KR20230088768A - 췌관 샘암종 치료를 위한 병용 면역치료학적 방법 및 조성물 - Google Patents

췌관 샘암종 치료를 위한 병용 면역치료학적 방법 및 조성물 Download PDF

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Abstract

본 개시내용의 측면은 췌관 샘암종 (pancreatic ductal adenocarcinoma; PDAC)를 갖는 대상자를 치료하기 위한 면역치료학적 방법을 지시한다. PDAC에 대해 효과적인 면역 반응을 생성하는 2개 이상의 면역치료학적 제제를 사용한 치료를 포함하는 방법이 개시된다. 특정 측면은 일부 경우 PDAC의 치료를 위한 케모킨 수용체 억제제와 함께 LAG-3 길항제 및 41BB 작용제의 사용을 포함하는 방법에 관한 것이다. 또한 LAG-3 길항제 및 41BB 작용제를 포함하는 조성물이 개시된다. 일부 경우 개시된 조성물은 케모킨 수용체 억제제를 추가로 포함한다.

Description

췌관 샘암종 치료를 위한 병용 면역치료학적 방법 및 조성물
관련 출원에 대한 교차 참조
본 출원은 2020년 10월 13일에 출원된 미국 가출원 번호 63/091,065에 대한 우선권에 이권을 주장하고, 이의 전문이 본원에 참조로서 포함된다.
배경
본 발명은 미국 국립 암 센터에 의해 공급된 CA117969하에 국가 지원으로 실행되었다. 정부는 본 발명의 특정한 이권을 갖는다.
I. 발명의 배경
본 발명의 측면은 적어도 암 생물학, 면역학, 및 약물 분야에 관한 것이다.
II. 배경
췌관 샘암종 (pancreatic ductal adenocarcinoma; PDAC)은 9%의 5-년 전반 생존 (OS) 비율의 가장 치명적인 사람 암 중에 있다 [1]. 전이 PDAC를 위한 치료의 중심은 겜시타빈- 또는 플루오로우라실-기반 용법을 사용한 화학요법이고; 그러나, 화학요법의 이점은 종종 보통 정도이고 일시적이다 [2, 3]. 면역 체크포인트 요법 (Immune checkpoint therapy; ICT)은 다수의 진행 암에 대해 치료 및 생존을 변형시키고; 그러나, PDAC는, PDAC가 항-PD-L1 및 항-CTLA4 기반 요법을 포함하는 현재 이용가능한 ICT에 난치성인 것을 다중 시도에서 나타내기 때문에 '비-면역원성'으로 고려되었다 [4, 5, 6, 7, 8]. PDAC를 "비-면역원성"에서 면역원성으로 변형시켜, 효과적인 면역치료학적 치료 및 유의하게 개선된 결과를 제공할 수 있는 신규한 치료학적 전략이 당해 기술분야에 필요하다.
요지
본 개시내용은 PDAC의 치료를 위한 면역치료학적 제제 및 방법을 제공하여 당해 기술분야에서 특정한 충족되지 않은 필요사항을 충족시킨다. 본 개시내용의 측면은 PDAC의 치료를 위한 면역치료학적 방법을 지시한다. 추가 측면은 면역치료학적 조성물을 지시한다. 본원에 개시된 바와 같이, 이러한 방법 및 조성물은 예상치 못하게 PDAC를 치료가능하게 하고, 장기간 생존을 연장시키고, 일부 실시형태에서, 치유력이 있다. 본 개시내용의 방법은, 일부 실시형태에서, 현재 이용가능한 치료와 비교하여 PDAC 환자에 대해 유의하게 개선된 결과를 제공한다. 특정 측면은 PDAC의 치료를 위한 LAG-3 길항제, 41BB 작용제, 및 케모킨 수용체 (예를 들면, CCR2) 억제제의 사용을 포함하는 병용 치료 전략에 관한 것이다.
본 개시내용의 실시형태는 PDAC에 대해 대상자를 치료하는 방법, PDAC에 대한 면역 반응을 자극하는 방법, 암 면역요법을 위한 방법, 면역세포 활성화를 자극하는 방법, 골수 면역억제 세포를 억제하는 방법, 면역치료학적 조성물, 및 약제학적 조성물을 포함한다. 본 개시내용의 방법은 하기 단계 중 1, 2, 3개 이상을 포함할 수 있다: LAG-3 길항제를 투여함, 41BB 작용제를 투여함, 케모킨 수용체 억제제를 투여함, CCR2 억제제를 투여함, 아르기나제 억제제를 투여함, 화학요법을 투여함, 방사선요법을 투여함, 면역요법을 투여함, PDAC를 갖는 대상자를 진단함, 및 병용 요법을 위한 후보로서 대상자를 확인함. 본 개시내용의 조성물은 다음 성분 중 1, 2, 3개 이상을 포함할 수 있다: LAG-3 길항제, 항-LAG-3 항체, 41BB 작용제, 항-41BB 항체, 케모킨 수용체 억제제, CCR1 억제제, CCR2 억제제, Cxcr2 억제제, 아르기나제 억제제, Arg1 억제제, 및 약제학적으로 허용되는 부형제. 선행하는 단계 또는 성분 중 어느 하나 이상은 본 개시내용의 특정 실시형태에서 제외될 수 있다.
일부 실시형태에서, PDAC를 위해 대상자를 치료하는 방법이 본원에 개시되고, 상기 방법은 대상자에게 (a) 41BB 작용제; (b) LAG3 길항제; 및 (c) 케모킨 수용체 억제제를 투여함을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 추가적인 케모킨 수용체 억제제를 대상자에게 투여함을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 아르기나제 억제제를 대상자에게 투여함을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 아르기나제 억제제는 Arg1 억제제이다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 Cxcr2 억제제를 대상자에게 투여함을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, Cxcr2 억제제는 항-Cxcr2 항체이다. 일부 실시형태에서, 항-Cxcr2 항체는 MAB2164이다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 대상자에서 골수세포의 성장, 증식, 및/또는 면역억제 활성을 억제함을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 추가적인 암 요법을 대상자에게 투여함을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 추가적인 암 요법은 화학요법, 방사선요법, 또는 면역요법을 포함한다. 일부 실시형태에서, 추가적인 암 요법은 FOLFIRINOX이다. 일부 실시형태에서, 추가적인 암 요법은 겜시타빈이다. 일부 실시형태에서, 추가적인 암 요법은 nab-파클리탁셀을 함께 사용한 겜시타빈이다. 일부 실시형태에서, 겜시타빈은, 41BB 작용제, LAG3 길항제, 및 케모킨 수용체 억제제를 투여하기 전에, 대상자에게 투여된다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 대상자에게 어떠한 추가적인 암 요법도 투여함을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 대상자는 PDAC에 대해 사전 치료로 사전 치료되었다. 일부 실시형태에서, 대상자는 사전 치료에 내성인 것으로 결정되었다. 일부 실시형태에서, 사전 치료는 FOLFIRINOX를 포함하였다. 일부 실시형태에서, 사전 치료는 겜시타빈을 포함하였다. 일부 실시형태에서, 사전 치료는 nab-파클리탁셀을 함께 사용한 겜시타빈을 포함하였다. 일부 실시형태에서, 사전 치료는 PD-1 길항제, PD-L1 길항제, 또는 CTLA-4 길항제를 포함하였다. 일부 실시형태에서, 41BB 작용제, LAG3 길항제, 및 케모킨 수용체 억제제는 실질적으로 동시에 투여된다. 일부 실시형태에서, 41BB 작용제, LAG3 길항제, 및 케모킨 수용체 억제제는 순차적으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 41BB 작용제, LAG3 길항제, 및 케모킨 수용체 억제제는 단일 조성물로 투여된다. 일부 실시형태에서, 41BB 작용제, LAG3 길항제, 및 케모킨 수용체 억제제는 2개 이상의 상이한 조성물로 투여된다.
일부 실시형태에서, (a) 항-41BB 작용제, (b) 항-LAG3 길항제, 및 (c) 케모킨 수용체 억제제를 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 일부 실시형태에서, 조성물은 아르기나제 억제제를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 아르기나제 억제제는 Arg1 억제제이다. 일부 실시형태에서, 조성물은 iNOS 억제제를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 Cxcr2 억제제를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, Cxcr2 억제제는 항-Cxcr2 항체이다. 일부 실시형태에서, 항-Cxcr2 항체는 MAB2164이다. 일부 실시형태에서, 조성물은 약제학적으로 허용되는 부형제를 추가로 포함한다.
일부 실시형태에서, 41BB 작용제는 항-41BB 항체이다. 일부 실시형태에서, 41BB 항체는 LOB12.3이다. 일부 실시형태에서, LAG3 길항제는 항-LAG3 항체이다. 일부 실시형태에서, LAG3 길항제는 C9B7W이다. 일부 실시형태에서, 케모킨 수용체 억제제는 CCR1 억제제이다. 일부 실시형태에서, 케모킨 수용체 억제제는 CCR2 억제제이다. 일부 실시형태에서, 케모킨 수용체 억제제는 RS504393이다.
본 개시내용의 실시형태는 췌관 샘암종에 대해 대상자를 치료하는 방법을 지시하고, 상기 방법은 (a) 41BB 작용제; (b) LAG3 길항제; (c) CCR2 억제제를 대상자에게 투여함을 포함한다.
추가 실시형태는 (a) 41BB 작용제; (b) LAG3 길항제; 및 (c) CCR2 억제제; 및 (d) 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 지시한다.
"개인", "대상자", 및 "환자"는 상호교환하여 사용하고, 사람 또는 비-사람을 언급할 수 있다.
본원 출원에 걸쳐서, 용어 "약"을 사용하여 값이 측정 또는 정량화 방법에 대해 내재하는 오차의 변동을 포함한다는 것을 나타낸다.
단어 하나("a" 또는 "an")의 사용은, 용어 "포함하는(comprising)"과 연관되어 사용되는 경우, "하나(one)"를 의미할 수 있지만, 또한 "하나 이상의", "적어도 하나", 및 "하나 초과"의 의미와 일치한다.
구문 "및/또는"은 "및" 또는 "또는"을 의미한다. 예시하기 위해, A, B, 및/또는 C는 다음을 포함한다: A 단독, B 단독, C 단독, A 및 B의 조합, A 및 C의 조합, B 및 C의 조합, 또는 A, B, 및 C의 조합. 다시 말해, "및/또는"은 포괄적인 것으로 작동된다.
단어 "포함하는(comprising)" (및 "포함한다(comprise)" 및 "포함한다(comprises)"와 같은 포함하는의 모든 형태), "갖는(having)" (및 "갖다(have)" 및 "갖다(has)"와 같은 갖는의 모든 형태), "포함하는(including)" (및 "포함한다(includes)" 및 "포함한다(include)"와 같은 포함하는의 모든 형태) 또는 "포함하는(containing)" (및 "포함한다(contains)" 및 "포함한다(contain)"와 같은 포함하는의 모든 형태)는 포괄적(inclusive) 또는 개방-말단(open-ended)이고, 추가로 나열되지 않은 성분 또는 방법 단계를 제외하지 않는다.
이들의 용도를 위한 조성물 및 방법은 명세서를 통해 기재된 성분 또는 단계 중 어느 것을 "포함하거나", "이로 본질적으로 이루어지거나", 또는 "이로 이루어질 수 있다". 기재된 성분 또는 단계 중 어느 것"으로 본질적으로 이루어진" 조성물 및 방법은 청구된 발명의 기본적이고 신규한 특징에 실질적으로 영향을 주지 않는 특정된 물질 또는 단계에 대한 청구항의 범위를 제한한다.
치료학적, 진단적, 또는 생리학적 목적 또는 효과의 정황에서 임의의 방법은 또한 기재된 치료학적, 진단적, 또는 생리학적 목적 또는 효과를 성취하거나 실행하기 위한 본원에 논의되는 임의의 화합물, 조성물, 또는 제제 "의 용도"와 같은 "용도" 청구항 표현으로 기재될 수 있다.
다양한 실시형태는 본 출원을 통해 논의된다. 하나의 측면에 대해 논의된 임의의 실시형태는 다른 측면에 또한 적용되고, 그 반대도 가능하다. 본원에 기재된 각각의 실시형태는 모든 측면에 적용가능한 실시형태인 것으로 이해된다. 본원에 논의되는 임의의 실시형태가 임의의 방법 또는 조성물에 대해 실행될 수 있고, 그 반대도 가능하다는 것이 고려된다. 또한, 조성물 및 키트를 사용하여 본원에 개시된 방법을 성취할 수 있다.
본 발명의 다른 목적, 특징 및 이점은 하기 상세한 설명에서 명백해질 것이다. 그러나, 상세한 설명 및 구체적인 실시예가, 본 발명의 특이적 실시형태를 지시하지만, 본 발명의 취지 및 범위 내에서 다양한 변화 및 변형이 당해 기술분야의 숙련가에게 상세한 설명으로부터 명백해질 것이기 때문에, 단지 예시의 방식으로 제공된다는 것을 이해하여야 한다.
도면의 간단한 설명
하기 도면은 본원 명세서의 부분을 형성하고, 본 발명의 특정 측면을 추가로 예시하기 위해 포함된다. 본 발명은 본원에 제시된 특이적 실시형태의 상세한 설명과 함께 이들 도면 중 하나 이상을 참조하여 더 잘 이해할 수 있다.
도 1a-1i는 iKRAS PDAC 마우스 모델의 특성화의 결과를 나타낸다.
도 2a-2f는 iKRAS PDAC 종양의 종양 미세환경으로부터 세포의 CyTOF 프로파일링의 결과를 나타낸다.
도 3a-3f는 iKRAS PDAC 종양으로부터 면역세포의 단일 세포 RNA 시퀀싱의 데이터의 분석 결과를 나타낸다.
도 4a-4f는 iKRAS PDAC 종양으로부터 면역세포의 단일 세포 RNA 시퀀싱의 데이터의 분석 결과를 나타낸다.
도 5a-5f는 다양한 ICT 용법으로 처리된 iKRAS PDAC 마우스로부터 면역세포의 단일 세포 RNA 시퀀싱의 데이터의 분석 결과를 나타낸다.
도 6a-6h는 다양한 ICT 용법으로 처리된 iKRAS PDAC 마우스의 분석 결과를 나타내고, 사람 PDAC 조직 시험편의 멀티플렉스 면역조직화학 염색의 결과를 나타낸다.
도 7a-7c는 TCGA 및 ICGC 데이터세트로부터의 사람 PDAC 코호트로부터 시퀀싱 데이터의 분석 결과를 나타낸다. 도 7d-7f는 iKRAS 종양으로부터 종양내 CD11b+Gr1+ 세포의 면역억제 활성의 분석 결과를 나타낸다. 도 7g는 항-Gr1 항체 치료 용법의 도식을 나타낸다. 도 7h-7i는 iKRAS PDAC 종양으로부터 골수 면역세포의 단일 세포 RNA 시퀀싱의 데이터의 분석 결과를 나타낸다. 도 7j는 병용 치료 용법 (항-LAG-3, 항-41BB, CCR2 억제제)의 도식을 나타낸다.
도 8a-8b은 항-Gr1-처리된 iKRAS PDAC 마우스의 분석 결과를 나타낸다. 도 8c-8d는 iKRAS PDAC 종양에서 내인성 골수세포 이질성의 집락화 분석의 결과를 나타낸다. 도 8e-8f는 작용제 41BB 및 길항제 LAG3 항체와 병용한 CCR2 억제제, RS504393를 사용한 iKRAS PDAC 마우스의 치료의 결과를 나타낸다.
상세한 설명
본 개시내용의 측면은 PDAC의 치료를 위한 방법 및 조성물을 제공하여 당해 기술분야에 요구사항을 해결한다. 본 개시내용은, 적어도 부분적으로, 이전에는 치료할 수 없었던 PDAC에 대해 대상자를 치료할때, 41BB 작용제, LAG3 길항제, 및 케모킨 수용체 (예를 들면, CCR1, CCR2) 억제제의 신규한 병용물을 제공하는 것이 유의한 및 상승적 효능을 제공한다는, 놀랍게도 예상치 못한 발견을 기초로 한다. 본 개시내용의 측면은, 41BB 작용제, LAG3 길항제, 및 케모킨 수용체 억제제의 효과적인 양을 투여함을 포함하는, PDAC에 대해 대상자를 치료하는 방법을 지시한다. 또한 41BB 작용제, LAG3 길항제, 및 케모킨 수용체 억제제를 포함하는 조성물이 기재되어 있다.
I. 치료학적 방법
본 개시내용의 조성물은 생체내, 시험관내, 또는 생체외 투여를 위해 사용할 수 있다. 조성물의 투여 경로는, 예를 들면, 피내, 피하, 정맥내, 국소, 국부, 경구, 및 복강내 투여일 수 있다.
A. 암 요법
일부 실시형태에서, 개시된 방법은 암 요법을 대상자에게 투여함을 포함한다. 암 요법은, 예를 들면, 발현 수준 측정치 (예를 들면, 바아오마커 발현 수준)를 기초로 하여, 단독으로 또는 대상자에 대해 계산된 임상적 위험 스코어와 함께 선택될 수 있다. 일부 실시형태에서, 암 요법은 국소 암 요법을 포함한다. 일부 실시형태에서, 암 요법은 전신 암 요법을 포함한다. 일부 실시형태에서, 암 요법은 전신 암 요법을 제외한다. 일부 실시형태에서, 암 요법은 국소 요법을 제외한다. 일부 실시형태에서, 암 요법은 전신 암 요법을 투여하지 않는 국소 암 요법을 포함한다. 일부 실시형태에서, 암 요법은 면역 체크포인트 요법일 수 있는 면역요법을 포함한다. 일부 실시형태에서, 암 요법은 케모킨 수용체 억제제의 용도를 포함한다. 케모킨 수용체 억제제는 케모킨 수용체, 예를 들면, CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, Cxcr1, Cxcr2, Cxcr3, Cxcr4, Cxcr5, 또는 Cxcr6의 억제제일 수 있다. 일부 실시형태에서, 암 요법은 대상자에서 골수세포의 성장, 증식, 및/또는 면역억제 활성의 억제제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 암 요법은 아르기나제 (예를 들면, Arg1) 억제제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 암 요법은 유발가능 산화질소 신타제 (iNOS) 억제제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 암 요법은 Cxcr2 억제제 (예를 들면, 항-Cxcr2 항체)를 포함한다. 이들 암 요법 중 어느 것은 또한 제외될 수 있다. 이들 요법의 병용이 또한 투여될 수 있다.
본원에 기재된 용어 "암"은 고형 종양, 전이 암, 또는 비-전이 암을 기술하기 위해 사용될 수 있다. 특정 실시형태에서, 암은 방광, 혈액, 뼈, 골수, 뇌, 유방, 결장, 식도, 십이지장, 소장, 대장, 결장, 직장, 항문, 잇몸, 머리, 신장, 간, 폐, 비인두, 목, 난소, 췌장, 전립선, 피부, 위, 고환, 혀, 또는 자궁에서 비롯될 수 있다.
암은 특히, 이들로 제한되는 것을 아니지만, 하기 조직학적 유형의 암일 수 있다: 거대 및 방추 세포 암종; 소세포 암종; 유두모양 암종; 편평 세포 암종; 림프상피 암종; 기저 세포 암종; 모발기질 암종; 이행세포 암종; 유두모양 이행세포 암종; 샘암종; 가스트린종; 담관암종; 간세포 암종; 조합된 간세포 암종 및 담관암종; 소주상 샘암종; 샘낭 암종; 샘종폴립에서 샘암종; 샘암종, 가족성폴립증 대장(coli); 고형 암종; 카르시노이드 종양; 아가미-폐포 샘암종; 유두모양 샘암종; 혐색소성 암종; 호산 암종; 호산세포 샘암종; 호염기 암종; 투명 세포 샘암종; 과립 세포 암종; 소포 샘암종; 유두모양 및 소포 샘암종; 비캡슐화 경화 암종; 부신피질 암종; 자궁내막 암종; 피부 부속기 암종; 아포크린 샘암종; 피부기름 샘암종; 귀지샘 샘암종; 점막표피모양 암종; 낭샘암종; 유두모양 낭샘암종; 유두모양 장액 낭샘암종; 점액 낭샘암종; 점액 샘암종; 반지 세포 암종; 침윤 관 암종; 수질성 암종; 소엽 암종; 염증 암종; 파제트병, 유방; 샘꽈리 세포 암종; 선편평상피 암종; 샘암종 w/편평상피 화생; 가슴샘종; 난소 기질 종양; 난포막종; 과립층 세포 종양; 남성모세포종; 세르톨리 세포 암종; 라이디히 세포 종양; 지질 세포 종양; 곁신경절종; 유방-외 곁신경절종; 크롬친화세포종; 사구맥관육종; 악성 흑색종; 멜라닌결핍 흑색종; 표재확산 흑색종; 거대색소모반에서 악성 흑색종; 상피모양 세포 흑색종; 청색모반; 육종; 섬유육종; 섬유조직구종; 점액 육종; 지방육종; 평활근육종; 횡문근육종; 배아 횡문근육종; 폐포 횡문근육종; 기질 육종; 혼합 종양; 뮐러리안 혼합 종양; 신장모세포종; 간모세포종; 암육종; 중간엽종; 브레너 종양; 엽상 종양; 윤활막 육종; 중피종; 이상종자세포종; 배아 암종; 기형종; 갑상샘종; 융모막암종; 중신종; 혈관육종; 혈관내피종; 카포시 육종; 혈관주위세포종; 림프관육종; 골육종; 피질주위 골육종; 연골육종; 연골모세포종; 중간엽 연골육종; 뼈의 거대 세포 종양; 유잉 육종; 치원성 종양; 사기질 치아육종(odontosarcoma); 사기질모세포종; 사기질 섬유육종; 송과체종; 척삭종; 신경아교종; 뇌실막종; 별아교세포종; 원형질 별아교세포종; 원섬유 별아교세포종; 별아교모세포종; 아교모세포종; 희소돌기아교세포종; 희소돌기아교모세포종; 원시신경외배엽; 소뇌 육종; 신경절신경모세포종; 신경모세포종; 망막모세포종; 후신경원성 종양; 수막종; 신경섬유육종; 신경집종; 과립 세포 종양; 악성 림프종; 호지킨병; 호지킨; 파라육아종; 악성 림프종, 소 림프구; 악성 림프종, 큰세포, 미만성; 악성 림프종, 소포; 균상식육종; 다른 특정된 비-호지킨 림프종; 악성 조직구증; 다중 골수종; 비만세포 육종; 면역증식 소장 질환; 백혈병; 림프구 백혈병; 형질세포 백혈병; 적백혈병; 림프육종 세포 백혈병; 골수 백혈병; 호염기 백혈병; 호산구 백혈병; 단핵구 백혈병; 비만세포 백혈병; 거핵아구성 백혈병; 골수 육종; 및 털모양 세포 백혈병.
일부 실시형태에서, 췌장으로부터 유래하는 암을 치료하는 방법이 개시된다. 일부 실시형태에서, 암은 췌장 암이다. 일부 실시형태에서, 암은 췌관 샘암종 (PDAC)이다.
B. 암 면역요법
일부 실시형태에서, 상기 방법은 암 면역요법의 투여를 포함한다. 암 면역요법 (때때로 면역-종양학으로 언급되고, IO로 축약됨)은 암을 치료하기 위한 면역체계의 이용이다. 면역요법은 능동, 수동 또는 하이브리드 (능동 및 수동)로서 범주화될 수 있다. 이들 접근법은 암 세포가 종종 종양-회합된 항원(TAAs)으로 공지된 면역체계에 의해 검출될 수 있는 이들의 표면 상 분자를 갖는다는 사실을 이용하고; 이들은 다른 단백질 또는 다른 거대분자 (예를 들면 탄수화물)이다. 능등 면역요법은 TAAs를 표적화하여 종양 세포를 공격하는 면역체계를 지시한다. 수동 면역요법은 존재하는 항-종양 반응을 향상시키고, 단클론성 항체, 림프구 및 사이토킨의 용도를 포함한다. 다양한 면역요법은 당해 기술분야에 공지되어 있고, 이의 예는 하기에 기재되어 있다.
1. 체크포인트 억제제 및 병용 치료
본 개시내용의 측면은 면역 체크포인트 억제제의 투여를 포함할 수 있고, 이의 예는 하기에 추가로 기재되어 있다. 본원에 개시된 바와 같이, "체크포인트 억제제 요법" (또한 "면역 체크포인트 차단 요법", "체크포인트 차단 요법", "면역 체크포인트 요법", "ICT", "체크포인트 차단 면역요법", 또는 "CBI")은, 하나 이상의 면역 체크포인트 억제제를 암을 앓고 있거나 암을 갖는 것으로 의심되는 대상자에게 제공함을 포함하는 암 요법을 언급한다.
a. PD-1, PDL1, 및 PDL2 억제제
PD-1은 종양 미세환경에서 작용할 수 있고, 여기서, T 세포는 감염 또는 종양을 접한다. 활성화된 T 세포는 PD-1을 상향조절하고, 주변 조직에서 이를 발현하는 것을 지속한다. 사이토킨, 예를 들면, IFN-감마는 상피 세포 및 종양 세포 상에서 PDL1의 발현을 유발한다. PDL2는 마크로파지 및 수지상 세포 상에서 발현된다. PD-1의 주요한 역할은 주변부에서 이펙터 T 세포의 활성을 제한하고, 면역 반응 동안 조직에 대한 과도한 손상을 예방하는 것이다. 본 개시내용의 억제제는 PD-1 및/또는 PDL1 활성의 하나 이상의 기능을 차단할 수 있다.
"PD-1"에 대한 대안적인 명칭은 CD279 및 SLEB2를 포함한다. "PDL1"에 대한 대안적인 명칭은 B7-H1, B7-4, CD274, 및 B7-H를 포함한다. "PDL2"에 대한 대안적인 명칭은 B7-DC, Btdc, 및 CD273을 포함한다. 일부 실시형태에서, PD-1, PDL1, 및 PDL2는 사람 PD-1, PDL1 및 PDL2이다.
일부 실시형태에서, PD-1 억제제는 이의 리간드 결합 파트너에 대한 PD-1의 결합을 억제하는 분자이다. 특정 측면에서, PD-1 리간드 결합 파트너는 PDL1 및/또는 PDL2이다. 또다른 실시형태에서, PDL1 억제제는 이의 결합 파트너에 대한 PDL1의 결합을 억제하는 분자이다. 특정 측면에서, PDL1 결합 파트너는 PD-1 및/또는 B7-1이다. 또다른 실시형태에서, PDL2 억제제는 이의 결합 파트너에 대한 PDL2의 결합을 억제하는 분자이다. 특정 측면에서, PDL2 결합 파트너는 PD-1이다. 억제제는 항체, 이의 항원 결합 단편, 면역접착제, 융합 단백질, 또는 올리고펩타이드일 수 있다. 예시적인 항체는 미국 특허 번호 8,735,553, 8,354,509, 및 8,008,449에 기재되어 있고, 이들 모두는 참조로서 본원에 포함된다. 본원에 제공된 방법 및 조성물에서 사용하기 위한 다른 PD-1 억제제는 당해 기술분야에 공지되어 있고, 예를 들면, 미국 특허 출원 번호 US2014/0294898, US2014/022021, 및 US2011/0008369에 기재되어 있고, 이들 모두는 참조로서 본원에 포함된다.
일부 실시형태에서, PD-1 억제제는 항-PD-1 항체 (예를 들면, 사람 항체, 사람화 항체, 또는 키메라 항체)이다. 일부 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 및 피딜리주맙으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, PD-1 억제제는 면역접착제, 예를 들면, 불변 영역 (예를 들면, 면역글로불린 서열의 Fc 영역)에 융합된 PDL1 또는 PDL2의 세포외 또는 PD-1 결합 부분을 포함하는 면역접착제이다. 일부 실시형태에서, PDL1 억제제는 AMP- 224를 포함한다. 또한 MDX-1106-04, MDX-1106, ONO-4538, BMS-936558, 및 OPDIVO®로서 공지된 니볼루맙은, WO2006/121168에 기재된 항-PD-1 항체이다. 또한 MK-3475, Merck 3475, 람브롤리주맙, KEYTRUDA®, 및 SCH-900475로서 공지된 펨브롤리주맙은, WO2009/114335에 기재된 항-PD-1 항체이다. 또한 CT-011, hBAT, 또는 hBAT-1로서 공지된 피딜리주맙은, WO2009/101611에 기재된 항-PD-1 항체이다. 또한 B7-DCIg로서 공지된 AMP-224는, WO2010/027827 및 WO2011/066342에 기재된 PDL2-Fc 융합 가용성 수용체이다. 추가 PD-1 억제제는 또한 AMP-514, 및 REGN2810로서 공지된 MEDI0680를 포함한다.
일부 실시형태에서, 면역 체크포인트 억제제는 PDL1 억제제, 예를 들면, 또한 MEDI4736로서 공지된 두르발루맙, 또한 MPDL3280A로서 공지된 아테졸리주맙, 또한 MSB00010118C, MDX-1105, BMS-936559로서 공지된 아벨루맙, 또는 이의 조합이다. 특정 측면에서, 면역 체크포인트 억제제는 PDL2 억제제, 예를 들면, rHIgM12B7이다.
일부 실시형태에서, 억제제는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 또는 피딜리주맙의 중쇄 및 경쇄 CDRs 또는 VRs을 포함한다. 따라서, 하나의 실시형태에서, 억제제는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 또는 피딜리주맙의 VH 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 도메인, 및 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 또는 피딜리주맙의 VL 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 또다른 실시형태에서, 항체는 상기-언급된 항체와 PD-1, PDL1, 또는 PDL2 상 동일한 에피토프에 대한 결합을 위해 경쟁하고/하거나 이에 결합한다. 또다른 실시형태에서, 항체는 상기-언급된 항체와 적어도 약 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 또는 99% (또는 그 내에 임의의 유도가능한 범위) 가변 영역 아미노산 서열 동일성을 갖는다.
b. CTLA-4, B7-1, 및 B7-2
본원에 제공된 방법에서 표적화될 수 있는 또다른 면역 체크포인트는 세포독성 T-림프구-회합된 단백질 4 (CTLA-4)이고, 또한 CD152로 공지되어 있다. 사람 CTLA-4의 완전한 cDNA 서열은 진뱅크 수탁 번호 L15006을 갖는다. CTLA-4는 T 세포의 표면 상에서 발견되고, 항원-제시 세포의 표면 상 B7-1 (CD80) 또는 B7-2 (CD86)에 결합되는 경우 "오프" 스위치로서 작용한다. CTLA4는, 헬퍼 T 세포의 표면 상에 발현되고, T 세포에 억제 신호를 전달하는 면역글로불린 상과의 구성원이다. CTLA4는 T-세포 공-자극성 단백질, CD28과 유사하고, 둘 다의 분자는 항원-제시 세포 상 B7-1 및 B7-2에 결합한다. CTLA-4는 억제 신호를 T 세포에 전달하지만, CD28은 자극성 신호를 전달한다. 세포내 CTLA-4는 또한 조절 T 세포에서 발견되고, 이들의 기능에서 중요할 수 있다. T 세포 수용체 및 CD28을 통한 T 세포 활성화는 CTLA-4, B7 분자에 대한 억제 수용체의 증가된 발현을 야기한다. 본 개시내용의 억제제는 CTLA-4, B7-1, 및/또는 B7-2 활성의 하나 이상의 기능을 차단할 수 있다. 일부 실시형태에서, 억제제는 CTLA-4 및 B7-1 상호작용을 차단한다. 일부 실시형태에서, 억제제는 CTLA-4 및 B7-2 상호작용을 차단한다.
일부 실시형태에서, 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 (예를 들면, 사람 항체, 사람화 항체, 또는 키메라 항체), 이의 항원 결합 단편, 면역접착제, 융합 단백질, 또는 올리고펩타이드이다.
본 방법에서 사용하기 위해 적합한 항-사람-CTLA-4 항체 (또는 이로부터 유도된 VH 및/또는 VL 도메인)는 당해 기술분야에 잘 공지된 방법을 사용하여 생성할 수 있다. 대안적으로, 당해 기술에서 인정된 항-CTLA-4 항체를 사용할 수 있다. 예를 들면, US 8,119,129, WO 01/14424, WO 98/42752; WO 00/37504 (CP675,206, 또한 트레멜리무맙; 이전 티실리무맙으로서 공지됨), 미국 특허 번호 6,207,156; Hurwitz et al., 1998에 기재된 항-CTLA-4 항체는; 본원에 개시된 방법에서 사용할 수 있다. 상기한 공보 각각의 교시는 본원에 참조로서 포함된다. CTLA-4에 결합하기 위해 이들 당해 기술 분야에서 인정되는 항체 중 어느 것과 경쟁하는 항체는 또한 사용할 수 있다. 예를 들면, 사람화 CTLA-4 항체는 국제 특허 출원 번호 WO2001/014424, WO2000/037504, 및 미국 특허 번호 8,017,114에 기재되어 있고; 이들 모두는 참조로서 본원에 포함된다.
본 개시내용의 방법 및 조성물에서 체크포인트 억제제로서 유용한 추가의 항-CTLA-4 항체는 이필리무맙 (또한 10D1, MDX- 010, MDX- 101, 및 Yervoy®로서 공지됨) 또는 이의 항원 결합 단편 및 변종 (예를 들면, WO0 1/14424 참조).
일부 실시형태에서, 억제제는 트레멜리무맙 또는 이필리무맙의 중쇄 및 경쇄 CDRs 또는 VRs을 포함한다. 따라서, 하나의 실시형태에서, 억제제는 트레멜리무맙 또는 이필리무맙의 VH 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 도메인, 및 트레멜리무맙 또는 이필리무맙의 VL 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 또다른 실시형태에서, 항체는 상기-언급된 항체와 PD-1, B7-1, 또는 B7-2 상 동일한 에피토프에 대한 결합을 위해 경쟁하고/하거나 이에 결합한다. 또다른 실시형태에서, 항체는 상기-언급된 항체와 적어도 약 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 또는 99% (또는 그 내에 임의의 유도가능한 범위) 가변 영역 아미노산 서열 동일성을 갖는다.
c. LAG-3
본원에 제공된 방법에서 표적화될 수 있는 또다른 면역 체크포인트는 림프구-활성화 유전자 3 단백질 (LAG-3; 또한 LAG3)이고, 또한 CD223으로 공지되어 있다. 사람 LAG-3의 완전한 cDNA 서열은 진뱅크 수탁 번호 NC_000012를 갖는다. LAG-3은 항원-활성화된 T-세포 상 억제 수용체이다. TCR 진입 후, LAG3은 면역학적 시냅스에서 CD3-TCR과 회합하고, T-세포 활성화를 직접적으로 억제한다. 본 개시내용의 분자를 표적화하는 것은 LAG-3의 하나 이상의 기능을 차단할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 면역 체크포인트 억제제를 제공하고, 여기서, 면역 체크포인트 억제제는 LAG-3 길항제이다. 본원에 사용된, "LAG3 길항제"는 세포에서 LAG-3 신호전달 활성을 감소 또는 예방할 수 있는 임의의 분자를 기술한다. 예를 들면, LAG-3 길항제는 LAG-3 및 MHC 부류 II 간의 상호작용을 차단할 수 있는 LAG-3 항체일 수 있다.
일부 실시형태에서, 면역 체크포인트 억제제는 항-LAG-3 항체 (예를 들면, 사람 항체, 사람화 항체, 또는 키메라 항체), 이의 항원 결합 단편, 면역접착제, 융합 단백질, 또는 올리고펩타이드이다.
본 방법에 유용하게 사용하기 위해 적합한 항-사람-LAG-3 항체 (또는 이로부터 유도된 VH 및/또는 VL 도메인)는 당해 기술분야에 잘 공지된 방법을 사용하여 생성할 수 있다. 대안적으로, 당해 기술에서 인정된 항-LAG-3 항체는 사용할 수 있다. 예를 들면, 본 개시내용의 방법 및 조성물에서 체크포인트 억제제로서 유용한 항-LAG-3 항체는 렐라트리맙 (또한 BMS-986016로서 공지됨)이다. 또다른 예에서, 본 개시내용의 방법 및 조성물에서 유용한 항-LAG-3 항체는 C9B7W이다 (또한 "클론 C9B7W", 예를 들면, 문헌에 기재된다: Workman CJ, et al. Eur J Immunol. 2002;32(8):2255-2263, 이의 전문이 본원에 포함된다).
일부 실시형태에서, LAG3 길항제는 렐라트리맙의 중쇄 및 경쇄 CDRs 또는 VRs을 포함한다. 따라서, 하나의 실시형태에서, LAG3 길항제는 렐라트리맙의 VH 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 도메인, 및 렐라트리맙의 VL 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, LAG3 길항제는 C9B7W의 중쇄 및 경쇄 CDRs 또는 VRs을 포함한다. 따라서, 하나의 실시형태에서, LAG3 길항제는 렐라트리맙의 VH 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 도메인, 및 C9B7W의 VL 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 또다른 실시형태에서, 항체는 상기-언급된 항체와 LAG-3 상 동일한 에피토프에 대한 결합을 위해 경쟁하고/하거나 이에 결합한다. 또다른 실시형태에서, 항체는 상기-언급된 항체와 적어도 약 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 또는 99% (또는 그 내에 임의의 유도가능한 범위) 가변 영역 아미노산 서열 동일성을 갖는다.
d. TIM-3
본원에 제공된 방법에서 표적화될 수 있는 또다른 면역 체크포인트는 T-세포 면역글로불린 및 뮤신-도메인 함유-3 (TIM-3)이고, 또한 A형 간염 바이러스 세포 수용체 2 (HAVCR2) 및 CD366로서 공지된다. 사람 TIM-3의 완전한 mRNA 서열은 진뱅크 수탁 번호 NM_032782를 갖는다. TIM-3은 표면 IFNγ-생성 CD4+ Th1 및 CD8+ Tc1 세포 상에서 발견된다. TIM-3의 세포외 영역은 막 원위 단일 가변 면역글로불린 도메인 (IgV) 및 막에 더 가까이 위치한 가변 길이의 글리코실화된 뮤신 도메인으로 이루어진다. TIM-3은 면역 체크포인트이고, PD-1 및 LAG3을 포함하는 다른 억제 수용체와 함께, T-세포 탈진을 매개한다. TIM-3은 또한 마크로파지 활성화를 조절하는 CD4+ Th1-특이적 세포 표면 단백질로서 나타났다. 본 개시내용의 억제제는 TIM-3 활성의 하나 이상의 기능을 차단할 수 있다.
일부 측면에서, 면역 체크포인트 억제제는 항-TIM-3 항체 (예를 들면, 사람 항체, 사람화 항체, 또는 키메라 항체), 이의 항원 결합 단편, 면역접착제, 융합 단백질, 또는 올리고펩타이드이다.
본 방법에서 사용하기 위해 적합한 항-사람-TIM-3 항체 (또는 이로부터 유도된 VH 및/또는 VL 도메인)는 당해 기술분야에 잘 공지된 방법을 사용하여 생성할 수 있다. 대안적으로, 당해 기술 분야에서 인정되는 항-TIM-3 항체를 사용할 수 있다. 예를 들면, 다음을 포함하는 항-TIM-3 항체: MBG453, TSR-022 (또한 코볼리맙으로서 공지됨), 및 LY3321367은 본원에 개시된 방법에 사용될 수 있다. 청구된 발명에 유용한 이들 및 다른 항-TIM-3 항체는, 예를 들면: US 9,605,070, US 8,841,418, US2015/0218274, 및 US 2016/0200815에서 발견될 수 있다. 상기 공보의 각각의 교시는 본원에 참조로서 포함된다. 이들 당해 기술 분야에서 인정되는 TIM-3에 대한 결합을 위해 항체 중 어느 것과 경쟁하는 항체가 또한 사용될 수 있다.
일부 측면에서, 억제제는 항-TIM-3 항체의 중쇄 및 경쇄 CDRs 또는 VRs을 포함한다. 따라서, 하나의 측면에서, 억제제는 항-TIM-3 항체의 VH 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 항-TIM-3 항체의 VL 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 도메인을 포함한다. 또다른 측면에서, 항체는 상기-언급된 항체와 적어도 약 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 또는 99% (또는 그 내의 임의의 유도가능한 범위 또는 값) 가변 영역 아미노산 서열 동일성을 갖는다.
2. 공-자극성 분자의 활성화
일부 실시형태에서, 면역요법은 공-자극성 분자의 활성화제 (또한 "작용제")이다. 일부 실시형태에서, 활성화제는 B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), CD28, ICOS, OX40 (TNFRSF4), 4-1BB (CD137; TNFRSF9), CD40L (CD40LG), GITR (TNFRSF18), 및 이의 조합의 활성화제이다. 활성화제는 자극성 항체, 폴리펩타이드, 화합물, 및 핵산을 포함한다.
일부 실시형태에서, 4-1BB (또한 "41BB") 작용제를 포함하는 면역치료학적 방법이 개시된다. 41BB는 또한 CD137 또는 TNFRSF9로서 공지되어 있다. 사람 41BB의 완전한 cDNA 서열은 진뱅크 수탁 번호 NM_001561을 갖는다. 본원에 사용된, "41BB 작용제"는 세포에서 41BB 신호전달 활성을 자극 또는 향상할 수 있는 임의의 분자를 기재한다. 예를 들면, 41BB 작용제는 41BB 신호전달을 활성화할 수 있는 41BB 항체일 수 있다. 또다른 예에서 41BB 작용제는 41BB 리간드 (41BBL)이다.
본 방법에 사용하기 위해 적합한 항-사람-41BB 항체 (또는 이로부터 유도된 VH 및/또는 VL 도메인)는 당해 기술분야에 잘 공지된 방법을 사용하여 생성할 수 있다. 대안적으로, 당해 기술에서 인정된 항-41BB 항체를 사용할 수 있다. 예를 들면, 본 개시내용의 방법 및 조성물에서 유용한 항-41BB 항체는 우토밀루맙이다 (또한 PF-05082566으로서 공지됨). 또다른 예에서, 본 개시내용의 방법 및 조성물에서 유용한 항-41BB 항체는 우렐루맙이다. 또다른 예에서, 본 개시내용의 방법 및 조성물에서 유용한 항-41BB 항체는 LOB12.3이다 (또한 "클론 LOB12.3", 예를 들면, 문헌에 기재됨: Taraban, Vadim Y et al. Eur J Immunol. 2002;32(12):3617-3627, 이의 전문이 본원에 참조로서 도입됨).
일부 실시형태에서, 41BB 작용제는 우토밀루맙 또는 우렐루맙의 중쇄 및 경쇄 CDRs 또는 VRs을 포함한다. 따라서, 하나의 실시형태에서, 41BB 작용제는 우토밀루맙, 우렐루맙, 또는 LOB12.3의 VH 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 도메인, 및 우토밀루맙, 우렐루맙, 또는 LOB12.3의 VL 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 또다른 실시형태에서, 항체는 상기-언급된 항체와 41BB 상 동일한 에피토프에 대한 결합을 위해 경쟁하고/하거나 이에 결합한다. 또다른 실시형태에서, 항체는 상기-언급된 항체와 적어도 약 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 또는 99% (또는 그 내에 임의의 유도가능한 범위) 가변 영역 아미노산 서열 동일성을 갖는다.
3. 수지상 세포 요법
수지상 세포 요법은 수지상 세포가 종양 항원을 림프구에 제시하도록 하고, 이를 활성화하고, 이를 프라이밍하여 항원을 제시하는 다른 세포를 사멸시키는 항-종양 반응을 일으킨다. 수지상 세포는 포유동물 면역체계에서 항원 제시 세포 (APCs)이다. 암 치료에 이들은 암 항원 표적화를 돕는다. 수지상 세포를 기초로 하는 세포 암 요법의 하나의 예는 시풀류셀-T이다.
수지상 세포를 유발하여 종양 항원을 제시하는 방법은 자가 종양 용해물 또는 짧은 펩타이드 (암 세포 상 단백질 항원에 상응하는 단백질의 작은 부분)를 사용한 백신화에 의한 방법이다. 이들 펩타이드는 종종 보조제 (고 면역원성 물질)와 병용하여 제공되어 면역 및 항-종양 반응을 증가시킨다. 다른 보조제는 단백질 또는 수지상 세포를 공격 및/또는 활성화하는 다른 화학물질, 예를 들면, 과립구 마크로파지 집락-자극 인자 (GM-CSF)를 포함한다.
수지상 세포는 또한 종양 세포가 GM-CSF를 발현하도록 하여 생체내 활성화될 수 있다. 이는 종양 세포를 유전적으로 조작하여 GM-CSF를 생성하거나, 종양 세포를 GM-CSF를 발현하는 종양용해 바이러스로 감염시켜 성취할 수 있다.
또다른 전략은 수지상 세포를 환자의 혈액으로부터 제거하고, 수지상 세포를 신체 밖에서 활성화시키는 것이다. 수지상 세포를 단일 종양-특이적 펩타이드/단백질 또는 종양 세포 용해물 (분해된 종양 세포의 용액)일 수 있는 종양 항원의 존재하에 활성화시킨다. 이들 세포 (선택적 보조제와 함께)는 면역 반응에 영향을 미치고 일으킨다.
수지상 세포 요법은 수지상 세포의 표면 상 수용체에 결합하는 항체의 사용을 포함한다. 항원은 항체에 첨가할 수 있고, 수지상 세포를 유발하여 종양에 대한 면역을 발달시키고 제공할 수 있다. 수지상 세포 수용체, 예를 들면, TLR3, TLR7, TLR8 또는 CD40은 항체 표적으로서 사용되었다.
4. CAR-T 세포 요법
키메라 항원 수용체 (CARs, 또한 키메라 면역수용체, 키메라 T 세포 수용체 또는 인공 T 세포 수용체로서 공지됨)는 신규한 특이성을 암 세포를 표적화하는 면역세포와 합하는 조작된 수용체이다. 전형적으로, 이들 수용체는 단클론성 항체의 특이성을 T 세포, 자연 킬러 (NK) 세포, 또는 다른 면역세포 상으로 이식된다. 수용체는 키메라로서 칭명되는데, 그 이유는 상이한 공급원으로부터의 부분의 수용체가 융합되기 때문이다. CAR-T 세포 요법은 암 요법을 위해 이러한 형질전환된 세포를 이용하는 치료를 언급하고, 여기서, 형질전환된 세포는 T 세포이다. 유사한 요법은, 예를 들면, 형질전환된 NK 세포를 이용하는 CAR-NK 세포 요법을 포함한다.
CAR-T 세포 설계의 기본 원리는 항원-결합 및 T-세포 활성화 기능을 조합하는 재조합 수용체를 수반한다. CAR-T 세포의 일반적인 전제는 암 세포 상에서 발견되는 마커에 대해 표적화된 T-세포를 인공적으로 생성하는 것이다. 과학자는 사람으로부터 T-세포를 제거하고, 유전적으로 상기 세포를 변경시키고, 상기 세포를 상기 세포가 암 세포를 공격하도록 위해 환자에게 다시 되돌릴 수 있다. T 세포를 조작하여 CAR-T 세포가 되면, "살아있는 약물"로서 작용한다. CAR-T 세포는 세포외 리간드 인식 도메인 사이에 세포내 신호전달 분자에 대한 결합을 생성하여 다시 T 세포를 활성화시킨다. 세포외 리간드 인식 도메인은 보통 단일-쇄 가변 단편 (scFv)이다. CAR-T 세포 요법의 안전성의 중요한 측면은 단지 암성 종양 세포만이 표적화되고, 정상 세포를 표적화하지 않는 것을 보장하는 방법이다. CAR-T 세포의 특이성을 표적화된 분자의 선택에 의해 측정된다.
예시적인 CAR-T 요법은 티사겐렉류셀 (Kymriah) 및 악시카브타겐 실로류셀 (Yescarta)을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR-T 요법은 CD19를 표적화한다.
5. 사이토킨 요법
사이토킨은 종양 내에 존재하는 다수의 형태의 세포에 의해 제조되는 단백질이다. 이들은 면역 반응을 조절할 수 있다. 종양은 종종 사이토킨을 이용하여 면역 반응을 성장시키고 감소되게 한다. 이들 면역-조절 효과는 사이토킨을 면역 반응을 일으키는 약물로서 사용될 수 있게 한다. 2개의 통상 사용되는 사이토킨은 인터페론 및 인터류킨이다.
인터페론은 면역체계에 의해 생성된다. 인터페론은 보통 항-바이러스 반응에 연루되지만, 또한 암을 위한 용도를 갖는다. 인터페론은 3개의 그룹에 속한다: I형 (IFNα 및 IFNβ), II형 (IFNγ) 및 III형 (IFNλ).
인터류킨은 다수의 면역체계 효과를 갖는다. IL-2는 예시적인 인터류킨 사이토킨 요법이다.
6. 입양 T-세포 요법
입양 T 세포 요법은 T-세포의 수혈 (입양 세포 전달)에 의한 수동 면역화의 한 형태이다. 이들은 혈액 및 조직에서 발견되고, 보통 이들이 외래 병원체를 발견하는 경우 활성화된다. 특히 이들은 T-세포의 표면 수용체가 이들의 표면 항원 상 외래 단백질의 부분을 나타내는 세포를 접하는 경우 활성화된다. 이들은 감염된 세포, 또는 항원 제시 세포 (APCs) 중 어느 하나일 수 있다. 이들은 정상 조직에서 및 종양 조직에서 발견되고, 여기서, 이들은 종양 침윤 림프구 (TILs)로서 공지되어 있다. 이들은 APCs, 예를 들면, 종양 항원을 제시하는 수지상 세포의 존재에 의해 활성화된다. 이들 세포는 종양을 공격할 수 있지만, 종양 내 환경은 매우 면역억제성이고, 면역-매개된 종양 사멸을 방지한다.
종양 표적화된 T-세포를 제조하고 수득하는 여러가지 방식을 개발하였다. 종양 항원에 특이적인 T-세포는 종양 샘플 (TILs)로부터 제거되거나, 혈액으로부터 여과될 수 있다. 후속적인 활성화 및 배양은 생체외 수행될 수 있고, 결과는 재주입된다(reinfused). 활성화를 유전자 요법을 통해, 또는 T 세포를 종양 항원에 노출시켜 발생시킬 수 있다.
암 치료는 본원에 기재된 암 치료 중 어느 것을 제외할 수 있는 것으로 고려된다. 또한, 본 개시내용의 실시형태는, 본원에 기재된 요법으로 사전 치료되거나, 본원에 기재된 요법으로 현재 치료되고 있거나, 본원에 기재된 요법으로 치료된 적이 없는 환자를 포함한다. 일부 실시형태에서, 환자는 본원에 기재된 요법에 내성이 있는 것으로 결정된 환자이다. 일부 실시형태에서, 환자는 본원에 기재된 요법에 민감성인 것으로 결정된 환자이다.
C. 케모킨 수용체 및 억제제
본 개시내용의 실시형태는 하나 이상의 케모킨 수용체의 억제제의 투여를 포함할 수 있다. "케모킨 수용체 억제제"는 하나 이상의 케모킨 수용체의 활성을 억제할 수 있는 임의의 제제 또는 분자를 기술한다.
케모킨 수용체는 하나 이상의 케모킨의 결합에 의해 활성화된 막횡단, G 단백질-결합된 수용체이다. 케모킨 수용체는 골수세포, 예를 들면, 마크로파지를 포함하는 다양한 면역세포에 의해 발현된다. 케모킨 수용체는, 예를 들면, CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, Cxcr1, Cxcr2, Cxcr3, Cxcr4, Cxcr5, 및 Cxcr6을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 케모킨 수용체 억제제는 CCR1 및/또는 CCR2 억제제이다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 케모킨 수용체 억제제는 Cxcr2 억제제이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 케모킨 수용체 억제제는 CCR2 억제제이다. C-C 케모킨 수용체 2 (CCR2) 신호전달은 종양으로 골수세포의 동원에서 중요한 역할을 한다 [21, 22]. 본 개시내용의 측면은 CCR2 억제제의 투여를 포함하는 PDAC 치료 방법을 지시한다. 일부 실시형태에서, CCR2 억제제는 항-CCR2 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 실시형태에서, CCR2 억제제는 소분자 CCR2 억제제이다. CCR2 억제제의 하나의 예는 RS504393이다. 다양한 CCR2 억제제는 당해 기술분야에 공지되어 있고, 본원에서 고려된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 케모킨 수용체 억제제는 Cxcr2 억제제이다. C-X-C 케모킨 수용체 2 (Cxcr2)는 인터류킨 8에 대한 수용체이다. 본 개시내용의 측면은 Cxcr2 억제제의 투여를 포함하는 췌장 암을 치료하는 방법을 지시한다. 일부 실시형태에서, Cxcr2 억제제는 항-Cxcr2 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 항-Cxcr2 항체의 하나의 예는 MAB2164이다.
D. 화학요법
본 개시내용의 측면은 화학요법 및 이용 방법을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 방법은 화학요법을 대상자에게 투여함을 포함한다. 일부 실시형태에서, 화학요법은 본원에 개시된 하나 이상의 치료제 (예를 들면, 41BB 작용제, LAG3 길항제, 케모킨 수용체 억제제 등)와 병용하여 대상자에게 투여된다. 적합한 부류의 화학요법제는 (a) 알킬화제, 예를 들면, 질소 머스타드 (예를 들면, 메클로레타민, 실로포스파미드, 이포스파미드, 멜팔란, 클로람부실), 에틸렌이민 및 메틸멜라민 (예를 들면, 헥사메틸멜라민, 티오테파), 알킬 설포네이트 (예를 들면, 부설판), 니트로소우레아 (예를 들면, 카르무스틴, 로무스틴, 클로로조티신, 스트렙토조신) 및 트리아진 (예를 들면, 디카바진), (b) 항대사성 물질, 예를 들면, 엽산 유사체 (예를 들면, 메토트렉세이트), 피리미딘 유사체 (예를 들면, 5-플루오로우라실, 플록수리딘, 시타라빈, 아자우리딘) 및 푸린 유사체 및 관련 물질 (예를 들면, 6-머캅토푸린, 6-티오구아닌, 펜토스타틴), (c) 천연 제품, 예를 들면, 빈카 알칼로이드 (예를 들면, 빈블라스틴, 빈크리스틴), 에피포도필로톡신 (예를 들면, 에토포시드, 테니포시드), 항생제 (예를 들면, 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 블레오마이신, 플리카마이신 및 미톡산트론), 효소 (예를 들면, L-아스파라기나제), 및 생물학적 반응 개질제 (예를 들면, 인터페론-α), 및 (d) 기타 제제, 예를 들면, 백금 배위 복합물 (예를 들면, 시스플라틴, 카보플라틴), 치환된 우레아 (예를 들면, 하이드록시우레아), 메틸하이디아진 유도체 (예를 들면, 프로카바진), 및 부신피질 억압제 (예를 들면, 탁솔 및 미토탄)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 겜시티빈은 알부민-결합된 파클리탁셀 (또한 "nab-파클리탁셀")의 존재 또는 부재하에 특히 적합한 화학요법제이다.
추가의 적합한 화학요법제는 피리미딘 유사체, 예를 들면, 시타라빈 (시토신 아라비노시드), 5-플루오로우라실 (플루오우라실; 5-FU) 및 플록수리딘 (플루오로데-옥시우리딘; FudR)을 포함한다. 5-FU는 대상자에게 약 7.5 내지 약 1000 mg/m2의 투여량으로 투여될 수 있다. 추가로, 5-FU 투약 일정은 본 개시내용에 관련된 당해 기술분야의 숙련가에 의해 결정되어 다양한 기간 동안, 예를 들면, 6주 이하 동안일 수 있다.
겜시타빈 디포스페이트 (GEMZAR®, Eli Lilly & Co., "겜시타빈"), 또다른 적합한 화학요법제는, 진행 및 전이 췌장 암의 치료를 위해 추천되고, 따라서 본 개시내용의 특정 실시형태에서 nab-파클리탁셀의 존재 또는 부재하에 유용할 것이다.
일부 실시형태에서, 다중 화학요법은 환자에게 화학요법 용법으로서 제공된다. 일부 실시형태에서, 화학요법은 폴린산, 5-플루오로우라실 (5-FU), 이리노테칸, 및 옥살리플라틴의 병용물이다. 이러한 치료 용법은 "FOLFIRINOX"로서 언급될 수 있다.
환자에게 전달되는 화학요법제의 양은 다양할 수 있다. 하나의 적합한 실시형태에서, 화학요법이 작제물과 함께 투여되는 경우, 화학요법제는 숙주에서 암의 저지 또는 퇴행을 야기하기 위해 효과적인 양으로 투여할 수 있다. 다른 실시형태에서, 화학요법제는 화학요법제의 화학요법 효과적인 용량(dose)보다 2 내지 10,000 배 적은 양으로 투여될 수 있다. 예를 들면, 화학요법제는 화학요법제의 화학요법 효과적인 용량보다 약 20 배 미만, 약 500 배 미만 또는 심지어 약 5000 배 미만 적은 양으로 투여될 수 있다. 본 개시내용의 화학요법은 작제물과 병용한 목적하는 치료학적 활성을 위해, 뿐만 아니라 효과적인 투여량의 측정을 위해 생체내 시험될 수 있다. 예를 들면, 이러한 화합물은, 이에 제한되는 것은 아니지만, 래트, 마우스, 닭, 소, 원숭이, 토끼 등을 포함하는, 사람에서 시험하기 전에 적합한 동물 모델 시스템에서 시험될 수 있다. 시험관내 시험은 또한 실시예에서 기재된 적합한 병용물 및 투여량을 측정하기 위해 사용할 수 있다.
II. 치료학적 조성물의 투여
본원에 제공된 요법은 치료학적 제제, 예를 들면, 첫번째 치료학적 제제 (예를 들면, 41BB 작용제), 두번째 치료학적 제제 (예를 들면, LAG-3 길항제), 및/또는 세번째 치료학적 제제 (예를 들면, 케모킨 수용체 억제제, 예를 들면, CCR2 억제제)의 병용물의 투여를 포함할 수 있다. 요법은 당해 기술분야에 공지된 임의의 적합한 방식으로 투여될 수 있다. 예를 들면, 첫번째, 두번째, 및 세번째 치료학적 제제는 순차적으로 (상이한 시간에) 또는 동시에 (동일한 시간에) 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 첫번째, 두번째, 및 세번째 치료학적 제제는 개별적인 조성물로 투여된다. 일부 실시형태에서, 첫번째, 두번째, 및 세번째 치료학적 제제는 동일한 조성물에 존재한다.
본 개시내용의 실시형태는 치료학적 조성물을 포함하는 조성물 및 방법에 관한 것이다. 상이한 요법은 하나의 조성물 또는 하나 초과의 조성물, 예를 들면, 2개의 조성물, 3개의 조성물, 또는 4개의 조성물로 투여할 수 있다. 제제의 다양한 병용물을 이용할 수 있다.
본 개시내용의 치료학적 제제는 동일한 투여 경로에 의해 또는 상이한 투여 경로에 의해 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 암 요법은 정맥내, 근육내, 피하, 국부, 경구, 경피, 복강내, 안와내, 이식으로, 흡입으로, 경막내, 심실내, 또는 비내 투여된다. 일부 실시형태에서, 항생제는 정맥내, 근육내, 피하, 국부, 경구, 경피, 복강내, 안와내, 이식으로, 흡입으로, 경막내, 심실내, 또는 비내 투여된다. 적합한 투여량은 치료될 질환 유형, 질환의 중증도 및 과정, 개인의 임상적 상태, 개인의 임상적 병력 및 치료에 대한 반응, 및 담당 의사의 재량을 기초로 하여 측정될 수 있다.
치료는 다양한 "단위 용량"을 포함할 수 있다. 단위 용량은 치료학적 조성물의 사전결정된-양을 포함하는 것으로 정의된다. 투여되는 양, 및 특정 경로 및 제형은, 임상 기술분야의 숙련가의 결정 기술 내에 있다. 단위 용량은 단일 주사로서 투여될 필요는 없지만, 정해진 기간 걸쳐서 연속 주입을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 단위 용량은 단일 투여가능한 용량을 포함한다.
치료 및 단위 용량의 횟수 둘 다에 따라서 투여되는 양은, 목적하는 치료 효과에 좌우된다. 효과적인 용량은 특정 효과를 성취하기 위해 필요한 양을 언급하는 것으로 이해된다. 특정 실시형태에서 실시에서, 10 mg/kg 내지 200 mg/kg의 범위의 용량이 이들 제제의 보호 능력에 영향을 줄 수 있다고 고려된다. 따라서, 용량이 약 0.1, 0.5, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 및 200, 300, 400, 500, 1000 μg/kg, mg/kg, μg/일, 또는 mg/일 또는 그 내에 유도될 수 있는 임의의 범위의 용량을 포함하는 것을 고려한다. 또한, 이러한 용량은 1일, 및/또는 수일, 수주, 또는 수개월 동안 다회로 투여될 수 있다.
특정 실시형태에서, 약제학적 조성물의 효과적인 용량은 약 1 μM 내지 150 μM의 혈액 수준을 제공할 수 있는 용량이다. 또다른 실시형태에서, 효과적인 용량은 약 4 μM 내지 100 μM; 또는 약 1 μM 내지 100 μM; 또는 약 1 μM 내지 50 μM; 또는 약 1 μM 내지 40 μM; 또는 약 1 μM 내지 30 μM; 또는 약 1 μM 내지 20 μM; 또는 약 1 μM 내지 10 μM; 또는 약 10 μM 내지 150 μM; 또는 약 10 μM 내지 100 μM; 또는 약 10 μM 내지 50 μM; 또는 약 25 μM 내지 150 μM; 또는 약 25 μM 내지 100 μM; 또는 약 25 μM 내지 50 μM; 또는 약 50 μM 내지 150 μM; 또는 약 50 μM 내지 100 μM (또는 그 내에 유도될 수 있는 임의의 범위)의 혈액 수준을 제공한다. 다른 실시형태에서, 용량은 대상자에게 투여되는 치료학적 제제로부터 야기되는 제제의 하기 혈액 수준을 제공할 수 있다: 약, 적어도 약, 또는 최대 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100 μM 또는 그 내에 유도될 수 있는 임의의 범위. 특정 실시형태에서, 대상자에게 투여되는 치료학적 제제는 대사된 치료학적 제제로 체내에서 대사되고, 이러한 경우, 혈액 수준은 이러한 제제의 양을 언급할 수 있다. 대안적으로, 치료학적 제제가 대상자에 의해 대사되지 않는 범위까지, 본원에 논의되는 혈액 수준은 대사되지 않은 치료학적 제제를 언급할 수 있다.
치료학적 조성물의 정확한 양은 또한 전문가의 판단에 좌우되고, 각각의 개인에게 특정된다. 용량에 영향을 주는 인자는 환자의 신체적 및 임상적 상태, 투여 경로, 의도된 치료 목적 (치료에 대한 증상의 완화) 및 잠재성, 대상자가 겪을 수 있는 특정 치료학적 물질 또는 다른 요법의 안정성 및 독성을 포함한다.
μg/kg 또는 mg/kg 체중의 투여량 단위를 4 μM 내지 100 μM과 같은 μg/ml 또는 mM (혈액 수준)의 비슷한 농도 단위로 전환하고 표현할 수 있음을 당해 기술분야의 숙련가가 이해할 것이고, 알고 있다. 또한 흡수는 종 및 기관/조직 의존적인 것으로 이해된다. 흡수 및 농도 측정에 관련하여 수행되는 이용가능한 전환 인자 및 생리학적 추정은 잘 공지되어 있고, 당해 기술분야의 숙련가가 하나의 농도 측정을 또다른 것으로 변환시키고 합리적인 비교 및 용량에 대한 결론, 본원에 기재된 효능 및 결과를 수행하도록 할 수 있다.
III. 키트
본 발명의 특정 측면은 또한 본 발명의 조성물을 포함하는 키트 또는 본 발명의 방법을 실행하기 위한 조성물에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 키트는 하나 이상의 바아오마커를 평가하기 위해 사용될 수 있다. 특정 실시형태에서, 키트는, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 100, 500, 1,000개 이상의 프로브, 프라이머 또는 프라이머 세트, 합성 분자 또는 억제제, 또는 그 내에 유도가능한 임의의 값 또는 범위 또는 조합을 포함하거나 적어도 포함하거나 또는 최대로 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포 내에 바아오마커 활성을 평가하기 위한 키트가 있다.
키트는, 개별적으로 피캐징되거나 용기, 예를 들면, 튜브, 병, 바이알, 시린지, 또는 다른 적합한 용기 수단에 위치할 수 있는 성분을 포함할 수 있다.
개별적인 성분은 또한 농축된 양으로 키트 내에 제공될 수 있고; 일부 실시형태에서, 다른 성분과 함께 용액으로 존재하기 때문에, 성분은 개별적으로 동일한 농도로 제공된다. 성분의 농도는 1x, 2x, 5x, 10x, 또는 20x 이상으로 제공될 수 있다.
예후 또는 진단적 적용을 위해 본 개시내용의 프로브, 합성 핵산, 비합성 핵산, 및/또는 억제제를 사용하기 위한 키트는 본 개시내용의 부분으로서 포함된다. 본원에 확인된 임의의 바아오마커에 상응하는 임의의 이러한 분자가 특히 고려되고, 이는 바아오마커의 전부 또는 부분와 동일하거나 이에 상호보완적인 핵산 프라이머/프라이머 세트 및 프로브를 포함하거나, 바아오마커의 비코딩 서열, 뿐만 아니라 바아오마커의 코딩 서열을 포함할 수 있는 다.
특정 측면에서, 음성 및/또는 양성 대조군 핵산, 프로브, 및 억제제는 일부 키트 실시형태에 포함된다.
실시예
하기 실시예는 본 발명의 특정 실시형태를 예시하기 위해 포함된다. 당해 기술분야의 숙련가에게 하기한 실시예에 개시된 기술이 본 발명의 실시를 잘 기능하게 하도록 본 발명자들에 의해 발견된 기술을 나타내고, 이에 따라, 이의 실행을 위한 특정 방식을 구성하기 위해 고려될 수 있음을 인식되어야 한다. 그러나, 당해 기술분야의 숙련가는, 본 개시내용의 관점에서, 다수의 변화가 개시된 특이적 실시형태에서 수행될 수 있고, 본 발명의 취지 및 범위를 벗어나지 않고 여전히 유사하게 수득되거나 유사한 결과를 야기할 수 있음을 인식하여야 한다.
실시예 1 - iKRAS PDAC 종양 미세환경의 CyTOF 분석
유발가능 종양형성 KRAS 마우스 모델 (p48Cre; tetO_LSL-Kras G12D ; ROSA_rtTA; p53 L/+ ) 설계된 "iKRAS"는 지금까지 사용된 모든 표준 요법에 내성을 포함하는 사람 PDAC의 증명 특징을 개요한다 [9]. 다중-암(arm) 약물 시험을 위해, iKRAS 세포주를 사용하여 동계 면역경쟁 마우스에서 동소 PDAC 종양을 갖는 큰 코호트를 생성하였다. 종양은 ~1000mm3의 용적까지 신속하게 성장하고, 이식 후 4-5 주 내에 열렬한 플루오로데옥시글루코스 (FDG) 흡수를 나타내고, PET/CT, MRI 및 생체발광을 사용하여 용이하게 검출할 수 있다 (도 1a-1b). 모든 마우스는 ~6 주의 중간 OS로 3 내지 8 주 후 PDAC로 죽었다 (도 1c). 중요하게는, 동소 종양은 충실히 자생 iKRAS 종양의 조직학적 특징을 개요하고, 여기에는 열악한 분화 세포를 갖는 샘 종양 구조, 콜라겐의 침전에 의해 입증된 유의한 섬유조직형성 반응 및 높은 평활근육 액틴 (SMA)의 기질 발현 및 비멘틴 (도 1d-1e), 뿐만 아니라 주위 림프절 (도 1f) 및 기관, 예를 들면, 십이지장 및 신장 내로 국소 침습을 포함된다 (도 1g).
PDAC 종양 미세환경 (TME)에서 침윤 면역세포의 무리를 철저히 검사하기 위해, 비행시간 질량 세포분석 (CyTOF)을 확립된 종양에 대해 수행하였다 (영상화 상에서 초기 검사 후 4 주, 종양 용적 ~1000mm3). CyTOF는 iKRAS 종양에서 CD45+-침윤 면역세포의 유의한 증가를 확인하였다 (도 2a). 살아있는 단일 세포의 상세한 면역표현형은 밀도-정규화 사건 -유래 트리의 스패닝-트리(spanning-tree) 진행 분석 (SPADE)의 구성을 가능하게 하고 [10], 상기 분석은 이종 세포 유형의 확인 및 분석을 수행하는 컴퓨터 접근법이다 (도 2b). iKRAS 종양의 SPADE는 상피 종양 세포 (EpCAM+CD45-), 비-면역 TME 세포 (EpCAM-CD45-), 및 다양한 하위집단으로 추가로 그룹화되는 침윤 면역세포 (EpCAM-CD45+)로 구성되는 PDAC TME의 복잡성을 나타낸다 (도 2c). CD45+-침윤 면역세포 내에, MDSCs (CD45+CD11b+Gr1+) 및 TAMs (CD45+CD11b+Gr1- F4/80+)를 포함하는 CD11b+ 골수세포는, 유의한 비율의 면역 집단을 나타내었다. PDAC TME 내에 다수의 MDSCs는 천연에서 호중성/과립구였다 (도 2d). PDAC 종양 침윤 CD3+ T 세포는 CD4+ 및 CD8+ 이펙터 기억 T 세포로 주로 구성되었다 (도 2e). 다수의 CD4+ T 세포는 적은 비율의 FoxP3+ Tregs를 갖는 Teff였다 (도 2f). PDAC TME에서 섬유조직형성 간질이 암 세포에서 떨어진 주변부에서 T 세포를 격리한다는 이전 가설과는 반대로, 동소 및 자생 iKRAS 종양의 면역조직화학 분석에 의한 면역세포의 공간 분포의 평가는 CD8+ T 세포가 PDAC 종양의 코어를 침윤시킬 수 있고, 암 세포에 직접적으로 인접하여 발견된다 (도 1h). 유사하게는, S100A9+ 골수세포는 암 세포에 직접적으로 인접하여 확인되고, CD8+ T 세포는 종양의 코어에서 확인되었다 (도 1h). 자생 iKRAS PDAC 종양의 TME에서 면역세포의 범위를 동소 iKRAS PDAC 종양로부터의 것과 비교하고, 유사한 조성 및 상대적 비율의 다양한 면역세포를 발견하였다 (도 1i).
실시예 2 - iKRAS PDAC 종양-회합된 면역세포의 단일-세포 RNA 시퀀싱 분석
PDAC에서 면역 미세환경의 복합 조성물을 기술하기 위해, 단일-세포 RNA 시퀀싱을 iKRAS 종양으로부터 분류된 살아있는 CD45+ 면역세포에서 수행하였다 (영상화 상에서 초기 검출 후 4 주, 종양 용적 ~1000mm3) (도 3a). 3 iKRAS 종양으로부터 총 4080 분류된 개인 세포를 평균 세포당 33,488 확고하게-매핑된 판독으로 시퀀싱하였다 (도 3b). 발현 데이터에 적용된 차원 축소 분석 (t-SNE) 및 집락화 (SNN)는, 살아있는 CD45+ 세포가 수개의 하위그룹 (도 4a)으로 동소 (도 2c) 및 유전적으로 조작된 (도 1i) 마우스 종양의 CyTOF 분석에 의해 확인된 것들과 유사한 분획 (도 4b)과 함께 집락화되는 것으로 나타났다. 서명 유전자 및 공지된 기능적 마커의 발현은, 골수세포 (S100A8/A9 및 Cxcr2 발현), M2 마크로파지 (Mafb 및 Tgfbi 발현), B 세포 (Cd79b 발현), T 세포 (Cd3 발현), NK 세포 (Klr 발현) 및 수지상 세포를 포함하는 면역세포의 집락을 제시한다 (도 3c 및 3d). MDSCs 및 M2 마크로파지를 포함하는 골수 구획은 PDAC TME에서 우세한 면역세포였다.
내인성 이질성 및 잠재적 기능적 하위유형의 T 세포 집단을 나타내기 위해, 무감독(unsupervised) 집락화를 SNN을 사용하여 수행하고, CD4+에 대해 2개의 집락 및 CD8+ T 세포에 대해 4개의 집락을 포함하는 6개의 집락을 확인하였다 (도 4c 및 4d). CD4+ T 세포 집락은 나이브 CD4+ T 세포 (Ccr7 및 Lef1 발현) 및 CD4+ Tregs (Foxp3 발현 뿐만 아니라 Ctla4 및 Tnfrsf4 발현)를 포함하였다 (도 3e). CD8+ T 세포 집락은 나이브 CD8+ T 세포 (Ccr7 및 Lef1 발현)을 포함하고, 2개의 개별적인 집락은 세포독성 유전자 (Nkg7 및 Gzmb)를 발현하고, 이들 집락 중 하나는 Pdcd1, Lag3 및 Havcr2 (탈진된 CD8+ T 세포)를 포함하는 T 세포 탈진 마커의 더 높은 발현을 나타내지만, 작은 집락은 CD8+ T 세포를 고도로 복제한다 (높은 Ki-67 발현) (도 3e 및 3f). PDAC TME 내에 CD8+ T 세포의 발달적 궤적을 설명하기 위해, 의사시간적(pseudotemporal) 시간 추론 알고리즘, Monocle2가, 적용되었다 [13]. CD8+ T 세포의 집락은 선형 구조를 형성하고, 나이브 CD8+ T 세포로 고정되는(rooted) 경우, 비-탈진된 세포독성 CD8+ T 세포가 이어지고, 탈진된 CD8+ T 세포로 종결되었다 (도 4e). 따라서, 탈진된 T 세포는 의사-시간의 후기에 고도로 풍부화되고, 나이브에서 활성화되고 탈진까지 T 세포 상태 전이를 나타낸다. 활성화 (Tnfrsf9 및 Tnfrsf4) 및 억제 (Pdcd1, Lag3, Ctla4 및 Havcr2) 면역 체크포인트의 발현은 탈진된 CD8+ T 세포 집락 상에서 언급되지만, 이들 분자가 PDAC TME에서 CD8+ T 세포의 탈진된 상태를 매개하는 것에 관련될 수 있다는 가능성을 증가시키는 나이브 또는 중간체 CD8+ T 세포 상태 (도 4e)에서는 그렇지 않다. 이들 연구는 PDAC에서 분화된 T 세포 집단 중에서 높은 Ctla4 및 Tnfrsf4 발현을 갖는 CD4+ Tregs 뿐만 아니라 높은 Pdcd1, Lag3, Tnfrsf9 및 Havcr2 발현을 갖는 탈진된 CD8+ T 세포의 우선적 풍부를 나타내었다 (도 4f). CD4+ 및 CD8+ T 세포 상 이들 체크포인트의 발현은 유동 세포분석법을 사용하여 입증하였다. 이들 2개의 T 세포 부분집합은 암 면역요법에 대한 표적이기 때문에 [2, 4, 8], 추가의 분석은 이들 세포 상 발현되는 것으로 확인된 PDAC에서 이들의 지금까지 특성화되지 않은 신규한 면역 체크포인트의 역할에 초점을 맞춘다.
실시예 3 - PDAC에서 면역 체크포인트 요법의 분석
자생 및 동소 마우스 모델 둘 다에서 예시된 종양내 CD8+ T 세포의 존재 (도 2c, 도 1i, 도 4a-4d)는, CD8+ T 세포의 증가된 침윤을 발견한 사람 PDAC에서 최근 연구를 종합하면, 환자의 개선된 OS와 관련되고 [11, 12], 능동 면역 반응의 존재는 PDAC를 표적화하는 면역치료학적 접근법에 대한 가능성을 제시한다. 그러나, 이에 따라 PDAC 환자의 치료에서 단일-제제 ICT의 효능은 지금까지 실망스러웠고, 이는 PDAC가 비-면역원성이라는 인식의 원인이 된다 [4, 5, 6, 7]. 이러한 가설을 확증하기 위해, PDAC 동소 종양을 사용한 면역경쟁 C57BL/6 마우스를 iKRAS PDAC 종양에서 분화된 T 세포에 대해 높은 발현을 갖는 상기 언급된 면역 체크포인트를 표적화하는 다양한 작용제 및 길항제 ICT 항체의 다중-암(armed) 치료학적 시도로 참여시켰다 (도 5a). 등가 크기의 MRI-기록된 PDAC 종양을 갖는 마우스를 단일 용량의 겜시타빈으로 처리하고, 후속적으로 종점 분석 전에 4 주 동안 단일 또는 병용 ICT 치료를 받도록 무작위배치하였다 (도 5a). 겜시타빈 화학요법의 단일 용량을 사용한 유발을 하기를 고려하여 사용하였다: (1) 사람 PDAC 환자에 대해 화학요법 용법에서 이의 용도를 기초로 하여, PDAC에 대한 겜시타빈의 공지된 항-종양 효과, TME에서 수지상 세포에 의해 종양 세포 사멸 및 증가된 항원성/항원 제시를 야기할 것임, 및 (2) 뮤린 모델 및 사람 PDAC 시험편에서 MDSC/Treg 축적 및 활성을 감소시킬 공지된 가능성 [3, 4, 14, 15, 16]. PDAC 환자에서 이전 임상적 시도와 유사하게 [5, 6, 7], 길항제 PD1 및 CTLA4 항체가 종양 성장 또는 PDAC 보유 마우스의 OS에 대해 임의의 주목할만한 효과를 갖지 않았다는 것을 발견하였다 (도 6a 및 6b). PDAC 종양이 이펙터 T 세포의 열악한 침윤 때문에 항-CTLA4 및 항-PD1 ICT에 반응하지 않는다고 이전에 고려되었지만, 각각 iKRAS PDAC 종양으로 높은 Ctla4 및 Pdcd1 발현을 갖는 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 침윤에도 불구하고, 이들 항체는 효과적인 항종양 면역을 유발할 수 없다 (도 6a 및 6b). 항-PD1 또는 항-CTLA4 치료-저항성 PDAC 보유 마우스로부터 단리된 T 세포에 대해 교대 면역 체크포인트의 발현, 증가된 Lag3 및 Havcr2 (TIM3) 발현의 평가는 항-PD1 및 항-CTLA4 단독요법에 반응하여 확인하고, 뿐만 아니라 증가된 Tnfrsf9 (41BB) 발현은 항-CTLA4 치료에 반응하여 확인하였다 (도 5b). 반대로, 감소된 발현의 Tnfrsf4 (OX-40)를 항-PD1 및 항-CTLA4 단독요법에 반응하여 언급되었다. T 세포 활성을 향상 또는 무효화하는 가능성에 관련된 주장된 면역조절 활성을 갖는 iKRAS 종양에서 CD4+ Tregs 및 탈진된 CD8+ T 세포 상에서 고도로 발현된 이들 면역 체크포인트의 발현에서 상대적 변화를 고려할 때, 단독요법으로서 작용제 (41BB 및 OX40) 및 길항제 (LAG3 및 TIM3) 항체를 사용하여 치료의 효과를 이러한 모델에서 평가하였다. PD1 및 CTLA4와 대조적으로, 작용제 41BB (클론 LOB12.3; BioXCell BE0169) 및 길항제 LAG3 (클론 C9B7W; BioXCell BE0174) 항체를 사용한 단독요법은 PDAC 진행을 감쇠시키고, PDAC 보유 마우스의 OS에서 상응하는 증가가 있었다 (도 6a 및 6b). 이들 발견을 고려할 때, 작용제 41BB 및 길항제 LAG3 항체와 병용한 이중 ICT를 평가하였다 (도 6c 및 6d). 이중 ICT로 치료는 4 주 치료 기간 동안 사멸 없이 양호하게 내성(tolerated)이었다. 단독요법과 비교하여, 병용물을 사용하여 감소된 진행, 및 증가된 생존의 효능의 보통 정도의 증가가 발견되었고; 그러나 모든 마우스 결국 죽었다. 이와 함께, 이들 발견은, 작용제 41BB 및/또는 길항제 LAG3 항체를 사용한 T 세포 활성의 활성화가 iKRAS PDAC 종양의 강건한 성장 억제를 위해 필수적이지 만, 확립된 종양의 완전한 제거를 유발하기에는 충분하지 않다는 것을 제시하였다. 이들 발견의 번역 가능성을 확증하기 위해, 이들 신규한 면역 체크포인트 표적의 발현은 멀티플렉스 IHC를 사용하여 사람 PDAC에서 입증된다 (도 6e 및 6f).
다양한 ICT 치료를 사용한 면역 미세환경에서 동적 변화를 평가하기 위해, 단일-세포 RNA 시퀀싱을 4-주 기간 후 효과적인 (작용제 41BB 및 길항제 LAG3) 및 효과적이지 않은 (길항제 PD1 및 CTLA4) ICT 제제로 처리된 PDAC 보유 마우스로부터 분류된 살아있는 CD45+ 면역세포 상에서 수행하였다 (치료 그룹당 n=3). 총 45,533 세포를 세포당 평균 깊이의 29,290 확고하게-매핑된 판독으로 시퀀싱하였다 (도 5c). 발현 데이터에 적용된 차원 축소 분석 (t-SNE)은, 면역세포가 세포독성 CD4+ T 세포를 제외하고는 비처리된 종양과 유사한 하위유형의 면역세포로 집락화된다 (Gzmk 발현으로 특성화됨)는 것을 나타내었다 (도 5d). 상대적 감소를 면역억제 골수세포의 비율에서 효과적인 (길항제 LAG3 및 작용제 41BB) 항체 치료로 확인하고, 증가를 효과적이지 않은 (길항제 PD1 및 CTLA4) 항체 치료로 확인하였다 (도 5e). 작용제 41BB 항체를 사용한 치료는 T 세포의 확대를 야기하지만 (비-탈진된 세포독성 CD8+ T 세포 집락에 의해 지배됨) 길항제 LAG3 항체 치료는 iKRAS PDAC 종양의 면역 침윤에서 CD4+ T 세포의 상대적 확대를 야기하였다 (도 5e 및 5f). 또한 효과적인 (길항제 LAG3 및 작용제 41BB) 항체 치료를 사용한 항원-제시 수지상 세포의 비율의 상대적 증가가 확인되었고, 효과적이지 않은 것은 (길항제 PD1 및 CTLA4) 그렇지 않았다 (도 5e).
다양한 ICT 치료 후 PDAC TME에서 각각의 개별적인 T 세포의 계통(lineage)을 측정하기 위해, 프라이머를 마우스 α 및 β TCR 유전자자리에 대해 설계하고, 표적화된 PCR을 10X 유전체학 단일-세포 5' cDNA 제품에서 수행하였다. TCR 제품 라이브러리로부터, 전체-길이 TCR α 및 β 서열을 10X 유전체학 셀레인저(cellranger) vdj 파이프라인을 사용하여 조립하였다 (도 6g). 전반적으로, 41BB 치료는, 주로 비-탈진된 세포독성 T 세포로 구성된, 대부분 CD8+ 세포 클로노타입 확대를 야기하였다. T 세포로부터 TCR CDR3 서열에서의 중복을 추가로 평가하고, 항-PD1 및 항-CTLA4 처리된 마우스가 대조군 (IgG) 치료 그룹과 유사한 이들의 치료 그룹 내 마우스 간의 TCRs 중에서 유의한 중복을 갖는다는 것을 발견하였다. 한편, 작용제 41BB 및 길항제 LAG3 항체로 처리된 마우스는 TCR 중복의 완전한 손실을 나타내고, TCR 레퍼토리의 다양화를 시사한다 (도 6h).
사람 PDAC 생물학에서 골수세포 유형의 생리학적 유의성을 평가하기 위해, CIBERSORT 디콘볼루션 알고리즘을 면역세포 부분집합의 분획을 열거하기 위해 PDAC TCGA 및 ICGC-AU 코호트에 적용하였다 [17]. iKRAS 종양와 일치하여, 단핵구/마크로파지는 사람 PDAC의 둘 다의 코호트에서 존재하는 우세한 면역세포 하위유형인 것으로 발견되었다 (도 7a). 마크로파지 중에서, TCGA 및 ICGC-AU 코호트 둘 다에서 우세한 세포 유형은 M2 마크로파지였다. 이러한 알고리즘은 다른 골수세포 하위유형, 예를 들면, 단핵구/마크로파지로부터 MDSCs의 디콘볼루션을 허용하지 않는다는 것을 주의하여야 한다. PDAC 환자의 OS 상 각각의 면역세포 유전자 서명의 영향력을 이후에 평가하였다 [10, 17]. 마크로파지 표현은 PDAC 환자의 OS와 유의하게 연관성이 있고 - 특히, 더 높은 M0 및 M1 마크로파지 서명을 갖는 환자는 더 악화된 전반적으로 예후를 나타낸다는 것을 발견하였다 (도 7b). 이들 발견은 유사한 결과를 갖는 PDAC ICGC-AU 코호트에서 입증되었다. 이러한 알고리즘이 다른 골수세포 하위유형으로부터 MDSCs의 디콘볼루션을 허용하지 않기 때문에, TCGA PDAC RNA-시퀀싱 데이터의 무감독 집락화는 39-유전자 MDSC 서명으로 수행되고 [18] 178 TCGA 일차 PDAC 종양은 3개의 하위유형으로 범주화되었다: MDSC-높은 (n=114), MDSC-중간 (n=54), 및 MDSC-저 (n=11), 이는 큰 비율의 사람 PDAC 종양이 MDSCs의 현저한 침윤을 가질 수 있음은 제시한다 (도 7c). 더 높은 MDSC 유전자 발현을 갖는 환자는 더 낮은 MDSC 발현을 갖는 환자와 비교하여 유의하게 더 낮은 OS를 가졌다. 이전 연구는 골수에서 증가된 빈도의 MDSCs 및 PDAC 환자의 주변 순환을 나타내고, 이는 질환 단계와 연관성이 있다 [19]. 자생 및 동소 iKRAS PDAC 종양에서 풍부한 MDSCs (도 2c, 도 1i)는, 상기 언급된 사람 TCGA PDAC 분석 (도 7c)과 함께, iKRAS PDAC 종양 진행에서 MDSCs 역할의 탐구를 자극하였다. iKRAS 종양으로부터 종양내 CD11b+Gr1+ 세포의 잠재적 면역억제 활성을 평가하기 위해, T-세포 증식을 표준 세포 공배양 시스템을 사용하여 조사하였다. 이들 CD11b+Gr1+ 세포는 강력하게 CD3 및 CD28 항체-유발된 T-세포 증식 및 활성화를 억압하고 (도 7d-7f), CD11b+Gr1+ 세포가 사실상 기능적 MDSCs인 것은 확립하였다. 잘-특성화된 항-Gr1 중화 항체를 사용하여 [18], MDSCs는 확립된 iKRAS PDAC 종양을 갖는 마우스에서 고갈되었다 (도 7g). 항-Gr1 단클론성 항체의 강력한 MDSC 고갈 활성이 감소된 기질 S100A9 발현에 의해 입증되었다. 이러한 MDSC 고갈은 증가된 종양내 CD8+ T 세포를 동반하고, MDSCs의 T-세포 억압 활성의 제거와 일치한다. 모든 마우스가 결국 죽지만, Gr1-처리된 마우스가 감소된 PDAC 진행을 나타내고, PDAC 보유 마우스의 증가된 OS를 야기한다는 것을 발견하였다 (도 8a 및 8b). 이들 발견은, 종양 세포 사멸을 야기하는, 과립구 MDSCs의 표적화된 고갈이 PDAC에서 내인성 T 세포 반응을 드러낼 수 있음을 나타내는 이전 연구와 일치한다 [20].
iKRAS PDAC 종양에서 내인성 골수세포 이질성을 평가하기 위해, 집락화를 SNN에 기초하여 적용하고, 5 골수세포 집락을 분화 발현의 서명 유전자 및 공지된 기능적 마커를 확인하고, Ly6g+Cxcr2high (S100A8/A9 발현), Ccl3highCxcr2low (Mif 발현), 호산구 (Siglecf 발현), Arg1+ 및 Ccr2+ M2 마크로파지를 포함하였다 (도 8c 및 8d, 도 7h 및 7i). 종양에 대한 골수세포의 동원에서 CCL2/CCR2 신호전달 축의 중요한 역할 [21] 및 iKRAS PDAC 종양에서 골수세포 상 이의 높은 발현 (도 7h 및 7i)을 고려할 때, Gr1 항체 치료를 사용하는 골수세포의 고갈이 전반적으로 PDAC 보유 마우스의 생존을 향상시킨다는 발견을 종합하면, CCR2 억제제, RS504393은, 작용제 41BB 및 길항제 LAG3 항체와 병용하여 평가되었다 (도 7j). 현저히, 이중 ICT (작용제 41BB 및 길항제 LAG3 항체)와 병용한 RS504393은 모든 마우스에서 확립된 PDAC 종양의 완전한 회귀를 생성하였다. 반응은 장시간 지속되고, 증가된 OS 및 6/10 마우스는 여전히 재발의 증거 없이 치료 개시 후 6 개월에도 살아있었다 (도 8e 및 8f). 병용물을 사용한 치료는 4 주 치료 기간 동안 치료-관련 사멸 없이 양호하게 내성이었다.
췌관 샘암종 (PDAC)은 '비-면역원성'으로 고려되고, 다중 시도는 항-PD1 및 항-CTLA4를 포함하는 현재 이용가능한 면역 체크포인트 요법에 대한 이의 반항(recalcitrance)을 나타낸다. PDAC의 마우스 모델, 수술로 절제된 사람 PDAC 생체시험편 및 분자 면역학 및 분자 생물학 기술을 사용하여, 본 발명자들은 동소 및 자생 모델 둘 다에서 장기간 반응과 함께 크게 확립된 PDAC 종양 축소에서 놀랍고 예상치 못한 효능을 갖는 신규한 면역요법 병용 용법 (작용제 41BB mAb + 길항제 LAG3 mAb + CCR2 억제제)을 확인하였다. 추가로, 동소 종양을 갖는 다수의 마우스는 이들의 질환에서 치유되고, 동일한 종양 세포로 재-시험접종시 종양 세포를 거부하였다. 본 발명자들은 골수세포의 감소 및 증가된 CD4+ 및 CD8+ T 세포 침윤이 상기 언급된 병용물로 치료 후 종양 미세환경에서 나타난 것으로 확인하였다. 본 발명자들은 또한 PDAC에서 이러한 병용 용법에 대한 적응 내성을 야기하는 교대 계통 (단핵구 대 과립구)의 골수세포의 평행한 유입을 확인하였다. 이와 함께, 이들의 예상치 못한 통찰은 PDAC의 치료를 위한 고도로 효과적이고 신규한 삼중 요법 용법 (작용제 41BB mAb + 길항제 LAG3 mAb + CCR2 억제제)을 나타낸다. 이들 연구는 또한 Cxcr2, 아르기나제 1 (Arg1), 및/또는 유발가능 산화질소 신타제 (iNOS)를 발현하는 면역억제 골수세포를 수반하는 이러한 삼중 요법 용법에 대한 신규하고 예상치 못한 내성 기전을 나타내었다. 이러한 발견은 골수세포를 표적화하는 약물, 예를 들면, CXCR2 억제제, iNOS 억제제, 및/또는 Arg1 억제제를 수반하는 이러한 내성 기전을 억제하는 치료 전략에 영향을 미친다.
본원에 모든 개시되고 청구된 방법은 본 개시내용의 관점에서 과도한 실험 없이 시행 및 수행될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법이 특정 실시형태의 측면에서 기재되지만, 변화가 본원에 기재된 방법에 및 방법의 단계에 또는 단계 순서에 본 발명의 개념, 취지 및 범위를 벗어나지 않고 적용될 수 있다는 것이 당해 기술분야의 숙련가에게 명백할 것이다. 보다 특히, 화학적으로 및 생리학적으로 둘 다 관련된 특정 제제가 본원에 기재된 제제를 대체할 수 있지만, 동일한 또는 유사한 결과를 성취할 것이라는 것이 명백할 것이다. 당해 기술분야의 숙련가에게 명백한 모든 이러한 유사한 치환 및 변형은 첨부된 청구범위에 의해 정의된 본 발명의 취지, 범위 및 개념 내에 있는 것으로 간주된다.
참조문헌
하기 참조문헌은, 이들이 예시적인 절차 또는 다른 상세한 보충을 제공하는 범위까지, 구체적으로 참조로서 본원에 포함된다.
Figure pct00001
Figure pct00002

Claims (60)

  1. 췌관 샘암종 (pancreatic ductal adenocarcinoma; PDAC)에 대해 대상자를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은:
    (a) 41BB 작용제;
    (b) LAG3 길항제; 및
    (c) 케모킨 수용체 억제제
    를 상기 대상자에게 투여함을 포함하는, 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 케모킨 수용체 억제제가 CCR1 억제제인, 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 케모킨 수용체 억제제가 CCR2 억제제인, 방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기 케모킨 수용체 억제제가 RS504393인, 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 추가적인 케모킨 수용체 억제제를 상기 대상자에게 투여함을 추가로 포함하는, 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 아르기나제 억제제를 상기 대상자에게 투여함을 추가로 포함하는, 방법.
  7. 제6항에 있어서, 상기 아르기나제 억제제가 Arg1 억제제인, 방법.
  8. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, iNOS 억제제를 상기 대상자에게 투여함을 추가로 포함하는, 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, Cxcr2 억제제를 상기 대상자에게 투여함을 추가로 포함하는, 방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 Cxcr2 억제제가 항-Cxcr2 항체인, 방법.
  11. 제10항에 있어서, 상기 항-Cxcr2 항체가 MAB2164인, 방법.
  12. 제6항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 상기 대상자에서 골수세포의 성장, 증식, 및/또는 면역억제 활성을 억제함을 포함하는, 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 추가적인 암 요법을 상기 대상자에게 투여함을 추가로 포함하는, 방법.
  14. 제13항에 있어서, 상기 추가적인 암 요법이 화학요법, 방사선요법, 또는 면역요법을 포함하는, 방법.
  15. 제14항에 있어서, 상기 추가적인 암 요법이 화학요법인, 방법.
  16. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추가적인 암 요법이 FOLFIRINOX인, 방법.
  17. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추가적인 암 요법이 겜시타빈인, 방법.
  18. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추가적인 암 요법이 nab-파클리탁셀과 함께 사용되는 겜시타빈인, 방법.
  19. 제17항 또는 제18항에 있어서, 상기 추가적인 암 요법이, 41BB 작용제, LAG3 길항제, 및 케모킨 수용체 억제제를 투여하기 전에, 상기 대상자에게 투여되는, 방법.
  20. 제17항 또는 제18항에 있어서, 상기 추가적인 암 요법이, 41BB 작용제, LAG3 길항제, 및 케모킨 수용체 억제제를 투여한 후, 상기 대상자에게 투여되는, 방법.
  21. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 어떠한 추가적인 암 요법도 상기 대상자에게 투여하는 것을 포함하지 않는, 방법.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상자가 사전 치료와 함께 PDAC로 사전 치료되는, 방법.
  23. 제22항에 있어서, 상기 대상자가 상기 사전 치료에 내성인 것으로 결정된, 방법.
  24. 제22항 또는 제23항에 있어서, 상기 사전 치료가 FOLFIRINOX를 포함하는, 방법.
  25. 제22항 또는 제23항에 있어서, 상기 사전 치료가 겜시타빈을 포함하는, 방법.
  26. 제22항 또는 제23항에 있어서, 상기 사전 치료가 nab-파클리탁셀을 함께 사용한 겜시타빈을 포함하는, 방법.
  27. 제22항 또는 제23항에 있어서, 상기 사전 치료가 PD-1 길항제, PD-L1 길항제, 또는 CTLA-4 길항제를 포함하는, 방법.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 41BB 작용제가 항-41BB 항체인, 방법.
  29. 제28항에 있어서, 상기 항-41BB 항체가 LOB12.3인, 방법.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 LAG3 길항제가 항-LAG3 항체인, 방법.
  31. 제30항에 있어서, 상기 항-LAG3 항체가 C9B7W인, 방법.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 41BB 작용제, 상기 LAG3 길항제, 및 상기 케모킨 수용체 억제제가 실질적으로 동시에 투여되는, 방법.
  33. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 41BB 작용제, 상기 LAG3 길항제, 및 상기 케모킨 수용체 억제제가 순차적으로 투여되는, 방법.
  34. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 41BB 작용제, 상기 LAG3 길항제, 및 상기 케모킨 수용체 억제제가 단일 조성물로 투여되는, 방법.
  35. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 41BB 작용제, 상기 LAG3 길항제, 및 상기 케모킨 수용체 억제제가 2개 이상의 상이한 조성물로 투여되는, 방법.
  36. (a) 항-41BB 작용제;
    (b) 항-LAG3 길항제; 및
    (c) 케모킨 수용체 억제제
    를 포함하는 조성물.
  37. 제36항에 있어서, 상기 41BB 작용제가 항-41BB 항체인, 조성물.
  38. 제37항에 있어서, 상기 항-41BB 항체가 LOB12.3인, 조성물.
  39. 제36항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 LAG3 길항제가 항-LAG3 항체인, 조성물.
  40. 제39항에 있어서, 상기 항-LAG3 항체가 C9B7W인, 조성물.
  41. 제36항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 케모킨 수용체 억제제가 CCR1 억제제인, 조성물.
  42. 제36항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 케모킨 수용체 억제제가 CCR2 억제제인, 조성물.
  43. 제42항에 있어서, 상기 케모킨 수용체 억제제가 RS504393인, 조성물.
  44. 제36항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 아르기나제 억제제를 추가로 포함하는, 조성물.
  45. 제44항에 있어서, 상기 아르기나제 억제제가 Arg1 억제제인, 조성물.
  46. 제36항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, iNOS 억제제를 추가로 포함하는, 조성물.
  47. 제36항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, Cxcr2 억제제를 추가로 포함하는, 조성물.
  48. 제47항에 있어서, 상기 Cxcr2 억제제가 항-Cxcr2 항체인, 조성물.
  49. 제48항에 있어서, 상기 항-Cxcr2 항체가 MAB2164인, 조성물.
  50. 제36항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 부형제를 추가로 포함하는, 조성물.
  51. 췌관 샘암종에 대해 대상자를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은:
    (a) 41BB 작용제;
    (b) LAG3 길항제; 및
    (c) CCR2 억제제
    의 치료학적 유효량을 상기 대상자에게 투여함을 포함하는, 방법.
  52. 제51항에 있어서, 상기 41BB 작용제가 항-41BB 항체인, 방법.
  53. 제51항에 있어서, 상기 LAG3 길항제가 항-LAG3 항체인, 방법.
  54. 제51항에 있어서, 상기 CCR2 억제제가 RS504393인, 방법.
  55. 제51항에 있어서, 상기 41BB 작용제가 항-41BB 항체이고, 상기 LAG3 길항제가 항-LAG3 항체이고, 상기 CCR2 억제제가 RS504393인, 방법.
  56. (a) 41BB 작용제;
    (b) LAG3 길항제;
    (c) CCR2 억제제; 및
    (d) 약제학적으로 허용되는 부형제
    를 포함하는 약제학적 조성물.
  57. 제56항에 있어서, 상기 41BB 작용제가 항-41BB 항체인, 약제학적 조성물.
  58. 제56항에 있어서, 상기 LAG3 길항제가 항-LAG3 항체인, 약제학적 조성물.
  59. 제56항에 있어서, 상기 CCR2 억제제가 RS504393인, 약제학적 조성물.
  60. 제56항에 있어서, 상기 41BB 작용제가 항-41BB 항체이고, 상기 LAG3 길항제가 항-LAG3 항체이고, 상기 CCR2 억제제가 RS504393인, 약제학적 조성물.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2935257T3 (es) * 2013-03-15 2023-03-03 Univ Chicago Métodos y composiciones relacionadas con la actividad de las células T
BR112016026993A2 (pt) * 2014-05-21 2017-10-31 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd combinação de um anticorpo anti-ccr4 e um agonista 4-1bb para tratar câncer
JP2019510832A (ja) * 2016-04-07 2019-04-18 ケモセントリクス，インコーポレーテッド Ｐｄ−１阻害剤又はｐｄ−ｌ１阻害剤と組み合わせてｃｃｒ１アンタゴニストを投与することによる腫瘍負荷の低減
US10660909B2 (en) * 2016-11-17 2020-05-26 Syntrix Biosystems Inc. Method for treating cancer using chemokine antagonists
AU2019346645A1 (en) * 2018-09-27 2021-04-29 Marengo Therapeutics, Inc. CSF1R/CCR2 multispecific antibodies

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