JP7385709B2 - 抗ｂｃｍａ ｃａｒ ｔ細胞組成物 - Google Patents

Description

関連出願の相互参照
本出願は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）下で、２０１７年６月２日出願の米国仮出願第６２／５１４，４０１号および２０１６年１１月４日出願の米国仮出願第６２／４１７，８４０号の利益を主張し、それらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

配列表に関する声明
本出願に関連する配列表は、ハードコピーの代わりにテキスト形式で提供され、本明細書に参照により組み込まれる。配列表を含むテキストファイル名は、ＢＬＢＤ＿０７９＿０２ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔである。テキストファイルは、２７ＫＢであり、２０１７年１１月３日に作成され、明細書の出願と同時に、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出されている。
背景

本発明は、改善された組成物およびＢ細胞関連疾患を治療するための方法に関する。より具体的に、本発明は、再発性／難治性多発性骨髄腫を治療するための治療用量の抗ＢＣＭＡキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を含む改善された組成物に関する。

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞は、所望の抗原に対する抗体系特異性をＴ細胞受容体活性化細胞内ドメインと組み合わせて、特定の抗癌免疫活性を示すキメラタンパク質を生成する分子である。ＣＡＲは、癌細胞を認識し、直接消す能力を患者自身のＴ細胞に与える。ＣＡＲ Ｔ細胞技術は、迅速に開発してきたが、さらにその治療可能性を実現化しなければならない。いくつかの課題が、血液悪性腫瘍に対するＣＡＲ Ｔ細胞の臨床応用に残っている。

血液悪性腫瘍に適用されるほとんどのＣＡＲ Ｔ細胞療法は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームに関連する。ＣＲＳは、養子細胞性免疫療法に対して特異的であり、敗血症性ショック様症状と共に発症し、最終的には患者の死亡をもたらす場合がある。実際には、多くの臨床試験が、ＣＡＲ Ｔ細胞試験におけるＣＲＳ関連の死亡のために、ＦＤＡによって一時的に停止された。ＣＲＳは、迅速で、予測不可能であり得、現在は、ＣＲＳの予防および管理に対する合意が存在しない。しかしながら、ＣＲＳの一因となる１つの特徴は、治療用細胞用量のＣＡＲ Ｔ細胞である。

ＣＡＲ Ｔ細胞は、インビボで注入後に増殖する能力を有する「生薬」であり、骨髄が存在する。例えば、２０１１年に公開されたペンシルベニア大学からの影響力の大きい症例研究では、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）患者に与えられた最低で１．５×１０^５のＣＡＲ Ｔ細胞が、経時的にインビボで１０００倍以上に増殖した。したがって、ＣＡＲ Ｔ細胞療法は、投与量に関して特有の課題を提示する。ＣＡＲ Ｔ細胞注入投与量、ならびに腫瘍量、有効性、および副作用を含む影響要因に対して一様な合意は存在しない。少量注入は、理想的な治療効果を得ないかもしれないが、代わりに、腫瘍抗原欠失および抗原エスケープを誘導するかもしれない。大量注入およびかなりの腫瘍量は、ＣＲＳおよび腫瘍崩壊症候群を増加させることになる。それは、生薬であるため、正確な治療用量を決定することは、予想不可能である。ＣＡＲ Ｔ細胞が動的で、生きている、持続性の薬であるため、薬力学および薬物動態学の従来の薬と体の相互作用の概念は、ＣＡＲ Ｔ細胞療法に容易に適用することはできない。

用量選択に対するいくつかの課題としては、これらに限定されないが、相関動物モデルの不足、ファーストインヒューマンの生成物は「先験的」情報が限定されていること、ヒト細胞のインビボ増殖は予想不可能であること、第一世代ＣＡＲ Ｔ生成物から安全データを「借りる」ことにおける制限、関連する生成物（ＴＩＬ、「同様の」ＴＣＲ転嫁細胞、「同様の」クラスのＣＡＲ Ｔ生成物から安全データを推定すること、および組織学的に異なる腫瘍型（複数可）の同じ生成物を用いて安全データを推定することが挙げられる。

その結果、ＣＡＲ Ｔ細胞の投薬に対する現在の取り組み方は、同じ適応症に使用するための異なるＣＡＲを内部に有するＴ細胞の中、および異なる適応症に使用するための同じＣＡＲ Ｔ細胞の中で、治療上有効なＣＡＲ Ｔ細胞用量を予測するのに十分に成熟していないように思われる。

本発明は、概して、改善された抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞組成物、および再発性／難治性多発性骨髄腫を治療するための同じ生成物を使用する方法を提供する。

様々な実施形態では、組成物は、治療上有効な量の抗Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を含むことを意図し、治療上有効な量とは、約５．０×１０^７を超える抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞であり、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含む。

特定の実施形態では、組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含む。

ある実施形態では、組成物は、５０：５０のＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ対ＣｒｙｏＳｔｏｒ ＣＳ１０を含む溶液中で配合される。

様々な実施形態では、治療上有効な量は、少なくとも約１５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ
ＣＡＲ Ｔ細胞である。

特定の実施形態では、治療上有効な量は、少なくとも約４５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ
ＣＡＲ Ｔ細胞である。

いくつかの実施形態では、治療上有効な量は、少なくとも約８０．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞である。

ある実施形態では、治療上有効な量は、少なくとも約１２．０×１０の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞である。

特定の実施形態では、治療上有効な量は、約５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約１５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞である。

様々な実施形態では、治療上有効な量は、約５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約４５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞である。

いくつかの実施形態では、治療上有効な量は、約５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ
Ｔ細胞～約８０．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞である。

特定の実施形態では、治療上有効な量は、約５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約１２．０×１０^８の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞である。

ある実施形態では、治療上有効な量は、約１５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約４５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞である。

いくつかの実施形態では、治療上有効な量は、約１５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約８０．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞である。

様々な実施形態では、治療上有効な量は、約１５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約１２．０×１０^８の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞である。

特定の実施形態では、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターで形質導入される。

ある実施形態では、レンチウイルスベクターコピー数（ＶＣＮ）は、１つの抗ＢＣＭＡ
ＣＡＲ Ｔ細胞当たり約２．０コピーである。

ある実施形態では、レンチウイルスベクターは、ヒト免疫不全ウイルス１（ＨＩＶ－１）ベクターである。

特定の実施形態では、医薬組成物は、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲをコードするレンチウイルスで形質導入されたＴ細胞の集団を含むことを意図し、Ｔ細胞の集団は、約５．０×１０^７を超える抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含み、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、組成物は、治療上許容される担体をさらに含む。

様々な実施形態では、組成物は、少なくとも約１５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ
Ｔ細胞を含む。

特定の実施形態では、組成物は、少なくとも約４５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ
Ｔ細胞を含む。

いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも約８０．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む。

ある実施形態では、組成物は、少なくとも約１２．０×１０の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む。

様々な実施形態では、組成物は、約１５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む。

特定の実施形態では、組成物は、約４５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む。

いくつかの実施形態では、組成物は、約８０．０×１０^７抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む。

ある実施形態では、組成物は、約１２．０×１０の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む。

特定の実施形態では、組成物は、約５．０×１０^７抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約１５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む。

様々な実施形態では、組成物は、約５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約４５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む。

特定の実施形態では、組成物は、約５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約８０．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む。

いくつかの実施形態では、組成物は、約５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約１２．０×１０^８の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む。

様々な実施形態では、組成物は、約１５．０×１０^７抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約４５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む。

ある実施形態では、組成物は、約１５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約８０．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む。

いくつかの実施形態では、組成物は、約１５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約１２．０×１０^８の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む。

特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞を含む。

様々な実施形態では、再発性／難治性多発性骨髄腫と診断された対象を治療する方法が提供され、本明細書で意図される組成物を対象に投与することを含む。

特定の実施形態では、再発性／難治性多発性骨髄腫を有する対象を治療する方法が提供され、本明細書で意図される組成物を対象に投与することを含む。

ある実施形態では、組成物は、単一用量で投与される。

ある実施形態では、組成物は、静脈内投与される。

いくつかの実施形態では、多発性骨髄腫は、組成物の投与前に、プロテアソーム阻害薬および免疫調節剤を含む少なくとも３つの治療計画に対して難治性であった。

特定の実施形態では、多発性骨髄腫は、組成物の投与前に、１つ以上の治療計画に対して二重難治性であった。

いくつかの実施形態では、対象は、組成物の投与前に、ダラツムマブ、レナリドミド、ポマリドミド、ボルテゾミブ、および／またはカルフィルゾミブで治療された。

ある実施形態では、対象は、組成物の投与前に、自家造血幹細胞移植を受けた。

特定の実施形態では、対象は、シクロホスファミド３００ｍｇ／ｍ^２およびフルダラビン３０ｍｇ／ｍ^２でリンパ枯渇された。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
治療上有効な量の抗Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を含む組成物であって、前記治療上有効な量が、約５．０×１０^７を超える抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞であり、前記抗ＢＣＭＡ ＣＡＲが、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含む、組成物。
（項目２）
薬学的に許容される担体をさらに含む、項目１に記載の組成物。
（項目３）
５０：５０のＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ対ＣｒｙｏＳｔｏｒ ＣＳ１０を含む溶液中に配合される、項目１または項目２に記載の組成物。
（項目４）
前記治療上有効な量が、少なくとも約１５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞である、項目１～３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５）
前記治療上有効な量が、少なくとも約４５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞である、項目１～４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６）
前記治療上有効な量が、少なくとも約８０．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞である、項目１～５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目７）
前記治療上有効な量が、少なくとも約１２．０×１０の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞である、項目１～６のいずれか一項に記載の組成物。
（項目８）
前記治療上有効な量が、約５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約１５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞である、項目１～３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目９）
前記治療上有効な量が、約５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約４５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞である、項目１～３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１０）
前記治療上有効な量が、約５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約８０．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞である、項目１～３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１１）
前記治療上有効な量が、約５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約１２．０×１０^８の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞である、項目１～３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１２）
前記治療上有効な量が、約１５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約４５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞である、項目１～３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１３）
前記治療上有効な量が、約１５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約８０．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞である、項目１～３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１４）
前記治療上有効な量が、約１５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約１２．０×１０^８の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞である、項目１～３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１５）
前記抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞が、前記抗ＢＣＭＡ ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターで形質導入される、項目１～１４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１６）
前記レンチウイルスベクターコピー数（ＶＣＮ）が、１つの抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞当たり約２．０コピーである、項目１５に記載の組成物。
（項目１７）
前記レンチウイルスベクターが、ヒト免疫不全ウイルス１（ＨＩＶ－１）ベクターである、項目１５または項目１６に記載の組成物。
（項目１８）
抗ＢＣＭＡ ＣＡＲをコードするレンチウイルスで形質導入されたＴ細胞の集団を含む医薬組成物であって、Ｔ細胞の集団が、約５．０×１０^７を超える抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含み、前記抗ＢＣＭＡ ＣＡＲが、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含む、医薬組成物。
（項目１９）
治療上許容される担体をさらに含む、項目１８に記載の医薬組成物。
（項目２０）
前記組成物が、少なくとも約１５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む、項目１８または項目１９に記載の医薬組成物。
（項目２１）
前記組成物が、少なくとも約４５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む、項目１８～２０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目２２）
前記組成物が、少なくとも約８０．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む、項目１８～２１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目２３）
前記組成物が、少なくとも約１２．０×１０の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む、項目１８～２２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目２４）
前記組成物が、約５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約１５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む、項目１８または項目１９に記載の医薬組成物。
（項目２５）
前記組成物が、約５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約４５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む、項目１８または項目１９に記載の医薬組成物。
（項目２６）
前記組成物が、約５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約８０．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む、項目１８または項目１９に記載の医薬組成物。
（項目２７）
前記組成物が、約５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約１２．０×１０^８の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む、項目１８または項目１９に記載の医薬組成物。
（項目２８）
前記組成物が、約１５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約４５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む、項目１８または項目１９に記載の医薬組成物。
（項目２９）
前記組成物が、約１５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約８０．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む、項目１８または項目１９に記載の医薬組成物。
（項目３０）
前記組成物が、約１５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞～約１２．０×１０^８の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む、項目１８または項目１９に記載の医薬組成物。
（項目３１）
前記Ｔ細胞が、ＣＤ８^＋Ｔ細胞を含む、項目１８～３０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目３２）
再発性／難治性多発性骨髄腫と診断された対象を治療する方法であって、項目１～３１のいずれか一項に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
（項目３３）
再発性／難治性多発性骨髄腫を有する対象を治療する方法であって、項目１～３１のいずれか一項に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
（項目３４）
前記組成物が、単一用量で投与される、項目３２または項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記組成物が、静脈内投与される、項目３２～３４のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
前記多発性骨髄腫が、前記組成物の前記投与前に、プロテアソーム阻害薬および免疫調節剤を含む少なくとも３つの治療計画に対して難治性であった、項目３２～３５のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
前記多発性骨髄腫が、前記組成物の前記投与前に、１つ以上の治療計画に対して二重難治性であった、項目３２～３５のいずれか一項に記載の方法。
（項目３８）
前記対象が、前記組成物の前記投与前に、ダラツムマブ、レナリドミド、ポマリドミド、ボルテゾミブ、および／またはカルフィルゾミブで治療された、項目３２～３５のいずれか一項に記載の方法。
（項目３９）
前記対象が、前記組成物の前記投与前に、自家造血幹細胞移植を受けた、項目３２～３８のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
前記対象が、シクロホスファミド３００ｍｇ／ｍ^２およびフルダラビン３０ｍｇ／ｍ^２でリンパ枯渇された、項目３２～３９のいずれか一項に記載の方法。

ネズミＢ細胞成熟抗原（ｍｕＢＣＭＡ）ＣＡＲ構成概念の模式図を示す。 形質導入されていないドナーＴ細胞の同等の培養物と比較した、１１個人のドナーのＰＢＭＣから製造された抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞の同程度のレベルの増殖を示す。 １１個人のドナーのＰＢＭＣから製造された抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞における、同程度のレベルのレンチウイルス形質導入効率（ＶＣＮ）を示す。 １１個人のドナーのＰＢＭＣから製造された抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞における、フローサイトメトリーによる同程度の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ発現を示す。 １１個人のドナーのＰＢＭＣから製造された抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞が、ＢＣＭＡ発現Ｋ５６２細胞に曝された時の、同程度のレベルのＩＦＮγ放出を示す。 抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞で治療された再発性／難治性多発性骨髄腫患者の経時的な臨床応答を示す。

配列番号の簡単な説明
配列番号１～３は、本明細書で意図されるＢＣＭＡ ＣＡＲに対する例示的な軽鎖ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を示す。
配列番号４～６は、本明細書で意図されるＢＣＭＡ ＣＡＲに対する例示的な重鎖ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を示す。
配列番号７は、本明細書で意図されるＢＣＭＡ ＣＡＲに対する例示的な軽鎖配列のアミノ酸配列を示す。
配列番号８は、本明細書で意図されるＢＣＭＡ ＣＡＲに対する例示的な重鎖配列のアミノ酸配列を示す。
配列番号９は、本明細書で意図される例示的なＢＣＭＡ ＣＡＲのアミノ酸配列を示す。
配列番号１０は、本明細書で意図される例示的なＢＣＭＡ ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド配列を示す。
配列番号１１は、ヒトＢＣＭＡのアミノ酸配列を示す。
配列番号１２～２２は、様々なリンカーのアミノ酸配列を示す。
配列番号２３～３５は、プロテアーゼ切断部位および自己切断型ポリペプチド切断部位のアミノ酸配列を示す。
配列番号３６は、ＢＣＭＡ ＣＡＲをコードするベクターのポリヌクレオチド配列を示す。

Ａ．概説
当技術分野では、特定のＣＡＲおよびその標的適応症に関する治療上有効なＣＡＲ Ｔ細胞用量を予測することに対する重大な課題が存在する。本開示は、概して、改善された抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞組成物、および再発性／難治性多発性骨髄腫を治療するための方法に関する。

Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ、ＣＤ２６９または腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー、メンバー１７；ＴＮＦＲＳＦ１７としても知られている、は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバーである（例えば、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１９２（１）：１２９－１３５，２０００、およびＭａｃｋａｙ
ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，２１：２３１－２６４，２００３を参照されたい。ＢＣＭＡは、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）および増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）を結合させる（例えば、Ｍａｃｋａｙ ｅｔ ａｌ．，２００３およびＫａｌｌｅｄ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ，２０４：４３－５４，２００５を参照されたい）。非悪性細胞の中では、ＢＣＭＡは、ほとんどが形質細胞および成熟Ｂ細胞のサブセットにおいて発現されると報告されている（例えば、Ｌａａｂｉ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，７７（１）：３８９７－３９０４，１９９２；Ｌａａｂｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２２（７）：１１４７－１１５４，１９９４；Ｋａｌｌｅｄ ｅｔ ａｌ．，２００５；Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ
ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１９９（１）：９１－９７，２００４；およびＮｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７３（２）：８０７－８１７，２００４を参照されたい。ＢＣＭＡが欠損しているマウスは、健康であり、正常な数のＢ細胞を有するが、長寿の形質細胞の生存は、低い（例えば、Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ ｅｔ ａｌ．，２００４；Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ，２１（１２）：４０６７－４０７４，２００１；およびＳｃｈｉｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９３（５５３７）：２ １１１－２１ １４，２００１を参照されたい）。ＢＣＭＡ
ＲＮＡは、多発性骨髄腫細胞において、および他のリンパ腫において広く検出されており、ＢＣＭＡタンパク質は、数人の治験責任医師によって多発性骨髄腫患者からの形質細胞の表面で検出されている（例えば、Ｎｏｖａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０３（２）：６８９－６９４，２００４；Ｎｅｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，７３（１９）：５９０３－５９０９，２００７；Ｂｅｌｌｕｃｃｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０５（１０）：３９４５－３９５０，２００５；およびＭｏｒｅａｕｘ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，７０３（８）：３１４８－３１５７，２００４を参照されたい。

様々な実施形態では、本明細書で意図される改善された養子細胞治療組成物は、重篤なサイトカイン放出症候群ＣＲＳの非存在下で予期せず増殖し、インビボで臨床応答を引き起こす、治療上有効な用量の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む。

特定の実施形態では、本明細書で意図される治療上有効な用量の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む改善された組成物は、再発性／難治性多発性骨髄腫を治療するために使用される。

本発明の実施は、特にそうでないと示さない限り、本技術分野内にある化学、生物化学、有機化学、分子生物学、微生物学、遺伝子組み換え技術、遺伝学、免疫学、および細胞生物学の従来の方法を使用し、それらの多くは、説明の目的で以下に記述される。そのような技術は、文献において完全に説明される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８９）；Ｍａｎｉａｔｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（１９８２）；Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ ＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ、２００８年７月更新）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｒｏｍ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ；Ｇｌｏｖｅｒ，ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｖｏｌ．Ｉ＆ＩＩ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９８５）；Ａｎａｎｄ，Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｇｅｎｏｍｅｓ，（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９２）；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．ＨａｍｅｓおよびＳ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｅｄｓ．，１９８４）；Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９９８）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｑ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．ＳｈｅｖａｃｈおよびＷ．Ｓｔｒｏｂｅｒ，ｅｄｓ．，１９９１）；Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；ならびにジャーナルにおける研究論文、例えば、Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙを参照されたい。

Ｂ．定義
特に定義のない限り、本明細書で使用されるすべての技術的および科学的用語は、本発明が属する当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書で説明されるものと同様または同等の任意の方法および材料が本発明の実施または試験において使用され得るが、組成物、方法、および材料の好ましい実施形態が本明細書で説明される。本発明の目的で、次の用語が以下に定義される。

冠詞「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」が、論文の文法的な物体の１つを、または２つ以上を（すなわち、少なくとも１つを、または１つ以上を）指すために本明細書で使用される。例として、「ある要素」は、１つの要素または１つ以上の要素を意味する。

代替物の使用（例えば、「または」）は、代替物の１つ、両方、またはその任意の組み合わせのいずれかを意味すると理解されるべきである。

用語「および／または」は、代替物の１つまたは両方のいずれかを意味すると理解されるべきである。

本明細書で使用される場合、用語「約」または「およそ」は、基準の数量、レベル、値、数、頻度、割合、寸法、大きさ、量、重量、または長さに対して２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％でも変化する数量、レベル、値、数、頻度、割合、寸法、大きさ、量、重量、または長さを指す。一実施形態では、用語「約」または「およそ」は、基準の数量、レベル、値、数、頻度、割合、寸法、大きさ、量、重量、または長さについて、数量、レベル、値、数、頻度、割合、寸法、大きさ、量、重量、または長さの±２０％、±１５％、±１０％、±９％、±８％、±７％、±６％、±５％、±４％、±３％、±２％、または±１％の範囲を指す。

本明細書にわたって、文脈上別段の要求がない限り、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、述べられる工程もしくは要素または工程もしくは要素の群の包括を明示することが理解され、任意の他の工程もしくは要素または工程もしくは要素の群の除外を明示するものではない。「からなる」とは、語句「からなる」に続くものを含み、かつそれに限定されることを意味する。したがって、語句「からなる」は、列挙された要素が、必要であるか、または必須であり、他の要素は存在しなくてもよいということを示す。「から本質的になる」とは、語句の後に列挙される任意の要素を含み、かつ列挙された要素に対する本開示で特定された活性または活動を妨げないか、またはその一因とならない他の要素に限定されることを意味する。したがって、語句「から本質的になる」は、列挙された要素が、必要であるか、または必須であるが、列挙された要素の活性または活動に実質的に影響を与える他の要素が存在することを示す。

本明細書にわたって、「一実施形態」、「実施形態」、「特定の実施形態」、「関連する実施形態」、「ある実施形態」、「追加の実施形態」、もしくは「さらなる実施形態」、またはそれらの組み合わせへの言及は、実施形態に関連して説明される特定の特色、構造、または特徴が本発明の少なくとも１つの実施形態に含まれることを意味する。したがって、本明細書にわたる様々な箇所における前述の語句の登場は、必ずしもすべてが同じ実施形態を指しているわけではない。さらに、特定の特色、構造、または特徴は、１つ以上の実施形態において任意の適切な様式で組み合わされてもよい。一実施形態における特色の肯定的な記載は、特定の実施形態における特色を除外するための根拠としての役割を果たすこともまた理解される。

「ポリペプチド」、「ポリペプチド断片」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、特に断りのない限り、同じ意味で、および従来の意味、すなわち、アミノ酸の配列として使用される。ポリペプチドは、特定の長さに限定されていなく、例えば、それらは、完全長タンパク質配列、または完全長タンパク質配列の断片を含み、かつポリペプチドの翻訳後修飾、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化など、および当技術分野で知られている他の修飾を含んでもよく、両方とも自然発生および非自然発生である。様々な実施形態では、本明細書で意図されるＣＡＲポリペプチドは、タンパク質のＮ末端にシグナル（またはリーダー）配列を含み、それは、タンパク質の移転を同時翻訳で、または翻訳後に指示する。本明細書に開示されるＣＡＲにおいて有用な適切なシグナル配列の実例としては、これらに限定されないが、ＩｇＧ１重鎖シグナル配列およびＣＤ８αシグナル配列が挙げられる。ポリペプチドは、任意の多様な周知の組み換えおよび／または合成技術を用いて調製され得る。本明細書で意図されるポリペプチドは、本開示のＣＡＲ、または本明細書に開示されるように、ＣＡＲの１つ以上のアミノ酸から欠失、それへの追加、および／もしくはその置換を有する配列を包含する。特定の実施形態では、用語「ポリペプチド」は、異形、断片、および融合ポリペプチドをさらに含む。

「単離ペプチド」または「単離ポリペプチド」などは、本明細書で使用される場合、細胞環境から、ならびに細胞の他の成分との関連からのペプチドまたはポリペプチド分子のインビトロ単離および／または精製を指し、すなわち、それは、インビボ物質とはあまり関連していない。同様に、「単離細胞」は、インビボ組織または臓器から得られた細胞を指し、細胞外マトリックスを実質的に含まない。

ポリペプチド異形は、１つ以上の置換、欠失、追加、および／または挿入において自然発生ポリペプチドとは異なってもよい。そのような異形は、自然発生であってもよいか、または例えば、上記のポリペプチド配列のうちの１つ以上を修飾することによって合成的に生成されてもよい。例えば、特定の実施形態では、それは、１つ以上の置換、欠失、追加および／または挿を、ＣＡＲポリペプチドの結合ドメイン、ヒンジ、ＴＭドメイン、同時刺激シグナル伝達ドメインまたはプライマリシグナル伝達ドメインに導入することによってＣＡＲの結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましいかもしれない。 好ましくは、本発明のポリペプチドは、それと少なくとも約６５％、７０％、７５％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。

ポリペプチドは、「ポリペプチド断片」を含む。ポリペプチド断片は、ポリペプチドを指し、それは、単量体または多量体であり得、かつ自然発生または組み換え技術によって生成されたポリペプチドのアミノ末端欠失、カルボキシル末端欠失、および／または内部欠失または置換を有する。ある実施形態では、ポリペプチド断片は、少なくとも５～約５００個のアミノ酸の長さのアミノ酸鎖を含み得る。ある実施形態では、断片は、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、または４５０個のアミノ酸の長さであることが認識されるであろう。

融合ポリペプチドおよび融合タンパク質は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個以上のポリペプチド区分を有するポリペプチドを指す。

本明細書で使用される場合、用語「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ＲＮＡ、ゲノムＲＮＡ（ｇＲＮＡ）、プラス鎖ＲＮＡ（ＲＮＡ（＋））、マイナス鎖ＲＮＡ（ＲＮＡ（－））、ゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、または組み換えＤＮＡを指す。ポリヌクレオチドには、一本鎖および二本鎖ポリヌクレオチドが含まれる。好ましくは、本発明のポリヌクレオチドは、本明細書で説明される任意の参照配列（例えば、配列表を参照されたい）と少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドまたは異形を含み、典型的には、異形は、参照配列の少なくとも１つの生物活性を維持する。様々な実例のための実施形態では、本発明は、一部では、発現ベクター、ウイルスベクター、および移転プラスミドを含むポリヌクレオチド、組成物、ならびに同じものを含む細胞を意図する。

本明細書で使用される場合、「単離ポリヌクレオチド」は、ポリヌクレオチドを指し、それは、自然発生の状態でそれの側面に位置する配列から精製されていて、例えば、通常は断片に隣接する配列から取り除かれたＤＮＡ断片である。「単離ポリヌクレオチド」はまた、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、組み換えＤＮＡ、または自然には存在しなく、人間の手で作製された他のポリヌクレオチドを指す。

発現ベクターに存在する「制御要素」または「調節配列」は、宿主細胞タンパク質と相互作用して、転写および翻訳を実行するベクターのそれらの非翻訳領域、複製の起源、選択カセット、プロモーター、エンハンサー、翻訳開始シグナル（Ｓｈｉｎｅ Ｄａｌｇａｒｎｏ配列またはＫｏｚａｋ配列）イントロン、ポリアデニル化配列、５’および３’非翻訳領域、である。そのような要素は、それらの強度および特異性において異なってもよい。使用されるベクター系および宿主によって、ユビキタスプロモーターおよび誘導プロモーターを含む、任意の数の適切な転写および翻訳要素が使用されてもよい。

「内因性」制御配列は、ゲノムにおける規定の遺伝子と自然に連結される制御配列である。「外因性」制御配列は、遺伝子操作（すなわち、分子生物学的手法）によって遺伝子と並ぶように配置され、それにより、その遺伝子の転写が連結されたエンハンサー／プロモーターによって指示される制御配列である。「異種」制御配列は、遺伝子操作されている細胞とは異なる種からの外因性配列である。

用語「プロモーター」は、本明細書で使用される場合、ＲＮＡポリメラーゼが結合するポリヌクレオチドの（ＤＮＡまたはＲＮＡ）の認識部位を指す。ＲＮＡポリメラーゼは、プロモーターに操作可能に連結されたポリヌクレオチドを開始し、転写する。特定の実施形態では、哺乳類細胞において操作的なプロモーターは、転写が開始される部位から上流に２５～３０個の塩基に位置づけられるＡＴリッチ領域および／または転写の開始から上流に７０～８０個の塩基で見出される別の配列、Ｎが任意のヌクレオチドであってもよいＣＮＣＡＡＴ領域を含む。

用語「エンハンサー」は、強化された転写を提供することが可能な配列を含有し、場合によっては、他の制御配列に関連するそれらの配向とは無関係に機能することができるＤＮＡの区分を指す。エンハンサーは、プロモーターおよび／または他のエンハンサー要素と協力的または追加的に機能することができる。用語「プロモーター／エンハンサー」は、プロモーターおよびエンハンサーの両方に機能を提供することが可能な配列を含有するＤＮＡの区分を指す。

用語「操作可能に連結される」は、説明される成分が、それらの意図する様式でそれらが機能することを可能にする関係にある並置を指す。一実施形態では、用語は、核酸発現制御配列（プロモーターおよび／またはエンハンサーなど）と、第２のポリヌクレオチド配列、例えば、対象のポリヌクレオチドとの間の機能的連結を指し、そこで、発現制御配列は、第２の配列に対応する核酸の転写を指示する。

用語「ベクター」は、本明細書において、他の核酸分子を移転または輸送することが可能な核酸分子を指すために使用される。

用語「レンチウイルスベクター」は、主にレンチウイルス由来のＬＴＲを含む、構造的および機能的遺伝要素、またはそれらの一部を含有するウイルスベクターまたはプラスミドを指す。

特定の実施形態では、用語「レンチウイルスベクター」、「レンチウイルス発現ベクター」は、レンチウイルス移転プラスミドおよび／または感染性レンチウイルス粒子を指すために使用されてもよい。本明細書において、クローニング部位、プロモーター、調節要素、異種核酸などの要素が言及される場合、それは、これらの要素の配列が、レンチウイルス粒子においてはＲＮＡ型で存在し、ＤＮＡプラスミドにおいてはＤＮＡ型で存在することが理解されるためである。

「自己不活性化」（ＳＩＮ）ベクターは、複製欠損ベクター、例えば、レトロウイルスまたはレンチウイルスベクターを指し、それは、Ｕ３領域として知られる右の（３’）ＬＴＲエンハンサープロモーター領域が、１回目のウイルス複製を超えるウイルス転写を防止するように修飾されている（例えば、欠失または置換によって）。自己不活性化は、好ましくは、ベクターＤＮＡ、すなわち、ベクターＲＮＡを精鋭するために使用されるＤＮＡの３’ＬＴＲのＵ３領域における欠失の導入において介して達成される。したがって、逆転写の間、この欠失は、プロウイルスＤＮＡの５’ＬＴＲに移転される。特定の実施形態では、ＬＴＲの転写活性を大いに減少させるか、または完全に消滅させるように十分なＵ３配列を排除し、それによって、形質導入された細胞における完全長ベクターＲＮＡの生成を大いに減少させるか、または消滅させることが望ましい。ＨＩＶ系レンチベクターの場合、そのようなベクターは、ベクター力価における有意な減少を伴わずに、ＬＴＲ ＴＡＴＡボックスの除去（例えば、－４１８～－１８からの欠失）を含む、有意なＵ３欠失に耐えることが発見されている。

Ｃ．抗ＢＣＭＡキメラ抗原受容体
様々な実施形態では、概して、Ｔ細胞の細胞毒性をＢＣＭＡ発現細胞へ方向転換する人工受容体が提供される。これらの遺伝し操作された人工受容体は、本明細書において、抗ＢＣＭＡキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と称される。

特定の実施形態で意図される抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、シグナルペプチド、抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ同時刺激ドメイン、およびＣＤ３ζプライマリシグナル伝達ドメインを含む。

「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインは、一本鎖ポリペプチドにおいて、いずれかの配向（例えば、ＶＬ－ＶＨまたはＶＨ－ＶＬ）で存在する。概して、ｓｃＦｖポリペプチドはさらに、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーをＶＨドメインとＶＬドメインとの間に含む。

「Ｖ_Ｈ」または「ＶＨ」は、免疫グロブリン重鎖の可変領域を指す。「Ｖ_Ｌ」または「ＶＬ」は、免疫グロブリン軽鎖の可変領域を指す。様々な実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号７に記載される軽鎖配列および配列番号８に記載される重鎖配列を含む。

軽鎖および重鎖可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」とも呼ばれる３つの超可変領域を含有する。特定の実施形態では、ｓｃＦｖ軽鎖は、配列番号１～３に記載されるＣＤＲＬ１－３配列を含み、ｓｃＦｖ重鎖は、配列番号４～６に記載されるＣＤＲＨ１－３配列を含む。

ある実施形態では、本明細書で意図されるＣＡＲは、例えば、適当な間隔および分子の配座のために添加されたリンカー残渣を様々なドメインの間に含んでもよい。特定の実施形態では、リンカーは、以下のアミノ酸配列を含む：ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号２２）（Ｃｏｏｐｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０１（４）：１６３７－１６４４（２００３））。

特定の実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８αヒンジ領域を含む。

「膜貫通ドメイン」は、細胞外結合部分および細胞内シグナル伝達を融合し、ＣＡＲをＴ細胞のプラズマ膜に固定するＣＡＲの部分である。特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α膜貫通領域を含む。

特定の実施形態では、本明細書で意図されるＣＡＲは、「同時刺激シグナル伝達ドメイン」および「プライマリシグナル伝達ドメイン」を含む。本明細書で使用される場合、用語「同時刺激シグナル伝達ドメイン」または「同時刺激ドメイン」は、同時刺激分子の細胞内シグナル伝達を指す。プライマリシグナル伝達ドメインは、ＴＣＲ複合体のプライマリ活性化を刺激的な方法または阻害的な方法のいずれかで調節する。刺激的な様式で作動するプライマリシグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシン系活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして知られるシグナリングモチーフを含有してもよい。特定の実施形態では、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、ＣＤ１３７同時刺激シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ζプライマリシグナル伝達ドメインを含む。

好ましい実施形態では、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含む。

特定の実施形態では、配列番号９に記載される抗ＢＣＭＡ ＣＡＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが提供される。

特定の実施形態で意図されるポリヌクレオチドは、コード配列自体の長さにかかわらず、本明細書の他の箇所で開示されるか、または本技術分野で知られている他のＤＮＡ配列、例えば、プロモーターおよび／またはエンハンサー、非翻訳領域（ＵＴＲ）、シグナル配列、Ｋｏｚａｋ配列、ポリアデニル化シグナル、追加の制限酵素部位、多重クローニング部位、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、リコンビナーゼ認識部位（例えば、ＬｏｘＰ、ＦＲＴ、および部位）、終止コドン、転写終止シグナル、ならびに自己切断型ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、エピトープ標識と組み合わされてもよく、それにより、それらの全体の長さが大幅に変化してもよい。そのため、ほとんどいかなる長さのポリヌクレオチドが使用されてもよく、全長が調製の容易性および目的とする組み換えＤＮＡプロトコルでの使用によって制限されることが好ましいことが意図される。

特定の実施形態では、本明細書で意図される抗ＢＣＭＡ ＣＡＲをコードするベクターは、ウイルスベクターであり、プロモーターおよび／またはエンハンサーなどの外因性、内因性、または異種制御配列を含むであろう。

特定の実施形態では、ベクターは、本明細書で意図される抗ＢＣＭＡ ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドに操作可能に連結された、骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、負の制御領域欠失、ｄｌ５８７ｒｅｖプライマー結合部位置換（ＭＮＤ）プロモーター（Ｃｈａｌｌｉｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．６９（２）：７４８－５５（１９９５））を含む。

特定の実施形態では、細胞（例えば、Ｔ細胞）は、本明細書で意図される抗ＢＣＭＡ ＣＡＲをコードするレトロウイルスベクター、例えば、レンチウイルスベクターで形質導入される。好ましい実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス、ＨＩＶ１型を含む）である。特定の好ましい実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＳＩＮ ＨＩＶ－１ベクターである。

Ｄ．抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞
本開示は、特定の実施形態において、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲを含むＴ細胞、例えば、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を意図する。用語「Ｔ細胞」または「Ｔリンパ球」は、当該技術分野において承認されていて、胸腺細胞、未熟Ｔリンパ球、成熟Ｔリンパ球、静止Ｔリンパ球、または活性化Ｔリンパ球を含むことを目的とする。Ｔ細胞は、Ｔヘルパー（Ｔｈ）細胞、例えば、Ｔヘルパー１（Ｔｈ１）またはＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞であり得る。Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞（ＨＴＬ；ＣＤ４^＋Ｔ細胞）ＣＤ４^＋Ｔ細胞、細胞毒性Ｔ細胞（ＣＴＬ；ＣＤ８^＋Ｔ細胞）、ＣＤ４^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^－ＣＤ８^－Ｔ細胞、またはＴ細胞の任意の他のサブセットであり得る。特定の実施形態で使用するための適切なＴ細胞の他の実例のための集団は、未感作Ｔ細胞および記憶Ｔ細胞を含む。

本発明のＴ細胞は、自家／自源（「自己」）または非自家（「非自己」、例えば、同種、同系、または異種）であり得る。「自家」は、本明細書で使用される場合、同じ対象からの細胞を指す。「同種」は、本明細書で使用される場合、比較する細胞とは遺伝子学的に異なる同じ種の細胞を指す。「同系」は、本明細書で使用される場合、比較する細胞と遺伝子学的に同一である異なる対象の細胞を指す。「異種」は、本明細書で使用される場合、比較する細胞とは異なる種の細胞を指す。好ましい実施形態では、本発明の細胞は、同種である。

Ｔ細胞は、これらに限定されないが、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺問題、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍を含む多数のソースから得られ得る。ある実施形態では、Ｔ細胞は、沈降、例えば、ＦＩＣＯＬＬ（登録商標）分離などの当業者に周知のかなり多数の技術を用いて対象から採取された血液の単位から得られ得る。一実施形態では、個人の循環血液からの細胞は、アフェレーシスによって得られる。アフェレーシス生成物は、典型的には、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球、および血小板を含むリンパ球を含有する。一実施形態では、アフェレーシスによって採取された細胞は、プラズマ分画を除去し、細胞を、後続する処理のために適当な緩衝剤または培地に配置するために洗浄されてもよい。細胞は、ＰＢＳ、またはカルシウム、マグネシウム、および他のすべてではない場合、ほとんどの二価陽イオンが欠乏している別の適切な溶液で洗浄され得る。当業者によって理解されるように、洗浄ステップは、半自動フロースルー遠心分離機を使用することによってなど、当業者に知られている方法によって遂行されてもよい。例えば、Ｃｏｂｅ２９９１細胞プロセッサー、ｔｈｅ Ｂａｘｔｅｒ ＣｙｔｏＭａｔｅなど。洗浄後、細胞は、多様な生体適合性緩衝剤、または緩衝剤を有する、または有さない他の食塩水中で再懸濁されてもよい。ある実施形態では、アフェレーシス試料の望ましくない成分は、細胞の直接再懸濁された養培地で除去されてもよい。

Ｔ細胞は、知られている方法を用いて単離の後に遺伝子操作され得るか、またはＴ細胞は、遺伝子操作される前に、インビトロで活性化され、増殖（または、前駆細胞の場合、分化）され得る。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、本明細書で意図されるキメラ抗原受容体で遺伝子操作され（例えば、ＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスベクターで形質導入され）、その後、インビトロで活性化され増殖される。様々な実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＡＲを発現するために、遺伝子修飾の前または後で活性化され、増殖され得る。

一実施形態では、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲを発現するＴ細胞は、細胞が解凍時に実行可能なままであるように、凍結保存される。本明細書で使用される場合、「凍結保存」は、氷点下温度、例えば、（典型的には）７７Ｋまたは－１９６℃（液体窒素の沸点）に冷却することによる細胞の保存を指す。凍結防止剤は、しばしば、低温での冷凍または室温への温度上昇による損傷から保存されている細胞を防ぐために、氷点下温度で使用される。凍結保存剤および最適な冷却速度が、Ｔ細胞の負傷から保護し得る。使用され得る凍結防止剤としては、これらに限定されないが、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（ＬｏｖｅｌｏｃｋおよびＢｉｓｈｏｐ，Ｎａｔｕｒｅ，１９５９；１８３：１３９４－１３９５；Ａｓｈｗｏｏｄ－Ｓｍｉｔｈ，Ｎａｔｕｒｅ，１９６１；１９０：１２０４－１２０５）、グリセロール、ポリビニルピロリジン（Ｒｉｎｆｒｅｔ，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９６０；８５：５７６）、およびポリエチレングリコール（ＳｌｏｖｉｔｅｒおよびＲａｖｄｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，１９６２；１９６：４８）が挙げられる。好ましい冷却速度は、１℃～３℃／分である。少なくとも２時間後、Ｔ細胞は、－８０℃の温度に到達し、長期用極低温貯蔵容器内などでの永久貯蔵のために液体窒素（－１９６℃）に直接配置され得る。

Ｅ．組成物および配合物
本明細書で意図される組成物は、治療上有効な量の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む。組成物は、これらに限定されないが、医薬組成物を含む。「医薬組成物」は、単独、または１つ以上の他の様式の療法を組み合わせて、細胞または動物への投与のために、薬学的に許容される、または生理学的に許容される溶液中で配合された組成物を指す。必要に応じて、組成物は、他の薬剤、例えば、サイトカイン、成長因子、ホルモン、小分子、化学療法、プロドラッグ、薬物、抗体、または他の様々な薬学的に活性な薬剤などと組み合わせて投与されてもよい。追加の薬剤が、目的とする療法を送達する組成物の能力に悪影響を与えないことを条件として、組成物中に含まれてもよい他の成分に事実上制限はない。

語句「薬学的に許容される」は、妥当な利益／リスク比に見合う、過度な毒性、刺激、アレルギー反応、もしくは他の問題、または合併症を伴わない、ヒトおよび動物の組織に接触する使用に対して健全な医学的判断の範囲内で適切である、それらの化合物、材料、組成物、および／または剤形を指すために本明細書において使用される。

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」は、ヒトまたは家畜に使用するために許容されているとして、米国食品医薬品局によって認可されている任意の補助剤、担体、賦形剤、流動促進剤、甘味料、希釈剤、保存料、染料／着色料、調味料、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、安定剤、等張剤、溶媒、界面活性剤、または乳化剤を制限なしに含む。例示的な薬学的に許容される担体としては、これらに限定されないが、糖類、例えば、ラクトース、グルコース、およびサッカロース；でんぷん、例えば、コーンスターチおよびジャガイモでんぷん；セルロースおよびそれの誘導体、例えば、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、およびセルロースアセテート；トラガカント；モルト；ゼラチン；タルク；ココアバター、ワックス、獣脂および植物性脂肪、パラフィン、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、酸化亜鉛；油、例えば、ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ごま油、オリーブ油、コーン油、および大豆油；グリコール、例えば、プロピレングリコール；ポリオール、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコール；エステル、例えば、エチルオレエートおよびエチルラウレート；寒天；緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；アルギン酸；パイロジェンフリー水；等張食塩水；リンガー溶液；エチルアルコール；リン酸緩衝液；および薬学的配合物に使用される任意の他の相溶性物質が挙げられる。

特定の実施形態では、組成物は、ある量、およびより好ましくは、治療上有効な量の本明細書で意図される抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ発現Ｔ細胞を含む。

本明細書で使用される場合、用語「量」または「用量」は、臨床結果を含む、有利な、または所望の予防的または治療的結果を得るのに十分な抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞の「有効な量」、「有効な用量」、「有効量」、または「有効用量」を指す。

「治療上有効な量」または「治療上有効な用量」の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞はまた、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞の任意の毒性または有害作用、例えば、ＣＲＳを治療上有益な効果が上回るものである。用語「治療上有効な量」は、対象（例えば、患者）を「治療」するのに有効である量を含む。一実施形態では、治療上有効な用量は、対象における多発性骨髄腫を治療するための抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞の最低限の有効な用量（ＭＥＤ）である。一実施形態では、治療上有効な用量は、対象において解決不可能なＣＲＳを引き起こさない抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞の最大耐用量（ＭＴＤ）である。

特定の実施形態では、組成物は、好ましくは、非経口投与、例えば、血管内（静脈内または動脈内）投与のために配合される。好ましい実施形態では、本明細書で意図される組成物は、単一用量で対象に静脈内に注入される。

一実施形態では、対象に投与される組成物における抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ＋Ｔ細胞の量は、少なくとも約５．０×１０^７の細胞、少なくとも約１５．０×１０^７の細胞、少なくとも約４５．０×１０^７の細胞、少なくとも約８０．０×１０^７の細胞、または少なくとも約１２．０×１０^８の細胞である。

一実施形態では、対象に投与される組成物における抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ＋Ｔ細胞の量は、約５．０×１０^７の細胞を超え、約１５．０×１０^７の細胞を超え、約４５．０×１０^７の細胞を超え、約８０．０×１０^７の細胞を超え、または約１２．０×１０^８の細胞を超える。

一実施形態では、対象に投与される組成物における抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ＋Ｔ細胞の量は、約５．０×１０^７の細胞～約１５．０×１０^７の細胞、約５．０×１０^７の細胞～約４５．０×１０^７の細胞、約５．０×１０^７の細胞～約８０．０×１０^７の細胞、または約５．０×１０^７の細胞～約１２．０×１０^８の細胞である。

一実施形態では、対象に投与される組成物における抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ＋Ｔ細胞の量は、約１５．０×１０^７の細胞～約４５．０×１０^７の細胞、約１５．０×１０^７の細胞～約８０．０×１０^７の細胞、または約１５．０×１０^７の細胞～約１２．０×１０^８の細胞である。

一実施形態では、対象に投与される組成物における抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ＋Ｔ細胞の量は、少なくとも５．０×１０^７の細胞±２０％、少なくとも１５．０×１０^７の細胞±２０％、少なくとも４５．０×１０^７の細胞±２０％、少なくとも８０．０×１０^７の細胞、±２０％、または少なくとも１２．０×１０^８の細胞±２０％である。

一実施形態では、対象に投与される組成物における抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ＋Ｔ細胞の量は、５．０×１０^７の細胞±２０％を超える、少なくとも１５．０×１０^７の細胞±２０％を超える、少なくとも４５．０×１０^７の細胞±２０％を超える、少なくとも８０．０×１０^７の細胞±２０％を超える、または少なくとも１２．０×１０^８の細胞±２０％を超える。

一実施形態では、対象に投与される組成物における抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ＋Ｔ細胞の量は、５．０×１０^７の細胞±２０％～１５．０×１０^７の細胞±２０％、５．０×１０^７の細胞±２０％～４５．０×１０^７の細胞±２０％、５．０×１０^７の細胞±２０％～８０．０×１０^７の細胞±２０％、または５．０×１０^７の細胞±２０％～１２．０×１０^８の細胞±２０％である。

一実施形態では、対象に投与される組成物における抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ＋Ｔ細胞の量は、１５．０×１０^７の細胞±２０％～４５．０×１０^７の細胞±２０％、１５．０×１０^７の細胞±２０％～８０．０×１０^７の細胞±２０％、または１５．０×１０^７の細胞±２０％～１２．０×１０^８の細胞±２０％である。

本明細書で提供される使用のために、細胞は、概して、１リットル以下の体積であり、５００ｍＬ以下、さらに２５０ｍＬまたは１００ｍＬ以下であり得る。

特定の実施形態では、医薬組成物は、１つ以上の薬学的にか、または生理学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて治療上有効な量の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む。

治療上有効な用量の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む医薬組成物は、緩衝剤、例えば中性緩衝食塩水、リン酸緩衝食塩水など；炭水化物、例えば、グルコース、マンノース、サッカロース、またはデキストラン、マンニトール；タンパク質；ポリペプチドまたはアミノ酸、例えば、グリシン；酸化防止剤；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡまたはグルタチオン；補助剤（例えば、水酸化アルミニウム）；および保存料を含んでもよい。

液体医薬組成物は、それらが溶液、懸濁液、または他の同様の形態にかかわらず、以下のうちの１つ以上を含んでもよい：無菌の希釈剤、例えば、注入用の水、食塩水、好ましくは、生理食塩水、リンガー溶液、生理食塩液、固定油、例えば、溶媒または懸濁化剤として機能を果たし得る合成モノグリセリドまたはジグリセリド、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の溶媒；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン；酸化防止剤、例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸；緩衝剤、例えば、アセテート、クエン酸塩、またはリン酸、および張度の調節のための薬剤、例えば、デキストロース。非経口調合液は、アンプル、使い捨てシリンジ、またはガラスもしくはプラスチックで作製された複数回投与用バイアルに収納され得る。注入可能な医薬組成物は、好ましくは無菌である。

一実施形態では、本明細書で意図される抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞組成物は、薬学的に許容される細胞養培地内で配合される。そのような組成物は、ヒトの対象への投与に適切である。特定の実施形態では、薬学的に許容される細胞養培地は、無血清培地である。

無血清培地は、簡素化され、かつより良く定義された組成物、低い程度の汚染物、感染体の潜在的源の除去、および低コストを含む、血清含有培地と比較していくつかの利点を有する。様々な実施形態では、無血清培地は、動物質を含まず、任意的にタンパク質を含まなくてもよい。任意的に、培地は、バイオ医薬的に許容される組み換えタンパク質を含有してもよい。「動物質を含まない」培地は、成分が非動物源由来である培地を指す。組み換えタンパク質は、動物質を含まない培地における天然の動物タンパク質に取って代わり、栄養物は、合成、植物、または微生物起源から得られる。対照的に、「タンパク質を含まない」培地は、タンパク質を実質的に含まないと定義される。

特定の組成物に使用される無血清培地の実例としては、これらに限定されないが、ＱＢＳＦ－６０（Ｑｕａｌｉｔｙ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，Ｉｎｃ．）、ＳｔｅｍＰｒｏ－３４（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、およびＸ－ＶＩＶＯ１０が挙げられる。

好ましい一実施例では、本明細書で意図される抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む組成物は、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａを含む溶液中で配合される。

他の好ましい一実施例では、本明細書で意図される抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む組成物は、凍結保存培地を含む溶液中で配合される。例えば、凍結保存剤を有する凍結保存培地は、解凍後に高い細胞生存結果を維持するために使用されてもよい。特定の組成物に使用される凍結保存培地の実例としては、これらに限定されないが、ＣｒｙｏＳｔｏｒ
ＣＳ１０、ＣｒｙｏＳｔｏｒ ＣＳ５、およびＣｒｙｏＳｔｏｒ ＣＳ２が挙げられる。

より好ましい実施形態では、本明細書で意図される抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む組成物は、５０：５０のＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ対ＣｒｙｏＳｔｏｒ ＣＳ１０を含む溶液中で配合される。

Ｆ．治療方法
本明細書で意図される多発性骨髄腫を治療するための方法は、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲを発現する治療上有効な量のＴ細胞を含む組成物を対象に投与することを含む。

本明細書で使用される場合、用語「個人」および「対象」は、しばしば、同じ意味で使用され、多発性骨髄腫を有するヒトを指す。好ましい実施形態では、対象は、再発性／難治性多発性骨髄腫を有するヒトを指す。

本明細書で使用される場合、用語「患者」は、多発性骨髄腫、より好ましくは、再発性／難治性多発性骨髄腫と診断された対象を指す。

本明細書で使用される場合、「治療」または「治療する」は、多発性骨髄腫、より好ましくは、再発性／難治性多発性骨髄腫の症状または病状に対する任意の有益な、または望ましい効果を含み、多発性骨髄腫、より好ましくは、再発性／難治性多発性骨髄腫の１つ以上の推測可能なマーカーにおける最小の低下でさえも含む場合がある。治療は、多発性骨髄腫の症状の低下もしくは改善、または多発性骨髄腫の進行の遅延のいずれかを任意的に含む。「治療」は、必ずしも、多発性骨髄腫またはその関連する症状の完全な根絶もしくは治癒を示すわけではない。

本明細書で使用される場合、「予防する」、および同様の語、例えば、「予防された」、「予防している」などは、多発性骨髄腫の再発の可能性を予防する、阻止する、または低減するための手段を示す。

多発性骨髄腫は、成熟形質細胞形態のＢ細胞悪性腫瘍であり、これらの種類の細胞の単一クローンの腫瘍性形質変化によって特徴付けられる。これらの形質細胞は、ＢＭにおいて増殖し、隣接する骨、および時々、血液を侵す場合がある。異型の多発性骨髄腫は、顕性多発性骨髄腫、くすぶり型多発性骨髄腫、形質細胞白血病、非分泌型骨髄腫、ＩｇＤ骨髄腫、骨硬化性骨髄腫、骨の孤立性形質細胞腫、および髄外性形質細胞腫（例えば、Ｂｒａｕｎｗａｌｄ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ），Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ２００１）を参照されたい）が挙げられる。

特定の実施形態では、治療上有効な量の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む組成物は、再発性／難治性多発性骨髄腫を治療するために対象に投与される。「再発する」は、向上または寛解期間の後に癌の再来、またそのは再来の兆候および症状の診断を指す。「難治性」は、特定の治療剤での療法に耐性を示す、または応答しない癌を指す。癌は、治療の開始から難治性である（すなわち、治療剤への最初の暴露に応答しない）か、または第１の治療期間にわたって、もしくは後続する治療期間の間のいずれかに治療剤への耐性を発現させた結果として難治性であり得る。

特定の実施形態では、本明細書で意図される組成物は、少なくとも１つのプロテアソーム阻害薬および／または免疫調節薬剤（ＩＭｉＤ）を含む、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上の治療で不成功であった再発性／難治性多発性骨髄腫を有する対象に投与される。一実施形態では、対象の多発性骨髄腫は、少なくとも１つのプロテアソーム阻害薬およびＩＭｉＤを含む、３つの治療計画に対して難治性である。一実施形態では、対象の多発性骨髄腫は、１つ以上の治療計画に対して二重難治性である。

対象の多発性骨髄腫が難治性であるプロテアソーム阻害薬の実例としては、これらに限定されないが、ボルテゾミブおよびカルフィルゾミブが挙げられる。

対象の多発性骨髄腫が難治性であるＩＭｉＤの実例としては、これらに限定されないが、サリドマイド、レナリドミド、およびポマリドミドが挙げられる。

多発性骨髄腫が難治性であり得る他の治療の実例としては、これらに限定されないが、デキサメタゾン、ならびにエロツズマブ、ダラツムマブ、ＭＯＲ０３０８７、イサツキシマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、シルツキシマブ、トシリズマブ、エルシリモマブ、アジントレル、リツキシマブ、トシツモマブ、ミラツズマブ、ルカツムマブ、ダセツズマブ、フィギツムマブ、ダロツズマブ、ＡＶＥ１６４２、タバルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、およびニボルマブからなる群から選択される抗体系療法が挙げられる。

一実施形態では、対象の多発性骨髄腫は、ダラツムマブを有する治療に対して難治性である。

特定の実施形態では、対象の多発性骨髄腫は、ＩＭｉＤ、プロテアソーム阻害薬、およびデキサメタゾンを有する治療に対して難治性である。

本明細書で意図される方法は、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞組成物の投与前に、再発性／難治性多発性骨髄腫を有する対象を自家造血幹細胞移植で治療することをさらに含んでもよい。

本明細書で意図される方法は、例えば、リンパ枯渇化学療法が投与の１～４日（例えば、１、２、３、または４日）前に終了するなど、本明細書で意図される抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞組成物の投与前に対象をリンパ枯渇することをさらに含んでもよい。特定の実施形態では、リンパ枯渇は、メルファラン、サイトキサン、シクロホスファミド、およびフルダラビンの１つ以上を投与することを含む。一実施形態では、対象は、本明細書で意図される抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞組成物の投与前に、シクロホスファミド３００ｍｇ／ｍ^２およびフルダラビン３０ｍｇ／ｍ^２でリンパ枯渇される。

本明細書に挙げられているすべての出版物、特許出願、および発行された特許は、各個々の出版物、特許出願、および発行された特許が、参照により組み込まれることが具体的にかつ個別に示されているかのように、参照により本明細書に組み込まれる。

前述の発明は、理解を明確にする目的のために説明および実施例を手段として詳述されているが、ある変更および修正が、添付の請求項の要旨および範囲を逸脱することなく、本発明になされてもよいことは、本発明の教示の観点から当業者は、すぐに分かるであろう。以下の実施例は、限定を目的としているのではなく、説明のみを目的として提供される。当業者は、ほぼ同様の結果を得るために変更または修正され得る多様な重要ではないパラメータを容易に認識するであろう。

実施例１
ＢＣＭＡ ＣＡＲの構造
ネズミ抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ抗体を含有するＣＡＲは、抗ＢＭＣＡ ｓｃＦｖに操作可能に連結されたＭＮＤプロモーター、ＣＤ８αからのヒンジおよび膜貫通ドメイン、およびＣＤ３ζ鎖の細胞内シグナル伝達が続くＣＤ１３７同時刺激ドメインを含有するように設計した。例えば、図１を参照されたい。図１に示される抗ＢＭＣＡ ＣＡＲは、Ｔ細胞の表面発現のためのＣＤ８αシグナルペプチド（ＳＰ）配列を含む。例示的な抗ＢＭＣＡ
ＣＡＲのポリヌクレオチド配列は、配列番号１０に記載され、抗ＢＭＣＡ ＣＡＲの例示的なポリペプチド配列は、配列番号９に記載され、例示的なＣＡＲ構成概念のベクター地図は、図１に示される。表３は、抗ＢＭＣＡ ＣＡＲレンチウイルスベクターの様々なヌクレオチド区分に対する同一性、ジェンバンク基準、ソース名、および引用を示す。

実施例２
抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞製造プロセス
固有の抗ＢＣＭＡ０２ＣＡＲ Ｔ細胞生成物を各患者の治療に製造する。抗ＢＣＭＡ０２ＣＡＲ Ｔ細胞生成物の製造プロセスの信頼性を、１１個人の正常ドナーＰＢＭＣから抗ＢＣＭＡ０２ＣＡＲ Ｔ細胞を生成することによって評価した。各ドナーからの抗ＢＣＭＡ０２ＣＡＲ Ｔ細胞の増殖は、同時に行われた同等の形質導入されていない培養物と同程度であった（図２Ａ）。

培養期間（１０日目）の最後に、Ｔ細胞導入効率を、ｑＰＣＲで統合されたレンチウイルスの数、およびレンチウイルス特異的プライマセット（ベクターコピー数、ＶＣＮ）を定量化することによって評価した。１１人のドナーからの抗ＢＣＭＡ０２ＣＡＲ Ｔ細胞培養は、同程度のレンチウイルス形質導入効率を示した（図２Ｂ）。抗ＢＣＭＡ０２ＣＡＲ陽性Ｔ細胞の振動数をフローサイトメトリーによって測定し、ＢＣＭＡ発現が、すべてのドナーで同程度であることが分かった（図２Ｃ）。

各抗ＢＣＭＡ０２ＣＡＲ Ｔ細胞生成物の活性を、ＢＣＭＡを発現するように操作されたＫ５６２細胞との共培養の後のＩＦＮγ放出によって評価した。すべての抗ＢＣＭＡＣＡＲ０２Ｔ細胞生成物は、ＢＣＭＡ発現Ｋ５６２細胞に曝されたとき、治療的に適切なレベルのＩＦＮγ放出を示した（図２Ｄ）。

実施例３
抗ＢＣＭＡ０２ＣＡＲ Ｔ細胞は、再発性／難治性多発性骨髄腫のヒト臨床試験において療活性を示す。
序論
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法は、いくつかの血液学的悪性腫瘍で見られる堅固で持続的な臨床応答を証明した。しかしながら、ＣＤ１９以外では、ＣＡＲ Ｔ細胞の有望さを支持する臨床データは、制限されている。ＣＡＲ Ｔ細胞安全性および有効性の可能性を、再発性／難治性多発性骨髄腫（ＭＭ）、制限された治療選択肢を有する患者集団において試験した。Ｔ細胞をＭＭに向け直すために、細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、悪性骨髄腫細胞、形質細胞、およびいくつかの成熟Ｂ細胞のみによってほぼ均一に発現される腫瘍壊死因子スーパーファミリーの一員を標的にした。抗ＢＣＭＡ活性の初期の裏付けが、最近、ＣＤ２８同時刺激ドメインで抗ＢＣＭＡＣＡＲをコードするガンマ－レトロウイルスベクターで形質導入されたＴ細胞を用いて証明されたが、有意なサイトカイン放出症候群が、高い病気の負担を有する患者において生じた（Ａｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ２０１６）。ヒトにおける治療上有効な用量の抗ＢＣＭＡ０２ＣＡＲ Ｔ細胞は、予測不可能であるため、用量漸増試験を実行した。

方法
抗ＢＣＭＡ０２ＣＡＲ Ｔ細胞を、プロテアソーム阻害薬および免疫調節剤を含む少なくとも３つの事前レジメンを受けた、再発性および／または難治性ＢＣＭＡ陽性ＭＭを有するか、または二重難治性である患者に投与した。簡潔に言うと、末梢血単核細胞を、白血球除去輸血を介して採取し、形質導入および増殖のために集中製造施設へ移転した。患者は、研究－５日目、－４日目、および－３日目にシクロホスファミド３００ｍｇ／ｍ^２およびフルダラビン３０ｍｇ／ｍ^２でリンパ枯渇し、その後、０日目に抗ＢＣＭＡ０２ＣＡＲ Ｔ細胞の単一注入を受けた。

ＣＡＲ Ｔ細胞の平均ベクターコピー数（ＶＣＮ）を９人の患者に対して決定した。表４．

結果
９人の患者は、５．０×１０^７のＣＡＲ＋Ｔ細胞、１５．０×１０^７のＣＡＲ＋Ｔ細胞、および４５．０×１０^７のＣＡＲ＋Ｔ細胞の３つの用量コホートにおいて抗ＢＣＭＡ０２ＣＡＲ Ｔ細胞を注入された。細胞を採取し、すべての患者において製造および放出が成功した。９人の注入された対象の登録時の平均年齢は、５８歳（４３～６８）であり、６７％が男性であった。診断からの平均期間は、６年（１．３～８．６）であった。事前の治療ラインの平均数は、６（４～１０）であり、１００％の患者が少なくとも１つの事前の自家幹細胞移植を受け、６７％が事前のダラツムマブまたはＣＤ３８マブを受け、８９％が事前のレナリドミドを受け、７８％が事前のポマリドミドを受け、１００％が事前のボルテゾミブを受け、７８％が事前のカルフィルゾミブを受けた。

現在まで、用量制限毒性、神経毒性＞グレード２、またはグレード３以上のサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）は、観察されていない。また、昇圧剤、トシリルズマブ、またはコルチコステロイドでの理療を必要とした患者はいなかった。グレード１またはグレード２のＣＲＳが、６／９人（６７％）の治療を受けた患者において報告された。ＣＲＳに加えて、最も多い治療中に発生した有害事象は、好中球減少（８９％）、白血球減少（６７％）、および貧血（４４％）であった。

臨床応答は、すべての容量コホートで観察された。最初のコホートの後、すべての患者は、研究に残り、１５．０×１０^７以上のＣＡＲ＋Ｔ細胞で治療された６人の患者における全奏効率は、２つの厳密完全奏功（ＣＲ）を含んで、８３％であった（表５を参照されたい）。驚くことに、５．０×１０^７のＣＡＲ＋Ｔ細胞を上回る用量レベルでは、ベースライン時に骨髄障害を有するすべての患者は、１４日後以降のいずれの時点においても骨髄疾患を検出しなかった。

ＣＡＲ＋Ｔ細胞増殖は、一貫して証明され、他の出版されたＣＡＲ Ｔ細胞試験と同様である。データが利用可能であった、＞５．０×１０^７のＣＡＲ＋Ｔ細胞で治療された５人の患者において、フローサイトメトリーによるピークＣＡＲ＋Ｔ細胞の範囲は、末梢血において１０～６８６のＣＡＲ＋細胞／μＬおよび骨髄において４～５２７のＣＡＲ＋細胞／μＬであり、末梢血におけるピークコピー／μｇゲノムＤＮＡの範囲は、ＰＣＲによって３４，２３１～８６０，２０４であった。

結論
抗ＢＣＭＡ０２ＣＡＲ Ｔ細胞は、２つのＣＲおよび６か月での進行中の臨床応答を含み、５．０×１０^７のＣＡＲ＋Ｔ細胞を上回る用量レベルで顕著な有効性を示した。他のＣＡＲ Ｔ細胞療法での結果とは対照的に、抗ＢＣＭＡ０２ＣＡＲ Ｔ細胞の有効性は、意外と軽度で対処可能なＣＲＳを伴い、≧５０％の骨髄障害を有する患者におけるものを含む。これらのデータは、再発性／難治性多発性骨髄腫に対する抗ＢＣＭＡ０２ＣＡＲ Ｔ細胞の治療有効性を支持する。

追加の用量コホートは、８０．０×１０^７および１２．０×１０^８のＣＡＲ＋Ｔ細胞の容量レベルで計画する。

実施例４
抗ＢＣＭＡ０２ＣＡＲ Ｔ細胞は、再発性／難治性多発性骨髄腫のヒト臨床試験において治療活性を示し続ける。
２１人の患者を、５．０×１０^７のＣＡＲ＋Ｔ細胞（３人の患者）、１５．０×１０^７のＣＡＲ＋Ｔ細胞（６人の患者）、４５．０×１０^７のＣＡＲ＋Ｔ細胞（９人の患者）、および８０．０×１０^７のＣＡＲ＋Ｔ細胞（３人の患者）の３つの用量コホートにおいて抗ＢＣＭＡ０２ＣＡＲ Ｔ細胞で注入した。細胞を採取し、すべての患者において製造および放出が成功した。９人の注入された対象の登録時の平均年齢は、５８歳（３７～７４）であり、６２％が男性であった。診断からの平均期間は、５年（１．０～１６．０）であった。事前の治療ラインの平均数は、７（３～１４）であり、１００％の患者が少なくとも１つの事前の自家幹細胞移植を受け、１００％が以前にレナリドミドおよびボルテゾミブで治療され、９１％が以前にポマリドミドおよびカルフィルゾミブで治療され、７１％が以前にダラツムマブで治療され、２９％の患者がペンタ難治性（ボルテゾミブ、レナリドミド、カルフィルゾミブ、ポマリドミド、ダラツムマブ）であった。

活性用量コホートにおけるすべての患者が最大５４週の期間で客観的応答に到達した。図３．ＣＡＲ Ｔ細胞用量、評価可能な患者の数、全奏効率、最良の応答、平均事前治療ライン、および各コホートの安全性が表６に提示される。

一般的に、以下の特許請求の範囲では、使用される用語は、本明細書および特許請求の範囲で開示される特定の実施形態に特許請求の範囲を限定すると解釈されるべきではなく、そのような特許請求の範囲に得る権利がある等価物の全範囲と共にすべての可能な実施形態を含むと解釈されるべきである。その結果、特許請求の範囲は、本開示によって限定されない。

Claims (13)

1. 多発性骨髄腫を有する対象を処置するための医薬組成物であって、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲをコードするレンチウイルスで形質導入されたＴ細胞の集団を含み、前記Ｔ細胞の集団は、１５．０×１０^７細胞～４５．０×１０^７細胞±２０％の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含み、ここで、前記抗ＢＣＭＡ ＣＡＲが、配列番号９に記載されるアミノ酸配列のアミノ酸２２～４９３を含み、前記Ｔ細胞の集団は、ＣＤ８^＋およびＣＤ４^＋Ｔ細胞を含む、医薬組成物。
2. 前記抗ＢＣＭＡ ＣＡＲが、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
3. 前記抗ＢＣＭＡ ＣＡＲが、配列番号１０に記載されるヌクレオチド配列によりコードされたものである、請求項１または２に記載の医薬組成物。
4. 薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
5. １５．０×１０^７～４５．０×１０^７の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
6. 前記Ｔ細胞が、ＣＤ４^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
7. 前記細胞がヒト細胞である、請求項１～６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
8. 再発性／難治性多発性骨髄腫と診断された対象、または、再発性／難治性多発性骨髄腫を有する対象の処置における使用のための、請求項１～７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
9. （ａ）前記多発性骨髄腫が、プロテアソーム阻害薬および免疫調節剤を含む少なくとも３つの治療計画に対して難治性であった；
   （ｂ）前記多発性骨髄腫が、１つ以上の治療計画に対して二重難治性であった；または
   （ｃ）前記多発性骨髄腫が、ダラツムマブ、レナリドミド、ポマリドミド、ボルテゾミブ、および／またはカルフィルゾミブに対して難治性であった、
   請求項８に記載の医薬組成物。
10. 前記対象が、前記医薬組成物が投与される以前に自家造血幹細胞移植で治療されていることを特徴とする、請求項８または請求項９に記載の医薬組成物。
11. 前記対象が、前記医薬組成物が投与される以前に、シクロホスファミド３００ｍｇ／ｍ^２およびフルダラビン３０ｍｇ／ｍ^２でリンパ枯渇されていることを特徴とする、請求項８～１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
12. 前記細胞が前記対象から得られたものである、請求項８～１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
13. 凍結防止剤を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。