JP7465272B2 - Ｃｓｆ１ｒ／ｃｃｒ２多特異性抗体 - Google Patents

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Description

関連出願
本出願は、２０１８年９月２７日出願の米国仮出願第６２／７３７，７４２号、２０１８年１０月２４日出願の米国仮出願第６２／７５０，１６３号、および２０１８年１２月７日出願の米国仮出願第６２／７７６，８２０号の優先権を主張し、当該出願の各々の全内容は、これにより参照により本明細書に組み込まれる。
配列リスト
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出され、その全体がこれにより参照により本明細書に組み込まれる配列リストを含有する。２０１９年９月２７日に作出された前記ＡＳＣＩＩ複製は、Ｅ２０７０－７０１８ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔと命名され、７１１，０２９バイトの大きさである。
腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ：ｔｕｍｏｒ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ）または骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ：ｍｙｅｌｏｉｄ ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌ）を標的とする多特異性分子、およびそれを使用する方法が開示される。
本開示は、特に、（ｉ）第１の免疫抑制性骨髄性細胞（ＩＭＣ：ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｃｅｌｌ）結合部分（例えば、第１の腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）結合部分；または第１の骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）結合部分）（例えば、抗体分子）；および（ｉｉ）第２のＩＭＣ結合部分（例えば、第１のＴＡＭ結合部分；または第２のＭＤＳＣ結合部分）（例えば、抗体分子）を含む新規多特異性分子であって、第１および第２のＩＭＣ（例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣ）結合部分が、異なる、新規多特異性分子に関する。理論に束縛されるものではないが、本明細書で開示される多特異性分子は、ＴＡＭおよび／またはＭＤＳＣを枯渇させることが予想される。したがって、特に、上記の部分を含む多特異性分子（例えば、多特異性抗体分子）、それをコードする核酸、上記の分子を産生する方法、および上記の分子を使用してがんを処置する方法が、本明細書で提供される。
一態様では、（ｉ）第１の免疫抑制性骨髄性細胞（ＩＭＣ）結合部分（例えば、第１の腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）結合部分；または第１の骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）結合部分）（例えば、抗体分子）；および（ｉｉ）第２のＩＭＣ結合部分（例えば、第２のＴＡＭ結合部分；または第２のＭＤＳＣ結合部分）（例えば、抗体分子）を含む、単離された多特異性分子、例えば、二特異性分子であって、第１および第２のＩＭＣ（例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣ）結合部分が、異なる、多特異性分子が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、第１および第２のＩＭＣ（例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣ）結合部分は、異なるエピトープに結合する。一部の実施形態では、第１および第２のＩＭＣ（例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣ）結合部分は、異なる抗原に結合する。
一部の実施形態では、第１のＩＭＣ結合部分は、第１のＭＤＳＣ結合部分であり；第２のＩＭＣ結合部分は、第２のＭＤＳＣ結合部分である。一部の実施形態では、第１のＩＭＣ結合部分は、第１のＴＡＭ結合部分であり；第２のＩＭＣ結合部分は、第２のＴＡＭ結合部分である。一部の実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、ＣＤ８６、ＣＤ１６３、ＣＸ３ＣＲ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ２０４、ＣＤ５２、葉酸受容体ベータまたはＰＤ－Ｌ１に結合し；第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２、ＣＤ８６、ＣＤ１６３、ＣＸ３ＣＲ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ２０４、ＣＤ５２、葉酸受容体ベータまたはＰＤ－Ｌ１に結合する。一部の実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２またはＰＤ－Ｌ１（例えば、ヒトＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２またはＰＤ－Ｌ１）に結合し、第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２またはＰＤ－Ｌ１（例えば、ヒトＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２またはＰＤ－Ｌ１）に結合する。一部の実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合し、第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合する。一部の実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合し、第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＸＣＲ２に結合する。一部の実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合し、第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＸＣＲ２に結合する。一部の実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合し、第２のＴＡＭ結合部分は、ＰＤ－Ｌ１に結合する。一部の実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合し、第２のＴＡＭ結合部分は、ＰＤ－Ｌ１に結合する。一部の実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＸＣＲ２に結合し、第２のＴＡＭ結合部分は、ＰＤ－Ｌ１に結合する。
一部の実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２またはＰＤ－Ｌ１に約１０ｎＭ未満、より典型的には、１０～１００ｐＭの解離定数で結合し；第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２またはＰＤ－Ｌ１に約１０ｎＭ未満、より典型的には、１０～１００ｐＭの解離定数で結合する。一部の実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２またはＰＤ－Ｌ１上のコンフォメーションエピトープまたは直鎖状エピトープに結合し；第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２またはＰＤ－Ｌ１上のコンフォメーションエピトープまたは直鎖状エピトープに結合する。
一部の実施形態では、多特異性分子は、少なくとも２つの非隣接ポリペプチド鎖を含む。一部の実施形態では、第１のＩＭＣ結合部分は、第１の抗ＩＭＣ抗体分子を含み、かつ／または第２のＩＭＣ結合部分は、第２の抗ＩＭＣ抗体分子を含む。一部の実施形態では、第１の抗ＩＭＣ抗体分子および第２の抗ＩＭＣ抗体分子は、独立して、全長抗体（例えば、少なくとも１つ、好ましくは２つの完全な重鎖および少なくとも１つ、好ましくは２つの完全な軽鎖を含む抗体）または抗原結合性断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体またはディアボディ（ｄＡｂ））である。
一部の実施形態では、第１の抗ＩＭＣ抗体分子および／または第２の抗ＩＭＣ抗体分子は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４またはその断片から選択される重鎖定常領域を含む。
一部の実施形態では、第１の抗ＩＭＣ抗体分子および／または第２の抗ＩＭＣ抗体分子は、カッパもしくはラムダの軽鎖定常領域またはその断片から選択される軽鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、第１の抗ＩＭＣ抗体分子は、カッパ軽鎖定常領域またはその断片を含み、第２の抗ＩＭＣ抗体分子は、ラムダ軽鎖定常領域またはその断片を含む。一部の実施形態では、第１の抗ＩＭＣ抗体分子は、ラムダ軽鎖定常領域またはその断片を含み、第２の抗ＩＭＣ抗体分子は、カッパ軽鎖定常領域またはその断片を含む。一部の実施形態では、第１の抗ＩＭＣ抗体分子および第２の抗ＩＭＣ抗体分子は、共通の軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、多特異性分子は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４の重鎖定常領域、特に、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４の重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）をさらに含む。一部の実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）は、第１の抗ＩＭＣ抗体分子および第２の抗ＩＭＣ抗体分子のうちの１つまたは両方に連結、例えば、共有結合される。一部の実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）は、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能または補体機能のうちの１つまたは複数を増大または減少するように変更、例えば、変異誘発される。一部の実施形態では、第１および第２の重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）の境界面は、例えば、非操作境界面と比較して、二量体化を増大または減少するように変更、例えば、変異誘発される。一部の実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）の二量体化は、第１および第２のＦｃ領域のＦｃ境界面に、例えば、非操作境界面と比較して、ヘテロ多量体：ホモ多量体のより大きな比が形成されるような、腔－突起部の対（「ノブ・イン・ホール（ｋｎｏｂ－ｉｎ－ａ ｈｏｌｅ）」）、静電相互作用または鎖交換のうちの１つまたは複数を提供することによって向上される。一部の実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）は、Ｅｕ番号付けシステムに基づいて番号付けると、例えば、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域の３４７、３４９、３５０、３５１、３６６、３６８、３７０、３９２、３９４、３９５、３９７、３９８、３９９、４０５、４０７または４０９のうちの１つまたは複数から選択される位置におけるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）は、Ｅｕ番号付けシステムに基づいて番号付けると、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡもしくはＹ４０７Ｖ（例えば、腔またはホールに対応する）またはＴ３６６Ｗ（例えば、突起部またはノブに対応する）から選択されるアミノ酸置換またはその組合せを含む。
一部の実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）は、天然に存在する重鎖定常領域と比較して、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能または補体機能のうちの１つまたは複数を増大または減少する１つまたは複数の変異を含む。一部の実施形態では、第１の抗ＩＭＣ抗体分子は、第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＦｃ領域）を含み、第２の抗ＩＭＣ抗体分子は、第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＦｃ領域）を含み、第１の重鎖定常領域は、天然に存在する重鎖定常領域と比較して、第１の重鎖定常領域と第２の重鎖定常領域とのヘテロ二量体化を増大する１つまたは複数の変異を含み、かつ／または第２の重鎖定常領域は、天然に存在する重鎖定常領域と比較して、第２の重鎖定常領域と第１の重鎖定常領域とのヘテロ二量体化を増大する１つまたは複数の変異を含む。一部の実施形態では、第１および第２の重鎖定常領域（例えば、第１および第２のＦｃ領域）は、例えば、天然に存在する重鎖定常領域と比較して、ヘテロ多量体：ホモ多量体のより大きな比が形成されるような、腔－突起部の対（「ノブ・イン・ホール）」）、静電相互作用または鎖交換のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、第１および／または第２の重鎖定常領域（例えば、第１および／または第２のＦｃ領域、例えば、第１および／または第２のＩｇＧ１ Ｆｃ領域）は、Ｅｕ番号付けシステムに基づいて番号付けると、３４７、３４９、３５０、３５１、３６６、３６８、３７０、３９２、３９４、３９５、３９７、３９８、３９９、４０５、４０７または４０９のうちの１つまたは複数から選択される位置におけるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、第１および／または第２の重鎖定常領域（例えば、第１および／または第２のＦｃ領域、例えば、第１および／または第２のＩｇＧ１ Ｆｃ領域）は、Ｅｕ番号付けシステムに基づいて番号付けると、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７ＶもしくはＹ３４９Ｃ（例えば、腔またはホールに対応する）またはＴ３６６ＷもしくはＳ３５４Ｃ（例えば、突起部またはノブに対応する）から選択されるアミノ酸置換またはその組合せを含む。
一部の実施形態では、多特異性分子は、リンカー、例えば、第１の抗ＩＭＣ抗体分子と第２の抗ＩＭＣ抗体分子との間、第１の抗ＩＭＣ抗体分子と重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）との間、または第２の抗ＩＭＣ抗体分子と重鎖定常領域との間のうちの１つまたは複数の間のリンカーをさらに含む。一部の実施形態では、リンカーは、切断性リンカー、非切断性リンカー、ペプチドリンカー、フレキシブルリンカー、リジッドリンカー、ヘリックスリンカーまたは非ヘリックスリンカーから選択される。一部の実施形態では、リンカーは、ペプチドリンカーである。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、ＧｌｙおよびＳｅｒを含む。
一部の実施形態では、重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）は、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ：ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）を誘導する。
一部の実施形態では、第１または第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号４８、配列番号６６もしくは配列番号６９の重鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号４８、配列番号６６もしくは配列番号６９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；かつ／または配列番号５０、配列番号６７もしくは配列番号７０の軽鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号５０、配列番号６７もしくは配列番号７０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子は、配列番号４８、配列番号６６もしくは配列番号６９、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号４８、配列番号６６もしくは配列番号６９のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の重鎖可変領域配列を含み；かつ／または配列番号５０、配列番号６７もしくは配列番号７０、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号５０、配列番号６７もしくは配列番号７０のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の軽鎖可変領域配列を含む。
一部の実施形態では、第１または第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号４４、配列番号５４、配列番号５９、配列番号６２、配列番号６４の重鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号４４、配列番号５４、配列番号５９、配列番号６２、配列番号６４のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；かつ／または配列番号４５、配列番号５７、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６５の軽鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号４５、配列番号５７、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６５のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ＣＣＲ２に結合する抗体分子は、配列番号４４、配列番号５４、配列番号５９、配列番号６２、配列番号６４、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号４４、配列番号５４、配列番号５９、配列番号６２、配列番号６４のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の重鎖可変領域配列を含み；かつ／または配列番号４５、配列番号５７、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６５、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号４５、配列番号５７、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６５のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の軽鎖可変領域配列を含む。
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号４４の重鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号４４のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；かつ／または配列番号４５の軽鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号４５のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号４８の重鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号４８のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；かつ／または配列番号５０の軽鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号５０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含む。
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号５４の重鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号５４のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；かつ／または配列番号５７の軽鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号５７のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６６の重鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号６６のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；かつ／または配列番号６７の軽鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号６７のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含む。
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号５４の重鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号５４のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；かつ／または配列番号５７の軽鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号５７のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６９の重鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号６９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；かつ／または配列番号７０の軽鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号７０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含む。
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号５９の重鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号５９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；かつ／または配列番号６０の軽鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号６０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６６の重鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号６６のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；かつ／または配列番号６７の軽鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号６７のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含む。
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号５９の重鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号５９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；かつ／または配列番号６０の軽鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号６０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６９の重鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号６９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；かつ／または配列番号７０の軽鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号７０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含む。
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号６２の重鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号６２のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；かつ／または配列番号６３の軽鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号６３のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６６の重鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号６６のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；かつ／または配列番号６７の軽鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号６７のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含む。
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号６２の重鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号６２のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；かつ／または配列番号６３の軽鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号６３のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６９の重鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号６９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；かつ／または配列番号７０の軽鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号７０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含む。
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号６４の重鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号６４のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；かつ／または配列番号６５の軽鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号６５のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６６の重鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号６６のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；かつ／または配列番号６７の軽鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号６７のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含む。
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号６４の重鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号６４のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；かつ／または配列番号６５の軽鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号６５のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６９の重鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号６９のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；かつ／または配列番号７０の軽鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号７０のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含む。
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号４４、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号４４のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の重鎖可変領域配列を含み；かつ／または配列番号４５、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号４５のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の軽鎖可変領域配列を含み；第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号４８、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号４８のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の重鎖可変領域配列を含み；かつ／または配列番号５０、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号５０のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の軽鎖可変領域配列を含む。
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号５４、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号５４のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の重鎖可変領域配列を含み；かつ／または配列番号５７、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号５７のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の軽鎖可変領域配列を含み；第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６６、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号６６のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の重鎖可変領域配列を含み；かつ／または配列番号６７、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号６７のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の軽鎖可変領域配列を含む。
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号５４、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号５４のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の重鎖可変領域配列を含み；かつ／または配列番号５７、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号５７のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の軽鎖可変領域配列を含み；第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６９、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号６９のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の重鎖可変領域配列を含み；かつ／または配列番号７０、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号７０のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の軽鎖可変領域配列を含む。
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号５９、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号５９のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の重鎖可変領域配列を含み；かつ／または配列番号６０、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号６０のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の軽鎖可変領域配列を含み；第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６６、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号６６のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の重鎖可変領域配列を含み；かつ／または配列番号６７、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号６７のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の軽鎖可変領域配列を含む。
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号５９、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号５９のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の重鎖可変領域配列を含み；かつ／または配列番号６０、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号６０のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の軽鎖可変領域配列を含み；第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６９、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号６９のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の重鎖可変領域配列を含み；かつ／または配列番号７０、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号７０のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の軽鎖可変領域配列を含む。
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号６２、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号６２のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の重鎖可変領域配列を含み；かつ／または配列番号６３、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号６３のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の軽鎖可変領域配列を含み；第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６６、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号６６のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の重鎖可変領域配列を含み；かつ／または配列番号６７、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号６７のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の軽鎖可変領域配列を含む。
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号６２、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号６２のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の重鎖可変領域配列を含み；かつ／または配列番号６３、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号６３のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の軽鎖可変領域配列を含み；第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６９、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号６９のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の重鎖可変領域配列を含み；かつ／または配列番号７０、それと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号７０のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の軽鎖可変領域配列を含む。
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号６４、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号６４のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の重鎖可変領域配列を含み；かつ／または配列番号６５、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号６５のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の軽鎖可変領域配列を含み；第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６６、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号６６のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の重鎖可変領域配列を含み；かつ／または配列番号６７、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号６７のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の軽鎖可変領域配列を含む。
一実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ＣＣＲ２に結合する抗体分子であり、配列番号６４、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号６４のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の重鎖可変領域配列を含み；かつ／または配列番号６５、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号６５のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の軽鎖可変領域配列を含み；第２のＴＡＭ結合部分は、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子であり、配列番号６９、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号６９のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の重鎖可変領域配列を含み；かつ／または配列番号７０、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号７０のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の軽鎖可変領域配列を含む。
一部の実施形態では、第１または第２のＴＡＭ結合部分は、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体分子であり、配列番号１０９、配列番号１１１もしくは配列番号１１３の重鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号１０９、配列番号１１１もしくは配列番号１１３のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含み；かつ／または配列番号１１０、配列番号１１２もしくは配列番号１１４の軽鎖可変領域配列からの１、２もしくは３つのＣＤＲ、または近縁のＣＤＲ、例えば、配列番号１１０、配列番号１１２もしくは配列番号１１４のＣＤＲからの少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体分子は、配列番号１０９、配列番号１１１もしくは配列番号１１３、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号１０９、配列番号１１１もしくは配列番号１１３のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の重鎖可変領域配列を含み；かつ／または配列番号１１０、配列番号１１２もしくは配列番号１１４、またはそれと実質的に同一の（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号１１０、配列番号１１２もしくは配列番号１１４のアミノ酸配列に対する少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する）アミノ酸配列の軽鎖可変領域配列を含む。
一部の実施形態では、（ｉ）第１のＩＭＣ結合部分は、第１の抗原（例えば、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、ＣＤ８６、ＣＤ１６３、ＣＸ３ＣＲ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ２０４、ＣＤ５２、葉酸受容体ベータまたはＰＤ－Ｌ１）に一価性で結合し、かつ／または（ｉｉ）第２のＩＭＣ結合部分は、第２の抗原（例えば、ＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２、ＣＤ８６、ＣＤ１６３、ＣＸ３ＣＲ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ２０４、ＣＤ５２、葉酸受容体ベータまたはＰＤ－Ｌ１）に一価性で結合し、第１の抗原は、第２の抗原とは異なる。
一部の実施形態では、（ｉ）多特異性分子は、第１の抗原（例えば、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、ＣＤ８６、ＣＤ１６３、ＣＸ３ＣＲ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ２０４、ＣＤ５２、葉酸受容体ベータまたはＰＤ－Ｌ１）に一価性で結合し、かつ／または（ｉｉ）多特異性分子は、第２の抗原（例えば、ＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２、ＣＤ８６、ＣＤ１６３、ＣＸ３ＣＲ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ２０４、ＣＤ５２、葉酸受容体ベータまたはＰＤ－Ｌ１）に一価性で結合し、第１の抗原は、第２の抗原とは異なる。
一部の実施形態では、（ｉ）多特異性分子は、第２の抗原の存在下で第１の抗原を阻害し、任意選択により、細胞が、細胞表面上で第１の抗原および第２の抗原の両方を発現する場合、多特異性分子は、細胞において第１の抗原の活性を、例えば、少なくとも４０、５０、６０、７０、８０もしくは９０％低減し、かつ／または（ｉｉ）多特異性分子は、第２の抗原の非存在下で第１の抗原を阻害しないか、または実質的に阻害せず、任意選択により、細胞が、細胞表面上で第１の抗原を発現するが、第２の抗原を発現しない場合、多特異性分子は、第１の抗原の活性を低減しないか、または第１の抗原の活性を２、４、６、８、１０もしくは１５％以下しか低減しない。
一部の実施形態では、（ｉ）多特異性分子は、第１の抗原の存在下で第２の抗原を阻害し、任意選択により、細胞が、細胞表面上で第１の抗原および第２の抗原の両方を発現する場合、多特異性分子は、細胞において第２の抗原の活性を、例えば、少なくとも４０、５０、６０、７０、８０もしくは９０％低減し、かつ／または（ｉｉ）多特異性分子は、第１の抗原の非存在下で第２の抗原を阻害しないか、または実質的に阻害せず、任意選択により、細胞が、細胞表面上で第２の抗原を発現するが、第１の抗原を発現しない場合、多特異性分子は、第２の抗原の活性を低減しないか、または第２の抗原の活性を２、４、６、８、１０もしくは１５％以下しか低減しない。
一部の実施形態では、多特異性分子は、１つまたは複数の追加の結合部分（例えば、第３の結合部分、第４の結合部分）をさらに含む（例えば、三特異性または四特異性分子）。一部の実施形態では、多特異性分子は、１つまたは複数の追加の結合部分（例えば、第３の結合部分、第４の結合部分）をさらに含む（例えば、三特異性または四特異性分子）。一部の実施形態では、多特異性分子は、第３のＴＡＭ結合部分（例えば、抗体分子）を含み、第３のＴＡＭ結合部分は、第１および第２のＴＡＭ結合部分とは異なる。一部の実施形態では、第１のＴＡＭ結合部分は、ヒトＣＳＦ１Ｒに結合し、第２のＴＡＭ結合部分は、ヒトＣＣＲ２に結合し、第３のＴＡＭ結合部分は、ＣＸＣＲ２に結合する。
一部の実施形態では、多特異性分子は、腫瘍標的化部分である第３の結合部分（例えば、抗体分子）を含む。一部の実施形態では、腫瘍標的化部分は、ＰＤ－Ｌ１、メソテリン、ＣＤ４７、ガングリオシド（ｇａｎｇｌｏｓｉｄｅ）２（ＧＤ２：ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ ２）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ：ｐｒｏｓｔａｔｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ａｎｔｉｇｅｎ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ：ｐｒｏｓｔａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｅｍｂｒａｎｅ ａｎｔｉｇｅｎ）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ：ｐｒｏｓｔａｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ：ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ）、Ｒｏｎキナーゼ、ｃ－Ｍｅｔ、未成熟ラミニン受容体、ＴＡＧ－７２、ＢＩＮＧ－４、カルシウムにより活性化された塩素イオンチャネル２、サイクリン－Ｂ１、９Ｄ７、Ｅｐ－ＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、ＳＡＰ－１、サバイビン、ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＬＡＧＥ－１、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ－２、Ｍｅｌａｎ－Ａ／ＭＡＲＴ－１、Ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１／－２、ＭＣ１Ｒ、β－カテニン、ＢＲＣＡ１／２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、フィブロネクチン、ｐ５３、Ｒａｓ、ＴＧＦ－Ｂ受容体、ＡＦＰ、ＥＴＡ、ＭＡＧＥ、ＭＵＣ－１、ＣＡ－１２５、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、β－カテニン、ＣＤＫ４、ＣＤＣ２７、ＣＤ４７、αアクチニン－４、ＴＲＰ１／ｇｐ７５、ＴＲＰ２、ｇｐ１００、Ｍｅｌａｎ－Ａ／ＭＡＲＴ１、ガングリオシド、ＷＴ１、ＥｐｈＡ３、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ：Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）、ＣＤ２０、ＭＡＲＴ－２、ＭＡＲＴ－１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＭ１、ＭＵＭ２、ＭＵＭ３、ＮＡ８８－１、ＮＰＭ、ＯＡ１、ＯＧＴ、ＲＣＣ、ＲＵＩ１、ＲＵＩ２、ＳＡＧＥ、ＴＲＧ、ＴＲＰ１、ＴＳＴＡ、葉酸受容体アルファ、Ｌ１－ＣＡＭ、ＣＡＩＸ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ｇｐＡ３３、ＧＤ３、ＧＭ２、ＶＥＧＦＲ、インテグリン（Ｉｎｔｅｒｇｒｉｎｓ）（インテグリンアルファＶベータ３、インテグリンアルファ５ベータ１）、炭水化物（Ｌｅ）、ＩＧＦ１Ｒ、ＥＰＨＡ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２またはＲＡＮＫＬに結合する。
一部の実施形態では、多特異性分子は、第１および第２の非隣接ポリペプチドを含む二特異性分子であり、（ｉ）第１のポリペプチドは、例えば、Ｎ～Ｃの向きで、第１のＴＡＭ結合部分（例えば、第１のＴＡＭ抗原、例えば、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２またはＰＤ－Ｌ１に結合する、例えば、抗体分子（例えば、第１の抗原ドメインの第１の部、例えば、Ｆａｂ分子の第１のＶＨ－ＣＨ１））、およびそれが、任意選択によりリンカーを介して、接続する、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとの間の会合を促進する第１のドメイン（例えば、第１の免疫グロブリン定常ドメイン（例えば、本明細書で説明する第１のＦｃ分子））を含み；（ｉｉ）第２のポリペプチドは、例えば、Ｎ～Ｃの向きで、第２のＴＡＭ結合部分（例えば、第２のＴＡＭ抗原、例えば、ＣＣＲ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＸＣＲ２またはＰＤ－Ｌ１に結合する、例えば、抗体分子、例えば、ｓｃＦｖ）、およびそれが、任意選択によりリンカーを介して、接続する、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとの間の会合を促進する第２のドメイン（例えば、第２の免疫グロブリン定常ドメイン（例えば、本明細書で説明する第２のＦｃ分子））を含み；かつ（ｉｉｉ）第３のポリペプチドは、例えば、Ｎ～Ｃの向きで、第１のＴＡＭ抗原に結合する第１の抗原ドメインの第２の部、例えば、Ｆａｂの第１のＶＬ－ＣＬを含み、例えば、第３のポリペプチドは、第１のポリペプチドと非共有結合し；（ｉｖ）第４のポリペプチドは、例えば、Ｎ～Ｃの向きで、第２のＴＡＭ抗原に結合する第２の抗原ドメインの第２の部、例えば、Ｆａｂの第２のＶＬ－ＣＬを含み、例えば、第４のポリペプチドは、第２のポリペプチドと非共有結合する。一部の実施形態では、第１および第２のポリペプチドは、ホモまたはヘテロ二量体である。
一部の実施形態では、多特異性分子は、二特異性分子であり、
（ｉ）第１のＴＡＭ結合部分（例えば、第１のＴＡＭ抗原、例えば、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２またはＣＸＣＲ２に結合する結合部分）は、第１および第２の非隣接ポリペプチドを含み、
（ｉｉ）第２のＴＡＭ結合部分（例えば、第２のＴＡＭ抗原、例えば、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２またはＣＸＣＲ２に結合する結合部分）は、第３および第４の非隣接ポリペプチドを含み、
（ａ）第１のポリペプチドは、例えば、Ｎ～Ｃの向きで、第１のＶＨ、第１のＣＨ１、およびそれが、任意選択によりリンカーを介して、接続する、第１のポリペプチドと第３のポリペプチドとの間の会合を促進する第１のドメイン（例えば、第１のＦｃ領域）を含み、
（ｂ）第２のポリペプチドは、例えば、Ｎ～Ｃの向きで、第１のＶＬおよび第１のＣＬを含み、
（ｃ）第３のポリペプチドは、例えば、Ｎ～Ｃの向きで、第２のＶＨ、第２のＣＨ１、およびそれが、任意選択によりリンカーを介して、接続する、第１のポリペプチドと第３のポリペプチドとの間の会合を促進する第２のドメイン（例えば、第２のＦｃ領域）を含み、
（ｄ）第４のポリペプチドは、例えば、Ｎ～Ｃの向きで、第２のＶＬおよび第２のＣＬを含む。一部の実施形態では、第１および第２のドメイン（例えば、第１および第２のＦｃ領域）は、ホモまたはヘテロ二量体を形成する。
一態様では、本発明は、（ｉ）抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）および（ｉｉ）抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）を含む単離された多特異性、例えば、二特異性分子を提供する。理論に束縛されるものではないが、抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞、またはＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合し得る。例示的なＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞には、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）および骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）が含まれるが、これらに限定されない。例示的なＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞には、組織常在性マクロファージ（例えば、クッパー細胞）およびランゲルハンス細胞が含まれるが、これらに限定されない。例示的なＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞には、Ｔ細胞（例えば、活性化Ｔ細胞、例えば、活性化ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞）、ＮＫ細胞および好中球が含まれるが、これらに限定されない。理論に束縛されるものではないが、抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞（例えば、組織常在性マクロファージ（例えば、クッパー細胞）またはランゲルハンス細胞）、またはＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞（例えば、活性化Ｔ細胞またはＮＫ細胞）と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞（例えば、腫瘍原性促進性ＴＡＭまたはＭＤＳＣ）に優先的に結合し得る。
理論に束縛されるものではないが、腫瘍原性促進性腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）および骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）は、ＣＳＦ１ＲおよびＣＣＲ２の両方を発現する。対照的に、クッパー細胞および他の組織マクロファージは、ＣＳＦ１Ｒを発現するが、ＣＣＲ２を発現しない。一実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２多特異性抗体分子は、腫瘍内Ｍ－ＭＤＳＣおよびＭ２マクロファージに選択的に結合する。一実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２多特異性抗体分子は、腫瘍において免疫抑制性骨髄性細胞を低減し、かつ／または細胞傷害性Ｔ細胞の浸潤を増大する。一実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２多特異性抗体分子は、ＴＡＭを枯渇させるが、健康な肝クッパー細胞を残す。一実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２多特異性抗体分子は、腫瘍に選択的に局在化して、全身性免疫毒性を低減する。
一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２多特異性分子は、それが標的細胞に結合した場合、標的細胞の抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ：ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）を誘導し得る。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２多特異性分子は、腫瘍微小環境において免疫抑制性骨髄性細胞（例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣ）に優先的に結合し、かつその数を低減し、一方で、恒常性骨髄性細胞（例えば、組織常在性マクロファージ（例えば、クッパー細胞））および他の抗腫瘍免疫細胞（例えば、活性化Ｔ細胞およびＮＫ細胞）を残し得る。恒常性骨髄性細胞の枯渇は、部分的に、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体治療を受容する患者における有害事象の原因であり得る。
一部の実施形態では、多特異性分子は、以下の特性：
（ｉ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１について実施例２で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞、またはＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合し、例えば、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合が、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞、またはＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合よりも少なくとも２、４、６、８、１０、１５、２０または２５倍強い；
（ｉｉ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１について実施例２で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合し、例えば、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合についてのＥＣ５０が、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞への結合についてのＥＣ５０の６０、５０、４０、３０、２０または１０％以下である；
（ｉｉｉ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１について実施例２で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、ＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合し、例えば、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合についてのＥＣ５０が、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合についてのＥＣ５０の５０、４０、３０、２０、１０または５％以下である；
（ｉｖ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図５について実施例６で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好中球、組織常在性マクロファージ（例えば、クッパー細胞）またはランゲルハンス細胞と比較して、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）または骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）に優先的に結合し、例えば、多特異性分子のＴＡＭまたはＭＤＳＣへの結合が、多特異性分子のＴ細胞、ＮＫ細胞、好中球、組織常在性マクロファージ（例えば、クッパー細胞）またはランゲルハンス細胞への結合よりも少なくとも２、４、６、８、１０、１５、２０または２５倍強い；
（ｖ）例えば、トランズウェルプレート遊走アッセイを使用して測定したとき、例えば、図２について実施例３で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、単球遊走、例えば単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ１）誘導単球遊走を阻害し、例えば、ＭＣＰ１誘導単球遊走を少なくとも４０、５０、６０または７０％低減する；
（ｖｉ）例えば、細胞増殖ＭＴＴアッセイを使用して測定したとき、例えば、図３Ｂについて実施例４で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、マクロファージ、例えば、骨髄系由来マクロファージの増殖、例えば、骨髄系由来マクロファージのＣＳＦ－１誘導増殖を阻害し、例えば、骨髄系由来マクロファージのＣＳＦ－１誘導増殖を少なくとも５０、６０、７０または８０％低減する；
（ｖｉｉ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図４について実施例５で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、単球、例えば、骨髄系由来単球の分化、例えば、骨髄系由来単球のＣＳＦ－１誘導分化を阻害しないか、または実質的に阻害せず、例えば、骨髄系由来単球のＣＳＦ－１誘導分化を２、４、６、８または１０％以下しか低減しない；
（ｖｉｉｉ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図６について実施例７で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、ｉｎ ｖｉｖｏで、抑制性骨髄性細胞、例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣを枯渇させ、例えば、抑制性骨髄性細胞、例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣの数を少なくとも８０、８５、９０、９５、９９または９９．５％低減する；
（ｉｘ）例えば、免疫組織化学分析を使用して測定したとき、例えば、図７Ｂおよび７Ｄについて実施例８で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、ｉｎ ｖｉｖｏで、組織常在性マクロファージ、例えば、クッパー細胞を枯渇させないか、または実質的に枯渇させず、例えば、組織常在性マクロファージ、例えば、クッパー細胞の数を４、６、８、１０または１５％以下しか低減しない；
（ｘ）例えば、フローサイトメトリー分析または免疫組織化学分析を使用して測定したとき、例えば、図２１について説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、ＴＡＭ上でのＣＤ８６またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増大する；
（ｘｉ）例えば、細胞生存率ＭＴＴアッセイを使用して測定したとき、例えば、図８Ａについて実施例９で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞のＣＳＦ－１依存細胞生存を阻害しないか、または実質的に阻害せず、例えば、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞のＣＳＦ－１依存細胞生存を５、１０または１５％以下しか低減しない；
（ｘｉｉ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図９について実施例１０で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、ｉｎ ｖｉｖｏでＣＤ８＋Ｔ細胞腫瘍浸潤を増大し、例えば、腫瘍におけるＣＤ３＋Ｔ細胞中のＣＤ８＋Ｔ細胞％を少なくとも１．５、２または２．５倍増大する；
（ｘｉｉｉ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１０Ａについて実施例１１で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、ｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍におけるＴｒｅｇ頻度を低減し、例えば、腫瘍におけるＴｒｅｇ頻度を少なくとも１５、２０、２５または３０％低減する；
（ｘｉｖ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１０Ｂについて実施例１１で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、ｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍におけるＣＤ８＋Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比を増大し、例えば、腫瘍におけるＣＤ８＋Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比を少なくとも２．５、３、３．５、４または４．５倍増大する；または
（ｘｖ）例えば、図１１Ａおよび１１Ｂについて実施例１２、または図２３について実施例１９で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、腫瘍成長を低減し、腫瘍保有動物の生存を増大し、かつ／または抗腫瘍免疫メモリーを向上させる
のうちの１つまたは複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３個またはそれよりも多く）を有する。
一部の実施形態では、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１について実施例２で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞、またはＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合し、例えば、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合は、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞、またはＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合よりも少なくとも２、４、６、８、１０、１５、２０または２５倍強い。
一部の実施形態では、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１について実施例２で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合し、例えば、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合についてのＥＣ５０は、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞への結合についてのＥＣ５０の６０、５０、４０、３０、２０または１０％以下である。
一部の実施形態では、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１について実施例２で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合し、例えば、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合についてのＥＣ５０は、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合についてのＥＣ５０の５０、４０、３０、２０、１０または５％以下である。
一部の実施形態では、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図５について実施例６で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好中球、組織常在性マクロファージ（例えば、クッパー細胞）またはランゲルハンス細胞と比較して、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）または骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）に優先的に結合し、例えば、多特異性分子のＴＡＭまたはＭＤＳＣへの結合は、多特異性分子のＴ細胞、ＮＫ細胞、好中球、組織常在性マクロファージ（例えば、クッパー細胞）またはランゲルハンス細胞への結合よりも少なくとも２、４、６、８、１０、１５、２０または２５倍強い。
一部の実施形態では、例えば、トランズウェルプレート遊走アッセイを使用して測定したとき、例えば、図２について実施例３で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、単球遊走、例えば単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ１）誘導単球遊走を阻害し、例えば、ＭＣＰ１誘導単球遊走を少なくとも４０、５０、６０または７０％低減する。
一部の実施形態では、例えば、細胞増殖ＭＴＴアッセイを使用して測定したとき、例えば、図３Ｂについて実施例４で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、マクロファージ、例えば、骨髄系由来マクロファージの増殖、例えば、骨髄系由来マクロファージのＣＳＦ－１誘導増殖を阻害し、例えば、骨髄系由来マクロファージのＣＳＦ－１誘導増殖を少なくとも５０、６０、７０または８０％低減する。
一部の実施形態では、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図４について実施例５で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、単球、例えば、骨髄系由来単球の分化、例えば、骨髄系由来単球のＣＳＦ－１誘導分化を阻害しないか、または実質的に阻害せず、例えば、骨髄系由来単球のＣＳＦ－１誘導分化を２、４、６、８または１０％以下しか低減しない。
一部の実施形態では、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図６について実施例７で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、ｉｎ ｖｉｖｏで、抑制性骨髄性細胞、例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣを枯渇させ、例えば、抑制性骨髄性細胞、例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣの数を少なくとも８０、８５、９０、９５、９９または９９．５％低減する。
一部の実施形態では、例えば、免疫組織化学分析を使用して測定したとき、例えば、図７Ｂおよび７Ｄについて実施例８で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、ｉｎ ｖｉｖｏで、組織常在性マクロファージ、例えば、クッパー細胞を枯渇させないか、または実質的に枯渇させず、例えば、組織常在性マクロファージ、例えば、クッパー細胞の数を４、６、８、１０または１５％以下しか低減しない。
一部の実施形態では、例えば、フローサイトメトリー分析または免疫組織化学分析を使用して測定したとき、例えば、図２１について説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、ＴＡＭ上でのＣＤ８６またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増大する。
一部の実施形態では、例えば、細胞生存率ＭＴＴアッセイを使用して測定したとき、例えば、図８Ａについて実施例９で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞のＣＳＦ－１依存細胞生存を阻害しないか、または実質的に阻害せず、例えば、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞のＣＳＦ－１依存細胞生存を５、１０または１５％以下しか低減しない。
一部の実施形態では、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図９について実施例１０で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、ｉｎ ｖｉｖｏでＣＤ８＋Ｔ細胞腫瘍浸潤を増大し、例えば、腫瘍におけるＣＤ３＋Ｔ細胞中のＣＤ８＋Ｔ細胞％を少なくとも１．５、２または２．５倍増大する。
一部の実施形態では、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１０Ａについて実施例１１で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、ｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍におけるＴｒｅｇ頻度を低減し、例えば、腫瘍におけるＴｒｅｇ頻度を少なくとも１５、２０、２５または３０％低減する。
一部の実施形態では、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１０Ｂについて実施例１１で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、ｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍におけるＣＤ８＋Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比を増大し、例えば、腫瘍におけるＣＤ８＋Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比を少なくとも２．５、３、３．５、４または４．５倍増大する。
一部の実施形態では、例えば、図１１Ａおよび１１Ｂについて実施例１２、または図２３について実施例１９で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、腫瘍成長を低減し、腫瘍保有動物の生存を増大し、かつ／または抗腫瘍免疫メモリーを向上させる。
一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および抗ＣＣＲ２結合部分は、独立して、全長抗体（例えば、少なくとも１つ、好ましくは２つの完全な重鎖および少なくとも１つ、好ましくは２つの完全な軽鎖）または抗原結合性断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体またはディアボディ（ｄＡｂ）を含む抗体）である。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および／または抗ＣＣＲ２結合部分は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４またはその断片から選択される重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および／または抗ＣＣＲ２結合部分は、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）を媒介し得る重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＦｃ領域）を含み、抗ＣＣＲ２結合部分は、第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＦｃ領域）を含み、第１の重鎖定常領域は、天然に存在する重鎖定常領域と比較して、第１の重鎖定常領域と第２の重鎖定常領域とのヘテロ二量体化を増大する１つまたは複数の変異を含み、かつ／または第２の重鎖定常領域は、天然に存在する重鎖定常領域と比較して、第２の重鎖定常領域と第１の重鎖定常領域とのヘテロ二量体化を増大する１つまたは複数の変異を含む。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および／または抗ＣＣＲ２結合部分は、カッパもしくはラムダの軽鎖定常領域またはその断片から選択される軽鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、カッパ軽鎖定常領域またはその断片を含み、抗ＣＣＲ２結合部分は、ラムダ軽鎖定常領域またはその断片を含む。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、ラムダ軽鎖定常領域またはその断片を含み、抗ＣＣＲ２結合部分は、カッパ軽鎖定常領域またはその断片を含む。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および抗ＣＣＲ２結合部分は、共通の軽鎖可変領域を有する。一部の実施形態では、多特異性分子は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４の重鎖定常領域、特に、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４の重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）をさらに含む。一部の実施形態では、多特異性分子は、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）を媒介し得る重鎖定常領域をさらに含む。
一部の実施形態では、多特異性分子は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子および抗ＣＣＲ２抗体分子を含み、
（ｉ）抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子は、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを含み、第１のポリペプチドは、第１の軽鎖可変領域（ＶＬ）および第１の軽鎖定常領域（ＣＬ）を含み、第２のポリペプチドは、第１の重鎖可変領域（ＶＨ）、第１の重鎖定常領域１（ＣＨ１）ならびに任意選択により、第１のＣＨ２および第１のＣＨ３を含み、
（ｉｉ）抗ＣＣＲ２抗体分子は、第３のポリペプチドおよび第４のポリペプチドを含み、第３のポリペプチドは、第２のＶＬおよび第２のＣＬを含み、第４のポリペプチドは、第２のＶＨ、第２のＣＨ１ならびに任意選択により、第２のＣＨ２および第２のＣＨ３を含む。
一部の実施形態では、（ｉ）抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子は、ＣＳＦ１Ｒに一価性で結合し、かつ／または（ｉｉ）抗ＣＣＲ２抗体分子は、ＣＣＲ２に一価性で結合する。一部の実施形態では、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒに一価性で結合し、かつ／またはＣＣＲ２に一価性で結合する。一部の実施形態では、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒに一価性で結合し、かつＣＣＲ２に一価性で結合する。
一部の実施形態では、
（ｉ）多特異性分子は、ＣＣＲ２の存在下でＣＳＦ１Ｒを阻害し、任意選択により、細胞が、細胞表面上でＣＳＦ１ＲおよびＣＣＲ２の両方を発現する場合、多特異性分子は、細胞においてＣＳＦ１Ｒの活性（例えば、ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達、例えば、ＣＳＦ－１誘導ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達）を、例えば、少なくとも４０、５０、６０、７０、８０もしくは９０％低減し、かつ／または
（ｉｉ）多特異性分子は、ＣＣＲ２の非存在下でＣＳＦ１Ｒを阻害しないか、または実質的に阻害せず、任意選択により、細胞が、細胞表面上でＣＳＦ１Ｒを発現するが、ＣＣＲ２を発現しない場合、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒの活性（例えば、ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達、例えば、ＣＳＦ－１誘導ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達）を低減しないか、またはＣＳＦ１Ｒの活性を２、４、６、８、１０もしくは１５％以下しか低減しない。
一部の実施形態では、
（ｉ）多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒの存在下でＣＣＲ２を阻害し、任意選択により、細胞が、細胞表面上でＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒの両方を発現する場合、多特異性分子は、細胞においてＣＣＲ２の活性を、例えば、少なくとも４０、５０、６０、７０、８０もしくは９０％低減し、かつ／または
（ｉｉ）多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒの非存在下でＣＣＲ２を阻害しないか、または実質的に阻害せず、任意選択により、細胞が、細胞表面上でＣＣＲ２を発現するが、ＣＳＦ１Ｒを発現しない場合、多特異性分子は、ＣＣＲ２の活性を低減しないか、またはＣＣＲ２の活性を２、４、６、８、１０もしくは１５％以下しか低減しない。
一態様では、本発明は、
（ｉ）単球、例えば、炎症性単球、例えば、Ｌｙ６ＣＨｉＣＣＲ２＋ＣＸ３ＣＲ１Ｌｏ炎症性単球の輸送を媒介する分子に結合する第１の結合部分であって、任意選択により、ＣＣＲ２に結合する第１の結合部分；ならびに
（ｉｉ）炎症組織における単球および／またはマクロファージの成熟および／または生存を媒介する分子に結合する第２の結合部分であって、任意選択により、ＣＳＦ１Ｒに結合する第２の結合部分
を含む単離された多特異性、例えば、二特異性分子を提供する。
一態様では、本発明は、
（ｉ）炎症性単球の腫瘍への動員を低減する第１の結合部分であって、任意選択により、ＣＣＲ２に結合し、かつ／またはそれを阻害する第１の結合部分；ならびに
（ｉｉ）腫瘍微小環境における単球および／またはマクロファージの成熟および／または生存を低減する第２の結合部分であって、任意選択により、ＣＳＦ１Ｒに結合し、かつ／またはそれを阻害する第２の結合部分
を含む単離された多特異性、例えば、二特異性分子を提供する。
一態様では、本発明は、（ｉ）抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）および（ｉｉ）抗ＰＤ－Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子）を含む単離された多特異性、例えば、二特異性分子を提供する。
上記の態様および実施形態の一部の実施形態では、多特異性分子は、１つまたは複数の追加の結合部分（例えば、第３の結合部分、第４の結合部分）をさらに含み（例えば、三特異性または四特異性分子）、任意選択により、第３の結合部分は、第３のＩＭＣ結合部分または腫瘍標的化部分である。一部の実施形態では、腫瘍標的化部分は、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１７１６５４６４、例えば、ＷＯ２０１７１６５４６４の１０８～１１８ページで開示される腫瘍標的化部分である。
上記の態様および実施形態の一部の実施形態では、多特異性分子は、Ｔ細胞係合子、ＮＫ細胞係合子、Ｂ細胞係合子、樹状細胞係合子またはマクロファージ細胞係合子から選択される免疫細胞係合子をさらに含む。一部の実施形態では、免疫細胞係合子は、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１７１６５４６４、例えば、ＷＯ２０１７１６５４６４の１１９～１３１ページで開示される免疫細胞係合子である。一部の実施形態では、免疫細胞係合子は、免疫細胞、例えば、エフェクター細胞に結合し、それを活性化する。一部の実施形態では、免疫細胞係合子は、免疫細胞、例えば、エフェクター細胞に結合するが、それを活性化しない。
一部の実施形態では、免疫細胞係合子は、Ｔ細胞係合子、例えば、Ｔ細胞への結合およびＴ細胞の活性化を媒介するＴ細胞係合子、またはＴ細胞への結合を媒介するが、Ｔ細胞の活性化を媒介しないＴ細胞係合子である。一部の実施形態では、Ｔ細胞係合子は、ＣＤ３、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲζ、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＴＩＭ１、ＳＬＡＭ、ＣＤ２またはＣＤ２２６に結合し、例えば、Ｔ細胞係合子は、抗ＣＤ３抗体分子である。
一部の実施形態では、免疫細胞係合子は、ＮＫ細胞係合子、例えば、ＮＫ細胞への結合およびＮＫ細胞の活性化を媒介するＮＫ細胞係合子、またはＮＫ細胞への結合を媒介するが、ＮＫ細胞の活性化を媒介しないＮＫ細胞係合子である。一部の実施形態では、ＮＫ細胞係合子は、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、ＤＮＡＭ１、ＤＡＰ１０、ＣＤ１６（例えば、ＣＤ１６ａ、ＣＤ１６ｂまたはその両方）、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ２７、ＰＳＧＬ１、ＣＤ９６、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＮＫｐ８０、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４または２Ｂ４としても公知）、ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭＦ７、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ３ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ３、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２ＥまたはＣＤ１６０に結合する（例えば、それを活性化する）抗体分子、例えば、抗原結合ドメイン、またはリガンドから選択される。
一部の実施形態では、免疫細胞係合子は、Ｂ細胞係合子、例えば、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０ＬもしくはＣＤ７０リガンド、またはＯＸ４０、ＣＤ４０もしくはＣＤ７０に結合する抗体分子である。一部の実施形態では、免疫細胞係合子は、マクロファージ細胞係合子、例えば、ＣＤ２アゴニスト；ＣＤ４０Ｌ；ＯＸ４０Ｌ；ＯＸ４０、ＣＤ４０もしくはＣＤ７０に結合する抗体分子；Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ：Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）（例えば、ＴＬＲ４、例えば、構成的活性型ＴＬＲ４（ｃａＴＬＲ４：ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅｌｙ ａｃｔｉｖｅ ＴＬＲ４）またはＴＬＲ９アゴニスト）のアゴニスト；ＣＤ４７；またはＳＴＩＮＧアゴニストである。
一部の実施形態では、免疫細胞係合子は、樹状細胞係合子、例えば、ＣＤ２アゴニスト、ＯＸ４０抗体、ＯＸ４０Ｌ、４１ＢＢアゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストまたはその断片（例えば、ＴＬＲ４、例えば、構成的活性型ＴＬＲ４（ｃａＴＬＲ４））、ＣＤ４７アゴニストまたはＳＴＩＮＧアゴニストである。
上記の態様および実施形態の一部の実施形態では、多特異性分子は、サイトカイン分子をさらに含む。一部の実施形態では、サイトカイン分子は、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インターロイキン－７（ＩＬ－７）、インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）、インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）、インターロイキン－１８（ＩＬ－１８）、インターロイキン－２１（ＩＬ－２１）もしくはインターフェロンガンマ、またはその断片もしくはバリアント、または上記サイトカインのいずれかの組合せから選択される。一部の実施形態では、サイトカイン分子は、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１７１６５４６４、例えば、ＷＯ２０１７１６５４６４の１０８～１１８ページで開示されるサイトカイン分子である。
上記の態様および実施形態の一部の実施形態では、多特異性分子は、間質改変部分をさらに含む。一部の実施形態では、間質改変部分は、間質もしくは細胞外基質（ＥＣＭ：ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ）成分のレベルもしくは産生を減少すること；腫瘍線維症を減少すること；間質性腫瘍輸送を増大すること；腫瘍灌流を改善すること；腫瘍微小血管系を拡張すること；腫瘍において間隙流体圧（ＩＦＰ：ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｆｌｕｉｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ）を減少すること；または剤、例えば、がん治療薬もしくは細胞療法の腫瘍もしくは腫瘍血管系への浸透もしくは拡散を減少もしくは向上させることのうちの１つまたは複数をもたらす。一部の実施形態では、間質改変部分は、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１７１６５４６４、例えば、ＷＯ２０１７１６５４６４の１３１～１３６ページで開示される間質改変部分である。
一態様では、
（ｉ）抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）と；
（ｉｉ）抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）と；
（ｉｉｉ）ＴＧＦ－ベータ阻害剤；
（ｉｖ）抗ＰＤ－Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子）；および
（ｖ）サイトカイン分子、例えば、ＩＬ－２分子
のうちの１、２つまたはすべてと
を含む多特異性、例えば、二特異性分子が本明細書で提供される。
一実施形態では、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１について実施例２で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞、またはＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合し、例えば、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合は、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞、またはＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合よりも少なくとも２、４、６、８、１０、１５、２０または２５倍強い。一実施形態では、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１について実施例２で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合し、例えば、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合についてのＥＣ５０は、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞への結合についてのＥＣ５０の６０、５０、４０、３０、２０または１０％以下である。一実施形態では、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１について実施例２で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合し、例えば、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合についてのＥＣ５０は、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合についてのＥＣ５０の５０、４０、３０、２０、１０または５％以下である。一実施形態では、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図５について実施例６で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好中球、組織常在性マクロファージ（例えば、クッパー細胞）またはランゲルハンス細胞と比較して、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）または骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）に優先的に結合し、例えば、多特異性分子のＴＡＭまたはＭＤＳＣへの結合は、多特異性分子のＴ細胞、ＮＫ細胞、好中球、組織常在性マクロファージ（例えば、クッパー細胞）またはランゲルハンス細胞への結合よりも少なくとも２、４、６、８、１０、１５、２０または２５倍強い。一実施形態では、例えば、トランズウェルプレート遊走アッセイを使用して測定したとき、例えば、図２について実施例３で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、単球遊走、例えば単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ１）誘導単球遊走を阻害し、例えば、ＭＣＰ１誘導単球遊走を少なくとも４０、５０、６０または７０％低減する。一実施形態では、例えば、細胞増殖ＭＴＴアッセイを使用して測定したとき、例えば、図３Ｂについて実施例４で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、マクロファージ、例えば、骨髄系由来マクロファージの増殖、例えば、骨髄系由来マクロファージのＣＳＦ－１誘導増殖を阻害し、例えば、骨髄系由来マクロファージのＣＳＦ－１誘導増殖を少なくとも５０、６０、７０または８０％低減する。一実施形態では、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図４について実施例５で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、単球、例えば、骨髄系由来単球の分化、例えば、骨髄系由来単球のＣＳＦ－１誘導分化を阻害しないか、または実質的に阻害せず、例えば、骨髄系由来単球のＣＳＦ－１誘導分化を２、４、６、８または１０％以下しか低減しない。一実施形態では、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図６について実施例７で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、ｉｎ ｖｉｖｏで、抑制性骨髄性細胞、例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣを枯渇させ、例えば、抑制性骨髄性細胞、例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣの数を少なくとも８０、８５、９０、９５、９９または９９．５％低減する。一実施形態では、例えば、免疫組織化学分析を使用して測定したとき、例えば、図７Ｂおよび７Ｄについて実施例８で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、ｉｎ ｖｉｖｏで、組織常在性マクロファージ、例えば、クッパー細胞を枯渇させないか、または実質的に枯渇させず、例えば、組織常在性マクロファージ、例えば、クッパー細胞の数を４、６、８、１０または１５％以下しか低減しない。一実施形態では、例えば、フローサイトメトリー分析または免疫組織化学分析を使用して測定したとき、例えば、図２１について説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、ＴＡＭ上でのＣＤ８６またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増大する。一実施形態では、例えば、細胞生存率ＭＴＴアッセイを使用して測定したとき、例えば、図８Ａについて実施例９で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞のＣＳＦ－１依存細胞生存を阻害しないか、または実質的に阻害せず、例えば、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞のＣＳＦ－１依存細胞生存を５、１０または１５％以下しか低減しない。一実施形態では、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図９について実施例１０で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、ｉｎ ｖｉｖｏでＣＤ８＋Ｔ細胞腫瘍浸潤を増大し、例えば、腫瘍におけるＣＤ３＋Ｔ細胞中のＣＤ８＋Ｔ細胞％を少なくとも１．５、２または２．５倍増大する。一実施形態では、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１０Ａについて実施例１１で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、ｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍におけるＴｒｅｇ頻度を低減し、例えば、腫瘍におけるＴｒｅｇ頻度を少なくとも１５、２０、２５または３０％低減する。一実施形態では、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１０Ｂについて実施例１１で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、ｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍におけるＣＤ８＋Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比を増大し、例えば、腫瘍におけるＣＤ８＋Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比を少なくとも２．５、３、３．５、４または４．５倍増大する。一実施形態では、例えば、図１１Ａおよび１１Ｂについて実施例１２、または図２３について実施例１９で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、腫瘍成長を低減し、腫瘍保有動物の生存を増大し、かつ／または抗腫瘍免疫メモリーを向上させる。
一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および抗ＣＣＲ２結合部分は、独立して、全長抗体（例えば、少なくとも１つ、好ましくは２つの完全な重鎖および少なくとも１つ、好ましくは２つの完全な軽鎖を含む抗体）または抗原結合性断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体またはディアボディ（ｄＡｂ））である。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および／または抗ＣＣＲ２結合部分は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４またはその断片から選択される重鎖定常領域を含む。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および／または抗ＣＣＲ２結合部分は、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）を媒介し得る重鎖定常領域を含む。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＦｃ領域）を含み、抗ＣＣＲ２結合部分は、第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＦｃ領域）を含み、第１の重鎖定常領域は、天然に存在する重鎖定常領域と比較して、第１の重鎖定常領域と第２の重鎖定常領域とのヘテロ二量体化を増大する１つまたは複数の突然変異を含み、かつ／または第２の重鎖定常領域は、天然に存在する重鎖定常領域と比較して、第２の重鎖定常領域と第１の重鎖定常領域とのヘテロ二量体化を増大する１つまたは複数の突然変異を含む。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および／または抗ＣＣＲ２結合部分は、カッパもしくはラムダの軽鎖定常領域またはその断片から選択される軽鎖定常領域を含む。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、カッパ軽鎖定常領域またはその断片を含み、抗ＣＣＲ２結合部分は、ラムダ軽鎖定常領域またはその断片を含む。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、ラムダ軽鎖定常領域またはその断片を含み、抗ＣＣＲ２結合部分は、カッパ軽鎖定常領域またはその断片を含む。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および抗ＣＣＲ２結合部分は、共通の軽鎖可変領域を有する。一実施形態では、多特異性分子は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４の重鎖定常領域、特に、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４の重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）をさらに含む。一実施形態では、多特異性分子は、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）を媒介し得る重鎖定常領域をさらに含む。一実施形態では、多特異性分子は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子および抗ＣＣＲ２抗体分子を含み、（ｉ）抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子は、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを含み、第１のポリペプチドは、第１の軽鎖可変領域（ＶＬ）および第１の軽鎖定常領域（ＣＬ）を含み、第２のポリペプチドは、第１の重鎖可変領域（ＶＨ）、第１の重鎖定常領域１（ＣＨ１）ならびに任意選択により、第１のＣＨ２および第１のＣＨ３を含み、（ｉｉ）抗ＣＣＲ２抗体分子は、第３のポリペプチドおよび第４のポリペプチドを含み、第３のポリペプチドは、第２のＶＬおよび第２のＣＬを含み、第４のポリペプチドは、第２のＶＨ、第２のＣＨ１ならびに任意選択により、第２のＣＨ２および第２のＣＨ３を含む。
一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子は、ＣＳＦ１Ｒに一価性で結合する。一実施形態では、抗ＣＣＲ２抗体分子は、ＣＣＲ２に一価性で結合する。一実施形態では、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒに一価性で結合する。一実施形態では、多特異性分子は、ＣＣＲ２に一価性で結合する。一実施形態では、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒに一価性で結合し、かつＣＣＲ２に一価性で結合する。
一実施形態では、多特異性分子は、ＣＣＲ２の存在下でＣＳＦ１Ｒを阻害し、任意選択により、細胞が、細胞表面上でＣＳＦ１ＲおよびＣＣＲ２の両方を発現する場合、多特異性分子は、細胞においてＣＳＦ１Ｒの活性（例えば、ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達、例えば、ＣＳＦ－１誘導ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達）を、例えば、少なくとも４０、５０、６０、７０、８０または９０％低減する。一実施形態では、多特異性分子は、ＣＣＲ２の非存在下でＣＳＦ１Ｒを阻害しないか、または実質的に阻害せず、任意選択により、細胞が、細胞表面上でＣＳＦ１Ｒを発現するが、ＣＣＲ２を発現しない場合、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒの活性（例えば、ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達、例えば、ＣＳＦ－１誘導ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達）を低減しないか、またはＣＳＦ１Ｒの活性を２、４、６、８、１０もしくは１５％以下しか低減しない。一実施形態では、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒの存在下でＣＣＲ２を阻害し、任意選択により、細胞が、細胞表面上でＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒの両方を発現する場合、多特異性分子は、細胞においてＣＣＲ２の活性を、例えば、少なくとも４０、５０、６０、７０、８０または９０％低減する。一実施形態では、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒの非存在下でＣＣＲ２を阻害しないか、または実質的に阻害せず、任意選択により、細胞が、細胞表面上でＣＣＲ２を発現するが、ＣＳＦ１Ｒを発現しない場合、多特異性分子は、ＣＣＲ２の活性を低減しないか、またはＣＣＲ２の活性を２、４、６、８、１０もしくは１５％以下しか低減しない。
一実施形態では、多特異性分子は、（ｉ）抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）、（ｉｉ）抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）および（ｉｉｉ）ＴＧＦ－ベータ阻害剤を含む。一実施形態では、例えば、図２６Ｂについて実施例２０で説明される方法を使用して測定したとき、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦ－ベータ１、ＴＧＦ－ベータ３、またはＴＧＦ－ベータ１およびＴＧＦ－ベータ３の両方を阻害する。一実施形態では、例えば、図２６Ｂについて実施例２０で説明される方法を使用して測定したとき、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦ－ベータ１、ＴＧＦ－ベータ２、ＴＧＦ－ベータ３、ＴＧＦ－ベータ１およびＴＧＦ－ベータ３の両方、またはＴＧＦ－ベータ１、ＴＧＦ－ベータ２およびＴＧＦ－ベータ３を阻害する。一実施形態では、例えば、図２７Ａ～２７Ｃについて実施例２０で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子は、腫瘍成長を低減し、かつ／または腫瘍保有動物の生存を増大する。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチド（例えば、ＴＧＦ－ベータ受容体の細胞外ドメイン、またはその機能的バリアント）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチドのうちの１、２、３つまたはそれよりも多く）、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチドのうちの１、２、３つまたはそれよりも多く）またはＴＧＦＢＲ３ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ３ポリペプチドのうちの１、２、３つまたはそれよりも多く）のうちの１、２つまたはすべてを含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１の細胞外ドメインまたはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号９５、９６、９７、１２０、１２１もしくは１２２の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号１０４もしくは１０５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインまたはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号９８、９９、１２３もしくは１２４の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号１００、１０１、１０２および１０３からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメインまたはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号１０６、１０７、１２５もしくは１２６の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号１０８のアミノ酸配列またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦＢＲ１ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦＢＲ２ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ヘテロ二量体を形成する２つのＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ヘテロ二量体を形成するＴＧＦＢＲ１ポリペプチドおよびＴＧＦＢＲ２ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ヘテロ二量体を形成するＴＧＦＢＲ１ポリペプチドおよびＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ヘテロ二量体を形成するＴＧＦＢＲ２ポリペプチドおよびＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含む。
一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドおよび第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドを含む。一実施形態では、多特異性分子は、第１のＦｃ領域（例えば、第１のＣＨ１－Ｆｃ領域）および第２のＦｃ領域（例えば、第２のＣＨ１－Ｆｃ領域）を含み、任意選択により、（ｉ）第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、例えば、リンカーを介して、第１のＦｃ領域（例えば、第１のＣＨ１－Ｆｃ領域）、例えば、第１のＦｃ領域（例えば、第１のＣＨ１－Ｆｃ領域）のＣ末端に連結されており、かつ（ｉｉ）第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、例えば、リンカーを介して、第２のＦｃ領域（例えば、第２のＣＨ１－Ｆｃ領域）、例えば、第２のＦｃ領域（例えば、第２のＣＨ１－Ｆｃ領域）のＣ末端に連結されている。一実施形態では、第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドおよび第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、ホモ二量体またはヘテロ二量体、例えば、ホモ二量体を形成する。一実施形態では、第１または第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２またはＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメイン、例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインを含む。一実施形態では、多特異性分子は、図３５Ａまたは３５Ｂの構成を有する。一実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９２のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）および配列番号１９３のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９２のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）および配列番号１９５のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９４のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）および配列番号１９３のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９４のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）および配列番号１９５のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。
一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドおよび第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドを含む。一実施形態では、多特異性分子は、重鎖定常領域１（ＣＨ１）および軽鎖定常領域（ＣＬ）を含み、任意選択により、（ｉ）第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、例えば、リンカーを介して、ＣＨ１、例えば、ＣＨ１のＮ末端に連結されており、かつ（ｉｉ）第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、例えば、リンカーを介して、ＣＬ、例えば、ＣＬのＮ末端に連結されている。一実施形態では、第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドおよび第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、ホモ二量体またはヘテロ二量体、例えば、ホモ二量体を形成する。一実施形態では、第１または第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２またはＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメイン、例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインを含む。一実施形態では、多特異性分子は、図３５Ｃまたは３５Ｄの構成を有する。一実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９６のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）および配列番号１９８のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９６のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）および配列番号１９９のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９７のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）および配列番号１９８のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９７のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）および配列番号１９９のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。
一実施形態では、ＴＧＦ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）に連結されている。一実施形態では、ＴＧＦ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）に連結されている。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および／または抗ＣＣＲ２結合部分は、Ｆｃ領域を含み、ＴＧＦ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、Ｆｃ領域、例えば、Ｆｃ領域のＣ末端に連結されている。一実施形態では、多特異性分子は、第１のＴＧＦ－ベータ阻害剤および第２のＴＧＦ－ベータ阻害剤を含み、第１のＴＧＦ－ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）に連結されており、第２のＴＧＦ－ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）に連結されている。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、第１のＦｃ領域を含み、抗ＣＣＲ２結合部分は、第２のＦｃ領域を含み、多特異性分子は、第１のＴＧＦ－ベータ阻害剤および第２のＴＧＦ－ベータ阻害剤を含み、第１のＴＧＦ－ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、第１のＦｃ領域、例えば、第１のＦｃ領域のＣ末端に連結されており、第２のＴＧＦ－ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、第２のＦｃ領域、例えば、第２のＦｃ領域のＣ末端に連結されている。
一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、第１の軽鎖および第１の重鎖を含み、第１の重鎖は、第１のＦｃ領域を含み、第１のＦｃ領域のＣ末端は、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）に連結されている。一実施形態では、抗ＣＣＲ２結合部分は、第２の軽鎖および第２の重鎖を含み、第２の重鎖は、第２のＦｃ領域を含み、第２のＦｃ領域のＣ末端は、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）に連結されている。一実施形態では、多特異性分子は、図１２Ｂで示される構成を有する。
一実施形態では、ＴＧＦ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）に連結されている。一実施形態では、ＴＧＦ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）に連結されている。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および／または抗ＣＣＲ２結合部分は、Ｆｃ領域を含み、ＴＧＦ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、Ｆｃ領域、例えば、Ｆｃ領域のＮ末端に連結されている。
一実施形態では、多特異性分子は、（ｉ）抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）、（ｉｉ）抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）および（ｉｉｉ）抗ＰＤ－Ｌ１結合部分（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子）を含む。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１結合部分は、ＰＤ－Ｌ１を阻害する。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１結合部分は、表１０の任意のＶＨ配列、または少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する配列のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１結合部分は、表１０の任意のＶＨ配列、またはそれと実質的に同一の、例えば、それと９５％～９９．９％同一の、もしくは少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する配列を含むＶＨを含む。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１結合部分は、表１０の任意のＶＬ配列、または少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する配列のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１結合部分は、表１０の任意のＶＬ配列、またはそれと実質的に同一の、例えば、それと９５％～９９．９％同一の、もしくは少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５個以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有する配列を含むＶＬを含む。
一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１結合部分は、例えば、リンカーを介して、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）または抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）に連結されている。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および／または抗ＣＣＲ２結合部分は、Ｆｃ領域を含み、抗ＰＤ－Ｌ１結合部分は、例えば、リンカーを介して、Ｆｃ領域、例えば、Ｆｃ領域のＣ末端に連結されている。一実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合部分は、ｓｃＦｖである。一実施形態では、多特異性分子は、図１２Ｃまたは１２Ｄで示される構成を有する。
一実施形態では、多特異性分子は、（ｉ）抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）、（ｉｉ）抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）および（ｉｉｉ）ＩＬ－２分子を含む。一実施形態では、ＩＬ－２分子は、本明細書で開示されるＩＬ－２分子、例えば、配列番号２３７もしくは２３８のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含むＩＬ－２分子である。
一実施形態では、ＩＬ－２分子は、例えば、リンカーを介して、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）または抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）に連結されている。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および／または抗ＣＣＲ２結合部分は、軽鎖定常領域を含み、ＩＬ－２分子は、例えば、リンカーを介して、軽鎖定常領域、例えば、軽鎖定常領域のＣ末端に連結されている。一実施形態では、多特異性分子は、第１のＩＬ－２分子および第２のＩＬ－２分子を含み、第１のＩＬ－２分子は、例えば、リンカーを介して、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）に連結されており、第２のＩＬ－２分子は、例えば、リンカーを介して、抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）に連結されている。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、第１の軽鎖定常領域を含み、抗ＣＣＲ２結合部分は、第２の軽鎖定常領域を含み、多特異性分子は、第１のＩＬ－２分子および第２のＩＬ－２分子を含み、第１のＩＬ－２分子は、例えば、リンカーを介して、第１の軽鎖定常領域、例えば、第１の軽鎖定常領域のＣ末端に連結されており、第２のＩＬ－２分子は、例えば、リンカーを介して、第２の軽鎖定常領域、例えば、第２の軽鎖定常領域のＣ末端に連結されている。一実施形態では、多特異性分子は、図１２Ｅ、１２Ｆまたは１２Ｇで示される構成を有する。
一態様では、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４０２、４７４および４７５のアミノ酸配列、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む、ＣＳＦ１Ｒ（例えば、ヒトＣＳＦ１Ｒ）に結合する抗体分子（例えば、単離された抗体分子）が本明細書で提供される。一部の実施形態では、抗体分子は、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含む。一部の実施形態では、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４３３、４３５および４３７のアミノ酸配列、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む。一態様では、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４３２、４３４および４３６、またはそれぞれ、配列番号４３３、４３５および４３７のアミノ酸配列、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む、ＣＳＦ１Ｒ（例えば、ヒトＣＳＦ１Ｒ）に結合する抗体分子（例えば、単離された抗体分子）が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４７６および４７７のアミノ酸配列、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４および４１３、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列；それぞれ、配列番号４０２、４０５および４１３、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列；それぞれ、配列番号４０２、４０６および４１３、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列；それぞれ、配列番号４０２、４０４および４１４、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列；それぞれ、配列番号４０２、４０７および４１３、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列；それぞれ、配列番号４０２、４０４および４１５、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列；それぞれ、配列番号４０２、４０８および４１３、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列；それぞれ、配列番号４０２、４０４および４１６、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列；それぞれ、配列番号４０２、４０４および４１７、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列；それぞれ、配列番号４０２、４０９および４１３、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列；それぞれ、配列番号４０２、４０４および４１８、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列；それぞれ、配列番号４０２、４０４および４１９、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列；それぞれ、配列番号４０２、４０４および４２０、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列；またはそれぞれ、配列番号４０２、４０４および４２１、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４および４１３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０５および４１３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０６および４１３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４および４１４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０７および４１３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４および４１５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０８および４１３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４および４１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４および４１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０９および４１３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４および４１８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４および４１９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４および４２０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４および４２１のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４３３、４３５および４３７のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１３、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０５、４１３、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０６、４１３、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１４、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０７、４１３、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１５、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０８、４１３、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１６、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１７、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０９、４１３、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１８、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１９、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４、４２０、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４、４２１、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３２３のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３２４のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３２５のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３２６のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３２７のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３２８のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３２９のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３０のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３１のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３２のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３３のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３４のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３５のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３６のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３４１のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３４２のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３２３および３４１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３２４および３４１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３２５および３４１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３２６および３４１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３２７および３４１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３２８および３４１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３２９および３４１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３３０および３４１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３３１および３４１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３３２および３４１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３３３および３４１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３３４および３４１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３３５および３４１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３３６および３４１のアミノ酸配列を含む。
一態様では、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４０３、４７８および４７９のアミノ酸配列、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む、ＣＳＦ１Ｒ（例えば、ヒトＣＳＦ１Ｒ）に結合する抗体分子（例えば、単離された抗体分子）が本明細書で開示される。一部の実施形態では、抗体分子は、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含む。一部の実施形態では、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４３３、４３５および４３７のアミノ酸配列、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む。一態様では、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４３２、４３４および４３６、またはそれぞれ、配列番号４３３、４３５および４３７のアミノ酸配列、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む、ＣＳＦ１Ｒ（例えば、ヒトＣＳＦ１Ｒ）に結合する抗体分子（例えば、単離された抗体分子）が本明細書で開示される。
一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０３、４１０および４２２、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列；それぞれ、配列番号４０３、４１０および４２３、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列；それぞれ、配列番号４０３、４１１および４２２、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列；またはそれぞれ、配列番号４０３、４１２および４２２、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４３３、４３５および４３７のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０３、４１０、４２２、４３３、４３５および４３７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０３、４１０、４２３、４３３、４３５および４３７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０３、４１１、４２２、４３３、４３５および４３７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０３、４１２、４２２、４３３、４３５および４３７のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３７のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３８のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３９のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３４０のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号１３９のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３４１のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３４２のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３３７および３４２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３３８および３４２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３３９および３４２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３４０および３４２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３３９および１３９のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、例えば、ＥＬＩＳＡ分析を使用して測定したとき、例えば、図２９Ａおよび２９Ｂについて実施例２２で説明される方法を使用して測定したとき、抗体分子は、ヒトおよび／またはカニクイザルＣＳＦ１Ｒに結合する。一部の実施形態では、例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図３１について実施例２４で説明される方法を使用して測定したとき、抗体分子は、ヒトＣＳＦ１Ｒを発現する細胞に結合する。一部の実施形態では、例えば、電気化学発光分析を使用して測定したとき、例えば、図３０について実施例２３で説明される方法を使用して測定したとき、抗体分子は、ＣＳＦ－１の存在下で単球からのＭＣＰ－１分泌を低減する。一部の実施形態では、抗体分子は、ＣＳＦ１Ｒの活性を低減する。
一態様では、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４４６、４４７、４４８、４５４、４５５および４５６のアミノ酸配列、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含み、
（ｉ）ＶＨが、配列番号４８０のアミノ酸配列を含まず、かつ／または
（ｉｉ）ＶＬが、配列番号４８１のアミノ酸配列を含まない、
ＣＣＲ２（例えば、ヒトＣＣＲ２）に結合する抗体分子（例えば、単離された抗体分子）が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４４６、４４７、４４８、４５４、４５５および４５６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３４３のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３４４のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３４５のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３４３および３４５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３４４および３４５のアミノ酸配列を含む。
一態様では、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４６１、４６２および４６３のアミノ酸配列、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む、ＰＤ－Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１）に結合する抗体分子（例えば、単離された抗体分子）が本明細書で提供される。一部の実施形態では、抗体分子は、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４６７、４６８および４６９のアミノ酸配列、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む。一態様では、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４６７、４６８および４６９のアミノ酸配列、または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む、ＰＤ－Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１）に結合する抗体分子（例えば、単離された抗体分子）が本明細書で提供される。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４６１、４６２、４６３、４６７、４６８および４６９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３４６のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３４７のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３４６および３４７のアミノ酸配列を含む。
上記の態様の一部の実施形態では、抗体分子は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４またはその断片から選択される重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、抗体分子は、カッパもしくはラムダの軽鎖定常領域またはその断片から選択される軽鎖定常領域を含む。
一態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および抗ＣＣＲ２結合部分を含む多特異性、例えば、二特異性分子が本明細書で提供される。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、本明細書で開示される抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子を含む。一部の実施形態では、抗ＣＣＲ２結合部分は、本明細書で開示される抗ＣＣＲ２抗体分子を含む。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、本明細書で開示される抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子を含み、抗ＣＣＲ２結合部分は、本明細書で開示される抗ＣＣＲ２抗体分子を含む。
一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４７４および４７５のアミノ酸配列を含み、かつ（ｉｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４３２、４３４および４３６、またはそれぞれ、配列番号４３３、４３５および４３７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４７６および４７７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４および４１３；それぞれ、配列番号４０２、４０５および４１３；それぞれ、配列番号４０２、４０６および４１３；それぞれ、配列番号４０２、４０４および４１４；それぞれ、配列番号４０２、４０７および４１３；それぞれ、配列番号４０２、４０４および４１５；それぞれ、配列番号４０２、４０８および４１３；それぞれ、配列番号４０２、４０４および４１６；それぞれ、配列番号４０２、４０４および４１７；それぞれ、配列番号４０２、４０９および４１３；それぞれ、配列番号４０２、４０４および４１８；それぞれ、配列番号４０２、４０４および４１９；それぞれ、配列番号４０２、４０４および４２０；またはそれぞれ、配列番号４０２、４０４および４２１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４３３、４３５および４３７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１３、４３２、４３４および４３６；それぞれ、配列番号４０２、４０５、４１３、４３２、４３４および４３６；それぞれ、配列番号４０２、４０６、４１３、４３２、４３４および４３６；それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１４、４３２、４３４および４３６；それぞれ、配列番号４０２、４０７、４１３、４３２、４３４および４３６；それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１５、４３２、４３４および４３６；それぞれ、配列番号４０２、４０８、４１３、４３２、４３４および４３６；それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１６、４３２、４３４および４３６；それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１７、４３２、４３４および４３６；それぞれ、配列番号４０２、４０９、４１３、４３２、４３４および４３６；それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１８、４３２、４３４および４３６；それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１９、４３２、４３４および４３６；それぞれ、配列番号４０２、４０４、４２０、４３２、４３４および４３６；またはそれぞれ、配列番号４０２、４０４、４２１、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３２３～３３６のいずれかのアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３４１もしくは３４２のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３２３および３４１；それぞれ、配列番号３２４および３４１；それぞれ、配列番号３２５および３４１；それぞれ、配列番号３２６および３４１；それぞれ、配列番号３２７および３４１；それぞれ、配列番号３２８および３４１；それぞれ、配列番号３２９および３４１；それぞれ、配列番号３３０および３４１；それぞれ、配列番号３３１および３４１；それぞれ、配列番号３３２および３４１；それぞれ、配列番号３３３および３４１；それぞれ、配列番号３３４および３４１；それぞれ、配列番号３３５および３４１；またはそれぞれ、配列番号３３６および３４１のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０３、４７８および４７９のアミノ酸配列を含み、かつ（ｉｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４３２、４３４および４３６、またはそれぞれ、配列番号４３３、４３５および４３７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０３、４１０および４２２；それぞれ、配列番号４０３、４１０および４２３；それぞれ、配列番号４０３、４１１および４２２；またはそれぞれ、配列番号４０３、４１２および４２２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４３３、４３５および４３７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０３、４１０、４２２、４３３、４３５および４３７；それぞれ、配列番号４０３、４１０、４２３、４３３、４３５および４３７；それぞれ、配列番号４０３、４１１、４２２、４３３、４３５および４３７；またはそれぞれ、配列番号４０３、４１２、４２２、４３３、４３５および４３７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３７～３４０のいずれかのアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３４１もしくは３４２のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３３７および３４２；それぞれ、配列番号３３８および３４２；それぞれ、配列番号３３９および３４２；またはそれぞれ、配列番号３４０および３４２のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＣＣＲ２結合部分は、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４４６、４４７、４４８、４５４、４５５および４５６のアミノ酸配列を含み、（ｉ）ＶＨは、配列番号４８０のアミノ酸配列を含まないか、または（ｉｉ）ＶＬは、配列番号４８１のアミノ酸配列を含まない。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３４３もしくは３４４のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３４５のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３４３および３４５；またはそれぞれ、配列番号３４４および３４５のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および抗ＣＣＲ２結合部分は、独立して、全長抗体（例えば、少なくとも１つ、好ましくは２つの完全な重鎖および少なくとも１つ、好ましくは２つの完全な軽鎖）または抗原結合性断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体またはディアボディ（ｄＡｂ）を含む抗体）である。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および／または抗ＣＣＲ２結合部分は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４またはその断片から選択される重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＦｃ領域）を含み、抗ＣＣＲ２結合部分は、第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＦｃ領域）を含み、第１の重鎖定常領域は、天然に存在する重鎖定常領域と比較して、第１の重鎖定常領域と第２の重鎖定常領域とのヘテロ二量体化を増大する１つもしくは複数の変異を含み、かつ／または第２の重鎖定常領域は、天然に存在する重鎖定常領域と比較して、第２の重鎖定常領域と第１の重鎖定常領域とのヘテロ二量体化を増大する１つもしくは複数の変異を含む。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および／または抗ＣＣＲ２結合部分は、カッパもしくはラムダの軽鎖定常領域またはその断片から選択される軽鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、カッパ軽鎖定常領域またはその断片を含み、抗ＣＣＲ２結合部分は、ラムダ軽鎖定常領域またはその断片を含む。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、ラムダ軽鎖定常領域またはその断片を含み、抗ＣＣＲ２結合部分は、カッパ軽鎖定常領域またはその断片を含む。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および抗ＣＣＲ２結合部分は、共通の軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒに一価性で結合し、かつ／またはＣＣＲ２に一価性で結合し、任意選択により、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒに一価性で結合し、かつＣＣＲ２に一価性で結合する。一部の実施形態では、多特異性分子は、ＣＣＲ２の存在下でＣＳＦ１Ｒを阻害し、任意選択により、細胞が、細胞表面上でＣＳＦ１ＲおよびＣＣＲ２の両方を発現する場合、多特異性分子は、細胞においてＣＳＦ１Ｒの活性（例えば、ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達、例えば、ＣＳＦ－１誘導ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達）を、例えば、少なくとも４０、５０、６０、７０、８０または９０％低減する。一部の実施形態では、多特異性分子は、ＣＣＲ２の非存在下でＣＳＦ１Ｒを阻害しないか、または実質的に阻害せず、任意選択により、細胞が、細胞表面上でＣＳＦ１Ｒを発現するが、ＣＣＲ２を発現しない場合、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒの活性（例えば、ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達、例えば、ＣＳＦ－１誘導ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達）を低減しないか、またはＣＳＦ１Ｒの活性を２、４、６、８、１０もしくは１５％以下しか低減しない。一部の実施形態では、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒの存在下でＣＣＲ２を阻害し、任意選択により、細胞が、細胞表面上でＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒの両方を発現する場合、多特異性分子は、細胞においてＣＣＲ２の活性を、例えば、少なくとも４０、５０、６０、７０、８０または９０％低減する。一部の実施形態では、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒの非存在下でＣＣＲ２を阻害しないか、または実質的に阻害せず、任意選択により、細胞が、細胞表面上でＣＣＲ２を発現するが、ＣＳＦ１Ｒを発現しない場合、多特異性分子は、ＣＣＲ２の活性を低減しないか、またはＣＣＲ２の活性を２、４、６、８、１０もしくは１５％以下しか低減しない。
一部の実施形態では、多特異性分子は、ＴＧＦ－ベータ阻害剤をさらに含む。一部の実施形態では、例えば、図２６Ｂについて実施例２０で説明される方法を使用して測定したとき、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦ－ベータ１、ＴＧＦ－ベータ３、またはＴＧＦ－ベータ１およびＴＧＦ－ベータ３の両方を阻害する。一実施形態では、例えば、図２６Ｂについて実施例２０で説明される方法を使用して測定したとき、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦ－ベータ１、ＴＧＦ－ベータ２、ＴＧＦ－ベータ３、ＴＧＦ－ベータ１およびＴＧＦ－ベータ３の両方、またはＴＧＦ－ベータ１、ＴＧＦ－ベータ２およびＴＧＦ－ベータ３を阻害する。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチド（例えば、ＴＧＦ－ベータ受容体の細胞外ドメインまたはその機能的バリアント）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチドのうちの１、２、３つまたはそれよりも多く）、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチドのうちの１、２、３つまたはそれよりも多く）またはＴＧＦＢＲ３ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ３ポリペプチドのうちの１、２、３つまたはそれよりも多く）のうちの１、２つまたはすべてを含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１の細胞外ドメインまたはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号９５、９６、９７、１２０、１２１もしくは１２２の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号１０４もしくは１０５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチドを含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインまたはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号９８、９９、１２３もしくは１２４の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号１００、１０１、１０２および１０３からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメインまたはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号１０６、１０７、１２５もしくは１２６の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号１０８のアミノ酸配列またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦＢＲ１ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦＢＲ２ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ヘテロ二量体を形成する２つのＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ヘテロ二量体を形成するＴＧＦＢＲ１ポリペプチドおよびＴＧＦＢＲ２ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ヘテロ二量体を形成するＴＧＦＢＲ１ポリペプチドおよびＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含む。一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ヘテロ二量体を形成するＴＧＦＢＲ２ポリペプチドおよびＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含む。
一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドおよび第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドを含む。一実施形態では、多特異性分子は、第１のＦｃ領域（例えば、第１のＣＨ１－Ｆｃ領域）および第２のＦｃ領域（例えば、第２のＣＨ１－Ｆｃ領域）を含み、任意選択により、（ｉ）第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、例えば、リンカーを介して、第１のＦｃ領域（例えば、第１のＣＨ１－Ｆｃ領域）、例えば、第１のＦｃ領域（例えば、第１のＣＨ１－Ｆｃ領域）のＣ末端に連結されており、かつ（ｉｉ）第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、例えば、リンカーを介して、第２のＦｃ領域（例えば、第２のＣＨ１－Ｆｃ領域）、例えば、第２のＦｃ領域（例えば、第２のＣＨ１－Ｆｃ領域）のＣ末端に連結されている。一実施形態では、第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドおよび第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、ホモ二量体またはヘテロ二量体、例えば、ホモ二量体を形成する。一実施形態では、第１または第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２またはＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメイン、例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインを含む。一実施形態では、多特異性分子は、図３５Ａまたは３５Ｂの構成を有する。一実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９２のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）および配列番号１９３のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９２のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）および配列番号１９５のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９４のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）および配列番号１９３のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９４のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）および配列番号１９５のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。
一実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドおよび第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドを含む。一実施形態では、多特異性分子は、重鎖定常領域１（ＣＨ１）および軽鎖定常領域（ＣＬ）を含み、任意選択により、（ｉ）第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、例えば、リンカーを介して、ＣＨ１、例えば、ＣＨ１のＮ末端に連結されており、かつ（ｉｉ）第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、例えば、リンカーを介して、ＣＬ、例えば、ＣＬのＮ末端に連結されている。一実施形態では、第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドおよび第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、ホモ二量体またはヘテロ二量体、例えば、ホモ二量体を形成する。一実施形態では、第１または第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２またはＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメイン、例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインを含む。一実施形態では、多特異性分子は、図３５Ｃまたは３５Ｄの構成を有する。一実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９６のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）および配列番号１９８のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９６のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）および配列番号１９９のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９７のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）および配列番号１９８のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。一実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９７のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）および配列番号１９９のアミノ酸配列（またはそれと実質的に同一の配列、例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。
一部の実施形態では、多特異性分子は、抗ＰＤ－Ｌ１結合部分をさらに含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１結合部分は、本明細書で開示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子を含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１結合部分は、ＰＤ－Ｌ１を阻害する。一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１結合部分は、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４６１、４６２、４６３、４６７、４６８および４６９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３４６のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３４７のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３４６および３４７のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、多特異性分子は、ＩＬ－２分子をさらに含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２分子は、本明細書で開示されるＩＬ－２分子、例えば、配列番号２３７もしくは２３８のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含むＩＬ－２分子である。
一部の実施形態では、多特異性分子は、１つもしくは複数のＣＤＲ（例えば、１、２または３つのＣＤＲ）、１つもしくは複数の（例えば、１または２つの）重鎖可変領域、１つもしくは複数の（例えば、１または２つの）軽鎖可変領域、表２５で開示されるアミノ酸配列の重鎖もしくは軽鎖、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、多特異性分子は、１つもしくは複数のＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個のＣＤＲ）、１つもしくは複数の（例えば、１または２つの）重鎖可変領域、１つもしくは複数の（例えば、１または２つの）軽鎖可変領域、表３４もしくは表２８で開示される多特異性分子の１つもしくは複数の（例えば、１または２つの）重鎖および／または１つもしくは複数の（例えば、１または２つの）軽鎖を含む。一部の実施形態では、多特異性分子は、表３４または表２８で開示される多特異性分子を含む。一部の実施形態では、多特異性分子は、表３４で開示される分子１０～８６のいずれかであるか、またはそれを含む。一部の実施形態では、多特異性分子は、表３４で開示されるＢＩＭ０６４８またはＢＩＭ０６５２であるか、またはそれを含む。一部の実施形態では、多特異性分子は、表２８で開示される分子１０～８６のいずれかであるか、またはそれを含む。一部の実施形態では、多特異性分子は、表２８で開示される分子ＢＩＭ０２０４、ＢＩＭ０２０５、ＢＩＭ０２０６、ＢＩＭ０２０７、ＢＩＭ０２０８、ＢＩＭ０２０９、ＢＩＭ０２１０、ＢＩＭ０２１１、ＢＩＭ０５４２、ＢＩＭ０５４３、ＢＩＭ０５４４、ＢＩＭ０５４５、ＢＩＭ０５４６、ＢＩＭ０５４７、ＢＩＭ０５４８、ＢＩＭ０５４９、ＢＩＭ０５５０、ＢＩＭ０５５１、ＢＩＭ０５５２、ＢＩＭ０５５３、ＢＩＭ０５５４、ＢＩＭ０５５５、ＢＩＭ０５５６、ＢＩＭ０５６６およびＢＩＭ０５６７であるか、またはそれを含む。
一部の実施形態では、多特異性分子は、図１２Ａ～１２Ｊのいずれかで示される構成を有する。
一態様では、（ｉ）抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）；（ｉｉ）抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）；および（ｉｉｉ）ＴＧＦ－ベータ阻害剤を含む多特異性分子が本明細書で開示される。一部の実施形態では、多特異性分子は、以下の特性：
（ｉ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１について実施例２で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞、またはＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合し、例えば、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合が、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞、またはＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合よりも少なくとも２、４、６、８、１０、１５、２０または２５倍強い；
（ｉｉ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１について実施例２で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合し、例えば、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合についてのＥＣ５０が、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞への結合についてのＥＣ５０の６０、５０、４０、３０、２０または１０％以下である；
（ｉｉｉ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１について実施例２で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、ＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合し、例えば、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合についてのＥＣ５０が、多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合についてのＥＣ５０の５０、４０、３０、２０、１０または５％以下である；
（ｉｖ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図５について実施例６で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好中球、組織常在性マクロファージ（例えば、クッパー細胞）またはランゲルハンス細胞と比較して、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）または骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）に優先的に結合し、例えば、多特異性分子のＴＡＭまたはＭＤＳＣへの結合が、多特異性分子のＴ細胞、ＮＫ細胞、好中球、組織常在性マクロファージ（例えば、クッパー細胞）またはランゲルハンス細胞への結合よりも少なくとも２、４、６、８、１０、１５、２０または２５倍強い；
（ｖ）例えば、トランズウェルプレート遊走アッセイを使用して測定したとき、例えば、図２について実施例３で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、単球遊走、例えば単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ１）誘導単球遊走を阻害し、例えば、ＭＣＰ１誘導単球遊走を少なくとも４０、５０、６０または７０％低減する；
（ｖｉ）例えば、細胞増殖ＭＴＴアッセイを使用して測定したとき、例えば、図３Ｂについて実施例４で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、マクロファージ、例えば、骨髄系由来マクロファージの増殖、例えば、骨髄系由来マクロファージのＣＳＦ－１誘導増殖を阻害し、例えば、骨髄系由来マクロファージのＣＳＦ－１誘導増殖を少なくとも５０、６０、７０または８０％低減する；
（ｖｉｉ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図４について実施例５で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、単球、例えば、骨髄系由来単球の分化、例えば、骨髄系由来単球のＣＳＦ－１誘導分化を阻害しないか、または実質的に阻害せず、例えば、骨髄系由来単球のＣＳＦ－１誘導分化を２、４、６、８または１０％以下しか低減しない；
（ｖｉｉｉ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図６について実施例７で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、ｉｎ ｖｉｖｏで、抑制性骨髄性細胞、例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣを枯渇させ、例えば、抑制性骨髄性細胞、例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣの数を少なくとも８０、８５、９０、９５、９９または９９．５％低減する；
（ｉｘ）例えば、免疫組織化学分析を使用して測定したとき、例えば、図７Ｂおよび７Ｄについて実施例８で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、ｉｎ ｖｉｖｏで、組織常在性マクロファージ、例えば、クッパー細胞を枯渇させないか、または実質的に枯渇させず、例えば、組織常在性マクロファージ、例えば、クッパー細胞の数を４、６、８、１０または１５％以下しか低減しない；
（ｘ）例えば、フローサイトメトリー分析または免疫組織化学分析を使用して測定したとき、例えば、図２１について説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、ＴＡＭ上でのＣＤ８６またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増大する；
（ｘｉ）例えば、細胞生存率ＭＴＴアッセイを使用して測定したとき、例えば、図８Ａについて実施例９で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞のＣＳＦ－１依存細胞生存を阻害しないか、または実質的に阻害せず、例えば、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞のＣＳＦ－１依存細胞生存を５、１０または１５％以下しか低減しない；
（ｘｉｉ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図９について実施例１０で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、ｉｎ ｖｉｖｏでＣＤ８＋Ｔ細胞腫瘍浸潤を増大し、例えば、腫瘍におけるＣＤ３＋Ｔ細胞中のＣＤ８＋Ｔ細胞％を少なくとも１．５、２または２．５倍増大する；
（ｘｉｉｉ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１０Ａについて実施例１１で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、ｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍におけるＴｒｅｇ頻度を低減し、例えば、腫瘍におけるＴｒｅｇ頻度を少なくとも１５、２０、２５または３０％低減する；
（ｘｉｖ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１０Ｂについて実施例１１で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、ｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍におけるＣＤ８＋Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比を増大し、例えば、腫瘍におけるＣＤ８＋Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比を少なくとも２．５、３、３．５、４または４．５倍増大する；
（ｘｖ）例えば、図１１Ａおよび１１Ｂについて実施例１２、または図２３について実施例１９で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、腫瘍成長を低減し、腫瘍保有動物の生存を増大し、かつ／または抗腫瘍免疫メモリーを向上する；
（ｘｖｉ）例えば、図３９Ｂおよび３９Ｄについて実施例２８で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、中間単球または非古典的単球と比較して、古典的単球に優先的に結合する；または
（ｘｖｉｉ）例えば、図４０Ａ～４０Ｆについて実施例２８で説明される方法を使用して測定したとき、多特異性分子が、ＴＧＦβの活性を、例えば、少なくとも３０、４０、５０、６０、７０、８０または９０％低減する
のうちの１つまたは複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６個またはそれよりも多く）を有する。
一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４７４、４７５、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４７６および４７７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０５、４１３、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１３、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０６、４１３、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１４、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０７、４１３、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１５、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０８、４１３、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１６、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１７、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０９、４１３、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１８、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１９、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４、４２０、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０２、４０４、４２１、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３２３～３３６のいずれかのアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３２４のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１２９のヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３４１のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号１３０のヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３２４および３４１、それぞれ、配列番号３２３および３４１、それぞれ、配列番号３２５および３４１、それぞれ、配列番号３２６および３４１、それぞれ、配列番号３２７および３４１、それぞれ、配列番号３２８および３４１、それぞれ、配列番号３２９および３４１、それぞれ、配列番号３３０および３４１、それぞれ、配列番号３３１および３４１、それぞれ、配列番号３３２および３４１、それぞれ、配列番号３３３および３４１、それぞれ、配列番号３３４および３４１、それぞれ、配列番号３３５および３４１、またはそれぞれ、配列番号３３６および３４１のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、多特異性分子は、配列番号１２７のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、多特異性分子は、配列番号１２８のヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０３、４７８、４７９、４３３、４３５および４３７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０３、４１１、４２２、４３３、４３５および４３７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０３、４１０、４２２、４３３、４３５および４３７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０３、４１０、４２３、４３３、４３５および４３７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４０３、４１２、４２２、４３３、４３５および４３７のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３７～３４０のいずれかのアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、任意選択により、ＶＨは、配列番号３３９のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１３８のヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号１３９もしくは３４２のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、任意選択により、ＶＬは、配列番号１３９のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号１４０のヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３３９および１３９、それぞれ、配列番号３３７および３４２、それぞれ、配列番号３３８および３４２、それぞれ、配列番号３３９および３４２、またはそれぞれ、配列番号３４０および３４２のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、多特異性分子は、配列番号１３６のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、多特異性分子は、配列番号１３７のヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＣＣＲ２結合部分は、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号４４６、４４７、４４８、４５４、４５５および４５６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号４８０のアミノ酸配列を含まない。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号４８１のアミノ酸配列を含まない。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号４８０のアミノ酸配列を含まず、ＶＬは、配列番号４８１のアミノ酸配列を含まない。
一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３４３もしくは３４４のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、任意選択により、ＶＨは、配列番号３４３のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１３３のヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３４５のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号２７２のヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、配列番号３４３および３４５、またはそれぞれ、配列番号３４４および３４５のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、多特異性分子は、配列番号１３１のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するアミノ酸配列のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、多特異性分子は、配列番号１３２のヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、多特異性分子は、配列番号３７３のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、多特異性分子は、配列番号１３４のヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、多特異性分子は、配列番号１２７のアミノ酸配列、配列番号１３１のアミノ酸配列、配列番号３７３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、多特異性分子は、配列番号１３６のアミノ酸配列、配列番号１３１のアミノ酸配列、配列番号３７３のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子は、ＣＳＦ１Ｒに一価性で結合する。一部の実施形態では、抗ＣＣＲ２抗体分子は、ＣＣＲ２に一価性で結合する。一部の実施形態では、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒに一価性で結合し、かつＣＣＲ２に一価性で結合する。一部の実施形態では、多特異性分子は、ＣＣＲ２の存在下でＣＳＦ１Ｒを阻害し、任意選択により、細胞が、細胞表面上でＣＳＦ１ＲおよびＣＣＲ２の両方を発現する場合、多特異性分子は、細胞においてＣＳＦ１Ｒの活性（例えば、ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達、例えば、ＣＳＦ－１誘導ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達）を、例えば、少なくとも４０、５０、６０、７０、８０または９０％低減する。一部の実施形態では、多特異性分子は、ＣＣＲ２の非存在下でＣＳＦ１Ｒを阻害しないか、または実質的に阻害せず、任意選択により、細胞が、細胞表面上でＣＳＦ１Ｒを発現するが、ＣＣＲ２を発現しない場合、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒの活性（例えば、ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達、例えば、ＣＳＦ－１誘導ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達）を低減しないか、またはＣＳＦ１Ｒの活性を２、４、６、８、１０もしくは１５％以下しか低減しない。
一部の実施形態では、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒの存在下でＣＣＲ２を阻害し、任意選択により、細胞が、細胞表面上でＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒの両方を発現する場合、多特異性分子は、細胞においてＣＣＲ２の活性を、例えば、少なくとも４０、５０、６０、７０、８０または９０％低減する。一部の実施形態では、多特異性分子は、ＣＳＦ１Ｒの非存在下でＣＣＲ２を阻害しないか、または実質的に阻害せず、任意選択により、細胞が、細胞表面上でＣＣＲ２を発現するが、ＣＳＦ１Ｒを発現しない場合、多特異性分子は、ＣＣＲ２の活性を低減しないか、またはＣＣＲ２の活性を２、４、６、８、１０もしくは１５％以下しか低減しない。
一部の実施形態では、例えば、図２６Ｂについて実施例２０で説明される方法を使用して測定したとき、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦ－ベータ１、ＴＧＦ－ベータ２、ＴＧＦ－ベータ３、ＴＧＦ－ベータ１およびＴＧＦ－ベータ３の両方、またはＴＧＦ－ベータ１、ＴＧＦ－ベータ２およびＴＧＦ－ベータ３を阻害する。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチド（例えば、ＴＧＦ－ベータ受容体の細胞外ドメイン、またはその機能的バリアント）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチドのうちの１、２、３つまたはそれよりも多く）、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチドのうちの１、２、３つまたはそれよりも多く）またはＴＧＦＢＲ３ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ３ポリペプチドのうちの１、２、３つまたはそれよりも多く）のうちの１、２つまたはすべてを含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチドを含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、（ｉ）ＴＧＦＢＲ１の細胞外ドメインまたはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）、（ｉｉ）配列番号９５、９６、９７、１２０、１２１もしくは１２２の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）、または（ｉｉｉ）配列番号１０４もしくは１０５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。
一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチドを含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、（ｉ）ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインまたはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）、（ｉｉ）配列番号９８、９９、１２３もしくは１２４の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）、または（ｉｉｉ）配列番号１００、１０１、１０２および１０３からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。
一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、（ｉ）ＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメインまたはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）、（ｉｉ）配列番号１０６、１０７、１２５もしくは１２６の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）、または（ｉｉｉ）配列番号１０８のアミノ酸配列またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）を含む。
一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドを含み、任意選択により、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、（ｉ）ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦＢＲ１ポリペプチド、（ｉｉ）ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦＢＲ２ポリペプチド、または（ｉｉｉ）ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含む。
一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ヘテロ二量体を形成する２つのＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドを含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、（ｉ）ヘテロ二量体を形成するＴＧＦＢＲ１ポリペプチドおよびＴＧＦＢＲ２ポリペプチド、（ｉｉ）ヘテロ二量体を形成するＴＧＦＢＲ１ポリペプチドおよびＴＧＦＢＲ３ポリペプチド、または（ｉｉｉ）ヘテロ二量体を形成するＴＧＦＢＲ２ポリペプチドおよびＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含む。
一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドおよび第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドを含む。
一部の実施形態では、多特異性分子は、第１のＦｃ領域（例えば、第１のＣＨ１－Ｆｃ領域）および第２のＦｃ領域（例えば、第２のＣＨ１－Ｆｃ領域）を含む。一部の実施形態では、（ｉ）第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、例えば、リンカーを介して、第１のＦｃ領域（例えば、第１のＣＨ１－Ｆｃ領域）、例えば、第１のＦｃ領域（例えば、第１のＣＨ１－Ｆｃ領域）のＣ末端に連結されており、かつ（ｉｉ）第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、例えば、リンカーを介して、第２のＦｃ領域（例えば、第２のＣＨ１－Ｆｃ領域）、例えば、第２のＦｃ領域（例えば、第２のＣＨ１－Ｆｃ領域）のＣ末端に連結されている。一部の実施形態では、第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドおよび第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、ホモ二量体またはヘテロ二量体、例えば、ホモ二量体を形成する。一部の実施形態では、第１または第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２またはＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメイン、例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、多特異性分子は、図３５Ａまたは３５Ｂの構成を有する。
一部の実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９２のアミノ酸配列および配列番号１９３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９２のアミノ酸配列および配列番号１９５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９４のアミノ酸配列および配列番号１９３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９４のアミノ酸配列および配列番号１９５のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、多特異性分子は、重鎖定常領域１（ＣＨ１）および軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む。一部の実施形態では、（ｉ）第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、例えば、リンカーを介して、ＣＨ１、例えば、ＣＨ１のＮ末端に連結されており、かつ（ｉｉ）第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、例えば、リンカーを介して、ＣＬ、例えば、ＣＬのＮ末端に連結されている。一部の実施形態では、第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドおよび第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、ホモ二量体またはヘテロ二量体、例えば、ホモ二量体を形成する。一部の実施形態では、第１または第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２またはＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメイン、例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、多特異性分子は、図３５Ｃまたは３５Ｄの構成を有する。
一部の実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９６のアミノ酸配列および配列番号１９８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９６のアミノ酸配列および配列番号１９９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９７のアミノ酸配列および配列番号１９８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、多特異性分子は、配列番号１９７のアミノ酸配列および配列番号１９９のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＴＧＦ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）、または抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）に連結されている。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および／または抗ＣＣＲ２結合部分は、Ｆｃ領域を含み、ＴＧＦ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、Ｆｃ領域、例えば、Ｆｃ領域のＣ末端に連結されている。一部の実施形態では、多特異性分子は、第１のＴＧＦ－ベータ阻害剤および第２のＴＧＦ－ベータ阻害剤を含み、第１のＴＧＦ－ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）に連結されており、第２のＴＧＦ－ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）に連結されている。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、第１のＦｃ領域を含み、抗ＣＣＲ２結合部分は、第２のＦｃ領域を含み、多特異性分子は、第１のＴＧＦ－ベータ阻害剤および第２のＴＧＦ－ベータ阻害剤を含み、第１のＴＧＦ－ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、第１のＦｃ領域、例えば、第１のＦｃ領域のＣ末端に連結されており、第２のＴＧＦ－ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して、第２のＦｃ領域、例えば、第２のＦｃ領域のＣ末端に連結されている。
一部の実施形態では、（ｉ）抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、第１の軽鎖および第１の重鎖を含み、第１の重鎖は、第１のＦｃ領域を含み、第１のＦｃ領域のＣ末端は、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）に連結されており、（ｉｉ）抗ＣＣＲ２結合部分は、第２の軽鎖および第２の重鎖を含み、第２の重鎖は、第２のＦｃ領域を含み、第２のＦｃ領域のＣ末端は、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）に連結されている。一部の実施形態では、多特異性分子は、図１２Ｂで示される構成を有する。
一部の実施形態では、多特異性分子は、表３４または表２８で開示される分子を含む。一部の実施形態では、多特異性分子は、図３９Ｆまたは１２Ａ～１２Ｊのいずれかで示される構成を有するか、またはそれを含む。
一部の実施形態では、本明細書で開示される多特異性分子は、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）を誘導する。
一部の実施形態では、本明細書で開示される多特異性分子は、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）を誘導しない。
別の態様では、本明細書で開示される多特異性分子（例えば、抗体）をコードする単離された核酸分子が本明細書で提供される。
別の態様では、本明細書で説明される多特異性分子のいずれかをコードするヌクレオチド配列、またはそれと実質的に相同の（例えば、それと少なくとも９５％～９９．９％同一の）ヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子が本明細書で提供される。
別の態様では、本明細書で説明される核酸分子のうちの１つまたは複数を含むベクター、例えば、発現ベクターが本明細書で提供される。
別の態様では、本明細書で説明される核酸分子または本明細書で説明されるベクターを含む細胞、例えば、宿主細胞が本明細書で提供される。
別の態様では、本明細書で説明される多特異性分子を作製、例えば、産生する方法であって、本明細書で説明される細胞、例えば、宿主細胞を好適な条件、例えば、遺伝子発現および／またはヘテロ二量体化に好適な条件下で培養するステップを含む方法が本明細書で提供される。
別の態様では、本明細書で説明される多特異性分子、および薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤を含む医薬組成物が本明細書で提供される。
別の態様では、過剰増殖性障害、がん、線維性障害もしくは状態、炎症性障害もしくは状態、または自己免疫障害を処置する方法が本明細書で提供される。一実施形態では、障害は、過剰増殖性障害、例えば、過剰増殖性結合組織障害（例えば、過剰増殖性線維性疾患）である。一実施形態では、線維性（例えば、過剰増殖性線維性）疾患は、多システム性または臓器特異性である。例示的な線維性疾患には、多システム性障害（例えば、全身性硬化症、多巣性線維性硬化症、骨髄移植レシピエントにおける強皮症性移植片対宿主病、腎性全身性線維症、強皮症）および臓器特異性障害（例えば、肺、肝臓、心臓、腎臓、膵臓、皮膚および他の臓器の線維症）が含まれるが、これらに限定されない。他の実施形態では、線維性疾患は、肝線維症（例えば、肝硬変、ＮＡＳＨおよび本明細書で説明される他の状態）、肺線維症（例えば、ＩＰＦ）、腎線維症または骨髄の線維症（例えば、骨髄線維症）から選択される。
別の態様では、対象においてがんを処置する方法であって、それを必要とする対象に、本明細書で説明される多特異性分子を投与するステップを含み、多特異性分子が、がんを処置するのに有効な量で投与される、方法が、本明細書で提供される。
一部の実施形態では、がんは、固形腫瘍がんまたは転移病変である。一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、膵がん（例えば、膵臓腺癌）、乳がん、結腸直腸がん、肺がん（例えば、小細胞または非小細胞肺がん）、皮膚がん（例えば、黒色腫）、卵巣がん、肝がん、脳がん（例えば、神経膠腫）、膀胱がん、子宮頸がん、頭頸部がん、腎がん、中皮がん、甲状腺がんまたは子宮がんのうちの１つまたは複数である。
一部の実施形態では、方法は、第２の治療的処置を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、第２の治療的処置は、治療剤（例えば、化学療法剤、生物剤、ホルモン治療）、放射線照射または手術を含む。一部の実施形態では、治療剤は、化学療法剤または生物剤から選択される。一部の実施形態では、治療剤は、チェックポイント阻害剤である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体（例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブまたはピディリズマブ）、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＣＤ１６０抗体、抗２Ｂ４抗体、抗ＣＤ８０抗体、抗ＣＤ８６抗体、抗Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）抗体、抗Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）抗体、抗ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０）抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗ＭＨＣクラスＩ抗体、抗ＭＨＣクラスＩＩ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＩＲ１抗体および抗Ａ２ａＲ抗体からなる群から選択される。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ１抗体である。
一態様では、対象においてがんを処置する方法であって、それを必要とする対象に、抗ＰＤ１抗体と組み合わせた、有効量の本明細書で説明される多特異性分子（例えば、本明細書で説明される抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２多特異性分子）を投与するステップを含む方法が、本明細書で提供される。
一態様では、本発明は、医薬としての使用のための本発明の多特異性分子、本発明の抗体分子、本発明の核酸分子、本発明のベクター、本発明の細胞、または本発明の医薬組成物に関する。
一態様では、本発明は、がんの処置における医薬としての使用のための本発明の多特異性分子、本発明の抗体分子、本発明の核酸分子、本発明のベクター、本発明の細胞、または本発明の医薬組成物に関する。
一態様では、線維性疾患または障害の処置を必要とする対象において線維性疾患または障害を処置する方法であって、対象に、有効量の本明細書で開示される多特異性分子を投与し、それによって、線維性疾患または障害を処置するステップを含む方法が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、線維性疾患または障害は、肺、肝臓、心臓もしくは血管系、腎臓、膵臓、皮膚、胃腸管、骨髄もしくは造血組織、神経系、眼またはその組合せの線維性疾患または障害である。一部の実施形態では、線維性疾患または障害は、肺線維症（例えば、特発性肺線維症（ＩＰＦ：Ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｉｂｒｏｓｉｓ））または肝線維症（例えば、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ：Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ））である。
一部の実施形態では、線維性状態の処置は、組織線維症の形成もしくは沈着のうちの１つもしくは複数を低減もしくは阻害すること；線維性病変の大きさ、細胞充実性（例えば、線維芽細胞または免疫細胞数）、組成もしくは細胞含量を低減すること；線維性病変のコラーゲンもしくはヒドロキシプロリン含量を低減すること；線維形成性タンパク質の発現もしくは活性を低減すること；炎症性応答と関連する線維症を低減すること；線維症と関連する体重減少を低下すること；または生存を増大することを含む。
一部の実施形態では、線維性疾患または障害は、肺線維症である。一実施形態では、線維性疾患または障害は、特発性である。他の実施形態では、線維性疾患または障害は、疾患（例えば、感染性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、悪性もしくはがん性疾患および／または結合性疾患）；毒素；傷害（例えば、環境ハザード（例えば、アスベスト、炭じん、多環芳香族炭化水素）、喫煙、創傷）；医学的処置（例えば、外科的切開、化学療法または放射線照射）またはその組合せと関連している（例えば、それに続発性である）。
一態様では、肝疾患または障害の処置を必要とする対象において肝疾患または障害を処置する方法であって、対象に、有効量の本明細書で開示される多特異性分子を投与し、それによって、肝疾患または障害を処置するステップを含む方法が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、肝疾患または障害は、肝臓の機能または生理に影響を及ぼす線維性障害または結合組織障害である。一実施形態では、線維性障害または結合組織障害は、全身性（全身に影響を及ぼす）、多臓器性または臓器特異性（例えば、肝特異性）であり得る。線維性肝障害の例には、肝線維症（ｌｉｖｅｒ ｆｉｂｒｏｓｉｓ／ｈｅｐａｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、肝硬変、および肝臓における細胞外基質タンパク質、例えば、コラーゲンの蓄積に関連する任意の障害、肝臓瘢痕ならびに／または異常な肝血管系が含まれるが、これらに限定されない。一実施形態では、肝疾患または障害は、肝硬変である。肝硬変は、再生結節（修復プロセスの結果としての）を含む肝線維症の末期であると考えられ、典型的に肝血管系の歪みを伴う。他の実施形態では、肝疾患または障害は、肝がんである。肝がんの例には、肝細胞癌（ＨＣＣ：ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、原発性肝臓細胞癌、肝細胞腫、線維層板型癌、限局性結節性過形成、胆管肉腫、肝内胆管がん、血管肉腫（ａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）または血管肉腫（ｈｅｍａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）、肝腺腫、肝血管腫、肝血腫（ｈｅｐａｔｉｃ ｈａｍａｒｔｏｍａ）、肝芽腫、乳児血管内皮腫（ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｈｅｍａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｏｍａ）、肝臓の混合腫瘍、間葉組織の腫瘍、および肝臓の肉腫が含まれるが、これらに限定されない。また、肝がんは、非肝がん、例えば、乳がん、結腸直腸がん、食道がん、腎臓または腎がん、肺がん、卵巣がん、膵がん、直腸がん、皮膚がん（例えば、黒色腫）、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）または胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）（胃腸管がんを含む）および子宮がんの転移と関連付けられ得る。一実施形態では、肝疾患または障害は、ＨＣＣである。ある特定の実施形態では、肝疾患または障害は、非限定的に、肝炎症または損傷；ウイルス（例えば、慢性ウイルス）感染（例えば、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス（デルタ型肝炎ウイルス）、Ｅ型肝炎ウイルス、エプスタイン・バーアデノウイルスまたはサイトメガロウイルス；または寄生虫感染、例えば、住血吸虫症）；アルコール依存症；脂肪性肝疾患；代謝障害（例えば、ヘモクロマトーシス（ｈｅｍａｃｈｒｏｍａｔｏｓｉｓ）、糖尿病、肥満、高血圧、脂質異常症、ガラクトース血症または糖原病）；自己免疫障害（例えば、自己免疫性肝炎（ＡＩＨ：ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ）、自己免疫性肝疾患、ルポイド肝炎、全身性エリテマトーデス、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ：ｐｒｉｍａｒｙ ｂｉｌｉａｒｙ ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ）、強皮症または全身性硬化症（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｓｃｅｒｌｏｓｉｓ））；炎症性肝障害（例えば、脂肪性肝炎、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ：ｐｒｉｍａｒｙ ｓｃｌｅｒｏｓｉｎｇ ｃｈｏｌａｎｇｉｔｉｓ）、潰瘍性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患）；遺伝性または先天性肝疾患（例えば、ウィルソン病、ジルベール病、バイラー症候群、グリーンランド・エスキモー家族性胆汁うっ滞症、ツェルヴェーガー症候群、アラジール症候群（ＡＬＧＳ：Ａｌａｇｉｌｌｅｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症（ＰＦＩＣ：ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｆａｍｉｌｉａｌ ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃ ｃｈｏｌｅｓｔａｓｉｓ）、アルファ１アンチトリプシン欠損症、嚢胞性線維症、インド小児肝硬変または遺伝性ヘモクロマトーシス）；および肝傷害（例えば、薬物毒性、アルコール依存症、虚血、栄養失調または身体的外傷）を含む１つまたは複数の傷害によって引き起こされる。一実施形態では、肝疾患または障害は、脂肪肝（またはＦＬＤ）、アルコール性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ：ｎｏｎ－ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性脂肪性肝炎、単純脂肪症、ライ症候群、および肝臓細胞における脂質の異常な保持を伴う任意の障害である。
一態様では、炎症性障害または状態の処置を必要とする対象において炎症性障害または状態を処置する方法であって、対象に、有効量の本明細書で開示される多特異性分子を投与し、それによって、炎症性障害または状態を処置するステップを含む方法が、本明細書で提供される。一実施形態では、炎症性障害または状態は、腎臓における炎症性障害または状態である。一実施形態では、炎症性障害または状態は、ループス腎炎である。
別に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で説明される方法および材料と同様または同等の方法および材料は、本発明の実施または試験において使用され得るが、好適な方法および材料は、以下に説明される。本明細書で挙げられるすべての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。不一致の場合、定義を含む本明細書が優先する。加えて、材料、方法および例は、単に例示であり、限定であるとは意図されない。
本発明の他の特色および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかである。
本特許または出願ファイルは、カラーで作成された少なくとも１つの図面を含有する。カラー図面を含む本特許または特許出願公開のコピーは、請求および必要な料金の支払いに応じて、特許庁により提供される。
フロー分析によって決定された、ｍＣＣＲ２（円）、ｍＣＳＦ１Ｒ（正方形）、またはｍＣＣＲ２およびｍＣＳＦ１Ｒの両方（三角形）を発現する一過性にトランスフェクトしたＥｘｐｉＣＨＯ細胞への、漸増濃度のＵｎｉＴＩ－０１のｉｎ ｖｉｔｒｏでの結合。図１において、蛍光パーセント（％）は、試験された抗体濃度に対してプロットされる。 トランズウェル細胞培養系における骨髄系由来単球のＭＣＰ－１依存細胞遊走に対する、漸増濃度のアイソタイプ対照（ｍＩｇＧ２ａ）、抗マウスＣＣＲ２モノクローナル抗体（ａＣＣＲ２）またはＵｎｉＴＩ－０１の効果。 ｉｎ ｖｉｔｒｏでの骨髄系由来単球のマクロファージへのｍＣＳＦ－１依存分化および増殖に対する、漸増濃度のＵｎｉＴＩ－０１、抗マウスＣＳＦ１Ｒモノクローナル抗体（ａＣＳＦ１Ｒ）またはアイソタイプ対照（ｍＩｇＧ２ａ）の効果。図３Ａは、ｍＣＳＦ１の存在下での細胞培養の０日目または４日目における抗ＣＣＲ２抗体および抗ＣＳＦ１Ｒ抗体を用いた骨髄系細胞の染色を示す１対のフローサイトメトリープロットである。 図３Ｂにおいて、増殖％は試験された各条件に関してプロットされる。すべての抗体は１５μｇ／ｍｌで試験された。 骨髄系由来単球のｍＣＳＦ－１依存分化および増殖に対するＵｎｉＴＩ－０１、抗マウスＣＳＦ１Ｒモノクローナル抗体（ａＣＳＦ１Ｒ）またはアイソタイプ対照（ｍＩｇＧ２ａ）の効果。すべての抗体は１５μｇ／ｍｌで試験された。 フロー分析によって決定された、初代腫瘍内Ｍ－ＭＤＳＣおよびＭ２様マクロファージへの、漸増濃度のＵｎｉＴＩ－０１のｉｎ ｖｉｔｒｏでの結合。図５は、ＵｎｉＴＩ－０１を使用したＣＤ２０６＋マクロファージ、Ｍ－ＭＤＳＣ、好中球またはＣＤ３＋Ｔ細胞の染色を示すヒストグラムのパネルである。 ＥＭＴ６およびＭＣ３８同系腫瘍モデルにおける腫瘍内骨髄性細胞集団に対するＵｎｉＴＩ－０１のｉｎ ｖｉｖｏ投与の効果。 ＥＭＴ６同系腫瘍モデルにおけるクッパー細胞に対するＵｎｉＴＩ－０１のｉｎ ｖｉｖｏ投与の効果。図７Ａおよび７Ｂは、それぞれ、抗体Ｆ４／８０を用いて染色した腫瘍および肝組織の免疫組織化学グラフである。図７Ｃおよび７Ｄは、それぞれ、腫瘍および肝組織のＦ４／８０陽性面積％を示すグラフである。 ＥＭＴ６同系腫瘍モデルにおけるクッパー細胞に対するＵｎｉＴＩ－０１のｉｎ ｖｉｖｏ投与の効果。図７Ａおよび７Ｂは、それぞれ、抗体Ｆ４／８０を用いて染色した腫瘍および肝組織の免疫組織化学グラフである。図７Ｃおよび７Ｄは、それぞれ、腫瘍および肝組織のＦ４／８０陽性面積％を示すグラフである。 ＥＭＴ６同系腫瘍モデルにおけるクッパー細胞に対するＵｎｉＴＩ－０１のｉｎ ｖｉｖｏ投与の効果。図７Ａおよび７Ｂは、それぞれ、抗体Ｆ４／８０を用いて染色した腫瘍および肝組織の免疫組織化学グラフである。図７Ｃおよび７Ｄは、それぞれ、腫瘍および肝組織のＦ４／８０陽性面積％を示すグラフである。 ＥＭＴ６同系腫瘍モデルにおけるクッパー細胞に対するＵｎｉＴＩ－０１のｉｎ ｖｉｖｏ投与の効果。図７Ａおよび７Ｂは、それぞれ、抗体Ｆ４／８０を用いて染色した腫瘍および肝組織の免疫組織化学グラフである。図７Ｃおよび７Ｄは、それぞれ、腫瘍および肝組織のＦ４／８０陽性面積％を示すグラフである。 小腸および腎臓における健康な組織マクロファージに対するＵｎｉＴＩ－０１のｉｎ ｖｉｖｏ投与の効果。図７Ｅおよび７Ｇは、それぞれ、抗体Ｆ４／８０を用いて染色した小腸および腎臓の免疫組織化学グラフである。図７Ｆおよび７Ｈは、それぞれ、小腸および腎臓のＦ４／８０陽性面積％を示すグラフである。 小腸および腎臓における健康な組織マクロファージに対するＵｎｉＴＩ－０１のｉｎ ｖｉｖｏ投与の効果。図７Ｅおよび７Ｇは、それぞれ、抗体Ｆ４／８０を用いて染色した小腸および腎臓の免疫組織化学グラフである。図７Ｆおよび７Ｈは、それぞれ、小腸および腎臓のＦ４／８０陽性面積％を示すグラフである。 小腸および腎臓における健康な組織マクロファージに対するＵｎｉＴＩ－０１のｉｎ ｖｉｖｏ投与の効果。図７Ｅおよび７Ｇは、それぞれ、抗体Ｆ４／８０を用いて染色した小腸および腎臓の免疫組織化学グラフである。図７Ｆおよび７Ｈは、それぞれ、小腸および腎臓のＦ４／８０陽性面積％を示すグラフである。 小腸および腎臓における健康な組織マクロファージに対するＵｎｉＴＩ－０１のｉｎ ｖｉｖｏ投与の効果。図７Ｅおよび７Ｇは、それぞれ、抗体Ｆ４／８０を用いて染色した小腸および腎臓の免疫組織化学グラフである。図７Ｆおよび７Ｈは、それぞれ、小腸および腎臓のＦ４／８０陽性面積％を示すグラフである。 ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＣＣＲ２陰性ＮＦＳ－６０細胞におけるＣＳＦ－１依存細胞生存に対するＵｎｉＴＩ－０１の効果。図８Ａにおいて、細胞生存率は、抗ＣＣＲ２／抗ＣＳＦ１Ｒ二特異性抗体ＵｎｉＴＩ－０１、二価単一特異性抗ＣＳＦ１Ｒ抗体（ａＣＳＦ１Ｒ）または一価単一特異性抗ＣＳＦ１Ｒ抗体（単ａＣＳＦ１Ｒ）に関して試験された抗体濃度に対してプロットされる。 図８Ｂは、抗ＣＣＲ２抗体および抗ＣＳＦ１Ｒ抗体を用いたＮＦＳ－６０細胞の染色、またはアイソタイプ対照抗体を用いたＮＦＳ－６０細胞の染色を示す１対のフローサイトメトリープロットである。 ＥＭＴ６モデルの腫瘍へのＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤に対するＵｎｉＴＩ－０１のｉｎ ｖｉｖｏ投与の効果。図９は、示された処置下での腫瘍におけるＣＤ３＋Ｔ細胞中のＣＤ８＋Ｔ細胞％を示すグラフである。 ＭＣ３８モデルの腫瘍におけるＴｒｅｇ頻度に対するＵｎｉＴＩ－０１のｉｎ ｖｉｖｏ投与の効果。図１０Ａは、示された処置下での腫瘍におけるＣＤ４＋Ｔ細胞中のＦＯＸＰ３＋細胞％を示すグラフである。 図１０Ｂにおいて、腫瘍におけるＣＤ８＋Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比は、各処置に関してプロットされる。 図１１Ａおよび１１Ｂ：ＵｎｉＴＩ－０１は、ＥＭＴ６腫瘍モデルにおいて抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせて処置した場合、抗腫瘍有効性、腫瘍縮小および向上した生存を示す。図１１Ａは、各処置に関する腫瘍体積を示すグラフのパネルである。図１１Ｂは、示された処置下での生存パーセントを示すグラフである。図１１Ｃ：ＵｎｉＴＩ－０１は、ＭＣ３８結腸モデルにおいて、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体よりも優れた抗ＰＤ－Ｌ１併用利益を示す。 図１１Ａおよび１１Ｂ：ＵｎｉＴＩ－０１は、ＥＭＴ６腫瘍モデルにおいて抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせて処置した場合、抗腫瘍有効性、腫瘍縮小および向上した生存を示す。図１１Ａは、各処置に関する腫瘍体積を示すグラフのパネルである。図１１Ｂは、示された処置下での生存パーセントを示すグラフである。図１１Ｃ：ＵｎｉＴＩ－０１は、ＭＣ３８結腸モデルにおいて、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体よりも優れた抗ＰＤ－Ｌ１併用利益を示す。 図１１Ｃは、各処置に関する腫瘍体積を示すグラフのパネルである。 図１１Ｃは、各処置に関する腫瘍体積を示すグラフのパネルである。 図１１Ｃは、各処置に関する腫瘍体積を示すグラフのパネルである。 図１２Ａは、抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２二特異性抗体の例示的な構成を示す図である。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２二特異性抗体は、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および抗ＣＣＲ２結合部分を含む。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、重鎖およびカッパ軽鎖を含み、抗ＣＣＲ２結合部分は、重鎖およびラムダ軽鎖を含む。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、重鎖およびラムダ軽鎖を含み、抗ＣＣＲ２結合部分は、重鎖およびカッパ軽鎖を含む。図１２Ｂは、ＴＧＦβトラップと融合した抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２二特異性抗体の例示的な構成を示す図である。一実施形態では、ＴＧＦβトラップは、ＴＧＦβ受容体２の２つの細胞外ドメインのホモ二量体を含む。図１２Ｃおよび１２Ｄは、抗ＰＤ－Ｌ１結合部分と融合した抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２二特異性抗体の例示的な構成を示す図である。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１結合部分はｓｃＦｖである。図１２Ｅ～１２Ｇは、１つまたは複数のＩＬ－２分子と融合した抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２二特異性抗体の例示的な構成を示す図である。一実施形態では、１つまたは複数のＩＬ－２分子は、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分または抗ＣＣＲ２結合部分の軽鎖のＣ末端と融合する。図１２Ｈは、抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２二特異性抗体の例示的な構成を示す図である。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２二特異性抗体は、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および抗ＣＣＲ２結合部分を含む。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、Ｆｃと融合した抗ＣＳＦ１Ｒ ｓｃＦｖを含む。一実施形態では、抗ＣＣＲ２結合部分は、Ｆｃと融合した抗ＣＣＲ２ Ｆａｂを含む。図１２Ｉは、ＴＧＦβトラップをさらに含む抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２二特異性抗体の例示的な構成を示す図である。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２二特異性抗体は、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および抗ＣＣＲ２結合部分を含む。一実施形態では、抗ＣＣＲ２結合部分は、Ｆｃと融合した抗ＣＣＲ２ Ｆａｂを含む。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、抗ＣＣＲ２結合部分のＦｃのＣ末端と融合した抗ＣＳＦ１Ｒ ｓｃＦｖを含む。一実施形態では、ＴＧＦβトラップは、ＣＨ１およびＦｃと融合した第１のＴＧＦＢＲ２ ＥＣＤと、ＣＬと融合した第２のＴＧＦＢＲ２ ＥＣＤとを含む。図１２Ｊは、ＴＧＦβトラップと融合した抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２二特異性抗体の例示的な構成を示す図である。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２二特異性抗体は、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および抗ＣＣＲ２結合部分を含む。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、Ｆｃと融合した抗ＣＳＦ１Ｒ ｓｃＦｖを含む。一実施形態では、抗ＣＣＲ２結合部分は、Ｆｃと融合した抗ＣＣＲ２ Ｆａｂを含む。一実施形態では、ＴＧＦβトラップは、抗ＣＣＲ２結合部分のＦｃのＣ末端と融合した第１のＴＧＦＢＲ２ ＥＣＤと、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分のＦｃのＣ末端と融合した第２のＴＧＦＢＲ２ ＥＣＤとを含む。 図１２Ｂは、ＴＧＦβトラップと融合した抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２二特異性抗体の例示的な構成を示す図である。一実施形態では、ＴＧＦβトラップは、ＴＧＦβ受容体２の２つの細胞外ドメインのホモ二量体を含む。 図１２Ｃは、抗ＰＤ－Ｌ１結合部分と融合した抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２二特異性抗体の例示的な構成を示す図である。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１結合部分はｓｃＦｖである。 図１２Ｄは、抗ＰＤ－Ｌ１結合部分と融合した抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２二特異性抗体の例示的な構成を示す図である。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１結合部分はｓｃＦｖである。 図１２Ｅは、１つまたは複数のＩＬ－２分子と融合した抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２二特異性抗体の例示的な構成を示す図である。一実施形態では、１つまたは複数のＩＬ－２分子は、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分または抗ＣＣＲ２結合部分の軽鎖のＣ末端と融合する。 図１２Ｆは、１つまたは複数のＩＬ－２分子と融合した抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２二特異性抗体の例示的な構成を示す図である。一実施形態では、１つまたは複数のＩＬ－２分子は、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分または抗ＣＣＲ２結合部分の軽鎖のＣ末端と融合する。 図１２Ｇは、１つまたは複数のＩＬ－２分子と融合した抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２二特異性抗体の例示的な構成を示す図である。一実施形態では、１つまたは複数のＩＬ－２分子は、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分または抗ＣＣＲ２結合部分の軽鎖のＣ末端と融合する。 図１２Ｈは、抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２二特異性抗体の例示的な構成を示す図である。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２二特異性抗体は、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および抗ＣＣＲ２結合部分を含む。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、Ｆｃと融合した抗ＣＳＦ１Ｒ ｓｃＦｖを含む。一実施形態では、抗ＣＣＲ２結合部分は、Ｆｃと融合した抗ＣＣＲ２ Ｆａｂを含む。 図１２Ｉは、ＴＧＦβトラップをさらに含む抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２二特異性抗体の例示的な構成を示す図である。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２二特異性抗体は、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および抗ＣＣＲ２結合部分を含む。一実施形態では、抗ＣＣＲ２結合部分は、Ｆｃと融合した抗ＣＣＲ２ Ｆａｂを含む。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、抗ＣＣＲ２結合部分のＦｃのＣ末端と融合した抗ＣＳＦ１Ｒ ｓｃＦｖを含む。一実施形態では、ＴＧＦβトラップは、ＣＨ１およびＦｃと融合した第１のＴＧＦＢＲ２ ＥＣＤと、ＣＬと融合した第２のＴＧＦＢＲ２ ＥＣＤとを含む。 図１２Ｊは、ＴＧＦβトラップと融合した抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２二特異性抗体の例示的な構成を示す図である。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２二特異性抗体は、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および抗ＣＣＲ２結合部分を含む。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、Ｆｃと融合した抗ＣＳＦ１Ｒ ｓｃＦｖを含む。一実施形態では、抗ＣＣＲ２結合部分は、Ｆｃと融合した抗ＣＣＲ２ Ｆａｂを含む。一実施形態では、ＴＧＦβトラップは、抗ＣＣＲ２結合部分のＦｃのＣ末端と融合した第１のＴＧＦＢＲ２ ＥＣＤと、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分のＦｃのＣ末端と融合した第２のＴＧＦＢＲ２ ＥＣＤとを含む。 図１３は、抗ＣＳＦ１Ｒ／抗ＣＣＲ２抗体分子が腫瘍において免疫抑制性骨髄性細胞を低減し、かつ細胞傷害性Ｔ細胞の浸潤を増大し得ることを示す概略図である。 図１４は、ＵｎｉＴＩ－０１が、抗ＣＳＦ１Ｒ処置と比較した場合、ＣＳＦ１Ｒ発現破骨細胞を存続させることを示すグラフのパネルである。 図１５Ａは、ＥＭＴ６、ＭＣ３８またはＬＬＣ１腫瘍を保有するマウスにおける腫瘍１ｍｇ当たりのＭ－ＭＤＳＣ数を示すグラフのパネルである。 図１５Ａは、ＥＭＴ６、ＭＣ３８またはＬＬＣ１腫瘍を保有するマウスにおける腫瘍１ｍｇ当たりのＭ－ＭＤＳＣ数を示すグラフのパネルである。 図１５Ａは、ＥＭＴ６、ＭＣ３８またはＬＬＣ１腫瘍を保有するマウスにおける腫瘍１ｍｇ当たりのＭ－ＭＤＳＣ数を示すグラフのパネルである。 図１５Ｂは、ＥＭＴ６、ＭＣ３８またはＬＬＣ１腫瘍を保有するマウスにおける腫瘍１ｍｇ当たりのＴＡＭ数を示すグラフのパネルである。 図１５Ｂは、ＥＭＴ６、ＭＣ３８またはＬＬＣ１腫瘍を保有するマウスにおける腫瘍１ｍｇ当たりのＴＡＭ数を示すグラフのパネルである。 図１５Ｂは、ＥＭＴ６、ＭＣ３８またはＬＬＣ１腫瘍を保有するマウスにおける腫瘍１ｍｇ当たりのＴＡＭ数を示すグラフのパネルである。 図１６は、抗ラットＩｇＧ抗体および抗Ｆ４／８０抗体を使用した組織の免疫組織化学染色を示すグラフのパネルである。 図１７は、注射後の示された時点の脾臓、脳、肺、心臓、結腸、腎臓、骨、筋肉または腫瘍におけるＵｎｉＴＩ－０１の体内分布を示す棒グラフである。 図１８は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体および抗ＣＣＲ２抗体を使用した腫瘍Ｍ－ＭＤＳＣまたは腫瘍Ｇ－ＭＤＳＣの染色を示すフローサイトメトリープロットのパネルである。 図１９Ａは、抗ＣＳＦ１Ｒ二価単一特異性抗体、抗ＣＣＲ２二価単一特異性抗体またはＵｎｉＴＩ－０１を使用した腫瘍組織の免疫化学染色を示すグラフのパネルである。 図１９Ｂは、試験された各条件下でのＣＤ３陽性面積％を示すグラフである。 図２０は、試験された各条件下でのＣＤ８陽性面積％、ＦｏｘＰ３陽性面積％またはＣＤ８／Ｔｒｅｇ比を示すグラフのパネルである。 図２１は、ＥＭＴ６、ＭＣ３８およびＬＬＣ１同系腫瘍モデルを使用したｉｎ ｖｉｖｏ研究に基づく、抗ＣＣＲ２二価単一特異性抗体、抗ＣＳＦ１Ｒ二価単一特異性抗体およびＵｎｉＴＩ－０１の特性を比較したグラフである。 ＵｎｉＴＩ－０１は、腫瘍縮小を駆動し、かつ抑制性骨髄性細胞を枯渇させる。図２２Ａは、試験された各条件下でのＣＤ４５＋細胞のうちのＭ－ＭＤＳＣ％（上段のパネル）またはＣＤ４５＋細胞のうちのＴＡＭ％（下段のパネル）を示す１対のグラフである。 図２２Ｂは、試験された各条件下でのＥＭＴ６乳房腫瘍を保有するマウスの腫瘍体積を示すグラフのパネルである。ＣＴ２６およびＭＣ３８結腸腫瘍を保有するマウスと類似した結果が観察された。 ＵｎｉＴＩ－０１／ａＰＤ－Ｌ１併用に関する持続的応答および免疫メモリー。図２３の左のパネルは、ＥＭＴまたはＣＴ２６腫瘍を保有するマウスの腫瘍体積を示す１対のグラフである。図２３の右のパネルは、ＥＭＴ腫瘍細胞およびＣＴ２６腫瘍細胞の両方を再び負荷したマウスの腫瘍体積を示す１対のグラフである。 ＵｎｉＴＩ－０１は追加のマウス同系がんモデルにおいて腫瘍成長を阻害する。図２４Ａ、２４Ｂおよび２４Ｃは、試験された各条件下でのＭＣ３８、ＣＴ２６またはＥＭＴ６腫瘍を保有するマウスの腫瘍体積を示すグラフのパネルである。 ＵｎｉＴＩ－０１は追加のマウス同系がんモデルにおいて腫瘍成長を阻害する。図２４Ａ、２４Ｂおよび２４Ｃは、試験された各条件下でのＭＣ３８、ＣＴ２６またはＥＭＴ６腫瘍を保有するマウスの腫瘍体積を示すグラフのパネルである。 ＵｎｉＴＩ－０１は追加のマウス同系がんモデルにおいて腫瘍成長を阻害する。図２４Ａ、２４Ｂおよび２４Ｃは、試験された各条件下でのＭＣ３８、ＣＴ２６またはＥＭＴ６腫瘍を保有するマウスの腫瘍体積を示すグラフのパネルである。 図２５は、ＵｎｉＴＩ－１０２が免疫抑制性骨髄性細胞を低減し、かつＴＧＦβを中和することを示す概略図である。 図２６Ａは、ＵｎｉＴＩ－１０２の構成を示す概略図である。図２６Ｂは、試験された各条件下でのＴＧＦβ／Ｓｍａｄ活性化のレベルを示すグラフである。 図２６Ａは、ＵｎｉＴＩ－１０２の構成を示す概略図である。図２６Ｂは、試験された各条件下でのＴＧＦβ／Ｓｍａｄ活性化のレベルを示すグラフである。 ＵｎｉＴＩ－１０２は、ＥＭＴ６腫瘍モデルにおいて強い単独療法応答を示し、かつ抗ＰＤ－Ｌ１の付加により増強されない。図２７Ａ～２７Ｃは、試験された各条件下でのＥＭＴ６腫瘍を保有するマウスの腫瘍体積を示すグラフのパネルである。 ＵｎｉＴＩ－１０２は、ＥＭＴ６腫瘍モデルにおいて強い単独療法応答を示し、かつ抗ＰＤ－Ｌ１の付加により増強されない。図２７Ａ～２７Ｃは、試験された各条件下でのＥＭＴ６腫瘍を保有するマウスの腫瘍体積を示すグラフのパネルである。 ＵｎｉＴＩ－１０２は、ＥＭＴ６腫瘍モデルにおいて強い単独療法応答を示し、かつ抗ＰＤ－Ｌ１の付加により増強されない。図２７Ａ～２７Ｃは、試験された各条件下でのＥＭＴ６腫瘍を保有するマウスの腫瘍体積を示すグラフのパネルである。 抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の１対のＳＤＳゲルを示す図である。 ＥＬＩＳＡによって測定した、抗ヒトＣＳＦ１Ｒ抗体のヒトおよびカニクイザルＣＳＦ１Ｒ－Ｆｃ ＥＣＤへの結合を示す１対のグラフである。 ＥＬＩＳＡによって測定した、抗ヒトＣＳＦ１Ｒ抗体のヒトおよびカニクイザルＣＳＦ１Ｒ－Ｆｃ ＥＣＤへの結合を示す１対のグラフである。 様々な一価抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の存在下での単球によるＭＣＰ－１分泌のレベルを示すグラフである。示されるデータは、２名のヒトドナーのうちの１名を表す。 フローサイトメトリーによって測定した、一価抗ＣＳＦ１Ｒ抗体のＣＳＦ１Ｒを発現する細胞への結合を示すグラフである。 例示的なＣＣＲ２×ＣＳＦ１Ｒ二特異性抗体の１対のＳＤＳゲルを示す図である。 ＣＣＲ２×ＣＳＦ１Ｒ二特異性抗体がＴａｎｇｏ ＣＣＲ２－ｂｌａ Ｕ２ＯＳ細胞においてＣＣＬ２依存レポーター活性を遮断することを示すグラフである。 ＣＣＲ２×ＣＳＦ１Ｒ二特異性抗体が精製ヒト単球においてｈＣＳＦ１媒介ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）分泌を遮断することを示すグラフである。示されるデータは、２名のヒトドナーのうちの１名を表す。 ＴＧＦβ阻害剤を含む例示的な多特異性分子を示す概略図である。一部の実施形態では、ＴＧＦβ阻害剤は、ＴＧＦ－ベータ受容体ＥＣＤホモ二量体を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦβ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２ ＥＣＤヘテロ二量体を含む。図３５Ａおよび３５Ｂにおいて、２つのＴＧＦＢＲ ＥＣＤドメインは、２つのＦｃ領域のＣ末端に連結されている。一部の実施形態では、図３５Ａまたは３５Ｂで示されるＣＨ１－Ｆｃ－ＴＧＦＢＲ ＥＣＤ領域は、配列番号１９２または１９３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、図３５Ａまたは３５Ｂで示されるＦｃ－ＴＧＦＢＲ ＥＣＤ領域は、配列番号１９４または１９５のアミノ酸配列を含む。図３５Ｃおよび３５Ｄにおいて、２つのＴＧＦＢＲ ＥＣＤドメインは、それぞれ、ＣＨ１およびＣＬに連結されている。一部の実施形態では、図３５Ｃまたは３５Ｄで示されるＴＧＦＢＲ ＥＣＤ－ＣＨ１－Ｆｃ領域は、配列番号１９６または１９７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、図３５Ｃまたは３５Ｄで示されるＴＧＦＢＲ ＥＣＤ－ＣＬ領域は、配列番号１９８または１９９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、多特異性分子は、結合部分Ａおよび結合部分Ｂを含む。一部の実施形態では、結合部分Ａまたは結合部分Ｂは、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）である。一部の実施形態では、結合部分Ａまたは結合部分Ｂは、抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）である。一部の実施形態では、結合部分Ａは、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）であり、結合部分Ｂは、抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）である。一部の実施形態では、結合部分Ａは、抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）であり、結合部分Ｂは、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）である。 ＴＧＦβ阻害剤を含む例示的な多特異性分子を示す概略図である。 ＴＧＦβ阻害剤を含む例示的な多特異性分子を示す概略図である。 ＴＧＦβ阻害剤を含む例示的な多特異性分子を示す概略図である。 ＴＧＦβ／Ｓｍａｄ活性化がＴＧＦβトラップ濃度に対してプロットされるグラフである。この研究において試験された構築物には、単一ＴＧＦβ Ｆａｂトラップ、抗ＰＤ－Ｌ１×ＴＧＦβトラップ、ＵｎｉＴＩ－０１（抗ＣＣＲ２×抗ＣＳＦ１Ｒ）およびＵｎｉＴＩ－１０２（抗ＣＣＲ２×抗ＣＳＦ１Ｒ×ＴＧＦβトラップ）が含まれた。 がん患者からの単球系骨髄系由来サプレッサー細胞（Ｍｏ－ＭＤＳＣ）および腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）上でのＣＳＦ１ＲおよびＣＣＲ２共発現。図３７は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体および抗ＣＣＲ２抗体を使用した卵巣腫瘍（上段のパネル）または結腸直腸腫瘍（下段のパネル）からのｍｏ－ＭＤＳＣまたはＴＡＭの染色を示すフローサイトメトリープロットのパネルを含む。図３７はまた、卵巣腫瘍（上段のパネル）または結腸直腸腫瘍（下段のパネル）からのＭ－ＭＤＳＣ、ＴＡＭ、顆粒細胞系骨髄系由来サプレッサー細胞（Ｇ－ＭＤＳＣ）、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、単球または非免疫細胞の中のＣＣＲ２＋ＣＳＦ１Ｒ＋細胞％を示す棒グラフも含む。ＣＳＦ１ＲおよびＣＣＲ２共発現はＣＤ１６３＋ＴＡＭ上でも検出された。 ＰＤ１またはＴＧＦβ遮断療法に耐性の同系腫瘍モデルにおいてマウス代替物ｍＵｎｉＴＩ－１０２を用いて実証された治療構想。図３８Ａは、ｍＵｎｉＴＩ－１０２がＥＭＴ６乳房腫瘍においてｍｏ－ＭＤＳＣを枯渇させることを示すグラフである。図３８Ｂは、ｍＵｎｉＴＩ－１０２が組織常在性マクロファージよりもＴＡＭを優先的に枯渇させることを示すグラフである。図３８Ｃは、ｍＵｎｉＴＩ－１０２がＥＭＴ６乳房腫瘍モデルにおいて単独療法抗腫瘍活性を実証することを示すグラフである。図３８Ｄは、ｍＵｎｉＴＩ－１０２がＥＭＴ６腫瘍保有マウスにおいて生存を向上させることを示すグラフである。 ＰＤ１またはＴＧＦβ遮断療法に耐性の同系腫瘍モデルにおいてマウス代替物ｍＵｎｉＴＩ－１０２を用いて実証された治療構想。図３８Ａは、ｍＵｎｉＴＩ－１０２がＥＭＴ６乳房腫瘍においてｍｏ－ＭＤＳＣを枯渇させることを示すグラフである。図３８Ｂは、ｍＵｎｉＴＩ－１０２が組織常在性マクロファージよりもＴＡＭを優先的に枯渇させることを示すグラフである。図３８Ｃは、ｍＵｎｉＴＩ－１０２がＥＭＴ６乳房腫瘍モデルにおいて単独療法抗腫瘍活性を実証することを示すグラフである。図３８Ｄは、ｍＵｎｉＴＩ－１０２がＥＭＴ６腫瘍保有マウスにおいて生存を向上させることを示すグラフである。 ＰＤ１またはＴＧＦβ遮断療法に耐性の同系腫瘍モデルにおいてマウス代替物ｍＵｎｉＴＩ－１０２を用いて実証された治療構想。図３８Ａは、ｍＵｎｉＴＩ－１０２がＥＭＴ６乳房腫瘍においてｍｏ－ＭＤＳＣを枯渇させることを示すグラフである。図３８Ｂは、ｍＵｎｉＴＩ－１０２が組織常在性マクロファージよりもＴＡＭを優先的に枯渇させることを示すグラフである。図３８Ｃは、ｍＵｎｉＴＩ－１０２がＥＭＴ６乳房腫瘍モデルにおいて単独療法抗腫瘍活性を実証することを示すグラフである。図３８Ｄは、ｍＵｎｉＴＩ－１０２がＥＭＴ６腫瘍保有マウスにおいて生存を向上させることを示すグラフである。 ＰＤ１またはＴＧＦβ遮断療法に耐性の同系腫瘍モデルにおいてマウス代替物ｍＵｎｉＴＩ－１０２を用いて実証された治療構想。図３８Ａは、ｍＵｎｉＴＩ－１０２がＥＭＴ６乳房腫瘍においてｍｏ－ＭＤＳＣを枯渇させることを示すグラフである。図３８Ｂは、ｍＵｎｉＴＩ－１０２が組織常在性マクロファージよりもＴＡＭを優先的に枯渇させることを示すグラフである。図３８Ｃは、ｍＵｎｉＴＩ－１０２がＥＭＴ６乳房腫瘍モデルにおいて単独療法抗腫瘍活性を実証することを示すグラフである。図３８Ｄは、ｍＵｎｉＴＩ－１０２がＥＭＴ６腫瘍保有マウスにおいて生存を向上させることを示すグラフである。 ヒトＵｎｉＴＩ－１０２は全血において初代ヒト古典的単球に優先的に結合する。図３９Ａは、古典的単球上でのＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒ共発現を示す模式図である。図３９Ｂは、示された濃度のＢＩＭ０６４８（「６４８」）、ＢＩＭ０６５２（「０５２」）またはアイソタイプ対照抗体（「ｉｓｏ」）における、古典的単球の中のＵｎｉＴＩ－１０２＋細胞の正規化頻度を示すグラフである。図３９Ｃは、非古典的単球上でのＣＳＦ１Ｒ発現を示す模式図である。図３９Ｄは、示された濃度のＢＩＭ０６４８（「６４８」）、ＢＩＭ０６５２（「０５２」）またはアイソタイプ対照抗体（「ｉｓｏ」）における、非古典的単球（ＣＤ１４－ＣＤ１６＋）の中のＵｎｉＴＩ－１０２＋細胞の正規化頻度を示すグラフである。図３９Ｅは、異なる種類の単球上でのＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒの受容体密度を示す表である。図３９Ｆは、ＵｎｉＴＩ－１０２分子ＢＩＭ０６４８およびＢＩＭ０６５２の構成を示す図である。 図３９Ｂは、示された濃度のＢＩＭ０６４８（「６４８」）、ＢＩＭ０６５２（「０５２」）またはアイソタイプ対照抗体（「ｉｓｏ」）における、古典的単球の中のＵｎｉＴＩ－１０２＋細胞の正規化頻度を示すグラフである。 図３９Ｃは、非古典的単球上でのＣＳＦ１Ｒ発現を示す模式図である。 図３９Ｄは、示された濃度のＢＩＭ０６４８（「６４８」）、ＢＩＭ０６５２（「０５２」）またはアイソタイプ対照抗体（「ｉｓｏ」）における、非古典的単球（ＣＤ１４－ＣＤ１６＋）の中のＵｎｉＴＩ－１０２＋細胞の正規化頻度を示すグラフである。 図３９Ｅは、異なる種類の単球上でのＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒの受容体密度を示す表である。 図３９Ｆは、ＵｎｉＴＩ－１０２分子ＢＩＭ０６４８およびＢＩＭ０６５２の構成を示す図である。 ｉｎ ｖｉｔｒｏでの様々な機能的アッセイによって確認されたヒトＵｎｉＴＩ－１０２分子によるＴＧＦβ中和。図４０Ａにおいて、ＴＧＦβ／Ｓｍａｄ活性化は、ＢＩＭ０６４８、ＢＩＭ０６５２およびヒトＩｇＧ１の濃度に対してプロットされる。図４０Ｂは、以下の処理群：ＴＧＦβを有するがいかなる構築物も有しない群（＋ＴＧＦｂ）、ＴＧＦβを有しない群（ＴＧＦｂ無し）、ＵｎｉＴＩ－１０２分子ＢＩＭ０６４８群、抗ＰＤ－Ｌ１－ＴＧＦＢＲ２群およびヒトＩｇＧ１群に関する、ＣＤ４＋Ｔ細胞のうちのＦＯＸＰ３＋ＣＤ２５＋％を示すグラフである。図４０Ｃは、以下の処理群：ＴＧＦβを有するがいかなる構築物も有しない群（＋ＴＧＦｂ）、ＴＧＦβを有しない群（ＴＧＦｂ無し）、ＵｎｉＴＩ－１０２分子ＢＩＭ０６４８群、抗ＰＤ－Ｌ１－ＴＧＦＢＲ２群およびヒトＩｇＧ１群に関する特異的死滅を示すグラフである。図４０Ｄは、ＳＷ８４０細胞によって分泌されたＴＧＦｂ１、ＴＧＦｂ２、ＴＧＦｂ３、ＩＬ－１０、ＩＬ－４およびＩＬ－６の量を示すグラフである。図４０Ｅおよび４０Ｆは、それぞれ、各処理群におけるＣＤ２０６（Ｍ２マーカー）およびＨＬＡ（Ｍ１マーカー）の発現を示すグラフである。データは２名のドナーを表す。同等の結果がＢＩＭ０６５２に関して観察された。 ｉｎ ｖｉｔｒｏでの様々な機能的アッセイによって確認されたヒトＵｎｉＴＩ－１０２分子によるＴＧＦβ中和。図４０Ｂは、以下の処理群：ＴＧＦβを有するがいかなる構築物も有しない群（＋ＴＧＦｂ）、ＴＧＦβを有しない群（ＴＧＦｂ無し）、ＵｎｉＴＩ－１０２分子ＢＩＭ０６４８群、抗ＰＤ－Ｌ１－ＴＧＦＢＲ２群およびヒトＩｇＧ１群に関する、ＣＤ４＋Ｔ細胞のうちのＦＯＸＰ３＋ＣＤ２５＋％を示すグラフである。 ｉｎ ｖｉｔｒｏでの様々な機能的アッセイによって確認されたヒトＵｎｉＴＩ－１０２分子によるＴＧＦβ中和。図４０Ｃは、以下の処理群：ＴＧＦβを有するがいかなる構築物も有しない群（＋ＴＧＦｂ）、ＴＧＦβを有しない群（ＴＧＦｂ無し）、ＵｎｉＴＩ－１０２分子ＢＩＭ０６４８群、抗ＰＤ－Ｌ１－ＴＧＦＢＲ２群およびヒトＩｇＧ１群に関する特異的死滅を示すグラフである。 ｉｎ ｖｉｔｒｏでの様々な機能的アッセイによって確認されたヒトＵｎｉＴＩ－１０２分子によるＴＧＦβ中和。図４０Ｄは、ＳＷ８４０細胞によって分泌されたＴＧＦｂ１、ＴＧＦｂ２、ＴＧＦｂ３、ＩＬ－１０、ＩＬ－４およびＩＬ－６の量を示すグラフである。 ｉｎ ｖｉｔｒｏでの様々な機能的アッセイによって確認されたヒトＵｎｉＴＩ－１０２分子によるＴＧＦβ中和。図４０Ｅは、各処理群におけるＣＤ２０６（Ｍ２マーカー）の発現を示すグラフである。データは２名のドナーを表す。同等の結果がＢＩＭ０６５２に関して観察された。 ｉｎ ｖｉｔｒｏでの様々な機能的アッセイによって確認されたヒトＵｎｉＴＩ－１０２分子によるＴＧＦβ中和。図４０Ｆは、各処理群におけるＨＬＡ（Ｍ１マーカー）の発現を示すグラフである。データは２名のドナーを表す。同等の結果がＢＩＭ０６５２に関して観察された。 健康なカニクイザルにおけるＢＩＭ０６４８の薬物動態データ。図４１Ａは、健康なカニクイザルへの０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇの投与後の示された時点におけるＢＩＭ０６４８の濃度を示すグラフである。 図４１Ｂは、ＢＩＭ０６４８の薬物動態データを要約した表である。 カニクイザルにおけるＢＩＭ０６４８の標的占有率の証拠。図４２は、０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇのＢＩＭ０６４８の投与後のカニクイザルにおけるＴＧＦβ１（左）、Ｍ－ＣＳＦ（中央）およびＭＣＰ－１（右）の血清レベルを示すグラフのパネルである。 サルおよびヒトにおけるＣＳＦ１Ｒ遮断と一致する、ＢＩＭ０６４８に関して示された生体応答の傾向。図４３Ａ～４３Ｄは、０．１ｍｇ／ｋｇ（図４３Ａ）、１ｍｇ／ｋｇ（図４３Ｂ）、１０ｍｇ／ｋｇ（図４３Ｃ）または３０ｍｇ／ｋｇ（図４３Ｄ）のＢＩＭ０６４８の投与後の示された時点におけるカニクイザル中の非古典的単球（総単球％）を示すグラフのパネルである。 図４Ｂは、１ｍｇ／ｋｇ（図４３Ｂ）のＢＩＭ０６４８の投与後の示された時点におけるカニクイザル中の非古典的単球（総単球％）を示すグラフのパネルである。 図４３Ｃは、１０ｍｇ／ｋｇ（図４３Ｃ）のＢＩＭ０６４８の投与後の示された時点におけるカニクイザル中の非古典的単球（総単球％）を示すグラフのパネルである。 図４３Ｄは、３０ｍｇ／ｋｇ（図４３Ｄ）のＢＩＭ０６４８の投与後の示された時点におけるカニクイザル中の非古典的単球（総単球％）を示すグラフのパネルである。 マウスＣＣＲ２×ＣＳＦ１Ｒ二特異性分子（ｍＵｎｉＴＩ－０１）は、抗ＣＳＦ１ＲｍＡｂと比べて、ＥＭＴ６腫瘍保有マウスにおいて循環Ｍｏ－ＭＤＳＣを枯渇させることにより効果的である。図４４は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせたｍＵｎｉＴＩ－０１または抗ＣＳＦ１Ｒ抗体（「ＣＳＦ１Ｒ」）の投与後のＥＭＴ６腫瘍保有マウスにおけるＭ－ＭＤＳＣ％を示す棒グラフである。 ｍＵｎｉＴＩ－１０２はＥＭＴ６同系腫瘍モデルにおいて血中Ｌｙ６Ｃｈｉ単球に効率的に結合する。図４５Ａは、ｍＵｎｉＴＩ－１０２のＬｙ６Ｃｈｉ古典的単球への結合を示すフローサイトメトリーヒストグラムを含む。図４５Ｂは、抗ヒトＴＧＦβＲＩＩ抗体を使用して検出したＴＧＦβＲＩＩ＋Ｌｙ６Ｃｈｉ単球％を示すグラフである。 ｍＵｎｉＴＩ－１０２はＥＭＴ６同系腫瘍モデルにおいて血中Ｌｙ６Ｃｈｉ単球に効率的に結合する。図４５Ａは、ｍＵｎｉＴＩ－１０２のＬｙ６Ｃｈｉ古典的単球への結合を示すフローサイトメトリーヒストグラムを含む。図４５Ｂは、抗ヒトＴＧＦβＲＩＩ抗体を使用して検出したＴＧＦβＲＩＩ＋Ｌｙ６Ｃｈｉ単球％を示すグラフである。 ｍＵｎｉＴＩ－１０２はＥＭＴ６同系腫瘍モデルにおいて血中Ｌｙ６Ｃｈｉ古典的単球を枯渇させる。図４６Ａおよび４６Ｂは、それぞれ、４用量のｍＵｎｉＴＩ－１０２の投与後のＥＭＴ６腫瘍保有マウスにおける単一細胞のうちのＬｙ６Ｃｈｉ単球％および単一細胞のうちのＬｙ６Ｃｌｏ単球％を示すグラフである。ｍＵｎｉＴＩ－１０２の投与は、血液中のＬｙ６Ｃｈｉ古典的単球の用量依存的枯渇をもたらしたが、ＣＣＲ２陰性であるＬｙ６Ｃｌｏ非古典的単球を存続させた。微小の変化が全血ＣＤ３＋％、Ｔｒｅｇ％またはＣＤ４／ＣＤ８比において指摘された。 図４６Ｂは、それぞれ、４用量のｍＵｎｉＴＩ－１０２の投与後のＥＭＴ６腫瘍保有マウスにおける単一細胞のうちのＬｙ６Ｃｈｉ単球％および単一細胞のうちのＬｙ６Ｃｌｏ単球％を示すグラフである。 ｍＵｎｉＴＩ－１０２はＥＭＴ６同系腫瘍モデルにおいて血清ＴＧＦβ－１レベルを減少する。図４７Ａは、ＥＭＴ６同系腫瘍モデルにおいてｍＵｎｉＴＩ－１０２を試験するｉｎ ｖｉｖｏ研究の設計を示す図である。 図４７Ｂは、ＥＬＩＳＡによって測定した酸処理血清試料におけるＴＧＦ－β１レベルを示す棒グラフである。類似した低減がＣＴ２６モデルにおいても観察された。 ＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒのヒトおよびカニクイザル全血受容体密度を示す表である。カニクイザルでは、ヒトと比べて高い非古典的単球上でのＣＳＦ１Ｒ発現が存在する。この発現パターンと一致して、ヒト全血と異なりカニクイザル全血では、非古典的単球集団への有意な結合が存在した。カニクイザル全血において、ＢＩＭ０６４８とＢＩＭ０６５２との間の単球集団への結合の有意差は観察されなかった。 ＵｎｉＴＩ－１０２（ＢＩＭ０６４８）は優良な製造特性を呈する。図４９Ａは、ＢＩＭ０６４８の製剤情報を要約する図である。図４９Ｂは、４０℃のＰＢＳ中でのＢＩＭ０６４８の安定性を試験する研究からの、０日目、１０日目および３０日目における結果を示すグラフである。図４９Ｃは、ＢＩＭ０６４８の高コロイド安定性および低凝集傾向を示すグラフである。図４９Ｄは、ＢＩＭ０６４８の熱安定性を試験する研究からの結果を示すグラフである。図４９Ｅは、ＢＩＭ０６４８の自己凝集する傾向を試験する研究からの結果を示すグラフである。図４９Ｆは、ＢＩＭ０６４８のｐＨ３．５における安定性を試験する研究からの結果を示すグラフである。 図４９Ｂは、４０℃のＰＢＳ中でのＢＩＭ０６４８の安定性を試験する研究からの、０日目、１０日目および３０日目における結果を示すグラフである。 図４９Ｃは、ＢＩＭ０６４８の高コロイド安定性および低凝集傾向を示すグラフである。 図４９Ｄは、ＢＩＭ０６４８の熱安定性を試験する研究からの結果を示すグラフである。 図４９Ｅは、ＢＩＭ０６４８の自己凝集する傾向を試験する研究からの結果を示すグラフである。 図４９Ｆは、ＢＩＭ０６４８のｐＨ３．５における安定性を試験する研究からの結果を示すグラフである。 ＵｎｉＴＩ－１０２（ＢＩＭ０６４８）はＦｃ受容体への保持された結合を示す。図５０は、Ｂｉａｃｏｒｅを使用して評価した、ＢＩＭ０６４８のＦｃ受容体への結合を示すグラフである。 ＵｎｉＴＩ－１０２（ＢＩＭ０６４８）は無視できる非特異的結合傾向を示す。図５１は、ＢＩＭ０６４８の非特異的結合を試験する研究からの結果を示す棒グラフである。多反応性は、バキュロウイルス粒子への結合を検査することによって評価した。ｈＩｇＧ１、ベバシズマブおよびペンブロリズマブは、ベンチマークとして使用した。 ＢＩＭ０６４８のＭ１マクロファージ、ＭＤＳＣ、ＴＡＭおよびＭ２マクロファージへの結合を示すグラフのパネルである。二価抗ＣＳＦ１Ｒ抗体であるＢＨＭ１６５０は、対照として使用した。ｉｎ ｖｉｔｒｏ分化単球由来Ｍ１マクロファージは、ＣＳＦ１ＲおよびＣＣＲ２の最も低い発現を有する。ＴＡＭおよびＭ２マクロファージは、最も高い発現を有する。ＭＤＳＣは、中間のＣＳＦ１Ｒ発現レベル、およびＭ１マクロファージと類似したＣＣＲ２発現レベルを有する。ＢＩＭ０６４８の接合は、ＣＣＲ２／ＣＳＦ１Ｒ発現と相関する－ＴＡＭおよびＭ２マクロファージにおいて最も高く、ＭＤＣＳにおいて中間であり、かつＭ１マクロファージにおいては結合が存在しない。 ＢＩＭ０６４８のＭ１マクロファージ、ＭＤＳＣ、ＴＡＭおよびＭ２マクロファージへの結合を示すグラフのパネルである。二価抗ＣＳＦ１Ｒ抗体であるＢＨＭ１６５０は、対照として使用した。ｉｎ ｖｉｔｒｏ分化単球由来Ｍ１マクロファージは、ＣＳＦ１ＲおよびＣＣＲ２の最も低い発現を有する。ＴＡＭおよびＭ２マクロファージは、最も高い発現を有する。ＭＤＳＣは、中間のＣＳＦ１Ｒ発現レベル、およびＭ１マクロファージと類似したＣＣＲ２発現レベルを有する。ＢＩＭ０６４８の接合は、ＣＣＲ２／ＣＳＦ１Ｒ発現と相関する－ＴＡＭおよびＭ２マクロファージにおいて最も高く、ＭＤＣＳにおいて中間であり、かつＭ１マクロファージにおいては結合が存在しない。 ＢＩＭ０６４８のＭ１マクロファージ、ＭＤＳＣ、ＴＡＭおよびＭ２マクロファージへの結合を示すグラフのパネルである。二価抗ＣＳＦ１Ｒ抗体であるＢＨＭ１６５０は、対照として使用した。ｉｎ ｖｉｔｒｏ分化単球由来Ｍ１マクロファージは、ＣＳＦ１ＲおよびＣＣＲ２の最も低い発現を有する。ＴＡＭおよびＭ２マクロファージは、最も高い発現を有する。ＭＤＳＣは、中間のＣＳＦ１Ｒ発現レベル、およびＭ１マクロファージと類似したＣＣＲ２発現レベルを有する。ＢＩＭ０６４８の接合は、ＣＣＲ２／ＣＳＦ１Ｒ発現と相関する－ＴＡＭおよびＭ２マクロファージにおいて最も高く、ＭＤＣＳにおいて中間であり、かつＭ１マクロファージにおいては結合が存在しない。 ＢＩＭ０６４８のＭ１マクロファージ、ＭＤＳＣ、ＴＡＭおよびＭ２マクロファージへの結合を示すグラフのパネルである。二価抗ＣＳＦ１Ｒ抗体であるＢＨＭ１６５０は、対照として使用した。ｉｎ ｖｉｔｒｏ分化単球由来Ｍ１マクロファージは、ＣＳＦ１ＲおよびＣＣＲ２の最も低い発現を有する。ＴＡＭおよびＭ２マクロファージは、最も高い発現を有する。ＭＤＳＣは、中間のＣＳＦ１Ｒ発現レベル、およびＭ１マクロファージと類似したＣＣＲ２発現レベルを有する。ＢＩＭ０６４８の接合は、ＣＣＲ２／ＣＳＦ１Ｒ発現と相関する－ＴＡＭおよびＭ２マクロファージにおいて最も高く、ＭＤＣＳにおいて中間であり、かつＭ１マクロファージにおいては結合が存在しない。 ＩｇＧ、ＢＩＭ０６４８およびＢＨＭ１６５０（二価抗ＣＳＦ１Ｒ抗体）の古典的単球（図５３Ａ）または非古典的単球（図５３Ｂ）への結合％を示すグラフである。ＢＩＭ０６４８は、ＰＢＭＣにおいて、非古典的単球に対するよりも大きい親和性で古典的単球に結合する。 ＩｇＧ、ＢＩＭ０６４８およびＢＨＭ１６５０（二価抗ＣＳＦ１Ｒ抗体）の古典的単球（図５３Ａ）または非古典的単球（図５３Ｂ）への結合％を示すグラフである。ＢＩＭ０６４８は、ＰＢＭＣにおいて、非古典的単球に対するよりも大きい親和性で古典的単球に結合する。 抗ＣＳＦ１Ｒ機能アッセイであるヒト単球生存アッセイからの結果を示すグラフである。図５４Ａは、ＢＩＭ０６４８、ＢＩＭ０６５２、ＢＨＭ１６５０（二価抗ＣＳＦ１Ｒ抗体）、ヒトＩｇＧ１、サイトカイン無し群、およびＣＳＦ１のみの群からの結果を示すグラフである。 図５４Ｂは、ＢＩＭ０６４８、ＢＩＭ０６５２、ＢＨＭ１６５０（二価抗ＣＳＦ１Ｒ抗体）、ヒトＩｇＧ１、サイトカイン無し群、およびＣＳＦ１のみの群からの結果を示すグラフである。 図５４Ｃは、ＢＩＭ０６４８、ＢＩＭ０６５２およびＢＨＭ１６５０のヒト単球生存／増殖／ＩＣ５０（ｎＭ）の阻害を示す表である。 抗ＣＣＲ２機能アッセイであるヒト単球系細胞遊走アッセイからの結果を示すグラフである。図５５Ａは、ＢＩＭ０６４８、ＢＩＭ０６５２、ＢＨＭ０１３９（二価抗ＣＣＲ２抗体）、ヒトＩｇＧ１、ｒｈＣＣＬ２無し群、およびｒｈＣＣＬ２単独群の、抗体濃度に対する細胞計数（遊走）を示すグラフである。 図５５Ｂは、ＴＨＰ－１遊走を阻害することに関するＢＩＭ０６４８、ＢＩＭ０６５２およびＢＨＭ０１３９のＩＣ５０（ｎＭ）を示す表である。 ＴＧＦβトラップ機能アッセイであるレポーター細胞アッセイからの結果を示すグラフである。図５６Ａは、ＢＩＭ０６４８、ＢＩＭ０６５２、ＢＨＭ１６０３（Ｆｃ領域のＣ末端でＴＧＦβタップと融合した二価抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、ヒトＩｇＧ１、細胞のみの群、および細胞＋ヒトＴＧＦβ１群に関するＴＧＦβ誘導Ｓｍａｄ活性化を示すグラフである。 図５６Ｂは、ＴＧＦβ誘導Ｓｍａｄシグナルを阻害することに関するＢＩＭ０６４８、ＢＩＭ０６５２およびＢＨＭ１６０３のＩＣ５０（ｎＭ）を示す表である。 ＴＧＦβトラップ機能アッセイであるヒトＴｒｅｇ分化アッセイからの結果を示すグラフである。図５７は、ＣＤ２５およびＦｏｘｐ３の染色を示すフローサイトメトリープロットのパネルを含む。ヒトＴｒｅｇ分化アッセイにおいて試験された抗体には、ＢＩＭ０６４８、ＢＨＭ１６０３（Ｆｃ領域のＣ末端でＴＧＦβタップと融合した二価抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、ＢＨＭ１５８３（ＴＧＦβＲＩＩトラップのＣ末端Ｆｃ融合体）およびヒトＩｇＧ１アイソタイプ抗体が含まれる。 ＵｎｉＴＩ－１０２（ＢＩＭ０６４８）はｉｎ ｖｉｔｒｏでヒトＴｒｅｇ分化を効果的に阻害することができる。図５８は、以下の処理群：ＴＧＦβを有し構築物を有しない群（「＋ＴＧＦｂ」）、ＴＧＦβ無し群、ＵｎｉＴＩ－１０２（ＢＩＭ０６４８）群、ＢＨＭ１６０３（Ｆｃ領域のＣ末端でＴＧＦβタップと融合した二価抗ＰＤ－Ｌ１抗体）群、ＢＨＭ１５８３（ＴＧＦβＲＩＩトラップのＣ末端Ｆｃ融合体）群およびヒトＩｇＧ１群に関する、ＣＤ４＋Ｔ細胞のうちのＦＯＸＰ３＋ＣＤ２５＋細胞％を示すグラフである。 ＴＧＦβトラップ機能アッセイであるヒトＮＫ細胞死滅アッセイを例証するグラフである。 ＵｎｉＴＩ－１０２（ＢＩＭ０６４８）は初代ヒトＮＫ細胞死滅に対するＴＧＦβの抑制効果を反転する。図６０Ａは、ヒトＮＫ細胞死滅アッセイからの結果を示すフローサイトメトリープロットのパネルである。この研究において試験された抗体には、ＩｇＧアイソタイプ対照抗体、ＢＩＭ０６４８およびＢＩＭ１６０３（Ｆｃ領域のＣ末端でＴＧＦβタップと融合した二価抗ＰＤ－Ｌ１抗体）が含まれる。 図６０Ｂは、それぞれ、示された処理群に関するＫ５６２死滅およびＮＫｐ３０ ＭＦＩを示す棒グラフである。この研究において試験された抗体には、ＩｇＧアイソタイプ対照抗体、ＢＩＭ０６４８およびＢＩＭ１６０３（Ｆｃ領域のＣ末端でＴＧＦβタップと融合した二価抗ＰＤ－Ｌ１抗体）が含まれる。 図６０Ｃは、それぞれ、示された処理群に関するＫ５６２死滅およびＮＫｐ３０ ＭＦＩを示す棒グラフである。この研究において試験された抗体には、ＩｇＧアイソタイプ対照抗体、ＢＩＭ０６４８およびＢＩＭ１６０３（Ｆｃ領域のＣ末端でＴＧＦβタップと融合した二価抗ＰＤ－Ｌ１抗体）が含まれる。 ＵｎｉＴＩ－１０２（ＢＩＭ０６４８）は初代ヒトＮＫ細胞死滅に対するＴＧＦβの抑制効果を反転する。図６１Ａは、死滅パーセントを示すグラフである。図６１Ｂおよび６１Ｃは、ＣＤ５６＋ＮＫｐ３０＋細胞パーセントを示すグラフである。以下の群がこの研究において試験された：ヒトＩｇＧ群、ＢＩＭ０６４８群、ＢＨＭ１６０３（Ｆｃ領域のＣ末端でＴＧＦβタップと融合した二価抗ＰＤ－Ｌ１抗体）群、ＢＨＭ１５８３（ＴＧＦβＲＩＩトラップのＣ末端Ｆｃ融合体）群、ＴＧＦβを有しない群（「ＮＫ」）、およびＴＧＦβを有し構築物を有しない群（「ＴＧＦｂ」）。 図６１Ｂは、ＣＤ５６＋ＮＫｐ３０＋細胞パーセントを示すグラフである。以下の群がこの研究において試験された：ヒトＩｇＧ群、ＢＩＭ０６４８群、ＢＨＭ１６０３（Ｆｃ領域のＣ末端でＴＧＦβタップと融合した二価抗ＰＤ－Ｌ１抗体）群、ＢＨＭ１５８３（ＴＧＦβＲＩＩトラップのＣ末端Ｆｃ融合体）群、ＴＧＦβを有しない群（「ＮＫ」）、およびＴＧＦβを有し構築物を有しない群（「ＴＧＦｂ」）。 図６１Ｃは、ＣＤ５６＋ＮＫｐ３０＋細胞パーセントを示すグラフである。以下の群がこの研究において試験された：ヒトＩｇＧ群、ＢＩＭ０６４８群、ＢＨＭ１６０３（Ｆｃ領域のＣ末端でＴＧＦβタップと融合した二価抗ＰＤ－Ｌ１抗体）群、ＢＨＭ１５８３（ＴＧＦβＲＩＩトラップのＣ末端Ｆｃ融合体）群、ＴＧＦβを有しない群（「ＮＫ」）、およびＴＧＦβを有し構築物を有しない群（「ＴＧＦｂ」）。
ＴＡＭは、循環単球に起因し、腫瘍へのその動員は、腫瘍由来走化因子によって駆動される。ＴＡＭは、ＢおよびＴ細胞活性化の阻害、腫瘍関連抗原提示の阻害、細胞傷害性顆粒放出の阻害、血管新生の増大ならびに幅広い成長および血管新生促進因子の分泌のような反応を引き起こすことによって腫瘍細胞増殖および転移を促進し得る（例えば、ＬｉｕらＣｅｌｌｕｌａｒ ＆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （２０１５年）１２巻、１～４頁およびＮｏｙ， ＲｏｙらＩｍｍｕｎｉｔｙ、４１巻、１号、４９～６１頁およびＱｕａｔｒｏｍｏｎｉらＡｍ Ｊ Ｔｒａｎｓｌ Ｒｅｓ． ２０１２年；４巻（４号）：３７６～３８９頁を参照されたい）。結果的に、多数のＴＡＭを有する多数の腫瘍が、腫瘍成長速度の増大、局所増殖および遠隔転移を有する。したがって、ＴＡＭを枯渇させるか、またはその活性を阻害する療法は有用であろう。
定義
本明細書で使用される場合、「トランスフォーミング増殖因子ベータ－１（ＴＧＦ－ベータ１）」という用語は、ヒトにおいて、遺伝子ＴＧＦＢ１またはそのオルソログによってコードされるタンパク質を指す。スイスプロット受託番号Ｐ０１１３７は、例示的ヒトＴＧＦ－ベータ１アミノ酸配列を提供する。例示的未熟ヒトＴＧＦ－ベータ１アミノ酸配列は、配列番号９２で提供される。例示的成熟ヒトＴＧＦ－ベータ１アミノ酸配列は、配列番号１１７で提供される。
本明細書で使用される場合、「トランスフォーミング増殖因子ベータ－２（ＴＧＦ－ベータ２）」という用語は、ヒトにおいて、遺伝子ＴＧＦＢ２またはそのオルソログによってコードされるタンパク質を指す。スイスプロット受託番号Ｐ６１８１２は、例示的ヒトＴＧＦ－ベータ２アミノ酸配列を提供する。例示的未熟ヒトＴＧＦ－ベータ２アミノ酸配列は、配列番号９３で提供される。例示的成熟ヒトＴＧＦ－ベータ２アミノ酸配列は、配列番号１１８で提供される。
本明細書で使用される場合、「トランスフォーミング増殖因子ベータ－３（ＴＧＦ－ベータ３）」という用語は、ヒトにおいて、遺伝子ＴＧＦＢ３またはそのオルソログによってコードされるタンパク質を指す。スイスプロット受託番号Ｐ１０６００は、例示的ヒトＴＧＦ－ベータ３アミノ酸配列を提供する。例示的未熟ヒトＴＧＦ－ベータ３アミノ酸配列は、配列番号９４で提供される。例示的成熟ヒトＴＧＦ－ベータ３アミノ酸配列は、配列番号１１９で提供される。
本明細書で使用される場合、「ＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチド」とは、ＴＧＦ－ベータ受容体（例えば、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２またはＴＧＦＢＲ３）またはその断片もしくはバリアントを指す。
本明細書で使用される場合、「トランスフォーミング増殖因子ベータ受容体１型（ＴＧＦＢＲ１）」（ＡＬＫ－５またはＳＫＲ４としても知られる）という用語は、ヒトにおいて、遺伝子ＴＧＦＢＲ１またはそのオルソログによってコードされるタンパク質を指す。スイスプロット受託番号Ｐ３６８９７は、例示的ヒトＴＧＦＢＲ１アミノ酸配列を提供する。例示的未熟ヒトＴＧＦＢＲ１アミノ酸配列は、配列番号９５、９６および９７で提供される。例示的成熟ヒトＴＧＦＢＲ１アミノ酸配列は、配列番号１２０、１２１および１２２で提供される。本明細書で使用される場合、「ＴＧＦＢＲ１ポリペプチド」とは、ＴＧＦＢＲ１またはその断片もしくはバリアントを指す。
本明細書で使用される場合、「トランスフォーミング増殖因子ベータ受容体２型（ＴＧＦＢＲ２）」という用語は、ヒトにおいて、遺伝子ＴＧＦＢＲ２またはそのオルソログによってコードされるタンパク質を指す。スイスプロット受託番号Ｐ３７１７３は、例示的ヒトＴＧＦＢＲ２アミノ酸配列を提供する。例示的未熟ヒトＴＧＦＢＲ２アミノ酸配列は、配列番号９８および９９で提供される。例示的成熟ヒトＴＧＦＢＲ２アミノ酸配列は、配列番号１２３および１２４で提供される。本明細書で使用される場合、「ＴＧＦＢＲ２ポリペプチド」とは、ＴＧＦＢＲ２またはその断片もしくはバリアントを指す。
本明細書で使用される場合、「トランスフォーミング増殖因子ベータ受容体３型（ＴＧＦＢＲ３）」という用語は、ヒトにおいて、遺伝子ＴＧＦＢＲ３またはそのオルソログによってコードされるタンパク質を指す。スイスプロット受託番号Ｑ０３１６７は、例示的ヒトＴＧＦＢＲ３アミノ酸配列を提供する。例示的未熟ヒトＴＧＦＢＲ３アミノ酸配列は、配列番号１０６および１０７で提供される。例示的成熟ヒトＴＧＦＢＲ３アミノ酸配列は、配列番号１２５および１２６で提供される。本明細書で使用される場合、「ＴＧＦＢＲ３ポリペプチド」とは、ＴＧＦＢＲ３またはその断片もしくはバリアントを指す。
本明細書で使用される場合、親配列の「バリアント」という用語は、親配列またはその断片と実質的に同一のアミノ酸配列を有する配列を指す。一部の実施形態では、バリアントは、機能的バリアントである。
本明細書で使用される場合、冠詞「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」は、冠詞の文法的目的語の１つまたは１つよりも多く、例えば、少なくとも１つを指す。本明細書において「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語と併せて使用される場合の「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」という単語の使用は、「１つ」を意味し得るが、「１つまたは複数」、「少なくとも１つ」および「１つまたは１つよりも多く」の意味とも一致する。
本明細書で使用される場合、「約」および「およそ」とは、一般に、測定の性質または精度を考慮すると、測定された量の許容可能な程度の誤差を意味する。誤差の例示的程度は、所与の値の範囲の２０パーセント（％）以内、典型的には１０％以内、より典型的には５％以内である。
「抗体分子」とは、本明細書で使用される場合、少なくとも１つの免疫グロブリン可変領域配列を含むタンパク質、例えば、免疫グロブリン鎖またはその断片を指す。抗体分子は、抗体（例えば、全長抗体）および抗体断片を包含する。一実施形態では、抗体分子は、全長抗体または全長免疫グロブリン鎖の抗原結合性断片または機能的断片を含む。例えば、全長抗体は、天然に存在するか、または正常免疫グロブリン遺伝子断片組換えプロセスによって形成される免疫グロブリン（Ｉｇ）分子（例えば、ＩｇＧ抗体）である。実施形態では、抗体分子とは、免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な抗原結合性部分、例えば、抗体断片を指す。抗体断片、例えば、機能的断片は、抗体の部分、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、可変断片（Ｆｖ）、ドメイン抗体（ｄＡｂ）または一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。機能的抗体断片は、無傷の（例えば、全長）抗体によって認識されるものと同一の抗原に結合する。「抗体断片」または「機能的断片」という用語はまた、可変領域からなる単離された断片、例えば、重鎖および軽鎖の可変領域からなる「Ｆｖ」断片または軽および重可変領域がペプチドリンカーによって接続されている組換え一本鎖ポリペプチド分子（「ｓｃＦｖタンパク質」）も含む。一部の実施形態では、抗体断片は、抗原結合活性を有さない抗体の部分、例えば、Ｆｃ断片または単一アミノ酸残基を含まない。例示的抗体分子は、全長抗体および抗体断片、例えば、ｄＡｂ（ドメイン抗体）、一本鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２断片ならびに一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。
本明細書で使用される場合、「免疫グロブリン可変領域配列」とは、免疫グロブリン可変領域の構造を形成できるアミノ酸配列を指す。例えば、配列は、天然に存在する可変領域のアミノ酸配列のすべてまたは一部を含み得る。例えば、配列は、１個、２個もしくはそれより多いＮ－もしくはＣ末端アミノ酸を含む場合もあり、含まない場合もあり、またはタンパク質構造の形成と適合する他の変更を含む場合もある。
実施形態では、抗体分子は、単一特異性であり、例えば、それは、単一エピトープに対する結合特異性を含む。一部の実施形態では、抗体分子は、多特異性であり、例えば、それは、複数の免疫グロブリン可変領域配列を含み、第１の免疫グロブリン可変領域配列は、第１のエピトープに対する結合特異性を有し、第２の免疫グロブリン可変領域配列は、第２のエピトープに対する結合特異性を有する。一部の実施形態では、抗体分子は、二特異性抗体分子である。「二特異性抗体分子」とは、本明細書で使用される場合、１つより多い（例えば、２、３、４つまたはそれより多い）エピトープおよび／または抗原に対する特異性を有する抗体分子を指す。
「抗原」（Ａｇ）とは、本明細書で使用される場合、例えば、ある特定の免疫細胞の活性化および／または抗体生成を含む免疫応答を引き起こすことができる分子を指す。ほとんどすべてのタンパク質またはペプチドを含む任意の高分子が、抗原であり得る。抗原はまた、遺伝子組換え体またはＤＮＡに由来する場合もある。例えば、免疫応答を誘発できるタンパク質をコードするヌクレオチド配列または一部のヌクレオチド配列を含む任意のＤＮＡが、「抗原」をコードする。実施形態では、抗原が、遺伝子の全長ヌクレオチド配列だけによってコードされる必要はなく、抗原が、遺伝子によってコードされる必要も全くない。実施形態では、抗原は、合成される場合も、生体試料、例えば、組織試料、腫瘍試料、細胞または他の生体成分を有する流体に由来する場合もある。本明細書で使用される場合、「腫瘍抗原」または同義的に「がん抗原」は、免疫応答を誘発できる、がん、例えば、がん細胞または腫瘍微小環境上に存在するか、またはそれと関連する任意の分子を含む。本明細書で使用される場合、「免疫細胞抗原」は、免疫応答を誘発できる、免疫細胞上に存在するか、またはそれと関連する任意の分子を含む。
抗体分子の「抗原結合部位」または「結合部分」とは、抗原結合に関与する、抗体分子の一部、例えば、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子を指す。実施形態では、抗原結合部位は、重（Ｈ）および軽（Ｌ）鎖の可変（Ｖ）領域のアミノ酸残基によって形成される。超可変領域と呼ばれる重鎖および軽鎖の可変領域内の３つの高度に多様なストレッチは、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と呼ばれるより保存された隣接するストレッチの間に配置される。ＦＲは、免疫グロブリン中の超可変領域の間に、それに隣接して天然に見られるアミノ酸配列である。実施形態では、抗体分子中では、軽鎖の３つの超可変領域および重鎖の３つの超可変領域は、結合した抗原の三次元表面と相補的である抗原結合表面を形成するように三次元空間中に互いに配置される。重鎖および軽鎖各々の３つの超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」と呼ばれる。フレームワーク領域およびＣＤＲは、例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら（１９９１年）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第４版、米国保健社会福祉省、ＮＩＨ刊行物９１－３２４２号およびＣｈｏｔｈｉａ， Ｃ．ら（１９８７年）Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６巻：９０１～９１７頁において定義され、記載されている。各可変鎖（例えば、重鎖可変鎖および軽鎖可変鎖）は、典型的には、アミノ酸順序でアミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲ：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４で構成されている。
「がん」は、本明細書で使用される場合、すべての種類の発がんプロセスおよび／またはがん成長を包含し得る。実施形態では、がんは、原発腫瘍ならびに転移組織または悪性に形質転換された細胞、組織もしくは臓器を含む。実施形態では、がんは、すべての病理組織診断およびステージ、例えば、がんの侵襲性／重症度のステージを包含する。実施形態では、がんは、再発がんおよび／または抵抗性がんを含む。「がん」および「腫瘍」という用語は、同義的に使用され得る。例えば、両用語は、固形および液体腫瘍を包含する。本明細書で使用される場合、「がん」または「腫瘍」という用語は、前悪性ならびに悪性がんおよび腫瘍を含む。
本発明の組成物および方法は、特定の配列またはそれと実質的に同一もしくは同様の配列、例えば、特定の配列と少なくとも８５％、９０％、９５％同一もしくはそれより高い配列を有するポリペプチドおよび核酸を包含する。アミノ酸配列との関連で、「実質的に同一の」という用語は、第２のアミノ酸配列中のアラインされたアミノ酸残基とｉ）同一であるか、またはｉｉ）それの保存的置換である十分な数または最小数のアミノ酸残基を含有し、その結果、第１および第２のアミノ酸配列が共通の構造ドメインおよび／または共通の機能活性を有し得る第１のアミノ酸を指すように本明細書で使用される。例えば、参照配列、例えば、本明細書において提供される配列と少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する共通の構造ドメインを含有するアミノ酸配列。
ヌクレオチド配列との関連で、「実質的に同一の」という用語は、第２の核酸配列中のアラインされたヌクレオチドと同一である十分な数または最小数のヌクレオチドを含有し、その結果、第１および第２のヌクレオチド配列が、共通の機能的活性を有するポリペプチドをコードするか、または共通の構造ポリペプチドドメインもしくは共通の機能的ポリペプチド活性をコードする第１の核酸配列を指すように本明細書で使用される。例えば、参照配列、例えば、本明細書において提供される配列と少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列。
配列間の相同性または配列同一性（これらの用語は、本明細書において同義的に使用される）の算出は、以下のとおりに実施される。
２つのアミノ酸配列の、または２つの核酸配列の同一性パーセントを決定するために、最適比較目的のために配列がアラインされる（例えば、最適アラインメントのために、第１および第２のアミノ酸または核酸配列の一方または両方にギャップが導入されてもよく、比較目的のために非相同配列が無視されてもよい）。好ましい実施形態では、比較目的のためにアラインされた参照配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは、少なくとも４０％、より好ましくは、少なくとも５０％、６０％、さらにより好ましくは、少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％である。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドが比較される。第１の配列中の位置が、第２の配列中の対応する位置と同一のアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占められる場合には、分子は、その位置で同一である（本明細書で使用される場合、アミノ酸または核酸「同一性」は、アミノ酸または核酸「相同性」と同等である）。
２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適アラインメントのために導入される必要があるギャップ数および各ギャップの長さを考慮した、配列によって共有される同一位置数の関数である。
２つの配列間の配列の比較および同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成され得る。好ましい実施形態では、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ中のＧＡＰプログラム中に組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（（１９７０年）Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ４８巻：４４４～４５３頁）アルゴリズム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）を使用して、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれかおよび１６、１４、１２、１０、８、６または４のギャップ重みおよび１、２、３、４、５または６の長さ重みを使用して決定される。さらに別の好ましい実施形態では、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ中のＧＡＰプログラム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）を使用して、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスおよび４０、５０、６０、７０または８０のギャップ重みおよび１、２、３、４、５または６の長さ重みを使用して決定される。パラメーターの特に好ましいセット（および特に断りのない限り使用されるべきもの）は、１２のギャップペナルティー、４のギャップ伸長ペナルティーおよび５のフレームシフトギャップペナルティーを用いるＢｌｏｓｓｕｍ６２スコアリングマトリックスである。
２つのアミノ酸またはヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）中に組み込まれているＥ． ＭｅｙｅｒｓおよびＷ． Ｍｉｌｌｅｒのアルゴリズム（（１９８９年）ＣＡＢＩＯＳ、４巻：１１～１７頁）を使用して、ＰＡＭ１２０重み残基表、１２のギャップ長ペナルティーおよび４のギャップペナルティーを使用して決定され得る。
本明細書において記載される核酸およびタンパク質配列は、例えば、他のファミリーメンバーまたは関連配列を同定するために公開データベースに対して検索を実施するための「クエリー配列」として使用され得る。このような検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０年）Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２１５巻：４０３～１０頁のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して実施され得る。本発明の核酸（例えば、配列番号１）分子と相同なヌクレオチド配列を得るために、ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索が、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２を用いて実施され得る。本発明のタンパク質分子と相同なアミノ酸配列を得るために、ＢＬＡＳＴタンパク質検索が、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３を用いて実施され得る。比較目的のためにギャップ付きアラインメントを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、（１９９７年） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２５巻：３３８９～３４０２頁に記載されるようにギャップ付きＢＬＡＳＴが利用され得る。ＢＬＡＳＴおよびギャップ付きＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合には、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメーターが使用され得る。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照されたい。
本発明の分子は、その機能に対して実質的な効果を有さないさらなる保存的または非必須アミノ酸置換を有し得るということは理解される。
「アミノ酸」という用語は、天然であれ、合成であれ、アミノ官能性および酸官能性の両方を含み、天然に存在するアミノ酸のポリマー中に含まれることが可能なすべての分子を包含するものとする。例示的アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸、そのアナログ、誘導体および同類物、バリアント側鎖を有するアミノ酸アナログ、ならびに前記のもののいずれかのすべての立体異性体を含む。本明細書で使用される場合、「アミノ酸」という用語は、Ｄ－またはＬ－光学異性体およびペプチド模倣物の両方を含む。
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられるものである。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野で定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分枝側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む。
「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」（一本鎖の場合）という用語は、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指すように本明細書において同義的に使用される。ポリマーは、直鎖である場合も、分岐である場合もあり、改変されたアミノ酸を含む場合もあり、非アミノ酸によって中断される場合もある。この用語はまた、改変；例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化または任意の他の操作、例えば、標識成分とコンジュゲートされているアミノ酸ポリマーを包含する。ポリペプチドは、天然供給源から単離される場合もあり、真核生物もしくは原核生物宿主から組換え技術によって生成される場合もあり、または合成手順の生成物である場合もある。
「核酸」、「核酸配列」、「ヌクレオチド配列」または「ポリヌクレオチド配列」および「ポリヌクレオチド」という用語は、同義的に使用される。それらは、任意の長さのヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチドのいずれかまたはそのアナログのポリマー形態を指す。ポリヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖のいずれかである場合があり、一本鎖の場合には、コーディング鎖である場合も、非コーディング（アンチセンス）鎖である場合もある。ポリヌクレオチドは、改変されたヌクレオチド、例えば、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチドアナログを含み得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって中断され得る。ポリヌクレオチドは、標識成分とのコンジュゲーションなどによって重合後にさらに改変され得る。核酸は、天然に生じないか、または非天然配置で別のポリヌクレオチドに連結された、ゲノム、ｃＤＮＡ、半合成または合成起源の組換えポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドであり得る。
「単離された」という用語は、本明細書で使用される場合、その元のまたは天然環境（例えば、天然に存在する場合には、天然環境）から取り出された材料を指す。例えば、生存動物中に存在する天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、単離されていないが、天然系中の共存材料の一部またはすべてからヒト介入によって分離された同一ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、単離されている。このようなポリヌクレオチドは、ベクターの一部である場合もあり、および／またはこのようなポリヌクレオチドもしくはポリペプチドは、組成物の一部である場合もあり、このようなベクターもしくは組成物は、天然に見られる環境の一部ではない点で依然として単離されている。
本明細書で使用される場合、「免疫抑制性骨髄性細胞」または「ＩＭＣ」という用語は、一般に、免疫抑制を促進する（例えば、腫瘍微小環境において）（例えば、Ｔ細胞活性化を阻害すること、Ｔ細胞生存力を阻害すること、Ｔ制御性細胞誘導および動員を促進することによって）骨髄系統の細胞を指す。免疫抑制性骨髄性細胞は、例えば、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）および骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）を含む。
本明細書で使用される場合、「腫瘍関連マクロファージ」または「ＴＡＭ」という用語は、一般に、がん、例えば、腫瘍の微小環境中に存在するマクロファージを指す。
本明細書で使用される場合、「ＴＡＭを低減すること」という用語は、一般に、ＴＡＭの数を減少させることを指す。低減することは、腫瘍または腫瘍付近中のＴＡＭの数を減少させること（例えば、本明細書において記載される多特異性分子の投与の前（例えば、本明細書において記載される多特異性分子の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回またはそれより多い投与の前）のＴＡＭの数と比較して）を含む。低減することは、任意の数のＴＡＭを減少させること（例えば、１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、１００％、すべて、または実質的に）（例えば、本明細書において記載される多特異性分子の投与の前（例えば、本明細書において記載される多特異性分子の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回またはそれより多い投与の前）のＴＡＭの数と比較して）を含む。
本明細書で使用される場合、「骨髄系由来サプレッサー細胞」または「ＭＤＳＣ」という用語は、一般に、免疫抑制を促進可能であり、ＣＤ３３、ＣＤ１１ｂおよびＣＤ４５を通常発現する骨髄起源の細胞を指す。ＭＤＳＣの種々の亜集団が定義されており、例えば、単球性ＭＤＳＣ（Ｍ－ＭＤＳＣ）は、ＣＤ１４およびＣＤ１２４の発現ならびにＨＬＡ－ＤＲの低発現と通常関連している。一部の実施形態では、ＭＤＳＣ集団は、ＭＯ－ＭＤＳＣ集団である。多形核ＭＤＳＣ（ＰＭＮ－ＭＤＳＣ）は、ＣＤ１５、ＣＤ６６ｂおよびＣＤ１２４の発現ならびにＨＬＡ－ＤＲの発現がないことと関連している。未熟ＭＤＳＣ（Ｉ－ＭＤＳＣ）は、ＣＤ１１７およびＣＤ３４の発現ならびにＬＩＮおよびＨＬＡ－ＤＲの発現がないことと関連している。例えば、Ｕｇｅｌら（２０１５年）ＪＣＩ Ｖｏｌ １２５巻（９号）、３３６５頁を参照されたい。
本明細書で使用される場合「ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞」とは、細胞表面でＣＳＦ１ＲおよびＣＣＲ２の両方を発現する細胞を指す。「ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞」という用語は、細胞表面でＣＳＦ１Ｒを発現するが、ＣＣＲ２を発現しない細胞を指す。「ＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞」という用語は、細胞表面でＣＣＲ２を発現するが、ＣＳＦ１Ｒを発現しない細胞を指す。
本明細書で使用される場合、結合部分、例えば、抗体分子が、標的上の単一エピトープに結合する場合に、結合部分、例えば、抗体分子は、標的に一価性で結合する。一部の実施形態では、結合部分は、標的に対して１つの抗原結合ドメインのみを含む。一部の実施形態では、結合部分の１つの分子は、標的の１つの分子とのみ結合できる。
本明細書で使用される場合、結合部分、例えば、抗体分子が、標的上の２つのエピトープに結合する場合に、結合部分、例えば、抗体分子は、標的に二価性で結合する。一部の実施形態では、２つのエピトープは同一である。一部の実施形態では、２つのエピトープは異なっている。一部の実施形態では、結合部分は、標的に対して２つの抗原結合ドメインを含む。一部の実施形態では、結合部分の１つの分子は、標的の２つの分子に結合できる。
本発明の種々の態様を、以下にさらに詳細に記載する。さらなる定義は、本明細書を通して記載されている。
抗原
本開示のＴＡＭ標的化抗原は、例えば、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ２、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、ＣＸ３ＣＲ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ２０４、ＣＤ５２および葉酸受容体ベータを含む。ＴＡＭ標的化抗原の例示的アミノ酸配列が、本明細書において提供される。
ＣＳＦ１Ｒ
ＣＳＦ１Ｒ（マクロファージコロニー刺激因子１受容体としても知られる）は、ＣＳＦ１およびＩＬ３４の細胞表面受容体として作用し、造血前駆体細胞、特に、単核貪食細胞、例えば、マクロファージおよび単球の生存、増殖および分化の調節において必要不可欠な役割を果たすチロシン－タンパク質キナーゼである。ＣＳＦ１Ｒは、ＩＬ３４およびＣＳＦ１に応じて炎症性ケモカインの放出を促進し、それによって、自然免疫において、および炎症プロセスにおいて重要な役割を果たす。例示的ＣＳＦ１Ｒ未熟アミノ酸配列は、配列番号８７および８８で提供される。
ＣＳＦ１Ｒ未熟アミノ酸配列アイソフォーム１（識別子：Ｐ０７３３３－１）：
ＭＧＰＧＶＬＬＬＬＬＶＡＴＡＷＨＧＱＧＩＰＶＩＥＰＳＶＰＥＬＶＶＫＰＧＡＴＶＴＬＲＣＶＧＮＧＳＶＥＷＤＧＰＰＳＰＨＷＴＬＹＳＤＧＳＳＳＩＬＳＴＮＮＡＴＦＱＮＴＧＴＹＲＣＴＥＰＧＤＰＬＧＧＳＡＡＩＨＬＹＶＫＤＰＡＲＰＷＮＶＬＡＱＥＶＶＶＦＥＤＱＤＡＬＬＰＣＬＬＴＤＰＶＬＥＡＧＶＳＬＶＲＶＲＧＲＰＬＭＲＨＴＮＹＳＦＳＰＷＨＧＦＴＩＨＲＡＫＦＩＱＳＱＤＹＱＣＳＡＬＭＧＧＲＫＶＭＳＩＳＩＲＬＫＶＱＫＶＩＰＧＰＰＡＬＴＬＶＰＡＥＬＶＲＩＲＧＥＡＡＱＩＶＣＳＡＳＳＶＤＶＮＦＤＶＦＬＱＨＮＮＴＫＬＡＩＰＱＱＳＤＦＨＮＮＲＹＱＫＶＬＴＬＮＬＤＱＶＤＦＱＨＡＧＮＹＳＣＶＡＳＮＶＱＧＫＨＳＴＳＭＦＦＲＶＶＥＳＡＹＬＮＬＳＳＥＱＮＬＩＱＥＶＴＶＧＥＧＬＮＬＫＶＭＶＥＡＹＰＧＬＱＧＦＮＷＴＹＬＧＰＦＳＤＨＱＰＥＰＫＬＡＮＡＴＴＫＤＴＹＲＨＴＦＴＬＳＬＰＲＬＫＰＳＥＡＧＲＹＳＦＬＡＲＮＰＧＧＷＲＡＬＴＦＥＬＴＬＲＹＰＰＥＶＳＶＩＷＴＦＩＮＧＳＧＴＬＬＣＡＡＳＧＹＰＱＰＮＶＴＷＬＱＣＳＧＨＴＤＲＣＤＥＡＱＶＬＱＶＷＤＤＰＹＰＥＶＬＳＱＥＰＦＨＫＶＴＶＱＳＬＬＴＶＥＴＬＥＨＮＱＴＹＥＣＲＡＨＮＳＶＧＳＧＳＷＡＦＩＰＩＳＡＧＡＨＴＨＰＰＤＥＦＬＦＴＰＶＶＶＡＣＭＳＩＭＡＬＬＬＬＬＬＬＬＬＬＹＫＹＫＱＫＰＫＹＱＶＲＷＫＩＩＥＳＹＥＧＮＳＹＴＦＩＤＰＴＱＬＰＹＮＥＫＷＥＦＰＲＮＮＬＱＦＧＫＴＬＧＡＧＡＦＧＫＶＶＥＡＴＡＦＧＬＧＫＥＤＡＶＬＫＶＡＶＫＭＬＫＳＴＡＨＡＤＥＫＥＡＬＭＳＥＬＫＩＭＳＨＬＧＱＨＥＮＩＶＮＬＬＧＡＣＴＨＧＧＰＶＬＶＩＴＥＹＣＣＹＧＤＬＬＮＦＬＲＲＫＡＥＡＭＬＧＰＳＬＳＰＧＱＤＰＥＧＧＶＤＹＫＮＩＨＬＥＫＫＹＶＲＲＤＳＧＦＳＳＱＧＶＤＴＹＶＥＭＲＰＶＳＴＳＳＮＤＳＦＳＥＱＤＬＤＫＥＤＧＲＰＬＥＬＲＤＬＬＨＦＳＳＱＶＡＱＧＭＡＦＬＡＳＫＮＣＩＨＲＤＶＡＡＲＮＶＬＬＴＮＧＨＶＡＫＩＧＤＦＧＬＡＲＤＩＭＮＤＳＮＹＩＶＫＧＮＡＲＬＰＶＫＷＭＡＰＥＳＩＦＤＣＶＹＴＶＱＳＤＶＷＳＹＧＩＬＬＷＥＩＦＳＬＧＬＮＰＹＰＧＩＬＶＮＳＫＦＹＫＬＶＫＤＧＹＱＭＡＱＰＡＦＡＰＫＮＩＹＳＩＭＱＡＣＷＡＬＥＰＴＨＲＰＴＦＱＱＩＣＳＦＬＱＥＱＡＱＥＤＲＲＥＲＤＹＴＮＬＰＳＳＳＲＳＧＧＳＧＳＳＳＳＥＬＥＥＥＳＳＳＥＨＬＴＣＣＥＱＧＤＩＡＱＰＬＬＱＰＮＮＹＱＦＣ
配列番号８７
ＣＳＦ１Ｒ未熟アミノ酸配列アイソフォーム２（識別子：Ｐ０７３３３－２）：
ＭＧＰＧＶＬＬＬＬＬＶＡＴＡＷＨＧＱＧＩＰＶＩＥＰＳＶＰＥＬＶＶＫＰＧＡＴＶＴＬＲＣＶＧＮＧＳＶＥＷＤＧＰＰＳＰＨＷＴＬＹＳＤＧＳＳＳＩＬＳＴＮＮＡＴＦＱＮＴＧＴＹＲＣＴＥＰＧＤＰＬＧＧＳＡＡＩＨＬＹＶＫＤＰＡＲＰＷＮＶＬＡＱＥＶＶＶＦＥＤＱＤＡＬＬＰＣＬＬＴＤＰＶＬＥＡＧＶＳＬＶＲＶＲＧＲＰＬＭＲＨＴＮＹＳＦＳＰＷＨＧＦＴＩＨＲＡＫＦＩＱＳＱＤＹＱＣＳＡＬＭＧＧＲＫＶＭＳＩＳＩＲＬＫＶＱＫＶＩＰＧＰＰＡＬＴＬＶＰＡＥＬＶＲＩＲＧＥＡＡＱＩＶＣＳＡＳＳＶＤＶＮＦＤＶＦＬＱＨＮＮＴＫＬＡＩＰＱＱＳＤＦＨＮＮＲＹＱＫＶＬＴＬＮＬＤＱＶＤＦＱＨＡＧＮＹＳＣＶＡＳＮＶＱＧＫＨＳＴＳＭＦＦＲＶＶＧＴＰＳＰＳＬＣＰＡ
配列番号８８
ＣＣＲ２
ＣＣＲ２（Ｃ－Ｃケモカイン受容体２型としても知られる）は、ＣＣＬ２、ＣＣＬ７およびＣＣＬ１３ケモカインのＧタンパク質共役受容体である。ＣＣＲ２は、単球／マクロファージおよびＴ細胞の動員において機能することが知られている。ＣＣＲ２は、単球およびＴ細胞の小さい亜集団で発現され、マウスおよびヒトにおいてほぼ同一の発現パターンを示す（ＭａｃｋらＪ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００１年；１６６巻：４６９７～４７０４頁）。例示的ＣＣＲ２アミノ酸配列は、配列番号８９および９０で提供される。
ＣＣＲ２アミノ酸配列アイソフォームＡ（識別子：Ｐ４１５９７－１）：
ＭＬＳＴＳＲＳＲＦＩＲＮＴＮＥＳＧＥＥＶＴＴＦＦＤＹＤＹＧＡＰＣＨＫＦＤＶＫＱＩＧＡＱＬＬＰＰＬＹＳＬＶＦＩＦＧＦＶＧＮＭＬＶＶＬＩＬＩＮＣＫＫＬＫＣＬＴＤＩＹＬＬＮＬＡＩＳＤＬＬＦＬＩＴＬＰＬＷＡＨＳＡＡＮＥＷＶＦＧＮＡＭＣＫＬＦＴＧＬＹＨＩＧＹＦＧＧＩＦＦＩＩＬＬＴＩＤＲＹＬＡＩＶＨＡＶＦＡＬＫＡＲＴＶＴＦＧＶＶＴＳＶＩＴＷＬＶＡＶＦＡＳＶＰＧＩＩＦＴＫＣＱＫＥＤＳＶＹＶＣＧＰＹＦＰＲＧＷＮＮＦＨＴＩＭＲＮＩＬＧＬＶＬＰＬＬＩＭＶＩＣＹＳＧＩＬＫＴＬＬＲＣＲＮＥＫＫＲＨＲＡＶＲＶＩＦＴＩＭＩＶＹＦＬＦＷＴＰＹＮＩＶＩＬＬＮＴＦＱＥＦＦＧＬＳＮＣＥＳＴＳＱＬＤＱＡＴＱＶＴＥＴＬＧＭＴＨＣＣＩＮＰＩＩＹＡＦＶＧＥＫＦＲＳＬＦＨＩＡＬＧＣＲＩＡＰＬＱＫＰＶＣＧＧＰＧＶＲＰＧＫＮＶＫＶＴＴＱＧＬＬＤＧＲＧＫＧＫＳＩＧＲＡＰＥＡＳＬＱＤＫＥＧＡ
配列番号８９
ＣＣＲ２アミノ酸配列アイソフォームＢ（識別子：Ｐ４１５９７－２）：
ＭＬＳＴＳＲＳＲＦＩＲＮＴＮＥＳＧＥＥＶＴＴＦＦＤＹＤＹＧＡＰＣＨＫＦＤＶＫＱＩＧＡＱＬＬＰＰＬＹＳＬＶＦＩＦＧＦＶＧＮＭＬＶＶＬＩＬＩＮＣＫＫＬＫＣＬＴＤＩＹＬＬＮＬＡＩＳＤＬＬＦＬＩＴＬＰＬＷＡＨＳＡＡＮＥＷＶＦＧＮＡＭＣＫＬＦＴＧＬＹＨＩＧＹＦＧＧＩＦＦＩＩＬＬＴＩＤＲＹＬＡＩＶＨＡＶＦＡＬＫＡＲＴＶＴＦＧＶＶＴＳＶＩＴＷＬＶＡＶＦＡＳＶＰＧＩＩＦＴＫＣＱＫＥＤＳＶＹＶＣＧＰＹＦＰＲＧＷＮＮＦＨＴＩＭＲＮＩＬＧＬＶＬＰＬＬＩＭＶＩＣＹＳＧＩＬＫＴＬＬＲＣＲＮＥＫＫＲＨＲＡＶＲＶＩＦＴＩＭＩＶＹＦＬＦＷＴＰＹＮＩＶＩＬＬＮＴＦＱＥＦＦＧＬＳＮＣＥＳＴＳＱＬＤＱＡＴＱＶＴＥＴＬＧＭＴＨＣＣＩＮＰＩＩＹＡＦＶＧＥＫＦＲＲＹＬＳＶＦＦＲＫＨＩＴＫＲＦＣＫＱＣＰＶＦＹＲＥＴＶＤＧＶＴＳＴＮＴＰＳＴＧＥＱＥＶＳＡＧＬ
配列番号９０
ＣＸＣＲ２
ＣＸＣＲ２（インターロイキン－８受容体としても知られる）は、好中球走化因子であるＩＬ８のＧタンパク質共役受容体である。ＩＬ８の受容体への結合は、好中球の活性化を引き起こす。この応答は、ホスファチジルイノシトール－カルシウムセカンドメッセンジャー系を活性化するＧ－タンパク質によって媒介される。ＣＸＣＲ２は、ＩＬ－８に高親和性で結合し、ＣＸＣＬ３、ＧＲＯ／ＭＧＳＡおよびＮＡＰ－２にも高親和性で結合する。ＣＸＣＲ２は、循環好中球で高レベルで発現され、その遊走を炎症部位へ方向付けるために重要である（Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ． ２０１２年；１２２巻（９号）：３１２７～３１４４頁）。例示的ＣＸＣＲ２アミノ酸配列は、配列番号９１で提供される。
ＣＸＣＲ２アミノ酸配列（識別子：Ｐ２５０２５－１）：
ＭＥＤＦＮＭＥＳＤＳＦＥＤＦＷＫＧＥＤＬＳＮＹＳＹＳＳＴＬＰＰＦＬＬＤＡＡＰＣＥＰＥＳＬＥＩＮＫＹＦＶＶＩＩＹＡＬＶＦＬＬＳＬＬＧＮＳＬＶＭＬＶＩＬＹＳＲＶＧＲＳＶＴＤＶＹＬＬＮＬＡＬＡＤＬＬＦＡＬＴＬＰＩＷＡＡＳＫＶＮＧＷＩＦＧＴＦＬＣＫＶＶＳＬＬＫＥＶＮＦＹＳＧＩＬＬＬＡＣＩＳＶＤＲＹＬＡＩＶＨＡＴＲＴＬＴＱＫＲＹＬＶＫＦＩＣＬＳＩＷＧＬＳＬＬＬＡＬＰＶＬＬＦＲＲＴＶＹＳＳＮＶＳＰＡＣＹＥＤＭＧＮＮＴＡＮＷＲＭＬＬＲＩＬＰＱＳＦＧＦＩＶＰＬＬＩＭＬＦＣＹＧＦＴＬＲＴＬＦＫＡＨＭＧＱＫＨＲＡＭＲＶＩＦＡＶＶＬＩＦＬＬＣＷＬＰＹＮＬＶＬＬＡＤＴＬＭＲＴＱＶＩＱＥＴＣＥＲＲＮＨＩＤＲＡＬＤＡＴＥＩＬＧＩＬＨＳＣＬＮＰＬＩＹＡＦＩＧＱＫＦＲＨＧＬＬＫＩＬＡＩＨＧＬＩＳＫＤＳＬＰＫＤＳＲＰＳＦＶＧＳＳＳＧＨＴＳＴＴＬ
配列番号９１
例示的抗体
ＴＡＭ抗原と結合する例示的抗体は、本明細書中および以下で提供される。例示的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書において、ならびにＷＯ２００９０２６３０３Ａ１、ＷＯ２０１１１２３３８１Ａ１、ＷＯ２０１６２０７３１２Ａ１、ＷＯ２０１６１０６１８０Ａ１、ＵＳ２０１６０２２０６６９Ａ１、ＵＳ２０１６０３２６２５４Ａ１、ＷＯ２０１３１６９２６４Ａ１、ＷＯ２０１３０８７６９９Ａ１、ＷＯ２０１１１４０２４９Ａ２、ＷＯ２０１１１３１４０７Ａ１、ＷＯ２０１１１２３３８１Ａ１、ＷＯ２０１１１０７５５３Ａ１およびＷＯ２０１１０７００２４Ａ１に記載され、それらのすべては、その全文で参照により本明細書に組み込まれる。例示的ＣＣＲ２抗体は、本明細書において、ならびにＷＯ２０１３１９２５９６Ａ２、ＷＯ２０１００２１６９７Ａ２、ＷＯ２００１０５７２２６Ａ１およびＷＯ１９９７０３１９４９Ａ１において記載され、それらのすべては、その全文で参照により本明細書に組み込まれる。例示的ＣＸＣＲ２抗体は、ＷＯ２０１４１７０３１７Ａ１およびＵＳ２０１６００６０３４７（例えば、ａ）配列番号１４（軽鎖）および配列番号１５（重鎖）、ｂ）配列番号２４（軽鎖）および配列番号２５（重鎖）、ｃ）配列番号３４（軽鎖）および配列番号３５（重鎖）、ｄ）配列番号４４（軽鎖）および配列番号４５（重鎖）、ｅ）配列番号５４（軽鎖）および配列番号５５（重鎖）、ｆ）配列番号６４（軽鎖）および配列番号６５（重鎖）、ｇ）配列番号７４（軽鎖）および配列番号７５（重鎖）、ｈ）配列番号８４（軽鎖）および配列番号８５（重鎖）を参照されたい）において記載され、それらのすべては、その全文で参照により本明細書に組み込まれる。例示的抗ＣＤ１６３抗体は、その全文で参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１２０２５８１０７（例えば、ＭＡＣ２１５８、ＭＡＣ２－４８を参照されたい）において提供される。例示的抗ＣＤ５２抗体は、その全文で参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２００５０１５２８９８において記載される。例示的抗葉酸抗体は、その全文で参照により本明細書に組み込まれるＵＳ９５２２１９６において記載される。例示的抗ＣＤ５２抗体は、その全文で参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２００５０１５２８９８において記載される。例示的抗ＭＡＲＣＯ抗体は、その全文で参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１６１９６６１２において記載される。
抗体分子
一実施形態では、多特異性分子は、第１の腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）抗原に結合する抗体分子および第２のＴＡＭ抗原に結合する抗体分子を含む。一部の実施形態では、第１のおよび／または第２のＴＡＭ抗原は、例えば、哺乳動物、例えば、ヒトである。例えば、抗体分子は、ＴＡＭ抗原上のエピトープ、例えば、線形またはコンフォメーションエピトープに特異的に結合する。
一実施形態では、多特異性分子は、第１の骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）抗原に結合する抗体分子および第２のＭＤＳＣ抗原に結合する抗体分子を含む。一部の実施形態では、第１のおよび／または第２のＭＤＳＣ抗原は、例えば、哺乳動物、例えば、ヒトである。例えば、抗体分子は、ＭＤＳＣ抗原上のエピトープ、例えば、線形またはコンフォメーションエピトープに特異的に結合する。
一実施形態では、抗体分子は、単一特異性抗体分子であり、単一エピトープに結合する。例えば、各々が同一エピトープに結合する複数の免疫グロブリン可変領域配列を有する単一特異性抗体分子。
一実施形態では、抗体分子は、多特異性抗体分子であり、例えば、それは、複数の免疫グロブリン可変領域配列を含み、複数のうちの第１の免疫グロブリン可変領域配列は、第１のエピトープに対して結合特異性を有し、複数のうちの第２の免疫グロブリン可変領域配列は、第２のエピトープに対する結合特異性を有する。一実施形態では、第１のおよび第２のエピトープは、同一抗原、例えば、同一タンパク質（または多量体タンパク質のサブユニット）上にある。一実施形態では、第１のおよび第２のエピトープは、重複する。一実施形態では、第１のおよび第２のエピトープは、重複しない。一実施形態では、第１のおよび第２のエピトープは、異なる抗原、例えば、異なるタンパク質（または多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。一実施形態では、多特異性抗体分子は、第３の、第４のまたは第５の免疫グロブリン可変領域を含む。一実施形態では、多特異性抗体分子は、二特異性抗体分子、三特異性抗体分子または四特異性抗体分子である。
一実施形態では、多特異性抗体分子は、二特異性抗体分子である。二特異性抗体は、２つより少ない抗原に対して特異性を有する。二特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変領域配列および第２のエピトープに対して結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変領域配列を特徴とする。一実施形態では、第１のおよび第２のエピトープは、同一抗原、例えば、同一タンパク質（または多量体タンパク質のサブユニット）上にある。一実施形態では、第１のおよび第２のエピトープは、重複する。一実施形態では、第１のおよび第２のエピトープは、重複しない。一実施形態では、第１のおよび第２のエピトープは、異なる抗原、例えば、異なるタンパク質（または多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。一実施形態では、二特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列ならびに第２のエピトープに対して結合特異性を有する重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列を含む。一実施形態では、二特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する半抗体および第２のエピトープに対して結合特異性を有する半抗体を含む。一実施形態では、二特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する半抗体またはその断片および第２のエピトープに対して結合特異性を有する半抗体またはその断片を含む。一実施形態では、二特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する、ｓｃＦｖもしくはＦａｂまたはその断片および第２のエピトープに対して結合特異性を有する、ｓｃＦｖもしくはＦａｂまたはその断片を含む。
一実施形態では、抗体分子は、ダイアボディおよび一本鎖分子ならびに抗体の抗原結合性断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ）を含む。例えば、抗体分子は、重（Ｈ）鎖可変領域配列（本明細書においてＶＨと略される）および軽（Ｌ）鎖可変領域配列（本明細書においてＶＬと略される）を含み得る。一実施形態では、抗体分子は、重鎖および軽鎖を含むか、またはからなる（本明細書において、半抗体と呼ばれる）。別の例では、抗体分子は、２つの重（Ｈ）鎖可変領域配列および２つの軽（Ｌ）鎖可変領域配列を含み、それによって、２つの抗原結合部位を形成する、例えば、全抗体の改変によって生成され得る、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、Ｆｄ、Ｆｄ’、Ｆｖ、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ、例えば）、単一可変領域抗体、ダイアボディ（Ｄａｂ）（二価および二特異性）およびキメラ（例えば、ヒト化）抗体または組換えＤＮＡ技術を使用してｄｅ ｎｏｖｏ合成されたもの。これらの機能的抗体断片は、そのそれぞれの抗原または受容体と選択的に結合する能力を保持する。抗体および抗体断片は、それだけには限らないが、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＥを含む抗体の任意のクラスに、ならびに抗体の任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４）に由来し得る。抗体分子の調製は、モノクローナルである場合も、ポリクローナルである場合もある。抗体分子はまた、ヒト、ヒト化、ＣＤＲグラフト化されたまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ生成された抗体であり得る。抗体は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４から選択された重鎖定常領域を有し得る。抗体はまた、例えば、カッパまたはラムダから選択された軽鎖を有し得る。「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、本明細書において「抗体」という用語と同義的に使用される。
抗体分子の抗原結合性断片の例として、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなるＦａｂ断片、一価断片、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド橋によって連結される２つのＦａｂ断片を含むＦ（ａｂ’）２断片、二価断片、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるダイアボディ（ｄＡｂ）断片、（ｖｉ）ラクダ類またはラクダ化可変領域、（ｖｉｉ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、（例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２巻：４２３～４２６頁およびＨｕｓｔｏｎら（１９８８年）Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５巻：５８７９～５８８３頁を参照されたい）、（ｖｉｉｉ）単一ドメイン抗体が挙げられる。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来技術を使用して得られ、断片は、無傷の抗体と同一方法で有用性についてスクリーニングされる。
抗体分子は、無傷の分子ならびにその機能的断片を含む。抗体分子の定常領域は、抗体の特性を改変するために（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能または補体機能のうち１つまたは複数を増大または減少するように）変更、例えば、突然変異され得る。
抗体分子はまた、単一ドメイン抗体であり得る。単一ドメイン抗体は、相補性決定領域が、単一ドメインポリペプチドの一部である抗体を含み得る。例として、それだけには限らないが、重鎖抗体、軽鎖を天然に欠く抗体、従来の４鎖抗体に由来する単一ドメイン抗体、操作された抗体および抗体由来のもの以外の単一ドメインスキャフォールドが挙げられる。単一ドメイン抗体は、当技術分野の任意のものまたは任意の将来の単一ドメイン抗体であり得る。単一ドメイン抗体は、それだけには限らないが、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、魚、サメ、ヤギ、ウサギおよびウシを含む任意の種に由来し得る。本発明の別の態様によれば、単一ドメイン抗体は、軽鎖を欠く重鎖抗体として知られる、天然に存在する単一ドメイン抗体である。このような単一ドメイン抗体は、例えば、ＷＯ９４０４６７８に開示されている。明確にするために、軽鎖を天然に欠く重鎖抗体に由来するこの可変領域は、本明細書において、それを、４鎖免疫グロブリンの従来のＶＨと区別するために、ＶＨＨまたはナノボディとして知られる。このようなＶＨＨ分子は、ラクダ科の種において、例えば、ラクダ、ラマ、ヒトコブラクダ、アルパカおよびグアナコにおいて作製された抗体に由来し得る。ラクダ科に加えて他の種も、軽鎖を天然に欠く重鎖抗体を産生する場合があり、このようなＶＨＨは、本発明の範囲内である。
ＶＨおよびＶＬ領域は、「フレームワーク領域」（ＦＲまたはＦＷ）と呼ばれるより保存されている領域が散在する、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域に細分され得る。
フレームワーク領域およびＣＤＲの広がりは、いくつかの方法によって正確に定義されている（Ｋａｂａｔ， Ｅ． Ａ．ら（１９９１年） Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、米国保健社会福祉省、ＮＩＨ刊行物９１－３２４２号、Ｃｈｏｔｈｉａ， Ｃ．ら（１９８７年）Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６巻：９０１～９１７頁およびＯｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用されるＡｂＭ定義を参照されたい。全般的に、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｌａｂ Ｍａｎｕａｌ（編：Ｄｕｅｂｅｌ， Ｓ．およびＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ， Ｒ．、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ）中の、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓを参照されたい）。
「相補性決定領域」および「ＣＤＲ」という用語は、本明細書で使用される場合、抗原特異性および結合親和性を付与する抗体可変領域内のアミノ酸の配列を指す。一般に、各重鎖可変領域中に３つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）および各軽鎖可変領域中に３つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）がある。
所与のＣＤＲの正確なアミノ酸配列境界は、Ｋａｂａｔら（１９９１年）、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、第５版、公衆衛生局、米国国立衛生研究所、メリーランド州、ベセスダによって記載されるもの（「Ｋａｂａｔ」番号付けスキーム）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら、（１９９７年）ＪＭＢ ２７３巻、９２７～９４８頁によって記載されるもの（「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号付けスキーム）を含めて、いくつかの公知のスキームのいずれかを使用して決定され得る。本明細書で使用される場合、「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号スキームに従って定義されたＣＤＲはまた、「超可変ループ」と呼ばれることがある。
例えば、Ｋａｂａｔ下では、重鎖可変領域（ＶＨ）中のＣＤＲアミノ酸残基は、３１～３５（ＨＣＤＲ１）、５０～６５（ＨＣＤＲ２）および９５～１０２（ＨＣＤＲ３）と番号付けされ、軽鎖可変領域（ＶＬ）中のＣＤＲアミノ酸残基は、２４～３４（ＬＣＤＲ１）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）および８９～９７（ＬＣＤＲ３）と番号付けされる。Ｃｈｏｔｈｉａ下では、ＶＨ中のＣＤＲアミノ酸は、２６～３２（ＨＣＤＲ１）、５２～５６（ＨＣＤＲ２）および９５～１０２（ＨＣＤＲ３）と番号付けされ、ＶＬ中のアミノ酸残基は、２６～３２（ＬＣＤＲ１）、５０～５２（ＬＣＤＲ２）および９１～９６（ＬＣＤＲ３）と番号付けされる。
各ＶＨおよびＶＬは、典型的には、以下の順序でアミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲ：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４を含む。
抗体分子は、ポリクローナルであっても、モノクローナル抗体であってもよい。
「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、本明細書で使用される場合、単一分子組成物の抗体分子の調製を指す。モノクローナル抗体組成物は、単一結合特異性および部分エピトープに対する親和性を示す。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術によって、またはハイブリドーマ技術を使用しない方法（例えば、組換え法）によって作製され得る。
抗体は、組換え産生され得る、例えば、ファージディスプレイによって、またはコンビナトリアル法によって産生され得る。
抗体を作製するためのファージディスプレイおよびコンビナトリアル法は、当技術分野で公知である（例えば、Ｌａｄｎｅｒら米国特許第５，２２３，４０９号、Ｋａｎｇら国際公開番号ＷＯ９２／１８６１９、Ｄｏｗｅｒら国際公開番号ＷＯ９１／１７２７１、Ｗｉｎｔｅｒら国際公開公報ＷＯ９２／２０７９１、Ｍａｒｋｌａｎｄら国際公開番号ＷＯ９２／１５６７９、Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇら国際公開公報ＷＯ９３／０１２８８、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら国際公開番号ＷＯ９２／０１０４７、Ｇａｒｒａｒｄら国際公開番号ＷＯ９２／０９６９０、Ｌａｄｎｅｒら国際公開番号ＷＯ９０／０２８０９、Ｆｕｃｈｓら（１９９１年）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９巻：１３７０～１３７２頁、Ｈａｙら（１９９２年）Ｈｕｍ Ａｎｔｉｂｏｄ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ３巻：８１～８５頁、Ｈｕｓｅら（１９８９年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６巻：１２７５～１２８１頁、Ｇｒｉｆｆｔｈｓら（１９９３年）ＥＭＢＯ Ｊ １２巻：７２５～７３４頁、Ｈａｗｋｉｎｓら（１９９２年）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２６巻：８８９～８９６頁、Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１年）Ｎａｔｕｒｅ ３５２巻：６２４～６２８頁、Ｇｒａｍら（１９９２年）ＰＮＡＳ ８９巻：３５７６～３５８０頁、Ｇａｒｒａｄら（１９９１年）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９巻：１３７３～１３７７頁、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（１９９１年）Ｎｕｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ １９巻：４１３３～４１３７頁およびＢａｒｂａｓら（１９９１年）ＰＮＡＳ ８８巻：７９７８～７９８２頁に記載されるように、これらのすべての開示内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。
一実施形態では、抗体は、完全ヒト抗体（例えば、ヒト免疫グロブリン配列から抗体を産生するように遺伝子操作されているマウスにおいて作製された抗体）または非ヒト抗体、例えば、げっ歯類（マウスまたはラット）、ヤギ、霊長類（例えば、サル）、ラクダ抗体である。好ましくは、非ヒト抗体は、げっ歯類（マウスまたはラット抗体）である。げっ歯類抗体を産生する方法は、当技術分野で公知である。
ヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなくヒト免疫グロブリン遺伝子を保持するトランスジェニックマウスを使用して作製され得る。目的の抗原を用いて免疫処置されたこれらのトランスジェニックマウスから得た脾細胞を使用して、ヒトタンパク質に由来するエピトープに対して特異的親和性を有するヒトｍＡｂを分泌するハイブリドーマを生成する（例えば、Ｗｏｏｄら国際出願ＷＯ９１／００９０６、ＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらＰＣＴ公開ＷＯ９１／１０７４１、Ｌｏｎｂｅｒｇら国際出願ＷＯ９２／０３９１８、Ｋａｙら国際出願９２／０３９１７、Ｌｏｎｂｅｒｇ， Ｎ．ら１９９４年Ｎａｔｕｒｅ ３６８巻：８５６～８５９頁、Ｇｒｅｅｎ， Ｌ．Ｌ．ら１９９４年Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ． ７巻：１３～２１頁、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， Ｓ．Ｌ．ら１９９４年Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８１巻：６８５１～６８５５頁、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎら１９９３年Ｙｅａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ７巻：３３～４０頁、Ｔｕａｉｌｌｏｎら１９９３年ＰＮＡＳ９０巻：３７２０～３７２４頁、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎら１９９１年Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２１巻：１３２３～１３２６頁を参照されたい）。
抗体分子は、可変領域またはその部分、例えば、ＣＤＲが、非ヒト生物、例えば、ラットまたはマウスにおいて生成されるものであってもよい。キメラ、ＣＤＲグラフト化およびヒト化抗体は、本発明の範囲内である。非ヒト生物、例えば、ラットまたはマウスにおいて生成され、次いで、例えば、ヒトにおける抗原性を低下させるように可変フレームワークまたは定常領域において改変された抗体分子は、本発明の範囲内である。
「効率的にヒト」タンパク質は、中和抗体反応、例えば、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）反応を実質的に惹起しないタンパク質である。ＨＡＭＡは、いくつかの状況において、例えば、抗体分子が、例えば、慢性もしくは再発性疾患状態の処置において反復して投与される場合に問題となり得る。ＨＡＭＡ反応が、血清からの抗体クリアランスの増大のために（例えば、Ｓａｌｅｈら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、３２巻：１８０～１９０頁（１９９０年）を参照されたい）、また潜在的アレルギー反応のために（例えば、ＬｏＢｕｇｌｉｏら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、５巻：５１１７～５１２３頁（１９８６年）を参照されたい）反復抗体投与を無効にする可能性がある。
キメラ抗体は、当技術分野で公知の組換えＤＮＡ技術によって産生され得る（Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、国際特許公開ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９、Ａｋｉｒａら、欧州特許出願１８４，１８７、Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．、欧州特許出願１７１，４９６、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、欧州特許出願１７３，４９４、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、国際出願ＷＯ８６／０１５３３、Ｃａｂｉｌｌｙら米国特許第４，８１６，５６７号、Ｃａｂｉｌｌｙら、欧州特許出願１２５，０２３、Ｂｅｔｔｅｒら（１９８８年Ｓｃｉｅｎｃｅ２４０巻：１０４１～１０４３頁）、Ｌｉｕら（１９８７年）ＰＮＡＳ８４巻：３４３９～３４４３頁、Ｌｉｕら、１９８７年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９巻：３５２１～３５２６頁、Ｓｕｎら（１９８７年）ＰＮＡＳ８４巻：２１４～２１８頁、Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら、１９８７年、Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．４７巻：９９９～１００５頁；Ｗｏｏｄら（１９８５年）Ｎａｔｕｒｅ３１４巻：４４６～４４９頁およびＳｈａｗら、１９８８年、Ｊ．Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８０巻：１５５３～１５５９頁を参照されたい）。
ヒト化またはＣＤＲグラフト化抗体は、少なくとも１つまたは２つであるが、一般に、３つすべての（重およびまたは軽免疫グロブリン鎖の）レシピエントＣＤＲが、ドナーＣＤＲで置き換えられている。抗体は、非ヒトＣＤＲの少なくとも部分で置き換えられ得る、またはＣＤＲの一部のみが、非ヒトＣＤＲで置き換えられ得る。抗原への結合に必要な数のＣＤＲを置き換えることのみが必要である。好ましくは、ドナーは、げっ歯類抗体、例えば、ラットまたはマウス抗体であり、レシピエントは、ヒトフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークとなる。典型的には、ＣＤＲを提供する免疫グロブリンは、「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供する免疫グロブリンは、「アクセプター」と呼ばれる。一実施形態では、ドナー免疫グロブリンは、非ヒト（例えば、げっ歯類）である。アクセプターフレームワークは、天然に存在する（例えば、ヒト）フレームワークまたはコンセンサスフレームワークまたはそれと約８５％もしくはより高く、好ましくは、９０％、９５％、９９％もしくはより高く同一の配列である。
本明細書で使用される場合、「コンセンサス配列」という用語は、関連配列のファミリーにおいて最も頻繁に生じるアミノ酸（またはヌクレオチド）から形成された配列を指す（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ、Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ （Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ、ドイツ、ヴァインハイム、１９８７年を参照されたい）。タンパク質のファミリーでは、コンセンサス配列中の各位置は、ファミリーにおいてその位置で最も頻繁に生じるアミノ酸によって占められる。２種のアミノ酸が等しい頻度で生じる場合には、コンセンサス配列中にいずれかが含まれてもよい。「コンセンサスフレームワーク」とは、コンセンサス免疫グロブリン配列中のフレームワーク領域を指す。
抗体分子は、当技術分野で公知の方法によってヒト化され得る（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， Ｓ． Ｌ．、１９８５年、Ｓｃｉｅｎｃｅ２２９巻：１２０２～１２０７頁、Ｏｉらによる、１９８６年、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４巻：２１４頁およびＱｕｅｅｎらによるＵＳ５，５８５，０８９、ＵＳ５，６９３，７６１およびＵＳ５，６９３，７６２を参照されたい、それらのすべての開示内容は、これにより参照により本明細書に組み込まれる）。
ヒト化またはＣＤＲグラフト化抗体分子は、免疫グロブリン鎖の１つ、２つまたはすべてのＣＤＲが置き換えられ得る、ＣＤＲグラフト化またはＣＤＲ置換によって生成され得る。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号、Ｊｏｎｅｓら１９８６年Ｎａｔｕｒｅ３２１巻：５５２～５２５頁、Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら１９８８年Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９巻：１５３４頁、Ｂｅｉｄｌｅｒら１９８８年Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１巻：４０５３～４０６０頁、Ｗｉｎｔｅｒ ＵＳ５，２２５，５３９を参照されたい、それらのすべての開示内容は、参照により本明細書に明確に組み込まれる。Ｗｉｎｔｅｒは、本発明のヒト化抗体を調製するために使用され得るＣＤＲグラフト化法を記載しており（１９８７年３月２６日に出願されたＵＫ特許出願ＧＢ２１８８６３８Ａ、Ｗｉｎｔｅｒ ＵＳ５，２２５，５３９）、その開示内容は、参照により本明細書に明確に組み込まれる。
また、特定のアミノ酸が置換、欠失または付加されているヒト化抗体分子も本発明の範囲内である。ドナーからアミノ酸を選択するための基準は、ＵＳ５，５８５，０８９、例えば、ＵＳ５，５８５，０８９の１２～１６段に記載されており、その開示内容は、これにより参照により本明細書に組み込まれる。抗体をヒト化するための他の技術は、１９９２年１２月２３日に公開されたＰａｄｌａｎら、ＥＰ５１９５９６Ａ１に記載されている。
抗体分子は、一本鎖抗体であり得る。一本鎖抗体（ｓｃＦＶ）は、操作され得る（例えば、Ｃｏｌｃｈｅｒ， Ｄ．ら（１９９９年）Ａｎｎ Ｎ Ｙ Ａｃａｄ Ｓｃｉ８８０巻：２６３～８０頁およびＲｅｉｔｅｒ， Ｙ．（１９９６年） Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２巻：２４５～５２頁を参照されたい）。一本鎖抗体は、同一標的タンパク質の異なるエピトープに対する特異性を有する多価抗体を作製するために二量体化または多量体化され得る。
さらに他の実施形態では、抗体分子は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥの重鎖定常領域から選択される、特に、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４の（例えば、ヒト）重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域を有する。別の実施形態では、抗体分子は、例えば、カッパまたはラムダの（例えば、ヒト）軽鎖定常領域から選択される軽鎖定常領域を有する。定常領域は、抗体の特性を改変するために（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能および／または補体機能のうち１つまたは複数を増大または減少するように）変更、例えば、突然変異され得る。一実施形態では、抗体は、エフェクター機能を有し、補体を固定し得る。他の実施形態では、抗体は、エフェクター細胞を動員しない、または補体を固定しない。別の実施形態では、抗体は、Ｆｃ受容体に結合するための低減した能力を有するか、または有さない。例えば、Ｆｃ受容体への結合を支持しない、アイソタイプまたはサブタイプ、断片または他の突然変異体であり、例えば、突然変異された、または欠失されたＦｃ受容体結合領域を有する。
抗体定常領域を変更する方法は、当技術分野で公知である。変更された機能、例えば、エフェクターリガンド、例えば、細胞上のＦｃＲまたは補体のＣ１成分に対する変更された親和性を有する抗体は、抗体の定常部分中の少なくとも１個のアミノ酸残基を、異なる残基で置き換えることによって生成され得る（例えば、ＥＰ３８８，１５１Ａ１、米国特許第５，６２４，８２１号および米国特許第５，６４８，２６０号を参照されたい、それらのすべての開示内容は、これにより参照により本明細書に組み込まれる）。マウスまたは他の種に適用された場合に、免疫グロブリンがこれらの機能を低減または排除する同様の種類の変更が説明され得る。
抗体分子は、誘導体化され得る、または別の機能的分子（例えば、別のペプチドまたはタンパク質）に連結され得る。本明細書で使用される場合、「誘導体化された」抗体分子は、改変されているものである。誘導体化の方法として、それだけには限らないが、蛍光部分、放射性ヌクレオチド、毒素、酵素または親和性リガンド、例えば、ビオチンの付加が挙げられる。したがって、本発明の抗体分子は、免疫接着分子を含む、本明細書において記載される抗体の誘導体化された、そうでなければ改変された形態を含むものとする。例えば、抗体分子は、１つまたは複数の他の分子実体、例えば、別の抗体（例えば、二特異性抗体またはダイアボディ）、検出可能物質、細胞傷害性薬剤、医薬物質および／または抗体もしくは抗体部分の、別の分子との会合を媒介できるタンパク質もしくはペプチド（例えば、ストレプトアビジンコア領域またはポリヒスチジンタグ）に、機能的に連結され得る（化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合的会合他によって）。
誘導体化された抗体分子の１種は、２つまたはそれより多い抗体（例えば、二特異性抗体を作出するために同一種の、または異なる種の）を架橋することによって生成される。適した架橋剤として、適当なスペーサーによって隔てられた２つの別個に反応性である基を有するヘテロ二機能性であるもの（例えば、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）、またはホモ二機能性であるもの（例えば、ジスクシンイミジルスベレート）が挙げられる。このようなリンカーは、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌｌから入手可能である。
ＣＳＦ１Ｒを標的とする抗体分子
一部の実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ、例えば、ヒトＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子（例えば、単一特異性または多特異性抗体分子）が、本明細書において提供される。
一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子は、表１３において、例えば、表１３の１つの横列において開示される１、２もしくは３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および／またはＨＣＤＲ３）または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子は、表１５において開示され、例えば、任意選択により、ＣＤＲがＫａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴ定義に従う、重鎖可変領域（ＶＨ）に由来する１、２または３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および／またはＨＣＤＲ３）を含む。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子は、表１３において、例えば、表１３の１つの横列において開示される１、２、３もしくは４つの重鎖フレームワーク領域（例えば、重鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３および／もしくはＦＲ４）または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子は、表１５において開示されるＶＨに由来する１、２、３または４つの重鎖フレームワーク領域（例えば、重鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３および／またはＦＲ４）を含む。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子は、表１５において開示されるＶＨまたはそれと少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子は、表１４において、例えば、表１４の１つの横列において開示される１、２もしくは３つの軽鎖ＣＤＲ（例えば、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２および／もしくはＬＣＤＲ３）または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子は、表１６において開示され、例えば、任意選択により、ＣＤＲがＫａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴ定義に従う、軽鎖可変領域（ＶＬ）に由来する１、２または３つの軽鎖ＣＤＲ（例えば、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２および／またはＬＣＤＲ３）を含む。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子は、表１４において、例えば、表１４の１つの横列において開示される１、２、３もしくは４つの軽鎖フレームワーク領域（例えば、軽鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３および／もしくはＦＲ４）または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子は、表１６に開示されるＶＬに由来する１、２、３または４つの軽鎖フレームワーク領域（例えば、軽鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３および／またはＦＲ４）を含む。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子は、表１６において開示されるＶＬまたはそれと少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子は、表１５において開示されるヌクレオチド配列（またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列）によってコードされるＶＨおよび／または表１６において開示されるヌクレオチド配列（またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列）によってコードされるＶＬを含む。
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ＣＣＲ２を標的とする抗体分子
一部の実施形態では、ＣＣＲ２、例えば、ヒトＣＣＲ２に結合する抗体分子（例えば、単一特異性または多特異性抗体分子）が、本明細書において提供される。
一部の実施形態では、抗ＣＣＲ２抗体分子は、表１７において、例えば、表１７の１つの横列において開示される１、２もしくは３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および／もしくはＨＣＤＲ３）または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＣＲ２抗体分子は、表１９において開示され、例えば、任意選択により、ＣＤＲがＫａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴ定義に従う、重鎖可変領域（ＶＨ）に由来する１、２または３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および／またはＨＣＤＲ３）を含む。一部の実施形態では、抗ＣＣＲ２抗体分子は、表１７において、例えば、表１７の１つの横列において開示される１、２、３もしくは４つの重鎖フレームワーク領域（例えば、重鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３および／もしくはＦＲ４）または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＣＲ２抗体分子は、表１９において開示されるＶＨに由来する１、２、３または４つの重鎖フレームワーク領域（例えば、重鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３および／またはＦＲ４）を含む。一部の実施形態では、抗ＣＣＲ２抗体分子は、表１９において開示されるＶＨまたはそれと少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＣＣＲ２抗体分子は、表１８において、例えば、表１８の１つの横列において開示される１、２もしくは３つの軽鎖ＣＤＲ（例えば、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２および／もしくはＬＣＤＲ３）または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＣＲ２抗体分子は、表２０において開示され、例えば、任意選択により、ＣＤＲがＫａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴ定義に従う、軽鎖可変領域（ＶＬ）に由来する１、２または３つの軽鎖ＣＤＲ（例えば、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２および／またはＬＣＤＲ３）を含む。一部の実施形態では、抗ＣＣＲ２抗体分子は、表１８において、例えば、表１８の１つの横列において開示される１、２、３もしくは４つの軽鎖フレームワーク領域（例えば、軽鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３および／もしくはＦＲ４）または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＣＲ２抗体分子は、表２０に開示されるＶＬに由来する１、２、３または４つの軽鎖フレームワーク領域（例えば、軽鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３および／またはＦＲ４）を含む。一部の実施形態では、抗ＣＣＲ２抗体分子は、表２０において開示されるＶＬまたはそれと少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＣＲ２抗体分子は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＦＮＡＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＲＴＫＮＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＴＦＹＧＮＧＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４８０）のアミノ酸配列を含むＶＨを含まない。一部の実施形態では、抗ＣＣＲ２抗体分子は、ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＦＬＮＷＬＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＬＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＷＱＧＴＨＦＰＹＴＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号４８１）のアミノ酸配列を含むＶＬを含まない。
一部の実施形態では、抗ＣＣＲ２抗体分子は、表１９において開示されるヌクレオチド配列（またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列）によってコードされるＶＨおよび／または表２０において開示されるヌクレオチド配列（またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列）によってコードされるＶＬを含む。
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ＰＤ－Ｌ１を標的とする抗体分子
一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１、例えば、ヒトＰＤ－Ｌ１に結合する抗体分子（例えば、単一特異性または多特異性抗体分子）が、本明細書において提供される。
一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、表２１において、例えば、表２１の１つの横列において開示される１、２もしくは３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および／もしくはＨＣＤＲ３）または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、表２３において開示され、例えば、任意選択により、ＣＤＲがＫａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴ定義に従う、重鎖可変領域（ＶＨ）に由来する１、２または３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および／またはＨＣＤＲ３）を含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、表２１において、例えば、表２１の１つの横列において開示される１、２、３もしくは４つの重鎖フレームワーク領域（例えば、重鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３および／もしくはＦＲ４）または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、表２３において開示されるＶＨに由来する１、２、３または４つの重鎖フレームワーク領域（例えば、重鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３および／またはＦＲ４）を含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、表２３において開示されるＶＨまたはそれと少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、表２２において、例えば、表２２の１つの横列において開示される１、２もしくは３つの軽鎖ＣＤＲ（例えば、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２および／もしくはＬＣＤＲ３）または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、表２４において開示され、例えば、任意選択により、ＣＤＲがＫａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴ定義に従う、軽鎖可変領域（ＶＬ）に由来する１、２または３つの軽鎖ＣＤＲ（例えば、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２および／またはＬＣＤＲ３）を含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、表２２において、例えば、表２２の１つの横列において開示される１、２、３もしくは４つの軽鎖フレームワーク領域（例えば、軽鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３および／もしくはＦＲ４）または１、２、３、４、５もしくは６つ以下の改変を含むアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、表２４に開示されるＶＬに由来する１、２、３または４つの軽鎖フレームワーク領域（例えば、軽鎖ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３および／またはＦＲ４）を含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、表２４において開示されるＶＬまたはそれと少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、表２３において開示されるヌクレオチド配列（またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列）によってコードされるＶＨおよび／または表２４において開示されるヌクレオチド配列（またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列）によってコードされるＶＬを含む。
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多特異性抗体分子
実施形態では、多特異性抗体分子は、１つより多い抗原結合部位を含む場合があり、異なる部位が異なる抗原に対して特異的である。実施形態では、多特異性抗体分子は、同一抗原上の１つより多い（例えば、２つまたはそれより多い）エピトープに結合できる。実施形態では、多特異性抗体分子は、標的細胞（例えば、がん細胞）に対する特異的な抗原結合部位および免疫エフェクター細胞に対する特異的な異なる抗原結合部位を含む。一実施形態では、多特異性抗体分子は、二特異性抗体分子である。二特異性抗体分子は、５つの異なる構造群：（ｉ）二特異性免疫グロブリンＧ（ＢｓＩｇＧ）、（ｉｉ）さらなる抗原結合部分が付加されたＩｇＧ、（ｉｉｉ）二特異性抗体断片、（ｉｖ）二特異性融合タンパク質および（ｖ）二特異性抗体コンジュゲートに分類され得る。
ＢｓＩｇＧは、各抗原に対して一価である形式である。例示的ＢｓＩｇＧ形式として、それだけには限らないが、ｃｒｏｓｓＭａｂ、ＤＡＦ（ツーインワン（ｔｗｏ－ｉｎ－ｏｎｅ））、ＤＡＦ（フォーインワン（ｆｏｕｒ－ｉｎ－ｏｎｅ））、ＤｕｔａＭａｂ、ＤＴ－ＩｇＧ、ノブ・イン・ホール共通ＬＣ、ノブ・イン・ホールアセンブリー、電荷対、Ｆａｂアーム交換、ＳＥＥＤボディ、トリオマブ（ｔｒｉｏｍａｂ）、ＬＵＺ－Ｙ、Ｆｃａｂ、κλボディ、直行性Ｆａｂが挙げられる。Ｓｐｉｅｓｓら Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ６７巻（２０１５年）：９５～１０６頁を参照されたい。例示的ＢｓＩｇＧは、抗ＣＤ３アームおよび抗ＥｐＣＡＭアームを含有するカツマキソマブ（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｔｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａ、Ｎｅｏｐｈａｒｍ）ならびにＣＤ３およびＨＥＲ２を標的とするエルツマキソマブ（Ｎｅｏｖｉｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を含む。一部の実施形態では、ＢｓＩｇＧは、ヘテロ二量体化のために操作される重鎖を含む。例えば、重鎖は、「ノブ・イン・ホール」戦略、ＳＥＥＤプラットフォーム、共通重鎖（例えば、κλボディ中）を使用するヘテロ二量体化およびヘテロ二量体Ｆｃ領域の使用のために操作され得る。Ｓｐｉｅｓｓら Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ６７巻（２０１５年）：９５～１０６頁を参照されたい。ＢｓＩｇＧ中のホモ二量体の重鎖対形成を避けるために使用されてきた戦略として、ノブ・イン・ホール、デュオボディ（ｄｕｏｂｏｄｙ）、アジメトリック（ａｚｙｍｅｔｒｉｃ）、電荷対、ＨＡ－ＴＦ、ＳＥＥＤボディおよび差次的プロテインＡ親和性が挙げられる。同著を参照されたい。ＢｓＩｇＧは、異なる宿主細胞における成分抗体の別個の発現およびその後の精製／ＢｓＩｇＧへのアセンブリーによって産生され得る。ＢｓＩｇＧはまた、単一宿主細胞における成分抗体の発現によって産生され得る。ＢｓＩｇＧは、例えば、プロテインＡおよび連続的ｐＨ溶出を使用するアフィニティークロマトグラフィーを使用して精製され得る。
さらなる抗原結合部分が付加されたＩｇＧは、二特異性抗体分子の別の形式である。例えば、単一特異性ＩｇＧは、例えば、重鎖または軽鎖いずれかのＮ末端またはＣ末端で、単一特異性ＩｇＧにさらなる抗原結合ユニットを付加することによって、二特異性を有するように操作され得る。例示的さらなる抗原結合ユニットは、単一ドメイン抗体（例えば、重鎖可変鎖または軽鎖可変鎖）、操作されたタンパク質スキャフォールドおよび対形成された抗体可変領域（例えば、一本鎖可変断片または可変断片）を含む。同著を参照されたい。付加されたＩｇＧ形式の例として、二重可変ドメインＩｇＧ（ＤＶＤ－Ｉｇ）、ＩｇＧ（Ｈ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）－Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）－Ｖ、Ｖ（Ｈ）－ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）－Ｖ、Ｖ（Ｌ）－ＩｇＧ、ＫＩＨ ＩｇＧ－ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ－ＩｇＧ、ＩｇＧ－２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４－Ｉｇ、ザイボディ（ｚｙｂｏｄｙ）およびＤＶＩ－ＩｇＧ（フォーインワン）が挙げられる。Ｓｐｉｅｓｓら Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ６７巻（２０１５年）：９５～１０６頁を参照されたい。ＩｇＧ－ｓｃＦｖの一例として、ＩＧＦ－１ＲおよびＨＥＲ３に結合するＭＭ－１４１（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）がある。ＤＶＤ－Ｉｇの例として、ＩＬ－１αおよびＩＬ－１βに結合するＡＢＴ－９８１（ＡｂｂＶｉｅ）ならびにＴＮＦおよびＩＬ－１７Ａに結合するＡＢＴ－１２２（ＡｂｂＶｉｅ）が挙げられる。
二特異性抗体断片（ＢｓＡｂ）は、抗体定常ドメインの一部またはすべてを欠く二特異性抗体分子の形式である。例えば、一部のＢｓＡｂは、Ｆｃ領域を欠く。実施形態では、二特異性抗体断片は、単一宿主細胞におけるＢｓＡｂの効率的発現を可能にするペプチドリンカーによって接続されている重鎖および軽鎖領域を含む。例示的二特異性抗体断片として、それだけには限らないが、ナノボディ、ナノボディ－ＨＡＳ、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃダイアボディ、ｓｃダイアボディ－ＣＨ３、ダイアボディ－ＣＨ３、トリプルボディ（ｔｒｉｐｌｅ ｂｏｄｙ）、ミニ抗体、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ－ＣＨ３ ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－ＣＨ－ＣＬ－ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）２－ｓｃＦｖ２、ｓｃＦｖ－ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ、四価ＨＣＡｂ、ｓｃダイアボディ－Ｆｃ、ダイアボディ－Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ－Ｆｃおよび細胞内抗体が挙げられる。同著を参照されたい。例えば、ＢｉＴＥ形式は、タンデムｓｃＦｖを含み、成分ｓｃＦｖは、Ｔ細胞上のＣＤ３およびがん細胞上の表面抗原に結合する。
二特異的融合タンパク質は、例えば、さらなる特異性および／または機能性を付加するために他のタンパク質に連結された抗体断片を含む。二特異性融合タンパク質の例として、ＨＬＡによって提示されたペプチドを認識する親和性成熟Ｔ細胞受容体に連結された抗ＣＤ３ ｓｃＦｖを含むｉｍｍＴＡＣがある。実施形態では、より高い結合価を有する二特異性抗体分子を生成するために、ドック・アンド・ロック（ｄｏｃｋ－ａｎｄ－ｌｏｃｋ）（ＤＮＬ）法が使用され得る。また、アルブミン結合タンパク質またはヒト血清アルブミンへの融合は、抗体断片の血清半減期を延長し得る。同著を参照されたい。
実施形態では、ＢｓＡｂ分子を作出するために、化学的コンジュゲーション、例えば、抗体および／または抗体断片の化学的コンジュゲーションが使用され得る。同著を参照されたい。例示的二特異性抗体コンジュゲートは、低分子量薬物が、各Ｆａｂアームもしくは抗体またはその断片中の単一反応性リシンに部位特異的にコンジュゲートされるＣｏｖＸ－ボディ形式を含む。実施形態では、コンジュゲーションは、低分子量薬物の血清半減期を改善する。例示的ＣｏｖＸ－ボディとして、ＶＥＧＦまたはＡｎｇ２のいずれかを阻害する２つの短いペプチドにコンジュゲートされた抗体を含む、ＣＶＸ－２４１（ＮＣＴ０１００４８２２）がある。同著を参照されたい。
抗体分子は、宿主系において、例えば、少なくとも１つまたは複数の成分の組換え発現によって産生され得る。例示的宿主系として、真核細胞（例えば、哺乳動物細胞、例えば、ＣＨＯ細胞または昆虫細胞、例えば、ＳＦ９またはＳ２細胞）および原核細胞（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））が挙げられる。二特異性抗体分子は、異なる宿主細胞における成分の別個の発現およびその後の精製／アセンブリーによって産生され得る。あるいは、抗体分子は、単一宿主細胞において成分の発現によって産生され得る。二特異性抗体分子の精製は、例えば、プロテインＡおよび連続的ｐＨ溶出を使用するアフィニティークロマトグラフィーなどの種々の方法によって実施され得る。他の実施形態では、精製のために親和性タグが使用され得る、例えば、ヒスチジン含有タグ、ｍｙｃタグまたはストレプトアビジンタグ。
多特異性抗体分子の種々の実施形態
一態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分を含む多特異性抗体分子が、本明細書において提供される。一実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、本明細書において開示される抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子、例えば、副題「ＣＳＦ１Ｒを標的とする抗体分子」を有する節において開示される抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子を含む。一部の実施形態では、多特異性抗体分子は、抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、本明細書において開示される抗ＣＣＲ２抗体分子）、抗ＰＤ－Ｌ１結合部分（例えば、本明細書において開示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子）、ＴＧＦベータ阻害剤および／またはサイトカイン分子（例えば、ＩＬ－２分子）をさらに含む。
一態様では、抗ＣＣＲ２結合部分を含む多特異性抗体分子が、本明細書において提供される。一実施形態では、抗ＣＣＲ２結合部分は、本明細書において開示される抗ＣＣＲ２抗体分子、例えば、副題「ＣＣＲ２を標的とする抗体分子」を有する節において開示される抗ＣＣＲ２抗体分子を含む。一部の実施形態では、多特異性抗体分子は、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、本明細書において開示される抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）、抗ＰＤ－Ｌ１結合部分（例えば、本明細書において開示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子）、ＴＧＦベータ阻害剤および／またはサイトカイン分子（例えば、ＩＬ－２分子）をさらに含む。
一態様では、抗ＰＤ－Ｌ１結合部分を含む多特異性抗体分子が、本明細書において提供される。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１結合部分は、本明細書において開示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子、例えば、副題「ＰＤ－Ｌ１を標的とする抗体分子」を有する節において開示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子を含む。一部の実施形態では、多特異性抗体分子は、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、本明細書において開示される抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）、抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、本明細書において開示される抗ＣＣＲ２抗体分子）、ＴＧＦベータ阻害剤および／またはサイトカイン分子（例えば、ＩＬ－２分子）をさらに含む。
一部の実施形態では、多特異性抗体分子は、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および抗ＣＣＲ２結合部分を含む。一部の実施形態では、多特異性抗体分子は、表２５において開示されるアミノ酸配列またはその断片を含む。一部の実施形態では、多特異性抗体分子は、本明細書において開示される多特異性抗体分子、例えば、表３４において開示されるＢＩＭ０６４８もしくはＢＩＭ０６５２であるか、またはそれを含む。一部の実施形態では、多特異性抗体分子は、表３４において開示されるＢＩＭ０６４８またはＢＩＭ０６５２の１つもしくは複数のＣＤＲ、１つもしくは複数の重鎖可変領域、１つもしくは複数の軽鎖可変領域、１つもしくは複数の重鎖および／または１つもしくは複数の軽鎖を含む。一部の実施形態では、多特異性抗体分子は、本明細書において開示される多特異性抗体分子、例えば、本明細書において開示される分子１～８６のいずれか、例えば、表２８において開示される分子１０～８６のいずれか、例えば、表２８において開示される分子ＢＩＭ０２０４、ＢＩＭ０２０５、ＢＩＭ０２０６、ＢＩＭ０２０７、ＢＩＭ０２０８、ＢＩＭ０２０９、ＢＩＭ０２１０、ＢＩＭ０２１１、ＢＩＭ０５４２、ＢＩＭ０５４３、ＢＩＭ０５４４、ＢＩＭ０５４５、ＢＩＭ０５４６、ＢＩＭ０５４７、ＢＩＭ０５４８、ＢＩＭ０５４９、ＢＩＭ０５５０、ＢＩＭ０５５１、ＢＩＭ０５５２、ＢＩＭ０５５３、ＢＩＭ０５５４、ＢＩＭ０５５５、ＢＩＭ０５５６、ＢＩＭ０５６６およびＢＩＭ０５６７のいずれかであるか、またはそれを含む。一部の実施形態では、多特異性抗体分子は、表２８において開示される分子ＢＩＭ０２０４、ＢＩＭ０２０５、ＢＩＭ０２０６、ＢＩＭ０２０７、ＢＩＭ０２０８、ＢＩＭ０２０９、ＢＩＭ０２１０、ＢＩＭ０２１１、ＢＩＭ０５４２、ＢＩＭ０５４３、ＢＩＭ０５４４、ＢＩＭ０５４５、ＢＩＭ０５４６、ＢＩＭ０５４７、ＢＩＭ０５４８、ＢＩＭ０５４９、ＢＩＭ０５５０、ＢＩＭ０５５１、ＢＩＭ０５５２、ＢＩＭ０５５３、ＢＩＭ０５５４、ＢＩＭ０５５５、ＢＩＭ０５５６、ＢＩＭ０５６６およびＢＩＭ０５６７のいずれかの１つもしくは複数のＣＤＲ、１つもしくは複数の重鎖可変領域、１つもしくは複数の軽鎖可変領域、１つもしくは複数の重鎖および／または１つもしくは複数の軽鎖を含む。
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ＣＳＦ１Ｒを標的とするさらなる多特異性抗体分子
一態様では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分を含む多特異性抗体分子が、本明細書において開示される。一部の実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子を含む。例示的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子配列は、ＷＯ２００９０２６３０３Ａ１、ＷＯ２０１１１２３３８１Ａ１、ＷＯ２０１６２０７３１２Ａ１、ＷＯ２０１６１０６１８０Ａ１、ＵＳ２０１６０２２０６６９Ａ１、ＵＳ２０１６０３２６２５４Ａ１、ＷＯ２０１３１６９２６４Ａ１、ＷＯ２０１３０８７６９９Ａ１、ＷＯ２０１１１４０２４９Ａ２、ＷＯ２０１１１３１４０７Ａ１、ＷＯ２０１１１２３３８１Ａ１、ＷＯ２０１１１０７５５３Ａ１およびＷＯ２０１１０７００２４Ａ１に記載されており、そのすべては、その全文で参照により本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、エマクツズマブのＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５もしくは６つすべてのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、重鎖もしくは軽鎖配列またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも９５％同一の、例えば、それと９５％～９９．９％同一の、もしくは少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５以下の変更（例えば、置換、欠失もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）を含む。一部の実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、カビラリズマブのＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５もしくは６つすべてのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、重鎖もしくは軽鎖配列またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも９５％同一の、例えば、それと９５％～９９．９％同一の、もしくは少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５以下の変更（例えば、置換、欠失もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）を含む。一部の実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、ＡＭＧ８２０のＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５もしくは６つすべてのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、重鎖もしくは軽鎖配列またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも９５％同一の、例えば、それと９５％～９９．９％同一の、もしくは少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５以下の変更（例えば、置換、欠失もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）を含む。一部の実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、ＩＭＣ－ＣＳ４のＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５もしくは６つすべてのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、重鎖もしくは軽鎖配列またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも９５％同一の、例えば、それと９５％～９９．９％同一の、もしくは少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５以下の変更（例えば、置換、欠失もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）を含む。一部の実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ結合部分は、表８において開示されるＶＨもしくはＶＬアミノ酸配列、表８において開示されるＶＨもしくはＶＬアミノ酸配列のＣＤＲまたはそれと実質的に同一の配列を含む。
Figure 0007465272000066
ＣＣＲ２を標的とするさらなる多特異性抗体分子
一態様では、ＣＣＲ２結合部分を含む多特異性抗体分子が、本明細書において開示される。例示的ＣＣＲ２抗体は、本明細書において、ならびにＷＯ２０１３１９２５９６Ａ２、ＷＯ２０１００２１６９７Ａ２、ＷＯ２００１０５７２２６Ａ１およびＷＯ１９９７０３１９４９Ａ１において記載され、それらのすべては、その全文で参照により本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、ＣＣＲ２結合部分は、プロザリズマブのＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５もしくは６つすべてのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、重鎖もしくは軽鎖配列またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、もしくは少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５以下の変更（例えば、置換、欠失もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）を含む。一部の実施形態では、ＣＣＲ２結合部分は、表９において開示されるＶＨもしくはＶＬアミノ酸配列、表９において開示されるＶＨもしくはＶＬアミノ酸配列のＣＤＲまたはそれと実質的に同一の配列を含む。
Figure 0007465272000067
ＰＤ－Ｌ１を標的とするさらなる多特異性抗体分子
一態様では、ＰＤ－Ｌ１結合部分を含む多特異性抗体分子が、本明細書において開示される。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子を含む。例示的抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子配列は、ＷＯ２０１３０７９１７４、ＷＯ２０１００７７６３４、ＷＯ２００７／００５８７４およびＵＳ２０１２００３９９０６に記載されており、それらのすべては、その全文で参照により本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合部分は、デュルバルマブのＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５もしくは６つすべてのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、重鎖もしくは軽鎖配列またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、もしくは少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５以下の変更（例えば、置換、欠失もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）を含む。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合部分は、アテゾリズマブのＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５もしくは６つすべてのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、重鎖もしくは軽鎖配列またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも９５％同一の、例えば、それと９５％～９９．９％同一の、もしくは少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５以下の変更（例えば、置換、欠失もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）を含む。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合部分は、アベルマブのＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５もしくは６つすべてのＣＤＲ）、ＶＨ、ＶＬ、重鎖もしくは軽鎖配列またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも９５％同一の、例えば、それと９５％～９９．９％同一の、もしくは少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５以下の変更（例えば、置換、欠失もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）を含む。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合部分は、表１０において開示されるＶＨもしくはＶＬアミノ酸配列、表１０において開示されるＶＨもしくはＶＬアミノ酸配列のＣＤＲまたはそれと実質的に同一の配列を含む。
Figure 0007465272000068
ＣＤＲグラフト化スキャフォールド
実施形態では、抗体分子は、ＣＤＲグラフト化スキャフォールドドメインである。実施形態では、スキャフォールドドメインは、フィブロネクチンドメイン、例えば、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメインに基づいている。フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）ドメインの全体的なフォールドは、最小機能的抗体断片、抗体重鎖の可変領域のものと密接に関連している。Ｆｎ３の末端に３つのループがあり、ＢＣ、ＤＥおよびＦＧループの位置は、抗体のＶＨドメインのＣＤＲ１、２および３のものとほぼ対応する。Ｆｎ３は、ジスルフィド結合を有さず、したがって、Ｆｎ３は、抗体およびその断片とは異なり、還元条件下で安定である（例えば、ＷＯ９８／５６９１５、ＷＯ０１／６４９４２、ＷＯ００／３４７８４を参照されたい）。Ｆｎ３ドメインは、例えば、本明細書において記載される抗原／マーカー／細胞に結合するドメインを選択するように改変され得る（例えば、本明細書において記載されるＣＤＲもしくは超可変ループを使用して）または変更され得る。
実施形態では、スキャフォールドドメイン、例えば、フォールディングされたドメインは、抗体、例えば、モノクローナル抗体の重鎖可変領域から３つのベータ鎖を欠失することによって作出された「ミニボディ」スキャフォールドに基づいている（例えば、Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏら、１９９４年、Ｊ Ｍｏｌ． Ｒｅｃｏｇｎｉｔ． ７巻：９頁およびＭａｒｔｉｎら、１９９４年、ＥＭＢＯ Ｊ． １３巻：５３０３～５３０９頁を参照されたい）。「ミニボディ」は、２つの超可変ループを提示するために使用され得る。実施形態では、スキャフォールドドメインは、Ｖ様ドメイン（例えば、ＣｏｉａらＷＯ９９／４５１１０を参照されたい）または７４個の残基の、２つのジスルフィド結合によって一緒に保持される６鎖ベータシートサンドイッチであるテンダミスタチン（ｔｅｎｄａｍｉｓｔａｔｉｎ）に由来するドメイン（例えば、ＭｃＣｏｎｎｅｌｌおよびＨｏｅｓｓ、１９９５年、Ｊ Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２５０巻：４６０頁）である。例えば、テンダミスタチンのループは、例えば、本明細書において記載されるマーカー／抗原／細胞に結合するドメインを選択するように改変され得る（例えば、ＣＤＲもしくは超可変ループを使用して）または変更され得る。別の例示的スキャフォールドドメインは、ＣＴＬＡ－４の細胞外ドメインに由来するベータサンドイッチ構造である（例えば、ＷＯ００／６００７０を参照されたい）。
他の例示的スキャフォールドドメインとして、それだけには限らないが、Ｔ細胞受容体、ＭＨＣタンパク質、細胞外ドメイン（例えば、フィブロネクチンＩＩＩ型リピート、ＥＧＦリピート）、プロテアーゼ阻害剤（例えば、Ｋｕｎｉｔｚドメイン、エコチン、ＢＰＴＩなど）、ＴＰＲリピート、トリフォイル（ｔｒｉｆｏｉｌ）構造、ジンクフィンガードメイン、ＤＮＡ結合タンパク質、特に、単量体ＤＮＡ結合タンパク質、ＲＮＡ結合タンパク質、酵素、例えば、プロテアーゼ（特に、不活性化プロテアーゼ）、ＲＮアーゼ、シャペロン、例えば、チオレドキシンおよび熱ショックタンパク質、ならびに細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＨ２およびＳＨ３ドメインなど）が挙げられる。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２００４０００９５３０およびＵＳ７，５０１，１２１を参照されたい。
実施形態では、スキャフォールドドメインは、例えば、以下の基準のうち１つまたは複数によって評価され、選択される：（１）アミノ酸配列、（２）いくつかの相同ドメインの配列、（３）３次元構造および／または（４）ｐＨ、温度、塩分、有機溶媒、酸化剤濃度の範囲にわたる安定性データ。実施形態では、スキャフォールドドメインは、小さい、安定性タンパク質ドメイン、例えば、１００、７０、５０、４０または３０個未満のアミノ酸のタンパク質である。ドメインは、１つまたは複数のジスルフィド結合を含む場合があり、金属、例えば、亜鉛をキレートし得る。
本明細書において定義される多機能性分子の例示的構造が以下に記載される。例示的構造は、Ｗｅｉｄｌｅ Ｕら（２０１３年） Ｔｈｅ Ｉｎｔｒｉｇｕｉｎｇ Ｏｐｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｆｏｒｍａｔｓ ｆｏｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ． Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ＆ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ １０巻：１～１８頁（２０１３年）およびＳｐｉｅｓｓ Ｃら（２０１５年） Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｆｏｒｍａｔｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７巻：９５～１０６頁においてさらに記載され、その各々の全開示内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
ヘテロ二量体化抗体分子
ヘテロ二量体化二特異性抗体は、天然ＩｇＧ構造に基づいており、２つの結合アームが異なる抗原を認識する。定義される一価の（および同時）抗原結合を可能にするＩｇＧ由来形式は、軽鎖誤対形成を最小にする技術（例えば、共通軽鎖）と組み合わされた、強制重鎖ヘテロ二量体化によって生成される。強制重鎖ヘテロ二量体化は、例えば、ノブ・イン・ホールＯＲ鎖交換操作されたドメイン（ＳＥＥＤ）を使用して得ることができる。
ノブ・イン・ホール
ＵＳ５，７３１，１１６、ＵＳ７，４７６，７２４およびＲｉｄｇｗａｙ， Ｊ．ら（１９９６年） Ｐｒｏｔ． Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ９巻（７号）：６１７～６２１頁において記載されるノブ・イン・ホールは、概して、（１）抗体の一方または両方のＣＨ３ドメインを突然変異して、ヘテロ二量体化を促進することおよび（２）突然変異された抗体をヘテロ二量体化を促進する条件下で組み合わせることを含む。「ノブ」または「突起」は、典型的には、Ｅｕ番号付けシステムに基づいて番号付けされた、親抗体中の小さいアミノ酸を、大きいアミノ酸で置き換えること（例えば、Ｔ３６６ＹまたはＴ３６６Ｗ）によって作出され、「ホール」または「空洞」は、親抗体中の大きい残基を、小さいアミノ酸で置き換えること（例えば、Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａおよび／またはＹ４０７Ｖ）によって作出される。
鎖交換操作されたドメイン（ＳＥＥＤ）
ＳＥＥＤは、優先的にヘテロ二量体化する非同一鎖を作出するためのＩｇＧ１とＩｇＡの間の配列交換に基づいている。ＳＥＥＤ ＣＨ３ドメインにおいてヒトＩｇＡおよびＩｇＧから配列を変更することによって、ＡＧおよびＧＡと名付けられる２つの非対称であるが相補的ドメインを生成する。ＳＥＥＤ設計によって、ＡＧ／ＧＡヘテロ二量体の効率的な生成が可能となるが、ＡＧおよびＧＡ ＳＥＥＤ ＣＨ３ドメインのホモ二量体化は好ましくない。
共通軽鎖＆ＣｒｏｓｓＭａｂ
二特異的ＩｇＧの均質な調製物を生成するには、軽鎖誤対形成は避けられなければならない。これを達成するための１つの方法は、共通軽鎖原理の使用、すなわち、１つの軽鎖を共有するが依然として別個の特異性を有する２つの結合剤を組み合わせることによる。別の選択肢として、二特異性抗体の２分の１のＦａｂにおいてＣＨ１およびＣＬドメインを交換することによって非特異的Ｌ鎖誤対形成を避けるＣｒｏｓｓＭａｂ技術がある。このような乗換えバリアントは、結合特異性および親和性を保持するが、２つのアームをかなり異なるものにし、Ｌ鎖誤対形成が防がれる。
抗体ベースの融合
抗体のＮまたはＣ末端に付着されたさらなる結合実体を含有する種々の形式が生成され得る。一本鎖またはジスルフィド安定化ＦｖまたはＦａｂとのこれらの融合は、各抗原に対して二価結合特異性を有する四価分子の生成をもたらす。ｓｃＦｖおよびｓｃＦａｂのＩｇＧとの組合せによって、３つ以上の異なる抗原を認識できる分子の産生が可能となる。
抗体－Ｆａｂ融合物
抗体－Ｆａｂ融合物は、第１の標的に対する伝統的な抗体、および抗体重鎖のＣ末端に融合された第２の標的に対するＦａｂを含む二特異性抗体である。一般に、抗体およびＦａｂは、共通軽鎖を有することとなる。抗体融合物は、（１）標的融合物のＤＮＡ配列を操作することおよび（２）標的ＤＮＡを適した宿主細胞にトランスフェクトして、融合タンパク質を発現させることによって産生され得る。Ｃｏｌｏｍａ， Ｊ．ら（１９９７年） Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ １５巻：１５９頁によって記載されるように、抗体－ｓｃＦｖ融合物は、ＣＨ３ドメインのＣ末端とｓｃＦｖのＮ末端の間で（Ｇｌｙ）－Ｓｅｒリンカーによって連結され得るようである。
抗体－ｓｃＦｖ融合物
抗体－ｓｃＦｖ融合物は、伝統的な抗体、および抗体重鎖のＣ末端に融合された特有の特異性のｓｃＦｖを含む二特異性抗体である。ｓｃＦｖは、ｓｃＦｖの重鎖によってＣ末端に、直接的にまたはリンカーペプチドを介してのいずれかで融合され得る。抗体融合物は、（１）標的融合物のＤＮＡ配列を操作することおよび（２）標的ＤＮＡを適した宿主細胞にトランスフェクトして、融合タンパク質を発現させることによって産生され得る。Ｃｏｌｏｍａ， Ｊ．ら（１９９７年） Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ １５巻：１５９頁によって記載されるように、抗体－ｓｃＦｖ融合物は、ＣＨ３ドメインのＣ末端とｓｃＦｖのＮ末端の間で（Ｇｌｙ）－Ｓｅｒリンカーによって連結され得るようである。
可変ドメイン免疫グロブリンＤＶＤ
関連形式としては、二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ）があり、より短いリンカー配列によるＶドメインのＮ末端の第２の特異性位置のＶＨおよびＶＬドメインから構成される。
Ｆｃ含有実体（ミニ抗体）
ミニ抗体としても知られるＦｃ含有実体は、ｓｃＦｖを、異なる特異性を有する抗体の定常重領域ドメイン３のＣ末端に（ＣＨ３－ｓｃＦｖ）、および／またはヒンジ領域に（ｓｃＦｖ－ｈｉｎｇｅ－Ｆｃ）融合することによって生成され得る。ＩｇＧのＣＨ３ドメインのＣ末端に融合されたジスルフィド安定化可変領域（ペプチドリンカーを有さない）を有する三価実体も作製され得る。
Ｆｃのない二特異性
Ｆｃのない二特異性は、一般に、Ｆｃ含有実体よりも小さい大きさを有することを特徴とする。このクラスの一般的な二特異性は、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ２およびＦａｂ－ｓｃＦｖ分子を含む。このクラスとしてまた、例えば、ＢｉＴＥ（二特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ－ｃｅｌｌ ｅｎｇａｇｅｒ）、ダイアボディ、ＴａｎｄＡｂ（四価タンデム抗体）およびＤＡＲＴ（二重親和性再標的化分子（ｄｕａｌ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌｅ））が挙げられる。ＢｉＴＥは、２つのｓｃＦｖを柔軟なリンカーペプチドによって融合することによって作出される。ダイアボディは、２つの異なる抗体に由来する２つのＶＨおよび２つのＶＬドメインからなる。ドメインを、ＶＨおよびＶＬドメインとのみの対形成を可能にする短いリンカーペプチドを用いて付着させることによって、別の鎖上の相補的ドメインとのみ相互作用が達成される。第２の結合剤のＶＬに連結された第１の結合剤のＶＨは、第１の抗体のＶＬに連結された第２の抗体のＶＨと同時発現される。ＴａｎｄＡｂ分子は、分子内対形成を妨げる配向にある４つの抗体可変Ｈ－およびＬ－鎖からなるタンパク質の機能的二量体化によって生成される。ＤＡＲＴは、ダイアボディのものと同様の設計概念を適用する、ジスルフィド結合によって安定化されている実体である。
カッパ／ラムダ形式
ラムダ軽鎖ポリペプチドおよびカッパ軽鎖ポリペプチドを含む多特異性分子（例えば、多特異性抗体分子）は、ヘテロ二量体化を可能にするために使用され得る。ラムダ軽鎖ポリペプチドおよびカッパ軽鎖ポリペプチドを含む二特異性抗体分子を生成する方法は、その全文で参照により本明細書に組み込まれる、２０１７年９月２２日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２０１７／５３０５３に開示されている。
実施形態では、多特異性分子は、多特異性抗体分子、例えば、２つの結合特異性を含む抗体分子、例えば、二特異性抗体分子を含む。多特異性抗体分子として、以下が挙げられる：
第１のエピトープに対して特異的なラムダ軽鎖ポリペプチド１（ＬＬＣＰ１）、
第１のエピトープに対して特異的な重鎖ポリペプチド１（ＨＣＰ１）、
第２のエピトープに対して特異的なカッパ軽鎖ポリペプチド２（ＫＬＣＰ２）、および
第２のエピトープに対して特異的な重鎖ポリペプチド２（ＨＣＰ２）。
「ラムダ軽鎖ポリペプチド１（ＬＬＣＰ１）」とは、その用語が本明細書において使用される場合、同族重鎖可変領域と組み合わされた場合に、そのエピトープに対する特異的結合を媒介し、ＨＣＰ１と複合体を形成できるような十分な軽鎖（ＬＣ）配列を含むポリペプチドを指す。一実施形態では、ＣＨ１領域のすべてまたは断片を含む。一実施形態では、ＬＬＣＰ１は、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、ＬＣ－ＣＤＲ３、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４およびＣＨ１、またはそれに由来する、そのエピトープの特異的結合を媒介し、ＨＣＰ１と複合体を形成するのに十分な配列を含む。ＬＬＣＰ１は、そのＨＣＰ１と一緒に、第１のエピトープに対する特異性を提供する（一方で、ＫＬＣＰ２は、そのＨＣＰ２と一緒に、第２のエピトープに対する特異性を提供する）。本明細書において別の場所に記載されるように、ＬＬＣＰ１は、ＨＣＰ１に対して、ＨＣＰ２に対してよりも高い親和性を有する。
「カッパ軽鎖ポリペプチド２（ＫＬＣＰ２）」とは、その用語が本明細書において使用される場合、同族重鎖可変領域と組み合わされた場合に、そのエピトープに対する特異的結合を媒介し、ＨＣＰ２と複合体を形成できるような十分な軽鎖（ＬＣ）配列を含むポリペプチドを指す。一実施形態では、ＣＨ１領域のすべてまたは断片を含む。一実施形態では、ＫＬＣＰ２は、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、ＬＣ－ＣＤＲ３、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４およびＣＨ１、またはそれに由来する、そのエピトープの特異的結合を媒介し、ＨＣＰ２と複合体を形成するのに十分な配列を含む。ＫＬＣＰ２は、そのＨＣＰ２と一緒に、第２のエピトープに対する特異性を提供する（一方で、ＬＬＣＰ１は、そのＨＣＰ１と一緒に、第１のエピトープに対する特異性を提供する）。
「重鎖ポリペプチド１（ＨＣＰ１）」とは、その用語が本明細書において使用される場合、同族ＬＬＣＰ１と組み合わされた場合に、そのエピトープに対する特異的結合を媒介し、ＨＣＰ１と複合体を形成できるような十分な重鎖（ＨＣ）配列、例えば、ＨＣ可変領域配列を含むポリペプチドを指す。一実施形態では、ＣＨ１領域のすべてまたは断片を含む。一実施形態では、ＣＨ２および／またはＣＨ３領域のすべてまたは断片を含む。一実施形態では、ＨＣＰ１は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、ＨＣ－ＣＤＲ３、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３、またはそれに由来する、（ｉ）そのエピトープの特異的結合を媒介し、ＬＬＣＰ１と複合体を形成する、（ｉｉ）ＫＬＣＰ２とは対照的にＬＬＣＰ１と、本明細書において記載されるように優先的に複合体を形成する、（ｉｉｉ）ＨＣＰ１の別の分子とは対照的にＨＣＰ２と、本明細書において記載されるように優先的に複合体を形成するのに十分な配列を含む。ＨＣＰ１は、そのＬＬＣＰ１と一緒に、第１のエピトープに対する特異性を提供する（一方で、ＫＬＣＰ２は、そのＨＣＰ２と一緒に、第２のエピトープに対する特異性を提供する）。
「重鎖ポリペプチド２（ＨＣＰ２）」とは、その用語が本明細書において使用される場合、同族ＬＬＣＰ１と組み合わされた場合に、そのエピトープに対する特異的結合を媒介し、ＨＣＰ１と複合体を形成できるような十分な重鎖（ＨＣ）配列、例えば、ＨＣ可変領域配列を含むポリペプチドを指す。一実施形態では、ＣＨ１領域のすべてまたは断片を含む。一実施形態では、ＣＨ２および／またはＣＨ３領域のすべてまたは断片を含む。一実施形態では、ＨＣＰ１は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、ＨＣ－ＣＤＲ３、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３、またはそれに由来する、（ｉ）そのエピトープの特異的結合を媒介し、ＫＬＣＰ２と複合体を形成する、（ｉｉ）ＬＬＣＰ１とは対照的にＫＬＣＰ２と、本明細書において記載されるように優先的に複合体を形成する、（ｉｉｉ）ＨＣＰ２の別の分子とは対照的にＨＣＰ１と、本明細書において記載されるように優先的に複合体を形成するのに十分な配列を含む。ＨＣＰ２は、そのＫＬＣＰ２と一緒に、第２のエピトープに対する特異性を提供する（一方で、ＬＬＣＰ１は、そのＨＣＰ１と一緒に、第１のエピトープに対する特異性を提供する）。
本明細書において開示される多特異性抗体分子の一部の実施形態では：
ＬＬＣＰ１は、ＨＣＰ２に対してよりもＨＣＰ１に対してより高い親和性を有する、および／または
ＫＬＣＰ２は、ＨＣＰ１に対してよりもＨＣＰ２に対してより高い親和性を有する。
実施形態では、ＨＣＰ１に対するＬＬＣＰ１親和性は、ＨＣＰ２に対するその親和性よりも十分に大きく、その結果、前選択された条件下で、例えば、水性緩衝液中、例えば、ｐＨ７で、生理食塩水中、例えば、ｐＨ７で、または生理学的条件下で、多特異性抗体分子の少なくとも７５％、８０、９０、９５、９８、９９、９９．５または９９．９％が、ＨＣＰ１と複合体形成している、またはそれと適合するＬＬＣＰ１を有する。
本明細書において開示される多特異性抗体分子の一部の実施形態では：
ＨＣＰ１は、ＨＣＰ１の第２の分子に対してよりもＨＣＰ２に対してより大きい親和性を有する、および／または
ＨＣＰ２は、ＨＣＰ２の第２の分子に対してよりもＨＣＰ１に対してより大きい親和性を有する。
実施形態では、ＨＣＰ２に対するＨＣＰ１の親和性は、ＨＣＰ１の第２の分子に対するその親和性よりも十分に大きく、その結果、前選択された条件下で、例えば、水性緩衝液中、例えば、ｐＨ７で、生理食塩水中、例えば、ｐＨ７で、または生理学的条件下で、多特異性抗体分子の少なくとも７５％、８０、９０、９５、９８、９９、９９．５または９９．９％が、ＨＣＰ２と複合体形成している、またはそれと適合するＨＣＰ１を有する。
別の態様では、多特異性抗体分子を作製または生成する方法が、本明細書において開示される。方法は、
（ｉ）～（ｉｖ）が関連する条件下で、
（ｉ）第１の重鎖ポリペプチド（例えば、第１の重鎖可変領域（第１のＶＨ）、第１のＣＨ１、第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＣＨ２、第１のＣＨ３または両方）のうち１、２、３つまたはすべてを含む重鎖ポリペプチド）を提供すること、
（ｉｉ）第２の重鎖ポリペプチド（例えば、第２の重鎖可変領域（第２のＶＨ）、第２のＣＨ１、第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＣＨ２、第２のＣＨ３または両方）のうち１、２、３つまたはすべてを含む重鎖ポリペプチド）を提供すること、
（ｉｉｉ）第１の重鎖ポリペプチド（例えば、第１のＶＨ）と優先的に会合するラムダ鎖ポリペプチド（例えば、ラムダ軽可変領域（ＶＬλ）、ラムダ軽定常鎖（ＶＬλ）または両方）を提供すること、
（ｉｖ）第２の重鎖ポリペプチド（例えば、第２のＶＨ）と優先的に会合するカッパ鎖ポリペプチド（例えば、ラムダ軽可変領域（ＶＬκ）、ラムダ軽定常鎖（ＶＬκ）または両方）を提供すること
を含む。
実施形態では、第１のおよび第２の重鎖ポリペプチドは、ヘテロ二量体化を増強するＦｃ界面を形成する。
実施形態では、（ｉ）～（ｉｖ）（例えば、（ｉ）～（ｉｖ）をコードする核酸）は、単一細胞、例えば、単一哺乳動物細胞、例えば、ＣＨＯ細胞中に導入される。実施形態では、（ｉ）～（ｉｖ）は、細胞において発現される。
実施形態では、（ｉ）～（ｉｖ）（例えば、（ｉ）～（ｉｖ）をコードする核酸）は、異なる細胞、例えば、異なる哺乳動物細胞、例えば、２つまたはそれより多いＣＨＯ細胞中に導入される。実施形態では、（ｉ）～（ｉｖ）は、細胞において発現される。
一実施形態では、方法は、例えば、ラムダ－および／または－カッパ特異的精製、例えば、アフィニティークロマトグラフィーを使用して、細胞によって発現された抗体分子を精製することをさらに含む。
実施形態では、方法は、細胞によって発現された多特異性抗体分子を評価することをさらに含む。例えば、精製された細胞によって発現された多特異性抗体分子は、質量分析を含む当技術分野で公知の技術によって分析され得る。一実施形態では、精製された細胞によって発現された抗体分子は、切断されて、例えば、パパインを用いて消化されて、Ｆａｂ部分が生じ、質量分析を使用して評価される。
実施形態では、方法は、正しく対形成されたカッパ／ラムダ多特異性、例えば、二特異性抗体分子を高収率、例えば、少なくとも７５％、８０、９０、９５、９８、９９ ９９．５または９９．９％で生成する。
他の実施形態では、多特異性、例えば、二特異性抗体分子は、
（ｉ）第１の重鎖ポリペプチド（ＨＣＰ１）（例えば、第１の重鎖可変領域（第１のＶＨ）、第１のＣＨ１、第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＣＨ２、第１のＣＨ３または両方）のうち１、２、３つまたはすべてを含む重鎖ポリペプチド）であって、例えば、第１のエピトープに結合する、ＨＣＰ１、
（ｉｉ）第２の重鎖ポリペプチド（ＨＣＰ２）（例えば、第２の重鎖可変領域（第２のＶＨ）、第２のＣＨ１、第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＣＨ２、第２のＣＨ３または両方）のうち１、２、３つまたはすべてを含む重鎖ポリペプチド）であって、例えば、第２のエピトープに結合する、ＨＣＰ２、
（ｉｉｉ）第１の重鎖ポリペプチド（例えば、第１のＶＨ）と優先的に会合するラムダ軽鎖ポリペプチド（ＬＬＣＰ１）（例えば、ラムダ軽可変領域（ＶＬｌ）、ラムダ軽定常鎖（ＶＬｌ）または両方）であって、例えば、第１のエピトープに結合する、ＬＬＣＰ１、
（ｉｖ）第２の重鎖ポリペプチド（例えば、第２のＶＨ）と優先的に会合するカッパ軽鎖ポリペプチド（ＫＬＣＰ２）（例えば、ラムダ軽可変領域（ＶＬｋ）、ラムダ軽定常鎖（ＶＬｋ）または両方）であって、例えば、第２のエピトープに結合する、ＫＬＣＰ２
を含む。
実施形態では、第１のおよび第２の重鎖ポリペプチドは、ヘテロ二量体化を増強するＦｃ界面を形成する。実施形態では、多特異性抗体分子は、Ｆｃ定常ＣＨ２－ＣＨ３ドメインに接続された第１の重鎖可変領域にヘテロ二量体化されたハイブリッドＶＬｌ－ＣＬｌ（ノブ改変を有する）を含む第１の結合特異性およびＦｃ定常ＣＨ２－ＣＨ３ドメインに接続された第２の重鎖可変領域にヘテロ二量体化されたハイブリッドＶＬｋ－ＣＬｋ（ホール改変を有する）を含む第２の結合特異性を有する。
非連続ポリペプチドを含む多特異性分子
一実施形態では、多特異性分子は、単一ポリペプチド鎖ではない。
一実施形態では、抗体分子は、２つの完全重鎖および２つの完全軽鎖を含む。一実施形態では、少なくとも２つまたは少なくとも３つの非連続ポリペプチド鎖を有する多特異性分子は、例えば、本明細書において記載されるように、少なくとも２つの非連続ポリペプチド鎖中に第１のおよび第２の重鎖定常領域（例えば、第１のおよび第２のＦｃ領域）を含む。
実施形態では、多特異性分子は、二特異性または二機能性分子であり、第１のおよび第２のポリペプチド（ｉ）および（ｉｉ）は、非連続であり、例えば、２つの別個のポリペプチド鎖である。一部の実施形態では、第１のおよび第２のポリペプチド（ｉ）および（ｉｉ）は、Ｅｕ番号付けシステムに基づいて番号付けされた、例えば、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域の３４７、３４９、３５０、３５１、３６６、３６８、３７０、３９２、３９４、３９５、３９７、３９８、３９９、４０５、４０７または４０９のうち１つまたは複数から選択される位置に対のアミノ酸置換を含む。例えば、第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＦｃ領域）は、Ｅｕ番号付けシステムに基づいて番号付けされた、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡまたはＹ４０７Ｖ（例えば、空洞またはホールに対応する）から選択されるアミノ酸置換を含む場合があり、第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＦｃ領域）は、Ｔ３６６Ｗ（例えば、突起またはノブに対応する）を含む。一部の実施形態では、第１のおよび第２のポリペプチドは、ヘテロ二量体第１のおよび第２のＦｃ領域の第１のおよび第２のメンバーである。
一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、ＮからＣに以下の立体配置を有する：
（ａ）第１の重鎖定常領域（例えば、ＣＨ３領域に接続されたＣＨ２）（例えば、第１のＦｃ領域）に任意選択により、リンカーを介して接続された、第１の抗原、例えば、ＣＳＦ１Ｒに結合する、第１の抗原ドメインの第１の部分、例えば、Ｆａｂ分子の第１のＶＨ－ＣＨ１、（ｂ）第２の重鎖定常領域（例えば、ＣＨ３領域に接続されたＣＨ２）（例えば、第１のＦｃ領域）に任意選択により、リンカーを介して接続された、第２の抗原、例えば、ＣＣＲ２またはＣＸＣＲ２に結合する第２の抗原ドメインの第１の部分、例えば、Ｆａｂ分子の第２のＶＨ－ＣＨ１、（ｃ）第３のポリペプチドは、ＮからＣに以下の立体配置を有する：第１の抗原ドメインの第２の部分、例えば、ＶＬがカッパサブタイプのものであり、第１の抗原、例えば、ＣＳＦ１Ｒ（例えば、第１のＶＨ－ＣＨ１が結合している同一抗原）に結合する、Ｆａｂの第１のＶＬ－ＣＬ、（ｄ）第４のポリペプチドは、ＮからＣに以下の立体配置を有する：第２の抗原ドメインの第２の部分、例えば、ＶＬがラムダサブタイプのものであり、第２の抗原、例えば、がん抗原、例えば、ＣＣＲ２またはＣＸＣＲ２（例えば、第２のＶＨ－ＣＨ１が結合している同一抗原）に結合する、Ｆａｂの第２のＶＬ－ＣＬ。
実施形態では、第１の重鎖定常領域（例えば、第１のＣＨ２－ＣＨ３領域）は、例えば、本明細書において記載されるような、突起またはノブを含む。実施形態では、第２の重鎖定常領域（例えば、第２のＣＨ２－ＣＨ３領域）は、空洞またはホールを含む。実施形態では、第１のおよび第２の重鎖定常領域は、二特異的分子のヘテロ二量体化を促進する。
ＴＧＦ－ベータ阻害剤
一態様では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤を含む多特異性抗体分子が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦ－ベータに結合し、阻害する、例えば、ＴＧＦ－ベータの活性を低減する。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦ－ベータ１を阻害する（例えば、その活性を低減する）。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦ－ベータ２を阻害する（例えば、その活性を低減する）。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦ－ベータ３を阻害する（例えば、その活性を低減する）。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦ－ベータ１およびＴＧＦ－ベータ３を阻害する（例えば、それらの活性を低減する）。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦ－ベータ１、ＴＧＦ－ベータ２およびＴＧＦ－ベータ３を阻害する（例えば、それらの活性を低減する）。
一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦ－ベータを阻害（例えば、その活性を低減）可能であるＴＧＦ－ベータ受容体の部分（例えば、ＴＧＦ－ベータ受容体の細胞外ドメイン）またはその機能的断片もしくはバリアントを含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ１の細胞外ドメインまたはその機能的バリアント）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインまたはその機能的バリアント）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ３ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメインまたはその機能的バリアント）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ１の細胞外ドメインまたはその機能的バリアント）およびＴＧＦＢＲ２ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインまたはその機能的バリアント）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ１の細胞外ドメインまたはその機能的バリアント）およびＴＧＦＢＲ３ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメインまたはその機能的バリアント）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインまたはその機能的バリアント）およびＴＧＦＢＲ３ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメインまたはその機能的バリアント）を含む。
ＴＧＦ－ベータ阻害剤として使用され得る例示的ＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドは、ＵＳ８９９３５２４、ＵＳ９６７６８６３、ＵＳ８６５８１３５、ＵＳ２０１５００５６１９９、ＵＳ２００７０１８４０５２およびＷＯ２０１７０３７６３４において開示されており、それらのすべては、その全文で本明細書に組み込まれる。
一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ１の細胞外ドメインまたはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一である配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号９５の細胞外ドメインまたはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一である配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号９６の細胞外ドメインまたはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一である配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号９７の細胞外ドメインまたはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一である配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号１０４のアミノ酸配列またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一である配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号１０５のアミノ酸配列またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一である配列）を含む。
一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインまたはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一である配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号９８の細胞外ドメインまたはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一である配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号９９の細胞外ドメインまたはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一である配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号１００のアミノ酸配列またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一である配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号１０１のアミノ酸配列またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一である配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号１０２のアミノ酸配列またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一である配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号１０３のアミノ酸配列またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一である配列）を含む。
一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、ＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメインまたはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一である配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号１０６の細胞外ドメインまたはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一である配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号１０７の細胞外ドメインまたはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一である配列）を含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、配列番号１０８のアミノ酸配列またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一である配列）を含む。
一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、１つ以下のＴＧＦ－ベータ受容体細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＴＧＦ－ベータ阻害剤は、例えば、リンカーを介して一緒に連結された２つまたはそれより多い（例えば、２、３、４、５またはそれより多い）ＴＧＦ－ベータ受容体細胞外ドメインを含む。
Figure 0007465272000069
Figure 0007465272000070
Figure 0007465272000071
Figure 0007465272000072
Figure 0007465272000073
Figure 0007465272000074
Figure 0007465272000075
サイトカイン分子
サイトカインは、一般に、例えば、シグナル伝達経路によって細胞性活性に影響を及ぼすポリペプチドである。したがって、多特異性または多機能性ポリペプチドのサイトカインは、有用であり、細胞膜の外側からシグナルを伝達し、細胞内の応答をモジュレートする受容体媒介性シグナル伝達と関連付けることができる。サイトカインは、免疫応答のメディエーターであるタンパク質性シグナル伝達化合物である。それらは、増殖、分化および細胞生存／アポトーシスを含む多数の異なる細胞性機能を管理する；サイトカインはまた、ウイルス感染および自己免疫疾患を含むいくつかの病態生理学的プロセスに関与する。サイトカインは、自然（単球、マクロファージ、樹状細胞）および適応（Ｔ細胞およびＢ細胞）免疫系両方の種々の細胞によって種々の刺激下で合成される。サイトカインは、２つの群に分類され得る：炎症促進性および抗炎症性。ＩＦＮγ、ＩＬ－１、ＩＬ－６およびＴＮＦ－アルファを含む炎症促進性サイトカインは、自然免疫細胞およびＴｈ１細胞に主に由来する。ＩＬ－１０、ＩＬ－４、ＩＬ－１３およびＩＬ－５を含む抗炎症性サイトカインは、Ｔｈ２免疫細胞から合成される。
本開示は、とりわけ、１つまたは複数のサイトカイン分子、例えば、免疫調節性（例えば、炎症促進性）サイトカインおよびバリアント、例えば、その機能的バリアントを含む、例えば、それを含有するように操作された多特異性（例えば、二－、三－、四－特異性）または多機能性分子を提供する。したがって、一部の実施形態では、サイトカイン分子は、インターロイキンまたはバリアント、例えば、その機能的バリアントである。一部の実施形態では、インターロイキンは、炎症促進性インターロイキンである。一部の実施形態では、インターロイキンは、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）、インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）、インターロイキン－１８（ＩＬ－１８）、インターロイキン－２１（ＩＬ－２１）、インターロイキン－７（ＩＬ－７）またはインターフェロンガンマから選択される。一部の実施形態では、サイトカイン分子は、炎症促進性サイトカインである。
ある特定の実施形態では、サイトカインは、一本鎖サイトカインである。ある特定の実施形態では、サイトカインは、多鎖サイトカインである（例えば、サイトカインは、２つまたはそれより多い（例えば、２つの）ポリペプチド鎖を含む）。例示的多鎖サイトカインは、ＩＬ－１２である。
有用なサイトカインの例として、それだけには限らないが、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－２１、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ＴＧＦ－β、ＴＮＦ－αおよびＴＮＦβが挙げられる。一実施形態では、多特異性または多機能性ポリペプチドのサイトカインは、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１βおよびＴＧＦ－βの群から選択されるサイトカインである。一実施形態では、多特異性または多機能性ポリペプチドのサイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＦＮ－αおよびＩＦＮ－γの群から選択されるサイトカインである。ある特定の実施形態では、サイトカインは、Ｎ－および／またはＯ－グリコシル化部位を除去するように突然変異される。グリコシル化の排除は、組換え産生において得ることができる産物の均質性を増大する。
一実施形態では、多特異性または多機能性ポリペプチドのサイトカインは、ＩＬ－２である。特定の実施形態では、ＩＬ－２サイトカインは、活性化Ｔリンパ球細胞の増殖、活性化Ｔリンパ球細胞の分化、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）活性、活性化Ｂ細胞の増殖、活性化Ｂ細胞の分化、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖、ＮＫ細胞の分化、活性化Ｔ細胞またはＮＫ細胞によるサイトカイン分泌およびＮＫ／リンパ球活性化キラー（ＬＡＫ）抗腫瘍細胞傷害性からなる群から選択される細胞性応答のうち１つまたは複数を誘発し得る。別の特定の実施形態では、ＩＬ－２サイトカインは、ＩＬ－２受容体のアルファサブユニットに対する結合親和性が低減された突然変異体ＩＬ－２サイトカインである。ベータ－およびガンマ－サブユニット（それぞれ、ＣＤ１２２およびＣＤ１３２としても知られる）と一緒に、アルファ－サブユニット（ＣＤ２５としても知られる）は、ヘテロ三量体高親和性ＩＬ－２受容体を形成し、一方で、β－およびγ－サブユニットのみからなる二量体受容体は、中間親和性ＩＬ－２受容体と呼ばれる。その全文で参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ特許出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０１２／０５１９９１に記載されるように、ＩＬ－２受容体のアルファ－サブユニットへの結合が低減された突然変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２ポリペプチドと比較して、制御性Ｔ細胞におけるＩＬ－２シグナル伝達を誘導する能力が低減し、Ｔ細胞においてより少ない活性化誘導細胞死（ＡＩＣＤ）を誘導し、ｉｎ ｖｉｖｏ毒性プロファイルが低減している。毒性が低減したこのようなサイトカインの使用は、Ｆｃドメインの存在のために長い血清半減期を有する、本発明に従う多特異性または多機能性ポリペプチドにおいて特に有利である。一実施形態では、本発明に従う多特異性または多機能性ポリペプチドの突然変異体ＩＬ－２サイトカインは、非突然変異ＩＬ－２サイトカインと比較して、ＩＬ－２受容体（ＣＤ２５）のアルファ－サブユニットに対する突然変異体ＩＬ－２サイトカインの親和性を低減または消失させるが、中間親和性ＩＬ－２受容体（ＩＬ－２受容体のβおよびγサブユニットからなる）に対する突然変異体ＩＬ－２サイトカインの親和性を保存する少なくとも１つのアミノ酸突然変異を含む。一実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸突然変異は、アミノ酸置換である。特定の実施形態では、突然変異体ＩＬ－２サイトカインは、ヒトＩＬ－２の残基４２、４５および７２に対応する位置から選択される１、２または３つの位置に１、２または３個のアミノ酸置換を含む。より特定の実施形態では、突然変異体ＩＬ－２サイトカインは、ヒトＩＬ－２の残基４２、４５および７２に対応する位置の３つのアミノ酸置換を含む。さらにより特定の実施形態では、突然変異体ＩＬ－２サイトカインは、アミノ酸置換Ｆ４２Ａ、Ｙ４５ＡおよびＬ７２Ｇを含むヒトＩＬ－２である。一実施形態では、突然変異体ＩＬ－２サイトカインは、ＩＬ－２のＯ－グリコシル化部位を排除する、ヒトＩＬ－２の３位に対応する位置にアミノ酸突然変異をさらに含む。特に、前記さらなるアミノ酸突然変異は、トレオニン残基をアラニン残基によって置き換えるアミノ酸置換である。本発明において有用な特定の突然変異体ＩＬ－２サイトカインは、ヒトＩＬ－２の残基３、４２、４５および７２に対応する位置に４つのアミノ酸置換を含む。特定のアミノ酸置換は、Ｔ３Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５ＡおよびＬ７２Ｇである。ＰＣＴ特許出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０１２／０５１９９１において、および添付の実施例において実証されるように、前記四重突然変異体ＩＬ－２ポリペプチド（ＩＬ－２ｑｍ）は、ＣＤ２５への検出可能な結合を示さず、Ｔ細胞においてアポトーシスを誘導する能力の低減を示し、Ｔ．ｓｕｂ．ｒｅｇ細胞においてＩＬ－２シグナル伝達を誘導する能力の低減を示し、ｉｎ ｖｉｖｏで毒性プロファイルの低減を示す。しかし、エフェクター細胞においてＩＬ－２シグナル伝達を活性化する能力、エフェクター細胞の増殖を誘導する能力およびＮＫ細胞によって二次サイトカインとしてＩＦＮ－γを生成する能力を保持する。
上記の実施形態のいずれかに従うＩＬ－２または突然変異体ＩＬ－２サイトカインは、発現または安定性の増大などの利点をさらに提供するさらなる突然変異を含み得る。例えば、ジスルフィド架橋されたＩＬ－２二量体の形成を避けるために、１２５位のシステインを、アラニンなどの中性アミノ酸で置き換えることができる。したがって、ある特定の実施形態では、本発明に従う多特異性または多機能性ポリペプチドのＩＬ－２または突然変異体ＩＬ－２サイトカインは、ヒトＩＬ－２の残基１２５に対応する位置にさらなるアミノ酸突然変異を含む。一実施形態では、前記のさらなるアミノ酸突然変異は、アミノ酸置換Ｃ１２５Ａである。
特定の実施形態では、多特異性または多機能性ポリペプチドのＩＬ－２サイトカインは、配列番号２３７［ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ］のポリペプチド配列を含む。別の特定の実施形態では、多特異性または多機能性ポリペプチドのＩＬ－２サイトカインは、配列番号２３８［ＡＰＡＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＡＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＧＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ］のポリペプチド配列を含む。
別の実施形態では、多特異性または多機能性ポリペプチドのサイトカインは、ＩＬ－１２である。特定の実施形態では、前記ＩＬ－１２サイトカインは、一本鎖ＩＬ－１２サイトカインである。さらにより特定の実施形態では、一本鎖ＩＬ－１２サイトカインは、配列番号２３９［ＩＷＥＬＫＫＤＶＹＶＶＥＬＤＷＹＰＤＡＰＧＥＭＶＶＬＴＣＤＴＰＥＥＤＧＩＴＷＴＬＤＱＳＳＥＶＬＧＳＧＫＴＬＴＩＱＶＫＥＦＧＤＡＧＱＹＴＣＨＫＧＧＥＶＬＳＨＳＬＬＬＬＨＫＫＥＤＧＩＷＳＴＤＩＬＫＤＱＫＥＰＫＮＫＴＦＬＲＣＥＡＫＮＹＳＧＲＦＴＣＷＷＬＴＴＩＳＴＤＬＴＦＳＶＫＳＳＲＧＳＳＤＰＱＧＶＴＣＧＡＡＴＬＳＡＥＲＶＲＧＤＮＫＥＹＥＹＳＶＥＣＱＥＤＳＡＣＰＡＡＥＥＳＬＰＩＥＶＭＶＤＡＶＨＫＬＫＹＥＮＹＴＳＳＦＦＩＲＤＩＩＫＰＤＰＰＫＮＬＱＬＫＰＬＫＮＳＲＱＶＥＶＳＷＥＹＰＤＴＷＳＴＰＨＳＹＦＳＬＴＦＣＶＱＶＱＧＫＳＫＲＥＫＫＤＲＶＦＴＤＫＴＳＡＴＶＩＣＲＫＮＡＳＩＳＶＲＡＱＤＲＹＹＳＳＳＷＳＥＷＡＳＶＰＣＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＮＬＰＶＡＴＰＤＰＧＭＦＰＣＬＨＨＳＱＮＬＬＲＡＶＳＮＭＬＱＫＡＲＱＴＬＥＦＹＰＣＴＳＥＥＩＤＨＥＤＩＴＫＤＫＴＳＴＶＥＡＣＬＰＬＥＬＴＫＮＥＳＣＬＮＳＲＥＴＳＦＩＴＮＧＳＣＬＡＳＲＫＴＳＦＭＭＡＬＣＬＳＳＩＹＥＤＬＫＭＹＱＶＥＦＫＴＭＮＡＫＬＬＭＤＰＫＲＱＩＦＬＤＱＮＭＬＡＶＩＤＥＬＭＱＡＬＮＦＮＳＥＴＶＰＱＫＳＳＬＥＥＰＤＦＹＫＴＫＩＫＬＣＩＬＬＨＡＦＲＩＲＡＶＴＩＤＲＶＭＳＹＬＮＡＳ］のポリペプチド配列を含む。一実施形態では、ＩＬ－１２サイトカインは、ＮＫ細胞の増殖、ＮＫ細胞の分化、Ｔ細胞の増殖およびＴ細胞の分化からなる群から選択される細胞性応答のうち１つまたは複数を誘発し得る。
別の実施形態では、多特異性または多機能性ポリペプチドのサイトカインは、ＩＬ－１０である。特定の実施形態では、前記ＩＬ－１０サイトカインは、一本鎖ＩＬ－１０サイトカインである。さらにより特定の実施形態では、一本鎖ＩＬ－１０サイトカインは、配列番号２４０［ＳＰＧＱＧＴＱＳＥＮＳＣＴＨＦＰＧＮＬＰＮＭＬＲＤＬＲＤＡＦＳＲＶＫＴＦＦＱＭＫＤＱＬＤＮＬＬＬＫＥＳＬＬＥＤＦＫＧＹＬＧＣＱＡＬＳＥＭＩＱＦＹＬＥＥＶＭＰＱＡＥＮＱＤＰＤＩＫＡＨＶＮＳＬＧＥＮＬＫＴＬＲＬＲＬＲＲＣＨＲＦＬＰＣＥＮＫＳＫＡＶＥＱＶＫＮＡＦＮＫＬＱＥＫＧＩＹＫＡＭＳＥＦＤＩＦＩＮＹＩＥＡＹＭＴＭＫＩＲＮＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＳＰＧＱＧＴＱＳＥＮＳＣＴＨＦＰＧＮＬＰＮＭＬＲＤＬＲＤＡＦＳＲＶＫＴＦＦＱＭＫＤＱＬＤＮＬＬＬＫＥＳＬＬＥＤＦＫＧＹＬＧＣＱＡＬＳＥＭＩＱＦＹＬＥＥＶＭＰＱＡＥＮＱＤＰＤＩＫＡＨＶＮＳＬＧＥＮＬＫＴＬＲＬＲＬＲＲＣＨＲＦＬＰＣＥＮＫＳＫＡＶＥＱＶＫＮＡＦＮＫＬＱＥＫＧＩＹＫＡＭＳＥＦＤＩＦＩＮＹＩＥＡＹＭＴＭＫＩＲＮ］のポリペプチド配列を含む。別の特定の実施形態では、ＩＬ－１０サイトカインは、単量体ＩＬ－１０サイトカインである。より特定の実施形態では、単量体ＩＬ－１０サイトカインは、配列番号２４１［ＳＰＧＱＧＴＱＳＥＮＳＣＴＨＦＰＧＮＬＰＮＭＬＲＤＬＲＤＡＦＳＲＶＫＴＦＦＱＭＫＤＱＬＤＮＬＬＬＫＥＳＬＬＥＤＦＫＧＹＬＧＣＱＡＬＳＥＭＩＱＦＹＬＥＥＶＭＰＱＡＥＮＱＤＰＤＩＫＡＨＶＮＳＬＧＥＮＬＫＴＬＲＬＲＬＲＲＣＨＲＦＬＰＣＥＮＧＧＧＳＧＧＫＳＫＡＶＥＱＶＫＮＡＦＮＫＬＱＥＫＧＩＹＫＡＭＳＥＦＤＩＦＩＮＹＩＥＡＹＭＴＭＫＩＲＮ］のポリペプチド配列を含む。一実施形態では、ＩＬ－１０サイトカインは、サイトカイン分泌の阻害、抗原提示細胞による抗原提示の阻害、酸素ラジカル放出の低減およびＴ細胞増殖の阻害からなる群から選択される細胞性応答のうち１つまたは複数を誘発し得る。サイトカインがＩＬ－１０である本発明に従う多特異性または多機能性ポリペプチドは、例えば、炎症性障害の処置における炎症の下方制御にとって特に有用である。
別の実施形態では、多特異性または多機能性ポリペプチドのサイトカインは、ＩＬ－１５である。特定の実施形態では、前記ＩＬ－１５サイトカインは、ＩＬ－１５受容体のα－サブユニットに対する結合親和性が低減された突然変異体ＩＬ－１５サイトカインである。理論に束縛されるものではないが、ＩＬ－１５受容体のアルファ－サブユニットへの結合が低減した突然変異体ＩＬ－１５ポリペプチドは、身体全体で線維芽細胞に結合する能力が低減しており、その結果、野生型ＩＬ－１５ポリペプチドと比較して、薬物動態および毒性プロファイルが改善される。毒性が低減したサイトカイン、例えば、記載された突然変異体ＩＬ－２および突然変異体ＩＬ－１５エフェクター部分の使用は、Ｆｃドメインの存在のために長い血清半減期を有する本発明に従う多特異性または多機能性ポリペプチドにおいて特に有利である。一実施形態では、本発明に従う多特異性または多機能性ポリペプチドの突然変異体ＩＬ－１５サイトカインは、非突然変異ＩＬ－１５サイトカインと比較して、ＩＬ－１５受容体のアルファ－サブユニットに対する突然変異体ＩＬ－１５サイトカインの親和性を低減または消失させるが、中間親和性ＩＬ－１５／ＩＬ－２受容体（ＩＬ－１５／ＩＬ－２受容体のベータおよびガンマサブユニットからなる）に対する突然変異体ＩＬ－１５サイトカインの親和性を保存する少なくとも１つのアミノ酸突然変異を含む。一実施形態では、アミノ酸突然変異は、アミノ酸置換である。特定の実施形態では、突然変異体ＩＬ－１５サイトカインは、ヒトＩＬ－１５の残基５３に対応する位置にアミノ酸置換を含む。より特定の実施形態では、突然変異体ＩＬ－１５サイトカインは、アミノ酸置換Ｅ５３Ａを含むヒトＩＬ－１５である。一実施形態では、突然変異体ＩＬ－１５サイトカインは、ＩＬ－１５のＮ－グリコシル化部位を排除する、ヒトＩＬ－１５の７９位に対応する位置にアミノ酸突然変異をさらに含む。特に、前記さらなるアミノ酸突然変異は、アスパラギン残基をアラニン残基によって置き換えるアミノ酸置換である。さらにより特定の実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインは、配列番号２４２［ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＡＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＡＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ］のポリペプチド配列を含む。一実施形態では、ＩＬ－１５サイトカインは、活性化Ｔリンパ球細胞の増殖、活性化Ｔリンパ球細胞の分化、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）活性、活性化Ｂ細胞の増殖、活性化Ｂ細胞の分化、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖、ＮＫ細胞の分化、活性化Ｔ細胞またはＮＫ細胞によるサイトカイン分泌およびＮＫ／リンパ球活性化キラー（ＬＡＫ）抗腫瘍細胞傷害性からなる群から選択される細胞性応答のうち１つまたは複数を誘発し得る。
多特異性または多機能性ポリペプチドにおいてエフェクター部分として有用である突然変異体サイトカイン分子は、当技術分野で周知の遺伝的または化学的方法を使用する欠失、置換、挿入または改変によって調製され得る。遺伝的方法は、コードするＤＮＡ配列の部位特異的突然変異誘発、ＰＣＲ、遺伝子合成などを含み得る。正しいヌクレオチド変更は、例えば、シーケンシングによって検証され得る。置換または挿入は、天然ならびに非天然アミノ酸残基を含み得る。アミノ酸改変は、周知の化学的改変の方法、例えば、グリコシル化部位の付加もしくは除去または炭水化物付着などを含む。
一実施形態では、多特異性または多機能性ポリペプチドのサイトカイン、特に、一本鎖サイトカインは、ＧＭ－ＣＳＦである。特定の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦサイトカインは、顆粒細胞、単球または樹状細胞の増殖および／または分化を誘発し得る。一実施形態では、多特異性または多機能性ポリペプチドのサイトカイン、特に、一本鎖サイトカインは、ＩＦＮ－αである。特定の実施形態では、ＩＦＮ－αサイトカインは、ウイルス感染細胞におけるウイルス複製の阻害および主要組織適合性複合体Ｉ（ＭＨＣ Ｉ）の発現の上方制御からなる群から選択される細胞性応答のうち１つまたは複数を誘発し得る。別の特定の実施形態では、ＩＦＮ－αサイトカインは、腫瘍細胞の増殖を阻害し得る。一実施形態では、多特異性または多機能性ポリペプチドのサイトカイン、特に、一本鎖サイトカインは、ＩＦＮγである。特定の実施形態では、ＩＦＮ－γサイトカインは、マクロファージ活性の増大、ＭＨＣ分子の発現の増大およびＮＫ細胞活性の増大の群から選択される細胞性応答のうち１つまたは複数を誘発し得る。一実施形態では、多特異性または多機能性ポリペプチドのサイトカイン、特に、一本鎖サイトカインは、ＩＬ－７である。特定の実施形態では、ＩＬ－７サイトカインは、Ｔおよび／またはＢリンパ球の増殖を誘発し得る。一実施形態では、多特異性または多機能性ポリペプチドのサイトカイン、特に、一本鎖サイトカインは、ＩＬ－８である。特定の実施形態では、ＩＬ－８サイトカインは、好中球において走化作用を誘発し得る。一実施形態では、多特異性または多機能性ポリペプチドのサイトカイン、特に、一本鎖サイトカインは、ＭＩＰ－１αである。特定の実施形態では、ＭＩＰ－１αサイトカインは、単球およびＴリンパ球細胞において走化作用を誘発し得る。一実施形態では、多特異性または多機能性ポリペプチドのサイトカイン、特に、一本鎖サイトカインは、ＭＩＰ－１βである。特定の実施形態では、ＭＩＰ－１βサイトカインは、単球およびＴリンパ球細胞において走化作用を誘発し得る。一実施形態では、多特異性または多機能性ポリペプチドのサイトカイン、特に、一本鎖サイトカインは、ＴＧＦ－βである。特定の実施形態では、ＴＧＦ－βサイトカインは、単球における走化作用、マクロファージにおける走化作用、活性化マクロファージにおけるＩＬ－１発現の上方制御および活性化Ｂ細胞におけるＩｇＡ発現の上方制御からなる群から選択される細胞性応答のうち１つまたは複数を誘発し得る。
一実施形態では、本発明の多特異性または多機能性ポリペプチドは、対照サイトカインのものよりも、少なくとも約１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５または１０倍より大きい解離定数（ＫＤ）でサイトカイン受容体に結合する。別の実施形態では、多特異性または多機能性ポリペプチドは、２つまたはそれより多いエフェクター部分を含む対応する多特異性または多機能性ポリペプチドのものよりも、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９または１０倍より大きいＫＤでサイトカイン受容体に結合する。別の実施形態では、多特異性または多機能性ポリペプチドは、２つまたはそれより多いサイトカインを含む対応する多特異性または多機能性ポリペプチドのものよりも約１０倍大きい解離定数ＫＤで、サイトカイン受容体に結合する。
一部の実施形態では、本明細書において開示される多特異性分子は、サイトカイン分子を含む。実施形態では、サイトカイン分子は、サイトカインの全長、断片またはバリアント、サイトカイン受容体ドメイン、例えば、サイトカイン受容体二量体化ドメインまたはサイトカイン受容体のアゴニスト、例えば、サイトカイン受容体に対する抗体分子（例えば、アゴニスト抗体）を含む。
一部の実施形態では、サイトカイン分子は、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－７、ＩＬ－２１もしくはインターフェロンガンマまたはその断片もしくはバリアントまたは前記サイトカインのいずれかの組合せから選択される。サイトカイン分子は、単量体または二量体であり得る。実施形態では、サイトカイン分子は、サイトカイン受容体二量体化ドメインをさらに含み得る。
他の実施形態では、サイトカイン分子は、サイトカイン受容体のアゴニスト、例えば、ＩＬ－１５ＲａまたはＩＬ－２１Ｒから選択されるサイトカイン受容体に対する抗体分子（例えば、アゴニスト抗体）である。
一実施形態では、サイトカイン分子は、ＩＬ－１５、例えば、ヒトＩＬ－１５（例えば、アミノ酸配列：
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号２４３）、その断片またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号２４３のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５以下の変更（例えば、置換、欠失もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）を含む）である。
一部の実施形態では、サイトカイン分子は、受容体二量体化ドメイン、例えば、ＩＬ１５Ｒアルファ二量体化ドメインを含む。一実施形態では、ＩＬ１５Ｒアルファ二量体化ドメインは、アミノ酸配列：
ＭＡＰＲＲＡＲＧＣＲＴＬＧＬＰＡＬＬＬＬＬＬＬＲＰＰＡＴＲＧＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬ（配列番号２４４）、その断片またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号２４４のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５以下の変更（例えば、置換、欠失もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）を含む。一部の実施形態では、多特異性分子のサイトカイン分子（例えば、ＩＬ－１５）および受容体二量体化ドメイン（例えば、ＩＬ１５Ｒアルファ二量体化ドメイン）は、例えば、リンカー（例えば、Ｇｌｙ－Ｓｅｒリンカー、例えば、アミノ酸配列ＳＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＱ（配列番号２４５）を含むリンカー）を介して共有結合によって連結される。他の実施形態では、多特異性分子のサイトカイン分子（例えば、ＩＬ－１５）および受容体二量体化ドメイン（例えば、ＩＬ１５Ｒアルファ二量体化ドメイン）は、共有結合によって連結されない、例えば、非共有結合によって会合される。
他の実施形態では、サイトカイン分子は、ＩＬ－２、例えば、ヒトＩＬ－２（例えば、アミノ酸配列：
ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号２４６）、その断片またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号２４６のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５以下の変更（例えば、置換、欠失もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）を含む）である。
他の実施形態では、サイトカイン分子は、ＩＬ－１８、例えば、ヒトＩＬ－１８（例えば、アミノ酸配列：
ＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＭＹＫＤＳＱＰＲＧＭＡＶＴＩＳＶＫＣＥＫＩＳＴＬＳＣＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＳＶＰＧＨＤＮＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＣＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ（配列番号２４７）、その断片またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号２４７のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５以下の変更（例えば、置換、欠失もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）を含む）である。
他の実施形態では、サイトカイン分子は、ＩＬ－２１、例えば、ヒトＩＬ－２１（例えば、アミノ酸配列：
ＱＧＱＤＲＨＭＩＲＭＲＱＬＩＤＩＶＤＱＬＫＮＹＶＮＤＬＶＰＥＦＬＰＡＰＥＤＶＥＴＮＣＥＷＳＡＦＳＣＦＱＫＡＱＬＫＳＡＮＴＧＮＮＥＲＩＩＮＶＳＩＫＫＬＫＲＫＰＰＳＴＮＡＧＲＲＱＫＨＲＬＴＣＰＳＣＤＳＹＥＫＫＰＰＫＥＦＬＥＲＦＫＳＬＬＱＫＭＩＨＱＨＬＳＳＲＴＨＧＳＥＤＳ（配列番号２４８）、その断片またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号２４８のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５以下の変更（例えば、置換、欠失もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）を含む）である。
さらに他の実施形態では、サイトカイン分子は、インターフェロンガンマ、例えば、ヒトインターフェロンガンマ（例えば、アミノ酸配列：
ＱＤＰＹＶＫＥＡＥＮＬＫＫＹＦＮＡＧＨＳＤＶＡＤＮＧＴＬＦＬＧＩＬＫＮＷＫＥＥＳＤＲＫＩＭＱＳＱＩＶＳＦＹＦＫＬＦＫＮＦＫＤＤＱＳＩＱＫＳＶＥＴＩＫＥＤＭＮＶＫＦＦＮＳＮＫＫＫＲＤＤＦＥＫＬＴＮＹＳＶＴＤＬＮＶＱＲＫＡＩＨＥＬＩＱＶＭＡＥＬＳＰＡＡＫＴＧＫＲＫＲＳＱＭＬＦＲＧ（配列番号２４９）、その断片またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、それと９５％～９９．９％同一の、または配列番号２４９のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変更であるが、５、１０もしくは１５以下の変更（例えば、置換、欠失もしくは挿入、例えば、保存的置換）を有する）を含む）である。
核酸
本発明はまた、本明細書において記載されるような抗体分子の重鎖および軽鎖可変領域ならびにＣＤＲまたは超可変ループをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を特徴とする。例えば、本発明は、本明細書において開示される抗体分子のうち１つまたは複数から選択される抗体分子の、それぞれ重鎖および軽鎖可変領域をコードする第１のおよび第２の核酸を特徴とする。核酸は、本明細書における表中に示されるようなヌクレオチド配列またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれより高く同一の、または本明細書における表において示される配列から３、６、１５、３０もしくは４５ヌクレオチド以下だけ異なる配列）を含み得る。
ある特定の実施形態では、核酸は、本明細書における表において示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域に由来する少なくとも１、２もしくは３つのＣＤＲまたは超可変ループをコードするヌクレオチド配列またはそれと実質的に相同の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれより高く同一の、および／または１つもしくは複数の置換、例えば、保存的置換を有する配列）を含み得る。他の実施形態では、核酸は、本明細書における表において示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域に由来する少なくとも１、２もしくは３つのＣＤＲまたは超可変ループをコードするヌクレオチド配列またはそれと実質的に相同の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれより高く同一の、および／または１つもしくは複数の置換、例えば、保存的置換を有する配列）を含み得る。さらに別の実施形態では、核酸は、本明細書における表において示されるアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域に由来する少なくとも１、２、３、４、５もしくは６つのＣＤＲまたは超可変ループをコードするヌクレオチド配列またはそれと実質的に相同の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれより高く同一の、および／または１つもしくは複数の置換、例えば、保存的置換を有する配列）を含み得る。
ある特定の実施形態では、核酸は、本明細書における表において示されるヌクレオチド配列を有する重鎖可変領域に由来する少なくとも１、２もしくは３つのＣＤＲまたは超可変ループをコードするヌクレオチド配列、それと実質的に相同の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれより高く同一の、および／または本明細書において記載されるストリンジェンシー条件下でハイブリダイズ可能な配列）を含み得る。別の実施形態では、核酸は、本明細書における表において示されるヌクレオチド配列を有する軽鎖可変領域に由来する少なくとも１、２もしくは３つのＣＤＲまたは超可変ループをコードするヌクレオチド配列、またはそれと実質的に相同の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれより高く同一の、および／または本明細書において記載されるストリンジェンシー条件下でハイブリダイズ可能な配列）を含み得る。さらに別の実施形態では、核酸は、本明細書における表において示されるヌクレオチド配列を有する重鎖および軽鎖可変領域に由来する少なくとも１、２、３、４、５もしくは６つのＣＤＲまたは超可変ループをコードするヌクレオチド配列またはそれと実質的に相同の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれより高く同一の、および／または本明細書において記載されるストリンジェンシー条件下でハイブリダイズ可能な配列）を含み得る。
別の態様では、本出願は、本明細書において記載される核酸を含有する宿主細胞およびベクターを特徴とする。核酸は、本明細書において以下により詳細に記載されるように、単一ベクターまたは同一宿主細胞もしくは別個の宿主細胞中に存在する別個のベクター中に存在し得る。
ベクター
本明細書において記載される抗体分子をコードするヌクレオチド配列を含むベクターが、本明細書においてさらに提供される。一実施形態では、ベクターは、本明細書において記載される抗体分子をコードするヌクレオチドを含む。一実施形態では、ベクターは、本明細書において記載されるヌクレオチド配列を含む。ベクターは、それだけには限らないが、ウイルス、プラスミド、コスミド、ラムダファージまたは酵母人工染色体（ＹＡＣ）を含む。
多数のベクター系が使用され得る。例えば、あるクラスのベクターは、動物ウイルス、例えば、ウシパピローマウイルス、ポリオーマウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス（ラウス肉腫ウイルス、ＭＭＴＶまたはＭＯＭＬＶ）またはＳＶ４０ウイルスなどに由来するＤＮＡエレメントを利用する。別のクラスのベクターは、セムリキ森林ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルスおよびフラビウイルスなどのＲＮＡウイルスに由来するＲＮＡエレメントを利用する。
さらに、ＤＮＡをその染色体中に安定に組み込んでいる細胞は、トランスフェクトされた宿主細胞の選択を可能にする１つまたは複数のマーカーを導入することによって選択され得る。マーカーは、例えば、栄養要求性宿主に原栄養性（ｐｒｏｔｏｔｒｏｐｙ）、殺生物剤耐性（例えば、抗生物質）または銅などの重金属に対する耐性などを提供し得る。選択マーカー遺伝子は、ＤＮＡ配列に直接連結され、発現される場合も、同時形質転換によって同一細胞中に導入される場合もある。ｍＲＮＡの最適合成のために、さらなるエレメントが必要とされる場合もある。これらのエレメントは、スプライスシグナルならびに転写プロモーター、エンハンサーおよび終結シグナルを含み得る。
構築物を含有する発現ベクターまたはＤＮＡ配列が、発現のために調製されると、発現ベクターは、適当な宿主細胞中にトランスフェクトまたは導入され得る。これを達成するために、例えば、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム沈殿、電気穿孔、レトロウイルス形質導入、ウイルストランスフェクション、遺伝子銃、脂質ベースのトランスフェクションまたは他の従来技術などの種々の技術が使用され得る。プロトプラスト融合の場合には、細胞を培地中で成長させ、適当な活性についてスクリーニングする。
得られたトランスフェクトされた細胞を培養するための、および産生された抗体分子を回収するための方法および条件は、当業者に公知であり、本説明に基づいて使用される特定の発現ベクターおよび哺乳動物宿主細胞に応じて変わり得る、または最適化され得る。
細胞
別の態様では、本出願は、本明細書において記載される核酸を含有する宿主細胞およびベクターを特徴とする。核酸は、単一ベクターまたは同一宿主細胞もしくは別個の宿主細胞中に存在する別個のベクター中に存在し得る。宿主細胞は、真核細胞、例えば、哺乳動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞または原核細胞、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）であり得る。例えば、哺乳動物細胞は、培養細胞または細胞系であり得る。例示的哺乳動物細胞として、リンパ球性細胞系（例えば、ＮＳＯ）、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、ＣＯＳ細胞、卵母細胞およびトランスジェニック動物に由来する細胞、例えば、乳腺上皮細胞が挙げられる。
本発明はまた、本明細書において記載されるような抗体分子をコードする核酸を含む宿主細胞も提供する。
一実施形態では、宿主細胞は、抗体分子をコードする核酸を含むように遺伝子操作される。
一実施形態では、宿主細胞は、発現カセットを使用することによって遺伝子操作される。「発現カセット」という語句は、このような配列と適合する、宿主において遺伝子の発現に影響を及ぼすことが可能であるヌクレオチド配列を指す。このようなカセットは、プロモーター、イントロンを含むか、または含まないオープンリーディングフレームおよび終結シグナルを含み得る。例えば、誘導プロモーターなどの、発現を達成するのに必要な、またはそれにおいて役立つさらなる因子も使用され得る。
本発明はまた、本明細書において記載されるベクターを含む宿主細胞を提供する。
細胞は、それだけには限らないが、真核細胞、細菌細胞、昆虫細胞またはヒト細胞であり得る。適した真核細胞として、それだけには限らないが、Ｖｅｒｏ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞およびＭＤＣＫＩＩ細胞が挙げられる。適した昆虫細胞として、それだけには限らないが、Ｓｆ９細胞が挙げられる。
使用および併用療法
本明細書において記載される多特異性分子は、単独でまたは第２の療法もしくは第２の治療剤と組み合わせて、過剰増殖性障害、がんまたは線維性障害を処置するために使用され得る。
がん
本明細書において記載される方法は、本明細書において記載される多特異性分子を使用すること、例えば、本明細書において記載される医薬組成物を使用することによって対象においてがんを処置することを含む。また、対象においてがんの症状を低減または軽快させるための方法ならびにがんの成長を阻害するおよび／または１種もしくは複数のがん細胞を死滅させるための方法も提供される。実施形態では、本明細書において記載される方法は、本明細書において記載されるものまたは本明細書において記載される医薬組成物を投与された対象において、腫瘍の大きさを減少させる、および／またはがん細胞数を減少させる。
実施形態では、がんは、血液がんである。実施形態では、血液がんは、白血病またはリンパ腫である。本明細書で使用される場合、「血液がん」とは、造血またはリンパ系組織の腫瘍、例えば、血液、骨髄またはリンパ節に影響を及ぼす腫瘍を指す。例示的血液悪性腫瘍として、それだけには限らないが、白血病（例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄球性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、へアリー細胞白血病、急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、若年性骨髄単球性白血病（ＪＭＭＬ）または大顆粒リンパ球性白血病）、リンパ腫（例えば、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫（例えば、古典的ホジキンリンパ腫または結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫）、菌状息肉症、非ホジキンリンパ腫（例えば、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（例えば、バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ／ＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆体Ｂリンパ芽球性リンパ腫またはマントル細胞リンパ腫）またはＴ細胞非ホジキンリンパ腫（菌状息肉症、未分化大細胞リンパ腫または前駆体Ｔリンパ芽球性リンパ腫））、原発性中枢神経系リンパ腫、セザリー症候群、ワルデンストレームマクログロブリン血症）、慢性骨髄増殖性腫瘍、ランゲルハンス細胞組織球症、多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍、骨髄異形成症候群または骨髄異形成／骨髄増殖性腫瘍が挙げられる。
実施形態では、がんは、固形がんである。例示的固形がんとして、それだけには限らないが、卵巣がん、直腸がん、胃がん、精巣がん、肛門領域のがん、子宮がん、結腸がん、直腸がん、腎細胞癌、肝臓がん、肺の非小細胞癌、小腸のがん、食道のがん、黒色腫、カポジ肉腫、内分泌系のがん、甲状腺のがん、副甲状腺のがん、副腎のがん、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部のがん、皮膚または眼球内悪性黒色腫、子宮がん、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、類表皮がん、子宮頸部の癌 扁平上皮がん、卵管の癌、子宮内膜の癌、膣の癌、軟部組織の肉腫、尿道のがん、外陰部の癌、陰茎のがん、膀胱のがん、腎臓もしくは尿管のがん、腎盂の癌、脊髄軸腫瘍、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、前記がんの転移病巣またはそれらの組合せが挙げられる。
ある特定の実施形態では、がんは、上皮性、間葉性または血液系悪性腫瘍である。ある特定の実施形態では、処置されるがんは、固形腫瘍（例えば、カルチノイド、癌または肉腫）、軟部組織腫瘍（例えば、ヘム悪性腫瘍）および転移病巣、例えば、本明細書において開示されるがんのいずれかの転移病巣である。一実施形態では、処置されるがんは、線維性または線維形成性固形腫瘍、例えば、腫瘍灌流の制限、圧迫された血管、線維性腫瘍間質または間質流体圧の増大のうち１つまたは複数を有する腫瘍である。一実施形態では、固形腫瘍は、膵臓（例えば、膵臓腺癌または膵臓導管腺癌）、乳房、結腸、結腸直腸、肺（例えば、小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）または非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ））、皮膚、卵巣、肝臓がん、食道がん、子宮内膜がん、胃がん、頭頸部がん、腎臓または前立腺がんのうち１つまたは複数から選択される。
がんの例として、それだけには限らないが、癌、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫および白血病またはリンパ系悪性腫瘍が挙げられる。より詳しくは、このようながんの例は、以下に記載され、挙げられる：扁平上皮がん（例えば、上皮性扁平上皮がん）、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌を含む肺がん、腹膜のがん、肝細胞がん、胃腸がんを含む胃（ｇａｓｔｒｉｃ）がんまたは胃（ｓｔｏｍａｃｈ）がん、膵臓がん、神経膠芽腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、肝細胞腫、乳がん、結腸がん、直腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜がんまたは子宮癌、唾液腺癌、腎臓または腎がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝臓癌、肛門癌、陰茎癌ならびに頭頸部がん。「がん」という用語は、原発性悪性細胞または腫瘍（例えば、細胞が元の悪性腫瘍または腫瘍の部位以外の対象の身体中の部位に遊走されていないもの）および続発性悪性細胞または腫瘍（例えば、悪性細胞または腫瘍細胞の、元の腫瘍の部位とは異なる続発性部位への転移、遊走に起因するもの）を含む。
がんまたは悪性腫瘍の他の例として、それだけには限らないが、急性小児リンパ芽球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄球性白血病、副腎皮質癌、成人（原発性）肝細胞がん、成人（原発性）肝臓がん、成人急性リンパ球性白血病、成人急性骨髄球性白血病、成人ホジキン病、成人ホジキンリンパ腫、成人リンパ球性白血病、成人非ホジキンリンパ腫、成人原発性肝臓がん、成人軟部組織肉腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、ＡＩＤＳ関連悪性腫瘍、肛門がん、星状細胞腫、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳幹神経膠腫、脳腫瘍、乳がん、腎盂および尿管のがん、中枢神経系（原発性）リンパ腫、中枢神経系リンパ腫、小脳星状細胞腫、大脳星状細胞腫、子宮頸がん、小児（原発性）肝細胞がん、小児（原発性）肝臓がん、小児急性リンパ芽球性白血病、小児急性骨髄球性白血病、小児脳幹神経膠腫、小児小脳星状細胞腫、小児大脳星状細胞腫、小児頭蓋外生殖細胞腫瘍、小児ホジキン病、小児ホジキンリンパ腫、小児視床下部および視覚路神経膠腫、小児リンパ芽球性白血病、小児髄芽腫、小児非ホジキンリンパ腫、小児松果体およびテント上原始神経外胚葉性腫瘍、小児原発性肝臓がん、小児横紋筋肉腫、小児軟部組織肉腫、小児視覚路および視床下部神経膠腫、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、結腸がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、内分泌膵臓島細胞癌、子宮内膜がん、上衣腫、上皮がん、食道がん、ユーイング肉腫および関連腫瘍、外分泌膵臓がん、頭蓋外生殖細胞腫瘍、性腺外生殖細胞腫瘍、肝外胆管がん、眼がん、女性乳がん、ゴーシェ病、胆嚢がん、胃（Ｇａｓｔｒｉｃ）がん、胃腸カルチノイド腫瘍、胃腸腫瘍、生殖細胞腫瘍、妊娠性絨毛性腫瘍、へアリー細胞白血病、頭頸部がん、肝細胞がん、ホジキン病、ホジキンリンパ腫、高ガンマグロブリン血症、下咽頭がん、腸がん、眼球内黒色腫、島細胞癌、島細胞膵臓がん、カポジ肉腫、腎臓がん、喉頭がん、口唇および口腔がん、肝臓がん、肺がん、リンパ増殖性障害、マクログロブリン血症、男性乳がん、悪性中皮腫、悪性胸腺腫、髄芽腫、黒色腫、中皮腫、転移性潜在性原発性扁平上皮頸部がん、転移性原発性扁平上皮頸部がん、転移性扁平上皮頸部がん、多発性骨髄腫、多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍、骨髄異形成症候群、骨髄性白血病、骨髄球性白血病、骨髄増殖性障害、鼻腔および副鼻腔がん、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、妊娠中非ホジキンリンパ腫、非黒色腫性皮膚がん、非小細胞肺がん、潜在性原発性転移性扁平上皮頸部がん、中咽頭がん、骨－／悪性線維性肉腫、骨肉腫／悪性繊維性組織球腫、骨肉腫／骨の悪性繊維性組織球腫、卵巣上皮がん、卵巣生殖細胞腫瘍、卵巣低悪性度潜在的腫瘍、膵臓がん、異常蛋白血症、紫斑病、副甲状腺がん、陰茎がん、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、形質細胞腫瘍／多発性骨髄腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性肝臓がん、前立腺がん、直腸がん、腎細胞がん、腎盂および尿管がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、サルコイドーシス肉腫、セザリー症候群、皮膚がん、小細胞肺がん、小腸がん、軟部組織肉腫、扁平上皮頸部がん、胃（Ｓｔｏｍａｃｈ）がん、テント上原始神経外胚葉性腫瘍および松果体腫瘍、Ｔ細胞リンパ腫、精巣がん、胸腺腫、甲状腺がん、腎盂および尿管の移行細胞がん、移行腎盂および尿管がん、絨毛性腫瘍、尿管および腎盂細胞がん、尿道がん、子宮がん、子宮肉腫、膣がん、視覚路および視床下部神経膠腫、外陰部がん、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍ならびに上記で列挙される臓器系に位置する新生物以外の任意の他の過剰増殖性疾患が挙げられる。
他の実施形態では、多特異性分子は、上記および本明細書において記載されるように、過剰増殖性障害、例えば、過剰増殖性（ｈｙｐｅｒｐｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ）結合組織障害（例えば、過剰増殖性線維性疾患）を処置するために使用される。一実施形態では、過剰増殖性線維性疾患は、多システム性であるか、または臓器特異性である。例示的過剰増殖性線維性疾患として、それだけには限らないが、多システム性障害（例えば、全身性硬化症、多巣性線維性硬化症、骨髄移植レシピエントにおける強皮症性移植片対宿主病、腎性全身性線維症、強皮症）および臓器特異性障害（例えば、眼、肺、肝臓、心臓、腎臓、膵臓、皮膚および他の臓器の線維症）が挙げられる。他の実施形態では、障害は、肝硬変または結核から選択される。他の実施形態では、障害は、らい病である。
実施形態では、多特異性分子（または医薬組成物）は、処置されるか、または予防されるべき疾患にとって適当な方法で投与される。投与の量および頻度は、患者の状態ならびに患者の疾患の種類および重症度のような因子によって決定される。適当な投与量は、臨床試験によって決定され得る。例えば、「有効量」または「治療量」が示される場合には、投与されるべき医薬組成物（または多特異性分子）の正確な量は、腫瘍の大きさ、感染または転移の程度、対象の年齢、体重および状態における個々の相違を考慮して医師によって決定され得る。実施形態では、本明細書において記載される医薬組成物は、それらの範囲内のすべての整数値を含む１０４～１０９個細胞／体重１ｋｇ、例えば、１０５～１０６個細胞／体重１ｋｇの投与量で投与され得る。実施形態では、本明細書において記載される医薬組成物は、これらの投与量で複数回投与され得る。実施形態では、本明細書において記載される医薬組成物は、免疫療法に記載される注入技術を使用して投与され得る（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、Ｎｅｗ Ｅｎｇ． Ｊ． ｏｆ Ｍｅｄ． ３１９巻：１６７６頁、１９８８年を参照されたい）。
実施形態では、多特異性分子または医薬組成物は、対象に非経口的に投与される。実施形態では、細胞は、対象に、静脈内に、皮下に、腫瘍内に、結節内に、筋肉内に、皮内に、または腹腔内に投与される。実施形態では、細胞は、投与される、例えば、腫瘍またはリンパ節中に直接注射される。実施形態では、細胞は、注入（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、Ｎｅｗ Ｅｎｇ． Ｊ． ｏｆ Ｍｅｄ． ３１９巻：１６７６頁、１９８８年に記載されるような）または静脈内プッシュとして投与される。実施形態では、細胞は、注射用デポー製剤として投与される。
実施形態では、対象は、哺乳動物である。実施形態では、対象は、ヒト、サル、ブタ、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、ラットまたはマウスである。実施形態では、対象は、ヒトである。実施形態では、対象は、小児科対象、例えば、１８歳未満、例えば、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１歳未満であるか、またはそれより小さい。実施形態では、対象は、成人、例えば、少なくとも１８歳、例えば、少なくとも１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２５～３０、３０～３５、３５～４０、４０～５０、５０～６０、６０～７０、７０～８０または８０～９０歳である。
肝臓状態または障害
本発明はまた、本明細書において記載される多特異性分子または医薬組成物を使用して、肝臓状態または障害を処置する方法も提供する。
本明細書で使用される場合、「肝臓障害療法」とは、本明細書において記載される肝臓障害を処置または予防するために使用される療法または治療剤を指し、したがって、肝臓がん療法および他の肝臓障害療法、例えば、遺伝病、アルコール依存症、薬物毒性、感染または傷害によって誘導される、線維性肝臓障害、脂肪肝疾患、肝臓炎症障害、自己免疫肝疾患および肝臓障害のための療法を包含する。
肝臓がんの例として、肝細胞癌（ＨＣＣ）、原発性肝臓細胞癌、肝細胞腫、線維層板型癌、限局性結節性過形成、胆管肉腫、肝内胆管がん、血管肉腫（ａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）または血管肉腫（ｈｅｍａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）、肝腺腫、肝血管腫、肝血腫、胆芽腫、乳児血管内皮腫（ｈｅｍａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｏｍａ）、肝臓の混合腫瘍、間葉性組織の腫瘍、肝臓の肉腫が挙げられる。肝臓に転移し得るがんの例として、乳がん、結腸直腸がん、食道がん、腎臓または腎がん、肺がん、卵巣がん、膵臓がん、直腸がん、皮膚がん（例えば、黒色腫）、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）または胃（ｓｔｏｍａｃｈ）がん（胃腸がんを含む）および子宮がんが挙げられる。
一実施形態では、肝臓障害は、肝臓の機能または生理に影響を及ぼす、線維性障害または結合組織障害である。一実施形態では、線維性障害または結合組織障害は、全身性（全身に影響を及ぼす）、多臓器性または臓器特異性（例えば、肝臓特異性）であり得る。線維性肝臓障害の例として、肝線維症（ｌｉｖｅｒ ｆｉｂｒｏｓｉｓ／ｈｅｐａｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、肝硬変および肝臓における細胞外マトリックスタンパク質、例えば、コラーゲンの蓄積と関連する任意の障害、肝臓瘢痕および／または異常な肝臓脈管構造が挙げられる。肝線維症は、コラーゲンを含めた細胞外マトリックスタンパク質の蓄積を引き起こす肝臓炎症または損傷、および肝臓における瘢痕組織によって引き起こされる。肝硬変は、肝線維症の末期であり、再生結節を含み（修復プロセスの結果として）、肝臓脈管構造の歪みを伴う。肝臓繊維性疾患は、最も一般的には慢性ウイルス感染（例えば、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎）、アルコール依存症および脂肪肝疾患によって引き起こされる。
脂肪肝疾患の例として、脂肪肝（またはＦＬＤ）、アルコール性肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性脂肪性肝炎、単純脂肪症、ライ症候群および肝臓細胞における脂質の異常な保持を伴う任意の障害が挙げられる。
一実施形態では、肝疾患は、ＮＡＳＨである。
代謝障害もまた、肝臓にも影響を及ぼし、肝損傷を引き起こし得る。肝臓の、または肝臓に影響を及ぼす代謝障害の例として、ヘマクロマトーシス、糖尿病、肥満症、高血圧症、脂質代謝異常、ガラクトース血症およびグリコーゲン貯蔵疾患が挙げられる。
肝臓の、または肝臓に影響を及ぼす自己免疫障害は、全身障害または肝臓以外の臓器に主に影響を及ぼすが、肝臓細胞もしくは肝臓機能に二次的影響を有する障害を含み得る。このような自己免疫障害の例として、自己免疫肝炎（ＡＩＨ）、自己免疫肝疾患、ルポイド肝炎、全身性エリテマトーデス、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、強皮症および全身性硬化症（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｓｃｅｒｌｏｓｉｓ）が挙げられる。
線維性状態または障害
別の態様では、本発明は、対象において線維性状態または障害を処置または予防する方法を特徴とする。方法は、多特異性分子を単剤として、または別の薬剤もしくは治療様式と組み合わせて、それを必要とする対象に、対象において線維性状態を減少させる、または阻害するのに十分な量で投与することを含む。
ある特定の実施形態では、線維症を低減することまたは線維性状態の処置は、組織線維症の形成または沈着のうち１つまたは複数を低減することもしくは阻害すること、線維性病変の大きさ、細胞充実性（例えば、繊維芽細胞または免疫細胞数）、組成もしくは細胞含量を低減すること、線維性病変のコラーゲンまたはヒドロキシプロリン含量を低減すること、線維形成性タンパク質の発現もしくは活性を低減すること、炎症反応と関連する線維症を低減すること、線維症と関連する体重減少を減少させること、または生存を増大することを含む。
ある特定の実施形態では、線維性状態は、原発性線維症である。一実施形態では、線維性状態は、特発性である。他の実施形態では、線維性状態は、疾患（例えば、感染性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、悪性もしくはがん性疾患および／または結合性疾患）、毒素、傷害（例えば、環境ハザード（例えば、アスベスト、炭塵、多環式芳香族炭化水素）、喫煙、創傷）、医学的処置（例えば、外科的切開、化学療法または放射線照射）またはそれらの組合せと関連している（例えば、それに続発する）。
ある特定の実施形態では、線維性状態は、肺の線維性状態、肝臓の線維性状態（例えば、本明細書において記載されるような）、心臓または脈管構造の線維性状態、腎臓の線維性状態、皮膚の線維性状態、胃腸管の線維性状態、骨髄もしくは造血組織の線維性状態、神経系の線維性状態、眼の線維性状態またはそれらの組合せである。
ある特定の実施形態では、線維性状態は、肺の線維性状態である。ある特定の実施形態では、肺の線維性状態は、肺線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、間質性肺疾患、原因不明の線維化性胞隔炎（ＣＦＡ）、気管支拡張症および強皮症肺疾患のうち１つまたは複数から選択される。一実施形態では、肺の線維症は、疾患、毒素、傷害、医学的処置またはそれらの組合せに続発する。例えば、肺の線維症は、石綿肺およびケイ肺症などの疾患プロセス、職業上のハザード、環境汚染物質、喫煙、自己免疫結合組織障害（例えば、関節リウマチ、強皮症および全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ））、サルコイドーシスなどの結合組織障害、感染性疾患、例えば、感染、特に、慢性感染、それだけには限らないが、放射線療法および薬物療法、例えば、化学療法（例えば、ブレオマイシン、メトトレキサート、アミオダロン、ブスルファン、および／またはニトロフラントインとして用いる処置）を含む医学的処置のうち１つまたは複数と関連している可能性がある（例えば、それに続発する）。一実施形態では、本発明の方法を用いて処置される肺の線維性状態は、がん処置、例えば、がん（例えば、ブレオマイシンを用いる扁平上皮がん、精巣がん、ホジキン病）の処置と関連する（例えば、それに続発する）。一実施形態では、肺の線維性状態は、自己免疫結合組織障害（例えば、強皮症またはループス、例えば、ＳＬＥ）と関連している。
肺線維症は、石綿肺およびケイ肺症などの疾患プロセスにおいて二次的効果として生じる場合があり、環境汚染物質に対する曝露が職業上のハザードである、炭坑作業員、船員およびサンドブラストを行うものなどのある特定の職業では、より蔓延していることが知られている（Ｇｒｅｅｎ， ＦＨら（２００７年） Ｔｏｘｉｃｏｌ Ｐａｔｈｏｌ． ３５巻：１３６～４７頁）。肺線維症に寄与する他の因子として、喫煙ならびに関節リウマチ、強皮症および全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）のような自己免疫結合組織障害が挙げられる（Ｌｅｓｌｉｅ， ＫＯら（２００７年）Ｓｅｍｉｎ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ． ２８巻：３６９～７８頁、Ｓｗｉｇｒｉｓ， ＪＪら（２００８年）Ｃｈｅｓｔ． １３３巻：２７１～８０頁、およびＡｎｔｏｎｉｏｕ， ＫＭら（２００８年）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ． ２０巻：６８６～９１頁）。サルコイドーシスなどの他の結合組織障害は、肺線維症を疾患の一部として含む場合があり（Ｐａｒａｍｏｔｈａｙａｎ， Ｓら（２００８年）Ｒｅｓｐｉｒ Ｍｅｄ． １０２巻：１～９頁）、肺の感染性疾患は、感染症、特に、慢性感染症の長期結果として線維症を引き起こす場合がある。
肺線維症はまた、ある特定の医学的処置、特に、胸部への放射線療法ならびにブレオマイシン、メトトレキサート、アミオダロン、ブスルファンおよびニトロフラントインのようなある特定の医薬品の副作用であり得る（Ｃａｔａｎｅ， Ｒら（１９７９年）Ｉｎｔ Ｊ Ｒａｄｉａｔ Ｏｎｃｏｌ Ｂｉｏｌ Ｐｈｙｓ． ５巻：１５１３～８頁、Ｚｉｓｍａｎ， ＤＡら（２００１年）Ｓａｒｃｏｉｄｏｓｉｓ Ｖａｓｃ Ｄｉｆｆｕｓｅ Ｌｕｎｇ Ｄｉｓ． １８巻：２４３～５２頁、Ｒａｋｉｔａ， Ｌら（１９８３年）Ａｍ Ｈｅａｒｔ Ｊ． １０６巻：９０６～１６頁、Ｔｗｏｈｉｇ， ＫＪら（１９９０年）Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｓｔ Ｍｅｄ． １１巻：３１～５４頁およびＷｉｔｔｅｎ ＣＭ．（１９８９年）Ａｒｃｈ Ｐｈｙｓ Ｍｅｄ Ｒｅｈａｂｉｌ． ７０巻：５５～７頁）。他の実施形態では、明確な原因物質または疾患を同定することができない特発性肺線維症が生じることがある。遺伝的因子は、肺線維症のこれらの場合において重大な役割を果たすことがある（Ｓｔｅｅｌｅ， ＭＰら（２００７年）Ｒｅｓｐｉｒａｔｉｏｎ ７４巻：６０１～８頁、Ｂｒａｓｓ， ＤＭら（２００７年）Ｐｒｏｃ Ａｍ Ｔｈｏｒａｃ Ｓｏｃ． ４巻：９２～１００頁およびｄｕ Ｂｏｉｓ ＲＭ．（２００６年）Ｓｅｍｉｎ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ． ２７巻：５８１～８頁）。
他の実施形態では、肺線維症として、それだけには限らないが、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群、強皮症、胸腔線維症、慢性喘息、急性肺症候群、アミロイドーシス、気管支肺異形成症、カプラン病、ドレスラー症候群、組織球増殖症Ｘ、特発性の肺のヘモジデリン沈着症、リンパ管筋腫症、僧帽弁狭窄、多発性筋炎、肺水腫、肺高血圧症（例えば、特発性肺高血圧症（ＩＰＨ））、塵肺症、放射線療法（例えば、放射線照射誘導性線維症）、リウマチ性疾患、シェーバー病、全身性エリテマトーデス、全身性硬化症、熱帯性肺性好酸球増加症、結節性硬化症、ウェーバー・クリスチャン病、ウェジナー肉芽腫症、ウィップル病または毒素もしくは刺激物質（例えば、医薬品薬物、例えば、アミオダロン、ブレオマイシン、ブスルファン、カルムスチン、クロラムフェニコール、ヘキサメトニウム、メトトレキサート、メチセルジド、マイトマイシンＣ、ニトロフラントイン、ペニシラミン、ペプロマイシンおよびプラクトロール；タルクまたは粉塵、例えば、炭塵、シリカの吸入）に対する曝露と関連する肺線維症が挙げられる。ある特定の実施形態では、肺線維症は、肺の炎症性障害、例えば、喘息および／またはＣＯＰＤと関連している。
ある特定の実施形態では、線維性状態は、肝臓の線維性状態である。ある特定の実施形態では、肝臓の線維性状態は、脂肪肝疾患、脂肪症（例えば、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、胆汁うっ滞性肝疾患（例えば、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ））、硬変、アルコール誘導性肝線維症、胆管傷害、胆管線維症または胆管症のうち１つまたは複数から選択される。他の実施形態では、肝臓または肝線維症として、それだけには限らないが、アルコール依存症、ウイルス感染、例えば、肝炎（例えば、Ｃ型、Ｂ型またはＤ型肝炎）、自己免疫肝炎、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、進行性広範囲線維症、毒素または刺激物質（例えば、アルコール、医薬品薬物および環境毒素）に対する曝露に関連する肝線維症が挙げられる。肝臓状態および障害のさらなる例は、本明細書において提供される「肝臓状態または障害」と題された節において提供される。
ある特定の実施形態では、線維性状態は、腎臓の線維性状態である。ある特定の実施形態では、腎臓の線維性状態は、腎線維症（例えば、慢性腎臓線維症）、傷害／線維症と関連する腎症（例えば、糖尿病と関連する慢性腎症（例えば、糖尿病性腎症））、ループス、腎臓の強皮症、糸球体腎炎、巣状分節状糸球体硬化症、ヒト慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）と関連するＩｇＡ腎症腎線維症、慢性進行性腎症（ＣＰＮ）、尿細管間質性線維症、尿管閉塞、慢性尿毒症、慢性間質性腎炎、放射線腎症、糸球体硬化症、進行性糸球体腎症（ＰＧＮ）、内皮／血栓性微小血管障害傷害、ＨＩＶ関連腎症または毒素、刺激物質もしくは化学療法剤に対する曝露と関連する線維症のうち１つまたは複数から選択される。一実施形態では、腎臓の線維性状態は、腎臓の強皮症である。一部の実施形態では、腎臓の線維性状態は、移植腎症、糖尿病性腎症、ループス腎炎、巣状分節状糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、内皮／血栓性微小血管障害傷害、腎臓の強皮症、ＨＩＶ関連腎症（ＨＩＶＶＡＮ）または毒素、刺激物質、化学療法剤に対する曝露である。
ある特定の実施形態では、線維性状態は、骨髄または造血組織の線維性状態である。ある特定の実施形態では、骨髄の線維性状態は、骨髄の慢性骨髄増殖性腫瘍、例えば、原発性骨髄線維症（本明細書において、特発性骨髄化生または慢性特発性骨髄線維症とも呼ばれる）の内因的特徴である。他の実施形態では、骨髄線維症は、悪性状態またはクローン増殖性疾患によって引き起こされる状態と関連している（例えば、それに続発する）。他の実施形態では、骨髄線維症は、血液系障害（例えば、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、脊髄形成異常症、へアリー細胞白血病、リンパ腫（例えば、ホジキンまたは非ホジキンリンパ腫）、多発性骨髄腫または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）のうち１つまたは複数から選択される血液系障害）と関連している。さらに他の実施形態では、骨髄線維症は、非血液障害（例えば、骨髄への固形腫瘍転移、自己免疫障害（例えば、全身性エリテマトーデス、強皮症、混合結合組織障害または多発性筋炎）、感染（例えば、結核またはらい病）またはビタミンＤ欠乏症と関連する二次的副甲状腺機能亢進症から選択される非血液障害と関連している（例えば、それに続発する）。一部の実施形態では、線維性状態は、特発性または薬物誘導性骨髄線維症である。一部の実施形態では、骨髄または造血組織の線維性状態は、全身性エリテマトーデスまたは強皮症と関連している。
他の実施形態では、線維性状態は、らい病または結核と関連している。
ある特定の実施形態では、線維性状態は、骨髄の線維性状態である。ある特定の実施形態では、骨髄の線維性状態は、骨髄線維症（例えば、原発性骨髄線維症（ＰＭＦ））、骨髄球性化生、慢性特発性骨髄線維症または原発性骨髄線維症である。他の実施形態では、骨髄線維症は、へアリー細胞白血病、リンパ腫または多発性骨髄腫のうち１つまたは複数から選択される血液系障害と関連している。
他の実施形態では、骨髄線維症は、本態性血小板血症（ＥＴ）、真性赤血球増加症（ＰＶ）、肥満細胞症、慢性好酸球性白血病、慢性好中球性白血病から選択される１つまたは複数の骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）または他のＭＰＮと関連している。
一実施形態では、線維性状態は、原発性骨髄線維症である。原発性骨髄線維症（ＰＭＦ）（文献において、特発性骨髄化生（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｍｙｅｌｏｉｄ ｍｅｔａｐｌａｓｉａ）および特発性骨髄化生（Ａｇｎｏｇｅｎｉｃ ｍｙｅｌｏｉｄ ｍｅｔａｐｌａｓｉａ）とも呼ばれる）は、多能性造血前駆体細胞のクローン性障害である（Ａｂｄｅｌ－Ｗａｈａｂ， Ｏ．ら（２００９年）Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｍｅｄ． ６０巻：２３３～４５頁、Ｖａｒｉｃｃｈｉｏ， Ｌ．ら（２００９年） Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ． Ｈｅｍａｔｏｌ． ２巻（３号）：３１５～３３４頁、Ａｇｒａｗａｌ， Ｍ．ら（２０１０年） Ｃａｎｃｅｒ １～１５頁において概説される）。
ある特定の実施形態では、線維性状態は、心臓の線維性状態である。ある特定の実施形態では、心臓の線維性状態は、心筋線維症（例えば、放射線心筋炎、外科手術手技合併症（例えば、心筋術後線維症）、感染性疾患（例えば、シャーガス病、細菌性、旋毛虫性または真菌性心筋炎）と関連する心筋線維症）、肉芽腫性代謝性貯蔵障害（例えば、心筋症、ヘモクロマトーシス）；発達障害（例えば、心内膜線維弾性症）、動脈硬化症、または毒素もしくは刺激物質に対する曝露（例えば、薬物誘導性心筋症、薬物誘導性心臓毒性、アルコール性心筋症、コバルト中毒もしくは曝露）である。ある特定の実施形態では、心筋線維症は、心臓組織の炎症性障害（例えば、心筋サルコイドーシス）と関連している。一部の実施形態では、線維性状態は、心筋梗塞と関連する線維性状態である。一部の実施形態では、線維性状態は、うっ血性心不全と関連する線維性状態である。
一部の実施形態では、線維性状態は、強皮症またはループス、例えば、全身性エリテマトーデスから選択される自己免疫疾患と関連している。
一部の実施形態では、線維性状態は、全身性である。一部の実施形態では、線維性状態は、全身性硬化症（例えば、限局性全身性硬化症、びまん性全身性硬化症または強皮症を伴わない全身性硬化症）、腎性全身性線維症、嚢胞性線維症、慢性移植片対宿主病またはアテローム性動脈硬化症である。
一部の実施形態では、線維性状態は、強皮症である。一部の実施形態では、強皮症は、限局性、例えば、モルフェアまたは線状強皮症である。一部の実施形態では、状態は、全身性硬化症、例えば、限局性全身性硬化症、びまん性全身性硬化症または強皮症を伴わない全身性硬化症である。
他の実施形態では、線維性状態は、筋肉、腱、軟骨、皮膚（例えば、皮膚表皮または内皮）、心臓組織、血管組織（例えば、動脈、静脈）、膵臓組織、肺組織、肝臓組織、腎臓組織、子宮組織、卵巣組織、神経組織、精巣組織、腹膜組織、結腸、小腸、胆道、腸、骨髄、造血組織または眼（例えば、網膜）組織のうち１つまたは複数から選択される組織に影響を及ぼす。
一部の実施形態では、線維性状態は、眼の線維性状態である。一部の実施形態では、線維性状態は、緑内障、黄斑変性（例えば、加齢性黄斑変性症）、黄斑浮腫（例えば、糖尿病性黄斑浮腫）、網膜症（例えば、糖尿病性網膜症）またはドライアイ病である。
ある特定の実施形態では、線維性状態は、皮膚の線維性状態である。ある特定の実施形態では、皮膚の線維性状態は、皮膚線維症（例えば、肥厚性瘢痕、ケロイド）、強皮症、腎性全身性線維症（例えば、重症腎不全を有する患者において、ガドリニウム（ＭＲＩのコントラスト物質として頻繁に使用される）に対する曝露の結果生じる）およびケロイドのうち１つまたは複数から選択される。
ある特定の実施形態では、線維性状態は、胃腸管の線維性状態である。ある特定の実施形態では、線維性状態は、強皮症と関連している線維症、放射線誘導性腸線維症、前腸炎症性障害、例えば、バレット食道および慢性胃炎と関連している線維症および／または後腸炎症性障害、例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎およびクローン病と関連している線維症のうち１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、胃腸管の線維性状態は、強皮症と関連している線維症である。
一実施形態では、線維性状態は、慢性線維性状態または障害である。ある特定の実施形態では、線維性状態は、炎症性状態または障害と関連している。
一部の実施形態では、線維性および／または炎症性状態は、骨髄炎、例えば、慢性骨髄炎である。
一部の実施形態では、線維性状態は、アミロイドーシスである。ある特定の実施形態では、アミロイドーシスは、慢性骨髄炎と関連している。
一部の実施形態では、本明細書において記載される１種または複数の組成物は、１種または複数の他の治療剤と組み合わせて投与される。例示的治療剤として、それだけには限らないが、抗線維化薬、副腎皮質ステロイド、抗炎症薬、免疫抑制薬、化学療法剤、代謝拮抗薬および免疫調節薬が挙げられる。
肝線維症の処置のための組成物と組み合わせて使用するための適した治療薬の例として、それだけには限らないが、アデホビルピボキシル、カンデサルタン、コルヒチン、併用ＡＴＧ、ミコフェノール酸モフェチルおよびタクロリムス、併用シクロスポリンマイクロエマルジョンおよびタクロリムス、エラストメトリー、エベロリムス、ＦＧ－３０１９、Ｆｕｚｈｅｎｇ Ｈｕａｙｕ、ＧＩ２６２５７０、グリチルリチン（グリチルリチン酸モノアンモニウム、グリシン、Ｌ－システインモノヒドロクロリド）、インターフェロンガンマ－１ｂ、イルベサルタン、ロサルタン、オルチプラズ、経口ＩＭＰＡＣＴ（登録商標）、ペグインターフェロンアルファ－２ａ、併用ペグインターフェロンアルファ－２ａおよびリバビリン、ペグインターフェロンアルファ－２ｂ（ＳＣＨ５４０３１）、併用ペグインターフェロンアルファ－２ｂおよびリバビリン、プラジカンテル、プラゾシン、ラルテグラビル、リバビリン（ＲＥＢＥＴＯＬ（登録商標）、ＳＣＨ１８９０８）、リトナビルブーストプロテアーゼ阻害剤、ペントキシフィリン（ｐｅｎｔｏｘｙｐｈｉｌｌｉｎｅ）、タクロリムス、タウロウルソデオキシコール酸、トコフェロール、ウルソジオール、ワルファリンおよびそれらの組合せが挙げられる。
併用療法
本明細書において開示される多特異性分子は、第２の治療剤または手順と組み合わせて使用され得る。
実施形態では、多特異性分子および第２の治療剤または手順は、対象ががんを有すると診断された後に、例えば、がんが対象から排除される前に投与／実施される。実施形態では、多特異性分子および第２の治療剤または手順は、同時に、または同時発生的に投与／実施される。例えば、ある処置の送達は、第２の送達が開始する際に依然として生じている、例えば、処置の投与に重複がある。他の実施形態では、多特異性分子および第２の治療剤または手順は、逐次投与／実施される。例えば、ある処置の送達は、他の処置の送達が始まる前に終わる。
実施形態では、併用療法は、いずれかの薬剤を単独で用いる単剤療法よりも有効な処置につながる可能性がある。実施形態では、第１のおよび第２の処置の組合せは、第１のまたは第２の処置単独よりも有効である（例えば、症状および／またはがん細胞のより大きな低減につながる）。実施形態では、併用療法は、単剤療法として投与された場合に同様の効果を達成するために通常必要とされる第１のまたは第２の処置の用量と比較して、より低用量の第１のまたは第２の処置の使用を可能にする。実施形態では、併用療法は、部分的相加効果、全体的相加効果または相加効果より大きいものを有する。
一実施形態では、多特異性分子は、療法、例えば、がん療法（例えば、抗がん剤、免疫療法、光線力学的療法（ＰＤＴ）、手術および／または放射線照射のうち１つまたは複数）と組み合わせて投与される。「化学療法薬」、「化学療法剤」および「抗がん剤」という用語は、本明細書において同義的に使用される。多特異性分子および療法、例えば、がん療法の投与は、逐次（重複を有するか、または有さない）であっても、同時であってもよい。多特異性分子の投与は、連続であっても、療法（例えば、がん療法）の過程の間で断続的であってもよい。本明細書において記載されるある特定の療法が、がんおよび非がん性疾患を処置するために使用され得る。例えば、本明細書において記載される方法および組成物を使用すると、ＰＤＴ有効性が、がん性および非がん性状態（例えば、結核）において増強され得る（例えば、Ａｇｏｓｔｉｎｉｓ， Ｐ．ら（２０１１年） ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ． Ｃｌｉｎ． ６１巻：２５０～２８１頁において概説される）。
抗がん療法
他の実施形態では、多特異性分子は、低または小分子量化学療法剤と組み合わせて投与される。例示的低または小分子量化学療法剤として、それだけには限らないが、１３－シス－レチノイン酸（イソトレチノイン、ＡＣＣＵＴＡＮＥ（登録商標））、２－ＣｄＡ（２－クロロデオキシアデノシン、クラドリビン、ＬＥＵＳＴＡＴＩＮ（商標））、５－アザシチジン（アザシチジン、ＶＩＤＡＺＡ（登録商標））、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ、フルオロウラシル、ＡＤＲＵＣＩＬ（登録商標））、６－メルカプトプリン（６－ＭＰ、メルカプトプリン、ＰＵＲＩＮＥＴＨＯＬ（登録商標））、６－ＴＧ（６－チオグアニン、チオグアニン、ＴＨＩＯＧＵＡＮＩＮＥ ＴＡＢＬＯＩＤ（登録商標））、アブラキサン（パクリタキセルタンパク質結合型）、アクチノマイシン－Ｄ（ダクチノマイシン、ＣＯＳＭＥＧＥＮ（登録商標））、アリトレチノイン（ＰＡＮＲＥＴＩＮ（登録商標））、オールトランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ、トレチノイン、ＶＥＳＡＮＯＩＤ（登録商標））、アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン、ＨＭＭ、ＨＥＸＡＬＥＮ（登録商標））、アメトプテリン（メトトレキサート、メトトレキサートナトリウム、ＭＴＸ、ＴＲＥＸＡＬＬ（商標）、ＲＨＥＵＭＡＴＲＥＸ（登録商標））、アミホスチン（ＥＴＨＹＯＬ（登録商標））、アラビノシルシトシン（Ａｒａ－Ｃ、シタラビン、ＣＹＴＯＳＡＲ－Ｕ（登録商標））、ヒ素三酸化物（ＴＲＩＳＥＮＯＸ（登録商標））、アスパラギナーゼ（エルウィニアＬ－アスパラギナーゼ、Ｌ－アスパラギナーゼ、ＥＬＳＰＡＲ（登録商標）、ＫＩＤＲＯＬＡＳＥ（登録商標））、ＢＣＮＵ（カルムスチン、ＢｉＣＮＵ（登録商標））、ベンダムスチン（ＴＲＥＡＮＤＡ（登録商標））、ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））、ブレオマイシン（ＢＬＥＮＯＸＡＮＥ（登録商標））、ブスルファン（ＢＵＳＵＬＦＥＸ（登録商標）、ＭＹＬＥＲＡＮ（登録商標））、カルシウムロイコボリン（シトロボラム因子、フォリン酸、ロイコボリン）、カンプトテシン－１１（ＣＰＴ－１１、イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、カルボプラチン（ＰＡＲＡＰＬＡＴＩＮ（登録商標））、カルムスチンウエハー（カルムスチンインプラントを有するプロリフェプロスパン２０、ＧＬＩＡＤＥＬ（登録商標）ウエハー）、ＣＣＩ－７７９（テムシロリムス、ＴＯＲＩＳＥＬ（登録商標））、ＣＣＮＵ（ロムスチン、ＣｅｅＮＵ）、ＣＤＤＰ（シスプラチン、ＰＬＡＴＩＮＯＬ（登録商標）、ＰＬＡＴＩＮＯＬ－ＡＱ（登録商標））、クロラムブシル（ロイケラン）、シクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）、ＮＥＯＳＡＲ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＩＣ、ＤＴＩＣ、イミダゾールカルボキサミド、ＤＴＩＣ－ＤＯＭＥ（登録商標））、ダウノマイシン（ダウノルビシン、塩酸ダウノルビシン、塩酸ルビドマイシン、ＣＥＲＵＢＩＤＩＮＥ（登録商標））、デシタビン（ＤＡＣＯＧＥＮ（登録商標））、デクスラゾキサン（ＺＩＮＥＣＡＲＤ（登録商標））、ＤＨＡＤ（ミトキサントロン、ＮＯＶＡＮＴＲＯＮＥ（登録商標））、ドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、ＲＵＢＥＸ（登録商標））、エピルビシン（ＥＬＬＥＮＣＥ（商標））、エストラムスチン（ＥＭＣＹＴ（登録商標））、エトポシド（ＶＰ－１６、エトポシドホスフェート、ＴＯＰＯＳＡＲ（登録商標）、ＶＥＰＥＳＩＤ（登録商標）、ＥＴＯＰＯＰＨＯＳ（登録商標））、フロクスウリジン（ＦＵＤＲ（登録商標））、フルダラビン（ＦＬＵＤＡＲＡ（登録商標））、フルオロウラシル（クリーム）（ＣＡＲＡＣ（商標）、ＥＦＵＤＥＸ（登録商標）、ＦＬＵＯＲＯＰＬＥＸ（登録商標））、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、ヒドロキシ尿素（ＨＹＤＲＥＡ（登録商標）、ＤＲＯＸＩＡ（商標）、ＭＹＬＯＣＥＬ（商標））、イダルビシン（ＩＤＡＭＹＣＩＮ（登録商標））、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イクサベピロン（ＩＸＥＭＰＲＡ（商標））、ＬＣＲ（ロイロクリスチン、ビンクリスチン、ＶＣＲ、ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標）、ＶＩＮＣＡＳＡＲ ＰＦＳ（登録商標））、Ｌ－ＰＡＭ（Ｌ－サルコリシン、メルファラン、フェニルアラニンマスタード、ＡＬＫＥＲＡＮ（登録商標））、メクロレタミン（塩酸メクロレタミン、ムスチン、ナイトロジェンマスタード、ＭＵＳＴＡＲＧＥＮ（登録商標））、メスナ（ＭＥＳＮＥＸ（商標））、マイトマイシン（マイトマイシン－Ｃ、ＭＴＣ、ＭＵＴＡＭＹＣＩＮ（登録商標））、ネララビン（ＡＲＲＡＮＯＮ（登録商標））、オキサリプラチン（エロキサチン（商標））、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、ＯＮＸＡＬ（商標））、ペガスパルガーゼ（ＰＥＧ－Ｌ－アスパラギナーゼ、ＯＮＣＯＳＰＡＲ（登録商標））、ＰＥＭＥＴＲＥＸＥＤ（ＡＬＩＭＴＡ（登録商標））、ペントスタチン（ＮＩＰＥＮＴ（登録商標））、プロカルバジン（ＭＡＴＵＬＡＮＥ（登録商標））、ストレプトゾシン（ＺＡＮＯＳＡＲ（登録商標））、テモゾロミド（ＴＥＭＯＤＡＲ（登録商標））、テニポシド（ＶＭ－２６、ＶＵＭＯＮ（登録商標））、ＴＥＳＰＡ（チオホスホアミド、チオテパ、ＴＳＰＡ、ＴＨＩＯＰＬＥＸ（登録商標））、トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ビンブラスチン（ビンブラスチンスルフェート、ビンカロイコブラスチン、ＶＬＢ、ＡＬＫＡＢＡＮ－ＡＱ（登録商標）、ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））、ビノレルビン（ビノレルビンタルトレート、ナベルビン（登録商標））およびボリノスタット（ＺＯＬＩＮＺＡ（登録商標））が挙げられる。
別の実施形態では、多特異性分子は、生物製剤とともに投与される。がんの処置において有用な生物製剤は、当技術分野で公知であり、本発明の結合分子は、例えば、このような公知の生物製剤とともに投与され得る。例えば、ＦＤＡは、乳がんの処置のために以下の生物製剤を承認してきた：ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（トラスツズマブ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ Ｉｎｃ．、カリフォルニア州、サウスサンフランシスコ、ＨＥＲ２陽性乳がんにおいて抗腫瘍活性を有するヒト化モノクローナル抗体）、ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標）（フルベストラント、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＬＰ、デラウェア州、ウィルミントン；乳がんを処置するために使用されるエストロゲン受容体アンタゴニスト）、ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）（アナストロゾール、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＬＰ；アロマターゼ；エストロゲンを作製するために必要とされる酵素を遮断する非ステロイド性アロマターゼ阻害剤）、アロマシン（登録商標）（エキセメスタン、Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．、ニューヨーク州、ニューヨーク；乳がんの処置において使用される不可逆的ステロイド性アロマターゼ失活剤）、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）（レトロゾール、Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ニュージャージー州、イーストハノーバー；乳がんを処置するためにＦＤＡによって承認された非ステロイド性アロマターゼ阻害剤）およびＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）（タモキシフェン、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＬＰ；乳がんを処置するためにＦＤＡによって承認された非ステロイド性抗エストロゲン剤）。本発明の結合分子を組み合わせることができる他の生物製剤として以下がある：ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）（ベバシズマブ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ Ｉｎｃ．；血管新生を阻害するように設計された最初にＦＤＡによって承認された療法）およびＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標）（イブリツモマブチウキセタン、Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ、マサチューセッツ州、ケンブリッジ；Ｂ細胞リンパ腫の処置のために現在承認されている放射標識されたモノクローナル抗体）。
さらに、ＦＤＡは、結腸直腸がんの処置のために以下の生物製剤を承認してきた：ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）；ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）（セツキシマブ、ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．、ニューヨーク州、ニューヨークおよびＢｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ、ニューヨーク州、ニューヨーク；上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対するモノクローナル抗体である）、ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）（メシル酸イマチニブ；タンパク質キナーゼ阻害剤）およびＥＲＧＡＭＩＳＯＬ（登録商標）（塩酸レバミソール、Ｊａｎｓｓｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、ＬＰ、ニュージャージー州、タイタスビル；デュークスのステージＣ結腸がんを有する患者において外科的切除後に５－フルオロウラシルを組み合わせたアジュバント処置として１９９０年にＦＤＡによって承認された免疫調節物質）。
肺がんの処置のための、例示的生物製剤として、ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）（エルロチニブＨＣＬ、ＯＳＩ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．、ニューヨーク州、メルヴィル；ヒト上皮成長因子受容体１（ＨＥＲ１）経路を標的とするように設計された小分子）が挙げられる。
多発性骨髄腫の処置のための、例示的生物製剤として、ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標）ベルケード（ボルテゾミブ、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、マサチューセッツ州、ケンブリッジ；プロテアソーム阻害剤）が挙げられる。さらなる生物製剤として、ＴＨＡＬＩＤＯＭＩＤ（登録商標）（サリドマイド、Ｃｌｅｇｅｎｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ニュージャージー州、ウォーレン；免疫調節剤であり、骨髄腫細胞の成長および生存を阻害する能力ならびに抗血管新生を含む複数の作用を有すると思われる）が挙げられる。
さらなる例示的がん治療用抗体として、それだけには限らないが、３Ｆ８、アバゴボマブ（ａｂａｇｏｖｏｍａｂ）、アデカツムマブ、アフツズマブ、アラシズマブペゴール（ａｌａｃｉｚｕｍａｂ ｐｅｇｏｌ）、アレムツズマブ（ＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標）、ＭＡＢＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標））、アルツモマブペンテテート（ａｌｔｕｍｏｍａｂ ｐｅｎｔｅｔａｔｅ）（ＨＹＢＲＩ－ＣＥＡＫＥＲ（登録商標））、アナツモマブマフェナトックス（ａｎａｔｕｍｏｍａｂ ｍａｆｅｎａｔｏｘ）、アンルキンズマブ（ＩＭＡ－６３８）、アポリズマブ、アルシツモマブ（ＣＥＡ－ＳＣＡＮ（登録商標））、バビツキシマブ、ベクツモマブ（ＬＹＭＰＨＯＳＣＡＮ（登録商標））、ベリムマブ（ＢＥＮＬＹＳＴＡ（登録商標）、ＬＹＭＰＨＯＳＴＡＴ－Ｂ（登録商標））、ベシレソマブ（ＳＣＩＮＴＩＭＵＮ（登録商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、ビバツズマブメルタンシン、ブリナツモマブ、ブレンツキシマブベドチン、カンツズマブメルタンシン、カプロマブペンデチド（ＰＲＯＳＴＡＳＣＩＮＴ（登録商標））、カツマキソマブ（ＲＥＭＯＶＡＢ（登録商標））、ＣＣ４９、セツキシマブ（Ｃ２２５、ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、シタツズマブボガトックス（ｃｉｔａｔｕｚｕｍａｂ ｂｏｇａｔｏｘ）、シズツムマブ、クリバツズマブテトラキセタン、コナツムマブ、ダセツズマブ、デノスマブ（ＰＲＯＬＩＡ（登録商標））、デツモマブ、エクロメキシマブ、エドレコロマブ（ＰＡＮＯＲＥＸ（登録商標））、エロツズマブ、エピツモマブシツキセタン（ｅｐｉｔｕｍｏｍａｂ ｃｉｔｕｘｅｔａｎ）、エピラツズマブ、エルツマソマブ（ＲＥＸＯＭＵＮ（登録商標））、エタラシズマブ、ファーレツズマブ、フィギツムマブ、フレソリムマブ、ガリキシマブ、ゲムツズマブオゾガミシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標））、ギレンツキシマブ、グレムバツムマブベドチン（ｇｌｅｍｂａｔｕｍｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）、イブリツモマブ（イブリツモマブチウキセタン、ＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標））、イゴボマブ（ＩＮＤＩＭＡＣＩＳ－１２５（登録商標））、インテツムマブ、イノツズマブオゾガミシン、イピリムマブ、イラツムマブ、ラベツズマブ（ＣＥＡ－ＣＩＤＥ（登録商標））、レクサツムマブ、リンツズマブ、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツズマブ、マツズマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ、ミツモマブ、ナコロマブタフェナトックス（ｎａｃｏｌｏｍａｂ ｔａｆｅｎａｔｏｘ）、ナプツモマブエスタフェナトックス（ｎａｐｔｕｍｏｍａｂ ｅｓｔａｆｅｎａｔｏｘ）、ネシツムマブ、ニモツズマブ（ＴＨＥＲＡＣＩＭ（登録商標）、ＴＨＥＲＡＬＯＣ（登録商標））、ノフェツモマブメルペンタン（ＶＥＲＬＵＭＡ（登録商標））、オファツムマブ（ＡＲＺＥＲＲＡ（登録商標））、オララツマブ、オポルツズマブモナトックス（ｏｐｏｒｔｕｚｕｍａｂ ｍｏｎａｔｏｘ）、オレゴボマブ（ＯＶＡＲＥＸ（登録商標））、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））、ペムツモマブ（ＴＨＥＲＡＧＹＮ（登録商標））、ペルツズマブ（ＯＭＮＩＴＡＲＧ（登録商標））、ピンツモマブ、プリツムマブ、ラムシルマブ、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標））、リロツムマブ、リツキシマブ（ＭＡＢＴＨＥＲＡ（登録商標）、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、ロバツムマブ、サツモマブペンデチド、シブロツズマブ、シルツキシマブ、ソンツズマブ、タカツズマブテトラキセタン（ＡＦＰ－ＣＩＤＥ（登録商標））、タプリツモマブパプトクス（ｔａｐｌｉｔｕｍｏｍａｂ ｐａｐｔｏｘ）、テナツモマブ、ＴＧＮ１４１２、チシリムマブ（トレメリムマブ）、チガツズマブ、ＴＮＸ－６５０、トシツモマブ（ＢＥＸＸＡＲ（登録商標））、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、トレメリムマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ベルツズマブ、ボロシキシマブ、ボツムマブ（ＨＵＭＡＳＰＥＣＴ（登録商標））、ザルツムマブ（ＨＵＭＡＸ－ＥＧＦＲ（登録商標））およびザノリムマブ（ＨＵＭＡＸ－ＣＤ４（登録商標））が挙げられる。
他の実施形態では、多特異性分子は、ウイルス性がん治療剤と組み合わせて投与される。例示的ウイルス性がん治療剤として、それだけには限らないが、ワクシニアウイルス（ｖｖＤＤ－ＣＤＳＲ）、麻疹ウイルス、がん胎児性抗原発現性組換えワクシニアウイルス（ＴＫ－欠失およびＧＭ－ＣＳＦ）、セネカバレー（Ｓｅｎｅｃａ Ｖａｌｌｅｙ）ウイルス－００１、ニューカッスル（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ）ウイルス、コクサッキーウイルスＡ２１、ＧＬ－ＯＮＣ１、ＥＢＮＡ１Ｃ末端／ＬＭＰ２キメラタンパク質発現性組換え改変ワクシニアアンカラ（Ａｎｋａｒａ）ワクチン、がん胎児性抗原発現性麻疹ウイルス、Ｇ２０７腫瘍溶解性ウイルス、ｐ５３を発現する改変ワクシニアウイルスアンカラ（Ａｎｋａｒａ）ワクチン、ＯｎｃｏＶＥＸ ＧＭ－ＣＳＦ改変単純ヘルペス１ウイルス、鶏痘ウイルスワクチンベクター、組換えワクシニア前立腺特異的抗原ワクチン、ヒトパピローマウイルス１６／１８ Ｌ１ウイルス様粒子／ＡＳ０４ワクチン、ＭＶＡ－ＥＢＮＡ１／ＬＭＰ２ Ｉｎｊ．ワクチン、四価ＨＰＶワクチン、四価ヒトパピローマウイルス（６、１１、１６、１８型）組換えワクチン（ＧＡＲＤＡＳＩＬ（登録商標））、組換え鶏痘－ＣＥＡ（６Ｄ）／ＴＲＩＣＯＭワクチン；組換えワクシニア－ＣＥＡ（６Ｄ）－ＴＲＩＣＯＭワクチン、組換え改変ワクシニアアンカラ（Ａｎｋａｒａ）－５Ｔ４ワクチン、組換え鶏痘－ＴＲＩＣＯＭワクチン、腫瘍溶解性ヘルペスウイルスＮＶ１０２０、ＨＰＶ Ｌ１ ＶＬＰワクチンＶ５０４、ヒトパピローマウイルス二価（１６および１８型）ワクチン（ＣＥＲＶＡＲＩＸ（登録商標））、単純ヘルペスウイルスＨＦ１０、Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３遺伝子、組換えワクシニアＤＦ３／ＭＵＣ１ワクチン、組換えワクシニア－ＭＵＣ－１ワクチン、組換えワクシニア－ＴＲＩＣＯＭワクチン、ＡＬＶＡＣ ＭＡＲＴ－１ワクチン、ヒトプレプロエンケファリン（ＮＰ２）を発現する複製欠陥型単純ヘルペスウイルスＩ型（ＨＳＶ－１）ベクター、野生型レオウイルス、レオウイルス３型Ｄｅａｒｉｎｇ （ＲＥＯＬＹＳＩＮ（登録商標））、腫瘍溶解性ウイルスＨＳＶ１７１６、エプスタイン－バーウイルス標的抗原をコードする組換え改変ワクシニアアンカラ（Ａｎｋａｒａ）（ＭＶＡ）ベースのワクチン、組換え鶏痘前立腺特異的抗原ワクチン、組換えワクシニア前立腺特異的抗原ワクチン、組換えワクシニア－Ｂ７．１ワクチン、ｒＡｄ－ｐ５３遺伝子、Ａｄ５－デルタ２４ＲＧＤ、ＨＰＶワクチン５８０２９９、ＪＸ－５９４（チミジンキナーゼが欠失されたワクシニアウイルスおよびＧＭ－ＣＳＦ）、ＨＰＶ－１６／１８ Ｌ１／ＡＳ０４、鶏痘ウイルスワクチンベクター、ワクシニア－チロシナーゼワクチン、ＭＥＤＩ－５１７ ＨＰＶ－１６／１８ ＶＬＰ ＡＳ０４ワクチン、単純ヘルペスウイルスＴＫ９９ＵＮのチミジンキナーゼを含有するアデノウイルスベクター、ＨｓｐＥ７、ＦＰ２５３／フルダラビン、ＡＬＶＡＣ（２）黒色腫マルチ抗原治療用ワクチン、ＡＬＶＡＣ－ｈＢ７．１、カナリアポックス－ｈＩＬ－１２黒色腫ワクチン、Ａｄ－ＲＥＩＣ／Ｄｋｋ－３、ｒＡｄ－ＩＦＮ ＳＣＨ ７２１０１５、ＴＩＬ－Ａｄ－ＩＮＦｇ、Ａｄ－ＩＳＦ３５およびコクサッキーウイルスＡ２１（ＣＶＡ２１、ＣＡＶＡＴＡＫ（登録商標））が挙げられる。
他の実施形態では、多特異性分子は、ナノ医薬品と組み合わせて投与される。例示的がんナノ医薬品として、それだけには限らないが、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）（パクリタキセル結合型アルブミンナノ粒子）、ＣＲＬＸ１０１（直線状シクロデキストリンベースのポリマーにコンジュゲートされたＣＰＴ）、ＣＲＬＸ２８８（生分解性ポリマー、乳酸－グリコール酸共重合体にドセタキセルをコンジュゲートしている）、シタラビンリポソーマル（リポソーマルＡｒａ－Ｃ、ＤＥＰＯＣＹＴ（商標））、ダウノルビシンリポソーマル（ＤＡＵＮＯＸＯＭＥ（登録商標））、ドキソルビシンリポソーマル（ドキシル（登録商標）、ＣＡＥＬＹＸ（登録商標））、カプセル化されたダウノルビシンシトレートリポソーム（ＤＡＵＮＯＸＯＭＥ（登録商標））およびＰＥＧ抗ＶＥＧＦアプタマー（ＭＡＣＵＧＥＮ（登録商標））が挙げられる。
一部の実施形態では、多特異性分子は、パクリタキセルまたはパクリタキセル製剤、例えば、タキソール（登録商標）、タンパク質結合型パクリタキセル（例えば、アブラキサン（登録商標））と組み合わせて投与される。例示的パクリタキセル製剤として、それだけには限らないが、ナノ粒子アルブミン結合型パクリタキセル（ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）、Ａｂｒａｘｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅによって市販されている）、ドコサヘキサエン酸結合型パクリタキセル（ＤＨＡ－パクリタキセル、タキソプレキシン、Ｐｒｏｔａｒｇａによって市販されている）、ポリグルタミン酸結合型パクリタキセル（ＰＧ－パクリタキセル、パクリタキセルポリグルメックス、ＣＴ－２１０３、ＸＹＯＴＡＸ、Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃによって市販されている）、腫瘍によって活性化されるプロドラッグ（ＴＡＰ）、ＡＮＧ１０５（３分子のパクリタキセルに結合されたアンギオペプ（Ａｎｇｉｏｐｅｐ）－２、ＩｍｍｕｎｏＧｅｎによって市販されている）、パクリタキセル－ＥＣ－１（ｅｒｂＢ２を認識するペプチドＥＣ－１に結合されたパクリタキセル；Ｌｉら、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ （２００７年）８７巻：２２５～２３０頁を参照されたい）およびグルコースがコンジュゲートされたパクリタキセル（例えば、２’－パクリタキセルメチル２－グルコピラノシルスクシネート、Ｌｉｕら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ （２００７年） １７巻：６１７～６２０頁を参照されたい）が挙げられる。
がんを処置するための例示的ＲＮＡｉおよびアンチセンスＲＮＡ剤として、それだけには限らないが、ＣＡＬＡＡ－０１、ｓｉＧ１２Ｄ ＬＯＤＥＲ（Ｌｏｃａｌ Ｄｒｕｇ ＥｌｕｔｅＲ）およびＡＬＮ－ＶＳＰ０２が挙げられる。
他のがん治療剤として、それだけには限らないが、サイトカイン（例えば、アルデスロイキン（ＩＬ－２、インターロイキン－２、ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標））、アルファインターフェロン（ＩＦＮ－アルファ、インターフェロンアルファ、イントロン（登録商標）Ａ（インターフェロンアルファ－２ｂ）、ＲＯＦＥＲＯＮ－Ａ（登録商標）（インターフェロンアルファ－２ａ））、エポエチンアルファ（ＰＲＯＣＲＩＴ（登録商標））、フィルグラスチム（Ｇ－ＣＳＦ、顆粒細胞－コロニー刺激因子、ＮＥＵＰＯＧＥＮ（登録商標））、ＧＭ－ＣＳＦ（顆粒細胞マクロファージコロニー刺激因子、サルグラモスチム、ＬＥＵＫＩＮＥ（商標））、ＩＬ－１１（インターロイキン－１１、オプレルベキン、ＮＥＵＭＥＧＡ（登録商標））、インターフェロンアルファ－２ｂ（ＰＥＧコンジュゲート）（ＰＥＧインターフェロン、ＰＥＧ－イントロン（商標））およびペグフィルグラスチム（ＮＥＵＬＡＳＴＡ（商標）））、ホルモン療法剤（例えば、アミノグルテチミド（ＣＹＴＡＤＲＥＮ（登録商標））、アナストロゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標））、ビカルタミド（ＣＡＳＯＤＥＸ（登録商標））、エキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標））、フルオキシメステロン（ＨＡＬＯＴＥＳＴＩＮ（登録商標））、フルタミド（ＥＵＬＥＸＩＮ（登録商標））、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標））、ゴセレリン（ＺＯＬＡＤＥＸ（登録商標））、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標））、リュープロリド（ＥＬＩＧＡＲＤ（商標）、ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（登録商標）、ＶＩＡＤＵＲ（商標））、メゲストロール（酢酸メゲストロール、ＭＥＧＡＣＥ（登録商標））、ニルタミド（ＡＮＡＮＤＲＯＮ（登録商標）、ＮＩＬＡＮＤＲＯＮ（登録商標））、オクトレオチド（酢酸オクトレオチド、ＳＡＮＤＯＳＴＡＴＩＮ（登録商標）、ＳＡＮＤＯＳＴＡＴＩＮ ＬＡＲ（登録商標））、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ（登録商標））、ロミプロスチム（ＮＰＬＡＴＥ（登録商標））、タモキシフェン（ＮＯＶＡＬＤＥＸ（登録商標））およびトレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）））、ホスホリパーゼＡ２阻害剤（例えば、アナグレリド（ＡＧＲＹＬＩＮ（登録商標）））、生物学的応答モディファイヤー（例えば、ＢＣＧ（ＴＨＥＲＡＣＹＳ（登録商標）、ＴＩＣＥ（登録商標））およびダルベポエチンアルファ（ＡＲＡＮＥＳＰ（登録商標）））、標的療法剤（例えば、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））、ダサチニブ（ＳＰＲＹＣＥＬ（商標））、デニロイキンジフチトクス（ＯＮＴＡＫ（登録商標））、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標））、エベロリムス（ＡＦＩＮＩＴＯＲ（登録商標））、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標））、メシル酸イマチニブ（ＳＴＩ－５７１、ＧＬＥＥＶＥＣ（商標））、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標））、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標））およびＳＵ１１２４８（スニチニブ、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）））、免疫調節性および抗血管新生剤（例えば、ＣＣ－５０１３（レナリドミド、ＲＥＶＬＩＭＩＤ（登録商標））およびサリドマイド（ＴＨＡＬＯＭＩＤ（登録商標）））、糖質コルチコステロイド（例えば、コルチゾン（ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンリン酸ナトリウム、ヒドロコルチゾンコハク酸ナトリウム、ＡＬＡ－ＣＯＲＴ（登録商標）、ＨＹＤＲＯＣＯＲＴ ＡＣＥＴＡＴＥ（登録商標）、ヒドロコルトンホスフェートＬＡＮＡＣＯＲＴ（登録商標）、ＳＯＬＵ－ＣＯＲＴＥＦ（登録商標））、デカドロン（デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、デキサメタゾンリン酸ナトリウム、ＤＥＸＡＳＯＮＥ（登録商標）、ＤＩＯＤＥＸ（登録商標）、ＨＥＸＡＤＲＯＬ（登録商標）、ＭＡＸＩＤＥＸ（登録商標））、メチルプレドニゾロン（６－メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロンコハク酸ナトリウム、ＤＵＲＡＬＯＮＥ（登録商標）、ＭＥＤＲＡＬＯＮＥ（登録商標）、ＭＥＤＲＯＬ（登録商標）、Ｍ－ＰＲＥＤＮＩＳＯＬ（登録商標）、ＳＯＬＵ－ＭＥＤＲＯＬ（登録商標））、プレドニゾロン（ＤＥＬＴＡ－ＣＯＲＴＥＦ（登録商標）、ＯＲＡＰＲＥＤ（登録商標）、ＰＥＤＩＡＰＲＥＤ（登録商標）、ＰＲＥＬＯＮＥ（登録商標））およびプレドニゾン（ＤＥＬＴＡＳＯＮＥ（登録商標）、ＬＩＱＵＩＤ ＰＲＥＤ（登録商標）、ＭＥＴＩＣＯＲＴＥＮ（登録商標）、ＯＲＡＳＯＮＥ（登録商標）））およびビスホスホネート（例えば、パミドロネート（ＡＲＥＤＥＡ（登録商標））およびゾレドロン酸（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標）））が挙げられる。
一部の実施形態では、多特異性分子は、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）阻害剤）と組み合わせて使用される。例示的チロシンキナーゼ阻害剤として、それだけには限らないが、上皮成長因子（ＥＧＦ）経路阻害剤（例えば、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤）、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）経路阻害剤（例えば、ＶＥＧＦに対する抗体、ＶＥＧＦトラップ、血管内皮細胞増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、ＶＥＧＦＲ－１阻害剤、ＶＥＧＦＲ－２阻害剤、ＶＥＧＦＲ－３阻害剤））、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）経路阻害剤（例えば、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）阻害剤（例えば、ＰＤＧＦＲ－β阻害剤））、ＲＡＦ－１阻害剤、ＫＩＴ阻害剤およびＲＥＴ阻害剤が挙げられる。一部の実施形態では、多特異性分子と組み合わせて使用される抗がん剤は、以下からなる群から選択される：アキシチニブ（ＡＧ０１３７３６）、ボスチニブ（ＳＫＩ－６０６）、セジラニブ（ＲＥＣＥＮＴＩＮ（商標）、ＡＺＤ２１７１）、ダサチニブ（ＳＰＲＹＣＥＬ（登録商標）、ＢＭＳ－３５４８２５）、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標））、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標））、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）、ＣＧＰ５７１４８Ｂ、ＳＴＩ－５７１）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＴＹＶＥＲＢ（登録商標））、レスタウルチニブ（ＣＥＰ－７０１）、ネラチニブ（ＨＫＩ－２７２）、ニロチニブ（ＴＡＳＩＧＮＡ（登録商標））、セマキサニブ（セマキサニブ、ＳＵ５４１６）、スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、ＳＵ１１２４８）、トセラニブ（ＰＡＬＬＡＤＩＡ（登録商標））、バンデタニブ（ＺＡＣＴＩＭＡ（登録商標）、ＺＤ６４７４）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７、ＰＴＫ／ＺＫ）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、リツキシマブ（ＲＩＵＸＡＮ（登録商標））、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、ニロチニブ（ＴＡＳＩＧＮＡ（登録商標））、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標））、アレムツズマブ（ＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標））、ゲムツズマブオゾガミシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標））、ＥＮＭＤ－２０７６、ＰＣＩ－３２７６５、ＡＣ２２０、乳酸ドビチニブ（ＴＫＩ２５８、ＣＨＩＲ－２５８）、ＢＩＢＷ ２９９２（ＴＯＶＯＫ（商標））、ＳＧＸ５２３、ＰＦ－０４２１７９０３、ＰＦ－０２３４１０６６、ＰＦ－２９９８０４、ＢＭＳ－７７７６０７、ＡＢＴ－８６９、ＭＰ４７０、ＢＩＢＦ １１２０（ＶＡＲＧＡＴＥＦ（登録商標））、ＡＰ２４５３４、ＪＮＪ－２６４８３３２７、ＭＧＣＤ２６５、ＤＣＣ－２０３６、ＢＭＳ－６９０１５４、ＣＥＰ－１１９８１、チボザニブ（ＡＶ－９５１）、ＯＳＩ－９３０、ＭＭ－１２１、ＸＬ－１８４、ＸＬ－６４７、ＸＬ２２８、ＡＥＥ７８８、ＡＧ－４９０、ＡＳＴ－６、ＢＭＳ－５９９６２６、ＣＵＤＣ－１０１、ＰＤ１５３０３５、ペリチニブ（ＥＫＢ－５６９）、バンデタニブ（ｚａｃｔｉｍａ）、ＷＺ３１４６、ＷＺ４００２、ＷＺ８０４０、ＡＢＴ－８６９（リニファニブ）、ＡＥＥ７８８、ＡＰ２４５３４（ポナチニブ）、ＡＶ－９５１（チボザニブ）、アキシチニブ、ＢＡＹ ７３－４５０６（レゴラフェニブ）、ブリバニブアラニネート（ｂｒｉｖａｎｉｂ ａｌａｎｉｎａｔｅ）（ＢＭＳ－５８２６６４）、ブリバニブ（ＢＭＳ－５４０２１５）、セジラニブ（ＡＺＤ２１７１）、ＣＨＩＲ－２５８（ドビチニブ）、ＣＰ ６７３４５１、ＣＹＣ１１６、Ｅ７０８０、Ｋｉ８７５１、マシチニブ（ＡＢ１０１０）、ＭＧＣＤ－２６５、モテサニブ二リン酸（ＡＭＧ－７０６）、ＭＰ－４７０、ＯＳＩ－９３０、塩酸パゾパニブ、ＰＤ１７３０７４、トシル酸ｎソラフェニブ（Ｂａｙ ４３－９００６）、ＳＵ ５４０２、ＴＳＵ－６８（ＳＵ６６６８）、バタラニブ、ＸＬ８８０（ＧＳＫ１３６３０８９、ＥＸＥＬ－２８８０）。選択されるチロシンキナーゼ阻害剤は、スニチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブまたはソラフェニブから選択される。一実施形態では、チロシンキナーゼ阻害剤は、スニチニブである。
一実施形態では、多特異性分子は、抗血管新生剤または血管標的化薬剤または血管破壊剤のうち１つまたは複数と組み合わせて投与される。例示的抗血管新生剤として、それだけには限らないが、中でも、ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、ベバシズマブ）、ＶＥＧＦ受容体阻害剤（例えば、イトラコナゾール）、細胞増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎ）および／または内皮細胞の遊走の阻害剤（例えば、カルボキシアミドトリアゾール、ＴＮＰ－４７０）、血管新生刺激物質の阻害剤（例えば、スラミン）が挙げられる。血管標的化薬剤（ＶＴＡ）または血管破壊剤（ＶＤＡ）は、がん腫瘍の脈管構造（血管）に損傷を与え、中心壊死を引き起こすように設計される（例えば、Ｔｈｏｒｐｅ， Ｐ．Ｅ．（２００４年） Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． １０巻：４１５～４２７頁に概説される）。ＶＴＡは、小分子であり得る。例示的小分子ＶＴＡとして、それだけには限らないが、微小管不安定化薬（例えば、コンブレタスタチンＡ－４リン酸二ナトリウム（ＣＡ４Ｐ）、ＺＤ６１２６、ＡＶＥ８０６２、Ｏｘｉ ４５０３）およびバジメザン（ＡＳＡ４０４）が挙げられる。
免疫チェックポイント阻害剤
他の実施形態では、本明細書において記載される方法は、多特異性分子と組み合わせた免疫チェックポイント阻害剤の使用を含む。方法は、ｉｎ ｖｉｖｏで治療プロトコールにおいて使用され得る。
実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、チェックポイント分子を阻害する。例示的チェックポイント分子として、それだけには限らないが、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０）、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１およびＡ２ａＲが挙げられる。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｐａｒｄｏｌｌ． Ｎａｔ． Ｒｅｖ． Ｃａｎｃｅｒ １２．４（２０１２年）：２５２～６４頁を参照されたい。
実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤、例えば、抗ＰＤ－１抗体、例えば、ニボルマブ、ペムブロリズマブまたはピディリズマブである。ニボルマブ（ＭＤＸ－１１０６、ＭＤＸ－１１０６－０４、ＯＮＯ－４５３８またはＢＭＳ－９３６５５８とも呼ばれる）は、ＰＤ１を特異的に阻害する完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。例えば、ＵＳ８，００８，４４９およびＷＯ２００６／１２１１６８を参照されたい。ペムブロリズマブ（ランブロリズマブ、ＭＫ－３４７５、ＭＫ０３４７５、ＳＣＨ－９００４７５またはキイトルーダ（登録商標）とも呼ばれる；Ｍｅｒｃｋ）は、ＰＤ－１に結合するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体である。例えば、Ｈａｍｉｄ， Ｏ．ら（２０１３年） Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３６９巻（２号）：１３４～４４頁、ＵＳ８，３５４，５０９およびＷＯ２００９／１１４３３５を参照されたい。ピディリズマブ（ＣＴ－０１１またはＣｕｒｅ Ｔｅｃｈともよばれる）は、ＰＤ１に結合するヒト化ＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体である。例えば、ＷＯ２００９／１０１６１１を参照されたい。一実施形態では、ＰＤ－１の阻害剤は、それと実質的に同一または同様の配列、例えば、ニボルマブ、ペムブロリズマブまたはピディリズマブの配列と少なくとも８５％、９０％、９５％同一である、またはそれより高い配列を有する抗体分子である。さらなる抗ＰＤ１抗体、例えば、ＡＭＰ５１４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）は、例えば、ＵＳ８，６０９，０８９、ＵＳ２０１００２８３３０および／またはＵＳ２０１２０１１４６４９に記載されている。
一部の実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、イムノアドヘシン、例えば、定常領域（例えば、重鎖のＦｃ領域）に融合されているＰＤ－１リガンド（例えば、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２）の細胞外／ＰＤ－１結合部分を含むイムノアドヘシンである。実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ＡＭＰ－２２４（例えば、ＷＯ２０１１／０６６３４２およびＷＯ２０１０／０２７８２７に記載されるＢ７－ＤＣＩｇ）であり、Ｂ７－Ｈ１とＰＤ－１の間の相互作用を遮断するＰＤ－Ｌ２ Ｆｃ融合可溶性受容体である。
実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、例えば、抗体分子である。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ－４７３６、ＭＳＢ－００１０７１８ＣまたはＭＤＸ－１１０５である。一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（Ａ０９－２４６－２とも呼ばれる；Ｍｅｒｃｋ Ｓｅｒｏｎｏ）であり、ＰＤ－Ｌ１に結合するモノクローナル抗体である。例示的ヒト化抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、例えば、ＷＯ２０１３／０７９１７４に記載されている。一実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、例えば、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０抗体は、例えば、ＷＯ２０１０／０７７６３４に記載されている。一実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ＭＤＸ－１１０５（ＢＭＳ－９３６５５９とも呼ばれる）であり、例えば、ＷＯ２００７／００５８７４に記載されている。一実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ＭＤＰＬ３２８０Ａ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）であり、ＰＤ－Ｌ１に対するヒトＦｃ最適化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。例えば、米国特許第７，９４３，７４３号および米国特許公開第２０１２００３９９０６号を参照されたい。一実施形態では、ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、それと実質的に同一のまたは同様の配列、例えば、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ－４７３６、ＭＳＢ－００１０７１８ＣまたはＭＤＸ－１１０５の配列と少なくとも８５％、９０％、９５％同一の、またはそれよりも高い配列を有する抗体分子である。
実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－Ｌ２阻害剤、例えば、ＡＭＰ－２２４（ＰＤ１とＢ７－Ｈ１の間の相互作用を遮断するＰＤ－Ｌ２ Ｆｃ融合可溶性受容体である）である。例えば、ＷＯ２０１０／０２７８２７およびＷＯ２０１１／０６６３４２を参照されたい。
一実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ－３阻害剤、例えば、抗ＬＡＧ－３抗体分子である。実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体は、ＢＭＳ－９８６０１６（ＢＭＳ９８６０１６とも呼ばれる；Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）である。ＢＭＳ－９８６０１６および他のヒト化抗ＬＡＧ－３抗体は、例えば、ＵＳ２０１１／０１５０８９２、ＷＯ２０１０／０１９５７０およびＷＯ２０１４／００８２１８に記載されている。
実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ－３阻害剤、例えば、抗ＴＩＭ３抗体分子であり、例えば、米国特許第８，５５２，１５６号、ＷＯ２０１１／１５５６０７、ＥＰ２５８１１１３および米国特許公開第２０１４／０４４７２８号に記載されている。
実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４阻害剤、例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体分子である。例示的抗ＣＴＬＡ４抗体として、トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ製のＩｇＧ２モノクローナル抗体、以前は、チシリムマブ、ＣＰ－６７５，２０６としても知られている）およびイピリムマブ（ＭＤＸ－０１０、ＣＡＳ番号４７７２０２－００－９とも呼ばれる）が挙げられる。他の例示的抗ＣＴＬＡ－４抗体は、例えば、米国特許第５，８１１，０９７号に記載されている。
以下の実施例は、例証的であることが意図され、決して限定することを意味するものではない。
実施例１
多数のαＣＣＲ２／αＣＳＦ１Ｒ二特異性抗体分子の生成
１．プラスミドの構築。
タンパク質配列をコードするＤＮＡを、Ｃｒｉｃｅｔｕｌｕｓ ｇｒｉｓｅｕｓでの発現に最適化し、合成し、Ｇａｔｅｗａｙクローニングを使用してｐｃＤＮＡ３．４－ＴＯＰＯ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ａ１４６９７）にクローニングした。すべての構築物は、Ｉｇカッパリーダー配列（ＡＴＧＧＡＡＡＣＣＧＡＣＡＣＡＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＧＧＴＧＣＴＧＣＴＣＴＴＧＴＧＧＧＴＧＣＣＡＧＧＡＴＣＴＡＣＡＧＧＡ（配列番号１１５）、ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ（配列番号１１６））を含有した。使用した核酸配列は表１で示される。
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２．発現および精製。
プラスミドをＥｘｐｉ２９３細胞（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ａ１４５２７）またはＥｘｐｉＣＨＯ細胞（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ａ２９１２７）のいずれかに同時トランスフェクトした。トランスフェクションは、１：１のノブ対ホール重鎖比および３：２の軽鎖対重鎖比を有する多特異性構築物のために１ｍｇの総ＤＮＡを使用して実施した。ビオチン化が必要とされた場合、多特異性構築物ＤＮＡに加えて１リットル当たり２５０μｇのＢｉｒＡを添加した。Ｅｘｐｉ２９３細胞におけるトランスフェクションは、２５，０００Ｄａの直鎖状ポリエチレンイミン（ＰＥＩ、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ ２３９６６）を総ＤＮＡと３：１の比で使用して行った。ＤＮＡおよびＰＥＩを各々５０ｍＬのＯｐｔｉＭｅｍ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ３１９８５０８８）培地に添加し、滅菌濾過した。ＤＮＡおよびＰＥＩを１０分間組み合わせ、１．８～２．８×１０６細胞／ｍＬの細胞密度および少なくとも９５％の生存率のＥｘｐｉ２９３細胞に添加した。ＥｘｐｉＣＨＯトランスフェクションは、製造業者の使用説明書に従って実施した。Ｅｘｐｉ２９３細胞は、トランスフェクション後、３７℃、８％ＣＯ２の加湿インキュベーター中で５～７日間成長させ、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞は、３２℃、５％ＣＯ２で１４日間成長させた。細胞を４５００×ｇの遠心分離によってペレット化し、上清を０．２μｍ膜により濾過した。プロテインＡ樹脂（ＧＥ １７－１２７９－０３）を、濾過した上清に添加し、室温で１～３時間インキュベートした。樹脂をカラムに詰め、３×１０カラム容量のダルベッコリン酸緩衝食塩水（ＤＰＢＳ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １４１９０－１４４）を用いて洗浄した。結合タンパク質を、２０ｍＭクエン酸塩、１００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ２．９を用いてカラムから溶出した。必要な場合、タンパク質を、泳動用緩衝液としてＤＰＢＳを含むＳｕｐｅｒｄｅｘ２００カラムでのリガンド親和性および／またはサイズ排除クロマトグラフィーを使用してさらに精製した。
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実施例２
ｍＣＣＲ２のみ、ｍＣＳＦ１Ｒのみ、またはｍＣＣＲ２およびｍＣＳＦ１Ｒの両方を発現する細胞へのＵｎｉＴＩ－０１結合
本実施例および次の少数の実施例では、表７で示される多特異性分子＃１（ＵｎｉＴＩ－０１とも称される）を特徴付けた。ＵｎｉＴＩ－０１は抗ＣＣＲ２／抗ＣＳＦ１Ｒ二特異性抗体である。ＵｎｉＴＩ－０１の可変領域および全長配列もまた表１１で提供される。少数の実施例では、二特異性抗体ＵｎｉＴＩ－０１を、抗ＣＣＲ２二価単一特異性抗体または抗ＣＳＦ１Ｒ二価単一特異性抗体に対して比較した。
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ＥｘｐｉＣＨＯ細胞にマウスＣＣＲ２、マウスＣＳＦ１Ｒ、またはマウスＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒの両方を、製造業者の使用説明書に従って一過性にトランスフェクトした。簡潔に説明すると、トランスフェクションを、５．６～６．３×１０６細胞／ｍＬの細胞密度および少なくとも９５％生存率のＥｘｐｉＣＨＯ細胞を用いて実施した。各トランスフェクションに関して、２５μｇのＤＮＡを、１ｍＬのＯｐｔｉＰｒｏ ＳＦＭ（Ｇｉｂｃｏ １２３０９０５０）を用いて希釈し、ｓｐｉｎ－Ｘ遠心管フィルター（Ｃｏｒｎｉｎｇ ８１６０）を使用して濾過した。９２０μＬのＯｐｔｉＰｒｏおよび８０μＬのエクスピフェクタミン（ｅｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅ）の溶液を、濾過したＤＮＡに添加し、室温で１分間インキュベートし、次いで細胞に添加した。トランスフェクションの１日目に、細胞を、１５０μＬのＥｘｐｉＣＨＯエンハンサーを使用して増強した。
トランスフェクションの２日目に、細胞を、１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ）を含有するＰＢＳを用いて洗浄し、１００，０００細胞／ウェルを含む９６ウェルＶ底プレート（Ｂｉｏｔｉｘ ＡＰ－０３５０－９ＣＶＳ）を用意するために使用した。ＵｎｉＴＩ－０１を段階希釈にて細胞に添加し、４℃で１時間インキュベートした。プレートを、１％ＢＳＡを含有するＰＢＳを用いて２回洗浄した。二次抗体は、１：５００の希釈率のヤギ抗マウスＦｃビオチン抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号３１８０５）であり、これを細胞と共に４℃で４５分間インキュベートした。プレートを、１％ＢＳＡを含有するＰＢＳを用いて２回洗浄した。検出のために、ウェル１つ当たり１．５６×１０－３μｇのストレプトアビジン－ＰＥ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅカタログ番号１２－４３１７－８７）を使用し、４℃で１時間インキュベートした。プレートをＣｙｔｏＦＬＥＸ Ｓ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）上で読み取った。データを、ＰＥ陽性集団の蛍光強度中央値対ＰＥ陰性集団の蛍光強度中央値として算出した。データを、総蛍光強度中央値のパーセントに関して正規化した。
理論に拘束されることを望むものではないが、ＵｎｉＴＩ－０１は、ＣＣＲ２またはＣＳＦ１Ｒのいずれかを発現する細胞と比較して、ＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒの両方を発現する細胞と優先的に結合し得る。二重標的結合がＵｎｉＴＩ－０１の標的細胞に関するアビディティを増大するという仮説と一致して、ＵｎｉＴＩ－０１は、単一陽性細胞と比較して、ＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒ二重陽性細胞への向上した結合を呈した（図１）。ＵｎｉＴＩ－０１は、ＣＣＲ２のみを発現する細胞に対して１５ｎＭのＥＣ５０の結合を示した。ＣＳＦ１Ｒのみを発現する細胞に関して、ＵｎｉＴＩ－０１は１ｎＭのＥＣ５０を有した。ＵｎｉＴＩ－０１は、ＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒの両方を発現した細胞に対して４００ｐＭのＥＣ５０を示した。
実施例３
ＵｎｉＴＩ－０１はｉｎ ｖｉｔｒｏで骨髄系由来単球のＭＣＰ１誘導遊走を阻害する
マウス骨髄系細胞を健康なＢａｌｂ／ｃマウスの大腿骨から単離し、ｍＣＳＦ１の存在下で４日間単球に分化させた。単球分化を、造血細胞上でのＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒ発現のフローサイトメトリーによる分析によって評価した。分化細胞を計数し、それぞれ、異なる濃度のアイソタイプ（ｍＩｇＧ２ａ）、抗ＣＣＲ２およびＵｎｉＴＩ－０１を用いて３７℃で３０分間培養した。その後、抗体処理細胞を、下部チャンバーにＭＣＰ１（ＣＣＬ２）を含有するトランズウェル挿入プレートの上部チャンバーに添加した。ＭＣＰ１誘導遊走を、トランズウェルプレートの下部チャンバーから培地を収集した後に評価し、細胞数の計算をフローサイトメトリーによる分析によって実施した。
抗ＣＣＲ２／抗ＣＳＦ１Ｒ二特異性抗体ＵｎｉＴＩ－０１は、トランズウェルにわたる単球のＭＣＰ１誘導遊走を用量依存的に阻害した（図２）。３．７μＭおよびそれよりも多い用量では、単球遊走は、ケモカインの非存在下で観察されたレベルまで低減した（図２）。類似した結果が抗ＣＣＲ２抗体処理の場合に取得されたが、ＩｇＧ２ａを用いた細胞の処理は遊走に影響を及ぼさなかった（図２）。
実施例４
ＵｎｉＴＩ－０１はｉｎ ｖｉｔｒｏで骨髄系由来マクロファージのｍＣＳＦ－１依存増殖を阻害する
マウス骨髄系細胞を健康なＢａｌｂ／ｃマウスの大腿骨から単離し、ｍＣＳＦ１の存在下で４日間単球に分化させた。フローサイトメトリー分析は、骨髄系細胞が０日目にＣＣＲ２を明らかには発現しなかったことを示した（図３Ａ；左のパネル）。しかしながら、ｍＣＳＦ１の存在下での細胞培養の４日後、著しい部分の骨髄系細胞が、ＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒ発現を示す単球に分化した（図３Ａ；右のパネル）。単球を計数し、ｍＣＳＦ１の存在下で９６ウェルプレートにプレーティングした。ＵｎｉＴＩ－０１、抗ＣＳＦ１ＲまたはｍＩｇＧ２ａ抗体を、ｍＣＳＦ１を含有する細胞に添加した。３７℃でのインキュベーションの７２時間後、細胞増殖代謝活性を、ＭＴＴアッセイキットのための製造業者のプロトコールに従って、ＯＤ５７０での比色読取りによって評価した。
ｍＣＳＦ１は、顕微鏡下で長い線維芽細胞として可視化される、単球のマクロファージへの分化を誘導した。ＵｎｉＴＩ－０１および抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ｍＣＳＦ１の存在下でマクロファージの増殖を妨げた（図３Ｂ）。
実施例５
ＵｎｉＴＩ－０１はｉｎ ｖｉｔｒｏでｍＣＳＦ－１依存骨髄系由来単球分化を阻害しない
骨髄系細胞をナイーブ（非腫瘍保有）Ｂａｌｂ／ｃマウスの大腿骨および脛骨の両方から摘出した。ＵｎｉＴＩ－０１、抗ＣＳＦ１ＲまたはｍＩｇＧ２抗体を、新たに単離した骨髄系細胞と共に３７℃で３０分間プレインキュベートした後に、ｍＣＳＦ－１の添加を行い、単球分化を可能にした。３７℃でのインキュベーションの４日後、細胞を、分化単球を同定するフローサイトメトリー染色のために収集した。細胞を、蛍光標識抗体を用いて４℃で１５分間染色し、続いてフローサイトメトリー分析を行った。単球を、生細胞、ＣＤ４５＋細胞、ＣＤ１１ｂ＋細胞、Ｌｙ６Ｃ＋細胞、Ｌｙ６Ｇ－細胞としてゲーティングする。
骨髄系前駆細胞は０日目にＣＣＲ２を有意には発現しなかったという観察（図３Ａ）と一致して、抗ＣＣＲ２／抗ＣＳＦ１Ｒ二特異性抗体ＵｎｉＴＩ－０１は、細胞培養の４日後、ｉｎ ｖｉｔｒｏでｍＣＳＦ－１依存骨髄系由来単球分化を阻害しなかった（図４）。対照的に、抗ＣＳＦ１Ｒ二価単一特異性抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでｍＣＳＦ－１依存骨髄系由来単球分化を有意に阻害した（図４）。
実施例６
ＵｎｉＴＩ－０１はｉｎ ｖｉｔｒｏで初代腫瘍内Ｍ－ＭＤＳＣおよびＭ２様マクロファージに特異的に結合する
Ｂ６アルビノマウスにおいて成長させたＬＬＣ腫瘍を、５００～８００ｍｍ３の体積で回収し、リベラーゼＤＬ＋Ｄｎａｓｅ Ｉを３７℃で３０分間、続いて解離プログラムｍ＿ｉｍｐｔｕｍｏｒ＿０１をＧｅｎｔｌｅＭａｃｓ上で使用して解離させた。単一細胞懸濁液を７０μｍ濾過器により濾過し、総細胞を、蛍光標識した抗体を用いて染色した。この結合研究のために、１００μｇのＵｎｉＴＩ－０１を、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ６４７抗体標識キット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して標識し、標識した抗体の濃度をＮａｎｏｄｒｏｐによって決定し、示された段階希釈液（５ｕＭ、１ｕＭ、０．１ｕＭ、０．０１ｕＭ）をＦａｃｓ緩衝液中で作製した。Ｍ－ＭＤＳＣを、生ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６ＣｈｉｇｈＬｙ６Ｇ－によってゲーティングし、Ｍ２マクロファージを、生ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋Ｆ４／８０＋ＣＤ２０６＋によってゲーティングし、ＣＤ３＋Ｔ細胞を、生ＣＤ４５＋ＣＤ３＋によってゲーティングし、好中球を、生ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ＋によってゲーティングした。細胞を氷上、暗所で１５分間染色し、生存率のためにｚｏｍｂｉｅ ｖｉｏｌｅｔを用いて染色し、サイトメーター上で直ちに捉えた。
ＵｎｉＴＩ－０１のＭ２マクロファージおよびＭ－ＭＤＳＣへの濃度依存結合は図５で示される。
実施例７
ＵｎｉＴＩ－０１はｉｎ ｖｉｖｏでいくつかのマウスモデルにおける抑制性骨髄性細胞を枯渇させる
マウスにＭＣ３８結腸がん細胞系（Ｂ６アルビノマウス）またはＥＭＴ６乳がん細胞系（ＢＡＬＢ／ｃマウス）のいずれかを注射し、腫瘍が１５０～２００ｍｍ３の体積に達したら、同種マウスを無作為化して２つの群に群分けした。一方の群は、１、４、７および１０日目にｉｐ経路を介して２０ｍｇ／ｋｇの用量の２０ｍｇ／ｋｇ ＵｎｉＴＩ－０１の処置を受け、他方は、同じ予定でＰＢＳ（ビヒクル）を受けた。４回目の用量の２４時間後、腫瘍をフローサイトメトリー分析のために回収した。腫瘍を約２ｍｍ片に細断し、リベラーゼ＋ｄｎａｓｅ Ｉを３７℃で３０分間用い、続いて１分間腫瘍混和プログラムをｇｅｎｔｌｅＭＡＣｓ上で使用して解離させた。単一細胞懸濁液を、７０μＭフィルターにより濾過することによって作製し、計数した。次いで、細胞をフローサイトメトリー分析のために染色した。ＴＡＭを、生ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ－Ｌｙ６Ｃ－Ｆ４／８０＋によってゲーティングし、Ｍ－ＭＤＳＣを、生ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ－Ｌｙ６Ｃｈｉｇｈによってゲーティングした。各点は単一のマウスを表す。エラーバーは個々のマウスの平均および標準誤差を表す。統計量を、スチューデントのｔ検定を使用して算出した。
実施例６で観察されたＭ２マクロファージおよびＭ－ＭＤＳＣへの結合と一致して、抗ＣＣＲ２／抗ＣＳＦ１Ｒ二特異性抗体ＵｎｉＴＩ－０１は、ＥＭＴ６同系腫瘍モデルおよびＭＣ３８同系腫瘍モデルの両方においてＴＡＭおよびＭ－ＭＤＳＣを低減した（図６）。
実施例８
ＵｎｉＴＩ－０１は腫瘍関連マクロファージを枯渇させるが、健康な組織マクロファージを存続させる
Ｂａｌｂ／ｃマウスにＥＭＴ６同系乳房細胞系を注射し、腫瘍が１５０～２００ｍｍ３の体積に達したら、無作為化して３つの群に群分けした。１、４、７および１０日目に、１つの群はｉｐ経路を介して２０ｍｇ／ｋｇの用量の２０ｍｇ／ｋｇ ＵｎｉＴＩ－０１の処置を受け、第２の群は１０ｍｇ／ｋｇ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の処置を受け、第３の群はＰＢＳを受けた。４回目の用量の２４時間後、マウスを屠殺し、腫瘍および肝臓を回収してホルマリン固定パラフィン包埋した。肝臓および腫瘍におけるマクロファージ集団を検出するために、組織切片を、Ｆ４／８０抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を用いて免疫組織化学染色し、Ｅｎｖｉｓｉｏｎシステムによって検出した。腫瘍または肝臓切片１つ当たりおよそ１０の目的の領域をＩｍａｇｅＪソフトウェアによって分析した。
理論に拘束されることを望むものではないが、ＵｎｉＴＩ－０１は、ＣＣＲ２またはＣＳＦ１Ｒのいずれかを発現する細胞と比較して、ＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒの両方を発現する細胞に優先的に結合し得、かつＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒの両方を発現する腫瘍関連マクロファージと比較して、ＣＣＲ２を発現しない組織常在性マクロファージ、例えば肝臓常在性クッパー細胞に対してより小さい効果を有し得る。
前述のデータ（図６）と一致して、抗ＣＣＲ２／抗ＣＳＦ１Ｒ二特異性抗体ＵｎｉＴＩ－０１は、腫瘍関連マクロファージを顕著に枯渇させた（図７Ａおよび７Ｃ）。対照的に、ＵｎｉＴＩ－０１は肝臓において組織常在性マクロファージを明らかには枯渇させなかったが（図７Ｂおよび７Ｄ）、抗ＣＳＦ１Ｒ二価単一特異性抗体は両方の区画においてマクロファージを有意に低減した（図７Ａ～７Ｄ）。
追加のデータは、抗ＣＳＦ１Ｒ二価単一特異性抗体と比較して、ＵｎｉＴＩ－０１は小腸（図７Ｅおよび７Ｆ）ならびに腎臓（図７Ｇおよび７Ｈ）においても健康な組織マクロファージを存続させることを示す。
実施例９
ＵｎｉＴＩ－０１はｉｎ ｖｉｔｒｏでＣＣＲ２陰性ＮＦＳ－６０細胞におけるＣＳＦ－１依存細胞生存を阻害しない
ＣＣＲ２陰性、ＣＳＦ１Ｒ陽性ＮＦＳ－６０細胞を、ＵｎｉＴＩ－０１、一価単一特異性抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、二価単一特異性抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはｍＩｇＧ２抗体の存在下のフェノールレッド不含培地中３７℃で３０分間培養し、続いて細胞生存のためにｍＣＳＦ－１の添加を行った。３７℃でのインキュベーションの４８時間後、細胞生存率代謝活性を、ＭＴＴアッセイキットのための製造業者のプロトコールに従って、ＯＤ５７０での比色読取りによって評価した。
図８Ａで示されるように、抗ＣＳＦ１Ｒ二価単一特異性抗体（ａＣＳＦ１Ｒ）は、高抗体濃度においてＮＦＳ－６０細胞の生存率を顕著に低減した。対照的に、抗ＣＣＲ２／抗ＣＳＦ１Ｒ二特異性抗体ＵｎｉＴＩ－０１または一価単一特異性抗ＣＳＦ１Ｒ抗体（単ａＣＳＦ１Ｒ）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、ＣＣＲ２陰性ＮＦＳ－６０細胞におけるＣＳＦ－１依存細胞生存を阻害しなかった（図８Ａ）。理論に拘束されることを望むものではないが、このデータは、抗ＣＣＲ２／抗ＣＳＦ１Ｒ二特異性抗体ＵｎｉＴＩ－０１が、抗ＣＳＦ１Ｒ二価単一特異性抗体と比較して、ＣＣＲ２陰性、ＣＳＦ１Ｒ陽性細胞を阻害する可能性がより低い場合があることを示唆し、図７Ｂおよび７Ｄに記載されている結果と一致する。ＮＦＳ－６０がＣＣＲ２を発現しなかったことを確認するために、細胞を、ＢＳＡ含有ＰＢＳ緩衝液ならびにＣＳＦ１ＲおよびＣＣＲ２に関する蛍光標識抗体を用いて４℃で２０分間洗浄し、続いてフローサイトメトリー分析を行った。図８Ｂで示されるように、ＮＦＳ－６０はＣＳＦ１Ｒを発現したが、ＣＣＲ２を発現しなかった。
実施例１０
ＵｎｉＴＩ－０１はｉｎ ｖｉｖｏでＥＭＴ６腫瘍へのＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤を促進する
Ｂａｌｂ／ｃマウスにＥＭＴ６同系乳房細胞系を注射し、腫瘍が１５０～２００ｍｍ３の体積に達したら、無作為化して３つの群に群分けした。１、４、７および１０日目に、１つの群はｉｐ経路を介して２０ｍｇ／ｋｇの用量の２０ｍｇ／ｋｇ ＵｎｉＴＩ－０１の処置を受け、第２の群は１０ｍｇ／ｋｇ抗ＰＤ－Ｌ１の処置を受け、第３の群はＰＢＳを受けた。４回目の用量の２４時間後、マウスを屠殺し、腫瘍をフローサイトメトリー分析のために回収した。腫瘍を約２ｍｍ片に細断し、リベラーゼ＋ｄｎａｓｅ Ｉを３７℃で３０分間用い、続いて１分間腫瘍混和プログラムをｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ上で使用して解離させた。単一細胞懸濁液を、７０μＭフィルターにより濾過することによって作製し、計数した。次いで、細胞をフローサイトメトリー分析のために染色した。ＣＤ８Ｔ細胞を、ＣＤ４５およびＣＤ３を発現した生ＣＤ８細胞に対する染色によってゲーティングした。各点は単一のマウス腫瘍を表す。エラーバーは個々のマウスの平均および標準誤差を表す。統計量を、一元配置分散分析を使用して算出した。
抗ＣＣＲ２／抗ＣＳＦ１Ｒ二特異性抗体ＵｎｉＴＩ－０１は、ｉｎ ｖｉｖｏで、ＥＭＴ６腫瘍へのＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤を有意に増大した（図９）。
実施例１１
ＵｎｉＴＩ－０１はｉｎ ｖｉｖｏでＥＭＴ６腫瘍におけるＴｒｅｇ頻度を低減し、ＣＤ８Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比を増大する
Ｂ６アルビノマウスにＭＣ３８同系結腸細胞系を注射し、腫瘍が１５０～２００ｍｍ３の体積に達したら、無作為化して３つの群に群分けした。１、４、７および１０日目に、１つの群はｉｐ経路を介して２０ｍｇ／ｋｇの用量の２０ｍｇ／ｋｇ ＵｎｉＴＩ－０１の処置を受け、第２の群は１０ｍｇ／ｋｇ抗ＰＤ－Ｌ１の処置を受け、第３の群はＰＢＳを受けた。４回目の用量の２４時間後、マウスを屠殺し、腫瘍をフローサイトメトリーによる免疫プロファイリングのために回収した。腫瘍を約２ｍｍ片に細断し、リベラーゼ＋ｄｎａｓｅ Ｉを３７℃で３０分間用い、続いて１分間腫瘍混和プログラムをｇｅｎｔｌｅＭＡＣｓ上で使用して解離させた。単一細胞懸濁液を、７０μＭフィルターにより濾過することによって作製し、計数した。次いで、細胞をフローサイトメトリー分析のために染色した。制御性Ｔ細胞を、生ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔ細胞に対するゲーティングによって分析した。加えて、ＣＤ８Ｔ細胞を、ＣＤ４５およびＣＤ３を発現した生ＣＤ８細胞に対する染色によってゲーティングした。各点は単一のマウス腫瘍を表す。エラーバーは個々のマウスの平均および標準誤差を表す。統計量を、一元配置分散分析を使用して算出した。
ＵｎｉＴＩ－０１を用いた処置は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を用いた処置と比較して、腫瘍におけるＴｒｅｇ頻度のより大きな低減およびＣＤ８＋Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比のより大きな増大をもたらした（図１０Ａおよび１０Ｂ）。
実施例１２
ＵｎｉＴＩ－０１は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせて使用した場合、抗腫瘍有効性、腫瘍縮小および向上した生存を示す
抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせたＵｎｉＴＩ－０１の腫瘍成長阻害を皮下マウス同系ＥＭＴ６乳がんモデルにおいて試験した。約８週齢雌ＢＡＬＢ／ｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ）を、研究の開始前に３日間馴化させた。マウスをケージ１つにつき５匹収容し、使い捨てケージをＩｎｎｏｖｉｖｅ ＩＶＣマウスラックに入れた。マウス病原体を含まないことが以前に試験されたＥＭＴ６細胞（マウスＣＬＥＡＲパネル、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｓ）を、０日目に０．５×１０６個の密度でＢＡＬＢ／ｃマウスの右側腹部に皮下移植した。腫瘍を、デジタルノギスを使用して週に２回二次元で測定および記録した。腫瘍体積（ｍｍ３）を、幅×幅×長さ×０．５２の式を使用して算出した。移植後７日目の腫瘍体積測定後、マウスを無作為化して、７７ｍｍ３の平均腫瘍体積に従って４つの群に群分けした。１つの群はＰＢＳを用いて処置し、第２の群は１０ｍｇ／ｋｇの用量の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を用いて処置し、第３の群は２０ｍｇ／ｋｇの用量のＵｎｉＴＩ－０１を用いて処置し、第４の群は抗ＰＤ－Ｌ１抗体およびＵｎｉＴＩ－０１の組合せを用いて処置した。すべての処置はｉｐ経路を介し、予定は週に２回、最大４週間の投薬であった。すべての薬剤はＰＢＳ中で新たに製剤化した後に投薬した。腫瘍体積測定は最大８０日継続した。腫瘍体積データは平均±ＳＥＭとしてプロットする。加えて、生存を２０００ｍｍ３のＴＶという研究のエンドポイントに達するまでの時間に基づいて記録し、カプラン・マイヤー曲線としてプロットする。統計量をログランク検定によって決定し、ｐ値をプロットする。
図１１Ａおよび１１Ｂで示されるように、ＵｎｉＴＩ－０１を用いた処置は腫瘍保有動物の生存を改善した。ＵｎｉＴＩ－０１および抗ＰＤ－Ｌ１抗体を組み合わせることは、ｉｎ ｖｉｖｏでの抗腫瘍有効性、腫瘍縮小および生存をさらに改善した（図１１Ａおよび１１Ｂ）。
ＭＣ３８結腸マウスモデルを使用した別個の研究では、ＵｎｉＴＩ－０１は抗ＣＳＦ１Ｒ抗体よりも優れた抗ＰＤ－Ｌ１併用利益を示す（図１１Ｃ）。
実施例１３
ＵｎｉＴＩ－０１は、抗ＣＳＦ１Ｒ処置と比べた場合、破骨細胞を存続させる
次の研究は、Ｍ－ＣＳＦおよびＲＡＮＫＬを有するマウス骨髄系細胞からの破骨細胞の６日間のｉｎ ｖｉｔｒｏ分化と、それに続く固定およびＴＲＡＰ染色とに関する。図１４で示されるように、ＵｎｉＴＩ－０１は、抗ＣＳＦ１Ｒ二価単一特異性抗体と比較した場合、破骨細胞を存続させる。
実施例１４
ＵｎｉＴＩ－０１は腫瘍においてＭ－ＭＤＳＣおよびＴＡＭの枯渇を駆動する
この研究では、ＥＭＴ６、ＭＣ３８またはＬＬＣ１腫瘍を保有するマウスは、抗ＰＤ－Ｌ１二価単一特異性抗体、抗ＣＳＦ１Ｒ二価単一特異性抗体、抗ＣＣＲ２二価単一特異性抗体またはＵｎｉＴＩ－０１を受けた。腫瘍１ｍｇ当たりのＭ－ＭＤＳＣ（図１５Ａ）またはＴＡＭ（図１５Ｂ）の量を、フローサイトメトリー分析を使用して測定した。図１５Ａおよび１５Ｂで示されるように、ＵｎｉＴＩ－０１は、ＥＭＴ６、ＭＣ３８およびＬＬＣ１腫瘍においてＭ－ＭＤＳＣおよびＴＡＭの枯渇を駆動する。
実施例１５
ＵｎｉＴＩ－０１は健康な組織よりもむしろ腫瘍内のマクロファージに優先的に結合する
この研究では、ＬＬＣ１腫瘍を保有するマウスはＵｎｉＴＩ－０１処置を受けた。ＵｎｉＴＩ－０１処置の２４時間後、腫瘍、腸、腎臓、脾臓または肝臓からの組織を、抗ラットＩｇＧ抗体（ＵｎｉＴＩ－０１を検出するため）ならびに抗Ｆ４／８０抗体（マクロファージおよび単球を検出するため）を使用して免疫組織化学によって分析した。図１６で示されるように、腫瘍保有マウスに投与されたＵｎｉＴＩ－０１は、腫瘍内のマクロファージに優先的に結合する。豊富なＦ４／８０＋細胞にもかかわらず、腸においても、腎臓においても、肝臓においても、脾臓においても、検出可能な抗ラットＩｇＧ抗体染色は存在しなかった。
実施例１６
ＥＭＴ６腫瘍移植マウスにおけるＵｎｉＴＩ－０１の体内分布
ＶｉｖｏＴａｇ８００蛍光色素標識ＵｎｉＴＩ－０１をＥＭＴ６腫瘍移植マウスへ投与し、蛍光イメージング（未処理臓器蛍光に対して正規化したシグナル）によって検出した。投与の６時間、２４時間または７２時間後のＵｎｉＴＩ－０１の体内分布は図１７で示される。
実施例１７
卵巣がん患者におけるＭ－ＭＤＳＣ細胞上でのＣＳＦ－１ＲおよびＣＣＲ２発現
腫瘍組織を４名の卵巣腫瘍患者から摘出し、ＣＳＦ１ＲおよびＣＣＲ２発現に関して分析した。図１８で示されるように、腫瘍Ｍ－ＭＤＳＣはＣＳＦ１ＲおよびＣＣＲ２の共染色を示すが、腫瘍Ｇ－ＭＤＳＣは示さない。ＣＳＦ－１ＲおよびＣＣＲ２共発現はＣＤ１６３＋ＴＡＭ上でも検出された（データは示していない）。
実施例１８
ＵｎｉＴＩ－０１は腫瘍へのＴ細胞浸潤を増大する
この研究では、ＥＭＴ６腫瘍を保有するマウスは、抗ＣＳＦ１Ｒ二価単一特異性抗体、抗ＣＣＲ２二価単一特異性抗体またはＵｎｉＴＩ－０１を受けた。腫瘍組織を、抗ＣＤ３抗体を使用して染色し、ＣＤ３陽性面積％を定量した。図１９Ａおよび１９Ｂで示されるように、抗ＣＳＦ１Ｒ二価単一特異性抗体と比較して、ＵｎｉＴＩ－０１はＥＭＴ６腫瘍へのＴ細胞浸潤を増大する。
追加の免疫組織化学分析は、ＵｎｉＴＩ－０１がＥＭＴ６、ＭＣ３８およびＬＬＣ１腫瘍におけるＣＤ８＋Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比を増大することを明らかにする（図２０）。
実施例１９
抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせたＵｎｉＴＩ－０１を試験する追加のｉｎ ｖｉｖｏ研究
いくつかのｉｎ ｖｉｖｏ研究を行って、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせて使用したＵｎｉＴＩ－０１の効果を分析した。抗ＰＤ－Ｌ１抗体を単剤として使用することと比較して、ＵｎｉＴＩ－０１および抗ＰＤ－Ｌ１抗体を組み合わせることは、単球系骨髄系由来サプレッサー細胞および腫瘍関連マクロファージの量を低減する（図２２Ａ）。
ＵｎｉＴＩ－０１および抗ＰＤ－Ｌ１併用療法は、持続的抗腫瘍応答（図２３の左のパネル）だけでなく、原発腫瘍に対する免疫メモリーの発生（図２３、右のパネル）も示す。
ＵｎｉＴＩ－０１は、ＭＣ３８同系マウスモデルにおいて単剤有効性を示すが（図２４Ａ）、ＣＴ２６またはＥＭＴ６腫瘍を保有するマウスは、ＵｎｉＴＩ－０１および抗ＰＤ－Ｌ１抗体の併用療法から恩恵を受ける（図２４Ｂおよび２４Ｃ）。理論に拘束されることを望むものではないが、異なる腫瘍モデルにおけるＵｎｉＴＩ－０１の異なる抗腫瘍活性は、少なくとも部分的には、腫瘍内Ｍ－ＭＤＳＣ含量に起因し得る。ＭＣ３８モデル、ＣＴ２６モデルおよびＥＭＴ６モデルに関する免疫浸潤物のパーセントとしての腫瘍内Ｍ－ＭＤＳＣ含量は、それぞれ、概ね３０％、１０％、および１０％であった。
実施例２０
ＵｎｉＴＩ－１０２の特性分析
ＵｎｉＴＩ－０１を、ヒトＴＧＦβ Ｒ２／Ｒ２二量体を重鎖のＣ末端と融合させることによって改変した（図１２Ｂおよび図２６Ａ）。この改変構築物をＵｎｉＴＩ－１０２と命名する。初めに、ＵｎｉＴＩ－１０２のＴＧＦβを中和する能力を試験した。図２６Ｂで示されるように、ＵｎｉＴＩ－１０２はＴＧＦβ／Ｓｍａｄ活性化を効果的に中和するが、ＵｎｉＴＩ－０１は中和しない。
次に、ＥＭＴ６同系腫瘍を移植したマウスにＵｎｉＴＩ－０１、ＵｎｉＴＩ－１０２、抗ＰＤ－Ｌ１、またはＵｎｉＴＩ－１０２および抗ＰＤ－Ｌ１の組合せを投与した。図２７Ａ、２７Ｂおよび２７Ｃで示されるように、ＵｎｉＴＩ－１０２は、ＥＭＴ６腫瘍モデルにおいて強い単独療法応答を示し、かつ試験された条件下では抗ＰＤ－Ｌ１の付加により増強されない。
実施例２１
抗ＣＳＦ１Ｒ半アームＦａｂの精製
２種のヒト抗ヒトＣＳＦ１Ｒ抗体ＢＩ１１７およびＢＩ１２３を、酵母ディスプレイを使用して最適化した。抗体ＢＩ１１７は、表１５で開示される配列番号３２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号３４１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む。抗体ＢＩ１２３は、表１５で開示される配列番号３３７のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号３４２のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。酵母ディスプレイを使用した親和性成熟は、ＢＩ１１７のＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３に改変を導入し、ＢＩ１１７のＶＨのバリアント（表１５で示される配列番号３２４～３３６）を生成した。同様に、ＢＩ１２３のＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３もまた突然変異させ、ＢＩ１２３のＶＨのバリアント（表１５で示される配列番号３３８～３４０）を生じさせた。
これらの親和性成熟バリアントを分析するために、半アーム抗体ＢＩＭ０５４２、ＢＩＭ０５４３、ＢＩＭ０５４４ ＢＩＭ０５４５、ＢＩＭ０５４６、ＢＩＭ０５４７、ＢＩＭ０５４８、ＢＩＭ０５４９、ＢＩＭ０５５０、ＢＩＭ０５５１、ＢＩＭ０５５２、ＢＩＭ０５５３、ＢＩＭ０５５４、ＢＩＭ０５５５、ＢＩＭ０５５６、ＢＩＭ０５６６およびＢＩＭ０５６７を発現させた。これらの抗体の全長配列情報は表２８で開示される。簡潔に述べると、これらのいわゆる半アーム抗体のすべては、３つの鎖：ＣＨ１と融合したＶＨと、ホールを含むＦｃとを含む重鎖（表２８においてＨＣ２と称される）、同族の軽鎖（表２８においてＬＣ２と称される）、およびノブを含む切断されたｈｉｓタグ付きＦｃドメイン（表２８においてＨＣ１と称される）を含む。これらの半アーム抗体に含有されるＶＨ／ＶＬ対は、表３０で開示される。
Figure 0007465272000094
タンパク質をＥｘｐｉＣＨＯ系（ＧＥ ｌｉｆｔ ｔｅｃｈ）において製造業者の使用説明書に従って発現させた。簡潔に述べると、表２８に概略を示した配列をコードするＤＮＡを等しく混合し、トランスフェクトしたＥｘｐｉＣＨＯ細胞に対して使用した。トランスフェクションの５日後、細胞を密度および生存率に関して測定した。細胞を５０ｍＬコニカルバイアルに移し、１８，０００×ｇで２０分間遠心分離した。各上清を０．２２μｍ膜により濾過した。２．０ｍＬの平衡化プロテインＡ樹脂を各構築物に添加した。混合物を室温で２時間インキュベートした後に１．５ｃｍカラムにロードした。樹脂を、３×１０ＣＶのＰＢＳを用いて洗浄した。タンパク質を５ＣＶのプロテインＡ溶出緩衝液（２０ｍＭクエン酸塩、１００ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ２．７６）中で溶出し、各試料に関して単一の１０．０ｍＬ画分において収集した。各試料を、１Ｍクエン酸ナトリウムを用いてｐＨ６．５に中和した。
溶出画分のタンパク質含量を、ｎａｎｏｄｒｏｐを用いて２８０ｎｍの吸光度を使用して推定した。１．０ｍＬの平衡化Ｎｉ ＩＭＡＣ樹脂を各構築物に添加した。混合物を室温で２時間インキュベートした後に１．５ｃｍカラムにロードした。樹脂を、３×１０ＣＶの５０ｍＭトリス－ＨＣｌ、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．５を用いて洗浄した。タンパク質を５ＣＶのＮｉ ＩＭＡＣ溶出緩衝液（５０ｍＭトリス－ＨＣｌ、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、５００ｍＭイミダゾール、ｐＨ７．５）中で溶出し、単一の５．０ｍＬ画分において収集した。各溶出画分を、ＰＤ－１０脱塩カラムを使用して、２０ｍＭクエン酸塩、１００ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ５．５に緩衝液交換した。プロテインＡカラムのロードおよびフロースルー（２μＬ）、溶出および低減溶出画分（５μｇ）のゲル（ＭＥＳ緩衝液中）泳動を行い純度を評価した。溶出画分のタンパク質含量を、ｎａｎｏｄｒｏｐを用いて２８０ｎｍの吸光度を使用して推定した。
最終精製抗体のＳＤＳゲルは図２８で示され、収率は表３１で示される。表３１において、「ｍｇ／ｍＬ」カラムは、最終精製試料の濃度を示し、「ｍｇ／Ｌ」カラムは、１Ｌに外挿した、パイロット実験のために使用した培養容量（５０ｍｌ）に基づく１リットル当たりの発現レベルの推定量を示す。
Figure 0007465272000095
実施例２２
精製抗ＣＳＦ１Ｒ抗体のＥＬＩＳＡ結合
マイクロプレートを、１００μＬ中２μｇ／ｍＬのヒトまたはカニクイザルＣＳＦ１Ｒを用いて別個にコーティングし、２％ＢＳＡを用いてブロッキングした。未標識一価ヒト抗体の段階希釈液（１１段階、３倍希釈、４００ｎＭ～６．８ｐＭ）を、コーティングかつブロッキングしたプレートに７５μＬ／ウェルで移し、室温で１時間インキュベートした。プレートを３回洗浄し、抗ヒトＦｃ西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲートと共に３０分間インキュベートし、続いてＨＲＰの基質であるＴＭＢの添加を行った。プレートを５分間発色させ、１Ｍ ＨＣＬを用いて停止し、４５０ｎｍの波長で読み取った。
実施例２１で精製したＢＩ１１７およびＢＩ１２３バリアントはすべて、ヒトＣＳＦ１Ｒへの結合を示した（図２９Ａ）。カニクイザルＣＳＦ１Ｒへの結合は、異なる構築物間で変動した（図２９Ｂ）。
実施例２３
精製抗ヒトＣＳＦ１Ｒ抗体の機能活性
損なわれていないＣＤ１４陽性ヒト単球を、磁気ビーズ分離を使用して、新たに単離したＰＢＭＣの負の選択から精製した。単球を、抗ＣＳＦ１Ｒ遮断抗体およびｈＣＳＦ－１の存在下の９６ウェルプレート中３７℃で２４時間培養した。細胞培養上清を、ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）分泌を測定するために回収した。単球単独は、最小のＭＣＰ－１分泌として役立った。ｈＣＳＦ－１の存在下の単球は、最大のＭＣＰ－１分泌として役立った。ＭＣＰ－１を、電気化学発光（Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を使用して測定した。
図３０で示されるように、一価ＣＳＦ１Ｒ遮断抗体の存在は、ＭＣＰ－１の濃度依存低減をもたらした。抗ＣＳＦ１Ｒ一価構築物ＢＩＭ０５４２、ＢＩＭ０５４３、ＢＩＭ０５４４、ＢＩＭ０５４５、ＢＩＭ０５４６、ＢＩＭ０５４７、ＢＩＭ０５４９、ＢＩＭ０５５０、ＢＩＭ０５５１、ＢＩＭ０５５２、ＢＩＭ０５５３、ＢＩＭ０５５５、ＢＩＭ０５５６、ＢＩＭ０５６７は、０．０４５～０．９ｎＭの範囲のＩＣ５０を示した（図３０）。ＢＩＭ０５４８およびＢＩＭ０５５４は、最大３０ｎＭのＩＣ５０を示した（図３０）。
実施例２４
精製抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の細胞結合
ＨＥＫ－２９３Ｔ細胞にヒトＣＳＦ１Ｒをレンチウイルスにより形質導入し、安定細胞系を生成した。ほぼすべての形質導入した細胞は、高レベルのＣＳＦ１Ｒを発現した。細胞を、０．５％ＢＳＡおよび０．１％アジ化ナトリウムを含有するＰＢＳ（染色緩衝液）を用いて洗浄し、９６ウェルＶ底プレートに１００，０００細胞／ウェルで添加した。ヒト抗ＣＳＦ１Ｒ一価抗体を２．５倍の段階希釈で細胞に添加し、室温で２時間インキュベートした。プレートを、染色緩衝液を用いて２回洗浄した。ＡＰＣにコンジュゲートしたヒトＦｃに対する二次抗体を１：２００の希釈率（１．５ｍｇ／ｍｌの原液）で添加し、細胞と共に４℃で１時間インキュベートし、続いて染色緩衝液を用いて洗浄した。その後、細胞を、生／死色素を用いて染色してあらゆる瀕死の細胞を排除し、４％パラホルムアルデヒドを用いて室温で１０分間固定した。プレートをＣｙｔｏＦＬＥＸ ＬＳ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）上で読み取った。データを、ＡＰＣ陽性集団パーセントとして算出した。
図３１で示されるように、試験したすべての抗ＣＳＦ１Ｒ一価抗体は、ヒトＣＳＦ１Ｒを発現する細胞と結合することを示した。
実施例２５
選択二特異性ＣＣＲ２×ＣＳＦ１Ｒカッパ／ラムダ抗体の発現および精製
抗ＣＣＲ２／抗ＣＳＦ１Ｒ（「ＣＣＲ２×ＣＳＦ１Ｒ」）二特異性抗体ＢＩＭ０２０４、ＢＩＭ０２０５、ＢＩＭ０２０６、ＢＩＭ０２０７、ＢＩＭ０２０８、ＢＩＭ０２０９、ＢＩＭ０２１０およびＢＩＭ０２１１を、下記のように生成した。これらの抗体の全長配列情報は表２８で開示される。簡潔に述べると、これらの抗体は、抗ＣＣＲ２アーム（表２８においてＨＣ１およびＬＣ１と称される）ならびに抗ＣＳＦ１Ｒアーム（表２８においてＨＣ２およびＬＣ２と称される）を含む。これらの二特異性抗体に含有されるＶＨ／ＶＬ対は、表３２で要約される。抗ＣＣＲ２結合アームは、カッパ軽鎖を含み、抗ＣＳＦ１Ｒ結合アームは、ラムダ軽鎖を含む。
Figure 0007465272000096
トランスフェクション前に、ＣＨＯ細胞（９９％超の生存率の３Ｅ７）を、約２×１０６細胞／ｍＬの密度で、４５０ｍＬのＣＤ Ｆｏｒｔｉ ＣＨＯおよび２ｍＭ Ｌ－グルタミンを含有する８×２Ｌ振盪三角フラスコに播種した。４つすべての鎖の同時トランスフェクションを行った。ＤＮＡ－ＰＥＩ混合物を各フラスコに添加した。フラスコを旋回し、３７℃、５％ＣＯ２、１３０ｒｐｍでインキュベートした。２日目に、温度を３２℃に変化させた。１０％ｆｅｅｄＣ、２ｍＭ Ｌ－グルタミンおよび２ｇ／Ｌグルコースを２日目および５日目に添加し、０．５ｍＭ酪酸ナトリウムを５日目に添加した。１５０ｍＬの新鮮培地、５％ｆｅｅｄＣ、２ｍＭ Ｌ－グルタミンおよび２ｇ／Ｌグルコースを７日目にバッチに添加し、細胞を９日目に回収した。
５００～６００ｍｌの培養上清を、揺動プラットフォーム上で２ｍｌのＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕｒｅ樹脂と共に４℃で約１６時間インキュベートした。樹脂を収集し、１倍ＰＢＳを用いて洗浄した。タンパク質を、３０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ３．６、１００ｍＭ ＮａＣｌを使用して、各々２ｍｌの４つの画分中に溶出した。１０μＬの画分を、還元または非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上で検査した。画分をプールし、ｐＨを約ｐＨ５．０に調整し、濃度を、ＵＶ吸光度を使用して推定した。最終精製二特異性ＣＣＲ２×ＣＳＦ１Ｒ抗体のＳＤＳ－ＰＡＧＥは図３２で示され、最終収率は表３３で示される。
Figure 0007465272000097
実施例２６
二特異性ＣＣＲ２×ＣＳＦ１Ｒ抗体の機能活性
Ｔａｎｇｏ－ＣＣＲ２ ｂｌａ２ Ｕ２ＯＳ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）は、リガンドＣＣＬ２に応答してベータ－ラクタマーゼレポーター遺伝子によって駆動される青色シグナル（４６０ｎｍにおける）を発光するヒトＣＣＲ２を発現する。レポーター細胞を、ＣＣＬ２の存在下の９６ウェルプレート中３７℃で１６時間培養した後に、ＢＬＡ基質の添加を行った。ＣＣＬ２の非存在下では、基質の添加は緑色発光（約５３０ｎｍにおける）をもたらす。
抗ＣＣＲ２遮断抗体の存在は、４６０ｎｍにおける発光の濃度依存低減（５３０ｎＭに対する）をもたらした（図３３）。二価抗ＣＣＲ２抗体陽性対照ＢＨＭ１６６２およびＢＨＭ０１３９は、それぞれ、１９．１ｎＭおよび８．５ｎＭのＩＣ５０を示した。ヒトＩｇＧ１は、ＣＣＲ２依存シグナル阻害を示さなかった。二特異性抗体構築物ＢＩＭ０２０６、ＢＨＩ０２０７、ＢＩＭ０２１０およびＢＩＭ０２１１は、５９～８２ｎＭの範囲のＩＣ５０を示したが、ＢＩＭ０２０４、ＢＩＭ０２０５、ＢＩＭ０２０８およびＢＩＭ０２０９のＩＣ５０は、１５０～６５０ｎＭの範囲であった（図３３）。
損なわれていないＣＤ１４陽性ヒト単球を、磁気ビーズ分離を使用して、新たに単離したＰＢＭＣの負の選択から精製した。単球を、抗ＣＳＦ１Ｒ遮断抗体およびｈＣＳＦ－１の存在下の９６ウェルプレート中３７℃で２４時間培養した。細胞培養上清を、ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）分泌を測定するために回収した。単球単独は、最小のＭＣＰ－１分泌として役立った。ｈＣＳＦ－１の存在下の単球は、最大のＭＣＰ－１分泌として役立った。ＭＣＰ－１を、電気化学発光（Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を使用して測定した。
抗ＣＳＦ１Ｒ遮断抗体の存在は、ＭＣＰ－１の濃度依存低減をもたらした（図３４）。一価および二価抗ＣＳＦ１Ｒ抗体陽性対照ＢＩ０２７およびＢＨＭ１７１４は、それぞれ、１．２５ｎＭおよび約０．００２ｎＭのＩＣ５０を示した（図３４）。二特異性抗体構築物ＢＩＭ０２０４、ＢＩＭ０２０５、ＢＩＭ０２０６およびＢＩＭ０２０７は、５～３０ｎＭの範囲のＩＣ５０を示したが、ＢＩＭ０２０８、ＢＩＭ０２０９、ＢＩＭ０２１０およびＢＩＭ０２１１に関しては、ＣＳＦ１Ｒ遮断活性が存在しなかった（図３４）。
実施例２７
ＴＧＦβトラップを使用したＴＧＦβシグナル伝達の阻害
この研究は、３種のＴＧＦβトラップ構築物を、ＴＧＦβシグナル伝達を阻害する能力に関して検討する。図３６で示される第１の構築物「単一ＴＧＦβ Ｆａｂトラップ」は２つの鎖を含み：第１の鎖は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、第１のＴＧＦＢＲ２ ＥＣＤ、第１のリンカーおよび重鎖定常領域１（ＣＨ１）を含み；第２の鎖は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、第２のＴＧＦＢＲ２ ＥＣＤ、第２のリンカーおよび軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む。この構築物はいかなる標的ドメインも含まない。図３６で示される第２の構築物「抗ＰＤ－Ｌ１×ＴＧＦβトラップ」は、２つのＦｃ領域のＣ末端でＴＧＦＢＲ２ ＥＣＤホモ二量体と融合した抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。図３６で示される第３の構築物「ＵｎｉＴＩ－１０２（抗ＣＣＲ２×抗ＣＳＦ１Ｒ×ＴＧＦβトラップ）」は、２つのＦｃ領域のＣ末端でＴＧＦＢＲ２ ＥＣＤホモ二量体と融合した抗ＣＣＲ２×抗ＣＳＦ１Ｒ二特異性抗体を含む。加えて、ＴＧＦβトラップを有しない抗ＣＣＲ２×抗ＣＳＦ１Ｒ二特異性抗体である、図３６における第４の構築物「ＵｎｉＴＩ－０１（抗ＣＣＲ２×抗ＣＳＦ１Ｒ）」を陰性対照として使用した。
簡潔に述べると、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＴＧＦ－ｂ細胞を、０．５ｎｇ／ｍｌのＴＧＦ－β１の存在下で上記の４種の構築物を用いて用量依存的に２０～２２時間処理した。ＴＧＦ－β１は、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ細胞上の受容体に結合し、Ｓｍａｄ３／Ｓｍａｄ４複合体の形成をもたらすＴＧＦ－β／Ｓｍａｄ経路の活性化を誘導する。このヘテロ複合体は、核に進入し、ＳＥＡＰ（分泌型胚性アルカリホスファターゼ）の産生を誘導するＳＢＥ（Ｓｍａｄ３／４結合エレメント）部位と結合する。上清に分泌されたＳＥＡＰを比色酵素アッセイ（ＱＵＡＮＴＩ－Ｂｌｕｅ）によって定量した。図３６で示されるように、ＴＧＦ－β１媒介ＳＥＡＰ産生は、本実施例で試験した３つすべてのＴＧＦβトラップ構築物によって低減した。ＴＧＦβトラップを有しない抗ＣＣＲ２×抗ＣＳＦ１Ｒ二特異性抗体は、ＴＧＦ－β１シグナル伝達を低減しなかった（図３６）。
実施例２８
ＵｎｉＴＩ－１０２構築物の特性分析
一部の実施形態では、図１２Ｊまたは３９Ｆで示される構成を有する多特異性分子が本明細書で提供される。一部の実施形態では、多特異性分子は、抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、ｓｃＦｖとして）、抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、Ｆａｂとして）、およびＦｃ領域のＣ末端と融合したＴＧＦβトラップ（例えば、ＴＧＦβＲＩＩホモ二量体）を含む。そのような分子はＵｎｉＴＩ－１０２と称される。理論に拘束されるものではないが、ＵｎｉＴＩ－１０２は、ＣＳＦ１Ｒ＋ＣＣＲ２＋Ｍｏ－ＭＤＳＣおよびＴＡＭに優先的に結合すると同時に阻害機能を発揮し；新規ＭＤＳＣおよびＴＡＭの動員を妨げ；局所分泌されたＴＧＦβを中和し間質を初期化して、Ｔ細胞浸潤を可能にし；かつ／または浸潤Ｔ細胞およびＮＫ細胞の細胞傷害性機能を回復し得る。
初めに、マウス代替抗体ｍＵｎｉＴＩ－１０２を、ＰＤ１またはＴＧＦβ遮断療法に耐性の同系腫瘍モデルであるＥＭＴ６乳房腫瘍モデルにおいて試験した。ｍＵｎｉＴＩ－１０２をＥＭＴ６腫瘍保有Ｂ細胞欠損Ｊｈ－／－マウスに５ｍｐｋ、ＴＩＷまたは２０ｍｐｋ、ＢＩＷで投与した。ｍＵｎｉＴＩ－１０２は、ＥＭＴ６腫瘍においてｍｏ－ＭＤＳＣを枯渇させ（図３８Ａ）、かつ組織常在性マクロファージよりもＴＡＭを優先的に枯渇させた（図３８Ｂ）。加えて、ｍＵｎｉＴＩ－１０２は、このモデルにおいて単独療法として抗腫瘍活性を実証した（図３８Ｃおよび３８Ｄ）。
次の少数の研究は、２種のＵｎｉＴＩ－１０２分子ＢＩＭ０６４８（「０６４８」または「６４８」とも称される）ならびにＢＩＭ０６５２（「０６５２」および「６５２」とも称される）を検討する。ＢＩＭ０６４８およびＢＩＭ０６５２の両方は、図３９Ｆで示される構成を有する。これらの２種の分子の配列情報は表３４で開示される。ＢＩＭ０６４８は、配列番号１２７、配列番号１３１および配列番号３７３のアミノ酸配列を含む。ＢＩＭ０６５２は、配列番号１３６、配列番号１３１および配列番号３７３のアミノ酸配列を含む。
ＢＩＭ０６４８およびＢＩＭ０６５２の全血への結合を、フローサイトメトリーを使用して検討した。簡潔に述べると、末梢血を４名の健康対照から、リチウムヘパリンを抗凝固薬として含有する管に収集した。１００μｌの血液を各管に添加し、適切な抗体（表３５）を添加した後に４℃で３０分間、暗所でインキュベーションを行った。ＵｎｉＴＩ－１０２構築物を、ＡｌｅｘａＦｌｏｕｒ６４７を製造業者の使用説明書（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ Ｉｎｃ、Ｅｕｇｅｎｅ ＯＲ）に従って蛍光標識し、抗体を含む管に添加した。効果的な標識構築物濃度は、１０００ｎＭ～６２．５ｐＭの範囲であった。赤血球を、塩化アンモニウム（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ＭＡ）の添加によって溶解した。溶解後、細胞を、１％ウシ胎児血清を含有するＰＢＳ中で洗浄し、１％パラホルムアルデヒドで固定した。試料をＢｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃｙｔｏｆｌｅｘ ＬＸにかけた。機器設定（細胞設定；特有の電圧および補正マトリックス）は、検討したすべてのドナーに関して同一であった。生データを、ＦｌｏｗＪｏ１０を使用して分析した。単染色および蛍光マイナス１（ＦＭＯ）対照管を使用して、陽性／陰性集団を定義した。すべてのデータ分析およびデータのグラフ表示を、Ｐｒｉｓｍ８．１（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して実施した。
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血液（溶解前）におけるｅｘ ｖｉｖｏでの結合の検討は、Ｆｃ遮断剤の必要性を排除した。加えて、蛍光標識プローブの使用は、二次検出試薬の必要性を除外した。初めに、白血球を前方および側方散乱によって溶解ＲＢＣから単離した。生細胞をゲーティングし、続いてＦＳＣ－Ｈに対するＦＳＣ－Ａのプロットを介したダブレットの排除を行い、これに続いて生単一細胞集団に対するゲーティングを行った。顆粒細胞をリンパ球（低ＳＳＣ）および単球（中ＳＳＣ）から分離した。ＣＤ３およびＣＤ５６二変数プロットは、Ｔ（ＣＤ３＋）、ＮＫ（ＣＤ５６＋）およびＮＫ－Ｔ（ＣＤ３＋ＣＤ５６＋）細胞集団の識別を可能にした。ＣＤ３／ＣＤ５６陰性細胞から、ＣＤ１４およびＣＤ１６二変数プロットを、単球（ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋古典的単球、ＣＤ１４－ＣＤ１６＋非古典的単球およびＣＤ１４＋ＣＤ１６＋中間単球）に関して生成した。全体として、６マーカーパネルと蛍光標識ＵｎｉＴＩ－１０２構築物との組合せは、合計５種の異なる初代細胞集団：顆粒細胞、Ｔ、ＮＫ、Ｂおよび単球における親集団および祖父母集団のパーセンテージとしてのＵｎｉＴＩ－１０２構築物の結合の検討を可能にした。使用したプロトコールは、リンパ球集団に加えて単球および顆粒細胞の定量を可能にした。
ＢＩＭ０６４８およびＢＩＭ０６５２の両方は、全血において初代ヒト古典的単球に優先的に結合した（図３９Ｂおよび３９Ｄ）。中間単球への結合は、観察されたが、古典的単球への結合よりも弱かった。ＵｎｉＴＩ－１０２分子は、全血において、Ｔ、Ｂ、ＮＫもしくは顆粒細胞と微小な接合を示したか、またはいずれとも接合を示さなかった（データは示していない）。
ＢＩＭ０６４８およびＢＩＭ０６５２のＴＧＦβを中和する能力を、下記の様々なｉｎ ｖｉｔｒｏ機能的アッセイによって確認した。
ＢＩＭ０６４８およびＢＩＭ０６５２の両方は、ＴＧＦβ誘導ＳＭＡＤ依存レポーター活性を阻害した（図４０Ａ）。
ＵｎｉＴＩ－１０２の、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞からのヒトＴｒｅｇ分化を阻害する能力を試験するために、ヒトナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞を新鮮ＰＢＭＣから単離し、１５０，０００細胞／ウェルを、抗ＣＤ３Ａｂ（ＯＫＴ３；５μｇ／ｍＬ）を用いてプレコーティングした９６ウェル丸底プレートに添加した。細胞を、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、ＩＬ－２（５０ｎｇ／ｍＬ）、ＴＧＦβ（１０ｎｇ／ｍＬ）および抗ＣＤ２８Ａｂ（１μｇ／ｍＬ）を含むＸ－ＶＩＶＯ１５培地中３７℃で６日間、以下の構築物：６．２ｎＭのＵｎｉＴＩ－１０２、抗ＰＤ－Ｌ１／抗ＴＧＦβトラップまたはヒトＩｇＧ１と共に培養した。対照には、構築物を有しない細胞、すなわちＴ－ｒｅｇ分化の最大誘導のためのＴＧＦβを有する細胞（ＴＧＦβ＋）およびベースライン阻害のためのＴＧＦβを有しない細胞（ＴＧＦβ－）が含まれた。６日目に、細胞を洗浄し、生存色素、続いて細胞外抗体カクテル（抗ＣＤ３、抗ＣＤ４および抗ＣＤ２５）を用いて染色した。次いで、細胞を固定し、透過処理し、細胞内ｆｏｘｐ３に関して抗Ｆｏｘｐ３Ａｂ（１５０Ｄ、１：５０の希釈率）を用いて染色した。試料を、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃｙｔｏｆｌｅｘ装置上で捉え、生細胞、ＣＤ３＋細胞、ＣＤ４＋細胞およびＣＤ２５＋／Ｆｏｘｐ３＋細胞に対してゲーティングした。図４０Ｂで示されるように、ＵｎｉＴＩ－１０２は、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞からのＴＧＦβ誘導ヒトＴｒｅｇ分化を阻害した。
次に、ＵｎｉＴＩ－１０２を、Ｋ５６２細胞の初代ＮＫ細胞媒介溶解に対するＴＧＦβの抑制効果を反転する能力に関して試験した。簡潔に述べると、凍結初代ＮＫ細胞を解凍し、２０％ＦＢＳおよび１００ＩＵ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－２を補充したＸ－ＶＩＶＯ１５培地中で一晩静置した。次いで、細胞を１×１０６細胞／ｍｌで播種し、ＴＧＦβ（１０ｎｇ／ｍＬ）単独、またはＴＧＦβと２０ｎＭの（ｉ）ＵｎｉＴＩ－１０２、（ｉｉ）抗ＰＤ－Ｌ１－ＴＧＦβトラップもしくは（ｉｉｉ）ヒトＩｇＧ１とを用いて３日間処理した。３日目に、処理したＮＫ細胞を計数し、ＣＦＳＥ標識Ｋ５６２細胞と共に１０：１のＥ：Ｔ比で４時間インキュベートした。次いで、細胞を生存色素、続いて抗体カクテル（抗ＣＤ５６、抗ＮＫｐ３０および抗ＮＫＧ２）を用いて染色した。試料を、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃｙｔｏｆｌｅｘ装置上で捉え、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアによって分析した。図４０Ｃで示されるように、ＴＧＦβはＫ５６２細胞の初代ＮＫ細胞媒介溶解を低減し、ＴＧＦβのこの抑制効果はＵｎｉＴＩ－１０２によって反転することができた。
さらに、ＵｎｉＴＩ－１０２の、ＳＷ４８０（ＭＳＳ ＣＲＣ細胞系）からの馴化培地（ＣＭ）によって駆動されたＭ２極性化を抑制する能力を検討する研究を行った。腫瘍馴化培地（ＴＣＭ）を生成するために、ＳＷ８４０結腸がん細胞（Ｃａｔ＃ ＣＣＬ－２２８、ＡＴＣＣ）を１０％ＦＢＳ／ＲＰＭＩ１６４０培地に播種し、２４時間後、０．２％ＦＢＳ／ＲＰＭＩ１６４０培地に切り替えた。培地を４８時間後に収集し、濾過し、１０％ＦＢＳに復元し、新たに使用するかまたは－８０℃で凍結した。単球を、古典的単球単離キット（Ｃａｔ＃ １３０－１１７－３３７、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）によって健康なドナーＰＢＭＣ（ＡｌｌＣｅｌｌｓ）から単離し、２ｍｌ／ウェル中１×１０６／ｍｌで６ウェルプレートの５０ｎｇ／ｍｌ Ｍ－ＣＳＦ（Ｃａｔ＃ ３００－２５、ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）を含むＳＷ４８０ＴＣＭに播種した。３日後、培地に１ｍｌ ＳＷ４８０ＴＣＭ／５０ｎｇ／ｍｌ Ｍ－ＣＳＦを補った。単球を、ＵｎｉＴＩ－１０２またはヒトＩｇＧ１（Ｃａｔ＃ ４０３５０２、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を用いて４８時間処理した。細胞を、Ｖｅｒｓｅｎｅ（Ｃａｔ＃ １５０４００６６、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を用いた処理によって回収し、Ｚｏｍｂｉｅ ＵＶ生存色素（Ｃａｔ＃ ４２３１０８、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）と共にインキュベートし、フルオロフォアコンジュゲートＣＤ２０６およびＨＬＡ抗体（どちらもＢｉｏｌｅｇｅｎｄ製）と共にインキュベートし、ＣｙｔｏＦＬＥＸ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）フローサイトメーター上で捉え、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアによって分析した。ＳＷ８４０結腸がん細胞は、高レベルのＴＧＦβ１を分泌し（図４０Ｄ）、Ｍ２極性化を駆動する。ＢＩＭ０６４８は、ＣＤ２０６（Ｍ２マーカー）発現の低減（図４０Ｅ）およびＨＬＡ（Ｍ１マーカー）発現の増大（図４０Ｆ）によって立証されるように、ＳＷ８４０ＣＭ誘導Ｍ２極性化を抑制した。
一部の実施形態では、ＵｎｉＴＩ－１０２は、マイクロサテライト安定（ＭＳＳ）結腸直腸がんの処置のために使用することができる。ＣＲＣ患者では、増大したＴＧＦβ１レベルは有害な転帰を予測し得る（Ｃａｌｏｎら、Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ．２０１５年４月；４７（４）：３２０～９ページ）。ＣＲＣ再発および転移は、高ＴＧＦβシグナル伝達に厳密に依存し（Ｃａｌｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２０１２年１１月１３日；２２（５）：５７１～８４ページ）；骨髄性細胞におけるＴｇｆｂｒ２の欠失は、前臨床モデルにおいて腫瘍転移を有意に阻害する（Ｐａｎｇら、Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ．２０１３年８月；３（８）：９３６～５１ページ）。ＣＲＣを含むＭＳＳ ＧＩ腫瘍の免疫サブセットは、高ＣＣＲ２、ＣＳＦ１ＲおよびＴＧＦβ１発現を有するＣＤ１６３＋骨髄性細胞からなる。大部分のＰＤ－Ｌ１は、ＣＲＣ ＭＳＩ患者では骨髄性細胞によって発現される（Ｌｌｏｓａら、Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ．２０１５年１月；５（１）：４３～５１ページ）。ＭＳＳ ＣＲＣ患者は、低～検出不能なＰＤ－Ｌ１を発現する。転移関連ＴＡＭは、ＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒ共発現を維持する。
理論に拘束されるものではないが、ＵｎｉＴＩ－１０２は、ＭＳＳ ＣＲＣにおいて相補的および／または相乗的機構を介して抗腫瘍応答を誘導／回復し得る。例えば、ＵｎｉＴＩ－１０２による局所分泌されたＴＧＦβの中和は、間質を初期化して、免疫細胞浸潤を可能にし得る。ＵｎｉＴＩ－１０２によるＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒの同時阻害は、ＴＧＦβ阻害のために、新規単球由来免疫抑制性骨髄性細胞の浸潤を妨げ得る。
一部の実施形態では、ＵｎｉＴＩ－１０２は、化学／放射線、抗血管新生または免疫チェックポイント療法と組み合わせてもよい。放射線療法、化学療法または抗ＶＥＧＦ療法は、ＴＡＭおよびＭＤＳＣを動員してＴＧＦβレベルを増大することが示されており、これらは腫瘍再発および／または耐性に関連する。標的接合および関連のある生体応答を実証するための血液に基づくバイオマーカーは、早期臨床試験に有用である。
要約すると、ＵｎｉＴＩ－１０２分子は、ＣＣＲ２、ＣＳＦ１ＲおよびＴＧＦβを同時に標的とする三特異性分子である。ＵｎｉＴＩ－１０２分子は、ＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒ二重陽性細胞、すなわちｍｏ－ＭＤＳＣ、ＴＡＭおよび古典的単球に優先的に結合する。ＵｎＩＴＩ－１０２の３つすべてのアームは、所期の標的を機能的に遮断することができる。カニクイザル研究は、ＵｎｉＴＩ－１０２の３つすべてのアームに関して標的接合を確認し、生体応答はｉｎ ｖｉｖｏでのＣＳＦ１Ｒ遮断と一致した。
参照による組込み
本明細書で言及されたすべての刊行物および特許は、個々の各刊行物または特許が参照により組み込まれることが具体的かつ個別的に指示されるように、それらの全体がこれにより参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書は以下の発明の開示を包含する。
［１］（ｉ）抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）；
（ｉｉ）抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）；および
（ｉｉｉ）ＴＧＦ－ベータ阻害剤
を含む多特異性分子。
［２］以下の特性：
（ｉ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１について実施例２で説明される方法を使用して測定したとき、前記多特異性分子が、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞、またはＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合し、例えば、前記多特異性分子の前記ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合が、前記多特異性分子の前記ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞、または前記ＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合よりも少なくとも２、４、６、８、１０、１５、２０または２５倍強い；
（ｉｉ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１について実施例２で説明される方法を使用して測定したとき、前記多特異性分子が、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合し、例えば、前記多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合についてのＥＣ５０が、前記多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞への結合についてのＥＣ５０の６０、５０、４０、３０、２０または１０％以下である；
（ｉｉｉ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１について実施例２で説明される方法を使用して測定したとき、前記多特異性分子が、ＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞と比較して、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞に優先的に結合し、例えば、前記多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合についてのＥＣ５０が、前記多特異性分子のＣＳＦ１Ｒ陰性、ＣＣＲ２陽性細胞への結合についてのＥＣ５０の５０、４０、３０、２０、１０または５％以下である；
（ｉｖ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図５について実施例６で説明される方法を使用して測定したとき、前記多特異性分子が、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好中球、組織常在性マクロファージ（例えば、クッパー細胞）またはランゲルハンス細胞と比較して、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）または骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）に優先的に結合し、例えば、前記多特異性分子のＴＡＭまたはＭＤＳＣへの結合が、前記多特異性分子のＴ細胞、ＮＫ細胞、好中球、組織常在性マクロファージ（例えば、クッパー細胞）またはランゲルハンス細胞への結合よりも少なくとも２、４、６、８、１０、１５、２０または２５倍強い；
（ｖ）例えば、トランズウェルプレート遊走アッセイを使用して測定したとき、例えば、図２について実施例３で説明される方法を使用して測定したとき、前記多特異性分子が、単球遊走、例えば単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ１）誘導単球遊走を阻害し、例えば、ＭＣＰ１誘導単球遊走を少なくとも４０、５０、６０または７０％低減する；
（ｖｉ）例えば、細胞増殖ＭＴＴアッセイを使用して測定したとき、例えば、図３Ｂについて実施例４で説明される方法を使用して測定したとき、前記多特異性分子が、マクロファージ、例えば、骨髄系由来マクロファージの増殖、例えば、骨髄系由来マクロファージのＣＳＦ－１誘導増殖を阻害し、例えば、骨髄系由来マクロファージのＣＳＦ－１誘導増殖を少なくとも５０、６０、７０または８０％低減する；
（ｖｉｉ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図４について実施例５で説明される方法を使用して測定したとき、前記多特異性分子が、単球、例えば、骨髄系由来単球の分化、例えば、骨髄系由来単球のＣＳＦ－１誘導分化を阻害しないか、または実質的に阻害せず、例えば、骨髄系由来単球のＣＳＦ－１誘導分化を２、４、６、８または１０％以下しか低減しない；
（ｖｉｉｉ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図６について実施例７で説明される方法を使用して測定したとき、前記多特異性分子が、ｉｎ ｖｉｖｏで、抑制性骨髄性細胞、例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣを枯渇させ、例えば、抑制性骨髄性細胞、例えば、ＴＡＭまたはＭＤＳＣの数を少なくとも８０、８５、９０、９５、９９または９９．５％低減する；
（ｉｘ）例えば、免疫組織化学分析を使用して測定したとき、例えば、図７Ｂおよび７Ｄについて実施例８で説明される方法を使用して測定したとき、前記多特異性分子が、ｉｎ ｖｉｖｏで、組織常在性マクロファージ、例えば、クッパー細胞を枯渇させないか、または実質的に枯渇させず、例えば、組織常在性マクロファージ、例えば、クッパー細胞の数を４、６、８、１０または１５％以下しか低減しない；
（ｘ）例えば、フローサイトメトリー分析または免疫組織化学分析を使用して測定したとき、例えば、図２１について説明される方法を使用して測定したとき、前記多特異性分子が、ＴＡＭ上でのＣＤ８６またはＭＨＣクラスＩＩ発現を増大する；
（ｘｉ）例えば、細胞生存率ＭＴＴアッセイを使用して測定したとき、例えば、図８Ａについて実施例９で説明される方法を使用して測定したとき、前記多特異性分子が、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞のＣＳＦ－１依存細胞生存を阻害しないか、または実質的に阻害せず、例えば、ＣＳＦ１Ｒ陽性、ＣＣＲ２陰性細胞のＣＳＦ－１依存細胞生存を５、１０または１５％以下しか低減しない；
（ｘｉｉ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図９について実施例１０で説明される方法を使用して測定したとき、前記多特異性分子が、ｉｎ ｖｉｖｏでＣＤ８＋Ｔ細胞腫瘍浸潤を増大し、例えば、腫瘍におけるＣＤ３＋Ｔ細胞中のＣＤ８＋Ｔ細胞％を少なくとも１．５、２または２．５倍増大する；
（ｘｉｉｉ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１０Ａについて実施例１１で説明される方法を使用して測定したとき、前記多特異性分子が、ｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍におけるＴｒｅｇ頻度を低減し、例えば、腫瘍におけるＴｒｅｇ頻度を少なくとも１５、２０、２５または３０％低減する；
（ｘｉｖ）例えば、フローサイトメトリー分析を使用して測定したとき、例えば、図１０Ｂについて実施例１１で説明される方法を使用して測定したとき、前記多特異性分子が、ｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍におけるＣＤ８＋Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比を増大し、例えば、腫瘍におけるＣＤ８＋Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比を少なくとも２．５、３、３．５、４または４．５倍増大する；
（ｘｖ）例えば、図１１Ａおよび１１Ｂについて実施例１２、または図２３について実施例１９で説明される方法を使用して測定したとき、前記多特異性分子が、腫瘍成長を低減し、腫瘍保有動物の生存を増大し、かつ／または抗腫瘍免疫メモリーを向上させる；
（ｘｖｉ）例えば、図３９Ｂおよび３９Ｄについて実施例２８で説明される方法を使用して測定したとき、前記多特異性分子が、中間単球または非古典的単球と比較して、古典的単球に優先的に結合する；または
（ｘｖｉｉ）例えば、図４０Ａ～４０Ｆについて実施例２８で説明される方法を使用して測定したとき、前記多特異性分子が、ＴＧＦβの活性を、例えば、少なくとも３０、４０、５０、６０、７０、８０または９０％低減する
のうちの１つまたは複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６個またはそれよりも多く）を有する、［１］に記載の多特異性分子。
［３］前記抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分が、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４０２、４７４、４７５、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む、［１］または［２］に記載の多特異性分子。
［４］前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４０２、４７６および４７７のアミノ酸配列を含む、［３］に記載の多特異性分子。
［５］前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３が、
それぞれ、配列番号４０２、４０５、４１３、４３２、４３４および４３６、
それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１３、４３２、４３４および４３６、
それぞれ、配列番号４０２、４０６、４１３、４３２、４３４および４３６、
それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１４、４３２、４３４および４３６、
それぞれ、配列番号４０２、４０７、４１３、４３２、４３４および４３６、
それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１５、４３２、４３４および４３６、
それぞれ、配列番号４０２、４０８、４１３、４３２、４３４および４３６、
それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１６、４３２、４３４および４３６、
それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１７、４３２、４３４および４３６、
それぞれ、配列番号４０２、４０９、４１３、４３２、４３４および４３６、
それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１８、４３２、４３４および４３６、
それぞれ、配列番号４０２、４０４、４１９、４３２、４３４および４３６、
それぞれ、配列番号４０２、４０４、４２０、４３２、４３４および４３６、または
それぞれ、配列番号４０２、４０４、４２１、４３２、４３４および４３６
のアミノ酸配列を含む、［３］または［４］に記載の多特異性分子。
［６］前記ＶＨが、配列番号３２３～３３６のいずれかのアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、任意選択により、前記ＶＨが、配列番号３２４のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、［３］～［５］のいずれかに記載の多特異性分子。
［７］前記ＶＨが、配列番号１２９のヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、［３］～［６］のいずれかに記載の多特異性分子。
［８］前記ＶＬが、配列番号３４１のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、［３］～［７］のいずれかに記載の多特異性分子。
［９］前記ＶＬが、配列番号１３０のヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、［３］～［８］のいずれかに記載の多特異性分子。
［１０］前記ＶＨおよびＶＬが、
それぞれ、配列番号３２４および３４１、
それぞれ、配列番号３２３および３４１、
それぞれ、配列番号３２５および３４１、
それぞれ、配列番号３２６および３４１、
それぞれ、配列番号３２７および３４１、
それぞれ、配列番号３２８および３４１、
それぞれ、配列番号３２９および３４１、
それぞれ、配列番号３３０および３４１、
それぞれ、配列番号３３１および３４１、
それぞれ、配列番号３３２および３４１、
それぞれ、配列番号３３３および３４１、
それぞれ、配列番号３３４および３４１、
それぞれ、配列番号３３５および３４１、または
それぞれ、配列番号３３６および３４１
のアミノ酸配列を含む、［３］～［９］のいずれかに記載の多特異性分子。
［１１］配列番号１２７のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、［３］～１０］のいずれかに記載の多特異性分子。
［１２］配列番号１２８のヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、［３］～［１１］のいずれかに記載の多特異性分子。
［１３］前記抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分が、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４０３、４７８、４７９、４３３、４３５および４３７のアミノ酸配列を含む、［１］または［２］に記載の多特異性分子。
［１４］前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３が、
それぞれ、配列番号４０３、４１１、４２２、４３３、４３５および４３７、
それぞれ、配列番号４０３、４１０、４２２、４３３、４３５および４３７、
それぞれ、配列番号４０３、４１０、４２３、４３３、４３５および４３７、または
それぞれ、配列番号４０３、４１２、４２２、４３３、４３５および４３７
のアミノ酸配列を含む、［１３］に記載の多特異性分子。
［１５］前記ＶＨが、配列番号３３７～３４０のいずれかのアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、任意選択により、前記ＶＨが、配列番号３３９のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、［１３］または［１４］に記載の多特異性分子。
［１６］前記ＶＨが、配列番号１３８のヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、［１３］～［１５］のいずれかに記載の多特異性分子。
［１７］前記ＶＬが、配列番号１３９もしくは３４２のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、任意選択により、前記ＶＬが、配列番号１３９のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、［１３］～［１６］のいずれかに記載の多特異性分子。
［１８］前記ＶＬが、配列番号１４０のヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、［１３］～［１７］のいずれかに記載の多特異性分子。
［１９］前記ＶＨおよびＶＬが、
それぞれ、配列番号３３９および１３９、
それぞれ、配列番号３３７および３４２、
それぞれ、配列番号３３８および３４２、
それぞれ、配列番号３３９および３４２、または
それぞれ、配列番号３４０および３４２
のアミノ酸配列を含む、［１３］～［１８］のいずれかに記載の多特異性分子。
［２０］配列番号１３６のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、［１３］～［１９］のいずれかに記載の多特異性分子。
［２１］配列番号１３７のヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、［１３］～［２０］のいずれかに記載の多特異性分子。
［２２］前記抗ＣＣＲ２結合部分が、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４４６、４４７、４４８、４５４、４５５および４５６のアミノ酸配列を含む、［１］～［２１］のいずれかに記載の多特異性分子。
［２３］前記ＶＨが、配列番号４８０のアミノ酸配列を含まず、かつ／または前記ＶＬが、配列番号４８１のアミノ酸配列を含まない、［１］～［２２］のいずれかに記載の多特異性分子。
［２４］前記ＶＨが、配列番号３４３もしくは３４４のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、任意選択により、前記ＶＨが、配列番号３４３のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、［１］～［２３］のいずれかに記載の多特異性分子。
［２５］前記ＶＨが、配列番号１３３のヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、［１］～［２４］のいずれかに記載の多特異性分子。
［２６］前記ＶＬが、配列番号３４５のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、［１］～［２５］のいずれかに記載の多特異性分子。
［２７］前記ＶＬが、配列番号２７２のヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、［１］～［２６］のいずれかに記載の多特異性分子。
［２８］前記ＶＨおよびＶＬが、
それぞれ、配列番号３４３および３４５、または
それぞれ、配列番号３４４および３４５
のアミノ酸配列を含む、［１］～［２７］のいずれかに記載の多特異性分子。
［２９］配列番号１３１のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９
５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、［１］～［２８］のいずれかに記載の多特異性分子。
［３０］配列番号１３２のヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、［１］～［２９］のいずれかに記載の多特異性分子。
［３１］配列番号３７３のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、［１］～［３０］のいずれかに記載の多特異性分子。
［３２］配列番号１３４のヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０、８５、９０もしくは９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、［１］～３１］のいずれかに記載の多特異性分子。
［３３］配列番号１２７のアミノ酸配列、配列番号１３１のアミノ酸配列、配列番号３７３のアミノ酸配列を含む、［１］～［３２］のいずれかに記載の多特異性分子。
［３４］配列番号１３６のアミノ酸配列、配列番号１３１のアミノ酸配列、配列番号３７３のアミノ酸配列を含む、［１］～［３２］のいずれかに記載の多特異性分子。
［３５］（ｉ）前記抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子が、ＣＳＦ１Ｒに一価性で結合し、かつ／または
（ｉｉ）前記抗ＣＣＲ２抗体分子が、ＣＣＲ２に一価性で結合し、
任意選択により、前記多特異性分子が、ＣＳＦ１Ｒに一価性で結合し、かつＣＣＲ２に一価性で結合する、
［１］～［３４］のいずれかに記載の多特異性分子。
［３６］（ｉ）前記多特異性分子が、ＣＣＲ２の存在下でＣＳＦ１Ｒを阻害し、任意選択により、細胞が、細胞表面上でＣＳＦ１ＲおよびＣＣＲ２の両方を発現する場合、前記多特異性分子が、前記細胞においてＣＳＦ１Ｒの活性（例えば、ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達、例えば、ＣＳＦ－１誘導ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達）を、例えば、少なくとも４０、５０、６０、７０、８０もしくは９０％低減し、かつ／または
（ｉｉ）前記多特異性分子が、ＣＣＲ２の非存在下でＣＳＦ１Ｒを阻害しないか、または実質的に阻害せず、任意選択により、細胞が、細胞表面上でＣＳＦ１Ｒを発現するが、ＣＣＲ２を発現しない場合、前記多特異性分子が、ＣＳＦ１Ｒの活性（例えば、ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達、例えば、ＣＳＦ－１誘導ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達）を低減しないか、またはＣＳＦ１Ｒの活性を２、４、６、８、１０もしくは１５％以下しか低減しない、
［１］～［３５］のいずれかに記載の多特異性分子。
［３７］（ｉ）前記多特異性分子が、ＣＳＦ１Ｒの存在下でＣＣＲ２を阻害し、任意選択により、細胞が、細胞表面上でＣＣＲ２およびＣＳＦ１Ｒの両方を発現する場合、前記多特異性分子が、前記細胞においてＣＣＲ２の活性を、例えば、少なくとも４０、５０、６０、７０、８０もしくは９０％低減し、かつ／または
（ｉｉ）前記多特異性分子が、ＣＳＦ１Ｒの非存在下でＣＣＲ２を阻害しないか、または実質的に阻害せず、任意選択により、細胞が、細胞表面上でＣＣＲ２を発現するが、ＣＳＦ１Ｒを発現しない場合、前記多特異性分子が、ＣＣＲ２の活性を低減しないか、またはＣＣＲ２の活性を２、４、６、８、１０もしくは１５％以下しか低減しない、
［１］～［３６］のいずれかに記載の多特異性分子。
［３８］例えば、図２６Ｂについて実施例２０で説明される方法を使用して測定したとき、前記
ＴＧＦ－ベータ阻害剤が、ＴＧＦ－ベータ１、ＴＧＦ－ベータ２、ＴＧＦ－ベータ３、ＴＧＦ－ベータ１およびＴＧＦ－ベータ３の両方、またはＴＧＦ－ベータ１、ＴＧＦ－ベータ２およびＴＧＦ－ベータ３を阻害する、［１］～［３７］のいずれかに記載の多特異性分子。
［３９］前記ＴＧＦ－ベータ阻害剤が、ＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチド（例えば、ＴＧＦ－ベータ受容体の細胞外ドメイン、またはその機能的バリアント）を含む、［１］～［３８］のいずれかに記載の多特異性分子。
［４０］前記ＴＧＦ－ベータ阻害剤が、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチドのうちの１、２、３つまたはそれよりも多く）、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチドのうちの１、２、３つまたはそれよりも多く）またはＴＧＦＢＲ３ポリペプチド（例えば、ＴＧＦＢＲ３ポリペプチドのうちの１、２、３つまたはそれよりも多く）のうちの１、２つまたはすべてを含む、［１］～［３９］のいずれかに記載の多特異性分子。
［４１］前記ＴＧＦ－ベータ阻害剤が、ＴＧＦＢＲ１ポリペプチドを含み、任意選択により、前記ＴＧＦ－ベータ阻害剤が、
（ｉ）ＴＧＦＢＲ１の細胞外ドメインもしくはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）、
（ｉｉ）配列番号９５、９６、９７、１２０、１２１もしくは１２２の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）、または
（ｉｉｉ）配列番号１０４もしくは１０５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）
を含む、［１］～［４０］のいずれかに記載の多特異性分子。
［４２］前記ＴＧＦ－ベータ阻害剤が、ＴＧＦＢＲ２ポリペプチドを含み、任意選択により、前記ＴＧＦ－ベータ阻害剤が、
（ｉ）ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインもしくはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）、
（ｉｉ）配列番号９８、９９、１２３もしくは１２４の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）、または
（ｉｉｉ）配列番号１００、１０１、１０２および１０３からなる群から選択されるアミノ酸配列、もしくはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）
を含む、［１］～［４１］のいずれかに記載の多特異性分子。
［４３］前記ＴＧＦ－ベータ阻害剤が、ＴＧＦＢＲ３ポリペプチドを含み、任意選択により、前記ＴＧＦ－ベータ阻害剤が、
（ｉ）ＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメインもしくはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）、
（ｉｉ）配列番号１０６、１０７、１２５もしくは１２６の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）、または
（ｉｉｉ）配列番号１０８のアミノ酸配列もしくはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）
を含む、［１］～［４２］のいずれかに記載の多特異性分子。
［４４］前記ＴＧＦ－ベータ阻害剤が、ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドを含み、任意選択により、前記ＴＧＦ－ベータ阻害剤が、
（ｉ）ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦＢＲ１ポリペプチド、
（ｉｉ）ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦＢＲ２ポリペプチド、または
（ｉｉｉ）ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦＢＲ３ポリペプチド
を含む、［１］～［４３］のいずれかに記載の多特異性分子。
［４５］前記ＴＧＦ－ベータ阻害剤が、ヘテロ二量体を形成する２つのＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドを含み、任意選択により、前記ＴＧＦ－ベータ阻害剤が、
（ｉ）ヘテロ二量体を形成するＴＧＦＢＲ１ポリペプチドおよびＴＧＦＢＲ２ポリペプチド、
（ｉｉ）ヘテロ二量体を形成するＴＧＦＢＲ１ポリペプチドおよびＴＧＦＢＲ３ポリペプチド、または
（ｉｉｉ）ヘテロ二量体を形成するＴＧＦＢＲ２ポリペプチドおよびＴＧＦＢＲ３ポリペプチド
を含む、［１］～［４４］のいずれかに記載の多特異性分子。
［４６］前記ＴＧＦ－ベータ阻害剤が、第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドおよび第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドを含む、［１］～［４５］のいずれかに記載の多特異性分子。
［４７］第１のＦｃ領域（例えば、第１のＣＨ１－Ｆｃ領域）および第２のＦｃ領域（例えば、第２のＣＨ１－Ｆｃ領域）を含み、任意選択により、
（ｉ）前記第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドが、例えば、リンカーを介して、前記第１のＦｃ領域（例えば、第１のＣＨ１－Ｆｃ領域）、例えば、前記第１のＦｃ領域（例えば、第１のＣＨ１－Ｆｃ領域）のＣ末端に連結されており、かつ
（ｉｉ）前記第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドが、例えば、リンカーを介して、前記第２のＦｃ領域（例えば、第２のＣＨ１－Ｆｃ領域）、例えば、前記第２のＦｃ領域（例えば、第２のＣＨ１－Ｆｃ領域）のＣ末端に連結されており、任意選択により、
前記第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドおよび前記第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドが、ホモ二量体またはヘテロ二量体、例えば、ホモ二量体を形成し、任意選択により、
前記第１または第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドが、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２またはＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメイン、例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインを含み、任意選択により、
前記多特異性分子が、図３５Ａまたは３５Ｂの構成を有する、
［４６］に記載の多特異性分子。
［４８］（ｉ）配列番号１９２のアミノ酸配列および配列番号１９３のアミノ酸配列、
（ｉｉ）配列番号１９２のアミノ酸配列および配列番号１９５のアミノ酸配列、
（ｉｉｉ）配列番号１９４のアミノ酸配列および配列番号１９３のアミノ酸配列、または
（ｉｖ）配列番号１９４のアミノ酸配列および配列番号１９５のアミノ酸配列
を含む、［４７］に記載の多特異性分子。
［４９］重鎖定常領域１（ＣＨ１）および軽鎖定常領域（ＣＬ）を含み、任意選択により、
（ｉ）前記第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドが、例えば、リンカーを介して、前記ＣＨ１、例えば、前記ＣＨ１のＮ末端に連結されており、かつ
（ｉｉ）前記第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドが、例えば、リンカーを介して、前記ＣＬ、例えば、前記ＣＬのＮ末端に連結されており、任意選択により、
前記第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドおよび前記第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドが、ホモ二量体またはヘテロ二量体、例えば、ホモ二量体を形成し、任意選択により、
前記第１または第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドが、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２またはＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメイン、例えば、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインを含み、任意選択により、
前記多特異性分子が、図３５Ｃまたは３５Ｄの構成を有する、
［４６］に記載の多特異性分子。
［５０］（ｉ）配列番号１９６のアミノ酸配列および配列番号１９８のアミノ酸配列、
（ｉｉ）配列番号１９６のアミノ酸配列および配列番号１９９のアミノ酸配列、
（ｉｉｉ）配列番号１９７のアミノ酸配列および配列番号１９８のアミノ酸配列、または
（ｉｖ）配列番号１９７のアミノ酸配列および配列番号１９９のアミノ酸配列
を含む、［４９］に記載の多特異性分子。
［５１］（ｉ）ＴＧＦ阻害剤が、例えば、リンカーを介して、前記抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）もしくは前記抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）に連結されているか；
（ｉｉ）前記抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および／もしくは前記抗ＣＣＲ２結合部分が、Ｆｃ領域を含み、前記ＴＧＦ阻害剤が、例えば、リンカーを介して、前記Ｆｃ領域、例えば、前記Ｆｃ領域のＣ末端に連結されているか；
（ｉｉｉ）前記多特異性分子が、第１のＴＧＦ－ベータ阻害剤および第２のＴＧＦ－ベータ阻害剤を含み、前記第１のＴＧＦ－ベータ阻害剤が、例えば、リンカーを介して、前記抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分（例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子）に連結されており、前記第２のＴＧＦ－ベータ阻害剤が、例えば、リンカーを介して、前記抗ＣＣＲ２結合部分（例えば、抗ＣＣＲ２抗体分子）に連結されているか；または
（ｉｖ）前記抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分が、第１のＦｃ領域を含み、前記抗ＣＣＲ２結合部分が、第２のＦｃ領域を含み、前記多特異性分子が、第１のＴＧＦ－ベータ阻害剤および第２のＴＧＦ－ベータ阻害剤を含み、前記第１のＴＧＦ－ベータ阻害剤が、例えば、リンカーを介して、前記第１のＦｃ領域、例えば、前記第１のＦｃ領域のＣ末端に連結されており、前記第２のＴＧＦ－ベータ阻害剤が、例えば、リンカーを介して、前記第２のＦｃ領域、例えば、前記第２のＦｃ領域のＣ末端に連結されている、
［１］～［４５］のいずれかに記載の多特異性分子。
［５２］（ｉ）前記抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分が、第１の軽鎖および第１の重鎖を含み、前記第１の重鎖が、第１のＦｃ領域を含み、前記第１のＦｃ領域のＣ末端が、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）に連結されており；かつ
（ｉｉ）前記抗ＣＣＲ２結合部分が、第２の軽鎖および第２の重鎖を含み、前記第２の重鎖が、第２のＦｃ領域を含み、前記第２のＦｃ領域のＣ末端が、ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメイン、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％同一の配列）に連結されており、任意選択により、
前記多特異性分子が、図１２Ｂで示される構成を有する、
［１］～［４５］のいずれかに記載の多特異性分子。
［５３］表３４または表２８で開示される分子を含む、［１］～［５２］のいずれかに記載の多特異性分子。
［５４］図３９Ｆまたは１２Ａ～１２Ｊのいずれかで示される構成を有する、［１］～［５３］のいずれかに記載の多特異性分子。
［５５］重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、
（ｉ）前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４０２、４７４および４７５のアミノ酸配列を含み；かつ
（ｉｉ）前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４３２、４３４および４３６、またはそれぞれ、配列番号４３３、４３５および４３７のアミノ酸配列を含む、
ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子。
［５６］前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４０２、４０５、４１３、４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む、［５５］に記載の抗体分子。
［５７］前記ＶＨおよびＶＬが、それぞれ、配列番号３２４および３４１のアミノ酸配列を含む、［５５］または［５６］に記載の抗体分子。
［５８］重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、
（ｉ）前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４０３、４７８および４７９のアミノ酸配列を含み；かつ
（ｉｉ）前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４３３、４３５および４３７、またはそれぞれ、配列番号４３２、４３４および４３６のアミノ酸配列を含む、
ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体分子。
［５９］前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４０３、４１１、４２２、４３３、４３５および４３７のアミノ酸配列を含む、［５８］に記載の抗体分子。
［６０］前記ＶＨおよびＶＬが、それぞれ、配列番号３３９および１３９のアミノ酸配列を含む、［５８］または［５９］に記載の抗体分子。
［６１］重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４４６、４４７、４４８、４５４、４５５および４５６のアミノ酸配列を含み、
（ｉ）前記ＶＨが、配列番号４８０のアミノ酸配列を含まないか、または
（ｉｉ）前記ＶＬが、配列番号４８１のアミノ酸配列を含まない、
ＣＣＲ２に結合する抗体分子。
［６２］前記ＶＨおよびＶＬが、それぞれ、配列番号３４３および３４５のアミノ酸配列を含む、［６１］に記載の抗体分子。
［６３］重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含
む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４６１、４６２、４６３、４６７、４６８および４６９のアミノ酸配列を含む、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体分子。
［６４］前記ＶＨが、配列番号３４６のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、［６３］に記載の抗体分子。
［６５］前記ＶＬが、配列番号３４７のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０、９２、９４、９６、９８もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、［６３］または［６４］に記載の抗体分子。
［６６］前記ＶＨおよびＶＬが、それぞれ、配列番号３４６および３４７のアミノ酸配列を含む、［６３］～［６５］のいずれかに記載の抗体分子。
［６７］抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および抗ＣＣＲ２結合部分を含む多特異性分子であって、前記抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分が、［５５］～［６０］のいずれかに記載の抗体分子を含む多特異性分子。
［６８］抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分および抗ＣＣＲ２結合部分を含む多特異性分子であって、前記抗ＣＣＲ２結合部分が、［６１］または［６２］に記載の抗体分子を含む多特異性分子。
［６９］前記抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分が、［５５］～［６０］のいずれかに記載の抗体分子を含み、前記抗ＣＣＲ２結合部分が、［６１または［６２］に記載の抗体分子を含む、［６７］または［６８］に記載の多特異性分子。
［７０］［１］～［５４］もしくは［６７］～［６９］のいずれかに記載の多特異性分子、または［５５］～［６６］のいずれかに記載の抗体分子をコードする単離された核酸分子。
［７１］［７０］の核酸分子を含むベクター、例えば、発現ベクター。
［７２］［７０］の核酸分子または［７１］のベクターを含む細胞、例えば、宿主細胞。
［７３］［１］～［５４］もしくは［６７］～［６９］のいずれかに記載の多特異性分子、または［５５］～［６６］のいずれかに記載の抗体分子を作製、例えば、産生する方法であって、［７２］に記載の細胞、例えば、宿主細胞を好適な条件、例えば、遺伝子発現および／またはヘテロ二量体化に好適な条件下で培養するステップを含む方法。
［７４］［１］～［５４］もしくは［６７］～［６９］のいずれかに記載の多特異性分子、または［５５］～［６６］のいずれかに記載の抗体分子、および薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤を含む医薬組成物。
［７５］対象においてがんを処置する方法であって、それを必要とする前記対象に、［１］～［５４］もしくは［６７］～［６９］のいずれかに記載の多特異性分子、［５５］～［６６］のいずれかに記載の抗体分子、または［７４］に記載の医薬組成物を投与するステップを含み、前記多特異性分子、抗体分子または医薬組成物が、前記がんを処置するのに有効な量で投与される、方法。
［７６］前記がんが、固形腫瘍がんまたは転移病変である、［７５］に記載の方法。
［７７］前記固形腫瘍がんが、膵がん（例えば、膵臓腺癌）、乳がん、結腸直腸がん、肺がん（例えば、小細胞または非小細胞肺がん）、皮膚がん（例えば、黒色腫）、卵巣がん、肝がん、脳がん（例えば、神経膠腫）、膀胱がん、子宮頸がん、頭頸部がん、腎がん、中皮がん、甲状腺がんまたは子宮がんのうちの１つまたは複数である、［７６］に記載の方法。
［７８］前記がんが、血液がんである、［７７］に記載の方法。
［７９］前記血液がんが、骨髄増殖性疾患、例えば、原発性もしくは特発性骨髄線維症（ＭＦ）、本態性血小板増加症（ＥＴ）、真性赤血球増加症（ＰＶ）または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）である、［７８］に記載の方法。
［８０］第２の治療的処置を投与するステップをさらに含み、任意選択により、前記第２の治療的処置が、治療剤（例えば、化学療法剤、生物剤、ホルモン治療）、放射線照射または手術を含み、任意選択により、前記治療剤が、化学療法剤または生物剤から選択され、任意選択により、前記治療剤が、チェックポイント阻害剤である、［７５］～［７９］のいずれかに記載の方法。
［８１］前記チェックポイント阻害剤が、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体（例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブまたはピディリズマブ）、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＣＤ１６０抗体、抗２Ｂ４抗体、抗ＣＤ８０抗体、抗ＣＤ８６抗体、抗Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）抗体、抗Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）抗体、抗ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０）抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗ＭＨＣクラスＩ抗体、抗ＭＨＣクラスＩＩ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＩＲ１抗体および抗Ａ２ａＲ抗体からなる群から選択され、任意選択により、前記チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ１抗体である、［８０］に記載の方法。
均等物
当業者は、単に慣例的な実験を使用して、本明細書に記載される本発明の具体的な実施形態の多くの均等物を認識するかまたは確かめることができるだろう。そのような均等物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。

Claims (32)

  1. （ａ）抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分；および
    （ｂ）抗ＣＣＲ２結合部分；
    を含む多特異性分子であって、
    （１）抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分が
    （ｉ）それぞれ配列番号４０２、４７４、および４７５、または配列番号４０２、４７６および４７７の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）および重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および
    それぞれ配列番号４３２、４３４、および４３６の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）および軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    （ｉｉ）それぞれ配列番号４０３、４７８、および４７９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含むＶＨ、およびそれぞれ配列番号４３３、４３５、および４３７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むＶＬ
    を含む抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子またはその抗原結合断片である；および
    （２）抗ＣＣＲ２結合部分が、それぞれ配列番号４４６、４４７、および４４８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含むＶＨ、およびそれぞれ配列番号４５４、４５５、および４５６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む抗ＣＣＲ２抗体分子またはその抗原結合断片であり、ここで
    （ｉ）抗ＣＣＲ２結合部分が配列番号４８０のアミノ酸配列を含むＶＨを含まない、
    （ｉｉ）抗ＣＣＲ２結合部分が配列番号４８１のアミノ酸配列を含むＶＬを含まない、または
    （ｉｉｉ）抗ＣＣＲ２結合部分が配列番号４８０のアミノ酸配列を含むＶＨを含まず、かつない、抗ＣＣＲ２結合部分が配列番号４８１のアミノ酸配列を含むＶＬを含まない；
    前記多特異性分子。
  2. 多特異性分子が第１のポリペプチド鎖および第２のポリペプチド鎖を含み；
    第１のポリペプチド鎖が第１の重鎖定常領域を含み、第２のポリペプチド鎖が第２の重鎖定常領域を含み；
    第１の重鎖定常領域および第２の重鎖定常領域が独立に、ＩｇＧ１またはその機能的断片、ＩｇＧ２またはその機能的断片、ＩｇＧ３またはその機能的断片、またはＩｇＧ４またはその機能的断片からなる群から選択され；および
    抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分が第１の重鎖定常領域に連結されており、抗ＣＣＲ２結合部分が第１の重鎖定常領域または第２の重鎖定常領域に連結されている、
    請求項１に記載の多特異性分子。
  3. （ｉ）抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分のＶＨが第１の重鎖定常領域に連結されており、多特異性分子がさらに第３のポリペプチド鎖を含み、第３のポリペプチド鎖が抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分のＶＬを含み、または
    （ｉｉ）抗ＣＣＲ２結合部分のＶＨが第１の重鎖定常領域または第２の重鎖定常領域に連結されており、多特異性分子がさらに第４のポリペプチド鎖を含み、第４のポリペプチド鎖が抗ＣＣＲ２結合部分のＶＬを含む、
    請求項１または２に記載の多特異性分子。
  4. 抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分が
    （ｉ）それぞれ配列番号４０２、４０５、および４１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含むＶＨ、およびそれぞれ配列番号４３２、４３４および４３６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
    （ｉｉ）それぞれ配列番号４０２，４０４，および４１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含むＶＨ、およびそれぞれ配列番号４３２、４３４および４３６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むＶＬ；、
    （ｉｉｉ）それぞれ配列番号４０２，４０６，および４１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含むＶＨ、およびそれぞれ配列番号４３２、４３４および４３６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むＶＬ；、
    （ｉｖ）それぞれ配列番号４０２、４０５、および４１４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含むＶＨ、およびそれぞれ配列番号４３２、４３４および４３６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
    （ｖ）それぞれ配列番号４０２、４０７、および４１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含むＶＨ、およびそれぞれ配列番号４３２、４３４および４３６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
    （ｖｉ）それぞれ配列番号４０２、４０４、および４１５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含むＶＨ、およびそれぞれ配列番号４３２、４３４および４３６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
    （ｖｉｉ）それぞれ配列番号４０２、４０８、および４１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含むＶＨ、およびそれぞれ配列番号４３２、４３４および４３６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
    （ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号４０２、４０４、および４１６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含むＶＨ、およびそれぞれ配列番号４３２、４３４および４３６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
    （ｉｘ）それぞれ配列番号４０２、４０４、および４１７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含むＶＨ、およびそれぞれ配列番号４３２、４３４および４３６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
    （ｘ）それぞれ配列番号４０２、４０９、および４１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含むＶＨ、およびそれぞれ配列番号４３２、４３４および４３６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
    （ｘｉ）それぞれ配列番号４０２、４０４、および４１８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含むＶＨ、およびそれぞれ配列番号４３２、４３４および４３６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
    （ｘｉｉ）それぞれ配列番号４０２、４０４、および４１９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
    、およびＨＣＤＲ３を含むＶＨ、およびそれぞれ配列番号４３２、４３４および４３６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
    （ｘｉｉｉ）それぞれ配列番号４０２、４０４、および４２０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含むＶＨ、およびそれぞれ配列番号４３２、４３４および４３６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
    （ｘｉｖ）それぞれ配列番号４０２、４０４、および４２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含むＶＨ、およびそれぞれ配列番号４３２、４３４および４３６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
    （ｘｖ）それぞれ配列番号４０３、４１１、および４２２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含むＶＨ、およびそれぞれ配列番号４３３、４３５および４３７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
    （ｘｖｉ）それぞれ配列番号４０３、４１０、および４２２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含むＶＨ、およびそれぞれ配列番号４３３、４３５および４３７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
    （ｘｖｉｉ）それぞれ配列番号４０３、４１０、および４２３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含むＶＨ、およびそれぞれ配列番号４３３、４３５および４３７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むＶＬ；または
    （ｘｖｉｉｉ）それぞれ配列番号４０３、４１２、および４２２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含むＶＨ、およびそれぞれ配列番号４３３、４３５および４３７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
    を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の多特異性分子。
  5. 抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分が
    （ａ）配列番号３２３～３３６、および３３９からなる群から選択されるいずれか１つの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号３３７、３３８、および３４０からなる群から選択されるいずれか１つの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ；
    （ｂ）配列番号３４１または配列番号１３９の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号３４２の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；または
    （ｃ）それらの組合せ
    を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の多特異性分子。
  6. 抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分が
    （ａ）配列番号３２３～３４０からなる群から選択されるいずれか１つの配列を含むＶＨ；
    （ｂ）配列番号３４１、配列番号１３９、または配列番号３４２の配列有するアミノ酸配列を含むＶＬ；または
    （ｃ）それらの組合せ
    を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の多特異性分子。
  7. 抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分が
    （ｉ）それぞれ、配列番号３２３および３４１；
    （ｉｉ）それぞれ、配列番号３２４および３４１；
    （ｉｉｉ）それぞれ、配列番号３２５および３４１；
    （ｉｖ）それぞれ、配列番号３２６および３４１；
    （ｖ）それぞれ、配列番号３２７および３４１；
    （ｖｉ）それぞれ、配列番号３２８および３４１；
    （ｖｉｉ）それぞれ、配列番号３２９および３４１；
    （ｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号３３０および３４１；
    （ｉｘ）それぞれ、配列番号３３１および３４１；
    （ｘ）それぞれ、配列番号３３２および３４１；
    （ｘｉ）それぞれ、配列番号３３３および３４１；
    （ｘｉｉ）それぞれ、配列番号３３４および３４１；
    （ｘｉｉｉ）それぞれ、配列番号３３５および３４１；
    （ｘｉｖ）それぞれ、配列番号３３６および３４１；
    （ｘｖ）それぞれ、配列番号３３７および３４２；
    （ｘｖｉ）それぞれ、配列番号３３８および３４２；
    （ｘｖｉｉ）それぞれ、配列番号３３９および１３９；
    （ｘｖｉ）それぞれ、配列番号３３９および３４２；
    （ｘｖ）それぞれ、配列番号３４０および３４２；
    （ｘｖｉ）それぞれ、配列番号３２３および３４２；または
    （ｘｖ）それぞれ、配列番号３３７および３４１
    のアミノ酸配列を含むＶＨおよびＶＬを含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の多特異性分子。
  8. 抗ＣＣＲ２結合部分が
    （ｉ）配列番号３４３または配列番号３４４のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ；
    （ｉｉ）配列番号３４５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；または
    （ｉｉｉ）それらの組合せ
    を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の多特異性分子。
  9. 抗ＣＣＲ２結合部分が、それぞれ、配列番号３４３および３４５；またはそれぞれ、配列番号３４４および３４５のアミノ酸配列を含むＶＨおよびＶＬを含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の多特異性分子。
  10. （ｉ）配列番号３８６または配列番号３８７の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖；
    （ｉｉ）配列番号３５１～３６５からなる群から選択されるいずれか１つの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖、および配列番号３６９の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第３のポリペプチド鎖；または
    （ｉｉｉ）配列番号３５１、および３６５～３６８からなる群から選択されるいずれか１つの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖、および配列番号３７０の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第３のポリペプチド鎖、
    を含む、請求項２～９のいずれか１項に記載の多特異性分子。
  11. （ｉ）配列番号３８６または配列番号３８７の配列を含む第１のポリペプチド鎖；
    （ｉｉ）配列番号３５１～３６５からなる群から選択されるいずれか１つの配列を含む第１のポリペプチド鎖、および配列番号３６９の配列を含む第３のポリペプチド鎖；または
    （ｉｉｉ）配列番号３５１、および３６５～３６８からなる群から選択されるいずれか１つの配列を含む第１のポリペプチド鎖、および配列番号３７０の配列を含む第３のポリペプチド鎖、
    を含む、請求項２～１０のいずれか１項に記載の多特異性分子。
  12. 配列番号３７１または配列番号３７２の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖または第２のポリペプチド鎖、および配列番号３７３の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第４のポリペプチド鎖を含む、請求項３～１１のいずれか１項に記載の多特異性分子。
  13. 配列番号３７１または配列番号３７２の配列を含む第１のポリペプチド鎖または第２のポリペプチド鎖、および配列番号３７３の配列を含む第４のポリペプチド鎖を含む、請求項３～１２のいずれか１項に記載の多特異性分子。
  14. ＴＧＦ－ベータ阻害剤、１つまたは複数のサイトカイン分子、抗ＰＤ－Ｌ１結合部分、またはその組合せをさらに含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載の多特異性分子。
  15. （ｉ）ＴＧＦ－ベータ阻害剤が、第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドおよび第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドを含み、第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドおよび第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドが：
    （１）ホモ二量体を形成し、第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドおよび第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドが：
    （ａ）ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦＢＲ１ポリペプチド、
    （ｂ）ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦＢＲ２ポリペプチド、または
    （ｃ）ホモ二量体を形成する２つのＴＧＦＢＲ３ポリペプチド
    である、
    （２）ヘテロ二量体を形成し、第１のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドおよび第２のＴＧＦ－ベータ受容体ポリペプチドが：
    （ａ）ヘテロ二量体を形成するＴＧＦＢＲ１ポリペプチドおよびＴＧＦＢＲ２ポリペプチド、
    （ｂ）ヘテロ二量体を形成するＴＧＦＢＲ１ポリペプチドおよびＴＧＦＢＲ３ポリペプチド、または
    （ｃ）ヘテロ二量体を形成するＴＧＦＢＲ２ポリペプチドおよびＴＧＦＢＲ３ポリペプチド
    である、または
    （ｉｉ）１つまたは複数のサイトカイン分子が、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）、インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）、インターロイキン－１８（ＩＬ－１８）、インターロイキン－２１（ＩＬ－２１）、インターロイキン－７（ＩＬ－７）、インターフェロンガンマ、またはそれらのいずれかの組合せからなる群から選択される、
    請求項１４に記載の多特異性分子。
  16. （Ａ）（ａ）ＴＧＦＢＲ１ポリペプチドが：
    （ｉ）ＴＧＦＢＲ１の細胞外ドメイン；
    （ｉｉ）配列番号９５、９６、９７、１２０、１２１、または１２２の細胞外ドメインと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列；
    （ｉｉｉ）配列番号１０４または配列番号１０５の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列；または
    （ｉｖ）配列番号１０４または配列番号１０５の配列；
    を含む；
    （ｂ）ＴＧＦＢＲ２ポリペプチドが：
    （ｉ）ＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメイン；
    （ｉｉ）配列番号９８、９９、１２３、または１２４の細胞外ドメインと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列；
    （ｉｉｉ）配列番号１００，１０１、１０２、および１０３の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列；または
    （ｉｖ）配列番号１００，１０１、１０２、および１０３の配列；
    を含む；
    （ｃ）ＴＧＦＢＲ３ポリペプチドが：
    （ｉ）ＴＧＦＢＲ３の細胞外ドメイン；
    （ｉｉ）配列番号１０６、１０７、１２５、または１２６の細胞外ドメインと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列；
    （ｉｉｉ）配列番号１０８の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列；または
    （ｉｖ）配列番号１０８の配列；
    を含む；
    （Ｂ）１つまたは複数のサイトカイン分子が、配列番号２３７～２４３および２４６～２４９からなる群から選択される配列を含む；または
    （Ｃ）抗ＰＤ－Ｌ１結合部分が、それぞれ配列番号４６１、４６２、および４６３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含むＶＨ、およびそれぞれ配列番号４６７、４６８および４６９のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むＶＬとを含む、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子またはその抗原結合性断片である、
    請求項１４または１５に記載の多特異性分子。
  17. 抗ＰＤ－Ｌ１結合部分が、配列番号３４６の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、配列番号３４７の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ、またはその組合せを含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子またはその抗原結合性断片である、
    請求項１６に記載の多特異性分子。
  18. 抗ＰＤ－Ｌ１結合部分が、配列番号３４６の配列を含むＶＨ、配列番号３４７の配列を含むＶＬ、またはその組合せを含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子またはその抗原結合性断片である、
    請求項１６または１７に記載の多特異性分子。
  19. （ａ）（ｉ）ＴＧＦ阻害剤が、前記抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分または前記抗ＣＣＲ２結合部分に連結されている；
    （ｉｉ）多特異性分子が、第１のＴＧＦ－ベータ阻害剤および第２のＴＧＦ－ベータ阻害剤を含み、第１のＴＧＦ－ベータ阻害剤が抗ＣＳＦ１Ｒ結合部分に連結されており、第２のＴＧＦ－ベータ阻害剤が抗ＣＣＲ２結合部分に連結されている；
    （ｉｉｉ）多特異性分子が、第１のＴＧＦ－ベータ阻害剤および第２のＴＧＦ－ベータ阻害剤を含み、第１のＴＧＦ－ベータ阻害剤が第１の重鎖定常領域に連結されており、第２のＴＧＦ－ベータ阻害剤が第２の重鎖定常領域に連結されている；
    （ｉｖ）多特異性分子が、第１のＴＧＦ－ベータ阻害剤、第２のＴＧＦ－ベータ阻害剤、および第３のポリペプチド鎖を含み、第１のＴＧＦ－ベータ阻害剤が第１の重鎖定常領域または第２の重鎖定常領域に連結されており、第２のＴＧＦ－ベータ阻害剤が第３のポリペプチド鎖に連結されている；または
    （ｉｖ）多特異性分子が、第１のＴＧＦ－ベータ阻害剤、第２のＴＧＦ－ベータ阻害剤、および第４のポリペプチド鎖を含み、第１のＴＧＦ－ベータ阻害剤が第１の重鎖定常領域または第２の重鎖定常領域に連結されており、第２のＴＧＦ－ベータ阻害剤が第４のポリペプチド鎖に連結されている；
    （ｂ）１つまたは複数のサイトカイン分子が、第１の重鎖定常領域、第２の重鎖定常領域、軽鎖定常領域、またはその組合せに連結されている；
    （ｃ）抗ＰＤ－Ｌ１結合部分が、第１の重鎖定常領域、または第２の重鎖定常領域に連結されている；または
    （ｄ）（ａ）～（ｂ）のいずれかの組合せである、
    請求項１４～１８のいずれか１項に記載の多特異性分子。
  20. （ａ）（ｉ）配列番号１９２および配列番号１９３のアミノ酸配列、
    （ｉｉ）配列番号１９２および配列番号１９５のアミノ酸配列、
    （ｉｉｉ）配列番号１９４および配列番号１９３のアミノ酸配列、
    （ｉｖ）配列番号１９４および配列番号１９５のアミノ酸配列
    （ｂ）（ｉ）配列番号１９６および配列番号１９８のアミノ酸配列、
    （ｉｉ）配列番号１９６および配列番号１９９のアミノ酸配列、
    （ｉｉｉ）配列番号１９７および配列番号１９８のアミノ酸配列、または
    （ｉｖ）配列番号１９７および配列番号１９９のアミノ酸配列
    を含む、請求項１４～１９のいずれか１項に記載の多特異性分子。
  21. （ｉ）配列番号１２７または配列番号１３６の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号１３１の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、および配列番号３７３の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列；
    （ｉｉ）配列番号３５１の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号３６９の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号３７６の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、および配列番号３７３の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列；
    （ｉｉｉ）配列番号３６５の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号３７０の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号３７６の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、および配列番号３７３の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列；
    （ｉｖ）配列番号３７４の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号３６９の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号３７１の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、および配列番号３７３の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列；
    （ｖ）配列番号３７５の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号３７０の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号３７１の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、および配列番号３７３の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列；
    （ｖｉ）配列番号３５１の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号３７７または配列番号３７８の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号３７１の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、および配列番号３７３の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列；
    （ｖｉｉ）配列番号３６５の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号３７９または配列番号３８０の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号３７１の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、および配列番号３７３の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列；
    （ｖｉｉｉ）配列番号３５１の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号３６９の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号３７１の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、および配列番号３８１の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列；
    （ｉｘ）配列番号３６５の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号３７０の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号３７１の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、および配列番号３８２の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列；
    （ｘ）配列番号３８３の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号３６９または配列番号３７０の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号３８５の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、および配列番号３７３の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列；
    （ｘｉ）配列番号３８８または配列番号３８９の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号３８５の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、および配列番号３７３の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列；
    （ｘｉｉ）配列番号３９０の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号３９１の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号３９２または配列番号３９３の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、および配列番号３７３の配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列
    を含む、請求項１４～２０のいずれか１項に記載の多特異性分子。
  22. （ｉ）配列番号１２７または配列番号１３６の配列、配列番号１３１の配列、および配列番号３７３の配列；
    （ｉｉ）配列番号３５１の配列、配列番号３６９の配列、配列番号３７６の配列、および配列番号３７３の配列；
    （ｉｉｉ）配列番号３６５の配列、配列番号３７０の配列、配列番号３７６の配列、および配列番号３７３；
    （ｉｖ）配列番号３７４の配列、配列番号３６９の配列、配列番号３７１の配列、および配列番号３７３の配列；
    （ｖ）配列番号３７５の配列、配列番号３７０の配列、配列番号３７１の配列、および配列番号３７３の配列；
    （ｖｉ）配列番号３５１の配列、配列番号３７７または配列番号３７８の配列、配列番号３７１の配列、および配列番号３７３の配列；
    （ｖｉｉ）配列番号３６５の配列、配列番号３７９または配列番号３８０の配列、配列番号３７１の配列、および配列番号３７３の配列；
    （ｖｉｉｉ）配列番号３５１の配列、配列番号３６９の配列、配列番号３７１の配列、および配列番号３８１の配列；
    （ｉｘ）配列番号３６５の配列、配列番号３７０の配列、配列番号３７１の配列、および配列番号３８２の配列；
    （ｘ）配列番号３８３の配列、配列番号３６９または配列番号３７０の配列、配列番号３８５の配列、および配列番号３７３の配列；
    （ｘｉ）配列番号３８８または配列番号３８９の配列、配列番号３８５の配列、および配列番号３７３の配列；または
    （ｘｉｉ）配列番号３９０の配列、配列番号３９１の配列、配列番号３９２または配列番号３９３の配列、および配列番号３７３の配列
    を含む、請求項１４～２１のいずれか１項に記載の多特異性分子。
  23. 請求項１～２２のいずれか１項に記載の多特異性分子をコードする配列を含む、組換えポリヌクレオチド。
  24. 請求項１～２２のいずれか１項に記載の多特異性分子、および薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤を含む医薬組成物。
  25. 癌の処置を必要とする対象でのがんを処置する方法において使用するための、請求項１～２２のいずれか１項に記載の多特異性分子を含む医薬組成物。
  26. がんが、固形腫瘍がん、血液がんまたは転移病変である、請求項２５に記載の医薬組成物。
  27. （ｉ）固形腫瘍がんが、膵がん、乳がん、結腸直腸がん、肺がん、皮膚がん、卵巣がん、肝がん、脳がん、膀胱がん、子宮頸がん、頭部がん、頸部がん、腎がん、中皮がん、甲状腺がんまたは子宮がんのうちの１つまたは複数である；または
    （ｉｉ）血液のがんが骨髄増殖性腫瘍である、
    請求項２６に記載の医薬組成物。
  28. 骨髄増殖性腫瘍が、原発性もしくは特発性骨髄線維症（ＭＦ）、本態性血小板増加症（ＥＴ）、真性赤血球増加症（ＰＶ）または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）である、請求項２７に記載の医薬組成物。
  29. 第２の治療的処置と組み合わせて対象に投与される、請求項２５～２８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  30. 第２の治療的処置が、治療剤、放射線照射または手術を含み。治療剤が、化学療法剤、生物剤、ホルモン治療からなる群から選択される、請求項２９に記載の医薬組成物。
  31. 治療剤がチェックポイント阻害剤である、請求項３０に記載の医薬組成物。
  32. チェックポイント阻害剤が、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＣＤ１６０抗体、抗２Ｂ４抗体、抗ＣＤ８０抗体、抗ＣＤ８６抗体、抗Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）抗体、抗Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）抗体、抗ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０）抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗ＭＨＣクラスＩ抗体、抗ＭＨＣクラスＩＩ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＩＲ１抗体および抗Ａ２ａＲ抗体からなる群から選択される。請求項３１に記載の医薬組成物。
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