JP7441306B2 - 化合物及びこれを用いた標識生体物質 - Google Patents

Description

本発明は、化合物及びこれを用いた標識生体物質に関する。

様々な刺激（病気、環境変化など）に対する生体内の変化を観察するために、目的の検出対象物質に対して結合性の生体分子（抗体等）を蛍光性化合物（色素）で標識した蛍光標識生体物質が多用されている。
例えば、タンパク質混合物から特定のタンパク質を検出するウエスタンブロッティング（以下、ＷＢとも略す。）でも、上記特定のタンパク質の有無ないし存在量を、このタンパク質に対して結合性の蛍光標識抗体を用いて検出する蛍光法が利用されている。
また、生体中の生体分子、細胞及び組織等の動態及び機能等を解析するバイオイメージング技術においては、蛍光標識により可視化した生体の特定の部位を観察する生体蛍光イメージングが、生体観察の技術の一つとして利用されている。

上記蛍光標識に用いられる蛍光色素として、シアニン色素が知られている。しかし、シアニン色素を蛍光標識に用いた場合、標識後の色素間における自己会合等の相互作用が生じやすく、蛍光量子収率が低下する傾向にある。
この問題に対処した技術として、例えば、特許文献１及び２には、水溶性のＰＥＧ（ポリエチレングリコール）基を導入したシアニン色素が記載されている。上記特許文献１及び２によれば、各特許文献記載のシアニン色素は、色素が有するＰＥＧ基によって標識後の色素間における自己会合が抑制され、従来のシアニン色素に比べて高い蛍光強度を示すとされる。

国際公開第２００９／０７８９７０号 国際公開第２０１３／１３０７６１号

しかし、本発明者らの検討により、上記特許文献１及び２に記載のシアニン色素を用いた蛍光標識では、抗体等の生体分子に対するシアニン色素の結合性が低いことがわかってきた。この結果、従来のシアニン色素と同当量の色素を用いた場合に得られる蛍光強度は低く、十分な蛍光強度が得られないことがわかってきた。
本発明は、生体物質への結合性が良好であり、得られた標識生体物質が優れた蛍光強度を示す化合物を提供することを課題とする。また本発明は、この化合物と生体物質とを結合してなる標識生体物質を提供することを課題とする。

すなわち、本発明の上記課題は、下記の手段によって解決された。
〔１〕
下記一般式（１）で表される化合物。

上記式中、Ｒ^１～Ｒ^４は、置換基を有していてもよいアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基又は－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１を示す。ｍは１～１０であって、Ｒ^２１は置換基を有していてもよいアルキル基を示す。
Ｒ^１１～Ｒ^１３は、水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アミノ基又はハロゲン原子を示し、隣接する基同士が互いに結合して５又は６員環を形成していてもよい。
ｎは１～３の整数である。
Ｌ^１及びＬ^２は置換基を有していてもよいアルキル基又は－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１を示す。Ｒ^２１及びｍは、上記のＲ^２１及びｍと同義である。
α１及びα２は０または１である。
環Ｚ^１及び環Ｚ^２は、炭素原子及び窒素原子から選択される環構成原子で形成される６員環を示し、置換基を有していてもよく、縮合環を形成していてもよい。ただし、環Ｚ^１及び環Ｚ^２の少なくとも一方は、下記一般式（Ｚα）で表されるベンゼン環、又は、下記規定（Ｚβ）を満たす含窒素６員環である。

上記式中、Ｒ^２２は、アルキル基、アルコキシ基、スルホ基、スルホンアミド基、ニトロ基又はハロゲン原子を示す。
Ｒ^２３～Ｒ^２５は、水素原子、アルキル基、アルコキシ基、アリール基、スルホ基、スルホンアミド基、ニトロ基又はハロゲン原子を示し、隣接する基同士が互いに結合して縮合環を形成していていてもよい。
一般式（Ｚα）で表される構造は、Ｒ^２２が、Ｌ^１もしくはＬ^２が結合する窒素原子のオルト位になるよう、＊の位置で一般式（１）の上記窒素原子を含む複素環と結合する。
規定（Ｚβ）：Ｌ^１もしくはＬ^２が結合する窒素原子に対してオルト位に位置する環構成原子が窒素原子である、含窒素６員環である。このオルト位に位置する環構成窒素原子は置換基で置換されていてもよい。
Ｒ^１～Ｒ^４、Ｌ^１及びＬ^２の少なくとも１つは－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１で表される構造を含む。Ｒ^２１及びｍは、上記のＲ^２１及びｍと同義である。
Ｌ^１、Ｌ^２及び上記のオルト位に位置する環構成窒素原子が有する置換基の少なくとも１つは、カルボキシ基又は生体物質に結合可能な置換基を含む。
Ｚ^１及びＺ^２の少なくとも一方が上記の規定（Ｚβ）を満たす含窒素６員環である場合、Ｌ^１、Ｌ^２、Ｒ^１～Ｒ^４及び上記のオルト位に位置する環構成窒素原子が有する置換基のうちの２つが互いに結合して、繰り返し数２ｎ＋３のメチン鎖を含む環を形成していてもよい。
ただし、式（１）で表される化合物は中性の化合物である。
〔２〕
下記一般式（２－１）～（２－３）のいずれかで表される、〔１〕に記載の化合物。

上記式中、Ｒ^３１は、置換基を有していてもよいアルキル基又は－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１を示す。
Ｒ^３２～Ｒ^３５は、水素原子、アルキル基、アルコキシ基、アリール基、スルホ基、スルホンアミド基、ニトロ基又はハロゲン原子を示し、隣接する基同士が互いに結合して縮合環を形成していてもよい。
Ｒ^１～Ｒ^４、Ｒ^１１～Ｒ^１３、Ｌ^１、Ｌ^２、Ｒ^２１～Ｒ^２５及びｍは上記のＲ^１～Ｒ^４、Ｒ^１１～Ｒ^１３、Ｌ^１、Ｌ^２、Ｒ^２１～Ｒ^２５及びｍと同義である。
ｌは２又は３を示す。
Ｌ^１、Ｌ^２及びＲ^３１の少なくとも１つは、カルボキシ基又は生体物質に結合可能な置換基を含む。
ただし、式（２－１）～（２－３）のいずれかで表される化合物は中性の化合物である。
〔３〕
上記のＲ^１及びＲ^２の少なくとも１つと上記のＲ^３及びＲ^４の少なくとも１つとが、ｍ＝１～１０であって、－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）ｍ－で表される構造を含む、〔１〕又は〔２〕に記載の化合物。
〔４〕
上記のＬ^１、Ｌ^２、規定（Ｚβ）におけるオルト位に位置する環構成窒素原子が有する置換基及びＲ^３１の少なくとも１つが、カルボキシ基又は生体物質に結合可能な置換基と、ｍ＝１～１０であって、－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－で表される構造とを含む、〔１〕～〔３〕のいずれか１つに記載の化合物。
〔５〕
上記Ｒ^１１～Ｒ^１３の少なくとも１つがアリールオキシ基又はアリールチオ基である、〔１〕～〔４〕のいずれか１つに記載の化合物。
〔６〕
下記一般式（５－１）～（５－４）のいずれかで表される、〔１〕に記載の化合物。

上記式中、Ｒ^１～Ｒ^６は、置換基を有していてもよいアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基又は－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１を示す。
Ｒ^３１は、置換基を有していてもよいアルキル基又は－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１を示す。
Ｒ^３２～Ｒ^３５は、水素原子、アルキル基、アルコキシ基、アリール基、スルホ基、スルホンアミド基、ニトロ基又はハロゲン原子を示し、隣接する基同士が互いに結合して縮合環を形成していてもよい。
ｌは２又は３を示す。
Ｌ^３～Ｌ^６はアルキレン基又は－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－アルキレン－＊を示す。＊はＵとの結合位置を示す。
連結基Ｕは総原子数１～１００の２価の連結基を示す。
Ｒ^１１～Ｒ^１３、Ｒ^２１、Ｌ^１及びｍは、上記のＲ^１１～Ｒ^１３、Ｒ^２１、Ｌ^１及びｍと同義である。
Ｒ^１～Ｒ^６、Ｌ^１、Ｒ^３１及びＬ^３～Ｌ^６の少なくとも１つは－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－で表される構造を含む。ｍは、上記ｍと同義である。
Ｌ^１、Ｒ^３１、Ｌ^３～Ｌ^６及び連結基Ｕの少なくとも１つは、カルボキシ基又は生体物質に結合可能な置換基を含む。
ただし、式（５－１）～（５－４）で表される化合物は中性の化合物である。
〔７〕
上記連結基ＵにおけるＬ^３～Ｌ^６との連結部が、－Ｏ－基、－ＮＲ^５０－基、－ＣＯＯ－基、－ＣＯＮＲ^５０－基又は－ＳＯ_２ＮＲ^５０－基である〔６〕に記載の化合物。ただし、Ｒ^５０は水素原子又はアルキル基である。
〔８〕
上記のＲ^１及びＲ^２の少なくとも１つと、上記のＲ^３及びＲ^４の少なくとも１つとが、ｍ＝１～１０であって、－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）ｍ－で表される構造を含む、〔６〕又は〔７〕に記載の化合物。
〔９〕
上記Ｌ^３～Ｌ^６の全てが、ｍ＝１～１０であって、－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）ｍ－で表される構造を含む、〔６〕～〔８〕のいずれか１つに記載の化合物。
〔１０〕
上記連結基Ｕが、カルボキシ基又は生体物質に結合可能な置換基を有する、２価の連結基である、〔６〕～〔９〕のいずれか１つに記載の化合物。
〔１１〕
〔１〕～〔１０〕のいずれか１つに記載の化合物と生体物質とが結合してなる標識生体物質。
〔１２〕
上記生体物質がタンパク質、アミノ酸、核酸、糖鎖及びリン脂質のいずれかである〔１１〕に記載の標識生体物質。

本発明の化合物は、生体物質への良好な結合性を示し、得られた標識生体物質は優れた蛍光強度を示す。また、本発明の標識生体物質は優れた蛍光強度を示す。

本発明において、特定の符号又は式で表示された置換基もしくは連結基等（以下、置換基等という）が複数あるとき、又は、複数の置換基等を同時に規定するときには、特段の断りがない限り、それぞれの置換基等は互いに同一でも異なっていてもよい。このことは、置換基等の数の規定についても同様である。また、複数の置換基等が近接するとき（特に、隣接するとき）には、特段の断りがない限り、それらが互いに連結して環を形成していてもよい。また、特段の断りがない限り、環、例えば脂環、芳香族環及びヘテロ環は、さらに縮環して縮合環を形成していてもよい。
本明細書において、特段の断りがない限り、二重結合については、分子内にＥ型及びＺ型が存在する場合、そのいずれであっても、またこれらの混合物であってもよい。また、特段の断りがない限り、化合物としてジアステレオマー及びエナンチオマーが存在する場合には、そのいずれであっても、またこれらの混合物であってもよい。

本発明において、化合物及び置換基の表示については、化合物そのもの及び置換基そのもののほか、その塩、そのイオンを含む意味に用いる。例えば、カルボキシ基、スルホ基及びホスホノ基（－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）_２）等は、水素原子が解離してイオン構造を取っていてもよく、塩構造を取っていてもよい。すなわち、本発明において、「カルボキシ基」はカルボン酸イオン又はその塩を、「スルホ基」はスルホン酸イオン又はその塩を、「ホスホノ基」はホスホン酸イオン又はその塩を、それぞれ含む意味で使用する。上記塩構造を構成する際の１価若しくは多価のカチオンとしては、特に制限されず、無機カチオン、有機カチオン等が挙げられ、具体的には、Ｎａ^＋、Ｌｉ^＋及びＫ^＋等のアルカリ金属のカチオン、Ｍｇ^２＋、Ｃａ^２＋及びＢａ^２＋等のアルカリ土類金属のカチオン、並びに、トリアルキルアンモニウムカチオン、テトラアルキルアンモニウムカチオン等の有機アンモニウムカチオンが挙げられる。
塩構造の場合、その塩の種類は１種類でもよく、２種類以上混在していてもよく、化合物中で塩型と遊離酸構造の基が混在していてもよく、また、塩構造の化合物と遊離酸構造化合物が混在していてもよい。
本発明の化合物は、いずれも中性の化合物である。本発明において、化合物が中性であるとは、電気的に中性であることを意味する。具体的には、化合物内の電荷を有する基又は対イオンによって、化合物全体として電荷が０となるように調整されている。例えば、一般式（１）で表される化合物において、Ｌ^２が結合する窒素原子の形式電荷は、α２＝０である場合を除き＋１である。この形式電荷と対となるようにして、化合物中のスルホ基等の解離性基がスルホン酸イオン等のイオン構造を有することによって、本発明の化合物は、化合物全体として電荷０の化合物となる。α２＝０である場合、Ｌ^２が結合する窒素原子の形式電荷は０である。
なお、一般式（１）で表される化合物において、Ｌ^１が結合する窒素原子の形式電荷は、α１＝１である場合０である。α１＝０である場合は、Ｌ^１が結合する窒素原子の形式電荷が０となるよう、一般式（１）におけるＬ^１が結合する窒素原子を含有する５員環と環Ｚ^１との縮合部分の二重結合に代えて、Ｌ^１が結合する窒素原子と環Ｚ^１との結合部分が二重結合となる共役構造を取る。
本発明で規定する各一般式においては、化合物が有する正電荷を、特定の窒素原子が有する構造として便宜上特定して示している。ただし、本発明の化合物は共役系を有するため、実際には、上記窒素原子以外の他の原子が正電荷を採りうることもあり、化学構造の１つとして各一般式で表される構造を取りうる化合物であれば、各一般式で表される化合物に包含される。このことは負電荷についても同様である。
本発明において、Ｌ^１が結合する窒素原子に対するオルト位とは、環構成原子としてＬ^１が結合する窒素原子を含み、環Ｚ^１が縮環した複素環において、Ｌ^１が結合する窒素原子を１位、Ｒ^１及びＲ^２が結合する炭素原子を３位としたときの、環Ｚ^１が５員環である場合は６位を、環Ｚ^１が６員環である場合は７位を、それぞれ意味する。例えば、一般式（２－１）～（２－３）においては、Ｌ^１が結合する窒素原子に対するオルト位に位置する置換基はＲ^３２である。このことは、Ｌ^２が結合する窒素原子に対するオルト位についても同様である。
また、本発明の効果を損なわない範囲で、構造の一部を変化させたものを含む意味である。更に、置換又は無置換を明記していない化合物については、本発明の効果を損なわない範囲で、任意の置換基を有していてもよい意味である。このことは、置換基（例えば、「アルキル基」、「メチル基」、「メチル」などのように表現される基）及び連結基（例えば、「アルキレン基」、「メチレン基」、「メチレン」などのように表現される基）についても同様である。このような任意の置換基のうち、本発明において好ましい置換基は、後述の置換基群Ｔから選択される置換基である。
本発明において、ある基の炭素数を規定する場合、この炭素数は、本発明ないし本明細書において特段の断りのない限りは、基全体の炭素数を意味する。つまり、この基がさらに置換基を有する形態である場合、この置換基を含めた全体の炭素数を意味する。

また、本発明において「～」を用いて表される数値範囲は、「～」前後に記載される数値を下限値及び上限値として含む範囲を意味する。

本発明の化合物は、下記一般式（１）で表される。本発明の化合物が、生体物質への良好な結合性を示し、得られた標識生体物質は優れた蛍光強度を示す理由の詳細については定かではないが、次のように考えられる。
本発明の化合物は、一般式（１）で示されるように、環構成原子として窒素原子を含み、環Ｚ^１若しくは環Ｚ^２が縮環した複素環を両末端に有するポリメチン鎖（本発明において、共役二重結合によって結ばれたメチン鎖であって、メチン鎖を構成する炭素原子数が２ｎ＋３であるメチン鎖を意味し、繰り返し数２ｎ＋３のメチン鎖とも称す。以下、同様である。）を有し、更に、環Ｚ^１が縮環した複素環の窒素原子が三級アミン構造を有し、環Ｚ^２が縮環した複素環の窒素原子が四級アンモニウム構造を有することにより、ポリメチン骨格を介した電荷移動による吸収が生じる。このように、本発明の化合物は、ポリメチン色素（広義にはシアニン色素）と称される化合物に分類される。
本発明の化合物は、上記構造を有する上で、更に、上記２つの複素環における、３位の環構成炭素原子に結合するＲ^１～Ｒ^４並びに環構成窒素原子に置換するＬ^１及びＬ^２の少なくとも１つが、ｍ＝１～１０であって、－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１で表されるＰＥＧ（ポリエチレングリコール）基を含む構造を有し、Ｌ^１、Ｌ^２及び環Ｚ^１又は環Ｚ^２が有し得る後記規定（Ｚβ）のオルト位に位置する環構成窒素原子が有する置換基の少なくとも１つが、生体物質に結合可能な置換基を有する。これによって、ｍが１０を越えるＰＥＧ基を有する化合物において、大きな排除体積効果により生じてしまう生体物質への結合性の低下が抑えられ、生体物質への良好な結合性を示すことができる。
加えて、本発明の化合物は、上記の環Ｚ^１及び環Ｚ^２の少なくとも一方として、後記一般式（Ｚα）で表される、窒素原子に対するオルト位に置換基を有するベンゼン環、又は、後記規定（Ｚβ）を満たす、窒素原子に対するオルト位が窒素原子である含窒素６員環を有する。これにより、ポリメチン鎖の末端に結合する複素環の環構成窒素原子に対するオルト位の置換基の立体効果、オルト位に位置する窒素原子により得られる親水化効果によって、化合物同士の相互作用が抑制された結果、化合物の自己会合による蛍光強度の低下を抑制することができると考えられる。

本発明の化合物は、繰り返し数２ｎ＋３のメチン鎖の長さに依存して、ｎ＝１の場合に５８５ｎｍ付近に、ｎ＝２の場合に６８５ｎｍ付近に、ｎ＝３の場合に７８５ｎｍ付近に、それぞれ励起吸収波長を有する。そのため、これらの一般式（１）で表される化合物は、それぞれ、励起光源として６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ付近のものを使用する蛍光標識において、生体物質への良好な結合性と優れた蛍光強度とを示す化合物として使用できる。

多色ＷＢでは、可視領域から近赤外領域までの範囲内において、複数の発光色を検出する。そのため、色素を励起発光させた際に互いに干渉してクロストークが起こらないように、複数の色素の吸収発光波形が適切な波長関係となるように選択する必要がある。ある励起光では１つの色素だけが光り、他の色素が光らないように調整されるのが理想的である。この観点で、例えば、多色ＷＢの近赤外領域の発光には、７００ｎｍ付近と８００ｎｍ付近という、ある程度波長の離れた２種類の励起光源が用いられている。
近赤外光励起による蛍光検出は、可視光励起による検出に比べてメンブレンの自家蛍光、すなわちバックグラウンド蛍光を抑制できるため、シグナルノイズ比（Ｓ／Ｎ比）を高めやすく、目的のタンパク質を高感度に検出することが可能となる。そのため、近年、微量タンパク質の解析研究において、近赤外領域の発光を利用した蛍光検出ＷＢの必要性が増してきている。
しかし、近赤外領域では、一般的に蛍光色素の蛍光量子収率が低く、高いシグナル量を得ることが難しい。本発明の化合物のうちｎ＝２又は３である化合物は、上記の７００ｎｍ付近と８００ｎｍ付近の２種類のものを有する多色ＷＢにおいても、生体物質への良好な結合性と優れた蛍光強度とを示す化合物として使用でき、特に、タンパク質をより高感度に観察、検出するという要望に対しても、上記特許文献１及び２記載のシアニン色素を含む従来のシアニン色素を用いた蛍光標識と比較して、生体物質への良好な結合性と優れた蛍光強度とを示すことができる。

以下、本発明の一般式（１）で表される化合物について詳述する。

＜一般式（１）で表される化合物＞
本発明の一般式（１）で表される化合物は、下記の通りである。

式中、Ｒ^１～Ｒ^４は、置換基を有していてもよいアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基又は－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１を示す。ｍは１～１０であって、Ｒ^２１は置換基を有していてもよいアルキル基を示す。
Ｒ^１１～Ｒ^１３は、水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アミノ基又はハロゲン原子を示し、隣接する基同士が互いに結合して５又は６員環を形成していてもよい。
ｎは１～３の整数である。
Ｌ^１及びＬ^２は置換基を有していてもよいアルキル基又は－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１を示す。Ｒ^２１及びｍは、上記のＲ^２１及びｍと同義である。
α１及びα２は０または１である。
環Ｚ^１及び環Ｚ^２は、炭素原子及び窒素原子から選択される環構成原子で形成される６員環を示し、置換基を有していてもよく、縮合環を形成していてもよい。ただし、環Ｚ^１及び環Ｚ^２の少なくとも一方は、後記一般式（Ｚα）で表されるベンゼン環、又は、後記規定（Ｚβ）を満たす含窒素６員環である。

Ｒ^１～Ｒ^４、Ｌ^１及びＬ^２の少なくとも１つは－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１で表される構造を含む。Ｒ^２１及びｍは、上記のＲ^２１及びｍと同義である。ただし、後述するように、Ｌ^１、Ｌ^２、Ｒ^１～Ｒ^４及び後記のオルト位に位置する環構成窒素原子が有する置換基のうちの２つが互いに結合する場合、この結合を形成した基を含むＲ^１～Ｒ^４、Ｌ^１及びＬ^２の少なくとも１つが－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－で表される構造を含んでいればよい。
Ｌ^１、Ｌ^２及び後記規定（Ｚβ）におけるオルト位に位置する環構成窒素原子が有する置換基の少なくとも１つは、カルボキシ基又は生体物質に結合可能な置換基を含む。
Ｚ^１及びＺ^２の少なくとも一方が後記の規定（Ｚβ）を満たす含窒素６員環である場合、Ｌ^１、Ｌ^２及び後記規定（Ｚβ）におけるオルト位に位置する環構成窒素原子が有する置換基のうちの２つが互いに結合して、繰り返し数２ｎ＋３のメチン鎖を含む環を形成していてもよい。
ただし、式（１）で表される化合物は中性の化合物である。

以下、一般式（１）における置換基等について詳述する。

（１）Ｒ^１～Ｒ^４
Ｒ^１～Ｒ^４は、各々独立に、置換基を有していてもよいアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基又は－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１を示す。Ｒ^１とＲ^２は互いに連結して環を形成していてもよく、Ｒ^３とＲ^４は互いに連結して環を形成していてもよい。
Ｒ^１～Ｒ^４として採りうるアルキル基、アリール基及びヘテロアリール基は、後述する置換基群Ｔにおけるアルキル基、アリール基及びヘテロアリール基と同義である。

無置換のアルキル基の炭素数は、１～６が好ましく、１～４がより好ましく、１～２がさらに好ましい。
置換基を有するアルキル基のアルキル基部分の炭素数としては、１～１０が好ましく、１～８がより好ましく、２～６がさらに好ましく、３～５がさらに好ましい。また、置換基を有するアルキル基の最長鎖を構成する原子数としては、３～３５が好ましく、３～３０がより好ましく、３～２５がさらに好ましい。ただし、後述するように、Ｌ^１、Ｌ^２及び後記規定（Ｚβ）におけるオルト位に位置する環構成窒素原子が有する置換基のうちの２つが互いに結合する場合には、Ｌ^３～Ｌ^６及びＵで構成される基において、上記置換基を有するアルキル基の最長鎖に該当する部分を構成する原子数は、５～５０であることも好ましく、５～４０がより好ましく、５～３０がさらに好ましい。
本発明において、「置換基を有するアルキル基のアルキル基部分の炭素数」とは、アルキル基が有する置換基部分を除く炭素数を意味する。
本発明において、「置換基を有するアルキル基の最長鎖を構成する原子数」とは、置換基部分を含む原子数（すなわち、全原子数から、最長鎖を構成しない分子鎖の原子数を引いた原子数）を意味する。なお、スルホ基、カルボキシ基等の解離性の水素原子を有する置換基が最長鎖を構成する場合、解離の有無にかかわらず、水素原子を含めて計算する。また、後述する生体物質に結合可能な置換基部分における原子数は含めない。

Ｒ^１～Ｒ^４として採りうるアルキル基が有していてもよい置換基としては、アルコキシ基、カルボキシ基、アルコキシカルボニル基、アシルオキシ基、カルバモイル基、アシルアミノ基、スルホ基、ホスホノ基及び－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１、並びにこれらの置換基の組み合わせからなる基が挙げられる。また、後述する生体物質に結合可能な置換基を挙げることができる。なお、上記のアルコキシ基、カルボキシ基、アルコキシカルボニル基、アシルオキシ基、カルバモイル基、アシルアミノ基、スルホ基及びホスホノ基並びにこれらの置換基の組み合わせからなる基におけるアルキル基部分が、後述する生体物質に結合可能な置換基を有していてもよい。
Ｒ^１～Ｒ^４として採りうる置換基を有するアルキル基としては、上記置換基を有するアルキル基であれば特に制限はないが、分子間相互作用の抑制の観点からは、－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１を置換基として有するアルキル基が好ましい。この場合、－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１がアルキル基に直接置換していてもよく、カルバモイル基と－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１との組み合わせからなる基として置換していてもよい。

（－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１）
Ｒ^１～Ｒ^４として採りうる－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１において、ｍは１～１０であり、Ｒ^２１は置換基を有していてもよいアルキル基を示す。
ｍは平均繰り返し数（単に、繰り返し数とも称す。）を意味し、４～１０が好ましく、４～８がより好ましい。
上記平均繰り返し数は、化合物について^１Ｈ－ＮＭＲ測定を行い、平均積分値より算出することができる。本発明において規定する平均繰り返し数は、上記方法により算出される平均繰り返し数の小数第一位を四捨五入して得られる数を意味する。
Ｒ^２１における置換基を有していてもよいアルキル基は、上記Ｒ^１～Ｒ^４として採りうる、置換基を有していてもよいアルキル基の記載を適用することができる。
Ｒ^１～Ｒ^４として採りうる－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１及びＲ^１～Ｒ^４に含まれる－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１としては、－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－無置換のアルキル基が好ましい。

Ｒ^１～Ｒ^４の少なくとも１つが、－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－で表される構造を含むことが好ましく、蛍光強度をより向上させる観点から、Ｒ^１及びＲ^２の少なくとも１つとＲ^３及びＲ^４の少なくとも１つとが、－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－で表される構造を含むことがより好ましい。上記－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－で表される構造は、－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１として、上記メチン鎖に直接結合する複素環に直接結合していることが好ましい。
上記－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－におけるｍは、上記－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１におけるｍと同義である。
Ｒ^１～Ｒ^４の置換基はシアニン色素骨格（平面）に対し垂直方向へ張り出すため、この置換基として－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－で表される構造を含むことにより、縮環部分がπ－π相互作用しにくくなり（会合抑制効果が強まり）、会合による蛍光強度の低下を抑制できると推定している。

（２）Ｒ^１１～Ｒ^１３
Ｒ^１１～Ｒ^１３は、各々独立に、水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アミノ基又はハロゲン原子を示す。隣接する基同士が互いに結合して５又は６員環を形成していてもよい。
Ｒ^１１～Ｒ^１３として採りうるアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アミノ基及びハロゲン原子は、後述する置換基群Ｔにおけるアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アミノ基及びハロゲン原子と同義であり、好ましい範囲も同じである。
Ｒ^１１～Ｒ^１３として採りうるアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基及びアミノ基は、各々独立に、無置換であってもよく、置換基を有していてもよい。
Ｒ^１１～Ｒ^１３におけるアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基及びアミノ基が有していてもよい置換基としては、後述する置換基群Ｔにおける置換基が挙げられ、例えば、アルコキシ基又はスルホ基が好ましい。

Ｒ^１１～Ｒ^１３のうち、隣接する基同士が互いに結合して形成される５又は６員環は、芳香族性又は脂肪族性のいずれであってもよく、脂肪族性であることが好ましい。また、６員環を形成することが好ましい。化合物中における上記の５又は６員環の数は特に制限されないが、１又は２個が好ましく、１個がより好ましい。
例えば、ｎ＝３の場合を例にすると、Ｒ^１１～Ｒ^１３のうち隣接する基同士が結合して形成される環を有する構造としては、下記構造が好ましく挙げられる。なお、下記例においては、環構造を形成していないＲ^１１～Ｒ^１３は水素原子であり、環構造は置換基を有しない構造を記載しているが、これらに限定されるものではない。

Ｒ^１１、及び、環Ｚ^２が縮環した複素環に結合する炭素原子が有するＲ^１３は、水素原子が好ましい。
Ｒ^１２及び上記以外のＲ^１３は、水素原子、アルキル基、アリールオキシ基又はアリールチオ基が好ましく、水素原子、アルキル基又はアリールオキシ基がより好ましい。
Ｒ^１１～Ｒ^１３の少なくとも１つは、アリールオキシ基又はアリールチオ基であることが好ましく、Ｒ^１２及び上記のインドレニン環に結合する炭素原子が有するＲ^１３以外のＲ^１３のうちの少なくとも１つは、アリールオキシ基又はアリールチオ基であることがより好ましい。
Ｒ^１１～Ｒ^１３のうち、Ｒ^１１、及び、環Ｚ^２が縮環した複素環に結合する炭素原子が有するＲ^１３以外のＲ^１２～Ｒ^１３における隣接する基同士が、互いに結合して５又は６員環を形成していることが好ましく、６員環を形成していることがより好ましい。また、環Ｚ^１が縮環した複素環と環Ｚ^２が縮環した複素環とを結ぶ結合の中心部分に上記５又は６員環を形成していることが好ましい。環Ｚ^１が縮環した複素環と環Ｚ^２が縮環した複素環とを結ぶ結合の中心部分に形成される環とは、２つの複素環からの結合原子数が等しくなる炭素原子を環構成原子として含む環を意味する。

（３）Ｌ^１、Ｌ^２
Ｌ^１及びＬ^２は、各々独立に、置換基を有していてもよいアルキル基又は－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１を示す。Ｒ^２１及びｍは、上記のＲ^２１及びｍと同義である。
Ｌ^１及びＬ^２におけるアルキル基が有していてもよい置換基としては、アルコキシ基、カルボキシ基、アルコキシカルボニル基、アシルオキシ基、カルバモイル基、アシルアミノ基、スルホ基及びホスホノ基並びにこれらの置換基の組み合わせからなる基が挙げられる。また、後述する生体物質に結合可能な置換基を挙げることができる。なお、上記のアルコキシ基、カルボキシ基、アルコキシカルボニル基、アシルオキシ基、カルバモイル基、アシルアミノ基、スルホ基及びホスホノ基並びにこれらの置換基の組み合わせからなる基におけるアルキル基部分が、後述する生体物質に結合可能な置換基を有していてもよい。

Ｌ^１及びＬ^２として採りうるアルキル基は、後述する置換基群Ｔにおけるアルキル基と同義である。
無置換のアルキル基の炭素数は、１～６が好ましく、１～４がより好ましく、１～３がさらに好ましい。
置換基を有するアルキル基のアルキル基部分の炭素数は、１～１０が好ましく、１～８がより好ましく、１～７がさらに好ましく、１～６がさらに好ましく、１～５がさらに好ましい。また、置換基を有するアルキル基の最長鎖を構成する原子数は、３～１４が好ましく、３～１２がより好ましく、３～１０がさらに好ましい。

Ｌ^１及びＬ^２として採り得る置換基を有するアルキル基としては、水溶性をより向上させる観点からは、アルコキシ基、カルボキシ基、スルホ基及びホスホノ基の少なくとも１つを置換基として有するアルキル基が好ましく、カルボキシ基及びスルホ基の少なくとも１つを置換基として有するアルキル基がより好ましい。なお、上記の好ましい置換基（アルコキシ基、カルボキシ基、スルホ基及びホスホノ基）と、これらの置換基以外の基との組合わせからなる置換基を有するアルキル基であってもよい。
また、上記Ｒ^１～Ｒ^４が採り得る、置換基を有するアルキル基の形態も好ましく適用できる。

Ｌ^１及びＬ^２として採りうる－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１は、上記Ｒ^１～Ｒ^４における－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１の記載を好ましく適用することができる。
Ｌ^１及びＬ^２として採りうる－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１としては、Ｒ^２１が末端にカルボキシ基又は生体物質に結合可能な置換基を有するアルキル基であることが好ましい。この場合、カルボキシ基又は生体物質に結合可能な置換基がアルキル基に直接置換していてもよく、アルコキシカルボニル基とカルボキシ基又は生体物質に結合可能な置換基との組み合わせからなる基として置換していてもよい。

（４）環Ｚ^１及び環Ｚ^２
環Ｚ^１及び環Ｚ^２は、炭素原子及び窒素原子から選択される環構成原子で形成される６員環を示し、置換基を有していてもよく、縮合環を形成していてもよい。蛍光強度をより向上させる観点からは、環Ｚ^１及び環Ｚ^２は単環であることが好ましい。
ただし、環Ｚ^１及び環Ｚ^２の少なくとも一方は、後記一般式（Ｚα）で表されるベンゼン環、又は、後記規定（Ｚβ）を満たす含窒素６員環である。

環Ｚ^１及び環Ｚ^２として採りうる素原子及び窒素原子から選択される環構成原子で形成される６員環としては、脂肪族環であっても芳香族環であってもよいが、芳香族環が好ましい。
上記６員環としては、例えば、炭化水素環又は含窒素複素環が挙げられ、具体的には、ベンゼン環、ピリジン環、ピリミジン環、ピリダジン環、ピラジン環及び１，２，３若しくは１，２，４－トリアジン環が挙げられ、ベンゼン環又はピリジン環が好ましい。また、共役構造の記載の方法によって、これらの芳香族環と環構成原子の種類及び位置を同じとする脂肪族環も挙げられる。

上記６員環が有していてもよい置換基としては、後述する置換基群Ｔにおける置換基が挙げられ、アルキル基、アルコキシ基、アリール基、カルボキシ基、スルホ基、ホスホノ基、スルホンアミド基、ニトロ基又はハロゲン原子がより好ましく、アルキル基、スルホ基、スルホンアミド基、ニトロ基又はハロゲン原子がより好ましい。
水溶性の向上および会合抑制の観点から、環Ｚ^１及び環Ｚ^２は、各々独立に、１つ以上の親水性基を有することが好ましく、環Ｚ^１又は環Ｚ^２を構成する環の数１つに付き少なくとも１つの親水性基を有することがより好ましい。例えば、環Ｚ^１及び環Ｚ^２が共にナフタレン環である場合、環Ｚ^１及び環Ｚ^２を構成する環の数はいずれも２となり、環Ｚ^１及び環Ｚ^２がいずれも、少なくとも２つの親水性基を有することがより好ましいことを意味する。上限値は、構造として可能な限り特に制限されず、後述する化合物全体としての親水性基の数にあわせて、適宜調整することができる。
親水性基としては、特に制限されないが、例えば、置換基を有するアルコキシ基、カルボキシ基、スルホ基及びホスホノ基が挙げられ、スルホ基が好ましい。

（一般式（Ｚα）で表されるベンゼン環）

上記式中、Ｒ^２２は、アルキル基、アルコキシ基、スルホ基、スルホンアミド基、ニトロ基又はハロゲン原子を示す。
Ｒ^２３～Ｒ^２５は、水素原子、アルキル基、アルコキシ基、アリール基、スルホ基、スルホンアミド基、ニトロ基又はハロゲン原子を示し、隣接する基同士が互いに結合して縮合環を形成していていてもよい。
一般式（Ｚα）で表される構造は、Ｒ^２２が、Ｌ^１もしくはＬ^２が結合する窒素原子のオルト位になるよう、＊の位置で一般式（１）の上記窒素原子を含む複素環と結合する。

Ｒ^２２におけるアルキル基、アルコキシ基、スルホ基、スルホンアミド基、ニトロ基及びハロゲン原子は、それぞれ、後述する置換基群Ｔにおけるアルキル基、アルコキシ基、スルホ基、スルホンアミド基、ニトロ基及びハロゲン原子と同義である。
Ｒ^２３～Ｒ^２５として採りうるアルキル基、アルコキシ基、アリール基、スルホ基、スルホンアミド基、ニトロ基及びハロゲン原子は、それぞれ、後述する置換基群Ｔにおけるアルキル基、アルコキシ基、アリール基、スルホ基、スルホンアミド基、ニトロ基及びハロゲン原子と同義である。
Ｒ^２３～Ｒ^２５のうち隣接する基同士が互いに結合して形成される縮合環としては、特に制限はないが、ベンゼン環が好ましく挙げられ、環Ｚ^１又は環Ｚ^２としてナフタレン環が好ましく挙げられる。

Ｒ^２２は、アルキル基又はスルホ基が好ましい。
Ｒ^２３～Ｒ^２５は、水素原子、スルホ基、ニトロ基又はハロゲン原子が好ましく、水素原子、スルホ基又はハロゲン原子がより好ましい。

（規定（Ｚβ））
規定（Ｚβ）：Ｌ^１もしくはＬ^２が結合する窒素原子に対してオルト位に位置する環構成原子が窒素原子である、含窒素６員環である。
上記の規定（Ｚβ）を満たす含窒素６員環としては、例えば、ピリジン環、ピリミジン環、ピリダジン環、ピラジン環及び１，２，３若しくは１，２，４－トリアジン環が挙げられ、ピリジン環が好ましい。
好ましくは、環Ｚ^１および環Ｚ^２が共に規定（Ｚβ）を満たすことはない。

規定（Ｚβ）を満たす含窒素６員環は、Ｌ^１もしくはＬ^２が結合する窒素原子に対してオルト位に位置する環構成窒素原子を含め、環構成原子である窒素原子上に置換基を有していてもよく、有していてもよい置換基としては、具体的には、上記のＲ^２３～Ｒ^２５又はＬ^１もしくはＬ^２として採りうる置換基を挙げることができる。
規定（Ｚβ）を満たす含窒素６員環は、窒素原子以外の環構成原子上に置換基を有していてもよく、具体的には、上記のＲ^２３～Ｒ^２５又はＬ^１もしくはＬ^２として採りうる置換基を挙げることができる。

（５）ｎ、α１及びα２
ｎは、１～３の整数であって、２又は３が好ましい。
α１及びα２は０または１である。α１が０であるとはＬ^１を有しないことを意味し、α１が１であるとはＬ^１を有することを意味する。同様に、α２が０であるとはＬ^２をしないことを意味し、α２が１であるとはＬ^２を有することを意味する。
環Ｚ^１が上記規定（Ｚβ）を満たす場合に、α１は０を取りうる。また、環Ｚ^２が上記規定（Ｚβ）を満たす場合に、α２は０を取りうる。

Ｌ^１、Ｌ^２及び上記規定（Ｚβ）におけるオルト位に位置する環構成窒素原子が有する置換基の少なくとも１つは、カルボキシ基又は生体物質に結合可能な置換基を含む。
上記一般式（１）で表される化合物は、上記のカルボキシ基または生体物質に結合可能な置換基により、生体物質と結合し、目的とする標識生体物質を得ることができる。なお、カルボキシ基は、生体物質に結合可能な置換基を常法により容易に誘導することができる。
本発明において、「生体物質に結合可能な置換基」は、カルボキシ基から誘導される生体物質に結合可能な置換基を含む。
このように、上記一般式（１）で表される化合物は、シアニン骨格構造中において特定の位置に有する置換基（具体的には、Ｌ^１、Ｌ^２又は上記規定（Ｚβ）におけるオルト位に位置する環構成窒素原子が有する置換基）により生体物質と結合するため、得られる標識生体物質は、上述の通り、優れた蛍光強度を示すと考えられる。
Ｌ^１、Ｌ^２及び上記規定（Ｚβ）におけるオルト位に位置する環構成窒素原子が有する置換基のうちカルボキシ基または生体物質に結合可能な置換基を有する基の数は、合計で、少なくとも１つ以上であればよく、検出対象物質の定量の観点から、１～３つが好ましく、１つ又は２つがより好ましく、１つがさらに好ましい。

Ｌ^１、Ｌ^２及び上記規定（Ｚβ）におけるオルト位に位置する環構成窒素原子が有する置換基の少なくとも１つは、蛍光強度をより向上させる観点から、カルボキシ基又は生体物質に結合可能な置換基と、ｍ＝１～１０であって、－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－で表される構造とを含むことが好ましい。これは、適度な親水性と、適度な排除体積効果を有するためと考えられる。

また、上記一般式（１）で表される化合物は、化合物として十分な親水性を付与する観点から、化合物全体として親水性基を、２個以上有することが好ましく、２～８個有することがより好ましく、２～６個有することがさらに好ましく、３～６個有することが特に好ましい。
親水性基としては、前述の環Ｚ^１及び環Ｚ^２が採りうる親水性基の記載を適用することができる。
親水性基の位置は特に制限されないが、上記親水性基を有する基としては、例えば、Ｒ^１１～Ｒ^１３、環Ｚ^１、環Ｚ^２、Ｌ^１及びＬ^２が好ましく挙げられる。

また、Ｚ^１及びＺ^２の少なくとも一方が上記の規定（Ｚβ）を満たす含窒素６員環である場合、Ｌ^１、Ｌ^２、Ｒ^１～Ｒ^４及び上記規定（Ｚβ）におけるオルト位に位置する環構成窒素原子が有する置換基（例えば、後述する一般式（２－３）のＲ^３１）のうちの２つが互いに結合して、繰り返し数２ｎ＋３（後述する一般式（２－１）～（２－３）においては繰り返し数２ｌ＋３）のメチン鎖を含む環を形成していてもよい。このようにして形成される環としては、例えば、後述の一般式（５－１）～（５－４）のいずれかで表される構造が挙げられる。このような環が形成されている場合には、回転（環Ｚ^１が縮環した複素環及び環Ｚ^２が縮環した複素環の回転）が抑制されることによって、蛍光強度をより向上させることができると考えられる。

＜一般式（２－１）～（２－３）のいずれかで表される化合物＞
本発明の一般式（１）で表される化合物は下記一般式（２－１）～（２－３）のいずれかで表されることが好ましい。

式中、Ｒ^３１は、置換基を有していてもよいアルキル基又は－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１を示す。
Ｒ^３２～Ｒ^３５は、水素原子、アルキル基、アリール基、スルホ基、スルホンアミド基、ニトロ基又はハロゲン原子を示し、隣接する基同士が互いに結合して縮合環を形成していてもよい。
Ｒ^１～Ｒ^４、Ｒ^１１～Ｒ^１３、Ｌ^１、Ｌ^２及びＲ^２２～Ｒ^２５は上記一般式（１）におけるＲ^１～Ｒ^４、Ｒ^１１～Ｒ^１３、Ｌ^１、Ｌ^２及びＲ^２２～Ｒ^２５と同義であり、好ましい範囲も同じである。
ｌは２又は３を示す。なお、ｌは整数である。
上記一般式（１）で表される化合物と同様に、上記一般式（２－１）～（２－３）のいずれかで表される化合物は、Ｌ^１、Ｌ^２及びＲ^３１の少なくとも１つはカルボキシ基又は生体物質に結合可能な置換基を含む。
ただし、Ｌ^１、Ｌ^２、Ｒ^１～Ｒ^４及びＲ^３１のうちの２つが互いに結合して、繰り返し数２ｎ＋３のメチン鎖を含む環を形成することはない。
ただし、式（２－１）～（２－３）のいずれかで表される化合物は中性の化合物である。

Ｒ^３１として採りうる置換基を有していてもよいアルキル基及び－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１は、Ｌ^１又はＬ^２として採りうる置換基を有していてもよいアルキル基及び－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１と同義である。

Ｒ^３２～Ｒ^３５として採り得るアルキル基、アリール基、スルホ基、スルホンアミド基、ニトロ基及びハロゲン原子は、上記一般式（Ｚα）におけるＲ^２３～Ｒ^２５として採り得るアルキル基、アリール基、スルホ基、スルホンアミド基、ニトロ基及びハロゲン原子と同義である。

＜一般式（５－１）～（５－４）のいずれかで表される化合物＞
本発明の一般式（１）で表される化合物は、下記一般式（５－１）～（５－４）のいずれかで表されることが好ましい。

式中、Ｒ^１～Ｒ^６は、置換基を有していてもよいアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基又は－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１を示す。
Ｒ^３１は、上記一般式（２－１）～（２－３）におけるＲ^３１と同義であり、好ましい範囲も同じである。すなわち、Ｒ^３１は、置換基を有していてもよいアルキル基又は－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１を示す。
Ｒ^３２～Ｒ^３５は、上記一般式（２－１）～（２－３）におけるＲ^３２～Ｒ^３５と同義であり、好ましい範囲も同じである。すなわち、Ｒ^３２～Ｒ^３５は、水素原子、アルキル基、アルコキシ基、アリール基、スルホ基、スルホンアミド基、ニトロ基又はハロゲン原子を示し、隣接する基同士が互いに結合して縮合環を形成していてもよい。
ｌは２又は３を示す。なお、ｌは整数である。
Ｌ^３～Ｌ^６はアルキレン基又は－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－アルキレン－＊を示す。＊はＵとの結合位置を示す。
連結基Ｕは原子数１～１００の２価の連結基を示す。
Ｒ^１１～Ｒ^１３、Ｒ^２１、Ｌ^１及びｍは上記一般式（１）におけるＲ^１１～Ｒ^１３、Ｒ^２１、Ｌ^１及びｍと同義であり、特段の断りのない限り、好ましい範囲も同じである。
Ｒ^１～Ｒ^６、Ｌ^１、Ｒ^３１及びＬ^３～Ｌ^６の少なくとも１つは－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－で表される構造を含む。ｍは、上記ｍと同義である。
Ｌ^１、Ｒ^３１、Ｌ^３～Ｌ^６及び連結基Ｕの少なくとも１つは、カルボキシ基又は生体物質に結合可能な置換基を含む。
ただし、式（５－１）～（５－４）のいずれかで表される化合物は中性の化合物である。

Ｌ^３として採りうるアルキレン基は、Ｌ^１及びＬ^２として採りうる置換基を有するアルキル基から水素原子又は置換基を１つ除いて得られるアルキレン基に相当する。Ｌ^４として採りうるアルキレン基は、規定（Ｚβ）を満たす含窒素６員環の環構成窒素原子上に有していてもよい置換基であるアルキル基から水素原子又は置換基を１つ除いて得られるアルキレン基に相当する。Ｌ^５及びＬ^６として採りうるアルキレン基は、Ｒ^１～Ｒ^４として採りうる置換基を有するアルキル基から水素原子又は置換基を１つ除いて得られるアルキレン基に相当する。
Ｌ^３～Ｌ^６として採りうるアルキレン基のアルキレン基部分の炭素数は、Ｌ^１及びＬ^２における置換基を有するアルキル基のアルキル基部分の炭素数の記載を好ましく適用することができる。

Ｌ^３として採りうる－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－アルキレン－＊は、Ｌ^１及びＬ^２として採りうる－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１（Ｒ^２１は置換基を有するアルキル基を示す。）のうち、Ｒ^２１としてのアルキル基から水素原子又は置換基を１つ除いて得られる－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－アルキレンに相当する。
Ｌ^４として採りうる－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－アルキレン－＊は、規定（Ｚβ）を満たす含窒素６員環の環構成窒素原子上に有していてもよい置換基である－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１（Ｒ^２１は置換基を有するアルキル基を示す。）から水素原子又は置換基を１つ除いて得られる－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－アルキレンに相当する。
Ｌ^５及びＬ^６として採りうる－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－アルキレン－＊は、Ｒ^１～Ｒ^４として採りうる－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１（Ｒ^２１は置換基を有するアルキル基を示す。）から水素原子又は置換基を１つ除いて得られる－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－アルキレンに相当する。
Ｌ^３～Ｌ^６として採り得うる－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－アルキレン－＊において、ｍは１～１０が好ましく、１～８がより好ましく、アルキレン基部分の炭素数は、Ｒ^１～Ｒ^４における置換基を有するアルキル基のアルキル基部分の炭素数の記載を好ましく適用することができる。

蛍光強度をより向上させる観点から、化合物中に含まれる全てのＬ^３～Ｌ^６（すなわち、化合物中に含まれるＬ^３～Ｌ^６のそれぞれ）は、－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－で表される構造を含むことが好ましい。各一般式について具体的に説明すると、一般式（５－２）においてはＬ^３及びＬ^５、一般式（５－３）においてはＬ^４及びＬ^６、一般式（５－４）においてはＬ^５及びＬ^６が、－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－で表される構造を含むことが好ましい。

また、上記一般式（５－１）～（５－３）において、Ｒ^１及びＲ^２の少なくとも１つと、Ｒ^３及びＲ^４の少なくとも１つとが、－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）ｍ－で表される構造を含むことが好ましい。各一般式について具体的に説明すると、一般式（５－１）においてはＲ^１及びＲ^２の少なくとも１つとＲ^３及びＲ^４の少なくとも１つが、一般式（５－２）においてはＲ^１及びＲ^２の少なくとも１つが、一般式（５－３）においてはＲ^３及びＲ^４の少なくとも１つが、－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）ｍ－で表される構造を含むことが好ましい。ｍは、上記一般式（１）におけるｍと同義である。
このことは、すなわち、一般式（５－１）～（５－３）におけるポリメチン鎖の両端に位置する２つの複素環がいずれも、下記条件Ｉを満たすことが好ましいことを意味する。
（条件Ｉ）
複素環の環構成原子であるｓｐ^３炭素原子のうち、連結基Ｕと結合する置換基を有していないｓｐ^３炭素原子は、このｓｐ^３炭素原子上の少なくとも１つの置換基が、－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－で表される構造を含む。

連結基Ｕを構成する総原子数は、１～１００であり、１０～９０が好ましく、２０～９０がより好ましく、３０～８０がさらに好ましい。
連結基Ｕは、アルキレン基、－Ｏ－、－ＮＲ⁵⁰－、－ＣＯＯ－、－ＣＯＮＲ⁵⁰－及び－ＳＯ₂ＮＲ⁵⁰－から選ばれる３つ以上が結合して形成される２価の連結基であることが好ましい。Ｒ⁵⁰は、水素原子又はアルキル基を示す。
連結基Ｕとして採り得るアルキレン基のアルキレン部分の炭素数は、１～１０が好ましく、１～８がより好ましく、１～７がさらに好ましく、１～６が特に好ましく、１～５が最も好ましい。
Ｒ⁵⁰として採り得るアルキル基は、上記Ｒ^１～Ｒ^４におけるアルキル基の記載を好ましく適用することができる。
Ｒ⁵⁰としては水素原子が好ましい。
連結基Ｕを構成する上記のアルキレン基、－Ｏ－、－ＮＲ⁵⁰－、－ＣＯＯ－、－ＣＯＮＲ⁵⁰－及び－ＳＯ₂ＮＲ⁵⁰－の数は、３～１１が好ましく、３～７がより好ましく、３～５がさらに好ましく、３が特に好ましい。
連結基Ｕは、Ｌ^３～Ｌ^６との連結部が－Ｏ－、－ＮＲ⁵⁰－、－ＣＯＯ－、－ＣＯＮＲ⁵⁰－又は－ＳＯ₂ＮＲ⁵⁰－であることが好ましい。すなわち、連結基Ｕは、連結基Ｕを構成する、－Ｏ－、－ＮＲ⁵⁰－、－ＣＯＯ－、－ＣＯＮＲ⁵⁰－又は－ＳＯ₂ＮＲ⁵⁰－を介して、Ｌ^３～Ｌ^６のアルキレン基に対して結合していることが好ましい。連結基Ｕは、Ｌ^３～Ｌ^６との連結部が－Ｏ－、－ＮＲ⁵⁰－、－ＣＯＯ－、－ＣＯＮＲ⁵⁰－又は－ＳＯ₂ＮＲ⁵⁰－であって、上記の連結部同士がアルキレン基で結ばれた２価の連結基であることがより好ましい。
連結基Ｕは、カルボキシ基又は生体物質に結合可能な置換基を有する２価の連結基であることが好ましい。連結基Ｕにおいて、カルボキシ基又は生体物質に結合可能な置換基を有する箇所としては、アルキレン基又はＲ⁵⁰としてのアルキル基が挙げられ、アルキレン基が好ましい。
連結基Ｕにおいて、アルキレン基又はＲ⁵⁰としてのアルキル基に対して、カルボキシ基又は生体物質に結合可能な置換基は直接結合していてもよく、連結基ＺＺＺを介して結合していてもよい。
上記連結基ＺＺＺとしては、アルキレン基、－ＮＲ^６０－、－ＣＯＯ－、－ＣＯＮＲ^６０－及び－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－、並びにこれらの置換基の組み合わせからなる基が挙げられる。組み合わせる数は、例えば、２～７が好ましく、２～５がより好ましい。
Ｒ^６０は水素原子又はアルキル基であり、水素原子が好ましい。Ｒ^６０として採り得るアルキル基としては、上記Ｒ^５０におけるアルキル基の記載を好ましく適用することができるが、Ｒ^６０として採り得るアルキル基がカルボキシ基又は生体物質に結合可能な置換基を有することはない。
ｍは繰り返し数を表し、１～１０が好ましく、１～８がより好ましく、１～４がさらに好ましい。

Ｒ^１２、及び、環Ｚ^２が縮環した複素環に結合する炭素原子が有するＲ^１３以外のＲ^１３は、水素原子、アルキル基、アリールオキシ基又はアリールチオ基が好ましく、水素原子、アルキル基又はアリールオキシ基がより好ましく、水素原子であることがさらに好ましい。

以下に、本発明の一般式（１）で表される化合物の具体例を示すが、本発明はこれらの化合物に限定されない。下記具体例において、スルホ基は、水素原子が解離して塩構造を採っていてもよい。下記具体例において、ｍＰＥＧ_４及びＰＥＧ_４は、それぞれ以下の構造を示し、Ｘは水素原子、塩素原子又は臭素原子を示し、Ｍｅはメチル基を示す。ただし、ＰＥＧ_４は炭素原子側で窒素原子、又は、環Ｚ^１もしくは環Ｚ^２が縮環した複素環の環構成原子と結合する。

本発明の一般式（１）で表される化合物は、Ｌ^１、Ｌ^２及び上記規定（Ｚβ）におけるオルト位に位置する環構成窒素原子が有する置換基の少なくとも１つが有する生体物質に結合可能な置換基によって、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、核酸、糖鎖及び脂質などの生体物質に結合させることができ、標識生体物質として用いることができる。
生体物質に結合可能な置換基としては、生体物質に作用（付着を含む）もしくは結合するための基であれば、特に制限することなく用いることができ、国際公開第２００２／０２６８９１号等に記載の置換基を挙げることができる。なかでも、ＮＨＳエステル構造（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）、スクシンイミド構造、マレイミド構造、アジド基、アセチレン基、ペプチド構造（ポリアミノ酸構造）、長鎖アルキル基（好ましくは、炭素数１２～３０）、４級アンモニウム基が好ましく挙げられる。

本発明の一般式（１）で表される化合物のうち、Ｌ^１、Ｌ^２及び上記規定（Ｚβ）におけるオルト位に位置する環構成窒素原子が有する置換基の少なくともいずれか１つに生体物質に結合可能な置換基を少なくとも有する化合物の具体例としては、例えば、後記標識生体物質における例示化合物が挙げられる。また、上記本発明の一般式（１）で表される化合物における例示化合物において、生体物質に結合可能な置換基を後記標識生体物質における例示化合物として示すようにして有する形態も、具体例として挙げられる。なお、本発明はこれらの化合物に限定されない。例えば、これらの具体例において、カルボキシ基及びスルホ基等の解離性の水素原子を有する基については、水素原子が解離して塩構造を採っていてもよい。

本発明の一般式（１）で表される化合物は、化合物構造を一般式（１）で規定する構造とすること以外は、公知の方法で合成できる。例えば、特許文献１、特許文献２等に記載の方法が挙げられる。
生体物質に結合可能な置換基を有する化合物は、化合物構造を一般式（１）で規定する構造とすること以外は、公知の方法で合成できる。例えば、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｇｒｅｇ Ｔ． Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ著）を参照することができる。

＜＜標識生体物質＞＞
本発明の標識生体物質は、本発明の一般式（１）で表される化合物と生体物質とが結合した物質である。本発明の一般式（１）で表される化合物は蛍光性を有し、近赤外領域の発色用として適した吸収波長ピークと優れた蛍光強度を示すため、標識生体物質に好ましく用いることができる。一般式（１）で表される化合物と生体物質との結合は、一般式（１）で表される化合物と生体物質とが直接結合した形態でもよいし、連結基を介して連結した形態でもよい。

上記生体物質としては、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、核酸、糖鎖及び脂質が好ましく挙げられる。タンパク質としては抗体が好ましく挙げられ、脂質としてはリン脂質、脂肪酸及びステロールが好ましく挙げられ、リン脂質がより好ましい。
上記生体物質のうち、臨床病理的に有用な物質としては、特に制限されるものではないが、例えば、Ｉｇ（Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）Ｇ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤ等の免疫グロブリン、補体、Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）、フェリチン、α_１マイクログロブリン、β_２マイクログロブリン等の血漿タンパク及びそれらの抗体、α－フェトプロテイン、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、前立線性酸性フォスファターゼ（ＰＡＰ）、ＣＡ（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ）１９－９、ＣＡ‐１２５等の腫瘍マーカー及びそれらの抗体、黄体化ホルモン（ＬＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、ヒト繊毛性ゴナドトロビン（ｈＣＧ）、エストロゲン、インスリン等のホルモン類及びそれらの抗体、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）関連抗原（ＨＢｓ、ＨＢｅ、ＨＢｃ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、成人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）等のウイルス感染関連物質及びそれらの抗体、等が挙げられる。
さらに、ジフテリア菌、ボツリヌス菌、マイコプラズマ、梅毒トレポネーマ等のバクテリア及びそれらの抗体、トキソプラズマ、トリコモナス、リーシュマニア、トリバノゾーマ、マラリア原虫等の原虫類及びそれらの抗体、ＥＬＭ３、ＨＭ１、ＫＨ２、ｖ６．５、ｖ１７．２、ｖ２６．２（由来マウス１２９、１２９／ＳＶ、Ｃ５７ＢＬ／６、ＢＡＬＢ／ｃ）等のＥＳ細胞（Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ）及びそれらの抗体、フェニトイン、フェノバルビタール等の抗てんかん薬、キニジン、ジゴキニシン等の心血管薬、テオフィリン等の抗喘息薬、クロラムフェニコール、ゲンタマイシン等の抗生物質等の薬物類及びそれらの抗体、その他の酵素、菌体外毒素（スチレリジンＯ等）及びそれらの抗体等も挙げられる。また、Ｆａｂ’２、Ｆａｂ、Ｆｖ等の抗体断片も用いる事ができる。

本発明の一般式（１）で表される化合物（以下、化合物（１）とも略す。）と生体物質が相互作用して結合した具体的な形態としては、例えば、下記に記載する形態が挙げられる。
ｉ）化合物（１）中のペプチドと生体物質中のペプチドとの非共有結合（例えば、水素結合、キレート形成を含むイオン結合）又は共有結合、
ｉｉ）化合物（１）中の長鎖アルキル基と生体物質中の脂質二重膜及び脂質などとのファンデルワールス力、
ｉｉｉ）化合物（１）中のＮＨＳエステル（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）と生体物質中のアミノ基との反応によるアミド結合、
ｉｖ）化合物（１）中のマレイミド基と生体物質中のスルファニル基（－ＳＨ）との反応によるチオエーテル結合、
ｖ）化合物（１）中のアジド基と生体物質中のアセチレン基とのＣｌｉｃｋ反応又は化合物（１）中のアセチレン基と生体物質中のアジド基とのＣｌｉｃｋ反応によるトリアゾール環の形成、
が挙げられる。
上記ｉ）～ｖ）の形態以外にも、例えば、Lucas C. D. de Rezende and Flavio da Silva Emery,. A Review of the Synthetic Strategies for the Development of BODIPY Dyes for Conjugation with Proteins, Orbital: The Electronic Journal of Chemistry, 2013, Vol 5, No. 1, p.62-83に記載の形態により結合することができる。また、本発明の標識生体物質の作製においても、同文献に記載の方法等を適宜参照することができる。

以下に、本発明の一般式（１）で表される化合物のうち、Ｌ^１、Ｌ^２及び上記規定（Ｚβ）におけるオルト位に位置する環構成窒素原子が有する置換基の少なくともいずれか１つに生体物質に結合可能な置換基を少なくとも有する化合物と、これと相互作用により結合する生体物質とから得られる本発明の標識生体物質の具体例を示すが、本発明はこれらの化合物等に限定されない。下記具体例において、スルホ基等の解離性の水素原子を有する基については、水素原子が解離して塩構造を採っていてもよい。ｍＰＥＧ_４及びＰＥＧ_４については、前述の一般式（１）で表される化合物の具体例におけるｍＰＥＧ_４及びＰＥＧ_４と同義である。

＜標識生体物質を含む試薬＞
本発明の標識生体物質を含む試薬において、本発明の標識生体物質は、例えば、生理食塩水及びリン酸緩衝液等の水系媒体に溶解した溶液形態、並びに、微粒子状粉末及び凍結乾燥粉末等の固形形態等、特に制限されることなく、使用目的等に応じてその形態を適宜選択することができる。
例えば、蛍光標識試薬として本発明の標識生体物質を用いる場合に、上記いずれかの形態の標識生体物質を含む試薬として使用することもできる。

＜標識生体物質の用途＞
本発明の一般式（１）で表される化合物から得られる本発明の標識生体物質は、優れた蛍光強度を示すことができ、光照射により励起された標識生体物質から放出される蛍光を安定的に検出することができる。このため、本発明の標識生体物質は、蛍光標識を用いた種々の技術に適用することができ、例えば、多色ＷＢにおける蛍光標識試薬又は生体蛍光イメージング試薬として好適に用いることができる。

本発明の標識生体物質を用いて行う蛍光検出は、通常、以下（ｉ）～（ｉｉｉ）または（ｉｖ）～（ｖｉｉ）の工程を含む。（ｉ）～（ｉｉｉ）の工程を含む蛍光検出は、本発明の化合物で蛍光標識した一次抗体を用いる直接法に該当し、（ｉｖ）～（ｖｉｉ）の工程を含む蛍光検出は、本発明の化合物で蛍光標識した二次抗体を用いる間接法に該当する。
（ｉ）下記（ａ）及び（ｂ）をそれぞれ用意する工程
（ａ）標的とする生体物質（以下、「標的生体物質」とも称す。）を含む試料
（ｂ）上記（ａ）における標的生体物質と結合可能な生体物質（以下、「一次生体物質」とも称す。）と、本発明の化合物と、が結合した本発明の標識生体物質（以下、「本発明の標識生体物質Ａ」とも称す。）
（ｉｉ）上記（ａ）における標的生体物質と、上記（ｂ）の本発明の標識生体物質Ａにおける一次生体物質と、が結合した結合体（以下、「蛍光標識された結合体Ａ」とも称す。）を用意する工程
（ｉｉｉ）上記の蛍光標識された結合体Ａに、本発明の標識生体物質Ａが吸収する波長域の光を照射し、本発明の標識生体物質Ａが発する蛍光を検出する工程

（ｉｖ）下記（ｃ）～（ｅ）をそれぞれ用意する工程
（ｃ）標的生体物質を含む試料
（ｄ）上記（ｃ）における標的生体物質と結合可能な生体物質（以下、「一次生体物質」とも称す。）
（ｅ）上記（ｄ）の一次生体物質と結合可能な生体物質（以下、「二次生体物質」とも称す。）と、本発明の化合物と、が結合した本発明の標識生体物質（以下、「本発明の標識生体物質Ｂ」とも称す。）
（ｖ）上記（ｃ）における標的生体物質と、上記（ｄ）の一次生体物質と、が結合した結合体（以下、「結合体ｂ」とも称す。）を用意する工程
（ｖｉ）上記結合体ｂにおける一次生体物質と、本発明の標識生体物質Ｂにおける二次生体物質と、が結合した結合体（以下、「蛍光標識された結合体Ｂ２」とも称す。）を用意する工程
（ｖｉｉ）上記の蛍光標識された結合体Ｂ２に、本発明の標識生体物質Ｂが吸収する波長域の光を照射し、本発明の標識生体物質Ｂが発する蛍光を検出する工程

上記の標的生体物質と結合可能な生体物質（一次生体物質）、及び、一次生体物質と結合可能な生体物質（二次生体物質）としては、上記本発明の標識生体物質における生体物質が挙げられる。標的生体物質（被検体中の生体物質）又は一次生体物質にあわせて適宜選択することができ、被検体中の生体物質又は一次生体物質に対して特異的に結合可能な生体物質を選択することができる。

上記標的生体物質のうち、タンパク質としては、いわゆる疾患マーカーが挙げられる。疾患マーカーとしては、特に制限はされるものではないが、例えば、α－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＰＩＶＫＡ－ＩＩ（ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｖｉｔａｍｉｎ Ｋ ａｂｓｅｎｃｅ ｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ＩＩ）、ＢＣＡ２２５（ｂｒｅａｓｔ ｃａｒｃｉｎｏｍａ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｎｔｉｇｅｎ）、塩基性フェトプロテイン（ＢＦＰ）、ＣＡ（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ）１５－３、ＣＡ１９－９、ＣＡ７２－４、ＣＡ１２５、ＣＡ１３０、ＣＡ６０２、ＣＡ５４／６１（ＣＡ５４６）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＤＵＰＡＮ－２、エラスターゼ１、免疫抑制酸性タンパク（ＩＡＰ）、ＮＣＣ－ＳＴ－４３９、γ－セミノプロテイン（γ－Ｓｍ）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、前立腺酸性フォスファターゼ（ＰＡＰ）、神経特異エノラーゼ（ＮＳＥ）、Ｉｂａ１、アミロイドβ、タウ、フロチリン、扁平上皮癌関連抗原（ＳＣＣ抗原）、シアリルＬｅＸ－ｉ抗原（ＳＬＸ）、ＳＰａｎ－１、組織ポリペプタイド抗原（ＴＰＡ）、シリアルＴｎ抗原（ＳＴＮ）、シフラ（ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ：ＣＹＦＲＡ）ペプシノゲン（ＰＧ）、Ｃ－反応性タンパク（ＣＲＰ）、血清アミロイドＡタンパク（ＳＡＡ）、ミオグロビン、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）、トロポニンＴ、心室筋ミオシン軽鎖Ｉ等が挙げられる。

上記標的生体物質は細菌でもよく、この細菌としては、細胞微生物学的検査の対象とされる細菌が挙げられ、特に制限されるものではないが、例えば、大腸菌、サルモネラ菌、レジオネラ菌、公衆衛生に問題を生じる菌等が挙げられる。

上記標的生体物質はウイルスでもよく、このウイルスとしては、特に制限されるものではないが、例えば、Ｃ型、Ｂ型肝炎ウイルスの抗原等の肝炎ウイルス抗原、ＨＩＶウイルスのｐ２４タンパク抗原、ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）のｐｐ６５タンパク抗原、ＨＰＶ（ヒトパピローマウイルス）のＥ６及びＥ７タンパク等が挙げられる。

上記（ｉ）または（ｉｖ）において、標的生体物質を含む試料は、特に制限されることなく、常法に従って調製することができる。
また、本発明の標識生体物質も、特に制限されることなく、標的生体物質と結合可能な生体物質と本発明の化合物とを常法に従って結合させて調製することができる。結合の形態及び結合を形成する反応は、上記本発明の標識生体物質で説明した通りである。

上記（ｖ）において、標的生体物質と一次生体物質とは、直接結合させても、標的生体物質及び一次生体物質とは異なるその他の生体物質を介して結合させてもよい。また、上記（ｖｉ）において、結合体ｂにおける一次生体物質と、本発明の標識生体物質Ｂにおける二次生体物質とは、直接結合させても、一次生体物質及び二次生体物質とは異なるその他の生体物質を介して結合させてもよい。
本発明の標識生体物質は、直接法及び間接法のいずれにおける蛍光標識抗体としても用いることができるが、間接法における蛍光標識抗体として用いることが好ましい。
上記（ｉｉ）または（ｖ）及び（ｖｉ）において、本発明の標識生体物質等と標的生体物質との結合は、特に制限されることなく、常法に従って行うことができる。

上記（ｉｉｉ）または（ｖｉｉ）において、本発明の標識生体物質を励起するための波長は、本発明の標識生体物質を励起可能な発光波長（波長光）であれば特に限定されない。
本発明の化合物（１）のうち、ｎが１である化合物を用いた標識生体物質は、５８５ｎｍ付近（５６０～６２０ｎｍ）に吸収極大波長を有するため、照射する光の波長域は５３０～６５０ｎｍが好ましく、５５０～６３０ｎｍがより好ましい。この化合物を用いた標識生体物質は、可視領域における６００ｎｍ付近の励起光源に対して、優れた蛍光強度を示す標識生体物質として、好適に用いることができる。
本発明の化合物（１）のうち、ｎが２である化合物を用いた標識生体物質は、６８５ｎｍ付近（６６０～７２０ｎｍ）に吸収極大波長を有するため、照射する光の波長域は６３０～７５０ｎｍが好ましく、６５０～７３０ｎｍがより好ましい。この化合物を用いた標識生体物質は、多色ＷＢ等の近赤外領域における７００ｎｍ付近の励起光源に対して、優れた蛍光強度を示す標識生体物質として、好適に用いることができる。
本発明の化合物（１）のうち、ｎが３である化合物を用いた標識生体物質は、７８５ｎｍ付近（７６０～８２０ｎｍ）に吸収極大波長を有するため、照射する光の波長域は７３０～８５０ｎｍが好ましく、７５０～８３０ｎｍがより好ましい。この化合物を用いた標識生体物質は、多色ＷＢ等の近赤外領域における８００ｎｍ付近の励起光源に対して、優れた蛍光強度を示す標識生体物質として、好適に用いることができる。

本発明に用いられる蛍光励起光源としては、本発明の標識生体物質を励起可能な発光波長（波長光）を発光するものであれば特に限定されず、例えば、各種レーザー光源を用いることができる。また、各種光学フィルターを用いて、好ましい励起波長を得たり、蛍光のみを検出したりする事ができる。

上記（ｉ）～（ｖｉｉ）におけるその他の事項については、特に制限されることなく、蛍光標識を用いる蛍光検出において通常用いられる手法、試薬、装置等の条件を適宜選択することができる。
また、上記（ｉ）～（ｖｉｉ）以外の工程についても、蛍光標識を用いる種々の手法にあわせて、通常用いられる手法、試薬、装置等の条件を適宜選択することができる。

例えば、本発明の標識生体物質を用いた多色ＷＢは、標的生体物質として通常用いられる手法（電気泳動によるタンパク質の分離、メンブレンへのブロッティング、メンブレンのブロッキング）によりブロットメンブレンを作製し、本発明の標識生体物質を標識抗体（好ましくは、二次抗体）として用いることにより、優れた蛍光強度で標的生体物質を検出することができる。

－ 置換基群Ｔ －
本発明において、好ましい置換基としては、下記置換基群Ｔから選ばれる置換基が挙げられる。
また、本発明において、単に置換基としてしか記載されていない場合は、この置換基群Ｔを参照するものであり、各々の基、例えば、アルキル基、が記載されているのみの場合は、この置換基群Ｔの対応する基が好ましく適用される。
さらに、本明細書において、アルキル基を環状（シクロ）アルキル基と区別して記載している場合、アルキル基は、直鎖アルキル基及び分岐アルキル基を包含する意味で用いる。一方、アルキル基を環状アルキル基と区別して記載していない場合、及び、特段の断りがない場合、アルキル基は、直鎖アルキル基、分岐アルキル基及びシクロアルキル基を包含する意味で用いる。このことは、環状構造を採りうる基（アルキル基、アルケニル基、アルキニル基等）を含む基（アルコキシ基、アルキルチオ基、アルケニルオキシ基等）、環状構造を採りうる基を含む化合物についても同様である。基が環状骨格を形成しうる場合、環状骨格を形成する基の原子数の下限は、この構造を採りうる基について下記に具体的に記載した原子数の下限にかかわらず、３以上であり、５以上が好ましい。
下記置換基群Ｔの説明においては、例えば、アルキル基とシクロアルキル基のように、直鎖又は分岐構造の基と環状構造の基とを明確にするため、これらを分けて記載していることもある。

置換基群Ｔに含まれる基としては、下記の基を含む。
アルキル基（好ましくは炭素数１～３０、より好ましくは炭素数１～２０、さらに好ましくは炭素数１～１２、さらに好ましくは炭素数１～８、さらに好ましくは炭素数１～６、特に好ましくは炭素数１～３）、アルケニル基（好ましくは炭素数２～３０、より好ましくは炭素数２～２０、さらに好ましくは炭素数２～１２、さらに好ましくは炭素数２～６、さらに好ましくは炭素数２～４）、アルキニル基（好ましくは炭素数２～３０、より好ましくは炭素数２～２０、さらに好ましくは炭素数２～１２、さらに好ましくは炭素数２～６、さらに好ましくは炭素数２～４）、シクロアルキル基（好ましくは炭素数３～２０）、シクロアルケニル基（好ましくは炭素数５～２０）、アリール基（単環の基であってもよく、縮環の基（好ましくは２～６環の縮環の基）であってもよい。縮環の基である場合、５～７員環等からなる。アリール基は好ましくは炭素数６～４０、より好ましくは炭素数６～３０、さらに好ましくは炭素数６～２６、特に好ましくは炭素数６～１０）、ヘテロ環基（環構成原子として少なくとも１つの窒素原子、酸素原子、硫黄原子、リン原子、ケイ素原子又はセレン原子を有し、単環の基であってもよく、縮環の基（好ましくは２～６環の縮環の基）であってもよい。単環の基である場合、その環員数は５～７員が好ましく、５員又は６員がより好ましい。ヘテロ環基の炭素数は好ましくは２～４０、より好ましくは２～２０である。ヘテロ環基は芳香族ヘテロ環基（ヘテロアリール基）及び脂肪族ヘテロ環基（脂肪族複素環基）が包含される。）、アルコキシ基（好ましくは炭素数１～２０、より好ましくは炭素数１～１２）、アルケニルオキシ基（好ましくは炭素数２～２０、より好ましくは炭素数２～１２）、アルキニルオキシ基（好ましくは炭素数２～２０、より好ましくは炭素数２～１２）、シクロアルキルオキシ基（好ましくは炭素数３～２０）、アリールオキシ基（好ましくは炭素数６～４０、より好ましくは炭素数６～２６、さらに好ましくは炭素数６～１４）、ヘテロ環オキシ基（好ましくは炭素数２～２０）、ポリアルキレンオキシ基（好ましくは炭素数２～４０、より好ましくは炭素数２～２０）、

アルコキシカルボニル基（好ましくは炭素数２～２０）、シクロアルコキシカルボニル基（好ましくは炭素数４～２０）、アリールオキシカルボニル基（好ましくは炭素数６～２０）、アミノ基（好ましくは炭素数０～２０で、無置換アミノ基（－ＮＨ_２）、（モノ－又はジ－）アルキルアミノ基、（モノ－又はジ－）アルケニルアミノ基、（モノ－又はジ－）アルキニルアミノ基、（モノ－又はジ－）シクロアルキルアミノ基、（モノ－又はジ－）シクロアルケニルアミノ基、（モノ－又はジ－）アリールアミノ基、（モノ－又はジ－）ヘテロ環アミノ基を含む。無置換アミノ基を置換する上記各基は置換基群Ｔの対応する基と同義である。）、スルファモイル基（好ましくは炭素数０～２０で、アルキル、シクロアルキルもしくはアリールのスルファモイル基が好ましい。）、アシル基（好ましくは炭素数１～２０、より好ましくは炭素数２～１５）、アシルオキシ基（好ましくは炭素数１～２０）、カルバモイル基（好ましくは炭素数１～２０で、アルキル、シクロアルキルもしくはアリールのカルバモイル基が好ましい。）、

アシルアミノ基（好ましくは炭素数１～２０）、スルホンアミド基（好ましくは炭素数０～２０で、アルキル、シクロアルキルもしくはアリールのスルホンアミド基が好ましい。）、アルキルチオ基（好ましくは炭素数１～２０、より好ましくは炭素数１～１２）、シクロアルキルチオ基（好ましくは炭素数３～２０）、アリールチオ基（好ましくは炭素数６～４０、より好ましくは炭素数６～２６、さらに好ましくは炭素数６～１４）、ヘテロ環チオ基（好ましくは炭素数２～２０）、アルキル、シクロアルキルもしくはアリールスルホニル基（好ましくは炭素数１～２０）、

シリル基（好ましくは炭素数１～３０、より好ましくは炭素数１～２０で、アルキル、アリール、アルコキシもしくはアリールオキシが置換したシリル基が好ましい。）、シリルオキシ基（好ましくは炭素数１～２０で、アルキル、アリール、アルコキシもしくはアリールオキシが置換したシリルオキシ基が好ましい。）、ヒドロキシ基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン原子（例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子）、酸素原子（具体的には、環を構成する＞ＣＨ_２を＞Ｃ＝Ｏに置き換える）、カルボキシ基（－ＣＯ_２Ｈ）、ホスホノ基〔－ＰＯ（ＯＨ）_２〕、ホスホリル基〔－Ｏ－ＰＯ（ＯＨ）_２〕、スルホ基（－ＳＯ_３Ｈ）、ホウ酸基〔－Ｂ（ＯＨ）_２〕、オニオ基（環状アンモニオを含むアンモニオ基、スルホニオ基、ホスホニオ基を含み、好ましくは炭素数０～３０、より好ましくは１～２０）、スルファニル基（－ＳＨ）、アミノ酸残基、又は、ポリアミノ酸残基が挙げられる。
また、カルボキシ基、ホスホノ基、スルホ基、オニオ基、アミノ酸残基、ポリアミノ酸残基又は－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－アルキル基（ｍはＲ^１～Ｒ^６におけるｍと同義である。）を置換基として有する上記のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アリール基、ヘテロ環基、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アルキニルオキシ基、シクロアルキルオキシ基、アリールオキシ基、ヘテロ環オキシ基、アルコキシカルボニル基、シクロアルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、アミノ基、スルファモイル基、アシル基、アシルオキシ基、カルバモイル基、アシルアミノ基、スルホンアミド基、アルキルチオ基、シクロアルキルチオ基、アリールチオ基、ヘテロ環チオ基、アルキル、シクロアルキルもしくはアリールスルホニル基が挙げられる。

置換基群Ｔから選ばれる置換基は、より好ましくは、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロ環基、アルコキシ基、シクロアルコキシ基、アリールオキシ基、アルコキシカルボニル基、シクロアルコキシカルボニル基、アミノ基、アシルアミノ基、シアノ基又はハロゲン原子であり、特に好ましくは、アルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロ環基、アルコキシ基、アルコキシカルボニル基、アミノ基、アシルアミノ基又はシアノ基である。

置換基群Ｔから選ばれる置換基は、特段の断りがない限り、上記の基を複数組み合わせてなる基をも含む。例えば、化合物又は置換基等がアルキル基、アルケニル基等を含むとき、これらは置換されていても置換されていなくてもよい。また、アリール基、ヘテロ環基等を含むとき、それらは単環でも縮環でもよく、置換されていても置換されていなくてもよい。

以下に実施例に基づき、本発明についてさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されない。なお、室温とは２５℃を意味する。

実施例で用いた化合物（１）～（１１）、比較化合物（１）～（６）を、以下に示す。
なお、実施例化合物において、特に記載しない場合にも、スルホ基は塩構造（例えば、カリウム塩、ナトリウム塩、ＴＥＡ（トリエチルアミン）塩あるいはＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン）塩）を含んでいてもよい。ｍは、平均繰り返し数を意味する。いずれの化合物も、平均繰り返し数の小数第一位が０である化合物を原料として用いて合成した。

比較化合物（１）はＬｉＣｏｒ社製のＩＲＤｙｅ８００ＣＷ（商品名）である。

以下に、各実施例で用いる化合物（１）～（８）の合成方法を詳しく説明するが、出発物質、色素中間体及び合成ルートはこれらに限定されるものではない。
以下の合成ルートにおいて、室温とは２５℃を意味する。

特に記載のない場合、逆相カラムクロマトグラフィーにおける担体は、ＳＮＡＰ Ｕｌｔｒａ Ｃ１８（商品名、Ｂｉｏｔａｇｅ社製）またはＳｆａｒ Ｃ１８（商品名、Ｂｉｏｔａｇｅ社製）を使用し、順相カラムクロマトグラフィーにおける担体は、Ｈｉ－Ｆｌａｓｈ Ｃｏｌｕｍｎ（商品名、山善社製）を使用した。
逆相カラムクロマトグラフィー又は順相カラムクロマトグラフィーにおいて使用する溶離液における混合比は、容量比である。例えば、「アセトニトリル：水＝０：１００→２０：８０」は、「アセトニトリル：水＝０：１００」の溶離液を「アセトニトリル：水＝２０：８０」の溶離液へ変化させたことを意味する。
分取ＨＰＬＣ（Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）は、２７６７（商品名、ｗａｔｅｒｓ社製）を使用した。

ＭＳスペクトルは、ＡＣＱＵＩＴＹ ＳＱＤ ＬＣ／ＭＳ Ｓｙｓｔｅｍ〔商品名、Ｗａｔｅｒｓ社製、イオン化法：ＥＳＩ（ＥｌｅｃｔｒｏＳｐｒａｙ Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ、エレクトロスプレーイオン化）〕又はＬＣＭＳ－２０１０ＥＶ〔商品名、島津製作所社製、イオン化法：ＥＳＩ及びＡＰＣＩ（Ａｔｏｍｏｓｐｈｅｒｉｃ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ ＣｈｅｍｉｃａｌＩｏｎｉｚａｔｉｏｎ、大気圧化学イオン化）を同時に行うイオン化法〕を用いて測定した。

＜化合物（１）の合成＞
下記のスキームに基づき、化合物（１）を合成した。

１）化合物（１－Ｂ）の合成
化合物（１－Ａ）１０ｇ、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）３０ｍｌ、蒸留水３．３ｍｌ、炭酸ナトリウム３．１ｇ及び３－ブロモ－３－メチル－２－ブタノン１６．５ｇを２００ｍｌ容の三つ口フラスコに入れ、窒素雰囲気下９０℃にて１２時間加熱攪拌した。その後、反応液から溶媒を減圧留去し、１０％塩酸水溶液を１５ｍｌ添加した後、９０℃にて１２時間さらに加熱攪拌した。その後、溶媒を減圧留去し、メタノールに分散させ、ろ過を施した。ろ液を減圧濃縮し、アセトンを加えて沈殿を生じさせ、上澄みをデカンテーションにて除去した。この粗生成物を逆相カラムクロマトグラフィー（アセトニトリル／水＝０／１００→１０／９０）にて精製することで化合物（１－Ｂ）４．１ｇを得た。

２）化合物（１－Ｃ）の合成
化合物（１－Ｂ）４００ｍｇ、スルホラン２ｍｌ、６－ブロモヘキサン酸３６５ｍｇ及びトリエチルアミン（Ｅｔ_３Ｎ）０．１６９ｍｌを５０ｍｌ容のナスフラスコに入れ、１２０℃にて６時間加熱撹拌した。反応液へ、酢酸エチルを加え、沈殿を生じさせた。沈殿物を逆相カラムクロマトグラフィー（溶離液：アセトニトリル／水＝０／１００→２０／１００）にて精製し、化合物（１－Ｃ）９５ｍｇを得た。

３）化合物（１－Ｆ）の合成
窒素置換した５０ｍｌ容の三ツ口フラスコに、ｔｅｒｔ－ブタノール（ｔＢｕＯＨ）２００ｍｌ及びカリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（ｔＢｕＯＫ）１２ｇを入れ、攪拌しているところに化合物（１－Ｄ）１４．４ｇを滴下し、しばらく攪拌した。次に、ポリエチレングリコールメチルエーテルトシラート（エチレングリコール単位の平均繰り返し数＝８．０、ＴｓＯ－ｍＰＥＧ_８）５３．９ｇを滴下し、加熱攪拌した。８０℃にて１時間攪拌した後、溶媒を減圧留去し、酢酸エチル及び蒸留水で分液操作を施し、蒸留水により粗生成物を抽出した。得られた粗生成物に３０％塩酸水溶液３０ｍｌを加え、１００℃にて３時間撹拌した。その後、溶媒を減圧留去し、順相カラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝５０／５０→３０／７０）で精製することで、化合物（１－Ｆ）１２．１ｇを得た。

４）化合物（１－Ｇ）の合成
１Ｌ容の三ツ口フラスコに化合物（１－Ａ）２０ｇ及び蒸留水１５０ｍｌを入れ、攪拌しているところへ、３０％塩酸水溶液７５ｍｌを滴下した。塩氷浴で冷却し、３℃以下を維持しながら、亜硝酸ナトリウム７ｇを蒸留水８０ｍｌに溶かした溶液をゆっくり滴下し、その後０～３℃で４５分間攪拌した。続いて、塩化スズ（ＩＩ）３８ｇを蒸留水９０ｍｌと３０％ＨＣｌ ３０ｍｌに溶解した溶液をゆっくり滴下し、その後４０分間７℃以下で攪拌した。溶媒を濃縮して、残渣をイソプロパノールで洗浄し、化合物（１－Ｇ）１５ｇを得た。

５）化合物（１－Ｈ）の合成
２００ｍｌ容のナスフラスコに化合物（１－Ｇ）２．０ｇ、酢酸（ＡｃＯＨ）３０ｍｌ、化合物（１－Ｆ）４．４ｇ及び酢酸カリウム（ＡｃＯＫ）０．９８ｇを入れ、窒素雰囲気下１４０℃にて１時間撹拌した。溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー（溶離液：アセトニトリル／水＝０／１００→３５／６５）で精製し、化合物（１－Ｈ）３．５ｇを得た。

６）化合物（１－Ｉ）の合成
５０ｍｌ容のナスフラスコに化合物（１－Ｈ）２００ｍｇ、スルホラン２ｍｌ、１，３－プロパンスルトン８０ｍｇ及びＮ－エチルジイソプロピルアミン１２９ｍｇを入れ、１２０℃で１．５時間撹拌した。室温に戻し、蒸留水２００ｍｇを加えて、逆相カラムクロマトグラフィー（溶離液：アセトニトリル／水＝０／１００→１０／９０）にて精製し、化合物（１－Ｉ）６１ｍｇを得た。

７）化合物（１－Ｋ）の合成
試験管に化合物（１－Ｉ）７２．８ｍｇ、化合物（１－Ｃ）３６．８ｍｇ、化合物（１－Ｊ）１７．３ｍｇ、酢酸カリウム（ＡｃＯＫ）９．８ｍｇ及び無水酢酸（Ａｃ_２Ｏ）１ｍＬを加え、窒素雰囲気下、６０℃で２時間攪拌した。反応収束後、蒸留水を加え、逆相カラムクロマトグラフィー（溶離液：アセトニトリル／水＝０／１００→２５／７５）にて精製し、化合物（１－Ｋ）３３ｍｇを得た。

８）化合物（１－Ｌ）の合成
試験管に化合物（１－Ｋ）１０ｍｇ及び蒸留水５００μＬを加え、９５℃で攪拌した。この溶液へ、４－ヒドロキシベンゼンスルホン酸ナトリウム１６．５ｍｇと水酸化ナトリウム５ｍｇを蒸留水５００μＬに混合した溶液を滴下して、９５℃で３０分撹拌した。反応液を室温に冷却し、分取ＨＰＬＣにて精製し、凍結乾燥を施して、化合物（１－Ｌ）５．１ｍｇを得た。化合物（１－Ｌ）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ^＋）^＋＝１３６９、（Ｍ－Ｈ^＋）^－＝１３６７

９）化合物（１）の合成
化合物（１－Ｌ）２．６ｍｇに、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）０．２８ｍｌ、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－Ｏ－（Ｎ－スクシンイミジル）ウロニウムヘキサフルオロホスファート １ｍｇを溶解させたＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液、及びトリエチルアミン（Ｅｔ_３Ｎ）１．３μＬを加えて１時間攪拌させた。その後、溶媒を減圧留去し、酢酸エチルを加えて上澄みを除去、真空乾燥を施すことで化合物（１）を得た。

＜化合物（２）の合成＞
下記のスキームに基づき、化合物（１）と同様に化合物（２）を合成した。化合物（２－Ｌ）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ^＋）^＋＝１３６９、（Ｍ－Ｈ^＋）^－＝１３６７

＜化合物（３）の合成＞
下記のスキームに基づき、化合物（１）と同様に化合物（３）を合成した。化合物（３－Ｌ）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ^＋）^＋＝１３８３、（Ｍ－Ｈ^＋）^－＝１３８１

＜化合物（４）の合成＞
下記のスキームに基づき、化合物（１）と同様に化合物（４）を合成した。化合物（４－Ｌ）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ^＋）^＋＝１９１２、（Ｍ－Ｈ^＋）^－＝１９１０

＜化合物（５）の合成＞
下記のスキームに基づき、化合物（１）と同様に化合物（５）を合成した。化合物（５－Ｌ）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ^＋）^＋＝１５７２、（Ｍ－Ｈ^＋）^－＝１５７０

＜化合物（６）の合成＞
下記のスキームに基づき、化合物（１）と同様に化合物（６）を合成した。 化合物（６－Ｋ）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ^＋）^＋＝１５０２、（Ｍ－Ｈ^＋）^－＝１５００

なお、化合物（６－Ｊ）は以下のようにして合成した。
（化合物（６－Ｊ）の合成）
５０ｍｌ容のナスフラスコに化合物（６－Ｉ）０．３５ｇ、亜鉛粉末１．３ｇ及びエタノール１０ｍｌを加え、還流下で３時間反応させた。セライトろ過で亜鉛を除去し、逆相カラムクロマトグラフィー（溶離液：アセトニトリル／水＝０／１００→３５／６５）で精製し、化合物（６－Ｊ）０．１ｇを得た。

＜化合物（７）の合成＞
下記のスキームに基づき、化合物（１）と同様に化合物（７）を合成した。化合物（７－Ｌ）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ^＋）^＋＝１４３８、（Ｍ－Ｈ^＋）^－＝１４３６

＜化合物（８）の合成＞
下記のスキームに基づき、化合物（１）と同様に化合物（８）を合成した。化合物（８－Ｌ）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ^＋）^＋＝１５１８、（Ｍ－Ｈ^＋）^－＝１５１６

＜化合物（９）の合成＞
下記のスキームに基づき、化合物（１）と同様に化合物（９）を合成した。化合物（９－Ｈ）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ^＋）^＋＝１４７０、（Ｍ－Ｈ^＋）^－＝１４６８

なお、化合物（９－Ｈ）は以下のようにして合成した。
（化合物（９－Ｇ）の合成）
１０ｍＬ容のナスフラスコに化合物（９－Ｆ）２０ｍｇ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－Ｏ－（Ｎ－スクシンイミジル）ウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＳＴＵ） ８０ｍｇ、ＴＥＡ（トリエチルアミン） ７７μＬを加え、３時間反応させた。その後、リジン塩酸塩６ｍｇ、炭酸ナトリウム３ｍｇを水４０ｍＬで溶かした溶液へ反応液を滴下し、その後３時間反応させた。反応液を濃縮後、分取ＨＰＬＣにて精製し、凍結乾燥を施して、化合物（９－Ｇ）７．０ｍｇを得た。

（化合物（９－Ｈ）の合成）
１０ｍＬ容のナスフラスコに化合物（９－Ｇ）７．０ｍｇ、ＤＭＦ２ｍＬ、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－Ｏ－（Ｎ－スクシンイミジル）ウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＳＴＵ） ２ｍｇ、ＴＥＡ（トリエチルアミン） ５μＬを加え、３時間反応させた。その後、アミノＰＥＧ４ａｃｉｄ（商品名、ＢＲＯＡＤ ＰＨＡＲＭ社製、エチレングリコール単位の平均繰り返し数＝４．０、） １ｍｇ のＤＭＦ溶液０．５ｍＬを反応液に加え、その後３時間反応させた。反応液を濃縮後、分取ＨＰＬＣにて精製し、凍結乾燥を施して、化合物（９－Ｈ）５．３ｍｇを得た。

＜化合物（１０）の合成＞
下記のスキームに基づき、化合物（１）と同様に化合物（１０）を合成した。化合物（１０－Ｈ）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ^＋）^＋＝１３３４、（Ｍ－Ｈ^＋）^－＝１３３２

＜化合物（１１）の合成＞
下記のスキームに基づき、化合物（１）と同様に化合物（１１）を合成した。化合物（１１－Ｆ）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ^＋）^＋＝１６４５、（Ｍ－Ｈ^＋）^－＝１６４３

＜比較化合物（２）の合成＞
下記のスキームに基づき、化合物（１）と同様に比較化合物（２）を合成した。化合物（ｃ２－Ｌ）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ^＋）^＋＝２０００、（Ｍ－Ｈ^＋）^－＝１９９８

＜比較化合物（３）の合成＞
下記のスキームに基づき、化合物（１）と同様に比較化合物（３）を合成した。化合物（ｃ３－Ｌ）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ^＋）^＋＝１３５５、（Ｍ－Ｈ^＋）^－＝１３５３

＜比較化合物（４）の合成＞
下記のスキームに基づき、化合物（１）と同様に比較化合物（４）を合成した。化合物（ｃ４－Ｆ）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ^＋）^＋＝７６４、（Ｍ－Ｈ^＋）^－＝７６２

＜比較化合物（５）の合成＞
下記のスキームに基づき、化合物（１）と同様に比較化合物（５）を合成した。化合物（ｃ５－Ｆ）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ^＋）^＋＝１７３３、（Ｍ－Ｈ^＋）^－＝１７３１

＜比較化合物（６）の合成＞
下記のスキームに基づき、化合物（１）と同様に比較化合物（６）を合成した。化合物（ｃ６－Ｆ）のＭＳ測定の結果は以下の通りであった。
ＭＳ（ＥＳＩ ｍ／ｚ）：（Ｍ＋Ｈ^＋）^＋＝１３６３、（Ｍ－Ｈ^＋）^－＝１３６１

＜実施例１＞
上記の各化合物について、蛍光標識率、溶液蛍光強度及びメンブレン上蛍光強度を評価した。

［１］蛍光標識率の評価
マイクロチューブに、抗ウサギＩｇＧ抗体（２．３ｍｇ／ｍｌ）２１７μＬ及び炭酸塩バッファー２１．７μＬを入れ、振とう撹拌を施した後、化合物（１）のジメチルスルホキシド溶液を、抗体に対して表１に示すモル当量比になるように加え、さらに振とう撹拌を行った。室温にて１時間静置させ、反応液をゲルろ過カラムクロマトグラフィーＰＤ１０（ＧＥヘルスケア ライフサイエンス社製）とＰＢＳ溶液（リン酸緩衝食塩水）を用いて精製を施し、標識抗体（１）を得た。得られた標識抗体について、下記に示す方法により蛍光標識率を算出した。表１に結果をまとめて示す。

蛍光標識率の算出方法は、下記に示すような一般的な手法を用いた。［ ］の中の記載は単位を示し、［－］は単位がないことを意味する。本試験においては、タンパク質は抗ウサギＩｇＧ抗体を意味する。
蛍光標識率＝蛍光色素の濃度／タンパク質の濃度
蛍光色素の濃度とは、標識されている蛍光色素の総モル濃度［Ｍ］を意味し、タンパク質の濃度とは、蛍光標識したタンパク質のモル濃度［Ｍ］を意味し、それぞれ、下記式により算出される。
蛍光色素の濃度＝Ｄｙｅ_ｍａｘ／ε_ｄｙｅ
タンパク質の濃度＝（ＩｇＧ_２８０－（Ｄｙｅ_ｍａｘ×ＣＦ））／ε_{ｐｒｏｔｅｉｎ}
上記式中の各符号は、下記の通りである。
Ｄｙｅ_ｍａｘ；蛍光色素の最大吸収波長における吸収［－］
ε_ｄｙｅ；蛍光色素のモル吸光係数［Ｍ^－１ｃｍ^－１］
ＩｇＧ_２８０；蛍光標識タンパク質の２８０ｎｍにおける吸収［－］
Ｄｙｅ_２８０；蛍光色素の２８０ｎｍにおける吸収［－］
ε_{ｐｒｏｔｅｉｎ}；タンパク質のモル吸光係数［Ｍ^－１ｃｍ^－１］
ＣＦ（Ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ）；Ｄｙｅ_２８０／Ｄｙｅ_ｍａｘ［－］

（表の注）
標識抗体の欄において、化合物（Ｚ）－ＩｇＧ又は比較化合物（Ｚ）－ＩｇＧとの表記は、それぞれ、化合物（Ｚ）のＩｇＧ標識抗体又は比較化合物（Ｚ）のＩｇＧ標識抗体を意味する。Ｚは、各化合物の番号を意味する。以降の表においても同義である。

上記表１の結果から、以下のことがわかる。
本発明の化合物である化合物（１）～（１１）は、抗体に対して３当量、５当量、７当量及び１０当量のいずれのモル当量で添加した場合にも、市販の標識化合物である比較化合物（１）を用いた場合と同程度又はそれ以上の蛍光標識率を示しており、抗体への結合性としては、実用上問題のない十分なレベルを示していた。このことは、Ｎｏ．ｃ１１とＮｏ．１０１～１１１との対比から読み取ることができる。
一方、比較化合物（２）及び（５）は、ＰＥＧの繰り返し数（本発明で規定するｍ）が１１である点で、本発明で規定する化合物ではない。Ｎｏ．ｃ１１とｃ１２及びｃ１５との対比から、比較化合物（２）及び（５）は、市販の標識化合物である比較化合物（１）に比べて蛍光標識率が低く、抗体に対するモル当量が高くなるにつれて蛍光標識率がより一層低下してしまい、抗体への結合性に劣っていた。
対して、本発明の化合物である化合物（３）及び（４）は、ＰＥＧの繰り返し数（本発明で規定するｍ）がそれぞれ４又は１０であるという点で異なる以外は、比較化合物（２）と同じ化学構造を有する。これらの化合物（３）及び（４）はいずれも、比較化合物（２）と比較して蛍光標識率が高く、ＰＥＧの繰り返し数が１０以下である構造を採択することにより、ＰＥＧを導入することに起因した抗体への結合性の低下を抑制できるとがわかる。同様に、本発明の化合物である化合物（１１）は、ＰＥＧの繰り返し数（本発明で規定するｍ）が１０であるという点で異なる以外は、比較化合物（５）と同じ化学構造を有する。この化合物（１１）は、比較化合物（５）と比較して蛍光標識率が高く、ＰＥＧの繰り返し数が１０以下である構造を採択することにより、ＰＥＧを導入することに起因した抗体への結合性の低下を抑制できるとがわかる。

［２］溶液蛍光強度の評価１
上記蛍光標識率において色素１０当量を添加して調製した各標識抗体の溶液を、タンパク質濃度０．１ｍｇ／ｍＬに調整し、分光蛍光強度計（商品名：ＲＦ－５３００、島津製作所社製）を用いて、７８５ｎｍの励起光で、露光条件を統一して、蛍光波長８１０～８４０ｎｍの範囲の蛍光強度の積分値を算出した。比較化合物（１）－ＩｇＧの蛍光波長８１０～８４０ｎｍの範囲の蛍光強度の積分値を基準値とし、この基準値に対する比（標識抗体の蛍光波長８１０～８４０ｎｍの範囲の蛍光強度の積分値／基準値）を算出し、以下の評価基準に基づき評価した。表２に結果をまとめて示す。
本試験において、蛍光強度は、評価ランク「Ｄ」以上が合格である。

－ 蛍光強度の評価基準 －
Ａ：基準値に対する蛍光強度の比が２倍以上
Ｂ：基準値に対する蛍光強度の比が１．８倍以上２倍未満
Ｃ：基準値に対する蛍光強度の比が１．６倍以上１．８倍未満
Ｄ：基準値に対する蛍光強度の比が１．４倍以上１．６倍未満
Ｅ：基準値に対する蛍光強度の比が１．２倍以上１．４倍未満
Ｆ：基準値に対する蛍光強度の比が０．９倍以上１．２倍未満
Ｇ：基準値に対する蛍光強度の比が０．９倍未満

上記表２の結果から、以下のことがわかる。
比較化合物（２）は、ＰＥＧの繰り返し数（本発明で規定するｍ）が１１である点で、本発明で規定する構造ではない。この比較化合物（２）を用いた標識抗体の溶液での蛍光強度は低かった（Ｎｏ．ｃ２２）。
比較化合物（３）は、環Ｚ^１及び環Ｚ^２が、Ｌ^１又はＬ^２が結合する窒素原子に対するオルト位に置換基を有しないベンゼン環である点で、本発明で規定する構造ではない。この比較化合物（３）を用いた標識抗体の溶液での蛍光強度も低かった（Ｎｏ．ｃ２３）。
これに対して、本発明で規定する化合物（１）～（８）の標識抗体は、いずれも、上記比較標識抗体（１）の蛍光強度に対して１．４倍以上の蛍光強度を有し、優れた蛍光強度を示していた（Ｎｏ．ｃ２１に対するＮｏ．２０１～２０８）。
特に、環Ｚ^１及び環Ｚ^２が、Ｌ^１又はＬ^２が結合する窒素原子に対するオルト位にメチル基を有するベンゼン環であるという点で異なる以外は比較化合物（３）と同じ化学構造を有する化合物（３）は、蛍光強度の評価がＢであるのに対し、上記の窒素原子に対するオルト位に置換基を有しない比較化合物（３）の蛍光強度の評価はＥである。このことから、ＰＥＧの繰り返し数が１０以下であって、Ｚ^１及びＺ^２としてオルト位に置換基を有するベンゼン環を採択することにより、溶液状態で優れた蛍光強度を示すことがわかる。

［３］溶液蛍光強度の評価２
前述の蛍光標識率の評価において色素１０当量を添加して調製した各標識抗体の溶液を、タンパク質濃度０．１ｍｇ／ｍＬに調整し、分光蛍光強度計（商品名：ＲＦ－５３００、島津製作所社製）を用いて、６８５ｎｍの励起光で、露光条件を統一して、蛍光波長７１０～７３０ｎｍの範囲の蛍光強度の積分値を算出した。比較化合物（４）－ＩｇＧの蛍光波長７１０～７３０ｎｍの範囲の蛍光強度の積分値を基準値とし、この基準値に対する比（標識抗体の蛍光波長７１０～７３０ｎｍの範囲の蛍光強度の積分値／基準値）を算出し、溶液蛍光強度の評価１と同様の評価基準に基づき評価した。表３に結果をまとめて示す。
本試験において、蛍光強度は、評価ランク「Ｄ」以上が合格である。

上記表３の結果から、以下のことがわかる。
比較化合物（４）は、Ｒ^１～Ｒ^４、Ｌ^１及びＬ^２の少なくとも１つとして繰り返し数ｍのＰＥＧを含む構造（－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１で表される構造）を有しない点で、比較化合物（５）はＰＥＧの繰り返し数（本発明で規定するｍ）が１１である点で、比較化合物（６）は環Ｚ^１及び環Ｚ^２が、Ｌ^１又はＬ^２が結合する窒素原子に対するオルト位に置換基を有しないベンゼン環である点で、それぞれ、本発明で規定する構造ではない。これらの比較化合物（４）～（６）を用いた標識抗体の溶液での蛍光強度はいずれも低かった（Ｎｏ．ｃ３１～ｃ３３）。
これらに対して、本発明で規定する化合物（９）～（１１）の標識抗体は、いずれも、上記比較標識抗体（４）の蛍光強度に対して１．６倍以上の蛍光強度を有し、優れた蛍光強度を示していた（Ｎｏ．ｃ３１に対するＮｏ．３０１～３０３）。
表２及び３の結果から、本発明の化合物から得られる標識抗体生体物質は、溶液中において優れた蛍光強度を示すことがわかる。

［４］メンブレン上蛍光強度評価１
抗ウサギＩｇＧ溶液（前述の蛍光標識率の評価において色素１０当量を添加して調製した各標識抗体の溶液）をタンパク質濃度５．０ｎｇ／ｍＬに調整し、２μＬをニトロセルロースメンブレン上に慎重にスポットした。メンブレンを乾燥後、次いでＴＢＳ－Ｔ中、Ｆｉｓｈ Ｇｅｌａｔｉｎブロッキング緩衝液でブロックした。膜を室温で１時間攪拌しながらインキュベートした。ブロッキング溶液を取り除き、標識抗体のＰＢＳ溶液をＴＢＳ緩衝液で２００００倍希釈した。メンブレンを希釈した溶液に浸し、１時間攪拌しながらインキュベートした。メンブレンをＴＢＳ－Ｔ緩衝液で１０分間、３回洗浄し、最後にＴＢＳ緩衝液で１０分洗浄した。得られたメンブレンを４０℃のホットプレートで１時間乾燥させ、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｔｙｐｈｏｏｎ ｓｃａｎｎｅｒ（ＧＥＨＣ社製）を用いて画像化し、７８５ｎｍの励起光で、露光条件を統一して、蛍光波長８１０～８４０ｎｍの範囲の蛍光強度を算出した。比較化合物（１）－ＩｇＧの蛍光波長８１０～８４０ｎｍの範囲の蛍光強度の積分値を基準値とし、この基準値に対する比（標識抗体の蛍光波長８１０～８４０ｎｍの範囲の蛍光強度の積分値／基準値）を算出し、以下の評価基準に基づき評価した。表４に結果をまとめて示す。
本試験において、蛍光強度は、評価ランク「Ｄ」以上が合格である。

－ 蛍光強度の評価基準 －
Ａ：基準値に対する蛍光強度の比が４．０倍以上
Ｂ：基準値に対する蛍光強度の比が３．０倍以上４．０倍未満
Ｃ：基準値に対する蛍光強度の比が２．５倍以上３．０倍未満
Ｄ：基準値に対する蛍光強度の比が２．０倍以上２．５倍未満
Ｅ：基準値に対する蛍光強度の比が１．５倍以上２．０倍未満
Ｆ：基準値に対する蛍光強度の比が０．９倍以上１．５倍未満
Ｇ：基準値に対する蛍光強度の比が０．９倍未満

上記表４の結果から、以下のことがわかる。
比較化合物（２）は、ＰＥＧの繰り返し数（本発明で規定するｍ）が１１である点で、本発明で規定する構造ではない。この比較化合物（２）を用いた標識抗体のメンブレン上での蛍光強度は低かった（Ｎｏ．ｃ４２）。
比較化合物（３）は、環Ｚ^１及び環Ｚ^２が、Ｌ^１又はＬ^２が結合する窒素原子に対するオルト位に置換基を有しないベンゼン環である点で、本発明で規定する構造ではない。この比較化合物（３）を用いた標識抗体のメンブレン上での蛍光強度も低かった（Ｎｏ．ｃ４３）。
これに対して、本発明で規定する化合物（１）～（８）の標識抗体は、いずれも、上記比較標識抗体（１）の蛍光強度に対して２．０倍以上の蛍光強度を有し、優れた蛍光強度を示していた（Ｎｏ．ｃ４１に対するＮｏ．４０１～４０８）。
特に、環Ｚ^１及び環Ｚ^２が、Ｌ^１又はＬ^２が結合する窒素原子に対するオルト位にメチル基を有するベンゼン環であるという点で異なる以外は比較化合物（３）と同じ化学構造を有する化合物（３）は、蛍光強度の評価がＢであるのに対し、上記の窒素原子に対するオルト位に置換基を有しない比較化合物（３）の蛍光強度の評価はＥである。このことから、ＰＥＧの繰り返し数が１０以下であって、Ｚ^１及びＺ^２としてオルト位に置換基を有するベンゼン環を採択することにより、メンブレン上において優れた蛍光強度を示すことがわかる。

［５］メンブレン上蛍光強度評価２
抗ウサギＩｇＧ溶液（前述の蛍光標識率の評価において色素１０当量を添加して調製した各標識抗体の溶液）をタンパク質濃度５．０ｎｇ／ｍＬに調整し、２μＬをニトロセルロースメンブレン上に慎重にスポットした。メンブレンを乾燥後、次いでＴＢＳ－Ｔ中、Ｆｉｓｈ Ｇｅｌａｔｉｎブロッキング緩衝液でブロックした。膜を室温で１時間攪拌しながらインキュベートした。ブロッキング溶液を取り除き、標識抗体のＰＢＳ溶液をＴＢＳ緩衝液で２００００倍希釈した。メンブレンを希釈した溶液に浸し、１時間攪拌しながらインキュベートした。メンブレンをＴＢＳ－Ｔ緩衝液で１０分間、３回洗浄し、最後にＴＢＳ緩衝液で１０分洗浄した。得られたメンブレンを４０℃のホットプレートで１時間乾燥させ、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｔｙｐｈｏｏｎ ｓｃａｎｎｅｒ（ＧＥＨＣ社製）を用いて画像化し、６８５ｎｍの励起光で、露光条件を統一して、蛍光波長７１０～７３０ｎｍの範囲の蛍光強度を算出した。比較化合物（４）－ＩｇＧの蛍光波長７１０～７３０ｎｍの範囲の蛍光強度の積分値を基準値とし、この基準値に対する比（標識抗体の蛍光波長７１０～７３０ｎｍの範囲の蛍光強度の積分値／基準値）を算出し、メンブレン上蛍光強度評価１と同様の評価基準に基づき評価した。表５に結果をまとめて示す。
本試験において、蛍光強度は、評価ランク「Ｄ」以上が合格である。

上記表５の結果から、以下のことがわかる。
比較化合物（４）は、Ｒ^１～Ｒ^４、Ｌ^１及びＬ^２の少なくとも１つとして繰り返し数ｍのＰＥＧを含む構造（－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１で表される構造）を有しない点で、比較化合物（５）はＰＥＧの繰り返し数（本発明で規定するｍ）が１１である点で、比較化合物（６）は環Ｚ^１及び環Ｚ^２が、Ｌ^１又はＬ^２が結合する窒素原子に対するオルト位に置換基を有しないベンゼン環である点で、それぞれ、本発明で規定する構造ではない。これらの比較化合物（４）～（６）を用いた標識抗体のメンブレン上での蛍光強度はいずれも低かった（Ｎｏ．ｃ５１～ｃ５３）。
これらに対して、本発明で規定する化合物（９）～（１１）の標識抗体は、いずれも、上記比較標識抗体（４）の蛍光強度に対して２．５倍以上の蛍光強度を有し、優れた蛍光強度を示していた（Ｎｏ．ｃ５１に対するＮｏ．５０１～５０３）。
表４及び５の結果から、本発明の化合物から得られる標識抗体生体物質は、メンブレン上において優れた蛍光強度を示すことがわかる。

このように、本発明の化合物は、抗体へ良好な結合性を有し、しかも、本発明の化合物を用いた標識生体物質は、溶液及びメンブレン上のいずれの形態においても、優れた蛍光強度を有する。

本発明をその実施態様とともに説明したが、我々は特に指定しない限り我々の発明を説明のどの細部においても限定しようとするものではなく、添付の請求の範囲に示した発明の精神と範囲に反することなく幅広く解釈されるべきであると考える。

本願は、２０２０年４月２４日に日本国で特許出願された特願２０２０－０７７１７６及び２０２０年７月３０日に日本国で特許出願された特願２０２０－１２９７５３に基づく優先権を主張するものであり、これらはここに参照してその内容を本明細書の記載の一部として取り込む。

Claims (12)

1. 下記一般式（１）で表される化合物。
   

   

   上記式中、Ｒ^１～Ｒ^４は、置換基を有していてもよいアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基又は－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１を示す。ｍは１～１０であって、Ｒ^２１は置換基を有していてもよいアルキル基を示す。
   Ｒ^１１～Ｒ^１３は、水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アミノ基又はハロゲン原子を示し、隣接する基同士が互いに結合して５又は６員環を形成していてもよい。
   ｎは１～３の整数である。
   Ｌ^１及びＬ^２は置換基を有していてもよいアルキル基又は－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１を示す。Ｒ^２１及びｍは、前記のＲ^２１及びｍと同義である。
   α１及びα２は０または１である。
   環Ｚ^１及び環Ｚ^２は、炭素原子及び窒素原子から選択される環構成原子で形成される６員環を示し、置換基を有していてもよく、縮合環を形成していてもよい。ただし、環Ｚ^１及び環Ｚ^２の少なくとも一方は、下記一般式（Ｚα）で表されるベンゼン環、又は、下記規定（Ｚβ）を満たす含窒素６員環である。
   

   

   上記式中、Ｒ^２２は、アルキル基、アルコキシ基、スルホ基、スルホンアミド基、ニトロ基又はハロゲン原子を示す。
   Ｒ^２３～Ｒ^２５は、水素原子、アルキル基、アルコキシ基、アリール基、スルホ基、スルホンアミド基、ニトロ基又はハロゲン原子を示し、隣接する基同士が互いに結合して縮合環を形成していていてもよい。
   一般式（Ｚα）で表される構造は、Ｒ^２２が、Ｌ^１もしくはＬ^２が結合する窒素原子のオルト位になるよう、＊の位置で一般式（１）の該窒素原子を含む複素環と結合する。
   規定（Ｚβ）：Ｌ^１もしくはＬ^２が結合する窒素原子に対してオルト位に位置する環構成原子が窒素原子である、含窒素６員環である。該オルト位に位置する環構成窒素原子は置換基で置換されていてもよい。
   Ｒ^１～Ｒ ^４ の少なくとも１つは－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍａ －Ｒ^２１で表される構造を含む。ｍａは４～１０であり、Ｒ^２１ は前記のＲ^２１ と同義である。
   Ｌ^１、Ｌ^２及び前記オルト位に位置する環構成窒素原子が有する置換基の少なくとも１つは、カルボキシ基又は生体物質に結合可能な置換基を含む。
   Ｚ^１及びＺ^２の少なくとも一方が前記の規定（Ｚβ）を満たす含窒素６員環である場合、Ｌ^１、Ｌ^２、Ｒ^１～Ｒ^４及び前記のオルト位に位置する環構成窒素原子が有する置換基のうちの２つが互いに結合して、繰り返し数２ｎ＋３のメチン鎖を含む環を形成していてもよい。ｎは前記のｎと同義である。
   ただし、式（１）で表される化合物は中性の化合物である。
2. 下記一般式（２－１）～（２－３）のいずれかで表される、請求項１に記載の化合物。
   

   

   上記式中、Ｒ^３１は、置換基を有していてもよいアルキル基又は－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１を示す。
   Ｒ^３２～Ｒ^３５は、水素原子、アルキル基、アルコキシ基、アリール基、スルホ基、スルホンアミド基、ニトロ基又はハロゲン原子を示し、隣接する基同士が互いに結合して縮合環を形成していてもよい。
   Ｒ^１～Ｒ^４、Ｒ^１１～Ｒ^１３、Ｌ^１、Ｌ^２、Ｒ^２１～Ｒ^２５及びｍは前記のＲ^１～Ｒ^４、Ｒ^１１～Ｒ^１３、Ｌ^１、Ｌ^２、Ｒ^２１～Ｒ^２５及びｍと同義である。
   ｌは２又は３を示す。
   Ｌ^１、Ｌ^２及びＲ^３１の少なくとも１つは、カルボキシ基又は生体物質に結合可能な置換基を含む。
   ただし、式（２－１）～（２－３）のいずれかで表される化合物は中性の化合物である。
3. 前記のＲ^１及びＲ^２の少なくとも１つと前記のＲ^３及びＲ^４の少なくとも１つとが、－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ） _ｍａ －Ｒ ^２１ で表される構造を含み、ｍａ及びＲ ^２１ は前記のｍａ及びＲ ^２１ と同義である、請求項１又は２に記載の化合物。
4. 前記のＬ^１、Ｌ^２及び規定（Ｚβ）におけるオルト位に位置する環構成窒素原子が有する置換基及びＲ^３１の少なくとも１つが、カルボキシ基又は生体物質に結合可能な置換基と、ｍ＝１～１０であって、－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－で表される構造とを含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物。
5. 前記Ｒ^１１～Ｒ^１３の少なくとも１つがアリールオキシ基又はアリールチオ基である、請求項１～４のいずれか１項に記載の化合物。
6. 下記一般式（５－１）～（５－４）のいずれかで表される、請求項１に記載の化合物。
   

   

   上記式中、Ｒ^１～Ｒ^６は、置換基を有していてもよいアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基又は－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１を示す。
   Ｒ^３１は、置換基を有していてもよいアルキル基又は－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－Ｒ^２１を示す。
   Ｒ^３２～Ｒ^３５は、水素原子、アルキル基、アルコキシ基、アリール基、スルホ基、スルホンアミド基、ニトロ基又はハロゲン原子を示し、隣接する基同士が互いに結合して縮合環を形成していてもよい。
   ｌは２又は３を示す。
   Ｌ^３～Ｌ^６はアルキレン基又は－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍ－アルキレン－＊を示す。＊はＵとの結合位置を示す。
   連結基Ｕは総原子数１～１００の２価の連結基を示す。
   Ｒ^１１～Ｒ^１３、Ｒ^２１、Ｌ^１及びｍは、前記のＲ^１１～Ｒ^１３、Ｒ^２１、Ｌ^１及びｍと同義である。
   Ｒ^１～Ｒ ^６ の少なくとも１つは－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｍａ －Ｒ ^２１ で表される構造を含む。ｍａ及びＲ ^２１ は前記のｍａ及びＲ ^２１ と同義である。
   Ｌ^１、Ｒ^３１、Ｌ^３～Ｌ^６及び連結基Ｕの少なくとも１つは、カルボキシ基又は生体物質に結合可能な置換基を含む。
   ただし、式（５－１）～（５－４）で表される化合物は中性の化合物である。
7. 前記連結基ＵにおけるＬ^３～Ｌ^６との連結部が、－Ｏ－基、－ＮＲ^５０－基、－ＣＯＯ－基、－ＣＯＮＲ^５０－基又は－ＳＯ_２ＮＲ^５０－基である、請求項６に記載の化合物。ただし、Ｒ^５０は水素原子又はアルキル基である。
8. 前記のＲ^１及びＲ^２の少なくとも１つと、前記のＲ^３及びＲ^４の少なくとも１つとが、－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ） _ｍａ －Ｒ ^２１ で表される構造を含み、ｍａ及びＲ ^２１ は前記のｍａ及びＲ ^２１ と同義である、請求項６又は７に記載の化合物。
9. 前記Ｌ^３～Ｌ^６の全てが、ｍ＝１～１０であって、－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ） _ｍ －で表される構造を含む、請求項６～８のいずれか１項に記載の化合物。
10. 前記連結基Ｕが、カルボキシ基又は生体物質に結合可能な置換基を有する、２価の連結基である、請求項６～９のいずれか１項に記載の化合物。
11. 請求項１～１０のいずれか１項に記載の化合物と生体物質とが結合してなる標識生体物質。
12. 前記生体物質がタンパク質、アミノ酸、核酸、糖鎖及びリン脂質のいずれかである請求項１１に記載の標識生体物質。