JP7339057B2

JP7339057B2 - ラクトフェリン含有腸溶錠及びその製造方法

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Publication number: JP7339057B2
Application number: JP2019144441A
Authority: JP
Inventors: 夏季松本; 光俊森部; 卓実満留
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Filing date: 2019-08-06
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Description

本発明はラクトフェリン含有腸溶錠及びその製造方法に関する。

特許文献１～３はラクトフェリンを含有する腸溶錠を開示している。これらの腸溶錠はラクトフェリンを含有する素錠をコーティングしたものである。コーティングが胃でのラクトフェリンの溶出を抑制することで、主に腸でラクトフェリンが素錠より溶出する。

特許文献１及び２は、ステアリン酸塩が滑沢剤として素錠に添加されていることで、腸溶錠を長期保存後であっても、腸でのラクトフェリン溶出が良好に保たれることを開示している。特許文献３は素錠とコーティングとの間にプレコーティングを施すことで、腸溶錠を長期保存後であっても胃でのラクトフェリン溶出の抑制が良好に保たれることを開示している。

国際公開第２０１６／１６３４６０号国際公開第２０１６／１６３４６３号国際公開第２０１６／０３５７５６号

本発明はラクトフェリン含有腸溶錠及びその製造方法を提供する。当該腸溶錠では、ステアリン酸塩が滑沢剤として素錠に添加されている。このため、腸溶錠を長期保存後であっても、ラクトフェリンを腸内で効率よく溶出させることができる。ここで特に高温下での長期保存後におけるラクトフェリンの溶出性については改善が求められていた。本発明は腸でのラクトフェリン溶出性を特に高温下で経時的に維持するための改善手段を提供することを課題とする。

＜１＞素錠が、（Ａ）ラクトフェリンと、（Ｂ）結晶セルロースを含有し、
前記（Ｂ）結晶セルロースの嵩密度は0.23 g/cm³以上である、
腸溶錠。
＜２＞前記（Ｂ）結晶セルロースの嵩密度は0.25 g/cm³以上であり、
前記（Ｂ）結晶セルロースと前記（Ａ）ラクトフェリンとの重量比（Ｂ／Ａ）は0.09以上である、
＜１＞の腸溶錠。
＜３＞前記重量比（Ｂ／Ａ）は60以下である、
＜２＞に記載の腸溶錠。
＜４＞前記（Ｂ）結晶セルロースと前記（Ａ）ラクトフェリンとの重量比（Ｂ／Ａ）は0.65以上2.60以下である、
＜３＞に記載の腸溶錠。
＜５＞前記素錠は、嵩密度が0.25 g/cm³より小さい他の結晶セルロースをさらに含有する、
＜２＞～＜４＞いずれかに記載の腸溶錠。
＜６＞前記（Ｂ）結晶セルロースの平均粒子径は20μｍ以上である、
＜１＞～＜５＞いずれかに記載の腸溶錠。
＜７＞素錠が、（Ａ）ラクトフェリンと、（Ｂ）結晶セルロースを含有し、
前記（Ｂ）結晶セルロースと前記（Ａ）ラクトフェリンとの重量比（Ｂ／Ａ）は0.65以上2.60以下であり、
素錠の硬度が7kgf以上であり、
溶出性維持率が70％以上である、
腸溶錠。
＜８＞前記素錠が、さらに（Ｃ）ステアリン酸塩を含有する、
＜１＞～＜７＞いずれかに記載の腸溶錠。
＜９＞前記素錠がメタクリル酸系高分子化合物、シェラック、ツェイン、アルギン酸及びアルギン酸塩のいずれかの保護膜成分でコーティングされている、
＜１＞～＜８＞いずれかに記載の腸溶錠。
＜１０＞前記素錠とコーティングとの間に前記保護膜成分を含まないプレコーティングが施されている、
＜９＞に記載の腸溶錠。
＜１１＞前記（Ａ）ラクトフェリンを、脂質代謝の活性化、便秘の治療又は予防、腸内フローラの活性化、安眠、成長ホルモンの分泌の促進、ドライアイ及び角膜上皮剥離並びにこれらから派生する目の疾患のいずれかの治療又は予防、血圧降下、アレルギーの治療又は予防、免疫の活性化、更年期障害の治療又は予防、並びに肝機能の活性化のいずれかのための生理活性成分として含有する、
＜１＞～＜１０＞のいずれかに記載の腸溶錠。
＜１２＞腸溶錠の製造方法であって、
（Ａ）ラクトフェリンの粉体と、嵩密度が0.23 g/cm³以上である（Ｂ）結晶セルロースの粉体とを含有する混合粉体を打錠機にて打錠することで素錠を得て、これをコーティングする、
方法。

本発明により、ラクトフェリン含有腸溶錠及びその製造方法において、腸でのラクトフェリン溶出性を特に高温下で経時的に維持するための改善手段を提供できる。

原料の付着状態（***）を示す写真。原料の付着状態（**）を示す写真。原料の付着状態（*）を示す写真。

＜１．腸溶錠の構成＞

本実施形態の腸溶錠は素錠に保護膜成分でコーティングが施されたものである。素錠は、（Ａ）ラクトフェリンと、（Ｂ）結晶セルロースとを含有する。一態様において腸溶錠は（Ａ）ラクトフェリンを生理活性成分として腸に届ける。一態様において腸溶錠は（Ａ）ラクトフェリンを生理活性成分以外の他の成分として腸に届ける。

コーティング中の保護膜成分は胃液中での（Ａ）ラクトフェリンの溶出を妨げるが、腸液中での溶出を妨げない。素錠とコーティングとの間には、保護膜成分を含まないプレコーティングをさらに施してもよい。コーティングの外側には、保護膜成分を含まない追加コーティングをさらに施してもよい。

素錠は（Ａ）ラクトフェリン以外の生理活性成分を含んでいてもよい。一態様において、（Ａ）ラクトフェリンは素錠中の生理活性成分の内、最も含有量の多い生理活性成分である。（Ａ）ラクトフェリンは素錠中の唯一の生理活性成分であってもよい。

本実施形態では結晶セルロースの嵩密度は0.23 g/cm³以上である。このため腸溶錠は、腸でのラクトフェリン溶出性を特に高温下で経時的に維持することができる。次に腸溶錠に必要な各成分とその分量を解説する。

＜２－１．（Ａ）ラクトフェリン＞

ラクトフェリンは分子量約80,000の鉄結合性の糖タンパク質で、１分子に２つの鉄を結合する。一態様においてラクトフェリンは鉄と結合している。一態様においてラクトフェリンは鉄と結合していない。この後に説明する実験例中のラクトフェリンは鉄含有量が0.05％以下であり実質的に鉄と結合していない組成物である。

ラクトフェリンは、脂質代謝を改善する機能、便秘を改善する機能、腸内フローラを改善する機能、睡眠を改善する機能、成長ホルモンの分泌を促進する機能、ドライアイ及び角膜上皮剥離並びにこれらから生じる目の障害を改善する機能、血圧を降下させる機能、アレルギーを改善する機能、免疫を改善する機能、更年期障害を改善する機能、肝機能を改善する機能及びその他の機能を有する生理活性成分である。

ラクトフェリンがペプシン消化を受けると、より強力な抗菌活性を持つペプチド、ラクトフェリシンが生成される。一態様においてラクトフェリンはラクトフェリシンを含む組成物である。一態様においてラクトフェリンはラクトフェリシンを含まない組成物である。この後に説明する実験例中のラクトフェリンはラクトフェリシンを含まない組成物である。

一態様において、素錠に対するラクトフェリンの含有量は1重量％以上60重量％であり、好ましくは4重量％以上60重量％以下、より好ましくは15重量％以上56重量％以下、さらに好ましくは、18重量％以上50重量％以下である。

含有量を4重量％以上とすることで打錠時にラクトフェリンを含む混合粉体が打錠機に付着することが抑制される。含有量を15重量％以上、好ましくは17.2重量％以上とすることで付着がさらに抑制される。含有量を18重量％以上、好ましくは18.5重量％以上とすることで初期溶出率が向上する。

含有量を50重量％以下、好ましくは48.2重量％以下とすることで打錠時の素錠の成型性が向上する。含有量を45重量％以下、好ましくは41.5重量％以下とすることで初期溶出率及び溶出性維持率が向上する。含有量を36.3重量％以下とすることで打錠時の素錠の成型性がさらに向上する。また溶出性維持率がさらに向上する。含有量を35重量％以下、好ましくは30.8重量％以下とすることで溶出性維持率がさらに向上する。

ここで溶出性維持率とは腸溶錠の保存期間を通じた溶出性の劣化に抗して、どれだけ溶出率が維持されているかの尺度を指すものとする。また本実施形態において溶出性維持率とは40℃を超える高温下での保存における溶出性維持率をいう。また一態様において溶出性維持率とは50℃を超える高温下での保存における溶出性維持率をいう。また一態様において溶出性維持率とは60℃に達する高温下での保存における溶出性維持率をいう。

ラクトフェリンは例えば乳用家畜から得られる乳汁から分離される。乳用家畜としてはウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ等が挙げられるがこれらに限定されない。乳汁はその採取時期ごとに初乳、移行乳、常乳及び末期乳として分類される。いずれの時期の乳汁も利用できる。乳汁を処理して得られたもの、例えば脱脂乳やホエーからラクトフェリンを分離してもよい。実験例中のラクトフェリンはいずれもウシ由来である。

ラクトフェリンは遺伝子組み換え生物で生産してもよい。ホストとなる生物は動物でも植物でも微生物でもよい。またホストは培養細胞でもよい。ホスト植物としてはトマト、イネ及びタバコが挙げられる。導入するラクトフェリン遺伝子はヒト及び乳用家畜のいずれかのものでもよい。導入するラクトフェリン遺伝子に変異を加えてラクトフェリン誘導体を生産してもよい。このようなラクトフェリン誘導体は本実施形態のラクトフェリンに含まれる。一態様においてラクトフェリンはクローニングされたままの変異のないラクトフェリンである。

分離した又は生産したラクトフェリンを化学的に処理してラクトフェリン誘導体を生成してもよい。このようなラクトフェリン誘導体は本実施形態のラクトフェリンに含まれる。一態様においてラクトフェリンはラクトフェリンの非誘導体である。

ラクトフェリンはイオン交換クロマトグラフィーといった通常の方法を用いて精製及び濃縮できる。濃縮されたラクトフェリンの乾燥は凍結乾燥及び噴霧乾燥のどちらで行ってもよい。

ラクトフェリンを他の原料粉体と混合する前に、ラクトフェリンの造粒、及びラクトフェリンの粉砕などの加工を施してもよい。これらの加工で得た、所定の粒子径分布又は平均粒子径を有するラクトフェリン粒子を他の原料粉体と混合することが好ましい。ラクトフェリン粒子をコーティングしてもよい。

ラクトフェリン粒子の平均粒子径は好ましくは20μｍ～300μｍ、より好ましくは20μｍ～200μｍ、さらに好ましくは20μｍ～100μｍである。下記の実験例では平均粒子径を80μｍとした。

ラクトフェリン粒子の平均粒子径は、ロータップ法又はレーザー回折散乱法で測定できる。ロータップ法で測定される平均粒子径は重量基準において頻度の累積が50重量％となる粒子径に相当する。なお本実施例においてラクトフェリンの嵩密度は特に限定されない。なお、ここで嵩密度とは一定容積の容器に粉体を目一杯充てんし、その内容積を体積としたときの密度のことである。

本実施例においてラクトフェリンは凝集していてもよく、凝集していなくともよい。凝集体のラクトフェリンの見かけの分子量は特に限定されない。ラクトフェリンは一分子ごとにバラバラでもよい。ラクトフェリンの凝集体中にさらに他のタンパク質が含まれていてもよい。ラクトフェリンの凝集体中に他のタンパク質又はラクトフェリンのペプチド断片が含まれていてもよい。

原料として用いられるラクトフェリンの濃縮物において、ラクトフェリンの純度は特に限定されない。純度は重量基準で50重量％以上が好ましく、85重量％以上がさらに好ましい。ラクトフェリンの濃縮物の純度は必ずしも100重量％でなくともよい。一態様において（Ａ）ラクトフェリンは原料、例えばホエーから精製されたラクトフェリン濃縮物として素錠中に混合される。

ラクトフェリンの含有量を決める際はラクトフェリン濃縮物中のラクトフェリンの純度や純分量すなわち重量を考慮してよい。下記実験例ではラクトフェリンの純分量にてラクトフェリンの含有量を特定している。一態様において純分量にはラクトフェリンは結合した鉄が含まれる。一態様において純分量にはラクトフェリンは結合した鉄が含まれない。

＜２－２．（Ｂ）結晶セルロース＞

一態様において、結晶セルロースは、繊維性植物から得られたα－セルロースを酸で部分的に解重合して精製することで得られる。結晶セルロース中のセルロースは官能基などを付与されていない。結晶セルロース中のセルロースは非誘導体セルロースである。

結晶セルロースは打錠に供する混合粉体中の粒子間の結合力を向上する。結晶セルロースはさらにラクトフェリンの溶出性を向上する。素錠に対する結晶セルロースの含有量は好ましくは、5重量％以上70重量％以下、より好ましくは15重量％以上60重量％以下、さらに好ましくは27重量％以上57重量％以下である。

含有量を5重量％以上、好ましくは12重量％以上とすることで打錠時の素錠の成型性が向上する。含有量を15重量％以上、好ましくは18.7重量％とすることで初期溶出率や溶出性維持率が向上する。含有量を23.8重量％以上とすることで打錠時の素錠の成型性がさらに向上する。また溶出性維持率がさらに向上する。27重量％以上、好ましくは29.3重量％以上とすることで溶出性維持率がさらに向上する。

含有量を57％以下、好ましくは56.2％以下とすることで打錠時にラクトフェリンを含む混合粉体が打錠機に付着することが抑制される。含有量を45％以下、好ましくは43.0%以下とすることで付着がさらに抑制される。含有量を42％以下、好ましくは41.7％以下とすることで初期溶出率が向上する。

結晶セルロースは粒子状である。結晶セルロースの嵩密度は0.23 g/cm³以上であることが好ましい。嵩密度は0.40 g/cm³以下であることが好ましい。嵩密度は0.25 g/cm³以上、0.35 g/cm³以下であることが好ましい。嵩密度は0.28 g/cm³以上、0.31 g/cm³以下であることが好ましい。

嵩密度を0.23 g/cm³以上とすることで溶出性維持率が向上する。嵩密度を0.25 g/cm³以上とすることで溶出性維持率がさらに向上する。嵩密度を0.35 g/cm³以下、好ましくは0.31 g/cm³以下とすることで打錠時の素錠の成型性が向上する。

なお、上述の通り、嵩密度とは一定容積の容器に粉体を目一杯充てんし、その内容積を体積としたときの密度のことである。錠剤中の結晶セルロース粉体は圧縮されているため、打錠前の嵩密度と異なる嵩密度を有する場合がある。打錠により嵩密度が変化する場合は、混合粉体を調製する直前の原料段階を基準にして嵩密度を特定してもよい。

嵩密度の測定は、第十七改正日本薬局方の「結晶セルロース」に記載の方法によって行われてもよい。嵩密度は日本薬局方指定の器具、ここではスコットボリュームメーターで測定できる。以下特に言及の無い限り嵩密度は日本薬局方の方法に沿って測定される嵩密度をいう。

結晶セルロースは所定の粒子径分布を有する。その平均粒子径は好ましくは20μｍ以上180μｍ以下、より好ましくは40μｍ以上150μｍ以下である。平均粒子径は、ロータップ法又はレーザー回折散乱法で測定できる。ロータップ法で測定される平均粒子径は重量基準において頻度の累積が50重量％となる粒子径に相当する。

素錠や腸溶錠の中に分散している結晶セルロースの粒子径を測定するための方法としては以下が例示される。まず、結晶セルロース以外の成分を溶かす媒質、例えば水やエタノール等で錠剤を崩壊させた後に、溶媒中の結晶セルロースの粉体を捕集する。次に捕集した粉体の粒子径分布を上述の方法で測定する。あるいは粒子画像分析装置で粒子径分布を測定する。粒子画像分析装置の例は、粒子画像分析『モフォロギ４』並びに粒子画像分析及びラマン分光分析装置『モフォロギ４－ＩＤ』、いずれもスペクトリス株式会社製である。

平均粒子径を20μｍ以上、好ましくは40μｍ以上、より好ましくは50μｍ以上とすることで溶出性維持率が向上する。平均粒子径を180μｍ以下、好ましくは150μｍ以下とすることで打錠時の素錠の成型性が向上するとともに、ラクトフェリンを含む混合粉体が打錠機に付着することが抑制される。

結晶セルロースの調製の上では嵩密度に留意する。嵩密度の調整は一般的な方法に従って行うことができる。結晶セルロースの調製の上では粒子径分布にも留意する。所望の平均粒子径又は粒子径分布を有する結晶セルロースを得るために一般的な方法を用いてもよい。

結晶セルロースの調製方法としては、例えば特開２０１９－０２６５５８号公報の段落[0022]から[0024]の記載が挙げられる。例えばセルロース分散液を一気に脱水精製を行うことで大きい粒子を得てもよい。また篩わけにより選別して粒子径分布を大きい粒子側に偏らせてもよい。また粉砕により一次粒子率を高めることでより小さい粒子を得てもよい。その他の一般的な方法も平均粒子径又は粒子径分布の調整に利用できる。

複数の結晶セルロース原料を組合せてもよい。嵩密度や粒子径分布又は平均粒子径が異なる、２種以上の結晶セルロースの集団を混合してもよい。嵩密度が異なる２種以上の結晶セルロースを組み合わせて、その嵩密度が本実施形態の嵩密度の範囲内になるよう調整してもよい。一態様において、素錠は嵩密度が0.25 g/cm³以上の、好ましくは0.28 g/cm³以上の結晶セルロースと、嵩密度が0.25 g/cm³より小さい他の結晶セルロースとを含有していてもよい。他の結晶セルロースの嵩密度は例えば0.23 g/cm³でもよい。他の結晶セルロースの含有量は、嵩密度が0.25 g/cm³以上の結晶セルロースの含有量よりも少ないことが好ましい。

＜２－３．重量比（Ｂ／Ａ）＞

（Ｂ）結晶セルロースと（Ａ）ラクトフェリンとの重量比（Ｂ／Ａ）は好ましくは0.09～60、より好ましくは0.45～15、さらに好ましくは、0.9～2.3である。

重量比（Ｂ／Ａ）を0.25以上とすることで打錠時の素錠の成型性が向上する。重量比（Ｂ／Ａ）を0.45以上で初期溶出率が向上するとともに、溶出性維持率が向上する。重量比（Ｂ／Ａ）を0.63超、好ましくは0.64以上、より好ましくは0.65以上、さらに好ましくは0.66以上とすることで素錠の成型性がさらに向上する。また溶出性維持率が向上する。重量比（Ｂ／Ａ）を0.8以上、好ましくは0.95とすることで溶出性維持率がさらに向上する。

重量比（Ｂ／Ａ）を15以下、好ましくは14.04以下とすることで打錠時にラクトフェリンを含む混合粉体が打錠機に付着することが抑制される。重量比（Ｂ／Ａ）を4以下、好ましくは2.50以下とすることで付着がさらに抑制され、さらに腸溶錠の初期溶出率が向上する。重量比（Ｂ／Ａ）は、ラクトフェリンの純分量に対する前記（Ｂ）結晶セルロースの重量の比として解釈してもよい。

＜２－４．（Ｃ）ステアリン酸塩ほか＞

素錠は、さらに滑沢剤としてステアリン酸塩を含有してもよい。ステアリン酸塩はステアリン酸カルシウム及びステアリン酸マグネシウムの少なくともいずれかでもよい。素錠に対するステアリン酸塩の含有量は、好ましくは、0.01重量％以上10重量％以下、より好ましくは0.05重量％以上5.0重量％以下、さらに好ましくは0.1重量％以上3.0重量％以下である。前記下限以上とすることで、付着性が改善され、前記上限以下とすることで、溶出性が良好となる。ステアリン酸塩以外の他の滑沢剤としてはショ糖脂肪酸エステルが挙げられる。素錠はさらに結合剤、賦形剤、流動化剤、崩壊剤及び他の滑沢剤を含有してもよい。

結合剤としては、アラビアゴム、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、メチルセルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール及びヒドロキシプロピルセルロースが挙げられる。打錠前の混合粉体に結合剤を含有させることで、素錠の打錠時の成形性が向上する。素錠に対する結合剤の含有量は、好ましくは、0.1重量％以上50重量％以下である。

賦形剤としては、マルチトール、デキストリン、キシリトール、エリスリトール、カオリン、カカオ脂、果糖、ステアリン酸、デキストラン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マクロゴール、リン酸水素カルシウム、リン酸水素ナトリウム、ショ糖、グルコース、ソルビトール、ラクチトール、コーンスターチ及びポテトスターチが挙げられる。素錠が賦形剤を含有することで、素錠の溶出性や服用性が向上する。素錠に対する賦形剤の含有量は、好ましくは、0.1重量％以上50重量％以下である。

流動化剤としては、微粒二酸化ケイ素が挙げられる。崩壊剤としては、カルボキシメチルセルロース（CMC）、CMCのアルカリ金属塩、部分α化デンプン及び低置換度のヒドロキシプロピルセルロース（HPC）が挙げられる。打錠前の混合粉体に流動化剤を含有させることで、流動化剤以外の粉体の流動性が向上する。素錠に対する流動化剤の含有量は、好ましくは、0.1重量％以上2.0重量％以下である。打錠前の混合粉体に崩壊剤を含有させることで、素錠及び腸溶錠の崩壊性が向上する。素錠に対する崩壊剤の含有量は、0.01重量％以上30重量％以下が好ましく、0.1以上15質量％以下がより好ましく、0.5質量％以上10質量％以下がより一層好ましい。

＜２－５．他の生理活性成分＞

素錠に他の生理活性成分として植物由来成分、ビタミン、ミネラル、食物繊維、魚油、乳酸菌といった成分をさらに添加してもよい。植物由来成分はカカオエキス、ヒハツエキス、葛の花エキス、ダービリアエキス、ブドウ種子抽出物、松樹皮抽出物、コレウス・フォルスコリ抽出物、アーティチョーク葉抽出物、ローズマリー抽出物、ルイボスエキス、トマト抽出物、オリーブ抽出物、田七人参抽出物、及びその他の植物エキスが挙げられる。植物エキスの加工物も植物由来成分として好適に利用できる。植物エキスから得られる精製化合物も植物由来成分として好適に利用できる。化合物としてはラズベリーケトンやイソフラボンが挙げられる。またビタミン、ミネラル及び食物繊維は植物由来成分でもよく、人工合成したものでもよい。ビタミンは脂溶性ビタミンでもよい。乳酸菌は生菌でもよく死菌でもよい。

素錠中の他の生理活性成分の含有量は、好ましくは、1重量％以上50重量％以下、より好ましくは4重量％以上30重量％以下、さらに好ましくは8重量％以上20重量％以下である。含有量を1重量％以上とすることで、溶出性が良好となる。含有量をさらに高めることで溶出性をさらに良好なものとすることができる。含有量を50重量％以下とすることで、混合粉体の成形性が良好となる。含有量をさらに低くすることで混合粉体の成形性をさらに良好なものとすることができる。

またこれら他の生理活性成分をさらに含有することで、本実施形態の腸溶錠は、高血糖、アレルギー、ドライシンドローム等の疾患の予防又は改善に貢献する。また本実施形態の腸溶錠は、腸内環境の改善に貢献する。本実施形態の腸溶錠では、胃でのラクトフェリンの溶出が抑制され、主に腸でラクトフェリンが素錠より溶出する。このため、ラクトフェリンが有する疾患の予防又は治療効果を一層向上することができる。本実施形態においてこれら他の生理活性成分は、特にメタボリックシンドロームに対するラクトフェリンの予防又は治療の効果をさらに高める。

＜２－６．コーティングと保護膜成分＞

本実施例の錠剤は腸溶錠である。錠剤は、素錠の上にコーティングを有する。コーティングは保護膜成分を有する。保護膜成分が錠剤に腸溶性を付与する。保護膜成分は胃で溶解しないため、保護膜成分が胃液と素錠中のラクトフェリンや他の生理活性成分との接触を妨げる。その後、保護膜成分は腸で溶けて腸液と素錠との接触を促す。一態様において、腸溶錠は、第十七改正日本薬局方に記載の「腸溶性製剤」に適合する。

保護膜成分として例えばメタクリル酸系高分子化合物、シェラック、ツェイン、アルギン酸及びアルギン酸塩が挙げられる。これらを１種又は２種以上併用してもよい。アルギン酸塩はアルギン酸アンモニウム、アルギン酸ナトリウム及びアルギン酸カリウムのいずれか１種又は２種以上でもよい。保護膜成分として、分子量が異なる２種以上の化合物を併用することが好ましい。例えば２種のアルギン酸塩を併用してもよい。これにより、腸溶錠の耐酸性や腸でのラクトフェリン及び他の生理活性成分の溶出性が向上する。保護膜成分を有しないプレコーティングをコーティングの内側に付してもよい。

コーティングに付着防止剤や着色料を添加してもよい。付着防止剤としては、二酸化ケイ素及びタルクが挙げられる。二酸化ケイ素は微粒二酸化ケイ素が好ましい。着色料としては、カラメル、カカオ、クチナシ黄色素、カロテン、クチナシ赤色素及びアカダイコン色素が挙げられる。

＜２－７．錠剤の形状等＞

錠剤の形状、大きさ及び重量は服用が容易であれば特に限定されない。形状はＲ錠、や二段Ｒ錠が好ましい。大きさは直径5 mm以上15 mm未満、厚み3mm以上10mm未満とすることが好ましい。また素錠の重量は200 mg以上400 mg以下が好ましく、250 mg以上350 mg以下がより好ましい。また、コーティング時の素錠の摩損防止のため、素錠の硬度は7kgf以上が好ましく、9kgf以上がより好ましく、10kgf以上がさらに好ましい。素錠の硬度の上限としては、腸での錠剤の崩壊性の観点から20kgf以下が好ましい。また、腸溶錠の硬度としては、20kgf以上40kgf以下が好ましい。

＜３－１．素錠の作製＞

（Ａ）ラクトフェリンと、（Ｂ）結晶セルロースと、（Ｃ）ステアリン酸塩ほかと、（Ｄ）植物エキスとを含む、いずれも粉体状の原料を秤量して混合した。原料の各成分の組成比は実験例にて示す表２～５の通りである。混合により総重量が５ｋｇの混合粉体を得た。混合粉体を、ロータリー式打錠機を用いて打錠することで素錠を得た。本実施例では、混合粉体の調製おいて造粒は行わなかった。

打錠機は菊水製作所製のLIBLA 2である。LIBLA 2の設定を以下に示す。
－臼杵金型の形状：
直径9.0 mm，コーナーは２段式のＲ面取り
R1＝3.6 mm，R2＝10.5 mm，ランド部＝1.5 mm
ランド部は錠剤の側面からＲ面の立ち上がり部までの距離を表す
－フィードシューの攪拌羽の回転数：60 rpm

各例とも15 kNで打錠することで素錠を得て、素錠の硬度を測定した。この素錠の硬度を成型性の評価の指標とした。さらに測定結果に基づき素錠の硬度が10 kgfとなるよう打錠圧を調整した上で、改めて初期溶出率及び溶出性維持率の評価用の素錠を作製した。この時の打錠圧の範囲は10から18 kNとした。素錠をコーティングしてからラクトフェリンの溶出性の評価を行った。

＜３－２．コーティング＞

素錠を下記組成の第１層コーティング液でプレコーティングした。
HPMC（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）：6％
グリセリン：2％
水：92％

プレコーティングした素錠を下記組成の第２層コーティング液でコーティングした。
HPMC：2.1％
グリセリン：1.1％
アルギン酸ナトリウム：3.2％
微粒二酸化ケイ素：0.5％
水：93.1％

コーティング装置として、フロイント産業製のパン回転式コーティング機、ハイコーターFZ-Labを用いた。まず素錠670錠に対し、20℃の第１層コーティング液33ｇを平均2 g/minで噴霧することでプレコーティングを行った。素錠の温度を約50℃とした。第１層コーティング液33g中、水を除いた成分は2640mg含まれる。2640mgを670錠で割ると約3.9mg／錠である。

続けて60℃の第２層コーティング液163gを平均2 g/minで噴霧した。噴霧後、約45℃で2分間乾燥させた。以上により腸溶錠を得た。腸溶錠1錠あたりのコーティング中の固形分の組成を以下に示す。

コーティング第１層の固形分の組成（mg／錠）
ヒドロキシプロピルメチルセルロース 2.9
グリセリン 1.0

コーティング第２層の固形分の組成（mg／錠）
ヒドロキシプロピルメチルセルロース 5.1
グリセリン 2.7
アルギン酸ナトリウム 7.8
微粒二酸化ケイ素 1.2

＜３－３．ラクトフェリンの溶出試験＞

ラクトフェリンの溶出率（％）の測定は、第十七改正日本薬局方に収載される錠剤の溶出試験法に準じて試験を行った。具体的にはパドル法により毎分５０回転でラクトフェリンを試験液に溶出させた。試験液としてpH約6.8の溶出試験第２液を、錠剤１個に対して900 mL使用した。試験開始２時間後、試験液を採取した。試験液中に溶出したラクトフェリンを定量することで溶出率を算出した。下記の試験は３回ずつ行うことで、これらの測定値から溶出率の平均値を算出した。なおpH約1.2の溶出試験第１液でも試験を行いコーティングが正常に形成されていたことを予め確認した。したがってさらに溶出試験第２液に対して本実施例の錠剤に溶出性のあることが確認されれば、本実施例の錠剤が腸溶錠として生体に利用できることが確認される。

（１）ラクトフェリンの溶出量を次のように求めた。まず規定体積50 mLのメスフラスコにラクトフェリン標準品75 mgを入れてから、試験液で規定体積までメスアップして1/1の標準溶液を得た。この標準溶液をさらに試験液で希釈して1/5、1/20及び1/50の標準溶液を作製した。各標準溶液中のラクトフェリンをHPLCで検出した。それぞれの標準溶液中のラクトフェリンのピーク面積を求めることで検量線を作成した。

ラクトフェリン標準品として富士フイルム和光純薬工業製の生化学用「ラクトフェリン牛乳由来」を使用した。ラクトフェリン標準品の純度は和光純薬工業発行の検査成績書に記載の含量（HPLC）の数値を引用した。

次に上述の通り採取した試験液中のラクトフェリンをHPLCにより検出することで、ラクトフェリンのピーク面積を求めた。検量線に基づきピーク面積より各試験液中のラクトフェリン濃度を求めることで、試験液中に溶出したラクトフェリンを定量した。

（２）錠剤中のラクトフェリンの含有量を次のようにして求めた。まず規定体積50 mLのメスフラスコにラクトフェリン標準品75 mgを入れてから、3重量％ NaCl水溶液で規定体積までメスアップして1/1の標準溶液を得た。この標準溶液をさらに3重量％ NaCl水溶液で希釈して1/2及び1/20の標準溶液を作製した。各標準溶液中のラクトフェリンをHPLCで検出した。それぞれの標準溶液中のラクトフェリンのピーク面積を求めることで検量線を作成した。なお（１）の溶出試験と（２）の定量試験とでは希釈液、すなわち溶出試験液と3重量％ NaCl水溶液とによって希釈倍率が異なる点に留意し、個別に検量線を作成することが好ましい。

次に規定体積100 mlメスフラスコに錠剤と3重量％ NaCl溶液を入れて錠剤を完全に溶解させた上で規定体積までメスアップして試料溶液を得た。ラクトフェリンのHPLC検出ピークの面積を求めた。試験は３回行った。検量線に基づきピーク面積より各試料溶液中のラクトフェリン濃度を求めることで、錠剤中のラクトフェリンの含有量を定量した。

（３）HPLCの条件は以下のとおりである。
－検出器：紫外吸光光度計（測定波長：280 nm）
－カラム充填剤： 5 μｍの液体クロマトグラフィー用ブチル化ポリビニルアルコールポリマーゲル（Shodex Asahipak C4P-50 4D）
－カラム管：内径4.6 mm、長さ15 cmのステンレス管
－ガードカラム： Shodex Asahipak C4P-50G 4A
－カラム温度： 35℃
－移動相Ａ: 0.03 w/v重量％トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル／塩化ナトリウム溶液（3→100）混液（10:90）
－移動相Ｂ: 0.03 w/v重量％トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル／塩化ナトリウム溶液（3→100）混液（50:50）
－濃度勾配：Ａ：Ｂ（50:50）からＡ：Ｂ（0:100）までの直線濃度勾配を25分間かけて適用する。
－流量： 0.8 mL／分

＜３－４．実験で使用した原料一覧＞

CMC-Ca：カルボキシメチルセルロースカルシウム

＜３－５．成型性の評価＞

打錠圧15 kNで圧縮した素錠の硬度を錠剤物性測定機（Multicheck6、ERWEKA製）で測定した。測定した硬度は水平硬度である。素錠間の硬度の平均値を求めた（n=10）。判定基準は次の通りである。本実施例では高い硬度の錠剤が得られた処方に対して成型性がよいという評価を与えた。

*** 9 kgf以上
** 7 kgf以上，9 kgf未満
* 7 kgf未満

＜３－６．打錠機への付着の評価＞

素錠を打錠機にて繰り返し打錠した際に、打錠機に対して素錠の原料の混合粉体が付着することがある。原料の混合粉体がロータリー打錠機に付着する様子を観察した。図１～３は原料の付着状態を示す写真である。図１には原料の付着が無い状態を例示する。図２及び図３は素錠の原料の付着Ａｄが見られる状態を例示する。

図２及び図３に示すように付着Ａｄは打錠機の盤面で生じる。また臼の壁面でも生じる。盤面に付着している混合粉体は、周回ごとのスクレイパーによる掻き取りに抗って付着している。臼の壁面に付着している混合粉体は、打錠ごとの杵による掻き取りに抗って付着している。

ロータリー打錠機で20分間打錠した。混合粉体が盤面又は臼の壁面に付着し始める時間を目視で確認した。判定基準は次のとおりである。
*** 付着が認められなかった（図１）。
** 打錠開始から20分後には付着が認められた（図２）。
* 打錠開始直後から付着が認められた（図３）。

混合粉体の付着は、混合粉体と金属との間の結合性に加えて、粉体間の結合性が影響していると考えられる。すなわち粉体上に粉体が付着するほど、スクレイパーや杵から、より強いずり応力を受けるためさらに粉体が付着する。付着は時間がたつにつれて増加する傾向にある。したがって上記の通り粉体が付着するまでの時間で評価を行った。

＜３－７．初期溶出率の評価＞

まず上述の＜３－３．ラクトフェリンの溶出試験＞に記載の通り、腸溶錠について溶出試験を行い、腸溶錠中のラクトフェリンの含有量を求めた。さらに保存試験前の初期の溶出率を得るために打錠後７日以内の錠剤で試験した。判定基準は以下のとおりである。

*** 初期溶出率８５％以上
** 初期溶出率７５％以上８５％未満
* 初期溶出率６５％以上７５％未満
なお今回の実験例中では初期溶出率が７５％に満たない処方は見られなかった。

＜３－８．溶出性維持率の評価＞

上述の＜３－３．ラクトフェリンの溶出試験＞の通り、プラスチックボトルに充填し60℃で12日間保存した後の腸溶錠につて溶出試験を行い、腸溶錠中のラクトフェリンの含有量を求めた。溶出性維持率（％）を下記式に従い求めた。判定基準は以下の通りである。

溶出性維持率（％）＝１００×（保存後の溶出量（mg））／（初期の溶出量（mg））

レベル６９０％以上
レベル５８５％以上，９０％未満
レベル４８０％以上，８５％未満
レベル３７５％以上，８０％未満
レベル２７０％以上，７５％未満
レベル１７０％未満

この60℃での溶出性維持率の試験は、特許文献１及び２に記載のような40℃での溶出性維持率の試験よりも過酷な条件下に腸溶錠を置くものである。したがって、例えば温帯や亜熱帯の夏場の高温下や、熱帯での高温下における腸溶錠の溶出性の劣化しにくさを評価するのに適する。

＜４．処方例＞

本実施例の錠剤の処方は実験例中の処方に限定されない。例えば以下のような処方としてもよい。
（素錠）
（ｍｇ／錠）
ラクトフェリン７９．０
葛の花エキス４３．０
結晶セルロース（UF-F702）１６７．０
CMC-Ca ６．０
微粒二酸化ケイ素３．０
ステアリン酸Ca ２．０

（コーティング第１層，プレコーティング）（ｍｇ／錠）
HPMC ２．９
グリセリン１．０
カラメル０．５

（コーティング第２層，腸溶コーティング）（ｍｇ／錠）
HPMC ４．６
グリセリン２．３
アルギン酸ナトリウム７．１
微粒二酸化ケイ素１．１
タルク１．１

＜５．実験例＞

原料を用いて種々の処方で素錠を作成した。素錠に対するコーティングは＜３－２．コーティング＞に示した通りに行った。処方Ｃ１から始まる各処方を評価した。いずれの処方も例示であり、本発明を限定するものではない。

表２は結晶セルロースの嵩密度に対する実験例を表す。組成は重量比である。表中、素錠に含まれる成分を上段に示している。評価の欄は上述の＜３－５．成型性の評価＞から＜３－８．溶出性維持率の評価＞までの各試験を行った結果を示す。他の表において同様である。以下、溶出性維持率の評価結果を中心に説明する。

表２中、処方Ｃ１及びＣ２は溶出性維持率レベル１であった。また、処方Ｗ１～Ｗ５は、溶出性維持率レベル２以上であった。処方Ｗ１～Ｗ５では賦形剤である（Ｂ）結晶セルロースの嵩密度が0.23 g/cm³以上のため、保存後の溶出性が維持されている。

表２中、処方Ｗ２～Ｗ５は溶出性維持率レベル３以上の処方である。表中ではいずれもレベル４以上となっている。（Ｂ）結晶セルロースの嵩密度が0.25 g/cm³以上のため、溶出性維持率がさらに高まっている。重量比（Ｂ／Ａ）も溶出性維持率に影響を及ぼすことは、後に説明する表３より説明される。

表２中、処方Ｗ３～Ｗ５は溶出性維持率レベル５以上の処方である。表中ではいずれもレベル６となっている。（Ｂ）結晶セルロースの嵩密度が0.28 g/cm³以上であるとともに、平均粒子径が５０μｍ以上であるため、溶出性維持率がさらに高まっている。重量比（Ｂ／Ａ）も溶出性維持率に影響を及ぼすことは、後に説明する表３より説明される。

表２中、処方Ｗ５では嵩密度が0.28 g/cm³以上の（Ｂ）結晶セルロースと、嵩密度が0.25 g/cm³より小さい他の結晶セルロースを併用した。処方Ｗ５でも溶出性維持率レベルは処方Ｗ３と同じに保たれている。

表３は重量比（Ｂ／Ａ）に対する実験例を表す。各処方に共通の（Ｂ）結晶セルロースとして選択したエンデュランス MCC VE-050は処方Ｗ３に用いたものと同じである。その嵩密度は0.28 g/cm³、平均粒子径は50 μｍである。表４において同様である。

表３中、処方Ｗ６～Ｗ７は溶出性維持率レベル２の処方である。表３中、処方Ｗ８～Ｗ１５は溶出性維持率レベル３以上の処方である。処方Ｗ８～Ｗ１５では重量比（Ｂ／Ａ）を0.45以上とすることで溶出性維持率を高めている。

表３中、処方Ｗ９～Ｗ１５は溶出性維持率レベル４以上の処方である。処方Ｗ９～Ｗ１５では重量比（Ｂ／Ａ）を0.66以上とすることで溶出性維持率をさらに高めている。処方Ｗ１０～Ｗ１５は溶出性維持率レベル５以上の処方である。処方Ｗ１０～Ｗ１５では重量比（Ｂ／Ａ）を0.95以上とすることで溶出性維持率をさらに高めている。

表４はその他の成分に対する実験例を表す。

表４中、処方Ｗ１６では表２の処方Ｗ３と異なり、カカオエキスに代えてヒハツエキスを用いている。溶出性維持率を高くする上で、植物エキス等の他の生理活性成分も好適に素錠に対して含有させることができる。

表４中、処方Ｗ１７では表２の処方Ｗ３と異なり、追加的な賦形剤としてのマルチトールを省略する代わりに（Ｂ）結晶セルロースの含有量を高めている。したがって処方Ｗ１７では重量比（Ｂ／Ａ）が2.01以上である。処方Ｗ１７でも溶出性維持率レベルは処方Ｗ３と同じレベル６に保たれている。

表４中、処方Ｗ１８は表２の処方Ｗ３と異なり、マルチトールに代えてデキストリンを含有している。処方Ｗ１８では溶出性維持率がレベル５となっている。他の処方において素錠は追加的な賦形剤としてのマルチトールと、崩壊剤としてのカルボキシメチルセルロースのアルカリ金属塩とを含有する。これにより溶出性維持率レベルはレベル６に保たれている。

表４中、処方Ｗ１９では表２の処方Ｗ３に比べて崩壊剤の成分を変更している。処方１９の腸溶錠はCMC-Caに代えて部分α化デンプンを含有している。処方Ｗ１９では溶出性維持率がレベル５となっている。

表５は結晶セルロースの平均粒子径に対する実験例を表す。組成は重量比である。

表５中、処方Ｗ２０～２２では表２の処方Ｗ３やＷ４で用いたものよりもさらに大きな平均粒子径を有する（Ｂ）結晶セルロースを用いる。溶出性維持率を高くする上でいずれの平均粒子径も好適である。

表３に示す重量比（Ｂ／Ａ）の評価結果及び表５に示す平均粒子径の評価結果を重ね合わせると次のように考察される。すなわち、（Ｂ）結晶セルロースと（Ａ）ラクトフェリンとの重量比（Ｂ／Ａ）を2.50以下とした上で、さらに（Ｂ）結晶セルロースの粒子径を150μｍ以下とすることが好ましい。これにより繰り返し打錠中に、余った原料が打錠機表面に付着することを抑制できる（図１から図３を参照）。

表２に示す嵩密度の評価結果、表３に示す重量比（Ｂ／Ａ）の評価結果及び表５に示す平均粒子径の評価結果を重ね合わせると次のように考察される。すなわち、（Ｂ）結晶セルロースの嵩密度を0.31 g/cm³以下とし、さらに（Ｂ）結晶セルロースと（Ａ）ラクトフェリンとの重量比（Ｂ／Ａ）を0.66以上、2.50以下とし、さらに（Ｂ）結晶セルロースの粒子径を150μｍ以下とすることが好ましい。これにより同じ打錠圧を用いた場合でもより素錠の硬度を高めることができる。これは混合粉体の成型性が高まっていることを表す。

表２に示す嵩密度の評価結果、及び表３に示す重量比（Ｂ／Ａ）の評価結果を重ね合わせると次のように考察される。すなわち、（Ｂ）結晶セルロースの嵩密度を0.28 g/cm³以上とし、さらにその粒子径を50μｍ以上とし、さらに（Ｂ）結晶セルロースと（Ａ）ラクトフェリンとの重量比（Ｂ／Ａ）を0.95以上とすることが好ましい。これによりレベル５以上の高い溶出性維持率が得られる。

表６はステアリン酸塩の影響を確認する実験例を表す。組成は重量比である。

処方Ｃ３はステアリン酸Ｃａを添加しなかったこと以外は表２に示す処方Ｃ２の組成と同様の組成を有する。意外なことに処方Ｃ３と処方Ｃ２との間で高温下での溶出性維持率レベルに大きな違いは表れなかった。以上より、素錠に（Ｃ）ステアリン酸塩を混合するだけでは高温下での溶出性維持率の改善は難しいことが分かった。

処方Ｗ２３では（Ｂ）結晶セルロースの嵩密度が処方Ｃ３よりも高められている。処方Ｗ２３ではステアリン酸塩が混合されていないにも関わらず、溶出性維持率を高めることができた。また同一の結晶セルロースを含有する処方Ｗ３と処方Ｗ２３との間で溶出性維持率は同等であった。以上より、嵩密度が高い（Ｂ）結晶セルロースが素錠中に混合されることで、（Ｃ）ステアリン酸塩の有無に関わらず高温下での溶出性維持率の改善を図れることが分かった。また、その効果は（Ｃ）ステアリン酸塩のもたらす効果よりも遥かに高いことが分かった。

なお特許文献１に記載の通り、ステアリン酸塩は40℃前後の温度での溶出性維持率の改善に役立つ。したがって、素錠において（Ｃ）ステアリン酸塩と、嵩密度の高い（Ｂ）結晶セルロースとを組み合わせることは、（Ａ）ラクトフェリンの溶出性維持率を様々な保存温度環境下で高める上で有効な手段の一つである。

Claims

素錠が、（Ａ）ラクトフェリンと、（Ｂ）結晶セルロースを含有し、
前記（Ｂ）結晶セルロースの嵩密度は0.28 g/cm³以上であり、
前記（Ｂ）結晶セルロースと前記（Ａ）ラクトフェリンとの重量比（Ｂ／Ａ）は1.41以上である、
腸溶錠。
前記重量比（Ｂ／Ａ）は60以下である、
請求項１に記載の腸溶錠。
前記重量比（Ｂ／Ａ）は1.41以上2.60以下である、
請求項２に記載の腸溶錠。
前記素錠は、嵩密度が0.25 g/cm³より小さい他の結晶セルロースをさらに含有する、
請求項１～３いずれか１項に記載の腸溶錠。
前記（Ｂ）結晶セルロースの平均粒子径は20μｍ以上である、
請求項１～４いずれか１項に記載の腸溶錠。
素錠が、（Ａ）ラクトフェリンと、（Ｂ）結晶セルロースを含有し、
前記（Ｂ）結晶セルロースの嵩密度は0.28 g/cm ³ 以上であり、
前記（Ｂ）結晶セルロースと前記（Ａ）ラクトフェリンとの重量比（Ｂ／Ａ）は1.41以上2.60以下であり、
素錠の硬度が7kgf以上であり、
溶出性維持率が70％以上である、
腸溶錠。
前記素錠が、さらに（Ｃ）ステアリン酸塩を含有する、
請求項１～６いずれか１項に記載の腸溶錠。
前記素錠がメタクリル酸系高分子化合物、シェラック、ツェイン、アルギン酸及びアルギン酸塩のいずれかの保護膜成分でコーティングされている、
請求項１～７いずれか１項に記載の腸溶錠。
前記素錠とコーティングとの間に前記保護膜成分を含まないプレコーティングが施されている、
請求項８に記載の腸溶錠。
前記（Ａ）ラクトフェリンを、脂質代謝の活性化、便秘の治療又は予防、腸内フローラの活性化、安眠、成長ホルモンの分泌の促進、ドライアイ及び角膜上皮剥離並びにこれらから派生する目の疾患のいずれかの治療又は予防、血圧降下、アレルギーの治療又は予防、免疫の活性化、更年期障害の治療又は予防、並びに肝機能の活性化のいずれかのための生理活性成分として含有する、
請求項１～９のいずれか１項に記載の腸溶錠。
腸溶錠の製造方法であって、
（Ａ）ラクトフェリンの粉体と、嵩密度が0.28 g/cm³以上である（Ｂ）結晶セルロースの粉体とを、前記（Ｂ）結晶セルロースと前記（Ａ）ラクトフェリンとの重量比（Ｂ／Ａ）1.41以上で含有する混合粉体を打錠機にて打錠することで素錠を得て、これをコーティングする、
方法。