JP7376048B2 - 大腸癌の診断を補助する方法、キット及びバイオマーカー - Google Patents
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Description
糖鎖は、生体内ではタンパク質や脂質と結合した複合糖質の形態で主に細胞表面に存在しており、細胞の増殖、細菌やウィルスへの感染、神経の伸長、炎症、免疫等の生理作用に関与している。
上記バイオマーカーとしては、例えば、癌胎児性抗原(CEA:carcinoembryonic antigen)、ロイシンリッチアルファ2グリコプロテイン等が知られている(特許文献1)。
本発明は、新たな大腸癌のバイオマーカー、キット及び診断補助方法の提供を課題とする。
特に、正確度の高い大腸癌のバイオマーカーの提供を課題とする。
[1]
下記(1)~(4)から選ばれる糖鎖を含む、大腸癌の診断を補助するためのバイオマーカー:
(1)アルファ1アンチトリプシンに存在する、下記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖、
(2)ロイシンリッチアルファ2グリコプロテインに存在する、下記式1で表される糖鎖、
(3)アルファ1アンチキモトリプシンに存在する、下記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖、
(4)補体成分9に存在する、下記式1で表される糖鎖。
(式1中、X1、X2及びX3はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A1及びA2はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表す)
(式2中、X4、X5、X6及びX7はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A3、A4及びA5はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表す)
[2]
前記糖鎖が、下記(1-1)~(4-1)の何れか1つで表される糖鎖である、[1]に記載のバイオマーカー:
(1-1)アルファ1アンチトリプシンのアミノ酸配列のN末端より70番目のアスパラギン残基に結合している、前記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖、
(2-1)ロイシンリッチアルファ2グリコプロテインのアミノ酸配列のN末端より79番目のアスパラギン残基、186番目のアスパラギン残基又は269番目のアスパラギン残基に結合している、前記式1で表される糖鎖、
(3-1)アルファ1アンチキモトリプシンのアミノ酸配列のN末端より93番目のアスパラギン残基に結合している、前記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖、
(4-1)補体成分9のアミノ酸配列のN末端より415番目のアスパラギン残基に結合している、前記式1で表される糖鎖。
[3]
前記糖鎖が、アルファ1アンチトリプシンのアミノ酸配列のN末端より70番目のアスパラギン残基に結合している、前記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖である、[1]又は[2]に記載のバイオマーカー。
[4]
被検動物由来の試料中の、下記(1)~(4)から選ばれる糖鎖を測定し、得られた測定結果に基づいて被検動物が大腸癌に罹患しているか否かを判定する、大腸癌の診断を補助する方法:
(1)アルファ1アンチトリプシンに存在する、下記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖、
(2)ロイシンリッチアルファ2グリコプロテインに存在する、下記式1で表される糖鎖、
(3)アルファ1アンチキモトリプシンに存在する、下記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖、
(4)補体成分9に存在する、下記式1で表される糖鎖。
(式1中、X1、X2及びX3はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A1及びA2はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表す)
(式2中、X4、X5、X6及びX7はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A3、A4及びA5はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表す)
[5]
前記糖鎖が、下記(1-1)~(4-1)の何れか1つで表される糖鎖である、[4]に記載の方法:
(1-1)アルファ1アンチトリプシンのアミノ酸配列のN末端より70番目のアスパラギン残基に結合している、前記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖、
(2-1)ロイシンリッチアルファ2グリコプロテインのアミノ酸配列のN末端より79番目のアスパラギン残基、186番目のアスパラギン残基又は269番目のアスパラギン残基に結合している、前記式1で表される糖鎖、
(3-1)アルファ1アンチキモトリプシンのアミノ酸配列のN末端より93番目のアスパラギン残基に結合している、前記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖、
(4-1)補体成分9のアミノ酸配列のN末端より415番目のアスパラギン残基に結合している、前記式1で表される糖鎖。
[6]
前記糖鎖が、アルファ1アンチトリプシンのアミノ酸配列のN末端より70番目のアスパラギン残基に結合している、前記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖である、[4]又は[5]に記載の方法。
[7]
前記試料が、全血、血清又は血漿である、[4]~[6]の何れか1つに記載の方法。
[8]
下記(1)~(4)から選ばれる糖鎖に親和性を有する物質を含む、大腸癌の診断を補助するための試薬キット:
(1)アルファ1アンチトリプシンに存在する、下記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖、
(2)ロイシンリッチアルファ2グリコプロテインに存在する、下記式1で表される糖鎖、
(3)アルファ1アンチキモトリプシンに存在する、下記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖、
(4)補体成分9に存在する、下記式1で表される糖鎖。
(式1中、X1、X2及びX3はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A1及びA2はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表す)
(式2中、X4、X5、X6及びX7はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A3、A4及びA5はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表す)
[9]
前記糖鎖が、下記(1-1)~(4-1)の何れか1つで表される糖鎖である、[8]に記載の試薬キット:
(1-1)アルファ1アンチトリプシンのアミノ酸配列のN末端より70番目のアスパラギン残基に結合している、前記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖、
(2-1)ロイシンリッチアルファ2グリコプロテインのアミノ酸配列のN末端より79番目のアスパラギン残基、186番目のアスパラギン残基又は269番目のアスパラギン残基に結合している、前記式1で表される糖鎖、
(3-1)アルファ1アンチキモトリプシンのアミノ酸配列のN末端より93番目のアスパラギン残基に結合している、前記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖、
(4-1)補体成分9のアミノ酸配列のN末端より415番目のアスパラギン残基に結合している、前記式1で表される糖鎖。
本発明の大腸癌の診断を補助するためのバイオマーカー(以下、本発明のバイオマーカーと略記する場合がある。)は、下記(1)~(4)から選ばれる糖鎖を含むものである。
(1)アルファ1アンチトリプシンに存在する、下記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖(以下、本発明のバイオマーカー(1)と略記する場合がある。)、
(2)ロイシンリッチアルファ2グリコプロテインに存在する、下記式1で表される糖鎖(以下、本発明のバイオマーカー(2)と略記する場合がある。)、
(3)アルファ1アンチキモトリプシンに存在する、下記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖(以下、本発明のバイオマーカー(3)と略記する場合がある。)、
(4)補体成分9に存在する、下記式1で表される糖鎖(以下、本発明のバイオマーカー(4)と略記する場合がある。)。
尚、本発明のバイオマーカーは、本発明のバイオマーカー(1)~(4)の何れかを単独で含むものでも、或いは複数種を含むものであってもよい。
以下に本発明のバイオマーカー(1)~(4)についてそれぞれ説明する。
本発明のバイオマーカー(1)は、アルファ1アンチトリプシンに存在する下記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖を含むものである。
(式1中、X1、X2及びX3はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A1及びA2はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表す)
(式2中、X4、X5、X6及びX7はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A3、A4及びA5はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表す)
上記式1及び2における、X1がHの場合(X2、X3、X4、X5、X6又は/及びX7がHの場合も同様)、X1-GlcNAcは、GlcNAcを表す。また、上記式1及び2における末端のA1がHの場合(A2、A3、A4又は/及びA5がHの場合も同様)、A1-Gal-は、Gal-を表す。以下、本明細書において同じ意味を表す。
また、上記アルファ1アンチトリプシンのアミノ酸配列は、例えば、Uniprot(アクセッション番号:P01009)等のデータベースに登録されている。
本発明のバイオマーカー(1)に係るアルファ1アンチトリプシンは、上記データベースに登録されているもののみならず、生体内で生じ得る変異体等も含む。例えば、当該アルファ1アンチトリプシンにおいて1~5個、好ましくは1又は2個のアミノ酸が欠失、置換又は/及び付加されたものであって、多型性や突然変異等により生じるものである。
但し、変異体であっても、本発明のバイオマーカー(1)における式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖とアルファ1アンチトリプシンとの結合部位である、当該アルファ1アンチトリプシンのアミノ酸配列のN末端より70番目のアミノ酸残基(アスパラギン残基)が保存されているものが好ましい。
以下に、本発明のバイオマーカー(1)における式1又は2で表される糖鎖について、それぞれ説明する。
(式1中、X1、X2及びX3はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A1及びA2はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表す)
(式1’中、X1、X2及びX3、並びにA1及びA2は、上記と同じ)
(式1’’’中、A1及びA2は、上記と同じ(但し、A1及びA2におけるNeu5Acの総数が2である))
式1’、式1’’及び式1’’’におけるX1、X2及びX3、並びにA1及びA2の具体例、組み合わせは、上記式1と同じである。
(式2中、X4、X5、X6及びX7はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A3、A4及びA5はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表す)
(式2’中、X4、X5、X6及びX7、並びにA3、A4及びA5は、上記と同じ)
(式2’’中、X4、X5、X6及びX7、並びにA3、A4及びA5は、上記と同じ(但し、X4、X5、X6及びX7の何れか1つがFuc、残り3つがそれぞれHであり、A3、A4及びA5におけるNeu5Acの総数が2である))
式2’、式2’’及び式2’’’におけるX4、X5、X6及びX7、並びにA3、A4及びA5の具体例、組み合わせは、上記式2と同じである。
尚、上記ペプチド断片とは、式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖とアルファ1アンチトリプシンとの結合部位である、アルファ1アンチトリプシンのアミノ酸配列のN末端より70番目のアミノ酸残基(アスパラギン残基)を少なくとも有する任意の断片である。具体的には、例えば、生体内で生じるものや、アルファ1アンチトリプシンを、トリプシン、リシルエンドペプチダーゼ、AspN等のプロテアーゼ処理に付した結果生じるものが挙げられ、より具体的には、2~50個のアミノ酸残基からなるもの等が挙げられ、配列番号1で表されるものが好ましい。
本発明のバイオマーカー(2)は、ロイシンリッチアルファ2グリコプロテインに存在する下記式1で表される少なくとも1つの糖鎖を含むものである。
(式1中、X1、X2及びX3はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A1及びA2はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表す)
尚、本発明のバイオマーカー(2)としては、上記式1に含まれる単一の糖鎖のみを有するものでも、式1に含まれる複数の糖鎖を有するものでもよい。
また、上記ロイシンリッチアルファ2グリコプロテインのアミノ酸配列は、例えば、Uniprot(アクセッション番号:P02750)等のデータベースに登録されている。
本発明のバイオマーカー(2)に係るロイシンリッチアルファ2グリコプロテインは、上記データベースに登録されているもののみならず、生体内で生じ得る変異体等も含む。例えば、当該ロイシンリッチアルファ2グリコプロテインにおいて1~5個、好ましくは1又は2個のアミノ酸が欠失、置換又は/及び付加されたものであって、多型性や突然変異等により生じるものである。
但し、変異体であっても、本発明のバイオマーカー(2)における式1で表される糖鎖とロイシンリッチアルファ2グリコプロテインとの結合部位である、当該ロイシンリッチアルファ2グリコプロテインのアミノ酸配列のN末端より79番目のアミノ酸残基(アスパラギン残基)、186番目のアミノ酸残基(アスパラギン残基)、又は269番目のアミノ酸残基(アスパラギン残基)が保存されているものが好ましい。
以下に、本発明のバイオマーカー(2)における式1で表される糖鎖について、説明する。
(式1中、X1、X2及びX3はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A1及びA2はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表す)
(式1’中、X1、X2及びX3、並びにA1及びA2は、上記と同じ)
(式1’’中、X1、X2及びX3、並びにA1及びA2は、上記と同じ(但し、X1、X2及びX3の何れか1つがFuc、残り2つがそれぞれHであり、A1及びA2におけるNeu5Acの総数が2である))
式1’、式1’’及び式1’’’におけるX1、X2及びX3、並びにA1及びA2の具体例、組み合わせは、上記式1と同じである。
尚、上記ペプチド断片とは、式1で表される糖鎖とロイシンリッチアルファ2グリコプロテインとの結合部位である、ロイシンリッチアルファ2グリコプロテインのアミノ酸配列のN末端より70番目のアミノ酸残基(アスパラギン残基)、186番目のアミノ酸残基(アスパラギン残基)、又は269番目のアミノ酸残基(アスパラギン残基)を少なくとも有する任意の断片である。具体的には、例えば、生体内で生じるものや、アルファ1アンチトリプシンを、トリプシン、リシルエンドペプチダーゼ、AspN等のプロテアーゼ処理に付した結果生じるものが挙げられ、より具体的には、2~50個のアミノ酸残基からなるもの等が挙げられ、配列番号2、配列番号3又は配列番号4で表されるものが好ましい。
本発明のバイオマーカー(3)は、アルファ1アンチキモトリプシンに存在する下記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖を含むものである。
(式1中、X1、X2及びX3はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A1及びA2はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表す)
(式2中、X4、X5、X6及びX7はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A3、A4及びA5はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表す)
また、上記アルファ1アンチキモトリプシンのアミノ酸配列は、例えば、Uniprot(アクセッション番号:P01011)等のデータベースに登録されている。
本発明のバイオマーカー(3)に係るアルファ1アンチキモトリプシンは、上記データベースに登録されているもののみならず、生体内で生じ得る変異体等も含む。例えば、当該アルファ1アンチキモトリプシンにおいて1~5個、好ましくは1又は2個のアミノ酸が欠失、置換又は/及び付加されたものであって、多型性や突然変異等により生じるものである。
但し、変異体であっても、本発明のバイオマーカー(3)における式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖とアルファ1アンチキモトリプシとの結合部位である、当該アルファ1アンチキモトリプシのアミノ酸配列のN末端より93番目のアミノ酸残基(アスパラギン残基)が保存されているものが好ましい。
以下に、本発明のバイオマーカー(3)における式1又は2で表される糖鎖について、それぞれ説明する。
(式1中、X1、X2及びX3はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A1及びA2はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表す)
(式1’中、X1、X2及びX3、並びにA1及びA2は、上記と同じ)
(式1’’中、X1、X2及びX3、並びにA1及びA2は、上記と同じ(但し、X1、X2及びX3の何れか1つがFuc、残り2つがそれぞれHであり、A1及びA2におけるNeu5Acの総数が2である))
式1’、式1’’及び式1’’’におけるX1、X2及びX3、並びにA1及びA2の具体例、組み合わせは、上記式1と同じである。
(式2中、X4、X5、X6及びX7はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A3、A4及びA5はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表す)
(式2’中、X4、X5、X6及びX7、並びにA3、A4及びA5は、上記と同じ)
(式2’中、X4、X5、X6及びX7、並びにA3、A4及びA5は、上記と同じ(但し、X4、X5、X6及びX7の何れか1つがFuc、残り3つがそれぞれHであり、A3、A4及びA5におけるNeu5Acの総数が2である))
式2’、式2’’及び式2’’’におけるX4、X5、X6及びX7、並びにA3、A4及びA5の具体例、組み合わせは、上記式1と同じである。
尚、上記ペプチド断片とは、式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖とアルファ1アンチキモトリプシンとの結合部位である、アルファ1アンチキモトリプシンのアミノ酸配列のN末端より93番目のアミノ酸残基(アスパラギン残基)を少なくとも有する任意の断片である。具体的には、例えば、生体内で生じるものや、アルファ1アンチキモトリプシンを、トリプシン、リシルエンドペプチダーゼ、AspN等のプロテアーゼ処理に付した結果生じるものが挙げられ、より具体的には、2~50個のアミノ酸残基からなるもの等が挙げられ、配列番号5で表されるものが好ましい。
本発明のバイオマーカー(4)は、補体成分9に存在する下記式1で表される糖鎖を含むものである。
(式1中、X1、X2及びX3はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A1及びA2はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表す)
また、上記補体成分9のアミノ酸配列は、例えば、Uniprot(アクセッション番号:P02748)等のデータベースに登録されている。
本発明のバイオマーカー(4)に係る補体成分9は、上記データベースに登録されているもののみならず、生体内で生じ得る変異体等も含む。例えば、当該補体成分9において1~5個、好ましくは1又は2個のアミノ酸が欠失、置換又は/及び付加されたものであって、多型性や突然変異等により生じるものである。
但し、変異体であっても、本発明のバイオマーカー(4)における式1で表される糖鎖と補体成分9との結合部位である、当該補体成分9のアミノ酸配列のN末端より415番目のアミノ酸残基(アスパラギン残基)が保存されているものが好ましい。
以下に、本発明のバイオマーカー(4)における式1で表される糖鎖について、それぞれ説明する。
(式1’中、X1、X2及びX3、並びにA1及びA2は、上記と同じ)
式1’及び式1’’’におけるX1、X2及びX3、並びにA1及びA2の具体例、組み合わせは、上記式1と同じである。
尚、上記ペプチド断片とは、式1で表される糖鎖と補体成分9との結合部位である、補体成分9のアミノ酸配列のN末端より415番目のアミノ酸残基(アスパラギン残基)を少なくとも有する任意の断片である。具体的には、例えば、生体内で生じるものや、補体成分9を、トリプシン、リシルエンドペプチダーゼ、AspN等のプロテアーゼ処理に付した結果生じるものが挙げられ、より具体的には、2~50個のアミノ酸残基からなるもの等が挙げられ、配列番号6で表されるものが好ましい。
本発明に係る大腸癌とは、大腸から発生した癌(悪性腫瘍)のことである。本発明に係る大腸癌には、例えば、結腸癌、直腸癌等が含まれる。
本発明の大腸癌の診断を補助する方法(以下、本発明の補助方法と略記する場合がある)は、被検動物由来の試料中の下記(1)~(4)から選ばれる糖鎖を測定し(以下、本発明に係る測定工程と略記する場合がある)、得られた測定結果に基づいて被検動物が大腸癌に罹患しているか否かを判定すること(以下、本発明に係る判定工程と略記する場合がある)によりなされる。
(1)アルファ1アンチトリプシンに存在する、上記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖(本発明のバイオマーカー(1))、
(2)ロイシンリッチアルファ2グリコプロテインに存在する、上記式1で表される糖鎖(本発明のバイオマーカー(2))、
(3)アルファ1アンチキモトリプシンに存在する、上記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖(本発明のバイオマーカー(3))、
(4)補体成分9に存在する、上記式1で表される糖鎖(本発明のバイオマーカー(4))
尚、本発明の補助方法は、本発明のバイオマーカー(1)~(4)の何れか単独を用いてなされても、或いは複数種を用いてなされてもよい。
本発明に係る被検動物としては、ヒト、サル、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ブタ、ウサギ、チンパンジー等の哺乳動物が挙げられ、ヒト、サル、マウス又はラットが好ましく、ヒトがより好ましい。
本発明に係る試料としては、上記被検動物由来のものであればよく、例えば、血清、血漿、全血、尿、唾液、脳脊髄液、組織液、汗、涙、羊水、骨髄液、胸水、腹水、間接液、眼房水、硝子体液等の生体由来試料が挙げられ、血清、血漿、全血等の血液由来試料が好ましく、血清がより好ましい。
尚、上記試料は、上記被検動物から得られた(採取された)直後のものであっても、当該試料を保存したものであってもよい。試料を保存する方法としては、通常この分野で行われている方法であれば何れでもよい。
本発明に係る測定工程は、下記(1)~(4)から選ばれる糖鎖を測定することによりなされる。
(1)アルファ1アンチトリプシンに存在する、上記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖、
(2)ロイシンリッチアルファ2グリコプロテインに存在する、上記式1で表される糖鎖、
(3)アルファ1アンチキモトリプシンに存在する、上記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖、
(4)補体成分9に存在する、下記式1で表される糖鎖
尚、本発明に係る測定工程としては、本発明のバイオマーカー(1)~(4)の何れか単独を測定することによりなされても、或いは複数種を測定することによりなされてもよい。
上記本発明のバイオマーカーにおけるコアタンパク質とは、本発明のバイオマーカーにおける糖鎖以外の部分を意味し、本発明のバイオマーカー(1)であれば、アルファ1アンチトリプシンを意味し、本発明のバイオマーカー(2)であれば、ロイシンリッチアルファ2グリコプロテインを意味し、本発明のバイオマーカー(3)であれば、アルファ1アンチキモトリプシンを意味し、本発明のバイオマーカー(4)であれば、補体成分9を意味する。
尚、上記「量」とは、容量、質量等の絶対値又は濃度、イオン強度、吸光度、蛍光強度、濁度、ピーク面積等から算出された値等の相対値の何れであってもよい。
以下に、上記(A)及び(B)についてそれぞれ具体的に説明する。
本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質として、抗体のみを用いる場合は免疫学的測定方法により、抗体以外の物質(例えばレクチン等)あるいは抗体以外の物質及び抗体を用いる場合は免疫学的測定方法に準じた方法により、本発明のバイオマーカーを測定すればよい。これらの測定方法の原理としては、例えばサンドイッチ法や競合法が挙げられ、また、ホモジニアスな測定系であってもヘテロジニアスな測定系であってもよい。
上記抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体の何れであってもよく、これらを単独で或いは組み合わせて用いてもよい。
上記抗体は、Fab、F(ab’2)、Fv、sFv等の抗体フラグメントやダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ等の合成抗体等であってもよい。
また、上記抗体は、市販の抗体を用いても、自体公知の方法に従って調製したものを用いてもよい。
尚、自体公知の方法に従って、上記抗体を調製する場合には、例えば、「免疫測定法」(生物化学的測定研究会編集、講談社、2014年)等に記載の方法に従ってなされればよい。
尚、上記標記物質を抗体に結合させる方法としては、自体公知の方法に従ってなされればよい。
即ち、本発明のバイオマーカー(1)であれば、上記式1で表される糖鎖のFuc(フコース)に結合するAleuria Aurantia Lectin(AAL)やLotus Tetragolonobus Lectin(LTL)等、Neu5Ac(N-アセチルノイラミン酸)に結合するElderberry Balk Lectin(EBL),Maackia Amurensis Lectin(MAA)等、上記式2で表される糖鎖のFuc(フコース)に結合するAALやLTL等、Neu5Ac(N-アセチルノイラミン酸)に結合するEBL、MAA等が挙げられる。
本発明のバイオマーカー(2)であれば、上記式1で表される糖鎖のFuc(フコース)に結合するAALやLTL等、Neu5Ac(N-アセチルノイラミン酸)に結合するEBL、MAA等が挙げられる。
本発明のバイオマーカー(3)であれば、上記式1で表される糖鎖のFuc(フコース)に結合するAALやLTL等、Neu5Ac(N-アセチルノイラミン酸)に結合するEBL、MAA等が挙げられる。
また、本発明のバイオマーカー(4)であれば、上記式1で表される糖鎖のFuc(フコース)に結合するAALやLTL等、Neu5Ac(N-アセチルノイラミン酸)に結合するEBL、MAA等が挙げられる。
即ち、本発明のバイオマーカー(1)であれば、上記式1で表される糖鎖に特異的に結合する抗体、上記式2で表される糖鎖に特異的に結合する抗体等が挙げられる。
本発明のバイオマーカー(2)であれば、上記式1で表される糖鎖に特異的に結合する抗体等が挙げられる。
本発明のバイオマーカー(3)であれば、上記式1で表される糖鎖に特異的に結合する抗体、上記式2で表される糖鎖に特異的に結合する抗体等が挙げられる。
本発明のバイオマーカー(4)であれば、上記式1で表される糖鎖に特異的に結合する抗体等が挙げられる。
また、上記標識物質をレクチンに結合させる方法としては、自体公知の方法に従ってなされればよい。
尚、上記方法の具体的な手法については、自体公知の手法に従ってなされればよい。
尚、下記説明において、本発明のバイオマーカーにおけるコアタンパク質(又はペプチド断片)を「標的コアタンパク質(又は標的ペプチド断片)」、本発明のバイオマーカーにおける糖鎖を「標的糖鎖」と表記する。
例えば、本発明のバイオマーカー(1)を測定する場合、アルファ1アンチトリプシンが「標的コアタンパク質(又は標的ペプチド断片)」を、式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖が「標的糖鎖」を意味する。
本発明のバイオマーカー(2)を測定する場合、ロイシンリッチアルファ2グリコプロテインが「標的コアタンパク質(又は標的ペプチド断片)」を、式1で表される糖鎖が「標的糖鎖」を意味する。
本発明のバイオマーカー(3)を測定する場合、アルファ1アンチキモトリプシンが「標的コアタンパク質(又は標的ペプチド断片)」、式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖が「標的糖鎖」を意味する。
本発明のバイオマーカー(4)を測定する場合、補体成分9が「標的コアタンパク質(又は標的ペプチド断片)」を、式1で表される糖鎖が「標的糖鎖」を意味する。
(工程1)試料から標的糖鎖が結合した標的コアタンパク質(本発明のバイオマーカー)を分離する工程、
(工程2)前記工程1で分離された標的糖鎖が結合した標的コアタンパク質の量を測定する工程
また、例えば、標的糖鎖に特異的に結合する物質(例えば、上記の本発明のバイオマーカーにおける糖鎖に特異的に結合するレクチン)と本発明のバイオマーカーとの相互作用を利用して、本発明のバイオマーカー等の標的糖鎖と相互作用する成分と他の成分を分離し、さらに標的コアタンパク質に特異的に結合する物質を用いて、本発明のバイオマーカーと他の成分を分離する方法、例えば、標的コアタンパク質に特異的に結合する物質を用いて、本発明のバイオマーカーと他の成分を分離し、さらに標的糖鎖に特異的に結合する物質(例えば、上記の本発明のバイオマーカーにおける糖鎖に特異的に結合するレクチン)と本発明のバイオマーカーとの相互作用を利用して、本発明のバイオマーカー等の標的糖鎖と相互作用する成分と他の成分を分離する方法により、試料から標的糖鎖が結合した標的コアタンパク質(本発明のバイオマーカー)を分離してもよい。当該本発明のバイオマーカーの分離は、例えばレクチン電気泳動法やレクチンカラム法によりおこなうことができる。
尚、標識物質で標識された親和性を有する物質を用いる場合には、標的糖鎖が結合した標的タンパク質の分離は、標識物質で標識された親和性を有する物質と本発明のバイオマーカーとの複合体の分離と言い換えてもよく、この場合、標識物質で標識された親和性を有する物質と本発明のバイオマーカー以外の成分との複合体又は/及び遊離の標識物質で標識された親和性を有する物質とを分離すればよい。標識物質で標識された親和性を有する物質を構成成分として含まない成分との分離は不要である。
また、上記糖鎖に特異的に結合する親和性を有する物質及びコアタンパク質に特異的に結合する親和性を有する物質については、上述の通りであり、具体例等も同じである。
該断片化処理としては、具体的には、例えば、工程1を行う前に、試料にトリプシン、リシルエンドペプチダーゼ、AspN等のプロテアーゼを加えることによりなされればよく、工程1で標的糖鎖に結合する物質、及び標的ペプチド断片に結合する物質をそれぞれ用いて、標的糖鎖が結合した標的ペプチド断片と親和性を有する物質との複合体(標的ペプチド断片に特異的に結合する物質-本発明のバイオマーカー標的糖鎖に特異的に結合する物質)を形成させ、該複合体を上述の如く分離した後、該複合体の量を測定すればよい。
具体的には、例えば、工程1で分離された標的糖鎖が結合した標的タンパク質を、グリカナーゼ、ヒドラジン等にて処理することにより標的糖鎖を分離した後、当該糖鎖の量のみを上述の如く測定すればよい。
質量分析法を利用する方法としては、具体的には、例えば、液体クロマトグラフィー質量分析計(LC/MS)、キャピラリー電気泳動質量分析計(CE/MS)、ガスクロマトグラフィー質量分析計(GC/MS)、液体クロマトグラフィータンデム型質量分析計(LC/MS/MS)等を利用する方法が挙げられる。
上記方法としては、具体的には、例えば、液体クロマトグラフ等のクロマトグラフを有する分離部にて、試料中の成分を分離し、分離された種々の成分を質量分析部にてイオン化させ、更に質量電荷比(m/z)毎に分離することによりなされればよい。
尚、上記質量分析法を利用する方法における具体的な手法は自体公知の手法やWO2014/038524、WO2017/19588、WO2018/034346等に記載の手法に従ってなされればよい。
本発明に係る測定工程では、(i)アルファ1アンチトリプシンに存在する、式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖又は(ii)ロイシンリッチアルファ2グリコプロテインに存在する、式1で表される糖鎖を測定することが好ましく、(i)アルファ1アンチトリプシンに存在する、式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖を測定することがより好ましく、(i)アルファ1アンチトリプシンのアミノ酸配列のN末端より70番目のアミノ酸残基(アスパラギン残基)に結合している式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖を測定することが更に好ましい。
また、上記測定を行う場合には、本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質を用いる方法が好ましく、ELISA法、EIA法、RIA法、FIA法、CLEIA法、ラテックス凝集比濁法等の免疫比濁法、免疫比ろう法、イムノクロマト法、ウェスタンブロット法、LOCI法、LBA-EATA法、レクチン電気泳動法等のキャピラリー電気泳動法、表面プラズモン共鳴法、レクチンカラム法がより好ましく、ELISA法、EIA法、RIA法、FIA法、CLEIA法、LBA-EATA法、レクチン電気泳動法等のキャピラリー電気泳動法がさらに好ましい。
本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質と本発明のバイオマーカーとを接触させて、本発明のバイオマーカーを分離し、本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質と本発明のバイオマーカーとの複合体を形成させ、当該複合体の量を測定する方法がより好ましく、本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質と本発明のバイオマーカーとを接触させて、本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質と本発明のバイオマーカーとの複合体を形成させ、当該複合体に結合した標識物質に由来するシグナルを検出する方法がさらに好ましい。
また、標的糖鎖に特異的に結合する物質(例えば、上記の本発明のバイオマーカーにおける糖鎖に特異的に結合するレクチン)と本発明のバイオマーカーとの相互作用を利用して、本発明のバイオマーカー等の標的糖鎖と相互作用する成分と他の成分を分離し、さらに標的コアタンパク質に特異的に結合する物質を用いて、本発明のバイオマーカーと他の成分を分離し、本発明のバイオマーカーの量を測定するのがより好ましく、
標的糖鎖に特異的に結合する物質と本発明のバイオマーカーとの相互作用を利用して、本発明のバイオマーカー等の標的糖鎖と相互作用する成分と他の成分を分離し、さらに標的コアタンパク質に特異的に結合する物質を用いて、本発明のバイオマーカーと他の成分を分離し、標的コアタンパク質に特異的に結合する物質と本発明のバイオマーカーとの複合体に結合した標識物質に由来するシグナルを検出する方法がさらに好ましい。
本発明に係る判定工程は、本発明に係る測定工程により得られた測定結果に基づいて被検動物が大腸癌に罹患しているか否かを判定する工程である。
即ち、(i)被検動物由来の値が、予め設定した基準値(カットオフ値等)以上の場合、「被検動物が大腸癌に罹患しているおそれがある、或いは被検動物が大腸癌に罹患しているおそれが高い」等の判定を下すことができ、(ii)被検動物由来の値が、予め設定した基準値(カットオフ値等)未満の場合、「被検動物が大腸癌に罹患しているおそれはない、或いは大腸癌に罹患しているおそれが低い」等の判定を下すことができる。
また、別の態様として、(i)被検動物由来の値が、予め設定した基準値(カットオフ値等)以下の場合、「被検動物が大腸癌に罹患しているおそれがある、或いは被検動物が大腸癌に罹患しているおそれが高い」等の判定を下すことができ、(ii)被検動物由来の値が、予め設定した基準値(カットオフ値等)超の場合、「被検動物が大腸癌に罹患しているおそれはない、或いは大腸癌に罹患しているおそれが低い」等の判定を下すことができる。
尚、上記基準値(カットオフ値等)は、大腸癌に罹患している動物由来の試料を用いて本発明に係る測定工程により得られた測定値と健常動物由来の試料を用いて本発明に係る測定工程により得られた値(以下、健常動物由来の値と略記する場合がある)とを用いてROC(Receiver Operating Characteristic)曲線解析等の統計解析に基づいて決定することができる。
また、上記基準値(カットオフ値等)の感度又は/及び特異度は、例えば60%以上、好ましくは70%以上、より好ましくは80%以上、更に好ましくは90%以上である。
本発明の大腸癌の診断を行うための試薬キット(以下、本発明のキットと略記する場合がある)は、下記(1)~(4)から選ばれる糖鎖に親和性を有する物質を含むものである。
(1)アルファ1アンチトリプシンに存在する、上記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖、
(2)ロイシンリッチアルファ2グリコプロテインに存在する、上記式1で表される糖鎖、
(3)アルファ1アンチキモトリプシンに存在する、上記式1又は2で表される少なくとも1つの糖鎖、
(4)補体成分9に存在する、上記式1で表される糖鎖。
本発明のキットは、本発明のバイオマーカー、言い換えると、本発明のバイオマーカー(1)~(4)にそれぞれ親和性を有する物質を含むものである。
尚、本発明のキットにおける、本発明のバイオマーカー及び大腸癌については、<本発明のバイオマーカー>及び<本発明の補助方法>にて説明した通りであり、具体例、好ましい例等も同じである。
上記親和性を有する物質については、<本発明の補助方法>にて説明した通りであり、具体例、好ましい例等も同じである。
尚、上記レクチン固定化固相、抗体固定化固相、抗原固定化固相等の固定化固相における素材については、自体公知の方法により製造されたものを用いても、市販のものを用いてもよい。例えば、自体公知の方法により上記磁性シリカ粒子等の磁性粒子を製造する場合、WO2012/173002に記載の方法により製造することができる。
尚、上記標識物質で標識された二次抗体又はその抗体断片における、標識物質及び標識物質を結合させる方法については、<本発明の補助方法>にて説明した通りであり、好ましい例、具体例等も同じである。
本発明に係る大腸癌の診断を補助するための装置(以下、本発明に係る補助装置と略記する場合がある)は、少なくとも(1)測定部を備えている。更に、(2)判定部、(3)出力部及び(4)入力部を備えていてもよい。
尚、要すれば、(1)測定部では、測定された測定値に基づいて、上記本発明のバイオマーカー(1)~(4)の量を算出するように構成されていてもよい。
本発明に係る大腸癌を治療する方法(以下、本発明に係る治療方法と略記する場合がある)は、被検動物由来の試料中の本発明のバイオマーカー(1)~(4)から選ばれる糖鎖の量を測定し、得られた測定結果に基づいて被検動物が大腸癌に罹患しているか否かを判定し、その判定結果に基づいて大腸癌のおそれがある又は大腸癌のおそれが高いと判定された患者に適切な治療を施すことによりなされる。
尚、本発明に係る治療方法における試料、マーカー、測定、判定等については、<本発明の補助方法>にて説明した通りであり、好ましい例、具体例等も同じである。
本発明に係る治療方法における適切な治療としては、具体的には、例えば、内視鏡治療、開腹手術、腹腔鏡手術等の外科療法、化学放射線療法等の放射線治療、オキサリプラチン(一般名)、イリノテカン(一般名)、フルオロウラシル(一般名)、ベバシズマブ(一般名)、ラムシルマブ(一般名)、アフリベルセプト(一般名)、セツキシマブ(一般名)、パニツムマブ(一般名)等の薬剤を投与することによりなされる薬物療法等が挙げられる。
[(1)検体(サンプル)]
横浜市立大学センター病院及び横浜市立大学先端医科学研究センターバイオバンクより提供された、大腸癌患者由来の血清(18検体)及び健常者由来の血清(20検体)を検体(サンプル)として用いた。
12mM Sodiumn deoxycholate(SDC)、12mM N-lauroylsarcosine(LS)を含む100mM Tris-HCl(pH9.0)からなる消化バッファーを調製し、当該消化バッファー90μLと上記(1)の大腸癌患者由来の血清及び健常者由来の血清10μLとをそれぞれ混合した。次いで、メルカプトエタノール溶液を最終濃度10mMとなるようそれぞれ添加し、95℃で5分間インキュベートすることにより、タンパク質を変性させた。次いで、最終濃度20mMとなるようacrylamide(AA)溶液をそれぞれ添加し、25℃で30分間、暗所でインキュベートすることにより、システインをアルキル化させた。次いで、5μgのLys-Cを用いて37℃で1時間インキュベートすることにより、タンパク質を消化した。次いで、1.5mM CaCl2を含む400μLの50mM Tris-HCl(pH8.0)でそれぞれ希釈した後、5μgのトリプシンを用いて37℃で12時間インキュベートすることにより、タンパク質を更に消化した。次いで、500μLの酢酸エチルと10μLのギ酸をそれぞれ加えた後、30秒間ボルテックスし、14000×gで5分間遠心した。その後、SDCとLCを含む上層(酢酸エチル層)を除去し、遠心エバポレーターで約30μLまで蒸発させることにより、糖ペプチドをそれぞれ調製した。
上記(2)で調製した38検体分(大腸癌患者:18検体、健常者:20検体)の各糖ペプチドを、下記手順によりそれぞれ濃縮した。
即ち、先ず、15mL遠心管内で、セルロース微結晶樹脂300μLを10mLの0.1%trifluoroacetic acid(TFA)/90%acetonitrile(ACN)を用いて洗浄した。次いで、洗浄済の300μLセルロース微結晶樹脂、10mlの0.1%TFA/90%ACN及び8μLの(2)で調製した各糖ペプチドをそれぞれ混合し、1rpmで6分間インキュベートした。次いで、各糖ペプチドを吸着させたセルロース微結晶樹脂を、10mLの0.1%TFA/80%ACNでそれぞれ4回洗浄した。次いで、各糖ペプチドを600μLの30%ACNでそれぞれ2回洗浄し、上記セルロース微結晶性樹脂から各糖ペプチドをそれぞれ溶出させることにより、糖ペプチドをそれぞれ濃縮した。尚、濃縮後、微細なセルロース粒子を除去するために、14000×gで遠心分離し、遠心エバポレーターで蒸発させ、50μLの0.1%ギ酸/3%ACNでそれぞれ再溶解した
上記(3)で調製した濃縮糖ペプチド試料25μLを、糖鎖修飾部位の同定のために、PNGase F処理にそれぞれ付した。即ち、上記試料に、20μLの1M Tris-HCl(pH8.0)をそれぞれ添加することで中和し、1ユニットのPNGase Fとそれぞれ混合した。次いで、37℃で1時間インキュベートした後、5μLのACNと0.1%ギ酸で事前に洗浄した脱塩カラムにそれぞれロードした。5μLの0.1%ギ酸でそれぞれ2回洗浄した後、5μLの50%ACNでそれぞれ溶出することにより、脱糖鎖ペプチドをそれぞれ調製した。尚、調製後、20μLの0.1%ギ酸でそれぞれ希釈し、使用するまでは-30℃で保存した。
上記(3)で調製した各濃縮糖ペプチドを、Orbitrap質量分析計Q-Exactive(サーモフィッシャーサイエンティフィック製)にてそれぞれ解析(分離/分析)した。
具体的には、Q-Exactiveに接続したnanoLC、EASY-nLC1000(サーモフィッシャーサイエンティフィック製)に各糖ペプチド1.6μLを200barでナノボアトラップカラムにそれぞれ注入し、20μLの0.1%ギ酸でそれぞれ洗浄した。次いで、流量300nL/分にて0.1%ギ酸(溶媒A)及び0.1%ギ酸/ACNの二元線形グラジエントでそれぞれ溶出することにより、糖ペプチドの量を測定した(0-150分:0%溶媒B-35%溶媒B、150-155分:100%溶媒B)。
尚、ナノボアトラップカラムと分析カラムは、各分析の前に、それぞれ12μL及び5μLの0.1%FAで初期化した。フルMSはm/z350からm/z2000までResolution 70000でモニタリングし、プロダクトイオンスキャンはData dependent acquisitionにより取得した。上記測定におけるイオン化パラメーター及びQ-ExactiveのData dependent acquisitionパラメーターは、それぞれ下記の通りである。
<イオン化パラメーター>
spray voltage:1800V
capillary temperature:250℃
S-lens RF level:50(単位なし)
尚、オグジリラリガス及びシースガスは使用しなかった。また、健常者と大腸癌患者由来の血清サンプルの測定順序は、交絡因子の影響を避けるためにランダム化した。
<Q-ExactiveのData dependent acquisitionパラメーター>
Resolution:17500
AGC target:1000000
maximum injection time:350ミリ秒
isolation width:3.0m/z
:stepped normalized collision energy:25及び35
上記(1)~(5)により、下記表7に示す通り、アルファ1アンチトリプシン、ロイシンリッチアルファ2グリコプロテイン、アルファ1アンチキモトリプシン及び補体成分9にそれぞれ由来する糖ペプチドA~Mが同定された。
また、上記糖ペプチドA~Mのピーク面積値について、大腸癌患者(18検体)の平均値及び健常者(20検体)の平均値を表8及び図1~4にそれぞれ示す。
また、上記糖ペプチドAにおける式1’’で表される糖鎖、糖ペプチドBにおける式1’’’で表される糖鎖、糖ペプチドCにおける式2’’で表される糖鎖及び糖ペプチドDにおける式2’’’で表される糖鎖は、アルファ1アンチトリプシンのアミノ酸配列のN末端より70番目のアスパラギン残基に結合していることを確認した。
また、上記糖ペプチドEにおける1’’で表される糖鎖及び糖ペプチドFにおける式1’’’’で表される糖鎖は、ロイシンリッチアルファ2グリコプロテインのアミノ酸配列のN末端より79番目のアスパラギン残基に結合していることを確認した。上記糖ペプチドGにおける式1’’’’で表される糖鎖は、ロイシンリッチアルファ2グリコプロテインのアミノ酸配列のN末端より186番目のアスパラギン残基に結合していることを確認した。上記糖ペプチドHにおける式1’’’で表される糖鎖は、ロイシンリッチアルファ2グリコプロテインのアミノ酸配列のN末端より269番目のアスパラギン残基に結合していることを確認した。
また、上記糖ペプチドIにおける式2’’で表される糖鎖、糖ペプチドJにおける式2’’’で表される糖鎖、糖ペプチドKにおける式1’’で表される糖鎖及び糖ペプチドLにおける式1’’’で表される糖鎖は、アルファ1アンチキモトリプシンのアミノ酸配列のN末端より93番目のアスパラギン残基に結合していることを確認した。
その結果を下記表9に示す。尚、AUC値については、1に近づく程高い判定能があるとされている。
Claims (8)
- 下記(1)に記載された糖鎖を含む、大腸癌の診断を補助するためのバイオマーカー:
(1)被検動物由来の試料中に含まれるアルファ1アンチトリプシンに存在する、下記式1’’、式1’’’、式2’’又は式2’’’で表される少なくとも1つの糖鎖であって、前記糖鎖は、アルファ1アンチトリプシンのアミノ酸配列のN末端より70番目のアスパラギン残基に結合しており、前記試料が全血、血清又は血漿である。
(式1’’中、X 1 、X 2 及びX 3 はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A 1 及びA 2 はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表し、但し、X 1 、X 2 及びX 3 の何れか1つがFuc、残り2つがそれぞれHであり、A 1 及びA 2 におけるNeu5Acの総数が2である))
(式1’’’中、A 1 及びA 2 はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表し、但し、A 1 及びA 2 におけるNeu5Acの総数が2である)
(式2’’中、X 4 、X 5 、X 6 及びX 7 はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A 3 、A 4 及びA 5 はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表し、但し、X 4 、X 5 、X 6 及びX 7 の何れか1つがFuc、残り3つがそれぞれHであり、A 3 、A 4 及びA 5 におけるNeu5Acの総数が2である)
(式2’’’中、A 3 、A 4 及びA 5 はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表し、但し、A 3 、A 4 及びA 5 におけるNeu5Acの総数が2である) - 前記糖鎖が、前記式2’’又は式2’’’で表される糖鎖である、請求項1に記載のバイオマーカー。
- 被検動物由来の試料中の、下記(1)に記載の糖鎖を測定することを含み、前記試料が全血、血清又は血漿である、データの取得方法:
(1)アルファ1アンチトリプシンのアミノ酸配列のN末端より70番目のアスパラギン残基に結合している、下記式1’’、1’’’、2’’又は2’’’で表される少なくとも1つの糖鎖。
(式1’’中、X 1 、X 2 及びX 3 はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A 1 及びA 2 はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表し、但し、X 1 、X 2 及びX 3 の何れか1つがFuc、残り2つがそれぞれHであり、A 1 及びA 2 におけるNeu5Acの総数が2である))
(式1’’’中、A 1 及びA 2 はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表し、但し、A 1 及びA 2 におけるNeu5Acの総数が2である)
(式2’’中、X 4 、X 5 、X 6 及びX 7 はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A 3 、A 4 及びA 5 はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表し、但し、X 4 、X 5 、X 6 及びX 7 の何れか1つがFuc、残り3つがそれぞれHであり、A 3 、A 4 及びA 5 におけるNeu5Acの総数が2である)
(式2’’’中、A 3 、A 4 及びA 5 はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表し、但し、A 3 、A 4 及びA 5 におけるNeu5Acの総数が2である) - 前記糖鎖が、前記式2’’又は式2’’’で表される糖鎖である、請求項3に記載のデータの取得方法。
- 被検動物由来の試料中の、下記(1)に記載された糖鎖を測定し、得られた測定結果をカットオフ値と比較する、得られた測定結果を健常動物由来の試料を用いて前記測定により得られた値と比較する、又は、同一の被検動物においてある時点における被検動物由来の測定結果と、異なる時点での被検動物由来の測定結果を比較し、
前記試料が、全血、血清又は血漿である、
大腸癌の診断を補助する方法:
(1)アルファ1アンチトリプシンに存在する、下記式1’’、式1’’’、式2’’又は式2’’’で表される少なくとも1つの糖鎖であって、前記糖鎖は、アルファ1アンチトリプシンのアミノ酸配列のN末端より70番目のアスパラギン残基に結合している。
(式1’’中、X 1 、X 2 及びX 3 はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A 1 及びA 2 はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表し、但し、X 1 、X 2 及びX 3 の何れか1つがFuc、残り2つがそれぞれHであり、A 1 及びA 2 におけるNeu5Acの総数が2である))
(式1’’’中、A 1 及びA 2 はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表し、但し、A 1 及びA 2 におけるNeu5Acの総数が2である)
(式2’’中、X 4 、X 5 、X 6 及びX 7 はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A 3 、A 4 及びA 5 はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表し、但し、X 4 、X 5 、X 6 及びX 7 の何れか1つがFuc、残り3つがそれぞれHであり、A 3 、A 4 及びA 5 におけるNeu5Acの総数が2である)
(式2’’’中、A 3 、A 4 及びA 5 はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表し、但し、A 3 、A 4 及びA 5 におけるNeu5Acの総数が2である) - 前記糖鎖が、前記式2’’又は式2’’’で表される糖鎖である、請求項5に記載の大腸癌の診断を補助する方法。
- 下記(1)に記載された糖鎖に親和性を有する物質を含み、全血、血清又は血漿に対して用いられる、大腸癌の診断を補助するための試薬キット:
(1)アルファ1アンチトリプシンのアミノ酸配列のN末端より70番目のアスパラギン残基に結合している、下記式1’’、式1’’’、式2’’又は式2’’’で表される少なくとも1つの糖鎖。
(式1’’中、X 1 、X 2 及びX 3 はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A 1 及びA 2 はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表し、但し、X 1 、X 2 及びX 3 の何れか1つがFuc、残り2つがそれぞれHであり、A 1 及びA 2 におけるNeu5Acの総数が2である))
(式1’’’中、A 1 及びA 2 はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表し、但し、A 1 及びA 2 におけるNeu5Acの総数が2である)
(式2’’中、X 4 、X 5 、X 6 及びX 7 はそれぞれ独立してFuc又はHを表し、A 3 、A 4 及びA 5 はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表し、但し、X 4 、X 5 、X 6 及びX 7 の何れか1つがFuc、残り3つがそれぞれHであり、A 3 、A 4 及びA 5 におけるNeu5Acの総数が2である)
(式2’’’中、A 3 、A 4 及びA 5 はそれぞれ独立してNeu5Ac、Neu5Ac-Neu5Ac又はHを表し、但し、A 3 、A 4 及びA 5 におけるNeu5Acの総数が2である) - 前記糖鎖が、前記式2’’又は式2’’’で表される糖鎖である、請求項7に記載の大腸癌の診断を補助するための試薬キット。
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Citations (1)
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---|---|---|---|---|
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JP2005184168A (ja) | 2003-12-17 | 2005-07-07 | Mitsubishi Electric Corp | 映像符号化装置および映像符号化方法 |
KR100767018B1 (ko) * | 2006-05-15 | 2007-10-12 | 한국생명공학연구원 | 종양 발생 및 전이에 관여하는 당단백질의 당쇄 변화를측정하는 방법 |
WO2009075883A2 (en) * | 2007-12-12 | 2009-06-18 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Glycoprotein cancer biomarker |
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Cormac McCarthy,The Role and Importance of Glycosylation of Acute Phase Proteins with Focus on Alpha-1 Antitrypsin in Acute and Chronic Inflammatory Conditions,J. Proteome Res,2014年06月03日,Vol.13,Page.3131-3143 |
Haidi Yin,Quantitative Analysis of α-1-Antitrypsin Glycosylation Isoforms in HCC Patients Using LC-HCD-PRM-MS,Anal. Chem,2020年05月19日,Vol.92,Page.8201-8208 |
JABERIE Hajar et al.,Evaluation of Alpha 1-Antitrypsin for the Early Diagnosis of Colorectal Cancer,Pathology & Oncology Research,2019年06月10日,Vol.26 No.2,Page.1165-1173 |
L. Renee Ruhaak,Targeted Biomarker Discovery by High Throughput Glycosylation Profiling of Human Plasma Alpha1- Antitrypsin and Immunoglobulin A,PLoS ONE,2013年09月09日,Vol.8 No.9,Page.e73082 |
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