JP7423522B2 - 尿素サイクル異常症の治療のためのオルニチントランスカルバミラーゼをコードするポリヌクレオチド - Google Patents
尿素サイクル異常症の治療のためのオルニチントランスカルバミラーゼをコードするポリヌクレオチド Download PDFInfo
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Description
本出願は、2017年11月22日に出願された米国仮出願第62/590,157号、及び2018年8月20日に出願された米国仮出願第62/765,354号の優先権を主張する。両出願の内容は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる。
(i)投与後少なくとも12時間、少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも120時間、少なくとも1週間、少なくとも2週間、少なくとも3週間、もしくは少なくとも4週間、肝臓組織におけるOTCの活性レベルを、正常なOTCの活性レベルの少なくとも2%、少なくとも5%、少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、もしくは少なくとも100%以内に増加させ、
(ii)投与後少なくとも12時間、少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも120時間、少なくとも1週間、少なくとも2週間、少なくとも3週間、もしくは少なくとも4週間、肝臓組織におけるOTCの活性レベルを、該対象のベースラインのOTCの活性レベルもしくはオルニチントランスカルバミラーゼ欠損症(OTCD)を有するヒト対象における参照のOTCの活性レベルと比較して、少なくとも1.5倍、少なくとも2倍、少なくとも3倍、少なくとも4倍、少なくとも5倍、少なくとも10倍、少なくとも20倍、もしくは少なくとも50倍に増加させ、
(iii)投与後少なくとも12時間、少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも120時間、少なくとも1週間、少なくとも2週間、少なくとも3週間、もしくは少なくとも4週間、アンモニアのRBC、血漿、血清、及び/または肝臓レベルを、該対象のベースラインのアンモニアのRBC、血漿、血清、及び/または肝臓レベルもしくはオルニチントランスカルバミラーゼ欠損症(OTCD)を有するヒト対象における参照のアンモニアのRBC、血漿、血清、及び/または肝臓レベルと比較して、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、もしくは少なくとも100%低下させ、
(iv)投与後少なくとも12時間、少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも120時間、少なくとも1週間、少なくとも2週間、少なくとも3週間、もしくは少なくとも4週間、オロチン酸の血漿、血清、及び/または尿レベルを、該対象のベースラインの血漿、血清、もしくは尿のオロチン酸レベルもしくはオルニチントランスカルバミラーゼ欠損症(OTCD)を有するヒト対象における参照の血漿、血清、もしくは尿のオロチン酸レベルと比較して、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、もしくは少なくとも100%低下させ、
(v)投与後少なくとも12時間、少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも120時間、少なくとも1週間、少なくとも2週間、少なくとも3週間、もしくは少なくとも4週間、アンモニアのRBC、血漿、血清、及び/または肝臓レベルを、該対象のベースラインのRBC、血漿、血清、及び/または肝臓アンモニアレベルもしくはオルニチントランスカルバミラーゼ欠損症(OTCD)を有する患者における参照のRBC、血漿、血清、及び/または肝臓アンモニアレベルと比較して、少なくとも1.5倍、少なくとも2倍、少なくとも5倍、少なくとも10倍、少なくとも20倍、もしくは少なくとも50倍低下させ、
(vi)投与後少なくとも12時間、少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも120時間、少なくとも1週間、少なくとも2週間、少なくとも3週間、もしくは少なくとも4週間、オロチン酸の血漿、血清、及び/または尿レベルを、該対象のベースラインの血漿、血清、及び/または尿のオロチン酸レベルもしくはオルニチントランスカルバミラーゼ欠損症(OTCD)を有する患者における参照の血漿、血清、及び/または尿のオロチン酸レベルと比較して、少なくとも1.5倍、少なくとも2倍、少なくとも5倍、少なくとも10倍、少なくとも20倍もしくは少なくとも50倍低下させ、
(vii)投与後少なくとも12時間、少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも5日、少なくとも7日、少なくとも14日、少なくとも24日、少なくとも48日、もしくは少なくとも60日で、該ヒト対象の体重を、治療前の体重の少なくとも2%、少なくとも5%、少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%、少なくとも25%、もしくは少なくとも30%増加させ、及び/または
(viii)投与後少なくとも12時間、少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも5日、少なくとも7日、少なくとも14日、少なくとも24日、少なくとも48日、もしくは少なくとも60日間、該ヒト対象の体重を、治療前の体重の少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、もしくは少なくとも99%以内に維持する。
(ii)該オロチン酸の血漿、血清、及び/または尿レベルは、単回投与後少なくとも12時間、少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも120時間、少なくとも6日、少なくとも1週間、少なくとも8日、少なくとも9日、少なくとも10日、少なくとも11日、少なくとも12日、少なくとも2週間、少なくとも3週間、もしくは少なくとも4週間、該対象のベースラインのオロチン酸の血漿、血清、及び/または尿レベルもしくはOTCDを有する患者における参照のオロチン酸の血漿、血清、及び/または尿レベルと比較して、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、もしくは少なくとも100%低下し、
(iii)該アンモニアのRBC、血漿、血清及び/または肝臓レベルは、単回投与後少なくとも12時間、少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも120時間、少なくとも6日、少なくとも1週間、少なくとも8日、少なくとも9日、少なくとも10日、少なくとも11日、少なくとも12日、少なくとも2週間、少なくとも3週間、もしくは少なくとも4週間以内に、正常なアンモニアのRBC、血漿、血清及び/または肝臓レベルと比較して、少なくとも1.5倍以内、少なくとも2倍以内、少なくとも5倍以内、少なくとも10倍以内、少なくとも20倍以内、もしくは少なくとも50倍以内に低下し、
(iv)該オロチン酸の血漿、血清、及び/または尿レベルは、単回投与後少なくとも12時間、少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも120時間、少なくとも6日、少なくとも1週間、少なくとも8日、少なくとも9日、少なくとも10日、少なくとも11日、少なくとも12日、少なくとも2週間、少なくとも3週間、もしくは少なくとも4週間、正常なオロチン酸の血漿、血清、及び/または尿レベルと比較して、少なくとも1.5倍以内、少なくとも2倍以内、少なくとも5倍以内、少なくとも10倍以内、少なくとも20倍以内、もしくは少なくとも50倍以内に低下し、
(v)該ヒト対象の体重は、投与後少なくとも12時間、少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも5日、少なくとも7日、少なくとも14日、少なくとも24日、少なくとも48日、もしくは少なくとも60日で、治療前の体重の少なくとも2%、少なくとも5%、少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%、少なくとも25%、もしくは少なくとも30%増加し、及び/または
(vi)該ヒト対象の体重は、投与後少なくとも12時間、少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも5日、少なくとも7日、少なくとも14日、少なくとも24日、少なくとも48日、もしくは少なくとも60日間、治療前の体重の少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、もしくは少なくとも99%以内を維持する。
(i)該対象におけるOTCの活性レベルは、単回投与後少なくとも12時間、少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも120時間、少なくとも6日、少なくとも1週間、少なくとも8日、少なくとも9日、少なくとも10日、少なくとも11日、少なくとも12日、少なくとも2週間、少なくとも3週間、もしくは少なくとも4週間、OTCDを有する対象における参照のOTCの活性レベルと比較して、少なくとも1.5倍、少なくとも2倍、少なくとも5倍、少なくとも10倍、少なくとも20倍、もしくは少なくとも50倍に増加し、及び/または
(ii)該医薬組成物もしくはポリヌクレオチドの単回投与が該対象に施された12時間後、該対象におけるOTC活性は、該対象のベースラインのOTC活性と比較して、少なくとも2%、少なくとも5%、少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも100%、少なくとも150%、少なくとも200%、少なくとも300%、少なくとも400%、少なくとも500%、もしくは少なくとも600%増加する。
オルニチントランスカルバミラーゼ(OTC、EC2.1.3.3)は、尿素サイクル及び細菌のアルギニン生合成経路の酵素である。OTCは、カルバミルリン酸とオルニチン間のシトルリン及びリン酸を形成する反応を触媒する。OTCは、細胞内でホモトリマーとして存在する。
本発明は、オルニチントランスカルバミラーゼ欠損症(OTCD)の治療または予防に使用するmRNAを特徴とする。本発明での使用を特徴とするmRNAは、対象に投与され、インビボでヒトオルニチントランスカルバミラーゼ(OTC)タンパク質をコードする。従って、本発明は、ヒトOTC(配列番号1)、そのアイソフォーム、その機能的断片、及びOTCを含む融合タンパク質をコードする連結ヌクレオシドのオープンリーディングフレームを含むポリヌクレオチド、例えば、mRNAに関する。いくつかの実施形態では、該オープンリーディングフレームは、配列最適化される。特定の実施形態では、本発明は、ヒトOTCのポリペプチド配列をコードするヌクレオチドを含む配列最適化ポリヌクレオチド、またはそれらの配列最適化ポリヌクレオチドと高い配列同一性を有する配列を提供する。
(i)完全長OTCポリペプチド(例えば、野生型OTCと同じまたは本質的に同じ長さを有する)、
(ii)本明細書に記載のOTCの機能的断片(例えば、OTCより短い切断型(例えば、カルボキシ末端、アミノ末端、または内部領域の欠失)配列であるが、OTC酵素活性をなお保持する)、
(iii)そのバリアント(例えば、1つ以上のアミノ酸が置き換えられた完全長もしくは切断型OTCタンパク質、例えば、参照タンパク質(例えば、当技術分野で既知の任意の天然もしくは人工バリアント)に対して該ポリペプチドのOTC活性のすべてもしくはほとんどを保持するバリアント)、または
(iv)(i)完全長OTCタンパク質(例えば、配列番号1)、その機能的断片もしくはバリアント、及び(ii)異種タンパク質を含む融合タンパク質。
本発明のポリヌクレオチド(例えば、RNA、例えば、mRNA)はまた、コードされたポリペプチドの治療関連部位への輸送を容易にするさらなる特徴をコードするヌクレオチド配列も含み得る。タンパク質輸送を支援する1つのかかる特徴は、シグナル配列、または標的化配列である。これらのシグナル配列によってコードされるペプチドは、標的化ペプチド、輸送ペプチド、及びシグナルペプチドを含めた様々な名称で知られている。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチド(例えば、RNA、例えば、mRNA)は、本明細書に記載のOTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結されたシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列(例えば、ORF)を含む。
いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチド(例えば、RNA、例えば、mRNA)は、目的のポリペプチドをコードする複数の核酸配列(例えば、ORF)を含み得る。いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、OTCポリペプチド、機能的断片、またはそのバリアントをコードする単一のORFを含む。しかしながら、いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、複数のORF、例えば、OTCポリペプチド(第一の目的のポリペプチド)をコードする第一のORF、機能的断片、またはそのバリアント、及び第二の目的のポリペプチドを発現する第二のORFを含み得る。いくつかの実施形態では、2つ以上の目的のポリペプチドは、遺伝子的に融合させることができ、すなわち、2つ以上のポリペプチドは、同一のORFによってコードされ得る。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチドは、2つ以上の目的のポリペプチド間のリンカー(例えば、G4S(配列番号86)ペプチドリンカーまたは当技術分野で既知の別のリンカー)をコードする核酸配列を含み得る。
ある特定の実施形態では、本開示のmRNAは、複数のOTCドメイン(例えば、OTC触媒ドメイン、OTC4量体化ドメイン)または異種ドメインをコードし、本明細書では多量体構築物と呼ばれる。該多量体構築物のある特定の実施形態では、該mRNAはさらに、各ドメイン間に位置するリンカーをコードする。該リンカーは、例えば、切断可能なリンカーまたはプロテアーゼ感受性リンカーであり得る。ある特定の実施形態では、該リンカーは、F2Aリンカー、P2Aリンカー、T2Aリンカー、E2Aリンカー、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。2Aペプチドと呼ばれるこの自己切断型ペプチドリンカーのファミリーは、当技術分野において記載されている(例えば、Kim,J.H.et al.(2011) PLoS ONE 6:e18556参照)。ある特定の実施形態では、該リンカーは、F2Aリンカーである。ある特定の実施形態では、該リンカーは、GGGSリンカーである。ある特定の実施形態では、該リンカーは、(GGGS)nリンカーであり、ここで、n=2、3、4、または5である。ある特定の実施形態では、該多量体構築物は、ドメイン-リンカー-ドメイン-リンカー-ドメイン、例えば、OTCドメイン-リンカー-OTCドメインの構造を有する介在リンカーを備えた3つのドメインを含む。
GGAAGCGGAGCUACUAACUUCAGCCUGCUGAAGCAGGCUGGAGACGUGGAGGAGAACCCUGGACCU(配列番号188)である。1つの例示的な実施形態では、2Aペプチドは、以下の配列によってコードされる:5’-
UCCGGACUCAGAUCCGGGGAUCUCAAAAUUGUCGCUCCUGUCAAACAAACUCUUAACUUUGAUUUACUCAAACUGGCTGGGGAUGUAGAAAGCAAUCCAGGTCCACUC-3’(配列番号200)。該2Aペプチドのポリヌクレオチド配列は、本明細書に記載の方法及び/または当技術分野で既知の方法によって修飾されても、コドン最適化されてもよい。
いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチド(例えば、RNA、例えば、mRNA)は、配列最適化される。いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチド(例えば、RNA、例えば、mRNA)は、OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列(例えば、ORF)、任意に、別の目的のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列(例えば、ORF)、5’-UTR、3’-UTR、任意に少なくとも1つのマイクロRNA結合部位を含む5’UTRまたは3’UTR、任意に、リンカー、ポリAテール、またはそれらの任意の組み合わせをコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該ORF(複数可)は配列最適化される。
表1.コドン選択肢
(i)参照ヌクレオチド配列(例えば、OTCポリペプチドをコードするORF)の少なくとも1つのコドンを、ウリジン含量を増加もしくは減少させる代替コドンで置換し、ウリジン修飾配列を生成すること、
(ii)参照ヌクレオチド配列(例えば、OTCポリペプチドをコードするORF)の少なくとも1つのコドンを、同義コドンセットにてコドン頻度がより高い代替コドンで置換すること、
(iii)参照ヌクレオチド配列(例えば、OTCポリペプチドをコードするORF)の少なくとも1つのコドンを、G/C含量を増加させる代替コドンで置換すること、または
(iv)それらの組み合わせ。
いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、本明細書に開示のOTCポリペプチドをコードする配列最適化ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、OTCポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含み、該ORFは配列最適化されている。
(i)本明細書に示す5’キャップ、例えば、キャップ1、
(ii)5’UTR、例えば、本明細書に示す配列、例えば、配列番号3、
(iii)OTCポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム、例えば、配列番号2及び5~29に示すOTCをコードする配列最適化核酸配列、
(iv)少なくとも1つの終止コドン、
(v)3’UTR、例えば、本明細書に示す配列、例えば、配列番号4、ならびに
(vi)上記のポリAテール。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチド、例えば、OTCポリペプチドをコードするmRNAヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドは、5’から3’末端に以下を含む:
(i)本明細書に示す5’キャップ、例えば、キャップ1、
(ii)5’UTR、例えば、本明細書に示す配列、例えば、配列番号3、配列番号191、配列番号196、または配列番号197、
(iii)OTCポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム、例えば、配列番号2及び5~29に示すOTCをコードする配列最適化核酸配列、
(iv)少なくとも1つの終止コドン、
(v)3’UTR、例えば、本明細書に示す配列、例えば、配列番号4、配列番号111、配列番号150、配列番号175、配列番号177、配列番号178、配列番号198、または配列番号199、ならびに
(vi)上記のポリAテール。
ある特定の実施形態では、該ポリヌクレオチドのすべてのウラシルはN1-メチルプソイドウラシル(G5)である。ある特定の実施形態では、該ポリヌクレオチドのすべてのウラシルは5-メトキシウラシル(G6)である。
本発明のいくつかの実施形態では、OTCポリペプチドをコードする本明細書に開示の配列最適化核酸を含むポリヌクレオチド(例えば、RNA、例えば、mRNA)は、少なくとも1つの核酸配列の特性(例えば、ヌクレアーゼに曝露された際の安定性)または発現特性が、非配列最適化核酸に対して改善されたかどうかを特定するために試験され得る。
本発明のいくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチドの所望の特性は、該核酸配列の固有特性である。例えば、該ヌクレオチド配列(例えば、RNA、例えば、mRNA)は、インビボまたはインビトロ安定性のために配列最適化され得る。いくつかの実施形態では、該ヌクレオチド配列は、特定の標的組織または細胞における発現のために配列最適化され得る。いくつかの実施形態では、該核酸配列は、エンドヌクレアーゼ及びエキソヌクレアーゼによる分解を防ぐことによって、その血漿半減期を延長するように配列最適化される。
本発明のいくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチドの所望の特性は、本明細書に開示の配列最適化配列によってコードされるOTCポリペプチドの発現レベルである。タンパク質発現レベルは、1つ以上の発現系を用いて測定することができる。いくつかの実施形態では、発現は、細胞培養系、例えば、CHO細胞、HEK293細胞、またはHeLa細胞で測定され得る。いくつかの実施形態では、発現は、生細胞の抽出物、例えば、ウサギ網状赤血球溶解物から調製したインビトロ発現系、または精製された個々の成分の集合により調製したインビトロ発現系を用いて測定され得る。他の実施形態では、該タンパク質発現は、インビボ系、例えば、マウス、ウサギ、サル等で測定される。
いくつかの実施形態では、核酸配列によってコードされる異種治療用タンパク質の発現は、当該標的組織または細胞に有害な影響を与える可能性があり、タンパク質収量を低減し、もしくは発現産物の質を低下させ(例えば、タンパク質断片の存在もしくは発現タンパク質の封入体での沈殿に起因して)、または毒性を生じる。
場合によっては、OTCポリペプチドまたはその機能的断片をコードする配列最適化核酸の投与は、免疫応答を誘発する可能性があり、これは、(i)治療薬(例えば、OTcポリペプチドをコードするmRNA)、または(ii)かかる治療薬の発現産物(例えば、該mRNAによってコードされるOTCポリペプチド)、または(iv)それらの組み合わせによって引き起こされ得る。従って、本開示のいくつかの実施形態では、本明細書に開示の核酸配列(例えば、mRNA)の配列最適化は、OTCポリペプチドをコードする核酸の投与によって、またはかかる核酸がコードするOTCの発現産物によって誘発される免疫もしくは炎症反応を減少させるために使用され得る。
いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチド(例えば、RNA、例えば、mRNA)は、化学的に修飾された核酸塩基、例えば、化学的に修飾されたウラシル、例えば、プソイドウラシル、N1-メチルプソイドウラシル、5-メトキシウラシル等を含む。いくつかの実施形態では、該mRNAは、OTCポリペプチドをコードするORFを含むウラシル修飾配列であり、該mRNAは、化学的に修飾された核酸塩基、例えば、化学的に修飾されたウラシル、例えば、プソイドウラシル、N1-メチルプソイドウラシル、または5-メトキシウラシルを含む。
本開示は、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、例えば、mRNA)を含む修飾ポリヌクレオチドを含む。該修飾ポリヌクレオチドは、化学的に修飾、及び/または構造的に修飾され得る。本発明のポリヌクレオチドが、化学的及び/または構造的に修飾される場合、該ポリヌクレオチドは、「修飾ポリヌクレオチド」と呼ばれ得る。
ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むポリヌクレオチドの翻訳は、様々なシス作用性核酸構造によって提供される様々な機序によって制御及び調節され得る。例えば、ヘアピンまたは他の高次(例えば、偽結節)分子内mRNA二次構造を形成する天然に存在するシス作用性RNA要素は、ポリヌクレオチドに翻訳調節活性を提供することができ、該RNA要素は、特に該RNA要素が5’キャップ構造に近い5’UTRに位置する場合にポリヌクレオチドの翻訳開始に影響を与え、またはこれを調節する(Pelletier and Sonenberg(1985)Cell 40(3):515-526、Kozak(1986)Proc Natl Acad Sci 83:2850-2854)。
本開示は、修飾を含む合成ポリヌクレオチド(例えば、RNA要素)を提供し、該修飾は、所望の翻訳調節活性を与える。いくつかの実施形態では、本開示は、5’非翻訳領域(UTR)、開始コドン、ポリペプチドをコードする完全オープンリーディングフレーム、3’UTR、及び少なくとも1つの修飾を含むポリヌクレオチドを提供し、該少なくとも1つの修飾は、所望の翻訳調節活性、例えば、mRNA翻訳の翻訳忠実度を推進及び/または向上させる修飾を与える。いくつかの実施形態では、該所望の翻訳調節活性は、シス作用性調節活性である。いくつかの実施形態では、該所望の翻訳調節活性は、開始コドンでの、または開始コドンの近位の43S転写開始前複合体(PIC)またはリボソームの滞留時間の延長である。いくつかの実施形態では、該所望の翻訳調節活性は、開始コドンでの、または開始コドンからのポリペプチド合成の開始の増加である。いくつかの実施形態では、該所望の翻訳調節活性は、該完全なオープンリーディングフレームから翻訳されるポリペプチド量の増加である。いくつかの実施形態では、該所望の翻訳調節活性は、該PICまたはリボソームによる開始コドン解読の忠実度の増加である。いくつかの実施形態では、該所望の翻訳調節活性は、該PICまたはリボソームによる開始コドンスキャンニング漏れの阻害または低減である。いくつかの実施形態では、該所望の翻訳調節活性は、該PICまたはリボソームによる開始コドンの解読速度の低下である。いくつかの実施形態では、該所望の翻訳調節活性は、開始コドン以外のmRNA内の任意のコドンでのポリペプチド合成開始の阻害または低減である。いくつかの実施形態では、該所望の翻訳調節活性は、該完全なオープンリーディングフレーム以外のmRNA内の任意のオープンリーディングフレームから翻訳されるポリペプチドの量の阻害または低減である。いくつかの実施形態では、該所望の翻訳調節活性は、異常な翻訳産物の産生の阻害または低減である。いくつかの実施形態では、該所望の翻訳調節活性は、上述の翻訳調節活性の1つ以上の組み合わせである。
表2
5’UTR-001(上流UTR)
(GGGAAAUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACC)(配列番号3)、
5’UTR-002(上流UTR)
(GGGAGAUCAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACC)(配列番号89)、
5’UTR-003(上流UTR)(WO2016/100812参照)、
5’UTR-004(上流UTR)
(GGGAGACAAGCUUGGCAUUCCGGUACUGUUGGUAAAGCCACC)(配列番号90)、
5’UTR-005(上流UTR)
(GGGAGAUCAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACC)(配列番号89)、
5’UTR-006(上流UTR)(WO2016/100812参照)、
5’UTR-007(上流UTR)
(GGGAGACAAGCUUGGCAUUCCGGUACUGUUGGUAAAGCCACC)(配列番号90)、
5’UTR-008(上流UTR)
(GGGAAUUAACAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACC)(配列番号93)、
5’UTR-009(上流UTR)
(GGGAAAUUAGACAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACC)(配列番号94)、
5’UTR-010、上流
(GGGAAAUAAGAGAGUAAAGAACAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACC)(配列番号95)、
5’UTR-011(上流UTR)
(GGGAAAAAAGAGAGAAAAGAAGACUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACC)(配列番号96)、
5’UTR-012(上流UTR)
(GGGAAAUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAUAUAUAAGAGCCACC)(配列番号97)、
5’UTR-013(上流UTR)
(GGGAAAUAAGAGACAAAACAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACC)(配列番号98)、
5’UTR-014(上流UTR)
(GGGAAAUUAGAGAGUAAAGAACAGUAAGUAGAAUUAAAAGAGCCACC)(配列番号99)、
5’UTR-15(上流UTR)
(GGGAAAUAAGAGAGAAUAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACC)(配列番号100)、
5’UTR-016(上流UTR)
(GGGAAAUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAAUUAAGAGCCACC)(配列番号101)、
5’UTR-017(上流UTR)、または
(GGGAAAUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUUUAAGAGCCACC)(配列番号102)、
5’UTR-018(上流UTR)5’UTR
(UCAAGCUUUUGGACCCUCGUACAGAAGCUAAUACGACUCACUAUAGGGAAAUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACC)(配列番号88)。
142-3p 3’UTR(miR142-3p結合部位を含むUTR)
(UGAUAAUAGUCCAUAAAGUAGGAAACACUACAGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC)(配列番号162)、
142-3p 3’UTR(miR142-3p結合部位を含むUTR)
(UGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCUCCAUAAAGUAGGAAACACUACACAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC)(配列番号163)、または
142-3p 3’UTR(miR142-3p結合部位を含むUTR)
(UGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUCCAUAAAGUAGGAAACACUACAUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC)(配列番号170)、
142-3p 3’UTR(miR142-3p結合部位を含むUTR)
(UGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGUCCAUAAAGUAGGAAACACUACACCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC)(配列番号171)、
142-3p 3’UTR(miR142-3p結合部位を含むUTR)
(UGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCUCCAUAAAGUAGGAAACACUACACUGCACCCGUACCCCCGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC)(配列番号172)、
142-3p 3’UTR(miR142-3p結合部位を含むUTR)
(UGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCUCCAUAAAGUAGGAAACACUACAGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC)(配列番号151)。
142-3p 3’UTR(miR142-3p結合部位を含むUTR)
(UGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCGUGGUCUUUGAAUAAAGUUCCAUAAAGUAGGAAACACUACACUGAGUGGGCGGC)(配列番号173)、
3’UTR-018(配列番号150参照、
3’UTR(miR142とmiR126結合部位のバリアント1)
(UGAUAAUAGUCCAUAAAGUAGGAAACACUACAGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCCGCAUUAUUACUCACGGUACGAGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC)(配列番号111)
3’UTR(miR142とmiR126結合部位のバリアント2)
(UGAUAAUAGUCCAUAAAGUAGGAAACACUACAGCUGGAGCCUCGGUGGCCUAGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCCGCAUUAUUACUCACGGUACGAGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC)(配列番号112)、または
3’UTR(miR142-3p結合部位のバリアント3)
UGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCUAGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCUCCAUAAAGUAGGAAACACUACAGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC(配列番号4)。
本発明のポリヌクレオチドは、調節要素、例えば、マイクロRNA(miRNA)結合部位、転写因子結合部位、構造化mRNA配列及び/またはモチーフ、内因性核酸結合分子の擬似受容体として作用するように操作された人工結合部位、ならびにそれらの組み合わせを含むことができる。いくつかの実施形態では、かかる調節要素を含むポリヌクレオチドは、「センサー配列」を含むと言われる。
表3.miR-142、miR-126、ならびにmiR-142及びmiR-126結合部位
表4A.5’UTR、3’UTR、miR配列、及びmiR結合部位
miR142-3p結合部位=下線
miR126-3p結合部位=太字下線
miR155-5p結合部位=網掛
miR142-5p結合部位=網掛及び太字下線
表4B.例示的な好ましいUTR
ある特定の実施形態では、本発明のポリヌクレオチド(例えば、本発明のOTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)は、さらに3’UTRを含む。
本発明はまた、5’キャップ及び本発明のポリヌクレオチド(例えば、OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)の両方を含むポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチド(例えば、OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)はさらに、ポリAテールを含む。さらなる実施形態では、安定化のため、該ポリAテールの末端基が組み込まれ得る。他の実施形態では、ポリAテールは、デス-3’ヒドロキシルテールを含む。
本発明は、開始コドン領域及び本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)の両方を含むポリヌクレオチドも含む。いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、開始コドン領域と類似の、または開始コドン領域のように機能する領域を有し得る。
本発明は、終止コドン領域及び本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)の両方を含むポリヌクレオチドも含む。いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、3’非翻訳領域(UTR)の前に少なくとも2つの終止コドンを含み得る。該終止コドンは、DNAの場合にはTGA、TAA及びTAGから、RNAの場合にはUGA、UAA及びUAGから選択され得る。いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、DNAの場合には終止コドンTGA、またはRNAの場合には終止コドンUGA、さらに1つの追加の終止コドンを含む。さらなる実施形態では、該追加の終止コドンは、TAAでもUAAでもよい。別の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、3つの連続した終止コドン、4つの終止コドン、またはそれ以上を含む。
ある特定の実施形態では、本開示のポリヌクレオチド、例えば、OTCポリペプチドをコードするmRNAヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドは、5’から3’末端に以下を含む:
(i)上記の5’キャップ、
(ii)5’UTR、例えば、上記の配列、
(iii)OTCポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム、例えば、本明細書に開示のOTCをコードする配列最適化核酸配列、
(iv)少なくとも1つの終止コドン、
(v)3’UTR、例えば、上記の配列、及び
(vi)上記のポリAテール。
表5-ヒトOTCをコードするORFを含む修飾mRNA構築物(構築物1~26の各々は、キャップ1の5’末端キャップ及び3’末端のポリA領域を含む)
本開示は、本発明のポリヌクレオチド(例えば、OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)またはその相補体の作製方法も提供する。
本明細書に開示の本発明のポリヌクレオチド(例えば、OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)は、インビトロ転写(IVT)システムを用いて転写され得る。該システムは、通常、転写緩衝液、ヌクレオチド三リン酸(NTP)、RNase阻害剤及びポリメラーゼを含む。該NTPは、天然及び非天然(修飾)NTPを含めた本明細書に記載のものから選択され得るが、これらに限定されない。該ポリメラーゼは、T7 RNAポリメラーゼ、T3 RNAポリメラーゼ及び変異型ポリメラーゼ、例えば、限定されないが、本明細書に開示のポリヌクレオチドを組み込むことが可能なポリメラーゼから選択され得るがこれらに限定されない。参照することにより全体として本明細書に組み込まれる米国公開第US20130259923号を参照されたい。
例えば、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)、鎖置換増幅(SDA)、転写増幅法(TMA)とも呼ばれる核酸配列ベース増幅(NASBA)、及び/またはローリングサークル増幅(RCA)は、本発明のポリヌクレオチドの1つ以上の領域の製造に利用され得る。リガーゼによってポリヌクレオチドまたは核酸を組み立てることも広く使用されている。
単離された目的のポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチド配列、例えば、本発明のポリヌクレオチド(例えば、OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を合成するために標準的な方法を適用することができる。例えば、特定の単離されたポリペプチドをコードするコドン最適化ヌクレオチド配列を含む単一のDNAまたはRNAオリゴマーを合成することができる。他の態様では、所望のポリペプチドの部分をコードするいくつかの小さなオリゴヌクレオチドを合成し、次いでライゲートすることができる。いくつかの態様では、個々のオリゴヌクレオチドは、通常、相補的アセンブリーのために5’または3’オーバーハングを含む。
本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)の精製は、ポリヌクレオチドのクリーンアップ、品質保証及び品質管理を含み得るが、これらに限定されない。クリーンアップは、当技術分野で既知の方法、例えば、これらに限定されないが、AGENCOURT(登録商標)ビーズ(Beckman Coulter Genomics,Danvers,MA)、ポリTビーズ、LNA(商標)オリゴT捕捉プローブ(EXIQON(登録商標)inc.,Vedbaek,Denmark)またはHPLC系の精製方法、例えば、これらに限定されないが、強アニオン交換HPLC、弱アニオン交換HPLC、逆相HPLC(RP-HPLC)、及び疎水性相互作用HPLC(HIC-HPLC)によって行われ得る。
いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチド(例えば、OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)、それらの発現産物、ならびに分解産物及び代謝産物は、当技術分野で既知の方法に従って定量され得る。
本開示は、上記のポリヌクレオチドのいずれかを含む医薬組成物及び製剤を提供する。いくつかの実施形態では、該組成物または製剤は、さらに送達剤を含む。
a.脂質化合物
本開示は、有利な特性を有する医薬組成物を提供する。本明細書に記載の脂質組成物は、治療薬及び/または予防薬、例えば、mRNAを哺乳類の細胞または器官へ送達するための脂質ナノ粒子組成物に有利に使用され得る。例えば、本明細書に記載の脂質は、ほとんどまたは全く免疫原性を有さない。例えば、本明細書に開示の脂質化合物は、参照脂質(例えば、MC3、KC2、またはDLinDMA)と比較して免疫原性が低い。例えば、本明細書に開示の脂質及び治療薬または予防薬、例えば、mRNAを含む製剤は、参照脂質(例えば、MC3、KC2、またはDLinDMA)及び同じ治療薬または予防薬を含む対応する製剤と比較して、治療指数が高い。
(a)OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、及び
(b)送達剤
を含む医薬組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明の核酸(例えば、OTCmRNA)は、脂質ナノ粒子(LNP)に製剤化される。脂質ナノ粒子は、通常、イオン性カチオン性脂質、非カチオン性脂質、ステロール及びPEG脂質成分と目的の核酸のカーゴを含む。本発明の脂質ナノ粒子は、当技術分野で一般に知られている成分、組成物、及び方法を用いて生成され得る。例えば、PCT/US2016/052352、PCT/US2016/068300、PCT/US2017/037551、PCT/US2015/027400、PCT/US2016/047406、PCT/US2016000129、PCT/US2016/014280、PCT/US2016/014280、PCT/US2017/038426、PCT/US2014/027077、PCT/US2014/055394、PCT/US2016/52117、PCT/US2012/069610、PCT/US2017/027492、PCT/US2016/059575及びPCT/US2016/069491を参照されたい。これらのすべては、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様では、本開示のイオン性脂質は、式(I)の化合物:
R1は、C5-30アルキル、C5-20アルケニル、-R*YR”、-YR”、及び-R”M’R’からなる群から選択され、
R2及びR3は、独立して、H、C1-14アルキル、C2-14アルケニル、-R*YR”、-YR”、及び-R*OR”からなる群から選択されるか、またはR2及びR3は、それらが結合している原子と一緒になって、ヘテロ環もしくは炭素環を形成し、
R4は、水素、C3-6炭素環、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-CHQR、-CQ(R)2、及び非置換C1-6アルキルからなる群から選択され、ここで、Qは、炭素環、ヘテロ環、-OR、-O(CH2)nN(R)2、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3、-CX2H、-CXH2、-CN、-N(R)2、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2、-N(R)R8、-N(R)S(O)2R8、-O(CH2)nOR、-N(R)C(=NR9)N(R)2、-N(R)C(=CHR9)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-N(OR)C(O)R、-N(OR)S(O)2R、-N(OR)C(O)OR、-N(OR)C(O)N(R)2、-N(OR)C(S)N(R)2、-N(OR)C(=NR9)N(R)2、-N(OR)C(=CHR9)N(R)2、-C(=NR9)N(R)2、-C(=NR9)R、-C(O)N(R)OR、及び-C(R)N(R)2C(O)ORから選択され、各nは、独立して、1、2、3、4及び5から選択され、
各R5は、独立して、C1-3アルキル、C2-3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R6は、独立して、C1-3アルキル、C2-3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
M及びM’は、独立して、-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(S)S-、-SC(S)-、-CH(OH)-、-P(O)(OR’)O-、-S(O)2-、-S-S-、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、ここで、M”は、結合、C1-13アルキルまたはC2-13アルケニルであり、
R7は、C1-3アルキル、C2-3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
R8は、C3-6炭素環及びヘテロ環からなる群から選択され、
R9は、H、CN、NO2、C1-6アルキル、-OR、-S(O)2R、-S(O)2N(R)2、C2-6アルケニル、C3-6炭素環及びヘテロ環からなる群から選択され、
各Rは、独立して、C1-3アルキル、C2-3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R’は、独立して、C1-18アルキル、C2-18アルケニル、-R*YR”、-YR”、及びHからなる群から選択され、
各R”は、独立して、C3-15アルキル及びC3-15アルケニルからなる群から選択され、
各R*は、独立して、C1-12アルキル及びC2-12アルケニルからなる群から選択され、
各Yは、独立して、C3-6炭素環であり、
各Xは、独立して、F、Cl、Br、及びIからなる群から選択され、
mは、5、6、7、8、9、10、11、12、及び13から選択され、ここで、R4が、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-CHQR、または-CQ(R)2の場合、(i)Qは、nが1、2、3、4もしくは5の場合に-N(R)2ではなく、または(ii)Qは、nが1もしくは2の場合に5、6、もしくは7員のヘテロシクロアルキルではない。
もしくはそれらのN-オキシド、またはそれらの塩もしくは異性体のものであり、式中、nは、2、3、または4であり、m、R’、R”、及びR2~R6は、本明細書に記載の通りである。例えば、R2及びR3の各々は、独立して、C5-14アルキル及びC5-14アルケニルからなる群から選択され得る。
Wは、
環Aは
tは、1または2であり、
A1及びA2は、各々独立して、CHまたはNから選択され、
Zは、CH2であるかまたは存在せず、ここで、ZがCH2の場合、破線(1)及び(2)は、各々単結合を表し、Zが存在しない場合、破線(1)及び(2)は、両方とも存在せず、
R1、R2、R3、R4、及びR5は、独立して、C5-20アルキル、C5-20アルケニル、-R”MR’、-R*YR”、-YR”、及び-R*OR”からなる群から選択され、
RX1及びRX2は、各々独立して、HまたはC1-3アルキルであり、
各Mは、独立して、-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)O-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(S)S-、-SC(S)-、-CH(OH)-、-P(O)(OR’)O-、-S(O)2-、-C(O)S-、-SC(O)-、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から選択され、
M*はC1-C6アルキルであり、
W1及びW2は、各々独立して、-O-及び-N(R6)-からなる群から選択され、
各R6は、独立して、H及びC1-5アルキルからなる群から選択され、
X1、X2、及びX3は、独立して、結合、-CH2-、-(CH2)2-、-CHR-、-CHY-、-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-(CH2)n-C(O)-、-C(O)-(CH2)n-、-(CH2)n-C(O)O-、-OC(O)-(CH2)n-、-(CH2)n-OC(O)-、-C(O)O-(CH2)n-、-CH(OH)-、-C(S)-、及び-CH(SH)-からなる群から選択され、
各Yは、独立して、C3-6炭素環であり、
各R*は、C1-12アルキル及びC2-12アルケニルからなる群から選択され、
各Rは、独立して、C1-3アルキル及びC3-6炭素環からなる群から選択され、
各R’は、独立して、C1-12アルキル、C2-12アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R”は、独立して、C3-12アルキル、C3-12アルケニル及び-R*MR’からなる群から選択され、
nは、1~6の整数であり、
環Aが、
i)X1、X2、及びX3のうちの少なくとも1つは、-CH2-ではなく、及び/または
ii)R1、R2、R3、R4、及びR5のうちの少なくとも1つは、-R”MR’である。
いくつかの実施形態では、該イオン性脂質は、(化合物VII)、またはその塩である。
本明細書に開示の脂質ナノ粒子組成物の脂質組成物は、1つ以上のリン脂質、例えば、1つ以上の飽和もしくは(ポリ)不飽和リン脂質またはそれらの組み合わせを含み得る。一般に、リン脂質は、リン脂質部分及び1つ以上の脂肪酸部分を含む。
各R1は、独立して、任意に置換されるアルキルであるか、または、任意に、2つのR1が介在原子と一緒になって、任意に置換される単環式カルボシクリルもしくは任意に置換される単環式ヘテロシクリルを形成するか、または、任意に、3つのR1が介在原子と一緒になって、任意に置換される二環式カルボシクリルもしくは任意に置換される二環式ヘテロシクリルを形成し、
nは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
mは、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
Aは、式:
L2の各例は、独立して、結合または任意に置換されるC1-6アルキレンであり、ここで、該任意に置換されるC1-6アルキレンの1つのメチレン単位は、O、N(RN)、S、C(O)、C(O)N(RN)、NRNC(O)、C(O)O、OC(O)、OC(O)O、OC(O)N(RN)、-NRNC(O)O、またはNRNC(O)N(RN)で任意に置き換えられ、
R2の各例は、独立して、任意に置換されるC1-30アルキル、任意に置換されるC1-30アルケニル、または任意に置換されるC1-30アルキニルであり、任意に、ここで、R2の1つ以上のメチレン単位は、独立して、任意に置換されるカルボシクリレン、任意に置換されるヘテロシクリレン、任意に置換されるアリーレン、任意に置換されるヘテロアリーレン、N(RN)、O、S、C(O)、C(O)N(RN)、NRNC(O)、-NRNC(O)N(RN)、C(O)O、OC(O)、OC(O)O、OC(O)N(RN)、NRNC(O)O、C(O)S、SC(O)、-C(=NRN)、C(=NRN)N(RN)、NRNC(=NRN)、NRNC(=NRN)N(RN)、C(S)、C(S)N(RN)、NRNC(S)、NRNC(S)N(RN)、S(O)、OS(O)、S(O)O、OS(O)O、OS(O)2、S(O)2O、OS(O)2O、N(RN)S(O)、-S(O)N(RN)、N(RN)S(O)N(RN)、OS(O)N(RN)、N(RN)S(O)O、S(O)2、N(RN)S(O)2、S(O)2N(RN)、N(RN)S(O)2N(RN)、OS(O)2N(RN)、またはN(RN)S(O)2Oで置き換えられ、
RNの各例は、独立して、水素、任意に置換されるアルキル、または窒素保護基であり、
環Bは、任意に置換されるカルボシクリル、任意に置換されるヘテロシクリル、任意に置換されるアリール、または任意に置換されるヘテロアリールであり、
pは1または2であり、
ただし、該化合物は、下記式のものではない:
ある特定の実施形態では、本発明に有用なまたは潜在的に有用なリン脂質は、修飾されたリン脂質頭部(例えば、修飾されたコリン基)を含む。ある特定の実施形態では、修飾された頭部を備えたリン脂質は、修飾された4級アミンを備えたDSPC、またはそのアナログである。例えば、式(IV)の実施形態では、少なくとも1つのR1はメチルではない。ある特定の実施形態では、少なくとも1つのR1は、水素でもメチルでもない。ある特定の実施形態では、式(IV)の化合物は、下記式のうちの1つ:
各tは、独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
各uは、独立して、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
各vは、独立して、1、2、または3である。
ある特定の実施形態では、式(IV)の化合物は、式(IV-a):
ある特定の実施形態では、本発明に有用なまたは潜在的に有用なリン脂質は、修飾された尾部を含む。ある特定の実施形態では、本発明に有用なまたは潜在的に有用なリン脂質は、修飾された尾部を備えたDSPC、またはそのアナログである。本明細書に記載の「修飾された尾部」とは、短縮されたまたは延長された脂肪族鎖を有する尾部、分岐が導入された脂肪族鎖を有する尾部、置換が導入された脂肪族鎖を有する尾部、1つ以上のメチレンが環状もしくはヘテロ原子基で置き換えられた脂肪族鎖を有する尾部、またはそれらの任意の組み合わせを有する尾部であり得る。例えば、ある特定の実施形態では、(IV)の化合物は、式(IV-a)、またはその塩のものであり、ここで、R2の少なくとも1つの例は、R2の各例は、任意に置換されるC1-30アルキルであり、ここで、R2の1つ以上のメチレン単位は、独立して、任意に置換されるカルボシクリレン、任意に置換されるヘテロシクリレン、任意に置換されるアリーレン、任意に置換されるヘテロアリーレン、N(RN)、O、S、C(O)、-C(O)N(RN)、NRNC(O)、NRNC(O)N(RN)、C(O)O、OC(O)、OC(O)O、OC(O)N(RN)、-NRNC(O)O、C(O)S、SC(O)、C(=NRN)、C(=NRN)N(RN)、NRNC(=NRN)、-NRNC(=NRN)N(RN)、C(S)、C(S)N(RN)、NRNC(S)、NRNC(S)N(RN)、S(O)、OS(O)、-S(O)O、OS(O)O、OS(O)2、S(O)2O、OS(O)2O、N(RN)S(O)、S(O)N(RN)、-N(RN)S(O)N(RN)、OS(O)N(RN)、N(RN)S(O)O、S(O)2、N(RN)S(O)2、S(O)2N(RN)、-N(RN)S(O)2N(RN)、OS(O)2N(RN)、またはN(RN)S(O)2Oで置き換えられる。
各xは、独立して、0と30を含めた0~30の整数であり、
Gの各例は、独立して、任意に置換されるカルボシクリレン、任意に置換されるヘテロシクリレン、任意に置換されるアリーレン、任意に置換されるヘテロアリーレン、N(RN)、O、S、C(O)、C(O)N(RN)、NRNC(O)、-NRNC(O)N(RN)、C(O)O、OC(O)、OC(O)O、OC(O)N(RN)、NRNC(O)O、C(O)S、SC(O)、-C(=NRN)、C(=NRN)N(RN)、NRNC(=NRN)、NRNC(=NRN)N(RN)、C(S)、C(S)N(RN)、NRNC(S)、NRNC(S)N(RN)、S(O)、OS(O)、S(O)O、OS(O)O、OS(O)2、S(O)2O、OS(O)2O、N(RN)S(O)、-S(O)N(RN)、N(RN)S(O)N(RN)、OS(O)N(RN)、N(RN)S(O)O、S(O)2、N(RN)S(O)2、S(O)2N(RN)、N(RN)S(O)2N(RN)、OS(O)2N(RN)、またはN(RN)S(O)2Oからなる群から選択される。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
ある特定の実施形態では、本開示のリン脂質の代わりに別の脂質が使用される。
本明細書に開示の医薬組成物の脂質組成物は、1つ以上の構造脂質を含み得る。本明細書で使用される、「構造脂質」という用語は、ステロールを指し、また、ステロール部分を含む脂質も指す。
本明細書に開示の医薬組成物の脂質組成物は、1つ以上のポリエチレングリコール(PEG)脂質を含み得る。
R3は-OROであり、
ROは、水素、任意に置換されるアルキル、または酸素保護基であり、
rは、1と100を含めた1~100の整数であり、
L1は、任意に置換されるC1-10アルキレンであり、ここで、該任意に置換されるC1-10アルキレンの少なくとも1つのメチレンは、独立して、任意に置換されるカルボシクリレン、任意に置換されるヘテロシクリレン、任意に置換されるアリーレン、任意に置換されるヘテロアリーレン、O、N(RN)、S、C(O)、C(O)N(RN)、NRNC(O)、C(O)O、-OC(O)、OC(O)O、OC(O)N(RN)、NRNC(O)O、またはNRNC(O)N(RN)で置き換えられ、
Dは、クリックケミストリーによって得られる部分であるか、または生理的条件下で切断可能な部分であり、
mは、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
Aは、式:
L2の各例は、独立して、結合または任意に置換されるC1-6アルキレンであり、ここで、該任意に置換されるC1-6アルキレンの1つのメチレン単位は、任意に、O、N(RN)、S、C(O)、C(O)N(RN)、NRNC(O)、C(O)O、OC(O)、OC(O)O、OC(O)N(RN)、-NRNC(O)O、またはNRNC(O)N(RN)で置き換えられ、
R2の各例は、独立して、任意に置換されるC1-30アルキル、任意に置換されるC1-30アルケニル、または任意に置換されるC1-30アルキニルであり、任意に、ここで、R2の1つ以上のメチレン単位は、独立して、任意に置換されるカルボシクリレン、任意に置換されるヘテロシクリレン、任意に置換されるアリーレン、任意に置換されるヘテロアリーレン、N(RN)、O、S、C(O)、C(O)N(RN)、NRNC(O)、-NRNC(O)N(RN)、C(O)O、OC(O)、OC(O)O、OC(O)N(RN)、NRNC(O)O、C(O)S、SC(O)、-C(=NRN)、C(=NRN)N(RN)、NRNC(=NRN)、NRNC(=NRN)N(RN)、C(S)、C(S)N(RN)、NRNC(S)、NRNC(S)N(RN)、S(O)、OS(O)、S(O)O、OS(O)O、OS(O)2、S(O)2O、OS(O)2O、N(RN)S(O)、-S(O)N(RN)、N(RN)S(O)N(RN)、OS(O)N(RN)、N(RN)S(O)O、S(O)2、N(RN)S(O)2、S(O)2N(RN)、N(RN)S(O)2N(RN)、OS(O)2N(RN)、またはN(RN)S(O)2Oで置き換えられ、
RNの各例は、独立して、水素、任意に置換されるアルキル、または窒素保護基であり、
環Bは、任意に置換されるカルボシクリル、任意に置換されるヘテロシクリル、任意に置換されるアリール、または任意に置換されるヘテロアリールであり、
pは1または2である。
R3は-OROであり、
ROは、水素、任意に置換されるアルキル、または酸素保護基であり、
rは、1と100を含めた1~100の整数であり、
R5は、任意に置換されるC10-40アルキル、任意に置換されるC10-40アルケニル、または任意に置換されるC10-40アルキニルであり、任意に、R5の1つ以上のメチレン基は、任意に置換されるカルボシクリレン、任意に置換されるヘテロシクリレン、任意に置換されるアリーレン、任意に置換されるヘテロアリーレン、N(RN)、O、S、C(O)、-C(O)N(RN)、NRNC(O)、NRNC(O)N(RN)、C(O)O、OC(O)、OC(O)O、OC(O)N(RN)、-NRNC(O)O、C(O)S、SC(O)、C(=NRN)、C(=NRN)N(RN)、NRNC(=NRN)、NRNC(=NRN)N(RN)、C(S)、C(S)N(RN)、NRNC(S)、NRNC(S)N(RN)、S(O)、OS(O)、S(O)O、OS(O)O、OS(O)2、-S(O)2O、OS(O)2O、N(RN)S(O)、S(O)N(RN)、N(RN)S(O)N(RN)、OS(O)N(RN)、N(RN)S(O)O、S(O)2、N(RN)S(O)2、S(O)2N(RN)、N(RN)S(O)2N(RN)、OS(O)2N(RN)、またはN(RN)S(O)2Oで置き換えられ、
RNの各例は、独立して、水素、任意に置換されるアルキル、または窒素保護基である。
いくつかの実施形態では、本発明のLNPは、イオン性カチオン性脂質である
、
DOPEを含むリン脂質、コレステロールを含む構造脂質、及び式VIIを有する化合物を含むPEG脂質を含む。
本明細書に開示の医薬組成物の脂質組成物は、上記のものに加えて1つ以上の成分を含み得る。例えば、該脂質組成物は、1つ以上の透過性促進分子、炭水化物、ポリマー、表面変質剤(例えば、界面活性剤)、または他の成分を含み得る。例えば、透過性促進分子は、米国特許出願公開第2005/0222064号に記載の分子であり得る。炭水化物としては、単糖(例えば、グルコース)及び多糖(例えば、グリコーゲンならびにその誘導体及びアナログ)を挙げることができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示の医薬組成物は、脂質ナノ粒子(LNP)として製剤化される。従って、本開示は、(i)本明細書に記載の化合物等の送達剤を含む脂質組成物、及び(ii)OTCポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むナノ粒子組成物もまた提供する。かかるナノ粒子組成物では、本明細書に開示の脂質組成物は、OTCポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを封入し得る。
a.リポソーム、リポプレックス、及び脂質ナノ粒子
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、送達剤、例えば、リポソーム、リポプレックス、脂質ナノ粒子、またはそれらの任意の組み合わせを含む。本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)は、1つ以上のリポソーム、リポプレックス、または脂質ナノ粒子を使用して製剤化され得る。リポソーム、リポプレックス、または脂質ナノ粒子は、これらの製剤が、該ポリヌクレオチドによる細胞のトランスフェクションを高めることができ、及び/またはコードされたタンパク質の翻訳を増加させることができるため、ポリヌクレオチド指向タンパク質産生の効力を高めるために使用され得る。該リポソーム、リポプレックス、または脂質ナノ粒子は、該ポリヌクレオチドの安定性を高めるためにも使用され得る。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、送達剤、例えば、リピドイドを含む。本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)は、リピドイドとともに製剤化され得る。これらリピドイドを含めて複合体、ミセル、リポソームまたは粒子を調製するため、局所及び/または全身投与経路を介したリピドイド製剤の注射後に、コードされたタンパク質の産生によって判断される該ポリヌクレオチドの効率的な送達を達成することができる。ポリヌクレオチドのリピドイド複合体は、静脈内、筋肉内、または皮下経路が挙げられるがこれらに限定されない様々な手段で投与され得る。
いくつかの実施形態における、注射(例えば、筋肉内または皮下注射)用の本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)及びヒアルロニダーゼ。ヒアルロニダーゼは、間質バリアの成分であるヒアルロナンの加水分解を触媒する。ヒアルロニダーゼは、ヒアルロナンの粘度を下げ、それにより、組織透過性を上げる(Frost,Expert Opin.Drug Deliv.(2007)4:427-440)。代替的に、該ヒアルロニダーゼは、筋肉内または皮下投与されたポリヌクレオチドに曝露される細胞数を増加させるために使用され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)は、ナノ粒子模倣体内に封入及び/またはナノ粒子模倣体に吸収される。ナノ粒子模倣体は、病原体、ウイルス、細菌、真菌、寄生生物、プリオン及び細胞等であるがこれらに限定されない生物または粒子の送達機能を模倣し得る。非限定的な例として、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、ウイルスの送達機能を模倣し得る非バイロン粒子に封入され得る(例えば、国際公開第WO2012006376号ならびに米国公開第US20130171241号及び第US20130195968号参照。これらの各々は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる)。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を、送達用の自己組織化ナノ粒子、または両親媒性高分子(AM)中に含む。AMは、ポリ(エチレングリコール)に共有結合したアルキル化糖骨格を有する生体適合性両親媒性ポリマーを含む。水溶液中、該AMは自己組織化してミセルを形成する。核酸の自己組織化ナノ粒子は、国際出願第PCT/US2014/027077号に記載されており、AM及びAMの形成方法は、米国公開第US20130217753号に記載されている。これらの各々は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)及びカチオンまたはアニオン、例えば、Zn2+、Ca2+、Cu2+、Mg2+及びそれらの組み合わせを含む。例示的な製剤は、ポリマー及び、例えば、各々が参照することにより全体として本明細書に組み込まれる米国特許第6,265,389号及び第6,555,525号に記載の金属カチオンと複合化したポリヌクレオチドを含み得る。いくつかの実施形態では、カチオン性ナノ粒子は、二価及び一価カチオンの組み合わせを含み得る。カチオン性ナノ粒子中またはカチオン性ナノ粒子を含む1つ以上のデポー中のポリヌクレオチドを送達することで、長時間作用型デポーとして作用すること及び/またはヌクレアーゼによる分解速度を低下させることにより、ポリヌクレオチドのバイオアベイラビリティを改善することができる。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、アミノ酸脂質との製剤である本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含む。アミノ酸脂質は、アミノ酸残基及び1つ以上の親油性尾部を含む親油性化合物である。アミノ酸脂質及びアミノ酸脂質の作製方法の非限定的な例は、米国特許第8,501,824号に記載されている。該アミノ酸脂質製剤は、当該ポリヌクレオチドに結合しかつこれを放出するアミノ酸脂質を含む放出可能な形態でポリヌクレオチドを送達することができる。非限定的な例として、本明細書に記載のポリヌクレオチドの放出は、例えば、各々が参照することにより全体として本明細書に組み込まれる米国特許第7,098,032号、第6,897,196号、第6,426,086号、第7,138,382号、第5,563,250号、及び第5,505,931号に記載の酸に不安定なリンカーによってもたらされ得る。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を高分子電解質間複合体に含む。高分子電解質間複合体は、電荷動的ポリマーが1つ以上のアニオン性分子と複合化された場合に形成される。電荷動的ポリマー及び高分子電解質間複合体ならびに高分子電解質間複合体の作製方法の非限定的な例は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる米国特許第8,524,368号に記載されている。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を結晶性ポリマー系に含む。結晶性ポリマー系は、結晶性部分及び/または結晶性部分を含む末端単位を備えたポリマーである。例示的なポリマーは、米国特許第8,524,259号(参照することにより全体として本明細書に組み込まれる)に記載されている。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)ならびに天然及び/または合成ポリマーを含む。該ポリマーとしては、ポリエテン、ポリエチレングリコール(PEG)、ポリ(l-リジン)(PLL)、PEGグラフトPLL、カチオン性リポポリマー、生分解性カチオン性リポポリマー、ポリエチレンイミン(PEI)、架橋分岐ポリ(アルキレンイミン)、ポリアミン誘導体、修飾ポロキサマー、弾性生分解性ポリマー、生分解性コポリマー、生分解性ポリエステルコポリマー、生分解性ポリエステルコポリマー、マルチブロックコポリマー、ポリ[α-(4-アミノブチル)-L-グリコール酸](PAGA)、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマー、ポリカーボネート、ポリ無水物、ポリヒドロキシ酸、ポリプロピルフメレート(polypropylfumerate)、ポリカプロラクトン、ポリアミド、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル、ポリ(オルソエステル)、ポリシアノアクリレート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリウレア、ポリスチレン、ポリアミン、ポリリジン、ポリ(エチレンイミン)、ポリ(セリンエステル)、ポリ(L-ラクチド-co-L-リジン)、ポリ(4-ヒドロキシ-L-プロリンエステル)、アミン含有ポリマー、デキストランポリマー、デキストランポリマー誘導体またはそれらの組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含み、該ポリヌクレオチドは、該ポリヌクレオチドによる細胞のトランスフェクションを増加させるための、及び/または該ポリヌクレオチドの生体内分布を変更(例えば、特定の組織もしくは細胞型を標的化することによって)するための、及び/またはコードされたタンパク質の翻訳を増加させるためのペプチド及び/またはタンパク質とともに製剤化される(例えば、国際公開第WO2012110636号及び第WO2013123298号)。いくつかの実施形態では、該ペプチドは、米国公開第US20130129726号、第US20130137644号及び第US20130164219号に記載のものであり得る。これら参考文献の各々は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、OTCポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含み、該ポリヌクレオチドは、コンジュゲートとして、担体もしくは標的化基に共有結合しているか、または、融合タンパク質(例えば、標的化基及び治療用タンパク質もしくはペプチドを有する)を一緒に産生する2つのコード領域を含む。該コンジュゲートは、該ナノ粒子を組織もしくは生物のニューロンに選択的に誘導するか、または血液脳関門の通過を支援するペプチドであり得る。
本発明は、反復投与された生物活性剤等の活性薬剤に対するABCの影響を低減するための化合物、組成物及びそれらの使用方法を提供する。容易に分かるように、投与された活性薬剤に対するABCの影響を低減または完全に除去することで、その半減期を延長し、ひいてはその有効性を高める。
LNPを含めた本明細書に提供する様々な化合物及び組成物は、インビボ投与に際してABC活性を促進しない。これらのLNPは、多くのアッセイ、例えば、これらに限定されないが、下記のもののいずれか、及び実施例の方法のサブセクションを含めた実施例のセクションに開示のアッセイのいずれかを通して特徴づけられ及び/または特定され得る。
本開示で提供するある特定の組成物は、B細胞、例えば、B1aもしくはB1b細胞(CD19+CD5+)及び/または従来のB細胞(CD19+CD5-)を活性化しない。B1a細胞、B1b細胞、または従来のB細胞の活性化は、多くの方法で測定される場合があり、そのいくつかを以下に示す。B細胞集団は、脾細胞または末梢血単球細胞(PBMC)の分画B細胞集団または未分画集団として提供され得る。後者の場合、該細胞集団を、最適なLNPと一定期間インキュベートし、その後、さらなる分析用に採取してもよい。代替的に、上清を採取して分析してもよい。
B1a細胞、B1b細胞、または従来のB細胞の活性化は、CD86等の後期活性化マーカーを含めたB細胞活性化マーカーの発現の増加として示され得る。例示的な非限定的なアッセイでは、未分画B細胞は、脾細胞集団として、またはPBMC集団として提供され、最適なLNPとともに特定の期間インキュベートされ、その後基準のB細胞マーカー、例えば、CD19について、及び活性化マーカー、例えば、CD86について染色され、例えば、フローサイトメトリーを用いて分析される。適切な陰性対照は、同じ集団を培地とともにインキュベートし、その後同じ染色及び可視化ステップを行うことを含む。該陰性対照と比較した試験集団のCD86発現の増加は、B細胞の活性化を示す。
B細胞活性化は、サイトカイン放出アッセイでも評価され得る。例えば、活性化は、目的のLNPによる曝露後の、IL-6及び/またはTNF-アルファ等のサイトカインの産生及び/または分泌を通して評価され得る。
目的のLNPを評価するため、及びさらにかかるLNPを特徴づけるため、LNPのB細胞との会合または結合を用いてもよい。会合/結合及び/または取り込み/内在化は、検出可能に標識化された、例えば、蛍光標識されたLNPを用い、様々なインキュベーション時間の後にB細胞内またはB細胞上のかかるLNPの位置を追跡することによって評価され得る。
本明細書では、治療薬等の薬剤を封入し得るLNPを、ABCを促進することなく対象に送達する方法も提供する。
本発明はさらに、LNPの投与と関連する用量制限毒性の基礎にある機序の解明に部分的に基づいている。かかる毒性には、急性か慢性にかかわらず、凝固障害、播種性血管内凝固症候群(DIC、消費性凝固障害とも呼ばれる)、及び/または血管内血栓が含まれ得る。ある場合には、LNPと関連する用量制限毒性は、急性期反応(APR)または補体活性化関連の仮性アレルギー(CARPA)である。
本明細書に記載のポリヌクレオチド、医薬組成物及び製剤は、OTC関連の疾患、障害または状態の治療及び/または予防のための調製、製造及び治療的使用に使用される。いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチド、組成物及び製剤は、オルニチントランスカルバミラーゼ欠損症(OTCD)を治療及び/または予防するために使用される。
本発明のある特定の態様は、対象、例えば、動物(例えば、げっ歯類、霊長類等)またはヒト対象におけるオルニチントランスカルバミラーゼ(OTC)タンパク質の発現レベル(複数可)の測定、特定及び/または観察を特徴とする。動物としては、正常、健康または野生型動物、ならびにオルニチントランスカルバミラーゼ欠損症(OTCD)の理解及びその治療に使用するための動物モデルが挙げられる。例示的な動物モデルとしては、げっ歯類モデル、例えば、OTCマウスとも呼ばれるOTC欠損マウスが挙げられる。
OTCD患者では、OTC酵素活性が、正常な生理的活性レベルと比較して低下している。本発明のさらなる態様は、対象、例えば、動物(例えば、げっ歯類、霊長類等)またはヒト対象におけるOTCタンパク質の活性レベル(複数可)(すなわち、酵素活性レベル(複数可))の測定、特定及び/または観察を特徴とする。活性レベルは、生体サンプル中の酵素活性レベルを特定するための当技術分野で承認されている任意の方法で測定または特定され得る。本明細書で使用される、「活性レベル」または「酵素活性レベル」という用語は、好ましくは、サンプルの体積、質量もしくは重量、またはサンプル中の総タンパク質当たりの酵素活性を意味する。例示的な実施形態では、該「活性レベル」または「酵素活性レベル」は、液体(例えば、体液、例えば、血清、血漿、尿等)の1ミリリットル当たりの単位を単位として記載されるか、または、サンプル中の組織の重量当たりの単位もしくはタンパク質(例えば、総タンパク質)の重量当たりの単位を単位として記載される。酵素活性の単位(「U」)は、単位時間当たりに加水分解される基質の重量または質量を単位として記載され得る。本発明のある特定の実施形態では、U/ml血漿またはU/mgタンパク質(組織)を単位として記載されるOTC活性を特徴とし、ここで、単位(「U」)は、1時間当たりに加水分解されるnmolの基質(すなわち、nmol/時間)を単位として記載される。
本発明のさらなる態様は、あるサンプルにおいて特定されるバイオマーカー、例えば、アンモニアまたはオロチン酸のレベル(複数可)を、例えば、同じ患者由来、別の患者由来、対照由来及び/または同じもしくは異なる時点由来の別のサンプルにおける同じもしくは別のバイオマーカーのレベル(例えば、参照レベル)と比較して、及び/または生理的レベル、及び/またはレベルの上昇、及び/または超生理学的なレベル、及び/または対照のレベルと比較して特定することを特徴とする。当業者であれば、バイオマーカーの生理的レベル、例えば、正常もしくは野生型動物、正常もしくは健常な対象等におけるレベル、特に、健康及び/または正常に機能する対象に特有のレベル(複数可)に詳しいであろう。本明細書で使用される、「レベルの上昇」という句は、正常もしくは野生型の前臨床動物において、または正常もしくは健常な対象、例えば、ヒト対象において通常見られるより多い量を意味する。本明細書で使用される、「超生理学的」という用語は、正常もしくは野生型の前臨床動物において、または正常もしくは健常な対象、例えば、ヒト対象において通常見られるより多い量を意味し、任意に、有意に上昇した生理反応を生成する。本明細書で使用される、「比較して(comparing)」または「比較して(compared to)」という用語は、好ましくは、例えば、バイオマーカー(複数可)のレベルの2つ以上の値の数学的比較を意味する。従って、当業者には、少なくとも2つのかかる値を互いに比較した場合、該値の1つが別の値または値の群より高いか、低いか、または同一であるかどうかが容易に分かるであろう。例えば、対照値と比較するという観点から、比較して(comparing)または比較して(comparison to)は、例えば、投与前の当該対象(例えば、OTCDの患者)または正常もしくは健常な対象における参照血液の血漿、血清、赤血球(RBC)及び/または組織(例えば、肝臓)のアンモニアレベルと、及び/または参照の血清、血漿、組織(例えば、肝臓)、及び/または尿のオロチン酸レベルと比較してであり得る。例えば、対照値と比較するという観点から、比較して(comparing)または比較して(comparison to)はまた、例えば、投与前の当該対象(例えば、OTCDの患者)または正常もしくは健常な対象における参照血液の血漿、血清、赤血球(RBC)及び/または組織(例えば、肝臓)のアンモニアGal-1-Pレベルと、及び/または参照の血清、血漿、組織(例えば、肝臓)、及び/または尿のオロチン酸レベルと比較してであり得る。
本発明のある特定の態様は、上記に開示のポリヌクレオチドのいずれかを含む組成物または製剤に関する。
(i)OTCポリペプチド(例えば、野生型配列、機能的断片、またはそのバリアント)をコードする配列最適化ヌクレオチド配列(例えば、ORF)を含むポリヌクレオチド(例えば、RNA、例えば、mRNA)であって、少なくとも1つの化学的に修飾された核酸塩基、例えば、N1-メチルプソイドウラシルまたは5-メトキシウラシルを含み(例えば、該ウラシルの少なくとも約25%、少なくとも約30%、少なくとも約40%、少なくとも約50%、少なくとも約60%、少なくとも約70%、少なくとも約80%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約99%、または100%はN1-メチルプソイドウラシルまたは5-メトキシウラシルである)、さらに、miRNA結合部位、例えば、miR-142に結合するmiRNA結合部位(例えば、miR-142-3pまたはmiR-142-5p結合部位)及び/またはmiR-126に結合するmiRNA結合部位(例えば、miR-126-3pまたはmiR-126-5p結合部位)を含む該ポリヌクレオチド、ならびに
(ii)例えば、式(I)を有する化合物、例えば、化合物1~232のいずれか、例えば、化合物II、式(III)、(IV)、(V)、もしくは(VI)を有する化合物、例えば、化合物233~342のいずれか、例えば、化合物VI、または式(VIII)を有する化合物、例えば、化合物419~428のいずれか、例えば、化合物I、またはそれらの任意の組み合わせを含む送達剤。いくつかの実施形態では、該送達剤は、化合物II、化合物VI、その塩もしくは立体異性体、またはそれらの任意の組み合わせを含む脂質ナノ粒子である。いくつかの実施形態では、該送達剤は、化合物II、DSPC、コレステロール、及び化合物IまたはPEG-DMGを、例えば、モル比約50:10:38.5:1.5で含む。いくつかの実施形態では、該送達剤は、化合物II、DSPC、コレステロール、及び化合物IまたはPEG-DMGを、例えば、モル比約47.5:10.5:39.0:3.0で含む。いくつかの実施形態では、該送達剤は、化合物VI、DSPC、コレステロール、及び化合物IまたはPEG-DMGを、例えば、モル比約50:10:38.5:1.5で含む。いくつかの実施形態では、該送達剤は、化合物VI、DSPC、コレステロール、及び化合物IまたはPEG-DMGを、例えば、モル比約47.5:10.5:39.0:3.0で含む。
上記の本発明のポリヌクレオチド、医薬組成物及び製剤は、治療効果のある結果をもたらす任意の経路で投与され得る。これらとしては、経腸(腸へ)、胃腸、硬膜外(epidural)(硬膜へ)、経口(口腔を介して)、経皮、硬膜外(peridural)、脳内(大脳へ)、脳室内(脳室へ)、皮膚上(皮膚への塗布)、皮内、(皮膚自体に)、皮下(皮膚の下)、経鼻投与(鼻を介して)、静脈内(静脈へ)、静脈内ボーラス、静脈点滴、動脈内(動脈へ)、筋肉内(筋肉へ)、心臓内(心臓へ)、骨内注入(骨髄へ)、髄腔内(脊髄へ)、腹腔内(腹膜への注入または注射)、膀胱内注入、硝子体内(目を通して)、海綿体内注射(病的腔へ)腔内(陰茎の基部へ)、膣内投与、子宮内、羊膜外投与、経皮(全身への分布のための無傷の皮膚を通した拡散)、経粘膜(粘膜を通した拡散)、経膣、吹送(吸引)、舌下、唇下、浣腸、点眼薬(結膜上)、点耳薬、耳介(耳の中または耳を介して)、頬側(頬に向けて)、結膜、皮膚、歯科(歯(複数可)へ)、電気浸透、子宮頸管内、洞内、気管内、体外、血液透析、浸透、間質内、腹腔内、羊水内、関節内、胆管内、気管支内、嚢内、軟骨内(軟骨の中)、尾内(馬尾内)、大槽内(大槽の中)、角膜内(角膜の中)、歯の歯冠内、冠動脈内(冠状動脈の中)、海綿体内(陰茎海綿体の拡張可能な空間内)、椎間板内(椎間板の中)、導管内(腺管の中)、十二指腸内(十二指腸の中)、硬膜内(硬膜の中または下)、表皮内(表皮へ)、食道内(食道へ)、胃内(胃の中)、歯肉内(歯肉の中)、回腸内(小腸の遠位部の中)、病変内(局所病変の中または局所病変に直接導入される)、管腔内(管の内腔の中)、リンパ内(リンパの中)、髄内(骨の髄腔の中)、髄膜内(髄膜の中)、眼内(眼の中)、卵巣内(卵巣の中)、心膜内(心膜の中)、胸膜内(胸膜の中)、前立腺内(前立腺の中)、肺内(肺またはその気管支の中)、洞内(副鼻腔または眼窩周囲洞の中)、脊髄内(脊柱の中)、滑膜内(関節の滑液腔の中)、腱内(腱の中)、精巣内(精巣の中)、髄腔内(脳脊髄軸の任意のレベルの脳脊髄液の中)、胸腔内(胸部の中)、管内(器官の細管の中)、鼓室内(中耳の中)、血管内(血管(複数可)の中)、心室内(心室の中)、イオン導入(可溶性塩のイオンが体の組織に移動する電流による)、洗浄法(開放創または体腔を浸すまたは洗い流すこと)、喉頭(喉頭に直接)、経鼻胃(鼻を通して胃の中)、閉鎖包帯法(局所経路投与後、当該領域を閉塞する包帯で覆う)、眼科(外眼部へ)、口腔咽頭(口腔及び咽頭へ直接)、非経口、経皮、関節周囲、硬膜周囲、神経周囲、歯周、直腸、呼吸器(局所的または全身的効果のために経口または経鼻で吸入することによる気道の中)、眼球後方(橋後方または眼球後方)、心筋内(心筋に入る)、軟部組織、くも膜下、結膜下、粘膜下、局所、経胎盤(胎盤を介してまたは横断して)、経気管(気管の壁を介して)、鼓室内(鼓室を横切ってまたは介して)、尿管(尿管へ)、尿道(尿道へ)、膣、仙骨ブロック、診断、神経ブロック、胆汁かん流、心臓かん流、フォトフェレシスまたは脊柱が挙げられるがこれらに限定されない。特定の実施形態では、組成物は、それらが血液脳関門、血管関門、または他の上皮関門を通過できるように投与され得る。いくつかの実施形態では、投与経路用の製剤は、少なくとも1つの不活性成分を含み得る。
a.キット
本発明は、特許請求にかかる本発明のヌクレオチドを都合よく及び/または効果的に使用するための様々なキットを提供する。通常、キットは、使用者が、対象(複数可)の複数の処置を実施できるようにするのに十分な、及び/または複数の実験を実施できるようにするのに十分な量及び/または数の成分を含む。
本発明は、目的のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを組み込むことができる装置を提供する。これらの装置は、それを必要とする対象、例えば、ヒト患者に対して、即座に送達することが可能な製剤にポリヌクレオチドを合成するための試薬を安定な製剤で含む。
カテーテル及びルーメンを用いる方法及び装置を使用して、本発明のポリヌクレオチドを、単回、複数回、または分割投与スケジュールで投与することができる。かかる方法及び装置は、国際出願公開第WO2013151666号に記載されており、その内容は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる。
電流を利用する方法及び装置を使用して、本発明のポリヌクレオチドを、本明細書に教示の単回、複数回、または分割投与レジメンに従って送達することができる。かかる方法及び装置は、国際出願公開第WO2013151666号に記載されており、その内容は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる。
本開示をさらに容易に理解できるようにするため、ある特定の用語を最初に定義する。本出願で使用される場合、本明細書で別段の定めのない限り、以下の用語の各々は、以下に示す意味を有するものとする。さらなる定義は、本出願を通して示される。
当業者は、日常の実験のみを用いて、本明細書に記載の本発明に従う特定の実施形態に対する多くの均等物を認識し、または確認することができるであろう。本発明の範囲は、上記の説明に限定されるものではなく、添付の特許請求の範囲に記載の通りである。
構築物の配列
「G5」は、当該mRNAにおけるすべてのウラシル(U)がN1-メチルプソイドウラシルで置き換えられることを意味する。
「G6」は、当該mRNAにおけるすべてのウラシル(U)が5-メトキシウラシルで置き換えられることを意味する。
A.三リン酸経路
キメラポリヌクレオチドの2つの領域または部分は、三リン酸化学種を用いて結合または連結することができる。本方法によれば、100ヌクレオチド以下の第一の領域または部分は、5’一リン酸及び末端3’desOHまたはブロックされたOHで化学的に合成することができる。該領域が80ヌクレオチドを超える場合、結合用に2本の鎖として合成することができる。
該キメラポリヌクレオチドは、一連の出発セグメントを用いて作製することができる。かかるセグメントは以下のものを含む:
(a)通常の3’OHを含む、キャップされ、保護された5’セグメント(SEG.1)
(b)ポリペプチドのコード領域を含むことができ、通常の3’OHを含む5’三リン酸セグメント(SEG.2)
(c)コルジセピンを含むか、または3’OHを含まないキメラポリヌクレオチドの3’末端(例えば、テール)用の5’一リン酸セグメント(SEG.3)。
cDNAの調製用のPCR手順は、Kapa Biosystems(Woburn,MA)製2xKAPA HIFI(商標)HotStart ReadyMixを用いて行うことができる。このシステムは、2xKAPA ReadyMix12.5μl、フォワードプライマー(10μM)0.75μl、リバースプライマー(10μM)0.75μl、鋳型cDNA-100ng、及びdH2O希釈25.0μlまでを含む。このPCR反応条件は次の通りであり得る:95℃で5分間及び98℃で20秒間を25サイクル、その後58℃で15秒間、その後72℃で45秒間、その後72℃で5分間、次に4℃で終了まで。
インビトロ転写反応では、均一に修飾されたポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを生成することができる。かかる均一に修飾されたポリヌクレオチドは、本発明のポリヌクレオチドの領域または部分を含み得る。投入するヌクレオチド三リン酸(NTP)ミックスは、天然及び非天然のNTPを用いて作製することができる。
1 鋳型cDNA-1.0μg
2 10×転写緩衝液(400mM トリス-HCl pH8.0、190mM MgCl2、50mM DTT、10mMスペルミジン)-2.0μl
3 カスタムNTP(各25mM)-7.2μl
4 RNase阻害剤-20U
5 T7RNAポリメラーゼ-3000U
6 dH2O-20μlまで。及び
7 37℃で3時間~5時間インキュベーション。
ポリヌクレオチドのキャッピングは、IVT RNA60μg~180μg及びdH2O 72μlまでを含む混合物を用いて行うことができる。この混合物を65℃で5分間インキュベートしてRNAを変性することができ、その後ただちに氷に移すことができる。
cDNAにポリTがない場合、最終産物のクリーンアップ前にポリAテール付加を実施する必要がある。これは、キャップされたIVT RNA(100μl)、RNase阻害剤(20U)、10xテール付加緩衝液(0.5M トリス-HCl(pH8.0)、2.5M NaCl、100mM MgCl2)(12.0μl)、20mM ATP(6.0μl)、ポリAポリメラーゼ(20U)、dH2Oを123.5μlまでを混合すること、及び37℃で30分間インキュベートすることにより行うことができる。ポリAテールがすでに転写物にある場合、このテール付加反応を省略して直接AmbionのMEGACLEAR(商標)キット(Austin,TX)でのクリーンアップに進むことができる(500μgまで)。ポリAポリメラーゼは、場合によっては、酵母で発現される組み換え酵素である。
ポリヌクレオチドの5’-キャッピングは、5’-グアノシンキャップ構造を生成する以下の化学的RNAキャップアナログを用いて、製造者のプロトコルに従い、インビトロ転写反応の過程で同時に完了することができる:3’-O-Me-m7G(5’)ppp(5’)G[ARCAキャップ]、G(5’)ppp(5’)A、G(5’)ppp(5’)G、m7G(5’)ppp(5’)A、m7G(5’)ppp(5’)G(New England BioLabs,Ipswich,MA)。修飾RNAの5’-キャッピングは、ワクシニアウイルスキャッピング酵素を用いて、転写後に「キャップ0」構造:m7G(5’)ppp(5’)G(New England BioLabs,Ipswich,MA)を生成して完了することができる。キャップ1構造は、m7G(5’)ppp(5’)G-2’-O-メチルを生成するワクシニアウイルスキャッピング酵素及び2’-Oメチル-トランスフェラーゼの両方を用いて生成することができる。キャップ2構造は、キャップ1構造から、5’末端から3番目のヌクレオチドを2’-Oメチル-トランスフェラーゼを用いて2’-O-メチル化することにより生成することができる。キャップ3構造は、キャップ2構造から、5’末端から3番目のヌクレオチドを2’-Oメチル-トランスフェラーゼを用いて2’-O-メチル化することにより生成することができる。酵素は組み換え供給源から得ることができる。
A.タンパク質発現アッセイ
本明細書に教示のキャップのいずれかを含む、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、等しい濃度で細胞にトランスフェクトすることができる。トランスフェクションの6、12、24、及び36時間後、培地に分泌されたタンパク質の量をELISAでアッセイすることができる。より高レベルのタンパク質を培地に分泌する合成ポリヌクレオチドは、翻訳的に能力がより高いキャップ構造の合成ポリヌクレオチドに相当する。
本明細書に教示のキャップのいずれかを含む、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、変性アガロース-尿素ゲル電気泳動またはHPLC分析を用いて純度を比較することができる。電気泳動による単一の統合されたバンドを有するポリヌクレオチドは、複数のバンドまたは筋状のバンドを有するポリヌクレオチドと比較して高純度の生成物に相当する。単一のHPLCピークを有する合成ポリヌクレオチドもまた、より高純度の生成物に相当する。より高効率のキャッピング反応により、より高純度のポリヌクレオチド集団が提供される。
本明細書に教示のキャップのいずれかを含む、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、複数の濃度で細胞にトランスフェクトすることができる。トランスフェクションの6、12、24、及び36時間後、培地に分泌された炎症性サイトカイン、例えば、TNF-アルファ及びINF-ベータの量をELISAでアッセイすることができる。より高レベルの炎症性サイトカインを培地に分泌するポリヌクレオチドは、免疫を活性化するキャップ構造を含むポリヌクレオチドに相当する。
本明細書に教示のキャップのいずれかを含む、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ヌクレアーゼ処理の後、LC-MSによってキャッピング反応効率を分析することができる。キャップされたポリヌクレオチドのヌクレアーゼ処理により、遊離のヌクレオチド及びLC-MSで検出可能なキャップされた5’-5-三リン酸キャップ構造の混合物が得られる。LC-MSスペクトルでのキャップされた生成物の量は、該反応物の合計ポリヌクレオチドのパーセントとして表すことができ、キャッピング反応効率に相当する。キャッピング反応効率がより高いキャップ構造は、LC-MSに従うより多量のキャップされた生成物を有する。
個々のポリヌクレオチド(200~400ng、体積20μl中)または逆転写PCR産物(200~400ng)を、非変性1.2%アガロースE-ゲル(Invitrogen,Carlsbad,CA)のウェルにロードし、12~15分間、製造業者のプロトコルに従って実行することができる。
修飾ポリヌクレオチドを含むTE緩衝液(1μl)をNanodropのUV吸光度の読み取りに使用し、化学合成またはインビトロ転写反応からの各ポリヌクレオチドの収量を定量することができる。
ポリヌクレオチドは、細胞への添加の前、インビトロ実験用に、ポリヌクレオチドをリピドイドと設定された比で混合することにより製剤化することができる。インビボ製剤は、全身の循環を促進するために追加の成分を加えることが必要な場合がある。これらリピドイドがインビボでの作用に適した粒子を形成する能力を調べるため、siRNA-リピドイド製剤に使用される標準的な製剤化プロセスを出発点として使用することができる。粒子の生成後、ポリヌクレオチドを加え、複合体と一体化させることができる。封入効率は、標準的な色素排除アッセイを用いて測定することができる。
A.エレクトロスプレーイオン化
対象に投与されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質を含み得る生体サンプルを調製し、1、2、3、または4つの質量分析装置を用いたエレクトロスプレーイオン化(ESI)用の製造業者のプロトコルに従って分析することができる。生体サンプルは、タンデム型ESI質量分析システムを用いて分析することもできる。
対象に投与される1つ以上のポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質を含み得る生体サンプルを調製し、マトリクス支援レーザー脱離/イオン化(MALDI)用の製造業者のプロトコルに従って分析することができる。
1つ以上のポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質を含み得る生体サンプルをトリプシン酵素で処理し、その中に含まれるタンパク質を消化することができる。得られたペプチドを液体クロマトグラフィー-質量分析-質量分析(LC/MS/MS)で分析することができる。これらのペプチドを質量分析計で断片化して診断パターンを得ることができ、これをコンピュータアルゴリズムによりタンパク質配列データベースに一致させることができる。消化サンプルを希釈し、所与のタンパク質について1ng以下の出発物質を得ることができる。単純緩衝液のバックグラウンド(例えば、水または揮発性塩)を含む生体サンプルは、直接の溶液中消化に適しており、より複雑なバックグラウンド(例えば、界面活性剤、非揮発性塩、グリセロール)は、サンプルの分析を容易にするためにさらなるクリーンアップステップを必要とする。
OTCポリペプチドをコードする配列最適化ポリヌクレオチド、すなわち、配列番号62を実施例1~11に記載の通りに合成し、特徴づけ、以下に記載の実施例用に調製する。
5’UTR:
GGGAAAUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACC(配列番号3)
3’UTR:
UGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCUAGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCUCCAUAAAGUAGGAAACACUACAGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC(配列番号4)
別の例示的な構築物では、5’UTR及び3’UTR配列は、以下である:
5’UTR:
GGGAAAUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACC(配列番号3)
3’UTR:
UGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC(配列番号150)
OTCの発現を、マウス及びヒト供給源の両方に由来する様々な細胞株で特徴づける。細胞を標準的な条件で培養し、その細胞を溶解緩衝液に入れることにより細胞抽出物を得る。比較のため、適切な対照も調製する。OTCの発現を分析するため、溶解物サンプルをこの試験細胞から調製し、ドデシル硫酸リチウムのサンプルローディング緩衝液と混合し、標準的なウェスタンブロット分析に供する。OTCの検出に使用する抗体は、市販のウサギポリクローナル抗OTC抗体(ab91418、Abcam)である。ロード対照の検出に使用する抗体は、抗シトラーゼ(anti-citrase)シンターゼ(ウサギポリクローナル、PA5-22126、Thermo-Fisher Scientific(登録商標))である。内因性OTCの局在を調べるため、免疫蛍光分析を細胞で行う。OTC発現は市販の抗OTCを用いて検出する。特定のオルガネラの位置は、既存の市販製品で検出することができる。例えば、ミトコンドリアはMitotrackerを用いて検出することができ、核は、DAPIで染色することができる。画像解析は、Zeiss ELYRAイメージングシステムで行われる。
HeLa細胞でのヒトOTCのインビトロ発現を測定するため、これらの細胞を12ウェルプレート(BD Biosciences,San Jose,USA)に、トランスフェクションの1日前に播種した。ヒトOTCまたはGFP対照を含むmRNA製剤を、ウェルあたり800ngのmRNA及び2μLのLipofectamin 2000を含むOPTI-MEM60μLを用いてトランスフェクトし、インキュベートした。
インビトロOTC活性のアッセイを、OTC配列を含むmRNAの導入後に外因的に発現されるOTCが活性であるかどうかを特定するために行った。
HeLa細胞を、ヒトOTCまたはマウスOTCを含むmRNA製剤でトランスフェクトした。細胞を、Lipofectamin2000でトランスフェクトし、上記の実施例14に記載の通りに溶解した。適切な対照もまた調製した。
外因性ヒト及びマウスOTCが機能することができるかどうかを評価するため、インビトロ活性アッセイを、トランスフェクトされたHeLa細胞溶解物を酵素活性の供給源として使用して行った。OTCは、カルバミルリン酸とオルニチン間のシトルリン及びリン酸を産生する反応を触媒する。OTC活性は、L-シトルリンの形成を検出する比色分析により測定した。細胞を実施例13に記載の通りに溶解した。アッセイは、50mMトリス酢酸、2mM EDTA、pH8.3にて25℃で行い、細胞タンパク質に対して正規化した。結果は、μmolシトルリン/gタンパク質/時間で表した。
本発明のポリヌクレオチドは、ヒトOTCをコードする連結されたヌクレオシドの少なくとも第一の領域を含むことができ、これは、上記実施例に従って構築、発現、及び特徴づけすることができる。同様に、このポリヌクレオチド配列は、活性が増加または低下したOTCの発現をもたらす1つ以上の突然変異を含み得る。さらに、OTCをコードするこのポリヌクレオチド配列は、キメラ融合タンパク質をコードする構築物の一部であり得る。
OTCタンパク質発現を、ヒトOTCをコードするmRNA(配列番号30~55及び61)または対照GFPをコードするmRNAでの細胞のトランスフェクション後のspfashマウスの初代肝細胞に関して特定した。これらOTCmRNA構築物のいくつかは、1-メチル-プソイドウリジン修飾であり、いくつかのOTCmRNA構築物は、5-メトキシウリジン修飾であった。細胞を6ウェルプレートに播種し、ウェル当たり1μgのmRNAでトランスフェクトした(ThermoFisher Lipofectamine MessengerMAX)。細胞をトランスフェクションの24時間後に実施例13に記載の通りに溶解し、OTCタンパク質発現をウサギポリクローナル抗OTC NBP1-87408(NovusBio)をキャピラリー電気泳動に用いて特定した。OTC活性は、実施例15に記載の通り、L-シトルリンの形成を検出する比色分析により測定した。
A.ナノ粒子組成物の製造
ナノ粒子は、混合プロセス、例えば、一方がポリヌクレオチドを含み、他方が脂質成分を有する2つの流体流のマイクロ流体工学及びT字形接合部での混合で作製することができる。
Zetasizer Nano ZS(Malvern Instruments Ltd,Malvern,Worcestershire,UK)を用いて、ナノ粒子組成物の粒径、多分散性指数(PDI)及びゼータ電位を、粒径の特定においては1×PBS、及びゼータ電位の特定においては15mMのPBSで特定することができる。
表6.ナノ粒子の例示的な製剤
OTCをコードするmRNAがOTC発現をインビボで促進する能力を評価するため、ヒトOTCをコードするmRNAを、OTCの欠損によって引き起こされるヒト尿素サイクル異常症の動物モデルに導入する。
0.5mg/kgもしくは1.0mg/kgのいずれかでのヒトOTCmRNA(構築物OTC-07(配列番号35)もしくはOTC-12(配列番号40)のいずれか)、または用量1mg/kgでのeGFPをコードする対照mRNAの単回投与を、spfash変異マウスに、尾静脈注射を介して静脈内に注射した。このmRNAは、マウスへの送達用に脂質ナノ粒子(化合物II)に製剤化した。尿のオロチン酸/クレアチニン分析用に、mRNA注射の48時間及び24時間前のマウスから尿を採取した。尿のオロチン酸/クレアチニンレベル用に、注射した各ヒトOTCmRNAに関して及び注射したeGFP対照に関して、投与の24時間、48時間、72時間、7日、14日、または21日後に、すべてのマウスの尿を採取した。図5は、ヒトOTCをコードするmRNA(構築物OTC-07またはOTC-12のいずれか)のspfashマウスへの単回投与が、このmRNAの注射後少なくとも21日間、実質的かつ持続的なオロチン酸レベルの低下につながったことを示す。
spfashマウスは、野生型マウスのOTC活性のおよそ5~10%を有し、尿のオロチン酸の上昇を示すが、正常な血漿アンモニアレベルを有する。ヒトでは、OTCDは、低タンパク食を維持することで管理することができる。従って、spfashマウスに高タンパク食を与え、これらのマウスでOTCDの症状が増悪するかどうかを調べた。図6A~Cは、高タンパク食がspfashマウスのOTCDを悪化させることを示す。図6Aは、高タンパク食を与えたspfashマウスが7日間にわたって10~20%の死亡率レベルを示したことを示す。図6Bは、血漿アンモニアレベルが、高タンパク食を与えてから7日目のspfashマウスで、野生型マウスの血漿アンモニアレベルに対して上昇したことを示す。図6Cは、高タンパク食中のspfashマウス(「HPD」、8日目では下のライン)が、対照マウス(8日目では上のライン)と比較して急激に体重を落としたことを示す。
化合物II/PEG-DMG LNPに製剤化したOTCmRNA(OTC-12、配列番号40)の生存率に対する有効性を評価するため、単回投与1ヶ月試験を、実施例10に記載の通り、高タンパク食を与えた10週齢のspfashマウスで行った。図10は、試験の概要を示す。マウスは、mRNAの注射の3日前(-3日目)に高タンパク食に切り替え、その後0日目にIVボーラス注射によって、1、0.5、0.2、もしくは0.05mg/kgのOTCmRNA、または1mg/kgのeGFPをコードする対照mRNAを投与した(n=14匹/群)。翌日、各群から4匹を屠殺し、OTCの発現及び活性を評価した。キャピラリー電気泳動を使用し、屠殺したマウスの肝臓ホモジネートにおけるOTCの発現をウサギポリクローナル抗OTC抗体(NBP1-87408(NovusBio))を用いて測定した。OTCの酵素活性は、実施例15に記載の通り、カルバミルリン酸とオルニチン基質からのL-シトルリン形成を測定する比色分析を用いて、肝臓のミトコンドリア抽出物で特定した。残りの各群の10匹は、高タンパク食を続け、経時的な生存率パーセントを特定し、mRNAの注射の31日後(31日目)に屠殺した。血漿は、mRNAの注射の1日前(-1日目)、ならびにmRNAの注射の3、10、17、24、及び31日後にマウスから採取し、市販のキット(Sigma)を用いて各時点で血漿アンモニアレベルを評価した。体重もまた、本試験を通して測定した。
mRNAが化合物II/PEG-DMG LNPの製剤でマウスに投与された場合、注射されたmRNAのそのマウスの肝細胞への取り込みは、低密度リポタンパク質(LDL)受容体(LDLR)の細胞表面発現に依存する。化合物II/PEG-DMG LNPによるmRNA製剤が、新生仔マウスへの投与に適合する範囲を特定するため、新生仔マウスの肝臓細胞ホモジネートにおけるLDLRの量を、成体マウス由来の肝臓細胞ホモジネートにおけるLDLRの量と比較した。キャピラリー電気泳動(CE)を、成体(3匹)と、1、4、及び7日齢の新生仔マウス(各群4匹)からの肝臓細胞ホモジネートで行った。LDLRの発現は、膜タンパク質ERP72に対して正規化した。図14は、LDLRの発現レベルが、新生仔マウスの各群と比較して、成体マウスの肝臓細胞で高かったことを示す。例えば、成体肝臓細胞におけるLDLRの発現は、1日齢の新生仔マウスにおけるLDLRの発現のおよそ8倍であった。
OTCmRNAの反復投与がOTCDの症状を改善することができるかどうかを評価するために反復投与試験を行う。spfashマウスに、0.25mg/kgもしくは0.5mg/kgのOTCmRNAのいずれか、または0.5mg/kgのeGFPをコードするmRNAを対照として、マウスを高タンパク食に切り替えて3日後から、尾静脈注射により(1群当たりn=12匹)、2週間おきに投与する。別の対照として、野生型マウスに、0.5mg/kgのeGFPをコードするmRNAを、高タンパク食を始めて3日後から、2週間おきに投与する(n=12匹)。試験を通して、生存率、体重、血漿アンモニアレベル、及び尿のオロチン酸レベルを評価する(生存率は毎日、体重は週2回、及び他のパラメータに関しては毎週)。試験の終了時に、肝臓のOTCの発現及び活性を特定する。さらに、臨床化学測定を末梢血の血漿で行い、抗OTC抗体及び抗PEG IgMのレベルを特定する。
マウスのSpf遺伝子のタモキシフェン誘導性ノックアウトを可能にするOTC変異型動物モデルを開発する。これら変異型マウスでは、タモキシフェンが投与されるまで、正常な内因性OTCタンパク質が発現される。タモキシフェンの投与により、Creが媒介する組み換えが誘導され、これがSpfのノックアウト及び肝臓を含めた特定の組織でのさらなる内因性OTCタンパク質の発現の防止につながる。ヒトOTCmRNAの発現及び活性を、実施例21及び22に記載の通り、この変異型マウスのバックグラウンドで調べる。
本試験では、OTCmRNA投与の影響を、タモキシフェンへの曝露後に肝臓のOTCがノックアウトされるように操作される実施例25に記載の誘導性動物モデルで調べる。このOTC表現型を誘導するため、腹腔内注射により75mg/kgのタモキシフェンでマウスを5日間、毎日処理する。動物をその後最大3週間観察し、血漿アンモニアレベルが上昇するかどうか、及びどの程度まで上昇するかを特定する。およそ3週間後、血漿アンモニアレベルは上昇することが予想される。この時点で、3群(1群当たり8匹の誘導性動物)に0.5mg/kgのeGFPmRNA(対照)、0.25mg/kgのOTCmRNA、または0.5mg/kgのOTCmRNAを尾静脈注射により投与する。別の対照として、8匹の野生型マウスの群に0.5mg/kgのeGFPmRNAを注射する。動物をその後最大4週間、生存率、体重変化、ならびに血漿アンモニアレベル及び尿のオロチン酸レベルの変化に関して観察する。
Claims (12)
- (i)5’UTR、
(ii)配列番号1のヒトオルニチントランスカルバミラーゼ(OTC)ポリペプチドをコードする核酸配列であって、配列番号14からなる核酸配列、
(iii)終止コドン、ならびに
(iv)3’UTR
を含むメッセンジャーRNA(mRNA)を含むポリヌクレオチド。 - 前記mRNAが、5’末端キャップを含む、請求項1に記載のポリヌクレオチド。
- 前記5’末端キャップが、キャップ0、キャップ1、ARCA、イノシン、N1-メチル-グアノシン、2’-フルオロ-グアノシン、7-デアザ-グアノシン、8-オキソ-グアノシン、2-アミノ-グアノシン、LNA-グアノシン、2-アジドグアノシン、キャップ2、キャップ4、5’メチルGキャップ、またはそのアナログを含む、請求項2に記載のポリヌクレオチド。
- 前記mRNAが、ポリA領域を含む、請求項1~3のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ポリA領域が、約10~約200、約20~約180、約50~約160、約70~約140、または約80~約120ヌクレオチドの長さを有する、請求項4に記載のポリヌクレオチド。
- 前記mRNAが、プソイドウラシル(ψ)、N1-メチルプソイドウラシル(m1ψ)、1-エチルプソイドウラシル、2-チオウラシル(s2U)、4’-チオウラシル、5-メチルシトシン、5-メチルウラシル、5-メトキシウラシル、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される少なくとも1つの化学的に修飾された核酸塩基を含む、請求項1~5のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ポリヌクレオチド中のすべてのウラシルが、N1-メチルプソイドウラシルである、請求項6に記載のポリヌクレオチド。
- 請求項1~7のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド、及び送達剤を含む、医薬組成物。
- オルニチントランスカルバミラーゼ欠損症(OTCD)の治療、予防、または発症及び/または進行の遅延の、それを必要とするヒト対象における方法における使用のための、請求項1~7のいずれか1項に記載のポリヌクレオチドまたは請求項8に記載の医薬組成物。
- 前記ポリヌクレオチドまたは前記医薬組成物が前記ヒト対象へ複数回投与される、請求項9に記載のポリヌクレオチドまたは医薬組成物。
- 前記ポリヌクレオチドまたは前記医薬組成物が、約1週間に1回、約2週間に1回、または約1ヶ月に1回、前記ヒト対象に投与される、請求項10に記載のポリヌクレオチドまたは医薬組成物。
- 前記ポリヌクレオチドまたは医薬組成物が静脈内投与される、請求項9~11のいずれか1項に記載のポリヌクレオチドまたは医薬組成物。
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MX2023012747A (es) * | 2021-04-27 | 2024-01-05 | Univ Pennsylvania | Composiciones y métodos para el direccionamiento genético in vivo mediado por nucleasas para el tratamiento de trastornos genéticos. |
EP4330404A1 (en) * | 2021-04-28 | 2024-03-06 | Genevant Sciences Gmbh | Mrna delivery constructs and methods of using the same |
WO2023140971A1 (en) * | 2022-01-21 | 2023-07-27 | The Trustees Of The University Ofpennsylvania | Methods for treatment of ornithine transcarbamylase (otc) deficiency |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2015518705A (ja) | 2012-04-02 | 2015-07-06 | モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドModerna Therapeutics,Inc. | ヒト疾患に関連する生物製剤およびタンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド |
WO2016118697A1 (en) | 2015-01-21 | 2016-07-28 | Phaserx, Inc. | Methods, compositions, and systems for delivering therapeutic and diagnostic agents into cells |
JP2017512466A (ja) | 2014-03-09 | 2017-05-25 | ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア | オルニチントランスカルバミラーゼ(otc)欠損症の処置において有用な組成物 |
JP2017537613A5 (ja) | 2015-11-01 | 2018-12-06 |
Family Cites Families (155)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB8613481D0 (en) | 1986-06-04 | 1986-07-09 | Diatech Ltd | Translation of mrna |
US5563250A (en) | 1987-12-02 | 1996-10-08 | Neorx Corporation | Cleavable conjugates for the delivery and release of agents in native form |
US5505931A (en) | 1993-03-04 | 1996-04-09 | The Dow Chemical Company | Acid cleavable compounds, their preparation and use as bifunctional acid-labile crosslinking agents |
JPH09505474A (ja) | 1993-11-26 | 1997-06-03 | ブリテイツシユ・テクノロジー・グループ・リミテツド | 翻訳エンハンサーdna |
US5681702A (en) | 1994-08-30 | 1997-10-28 | Chiron Corporation | Reduction of nonspecific hybridization by using novel base-pairing schemes |
US5795587A (en) | 1995-01-23 | 1998-08-18 | University Of Pittsburgh | Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production |
US5824497A (en) | 1995-02-10 | 1998-10-20 | Mcmaster University | High efficiency translation of mRNA molecules |
US6265389B1 (en) | 1995-08-31 | 2001-07-24 | Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. | Microencapsulation and sustained release of oligonucleotides |
US6004573A (en) | 1997-10-03 | 1999-12-21 | Macromed, Inc. | Biodegradable low molecular weight triblock poly(lactide-co-glycolide) polyethylene glycol copolymers having reverse thermal gelation properties |
US6165763A (en) | 1997-10-30 | 2000-12-26 | Smithkline Beecham Corporation | Ornithine carbamoyltransferase |
AU1819499A (en) | 1997-12-12 | 1999-06-28 | Samyang Corporation | Positively-charged poly{alpha-(omega-aminoalkyl)glycolic acid} for the delivery of a bioactive agent via tissue and cellular uptake |
US6517869B1 (en) | 1997-12-12 | 2003-02-11 | Expression Genetics, Inc. | Positively charged poly(alpha-(omega-aminoalkyl)lycolic acid) for the delivery of a bioactive agent via tissue and cellular uptake |
CA2317549C (en) | 1998-01-05 | 2006-04-11 | University Of Washington | Composition for enhancing transport through lipid-containing membranes, and uses thereof |
US6426086B1 (en) | 1998-02-03 | 2002-07-30 | The Regents Of The University Of California | pH-sensitive, serum-stable liposomes |
BR9911062A (pt) | 1998-05-20 | 2001-02-06 | Expression Genetics Inc | Veìculo de gene polimérico de poli-l-lisina enxertado por polietileno glicol de direcionamento de hepatócito |
US7091192B1 (en) | 1998-07-01 | 2006-08-15 | California Institute Of Technology | Linear cyclodextrin copolymers |
JP2002520435A (ja) | 1998-07-13 | 2002-07-09 | エクスプレション・ジェネティックス・インコーポレーテッド | 可溶性、生物分解性な遺伝子輸送キャリアーとしてのポリ−l−リジンのポリエステル類似体 |
EP1102785B1 (en) | 1999-06-07 | 2013-02-13 | Arrowhead Research Corporation | COMPOSITIONS FOR DRUG DELIVERY USING pH SENSITIVE MOLECULES |
US7098032B2 (en) | 2001-01-02 | 2006-08-29 | Mirus Bio Corporation | Compositions and methods for drug delivery using pH sensitive molecules |
US7737108B1 (en) | 2000-01-07 | 2010-06-15 | University Of Washington | Enhanced transport using membrane disruptive agents |
US6696038B1 (en) | 2000-09-14 | 2004-02-24 | Expression Genetics, Inc. | Cationic lipopolymer as biocompatible gene delivery agent |
US20040142474A1 (en) | 2000-09-14 | 2004-07-22 | Expression Genetics, Inc. | Novel cationic lipopolymer as a biocompatible gene delivery agent |
US6897196B1 (en) | 2001-02-07 | 2005-05-24 | The Regents Of The University Of California | pH sensitive lipids based on ortho ester linkers, composition and method |
US6652886B2 (en) | 2001-02-16 | 2003-11-25 | Expression Genetics | Biodegradable cationic copolymers of poly (alkylenimine) and poly (ethylene glycol) for the delivery of bioactive agents |
US6586524B2 (en) | 2001-07-19 | 2003-07-01 | Expression Genetics, Inc. | Cellular targeting poly(ethylene glycol)-grafted polymeric gene carrier |
AU2002319668A1 (en) | 2001-07-27 | 2003-02-17 | President And Fellows Of Harvard College | Laminar mixing apparatus and methods |
EP2428568B1 (en) | 2001-09-28 | 2018-04-25 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Microrna molecules |
US20050222064A1 (en) | 2002-02-20 | 2005-10-06 | Sirna Therapeutics, Inc. | Polycationic compositions for cellular delivery of polynucleotides |
WO2003092665A2 (en) | 2002-05-02 | 2003-11-13 | Massachusetts Eye And Ear Infirmary | Ocular drug delivery systems and use thereof |
WO2005007819A2 (en) | 2003-07-09 | 2005-01-27 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Charge-dynamic polymers and delivery of anionic compounds |
EP1648914A4 (en) | 2003-07-31 | 2009-12-16 | Regulus Therapeutics Inc | OLIGOMERIC COMPOUNDS AND COMPOSITIONS USEFUL FOR MODULATING SMALL NON-CODING RNA |
US8372966B2 (en) | 2003-12-19 | 2013-02-12 | University Of Cincinnati | Oligonucleotide decoys and methods of use |
AU2005329255B2 (en) | 2004-04-15 | 2010-09-30 | Chiasma, Inc. | Compositions capable of facilitating penetration across a biological barrier |
US8057821B2 (en) | 2004-11-03 | 2011-11-15 | Egen, Inc. | Biodegradable cross-linked cationic multi-block copolymers for gene delivery and methods of making thereof |
US8354476B2 (en) | 2004-12-10 | 2013-01-15 | Kala Pharmaceuticals, Inc. | Functionalized poly(ether-anhydride) block copolymers |
US7404969B2 (en) | 2005-02-14 | 2008-07-29 | Sirna Therapeutics, Inc. | Lipid nanoparticle based compositions and methods for the delivery of biologically active molecules |
WO2006110776A2 (en) | 2005-04-12 | 2006-10-19 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Polyethylene glycol cojugates of antimicrobial agents |
US8101385B2 (en) | 2005-06-30 | 2012-01-24 | Archemix Corp. | Materials and methods for the generation of transcripts comprising modified nucleotides |
KR20080025181A (ko) | 2005-06-30 | 2008-03-19 | 아케믹스 코포레이션 | 완전 2'-변형된 핵산 전사체를 생성하기 위한 물질 및 방법 |
ES2735531T3 (es) | 2005-08-23 | 2019-12-19 | Univ Pennsylvania | ARN que contiene nucleósidos modificados y métodos de uso del mismo |
JP5135220B2 (ja) | 2005-09-01 | 2013-02-06 | ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス ゲーエムベーハー アンド カンパニー カーゲー | 血清群c髄膜炎菌を含む複数ワクチン接種 |
DE102005046490A1 (de) | 2005-09-28 | 2007-03-29 | Johannes-Gutenberg-Universität Mainz | Modifikationen von RNA, die zu einer erhöhten Transkriptstabilität und Translationseffizienz führen |
AU2006325030B2 (en) | 2005-12-16 | 2012-07-26 | Cellectis | Cell penetrating peptide conjugates for delivering nucleic acids into cells |
WO2007097561A1 (en) | 2006-02-20 | 2007-08-30 | Ewha University - Industry Collaboration Foundation | Peptide having cell membrane penetrating activity |
CN103030801B (zh) | 2006-02-21 | 2015-07-22 | 尼克塔治疗公司 | 嵌段可降解聚合物及由其制备的轭合物 |
BRPI0715299A2 (pt) | 2006-10-05 | 2013-07-23 | The Johns Hopkins University | mÉtodo para preparar nanoparticulas polimÉricas, mÉtodod para preparar uma coposiÇço micelar, micelas polimÉricas reconstituÍveis, composiÇço polimÉrica bioativa de nanopartÍculas, mÉtodo para proporcionar um medicamento a um paciente e processo para preparar composiÇÕes de nanoparticulas polimÉricas |
DE102006051516A1 (de) | 2006-10-31 | 2008-05-08 | Curevac Gmbh | (Basen-)modifizierte RNA zur Expressionssteigerung eines Proteins |
CA2670749A1 (en) | 2006-12-05 | 2008-06-12 | Landec Corporation | Drug delivery |
CA2671925A1 (en) | 2006-12-21 | 2008-07-10 | Stryker Corporation | Sustained-release formulations comprising crystals, macromolecular gels, and particulate suspensions of biologic agents |
WO2008078180A2 (en) | 2006-12-22 | 2008-07-03 | Archemix Corp. | Materials and methods for the generation of transcripts comprising modified nucleotides |
CN101588819B (zh) | 2006-12-27 | 2012-11-21 | 尼克塔治疗公司 | 具有可释放的键合的ix因子部分-聚合物轭合物 |
JP2010519203A (ja) | 2007-02-16 | 2010-06-03 | メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション | 生物活性分子の活性を強化するための組成物及び方法 |
EP2136788B1 (en) | 2007-03-30 | 2011-10-26 | Bind Biosciences, Inc. | Cancer cell targeting using nanoparticles |
EP2134353B1 (en) | 2007-03-30 | 2016-11-16 | Helix Biopharma Corp. | Biphasic lipid-vesicle composition and method for treating cervical dysplasia by intravaginal delivery |
DK2494993T3 (en) | 2007-05-04 | 2018-11-12 | Marina Biotech Inc | Amino acid lipids and uses thereof |
WO2009030254A1 (en) | 2007-09-04 | 2009-03-12 | Curevac Gmbh | Complexes of rna and cationic peptides for transfection and for immunostimulation |
CA2715078C (en) | 2007-09-26 | 2019-07-23 | Intrexon Corporation | Synthetic 5'utrs, expression vectors, and methods for increasing transgene expression |
WO2009114854A1 (en) | 2008-03-14 | 2009-09-17 | Egen, Inc. | Biodegradable cross-linked branched poly (alkylene imines) |
WO2010005721A2 (en) | 2008-06-16 | 2010-01-14 | Bind Biosciences, Inc. | Drug loaded polymeric nanoparticles and methods of making and using same |
WO2009127230A1 (en) | 2008-04-16 | 2009-10-22 | Curevac Gmbh | MODIFIED (m)RNA FOR SUPPRESSING OR AVOIDING AN IMMUNOSTIMULATORY RESPONSE AND IMMUNOSUPPRESSIVE COMPOSITION |
PL215513B1 (pl) | 2008-06-06 | 2013-12-31 | Univ Warszawski | Nowe boranofosforanowe analogi dinukleotydów, ich zastosowanie, czasteczka RNA, sposób otrzymywania RNA oraz sposób otrzymywania peptydów lub bialka |
US20100104645A1 (en) | 2008-06-16 | 2010-04-29 | Bind Biosciences, Inc. | Methods for the preparation of targeting agent functionalized diblock copolymers for use in fabrication of therapeutic targeted nanoparticles |
US8613951B2 (en) | 2008-06-16 | 2013-12-24 | Bind Therapeutics, Inc. | Therapeutic polymeric nanoparticles with mTor inhibitors and methods of making and using same |
ES2721850T3 (es) | 2008-06-16 | 2019-08-05 | Pfizer | Nanopartículas poliméricas terapéuticas que comprenden alcaloides vinca y procedimientos de fabricación y uso de las mismas |
US20100087337A1 (en) | 2008-09-10 | 2010-04-08 | Bind Biosciences, Inc. | High Throughput Fabrication of Nanoparticles |
JP6087504B2 (ja) | 2008-11-07 | 2017-03-01 | マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー | アミノアルコールリピドイドおよびその使用 |
ES2776126T3 (es) | 2008-12-15 | 2020-07-29 | Pfizer | Nanopartículas de circulación prolongada para la liberación sostenida de agentes terapéuticos |
WO2010087791A1 (en) | 2009-01-27 | 2010-08-05 | Utc Power Corporation | Distributively cooled, integrated water-gas shift reactor and vaporizer |
CN102438978B (zh) | 2009-03-20 | 2017-02-22 | Clsn实验室股份有限公司 | 聚胺衍生物 |
EA201791744A3 (ru) | 2009-06-10 | 2018-07-31 | Арбутус Биофарма Корпорэйшн | Улучшенная липидная композиция |
CN107028886A (zh) | 2009-11-04 | 2017-08-11 | 不列颠哥伦比亚大学 | 含有核酸的脂质粒子及相关的方法 |
US9415113B2 (en) | 2009-11-18 | 2016-08-16 | University Of Washington | Targeting monomers and polymers having targeting blocks |
NZ700688A (en) | 2009-12-01 | 2016-02-26 | Shire Human Genetic Therapies | Delivery of mrna for the augmentation of proteins and enzymes in human genetic diseases |
WO2011069529A1 (en) | 2009-12-09 | 2011-06-16 | Curevac Gmbh | Mannose-containing solution for lyophilization, transfection and/or injection of nucleic acids |
WO2011084521A2 (en) | 2009-12-15 | 2011-07-14 | Bind Biosciences, Inc. | Therapeutic polymeric nanoparticles comprising epothilone and methods of making and using same |
ES2780156T3 (es) | 2009-12-15 | 2020-08-24 | Pfizer | Composiciones terapéuticas de nanopartículas poliméricas con alta temperatura de transición vítrea o copolímeros de alto peso molecular |
EA201290497A1 (ru) | 2009-12-15 | 2013-01-30 | Байнд Байосайенсиз, Инк. | Терапевтические полимерные наночастицы, включающие кортикостероиды, и способы получения таковых |
US20130231287A1 (en) | 2010-02-25 | 2013-09-05 | Parimala Nacharaju | Pegylated albumin polymers and uses thereof |
EP3391877A1 (en) | 2010-04-08 | 2018-10-24 | The Trustees of Princeton University | Preparation of lipid nanoparticles |
CN104959087B (zh) | 2010-04-09 | 2017-08-15 | 帕西拉制药有限公司 | 用于配制大直径合成膜囊泡的方法 |
US20110262491A1 (en) | 2010-04-12 | 2011-10-27 | Selecta Biosciences, Inc. | Emulsions and methods of making nanocarriers |
EP2579899B1 (en) | 2010-06-14 | 2017-03-15 | F. Hoffmann-La Roche AG | Cell-penetrating peptides and uses thereof |
US20130196948A1 (en) | 2010-06-25 | 2013-08-01 | Massachusetts Insitute Of Technology | Polymers for biomaterials and therapeutics |
RS63817B1 (sr) | 2010-07-06 | 2023-01-31 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Čestice za isporuku slične virionu za molekule samoreplicirajuće rnk |
EP2590626B1 (en) | 2010-07-06 | 2015-10-28 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Liposomes with lipids having an advantageous pka-value for rna delivery |
JP6025721B2 (ja) | 2010-07-06 | 2016-11-16 | ノバルティス アーゲー | カチオン性水中油型エマルジョン |
WO2012012772A2 (en) | 2010-07-22 | 2012-01-26 | The Johns Hopkins University | Drug eluting hydrogels for catheter delivery |
EP2449113B8 (en) | 2010-07-30 | 2015-11-25 | CureVac AG | Complexation of nucleic acids with disulfide-crosslinked cationic components for transfection and immunostimulation |
WO2012021516A2 (en) | 2010-08-09 | 2012-02-16 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Nanoparticle-oligonucletide hybrid structures and methods of use thereof |
JP2013536199A (ja) | 2010-08-19 | 2013-09-19 | ピーイージー バイオサイエンシーズ インコーポレイテッド | 相乗性生体分子−ポリマーコンジュゲート |
EP2605799A4 (en) | 2010-08-20 | 2014-02-26 | Cerulean Pharma Inc | CONJUGATES, PARTICLES, COMPOSITIONS AND RELATED METHODS |
PL2611467T3 (pl) | 2010-08-31 | 2022-08-16 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Małe liposomy do dostarczania rna kodującego immunogen |
EP4119155A1 (en) | 2010-08-31 | 2023-01-18 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Pegylated liposomes for delivery of immunogen-encoding rna |
BR112013004865A2 (pt) | 2010-08-31 | 2016-06-07 | Novartis Ag | lípidos adequados para entrega lipossomal de codificadores de proteínas rna |
WO2012039979A2 (en) | 2010-09-10 | 2012-03-29 | The Johns Hopkins University | Rapid diffusion of large polymeric nanoparticles in the mammalian brain |
JP5927194B2 (ja) | 2010-09-24 | 2016-06-01 | マリンクロッド エルエルシー | 治療ナノキャリアおよび/または診断ナノキャリアのターゲティングのためのアプタマーコンジュゲート |
EP2629760A4 (en) | 2010-10-22 | 2014-04-02 | Bind Therapeutics Inc | THERAPEUTIC NANOPARTICLES CONTAINING COPOLYMERS OF HIGH MOLECULAR WEIGHT |
US8853377B2 (en) | 2010-11-30 | 2014-10-07 | Shire Human Genetic Therapies, Inc. | mRNA for use in treatment of human genetic diseases |
EP2663548B1 (en) | 2011-01-11 | 2017-04-05 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Pegylated lipids and their use for drug delivery |
US20140066363A1 (en) | 2011-02-07 | 2014-03-06 | Arun K. Bhunia | Carbohydrate nanoparticles for prolonged efficacy of antimicrobial peptide |
EP2489371A1 (en) | 2011-02-18 | 2012-08-22 | Instituto Nacional de Investigacion y Tecnologia Agraria y Alimentaria | Carrier peptides for drug delivery |
US8846850B2 (en) | 2011-02-22 | 2014-09-30 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Amphiphilic macromolecules for nucleic acid delivery |
US8710200B2 (en) | 2011-03-31 | 2014-04-29 | Moderna Therapeutics, Inc. | Engineered nucleic acids encoding a modified erythropoietin and their expression |
JP6184945B2 (ja) | 2011-06-08 | 2017-08-23 | シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド | mRNA送達のための脂質ナノ粒子組成物および方法 |
AU2012267578B2 (en) | 2011-06-08 | 2017-04-20 | Translate Bio, Inc. | Cleavable lipids |
CN103930135A (zh) | 2011-08-31 | 2014-07-16 | 马林克罗特有限公司 | 使用h-膦酸酯的纳米颗粒peg修饰 |
WO2013039857A1 (en) | 2011-09-12 | 2013-03-21 | modeRNA Therapeutics | Engineered nucleic acids and methods of use thereof |
RS62993B1 (sr) | 2011-10-03 | 2022-03-31 | Modernatx Inc | Modifikovani nukleozidi, nukleotidi, i nukleinske kiseline, i njihove upotrebe |
EP2785326A2 (en) | 2011-11-29 | 2014-10-08 | The University of North Carolina at Chapel Hill | Geometrically engineered particles and methods for modulating macrophage or immune responses |
WO2013086322A1 (en) | 2011-12-07 | 2013-06-13 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Branched alkyl and cycloalkyl terminated biodegradable lipids for the delivery of active agents |
ES2921724T1 (es) | 2011-12-07 | 2022-08-31 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Lípidos biodegradables para la administración de agentes activos |
EP2787977A4 (en) | 2011-12-09 | 2015-05-06 | Univ California | LIPOSOMAL ACTIVE INVERTING |
WO2013106072A1 (en) | 2012-01-10 | 2013-07-18 | Sorbent Therapeutics, Inc. | Compositions comprising crosslinked cation-binding polymers and uses thereof |
WO2013106086A1 (en) | 2012-01-10 | 2013-07-18 | Sorbent Therapeutics, Inc. | Compositions comprising crosslinked cation-binding polymers and uses thereof |
WO2013106073A1 (en) | 2012-01-10 | 2013-07-18 | Sorbent Therapeutics, Inc. | Compositions comprising crosslinked cation-binding polymers and uses thereof |
WO2013105101A1 (en) | 2012-01-13 | 2013-07-18 | Department Of Biotechnology | Solid lipid nanoparticles entrapping hydrophilic/ amphiphilic drug and a process for preparing the same |
KR101811917B1 (ko) | 2012-01-19 | 2017-12-22 | 더 존스 홉킨스 유니버시티 | 점액 침투 강화를 나타내는 나노 입자 제형 |
WO2013116126A1 (en) | 2012-02-01 | 2013-08-08 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Novel low molecular weight, biodegradable cationic lipids for oligonucleotide delivery |
SG10201604810UA (en) | 2012-02-07 | 2016-08-30 | Global Bio Therapeutics Inc | Compartmentalized method of nucleic acid delivery and compositions and uses thereof |
WO2013123298A1 (en) | 2012-02-17 | 2013-08-22 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Nanoparticles for mitochondrial trafficking of agents |
US10398905B2 (en) | 2012-02-19 | 2019-09-03 | Nvigen, Inc. | Uses of porous nanostructure in delivery |
WO2013124867A1 (en) | 2012-02-21 | 2013-08-29 | Amrita Vishwa Vidyapeetham University | Polymer - polymer or polymer - protein core - shell nano medicine loaded with multiple drug molecules |
US9877919B2 (en) | 2012-03-29 | 2018-01-30 | Translate Bio, Inc. | Lipid-derived neutral nanoparticles |
BR112014024131A2 (pt) | 2012-03-29 | 2017-07-25 | Shire Human Genetic Therapies | lipídios catiônicos ionizáveis |
DE18200782T1 (de) | 2012-04-02 | 2021-10-21 | Modernatx, Inc. | Modifizierte polynukleotide zur herstellung von proteinen im zusammenhang mit erkrankungen beim menschen |
EA201492055A1 (ru) | 2012-06-08 | 2015-11-30 | Шир Хьюман Дженетик Терапис, Инк. | ИНГАЛЯЦИОННАЯ ДОСТАВКА мРНК В НЕЛЕГОЧНЫЕ КЛЕТКИ-МИШЕНИ |
EP3536787A1 (en) | 2012-06-08 | 2019-09-11 | Translate Bio, Inc. | Nuclease resistant polynucleotides and uses thereof |
WO2014028429A2 (en) | 2012-08-14 | 2014-02-20 | Moderna Therapeutics, Inc. | Enzymes and polymerases for the synthesis of rna |
EP2931319B1 (en) | 2012-12-13 | 2019-08-21 | ModernaTX, Inc. | Modified nucleic acid molecules and uses thereof |
WO2014164253A1 (en) | 2013-03-09 | 2014-10-09 | Moderna Therapeutics, Inc. | Heterologous untranslated regions for mrna |
ES2647832T3 (es) | 2013-03-14 | 2017-12-26 | Translate Bio, Inc. | Ácidos ribonucleicos con nucleótidos modificados con 4-tio y procedimientos relacionados |
ES2795249T3 (es) | 2013-03-15 | 2020-11-23 | Translate Bio Inc | Mejora sinérgica de la administración de ácidos nucleicos a través de formulaciones mezcladas |
CA3160394C (en) | 2013-07-30 | 2023-11-07 | Genevant Sciences Gmbh | Block copolymers and their conjugates or complexes with oligonucleotides |
MX366880B (es) | 2013-08-08 | 2019-07-29 | Global Bio Therapeutics Inc | Dispositivo de inyección para procedimientos mínimamente invasivos y usos del mismo. |
MX2016004249A (es) | 2013-10-03 | 2016-11-08 | Moderna Therapeutics Inc | Polinulcleotidos que codifican el receptor de lipoproteina de baja densidad. |
EP3060257B1 (en) | 2013-10-22 | 2021-02-24 | Translate Bio, Inc. | Lipid formulations for delivery of messenger rna |
US10821175B2 (en) | 2014-02-25 | 2020-11-03 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Lipid nanoparticle vaccine adjuvants and antigen delivery systems |
JP6728156B2 (ja) | 2014-11-02 | 2020-07-22 | アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッドArcturus Therapeutics,Inc. | メッセンジャーuna分子およびその使用 |
SI3350157T1 (sl) | 2015-09-17 | 2022-04-29 | Modernatx, Inc. | Sestave za doziranje terapevtskih sredstev v celice |
WO2017100551A1 (en) | 2015-12-09 | 2017-06-15 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | HETEROLOGOUS UTR SEQUENCES FOR ENHANCED mRNA EXPRESSION |
WO2017153936A1 (en) | 2016-03-10 | 2017-09-14 | Novartis Ag | Chemically modified messenger rna's |
RU2759737C2 (ru) * | 2016-03-31 | 2021-11-17 | Этрис Гмбх | Новые минимальные utr-последовательности |
ES2844180T3 (es) | 2016-04-08 | 2021-07-21 | Translate Bio Inc | Acido nucleico codificante multimérico y usos del mismo |
EP3452101A2 (en) * | 2016-05-04 | 2019-03-13 | CureVac AG | Rna encoding a therapeutic protein |
US20180126003A1 (en) | 2016-05-04 | 2018-05-10 | Curevac Ag | New targets for rna therapeutics |
MY201498A (en) | 2016-05-18 | 2024-02-27 | Modernatx Inc | Polynucleotides encoding citrin for the treatment of citrullinemia type 2 |
CN109312313A (zh) | 2016-06-13 | 2019-02-05 | 川斯勒佰尔公司 | 用于治疗鸟氨酸转氨甲酰酶缺乏症的信使rna疗法 |
US10576167B2 (en) | 2016-08-17 | 2020-03-03 | Factor Bioscience Inc. | Nucleic acid products and methods of administration thereof |
EP3538136A1 (en) | 2016-11-10 | 2019-09-18 | Translate Bio, Inc. | Subcutaneous delivery of messenger rna |
EP3562510A4 (en) | 2016-12-30 | 2021-01-06 | Genevant Sciences GmbH | BRANCHED PEG MOLECULES AND ASSOCIATED COMPOSITIONS AND PROCEDURES |
EP3565605A1 (en) * | 2017-01-03 | 2019-11-13 | ethris GmbH | Ornithine transcarbamylase coding polyribonucleotides and formulations thereof |
MA47605A (fr) | 2017-02-27 | 2020-01-01 | Translate Bio Inc | Procédés de purification d'arn messager |
MA47607A (fr) | 2017-02-27 | 2020-01-01 | Translate Bio Inc | Synthèse à grande échelle d'arn messager |
EP4008783A1 (en) | 2017-02-27 | 2022-06-08 | Translate Bio MA, Inc. | Methods for purification of messenger rna |
EP3592728A1 (en) | 2017-03-07 | 2020-01-15 | Translate Bio, Inc. | Polyanionic delivery of nucleic acids |
-
2018
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Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2015518705A (ja) | 2012-04-02 | 2015-07-06 | モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドModerna Therapeutics,Inc. | ヒト疾患に関連する生物製剤およびタンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド |
JP2017512466A (ja) | 2014-03-09 | 2017-05-25 | ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア | オルニチントランスカルバミラーゼ(otc)欠損症の処置において有用な組成物 |
WO2016118697A1 (en) | 2015-01-21 | 2016-07-28 | Phaserx, Inc. | Methods, compositions, and systems for delivering therapeutic and diagnostic agents into cells |
JP2017537613A5 (ja) | 2015-11-01 | 2018-12-06 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
Molecular Genetics and Metabolism, 2016, Vol.120, p.S31, #41 |
Molecular Therapy, 2017.05, Vol. 25, No 5, S1, p.191, #413 |
Molecular Therapy, 2018.03, Vol.26, No.3, pp.801-813 |
Also Published As
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---|---|
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