JP7398704B2 - オーキシンデグロンシステムにおけるタンパク質分解阻害剤及びその使用 - Google Patents
オーキシンデグロンシステムにおけるタンパク質分解阻害剤及びその使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7398704B2 JP7398704B2 JP2019557108A JP2019557108A JP7398704B2 JP 7398704 B2 JP7398704 B2 JP 7398704B2 JP 2019557108 A JP2019557108 A JP 2019557108A JP 2019557108 A JP2019557108 A JP 2019557108A JP 7398704 B2 JP7398704 B2 JP 7398704B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- group
- compound
- nucleic acid
- auxin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229930192334 Auxin Natural products 0.000 title claims description 147
- 239000002363 auxin Substances 0.000 title claims description 147
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 144
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title claims description 51
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 title description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 260
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 193
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 155
- 101150044379 TIR1 gene Proteins 0.000 claims description 85
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 82
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 82
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 82
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 claims description 78
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 63
- 108091068561 Aux/IAA family Proteins 0.000 claims description 30
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 29
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 29
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 claims description 20
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 claims description 20
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 claims description 10
- 239000003617 indole-3-acetic acid Substances 0.000 claims description 10
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 claims description 7
- KTHADMDGDNYQRX-UHFFFAOYSA-N 3-indoleacetic acid methyl ester Natural products C1=CC=C2C(CC(=O)OC)=CNC2=C1 KTHADMDGDNYQRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 claims description 6
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 claims description 6
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 claims description 6
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 claims description 5
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 claims description 5
- SMYMJHWAQXWPDB-UHFFFAOYSA-N (2,4,5-trichlorophenoxy)acetic acid Chemical compound OC(=O)COC1=CC(Cl)=C(Cl)C=C1Cl SMYMJHWAQXWPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- SODPIMGUZLOIPE-UHFFFAOYSA-N (4-chlorophenoxy)acetic acid Chemical compound OC(=O)COC1=CC=C(Cl)C=C1 SODPIMGUZLOIPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- XFNJVKMNNVCYEK-UHFFFAOYSA-N 1-naphthaleneacetamide Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)N)=CC=CC2=C1 XFNJVKMNNVCYEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003559 2,4,5-trichlorophenoxyacetic acid Substances 0.000 claims description 3
- OVSKIKFHRZPJSS-DOMIDYPGSA-N 2-(2,4-dichlorophenoxy)acetic acid Chemical compound OC(=O)[14CH2]OC1=CC=C(Cl)C=C1Cl OVSKIKFHRZPJSS-DOMIDYPGSA-N 0.000 claims 2
- WNCFBCKZRJDRKZ-UHFFFAOYSA-N 4-chloroindole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC(Cl)=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 WNCFBCKZRJDRKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 143
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 61
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 54
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 52
- HGUYAIJBXSQXGV-UHFFFAOYSA-N 4-(2,4-dimethylphenyl)-2-(1H-indol-3-yl)-4-oxobutanoic acid Chemical compound CC1=CC(C)=CC=C1C(=O)CC(C(O)=O)C1=CNC2=CC=CC=C12 HGUYAIJBXSQXGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 51
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 51
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 46
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 41
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 38
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 37
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 36
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 36
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 34
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 31
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 230000008569 process Effects 0.000 description 29
- CYRMSUTZVYGINF-UHFFFAOYSA-N trichlorofluoromethane Chemical compound FC(Cl)(Cl)Cl CYRMSUTZVYGINF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 25
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 24
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 21
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 21
- -1 etc. group Chemical group 0.000 description 20
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 20
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 19
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 15
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 14
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 14
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 description 14
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 13
- SJVMWLJNHPHNPT-UHFFFAOYSA-N 2-(1h-indol-3-yl)-4-oxo-4-phenylbutanoic acid Chemical compound C=1NC2=CC=CC=C2C=1C(C(=O)O)CC(=O)C1=CC=CC=C1 SJVMWLJNHPHNPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical group C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 12
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 12
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 11
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 11
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 10
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 10
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 10
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 10
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 9
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 9
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 9
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 9
- 125000000740 n-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 9
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 9
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 8
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 description 8
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 8
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 8
- SGKRLCUYIXIAHR-AKNGSSGZSA-N (4s,4ar,5s,5ar,6r,12ar)-4-(dimethylamino)-1,5,10,11,12a-pentahydroxy-6-methyl-3,12-dioxo-4a,5,5a,6-tetrahydro-4h-tetracene-2-carboxamide Chemical compound C1=CC=C2[C@H](C)[C@@H]([C@H](O)[C@@H]3[C@](C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@H]3N(C)C)(O)C3=O)C3=C(O)C2=C1O SGKRLCUYIXIAHR-AKNGSSGZSA-N 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 7
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K aluminium trichloride Chemical compound Cl[Al](Cl)Cl VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 4
- 101000702566 Homo sapiens Structural maintenance of chromosomes protein 6 Proteins 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N N-Pentanol Chemical compound CCCCCO AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100031030 Structural maintenance of chromosomes protein 6 Human genes 0.000 description 4
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 4
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 4
- 239000007810 chemical reaction solvent Substances 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 4
- 201000010897 colon adenocarcinoma Diseases 0.000 description 4
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 4
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 4
- 108060002430 dynein heavy chain Proteins 0.000 description 4
- 102000013035 dynein heavy chain Human genes 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 125000000816 ethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 4
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 4
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 4
- JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N indole-3-butyric acid Chemical compound C1=CC=C2C(CCCC(=O)O)=CNC2=C1 JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 4
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 4
- QPRQEDXDYOZYLA-UHFFFAOYSA-N 2-methylbutan-1-ol Chemical compound CCC(C)CO QPRQEDXDYOZYLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MSXVEPNJUHWQHW-UHFFFAOYSA-N 2-methylbutan-2-ol Chemical compound CCC(C)(C)O MSXVEPNJUHWQHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100031635 Cytoplasmic dynein 1 heavy chain 1 Human genes 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 102100030960 DNA replication licensing factor MCM2 Human genes 0.000 description 3
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000866326 Homo sapiens Cytoplasmic dynein 1 heavy chain 1 Proteins 0.000 description 3
- 101000583807 Homo sapiens DNA replication licensing factor MCM2 Proteins 0.000 description 3
- 101001018431 Homo sapiens DNA replication licensing factor MCM7 Proteins 0.000 description 3
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 3
- 101150015653 IAA1 gene Proteins 0.000 description 3
- 101150028662 IAA13 gene Proteins 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 3
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 3
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 235000002597 Solanum melongena Nutrition 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N butan-2-ol Chemical compound CCC(C)O BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 125000006165 cyclic alkyl group Chemical group 0.000 description 3
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 3
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 3
- 229960003722 doxycycline Drugs 0.000 description 3
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 3
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 3
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 1-Octanol Chemical compound CCCCCCCCO KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BBMCTIGTTCKYKF-UHFFFAOYSA-N 1-heptanol Chemical compound CCCCCCCO BBMCTIGTTCKYKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005971 1-naphthylacetic acid Substances 0.000 description 2
- 239000005631 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid Substances 0.000 description 2
- CETWDUZRCINIHU-UHFFFAOYSA-N 2-heptanol Chemical compound CCCCCC(C)O CETWDUZRCINIHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WFRBDWRZVBPBDO-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-2-pentanol Chemical compound CCCC(C)(C)O WFRBDWRZVBPBDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NGDNVOAEIVQRFH-UHFFFAOYSA-N 2-nonanol Chemical compound CCCCCCCC(C)O NGDNVOAEIVQRFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GYSCXPVAKHVAAY-UHFFFAOYSA-N 3-Nonanol Chemical compound CCCCCCC(O)CC GYSCXPVAKHVAAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MXLMTQWGSQIYOW-UHFFFAOYSA-N 3-methyl-2-butanol Chemical compound CC(C)C(C)O MXLMTQWGSQIYOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FRDAATYAJDYRNW-UHFFFAOYSA-N 3-methyl-3-pentanol Chemical compound CCC(C)(O)CC FRDAATYAJDYRNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YVBCULSIZWMTFY-UHFFFAOYSA-N 4-Heptanol Natural products CCCC(O)CCC YVBCULSIZWMTFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IIDAJRNSZSFFCB-UHFFFAOYSA-N 4-amino-5-methoxy-2-methylbenzenesulfonamide Chemical compound COC1=CC(S(N)(=O)=O)=C(C)C=C1N IIDAJRNSZSFFCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 description 2
- 108700030681 Arabidopsis AXR3 Proteins 0.000 description 2
- 241000219195 Arabidopsis thaliana Species 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 2
- XTHFKEDIFFGKHM-UHFFFAOYSA-N Dimethoxyethane Chemical compound COCCOC XTHFKEDIFFGKHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N Dimethylamine Chemical compound CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100029952 Double-strand-break repair protein rad21 homolog Human genes 0.000 description 2
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 2
- RZKSECIXORKHQS-UHFFFAOYSA-N Heptan-3-ol Chemical compound CCCCC(O)CC RZKSECIXORKHQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000584942 Homo sapiens Double-strand-break repair protein rad21 homolog Proteins 0.000 description 2
- 101150081360 IAA10 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150022751 IAA11 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150086834 IAA12 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150063006 IAA14 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150004288 IAA15 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150010342 IAA17 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150074419 IAA18 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150045384 IAA19 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150079901 IAA2 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150104469 IAA20 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150090690 IAA26 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150033847 IAA27 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150099854 IAA28 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150042902 IAA29 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150021289 IAA3 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150103208 IAA30 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150042378 IAA31 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150015625 IAA32 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150081626 IAA33 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150024933 IAA34 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150100504 IAA4 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150041787 IAA5 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150102463 IAA6 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150032688 IAA7 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150093327 IAA8 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150053283 IAA9 gene Proteins 0.000 description 2
- 238000006957 Michael reaction Methods 0.000 description 2
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical compound CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IXUOEGRSQCCEHB-UHFFFAOYSA-N Propyl-n-amyl-carbinol Natural products CCCCCC(O)CCC IXUOEGRSQCCEHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100038803 Somatotropin Human genes 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 102000006275 Ubiquitin-Protein Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108010083111 Ubiquitin-Protein Ligases Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-WFGJKAKNSA-N acetone d6 Chemical compound [2H]C([2H])([2H])C(=O)C([2H])([2H])[2H] CSCPPACGZOOCGX-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- NNBZCPXTIHJBJL-UHFFFAOYSA-N decalin Chemical compound C1CCCC2CCCCC21 NNBZCPXTIHJBJL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 125000001301 ethoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])O* 0.000 description 2
- 125000000031 ethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])N([H])[*] 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000010265 fast atom bombardment Methods 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 2
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 2
- ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N hexan-1-ol Chemical compound CCCCCCO ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QNVRIHYSUZMSGM-UHFFFAOYSA-N hexan-2-ol Chemical compound CCCCC(C)O QNVRIHYSUZMSGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZOCHHNOQQHDWHG-UHFFFAOYSA-N hexan-3-ol Chemical compound CCCC(O)CC ZOCHHNOQQHDWHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N isobutanol Chemical compound CC(C)CO ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- IVSZLXZYQVIEFR-UHFFFAOYSA-N m-xylene Chemical group CC1=CC=CC(C)=C1 IVSZLXZYQVIEFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 2
- 125000000250 methylamino group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- UAEPNZWRGJTJPN-UHFFFAOYSA-N methylcyclohexane Chemical compound CC1CCCCC1 UAEPNZWRGJTJPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 2
- ZWRUINPWMLAQRD-UHFFFAOYSA-N nonan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCO ZWRUINPWMLAQRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SJWFXCIHNDVPSH-UHFFFAOYSA-N octan-2-ol Chemical compound CCCCCCC(C)O SJWFXCIHNDVPSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 2
- 125000004817 pentamethylene group Chemical group [H]C([H])([*:2])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[*:1] 0.000 description 2
- JYVLIDXNZAXMDK-UHFFFAOYSA-N pentan-2-ol Chemical compound CCCC(C)O JYVLIDXNZAXMDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N pentan-3-ol Chemical compound CCC(O)CC AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001226 reprecipitation Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 125000003548 sec-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical class O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000383 tetramethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- NMRPBPVERJPACX-UHFFFAOYSA-N (3S)-octan-3-ol Natural products CCCCCC(O)CC NMRPBPVERJPACX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WFDMCLINTAGONZ-AATRIKPKSA-N (e)-4-(2,4-dimethylphenyl)-4-oxobut-2-enoic acid Chemical compound CC1=CC=C(C(=O)\C=C\C(O)=O)C(C)=C1 WFDMCLINTAGONZ-AATRIKPKSA-N 0.000 description 1
- CMSWGWOQRTZZAS-AATRIKPKSA-N (e)-4-(4-fluorophenyl)-4-oxobut-2-enoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(=O)C1=CC=C(F)C=C1 CMSWGWOQRTZZAS-AATRIKPKSA-N 0.000 description 1
- GETTZEONDQJALK-UHFFFAOYSA-N (trifluoromethyl)benzene Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC=C1 GETTZEONDQJALK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BLRHMMGNCXNXJL-UHFFFAOYSA-N 1-methylindole Chemical compound C1=CC=C2N(C)C=CC2=C1 BLRHMMGNCXNXJL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001637 1-naphthyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C(*)=C([H])C([H])=C([H])C2=C1[H] 0.000 description 1
- PHSORZZLPKIHMG-UHFFFAOYSA-N 2,2-diethylpentan-1-ol Chemical compound CCCC(CC)(CC)CO PHSORZZLPKIHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HMSVXZJWPVIVIV-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethylpentan-3-ol Chemical compound CCC(O)C(C)(C)C HMSVXZJWPVIVIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKXVARYIKDXAEO-UHFFFAOYSA-N 2,3,3-trimethylbutan-2-ol Chemical compound CC(C)(C)C(C)(C)O OKXVARYIKDXAEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IKECULIHBUCAKR-UHFFFAOYSA-N 2,3-dimethylbutan-2-ol Chemical compound CC(C)C(C)(C)O IKECULIHBUCAKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRSIFCHKXFKNME-UHFFFAOYSA-N 2,3-dimethylpentan-2-ol Chemical compound CCC(C)C(C)(C)O YRSIFCHKXFKNME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RFZHJHSNHYIRNE-UHFFFAOYSA-N 2,3-dimethylpentan-3-ol Chemical compound CCC(C)(O)C(C)C RFZHJHSNHYIRNE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HXKWSTRRCHTUEC-UHFFFAOYSA-N 2,4-Dichlorophenoxyaceticacid Chemical compound OC(=O)C(Cl)OC1=CC=C(Cl)C=C1 HXKWSTRRCHTUEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FMLSQAUAAGVTJO-UHFFFAOYSA-N 2,4-dimethylpentan-2-ol Chemical compound CC(C)CC(C)(C)O FMLSQAUAAGVTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BAYAKMPRFGNNFW-UHFFFAOYSA-N 2,4-dimethylpentan-3-ol Chemical compound CC(C)C(O)C(C)C BAYAKMPRFGNNFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MRUDNSFOFOQZDA-UHFFFAOYSA-N 2,6-dichlorobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=C(Cl)C=CC=C1Cl MRUDNSFOFOQZDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JNEQKENJJDOEMI-UHFFFAOYSA-N 2-(3-chloro-1h-indol-2-yl)acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(Cl)=C(CC(=O)O)NC2=C1 JNEQKENJJDOEMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WOFPPJOZXUTRAU-UHFFFAOYSA-N 2-Ethyl-1-hexanol Natural products CCCCC(O)CCC WOFPPJOZXUTRAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNVRIHYSUZMSGM-LURJTMIESA-N 2-Hexanol Natural products CCCC[C@H](C)O QNVRIHYSUZMSGM-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- TZYRSLHNPKPEFV-UHFFFAOYSA-N 2-ethyl-1-butanol Chemical compound CCC(CC)CO TZYRSLHNPKPEFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YIWUKEYIRIRTPP-UHFFFAOYSA-N 2-ethylhexan-1-ol Chemical compound CCCCC(CC)CO YIWUKEYIRIRTPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004493 2-methylbut-1-yl group Chemical group CC(C*)CC 0.000 description 1
- 125000003229 2-methylhexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000005916 2-methylpentyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001622 2-naphthyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C([H])=C(*)C([H])=C([H])C2=C1[H] 0.000 description 1
- RZCJYMOBWVJQGV-UHFFFAOYSA-N 2-naphthyloxyacetic acid Chemical compound C1=CC=CC2=CC(OCC(=O)O)=CC=C21 RZCJYMOBWVJQGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DUXCSEISVMREAX-UHFFFAOYSA-N 3,3-dimethylbutan-1-ol Chemical compound CC(C)(C)CCO DUXCSEISVMREAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BODRLKRKPXBDBN-UHFFFAOYSA-N 3,5,5-Trimethyl-1-hexanol Chemical compound OCCC(C)CC(C)(C)C BODRLKRKPXBDBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 3-Amino-1-methyl-5H-pyrido[4,3-b]indole Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C=C(N)N=C2C LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XKIRHOWVQWCYBT-UHFFFAOYSA-N 3-ethylpentan-3-ol Chemical compound CCC(O)(CC)CC XKIRHOWVQWCYBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZXNBBWHRUSXUFZ-UHFFFAOYSA-N 3-methyl-2-pentanol Chemical compound CCC(C)C(C)O ZXNBBWHRUSXUFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003469 3-methylhexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000005917 3-methylpentyl group Chemical group 0.000 description 1
- IXUOEGRSQCCEHB-SECBINFHSA-N 4-Nonanol Natural products CCCCC[C@H](O)CCC IXUOEGRSQCCEHB-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 1
- WVYWICLMDOOCFB-UHFFFAOYSA-N 4-methyl-2-pentanol Chemical compound CC(C)CC(C)O WVYWICLMDOOCFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PCWGTDULNUVNBN-UHFFFAOYSA-N 4-methylpentan-1-ol Chemical compound CC(C)CCCO PCWGTDULNUVNBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YYFFEPUCAKVRJX-UHFFFAOYSA-N 6-fluoro-1h-indole Chemical compound FC1=CC=C2C=CNC2=C1 YYFFEPUCAKVRJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QDTDKYHPHANITQ-UHFFFAOYSA-N 7-methyloctan-1-ol Chemical compound CC(C)CCCCCCO QDTDKYHPHANITQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical group [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150104033 AFB1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150041168 AFB2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150105285 AFB3 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 210000002237 B-cell of pancreatic islet Anatomy 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical group [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HXQPUEQDBSPXTE-UHFFFAOYSA-N Diisobutylcarbinol Chemical compound CC(C)CC(O)CC(C)C HXQPUEQDBSPXTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000019205 Dynactin Complex Human genes 0.000 description 1
- 108010012830 Dynactin Complex Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 102000018700 F-Box Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010066805 F-Box Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101150037255 FBX14 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000003547 Friedel-Crafts alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 101100226596 Gallus gallus FABP gene Proteins 0.000 description 1
- 101000609762 Gallus gallus Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 102100039289 Glial fibrillary acidic protein Human genes 0.000 description 1
- 101710193519 Glial fibrillary acidic protein Proteins 0.000 description 1
- 101000988834 Homo sapiens Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101001050288 Homo sapiens Transcription factor Jun Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 102000018251 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 102100029098 Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 101150068457 IAA16 gene Proteins 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 208000005016 Intestinal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 1
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 1
- 102100031413 L-dopachrome tautomerase Human genes 0.000 description 1
- 101710093778 L-dopachrome tautomerase Proteins 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 1
- 102000008730 Nestin Human genes 0.000 description 1
- 108010088225 Nestin Proteins 0.000 description 1
- 102000008763 Neurofilament Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010088373 Neurofilament Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000195888 Physcomitrella Species 0.000 description 1
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 description 1
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 description 1
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 1
- 102000004245 Proteasome Endopeptidase Complex Human genes 0.000 description 1
- 108090000708 Proteasome Endopeptidase Complex Proteins 0.000 description 1
- 102000036366 SCF complex Human genes 0.000 description 1
- 108091007047 SCF complex Proteins 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101150081494 TMPO gene Proteins 0.000 description 1
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 102100023132 Transcription factor Jun Human genes 0.000 description 1
- 241000219793 Trifolium Species 0.000 description 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- 108091000117 Tyrosine 3-Monooxygenase Proteins 0.000 description 1
- 102000048218 Tyrosine 3-monooxygenases Human genes 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 108010051583 Ventricular Myosins Proteins 0.000 description 1
- 240000003307 Zinnia violacea Species 0.000 description 1
- WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N acetyl chloride Chemical compound CC(Cl)=O WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012346 acetyl chloride Substances 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 150000001252 acrylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 210000000233 bronchiolar non-ciliated Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- QGJOPFRUJISHPQ-NJFSPNSNSA-N carbon disulfide-14c Chemical compound S=[14C]=S QGJOPFRUJISHPQ-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 201000007455 central nervous system cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 108010045512 cohesins Proteins 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001995 cyclobutyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004976 cyclobutylene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000582 cycloheptyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004977 cycloheptylene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004956 cyclohexylene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000006547 cyclononyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000640 cyclooctyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004978 cyclooctylene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004979 cyclopentylene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000006317 cyclopropyl amino group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004980 cyclopropylene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000131 cyclopropyloxy group Chemical group C1(CC1)O* 0.000 description 1
- SBZXBUIDTXKZTM-UHFFFAOYSA-N diglyme Chemical compound COCCOCCOC SBZXBUIDTXKZTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000002147 dimethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009454 functional inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000005046 glial fibrillary acidic protein Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000002064 heart cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- GNOIPBMMFNIUFM-UHFFFAOYSA-N hexamethylphosphoric triamide Chemical compound CN(C)P(=O)(N(C)C)N(C)C GNOIPBMMFNIUFM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 125000003454 indenyl group Chemical group C1(C=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 201000002313 intestinal cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000004491 isohexyl group Chemical group C(CCC(C)C)* 0.000 description 1
- 125000001972 isopentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- JMMWKPVZQRWMSS-UHFFFAOYSA-N isopropanol acetate Natural products CC(C)OC(C)=O JMMWKPVZQRWMSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003253 isopropoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(O*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940011051 isopropyl acetate Drugs 0.000 description 1
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N isovaleric acid Chemical compound CC(C)CC(O)=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229910052743 krypton Inorganic materials 0.000 description 1
- DNNSSWSSYDEUBZ-UHFFFAOYSA-N krypton atom Chemical compound [Kr] DNNSSWSSYDEUBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 229910001507 metal halide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000005309 metal halides Chemical class 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- GYNNXHKOJHMOHS-UHFFFAOYSA-N methyl-cycloheptane Natural products CC1CCCCCC1 GYNNXHKOJHMOHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- PYLWMHQQBFSUBP-UHFFFAOYSA-N monofluorobenzene Chemical compound FC1=CC=CC=C1 PYLWMHQQBFSUBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QQZOPKMRPOGIEB-UHFFFAOYSA-N n-butyl methyl ketone Natural products CCCCC(C)=O QQZOPKMRPOGIEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003136 n-heptyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001280 n-hexyl group Chemical group C(CCCCC)* 0.000 description 1
- 125000003506 n-propoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 229910052754 neon Inorganic materials 0.000 description 1
- GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N neon atom Chemical compound [Ne] GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KPSSIOMAKSHJJG-UHFFFAOYSA-N neopentyl alcohol Chemical compound CC(C)(C)CO KPSSIOMAKSHJJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001971 neopentyl group Chemical group [H]C([*])([H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000005055 nestin Anatomy 0.000 description 1
- 210000005044 neurofilament Anatomy 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- LYGJENNIWJXYER-UHFFFAOYSA-N nitromethane Chemical compound C[N+]([O-])=O LYGJENNIWJXYER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FCBBRODPXVPZAH-UHFFFAOYSA-N nonan-5-ol Chemical compound CCCCC(O)CCCC FCBBRODPXVPZAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 108090000629 orphan nuclear receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000004164 orphan nuclear receptors Human genes 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 125000003538 pentan-3-yl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229960004624 perflexane Drugs 0.000 description 1
- ZJIJAJXFLBMLCK-UHFFFAOYSA-N perfluorohexane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F ZJIJAJXFLBMLCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003279 phenylacetic acid Substances 0.000 description 1
- 229960003424 phenylacetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- DFOXKPDFWGNLJU-UHFFFAOYSA-N pinacolyl alcohol Chemical compound CC(O)C(C)(C)C DFOXKPDFWGNLJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 125000005575 polycyclic aromatic hydrocarbon group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 108010042121 probasin Proteins 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- RUOJZAUFBMNUDX-UHFFFAOYSA-N propylene carbonate Chemical compound CC1COC(=O)O1 RUOJZAUFBMNUDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 230000004853 protein function Effects 0.000 description 1
- 239000012474 protein marker Substances 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M sodium benzoate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000010234 sodium benzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004299 sodium benzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003885 sodium benzoate Drugs 0.000 description 1
- 229940001607 sodium bisulfite Drugs 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 235000010268 sodium methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- HXJUTPCZVOIRIF-UHFFFAOYSA-N sulfolane Chemical compound O=S1(=O)CCCC1 HXJUTPCZVOIRIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001973 tert-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940072172 tetracycline antibiotic Drugs 0.000 description 1
- 229940040944 tetracyclines Drugs 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003258 trimethylene group Chemical group [H]C([H])([*:2])C([H])([H])C([H])([H])[*:1] 0.000 description 1
- 230000034512 ubiquitination Effects 0.000 description 1
- 238000010798 ubiquitination Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 108090000195 villin Proteins 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052724 xenon Inorganic materials 0.000 description 1
- FHNFHKCVQCLJFQ-UHFFFAOYSA-N xenon atom Chemical compound [Xe] FHNFHKCVQCLJFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
- A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
- A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
- A61K31/405—Indole-alkanecarboxylic acids; Derivatives thereof, e.g. tryptophan, indomethacin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
- C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
- C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
- C07D209/18—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/99—Enzyme inactivation by chemical treatment
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Indole Compounds (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
本願は、2017年11月28日に、日本に出願された特願2017-228310号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
また、厳密かつ自在にタンパク質の分解制御が可能なオーキシンデグロンシステムのキット及び目的タンパク質分解制御方法を提供する。また、オーキシンデグロンシステムにおけるタンパク質の分解阻害に有用な新規化合物を提供する。
本発明の第1態様に係るオーキシンデグロンシステムにおけるタンパク質分解阻害剤は、TIR1オーキシン受容体拮抗剤を含有する。
上記態様のオーキシンデグロンシステムのキット及び目的タンパク質分解制御方法によれば、厳密かつ自在にタンパク質の分解制御が可能である。
また、上記態様の化合物は、オーキシンデグロンシステムにおけるタンパク質の分解阻害に有用である。
本発明の一実施形態に係るオーキシンデグロンシステムにおけるタンパク質分解阻害剤は、TIR1オーキシン受容体拮抗剤を含有する。
本実施形態のタンパク質分解阻害剤に含まれるTIR1オーキシン受容体拮抗剤は、TIR1ファミリータンパク質への結合能を要するが、分解誘導ペプチド(特に、mAID)への結合能を有さないものである。これにより、TIR1ファミリータンパク質と、分解誘導ペプチド(特に、mAID)との結合を阻害することができる。本発明者らは、TIR1-オーキシン類-分解誘導ペプチドの結合構造から、TIR1オーキシン受容体拮抗剤となり得る化合物を分子設計し、オーキシン類の誘導体が有効であることを見出した。
IAA誘導体としては、例えば、下記一般式(I)で示される化合物(以下、「化合物(I)」と略記する)等が挙げられる。
一般式(I)中、Arは置換基を有してもよいアリール基である。
一般式(I)中、Y11は、単結合、又は、エステル結合、エーテル結合、アミド結合及びカルボニル基からなる群から選択される1種以上を含んでもよい炭素数1~10のアルキレン基である。
Y11がエステル結合、エーテル結合、アミド結合及びカルボニル基からなる群から選択される1種以上を含む炭素数1~10のアルキレン基である場合、例えば、下記一般式(II)で示される基(以下、「基(II)」と略記することがある)等が挙げられる。
基(II)において、n111及びn112は、それぞれ独立して、0~10の整数である。また、1≦n111+n112≦10である。また、中でも、n111が0以上2以下であり、n112が1以下上3以下であることが好ましく、n111が0以上1以下であり、n112が1以下上2以下であることがより好ましく、n111が0であり、n112が1であることがさらに好ましい。
Y111は、エステル結合(-C(=O)-O-)、エーテル結合(-O-)、アミド結合(-N(H)-C(=O)-)及びカルボニル基(-C(=O)-)からなる群から選択される1種以上である。中でも、Y111は、カルボニル基(-C(=O)-)であることが好ましい。
一般式(I)中、A11、A12、A13及びA14は、それぞれ独立に、CH又は窒素原子である。また、A11、A12、A13及びA14が窒素原子である場合、n11は0である。
一般式(I)中、R11は、インドール環様構造を形成するベンゼン環の置換基である。また、R11は、ハロゲン原子又は炭素数1~10のアルキル基である。また、n11が2~4の整数である場合、n11個のR11は互いに同一であってもよく、異なっていてもよい。中でも、合成が容易であることから、R11を2つ以上有する場合、R11は同一であることが好ましい。
一般式(I)中、R12及びR14は、それぞれ独立に、水素原子又は炭素数1~10のアルキル基である。R12及びR14は、同じであってもよく、異なっていてもよい。
一般式(I)中、R13は、水素原子、ハロゲン原子又は炭素数1~10のアルキル基である。
一般式(I)中、n11は、置換基R11の数を示し、0~4の整数である。例えば、A11、A12、A13及びA14が窒素原子である場合、n11は0である。また、例えば、A11、A12、A13及びA14からなる群の1つ以上がCHである場合、nは0~4である。中でも、n11は0~3であることが好ましく、0~2であることがより好ましく、0又は1がさらに好ましい。
一般式(I-1)中、R15は、ベンゼン環の置換基である。R15は、ハロゲン原子又は炭素数1~10のアルキル基である。また、n12が2~5の整数である場合、n12個のR15は互いに同一であってもよく、異なっていてもよい。中でも、合成が容易であることから、R15を2つ以上有する場合、R15は同一であることが好ましい。
一般式(I-1)中、n12は置換基R15の数を示し、0~5の整数である。中でも、合成が容易であり、タンパク質分解阻害効果が優れることから、n12は0~4であることが好ましく、0~3であることがより好ましく、0~2がさらに好ましい。また、化合物(I-1)において、n12が2である場合、置換基R15は置換基R15同士がメタ位となるように配置されていることが好ましい。
化合物(I-1)でより好ましいものとしては、例えば、R11及びR15がフッ素原子、塩素原子、メチル基又はエチル基であり、R12及びR14が水素原子、メチル基又はエチル基であり、n11及びn12が0~2であるもの等が挙げられる。
R14としては、上記一般式(I)中のR14と同じである。中でも、R14は、水素原子、メチル基、エチル基、n-プロピル基、n-ブチル基又はn-ペンチル基であることが好ましく、水素原子、メチル基、エチル基又はn-プロピル基であることがより好ましく、水素原子、メチル基又はエチル基であることがさらに好ましい。
R15a及びR15bとしては、それぞれ独立に、水素原子、ハロゲン原子又は炭素数1~6のアルキル基である。R15a及びR15bは同一であってもよく、異なっていてもよい。
化合物(I-2)でより好ましいものとしては、例えば、R14が水素原子又はメチル基であり、R15aが水素原子、塩素原子又はメチル基であり、R15bが水素原子又はメチル基であるもの等が挙げられる。
下記式(I-1-1)で示される化合物(以下、「化合物(I-1-1)」と略記する)(PEO-IAA);
下記式(I-1-2)で示される化合物(以下、「化合物(I-1-2)」と略記する)(Auxinole);
下記式(I-1-3)で示される化合物(以下、「化合物(I-1-3」と略記する)(4F-PEO-IAA);
下記式(I-1-4)で示される化合物(以下、「化合物(I-1-4)」と略記する)(PEO-IAA ethyl ester);
下記式(I-1-5)で示される化合物(以下、「化合物(I-1-5)」と略記する)(N-methyl-PEO-IAA);
下記式(I-1-6)で示される化合物(以下、「化合物(I-1-6)」と略記する)(4Cl-PEO-IAA);
下記式(I-1-7)で示される化合物(以下、「化合物(I-1-7)」と略記する)(4’-Methyl-PEO-IAA);
下記式(I-1-8)で示される化合物(以下、「化合物(I-1-8)」と略記する)(6’-F-Auxinole)
化合物(I)は、例えば、Ar及びリンカーであるY11の種類に応じて、公知の方法を用いて、単環又は多環式芳香族炭化水素を二環式化合物に反応させることで製造できる。より具体的には、以下のとおりである。
化合物(I)のうち、化合物(I-1)は、R14が水素原子である場合、例えば、以下の工程1)及び工程2)を備える製造方法により製造できる。
1)下記一般式(I-1a)で示される化合物(以下、「化合物(I-1a)」と略記する)と、無水マレイン酸とを反応させて、下記一般式(I-1b)で示される化合物(以下、「化合物(I-1b)」と略記する)を得る工程(以下、「化合物(I-1b)製造工程」と略記する);
2)化合物(I-1b)と、下記一般式(I-1c)で示される化合物(以下、「化合物(I-1c)」と略記する)とを反応させて、下記一般式(I-1)-1aで示される化合物(以下、「化合物((I-1)-1a)」と略記する)を得る工程(以下、「化合物((I-1)-1a)製造工程」と略記する)
前記化合物(I-1b)製造工程では、化合物(I-1a)と無水マレイン酸とをフリーデル-クラフツ(Friedel-Crafts)アルキル化反応により反応させて、化合物(I-1b)を得る。
化合物(I-1a)は置換基を有してもよいベンゼンであり、公知化合物である。
化合物(I-1a)において、R16はベンゼン環中の置換基を示す。また、R16はハロゲン原子又は炭素数1~10のアルキル基である。また、R16は無水マレイン酸との反応前のR15であり、R15及びR16は同一である。
また、化合物(I-1a)において、n13が2である場合、置換基R16は置換基R16同士がメタ位となるように配置されていることが好ましい。
化合物(I-1b)は置換基を有してもよいフェニル基を側鎖に有するアクリル酸誘導体であり、公知化合物である。
化合物(I-1b)において、R15はベンゼン環の置換基である。また、R15は、ハロゲン原子又は炭素数1~10のアルキル基である。また、化合物(I-1b)において、R15は化合物(I-1a)中の無水マレイン酸と反応後のR16であり、R15及びR16は同一である。
化合物(I-1b)製造工程においては、触媒を用いて反応を行うことが好ましい。
前記触媒は特に限定されないが、例えば、塩化鉄(III)、塩化アルミニウム等の金属ハロゲン化物が挙げられる。
前記触媒は、1種を単独で用いてもよいし、2種以上を併用してもよく、2種以上を併用する場合、それらの組み合わせ及び比率は任意に選択できる。
前記触媒の使用量は、化合物(I-1a)の使用量の1倍モル量以上3倍モル量以下であることが好ましい。
前記非プロトン性溶媒は特に限定されないが、例えば、ペルフルオロヘキサン、α,α,α-トリフルオロトルエン、ペンタン、ヘキサン、シクロヘキサン、メチルシクロヘキサン、デカヒドロナフタレン、四塩化炭素、ジオキサン、フルオロトリクロロメタン、ベンゼン、トルエン、トリエチルアミン、二硫化炭素、ジイソプロピルエーテル、ジエチルエーテル、tert-ブチルメチルエーテル、クロロホルム、酢酸エチル、2-メトキシエチルエーテル、1,2-ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、塩化メチレン、ピリジン、2-ブタノン、アセトン、ヘキサメチルホスホルアミド、N-メチルピロリジノン、ニトロメタン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、スルホラン、ジメチルスルホキシド、ジイソプロピルエチルアミン、酢酸イソプロピル、ジクロロメタン、ジメチルアミン、N,N-ジメチルホルムアミド、炭酸プロピレン等が挙げられる。
前記溶媒は、1種を単独で用いてもよいし、2種以上を併用してもよく、2種以上を併用する場合、それらの組み合わせ及び比率は任意に選択できる。
前記溶媒の使用量は、化合物(I-1a)の使用量の10倍モル量以上200倍モル量以下であることが好ましい。
前記不活性ガスは特に限定されないが、例えば、窒素、ヘリウム、ネオン、アルゴン、クリプトン、キセノン等が挙げられる。
前記不活性ガスは、1種を単独で用いてもよいし、2種以上を併用してもよく、2種以上を併用する場合、それらの組み合わせ及び比率は任意に選択できる。
化合物(I-1b)製造工程において、反応時間は、30分以上10時間以下であることが好ましく、1時間以上5時間以下であることがより好ましい。
化合物(I-1b)製造工程においては、反応終了後、化合物(I-1b)を取り出さずに、次工程で用いてもよいが、目的物である化合物((I-1)-1a)の収率が向上する点から、化合物(I-1b)を上述の方法で取り出すことが好ましい。
前記化合物((I-1)-1a)製造工程においては、化合物(I-1b)と化合物(I-1c)とをマイケル(Michael)反応により反応させて、化合物((I-1)-1a)を得る。
化合物(I-1c)は、インドール環様構造を有する化合物であり、公知化合物である。
化合物(I-1c)において、R11はインドール環様構造を形成するベンゼン環の置換基である。また、R11は、ハロゲン原子又は炭素数1~10のアルキル基である。R11を2つ以上有する場合、R11は同一であってもよく、異なっていてもよい。中でも、合成が容易であることから、R11を2つ以上有する場合、R11は同一であることが好ましい。
化合物((I-1)-1a)製造工程においては、非プロトン性溶媒を反応溶媒として用いることが好ましい。前記非プロトン性溶媒としては、上述の「化合物(I-1b)製造工程」において例示されたものと同様のものが挙げられる。
前記溶媒の使用量は、化合物(I-1b)の使用量の10倍モル量以上200倍モル量以下であることが好ましい。
化合物((I-1)-1a)製造工程においては、反応時間は、30分以上10時間以下であることが好ましく、1時間以上5時間以下であることがより好ましい。
化合物(I)のうち、化合物(I-1)は、R14が炭素数1~10のアルキル基である場合、例えば、以下の工程1)、工程2)及び工程3)を備える製造方法により製造できる。
1)化合物(I-1a)と、無水マレイン酸とを反応させて、化合物(I-1b)を得る工程(化合物(I-1b)製造工程)
2)化合物(I-1b)と、1価のアルコールとを反応させて、下記一般式(I-1d)で示される化合物(以下、「化合物(I-1d)」と略記する)を得る工程(以下、「化合物(I-1d)製造工程」と略記する)
3)化合物(I-1d)と、化合物(I-1c)とを反応させて、下記一般式(I-1)-1bで示される化合物(以下、「化合物((I-1)-1b)」と略記する)を得る工程(以下、「化合物((I-1)-1b)製造工程」と略記する)
前記化合物(I-1d)製造工程では、化合物(I-1b)と1価のアルコールとを脱水縮合により反応させて、化合物(I-1d)を得る。
1価のアルコールは公知化合物である。
1価のアルコールとしては、炭素数1~10のアルキル基を有する1価のアルコールであること好ましい。前記1価のアルコールとして具体的には、例えば、メタノール、エタノール、1-プロパノール、2-プロパノール、1-ブタノール、2-ブタノール、2-メチル-1-プロパノール、2-メチル-2-プロパノール、1-ペンタノール、2-ペンタノール、3-ペンタノール、2-メチル-1-ブタノール、3-メチル-1-ブタノール、2-メチル-2-ブタノール、3-メチル-2-ブタノール、2-エチル-1-ブタノール、2,2-ジメチル-1-プロパノール、1-ヘキサノール、2-ヘキサノール、3-ヘキサノール、4-メチル-1-ペンタノール、4-メチル-2-ペンタノール、2-メチル-2-ペンタノール、3-メチル-2-ペンタノール、3-メチル-3-ペンタノール、2,3-ジメチル-2-ブタノール、3,3-ジメチル-1-ブタノール、3,3-ジメチル-2-ブタノール、1-ヘプタノール、2-ヘプタノール、3-ヘプタノール、4-ヘプタノール、3-エチル-3-ペンタノール、2,4-ジメチル-3-ペンタノール、2,4-ジメチル-2-ペンタノール、2,3-ジメチル-2-ペンタノール、2,3-ジメチル-3-ペンタノール、2,2-ジメチル-3-ペンタノール、2,3,3-トリメチル-2-ブタノール、2,3,3-トリメチル-3-ペンタノール、2,2-ジエチル-1-ペンタノール、1-オクタノール、2-オクタノール、7-メチル-1-オクタノール、2-エチル-1-ヘキサノール、3,5,5-トリメチル-1-ヘキサノール、1-ノナノール、2-ノナノール、3-ノナノール、4-ノナノール、5-ノナノール、2,6-ジメチル-4-ヘプタノール、3,5-ジメチル-4-ヘプタノール1-デカノール等が挙げられ、これらに限定されない。中でも、1価のアルコールとしては、メタノール、エタノール、1-プロパノール、1-ブタノール又は1-ペンタノールが好ましく、メタノール、エタノール又は1-プロパノールがより好ましく、メタノール又はエタノールがさらに好ましい。
化合物(I-1d)は公知化合物である。
化合物(I-1d)において、R15はベンゼン環の置換基である。ハロゲン原子又は炭素数1~10のアルキル基である。また、R15は、ハロゲン原子又は炭素数1~10のアルキル基である。R15を2つ以上有する場合、R15は同一であってもよく、異なっていてもよい。中でも、合成が容易であることから、R15を2つ以上有する場合、R15は同一であることが好ましい。
化合物(I-1d)製造工程においては、縮合剤を用いて反応を行うことが好ましい。
前記縮合剤は特に限定されないが、例えば、N,N-ジメチル-4-アミノピリジン(N,N-dimethyl-4-aminopyridine;DMAP)等が挙げられる。
前記縮合剤は1種を単独で用いてもよいし、2種以上を併用してもよく、2種以上を併用する場合、それらの組み合わせ及び比率は任意に選択できる。
前記縮合剤の使用量は、化合物(I-1b)の使用量の0.05モル量以上0.2倍モル量以下であることが好ましい。
前記溶媒の使用量は、化合物(I-1b)の使用量の10倍モル量以上200倍モル量以下であることが好ましい。
化合物(I-1d)製造工程においては、反応時間は、30分以上10時間以下であることが好ましく、1時間以上5時間以下であることがより好ましい。
前記化合物((I-1)-1b)製造工程においては、化合物(I-1d)と化合物(I-1c)とをマイケル(Michael)反応により反応させて、化合物((I-1)-1b)を得る。
化合物((I-1)-1b)製造工程においては、非プロトン性溶媒を反応溶媒として用いることが好ましい。前記非プロトン性溶媒としては、上述の「化合物(I-1b)製造工程」において例示されたものと同様のものが挙げられる。
前記溶媒の使用量は、化合物(I-1d)の使用量の10倍モル量以上100倍モル量以下であることが好ましい。
化合物((I-1)-1b)製造工程においては、反応時間は、30分以上10時間以下であることが好ましく、1時間以上5時間以下であることがより好ましい。
本実施形態のタンパク質分解阻害剤は、上述のTIR1オーキシン受容体拮抗剤の他に、タンパク質分解阻害効果を妨げない範囲で、添加剤等を含んでいてもよい。
<第1実施形態>
本発明の一実施形態に係るオーキシンデグロンシステムのキットは、上記実施形態に係るオーキシンデグロンシステムにおけるタンパク質分解阻害剤と、TIR1ファミリータンパク質をコードする第一の核酸と、少なくともmAIDをコードする第二の核酸と、を備える。
本実施形態のキットが備える上記タンパク質分解阻害剤以外の構成成分について、以下に詳細を説明する。
第一の核酸はTIR1ファミリータンパク質をコードする核酸である。
本実施形態のキットにおいて、TIR1ファミリータンパク質をコードする第一の核酸の5’末端に、該第一の核酸の転写を制御するプロモーター配列が作動可能に連結されていることが好ましい。これによって、より確実にTIR1ファミリータンパク質を発現できる。
誘導性プロモーターとしては、特別な限定はなく、例えば、化学的誘導性プロモーター、熱ショック誘導性プロモーター、電磁気的誘導性プロモーター、核レセプター誘導性プロモーター、ホルモン誘導性プロモーター等が挙げられる。中でも、本実施形態の細胞において、TIR1ファミリータンパク質をコードする第一の核酸に作動可能に連結された誘導性プロモーターとしては、化学的誘導性プロモーターであることが好ましい。
ウイルス性プロモーターとしては、特別な限定はなく、例えば、サイトメガロウイルス(CMV)プロモーター(CMV極初期プロモーター(例えば、特許文献8参照。)、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)由来のプロモーター(例えば、HIV長末端リピート等)、ラウス肉腫ウイルス(RSV)プロモーター(例えば、RSV長末端リピート等) 、マウス乳腫瘍ウイルス(MMTV)プロモーター、HSVプロモーター(Lap2プロモーター又はヘルペスチミジンキナーゼプロモーター等)(例えば、非特許文献4参照) 、SV40又はエプスタイン バール ウイルス由来のプロモーター、アデノ随伴ウイルスプロモーター(例えば、p5プロモーター等)等が挙げられる。
ハウスキーピング遺伝子プロモーターとしては、特別な限定はなく、例えば、GAPDH(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)遺伝子プロモーター、β-アクチン遺伝子プロモーター、β2-マイクログロブリン遺伝子プロモーター、HPRT 1(hypoxanthine phosphoribosyltransferase 1)遺伝子プロモーター等が挙げられる。
組織特異的プロモーターとしては、特別な限定はなく、例えば、黒色腫細胞又はメラニン細胞の場合は、チロシナーゼプロモーター又はTRP2プロモーター;乳房細胞又は乳癌の場合は、MMTVプロモーター又はWAPプロモーター;腸細胞又は腸癌の場合は、ビリンプロモーター又はFABPプロモーター;膵細胞の場合は、PDXプロモーター;膵ベータ細胞の場合は、RIPプロモーター;ケラチノサイトの場合は、ケラチンプロモーター;前立腺上皮の場合は、プロバシンプロモーター;中枢神経系(CNS)の細胞又は中枢神経系の癌の場合は、ネスチンプロモーター又はGFAPプロモーター;ニューロンの場合は、チロシンヒドロキシラーゼ、S100プロモーター又は神経フィラメントプロモーター;非特許文献5に記載される、膵臓特異的プロモーター;肺癌の場合は、クラーラ細胞分泌タンパク質プロモーター;心細胞の場合は、αミオシンプロモーター等が挙げられる。
本実施形態のキットにおいて、TIR1ファミリータンパク質をコードする第一の核酸及び上流に作動可能に連結されたプロモーター配列は、ベクターに挿入された形であってもよい。
第二の核酸はAux/IAAファミリータンパク質の全長又は部分タンパク質をコードする核酸である。中でも、第二の核酸は、Aux/IAAファミリータンパク質のうち、mAIDの全長又は部分タンパク質をコードする核酸を含むことが好ましい。
本実施形態のキットにおいて、第二の核酸の5’末端に、該第二の核酸の転写を制御するプロモーター配列が作動可能に連結されていることが好ましい。これによって、より確実に分解誘導ペプチドを発現できる。前記プロモーターとしては、上述の「第一の核酸」において例示されたものと同様のものが挙げられる。
本実施形態のキットにおいて、第二の核酸及び上流に作動可能に連結されたプロモーター配列は、ベクターに挿入された形であってもよい。前記ベクターとしては、上述の「第一の核酸」において例示されたものと同様のものが挙げられる。
本発明の一実施形態に係るオーキシンデグロンシステムのキットは、上記実施形態に係るオーキシンデグロンシステムにおけるタンパク質分解阻害剤と、TIR1ファミリータンパク質をコードする第一の核酸、並びに、目的タンパク質をコードする第三の核酸及び前記第三の核酸の上流又は下流に連結されたAux/IAAファミリータンパク質の全長又は部分タンパク質をコードする第二の核酸を含む真核細胞と、を備える。
本実施形態のキットが備える上記タンパク質分解阻害剤以外の構成成分について、以下に詳細を説明する。
本実施形態のキットが備える真核細胞としては、株化された真核動物由来細胞やES細胞、iPS細胞であればよい。真核細胞として具体的には、例えば、株化されたヒト由来細胞、株化されたマウス由来細胞、株化されたニワトリ由来細胞、ヒトES細胞、マウスES細胞、ヒトiPS細胞、マウスiPS細胞等が挙げられる。中でも、ヒトHCT116細胞、ヒトHT1080細胞、ヒトNALM6細胞、ヒトES細胞、ヒトiPS細胞、マウスES細胞、マウスiPS細胞又はニワトリDT40細胞が好ましく、HCT116細胞、ヒトES細胞、ヒトiPS細胞、マウスES細胞又はマウスiPS細胞がより好ましい。
本発明の一実施形態に係る目的タンパク質分解制御方法は、上記実施形態に係るオーキシンデグロンシステムにおけるタンパク質分解阻害剤を用いた方法である。
より具体的には、例えば、上述の真核細胞にオーキシン類を添加して、発現した目的タンパク質の分解を誘導した後、前記オーキシン類を除去して、上述のタンパク質分解阻害剤を添加し、新たに発現した目的タンパク質の分解を抑制する方法等によって検討することができる。又は、例えば、上述の細胞にオーキシン類を添加して、発現した目的タンパク質の分解を誘導した後、上述のタンパク質分解阻害剤を添加して、新たに発現した目的タンパク質の分解を抑制する方法等によって検討することができる。
工程1aでは、特定の構成を含む真核細胞を含む第一の培養物に、上記オーキシンデグロンシステムにおけるタンパク質分解阻害剤、及びテトラサイクリンを添加する。工程1aに用いられる真核細胞は、TIR1ファミリータンパク質をコードする第一の核酸、及び前記第一の核酸の5’末端に、作動可能に連結されているテトラサイクリン誘導性プロモーターと、目的タンパク質及びAux/IAAファミリータンパク質の全長又は部分タンパク質を含む融合タンパク質をコードする第四の核酸と、を含む。これにより、前記TIR1ファミリータンパク質、及び前記融合タンパク質を発現した真核細胞を含む第二の培養物を得る。
工程2aでは、前記第二の培養物から、前記タンパク質分解阻害剤を除去し、オーキシン類を添加し、前記目的タンパク質を分解させた第三の培養物を得る。
工程1bでは、特定の構成を含む真核細胞を含む第一の培養物に、オーキシン類を添加し、前記目的タンパク質を分解させた第二の培養物を得る。工程1bに用いられる真核細胞は、TIR1ファミリータンパク質をコードする第一の核酸、及び前記第一の核酸の5’末端に、作動可能に連結されているプロモーターと、目的タンパク質及びAux/IAAファミリータンパク質の全長又は部分タンパク質を含む融合タンパク質をコードする第四の核酸と、を含み、前記TIR1ファミリータンパク質、及び前記融合タンパク質を発現している。
工程2bでは、前記第二の培養物から、前記オーキシン類を除去し、上記オーキシンデグロンシステムにおけるタンパク質分解阻害剤を添加し、前記目的タンパク質を発現させた第三の培養物を得る。
以下に示す経路で、Auxinole(化合物(I-1-2))を製造した。
50mL丸底フラスコ内で、窒素充填下でm-キシレン(1.00g、9.42mmol)をジクロロメタン(40mL) に溶解させた。次いで、無水マレイン酸(0.93g、9.42mmol)と塩化アルミニウム(2.51g、18.84mmol)とを加え、室温で4時間攪拌した。次いで、反応液に1N塩酸(10mL)を加え、pH1にした。次いで、酢酸エチル(40mL)で3回抽出した。次いで、有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。次いで、溶媒を減圧留去した。次いで、ベンゼンから再結晶で精製を行い、化合物(I-1b-1)(trans-4-(2,4-dimethyl-phenyl)-4-oxo-but-2-enoic acid)を得た(収量:1.49g、収率:77%、融点:85.4~88.2℃)。
1H NMR (CDCl3):δ7.75 (d, J=15.6 Hz, 1H), 7.56 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.10(m, 2H), 6.70 (d, J=15.6 Hz, 1H), 2.50(s, 3H), 2.38(s, 3H).
13C NMR (CDCl3):δ192.5, 170.9, 143.1, 141.7, 139.5, 133.6, 133.0, 130.9, 130.0, 126.4, 21.5 21.2.
IR v max (neat) :2986, 1703, 1667 cm-1.
FAB-MS :m/z 205 [M+H+].
次いで、30mL丸底フラスコ内で、化合物(I-1b-1)(0.40g、1.96mmol)をベンゼン(10mL)で溶解させた。次いで、インドール(0.47g、4.01mmol)を加えて、80℃で8時間撹拌し、室温になるまで攪拌した。次いで、反応液を減圧留去した。次いで、ベンゼンから再結晶を行い、Auxinole(化合物(I-1-2))を得た(収量:0.46g、収率:72%、融点:178.8~183.2℃)。
1H NMR (DMSO-d6) :δ7.79 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.65 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.36 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.31 (d, J=2.3 Hz, 1H), 7.10 (m, 3H), 7.00 (td, J=7.3 Hz, 1.0, 1H), 4.32 (dd, J=10.6, 3.9 Hz, 1H), 3.89 (dd, J=17.9, 10.6 Hz, 1H), 3.23 (dd, J=17.9, 3.9 Hz, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.31 (s, 3H).
13C NMR (DMSO-d6) :δ198.8, 175.7, 144.5, 137.8, 134.9, 130.2, 129.0, 127.2, 124.1, 122.1, 112.0, 119.5, 112.9, 112.4, 42.0, 38.6, 22.1.
IR v max (neat): 3428, 2923, 1707 cm-1.
HRFAB-MS: m/z 322.1422 [M+H]+, calcd for 322.1443, C19H17NO3.
以下に示す経路で、4F-PEO-IAA(化合物(I-1-3))を製造した。
50mL丸底フラスコ内で、窒素充填下でフルオロベンゼン(0.50g、5.21mmol)をジクロロメタン(20mL)で溶解させた。次いで、無水マレイン酸(0.51g、5.20mmol)と塩化アルミニウム(1.40g、10.49mmol)とを加え、室温で4時間攪拌した。次いで、反応液に1N塩酸(10mL)を加え、pH1にした。次いで、酢酸エチル(40mL)で3回抽出した。次いで、有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。次いで、溶媒を減圧留去した。次いで、ベンゼンから再結晶で精製を行い、化合物(I-1b-2)(trans-4-(4-fluorophenyl)-4-oxo-but-2-enoic acid)を得た(収量:0.57g、収率:56%、融点:114.8~119.6℃)。
1H NMR (CDCl3) :δ8.06 (m, 2H), 7.98 (d, J=15.4 Hz, 1H), 7.21 (m, 2H), 6.90 (d, J=15.4 Hz, 1H).
13C NMR (CDCl3) :δ187.5, 170.7, 166.3 (d, JC-F=255.5 Hz), 138.0, 132.8 (d, JC-F=3.2 Hz), 131.7 (d, JC-F=9.9 Hz), 131.6, 116.2 (d, JC-F=22.1 Hz) .
FAB-MS: m/z 195 [M+H] +
200mLのナスフラスコ内で、化合物(I-1b-2)(5g、25.8mmol、分子量194.16)とインドール(6g、51.5mmol、分子量117.15)をトルエンに溶かし、80℃で4時間撹拌した。次いで、析出した固体を桐山漏斗(登録商標)で集めた。次いで、析出した固体を酢酸エチルとヘキサンとから再結晶し、4F-PEO-IAA(化合物(I-1-3))を白色の粉末として得た(収量:4.8g、収率:60%、融点:162~166℃)。
1H NMR (400 MHz, acetone-d6): δ 3.41 ( 1H, dd, J=0.4,0.4) 4.11 (1H, q), 7.05 (1H, m), 7.13 (1H, m ), 7.28 (2H, m,), 7.37 (2H, m), 7.78 (1H, d, J=0.8), 8.16 (2H, m), 10.2 (1H, s).
13C NMR (100 MHz, acetone-d6): δ 38.58, 42.40, 112.32, 113.50, 116.22, 116.44, 119.83, 120.05, 122.42, 131.73, 131.8, 137.71, 167.74, 175.14, 197.16.
FAB-MS: m/z 312 [M+H] +
以下に示す経路で、PEO-IAA ethyl ester(化合物(I-1-4))を製造した。
50mL丸底フラスコ内で、PEO-IAA(0.50g、1.71mmol)をエタノール(15mL) に溶解させた。次いで、塩化アセチル(0.5g、6.36mmol)を滴下し、室温で6時間攪拌した。反応液から溶媒を減圧留去した後,酢酸エチルとヘキサンから再結晶で精製を行い、(化合物(I-1-4)(PEO-IAA ethyl ester)を得た(収量:0.50g、収率:92%、融点:89~92℃)。
1H NMR (DMSO-d6) :δ11.0 (brs, 1H), 8.04 (d, J=7.4, 2H), 7.69 (d, J=8.2, 1H), 7.65 (t, J=7.3, 1H), 7.53 (t, J=7.3, 2H), 7.38 (s, 1H), 7.37 (d, J=6.2, 1H), 7.10 (t, J=8.2, 1H), 7.01 (t, J=7.2, 1H), 4.30 (dd, J=10.5 3.6, 1H) , 4.02 (dd, J=18.0, 7.3, 1H), 4.04 (m, 2H), 3.34 (dd, 18.0, 4.0), 1.10 (t, J=7.3, 3H).
13C NMR (DMSO-d6) :δ198.81, 173.78, 136.79, 133.87, 129.26,128.53, 126.62, 123.81, 121.75, 119.38, 119.23, 112.09, 111.83, 60.6, 41.73, 38.23, 14.54.
FAB-MS: m/z 332 [M+H] +
以下に示す経路で、N-methyl-PEO-IAA(化合物(I-1-5))を製造した。
30mL丸底フラスコ内で、化合物(I-1b-3)(0.40g、2.27mmol)をベンゼン(10mL)で溶解させた。次いで、N-メチルインドール(0.45g、3.41mmol)を加えて、80℃で8時間撹拌し、室温になるまで攪拌した。反応液を室温まで冷却後、析出した結晶を桐山漏斗(登録商標)で集め、ベンゼン(1mL)で結晶を洗浄した。その後、結晶を減圧乾燥してN-methyl-PEO-IAA(化合物(I-1-5)を得た(収量:0.38g、収率:54%、融点:183~186℃)。
1H NMR (DMSO-d6) : δ12.2 (brs, 1H), 8.03 (d, J=6.9, 2H), 7.69 (d, J=7.8, 1H), 7.63 (t, J=7.3, 1H), 7.53 (t, J=7.8, 2H), 7.41 (d, J=8.2, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.16 (t, J=6.9, 1H), 7.05 (t, J=7.2, 1H), 4.34 (dd, J=10.5 3.6, 1H) , 4.02 (dd, J=18.0, 7.3, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.34 (m, 1H).
13C NMR (DMSO-d6) : δ198.79, 175.14, 137.15, 136.91, 133.81, 129.26, 128.47, 128.02, 127.06, 121.81, 119.74, 119.27, 111.72, 110.24, 41.75, 38.01, 32.87.
FAB-MS: m/z 308 [M+H] +
以下に示す経路で、4Cl-PEO-IAA(化合物(I-1-6))を製造した。
50mLのナスフラスコ内で、化合物(I-1b-4)(市販試薬)(0.50g、2.38mmol)とインドール(0.42g、3.57mmol)とをトルエンに溶かし、80℃で4時間撹拌した。室温まで冷却後、次いで、析出した結晶を桐山漏斗(登録商標)で集め、トルエン(1mL)で結晶を洗浄した。その後、結晶を減圧乾燥して、4Cl-PEO-IAA(化合物(I-1-6))を淡黄色結晶として得た(収量:0.49g、収率:63%、融点:185~190℃)。
1H NMR(DMSO-d6) : 11.0 (brs, 1H), 8.06 (d, J=8.7, 2H), 7.69 (d, J=8.2, 1H), 7.63 (d, J=8.7, 1H), 7.59 (d, J=8.7, 2H), 7.35 (s, 1H), 7.10 (t, J=8.2, 1H), 7.01 (t, J=7.2, 1H), 4.34 (dd, J=10.5 3.6, 1H) , 4.02 (dd, J=18.3, 10.5, 1H), 3.34 (dd, 18.0, 4.0).
FAB-MS: m/z 328 [M+H] +
以下に示す経路で、4’-Methyl-PEO-IAA(化合物(I-1-7))を製造した。
30mLのナスフラスコ内で、化合物(I-1b-3)(0.60g、3.40mmol)と4-メチルインドール(0.60g、5.11mmol)とをトルエンに溶かし、80℃で4時間撹拌した。室温まで冷却後、次いで、析出した結晶を桐山漏斗(登録商標)で集め、トルエン(1mL)で結晶を洗浄した。その後、結晶を減圧乾燥して、4’-Methyl-PEO-IAA(化合物(I-1-7)を無色結晶として得た(収量:0.56g、収率:58%、融点:176~180℃)。
1H NMR (DMSO-d6) : 11.0 (brs, 1H), 8.04 (d, J=7.9, 2H), 7.63 (t, J=7.3, 1H), 7.53 (d, J=7.8, 1H), 7.51 (t, J=7.3, 1H), 7.30 (d, J=2.8, 1H), 7.20 (d, J=8.2, 1H), 6.96 (t, J=7.8, 1H), 6.74 (d, J=7.3, 1H), 4.72 (dd, J=10.1 4.1, 1H) , 3.94 (dd, J=18.3, 10.5, 1H), 3.34 (dd, 18.0, 4.0), 2.71 (s, 3H).
13C NMR (DMSO-d6) : 198.94, 175.81, 136.95, 136.75, 133.8, 130.07, 129.24, 128.54, 125.37, 123.38, 121.61, 121.18, 113.76, 110.19, 43.49, 38.33, 20.67.
FAB-MS: m/z 308 [M+H] +
以下に示す経路で、6’-F-Auxinole(化合物(I-1-8))を製造した。
30mL丸底フラスコ内で、化合物(I-1b-1)(0.40g、1.96mmol)をベンゼン(10mL)で溶解させた。次いで、6-フルオロインドール(0.40g、2.95mmol)を加えて、80℃で4時間撹拌した。室温まで冷却後、次いで、析出した結晶を桐山漏斗(登録商標)で集め、ベンゼン(1mL)で結晶を洗浄した。その後、結晶を減圧乾燥して、6’-F-Auxinole(化合物(I-1-8)を得た(収量:0.45g、収率:67%、融点:178~179℃)。
1H NMR (DMSO-d6) : 11.0 (brs, 1H) 7.79 (d, J=7.8, 1H), 7.64 (dd, J=11.4, 5.5, 1H), 7.31 (d, J=2.3, 1H), 7.13 (m, 3H), 6.87 (td, J=9.6, 2.7, 1H), 4.29 (dd, J=10.5 4.1, 1H) , 3.87 (dd, J=17.4, 10.9, 1H), 3.34 (dd, 18.0, 4.0), 2.37 (s, 3H), 2.31 (s, 3H).
13C NMR DMSO-d6) : 201.55, 174.65, (160.00, 157.67: JC-F=234 Hz), 141.44, 137.42, (136.14, 136.01: JC-F=12.4 Hz), 134.62, 132.31, 129.25, 126.40, 123.82, 123.07, (120.09, 119.99: JC-F=10.5 Hz), 112.1, (107.24, 107.00: JC-F=24.0 Hz), (97.52, 97.27: JC-F=25.8 Hz), 43.58, 37.98, 20.87, 20.85.
FAB-MS: m/z 340[M+H] +
1.細胞の準備
Tet-OsTIR1遺伝子を含むプラスミドが導入されており、MCM2-mAID-mClover遺伝子が染色体上に挿入されているHCT116細胞(ヒト結腸腺癌由来細胞)(以下、「MCM2-mAID-mClover発現細胞」と称する)を準備した。また、Tet-OsTIR1遺伝子を含むプラスミドが導入されており、SMC6-mAID-mClover遺伝子が染色体上に挿入されているHCT116細胞(ヒト結腸腺癌由来細胞)(以下、「SMC6-mAID-mClover発現細胞」と称する)を準備した。
MCM2-mAID-mClover発現細胞及びSMC6-mAID-mClover発現細胞にテトラサイクリン系抗生物質としてドキシサイクリン(Dox)(培地中の濃度:2μg/mL)と、タンパク質分解阻害剤候補化合物として、PEO-IAA(和光純薬工業社製)又は合成例1~7で得られた各化合物(培地中の濃度:各100μM)とを添加して、24時間培養した。また、対照として、Dox及び候補化合物を添加していない細胞、Doxのみを添加した細胞、Dox及び天然オーキシンであるIAAを添加した細胞、Dox及びアンチオーキシンとして知られているパラクロロイソ酪酸(PCIB)を添加した細胞も準備した。
各種化合物の添加から24時間後に細胞を回収し、FACS解析を行った。結果を図1に示す。図1において、「Control」とは、Doxのみを添加した細胞を示し、「Untreated」とは、Dox及び候補化合物を添加していない細胞を示す。
特に、MCM2-mAID-mClover発現細胞では、Auxinolを添加した細胞において、MCM2タンパク質の分解が顕著に抑制されていた。また、SMC6-mAID-mClover発現細胞では、Auxinol、PEO-IAA ethyl ester及び4Cl-PEO-IAAを添加した細胞において、SMC6タンパク質の分解が顕著に抑制されていた。
実施例1の結果からAuxinolを用いて、再度タンパク質の分解阻害効果を確認した。
実施例1の「1.」に記載のSMC6-mAID-mClover発現細胞を準備した。
SMC6-mAID-mClover発現細胞にDox及びAuxinoleを培地中の濃度がそれぞれ2μg/mL及び100μMとなるように添加して、24時間培養した。対照として、Dox及びAuxinoleを添加していない細胞、Doxのみを添加した細胞、Dox及び天然オーキシンであるIAAを添加した細胞も準備した。
Dox及びAuxinoleの添加から24時間後に細胞を回収し、FACS解析を行った。結果を図2に示す。図2において、「+OsTIR1」とは、Doxのみを添加した細胞を示し、「Untreated」とはDox及びAuxinoleを添加していない細胞を示す。
1.細胞の準備
Tet-OsTIR1遺伝子を含むプラスミドが導入されており、DHC1-mAID-mClover遺伝子が染色体上に挿入されているHCT116細胞(ヒト結腸腺癌由来細胞)(以下、「DHC1-mAID-mClover発現細胞」と称する)を準備した。
DHC1-mAID-mClover発現細胞にTet又はDox(培地中の濃度:各2μg/mL)及びAuxinを添加して、72時間培養した。対照として、Dox及びAuxinを添加しない細胞、Tet及びAuxinを添加しない細胞、Doxを添加し、Auxinを添加しない細胞、Tetを添加し、Auxinを添加しない細胞も準備した。
Dox及びAuxin添加時に細胞数の測定し、さらに、Dox及びAuxin添加から24時間後、48時間後、72時間後、及び、96時間後に細胞数を測定した。結果を図3Aに示す。図3Aにおいて、「Control」とは、Dox及びAuxinを添加しない細胞である。「+dox」とは、Doxを添加し、Auxinを添加しない細胞である。
Dox及びAuxin添加から48時間後に、Dox及びAuxinを添加しない細胞、並びに、Doxを添加し、Auxinを添加しない細胞を、顕微鏡(サーモフィッシャーサイエンティフィック社製、型番:VOS XL Core)を用いて観察した(倍率:10倍)。結果を図3Bに示す。
Tet及びAuxin添加から42時間後に細胞を回収し、細胞破砕液を調製した。次いで、得られた細胞破砕液を用いて、ウエスタンブロッティングにより、抗DHC1抗体、抗DIC抗体及び抗p150抗体を用いて、DHC1-mAID-mClover、並びに、DHC1と複合体を形成するDIC及びp150の発現量をそれぞれ解析した。結果を図3Cに示す。図3Cにおいて、「DHC1-mAC」とは、抗DHC1抗体を用いて検出されたDHC1-mAID-mClover融合タンパク質を示す。また、「DIC」とは、dynein intermediate chainの略称であり、ダイニン中間鎖を意味する。また、p150とはダイナクチンのサブユニットである。
参考例1で示唆されたTIR1によるオーキシン非依存性のタンパク質の分解を阻害するために、Auxinoleの添加による阻害効果を検討した。
参考例1の「1.」と同様に、DHC1-mAID-mClover発現細胞を準備した。
次いで、DHC1-mAID-mClover発現細胞にDox及びAuxinoleを培地中の濃度がそれぞれ2μg/mL及び100μMとなるように添加し、24時間培養した。
Dox及びAuxinoleの添加から24時間後の細胞を、デコンボリューション蛍光顕微鏡(横河電機社製、型番:CV1000)を用いて観察した(倍率:60倍)。結果を図4に示す。図4において、「Control」とは、Dox及びAuxinを添加せず、代わりにジメチルスルホキシド(Dimethyl sulfoxide;DMSO)を2μg/mLとなるように添加した細胞である。「+Dox」とは、Doxのみを添加した細胞である。「+Dox and auxinole」はDox及びAuxinoleを添加した細胞である。
Auxinoleを用いた目的タンパク質の分解制御を検討した。
参考例1の「1.」と同様に、DHC1-mAID-mClover発現細胞を準備した。
DHC1-mAID-mClover発現細胞にDox及びAuxinoleを培地中の濃度がそれぞれ2μg/mL及び100μMとなるように添加し、48時間培養した。Dox及びAuxinoleの添加から48時間後の細胞を、デコンボリューション蛍光顕微鏡(横河電機社製、型番:CV1000)を用いて観察した(倍率:60倍)。結果を図5Aに示す。図5Aにおいて、「Control」とは、Dox及びAuxinoleを添加せず、代わりにDMSOを培地中の濃度が2μg/mLとなるように添加した細胞である。「+Dox」とは、Doxを添加した細胞である。「+auxinole」とは、auxinoleを添加した細胞である。
一方、Dox及びAuxinoleを添加した細胞では、Controlと比較して大きな変化は見られなかった。よって、Auxinoleの添加により、分裂期細胞の蓄積が抑制されていることが確認された。
図5Bに示すように、以下のプロトコールに従って、DHC1-mAID-mClover発現細胞を培養し、DHC1-mAID-mClover融合タンパク質の分解制御を検討した。まず、Doxのみを培地中の濃度が2μg/mLとなるように添加、又は、Dox及びAuxinoleを培地中の濃度がそれぞれ2μg/mL及び100μMとなるように添加して、24時間培養した。次いで、Auxinを培地中の濃度が500μMとなるように添加し、Auxinの添加から1時間後及び4時間後に細胞を回収し、FACS解析を行った。また、試験開始前の細胞、Doxのみを添加又はDox及びAuxinoleを添加して24時間培養した細胞も同様に回収し、FACS解析を行った。結果を図5Bに示す。
Auxinoleを用いた目的タンパク質の発現制御を検討した。
CMV-OsTIR1遺伝子を含むプラスミドが導入されており、RAD21-mAID-mClover遺伝子が染色体上に挿入されているHCT116細胞(ヒト結腸腺癌由来細胞)(以下、「RAD21-mAID-mClover発現細胞」と称する)を準備した。
図6に示すように、以下のプロトコールに従って、RAD21-mAID-mClover発現細胞を培養し、RAD21-mAID-mClover融合タンパク質の発現制御を検討した。まず、Auxinを培地中の濃度が100μMとなるように添加し、2時間培養した。次いで、Auxinを含む培養液を取り除き、Auxinoleを培地中の濃度が100μMとなるように添加した培地、又は、Auxinoleを添加しない培地に交換して、培養した。培地交換から1時間後、2時間後、3時間後、4時間後、5時間後及び6時間後に細胞を回収し、FACS解析を行った。結果を図6に示す。
Claims (6)
- 請求項1に記載のタンパク質分解阻害剤と、
TIR1ファミリータンパク質をコードする第一の核酸と、
Aux/IAAファミリータンパク質の全長又は部分タンパク質をコードする第二の核酸と、
を備える動物細胞のオーキシンデグロンシステムのキット。 - 請求項1に記載のタンパク質分解阻害剤と、
TIR1ファミリータンパク質をコードする第一の核酸、並びに、目的タンパク質をコードする第三の核酸及び前記第三の核酸の上流又は下流に連結されたAux/IAAファミリータンパク質の全長又は部分タンパク質をコードする第二の核酸を含む動物細胞と、
を備える動物細胞のオーキシンデグロンシステムのキット。 - 請求項1に記載のタンパク質分解阻害剤を用いた動物細胞における目的タンパク質分解制御方法。
- TIR1ファミリータンパク質をコードする第一の核酸、及び前記第一の核酸の5’末端に、作動可能に連結されているテトラサイクリン誘導性プロモーターと、
目的タンパク質及びAux/IAAファミリータンパク質の全長又は部分タンパク質を含む融合タンパク質をコードする第四の核酸と、を含む動物細胞を含む第一の培養物に、請求項1に記載のタンパク質分解阻害剤、及びテトラサイクリンを添加して、前記TIR1ファミリータンパク質、及び前記融合タンパク質を発現した動物細胞を含む第二の培養物を得る工程と、
前記第二の培養物から、前記タンパク質分解阻害剤を除去し、オーキシン類を添加し、前記目的タンパク質を分解させた第三の培養物を得る工程と、
を有し、
前記オーキシン類は、インドール-3-酢酸、インドール-3-酢酸メチルエステル、4-クロロインドール酢酸、2,4-ジクロロフェノキシ酢酸、2,4,5-トリクロロフェノキシ酢酸、4-クロロフェノキシ酢酸、又は1-ナフタレンアセトアミドである、
動物細胞における目的タンパク質分解制御方法。 - TIR1ファミリータンパク質をコードする第一の核酸、及び前記第一の核酸の5’末端に、作動可能に連結されているプロモーターと、
目的タンパク質及びAux/IAAファミリータンパク質の全長又は部分タンパク質を含む融合タンパク質をコードする第四の核酸と、を含み、前記TIR1ファミリータンパク質、及び前記融合タンパク質を発現している動物細胞を含む第一の培養物に、オーキシン類を添加し、前記目的タンパク質を分解させた第二の培養物を得る工程と、
前記第二の培養物から、前記オーキシン類を除去し、請求項1に記載のタンパク質分解阻害剤を添加し、前記目的タンパク質を発現させた第三の培養物を得る工程と、
を有し、
前記オーキシン類は、インドール-3-酢酸、インドール-3-酢酸メチルエステル、4-クロロインドール酢酸、2,4-ジクロロフェノキシ酢酸、2,4,5-トリクロロフェノキシ酢酸、4-クロロフェノキシ酢酸、又は1-ナフタレンアセトアミドである、
目的タンパク質分解制御方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2017228310 | 2017-11-28 | ||
JP2017228310 | 2017-11-28 | ||
PCT/JP2018/041563 WO2019107109A1 (ja) | 2017-11-28 | 2018-11-08 | オーキシンデグロンシステムにおけるタンパク質分解阻害剤及びその使用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2019107109A1 JPWO2019107109A1 (ja) | 2020-11-26 |
JP7398704B2 true JP7398704B2 (ja) | 2023-12-15 |
Family
ID=66665631
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019557108A Active JP7398704B2 (ja) | 2017-11-28 | 2018-11-08 | オーキシンデグロンシステムにおけるタンパク質分解阻害剤及びその使用 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP7398704B2 (ja) |
WO (1) | WO2019107109A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114058641B (zh) * | 2022-01-17 | 2022-04-01 | 苏州大学 | 一种载体系统和应用及通过其降解目的蛋白的方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008187958A (ja) | 2007-02-05 | 2008-08-21 | Osaka Univ | タンパク質分解誘導性細胞、その製造方法、および、タンパク質分解の制御方法 |
WO2017072816A1 (ja) | 2015-10-29 | 2017-05-04 | 国立大学法人東北大学 | 臓器線維化疾患の治療剤 |
JP2018076274A (ja) | 2016-11-11 | 2018-05-17 | 国立大学法人東北大学 | ライソゾーム病の予防又は改善剤 |
JP2018127429A (ja) | 2017-02-10 | 2018-08-16 | 国立大学法人東北大学 | インドール酢酸アミド誘導体 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5605658B2 (ja) * | 2009-04-30 | 2014-10-15 | 国立大学法人大阪大学 | 哺乳類細胞におけるタンパク質分解誘導方法 |
JP6021116B2 (ja) * | 2011-11-18 | 2016-11-02 | 大学共同利用機関法人情報・システム研究機構 | 真核細胞におけるタンパク質分解誘導方法 |
-
2018
- 2018-11-08 WO PCT/JP2018/041563 patent/WO2019107109A1/ja active Application Filing
- 2018-11-08 JP JP2019557108A patent/JP7398704B2/ja active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008187958A (ja) | 2007-02-05 | 2008-08-21 | Osaka Univ | タンパク質分解誘導性細胞、その製造方法、および、タンパク質分解の制御方法 |
WO2017072816A1 (ja) | 2015-10-29 | 2017-05-04 | 国立大学法人東北大学 | 臓器線維化疾患の治療剤 |
JP2018076274A (ja) | 2016-11-11 | 2018-05-17 | 国立大学法人東北大学 | ライソゾーム病の予防又は改善剤 |
JP2018127429A (ja) | 2017-02-10 | 2018-08-16 | 国立大学法人東北大学 | インドール酢酸アミド誘導体 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
BLAY G. et al.,Synthesis of Functionalized Indoles with an α-Stereogenic Ketone Moiety Through an Enantioselective,Adv. Synth. Catal,2009年,Vol. 351,pp. 2433-2440,Scheme 4の式7及びTable 3のEntry 1-5, 7-9 |
HAYASHI K. et al.,Rational Design of an Auxin Antagonist of the SCFTIR1 Auxin Receptor Complex,ACS Chemical Biology,2012年,Vol. 7,pp.590-598,Figure 1の化合物番号14, Figure 4の化合物番号 15(auxinole), 16(PEO-IAA), 17, 18, 19(4F-PEO-IAA), 20, |
林謙一郎 他,オーキシン受容と信号伝達の分子機構 TIR1オーキシン受容体拮抗剤の分子設計,化学と生物,2012年,Vol. 50, No. 12,pp.876-882,図1のPEO-IAA, Auxinole, 880-881頁"新しいオーキシン受容体拮抗剤と分子機構作用", 図5 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2019107109A1 (ja) | 2019-06-06 |
JPWO2019107109A1 (ja) | 2020-11-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU713547B2 (en) | Preparation of nitrobiphenyls | |
AU623132B2 (en) | Synthesis of n-t-alkyl-1,2-diacylhydrazines | |
JP2023065511A (ja) | ペプチド化合物の製造方法、保護基形成用試薬、及び、芳香族複素環化合物 | |
JP7139511B2 (ja) | ペプチド化合物の製造方法、保護基形成用試薬、及び、縮合多環芳香族炭化水素化合物 | |
JP7398704B2 (ja) | オーキシンデグロンシステムにおけるタンパク質分解阻害剤及びその使用 | |
KR20070115896A (ko) | (z)-1-페닐-1-(n,n-디에틸아미노카르보닐)-2-프탈이미도메틸시클로프로판의 제조 방법 | |
CN113072436A (zh) | 一种苄基芳基醚的制备方法 | |
US9040745B2 (en) | Process for producing fluorosulfuric acid aromatic-ring esters | |
JP7301965B2 (ja) | ペプチド化合物の製造方法、保護基形成用試薬、及び、縮合多環化合物 | |
US6362380B1 (en) | Preparation of nitrobiphenyls | |
KR100592213B1 (ko) | 중간체의 제조 방법 | |
Wessjohann et al. | 1, 4-Addition of (Diphenylmethylene) amine to Acceptor Substituted Olefins. A Versatile Synthesis of Protected β-Amino Acids, Nitriles, and Ketones | |
WO2008139057A2 (fr) | Procede de preparation de 2-(n-butyl)-3-(4-hydroxybenzoyl)-5-nitrobenzofurane | |
AU727050B2 (en) | Process for preparing 1-alkyl-4- (2-chloro-3-alkoxy- 4-alkylsulfonylbenzoyl) -5-hydroxypyrazole and related compounds | |
KR0141482B1 (ko) | 0-카르복시피리딜-및 0-카르복시퀴놀릴이미다졸리논의 개선된 제조방법 | |
Kotha et al. | Design and Synthesis of Conformationally Constrained Bicyclo [2.2. 2] octane-Based Unusual α-Amino Acid Derivatives via the Diels− Alder Reaction | |
CA2767132A1 (en) | Intermediates and processes for the preparation of 4-(acetylamino))-3-[(4-chloro-phenyl)thio]-2-methyl-1h-indole-1-acetic acid | |
KR100619386B1 (ko) | 할로겐화 페닐말로네이트의 제조방법 | |
CA2867936C (en) | Industrial method for manufacturing high-purity methiozolin | |
WO2022138605A1 (ja) | ペプチドの製造方法、保護基形成用試薬、及び、縮合多環化合物 | |
WO2024043198A1 (ja) | トリチル系アルコール保護基 | |
Uchil et al. | Selective reductions of substituted α-(1, 2, 4-triazol-l-yl) chalcones with NaBH 4 and Al-isopropoxide: Synthesis of substituted (±) α-(4-chlorophenyl)-β-(phenylmethylene)-1H-1, 2, 4-triazole-l-ethanols having potential bacteriostatic and agro-based fungicidal activity | |
JP2000344722A (ja) | 4−ヒドロキシメチル−1−アミノシクロペント−2−エン誘導体の製造方法 | |
JP3515257B2 (ja) | 2,3,6,7,10,11−ヘキサアセトキシトリフェニレンの製造方法 | |
CN116997544A (zh) | 用于合成5-{5-氯-2-[(3s)-3-[(吗啉-4-基)甲基]-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-羰基]苯基}-1,2-二甲基-1h-吡咯-3-甲酸衍生物的新方法及其在生产药物化合物中的应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
RD01 | Notification of change of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7426 Effective date: 20200619 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20200619 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210826 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220906 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221031 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20230307 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230523 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20230529 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230725 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230824 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20231024 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20231124 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7398704 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |