KR20180030704A - Ezh2의 억제제 - Google Patents

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데키 구오
매리 마가렛 메이더
안-쿠안 한나 뉴엔
미리암 필라델파 델 프라도
마이클 엔리코 리쳇
마이클 존 로드리게즈
이본 이 마이 입
쿠오-롱 유
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일라이 릴리 앤드 캄파니
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Abstract

본 발명은 히스톤 리신 메틸트랜스퍼라제인 제스트 인핸서 상동체 2 (EZH2)의 활성을 억제하는 화합물, 상기 화합물을 포함하는 제약 조성물, 및 암, 예컨대 혈액 및 고형 종양을 치료하기 위해 상기 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다.

Description

EZH2의 억제제
본 발명은 히스톤 리신 메틸트랜스퍼라제인 제스트 인핸서 상동체 2 (EZH2, Enhancer of Zeste Homolog 2)의 활성을 억제하는 화합물, 상기 화합물을 포함하는 제약 조성물, 및 암, 예컨대 혈액 및 고형 종양을 치료하기 위해 상기 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다.
EZH2는 EZH2 유전자에 의해 코딩되며, 염색질에서 히스톤 3 상의 리신 27 (H3K27)의 메틸화를 담당하는 폴리콤 억제 복합체 2 (PRC2) 내에 있는 촉매 구성성분이다. EZH2 과다발현은 종양 저해제 유전자의 발현을 침묵시키는 히스톤 메틸화 증가의 결과로서 암을 촉진시키는 것으로 생각된다. EZH2의 촉매 활성은 S-아데노실메티오닌 (SAM) 보조인자 및 리신 기질 잔기를 위한 결합 포켓을 제공하는, 130개 아미노산 Su(var)3-9, 제스트 인핸서 및 트리토락스 (SET) 도메인에 의해 매개된다. 코어 PRC2 복합체는 EZH2 및 단백질 EED (배아 외배엽 발달), SUZ12 (제스트 저해제 12 상동체) 및 RbAp46/48 (RBBP7/4로도 공지됨)로 구성되며, 다른 단백질, 예컨대 JARID2, AEBP2, 및 폴리콤 유사 (PCL) 1/2/3 또한 포함할 수 있다.
EZH2의 과다발현 외에도, 증가된 H3K27 메틸화는 또한 EZH2의 촉매 효율을 증가시키는 돌연변이, 예컨대 Y641N, A677G 및 A678V로 인해 발생할 수 있다. 또한, H3K27 메틸화의 수준이 다양한 신호전달 경로, 예컨대 VEGFR2 및 PI3K/AKT와 관련된 경로를 통해 고형 종양에서 조절될 수 있음이 보고되었다.
SWI/SNF 및 PRC2 복합체는 각각 전사의 활성화 및 억제에서 길항적인 역할을 한다. SWI/SNF 단백질 SNF5 (SMARCB1/INI1로도 공지됨)가 결여되거나 그에 결함이 있는 종양은 PRC2에 의한 비정상적인 메틸화 및 억제를 입증할 수 있고, EZH2 소분자 억제제로 처리한 후에 성장이 억제된다. PI3K 경로, 예컨대 PIK3CA의 구성성분에서의 구성적 활성화 돌연변이와 조합된 SWI/SNF 단백질 ARID1A (BAF250으로도 공지됨)가 결여되거나 그에 결함이 있는 종양 또한 EZH2 소분자 억제제로 처리한 후에 성장이 억제된다. 또한, SMARCA2 (BRM으로도 공지됨) 및 SMARCA4 (BRG1로도 공지됨) 둘 다가 결여되거나 그에 결함이 있는 종양 또한 EZH2 소분자 억제제로 처리한 후에 성장이 억제된다.
H3K4 메틸트랜스퍼라제 (MLL 또는 COMPASS로도 공지됨) 복합체는 PRC2의 억제 효과를 길항시키는데 있어서 SWI/SNF 복합체와 협력한다 (Van der Meulen, J. et al. (2014) Epigenetics 9:658-68, Xu, B. et al. (2015) Exp. Hematol. 43:698-712에서 검토됨). H3K4 메틸트랜스퍼라제 복합체 구성성분, 예컨대 비제한적으로 MLL2 (본원에서 위암의 환자- 유래된 이종이식 모델에서 EZH2 억제제 + 표준 치료 화학요법으로의 조합 치료에 대한 데이터가 도시됨), MLL3 (본원에서 폐암의 환자- 유래된 이종이식 모델에서 EZH2 억제제 + 표준 치료 화학요법으로의 조합 치료에 대한 데이터가 도시됨), 리신-특이적 데메틸라제 6A (편재적으로 전사된 테트라트리코펩티드 반복부, X 염색체 (UTX)로도 공지됨) (KDM6A로도 공지됨 [Ezponda, T. et al. (2014) Blood 124:611])의 결여 또는 결함을 단독으로 또는 상기 기재된 SWI/SNF 복합체 구성성분의 결여 또는 결함, 예컨대 비제한적으로 ARID1A (본원에서 위암의 환자- 유래된 이종이식 모델에서 EZH2 억제제 + 표준 치료 화학요법으로의 조합 치료에 대한 데이터가 도시됨)와 조합하여 갖는 종양은, EZH2 소분자 억제제를 단일 작용제로서 또는 표준 치료 (SOC) 화학요법제와 조합하여 처리한 후에 성장이 억제된다. 배중심 B-세포 기원을 가진 림프종은 EZH2에서의 변화에 의해 성장이 억제되고 (Beguelin et al. (2013) Cancer Cell 23:677-92; Velichutina, I. et al. (2010) Blood 116:5247-5255), 또한 MLL2, CREBBP, EP300, ARID1A 및 SMARCA4에서의 돌연변이 빈도가 매우 높다 (Lunning, M.A. and Green, M.R. (2015) Blood Cancer Journal 5, e361; Carbone, A. et al. (2014) Ann. Hematol. 93:1263-1277).
일부 EZH2 억제제는 문헌을 통해 이미 공지되어 있다. 예를 들어 WO2012/142504, WO2012/142513, WO2013/120104, WO2013/173441, WO2013/075083, WO2014/177982, WO2014/097041, 및 WO2016/066697을 참고한다.
암의 치료를 위한 대안적인 EZH2 억제제를 제공하는 것이 여전히 요구된다. 따라서, 본 발명은 암 치료에 유용할 수 있는 EZH2의 특정 억제제를 제공한다.
본 발명은 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00001
여기서
X는 -CH2- 또는 -CH2-CH2-이고;
Y'는 -NR4R5, CH(CH3)-시클로헥스-4-일-디메틸아미노, CH(CH3)-시클로헥스-4-일-N-메틸-N-메톡시에틸아미노, 또는 -CH(CH3)-시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시, 2-프로폭시, 메톡시메틸, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시, 시클로프로필메톡시, N-트리아졸릴, N-피롤리디닐, 모르폴리닐, 테트라히드로푸란-3-일옥시, 또는 메틸로 임의로 치환된 N-피라졸릴로 임의로 치환되고;
R4는 디메틸아미노, N-메틸-N-메톡시에틸아미노, N-메틸-N-시클로프로필아미노 또는 아제티딘-1-일로 치환된 피페리딘-4-일 또는 시클로헥스-4-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시, 에톡시, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시, 또는 메틸로 임의로 치환된 N-피라졸릴로 치환되고;
R5는 메틸 또는 에틸이고;
R6은 메틸 또는 클로로이다.
본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00002
여기서
X는 -CH2- 또는 -CH2-CH2-이고;
Y'는 -NR4R5, -CH(CH3)-시클로헥실-4-일-N-메틸-N-메톡시에틸, 또는 -CH(CH3)-시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시, 2-프로폭시, 메톡시메틸, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시, 시클로프로필메톡시, 피라졸릴, 메틸피라졸릴, 트리아졸릴, 피롤리디닐, 테트라히드로푸라닐옥시 또는 모르폴리닐로 임의로 치환되고;
R4는 N-메틸-N-메톡시에틸아미노, N-메틸-N-시클로프로필아미노 또는 아제티딘-1-일로 치환된 시클로헥스-4-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시, 에톡시, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시 또는 피라졸릴로 치환되고;
R5는 메틸 또는 에틸이고;
R6은 메틸 또는 클로로이다.
본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00003
여기서
X는 -CH2-이고;
Y'는 -NR4R5, CH(CH3)-시클로헥스-4-일-디메틸아미노, CH(CH3)-시클로헥스-4-일-N-메틸-N-메톡시에틸아미노, 또는 -CH(CH3)-시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시, 2-프로폭시, 메톡시메틸, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시, 시클로프로필메톡시, N-트리아졸릴, N-피롤리디닐, 모르폴리닐, 테트라히드로푸란-3-일옥시, 또는 메틸로 임의로 치환된 N-피라졸릴로 임의로 치환되고;
R4는 디메틸아미노, N-메틸-N-메톡시에틸아미노, N-메틸-N-시클로프로필아미노 또는 아제티딘-1-일로 치환된 시클로헥스-4-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시, 에톡시, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시, 또는 메틸로 임의로 치환된 N-피라졸릴이고;
R5는 메틸 또는 에틸이고;
R6은 메틸 또는 클로로이다.
본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00004
여기서
X는 -CH2-이고;
Y'는 -NR4R5, CH(CH3)-시클로헥스-4-일-N-메틸-N-메톡시에틸아미노, 또는 -CH(CH3)-시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시, 2-프로폭시, 메톡시메틸, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시, 시클로프로필메톡시, N-트리아졸릴, N-피롤리디닐, 모르폴리닐, 테트라히드로푸란-3-일옥시, 또는 메틸로 임의로 치환된 N-피라졸릴로 임의로 치환되고;
R4는 N-메틸-N-메톡시에틸아미노, N-메틸-N-시클로프로필아미노 또는 아제티딘-1-일로 치환된 시클로헥스-4-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시, 에톡시, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시, 또는 메틸로 임의로 치환된 N-피라졸릴로 치환되고;
R5는 메틸 또는 에틸이고;
R6은 메틸 또는 클로로이다.
본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00005
여기서
X는 -CH2- 또는 -CH2-CH2-이고;
Y'는 -CH(CH3)-시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시, 프로폭시, 메틸메톡시, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시, 시클로프로필메톡시, 모르폴리닐, N-트리아졸릴, N-피롤리디닐, 테트라히드로푸란-3-일옥시, 또는 메틸로 임의로 치환된 N-피라졸릴로 임의로 치환되고;
R6은 메틸이다.
본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
여기서
X는 -CH2-이고;
Y'는 -CH(CH3)-시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시, 프로폭시, 메틸메톡시, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시, 시클로프로필메톡시, 모르폴리닐, N-트리아졸릴, N-피롤리디닐, 테트라히드로푸란-3-일옥시, 또는 메틸로 임의로 치환된 N-피라졸릴로 임의로 치환되고;
R6은 메틸이다.
본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00007
여기서
X는 -CH2-CH2-이고;
Y'는 -CH(CH3)-시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시, 프로폭시, 메틸메톡시, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시, 시클로프로필메톡시, 모르폴리닐, N-트리아졸릴, N-피롤리디닐, 테트라히드로푸란-3-일옥시, 또는 메틸로 임의로 치환된 N-피라졸릴로 임의로 치환되고;
R6은 메틸이다.
본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00008
여기서
X는 -CH2- 또는 -CH2-CH2-이고;
Y'는 -NR4R5이고;
R4는 시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시, 에톡시, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시, 또는 메틸로 임의로 치환된 N-피라졸릴로 치환되고;
R5는 메틸 또는 에틸이고;
R6은 메틸 또는 클로로이다.
본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00009
여기서
X는 -CH2-이고;
Y'는 -NR4R5이고;
R4는 시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시, 에톡시, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시, 또는 메틸로 임의로 치환된 N-피라졸릴로 치환되고;
R5는 메틸 또는 에틸이고;
R6은 메틸 또는 클로로이다.
본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00010
여기서
X는 -CH2-CH2-이고;
Y'는 -NR4R5이고;
R4는 시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시, 에톡시, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시, 또는 메틸로 임의로 치환된 N-피라졸릴로 치환되고;
R5는 메틸 또는 에틸이고;
R6은 메틸이다.
본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00011
여기서
X는 -CH2- 또는 -CH2-CH2-이고;
Y'는 -CH(CH3)-시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시, 프로폭시, 메틸메톡시, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시, 시클로프로필메톡시, 모르폴리닐, N-트리아졸릴, N-피롤리디닐, 테트라히드로푸란-3-일옥시, 또는 메틸로 임의로 치환된 N-피라졸릴로 임의로 치환되고;
R6은 메틸 또는 클로로이고;
여기서, 6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온의 2 위치에 부착된 탄소는 (R) 배치를 갖는다.
본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00012
여기서
X는 -CH2- 또는 -CH2-CH2-이고;
Y'는 -CH[CH3]-시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시, 프로폭시, 메틸메톡시, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시, 시클로프로필메톡시, 모르폴리닐, N-트리아졸릴, N-피롤리디닐, 테트라히드로푸란-3-일옥시, 또는 메틸로 임의로 치환된 N-피라졸릴로 임의로 치환되고;
R6은 메틸 또는 클로로이고;
여기서, 6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온의 2 위치에 부착된 탄소는 (R) 배위를 갖고, 시클로헥산 고리는 트랜스 배위를 갖는다.
본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00013
여기서
X는 -CH2- 또는 -CH2-CH2-이고;
Y'는 -NR4R5이고;
R4는 시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시, 에톡시, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시, 또는 메틸로 임의로 치환된 N-피라졸릴로 치환되고;
R5는 메틸 또는 에틸이고;
R6은 메틸 또는 클로로이고;
여기서, 시클로헥산 고리는 트랜스 배위를 갖는다.
본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00014
여기서
X는 -CH2- 또는 -CH2-CH2-이고;
Y는 CHCH3, N(CH3), 또는 N(CH2CH3)이다.
본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00015
여기서
X는 -CH2- 또는 -CH2-CH2-이고;
Y는 CHCH3, N(CH3), 또는 N(CH2CH3)이고;
R7은 수소, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 메틸메톡시, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시, 시클로프로필메톡시, 모르폴리닐, N-트리아졸릴, N-피롤리디닐, 테트라히드로푸란-3-일옥시, 또는 메틸로 임의로 치환된 N-피라졸릴이다.
본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00016
여기서
X는 -CH2- 또는 -CH2-CH2-이고;
Y는 CHCH3, N(CH3), 또는 N(CH2CH3)이고;
R7은 수소, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 메틸메톡시, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시, 시클로프로필메톡시, 모르폴리닐, N-트리아졸릴, N-피롤리디닐, 테트라히드로푸란-3-일옥시, 또는 메틸로 임의로 치환된 N-피라졸릴이다.
본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00017
여기서
X는 -CH2- 또는 -CH2-CH2-이고;
Y는 CHCH3, N(CH3), 또는 N(CH2CH3)이다.
본 발명은 하기 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00018
본 발명은 하기 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00019
본 발명은 하기 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00020
본 발명은 하기 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00021
본 발명은 하기 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00022
본 발명은 하기 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00023
본 발명은 하기 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00024
본 발명은 하기 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00025
본 발명은 하기 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00026
본 발명은 하기 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00027
본 발명은 하기 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00028
본 발명은 하기 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00029
본 발명은 하기 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00030
본 발명은 본 발명의 화합물 또는 그의 염의 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 림프종, 횡문근양 종양, SWI/SNF 복합체 (예를 들어, SNF5), MLL 복합체 및 구성적 활성 PI3K 경로의 1종 이상의 구성성분이 결여되거나 그에 결함이 있는 종양, 육종, 다발성 골수종, 흑색종, 위암, 결장직장암, 폐암, 신장암, 유방암, 난소암 및 전립선암으로 이루어진 군으로부터 선택된 암을 치료하는 방법을 제공한다. 바람직하게는, 상기 암은 미만성 대 B-세포 림프종 또는 여포성 림프종이다. 바람직하게는, 상기 암은 미만성 대 B-세포 림프종이다. 바람직하게는, 상기 암은 위암이다. 바람직하게는, 상기 암은 난소암이다. 바람직하게는, 상기 암은 다발성 골수종이다. 바람직하게는, 상기 암은 폐암이다. 바람직하게는, 상기 암은 결장직장암이다. 바람직하게는, 상기 암은 야생형 (WT) EZH2를 보유하는 고형 또는 혈액 종양, 뿐만 아니라 돌연변이 EZH2를 보유하는 고형 또는 혈액 종양이다. 바람직하게는, 상기 암은 WT EZH2를 보유하는 고형 또는 혈액 종양이다. 바람직하게는, 상기 암은 돌연변이 EZH2를 보유하는 고형 또는 혈액 종양이다.
본 발명은 또한 본 발명의 화합물 또는 그의 염을 카르보플라틴 및 파클리탁셀과 조합하여 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 난소암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 화합물 또는 그의 염을 옥살리플라틴 및 파클리탁셀과 조합하여 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 위암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 화합물 또는 그의 염을 겜시타빈 및 시스플라틴과 조합하여 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 폐암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 화합물 또는 그의 염을 이리노테칸 및 옥살리플라틴과 조합하여 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 결장직장암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 난소암의 치료를 위한 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 카르보플라틴 및 파클리탁셀을 포함하는 키트가 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 난소암의 치료를 위한 본 발명의 화합물 또는 그의 염과 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제, 및 카르보플라틴과 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제, 및 파클리탁셀과 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 키트가 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 위암의 치료를 위한 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 옥살리플라틴 및 파클리탁셀을 포함하는 키트가 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 위암의 치료를 위한 본 발명의 화합물 또는 그의 염과 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제, 및 옥살리플라틴과 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제, 및 파클리탁셀과 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 키트가 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 폐암의 치료를 위한 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 겜시타빈 및 시스플라틴을 포함하는 키트가 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 폐암의 치료를 위한 본 발명의 화합물 또는 그의 염과 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제, 및 겜시타빈과 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제, 및 시스플라틴과 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 키트가 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 결장직장암의 치료를 위한 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 이리노테칸 및 옥살리플라틴을 포함하는 키트가 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 결장직장암의 치료를 위한 본 발명의 화합물 또는 그의 염과 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제, 및 이리노테칸과 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제, 및 옥살리플라틴과 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 키트가 제공된다.
본 발명은 요법에서 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 그의 염을 제공한다. 추가로, 본 발명은 림프종, 횡문근양 종양, SWI/SNF 복합체 (예를 들어, SNF5), MLL 복합체 및 구성적 활성 PI3K 경로의 1종 이상의 구성성분이 결여되거나 그에 결함이 있는 종양, 육종, 다발성 골수종, 흑색종, 위장암, 결장직장암, 폐암, 신장암, 유방암, 난소암 및 전립선암으로 이루어진 군으로부터 선택된 암의 치료에서 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 그의 염을 제공한다. 바람직하게는, 상기 암은 미만성 대 B-세포 림프종 또는 여포성 림프종이다. 바람직하게는, 상기 암은 미만성 대 B-세포 림프종이다. 바람직하게는, 상기 암은 위암이다. 바람직하게는, 상기 암은 난소암이다. 바람직하게는, 상기 암은 다발성 골수종이다. 바람직하게는, 상기 암은 폐암이다. 바람직하게는, 상기 암은 결장직장암이다. 바람직하게는, 상기 암은 야생형 (WT) EZH2를 보유하는 고형 또는 혈액 종양, 뿐만 아니라 돌연변이 EZH2를 보유하는 고형 또는 혈액 종양이다. 바람직하게는, 상기 암은 WT EZH2를 보유하는 고형 또는 혈액 종양이다. 바람직하게는, 상기 암은 돌연변이 EZH2를 보유하는 고형 또는 혈액 종양이다.
더욱이, 본 발명은 림프종, 횡문근양 종양, SWI/SNF 복합체 (예를 들어, SNF5), MLL 복합체 및 구성적 활성 PI3K 경로의 1종 이상의 구성성분이 결여되거나 그에 결함이 있는 종양, 육종, 다발성 골수종, 흑색종, 위장암, 결장직장암, 폐암, 신장암, 유방암, 난소암 및 전립선암으로 이루어진 군으로부터 선택된 암의 치료를 위한 의약의 제조에서 본 발명의 화합물 또는 그의 염의 용도를 제공한다. 바람직하게는, 상기 암은 미만성 대 B-세포 림프종 또는 여포성 림프종이다. 바람직하게는, 상기 암은 미만성 대 B-세포 림프종이다. 바람직하게는, 상기 암은 위암이다. 바람직하게는, 상기 암은 난소암이다. 바람직하게는, 상기 암은 다발성 골수종이다. 바람직하게는, 상기 암은 폐암이다. 바람직하게는, 상기 암은 결장직장암이다. 바람직하게는, 상기 암은 야생형 (WT) EZH2를 보유하는 고형 또는 혈액 종양, 뿐만 아니라 돌연변이 EZH2를 보유하는 고형 또는 혈액 종양이다. 바람직하게는, 상기 암은 WT EZH2를 보유하는 고형 또는 혈액 종양이다. 바람직하게는, 상기 암은 돌연변이 EZH2를 보유하는 고형 또는 혈액 종양이다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 난소암의 치료에서 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 카르보플라틴 및 파클리탁셀을 포함하는 조합물이 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 난소암의 치료에서 카르보플라틴 및 파클리탁셀과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 그의 염이 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 난소암의 치료에서 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 파클리탁셀과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 카르보플라틴이 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 난소암의 치료에서 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 카르보플라틴과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 파클리탁셀이 제공된다.
본 발명은 또한 난소암의 치료를 위한 의약의 제조에서 카르보플라틴 및 파클리탁셀과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 투여되는 본 발명의 화합물 또는 그의 염의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 난소암의 치료를 위한 의약의 제조에서 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 파클리탁셀과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 투여되는 카르보플라틴의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 난소암의 치료를 위한 의약의 제조에서 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 카르보플라틴과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 투여되는 파클리탁셀의 용도를 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 위암의 치료에서 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 옥살리플라틴 및 파클리탁셀을 포함하는 조합물이 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 위암의 치료에서 옥살리플라틴 및 파클리탁셀과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 그의 염이 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 위암의 치료에서 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 파클리탁셀과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 옥살리플라틴이 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 위암의 치료에서 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 옥살리플라틴과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 파클리탁셀이 제공된다.
본 발명은 또한 위암의 치료를 위한 의약의 제조에서 옥살리플라틴 및 파클리탁셀과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 투여되는 본 발명의 화합물 또는 그의 염의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 위암의 치료를 위한 의약의 제조에서 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 파클리탁셀과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 투여되는 옥살리플라틴의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 위암의 치료를 위한 의약의 제조에서 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 옥살리플라틴과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 투여되는 파클리탁셀의 용도를 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 폐암의 치료에서 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 겜시타빈 및 시스플라틴을 포함하는 조합물이 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 폐암의 치료에서 겜시타빈 및 시스플라틴과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 그의 염이 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 폐암의 치료에서 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 시스플라틴과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 겜시타빈이 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 폐암의 치료에서 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 겜시타빈과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 시스플라틴이 제공된다.
본 발명은 또한 폐암의 치료를 위한 의약의 제조에서 겜시타빈 및 시스플라틴과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 투여되는 본 발명의 화합물 또는 그의 염의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 폐암의 치료를 위한 의약의 제조에서 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 시스플라틴과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 투여되는 겜시타빈의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 폐암의 치료를 위한 의약의 제조에서 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 겜시타빈과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 투여되는 시스플라틴의 용도를 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 결장직장암의 치료에서 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 이리노테칸 및 옥살리플라틴을 포함하는 조합물이 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 결장직장암의 치료에서 이리노테칸 및 옥살리플라틴과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 그의 염이 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 결장직장암의 치료에서 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 옥살리플라틴과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 이리노테칸이 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 결장직장암의 치료에서 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 이리노테칸과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 옥살리플라틴이 제공된다.
본 발명은 또한 결장직장암의 치료를 위한 의약의 제조에서 이리노테칸 및 옥살리플라틴과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 투여되는 본 발명의 화합물 또는 그의 염의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 결장직장암의 치료를 위한 의약의 제조에서 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 옥살리플라틴과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 투여되는 이리노테칸의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 결장직장암의 치료를 위한 의약의 제조에서 본 발명의 화합물 또는 그의 염 및 이리노테칸과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 투여되는 옥살리플라틴의 용도를 제공한다.
하기 문단은 본 발명의 바람직한 부류를 기재한다:
a) X는 -CH2-이고;
b) X는 -CH2-CH2-이고;
c) Y'는 -CH(CH3)-시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시, 시클로프로필옥시 또는 테트라히드로푸란-3-일옥시로 임의로 치환되고;
d) Y'는 NR4R5이고;
e) R4는 시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시 또는 메톡시에톡시로 치환되고;
f) R5는 에틸이고;
g) R6은 메틸이고;
h) X는 -CH2-이고, Y'는 -CH(CH3)-시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시로 치환되고, R6은 메틸이고;
i) X는 -CH2-이고, Y'는 -CH(CH3)-시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 시클로프로필옥시로 치환되고, R6은 메틸이고;
j) X는 -CH2-이고, Y'는 -CH(CH3)-시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 테트라히드로푸란-3-일옥시로 치환되고, R6은 메틸이고;
k) X는 -CH2-이고, Y'는 NR4R5이고, R4는 시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시로 치환되고, R5는 에틸이고, R6은 메틸이고;
l) X는 -CH2-CH2-이고, Y'는 NR4R5이고, R4는 시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시에톡시로 치환되고, R5는 에틸이고, R6은 메틸이고;
m) X는 -CH2-CH2-이고, Y'는 -CH(CH3)-시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시로 치환되고, R6은 메틸이다.
관련 기술분야의 통상의 기술자라면, 용어 "트랜스-"는 하기 도시된 바와 같이 시클로헥실 모이어티 둘레의 1,4 위치에 있는 치환기들이 서로에 대해 트랜스-인 경우임을 이해할 것이다.
Figure pct00031
여기서 R은 디메틸아미노, N-메틸-N-메톡시에틸아미노, N-시클로프로필-N-메틸아미노, 또는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 메틸메톡시, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시, 시클로프로필메톡시, 모르폴리닐, N-트리아졸릴, 피롤리딘-4-일, 테트라히드로푸란-3-일옥시, 또는 메틸로 임의로 치환된 N-피라졸릴로 임의로 치환된 아제티딘-1-일로부터 선택되고, X 및 Y는 상기 정의된 바와 같다.
숙련된 독자라면, 본 발명의 화합물이 염을 형성할 수 있음을 이해할 것이다. 본 발명의 화합물은 염기이고, 따라서 임의의 수많은 무기산 및 유기산과 반응하여 제약상 허용되는 염을 형성한다. 이러한 제약상 허용되는 산 부가염 및 그의 일반적인 제조 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, P. Stahl, et al., HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION AND USE, (VCHA/Wiley-VCH, 2008); S.M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol 66, No. 1, January 1977을 참고한다.
본 발명의 화합물 또는 그의 염은 관련 기술분야에 공지된 다양한 절차에 의해 제조될 수 있으며, 이 중 일부는 하기 제조예 및 실시예에 기재된다. 기재된 구체적인 합성 단계를 상이한 방식으로 조합하여, 본 발명의 화합물 또는 염을 제조할 수 있다. 합성 단계의 생성물은 관련 기술분야에 널리 공지된 통상적인 방법, 예컨대 추출, 증발, 침전, 크로마토그래피, 여과, 연화처리 및 결정화에 의해 회수될 수 있다. 시약 및 출발 물질은 통상의 기술자에 의해 용이하게 입수가능하다.
본 발명의 일부 중간체 또는 화합물은 1개 이상의 키랄 중심을 가질 수 있다. 본 발명은 모든 개별 에난티오머 또는 디아스테레오머, 뿐만 아니라 상기 화합물의 에난티오머 및 디아스테레오머의 혼합물, 예컨대 라세미체를 포괄한다. 1개 이상의 키랄 중심을 함유하는 본 발명의 화합물이 단일 에난티오머 또는 디아스테레오머로서 존재하는 것이 바람직하다. 단일 에난티오머 또는 디아스테레오머는 키랄 시약을 이용하여 또는 입체선택적 또는 입체특이적 합성 기술에 의해 시작하여 제조될 수 있다. 대안적으로, 단일 에난티오머 또는 디아스테레오머는 표준 키랄 크로마토그래피 또는 결정화 기술에 의해 혼합물로부터 단리될 수 있다. 통상의 기술자는, 일부 상황에서 에난티오머 또는 디아스테레오머의 용리 순서가 상이한 크로마토그래피 칼럼 및 이동상으로 인해 다를 수 있음을 이해할 것이다.
명료함을 위해 하기 반응식에서 특정 입체화학 중심을 구체화하지 않았고, 특정 치환기들을 제거하였으며, 이는 어떠한 방식으로도 교시내용을 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 더욱이, 개별 이성질체, 에난티오머 또는 디아스테레오머는 통상의 기술자에 의해 본 발명의 화합물의 합성에서의 임의의 편리한 시점에서 선택적 결정화 기술 또는 키랄 크로마토그래피와 같은 방법에 의해 분리 또는 분할될 수 있다 (예를 들어, J. Jacques, et al., "Enantiomers , Racemates , and Resolutions", John Wiley and Sons, Inc., 1981, 및 E.L. Eliel and S.H. Wilen," Stereochemistry of Organic Compounds", Wiley-Interscience, 1994 참고). 추가로, 하기 반응식에 기재된 중간체는 수많은 질소 보호기를 함유한다. 가변적인 보호기는 각각의 경우에 수행되는 특정한 반응 조건 및 특정한 변형에 따라 동일하거나 상이할 수 있다. 보호 및 탈보호 조건은 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있고, 문헌에 기재되어 있다 (예를 들어 "Greene's Protective Groups in Organic Synthesis", Fourth Edition, by Peter G.M. Wuts and Theodora W. Greene, John Wiley and Sons, Inc. 2007 참고).
특정 약어는 다음과 같이 정의된다: "AcOH"는 아세트산 또는 빙초산을 지칭하고; "ACN"은 아세토니트릴을 지칭하고; "AdoMet"는 S-아데노실-L-메티오닌을 지칭하고; "AEBP"는 지방세포-인핸서 결합 단백질을 지칭하고; "AUC"는 곡선하 면적을 지칭하고; "BOC"는 tert-부톡시카르보닐을 지칭하고; "bid"는 1일 2회 투여를 지칭하고; "bm"은 넓은 다중선을 지칭하고; "Bn"은 벤질을 지칭하고; "BSA"는 소 혈청 알부민을 지칭하고; "c"는 그램/밀리리터의 농도를 지칭하고; "CAT. #"는 카탈로그 번호를 지칭하고; "CDI"는 카르보닐디이미다졸을 지칭하고; "CO2"는 이산화탄소를 지칭하고; "CV"는 칼럼 부피를 지칭하고; "Ci"는 퀴리를 지칭하고; "CPM"은 백만개당 카운트를 지칭하고; "cPr"은 시클로프로필을 지칭하고; "DCE"는 1,2-디클로로에탄을 지칭하고; "DCM"은 메틸렌 클로라이드 또는 디클로로메탄을 지칭하고; "DIBAL-H"는 디이소부틸 알루미늄 히드라이드를 지칭하고; "DIPEA"는 디이소프로필에틸 아민을 지칭하고; "dm"은 데시미터 또는 10 센티미터를 지칭하고; "DMA"는 디메틸아세트아미드를 지칭하고; "DMEA"는 N,N-디메틸에틸아민을 지칭하고; "DMF"는 디메틸포름아미드 또는 N,N-디메틸포름아미드를 지칭하고; "DMSO"는 디메틸 술폭시드를 지칭하고; "DNase"는 데옥시리보뉴클레아제를 지칭하고; "DTT"는 디티오트레이톨을 지칭하고; "EED"는 배아 외배엽 발달을 지칭하고; "Et2O"는 디에틸 에테르를 지칭하고; "EtOAc"는 에틸 아세테이트를 지칭하고; "ES/MS"는 전기분무 질량 분광법을 지칭하고; "EtOH"는 에탄올 또는 에틸 알콜을 지칭하고; "Ex"는 실시예를 지칭하고; "GAPDH"는 글리세르알데히드 3-포스페이트 데히드로게나제를 지칭하고; "hr"은 시간을 지칭하고; "HEC"는 히드록시 에틸 셀룰로스를 지칭하고; "HOAt"는 히드록시아자벤조트리아졸을 지칭하고; "HOBt"는 히드록시벤조트리아졸을 지칭하고; "HSQC"는 이핵종 단일 양자 코히어런스를 지칭하고; "IPAm"은 이소프로필아민, 프로판-2-아민, 또는 2-아미노프로판을 지칭하고; "iPr"은 이소프로필 또는 1-메틸에틸을 지칭하고; "IrMeO(COD)2"는 (1,5-시클로옥타디엔)(메톡시)이리듐(I) 이합체 또는 비스(1,5-시클로옥타디엔)디-μ-메톡시디이리듐(I)을 지칭하고; "kPa"는 킬로파스칼을 지칭하고; "KHMDS"는 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드를 지칭하고; "KOtBu"는 칼륨-tert-부톡시드 또는 칼륨-t-부톡시드를 지칭하고; "LAH"는 수소화리튬알루미늄을 지칭하고; "LiBH4"는 수소화붕소리튬을 지칭하고; "LC"는 액체 크로마토그래피를 지칭하고; "LiHMDS"는 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드를 지칭하고; "LOF"는 기능 상실을 지칭하고; "3H-SAM"은 아데노실-L-메티오닌, S[메틸-3H]를 지칭하고; "IC50"은 작용제에 대해 가능한 최대 억제 반응의 50%를 제공하는 작용제의 농도를 지칭하고; "Me"는 메틸을 지칭하고; "MgSO4"는 황산마그네슘을 지칭하고; "mpk"는 밀리그램/킬로그램을 지칭하고; "min"은 분을 지칭하고; "NaH"는 수소화나트륨을 지칭하고; "NBS"는 N-브로모숙신이미드를 지칭하고; "NH3"은 암모니아를 지칭하고; "nm"는 나노미터를 지칭하고; "MeOH"는 메탄올 또는 메틸 알콜을 지칭하고; "MsOH"는 메탄술폰산을 지칭하고; "MTBE"는 메틸 tert-부틸 에테르를 지칭하고; "mut"는 돌연변이체를 지칭하고; "OAc"는 아세테이트를 지칭하고; "PBS"는 포스페이트 완충된 식염수를 지칭하고; "PCR"은 폴리머라제 연쇄 반응을 지칭하고; "PDX"는 환자-유래된 이종이식을 지칭하고; "PRC2"는 폴리콤 억제 복합체 2를 지칭하고; "Prep"은 제조예를 지칭하고; "psi"는 파운드/평방 인치를 지칭하고; "PTSA"는 파라-톨루엔 술폰산을 지칭하고; "정량적 수율"은 본질적으로 99% 초과의 수율을 지칭하고; "RBBP4"는 망막모세포종 결합 단백질 4를 지칭하고; "RNase"는 리보뉴클레아제를 지칭하고; "rpm"은 분당 회전수를 지칭하고; "RT"는 실온을 지칭하고; "Rt"는 분 단위의 체류 시간을 지칭하고; "RuPhos-G3-팔라다사이클"은 (2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-비페닐)[2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II) 메탄술포네이트를 지칭하고; "SCX"는 선택적 양이온 교환을 지칭하고; "SFC"는 초임계 유체 크로마토그래피를 지칭하고; "SPA"는 섬광 근접 검정을 지칭하고; "NaHCO3"는 중탄산나트륨을 지칭하고; "Na2SO4"는 황산나트륨을 지칭하고; "SoC"는 표준 치료를 지칭하고; "THF"는 테트라히드로푸란을 지칭하고, "TEA"는 트리에틸아민을 지칭하고; "Tris"는 트리스(히드록시메틸)-아미노메탄을 지칭하고; "WT"는 야생형을 지칭하고; "XPhos Pd Gen 2"는 클로로(2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐)-[2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]-팔라듐(II)을 지칭하고; "Å"는 옹스트롬을 지칭하고; "λ"는 파장을 지칭하고; "[α]D 20"은 편광계에서 나트륨 램프 (파장 589.3 nm)의 D-라인을 이용하여 평면 편광을 회전시키는 화합물의 광학 회전으로서, 적합한 용매, 예컨대 MeOH 중에서, 20℃, 규정된 농도 c, 2 mL의 부피, 및 1 dm의 경로 길이에서 측정되는 관찰 편광 측정치 α를 지칭한다.
하기 반응식에서, 달리 나타내지 않는다면 모든 치환기들은 이전에 정의된 바와 같다. 시약 및 출발 물질은 통상의 기술자에 의해 용이하게 입수가능하다. 하기 반응식, 제조예, 실시예 및 검정은 본 발명을 추가로 설명하기 위한 것이지만, 어떠한 방식으로도 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
제조예 및 실시예
하기 제조예 및 실시예는 본 발명을 추가로 설명하고, 본 발명의 화합물의 전형적인 합성을 나타낸다. 시약 및 출발 물질은 통상의 기술자에 의해 용이하게 입수가능하거나 또는 용이하게 합성될 수 있다. 제조예 및 실시예가 설명을 위해 기재되고, 제한되는 것이 아니며, 통상의 기술자에 의해 다양한 변형이 이루어질 수 있음을 이해해야 한다.
본 발명의 화합물의 R- 또는 S- 배위는 표준 기술, 예컨대 X-선 분석에 의해 결정될 수 있다. 1개의 중심이 알려져 있는 경우, 1H NMR, 키랄 HPLC, 및 키랄-HPLC 체류 시간의 상관관계를 이용하여 입체이성질체를 추가로 해명할 수 있다.
LC-ES/MS는 애질런트(Agilent) HP1100 액체 크로마토그래피 시스템 상에서 수행한다. 전기분무 질량 분광법 측정 (포지티브 및/또는 네가티브 방식으로 획득됨)은 HP1100 HPLC에 접속된 질량 선택적 검출기(Mass Selective Detector) 사중극 질량 분광계 상에서 수행한다. LC-MS 조건 (낮은 pH): 칼럼: 페노메넥스 제미니(Phenomenex GEMINI)® NX C-18 2.1 x 50 mm 3.0 μm; 구배: 3분 내로 5-100% B, 이어서 0.75분 동안 100% B; 칼럼 온도: 50℃ +/-10℃; 유속: 1.2 mL/분; 용매 A: 0.1% HCOOH를 갖는 탈이온수; 용매 B: 0.1% 포름산을 갖는 ACN; 파장 214 nm. 대안적인 LC-MS 조건 (높은 pH): 칼럼: 워터스(WATERS)™ 엑스테라(XTERRA)® MS C-18 칼럼 2.1 x 50 mm, 3.5 μm; 구배: 0.25분 동안 5%의 용매 A, 3분 내로 5% 내지 100%의 용매 B의 구배 및 0.5분 동안 100%의 용매 B 또는 3분 내로 10% 내지 100%의 용매 B 및 0.75분 동안 100%의 용매 B; 칼럼 온도: 50℃ +/-10℃; 유속: 1.2 mL/분; 용매 A: 10 mM NH4HCO3 pH 9; 용매 B: ACN; 파장: 214 nm.
제조용 역상 크로마토그래피는 질량 선택적 검출기 질량 분광계 및 립(Leap) 오토샘플러/분획 수집기를 구비한 애질런트 1200 LC-ES/MS 상에서 수행한다. 높은 pH 방법은 75 X 30 mm 페노메넥스 제미니®-NX, 10 X 20 mm 가드를 갖는 5 μm 입자 크기 칼럼에서 작동시킨다. 유속은 85 mL/분이다. 용리액은 ACN 중 10 mM 중탄산암모늄 (pH 10)이다.
NMR 스펙트럼은 기준 표준으로서 잔류 용매 [CDCl3, 7.26 ppm; (CD3)2SO, 2.50 ppm]를 사용하여 ppm으로 기록되는 CDCl3 또는 (CD3)2SO 용액으로서 수득되는, 브루커(Bruker) AVIII HD 400 MHz NMR 분광계 상에서 수행한다. 피크 다중도를 기록할 때, 하기 약어를 사용할 수 있다: s (단일선), d (이중선), t (삼중선), q (사중선), m (다중선), br-s (넓은 단일선), dd (이중선들의 이중선), dt (삼중선들의 이중선). 커플링 상수 (J)는 기록시 헤르츠 (Hz)로 기록한다.
반응식 1
Figure pct00032
반응식 1은 보호된 4-옥소시클로헥산카르복실레이트 (화합물 1)로부터 출발하여 치환된 1,4-디옥사스피로[4,5]데칸 (화합물 5)의 형성을 도시한다. 보호된 4-옥소시클로헥산카르복실레이트를 용매, 예컨대 EtOH 중에서 p-톨루엔술폰산, 트리에틸 오르토포르메이트 및 에틸렌 글리콜로 처리하여, 보호된 1,4-디옥사스피로[4,5]데칸-8-카르복실산 에스테르를 제공할 수 있고, 이어서 이를 관련 기술분야에 널리 공지된 절차에 의해, 예컨대 수성 염기를 사용함으로써 탈보호시켜, 2 단계에 걸쳐 1,4-디옥사스피로[4,5]데칸-8-카르복실산 (화합물 2, 반응식 1, 단계 A)을 제공할 수 있다. 웨인레브(Weinreb) 아미드 (화합물 3)는 단계 A의 산 생성물로부터 커플링 시약, 예컨대 CDI 또는 HOBt를 소량씩 첨가한 다음, N-메톡시메탄아민 히드로클로라이드를 소량씩 첨가하여 제조될 수 있다 (반응식 1, 단계 B). 유기금속 시약, 예컨대 그리나드(Grignard) 시약 또는 유기리튬 시약을 이용하여 웨인레브 아미드 (화합물 3)를 케톤 (화합물 4)으로 전환시킬 수 있다 (반응식 1, 단계 C). 더욱 구체적으로, 메틸 마그네슘 브로마이드를 적절한 용매, 예컨대 Et2O 및/또는 THF에 첨가하여, 메틸 케톤 (화합물 4)을 제공할 수 있다. 용매, 예컨대 THF 중에서 비친핵성 염기, 예컨대 LiHMDS를 적가하고 디페닐 포스포로클로리데이트를 첨가하여 메틸 케톤 (화합물 4)을 비닐 포스포네이트 (화합물 5)로 전환시킬 수 있다 (반응식 1, 단계 D).
반응식 2
Figure pct00033
반응식 3
Figure pct00034
반응식 2 및 3은 치환된 아제티딘의 합성을 도시한다. N-보호된 비닐옥시아제티딘 (화합물 7a, R1 = 알릴)은, 적절히 치환된 3-히드록시아제티딘 (화합물 6)을 알킬 할라이드 및 비친핵성 염기, 예컨대 DIPEA에 의해 알킬화시킴으로써, 또는 대안적으로 이염기성 리간드, 예컨대 1,10-페난트롤린의 존재 하에 비친핵성 염기, 예컨대 DIPEA 또는 TEA의 존재 하에 용매로서 비대칭 비닐 에테르를 사용하여 팔라듐 (II) 공급원에 의해 금속-매개된 에테르화시킴으로써 제조할 수 있다. 통상의 기술자는 아제티딘을 다양한 보호기, 예컨대 알킬 기, 치환된 알킬, 아르알킬, 아미드, 또는 알킬 카르바메이트로 보호할 수 있음을 인식할 것이다. 더욱 구체적으로, N-BOC-3-히드록시아제티딘의 용액을 n-부틸 비닐 에테르 중에서 TEA 및 4,7-디페닐-1,10-페난트롤린의 존재 하에 팔라듐(II) 아세테이트로 처리하여, N-보호된 비닐옥시아제티딘 (화합물 7a, R1 = 알릴, 반응식 2, 단계 A)을 제공할 수 있다. 반응식 2, 단계 B에 도시된 바와 같이, 시몬스-스미쓰(Simmons-Smith) 반응 또는 유사한 카르벤-생성 조건에 의해, 예를 들어 DCE 중에서 클로로아이오도메탄 및 알킬아연 시약을 사용하여 비닐 기를 보호된 3-시클로프로폭시아제티딘 (화합물 8)으로 전환시킬 수 있다. 관련 기술분야에 잘 기재된 것과 같은 표준 조건 하에 보호된 3-시클로프로폭시아제티딘 (화합물 8)을 탈보호시킨 후, 유리 염기를 유기 용매 중 광물산의 용액, 예컨대 디에틸 에테르 또는 1,4-디옥산 중 HCl로 처리하여, 안정한 아제티딘 염 (화합물 9a)을 제공할 수 있다. 더욱 구체적으로, 보호기가 BOC인 경우, 통상의 기술자라면, 보호된 3-시클로프로폭시아제티딘 (화합물 8)을 산, 예컨대 1,4-디옥산 중 HCl로 처리한 후, 용매를 증발시켜, 조 3-시클로프로폭시아제티딘 히드로클로라이드 (화합물 9a, 반응식 2, 단계 C)를 수득할 수 있음을 인식할 것이다. 추가로, 강염기성 탈양성자화 조건 하에 브로모메틸시클로프로판을 사용하여, 예를 들어 극성 용매, 예컨대 DMF 또는 DMSO 중에서 NaH를 사용하여 적절히 치환된 3-히드록시아제티딘 (화합물 6)을 알킬화시켜 시클로프로필메톡시아제티딘 (화합물 7b, R1 = 시클로프로필메틸, 반응식 2, 단계 A)을 제조한 후, 보호된 시클로프로필메톡시아제티딘 (화합물 7b, R1 = 시클로프로필메틸)을 탈보호시켜, 조 시클로프로필메톡시아제티딘 히드로클로라이드 (화합물 9b, 반응식 2, 단계 D)를 수득할 수 있다.
다른 치환된 아제티딘은 상업적으로 입수가능한 벤즈히드릴아제티딘 메실레이트 (화합물 10)를 적절한 염기, 예컨대 NaHCO3, K2CO3, DIPEA 또는 TEA를 사용하여 친핵성 치환 조건 하에 다양한 N, O, C 및 S 함유 친핵체로 처리하고 마이크로웨이브 가열함으로써, 또는 강염기, 예컨대 NaH, KOtBu 또는 LHMDS로 처리하고 극성 유기 용매, 예컨대 DMF 또는 DMSO 중에서 가열함으로써, 치환된 벤즈히드릴아제티딘 (화합물 11, 반응식 3, 단계 A)을 제공함으로써 제조할 수 있다. 촉매적 수소화하에 후속적으로 탈보호시킴으로써 (반응식 3, 단계 B), 목적하는 치환된 아제티딘 (화합물 12)을 수득할 수 있다.
반응식 4
Figure pct00035
반응식 4는 2-알콕시-3-클로로메틸-4,6-디메틸-피리딘 (화합물 17, 여기서 Ra는 CH3,CH2CH3 또는 Bn임)의 제조를 도시하며, 이는 상업적으로 입수가능한 3-시아노-4,6-디메틸피리돈 (화합물 13)으로부터 출발하여 제조될 수 있다. 통상의 기술자에게 공지된 표준 문헌 조건 하에 적절한 알킬 할라이드를 사용하여 3-시아노-4,6-디메틸피리돈 (화합물 13)을 알킬화시킴으로써 목적하는 2-알콕시-3-시아노-4,6-디메틸피리딘 (화합물 14)을 제공할 수 있다. 구체적으로, 3-시아노-4,6-디메틸피리돈 (화합물 13)을 비양성자성 용매, 예컨대 1,4-디옥산, DMF, 톨루엔 또는 CHCl3 중에서 AgCO3 또는 Ag2O와 함께 메틸 아이오다이드 또는 벤질 클로라이드로 처리한 후, 가열함으로써, 필요한 2-메톡시- 또는 2-벤질옥시-3-시아노-4,6-디메틸피리딘 (화합물 14, 반응식 4, 단계 A)을 제공할 수 있다. 후속적으로, 통상의 기술자에게 문헌을 통해 널리 공지된 표준 조건 하에 2-알콕시-3-시아노-4,6-디메틸피리딘 (화합물 14)에 있는 시아노 기를 환원시킴으로써, 예컨대 0℃ 또는 RT에서 비양성자성 용매, 예컨대 DCM 중에서 환원제, 예컨대 DIBAL-H로 천천히 처리함으로써, 상응하는 피리딘 알데히드 (화합물 15, 반응식 4, 단계 B)를 제공할 수 있다. 통상의 기술자에게 널리 공지된 표준 조건에 의해 카르비놀 (화합물 16, 반응식 4, 단계 C)로 추가로 환원시킬 수 있으며, 구체적으로 0℃ 또는 저온에서 피리딘 알데히드 (화합물 15)를 일반적인 환원제, 예컨대 NaBH4로 일부씩 나누어 처리함으로써 카르비놀 (화합물 16)을 수득할 수 있다. 후속적으로, 저온, 예컨대 -40℃ 내지 -60℃에서 비양성자성 용매, 예컨대 DCM 중에서 카르비놀 (화합물 16)을 전형적인 염소화제, 예컨대 SOCl2 또는 POCl3에 의해 염소화시켜, 필요한 클로로메틸피리딘 (화합물 17, 반응식 4, 단계 D)을 제공할 수 있다.
반응식 5
Figure pct00036
반응식 5는 메틸 4-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)티오펜-3-카르복실레이트 (화합물 20)의 합성을 도시한다. 관련 기술분야에 널리 공지된 바와 같이, 일산화탄소의 가압된 분위기 하에 비친핵성 유기 염기, 예컨대 DIPEA 또는 TEA를 사용하거나 사용하지 않고 극성 용매, 예컨대 DMF 또는 DMA 중에서 알콜, 예컨대 MeOH의 존재 하에 아릴 브로마이드 (화합물 18)를 다양한 팔라듐(II) 촉매 및 다양한 적절한 포스핀 리간드, 구체적으로 팔라듐(II) 아세테이트 및 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센을 사용하여 카르보닐화시켜, 에스테르 (화합물 19, 반응식 5, 단계 A)를 수득할 수 있다. 알킬 금속화 시약, 예컨대 n-부틸-, s-부틸- 또는 t-부틸리튬으로 탈양성자화시키고 아릴 음이온을 보레이트 에스테르로 켄칭시킴으로써, 또는 팔라듐(II), 이리듐(I) 또는 철(III)을 사용하여 전이 금속 배위 복합체를 형성함으로써 후속적인 보롤란 에스테르화를 수행하여, 목적하는 보론산 에스테르를 수득할 수 있다. 구체적으로, 에스테르 (화합물 19)를 비극성 용매, 예컨대 시클로헥산 중에서 가열하면서 비스(1,5-시클로옥타디엔)디-μ-메톡시디이리듐(I) 및 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란으로 일부씩 나누어 처리하여, 메틸 4-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)티오펜-3-카르복실레이트 (화합물 20, 반응식 5, 단계 B)를 수득할 수 있다.
반응식 6
Figure pct00037
반응식 6에 도시된 경로에 따라, 적절한 극성 유기 용매, 예컨대 수소화나트륨 및 THF 중에서 염기성 조건 하에 말로노니트릴과 아세틸 케텐을 축합시켜 2-아미노-3-시아노피라논 (화합물 21, 반응식 6, 단계 A)을 수득하는 것으로 출발하여 2-에톡시피리딘 (화합물 27)을 제조할 수 있다. 무기산, 예컨대 HCl에 의한 후속적인 열적 재배열에 의해, 3-시아노-4-히드록시-6-메틸피리돈 (화합물 22, 반응식 6, 단계 B)을 제공할 수 있다. 4-클로로피리돈 (화합물 23)으로의 염소화는 관련 기술분야에 널리 공지된 여러 염소화제, 더욱 구체적으로 POCl3 및 PCl5의 혼합물을 사용하여 수행할 수 있고 (반응식 6, 단계 C); 적절한 비극성 유기 용매 중에서 알킬 할라이드를 사용하여, 더욱 구체적으로 톨루엔 중에서 산화은(I) 및 아이오도에탄을 사용하여, 금속-매개된 에테르화를 통해 생성된 피리돈 (화합물 23)을 알킬화시켜, 2-에톡시-3-시아노-4-클로로피리딘 (화합물 24, 반응식 6, 단계 D)을 제공할 수 있다. 환원제, 예컨대 DIBAL-H에 이어, NaBH4 또는 NaCNBH3을 사용하는 2-단계 환원에 의해 알콜 (화합물 26, 반응식 6, 단계 E-F)을 제공할 수 있고, 적절한 유기 용매 중에서 염소화제, 예컨대 POCl3 또는 PCl5로 후속적으로 염소화시켜 에톡시피리딘 (화합물 27)을 수득할 수 있다. 더욱 구체적으로, 알콜 (화합물 26)의 염소화는 0℃ 내지 RT에서 DCM 중에서 메탄술포닐 클로라이드로 처리함으로써 메실레이트의 동일계내 제조에 의해 수행하여, 에톡시피리딘 (화합물 27, 반응식 6, 단계 G)을 제공할 수 있다.
반응식 7
Figure pct00038
반응식 7은 화학식 I의 화합물의 합성을 도시한다. 극성 유기 용매, 예컨대 1,4-디옥산 중에서 약한 무기 염기, 예컨대 K3PO4와 함께 팔라듐(II) 촉매 및 포스핀 리간드를 사용하는 표준 스즈키(Suzuki)-유형 커플링 조건 하에 제조된 비닐 포스페이트 (화합물 5, 반응식 1, 단계 D)와 아릴 보로네이트 에스테르 (화합물 20, 반응식 5, 단계 B)를 커플링시킴으로써, 비닐 티오펜 에스테르 (화합물 28, 반응식 7, 단계 A)를 제공할 수 있다. 관련 기술분야에 널리 입증된 절차에 의해 비닐 모이어티를 환원시켜, α-메틸 티오펜 에스테르 (화합물 29, 반응식 7, 단계 B)를 수득할 수 있다. 관련 기술분야에 널리 입증된 다양한 촉매 및 리간드, 특히 이리듐(I) 촉매/리간드 복합체, 예컨대 [(4R,5R)-(+)-O-[1-벤질-1-(5-메틸-2-페닐-4,5-디히드로옥사졸-4-일)-2-페닐에틸] (디시클로헥실포스피나이트) (1,5-COD) 이리듐(I) 테트라키스 (3,5-비스(트리플루오로메틸) 페닐보레이트를 사용하여 비닐 기를 입체선택적으로 환원시켜, 목적하는 입체특이적 에스테르 (화합물 29)를 수득할 수 있다. 반응식 7, 단계 C에서, 적합한 유기 용매, 예컨대 CHCl3, DCM, EtOAc, 1,4-디옥산 또는 CCl4 중에서 브로민화제, 예컨대 원소 브로민 또는 NBS를 사용하여 후속적으로 브로민화를 수행하여 5-브로모티오펜 에스테르 (화합물 30)를 제공할 수 있다. 표준 팔라듐-매개된 커플링 조건 하에, 구체적으로 RuPhos-G3-팔라다사이클을 사용하여 메틸 2-[2-(벤질옥시카르보닐아미노)에틸]-5-[1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)에틸]-4-메틸-티오펜-3-카르복실레이트 (화합물 31)로 알킬화시킨 후 (반응식 7, 단계 D), 관련 기술분야에 널리 공지된 전형적인 가수소분해 조건 하에, 구체적으로 극성 유기 알콜성 용매, 예컨대 MeOH 중에서 동일계내 고리화에 의해 카르보벤질옥시 아민 (화합물 31)을 탈보호시키고 (반응식 7, 단계 E), 표준 산성 조건 하에, 예를 들어 적합한 극성 용매, 예컨대 THF 또는 EtOH 중에서 HCl을 사용하여 케톤으로 탈차폐화시킴으로써, 3-메틸-2-[1-(4-옥소시클로헥실)에틸]-6,7-디히드로-5H-티에노[3,2-c]피리딘-4-온 (화합물 33, 반응식 7, 단계 F)을 제공할 수 있다. 적합한 용매, 예컨대 DCM 또는 MeOH 중에서 루이스(Lewis) 산, 예컨대 티타늄 이소프로폭시드 및 환원제, 예컨대 NaBH4, Na(OAc3)BH 또는 NaCNBH3의 존재 하에 환원성 아미노화를 수행하여, 트랜스- 및 시스-시클로헥산의 혼합물 (화합물 34, 반응식 7, 단계 G)을 수득할 수 있고, 이를 관련 기술분야에 널리 공지된 결정화 또는 크로마토그래피 방법에 의해 분리할 수 있다. 추가로, 통상의 기술자는 환원제로서 LiBH4의 사용이 주로 트랜스-입체이성질체를 유도할 수 있음을 인식할 수 있다. 적절히 치환된 아르알킬 할라이드, 예컨대 벤질 할라이드를 사용하여 널리 공지된 조건 하에 알킬화시킨 후, 산성 조건 하에, 예를 들어 가열하면서 PTSA의 존재 하에 LiCl을 사용하여 탈메틸화 또는 탈벤질화시킴으로써, 화학식 I의 화합물 (반응식 7, 단계 H 및 M)을 제공할 수 있다.
대안적으로, 카르보벤질옥시 아민 (화합물 31, 반응식 7, 단계 D)을 관련 기술분야에 널리 공지된 조건을 이용하여, 예를 들어 적합한 유기 용매, 예컨대 MeOH 중에서 탄소 상 Pd(OH)2를 사용하여 가수소분해시킬 수 있고, 피리딘 알데히드 (예를 들어, 화합물 15, 반응식 4, 단계 B)의 존재 하에 가수소분해를 수행하여, 메틸 5-[1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)에틸]-4-메틸-2-[2-[(6-메틸-3-피리딜)메틸아미노]에틸]티오펜-3-카르복실레이트 (화합물 35, 반응식 7, 단계 I)를 제공할 수 있다. 상기와 같이, 케톤으로의 후속적인 탈차폐화, 환원성 아미노화, 열적 산성 조건 하의 고리화, 및 O-탈보호에 의해 화학식 I의 화합물을 수득할 수 있다 (반응식 7, 단계 J-M).
대안적으로, R3=H, R4= 벤질인 아민, 예컨대 화합물 38을 관련 기술분야에 널리 공지된 조건 하에 가수소분해하여, R3=R4=H인 아민을 제공할 수 있다. 이 아민을 상기와 같이 환원성 아미노화 조건에 적용하고 O-탈보호시켜, 화학식 I의 화합물을 수득할 수 있다. 구체적으로, 산, 포름알데히드 및 트리아세톡시보로히드라이드를 사용하여, R3=R4=Me인 환원성 아미노화 생성물을 생성할 수 있다.
반응식 8
Figure pct00039
반응식 8은 화학식 II의 화합물의 합성을 도시한다. 에스테르 (화합물 19, 반응식 5, 단계 A)를 질화시킨 후, 후속적으로 표준 조건 하에 니트로 환원시켜, 메틸 5-아미노-4-메틸-티오펜-3-카르복실레이트 (화합물 40, 반응식 8, 단계 A-B)을 수득할 수 있다. 적합한 아민 보호기, 예컨대 BOC에 의해 아미노를 보호하고, 후속적으로 전형적인 조건 하에 알킬화시켜, 예를 들어 극성 용매, 예컨대 DMF 중에서 약염기, 예컨대 K2CO3 또는 Cs2CO3의 존재 하에 메틸 아이오다이드를 사용하여 알킬화시켜, 적절히 N-알킬화된 보호된 아미노 티오펜을 수득한 후, 이를 동일계내에서 카르바메이트 분할시키고, 후속적으로 예를 들어 적합한 유기 용매, 예컨대 DCE 중에서 시클로헥사논, 예컨대 1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-온, 및 Na(OAc3)BH 또는 NaCHBH3을 사용하여 환원성 아미노화시킴으로써, 필요한 3급 아민 (화합물 41, 반응식 8, 단계 C, 여기서 R5 = CH3)을 수득할 수 있다. 대안적으로, 먼저 적합한 유기 용매, 예컨대 DCE 중에서 Na(OAc)3BH 또는 NaCNBH3의 존재 하에 시클로헥사논, 예컨대 1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-온을 사용하여 5-아미노-4-메틸-티오펜-3-카르복실레이트 (화합물 40)를 환원성 아미노화 조건에 적용한 후, 아세트알데히드를 사용하여 동일계내에서 두번째 환원성 아미노화에 적용하여, 필요한 3급 아민 (화합물 41, 반응식 8, 단계 C, 여기서 R5 = CH2CH3)을 수득할 수 있다. 후속적인 브로민화, 금속-매개된 알킬화, 바이시클릭 락탐 (화합물 44)으로의 고리화, 락탐 N-알킬화, 케톤으로의 탈차폐화, 환원성 아미노화 및 최종적인 탈메틸화 또는 탈벤질화를 모두 반응식 7의 방법과 유사하게 수행하여, 최종 화학식 II의 화합물을 수득할 수 있다 (반응식 8, 단계 D-J).
대안적으로, 먼저 반응식 7에 기재된 것과 유사한 조건 하에 케탈 (화합물 45, 반응식 8, 단계 G)을 탈알킬화시켜 피리돈 케톤 (화합물 48, 반응식 8, 단계 K)을 수득할 수 있다. 후속적인 알킬화에 이어, 환원성 아미노화 또는 이중 환원성 아미노화 (반응식 8, 단계 C와 유사한 조건 하에)를 수행하여 화학식 II의 화합물을 수득할 수 있다 (반응식 8, 단계 L).
반응식 9
Figure pct00040
반응식 9는 화학식 III의 화합물의 합성을 도시한다. N-알킬화된 메틸 2-브로모-5-[R5-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)아미노]-4-메틸-티오펜-3-카르복실레이트 (화합물 42, 반응식 8, 단계 D)를 관련 기술분야에 널리 공지된 전이 금속 매개된 커플링 절차를 통해 알키닐화시킬 수 있다. 더욱 구체적으로, CuI, 적절한 팔라듐(II)-리간드 복합체, 예컨대 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 디클로라이드, 및 비친핵성 유기 염기, 예컨대 TEA의 존재 하에 벤질 프로프-2-인-1-일 카르바메이트로 브로모티오펜 (화합물 42)을 처리하여, 알킨 (화합물 49, 반응식 9, 단계 A)을 수득할 수 있다. 후속적인 알킨의 환원 및 아민 모이어티의 탈보호는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 구체적으로, 표준 촉매적 수소화 조건 하에 알킨 (화합물 49)의 처리, 및 압력 하에 적합한 유기 용매, 예컨대 MeOH, EtOH 또는 EtOAc 중에서 탄소 상 Pd 또는 탄소 상 Pd(OH)2의 존재 하에 H2에 의한 동일계내 가수소분해를 통해 아민 (화합물 50, 반응식 9, 단계 B)을 제공할 수 있고, 후속적으로 이를 염기성 조건 하에, 예컨대 KOtBu를 사용하여 고리화시키고 가열하여, 락탐 (화합물 51, 반응식 9, 단계 C)을 수득할 수 있다. 락탐 질소의 알킬화, 케톤으로의 탈차폐화, 환원성 아미노화 및 최종적인 탈알킬화를 모두 반응식 8에 기재된 것과 유사하게 수행하여, 화학식 III의 화합물을 수득할 수 있다 (반응식 9, 단계 D-F).
반응식 10
Figure pct00041
반응식 10은 반응식 9에 기재된 것과 유사한 방법을 이용하여 적절히 치환된 5-브로모티오펜 에스테르 (화합물 30)로부터 출발하는 화학식 IV의 화합물의 합성을 도시한다 (반응식 10, 단계 A-F).
반응식 11
Figure pct00042
반응식 11은 화학식 V의 화합물의 제조를 도시한다. 관련 기술분야에 널리 공지된 환원성 아미노화 조건 하에 아미노티오펜 (화합물 40, 반응식 8, 단계 B)을 적절히 보호된 아미노알킬 케톤으로 처리하고, 후속적으로 적절한 염기, 예컨대 NaH 또는 K2CO3를 사용하는 염기성 조건 하에 알킬화제, 예컨대 CH3I 또는 CH3CH3I를 사용하여 알킬화시키거나, 또는 예를 들어 아세트알데히드를 사용하여 두번째 환원성 아미노화를 통해 알킬화시켜 (반응식 11, 단계 A), N-알킬화된 N-피페리디닐 티오펜 에스테르 (화합물 59)를 제공할 수 있다. 더욱 구체적으로, 적절한 유기 용매, 예컨대 DCE 중에서 3,4-디메틸티오펜-2-아민 (화합물 40)을 tert-부틸-4-옥소피페리딘-1-카르복실레이트로 처리하고, 적합한 환원제, 예컨대 Na(OAc)3BH를 일부씩 나누어 첨가한 후, 후속적으로 포름알데히드 또는 아세트알데히드를 첨가하여, N-알킬화된 N-피페리디닐 티오펜 (화합물 59)을 수득할 수 있다. 후속적인 브로민화, Pd-촉매된 커플링 조건 하에 아릴 브로마이드 (화합물 60)의 알킬화에 의해 알킬티오펜 (화합물 61)의 생성, 락탐으로의 고리화, 락탐-N 알킬화, 및 최종적인 탈보호를 반응식 8에 기재된 것과 유사한 방식으로 수행하여, 화학식 V의 화합물을 제공할 수 있다 (반응식 11, 단계 B-F).
반응식 12
Figure pct00043
반응식 12는 화학식 VI의 화합물의 합성을 도시한다. 환원성 아미노화 조건 하에, 구체적으로 먼저 적절히 보호된 4-아미노시클로헥사논에 이어, Na(OAc)3BH의 존재 하에 아세트알데히드를 사용하여 아미노티오펜 (화합물 40)을 이중 알킬화시켜, N-알킬화된 티에닐시클로헥실아민 (화합물 64, 반응식 12, 단계 A)을 제공할 수 있다. 추가로, 먼저 아미노 티오펜을 적절한 아민 보호기, 예컨대 BOC로 보호시킨 후, 후속적인 카르바메이트를 강염기, 예컨대 NaH 또는 KOtBu로 처리하고, 생성된 음이온을 알킬 할라이드, 예컨대 CH3I로 처리하고, 아민 보호기를 제거하고, 최종적으로 적절히 보호된 4-아미노시클로헥사논에 의해 환원성 아미노화시킴으로써, 상기 N-알킬화된 티에닐시클로헥실 아민 (화합물 64)으로 N-메틸화시킬 수 있다. 통상의 기술자에게 널리 공지된 다양한 조건을 통해 시클로헥실아미노 기를 용이하게 탈보호시켜, 4-아미노시클로헥산 (화합물 65)을 수득할 수 있다 (반응식 12, 단계 B). 상기 4-아미노시클로헥산 (화합물 65, 반응식 12, 단계 C)의 알킬화 (반응식 12, 단계 C)는 동일계내에서 생성된 2-메톡시프로판-1,3-디올의 트리플레이트 (화합물 66)를 이용하여 수행할 수 있고, 후속적으로 원소 브로민 또는 NBS를 사용하여 브로민화를 수행하여, 브로모티오펜 (화합물 69, 반응식 12, 단계 E)을 제공할 수 있다. 팔라듐 촉매된 조건 하에, 예를 들어 무기 염기, 예컨대 K2CO3의 존재 하에 톨루엔 및 물의 혼합물 중에서 촉매적 RuPhos-G3-팔라다사이클과 함께 치환된 칼륨 트리플루오로보레이트 염을 사용하여 아릴브로마이드 (화합물 69)를 알킬화시키고 가열하여, N-알킬화된 메틸 2-[2-(벤질옥시카르보닐아미노)에틸]-5-[[4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]아미노]-4-메틸-티오펜-3-카르복실레이트 (화합물 70, 반응식 12, 단계 F)를 생성할 수 있다. 적절히 치환된 헤테로아릴 알데히드를 사용하는, 예를 들어 압력 하에 알콜성 용매, 예컨대 EtOH 중에서 탄소 상 Pd(OH)2의 존재 하에 동일계내 환원성 아미노화와 함께, 관련 기술분야에 널리 기재된 조건 하에 탈보호시키고 가열하여, 치환된 아미노메틸 피리딘 (화합물 71, Ra = CH3 또는 Bn, 반응식 12, 단계 G)을 제공할 수 있다. 반응식 8에 기재된 것과 유사한 조건 하에 후속적인 고리화 및 탈보호를 수행하여, 화학식 VI의 화합물을 수득할 수 있다 (반응식 12, 단계 H-I).
반응식 13
Figure pct00044
반응식 13은 화학식 II의 화합물의 대안적인 합성을 도시한다. 반응식 7, 단계 J 또는 반응식 8, 단계 K에 기재된 것과 유사한 산성 조건 하에 케탈 (화합물 42, 반응식 8, 단계 D)을 탈차폐화시켜, 상응하는 케톤 (화합물 73, 반응식 13, 단계 A)을 제공할 수 있다. 반응식 8, 단계 L과 유사한 조건 하에 이중 환원성 아미노화를 수행하여, 시클로헥실아민 (화합물 74, 반응식 13, 단계 B)을 생성할 수 있고, 후속적으로 반응식 7, 단계 D에 기재된 조건 하에 전이 금속 매개된 커플링을 수행한 후, 문헌에 널리 기재된 바와 같이 아민 탈보호를 수행하여, 아미노시클로헥산 (화합물 75, 반응식 13, 단계 C)을 제공할 수 있다. 반응식 11, 단계 D에 기재된 것과 유사한 조건 하에 6,7-디히드로-5H-티에노[3,2-c]피리딘-4-온 (화합물 76)으로 고리화시킨 후, 반응식 7, 단계 H에 기재된 것과 유사한 조건 하에 알킬화시켜, 치환된 피리딘 (화합물 77, 반응식 13, 단계 E)을 제공할 수 있고, 반응식 7, 단계 M에 기재된 것과 유사한 조건 하에 최종적으로 탈알킬화시켜, 화학식 II의 화합물 (반응식 13, 단계 F)을 생성할 수 있다.
반응식 14
Figure pct00045
반응식 14는 화학식 IV의 화합물의 대안적인 합성 경로를 도시한다. 반응식 9, 단계 B에 도시된 것과 유사한 조건 하에 관련 기술분야에 널리 공지된 다양한 기술을 이용하여, 예컨대 수산화팔라듐(II)을 사용하는 촉매적 수소화, 및 적절히 치환된 2-알콕시피리딘, 예컨대 4,6-디메틸-2-알콕시피리딘을 사용하는 동일계내 환원성 아미노화를 이용하여, 알킨 화합물 54 (반응식 10, 단계 A)를 동시에 환원 및 탈보호시켜, 케탈 화합물 78을 제공할 수 있다. 케톤 화합물 79로의 후속적인 탈차폐화, 락탐 화합물 80으로의 고리화, 적절히 치환된 아민을 사용하는 환원성 아미노화에 의해 화합물 81의 생성, 및 최종적인 탈알킬화는 모두 반응식 7 (단계 J-M)에 기재된 것과 유사한 조건 하에 수행하여, 화학식 IV의 화합물을 수득할 수 있다.
통상의 기술자는 반응식 7-12에 기재된 모든 관련된 트랜스- 및 시스- 이성질체의 분리는 관련 기술분야에 널리 공지된 표준 기술을 이용하여, 예를 들어 적절한 유기 용매 혼합물 (예를 들어, EtOAc/헥산)을 사용하는 실리카 상에서의 표준 플래시 크로마토그래피에 의해, 또는 적절한 물/유기 용매 혼합물 (예를 들어, NH4OAc 또는 NH4HCO3으로 완충된 H2O 및 ACN)을 사용하는 C-18 실리카 상에서의 역상 크로마토그래피에 의해 수행될 수 있음을 인식할 것이다.
제조예 1
tert-부틸 3-비닐옥시아제티딘-1-카르복실레이트
Figure pct00046
tert-부틸 3-히드록시아제티딘-1-카르복실레이트 (12.0 g, 69.3 mmol), n-부틸 비닐 에테르 (125.0 mL, 961 mmol), 및 TEA (4.1 mL, 29 mmol)를 밀봉된 플라스크에 첨가하였다. 10분 동안 혼합물을 N2로 강력하게 버블링시켰다. 4,7-디페닐-1,10-페난트롤린 (1.0 g, 2.92 mmol) 및 Pd(OAc)2 (0.66 g, 2.91 mmol)를 첨가하였다. 플라스크를 밀봉하고, 혼합물을 N2 하에 80℃에서 7일 동안 교반하였다. 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 여과 케이크를 EtOAc로 세정하였다. 여액을 농축시키고, 생성된 잔류물을 헥산 중 0-20% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (9.95 g, 72% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400.1 MHz, CDCl3) δ 1.44 (s, 9H), 3.90 (dd, J = 4.2, 10.1 Hz, 2H), 3.97 (dd, J = 2.5, 14.5 Hz, 1H), 4.08 (dd, J = 2.5, 6.8 Hz, 1H), 4.17 (dd, J = 6.5, 10.1 Hz, 2H), 4.55-4.61 (m, 1H), 6.37 (dd, J = 6.8, 14.5 Hz, 1H).
제조예 2
tert-부틸 3-(시클로프로폭시)아제티딘-1-카르복실레이트
Figure pct00047
DCE (50 mL) 중에서 tert-부틸 3-비닐옥시아제티딘-1-카르복실레이트 (9.9 g, 50 mmol) 및 클로로아이오도메탄 (12 mL, 159.8 mmol)의 용액을 -5℃로 냉각시킨 다음, 0 내지 -5℃의 내부 온도를 유지하면서 헵탄 중 1M 디에틸아연의 용액 (80 mL, 80 mmol)을 60분에 걸쳐 적가하였다. RT로 가온시키고, 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 빙조에서 재냉각시키고, 포화 수성 NH4Cl 용액으로 반응을 켄칭시켰다. 진한 NH4OH 용액을 첨가한 다음, 생성된 혼합물을 MTBE로 3회 추출하였다. 합한 추출물을 포화 수성 NH4Cl 용액으로 세척하고, 무수 K2CO3 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0-20% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (4.90 g, 46% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400.1 MHz, CDCl3) δ 0.45-0.50 (m, 2H), 0.57-0.62 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 3.21-3.26 (m, 1H), 3.85 (dd, J = 4.2, 9.8 Hz, 2H), 4.08 (dd, J = 6.6, 9.8 Hz, 2H), 4.32 (m, 1H).
제조예 3
3-(시클로프로폭시)아제티딘 히드로클로라이드
Figure pct00048
빙조에서 THF (10 mL, 123 mmol) 중 tert-부틸 3-(시클로프로폭시)아제티딘-1-카르복실레이트 (4.45 g, 20.9 mmol)의 용액을 냉각시키고, 1,4-디옥산 중 4N HCl의 용액 (20 mL, 80 mmol)을 적가하였다. 용액을 RT에서 3시간 동안 교반하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 2-프로판올에 용해시키고, 농축시키고, 진공 하에 건조시켜, 표제 화합물 (3.0 g, 96% 수율)을 수득하였고, 이를 추가로 정제하지 않고 사용하였다. 1H NMR (400.1 MHz, CD3OD) δ 0.48-0.54 (m, 2H), 0.56-0.61 (m, 2H), 3.35-3.40 (m, 1H), 3.98 (dd, J = 4.8, 11.8 Hz, 2H), 4.29 (dd, J = 6.8, 11.8 Hz, 2H), 4.51-4.58 (m, 1H).
제조예 4
1-벤즈히드릴-3-[(3S)-테트라히드로푸란-3-일]옥시-아제티딘
Figure pct00049
100℃에서 마이크로웨이브에서 20분 동안 (3S)-테트라히드로푸란-3-올 (10 mL, 122.0 mmol) 및 1-벤즈히드릴아제티딘-3-일 메탄술포네이트 (3.0 g, 9.3 mmol)의 혼합물을 가열하였다. 혼합물을 RT로 냉각시키고, EtOAc 및 포화 수성 Na2CO3 용액으로 희석하였다. 층들을 분리하고, 유기 층을 물 및 포화 수성 NaCl로 순차적으로 세척하고, Mg2SO4 상에서 건조시켰다. 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 10-30% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (0.9 g, 30% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 310 (M+H).
(3R)-테트라히드로푸란-3-올을 사용하여 본질적으로 제조예 4의 방법에 의해 제조예 5를 제조하였다.
Figure pct00050
제조예 6
3-[(3S)-테트라히드로푸란-3-일]옥시아제티딘
Figure pct00051
1-벤즈히드릴-3-[(3S)-테트라히드로푸란-3-일]옥시-아제티딘 (0.85 g, 2.7 mmol), MeOH (20 mL), EtOAc (5 mL) 및 AcOH (1 mL)의 혼합물을 통해 10분 동안 N2를 플러싱하였다. 탄소 상 10% Pd (0.50 g)를 첨가하고, 생성된 슬러리를 H2 하에 60 psi에서 18시간 동안 교반하였다. 촉매를 여과에 의해 제거하고, 여과 케이크를 MeOH로 세정하였다. 농축시키고, 잔류물을 진공 하에 건조시켜, 추가의 정제없이 사용하기에 적합한 표제 화합물 (0.39 g, 95% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (400.1 MHz, CDCl3): δ 1.85-2.05 (m, 2H), 2.05 (bs, 1H), 3.58-3.72 (m, 5H), 3.74 (d, 1H), 3.80 (m, 1H), 3.89 (m 1H), 4.07 (m, 1H), 4.34 (m, 1H).
1-벤즈히드릴-3-[(3R)-테트라히드로푸란-3-일]옥시-아제티딘을 사용하여 본질적으로 제조예 6의 방법에 의해 제조예 7을 제조하였다.
Figure pct00052
제조예 8
1-[1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일]-3-메틸-1H-피라졸 및 1-(1-벤즈히드릴아제티딘-3-일)-5-메틸-피라졸 (위치 이성질체의 혼합물)
Figure pct00053
밀봉된 튜브에 DMF (15 mL) 중 (1-벤즈히드릴아제티딘-3-일) 메탄술포네이트 (7 g, 22.05 mmol), 3-메틸-1H-피라졸 (2.17 g, 26.47 mmol) 및 Cs2CO3 (8.6 g, 26.47 mmol)의 용액을 첨가하고, 혼합물을 120℃에서 24시간 동안 교반하였다. RT로 냉각시키고, 혼합물을 빙수에 붓고, DCM 중 5% MeOH의 용액으로 추출하였다. 층들을 분리하고, 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 7-30% EtOH의 구배로 용리시키는 실리카 겔 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (3.5 g, 49% 수율)을 위치 이성질체의 혼합물로서 황색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 304 (M+H).
본질적으로 제조예 8의 방법에 의해 하기 화합물을 제조하였다.
Figure pct00054
제조예 11
1-(아제티딘-3-일)-3-메틸-1H-피라졸 및 1-(아제티딘-3-일)-5-메틸-피라졸 (위치 이성질체의 혼합물)
Figure pct00055
300 mL 파르 오토클레이브에서 1-[1-(디페닐메틸)아제티딘-3-일]-3-메틸-1H-피라졸 (3.5 g, 11.5 mmol) 및 1-(1-벤즈히드릴아제티딘-3-일)-5-메틸-피라졸의 혼합물 (위치 이성질체의 혼합물)을 탄소 상 10% Pd (3.5 g, 1 g/g)와 함께 MeOH (75 mL) 및 EtOAc (25 mL)의 용액에 첨가하였다. 용기를 H2로 3회 퍼징하고, 50 psi의 H2를 충전하고, RT에서 24시간 동안 강력 교반하였다. 규조토의 층을 통해 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (1.58 g, 93% 수율)을 위치 이성질체의 혼합물로서 무색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 138 (M+H).
상응하는 1-(디페닐메틸)아제티딘을 사용하여 본질적으로 제조예 11의 방법에 의해 하기 화합물을 제조하였다.
Figure pct00056
제조예 14
tert-부틸 3-(시클로프로필메톡시)아제티딘-1-카르복실레이트
Figure pct00057
0℃에서 NaH (오일 중 60%, 900 mg, 22.5 mmol)를 DMF (10 mL) 중 tert-부틸 3-히드록시아제티딘-1-카르복실레이트 (3 g, 17.32 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 RT에서 1.5시간 동안 교반한 다음, 브로모메틸시클로프로판 (2.80 g, 20.7 mmol)을 천천히 첨가하고, 72시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc 및 Et2O로 희석하고, 물로 2회, 포화 수성 NaCl로 1회 세척하고, 층들을 분리하고, 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0-20% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (1.91 g, 48% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400.1 MHz, CDCl3) δ 0.18-0.22 (m, 2H), 0.54-0.58 (m, 2H), 1.00-1.04 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 3.23 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 3.85 (dd, J = 4.3, 10.1 Hz, 2H), 4.06 (dd, J = 6.5, 10.1 Hz, 2H), 4.20-4.26 (m, 1H).
제조예 15
3-(시클로프로필메톡시)아제티딘 히드로클로라이드
Figure pct00058
둥근 바닥 플라스크에서 1,4-디옥산 중 4N HCl 용액 (15 mL, 60 mmol)을 tert-부틸 3-(시클로프로필메톡시)-아제티딘-1-카르복실레이트 (1.91 g, 8.40 mmol)에 첨가하고, RT에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 진공 하에 건조시켜, 추가의 정제없이 사용하기에 적합한 표제 화합물 (1.68 g, 정량적 수율)을 수득하였다. 1H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6) δ 0.14-0.18 (m, 2H), 0.44-0.48 (m, 2H), 0.91-0.99 (m, 1H), 3.21 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 3.72-3.82 (m, 2H), 4.02-4.12 (m, 2H), 4.30-4.37 (m, 1H), 9.17 (bs, 2H).
제조예 16
2-메톡시-4,6-디메틸-피리딘-3-카르보니트릴
Figure pct00059
수조에서 MeOH 중 NaOCH3의 용액 (30 질량%, 175 mL, 940 mmol)을 MeOH (450 mL) 중 2-클로로-4,6-디메틸-피리딘-3-카르보니트릴 (75 g, 441.1 mmol)의 용액에 적가한 후, MeOH 중 NaOCH3 (25 질량%, 250 mL, 1090 mmol)를 다시 적가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 빙냉수에 붓고, 30분 동안 교반하고, 생성된 고체를 여과하였다. 여과 케이크를 헥산으로 세척하고, 진공 오븐에서 밤새 건조하였다. 수성 여액을 DCM으로 추출하고, 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 여과된 고체 및 증발된 잔류물을 합하여, 표제 화합물 (71.8 g, 정량적 수율)을 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 163 (M+H).
제조예 17
2-메톡시-4,6-디메틸-피리딘-3-카르브알데히드
Figure pct00060
톨루엔 중 DIBAL-H의 1M 용액 (240 mL, 240 mmol)을 DCM (480 mL) 중 2-메톡시-4,6-디메틸-피리딘-3-카르보니트릴 (48 g, 295.95 mmol)의 용액에 0℃에서 2시간에 걸쳐 첨가하였다. 1시간 후에 빙조를 제거하고, RT에서 밤새 교반하였다. 수조에서 RT에서 냉각시키고, 1M 수성 HCl (192 mL) 및 AcOH (192 mL)의 혼합물을 천천히 첨가하여 켄칭시켰다. DCM을 첨가하고, 층들을 분리하고, 유기 상을 포화 수성 NaCl로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 0-20% EtOAc/헥산의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (22.6 g, 46% 수율)을 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 166 (M+H). 1H NMR (400.1 MHz, CDCl3) δ 2.43 (s, 3H), 2.54 (s, 3H), 4.01 (s, 3H), 6.61 (s, 1H), 10.48 (s, 1H).
제조예 18
(2-메톡시-4,6-디메틸-3-피리딜)메탄올
Figure pct00061
0℃에서 NaBH4 (6.4 g, 170 mmol)를 MeOH (500 mL) 중 2-메톡시-4,6-디메틸-피리딘-3-카르브알데히드 (22.6 g, 137 mmol)의 용액에 일부씩 나누어 첨가하였다. 용액을 RT로 가온시키고, 밤새 교반하였다. 추가의 NaBH4 (1.0 g)를 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 플라스크를 0℃로 냉각시키고, 빙냉수 (50 mL)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 진공 하에 ~1/2 부피로 농축시켰다. 포화 수성 NaHCO3를 생성된 잔류물에 첨가하고, DCM으로 추출하고, 층들을 분리하고, 유기 상을 포화 수성 NaCl로 세척하고, 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (23 g, 정량적 수율)을 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 168 (M+H).
제조예 19
3-(클로로메틸)-2-메톡시-4,6-디메틸-피리딘
Figure pct00062
0℃에서 DCM (100 mL)에 용해된 메탄술포닐 클로라이드 (22 mL, 281 mmol)의 용액을 DIPEA (54 mL)를 함유하는 DCM (500 mL) 중 (2-메톡시-4,6-디메틸-3-피리딜)메탄올 (39 g, 233.25 mmol)의 용액에 첨가하였다. RT로 천천히 가온시키고, 약 48시간에 걸쳐 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 2-5% EtOAc/헥산의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (30.85 g, 71% 수율)을 고체로서 수득하였다. 1H NMR (399.8 MHz, DMSO-d6): 2.28 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 4.69 (s, 2H), 6.70 (s, 1H).
제조예 20
2-(벤질옥시)-4,6-디메틸피리딘-3-카르보니트릴
Figure pct00063
기계적 교반기를 구비한 2-L 3목 플라스크에서 벤질 클로라이드 (100 mL, 859.5 mmol)를 톨루엔 (1 L) 중 2-히드록시-4,6-디메틸-피리딘-3-카르보니트릴 (100 g, 675 mmol) 및 산화은 (174 g, 747 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 110℃에서 6시간 동안 교반하였다. 혼합물을 ~60℃로 냉각시키고, 규조토 상에서 여과하고, DCM으로 세정하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 DCM에 용해시키고, 고체가 나타날 때까지 MeOH를 적가하였다. 여과하고, 생성된 고체를 수집하여, 표제 생성물 (144.9 g, 90% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 239 (M+H).
제조예 21
2-(벤질옥시)-4,6-디메틸피리딘-3-카르브알데히드
Figure pct00064
0℃에서 톨루엔 중 1M DIBAL-H의 용액 (200 mL, 200 mmol)을 DCM (400 mL) 중 2-(벤질옥시)-4,6-디메틸피리딘-3-카르보니트릴 (40.3 g, 169 mmol)의 용액에 3시간에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 RT로 가온시키고, 3시간 동안 교반하였다. RT에서 1N HCl (160 mL) 및 아세트산 (160 mL)의 1:1 혼합물로 반응을 매우 천천히 켄칭시켰다. 포화 수성 NaCl (100 mL)을 첨가하고, DCM으로 추출하였다. 층들을 분리하고, 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 밤새 건조시켰다. 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 헥산 중 0-5% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (24.47 g, 60% 수율)을 수득하였다. ES/MS (m/z): 242 (M+H).
제조예 22
(2-벤질옥시-4,6-디메틸-3-피리딜)메탄올
Figure pct00065
기계적 교반기를 구비한 빙조에서 2-L 3목 플라스크에서 2-(벤질옥시)-4,6-디메틸피리딘-3-카르브알데히드 (46.5 g, 193 mmol)를 MeOH (1 L)에 용해시키고, NaBH4 (8.7 g, 230 mmol)를 1시간에 걸쳐 소량씩 첨가하였다. 혼합물을 RT로 가온시키고, 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃로 재냉각시키고, 빙냉수 (50 mL)로 켄칭시켰다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 포화 수성 NaHCO3 용액을 첨가하였다. DCM으로 3회 추출하고, 합한 추출물을 포화 수성 NaCl로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (46.8 g, 99.8% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 244 (M+H).
제조예 23
2-벤질옥시-3-(클로로메틸)-4,6-디메틸-피리딘
Figure pct00066
-60℃에서 N2 하에 SOCl2 (4.0 g, 33 mmol)를 DCM (100 mL) 중 (2-벤질옥시-4,6-디메틸-3-피리딜)메탄올 (6.0 g, 25 mmol)의 용액에 천천히 첨가한 다음, -40℃로 30분 동안 가온시켰다. 저온의 반응 혼합물을 얼음/물 (100 mL)에 부었다. 포화 수성 NaHCO3를 사용하여 혼합물의 pH가 약염기성이 될 때까지 조정한 다음, 순차적으로 수성 혼합물을 DCM으로 2회 추출하고, 유기 추출물을 합하고, MgSO4 상에서 건조시켰다. 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0-30% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 표제 화합물 (4.90 g, 76% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400.1 MHz, CDCl3) δ 2.35 (s, 3H), 2.40 (s, 3H), 4.71 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 6.61 (s, 1H), 7.28-7.33 (m, 1H), 7.35-7.40 (m, 2H), 7.47-7.51 (m, 2H).
제조예 24
2-아미노-6-메틸-4-옥소-4H-피란-3-카르보니트릴
Figure pct00067
무수 THF (0.70 L) 중 NaH (85.4 g, 2.10 mol)의 현탁액을 0℃로 냉각시켰다. 순수 말로노니트릴 (238 g, 3.6 mol)을 교반된 현탁액에 적가하였다. 0℃에서 10분 동안 교반한 다음, -10℃로 냉각시키고, THF (0.6 L) 중 아세틸 케텐 (163 g, 1.91 mol)의 용액을 적가하였다. -10 내지 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 진한 HCl을 이용하여 중화시키고, 물 (1.0 L)로 희석하였다. RT에서 16시간 동안 교반하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 공기 건조시켜, 황색 고체를 수득하였다. EtOH로부터 재결정화하여, 표제 화합물 (120 g, 42% 수율)을 황색 분말로서 수득하였다. 1H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6) δ 2.15 (3H, s) 5.87 (1H, s), 8.50 (2H, s).
제조예 25
4-히드록시-6-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-카르보니트릴
Figure pct00068
10% 수성 HCl (1.0 L) 중 2-아미노-6-메틸-4-옥소-4H-피란-3-카르보니트릴 (120 g, 0.80 mol)의 현탁액을 교반하면서 100℃에서 12시간 동안 가열하였다. RT로 냉각시키고, 감압 하에 농축시켰다. EtOH (0.40 L)를 생성된 잔류물에 첨가하고, 고체를 여과에 의해 수집하여, 표제 화합물 (103 g, 86% 수율)을 백색 고체로서 수집하였다. 1H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6,) δ 2.15 (3H, s), 5.87 (1H, s), 11.68 (1H, s), 12.49 (bs).
제조예 26
4-클로로-6-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-카르보니트릴
Figure pct00069
4-히드록시-6-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-카르보니트릴 (103 g, 0.69 mol)을 CHCl3 (1.0 L) 중에 현탁시키고, 포스포릴 클로라이드 (210 g, 1.37 mol) 및 오염화인 (286 g, 1.37 mol)을 첨가하였다. 교반하면서 70℃에서 8시간 동안 가열하였다. RT로 냉각시키고, 강력 교반하면서 빙수에 천천히 붓고, 진한 수성 NH3를 사용하여 혼합물을 중화시키고, 여과에 의해 생성된 침전물 수집하여, 진공 오븐에서 건조시킨 후 표제 화합물 (77 g, 65% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (DMSO-d6, 400.1 MHz, ppm) δ 2.27 (3H, s), 6.50 (1H, s).
제조예 27
4-클로로-2-에톡시-6-메틸피리딘-3-카르보니트릴
Figure pct00070
아이오도에탄 (3.3 mL, 41 mmol)을 톨루엔 (250 mL) 중 4-클로로-6-메틸-2-옥소-1H-피리딘-3-카르보니트릴 (4.6 g, 27 mmol) 및 Ag2O (13 g, 55.8 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 생성된 혼합물을 환류 하에 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 60℃로 냉각시키고, 규조토를 통해 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0-100% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (2.5 g, 47% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): (35Cl/37Cl) 197/199 (M+H).
제조예 28
4-클로로-2-에톡시-6-메틸피리딘-3-카르브알데히드
Figure pct00071
0℃에서 톨루엔 중 1M DIBAL-H (18 mL, 18 mmol)를 DCM (100 mL) 중 4-클로로-2-에톡시-6-메틸피리딘-3-카르보니트릴 (2.2 g, 11 mmol)의 용액에 적가하였다. 혼합물을 RT로 서서히 가온시키고, 밤새 교반하고, RT에서 수조 중의 플라스크에 넣고, 1M 수성 HCl (9 mL) 및 AcOH (9 mL)의 혼합물을 적가하여 반응을 켄칭시켰다. 생성된 혼합물을 DCM으로 희석하고, 생성된 층들을 분리하고, 유기 추출물을 포화 수성 NaCl로 세척하고, 유기 추출물을 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (1.7 g, 76% 수율)을 오렌지색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): (35Cl/37Cl) 200/202 (M+H).
제조예 29
(4-클로로-2-에톡시-6-메틸피리딘-3-일)메탄올
Figure pct00072
0℃에서 NaBH4 (0.230 g, 6.08 mmol)를 MeOH (50 mL) 중 4-클로로-2-에톡시-6-메틸피리딘-3-카르브알데히드 (1 g, 5 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 RT로 서서히 가온시키고, 대략 2시간 동안 교반하고, 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 용액에 의해 켄칭시키고, 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 희석하고, DCM으로 추출하였다. 층들을 분리하고, 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (1.03 g, 82% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): (35Cl/37Cl) 202/204 (M+H).
제조예 30
4-클로로-3-(클로로메틸)-2-에톡시-6-메틸피리딘
Figure pct00073
DIPEA (0.762 mL, 4.33 mmol)를 DCM (40 mL) 중 (4-클로로-2-에톡시-6-메틸피리딘-3-일)메탄올 (1.03 g, 4.09 mmol, 80% 순도)의 RT 용액을 첨가하였다. 용액을 0℃로 냉각시킨 다음, 메탄술포닐 클로라이드 (0.335 mL, 4.28 mmol)를 적가하였다. 용액을 RT로 서서히 가온시키고, 생성된 혼합물을 RT에서 약 3시간 동안 교반하고, 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 포화 수성 NaHCO3 용액을 첨가하고, EtOAc로 추출하였다. 층들을 분리하고, 유기 추출물을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 5-30% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (0.788 g, 88% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR δ (400.1 MHz, DMSO): 1.31 (t, J= 7.0 Hz, 3H), 2.37 (s, 3H), 4.37 (q, J= 7.0 Hz, 2H), 4.71 (s, 2H), 7.05 (s, 1H).
제조예 31
1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-카르복실산
Figure pct00074
트리에틸 오르토포르메이트 (2.35 kg, 2.65 L, 15.9 mol), PTSA (2.8 g, 16 mmol) 및 에틸렌 글리콜 (1.64 kg, 26.4 mol)을 EtOH (4 L) 중 에틸 4-옥소시클로헥산카르복실레이트 (900 g, 5.29 mol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. RT로 냉각시키고, NaOH의 5M 수용액 (4.24 L, 21.18 mol)을 20분에 걸쳐 천천히 첨가하고, 생성된 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 대부분의 EtOH를 감압 하에 증발시키고, 물 (5 L) 및 MTBE (4 L)를 첨가하고, 교반하고, 상들을 분리하고, 유기 상을 폐기하였다. 수성 상을 15℃로 냉각시키고, 5M 수성 HCl을 천천히 첨가하여 pH~3.3 (~3.7 L)이 될 때까지 산성화시켰다. DCM (8 L)을 첨가하고, 층들을 분리하고, 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 정치시 백색의 저융점 고체로서 천천히 고화되는 표제 화합물 (887 g, 90% 수율)을 추가의 정제없이 다음 단계에 사용하기에 적합한 점성 오일로서 수득하였다. (GC-MS) MS (m/z): 99 (M-87).
제조예 32
N-메톡시-N-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-카르복사미드
Figure pct00075
CDI (915 g, 5.64 mol)를 소량씩 20분에 걸쳐 DCM (10 L) 중 1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-카르복실산 (988.6 g, 5.31 mol)의 용액에 천천히 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. N-메톡시메탄아민 히드로클로라이드 (577 g, 5.92 mol)를 소량씩 15분에 걸쳐 첨가하고, 12시간 동안 교반하였다. 추가의 N-메톡시메탄아민 히드로클로라이드 (53 g, 0.55 mol)를 첨가하고, 추가 12시간 동안 교반하였다. 물 (10 L)을 첨가하고, 상들을 분리하고, 유기 상을 물 (5 L) 및 포화 수성 NaCl (5 L)로 순차적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (1.24 kg, 정량적 수율)을 추가의 정제없이 다음 단계에 사용하기에 적합한 무색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 230 (M+H).
제조예 33
1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에타논
Figure pct00076
THF (3.5 L) 중 N-메톡시-N-메틸-1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-카르복사미드 (400 g, 1.74 mol)의 용액을 N2 하에 0℃로 냉각시키고, Et2O 중 3M MeMgBr 용액 (697.87 mL, 2.1 mol)을 30분에 걸쳐 첨가하였다. RT로 가온시키면서 30분 동안 교반하였다. 수성 포화 NH4Cl (1 L)을 천천히 첨가하여 반응을 켄칭시키고, MTBE (500 mL x 3)로 추출하였다. 층들을 분리하고, 유기 층을 포화 수성 NaCl로 세척하였다. Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 조 표제 화합물 (275 g, 86% 수율)을 추가의 정제없이 사용하기에 적합한 밝은 황색 오일로서 수득하였다. (GC-MS) MS (m/z): 184 (M+).
제조예 34
1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에테닐 디페닐 포스페이트
Figure pct00077
THF (1 L) 중 1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에타논 (150 g, 0.81 mol)의 용액을 -70℃로 냉각시키고, THF 중 1M LiHMDS의 용액 (896 mL, 0.89 mol)을 30분에 걸쳐 적가하였다. 혼합물을 -60℃에서 15분 동안 교반한 다음, -70℃에서 THF (450 mL) 중 디페닐 포스포로클로리데이트 (240.6 g, 896 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 RT로 가온시키면서 14시간 동안 교반하였다. 포화 수성 NaHCO3 용액 (1 L)으로 반응을 켄칭시키고, 1시간 동안 교반하였다. MTBE (8 L x 3)로 추출하고, 층들을 분리하고, 합한 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 2-33 % EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (190 g, 56% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 417 (M+H).
제조예 35
메틸 4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00078
3-브로모-4-메틸티오펜 (200 g, 1.13 mol), MeOH (800 mL), DMA (1200 mL), TEA (390 mL, 2.8 mol)를 혼합하고, 10분 동안 질소로 퍼징하였다. 1,1'-비스(디페닐포스피노) 페로센 (50 g, 0.09 mol) 및 팔라듐 (II) 아세테이트 (20 g, 0.09 mol)를 첨가하고, CO 분위기 하에 60 psi에서 30시간 동안 80℃에서 교반하였다. 혼합물을 RT로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 물 및 포화 수성 NaCl로 순차적으로 세척하고, 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (360 g)을 추가의 정제없이 사용하기에 충분한 황색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 157 (M+H).
메틸 4-메틸티오펜-3-카르복실레이트의 대안적인 제조예
3-브로모-4-메틸티오펜 (1.00 kg, 5.65 mol) 및 TEA (1.43 kg, 14.12 mol)를 DMA (2.5 L) 및 MeOH (1.32 L)에 용해시키고, 1,1-비스-디페닐포피노페로센 (187.9 g, 0.34 mol)에 이어 Pd(OAc)2 (63.4 g, 0.28 mol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물 CO 분위기 하에 50 psi에서 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. RT로 냉각시킨 후, EtOAc (5 L)를 첨가하고, 10% 수성 시트르산 용액 (1.6 L x 2), 포화 수성 NaHCO3 용액 (1.6 L x 2), 물 (1.2 L x 2) 및 포화 수성 NaCl (1 L x 2)로 순차적으로 세척하였다. 층들을 분리하고, 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 5% EtOAc로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (653 g, 74% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 157 (M+H).
제조예 36
메틸 4-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00079
시클로헥산 (2.5 L) 중에서 메틸 4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (250 g, 1.60 mol), 4-tert-부틸-2-(4-tert-부틸-2-피리딜)피리딘 (8.59 g, 32.01 mmol) 및 [IrMeO(COD)]2 (5.37 g, 8.00 mmol)를 혼합하였다. 혼합물을 진공 하에 탈기시키고, N2로 철저히 퍼징한 다음, 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (409.67 g, 3.20 mol)을 소량씩 1시간에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 RT로 냉각시키고, 진공 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 헥산 중 0-1% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (300 g, 66% 수율)을 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 283 (M+H).
제조예 37
메틸 5-[1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에테닐]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00080
RT에서 디옥산 (2.4 L) 중 1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에테닐 디페닐 포스페이트 (240 g, 576.37 mmol), 메틸 4-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)티오펜-3-카르복실레이트 (211.4 g, 749.28 mmol) 및 2M K3PO4 수용액 (367 g, 1.73 mol)의 혼합물을 교반하였다. 클로로(2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐)[2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II) (9.07 g, 11.53 mmol)을 첨가하고, 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, EtOAc (750 mL x 2)로 추출하고, 층들을 분리하고, 합한 유기 상을 물 (150 mL) 및 포화 수성 NaCl로 순차적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 5% EtOAc로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 제거 후에 표제 화합물 (375 g, 67% 수율)을 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 323 (M+H).
제조예 38
메틸 5-[(1R)-1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에틸]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00081
[(4R,5R)-(+)-O-[1-벤질-1-(5-메틸-2-페닐-4,5-디히드로옥사졸-4-일)-2-페닐에틸] (디시클로헥실포스피나이트) (1,5-COD) 이리듐(I) 테트라키스 (3,5-비스(트리플루오로메틸) 페닐보레이트 (1.61 g, 0.93 mmol)를 DCM (1.9 L) 중 메틸 5-[1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에테닐]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (60 g, 186 mmol)의 용액에 첨가하고, 80 파르의 수소 분위기 하에 12 mL/분에서 2시간 동안 RT에서 48 mL 스테인리스 스틸 반응기를 통해 용액을 용리시켰다. 용액을 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 조 표제 화합물 (60 g, 정량적 수율)을 추가의 정제없이 다음 단계에 사용하기에 적합한 갈색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 325 (M+H).
제조예 39
메틸 4-메틸-5-[(1R)-1-(4-옥소시클로헥실)에틸]티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00082
THF (450 mL) 중 메틸 5-[(1R)-1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에틸]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (64.7 g, 178 mmol)의 용액에 1N HCl 용액 (450 mL, 5.53 mol)을 첨가하고, RT에서 16시간 동안, 이어서 45℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, MTBE (500 mL)를 첨가하고, 상들을 분리하였다. 유기 상을 물 (200 mL), 포화 수성 NaHCO3 용액 (100 mL) 및 포화 수성 NaCl (100 mL)로 순차적으로 세척하였다. 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 조 표제 화합물 (53.3 g, 96% 수율)을 갈색 오일로서 수득하였고, 이를 추가로 정제하지 않고 사용하였다. ES/MS (m/z): 281 (M+H).
제조예 40a
메틸 5-[(1R)-1-[트랜스-4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]에틸]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00083
MeOH (500 mL) 중 3-메톡시아제티딘 히드로클로라이드 (43.4 g, 351 mmol) 및 DIPEA (65 mL, 373 mmol)의 용액을 RT에서 45분 동안 교반하였다. 이 혼합물을 THF (250 mL) 중 메틸 4-메틸-5-[(1R)-1-(4-옥소시클로헥실)에틸]티오펜-3-카르복실레이트 (50.0 g, 160 mmol)의 용액에 첨가하고, RT에서 40분 동안 교반하였다. 혼합물을 -70℃에서 냉각시키고, LiBH4 (4.9 g, 220 mmol)를 25분에 걸쳐 5회 분량으로 나누어 첨가하였다. -20℃로 가온시키면서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 1M HCl의 수용액 (500 mL)에 천천히 붓고, 10분 동안 교반하였다. 대부분의 유기 용매를 진공 하에 증발시키고, DCM (500 mL) 및 5M K2CO3 수용액 (~ pH 9)을 첨가하고, 층들을 분리하고, 수성 상을 다시 DCM (250 mL)으로 세척하였다. 유기 추출물을 합하고, 포화 수성 NaCl로 세척하고, 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. EtOAc (50 mL)를 첨가하고, 진공 하에 다시 농축시켰다. 생성된 잔류물을 2% 트리에틸아민/헥산 중 20% EtOAc로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 오일을 수득하였다. 생성된 오일을 MTBE (200 mL)에 용해시키고, 수성 1M HCl (200 mL)로 세척하고, 수성 2M K3PO4를 수성 상 (~pH 7.5)에 첨가하였다. 수용액을 EtOAc (2 x 300 mL)로 추출하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (15.5 g, 57% 수율)을 옅은 황색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 352 (M+H).
제조예 40b
메틸 5-[(1R)-1-[트랜스-4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]에틸]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 히드로클로라이드
Figure pct00084
메틸 5-[(1R)-1-[트랜스-4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]에틸]-4-메틸-티오펜-3-카르복실레이트 히드로클로라이드는 본질적으로 제조예 40a에 기재된 바와 같이 제조될 수 있으며, 조 반응 혼합물을 HCl 켄칭 후에 용매 증발시키고, DCM 중 0-100% 2M NH3/MeOH의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 오일을 수득하였고, 이는 진공 하에 건조시 부분적으로 결정화되었다. 후속적으로 EtOAc 및 미량의 MeOH로부터 재결정화시켜, X-선 결정학에 충분한 결정질 물질을 수득하였다. ES/MS (m/z): 352 (M+H).
EtOAc 및 MeOH 중에서 재결정화시켜 메틸 5-[(1R)-1-[트랜스-4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]에틸]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 히드로클로라이드의 단일 결정을 제조하였다. -173℃에서 얇은 섬유 상에 탑재시켰다. Iμ CuKα 방사선원 (λ = 1.54178 Å), 및 스마트(SMART)® 6000CCD 영역 검출기 (결정 치수 = 0.150 x 0.080 x 0.020 mm)를 구비한 브루커 D8 기재 3-써클 측각기 회절계를 사용하여 데이터를 수집하였다. 세인트(SAINT) 프로그램 V8.32b를 이용하여 셀 정련 및 데이터 감소를 수행하였다. 12.2214(3) Å, b = 7.0314(2) Å, c = 12.8284(3) Å, 및 β = 108.8099(15)° (결정 구조체로부터의 셀 부피 = 1043.52(5) Å3, 구조체의 계산된 밀도 = -173℃에서 1.235 g/㎤)의 단사정계 파라미터를 갖는 단위 셀을 표시하였다. 쉘렉스(SHELXS) 프로그램을 이용하는 직접적인 방법에 의해 구조를 결정하였다. 수소 원자를 제외한 모든 원자의 파라미터를 이방성으로 독립적으로 정의하였다. 이상적으로 계산된 위치에 놓았다. 1.110 핏의 최종 양호함을 갖는, 쉘렉셀(SHELXL) 프로그램을 사용하는 F2 상에서의 완전 매트릭스 최소 자승법 정련의 성공적인 수렴에 의해, 공간 군 선택, 즉 P21을 확인하였다. 최종 R 지수 (I>2시그마(I))는 R1 = 0.0603, R2 = 0.1242이었다. 절대 구조 파라미터를0.081(12)로 정련하였다. 구조를 결정하였다. 상기 구조는 히드로클로라이드 염인 것으로 결정되었고, 절대 구조는 입체 중심에서 R-배위 및 시클로헥산 고리 둘레에서 트랜스-배위를 갖는 것으로 결정되었다.
제조예 41
메틸 2-브로모-5-[(1R)-1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)에틸]-4-메틸-티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00085
N-브로모숙신이미드 (6.18 g, 34.7 mmol)를 EtOAc (60 mL) 중 메틸 5-[(1R)-1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에틸]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (15.56 g, 47.97 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 55℃에서 30분 동안 교반한 다음, 40℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHSO3 용액으로 2회 세척하고, 층들을 분리하고, 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시켰다. 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0-20% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (15.67 g, 81% 수율)을 수득하였다. ES/MS (m/z) (79Br/81Br): 403/405 (M+H).
제조예 42
메틸 2-(2-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}에틸)-5-[(1R)-1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에틸]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00086
메틸 2-브로모-5-[(1R)-1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)에틸]-4-메틸-티오펜-3-카르복실레이트 (15.44 g, 38.28 mmol), 톨루엔 (350 mL) 및 물 (40 mL)을 기계적 교반기를 구비한 1-L 3목 플라스크에 첨가하였다. 혼합물을 하우스 진공 하에 15분 동안 탈기시켰다. 칼륨 벤질 N-[2-(트리플루오로보라누이딜)에틸]카르바메이트 (17.3 g, 57.6 mmol), Cs2CO3 (37.4 g, 115 mmol), 및 RuPhos-G3-팔라다사이클 (2.30 g, 2.69 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 추가 15분 동안 탈기시킨 다음, N2 하에 80-85℃에서 밤새 교반하였다. 포화 수성 NaHCO3 용액을 첨가하고, EtOAc로 3회 추출하고, 합한 추출물을 물 및 포화 수성 NaCl로 순차적으로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0-50% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 표제 화합물 (14.72 g, 76% 수율)을 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 502 (M+H).
제조예 43
2-[(1R)-1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00087
H2 하에 60 psi에서 밤새 MeOH (80 mL) 중 메틸 2-(2-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}에틸)-5-[(1R)-1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에틸]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (14.72 g, 29.35 mmol) 및 건조한 탄소 상 10% Pd (3.0 g)의 혼합물을 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토 상에서 여과하고, 여액을 RT에서 24시간 동안 교반하고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 20-100% EtOAc의 구배에 이어, EtOAc 중 10% MeOH의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (8.20 g, 83% 수율)을 수득하였다. ES/MS (m/z): 336 (M+H).
제조예 44
3-메틸-2-[(1R)-1-(4-옥소시클로헥실)에틸]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00088
THF (30 mL) 및 1N HCl (30 mL)의 혼합물 중 2-[(1R)-1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (6.18 g, 18.4 mmol)의 용액을 RT에서 밤새, 이어서 55℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응을 고체 Na2CO3로 켄칭시키고, EtOAc로 추출하였다. 합한 추출물을 포화 수성 NaCl로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0-100 % EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 제거 후에 표제 화합물 (4.69 g, 87% 수율)을 발포체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 292 (M+H).
제조예 45
메틸 4-메틸-5-니트로티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00089
25℃ 미만에서 아세트산 무수물 (2.5 L)을 AcOH (4.5 L) 중 메틸 4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (150 g, 0.96 mol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 10℃로 냉각시키고, 발연 HNO3 (220 mL)를 천천히 첨가하고, 온도를 15℃ 미만으로 유지하고, RT로 가온시키고, 1시간 동안 교반하였다. 반응을 빙수에 천천히 붓고, EtOAc (2 x 3 L)로 추출하였다. 생성된 층들을 분리하고, 유기 상을 물 (4 x 3 L) 및 포화 수성 NaHCO3 용액으로 순차적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 5% EtOAc/헥산으로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (91 g, 47% 수율)을 오렌지색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6) δ 2.77 (s, 3H); 3.83 (s, 3H); 8.61 (s, 1H).
제조예 46
메틸 5-아미노-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00090
철 (166 g, 2.98 mol)을 AcOH (1200 mL) 및 EtOH (1200 mL) 중 메틸 4-메틸-5-니트로티오펜-3-카르복실레이트 (120 g, 0.55 mol)의 용액에 천천히 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 15분 동안 교반하였다. 반응을 냉각시키고, 빙수에 천천히 붓고, pH 7-7.5이 될 때까지 NaHCO3의 포화 수용액을 첨가하였다. EtOAc (2 x 3 L)로 추출하고, 층들을 분리하고, 합한 유기 층을 포화 수성 NaCl로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 증발시켜, 표제 화합물 (98 g, 98% 수율)을 추가의 정제없이 사용하기에 충분한 황색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 172 (M+H).
제조예 47
메틸 5-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00091
1,4-디옥산 (40 mL) 중 메틸 5-아미노-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (7.79 g, 37.3 mmol)의 용액에 tert-부톡시카르보닐 tert-부틸 카르보네이트 (16.3 g, 74.6 mmol)를 첨가하고, 환류 하에 2시간 동안 가열한 다음, RT로 냉각시키고, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0-10% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (8.88 g, 88% 수율)을 진한 황색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 272 (M+H).
제조예 48
메틸 5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(메틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00092
DMF (20 mL) 중 메틸 5-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (2.01 g, 7.41 mmol)의 용액에 Cs2CO3 (6.03 g, 18.5 mmol) 및 CH3I (1.05 g, 7.41 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 10분 동안 가열하고, 반응 혼합물을 RT로 냉각시켰다. DCM (50 mL) 및 물 (10 mL)로 희석하고, 유기 층들을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. MeOH (40 mL) 및 5M 수성 HCl (20 mL)을 생성된 잔류물에 첨가하고, 50℃에서 대략 1시간 동안 가열하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시키고, DCM으로 희석하고, 혼합물이 약 pH 7로 중화될 때까지 고체 NaHCO3를 첨가하였다. 유기 층들을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 조 메틸 4-메틸-5-(메틸아미노)-티오펜-3-카르복실레이트를 수득하였다. ES/MS (m/z): 186 (M+H).
조 메틸 4-메틸-5-(메틸아미노)-티오펜-3-카르복실레이트를 DCM (20 mL)에 용해시키고, 30분 동안 교반하면서 1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-온 (1.16 g, 7.40 mmol)을 첨가한 다음, 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드 (3.13 g, 14.8 mmol)를 첨가하고, RT에서 추가 30분 동안 교반하였다. 추가의 1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-온 (0.289 g, 1.85 mmol)을 첨가하고, 15분 동안 교반하고, 추가의 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드 (0.784 g, 3.70 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 RT에서 밤새 교반하였다. 반응을 포화 수성 NaHCO3 용액 (10 mL) 및 DCM (40 mL)으로 희석하고, 1시간 동안 교반하고, 유기 층들을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0-10% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (1.21 g, 50% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 326 (M+H).
제조예 49
메틸 2-브로모-5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(메틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00093
RT에서 DCM (11 mL) 중 메틸 5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(메틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (1.13 g, 3.47 mmol)에 N-브로모숙신이미드 (0.701 g, 3.82 mmol)를 첨가하였다. 5분 후에, 반응을 DCM (40 mL)으로 희석하고, 0.1M NaOH (2 x 10 mL)로 세척하였다. 유기 층들을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 조 표제 화합물 (1.47 g, 정량적 수율)을 갈색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): (79Br/81Br) 404/406 (M+H).
제조예 50
메틸 2-(2-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}에틸)-5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(메틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00094
플라스크에서 톨루엔 (15 mL) 및 물 (2.5 mL)을 조 메틸 2-브로모-5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(메틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (1.36 g, 3.20 mmol), 칼륨 벤질 N-[2-(트리플루오로보라누이딜)에틸]카르바메이트 (1.25 g, 4.15 mmol) 및 Cs2CO3 (3.64 g, 11.2 mmol)에 첨가하였다. 혼합물을 N2로 퍼징한 다음, RuPhos (0.0761 g, 0.160 mmol) 및 제2 세대 Ruphos 전구촉매 (0.124 g, 0.160 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 강력 교반하고, 100℃에서 18시간 동안 가열하였다. RT로 냉각시키고, 반응을 EtOAc (40 mL) 및 물 (10 mL)로 희석하였다. 유기 층들을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0-30% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (0.93 g, 58% 수율)을 오렌지색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 503 (M+H).
제조예 51
2-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(메틸)아미노]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00095
MeOH (10 mL) 중 메틸 2-(2-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}에틸)-5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(메틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (0.93 g, 1.86 mmol)에 탄소 상 20% Pd(OH)2 (0.500 g, 3.56 mmol) 및 TEA (0.78 mL, 5.57 mmol)를 첨가하였다. 반응 용기를 H2 (345 kPa)로 충전하고, RT에서 교반하였다. 약 1.5시간 후, 촉매를 여과에 의해 제거한 다음, 혼합물을 70℃에서 5시간 동안 가열하였다. 혼합물을 RT로 냉각시키고, 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (0.513 g, 82% 수율)을 추가의 정제없이 사용하기에 충분한 황색 발포체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 337 (M+H).
제조예 52
메틸 5-[{트랜스-4-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]시클로헥실}(에틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00096
RT에서 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드 (441 g, 2.05 mol)를 tert-부틸 (4-옥소시클로헥실)카르바메이트 (156.7 g, 0.75 mol)를 함유하는 DCE (1000 mL), 및 AcOH (118 mL) 중 메틸 5-아미노-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (98 g, 0.57 mol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 RT에서 30분 동안 교반하고, 아세트알데히드 (63.7 mL, 1.15 mol)를 첨가하고, 45분 더 교반하고, 물에 이어 포화 수성 NaHCO3 용액 (pH ~9-10)을 첨가하였다. 수성 혼합물을 EtOAc (2 x 3 L)로 추출하고, 합한 유기 추출물을 포화 수성 NaCl로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 5% EtOAc로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 제거 후에 시스-/트랜스-혼합물 337 g을 수득하였다. 다중의 순차적 키랄 SFC 작동 (키랄팩(CHIRALPAK)® AD, 5 μm, 5 x 25 cm; 용리액: CO2 중 5% MeOH의 등용매성 혼합물; 칼럼 온도: 50℃; 유속: 400 g/분)에 의해 시스- 및 트랜스- 이성질체를 분리하여, 용매 제거 후에 순수한 트랜스- 표제 화합물 (183 g, 76% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다. Rt = 3.54 min. ES/MS (m/z): 397 (M+H).
제조예 53
메틸 5-[(트랜스-4-아미노시클로헥실)(에틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00097
THF (200 mL) 중 메틸 5-[[4-(tert-부톡시카르보닐아미노)시클로헥실]-에틸-아미노]-4-메틸-티오펜-3-카르복실레이트 (40 g, 100.9 mmol)의 용액을 0℃로 냉각시켰다. 디옥산 중 4M HCl의 용액 (250 mL, 1000 mmol)을 적가하고, 생성된 혼합물을 RT에서 16시간 동안 교반하였다. 진공 하에 ~1/4 부피로 농축시키고, EtOAc (400 mL) 및 포화 수성 K2CO3 용액 (200 mL)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 RT에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 상들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (2 x 100 mL)로 세척하고, 유기 층들을 합하고, 물 (100 mL) 및 포화 수성 NaCl (100 mL)로 순차적으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 용매 증발 후에 표제 화합물 (31.7 g, 정량적 수율)을 암갈색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 297 (M+H).
제조예 54
2-메톡시프로판-1,3-디올
Figure pct00098
-15℃에서 THF (300 mL) 중 디메틸 2-메톡시프로판디오에이트 (25 g, 154.19 mmol)의 저온 용액에 -15℃에서 2-메틸테트라히드로푸란 중 2.3M LAH의 용액 (170 mL, 150 g, 385.47 mmol)을 적가하고, 0℃에서 2시간 동안, 이어서 RT에서 1시간 동안 교반하였다. -15℃로 재냉각시키고, 물 (15 mL), 2N KOH (15 mL) 및 물 (30 mL)로 천천히 켄칭시키고, 생성된 혼합물을 RT에서 30분 동안 교반하였다. 생성된 백색 고체를 여과하고, 고체를 EtOAc (250 mL)에 이어 40% (v/v) MeOH/EtOAc (500 mL)로 세척하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 EtOAc 중 0-20% MeOH의 구배로 용리시키는 실리카 겔 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (6.66 g, 40% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400.1 MHz, CDCl3) δ 2.50 (bs, 2H), 3.47 (s, 3H), 3.36 (quintet, J= 4.5 Hz, 1H), 3.69 (dd, J= 4.6, 11.7 Hz, 2H), 3.79 (dd, J= 4.2, 11.7 Hz, 2H).
제조예 55
메틸 5-{에틸[트랜스-4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]아미노}-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00099
트리플루오로메탄술폰산 무수물 (36.47 mL, 61.16 g, 214.6 mmol)을 ACN (500 mL) 중 2-메톡시프로판-1,3-디올 (14.81 g, 139.6 mmol)의 용액에 -20℃에서 45분에 걸쳐 적가하였다. 이어서, DIPEA (44.4 mL, 32.9 g, 255 mmol)를 35분에 걸쳐 적가하고, 생성된 혼합물을 -15℃에서 45분 동안 교반하였다. 혼합물을 -25 ℃로 냉각시키고, DIPEA (44.4 mL, 32.9 g, 255 mmol)를 20분에 걸쳐 적가하였다. ACN (300 mL) 중 메틸 5-[(트랜스-4-아미노시클로헥실)(에틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (31.72 g, 107.0 mmol)의 용액을 30분에 걸쳐 적가하였다. 반응을 RT로 가온시킨 다음, 70℃에서 추가 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 RT로 냉각시키고, EtOAc (500 mL) 및 물 (500 mL)로 희석하고, 상들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (2 x 250 mL)로 추출하였다. 4M 수성 K2CO3의 용액 (250 mL)을 합한 유기 추출물에 첨가하고, RT에서 2시간 동안 교반하였다. 상들을 분리하고, 유기 층을 포화 수성 NaCl (250 mL)로 세척하고, 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 EtOAc 중 0-10% MeOH의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (29.2 g, 74% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 367 (M+H).
제조예 56
메틸 2-브로모-5-{에틸[트랜스-4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]아미노}-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00100
DMF (400 mL) 중에서 메틸 5-{에틸[트랜스-4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]아미노}-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (29.17 g, 79.59 mmol) 및 NBS (17.00 g, 95.51 mmol)를 혼합하고, 생성된 혼합물을 RT에서 2시간 동안 교반하였다. EtOAc (400 mL) 및 물 (250 mL)로 희석하고, 상들을 분리하고, 유기 층을 4M 수성 K2CO3 용액 (2 x 200 mL), 물 (200 mL), 및 포화 수성 NaCl (200 mL)로 순차적으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (32.4 g, 89% 수율)을 추가의 정제없이 다음 단계에 사용하기에 적합한 갈색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z) (79Br/81Br): 445, 447 (M+H).
제조예 57
메틸 2-(2-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}에틸)-5-{에틸[트랜스-4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]아미노}-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00101
물 (123 mL, 6828 mmol) 중 K2CO3 (657.8 g, 414.3 mmol)의 용액에 칼륨 벤질 N-[2-(트리플루오로보라누이딜)에틸]카르바메이트 (23.62 g, 82.85 mmol)를 적가한 다음, 톨루엔 (450 mL) 중 메틸 2-브로모-5-{에틸[트랜스-4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]아미노}-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (32.37 g, 69.04 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 30분에 걸쳐 90℃로 가온시키면서 N2로 약하게 퍼징한 다음, 2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-비페닐 (2.46 g, 5.18 mmol) 및 클로로(2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-비페닐)[2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐 (II) (4.02 g, 5.18 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 105℃에서 4시간 동안 교반하고, RT로 냉각시키고, EtOAc (300 mL) 및 물 (100 mL)로 희석하고, 상들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 4M 수성 K2CO3 (2 x 100 mL), 물 (150 mL) 및 포화 수성 NaCl (150 mL)로 순차적으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여액을 진공 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 EtOAc 중 0-5% MeOH의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (23.1 g, 51% 수율)을 갈색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 544 (M+H).
제조예 58
메틸 5-{에틸[트랜스-4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]아미노}-2-(2-{[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]아미노}에틸)-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00102
탄소 상 Pd(OH)2 (20% 건조 기준, 습윤 상태, 5.75 g)를 EtOH (280 mL) 중 메틸 2-(2-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}에틸)-5-{에틸[트랜스-4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]아미노}-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (23.00 g, 35.11 mmol) 및 2-메톡시-4,6-디메틸-피리딘-3-카르브알데히드 (7.03 g, 42.13 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 50℃에서 H2 (70 psi)하에 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, EtOH로 세정하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 0-25% MeOH의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (18.4 g, 89% 수율)을 갈색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 559 (M+H).
제조예 59
2-{에틸[트랜스-4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]아미노}-5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00103
톨루엔 (175 mL) 중 메틸 5-{에틸[트랜스-4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]아미노}-2-(2-{[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]아미노}에틸)-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (18.35 g, 30.21 mmol) 및 AcOH (9.07 g, 151.1 mmol)의 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각시키고, EtOAc (250 mL) 및 물 (150 mL)로 희석하고, 상들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하고, 합한 유기 추출물을 4M 수성 K2CO3 용액 (2 x 100 mL), 물 (150 mL) 및 포화 수성 NaCl (150 mL)로 순차적으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (16.42 g, 95% 수율)을 추가의 정제없이 사용하기에 적합한 갈색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 527 (M+H).
제조예 60
메틸 5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(에틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00104
DCE (430 mL) 중 메틸 5-아미노-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (43 g, 251 mmol), 1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-온 (39.23 g, 251 mmol) 및 AcOH (47 mL)의 용액에 25℃ 미만에서 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드 (159.6 g, 754 mmol)를 천천히 첨가하였다. 혼합물을 RT에서 30분 동안 교반한 다음, 아세트알데히드 (28 mL, 503 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 RT에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물의 내용물을 빙수에 붓고, pH 7.0-7.5가 될 때까지 포화 수성 NaHCO3 용액을 첨가하여 염기성화시켰다. 생성된 혼합물을 EtOAc (2 x 3 L)로 추출하고, 포화 수성 NaCl로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 5% EtOAc로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (55 g, 67% 수율)을 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 340 (M+H).
제조예 61
메틸 2-브로모-5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(에틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00105
첨가 깔때기를 구비한 3목 둥근 바닥 플라스크에 DCM (1.2 L) 중 메틸 5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(에틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (91 g, 268.1 mmol)의 용액에 첨가하였다. 플라스크를 0℃로 냉각시킨 다음, NBS (58.4 g, 322 mmol)를 1시간에 걸쳐 일부씩 나누어 첨가하였다. 빙조를 제거하고, 반응 혼합물을 RT에서 2시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 유기 층들을 분리하고, 유기 상을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 4개의 배치에서 각각 헥산 중 10-50% EtOAc로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하였다. 처음 2개의 배치로부터의 합한 분획을 농축시켜, 오일을 수득하였다. 물질을 밤새 진공 하에 건조시켜, 백색 고체 (40.9 g)를 수득하였다. 세번째 및 네번째 배치로부터의 분획을 농축시켜, 갈색 오일을 수득하였다. 고체가 나타날 때까지 생성된 물질을 소량의 헥산으로 처리하고, 여과하고, 진공 하에 밤새 건조시켜, 밝은 갈색 고체 (37.9 g)를 수득하였다. 2개의 생성된 수집 배치를 합하여, 표제 화합물 (78.8 g, 70% 수율)을 갈색 오일성 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): (79Br/81Br) 418/420 (M+H).
제조예 62
메틸 2-브로모-5-[에틸(4-옥소시클로헥실)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00106
THF (140 mL) 중 메틸 2-브로모-5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(에틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (7.81 g, 18.7 mmol)에 1M 수성 HCl (100 mL)을 첨가하였다. 반응을 RT에서 약 25시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (200 mL)로 희석하고, 층들을 분리하였다. 유기 층을 포화 수성 NaHCO3 (2 x 25 mL)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 조 표제 화합물 (6.71 g, 96% 수율)을 추가의 정제없이 다음 단계에 사용하기에 충분한 붉은 빛의 갈색 진한 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): (79Br/81Br) 374/376 (M+H).
제조예 63
메틸 2-(2-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}에틸)-5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(에틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00107
2개의 별도의 배치에서, 톨루엔 (428 mL) 및 물 (100 mL)을 메틸 2-브로모-5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(에틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (20 g, 48 mmol), 칼륨 벤질 N-[2-(트리플루오로보라누이딜)에틸]카르바메이트 (17.5 g, 58.9 mmol), (2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-비페닐)[2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II) 메탄술포네이트 (4.1 g, 4.8 mmol) 및 Cs2CO3 (47 g, 144 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2로 플러싱한 다음, 80℃에서 4시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 빙냉수에 붓고, EtOAc를 첨가하고, 층들을 분리하고, 유기 상을 규조토 상에서 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 5-40% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하였다. 생성된 원하는 분획을 농축시키고, 진공 하에 72시간 동안 건조시켜, 표제 화합물 (41.9 g 합한 질량, 85% 2회 작동으로부터 합한 수율)을 갈색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 517 (M+H).
제조예 64
2-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(에틸)아미노]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00108
파르 플라스크를 N2로 퍼징하고, 탄소 상 20% Pd(OH)2 (40 g, 284.9 mmol)를 첨가하고, 플라스크를 N2로 다시 퍼징하고, TEA (150 mL, 1080 mmol), MeOH (500 mL), 및 MeOH (500 mL) 중 메틸 2-(2-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}에틸)-5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(에틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (39.5 g, 76.5 mmol)의 용액을 첨가하였다. 플라스크를 밀봉하고, N2로 퍼징하고, H2 기체로 퍼징하고, 시스템을 H2 (414 kPa)로 채웠다. RT에서 약 4시간 동안 교반하고, 반응 혼합물을 72시간 동안 정치하였다. 생성된 현탁액을 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 EtOAc에 용해시키고, 고체가 형성될 때가지 소량의 Et2O를 첨가하였다. 여과하고, 생성된 고체를 수집하여, 표제 화합물 (15.3 g)을 백색 고체로서 수득하였다. 황색 여액을 농축시키고, 생성된 잔류물을 헥산 중 10-60% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 추가의 표제 화합물 (8 g)을 수득하였다. 추가의 사용을 위해 여과 및 크로마토그래피한 물질을 합하였다 (23.3 g, 86% 수율). ES/MS (m/z): 351 (M+H).
제조예 65
tert-부틸 4-{에틸[4-(메톡시카르보닐)-3-메틸티오펜-2-일]아미노}피페리딘-1-카르복실레이트
Figure pct00109
둥근 바닥 플라스크에 메틸 5-아미노-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (~50% 순도, 34 g, 99 mmol), DCE (408 mL) 중 tert-부틸-4-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (25.7 g, 129 mmol) 및 AcOH (17 mL, 297 mmol)를 첨가하고, RT에서 10분 동안 교반한 다음, 0℃로 냉각시키고, 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드 (54.2 g, 248 mmol)를 일부씩 나누어 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 RT로 서서히 가온시키고, 2시간 동안 교반하였다. 아세트알데히드 (11.1 mL, 199 mmol)를 적가한 다음, 72시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 켄칭시키고, DCM으로 희석하였다. 층들을 분리하고, 수성 층을 DCM으로 추출하고, 유기 상들을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0-10% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (6.4 g, 17% 수율)을 오렌지색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 383 (M+H).
제조예 66
tert-부틸 4-{[5-브로모-4-(메톡시카르보닐)-3-메틸티오펜-2-일](에틸)아미노}피페리딘-1-카르복실레이트
Figure pct00110
둥근 바닥 플라스크에 DCM (84 mL) 중 tert-부틸 4-{에틸[4-(메톡시카르보닐)-3-메틸티오펜-2-일]아미노}피페리딘-1-카르복실레이트 (6.4 g, 17 mmol)를 첨가하고, 0℃로 냉각시키고, NBS (3.3 g, 18 mmol)를 일부씩 나누어 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, 층들을 분리하고, 수성 층을 추가의 DCM으로 추출하고, 유기 상들을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0-20% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 제거 후에 표제 화합물 (6.7 g, 87% 수율)을 오렌지색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): (79Br/81Br) 405/407 (M+H - t-부틸).
제조예 67
tert-부틸 4-{[5-(2-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}에틸)-4-(메톡시카르보닐)-3-메틸티오펜-2-일](에틸)아미노}피페리딘-1-카르복실레이트
Figure pct00111
2개의 별도의 배치에서 둥근 바닥 플라스크에 tert-부틸 4-{[5-브로모-4-(메톡시카르보닐)-3-메틸티오펜-2-일](에틸)아미노}피페리딘-1-카르복실레이트 (0.900 g, 1.95 mmol), 칼륨 벤질 N-[2-(트리플루오로보라누이딜)에틸]카르바메이트 (0.695 g, 2.34 mmol), (2-디시클로헥실-포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-비페닐)[2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II) 메탄술포네이트 (0.167 g, 0.195 mmol), Cs2CO3 (1.91 g, 5.85 mmol), 톨루엔 (9.75 mL) 및 물 (3.55 mL)을 첨가하였다. 각각의 혼합물을 N2로 15분 동안 탈기시킨 다음, 90℃에서 밤새 가열하였다. 각각의 반응 혼합물을 RT로 냉각시키고, 합하였다. 빙수로 켄칭시키고, EtOAc로 희석하고, 층들을 분리하고, 수성 층을 추가의 EtOAc로 추출하고, 유기 상들을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0-30% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (1.29 g, 59% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 460 (M+H- BOC).
제조예 68
tert-부틸 4-[에틸(3-메틸-4-옥소-4,5,6,7-테트라히드로티에노[3,2-c]피리딘-2-일)아미노]피페리딘-1-카르복실레이트
Figure pct00112
둥근 바닥 플라스크에 MeOH (23 mL) 및 THF (15 mL) 중 tert-부틸 4-{[5-(2-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}에틸)-4-(메톡시카르보닐)-3-메틸티오펜-2-일](에틸)아미노}피페리딘-1-카르복실레이트 (1.29 g, 2.30 mmol)를 첨가하고, N2로 ~10분 동안 탈기시키고, 탄소 상 10% Pd (1.29 g) 및 TEA (0.400 mL, 2.84 mmol)를 첨가한 다음, H2 분위기 하에 두고, RT에서 약 72시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, MeOH로 세척하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 마이크로웨이브 바이알에 옮기고, TEA (0.300 mL)를 첨가하고, 90℃에서 2시간 동안 가열하였다. 밤새 교반하면서 RT로 냉각시킨 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 0-30% ACN의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (0.466 g, 51% 수율)을 황색 발포체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 394 (M+H).
제조예 69
메틸 2-(3-{[(벤질옥시)카르보닐]-아미노}프로프-1-인-1-일)-5-[(1R)-1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에틸]-4-메틸-티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00113
1,4-디옥산 (130 mL) 중 조 메틸 2-브로모-5-[(1R)-1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)에틸]-4-메틸-티오펜-3-카르복실레이트 (10.1 g, 25.0 mmol), CuI (1.91 g, 10.0 mmol), 및 벤질 프로프-2-인-1-일카르바메이트 (11.4 g, 60.3 mmol)의 혼합물에 TEA (52 mL, 369 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2로 탈기시키고 퍼징한 다음, 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 디클로라이드 (3.6 g, 5.1 mmol)를 첨가하였다. 40℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 규조토 상에서 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0-20% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (10.8 g, 80% 수율)을 밝은 갈색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 512 (M+H).
제조예 70
메틸 2-(3-아미노프로필)-5-[(1R)-1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에틸]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00114
TEA (0.500 mL, 3.55 mmol)를 MeOH (150 mL) 중 메틸 2-(3-{[(벤질옥시)카르보닐]-아미노}프로프-1-인-1-일)-5-[(1R)-1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에틸]-4-메틸-티오펜-3-카르복실레이트 (10 g, 19.55 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 N2로 탈기시키고 퍼징하고, 탄소 상 20% Pd(OH)2 (4.10 g, 5.84 mmol)를 첨가하고, 반응 용기를 H2 (414 kPa)로 충전하고, 밤새 교반하였다. 추가 분량의 탄소 상 20% Pd(OH)2 (500 mg, 0.712 mmol) 및 TEA (0.500 mL, 3.55 mmol)를 첨가하고, N2로 다시 탈기시키고, 반응 용기를 H2 (414 kPa)로 충전하였다. 추가 6시간 동안 교반하고, 반응을 규조토 상에서 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 황색 오일을 수득하였다. 생성된 오일을 DCM 중 0-30% MeOH의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (6.6 g, 89% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 382 (M+H).
제조예 71
2-[(1R)-1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에틸]-3-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온
Figure pct00115
마이크로웨이브 바이알에 톨루엔 (8 mL) 중 메틸 2-(3-아미노프로필)-5-[(1R)-1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에틸]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (1.5 g, 3.9 mmol)의 용액을 첨가한 다음, KOtBu (940 mg, 7.87 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 90℃에서 밤새 교반하였다. 반응을 빙냉 포화 수성 NaHCO3 용액에 붓고, DCM으로 추출하고, 층들을 분리하고, 유기 층을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 0-5% MeOH의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (1.3 g, 85% 수율)을 밝은 갈색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 350 (M+H).
제조예 72
2-[(1R)-1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에틸]-5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온
Figure pct00116
THF (10 mL) 중 2-[(1R)-1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에틸]-3-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온 (1.1 g, 3.1 mmol)의 용액에 분쇄된 KOH (700 mg, 12.4 mmol)를 첨가하였다. 30분 동안 교반한 다음, THF (1 mL)에 용해된 3-(클로로메틸)-2-메톡시-4,6-디메틸-피리딘 (700 mg, 3.77 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙냉 포화 수성 NaHCO3 용액에 붓고, DCM으로 추출하고, 층들을 분리하고, 유기 층을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 진공 하에 건조시켜, 조 표제 화합물 (2.2 g, 87% 수율)을 추가의 정제없이 추가의 사용에 적합한 갈색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 499 (M+H).
제조예 73
5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-(4-옥소시클로헥실)에틸]-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온
Figure pct00117
PTSA (1.3 g, 7.2 mmol)를 DMF (10 mL) 중 조 2-[(1R)-1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에틸]-5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온 (1.0 g, 1.2 mmol)에 첨가하고, 생성된 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 빙냉 포화 수성 NaHCO3 용액에 붓고, DCM으로 추출하고, 층들을 분리하고, 유기 층을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 0-5% MeOH의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (680 mg, 정량적 수율)을 밝은 갈색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 441 (M+H).
제조예 74
2-[(1R)-1-{트랜스-4-[3-(시클로프로폭시)아제티딘-1-일]시클로헥실}에틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00118
티타늄(IV) 이소프로폭시드 (1.40 g, 4.9 mmol) 및 3-(시클로프로필옥시)아제티딘 히드로클로라이드 (0.74 g, 4.9 mmol)를 DIPEA (0.87 mL, 4.9 mmol)를 함유하는 DCM (10 mL) 중 3-메틸-2-[(1R)-1-(4-옥소시클로헥실)에틸]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (0.72 g, 2.5 mmol)의 용액에 첨가하고, 생성된 반응 혼합물 RT에서 18시간 동안 교반하고, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. THF (4 mL) 및 MeOH (6 mL)를 나머지 잔류물에 첨가하고, 생성된 용액을 -78℃로 냉각시켰다. THF 중 2M LiBH4 (1.9 mL, 3.8 mmol)를 적가하고, 3시간에 걸쳐 RT로 서서히 가온시켰다. 반응 혼합물을 DCM/CHCl3 (100 mL) 및 50% 포화 NaHCO3 용액 (50 mL)의 1:1 혼합물로 희석하고, 생성된 층들을 분리하고, 합한 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 10% MeOH 및 DCM의 혼합물 10-50%의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (0.40 g, 42% 수율)을 수득하였다. ES/MS (m/z): 389 (M+H).
상응하는 치환된 아제티딘을 사용하여 본질적으로 제조예 74의 방법에 의해 하기 화합물을 제조하였다.
Figure pct00119
제조예 81
2-[(1R)-1-{트랜스-4-[3-(메톡시메틸)아제티딘-1-일]시클로헥실}에틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00120
MeOH (5 mL) 중 3-(메톡시메틸)아제티딘 히드로클로라이드 (368 mg, 2.67 mmol) 및 DIPEA (400 mg, 3.06 mmol)의 혼합물을 N2 하에 RT에서 10분 동안 교반하고, 3-메틸-2-[(1R)-1-(4-옥소시클로헥실)에틸]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (400 mg, 1.37 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. -78℃로 냉각시키고, THF 중 2M LiBH4 (0.90 mL, 1.8 mmol)를 천천히 첨가하고, 밤새 RT로 서서히 가온시켰다. 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 희석하고, DCM으로 추출하고, 생성된 층들을 분리하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 (10% 2N NH3 MeOH 용액) 및 DCM의 혼합물 0-80%의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하였다. 목적하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 5분 동안 5% MeOH/물 중 100% 10 mM NH4HCO3에 이어, 5분 동안 25% ACN/5% MeOH/물 중 10 mM NH4HCO3의 단계 구배, 이어서 25%-90% ACN/5% MeOH/물 중 10 mM NH4HCO3의 선형 구배를 이용하여 5% MeOH/물 중 10 mM NH4HCO3, pH 10 및 ACN으로 용리시키는 C-18-실리카 (40 g) 상에서의 역상 크로마토그래피에 적용하였다. 순수한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (114 mg, 22% 수율)을 수득하였다. ES/MS (m/z): 377 (M+H).
제조예 82
5-{[2-(벤질옥시)-4,6-디메틸피리딘-3-일]메틸}-2-[(1R)-1-{트랜스-4-[3-(시클로프로필옥시)아제티딘-1-일]시클로헥실}에틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00121
톨루엔 중 0.7M KHMDS (1.2 mL, 0.84 mmol)를 THF (10 mL) 중 2-[(1R)-1-{트랜스-4-[3-(시클로프로폭시)아제티딘-1-일]시클로헥실}에틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (230 mg, 0.59 mmol)의 용액에 RT에서 30분에 걸쳐 천천히 첨가하고, 추가 30분 동안 교반하였다. THF (5 mL) 중 2-벤질옥시-3-(클로로메틸)-4,6-디메틸-피리딘 (200 mg, 0.76 mmol)의 용액을 적가하고, RT에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 55℃로 가열하고, 1시간 동안 교반하고, RT로 냉각시키고, 빙냉 수성 NaHCO3 용액에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 층들을 분리하고, 유기 추출물을 포화 수성 NaCl로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 10-50% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (210 mg, 57% 수율)을 수득하였다. ES/MS (m/z): 614 (M+H).
본질적으로 제조예 82의 방법 및 적절히 치환된 6,7-디히드로-5H-티에노[3,2-c]피리딘-4-온에 의해 하기 화합물을 제조하였다.
Figure pct00122
Figure pct00123
제조예 90
메틸 5-[(1R)-1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에틸]-2-(2-{[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]아미노}에틸)-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00124
파르 반응기에서 메틸 2-(2-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}에틸)-5-[(1R)-1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에틸]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (77 g, 153.5 mmol) 및 2-메톡시-4,6-디메틸-피리딘-3-카르브알데히드 (23.3 g, 140 mmol)를 EtOH (500 mL)에 용해시키고, 탄소 상 Pd(OH)2 (20% 건조 기준, 습윤 상태, 11.5 g)를 첨가하였다. 용기를 H2 (100 psi)로 채우고, 50℃에서 3.5시간 동안 교반하였다. RT로 냉각시킨 후, 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, EtOH로 세척하였다. 여액을 진공 하에 농축시키고, 톨루엔 (800 mL)을 잔류물에 첨가하고, 대략 400 g의 최종 중량까지 휘발성 물질을 계속 부분 증류하여, 표제 화합물을 추가의 정제없이 다음 단계에 사용하기에 적합한 톨루엔 중 용액으로서 수득하였다. 증발된 샘플의 ES/MS (m/z): 517 (M+H).
제조예 91
메틸 2-(2-{[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]아미노}에틸)-4-메틸-5-[(1R)-1-(4-옥소시클로헥실)에틸]티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00125
제조예 90으로부터의 메틸 5-[(1R)-1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일)에틸]-2-(2-{[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]아미노}에틸)-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트의 조 톨루엔 용액 (대략 76 g)에 1M 수성 HCl (800 mL)을 첨가하고, RT에서 1시간 동안 교반하였다. 층들을 분리하고, 유기 층을 2M 수성 HCl (2 x 50 mL)로 순차적으로 세척하고, 합한 산성 수성 층들을 톨루엔 (100 mL)으로 세척하였다. 톨루엔 (0.4 L)을 수성 층에 첨가하고, 6M 수성 K2CO3를 첨가하여 pH 9로 만들고, 5분 동안 교반하고, 상들을 분리하고, 유기 층을 수성 포화 NaCl로 세척한 다음, Na2SO4의 짧은 패드에 통과시켰다. 추가로 Na2SO4 패드를 톨루엔으로 세정하여, 추가의 정제없이 다음 단계에 사용하기에 적합한 표제 화합물의 조 톨루엔 용액 (대략 부피 1 L)을 수득하였다. 증발된 샘플의 ES/MS (m/z): 473 (M+H).
제조예 92
5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-(4-옥소시클로헥실)에틸]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00126
AcOH (9 mL, 157.1 mmol)를 메틸 2-(2-{[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]아미노}에틸)-4-메틸-5-[(1R)-1-(4-옥소시클로헥실)에틸]티오펜-3-카르복실레이트의 조 용액 (1 L, 대략 79 g, 제조예 91로부터)에 첨가하고, 90℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 2M 수성 HCl (총 0.15 L)로 2회 세척하고, 순차적으로 물, 1M 수성 K3PO4 및 포화 수성 NaCl (각각 0.1 L)로 각각 1회 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 증발시켜, 표제 화합물 (40.98 g, 48.5% 수율)을 오렌지색 점성 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 441 (M+H).
제조예 93
5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-2-{(1R)-1-[트랜스-4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]에틸}-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00127
DIPEA (29 mL, 21.5 g, 166 mmol)를 MeOH (280 mL) 중 3-메톡시아제티딘 히드로클로라이드 (18.7 g, 151 mmol)의 용액에 첨가하고, RT에서 30분 동안 교반하였다. 이 혼합물을 5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-(4-옥소시클로헥실)에틸]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (27.55 g, 56.28 mmol)에 첨가하고, RT에서 N2 하에 1.5시간 동안 교반한 다음, THF (50 mL)를 첨가하였다. 반응을 -70℃로 냉각시키고, THF 중 2M LiBH4 (40 mL, 80 mmol)를 30분에 걸쳐 첨가하였다. 반응을 동일한 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 반응을 1M 수성 HCl 용액 (약 1 L)에 10분에 걸쳐 천천히 부어서 반응을 켄칭시켰다. MTBE (2 x 0.25 L)로 세척한 다음, 수성 상을 2M 수성 K3PO4로 처리하여 pH 9로 만들고, EtOAc (약 0.5 L)로 추출하였다. 유기 상을 순차적으로 3M 수성 K2CO3 및 포화 수성 NaCl (각각 약 100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 EtOAc 중 7N NH3/MeOH의 20% 용액 10-25%의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 표제 화합물 (19.5 g, 68% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 512 (M+H).
제조예 94
5-[2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-{트랜스-4-[3-(3-메틸-1H-피라졸-1-일)아제티딘-1-일]시클로헥실}에틸]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
및
5-[(2-메톡시-4,6-디메틸-3-피리딜)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-[트랜스-4-[3-(5-메틸피라졸-1-일)아제티딘-1-일]시클로헥실]에틸]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4-온 (위치 이성질체의 혼합물)
Figure pct00128
MeOH (5 mL) 중 1-(아제티딘-3-일)-3-메틸-1H-피라졸 및 1-(아제티딘-3-일)-5-메틸-피라졸 (0.53 g, 3.59 mmol, 위치 이성질체의 혼합물), DIPEA (1.37 mL, 7.79 mmol) 및 디옥산 중 4N HCl (1.8 mL, 7.190 mmol)의 혼합물의 용액을 30분 동안 RT에서 교반하였다. 이를 MeOH (19 mL) 중 5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-(4-옥소시클로헥실)에틸]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (600 mg, 1.2 mmol)의 용액에 첨가하고, RT에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 -78℃로 냉각시키고, THF 중 2M LiBH4의 용액 (0.78 mL, 1.56 mmol)을 첨가하고, RT로 서서히 가온시키고, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 MeOH (2 x 100 mL)에 이어 MeOH 중 2N NH3의 용액으로 용리시키는 SCX (25 g 카트리지) 상에서의 크로마토그래피에 적용하였다. NH3 중 MeOH 분획을 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (0.51 g, 65% 수율)을 위치 이성질체의 혼합물로서 옅은 황색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 562 (M+H).
5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-(4-옥소시클로헥실)에틸]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 및 적절히 치환된 아제티딘을 사용하여 본질적으로 제조예 94의 방법에 의해 하기 화합물을 제조하였다.
Figure pct00129
제조예 99
5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-2-[(1R)-1-{4-[3-(2-메톡시에톡시)아제티딘-1-일]시클로헥실}에틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (디아스테레오머의 혼합물)
Figure pct00130
DIPEA (0.45 mL, 2.49 mmol)를 MeOH (5.6 mL) 중 3-(2-메톡시에톡시)아제티딘 히드로클로라이드 (0.42 g, 2.38 mmol)의 용액에 첨가하고, RT에서 30분 동안 교반하였다. 5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-(4-옥소시클로헥실)에틸]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (0.62 g, 1.12 mmol)을 첨가하고, RT에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 -78℃로 냉각시키고, THF 중 LiBH4의 2M 용액 (0.74 mL, 1.47 mmol)을 첨가하고, RT로 가온시키고, 밤새 교반하였다. 포화 수성 NaHCO3 용액을 첨가하고, EtOAc로 추출하고, 층들을 분리하였다. 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (0.5 g, 98% 수율)을 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 556 (M+H).
제조예 100
2-{(1R)-1-[트랜스-4-(벤질아미노)시클로헥실]에틸}-5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00131
MeOH (5 mL) 중 벤질 아민 (0.257 g, 2.397 mmol), DIPEA (0.95 mL, 5.39 mmol) 및 디옥산 중 4N HCl (600 μL, 2.397 mmol)의 용액을 30분 동안 RT에서 교반하였다. 이 혼합물을 MeOH (19 mL) 중 5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-(4-옥소시클로헥실)에틸]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (0.6 g, 1.2 mmol)의 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 18시간 동안 RT에서 교반하였다. 혼합물을 -70℃로 냉각시키고, THF 중 2M LiBH4의 용액 (0.78 mL, 1.558 mmol)을 첨가하였다. 실온으로 서서히 가온시켰다. 빙냉 포화 NaHCO3 용액을 첨가하고, EtOAc (100 mL)로 추출하고, 층들을 분리하고, 유기 추출물을 포화 수성 NaCl로 세척하고, 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (0.75 g, 99% 수율)을 추가의 정제없이 사용하기에 적합한 황색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 532 (M+H).
제조예 101
2-[(1R)-1-(트랜스-4-아미노시클로헥실)에틸]-5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00132
MeOH (20 mL) 중 2-{(1R)-1-[트랜스-4-(벤질아미노)시클로헥실]에틸}-5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (750 mg, 1.19 mmol)의 용액을 교반하였다. 10% Pd-C (500 mg, 0.474 mmol)를 첨가하고, H2 하에 30 psi에서 RT에서 밤새 교반하였다. 규조토를 통해 여과하고, MeOH로 세척하였다. 여액을 증발시켜, 표제 화합물 (0.5 g, 80% 수율)을 추가의 정제없이 사용하기에 적합한 황색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 442 (M+H).
제조예 102
2-{(1R)-1-[트랜스-4-(디메틸아미노)시클로헥실]에틸}-5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00133
MeOH (10 mL) 중 2-[(1R)-1-(트랜스-4-아미노시클로헥실)에틸]-5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (0.5 g, 0.95 mmol)의 용액을 교반하였다. AcOH (172 mg, 2.85 mmol), 37% 수성 포름알데히드 (232 mg, 2.853 mmol)를 첨가하였다. 빙조에 의해 용액을 냉각시키고, 트리아세톡시보로히드라이드 (605 mg, 2.853 mmol)를 첨가하였다. RT로 서서히 가온시키고, 밤새 교반하였다. 빙냉 포화 NaHCO3 용액을 첨가하고, DCM (2 x 100 mL)으로 추출하였다. 층들을 분리하고, 유기 상들을 합하고, 합한 유기 추출물을 포화 수성 NaCl로 세척하였다. Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (390 mg, 70% 수율)을 추가의 정제없이 사용하기에 적합한 황색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 470 (M+H).
제조예 103
5-{[2-(벤질옥시)-4,6-디메틸피리딘-3-일]메틸}-2-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(메틸)아미노]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00134
0℃에서 THF (5 mL) 중 2-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(메틸)아미노]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (0.51 g, 1.53 mmol)에 THF 중 1M KHMDS의 용액 (2.14 mL, 2.14 mmol)을 첨가하였다. RT로 가온시키고, 15분 후에 2-벤질옥시-3-(클로로메틸)-4,6-디메틸-피리딘 (0.60 g, 2.29 mmol)을 첨가하였다. RT에서 약 17시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 NH4Cl 용액 (1 mL)으로 켄칭시켰다. 혼합물을 EtOAc (40 mL) 및 물 (5 mL)로 희석하고, 유기 층들을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (0.94 g, 92% 수율)을 추가의 정제없이 사용하기에 적합한 황색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 562 (M+H).
제조예 104
5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[메틸(4-옥소시클로헥실)아미노]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00135
THF (14 mL) 중 조 5-{[2-(벤질옥시)-4,6-디메틸피리딘-3-일]메틸}-2-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(메틸)아미노]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (0.94 g, 1.4 mmol)에 1M 수성 HCl (14 mL, 14 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 8시간 동안 50℃로 가열하고, RT에서 2일 동안 교반하였다. 고체 NaHCO3 (1.8 g, 21 mmol) 및 EtOAc (125 mL)를 첨가하고, 유기 층들을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 0-10% 7N 메탄올성 NH3의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (0.408 g, 62% 수율)을 황색 발포체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 428 (M+H).
제조예 105
2-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(에틸)아미노]-5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00136
2개의 별도의 배치에서, THF 중 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드의 0.91M 용액 (22 mL, 20 mmol)을 THF (70 mL) 중 2-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(에틸)아미노]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (6 g, 17.12 mmol)의 용액에 RT에서 30분에 걸쳐 천천히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 추가 30분 동안 RT에서 교반한 다음, THF (10 mL) 중 3-(클로로메틸)-2-메톡시-4,6-디메틸-피리딘 (3.4 g, 18 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 RT에서 밤새 교반하였다. 양쪽 혼합물을 합하고, 빙냉 포화 수성 NaHCO3 용액에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 상들을 분리하고, 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (총 18.55 g, 정량적 수율)을 추가의 정제없이 사용하기에 적합한 황색 검으로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 500 (M+H).
제조예 106
2-[에틸(4-옥소시클로헥실)아미노]-5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00137
6M 수성 HCl (20 mL, 120 mmol)을 THF (20 mL) 중 조 2-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(에틸)아미노]-5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (18.05 g, 36.12 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 가열하고, RT에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 빙냉 포화 수성 NaHCO3에 붓고, DCM으로 추출하고, 층들을 분리하고, 유기 층을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 10-50% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (4.01 g, 24% 수율)을 밝은 황색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 456 (M+H).
제조예 107
5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-[에틸(4-옥소시클로헥실)아미노]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00138
밀봉된 튜브에서, DMF (50 mL) 중 2-[에틸(4-옥소시클로헥실)아미노]-5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (6.3 g, 14 mmol)의 용액을 첨가하고, 튜브를 0℃로 냉각시키고, LiCl (3 g, 70 mmol)에 이어 PTSA (13 g, 72 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 가열하였다. RT로 냉각시키고, 빙냉 포화 수성 NaHCO3 (400 mL)에 천천히 부었다. 침전된 고체를 여과하고, 물로 세척하였다. 고체를 둥근 바닥 플라스크에 넣고, MeOH로 희석하고, 진공 하에 농축시켰다. 고체를 MeOH 및 THF와 함께 진공 하에 다시 공비 혼합한 다음, 잔류물을 진공 오븐에서 밤새 건조시켜, 표제 화합물 (6.1 g, 100% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 442 (M+H).
제조예 108
2-{[트랜스-4-(벤질아미노)시클로헥실](에틸)아미노}-5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00139
둥근 바닥 플라스크에서 페닐메탄아민 (0.445 mL, 4.076 mmol), 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-[에틸(4-옥소시클로헥실)아미노]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (0.600 g, 1.359 mmol)을 THF (25 mL) 및 MeOH (5 mL)에 첨가하고, RT에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 -78℃로 냉각시키고, THF 중 2M LiBH4 (1.698 mL, 3.397 mmol)를 적가하였다. 반응을 빙조에 두고, 3시간 동안 교반하면서 RT로 가온시켰다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 켄칭시키고, DCM으로 희석하였다. 유기 층들을 분리하고, 수성 층을 DCM으로 추가로 추출하였다. 유기 상들을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 0-10% MeOH의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하고, 생성된 트랜스- 및 시스- 이성질체의 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 혼합물을 10 mM 수성 NH4CO3/물 중 10-75% ACN의 구배로 용리시키는 역상 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (0.132 g, 18% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 533 (M+H).
제조예 109
2-[(트랜스-4-아미노시클로헥실)(에틸)아미노]-5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00140
둥근 바닥 플라스크에 습윤 90% EtOH (0.89 mL) 중 2-{[트랜스-4-(벤질아미노)시클로헥실](에틸)아미노}-5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (0.095 g, 0.178 mmol), 탄소 상 10% Pd (0.095 g) 및 NH4HCO2 (0.057 g, 0.892 mmol)를 첨가하였다. N2로 10분 동안 탈기시키고, 반응 용기를 밀봉하고, 90℃에서 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 RT로 냉각시키고, 규조토를 통해 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 7-100% DCM:MeOH:NH4OH의 87.5:11:1.5 용액/DCM의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (0.045 g, 57% 수율)을 백색 분말로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 443 (M+H).
제조예 110
tert-부틸 4-(에틸{5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-4-옥소-4,5,6,7-테트라히드로티에노[3,2-c]피리딘-2-일}아미노)피페리딘-1-카르복실레이트
Figure pct00141
둥근 바닥 플라스크에 THF 중 KHMDS의 용액 (0.91M, 2.6 mL, 2.348 mmol)을 함유하는 THF (20 mL) 중 tert-부틸 4-[에틸(3-메틸-4-옥소-4,5,6,7-테트라히드로티에노[3,2-c]피리딘-2-일)아미노]피페리딘-1-카르복실레이트 (0.770 g, 1.957 mmol) 및 3-(클로로메틸)-2-메톡시-4,6-디메틸-피리딘 (0.436 g, 2.348 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 RT에서 4시간 동안 교반하고, 빙냉 포화 수성 NaHCO3로 켄칭시키고, EtOAc로 희석하고, 층들을 분리하고, 수성 층을 추가의 EtOAc로 추출하였다. 유기 상들을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (1.17 g, 99% 수율)을 추가의 정제없이 사용하기에 충분한 황색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 543 (M+H).
제조예 111
2-(에틸{4-[(2-메톡시에틸)(메틸)아미노]시클로헥실}아미노)-5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (시스- 및 트랜스-디아스테레오머의 혼합물)
Figure pct00142
2-[에틸(4-옥소시클로헥실)아미노]-5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (0.57 g, 1.25 mmol)을 MeOH (10 mL) 중 2-메톡시에탄아민 (0.19 g, 2.64 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. -78℃로 냉각시키고, THF 중 LiBH4의 2M 용액 (0.82 mL, 1.63 mmol)을 첨가하였다. 온도를 RT로 천천히 증가시키고, 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 포화 수성 NaHCO3를 첨가하고, EtOAc로 추출하고, 생성된 층들을 분리하고, 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM (6.2 mL)에 용해시키고, H2O 중 37% 포름알데히드 (0.27 mL, 3.7 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 RT에서 15분 동안 교반한 다음, 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드 (1.06 g, 5.03 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 RT에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물의 내용물을 먼저 MeOH에 이어 MeOH 중 2M NH3로 용리시키는 SCX 카트리지에 로딩하고, 메탄올성 암모니아 분획을 진공 하에 농축시켜, 용매 증발 후에 표제 화합물 (0.57 g, 86% 수율)을 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 529 (M+H).
제조예 112
2-[{4-트랜스-[시클로프로필(메틸)아미노]시클로헥실}(에틸)아미노]-5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00143
2-[에틸(4-옥소시클로헥실)아미노]-5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (0.57 g, 1.26 mmol)을 MeOH (10 mL) 중 시클로프로판아민 (0.15 g, 2.641 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. -78℃로 냉각시키고, THF 중 LiBH4의 2M 용액 (0.82 mL, 1.64 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 RT로 천천히 가온시키고, 1시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 포화 수성 NaHCO3 용액을 첨가하고, EtOAc로 추출하고, 생성된 층들을 분리하고, 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM (6.2 mL)에 용해시키고, H2O 중 37% 포름알데히드 용액 (0.27 mL, 3.77 mmol)을 첨가하고, 15분 동안 교반하였다. 이어서, 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드 (0.8 g, 5.03 mmol)를 첨가하고, RT에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 먼저 MeOH에 이어 MeOH 중 2M NH3로 용리시키는 SCX 카트리지 상에 바로 로딩하였다. 메탄올성 암모니아 분획을 진공 하에 농축시켜, 용매 증발 후에 추가의 정제없이 사용하기에 적합한 오일 (0.56 g, 87% 수율)을 수득하였다. ES/MS (m/z): 511 (M+H).
제조예 113
메틸 2-브로모-5-{[트랜스-4-(3-에톡시아제티딘-1-일)시클로헥실](에틸)아미노}-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00144
DCM (20 mL) 중 메틸 2-브로모-5-[에틸(4-옥소시클로헥실)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (2.17 g, 5.80 mmol)의 조 샘플에 티타늄(IV) 이소프로폭시드 (6.79 g, 23.2 mmol) 및 3-에톡시아제티딘 히드로클로라이드 (1.60 g, 11.6 mmol)를 첨가하였다. 반응을 RT에서 약 18시간 동안 교반하였다. THF (20 mL)를 첨가한 다음, 혼합물을 진공 하에 약 20 mL로 농축시켰다. 생성된 혼합물을 -78℃로 냉각시킨 다음, MeOH (25 mL)를 첨가한 후, THF 중 2M LiBH4 (4.34 mL, 8.70 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 약 3시간 동안 교반한 다음, 저온조를 제거하고, 혼합물을 RT로 천천히 가온시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc (200 mL) 및 포화 수성 NaHCO3 용액 (50 mL)으로 희석하고, 고체를 여과해 내고, 여액을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 EtOAc (50 mL)로 희석하고, 고체를 다시 여과하였다. 유기 층을 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (2.25 g, 78 % 수율)을 이성질체의 분리 또는 추가의 크로마토그래피없이 사용하기에 적합한 황색 검으로서 수득하였다. ES/MS (m/z): (79Br/81Br) 459/461 (M+H).
제조예 114
메틸 2-{2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]에틸}-5-{[트랜스-4-(3-에톡시아제티딘-1-일)시클로헥실](에틸)아미노}-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00145
물 (0.6 mL) 중 칼륨 tert-부틸 N-[2-(트리플루오로보라누이딜)에틸]카르바메이트 (0.47 g, 1.8 mmol) 및 탄산세슘 (0.89 g, 2.7 mmol, 0.89 g)을 톨루엔 (6 mL) 중 조 메틸 2-브로모-5-{[트랜스-4-(3-에톡시아제티딘-1-일)시클로헥실](에틸)아미노}-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (0.68 g, 1.4 mmol)에 첨가한 다음, 팔라듐(II) 아세테이트 (0.031 g, 0.14 mmol) 및 2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-비페닐 (0.13 g, 0.27 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 유동 N2로 탈기시켰다. 생성된 혼합물을 100℃에서 약 2시간 동안 가열하고, 혼합물을 EtOAc (60 mL)로 희석하고, 층들을 분리하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 0-10% MeOH 중 7N NH3/DCM의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (0.401 g, 44% 수율)을 황색 검으로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 524 (M+H).
제조예 115
메틸 2-(2-아미노에틸)-5-{[트랜스-4-(3-에톡시아제티딘-1-일)시클로헥실](에틸)아미노}-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00146
RT에서 디옥산 중 4M HCl (5 mL, 20 mmol)을 DCM (5 mL) 중 메틸 2-{2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]에틸}-5-{[트랜스-4-(3-에톡시아제티딘-1-일)시클로헥실](에틸)아미노}-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (0.401 g, 0.605 mmol)에 첨가하였다. 반응을 약 2시간 동안 RT에서 교반하고, 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. MeOH (5 mL)를 첨가하고, 혼합물을 진공 하에 다시 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM (25 mL)으로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3 용액 (3 mL)으로 세척하고, 층들을 분리하고, 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 조 표제 화합물 (0.380 g, 95% 수율)을 추가의 정제없이 사용하기에 적합한 황색 검으로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 424 (M+H).
제조예 116
2-{[트랜스-4-(3-에톡시아제티딘-1-일)시클로헥실](에틸)아미노}-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00147
MeOH (4 mL) 중 메틸 2-(2-아미노에틸)-5-{[트랜스-4-(3-에톡시아제티딘-1-일)시클로헥실](에틸)아미노}-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (0.380 g, 0.574 mmol)를 3시간 동안 환류 하에 가열하고, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 5% MeOH를 함유하는 10 mM 수성 NH4CO3 중 20-90% ACN의 구배로 용리시키는 C-18 실리카 (워터스™ 엑스브릿지(XBRIDGE)® OBD, 30 x 75 mm, 5 μm) 상에서의 역상 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (0.113 g, 50% 수율)을 회백색 검으로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 392 (M+H).
제조예 117
5-{[2-(벤질옥시)-4,6-디메틸피리딘-3-일]메틸}-2-{[트랜스-4-(3-에톡시아제티딘-1-일)시클로헥실](에틸)아미노}-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00148
빙조에서 THF (2 mL) 중 2-{[트랜스-4-(3-에톡시아제티딘-1-일)시클로헥실](에틸)아미노}-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (0.113 g, 0.289 mmol)을 냉각시키고, THF 중 1M KHMDS (0.404 mL, 0.404 mmol)를 첨가하고, 빙조를 제거하고, RT로 가온시키고, 혼합물을 30분 동안 교반하였다. THF (2 mL) 중 2-벤질옥시-3-(클로로메틸)-4,6-디메틸-피리딘 (0.113 g, 0.433 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 RT에서 22시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl (2 mL)로 켄칭시키고, EtOAc (40 mL)로 추출하고, 유기 층들을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 0-10% 7N NH3/MeOH의 구배로 용리시키는 실리카 겔 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 표제 화합물 (0.084 g, 45% 수율)을 황색 검으로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 617 (M+H).
제조예 118
5-[(4-클로로-2-에톡시-6-메틸피리딘-3-일)메틸]-2-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(에틸)아미노]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00149
분쇄된 KOH (0.427 g, 7.53 mmol)를 THF (10 mL) 중 2-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(에틸)아미노]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (0.660 g, 1.88 mmol)의 용액에 한번에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 30분 동안 교반하고, THF (1 mL) 중 4-클로로-3-(클로로메틸)-2-에톡시-6-메틸피리딘 (0.500 g, 2.27 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 RT에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 포화 수성 NaHCO3로 켄칭시키고, DCM으로 추출하고, 층들을 분리하고, 유기 상을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0-100% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (0.988 g, 98% 수율)을 옅은 황색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): (35Cl/37Cl) 534/536 (M+H).
제조예 119
5-[(4-클로로-6-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-[에틸(4-옥소시클로헥실)아미노]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00150
LiCl (0.395 g, 9.22 mmol) 및 PTSA (1.67 g, 9.21 mmol)를 DMF (20 mL) 중 5-[(4-클로로-2-에톡시-6-메틸피리딘-3-일)메틸]-2-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(에틸)아미노]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (0.985 g, 1.84 mmol)의 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 70℃에서 1시간 동안 가열하였다. 온도를 90℃로 증가시키고, 5시간 동안 교반하고, 혼합물을 RT로 냉각시키고, 물을 첨가하고, RT에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 포화 수성 NaHCO3로 켄칭시키고, DCM으로 추출하고, 생성된 층들을 분리하고, 유기 상을 5% 수성 LiCl로 세척하였다. 층들을 분리하고, 유기 상을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0-50% EtOAc의 구배에 이어 DCM 중 0-20% MeOH의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (0.450 g, 26% 수율)을 오렌지색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): (35Cl/37Cl) 462/464 (M+H).
제조예 120
메틸 2-(3-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}프로프-1-인-1-일)-5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(에틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00151
TEA (55.6 g, 550.0 mol)를 THF (200 mL) 중 메틸 2-브로모-5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(메틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (7.9 g, 19.0 mmol), CuI (1.5 g, 7.90 mmol), 및 벤질 N-프로프-2-이닐카르바메이트 (8.9 g, 47 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 유동 N2로 탈기시키고, 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 디클로라이드 (2.8 g, 3.9 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 RT에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토 상에서 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0-60% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (8.2 g, 82% 수율)을 수득하였다. ES/MS (m/z): 513 (M+H).
제조예 121
메틸 2-(3-아미노프로필)-5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(에틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00152
압력 용기에 TEA (1.0 mL, 7.1 mmol) 및 탄소 상 10% Pd (3 g, 2.82 mmol)를 함유하는 MeOH (200 mL) 중 메틸 2-(3-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}프로프-1-인-1-일)-5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(에틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (7.6 g, 14 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 용기를 H2 (414 kPa)로 채우고, 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토 상에서 여과하고, 여액을 진공 하에 대략 150 mL로 농축시키고, 탄소 상 20% Pd(OH)2 (2.0 g)를 첨가하고, N2에 이어 H2로 탈기시키고, H2 분위기 하에 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토 층 상에서 여과하고, 진공 하에 약 100 mL로 농축시키고, 탄소 상 20% Pd(OH)2 (1.2 g)를 첨가하고, H2 하에 (414 kPa) 밤새 교반하였다. 반응을 규조토 상에서 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (6.5 g, 정량적 수율)을 추가의 정제없이 사용하기에 적합한 갈색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 397 (M+H).
제조예 122
2-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(에틸)아미노]-3-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온
Figure pct00153
KOtBu (3 g, 25 mmol)를 THF (200 mL) 및 TEA (1.0 mL, 7.1 mmol) 중 메틸 2-(3-아미노프로필)-5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(에틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (7.6 g, 19 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 4시간 동안 가열하고, RT로 냉각시키고, 물 (100 mL)을 첨가하였다. 전체 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 고체가 나타날 때까지 생성된 잔류물을 소량의 MeOH로 처리하였다. 생성된 고체를 여과해 내고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 0-50% 0.1% 포름산 함유 ACN 및 0.1% 포름산 함유 물의 구배로 용리시키는 C-18 실리카 (써모 사이언티픽 하이퍼실 골드(Thermo Scientific Hypersil GOLD)™) 상에서의 역상 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (1.7 g, 24% 수율)을 밝은 갈색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 365 (M+H).
제조예 123
2-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(에틸)아미노]-5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온
Figure pct00154
디메틸 술폭시드 (20 mL) 및 THF (20 mL) 중 2-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(에틸)아미노]-3-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온 (1.7 g, 4.7 mmol)의 용액에 분쇄된 KOH (1.1 g, 19 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반한 다음, 3-(클로로메틸)-2-메톡시-4,6-디메틸-피리딘 (1.0 g, 5.4 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 혼합물을 빙냉 수성 NaHCO3 용액에 붓고, DCM으로 추출하였다. 생성된 층들을 분리하고, 유기 상을 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (2.1 g, 61% 수율)을 추가의 정제없이 사용하기에 적합한 갈색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 514 (M+H).
제조예 124
5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-[에틸(4-옥소시클로헥실)아미노]-3-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온
Figure pct00155
LiCl (0.830 g, 19.4 mmol) 및 PTSA (3.5 g, 19 mmol)를 DMF (20 mL) 중 2-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(에틸)아미노]-5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온 (2.0 g, 2.7 mmol, ~70% 순도)의 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 70℃에서 1시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 RT로 냉각시키고, 빙냉 포화 수성 NaHCO3 용액을 붓고, DCM (2 x 100 mL)으로 추출하고, 층들을 분리하였다. 합한 유기 층을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 0-10% MeOH의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (1.8 g, 분석용 LCMS에 의한 ~85% 순도)을 밝은 갈색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 456 (M+H).
제조예 125
메틸 2-(3-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}프로프-1-인-1-일)-5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(메틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00156
TEA (35.4 g, 350.0 mmol)를 1,4-디옥산 (54 mL) 중 메틸 2-브로모-5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(메틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (5.40 g, 13.0 mmol), CuI (0.987 g, 5.18 mmol) 및 벤질 N-프로프-2-이닐카르바메이트 (3.17 g 14.3 mmol, 85% 순도)의 현탁액에 첨가하였다. 혼합물을 유동 N2로 탈기시키고, 비스(트리페닐포스핀) 팔라듐(II) 디클로라이드 (1.84 g, 2.59 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 40℃에서 1시간 동안 교반하고, 추가의 벤질 N-프로프-2-이닐카르바메이트 (3.17 g, 14.3 mmol, 85% 순도)를 첨가하고, 40℃에서 1시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, DCM/헥산 (대략 1:1)을 첨가하고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 갈색 오일성 잔류물을 헥산 중 0-75% MTBE의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하고, 크로마토그래피 분획을 진공 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 MeOH에 용해시키고, 진공 하에 다시 농축시켜, 표제 화합물 (5.23 g, 75% 수율)을 점착성 갈색 잔류물로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 513 (M+H).
제조예 126
메틸 2-(3-아미노프로필)-5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(메틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00157
MeOH (45 mL) 및 EtOAc (15 mL) 중 메틸 2-(3-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}프로프-1-인-1-일)-5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(메틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (5.23 g, 9.18 mmol)에 TEA (6.40 mL, 45.9 mmol) 및 탄소 상 10% Pd (2.6 g, 2.4 mmol)를 첨가하였다. 반응 용기를 비우고, RT에서 H2 하에 (345 kPa) 5시간 동안 교반하였다. 탄소 상 20% Pd(OH)2 (2.78 g, 3.96 mmol)를 첨가하고, 반응 용기를 비우고, H2로 충전하고, RT에서 약 17시간 동안 교반하였다. 추가의 탄소 상 20% Pd(OH)2 (1.0 g, 1.4 mmol)를 첨가하고, H2로 충전하고, RT에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토 층 상에서 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 DCM 중 0-12% 7N 메탄올성 NH3의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하였다. 크로마토그래피 분획을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 MeOH에 용해시키고, 진공 하에 다시 농축시켜, 표제 화합물 (2.60 g, 73% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 383 (M+H).
제조예 127
2-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(메틸)아미노]-3-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-4h-티에노[3,2-c]아제핀-4-온
Figure pct00158
KOtBu (THF 중 20 중량%, 5.46 g, 9.72 mmol)를 톨루엔 (25 mL) 중 메틸 2-(3-아미노프로필)-5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(메틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (2.53 g, 6.48 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 120℃에서 1시간 동안 교반하고, RT로 냉각시키고, 프로필포스폰산 무수물 (에틸 아세테이트 중 50 중량%, 0.386 mL 0.648 mmol)을 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl 용액으로 켄칭시키고, EtOAc (약 50 mL)로 희석하고, 층들을 분리하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (2.21 g, 97% 수율)을 추가의 정제없이 사용하기에 적합한 황색 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 351 (M+H).
제조예 128
5-{[2-(벤질옥시)-4,6-디메틸피리딘-3-일]메틸}-2-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(메틸)아미노]-3-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온
Figure pct00159
THF (10 mL) 및 디메틸 술폭시드 (10 mL) 중 2-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(메틸)아미노]-3-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-4h-티에노[3,2-c]아제핀-4-온 (2.21 g, 6.31 mmol)의 용액에 분쇄된 KOH (1.43 g, 25.2 mmol)를 한번에 첨가하고, 30분 동안 교반한 다음, THF (2 mL)에 용해된 2-벤질옥시-3-(클로로메틸)-4,6-디메틸-피리딘 (1.98 g, 6.81 mmol, 90% 순도)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 RT에서 4시간 동안 교반한 다음, 빙냉 수성 NaHCO3 용액에 붓고, DCM으로 추출하였다. 층들을 분리하고, 유기 층을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헥산 중 0-50% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (3.2 g, 86% 수율)을 수득하였다. ES/MS (m/z): 576 (M+H).
제조예 129
5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[메틸(4-옥소시클로헥실)아미노]-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온
Figure pct00160
LiCl (1.4 g, 33 mmol) 및 PTSA (5.8 g, 32 mmol)를 DMF (30 mL) 중 5-{[2-(벤질옥시)-4,6-디메틸피리딘-3-일]메틸}-2-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(메틸)아미노]-3-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온 (3.2 g, 5.4 mmol)의 용액에 첨가하였다. 70℃에서 1시간 동안 가열하고, RT로 냉각시키고, 빙냉 포화 수성 NaHCO3 용액에 붓고, DCM으로 추출하였다. 생성된 층들을 분리하고, 유기 상을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 0-5% 7N 메탄올성 NH3의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (1.7 g, 60% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 442 (M+H).
제조예 130
5-[(2-메톡시-4,6-디메틸-3-피리딜)메틸]-2-[(1R)-1-{트랜스-4-[2-메톡시에틸(메틸)아미노]시클로헥실}에틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4-온
Figure pct00161
2-메톡시에탄아민 (100 mg, 1.33 mmol)을 MeOH (4 mL)에 용해시키고, 5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-(4-옥소시클로헥실)에틸]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (160 mg, 0.36 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. -78℃로 냉각시키고, THF 중 2M LiBH4 (235 μL, 0.47 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 15분 동안 교반하고, 1시간 동안 교반하면서 RT로 가온시켰다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, DCM 및 포화 수성 NaHCO3로 희석하였다. 층들을 분리하고, 수성 상을 추가의 DCM으로 추출하고, 유기 추출물을 합하고, 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시켰다. 여과하고, 여액을 농축시켜, 조 5-[(2-메톡시-4,6-디메틸-3-피리딜)메틸]-2-[(1R)-1-{트랜스-4-[(2-메톡시에틸아미노)시클로헥실]에틸}-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4-온 (150 mg, 83% 수율)을 추가의 정제없이 다음 단계에 사용하기에 충분한 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 500 (M+H).
조 5-[(2-메톡시-4,6-디메틸-3-피리딜)메틸]-2-[(1R)-1-{트랜스-4-[(2-메톡시에틸아미노)시클로헥실]에틸}-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4-온 (100 mg, 0.20 mmol)을 DCM (2 mL)에 용해시키고, 37% 수성 포름알데히드 (0.4 mL, 5.0 mmol)의 용액을 첨가하고, 혼합물을 RT에서 15분 동안 교반하였다. Na(OAc)3BH (170 mg, 0.80 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 RT에서 약 3시간 동안 교반하였다. 추가의 37% 수성 포름알데히드 용액 (1.5 mL, 18.75 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 2시간 동안 RT에서 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, DCM (25 mL)을 첨가하였다. 추가로 MeOH (8 mL)와 TEA (1.5 mL, 11 mmol)의 혼합물 중에 현탁시켰다. 37% 수성 포름알데히드 용액 (6 mL, 80.0 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 RT에서 1시간 동안 교반하였다. Na(OAc)3BH (300 mg, 1.42 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물 RT에서 대략 4시간 동안 교반하였다. 반응을 DCM (40 mL) 및 포화 수성 NaHCO3 (1.0 mL)로 희석하였다. 층들을 분리하고, 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 0-10% MeOH의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (48 mg, 47% 수율)을 수득하였다. ES/MS (m/z): 514 (M+H).
제조예 131
메틸 5-[(1R)-1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)에틸]-2-[3-[(2-메톡시-4,6-디메틸-3-피리딜)메틸아미노]프로필]-4-메틸-티오펜-3-카르복실레이트
Figure pct00162
EtOH (7.5 L) 중 메틸 2-(3-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}프로프-1-인-1-일)-5-[1,4-디옥사스피로[4.5]데스-8-일(메틸)아미노]-4-메틸티오펜-3-카르복실레이트 (803 g, 1.57 mol), 2-메톡시-4,6-디메틸-피리딘-3-카르브알데히드 (314.5 g, 1.90 mol) 및 활성탄 상 팔라듐 Pd(OH)2 (298 g)의 용액을 100 psi하에 60℃에서 수소화에 적용하였다. H2 흡수가 멈추었을 때 (18시간), 반응을 냉각시키고, 생성된 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, EtOH (2 L)로 세정하였다. 용매를 감압 하에 제거하여, 표제 화합물 (892 g, >99% 수율)을 오일로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 531 (M+H).
제조예 132
5-[(2-메톡시-4,6-디메틸-3-피리딜)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-(4-옥소시클로헥실)에틸]-7,8-디히드로-6H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온
Figure pct00163
칼륨 트리메틸실라놀레이트 (256.7 g, 2.0 mol)를 THF (6.4 L) 중 메틸 5-[(1R)-1-(1,4-디옥사스피로[4.5]데칸-8-일)에틸]-2-[3-[(2-메톡시-4,6-디메틸-3-피리딜)메틸아미노]프로필]-4-메틸-티오펜-3-카르복실레이트 (531.4 g, 1.0 mol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 65℃에서 18시간 동안 교반하고, 5℃로 냉각시키고, 순차적으로 TEA (382 ml, 2.7 mol) 및 트리에틸아민 히드로클로라이드 (471 g, 3.4 mol)를 첨가하였다. 10분 동안 교반한 후, 온도를 ~5℃로 유지하면서 EtOAc 중 2,4,6-트리프로필-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스포리난-2,4,6-트리옥시드 (887 ml, 1.5 mol)를 30분에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 RT에서 교반하고, 2N 수성 HCl (5.0 L, 10.0 mol)을 23℃에서 첨가하였다. 반응을 16시간 동안 교반하고, EtOAc (6.5 L)로 희석하고, 2M K3PO4 (6.5 L)로 중화시켰다. 유기 층을 포화 수성 NaCl (3.2 L)로 세척하고, 층들을 분리하고, 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 생성된 여액을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 헵탄 중 10 내지 50% EtOAc의 구배로 용리시키는 실리카 (4 kg) 상에서의 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 정제된 분획을 헵탄 (2.3 L)으로 연화처리하고, 진공 하에 40℃에서 건조시켜, 표제 화합물 (196.2 g, 43% 수율)을 수득하였다. ES/MS (m/z): 455 (M+H).
제조예 133
2-[(1R)-1-[4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]에틸]-5-[(2-메톡시-4,6-디메틸-3-피리딜)메틸]-3-메틸-7,8-디히드로-6H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온
Figure pct00164
5-[(2-메톡시-4,6-디메틸-3-피리딜)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-(4-옥소시클로헥실)에틸]-7,8-디히드로-6H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온 (246.3 g, 0.5418 mol)을 DIPEA (573 ml, 3.29 mol)를 함유하는 MeOH (2.9L) 중 3-메톡시아제티딘 히드로클로라이드 (186.9 g, 1.51 mol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 RT에서 밤새 교반하였다. THF (991 ml)를 첨가하고, 용액을 -72℃로 냉각시켰다. 내부 온도를 -70℃ 미만으로 유지하면서 THF 중 2M LiBH4의 용액 (379 ml, 0.758 mol)을 45분에 걸쳐 적가하였다. 2.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 1M 수성 HCl (6.6 L)에 20분에 걸쳐 첨가함으로써 반응을 켄칭시켰다. 혼합물을 10분 동안 교반하고, 6M 수성 K2CO3 (1.25 L)에 의해 pH를 ~9로 조정하였다. 생성된 혼합물을 농축시켜, 휘발성 물질을 제거하고, 나머지 수성 혼합물을 EtOAc (6 L)로 희석하였다. 층들을 분리하고, 유기 층을 3M K2CO3 (1.65 L) 및 포화 수성 NaCl로 순차적으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 EtOAc 중 0 내지 5% 7N NH3/MeOH의 혼합물의 구배로 용리시키는 실리카 겔 (3.2 kg) 상에서 정제하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (208.6 g, 73% 수율)을 수득하였다. ES/MS (m/z): 526 (M+H).
실시예 1
5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-{(1R)-1-[트랜스-4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]에틸}-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00165
LiCl (9.83 g, 230 mmol) 및 PTSA (41.6 g, 230 mmol)를 DMF (188 mL) 중 5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-2-{(1R)-1-[트랜스-4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]에틸}-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (23.5 g, 45.9 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 8시간 동안 및 RT에서 16시간 동안 교반하였다. 물 (400 mL) 및 2M 수성 K2CO3 용액 (300 mL)을 첨가하고, EtOAc (2 x 250 mL)로 추출하고, 층들을 분리하고, 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 고체를 헵탄 (400 mL) 중에 현탁시키고, 80℃에서 3시간 동안 가열하였다. 현탁액을 냉각시키고, 여과하고, 진공 하에 45℃에서 16시간 동안 건조시켰다. 생성된 고체를 디이소프로필 에테르 (195 mL) 중에 현탁시키고, 70℃에서 2시간 동안 가온시키고, 현탁액을 냉각시키고, 여과하고, 진공 하에 45℃에서 16시간 동안 건조시켰다. 수집한 고체를 물 (180 mL) 중에 현탁시키고, 70℃에서 5시간 동안, 이어서 RT에서 5시간 동안 가온시켰다. 생성된 고체를 여과하고, 진공 하에 45℃에서 16시간 동안 건조시켜, 표제 화합물 (16.6 g, 70% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 498 (M+H). [α]D 20 = -68.93o (c=1.0, MeOH).
실시예 2 및 3
실시예 2: 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-{트랜스-4-[3-(3-메틸-1H-피라졸-1-일)아제티딘-1-일]시클로헥실}에틸]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00166
실시예 3: 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1H-피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-[4-[3-(5-메틸피라졸-1-일)아제티딘-1-일]시클로헥실]에틸]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4-온
Figure pct00167
0℃에서 DMF (5 mL) 중 5-[2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-{트랜스-4-[3-(3-메틸-1H-피라졸-1-일)아제티딘-1-일]시클로헥실}에틸]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 및 5-[(2-메톡시-4,6-디메틸-3-피리딜)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-[트랜스-4-[3-(5-메틸피라졸-1-일)아제티딘-1-일]시클로헥실]에틸]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4-온 (800 mg, 0.925 mmol, 위치 이성질체의 혼합물)의 용액에 LiCl (198 mg, 4.63 mmol) 및 PTSA (839 mg, 4.63 mmol)를 첨가하였다. 생성된 현탁액을 50℃에서 밤새 가열하였다. 빙냉 포화 수성 NaHCO3 용액을 첨가하고, DCM (2 x 100 mL)으로 추출하고, 층들을 분리하고, 유기 상들을 합하고, 포화 수성 NaCl로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 ACN 중 40-60% 20 mM 수성 NH4HCO3 (pH 9)의 구배를 이용하는 C-18 실리카 (엑스브릿지™, 5 μm, 19 x 100 mm, 유속: 25 mL/분) 상에서의 역상 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (130 mg, 26%)을 위치 이성질체의 혼합물로서 옅은 황색 고체 분말로서 수득하였다. 위치 이성질체를 제조용 SFC 크로마토그래피 (키랄팩® IA, 35% EtOH (0.2% IPAm)/CO2, 21 x 250 mm)에 의해 분리하고, 1H 및 HSQC 분광학에 기초하여 구조를 배정하였다. 위치 이성질체 1 (실시예 2): 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-{트랜스-4-[3-(3-메틸-1H-피라졸-1-일)아제티딘-1-일]시클로헥실}에틸]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온, ES/MS (m/z): 548 (M+H), tR = 2.93분 (분석용 SFC 키랄팩® IA, 35% (0.2% IPAm)/CO2, 5 mL/분, 225 nm, 5 x 25 mm). 1H NMR (400.1 MHz, CDCl3): δ 0.87-1.04 (m, 4H), 1.22 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.31-1.25 (m, 1H), 1.60-1.69 (m, 1H), 1.69-1.79 (m, 1H), 1.86-1.91 (m, 1H), 1.92-2.01 (m, 1H), 2.08-2.17 (m, 1H), 2.26 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 2.79-2.89 (m, 3H), 3.33-3.43 (m, 2H), 3.62-3.71 (m, 2H), 3.77 (q, J= 6.8 Hz, 2H), 4.71 (s, 2H), 4.85 (quintet, J= 7.2 Hz, 1H), 5.92 (s, 1H), 6.01 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 7.36 (d, J= 2.0 Hz, 1H),12.53-12.55 (bs, 1H). 피라졸의 C5는 HSQC 분광학에서 128.6 ppm의 탄소 이동을 나타내었다. 위치 이성질체 2 (실시예 3): 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1H-피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-[4-[3-(5-메틸피라졸-1-일)아제티딘-1-일]시클로헥실]에틸]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4-온, ES/MS (m/z): 548 (M+H), tR = 3.69분 (분석용 SFC 키랄팩® IA, 35% (0.2% IPAm)/CO2, 5 mL/분, 225 nm, 5 x 25 mm). 1H NMR (400.1 MHz, CDCl3): δ 0.90-1.04 (m, 4H), 1.21 (d, J= 6.9 Hz, 3H), 1.25-1.31 (m, 1H), 1.62-1.67 (m, 1H),1.79 (s, 1H), 1.84-1.91 (m, 1H), 1.99-2.01 (m, 1H), 2.09-2.19 (m, 1H), 2.23 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 2.81-2.89 (m, 3H), 3.50-3.56 (m, 2H), 3.62-3.71 (m, 2H), 3.79 (q, J= 6.7 Hz, 2H), 4.71 (s, 2H), 4.81-4.88 (m, 1H), 5.92 (s, 1H), 5.99 (s, 1H), 7.43 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 12.32-12.34 (bs, 1H). 피라졸의 C3은 HSQC 분광학에서 138.4 ppm의 탄소 이동을 나타내었다.
적절한 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1H-피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-[4-치환된-시클로헥실]에틸]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4-온을 이용하고, 정상 또는 역상 크로마토그래피에 의해 정제하여, 본질적으로 실시예 2의 방법에 의해 하기 화합물들을 제조하였다.
Figure pct00168
Figure pct00169
실시예 9
2-[(1R)-1-[4-[3-(시클로프로폭시)아제티딘-1-일]시클로헥실]에틸]-5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1H-피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4-온
Figure pct00170
THF (6 mL) 및 1N HCl (10 mL) 중 5-{[2-(벤질옥시)-4,6-디메틸피리딘-3-일]메틸}-2-[(1R)-1-{트랜스-4-[3-(시클로프로필옥시)아제티딘-1-일]시클로헥실}에틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (200 mg, 0.33 mmol)의 혼합물을 90℃에서 2시간 동안 교반하였다. RT로 냉각시키고, 혼합물을 얼음과 함께 포화 수성 NaHCO3 용액에 부은 다음, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 추출물을 포화 수성 NaCl로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 (10% 7N NH3 MeOH) 및 DCM의 혼합물 20-50%의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 66 mg의 순수한 생성물을 수득하였다. 덜 순수한 합한 분획 (용매 증발 후에 54 mg)을 물 중 10 mM NH4HCO3 (pH 10) 중 10-75% ACN의 구배를 이용하는 C-18 실리카 (페노메넥스 루나(Phenomenex LUNA)®, 5 μm C-18 악시아(AXIA)®, 30 x 75 mm, 칼럼 온도 25℃, 85 mL/분) 상에서의 역상 크로마토그래피에 적용하였다. 유사한 분획들을 합하고, 진공 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 DCM 중 (MeOH 중 10% 7N NH3) 및 DCM의 혼합물 20-50%의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 추가 22 mg의 표제 화합물을 수득하였다. 정제된 두 물질을 표제 화합물 (88 mg, 51% 수율)로서 합하였다. ES/MS (m/z): 524 (M+H). 1H NMR (400.1 MHz, CDCl3): 0.40-0.47 (m, 2H), 0.49-0.55 (m, 2H), 0.91-1.01 (m, 4H), 1.20 (d, J= 6.9 Hz, 3H), 1.24-1.29 (m, 1H), 1.55-1.65 (m, 1H), 1.67-1.76 (m, 1H), 1.76-1.82 (m, 1H), 1.86-1.97 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 2.77-2.89 (m, 5H), 3.17-3.22 (m, 1H), 3.57-3.69 (m, 4H), 4.71 (s, 2H), 4.20 (quintet, J= 6.0 Hz, 1H), 5.92 (s, 1H), 12.81-12.83 (bs, 1H).
적절히 치환된 5-[(2-벤질옥시-4,6-디메틸-3-피리딜)메틸]-2-[(1R)-1-[4-아제티딘-1-일]시클로헥실]에틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4-온을 사용하여 본질적으로 실시예 9의 방법에 의해 하기 화합물들을 제조하였다.
Figure pct00171
Figure pct00172
실시예 12: 1H NMR (399.8 MHz, CDCl3): 1.05-1.07 (m, 2H), 1.32-1.46 (m, 2H), 1.83-1.85 (m, 2H), 1.93-1.94 (m, 2H), 2.14-2.16 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.62 (s, 3H), 2.58-2.67 (m,1H), 2.76-2.80 (m, 2H), 3.43-3.47 (m, 2H), 3.62-3.66 (m, 2H), 3.77-3.81 (m, 2H), 4.69 (s, 2H), 4.92-4.95 (m, 1H), 5.90 (s, 1H), 6.24 (t, J= 2.0 Hz, 1H), 7.46 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.53 (d, J= 1.9 Hz, 1H). (교환가능한 NH 양성자는 관찰되지 않음.)
실시예 15
2-{(1R)-1-[트랜스-4-(아제티딘-1-일)시클로헥실]에틸}-5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00173
MeOH (15 mL) 중 2-{(1R)-1-[트랜스-4-(아제티딘-1-일)시클로헥실]에틸}-5-{[2-(벤질옥시)-4,6-디메틸피리딘-3-일]메틸}-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (190 mg, 0.34 mmol) 및 탄소 상 10% Pd (60 mg)의 혼합물을 H2 하에 60 psi에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토 층 상에서 여과하고, 여액을 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 10% 7N NH3 MeOH/DCM의 혼합물 0-60%의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (117 mg, 73% 수율)을 수득하였다. ES/MS (m/z): 468 (M+H).
실시예 16
2-[(1R)-1-{트랜스-4-[3-(시클로프로필메톡시)아제티딘-1-일]시클로헥실}에틸]-5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00174
DMF (3 mL) 중 5-{[2-(벤질옥시)-4,6-디메틸피리딘-3-일]메틸}-2-[(1R)-1-{트랜스-4-[3-(시클로프로필메톡시)아제티딘-1-일]시클로헥실}에틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (96 mg, 0.15 mmol), LiCl (34 mg, 0.79 mmol) 및 p-톨루엔술폰산 일수화물 (135 mg, 0.77 mmol)의 혼합물을 62℃에서 1.5시간 동안 교반하고, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 MeOH 중 10% 2N NH3/DCM의 혼합물 0-70%의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (40 mg, 48% 수율)을 수득하였다. ES/MS (m/z): 538 (M+H).
실시예 17 및 18
실시예 17: 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-[(1R)-{트랜스-4-[3-(2-메톡시에톡시)아제티딘-1-일]시클로헥실}에틸)]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00175
실시예 18: 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-[(1R)-{시스-4-[3-(2-메톡시에톡시)아제티딘-1-일]시클로헥실}에틸)]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00176
LiCl (0.2 g, 5.57 mmol) 및 PTSA (1.01 g, 5.578 mmol)를 DMF (5.6 mL) 중 5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-2-[(1R)-1-{4-[3-(2-메톡시에톡시)아제티딘-1-일]시클로헥실}에틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (0.62 g, 1.11 mmol, 시스- 및 트랜스-디아스테레오머의 혼합물)의 용액에 첨가하고, 90℃에서 2시간 동안 교반하였다. 포화 수성 NaHCO3를 첨가하고, EtOAc로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 먼저 MeOH에 이어 MeOH 중 2M NH3로 용리시키는 SCX (10 g) 상에서의 크로마토그래피에 적용하였다. 암모니아 중 MeOH 분획을 진공 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 25 mL/분에서 3분에 걸쳐 35-55% 물 중 20 mM NH4CO3 (pH 9)/ACN의 구배로 용리시키는 C-18 실리카 (엑스테라 엑스브릿지® 칼럼, 5 μm, 19 x 100 cm) 상에서의 역상 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 첫번째로 용리되는 트랜스-화합물 실시예 17 (0.148 g, 25% 수율)을 고체로서 (ES/MS (m/z): 541 (M+H)), 두번째로 용리되는 시스-화합물 실시예 18 (0.027 g, 4.5% 수율)을 고체로서 (ES/MS(m/z): 541 (M+H)) 수득하였다.
실시예 19
5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-{[트랜스-4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실](메틸)아미노}-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00177
MeOH (5 mL) 및 THF (5 mL) 중 3-메톡시아제티딘 히드로클로라이드 (0.304 g, 2.460 mmol)를 DIPEA (0.308 mL, 1.77 mmol)와 함께 RT에서 30분 동안 교반하였다. 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[메틸(4-옥소시클로헥실)아미노]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (0.28 g, 0.49 mmol)을 첨가하고, RT에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 -78℃로 냉각시키고, THF 중 2M LiBH4의 용액 (6.4 mL, 13 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하고, RT로 가온시켰다. 반응 혼합물을 빙냉 포화 NaHCO3 용액에 붓고, DCM으로 추출하고, 층들을 분리하고, 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 유기 추출물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 10% 용액 7N 메탄올성 NH3에서 DCM으로 0-50%의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하였다. 트랜스- 및 시스- 이성질체를 함유하는 크로마토그래피 분획을 수집하고, 진공 하에 농축시켰다. 트랜스- 및 시스- 이성질체를 10 mM 수성 NH4CO3 중 10-100% ACN의 구배로 용리시키는 C-18 실리카 (30 g 써모 사이언티픽 하이퍼실 골드)™ 상에서의 역상 크로마토그래피에 의해 분리하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (0.064 g, 26% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 499(M+H).
실시예 20
5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-(메틸{트랜스-4-[3-(1H-피라졸-1-일)아제티딘-1-일]시클로헥실}아미노)-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00178
RT에서 티타늄(IV) 이소프로폭시드 (0.373 g, 1.27 mmol)를 DCM (2.5 mL) 중 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[메틸(4-옥소시클로헥실)아미노]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (0.148 g, 0.32 mmol)에 첨가한 후, 1-(아제티딘-3-일)피라졸 디히드로클로라이드 (0.187 g, 0.955 mmol)를 첨가하였다. 3시간 후, THF (2.5 mL)를 첨가한 다음, 혼합물을 진공 하에 약 2.5 mL로 농축시켰다. 생성된 혼합물을 -78℃로 냉각시키고, MeOH (2.5 mL)에 이어 THF 중 2M LiBH4의 용액 (0.24 mL, 0.48 mmol)을 첨가하고, RT로 서서히 가온시키고, 밤새 교반하였다. 혼합물을 DCM (50 mL) 및 물 (10 mL)로 희석하고, 규조토 층 상에서 여과하고, 여과 케이크를 DCM (100 mL)으로 세척하였다. 여액을 진공 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 5% MeOH를 함유하는 10 mM 수성 NH4CO3 중 20-60% ACN의 구배로 용리시키는 C-18 실리카 (워터스™ 엑스브릿지®, 30 x 75 mm, 5 μm) 상에서의 역상 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (0.025 g, 14% 수율)을 투명한 얇은 필름으로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 535 (M+H).
실시예 21
5-[(4-클로로-6-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-{에틸[트랜스-4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]아미노}-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00179
메탄올 (5 mL) 중 3-메톡시아제티딘 히드로클로라이드 (0.300 g, 2.43 mmol)를 THF (5 mL) 및 DIPEA (0.306 mL, 1.75 mmol)를 함유하는 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, RT에서 30분 동안 교반한 다음, 5-[(4-클로로-6-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-[에틸(4-옥소시클로헥실)아미노]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (0.450 g, 0.487 mmol, 50% 순도)을 상기 용액에 첨가하고, RT에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 -78℃로 냉각시키고, THF 중 2M LiBH4의 용액 (0.63 mL, 1.3 mmol)을 첨가하였다. 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 RT로 서서히 가온시키고, 혼합물을 빙냉 포화 수성 NaHCO3에 붓고, DCM으로 추출하고, 층들을 분리하고, 유기 상을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 7N NH3/MeOH/DCM의 10%의 혼합물 0-40%의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하였다. 시스- 및 트랜스- 이성질체를 분리하기 위해, 생성물을 함유하는 분획을 증발시키고, 생성된 잔류물을 5% MeOH를 함유하는 10 mM NH4CO3 중 10-100% ACN의 구배로 용리시키는 C-18 실리카 (15.5 g 써모 사이언티픽 하이퍼실 골드)™ 상에서의 역상 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (0.120 g, 46% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): (35Cl/37Cl) 533/535 (M+H).
실시예 22
5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-{에틸[트랜스-4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]아미노}-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00180
LiCl (6.13 g, 143.2 mmol)을 DMF (100 mL) 중 2-{에틸[트랜스-4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]아미노}-5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (16.40 g, 28.65 mmol) 및 PTSA (25.96 g, 143.2 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 50℃에서 9시간 동안에 이어 RT에서 18시간 동안 교반하였다. EtOAc (400 mL) 및 4M 수성 K2CO3 용액 (200 mL)으로 희석하였다. 상들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 4M 수성 K2CO3 용액 (2 x 100 mL), 물 (100 mL) 및 포화 수성 NaCl (100 mL)로 순차적으로 세척하였다. 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켜, 옅은 갈색 고체를 수득하였다. 고체를 EtOAc (100 mL)로 슬러리화하고, 1시간 동안 RT에서 교반하였다. 디에틸 에테르 (100 mL)를 첨가하고, 2시간 동안 RT에서 교반하고, 고체를 여과하고, 저온의 디에틸 에테르 (50 mL)로 세척하고, 진공 하에 건조시켰다. TEA (21.54 g, 212.8 mmol)를 ACN (500 mL) 중 생성된 고체의 혼합물에 첨가하고, 24시간 동안 85℃에서 교반하였다. 혼합물을 냉각시키고, 진공 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 물 (165 mL)에 현탁시키고, 4시간 동안 RT에서 교반하였다. 생성된 고체를 여과하고, 물 (50 mL)로 세척하고, 진공 하에 50℃에서 16시간 동안 건조시켜, 표제 화합물 (10.83 g, 76% 수율)을 옅은 아이보리색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 513 (M+H).
실시예 23
2-[{트랜스-4-[3-(시클로프로필옥시)아제티딘-1-일]시클로헥실}(에틸)아미노]-5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00181
둥근 바닥 플라스크에 3-(시클로프로폭시)아제티딘 히드로클로라이드 (0.6776 g, 4.529 mmol), MeOH (4 mL), DIPEA (0.5853 g, 4.529 mmol), 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-[에틸(4-옥소시클로헥실)아미노]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (0.500 g, 1.13 mmol) 및 THF (20 mL)를 첨가하였다. 생성된 용액을 RT에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 -78℃로 냉각시키고, THF 중 2M LiBH4 (1.13 mL, 2.26 mmol)를 적가하였다. 반응을 0℃의 빙조에 두고, RT로 1.5시간에 걸쳐 천천히 가온시켰다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 켄칭시키고, DCM으로 희석하고, 층들을 분리하고, 수성 상을 추가의 DCM으로 추출하였다. 유기 상들을 합하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 C-18 실리카 상에서의 역상 크로마토그래피에 적용하였다. 목적하는 분획을 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (0.092 g, 15%)을 백색 분말로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 539 (M+H).
실시예 24 및 25
실시예 24: 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-(에틸{트랜스-4-[3-(1H-피라졸-1-일)아제티딘-1-일]시클로헥실}아미노)-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00182
실시예 25: 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-(에틸{시스-4-[3-(1H-피라졸-1-일)아제티딘-1-일]시클로헥실}아미노)-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00183
둥근 바닥 플라스크에 1-(아제티딘-3-일)피라졸 디히드로클로라이드 (0.266 g, 1.36 mmol), MeOH (6.8 mL), 및 DIPEA (0.239 mL, 1.36 mmol)를 첨가하고, RT에서 30분 동안 교반하였다. 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-[에틸(4-옥소시클로헥실)아미노]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (0.150 g, 0.340 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 -78℃로 냉각시킨 다음, THF 중 2M LiBH4 (0.255 mL, 0.510 mmol)를 적가하고, 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 RT로 가온시키고, 빙냉 포화 수성 NaHCO3 용액에 붓고, 생성된 현탁액을 DCM/물로 희석하고, DCM으로 3회 추출하였다. 층들을 분리하고, 유기 상들을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 10 mM NH4CO3/물 중 0-55% ACN의 구배로 용리시키는 C-18 실리카 상에서의 역상 크로마토그래피에 적용하여, 트랜스- 표제 화합물 실시예 24 (0.088 g, 47% 수율)를 백색 고체로서 (ES/MS (m/z): 549 (M+H)), 시스- 표제 화합물 실시예 25 (0.048 g, 26% 수율)을 백색 고체로서 (ES/MS (m/z): 549 (M+H)) 수득하였다.
실시예 26
5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-(에틸{트랜스-4-[3-(2-메톡시에톡시)아제티딘-1-일]시클로헥실}아미노)-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00184
둥근 바닥 플라스크에 MeOH (20 mL) 중 3-(2-메톡시에톡시)아제티딘 히드로클로라이드 (1.5 g, 8.9 mmol) 및 DIPEA (2 mL, 11.5 mmol)를 첨가하였다. RT에서 30분 동안 교반한 다음, THF (5 mL) 중 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-[에틸(4-옥소시클로헥실)아미노]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (1.0 g, 2.3 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 RT에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 -78℃로 냉각시키고, THF 중 2M LiBH4 (2.8 mL, 5.6 mmol)를 적가하였다. 반응을 빙조에 두고, RT로 천천히 2시간 동안 가온시켰다. 반응 혼합물을 빙냉 포화 수성 NaHCO3 용액에 붓고, DCM으로 추출하고, 층들을 분리하고, 유기 추출물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 7N NH3/MeOH의 혼합물 0-3%의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 트랜스- 이성질체 (0.450 g, 36% 수율)를 순수하지 않은 밝은 갈색 고체로서, 시스- 이성질체 (0.220 g, 17% 수율)를 밝은 갈색 오일로서 수득하였다. 트랜스- 이성질체를 10 mM NH4CO3/물 중 0-60% ACN의 구배로 용리시키는 C-18 실리카 상에서의 역상 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 트랜스- 표제 화합물 (233 mg, 18% 수율)을 밝은 갈색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 557 (M+H). 1H NMR (400.1 MHz, CDCl3): 0.94 (t, J= 7.0 Hz, 3H), 0.98-1.03 (m, 2H), 1.20-1.28 (m, 2H), 1.78-1.81 (m, 2H), 1.86-1.92 (m, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.35 (s, 6H), 2.67-2.77 (m, 1H), 2.83 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 2.85-2.95 (m, 4H), 3.39 (s, 3H), 3.59 (dd, J= 6.1, 7.5 Hz, 2H), 3.52 (s, 4H), 3.69 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 4.13 (quintet, J= 5.9 Hz, 1H), 4.73 (s, 2H), 5.94 (s, 1H), 12.24-12.25 (bs, 1H).
실시예 27
2-{[트랜스-4-(디메틸아미노)시클로헥실](에틸)아미노}-5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00185
5 mL 마이크로웨이브 바이알에 MeOH (4 mL) 중 2-[(트랜스-4-아미노시클로헥실)(에틸)아미노]-5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (0.050 g, 0.113 mmol), 아세트산 (0.019 mL, 0.339 mmol), 및 37% 수성 포름알데히드 (0.025 mL, 0.3389 mmol)를 첨가하였다. 바이알을 0℃로 냉각시키고, NaCNBH4 (0.0213 g, 0.3389 mmol)를 반응 혼합물에 천천히 첨가하였다. RT로 가온시키고, 4.5시간 동안 교반한 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 및 물로 희석하고, 층들을 분리하고, 수성 층을 추가의 DCM으로 추출하였다. 유기 상들을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 10 mM NH4CO3/물 중 ACN으로 용리시키는 C-18 실리카 (50 g) 상에서의 역상 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (0.0135 g, 25% 수율)을 백색 분말로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 471 (M+H).
실시예 28
5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-[에틸(피페리딘-4-일)아미노]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00186
DMF (6.45 mL) 중 tert-부틸 4-(에틸{5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-4-옥소-4,5,6,7-테트라히드로티에노[3,2-c]피리딘-2-일}아미노)피페리딘-1-카르복실레이트 (0.700 g, 1.290 mmol)를 마이크로웨이브 바이알에 첨가하였다. 0℃로 냉각시킨 다음, LiCl (0.276, 6.45 mmol) 및 PTSA (1.17 g, 6.45 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물를 밤새 90℃로 가열하고, 반응 혼합물을 RT로 냉각시키고, 빙냉 포화 수성 NaHCO3로 켄칭시키고, DCM으로 희석하였다. 층들을 분리하고, 수성 층을 추가의 DCM으로 추출하고, 유기 상들을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 0-10% MeOH 중 7N NH3/DCM의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (0.284 g, 51% 수율)을 베이지색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 429 (M+H).
실시예 29 및 30
실시예 29: 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-(에틸{트랜스-4-[(2-메톡시에틸)(메틸)아미노]시클로헥실}아미노)-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00187
실시예 30: 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-(에틸{시스-4-[(2-메톡시에틸)(메틸)아미노]시클로헥실}아미노)-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00188
LiCl (0.22 g, 5.20 mmol) 및 PTSA (0.94 g, 5.20 mmol)를 DMF (5.2 mL) 중 2-(에틸{4-[(2-메톡시에틸)(메틸)아미노]시클로헥실}아미노)-5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (0.55 g, 1.04 mmol, 시스- 및 트랜스-디아스테레오머의 혼합물)의 용액에 첨가하고, 90℃에서 밀봉된 튜브에서 1시간 동안 가열하였다. 반응을 RT로 냉각시키고, 포화 수성 NaHCO3 용액을 첨가하고, EtOAc로 추출하고, 유기 추출물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 먼저 MeOH에 이어 MeOH 중 2M NH3로 용리시키는 SCX 카트리지 (25 g) 상에 로딩하였다. 메탄올성 암모니아 분획을 진공 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 65 mL/분에서 CO2/0.2% DMA를 함유하는 MeOH의 이동상으로 30%에서 등용매성으로 용리시키는 초임계 유체 크로마토그래피 (키랄셀(CHIRALCEL)® OD, 5 um, 2 x 25 cm)에 적용하여, 표제 화합물을 수득하였다: 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-(에틸{트랜스-4-[(2-메톡시에틸)(메틸)아미노]시클로헥실}아미노)-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온, 실시예 29, (0.07 g, 13% 수율), ES/MS (m/z): 515 (M+H). 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-(에틸{시스-4-[(2-메톡시에틸)(메틸)아미노]시클로헥실}-아미노)-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온, 실시예 30, (0.04 g, 8% 수율), ES/MS (m/z): 515 (M+H).
실시예 31
2-[{트랜스-4-[시클로프로필(메틸)아미노]시클로헥실}(에틸)아미노]-5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00189
LiCl (0.23 g, 5.38 mmol) 및 PTSA (0.97 g, 5.38 mmol)를 DMF (5.4 mL) 중 2-[{4-트랜스-[시클로프로필(메틸)아미노]시클로헥실}(에틸)아미노]-5-[(2-메톡시-4,6-디메틸피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (0.55 g, 1.07 mmol)의 용액에 첨가하고, 90℃에서 1시간 동안 가열하였다. RT로 냉각시키고, 포화 수성 NaHCO3 용액을 첨가하고, EtOAc로 추출하고, 층들을 분리하였다. 유기 상을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 먼저 MeOH에 이어 MeOH 중 2M NH3로 용리시키는 SCX 카트리지 상에 로딩하였다. 메탄올성 암모니아 분획을 진공 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 65 mL/분에서 CO2/0.2% DMA를 함유하는 MeOH의 이동상으로 30%에서 등용매성으로 용리시키는 SFC (키랄셀® OD, 5 μm, 2 x 25 cm)에 의한 크로마토그래피에 적용하여, 표제 화합물 (0.15 g, 29% 수율)을 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 497 (M+H).
실시예 32
5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-{[트랜스-4-(3-에톡시아제티딘-1-일)시클로헥실](에틸)아미노}-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00190
탄소 상 10% Pd (0.035 g, 0.033 mmol)를 EtOAc (2 mL) 및 MeOH (2 mL) 중 5-{[2-(벤질옥시)-4,6-디메틸피리딘-3-일]메틸}-2-{[트랜스-4-(3-에톡시아제티딘-1-일)시클로헥실](에틸)아미노}-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (0.084 g, 0.13 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 용기를 H2 (345 kPa)로 충전하고, 약 3시간 동안 교반하고, 여과하고, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 20% EtOAc에 이어 DCM 중 0-10% 7N NH3/MeOH의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (0.041 g, 57% 수율)을 황색 검으로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 527 (M+H).
실시예 33
5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-(에틸{트랜스-4-[3-(1H-피라졸-1-일)아제티딘-1-일]시클로헥실}아미노)-3-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-4h-티에노[3,2-c]아제핀-4-온
Figure pct00191
1-(아제티딘-3-일)피라졸 (0.600 g, 4.87 mmol)을 DIPEA (1.5 mL, 8.6 mmol)를 함유하는 MeOH (10 mL)의 용액에 첨가하고, RT에서 30분 동안 교반한 다음, THF (10 mL) 중 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-[에틸(4-옥소시클로헥실)아미노]-3-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온 (0.800 g, 1.76 mmol)을 첨가하였다. RT에서 1시간 동안 교반하고, 반응 혼합물을 -78℃로 냉각시키고, THF 중 2M LiBH4의 용액 (0.9 mL, 1.8 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 3시간 동안 교반하고, RT로 서서히 가온시키고, 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 빙냉 포화 NaHCO3 용액에 붓고, DCM으로 추출하고, 층들을 분리하고, 유기 상을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 0-50% 0.1% 포름산 함유 ACN 및 0.1% 포름산 함유 물의 구배로 용리시키는 C-18 실리카 (100 g, 써모 사이언티픽 하이퍼실 골드)™ 상에서의 역상 크로마토그래피에 적용하고, 용매를 증발시키고, 생성된 잔류물을 0-40% 0.1% 포름산 함유 ACN 및 0.1% 포름산 함유 물의 구배로 용리시키는 C-18 실리카 (100 g, 써모 사이언티픽 하이퍼실 골드)™ 상에서의 역상 크로마토그래피에 추가로 적용하였다. 합한 크로마토그래피 분획을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 처리하고, DCM으로 추출하고, 층들을 분리하고, 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시키고, 진공 오븐에서 밤새 건조하여, 단일 이성질체로서의 표제 화합물 (0.047 g, 4.7% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 563 (M+H).
실시예 34
5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-{에틸[트랜스-4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]아미노}-3-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온
Figure pct00192
3-메톡시아제티딘 히드로클로라이드 (0.580 g, 4.69 mmol)를 MeOH (5 mL) 및 DIPEA (1 mL, 5.7 mmol)의 용액에 첨가하고, RT에서 30분 동안 교반한 다음, THF (5 mL) 중 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-[에틸(4-옥소시클로헥실)아미노]-3-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온 (0.600 g, 1.12 mmol, 85% 순도)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 RT에서 1시간 동안 교반하고, -78℃로 냉각시키고, THF 중 2M LiBH4의 용액 (1.2 mL, 2.4 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 2시간 동안 교반하면서 RT로 가온시킨 다음, 반응 혼합물을 빙냉 포화 NaHCO3 용액에 부었다. DCM (3 x 100 mL)으로 추출하고, 층들을 분리하고, 유기 상을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 0-10% MeOH의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 후에 트랜스- 및 시스- 이성질체의 혼합물을 수득하였다. 트랜스- 및 시스- 이성질체를 10 mM 수성 NH4CO3 중 0-60% ACN의 구배로 용리시키는 C-18 실리카 (100 g, 써모 사이언티픽 하이퍼실 골드)™ 상에서의 역상 크로마토그래피에 의해 분리하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (0.0779 g, 13% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 527 (M+H).
실시예 35
2-[{트랜스-4-[3-(시클로프로필옥시)아제티딘-1-일]시클로헥실}(메틸)아미노]-5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온
Figure pct00193
MeOH (10 mL) 중 3-(시클로프로폭시)아제티딘 히드로클로라이드 (0.400 g, 2.67 mmol)를 슬러리화하고, THF (10 mL) 및 DIPEA (0.600 mL, 3.44 mmol)를 첨가하고, RT에서 30분 동안 교반하고, 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[메틸(4-옥소시클로헥실)아미노]-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온 (0.300 g, 0.577 mmol, 85% 순도)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 RT에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 -78℃로 냉각시키고, THF 중 2M LiBH4의 용액 (0.700 mL, 1.4 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 -78℃에서 교반하였다. 혼합물을 RT로 가온시키고, 1시간 동안 교반하고, 반응 혼합물을 빙냉 포화 NaHCO3 용액에 붓고, DCM으로 추출하고, 층들을 분리하고, 유기 층을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 0-5% 7N 메탄올성 NH3의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하였다. 트랜스- 및 시스- 이성질체를 함유하는 크로마토그래피 분획을 수집하고, 진공 하에 농축시켰다. 트랜스- 및 시스- 이성질체를 10 mM 수성 NH4CO3 중 5-60% ACN의 구배로 용리시키는 C-18 실리카 (40 g, 써모 사이언티픽 하이퍼실 골드)™ 상에서의 역상 크로마토그래피에 의해 분리하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (0.0662 g, 21% 수율)을 밝은 갈색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 539 (M+H).
실시예 36
5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-{(트랜스-4-[3-(2-메톡시에톡시)아제티딘-1-일]시클로헥실}(메틸)아미노]-3-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온
Figure pct00194
DIPEA (0.418 mL, 2.40 mmol)를 함유하는 MeOH (5 mL) 및 THF (5 mL) 중 3-(2-메톡시에톡시)아제티딘 (0.437 g, 2.460 mmol)을 RT에서 30분 동안 교반하였다. 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[메틸(4-옥소시클로헥실)아미노]-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온 (0.35 g, 0.67 mmol)을 첨가하고, RT에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 -78℃로 냉각시키고, THF 중 2M LiBH4의 용액 (0.87 mL, 1.7 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하고, 밤새 RT로 가온시켰다. 혼합물을 -78℃로 냉각시키고, THF 중 2M LiBH4의 용액 (0.5 mL, 1.0 mmol)을 첨가하고, RT로 가온시켰다. 반응 혼합물을 빙냉 포화 NaHCO3 용액에 붓고, DCM으로 추출하고, 층들을 분리하고, 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 유기 추출물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 10% 용액 7N 메탄올성 NH3/DCM의 0-40% 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하였다. 트랜스- 및 시스- 이성질체를 함유하는 크로마토그래피 분획을 수집하고, 진공 하에 농축시켰다. 트랜스- 및 시스- 이성질체를 5% MeOH를 함유하는 10 mM 수성 NH4CO3 중 10-100% ACN의 구배로 용리시키는 C-18 실리카 (15.5 g 써모 사이언티픽 하이퍼실 골드)™ 상에서의 역상 크로마토그래피에 의해 분리하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (0.036 g, 9% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 557(M+H).
실시예 37
5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-{[트랜스-4-(3-에톡시아제티딘-1-일)시클로헥실](메틸)아미노}-3-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온
Figure pct00195
THF (10 mL) 중 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[메틸(4-옥소시클로헥실)아미노]-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온 (0.320 g, 0.616 mmol)에 MeOH (5 mL) 및 DIPEA (0.55 mL, 3.15 mmol) 중 3-에톡시아제티딘 히드로클로라이드 (0.424 g, 3.08 mmol)를 첨가하였다. RT에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 -78℃로 냉각시키고, THF 중 2M LiBH4의 용액 (0.650 mL, 1.3 mmol)을 천천히 첨가하고, 생성된 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하고, RT로 가온시키고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙냉 포화 NaHCO3 용액에 붓고, DCM으로 추출하고, 층들을 분리하고, 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 10% 용액 7N 메탄올성 NH3에서 DCM으로의 0-70% 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하였다. 트랜스- 및 시스- 이성질체를 함유하는 크로마토그래피 분획을 수집하고, 진공 하에 농축시켰다. 트랜스- 및 시스- 이성질체를 5% MeOH를 함유하는 10 mM 수성 NH4CO3 중 40-75% ACN의 구배로 용리시키는 C-18 실리카 (페노메넥스 루나) 상에서의 역상 크로마토그래피에 의해 분리하여, 용매 증발 후에 표제 화합물 (0.099 g, 37% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 527(M+H).
실시예 38
5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-{(1R)-1-[트랜스-4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]에틸}-3-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온
Figure pct00196
MeOH (10 mL) 및 THF (10 mL) 중 3-메톡시아제티딘 히드로클로라이드 (480 mg, 3.88 mmol)에 DIPEA (1.0 mL, 5.7 mmol)를 첨가하고, RT에서 30분 동안 교반하였다. 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-(4-옥소시클로헥실)에틸]-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온 (0.25 g, 0.57 mmol)을 상기 용액에 첨가하고, RT에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 -78℃로 냉각시킨 다음, THF 중 2M 수소화붕소리튬 (1.0 mL, 2.0 mmol)을 첨가하였다. 3시간 후, 저온조를 제거하고, 1시간 동안 RT에서 교반하였다. 반응 혼합물을 빙냉 포화 수성 NaHCO3 용액에 붓고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 물 (0.1% 포름산 함유) 중 0-50% ACN (0.1% 포름산 함유)의 구배로 용리시키는 역상 크로마토그래피에 적용하였다. 순수한 분획을 수집하고, 농축시켜, 생성물을 포름산 염으로서 수득하였다. 유사한 절차에 따라 생성물을 약 2배의 이전 작업 반응으로부터의 물질과 합하였다. 합한 생성물 혼합물에 포화 수성 NaHCO3 용액을 첨가하고, DCM으로 추출하고, 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여액을 진공 하에 농축시키고, 오븐에서 밤새 건조시켜, 표제 화합물 (0.057 g 합한 질량, 6% 합한 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 512 (M+H). [α]D 20 = -42.80° (c=1.0, MeOH).
실시예 38에 대한 대안적인 절차
25 내지 34℃의 온도에서 클로로트리메틸실란 (233 ml, 1.83 mol)을 10분에 걸쳐 아세토니트릴 중 2-[(1R)-1-[4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]에틸]-5-[(2-메톡시-4,6-디메틸-3-피리딜)메틸]-3-메틸-7,8-디히드로-6H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온 (240 g, 0.456 mol) 및 NaI (267 g, 1.78 mol)의 혼합물에 첨가하였다. 반응을 33 내지 41℃에서 2시간 동안 가열하였다. RT로 냉각시키고, 아세토니트릴 (4 L)로 2회 희석하고, 혼합물을 감압 하에 매회 원래의 부피로 농축시켰다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (2.4 L) 및 물 (2.4 L)로 희석하고, NH4OH (380 ml)에 의해 대략 pH 10으로 조정하였다. 생성된 층들을 분리하고, 유기 층을 포화 수성 NaCl (1.9 L)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 먼저 EtOAc 중 10% EtOH에 이어, MeOH 중 5% 7N NH3 및 EtOAc 중 10% EtOH의 혼합물로 용리시키는 실리카 겔 플러그 상에서 여과에 의해 분리하였다. 메탄올성 암모니아 여액을 증발시키고, 0℃에서 생성된 잔류물을 아세톤 (3 부피)으로 연화처리하였다. 진공 하에 RT에서 건조시켜, 표제 화합물 (186.4 g, 80% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 512 (M+H).
실시예 39
5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1H-피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-[4-(3-피라졸-1-일아제티딘-1-일)시클로헥실]에틸]-7,8-디히드로-6H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온
Figure pct00197
THF (5 mL) 및 DIPEA (0.500 mL, 2.87 mmol)를 MeOH (5 mL) 중 1-(아제티딘-3-일)피라졸 (0.380 g, 3.09 mmol)의 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 RT에서 30분 동안 교반하고, 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-(4-옥소시클로헥실)에틸]-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온 (0.400 g, 0.763 mmol, 84% 순도)을 첨가하고, 혼합물을 밤새 RT에서 교반하였다. 반응 혼합물을 -78℃로 냉각시키고, THF 중 2M LiBH4의 용액 (0.720 mL, 1.4 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하고, RT로 가온시키고, 2시간 동안 교반하고, 혼합물을 빙냉 포화 수성 NaHCO3 용액에 붓고, DCM (3x100 mL)으로 추출하고, 층들을 분리하고, 합한 유기 상을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 10 mM 수성 NH4CO3 중 5-60% ACN의 구배로 용리시키는 C-18 실리카 상에서의 역상 크로마토그래피에 적용하여, 용매 증발 및 진공 건조 후에 표제 화합물 (0.110 g, 26% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 548 (M+H).
실시예 40
2-{(1R)-1-[트랜스-4-(디메틸아미노)시클로헥실]에틸}-5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 메탄술포네이트
Figure pct00198
MsOH (9.1 mg, 94.3 mmol)를 MeOH (2 mL) 중 2-{(1R)-1-[트랜스-4-(디메틸아미노)시클로헥실]에틸}-5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (42.9 mg, 90.5 mmol)의 현탁액에 첨가하고, 초음파 처리하여, 무색 용액을 수득하였다. 용액을 진공 하에 농축시켜, 표제 화합물 (47.8 mg, 93.8% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 454.3 (M-H).
실시예 41
5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-{트랜스-4-[3-(5-메틸-1H-피라졸-1-일)아제티딘-1-일]시클로헥실}에틸]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 메탄술포네이트
Figure pct00199
MeOH (1 mL) 중 MsOH (1.55 μL, 0.0238 mmol)의 용액을 MeOH (2 mL) 중 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1H-피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-[4-[3-(5-메틸피라졸-1-일)아제티딘-1-일]시클로헥실]에틸]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4-온 (12.7 mg, 0.023 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 초음파 처리하여, 투명한 용액을 수득하였다. 진공 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 오븐에서 약 40℃에 이어 RT에서 수일 동안 건조시켜, 표제 화합물 (13.8 mg, 84% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 548 (M+H).
실시예 42
5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-{트랜스-4-[3-(3-메틸-1H-피라졸-1-일)아제티딘-1-일]시클로헥실}에틸]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 메탄술포네이트
Figure pct00200
MsOH (1.73 μL, 0.0265 mmol)를 MeOH (2 mL) 중 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-3-메틸-2-[(1R)-1-{트랜스-4-[3-(3-메틸-1H-피라졸-1-일)아제티딘-1-일]시클로헥실}에틸]-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4(5H)-온 (14.5 mg, 0.027 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 용액을 진공 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 진공 오븐에서 50℃에서 2시간 동안 건조시켜, 표제 화합물 (15.1 mg, 89% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 548 (M+H).
실시예 43
5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-[(1R)-1-{트랜스-4-[(2-메톡시에틸)(메틸)아미노]시클로헥실}에틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-C]피리딘-4(5H)-온
Figure pct00201
5-[(2-메톡시-4,6-디메틸-3-피리딜)메틸]-2-[(1R)-1-{트랜스-4-[2-메톡시에틸(메틸)아미노]시클로헥실}에틸]-3-메틸-6,7-디히드로티에노[3,2-c]피리딘-4-온 (48.0 mg, 0.093 mmol)을 DMF (3.0 mL)에 용해시켰다. LiCl (30.0 mg, 0.71 mmol) 및 PTSA (30mg, 0.16 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 4시간 동안 가열하였다. RT로 냉각시키고, 밤새 교반하였다. EtOAc (30 mL) 및 물 (3 mL)로 희석하였다. 에틸 아세테이트 층을 물로 추출하고, EtOAc 상을 MgSO4 상에서 건조시켰다. 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 0-10% MeOH의 구배로 용리시키는 실리카 상에서의 크로마토그래피에 적용하여, 용매 제거 후에 표제 화합물 (47 mg, 정량적 수율)을 백색 분말로서 수득하였다. ES/MS (m/z): 500 (M+H).
생물학적 검정
문헌에서 EZH2 발현은 여러 유형의 암, 예를 들어, 림프종 (Velichutina, I. et al. (2010) Blood 116:5247-55; Sneeringer, C.J. et al. (2010) Proc Natl Acad Sci U S A. 107:20980-5; McCabe et al. (2012) Nature 492:108-12. Beguelin, W. et al. (2013) Cancer Cell 23:677-92; Knutson, S.K. et al. Mol Cancer Ther 13:842-54), 횡문근양 종양 (Knutson, S.K. et al. (2013) Proc Natl Acad Sci U S A. 110: 7922-7), SNF5가 결여되거나 그에 결함이 있는 종양 (Wilson, B.G. et al. (2010) Cancer Cell 18:316-28), 육종 (Kadoch and Crabtree (2013) Cell 153:71-85; Shen et al. (2016) Sci Rep 6:25239), 다발성 골수종 (Kalushkova, A. et al. (2010) PLoS One 5:e11483; Popovic, R. et al. (2014) PLoS Genet.10:e1004566; Hernando, H. et al. (2016) Mol Cancer Ther. 15(2):287-98; Agarwal, P et al. (2016) Oncotarget 7:6809-23), 흑색종 (Zingg et al.(2015) Nat Commun. 6:6051; Barsotti, A.M. et al. (2015) Oncotarget 6(5):2928-38; Souroullas, G.P. et al. (2016) Nat. Med. 22:632-40), 결장직장암 (Nagarsheth, N. et al. (2016) Cancer Res. 76:275-82), 폐암 (Byers, L.A. et al. (2012) Cancer Discov. 2:798-811; Behrens, C. et al. (2013) Clin Cancer Res.19:6556-65; Riquelme, E. et al. (2014) Clin Cancer Res. 20:3849-61; Fillmore, C.M. et al. (2015) Nature 520:239-42), 신장암 (Adelaiye, R. et al. (2015) Mol Cancer Ther.14(2):513-22), 유방암 (Kleer, C.G. et al. (2003), Proc Natl Acad Sci U S A. 100:11606-11; Ren et al. (2012) Cancer Res 72:3091-104), 난소암 (Bitler et al. (2015) Nat Med 21:231-8), 및 전립선암 (Varambally, S. et al. (2002) Nature 419:624-9; Yu, J. et al. (2007) Cancer Res. 67:10657-63; Varambally, S. et al. (2008) Science 322:1695-9; Yu, J. et al. (2010) Cancer Cell 17:443-54)과 관련이 있었다.
하기 검정의 결과는, 실시예 1-43의 화합물이 EZH2 억제제이고, 본 발명의 화합물, 예를 들어 실시예 1, 9, 13, 22 및 38이 본원에서 암을 치료하는데 유용할 수 있음을 입증한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "IC50"은 작용제에 대해 가능한 최대 억제 반응의 50%를 제공하는 작용제의 농도 (상대적 IC50), 또는 플라시보 대조군에 비해 표적 효소 활성의 50% 억제를 제공하는 작용제의 농도 (절대 IC50)를 지칭한다.
EZH2 WT/ Y641N mut 384-웰 생화학 검정
이 검정의 목적은 PRC2 복합체 내에 있는 EZH2 WT/Y641N의 촉매 활성에 대한 화합물의 효과를 측정하는 것이다.
Sf9 세포에서 바쿨로바이러스 발현계를 이용하여 EZH2, EED, SUZ12, RBBP4 및 AEBP 단백질로 구성된 PRC2 5-원 (5-mer) 복합체로서 FLAG-태그 부착된 EZH2 또는 EZH2 Y641N을 발현시키고, FLAG® 친화도 정제 (시그마-알드리치(Sigma-Aldrich))를 이용하여 정제하였다. 상기 효소 복합체를 검정 완충제 (50 mM Tris-HCl pH 8.5, 10 mM DTT, 0.005% 트리톤(TRITON)®-X 100)에 의해 3.33 nM (mut 검정의 경우 6.67 nM)의 작업 스톡으로 희석하였다. WT 검정에서, 비-비오틴 리신 27 트리-메틸화 히스톤 H3 (21-44) 공활성제 펩티드 (씨피씨 사이언티픽(CPC Scientific) Cat # 869799)를 상기 효소 작업 스톡으로 희석하여 13.33 nM의 최종 농도로 만들었다. WT 검정의 경우 비오틴 히스톤 H3 (21-44) 펩티드 기질 (잔기 21-44, 씨피씨 사이언티픽 Cat# 811115) 또는 mut 검정의 경우 비오틴 리신 27 디-메틸화 히스톤 H3 (21-44) 펩티드 기질 (씨피씨 사이언티픽, Cat# 830754)을 3H-SAM (아데노실-L-메티오닌, S-(메틸)-3H(Adomet), 로트 169500/12, 15 Ci/mmol 또는 0.55 mCi/mL, 36.7 μM, 퍼킨 엘머(Perkin Elmer) NET155)과 함께 공동 희석하여 검정 완충제 중 4 μM (WT 검정) 또는 2 μM (mut 검정)의 최종 농도로 만들었다.
100% DMSO (WT 검정의 경우 4 mM 스톡 50 μL 또는 mut 검정의 경우 0.2 mM 스톡 50 μL) 중 시험 화합물을 384 웰 눈크(NUNC)™ 플레이트 (써모 사이언티픽(Thermo Scientific), Cat# 264573)에 첨가하였다. 희석 웰에 20 μL의 100% DMSO를 두었다. 한 웰에서 다음 웰로 10 μL를 옮김으로써 3x 계열 희석을 수행하였다. WT 검정에서는 랩사이트(Labcyte) 384 웰 플레이트 (Cat# P-05525)에서 2 μL의 계열 희석된 화합물을 38 μL의 DMSO와 혼합한 반면에, mut 검정에서는 모든 20 μL의 계열 희석된 화합물을 384-웰 랩사이트 저부피 플레이트 (Cat# LP-0200)로 옮겼다. 200 nL (WT 검정) 또는 100 nL (mut 검정)의 화합물을 전자 장치를 사용하지 않고 수용 384-웰 검정 플레이트 (코닝(Corning) 3706)로 옮겼다. WT 검정에서는, 15 μL의 효소/트리-메틸 H3 공활성제 펩티드 혼합물을 검정 플레이트에 분배한 후, 5 μL의 비오틴 H3 펩티드 기질/3H-SAM 혼합물을 분배하였다. 플레이트를 밀봉하고, 2시간 동안 RT에서 진탕시켰다. 최종 검정 조건은 2.5 nM 효소 복합체, 10 nM 트리-메틸 히스톤/공활성제 H3 펩티드, 1 μM 비오틴 기질 펩티드, 1 μM 3H-SAM, 및 1 μM의 최고 농도의 시험 화합물 (WT 검정); 또는 5 nM 효소 복합체, 0.5 μM 비오틴 기질 펩티드, 0.5 μM 3H-SAM, 및 1 μM의 최고 농도의 시험 화합물 (mut 검정)이었다. 1 mg/mL (WT 검정) 또는 0.5 mg/mL (mut 검정)의 이트륨 실리케이트 스트렙타비딘 SPA 비드 (퍼킨 엘머, Cat# RPNQ0012)를 3 M 구아니딘-HCL 중에서 재구성하였다. 비드 혼합물을 검정 플레이트에 20 μL/웰로 첨가하고, 10분 동안 진탕시키고, 마이크로베타(MICROBETA)® 상에서 카운팅하기 전에 1시간 동안 RT에서 정치시켰다. 원 데이터를 계산하고 (CPM), % 억제율을 진데이터(Genedata) 검정 분석기를 이용하여 % 억제율 = 100 - [(시험 화합물 CPM - 중앙 최소 CPM) / (중앙 최대 CPM - 중앙 최소 CPM) x 100]로서 정규화하였다. 정규화된 데이터를 플롯팅하고, 진데이터® 콘도세오(Condoseo)를 이용하여 % 억제율 (y 축) 대 로그 화합물 농도 (x-축)로서 곡선을 작성하고, 4-파라미터 비선형 로지스틱 피팅 알고리즘을 이용하여 IC50 값을 결정하였다. 이 검정에서 실질적으로 상기 기재된 바와 같이 본 발명의 범위 내에 있는 화합물을 시험할 수 있다. 예를 들어, 실시예 1 및 20의 화합물은 PRC2 복합체 내에 있는 재조합 WT/mut EZH2의 메틸트랜스퍼라제 활성의 억제를 입증하는 생화학적 IC50 결과를 가졌다. 예를 들어, 실시예 1의 화합물은 WT 5-mer EZH2에 대해 2.06±1.90 nM (n=5) 및 mut 5-mer EZH2에 대해 2.11±0.58 nM (n=2)의 IC50을 나타내었다. 실시예 22의 화합물은 WT 5-mer EZH2에 대해 3.29±1.24 nM (n=3) 및 mut 5-mer EZH2에 대해 7.21 nM (n=1)의 IC50을 나타내었다. 실시예 38의 화합물은 WT 5-mer EZH2에 대해 0.923±0.091 nM (n=2) 및 mut 5-mer EZH2에 대해 2.65 nM (n=1)의 IC50을 나타내었다.
H3K27me3 세포-기재 ELISA
이 검정의 목적은 세포 트리-메틸화 H3K27의 수준의 측정을 통해 화합물이 세포에서 EZH2의 기능적 활성을 억제하는 능력을 평가하는 것이다. 카르파스(Karpas)-422 (EZH2 Y641N) 세포를 5,000 세포/100 μL/웰로 블랙 96-웰 비디 바이오코트® 셀웨어(BD BIOCOAT® Cellware), 폴리-리신 플레이트 (비디 바이오사이언시즈(BD Biosciences), Cat# 354640)에 플레이팅하였다. 눈크™ 96-웰 폴리프로필렌 마이크로웰(MICROWELL)™ 플레이트 (써모 사이언티픽 Cat# #249944)에서 40 μL/웰의 10 mM 화합물 (20 μM의 출발 최종 농도를 나타냄) 또는 40 μL의 DMSO를 첨가하여 화합물 플레이트를 제조한 다음, 한 웰로부터 다음 웰로 20 μL를 옮김으로써 계열 희석액을 제조하였다. 별도의 눈크™ 96-웰 폴리프로필렌 마이크로웰™ 플레이트에서 5 μL의 시험 화합물을 245 μL/웰의 성장 배지에 첨가하고, 11 μL의 화합물/배지 혼합물을 세포 플레이트에 스탬핑하였다. 세포 플레이트를 37℃ 인큐베이터에 48시간 동안 두었다. 인큐베이터로부터 플레이트를 꺼내고, 플레이트를 실온에서 15-20분 동안 두고, 플레이트를 1000 rpm에서 5분 동안 스핀 다운시켰다. 30 μL의 16% 파라포름알데히드를 이용하여 RT에서 15분 동안 세포를 고정시켰다. 파라포름알데히드를 제거하고, 0.1% 트리톤® X-100을 함유하는 칼슘 또는 마그네슘 무함유 (-/-) PBS 100 μL/웰을 이용하여 RT에서 20분 동안 세포를 투과성으로 만들었다. 플레이트를 PBS(-/-)로 세척한 후 (2x), 50 μL/웰의 일차 항체 용액 (디아제노드(Diagenode) 항-H3K27me3 MAb-181-050; 1% BSA를 함유하는 칼슘 및 마그네슘 함유 (+/+) PBS 중에서 1:3000 희석)을 RT에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBS-/-로 세척한 후 (3x), 50 μL/웰의 이차 항체 용액 (인비트로젠(Invitrogen) 염소 항-마우스 IgG 알렉사(Alexa) 488, Cat# A11001; PBS+/+ 중에서 1:1000 희석)과 함께 어두운 곳에서 RT에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBS-/-로 세척한 후 (3x), 200 ㎍/mL RNase (인비트로젠; Cat# 12091021)를 함유하는 PBS 중에서 5 ㎍/mL 프로피듐 아이오다이드 (인비트로젠; Cat# p3566) 염색 용액을 50 μL/웰로 첨가하였다. 플레이트를 블랙 플레이트 밀봉으로 커버하고, Ex 488nm/Em 505 nm-530 nm (H3K27m3 신호) 및 LP655nm (세포 핵 신호)을 이용하여 아큐멘(ACUMEN)® 레이저 스캐닝 세포측정기 (티티피 랩 테크(TTP Lab Tech)) 상에서 스캐닝하였다. 이 검정에서 실질적으로 상기 기재된 바와 같이 본 발명의 범위 내에 있는 화합물을 시험할 수 있다. 예를 들어, 실시예 1의 화합물은 MDA MB-231 및 카르파스-422에서 각각 19.2±1.55 nM (n=2) 또는 23.6±20.5 nM (n=6)의 세포 H3K27me3 IC50을 나타내었다. 실시예 22의 화합물은 MDA MB-231 및 카르파스-422에서 각각 <1 nM (n=1) 또는 0.0148±0.0147 nM (n=6)의 세포 H3K27me3 IC50을 나타내었다. 실시예 38의 화합물은 카르파스-422에서 0.00973±0.00956 nM (n=4)의 세포 H3K27me3 IC50을 나타내었다.
카르파스 -422 증식 검정
이 검정의 목적은 시험 화합물이 시험관 내에서 종양 세포의 성장을 억제하는 능력을 입증하는 것이다.
카르파스-422 세포를 5000 세포/100 μL/웰의 밀도로 96 웰, 블랙 96-웰 비디 바이오코트® 셀웨어, 폴리-리신 플레이트 (비디 바이오사이언시즈, Cat# 354640)에 플레이팅하였다. 40 μL의 10 mM 시험 화합물 (20 μM의 출발 최종 농도를 나타냄) 또는 100% DMSO를 눈크™ 96-웰 폴리프로필렌 마이크로웰™ 플레이트 (써모 사이언티픽 Cat# #249944)에 첨가하였다. 한 웰에서 다음 웰로 20 μL를 옮김으로써 계열 희석을 수행하였다. 별도의 눈크™ 96-웰 폴리프로필렌 마이크로웰™ 플레이트에서 5 μL의 화합물을 245 μL/웰의 성장 배지에 첨가하고, 11 μL의 화합물/배지 혼합물을 세포 플레이트에 스탬핑하였다. 세포 플레이트를 37℃에서 7일 동안 인큐베이션하였다. 100 μL/웰의 셀 타이터 글로(Cell Titer GLO)® 시약 (프로메가(Promega), Cat# G7671)을 세포 플레이트에 첨가하였다. 2분 동안 진탕시키고, 플레이트 판독기를 이용하여 발광을 측정하였다. 이 검정에서 실질적으로 상기 기재된 바와 같이 본 발명의 범위 내에 있는 화합물을 시험할 수 있다. 예를 들어, 실시예 1의 화합물은 176±165 nM (n=5)의 IC50을 나타내었다. 실시예 22의 화합물은 84.5±42.7 nM (n=5)의 IC50을 나타내었다. 실시예 38의 화합물은 10.1±4.6 nM (n=4)의 IC50을 나타내었다.
이종이식 연구
이 검정의 목적은 시험 화합물이 생체 내에서 종양 EZH2 기능 및 EZH2-매개된 종양 성장을 억제하는 능력을 평가하는 것이다.
본질적으로 McCabe et al. (2012) Nature 492:108-12에 기재된 바와 같이 카르파스-422 이종이식 모델을 이용하여 실시예 1의 화합물에 의해 하기 변화/규정에 따라 생체 내에서 표적 억제 및 효능 연구를 수행하였다: 1) 제제 비히클로서 20% 캡티솔(CAPTISOL)® 대신에 히드록시에틸셀룰로스 (1% HEC/0.25% 트윈(TWEEN)® 80/0.05% 소포제)를 사용하고; 2) 화합물을 복강내 주사에 의해서가 아니라 경구 가비지에 의해 투여하고; 3) 종양 부피가 효능 실험의 경우 150-200 ㎣ 및 표적 억제 실험의 경우 300-350 ㎣에 도달하였을 때 화합물 처리를 시작하고; 4) 10일째 대신에 7일째에 종양 메틸화 또는 종양 TNFRSF21 발현의 억제를 측정하였다.
종양- 유래된 트리-메틸화 H3K27의 ELISA-기재 측정
종양으로부터 히스톤의 산성 추출을 위해, 대략 0.5 cm x 0.25 cm 또는 20-30 mg 중량의 종양 절편을 용해 매트릭스 D 500 x 2 mL에 두었다. RNASE/DNASE-무함유 튜브를 균질화용 비드 (엠피 바이오메디칼즈(MP Biomedicals), Cat# 6913-500)와 함께 첨가하였다. 650 μL의 산 용해 완충제 (프로테아제 억제제 칵테일 정제 (로쉐(Roche); Cat# 11836153001)를 함유하는 0.4 N HCl)를 첨가하였다. 패스트프렙(FASTPREP)® FP120 균질화기에서 종양 샘플을 6 m/초의 속도에서 20초 동안 2-3회 균질화하였다. 샘플을 얼음 상에서 1시간 동안 두어 분리시켰다. 상청액을 에펜도르프 튜브로 옮기고, 튜브 회전기 상에 두어 밤새 4℃에서 용해시켰다. 샘플을 4℃에서 8000 rpm에서 10분 동안 스핀 다운시켰다. 상청액을 새로운 튜브로 옮기고, 단백질 농도를 측정하였다.
150 μL/웰의 MSD 차단 용액 A (메조 스케일 디스커버리(Meso Scale Discovery; MSD); 3%의 최종 농도)를 멀티-스팟(MULTI-SPOT)® 트리-메틸-히스톤 H3(K27) 싱글플렉스(SINGLEPLEX)® 플레이트 (MSD; Cat#: N45CA-1)에 첨가하였다. RT에서 1시간 동안 진탕시켰다. 플레이트를 1X MSD 트리스 워시 버퍼(Tris Wash Buffer)™ (MSD)로 세척하였다 (3x). 0.25 ㎍의 종양 용해물을 3벌식으로 웰당 25 μL의 산 용해 완충제로 분배하였다. 밤새 4℃에서 진탕시켰다. 플레이트를 1X MSD 트리스 워시 버퍼™로 3회 세척하였다. 25 μL/웰의 검출 항체 술포-태그(SULFO-TAG)™-트리메틸-히스톤 H3 (K27)을 첨가하여 항체 희석 완충제 (1% MSD 블록커(Blocker)-A; 0.1% MSD 블록커 D-B 및 0.1% MSD® 블록커 D-G의 최종 농도) 중에서 1.5 ㎍/μL의 최종 농도로 희석하였다. RT에서 1-2시간 동안 진탕시켰다. 플레이트를 1X MSD 트리스 워시 버퍼로 3회 세척하였다. PBS 중 4% 포름알데히드 100 μL/웰을 첨가하여 플레이트를 고정시켰다. RT에서 30분 동안 진탕시켰다. 플레이트를 1x MSD 트리스 워시 버퍼로 3회 세척하였다. 150 μL/웰의 1X MSD® 리드 버퍼를 첨가하고, MSD 섹터(MSD SECTOR)® 이미저 6000 장비를 이용하여 화학전기발광을 측정하였다. 이 검정에서 실질적으로 상기 기재된 바와 같이 본 발명의 범위 내에 있는 화합물을 시험할 수 있다. 예를 들어, 마우스에서 50 mpk의 실시예 1의 화합물을 BID 투여한 결과, 종양 메틸화의 53%가 억제되었다 (n=8 마우스; p<0.0001). 마우스에서 15 mpk의 실시예 38의 화합물을 BID 투여한 결과, 종양 메틸화의 73%가 억제되었다 (n=8 마우스; p<0.0001).
종양- 유래된 TNFRSF21 mRNA 발현의 qPCR -기재 측정
종양 조직으로부터 RNA를 단리하기 위해, 대략 0.5 cm x 0.25 cm 또는 20-30 mg 중량의 종양 절편을 용해 매트릭스 D 500 x 2 mL에 두었다. 균질화용 비드 (엠피 바이오메디칼즈, REF: 6913-500)와 함께 RNASE/DNASE-무함유 튜브를 첨가하였다. 알엔이지(RNEASY)® 키트 (퀴아젠(Qiagen); Cat#74104)로부터의 650 μL의 RLT 완충제를 첨가하였다. 샘플을 패스트프렙® FP120 균질화기에서 6의 속도로 20초 동안 2 내지 3회 균질화시켰다. 샘플을 얼음 상에 두어 10분 동안 냉각시켰다. 4℃에서 13,000 rpm에서 10분 동안 원심분리하였다. 상청액을 QIA 튜브에 두고, 알엔이지® 키트 (퀴아젠; Cat#74104)를 사용하여 RNA를 단리하였다.
고용량 cDNA 역전사 키트 (어플라이드 바이오시스템즈(Applied Biosystems); Cat# 4368813)를 사용하여 3 ㎍의 종양 RNA로부터 cDNA를 제조하고, 샘플을 하기 사이클 조건을 이용하여 PCR 써모사이클러에서 인큐베이션하였다: 25℃에서 10분; 37℃에서 2시간, 4℃에서 유지. cDNA 생성물을 어플라이드 바이오시스템즈 비아 7(ViiA 7)™ 리얼-타임 PCR 사이클러에서 써모 사이언티픽 앱솔루트 블루 QPCR ROX 믹스 (어플라이드 바이오시스템즈; Cat# AB-4139) 및 TNFRSF21에 대한 탁맨(Taqman) 프로브 (어플라이드 바이오시스템즈; Cat# Hs01560899_m1) 및 하우스키핑 유전자 GAPDH (어플라이드 바이오시스템즈; Cat# Hs02758991-gl)를 사용하여 증폭시켰다. TNFRSF21 사이클 역치 값을 계산하고, 그의 각각의 샘플의 GAPDH 수준으로 정규화하였다. 이 검정에서 실질적으로 상기 기재된 바와 같이 본 발명의 범위 내에 있는 화합물을 시험할 수 있다. 예를 들어, 50 mpk의 실시예 1의 화합물을 BID 투여한 결과, 종양 TNFRSF21 유전자 발현이 25배 증가되었다 (n=8 마우스; p<0.0001). 15 mpk의 실시예 38의 화합물을 BID 투여한 결과, 종양 TNFRSF21 유전자 발현이 60배 증가되었다 (n=8 마우스; p<0.0001).
EZH2 억제제 및 다른 암 화학요법제로의 조합 처리
하기 문단은 SWI/SNF 복합체 및/또는 MLL 복합체 및/또는 PI3K 경로의 구성성분에서의 돌연변이의 조합을 보유하는 난소암, 위암, 폐암 또는 결장직장암의 치료에서 EZH2 억제제, 예컨대 비제한적으로 Ex. 1 또는 Ex. 38의 단독 사용 및/또는 표준 치료 (SoC) 화학요법과의 조합 사용을 뒷받침하는 증거를 제공한다. 이들에는 PTEN 또는 PIK3CA에서의 돌연변이 및/또는 트레오닌 308 (Thr308) 상에서 인산화된 Akt의 구성 단백질 발현과 조합된 ARID1A 단백질 발현이 결여된 난소암이 포함되나 이로 제한되지 않는다. 추가로, 이들에는 SMARCA2 및 SMARCA4 단백질 발현 둘 다가 결여된 난소암이 포함되나 이로 제한되지 않는다. 추가로, 이들에는 MLL2에서의 이형접합 기능 상실 (LOF) 돌연변이와 조합된 ARID1A에서의 이형접합 LOF 돌연변이 (예컨대 비제한적으로 넌센스, 프레임쉬프트 및 코딩-스플라이스 돌연변이)를 보유하고, TP53에서의 동형접합 돌연변이는 보유하지 않는 위암이 포함되나 이로 제한되지 않는다. 추가로, 이들에는 PTEN 또는 PIK3CA에서의 돌연변이 및/또는 Thr308 상에서 인산화된 Akt의 구성 단백질 발현과 조합된 ARID1A에서의 이형접합 LOF 돌연변이 (예컨대 비제한적으로 넌센스, 프레임쉬프트 및 코딩-스플라이스 돌연변이)를 보유하고, TP53에서의 동형접합 돌연변이는 보유하지 않는 위암이 포함되나 이로 제한되지 않는다. 추가로, 이들에는 MLL3에서의 이형접합 LOF 돌연변이를 갖는 폐암이 포함되나 이로 제한되지 않는다. 추가로, 이들에는 PTEN 또는 PIK3CA에서의 돌연변이 및/또는 Thr308 상에서 인산화된 Akt의 구성 단백질 발현과 조합된 ARID1A에서의 이형접합 LOF 돌연변이를 갖는 결장직장암이 포함되나 이로 제한되지 않는다.
7일 또는 10일 증식 검정에서 실시예 1 또는 실시예 38에 대한 반응에 대해 난소암 세포주를 시험하였다. 각각의 세포주를 7 또는 10일 기간 동안 96-웰 포멧에서 로그 상 성장을 최대화하는 세포 개수 및 분할 스케쥴에 대해 최적화하였다. 0일째에 세포를 96-웰 블랙, 투명 바닥, 폴리-D-리신-코팅된 96-웰 플레이트 (비디 바이오사이언시즈; 비디 바이오코트™ 셀웨어, 폴리-리신, Cat. #354640)에 90 μL 세포 배양 배지의 총 부피로 플레이팅하고, 37℃/5% CO2에서 18-24시간 동안 인큐베이션하였다. 1일째에, 2% 디메틸 술폭시드를 함유하는 150 μL 배지 (DMSO; 시그마-알드리치 Cat. #D2438)를 96-웰 투명한 편평 바닥 플레이트 (코닝® 코스타(COSTAR)® 세포 배양 플레이트 Cat #3596)의 칼럼 3-12에 첨가하여 화합물 희석 플레이트를 제조하였다. 100% DMSO 중 실시예 1 또는 실시예 38의 10 mM 스톡을 제조하고, 세포 배양 배지 중에서 200 μM의 작업 농도로 추가로 희석하였다. 225 μL의 실시예 1 또는 실시예 38을 화합물 희석 플레이트의 칼럼 2에 첨가하고, 칼럼 3 내지 12에 의해 시험 화합물의 1:3 10점 계열 희석액을 제조하였다. 10 μL의 계열 희석된 화합물을 세포 플레이트에 첨가하여, 1 nM 내지 20 μM 농도 범위의 최종 시험 화합물 및 0.2% 최종 농도의 DMSO를 수득하였다. 7일 또는 10일 검정 기간의 마지막에, 다음과 같이 세포를 셀타이터-글로(CELLTITER-GLO)® 발광 세포 생존성 검정 (프로메가, Cat. #G7570)에 적용하였다: 1) 셀타이터-글로® 완충제를 해동시키고, 실온으로 평형화시키고; 2) 동결건조된 셀타이터-글로® 기질을 실온으로 평형화시키고; 3) 셀타이터-글로® 완충제를 기질 보틀로 옮겨서, 셀타이터-글로® 시약을 형성하고; 4) 세포 플레이트를 실온으로 평형화시키고; 5) 부착 세포의 경우에만 세포 플레이트로부터 배지를 제거하고; 6) 25 μL 셀타이터-글로® 시약을 각 웰에 첨가하고; 7) 플레이트를 추가 20-30분 동안 실온에서 인큐베이션시키고; 8) 퍼킨 엘머 엔비젼(EnVision) 2104 멀티 검출 마이크로플레이트 판독기를 이용하여 발광을 판독하였다.
Ye, X.S. et al. (1997) Methods Enzymol. 283:520-32에 기재된 바와 같이 난소암 세포주의 전세포 용해물을 유도하고, 하기 항체를 사용하여 SWI/SNF 복합체, MLL 복합체 및 PI3K 경로 구성성분, 예컨대 ARID1A, SMARCA2, SMARCA4 (3-8% SDS-PAGE 사용), 및 Thr308 상에서 인산화된 Akt (4-20% SDS-PAGE 사용)의 단백질 발현에 의해 웨스턴 블롯에 의해 측정하였다: 항-ARID1A (베틸(Bethyl), Cat. #A301-040A); 항-SMARCA2/BRM (아브캄(Abcam), Cat. # ab15597); 항-BRG1/SMARCA4 (베틸, Cat. #A300-813A) 및 항-포스포-Akt (Thr308) 항체 D25E6 (셀 시그널링(Cell Signaling), Cat. #13038). 항-Akt (pan) 항체 40D4 (셀 시그널링, Cat. #2920) 및 항-β-액틴 AC-74 (시그마(Sigma), Cat. #A2228) 항체를 사용하여 단백질 로딩을 위한 대조군으로서 총 Akt 및 액틴 수준을 측정하였다.
표 1은 난소 세포주 패널에 대한 실시예 38의 효과를 요약하며, ARID1A-음성 및 Akt의 Thr308 상에서의 인산화 둘 다를 나타내거나, 또는 SMARCA2 및 SMARCA4 둘 다의 발현이 결여된 난소암 세포주에서 EZH2 억제제에 대한 민감성을 도시한다.
표 1. 9가지 난소암 세포주의 증식, 뿐만 아니라 그들의 SWI/SNF 및 PI3K 경로 구성성분 단백질 발현 프로파일에 대한 실시예 38의 효과
Figure pct00202
난소암 SoC 카르보플라틴 + 파클리탁셀과 비교한 실시예 38의 효과를 A2780 이종이식 모델을 이용하여 생체 내에서 시험하였다. 50% 마트리겔(MATRIGEL)® 중 2백만 개의 A2780 세포를 그룹당 10 마리의 흉선 누드 마우스 (엔비고 알엠에스, 인크.(Envigo RMS, Inc.), 인디애나주 인디애나폴리스)의 우측 뒷 옆구리에 피하 이식하였다. 종양 부피가 100-150 ㎣에 도달하였을 때 처리를 시작하였다. 동물들을 5일 동안 실시예 38로 예비 처리한 후, 적어도 추가 23일 동안 또는 비히클 종양 부피가 2000 ㎣에 도달할 때까지 실시예 38 및 SoC를 공동 투여하였다. 1% HEC/0.25% 트윈® 80/0.05% 소포제 중에서 실시예 38을 제제화하고, 50 mpk로 경구 가비지 (p.o.)에 의해 1일 2회 (BID) 투여하였다. 포스페이트 완충된 식염수 (PBS) 중에서 카르보플라틴 (에이피피 파마슈티칼즈(APP Pharmaceuticals) NDC 63323-172-60)을 제제화하고, 60 mpk에서 복강내 (i.p.) 주사에 의해 2주마다 (Q14D) 투여하였다. PBS 중에서 파클리탁셀 (호스피라, 인크(Hospira, Inc) NDC 61703-342-50)을 제제화하고, 10 mpk에서 정맥내 (IV) 주사에 의해 Q14D로 투여하였다. 종양 성장 억제를 개별 동물의 평균 [(실시예 38 처리 28일째의 종양 부피 - 0일째의 종양 부피) ÷ (비히클 처리 28일째의 종양 부피 - 0일째의 종양 부피)] x 100으로서 계산된 ΔT/C (%)로서 측정하였다. 표 2는 처리 28일째에 A2780 종양 성장에 대한 실시예 38 및 난소암 SoC의 효과의 결과를 요약한다. A2780 종양 성장에 대한 SoC 단독의 약한 효과와는 대조적으로, 50 mpk BID p.o. 실시예 38 단독으로 처리한 후에 및 50 mpk QD p.o. 실시예 38과 SoC의 조합물로 처리한 후에 A2780 종양 성장의 유의한 억제가 관찰되었다.
표 2: 투여 28일째에 A2780 종양 성장에 대한 실시예 38, 난소 SoC 카르보플라틴 + 파클리탁셀, 및 실시예 38과 SoC 조합물의 효과
Figure pct00203
스타트 디스커버리 (START Discovery; http://startdiscovery.net/)는 환자-유래된 종양 모델의 플랫폼을 갖는다. SWI/SNF 구성성분 기능 상실 및 PI3K 경로 돌연변이의 존재 또는 부재를 기준으로 2가지 스타트 디스커버리 난소 환자-유래된 모델을 선택하고, 스타트 디스커버리에서 종양 성장에 대한 실시예 1의 효과를 시험하였다. 28일째에 각각 2 마리를 갖는 2개의 그룹을 처리하였다. 그룹 1을 난소 표준 치료 (SoC) 화합물 카르보플라틴 (0.9% NaCl 중에서 제제화되고 60 mpk Q14D i.p.로 투여됨) 및 파클리탁셀 (0.9% NaCl 중에서 제제화되고 10 mpk Q14D IV로 투여됨)로 처리하였다. 그룹 2를 실시예 1 (1% HEC/0.25% 트윈® 80/0.05% 소포제 중에서 제제화되고 50 mpk BID p.o.로 투여됨)로 5일 동안 예비 처리한 후, 실시예 1 및 SoC를 23일 동안 또는 종양 부피가 2000 ㎣에 도달할 때까지 공동 투여하였다. 종양 재성장이 관찰될 때까지 투여 종료후 28일째에 조합 처리에 의해 종양 정체 또는 퇴행을 나타내는 모델을 모니터링하였다. 종양 부피에서의 평균 % 변화를 0일째의 기준선 종양 부피와 비교하고, 개별 동물의 평균 [(처리 x일째의 종양 부피 - 0일째의 종양 부피) ÷ 0일째의 종양 부피] x 100으로서 계산하였다. 표 3은 2가지 환자-유래된 난소 종양 모델의 성장에 대한 실시예 1 처리의 효과를 요약한다. ST884 - 실시예 1 처리에 의해 유의한 종양 성장 억제를 나타내는 환자 유래된 난소 종양 모델은 PIK3CA에서의 돌연변이와 조합된 ARID1A에서의 동형접합 돌연변이를 보유하였다. 대조적으로, ST416 - 이형접합 돌연변이 ARID1A를 갖고 PIK3CA 또는 PTEN에서의 돌연변이는 갖지 않는 환자 유래된 난소 종양 모델은 실시예 1 처리에 의해 종양 성장 억제를 나타내지 않았다.
표 3: 2가지 난소 환자 유래된 종양 모델에 대한 난소암 표준 치료 (SoC) 카르보플라틴 및 파클리탁셀, 또는 실시예 1 + SoC의 조합물의 효과
Figure pct00204
온코테스트 (Oncotest; http://www.oncotest.com/) 또한 환자로부터 직접 이식되고 PDX로서 누드 마우스에 피하 통과된 환자 종양 외식편의 정립된 다량의 수집물을 갖는다. 기능 상실 (LOF) SWI/SNF 및/또는 MLL 복합체 돌연변이의 존재를 기준으로 9가지 온코테스트 위 PDX를 선택하고, 종양 성장에 대한 실시예 1 또는 비히클의 효과에 대해 온코테스트에서 시험하였다. 모델 GXA-3011의 경우, 그룹당 5마리의 동물을 시험하였고, 28일 동안 비히클 (1% HEC/0.25% 트윈® 80/0.05% 소포제) 또는 실시예 1로 50 mpk BID p.o.로 처리하였다. 종양 재성장이 관찰될 때까지 투여 종료후 28일째에 종양 정체 또는 퇴행을 나타내는 모델을 모니터링하였다. 개별 동물의 평균 [(실시예 1 처리 ≥28일째의 종양 부피 - 0일째의 종양 부피) ÷ (비히클 처리 ≥28일째의 종양 부피 - 0일째의 종양 부피)] x 100으로서 ΔT/C (%)를 계산하였다.
다른 온코테스트 위 PDX의 경우, 28일 동안 각각 2마리의 마우스를 갖는 2개의 그룹을 처리하였다. 그룹 1을 위 표준 치료 (SoC) 화합물 옥살리플라틴 (5% 글루코스 중에서 제제화되고 8 mpk Q14D i.p.로 투여됨) 및 파클리탁셀 (0.9% NaCl 중에서 제제화되고 10 mpk Q14D IV로 투여됨)로 처리하였다. 그룹 2 동물을 실시예 1 (1% HEC/0.25% 트윈® 80/0.05% 소포제 중에서 제제화되고 50 mpk BID p.o.로 투여됨)로 5일 동안 예비 처리한 후, 실시예 1 및 SoC를 23일 동안 또는 종양 부피가 2000 ㎣에 도달할 때까지 공동 투여하였다. 개별 동물의 평균 [(처리 ≥28일째의 종양 부피 - 0일째의 종양 부피) ÷ 0일째의 종양 부피] x 100으로서 종양 부피에서의 평균 % 변화를 계산하였다.
표 4는 환자-유래된 위암 모델 (암종 또는 선암종)의 성장에 대한 실시예 1 처리 효과의 결과를 요약하며, 실시예 1 처리에 의해 성장이 지연된 모델은 2가지 돌연변이를 보유하였다: 1) ARID1A에서의 적어도 1개의 이형접합 LOF 돌연변이, 및 2) MLL2에서의 이형접합 LOF (PDX GXA-3052, GXA-3079, GXA-3083에서 발견됨) 및/또는 PI3K 경로의 구성성분에 영향을 미치는 돌연변이 (예컨대 비제한적으로 PIK3CA 및 PTEN; PDX GXA-3002 및 GXA-3005에서 관찰됨). 실시예 1 처리 후에 성장이 억제되지 않는 모델은 ARID1A 또는 MLL2에서의 LOF 돌연변이 상태와 무관하게 (PDX GXA 3011에서와 같이) 및 PI3K 경로의 구성성분의 돌연변이 상태와 무관하게 (PDX GXA-3069에서와 같이) p53에서 동형접합 돌연변이를 가졌다.
표 4: 환자-유래된 위암 모델의 성장에 대한 SoC 옥살리플라틴 + 파클리탁셀, 또는 실시예 1 + SoC의 조합물의 효과
Figure pct00205
유사하게, 2가지 이형접합 MLL3 기능 상실 돌연변이를 보유한 환자-유래된 폐 종양 모델 LXFE 937의 성장은 실시예 1을 폐암 SoC 겜시타빈 (0.9% NaCl 중에서 제제화되고 120 mpk 주1회 i.p 투여됨) + 시스플라틴 (0.9% NaCl 중에서 제제화되고 3.2 mpk 주1회 피하 투여됨)과 조합하여 처리한 후에 유의하게 억제되었다. 데이터는 표 5에 도시하였다.
표 5: 폐 환자-유래된 NSCLC 편평세포 암종 모델의 성장에 대한 표준 치료 (SoC) 겜시타빈 + 시스플라틴, 또는 실시예 1 + SoC의 조합물의 효과
Figure pct00206
유사하게, ARID1A 단백질을 발현하지 않고 PIK3CA 및 PTEN에서의 돌연변이를 보유한 환자 유래된 결장직장 종양 CXF 1034는 SoC 조합물 이리노테칸 히드로클로라이드 삼수화물 (0.9% NaCl 중에서 제제화되고 20 mpk Q7D IV 투여됨) + 옥살리플라틴 (5% 글루코스 중에서 제제화되고 8 mpk Q14D i.p.로 투여됨)과 함께 실시예 1로 처리할 때 유의하게 성장이 억제되었다. 데이터는 표 6에 도시하였다.
표 6: 환자-유래된 결장직장 암종 모델의 성장에 대한 표준 치료 (SoC) 이리노테칸 + 옥살리플라틴, 또는 실시예 1 + SoC의 조합물의 효과
Figure pct00207
결론적으로, 상기 기재된 결과는 SWI/SNF 복합체 및/또는 MLL 복합체 및/또는 PI3K 경로의 구성성분에서의 돌연변이 조합을 보유하는 난소암, 위암, 폐암 또는 결장직장암의 치료에서 EZH2 억제제, 예컨대 비제한적으로 실시예 1 또는 실시예 38의 단독 사용 및/또는 표준 치료 (SoC) 화학요법과의 조합 사용을 뒷받침하는 증거를 제공하였다.
바람직하게는 본 발명의 화합물은 다양한 경로에 의해 투여되는 제약 조성물로 제제화된다. 가장 바람직하게는, 이러한 조성물은 경구 투여용이다. 이러한 제약 조성물 및 그의 제조 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY (D. Troy, et al., eds., 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2005)를 참고한다.
환자에서 SoC 화합물에 대한 용량은 승인된 용법을 통해 투여되거나 또는 의사의 추천에 따라 달라질 수 있다. SoC 화합물에 대한 용법의 예는 예를 들어 다음과 같을 수 있다: 난소암의 경우, 카르보플라틴 + 파클리탁셀의 용량은 파클리탁셀 175 mg/㎡ IV 3주마다에 이어, 카르보플라틴 175 mg/㎡ IV 3주마다일 수 있다. 위암의 경우, 파클리탁셀 + 옥살리플라틴의 용량은 파클리탁셀 50 mg/㎡ IV 매주 및 옥살리플라틴 AUC 2 mg/mL 매주일 수 있다. 폐암의 경우, 겜시타빈 + 시스플라틴의 용량은 겜시타빈 1250 mg/㎡ IV 3주마다 + 시스플라틴 75 mg/㎡ IV 3주마다일 수 있다. 결장직장암의 경우, 이리노테칸 + 옥살리플라틴의 용량은 이리노테칸 125 mg/㎡ IV 매주 또는 350 mg/㎡ IV 3주마다 및 옥살리플라틴 85 mg/㎡ IV 2주마다일 수 있다. (SoC 처리 용량에 대한 참고는 http://www.cancertherapyadvisor.com/gastrointestinal-cancers/gastric-cancer-treatment-regimens/article/218159/에서도 확인할 수 있다).
본 발명의 EZH2 화합물은 전반적으로 광범위한 용량 범위에 대해 효과적이다. 예를 들어, 용량/일은 5000 mg/일 이하, 바람직하게는 약 100-2000 mg/일의 매일 범위 내에 있을 수 있고 하나 이상의 용량으로 투여된다. 그러나, 실제로 투여되는 화합물의 양은 치료할 상태, 선택된 투여 경로, 투여되는 실제 화합물 또는 화합물들, 개별 환자의 연령, 체중 및 반응, 및 환자 증상의 중증도를 비롯한 관련 상황에 따라 의사에 의해 결정될 것임을 이해할 것이다.

Claims (48)

  1. 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00208

    여기서
    X는 -CH2- 또는 -CH2-CH2-이고;
    Y'는 -NR4R5, -CH(CH3)-시클로헥실-4-일-N-메틸-N-메톡시에틸, 또는 -CH(CH3)-시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시, 2-프로폭시, 메톡시메틸, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시, 시클로프로필메톡시, 피라졸릴, 메틸피라졸릴, 트리아졸릴, 피롤리디닐, 테트라히드로푸라닐옥시 또는 모르폴리닐로 임의로 치환되고;
    R4는 N-메틸-N-메톡시에틸아미노, N-메틸-N-시클로프로필아미노 또는 아제티딘-1-일로 치환된 시클로헥스-4-일이고, 여기서 아제티딘-1-일은 메톡시, 에톡시, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시 또는 피라졸릴로 치환되고;
    R5는 메틸 또는 에틸이고;
    R6은 메틸 또는 클로로이다.
  2. 제1항에 있어서, X가 -CH2-인 화합물 또는 그의 염.
  3. 제1항에 있어서, X가 -CH2-CH2-인 화합물 또는 그의 염.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, Y'가 -CH(CH3)-시클로헥실-4-일-N-메틸-N-메톡시에틸 또는 -CH(CH3)-시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일이 메톡시, 2-프로폭시, 메톡시메틸, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시, 시클로프로필메톡시, 피라졸릴, 메틸피라졸릴, 트리아졸릴, 피롤리디닐, 테트라히드로푸라닐옥시 또는 모르폴리닐로 임의로 치환된 것인 화합물 또는 그의 염.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, Y'가 -CH(CH3)-시클로헥스-4-일-아제티딘-1-일이고, 여기서 아제티딘-1-일이 메톡시, 2-프로폭시, 메톡시메틸, 메톡시에톡시, 시클로프로필옥시, 시클로프로필메톡시, 피라졸릴, 메틸피라졸릴, 트리아졸릴, 피롤리디닐, 테트라히드로푸라닐옥시 또는 모르폴리닐로 임의로 치환된 것인 화합물 또는 그의 염.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, R6이 메틸인 화합물 또는 염.
  7. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, Y'가 -NR4R5인 화합물 또는 그의 염.
  8. 제1항, 제3항 및 제4항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 화합물.
    Figure pct00209
  9. 제8항에 있어서, 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-{(1R)-1-[4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]에틸}-3-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온 또는 그의 제약상 허용되는 염인 화합물.
  10. 제9항에 있어서, 5-[(4,6-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-3-일)메틸]-2-{(1R)-1-[트랜스-4-(3-메톡시아제티딘-1-일)시클로헥실]에틸}-3-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-4H-티에노[3,2-c]아제핀-4-온 또는 그의 제약상 허용되는 염인 화합물.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염 및 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는 제약 조성물.
  12. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염의 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 림프종, 횡문근양 종양, SWI/SNF 복합체, MLL 복합체 및 구성적 활성 PI3K 경로의 1종 이상의 구성성분이 결여되거나 그에 결함이 있는 종양, 육종, 다발성 골수종, 흑색종, 위장암, 결장직장암, 폐암, 신장암, 유방암, 난소암 및 전립선암으로 이루어진 군으로부터 선택된 암을 치료하는 방법.
  13. 제12항에 있어서, 암이 미만성 대 B-세포 림프종 및 여포성 림프종인 방법.
  14. 제12항 또는 제13항에 있어서, 암이 미만성 대 B-세포 림프종인 방법.
  15. 제12항에 있어서, 암이 SNF5가 결여된 횡문근양 종양인 방법.
  16. 제12항에 있어서, 암이 위암인 방법.
  17. 제12항에 있어서, 암이 난소암인 방법.
  18. 제12항에 있어서, 암이 다발성 골수종인 방법.
  19. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염을 카르보플라틴 및 파클리탁셀과 조합하여 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 난소암을 치료하는 방법.
  20. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염을 옥살리플라틴 및 파클리탁셀과 조합하여 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 위암을 치료하는 방법.
  21. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염을 겜시타빈 및 시스플라틴과 조합하여 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 폐암을 치료하는 방법.
  22. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염을 이리노테칸 및 옥살리플라틴과 조합하여 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 결장직장암을 치료하는 방법.
  23. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 요법에서 사용하기 위한 화합물 또는 그의 염.
  24. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 암의 치료에서 사용하기 위한 화합물 또는 그의 염.
  25. 제24항에 있어서, 암이 림프종, 횡문근양 종양, SWI/SNF 복합체, MLL 복합체 및 구성적 활성 PI3K 경로의 1종 이상의 구성성분이 결여되거나 그에 결함이 있는 종양, 육종, 다발성 골수종, 흑색종, 위장암, 결장직장암, 폐암, 신장암, 유방암, 난소암 및 전립선암으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 염.
  26. 제25항에 있어서, 암이 미만성 대 B-세포 림프종 또는 여포성 림프종인 화합물 또는 그의 염.
  27. 제25항 또는 제26항에 있어서, 암이 미만성 대 B-세포 림프종인 화합물 또는 그의 염.
  28. 제26항에 있어서, 암이 SNF5가 결여된 횡문근양 종양인 화합물 또는 그의 염.
  29. 제26항에 있어서, 암이 위암인 화합물 또는 그의 염.
  30. 제26항에 있어서, 암이 난소암인 화합물 또는 그의 염.
  31. 제26항에 있어서, 암이 다발성 골수종인 화합물 또는 그의 염.
  32. 난소암의 치료에서 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 사용하기 위한 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염 및 카르보플라틴 및 파클리탁셀을 포함하는 조합물.
  33. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 난소암의 치료에서 카르보플라틴 및 파클리탁셀과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 화합물 또는 그의 염.
  34. 난소암의 치료에서 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염 및 파클리탁셀과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 카르보플라틴.
  35. 난소암의 치료에서 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염 및 카르보플라틴과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 파클리탁셀.
  36. 위암의 치료에서 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 사용하기 위한 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염 및 옥살리플라틴 및 파클리탁셀을 포함하는 조합물.
  37. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 위암의 치료에서 옥살리플라틴 및 파클리탁셀과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 화합물 또는 그의 염.
  38. 위암의 치료에서 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염 및 파클리탁셀과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 옥살리플라틴.
  39. 위암의 치료에서 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염 및 옥살리플라틴과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 파클리탁셀.
  40. 폐암의 치료에서 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 사용하기 위한 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염 및 겜시타빈 및 시스플라틴을 포함하는 조합물.
  41. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 폐암의 치료에서 겜시타빈 및 시스플라틴과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 화합물 또는 그의 염.
  42. 폐암의 치료에서 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염 및 시스플라틴과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 겜시타빈.
  43. 폐암의 치료에서 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염 및 겜시타빈과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 시스플라틴.
  44. 결장직장암의 치료에서 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 사용하기 위한 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염 및 이리노테칸 및 옥살리플라틴을 포함하는 조합물.
  45. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 결장직장암의 치료에서 이리노테칸 및 옥살리플라틴과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 화합물 또는 그의 염.
  46. 결장직장암의 치료에서 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염 및 옥살리플라틴과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 이리노테칸.
  47. 결장직장암의 치료에서 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염 및 이리노테칸과 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 사용하기 위한 옥살리플라틴.
  48. 제32항 내지 제47항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 조합물, 옥살리플라틴, 겜시타빈, 파클리탁셀, 화합물 또는 그의 염, 이리노테칸, 시스플라틴, 또는 카르보플라틴.
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