WO2014038524A1 - 乳癌の判定方法 - Google Patents

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breast cancer
carbonic anhydrase
cancer marker
detecting
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脩治 松浦
成昭 松浦
定 黒野
有香 金子
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和光純薬工業株式会社
国立大学法人大阪大学
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    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Definitions

  • the present invention relates to a novel breast cancer marker, a method for detecting it and determining (diagnosis / testing) breast cancer based on the result, and a kit used for the determination.
  • diagnosis by detecting a breast cancer marker in a sample such as body fluid or blood, or diagnosis by mammography is performed.
  • the amount in a sample is measured using a diagnostic kit or the like using carcinoembryonic antigen (CEA) as a marker, and breast cancer is diagnosed based on the result. is doing.
  • CEA carcinoembryonic antigen
  • Patent Document 1 Japanese Patent Application Laid-Open No. 2002-131322 identifies a patient having breast cancer or pre-mammary cancer by using a subject's milk duct fluid as a sample and detecting a component in the breast duct fluid. A method is disclosed.
  • this document describes a large number of marker candidates including extracellular matrix proteins and apolipoproteins, it merely lists the marker candidates and does not analyze the components in the breast duct fluid of breast cancer patients. Therefore, it is unclear from the disclosure of Patent Document 1 whether the many listed markers are really useful as breast cancer markers.
  • Patent Document 2 a tissue piece of a breast cancer patient is analyzed by LC-ESI-MS / MS (liquid chromatography-electrospray ionization-tandem mass spectrometry), and PDX1 (peroxy It describes that redoxin 1) was selected as a breast cancer marker candidate and that PXD1 was detected in the serum of breast cancer patients. There is also a description suggesting that breast cancer is diagnosed by the combined use of PDX1 and other markers. However, there is no disclosure of evidence indicating that these markers are specific for breast cancer, such as measurement results of these markers in samples from non-breast cancer patients. Therefore, it has not been confirmed whether PDX1 is useful as a breast cancer marker and whether a combination with other markers can be used for diagnosis of breast cancer.
  • breast cancer diagnostic methods using mammography often have mental and physical distress for the examinee (subject).
  • it is difficult to image a young group with high breast density it is still not a highly accurate breast cancer diagnostic technique.
  • the conventional breast cancer diagnosis methods have the above-mentioned problems, so the breast cancer screening rate does not improve, the diagnosis of early breast cancer and breast cancer is delayed, and as a result results in the prevention of breast cancer morbidity and breast cancer mortality. It is a big social problem. In order to solve these problems, development of a new breast cancer diagnosis technique using a breast cancer marker protein that is less invasive and highly accurate as an index for breast cancer diagnosis is awaited.
  • An object of the present invention is to provide a novel breast cancer marker useful for the detection of breast cancer and a highly accurate novel method for determining breast cancer by detecting the breast cancer marker.
  • the present invention has been made for the purpose of solving the above-described problems, and has the following configuration.
  • Carboxypeptidase N subunit 2 extracellular matrix protein 1, serum amyloid P component, nebulin, complement component C8 ⁇ chain, apolipoprotein L1, flavin reductase, catalase, carbonic anhydrase 2 (carbonic anhydrase 2), Apolipoprotein CI, nuclear pore glycoprotein 210, superoxide dismutase [Cu-Zn] (superoxide dismutase [Cu-Zn]), bisphosphoglycerate mutase, carbonic anhydrase 1 (carbonic anhydride)
  • a breast cancer marker selected from the group consisting of lyase 1) and peroxiredoxin 2.
  • Carboxypeptidase N subunit 2 in the sample extracellular matrix protein 1, serum amyloid P component, nebulin, complement component C8 ⁇ chain, apolipoprotein L1, flavin reductase, catalase, carbonic anhydrase 2 (carbonic anhydrase) 2) Apolipoprotein CI, nuclear pore glycoprotein 210, superoxide dismutase [Cu-Zn] (superoxide disproportionase [Cu-Zn]), bisphosphoglycerate mutase, carbonic anhydrase 1 ( A method for determining breast cancer, wherein one or more breast cancer markers arbitrarily selected from the group consisting of carbonic anhydrase 1) and peroxiredoxin 2 are detected and determined based on the results.
  • a kit for detecting a breast cancer marker for determining breast cancer comprising a reagent for detecting a breast cancer marker selected from the group consisting of lyase 1) and peroxiredoxin 2.
  • the inventors of the present invention are in the midst of intensive research to establish a breast cancer marker with high accuracy of breast cancer diagnosis and a method for determining breast cancer using the same, which has solved the above problems, and information on the breast duct that is the onset site of breast cancer.
  • proteomics using nano LC-ESI-MS / MS, the latest two-dimensional liquid chromatography (LC) / mass spectrometry (MS) system, using nipple discharge (Nipple discharge, ND) that can be obtained directly as a sample
  • nipple discharge Napple discharge, ND
  • a new marker that is expected to be a promising breast cancer marker by comparing the results of nano LC-ESI-MS / MS using nipple discharge derived from breast cancer patients and non-breast cancer patients. Sorted out. And when these markers were used as an index, it was found that breast cancer can be accurately determined, and the present invention was completed.
  • the determination method using the breast cancer marker of the present invention enables determination (diagnosis, examination) of breast cancer with higher accuracy.
  • the breast cancer marker of the present invention is found, for example, in the nipple secretion, it is possible to determine (diagnose and test) breast cancer noninvasively and simply.
  • the results obtained by detecting each protein component in a sample derived from a breast cancer patient and a non-breast cancer patient obtained in Example 1 and the statistical results obtained based thereon are shown, (1) is a carboxypeptidase N subunit 2, (2) shows extracellular matrix protein 1, and (3) shows the results of measuring serum amyloid P component.
  • (1) is nebulin
  • (2) is a complement.
  • (3) shows the results of measuring apolipoprotein L1.
  • (1) is flavin reductase
  • (2) is Catalase
  • (3) show the results of measuring carbonic anhydrase 2 (carbonic anhydrase 2), respectively.
  • the results of detecting each protein component in the sample derived from a breast cancer patient and a non-breast cancer patient obtained in Example 1 and the statistical results obtained based on the results are shown.
  • (1) is apolipoprotein CI
  • ( 2) shows the nuclear pore glycoprotein 210
  • (3) shows the result of measurement of superoxide dismutase [Cu-Zn].
  • (1) is bisphosphoglycerate mutase
  • (2) shows carbonic anhydrase 1 (carbonic anhydrase 1)
  • (3) shows the results of measuring peroxiredoxin 2.
  • the breast cancer markers of the present invention include carboxypeptidase N subunit 2, extracellular matrix protein 1, serum amyloid P component, nebulin, complement component C8 ⁇ chain, apolipoprotein L1, flavin reductase, catalase, carbonic anhydrase 2 (carbonic ann) Hydrase 2), apolipoprotein CI, nuclear pore glycoprotein 210, superoxide dismutase [Cu-Zn] (superoxide dismutase [Cu-Zn]), bisphosphoglycerate mutase, carbonic anhydrase 1 (carbonic anhydrase 1) and a breast cancer marker selected from the group consisting of peroxiredoxin 2 (hereinafter, these may be collectively referred to as “the breast cancer marker of the present invention”). Although these components are already known per se, it has been revealed for the first time by the present inventors that they are useful as an index for determining breast cancer (breast cancer marker).
  • the method for determining breast cancer of the present invention is “a method for determining breast cancer in which the breast cancer marker of the present invention is detected and determined based on the result”.
  • the method for detecting the breast cancer marker of the present invention includes a conventional method for detecting and measuring each component which is the breast cancer marker of the present invention.
  • a reagent for detecting / measuring a breast cancer marker used therefor any reagent can be used as long as it is a reagent used in a conventional method for detecting / measuring each component of the breast cancer marker.
  • Examples of methods for detecting the breast cancer marker of the present invention include, for example, substances having affinity for the breast cancer marker of the present invention (for example, antibodies, lectins, polysaccharides, DNA, enzyme substrates, proteins, various receptors, various ligands, etc. ), So-called enzyme immunoassay (EIA), radioimmunoassay (RIA), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), fluorescence immunoassay (FIA), simple immunochromatographic assay, etc. itself
  • EIA enzyme immunoassay
  • RIA radioimmunoassay
  • ELISA enzyme-linked immunosorbent assay
  • FFA fluorescence immunoassay
  • simple immunochromatographic assay etc. itself
  • methods using these in combination with high performance liquid chromatography (HPLC), electrophoresis, capillary electrophoresis, capillary chip electrophoresis and the like can be mentioned.
  • Examples of the measurement principle include, but are not limited to, a sandwich method,
  • the breast cancer marker of the present invention may be detected by a measurement method according to an immunoagglutination method such as an immunoratio wax method or an immunoturbidimetric method. These detection methods may be performed according to a method known per se.
  • an immunoagglutination method such as an immunoratio wax method or an immunoturbidimetric method.
  • the antibody against the breast cancer marker used for detecting the breast cancer marker of the present invention is not particularly limited as long as it is an antibody capable of recognizing the breast cancer marker of the present invention, a partial peptide thereof, or a salt thereof.
  • any of a polyclonal antibody and a monoclonal antibody may be used, and these may be used alone or in appropriate combination.
  • these antibodies may be used as F (ab ′) 2 , Fab ′, or Fab after digestion with an enzyme such as pepsin or papain, if necessary.
  • a commercially available antibody against the breast cancer marker of the present invention can also be used.
  • Reagents used for detecting the above-described breast cancer marker of the present invention the concentration at the time of detection, the measurement conditions for carrying out the detection, etc. (reaction temperature, reaction time, pH at the time of reaction, measurement wavelength, measurement device, etc.) ) May be set according to the measurement method of the above-described immunological measurement method known per se, and any of the automatic analyzers and spectrophotometers that are usually used in this field are also used. Can be used without exception.
  • reagents usually used in this field for example, stabilizers such as buffers, reaction accelerators, sugars, proteins, salts, surfactants, A preservative or the like that does not inhibit the stability of coexisting reagents or the like and does not inhibit the reaction between the breast cancer marker of the present invention and the antibody against the breast cancer marker of the present invention may be included.
  • concentration may be appropriately selected from a concentration range usually used in this field.
  • a method of detecting a breast cancer marker when the breast cancer marker to be detected is an enzyme, such as a method of reacting this with a coloring reagent to lead to a coloring reaction, and measuring the amount of the resulting dye with a spectrophotometer or the like
  • a method known per se can also be mentioned.
  • the coloring reagent used for such purposes include coloring reagents usually used in this field, and are appropriately selected for each enzyme to be measured. Also, the concentration used may be appropriately set from the concentration range usually used in this field.
  • two or more breast cancer markers of the present invention may be detected in combination.
  • the combination may be any combination of two or more of the breast cancer markers of the present invention, and is not particularly limited.
  • any combination of one or more breast cancer markers of the present invention and one or more breast cancer markers other than the breast cancer marker of the present invention may be used.
  • the detection of the breast cancer marker of the present invention is not limited to the method used, and may be performed by a measurement system using an automatic analyzer.
  • an automatic analyzer There are no particular restrictions on the combination of reagents, etc. when performing measurement using a method for use or an automatic analyzer, depending on the environment and model of the automatic analyzer to be applied, or taking other factors into consideration
  • the combination of reagents and the like that are considered to be the best may be appropriately selected and used.
  • the breast cancer marker of the present invention may be detected by performing protein coverage analysis by so-called nano LC-ESI-MS / MS.
  • Nano LC-ESI-MS / MS uses a nano liquid chromatograph as a separation means, sends it at a low flow rate of several hundred nL / min, and separates the components in the sample with a liquid chromatograph for a sample consisting of many components.
  • the mass analysis is performed online by electrospray ionization, and the mass component specified by the mass analysis is performed again using collision-induced dissociation.
  • this analysis method after mass spectrometry is performed once, only specific mass components are subjected to mass spectrometry again, and the obtained fragment pattern is analyzed, so that more detailed analysis can be performed.
  • the LC portion of the nano LC-ESI-MS / MS can be detected by using two separation systems having different pHs, and two-dimensional nano LC-ESI.
  • -It may be detected by performing a protein exhaustive analysis by MS / MS.
  • a specific example of the method for detecting a breast cancer marker of the present invention by two-dimensional nano LC-ESI-MS / MS is as follows.
  • the mobile phase is a basic solution (pH 9 to 10) such as about 20 mM ammonium formate aqueous solution or about 70 mM triethylamine aqueous solution and acetonitrile, and several ⁇ L / min.
  • the liquid is fed at a low flow rate (preferably 5 to 500 ⁇ L / min) to separate the components in the sample, and for example, several tens of fractions are collected at regular time intervals of about 1 to 10 minutes.
  • a 0.1% aqueous trifluoroacetic acid solution is added to each fraction to dissolve the separated components.
  • each total amount of each fraction solution obtained is applied to a second-dimensional liquid chromatograph and separated by the following method. That is, the total amount of each of the above-mentioned fractions was applied to a reversed-phase chromatographic column, and the mobile phase was an acidic solution (pH 2-3) such as 0.1% formic acid aqueous solution, acetonitrile / 0.1 % Formic acid is fed at a low flow rate of several tens to hundreds of nL / min (preferably 50 to 500 nL / min), a large number of components in each fraction are separated, and ESI-MS / MS is performed online.
  • an acidic solution pH 2-3
  • breast cancer determination is performed by the following method, for example.
  • the breast cancer marker of the present invention by detecting the breast cancer marker of the present invention in a sample derived from a subject and detecting that the breast cancer marker is detected, it is possible to determine that the subject has a risk of breast cancer or a high risk of breast cancer. is there. Alternatively, when the breast cancer marker is not detected, it can be determined that the subject has no risk of breast cancer or has a low risk of breast cancer.
  • the amount of the breast cancer marker of the present invention contained in the sample is determined by the above method. Then, the result is compared with the result obtained in advance using a sample derived from a non-breast cancer patient as a separate sample in advance, and the amount of the breast cancer marker contained in the sample derived from the subject is included in the sample derived from the non-breast cancer patient. From the test result that the amount is larger than the amount, it is possible to determine that the subject has a risk of breast cancer or a high risk of breast cancer.
  • the subject has no risk of breast cancer. It is possible to determine that the risk of breast cancer is low.
  • a reference value is set in advance, and from the test result that the amount of the breast cancer marker of the present invention is larger than the reference value of the breast cancer marker, it is determined that the subject has a risk of breast cancer or the subject has a high risk of breast cancer. Is possible.
  • a plurality of judgment categories are set corresponding to the amount of the breast cancer marker or its quantitative range [for example, (1) there is no risk of breast cancer, (2) there is a low risk of breast cancer, (3) there are signs of breast cancer It is also possible to determine which determination category the test result is in (4) high risk of breast cancer, etc.].
  • the amount of the breast cancer marker of the present invention in the subject-derived sample measured at a certain time point is compared with the amount of the breast cancer marker at a different time point, and whether there is an increase or decrease in the amount of the breast cancer marker. Further, by evaluating the degree of increase / decrease, it is possible to diagnose the degree of progression or malignancy of breast cancer, or postoperative prognosis. That is, from the test result that an increase in the amount of the breast cancer marker was observed, the disease progressed to breast cancer (or the malignancy of breast cancer increased), or there was an indication of progression of the disease state to breast cancer (or breast cancer). Can be determined).
  • the pathology of breast cancer has improved or that there is an indication of improvement in the pathology of breast cancer.
  • a method of detecting and measuring two or more breast cancer markers of the present invention and determining breast cancer based on the results is also included. For example, by detecting the breast cancer marker of the present invention alone or in combination of two or more, the presence pattern of the breast cancer marker of the present invention characteristic to breast cancer patients can be obtained. Therefore, by detecting / identifying the breast cancer marker of the present invention from a sample such as the nipple discharge fluid of the subject and analyzing the presence pattern of these multiple breast cancer markers of the present invention, it is determined whether or not the subject has developed breast cancer. Estimation is possible.
  • the combination of two or more breast cancer markers may be arbitrarily selected from the group consisting of the breast cancer markers of the present invention.
  • one or more breast cancer markers of the present invention and one or more breast cancer markers other than the breast cancer marker of the present invention may be detected and measured, and breast cancer may be determined by the same method as described above. Detection of breast cancer markers other than the breast cancer marker of the present invention may be performed by a method known per se according to each breast cancer marker.
  • Examples of the sample used for detecting the breast cancer marker of the present invention include a subject's nipple secretion, or a biological sample such as blood (whole blood), serum, plasma, urine, lymph, etc. It is not limited.
  • nipple discharge fluid examples include, but are not limited to, a nipple discharge fluid that is naturally secreted from one or both breasts of a subject, a secretion fluid that exudes by breast massage, and a nipple aspirate fluid.
  • the sample can be collected non-invasively to the subject, which is excellent in that the burden on the patient is much less.
  • the “kit for detecting a breast cancer marker for determining breast cancer” of the present invention includes a reagent for detecting the breast cancer marker of the present invention as a constituent element.
  • the “reagent for detecting a breast cancer marker of the present invention” and preferred embodiments and specific examples of the constituents thereof are as described in the above description of the method for detecting a breast cancer marker of the present invention. Moreover, a preferable embodiment such as the concentration of these reagents may be appropriately selected from a concentration range usually used in this field.
  • a reagent for detecting the breast cancer marker of the present invention one containing a substance having affinity for the breast cancer marker can be mentioned.
  • substances having affinity for the breast cancer marker include antibodies and lectins.
  • the kit may comprise a reagent or kit for detecting one kind of breast cancer marker, or may comprise a combination of a plurality of reagents or kits for detecting a plurality of breast cancer markers.
  • a combination of a plurality of reagents or kits for detecting a plurality of breast cancer markers in addition to a combination of a plurality of reagents or kits for detecting a plurality of breast cancer markers of the present invention, one type or a plurality of the present invention.
  • the reagents included in these kits include reagents usually used in this field, such as buffers, reaction accelerators, sugars, proteins, salts, stabilizers such as surfactants, preservatives, and the like.
  • reagents usually used in this field such as buffers, reaction accelerators, sugars, proteins, salts, stabilizers such as surfactants, preservatives, and the like.
  • a reagent that does not inhibit the stability of the coexisting reagent or the like and does not inhibit the reaction between the breast cancer marker of the present invention and the antibody (or lectin or the like) may be contained.
  • the concentration may be appropriately selected from the concentration range usually used in this field.
  • kits may be combined with a standard for preparing a calibration curve used for detecting the breast cancer marker.
  • a standard a commercially available standard product or a product manufactured according to a known method may be used.
  • Example 1 Breast Cancer Marker Selection
  • Sample Pretreatment Each nipple discharge (several ⁇ L) collected from breast cancer patients (11 patients) was treated with 100 ⁇ L of sample stock solution (50 mM ammonium bicarbonate and 0.02% azide). Aqueous solution containing sodium chloride) and centrifuged at 18,000 ⁇ g for 5 minutes at 4 ° C. After the supernatant was collected, the protein concentration was determined by an ultraviolet absorption method using ultraviolet light having a wavelength of 280 nm, and the protein concentration was adjusted to 0.5 mg / mL using a 50 mM aqueous ammonium hydrogen carbonate solution.
  • nipple secretions collected from non-breast cancer patients (15 subjects) who were diagnosed as non-breast cancer patients (subjects) who complained of secretory fluid secretion from the nipples as indefinite complaint Processed.
  • LC condition first dimension
  • HPLC column Acclaim PA2, 300 ⁇ m id x 15 cm reverse phase column (manufactured by Thermo Fisher Scientific Inc. (Dionex))
  • Flow rate 6.0 ⁇ L / min
  • a Solvent 20 mM ammonium formate aqueous solution, pH 10.0
  • B Solvent Acetonitrile Elution: 0 min ⁇ 19 min: Linear gradient from 12% to 20% B solvent, 19 min ⁇ 29 min: linear gradient up to 48% B solvent, 29 minutes ⁇ 34 minutes: wash with 95% B solvent, 34 min ⁇ 75 min: equilibrated with 2% B solvent.
  • HPLC column L-column Micro L2-C18, 75 ⁇ m id x 15 cm reversed-phase column (Chemicals Research Institute) Flow rate: 300 nL / min A Solvent: 0.1% formic acid aqueous solution, pH 2.0 B solvent: acetonitrile / 0.1% formic acid Elution: 0 min ⁇ 1 min: linear gradient up to 8% B solvent, 1 min to 20 min: linear gradient up to 20% B solvent, 20 min to 25 min: linear gradient up to 35% B solvent, 25 minutes ⁇ 30 minutes: wash with 95% B solvent, 30 min ⁇ 45 min: equilibrated with 2% B solvent. Column temperature: Room temperature Injection volume: 30 ⁇ L
  • Ionization method Electrospray ionization method (ESP method) Measurement ion: Positive ion Spray voltage: 1200V Dry gas: Nitrogen (4 L / min) Ion source temperature: 160 ° C Scanning range: m / z 300 to 1,500 (MS / MS measurement: m / z 50 to 2,200) Precursor ion selection number: 4 ions / mass spectrum Minimum precursor ion intensity: 50,000 counts Precursor ion selection exclusion time: 30 s Precursor ion exclusion valence: 1
  • Protein search engine Mascot (Matrix Science Ltd., London, UK)
  • Protein search method MS / MS Ion Search Protein Database: Swiss-Prot Animal species classification at protein search: Homo sapiens (human) Post-translational modification at protein search: Carbamidomethyl (Cysteine residue modification) Allowable number of trypsin uncleaved sites: 1 Precursor ion mass tolerance: ⁇ 0.5 Da Product ion mass tolerance: ⁇ 1 Da
  • Identification protein analysis software Scaffold (Proteome Software, Inc., Portland, OR, USA)
  • proteins specifically detected from breast cancer patient samples were selected as breast cancer marker candidates by the following method.
  • Ratio A of the number (n1) of breast cancer patients in which each protein component was detected in the sample among 11 breast cancer patients who were analyzed.
  • Ratio B of the number of non-breast cancer patients (n2) in which each protein component was detected in the sample among 15 non-breast cancer patients who were analyzed, and
  • Ratio A / Ratio B Ratio C
  • Table 1 shows a list of protein components having a ratio C of 2.00 or more among 575 types of protein components detected in (3) above due to space limitations.
  • protein components that are suspected to be blood-derived components are excluded, and peptide peaks that are protein components with a ratio C of 2.4 or more and detected in the mass spectrum
  • a protein component in which the spectrum count value indicating the abundance of the protein component calculated based on the above is a statistically significant difference between breast cancer patients and non-breast cancer patients (a protein component of p ⁇ 0.05 in the Mann-Whitney U test) ) was selected as a breast cancer marker candidate.
  • the selected breast cancer markers and the ratios A, B, and C of each breast cancer marker are shown in Table 2, and the statistical results are shown in FIGS.
  • the ratio C in this case describes the same value as the number of n1 breast cancer patients (*).
  • carboxypeptidase N subunit 2 (Carboxypeptidase N subunit 2), extracellular matrix protein 1 (Extracellular matrix N protein 1), serum amyloid P component (Serum amyloid P component), nebulin, complement Body component C8 ⁇ chain (Complement component C8 alpha chain), apolipoprotein L1 (Apolipoprotein L1), flavin reductase (Flavin reductase), catalase, carbonic anhydrase 2 (Carbonic anhydrase 2), apolipo Protein CI (Apolipoprotein CI), Nuclear Membrane Porous Glycoprotein 210 (Nuclear pore membrane glycoprotein ⁇ 210), Superoxide Dismutase [Cu-Zn] (Superoxide Dismutase [Cu-Zn]) (Superoxide (dismutase) [Cu-Zn]), Bisphosphoglycerate mutase e) Carbonic anhydrase 1 (Carbonic
  • these breast cancer markers were present in high concentrations in the nipple secretions of breast cancer patients compared to the concentrations in the nipple secretions of non-breast cancer patients. Moreover, since these components have not been used as a breast cancer marker, they are extremely promising as a novel breast cancer marker.
  • breast cancer and its progress can be determined by detecting these breast cancer markers alone or in combination of two or more.
  • the presence pattern of the breast cancer marker of the present invention which is characteristic for breast cancer patients, can be obtained by detecting these breast cancer markers alone or in combination of two or more. Therefore, by detecting and identifying the breast cancer marker of the present invention from a sample such as the nipple secretion of the subject and analyzing the presence pattern of these breast cancer markers, it is possible to estimate whether or not the subject has developed breast cancer. It is expected to be
  • the determination method using the breast cancer marker of the present invention enables determination (diagnosis, examination) of breast cancer with higher accuracy.
  • the breast cancer marker of the present invention is found, for example, in the nipple secretion, it is possible to determine (diagnose, test) breast cancer noninvasively and simply. As a result, breast cancer diagnosis according to the present invention with less mental and physical distress promotes the breast cancer screening of younger generations and younger breast-feeding women during and after breastfeeding voluntarily. An economic effect is expected by improving the screening rate and reducing breast cancer mortality.

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Abstract

　本発明は、カルボキシペプチダーゼＮサブユニット２、細胞外マトリックスタンパク質１、血清アミロイドＰ成分、ネブリン、補体成分C8α鎖、アポリポタンパク質Ｌ１、フラビンレダクターゼ、カタラーゼ、炭酸脱水酵素２（カルボニックアンヒドラーゼ２）、アポリポタンパク質C-I、核膜孔糖タンパク質２１０、スーパーオキシドジスムターゼ[Cu-Zn]（超酸化物不均化酵素[Cu-Zn]）、ビスホスホグリセリン酸ムターゼ、炭酸脱水酵素１（カルボニックアンヒドラーゼ１）、及びペルオキシレドキシン２からなる群から選択される乳癌マーカー、試料中の該乳癌マーカーを検出し、その結果に基づいて判定する乳癌の判定方法、並びにそのために用いられるキット、に関する。

Description

乳癌の判定方法
　本発明は、新規な乳癌マーカー、及びそれを検出し、その結果に基づいて乳癌を判定（診断・検査）する方法、及び該判定のために用いられるキットに関する。
　現在、乳癌の診断方法として、体液，血液等の試料中の乳癌マーカーを検出することによる診断、又はマンモグラフィーによる診断が行われている。
　乳癌マーカーを検出することにより乳癌を診断する方法では、癌胎児性抗原（Carcinoembryonic antigen、CEA）をマーカーとして、試料中の量を診断キット等を用いて測定し、その結果に基づいて乳癌を診断している。しかし、この方法は乳癌特異性を示す確度が乏しいため、実用的な乳癌確定診断とはなっていない。
　また、特開２００２－１３１３２２号公報（特許文献１）には、被検者の乳管液を試料として用い、乳管液中の成分を検出することにより乳癌または乳房前癌を有する患者を同定する方法が開示されている。しかしながら、該文献は細胞外マトリックスタンパク質やアポリポタンパク質を含む多数のマーカー候補を記載しているものの、単にマーカー候補を羅列しているのみで、乳癌患者乳管液中の成分分析を行っていない。そのため、特許文献１の開示内容からは、列挙された多数のマーカーが乳癌マーカーとして本当に有用であるか否かは不明である。
　また、特表２００８－５０２８９１号公報（特許文献２）には、乳癌患者の組織片をＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳ（液体クロマトグラフィー－エレクトロスプレーイオン化－タンデム質量分析）で分析し、PDX1（ペルオキシレドキシン１）を乳癌マーカー候補として選択したこと、及び乳癌患者の血清中のPXD1を検出したことを記載している。また、PDX1と他のマーカーとの併用により乳癌を診断することを示唆する記載がある。しかしながら、これらのマーカーが乳癌に特異的であることを示す証拠、例えば非乳癌者由来試料中のこれらのマーカーの測定結果等を開示していない。そのため、PDX1が乳癌マーカーとして有用であるか否か、及び他のマーカーとの組み合わせが乳癌の診断に用いることができるか否かについては確認できていない。
　また、マンモグラフィーを用いる乳癌の診断方法は、検査の受診者（被検者）の精神的及び肉体的苦痛が少なくない。また、乳腺密度が高い若年層の撮像は困難なため、やはり確度の高い乳癌診断技術とはなっていない。
　そのほか、近年バイオマーカー（タンパク質・ペプチド、脂質、糖鎖等）の探索に関する研究が盛んに行われるようになり、特に疾患と関連して各種体液を用いたプロテオミクス等の網羅的解析研究が盛んに行われている。これらの解析は、生体から得られる微量試料の高感度かつ正確な分析を行うことができる。そこで、プロテオミクスを用いた乳癌マーカーの研究も行われていることが、F. Mannello et al. Expert Rev. Proteomics 6, 43－60 （2009）（非特許文献１）に紹介されている。しかし、未だ乳癌マーカーとして乳癌診断確度の高い乳癌マーカーは見出されていない。
特開２００２－１３１３２２号公報 特表２００８－５０２８９１号公報
F. Mannello et al. Expert Rev. Proteomics 6, 43－60 （2009）
　従来の乳癌診断方法には以上のような問題があるため、乳癌検診率が向上せず、早期乳癌及び乳癌の診断が遅れ、その結果、乳癌罹患率及び乳癌死亡率の低減を阻む結果を生じており、大きな社会問題となっている。これらの問題を解消するため、より低侵襲で且つ確度の高い乳癌マーカータンパク質を乳癌診断の指標とする新しい乳癌診断技術の開発が待たれている。
　本発明の課題は、乳癌の検出に有用な新規な乳癌マーカー、及び該乳癌マーカーを検出することによる、確度の高い、新規な乳癌の判定方法を提供することにある。
　本発明は、上記したごとき課題を解決する目的でなされたものであり、以下の構成よりなる。
（１）カルボキシペプチダーゼＮサブユニット２、細胞外マトリックスタンパク質１、血清アミロイドＰ成分、ネブリン、補体成分C8α鎖、アポリポタンパク質Ｌ１、フラビンレダクターゼ、カタラーゼ、炭酸脱水酵素２（カルボニックアンヒドラーゼ２）、アポリポタンパク質C－I、核膜孔糖タンパク質２１０、スーパーオキシドジスムターゼ［Cu－Zn］（超酸化物不均化酵素［Cu－Zn］）、ビスホスホグリセリン酸ムターゼ、炭酸脱水酵素１（カルボニックアンヒドラーゼ１）、及びペルオキシレドキシン２からなる群から選択される乳癌マーカー。
（２）試料中のカルボキシペプチダーゼＮサブユニット２、細胞外マトリックスタンパク質１、血清アミロイドＰ成分、ネブリン、補体成分C8α鎖、アポリポタンパク質Ｌ１、フラビンレダクターゼ、カタラーゼ、炭酸脱水酵素２（カルボニックアンヒドラーゼ２）、アポリポタンパク質C－I、核膜孔糖タンパク質２１０、スーパーオキシドジスムターゼ［Cu－Zn］（超酸化物不均化酵素［Cu－Zn］）、ビスホスホグリセリン酸ムターゼ、炭酸脱水酵素１（カルボニックアンヒドラーゼ１）、及びペルオキシレドキシン２からなる群から任意に選択される1つ以上の乳癌マーカーを検出し、その結果に基づいて判定する、乳癌の判定方法。
（３）カルボキシペプチダーゼＮサブユニット２、細胞外マトリックスタンパク質１、血清アミロイドＰ成分、ネブリン、補体成分C8α鎖、アポリポタンパク質Ｌ１、フラビンレダクターゼ、カタラーゼ、炭酸脱水酵素２（カルボニックアンヒドラーゼ２）、アポリポタンパク質C－I、核膜孔糖タンパク質２１０、スーパーオキシドジスムターゼ［Cu－Zn］（超酸化物不均化酵素［Cu－Zn］）、ビスホスホグリセリン酸ムターゼ、炭酸脱水酵素１（カルボニックアンヒドラーゼ１）、及びペルオキシレドキシン２からなる群から選択される乳癌マーカーを検出する試薬を含む、乳癌を判定するために乳癌マーカーを検出するためのキット。
　すなわち、本発明者らは、上記問題を解決した、乳癌診断の確度の高い乳癌マーカー及びそれを用いた乳癌の判定方法を確立すべく鋭意研究の途上、乳癌発症部位である乳管内の情報を直接得ることができる乳頭分泌液（Nipple discharge, ND）を試料とし、最新の二次元液体クロマトグラフィー（LC）／質量分析（MS）システムであるナノＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳによるプロテオミクスを応用することにより、多数の成分を含む乳頭分泌液中の成分を分析した。そして、乳癌患者由来乳頭分泌液と非乳癌者由来乳頭分泌液を試料として用い、ナノＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳを行った結果を比較することにより、乳癌マーカーとして有望と推測される新たなマーカーを選別した。そして、これらのマーカーを指標として用いれば、乳癌を確度よく判定することができることを見出し、本発明を完成した。
　本発明の乳癌マーカーを利用した判定方法はより確度の高い乳癌の判定（診断、検査）を可能とする。また、本発明の乳癌マーカーは、例えば乳頭分泌液中に見出されるため、非侵襲的且つ簡便に乳癌を判定（診断、検査）することが可能である。
実施例１において得られた、乳癌患者及び非乳癌者由来試料中の各タンパク質成分を検出した結果及びそれをもとに得られた統計結果を示し、（１）はカルボキシペプチダーゼＮサブユニット２、（２）は細胞外マトリックスタンパク質１、（３）は血清アミロイドＰ成分を測定した結果をそれぞれ示す。 実施例１において得られた、乳癌患者及び非乳癌者由来試料中の各タンパク質成分を検出した結果及びそれをもとに得られた統計結果を示し、（１）はネブリン、（２）は補体成分C8α鎖、（３）はアポリポタンパク質Ｌ１を測定した結果をそれぞれ示す。 実施例１において得られた、乳癌患者及び非乳癌者由来試料中の各タンパク質成分を検出した結果及びそれをもとに得られた統計結果を示し、（１）はフラビンレダクターゼ、（２）はカタラーゼ、（３）は炭酸脱水酵素２（カルボニックアンヒドラーゼ２）を測定した結果をそれぞれ示す。 実施例１において得られた、乳癌患者及び非乳癌者由来試料中の各タンパク質成分を検出した結果及びそれをもとに得られた統計結果を示し、（１）はアポリポタンパク質C－I、（２）は核膜孔糖タンパク質２１０、（３）はスーパーオキシドジスムターゼ［Cu－Zn］を測定した結果をそれぞれ示す。 実施例１において得られた、乳癌患者及び非乳癌者由来試料中の各タンパク質成分を検出した結果及びそれをもとに得られた統計結果を示し、（１）はビスホスホグリセリン酸ムターゼ、（２）は炭酸脱水酵素１（カルボニックアンヒドラーゼ１）、（３）はペルオキシレドキシン２を測定した結果をそれぞれ示す。
　本発明の乳癌マーカーとしては、カルボキシペプチダーゼＮサブユニット２、細胞外マトリックスタンパク質１、血清アミロイドＰ成分、ネブリン、補体成分C8α鎖、アポリポタンパク質Ｌ１、フラビンレダクターゼ、カタラーゼ、炭酸脱水酵素２（カルボニックアンヒドラーゼ２）、アポリポタンパク質C－I、核膜孔糖タンパク質２１０、スーパーオキシドジスムターゼ［Cu－Zn］（超酸化物不均化酵素［Cu－Zn］）、ビスホスホグリセリン酸ムターゼ、炭酸脱水酵素１（カルボニックアンヒドラーゼ１）、及びペルオキシレドキシン２からなる群から選択される乳癌マーカー（以下、これらをまとめて「本発明の乳癌マーカー」と記載する場合がある。）が挙げられる。これらの成分自体は既に公知のものであるが、これらが乳癌を判定する指標（乳癌マーカー）として有用であることは、本発明者らによって初めて明らかになった。
　本発明の乳癌の判定方法は、「本発明の乳癌マーカーを検出し、その結果に基づいて判定する、乳癌の判定方法」である。
　そのために行う本発明の乳癌マーカーを検出する方法としては、本発明の乳癌マーカーである各成分を検出・測定する常法が挙げられる。それに用いられる乳癌マーカーを検出・測定する試薬としては、当該乳癌マーカーの各成分を検出・測定する常法に用いられる試薬であればよい。
　本発明の乳癌マーカーを検出する方法の例としては、例えば本発明の乳癌マーカーに対する親和性を有する物質（例えば、抗体、レクチン、多糖類、DNA、酵素基質、タンパク質、各種受容体、各種リガンド等）を用いた、いわゆる酵素免疫測定法（EIA）、放射免疫測定法（RIA）、酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）、蛍光免疫測定法（FIA）、簡易イムノクロマトグラフィーによる測定法、等の自体公知の免疫学的測定法に準じた方法の他、これらと高速液体クロマトグラフィー（HPLC）、電気泳動法、キャピラリー電気泳動法、キャピラリーチップ電気泳動法等の組み合わせによる方法等が挙げられる。その測定原理としては、例えばサンドイッチ法、競合法、二抗体法等が挙げられるが、これに限定されない。
　また、例えば、免疫比ろう法、免疫比濁法等の免疫凝集法に準じた測定法で、本発明の乳癌マーカーを検出してもよい。これらの検出方法も、自体公知の方法に準じて行えばよい。
　本発明の乳癌マーカーを検出するために用いられる乳癌マーカーに対する抗体は、本発明の乳癌マーカーやその部分ペプチド、又はそれらの塩を認識し得る抗体であればよく、特に限定されない。例えばポリクローナル抗体、モノクローナル抗体の何れであってもよく、これらを単独であるいはこれらを適宜組み合わせて用いる等は任意である。また、これら抗体は、要すればペプシン，パパイン等の酵素を用いて消化してF（ab'）2、Fab'、或はFabとして使用してもよい。更に、本発明の乳癌マーカーに対する、市販の抗体を用いることもできる。
　上記した本発明の乳癌マーカーを検出するために用いられる、試薬及びその検出時の濃度、検出を実施するに際しての測定条件等（反応温度、反応時間、反応時のｐＨ，測定波長、測定装置等）は、すべて自体公知の上記した如き免疫学的測定法の測定操作法に準じて設定すれば良く、使用する自動分析装置、分光光度系等も通常この分野で使用されているものは何れも例外なく使用し得る。
　上記した本発明の乳癌マーカーの検出に用いられるこれら試薬中には、通常この分野で用いられる試薬類、例えば緩衝剤、反応促進剤、糖類、タンパク質、塩類、界面活性剤等の安定化剤、防腐剤等であって、共存する試薬等の安定性を阻害したりせず、本発明の乳癌マーカーと本発明の乳癌マーカーに対する抗体等との反応を阻害しないものが含まれていてもよい。また、その濃度も、通常この分野で通常用いられる濃度範囲から適宜選択すればよい。
　検出対象の乳癌マーカーが酵素である場合の乳癌マーカーを検出する方法としては、これを発色試薬と反応させて発色反応に導き、その結果生成する色素量を分光光度計等により測定する方法等の自体公知の方法も挙げられる。このような目的で用いられる発色試薬等としては、通常この分野で用いられる発色試薬等が挙げられ、測定対象の酵素毎に適宜選択される。また、これらの使用濃度も、通常この分野で用いられる濃度範囲から適宜設定すればよい。
　また、本発明の乳癌マーカーを２種以上、組み合わせて検出してもよい。その組み合わせは、本発明の乳癌マーカーから任意に２種以上組み合わせればよく、特に限定されない。
　更に、本発明の乳癌マーカー１種以上と、本発明の乳癌マーカー以外の乳癌マーカー１種以上との任意の組み合わせであってもよい。
　尚、本発明の乳癌マーカーの検出は、用手法に限らず、自動分析装置を用いた測定系で行ってもよい。用手法又は自動分析装置を用いて測定を行う場合の試薬類等の組み合わせ等については、特に制約はなく、適用する自動分析装置の環境、機種に合わせて、或いは、他の要因を考慮にいれて最も良いと思われる試薬類等の組み合わせを適宜選択して用いれば良い。
　更に、本発明の乳癌マーカーは、いわゆるナノＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳによる蛋白質網羅解析を行って、検出してもよい。ナノＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳは、分離手段としてナノ液体クロマトグラフを用い、数百nL／minという低流速で送液し、多数の成分からなる試料について液体クロマトグラフで試料中の成分を分離した後、オンラインでエレクトロスプレーイオン化法による質量分析を行い、それにより特定された質量成分について、更にもう一度衝突誘起解離を用いて質量分析を行う方法である。この分析方法は、一度質量分析を行った後、特定質量成分だけを再度質量分析に付し、更に得られたフラグメントパターンを解析するので、より詳細な解析が行える。
　本発明の乳癌マーカーをナノＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳで検出する場合、例えば上記ナノＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳのＬＣ部分をｐＨの異なる二つの分離システムを用いて、二次元ナノＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳによる蛋白質網羅解析を行って検出すればよい。
　二次元ナノＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳにより本発明の乳癌マーカーを検出する方法の具体的な例は、以下の通りである。
　一次元目の液体クロマトグラフとして例えば逆相カラムを用い、移動相は例えば約２０ｍＭのギ酸アンモニウム水溶液や約７０ｍＭのトリエチルアミン水溶液等の塩基性溶液（ｐＨ９～１０）と、アセトニトリルとし、数μL／min（好ましくは５～５００μL／min）という低流速で送液し、試料中の成分を分離し、例えば１～１０分間間隔程度の一定時間間隔で、数十画分を分取する。次いで、分取した各画分中の溶媒を蒸発させた後、各画分に０．１％トリフルオロ酢酸水溶液を加え、分離した成分を溶解させる。
　次に、得られた各画分溶液の各全量をそれぞれ二次元目の液体クロマトグラフに付し、以下の方法で分離する。すなわち、上記の各画分の溶液の各全量を、それぞれ逆相クロマトグラフカラムにアプライし、移動相は例えば０．１％ギ酸水溶液等の酸性溶液（ｐＨ２～３）と、アセトニトリル／０．１％ギ酸とし、数十～百nL／min（好ましくは５０～５００nL／min）という低流速で送液し、各画分中の多数の成分を分離し、オンラインでＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳを行う。
　二次元ナノＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳを用いて行った解析は、単次元のナノＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳよりもより分離能が向上するため、更に網羅的な蛋白質解析が可能となる。内部標準物質等を用いて測定することによって、定量解析も可能である。
　以上の方法により本発明の乳癌マーカーを検出し、その結果を基に、本発明の乳癌マーカーを指標として乳癌を判定するための、本発明の乳癌マーカーに関するデータ（例えば本発明の乳癌マーカーの存在の有無、濃度、量の増加の程度等の情報）を得る。得られたデータを用いて、例えば下記の方法で、乳癌の判定（診断・検査）を行う。
　すなわち、例えば、被験者由来試料中の本発明の乳癌マーカーを検出し、当該乳癌マーカーが検出されたとの検査結果から、被験者に乳癌のおそれがある、又は乳癌のおそれが高い等の判定が可能である。又は当該乳癌マーカーが検出されなかった場合には、被験者に乳癌のおそれがない、又は乳癌のおそれが低い等の判定が可能である。
　他の方法としては、まず上記の方法によって試料中に本発明の乳癌マーカーが含まれる量を決定する。次いでその結果を予め別試料として非乳癌者由来の試料を用いて同様に行った結果と比較し、被験者由来試料中に当該乳癌マーカーが含まれる量が、非乳癌者由来試料中に含まれるその量より多いとの検査結果から、被験者に乳癌のおそれがある、又は乳癌のおそれが高い等の判定が可能である。又は、被験者由来試料中に当該乳癌マーカーが含まれる量と、非乳癌者由来試料中に含まれるその量との間に顕著な差が認められないという検査結果から、被験者に乳癌のおそれはない、又は乳癌のおそれが低い等の判定が可能である。
　また、予め基準値を設定しておき、本発明の乳癌マーカーの量がその乳癌マーカーの基準値より多いという検査結果から、被験者に乳癌のおそれがある又は被験者に乳癌のおそれが高い等の判定が可能である。また、当該乳癌マーカーの量又はその量的範囲に対応させて複数の判定区分を設定し［例えば（１）乳癌のおそれはない、（２）乳癌のおそれは低い、（３）乳癌の兆候がある、（４）乳癌のおそれが高い、等］、検査結果がどの判定区分にはいるかを判定することも可能である。
　更にまた、同一被験者において、ある時点で測定された被験者由来試料中の本発明の乳癌マーカーの量と、異なる時点での当該乳癌マーカーの量とを比較し、当該乳癌マーカーの量の増減の有無及び／又は増減の程度を評価することによって、乳癌の進行度や悪性度の診断、あるいは術後の予後診断が可能である。すなわち、当該乳癌マーカーの量の増加が認められたという検査結果から、乳癌へ病態が進行した（あるいは乳癌の悪性度が増した）、又は乳癌への病態の進行の兆候が認められる（あるいは乳癌の悪性度が増す兆候が認められる）との判定が行える。また、被験者由来試料中の当該乳癌マーカーの量の減少が認められたという検査結果から、乳癌の病態が改善した、又は乳癌の病態の改善の兆候が認められるとの判定ができる。また、当該乳癌マーカーの量の変動が認められないという検査結果から、病態に変化はないとの判定が可能である。
　更に、本発明の乳癌マーカーを２つ以上検出・測定し、その結果を基に乳癌の判定を行う方法も挙げられる。例えば、本発明の乳癌マーカーを単独或いは２種以上組み合わせて検出することで、乳癌患者に特徴的な本発明の乳癌マーカーの存在パターンが得られる。そこで、被験者の乳頭分泌液等の試料から本発明の乳癌マーカーを検出・同定し、これら複数の本発明の乳癌マーカーの存在パターン解析をすることにより、被験者が乳癌を発症しているか否かの推定が可能となる。
　２つ以上の乳癌マーカーの組み合わせは、本発明の乳癌マーカーからなる群から任意に選択すればよい。
　また、本発明の乳癌マーカー１種以上と本発明の乳癌マーカー以外の乳癌マーカー１種以上とを検出・測定し、上記と同様の方法で乳癌の判定を行ってもよい。本発明の乳癌マーカー以外の乳癌マーカーの検出は、それぞれの乳癌マーカーに応じた自体公知の方法で行えばよい。
　本発明の乳癌マーカーを検出するために用いられる試料としては、被検者の乳頭分泌液、又は血液（全血），血清，血漿，尿，リンパ等の生体由来試料等が挙げられるがこれらに限定されない。
　乳頭分泌液としては、被験者の片側あるいは両側の乳房から、自然に分泌される乳頭分泌液、乳房のマッサージによって滲出する分泌液、乳頭吸引液等が挙げられるが、これらに限定されない。
　試料として乳頭分泌液を使用すれば、被験者に対して非侵襲的に試料を採取することができるので、患者の負担が遙かに少ない点で、優れている。
　本発明の「乳癌の判定を行うために乳癌マーカーを検出するためのキット」は、本発明の乳癌マーカーを検出する試薬を構成要件として含むものである。
　「本発明の乳癌マーカーを検出する試薬」及びその構成要件の好ましい態様と具体例は、上記の本発明の乳癌マーカーを検出する方法に関する説明において記載した通りである。また、これら試薬の濃度等の好ましい態様も、通常この分野で通常用いられる濃度範囲から適宜選択すればよい。
　例えば、本発明の乳癌マーカーを検出する試薬の例として、該乳癌マーカーに親和性を有する物質を含むものが挙げられる。また、その乳癌マーカーに親和性を有する物質の例としては、例えば抗体やレクチン等が挙げられる。
　該キットは、一種類の乳癌マーカーを検出する試薬又はキットを構成要件とするものであっても、複数の乳癌マーカーを検出する、複数の試薬又はキットの組み合わせからなるものであってもよい。また、複数の乳癌マーカーを検出する、複数の試薬又はキットの組合せとしては、複数の本発明の乳癌マーカーを検出する、複数の試薬又はキットの組合せの他に、 一種類又は複数の本発明の乳癌マーカーを検出する、一種又は複数の試薬又はキットと、一種類又は複数の本発明の乳癌マーカー以外の乳癌マーカーを検出する、一種又は複数の試薬又はキットの組合せ、等が挙げられる。
　また、これらキットに含まれる試薬中には、通常この分野で用いられる試薬類、例えば緩衝剤、反応促進剤、糖類、タンパク質、塩類、界面活性剤等の安定化剤、防腐剤等であって、共存する試薬等の安定性を阻害したりせず、本発明の乳癌マーカーと抗体（又はレクチン等）との反応を阻害しないものが含まれていてもよい。またその濃度も、通常この分野で通常用いられる濃度範囲から適宜選択すればよい。
　さらに、当該乳癌マーカーを検出する際に用いられる、検量線作成用の乳癌マーカーの標準を組み合わせたキットとしてもよい。該標準は、市販の標準品を用いても、公知の方法に従って、製造されたものを用いても構わない。
　以下、実施例に基づいて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれら実施例によって何ら限定されるものではない。
実施例１　乳癌のマーカーの選別
（１）試料の前処理
　乳癌患者（１１名）から採取したそれぞれの乳頭分泌液（数μL）を、100μL のサンプル保存液（50 mM 炭酸水素アンモニウムと0.02% アジ化ナトリウムを含有する水溶液）に加え、４℃、５分間 18,000 x g で遠心した。上澄みを分取後、280 nm の波長の紫外線を用いた紫外吸収法によりタンパク質濃度を求め、50 mM 炭酸水素アンモニウム水溶液を用いてタンパク質濃度が 0.5 mg／mL となるように調製した。45 mM ジチオトレイトール水溶液を 1.41μL 加えて還元し、タンパク質を変性させるためトリフルオロエタノールを 50% になるよう加え、60 ℃、１時間加熱した。加熱後室温に戻し、100 mM のヨードアセトアミド水溶液を 1.41μL 加えて室温暗環境下において１時間アルキル化を行った。次いで、アルキル化産物から10μLを分取し、90μLの50 mM 炭酸水素アンモニウム水溶液を加えて、トリフルオロエタノールの割合が 5%になるように調整した。更に、100ng／μLのトリプシン（マススペクトロメトリーグレード、Promega Corporation, Madison, WI, USA）の溶液 1.2μL（タンパク質重量の 1／20量のトリプシン含有）を加え 37 ℃ で一晩インキュベートした。得られたトリプシン消化産物（タンパク質換算で約 350 fmol／μL）について、以下の方法で二次元ナノＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳ測定を行った。
　別に、乳頭から分泌液が分泌されることを不定愁訴として訴える受診者（被験者）であって乳癌ではないと診断された非乳癌者（１５名）から採取した乳頭分泌液を、上記と同様に処理した。
（２）二次元ナノＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳ測定
　上記（１）で得られたトリプシン消化産物のうち40μLを、二次元 Nano HPLC system （UltiMate 3000； Thermo Fisher Scientific Inc. （Dionex）, Waltham, MA, USA） に装着した Acclaim PA2, 300μm i.d. x 15 cm 逆相カラム （Thermo Fisher Scientific Inc. （Dionex）, Waltham, MA, USA） を用いて A 溶媒 20 mM ギ酸アンモニウム水溶液, pH 10.0、B 溶媒 アセトニトリルを用い、７５分のグラジエント（12～95% の B 溶媒）で分離し 26 個の画分を得た。それらの画分を 70 ℃ で４時間加熱して溶媒を蒸発させた。次いで各々の画分に 0.1% トリフルオロ酢酸水溶液を 30μL 加えて、分離した成分を溶解させた。次いで、得られた各画分溶液の各全量を、それぞれ L－column Micro L2－C18, 75μm i.d. x 15 cm 逆相カラム（（財）化学物質評価研究機構製）を用いて A 溶媒 0.1% ギ酸水溶液、B 溶媒 アセトニトリル／0.1% ギ酸を用い、４５分のグラジエント（2～95% の B 溶媒）で分離し、連続的にナノＥＳＩイオン源を装着したＥＳＩ－イオントラップ型質量分析計 （HCTultra； Bruker Daltonik GmbH, Bremen, Germany）でデータ依存的スキャンを用いてオンライン分析した。各試料について、２回のランを行った。
　二次元ナノＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳ分析の各条件は以下の通りである。
i）LC 条件
　（一次元目）
　　HPLCカラム：Acclaim PA2, 300μm i.d. x 15 cm 逆相カラム （Thermo Fisher Scientific Inc. （Dionex） 製）
　　流速：6.0μL／分
    A 溶媒：20 mM ギ酸アンモニウム水溶液, pH 10.0
    B 溶媒：アセトニトリル
　　溶出：  0分→19 分：12% から 20% B 溶媒までリニアグラジエント、
　　　　　19 分→29 分：48% B 溶媒までリニアグラジエント、
　　　　　29 分→34 分：95% B 溶媒で洗浄、
　　　　　34 分→75 分：2% B 溶媒で平衡化。
　　　　　（なお、溶出開始後すぐにB溶媒の濃度を上げたので、溶出開始後ほとんど0分で、溶出液のＢ溶媒の濃度は12%になっている。）
　　カラム温度：35 ℃
　　注入量：40μL
　　分画数：26
　（二次元目）
　　HPLCカラム：L－column Micro L2－C18, 75μm i.d. x 15 cm 逆相カラム（（財）化学物質評価研究機構製）
　　流速：300 nL／分
    A 溶媒：0.1% ギ酸水溶液, pH 2.0
    B 溶媒：アセトニトリル／0.1% ギ酸
　　溶出：  0分→1 分：8% B 溶媒までリニアグラジエント、
　　　　　 1 分→20 分：20% B 溶媒までリニアグラジエント、
　　　　　20 分→25 分：35% B 溶媒までリニアグラジエント、
　　　　　25 分→30 分：95% B 溶媒で洗浄、
　　　　　30 分→45 分：2% B 溶媒で平衡化。
　　カラム温度：室温
　　注入量：30μL
ii）ESI－MS／MS 条件
　　イオン化法：エレクトロスプレーイオン化法 (electrospray ionization 法、ESI 法)
　　測定イオン：正イオン
　　スプレー電圧：1200V
　　ドライガス：窒素（4 L／min）
　　イオン源温度：160 ℃
　　走査範囲：m／z 300 ～ 1,500（MS／MS 測定時：m／z 50 ～ 2,200）
　　プリカーサーイオン選択数：4 イオン／マススペクトル
　　最小限のプリカーサーイオン強度：50,000 カウント
　　プリカーサーイオン選択排除時間：30 s
　　プリカーサーイオン排除価数：1
iii）タンパク質同定解析条件
　　タンパク質サーチエンジン：Mascot (Matrix Science Ltd., London,UK)
　　タンパク質サーチ手法：MS／MS Ion Search
　　タンパク質データベース：Swiss－Prot
　　タンパク質サーチ時動物種分類：Homo sapiens （human）
　　タンパク質サーチ時翻訳後修飾設定：Carbamidomethyl （システイン残基修飾）
　　トリプシン未切断部位許容回数：1
　　プリカーサーイオン質量許容値：±0.5 Da
　　プロダクトイオン質量許容値：±1 Da
　　同定タンパク質解析ソフトウェア：Scaffold（Proteome Software,Inc., Portland, OR, USA）
（３）二次元ナノＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳ測定の結果
　二次元ナノＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳ測定によって、乳癌患者由来試料から３５０種、非乳癌者由来試料から４７９種、総計５７５種のタンパク質成分が検出された。この分析では、特許文献２に記載されたペルオキシレドキシン１は乳癌患者試料及び非乳癌者試料の両方から検出され、更に乳癌患者に特異的な検出ではなかったことを、付記しておく。
　次いで、以下の方法で、乳癌患者試料から特異的に検出されたタンパク質を乳癌マーカー候補として選別した。
（４）乳癌マーカー候補の選別
　上記（３）の結果を基に、
　（i）分析を行った乳癌患者１１名中の、各タンパク質成分が試料中に検出された乳癌患者数（ｎ１）の割合（比率Ａ）、
　（ii）分析を行った非乳癌者１５名中の、各タンパク質成分が試料中に検出された非乳癌者数（ｎ２）の割合（比率Ｂ）、及び
　（iii）比率Ａ／比率Ｂ（比率Ｃ）
を求めた。
　紙面の都合上、上記（３）で検出されたタンパク質成分５７５種のうち、比率Ｃが2.00以上であったタンパク質成分の一覧を、下記表１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　そして、表１に挙げられたタンパク質成分の一覧中から血液由来成分と疑われるタンパク質成分等は除外し、比率Ｃが２．４以上であるタンパク質成分で、且つマススペクトル中に検出されたペプチドピークを基準に算出されたタンパク質成分の存在量を示すスペクトラムカウント値が乳癌患者及び非乳癌者間で統計的に有意な差が認められるタンパク質成分（マン・ホイットニーのＵ検定において p〈0.05 のタンパク質成分）を、乳癌マーカー候補として選択した。選択された乳癌マーカー及び各乳癌マーカーの比率Ａ，Ｂ，Ｃを表２に、統計結果を図１～図５に示す。
　尚、表２において、比率Ｂが０だった場合、非乳癌者からはその乳癌マーカーが検出されなかったということを意味し、比率Ｃの値は計算できなくなる。そこで、この場合の比率Ｃは、ｎ１の乳癌患者数と同じ値を記載している（＊）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　すなわち、表２に記載のカルボキシペプチダーゼＮサブユニット２（Carboxypeptidase N subunit 2）、細胞外マトリックスタンパク質１（Extracellular matrix protein 1）、血清アミロイドＰ成分（Serum amyloid P－component）、ネブリン（Nebulin）、補体成分C8α鎖（Complement component C8 alpha chain）、アポリポタンパク質Ｌ１（Apolipoprotein L1）、フラビンレダクターゼ（Flavin reductase）、カタラーゼ（Catalase）、炭酸脱水酵素２（カルボニックアンヒドラーゼ２）（Carbonic anhydrase 2）、アポリポタンパク質C－I（Apolipoprotein C－I）、核膜孔糖タンパク質２１０（Nuclear pore membrane glycoprotein 210）、スーパーオキシドジスムターゼ［Cu－Zn］（超酸化物不均化酵素［Cu－Zn］）（Superoxide dismutase ［Cu－Zn］）、ビスホスホグリセリン酸ムターゼ（Bisphosphoglycerate mutase）、炭酸脱水酵素１（カルボニックアンヒドラーゼ１）（Carbonic anhydrase 1）、及びペルオキシレドキシン２（Peroxiredoxin 2）を本発明の乳癌マーカーとして選別した。
　表２及び図１～５から明らかな通り、これらの乳癌マーカーは、非乳癌者の乳頭分泌液中濃度に比較して乳癌患者の乳頭分泌液中に高濃度に存在していた。また、これらの成分は乳癌マーカーとして使用されたという実績はないことから、新規な乳癌マーカーとして極めて有望である。
　また、これらの乳癌マーカーを単独或いは２種以上組み合わせて検出することにより乳癌、及びその進行度の判定が行えることが期待される。例えば、これらの乳癌マーカーを単独或いは２種以上組み合わせて検出することで、乳癌患者に特徴的な本発明の乳癌マーカーの存在パターンが得られる。そこで、被験者の乳頭分泌液等の試料から本発明の乳癌マーカーを検出・同定し、これら複数の乳癌マーカーの存在パターン解析をすることにより、被験者が乳癌を発症しているか否かの推定が可能となることが期待される。
　本発明の乳癌マーカーを利用した判定方法はより確度の高い乳癌の判定（診断、検査）を可能とする。
　また、本発明の乳癌マーカーは、例えば乳頭分泌液中に見出されるため、非侵襲的且つ簡便に乳癌を判定（診断、検査）することが可能である。その結果、精神的及び肉体的苦痛が少ない本発明による乳癌診断は、若い世代や授乳中・後の若年経産婦人が自主的に乳癌検診を行うことを促進し、世界に比べて低い我が国の乳癌検診率の向上と、乳癌死亡率の低減による経済的効果が期待される。

Claims (7)

  1. カルボキシペプチダーゼＮサブユニット２、細胞外マトリックスタンパク質１、血清アミロイドＰ成分、ネブリン、補体成分C8α鎖、アポリポタンパク質Ｌ１、フラビンレダクターゼ、カタラーゼ、炭酸脱水酵素２（カルボニックアンヒドラーゼ２）、アポリポタンパク質C-I、核膜孔糖タンパク質２１０、スーパーオキシドジスムターゼ[Cu-Zn]（超酸化物不均化酵素[Cu-Zn]）、ビスホスホグリセリン酸ムターゼ、炭酸脱水酵素１（カルボニックアンヒドラーゼ１）、及びペルオキシレドキシン２からなる群から選択される乳癌マーカー。
  2. 試料中のカルボキシペプチダーゼＮサブユニット２、細胞外マトリックスタンパク質１、血清アミロイドＰ成分、ネブリン、補体成分C8α鎖、アポリポタンパク質Ｌ１、フラビンレダクターゼ、カタラーゼ、炭酸脱水酵素２（カルボニックアンヒドラーゼ２）、アポリポタンパク質C-I、核膜孔糖タンパク質２１０、スーパーオキシドジスムターゼ[Cu-Zn]（超酸化物不均化酵素[Cu-Zn]）、ビスホスホグリセリン酸ムターゼ、炭酸脱水酵素１（カルボニックアンヒドラーゼ１）、及びペルオキシレドキシン２からなる群から任意に選択される1つ以上の乳癌マーカーを検出し、その結果に基づいて判定する、乳癌の判定方法。
  3. 試料が乳頭分泌液である、請求項２に記載の方法。
  4. 試料が血清、血漿、又は全血である、請求項２に記載の方法。
  5. カルボキシペプチダーゼＮサブユニット２、細胞外マトリックスタンパク質１、血清アミロイドＰ成分、ネブリン、補体成分C8α鎖、アポリポタンパク質Ｌ１、フラビンレダクターゼ、カタラーゼ、炭酸脱水酵素２（カルボニックアンヒドラーゼ２）、アポリポタンパク質C-I、核膜孔糖タンパク質２１０、スーパーオキシドジスムターゼ[Cu-Zn]（超酸化物不均化酵素[Cu-Zn]）、ビスホスホグリセリン酸ムターゼ、炭酸脱水酵素１（カルボニックアンヒドラーゼ１）、及びペルオキシレドキシン２からなる群から選択される乳癌マーカーを検出する試薬を含む、乳癌を判定するために乳癌マーカーを検出するためのキット。
  6. 乳癌マーカーを検出する試薬が乳癌マーカーに親和性を有する物質を含むものである、請求項５に記載のキット。
  7. 乳癌マーカーに親和性を有する物質が抗体である、請求項６に記載のキット。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016074084A1 (en) * 2014-11-12 2016-05-19 Consortium For Clinical Diagnostics Predictive biomarker(s) of treatment with erb antibodies
WO2020004244A1 (ja) 2018-06-26 2020-01-02 富士フイルム和光純薬株式会社 膵臓癌の判定用マーカー
WO2021095824A1 (ja) 2019-11-15 2021-05-20 富士フイルム和光純薬株式会社 大腸癌の診断を補助する方法、キット及びバイオマーカー

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017181163A2 (en) * 2016-04-16 2017-10-19 Oncocyte Corporation Methods and compositions for detection and diagnosis of breast cancer
CN108132349A (zh) * 2016-11-30 2018-06-08 北京大学 一种用于癫痫预后评估的生物标志物

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002131322A (ja) 2000-07-26 2002-05-09 Pro Duct Health Inc 乳管からの物質の同定
JP2003503050A (ja) * 1999-06-30 2003-01-28 ミレニアム・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 新規なヒトカルボキシペプチダーゼである２２０１２
JP2008502891A (ja) 2004-06-18 2008-01-31 エフ．ホフマン−ラ　ロシュ　アーゲー 乳癌のマーカーとしてのタンパク質ｐｄｘ１の使用
JP2010502646A (ja) * 2006-08-29 2010-01-28 バイオストリーム セラピューティクス インコーポレーティッド ペプチダーゼ結合部分と結合しペプチダーゼ発現組織及び器官をイメージングする放射性イメージング部分
WO2011007764A1 (ja) * 2009-07-14 2011-01-20 独立行政法人産業技術総合研究所 肝疾患病態指標糖鎖マーカー

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RO114835B1 (ro) * 1997-03-17 1999-07-30 Ioan Puşcaş Metodă rapidă de diagnostic al cancerelor
US6964849B2 (en) * 2001-01-11 2005-11-15 Curagen Corporation Proteins and nucleic acids encoding same
ATE503023T1 (de) * 2001-06-18 2011-04-15 Rosetta Inpharmatics Llc Diagnose und prognose von brustkrebspatientinnen
AU2003217774A1 (en) * 2002-02-28 2003-09-16 Georgetown University Method and composition for detection and treatment of breast cancer
EP1539957A4 (en) * 2002-09-05 2006-10-11 Garvan Inst Med Res NEW DIAGNOSTIC AND THERAPY PROCEDURES AND REAGENTS FOR THIS
GB0616045D0 (en) * 2006-08-11 2006-09-20 Univ Bristol Blood cell separation
WO2008074131A1 (en) * 2006-12-20 2008-06-26 Mcmaster University Skin and salivary tests for the detection of sensitivity to oxidative stress based therapies
US8097423B2 (en) * 2007-07-30 2012-01-17 Institute Of Virology MN/CA IX and breast cancer therapy
US8728744B2 (en) * 2007-10-26 2014-05-20 The Regents Of The University Of California Salivary protein biomarkers for human oral cancer
JP2015155795A (ja) * 2012-05-21 2015-08-27 東レ株式会社 癌の検出方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003503050A (ja) * 1999-06-30 2003-01-28 ミレニアム・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 新規なヒトカルボキシペプチダーゼである２２０１２
JP2002131322A (ja) 2000-07-26 2002-05-09 Pro Duct Health Inc 乳管からの物質の同定
JP2008502891A (ja) 2004-06-18 2008-01-31 エフ．ホフマン−ラ　ロシュ　アーゲー 乳癌のマーカーとしてのタンパク質ｐｄｘ１の使用
JP2010502646A (ja) * 2006-08-29 2010-01-28 バイオストリーム セラピューティクス インコーポレーティッド ペプチダーゼ結合部分と結合しペプチダーゼ発現組織及び器官をイメージングする放射性イメージング部分
WO2011007764A1 (ja) * 2009-07-14 2011-01-20 独立行政法人産業技術総合研究所 肝疾患病態指標糖鎖マーカー

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
F. MANNELLO ET AL., EXPERT REV. PROTEOMICS, vol. 6, 2009, pages 43 - 60
SADAMU KURONO ET AL.: "Nano LC-ESI-IT-MS ni yoru Rinsho Kentai o Mochiita Proteome Kaiseki kara Miete kuru Koto", JSBMS LETT, vol. 36, 10 August 2011 (2011-08-10), pages 39, XP055186888 *
See also references of EP2894477A4

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016074084A1 (en) * 2014-11-12 2016-05-19 Consortium For Clinical Diagnostics Predictive biomarker(s) of treatment with erb antibodies
WO2020004244A1 (ja) 2018-06-26 2020-01-02 富士フイルム和光純薬株式会社 膵臓癌の判定用マーカー
WO2021095824A1 (ja) 2019-11-15 2021-05-20 富士フイルム和光純薬株式会社 大腸癌の診断を補助する方法、キット及びバイオマーカー

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