，步骤A)。随后的采用无机酸例如HCl进行的热重排可以提供3-氰基-4-羟基-6-甲基吡啶酮(化合物22，方案6，步骤B)。可以使用本领域中熟知的很多氯化剂（更具体地POCl3和PCl5的混合物）实现对4-氯吡啶酮(化合物23)的氯化(方案6，步骤C)；可以通过采用在合适的非极性有机溶剂中的烷基卤化物（更具体地使用甲苯中的氧化银(I)和碘乙烷）进行金属参与的醚化实现所得吡啶酮（化合物23）的烷基化，以提供2-乙氧基-3-氰基-4-氯吡啶(化合物24，方案6，步骤D)。使用还原剂例如DIBAL-H然后NaBH4或NaCNBH3 进行的两步还原可以提供醇(化合物 26，方案6，步骤E-F)，随后采用适当的有机溶剂中的氯化剂例如POCl3或PCl5 进行的氯化可以提供乙氧基吡啶(化合物27)。更具体地，可以通过在0℃至RT的DCM中采用甲磺酰氯处理通过甲磺酸盐的原位制备实现醇(化合物26)的氯化以提供乙氧基吡啶(化合物27，方案6，步骤G)。
方案7描述式I化合物的合成。在标准Suzuki 型偶联条件下使用钯(II)催化剂和膦配体采用温和无机碱例如K3PO4在极性有机溶剂例如1,4-二氧六环中进行的经制备的磷酸乙烯酯(化合物5，方案1，步骤D)与硼酸芳基酯(化合物20，方案5，步骤B)的偶联提供乙烯基噻吩酯(化合物28，方案7，步骤A)。可以通过本领域熟知的程序完成乙烯基的还原以获得α-甲基噻吩酯(化合物29，方案7，步骤B)。可以使用本领域熟知的大量催化剂和配体，特别是采用铱(I)催化剂/配体络合物例如[(4R,5R)-(+)-O-[1-苄基-1-(5-甲基-2-苯基-4,5-二氢噁唑-4-基)-2-苯基乙基] (次磷酸二环己酯) (1,5-COD)铱(I)四(3,5-双(三氟甲基)苯基硼酸盐实现乙烯基的立体选择性还原以获得期望的立体特异性酯 (化合物29)。用以提供5-溴噻吩酯(化合物30)的随后在方案7，步骤C中的溴化可以使用溴化剂例如元素溴或NBS在合适的有机溶剂例如CHCl3、DCM、EtOAc、1,4-二氧六环或CCl4中实现。可以实现在标准的钯参与的偶联条件下，特别是使用RuPhos-G3-palladacycle(方案7，步骤D)，然后在本领域熟知的典型的氢解条件下进行的苄氧羰基胺(化合物31)的脱保护具体地在极性有机醇溶剂例如MeOH中原位环化(方案7，步骤E)并在标准酸性条件下例如在合适极性溶剂例如THF或EtOH中使用HCl脱去(unmasking)成酮对2-[2-(苄氧基羰基氨基)乙基]-5-[1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-4-甲基-噻吩-3-甲酸甲酯(化合物31)的烷基化以提供3-甲基-2-[1-(4-氧代环己基)乙基]-6,7-二氢-5H-噻吩并[3,2-c]吡啶-4-酮(化合物33，方案7，步骤F)。可以在路易斯酸例如异丙醇钛和还原剂例如NaBH4、Na(OAc3)BH或NaCNBH3存在下在合适溶剂例如DCM或MeOH中实现还原胺化以获得反式-和-顺式- 环己烷的混合物(化合物34，方案7，步骤G)，其可以通过本领域技术人员熟知的结晶或层析法分离。此外，本领域技术人员可能意识到使用LiBH4作为还原剂可以导致初步地获得反式-立体异构体。在熟知条件下采用适当取代的芳烷基卤化物，例如苄基卤化物烷基化，随后在酸性条件下，例如在PTSA存在下使用LiCl 伴随加热进行脱甲基化或脱苄基化，可能提供式I化合物(方案7，步骤H和M)。
或者，可以使用本领域熟知的条件例如采用碳载Pd(OH)2在合适的有机溶剂例如MeOH中对苄氧羰基胺(化合物31，方案7，步骤D)施以氢解，并且氢解可以在吡啶醛(例如化合物15，方案4，步骤B)存在下进行，以提供5-[1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-4-甲基-2-[2-[(6-甲基-3-吡啶基)甲基氨基]乙基]噻吩-3-甲酸甲酯(化合物35，方案7，步骤I)。随后的脱去成酮、还原胺化、在热酸性条件下的环化和上述O-脱保护可以获得式I化合物(方案7，步骤J-M)。
或者，可以使用本领域中熟知的条件对胺例如化合物38（其中R3=H，R4=苄基）施以氢解以提供胺（其中R3=R4=H）。对这种胺施以还原胺化条件和如上所述的O-脱保护可以提供式I化合物。具体地，酸、甲醛和三乙酰氧基硼氢化物可以导致获得还原胺化产物（其中R3=R4=Me）。
方案8描述式II化合物的合成。在标准条件下进行的酯的硝化(化合物19，方案5，步骤A)和随后的硝基还原可以提供5-氨基-4-甲基-噻吩-3-甲酸甲酯(化合物40，方案8，步骤A-B)。采用合适的胺保护基例如BOC进行的氨基保护和随后在典型条件下进行的烷基化，例如在温和碱例如K2CO3或Cs2CO3存在下在极性溶剂例如DMF中采用碘甲烷进行的烷基化可以提供适当N-烷基化保护的氨基噻吩，其可以随后原位氨基甲酸酯裂化和随后的还原胺化，例如采用环己酮例如1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮和Na(OAc3)BH或NaCHBH3在合适的有机溶剂例如DCE中进行以获得必需的叔胺(化合物41，方案8，步骤C，其中R5 = CH3)。或者，可以首先采用环己酮例如1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮在Na(OAc)3BH或NaCNBH3存在下在合适有机溶剂例如DCE中对5-氨基-4-甲基-噻吩-3-甲酸酯(化合物40)施以还原胺化条件，然后采用乙醛进行第二次原位还原胺化，以获得必需的叔胺 (化合物41，方案8，步骤C，其中R5 =CH2CH3)。随后的溴化、金属参与的烷基化、环化成二环内酰胺(化合物44)、内酰胺N-烷基化、脱去成酮、还原胺化和最后的脱甲基化或脱苄基化全部都可以类似于方案7的方法进行以获得式II的最终化合物(方案8，步骤D-J)。
或者，可以首先在类似于方案7中所述的条件下对缩酮(化合物45，方案8，步骤G)脱烷基化以获得吡啶酮 (化合物48，方案8，步骤K)。可以进行随后的烷基化然后还原胺化或双还原胺化(在类似于方案8，步骤C的条件下)以获得式II化合物(方案8，步骤L)。
方案9描述式III化合物的合成。N-烷基化的2-溴-5-[R5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)氨基]-4-甲基-噻吩-3-甲酸甲酯(化合物42，方案8，步骤D)可以通过本领域中熟知的过渡金属参与的偶联程序炔基化。更具体地，溴噻吩 (化合物42)可以在CuI、合适的钯(II)-配体络合物，例如双(三苯基膦)二氯化钯(II)和非亲核有机碱例如TEA存在下采用丙-2-炔-1-基氨基甲酸苄酯处理以获得炔 (化合物49，方案9，步骤A)。随后的炔的还原和胺基的脱保护是本领域中熟知的。具体地，在标准催化加氢条件和采用H2原位氢解下在碳载Pd或碳载Pd(OH)2存在下在合适的有机溶剂例如MeOH、EtOH或EtOAc中在压力下处理炔(化合物49)可能提供胺(化合物50，方案9，步骤B)，其可以随后在碱性条件例如KOtBu和加热下环化以获得内酰胺(化合物51，方案9，步骤C)。内酰胺氮的烷基化、脱去成酮、还原胺化和最终的脱烷基化全部可能类似于方案8中所述的进行以获得式III化合物 (方案9，步骤D-F)。
方案10描述采用适当取代的5-溴噻吩酯(化合物30)起始使用类似于方案9中所述的那些方法进行的式IV化合物的合成(方案10，步骤A-F)。
在方案11中描述式V化合物的制备。在本领域熟知的还原胺化条件下采用适当保护的氨基烷基酮处理氨基噻吩(化合物40，方案8，步骤B)，随后在采用合适的碱例如NaH或K2CO3的碱性条件下使用烷基化剂例如CH3I或CH3CH3I烷基化或通过例如采用乙醛进行第二还原胺化烷基化(方案11，步骤A)可以提供N-烷基化的N-哌啶基噻吩酯(化合物59)。更具体地，3,4-二甲基噻吩-2-胺(化合物40)可以在合适的有机溶剂例如DCE中逐份添加合适的还原剂例如Na(OAc)3BH随后添加甲醛或乙醛采用叔丁基-4-氧代哌啶-1-甲酸酯处理以获得N-烷基化的N-哌啶基噻吩 (化合物59)。以类似于方案8中所述的方式，随后的溴化、在Pd-催化的偶联条件下芳基溴的（化合物60）的烷基化以获得烷基噻吩 (化合物61)、环化成内酰胺、内酰胺-N烷基化和最终的脱保护可以提供式V化合物(方案11，步骤B-F)。
方案12示出式VI化合物的合成。在还原胺化条件下，具体地首先使用适当保护的4-氨基环己酮并然后在Na(OAc)3BH存在下使用乙醛进行的氨基噻吩(化合物40)的双烷基化可以提供N-烷基化的噻吩基环己基胺(化合物64，方案12，步骤A)。另外，N-甲基化成这个N-烷基化的噻吩基环己基胺(化合物64)可以通过首先采用适当的胺保护基例如BOC保护氨基噻吩，然后采用强碱例如NaH或KOtBu处理随后的氨基甲酸酯，采用烷基卤化物例如CH3I处理所得阴离子，除去胺保护基，并最终采用适当保护的4-氨基环己酮还原胺化实现。可以通过大量的本领域技术人员熟知的条件容易地完成获得4-氨基环己烷(化合物65)的环己基氨基的脱保护(方案12，步骤B)。可以使用原位生成的2-甲氧基丙烷-1,3-二醇(化合物66)的三氟甲磺酸酯，随后使用元素溴或NBS溴化实现的这个4-氨基环己烷(化合物65，方案12，步骤C)的烷基化(方案12，步骤C)提供溴噻吩 (化合物69，方案12，步骤E)。在钯催化条件例如在甲苯和水的混合物中在无机碱例如K2CO3和加热存在下使用取代的三氟硼酸钾盐和催化的RuPhos-G3-Palladacycle进行的芳基溴(化合物69)的烷基化可以获得N-烷基化的2-[2-(苄氧基羰基氨基)乙基]-5-[[4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]氨基]-4-甲基-噻吩-3-甲酸甲酯(化合物70，方案12，步骤F)。在本领域熟知的条件下的脱保护，并伴随使用适当取代的杂芳基醛原位还原胺化，例如在碳载Pd(OH)2存在下在醇溶剂例如EtOH中，在压力和加热下，可以提供取代的氨基甲基吡啶(化合物71，Ra = CH3或Bn，方案12，步骤G)。在类似于方案8中所述的那些条件下进行的随后的环化和脱保护可以获得式VI化合物(方案12，步骤H-I)。
方案13描述式II化合物的替代合成。在类似于方案7，步骤J或方案8，步骤K 中所述的那些酸性条件下脱去缩酮(化合物42，方案8，步骤D)可以提供相应的酮(化合物73，方案13，步骤A)。在类似于方案8，步骤L的条件下进行的双还原胺化可以导致获得环己胺(化合物74，方案13，步骤B)，在方案7，步骤D 中所述的条件下的随后的过渡金属参与的偶联，然后在文献中熟知的胺脱保护可以提供氨基环己烷(化合物75，方案13，步骤C)。在方案11，步骤D中的类似描述条件下环化成6,7-二氢-5H-噻吩并[3,2-c]吡啶-4-酮 (化合物76)，然后进行方案7，步骤H中类似描述的烷基化条件，可以提供取代的吡啶(化合物77，方案13，步骤E)，并且在方案7，步骤M中的类似描述的条件下的最终脱烷基化可以导致获得式II化合物(方案13，步骤F)。
方案14示例式IV化合物的替代合成路径。炔化合物54 (方案10，步骤A) 可以使用大量的本领域熟知的技术例如采用氢氧化钯(II)催化加氢同时还原和脱保护，并且采用适当取代的2-烷氧基吡啶例如4,6-二甲基-2-烷氧基吡啶的原位还原胺化可以在类似于方案9，步骤B 中所述的那些条件下完成，以提供缩酮化合物78。随后的脱去成酮化合物79、环化成内酰胺化合物80、采用适当取代的胺还原胺化以获得化合物81和最终的脱烷基化，全部在方案7 (步骤J-M)中所述的类似描述的条件下，可以提供式IV化合物。
本领域技术人员意识到可以使用本领域熟知的标准技术，例如通过使用硅胶上的标准快速层析和合适的有机溶剂混合物（例如EtOAc/己烷）或通过经C-18硅胶的反相层析使用适当的水/有机溶剂混合物（例如采用NH4OAc或NH4HCO3和ACN缓冲的H2O）完成方案7-12中所述的全部相关反式- 和顺式-异构体的分离。
制备例1
3-乙烯氧基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
添加3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(12.0 g, 69.3 mmol)、叔丁基乙烯基醚(125.0mL, 961 mmol)和TEA (4.1 mL, 29 mmol)至密封烧瓶。采用N2剧烈鼓泡该混合物10 min。添加4,7-二苯基-1,10-邻二氮杂菲(1.0 g, 2.92 mmol)和Pd(OAc)2 (0.66 g, 2.91mmol)。密封该烧瓶并在N2下在80℃下搅拌该混合物7天。通过硅藻土过滤该混合物并采用EtOAc冲洗滤饼。浓缩滤液并对所得残余物施以硅胶上的层析，采用0-20% EtOAc/己烷的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得黄色油形式的标题化合物(9.95 g, 72%收率)。1H NMR(400.1 MHz, CDCl3) δ 1.44 (s, 9H), 3.90 (dd, J = 4.2, 10.1 Hz, 2H), 3.97 (dd,J = 2.5, 14.5 Hz, 1H), 4.08 (dd, J = 2.5, 6.8 Hz, 1H), 4.17 (dd, J = 6.5,10.1 Hz, 2H), 4.55-4.61 (m, 1H), 6.37 (dd, J = 6.8, 14.5 Hz, 1H)。
制备例2
3-(环丙氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
冷却3-乙烯氧基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(9.9 g, 50 mmol)和氯碘甲烷(12 mL,159.8 mmol)在DCE (50 mL)中的溶液至-5℃，然后经60 min逐滴添加1M 二乙基锌/庚烷溶液 (80 mL, 80 mmol)，同时保持内部温度0至-5℃。温热至室温并搅拌该混合物30 min。在冰浴中再次冷却该混合物并采用饱和NH4Cl水溶液淬灭该反应。添加浓NH4OH溶液，然后采用MTBE 萃取所得混合物三次。采用饱和NH4Cl水溶液洗涤合并的萃取液，经无水K2CO3干燥，过滤并在真空下浓缩。在硅胶上对所得残余物施以层析，采用0-20% EtOAc/己烷的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后提供无色油形式的标题化合物(4.90 g, 46%收率)。1H NMR (400.1MHz, CDCl3) δ 0.45-0.50 (m, 2H), 0.57-0.62 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 3.21-3.26(m, 1H), 3.85 (dd, J = 4.2, 9.8 Hz, 2H), 4.08 (dd, J = 6.6, 9.8 Hz, 2H), 4.32(m, 1H)。
制备例3
3-(环丙氧基)氮杂环丁烷盐酸盐
在冰浴中冷却3-(环丙氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(4.45 g, 20.9 mmol)在THF(10 mL, 123 mmol)中的溶液并逐滴添加4N HCl在1,4-二氧六环中的溶液 (20 mL, 80mmol)。在RT下搅拌该溶液3 h并在真空下浓缩。溶解残余物在2-丙醇中，浓缩并在真空下干燥以提供标题化合物(3.0 g, 96%收率)，其可以不经另外纯化即使用。1H NMR (400.1MHz, CD3OD) δ 0.48-0.54 (m, 2H), 0.56-0.61 (m, 2H), 3.35-3.40 (m, 1H), 3.98(dd, J = 4.8, 11.8 Hz, 2H), 4.29 (dd, J = 6.8, 11.8 Hz, 2H), 4.51-4.58 (m,1H)。
制备例4
1-二苯甲基-3-[(3S)-四氢呋喃-3-基]氧基-氮杂环丁烷
在100℃下在微波中加热 (3S)-四氢呋喃-3-醇(10 mL, 122.0 mmol)和1-二苯甲基氮杂环丁烷-3-基 甲磺酸盐 (3.0 g, 9.3 mmol)的混合物持续20 min。冷却该混合物至RT并采用EtOAc和饱和Na2CO3水溶液稀释。分离各层，顺序地采用水和饱和NaCl 水溶液洗涤有机层，并经Mg2SO4干燥。过滤并在真空下浓缩。对所得残余物施以硅胶上的层析，采用10-30%EtOAc/己烷的梯度洗脱以在溶剂蒸发之后提供无色油形式的标题化合物(0.9 g, 30%收率)。ES/MS (m/z): 310 (M+H)。
基本上通过制备例4的方法使用(3R)-四氢呋喃-3-醇制备制备例5。
制备例编号 化学名称 结构 ES/MS (m/z) (M+H)
5 1-二苯甲基-3-[(3R)-四氢呋喃-3-基]氧基-氮杂环丁烷 310
制备例6
3-[(3S)-四氢呋喃-3-基]氧基氮杂环丁烷
将N2冲洗通过1-二苯甲基-3-[(3S)-四氢呋喃-3-基]氧基-氮杂环丁烷 (0.85 g, 2.7mmol)、MeOH (20 mL)、EtOAc (5 mL)和AcOH (1 mL)的混合物10 min。添加10% Pd/C(0.50g)并在H2下在60 psi下搅拌所得浆液18 h。通过过滤除去催化剂并采用MeOH冲洗滤饼。浓缩并在真空下干燥残余物以提供标题化合物(0.39 g, 95%收率)，其适合不经进一步纯化使用。1H NMR (400.1 MHz, CDCl3): δ 1.85-2.05 (m, 2H), 2.05 (bs, 1H), 3.58-3.72(m, 5H), 3.74 (d, 1H), 3.80 (m, 1H), 3.89 (m 1H), 4.07 (m, 1H), 4.34 (m, 1H)。
基本上通过制备例6的方法使用1-二苯甲基-3-[(3R)-四氢呋喃-3-基]氧基-氮杂环丁烷制备制备例7。
制备例编号 化学名称 结构 1H NMR (400.1 MHz, CDCl3)δ
7 3-[(3R)-四氢呋喃-3-基]氧基氮杂环丁烷 1.85-2.02 (m, 2H), 2.48 (bs, 1H), 3.56-3.78 (bm,5H),3.74 (d, 1H), 3.80 (m, 1H), 3.89 (m 1H), 4.08 (m, 1H),4.36 (m, 1H)
制备例8
1-[1-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-基]-3-甲基-1H-吡唑和1-(1-二苯甲基氮杂环丁烷-3-基)-5-甲基-吡唑 (位置异构体混合物)
向密封管将3-甲基-1H-吡唑 (2.17 g, 26.47 mmol)和Cs2CO3 (8.6 g, 26.47 mmol)添加至 (1-二苯甲基氮杂环丁烷-3-基) 甲磺酸盐 (7 g, 22.05 mmol)在DMF (15 mL)中的溶液中，并在120℃下搅拌该混合物24 h。冷却至RT，将该混合物倾倒至冰水中，采用5%MeOH/DCM溶液萃取。分离各层，经Na2SO4干燥有机层，过滤，并在真空下浓缩滤液。在硅胶上对所得残余物施以层析，采用7-30% EtOH/己烷的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得位置异构体混合物形式的黄色油标题化合物(3.5 g, 49%收率)。ES/MS (m/z): 304 (M+H)。
基本上通过制备例8的方法制备以下化合物。
制备例编号 化学名称 结构 ES/MS (m/z)
9 1-[1-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-基]-4-甲基-1H-吡唑 304 (M+H)
10 1-[1-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-基]- 1H-1,2,3-三唑 291 (M+H)
制备例11
1-(氮杂环丁烷-3-基)-3-甲基-1H-吡唑和1-(氮杂环丁烷-3-基)-5-甲基-吡唑 (位置异构体混合物)
向300 mL Parr高压釜添加1-[1-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-基]-3-甲基-1H-吡唑(3.5 g, 11.5 mmol)和1-(1-二苯甲基氮杂环丁烷-3-基)-5-甲基-吡唑 (位置异构体混合物)与10% Pd/C(3.5 g, 1 g/g)的混合物至MeOH (75 mL)和EtOAc (25 mL)的溶液。用H2吹扫容器三次，装填至50 psi的H2，并在RT下剧烈搅拌24 h。通过硅藻土床过滤并在真空下浓缩滤液以获得位置异构体混合物形式的无色油标题化合物 (1.58 g, 93%收率)。ES/MS(m/z): 138 (M+H)。
基本上通过制备例11的方法使用相应的1-(二苯基甲基)氮杂环丁烷制备以下化合物。
制备例编号 化学名称 结构 ES/MS (m/z)
12 1-(氮杂环丁烷-3-基)-4-甲基-1H-吡唑 138 (M+H)
13 1-(氮杂环丁烷-3-基)-1H-1,2,3-三唑 125 (M+H)
制备例14
3-(环丙基甲氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃下添加NaH (60%在油中, 900 mg, 22.5 mmol)至3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(3 g, 17.32 mmol)在DMF (10 mL)中的溶液。在RT下搅拌该混合物1.5 h，然后缓慢添加溴甲基环丙烷(2.80 g, 20.7 mmol)并搅拌72 h。用EtOAc和Et2O稀释该混合物，用水洗涤两次，用饱和NaCl水溶液洗涤一次，分离各层，经MgSO4干燥有机萃取液，过滤并在真空下浓缩滤液。在硅胶上对所得残余物施以层析，用0-20% EtOAc/己烷的梯度洗脱以在溶剂蒸发之后提供无色油形式的标题化合物(1.91 g, 48%收率) 。1H NMR (400.1 MHz, CDCl3) δ0.18-0.22 (m, 2H), 0.54-0.58 (m, 2H), 1.00-1.04 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 3.23(d, J= 7.0 Hz, 2H), 3.85 (dd, J = 4.3, 10.1 Hz, 2H), 4.06 (dd, J = 6.5, 10.1Hz, 2H), 4.20-4.26 (m, 1H)。
制备例15
3-(环丙基甲氧基)氮杂环丁烷盐酸盐
在圆底烧瓶中添加4N HCl在1,4-二氧六环中的溶液(15 mL, 60 mmol)至3-(环丙基甲氧基)-氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.91 g, 8.40 mmol)并在RT下搅拌过夜。在真空下浓缩反应混合物并在真空下干燥所得残余物以提供标题化合物 (1.68 g, 定量收率)，其适合不经进一步纯化使用。1H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6) δ 0.14-0.18 (m, 2H), 0.44-0.48(m, 2H), 0.91-0.99 (m, 1H), 3.21 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 3.72-3.82 (m, 2H),4.02-4.12 (m, 2H), 4.30-4.37 (m, 1H), 9.17 (bs, 2H)。
制备例16
2-甲氧基-4,6-二甲基-吡啶-3-甲腈
在水浴中逐滴添加NaOCH3在MeOH中的溶液(30质量%, 175 mL, 940 mmol)至2-氯-4,6-二甲基-吡啶-3-甲腈(75 g, 441.1 mmol)在MeOH (450 mL)中的溶液，然后再逐滴添加NaOCH3/MeOH (25质量%, 250 mL, 1090 mmol)。搅拌所得混合物1 h，倾倒在冰冷水中，搅拌30 min，并过滤所得固体。采用己烷洗涤滤饼并在真空炉中干燥过夜。采用DCM萃取含水滤液，经MgSO4干燥有机相，过滤并在真空下浓缩。合并经过滤的固体和经蒸发的残余物以提供固体形式的标题化合物(71.8 g, 定量收率)。ES/MS (m/z): 163 (M+H)。
制备例17
2-甲氧基-4,6-二甲基-吡啶-3-甲醛
在0℃下经2 h添加1M DIBAL-H在甲苯中的溶液(240 mL, 240 mmol)至2-甲氧基-4,6-二甲基-吡啶-3-甲腈(48 g, 295.95 mmol)在DCM (480 mL)中的溶液。在1 h之后除去冰浴并在RT下搅拌过夜。在RT下冷却在水浴中并通过缓慢添加1M HCl水溶液 (192 mL)和AcOH(192 mL)的混合物淬灭。添加DCM，分离各层，采用饱和NaCl水溶液洗涤有机相，经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。在硅胶上对所得残余物施以层析，采用0-20% EtOAc/己烷的梯度洗脱以在溶剂蒸发之后获得固体形式的标题化合物(22.6 g, 46%收率)。ES/MS (m/z):166 (M+H). 1H NMR (400.1 MHz, CDCl3) δ 2.43 (s, 3H), 2.54 (s, 3H), 4.01 (s,3H), 6.61 (s, 1H), 10.48 (s, 1H)。
制备例18
(2-甲氧基-4,6-二甲基-3-吡啶基)甲醇
在0℃下逐份添加NaBH4 (6.4 g, 170 mmol)至2-甲氧基-4,6-二甲基-吡啶-3-甲醛(22.6 g, 137 mmol)在MeOH (500 mL)中的溶液。温热该溶液至RT并搅拌过夜。添加另外的NaBH4 (1.0 g)并搅拌该混合物1 h。冷却该烧瓶至0º C，添加冰冷水(50 mL)，并在真空下浓缩所得混合物至约½体积。添加饱和NaHCO3水溶液至所得残余物，用DCM萃取，分离各层，用饱和NaCl水溶液洗涤有机相，并经Na2SO4干燥有机相。在真空下过滤并浓缩滤液以获得油形式的标题化合物(23 g, 定量收率)。ES/MS (m/z): 168 (M+H)。
制备例19
3-(氯甲基)-2-甲氧基-4,6-二甲基-吡啶
在0℃下添加甲磺酰氯(22 mL, 281 mmol)溶解在DCM (100 mL)中的溶液至(2-甲氧基-4,6-二甲基-3-吡啶基)甲醇(39 g, 233.25 mmol)在含DIPEA (54 mL)的DCM (500 mL)中的溶液。缓慢温热至RT并搅拌约48小时。在真空下浓缩反应混合物并对所得残余物施以硅胶上的层析，采用2-5% EtOAc/己烷的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得固体形式的标题化合物(30.85 g, 71%收率)。H1 NMR (399.8 MHz, DMSO-d6): 2.28 (s, 3H), 2.30 (s,3H), 3.84 (s, 3H), 4.69 (s, 2H), 6.70 (s, 1H)。
制备例20
2-(苄氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-甲腈
在配备机械搅拌器的2-L三颈烧瓶中逐滴添加苄氯(100 mL, 859.5 mmol)至2-羟基-4,6-二甲基-吡啶-3-甲腈 (100 g, 675 mmol)和氧化银(174 g, 747 mmol)在甲苯(1 L)中的混合物。在110℃下搅拌该混合物6 h。冷却该混合物至约60℃，通过硅藻土过滤，采用DCM冲洗并在真空下浓缩滤液。溶解粗产物至DCM中并逐滴添加MeOH直到出现固体。过滤并收集所得固体以提供棕色固体形式的标题产物 (144.9 g, 90%收率)。ES/MS (m/z): 239(M+H)。
制备例21
2-(苄氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-甲醛
在0℃下经3 h逐滴添加1M DIBAL-H在甲苯中的溶液(200 mL, 200 mmol)至2-(苄氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-甲腈 (40.3 g, 169 mmol)在DCM (400 mL)中的溶液。温热该反应混合物至RT并搅拌3 h。在RT下采用1:1的1N HCl (160 mL)和乙酸(160 mL)的混合物非常缓慢地淬灭该反应。添加饱和NaCl水溶液(100 mL)并采用DCM萃取。分离各层并经Na2SO4干燥有机萃取液过夜。过滤，在真空下浓缩滤液，并对所得残余物施以在硅胶上的层析，用0-5% EtOAc/己烷的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得标题化合物(24.47 g, 60%收率)。ES/MS (m/z): 242 (M+H)。
制备例22
(2-苄氧基-4,6-二甲基-3-吡啶基)甲醇
在配备机械搅拌器的冰浴中在2-L三颈烧瓶中将2-(苄氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-甲醛(46.5 g, 193 mmol)溶解在MeOH (1 L)中并经1 h分小份添加NaBH4 (8.7 g, 230 mmol)。温热该混合物至RT并搅拌3 h。将该混合物再冷却至0℃并用冰冷水(50 mL)淬灭。在真空下浓缩该反应混合物并添加饱和NaHCO3水溶液。采用DCM萃取三次，用饱和NaCl水溶液洗涤合并的萃取液，经Na2SO4干燥。在真空下过滤并浓缩滤液以提供无色油形式的标题化合物(46.8 g, 99.8%收率)。ES/MS (m/z): 244 (M+H)。
制备例23
2-苄氧基-3-(氯甲基)-4,6-二甲基-吡啶
在-60℃下在N2下缓慢添加SOCl2 (4.0 g, 33 mmol)至(2-苄氧基-4,6-二甲基-3-吡啶基)甲醇(6.0 g, 25 mmol)在DCM (100 mL)中的溶液然后温热至-40℃持续30 min。将冷反应混合物倾倒至冰/水(100 mL)中。采用饱和NaHCO3水溶液调节混合物的pH直到稍微碱性，然后用DCM 顺序地萃取含水混合物两次，合并有机萃取物，并经MgSO4干燥。过滤并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-30% EtOAc/己烷的梯度洗脱，以提供白色固体形式的标题化合物(4.90 g, 76%收率)。1H NMR (400.1 MHz, CDCl3) δ 2.35(s, 3H), 2.40 (s, 3H), 4.71 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 6.61 (s, 1H), 7.28-7.33(m, 1H), 7.35-7.40 (m, 2H), 7.47-7.51 (m, 2H)。
制备例24
2-氨基-6-甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-甲腈
冷却NaH (85.4 g, 2.10 mol)在无水THF (0.70 L)中的悬浮液至0℃。逐滴添加净丙二腈(238 g, 3.6 mol)至经搅拌的悬浮液。在0℃下搅拌10 min，然后冷却至-10℃并逐滴添加乙酰基烯酮(163 g, 1.91 mol)在THF (0.6 L)中的溶液。在-10至0℃下搅拌1 h，然后使用浓HCl中和并采用水(1.0 L)稀释。在RT下搅拌16 h。通过过滤收集固体并空气干燥以提供黄色固体。从EtOH重结晶以获得黄色粉末形式的标题化合物(120 g, 42%收率)。1HNMR (400.1 MHz, DMSO-d6) δ 2.15 (3H, s) 5.87 (1H, s), 8.50 (2H, s)。
制备例25
4-羟基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲腈
伴随搅拌在100℃ 下加热2-氨基-6-甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-甲腈 (120 g, 0.80mol)在10% HCl水溶液 (1.0 L)中的悬浮液12 h。冷却至RT并在减压下浓缩。添加EtOH(0.40 L)至所得残余物并通过过滤收集固体以提供白色固体形式的标题化合物 (103 g,86%收率)。1H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6,) δ 2.15 (3H, s), 5.87 (1H, s), 11.68 (1H,s), 12.49 (bs)。
制备例26
4-氯-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲腈
将4-羟基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲腈 (103 g, 0.69 mol)悬浮在CHCl3(1.0 L)中并添加三氯氧磷(210 g, 1.37 mol)和五氯化磷(286 g, 1.37 mol)。伴随搅拌在70℃下加热8 h。冷却至RT，伴随剧烈搅拌缓慢倾倒至冰水中，使用浓NH3水溶液中和该混合物，并通过过滤收集所得沉淀物以在真空炉中干燥之后提供棕色固体形式的标题化合物(77 g, 65%收率)。1H NMR (DMSO-d6, 400.1 MHz, ppm) δ 2.27 (3H, s), 6.50 (1H, s)。
制备例27
4-氯-2-乙氧基-6-甲基吡啶-3-甲腈
添加碘乙烷(3.3 mL, 41 mmol)至4-氯-6-甲基-2-氧代-1H-吡啶-3-甲腈 (4.6 g, 27mmol)和Ag2O (13 g, 55.8 mmol)在甲苯(250 mL)中的混合物并在回流下搅拌所得混合物4 h。冷却该混合物至60℃，通过硅藻土过滤并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-100% EtOAc/己烷的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后提供白色固体形式的标题化合物(2.5 g, 47%收率)。ES/MS (m/z): (35Cl/37Cl) 197/199 (M+H)。
制备例28
4-氯-2-乙氧基-6-甲基吡啶-3-甲醛
在0℃下逐滴添加1M DIBAL-H/甲苯(18 mL, 18 mmol)至4-氯-2-乙氧基-6-甲基吡啶-3-甲腈 (2.2 g, 11 mmol)在DCM (100 mL)中的溶液。逐渐温热该混合物至RT，搅拌过夜，在室温下将烧瓶放置在水浴中，并通过逐滴添加1M HCl水溶液 (9 mL)和AcOH (9 mL)的混合物淬灭该反应。采用DCM稀释所得混合物，分离所得各层，用饱和NaCl水溶液洗涤有机萃取物，并经无水Na2SO4干燥有机萃取物。过滤并在真空下浓缩滤液以提供橙色固体形式的标题化合物(1.7 g, 76%收率)。ES/MS (m/z): (35Cl/37Cl) 200/202 (M+H)。
制备例29
(4-氯-2-乙氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲醇
在0℃下添加NaBH4 (0.230 g, 6.08 mmol)至4-氯-2-乙氧基-6-甲基吡啶-3-甲醛 (1g, 5 mmol)在MeOH (50 mL)中的溶液。逐渐温热该混合物至RT，搅拌约2 h，用饱和NaHCO3水溶液淬灭该混合物，在真空下浓缩该混合物，采用饱和NaHCO3水溶液稀释所得残余物，并用DCM萃取。分离各层，经无水Na2SO4干燥有机层，过滤并在真空下浓缩滤液以提供黄色油形式的标题化合物(1.03 g, 82%收率)。ES/MS (m/z): (35Cl/37Cl) 202/204 (M+H)。
制备例30
4-氯-3-(氯甲基)-2-乙氧基-6-甲基吡啶
添加DIPEA (0.762 mL, 4.33 mmol)至(4-氯-2-乙氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲醇(1.03g, 4.09 mmol, 80%纯度)在DCM (40 mL)中的RT溶液。冷却该溶液至0℃，然后逐滴添加甲磺酰氯(0.335 mL, 4.28 mmol)。逐渐温热该溶液至RT，在RT下搅拌所得混合物约3 h，并在真空下浓缩该混合物。添加饱和NaHCO3水溶液并用EtOAc萃取。分离各层，经无水Na2SO4干燥有机萃取物，过滤并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用5-30%EtOAc/己烷的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得黄色油形式的标题化合物(0.788 g, 88%收率)。1H NMR δ (400.1 MHz, DMSO): 1.31 (t, J= 7.0 Hz, 3H), 2.37 (s, 3H), 4.37(q, J= 7.0 Hz, 2H), 4.71 (s, 2H), 7.05 (s, 1H)。
制备例31
1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸
添加原甲酸三乙酯(2.35 kg, 2.65 L, 15.9 mol)、PTSA (2.8 g, 16 mmol)和乙二醇(1.64 kg, 26.4 mol)至4-氧代环己烷甲酸乙酯 (900 g, 5.29 mol)在EtOH (4 L)中的溶液并在50℃下搅拌该混合物1 h。冷却至RT并经20 min缓慢添加5M NaOH的水溶液 (4.24L, 21.18 mol)；搅拌所得混合物2 h。在减压下蒸发大部分EtOH，添加水(5 L)和MTBE (4L)，搅拌，分离各相，并丢弃有机相。冷却水相至15℃并通过缓慢添加5M HCl水溶液酸化直到pH约为3.3 (约3.7 L)。添加DCM (8 L)，分离各层，经Na2SO4干燥有机相，过滤并在真空下浓缩滤液以提供粘稠油形式的标题化合物，其在静置下缓慢固化成白色低熔点固体(887g, 90%收率)，其适合不经进一步纯化即用于接下来的步骤。(GC-MS) MS (m/z): 99 (M-87)。
制备例32
N-甲氧基-N-甲基-1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-甲酰胺
经20 min分小份缓慢添加CDI (915 g, 5.64 mol)至1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸(988.6 g, 5.31 mol)在DCM (10 L)中的溶液并搅拌1 h。经15 min分小份添加N-甲氧基甲胺盐酸盐 (577 g, 5.92 mol)并搅拌12 h。添加更多的N-甲氧基甲胺盐酸盐(53 g, 0.55mol)并再搅拌12 h。添加水(10 L)，分离各相，顺序地采用水(5 L)和饱和NaCl水溶液(5 L)洗涤有机相，经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩滤液以获得无色油形式的标题化合物(1.24 kg, 定量收率)，其适合不经另外的纯化即用于接下来的步骤。ES/MS (m/z): 230(M+H)。
制备例33
1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙酮
在N2下冷却N-甲氧基-N-甲基-1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-甲酰胺(400 g, 1.74 mol)在THF (3.5 L)中的溶液至0℃并经30 min添加3M MeMgBr在Et2O中的溶液 (697.87 mL,2.1 mol)。搅拌30 min同时温热至RT。通过缓慢添加饱和NH4Cl水溶液(1 L)淬灭该反应并采用MTBE (500 mL x 3)萃取。分离各层并采用饱和NaCl水溶液洗涤有机层。经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液以获得浅黄色油形式的粗标题化合物 (275 g, 86%收率)，其适合不经进一步纯化即使用。(GC-MS) MS (m/z): 184 (M+)。
制备例34
磷酸1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙烯酯二苯酯
冷却1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙酮 (150 g, 0.81 mol)在THF (1 L)中的溶液至-70℃并经30 min逐滴添加1M LiHMDS在THF中的溶液 (896 mL, 0.89 mol)。在-60℃下搅拌该混合物15 min，然后在-70℃下逐滴添加氯磷酸二苯酯(240.6 g, 896 mmol)/THF(450 mL)。搅拌该反应混合物14 h，同时温热至RT。采用饱和NaHCO3水溶液(1 L)淬灭该反应并搅拌1 h。采用MTBE (8 L x 3)萃取，分离各层，经Na2SO4干燥合并的有机萃取物，过滤并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用2-33 % EtOAc/己烷的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后提供黄色油形式的标题化合物 (190 g, 56%收率)。ES/MS (m/z):417 (M+H)。
制备例35
4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
混合3-溴-4-甲基噻吩 (200 g, 1.13 mol)、MeOH (800 mL)、DMA (1200 mL)、TEA(390 mL, 2.8 mol)，并用氮气吹扫10 min。添加1,1'-双(二苯基膦)二茂铁(50 g, 0.09mol)和乙酸钯(II)(20 g, 0.09 mol)并在80℃下在CO气氛下在60 psi下搅拌30 h。冷却该混合物至RT，采用EtOAc稀释，顺序地采用水和饱和NaCl水溶液洗涤，并经Na2SO4干燥有机相。过滤，并在真空下浓缩滤液以提供黄色油形式的标题化合物 (360 g)，其足以不经另外纯化即使用。ES/MS (m/z): 157 (M+H)。
4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯的替代制备例
溶解3-溴-4-甲基噻吩 (1.00 kg, 5.65 mol)和TEA (1.43 kg, 14.12 mol)在DMA(2.5 L)和MeOH (1.32 L)中并添加1,1-双-二苯基膦二茂铁(187.9 g, 0.34 mol)，然后添加Pd(OAc)2 (63.4 g, 0.28 mol)。在CO的气氛下在50 psi下在80℃下搅拌所得混合物16h。在冷却至RT之后，添加EtOAc (5 L)，用10%柠檬酸水溶液(1.6 L x 2)、饱和NaHCO3水溶液(1.6 L x 2)、水(1.2 L x 2)和饱和NaCl水溶液 (1 L x 2)顺序地洗涤。分离各层，经MgSO4干燥有机相，过滤并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用5%EtOAc/己烷洗脱，以在溶剂蒸发之后提供黄色油形式的标题化合物(653 g, 74%收率)。ES/MS (m/z): 157 (M+H)。
制备例36
4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噻吩-3-甲酸甲酯
混合4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(250 g, 1.60 mol)、4-叔丁基-2-(4-叔丁基-2-吡啶基)吡啶 (8.59 g, 32.01 mmol)和[IrMeO(COD)]2 (5.37 g, 8.00 mmol)在环己烷(2.5 L)中。在真空下将该混合物脱气，采用N2充分吹扫，然后经1 h分小份添加4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(409.67 g, 3.20 mol)。在70℃下搅拌所得混合物3 h。冷却该混合物至RT，在真空下浓缩，并对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-1% EtOAc/己烷的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得固体形式的标题化合物(300 g, 66%收率)。ES/MS (m/z):283 (M+H)。
制备例37
5-[1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙烯基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
在RT下搅拌磷酸1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙烯酯二苯酯 (240 g, 576.37mmol)、4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噻吩-3-甲酸甲酯(211.4 g, 749.28 mmol)和2M K3PO4 (367 g, 1.73 mol)在二氧六环 (2.4 L)中的水溶液的混合物。添加氯(2-二环己基膦-2′,4′,6′-三异丙基-1,1′-联苯)[2-(2′-氨基-1,1′-联苯)]钯(II) (9.07 g, 11.53 mmol)并在80℃下搅拌3 h。在减压下蒸发溶剂，采用EtOAc(750 mL x 2)萃取，分离各层，采用水(150 mL)和饱和NaCl水溶液顺序地洗涤经合并的有机相，经 Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用5% EtOAc/己烷洗脱，以在溶剂除去之后提供固体形式的标题化合物(375 g, 67%收率)。ES/MS (m/z): 323 (M+H)。
制备例38
5-[(1R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
添加[(4R,5R)-(+)-O-[1-苄基-1-(5-甲基-2-苯基-4,5-二氢噁唑-4-基)-2-苯基乙基] (次磷酸二环己酯) (1,5-COD)铱(I)四(3,5-双(三氟甲基)苯基硼酸盐(1.61 g, 0.93mmol)至5-[1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙烯基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(60 g, 186mmol)在DCM (1.9 L)中的溶液并在80 parr的氢气气氛下在RT下以12 mL/min洗脱该溶液通过48 mL不锈钢反应器持续2 h。过滤该溶液并在真空下浓缩滤液以获得棕色油形式的粗标题化合物(60 g, 定量收率)，其适合不经进一步纯化即用于接下来的步骤。ES/MS (m/z): 325 (M+H)。
制备例39
4-甲基-5-[(1R)-1-(4-氧代环己基)乙基]噻吩-3-甲酸甲酯
向5-[(1R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(64.7 g,178 mmol)在THF (450 mL)中的溶液添加1N HCl 溶液(450 mL, 5.53 mol)并在室温下搅拌16 h，然后在45℃下持续2 h。在真空下浓缩该反应混合物，添加MTBE (500 mL)并分离各相。用水(200 mL)、饱和NaHCO3水溶液(100 mL)和饱和NaCl水溶液(100 mL)顺序地洗涤有机相。经MgSO4干燥有机相，过滤并在真空下浓缩滤液以提供棕色油形式的粗标题化合物(53.3 g, 96%收率)，其可以不经另外纯化即使用。ES/MS (m/z): 281 (M+H)。
制备例40a
5-[(1R)-1-[反式-4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]乙基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
在RT下搅拌3-甲氧基氮杂环丁烷盐酸盐(43.4 g, 351 mmol)和DIPEA (65 mL, 373mmol)在MeOH (500 mL)中的溶液持续45 min。添加该混合物至4-甲基-5-[(1R)-1-(4-氧代环己基)乙基]噻吩-3-甲酸甲酯(50.0 g, 160 mmol)在THF (250 mL)中的溶液并在RT下搅拌40 min。在-70℃下冷却该混合物并经25 min分5份添加LiBH4 (4.9 g, 220 mmol)。使其搅拌4 h同时温热至-20℃。将该混合物缓慢倾倒至1M HCl的水溶液(500 mL)中并搅拌10min。在真空下蒸发大部分有机溶剂，添加DCM (500 mL)和5M K2CO3的水溶液(约pH 9)，分离各层，并采用DCM (250 mL)再次洗涤水相。合并有机萃取液，采用饱和NaCl水溶液洗涤，经MgSO4干燥有机相，过滤并在真空下浓缩滤液。添加EtOAc (50 mL)并在真空下再次浓缩。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用20% EtOAc/（2%三乙胺/己烷）洗脱以在溶剂蒸发之后提供油。在MTBE (200 mL)中溶解所得油，采用1M HCl水溶液(200 mL)洗涤并添加2MK3PO4水溶液至水相(约pH 7.5)。采用EtOAc (2 x 300 mL)萃取水溶液，采用MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩滤液以获得浅黄色油形式的标题化合物(15.5 g, 57%收率)。ES/MS (m/z): 352 (M+H)。
制备例40b
5-[(1R)-1-[反式-4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]乙基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯盐酸盐
可以基本上如制备例40a 中所述制备5-[(1R)-1-[反式-4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]乙基]-4-甲基-噻吩-3-甲酸甲酯盐酸盐，其中粗反应混合物溶剂蒸发然后HCl淬灭，并在硅胶上层析，采用0-100% 2M NH3/MeOH（在DCM中）的梯度洗脱，以在溶剂蒸发后提供油，其在真空下干燥之后部分结晶。随后从EtOAc和痕量的MeOH重结晶提供足以进行X射线结晶的结晶材料。ES/MS (m/z): 352 (M+H)。
通过在EtOAc和MeOH中重结晶制备5-[(1R)-1-[反式-4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]乙基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯盐酸盐的单晶。在-173℃下安装在薄纤维上。使用Iµ CuKα辐射源(λ = 1.54178 Å)和配备SMART® 6000CCD面积检测器的基于Bruker D8的3-循环测角衍射仪(晶体尺寸 = 0.150 x 0.080 x 0.020 mm)收集数据。使用SAINT程序V8.32b进行晶胞精修和数据简化。索引具有12.2214(3) Å, b = 7.0314(2) Å, c =12.8284(3) Å和β = 108.8099(15)°的单斜晶体参数的单位晶胞 (在-173℃下，晶体结构的晶胞体积 = 1043.52(5) Å3, 计算的结构密度 = 1.235 g/cm3)。使用SHELXS 程序通过直接方法测定该结构。各向异性地独立地限定除了氢原子之外的所有原子参数。放置在理想化的计算位置。通过使用SHELXL 程序成功地收敛F2的全矩阵最小平方精修，最终拟合优度为1.110，证实空间群的选择即P21。最终R指数(I>2σ(I))为R1 = 0.0603, R2 = 0.1242。精修绝对结构参数为0.081(12)。测定结构。测定该结构为盐酸盐并测定绝对结构在立体中心为R-构型并在环己烷环周围为反式-构型。
制备例41
2-溴-5-[(1R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-
4-甲基-噻吩-3-甲酸甲酯
添加N-溴代琥珀酰亚胺(6.18 g, 34.7 mmol)至5-[(1R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(15.56 g, 47.97 mmol)在EtOAc (60 mL)中的溶液并在55℃下搅拌该混合物30 min，然后在40℃下搅拌过夜。采用饱和NaHSO3水溶液洗涤该反应混合物两次，分离各层，并经MgSO4干燥合并的有机层。过滤并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-20% EtOAc/己烷的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后提供标题化合物(15.67 g, 81%收率)。ES/MS (m/z)(79Br/81Br): 403/405 (M+H)。
制备例42
2-(2-{[(苄氧基)羰基]氨基}乙基)-5-[(1R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
添加2-溴-5-[(1R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-4-甲基-噻吩-3-甲酸甲酯(15.44 g, 38.28 mmol)、甲苯(350 mL)和水(40 mL)至配备机械搅拌器的1-L三颈烧瓶。在低真空下将该混合物脱气持续15 min。添加N-[2-(三氟硼酸根)乙基]氨基甲酸苄酯钾(17.3 g, 57.6 mmol)、Cs2CO3 (37.4 g, 115 mmol)和RuPhos-G3-Palladacycle (2.30 g,2.69 mmol)。将该混合物再脱气15 min，然后在N2下在80-85℃下搅拌过夜。添加饱和NaHCO3水溶液并用EtOAc萃取三次；用水和饱和NaCl水溶液顺序地洗涤合并的萃取物，经MgSO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-50% EtOAc/己烷的梯度洗脱以获得油形式的标题化合物(14.72 g, 76%收率)。ES/MS (m/z): 502 (M+H)。
制备例43
2-[(1R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
在H2下在60 psi 下搅拌2-(2-{[(苄氧基)羰基]氨基}乙基)-5-[(1R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(14.72 g, 29.35 mmol)的混合物和干10% Pd/C (3.0 g)在MeOH (80 mL)中的混合物过夜。经硅藻土过滤该反应混合物，在RT下搅拌滤液24 h并在真空下浓缩。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用20-100% EtOAc至己烷的梯度，然后10% MeOH/EtOAc的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后提供标题化合物(8.20g, 83%收率)。ES/MS (m/z): 336 (M+H)。
制备例44
3-甲基-2-[(1R)-1-(4-氧代环己基)乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
在RT下搅拌2-[(1R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (6.18 g, 18.4 mmol)在THF (30 mL)和1N HCl (30 mL)的混合物中的溶液过夜，然后在55℃下搅拌2 h。采用固体Na2CO3淬灭该反应并用EtOAc萃取。用饱和NaCl水溶液洗涤合并的萃取物并经MgSO4干燥。对所得残余物施以在硅胶上的层析，用0-100 % EtOAc/己烷的梯度洗脱，以在溶剂除去之后提供泡沫形式的标题化合物(4.69 g,87%收率)。ES/MS (m/z): 292 (M+H)。
制备例45
4-甲基-5-硝基噻吩-3-甲酸甲酯
在低于25℃ 下添加乙酸酐(2.5 L)至4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(150 g, 0.96 mol)在AcOH (4.5 L)中的溶液。冷却该混合物至10℃，缓慢添加发烟HNO3 (220 mL)，保持温度低于15℃，温热至RT并搅拌1 h。将该反应缓慢倾倒至冰水中并采用EtOAc (2 x 3 L)萃取。分离所得各层，采用水(4 x 3 L)和饱和NaHCO3水溶液顺序地洗涤有机相，经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用5% EtOAc/己烷洗脱，以在溶剂蒸发之后提供橙色固体标题化合物(91 g, 47%收率)。1H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6) δ 2.77 (s, 3H); 3.83 (s, 3H); 8.61 (s, 1H)。
制备例46
5-氨基-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
缓慢添加铁(166 g, 2.98 mol)至4-甲基-5-硝基噻吩-3-甲酸甲酯(120 g, 0.55mol)在AcOH (1200 mL)和EtOH (1200 mL)中的溶液。在80℃下搅拌该混合物15 min。冷却该反应，缓慢倾倒至冰水中，并添加饱和NaHCO3的水溶液直到pH 7-7.5。用EtOAc (2 x 3L)萃取，分离各层，采用饱和NaCl水溶液洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下蒸发滤液以获得黄色油形式的标题化合物(98 g, 98%收率)，其足以不经另外纯化即使用。ES/MS (m/z): 172 (M+H)。
制备例47
5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
向5-氨基-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(7.79 g, 37.3 mmol)在1,4-二氧六环 (40 mL)中的溶液添加叔丁氧基羰基叔丁基碳酸酯(16.3 g, 74.6 mmol)，在回流下加热2 h，然后冷却至RT并在真空下浓缩该反应混合物。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-10%EtOAc/己烷的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得稠黄色油形式的标题化合物(8.88 g, 88%收率)。ES/MS (m/z): 272 (M+H)。
制备例48
5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(甲基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
向5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(2.01 g, 7.41 mmol)在DMF(20 mL)中的溶液添加Cs2CO3 (6.03 g, 18.5 mmol)和CH3I (1.05 g, 7.41 mmol)。在80℃下加热该混合物10 min并冷却该反应混合物至RT。采用DCM (50 mL)和水(10 mL)稀释，分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液。添加MeOH (40 mL)和5M HCl水溶液(20 mL)至所得残余物，在50℃下加热约1 h。在真空下浓缩该混合物，采用DCM稀释并添加固体NaHCO3直到该混合物中和至约pH 7。分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液以提供粗4-甲基-5-(甲基氨基)-噻吩-3-甲酸甲酯。ES/MS (m/z): 186 (M+H)。
溶解粗4-甲基-5-(甲基氨基)-噻吩-3-甲酸甲酯/DCM (20 mL)，添加1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮 (1.16 g, 7.40 mmol)，同时搅拌30 min，然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(3.13 g, 14.8 mmol)并在RT下再搅拌30 min。添加另外的1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮(0.289 g, 1.85 mmol)，搅拌15 min，添加更多的三乙酰氧基硼氢化钠(0.784 g, 3.70mmol)，并在RT下搅拌所得混合物过夜。采用饱和NaHCO3水溶液(10 mL)和DCM (40 mL)稀释该反应，搅拌1 h，分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-10% EtOAc/己烷的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得无色油形式的标题化合物(1.21 g, 50%收率)。ES/MS (m/z): 326 (M+H)。
制备例49
2-溴-5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(甲基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
在RT下向5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(甲基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(1.13 g, 3.47 mmol)/DCM (11 mL)中添加N-溴代琥珀酰亚胺 (0.701 g, 3.82 mmol)。在5 min之后，采用DCM (40 mL)稀释该反应并采用0.1M NaOH (2 x 10 mL)洗涤。分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液以提供棕色油形式的粗标题化合物(1.47 g,定量收率)。ES/MS (m/z): (79Br/81Br) 404/406 (M+H)。
制备例50
2-(2-{[(苄氧基)羰基]氨基}乙基)-5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(甲基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
在烧瓶中添加甲苯(15 mL)和水(2.5 mL)至粗2-溴-5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(甲基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(1.36 g, 3.20 mmol)、N-[2-(三氟硼酸根)乙基]氨基甲酸苄酯钾(1.25 g, 4.15 mmol)和Cs2CO3 (3.64 g, 11.2 mmol)。采用N2吹扫该混合物，然后添加RuPhos (0.0761 g, 0.160 mmol)和第二代Ruphos预催化剂(0.124 g, 0.160mmol)。剧烈搅拌该混合物并在100℃下加热18 h。冷却至RT并用EtOAc (40 mL)和水(10mL)稀释该反应。分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-30% EtOAc/己烷的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后提供橙色油形式的标题化合物(0.93 g, 58%收率)。ES/MS (m/z): 503 (M+H)。
制备例51
2-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(甲基)氨基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
向2-(2-{[(苄氧基)羰基]氨基}乙基)-5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(甲基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(0.93 g, 1.86 mmol)/MeOH (10 mL)添加20% Pd(OH)2/C(0.500g, 3.56 mmol)和TEA (0.78 mL, 5.57 mmol)。采用H2 (345 kPa)装填反应容器并在RT下搅拌。在约1.5 h之后，通过过滤除去催化剂，然后在70℃下加热该混合物5 h。冷却该混合物至RT并在真空下浓缩以提供黄色泡沫形式的标题化合物(0.513 g, 82%收率)，其足以不经另外的纯化即使用。ES/MS (m/z): 337 (M+H)。
制备例52
5-[{反式-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]环己基}(乙基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
在RT下添加三乙酰氧基硼氢化钠(441 g, 2.05 mol)至5-氨基-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(98 g, 0.57 mol)在含(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯(156.7 g, 0.75 mol)和AcOH(118 mL)的DCE (1000 mL)中的溶液。在RT下搅拌所得混合物30 min，添加乙醛(63.7 mL,1.15 mol)，再搅拌45 min，并添加水随后添加饱和NaHCO3水溶液(pH 约9-10)。采用EtOAc(2 x 3 L)萃取含水混合物，采用饱和NaCl水溶液洗涤合并的有机萃取物，经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用5% EtOAc/己烷洗脱，以在溶剂除去之后提供337 g的顺式-/反式-混合物。通过多个连续的手性SFC 运行分离顺式-和反式-异构体(CHIRALPAK® AD, 5 μm, 5 x 25 cm; 洗脱液：5% MeOH在CO2中的等度混合物(isocratic mixture)；柱温：50℃；流速：400 g/min)以在溶剂除去之后提供棕色固体形式的纯反式- 标题化合物(183 g, 76%收率)。Rt = 3.54 min. ES/MS (m/z): 397 (M+H)。
制备例53
5-[(反式-4-氨基环己基)(乙基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
冷却5-[[4-(叔丁氧基羰基氨基)环己基]-乙基-氨基]-4-甲基-噻吩-3-甲酸甲酯(40g, 100.9 mmol)在THF (200 mL)中的溶液至0℃。逐滴添加4M HCl在二氧六环中的溶液(250 mL, 1000 mmol)，并在RT下搅拌所得混合物16 h。在真空下浓缩至约1/4体积，添加EtOAc (400 mL)和饱和K2CO3水溶液(200 mL)，并在RT下搅拌所得混合物1 h。分离所得相，采用EtOAc (2 x 100 mL)洗涤水相，合并有机层，并用水 (100 mL)和饱和NaCl水溶液(100mL)顺序地洗涤。经Na2SO4干燥有机层，过滤，并在真空下浓缩滤液以在溶剂蒸发之后提供深棕色油形式的标题化合物(31.7 g, 定量收率)。ES/MS (m/z): 297 (M+H)。
制备例54
2-甲氧基丙-1,3-二醇
在-15℃下向2-甲氧基丙二酸二甲酯(25 g, 154.19 mmol)在THF (300 mL)中的冷溶液逐滴添加2.3M LAH在2-甲基四氢呋喃 (170 mL, 150 g, 385.47 mmol)中的溶液并在0℃下搅拌2 h，然后在RT下搅拌1 h。再冷却至-15℃并用水(15 mL)、2N KOH (15 mL)和水(30 mL)缓慢淬灭，并在RT下搅拌所得混合物30 min。过滤所得白色固体，用EtOAc (250mL)，然后用40% (v/v) MeOH/EtOAc (500 mL)洗涤固体，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-20% MeOH/EtOAc的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后提供无色油形式的标题化合物(6.66 g, 40%收率)。1H NMR (400.1 MHz, CDCl3) δ 2.50 (bs, 2H),3.47 (s, 3H), 3.36 (五重峰, J= 4.5 Hz, 1H), 3.69 (dd, J= 4.6, 11.7 Hz, 2H),3.79 (dd, J= 4.2, 11.7 Hz, 2H)。
制备例55
5-{乙基[反式-4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]氨基}-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
在-20℃下经45 min滴加三氟甲磺酸酐(36.47 mL, 61.16 g, 214.6 mmol)至2-甲氧基丙-1,3-二醇(14.81 g, 139.6 mmol)在ACN (500 mL)中的溶液。然后，经35 min逐滴添加DIPEA (44.4 mL, 32.9 g, 255 mmol)并在-15℃下搅拌所得混合物45 min。冷却该混合物至-25℃并经20 min逐滴添加DIPEA (44.4 mL, 32.9 g, 255 mmol)。经30 min逐滴添加5-[(反式-4-氨基环己基)(乙基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯 31.72 g, 107.0 mmol)在ACN (300 mL)中的溶液。温热该反应至RT，然后在70℃下再搅拌1 h。冷却该混合物至RT，采用EtOAc (500 mL)和水(500 mL)稀释，分离各相，并采用EtOAc (2 x 250 mL)萃取水相。添加4M K2CO3水溶液(250 mL)至合并的有机萃取物并在RT下搅拌2 h。分离各相，用饱和NaCl水溶液 (250 mL)洗涤有机层，经Na2SO4干燥有机层，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，用0-10% MeOH/EtOAc的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后提供棕色固体形式的标题化合物(29.2 g, 74%收率)。ES/MS (m/z): 367 (M+H)。
制备例56
2-溴-5-{乙基[反式-4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]氨基}-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
混合5-{乙基[反式-4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]氨基}-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(29.17 g, 79.59 mmol)和NBS (17.00 g, 95.51 mmol)在DMF (400 mL)中并在RT下搅拌所得混合物2 h。用EtOAc (400 mL)和水(250 mL)稀释，分离各相，并用4M K2CO3水溶液(2 x 200 mL)、水(200 mL)和饱和NaCl水溶液(200 mL)顺序地洗涤有机层。经Na2SO4干燥有机层，过滤，并在真空下浓缩滤液以提供棕色油形式的标题化合物(32.4 g, 89%收率)，其适合不经进一步纯化即使用。ES/MS (m/z) (79Br/81Br): 445, 447 (M+H)。
制备例57
2-(2-{[(苄氧基)羰基]氨基}乙基)-5-{乙基[反式-4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]氨基}-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
向K2CO3 (657.8 g, 414.3 mmol)在水(123 mL, 6828 mmol)中的溶液逐滴添加N-[2-(三氟硼酸根)乙基]氨基甲酸苄酯钾(23.62 g, 82.85 mmol)，然后2-溴-5-{乙基[反式-4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]氨基}-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(32.37 g, 69.04mmol)在甲苯(450 mL)中的溶液。用N2温和地吹扫该混合物，同时经30 min温热至90℃，然后添加2-二环己基膦-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(2.46 g, 5.18 mmol)和氯(2-二环己基膦-2′,6′-二异丙氧基-1,1′-联苯)[2-(2′-氨基-1,1′-联苯)]钯(II) (4.02 g, 5.18mmol)。在105℃下搅拌所得混合物4 h，冷却至RT，用EtOAc (300 mL)和水(100 mL)稀释，分离各相，采用EtOAc (3 x 100 mL)萃取水相，并用4M K2CO3水溶液(2 x 100 mL)、水(150mL)和饱和NaCl水溶液(150 mL)顺序地洗涤合并的有机层。经Na2SO4干燥有机层，在真空下浓缩滤液，并对所得残余物施以在硅胶上的层析，用0-5% MeOH/EtOAc的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得棕色油形式的标题化合物(23.1 g, 51%收率)。ES/MS (m/z): 544 (M+H)。
制备例58
5-{乙基[反式-4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]氨基}-2-(2-{[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]氨基}乙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
添加碳载Pd(OH)2（20%干基，水润）(5.75 g)至2-(2-{[(苄氧基)羰基]氨基}乙基)-5-{乙基[反式-4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]氨基}-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(23.00 g, 35.11 mmol)和2-甲氧基-4,6-二甲基-吡啶-3-甲醛 (7.03 g, 42.13 mmol)在EtOH (280 mL)中的混合物并在50℃下在H2 (70 psi)下搅拌24 h。通过硅藻土过滤该混合物，采用EtOH冲洗，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，用0-25%MeOH/DCM的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得棕色油形式的标题化合物(18.4 g, 89%收率)。ES/MS (m/z): 559 (M+H)。
制备例59
2-{乙基[反式-4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]氨基}-5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
在110℃下搅拌5-{乙基[反式-4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]氨基}-2-(2-{[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]氨基}乙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(18.35g, 30.21 mmol)和AcOH (9.07 g, 151.1 mmol)在甲苯(175 mL)中的混合物3 h。冷却该混合物，用EtOAc (250 mL)和水(150 mL)稀释，分离各相，用EtOAc (3 x 100 mL)萃取水相，用4M K2CO3水溶液(2 x 100 mL)、水(150 mL)和饱和NaCl水溶液(150 mL)顺序地洗涤合并的有机萃取物。经Na2SO4干燥有机层，过滤，并在真空下浓缩滤液，以获得棕色油形式的标题化合物(16.42 g, 95%收率)，其适合不经另外纯化即使用。ES/MS (m/z): 527 (M+H)。
制备例60
5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(乙基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
在低于25℃下向5-氨基-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(43 g, 251 mmol)、1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮 (39.23 g, 251 mmol)和AcOH (47 mL)在DCE (430 mL)中的溶液缓慢添加三乙酰氧基硼氢化钠(159.6 g, 754 mmol)。在RT下搅拌该混合物30 min，然后添加乙醛(28 mL, 503 mmol)。在RT下搅拌该混合物30 min。将该混合物的内容物倾倒至冰水中，并通过添加饱和NaHCO3水溶液碱化直到pH 7.0-7.5。采用EtOAc (2 x 3 L)萃取所得混合物，采用饱和NaCl水溶液洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用5% EtOAc/己烷洗脱，以在溶剂蒸发之后获得固体形式的标题化合物(55 g, 67%收率)。ES/MS (m/z): 340 (M+H)。
制备例61
2-溴-5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(乙基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
向配备油加料漏斗的三颈圆底烧瓶添加5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(乙基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(91 g, 268.1 mmol)在DCM (1.2 L)中的溶液。冷却该烧瓶至0℃，然后经1 h逐份添加NBS (58.4 g, 322 mmol)。除去冰浴并在RT下搅拌该反应混合物2 h。添加水，分离有机层并在真空下浓缩有机相。分四批对所得残余物施以在硅胶上的层析，各采用10-50% EtOAc/己烷洗脱。浓缩来自先前两批的合并的级分以获得油。在真空下干燥该材料过夜以获得白色固体(40.9 g)。浓缩来自第三和第四批的级分以获得棕色油。采用少量的己烷处理所得材料直到出现固体，过滤，并在真空下干燥过夜以获得浅棕色固体(37.9g)。合并这两个所得的收集的批次以获得棕色油状固体形式的标题化合物(78.8 g, 70%收率)。ES/MS (m/z): (79Br/81Br) 418/420 (M+H)。
制备例62
2-溴-5-[乙基(4-氧代环己基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
向2-溴-5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(乙基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(7.81g, 18.7 mmol)/THF (140 mL)添加1M HCl水溶液(100 mL)。在RT下搅拌该反应约25 h。采用EtOAc (200 mL)稀释该反应混合物并分离各层。采用饱和NaHCO3水溶液(2 x 25 mL)洗涤有机层。经Na2SO4干燥有机层，过滤，并在真空下浓缩滤液以获得红棕色稠油形式的粗标题化合物(6.71 g, 96%收率)，其足以不经另外纯化即用于接下来的步骤。ES/MS (m/z):(79Br/81Br) 374/376 (M+H)。
制备例63
2-(2-{[(苄氧基)羰基]氨基}乙基)-5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(乙基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
在两个分开的批次中，添加甲苯(428 mL)和水(100 mL)至2-溴-5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(乙基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(20 g, 48 mmol)、N-[2-(三氟硼酸根)乙基]氨基甲酸苄酯钾(17.5 g, 58.9 mmol)、(2-二环己基膦-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II) 甲磺酸盐 (4.1 g, 4.8 mmol)和Cs2CO3 (47g, 144 mmol)的混合物。用N2冲洗该反应混合物，然后在80℃下加热4 h。将该反应混合物倾倒至冰冷水中，添加EtOAc，分离各层，通过硅藻土过滤有机相，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用5-40% EtOAc/己烷的梯度洗脱。浓缩所得的期望的级分并在真空下干燥72 h以获得棕色油形式的标题化合物 (41.9 g合计质量, 85%两次的合计收率)。ES/MS (m/z): 517 (M+H)。
制备例64
2-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(乙基)氨基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
用N2吹扫Parr烧瓶，添加20% Pd(OH)2/C(40 g, 284.9 mmol)，再次用N2吹扫该烧瓶，并添加TEA (150 mL, 1080 mmol)、MeOH (500 mL)和2-(2-{[(苄氧基)羰基]氨基}乙基)-5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(乙基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(39.5 g, 76.5 mmol)在MeOH (500 mL)中的溶液。密封该烧瓶，用N2吹扫，用H2气体吹扫，并用H2 (414 kPa)填充该系统。在RT 下搅拌约4 h，并使该反应混合物静置72 h。过滤所得悬浮液，在真空下浓缩滤液，溶解所得残余物在EtOAc中，并添加少量Et2O直到形成固体。过滤并收集所得固体以提供白色固体形式的标题化合物(15.3 g)。浓缩黄色滤液并对所得残余物施以在硅胶上的层析，用10-60% EtOAc/己烷的梯度洗脱，以获得另外的标题化合物(8 g)。合并经过滤和层析的材料用于进一步使用 (23.3 g, 86%收率)。ES/MS (m/z): 351 (M+H)。
制备例65
4-{乙基[4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基]氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
向圆底烧瓶添加DCE (408 mL)和AcOH (17 mL, 297 mmol)中的5-氨基-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(约50%纯度, 34 g, 99 mmol)、叔丁基-4-氧代哌啶-1-甲酸酯(25.7 g, 129mmol)，在RT下搅拌10 min，然后冷却至0℃并逐份缓慢添加三乙酰氧基硼氢化钠(54.2 g,248 mmol)。逐渐地温热该反应混合物至RT并搅拌2 h。逐滴添加乙醛(11.1 mL, 199mmol)，然后搅拌72 h。冷却该反应混合物至0℃，采用饱和NaHCO3水溶液淬灭，并采用DCM稀释。分离各层，用DCM萃取水层，合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-10% EtOAc/己烷的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得橙色固体形式的标题化合物(6.4 g, 17%收率)。ES/MS (m/z): 383 (M+H)。
制备例66
4-{[5-溴-4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基](乙基)氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
向圆底烧瓶添加DCM (84 mL)中的4-{乙基[4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基]氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯 (6.4 g, 17 mmol)，冷却至0℃，逐份添加NBS (3.3 g, 18 mmol)，并搅拌1 h。用水稀释该反应混合物，分离各层，用另外的DCM萃取水层，合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-20% EtOAc/己烷的梯度洗脱，以在溶剂除去之后获得橙色油形式的标题化合物(6.7 g, 87%收率)。ES/MS (m/z): (79Br/81Br) 405/407 (M+H – 叔丁基)。
制备例67
4-{[5-(2-{[(苄氧基)羰基]氨基}乙基)-4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基](乙基)氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
在两个分开的批次中，添加4-{[5-溴-4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基](乙基)氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.900 g, 1.95 mmol)、N-[2-(三氟硼酸根)乙基]氨基甲酸苄酯钾(0.695 g, 2.34 mmol)、(2-二环己基-膦-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)甲磺酸盐 (0.167 g, 0.195 mmol)、Cs2CO3 (1.91 g, 5.85 mmol)、甲苯(9.75 mL)和水(3.55 mL)至圆底烧瓶中。采用N2将各混合物脱气15 min，然后在90℃下加热过夜。冷却各反应混合物至RT并合并。采用冰水淬灭，用EtOAc稀释，分离各层，用另外的EtOAc萃取水层，合并各有机相，并经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-30% EtOAc/己烷的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得黄色油形式的标题化合物(1.29 g, 59%收率)。ES/MS (m/z): 460 (M+H- BOC)。
制备例68
4-[乙基(3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
向圆底烧瓶添加MeOH (23 mL)和THF (15 mL)中的4-{[5-(2-{[(苄氧基)羰基]氨基}乙基)-4-(甲氧基羰基)-3-甲基噻吩-2-基](乙基)氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.29 g,2.30 mmol)，用N2脱气约10 min，添加10% Pd/C(1.29 g)和TEA (0.400 mL, 2.84 mmol)，然后置于H2气氛下并在RT下搅拌约72 h。通过硅藻土过滤该反应混合物，用MeOH洗涤, 并在真空下浓缩滤液。将残余物转移至微波小瓶，添加TEA (0.300 mL)，并在90℃下加热2 h。在搅拌下冷却至RT过夜，然后在真空下浓缩该反应混合物。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-30% ACN/DCM的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得黄色泡沫形式的标题化合物(0.466 g, 51%收率)。ES/MS (m/z): 394 (M+H)。
制备例69
2-(3-{[(苄氧基)羰基]-氨基}丙-1-炔-1-基)-5-[(1R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-4-甲基-噻吩-3-甲酸甲酯
向粗2-溴-5-[(1R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-4-甲基-噻吩-3-甲酸甲酯(10.1 g, 25.0 mmol)、CuI (1.91 g, 10.0 mmol)和丙-2-炔-1-基氨基甲酸苄酯(11.4 g,60.3 mmol)在1,4-二氧六环 (130 mL)中的混合物添加TEA (52 mL, 369 mmol)。脱气并采用N2吹扫该混合物，然后添加双(三苯基膦)二氯化钯(II) (3.6 g, 5.1 mmol)。在40℃下搅拌1 h。经硅藻土过滤该混合物并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-20% EtOAc/己烷的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得浅棕色油形式的标题化合物(10.8 g, 80%收率)。ES/MS (m/z): 512 (M+H)。
制备例70
2-(3-氨基丙基)-5-[(1R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
添加TEA (0.500 mL, 3.55 mmol)至2-(3-{[(苄氧基)羰基]-氨基}丙-1-炔-1-基)-5-[(1R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-4-甲基-噻吩-3-甲酸甲酯(10 g, 19.55mmol)在MeOH (150 mL)中的混合物。脱气并采用N2吹扫该混合物，添加20% Pd(OH)2/C(4.10g, 5.84 mmol)，采用H2 (414 kPa)装载该反应容器，并搅拌过夜。添加另外部分的20% Pd(OH)2/C(500 mg, 0.712 mmol)和TEA (0.500 mL, 3.55 mmol)，用 N2再次脱气并采用H2(414 kPa)装载该反应容器。再搅拌6 h，通过硅藻土过滤该反应，并在真空下浓缩滤液成黄色油。对所得油施以在硅胶上的层析，用0-30% MeOH/DCM的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得黄色油形式标题化合物(6.6 g, 89%收率)。ES/MS (m/z): 382 (M+H)。
制备例71
2-[(1R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮
向微波小瓶添加2-(3-氨基丙基)-5-[(1R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(1.5 g, 3.9 mmol)在甲苯(8 mL)中的溶液，然后添加KOtBu (940mg, 7.87 mmol)。在90℃下搅拌该混合物过夜。将该反应倾倒至冰冷饱和NaHCO3水溶液，用DCM萃取，分离各层，并在真空下浓缩有机层。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-5%MeOH/DCM的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得浅棕色固体形式的标题化合物(1.3 g, 85%收率)。ES/MS (m/z): 350 (M+H)。
制备例72
2-[(1R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮
向2-[(1R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮 (1.1 g, 3.1 mmol)在THF (10 mL)中的溶液添加磨碎的KOH (700mg, 12.4 mmol)。搅拌30 min，然后添加溶解于THF (1 mL)中的3-(氯甲基)-2-甲氧基-4,6-二甲基-吡啶 (700 mg, 3.77 mmol)，并搅拌所得混合物2 h。将该反应混合物倾倒至冰冷饱和NaHCO3水溶液，用DCM萃取，分离各层，并在真空下浓缩该有机层。在真空下干燥所得残余物以获得棕色油形式的粗标题化合物(2.2 g, 87%收率)，其适合不经另外纯化即另外使用。ES/MS (m/z): 499 (M+H)。
制备例73
5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-(4-氧代环己基)乙基]-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮
添加PTSA (1.3 g, 7.2 mmol)至DMF (10 mL)中的粗2-[(1R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮 (1.0 g, 1.2 mmol)，并在70℃下搅拌所得混合物2 h。将该混合物倾倒至冰冷饱和NaHCO3水溶液，用DCM萃取，分离各层，并在真空下浓缩该有机层。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-5% MeOH/DCM的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得浅棕色油形式的标题化合物(680 mg, 定量收率)。ES/MS (m/z): 441 (M+H)。
制备例74
2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(环丙氧基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
添加异丙醇钛(IV) (1.40 g, 4.9 mmol)和3-(环丙基氧基)氮杂环丁烷盐酸盐(0.74g, 4.9 mmol)至3-甲基-2-[(1R)-1-(4-氧代环己基)乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (0.72 g, 2.5 mmol)在含DIPEA (0.87 mL, 4.9 mmol)的DCM (10 mL)中的溶液，在RT下搅拌所得反应混合物18 h，并在真空下浓缩该反应混合物。添加THF (4 mL)和MeOH (6 mL)至剩余的残余物中并冷却所得溶液至-78℃。逐滴添加2M LiBH4/THF (1.9mL, 3.8 mmol)并经3 h逐渐温热至RT。采用DCM/CHCl3 (100 mL)和50%饱和NaHCO3溶液(50mL) 的1:1混合物稀释该反应混合物，分离各所得层，经MgSO4干燥合并的有机萃取物，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用10-50%的10% MeOH/DCM和DCM的混合物的梯度洗脱以在溶剂蒸发之后提供标题化合物(0.40 g, 42%收率)。ES/MS(m/z): 389 (M+H)。
使用相应的取代的氮杂环丁烷基本上通过制备例74的方法制备以下化合物。
制备例编号 化学名称 结构 ES/MS (m/z)(M+H)
75 2-{(1R)-1-[反式-4-(氮杂环丁烷-1-基)环己基]乙基}-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮. 333
76 2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(环丙基甲氧基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 403
77 3-甲基-2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(丙-2-基氧基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 391
78 3-甲基-2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 399
79 3-甲基-2-[(1R)-1-(反式-4-{3-[(3S)-四氢呋喃-3-基氧基]氮杂环丁烷-1-基}环己基)乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 419
80 3-甲基-2-[(1R)-1-(反式-4-{3-[(3R)-四氢呋喃-3-基氧基]氮杂环丁烷-1-基}环己基)乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 419
制备例81
2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(甲氧基甲基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
在N2下在RT下搅拌 3-(甲氧基甲基)氮杂环丁烷盐酸盐(368 mg, 2.67 mmol)和DIPEA(400 mg, 3.06 mmol)在MeOH (5 mL)中的混合物10 min，添加3-甲基-2-[(1R)-1-(4-氧代环己基)乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (400 mg, 1.37 mmol)，并搅拌该混合物4 h。冷却至-78℃，缓慢添加2M LiBH4/THF (0.90 mL, 1.8 mmol)并逐渐温热至RT过夜。在真空下浓缩该混合物，采用饱和NaHCO3水溶液稀释所得残余物，采用DCM萃取，并分离所得层。经MgSO4干燥有机层，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-80%的(10% 2N NH3 MeOH溶液)/DCM和DCM的混合物的梯度洗脱。合并含期望产物的各级分并在真空下浓缩。对所得残余物施以经C-18-硅胶(40 g)的反相层析，采用10mM NH4HCO3, pH 10, （在5% MeOH/水和ACN中）洗脱，使用100% 10 mM NH4HCO3（在5% MeOH/水中）的不连续梯度(step gradient)持续5 min，然后25% ACN/10 mM NH4HCO3（在5% MeOH/水中）持续5 min，然后25%-90% ACN/10 mM NH4HCO3（在5% MeOH/水中）的线性梯度进行。合并各纯级分并在真空下浓缩以提供标题化合物(114 mg, 22%收率)。ES/MS (m/z): 377 (M+H)。
制备例82
5-{[2-(苄氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基]甲基}-2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(环丙基氧基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
在RT下经30 min缓慢添加0.7M KHMDS/甲苯(1.2 mL, 0.84 mmol)至2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(环丙氧基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (230 mg, 0.59 mmol)在THF (10 mL)中的溶液并再搅拌30 min。逐滴添加2-苄氧基-3-(氯甲基)-4,6-二甲基-吡啶 (200 mg, 0.76 mmol)在THF (5 mL)中的溶液并在RT下搅拌18 h。加热该反应混合物至55℃，搅拌1 h，冷却至RT，倾倒至冰冷的NaHCO3水溶液中，并采用EtOAc萃取。分离各层，用饱和NaCl水溶液洗涤有机萃取物，经MgSO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，用10-50% EtOAc/己烷的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得标题化合物 (210 mg, 57%收率)。ES/MS (m/z): 614 (M+H)。
基本上通过制备例82的方法和适当取代的6,7-二氢-5H-噻吩并[3,2-c]吡啶-4-酮制备以下化合物。
制备例编号 化学名称 结构 ES/MS(m/z) (M+H)
83 2-{(1R)-1-[反式-4-(氮杂环丁烷-1-基)环己基]乙基}-5-{[2-(苄氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基]甲基}-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 558
84 5-{[2-(苄氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基]甲基}-2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(甲氧基甲基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 602
85 5-{[2-(苄氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基]甲基}-2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(环丙基甲氧基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 628
86 5-{[2-(苄氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基]甲基}-3-甲基-2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(丙-2-基氧基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 616
87 5-{[2-(苄氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基]甲基}-3-甲基-2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 624
88 5-{[2-(苄氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基]甲基}-3-甲基-2-[(1R)-1-(反式-4-{3-[(3S)-四氢呋喃-3-基氧基]氮杂环丁烷-1-基}环己基)乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 644
89 5-{[2-(苄氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基]甲基}-3-甲基-2-[(1R)-1-(反式-4-{3-[(3R)-四氢呋喃-3-基氧基]氮杂环丁烷-1-基}环己基)乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 644
制备例90
5-[(1R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-2-(2-{[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]氨基}乙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
在Parr 反应器中溶解2-(2-{[(苄氧基)羰基]氨基}乙基)-5-[(1R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(77 g, 153.5 mmol)和2-甲氧基-4,6-二甲基-吡啶-3-甲醛 (23.3 g, 140 mmol)至EtOH (500 mL)中并添加Pd(OH)2/C（20%干基，水润）(11.5 g)。用H2 (100 psi)填充容器并在50℃下搅拌3.5 h。在冷却至RT之后，通过硅藻土过滤该混合物并用EtOH洗涤。在真空下浓缩滤液，添加甲苯(800 mL)至残余物，并继续挥发物的部分蒸馏至最终约400 g的重量，以获得甲苯中溶液形式的标题化合物，其适合不经另外纯化即用于接下来的步骤。蒸发样品的ES/MS (m/z): 517 (M+H)。
制备例91
2-(2-{[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]氨基}乙基)-4-甲基-5-[(1R)-1-(4-氧代环己基)乙基]噻吩-3-甲酸甲酯
向来自制备例90的5-[(1R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-2-(2-{[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]氨基}乙基)-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯的粗甲苯溶液(约76g)添加1M HCl水溶液 (800 mL)并在RT下搅拌1 h。分离各层，用2M HCl水溶液 (2 x 50mL)顺序地洗涤有机层，并用甲苯 (100 mL)洗涤合并的酸性水层。添加甲苯(0.4 L)至水层并添加6M K2CO3水溶液至pH 9，搅拌5 min，分离各相，用饱和NaCl水溶液洗涤有机层，然后通过Na2SO4的短垫。用甲苯进一步冲洗Na2SO4垫以获得标题化合物的粗甲苯溶液(约体积1L)，其适合不经另外纯化即用于接下来的步骤。蒸发样品的ES/MS (m/z): 473 (M+H)。
制备例92
5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-(4-氧代环己基)乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
添加AcOH (9 mL, 157.1 mmol)至2-(2-{[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]氨基}乙基)-4-甲基-5-[(1R)-1-(4-氧代环己基)乙基]噻吩-3-甲酸基酯的粗溶液(1 L, 约79 g, 来自制备例91)并在90℃下搅拌2 h。用2M HCl水溶液 (总0.15 L)洗涤该混合物两次，并用水、1M K3PO4水溶液和饱和NaCl水溶液(各0.1 L)顺序地各一次。经MgSO4干燥有机层，过滤，并在真空下蒸发滤液以获得橙色粘稠油形式的标题化合物(40.98 g, 48.5%收率)。ES/MS (m/z): 441 (M+H)。
制备例93
5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-2-{(1R)-1-[反式-4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]乙基}-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
添加DIPEA (29 mL, 21.5 g, 166 mmol)至3-甲氧基氮杂环丁烷盐酸盐(18.7 g, 151mmol)在MeOH (280 mL)中的溶液并在RT下搅拌30分钟。添加该混合物至5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-(4-氧代环己基)乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (27.55 g, 56.28 mmol)，在RT下在N2下搅拌1.5 h，然后添加THF(50 mL)。冷却该反应至-70℃并经30分钟添加2M LiBH4/THF (40 mL, 80 mmol)。在相同的温度下搅拌该反应2 h。通过将该反应经10 min缓慢倾倒至1M HCl水溶液(约1 L)中淬灭该反应。用MTBE (2 × 0.25 L)洗涤，然后采用2M K3PO4水溶液处理水相至pH 9并用EtOAc(约0.5 L)萃取。用3M K2CO3水溶液和饱和NaCl水溶液(各约100 mL)顺序地洗涤有机相，经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用10-25%的20% 7N NH3/MeOH在EtOAc中的溶液的梯度洗脱以提供白色固体形式的标题化合物(19.5g, 68%收率)。ES/MS (m/z): 512 (M+H)。
制备例94
5-[2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
和
5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-[反式-4-[3-(5-甲基吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基]乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4-酮 (位置异构体混合物)
在RT下搅拌1-(氮杂环丁烷-3-基)-3-甲基-1H-吡唑和1-(氮杂环丁烷-3-基)-5-甲基-吡唑 (0.53 g, 3.59 mmol, 位置异构体混合物)的混合物、DIPEA (1.37 mL, 7.79 mmol)和4N HCl/二氧六环 (1.8 mL, 7.190 mmol)在MeOH (5 mL)中的溶液30 min。将其添加至5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-(4-氧代环己基)乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (600 mg, 1.2 mmol)在MeOH (19 mL)中的溶液并在RT下搅拌2 h。冷却该混合物至-78℃并添加2M LiBH4在THF中的溶液(0.78 mL, 1.56mmol)；逐渐温热至RT并搅拌该反应混合物过夜。在真空下浓缩该反应混合物。对所得残余物施以经SCX (25 g药筒)上的层析，采用MeOH (2 x 100 mL)然后2N NH3在MeOH中的溶液洗脱。在真空下浓缩MeOH/NH3级分以提供位置异构体混合物形式的浅黄色油标题化合物(0.51 g, 65%收率)。ES/MS (m/z): 562 (M+H)。
使用5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-(4-氧代环己基)乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮和适当取代的氮杂环丁烷基本上通过制备例94的方法制备以下化合物。
制备例编号 化学名称 结构 ES/MS(m/z) (M+H)
95 5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-{4-[3-(4-甲基-1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 562
96 5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-{4-[3-(吡咯烷-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 551
97 5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-{4-[3-(吗啉-4-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 567
98 5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-{4-[3-(1H-1,2,3-三唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 549
制备例99
5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-2-[(1R)-1-{4-[3-(2-甲氧基乙氧基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (非对映异构体的混合物)
添加DIPEA (0.45 mL, 2.49 mmol)至3-(2-甲氧基乙氧基)氮杂环丁烷盐酸盐(0.42g, 2.38 mmol)在MeOH (5.6 mL)中的溶液并在RT下 搅拌30 min。添加5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-(4-氧代环己基)乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (0.62 g, 1.12 mmol)并在RT下搅拌过夜。冷却该混合物至-78℃，添加2M LiBH4在THF中的溶液(0.74 mL, 1.47 mmol)，温热至RT并搅拌过夜。添加饱和NaHCO3水溶液，采用EtOAc萃取并分离各层。经Na2SO4干燥有机相，过滤，并在真空下浓缩滤液以获得油形式的标题化合物(0.5 g, 98%收率)。ES/MS (m/z): 556 (M+H)。
制备例100
2-{(1R)-1-[反式-4-(苄基氨基)环己基]乙基}-5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
在RT下搅拌苄胺(0.257 g, 2.397 mmol)、DIPEA (0.95 mL, 5.39 mmol)和4N HCl/二氧六环 (600 μL, 2.397 mmol)在MeOH (5 mL)中的溶液30 min。添加该混合物至5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-(4-氧代环己基)乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (0.6 g, 1.2 mmol)在MeOH (19 mL)中的溶液并在RT下搅拌所得混合物18 h。冷却该混合物至-70℃并添加2M LiBH4在THF中的溶液(0.78 mL,1.558 mmol)。使其逐渐温热至室温。添加冰冷饱和NaHCO3溶液，采用EtOAc (100 mL)萃取，分离各层，采用饱和NaCl水溶液洗涤有机萃取物，并经Na2SO4干燥有机萃取物。过滤并在真空下浓缩滤液以获得黄色油形式的标题化合物(0.75 g, 99%收率)，其适合不经另外纯化即使用。ES/MS (m/z): 532 (M+H)。
制备例101
2-[(1R)-1-(反式-4-氨基环己基)乙基]-5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
2-{(1R)-1-[反式-4-(苄基氨基)环己基]乙基}-5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (750 mg, 1.19 mmol)在MeOH(20 mL)中的溶液。添加10% Pd-C (500 mg, 0.474 mmol)并在H2下在30 psi下在RT下搅拌过夜。通过硅藻土过滤并采用MeOH洗涤。蒸发滤液以获得黄色油形式的标题化合物(0.5 g,80%收率)，其适合不经另外纯化即使用。ES/MS (m/z): 442 (M+H)。
制备例102
2-{(1R)-1-[反式-4-(二甲基氨基)环己基]乙基}-5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
2-[(1R)-1-(反式-4-氨基环己基)乙基]-5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (0.5 g, 0.95 mmol)在MeOH (10mL)中的溶液。添加AcOH (172 mg, 2.85 mmol)、37%甲醛水溶液(232 mg, 2.853 mmol)。采用冰浴冷却该溶液并添加三乙酰氧基硼氢化物(605 mg, 2.853 mmol)。使其逐渐温热至RT并搅拌过夜。添加冰冷的饱和NaHCO3溶液，采用DCM (2 x 100 mL)萃取。分离各层，合并有机相，并采用饱和NaCl 水溶液洗涤合并的有机萃取物。经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液以获得黄色油形式的标题化合物 (390 mg, 70%收率)，其适合不经另外纯化即使用。ES/MS (m/z): 470 (M+H)。
制备例103
5-{[2-(苄氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基]甲基}-2-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(甲基)氨基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
在0℃下向2-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(甲基)氨基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (0.51 g, 1.53 mmol)/THF (5 mL)添加1M KHMDS在THF中的溶液(2.14 mL, 2.14 mmol)。温热至RT 并在15 min之后添加2-苄氧基-3-(氯甲基)-4,6-二甲基-吡啶 (0.60 g, 2.29 mmol)。在RT下搅拌约17 h，然后采用饱和NH4Cl水溶液(1 mL)淬灭。采用EtOAc (40 mL)和水(5 mL)稀释该混合物，分离该有机层，经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液以获得黄色油形式的标题化合物 (0.94 g, 92%收率)，其适合不经另外纯化即使用。ES/MS (m/z): 562 (M+H)。
制备例104
5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[甲基(4-氧代环己基)氨基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
向粗5-{[2-(苄氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基]甲基}-2-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(甲基)氨基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (0.94 g, 1.4 mmol)/THF(14 mL)添加1M HCl水溶液(14 mL, 14 mmol)，加热该混合物至50℃持续8 h并在RT下搅拌2天。添加固体NaHCO3 (1.8 g, 21 mmol)和EtOAc (125 mL)，分离该有机层，并经Na2SO4干燥。过滤并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-10% 7N 甲醇氨/DCM的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得黄色泡沫形式的标题化合物(0.408 g, 62%收率)。ES/MS (m/z): 428 (M+H)。
制备例105
2-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(乙基)氨基]-5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
在两个分开的批次中，在RT下经30 min缓慢添加0.91M 双(三甲基甲硅烷基)氨基钾在THF中的溶液(22 mL, 20 mmol)至2-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(乙基)氨基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (6 g, 17.12 mmol)在THF (70 mL)中的溶液。在RT下再搅拌所得混合物30 min，然后逐滴添加3-(氯甲基)-2-甲氧基-4,6-二甲基-吡啶 (3.4g, 18 mmol)/THF (10 mL)。在RT下搅拌所得混合物过夜。合并两个混合物，倾倒至冰冷饱和NaHCO3水溶液中，并采用EtOAc萃取。分离各相，经MgSO4干燥有机萃取物，过滤，并在真空下浓缩滤液以获得黄色胶形式的标题化合物(总计18.55 g, 定量收率)，其适合不经另外纯化即使用。ES/MS (m/z): 500 (M+H)。
制备例106
2-[乙基(4-氧代环己基)氨基]-5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
添加6M HCl水溶液(20 mL, 120 mmol)至粗2-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(乙基)氨基]-5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (18.05 g, 36.12 mmol)在THF (20 mL)中的溶液。在50℃下加热所得混合物2 h，并在RT下搅拌过夜。将该反应混合物倾倒至冰冷的饱和NaHCO3水溶液，采用DCM萃取，分离各层，并在真空下浓缩该有机层。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用10-50% EtOAc/己烷的梯度洗脱以在溶剂蒸发后获得浅黄色油形式的标题化合物(4.01 g, 24%收率)。ES/MS (m/z): 456 (M+H)。
制备例107
5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-[乙基(4-氧代环己基)氨基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
在密封管中，添加2-[乙基(4-氧代环己基)氨基]-5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (6.3 g, 14 mmol)在DMF (50mL)中的溶液，冷却该管至0℃，并添加LiCl (3 g, 70 mmol)，然后添加PTSA (13 g, 72mmol)。在70℃下加热所得混合物2 h。冷却至RT，并缓慢倾倒至冰冷饱和NaHCO3水溶液(400mL)。过滤沉淀固体并用水洗涤。将该固体转移至圆底烧瓶，采用MeOH稀释，并在真空下浓缩。在真空下采用MeOH和THF使固体再次共沸，然后在真空炉中干燥该残余物过夜以获得棕色固体形式的标题化合物(6.1 g, 100%收率)。ES/MS (m/z): 442 (M+H)。
制备例108
2-{[反式-4-(苄基氨基)环己基](乙基)氨基}-5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
向圆底烧瓶添加苯基甲胺(0.445 mL, 4.076 mmol)、5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-[乙基(4-氧代环己基)氨基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (0.600 g, 1.359 mmol)至THF (25 mL)和MeOH (5 mL)，并在RT下搅拌过夜。冷却该反应混合物至-78℃并逐滴添加2M LiBH4/THF (1.698 mL, 3.397 mmol)。将该反应置于冰浴中并在搅拌下使其温热至RT持续3 h。采用饱和NaHCO3水溶液淬灭该反应混合物并用DCM稀释。分离有机层并采用DCM另外萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-10% MeOH/DCM的梯度洗脱，并在真空下浓缩反式-和顺式-异构体的所得混合物。对所得混合物施以反相层析，采用10-75% ACN（在10 mM NH4CO3水溶液/水中）的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得白色固体形式的标题化合物(0.132 g, 18%收率)。ES/MS (m/z): 533 (M+H)。
制备例109
2-[(反式-4-氨基环己基)(乙基)氨基]-5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
向圆底烧瓶添加湿润 90% EtOH (0.89 mL)中的2-{[反式-4-(苄基氨基)环己基](乙基)氨基}-5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (0.095 g, 0.178 mmol)、10% Pd/C(0.095 g)和NH4HCO2 (0.057g, 0.892 mmol)。采用N2脱气10 min，密封该反应容器，并在90℃下加热过夜。冷却该反应混合物至RT，通过硅藻土过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用7-100% 87.5:11:1.5的DCM:MeOH:NH4OH溶液/ DCM的梯度洗脱以在溶剂蒸发之后获得白色粉末形式的标题化合物(0.045 g, 57%收率)。ES/MS (m/z): 443 (M+H)。
制备例110
4-(乙基{5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基}氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
向圆底烧瓶添加含KHMDS在THF中的溶液(0.91M, 2.6 mL, 2.348 mmol)的THF (20mL)中的4-[乙基(3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.770 g, 1.957 mmol)和3-(氯甲基)-2-甲氧基-4,6-二甲基-吡啶(0.436 g,2.348 mmol)。在RT下搅拌该反应混合物4 h，采用冰冷饱和NaHCO3水溶液淬灭，采用EtOAc稀释，分离各层，并采用另外的EtOAc萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液以获得黄色油形式的标题化合物(1.17 g, 99%收率)，其足以不经另外纯化即使用。ES/MS (m/z): 543 (M+H)。
制备例111
2-(乙基{4-[(2-甲氧基乙基)(甲基)氨基]环己基}氨基)-5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (顺式-和反式-非对映异构体的混合物)
添加2-[乙基(4-氧代环己基)氨基]-5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (0.57 g, 1.25 mmol)至2-甲氧基乙胺(0.19 g, 2.64 mmol)在MeOH (10 mL)中的溶液并搅拌该混合物4 h。冷却至-78℃并添加2M LiBH4在THF中的溶液(0.82 mL, 1.63 mmol)。缓慢升高温度至RT并搅拌1 h。在真空下浓缩该混合物，添加饱和NaHCO3水溶液，采用EtOAc萃取，分离所得各层，经Na2SO4干燥有机层，过滤，并在真空下浓缩滤液。溶解所得残余物在DCM (6.2 mL)中并添加37% 甲醛/H2O(0.27 mL, 3.7 mmol)，在RT下搅拌所得混合物15 min，然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.06 g, 5.03 mmol)并在RT下搅拌所得混合物过夜。将该反应混合物的内容物装载至SCX药筒上，首先采用MeOH然后采用2M NH3/MeOH洗脱，并在真空下浓缩甲醇氨级分以在溶剂蒸发之后获得油形式的标题化合物(0.57 g, 86%收率)。ES/MS (m/z): 529 (M+H)。
制备例112
2-[{4-反式-[环丙基(甲基)氨基]环己基}(乙基)氨基]-5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
添加2-[乙基(4-氧代环己基)氨基]-5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (0.57 g, 1.26 mmol)至环丙胺(0.15 g,2.641 mmol)在MeOH (10 mL)中的溶液并搅拌该混合物4 h。冷却至-78℃，并添加2M LiBH4在THF中的溶液(0.82 mL, 1.64 mmol)。缓慢温热该反应混合物至RT并搅拌1 h。在真空下除去溶剂，添加饱和NaHCO3水溶液，采用EtOAc萃取，分离所得各层，并经Na2SO4干燥有机相。过滤并在真空下浓缩滤液。溶解所得残余物在DCM (6.2 mL)中，添加37% 甲醛在H2O中的溶液(0.27 mL, 3.77 mmol)并搅拌15 min。然后，添加三乙酰氧基硼氢化钠(0.8 g, 5.03mmol)并在RT下搅拌过夜。将该反应混合物直接装载至SCX药筒上，首先采用MeOH然后采用2M NH3/MeOH洗脱。在真空下浓缩甲醇氨级分以在溶剂蒸发之后获得油(0.56 g, 87%收率)，其适合不经另外纯化即使用。ES/MS (m/z): 511 (M+H)。
制备例113
2-溴-5-{[反式-4-(3-乙氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基](乙基)氨基}-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
2-溴-5-[乙基(4-氧代环己基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(2.17 g, 5.80 mmol)在DCM (20 mL)中的粗样品添加异丙醇钛(IV)(6.79 g, 23.2 mmol)和3-乙氧基氮杂环丁烷盐酸盐(1.60 g, 11.6 mmol)。在RT下搅拌该反应约18 h。添加THF (20 mL)，然后在真空下浓缩该混合物至约20 mL。冷却所得混合物至-78℃，然后添加MeOH (25 mL)，然后滴加2MLiBH4/THF (4.34 mL, 8.70 mmol)。搅拌所得混合物约3 h，然后除去冷浴并使该混合物缓慢温热至RT。采用EtOAc (200 mL)和饱和NaHCO3水溶液(50 mL)稀释该反应混合物，过滤掉固体，在真空下浓缩滤液，采用EtOAc (50 mL)稀释残余物，并再次过滤固体。在真空下浓缩有机层以获得黄色胶形式的标题化合物(2.25 g, 78 %收率)，其适合不经异构体分离或进一步层析即使用。ES/MS (m/z): (79Br/81Br) 459/461 (M+H)。
制备例114
2-{2-[(叔丁氧基羰基)氨基]乙基}-5-{[反式-4-(3-乙氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基](乙基)氨基}-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
添加水(0.6 mL)中的N-[2-(三氟硼酸根)乙基]氨基甲酸叔丁酯钾(0.47 g, 1.8mmol)和碳酸铯(0.89 g, 2.7 mmol, 0.89 g)至粗2-溴-5-{[反式-4-(3-乙氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基](乙基)氨基}-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(0.68 g, 1.4 mmol)在甲苯(6mL)中的溶液，然后添加乙酸钯(II) (0.031 g, 0.14 mmol)和2-二环己基膦-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯 (0.13 g, 0.27 mmol)。采用流动的N2使所得混合物脱气。在100℃下加热所得混合物约2 h，采用EtOAc (60 mL)稀释该混合物，并分离各层。经Na2SO4干燥有机层，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-10% 7N NH3在MeOH/DCM中的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得黄色胶形式的标题化合物(0.401 g, 44%收率)。ES/MS (m/z): 524 (M+H)。
制备例115
2-(2-氨基乙基)-5-{[反式-4-(3-乙氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基](乙基)氨基}-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
在RT下添加4M HCl/二氧六环 (5 mL, 20 mmol)至2-{2-[(叔丁氧基羰基)氨基]乙基}-5-{[反式-4-(3-乙氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基](乙基)氨基}-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(0.401 g, 0.605 mmol)/DCM (5 mL)。在RT下搅拌该反应约2 h并在真空下浓缩该混合物。添加MeOH (5 mL)，并在真空下再次浓缩该混合物。采用DCM (25 mL)稀释所得残余物，采用饱和NaHCO3水溶液(3 mL)洗涤，分离各层，并经Na2SO4干燥有机层。过滤并在真空下浓缩滤液以获得黄色胶形式的粗标题化合物(0.380 g, 95%收率)，其适合不经另外纯化即使用。ES/MS (m/z): 424 (M+H)。
制备例116
2-{[反式-4-(3-乙氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基](乙基)氨基}-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
加热2-(2-氨基乙基)-5-{[反式-4-(3-乙氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基](乙基)氨基}-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(0.380 g, 0.574 mmol)/MeOH (4 mL)至回流持续3 h，在真空下浓缩该反应混合物，并对该残余物施以C-18硅胶上的反相层析(WATERSTM XBRIDGE® OBD, 30 x 75 mm, 5 μm)，采用20-90% ACN/含5% MeOH 的10 mM NH4CO3水溶液的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得灰白色胶形式的标题化合物 (0.113 g, 50%收率)。ES/MS (m/z): 392 (M+H)。
制备例117
5-{[2-(苄氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基]甲基}-2-{[反式-4-(3-乙氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基](乙基)氨基}-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
在冰浴中冷却2-{[反式-4-(3-乙氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基](乙基)氨基}-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (0.113 g, 0.289 mmol)/THF (2 mL)，添加1MKHMDS/THF (0.404 mL, 0.404 mmol)，除去冰浴，温热至RT并搅拌该混合物30 min。逐滴添加2-苄氧基-3-(氯甲基)-4,6-二甲基-吡啶 (0.113 g, 0.433 mmol)/THF (2 mL)。在RT下搅拌该反应混合物22 h。采用饱和NH4Cl水溶液(2 mL)淬灭该反应混合物，采用EtOAc (40mL)萃取，分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-10% 7N NH3/ MeO在DCM中的梯度洗脱，以获得黄色胶形式的标题化合物(0.084 g, 45%收率)。ES/MS (m/z): 617 (M+H)。
制备例118
5-[(4-氯-2-乙氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲基]-2-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(乙基)氨基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
一次性添加粉末状KOH (0.427 g, 7.53 mmol)至2-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(乙基)氨基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (0.660 g, 1.88 mmol)在THF(10 mL)中的溶液。搅拌所得混合物30 min，添加4-氯-3-(氯甲基)-2-乙氧基-6-甲基吡啶(0.500 g, 2.27 mmol)/THF (1 mL)，并在RT下搅拌所得混合物过夜。采用饱和NaHCO3水溶液淬灭该混合物，采用DCM萃取，分离各层，经无水Na2SO4干燥有机相，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-100% EtOAc/己烷的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得浅黄色油形式的标题化合物 (0.988 g, 98%收率)。ES/MS (m/z): (35Cl/37Cl) 534/536 (M+H)。
制备例119
5-[(4-氯-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-[乙基(4-氧代环己基)氨基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
添加LiCl (0.395 g, 9.22 mmol)和PTSA (1.67 g, 9.21 mmol)至5-[(4-氯-2-乙氧基-6-甲基吡啶-3-基)甲基]-2-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(乙基)氨基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (0.985 g, 1.84 mmol)在DMF (20 mL)中的溶液并在70℃下加热所得混合物1 h。升高温度至90℃，搅拌5 h，冷却该混合物至RT，添加水并在RT下搅拌过夜。用饱和NaHCO3水溶液淬灭该混合物，采用DCM萃取，分离所得各层，并采用5%LiCl水溶液洗涤有机相。分离各层，经无水Na2SO4干燥有机相，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-50% EtOAc/己烷的梯度，然后0-20% MeOH/DCM的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得橙色油形式的标题化合物(0.450 g, 26%收率)。ES/MS(m/z): (35Cl/37Cl) 462/464 (M+H)。
制备例120
2-(3-{[(苄氧基)羰基]氨基}丙-1-炔-1-基)-5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(乙基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
添加TEA (55.6 g, 550.0 mol)至2-溴-5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(甲基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯 (7.9 g, 19.0 mmol)、CuI (1.5 g, 7.90 mmol)和N-丙-2-炔基氨基甲酸苄酯(8.9 g, 47 mmol)在THF (200 mL)中的混合物。采用流动的N2将该混合物脱气并添加双(三苯基膦)二氯化钯(II)(2.8 g, 3.9 mmol)。在RT下搅拌该混合物过夜。经硅藻土过滤该反应混合物，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-60% EtOAc/己烷的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得标题化合物(8.2 g, 82%收率)。ES/MS(m/z): 513 (M+H)。
制备例121
2-(3-氨基丙基)-5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(乙基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
向加压容器添加2-(3-{[(苄氧基)羰基]氨基}丙-1-炔-1-基)-5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(乙基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(7.6 g, 14 mmol)在含TEA (1.0 mL, 7.1mmol)和10% Pd/C(3 g, 2.82 mmol)的MeOH (200 mL)中的溶液。采用H2 (414 kPa)填充该反应容器并搅拌4 h。经硅藻土过滤该反应混合物，在真空下浓缩滤液至约150 mL，添加20% Pd(OH)2/C(2.0 g)，采用N2然后H2脱气，并在H2的气氛下搅拌过夜。经硅藻土床过滤该反应混合物，在真空下浓缩至约100 mL，添加20% Pd(OH)2/C(1.2 g)并在H2 (414 kPa)下搅拌过夜。经硅藻土过滤该反应并在真空下浓缩滤液以获得棕色油形式的标题化合物(6.5 g,定量收率)，其适合不经另外纯化即使用。ES/MS (m/z): 397 (M+H)。
制备例122
2-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(乙基)氨基]-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮
添加KOtBu (3 g, 25 mmol)至2-(3-氨基丙基)-5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(乙基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(7.6 g, 19 mmol)在THF (200 mL)和TEA (1.0 mL,7.1 mmol)中的溶液。在80℃下加热该混合物4 h，冷却至RT，并添加水(100 mL)。在真空下浓缩全部混合物并采用少量MeOH处理所得残余物直到出现固体。过滤掉所得固体并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在C-18硅胶上的反相层析(Thermo Scientific HypersilGOLDTM)，采用0-50% ACN（含0.1%甲酸）和水（含0.1%甲酸）的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得浅棕色固体形式的标题化合物(1.7 g, 24%收率)。ES/MS (m/z): 365 (M+H)。
制备例123
2-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(乙基)氨基]-5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮
向2-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(乙基)氨基]-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮 (1.7 g, 4.7 mmol)在二甲亚砜(20 mL)和THF (20 mL)中的溶液添加粉末状KOH (1.1 g, 19 mmol)。搅拌该混合物30 min，然后添加3-(氯甲基)-2-甲氧基-4,6-二甲基-吡啶 (1.0 g, 5.4 mmol)。搅拌所得混合物1 h，将该混合物倾倒至冰冷NaHCO3水溶液，并采用DCM萃取。分离所得各层并在真空下浓缩有机相以获得棕色油形式的标题化合物(2.1 g, 61%收率)，其适合不经另外纯化即使用。ES/MS (m/z): 514 (M+H)。
制备例124
5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-[乙基(4-氧代环己基)氨基]-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮
添加LiCl (0.830 g, 19.4 mmol)和PTSA (3.5 g, 19 mmol)至2-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(乙基)氨基]-5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮 (2.0 g, 2.7 mmol, 约70%纯度)在DMF (20 mL)中的溶液并在70℃下加热所得混合物1 h。冷却该反应混合物至RT，倾倒至冰冷饱和NaHCO3水溶液，采用DCM (2 x 100 mL)萃取，并分离各层。在真空下浓缩合并的有机层。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-10% MeOH/DCM的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得浅棕色油形式的标题化合物(1.8 g, 通过分析LCMS测得的约85%纯度)。ES/MS (m/z): 456 (M+H)。
制备例125
2-(3-{[(苄氧基)羰基]氨基}丙-1-炔-1-基)-5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(甲基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
添加TEA (35.4 g, 350.0 mmol)至2-溴-5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(甲基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(5.40 g, 13.0 mmol)、CuI (0.987 g, 5.18 mmol)和N-丙-2-炔基氨基甲酸苄酯(3.17 g 14.3 mmol, 85%纯度)在1,4-二氧六环 (54 mL)中的悬浮液。采用流动的N2将该混合物脱气，添加双(三苯基膦)二氯化钯(II) (1.84 g, 2.59mmol)，在40℃下搅拌该混合物1 h，添加另外的N-丙-2-炔基氨基甲酸苄酯(3.17 g, 14.3mmol, 85%纯度)并在40℃下加热1 h。在真空下浓缩该反应混合物，添加DCM/己烷(约1:1)，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得棕色油状残余物施以在硅胶上的层析，采用0-75%MTBE/己烷的梯度洗脱，在真空下浓缩该层析级分，将所得残余物溶解于MeOH中，并在真空中再次浓缩以获得稠棕色残余物形式的标题化合物(5.23 g, 75%收率)。ES/MS (m/z):513 (M+H)。
制备例126
2-(3-氨基丙基)-5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(甲基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯
向在MeOH (45 mL)和EtOAc (15 mL)中的2-(3-{[(苄氧基)羰基]氨基}丙-1-炔-1-基)-5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(甲基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(5.23 g, 9.18mmol)添加TEA (6.40 mL, 45.9 mmol)和10% Pd/C(2.6 g, 2.4 mmol)。排空该反应容器并在RT下在H2 (345 kPa)下搅拌5 h。添加20% Pd(OH)2/C(2.78 g, 3.96 mmol)，排空该反应容器，装填H2，并在RT下搅拌约17 h。添加另外的20% Pd(OH)2/C(1.0 g, 1.4 mmol)，装填H2,，并在RT下搅拌4 h。在硅藻土床上过滤该反应混合物，并在真空下浓缩滤液。对该残余物施以在硅胶上的层析，采用0-12% 7N 甲醇NH3/DCM的梯度洗脱。在减压下浓缩层析级分，将所得残余物溶解在MeOH中并在真空中再次浓缩以获得黄色油形式的标题化合物(2.60g, 73%收率)。ES/MS (m/z): 383 (M+H)。
制备例127
2-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(甲基)氨基]-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮
添加KOtBu (20% wt. 在THF中, 5.46 g, 9.72 mmol)至2-(3-氨基丙基)-5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(甲基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(2.53 g, 6.48 mmol)在甲苯(25 mL)中的混合物。在120℃下搅拌1 h，冷却至RT，添加丙基膦酸酐(50% wt. 在乙酸乙酯中, 0.386 mL 0.648 mmol)并搅拌30 min。用饱和NH4Cl溶液淬灭该反应混合物，用EtOAc(约50 mL)稀释，并分离各层。经Na2SO4干燥有机层，过滤，并在真空下浓缩滤液以获得黄色油形式的标题化合物(2.21 g, 97%收率)，其适合不经另外纯化即使用。ES/MS (m/z): 351(M+H)。
制备例128
5-{[2-(苄氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基]甲基}-2-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(甲基)氨基]-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮
向2-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(甲基)氨基]-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮 (2.21 g, 6.31 mmol) 在THF (10 mL)和二甲亚砜(10 mL)中的溶液一次性添加粉末状KOH (1.43 g, 25.2 mmol) ，搅拌30 min，然后添加溶解在THF (2 mL)中的2-苄氧基-3-(氯甲基)-4,6-二甲基-吡啶 (1.98 g, 6.81 mmol, 90%纯度)。在RT下搅拌所得混合物4 h，然后倾倒至冰冷NaHCO3水溶液，并采用DCM萃取。分离各层并在真空下浓缩该有机层。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-50% EtOAc/己烷的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得标题化合物 (3.2 g, 86%收率)。ES/MS (m/z): 576 (M+H)。
制备例129
5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[甲基(4-氧代环己基)氨基]-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮
添加LiCl (1.4 g, 33 mmol)和PTSA (5.8 g, 32 mmol)至5-{[2-(苄氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基]甲基}-2-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(甲基)氨基]-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮 (3.2 g, 5.4 mmol)在DMF (30 mL)中的溶液。在70℃下加热1 h，冷却至RT，倾倒至冰冷饱和NaHCO3水溶液，并采用DCM稀释。分离所得各层并在真空下浓缩有机层。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-5% 7N 甲醇NH3/DCM的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得白色固体形式的标题化合物(1.7 g, 60%收率)。ES/MS (m/z):442 (M+H)。
制备例130
5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基-3-吡啶基)甲基]-2-[(1R)-1-{反式-4-[2-甲氧基乙基(甲基)氨基]环己基}乙基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4-酮
溶解2-甲氧基乙胺(100 mg, 1.33 mmol)在MeOH (4 mL)中并添加5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-(4-氧代环己基)乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (160 mg, 0.36 mmol)。搅拌该混合物4 h。冷却至-78℃并逐滴添加2MLiBH4/THF (235 μL, 0.47 mmol)。搅拌所得混合物15分钟并伴随搅拌温热至RT持续1 h。在真空下浓缩该反应混合物并采用DCM和饱和NaHCO3水溶液稀释。分离各层，采用另外的DCM萃取水相，合并有机萃取物，并经MgSO4干燥有机相。过滤并浓缩滤液以获得油形式的粗5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基-3-吡啶基)甲基]-2-[(1R)-1-{反式-4-[(2-甲氧基乙基氨基)环己基]乙基}-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4-酮 (150 mg, 83%收率)，其足以不经另外纯化即用于接下来的步骤。ES/MS (m/z): 500 (M+H)。
溶解粗5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基-3-吡啶基)甲基]-2-[(1R)-1-{反式-4-[(2-甲氧基乙基氨基)环己基]乙基}-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4-酮 (100 mg, 0.20mmol)在DCM (2 mL)中并添加37%甲醛水溶液(0.4 mL, 5.0 mmol)；在RT下搅拌该混合物15min。添加Na(OAc)3BH (170 mg, 0.80 mmol)并在RT下搅拌该混合物约3 h。添加另外的37%甲醛水溶液(1.5 mL, 18.75 mmol)至该反应混合物并在RT下搅拌2 h。在真空下浓缩该反应混合物并添加DCM (25 mL)。将该混合物进一步悬浮在含TEA (1.5 mL, 11 mmol)的MeOH(8 mL)中。添加37%甲醛水溶液(6 mL, 80.0 mmol)。在RT下搅拌该混合物1 h。添加Na(OAc)3BH (300 mg, 1.42 mmol)并在RT下搅拌所得混合物约4 h。采用DCM (40 mL)和饱和NaHCO3水溶液(1.0 mL)稀释该反应。分离各层，经MgSO4干燥有机相并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-10% MeOH/DCM的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得标题化合物 (48 mg, 47%收率)。ES/MS (m/z): 514 (M+H)。
制备例131
5-[(1R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-2-[3-[(2-甲氧基-4,6-二甲基-3-吡啶基)甲基氨基]丙基]-4-甲基-噻吩-3-甲酸甲酯
在100 psi下在60℃下对-(3-{[(苄氧基)羰基]氨基}丙-1-炔-1-基)-5-[1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基(甲基)氨基]-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(803 g, 1.57 mol)、2-甲氧基-4,6-二甲基-吡啶-3-甲醛 (314.5 g, 1.90 mol)和活性炭载钯Pd(OH)2(298 g)在EtOH (7.5L)中的溶液进行加氢。在停止H2吸收(18 h)之后，冷却该反应并通过硅藻土过滤所得混合物，采用EtOH (2 L)冲洗。在减压下除去溶剂以提供油形式的标题化合物(892 g, >99%收率)。ES/MS (m/z): 531 (M+H)。
制备例132
5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-(4-氧代环己基)乙基]-7,8-二氢-6H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮
添加三甲基硅醇钾(256.7 g, 2.0 mol)至5-[(1R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)乙基]-2-[3-[(2-甲氧基-4,6-二甲基-3-吡啶基)甲基氨基]丙基]-4-甲基-噻吩-3-甲酸甲酯(531.4 g, 1.0 mol)在THF (6.4 L)中的溶液。在65℃下加热该混合物18 h，冷却至5℃，并顺序地添加TEA (382 ml, 2.7 mol)和三乙胺盐酸盐(471 g, 3.4 mol)。在搅拌10 min之后，经30 min时间添加2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷-2,4,6-三氧化物/EtOAc (887 ml, 1.5 mol)同时保持温度为约5℃。在RT下搅拌该反应混合物过夜，并在23℃下添加2N HCl水溶液(5.0 L, 10.0 mol)。搅拌该反应16 h，采用EtOAc (6.5 L)稀释，并采用2M K3PO4 (6.5 L)中和。用饱和NaCl水溶液(3.2 L)洗涤有机层，分离各层，经Na2SO4干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩所得滤液。通过在硅胶(4 kg)上的层析纯化所得残余物，采用10至50% EtOAc/庚烷的梯度洗脱。采用庚烷(2.3 L)研磨经纯化的级分并在真空下在40℃下干燥以获得标题化合物(196.2 g, 43%收率)。ES/MS (m/z): 455 (M+H)。
制备例133
2-[(1R)-1-[4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]乙基]-5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-7,8-二氢-6H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮
添加5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-(4-氧代环己基)乙基]-7,8-二氢-6H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮 (246.3 g, 0.5418 mol)至3-甲氧基氮杂环丁烷盐酸盐(186.9 g, 1.51 mol)在含DIPEA (573 ml, 3.29 mol)的MeOH (2.9L)中的溶液。在RT下搅拌所得反应混合物过夜。添加THF (991 ml)并冷却该溶液至-72℃。经45 min逐滴添加2M LiBH4/THF溶液(379 ml, 0.758 mol)，同时保持内部温度低于-70℃。在搅拌2.5 h之后，通过经20 min添加该反应混合物至1M HCl水溶液(6.6 L)淬灭该反应。搅拌该混合物10 min并采用6M K2CO3水溶液(1.25 L)调节至pH约为9。浓缩所得混合物以除去挥发物并采用EtOAc (6 L)稀释剩余混合物水溶液。分离各层并采用3M K2CO3 (1.65 L)和饱和NaCl水溶液顺序地洗涤有机层。经Na2SO4干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩滤液。经硅胶(3.2 kg)纯化所得残余物，采用0至5% 7N NH3/MeOH在EtOAc中的混合物的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得标题化合物(208.6 g, 73%收率)。ES/MS (m/z): 526 (M+H)。
实施例1
5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-{(1R)-1-[反式-4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]乙基}-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
添加LiCl (9.83 g, 230 mmol)和PTSA (41.6 g, 230 mmol)至5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-2-{(1R)-1-[反式-4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]乙基}-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (23.5 g, 45.9 mmol)在DMF (188 mL)中的溶液。在50℃下搅拌所得混合物8 h并在RT下搅拌16 h。添加水(400 mL)和2M K2CO3水溶液(300 mL)，采用EtOAc (2 x 250 mL)萃取，分离各层，经MgSO4干燥合并的有机相，过滤，并在真空下浓缩滤液。将所得固体悬浮在庚烷(400 mL)中并在80℃下加热3 h。冷却该悬浮液，过滤，并在45℃下在真空下干燥16 h。将所得固体悬浮在二异丙醚(195 mL)中，在70℃下温热2 h，冷却该悬浮液，过滤，并在45℃下在真空下干燥16 h。将收集的固体悬浮在水(180 mL)中并在70℃下温热5 h，然后在RT下放置5 h。过滤所得固体并在真空下在45℃下干燥16 h以获得灰白色固体形式的标题化合物(16.6 g, 70%收率)。ES/MS (m/z): 498 (M+H). [α]D 20= -68.93o (c=1.0, MeOH)。
实施例2和3
实施例2：5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
实施例3：5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1H-吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-[4-[3-(5-甲基吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基]乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4-酮
在0℃下向5-[2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮和5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-[反式-4-[3-(5-甲基吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基]乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4-酮 (800 mg, 0.925 mmol, 位置异构体混合物)在DMF (5 mL)中的溶液中添加LiCl (198mg, 4.63 mmol)和PTSA (839 mg, 4.63 mmol)。在50℃下加热所得悬浮液过夜。添加冰冷饱和NaHCO3水溶液，用DCM (2 x 100 mL)萃取，分离各层，合并有机相，用饱和NaCl水溶液洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩滤液。使用40-60% 20 mM NH4HCO3水溶液(pH 9)/ACN的梯度，对所得残余物施以C-18硅胶上的反相层析 (XBRIDGETM, 5 μm, 19 x 100 mm,流速: 25 mL/min)，以在溶剂蒸发之后获得位置异构体混合物形式的浅黄色固体粉末状标题化合物(130 mg, 26%)。通过制备型SFC层析 (CHIRALPAK® IA, 35% EtOH (0.2% IPAm)/CO2, 21 x 250 mm )和基于1H和HSQC谱的指定结构分离所述位置异构体。位置异构体1(实施例2)：5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮, ES/MS (m/z): 548 (M+H), tR = 2.93 min (分析型SFC CHIRALPAK®IA, 35% (0.2% IPAm)/CO2, 5 mL/min, 225 nm, 5 x 25 mm)。1H NMR (400.1 MHz,CDCl3): δ 0.87-1.04 (m, 4H), 1.22 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.31-1.25 (m, 1H),1.60-1.69 (m, 1H), 1.69-1.79 (m, 1H), 1.86-1.91 (m, 1H), 1.92-2.01 (m, 1H),2.08-2.17 (m, 1H), 2.26 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.39 (s, 3H),2.79-2.89 (m, 3H), 3.33-3.43 (m, 2H), 3.62-3.71 (m, 2H), 3.77 (q, J= 6.8 Hz,2H), 4.71 (s, 2H), 4.85 (五重峰, J= 7.2 Hz, 1H), 5.92 (s, 1H), 6.01 (d, J=1.9 Hz, 1H), 7.36 (d, J= 2.0 Hz, 1H),12.53-12.55 (bs, 1H)。吡唑的C5表现出在HSQC谱中128.6 ppm的碳偏移。
位置异构体2 (实施例3)：5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1H-吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-[4-[3-(5-甲基吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基]乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4-酮, ES/MS (m/z): 548 (M+H), tR = 3.69 min (分析型SFCCHIRALPAK® IA, 35% (0.2% IPAm)/CO2, 5 mL/min, 225 nm, 5 x 25 mm). 1H NMR(400.1 MHz, CDCl3): δ 0.90-1.04 (m, 4H), 1.21 (d, J= 6.9 Hz, 3H), 1.25-1.31(m, 1H), 1.62-1.67 (m, 1H),1.79 (s, 1H), 1.84-1.91 (m, 1H), 1.99-2.01 (m,1H), 2.09-2.19 (m, 1H), 2.23 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.39 (s,3H), 2.81-2.89 (m, 3H), 3.50-3.56 (m, 2H), 3.62-3.71 (m, 2H), 3.79 (q, J= 6.7Hz, 2H), 4.71 (s, 2H), 4.81-4.88 (m, 1H), 5.92 (s, 1H), 5.99 (s, 1H), 7.43(d, J= 1.5 Hz, 1H), 12.32-12.34 (bs, 1H)。吡唑的C3表现出在HSQC 谱中138.4 ppm的碳偏移。
使用适当的5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1H-吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-[4-取代的-环己基]乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4-酮基本上通过实施例2的方法制备以下化合物并通过正向或反相层析法纯化。
实施例编号 化学名称 结构 ES/MS (m/z) (M+H)
4 5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(4-甲基-1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 548
5 5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(吡咯烷-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 537
6 5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(吗啉-4-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 553
7 5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(1H-1,2,3-三唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 535
8 2-{(1R)-1-[反式-4-(二甲基氨基)环己基]乙基}-5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 458
实施例9
2-[(1R)-1-[4-[3-(环丙氧基)氮杂环丁烷-1-基]环己基]乙基]-5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1H-吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4-酮
在90℃下搅拌5-{[2-(苄氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基]甲基}-2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(环丙基氧基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮(200 mg, 0.33 mmol)在THF (6 mL)和1N HCl (10 mL)中的混合物2 h。冷却至RT并将该混合物倾倒至含冰的饱和NaHCO3水溶液中，然后采用EtOAc萃取两次。用饱和NaCl水溶液洗涤合并的萃取物，经MgSO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用20-50% (10% 7N NH3 MeOH)/DCM和DCM的混合物的梯度洗脱以在溶剂蒸发之后获得66 mg的纯产物。使用10-75% ACN 在10 mM NH4HCO3 (pH 10)/水中的梯度，对较不纯的合并级分(在溶剂蒸发之后，54 mg)施以在C-18硅胶上的反相层析 (PhenomenexLUNA®, 5 μm C-18 AXIA®, 30 x 75 mm, 柱温25℃, 85 mL/min)。合并类似的级分，在真空下浓缩，并对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用20-50%的(10% 7N NH3/MeOH)/DCM和DCM的混合物洗脱，以在溶剂蒸发之后获得另外的22 mg标题化合物。合并两个经纯化的材料作为标题化合物(88 mg, 51%收率)。ES/MS (m/z): 524 (M+H). 1H NMR (400.1 MHz,CDCl3): 0.40-0.47 (m, 2H), 0.49-0.55 (m, 2H), 0.91-1.01 (m, 4H), 1.20 (d, J=6.9 Hz, 3H), 1.24-1.29 (m, 1H), 1.55-1.65 (m, 1H), 1.67-1.76 (m, 1H), 1.76-1.82 (m, 1H), 1.86-1.97 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.38 (s, 3H),2.77-2.89 (m, 5H), 3.17-3.22 (m, 1H), 3.57-3.69 (m, 4H), 4.71 (s, 2H), 4.20(五重峰, J= 6.0 Hz, 1H), 5.92 (s, 1H), 12.81-12.83 (bs, 1H)。
使用适当取代的5-[(2-苄氧基-4,6-二甲基-3-吡啶基)甲基]-2-[(1R)-1-[4-氮杂环丁烷-1-基]环己基]乙基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4-酮基本上通过实施例9的方法制备以下化合物。
实施例编号 化学名称 结构 ES/MS (m/z) (M+H)
10 5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(甲氧基甲基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 512
11 5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(丙-2-基氧基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 526
12 5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-{反式-4-[3-(1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 534
13 5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-(反式-4-{3-[(3S)-四氢呋喃-3-基氧基]氮杂环丁烷-1-基}环己基)乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 554
14 5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-(反式-4-{3-[(3R)-四氢呋喃-3-基氧基]氮杂环丁烷-1-基}环己基)乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 554
实施例12：1H NMR (399.8 MHz, CDCl3): 1.05-1.07 (m, 2H), 1.32-1.46 (m,2H), 1.83-1.85 (m, 2H), 1.93-1.94 (m, 2H), 2.14-2.16 (m, 1H), 2.25 (s, 3H),2.29 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.62 (s, 3H), 2.58-2.67 (m,1H), 2.76-2.80 (m,2H), 3.43-3.47 (m, 2H), 3.62-3.66 (m, 2H), 3.77-3.81 (m, 2H), 4.69 (s, 2H),4.92-4.95 (m, 1H), 5.90 (s, 1H), 6.24 (t, J= 2.0 Hz, 1H), 7.46 (d, J= 2.1 Hz,1H), 7.53 (d, J= 1.9 Hz, 1H). (未观察到可交换的NH质子)。
实施例15
2-{(1R)-1-[反式-4-(氮杂环丁烷-1-基)环己基]乙基}-5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
在H2下在60 psi 下搅拌2-{(1R)-1-[反式-4-(氮杂环丁烷-1-基)环己基]乙基}-5-{[2-(苄氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基]甲基}-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (190 mg, 0.34 mmol)和10% Pd/C(60 mg)在MeOH (15 mL)中的混合物过夜。经硅藻土床过滤该反应混合物并浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-60%的10% 7N NH3 MeOH /DCM在DCM中的混合物的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得标题化合物(117 mg, 73%收率)。ES/MS (m/z): 468 (M+H)。
实施例16
2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(环丙基甲氧基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
在62℃下搅拌5-{[2-(苄氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基]甲基}-2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(环丙基甲氧基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (96 mg, 0.15 mmol)、LiCl (34 mg, 0.79 mmol)和对甲苯磺酸一水合物(135 mg, 0.77 mmol)在DMF (3 mL)中的混合物1.5 h并在真空下浓缩该反应混合物。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-70%的10% 2N NH3/(MeOH/DCM)在DCM中的混合物的梯度洗脱以在溶剂蒸发之后获得标题化合物(40 mg, 48%收率)。ES/MS (m/z): 538 (M+H)。
实施例17和18
实施例17：5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-[(1R)-{反式-4-[3-(2-甲氧基乙氧基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基)]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
实施例18：5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-[(1R)-{顺式-4-[3-(2-甲氧基乙氧基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基)]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
添加LiCl (0.2 g, 5.57 mmol)和PTSA (1.01 g, 5.578 mmol)至5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-2-[(1R)-1-{4-[3-(2-甲氧基乙氧基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (0.62 g, 1.11 mmol,顺式-和反式-非对映异构体的混合物)在DMF (5.6 mL)中的溶液并在90℃下搅拌2 h。添加饱和NaHCO3水溶液，采用EtOAc萃取，经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在SCX (10 g)上的层析，首先采用MeOH然后采用2M NH3/MeOH洗脱。在真空下浓缩MeOH/氨级分，并对所得残余物施以在C-18硅胶上的反相层析 (Xterra XBRIDGE®柱, 5 µm, 19x 100 cm)，以25 mL/min采用35-55% 20 mM NH4CO3 (pH 9)在水/ACN中的梯度洗脱3 min，以在溶剂蒸发之后获得固体形式的第一个洗脱出的反式- 化合物实施例17(0.148 g, 25%收率)，ES/MS (m/z): 541 (M+H)，和固体形式的第二个洗脱出的顺式- 化合物实施例18(0.027 g, 4.5%收率)，ES/MS(m/z): 541 (M+H)。
实施例19
5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-{[反式-4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基](甲基)氨基}-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
在RT下搅拌3-甲氧基氮杂环丁烷盐酸盐(0.304 g, 2.460 mmol)/MeOH (5 mL)和含DIPEA (0.308 mL, 1.77 mmol)的THF (5 mL) 30 min。添加5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[甲基(4-氧代环己基)氨基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (0.28 g, 0.49 mmol)并在RT下搅拌1 h。冷却该混合物至-78℃并添加2MLiBH4在THF中的溶液(6.4 mL, 13 mmol)，在-78℃下搅拌所得混合物1 h并温热至RT。将该反应混合物倾倒至冰冷饱和NaHCO3溶液，采用DCM萃取，分离各层，经Na2SO4干燥有机萃取物，过滤，并在真空下浓缩有机萃取物。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-50%的10% 7N 甲醇NH3在DCM中的溶液至DCM的梯度洗脱。收集含反式-和顺式- 异构体的层析级分并在真空下浓缩。通过在C-18硅胶上的反相层析分离反式-和顺式-异构体(30 g ThermoScientific Hypersil GOLDTM)，采用10-100% ACN/10 mM NH4CO3水溶液的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得白色固体形式的标题化合物(0.064 g, 26%收率)。ES/MS (m/z): 499(M+H)。
实施例20
5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-(甲基{反式-4-[3-(1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}氨基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
在RT下添加异丙醇钛(IV)(0.373 g, 1.27 mmol)至5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[甲基(4-氧代环己基)氨基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (0.148 g, 0.32 mmol)/DCM (2.5 mL)，然后添加1-(氮杂环丁烷-3-基)吡唑二盐酸盐(0.187 g, 0.955 mmol)。在3 h之后，添加THF (2.5 mL)，然后在真空下浓缩该混合物至约2.5 mL。冷却所得混合物至-78℃，添加MeOH (2.5 mL)，然后添加2M LiBH4在THF中的溶液(0.24 mL, 0.48 mmol)，逐渐温热至RT并搅拌过夜。采用DCM (50 mL)和水(10mL)稀释该混合物，经硅藻土床过滤，并采用DCM (100 mL)洗涤滤饼。在真空下浓缩滤液并对所得残余物施以在C-18硅胶上的反相层析 (WATERSTM XBRIDGE®, 30 x 75 mm, 5 μm)，采用20-60% ACN/含5% MeOH的10 mM NH4CO3水溶液的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得薄透明膜形式的标题化合物(0.025 g, 14%收率)。ES/MS (m/z): 535 (M+H)。
实施例21
5-[(4-氯-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-{乙基[反式-4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]氨基}-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
添加3-甲氧基氮杂环丁烷 盐酸盐(0.300 g, 2.43 mmol)/甲醇(5 mL)至含THF (5mL)和DIPEA (0.306 mL, 1.75 mmol)的圆底烧瓶，在RT下搅拌30 min，然后添加5-[(4-氯-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-[乙基(4-氧代环己基)氨基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (0.450 g, 0.487 mmol, 50%纯度)至该溶液，并在RT下搅拌1 h。冷却该反应混合物至-78℃并添加2M LiBH4在THF中的溶液(0.63 mL, 1.3mmol)。搅拌1 h，然后逐渐温热该混合物至RT，倾倒该混合物至冰冷饱和NaHCO3水溶液，采用DCM萃取，分离各层，经无水Na2SO4干燥有机相，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-40% 10%的7N NH3/MeOH在DCM/DCM中的混合物的梯度洗脱。为了分离顺式-和反式-异构体，蒸发含产物的级分并对所得残余物施以在C-18硅胶上的反相层析(15.5 g Thermo Scientific Hypersil GOLDTM)，采用10-100% ACN在含5% MeOH 的10mM NH4CO3中的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得白色固体形式的标题化合物(0.120 g,46%收率)。ES/MS (m/z): (35Cl/37Cl) 533/535 (M+H)。
实施例22
5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-{乙基[反式-4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]氨基}-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
添加LiCl (6.13 g, 143.2 mmol)至2-{乙基[反式-4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]氨基}-5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (16.40 g, 28.65 mmol)和PTSA (25.96 g, 143.2 mmol)在DMF (100mL)中的混合物并在50℃下搅拌9 h，然后在RT下搅拌18 h。采用EtOAc (400 mL)和4M K2CO3水溶液(200 mL)稀释。分离各相，采用EtOAc (3 x 100 mL)萃取水相，并采用4M K2CO3水溶液(2 x 100 mL)、水(100 mL)和饱和NaCl水溶液(100 mL)顺序地洗涤合并的有机层。经Na2SO4干燥有机相，过滤，并在真空下浓缩滤液以获得浅棕色固体。采用EtOAc (100 mL)将该固体制浆，在RT下搅拌1 h。添加乙醚(100 mL)，在RT下搅拌2 h，过滤该固体，采用冷二乙醚(50 mL)洗涤，并在真空下干燥。添加TEA (21.54 g, 212.8 mmol)至所得固体在ACN中的混合物(500 mL)并在85℃下搅拌24 h。冷却该混合物，在真空下浓缩，将所得残余物悬浮在水(165 mL)中，并在RT下搅拌4 h。过滤所得固体，采用水(50 mL)洗涤，并在真空下在50℃下干燥16 h以获得浅乳白色固体形式的标题化合物(10.83 g, 76%收率)。ES/MS (m/z):513 (M+H)。
实施例23
2-[{反式-4-[3-(环丙基氧基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}(乙基)氨基]-5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
向圆底烧瓶添加3-(环丙氧基)氮杂环丁烷盐酸盐(0.6776 g, 4.529 mmol)、MeOH (4mL)、DIPEA (0.5853 g, 4.529 mmol)、5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-[乙基(4-氧代环己基)氨基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮(0.500 g, 1.13 mmol)和THF (20 mL)。在RT下搅拌所得溶液过夜。冷却该反应混合物至-78℃并逐滴添加2M LiBH4/THF (1.13 mL, 2.26 mmol)。将该反应置于0℃的冰浴中并经1.5 h使其缓慢温热至RT。采用饱和NaHCO3水溶液淬灭该反应混合物，采用DCM稀释，分离各层，并采用另外的DCM萃取水相。合并有机相，经无水Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在C-18硅胶上的反相层析。在真空下浓缩期望的级分以获得白色粉末形式的标题化合物(0.092 g, 15%)。ES/MS (m/z): 539 (M+H)。
实施例24和25
实施例24：5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-(乙基{反式-4-[3-(1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}氨基)-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
实施例25：5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-(乙基{顺式-4-[3-(1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}氨基)-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
向圆底烧瓶添加1-(氮杂环丁烷-3-基)吡唑二盐酸盐(0.266 g, 1.36 mmol)、MeOH(6.8 mL)和DIPEA (0.239 mL, 1.36 mmol)，并在RT下搅拌30 min。添加5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-[乙基(4-氧代环己基)氨基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (0.150 g, 0.340 mmol)至该反应混合物并搅拌3 h。冷却该反应混合物至-78℃，然后逐滴添加2M LiBH4/THF (0.255 mL, 0.510 mmol)并搅拌3 h。温热该反应混合物至RT，倾倒至冰冷饱和NaHCO3水溶液，采用DCM/水稀释所得悬浮液，并采用DCM萃取三次。分离各层，合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在C-18硅胶上的反相层析，采用0-55% ACN在10 mM NH4CO3/水中的梯度洗脱，以获得白色固体形式的反式- 标题化合物实施例24 (0.088 g, 47%收率)，ES/MS (m/z): 549(M+H)，和白色固体形式的顺式- 标题化合物实施例25 (0.048 g, 26%收率)，ES/MS (m/z): 549 (M+H)。
实施例26
5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-(乙基{反式-4-[3-(2-甲氧基乙氧基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}氨基)-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
向圆底烧瓶添加MeOH (20 mL)中的3-(2-甲氧基乙氧基)氮杂环丁烷盐酸盐(1.5 g,8.9 mmol)和DIPEA (2 mL, 11.5 mmol)。在RT下搅拌30 min，然后添加5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-[乙基(4-氧代环己基)氨基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (1.0 g, 2.3 mmol)/THF (5 mL)并在RT下搅拌所得混合物过夜。冷却该反应混合物至-78℃并逐滴添加2M LiBH4/THF (2.8 mL, 5.6 mmol)。将该反应放置在冰浴中并缓慢温热至RT持续2 h。将该反应混合物倾倒至冰冷饱和NaHCO3水溶液，采用DCM萃取，分离各层，并在真空下浓缩有机萃取物。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-3%的7N NH3/MeOH在DCM中的混合物的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得不纯浅棕色固体形式的反式-异构体(0.450 g, 36%收率)和浅棕色油形式的顺式- 异构体(0.220 g, 17%收率)。对反式- 异构体施以在C-18硅胶上的反相层析，采用0-60% ACN在10 mM NH4CO3/水中的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得浅棕色固体形式的反式- 标题化合物(233 mg, 18%收率)。ES/MS (m/z): 557 (M+H). 1H NMR (400.1 MHz, CDCl3): 0.94 (t, J= 7.0 Hz,3H), 0.98-1.03 (m, 2H), 1.20-1.28 (m, 2H), 1.78-1.81 (m, 2H), 1.86-1.92 (m,3H), 2.29 (s, 3H), 2.35 (s, 6H), 2.67-2.77 (m, 1H), 2.83 (t, J= 6.6 Hz, 2H),2.85-2.95 (m, 4H), 3.39 (s, 3H), 3.59 (dd, J= 6.1, 7.5 Hz, 2H), 3.52 (s, 4H),3.69 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 4.13 (五重峰, J= 5.9 Hz, 1H), 4.73 (s, 2H), 5.94 (s,1H), 12.24-12.25 (bs, 1H)。
实施例27
2-{[反式-4-(二甲基氨基)环己基](乙基)氨基}-5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
向5 mL微波小瓶添加MeOH (4 mL)中的2-[(反式-4-氨基环己基)(乙基)氨基]-5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (0.050 g, 0.113 mmol)、乙酸(0.019 mL, 0.339 mmol)和37%甲醛水溶液(0.025mL, 0.3389 mmol)。冷却该小瓶至0℃并缓慢添加NaCNBH4 (0.0213 g, 0.3389 mmol)至该反应混合物。温热至RT，搅拌4.5 h，然后在真空下浓缩该反应混合物。采用DCM和水稀释所得残余物，分离各层，并用另外的DCM萃取水层。合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在C-18硅胶(50 g)上的反相层析，采用在10 mM NH4CO3/水中的ACN洗脱，以在溶剂蒸发之后获得白色粉末形式的标题化合物(0.0135 g, 25%收率)。ES/MS (m/z): 471 (M+H)。
实施例28
5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-[乙基(哌啶-4-基)氨基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
添加4-(乙基{5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基}氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.700 g, 1.290 mmol)/DMF(6.45 mL)至微波小瓶。冷却至0℃，然后添加LiCl (0.276, 6.45 mmol)和PTSA (1.17 g,6.45 mmol)。加热所得混合物至90℃过夜，冷却该反应混合物至RT，采用冰冷饱和NaHCO3水溶液淬灭，并采用DCM稀释。分离各层，采用另外的DCM萃取水层，合并有机相，经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-10% 7N NH3在MeOH/DCM中的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得米黄色固体形式的标题化合物 (0.284 g, 51%收率)。ES/MS (m/z): 429 (M+H)。
实施例29和30
实施例29：5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-(乙基{反式-4-[(2-甲氧基乙基)(甲基)氨基]环己基}氨基)-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
实施例30：5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-(乙基{顺式-4-[(2-甲氧基乙基)(甲基)氨基]环己基}氨基)-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
添加LiCl (0.22 g, 5.20 mmol)和PTSA (0.94 g, 5.20 mmol)至2-(乙基{4-[(2-甲氧基乙基)(甲基)氨基]环己基}氨基)-5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (0.55 g, 1.04 mmol, 顺式-和反式-非对映异构体的混合物)在DMF (5.2 mL)中的溶液并在90℃下在密封管中加热1 h。冷却该反应至RT，添加饱和NaHCO3水溶液，采用EtOAc萃取，并在真空下浓缩有机萃取物。将所得残余物装载至SCX药筒(25 g)上，首先采用MeOH然后采用2M NH3/MeOH洗脱。在真空下浓缩甲醇氨级分并对所得残余物施以超临界流体色谱 (CHIRALCEL® OD, 5 um, 2 x 25 cm)，以65 mL/min采用CO2/MeOH（含0.2% DMA）的流动相以30%等度洗脱，以获得标题化合物：5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-(乙基{反式-4-[(2-甲氧基乙基)(甲基)氨基]环己基}氨基)-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮, 实施例29, (0.07 g,13%收率), ES/MS (m/z): 515 (M+H). 5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-(乙基{顺式-4-[(2-甲氧基乙基)(甲基)氨基]环己基}-氨基)-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮, 实施例30, (0.04 g, 8%收率), ES/MS (m/z): 515 (M+H)。
实施例31
2-[{反式-4-[环丙基(甲基)氨基]环己基}(乙基)氨基]-5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
添加LiCl (0.23 g, 5.38 mmol)和PTSA (0.97 g, 5.38 mmol)至2-[{4-反式-[环丙基(甲基)氨基]环己基}(乙基)氨基]-5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮(0.55 g, 1.07 mmol)在DMF (5.4 mL)中的溶液并加热90℃持续1 h。冷却至RT并添加饱和NaHCO3水溶液，采用EtOAc萃取，并分离各层。经无水Na2SO4干燥有机相，过滤，在真空下浓缩，并将所得残余物装载至SCX药筒上，首先采用MeOH然后采用2M NH3/MeOH洗脱。在真空下浓缩甲醇氨级分并通过SFC对所得残余物施以层析(CHIRALCEL® OD, 5 µm, 2 x 25 cm)，以65 mL/min采用含0.2% DMA的CO2/MeOH流动相以30%等度洗脱，以获得固体形式的标题化合物(0.15 g, 29%收率)。ES/MS (m/z): 497(M+H)。
实施例32
5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-{[反式-4-(3-乙氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基](乙基)氨基}-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮
添加10% Pd/C(0.035 g, 0.033 mmol)至5-{[2-(苄氧基)-4,6-二甲基吡啶-3-基]甲基}-2-{[反式-4-(3-乙氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基](乙基)氨基}-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (0.084 g, 0.13 mmol)在EtOAc (2 mL)和MeOH (2 mL)中的溶液。采用H2 (345 kPa)装填该反应容器，搅拌约3 h，过滤，并在真空下浓缩该反应混合物。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用20% EtOAc/DCM然后0-10% 7N NH3/MeOH（在DCM中）的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得黄色胶形式的标题化合物(0.041 g, 57%收率)。ES/MS (m/z): 527 (M+H)。
实施例33
5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-(乙基{反式-4-[3-(1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}氨基)-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4h-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮
添加1-(氮杂环丁烷-3-基)吡唑 (0.600 g, 4.87 mmol)至含DIPEA (1.5 mL, 8.6mmol)的MeOH (10 mL)溶液，在RT下搅拌30 min，然后添加5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-[乙基(4-氧代环己基)氨基]-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮 (0.800 g, 1.76 mmol)/THF (10 mL)。在RT下搅拌1 h，冷却该反应混合物至-78℃，并添加2M LiBH4在THF中的溶液(0.9 mL, 1.8 mmol)。搅拌所得混合物3 h，逐渐温热至RT并搅拌过夜。将该反应混合物倾倒至冰冷饱和NaHCO3溶液，采用DCM萃取，分离各层，并在真空下浓缩有机相。对该残余物施以在C-18硅胶上的反相层析(100 g, ThermoScientific Hypersil GOLDTM)，采用0-50% ACN（含0.1%甲酸）和水（含0.1%甲酸）的梯度洗脱，蒸发溶剂，并对所得残余物施以另外时间的在C-18硅胶上的反相层析(100 g, ThermoScientific Hypersil GOLDTM)，采用0-40% ACN（含0.1%甲酸）和水（含0.1%甲酸）的梯度洗脱。采用饱和NaHCO3水溶液处理合并的层析级分，采用DCM萃取，分离各层，经MgSO4干燥有机相，过滤，在真空下浓缩滤液，并在真空炉中干燥过夜以获得单一异构体形式的白色固体标题化合物(0.047 g, 4.7%收率)。ES/MS (m/z): 563 (M+H)。
实施例34
5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-{乙基[反式-4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]氨基}-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮
添加3-甲氧基氮杂环丁烷盐酸盐(0.580 g, 4.69 mmol)至MeOH (5 mL)和DIPEA(1mL, 5.7 mmol)的溶液，在RT下搅拌30 min，然后添加5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-[乙基(4-氧代环己基)氨基]-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮 (0.600 g, 1.12 mmol, 85%纯度)/THF (5 mL)。在RT下搅拌所得混合物1 h，冷却至-78℃并添加2M LiBH4在THF中的溶液(1.2 mL, 2.4 mmol)。搅拌所得混合物1 h，伴随搅拌温热至RT持续2 h，然后将该反应混合物倾倒至冰冷饱和NaHCO3溶液。采用DCM (3 x100 mL)萃取，分离各层，并在真空下浓缩有机相。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-10% MeOH/DCM的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得反式- 和顺式- 异构体的混合物。通过在C-18硅胶上的反相层析分离反式- 和顺式- 异构体(100 g, Thermo ScientificHypersil GOLDTM)，采用0-60% ACN/10 mM NH4CO3水溶液的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得白色固体形式的标题化合物(0.0779 g, 13%收率)。ES/MS (m/z): 527 (M+H)。
实施例35
2-[{反式-4-[3-(环丙基氧基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}(甲基)氨基]-5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮
将3-(环丙氧基)氮杂环丁烷 盐酸盐(0.400 g, 2.67 mmol)在MeOH (10 mL)中制浆，添加THF (10 mL)和DIPEA (0.600 mL, 3.44 mmol)，在RT下搅拌30 min，添加5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[甲基(4-氧代环己基)氨基]-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮 (0.300 g, 0.577 mmol, 85%纯度)，并在RT下搅拌所得混合物过夜。冷却该混合物至-78℃并添加2M LiBH4在THF中的溶液(0.700 mL, 1.4mmol)。在-78℃下搅拌所得混合物1 h。温热该混合物至RT，搅拌1 h，将该反应混合物倾倒至冰冷饱和NaHCO3溶液，采用DCM萃取，分离各层，并在真空下浓缩该有机层。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-5% 7N 甲醇NH3/DCM的梯度洗脱。收集含反式-和顺式- 异构体的层析级分并在真空下浓缩。通过在C-18硅胶上的反相层析分离反式- 和顺式- 异构体(40 g, Thermo Scientific Hypersil GOLDTM)，采用5-60% ACN/10 mM NH4CO3水溶液的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得浅棕色固体形式的标题化合物(0.0662 g, 21%收率。ES/MS(m/z): 539 (M+H)。
实施例36
5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-{(反式-4-[3-(2-甲氧基乙氧基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}(甲基)氨基]-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮
在RT下搅拌在含DIPEA (0.418 mL, 2.40 mmol)的MeOH (5 mL)和THF (5 mL) 中的3-(2-甲氧基乙氧基)氮杂环丁烷 (0.437 g, 2.460 mmol)持续30 min。添加5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[甲基(4-氧代环己基)氨基]-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮 (0.35 g, 0.67 mmol)并在RT下搅拌1 h。冷却该混合物至-78℃并添加2M LiBH4在THF中的溶液(0.87 mL, 1.7 mmol)，在-78℃下搅拌所得混合物2 h并温热至RT过夜。冷却该混合物至-78℃，添加2M LiBH4在THF中的溶液(0.5 mL,1.0 mmol)并温热至RT。将该反应混合物倾倒至冰冷饱和NaHCO3溶液，采用DCM萃取，分离各层，经Na2SO4干燥有机萃取物，过滤，并真空下浓缩有机萃取物。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-40%的10% 7N 甲醇NH3/DCM在DCM中的溶液的梯度洗脱。收集含反式- 和顺式- 异构体的层析级分并在真空下浓缩。通过在C-18硅胶上的反相层析分离反式- 和顺式- 异构体(15.5 g Thermo Scientific Hypersil GOLDTM)，采用10-100% ACN/含5% MeOH的10 mM NH4CO3水溶液的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得白色固体形式的标题化合物(0.036 g, 9%收率)。ES/MS (m/z): 557(M+H)。
实施例37
5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-{[反式-4-(3-乙氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基](甲基)氨基}-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮
向5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[甲基(4-氧代环己基)氨基]-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮 (0.320 g, 0.616 mmol)/THF(10 mL)添加MeOH (5 mL)和DIPEA (0.55 mL, 3.15 mmol)中的3-乙氧基氮杂环丁烷盐酸盐(0.424 g, 3.08 mmol)。在RT下搅拌30 min。冷却该混合物至-78℃并缓慢添加2M LiBH4在THF中的溶液(0.650 mL, 1.3 mmol)，在-78℃下搅拌所得混合物1 h，温热至RT并搅拌1h。将该反应混合物倾倒至冰冷饱和NaHCO3溶液，采用DCM萃取，分离各层，经Na2SO4干燥有机萃取物，过滤，并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-70%的10%7N 甲醇NH3/DCM溶液至DCM的梯度洗脱。收集含反式- 和顺式- 异构体的层析级分并在真空下浓缩。通过在C-18硅胶上的反相层析分离反式- 和顺式- 异构体(Phenomenex Luna)，采用40-75% ACN/含5% MeOH 的10 mM NH4CO3水溶液的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后获得白色固体形式的标题化合物(0.099 g, 37%收率)。ES/MS (m/z): 527(M+H)。
实施例38
5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-{(1R)-1-[反式-4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]乙基}-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮
向MeOH (10 mL)和THF (10 mL)中的3-甲氧基氮杂环丁烷盐酸盐(480 mg, 3.88mmol)添加DIPEA (1.0 mL, 5.7 mmol)并在RT下搅拌30 min。添加5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-(4-氧代环己基)乙基]-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮 (0.25 g, 0.57 mmol)至该溶液并在RT下搅拌1 h。冷却该反应混合物至-78℃，然后添加2M 硼氢化锂/THF (1.0 mL, 2.0 mmol)。在3 h之后，除去冷浴并在RT下搅拌1 h。将该反应混合物倾倒至冰冷饱和NaHCO3水溶液并在真空下浓缩。对所得残余物施以反相层析，采用0-50% ACN (含0.1%甲酸)在水(含0.1%甲酸)中的梯度洗脱。收集各纯级分并浓缩以提供甲酸盐形式的产物。在类似程序之后，合并该产物与来自先前运行反应的材料（约2倍规模）。向合并的产物混合物添加饱和NaHCO3水溶液，采用DCM萃取，用盐水洗涤，经MgSO4干燥并过滤。在真空下浓缩滤液并在炉中干燥过夜以获得白色固体形式的标题化合物(0.057 g合计质量, 6%合计收率)。ES/MS (m/z): 512 (M+H). [α]D 20 = -42.80° (c=1.0, MeOH)。
实施例38的替代程序
在25至34℃的温度下经10 min时间添加氯三甲基硅烷(233 ml, 1.83 mol)至2-[(1R)-1-[4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]乙基]-5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-7,8-二氢-6H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮 (240 g, 0.456 mol)和NaI (267 g, 1.78 mol)在乙腈中的混合物。在33至41℃下加热该反应2 h。冷却至RT，并采用乙腈(4 L)稀释两次，在减压下每次浓缩该混合物至初始体积。采用乙酸乙酯(2.4 L) 和水(2.4 L)稀释该混合物，并采用NH4OH (380 ml)调节至约pH 10。分离所得各层，用饱和NaCl 水溶液(1.9 L)洗涤有机层。经Na2SO4干燥有机层，过滤，并在减压下除去溶剂。通过硅胶塞过滤纯化所得残余物，首先采用10% EtOH/EtOAc，然后采用5% 7N NH3/MeOH和10%EtOH/EtOAc的混合物洗脱。蒸发甲醇氨滤液并在0℃下用丙酮(3 体积)研磨所得残余物。在真空下在RT下干燥以获得白色固体形式的标题化合物(186.4 g, 80%收率)。ES/MS (m/z):512 (M+H)。
实施例39
5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1H-吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-[4-(3-吡唑-1-基氮杂环丁烷-1-基)环己基]乙基]-7,8-二氢-6H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮
添加THF (5 mL)和DIPEA (0.500 mL, 2.87 mmol)至1-(氮杂环丁烷-3-基)吡唑(0.380 g, 3.09 mmol)在MeOH (5 mL)中的溶液，在RT下搅拌所得混合物30 min，添加5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-(4-氧代环己基)乙基]-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮 (0.400 g, 0.763 mmol, 84%纯度)，并在RT下搅拌该混合物过夜。冷却该反应混合物至-78℃，添加2M LiBH4在THF中的溶液(0.720 mL, 1.4 mmol)，在-78℃下搅拌所得混合物2 h，温热至RT，搅拌2 h，将该混合物倾倒至冰冷饱和NaHCO3水溶液，采用DCM (3x100 mL)萃取，分离各层，并在真空下浓缩合并的有机相。对所得残余物施以在C-18硅胶上的反相层析，采用5-60% ACN/10 mM NH4CO3水溶液的梯度洗脱，以在溶剂蒸发和真空干燥之后获得白色固体形式的标题化合物(0.110 g,26%收率)。ES/MS (m/z): 548 (M+H)。
实施例40
2-{(1R)-1-[反式-4-(二甲基氨基)环己基]乙基}-5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 甲磺酸盐
添加MsOH (9.1 mg, 94.3 mmol)至2-{(1R)-1-[反式-4-(二甲基氨基)环己基]乙基}-5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 (42.9 mg, 90.5 mmol)在MeOH (2 mL)中的悬浮液并超声处理以获得无色溶液。在真空下浓缩该溶液以获得白色固体形式的标题化合物(47.8 mg, 93.8%收率)。ES/MS(m/z): 454.3 (M-H)。
实施例41
5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(5-甲基-1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 甲磺酸盐
添加MsOH (1.55 μL, 0.0238 mmol)在MeOH (1 mL)中的溶液至5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1H-吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-[4-[3-(5-甲基吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基]乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4-酮 (12.7 mg, 0.023 mmol)在MeOH (2mL)中的溶液。超声处理该混合物以获得透明溶液。在真空下浓缩并在炉中在约40℃下干燥所得残余物，然后在RT下干燥几天，以获得白色固体形式的标题化合物(13.8 mg, 84%收率)。ES/MS (m/z): 548 (M+H)。
实施例42
5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮 甲磺酸盐
添加MsOH (1.73 μL, 0.0265 mmol)至5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-2-[(1R)-1-{反式-4-[3-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}乙基]-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮(14.5 mg, 0.027 mmol)在MeOH (2 mL)中的悬浮液。在真空下浓缩该溶液并在真空炉中在50℃下干燥所得残余物2 h以获得白色固体形式的标题化合物(15.1 mg, 89%收率)。ES/MS (m/z): 548 (M+H)。
实施例43
5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-[(1R)-1-{反式-4-[(2-甲氧基乙基)(甲基)氨基]环己基}乙基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-C]吡啶-4(5H)-酮
溶解5-[(2-甲氧基-4,6-二甲基-3-吡啶基)甲基]-2-[(1R)-1-{反式-4-[2-甲氧基乙基(甲基)氨基]环己基}乙基]-3-甲基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4-酮 (48.0 mg,0.093 mmol)在DMF (3.0 mL)中。添加LiCl (30.0 mg, 0.71 mmol)和PTSA (30mg, 0.16mmol)。在60℃下加热该混合物4 h。冷却至RT并搅拌过夜。采用EtOAc (30 mL)和水(3 mL)稀释。采用水萃取乙酸乙酯层并经MgSO4干燥EtOAc相。过滤并在真空下浓缩滤液。对所得残余物施以在硅胶上的层析，采用0-10% MeOH/DCM的梯度洗脱，以在溶剂除去之后获得白色粉末形式的标题化合物(47 mg, 定量收率)。ES/MS (m/z): 500 (M+H)。
生物分析
在文献中，EZH2表达与多种类型的癌症有关，例如淋巴瘤(Velichutina, I. et al.(2010) Blood 116:5247-55; Sneeringer, C.J. et al. (2010) Proc Natl Acad Sci US A. 107:20980-5; McCabe et al. (2012) Nature 492:108-12. Béguelin, W. et al.(2013) Cancer Cell 23:677-92; Knutson, S.K. et al. Mol Cancer Ther 13:842-54)、横纹肌样瘤(Knutson, S.K. et al. (2013) Proc Natl Acad Sci U S A. 110:7922-7)、缺少或缺乏SNF5的肿瘤 (Wilson, B.G. et al. (2010) Cancer Cell 18:316-28)、肉瘤(Kadoch and Crabtree (2013) Cell 153:71-85; Shen et al. (2016) SciRep 6:25239)、多发性骨髓瘤(Kalushkova, A. et al. (2010) PLoS One 5:e11483;Popovic, R. et al. (2014) PLoS Genet.10:e1004566; Hernando, H. et al. (2016)Mol Cancer Ther. 15(2):287-98; Agarwal, P et al. (2016) Oncotarget 7:6809-23)、黑素瘤(Zingg et al.(2015) Nat Commun. 6:6051; Barsotti, A.M. et al.(2015) Oncotarget 6(5):2928-38; Souroullas, G.P. et al. (2016) Nat. Med. 22:632-40)、结肠直肠癌(Nagarsheth, N. et al. (2016) Cancer Res. 76:275-82)、肺癌(Byers, L.A. et al. (2012) Cancer Discov. 2:798-811; Behrens, C. et al.(2013) Clin Cancer Res.19:6556-65; Riquelme, E. et al. (2014) Clin CancerRes. 20:3849-61; Fillmore, C.M. et al. (2015) Nature 520:239-42)、肾癌(Adelaiye, R. et al. (2015) Mol Cancer Ther.14(2):513-22)、乳癌(Kleer, C.G. etal. (2003), Proc Natl Acad Sci U S A. 100:11606-11; Ren et al. (2012) CancerRes 72:3091-104)、卵巢癌(Bitler et al. (2015) Nat Med 21:231-8)和前列腺癌(Varambally, S. et al. (2002) Nature 419:624-9; Yu, J. et al. (2007) CancerRes. 67:10657-63; Varambally, S. et al. (2008) Science 322:1695-9; Yu, J. et al. (2010) Cancer Cell 17:443-54)。
以下分析结果证实实施例1至43的化合物为EZH2抑制剂及本发明化合物（例如实施例1、9、13、22和38）在本文中可用于治疗癌症。如本文所使用，“IC50”是指药剂产生针对该药剂所可能的最大抑制响应的50%的浓度（相对IC50）、或药剂相比于安慰剂对照产生靶酶活性的50%抑制的浓度（绝对IC50）。
EZH2 WT/Y641N mut 384-孔生物化学分析
该分析的目的是测量在PRC2复合物的背景内容中化合物对于EZH2 WT/Y641N的催化活性的效应。
在Sf9细胞中使用杆状病毒表达体系表达FLAG-标记的EZH2或EZH2 Y641N为由EZH2、EED、SUZ12、RBBP4和AEBP蛋白质组成的PRC2 5-元(5-mer) 复合物，并使用FLAG®亲和纯化(Sigma-Aldrich)纯化。利用分析缓冲液(50 mM Tris-HCl pH 8.5, 10 mM DTT,0.005% TRITON®-X 100)将该酶复合物稀释为3.33 nM (就mut分析而言，6.67 nM)的工作原液中。在WT分析中，将非生物素赖氨酸27 三甲基化组蛋白H3 (21-44)共活化剂肽(CPCScientific Cat # 869799)稀释于上述酶工作溶液中至13.33 nM的最终浓度。利用3H-SAM(腺苷-L-甲硫氨酸、S-(甲基)-3H(Adomet), 批号169500/12, 15 Ci/mmol或0.55 mCi/mL,36.7 μM, Perkin Elmer NET155)共稀释针对WT分析而言生物素组蛋白H3 (21-44)肽底物(残基21-44, CPC Scientific Cat# 811115)或针对mut分析而言生物素赖氨酸27二甲基化组蛋白H3 (21-44)肽底物(CPC Scientific, Cat# 830754)至于分析缓冲液中的4 μM(WT分析)或2 μM (mut分析)的最终浓度。
将含于100% DMSO中的测试化合物 (针对WT分析而言50 μL的4 mM原液或针对mut分析而言50 μL 0.2 mM原液)添加至384孔NUNCTM板(Thermo Scientific, Cat# 264573)。将20 μL 100% DMSO至于稀释孔中。自一个孔转移10 μL至下一个孔进行3X连续稀释。在WT分析中，使2 μL经连续稀释的化合物与38 μL DMSO在Labcyte 384孔板(Cat# P-05525)中混合，而在mut分析中，将全部20 μL经连续稀释的化合物转移至384孔Labcyte低容量板(Cat# LP-0200)。声学转移200 nL (WT分析)或100 nL (mut分析)化合物至接受384-孔分析板(Corning 3706)。在WT分析中，将15 μL酶/三甲基H3共活化剂肽混合物分配至分析板中，接着分配5 μL生物素H3肽底物/3H-SAM混合物。密封此类板并于RT下振荡2小时。最终分析条件为2.5 nM酶复合物、10 nM三甲基组蛋白/共活化剂H3肽、1 μM生物素底物肽、1 μM3H-SAM和最高浓度为1 μM测试化合物 (WT分析)；或5 nM酶复合物、0.5 μM生物素底物肽、0.5 μM 3H-SAM和最高浓度为1 μM的测试化合物 (mut分析)。使硅酸钇链霉亲和素SPA珠粒(Perkin Elmer, Cat# RPNQ0012)在3 M胍-HCL中以1 mg/mL (WT分析)或0.5 mg/mL (mut分析)复水。以20 μL/孔将该珠粒混合物添加至分析板，振荡10分钟，并允许于MICROBETA®上计数前在RT下沉降1小时。计算原始数据(CPM)并使用Genedata Assay分析仪标准化至抑制%为抑制% = 100 – [(测试化合物CPM – 最小CPM中位数) / (最大CPM中位数–最小CPM中位数) x 100]。将经标准化的数据作图并使用 GENEDATA® Condoseo使得曲线为抑制%(y轴) vs. log化合物浓度(x轴)，并使用4参数非线性逻辑斯谛拟合算法确定IC50值。可在该分析中实质上如上所述测试本发明范围内的化合物。例如，实施例1至20的化合物具有证实在PRC2复合物背景内容中重组体WT/mut EZH2的甲基转移酶活性的抑制作用的生物化学IC50结果。例如，实施例1的化合物示出对抗WT 5-mer EZH2为2.06±1.90 nM (n=5)和对抗mut 5-mer EZH2为2.11±0.58 nM (n=2)的IC50。实施例 22的化合物示出对抗WT 5-merEZH2为3.29±1.24 nM (n=3)和对抗mut 5-mer EZH2为7.21 nM (n=1)的IC50。实施例38的化合物示出对抗WT 5-mer EZH2为0.923±0.091 nM (n=2)和对抗mut 5-mer EZH2为2.65nM (n=1)的IC50。
基于H3K27me3细胞的ELISA
该分析的目的是经由测量细胞三甲基化H3K27浓度评估化合物抑制细胞中EZH2的功能性活性的能力。在黑色96-孔BD BIOCOAT® Cellware聚赖氨酸板(BD Biosciences, Cat#354640)中以5,000个细胞/100 μL/孔铺放Karpas-422 (EZH2 Y641N)细胞。在NUNC™ 96-孔聚丙烯MICROWELLTM板(Thermo Scientific Cat# #249944)中通过添加40 μL/孔的10 mM化合物(代表起始最终浓度为20 μM)或40 μL DMSO制备化合物板，接着经由自一个孔转移20 μL至下一个孔制备连续稀释液。在单独的NUNCTM 96-孔聚丙烯MICROWELLTM板中添加5 μL测试化合物至245 μL/孔的生长培养基，和标记11 μL的化合物/培养基混合物至细胞板上。将细胞板置于37℃培养箱中48小时。从培养箱移走这些板，将所述板置于室温下15-20min，并以1000 rpm旋转减慢这些板5 min。在RT下用30 μL 16%多聚甲醛固定细胞15 min。除去多聚甲醛并在RT下用100 μL/孔包含0.1% TRITON® X-100的PBS减去钙或镁(-/-)透化细胞20 min。用PBS(-/-) (2×)洗涤板，接着在RT下用50 μL/孔初级抗体溶液(Diagenode抗-H3K27me3 MAb-181-050；于包含1% BSA的PBS加上钙和镁(+/+)中的1:3000稀释)孵育2小时。用PBS-/-, (3×)洗涤板，接着在RT下在黑暗中用50 μL/孔二级抗体溶液(Invitrogen山羊抗小鼠IgG Alexa 488, Cat# A11001；于PBS+/+中的1:1000稀释)孵育1小时。用PBS-/-, (3×)洗涤板，接着添加50 μL/孔的含于包含200 μg/mL RNase(Invitrogen; Cat# 12091021)的PBS中的5 μg/mL碘化丙啶(Invitrogen; Cat# p3566)染色溶液。用黑色板密封件覆盖板并于ACUMEN®激光扫描细胞仪(TTP Lab Tech)上以Ex488nm/Em 505 nm-530 nm (H3K27m3信号)和LP655nm (细胞和信号)扫描。在该分析中可基本上如上所述测试本发明范围内的化合物。例如，实施例1的化合物示出在MDA MB-231和Karpas-422中分别为19.2±1.55 nM (n=2)或23.6±20.5 nM (n=6)的细胞 H3K27me3IC50。实施例22的化合物示出在MDA MB-231和Karpas-422中分别为<1 nM (n=1)或0.0148±0.0147 nM (n=6)的细胞H3K27me3 IC50。实施例38的化合物示出在Karpas-422中为0.00973±0.00956 nM (n=4)的细胞H3K27me3 IC50。
Karpas-422增殖分析
该分析目的为证实测试化合物抑制体外肿瘤细胞生长的能力。
在96孔、黑色96-孔BD BIOCOAT® Cellware聚赖氨酸板(BD Biosciences, Cat#354640)中以5000个细胞/100 μL/孔的密度铺放Karpas-422细胞。添加40 μL的10 mM测试化合物(代表起始最终浓度为20 μM)或添加100% DMSO至NUNCTM 96-孔聚丙烯MICROWELLTM板(Thermo Scientific Cat# #249944)。通过从一个孔转移20 μL至下一个孔来进行连续稀释。于单独NUNCTM 96-孔聚丙烯MICROWELLTM板中，添加5 μL化合物至含245 μL/孔生长培养基，并标记11 μL化合物/培养基混合物至细胞板上。在37℃下孵育细胞板7天。添加100 μL/孔的Cell Titer GLO®试剂(Promega, Cat# G7671)至细胞板。振荡2 min并使用板读取器测量发光。在该分析中可实质上如上所述测试本发明范围中的化合物。例如，实施例1的化合物示出176±165 nM (n=5)的IC50。实施例22的化合物示出84.5±42.7 nM (n=5)的IC50。实施例38的化合物示出10.1±4.6 nM (n=4)的IC50。
异种移植研究
该分析目的为评估测试化合物抑制体内肿瘤EZH2功能和EZH2介导的肿瘤生长的能力。
以实施例1的化合物使用基本上如McCabe et al. (2012) Nature 492:108-12中所述的Karpas-422异种移植模型，在以下改变/规格下实施体内靶向抑制和效力研究：1）改用羟乙基纤维素(1% HEC/0.25% TWEEN® 80/0.05%消泡剂)代替20% CAPTISOL®为制剂媒介物；2）通过口腔强饲代替通过腹膜内注射给予化合物；3）当肿瘤体积就效力实验而言达到150-200 mm3范围及就靶向抑制实验而言达到300-350 mm3时开始化合物治疗和；4）改在第7天代替第10天测量肿瘤甲基化或肿瘤TNFRSF21表达的抑制。
源自肿瘤的三甲基化H3K27的基于ELISA的测试
为自肿瘤酸萃取组蛋白，将约0.5 cm X 0.25 cm或20-30 mg重的肿瘤切片放入溶胞基质D 500 x 2 mL中。于无RNA酶/DNA酶管中添加用于均质化的珠粒(MP Biomedicals, Cat#6913-500)。添加650 μL酸溶胞缓冲液(包含蛋白酶抑制剂混合物片剂(Roche; Cat#11836153001)的0.4 N HCl)。在FASTPREP® FP120均质机中，以速度6 m/s均质化肿瘤样本20秒2-3次。将样本置于冰上1小时以进行分离。将上清液转移至Eppendorf管并置于管旋转器上以于4℃下溶胞过夜。以8000 rpm在4℃下旋转减慢样本10 min。将上清液转移至新管并测量蛋白质浓度。
将150 μL/孔的MSD阻断溶液A(Meso Scale Discovery (MSD)；最终浓度为3%)添加至MULTI-SPOT®三甲基组蛋白H3(K27) SINGLEPLEX®板(MSD; Cat#: N45CA-1)。于RT下振荡1小时。用1X MSD Tris洗涤缓冲液™(MSD), (3×)洗涤板。将0.25 μg肿瘤溶胞液/孔分配在25 μL酸溶胞缓冲液中，一式三份。在4℃下振荡过夜。用1X MSD Tris Wash Buffer™洗涤板三次。添加25 μL/孔的检测抗体SULFO-TAG™-三甲基组蛋白H3 (K27)，其已于抗体稀释缓冲液（1% MSD阻断剂-A；0.1% MSD阻断剂D-B和0.1% MSD®阻断剂D-G的最终浓度）中稀释至1.5 μg/μL的最终浓度。在室温下振荡1-2小时。用1X MSD Tris洗涤缓冲液洗涤板三次。通过添加100 μL/孔的4%甲醛/PBS固定板。在RT下振荡30 min。用1× MSD Tris洗涤缓冲液洗涤板三次。添加150 μL/孔1X MSD®读取缓冲液并使用MSD SECTOR® Imager 6000仪器测量化学电致发光。在该分析中可基本上如上所述测试本发明范围内的化合物。例如，小鼠中BID给药50 mpk的实施例1的化合物导致肿瘤甲基化抑制53%（n=8小鼠；p<0.0001）。小鼠中BID给药15 mpk的实施例38的化合物导致肿瘤甲基化抑制73%（n=8小鼠；p<0.0001）。
源自肿瘤的TNFRSF21 mRNA表达的基于qPCR的测试
为了从肿瘤组织分离RNA，将约0.5 cm X 0.25 cm或20-30 mg（以重量计）的肿瘤切片放入溶胞基质D 500 x 2 mL中。在无RNA酶/DNA酶管中添加用于均质化的珠粒(MPBiomedicals, REF: 6913-500)。添加650 μL来自的RNEASY®试剂盒(Qiagen; Cat#74104)的RLT缓冲液。在FASTPREP® FP120均质机中以速度6均质化样本20秒2至3次。将样本置于冰上以冷却10 min。在4℃下以13 000 rpm离心10 min。将上清液放入QIA管中并使用RNEASY®试剂盒(Qiagen; Cat#74104)分离RNA。
使用高容量cDNA逆转录试剂盒(Applied Biosystems; Cat# 4368813)，从3 μg肿瘤RNA制备cDNA并在PCR热循环仪中使用以下循环条件培养样本：在25℃下10 min；在37℃下2小时，维持在4℃。在Applied Biosystems ViiA 7™即时PCR循环仪中，使用ThermoScientific ABsolute Blue QPCR ROX混合物(Applied Biosystems; Cat# AB-4139)和针对TNFRSF21的Taqman探针(Applied Biosystems; Cat# Hs01560899_m1)和管家基因GAPDH(Applied Biosystems; Cat# Hs02758991-gl)来扩增cDNA产物。计算TNFRSF21循环阈值并标准化至其各样本的GAPDH水平。在该分析中可基本上如上所述测试本发明范围内的化合物。例如，BID给药50 mpk的实施例1的化合物导致肿瘤TNFRSF21基因表达增加25倍（n=8小鼠；p<0.0001）。BID给药15 mpk的实施例38的化合物导致肿瘤TNFRSF21基因表达增加60倍（n=8小鼠；p<0.0001）。
EZH2抑制剂和其他癌症化疗剂的组合治疗
以下段落提供支持以下的证据：EZH2抑制剂（包括但不限于实施例1或实施例38），单独地和/或组合标准护理(SoC)化学疗法用于治疗具有SWI/SNF复合物和/或MLL复合物和/或PI3K路径的组分中的突变组合的卵巢癌、胃癌、肺癌或结肠直肠癌。这些癌症包括但不限于缺乏ARID1A蛋白质表达组合PTEN或PIK3CA和/或在苏氨酸308 (Thr308)上磷酸化的Akt的组成性蛋白质表达的卵巢癌。另外，这些癌症包括但不限于同时缺乏SMARCA2和SMARCA4蛋白质表达的卵巢癌。另外，这些癌症包括但不限于具有ARID1A中异型接合功能丧失(LOF)突变（包括但不限于无义、移码和编码-剪接突变）组合MLL2中异型接合LOF突变但不具有TP53中同型接合突变的胃癌。另外，这些癌症包括但不限于具有ARID1A中异型接合LOF突变（包括但不限于无义、移码和编码-剪接突变）组合PTEN或PIK3CA中突变和/或在Thr308上磷酸化的Akt的组成性蛋白质表达但不具有TP53中同型接合突变的胃癌。另外，这些癌症包括但不限于具有MLL3中异型接合LOF突变的肺癌。另外，这些癌症包括但不限于具有ARID1A中异型接合LOF突变组合具有PTEN或PIK3CA中突变的突变和/或在Thr308上磷酸化的Akt的组成性蛋白质表达的结肠直肠癌。
在7-或10-天增殖分析中测试对实施例1或实施例38响应的卵巢癌细胞系。针对细胞数量和分裂时程将各细胞系最佳化，其将7或10天期间96孔格式中log阶段生长最大化。在第0天在96孔黑色、透明底、涂布聚-D-赖氨酸的96-孔板(BD BioSciences; BD BIOCOATTMCellware, Poly-Lysine, Cat. #354640)中将细胞铺放于总体积90 μL的细胞培养基中并在37℃/5% CO2下培养18-24小时。第1天，通过添加150 μL包含2%二甲亚砜(DMSO; Sigma-Aldrich Cat. #D2438)的培养基至96孔透明平底板(CORNING® COSTAR®细胞培养板Cat #3596)的第3-12栏制备化合物稀释板。制备实施例1或实施例38在100% DMSO中的10 mM原液，并进一步在细胞培养基中稀释至200 μM的工作浓度。添加225 μL的实施例1或实施例38至化合物稀释板的第2栏，并以第3栏至第12栏制备测试化合物的1:3 10-点连续稀释。将10μL的经连续稀释的化合物添加至细胞板，可提供1 nM至20 μM的最终测试化合物浓度范围及0.2%的最终DMSO浓度。在该7-或10-天分析期结束时，使细胞经历如下的CELLTITER-GLO®发光细胞活力分析(Promega, Cat. #G7570)：1）解冻CELLTITER-GLO®缓冲液并使其与室温平衡；2）使冻干CELLTITER-GLO®底物于室温平衡；3）将CELLTITER-GLO®缓冲液转移至底物瓶以形成CELLTITER-GLO®试剂；4）使细胞板于室温平衡；5）仅就粘连细胞而言，从细胞板移除培养基；6）添加25 μL CELLTITER-GLO®试剂至各孔；7）该板在室温下再孵育20-30 min；8）使用Perkin Elmer EnVision 2104多检测微量滴定板读取器读取发光。
如Ye, X.S. et al. (1997) Methods Enzymol. 283:520-32中所述衍生卵巢癌细胞系的全细胞溶胞产物并通过西方墨点法，使用以下抗体：抗-ARID1A (Bethyl, Cat. #A301-040A)；抗-SMARCA2/BRM (Abcam, Cat. # ab15597)；抗-BRG1/SMARCA4 (Bethyl,Cat. #A300-813A)和抗-磷酸化-Akt (Thr308)抗体D25E6 (Cell Signaling, Cat. #13038)测量SWI/SNF复合物、MLL复合物和PI3K路径组分，其包括ARID1A、SMARCA2、SMARCA4(使用3-8% SDS-PAGE)和在Thr308上磷酸化的Akt(使用4-20% SDS-PAGE)的蛋白质的表达。使用抗-Akt (泛)抗体40D4 (Cell Signaling, Cat. #2920)和抗-β-肌动蛋白AC-74(Sigma, Cat. #A2228)抗体以测量总Akt和肌动蛋白含量作为蛋白质负载的对照。
表1概述实施例38对卵巢细胞系小组的效应和显示ARID1A阴性而且对Akt上的Thr308上磷酸化、或同时缺乏SMARCA2和SMARCA4表达的卵巢癌细胞系中对EZH2抑制剂敏感。
表1. 实施例38对9种卵巢癌细胞系的增殖的效应和其SWI/SNF和PI3K路径组分蛋白质表现谱。
使用A2780异种移植模型，体内测试相较于卵巢癌SoC卡铂加上紫杉醇的实施例38的效应。皮下植入含在50% MATRIGEL®中的2百万个A2780细胞至每个组各10双无胸腺裸小鼠(Envigo RMS, Inc., Indianapolis, IN)的右后侧腹中。当肿瘤体积达到100-150 mm3时开始治疗。用实施例38预治疗动物5天接着再共给予实施例38和SoC至少23或直到媒介物肿瘤体积达到2000 mm3。在1% HEC/0.25% TWEEN® 80/0.05%消泡剂中配制实施例38并通过口腔强饲(p.o.)以50 mpk每天两次(BID)给药。在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中配制卡铂(APPPharmaceuticals NDC 63323-172-60)并通过由腹膜内(i.p.)注射以 60 mpk每2周(Q14D)给药。在PBS中配制紫杉醇(Hospira, Inc NDC 61703-342-50)并通过由静脉内(IV)注射以10 mpk Q14D给药。测量肿瘤生长抑制为ΔT/C (%)，经计算为各个动物的平均值[(实施例38治疗第28天时的肿瘤体积减去第0天时的肿瘤体积)除以(媒介物处理第28天时的肿瘤体积减去第0天时的肿瘤体积)]乘以100。表2概述治疗第28天实施例38和卵巢癌SoC对于A2780肿瘤生长的效应的结果。与单独SoC对A2780肿瘤生长的弱效应对比，在单独用50 mpkBID p.o. 实施例38治疗后，和在用50 mpk QD p.o. 实施例38组合SoC治疗后，观察到A2780肿瘤生长受到显著抑制。
表2：给药第28天实施例38、卵巢SoC卡铂加上紫杉醇，以及实施例38组合SoC对于A2780肿瘤生长的效应。
START Discovery (http://startdiscovery.net/) 具有源自患者的肿瘤模型的平台。基于存在或不存在SWI/SNF组分功能丧失和PI3K路径突变选择两个源自STARTDiscovery卵巢患者的模型，和在START Discovery测试实施例1对肿瘤生长的效应。治疗各2只小鼠的2个组28天。用卵巢标准护理(SoC)化合物卡铂(在0.9% NaCl中配制并以60 mpkQ14D i.p.给药)和紫杉醇(在0.9% NaCl中配制并以10 mpk Q14D IV给药)治疗组1。用实施例1 (在1% HEC/0.25% TWEEN® 80/0.05%消泡剂中配制并以50 mpk BID p.o.给药)预治疗组2持续5天，接着共给予实施例1和SoC持续23天或直到肿瘤体积达到2000 mm3。监测模型，显示通过组合治疗在停止给药后第28天肿瘤停滞或消退直到观潮到肿瘤再生长。将肿瘤体积的平均改变%与第0天的基线肿瘤体积进行比较，并计算为各个动物的平均值[(治疗第x天时的肿瘤体积减去第0天时的肿瘤体积)除以第0天时的肿瘤体积]乘以100。表3概述实施例1治疗对两种源自患者的卵巢肿瘤模型的生长的效应。显示利用实施例1治疗显著抑制肿瘤生长的ST884（一种源自患者的卵巢肿瘤模型）具有ARID1A中的同型接合突变和PIK3CA中的突变的组合。相比之下，为异型接合突变体ARID1A而无PIK3CA或PTEN中突变的ST416（一种源自患者的卵巢肿瘤模型）未显示实施例1治疗的肿瘤生长抑制。
表3：卵巢癌标准护理(SoC)卡铂和紫杉醇或实施例1加上SoC的组合对2种源自卵巢患者的肿瘤模型的生长效应。
Oncotest (http://www.oncotest.com/)也具有直接地从患者移植的患者肿瘤外植体的已确认的大量集合并呈PDX形式皮下继代培养于裸小鼠中。基于功能丧失(LOF)SWI/SNF和/或MLL复合体突变的存在来选择9个Oncotest胃PDX，并在Oncotest测试实施例1或媒介物对肿瘤生长的效应。就模型GXA-3011而言，测试每个组各5只动物并用媒介物(1%HEC/0.25% TWEEN® 80/0.05%消泡剂)或实施例1中任一者以50 mpk BID p.o.治疗28天。监测模型，显示停止给药后第28天肿瘤停滞或消退直到观察到肿瘤再生长。计算ΔT/C (%)为各个动物的平均值[(实施例1治疗> 28天时的肿瘤体积减去第0天时的肿瘤体积)除以(媒介物治疗> 28天时的肿瘤体积减去第0天时的肿瘤体积)]乘以100。
就其他Oncotest胃PDX而言，治疗各2只小鼠的2个组28天。用胃标准护理(SoC)化合物奥沙利铂(在5%葡萄糖中配制并以8 mpk Q14D i.p.给药)和紫杉醇(在0.9% NaCl中配制并以10 mpk Q14D IV给药)治疗组1。用实施例1(在1% HEC/0.25% TWEEN® 80/0.05%消泡剂中配制并以50 mpk BID p.o.给药)预治疗组2动物5天，接着共给予实施例1和SoC持续23天或直到肿瘤体积达到2000 mm3。计算肿瘤体积的平均变化%为各个动物的平均值[(治疗> 28天时的肿瘤体积减去第0天时的肿瘤体积)除以第0天时的肿瘤体积]乘以100。
表4概述实施例1治疗对于源自患者的胃癌模型(癌或腺癌)的生长的效应的结果，和显示其生长受到实施例1治疗阻碍的模型具有两种突变：1）ARID1A中至少一个异型接合LOF突变和2）MLL2中的任一异型接合LOF（在PDX GXA-3052、GXA-3079、GXA-3083中发现）和/或影响PI3K路径的组分的突变（包括但不限于PIK3CA和PTEN；在PDX GXA-3002和GXA-3005中发现）。在实施例1治疗后其生长不受抑制的模型具有p53中的同型接合突变，而不论ARID1A或MLL2中的LOF突变状态（如在PDX GXA 3011中）和不论PI3K路径的组分的突变状态（如在PDX GXA-3069中）。
表4：SoC奥沙利铂加上紫杉醇、或实施例1加上SoC的组合对源自患者的胃癌模型的生长的效应。
类似地，具有两个异型接合MLL3功能丧失突变的源自患者的肺肿瘤模型LXFE 937的生长在以实施例1组合肺癌SoC吉西他滨（在0.9% NaCl中配制并每周一次以120 mpk i.p给药）加上顺铂（在0.9% NaCl中配制并每周一次以3.2 mpk经皮下给药）治疗后受到显著抑制。数据显示于表5中。
表5：标准护理(SoC)吉西他滨加上顺铂、或实施例1加上SoC的组合对于源自肺患者的NSCLC鳞状细胞癌模型的生长的效应。
类似地，源自患者的结肠直肠肿瘤CXF 1034（其不表达ARID1A蛋白质和具有PIK3CA和PTEN中的突变）在用实施例1与SoC组合盐酸伊立替康三水合物（在0.9% NaCl中配制并以20 mpk Q7D IV给药）加上奥沙利铂（在5%葡萄糖中配制并以8 mpk Q14D i.p.给药）测试时其生长受到显著限制。数据显示于表6中。
表6：标准护理(SoC)伊立替康加上奥沙利铂、或实施例1加上SoC的组合对于源自患者的结肠直肠癌模型的生长的效应。
总言之，上述结果提供支持以下的证据：EZH2抑制剂，包括但不限于实施例1或实施例38，单独和/或组合标准护理(SoC)化学疗法用于治疗具有SWI/SNF复合物和/或MLL复合物和/或PI3K路径的组分的突变组合的卵巢癌、胃癌、肺癌或结肠直肠癌。
本发明化合物优选配制为通过多种途径给药的药物组合物。最优选地，此类组合物用于经口给药。此类药物组合物和其制备方法是相关技术中所熟知的。参见，例如，REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY (D. Troy, et al.编, 第21版,Lippincott Williams & Wilkins, 2005)。
患者的SoC化合物的剂量可按照已审批的剂量进行给药或可根据医师建议改变。SoC化合物给药的实例可例如如下：就卵巢癌而言，卡铂加上紫杉醇的剂量可为每3周175mg/m2 IV紫杉醇然后每3周175 mg/m2 IV卡铂。就胃癌而言，紫杉醇加上奥沙利铂的剂量可为每周50 mg/m2 IV紫杉醇和每周AUC 2 mg/mL奥沙利铂。就肺癌而言，吉西他滨加上顺铂的剂量可为每3周1250 mg/m2 IV吉西他滨加上每3周75 mg/m2 IV顺铂。就结肠直肠癌而言，伊立替康加上奥沙利铂的剂量可为每周125 mg/m2 IV或每3周350 mg/m2 IV伊立替康和每2周85 mg/m2 IV奥沙利铂。(SoC治疗剂量的参考也可在http://www.cancertherapyadvisor.com/gastrointestinal-cancers/gastric-cancer-treatment-regimens/article/218159/中找到)。
本发明EZH2化合物在宽剂量范围内普遍有效。例如，每日剂量可落在以单或多剂量给药的至多5000 mg/天，优选约100-2000 mg/天的每日范围内。然而，应了解：实际所给药的化合物的量将由医师根据相关情况（包括待治疗的病状、所选给药途径、给药的实际化合物、各患者的年龄、体重和反应及患者症状的严重度）来决定。

Claims (48)

1.下式的化合物：
其中：
X为-CH2-或-CH2-CH2-；
Y’为-NR4R5、-CH(CH3)-环己基-4-基-N-甲基-N-甲氧基乙基或-CH(CH3)-环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基任选地被甲氧基、2-丙氧基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基、环丙氧基、环丙基甲氧基、吡唑基、甲基吡唑基、三唑基、吡咯烷基、四氢呋喃基氧基或吗啉基取代；
R4为被N-甲基-N-甲氧基乙基氨基、N-甲基-N-环丙基氨基或氮杂环丁烷-1-基取代的环己-4-基，其中氮杂环丁烷-1-基被甲氧基、乙氧基、甲氧基乙氧基、环丙氧基、或吡唑基取代；
R5为甲基或乙基；和
R6为甲基或氯；或其药学上可接受的盐。
2.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中X为-CH2-。
3.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中X为-CH2-CH2-。
4.根据权利要求1-3任一项所述的化合物或其盐，其中Y’为-CH(CH3)-环己基-4-基-N-甲基-N-甲氧基乙基或-CH(CH3)-环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基任选地被甲氧基、2-丙氧基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基、环丙氧基、环丙基甲氧基、吡唑基、甲基吡唑基、三唑基、吡咯烷基、四氢呋喃基氧基或吗啉基取代。
5.根据权利要求1-4任一项所述的化合物或其盐，其中Y’为-CH(CH3)-环己-4-基-氮杂环丁烷-1-基，其中氮杂环丁烷-1-基任选地被甲氧基、2-丙氧基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基、环丙氧基、环丙基甲氧基、吡唑基、甲基吡唑基、三唑基、吡咯烷基、四氢呋喃基氧基或吗啉基取代。
6.根据权利要求1-5任一项所述的化合物或其盐，其中R6为甲基。
7.根据权利要求1-3任一项所述的化合物或其盐，其中Y’为-NR4R5。
8.根据权利要求1、3或4-6任一项所述的化合物，其为
或其药学上可接受的盐。
9.根据权利要求8所述的化合物，其为5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-{(1R)-1-[4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]乙基}-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮，或其药学上可接受的盐。
10.根据权利要求9所述的化合物，其为5-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-{(1R)-1-[反式-4-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)环己基]乙基}-3-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-噻吩并[3,2-c]氮杂䓬-4-酮，或其药学上可接受的盐。
11.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
12.一种治疗患者癌症的方法，其中所述癌症选自淋巴瘤、横纹肌样瘤、缺少或缺乏SWI/SNF 复合物、MLL 复合物和组成性活性PI3K 路径之一或多种组分的肿瘤、肉瘤、多发性骨髓瘤、黑色素瘤、胃肠癌、结肠直肠癌、肺癌、肾癌、乳癌、卵巢癌和前列腺癌，包括对患者给予有效量的根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述癌症为弥漫性大B细胞淋巴瘤或滤泡淋巴瘤。
14.根据权利要求12或13所述的方法，其中所述癌症为弥漫性大B细胞淋巴瘤。
15.根据权利要求12所述的方法，其中所述癌症为缺少SNF5的横纹肌样瘤。
16.根据权利要求12所述的方法，其中所述癌症为胃癌。
17.根据权利要求12所述的方法，其中所述癌症为卵巢癌。
18.根据权利要求12所述的方法，其中所述癌症为多发性骨髓瘤。
19.一种治疗患者卵巢癌的方法，包括对患者给予根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐与卡铂和紫杉醇的组合。
20.一种治疗患者胃癌的方法，包括对患者给予根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐与奥沙利铂和紫杉醇的组合。
21.一种治疗患者肺癌的方法，包括对患者给予根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐与吉西他滨和顺铂的组合。
22.一种治疗患者结肠直肠癌的方法，包括对患者给予根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐与伊立替康和奥沙利铂的组合。
23.根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐，其用于治疗。
24.根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐，其用于治疗癌症。
25.根据权利要求24所述使用的化合物或其盐，其中所述癌症选自淋巴瘤、横纹肌样瘤、缺少或缺乏SWI/SNF 复合物、MLL 复合物和组成性活性PI3K 路径之一或多种组分的肿瘤、肉瘤、多发性骨髓瘤、黑色素瘤、胃肠癌、结肠直肠癌、肺癌、肾癌、乳癌、卵巢癌和前列腺癌。
26.根据权利要求25所述使用的化合物或其盐，其中所述癌症为弥漫性大B细胞淋巴瘤或滤泡淋巴瘤。
27.根据权利要求25或26所述使用的化合物或其盐，其中所述癌症为弥漫性大B细胞淋巴瘤。
28.根据权利要求26所述使用的化合物或其盐，其中所述癌症为缺少SNF5的横纹肌样瘤。
29.根据权利要求26所述使用的化合物或其盐，其中所述癌症为胃癌。
30.根据权利要求26所述使用的化合物或其盐，其中所述癌症为卵巢癌。
31.根据权利要求26所述使用的化合物或其盐，其中所述癌症为多发性骨髓瘤。
32.一种组合，其包含根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐与卡铂和紫杉醇，在治疗卵巢癌中同时、分开或顺序地使用。
33.根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐，其在治疗卵巢癌中与卡铂和紫杉醇同时、分开或顺序地组合使用。
34.卡铂，其在治疗卵巢癌中与根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐和紫杉醇同时、分开或顺序地组合使用。
35.紫杉醇，其在治疗卵巢癌中与根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐和卡铂同时、分开或顺序地组合使用。
36.一种组合，其包含根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐与奥沙利铂和紫杉醇，在治疗胃癌中同时、分开或顺序地使用。
37.根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐，其在治疗胃癌中与奥沙利铂和紫杉醇同时、分开或顺序地组合使用。
38.奥沙利铂，其在治疗胃癌中与根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐和紫杉醇同时、分开或顺序地组合使用。
39.紫杉醇，其在治疗胃癌中与根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐和奥沙利铂同时、分开或顺序地组合使用。
40.一种组合，其包含根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐与吉西他滨和顺铂，在治疗肺癌中同时、分开或顺序地使用。
41.根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐，其在治疗肺癌中与吉西他滨和顺铂同时、分开或顺序地组合使用。
42.吉西他滨，其在治疗肺癌中与根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐和顺铂同时、分开或顺序地组合使用。
43.顺铂，其在治疗肺癌中与根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐和吉西他滨同时、分开或顺序地组合使用。
44.一种组合，其包含根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐与伊立替康和奥沙利铂，在治疗结肠直肠癌中同时、分开或顺序地使用。
45.根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐，其在治疗结肠直肠癌中与伊立替康和奥沙利铂同时、分开或顺序地组合使用。
46.伊立替康，其在治疗结肠直肠癌中与根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐和奥沙利铂同时、分开或顺序地组合使用。
47.奥沙利铂，其在治疗结肠直肠癌中与根据权利要求1-10任一项所述的化合物或其盐和伊立替康同时、分开或顺序地组合使用。
48.根据权利要求32-47任一项所述使用的组合、奥沙利铂、吉西他滨、紫杉醇、所述化合物或其盐、伊立替康、顺铂或卡铂。
CN201680049957.2A 2015-08-27 2016-08-22 Ezh2抑制剂 Active CN107922434B (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP15382433 2015-08-27
EP15382433.9 2015-08-27
EP15382615.1 2015-12-11
EP15382615 2015-12-11
PCT/US2016/047989 WO2017035060A1 (en) 2015-08-27 2016-08-22 Inhibitors of ezh2

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107922434A true CN107922434A (zh) 2018-04-17
CN107922434B CN107922434B (zh) 2020-06-19

Family

ID=56801893

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201680049957.2A Active CN107922434B (zh) 2015-08-27 2016-08-22 Ezh2抑制剂

Country Status (31)

Country Link
US (1) US9718838B2 (zh)
EP (1) EP3341379B1 (zh)
JP (1) JP6704040B2 (zh)
KR (1) KR20180030704A (zh)
CN (1) CN107922434B (zh)
AU (1) AU2016313541A1 (zh)
BR (1) BR112018003108A2 (zh)
CA (1) CA2994428A1 (zh)
CO (1) CO2018002033A2 (zh)
CR (1) CR20180104A (zh)
CY (1) CY1122364T1 (zh)
DK (1) DK3341379T3 (zh)
DO (1) DOP2018000058A (zh)
EC (1) ECSP18014798A (zh)
ES (1) ES2756603T3 (zh)
HR (1) HRP20192101T1 (zh)
HU (1) HUE047630T2 (zh)
IL (1) IL257061A (zh)
LT (1) LT3341379T (zh)
MD (1) MD3341379T2 (zh)
ME (1) ME03650B (zh)
MX (1) MX2018002484A (zh)
PE (1) PE20181025A1 (zh)
PH (1) PH12018500423A1 (zh)
PL (1) PL3341379T3 (zh)
PT (1) PT3341379T (zh)
RS (1) RS59615B1 (zh)
SI (1) SI3341379T1 (zh)
TN (1) TN2018000058A1 (zh)
TW (1) TW201718598A (zh)
WO (1) WO2017035060A1 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111601791A (zh) * 2018-04-24 2020-08-28 上海海雁医药科技有限公司 Ezh2抑制剂及其药学上可接受的盐和多晶型物及其应用
CN111909157A (zh) * 2019-05-07 2020-11-10 南京药石科技股份有限公司 Ezh2抑制剂及其用途

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1191860C (zh) * 1999-04-22 2005-03-09 比奥根公司 利用整联蛋白α4亚单位的拮抗剂治疗纤维变性的方法
UY36758A (es) * 2015-06-30 2016-12-30 Glaxosmithkline Ip No 2 Ltd Inhibidores del potenciador del homólogo zeste 2
WO2017191545A1 (en) * 2016-05-05 2017-11-09 Glaxosmithkline Intellectual Property (No.2) Limited Enhancer of zeste homolog 2 inhibitors
US20200129519A1 (en) * 2016-06-08 2020-04-30 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for cancer
US10266542B2 (en) 2017-03-15 2019-04-23 Mirati Therapeutics, Inc. EZH2 inhibitors
CN109942556A (zh) * 2017-12-21 2019-06-28 上海青煜医药科技有限公司 嘧啶酮化合物及其应用
CN112004816B (zh) 2018-01-31 2024-01-05 米拉蒂医疗股份有限公司 Prc2抑制剂
EP3823671B1 (en) 2018-07-09 2024-02-07 Fondation Asile Des Aveugles Inhibition of prc2 subunits to treat eye disorders

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014177982A1 (en) * 2013-04-30 2014-11-06 Glaxosmithkline Intellectual Property (No.2) Limited Enhancer of zeste homolog 2 inhibitors
CN104870435A (zh) * 2012-12-21 2015-08-26 辉瑞大药厂 芳基和杂芳基稠合的内酰胺类

Family Cites Families (58)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2004504342A (ja) * 2000-07-24 2004-02-12 ファルマシア・アンド・アップジョン・カンパニー 極めて水不溶性の脂肪親和性薬剤用の自己乳化性ドラッグデリバリーシステム
AU2001212168A1 (en) * 2000-10-20 2002-05-06 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Acylsemicarbazides and their use as cyclin dependent kinase (CDK) inhibitors
JP2005508322A (ja) * 2001-09-24 2005-03-31 ジェシー エル エス オウ 併用療法に用いられるスラミンの化学増感用量を決定するための方法及び成分
EP1620449A4 (en) 2003-02-14 2008-10-01 Smithkline Beecham Corp NUCLEIC ACIDS WITH DIFFERENTIAL EXPRESSION THAT CORRELATE WITH KSP EXPRESSION
WO2011140325A1 (en) 2010-05-07 2011-11-10 Glaxosmithkline Llc Indazoles
SI2566327T1 (sl) 2010-05-07 2017-07-31 Glaxosmithkline Llc Indoli
US8637509B2 (en) 2010-05-07 2014-01-28 Glaxosmithkline Llc Azaindazoles
US9175331B2 (en) 2010-09-10 2015-11-03 Epizyme, Inc. Inhibitors of human EZH2, and methods of use thereof
JP6389036B2 (ja) 2010-09-10 2018-09-12 エピザイム インコーポレイテッド ヒトｅｚｈ２の阻害剤、およびその使用方法
WO2012068589A2 (en) 2010-11-19 2012-05-24 Constellation Pharmaceuticals Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
US8765792B2 (en) 2010-12-01 2014-07-01 Glaxosmithkline Llc Indoles
JP2014511389A (ja) 2011-02-28 2014-05-15 エピザイム インコーポレイテッド 置換６，５−縮合二環式ヘテロアリール化合物
TWI598336B (zh) 2011-04-13 2017-09-11 雅酶股份有限公司 經取代之苯化合物
JO3438B1 (ar) 2011-04-13 2019-10-20 Epizyme Inc مركبات بنزين مستبدلة بأريل أو أريل غير متجانس
US9073924B2 (en) 2011-09-13 2015-07-07 Glaxosmithkline Llc Azaindazoles
BR112014007603A2 (pt) 2011-09-30 2017-06-13 Glaxosmithkline Llc métodos de tratamento do câncer
WO2013067302A1 (en) 2011-11-04 2013-05-10 Glaxosmithkline Intellectual Property (No. 2) Limited Method of treatment
KR20140095073A (ko) 2011-11-04 2014-07-31 글락소스미스클라인 인털렉츄얼 프로퍼티 (넘버 2) 리미티드 치료 방법
WO2013067300A1 (en) 2011-11-04 2013-05-10 Glaxosmithkline Intellectual Property (No. 2) Limited Method of treatment
US9206128B2 (en) 2011-11-18 2015-12-08 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
EP2780013A4 (en) 2011-11-18 2015-07-01 Constellation Pharmaceuticals Inc MODULATORS OF METHYL MODIFYING ENZYMES, COMPOSITIONS AND USES THEREOF
WO2013078320A1 (en) 2011-11-21 2013-05-30 Constellation Pharmaceuticals Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
US9085583B2 (en) 2012-02-10 2015-07-21 Constellation—Pharmaceuticals, Inc. Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
AU2013232229B2 (en) * 2012-03-12 2017-11-23 Epizyme, Inc. Inhibitors of human EZH2, and methods of use thereof
US20150108176A1 (en) 2012-04-12 2015-04-23 E I Du Pont De Nemours And Company Can tap
RU2019126908A (ru) 2012-04-13 2020-01-13 Эпизайм, Инк. Комбинированная терапия для лечения рака
HUE060881T2 (hu) 2012-04-13 2023-04-28 Epizyme Inc Sóforma az EZH2 gátláshoz
US9562041B2 (en) 2012-05-16 2017-02-07 Glaxosmithkline Llc Enhancer of zeste homolog 2 inhibitors
JP2015518053A (ja) * 2012-05-31 2015-06-25 アムジエン・インコーポレーテツド 癌の治療のためのａｍｇ９００の使用
JP6254169B2 (ja) 2012-09-28 2017-12-27 ファイザー・インク ベンズアミドおよびヘテロベンズアミド化合物
EP2906537B1 (en) 2012-10-15 2020-03-11 Epizyme, Inc. Substituted benzene compounds
CA2887243C (en) 2012-10-15 2024-04-09 Epizyme, Inc. Methods of treating cancer
KR20150095779A (ko) 2012-12-13 2015-08-21 글락소스미스클라인 엘엘씨 제스트 인핸서 상동체 2 억제제
US20150313906A1 (en) 2012-12-19 2015-11-05 Glaxosmithkline Llc Combination
AU2013361079B2 (en) 2012-12-21 2018-07-26 Epizyme, Inc. 1,4-pyridone bicyclic heteroaryl compounds
WO2014100646A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Epizyme, Inc. 1,4-pyridone compounds
CN105102446B (zh) 2013-02-11 2018-01-23 星座制药公司 甲基修饰酶的调节剂、其组合物及用途
US9745305B2 (en) 2013-03-15 2017-08-29 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
JP2016523955A (ja) 2013-07-10 2016-08-12 グラクソスミスクライン、インテレクチュアル、プロパティー、ナンバー２、リミテッドＧｌａｘｏｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ Ｎｏ．２ Ｌｉｍｉｔｅｄ Ｚｅｓｔｅホモログ２エンハンサー阻害剤
WO2015010078A2 (en) 2013-07-19 2015-01-22 Epizyme, Inc. Substituted 6,5-fused bicyclic heteroaryl compounds
US10150764B2 (en) 2013-07-19 2018-12-11 Epizyme, Inc. Substituted benzene compounds
US9969716B2 (en) 2013-08-15 2018-05-15 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Indole derivatives as modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
AU2014337121A1 (en) 2013-10-18 2016-04-14 Epizyme, Inc. Method of treating cancer
WO2015077193A1 (en) 2013-11-19 2015-05-28 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of lysine methyl transferase
US9822103B2 (en) 2013-11-22 2017-11-21 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of lysine methyl transferase
WO2015104677A1 (en) 2014-01-10 2015-07-16 Piramal Enterprises Limited Heterocyclic compounds as ezh2 inhibitors
BR112016020621B1 (pt) 2014-03-17 2022-06-07 Daiichi Sankyo Company, Limited Composto, composição farmacêutica, inibidor de atividade da enzima ezh1 e/ou ezh2, agente terapêutico para tumores, e, agente antitumor
WO2015193768A1 (en) 2014-06-17 2015-12-23 Pfizer Inc. Aryl fused lactams as ezh2 modulators
EP3521285A1 (en) 2014-06-17 2019-08-07 Pfizer Inc Substituted dihydroisoquinolinone compounds
SG10201811128RA (en) 2014-06-17 2019-01-30 Epizyme Inc Ezh2 inhibitors for treating lymphoma
EA036889B1 (ru) 2014-06-19 2021-01-12 Мемориал Слоан-Кеттеринг Кэнсер Сентер Биомаркеры ответа на ингибиторы ezh2
WO2015200650A1 (en) 2014-06-25 2015-12-30 Epizyme, Inc. Substituted benzene and 6,5-fused bicyclic heteroaryl compounds
MA40848A (fr) 2014-10-28 2021-05-05 Glaxosmithkline Ip No 2 Ltd Inhibiteurs d'ezh2 (enhancer of zeste homolog 2)
AR102767A1 (es) 2014-12-05 2017-03-22 Lilly Co Eli Inhibidores de ezh2
WO2016102493A1 (en) 2014-12-22 2016-06-30 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Imidazopyridine ezh2 inhibitors
WO2016130396A1 (en) 2015-02-13 2016-08-18 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
WO2016140501A1 (en) 2015-03-04 2016-09-09 Kainos Medicine, Inc. Pyridine n-oxide for enhancer of zeste homolog 2 inhibitors
UY36758A (es) 2015-06-30 2016-12-30 Glaxosmithkline Ip No 2 Ltd Inhibidores del potenciador del homólogo zeste 2

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104870435A (zh) * 2012-12-21 2015-08-26 辉瑞大药厂 芳基和杂芳基稠合的内酰胺类
WO2014177982A1 (en) * 2013-04-30 2014-11-06 Glaxosmithkline Intellectual Property (No.2) Limited Enhancer of zeste homolog 2 inhibitors

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111601791A (zh) * 2018-04-24 2020-08-28 上海海雁医药科技有限公司 Ezh2抑制剂及其药学上可接受的盐和多晶型物及其应用
CN111601791B (zh) * 2018-04-24 2022-10-04 上海海雁医药科技有限公司 Ezh2抑制剂及其药学上可接受的盐和多晶型物及其应用
CN111909157A (zh) * 2019-05-07 2020-11-10 南京药石科技股份有限公司 Ezh2抑制剂及其用途
WO2020224607A1 (zh) * 2019-05-07 2020-11-12 南京药石科技股份有限公司 Ezh2抑制剂及其用途
CN113365989A (zh) * 2019-05-07 2021-09-07 南京药石科技股份有限公司 Ezh2抑制剂及其用途
CN111909157B (zh) * 2019-05-07 2023-02-03 南京药石科技股份有限公司 Ezh2抑制剂及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
DOP2018000058A (es) 2018-03-30
JP6704040B2 (ja) 2020-06-03
TW201718598A (zh) 2017-06-01
JP2018530527A (ja) 2018-10-18
EP3341379B1 (en) 2019-10-09
CY1122364T1 (el) 2021-01-27
MX2018002484A (es) 2018-06-15
PT3341379T (pt) 2019-12-16
CN107922434B (zh) 2020-06-19
CO2018002033A2 (es) 2018-05-21
ME03650B (me) 2020-07-20
LT3341379T (lt) 2019-12-10
EP3341379A1 (en) 2018-07-04
KR20180030704A (ko) 2018-03-23
SI3341379T1 (sl) 2019-11-29
ECSP18014798A (es) 2018-04-30
HRP20192101T1 (hr) 2020-02-21
PL3341379T3 (pl) 2020-05-18
TN2018000058A1 (en) 2019-07-08
HUE047630T2 (hu) 2021-12-28
RS59615B1 (sr) 2020-01-31
PE20181025A1 (es) 2018-06-27
AU2016313541A1 (en) 2018-02-15
US20170066780A1 (en) 2017-03-09
ES2756603T3 (es) 2020-04-27
DK3341379T3 (da) 2019-12-02
PH12018500423A1 (en) 2018-08-29
CA2994428A1 (en) 2017-03-02
BR112018003108A2 (pt) 2018-09-25
WO2017035060A1 (en) 2017-03-02
MD3341379T2 (ro) 2020-01-31
IL257061A (en) 2018-03-29
CR20180104A (es) 2018-04-24
US9718838B2 (en) 2017-08-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107922434A (zh) Ezh2抑制剂
US10813936B2 (en) Crystalline form of (S)-N-(5-((R)-2-(2,5-difluorophenyl)-pyrrolidin-1-YL)-pyrazolo[1,5-A]pyrimidin-3-YL)-3-hydroxypyrrolidine-1-carboxamide hydrogen sulfate
CA3087089C (en) Fused ring compounds
JP5581390B2 (ja) Ａｋｔ阻害剤
KR20230113416A (ko) 테트라하이드로-피리도[3,4-b]인돌 에스트로겐 수용체조절제 및 이의 용도
CN104520300A (zh) 作为激酶抑制剂的咪唑并[1,2-b]哒嗪衍生物
CN104513229A (zh) 喹唑啉衍生物及其制备方法
CN106008511A (zh) 蝶啶酮衍生物及其作为egfr、blk、flt3抑制剂的应用
JP2023052462A (ja) ブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤のコハク酸塩形態および組成物
KR20170095243A (ko) Pi3kbeta 저해제로서의 헤테로사이클릴 연결된 이미다조피리다진 유도체
KR20160119100A (ko) 아미노피라졸론 유도체
TW201902892A (zh) 化合物
EP3514150A1 (en) Heterocyclic amide compound
Van der Westhuizen 2015-06-10 Synthesis of potentially irreversible Akt inhibitors

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant