JP7286658B2 - キメラエンガルフメント受容体分子および使用方法 - Google Patents

キメラエンガルフメント受容体分子および使用方法 Download PDF

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Description

配列表に関する説明
本出願に関連する配列表は、紙コピーに代えてテキスト形式で提供され、引用により本明細書に組み込まれている。配列表を含むテキストファイルの名称は、200265_402WO_SEQUENCE_LISTING.txtである。このテキストファイルは、４０７ＫＢであり、２０１８年９月１９日に作成され、そしてＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出されている。
背景
標的、細胞タイプおよび周囲の環境によって影響を受ける食細胞作用には２つの主な種類がある。微生物に対する食細胞作用は、疾患の原因となる微生物を排除および分解し、サイトカインおよびケモカインの分泌を介して炎症誘発性のシグナル伝達を誘導し、ならびに免疫細胞を動員して効果的な炎症反応を引き起こす。この種の食細胞作用はしばしば、“炎症性食細胞作用”（または“免疫原性食細胞作用”）と称される。しかしながら、ある種の持続感染症のようないくつかの例では、抗炎症反応が微生物の取り込み後に生じ得る。微生物に対する食細胞作用は、一般的に、未成熟樹状細胞（ＤＣ）およびマクロファージのような骨髄系のプロフェッショナル食細胞ならびに組織常在型免疫細胞によって行われる。
これとは対照的に、損傷を受けた自己由来のアポトーシス細胞または細胞片の食細胞作用（例えば、エフェロサイトーシス）は、一般的には、非炎症性（“非免疫原性”とも称される）プロセスである。何十億もの損傷を受けた細胞、死につつある細胞、および不要な細胞が、毎日、アポトーシスを起こしている。不要な細胞には、例えば、発生中に生成された過剰な細胞、老化細胞、感染細胞（細胞内細菌またはウイルス）、形質転換細胞または悪性細胞、および細胞傷害物質によって不可逆的に損傷を受けた細胞が含まれる。食細胞は、周囲の組織に損傷を与えたり、炎症誘発性免疫応答を誘導したりすることなく、アポトーシス細胞の特異的で迅速な除去を行う。アポトーシス細胞のクリアランスのための工程は以下を含む：（１）アポトーシス細胞からの、アポトーシス細胞の位置に食細胞を動員するための“ファインドミー”シグナルの放出；（２）アポトーシス細胞の表面に露出した“イートミー”シグナルが、特異的受容体を介して食細胞に結合される；（３）アポトーシス細胞を取り込むための細胞骨格再配列；および、（４）取り込まれたアポトーシス細胞が消化され、特異的な食細胞作用反応が誘発される（例えば、抗炎症性サイトカインの分泌が起こる）。
感染症、炎症性疾患、免疫疾患および種々の癌を処置するための新規組成物および方法が必要とされている。本明細書に記載される方法および組成物は、種々の癌、急性および慢性の感染症、炎症性疾患、免疫疾患および選択された神経性疾患の処置において、身体から感染細胞、形質転換細胞、悪性細胞、アポトーシス細胞、損傷を受けた細胞または壊死細胞の除去を促進することによってそのようなニーズを満たす。
概要
本明細書には、キメラのエンガルフメント（engulfment）受容体が記載されている。特定の態様において、キメラエンガルフメント受容体（単数形で“ＣＥＲ”および複数形で“ＣＥＲｓ”）は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内エンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。膜貫通ドメインは、細胞外ドメインとエンガルフメントシグナル伝達ドメインの間に位置し、それらを連結している。細胞外ドメインは、結合ドメイン、および要すれば、結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置する細胞外スペーサードメインを含む。特定の態様において、本明細書に記載のキメラエンガルフメント受容体は、（ａ）疾患、障害、病状または感染と関連する、エンガルフメント促進マーカー(pro-engulfment marker)または標的抗原を標的とする細胞外ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、および（ｃ）トール様受容体（ＴＬＲ）シグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ6シグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメイン、またはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを有する、キメラタンパク質である。特定の態様において、エンガルフメントシグナル伝達ドメインは、恒常性エンガルフメントドメインおよび炎症誘発性エンガルフメントドメインのうち少なくとも１つを含む。ある態様において、エンガルフメントシグナル伝達ドメインは、第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよび第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。特定の態様において、キメラエンガルフメント受容体は、一本鎖キメラタンパク質である。キメラエンガルフメント受容体は、標的細胞／臓器／組織／領域に対する炎症反応を生じるように設計され得る。アポトーシス細胞クリアランスは一般的には非炎症過程であるが、炎症は、例えば、残存腫瘍細胞に対する免疫応答を誘導するためのアポトーシス腫瘍細胞のクリアランスなど、特定の状況において宿主にとって有益であり得る。
ある態様において、ＣＥＲの細胞外ドメインは、エンガルフメント促進マーカーに特異的な結合ドメインを含む。かかる特定の態様において、細胞外ドメインは、ホスファチジルセリン（ＰｔｄＳｅｒ）結合ドメインを含む。本明細書に記載のＣＥＲの態様において、ＰｔｄＳｅｒ結合ドメインは、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン１（Ｔｉｍ１）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン４（Ｔｉｍ４）またはＴ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン３（Ｔｉｍ３）の細胞外ドメインの全部または一部を含み得る。他の態様において、ＰｔｄＳｅｒ結合ドメインは、ＦＡ５８Ｃ２、ＧＡＳ６、プロテインＳ、第ＶＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、またはプロトロンビンＰＳに由来する結合ドメインの全部または一部を含み得る。
さらなる態様において、細胞外ドメインは標的抗原に結合する。かかる特定の態様において、細胞外ドメインは、例えば、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲ２Ａ、ＦｃγＲ２Ｂ２、ＦｃγＲ２Ｃ、ＦｃγＲ３Ａ、ＦｃεＲ１およびＦｃαＲ１などのＦｃ受容体（ＦｃＲ）の細胞外ドメインの全部または一部を含む。さらに他の態様において、細胞外ドメインが標的抗原に結合するとき、該細胞外ドメインは抗体またはその抗原結合ドメインを含み得る。例えば、細胞外ドメインは、イントラボディ、ペプチボディ、ナノボディ、単一ドメイン抗体、ＳＭＩＰおよび多重特異性抗体から選択される抗体または抗原結合ドメインを含み得る。かかる特定の態様において、細胞外ドメインはＦａｂ結合ドメインを含む。さらに他のそのような態様において、細胞外ドメインはｓｃＦｖを含む。
エンガルフメント促進マーカーまたは標的化抗原へのＣＥＲの細胞外ドメインの結合により、エンガルフメントシグナル伝達ドメインは、エンガルフメントシグナル伝達活性を刺激する。従って、活性化により、ＣＥＲに含まれるエンガルフメントシグナル伝達ドメインは、宿主細胞にエンガルフするように指示するエフェクター機能的シグナルを伝達する。特定の態様において、エンガルフメントシグナル伝達ドメインは、ＴＬＲシグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメイン、またはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含む、第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメイン；および、第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインの例としては、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲ２Ａ、ＦｃγＲ２Ｂ２、ＦｃγＲ２Ｃ、ＦｃγＲ３Ａ、ＦｃεＲ１、ＦｃαＲ１、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＮＦＡＭ１、ＤＡＰ１２、ＭＥＲＴＫ、ＣＤ７９ｂ、ＴＬＲ、Ｔｒａｆ２、Ｔｒａｆ３およびＴｒａｆ６シグナル伝達ドメインが挙げられる。
さらなる側面において、本発明は、ＣＥＲを発現するように遺伝子改変された細胞に関する。特定の態様において、ＣＥＲは、単一の天然受容体タンパク質によっては現されないエンガルフメント表現型をもたらす。他の態様において、本発明のＣＥＲは、エンガルフメント活性を天然では示さない細胞に、エンガルフメント表現型を付与する。一態様において、ＣＥＲによる抗原結合は、天然に貪食シグナル伝達活性を示さない細胞で貪食シグナル伝達カスケードを誘発する。別の態様において、天然に貪食シグナル伝達活性を示さず、標的細胞を貪食するＣＥＲ発現細胞は、標的細胞を分解することができる。他の態様では、本発明のＣＥＲは、ＣＥＲを発現しない宿主細胞には存在しない可能性がある、増殖活性（proliferative activity, expansion activity）、活性化、細胞溶解活性、抗原提示活性、記憶形成、持続性の増大またはそれらの組合せなどの表現型を宿主細胞にさらに与える。特定の態様において、細胞は、死細胞、死につつある細胞、損傷を受けた細胞、感染細胞または壊死細胞と関連するエンガルフメント促進マーカーを標的とするＣＥＲを発現するように遺伝子改変されている。他の態様において、細胞は、感染性微生物または感染性粒子によって誘導される分子と結合する抗体などのマーカーを標的とするＣＥＲを発現するように遺伝子改変されている。かかる態様において、遺伝子改変細胞は、標的化感染微生物または感染粒子によって誘導される標的分子と関連するマーカーのＣＥＲによる結合により、標的化細胞または微生物の除去または分解を促進する。他の特定の態様において、細胞は、通常はエンガルフメントを引き起こさない抗原マーカーを標的とするＣＥＲを発現するように遺伝子改変されている。例えば、かかる態様において、ＣＥＲの細胞外ドメインは、抗体またはその抗原結合部分、例えばＦａｂ結合ドメインまたは抗原マーカーに特異的なｓｃＦｖなどを含み得る。かかる特定の態様において、抗原マーカーは、疾患、障害または他の望ましくない状態に関連する異常細胞に特徴的な表面タンパク質、糖タンパク質または糖脂質であり得る。かかる態様において、遺伝子改変された細胞は、ＣＥＲによる抗原マーカーの結合の際に異常細胞の排除または分解を促進する。特定の態様において、通常エンガルフメントを引き起こさない抗原マーカーを標的とするＣＥＲを発現するように遺伝子改変された細胞は、Ｂ細胞である。
またさらなる側面では、本発明は、疾患、障害または望ましくない状態に罹患している対象を処置する方法に関する。これらの方法の態様は、治療的有効量の、１以上のＣＥＲを含む医薬組成物または本明細書の記載に従って１以上のＣＥＲを発現するように遺伝子改変された細胞集団を対象に投与することを含む。
他の側面において、本発明は、宿主細胞のエンガルフメント表現型を改変するための方法を提供する。特定の態様において、そのような方法としては１以上の以下の方法が挙げられる：エンガルフメント表現型を天然に示さない宿主細胞にＣＥＲを導入し、それを発現させることにより、エンガルフメント表現型を示す細胞集団を作製する方法；宿主細胞にＣＥＲを導入して発現させることによって細胞集団のエンガルフメント表現型を改変する方法（ここで、ＣＥＲは、宿主細胞によって天然に標的とされないエンガルフメント促進マーカーまたは抗原マーカーに特異的なエンガルフメント表現型を付与する）；および、宿主細胞にＣＥＲを導入して発現させることによって細胞集団のエンガルフメント表現型を増強するための方法（ここで、ＣＥＲは、宿主細胞によって天然に標的とされるエンガルフメント促進マーカーまたは抗原マーカーに特異的であり、宿主細胞によるＣＥＲの発現は、標的化されたエンガルフメント促進マーカーまたは抗原マーカーを示す、細胞、微生物または粒子の、宿主細胞によるエンガルフメントを増強する）。
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図１Ａ－Ｂは、キメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）の例示的な概略図を示す。図１Ａは、エンガルフメント促進マーカーに特異的な細胞外ドメイン（例えば、ホスファチジルセリンに対するＴｉｍ４結合ドメイン）、膜貫通ドメイン、ＴＬＲシグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメイン、および要すれば、第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを有する例示的なＣＥＲを示す。図１Ｂは、ｓｃＦｖ結合ドメインを含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、ＴＬＲシグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメイン、および要すれば、第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを有する例示的なＣＥＲを示す。 図２Ａ－Ｂは、天然リンパ球と本発明のＣＥＲで改変されたリンパ球との比較を示す。図２Ａは、内生リンパ球を示す。図２Ｂは、本発明のＣＥＲで改変されたリンパ球を示す。 図３は、本発明のＣＥＲの例示的な投与方法を示す。 図４Ａ－４Ｃは、例示的な処置タイムラインを示す。図４Ａは、ＣＥＲで改変された細胞を用いる処置のための治療計画を示す。図４Ｂは、非食細胞作用性Ｔ細胞免疫療法と組み合わせて用いられるＣＥＲ改変細胞の治療計画を示す。図４Ｃは、モノクローナル抗体、従来の化学療法または放射線療法と組み合わせて用いられるＣＥＲ改変細胞の治療計画を示す。 図５は、放射線療法、ＣＥＲ免疫療法（例えば、ホスファチジルセリン発現細胞を標的とする）、続いてＴＣＲまたはＣＡＲ免疫療法を含む、例示的な３剤併用療法のタイムラインを示す。 図６は、配列番号８１のアミノ酸配列を有する“ＣＥＲ０５”キメラエンガルフメント受容体を含むレンチウイルスベクターのベクターマップを示す。ＣＥＲ０５は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインおよびＴＬＲ４シグナル伝達ドメインを含む。レンチウイルスベクターはまた、ウイルスＴ２Ａ配列によってＣＥＲ０５配列から分離されている、切断型ＥＧＦＲをコードする配列（配列番号１０５）を含む。 図７は、ＣＥＲ０５＋ Ｂａ／Ｆ３細胞によるデキサメタゾン処理胸腺細胞のインビトロでのエンガルフメントの蛍光顕微鏡画像を示す。白色矢印は、食作用事象を示す。右側の画像は、左側の画像を用いて自動化されたソフトウェアによって作成されたもので、ＣＥＲ０５＋ Ｂａ／Ｆ３細胞の輪郭が青で示され、取り込まれた標的細胞が白で示されている。 図８は、デキサメサゾン処置胸腺細胞と共培養された、ＣＥＲ０５＋、ＣＥＲ０７＋または対照ＥＧＦＲｔ＋ Ｂａ／Ｆ３細胞の食作用指数の棒グラフを示す。 図９は、ＣＥＲ０５＋ Ｂａ／Ｆ３細胞における、エンガルフされた胸腺細胞とLysotrackerグリーンシグナルの共局在の蛍光顕微鏡画像を示す。白色矢印は、pHrodoレッドで標識された胸腺細胞とLysoTrackerグリーンで染色された酸性コンパートメントの共局在を示す。
図１０は、対照ｔＥＧＦＲ ＋ Ｂａ／Ｆ３細胞における、エンガルフされたpHrodo redで標識された胸腺細胞とLysotracker greenで染色された酸性コンパートメントのシグナルの共局在の蛍光顕微鏡画像を示す。この画像では共局在は観察されない。 図１１は、スタウロスポリンで処理された、pHrodoレッド染色されたＣＴ２６結腸癌細胞のCELLTRACE Violet染色されたＣＥＲ０５＋ Ｂａ／Ｆ３細胞によるインビトロでのエンガルフメントの蛍光顕微鏡画像を示す。白色矢印は、食作用事象を示す。 図１２は、対照ｔＥＧＦＲ＋ Ｂａ／Ｆ３細胞（右）と比較した、CELLTRACE Violet染色されたＣＥＲ０５＋ Ｂａ／Ｆ３細胞（左）によるスタウロスポリン処理された、pHrodo red染色されたＣＴ２６結腸癌細胞のインビトロでのエンガルフメントの蛍光顕微鏡画像を示す。白色矢印は、食作用事象を示す。 図１３は、ＣＥＲ０５ ＋Ｂａ／Ｆ３細胞、ＣＥＲ０７ ＋Ｂａ／Ｆ３細胞、またはＥＧＦＲｔ ＋対照Ｂａ／Ｆ３細胞からＣＴ２６標的細胞面積を抽出するハイブリッド細胞数の散布図(scatterplot)を示す。面積比は、Ｂａ／Ｆ３細胞内のＣＴ２６細胞のオーバーレイ領域を表す。 図１４は、スタウロスポリン処置したＣＴ２６結腸癌細胞と共培養されたＣＥＲ０５＋、ＣＥＲ０７＋、または対照ＥＧＦＲｔ＋ Ｂａ／Ｆ３細胞の食作用指数の棒グラフを示す。 図１５は、配列番号８３のアミノ酸配列を有する“ＣＥＲ０７”キメラエンガルフメント受容体を含むレンチウイルスベクターのベクターマップを示す。ＣＥＲ０７は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、ＴＬＲ４膜近傍ドメイン、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ４シグナル伝達ドメインを含む。レンチウイルスベクターはまた、ウイルスＴ２Ａ配列によってＣＥＲ０７配列から分離されている、切断型ＥＧＦＲをコードする配列（配列番号１０５）を含む。 図１６は、スタウロスポリン処置されたＣＴ２６結腸癌細胞のＣＥＲ０７＋ Ｂａ／Ｆ３細胞によるインビトロでのエンガルフメントの蛍光顕微鏡画像を示す。白色矢印は、食作用事象を示す。 図１７は、対照ｔＥＧＦＲ＋ Ｂａ／Ｆ３細胞（右）と比較した、CELLTRACE Violet染色されたＣＥＲ０７＋ Ｂａ／Ｆ３細胞（左）によるスタウロスポリン処置した、pHrodo red染色されたＣＴ２６結腸癌細胞のインビトロでのエンガルフメントの蛍光顕微鏡画像を示す。白色矢印は、食作用事象を示す。 図１８は、配列番号８８のアミノ酸配列を有する“ＣＥＲ２１”キメラエンガルフメント受容体を含むレンチウイルスベクターのベクターマップを示す。ＣＥＲ２１は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインおよびＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む。レンチウイルスベクターはまた、ウイルスＴ２Ａ配列によってＣＥＲ２１配列から分離されている、切断型ＥＧＦＲをコードする配列（配列番号１０５）を含む。 図１９は、ＣＥＲ２１＋ヒト初代Ｂ細胞によるスタウロスポリン処置されたジャーカット細胞のインビトロ食作用（図１９Ａ）および細胞溶解（図１９Ｂ）の蛍光顕微鏡画像を示す。
図２０Ａ－Ｂは、細胞溶解活性の測定として、ジャーカット細胞と共培養されたＣＥＲ２１＋ヒト初代Ｂ細胞（＋および－スタウロスポリン（ＳＴＳ））のアポトーシスオブジェクトカウント（図２０Ａ）およびアポトーシス蛍光カウントを測定するグラフを示す。切断型ＥＧＦＲで形質導入されたヒト初代Ｂ細胞（＋および－ ＳＴＳ）を対照として用いた。 図２１は、ＣＥＲ２１＋ヒト初代Ｂ細胞または対照ＥＧＦＲｔ＋ヒト初代Ｂ細胞とパクリタキセル処理されたＨ１７０３非小細胞肺癌細胞との共培養におけるインビトロアポトーシスの蛍光顕微鏡画像を示す。アポトーシスを起こしている細胞は赤く蛍光を発する（上段）。自動化されたソフトウェアは、赤い蛍光オブジェクト（下の列）の輪郭を描いた。 図２２は、パクリタキセルで処置されたＨ１７０３細胞と共培養されたＣＥＲ２１＋ヒト初代Ｂ細胞または対照ＥＧＦＲｔ＋ヒト初代Ｂ細胞のアポトーシスオブジェクトカウント領域のグラフを示す。 図２３は、外生サイトカインの不存在下でのパクリタキセル処置ジャーカットリンパ腫細胞との共培養後のＣＥＲ１９＋、ＣＥＲ２１＋、または対照ヒト初代Ｂ細胞増殖のＦＡＣＳプロット（左）およびヒストグラム（右）を示す。 図２４は、炎症促進性ＩＬ－１サイトカイン（左上グラフ）、共刺激分子（右上グラフ）、Ｂ細胞の活性化分子および生存分子（右上グラフ）、リンパ球化学誘引物質（左下グラフ）およびリンパ節組織のリモデリングに関与する分子（右下グラフ）の発現増加によって測定されたＣＥＲ２１＋ヒト初代Ｂ細胞の増加した活性化状態を示す。発現レベルを、対照ベクターで形質導入されたＢ細胞と比較した。 図２５は、ＣＤ１９特異的ＣＥＲ４４＋ Ｂａ／Ｆ３細胞によるＣＤ１９＋ Ｒａｊｉ細胞のインビトロ食作用の蛍光顕微鏡画像を示す。白色矢印は、エンガルフメント事象を示す。食作用を示す蛍光顕微鏡画像の４つの拡大図が右側に示されている。 図２６は、ＣＤ１９＋Ｒａｊｉリンパ腫細胞と共培養されたＣＥＲ４３＋ Ｂａ／Ｆ３細胞、ＣＥＲ４４＋ Ｂａ／Ｆ３細胞または対照ＥＧＦＲｔ Ｂａ／Ｆ３細胞のＦＡＣＳ分析を示す。ＣＥＲ４３＋、ＣＥＲ４４＋またはＥＧＦＲｔ＋ Ｂａ／Ｆ３細胞によるＲａｊｉ細胞のエンガルフメントは、pHrodo RedおよびCELLTRACE Violetで二重陽性に染色された細胞集団によって測定された。 図２７は、Ｒａｊｉ細胞と共培養されたＣＥＲ４３＋、ＣＥＲ４４＋、または対照ＥＧＦＲｔ＋ Ｂａ／Ｆ３細胞の食作用の頻度のグラフを示す。
図２８は、配列番号１２２のアミノ酸配列を有する“ＣＥＲ４３”キメラエンガルフメント受容体を含むレンチウイルスベクターのベクターマップを示す。ＣＥＲ４３は、ＣＤ１９特異的ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖを含む細胞外ドメイン、ＴＬＲ４膜近傍ドメインを含む細胞外スペーサー領域、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ４シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。レンチウイルスベクターはまた、ウイルスＴ２Ａ配列によってＣＥＲ４３配列から分離されている、切断型ＥＧＦＲをコードする配列（配列番号１０５）を含む。 図２９は、配列番号１２３のアミノ酸配列を有する“ＣＥＲ４４”キメラエンガルフメント受容体を含むレンチウイルスベクターのベクターマップを示す。ＣＥＲ４４は、ＣＤ１９特異的ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖを含む細胞外ドメイン、改変型ＩｇＧ４ヒンジ領域を含む細胞外スペーサー領域、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ４シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。レンチウイルスベクターはまた、ウイルスＴ２Ａ配列によってＣＥＲ４４配列から分離されている、切断型ＥＧＦＲをコードする配列（配列番号１０５）を含む。 図３０Ａ－Ｂは、選択されたＣＥＲで形質導入されたＣＤ４＋Ｔ細胞 ＋ ＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＴＣＲで形質導入されたＣＤ８＋Ｔ細胞の、インビトロ共培養アッセイの概略図およびそのデータを示す。図３０Ａは、例示的なインビトロ共培養実験の概略図である。ＣＤ８ Ｔ細胞を活性化し、ヒトパピローマウイルス１６（ＨＰＶ１６）Ｅ７タンパク質特異的ＴＣＲをコードするレンチウイルスカセットで形質導入したが、同じ移植片からのＣＤ４ Ｔ細胞は、ＣＥＲをコードするレンチウイルスで活性化および形質導入した。細胞の両方のセットをエクスビボで増殖させ、１：１の比で組み合わせ、ＨＰＶ１６ Ｅ７＋頭頸部扁平上皮癌細胞（ＳＣＣ１５２）と共培養した。図３０Ｂは、ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲの単独投与と比較したカスパーゼ誘導によって測定されるように、本発明のＣＤ４ Ｔ細胞／ＣＥＲとＣＤ８＋／ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ（ＰＣＴ公開出願番号ＷＯ２０１５／１８４２２８；配列番号１５８を参照のこと）の組み合わせが、標的細胞の細胞溶解を増強することを示す棒グラフである。ＳＣＣ１５２は、ＨＰＶ１６＋である頭頸部扁平上皮がんである。ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲで形質導入されたヒト初代ＣＤ８＋細胞を、ＳＣＣ１５２細胞のみと、または本発明の種々のＣＥＲで形質導入されたＣＤ４＋ Ｔ細胞（ＣＥＲ５、ＣＥＲ１７、ＣＥＲ１９、ＣＥＲ２１、ＣＥＲ２３、ＣＥＲ２６、ＣＥＲ２７、ＣＥＲ１０３Ｂ、ＣＥＲ１０４、ＣＥＲ１０５、ＣＥＲ１０６またはＣＥＲ１１６）と、１：１の比で共培養した。共培養アッセイにおけるカスパーゼ陽性ＳＣＣ１５２標的細胞の数は、活性化されたカスパーゼ３／７認識モチーフを切断時に蛍光を発する赤色試薬と結合させるカスパーゼ３／７アポトーシス試薬からの赤色蛍光の強度を定量化することによって測定された。カスパーゼ３／７アポトーシス試薬を６時間後に共培養アッセイに追加し、BZ-X710 Keyence顕微鏡とハイブリッドキャプチャーソフトウェアを用いて、蛍光を検出した。標的ＳＣＣ１５２細胞（緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）で形質導入）も同様に判定した。Ｙ軸は、カスパーゼ陽性ターゲットの割合（カスパーゼ事象数／ＧＦＰターゲット細胞数）＊１００を表す。
図３１は、本発明のＣＤ４ Ｔ細胞／ＣＥＲとＣＤ８＋／ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲとの組み合わせが、ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ単独投与と比較して、カスパーゼ誘導によって測定される標的細胞の細胞溶解を増強することを示す棒グラフである。ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲで形質導入されたヒト初代ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＳＣＣ１５２細胞のみと、または本発明の種々のＣＥＲで形質導入されたＣＤ４＋ Ｔ細胞（ＣＥＲ５、ＣＥＲ１７、ＣＥＲ１９、ＣＥＲ２１、ＣＥＲ２３、ＣＥＲ２６、ＣＥＲ２７、ＣＥＲ１０３Ｂ、ＣＥＲ１０４、ＣＥＲ１０５、ＣＥＲ１０６、またはＣＥＲ１１６）と、１：１の比率で共培養した。共培養アッセイにおけるカスパーゼ陽性ＳＣＣ１５２標的細胞の数は、活性化されたカスパーゼ３／７認識モチーフを、切断時に蛍光を発する赤色試薬と結合させるカスパーゼ３／７アポトーシス試薬からの赤色蛍光の強度を定量化することによって測定した。カスパーゼ３／７アポトーシス試薬を６時間後に共培養アッセイに追加し、BZ-X710 Keyence顕微鏡とハイブリッドキャプチャーソフトウェアを用いて蛍光を検出した。Ｙ軸は、カスパーゼ試薬の強度を任意の単位で表す（a.u.）。 図３２は、ＣＤ４＋ Ｔ細胞／ＣＥＲ１０４（Ｔｉｍ４－ＴＬＲ８）をＣＤ８＋ Ｔ細胞／ ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲおよびＳＣＣ１５２標的細胞との共培養試験に追加すると、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）細胞毒性アッセイによって測定される細胞毒性が増強されることを示す棒グラフである。ＬＤＨの存在は、１：１の比率のＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲで形質導入されたＣＤ８ Ｔ細胞およびＣＥＲ１０４で形質導入されたＣＤ４ Ｔ細胞と、ＳＣＣ１５２標的細胞とを、種々の標的細胞：エフェクター細胞の比率（０．５：１、 １：１、１：２．５、１：５、１：１０、１：２０）で共培養後に４時間アッセイした。 図３３は、経時的なＳＣＣ１５２ ＨＰＶ＋頭頸部扁平上皮癌細胞の定量化の棒グラフである。標的細胞を、選択したＣＥＲで形質導入したＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ＋ ＣＤ４ Ｔ細胞で形質導入したＣＤ８ Ｔ細胞、または対照（ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ＋ ＣＤ４形質導入対照で形質導入したＣＤ８ Ｔ細胞）と１：１：１の比率で共培養した。標的細胞の数を、イメージングソフトウェアを用いて定量化した。本発明の種々のＣＥＲで形質導入されたＣＤ４＋Ｔ細胞をＣＤ８＋Ｔ細胞／ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲに添加すると、ＳＣＣ１５２標的細胞のクリアランスが増強された。 図３４は、共培養試験における経時的なカスパーゼ３／７誘導を示す折れ線グラフである。グラフは、ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲで形質導入されたＣＤ８ Ｔ細胞と、対照または選択されたＣＥＲで形質導入されたＣＤ４ Ｔ細胞を含む共培養アッセイにおけるカスパーゼ陽性ＳＣＣ１５２標的細胞の数を示す。カスパーゼの強度は、活性化されたカスパーゼ３／７認識モチーフを開裂時に蛍光を発する赤い試薬と結合させるカスパーゼ３／７アポトーシス試薬からの赤い蛍光の強度を定量化することによって測定した。共培養アッセイの２、６、８および１０時間で測定を行った。 図３５は、ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲで形質導入されたＣＤ８ Ｔ細胞 ＋ 本発明の選択されたＣＥＲで形質導入されたＣＤ４ Ｔ細胞とＳＣＣ１５２細胞との共培養で誘発される増強されたエフェクターサイトカインプロファイルを示す棒グラフである。ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲで形質導入したＣＤ８ Ｔ細胞を、選択したＣＥＲを形質導入したＣＤ４ Ｔ細胞と、エフェクター：標的細胞の比率が１：１のＳＣＣ１５２標的細胞に対して１：１の比率で同時投与した。抗原特異的サイトカイン分泌は、メソスケールのマルチアレイサイトカインプレートを用いた各共培養試験からの細胞上清中のサイトカイン濃度を測定することによって決定した。ＣＤ４ Ｔ細胞／ＣＥＲをＣＤ８ Ｔ細胞／ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲに添加すると、ＣＤ８ Ｔ細胞／ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ単独または切断型ＥＧＦＲで形質転換されたＣＤ４ Ｔ細胞との組み合わせで、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＴＮＦａおよびＩＬ－１３応答が増強される。以下のサイトカインがアッセイで測定された：ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＴＮＦα、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１３、ＩＬ－１ｂおよびＩＬ－１０。
図３６は、ＳＣＣ１５２標的細胞のＣＤ４ Ｔ細胞－ＣＥＲ介在性食作用の定量化を表す棒グラフである。結果は、共培養アッセイの開始から４時間後の３Ｘ３ ４０ｘ画像から（（食作用の標的事象の数）／（エフェクターの総数））＊１００として計算した。ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲで形質導入されたＣＤ８ Ｔ細胞および選択されたＣＥＲ（ＣＥＲ５、ＣＥＲ１７、ＣＥＲ１９、ＣＥＲ２１、ＣＥＲ２３、ＣＥＲ２６、ＣＥＲ２７、ＣＥＲ１０３Ｂ、ＣＥＲ１０４、ＣＥＲ１０５、ＣＥＲ１０６またはＣＥＲ１１６）で形質導入されたＣＤ４ Ｔ細胞を、ＳＣＣ１５２扁平頭頸部癌標的細胞と共に、１：１：０．５の比率で４時間共培養し、画像化した。ＣＤ８ Ｔ細胞／ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ＋ ＣＤ４ Ｔ細胞／ＣＥＲは、ＣＤ８ Ｔ細胞／ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲのみと比較して、ＳＣＣ１５２エンガルフメント活性の増強を示した。 図３７は、ＳＣＣ１５２標的細胞のＣＤ４ Ｔ細胞－ＣＥＲ介在性食作用の定量化を表す棒グラフである。結果は、共培養アッセイの開始から４時間後の３Ｘ３ ４０ｘ画像から（エフェクター細胞における標的事象の平均面積比＊食作用％）として計算された。ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲで形質導入されたＣＤ８ Ｔ細胞および選択されたＣＥＲ（ＣＥＲ５、ＣＥＲ１７、ＣＥＲ１９、ＣＥＲ２１、ＣＥＲ２３、ＣＥＲ２６、ＣＥＲ２７、ＣＥＲ１０３Ｂ、ＣＥＲ１０４、ＣＥＲ１０５、ＣＥＲ１０６またはＣＥＲ１１６）で形質導入されたＣＤ４ Ｔ細胞を、ＳＣＣ１５２扁平頭頸部癌標的細胞と共に、１：１：０．５の比率で４時間共培養し、画像化した。ＣＤ８ Ｔ細胞／ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ＋ ＣＤ４ Ｔ細胞／ＣＥＲは、ＣＤ８ Ｔ細胞／ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲのみと比較して、ＳＣＣ１５２エンガルフメント活性の増強を示した。 図３８Ａ－Ｆは、例示的なタンデム発現カセットのベクターマップを示す。タンデム発現カセットは、腫瘍（子宮頸部など）特異的な細胞溶解反応を誘発するＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＴＣＲと、細胞溶解誘発ホスファチジルセリン曝露時に腫瘍特異的食作用活性を誘発するホスファチジルセリン特異的ＣＥＲの両方を備えている。図３８Ａは、キメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）５構築物をコードするポリヌクレオチドおよびＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む例示的なタンデム発現カセットを示す。ＣＥＲ５は、ＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＴＣＲの上流に位置する。ＣＥＲ５およびＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲをコードする配列は、ＥＦ－１αプロモーターに機能的に連結され、Ｔ２Ａペプチドによって分離されている。ＣＥＲ５は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインおよびＴＬＲ４エンガルフメンシグナル伝達ドメインで構成されている。図３８Ｂは、キメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）１９構築物をコードするポリヌクレオチドおよびＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む例示的なタンデム発現カセットを示す。ＣＥＲ１９は、ＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＴＣＲの上流に位置する。ＣＥＲ１９およびＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲをコードする配列は、ＥＦ－１αプロモーターに機能的に連結され、Ｔ２Ａペプチドによって分離されている。ＣＥＲ１９は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインおよびＴＬＲ５シグナル伝達ドメインで構成されている。図３８Ｃは、ＣＥＲ２１構築物をコードするポリヌクレオチドおよびＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む例示的なタンデム発現カセットを示す。ＣＥＲ２１は、ＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＴＣＲの上流に位置する。ＣＥＲ２１およびＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲをコードする配列は、ＥＦ－１αプロモーターに機能的に連結され、Ｔ２Ａペプチドによって分離されている。ＣＥＲ２１は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインおよびＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む。図３８Ｄは、ＣＥＲ２７構築物をコードするポリヌクレオチドおよびＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む例示的なタンデム発現カセットを示す。ＣＥＲ２７は、ＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＴＣＲの上流に位置する。ＣＥＲ２７およびＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲをコードする配列は、ＥＦ－１αプロモーターに機能的に連結され、Ｔ２Ａペプチドによって分離されている。ＣＥＲ２７は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインおよびＴＬＲ２シグナル伝達ドメインで構成されている。図３８Ｅは、ＣＥＲ２９構築物をコードするポリヌクレオチドおよびＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む例示的なタンデム発現カセットを示す。ＣＥＲ２９は、ＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＴＣＲの上流に位置する。ＣＥＲ２９およびＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲをコードする配列は、ＥＦ－１αプロモーターに機能的に連結され、Ｔ２Ａペプチドによって分離されている。ＣＥＲ２９は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインおよびＴｒａｆ６シグナル伝達ドメインを含む。図３８Ｆは、ＣＥＲ３１構築物をコードするポリヌクレオチドおよびＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む例示的なタンデム発現カセットを示す。ＣＥＲ３１は、ＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＴＣＲの上流に位置する。ＣＥＲ３１およびＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲをコードする配列は、ＥＦ－１αプロモーターに機能的に連結され、Ｔ２Ａペプチドによって分離されている。ＣＥＲ３１は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインおよびＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含む。
図３９は、Ｔ２Ａ配列により分離されたＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲおよびキメラ受容体２１（ＣＥＲ２１）を含むレンチウイルスベクターで形質導入されたヒト初代ＣＤ８ Ｔ細胞との共培養後のＨＰＶ１６ Ｅ７＋ＳＣＣ１５２細胞における経時的なカスパーゼ３／７誘導を示す線グラフである。ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲおよびＣＥＲ２１は、ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲのみを含む宿主ＣＤ８ Ｔ細胞と比較して、宿主ＣＤ８ Ｔ細胞に増強した標的細胞致死能を与える。エフェクターＣＤ８＋ Ｔ細胞を標的ＳＣＣ１５２細胞と１：１の比率で共にインキュベートした。総カスパーゼ３／７蛍光を経時的に定量化した。 図４０は、Ｔ２Ａ配列によって分離されたＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲおよびＣＥＲを含むレンチウイルスベクターで形質導入されたＣＤ８ Ｔ細胞と共培養した場合のＨＰＶ１６ Ｅ７＋ ＳＣＣ１５２細胞におけるカスパーゼ３／７誘導を示す棒グラフであり、モック形質導入細胞を陰性対照として用いた。IncuCyte(登録商標）カスパーゼ３／７赤色アポトーシス試薬の標識により、アポトーシス（赤色蛍光）を受けている細胞の検出が可能になる。ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ対照と比較して、タンデムＣＥＲ－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲカセットで形質導入されたＣＤ８を共培養試験から経時的に測定した。 図４１は、ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ、ＣＥＲ２１－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ発現カセット、ＣＥＲ２９－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ発現カセットまたはＣＥＲ３１－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ発現カセットで形質導入されたＣＤ８＋ Ｔ細胞の共培養の６時間後の食作用の定量化を示す棒グラフである。食作用の定量化は、Keyence BZ-X710イメージングシステムのハイブリッドキャプチャソフトウェアによって行い、ここで、％食作用は、青色に染色されたエフェクター細胞内の赤色蛍光標識（ＳＣＣ１５２細胞）の数を同定することで決定した（ＣＥＲ－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ発現カセットで形質導入された細胞トレースバイオレット標識ＣＤ８＋ Ｔ細胞－内在化した赤の数／青の数）×１００）。 図４２は、ＣＥＲ２１－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ発現カセットまたはＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ単独で形質導入され、ＳＣＣ１５２標的細胞と共培養されたＣＤ８ Ｔ細胞のサイトカイン分泌パターンを示す３Ｄ棒グラフである。サイトカイン分泌パターンを決定するために、ＣＥＲ２１－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ改変型ＣＤ８ Ｔ細胞をＳＣＣ１５２標的細胞と共培養した。抗原特異的サイトカイン分泌は、メソスケールマルチアレイサイトカインプレートを用いて、各共培養からの細胞上清中のサイトカイン濃度を測定することによって決定した。以下のサイトカインがアッセイで測定された：ＩＦＮγ、ＩＬ－２、ＴＮＦα、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１３、ＩＬ－１ｂおよびＩＬ－１０。ＣＥＲ２１－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ発現カセットで形質導入されたＣＤ８ Ｔ細胞は、サイトカイン分泌、例えばＩＦＮγによって示されるような抗原特異的エフェクター機能を示す。 図４３Ａ－Ｂは、ＥＧＦＲ－キナーゼ阻害剤（Ａ）オシメリチニブおよび（Ｂ）ブリガチニブが、Ｔｉｍ４－ＩｇＧ１ Ｆｃ組換え融合タンパク質によって検出されるように、薬物曝露時にＨＣＣ１５９細胞上に二次エンガルフメント促進マーカーを誘発することを示す。
図４４Ａ－Ｂは、ＥＧＦＲ－キナーゼ阻害剤（Ａ）エルロチニブおよび（Ｂ）ゲフィチニブが、Ｔｉｍ４－ＩｇＧ１ Ｆｃ組換え融合タンパク質により検出されるように、薬物曝露時にＨＣＣ１５９細胞上に二次エンガルフメント促進マーカーを誘発することを示す。 図４５Ａ－Ｂは、ＥＧＦＲ阻害剤オシメリチニブ（２５０ｎＭ、５００ｎＭおよび１０００ｎＭ）をホスファチジルセリン特異的ＣＥＲ１２３またはＣＥＲ１２６発現細胞と組み合わせると、ＥＧＦＲ再構成を有するＮＳＣＬＣ細胞の増殖が、ＭＴＴアッセイ（Ａ）または顕微鏡（５００ｎＭオシメリチニブ＋ＣＥＲ１２６）（Ｂ）により測定されるように、インビトロで相乗的に抑制された。図４５Ａでは、左の棒グラフはエフェクター：標的細胞比１：１を用いたデータを示し、中央の棒グラフはエフェクター：標的比２：１を用いたデータを示し、右の棒グラフはエフェクター：標的比５：１を用いたデータを示す。 図４６は、オシメリチニブ（０、５００または１０００ｎＭ）の存在下で、ＣＥＲ１２３またはＣＥＲ１２６を発現する細胞が、ＮＳＣＬＣ細胞の誘導可能な用量依存的細胞致死を示すことを示す。左の棒グラフは、エフェクター：標的細胞の比が５：１のデータを示し、右の棒グラフは、エフェクター：標的の比が２：１のデータを示している。 図４７は、５００ｎＭオシメリチニブでの処置後のＣＥＲ１２２修飾細胞によるＥＧＦＲ変異ＮＳＣＬＣ細胞の食作用による排除の蛍光顕微鏡写真（左パネル）および５００ｎＭオシメリチニブによる処置後のモック形質導入細胞によるＮＳＣＬＣ細胞の食作用の欠如（右パネル）を示す。下パネルは、オシメリチニブ処置後のＣＥＲ１２２修飾細胞によるＮＳＣＬＣ細胞の食作用の増大を示しており、白色矢印は食作用事象を示す（CT-violet標識Ｔ細胞内のpHrodo red標的）。 図４８Ａ－Ｂは、ＥＧＦＲ阻害剤オシメリチニブ（０．１ｎＭ、１ｎＭおよび５ｎＭ）がホスファチジルセリン特異的ＣＥＲ１２３またはＣＥＲ１２６を発現する細胞と組み合わされたとき、ＥＧＦＲ再構成を有するＮＳＣＬＣ細胞の増殖が、ＭＴＴアッセイ（Ａ）または顕微鏡（１ｎＭオシメリチニブ＋ＣＥＲ１２３）（Ｂ）によって測定されるように相乗的に抑制されたことを示す。図４８Ａにおいて、左棒グラフは、エフェクター：標的細胞の比が１：１のデータを示し、中央の棒グラフは、エフェクター：標的の比が２：１のデータを示し、右の棒グラフは、エフェクター：標的の比は５：１を用いたデータを示す。 図４９は、オシメリチニブ（０、１ｎＭおよび５ｎＭ）の存在下で、ＣＥＲ１２３またはＣＥＲ１２６発現細胞がＮＳＣＬＣ細胞の誘導可能な用量依存的細胞致死を示すことを示す。左の棒グラフは、エフェクター：標的細胞の比が５：１のデータを示し、右の棒グラフは、エフェクター：標的の比が２：１のデータを示す。 図５０は、種々のレベルのオシメリチニブ（０、１ｎＭおよび５ｎＭ）でＨＣＣ１５９細胞と共培養されたＣＥＲ１２３およびＣＥＲ１２６発現細胞におけるＩＦＮ－γ分泌レベルを示す。 図５１Ａ－Ｂ：オシメリチニブ（１ｎＭ）と組み合わせたＣＥＲ発現Ｔ細胞は、インビトロでＥＧＦＲ変異を有するＨＣＣ８２７ ＮＳＣＬＣ細胞を相乗的に殺す。図５１Ａは、オシメリチニブ＋ＣＥＲ２１、ＣＥＲ１０８、ＣＥＲ１０４またはＣＥＲ１２９発現Ｔ細胞と共にインキュベートされたＨＣＣ８２７細胞の生存率％を示す。図５１Ｂは、オシメリチニブ＋ＣＥＲ２７、ＣＥＲ１２０、ＣＥＲ１２２、ＣＥＲ１２３、ＣＥＲ１２４またはＣＥＲ１２６を発現するＴ細胞と共にインキュベートされたＨＣＣ８２７細胞の生存率％を示す。
図５２は、ＬＤＨ細胞毒性アッセイによって測定された、＋オシメリチニブ（１ｎＭ）と組み合わせたＣＥＲ発現ＣＤ４＋ Ｔ細胞によるＥＧＦＲ突然変異を有する細胞死滅ＨＣＣ１５９ ＮＳＣＬＣ細胞の割合（％）を示す。 図５３は、ＨＣＣ８２７＋細胞の共培養試験からの明視野顕微鏡画像を示す。細胞をオシメリチニブ（１ｎＭ）で４８時間（右画像）またはオシメリチニブなし（左画像）で処理した。 図５４は、ＨＣＣ８２７＋細胞の共培養試験からの明視野顕微鏡画像を示す。ＨＣＣ８２７細胞を、オシメリチニブ（１ｎＭ）を含むＣＥＲ１０４形質導入ＣＤ４＋ Ｔ細胞で４８時間（右画像）またはオシメリチニブなし（左画像）で処理した。矢印は、食作用ＣＥＲ１０４＋ Ｔ細胞に囲まれた死んだＨＣＣ８２７ ＥＧＦＲ＋細胞のクラスターを示す。 図５５は、ＨＣＣ８２７＋細胞の共培養試験からの明視野顕微鏡画像を示す。ＨＣＣ８２７細胞を、オシメリチニブ（１ｎＭ）を含むＣＥＲ２１形質導入ＣＤ４＋ Ｔ細胞で４８時間（右画像）またはオシメリチニブなし（左画像）で処理した。矢印は、食作用ＣＥＲ２１＋ Ｔ細胞に囲まれた死んだＨＣＣ８２７ ＥＧＦＲ＋細胞のクラスターを示す。 図５６は、ＨＣＣ８２７＋細胞の共培養試験からの明視野顕微鏡画像を示す。ＨＣＣ８２７細胞を、オシメリチニブ（１ｎＭ）を含むＣＥＲ１２２形質導入ＣＤ４＋ Ｔ細胞で４８時間（右画像）、またはオシメリチニブなし（左画像）で処理した。矢印は、食作用ＣＥＲ１２２＋ Ｔ細胞に囲まれた死んだＨＣＣ８２７ ＥＧＦＲ＋細胞のクラスターを示す。 図５７は、ＬＤＨ細胞毒性アッセイで測定した、１μＭのオシメリチニブと組み合わせたＣＥＲ発現Ｔ細胞によるＥＧＦＲ変異を有するＨ１９７５ ＮＳＣＬＣ細胞の細胞致死率を示す。 図５８は、Ｈ１９７５細胞の共培養試験からの明視野顕微鏡画像を示す。Ｈ１９７５細胞をＣＥＲ１２６形質導入Ｔ細胞＋オシメリチニブ（５００ｎＭ）で４８時間処理（右画像）またはモック形質導入（ベクターのみ）Ｔ細胞＋オシメリチニブ（５００ｎＭ）（左画像）で処置した。 図５９Ａ－Ｂは、ＡＬＫ阻害剤（図５９Ａ）アレクチニブおよび（図５９Ｂ）クリゾチニブが、Ｔｉｍ４－ＩｇＧ１ Ｆｃ組換え融合タンパク質によって検出されるように、薬物曝露時にＡ５４９細胞上に二次エンガルフメント促進マーカーを誘発することを示す。 図６０Ａ－Ｄは、ＡＬＫ阻害剤であるクリゾチニブまたはアレクチニブをＣＥＲ１０４またはＣＥＲ１２２を発現するＴ細胞と組み合わせることにより、ＡＬＫ再構成を有するＮＳＣＬＣ細胞のインビトロ増殖を相乗的に抑制することを示す。図６０Ａおよび図６０Ｂは、エフェクター：標的細胞の比が２：１（図６０Ａ）および５：１（図６０Ｂ）での共培養の４８時間後のＡ５４９細胞生存率に対するアレクチニブ（２５０ｎＭ、５００ｎＭ、１μＭ、２．５μＭ、３．７μＭ、７μＭまたは１０μＭ）＋ＣＥＲ１０４またはＣＥＲ１２２修飾Ｔ細胞の効果を示す。図６０Ｃおよび図６０Ｄは、エフェクター：標的細胞の比が２：１（図６０Ｃ）および５：１（図６０Ｄ）での共培養の４８時間後のＡ５４９細胞生存率に対するクリゾチニブ（２５０ｎＭ、５００ｎＭ、１μＭ、２．５μＭ、３．７μＭ、７μＭまたは１０μＭ）＋ＣＥＲ１０４またはＣＥＲ１２２修飾T細胞の効果を示す。モック形質導入（ベクターのみ）Ｔ細胞を対照として用いた。
図６１Ａ－Ｄは、ＡＬＫ阻害剤であるクリゾチニブまたはアレクチニブをＣＥＲ１０４またはＣＥＲ１２２発現Ｔ細胞と組み合わせることにより、ＡＬＫ再構成を有するＮＳＣＬＣ細胞のインビトロ増殖を相乗的に抑制することを示す。図６１Ａおよび図６１Ｂは、エフェクター：標的細胞の比が２：１（図６１Ａ）および５：１（図６１Ｂ）での共培養の７２時間後のＡ５４９細胞生存率に対するアレクチニブ（２５０ｎＭ、５００ｎＭ、１μＭ、２．５μＭ、３．７μＭ、７μＭまたは１０μＭ）＋ＣＥＲ１０４またはＣＥＲ１２２修飾T細胞の効果を示す。図６１Ｃおよび図６１Ｄは、エフェクター：標的細胞の比が２：１（図６１Ｃ）および５：１（図６１Ｄ）での共培養の７２時間後のＡ５４９細胞生存率に対するクリゾチニブ（２５０ｎＭ、５００ｎＭ、１μＭ、２．５μＭ、３．７μＭ、７μＭまたは１０μＭ）＋ＣＥＲ１０４またはＣＥＲ１２２修飾T細胞の効果を示す。モック形質導入（ベクターのみ）Ｔ細胞を対照として用いた。 図６２Ａ－Ｅは、ＡＬＫ阻害剤（アレクチニブまたはクリゾチニブ）で処理されたＡＬＫ陽性Ａ５４９ ＮＳＣＬＣ細胞の食作用による排除の蛍光顕微鏡写真（倍率４０倍）を示す。Ａ５４９細胞は、ｐＨ検出色素であるpHrodo red色素で標識され、低ＰＨ保持エンドソームでの局在を示す。ＣＤ４ Ｔ細胞をCT-violetで標識した。図６２Ａは、モック形質導入（ベクターのみ）Ｔ細胞がＡ５４９細胞の食作用を示さないことを示す。図６２Ｂ－Ｃは、１μＭのアレクチニブ（図６２Ｂ）または１μＭのクリゾチニブ（図６２Ｃ）と共培養すると、ＣＥＲ１０４発現Ｔ細胞がＡ５４９細胞を貪食したことを示す。図６２Ｄ－Ｅは、１μＭのアレクチニブ（図６２Ｄ）または１μＭのクリゾチニブ（図６２Ｅ）と共培養すると、ＣＥＲ１１７発現Ｔ細胞がＡ５４９細胞を貪食したことを示す。白色矢印は、食作用事象の例を示す（CT-violet標識されたＣＤ４ Ｔ細胞内のpHrodo red標的細胞）。 図６３Ａ－Ｆは、ＡＬＫ阻害剤（アレクチニブ）で処置されたＡＬＫ陽性Ａ５４９ ＮＳＣＬＣ細胞の食作用による排除の蛍光顕微鏡写真（倍率６３倍）を示す。Ａ５４９細胞は、ｐＨ検出色素であるpHrodo red色素で標識され、低ＰＨ保持エンドソームでの局在を示す。ＣＤ４ Ｔ細胞をCT-violetで標識した。図６３Ａは、モック形質導入（ベクターのみ）Ｔ細胞がＡ５４９細胞の食作用を示さないことを示す。図６３Ｄは、図６３Ａの白い四角で囲んだ領域の拡大図である。図６３Ｂは、２．５μＭのアレクチニブと共培養したとき、ＣＥＲ１２３発現Ｔ細胞がＡ５４９細胞を貪食したことを示す（図６３Ｂ）。図６３Ｅは、図６３Ｂの白い四角で囲んだ領域の拡大図である。図６３Ｃは、２．５μＭのアレクチニブと共培養したとき、ＣＥＲ１２６発現Ｔ細胞がＡ５４９細胞を貪食したことを示す（図６３Ｃ）。図６３Ｆは、図６３Ｃの白い四角で囲んだ領域の拡大図である。白色矢印は、食作用事象の例を示す（CELLTRACE-violet標識されたＣＤ４ Ｔ細胞内のpHrodo red標的細胞）。 図６４Ａ－Ｂは、ＣＥＲ１２３またはＣＥＲ１２６発現Ｔ細胞によるアレクチニブ（１μＭ）処理Ａ５４９細胞の食作用％（図６４Ａ）および食作用指数（図６４Ｂ）を表す棒グラフである。 図６５Ａ－Ｃは、ＣＥＲ発現Ｔ細胞が、ＡＬＫ阻害剤であるクリゾチニブおよびアレクチニブの存在下で、用量依存性の誘導性細胞致死応答を示すことを示す。図６５Ａは、クリゾチニブ（０、２５００、または３７００ｎＭ）の存在下で、ＣＥＲ１２３またはＣＥＲ１２６を発現する細胞が、Ａ５４９細胞の誘導可能な用量依存的細胞致死を示すことを示す。左棒グラフは、エフェクター：標的細胞の比が５：１のデータを示し、右棒グラフは、エフェクター：標的の比が２：１のデータを示す。図６５Ｂは、アレクチニブ（０、２５００、または３７００ｎＭ）の存在下で、ＣＥＲ１２３またはＣＥＲ１２６を発現する細胞が、Ａ５４９細胞の誘導可能な用量依存的細胞致死を示すことを示す。左棒グラフは、エフェクター：標的細胞の比が５：１のデータを示し、右棒グラフは、エフェクター：標的の比が２：１のデータを示す。図６５Ｃは、対照（右パネル）と比較した、ＣＥＲ１２６形質導入Ｔ細胞の存在下（左パネル）でのクリゾチニブ（３７００ｎＭ）処置Ａ５４９細胞のほぼ完全な喪失を伴う共培養試験からの顕微鏡写真画像を示す。 図６６Ａ－Ｂは、アレクチニブ（３，７００ｎＭ）（図６６Ａ）またはクリゾチニブ（３，７００ｎＭ）（図６６Ｂ）と共にＡ５４９細胞と共培養されたＣＥＲ１２３およびＣＥＲ１２６発現細胞におけるＩＦＮ－γ分泌レベルを示す。
図６７Ａ－Ｂは、アレクチニブと組み合わせた種々のＣＥＲ発現Ｔ細胞が、インビトロでＡＬＫ再構成を有するＮＳＣＬＣ細胞の増殖を相乗的に抑制することを示す。図６７Ａは、アレクチニブ＋ＣＥＲ２１－、ＣＥＲ１０８－、ＣＥＲ１０４－、またはＣＥＲ１２９－発現Ｔ細胞と共培養されたＡ５４９ ＡＬＫ＋細胞の細胞生存率％を示す。図６７Ｂは、アレクチニブ＋ＣＥＲ２７－、ＣＥＲ１２０－、ＣＥＲ１２２－、ＣＥＲ１２３－、ＣＥＲ１２４－、またはＣＥＲ１２６－発現Ｔ細胞と共培養されたＡ５４９ ＡＬＫ＋細胞の細胞生存率％を示す。 図６８は、Ａ５４９ ＡＬＫ＋細胞の共培養試験からの明視野顕微鏡画像を示す。Ａ５４９ ＡＬＫ＋細胞をＣＥＲ１０４形質導入Ｔ細胞＋アレクチニブ（３．７μＭ）で４８時間処理（右画像）またはモック形質導入（ベクターのみ）Ｔ細胞＋アレクチニブ（３．７μＭ）（左画像）で処理した。矢印は、食作用ＣＥＲ１０４＋ Ｔ細胞に囲まれた死んだＡ５４９ ＡＬＫ＋細胞のクラスターを示す。 図６９は、Ａ５４９ ＡＬＫ＋細胞の共培養試験からの明視野顕微鏡画像を示す。Ａ５４９ ＡＬＫ＋細胞をＣＥＲ１２６形質導入Ｔ細胞＋アレクチニブ（３．７μＭ）で４８時間処理（右画像）またはモック形質導入（ベクターのみ）Ｔ細胞＋アレクチニブ（３．７μＭ）（左画像）で処理した。矢印は、食作用ＣＥＲ１２６＋ Ｔ細胞に囲まれた死んだＡ５４９ ＡＬＫ＋細胞のクラスターを示す。 図７０は、アレクチニブ処理Ａ５４９細胞＋種々のＣＥＲ発現Ｔ細胞（ＣＥＲ２１、ＣＥＲ２７、ＣＥＲ３０、ＣＥＲ１０８、ＣＥＲ１１０、ＣＥＲ１１２、ＣＥＲ１２０、ＣＥＲ１２２、ＣＥＲ１２３、ＣＥＲ１２４、ＣＥＲ１２６、ＣＥＲ１２７またはＣＥＲ１０４）の調整された食作用指数の定量化を表す棒グラフを示す。 図７１は、種々のＣＥＲ修飾Ｔ細胞＋アレクチニブと共培養されたＡＬＫ＋ ＮＳＣＬＣ細胞の食作用による排除の蛍光顕微鏡写真画像（４０Ｘ）を示す。黄色の三角形は、食作用事象を示す（CT-violet で標識されたＣＤ４ Ｔ細胞内のpH rodo red標的細胞）。モック形質導入（ベクターのみ）Ｔ細胞は、食作用を示さない。 図７２Ａ－Ｃは、％食作用（図７２Ａ）および食作用指数（図７２Ｂ）としての、ＣＥＲ１２２発現Ｔ細胞によるアレクチニブ処理Ａ５４９ ＡＬＫ＋細胞の食作用取り込みの時間経過（４時間、８時間および１２時間）を示す。図７２Ｃは、１６時間の共培養で得られた蛍光顕微鏡写真画像を示す。黄色の矢印は、食作用事象を示す（CT-violetで標識されたＣＤ４ Ｔ細胞内のpHrodo red標識）（図７２Ｃ右画像）。モック形質導入（ベクターのみ）対照は、食作用活性を示さない（図７２Ｃ左画像）。 図７３は、ＬＤＨ細胞毒性アッセイにより測定された、Ａ５４９ ＡＬＫ＋細胞＋アレクチニブ（３．７μＭ）と共培養されたＣＥＲ発現Ｔ細胞による細胞死％の棒グラフを示す。モック形質導入（ベクターのみ）Ｔ細胞を対照として用いた。 図７４は、ＡＬＫ阻害剤療法と組み合わせたＣＥＲ形質導入Ｔ細胞の養子移植の例示的な治療レジメンの概略図である。
図７５Ａ－Ｄは、ＣＥＲ発現Ｔ細胞の作製を増加できることを示している。図７５Ａ：Ｔ細胞を濃縮し、活性化し、ＣＥＲ１２２－Ｔ２Ａ－ｔＥＧＦＲレンチウイルス構築物で形質導入し、ＦＡＣＳにより表面ｔＥＧＦＲおよびＴ細胞マーカーＣＤ４およびＣＤ８について表現型を決定した。図７５Ｂ：ＣＤ３およびＣＤ２８ビーズの活性化後に、選択されていない培養物における形質導入および対照Ｔ細胞の総数を決定した。図７５Ｃ：ＣＥＲ１２２を発現するＴ細胞のＤＮＡからの２Ｄ蛍光液滴デジタルＰＣＲプロットは、ＣＥＲカセットからの領域の増幅を示している。プロットの青いクラスター（左上）は、ＣＥＲ１２２のみに陽性の液滴を表し、橙色のクラスター（右上）は、ＣＥＲ１２２とＲＰＰ３０の両方に陽性のクラスターを表す。図７５Ｄ：液滴デジタルＰＣＲにより決定されたＣＥＲ１２２形質導入Ｔ細胞のコピー数値（ＣＮＶ）を示す表である。 図７６Ａ－Ｃは、ＣＥＲ１２２発現Ｔ細胞が、インビボでＡＬＫ阻害剤（１５ｍｇ／ｋｇのアレクチニブ）に対する抗腫瘍応答を増強することを示す。図７６Ａは、未処置、アレクチニブのみ＋モック形質導入Ｔ細胞（ベクターのみ）、およびアレクチニブ＋ＣＥＲ１２２形質導入Ｔ細胞（ｎ＝５／処置群）ＮＳＧマウスにおける養子移植後の腫瘍体積測定を示す。図７６Ｂは、生物発光イメージングにより評価された、ＮＳＧマウスにおけるＡ５４９／ルシフェラーゼ＋／ＡＬＫ＋細胞の増殖を示す。図７６Ｃは、養子移植後８日目におけるＡ５４９陽性腫瘍負荷の生物発光イメージングを示す。 図７７Ａ－Ｂは、ＦＡＣＳプロット（図７７Ａ）および棒グラフ（図７７Ｂ）を示し、末梢血の養子移植後細胞処置におけるＣＤ４５＋／ＣＥＲ１２２＋ヒトＴ細胞の早期増殖を示す。図７７Ｂは、移植後４、８、１６および２５日目にＡＰＣ結合抗ヒトＣＤ４５抗体によって測定された、養子移植後のＣＥＲ１２２形質導入Ｔ細胞の増殖を示す。 図７８は、ＥＧＦＲ阻害剤療法と組み合わせたＣＥＲ形質導入Ｔ細胞の養子移植の例示的な治療レジメンの概略図である。 図７９は、未処置、オシメリチニブのみ、およびオシメリチニブ＋ＣＥＲ１２２形質導入細胞における養子移植後の腫瘍体積測定値を示す線グラフである（１群あたりｎ＝５）。 図８０Ａ－Ｂは、ＣＥＲ発現ＣＤ４＋ Ｔ細胞によるＨＰＶ＋ ＳＣＣ１５２細胞の食作用の分析を示す。図８０Ａは、ＣＥＲタイプによるＣＤ４＋ Ｔ細胞食作用の大きさ－幅曲線（magnitude breadth curve）を示す。図８０Ｂは、ＣＤ４＋ ＣＥＲ１２６形質導入Ｔ細胞によってエンガルフされたＳＣＣ１５２標的細胞の蛍光顕微鏡写真画像を示す。上の画像は左下の画像の拡大図であり、ＣＥＲ１２６で形質導入されたＣＤ４＋ Ｔ細胞にエンガルフされたＳＣＣ１５２細胞を示す。左下の画像は、ＣＥＲ１２６で形質導入されたＣＤ４＋ Ｔ細胞にエンガルフされたＳＣＣ１５２細胞（pHrodo red で染色）を示している。右下の画像は同じ顕微鏡写真で、CELLTRACE violetで発色されたＣＥＲ１２６形質導入ＣＤ４＋ Ｔ細胞を示している。白色矢印は、Ｅ７特異的ＴＣＲで形質導入されたＣＤ８＋ Ｔ細胞を示し、これはpHrodo Red陰性である（図８０Ｂの左下パネル）。食作用のソフトウェア表現(rendition)（図８０Ｂの右下パネル）。 図８１は、ＣＥＲ発現ＣＤ４＋ Ｔ細胞＋ Ｅ７特異的ＴＣＲ ＣＤ８＋ Ｔ細胞共培養試験からのサイトカイン分泌を示す。Ｅ７特異的ＴＣＲ発現ＣＤ８＋ Ｔ細胞へのＣＥＲ発現ＣＤ４＋ Ｔ細胞の添加は、ＩＦＮγ分泌レベルを高めた。 図８２Ａ－Ｂは、抗原遭遇時のＣＥＲ形質導入ＣＤ４＋ Ｔ細胞のマスサイトメトリーデータのｖｉＳＮＥマップを示す。ＣＥＲ形質導入ＣＤ４＋ Ｔ細胞をＥ７特異的ＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋ Ｔ細胞およびＨＰＶ＋ ＳＣＣ１５２標的細胞と共培養し、マスサイトメトリー（CyTof）で調べた。無傷のＣＥＲ－ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、ｔＳＮＥ１およびｔＳＮＥ２軸を表示するプロットに表示される。９つの細胞内マーカーをｖｉＳＮＥ分析に用いた。各ドットは単一の細胞を表す。図８２Ａ：いくつかの測定されたマーカー（ＧＭ－ＣＳＦ、ＭＩＰ１ｂ、パーフォリン、ＴＮＦ、ＩＬ－１７、グランザイムＢ、ＩＬ－４、ＩＬ－２、ＩＦＮγ）によるプロットの色分けは、ｖｉＳＮＥ‘アイランド’全体の表現型を示す。各マーカーについて、赤色は高発現を表し、青色は低発現を表す。図８２Ｂ：ＣＤ４＋ Ｔ細胞の集団は、３２のマーカーすべてからクラスター化アルゴリズムを用いて作製され、ｖｉＳＮＥマップに重複させた。矢印は、ＣＥＲ１０４、ＣＥＲ１１６およびＣＥＲ１１７を含むサンプルで細胞内マーカーＩＦＮγを発現するアイランドの濃縮を示している。
図８３Ａ－Ｂは、抗原遭遇時のＣＥＲ発現ＣＤ４＋ Ｔ細胞のマスサイトメトリーデータのｖｉＳＮＥマップを示す。ＣＥＲ形質導入ＣＤ４＋ Ｔ細胞をＥ７特異的ＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋ Ｔ細胞およびＨＰＶ＋ ＳＣＣ１５２標的細胞と共培養し、マスサイトメトリー（CyTof）で調べた。無傷のＣＥＲ－ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、ｔＳＮＥ１およびｔＳＮＥ２軸を表示するプロットに表示される。１８個の細胞表面マーカーをｖｉＳＮＥ分析に用いた。各ドットは単一の細胞を表す。図８３Ａ：ＣＤ４＋ Ｔ細胞の集団は、１８のマーカーすべてからクラスター化アルゴリズムを用いて作製され、ｖｉＳＮＥマップに重複させた。矢印は、ＣＥＲ１０４およびＣＥＲ１１６を含むサンプルでＴ細胞活性化マーカーＣＤ６９を発現するアイランドの濃縮を示している。図８３Ｂ：カラープロットは、ｖｉＳＮＥの‘アイランド’全体の表現型を示す。赤色は高発現を表し、青色は低発現を表す。強調表示された領域は、Ｔ細胞活性化マーカーＣＤ６９を発現する細胞を示す。 図８４Ａ－Ｂは、抗原遭遇時のＣＥＲ発現ＣＤ４＋ Ｔ細胞のマスサイトメトリーデータのｖｉＳＮＥマップを示す。ＣＥＲ形質導入ＣＤ４＋ Ｔ細胞をＥ７特異的ＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋ Ｔ細胞およびＨＰＶ＋ ＳＣＣ１５２標的細胞と共培養し、マスサイトメトリー（CyTof）で調べた。無傷のＣＥＲ－ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、ｔＳＮＥ１およびｔＳＮＥ２軸を表示するプロットに表示される。１８個の細胞表面マーカーをｖｉＳＮＥ分析に用いた。各ドットは単一の細胞を表す。図８４Ａ：ＣＤ４＋ Ｔ細胞の集団は、１８のマーカーすべてからクラスター化アルゴリズムを用いて作製され、ｖｉＳＮＥマップに重複させた。矢印は、対照と比較して、ＣＥＲ１０４およびＣＥＲ１１６サンプルのＣＣＲ７＋集団内での天然Ｔ細胞マーカーＣＤ４５ＲＡを発現するアイランドの喪失を示している。図８４Ｂ：カラープロットは、ｖｉＳＮＥの‘アイランド’全体の表現型を示す。赤色は各マーカーの高発現を表し、青色は低発現を表す。強調表示された領域は、天然Ｔ細胞マーカーＣＤ４５ＲＡを示す。ＣＥＲ１０４およびＣＥＲ１１６形質導入ＣＤ４ Ｔ細胞は、抗原との遭遇後の記憶形成と関連していた。 図８５Ａ－Ｇは、ＣＥＲ発現細胞における食細胞シグナル伝達カスケードの誘導および管腔内容物の分解を示す。図８５Ａ：ＣＥＲ２１、ＣＥＲ１１６または空のプラスミド（モック）を含むＢａ／Ｆ３細胞株を、デキサメタゾンで前処理した胸腺細胞と２時間共培養した。Ｒａｃ１阻害剤ＮＳＣ２３７６６（Selleck Chem）を、適当なウェルでの共培養中に添加した。次いで、細胞を回収し、溶解バッファーに可溶化し、タンパク質溶解物にＰＡＫ－ＰＢＤビーズ（Cytoskeleton Inc.）を用いてリン酸化Ｒａｃ１の免疫沈降を行った。免疫沈降物を溶出し、２５μｇのタンパク質をＳＤＳ－ＰＡＧＥ勾配ゲルにロードし、モノクローナルＲａｃ－１一次抗体（Cytoskeleton Inc.）で４℃にて一晩プローブ化し、洗浄し、抗マウスＨＲＰ（Jackson Labs）でハイブリダイズした。免疫沈降前に、いくつかのサンプルをタンパク質予測および総Ｒａｃ１予測のために保持した。基底（Basal）サンプルは、標的細胞なしで培養されたＣＥＲ発現細胞株を示す。図８５Ｂ：ＩｍａｇｅＪを用いてゲルバンドを定量化し、活性化Ｒａｃ１の割合を定量化した。図８５Ｃ：６時間の共培養後のＣＥＲ２１を有するＢａ／ｆ３細胞株におけるpHrodo＋細胞の代表的なＦＡＣプロファイル。特定のＲａｃ１小分子阻害剤を添加すると、食作用が無効になる（右）。数値は、ＣＥＲ２１ Ｂａ／ｆ３細胞におけるpHrodo＋細胞の割合（食作用）を示す。図８５Ｄ：食細胞指数は蛍光イメージングから計算した（図８５Ｅ）。図８５Ｅ：Ｒａｃ１阻害の存在下または不存在下でのＣＥＲ含有Ｂａ／ｆ３細胞株の食作用アッセイの代表的な視覚化。図８５Ｆ：Ｂａ／ｆ３細胞株をpHrodo-red標識した標的細胞（prey）と共に一晩培養し、その後ＦＡＣＳにより精製した。標的細胞の破壊は、タイムラプスイメージングによって視覚化され、経時的に定量化した。ＣＥＲ１１６ドメインにＴＲＡＦ６シグナル伝達を添加すると、ＣＥＲ１１６の管腔内容物の経時的な分解が増強され、３６時間で管腔内容物のほぼ完全な分解が得られる。図８５Ｇ：タイムラプスイメージングは、ＣＥＲ１１６を発現するＢａ／Ｆ３細胞の管腔内容物の破壊を示す。pHrodo-redで標識された内容物は、時間の経過とともに分解される。ＣＥＲ１１６を有するＢａ／Ｆ３細胞（上パネル）は標的細胞を分解(catabolize)し、細胞が恒常性に戻り、免疫応答を再開できるようにする。 図８６は、例示的な抗原提示アッセイの略図を示す。食作用アッセイステップでは、ＣＥＲを発現するＣＤ４およびＣＤ８＋ Ｔ細胞株を、ＨＰＶ Ｅ７特異的ＴＣＲおよびＳＣＣ１５２（ＨＰＶ＋）細胞を発現するＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞と共に一晩培養した。翌日、ＣＥＲ＋ Ｔ細胞をＦＡＣＳで分別した。ＦＡＣＳプロットはCT violet ＋ ＣＥＲを示す。ＦＡＣＳ精製後、ＨＰＶ腫瘍性タンパク質の抗原提示を評価した。ＣＥＲを発現する細胞を、Ｅ６およびＥ７特異的ＴＣＲ／ＮＦＡＴレポーター細胞株と１：２の比で共培養し、プレートリーダーを用いてＮＦＡＴ活性化を経時的に測定した。 図８７は、図８６の図に示すように、ＨＰＶ＋腫瘍細胞およびＣＤ４＋／ＣＤ８＋ Ｅ７ ＴＣＲ形質導入Ｔ細胞と共培養されたＣＤ４＋およびＣＤ８＋ ＣＥＲ１２３形質導入Ｔ細胞との共培養後のＮＦＡＴレポーター遺伝子を含むＥ６／Ｅ７ ＴＣＲ形質導入Ｔ細胞におけるＮＦＡＴ活性化の線グラフを示す。ＣＥＲ発現ＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞株は、ＮＦＡＴ活性化により測定されるように、ＨＰＶ＋腫瘍細胞を貪食した後、Ｅ７ ＨＰＶ腫瘍性タンパク質からＥ７ ＴＣＲ／ＮＦＡＴレポーター発現Ｔ細胞への交差提示が可能である。
詳細な説明
（ａ）細胞外結合ドメインおよび場合により細胞外スペーサードメインを含む細胞外ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、および（ｃ）トール様受容体（ＴＬＲ）シグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメイン、を含むキメラタンパク質、ならびに該キメラタンパク質をコードする核酸分子が、本明細書に記載される。さらに、これらのキメラタンパク質を発現するように改変された細胞、ならびにそのような改変細胞を、それを必要とする対象に送達するための方法および組成物を提供する。キメラタンパク質は、本明細書中、“キメラエンガルフメント受容体（複数可）”（単数形の“ＣＥＲ”および複数形の“ＣＥＲｓ”）と称される。本明細書に記載のキメラエンガルフメント受容体は、該キメラエンガルフメント受容体を発現するように遺伝子的に改変されている宿主細胞にエンガルフメント表現型を付与することができる。そのようなある態様において、本明細書に記載のＣＥＲの発現は、エンガルフメント表現型を天然には示さない宿主細胞にエンガルフメント表現型を付与する。他のそのような態様において、宿主細胞による本明細書に記載のＣＥＲの発現は、宿主細胞によって天然に標的とされないエンガルフメント促進マーカーまたは抗原マーカーに特異的なエンガルフメント表現型を付与する。さらに他のそのような態様において、宿主細胞による本明細書に記載のＣＥＲの発現は、宿主細胞により天然に標的とされるエンガルフメント促進マーカーまたは抗原マーカーに特異的なエンガルフメント表現型を付与し、該宿主細胞によるＣＥＲの発現は、標的化されたエンガルフメント促進または抗原マーカーを示す細胞、微生物または粒子の宿主細胞によるエンガルフメントを増強する。
特定の態様において、ＣＥＲは、アポトーシス細胞、死細胞、死にかけの細胞、損傷細胞、感染細胞または壊死細胞に関連するエンガルフメントマーカーを標的とする。他の態様において、ＣＥＲは、感染性微生物または粒子に関連する抗体結合細胞を標的とする。さらに他の態様において、ＣＥＲは、疾患、障害、または他の望ましくない病状に関連する異常な細胞またはミスフォールドタンパク質によって提示される抗原マーカーを標的とする。
本明細書に記載の１つまたはそれ以上のＣＥＲは、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、Ｂ細胞、リンパ系前駆細胞、樹状細胞、ランゲルハンス細胞、および骨髄細胞などの細胞に形質導入され、発現され得る。特定の態様において、特定の標的分子（例えば、エンガルフメントマーカーまたは抗原マーカー）に結合するようにＣＥＲを操作することに加えて、ＣＥＲのエンガルフメントシグナル伝達ドメインは、所望のエンガルフメント活性を提供するように選択される。別の態様において、ＣＥＲは、第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよび第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。
本明細書に記載の１つまたはそれ以上のＣＥＲを発現するように改変されている宿主細胞は、ＣＥＲの細胞外ドメインが結合する標的分子を発現する標的細胞または粒子の特異的エンガルフメントのために用いられ得る。特定の態様において、標的細胞または粒子は、感染、疾患、障害もしくは他の望ましくない病状に関連する、腫瘍細胞、癌細胞、微生物（例えば、細菌、真菌、ウイルス）、原虫寄生虫、異常細胞、またはミスフォールドタンパク質であり得る。さらなる態様において、本明細書に記載の１つまたはそれ以上のＣＥＲを発現するように遺伝子改変されている宿主細胞は、対象において、癌、感染症（ウイルス、細菌、真菌、原生動物）、炎症性疾患、免疫疾患（例えば、自己免疫疾患）を処置するための、一次療法または補助療法もしくは併用療法として用いられる。本明細書に記載のＣＥＲは、ＴＬＲ、Ｔｒａｆ６、Ｔｒａｆ２またはＴｒａｆ３エンガルフメントシグナル伝達ドメインを介して、ＣＥＲを発現する宿主細胞に炎症誘発性（免疫原性）表現型を付与する。特定の態様において、ＣＥＲ改変宿主細胞はさらに、増殖活性（proliferative activity, expansion activity）、活性化、記憶形成、細胞溶解活性、抗原提示活性、食作用シグナル伝達活性、管腔分解、またはそれらの組合せの増強を示し、これらはＣＥＲを発現しない宿主細胞には存在しない。
定義
本発明をより詳細に説明する前に、本明細書で用いる特定の用語の定義を提供することがその理解に役立ち得る。
本明細書中、任意の濃度範囲、百分率範囲、比範囲、または整数範囲は、特記しない限り、列挙された範囲内の任意の整数の値、および適当な場合にはその端数（例えば、整数の１０分の１および１００分の１など）を含むと理解されるべきである。また、ポリマーサブユニット、サイズまたは厚さなどの任意の物理的特徴に関する本明細書に列挙された任意の数の範囲は、特記しない限り、列挙された範囲内の任意の整数を含むと理解される。本明細書で用いる用語“約”は、特記しない限り、指示された範囲、値、または構造の±２０％を意味する。本明細書で用いる用語“ａ”および“ａｎ”は、列挙された構成要素のうちの“１つまたはそれ以上”を意味することを理解されたい。代替物の使用（例えば、“または”）は、代替物の一方、両方、またはそれらの任意の組み合わせのいずれかを意味すると理解されるべきである。本明細書で用いる用語“含む（include）”、“有する”および“含む（comprise）”は、互換的に用いられ、その用語およびその変形は非限定的と解釈されることを意図している。
抗体の技術分野の当業者によって理解される用語は、本明細書において明らかに異なるように定義されていない限り、それぞれ当技術分野で受け入れられている意味を有する。用語“抗体”は、最も広い意味で用いられ、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を包含する。“抗体”は、ジスルフィド結合によって相互に連結された少なくとも２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖を含む無傷（インタクト）抗体、ならびに標的分子に結合する能力を有するかまたは保持する無傷抗体の抗原結合部分（または抗原結合ドメイン）を意味し得る。抗体は、天然に存在する、組換え産生された、遺伝子操作された、または修飾された形態の免疫グロブリン、例えば、イントラボディ（intrabody）、ペプチボディ、ナノボディ、単一ドメイン抗体、ＳＭＩＰ、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、タンデムジ－ｓｃＦＶ、タンデムトリ－ｓｃＦｖ、ＡＤＡＰＴＩＲ）であり得る。モノクローナル抗体またはその抗原結合部分は、非ヒト、キメラ、ヒト化、またはヒト、好ましくはヒト化またはヒトであり得る。免疫グロブリン構造および機能は、例えばHarlow et al., Eds., Antibodies: A Laboratory Manual、Chapter 14 （Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, 1988）に記載されている。無傷抗体の“抗原結合部分”または“抗原結合ドメイン”は、無傷抗体の一部を示し、無傷抗体の抗原決定可変領域または相補性決定領域を意味する“抗体断片”を包含することを意味する。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直線状抗体、ｓｃＦｖ抗体、ＶＨ、ならびに抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。“Ｆａｂ”（抗原結合断片）は、抗原に結合する抗体の一部であり、鎖間ジスルフィド結合を介して軽鎖に結合している重鎖の可変領域およびＣＨ１を含む。抗体は、ＩｇＧおよびそのサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、およびＩｇＤを含む任意のクラスまたはサブクラスのものであり得る。
用語“可変領域”または“可変ドメイン”は、抗体の抗原への結合に関与する抗体重鎖または軽鎖のドメインを意味する。天然抗体の重鎖および軽鎖（それぞれＶＨおよびＶＬ）の可変ドメインは一般的に、類似の構造を有し、各ドメインは４つの保存的フレームワーク領域（ＦＲ）および３つのＣＤＲを含む（例えば、Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)を参照のこと）。単一のＶＨまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。さらに、特定の抗原を結合する抗体は、該抗原を結合する抗体からのＶＨまたはＶＬドメインを用いて、それぞれ相補的なＶＨまたはＶＬドメインのライブラリーをスクリーニングすることにより単離され得る。例えば、Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)を参照のこと。
“超可変領域”または“ＨＶＲ”と同義である、用語“相補性決定領域”および“ＣＤＲ”は、抗原特異性および／または結合親和性を付与する抗体可変領域内のアミノ酸の非連続配列を意味することが当技術分野において知られている。一般的に、各重鎖可変領域に３つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）および各軽鎖可変領域に３つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）がある。
用語“抗原”および“Ａｇ”は、免疫応答を誘発する分子を意味する。誘発された免疫応答は、抗体産生、特定の免疫適格細胞（immunologically-competent細胞）の活性化、またはその両方を含み得る。タンパク質、糖タンパク質および糖脂質を含む巨大分子は、抗原として役立ち得る。抗原は組換えＤＮＡまたはゲノムＤＮＡに由来し得る。本明細書で企図されるように、抗原は、（ｉ）遺伝子の全長ヌクレオチド配列のみによって、または（ｉｉ）“遺伝子”によってコードされる必要は全くない。抗原を生成または合成することができるか、または抗原を生物学的試料から誘導することができる。そのような生物学的試料は、組織サンプル、腫瘍サンプル、細胞または体液を含み得るが、これらに限定されない。
用語“エピトープ”または“抗原エピトープ”は、抗体またはその断片（例えば、ｓｃＦｖ）などの同種の免疫結合分子、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラエンガルフメント受容体、あるいは他の結合分子、ドメインまたはタンパク質によって特異的に結合される抗原内の任意の分子、構造、アミノ酸配列またはタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は、一般的に、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面基を含み、特定の三次元構造特性、ならびに特定の電荷特性を有し得る。エピトープは、線形エピトープまたは立体構造的エピトープであってよい。
用語“抗腫瘍効果”は、腫瘍体積の減少、腫瘍細胞数の減少、転移数の減少、平均余命の延長、または癌状態と関連する種々の生理学的症状の改善によって明らかにされ得る生物学的効果を意味する。“抗腫瘍効果”は、血液癌または腫瘍形成の予防によっても明らかにされ得る。
“自己免疫疾患”は、自己免疫応答の結果生じる障害を意味する。自己免疫疾患は、自己抗原に対する不適切に過剰は応答の結果である。自己免疫応答は、自己抗体を産生する自己反応性Ｂ細胞、自己反応性Ｔ細胞、またはその両方を含み得る。本明細書で用いる“自己抗体”は、対象によっても産生される自己抗原に結合する、該対象により産生される抗体である。
“自己由来”とは、後で再導入されるのと同じ対象に由来する任意の材料を意味する。
“同種異系”とは、同じ種の異なる対象に由来する移植片を意味する。
本明細書で用いる用語“結合ドメイン”、“結合領域”および“結合部分”は、特異的かつ非共有結合的に結合する、関連する、合体する、認識するまたは標的分子（例えば、ＰｔｄＳｅｒ、ＩｇＧ抗体、ＩｇＥ抗体、ＩｇＡ抗体、ＣＤ１３８、ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ７９ｂ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＢＣＭＡ、ＲＯＲ１、ＭＵＣ－１６、Ｌ１ＣＡＭ、ＣＤ２２、ＣＤ１９、ＥＧＦＲｖｉｉｉ、ＶＥＧＦＲ－２またはＧＤ２）と結合する能力を有する、ペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質などの分子を意味する。結合ドメインは、生物学的分子または他の目的の標的に対する任意の天然の、合成された、半合成されたまたは組換え産生された結合パートナーを含む。ある態様において、結合ドメインは、抗体、またはその機能的結合ドメインもしくは抗原結合部分などの抗原結合ドメインである。例示的な結合ドメインとしては、一本鎖抗体可変領域（例えば、ドメイン抗体、ｓＦｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ）、受容体エクトドメイン（ectodomain）(例えば、ＴＮＦ－α)、リガンド（例えば、サイトカイン、ケモカイン）、または生体分子に結合する特異的能力に対して選択された合成ポリペプチドが挙げられる。
特定の標的に特異的に結合する本発明の結合ドメインを同定するため、ならびにウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、およびＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析などの結合ドメイン親和性を決定するための様々なアッセイが知られている（例えば、Scatchard et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660, 1949；および、米国特許第５，２８３，１７３号、同第５，４６８，６１４号、またはその同等物も参照のこと）。本明細書で用いる“特異的に結合する”は、結合ドメインまたはその融合タンパク質が、１０５Ｍ－１以上の親和性またはＫａ（すなわち１／Ｍの単位の特定の結合相互作用の平衡結合定数）で標的分子へ会合または結合するが、サンプル中の他の分子または成分と有意に会合または結合していないことを意味する。
本明細書で用いる用語“癌”は、異常細胞の急速、かつ制御されない増殖を特徴とする疾患として定義される。異常な細胞は固形腫瘍を形成するか、または血液癌を構成し得る。癌細胞は、局所的に、または血液系およびリンパ系を通って体の他の部分に拡がり得る。種々の癌の例としては、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頚癌、皮膚癌、膵臓癌、結腸直腸癌、腎癌、肝臓癌、脳腫瘍、リンパ腫、白血病、肺癌などが挙げられるが、これらに限定されない。
“疾患”とは、対象が恒常性を維持することができず、かつ疾患が改善されない場合、対象の健康が悪化し続ける、対象の健康状態である。対照的に、対象における“障害”または“望ましくない状態”は、対象が恒常性を維持し得るが、対象の健康状態は、障害または望ましくない状態が存在しない場合よりも好ましくない健康状態である。未処置のままの障害または望ましくない状態は、必ずしも対象の健康状態のさらなる低下をもたらすわけではない。
“病原菌”または“微生物”は、細菌、ウイルス、古細菌、または真菌の任意の種を意味する。
“粒子”とは、細胞の断片または直径が少なくとも１００ｎｍから最大６μｍの小物質を意味し、それは生細胞または生物に由来する。粒子は、ウイルス粒子、小さな鉱物粒子、細胞片、または合成粒子であり得る。
“コードする”とは、定義されたヌクレオチド配列（すなわち、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡおよびｍＲＮＡ）または定義されたアミノ酸配列およびそれから生じる生物学的産物のいずれかを有する、生物学的プロセスにおいて他のポリマーおよび高分子を合成するための鋳型として役立つ、ＤＮＡ、ｃＤＮＡおよびｍＲＮＡ配列などの特定のポリヌクレオチド配列の固有の性質を意味する。
従って、ポリヌクレオチドは、そのポリヌクレオチドに対応するｍＲＮＡの転写および翻訳が細胞または他の生物系においてタンパク質を産生する場合にそのタンパク質をコードする。コード鎖および非コード鎖の両方とも、タンパク質またはポリヌクレオチドの他の産物をコードすると称され得る。
他に特記されない限り、“アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列”は、互いの縮重型であり、同じアミノ酸配列をコードする、全てのヌクレオチド配列を含む。
本明細書で用いる用語“内生”または“天然”とは、宿主または宿主細胞中に通常存在する遺伝子、タンパク質、化合物、分子または活性を意味する。
本明細書で用いる用語“エンガルフメント”は、直径１００ｎｍを超える内生もしくは外生の細胞または粒子が本明細書に記載の食細胞または宿主細胞によって内在化される受容体介在プロセスを意味する。エンガルフメントは、一般的には、以下の複数の工程からなる：（１）標的細胞または粒子上のエンガルフメント促進マーカーもしくは抗原マーカーへの直接的または間接的な（架橋分子を介して）エンガルフメント受容体の結合による標的細胞または粒子の繋留（tethering）；および、（２）標的細胞全体もしくは粒子、またはその一部の内在化または取り込み。特定の態様において、内部移行は、食細胞または宿主細胞の細胞骨格再配列を介して起こり、内部移行標的を含む膜結合区画であるファゴソームを形成し得る。エンガルフメントはファゴソームの成熟をさらに含み、ここで、ファゴソームはますます酸性になり、リソソームと融合して（ファゴリソソームを形成する）、それにより取り込まれた標的は分解される（例えば、“食細胞作用（phagocytosis）”）。あるいは、ファゴソーム－リソソーム融合は、エンガルフメントでは観察されないかもしれない。さらに別の態様において、ファゴソームは、完全な分解の前にその内容物を細胞外環境に吐き戻す（regurgitate）または放出し得る。ある態様において、エンガルフメントは、食細胞作用を意味する。ある態様において、エンガルフメントは、本明細書に記載の宿主細胞の食細胞による標的細胞または粒子の繋留を含むが、内在化は含まない。ある態様において、エンガルフメントは、本明細書に記載の宿主細胞の食細胞による標的細胞または粒子の繋留および標的細胞または粒子の一部の内在化を含む。
本明細書で用いる用語“食細胞作用”は、標的細胞または粒子の繋留、標的細胞または粒子のエンガルフメント、および内在化標的細胞または粒子の分解が起こる、細胞または大きな粒子（≧１００ｎｍ）のエンガルフメントプロセスを意味する。特定の態様において、食細胞作用は、内在化標的細胞または粒子を包含するファゴソームの形成、およびリソソームとのファゴソーム融合によるファゴリソソームの形成を含み、そこでその内容物は分解される。特定の態様において、食細胞作用の間、本明細書に記載の食細胞または宿主細胞上に発現されたＣＥＲが標的細胞または粒子によって発現されたエンガルフメントマーカーに結合した後、食細胞作用シナプスが形成される。アクチンが豊富な食細胞作用カップ（phagocytic cup）が食細胞作用シナプスで生成される。食細胞作用アーム（phagocytic arm）は、細胞骨格の再配列を通して標的細胞または粒子の周りに伸びてくる。そして最終的に、標的細胞または粒子は、モータータンパク質によって生じる力によって食細胞または宿主細胞内に取り込まれる。本明細書で用いる“食細胞作用”は、“エフェロサイトーシス”のプロセスを含み、これは具体的には、非炎症性様式におけるアポトーシス細胞または壊死細胞の食細胞作用を意味する。
本明細書で用いる用語“エンガルフメント促進マーカー”とは、アポトーシス細胞、壊死細胞、ピロトーシスを起こした細胞（pyroptotic cell）、または感染細胞が、それぞれ非アポトーシス細胞、非壊死細胞、非ピロトーシス細胞、腫脹（oncotic）細胞、または未感染細胞と区別するためにその表面に示す部分（例えば、タンパク質、脂質、または多糖）を意味する。エンガルフメント促進マーカーは、アポトーシス細胞もしくは壊死細胞上で表面露出されている細胞内部分、アポトーシス細胞もしくは壊死細胞上でグリコシル化もしくは表面電荷が変化している部分、またはアポトーシス細胞、壊死細胞、ピロトーシスを起こした細胞または腫脹細胞に結合している血清部分であり得る。アポトーシス細胞のエンガルフメント促進マーカーの例には、ホスファチジルセリン（ＰｔｄＳｅｒ）、ＩＣＡＭ－３、酸化低密度リポタンパク質、カルレティキュリン、アネキシンＩ、補体Ｃ１ｑ、およびトロンボスポンジンが含まれる。壊死細胞、腫脹細胞およびピロトーシスを起こした細胞はまた、細胞表面上にＰｔｄＳｅｒエンガルフメント促進マーカーを露出させる。エンガルフメント受容体は、エンガルフメント促進マーカーに結合する中間体として可溶性架橋分子を用いて、直接的または間接的に標的細胞（例えば、損傷を受けた細胞、感染細胞、アポトーシス細胞、壊死細胞、ピロトーシスを起こした細胞または腫脹細胞）上のエンガルフメント促進マーカーを検出（または結合）し得る。
“トール様受容体”とは、病原体に保存されているが宿主分子とは区別可能な分子（例えば、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ））ならびに壊死細胞または死にかけている細胞から放出された内因性分子（危険関連分子パターン（ＤＡＭＰ））を認識するパターン認識受容体（ＰＲＲ）である保存免疫受容体ファミリーのメンバーを意味する。ＴＬＲ ＰＡＭＰリガンドの例としては、細菌リポタンパク質、細菌ペプチドグリカン、二本鎖ＲＮＡ、リポ多糖、細菌鞭毛、一本鎖ＲＮＡおよびＣｐＧ ＤＮＡが挙げられる。ＤＡＭＰには、熱ショックタンパク質および細胞外マトリックスからのタンパク質断片が含まれる。ＴＬＲは、ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）を含む細胞外ドメイン、ＬＲＲと膜貫通ドメインの間にある酸性アミノ酸を含む膜近傍ドメイン、およびＴｏｌｌ／ＩＬ－１受容体（ＴＩＲ）ドメインと称される保存領域を含む細胞質シグナル伝達ドメインを特徴とするタイプＩ膜貫通タンパク質である。ＴＬＲは、樹状細胞、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、適応免疫細胞（Ｔ細胞およびＢ細胞）を含む白血球ならびに非免疫細胞（上皮細胞、内皮細胞および線維芽細胞）の膜上に発現される。ＴＬＲによるリガンド結合は、ＡＰ－１、ＮＦ－κＢ、インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）などの転写因子の活性化につながるシグナル伝達カスケードを開始し、その結果、インターフェロン、炎症誘発性サイトカインおよび適応免疫反応を誘導するエフェクターサイトカインを産生する。ＴＬＲは、哺乳動物、例えば、ヒト、霊長動物、ウシ、ウマ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモットまたはブタに由来し得る。ＴＬＲは、ヒトで識別された１０個のＴＬＲ（ＴＬＲ１－ＴＬＲ１０）のいずれか１つ、またはマウスで識別された１３個のＴＬＲ（ＴＬＲ１－１３）のいずれか１つである。ＴＬＲは、エンドソームＴＬＲであるＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８およびＴＬＲ９を除いて、原形質膜上にある。
“ＴＬＲシグナル伝達ドメイン”は、ＴＩＲドメインまたはその機能的断片を含むＴＬＲ分子の細胞質ドメインを意味する。特定の態様において、ＴＬＲシグナリングドメインは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８またはＴＬＲ９のいずれか１つのシグナリングドメインまたはその機能的断片であり得る。
“エンガルフメントシグナル伝達ドメイン”は、宿主細胞によって発現されるＣＥＲの細胞外ドメインによって標的化された標的分子（例えば、エンガルフメント促進マーカーまたは抗原マーカー）の結合時に、宿主細胞において１以上のシグナル伝達経路を活性化し、結果として、具体的な態様では、宿主細胞の細胞骨格再配列、ならびにマーカーもしくは抗原に関連する標的細胞、病原菌または粒子の内在化を含むエンガルフメントが起こる、細胞内エフェクタードメインを意味する。特定の態様において、エンガルフメントシグナル伝達ドメインは１以上のシグナル伝達経路を活性化し、結果として標的細胞、病原菌または粒子の食細胞作用をもたらす。特定の態様において、エンガルフメントシグナル伝達ドメインは、ＴＬＲシグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。他の特定の態様において、エンガルフメントシグナル伝達ドメインは、第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよび第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。エンガルフメントシグナル伝達ドメインは、エンガルフメントシグナル伝達分子またはその機能的断片の全長細胞内成分を含み得る。
“炎症誘発性エンガルフメントシグナル伝達ドメイン”は、（ｉ）標的細胞、病原菌または粒子のエンガルフメントを刺激し、（ｉｉ）一般的に、化学療法、抗体ベースの免疫療法、または例えばＴ細胞標的化療法などの細胞療法を誘導、増強または補完する、（ａ）炎症性サイトカイン、例えばＴＮＦα、ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＩＬ－１２およびＩＬ－２３などの宿主細胞分泌、（ｂ）炎症性ケモカイン、例えばＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＸＣＬ９およびＣＸＣＬ１０などの宿主細胞分泌、（ｃ）細胞表面共刺激マーカー、例えばＣＤ８０、ＣＤ８６、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ４０、ＨＶＥＭおよび４－１ＢＢＬなどの上方制御、ならびに（ｄ）１以上のシグナル伝達カスケード、例えばＮＦ－κＢなどの活性化、の１以上を刺激する、内生受容体またはシグナル伝達分子に由来する、エフェクタードメインを意味する。特定の態様において、炎症誘発性エンガルフメントシグナル伝達の刺激は、局所組織環境における炎症を促進する。炎症誘発性エンガルフメントシグナル伝達ドメインはまた、“免疫原性”エンガルフメントシグナル伝達ドメインまたは“炎症性”エンガルフメントシグナル伝達ドメインとも称され得る。
本明細書で用いる“エフェクタードメイン”は、適切なシグナルを受けたときにエフェクタードメインを発現する細胞において直接的または間接的に生物学的または生理学的応答を促進し得る融合タンパク質または受容体の細胞内部分である。特定の態様において、エフェクタードメインは、結合したときにシグナルを受け取るタンパク質またはタンパク質複合体の一部であるか、あるいはそれが標的分子に直接結合してエフェクタードメインからのシグナルを誘発する。例えば、標的分子へのＣＥＲの結合に応答して、エフェクタードメインは、宿主細胞の内部にシグナルを伝達して、エフェクター機能、例えば、エンガルフメント、ファゴリソソーム成熟、炎症性サイトカインおよび／またはケモカインの分泌を誘導し得る。エフェクタードメインは、それが１以上のシグナル伝達ドメインまたはモチーフを含む場合、細胞応答を直接促進し得る。他の態様において、エフェクタードメインは、細胞応答を直接促進する１以上の他のタンパク質と会合することによって細胞応答を間接的に促進し得る。
本明細書で用いる“異種”または“非内生（non-endogenous）”または“外生（exogenous）”は、宿主細胞または対象に固有のものではない遺伝子、タンパク質、化合物、分子または活性を意味するか、あるいは対象または宿主細胞に固有の遺伝子、タンパク質、化合物、分子または活性であるが、構造、活性またはその両方が天然分子と変異分子との間で異なるように改変または変異されているものを意味する。特定の態様において、異種、非内生または外生分子（例えば、受容体、リガンド）は、宿主細胞または対象にとって内生ではなくともよいが、代わりにかかる分子をコードする核酸が、接合、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーションなどによって宿主細胞に添加され得て、ここで、添加された核酸分子は、宿主細胞ゲノムに組み込まれてもよいか、または染色体外遺伝物質として（例えば、プラスミドまたは他の自己複製ベクターとして）存在してもよい。用語“相同”または“相同体”は、宿主細胞、種または株に見出されるまたはそれらに由来する分子または活性を意味する。例えば、異種もしくは外生分子または該分子をコードする遺伝子は、それぞれ天然の宿主もしくは宿主細胞分子または該分子をコードする遺伝子と相同であり得るが、改変された構造、配列、発現レベル、またはそれらの組み合わせを有し得る。非内生分子は、同じ種、異なる種またはそれらの組み合わせに由来し得る。
“接合アミノ酸”または“接合アミノ酸残基”とは、ポリペプチドの２つの隣接モチーフ、領域またはドメイン間の１つまたは複数（例えば、約２から２０）のアミノ酸残基を意味する。接合アミノ酸は、キメラタンパク質の構築物設計から生じ得る（例えば、融合タンパク質をコードする核酸分子の構築中に制限酵素部位の使用から生じるアミノ酸残基であり得る）。
“核酸分子”および“ポリヌクレオチド”は、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡおよび合成ＤＮＡを含む、ＲＮＡまたはＤＮＡの形態であり得る。核酸分子は、二本鎖または一本鎖であり得て、そして一本鎖である場合、コード鎖または非コード（アンチセンス鎖）であり得る。コーディング分子は、当技術分野で公知のコーディング配列と同一のコーディング配列を有し得るか、あるいは遺伝コードの冗長性(redundancy)もしくは縮重(degeneracy)の結果として、またはスプライシングにより、同じポリペプチドをコードし得る、異なるコード配列を有し得る。
用語“過剰発現された”または抗原の“過剰発現”は、細胞内での異常に高いレベルの抗原発現を意味する。過剰発現された抗原または抗原の過剰発現は、血液癌および対象の特定の組織または臓器内に固形腫瘍を形成している細胞におけるような疾患状態に関連することが多い。腫瘍抗原の過剰発現を特徴とする固形腫瘍または血液癌は、当技術分野において公知の標準的なアッセイ法によって決定することができる。
本明細書で用いる用語“ペプチド”、“ポリペプチド”および“タンパク質”は互換的に用いられ、ペプチド結合により共有結合されたアミノ酸残基を含む化合物を意味する。タンパク質またはペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含まなければならず、タンパク質配列またはペプチド配列を含み得るアミノ酸の最大数に制限はない。ポリペプチドは、ペプチド結合によって互いに結合した２つ以上のアミノ酸を含むペプチドまたはタンパク質を含む。本明細書で用いる用語は、当技術分野で通常、例えばペプチド、オリゴペプチドおよびオリゴマーとも称される短鎖と、当技術分野で一般にタンパク質（多くの種類がある）と称される長鎖との両方を意味する。“ポリペプチド”には、例えば、生物学的に活性な断片、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドの変異体、修飾ポリペプチド、誘導体、類縁体、融合タンパク質などが含まれる。ポリペプチドは、天然ペプチド、組換えペプチド、合成ペプチド、またはそれらの組み合わせを含む。
本明細書で用いる用語“成熟ポリペプチド”または“成熟タンパク質”は、細胞膜中または特定の細胞オルガネラ（例えば、小胞体、ゴルジ体またはエンドソーム）中に分泌または局在するタンパク質またはポリペプチドを意味し、Ｎ末端シグナルペプチドを含まない。
“シグナル配列”、“リーダー配列”、“リーダーペプチド”、“局在化シグナル”または“局在化配列”とも称される“シグナルペプチド”は、分泌経路に向かう予定の新しく合成されたタンパク質のＮ末端に存在する短いペプチド（通常、１５～３０アミノ酸長）である。シグナルペプチドは、一般的に、Ｎ末端に親水性の正荷電アミノ酸の短い配列、５～１５残基の中央の疎水性ドメイン、およびシグナルペプチダーゼのための切断部位を有するＣ末端領域を含む。真核生物では、シグナルペプチドは、新たに合成されたタンパク質の小胞体への移行を促し、そこでシグナルペプチダーゼによって切断されて成熟タンパク質を生成し、それがその後適切な目的地へと進む。
２以上の核酸またはアミノ酸配列間の“同一性パーセント”は、その配列によって共有される同一位置の数の関数であり（すなわち、同一性パーセント（％）＝同一位置の数／位置の総数×１００）、２以上の配列のアライメントを最適化するために導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さも考慮に入れる。配列の比較および２つ以上の配列間の同一性パーセントの決定は、それらのデフォルトパラメーターでＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムなどの数学的アルゴリズムを用いて達成することができる（例えば、Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403, 1990；BLASTN（www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST）も参照のこと）。
“保存的置換”は、当技術分野において、類似の特性を有する別のアミノ酸に対するあるアミノ酸の置換として認識されている。保存的置換の例は、当技術分野において周知である（例えば、ＷＯ９７／０９４３３、１０頁、１９９７年３月１３日公開；Lehninger, Biochemistry, Second Edition；Worth Publishers, Inc. NY:NY (1975), pp.71-77；Lewin, Genes IV, Oxford University Press, NY and Cell Press, Cambridge, MA (1990), p.8参照）。
用語“キメラ”は、内生ではなく、天然には共に結合または連結していることが通常は見られない、共に結合または連結された配列を含む、核酸分子またはタンパク質を意味する。例えば、キメラ核酸分子は、異なる供給源に由来する調節配列およびコーディング配列、または同じ供給源に由来するが天然に見出だされるものとは異なる様式で配置された調節配列およびコーディング配列を含み得る。
本明細書で用いる用語“プロモーター”は、ポリヌクレオチド配列の特異的転写を開始するのに必要とされる、細胞の合成機構によって認識されるＤＮＡ配列、または導入された合成機構として定義される。
本明細書で用いる用語“プロモーター／調節配列”は、プロモーター／調節配列に作動可能に連結された遺伝子産物の発現に必要とされる核酸配列を意味する。ある例において、この配列はコアプロモーター配列であり得て、他の例において、この配列は、エンハンサー配列および遺伝子産物の発現に必要とされる他の制御要素を含み得る。プロモーター／調節配列は、例えば、組織特異的に遺伝子産物を発現するものであり得る。
“構成的”プロモーターは、遺伝子産物をコードするかまたは特定するポリヌクレオチドと作動可能に連結されたときに、細胞のほとんどまたはすべての生理的条件下で遺伝子産物を細胞内で産生させるヌクレオチド配列である。
“誘導性”プロモーターは、遺伝子産物をコードするかまたは特定するポリヌクレオチドと作動可能に連結されたときに、プロモーターに対応するインデューサーが実質的に細胞内に存在する場合にのみ細胞内で遺伝子産物を産生させるヌクレオチド配列である。
“組織特異的”プロモーターは、遺伝子によってコードされるかまたは特定されるポリヌクレオチドと作動可能に連結されたときに、実質的に細胞がプロモーターに対応する組織タイプの細胞である場合にのみ細胞内で遺伝子産物を産生させるヌクレオチド配列である。
用語“対象”、“患者”および“個体”は、本明細書中、互換的に用いられ、免疫応答を誘発することができる生物（例えば、哺乳動物）を含むことを意図している。対象の例には、ヒト、霊長動物、ウシ、ウマ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタおよびそれらのトランスジェニック種が含まれる。
用語“Ｔ細胞”は、Ｔ細胞系統の細胞を意味する。“Ｔ細胞系統の細胞”とは、他のリンパ系細胞および赤血球もしくは骨髄系列の細胞から該細胞を区別する、Ｔ細胞またはその前駆細胞（precursorもしくはprogenitor）の少なくとも１つの表現型の特徴を示す細胞を意味する。そのような表現型の特徴は、Ｔ細胞に特異的な１以上のタンパク質（例えば、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋）の発現、またはＴ細胞に特異的な生理的、形態学的、機能的もしくは免疫学的特徴を含み得る。例えば、Ｔ細胞系統の細胞は、Ｔ細胞系統に関与する前駆細胞（precursorもしくはprogenitor cell）；ＣＤ２５＋未成熟および不活性化Ｔ細胞；ＣＤ４またはＣＤ８系統の関与を受けた細胞；ＣＤ４＋ＣＤ８＋二重陽性である胸腺前駆細胞；ＣＤ４＋またはＣＤ８＋の単一陽性細胞；ＴＣＲαβまたはＴＣＲγκ；または、成熟および機能的もしくは活性化Ｔ細胞であり得る。用語“Ｔ細胞”には、ナイーブＴ細胞（ＣＤ４５ ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ４５ＲＯ－）、セントラルメモリーＴ細胞（ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ８＋）、エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＣＲ７－、ＣＤ６２Ｌ－、ＣＤ２７－）、粘膜関連インバリアントＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、および組織常在性Ｔ細胞が包含される。
用語“Ｂ細胞”は、Ｂ細胞系統の細胞を意味する。“Ｔ細胞系統の細胞”とは、他のリンパ系細胞および赤血球もしくは骨髄系列の細胞から該細胞を区別する、Ｂ細胞またはその前駆細胞（precursorもしくはprogenitor）の少なくとも１つの表現型の特徴を示す細胞を意味する。そのような表現型の特徴は、Ｂ細胞に特異的な１以上のタンパク質（例えば、ＣＤ１９＋、ＣＤ７２＋、ＣＤ２４＋、ＣＤ２０＋）の発現、またはＢ細胞に特異的な生理的、形態学的、機能的もしくは免疫学的特徴を含み得る。例えば、Ｂ細胞系統の細胞は、Ｂ細胞系統に関与する前駆細胞（precursorもしくはprogenitor cell）（例えば、プレプロ－Ｂ細胞、プロ－Ｂ細胞、およびプロ－Ｂ細胞）；未成熟および不活化Ｂ細胞または成熟および機能的もしくは活性化Ｂ細胞であり得る。従って、“Ｂ細胞”には、ナイーブＢ細胞、血漿細胞、制御性Ｂ細胞、辺縁帯Ｂ細胞、濾胞Ｂ細胞、リンパ形質細胞様細胞、プラズマブラスト細胞、およびメモリーＢ細胞（例えば、ＣＤ２７＋、ＩｇＤ－）が包含される。
本発明のキメラタンパク質またはキメラタンパク質を発現する細胞（例えば、ＣＥＲまたはＣＥＲを発現する細胞）の“治療的有効量”または“有効量”は、処置されている疾患、障害または望ましくない病状の１以上の症状の改善をもたらすのに十分なタンパク質または細胞の量を意味する。単独で投与される、個々の活性成分または単一の活性成分を発現する細胞について言及するとき、治療的有効量は、その成分またはその成分を単独で発現する細胞の効果を意味する。組合せについて言及するとき、治療的有効量は、連続的に投与されるか同時に投与されるかにかかわらず、活性成分の組み合わせた量または治療的効果をもたらす活性成分を発現する細胞と組み合わせた補助活性成分の組み合わせた量を意味する。
“処置する”または“処置”または“改善する”は、対象の疾患、障害または望ましくない病状の医学的管理を意味する。一般的に、本発明のＣＥＲを発現する宿主細胞を含む適切な用量または処置レジメンは、治療上または予防上の利益をもたらすのに十分な量で投与される。治療上または予防上／阻止上の利益には、改善された臨床成果；疾患、障害または望ましくない病状に関連する症状の緩和または軽減；症状の発生の減少；生活の質の向上；より長期の無疾患状態；疾患、障害または望ましくない病状の程度の低下；疾患状態の安定化；疾患の進行の遅延；寛解；生存；生存期間の延長；または、それらの何れかの組合せが含まれる。
本明細書で用いる語句“転写制御下”または“作動可能に連結された”は、プロモーターが、ＲＮＡポリメラーゼによる転写の開始およびポリヌクレオチドの発現を制御するために、該ポリヌクレオチドに対して正しい位置および配向にあることを意味する。
“ベクター”は、別の核酸を輸送することができる核酸分子である。ベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス、またはファージであり得る。この用語は、細胞への核酸の移動を促進する非プラスミドおよび非ウイルス化合物を含むと解釈されるべきである。“発現ベクター”は、それが適切な環境に存在するとき、ベクターによって運ばれる１つまたは複数の遺伝子によってコードされるタンパク質の発現を指示することができるベクターである。
特定の態様において、ベクターはウイルスベクターである。ウイルスベクターの例としては、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ガンマレトロウイルスベクター、およびレンチウイルスベクターが挙げられるが、これらに限定されない。“レトロウイルス”は、ＲＮＡゲノムを有するウイルスである。“ガンマレトロウイルス”は、レトロウイルス科ファミリーを意味する。ガンマレトロウイルスの例には、マウス幹細胞ウイルス、マウス白血病ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ肉腫ウイルス、およびトリ細網内皮症ウイルス（reticuloendotheliosis virus）が含まれる。“レンチウイルス”とは、分裂細胞および非分裂細胞に感染することができるレトロウイルス属を意味する。レンチウイルスの例には、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス、ＨＩＶ １型およびＨＩＶ ２型を含む）、ウマ感染性貧血ウイルス、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）が含まれるが、これらに限定されない。
他の態様において、ベクターは非ウイルスベクターである。非ウイルスベクターの例としては、脂質ベースのＤＮＡベクター、修飾ｍＲＮＡ（ｍｏｄＲＮＡ）、自己増幅ｍＲＮＡ、閉鎖末端直鎖状二本鎖（ＣＥＬｉＤ）ＤＮＡ、およびトランスポゾン介在遺伝子導入（PiggyBac、Sleeping Beauty）が挙げられる。非ウイルス送達系が用いられるとき、送達ビークルはリポソームであり得る。脂質製剤は、インビトロ、エクスビボ、またはインビボで核酸を宿主細胞に導入するために用いられ得る。核酸は、リポソームの内部に封入されるか、リポソームの脂質二重層内に散在しているか、リポソームと核酸の両方と会合している連結分子を介してリポソームに付着しているか、ミセルを含むかもしくはそれと複合体を形成しているか、そうでなければ脂質と結合していてよい。
本明細書を通してさらなる定義が提供される。
キメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）
キメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）は本明細書に記載されている。特定の態様において、ＣＥＲは、膜貫通ドメインによって連結されている、細胞外ドメインおよびＴＬＲシグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む、キメラの一本鎖タンパク質である。細胞外ドメインは、細胞外結合ドメイン、および場合により、細胞外スペーサードメインを含む。宿主細胞において発現されるとき、ＣＥＲは、標的細胞、病原菌、粒子または他の物質上に存在するかまたはそれらにより発現される選択されたエンガルフメント促進マーカーまたは抗原性マーカーに特異的な改変された宿主細胞（宿主細胞は、エンガルフメント表現型に“切り替えられる”）にエンガルフメント表現型を付与する。特定のＣＥＲの態様において、キメラタンパク質は、アミノ末端からカルボキシ末端の順に、標的分子に特異的な結合ドメインを有する細胞外ドメインおよび要すれば細胞外スペーサードメイン；膜貫通ドメイン；ならびに、ＴＬＲシグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。さらなる態様において、エンガルフメントシグナル伝達ドメインは、第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよび第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（例えば、図１Ａおよび図１Ｂ参照）。
本明細書に記載のＣＥＲの構成部分は、所望のエンガルフメント表現型を提供するように選択および配置され得る。例えば、特定の態様では、細胞外ドメインは、（ｉ）アポトーシス細胞、死細胞、死にそうな細胞、損傷細胞または壊死細胞に関連するエンガルフメント促進マーカー；あるいは、（ｉｉ）感染症、疾患、障害または他の望ましくない病状に関連する、外来物（例えば、病原菌）、感染Ｔ細胞または異常なＴ細胞によって提示される抗原マーカー、に特異的な結合ドメインを含み得る。
エンガルフメントシグナル伝達ドメインは、標的細胞のエンガルフメントを駆動する１以上のエフェクタードメイン（“シグナル伝達”ドメインとも言う）を含み得る。エンガルフメントシグナル伝達ドメインによるシグナル伝達は、細胞外ドメインの、標的化されたエンガルフメント促進または抗原性マーカーへの結合によって引き起こされる。特定の態様において、エンガルフメントシグナル伝達ドメインは、ＴＬＲシグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。特定の態様において、ＴＬＲシグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ３シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ５シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ６シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ７シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ８シグナル伝達ドメインまたはＴＬＲ９シグナル伝達ドメインを含む。他の態様において、エンガルフメントシグナル伝達ドメインは、ＴＬＲシグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよび第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。特定の態様において、第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＲＡＦ６、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲ２Ａ、ＦｃγＲ２Ｂ２、ＦｃγＲ２Ｃ、ＦｃγＲ３Ａ、ＦｃεＲ１、ＦｃαＲ１、ＢＡＦＦＲ、ＮＦＡＭ１、Ｄａｐ１２、ＭＥＲＴＫまたはＣＤ７９ｂシグナル伝達ドメインを含む。本明細書に記載のＣＥＲは、種々の治療的状況（例えば、アポトーシス細胞、死細胞、死にかけの細胞、損傷細胞、感染細胞または壊死細胞の排除、感染症の原因となる病原菌の排除、および疾患、障害または望ましくない病状に関連する異常細胞の排除）における適用のために設計され得て、所望の治療結果を補完するエンガルフメントシグナル伝達（例えば、炎症誘発性エンガルフメントシグナル伝達）を提供する。
図２Ａおよび２Ｂは、本発明のＣＥＲの態様で改変されたリンパ球と天然リンパ球との機能的比較を提供する。図２Ａは内生リンパ球を示し、該図に示されるように、天然リンパ球はエンガルフメント表現型を示さない。しかしながら、図２Ｂに示されるように、本明細書に記載のＣＥＲを発現するように改変されたリンパ球は、標的化された癌細胞に特異的なエンガルフメント表現型を示し、エンガルフメント（例えば、食細胞作用）および標的化癌細胞の排除をもたらす。特定の態様において、本明細書に記載のＣＥＲに含まれるエンガルフメントシグナル伝達ドメインは、炎症誘発性エンガルフメントシグナル伝達を駆動し得る。
本発明の融合タンパク質の構成部分は、本明細書にさらに記載されている。
Ｉ．細胞外ドメイン
本明細書に記載の通り、ＣＥＲは、標的分子に特異的な細胞外ドメインを含む。特定の態様において、細胞外ドメインは、標的化エンガルフメント促進マーカーまたは抗原に特異的に結合する細胞外結合ドメインを含む。結合ドメインによる標的分子の結合は、標的分子（例えば、受容体またはリガンド）と別の分子との間の相互作用を阻止し、例えば、標的分子の特定の機能（例えば、シグナル伝達）を妨害するか、低減するか、または排除し得る。ある態様において、標的分子の結合は、特定の生物学的経路を誘導し得るか、または標的分子もしくは標的分子を発現する細胞を排除するために同定し得る。
結合ドメインは、目的の標的分子に特異的に結合する任意のポリペプチドまたはペプチドであり得る。結合ドメインの供給源には、受容体結合ドメイン、リガンド結合ドメイン、および抗体または抗原結合部分、例えばヒト、げっ歯動物、鳥類またはヒツジを含む様々な種由来の抗体可変領域（それらは、抗体、ｓＦｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦｖベースのグラバボディ（grababody）、または可溶性ＶＨドメインもしくはドメイン抗体であり得る）などが含まれる。結合ドメインのさらなる供給源には、ラクダ科動物（ラクダ、ヒトコブラクダまたはラマ由来のもの；Ghahroudi et al., FEBS Lett. 414:521, 1997; Vincke et al., J. Biol. Chem. 284:3273, 2009; Hamers-Casterman et al., Nature 363:446, 1993 およびNguyen et al., J. Mol. Biol. 275:413, 1998）、コモリザメ（Roux et al., Proc. Nat’l. Acad. Sci. (USA) 95:11804, 1998）、スポッティドラットフィッシュ（Nguyen et al., Immunogen. 54:39, 2002）またはヤツメウナギ（Herrin et al., Proc. Nat’l. Acad. Sci. (USA) 105:2040, 2008 およびAlder et al. Nat. Immunol. 9:319, 2008）などの他の種由来の抗体の可変領域が含まれる。これらの抗体は、重鎖可変領域のみを用いて抗原結合領域を形成することができる。すなわち、これらの機能的抗体は、重鎖のみのホモ二量体である（“重鎖抗体”と称される）（Jespers et al., Nat. Biotechnol. 22:1161, 2004; Cortez-Retamozo et al., Cancer Res. 64:2853, 2004; Baral et al., Nature Med. 12:580, 2006；および、Barthelemy et al., J. Biol. Chem. 283:3639, 2008）。
ある態様において、細胞外ドメインは、エンガルフメント促進マーカーに結合する。かかる特定の態様において、細胞外ドメインによって標的化されるエンガルフメント促進マーカーは、ホスファチジルセリン（ＰｔｄＳｅｒ）、ＩＣＡＭ－３、酸化低密度リポタンパク質、カルレティキュリン、アネキシンＩ、補体Ｃ１ｑ、またはトロンボスポンジンである。さらなる態様において、エンガルフメント促進マーカーに結合する細胞外ドメインは、内生エンガルフメント受容体またはエンガルフメント受容体のための可溶性架橋分子（例えば、ＧＡＳ６、プロテインＳ、ＭＦＧ－Ｅ８）に由来する。ある態様において、細胞外部分全体（膜貫通分子の場合）、架橋分子全体またはエンガルフメント受容体もしくは架橋分子の切断部分が用いられる。ただし、該切断部分が、エンガルフメント促進マーカーへの十分な結合活性を保持する（すなわち、機能的変異体である）という条件がある。さらなる態様において、細胞外ドメインに用いられるエンガルフメント受容体または架橋分子の細胞外部分は、細胞外部分全体（膜貫通分子の場合）、架橋分子全体またはエンガルフメント受容体もしくは架橋分子の細胞外部分の変異体であり、ただし、該変異体は、エンガルフメント促進マーカーへの十分な結合活性を保持する（すなわち、機能的変異体である）。
ある態様において、細胞外ドメインは、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン１（Ｔｉｍ１）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン４（Ｔｉｍ４）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン３（Ｔｉｍ３）、スタビリン－２、ＲＡＧＥ、またはＦｃ受容体（ＦｃＲ）細胞外ドメインを含む。特定の態様において、ＦｃＲ細胞外ドメインは、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲ２Ａ、ＦｃγＲ２Ｂ２、ＦｃγＲ２Ｃ、ＦｃγＲ３Ａ、ＦｃεＲ１またはＦｃαＲ１由来の結合ドメインを含み得る。さらなる態様において、細胞外ドメインは、Ｔｉｍ１、Ｔｉｍ４、Ｔｉｍ３、スタビリン－２、糖化最終産物受容体（ＲＡＧＥ）、脳特異的血管新生阻害因子１（ＢＡＩ１）、乳脂肪小球ＥＧＦ因子８タンパク質（Milk Fat Globule-EGF factor 8, ＭＦＧ－Ｅ８）（例えば、ＰｔｄＳｅｒへの高親和性結合を媒介するＦＡ５８Ｃ２ドメイン）、増殖停止特異的６（ＧＡＳ６）、プロテインＳ、プロテインＣ、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、β ２－糖タンパク質Ｉ、α５β３インテグリンおよび他のインテグリン、ＣＲ３補体受容体、ＣＲ４補体受容体、ＣＤ１４、ＣＤ９３、アネキシンＶ、ホスファチジルセリン受容体（ＰＳｒ）、プロトロンビン、またはスカベンジャー受容体Ｂ（ＳＲＢ）（例えば、ＳＲＢ１（ＣＤ３６））、スカベンジャー受容体Ｃ（ＳＲＣ）（例えば、ＬＯＸ－１、ＳＲＣＬ）、スカベンジャー受容体Ｄ（ＳＲＤ）（例えば、ＣＤ６８、マクロシアニン）などのスカベンジャー受容体、ならびにＰＳＯＸ由来のＰｔｄＳｅｒ結合ドメインを含み得る。
ある態様において、細胞外ドメインは、配列番号１のアミノ酸配列または配列番号１のアミノ酸１６－２９２を含むＦｃγＲＩ結合ドメイン、配列番号２のアミノ酸配列または配列番号２のアミノ酸２１－２９０を含むＴＩＭ１結合ドメイン、配列番号３のアミノ酸配列または配列番号３のアミノ酸２５－３１４を含むＴＩＭ４結合ドメイン、配列番号
４のアミノ酸配列または配列番号４のアミノ酸２２－２０２を含むＴＩＭ３結合ドメイン、配列番号５のアミノ酸配列を含むＦＡ５８Ｃ２結合ドメイン、配列番号６のアミノ酸配列または配列番号６アミノ酸３１－９４を含むＧＡＳ６結合ドメイン、配列番号８のアミノ酸配列を含むＢＡＩ１結合ドメイン、あるいは配列番号７のアミノ酸配列または配列番合７のアミノ酸２５－８７を含むプロテインＳ結合ドメインと、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％同一である配列を含むか、または該配列である。任意の他の態様において、細胞外ドメインは、配列番号９のＦｃγＲＩ結合ドメインをコードするポリヌクレオチド、配列番号１０のＴＩＭ１結合ドメインをコードするポリヌクレオチド、配列番号１１のＴＩＭ４結合ドメインをコードするポリヌクレオチド、配列番号１２のＴＩＭ３結合ドメインをコードするポリヌクレオチド、配列番号１３のＦＡ５８Ｃ２結合ドメインをコードするポリヌクレオチド、配列番号１４のＧＡＳ６結合ドメインをコードするポリヌクレオチド、配列番号１２０のＢＡＩ１結合ドメインをコードするポリヌクレオチド、配列番号１５のプロテインＳ結合ドメインをコードするポリヌクレオチド配列と、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％同一である配列を含むか、または該配列であるポリヌクレオチド配列によってコードされている。
他の態様において、細胞外ドメインは、以下のうちの少なくとも１つに由来する：ＩＣＡＭ３に結合するＣＤ１４；酸化ＬＤＬに結合するスカベンジャー受容体細胞外ドメイン；改変糖類（altered sugar）に結合するレクチン；トロンボスポンジンに結合するＣＤ３６；または、カルレティキュリンに結合するＬＲＰ１／ＣＤ９１もしくはレクチン部分。
さらに他の態様において、細胞外ドメインは、目的の標的分子に特異的なＶＨおよびＶＬ領域を含む一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）などの、抗体またはその抗原結合断片を含む。特定の態様において、抗体は、キメラ抗体、ヒト抗体またはヒト化抗体である。さらなる態様において、ＶＨおよびＶＬ領域は、ヒトまたはヒト化抗体由来である。特定の態様において、細胞外ドメインは、エンガルフメント促進マーカーに特異的な抗体またはその抗原結合部分である。ホスファチジルセリンに特異的な抗体は、当技術分野で公知である（米国特許第７，２４７，３０３号；Khogeer et al., 2015, Lupus 24:186-90; Gerber et al., 2015, Am. J. Nucl. Med. Mol. Imaging, 5:493-503を参照こと。これらの各々は、その内容全体が引用により本明細書中に包含される）。特定の態様において、目的の標的分子は、腫瘍抗原であり、例えばＣＤ１３８、ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ７２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＢＣＭＡ、ＲＯＲ１、ＭＵＣ－１６、Ｌ１ＣＡＭ、ＣＤ２２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ３０、ＣＡ１２５、ＣＤ５６、ｃ－Ｍｅｔ、ＥＧＦＲ、ＧＤ－３、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、ＭＵＣ－１、ＨＥＲ２、葉酸受容体α、ＣＤ９７、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ４４ｖ６、ＷＴ１、ＶＥＧＦ－α、ＶＥＧＦＲ１、ＩＬ－１３Ｒα１、ＩＬ－１３Ｒα２、ＩＬ－１１Ｒα、ＰＳＡ、ＦｃＲＨ５、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＴＡＧ－７２、ＣＥＡ、エフリンＡ２、エフリンＢ２、ルイスＡ抗原、ルイスＹ抗原、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＲＡＧＥ－１、ｆｏｌａｔｅ受容体β、ＥＧＦＲｖｉｉｉ、ＶＥＧＦＲ－２、ＬＧＲ５、ＳＳＸ２、ＡＫＡＰ－４、ＦＬＴ３、フコシルＧＭ１、ＧＭ３、ｏ－アセチル－ＧＤ２、およびＧＤ２であり、例示的なＶＨおよびＶＬ領域には、それぞれ、抗ＣＤ１３８、－ＣＤ３８、－ＣＤ３３、－ＣＤ１２３、－ＣＤ７２、－ＣＤ７９ａ、－ＣＤ７９ｂ、－メソテリン、－ＰＳＭＡ、－ＢＣＭＡ、－ＲＯＲ１、－ＭＵＣ－１６、－Ｌ１ＣＡＭ、－ＣＤ２２、－ＣＤ１９、－ＣＤ２０、－ＣＤ２３、－ＣＤ２４、－ＣＤ３７、－ＣＤ３０、－ＣＡ１２５、－ＣＤ５６、－ｃ－Ｍｅｔ、－ＥＧＦＲ、－ＧＤ－３、－ＨＰＶ Ｅ６、－ＨＰＶ Ｅ７、－ＭＵＣ－１、－ＨＥＲ２、－葉酸受容体α、－ＣＤ９７、－ＣＤ１７１、－ＣＤ１７９ａ、－ＣＤ４４ｖ６、－ＷＴ１、－ＶＥＧＦ－α、－ＶＥＧＦＲ１、－ＩＬ－１３Ｒα１、－ＩＬ－１３Ｒα２、－ＩＬ－１１Ｒα、－ＰＳＡ、－ＦｃＲＨ５、－ＮＫＧ２Ｄリガンド、－ＮＹ－ＥＳＯ－１、－ＴＡＧ－７２、－ＣＥＡ、－エフリンＡ２、－エフリンＢ２、－ルイスＡ抗原、－ルイスＹ抗原、－ＭＡＧＥ、－ＭＡＧＥ－Ａ１、－ＲＡＧＥ－１、－葉酸受容体β、－ＥＧＦＲｖｉｉｉ、－ＶＥＧＦＲ－２、－ＬＧＲ５、－ＳＳＸ２、－ＡＫＡＰ－４、－ＦＬＴ３、－フコシルＧＭ１、－ＧＭ３、－ｏ－アセチル－ＧＤ２、および－ＧＤ２特異的モノクローナル抗体のセグメントが含まれる。
さらなる態様において、細胞外ドメインは、目的の標的に特異的なＦａｂを含む。かかる態様において、目的の標的には、ＣＤ１３８、ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ７２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＢＣＭＡ、ＲＯＲ１、ＭＵＣ－１６、Ｌ１ＣＡＭ、ＣＤ２２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ３０、ＣＡ１２５、ＣＤ５６、ｃ－Ｍｅｔ、ＥＧＦＲ、ＧＤ－３、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、ＭＵＣ－１、ＨＥＲ２、葉酸受容体α、ＣＤ９７、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ４４ｖ６、ＷＴ１、ＶＥＧＦ－α、ＶＥＧＦＲ１、ＩＬ－１３Ｒα１、ＩＬ－１３Ｒα２、ＩＬ－１１Ｒα、ＰＳＡ、ＦｃＲＨ５、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＴＡＧ－７２、ＣＥＡ、エフリンＡ２、エフリンＢ２、ルイスＡ抗原、ルイスＹ抗原、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＲＡＧＥ－１、葉酸受容体β、ＥＧＦＲｖｉｉｉ、ＶＥＧＦＲ－２、ＬＧＲ５、ＳＳＸ２、ＡＫＡＰ－４、ＦＬＴ３、フコシルＧＭ１、ＧＭ３、ｏ－アセチル－ＧＤ２、およびＧＤ２が含まれ、Ｆａｂ領域には、それぞれ、抗ＣＤ１３８、－ＣＤ３８、－ＣＤ３３、－ＣＤ１２３、－ＣＤ７２、－ＣＤ７９ａ、－ＣＤ７９ｂ、－メソテリン，－ＰＳＭＡ、－ＢＣＭＡ、－ＲＯＲ１、－ＭＵＣ－１６、－Ｌ１ＣＡＭ、－ＣＤ２２、－ＣＤ１９、－ＣＤ２０、－ＣＤ２３、－ＣＤ２４、－ＣＤ３７、－ＣＤ３０、－ＣＡ１２５、－ＣＤ５６、－ｃ－Ｍｅｔ、－ＥＧＦＲ、－ＧＤ－３、－ＨＰＶ Ｅ６、－ＨＰＶ Ｅ７、－ＭＵＣ－１、－ＨＥＲ２、－葉酸受容体α、－ＣＤ９７、－ＣＤ１７１、－ＣＤ１７９ａ、－ＣＤ４４ｖ６、－ＷＴ１、－ＶＥＧＦ－α、－ＶＥＧＦＲ１、－ＩＬ－１３Ｒα１、－ＩＬ－１３Ｒα２、－ＩＬ－１１Ｒα、－ＰＳＡ、－ＦｃＲＨ５、－ＮＫＧ２Ｄリガンド、－ＮＹ－ＥＳＯ－１、－ＴＡＧ－７２、－ＣＥＡ、－エフリンＡ２、－エフリンＢ２、－ルイスＡ抗原、－ルイスＹ抗原、－－ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ－Ａ１、－ＲＡＧＥ－１、－葉酸受容体β、－ＥＧＦＲｖｉｉｉ、－ＶＥＧＦＲ－２、－ＬＧＲ５、－ＳＳＸ２、ＡＫＡＰ－４、－ＦＬＴ３、－フコシルＧＭ１、－ＧＭ３、－ｏ－アセチル－ＧＤ２、および－ＧＤ２特異的モノクローナル抗体の一部分が含まれる。
本発明のＣＥＲの細胞外ドメインに特異的に結合する標的分子は、目的の細胞（“標的細胞”）上にまたはそれと関連して見いだされ得る。例示的な標的細胞には、癌細胞、自己免疫疾患もしくは障害または炎症性疾患もしくは障害に関連する細胞、および感染性病原菌（例えば、細菌、ウイルスまたは真菌）、あるいは感染細胞（例えば、ウイルス感染細胞）が含まれる。哺乳動物寄生虫などの感染性生物の細胞もまた、標的細胞として意図される。
ある態様において、細胞外ドメインは、要すれば、細胞外の非シグナリングスペーサーまたはリンカードメインを含む。含まれる場合、そのようなスペーサーまたはリンカードメインは、適当な細胞／細胞接触、結合、活性化および増殖をさらに可能にするために、結合ドメインを宿主細胞表面から離して配置してもよい。細胞外スペーサードメインは、一般的に、細胞外結合ドメインと膜貫通ドメインの間に位置する。細胞外スペーサーの長さは、選択された標的分子、選択された結合エピトープ、結合ドメインサイズおよび親和性に基づいて標的分子の結合を最適化するように変えることができる（例えば、Guest et al., J. Immunother. 28:203-11, 2005; Hudecek et al., Clin. Cancer Res. 19:3153-64, 2013; Hudecek et al., Cancer Immunol. Res. 3:125-35, 2015;ＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１４／０３１６８７参照。それらの内容全体は引用により本明細書中に包含される）。特定の態様において、細胞外スペーサードメインは、ＴＬＲ膜近傍ドメイン（例えば、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８またはＴＬＲ９膜近傍ドメイン）を含む。特定の態様において、細胞外スペーサードメインは、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＴＬＲ４膜近傍ドメインを含む。特定の態様において、細胞外スペーサードメインは、免疫グロブリンヒンジ領域（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ）である。免疫グロブリンヒンジ領域は、野生型免疫グロブリンヒンジ領域であるか、または改変された野生型免疫グロブリンヒンジ領域であり得る。改変されたＩｇＧ４ヒンジ領域は、ＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１４／０３１６８７に記載されており、その文献の内容全体が引用により本明細書中に包含される。特定の態様において、細胞外スペーサードメインは、ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰのアミノ酸配列（配列番号１６）を有する修飾されたＩｇＧ４ヒンジ領域を含む。本明細書に記載のＣＥＲに用いられ得るヒンジ領域の他の例には、野生型またはその変異体であり得る、ＣＤ８ａ、ＣＤ４、ＣＤ２８およびＣＤ７などのＩ型膜タンパク質の細胞外領域に存在するヒンジ領域が含まれる。さらなる態様において、細胞外スペーサードメインは、以下から選択される免疫グロブリンＦｃドメインの全部または一部を含む：ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはそれらの組合せ（例えば、ＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１４／０３１６８７参照、その内容全体は引用により本明細書中に包含される）。特定の態様において、Ｆｃドメインは、ＣＥＲ修飾細胞の標的外（off-target)活性化をもたらし得るＦｃγＲを発現する細胞とのインビボ相互作用を阻止するように修飾される。なおさらなる態様において、細胞外スペーサードメインは、ＩＩ型Ｃ－レクチンのストーク領域（Ｃ型レクチンドメインと膜貫通ドメインとの間に位置する細胞外ドメイン）を含み得る。ＩＩ型Ｃ－レクチンには、ＣＤ２３、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ９４、ＮＫＧ２ＡおよびＮＫＧ２Ｄが含まれる。なおさらなる態様において、細胞外スペーサードメインは、ＭＥＲＴＫに由来し得る。
ＩＩ．膜貫通ドメイン
膜貫通ドメインは、細胞外ドメインとエンガルフメントシグナル伝達ドメインとを連結し、それらの間に位置する。膜貫通ドメインは、宿主細胞膜を横切る疎水性αへリックスである。膜貫通ドメインは、結合ドメインまたは存在する場合、細胞外スペーサードメインに直接融合することができる。特定の態様において、膜貫通ドメインは、内在性膜タンパク質（例えば、受容体、分化クラスター（ＣＤ）分子、酵素、トランスポーター、細胞接着分子など）に由来する。膜貫通ドメインは、ＣＥＲに含まれる細胞外ドメインまたはエンガルフメントシグナル伝達ドメインのいずれかと天然に結合し得る（例えば、ＣＥＲは、Ｔｉｍ４結合ドメインおよびＴｉｍ４膜貫通ドメインを含む）。特定の態様において、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインは異なる分子に由来するか、膜貫通ドメインおよびエンガルフメントシグナル伝達ドメインは異なる分子に由来するか、または膜貫通ドメイン、細胞外ドメインおよびエンガルフメントシグナル伝達ドメインは全て異なる分子に由来する。
特定の態様において、膜貫通ドメインは、ＴＬＲ膜貫通ドメイン（例えば、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８またはＴＬＲ９膜貫通ドメイン）、Ｔｉｍ１膜貫通ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメイン、ＦｃＲ膜貫通ドメイン（例えば、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲ２Ａ、ＦｃγＲ２Ｂ２、ＦｃγＲ２Ｃ、ＦｃγＲ３Ａ、ＦｃεＲ１またはＦｃαＲ１膜貫通ドメイン）、ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＭＥＲＴＫ膜貫通ドメイン、Ａｘｌ膜貫通ドメイン、Ｔｙｒｏ３膜貫通ドメイン、ＢＡＩ１膜貫通ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＭＲＣ１膜貫通ドメインあるいはＤＡＰ１２膜貫通ドメインである。
特定の態様において、膜貫通ドメインは、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＴＬＲ１膜貫通ドメイン、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＴＬＲ２膜貫通ドメイン、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＴＬＲ３膜貫通ドメイン、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＴＬＲ４膜貫通ドメイン、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＴＬＲ５膜貫通ドメイン、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＴＬＲ６膜貫通ドメイン、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＴＬＲ７膜貫通ドメイン、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＴＬＲ８膜貫通ドメイン、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＴＬＲ９膜貫通ドメイン、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＴｉｍ１膜貫通ドメイン、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＴｉｍ４膜貫通ドメイン、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＦｃγＲＩ膜貫通ドメイン、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＦｃεＲＩγ膜貫通ドメイン、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤ８膜貫通ドメイン、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＭＥＲＴＫ膜貫通ドメイン、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＡｘｌ膜貫通ドメイン、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＴｙｒｏ３膜貫通ドメイン、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＢＡＩ１膜貫通ドメイン、配列番号２６のアミノ酸配列で記載されるＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤ４膜貫通ドメイン、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＭＲＣ１膜貫通ドメインまたは配列番号２８のアミノ酸配列を含むＤＡＰ１２膜貫通ドメインと、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％同一の配列を含むか、または該配列である。
他の態様において、膜貫通ドメインは、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＴｉｍ１膜貫通ドメイン、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＴｉｍ４膜貫通ドメイン、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＦｃεＲＩγ膜貫通ドメイン、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＦｃγＲＩ膜貫通ドメイン、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＭＥＲＴＫ膜貫通ドメイン、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＡｘｌ膜貫通ドメイン、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＴｙｒｏ３膜貫通ドメイン、配列番号１１０のアミノ酸配列で示されるＣＤ２８膜貫通ドメイン、
配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＢＡＩ１膜貫通ドメイン、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤ４膜貫通ドメイン、配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＭＲＣ１膜貫通ドメイン、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＤＡＰ１２膜貫通ドメインまたは配列番号１１２のＴＬＲ４膜貫通ドメインをコードするポリヌクレオチド配列と、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％同一の配列を含むか、または該配列であるポリヌクレオチド配列により提供される。
本明細書に記載のＣＥＲの、あるドメインの別のドメインへの直接結合は、介在するジャンクションアミノ酸の存在を排除しないことが理解される。ジャンクションアミノ酸は、天然または非天然（例えば、キメラタンパク質の構築物設計から生じたもの）であってよい。
ＩＩＩ．エンガルフメントシグナル伝達ドメイン
ＣＥＲのエンガルフメントシグナル伝達ドメインは、細胞内エフェクタードメインであり、標的分子への該ＣＥＲの細胞外ドメインの結合に応答して細胞に機能的シグナルを伝達することができる。本発明のＣＥＲは、本明細書に記載の通り、１以上の恒常性エンガルフメントシグナル伝達ドメインを含み得る。
特定の態様において、エンガルフメントシグナル伝達ドメインは、内生トール様受容体（ＴＬＲ）の細胞内シグナル伝達ドメインまたはＴＬＲシグナル伝達に関与する内生シグナル伝達タンパク質の細胞内シグナル伝達ドメインである。ヒトにおいて、１０個のＴＬＲが同定されている。エンガルフメントシグナル伝達ドメインが由来し得る内生ＴＬＲの例としては、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８およびＴＬＲ９が挙げられる。エンガルフメントシグナル伝達ドメインを得るために用いられ得るＴＬＲシグナル伝達に関与する内生シグナル伝達タンパク質の例としては、Ｔｒａｆ６、Ｔｒａｆ２およびＴｒａｆ３が挙げられる。
特定の態様において、第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインは、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＴＬＲ３シグナル伝達ドメイン、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＴＬＲ５シグナル伝達ドメイン、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＴＬＲ６シグナル伝達ドメイン、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＴＬＲ７シグナル伝達ドメイン、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＴＬＲ８シグナル伝達ドメイン、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＴＬＲ９シグナル伝達ドメイン、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＴｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、配列番号５８のアミノ酸配列を含む切断型Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＴｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたは配列番号７３のアミノ酸配列を含むＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインと、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％同一の配列を含むか、または該配列である。
エンガルフメントシグナル伝達ドメインは、十分なシグナル伝達活性を保持するエンガルフメントシグナル伝達分子の任意の部分であり得る。ある態様において、エンガルフメントシグナル伝達分子の全長またはその全長細胞内成分を用いる。ある態様において、エンガルフメントシグナル伝達分子の切断部分またはエンガルフメントシグナル伝達分子の細胞内成分の切断部分を用いる。ただし、該切断部分は、十分なシグナル伝達活性を保持している。さらなる態様において、エンガルフメントシグナル伝達ドメインは、エンガルフメントシグナル伝達分子の全体または切断部分の変異体である。ただし、該変異体は、十分なシグナル伝達活性を保持している（すなわち、それは機能的変異体である）。
特定の態様において、エンガルフメントシグナル伝達ドメインは、ＴＬＲシグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含む第１のエンガルフメントシグナル伝達ドメイン；および、第２のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。第２のエンガルフメントシグナル伝達ドメインは、ＦｃＲシグナル伝達ドメイン（ＦｃγＲ１シグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ２Ａシグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ２Ｃシグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ２Ｂ２シグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ３Ａシグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ２Ｃシグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ３Ａシグナル伝達ドメイン、ＦｃεＲ１シグナル伝達ドメインおよびＦｃαＲ１シグナル伝達ドメインを含む）、Ｂ細胞活性化因子受容体（ＢＡＦＦ－Ｒ）シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１２（ＴＹＲＯタンパク質チロシンキナーゼ結合タンパク質（ＴＹＲＯＢＰ）とも称する）シグナル伝達ドメイン、ＩＴＡＭモチーフ１を有するＮＦＡＴ活性化タンパク質（ＮＦＡＭ１）シグナル伝達ドメイン、ＭＥＲＴＫシグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ３シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ５シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ６シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ７シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ８シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ９シグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメイン、またはＣＤ７９ｂシグナル伝達ドメインを含み得る。特定の態様において、第２のエンガルフメントシグナル伝達ドメインは、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＦｃεＲＩγシグナル伝達ドメイン、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＦｃγＲ１シグナル伝達ドメイン、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＦｃγＲ２Ａシグナル伝達ドメイン、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＦｃγＲ２Ｃシグナル伝達ドメイン、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＦｃγＲ３Ａシグナル伝達ドメイン、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＢＡＦＦ－Ｒシグナル伝達ドメイン、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＤＡＰ１２シグナル伝達ドメイン、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＮＦＡＭ１シグナル伝達ドメイン、配列番号７０のアミノ酸配列を含む切断型ＮＦＡＭ１シグナル伝達ドメイン、配列番号７５のアミノ酸配を含むＣＤ７９ｂシグナル伝達ドメイン、配列番号７１のアミノ酸配列を含む切断型ＣＤ７９ｂシグナル伝達ドメイン、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＭＥＲＴＫシグナル伝達ドメイン、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＴＬＲ３シグナル伝達ドメイン、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＴＬＲ５シグナル伝達ドメイン、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＴＬＲ６シグナル伝達ドメイン、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＴＬＲ７シグナル伝達ドメイン、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＴＬＲ８シグナル伝達ドメイン、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＴＬＲ９シグナル伝達ドメイン、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＴｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、配列番号５８のアミノ酸配列を含む切断型Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＴｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたは配列番号７３のアミノ酸配列を含むＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインと、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％同一の配列を含むか、または該配列である。
他の態様において、第２のエンガルフメントシグナル伝達ドメインは、配列番号１１５のＦｃεＲＩγシグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチド、配列番号７７のＦｃγＲ１シグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチド、配列番号７８のＦｃγＲ２Ａシグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチド、配列番号７９のＦｃγＲ２Ｃシグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチド、配列番号８０のＦｃγＲ３Ａシグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチド、配列番号１１７のＢＡＦＦ－Ｒシグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチド、配列番号１１６のＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチド、配列番号１１９のＮＦＡＭ１シグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチド、または配列番号１１８のＣＤ７９ｂシグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチドと、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％同一の配列を含むか、または該配列であるポリヌクレオチド配列によって提供される。
特定の態様において、エンガルフメントシグナル伝達ドメインによるシグナル伝達は、炎症性サイトカイン、炎症性ケモカインまたは共刺激細胞表面マーカーの少なくとも１つの発現をもたらす。なおさらなる態様において、炎症性サイトカインは、ＴＮＦα、ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＩＬ－１２またはＩＬ－２３あるいはそれらの何れかの組合せであり、炎症性ケモカインは、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＸＣＬ９またはＣＸＣＬ１０あるいはそれらの何れかの組合せであり、共刺激細胞表面マーカーは、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ４０、ＨＶＥＭまたは４－１ＢＢＬあるいはそれらの何れかの組合せである。
特定の態様において、第２のエンガルフメントシグナル伝達ドメインの存在は、ＣＥＲのエンガルフメント活性を増強するか、ＣＥＲで改変された宿主細胞の持続性を増すか、ＣＥＲで改変された宿主細胞の増殖を増加させるか、またはそれらの組合せである。特定の態様において、第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインと第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインの包含は、ＣＥＲのエンガルフメント活性を増強するか、ＣＥＲで改変された宿主細胞の食細胞性シグナル伝達を増強するか、ＣＥＲで改変された宿主細胞による管腔内容物の分解を促進するか、ＣＥＲで改変された宿主細胞の活性化を増加するか、ＣＥＲで改変された宿主細胞の持続性を増すか、ＣＥＲで改変された宿主細胞の記憶形成を増加するか、ＣＥＲで改変された宿主細胞の増殖を増加させるか、ＣＥＲで改変された宿主細胞による抗原提示活性を増加するか、またはそれらの組合せである。
特定の態様において、ＣＥＲにおけるＴｒａｆ２、Ｔｒａｆ３またはＴｒａｆ６シグナル伝達ドメインを伴うＴＬＲシグナル伝達ドメインの存在は、ＣＥＲおよび／またはＣＥＲ改変宿主細胞に増強された機能を提供する。一態様において、第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８またはＴＬＲ９シグナル伝達ドメインを含み、第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインは、Ｔｒａｆ６、Ｔｒａｆ２またはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含む。別の態様において、第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインは、Ｔｒａｆ６、Ｔｒａｆ２またはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含み、第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８またはＴＬＲ９シグナル伝達ドメインを含む。特定の態様において、ＴＬＲシグナル伝達ドメインおよびＴｒａｆ２、Ｔｒａｆ３またはＴｒａｆ６シグナル伝達ドメインの両方を含むＣＥＲは、増強された活性化、抵抗性（persistence）、記憶形成、抗原提示またはそれらのいずれかの組合せを示す。
ＣＥＲが第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよび第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む態様では、エンガルフメントシグナル伝達ドメインの位置を交換できることが理解される。例えば、第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよび第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むＣＥＲにおいて、第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインは、ＴＬＲシグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８またはＴＬＲ９）、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含んでいてよく、第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインは、ＦｃＲシグナル伝達ドメイン（ＦｃγＲ１シグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ２Ａシグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ２Ｃシグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ２Ｂ２シグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ３Ａシグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ２Ｃシグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ３Ａシグナル伝達ドメイン、ＦｃεＲ１シグナル伝達ドメインおよびＦｃαＲ１シグナル伝達ドメインを含む）、ＢＡＦＦ－Ｒシグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１２シグナル伝達ドメイン、ＮＦＡＭ１シグナル伝達ドメイン、ＭＥＲＴＫシグナル伝達ドメイン、ＣＤ７９ｂシグナル伝達ドメイン、ＴＬＲシグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ３シグナル伝達ドメインまたはＴｒａｆ６シグナル伝達ドメインを含んでいてよい。
ＩＶ．ＣＥＲの例
本明細書に記載のＣＥＲの構成部分は、宿主細胞に所望のエンガルフメント表現型を提供するために種々の組合せで選択および配置され得る。ＣＥＲで改変された宿主細胞によって標的化される分子を発現するか、またはそれによって特徴付けられる細胞、病原菌または粒子のエンガルフメントを誘導することに加えて、本明細書に記載のＣＥＲは、標的細胞または粒子、病状および所望の治療結果に応じて、炎症誘発性エンガルフメント応答を開始する、エンガルフメント活性を増強する、管腔内容物の分解を促進する、細胞溶解活性を増強する、細胞活性化を増強する、細胞増殖を増加させる、細胞記憶を増強する、細胞持続性を増す、抗原提示を増強させる、または細胞増殖を増加するように設計され得る。
一面において、本発明は、一本鎖キメラタンパク質を含むキメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）を提供し、該一本鎖キメラタンパク質は、ホスファチジルセリン（ＰｔｄＳｅｒ）に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメイン；ＴＬＲシグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメイン；および、細胞外ドメインとエンガルフメントシグナル伝達ドメインとの間に位置し、それらを連結している膜貫通ドメインを含む。
特定の態様において、細胞外ドメインはさらに、結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置する細胞外スペーサードメインを含む。
特定の態様において、ＣＥＲはさらに、第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインは、ＦｃＲシグナル伝達ドメイン（ＦｃγＲ１シグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ２Ａシグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ２Ｃシグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ２Ｂ２シグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ３Ａシグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ２Ｃシグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ３Ａシグナル伝達ドメイン、ＦｃεＲ１シグナル伝達ドメインおよびＦｃαＲ１シグナル伝達ドメインを含む）、ＢＡＦＦ－Ｒシグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１２シグナル伝達ドメイン、ＮＦＡＭ１シグナル伝達ドメイン、ＣＤ７９ｂシグナル伝達ドメイン、ＭＥＲＴＫシグナル伝達ドメイン、ＴＬＲシグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含み得る。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの一態様は、ＴＩＭ４ ＰｔｄＳｅｒ結合ドメインを含む細胞外ドメイン、ＴＩＭ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ４シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ０５”とも称される）（例えば、図６参照）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号８１のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号８１のアミノ酸１－２２）を除く配列番号８１のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、ＴＩＭ４ ＰｔｄＳｅｒ結合ドメインを含む細胞外ドメイン、ＴＩＭ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインおよびＴＬＲ４シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ０６”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号８２のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号８２のアミノ酸１－２２）を除く配列番号８２のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、ＴＩＭ４ ＰｔｄＳｅｒ結合ドメインを含む細胞外ドメイン、ＴＬＲ４膜近接ドメインを含む細胞外スペーサードメイン、ＴＬＲ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインおよびＴＬＲ４シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ０７”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号８３のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号８３のアミノ酸１－２２）を除く配列番号８３のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、ＴＩＭ４ ＰｔｄＳｅｒ結合ドメインを含む細胞外ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインおよびＴＬＲ３シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１７”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号８４のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号８４のアミノ酸１－２２）を除く配列番号８４のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、ＴＩＭ４ ＰｔｄＳｅｒ結合ドメインを含む細胞外ドメイン、ＴＬＲ３膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインおよびＴＬＲ３シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１８”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号８５のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号８５のアミノ酸１－２２）を除く配列番号８５のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、ＴＩＭ４ ＰｔｄＳｅｒ結合ドメインを含む細胞外ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインおよびＴＬＲ５シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１９”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号８６のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号８６のアミノ酸１－２２）を除く配列番号８６のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲのさらに別の態様は、ＴＩＭ４ ＰｔｄＳｅｒ結合ドメインを含む細胞外ドメイン、ＴＬＲ５膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ならびにＴＬＲ５シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ２０”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号８７のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチド配列は、シグナルペプチド配列（配列番号８７のアミノ酸１－２２）を除く配列番号８７のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、ＴＩＭ４ ＰｔｄＳｅｒ結合ドメインを含む細胞外ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインおよびＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ２１”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号８８のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号８８のアミノ酸１－２２）を除く配列番号８８のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、ＴＩＭ４ ＰｔｄＳｅｒ結合ドメインを含む細胞外ドメイン、ＴＬＲ８膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインおよびＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ２２”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号８９のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号８９のアミノ酸１－２２）を除く配列番号８９のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、ＴＩＭ４ ＰｔｄＳｅｒ結合ドメインを含む細胞外ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインおよびＴＬＲ９シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ２３”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号９０のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号９０のアミノ酸１－２２）を除く配列番号９０のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、ＴＩＭ４ ＰｔｄＳｅｒ結合ドメインを含む細胞外ドメイン、ＴＬＲ９膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ９シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ２４”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号９のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチド配列は、シグナルペプチド配列（配列番号９１のアミノ酸１－２２）を除く配列番号９１のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、ＴＩＭ４ ＰｔｄＳｅｒ結合ドメインを含む細胞外ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ１シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ２６”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号９２のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲは、シグナルペプチド配列（配列番号９２のアミノ酸１－２２）を除く配列番号９２のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、ＴＩＭ４ ＰｔｄＳｅｒ結合ドメインを含む細胞外ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ２７”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号９３のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲは、シグナルペプチド配列（配列番号９３のアミノ酸１－２２）を除く配列番号９３のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、ＴＩＭ４ ＰｔｄＳｅｒ結合ドメインを含む細胞外ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ７シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ２８”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号９４のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲは、シグナルペプチド配列（配列番号９４のアミノ酸１－２２）を除く配列番号９４のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、ＴＩＭ４ ＰｔｄＳｅｒ結合ドメインを含む細胞外ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、およびＴｒａｆ２シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ３０”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号９６のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲは、シグナルペプチド配列（配列番号９６のアミノ酸１－２２）を除く配列番号９６のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、ＴＩＭ４ ＰｔｄＳｅｒ結合ドメインを含む細胞外ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、およびＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ３１”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号９７のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲは、シグナルペプチド配列（配列番号９７のアミノ酸１－２２）を除く配列番号９７のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖ結合ドメインを含む細胞外ドメイン、変異型ＩｇＧ４ヒンジ領域を含む細胞外スペーサードメイン、ＴＬＲ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ４シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ４２”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号９８のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲは、シグナルペプチド配列（配列番号９８のアミノ酸１－２２）を除く配列番号９８のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、ＴＩＭ４結合ドメインを含む細胞外ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、切断型Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ２９”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１２４のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１２４のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１２４のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ならびに切断型Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメインを含む第１のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＮＦＡＭ１シグナル伝達ドメインを含む第２のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１１２”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１２８のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチド配列は、シグナルペプチド配列（配列番号１２８のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１２８のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ならびに切断型Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメインを含む第１のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインを含む第２のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１１０”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１２５のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチド配列は、シグナルペプチド配列（配列番号１２５のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１２５のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメインを含む細胞外ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ならびに切断型Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＢＡＦＦＲシグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１１３”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１２７または１４０のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチド配列は、シグナルペプチド配列（配列番号１２７のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１２７のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、切断型Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＣＤ７９ｂシグナル伝達ドメイン（ＣＤ７９ｂ １８５－２１３）を含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１１１Ｂ”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１２６のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１２６のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１２６のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＮＦＡＭ１シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１０２”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチド配列は、シグナルペプチド配列（配列番号１３０のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１３０のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＣＤ７９ｂ（１８５－２２９）シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１０３Ａ”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１３１のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１３１のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１３１のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＣＤ７９ｂ（１８５－２１３）シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１０３Ｂ”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１３２のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１３２のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１３２のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１０４”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１３３のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１３３のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１３３のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＢＡＦＦ－Ｒシグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１０５”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１３４のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１３４のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１３４のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＮＦＡＭ１シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１０６”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１３５のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１３５のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１３５のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＣＤ７９ｂ（１８５－２１３）シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１０７”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１３６のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１３６のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１３６のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１０８”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１３７のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１３７のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１３７のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＢＡＦＦ－Ｒシグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１０９”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１３８のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１３８のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１３８のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＴＲＡＦ６シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＣＤ７９ｂ（１８５－２２９）シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１１１Ａ”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１３９のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１３９のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１３９のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＴＲＡＦ６シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＭＥＲＴＫシグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１１４”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１４１のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１４１のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１４１のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＭＥＲＴＫシグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＲＡＦ６シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１１５”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１４２のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１４２のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１４２のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＴＲＡＦ６シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１１６”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１４３のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１４３のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１４３のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＲＡＦ６シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１１７”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１４４のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１４４のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１４４のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＴＬＲ１シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＮＦＡＭ１シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１１８”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１４５のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１４５のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１４５のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲのさらに別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＴＬＲ１シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＣＤ７９ｂ（１８５－２２９）シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１１９Ａ”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１７３のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１７３のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１７３のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＴＬＲ１シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＣＤ７９ｂ（１８５－２１３）シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１１９Ｂ”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１４６のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１４６のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１４６のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＴＬＲ１シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１２０”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１４７のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１４７のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１４７のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＴＬＲ１シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＲＡＦ６シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１２１”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１４８のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１４８のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１４８のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１２２”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１４９のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１４９のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１４９のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲのさらに別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＲＡＦ６シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１２３”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１５０のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１５０のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１５０のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＮＦＡＭ１シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１２４”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１５１のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１５１のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１５１のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＣＤ７９ｂ （１８５－２２９）シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１２５Ａ”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１５２のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１５２のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１５２のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＣＤ７９ｂ （１８５－２１３）シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１２５Ｂ”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１５３のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１５３のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１５３のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＲＡＦ２シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１２６”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１７４のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１７４のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１７４のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＴＲＡＦ２シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１２７”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１７５のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１７５のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１７５のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＴＲＡＦ２シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１２８”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１７６のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１７６のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１７６のアミノ酸配列を含む。
ＰｔｄＳｅｒに結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、ＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＲＡＦ２シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（本明細書中、“ＣＥＲ１２９”とも称される）。特定の態様において、そのようなＣＥＲは、配列番号１７７のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチドは、シグナルペプチド配列（配列番号１７７のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１７７のアミノ酸配列を含む。
別の側面において、本発明は、一本鎖キメラタンパク質を含むＣＥＲを提供し、ここで、該一本鎖キメラタンパク質は、エンガルフメント促進マーカーまたは標的抗原に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメイン；ＴＬＲシグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメイン；および、細胞外ドメインとエンガルフメントシグナル伝達ドメインとの間に位置する膜貫通ドメインを含む。かかるＣＥＲは、標的分子（例えば、エンガルフメント促進マーカーまたは標的抗原）に結合した際に炎症性または免疫原性エンガルフメント表現型を提供し得る。
ＴＬＲシグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むＣＥＲの特定の態様において、細胞外ドメインは、結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置する細胞外スペーサードメインをさらに含む。
さらに別の側面において、本発明は、一本鎖キメラタンパク質を含むＣＥＲを提供し、ここで、該一本鎖キメラタンパク質は、エンガルフメント促進マーカーまたは標的抗原に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメイン；ＴＬＲシグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよび第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメイン；ならびに、細胞外ドメインとエンガルフメントシグナル伝達ドメインとの間に位置し、それらを連結している膜貫通ドメインを含む。ある態様において、該第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインは、ＦｃＲシグナル伝達ドメイン（ＦｃγＲ１シグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ２Ａシグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ２Ｃシグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ２Ｂ２シグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ３Ａシグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ２Ｃシグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ３Ａシグナル伝達ドメイン、ＦｃεＲ１シグナル伝達ドメインおよびＦｃαＲ１シグナル伝達ドメインを含む）、ＢＡＦＦ－Ｒシグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１２シグナル伝達ドメイン、ＮＦＡＭ１シグナル伝達ドメインおよびＣＤ７９ｂシグナル伝達ドメインを含む炎症促進性エンガルフメントシグナル伝達ドメインである。
第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよび第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むＣＥＲの任意の態様において、細胞外ドメインは、結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置する細胞外スペーサードメインをさらに含む。
さらに別の側面において、本発明は、一本鎖キメラタンパク質を含むＣＥＲを提供し、ここで、該一本鎖キメラタンパク質は、エンガルフメント促進マーカーまたは標的抗原に結合するｓｃＦｖを含む細胞外ドメイン；ＴＬＲシグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ６シグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメイン；および、細胞外ドメインとエンガルフメントシグナル伝達ドメインとの間に位置し、それらを連結している膜貫通ドメイン（ここで、膜貫通ドメインおよびエンガルフメントシグナル伝達ドメインはそれぞれ異なる分子に由来する）を含む。
エンガルフメント促進マーカーまたは標的抗原に結合するｓｃＦｖを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの特定の態様において、該細胞外ドメインは、結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置する細胞外スペーサードメインをさらに含む。
エンガルフメント促進マーカーまたは標的抗原に結合するｓｃＦｖを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの態様は、ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖ結合ドメインを含む細胞外ドメイン；ＴＬＲ４膜近接ドメインを含む細胞外スペーサードメイン；ＴＬＲ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ４シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（“ＣＥＲ４３”とも称される）。特定の態様において、かかるＣＥＲは、配列番号１２２のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチド配列は、シグナルペプチド配列（配列番号１２２のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１２２のアミノ酸配列を含む。
エンガルフメント促進マーカーまたは標的抗原に結合するｓｃＦｖを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖ結合ドメインを含む細胞外ドメイン；修飾されたＩｇＧ４ヒンジ領域を含む細胞外スペーサードメイン；ＴＬＲ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ４シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（“ＣＥＲ４４”とも称される）。特定の態様において、かかるＣＥＲは、配列番号１２３のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＥＲ成熟ポリペプチド配列は、シグナルペプチド配列（配列番号１２３のアミノ酸１－２２）を除く配列番号１２３のアミノ酸配列を含む。
エンガルフメント促進マーカーまたは標的抗原に結合するｓｃＦｖを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、メソテリンに特異的なｓｃＦｖ結合ドメインを含む細胞外ドメイン；ＴＬＲ４膜近接ドメインを含む細胞外スペーサードメイン；ＴＬＲ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ４シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（“ＣＥＲ５１”とも称される）。
エンガルフメント促進マーカーまたは標的抗原に結合するｓｃＦｖを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、メソテリンに特異的なｓｃＦｖ結合ドメインを含む細胞外ドメイン；修飾されたＩｇＧ４ヒンジ領域を含む細胞外スペーサードメイン；ＴＬＲ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ４シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（“ＣＥＲ５２”とも称される）。
エンガルフメント促進マーカーまたは標的抗原に結合するｓｃＦｖを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、ＬＧＲ５に特異的なｓｃＦｖ結合ドメインを含む細胞外ドメイン；ＴＬＲ４膜近接ドメインを含む細胞外スペーサードメイン；ＴＬＲ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ４シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（“ＣＥＲ５３”とも称される）。
エンガルフメント促進マーカーまたは標的抗原に結合するｓｃＦｖを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲの別の態様は、ＬＧＲ５に特異的なｓｃＦｖ結合ドメインを含む細胞外ドメイン；修飾されたＩｇＧ４ヒンジ領域を含む細胞外スペーサードメイン；ＴＬＲ４膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、およびＴＬＲ４シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む（“ＣＥＲ５４”とも称される）。
特定の態様において、宿主細胞の表面上に発現されたＣＥＲの、その類似の（cognate）標的分子への結合後に、ＣＥＲの側方（lateral）クラスター形成が宿主細胞表面上で起こり、局所的にＣＥＲ濃度が上昇する。クラスター化は、標的細胞または粒子表面上の多価リガンドの存在によって促進される。
特定の態様において、宿主細胞の表面上に発現されたＣＥＲの、その類似の標的分子への結合後に、ＣＥＲの二量体化または多量体化が起こり、細胞内エンガルフメントシグナル伝達ドメインも結合し、その後、それは細胞内キナーゼの標的となる。
特定の態様において、本発明のＣＥＲは、宿主細胞の表面上に発現されるとき、標的分子または粒子を繋留し、内在化し、そしてプロセシング（分解）する（例えば、標的を貪食する）ことができる。他の態様において、本発明のＣＥＲは、標的分子または粒子をつなぎ留め、内在化する（例えば、標的を貪食する）ことができる。ある態様において、ファゴソーム内の標的細胞または粒子は、ファゴソーム成熟前または成熟中に排出され得る。さらに、内在化は、ＣＥＲの細胞外ドメインによって結合されている細胞または粒子の全体を内在化することを含んでもよいか、またはＣＥＲの細胞外ドメインによって結合されている細胞または粒子の断片または一部分の内在化を含んでもよい。
特定の態様において、本発明のＣＥＲは、内在化なしに標的分子または粒子を繋留する。ＣＥＲを発現する宿主細胞は、多数の標的細胞または粒子をエンガルフするかまたは繋留する（tether）ことができる。理論はともかく、標的細胞または粒子の内在化および分解がなくとも、ＣＥＲを発現する宿主細胞による標的細胞または粒子の繋留は、標的細胞または粒子の分解をもたらすか、または炎症性環境を促進することができ、それは、特定の治療的状況（例えば、癌）において望ましい
本明細書によるＣＥＲの態様は、図６、１５、１８、配列表、表１および実施例に示されている。
Figure 0007286658000001
Figure 0007286658000002
核酸、ベクターおよび宿主細胞
特定の側面において、本発明は、本明細書に記載のＣＥＲの任意の１つまたはそれ以上をコードする核酸分子を提供する。所望のＣＥＲをコードする核酸配列は、所望の配列またはその一部を発現する細胞からライブラリーをスクリーニングすること、該配列を含むことが公知のベクターからそれを導出すること、または該配列を含む細胞もしくは組織から直接その配列もしくはその一部を単離することなどにより、当技術分野で知られている組換え方法を用いて、標準的技術を用いて、得られ得るかまたは産生され得る。
本明細書に記載のＣＥＲ組成物をコードするポリヌクレオチドは、ヒト、霊長動物、ウシ、ウマ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、またはブタなどの任意の動物に由来し得る。特定の態様において、ＣＥＲをコードするポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドが挿入されている宿主細胞と同じ動物種に由来する。
本明細書に記載のＣＥＲ組成物をコードするポリヌクレオチドはまた、分泌経路への前駆体タンパク質の標的化のためにＣＥＲのアミノ末端にシグナルペプチド（リーダーペプチドまたはシグナル配列とも称される）をコードする配列を含み得る。シグナルペプチドは、要すれば、細胞プロセシングの間およびＣＥＲの細胞膜への局在化の間に細胞外ドメインのＮ末端から切断されてよい。シグナルペプチド配列が切断または除去されたポリペプチドはまた、成熟ポリペプチドとも呼ばれてもよい。本発明のＣＥＲにおいて用いられ得るシグナルペプチドの例としては、例えばＧＭ－ＣＳＦ（配列番号９９のアミノ酸配列）、Ｔｉｍ４（配列番号１００のアミノ酸配列または配列番号３のアミノ酸１－２４）を含む、内生分泌タンパク質由来のシグナルペプチドが挙げられる。特定の態様において、本発明のＣＥＲのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列は、成熟ポリペプチドのための配列を含む。シグナルペプチド配列を含む本明細書に記載の配列について、シグナルペプチド配列は、コードされたタンパク質を細胞外膜に輸送することができる別のシグナルペプチドと置き換えられ得ることが、当業者により理解される。
特定の態様において、本発明のＣＥＲをコードする核酸分子は、発現 標的宿主細胞における効率的な発現のためにコドン最適化されている。
所望のＣＥＲをコードする核酸分子は、適当なベクター（例えば、ウイルスベクター、非ウイルスプラスミドベクターおよび非ウイルスベクター、例えば脂質ベースのＤＮＡベクター、修飾ｍＲＮＡ（ｍｏｄＲＮＡ）、自己増幅ｍＲＮＡ、ＣＥＬｉＤおよびトランスポゾン介在遺伝子導入（PiggyBac、Sleeping Beauty）など）中に、目的の宿主細胞（例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞、リンパ球前駆細胞、抗原提示細胞、ランゲルハンス細胞または骨髄細胞）への導入のために挿入され得る。本発明のＣＥＲをコードする核酸分子は、発現ベクター、複製ベクター、プローブ作製ベクター、または配列決定ベクターなどの好適なベクター中にクローニングされ得る。特定の態様において、細胞外ドメインをコードする核酸配列、膜貫通ドメインをコードする核酸配列およびエンガルフメントシグナル伝達ドメインをコードする核酸配列は、単一のポリヌクレオチドに共に連結され、その後、ベクターに挿入される。他の態様において、細胞外ドメインをコードする核酸配列、膜貫通ドメインをコードする核酸配列およびエンガルフメントシグナル伝達ドメインをコードする核酸配列は、得られたアミノ酸配列が機能的ＣＥＲを生じるようにベクターに別々に挿入され得る。ＣＥＲをコードするベクターは、本明細書中、“ＣＥＲベクター”と称される。
特定の態様において、ベクターは、１つのＣＥＲをコードする核酸分子を含む。他の態様において、ベクターは、２以上のＣＥＲをコードする１以上の核酸分子を含む。一態様において、それぞれがＣＥＲをコードする２以上の核酸分子を、異なる複数のクローニング部位でベクターに順次クローニングし、各ＣＥＲを異なるプロモーターの制御下で発現させることができる。別の態様において、複数のＣＥＲをコードする単一の核酸分子をクローニング部位にクローニングし、単一のプロモーターから発現させ、各ＣＥＲはＩＲＥＳまたはウイルス２Ａペプチド配列によって互いに分離されて、単一のオープンリーディングフレームからの複数の遺伝子の同時発現を可能にする（例えば、マルチシストロン性ベクター）。特定の態様において、ウイルス２ＡペプチドはＴ２Ａ（配列番号１０２、１５４、１５５または１５６）、Ｐ２Ａ（配列番号１０１または１５７）、Ｅ２Ａ（配列番号１０３）、またはＦ２Ａ（配列番号１０４）である。
ある態様において、導入遺伝子の長期組込みおよび娘細胞への増殖を可能にするベクターが利用される。例としては、ウイルスベクター、例えばアデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ワクシニアウイルス、ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、ポックスウイルス、またはレトロウイルスベクター、例えばレンチウイルスベクターなどが挙げられる。レンチウイルスに由来するベクターは、長期間の遺伝子導入を達成するために用いることができ、そして肝細胞などの非増殖細胞を形質導入する能力および低い免疫原性を含むベクターを超える利点を追加した。
特定の態様において、ＣＥＲベクターは、空間的および時間的制御を最適化するように構築され得る。例えば、ＣＥＲベクターは、空間的および時間的制御を最適化するためのプロモーターエレメントを含み得る。ある態様において、ＣＥＲベクターは、腫瘍または感染組織などの臓器または病理学的微小環境へのＣＥＲの特異的誘導を可能にする組織特異的プロモーターまたはエンハンサーを含む。“エンハンサー”は、転写を活性化するために協調的にまたは独立して機能することができるさらなるプロモーターエレメントである。他の態様において、ＣＥＲベクターは、構成的プロモーターを含む。さらに他の態様において、ＣＥＲベクターは誘導プロモーターを含む。
さらなる態様において、ＣＥＲベクターは、インビボでのホーミング（homing）および抗腫瘍活性を改善するために、ＣＣＲ４またはＣＸＣＲ４などのホーミング受容体を含み得る。
時間的制御が望まれる場合、ＣＥＲベクターは、形質導入細胞の誘導的除去を可能にする要素（element）を含み得る。例えば、そのようなベクターは、誘導性自殺遺伝子を含み得る。自殺遺伝子は、アポトーシス遺伝子、または化学的に誘導可能なカスパーゼ９（ｉＣＡＳＰ９）、化学的に誘導可能なＦａｓもしくはＨＳＶ－ＴＫ（ガンシクロビルに対する感受性を付与する）などの物質（例えば、薬物）に対する感受性を付与する遺伝子であり得る。さらなる態様において、ＣＥＲベクターは、関連する抗体の注入時に形質導入細胞の枯渇を可能にする既知の細胞表面抗原を発現するように設計することができる。形質導入細胞の枯渇に用い得る細胞表面抗原およびそれらの関連抗体には、ＣＤ２０およびリツキシマブ、ＲＱＲ８（ＣＤ３４選択および抗ＣＤ２０欠失を可能にする、ＣＤ３４およびＣＤ２０エピトープの組合せ）およびリツキシマブ、ならびにＥＧＦＲおよびセツキシマブが含まれる。
誘導性ベクター系、例えばドキシサイクリンを用いて導入遺伝子発現を活性化する、テトラサイクリン（Ｔｅｔ）－Ｏｎベクター系（Heinz et al., Hum. Gene Ther. 2011, 22:166-76）もまた、誘導性ＣＥＲ発現に用いることができる。誘導性ＣＥＲ発現はまた、フックを通して小胞体の膜に固定化されたストレプトアビジンおよびＣＥＲ構造に導入されたストレプトアビジン結合タンパク質に基づく選択的フック（ＲＵＳＨ）システムを用いた保持によっても達成され得て、ここで該システムへのビオチンの添加は、小胞体からのＣＥＲの放出をもたらす（Agaugue et al., 2015, Mol. Ther. 23(Suppl. 1):S88）。
本明細書で用いる用語“組換え”または“非天然”は、少なくとも１つの遺伝子改変を含むか、または外生核酸分子の導入により改変されている、生物、微生物、細胞、核酸分子またはベクターを意味し、ここで、かかる改変または修飾は、遺伝子操作によって導入される。遺伝子改変には、例えば、タンパク質、キメラタンパク質もしくは酵素をコードする発現可能な核酸分子を導入する改変、または細胞の遺伝物質の他の核酸分子の付加、欠失、置換もしくは他の機能的破壊が含まれる。さらなる修飾には、例えば、その修飾が遺伝子またはオペロンの発現を変化させる非コーディング調節領域が挙げられる。特定の態様において、対象から得られたＴ細胞などの細胞は、本明細書に記載のＣＥＲをコードする核酸を導入することによって、非天然または組換え細胞（例えば、非天然または組換えＴ細胞）に遺伝子改変することができ、それにより細胞は細胞表面に位置するＣＥＲを発現する。
コアウイルスをコードするベクターは、本明細書中、“ウイルスベクター”と称される。ヒト遺伝子治療用途について同定されたものを含む、本明細書に記載の組成物と共に用いるのに適する多数の入手可能なウイルスベクターが存在する（Pfeifer and Verma, Ann. Rev. Genomics Hum. Genet. 2:177, 2001）。好適なウイルスベクターとしては、レトロウイルス由来のベクター、例えばモロニーマウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）由来ベクターなどのＲＮＡウイルスに基づくベクターが挙げられ、より複雑なレトロウイルス由来のベクター、例えば、レンチウイルス由来のベクターが含まれる。ＨＩＶ－１由来のベクターはこのカテゴリーに属する。他の例には、ＨＩＶ－２、ＦＩＶ、ウマ感染性貧血ウイルス、ＳＩＶ、およびＭａｅｄｉ－Ｖｉｓｎａウイルス（ヒツジレンチウイルス）に由来するレンチウイルスベクターが含まれる。レトロウイルスベクターおよびレンチウイルスウイルスベクターを使用する方法ならびにキメラ受容体導入遺伝子を含むウイルス粒子で哺乳動物宿主細胞を形質導入するために細胞をパッケージングする方法は、当技術分野において公知であり、例えば米国特許第８，１１９，７７２号； Walchli et al., PLoS One 6:327930, 2011; Zhao et al., J. Immunol. 174:4415, 2005; Engels et al., Hum. Gene Ther. 14:1155, 2003; Frecha et al., Mol. Ther. 18:1748, 2010; Verhoeyen et al., Methods Mol. Biol. 506:97, 2009に既報である。レトロウイルスおよびレンチウイルスベクター構築物および発現系もまた市販されている。
特定の態様において、ウイルスベクターは、標的に特異的なＣＥＲをコードする非内生核酸配列を導入するために用いられる。ウイルスベクターは、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターであり得る。ウイルスベクターはまた、形質導入のためのマーカーをコードする核酸配列を含み得る。ウイルスベクターのための形質導入マーカーは、当技術分野で公知であり、そして薬剤耐性を付与し得る選択マーカー、またはフローサイトメトリーのような方法によって検出され得る蛍光マーカーもしくは細胞表面タンパク質のような検出可能なマーカーを含む。特定の態様において、ウイルスベクターは、蛍光タンパク質（例えば、緑色、黄色）、ヒトＣＤ２の細胞外ドメイン、または切断型ヒトＥＧＦＲ（配列番号１０５のアミノ酸配列をコードする）（ｈｕＥＧＦＲｔ；Wang et al., Blood 118:1255, 2011を参照のこと）を含む形質導入のためのマーカーをさらに含む。ウイルスベクターゲノムが別個の転写物として宿主細胞中で発現されるべき複数の核酸配列を含む場合、ウイルスベクターはまた、双シストロン性またはマルチシストロン性発現を可能にする２つ（またはそれ以上）の転写物間にさらなる配列を含み得る。ウイルスベクターに用いられるそのような配列の例としては、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、フリン切断部位、ウイルス２Ａペプチド（例えば、Ｔ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｆ２Ａ）、またはそれらの何れかの組合せが挙げられる。
例えばアデノウイルスベースのベクターおよびアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベースのベクターを含むＤＮＡウイルスベクター；アンプリコンベクター、複製欠損型単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）および弱毒化ＨＳＶを含む、単純ヘルペスウイルス由来のベクターを含む、他のウイルスベクターもまた、ポリヌクレオチド送達のために用いることができる（Krisky et al., Gene Ther. 5: 1517, 1998）。
遺伝子治療用途のために最近開発された他のウイルスベクターもまた、本明細書に記載の組成物および方法と共に用いられ得る。かかるベクターには、バキュロウイルスおよびα－ウイルス由来のもの（Jolly, D J. 1999. Emerging Viral Vectors. pp 209-40 in Friedmann T. ed. The Development of Human Gene Therapy. New York: Cold Spring Harbor Lab）、またはプラスミドベクター（例えば、スリーピングビューティーまたは他のトランスポゾンベクター）が含まれる。ある態様において、ウイルスまたはプラスミドベクターはさらに、形質導入のための遺伝子マーカー（例えば、緑色蛍光タンパク質、ｈｕＥＧＦＲｔ（配列番号１０５のアミノ酸配列をコードする）を含む。
特定の態様において、遺伝子編集方法は、本発明のＣＥＲをコードするポリヌクレオチドを含むように宿主細胞ゲノムを改変するために用いられる。遺伝子編集またはゲノム編集は、遺伝子操作されたエンドヌクレアーゼを用いて、ＤＮＡを挿入、置換、または宿主細胞のゲノムから除去する遺伝子操作の方法である。ヌクレアーゼは、ゲノム内の標的遺伝子座に特異的な二本鎖切断を引き起こす。次いで、宿主細胞の内生ＤＮＡ修復経路は、非相同末端結合（ＮＨＥＪ）および相同組換えによって、誘導された切断を修復する。遺伝子編集に有用な例示的エンドヌクレアーゼとしては、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写アクティベーター様エフェクター（ＴＡＬＥ）ヌクレアーゼ、クラスター化され、規則的に間隔が空いた短い回文構造の繰り返し（ＣＲＩＳＰＲ）／Ｃａｓヌクレアーゼシステム（例えば、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９）、メガヌクレアーゼまたはそれらの組合せが挙げられる。遺伝子編集エンドヌクレアーゼを用いて、Ｂ細胞およびＴ細胞を含む免疫細胞における遺伝子または遺伝子発現を破壊またはノックアウトする方法は、当技術分野において公知であり、例えば、ＰＣＴ公開公報ＷＯ ２０１５／０６６２６２；ＷＯ ２０１３／０７４９１６；ＷＯ ２０１４／０５９１７３； Cheong et al., Nat. Comm. 2016 7:10934; Chu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2016 113:12514-12519に記載されている（それらのそれぞれからの方法は、その全体が引用により本明細書中に包含される）。
特定の態様において、Ｂ細胞、共通リンパ球前駆細胞を含むリンパ球系前駆細胞、樹状細胞を含む抗原提示細胞、ランゲルハンス細胞、骨髄系前駆細胞または成熟骨髄細胞は、本発明のＣＥＲをコードする非内生核酸分子を含むように改変される。
ある態様において、Ｂ細胞は、一般的に、１以上のＣＥＲを発現するように遺伝子改変されている。Ｂ細胞は、宿主細胞として有利であり得る特定の性質を有し、これには、炎症部位（例えば、リンパ節、腫瘍）への輸送、抗原を内在化および提示することができる、Ｔ細胞を共刺激することができる、高度に増殖性である、そして自己複製することができる（生存し続ける）ことが含まれる。特定の態様において、ＣＥＲで改変されたＢ細胞は、エンガルフされた標的細胞またはエンガルフされた標的粒子をより小さいペプチドに消化し、それらをＭＨＣ分子を介してＴ細胞に提示することができる。ＣＥＲで改変されたＢ細胞による抗原提示は、非標的抗原に対する免疫応答の抗原拡散に寄与し得る。Ｂ細胞には、Ｂ細胞系統（例えば、プレプロ－Ｂ細胞、プロ－Ｂ細胞およびプレ－Ｂ細胞）；未成熟および不活化Ｂ細胞または成熟および機能的または活性化Ｂ細胞に関与する前駆細胞（progenitorまたはprecursor）が含まれる。特定の態様において、Ｂ細胞は、ナイーブＢ細胞、血漿細胞、制御性Ｂ細胞、辺縁帯Ｂ細胞、濾胞Ｂ細胞、リンパ形質細胞様細胞、プラズマブラスト細胞、メモリーＢ細胞、またはそれらの何れかの組合せであり得る。メモリーＢ細胞は、ナイーブＢ細胞には存在しないＣＤ２７の発現によりナイーブＢ細胞特別され得る。特定の態様において、Ｂ細胞は、ヒト、マウス、ラット、または他の哺乳動物に由来する初代細胞または細胞株であり得る。Ｂ細胞系は当技術分野で周知である。哺乳動物から得られる場合、Ｂ細胞は、血液、骨髄、脾臓、リンパ節、または他の組織もしくは体液を含む多数の供給源から得ることができる。特定の態様において、Ｂ細胞は、腫瘍部位（腫瘍浸潤性Ｂ細胞）から単離される。Ｂ細胞組成物は、濃縮または精製され得る。
特定の態様において、宿主Ｂ細胞の内生遺伝子の発現は、阻害、ノックダウンまたはノックアウトされる。Ｂ細胞において阻害、ノックダウンまたはノックアウトされ得る内生遺伝子の例には、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）遺伝子（例えば、ＣＤ７９ｂ、ＩＧＨ、ＩＧκ、ＩＧλ、またはそれらの何れかの組合せ）、免疫チェックポイント分子（例えば、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、アデノシン、ＧＡＬ９、ＶＩＳＴＡ、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ－５、ＰＶＲＬ２、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ａ２ａＲ、ＣＤ２４４／２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ－１、ＰＶＲＩＧ／ＣＤ１１２Ｒ、またはそれらの何れかの組合せ）、またはそれらの何れかの組合せが含まれる。ＢＣＲ遺伝子、免疫チェックポイント分子遺伝子、またはその両方の発現は、遺伝子レベル、転写レベル、もしくは翻訳レベル、またはそれらの組み合わせで阻害、ノックダウン、またはノックアウトされ得る。ＢＣＲ遺伝子、免疫チェックポイント分子遺伝子、またはその両方を阻害、ノックダウンまたはノックアウトする方法は、例えば、ＲＮＡ干渉物質（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡなど）または人工エンドヌクレアーゼ（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼシステム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写アクティベーター様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、メガヌクレアーゼ、またはそれらの何れかの組合せ）により達成することができる。ある態様において、内生遺伝子（例えば、ＢＣＲ遺伝子または免疫チェックポイント分子遺伝子）は、本発明のＣＥＲをコードするポリヌクレオチドを、人工エンドヌクレアーゼを用いるなどして、内生Ｂ細胞遺伝子の遺伝子座に挿入することによってノックアウトされる。
ある態様において、細胞表面上に本発明のＣＥＲを発現することができる細胞は、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ナイーブ（ＣＤ４５ ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ４５ＲＯ－）、セントラルメモリー（ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ８＋）、エフェクターメモリー（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＣＲ７－、ＣＤ６２Ｌ－、ＣＤ２７－）、ウイルス特異的、粘膜関連インバリアント、γδ（ｇｄ）、組織常在性Ｔ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞を含むＴ細胞である。特定の態様において、Ｔ細胞は、ヒト、マウス、ラットまたは他の哺乳動物に由来する初代細胞または細胞株であり得る。哺乳動物から得られる場合、Ｔ細胞は、血液、骨髄、リンパ節、胸腺、または他の組織もしくは体液を含む多数の供給源から得ることができる。特定の態様において、Ｔ細胞は、腫瘍部位（腫瘍浸潤性Ｔ細胞）から単離される。Ｔ細胞組成物は、濃縮または精製され得る。Ｔ細胞株は当技術分野で周知であり、そのいくつかは、Sandberg et al., Leukemia 21:230, 2000に記載されている。特定の態様において、ＴＣＲαおよびβ鎖の内生発現を欠くＴ細胞を用いる。そのようなＴ細胞は、ＴＣＲαおよびβ鎖の内生発現を天然に欠くか、または発現を遮断するように（例えば、ＴＣＲαおよびβ鎖を発現しないトランスジェニックマウス由来のＴ細胞またはＴＣＲαおよびβ鎖の発現を阻害するように操作された細胞）、またはＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、または両方の遺伝子をノックアウトするように改変されていてもよい。特定の態様において、細胞表面上に本発明のキメラタンパク質を発現することができる細胞は、Ｔ細胞またはＴ細胞系統の細胞ではなく、前駆細胞、幹細胞、または細胞表面抗ＣＤ３を発現するように改変された細胞である。
特定の態様において、ＣＥＲ改変型Ｔ細胞は、エンガルフされた標的細胞またはエンガルフされた標的粒子をより小さいペプチドに消化し、それらをＭＨＣ分子を介してＴ細胞に提示することができる。ＣＥＲ改変Ｔ細胞による抗原提示は、非標的抗原に対する免疫応答の抗原拡散に寄与し得る。
特定の態様において、本発明のＣＥＲを発現するようにトランスフェクトされた宿主Ｔ細胞は、ウイルス特異的Ｔ細胞、腫瘍抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞、ナイーブＴ細胞、メモリー幹Ｔ細胞、セントラルメモリーもしくはエフェクターメモリーＴ細胞、またはＣＤ４＋ ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞などの、機能的Ｔ細胞である。
特定の態様において、宿主Ｔ細胞の内生遺伝子の発現は、阻害されるか、ノックダウンされるか、またはノックアウトされる。Ｔ細胞において阻害、ノックダウン、またはノックアウトされ得る内生遺伝子の例には、ＴＣＲ遺伝子（ＴＲＡ、ＴＲＢまたは両方）、ＨＬＡ遺伝子（ＨＬＡ クラスＩ遺伝子、ＨＬＡ クラスＩＩ遺伝子、または両方）、免疫チェックポイント分子（ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、アデノシン、ＧＡＬ９、ＶＩＳＴＡ、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ－５、ＰＶＲＬ２、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ａ２ａＲ、ＣＤ２４４／２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ－１、ＰＶＲＩＧ／ＣＤ１１２Ｒ、またはそれらの何れかの組合せ）、またはそれらの何れかの組合せが含まれる。ＴＣＲ遺伝子、ＨＬＡ遺伝子、免疫チェックポイント分子遺伝子、またはそれらの任意の組み合わせの発現は、遺伝子レベル、転写レベル、もしくは翻訳レベル、またはそれらの何れかの組合せの阻害、ノックダウン、またはノックアウトを可能にする。ＴＣＲ遺伝子、ＨＬＡ遺伝子、免疫チェックポイント分子遺伝子、またはそれらの任意の組み合わせを阻害、ノックダウン、またはノックアウトする方法は、例えば、ＲＮＡ干渉物質（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡなど）または人工エンドヌクレアーゼ（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼシステム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写アクティベーター様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、メガヌクレアーゼ、またはそれらの何れかの組合せ）によって達成することができる。ある態様において、内生遺伝子（例えば、ＴＣＲ遺伝子、ＨＬＡ遺伝子、または免疫チェックポイント分子遺伝子）は、本発明のＣＥＲをコードするポリヌクレオチドを、例えば人工エンドヌクレアーゼを介して内生Ｔ細胞遺伝子の遺伝子座に挿入することによってノックアウトされる。
特定の態様において、本明細書に記載の態様のいずれかの、ホスファチジルセリン（ＰｔｄＳｅｒ）に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲを含む宿主細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞、共通リンパ球前駆細胞を含むリンパ球系前駆細胞、樹状細胞を含む抗原提示細胞、ランゲルハンス細胞、骨髄系前駆細胞または成熟骨髄細胞である。
他の態様において、本明細書に記載の態様のいずれかの、標的抗原に結合する結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）に結合する細胞外ドメインを含むＣＥＲを含む宿主細胞は、Ｂ細胞である。
さらに他の態様において、本明細書に記載の態様のいずれかの、エンガルフメント促進マーカーまたは標的抗原に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＥＲを含む宿主細胞は、エンガルフメント表現型を天然に示さない細胞である。特定の態様において、宿主細胞はＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞、またはリ共通リンパ球前駆細胞を含むリンパ球系前駆細胞である。特定の態様において、宿主細胞は、哺乳動物細胞に対してエンガルフメント表現型を天然に示さない細胞である。
特定の態様において、宿主細胞は、１種類のＣＥＲを発現するように遺伝子改変されていてもよい。他の態様において、宿主細胞は、少なくとも２つ以上の異なるＣＥＲを発現し得る。
特定の態様において、１つまたは複数のＣＥＲを発現するように改変されている宿主細胞集団は、Ｂ細胞の集団、Ｔ細胞の集団、ナチュラルキラー細胞の集団、共通リンパ球前駆細胞を含むリンパ球系前駆細胞の集団、樹状細胞、ランゲルハンス細胞を含む抗原提示細胞の集団、骨髄系前駆細胞の集団、成熟骨髄細胞の集団、またはそれらの何れかの組合せであり得る。特定の態様において、１つまたは複数のＣＥＲを発現するように改変されている宿主細胞集団は、Ｂ細胞の集団、Ｔ細胞の集団、またはその両方である。
特定の態様において、宿主細胞集団内の各宿主細胞は、同じＣＥＲまたはＣＥＲのセットを発現する。他の態様において、宿主細胞集団は、２以上の宿主細胞亜集団の混合物を含み、ここで、各亜集団は、異なるＣＥＲまたはＣＥＲのセットを発現する。
特定の態様において、本明細書に記載のＣＥＲを発現する宿主細胞、例えばＢ細胞またはＴ細胞を調製するとき、宿主細胞、例えばＢ細胞またはＴ細胞の増殖を促進する１以上の増殖因子サイトカインを、細胞培養物へ添加することができる。該サイトカインは、ヒトまたは非ヒトであってよい。Ｔ細胞増殖を促進するために用い得る増殖因子サイトカインの例には、ＩＬ－２、ＩＬ－１５などが含まれる。Ｂ細胞増殖を促進するために用い得る増殖因子サイトカインの例には、ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＢＡＦＦなどが含まれる。
さらなる態様において、選択的遺伝子導入を用いて、ＣＥＲベクターを特定の領域または臓器に局在化させる。ある態様において、選択的遺伝子導入を用いて、ＣＥＲベクターを対象の肝臓または肺に局在化させる。
ＣＥＲベクターを用いた宿主細胞の遺伝子改変の前に、宿主細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞など）の供給源を、対象から得て（例えば、全血、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織）、それから得られた宿主細胞を当技術分野で公知の方法を用いて単離する。特定の宿主細胞サブセットは、公知の技術に従って収集され得て、そして抗体への親和性結合、フローサイトメトリーおよび／または免疫磁気選択のような公知の技術によって濃縮または枯渇され得る。濃縮および／または枯渇工程およびＣＥＲの導入後、所望の改変宿主細胞のインビトロでの増殖は、当業者には明らかであろう既知の技術またはその変形に従って実施することができる。
特定の態様において、本明細書に記載の態様のいずれかによるＣＥＲを含む、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞、リンパ球系前駆細胞、抗原提示細胞、樹状細胞、ランゲルハンス細胞、骨髄系前駆細胞、および成熟骨髄細胞を含む宿主細胞は、標的細胞に対して約２０から約１，５００の食細胞作用指数を有する。“食細胞作用指数”は、培地中の標的細胞およびＣＥＲで改変された宿主細胞の懸濁液の一定期間のインキュベーション中にＣＥＲで改変された宿主細胞あたりに取り込まれた標的細胞の数を数えることによって決定される形質導入宿主細胞の食細胞作用活性の尺度である。食細胞作用指数は、［エンガルフされた標的細胞の総数／計数されたＣＥＲで改変された細胞の総数（例えば、食細胞作用頻度）］に、［ＣＥＲ＋Ｂａ／Ｆ３細胞当たりの標的細胞染色の平均面積×１００（例えば、ハイブリッドキャプチャー）］を乗じることによって計算できるか、または［エンガルフされた粒子の総数／計数されたＣＥＲで改変された宿主細胞の総数］に［エンガルフされた粒子を含むＣＥＲで改変された宿主細胞の総数／計数されたＣＥＲ細胞の総数］×１００を乗じることによって計算できる。特定の態様において、ＣＥＲで改変された細胞は、約３０から約１，５００；約４０から約１，５００；約５０から約１，５００；約７５から約１，５００；約１００から約１，５００；約２００から約１，５００；約３００から約１，５００；約４００から約１，５００；約５００から約１，５００；約２０から約１，４００；約３０から約１，４００；約４０から約１，４００；約５０から約１，４００；約１００から約１，４００；約２００から約１，４００；約３００から約１，４００；約４００から約１，４００；約５００から約１，４００；約２０から約１，３００；約３０から約１，３００；約４０から約１，３００；約５０から約１，３００；約１００から約１，３００；約２００から約１，３００；約３００から約１，３００；約４００から約１，３００；約５００から約１，３００；約２０から約１，２００；約３０から約１，２００；約４０から約１，２００；約５０から約１，２００；約１００から約１，２００；約２００から約１，２００；約３００から約１，２００；約４００から約１，２００；約５００から約１，２００；約２０から約１，１００；約３０から約１，１００；約４０から約１，１００；約５０から約１，１００；約１００から約１，１００；約２００から約１，１００；約３００から約１，１００；約４００から約１，１００；または、約５００から約１，１００；約２０から約１，０００；約３０から約１，０００；約４０から約１，０００；約５０から約１，０００；約１００から約１，０００；約２００から約１，０００；約３００から約１，０００；約４００から約１，０００；または、約５００から約１，０００；約２０から約７５０；約３０から約７５０；約４０から約７５０；約５０から約７５０；約１００から約７５０；約２００から約７５０；約３００から約７５０；約４００から約７５０；または、約５００から約７５０；約２０から約５００；約３０から約５００；約４０から約５００；約５０から約５００；約１００から約５００；約２００から約５００；または、約３００から約５００の食細胞作用指数を有する。さらなる態様において、インキュベーション時間は約２時間から約４時間、約２時間、約３時間、または約４時間である。なおさらなる態様において、ＣＥＲで改変された細胞は、切断型ＥＧＦＲ対照で形質導入された細胞よりも統計的に有意に高い食細胞作用指数を示す。食細胞作用指数は、当技術分野において公知であり、実施例にさらに記載されているように、フローサイトメトリーまたは蛍光顕微鏡による定量化を含む方法を用いて計算することができる。
特定の態様において、本明細書に記載の態様の１つのように、ＣＥＲを発現するように改変された宿主細胞は、ＣＥＲを発現しない宿主細胞と比較して、以下を示す：標的細胞に対する細胞溶解活性、すなわち、その表面上に標的抗原を発現する標的細胞を溶解することができる；活性化の亢進（例えば、ＩＦＮγなどのサイトカイン産生の亢進）；増強された細胞増殖；増強された細胞増殖（expansion）；増強された抵抗性；増強された記憶形成；抗原提示活性；抗原特異的食作用シグナル伝達の誘導または抗原特異的食作用シグナル伝達の増強；エンガルフされた標的細胞の分解；またはそれらのいずれかの組合せ。特定の態様において、ＣＥＲ改変宿主細胞は、その抗原提示活性を介して抗原拡散を誘発することができる。
宿主細胞は、霊長動物、ウシ、ウマ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、またはブタなどの動物由来であり得る。好ましい態様において、動物はヒトである。宿主細胞は、健康な対象または抗原の発現に関連する疾患を有する対象から得られ得る。
ＣＥＲおよびＣＥＲを発現するように改変された細胞の使用
本発明は、宿主細胞のエンガルフメント表現型を変化させるための方法を提供する。一側面において、本発明は、エンガルフメント表現型を天然に示さない宿主細胞集団に、本明細書に記載の態様のいずれかの、少なくとも１つのＣＥＲをコードする核酸分子または少なくとも１つのＣＥＲを含むベクターを導入し、そして該宿主細胞集団において少なくとも１つのＣＥＲを発現させることを含む、エンガルフメント表現型を示す細胞集団を作製する方法を提供する。特定の態様において、エンガルフメント表現型とは食細胞作用である。特定の態様において、少なくとも１つのＣＥＲを発現する宿主細胞集団は、抗原特異的食作用シグナル伝達活性が可能である。抗原特異的食作用シグナル伝達カスケードの誘導には、ＣＤＣ４２、Ｒａｃ１またはその両方の活性化が含まれ得る。特定の態様において、少なくとも１つのＣＥＲを発現する宿主細胞の集団は、エンガルフされた標的細胞を分解することができる。
別の側面において、本発明は、本明細書に記載の態様のいずれかの、少なくとも１つのＣＥＲをコードする核酸分子または少なくとも１つのＣＥＲを含むベクターを宿主細胞集団に導入し、そして該宿主細胞集団において少なくとも１つのＣＥＲを発現させることを含む（ここで、少なくとも１つのＣＥＲは、宿主細胞によって天然には標的化されていない、エンガルフメント促進マーカーまたは抗原マーカー（標的抗原）に特異的なエンガルフメント表現型を付与する）、細胞集団のエンガルフメント表現型を改変する方法を提供する。特定の態様において、エンガルフメント表現型とは食細胞作用である。
さらに別の側面において、本発明は、本明細書に記載の態様のいずれかの少なくとも１つのＣＥＲをコードする核酸分子または少なくとも１つのＣＥＲを含むベクターを宿主細胞集団に導入し、該宿主細胞集団において少なくとも１つのＣＥＲを発現させることを含む（ここで、少なくとも１つのＣＥＲは、宿主細胞によって天然に標的とされるエンガルフメント促進マーカーまたは抗原マーカー（標的抗原）に特異的であり、宿主細胞による少なくとも１つのＣＥＲの発現は、標的化されたエンガルフメント促進マーカーまたは抗原マーカーを提示する細胞、病原菌または粒子の宿主細胞によるエンガルフメントを増強する）、細胞集団のエンガルフメント表現型を増強する方法を提供する。
エンガルフメント表現型を示す宿主細胞の集団を作製する方法、細胞の集団におけるエンガルフメント表現型を変更する方法、または細胞の集団におけるエンガルフメント表現型を増強する方法のさらなる態様において、宿主細胞の集団による少なくとも１つのＣＥＲの発現は、細胞集団の増殖能を増強し、細胞集団の活性化を増強し（例えば、ＩＦＮγなどのサイトカイン産生の増強）、宿主細胞集団の増殖を増強し、宿主細胞集団の抵抗性を増強し、細胞集団の記憶形成を増強し、宿主細胞の集団に抗原提示活性を付与し、宿主細胞の集団の細胞溶解活性を増強し、またはそれらのいずれかの組合せを示す。特定の態様において、ＣＥＲ改変宿主細胞の集団は、抗原提示活性を介して抗原拡散を誘発することができる。
本明細書に記載の態様のいずれかの、ＣＥＲ、ＣＥＲをコードする核酸分子、ＣＥＲを含むベクター、およびＣＥＲを発現する宿主細胞もまた、疾患、障害または望ましくない病状に罹患している対象を処置する方法において用い得る。これらの方法の態様は、本明細書に記載の、１以上のＣＥＲ、１以上のＣＥＲをコードする核酸分子、１以上のＣＥＲを含むベクター、または１以上のＣＥＲを発現するように遺伝子改変された宿主細胞集団を含む治療的有効量の医薬組成物を対象に投与することを含む。
本明細書に記載のＣＥＲを発現する細胞で処置することができる疾患には、癌、感染症（ウイルス、細菌、真菌、原虫感染症）、炎症性または免疫疾患（例えば、自己免疫疾患、炎症性腸疾患、多発性硬化症）、変性疾患（例えば、関節および軟骨）、および神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病）が含まれる。養子免疫療法および遺伝子療法は、様々な種類の癌（Morgan et al., Science 314:126, 2006; Schmitt et al., Hum. Gene Ther. 20:1240, 2009; June, J. Clin. Invest. 117:1466, 2007）および感染症（Kitchenen et al., PLoS One 4:38208, 2009; Rossi et al., Nat. Biotechnol. 25:1444, 2007; Zhang et al., PLoS Pathog. 6:e1001018, 2010; Luo et al., J. Mol. Med. 89:903, 201）に対する有望な治療法である。
本明細書に記載の組成物および方法により処置され得る対象には、ヒト、霊長動物、ウシ、ウマ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、またはブタなどの動物が含まれる。対象は男性でも女性でもよく、幼児、若年、青年、成人および老年の対象を含む任意の適切な年齢であり得る。
固形腫瘍および白血病を含む多数の癌が、本明細書に記載の組成物および方法に適している。処置され得る例示的な癌種には、乳線、前立腺および結腸の腺癌；肺の全ての型の気管支原発癌；気管支原発癌；黒色腫；肝細胞癌；神経芽腫；乳頭腫；アプドーマ；分離腫（choristoma）；鰓腫（branchioma）；悪性カルチノイド症候群；カルチノイド心臓病；および、癌腫（例えば、ウォーカー癌、基底細胞癌、扁平上皮癌、ブラウン・ピアース癌、乳管癌、エールリッヒ腫瘍、Ｋｒｅｂｓ２、メルケル細胞癌、粘液癌、非小細胞肺癌、エンバク細胞癌、乳頭癌、スキルス癌、細気管支癌、気管支原性癌、扁平細胞癌および移行上皮癌）が含まれる。処置され得るさらなる癌種には、組織球症；悪性組織球症；白血病；ホジキン疾患；免疫増殖性小腸疾患；非ホジキンリンパ腫；形質細胞腫；多発性骨髄腫；形質細胞腫；細網内皮症；黒色腫；軟骨芽細胞腫；軟骨腫；軟骨肉腫；線維腫；線維肉腫；巨細胞腫；組織球腫；脂肪腫；脂肪肉腫；中皮腫；粘液腫；粘液肉腫；骨腫；骨肉腫；脊索腫；頭蓋咽頭腫；胚細胞腫；過誤腫；間葉腫；中腎腫；筋肉腫；エナメル上皮腫；セメント腫；歯牙腫；奇形腫；胸腺腫；絨毛性腫瘍が含まれる。さらに、以下の癌種もまた処置に適していると考えられる：腺腫；胆管腫；真珠腫；円柱腫；嚢胞腺癌；嚢胞腺腫；顆粒膜細胞腫；男性胚腫（gynandroblastoma）；肝細胞癌；汗腺腫；膵島細胞腫；ライディッヒ細胞腫；乳頭腫；セルトリ細胞腫；莢膜細胞腫；平滑筋腫；平滑筋肉腫；筋芽細胞腫；子宮筋腫（myomma）；筋肉腫；横紋筋腫；横紋筋肉腫；上衣細胞腫；神経節腫；神経膠腫；髄芽腫；髄膜腫；神経鞘腫；神経芽細胞腫；神経上皮腫；神経線維腫；神経細胞腫；傍神経節腫；非クロム親和性傍神経筋腫。処置され得る癌種には、被角血管腫；好酸球増多随伴性血管類リンパ組織増殖症；硬化性血管腫；血管腫症；血管球腫瘍；血管内皮細胞腫；血管腫；血管周皮腫；血管肉腫；リンパ管腫；リンパ管筋腫；リンパ管肉腫；松果体腫；癌肉腫；軟骨肉腫；嚢胞肉腫；葉状嚢胞肉腫；線維肉腫；血管肉腫；平滑筋肉腫；白血肉腫；脂肪肉腫；リンパ管肉腫；筋肉腫；粘液肉腫；卵巣癌腫；横紋筋肉腫；肉腫；新生物；神経線維腫症；および、子宮頸部形成異常が含まれる。
ＣＥＲ療法に適する過増殖性疾患の例としては、Ｂ細胞リンパ腫を含むＢ細胞癌（例えば、さまざまな形態のホジキン病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）または中枢神経系リンパ腫）、白血病（例えば、リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ芽球性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞白血病、慢性骨髄性白血病のＢ細胞芽球形質転換）および骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）である。さらなるＢ細胞癌には、小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、骨の孤立性形質細胞腫、骨外性形質細胞腫、粘膜に関連したリンパ系組織（ＭＡＬＴ）の節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、バーキットリンパ腫／白血病、悪性度不明のＢ細胞増殖、リンパ腫様肉芽腫症、および移植後リンパ増殖性疾患が含まれる。
炎症性疾患および自己免疫疾患には、関節炎、リウマチ性関節炎、若年性リウマチ性関節炎、骨関節症、多発性軟骨炎、乾癬性関節炎、乾癬、皮膚炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、封入体筋炎、炎症性筋疾患、中毒性表皮壊死症、全身性強皮症（systemic scleroderma and sclerosis）、ＣＲＥＳＴ症候群、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、呼吸窮迫症候群、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、髄膜炎、脳炎、ブドウ膜炎、大腸炎、糸球体腎炎、アレルギー症状、湿疹、喘息、Ｔ細胞浸潤および慢性炎症性応答を伴う症状、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性心筋炎、白血球粘着不全症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、亜急性皮膚エリテマトーデス、円板状ループス、ループス脊髄炎、ループス脳炎、若年発症糖尿病、多発性硬化症、アレルギー性脳炎、視神経脊髄炎、リウマチ熱、シドナム舞踏病、サイトカインおよびＴリンパ球が介在する急性および遅延型過敏反応に関連する免疫応答、結核、サルコイドーシス、ウェゲナー肉芽腫症およびチャーグ・ストラウス症候群を含む肉芽腫症、無顆粒球症、血管炎（過敏性血管炎／血管炎、ＡＮＣＡおよびリウマトイド血管炎を含む）、再生不良性貧血、先天性赤芽球癆（Diamond Blackfan anemia）、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）を含む免疫性溶血性貧血、悪性貧血、赤芽球癆（ＰＲＣＡ）、第ＶＩＩＩ因子欠乏症、血友病Ａ、自己免疫性好中球減少症、汎血球減少症、白血球減少症、白血球滲出を伴う疾患、中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性疾患、アルツハイマー病、多臓器損傷症候群、重症筋無力症、抗原－抗体複合体介在疾患、抗糸球体基底膜疾患、抗リン脂質抗体症候群、アレルギー性神経炎、ベーチェット病、キャッスルマン症候群、グッドパスチャー症候群、ランバート－イートン筋無力症候群、レイノー症候群、ジョルゲン症候群、スティーブンス・ジョンソン症候群、固形臓器移植拒絶反応、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、類天疱瘡、天疱瘡、自己免疫性多発性内分泌障害、血清反応陰性脊椎関節症、ライター病、スティッフマン症候群、巨細胞性動脈炎、免疫複合腎炎、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発神経障害またはＩｇＭ介在ニューロパシー、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、自己免疫性血小板減少症、自己免疫性精巣炎および卵巣炎を含む精巣および卵巣の自己免疫性疾患、原発性甲状腺機能低下症；自己免疫性甲状腺炎、慢性甲状腺炎（橋本甲状腺炎）、亜急性甲状腺炎、特発性甲状腺機能低下症、アジソン病、グレーブ病、自己免疫性多腺性症候群（または、多腺性内分泌障害症候群）、インスリン依存性真性糖尿病（ＩＤＤＭ）とも称されるＩ型糖尿病およびシーハン症候群を含む、自己免疫性内分泌疾患；自己免疫性肝炎、リンパ系間質性肺炎（ＨＩＶ）、閉塞性細気管支炎（非移植性）、非特異性間質性肺炎（ＮＳＩＰ）、ギランバレー症候群、大血管血管炎（リウマチ性多発筋痛症および大細胞（タカヤス）動脈炎を含む）、中型血管炎（川崎病および結節性多発性動脈炎を含む）、結節性多発性動脈炎（ＰＡＮ）、強直性脊椎炎、バーガー病（ＩｇＡ腎症）、急速進行性糸球体腎炎、原発性胆汁性肝硬変、セリアック病（グルテン性腸症）、クリオグロビン血症、肝炎と関連するクリオグロブリン血症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、冠状動脈疾患、家族性地中海熱、顕微鏡的多発性血管炎、コーガン症候群、ウィスコット－アルドリッチ症候群ならびに閉塞性血栓性血管炎が含まれる。特定の態様において、炎症性疾患を処置するという状況において、恒常性（非炎症性）エンガルフメントシグナル伝達ドメインを有するＣＥＲを設計することが好ましい場合がある。
感染症は、感染性病原体に関連するものを含み、そして種々の細菌（例えば、病原性大腸菌、ネズミチフス菌、緑膿菌、炭疽菌、ボツリヌス菌、クロストリジウム・ディフィシル、ウェルシュ菌、ヘリコバクター・ピロリ菌、コレラ菌、リステリア菌、リケッチア菌、クラミジア菌など）、マイコバクテリア、および寄生虫（原虫の既知の寄生虫メンバーを含む）が含まれる。感染性ウイルスには、アデノウイルス、ブニヤウイルス、ヘルペスウイルス、パポバウイルス、パピローマウイルス（例えば、ＨＰＶ）、パラミクソウイルス、ピコルナウイルス、ラブドウイルス（例えば、狂犬病）、オルソミクソウイルス（例えば、インフルエンザ）、ポックスウイルス（例えば、ワクシニア）、レオウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ）、フラビウイルス（例えば、ＨＣＶ、ＨＢＶ）などの真核生物ウイルスが含まれる。特定の態様において、本発明のＣＥＲを含む組成物は、対象において持続感染を確立することができる病原菌による感染症を処置するために用いられる。
神経変性疾患は、レビー小体病、ポリオ後症候群、シャイ－ドレーガー症候群、オリーブ橋小脳変性症、パーキンソン病、多系統萎縮症、線条体黒質変性症、ユビキチン陽性封入体を伴う前頭側頭葉変性症（ＦＬＴＤ－Ｕ）、タウオパチー（アルツハイマー病および核上性麻痺を含むが、これに限定されない）、プリオン病（牛海綿状脳症、スクレイピー、クロイツフェルト－ヤコブ症候群、クールー（kuru）、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、慢性消耗病および致死性家族性不眠症を含むが、これに限定されない、伝達性海綿状脳症としても公知)、眼球麻痺、運動神経疾患（筋萎縮性側索硬化症（ルー・ゲーリッグ病）を含む）、および神経系ヘテロ変性疾患（カナバン病、ハンチントン病、神経性ステロイドリポフスチン症、アレクサンダー病、トゥレット症候群、メンケス変態症候群、コケイン症候群、ハールフォルデン－スパッツ症候群、ラフォラ病、レット症候群、肝レンズ核変性症、レッシュナイハン症候群およびウンフェルリヒト・ルントボルク病を含むが、これに限定されない）、認知症（ピック病および脊髄小脳失調症を含むが、これに限定されない）、癌（例えば、体内の何れかの部位の癌に起因する脳転移を含む、ＣＮＳの癌および／または脳腫瘍）を含む。アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ルー・ゲーリッグ病患）およびプリオン病を含む多くの神経変性疾患は、神経病理学的徴候を共有し、アミロイドβまたはアルツハイマー病におけるタウなどのタンパク質；パーキンソン病（ＰＤ）、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、またはアルツハイマー病におけるαシヌクレイン；ハンチントン病におけるハンチントン、筋萎縮性側索硬化症におけるＳＯＤ１、ハンチントン病または筋萎縮性側索硬化症におけるポリグルタミン（ｐｏｌｙＱ）リピートを含むタンパク質；筋萎縮性側索硬化症またはＦＬＴＤ－ＵにおけるＴＤＰ－４３；あるいは、プリオン病におけるプリオンタンパク質（例えば、ＰｒＰＳｃ）の異常な蓄積がある。従って、特定の態様において、ＣＥＲ療法は、異常なタンパク質蓄積を低減または防止し、それによって神経変性疾患の進行を遅延または防止するために、疾患関連タンパク質を標的とするように設計され得る。
本発明のＣＥＲは、細胞結合形態（例えば、標的細胞集団（成熟Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋またはＣＤ４＋ Ｔ細胞）またはＴ細胞系統の他の細胞）の遺伝子治療）で対象に投与され得る。従って、例えば、本発明のＣＥＲは、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、Ｂ細胞、リンパ球系前駆細胞、抗原提示細胞、樹状細胞、ランゲルハンス細胞、骨髄系前駆細胞、成熟骨髄細胞（それらのサブセットを含む）、またはそれらの何れかの組合せの表面上に発現されるものを対象に投与され得る。特定の態様において、患者を処置する方法は、有効量のＣＥＲにより改変された細胞（すなわち、１つまたは複数のＣＥＲを発現する組換え細胞）を投与することを含む。そのような態様において、ＣＥＲにより改変された細胞は、Ｔ細胞系統、ナチュラルキラー細胞系統、ナチュラルキラーＴ細胞系統、Ｂ細胞系統、リンパ系前駆細胞系統、樹状細胞系統、ランゲルハンス細胞系統、骨髄性細胞系統、またはそれらの何れかの組合せの異種細胞、同系細胞、同種異系細胞または自家細胞である。
ＣＥＲにより改変された細胞を含む医薬組成物は、医薬分野の当業者によって決定されるように、処置される（または予防される）疾患または病状に適した方法で投与され得る。組成物の、好適な用量、好適な期間および投与頻度は、患者の状態、体格、体重、体表面積、年齢、性別、疾患の種類および重症度、投与される具体的な治療薬、特定の形態の活性成分、投与時間および投与方法、ならびに同時に投与される他の薬物などの要因によって決定され得る。本発明は、ＣＥＲで改変された細胞および薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。好適な賦形剤には、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロールなど、およびそれらの組合せが含まれる。他の好適な注射媒体は、生理食塩水、Ｎｏｒｍｏｓｏｌ Ｒ（Abbott）、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（Baxter）、５％デキストロース水溶液、または乳酸リンゲル液を含む任意の等張媒体製剤であり得る。
医薬組成物中の細胞の処置有効量は、少なくとも１つの細胞（例えば、１つのＣＥＲで改変されたＢ細胞）であるか、または一般的には１０２細胞を超える細胞、例えば、最大１０６細胞、最大１０７細胞、最大１０８細胞、最大１０９細胞、最大１０１０細胞、または最大１０１１細胞もしくはそれ以上である。特定の態様において、細胞は、約１０６から約１０１０細胞／ｍ２の範囲で、好ましくは約１０７から約１０９細胞／ｍ２の範囲で投与される。細胞の数は、該組成物が意図される最終用途ならびにそれに含まれる細胞タイプよって変わり得る。例えば、特定の抗原に特異的なＣＥＲを含むように改変された細胞を含む組成物は、５％～約９５％またはそれ以上のそのような細胞を含む細胞集団を含み得る。特定の態様において、ＣＥＲ改変細胞を含む組成物は、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上のそのような細胞を含む細胞集団を含む。本明細書で提供される使用のために、細胞は、一般的に、１リットル以下、５００ｍｌ以下、２５０ｍｌ以下、または１００ｍｌ以下の容量である。それ故、所望の細胞の密度は、一般的に、１０４細胞／ｍｌを超え、一般的には、１０７細胞／ｍｌを超え、一般的に１０８細胞／ｍｌを超えるか、またはそれ以上である。細胞は、単回注射として、またはある範囲の期間にわたる複数回注射で投与され得る。ＣＥＲ改変細胞の反復注射は、疾患の再発または疾患活動性が存在する場合、数日、数週間、数ヶ月、または数年でさえも隔てて行われ得る。臨床的に意義のある数の免疫細胞を、累積的に１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０または１０１１細胞に等しいかそれを超える複数回の注射に配分することができる。本明細書に記載の組換え発現ベクターを含む宿主細胞の投与に好適な用量は、約１０７細胞／ｍ２、約５ｘ１０７細胞／ｍ２、約１０８細胞／ｍ２、約５ｘ１０８細胞／ｍ２、約１０９細胞／ｍ２、約５ｘ１０９細胞／ｍ２、約１０１０細胞／ｍ２、約５ｘ１０１０細胞／ｍ２、または約１０１１細胞／ｍ２である。特定の態様において、ＣＥＲ改変Ｂ細胞の組成物およびＣＥＲ改変Ｔ細胞の組成物は両方とも投与され、その投与は同時投与（simultaneous, concurrent）または逐次投与であり得る。
ある態様において、本明細書に記載の組成物は、静脈内、腹腔内、腫瘍内、骨髄内、リンパ節内および／または脳脊髄液内に投与される。ある態様において、キメラエンガルフメント受容体改変組成物は、腫瘍部位に送達される。
ある態様において、ＣＥＲ改変細胞は、１以上の追加の療法と共同して、または組合せて対象に投与される。かかる態様において、１以上の追加の療法は、放射線療法、遺伝子操作細胞免疫療法（例えば、Ｔ細胞、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）療法）、抗体療法、免疫チェックポイント分子阻害剤療法、または化学療法剤、治療用ペプチド、ホルモン療法、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌薬、抗炎症剤、ＵＶ線療法、電気パルス療法、高密度焦点式超音波療法、腫瘍溶解性ウイルス療法または小分子療法剤などの薬物療法のうちの１つまたは複数であり得る。そのような態様において、ＣＥＲ改変細胞は、１以上の追加の療法の設定において誘導されるアポトーシス促進マーカーを表示するアポトーシス細胞、死細胞、死につつある細胞、損傷細胞、感染細胞または壊死細胞を除去し得る。ＣＥＲ改変細胞が１以上の追加の療法と組み合わせて投与される特定の態様において、該１以上の追加の療法は、ＣＥＲ療法との組み合わせの相加効果または相乗効果のために治療用量以下の用量で投与され得る。併用療法は、追加療法の前（例えば、追加療法の１日から３０日またはそれ以上前）、追加療法と同時（同日）、または追加療法の後（例えば、追加療法の１日から３０日またはそれ以上後）のＣＥＲの投与を含む。特定の態様において、ＣＥＲ改変細胞は、１以上の追加の療法の投与後に投与される。さらなる態様において、ＣＥＲ改変細胞は、１以上の追加の療法の投与の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０日後に投与される。なおさらなる態様において、ＣＥＲ改変細胞は、１以上の追加の療法の投与後４週間以内、３週間以内、２週間以内、または１週間以内に投与される。１以上の追加の治療が複数回投与を含む場合、ＣＥＲで改変された細胞は、１以上の追加の療法の初回投与後、１以上の追加の療法の最終投与後、または１以上の追加の療法の複数回投与の間に投与され得る。
３剤併用療法（放射線＋ＣＥＲ＋ＣＡＲ／またはＴＣＲ）レジメンの一例を図５に示す。放射線療法後、本明細書に記載の腫瘍抗原特異的、ＣＥＲ改変宿主細胞（例えば、腫瘍抗原に結合する結合ドメインを含む）を、抗腫瘍免疫応答を促進し、免疫活性化細胞を腫瘍微小環境に動員するために対象に投与する。特定の態様において、ＣＥＲは局所的な照射された腫瘍に移動し、腫瘍組織を免疫浸潤および破壊に対して許容性にし（例えば、炎症性サイトカインの発現、エフェクターＴ細胞の活性化、樹状細胞の活性化、制御性Ｔ細胞の阻害など)、それにより、その後の養子Ｔ細胞免疫療法（例えば、ＣＡＲまたはＴＣＲ免疫療法）に対して腫瘍微小環境を感作する。特定の態様において、ＣＥＲ改変細胞は、放射線療法後、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０日後に投与される。さらなる態様において、ＣＥＲ改変細胞は、放射線療法後、４週間以内、３週間以内、２週間以内、または１週間以内に投与される。特定の態様において、ＣＡＲまたはＴＣＲ免疫療法は、ＣＥＲ療法の投与後、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０日後、あるいはＣＥＲ療法の投与後、４週間以内、３週間以内、２週間以内、または１週間以内に投与される。特定の態様において、放射線療法、ＣＡＲまたはＴＣＲ免疫療法あるいはその両方は、治療量以下のレベルで投与される。
ＣＥＲ療法と組み合わせて用いられ得る放射線療法の例には、外部照射療法（例えば、従来の外部照射療法、定位放射療法、３次元コンフォーマル放射線療法、強度変調放射線療法、強度変調回転放射線治療、粒子療法、プロトン療法およびオーガー療法）、近接照射療法、全身性放射性同位体療法、術中放射線療法、またはそれらの何れかの組合せが含まれる。特定の態様において、一般的な用量または治療用量以下の用量よりも低い用量または放射線療法の用量が、ＣＥＲ療法と組み合わせて用いられる。低用量または治療用量以下の用量の放射線療法は、細胞への溶解性膜損傷を引き起こすのに十分であり得るが、必ずしも細胞溶解性である必要はない。細胞溶解性膜の損傷は、ＣＥＲ療法の標的となる可能性のあるエンガルフメント促進マーカー（例えば、ホスファチジルセリン）を露出させるのに十分である。
ＣＥＲ療法と組み合わせて標的とされ得る免疫チェックポイント分子の例には、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、アデノシン、ＧＡＬ９、ＶＩＳＴＡ、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ－５、ＰＶＲＬ２、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ａ２ａＲ、ＣＤ２４４／２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ－１、ＰＶＲＩＧ／ＣＤ１１２Ｒ、またはそれらの何れかの組合せが含まれる。特定の態様において、免疫チェックポイント分子阻害剤は、抗体、ペプチド、ＲＮＡｉ剤、または小分子である。ＣＴＬＡ－４に特異的な抗体は、イピリムマブまたはトレメリムマブであり得る。ＰＤ－１に特異的な抗体は、ピジリズマブ、ニボルマブ、またはペンブロリズマブであり得る。ＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、またはアベルマブであり得る。
化学療法剤には、有糸分裂または細胞分裂を阻害する非特異的な細胞毒性薬、ならびに腫瘍の増殖、進行および転移（例えば、発癌遺伝子）に関与する特定の分子を標的とすることにより癌細胞の増殖および拡散を阻止する分子標的療法が含まれる。例示的な非特異的な化学療法剤としては、アルキル化剤、白金系薬剤、細胞傷害性薬剤、クロマチン機能阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管阻害剤、ＤＮＡ損傷剤、代謝拮抗剤（例えば、葉酸アンタゴニスト、ピリミジン類縁体、プリン類縁体、および糖修飾類縁体）、ＤＮＡ合成阻害剤、ＤＮＡ相互作用剤（例えば、挿入剤）、ならびにＤＮＡ修復阻害剤が挙げられる。
併用療法での使用が考慮される化学療法剤の例としては、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、トラメチニブ、コビメチニブ、アナストロゾール（アリミデックス（登録商標））、ビカルタミド（カソデックス（登録商標））、ブレオマイシン硫酸塩（ブレノキサン（登録商標））、ブスルファン（マイレラン（登録商標）)、ブスルファン注射（ブスルフェックス（登録商標））、カペシタビン（ゼローダ（登録商標））、Ｎ４－ペントキシカルボニル－５－デオキシ－５－フルオロシチジン、カルボプラチン（パラプラチン（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロラムブシル（リューケラン（登録商標））、シスプラチン（プラチノル（登録商標））、クラドリビン（ロイスタチン（登録商標）)、シクロホスファミド（サイトキサン（登録商標）またはネオサー（Neosar）（登録商標）)、シタラビン、シトシンアラビノシド（サイトサール（Cytosar）－Ｕ（登録商標）)、シタラビンリポソーム注射剤（デポサイト（登録商標）)、ダカルバジン（ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標）)、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ、コスメガン（Cosmegan））、ダウノルビシン塩酸塩（セルビジン（Cerubidine）（登録商標））、クエン酸ダウノルビシンリポソーム注射剤（ダウノキソーム（登録商標）)、デキサメサゾン、ドセタキセル（タキソテール（登録商標））、ドキソルビシン塩酸塩（アドリアマイシン（登録商標）、ルベックス（登録商標））、エトポシド（ベプシド（登録商標））、フルダラビンホスフェート（フルダラ（登録商標））、５－フルオロウラシル（アドルシル（登録商標）、エフデックス（登録商標）)、フルタミド（ユーレキシン(Eulexin)（登録商標）)、テザシチビン、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシウレア（ハイドレア（登録商標））、イダルビシン（イダマイシン（登録商標））、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（カンポトスター（登録商標））、Ｌ－アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ（登録商標））、ロイコボリンカルシウム、メルファラン（アルケラン（登録商標））、６－メルカプトプリン（ピュリネソール（Purinethol）（登録商標））、メトトレキサート（フォレックス（登録商標））、ミトキサントロン（ノバントロン（登録商標）)、マイロターグ、パクリタキセル（タキソール（登録商標）)、フェニックス（Ｙｔｔｒｉｕｍ９０／ＭＸ－ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、ポリフェプロサン２０とカルムスチンインプラント（ギリアデル（登録商標）)、タモキシフェンシトレート（ノルバデックス（登録商標））、テニポシド（ブモン（Vumon）（登録商標）)、６－チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（チラゾン（登録商標）)、注射用トポテカン塩酸塩（ハイカムチン（登録商標））、ビンブラスチン（ベルバン（Velban）（登録商標））、ビンクリスチン（オンコビン（登録商標））、およびビノレルビン（ナベルビン（登録商標））が挙げられる。
アルキル化剤の例としては、窒素マスタード（エチレンイミン誘導体、アルキルスルホネート、ニトロソ尿素およびトリアゼン）：ウラシルマスタード（アミノウラシルマスタード（登録商標）、クロレタナシル（登録商標）、デスメチルドパン（登録商標）、デスメチルドパン（登録商標））、ヘマンタンアミン（登録商標）、ノルドパン（登録商標）、ウラシル窒素マスタード（登録商標）、ウラシルロスト（登録商標）、ウラシルモスタザ（Uracilmostaza）（登録商標）、ウラムスチン（Uramustin）（登録商標）、ウラムスチン（Uramustine）（登録商標））、クロルメチン（マスタージェン（登録商標））、シクロホスファミド（サイトキサン（登録商標）、ネオサール（登録商標）、クラフェン（登録商標）、エンドキサン（登録商標）、プロシトックス（登録商標）、レビミュン（Revimmune）（商標）)、イホスファミド（ミトキサナ（登録商標））、メルファラン（アルケラン（登録商標）)、クロラムブシル（リューケラン（登録商標）)、ピポブロマン（アメデル（登録商標）、ベルシト（登録商標）)、トリエチレンメラミン（ヘイメル（登録商標）、ヘキサレン（登録商標）、ヘキサスタット（登録商標）)、トリエチレンチオホスホラミン、テモゾロミド（テモダール（登録商標））、チオテパ（チオプレックス（登録商標））、ブスルファン（ブシルベックス（Busilvex）（登録商標）、ミレラン（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、ロムスチン（ＣｅｅＮＵ（登録商標））、ストレプトゾシン（ザノサー（登録商標））およびダカルバジン（ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標））が挙げられる。さらなる例示的なアルキル化剤としては、オキサリプラチン（エロキサチン（登録商標））；テモゾロミド（テモダール（Temodar, Temodal）（登録商標））；ダクチノマイシン（アクチノマイシン－Ｄとしても公知、コスメゲン（登録商標））；メルファラン（Ｌ－ＰＡＭ、Ｌ－サルコリシンおよびフェニルアラニンマスタードとしても公知、アルケラン（登録商標））；アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）としても公知、ヘキサレン（登録商標））；カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））；ベンダムスチン（トレアンダ（登録商標））；ブスルファン（ブスルフェクス（登録商標）およびマイレラン（登録商標））；カルボプラチン（パラプラチン（登録商標））；ロムスチン（ＣＣＮＵとしても公知、ＣｅｅＮＵ（登録商標））；シスプラチン（ＣＤＤＰとしても公知、プラチノル（登録商標）およびプラチノル（登録商標）－ＡＱ）；クロラムブシル（リューケラン（登録商標））；シクロホスファミド（サイトキサン（登録商標）およびネオサー（Neosar）（登録商標））；ダカルバジン（ＤＴＩＣ、ＤＩＣおよびイミダゾールカルボキサミドとしても公知、ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標））；アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）としても公知、ヘキサレン（登録商標））；イホスファミド（Ｉｆｅｘ（登録商標））；プレヌムスチン；プロカルバジン（マチュレーン（登録商標））；メクロレタミン（窒素マスタード、マスタチンおよび塩酸メクロロエタミンとしても公知、マスタージェン（登録商標））；ストレプトゾシン（ザノサー（登録商標））；チオテパ（チオホスホアミド、ＴＥＳＰＡおよびＴＳＰＡとしても公知、チオプレックス（登録商標））；シクロホスファミド（エンドキサン（登録商標）、サイトキサン（登録商標）、ネオサール（登録商標）、プロシトックス（登録商標）、レビミュン（Revimmune）（登録商標））；および、ベンダムスチンＨＣｌ（トレアンダ（登録商標）)が挙げられるが、これらに限定されない。
白金系薬剤の例としては、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、ピコプラチン、サトラプラチン、フェナントリプラチン、および四硝酸トリプラチンが挙げられる。
血管形成阻害剤の例としては、Ａ６（Angstrom Pharmaceuticals）、ＡＢＴ－５１０（Abbott Laboratories）、ＡＢＴ－６２７（アトラセンタン）（Abbott Laboratories/Xinlay）、ＡＢＴ－８６９（Abbott Laboratories）、アクチミド（ＣＣ４０４７、ポマリドミド）（Celgene Corporation）、ＡｄＧＶＰＥＤＦ.１１Ｄ（GenVec）、ＡＤＨ－１（エクスヘリン）（Adherex Technologies）、ＡＥＥ７８８（Novartis）、ＡＧ－０１３７３６（アクシチニブ）（Pfizer）、ＡＧ３３４０（プリノマスタット）（Agouron Pharmaceuticals）、ＡＧＸ１０５３（AngioGenex）、ＡＧＸ５１（AngioGenex）、ＡＬＮ－ＶＳＰ（ALN-VSP O2）（Alnylam Pharmaceuticals）、ＡＭＧ ３８６（Amgen）、ＡＭＧ７０６（Amgen）、アパチニブ（ＹＮ９６８Ｄ１）（Jiangsu Hengrui Medicine）、ＡＰ２３５７３（リダフォロリムス／ＭＫ８６６９）（Ariad Pharmaceuticals）、ＡＱ４Ｎ（ノバヴィア（Novavea））、ＡＲＱ １９７（ArQule）、ＡＳＡ４０４（Novartis/Antisoma）、アチプリモド（Callisto Pharmaceuticals）、ＡＴＮ－１６１（Attenuon）、ＡＶ－４１２（Aveo Pharmaceuticals）、ＡＶ－９５１（Aveo Pharmaceuticals）、アバスチン（ベバシズマブ）（Genentech）、ＡＺＤ２１７１（セジラニブ／レセンチン）（AstraZeneca）、ＢＡＹ ５７－９３５２（テラチニブ）（Bayer）、ＢＥＺ２３５（Novartis）、ＢＩＢＦ１１２０（Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals）、ＢＩＢＷ ２９９２（Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals）、ＢＭＳ－２７５２９１（Bristol-Myers Squibb）、ＢＭＳ－５８２６６４（ブリバニブ）（Bristol-Myers Squibb）、ＢＭＳ－６９０５１４（Bristol-Myers Squibb）、カルシトリオール、ＣＣＩ－７７９（トーリセル）（Wyeth）、ＣＤＰ－７９１（ImClone Systems）、セフラトニン（ceflatonin）（ホモハリングトニン／ＨＨＴ）（ChemGenex Therapeutics）、セレブレックス（セレコキシブ）（Pfizer）、ＣＥＰ－７０５５（Cephalon/Sanofi）、ＣＨＩＲ－２６５（Chiron Corporation）、ＮＧＲ－ＴＮＦ、ＣＯＬ－３（メタスタット）（Collagenex Pharaceuticals）、コンブレタスタチン（Oxigene）、ＣＰ－７５１，８７１（フィギツムマブ）（Pfizer）、ＣＰ－５４７，６３２（Pfizer）、ＣＳ－７０１７（第一三共）、ＣＴ－３２２（アンジオセプト)（Adnexus）、クルクミン、ダルテパリン（フラグミン）（Pfizer）、ジスルフィラム（Antabuse）、E７８２０（エーザイ株式会社）、Ｅ７０８０（エーザイ株式会社）、ＥＭＤ １２１９７４（シレンジタイド）（EMD Pharmaceuticals）、ＥＮＭＤ－１１９８（EntreMed）、ＥＮＭＤ－２０７６（EntreMed）、エンドスター（Simcere）、エルビタックス（ImClone/Bristol-Myers Squibb）、ＥＺＮ－２２０８（Enzon Pharmaceuticals）、ＥＺＮ－２９６８（Enzon Pharmaceuticals）、ＧＣ１００８（Genzyme）、ゲニステイン、ＧＳＫ１３６３０８９（フォレチニブ）（GlaxoSmithKline）、ＧＷ７８６０３４（パゾパニブ）（GlaxoSmithKline）、ＧＴ－１１１（Vascular Biogenics Ltd.）、ＩＭＣ－１１２１Ｂ（ラムシルマブ）（ImClone Systems）、ＩＭＣ－１８Ｆ１（ImClone Systems）、ＩＭＣ－３Ｇ３（ImClone LLC）、ＩＮＣＢ００７８３９（Incyte Corporation）、ＩＮＧＮ２４１（Introgen Therapeutics）、イレッサ（ＺＤ１８３９／ゲフィチニブ）、ＬＢＨ５８９（ファリダク／パノビノストスト）（Novartis）、ルセンティス（ラニビズマブ）（Genentech/Novartis）、ＬＹ３１７６１５（エンザスタウリン）（Eli Lilly and Company）、マクジェン（ペガプタニブ）（Pfizer）、ＭＥＤＩ５２２（アベグリン）（MedImmune）、ＭＬＮ５１８（タントゥチニブ）（Millennium）、ネオバスタット（ＡＥ９４１／ベネフィン）（Aeterna Zentaris）、ネクサバール（Bayer/Onyx）、ＮＭ－３（Genzyme Corporation）、ノスカピン（Cougar Biotechnology）、ＮＰＩ－２３５８（Nereus Pharmaceuticals）、ＯＳＩ－９３０（OSI）、パロミド５２９（Paloma Pharmaceuticals、Inc.）、パンゼム（Panzem）カプセル（２ＭＥ２）（EntreMed）、Panzem ＮＣＤ（２ＭＥ２）（EntreMed）、ＰＦ－０２３４１０６６（Pfizer）、ＰＦ－０４５５４８７８（Pfizer）、ＰＩ－８８（Progen Industries/Medigen Biotechnology）、ＰＫＣ４１２（Novartis）、ポリフェノンＥ（緑茶エキス）（Polypheno E International, Inc）、ＰＰＩ－２４５８（Praecis Pharmaceuticals）、ＰＴＣ２９９（PTC Therapeutics）、ＰＴＫ７８７（バタラニブ）（Novartis）、ＰＸＤ１０１（ベリノスタット）（CuraGen Corporation）、ＲＡＤ００１（エベロリムス）（Novartis）、ＲＡＦ２６５（Novartis）、レゴラフェニブ（ＢＡＹ７３－４５０６）（Bayer）、レブラミド（Celgene）、レタアン(Retaane)(Alcon Research)、ＳＮ３８（リポソーマル）（Neopharm）、ＳＮＳ－０３２（ＢＭＳ－３８７０３２）（Sunesis）、ＳＯＭ２３０（パシレオチド）（Novartis）、スクアラミン（Genaera）、スラミン、スーテント（Pfizer）、タルセバ（Genentech）、ＴＢ－４０３（Thrombogenics）、テンポスタチン（Collard Biopharmaceuticals）、テトラチオモリブデン酸（Sigma-Aldrich）、ＴＧ１００８０１（TargeGen）、サリドマイド（Celgene Corporation）、チンザパリンナトリウム、ＴＫＩ２５８（Novartis）、ＴＲＣ０９３（Tracon Pharmaceuticals Inc.）、ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（アフリベルセプト）（Regeneron Pharmaceuticals）、ＶＥＧＦトラップアイ（Regeneron Pharmaceuticals）、ベグリン（Veglin）（VasGene Therapeutics）、ボルテゾミブ（Millennium）、ＸＬ１８４（Exelixis）、ＸＬ６４７（Exelixis）、ＸＬ７８４（Exelixis）、ＸＬ８２０（Exelixis）、ＸＬ９９９（Exelixis）、ＺＤ６４７４（AstraZeneca）、ボリノスタット（Merck）、およびＺＳＴＫ４７４が挙げられるが、これらに限定されない。
例示的な分子標的化阻害剤としては、血管形成阻害剤（例えば、ＶＥＧＦ経路阻害剤）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、ＥＧＦ経路阻害剤）、受容体チロシンキナーゼ阻害剤、増殖因子阻害剤、ＧＴＰａｓｅ阻害剤、セリン／スレオニンキナーゼ阻害剤、転写因子阻害剤、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＲＯＳ１阻害剤、ＢＣＬ－２阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＢＣＲ－ＡＢＬ阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、ＭＹＣ阻害剤、ＡＢＬ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、Ｈ－ＲＡＳ阻害剤、Ｋ－ＲＡＳ阻害剤およびＰＤＧＦＲ阻害剤が挙げられる。特定の態様において、分子標的療法の使用は、分子標的（例えば、ドライバー癌遺伝子）を有する腫瘍を有すると特定された対象に該分子標的に特異的な分子標的化療法剤を投与することを含む。特定の態様において、分子標的は活性化変異を有する。特定の態様において、分子標的化阻害剤と組み合わせたＣＥＲ改変細胞の使用は、抗腫瘍応答の大きさ、抗腫瘍応答の持続性、またはその両方を増加させる。特定の態様において、分子標的化療法の一般的な用量より低い用量または治療用量以下の用量が、ＣＥＲ改変細胞と組み合わせて用いられる。
血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体阻害剤の例としては、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））、アクシチニブ（インリタ（登録商標））；アラニネート酸ブリバニブ（ＢＭＳ－５８２６６４、（Ｓ）－（（Ｒ）－１－（４－（４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－インドール－５－イルオキシ）－５－メチルピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－６－イルオキシ）プロパン－２－イル）２－アミノプロパノエート）；ソラフェニブ（ネクサバール（登録商標））；パゾパニブ（ヴォトリエント（登録商標））; スニチニブマレート（スーテント（登録商標））；セジラニブ（ＡＺＤ２１７１、ＣＡＳ２８８３８３－２０－１）；バルガテフ（Vargatef）（ＢＩＢＦ１１２０、ＣＡＳ９２８３２６－８３－４）；フォレチニブ（ＧＳＫ１３６３０８９）；テラチニブ（ＢＡＹ５７－９３５２、ＣＡＳ３３２０１２－４０－５）；アパチニブ（ＹＮ９６８Ｄ１、ＣＡＳ８１１８０３－０５－１）；イマチニブ（グリベック（登録商標））；ポナチニブ（ＡＰ２４５３４、ＣＡＳ９４３３１９－７０－８）；チボザニブ（ＡＶ９５１、ＣＡＳ４７５１０８－１８－０）；レゴラフェニブ（ＢＡＹ７３－４５０６、ＣＡＳ７５５０３７－０３－７）；バタラニブ二塩酸塩（ＰＴＫ７８７、ＣＡＳ２１２１４１－５１－０）；ブリバニブ（ＢＭＳ－５４０２１５、ＣＡＳ６４９７３５－４６－６）；バンデタニブ（カプレルサ（登録商標）またはＡＺＤ６４７４）；モテサニブ二リン酸（ＡＭＧ７０６、ＣＡＳ８５７８７６－３０－３、Ｎ－（２，３－ジヒドロ－３,３－ジメチル－１Ｈ－インドール－６－イル）－２－［（４－ピリジニルメチル）アミノ］－３－ピリジンカルボキサミド（ＰＣＴ公開公報ＷＯ０２／０６６４７０に記載）；ドビチニブ乳酸塩（ＴＫＩ２５８、ＣＡＳ８５２４３３－８４－２）；リンファニブ（ＡＢＴ８６９、ＣＡＳ７９６９６７－１６－３）；カボザンチニブ（ＸＬ１８４、ＣＡＳ８４９２１７－６８－１）；レスタウルチニブ（ＣＡＳ１１１３５８－８８－４）；Ｎ－［５－［［［５－（１，１－ジメチルエチル）－２－オキサゾリル］メチル］チオ］－２－チアゾリル］－４－ピペリジンカルボキサミド（ＢＭＳ３８７０３、ＣＡＳ３４５６２７－８０－７）；（３Ｒ，４Ｒ）－４－アミノ－１－（（４－（（３－メトキシフェニル）アミノ）ピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－５－イル）メチル）ピペリジン－３－オール（ＢＭＳ６９０５１４）；Ｎ－（３，４－ジクロロ－２－フルオロフェニル）－６－メトキシ－７－［［（３ａα，５β，６ａα）－オクタヒドロ－２－メチルシクロペンタ［ｃ］ピロール－５－イル］メトキシ］－４－キナゾリンアミン（ＸＬ６４７、ＣＡＳ７８１６１３－２３－８）；４－メチル－３－［［１－メチル－６－（３－ピリジニル）－１Ｈ－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ］－Ｎ－［３－（トリフルオロメチル）フェニル］－ベンズアミド（ＢＨＧ７１２、ＣＡＳ９４０３１０－８５－０）；および、アフリベルセプト（アイリーア（登録商標））が挙げられるが、これらに限定されない。
ＥＧＦ経路阻害剤の例としては、チルホスチン４６、ＥＫＢ－５６９、エルロチニブ（タルセバ（登録商標））、ゲフィチニブ（イレッサ（登録商標））、エルビタックス、ニモツズマブ、ラパチニブ（タイカーブ（登録商標））、セツキシマブ（抗ＥＧＦＲｍＡｂ）、１８８Ｒｅ－標識ニモツズマブ（抗ＥＧＦＲ ｍＡｂ）、ならびにＷＯ９７／０２２６６、ＥＰ０５６４４０９、ＷＯ９９／０３８５４、ＥＰ０５２０７２２、ＥＰ０５６６２２６、ＥＰ０７８７７２２、ＥＰ０８３７０６３、米国特許第５，７４７，４９８号、ＷＯ９８／１０７６７、ＷＯ９７／３００３４、ＷＯ９７／４９６８８、ＷＯ９７／３８９８３およびＷＯ９６／３３９８０に一般的および具体的に開示されている化合物が挙げられるが、これらに限定されない。ＥＧＦＲ抗体の例としては、セツキシマブ（Erbitux（登録商標））；パニツムマブ（Vectibix（登録商標））；マツズマブ（ＥＭＤ－７２０００）；トラスツマブ（ハーセプチン（登録商標））；ニモツズマブ（ｈＲ３）；ザルツムマブ；ＴｈｅｒａＣＩＭ ｈ－Ｒ３；ＭＤＸ０４４７（ＣＡＳ３３９１５１－９６－１）；および、ｃｈ８０６（ｍＡｂ－８０６、ＣＡＳ９４６４１４－０９－１）が挙げられるが、これに限定されない。上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤の例としては、エルロチニブ塩酸塩（Tarceva（登録商標））、ブリガチニブ、オシメルチニブ、イコチニブ、ゲフィチニブ（Iressa（登録商標））；Ｎ－［４－［（３－クロロ－４－フルオロフェニル）アミノ］－７－［［（３”Ｓ”）－テトラヒドロ－３－フラニル］オキシ］－６－キナゾリニル］－４（ジメチルアミノ）－２－ブタナミド、Ｔｏｖｏｋ（登録商標））；バンデタニブ（カプレルサ（登録商標））；ラパチニブ（タイケルブ（登録商標））；（３Ｒ，４Ｒ）－４－アミノ－１－（（４－（（３－メトキシフェニル）アミノ）ピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－５－イル）メチル）ピペリジン－３－オール（ＢＭＳ６９０５１４）；カネルチニブ塩酸塩（ＣＩ－１０３３）；６－［４－［（４－エチル－１－ピペラジニル）メチル］フェニル］－Ｎ－［（１Ｒ）－１－フェニルエチル］－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン（ＡＥＥ７８８、ＣＡＳ４９７８３９－６２－０）；ムブリチニブ（ＴＡＫ１６５）；ペリチニブ（ＥＫＢ５６９）；アファチニブ（ＢＩＢＷ２９９２）；ネラチニブ（ＨＫＩ－２７２）；Ｎ－［４－［［１－［（３－フルオロフェニル）メチル］－１Ｈ－インダゾール－５－イル］アミノ］－５－メチルピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－６－イル］－カルバミン酸、（３Ｓ）－３－モルホリニルメチルエステル（ＢＭＳ５９９６２６）；Ｎ－（３，４－ジクロロ－２－フルオロフェニル）－６－メトキシ－７－［［（３ａα，５β，６ａα）－オクタヒドロ－２－メチルシクロペンタ［ｃ］ピロール－５－イル］メトキシ］－４－キナゾリンアミン（ＸＬ６４７、ＣＡＳ７８１６１３－２３－８）；ならびに、４－［４－［［（１Ｒ）－１－フェニルエチル］アミノ］－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－６－イル］－フェノール（ＰＫＩ１６６、ＣＡＳ１８７７２４－６１－４）が挙げられるが、これらに限定されない。
ｍＴＯＲ阻害剤の例としては、ラパマイシン（ラパミューン（登録商標））ならびにその類縁体および誘導体；SDZ－RAD；テムシロリムス（トーリセル（登録商標）、ＣＣＩ－７７９としても公知）；リダフォロリムス（正式にはデフェロリムスとして知られている、（１Ｒ，２Ｒ，４Ｓ）－４－［（２Ｒ）－２［（１Ｒ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｒ，１６Ｅ，１８Ｒ，１９Ｒ，２１Ｒ，２３Ｓ，２４Ｅ，２６Ｅ，２８Ｚ，３０Ｓ，３２Ｓ，３５Ｒ）－１，１８－ジヒドロキシ－１９，３０－ジメトキシ－１５，１７，２１，２３，２９，３５－ヘキサメチル－２，３，１０，１４，２０－ペンタオキソ－１１，３６－ジオキサ－４－アザトリシクロ［３０．３．１．０４，９］ヘキサトリアコンタ－１６，２４，２６，２８－テトラエン－１２－イル］プロピル］－２－メトキシシクロヘキシルジメチルホスフィネート、ＡＰ２３５７３およびＭＫ８６６９としても公知、ＰＣＴ公開公報ＷＯ０３／０６４３８３に記載）；エベロリムス（アフィニトール（登録商標）またはＲＡＤ００１）；ラパマイシン（ＡＹ２２９８９、シロリムス（登録商標）)；シマピモド（ＣＡＳ１６４３０１－５１－３）；（５－｛２，４－ビス［（３Ｓ）－３－メチルモルホリン－４－イル］ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル｝－２－メトキシフェニル）メタノール（ＡＺＤ８０５５）；２－アミノ－８－［トランス－４－（２－ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］－６－（６－メトキシ－３－ピリジニル）－４－メチル－ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（ＰＦ０４６９１５０２、ＣＡＳ１０１３１０１－３６－４）；ならびに、Ｎ２－［１，４－ジオキソ－［［４－（４－オキソ－８－フェニル－４Ｈ－１－ベンゾピラン－２－イル）モルホリニウム－４－イル］メトキシ］ブチル］－Ｌ－アルギニルグリシル－Ｌ－α－アスパルチルＬ－セリン－、内部塩（ＳＦ１１２６、ＣＡＳ９３６４８７－６７－１）が挙げられるが、これらに限定されない。
ホスホイノシチド３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤の例としては、４－［２－（１Ｈ－インダゾール－４－イル）－６－［［４－（メチルスルホニル）ピペラジン－１－イル］メチル］チエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－イル］モルホリン（ＧＤＣ ０９４１としても公知、ＰＣＴ公開公報ＷＯ０９／０３６０８２およびＷＯ０９／０５５７３０に記載）；２－メチル－２－［４－［３－メチル－２－オキソ－８－（キノリン－３－イル）－２，３－ジヒドロイミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－１－イル］フェニル］プロピオニトリル（ＢＥＺ ２３５またはＮＶＰ－ＢＥＺ ２３５としても公知、ＰＣＴ公開公報ＷＯ０６／１２２８０６に記載）；４－（トリフルオロメチル）－５－（２，６－ジモルホリノピリミジン－４－イル）ピリジン－２－アミン（ＢＫＭ１２０またはＮＶＰ－ＢＫＭ１２０としても公知、ＰＣＴ公開公報ＷＯ２００７／０８４７８６に記載）；トザセルチブ（ＶＸ６８０またはＭＫ－０４５７、ＣＡＳ６３９０８９－５４－６）；（５Ｚ）－５－［［４－（４－ピリジニル）－６－キノリニル］メチレン］－２，４－チアゾリジンジオン（ＧＳＫ１０５９６１５、ＣＡＳ９５８８５２－０１－２）；（１Ｅ，４Ｓ，４ａＲ，５Ｒ，６ａＳ，９ａＲ）－５－（アセチルオキシ）－１－［（ジ－２－プロペニルアミノ）メチレン］－４，４ａ，５，６，６ａ，８，９，９ａ－オクタヒドロ－１１－ヒドロキシ－４－（メトキシメチル）－４ａ，６ａ－ジメチル－シクロペンタ［５，６］ナフト［１，２－ｃ］ピラン－２，７，１０（１Ｈ）－トリオン（ＰＸ８６６、ＣＡＳ５０２６３２－６６－８）；および、８－フェニル－２－（モルホリン－４－イル）－クロメン－４－オン（ＬＹ２９４００２、ＣＡＳ１５４４４７－３６－６）が挙げられるが、これらに限定されない。タンパク質キナーゼＢ（ＰＫＢ）またはＡＫＴ阻害剤の例としては、８－［４－（１－アミノシクロブチル）フェニル］－９－フェニル－１，２，４－トリアゾロ［３，４－ｆ］［１，６］ナフチリジン－３（２Ｈ）－オン（ＭＫ－２２０６、ＣＡＳ１０３２３４９－９３－１）；ペリホシン（ＫＲＸ０４０１）；４－ドデシル－Ｎ－１，３，４－チアジアゾール－２－イル－ベンゼンスルホンアミド（ＰＨＴ－４２７、ＣＡＳ１１９１９５１－５７－１）；４－［２－（４－アミノ－１，２，５－オキサジアゾール－３－イル）－１－エチル－７－［（３Ｓ）－３－ピペリジニルメトキシ］－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－４－イル］－２－メチル－３－ブチン－２－オール（ＧＳＫ６９０６９３、ＣＡＳ９３７１７４－７６－０）；８－（１－ヒドロキシエチル）－２－メトキシ－３－［（４－メトキシフェニル）メトキシ］－６Ｈ－ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン－６－オン（パロミド５２９、Ｐ５２９、またはＳＧ－００５２９）；トリシルビン（６－アミノ－４－メチル－８－（β－Ｄ－リボフラノシル）－４Ｈ，８Ｈ－ピロロ［４，３，２－デ］ピリミド［４，５－ｃ］ピリダジン）；（αＳ）－α－［［［５－（３－メチル－１Ｈ－インダゾール－５－イル）－３－ピリジニル］オキシ］メチル］－ベンゼンエタンアミン（Ａ６７４５６３、ＣＡＳ５５２３２５－７３－２）；４－［（４－クロロフェニル）メチル］－１－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－４－ピペリジンアミン（ＣＣＴ１２８９３０、ＣＡＳ８８５４９９－６１－６）；４－（４－クロロフェニル）－４－［４－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）フェニル］－ピペリジン（ＡＴ７８６７、ＣＡＳ８５７５３１－００－１）；ならびに、Ａｒｃｈｅｘｉｎ（ＲＸ－０２０１、ＣＡＳ６６３２３２－２７－７）が挙げられるが、これらに限定されない。
特定の態様において、ＣＥＲ改変細胞と組み合わせて用いられるチロシンキナーゼ阻害剤は、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）阻害剤である。例示的なＡＬＫ阻害剤には、クリゾチニブ、セリチニブ、アレクチニブ、ブリガチニブ、ダランターセプト、エントレクチニブ、およびロラチニブが含まれる。
図３－５は、ＣＥＲ改変細胞を利用するレジメンの態様を例示する。図３および図４Ａに示すように、白血球除去療法に続いて、細胞をエクスビボで処理して活性化することができ、対象への注入のために遺伝子改変および増殖を行う。図４Ｂは、従来のＴ細胞ベースの療法（例えば、ＣＡＲまたはＴＣＲ）と組み合わせて用いられるＣＥＲ改変細胞のための治療スキーム例を示す。操作されたＴ細胞の最初の注入は、抗腫瘍効果を示す腫瘍細胞アポトーシスを誘導する。その後、ＣＥＲ改変細胞を注入する。ＣＥＲ改変細胞は、エンガルフメント促進（例えば、ＰｔｄＳｅｒ）を示す腫瘍細胞を除去し、それはＴ細胞抑制性腫瘍微小環境も回避しながら腫瘍退縮を促進する。その後、腫瘍微小環境の変化は、Ｔ細胞療法に対して腫瘍を再感作し、Ｔ細胞の２回目の注入を可能にする。治療方法の別の態様を図４Ｃに示す。図４Ｃに示される処置スキームは、モノクローナル抗体療法と組み合わせてＣＥＲ改変細胞を利用する。ＥＧＦＲを標的とするセツキシマブまたはＣＤ２０を標的とするリツキシマブなどの腫瘍特異的抗体の注入は、細胞死を誘発し得るか、またはＣＥＲ改変細胞によって結合される標的部分を誘導し得る。その後、対象は、抗体結合細胞に結合してそれを除去するＣＥＲ改変細胞を投与される。そのような態様において、ＣＥＲ細胞外ドメインは、ＦｃＲ結合ドメイン、ＰｔｄＳｅｒ結合ドメインまたは他の抗原結合ドメインを含み得る。
別のシナリオでは、ＣＥＲ改変細胞は、小分子阻害剤、例えばＢＴＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、アデノシン経路阻害剤Ａ２ＡＲアンタゴニスト、ＩＤＯ１阻害剤、レナリドマイドなどのＩＭｉＤ、ＰＩ３Ｋδ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、またはＢＣＲ－ＡＢＬ阻害剤などと併用することができる。
特定の態様において、本発明の方法は枯渇工程を含む。対象からＣＥＲを除去するための枯渇工程は、対象に対する毒性を軽減するために、治療上の利益のために十分な時間の後に行われ得る。かかる態様において、ＣＥＲベクターは、ｉＣＡＳＰ９、誘導性ＦａｓまたはＨＳＶ－ＴＫなどの誘導性自殺遺伝子を含む。同様に、ＣＥＲベクターは、関連するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）、例えばＣＤ２０に対するリツキシマブまたはＥＧＦＲに対するセツキシマブの注入を介して形質導入細胞の枯渇を促進する、ＣＤ２０または切断型ＥＧＦＲ（配列番号１０５）などの公知の細胞表面抗原の発現のために設計され得る。成熟リンパ球の表面に存在するＣＤ５２を標的とするアレムツズマブもまた、形質導入されたＢ細胞、Ｔ細胞、またはナチュラルキラー細胞を枯渇させるために用いられ得る。
さらなる態様において、本発明のＣＥＲを発現する細胞は、本明細書中で同定された適応症または病状に関して用いられる方法を含む、診断方法または画像化方法において使用され得る。
実施例１
ＴＩＭ４－ＴＬＲ４ ＣＥＲ“ＣＥＲ０５”の構築
シグナルペプチド（配列番号１０６のアミノ酸１－２２）および膜貫通ドメイン（配列番号１０８のアミノ酸配列によりコードされる）を含むホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４（配列番号１０６のアミノ酸配列によりコードされる）の細胞外ドメインを、ＴＬＲ４のシグナルドメイン（配列番号５１のアミノ酸配列によりコードされる）に融合させて、キメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ０５”（配列番号８１のアミノ酸配列を有するＴｉｍ４－ＴＬＲ４ ＣＥＲ）を作製した（図６Ａ）。ＴＬＲ４シグナルドメインは、エンガルフメントのためのシグナルを伝達し、Ｔｉｍ４は、ホスファチジルセリン結合受容体である。その後、Ｔｉｍ４－ＴＬＲ４（ＣＥＲ０５）キメラエンガルフメント受容体ヌクレオチド配列を、Ｔ２Ａ配列によって分離された、形質導入マーカーとしての切断型ＥＧＦＲ（ＥＧＦＲｔまたはｔＥＧＦＲ）（配列番号１０５のアミノ酸配列によりコードされる）と共にｐＬｅｎｔｉ レンチウイルスベクターに挿入した（図６参照）。マウスＢａ／Ｆ３ Ｂ細胞を、１２ウェルプレート中、１０％ウシ胎仔血清、１％ペニシリン－ストレプトマイシンおよび１０Ｎｇ／ｍＬ マウスＩＬ－３（Peprotech カタログ番号２１３－１３）を添加したＲＭＰＩ １６４０培地中で、５０万細胞／ｍｌの密度で培養した。通常の条件下では、Ｂａ／Ｆ３マウスＢ細胞株は、標的細胞を貪食する能力が欠けているため、貪食するためのアッセイシステムを確立するために選択された。Ｂａ／Ｆ３細胞を形質導入するために、Ｔｉｍ４－ＴＬＲ４（ＣＥＲ０５）を発現する１００μｌのウイルスベクターならびに５μｌのＴＲＡＮＳＤＵＸ（商標）形質導入試薬を０．５ｍｌの完全細胞増殖培地で希釈し、Ｂａ／Ｆ３細胞に添加した。その後、Ｂａ／Ｆ３細胞を３２℃に予め温めた遠心機で２７０ ｘ ｇ ｒｐｍで１時間遠心した。Ｂａ／Ｆ３細胞を３７℃で２４時間インキュベートした。Ｂａ／Ｆ３細胞を完全細胞増殖培地中でさらに４８時間増殖させた。陽性Ｂａ／Ｆ３細胞形質導入体を、標識したＥＧＦＲ特異的抗体（セツキシマブ）で染色することにより蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣｓ）（Sony Sorter SH800）を用いて選別した。選別後、ウイルスベクターを含むＴｉｍ４－ＴＬＲ４－Ｔ２Ａ－形質導入マーカーを含む、精製され、形質導入されたＢａ／Ｆ３細胞を、食細胞作用アッセイに利用する前に４８時間静置した。
初代培養アポトーシス胸腺細胞に対する食細胞作用活性
食細胞作用アッセイの１日前に、初代培養胸腺細胞をＣ３Ｈマウス（Charles River Laboratories International、Inc.）から単離した。胸腺細胞を、６ウェルプレート中、１０％ウシ胎仔血清および１％ペニシリン－ストレプトマイシンを添加した完全ＲＰＭＩ１６４０増殖培地中で培養した。アポトーシスおよび細胞表面上でのホスファチジルセリン発現を誘導するために、胸腺細胞を１μＭデキサメタゾンで２４時間処理した。未処理の胸腺細胞を陰性対照として用いた。胸腺細胞を６ウェルプレートから回収し、滅菌１Ｘ ＰＢＳで１回洗浄し、その後、ＰＢＳ中、１ｎｇ／μｌのｐＨ感受性ｐＨｒｏｄｏ(商標) Ｒｅｄ色素（ThermoFisher Scientific、カタログ番号P36600）で１５分間、室温で染色した。標的細胞をｐＨｒｏｄｏ Ｒｅｄ色素で標識すると、酸性のリソソーム環境での発光が増加するため、貪食されリソソームに輸送される細胞を視覚化できる。その後、細胞に増殖培地を添加し、もう一度洗浄して、過剰のｐＨｒｏｄｏ Ｒｅｄを除去した。ｐＨｒｏｄｏ Ｒｅｄ染色された胸腺細胞を、ＲＭＰＩ １６４０完全培地中、２５０，０００細胞／ウェルで平底９６ウェルプレートに播いた。
上記のようにして作製したＢａ／Ｆ３ ＣＥＲ０１＋ ｔＥＧＦＲ＋細胞を、１Ｘ ＰＢＳで１回洗浄し、ＰＢＳ中、１μＭ ＣＥＬＬＴＲＡＣＥ（商標） Ｖｉｏｌｅｔ色素（ThermoFisher Scientific、カタログ番号C34557）で、３７℃にて１０分間染色した。染色された形質導入されたＢａ／Ｆ３細胞に増殖培地を添加し、１Ｘ ＰＢＳで１回洗浄して、過剰量のＣＥＬＬＴＲＡＣＥ（商標） Ｖｉｏｌｅｔを除去して、ＲＭＰＩ１６４０完全培地中、約２５，０００細胞／ウェルで平底９６ウェルプレートに播いた。
標的胸腺細胞を染色されたＢａ／Ｆ３ ＣＥＲ０５＋ｔＥＧＦＲ＋細胞と共に、１０：１（標的細胞：エフェクター細胞）の比率で、３７℃にて３時間または一晩（～１４時間）培養した。インキュベーション後、プレートを遠心分離し、培地を、２％ウシ胎仔血清（ｐＨ９）を添加したＰＢＳと交換した。その後、９６ウェルプレートを、ＫＥＹＥＮＣＥ ＢＺ－Ｘ７１０蛍光顕微鏡を２０倍対物レンズで用いて観察した。切断型ＥＧＦＲを発現するｐＬｅｎｔｉベクターで形質導入したＢａ／Ｆ３細胞を陰性対照として用いた。蛍光顕微鏡検査は、ＣＥＲ０５＋Ｂａ／Ｆ３細胞が、デキサメサゾン処理した胸腺細胞をエンガルフすることを示した（白色矢印は、エンガルフメント事象を示す）（図７参照）
食細胞作用指数は、対照ＥＧＦＲｔ＋Ｂａ／Ｆ３細胞と比較して、［エンガルフされた標的細胞の総数／計算されたＣＥＲ改変細胞の総数の平均（例えば、食細胞作用頻度）］に、［ＣＥＲ＋ Ｂａ／Ｆ３細胞当たりの標的細胞染色の平均面積 ｘ １００（例えば、ハイブリッドキャプチャー）］を乗じて計算された（図８参照）。
Ｂａ／Ｆ３ ＣＥＲ０５＋細胞とデキサメサゾン処理した胸腺細胞とを共培養したデュプリケートプレートを、ＩＬ－３を含む培地中で６時間培養した。生細胞の酸性コンパートメント（例えば、リソソーム）を緑色に染色する５０ｎＭ LysoTracker greenを、インキュベーション期間の終了５分前に添加した。内在化されたpHrodo red標識胸腺細胞とLysoTracker green小胞の共局在は、これら２つの画像の重ね合わせによって視覚化できる。赤色および緑色の蛍光の共局在は、重ね合わされた画像で黄色／橙色の蛍光を生じ、pHrodo標識された標的細胞がリソソームに内在化され、摂取された細胞の急速な酸性化と細胞死を引き起こしていることを示す（図９を参照、白色矢印は、pHrodo redで標識された胸腺細胞とLysoTracker greenの小胞との共存を示している）。切断されたＥＧＦＲおよびデキサメタゾン処理された胸腺細胞で形質導入された共培養された対照Ｂａ／Ｆ３細胞の蛍光顕微鏡画像を図１０に示す。
マウス細胞株に対する貪食活性
食細胞作用アッセイの１日前に、ＣＴ２６マウス結腸癌腫細胞を、６ウェルプレート中、１０％ウシ胎仔血清および１％ペニシリン－ストレプトマイシンを添加した完全ＲＰＭＩ １６４０増殖培地中で培養し、１ｍＭのスタウロスポリン（ＳＴＳ）で１２時間処理して、アポトーシスを誘導した。未処理のＣＴ２６細胞を陰性対照として用いた。
食細胞作用アッセイの日に、ＣＴ２６細胞を回収し、１Ｘ ＰＢＳで２回洗浄して、過剰のスタウロスポリンを除去し、その後、ＰＢＳ中、１ｎｇ／μｌのｐＨｒｏｄｏ Ｒｅｄで、室温にて１５分間染色した。ＣＴ２６細胞に増殖培地を添加し、１回洗浄して、過剰のｐＨｒｏｄｏ Ｒｅｄを除去し、ＲＰＭＩ １６４０完全培地中、平底９６ウェルプレートに２５０，０００細胞／ウェルで播いた。
上記のようにして作製したＢａ／Ｆ３ ＣＥＲ０５＋ ＥＧＦＲ＋細胞を、１Ｘ ＰＢＳで１回洗浄し、ＰＢＳ中、１μＭ ＣＥＬＬＴＲＡＣＥ（商標） Ｖｉｏｌｅｔ色素（ThermoFisher Scientific、カタログ番号Ｃ３４５５７）で、３７℃にて１０分間染色した。染色され、形質導入されたＢａ／Ｆ３細胞に増殖培地を添加し、１Ｘ ＰＢＳで１回洗浄して、過剰のＣＥＬＬＴＲＡＣＥ（商標） Ｖｉｏｌｅｔを除去し、ＲＰＭＩ １６４０完全培地中、同じ平底９６ウェルプレートに約５０，０００細胞／ウェルで播いた。
標的ＣＴ２６細胞を、染色したＣＥＲ０５＋ ｔＥＧＦＲ＋細胞と共に、５：１（標的細胞：エフェクター細胞）の比で、３７℃にて３時間、培養した。インキュベーション後、プレートを遠心分離し、培地を、２％ウシ胎仔血清（ｐＨ９）を添加したＰＢＳと交換した。その後、９６ウェルプレートを、ＫＥＹＥＮＣＥ ＢＺ－Ｘ７１０蛍光顕微鏡で、２０倍対物レンズを用いて観察した。切断型ＥＧＦＲを発現するｐＬｅｎｔｉベクターで形質導入されたＢａ／Ｆ３細胞を陰性対照として用いた。インビトロ食細胞作用を示す蛍光顕微鏡写真を、図１１に示す（白色矢印は、食細胞作用事象を示す）。ｐＨｒｏｄｏ Ｒｅｄで標識されたＣＴ２６細胞は、エンガルフされるとリソソームの低ｐＨ区画内で蛍光を発した（ピンク色の輪郭）。
ＣＥＬＬＴＲＡＣＥ Ｖｉｏｌｅｔ染色領域内でｐＨｒｏｄｏ Ｒｅｄの蛍光を検出するハイブリッドキャプチャーアルゴリズムを蛍光画像に適用して、エンガルフされた標的細胞の面積／ＣＥＲ＋ Ｂ細胞または対照ｔＥＧＦＲ+Ｂ細胞の面積を定量した（図１２）。図１３は、ＣＥＲ０５＋ＥＧＦＲ＋またはＥＧＦＲ＋対照を形質導入したＢａ／Ｆ３細胞内のＣＴ２６標的細胞領域を抽出するハイブリッド細胞数の散布図（Scatter plot）を示す。ＥＧＦＲｔ形質導入Ｂａ／Ｆ３対照細胞と比較した、ＣＥＲ０５＋Ｂａ／Ｆ３細胞の食細胞作用指数を、図１４に示す。
実施例２
ＴＩＭ４－ＴＬＲ４（ＴＬＲ４ ＴＭＤ）ＣＥＲ“ＣＥＲ０７”の構築
シグナルペプチド（配列番号１０６のアミノ酸１－２２）を含む、ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４（配列番号１０６のアミノ酸配列）の細胞外ドメインは、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン（配列番号３４のアミノ酸配列）およびＴＬＲ４の細胞内シグナル伝達ドメイン（配列番号５１）を結合させて、キメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ０７”（配列番号８３のアミノ酸配列を有するＴｉｍ４－Ｔｙｒｏ３ ＣＥＲ）を作製する。ＴＬＲ４シグナル伝達ドメインは、エンガルフメントのためのシグナルを伝達し、Ｔｉｍ４はホスファチジルセリン結合受容体である。次いで、Ｔｉｍ４－ＴＬＲ４－ＴＬＲ４（ＣＥＲ０７）キメラエンガルフメント受容体ヌクレオチド配列を、Ｔ２Ａ配列によって分離された、形質導入マーカーとしての切断型ＥＧＦＲと共にpLentiレンチウイルスベクターに挿入した（図１５を参照）。マウスのＢａ／Ｆ３ Ｂ細胞に、Ｔｉｍ４－ＴＬＲ４－ＴＬＲ４（ＣＥＲ０７）およびＥＧＦＲｔを発現するpLentiベクターを形質導入し、増殖させ、ＦＡＣｓで分別し、実施例１に記載のインビトロ試験に用いた。
一次アポトーシス胸腺細胞に対する食作用活性
初代Ｃ３Ｈマウス胸腺細胞を分離し、デキサメタゾンで処理し、実施例１で説明したようにpHrodo Redで染色した。Ｂａ／Ｆ３ ＣＥＲ０７＋ ｔＥＧＦＲ＋細胞を、実施例１に記載のようにCELLTRACETMバイオレット色素で標識した。１０：１の標的細胞：エフェクター細胞の比率で共培養試験を行い、Ｂａ／Ｆ３ ＣＥＲ０７＋ ｔＥＧＦＲ＋細胞を、実施例１に記載のように、蛍光顕微鏡検査およびＦＡＣによって食作用について定量化した。切断型ＥＧＦＲを発現するpLentiベクターで形質導入されたＢａ／Ｆ３細胞を陰性対照として用いた。
蛍光顕微鏡法は、ＣＥＲ０７＋ Ｂａ／Ｆ３細胞が、ＥＧＦＲｔ形質導入Ｂａ／Ｆ３対照細胞と比較して、デキサメタゾン処理胸腺細胞をエンガルフしたことを示した。
食細胞作用指数は、ＥＧＦＲｔ形質導入Ｂａ／Ｆ３対象細胞と比較して、[エンガルフされた標的細胞の総数／計数されたＣＥＲで改変された細胞の総数（例えば、食細胞作用頻度）］に、［ＣＥＲ＋Ｂａ／Ｆ３細胞当たりの標的細胞染色の平均面積×１００（例えば、ハイブリッドキャプチャー）］を乗じることによって計算された（図８参照）。
マウス細胞株に対する食細胞作用活性
ＣＥＲ０７＋ Ｂａ／Ｆ３細胞を、実施例１に記載のようにＣＴ２６マウス結腸癌細胞と共培養した。蛍光顕微鏡検査は、ＣＥＲ０７＋ Ｂａ／Ｆ３細胞がスタウロスポリン処理ＣＴ２６細胞をエンガルフしたことを示した（図１６参照、白色矢印は食作用を示す）。ＥＧＦＲｔで形質導入されたＢａ／Ｆ３細胞を対照として用いた。
CELLTRACE Violet染色領域内のpHrodo Redの蛍光を検出するハイブリッドキャプチャアルゴリズムを蛍光画像に適用して、エンガルフされた標的細胞の領域／ＣＥＲ＋Ｂ細胞の領域を定量化した（図１７を参照）。図１３は、ＣＥＲ０７＋ＥＧＦＲ＋またはＥＧＦＲ＋対照で形質導入されたＢａ／Ｆ３細胞内のＣＴ２６標的細胞領域を抽出するハイブリッド細胞数の散布図を示す。面積比は、Ｂａ／Ｆ３細胞内のＣＴ２６細胞の共局在面積を表す。ＥＧＦＲｔ形質導入Ｂａ／Ｆ３対照細胞と比較したＣＥＲ０７＋Ｂａ／Ｆ３細胞の食細胞作用指数を図１４に示す。
実施例３
ＴＩＭ４－ＴＬＲ８（ＴＬＲ４ ＴＭＤおよびスペーサー）ＣＥＲ “ＣＥＲ２１”およびＴＩＭ４－ＴＬＲ５ ＣＥＲ “ＣＥＲ１９”の構築
シグナルペプチド（配列番号１０６のアミノ酸１－２２）を含むホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４（配列番号１０６のアミノ酸配列）の細胞外ドメインおよびＴｉｍ４膜貫通ドメイン（配列番号１０８のアミノ酸配列）を、ＴＬＲ８（配列番号５５）の細胞内 シグナル伝達ドメインに連結させて、キメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ２１”（配列番号８８のアミノ酸配列を有するＴｉｍ４－ＴＬＲ８ ＣＥＲ）を作製した。ＴＬＲ８シグナル伝達ドメインは、エンガルフメントのためのシグナルを伝達し、Ｔｉｍ４はホスファチジルセリン結合受容体である。次いで、Ｔｉｍ４－ＴＬＲ８（ＣＥＲ２１）キメラエンガルフメント受容体ヌクレオチド配列を、Ｔ２Ａ配列により分離された、形質導入マーカーとしての切断型ＥＧＦＲと共にpLenti レンチウイルスベクターに挿入した（図１８参照）。ヒト初代Ｂ細胞を、Ｔｉｍ４－ＴＬＲ８（ＣＥＲ２１）およびＥＧＦＲｔを発現するpLenti ベクターで形質導入し、増殖させ、ＦＡＣＳで分別し、そして実施例１に記載のインビトロ試験に用いた。
シグナルペプチド（配列番号１０６のアミノ酸１－２２）を含むホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４（配列番号１０６のアミノ酸配列）の細胞外ドメインおよびＴｉｍ４膜貫通ドメイン（配列番号１０８のアミノ酸配列）を、ＴＬＲ５の細胞内シグナル伝達ドメイン（配列番号５２）に連結させて、キメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ１９”（配列番号８６のアミノ酸配列を有するＴｉｍ４－ＴＬＲ５ ＣＥＲ）を作製した。ＴＬＲ５シグナル伝達ドメインは、エンガルフメントのためのシグナルを伝達し、Ｔｉｍ４はホスファチジルセリン結合受容体である。次いで、Ｔｉｍ４－ＴＬＲ５（ＣＥＲ１９）キメラエンガルフメント受容体ヌクレオチド配列を、Ｔ２Ａ配列によって分離された、形質導入マーカーとしての切断型ＥＧＦＲと共にpLentiレンチウイルスベクターに挿入した。ヒト初代Ｂ細胞を、Ｔｉｍ４－ＴＬＲ８（ＣＥＲ１９）およびＥＧＦＲｔを発現するpLentiベクターで形質導入し、増殖させ、ＦＡＣＳで分別し、実施例１に記載のようにインビトロ試験に用いた。
ヒト細胞株に対するヒトＣＥＲ２１＋ Ｂ細胞の食細胞作用活性
食細胞作用アッセイを設定する１日前に、ＪｕｒｋａｔヒトＢリンパ球を、６ウェルプレート中、１０％ウシ胎仔血清および１％ペニシリン－ストレプトマイシンを添加した完全ＲＰＭＩ １６４０増殖培地中で培養し、１ｍＭ スタウロスポリンで３時間処理して、アポトーシスを誘導した。Ｊｕｒｋａｔ細胞を１Ｘ ＰＢＳで２回洗浄し、過剰のスタウロスポリンを除去後、ｐＨｒｏｄｏ Ｒｅｄ（ＰＢＳ中、１ｎｇ／μｌ）で、室温にて１５分間染色した。Ｊｕｒｋａｔ細胞に増殖培地を添加し、１回洗浄して、過剰のｐＨｒｏｄｏ Ｒｅｄを除去し、ＲＰＭＩ １６４０完全培地中、平底９６ウェルプレートに約２５０，０００細胞／ウェルで播いた。
形質導入したＣＥＲ２１+ヒト初代Ｂ細胞を１Ｘ ＰＢＳで１回洗浄し、ＰＢＳ中、１μＭ ＣＥＬＬＴＲＡＣＥ Ｖｉｏｌｅｔで、３７℃にて１０分間染色した。ＣＥＲ２１＋ヒト初代Ｂ細胞に増殖培地を添加し、１Ｘ ＰＢＳで１回洗浄し、過剰のＣＥＬＬＴＲＡＣＥ Ｖｉｏｌｅｔを除去し、ＲＰＭＩ １６４０完全培地中、９６ウェルプレートに約５０，０００細胞／ウェルで播いた。ヒトＣＥＲ２１＋初代Ｂ細胞およびＪｕｒｋａｔ細胞を、標的細胞 対 エフェクター細胞比が５：１で、３７℃にて３時間、共培養した。インキュベーション後、共培養プレートを遠心分離し、培地を、２％ウシ胎仔血清（ｐＨ９）を添加したＰＢＳと交換した。食細胞作用事象を蛍光顕微鏡（ＫＥＹＥＮＣＥ ＢＺ－Ｘ７１０蛍光顕微鏡、２０倍対物レンズ）によって定量した。インビトロ食細胞作用を示す蛍光顕微鏡画像を、ジャーカット細胞と共培養したＣＥＲ０２１＋Ｂ細胞について図１９Ａに示す。ＣＥＲ２１＋ Ｂ細胞に取り込まれたジャーカット細胞のインビトロ細胞溶解を示す蛍光顕微鏡画像を図１９Ｂに示す。破線の矢印は細胞溶解活性を示す。
アポトーシス細胞は、自動ソフトウェアを用いて蛍光画像から定量化され、高出力ビューあたりのアポトーシス細胞の数（図２０Ａ）と高出力ビューあたりの総蛍光発光（図２０Ｂ）を、ｐＨインジケーター色素を用いて計算した。スタウロスポリン処理した（治療用量以下の用量）Ｊｕｒｋａｔ細胞と共培養されたＣＥＲ２１＋Ｂ細胞は、標的細胞の増強された細胞致死を示した。
化学療法処理ヒト細胞株に対するヒトＣＥＲ２１＋ Ｂ細胞による増強された細胞致死
ヒト初代Ｂ細胞を、実施例１に記載のように、形質導入マーカーとして切断型ＥＧＦＲを発現するｐＬｅｎｔｉ Ｔｉｍ４－ＴＬＲ８（ＣＥＲ２１）レンチウイルスで形質導入し、ＣＥＬＬＴＲＡＣＥ Ｖｉｏｌｅｔで染色した。共培養アッセイをセットアップする1日前、Ｈ１７０３非小細胞肺癌細胞を無血清培地中でホスファチジルセリン誘導化学療法パクリタキセル（３０μＭ）と共に２４時間インキュベートした。浮遊および付着のＨ１７０３細胞を収集し、遠心分離し、pHrodo red（１ｎｇ／μＬ）と共にＰＢＳ中で室温にて１５分間インキュベートし、洗浄して、非付着性の９６ウェルプレートに播種した。ヒトＣＥＲ２１＋Ｂ細胞とＨ１７０３細胞を、３７℃にて３時間、標的細胞とエフェクター細胞の比率が５：１で共培養した。切断型ＥＧＦＲで形質導入されたＢ細胞を対照として用いた。次に、２０Ｘ対物レンズのKeyence BZ-X710顕微鏡を用いてプレートをイメージングした（図２１）。アポトーシスを起こしている細胞は、アポトーシスの最も初期の段階で細胞内ｐＨが低下するにつれて、赤色蛍光の増加を示す（図２１上段）。パクリタキセル処理によって誘導されない隣接細胞は、ほんのわずかに蛍光を発する。ＣＥＲ２１＋Ｂ細胞の存在下でのアポトーシス測定は、各高出力フィールドについて、赤色蛍光オブジェクトの曲線下面積として定量化され、自動ソフトウェア（図２１、下の列；図２２）を用いて輪郭が青色線で表された。白色矢印はアポトーシス事象を示す。ＣＥＲ２１＋Ｂ細胞は、化学療法の治療用量以下の用量で標的細胞の細胞致死を増強することが見いだされた。
ＣＥＲ１９＋およびＣＥＲ２１＋ Ｂ細胞の増殖能の向上
ＣＥＲ１９＋およびＣＥＲ２１＋のヒト初代Ｂ細胞の増殖能を、パクリタキセル（３０ μＭ）処理したＪｕｒｋａｔリンパ腫細胞との共培養により評価した。ＣＥＲ形質導入Ｂ細胞をCELLTRACE Violetで標識し、外因性サイトカインの不存在下、３７℃にて５日間、５：１の標的細胞とエフェクター細胞の比率でパクリタキセル処理したＪｕｒｋａｔ細胞と共培養した。ＣＥＲ１９＋またはＣＥＲ２１＋Ｂ細胞の増殖を、CELLTRACE Violetの希釈を測定することによりフローサイトメトリーで評価した（図２３）。外因性サイトカインの不存在下で共培養を５日間行った後、ＣＥＲ１９＋およびＣＥＲ２１＋Ｂ細胞の両方が約１０倍に増加した。対照的に、対照ベクターで形質導入された細胞は、細胞数の増加を示さなかった。
ＣＥＲ２１＋ Ｂ細胞の増強された活性化状態
ＣＥＲ２１＋ヒト初代Ｂ細胞の活性化状態を評価するために、遺伝子発現プロファイルを形質導入Ｂ細胞集団から調べた。ＴＬＲファミリーの活性化を炎症誘発性ＩＬ－１サイトカイン（例えば、ＩＬ－１ＢおよびＩＬ－１８）の発現および共刺激分子（例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６）の上昇に結び付ける以前のレポートと一致して、ＣＥＲ２１も、Ｂ細胞活性化分子および生存因子（例えば、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ）、リンパ球化学誘引物質（ＲＡＮＴＥＳ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１）を促進し、リンパ節組織リモデリングに関与する分子、例えばＬＴαおよびＴＮＦαなどを発現して、腫瘍特異的適応免疫応答の出現を促進した（図２４を参照。棒グラフは、形質導入された対照Ｂ細胞と比較したＢ細胞ｍＲＮＡレベルの変化倍を示す）。
実施例４
ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ－ＴＬＲ４ ＣＥＲ “ＣＥＲ４３”およびＦＭＣ ６３ ｓｃＦｖ－ＩｇＧ４－ＴＬＲ４ ＣＥＲ “ＣＥＲ４４”の構築
ＦＭＣ６３マウスＩｇＧ２ａマウスモノクローナル抗体に由来し、ＧＭ－ＣＳＦ由来シグナルペプチド（配列番号１０９のアミノ酸１－２２）を含む、抗ＣＤ１９一本鎖断片（ｓｃＦｖ）（配列番号１０９のアミノ酸配列によりコードされる）を、ＴＬＲ４膜近接ドメイン（配列番号１７）、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン（配列番号３４のアミノ酸配列）およびＴＬＲ４の細胞内シグナル伝達ドメイン（配列番号５１）に融合させて、キメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ４３”（配列番号１２２のアミノ酸配列を有するＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ－ＴＬＲ４ ＣＥＲ）を作製した。ＴＬＲ４シグナル伝達ドメインは、エンガルフメントのためのシグナルを伝達し、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖはＣＤ１９に結合する。次いで、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ－ＴＬＲ４（ＣＥＲ４３）キメラエンガルフメント受容体ヌクレオチド配列を、Ｔ２Ａ配列によって分離された、形質導入マーカーとしての切断型ＥＧＦＲ（ＥＧＦＲｔ）と共にpLentiレンチウイルスベクターに挿入した。マウスＢａ／Ｆ３ Ｂ細胞を、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ－ＴＬＲ４（ＣＥＲ４３）およびＥＧＦＲｔを発現するpLenti ベクターで形質導入し、増殖させ、ＦＡＣｓにより分別して、実施例１に記載のインビトロ試験に用いた。
ＦＭＣ６３マウスＩｇＧ２ａマウスモノクローナル抗体に由来し、ＧＭ－ＣＳＦ由来のシグナルペプチド（配列番号１０９のアミノ酸１－２２）を含む、抗ＣＤ１９一本鎖断片（ｓｃＦｖ）（配列番号１０９のアミノ酸配列によりコードされる）を、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン（配列番号３４のアミノ酸配列）およびＴＬＲ４の細胞内シグナル伝達ドメイン（配列番号５１）を含む改変型ＩｇＧ４ヒンジ細胞外スペーサードメイン（配列番号１６）に融合して、キメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ４４”（配列番号１２３のアミノ酸配列を有するＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ－ＩｇＧ４－ＴＬＲ４ ＣＥＲ）を作製した。ＴＬＲ４シグナル伝達ドメインは、エンガルフメントのためのシグナルを伝達し、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖはＣＤ１９に結合する。次に、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ－ＩｇＧ４－ＴＬＲ４（ＣＥＲ４４）キメラエンガルフメント受容体ヌクレオチド配列を、Ｔ２Ａ配列によって分離された、形質導入マーカーとしての切断型ＥＧＦＲと共にpLentiレンチウイルスベクターに挿入した。マウスＢａ／Ｆ３ Ｂ細胞に、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ－ＩｇＧ４－ＴＬＲ４（ＣＥＲ４４）およびＥＧＦＲｔを発現するpLentiベクターを形質導入し、増殖させ、ＦＡＣｓで分別し、実施例１に記載のインビトロ試験に用いた。
ヒトリンパ腫細胞株に対する食細胞作用活性
RajiヒトバーキットＢ細胞リンパ腫細胞を、１μＭのpHrodo Red色素で標識し、食作用アッセイの標的細胞として用いた。ＣＥＲ４３＋またはＣＥＲ４４＋改変Ｂａ／Ｆ３細胞を、実施例１に記載のようにCELLTRACE Violetで染色した。遺伝子改変ＣＤ１９標的化ＣＥＲ４３＋またはＣＥＲ４４＋Ｂａ／Ｆ３細胞およびＣＤ１９＋Ｒａｊｉ細胞を用いた共培養試験を実施例１に記載のように行った。切断型ＥＧＦＲを形質導入されたＢａ／Ｆ３細胞を対照として用いた。ＣＥＲ４３＋またはＣＥＲ４４＋Ｂａ／Ｆ３細胞およびＲａｊｉ細胞を、標的細胞とエフェクター細胞の比率が５：１で、３７℃にて３時間共培養した。食細胞作用事象を、蛍光顕微鏡（KEYENCE BZ-X710蛍光顕微鏡、２０Ｘ対物レンズ）によって定量化した。図２５は、ＣＤ１９特異的ＣＥＲ４４発現Ｂａ／Ｆ３細胞によるＲａｊｉ細胞のエンガルフメントを示す（白色矢印はエンガルフメント事象を示す）。食細胞作用の頻度を、FACSで検出されたpHrodo RedとCELLTRACE Violetの二重陽性染色細胞集団として定量化した。図２６は、Ｒａｊｉ細胞と共培養した、ＣＥＲ４３＋Ｂａ／Ｆ３細胞（９．１０％）、ＣＥＲ４４＋Ｂａ／Ｆ３細胞（６．９２％）または対照ＥＧＦＲｔ＋Ｂａ／Ｆ３細胞（４．４９％）の二重陽性細胞集団を示すＦＡＣＳプロットを示す。Ｒａｊｉ細胞と共培養されたＣＥＲ４３＋、ＣＥＲ４４＋または対照ＥＧＦＲｔ＋Ｂａ／Ｆ３細胞の食細胞作用の頻度も図２７の棒グラフに示されている。ＣＤ１９特異的ＣＥＲ４３またはＣＥＲ４４を発現するレンチウイルスベクターで形質導入されたＢａ／Ｆ３細胞は、Rajiリンパ腫細胞の食細胞作用による取り込みの増強を示した。
実施例５
細胞免疫療法の組み合わせのためのＣＥＲ、ＴＣＲおよび改変型Ｔ細胞の構築
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインおよびＴｉｍ４膜貫通ドメインを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ４の細胞内シグナル伝達ドメインに結合させて、配列番号８１のアミノ酸配列によりコードされるキメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ５”を作製した。
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインおよびＴｉｍ４膜貫通ドメインを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ３の細胞内シグナル伝達ドメインに結合させて、配列番号８４のアミノ酸配列によりコードされるキメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ１７”を作製した。
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインおよびＴｉｍ４膜貫通ドメインを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ５の細胞内シグナル伝達ドメインに結合させて、配列番号８６のアミノ酸配列によりコードされるキメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ１９”を作製した。
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインおよびＴｉｍ４膜貫通ドメインを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ８の細胞内シグナル伝達ドメインに結合させて、配列番号８８のアミノ酸配列によりコードされるキメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ２１”を作製した。
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインおよびＴｉｍ４膜貫通ドメインを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ９の細胞内シグナル伝達ドメインに結合させて、配列番号９０のアミノ酸配列によりコードされるキメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ２３”を作製した。
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインおよびＴｉｍ４膜貫通ドメインを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ１の細胞内シグナル伝達ドメインに結合させて、配列番号９２のアミノ酸配列によりコードされるキメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ２６”を作製した。
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインおよびＴｉｍ４膜貫通ドメインを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ２の細胞内シグナル伝達ドメインに結合させて、配列番号９３のアミノ酸配列によりコードされるキメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ２７”を作製した。
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインおよびＴｉｍ４膜貫通ドメインを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ８の細胞内シグナル伝達ドメインおよびＣＤ７９ｂの切断型細胞内シグナル伝達ドメインに結合させて、配列番号１３２のアミノ酸配列によりコードされるキメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ１０３Ｂ”を作製した。
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインおよびＴｉｍ４膜貫通ドメインを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ８の細胞内シグナル伝達ドメインおよびＤＡＰ１２の細胞内シグナル伝達ドメインに結合させて、配列番号１３３のアミノ酸配列によりコードされるキメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ１０４”を作製した。
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインおよびＴｉｍ４膜貫通ドメインを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ８の細胞内シグナル伝達ドメインおよびＢＡＦＦ－Ｒの細胞内シグナル伝達ドメインに結合させて、配列番号１３４のアミノ酸配列によりコードされるキメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ１０５”を作製した。
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインおよびＴｉｍ４膜貫通ドメインを含むポリヌクレオチドを、ＮＦＡＭ１の細胞内シグナル伝達ドメインおよびＴＬＲ８の細胞内シグナル伝達ドメインに結合させて、配列番号１３５のアミノ酸配列によりコードされるキメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ１０６”を作製した。
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインおよびＴｉｍ４膜貫通ドメインを含むポリヌクレオチドを、Ｔｒａｆ６の細胞内シグナル伝達ドメインおよびＴＬＲ８の細胞内シグナル伝達ドメインに結合させて、配列番号１４３のアミノ酸配列によりコードされるキメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ１１６”を作製した。
ＴＣＲβ鎖をコードするポリヌクレオチドおよびＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＴＣＲ（ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１５／１８４２２８を参照）のＴＣＲαをコードするポリヌクレオチドを、それらの間のＰ２Ａ自己切断ペプチドをコードする配列を用いて融合させた。ＴＣＲＶαドメインは、配列番号１６２のアミノ酸配列を含み、ＴＣＲＶβ領域は、配列番号１６０のアミノ酸配列を含む。Ｃαドメインは、１２、１４および１５位にシステイン置換およびＬＶＬ置換を含み、配列番号１６３のアミノ酸配列を含む。Ｃβはまた、システイン置換を含み、そして配列番号１６１のアミノ酸配列を含む。コードされたＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＴＣＲは、配列番号１５８のアミノ酸配列を含む。
選択したＣＥＲポリヌクレオチドおよびＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲポリヌクレオチドをそれぞれpLentiレンチウイルスベクターに挿入した。末梢血は、ヒトドナーから静脈穿刺によって採血され、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、リンパ球分離媒体を用いた密度勾配遠心分離によって分離した。ＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞を、市販の分離キットを使用してＰＢＭＣから濃縮し、完全細胞増殖培地中、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８で活性化した。ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲを発現するウイルスベクター５０μｌを０．５ｍｌの完全細胞増殖培地で希釈し、ＣＤ８＋Ｔ細胞に添加した。選択したＣＥＲを発現するウイルスベクター５０μｌを完全細胞増殖培地０．５ｍｌで希釈し、ＣＤ４＋ Ｔ細胞に添加した。次に、形質導入されたＴ細胞を、予め加温した３２℃の遠心分離機で２７０ｘ ｇ ｒｐｍで１時間遠心分離した。Ｔ細胞を３７℃にて２４時間インキュベートした。Ｔ細胞を完全細胞増殖培地でさらに７２時間増殖させ、ビーズを除去し、機能アッセイに用いる前に５日間増殖させた。形質導入されたＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞は、機能アッセイのために１：１の比率で組み合わせた。
ＣＤ８ Ｔ細胞－ＴＣＲ ＋ ＣＤ４ Ｔ細胞－ＣＥＲの組合せは、抗原特異的細胞溶解活性および食細胞作用活性の増強を示す
二重ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲおよびＣＥＲを介した標的ＳＣＣ１５２細胞の除去は、細胞毒性および食細胞作用アッセイを用いて検出された（図３０Ａを参照）。ＳＣＣ１５２細胞は、下咽頭の扁平上皮癌からのＨＰＶ＋細胞である。ＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＴＣＲで形質導入されたＣＤ８＋ Ｔ細胞の細胞毒性活性は、活性化されたカスパーゼ３／７認識モチーフと、切断時に蛍光を発する赤色試薬を結合するカスパーゼ３／７アポトーシス試薬（IncuCyte（登録商標））を用いて検出された。蛍光シグナルを、蛍光顕微鏡を用いて測定した。ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋ Ｔ細胞と選択したＣＥＲ形質導入ＣＤ４＋ Ｔ細胞とを１：１の比率で混合し、ＨＰＶ１６ Ｅ７＋頭頸部扁平上皮癌細胞（ＳＣＣ１５２）と１：１の比率で共培養し、カスパーゼ３／７アポトーシス試薬を共培養に添加した。細胞毒性活性を、蛍光を測定することによって経時的に測定した。対照サンプルは、ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲのみで形質導入されたＣＤ８ Ｔ細胞であった。図３０Ｂ、３１および３４ならびに蛍光顕微鏡写真（データは示していない）のグラフにみられるように、試験されたほとんどのＣＥＲで形質導入されたＣＤ４＋Ｔ細胞をＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲで形質導入されたＣＤ８ Ｔ細胞に添加すると、ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲで形質導入されたＣＤ８ Ｔ細胞での単一処置（mono-treatment）よりも細胞溶解活性が増強された。
ＣＥＲ１０４で形質導入されたＣＤ４ Ｔ細胞＋ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲで形質導入されたＣＤ８ Ｔ細胞の増強された細胞溶解活性が、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）細胞毒性アッセイを用いて測定したときに観察された（図３２を参照）。ＬＤＨは細胞質性酵素であり、細胞膜が損傷したときに細胞から細胞培養液に放出される。したがって、ＬＤＨの培地中の存在は細胞死のマーカーである。ＬＤＨアッセイは、他の方法では検出できない細胞膜への低レベルの損傷を検出できる。ＬＤＨは、比色法または蛍光法を用いて検出できる。
ＨＰＣ１６ Ｅ７特異的ＴＣＲで形質導入されたＣＤ８＋Ｔ細胞と選択したＣＥＲで形質転換したＣＤ４ Ｔ細胞との共培養中に、ＳＣＣ１５２細胞による緑色蛍光タンパク質の発現を経時的に（０時間、２４時間、４８時間）定量することにより、標的ＳＣＣ１５２細胞の排除も検出された（図３３を参照）。４８時間までに、ＣＤ４ Ｔ細胞／ＣＥＲ＋ ＣＤ８ Ｔ細胞／ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲの組合せの共培養物のすべてが、対照と比較してＳＣＣ１５２細胞の除去の増強を示した。共培養試験のタイムラプスイメージングも同様に、対照と比較して、ＣＤ４ Ｔ細胞／ＣＥＲ＋ ＣＤ８ Ｔ細胞／ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲの組合せによるＳＣＣ１５２細胞の除去の増強を示した（データは示さず）。
共培養試験のサイトカイン応答は、メソスケールマルチアレイサイトカインプレートを用いて細胞上清をサンプリングすることによって測定された。以下のサイトカインが測定された：ＩＦＮγ、ＩＬ－２、ＴＮＦα、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１３、ＩＬ－１ｂおよびＩＬ－１０。活性化プロファイルを示す増強されたサイトカイン（例えば、ＩＦＮγ、ＩＬ－２）産生は、対照と比較して、ＣＤ４ Ｔ細胞／ＣＥＲ＋ＣＤ８ Ｔ細胞／ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲの組合せとの共培養で誘発された（図３５を参照）。
ＳＣＣ１５２細胞と共培養したＣＤ４ Ｔ細胞／ＣＥＲ＋ＣＤ８ Ｔ細胞／ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲの組合せの食細胞作用活性を、KEYENCE BZ-X710蛍光顕微鏡、２０Ｘ対物レンズおよびハイブリッドキャプチャーソフトウェアを用いて視覚化および定量化した。図３６－３７は、ＣＤ８ Ｔ細胞／ＨＰＶ Ｅ７ ＴＣＲとの共培養で用いられる種々のＣＥＲで形質導入されたＣＤ４＋Ｔ細胞が、対照ＣＤ８ Ｔ細胞／ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ単独との共培養よりも、ＳＣＣ１５２標的細胞のエンガルフメントを増強したことを示している。
実施例６
タンデム発現カセットの構築
ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインおよびＴｉｍ４膜貫通ドメインを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ４の細胞内シグナル伝達ドメインに連結させて、配列番号８１のアミノ酸配列をコードするキメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ５”を作製した。ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインおよびＴｉｍ４膜貫通ドメインを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ５の細胞内シグナル伝達ドメインに連結させて、配列番号９８のアミノ酸配列をコードするキメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ１９”を作製した。ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインを含むポリヌクレオチドを、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインおよびＴＬＲ８の細胞内シグナル伝達ドメインに連結させて、配列番号８６のアミノ酸配列をコードするキメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ２１”を作製した。ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインおよびＴｉｍ４膜貫通ドメインを含むポリヌクレオチドを、ＮＦＡＭ１の細胞内シグナル伝達ドメインに連結させて、配列番号１５９のアミノ酸配列をコードするキメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ２５”を作製した。ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインおよびＴｉｍ４膜貫通ドメインを含むポリヌクレオチドを、ＴＬＲ２の細胞内シグナル伝達ドメインに連結させて、配列番号９３のアミノ酸配列をコードするキメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ２”を作製した。ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインおよびＴｉｍ４膜貫通ドメインを含むポリヌクレオチドを、Ｔｒａｆ６の細胞内シグナル伝達ドメインに連結させて、配列番号１０２のアミノ酸配列をコードするキメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ２９”を作製した。ホスファチジルセリン結合タンパク質Ｔｉｍ４の細胞外ドメインおよびＴｉｍ４膜貫通ドメインを含むポリヌクレオチドを、Ｔｒａｆ３の細胞内シグナル伝達ドメインに連結させて、配列番号１２４のアミノ酸配列をコードするキメラエンガルフメント受容体“ＣＥＲ３１”を作製した。
ＴＣＲβ鎖をコードするポリヌクレオチドおよびＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＴＣＲのＴＣＲαをコードするポリヌクレオチド（ＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１５/１８４２２８参照）を、それらの間のＰ２Ａ自己切断ペプチドの配列を用いて連結させた。ＴＣＲＶαドメインは、配列番号１６２のアミノ酸配列を含み、ＴＣＲＶβ領域は、配列番号１６０のアミノ酸配列を含む。Ｃαドメインは、１２、１４および１５位にシステイン置換およびＬＶＬ置換を含み、配列番号１６３のアミノ酸配列を含む。Ｃβはまた、システイン置換を含み、配列番号１６１のアミノ酸配列を含む。コードされたＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＴＣＲは、配列番号１５８のアミノ酸配列を含む。本実施例に記載のタンデム発現構築物のアミノ酸配列を表２に提供する（図３８Ａから３８Ｆも参照のこと）。
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選択されたＣＥＲポリヌクレオチドおよびＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲポリヌクレオチドを、それらの間にＴ２Ａ配列（配列番号１５６のアミノ酸配列をコードする）を有する同じpLentiレンチウイルスベクターに挿入した（図１Ａ－１Ｇを参照）。末梢血を、ヒトドナーから静脈穿刺によって採血し、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、リンパ球分離媒体を用いた密度勾配遠心分離によって分離した。ＣＤ８＋ Ｔ細胞を、市販の分離キットを用いてＰＢＭＣから濃縮し、完全細胞増殖培地で抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８で活性化した。ＣＥＲ－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲの組合せを発現するウイルスベクター５０μlを０．５ｍｌの完全細胞増殖培地で希釈し、ＣＤ８＋ Ｔ細胞に添加した。次いで、形質導入されたＴ細胞を、予め加温した３２℃にて遠心分離機で２７０ ｘ ｇ ｒｐｍで１時間遠心分離した。Ｔ細胞を３７℃にて２４時間インキュベートした。Ｔ細胞を完全細胞増殖培地でさらに７２時間増殖させ、ビーズを除去し、機能アッセイに用いる前に５日間増殖させた。
ＣＥＲ－ＴＣＲタンデム発現カセットで形質導入されたＣＤ８ Ｔ細胞は、抗原特異的な細胞溶解および食細胞作用活性を示す
タンデム発現カセット形質導入ＣＤ８＋ Ｔ細胞の細胞毒性活性は、活性化されたカスパーゼ３／７認識モチーフを切断時に蛍光を発する赤色試薬と結合させるカスパーゼ３／７アポトーシス試薬（IncuCyte（登録商標））を用いて検出した。蛍光シグナルを、蛍光顕微鏡を用いて測定した。形質導入されたＣＤ８＋ Ｔ細胞をＨＰＶ１６ Ｅ７＋頭頸部扁平上皮癌細胞（ＳＣＣ１５２）と１：１の比率で共培養し、カスパーゼ３／７アポトーシス試薬を共培養に添加した。ＣＥＲ２１－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲタンデム発現カセットを含むＣＤ８＋ Ｔ細胞は、ＳＣＣ１５２細胞に対して細胞毒性活性を示す。ＣＥＲ２１－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲタンデム発現カセットで形質導入されたＣＤ８＋ Ｔ細胞による細胞毒性応答は、ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲのみを含むＣＤ８＋ Ｔ細胞よりも６時間指数関数的に高いことが明らかである（図３９を参照）。ＣＥＲ２１－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲタンデム発現カセット、ＣＥＲ２９－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲタンデム発現カセット、またはＣＥＲ３１－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲタンデム発現カセットで形質導入されたＣＤ８＋ Ｔ細胞を、ＳＣＣ１５２細胞と１：１の標的：エフェクター細胞比で共培養した。カスパーゼ３／７アポトーシス試薬を共培養に添加し、蛍光を測定することにより、細胞毒性活性を経時的に測定した（図４０を参照）。対照サンプルは、ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ単独で形質導入されたＣＤ８ Ｔ細胞またはモック形質導入Ｔ細胞であった。
タンデム発現カセット形質導入ＣＤ８＋ Ｔ細胞の食細胞作用活性は、タンデム発現カセット形質導入ＣＤ８＋ Ｔ細胞とＳＣＣ１５２細胞を１：１の比率で６時間共培養することにより検出した。食細胞作用事象は、KEYENCE BZ-X710蛍光顕微鏡、２０Ｘ対物レンズ、ハイブリッドキャプチャーソフトウェアを用いて視覚化および定量化した。ＣＥＲ２１－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ、ＣＥＲ２９－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲまたはＣＥＲ３１－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲタンデムカセットで形質導入されたＣＤ８＋ Ｔ細胞は、ＳＣＣ１５２細胞を貪食することができた（図４１を参照）。Ｒａｃ１阻害剤ＮＳＣ２３７６６（５０μＭ）も共培養試験に添加し、インビトロでの食細胞作用を測定した。Ｒａｃ１阻害剤による処置により、ＣＥＲ２１－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ、ＣＥＲ２９－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲまたはＣＥＲ３１－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ形質導入Ｔ細胞によるＳＣＣ１５２細胞のエンガルフメントがＲａｃ１依存的に生じることが明らかになった（データは示さず）。ＣＥＲ２１－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲタンデム発現カセットで形質導入されたＣＤ８＋ Ｔ細胞は、ビオチン結合ホスファチジルセリンでコーティングされたストレプトアビジンコーティングされたラテックスビーズをエンガルフした（データは示さず）。約３０分のインキュベーション後、ホスファチジルセリンでコーティングされたビーズは、ＣＥＲ２１－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ＋ Ｔ細胞内で可視化できた。
ＣＥＲ２１－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲタンデム発現カセットで形質導入されたＣＤ８＋ Ｔ細胞のサイトカイン応答は、ＳＣＣ１５２細胞との共培養試験中に細胞上清をサンプリングすることにより測定し、ＣＥＲ２１－ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ＋ Ｔ細胞がＩＦＮγ応答によって測定される抗原特異的エフェクター機能を示すことを示した（図４２を参照）。
実施例７
癌分子標的癌療法のＣＥＲ増強
本実施例は、癌の処置のために、分子標的化療法をＣＥＲ発現細胞と組み合わせて利用するアプローチについて記載する。このシナリオでは、第一の分子、例えば、ドライバーオンコジーンを標的とする小分子阻害剤が、ＣＥＲ発現細胞によって認識される第二の分子の発現または膜暴露を誘導する。この薬物誘導性標的は、エンガルフメント促進マーカー（例えば、ホスファチジルセリン）であり得る。誘導された第２の標的分子の認識および結合時に、ＣＥＲ発現細胞は、食細胞作用シグナル伝達カスケードの活性化を介して抗腫瘍活性を誘発する。このアプローチは、血液腫瘍および固形腫瘍の分子標的化療法を強化するために利用できる。
ＥＧＦＲ阻害剤のＣＥＲ増強
日本人患者の非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の約３０～４０％および上皮細胞増殖因子（ＥＧＦＲ）活性化変異の約１５％。ＥＧＦＲ変異ＮＳＣＬＣの処置のために、ＥＧＦＲ誘発性下流シグナル伝達経路を阻害するＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（ＥＧＦＲ－ＴＫＩ）が開発された。臨床治験では、ＥＧＦＲ変異肺癌患者のＥＧＦＲ阻害剤による予後の改善が示され、進行したＮＳＣＬＣの全生存期間が１年から２－３年に延長されている。ＥＧＦＲ阻害剤は、結腸直腸癌、乳癌、卵巣癌、膵臓癌および神経膠芽腫を含む、活性化ＥＧＦＲ変異を有する他の癌の処置に用いられ得る。臨床腫瘍学研究は、最も強力な標的化療法でも、特定の遺伝子またはタンパク質を妨害するように設計された薬物を投与された患者の大多数が、最終的には再発し、多くの場合、治療に反応しなくなった新しい腫瘍を伴うことを示している。
ＣＥＲ改変細胞は、エンガルフメント促進マーカーホスファチジルセリンを認識するように設計されており、さまざまなＥＧＦＲ阻害剤であるオシメリチニブ、ブリガチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブと組み合わせて投与され、ＣＥＲ療法がＥＧＦＲ標的化療法を増強できるかどうかを判断した。
ＨＣＣ１５９肺腺癌細胞はＥＧＦＲ変異を有し、ＥＧＦＲ阻害に感受性がある。ＨＣＣ１５９細胞は、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤であるオシメリチニブ、ブリガチニブ、エルロチニブまたはゲフィチニブを濃度を上げながら（５０ｎＭ、２５０ｎＭ、５００ｎＭ、１０００ｎＭ、２５００ｎＭ、３７００ｎＭまたは５０００ｎＭのオシメリチニブ、ブリガチニブおよびエルロチニブ；５０ｎＭ、２５０ｎＭ、５００ｎＭ、１０００ｎＭ、２５００ｎＭ、５０００ｎＭ、１００００ｎＭのブリガチニブ）の存在下で１２時間処置し、Ｔｉｍ４－ＩｇＧ１ Ｆｃ組換え融合タンパク質とインキュベートして、エンガルフメント促進マーカー（ホスファチジルセリン）のＥＧＦＲ阻害剤処置後の標的細胞への曝露を評価する。オシメリチニブ（図４３Ａ）、ブリガチニブ（図４３Ｂ）、エルロチニブ（図４４Ａ）およびゲフィチニブ（図４４Ｂ）の濃度の増加は、Ｔｉｍ４－ＩｇＧ１ Ｆｃ融合タンパク質による表面染色を増強し、ホスファチジルセリン標的分子の露出がＥＧＦＲ薬物誘導性であることを示している。
ＥＧＦＲ変異を有するＨ１９７５肺腺癌細胞を、ＣＥＲ１２３またはＣＥＲ１２６改変またはモック形質導入（ベクターのみ）ＣＤ４＋ Ｔ細胞と、オシメリチニブの濃度を増加させながら共培養した。ＣＥＲ１２３は、配列番号１５０に記載のポリペプチド配列を有し、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＲＡＦ６シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。ＣＥＲ１２６は、配列番号１７４に記載のポリペプチド配列を有し、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＲＡＦ２シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む貪食シグナル伝達ドメインを含む。ＣＤ４ Ｔ細胞は、ＣＥＲ１２３またはＣＥＲ１２６核酸および切断されたＥＧＦＲ（形質導入マーカー）核酸を含むレンチウイルスベクターで形質導入した。アッセイは、ＣＤ３およびＣＤ２８マイクロビーズを用いた活性化の７日後に、ＥＧＦＲ特異的抗体を用いたＦＡＣＳによって精製されたＣＥＲ改変Ｔ細胞を用いて実行した。ＣＥＲ改変Ｔ細胞およびＨ１９７５細胞を、エフェクター：標的細胞比（Ｅ：Ｔ）が１：１、２：１または５：１で共培養した。オシメリチニブ（０、２５０ｎＭ、５００ｎＭまたは１０００ｎＭ）の存在下で４８時間共培養した後、Ｔ細胞を洗浄し、生存可能なＨ１９７５細胞の数を比色ＭＴＴアッセイを用いて定量化した。細胞生存率試験をトリプリケートに行い、対照の％として示した（図４５Ａ）。共培養試験の明視野画像は、対照Ｔ細胞（ベクターのみ）（図４５Ｂ、左パネル）と比較して、オシメリチニブ（５００ｎＭ）＋ＣＥＲ１２６改変Ｔ細胞（図４５Ｂ、右パネル）の存在下でＨ１９７５細胞の喪失を示している。したがって、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤の存在下では、エンガルフメント促進マーカーを標的とするＣＥＲ発現Ｔ細胞は、用量依存的な細胞致死反応を示す。
Ｈ１９７５ ＮＳＣＬＣ細胞は、ＣＥＲ１２３またはＣＥＲ１２６を発現するＣＤ４＋ Ｔ細胞と、オシメリチニブの濃度を増加させて（０、５００ｎＭまたは１０００ｎＭ）共培養した。モック形質導入（ベクターのみ）したＴ細胞を対照として用いた。アッセイは、ＣＤ３およびＣＤ２８マイクロビーズを用いた活性化の７日後に、ＥＧＦＲ特異的抗体を用いたＦＡＣＳによって精製されたＣＥＲ改変Ｔ細胞を用して行われた。ＣＥＲ改変Ｔ細胞およびＨ１９７５細胞を、エフェクター：標的細胞の比率が２：１または５：１で共培養した。共培養の１８時間後に、ＬＤＨベースの細胞毒性アッセイを用いてバルク上清を評価した。オシメリチニブの存在下で、ＣＥＲ１２３またはＣＥＲ１２６を発現するＴ細胞は、誘導可能な細胞致死応答を示す（図４６）。
Ｈ１９７５ ＮＳＣＬＣ細胞を５００ｎＭオシメリチニブで処理し、低ｐＨ保持エンドソームへの局在を示すために、ｐＨ検出色素であるpH-rodo redで標識した。ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、ＣＥＲ１２２核酸およびｔＥＧＦＲ核酸（形質導入マーカー）を含むレンチウイルスベクターで形質導入した。ＣＥＲ１２２は、配列番号１４９に記載のポリペプチド配列を有し、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。CELLTRACE Violetで標識されたＣＥＲ１２２形質導入Ｔ細胞を、オシメリチニブ処理Ｈ１９７５ ＮＳＣＬＣ細胞と共培養した。蛍光顕微鏡画像（４０Ｘ）を、Ｈ１９７５細胞およびＣＥＲ発現Ｔ細胞の共培養から１２時間後に得た（図４７、左上パネル）。モック形質導入されたＣＤ４＋ Ｔ細胞（ベクターのみ）を対照として用い、食細胞作用活性を示さなかった（図４７、右上パネル）。食細胞作用事象は、CELLTRACE Violet標識Ｔ細胞内のpHrodo red標識として視覚化できる。CELLTRACE Violet標識ＣＥＲ１２２改変Ｔ細胞によるpHrodo red標識Ｈ１９７５細胞の食細胞作用の拡大を図４７の下パネルに示し、白色矢印は食細胞作用事象を示す。
ＥＧＦＲ変異を有するＨＣＣ１５９肺腺癌細胞を、オシメリチニブの濃度を上げて（０．１ｎＭ、１ｎＭまたは５ｎＭ）、ＣＥＲ１２３またはＣＥＲ１２６を発現するＣＤ４＋ Ｔ細胞と共培養した。モック形質導入（ベクターのみ）Ｔ細胞を対照として用いた。エフェクター：標的細胞の比が１：１、２：１または５：１で薬物の存在下での４８時間の共培養後、Ｔ細胞を洗い流し、生存ＨＣＣ１５９細胞の数を熱量測定ＭＴＴアッセイを用いて定量化した。細胞生存率実験はトリプリケートで行い、対照の％として示された（図４８Ａ）。ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤の存在下で、ＣＥＲ１２３およびＣＥＲ１２６を発現する細胞は、用量依存的な標的細胞致死反応を示す。明視野画像は、対照Ｔ細胞（ベクターのみ）（図４８Ｂ、左パネル）と比較して、１ｎＭオシメリチニブおよびＣＥＲ１２３発現Ｔ細胞の存在下でＨＣＣ１５９細胞の喪失を示している（図４８Ｂ、右パネル）。
ＨＣＣ１５９肺腺癌細胞を、ＣＥＲ１２３またはＣＥＲ１２６を発現するＣＤ４＋ Ｔ細胞と、オシメリチニブの濃度を上げて（０、１ｎＭ、５ｎＭ）共培養した。１８時間の共培養後、ＬＤＨベースの細胞毒性アッセイを用いて、バルク上清を評価した。Ｔ細胞アッセイは、エフェクター：標的細胞の比率が２：１または５：１でＣＤ３およびＣＤ２８マイクロビーズを用いる活性化から７日後に、精製ＥＧＦＲ＋（形質導入マーカー）、ＣＥＲ改変Ｔ細胞を用いて行った。対照“モック”Ｔ細胞にベクターのみを形質導入した。オシメリチニブの存在下で、ＣＥＲ１２３およびＣＥＲ１２６を発現する細胞は、誘導可能な細胞致死応答を示す（図４９）。インターフェロンγ（ＩＦＮγ）分泌について１８時間共培養した後にバルク上清も分析した（図５０）。対照“モック”Ｔ細胞にベクターのみを形質導入した。オシメリチニブの存在下で、ＣＥＲ１２３－は誘導可能なサイトカイン分泌を示す。
ＣＤ４＋ Ｔ細胞に、さまざまなＣＥＲ（ＣＥＲ２１、ＣＥＲ１０８、ＣＥＲ１０４、ＣＥＲ１２９、ＣＥＲ２７、ＣＥＲ１２０、ＣＥＲ１２２、ＣＥＲ１２３、ＣＥＲ１２４またはＣＥＲ１２６）をコードするレンチウイルスベクターで形質導入した。モック形質導入（ベクターのみ）ＣＤ４＋ Ｔ細胞を対照として用いた。ＣＥＲ２１は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。ＣＥＲ２１は、配列番号８８に記載のポリペプチド配列を有する。ＣＥＲ１０８は、配列番号１３７に記載のポリペプチド配列を有し、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。ＣＥＲ１０４は、配列番号１３３に記載のポリペプチド配列を有し、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。ＣＥＲ１２９は、配列番号１７７に記載のポリペプチド配列を有し、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＲＡＦ２シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。ＣＥＲ２７は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。ＣＥＲ２７は、配列番号９３に示されるようなポリペプチド配列を有する。ＣＥＲ１２０は、配列番号１４７に記載のポリペプチド配列を有し、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＴＬＲ１シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。ＣＥＲ１２２は、配列番号１４９に記載のポリペプチド配列を有し、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。ＣＥＲ１２３は、配列番号１５０に記載のポリペプチド配列を有し、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＲＡＦ６シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。ＣＥＲ１２６は、配列番号１７４に示されるポリペプチド配列を有し、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＲＡＦ２シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。ＣＥＲ１２４は、配列番号１５１に記載のポリペプチド配列を有し、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＮＦＡＭ１シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。ＥＧＦＲ変異を有するＨＣＣ８２７肺腺癌細胞を、ＣＥＲ発現Ｔ細胞またはモック形質導入Ｔ細胞と、エフェクター：標的細胞比が１：１の１ｎＭのオシメリチニブで４８時間共培養した。Ｔ細胞を洗い流し、生存ＨＣＣ８２７細胞の数を、比色ＭＴＴアッセイを用いて定量化した。細胞生存率試験をトリプリケートで行い、対照の％として示した。ＣＥＲ発現Ｔ細胞は、ＥＧＦＲ阻害によるＨＣＣ８２７細胞の相乗的細胞致死を実証する（図５１Ａ－Ｂ）。ＥＧＦＲ変異を有するＨＣＣ８２７細胞を、１ｎＭのオシメリチニブを用いて、ＣＥＲ発現またはモック形質導入（ベクターのみ）ＣＤ４＋ Ｔ細胞と共培養した。エフェクター：標的細胞比が１：１で４８時間共培養した後、Ｔ細胞を洗い流し、生存ＨＣＣ８２７細胞数を比色ＬＤＨアッセイを用いて定量化した（図５２）。細胞生存率試験をトリプリケートで行い、対照の％として示した。ＣＥＲ＋ ＨＣＣ８２７＋ １ｎＭオシメリチニブ共培養試験からの明視野顕微鏡画像を４８時間で得た（図５３－５６）。
ＣＥＲ発現（ＣＥＲ２１、ＣＥＲ２７、ＣＥＲ３０、ＣＥＲ１０８、ＣＥＲ１１０、ＣＥＲ１１２、ＣＥＲ１２０、ＣＥＲ１２２、ＣＥＲ１２３、ＣＥＲ１２４、ＣＥＲ１２６、ＣＥＲ１２７、ＣＥＲ１２９またはＣＥＲ１０４）ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、ＥＧＦR阻害時にＨ１９７５肺腺癌細胞の相乗的細胞致死も示した（図５７）。ＣＥＲ３０は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＴＲＡＦ２シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。ＣＥＲ３０は、配列番号９６に示されるようなポリペプチド配列を有する。ＣＥＲ１１０は、配列番号１２５のポリペプチド配列を含み、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＴＲＡＦ６シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。ＣＥＲ１１２は、配列番号１２８のポリペプチド配列を有し、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＴＲＡＦ６シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＮＦＡＭ１シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。ＣＥＲ１２７は、配列番号１７５のポリペプチド配列を含み、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＴＲＡＦ２シグナルドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＬＲ２シグナルドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナルドメインを含む。Ｈ１９７５細胞はＥＧＦＲ阻害剤に対してより耐性があるため、オシメリチニブをわずかに高い濃度で用いた。ＥＧＦＲ変異を有するＨ１９７５肺腺癌細胞を、ＣＥＲを発現するまたはモック形質導入（ベクターのみ）ＣＤ４＋ Ｔ細胞と１μＭのオシメリチニブとを共培養した。エフェクター：標的細胞比が１：１で４８時間共培養した後、Ｔ細胞を洗い流し、生存Ｈ１９７５細胞の数を、比色ＬＤＨアッセイを用いて定量化した（図５７）。細胞生存率試験はトリプリケートで行い、対照の％として示した。図５８は、Ｈ１９７５細胞とモック形質導入Ｔ細胞（左の画像）またはオシメリチニブ（５００ｎＭ）で４８時間処置したＣＥＲ１２６＋ Ｔ細胞（右の画像）の共培養の明視野画像を示している。
ＡＬＫ阻害剤のＣＥＲ増強
未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）遺伝子再構成は、ＮＳＣＬＣ患者の約７％を占める。ＡＬＫの選択的阻害剤は、ＮＳＣＬＣの処置のために開発された。臨床治験ではＡＬＫ阻害剤を用いたＡＬＫ陽性ＮＳＣＬＣの一次療法において優れた有効性と低い毒性が示されているが、反応は一般的に不完全で一時的なものである。
エンガルフメント促進マーカーホスファチジルセリンを認識するように設計されたＣＥＲ改変細胞を、種々のＡＬＫ阻害剤であるアレクチニブとクリゾチニブを組み合わせて投与し、ＣＥＲ療法がＡＬＫ標的療法を増強できるかどうかを判定した。
ＥＬＭ４－ＡＬＫ融合転座をＡ５４９肺腺癌細胞に導入した。次いで、Ａ５４９細胞を、漸増濃度のＡＬＫキナーゼ阻害剤であるアレクチニブ（２５０ｎＭ、５００ｎＭ、１０００ｎＭ、２５００ｎＭ、３７００ｎＭまたは５０００ｎＭ）またはクリゾチニブ（５００ｎＭ、１μＭ、２．５μＭまたは５μＭ）の存在下で１２時間処置し、Ｔｉｍ４－ＩｇＧ１ Ｆｃ組換え融合タンパク質で染色し、ＡＬＫ阻害剤処置後の標的細胞へのエンガルフメント促進マーカー（ホスファチジルセリン）の暴露を評価した。アレクチニブ（図５９Ａ）およびクリゾチニブ（図５９Ｂ）の濃度を上げると、Ｔｉｍ４－ＩｇＧ１ Ｆｃ融合タンパク質による表面染色が増強され、ホスファチジルセリン標的分子の露出がＡＬＫ阻害剤による薬物誘導であることを示している。
ＥＬＭ４－ＡＬＫ転座をＡ５４９細胞に導入した。次いで、Ａ５４９細胞を、ＣＥＲ１０４またはＣＥＲ１２２を発現するＴ細胞またはモック形質導入（ベクターのみ）Ｔ細胞を共に、ＡＬＫ阻害薬であるアレクチニブの濃度を上げて（２５０ｎＭ、５００ｎＭ、１μＭ、２．５μＭ、３．７μＭ、７μＭまたは１０μＭ）またはクリゾチニブ（２５０ｎＭ、５００ｎＭ、１μＭ、２．５μＭ、３．７μＭ、７μＭまたは１０μＭ）共培養した。ＣＥＲ１０４は、配列番号１３３に記載のポリペプチド配列を有し、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＤＡＰ１２シグナル伝達を含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。ＣＥＲ１２２は、配列番号１４９に記載のポリペプチド配列を有し、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＤＡＰ１２シグナル伝達を含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。エフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）細胞比は２：１または５：１で共培養した。ＡＬＫ阻害剤の存在下で４８時間および７２時間共培養した後、Ｔ細胞を洗い流し、比色ＭＴＴアッセイを用いて生存Ａ５４９細胞の数を定量化した。処置後４８時間のＣＥＲ＋アレクチニブ処置Ａ５４９細胞の細胞生存率（％）を図６０Ａ（エフェクター：標的細胞比２：１）および図６０Ｂ（エフェクター：標的細胞比５：１）に示す。処置後４８時間のＣＥＲ＋クリゾチニブ処置Ａ５４９細胞の細胞生存率（％）を図６０Ｃ（エフェクター：標的細胞比２：１）および図６０Ｄ（エフェクター：標的細胞比５：１）に示す。処置後７２時間でのＣＥＲ＋アレクチニブ処置Ａ５４９細胞の細胞生存率（％）を図６１Ａ（エフェクター：標的細胞比２：１）および図６１Ｂ（エフェクター：標的細胞比５：１）に示す。処置後７２時間のＣＥＲ＋クリゾチニブ処置Ａ５４９細胞の細胞生存率（％）を図６１Ｃ（エフェクター：標的細胞比２：１）および図６１Ｄ（エフェクター：標的細胞比５：１）に示す。細胞生存率試験はトリプリケートでに行い、対照の％として示した。線形回帰モデルを用いて生データから最適な曲線を作成した。ＡＬＫキナーゼ阻害剤の存在下で、ＣＥＲ発現細胞は用量依存的な細胞致死反応を示す。
ＥＬＭ４－ＡＬＫ転座をＡ５４９細胞に導入した。ＡＬＫ＋Ａ５４９細胞を１μＭアレクチニブまたは１μＭクリゾチニブで処置し、ｐＨ感受性色素であるpHrodo redで標識して、低ｐＨ保持エンドソームでの局在を示した。ＣＤ４ Ｔ細胞を、ＣＥＲ１０４またはＣＥＲ１１７を発現するように改変し、CELLTRACE Violetで標識した。ＣＥＲ１１７は、配列番号１４４に記載のポリペプチド配列を有し、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＲＡＦ６シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。次いで、ＡＬＫ＋Ａ５４９細胞を、ＣＥＲ１０４またはＣＥＲ１１７発現ＣＤ４＋ Ｔ細胞またはモック形質導入（ベクターのみ）Ｔ細胞と１２時間共培養し、４０倍の倍率で蛍光顕微鏡法によって画像を取得した（図６２Ａ－Ｅ）。白色矢印は、例示的な食細胞作用事象（CELLTRACE Violet標識ＣＤ４＋ Ｔ細胞内のpHrodo red細胞標的）を示す。ＣＥＲ発現Ｔ細胞は、アレクチニブまたはクリゾチニブで処置されたＡＬＫ＋ Ａ５４９細胞を貪食した（図６２Ｂ－Ｅ）。モック形質導入（ベクターのみ）対照は、食細胞作用活性を示さない（図６２Ａ）。
同様に、ＣＥＲ１２３およびＣＥＲ１２６を発現するＣＤ４＋ Ｔ細胞は、２．５μＭアレクチニブで処置したＡＬＫ＋ Ａ５４９細胞の食細胞作用による排除を示した（図６３Ｂ、６３Ｃ、６３Ｅ、６３Ｆ）。ＡＬＫ＋ Ａ５４９細胞を２．５μＭのアレクチニブで処置し、次いでｐＨ感知色素であるpHrodo redで標識して、低ｐＨ保持エンドソームへの局在を示した。ＣＥＲ１２３およびＣＥＲ１２６で形質導入されたＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞をCELLTRACE Violetで標識し、Ａ５４９ ＡＬＫ陽性細胞と共培養した。共培養細胞を、１２時間後に６３倍の倍率で蛍光顕微鏡によって画像化した（図６３Ａ－Ｆ）。白色矢印は、例示的な食細胞作用事象（CELLTRACE Violet標識ＣＤ４ Ｔ細胞内のpHrodo red標識）を示す。ＣＥＲ発現Ｔ細胞は、アレクチニブで処置されたＡＬＫ＋ Ａ５４９細胞を貪食した（図６３Ｂ、６３Ｃ、６３Ｅおよび６３Ｆ）。モック形質導入（ベクターのみ）対照は、食細胞作用を示さない（図６３Ａ、６３Ｄ）。
ＣＥＲ発現Ｔ細胞によるアレクチニブ処置ＡＬＫ＋ Ａ５４９細胞の食細胞作用も定量化した。Ａ５４９細胞を１μＭのアレクチニブで１２時間処置し、ＣＥＲ１２３またはＣＥＲ１２６を発現するＴ細胞と１：１の比率で１２時間共培養しました。図６４Ａの棒グラフは、（（食細胞作用の標的事象の数）／（エフェクター細胞の総数））＊１００として計算された食細胞作用の割合の定量化を表す。事象は、１２時間の共培養後、４０ｘ解像度で３Ｘ３ステッチの蛍光画像から計算した。図６４Ｂの棒グラフは、（エフェクター細胞における標的事象の平均面積比＊食作用％）として計算された、調整された食細胞作用指数の定量化を表す。事象は、１２時間の共培養後、３Ｘ３ステッチの蛍光画像から４０ｘ解像度で計算した。
ＡＬＫキナーゼ阻害剤クリゾチニブおよびアレクチニブの存在下で、ＣＥＲ１２３またはＣＥＲ１２６を発現するＴ細胞は、用量依存的な誘導性サイトカイン分泌および細胞致死反応を示す。ＥＬＭ４－ＡＬＫ転座をＡ５４９細胞に導入した。ＡＬＫ＋Ａ５４９細胞を、ＡＬＫ阻害薬クリゾチニブまたはアレクチニブの濃度を増加させながら（０、２５００ｎＭまたは３７００ｎＭ）、ＣＥＲ発現Ｔ細胞と共培養した。アッセイを、２：１または５：１のエフェクター：標的細胞比でＣＤ３およびＣＤ２８マイクロビーズを用いて、活性化の7日後に精製されたｔＥＧＦＲ＋（形質導入マーカー）、ＣＥＲ発現細胞で行った。モックＴ細胞にベクターのみを形質導入し、対照として用いた。共培養の１８時間後、ＬＤＨ細胞毒性アッセイを用いてバルク上清を評価し、細胞致死を示した（図６５Ａ－Ｂ）。共培養試験の顕微鏡写真は、ＣＥＲ１２６形質導入細胞の存在下で、ウェルからのクリゾチニブ処置Ａ５４９細胞のほぼ完全な消失を示す（図６５Ｃ、左パネル）。
ＡＬＫキナーゼ阻害剤クリゾチニブおよびアレクチニブの存在下で、ＣＥＲ１２３またはＣＥＲ１２６を発現するＴ細胞は、用量依存的な誘導性サイトカイン分泌を示す（図６６Ａ－Ｂ）。ＥＬＭ４－ＡＬＫ転座により導入されたＡ５４９細胞は、ＡＬＫ阻害剤クリゾチニブ（３７００ｎＭ）またはアレクチニブ（３７００ｎＭ）と共にＣＥＲ１２３またはＣＥＲ１２６を発現するＴ細胞と共培養した。１８時間の共培養後、バルク上清をインターフェロンγ分泌について評価した（図６６Ａ－Ｂ）。アッセイは、エフェクター：標的比（２：１および５：１）でＣＤ３およびＣＤ２８マイクロビーズを用いて、活性化から７日後に精製したｔＥＧＦＲ＋（形質導入マーカー）、ＣＥＲ発現Ｔ細胞を用いて行った。対照“モック”Ｔ細胞にベクターのみを形質導入した。
ＣＥＲ２１－、ＣＥＲ１０８－、ＣＥＲ１０４－およびＣＥＲ１２９で形質導入されたＣＤ４＋ Ｔ細胞を、ＡＬＫ阻害剤の存在下でＡ５４９ ＡＬＫ＋細胞を致死させる能力について試験した。ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、ＣＥＲ２１、ＣＥＲ１０８、ＣＥＲ１０４、ＣＥＲ１２９、ＣＥＲ２７、ＣＥＲ１２０、ＣＥＲ１２２、ＣＥＲ１２３、ＣＥＲ１２４またはＣＥＲ１２６核酸を含むレンチウイルスベクターで形質導入した。ＥＬＭ４－Ａｌｋ転座により導入されたＡ５４９肺腺癌細胞を、ＣＥＲ形質導入またはモック形質導入（ベクターのみ）ＣＤ４＋ Ｔ細胞と共に、エフェクター：標的細胞の比率１：１で、３．７μＭアレクチニブと４８時間共培養した。４８時間の共培養後、Ｔ細胞を洗い流し、生存Ａ５４９ ＡＬＫ＋細胞の数を熱量測定ＭＴＴアッセイを用いて定量した（図６７Ａ－Ｂ）。細胞生存率試験をトリプリケートで行い、対照の％として示した。明視野顕微鏡画像は、Ａ５４９ ＡＬＫ＋共培養試験からも得た。図６８は、アレクチニブ（３．７μＭ）で４８時間処置し、モック形質導入T細胞（左の画像）またはＣＥＲ１０４形質導入Ｔ細胞（右の画像）と共培養したＡ５４９ ＡＬＫ＋細胞を示す。矢印は、食細胞作用のＣＥＲ１０４＋ Ｔ細胞に囲まれた死んだＡ５４９ ＡＬＫ＋細胞のクラスターを示す。図６９は、アレクチニブ（３．７μＭ）で４８時間処置し、モック形質導入Ｔ細胞（左の画像）またはＣＥＲ１２６形質導入T細胞（右の画像）と共培養したＡ５４９ ＡＬＫ＋細胞を示す。矢印は、食細胞作用性ＣＥＲ１０４＋ Ｔ細胞に囲まれた死んだＡ５４９ ＡＬＫ＋細胞のクラスターを示す。
種々のＣＥＲ形質導入されたＣＤ４＋ Ｔ細胞によるアレクチニブ処置Ａ５４９肺腺癌細胞の食細胞作用も定量化した。Ａ５４９細胞をアレクチニブ（１μＭ）で１２時間処置した。ＣＥＲ２１－、ＣＥＲ２７－、ＣＥＲ３０－、ＣＥＲ１０８－、ＣＥＲ１１０－、ＣＥＲ１１２－、ＣＥＲ１２０－、ＣＥＲ１２３－、ＣＥＲ１２４－、ＣＥＲ１２６－、ＣＥＲ１２７－またはＣＥＲ１０４で形質導入されたＣＤ４＋ Ｔ細胞を、アレクチニブ処置Ａ５４９細胞と１：１の比率で１２時間共培養した。食作用事象は、４０Ｘ解像度で３ｘ３ステッチの蛍光顕微鏡画像から計算した。図７０は、（エフェクター細胞における標的事象の中央面積比×％食作用）として計算された調整された食細胞作用指数を示す。図７１は、pHrodo redで標識し、CELL TRACE violetで標識したCER形質導入T細胞と共培養した、アレクチニブ処置したＡ５４９ ＡＬＫ＋細胞の蛍光顕微鏡写真を示す。１２時間の共培養後に画像が得られた。黄色の三角形は、例示的な食作用事象を示す（CELLTRACE violet標識ＣＤ４＋ Ｔ細胞内のpHrodo red標識）。モック形質導入（ベクターのみ）Ｔ細胞は、食細胞作用を示さない。
ＣＥＲ形質導入Ｔ細胞による腫瘍細胞の食細胞作用取り込みの経時的試験を行った。ＣＤ４＋ Ｔ細胞に、ＣＥＲ１２２核酸を含むレンチウイルスベクターを形質導入した。モック形質導入（ベクターのみ）ＣＤ４＋ Ｔ細胞を対照として用いた。ＣＥＲ１２２形質導入Ｔ細胞をCELLTRACE violetで標識し、pHrodo red標識Ａ５４９ ＡＬＫ＋肺腺癌細胞と共培養した。蛍光顕微鏡画像は４、８および１６時間の共培養で得て（図７２Ｃ）、％食細胞作用（図７２Ａ）および食細胞作用指数（図７２Ｂ）を計算した。黄色の三角形は、ＣＥＲ１２２形質導入Ｔ細胞（CELLTRACE violet標識ＣＤ４＋ Ｔ細胞内のpHrodo red 標的）による例示的な食細胞作用事象を示す（図７２Ｃの右の画像）。モック形質導入Ｔ細胞は、食細胞作用を示さない（図７２Ｃ、左の画像）。
追加のＣＥＲタイプの試験では、ＡＬＫ阻害時にＡＬＫ再構成を有するＡ５４９肺腺癌細胞の相乗的細胞致死が示された（図７３）。ＥＬＭ４－ＡＬＫ転座により導入されたＡ５４９細胞を、モック形質導入（ベクターのみ）ＣＤ４＋ Ｔ細胞またはＣＥＲ形質導入ＣＤ４＋ Ｔ細胞（ＣＥＲ２１、ＣＥＲ２７、ＣＥＲ３０、ＣＥＲ１０８、ＣＥＲ１１０、ＣＥＲ１１２、ＣＥＲ１２０、ＣＥＲ１２２、ＣＥＲ１２３、 ＣＥＲ１２４、ＣＥＲ１２６、ＣＥＲ１２７、ＣＥＲ１２９またはＣＥＲ１０４）と、アレクチニブ（３．７μＭ）の併用して共培養した。共培養のエフェクター：標的細胞比は１：１であった。１８時間の共培養後、バルク上清をＬＤＨ細胞毒性アッセイで評価し、細胞致死を測定した（図７３）。ＣＥＲを発現するＴ細胞は、ＡＬＫ阻害時に相乗的細胞致死反応を示した。
インビボでのＡＬＫ阻害剤のＣＥＲ増強
ＣＥＲ療法およびＡＬＫ阻害剤療法の組合せもまた、インビボで評価した。図７４は、ＡＬＫ阻害剤療法と組み合わせてＣＥＲ発現Ｔ細胞を用いて養子細胞療法試験の詳細を示す略図を示す。Ａ５４９ ＡＬＫ＋ルシフェラーゼ＋細胞を、試験開始の２１日前に免疫不全（ＮＳＧ）マウスに移植し、生物発光および腫瘍体積による移植について７日後に評価した。ＣＥＲ養子移植の前日（－１日目）に、腫瘍が確立された動物を無作為にグループ分けし、アレクチニブ １５ｍｇ／ｋｇ （腹腔内）で処置し、その後、眼窩後部に１０μｇのＣＥＲ形質転換ヒトＴ細胞を注入した。動物は、細胞注入後２４時間ｘ ３日毎に１０μｇの全身性ＩＬ－２を受容し、その後、腫瘍の進行とその後の細胞の増殖および持続性をモニターした。
ＣＥＲ発現Ｔ細胞を、エクスビボで増殖させることができる。Ｔ細胞を濃縮し、活性化させ、ＣＥＲ１２２－Ｔ２Ａ－ｔＥＧＦＲレンチウイルスコンストラクトで形質導入し、ＦＡＣＳにより表面ＥＧＦＲおよびＴ細胞マーカーＣＤ４、ＣＤ８の表現型を決定した（図７５Ａ）。非選択培養における形質導入および対照Ｔ細胞（ベクターのみで形質導入）の総数を、ＣＤ３およびＣＤ２８ビーズの活性化後に決定した（図７５Ｂ）。２－Ｄ蛍光液滴デジタルＰＣＲをＣＥＲ１２２形質導入Ｔ細胞ゲノムＤＮＡで行い、ＣＥＲカセットからの領域の増幅が示されている（図７５Ｃ）。ＣＥＲ１２２形質導入Ｔ細胞のコピー数の値は、デジタル液滴ＰＣＲから決定した（図７５Ｄ）。
図７６Ａは、未処置、アレクチニブのみ、およびアレクチニブ＋ＣＥＲ１２２形質導入Ｔ細胞における－１４日から養子移植後３０日の腫瘍体積測定値を示す（１群当たりｎ＝５）。図７６Ｂは、生物発光イメージングによって評価された、養子移植後０日目から８日目のＮＳＧマウスにおけるＡ５４９－ルシフェラーゼ＋ ＡＬＫ陽性細胞の増殖を示す。図７６Ｃは、養子移入後８日目のＡ５４９ ＡＬＫ陽性腫瘍量の生物発光画像を示す。ＣＥＲ１２２療法とアレクチニブ療法の併用は、インビボでのＡＬＫ＋ＮＳＣＬＣに対する抗腫瘍反応を増強した。ＣＥＲが導入されたＴ細胞は、養子移入後の早期の増殖を示した。ＦＡＣＳプロットは、養子細胞処置後の動物の末梢血におけるＣＤ４５＋ヒト細胞の早期の増殖を示す（図７７Ａ）。細胞注入後8日目に、末梢血サンプルを抗ヒトＣＤ４５－ＡＰＣ結合抗体で染色した。各ＦＡＣＳプロットは、単一の動物を示す。ＣＥＲ１２２＋ Ｔ細胞の養子移入４、８、１６および２5日目におけるヒトＣＤ４５＋細胞／μＬの末梢血の頻度を示す棒グラフ（図７７Ｂ）。末梢血は眼窩後出血によって得られ、Ｔ細胞エンガルフメントの証拠についてＦＡＣＳで調べた。ヒトＣＤ４５細胞／μＬの末梢血の頻度は、TRUCOUNT（BD Biosciences）ビーズを用いてＦＡＣｓによって決定した。
インビボでのＥＧＦＲ阻害剤のＣＥＲ増強
ＣＥＲ療法およびＥＧＦＲ阻害剤療法の組み合わせもインビボで評価した。図７８は、ＥＧＦＲ阻害剤療法と組み合わせてＣＥＲ発現細胞を用いる養子細胞療法試験の詳細を示す略図を示す。Ｈ１９７５ ＥＧＦＲ＋／ルシフェラーゼ＋細胞を、試験開始の１４日前に免疫不全（ＮＳＧ）マウスに移植し、７日後に生物発光と腫瘍体積による移植について評価した。ＣＥＲ養子移入の前日（－１日目）に、腫瘍が確立された動物を無作為にグループに分け、オシメリチニブ１ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）で処置し、尾静脈から１０μｇのＣＥＲ形質導入ヒトＴ細胞を注入した。動物は、細胞注入後２４時間ｘ ３日毎に１０μｇの全身性ＩＬ－２を受容し、その後、腫瘍の進行とその後の細胞の増殖および持続性をモニターした。腫瘍体積測定値は、未処理、オシメリチニブ処理（１ｍｇ／ｋｇ）＋モック形質導入Ｔ細胞（ベクターのみ）、およびオシメリチニブ（１ｍｇ／ｋｇ）＋ＣＥＲ１２２形質導入Ｔ細胞（１群当たりｎ＝５）で養子移入後に得た（図７９）。オシメリチニブと組み合わせたＣＥＲ１２２を発現するＴ細胞は、インビボでＥＧＦＲ＋ＮＳＣＬＣモデルの抗腫瘍応答を増強した。
実施例８
ＣＥＲ改変ＣＤ４ Ｔ細胞の特徴付け
種々のＣＥＲ改変ＣＤ４＋ Ｔ細胞も反応の大きさについて評価し、特定のＣＥＲが低度の広い食細胞作用応答（例えば、９０％の細胞で１０％のエンガルフメント）を与えるか、または頻度は低いが強い食細胞作用応答（例えば、宿主細胞の９０％における１０％のエンガルフメント）を供するかどうかを決定した。ＣＤ８＋ Ｔ細胞は、実施例５に記載のようにＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＴＣＲで形質導入した。ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、ＣＥＲ２１、ＣＥＲ２７、ＣＥＲ１０４、ＣＥＲ１１６またはＣＥＲ１１７核酸を含むレンチウイルスベクターで形質導入した。モック形質導入（ベクターのみ）ＣＤ４＋ Ｔ細胞を対照として用いた。ＣＤ４＋／ＣＥＲ＋およびＣＤ８＋／Ｅ７ ＴＣＲ＋ Ｔ細胞をCELLTRACE violetで染色した。ＨＰＶ１６ Ｅ７＋頭頸部扁平上皮癌細胞（ＳＣＣ１５２）を、pHrodo redで染色した。ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋ Ｔ細胞および選択したＣＥＲ形質導入ＣＤ４＋ Ｔ細胞を１：１の比率で混合し、ＳＣＣ１５２細胞と１：１の比率で８時間共培養した。ＣＥＲ形質導入されたＣＤ４＋ Ｔ細胞による標的ＳＣＣ１５２細胞の食細胞作用を蛍光顕微鏡で分析した。図８０Ａは、ＣＥＲタイプによる食細胞作用の大きさ－幅曲線（magnitude breadth curve）を示す。横軸は、エンガルフメントを有するＣＥＲ形質導入ＣＤ４＋ Ｔ細胞の％面積または標的ＳＣＣ１５２細胞によって取り込まれたＣＥＲ形質導入ＣＤ４＋ Ｔ細胞の％面積を表す。この測定値は、試験されたＣＥＲタイプ全体で４０％を超えることはめったになかった。縦軸は、食細胞作用性であったＣＥＲ形質導入ＣＤ４＋ Ｔ細胞の割合を表す。ＣＥＲ１０４の場合、ＣＥＲ１０４で形質導入されたＣＤ４＋ Ｔ細胞の約２０％に、１０％を超えるエンガルフメントがある。ＣＥＲ１１７で形質導入されたＣＤ４＋ Ｔ細胞では、１０％未満が１０％を超えるエンガルフメントを有する。図８０Ｂは、ＣＥＲ１２６で形質導入されたＣＤ４＋ Ｔ細胞によってエンガルフされたＳＣＣ１５２標的細胞の蛍光顕微鏡画像を示す。
ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、ＣＥＲ２１、ＣＥＲ２７、ＣＥＲ１０２、ＣＥＲ１０３Ａ、ＣＥＲ１０３Ｂ、ＣＥＲ１０４、ＣＥＲ１０６、ＣＥＲ１１６またはＣＥＲ１１７核酸を含むレンチウイルスベクターで形質導入した。モック形質導入（ベクターのみ）ＣＤ４＋ Ｔ細胞を対照として用いた。ＣＤ８＋ Ｔ細胞を、ＨＰＶ１６ Ｅ７特異的ＴＣＲで形質導入した。ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋ Ｔ細胞および選択したＣＥＲ形質導入ＣＤ４＋ Ｔ細胞を１：１の比率で混合し、ＳＣＣ１５２細胞と１：１の比率で１０時間共培養した。次いで、上清を集め、大量のサイトカイン分泌について分析した。図８１に示すように、ＣＦＲ発現ＣＤ４＋ Ｔ細胞をＥ７ ＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋ Ｔ細胞に添加すると、ＩＦＮγ分泌のレベルが向上した。
実施例９
ＣＥＲ改変ＣＤ４ Ｔ細胞のマーカー分析
ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、ＣＥＲ１０４、ＣＥＲ１１６またはＣＥＲ１１７核酸を含むレンチウイルスベクターで形質導入した。ＣＥＲ１０４（配列番号１３３）は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。ＣＥＲ１１６（配列番号１４３）は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＴＲＡＦ６シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。ＣＥＲ１１７（配列番号１４４）は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＲＡＦ６シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。ＣＥＲで形質導入されたＣＤ４＋ Ｔ細胞は、Ｅ７ ＴＣＲで形質導入されたＣＤ８＋ Ｔ細胞およびＨＰＶ＋ ＳＣＣ１５２標的細胞と共培養し、高次元の単一細胞データの可視化のためにｖｉＳＮＥを用いたマスサイトメトリー（ＣｙＴＯＦ）により調べた（図８２－８４）。無傷のＣＥＲ形質導入ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、ｔＳＮＥ１（水平）軸およびｔＳＮＥ２（垂直）軸を示すプロットに表示される。２７の細胞内マーカーをｖｉＳＮＥ分析に用いた。各ドットは単一の細胞を表す。いくつかの測定マーカー（ＧＭ－ＣＳＦ、ＭＩＰ１ｂ、パーフォリン、ＴＮＦ、ＩＬ－１７、グランザイムＢ、ＩＬ－４、ＩＬ－２、ＩＦＮγ）でプロットを色分けすると、ｖｉＳＮＥの‘アイランド’全体の表現型がわかる（図８２Ａ）。各マーカーの赤色は高発現を表し、青色は低発現を表す。ＣＤ４＋ Ｔ細胞の集団は、２７のマーカーすべてからクラスター化アルゴリズムを用いて作成され、ｖｉＳＮＥマップに重ねた。矢印は、ＣＥＲ１０４、ＣＥＲ１１６およびＣＥＲ１１７を含むサンプルで細胞内マーカーＩＦＮγを発現するアイランドの濃縮を示す（図８２Ｂ）。ＣＤ４＋ Ｔ細胞の集団は、１８のマーカーすべてからクラスター化アルゴリズムを用いて作成され、ｖｉＳＮＥマップに重ねた（図８３Ａ）。矢印は、ＣＥＲ１０４およびＣＥＲ１１６で形質導入されたＣＤ４＋ Ｔ細胞を含むサンプルでＴ細胞活性化マーカーＣＤ６９を発現するアイランドの濃縮を示す。１８の細胞内マーカー（ＣＤ２８、ＣＣＲ７、ＣＤ４５ＲＡ、ＰＤ１、ＣＤ１２７、パーフォリン、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ８５ｊ、ＣＤ３８、ＣＤ２７、グランザイムＢ、ＣＤ５７、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＣＤ１５４、ＣＤ５６、ＨＬＡ－ＤＲ、ＴＣＲγδ）によるカラープロットは、ｖｉＳＮＥ‘アイランド’全体の表現型を示す（図８３Ｂ）。各マーカーの赤色は高発現を表し、青色は低発現を表す。矢印付きの強調表示された領域は、Ｔ細胞活性化マーカーＣＤ６９を発現する細胞を示す。１８の細胞内マーカー（ＣＤ２８、ＣＣＲ７、ＣＤ４５ＲＡ、ＰＤ１、ＣＤ１２７、パーフォリン、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ８５ｊ、ＣＤ３８、ＣＤ２７、グランザイムＢ、ＣＤ５７、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＣＤ１５４、ＣＤ５６、ＨＬＡ－ＤＲおよびＴＣＲγδ）からクラスター化アルゴリズムを用いてＣＤ４＋ Ｔ細胞の集団を作成し、ｖｉＳＮＥマップに重ねた。矢印は、対照と比較して、ＣＥＲ１０４およびＣＥＲ１１６サンプルのＣＣＲ７＋集団内で天然Ｔ細胞マーカーＣＤ４５ＲＡを発現するアイランドの喪失を示す（図８４Ａ）。１８の細胞内マーカーによるカラープロットは、ｖｉＳＮＥの‘アイランド’全体の表現型を示す（図８４Ｂ）。各マーカーの赤色は高発現を表し、青色は低発現を表す。矢印付きの強調表示された領域は、天然Ｔ細胞マーカーＣＤ４５ＲＡを発現する細胞を示す。したがって、このデータは、ＣＥＲ１０４およびＣＥＲ１１６で形質導入されたＣＤ４＋ Ｔ細胞が、抗原と遭遇後の記憶形成と関連していることを示す。
実施例１０
ＣＥＲ改変細胞における食細胞作用シグナル伝達
ＧＴＰａｓｅのＲｈｏファミリーは、食細胞作用中のアクチン重合に重要な役割を果たす。マクロファージにおけるＲｈｏ ＧＴＰａｓｅ Ｒａｃ１またはＣＤＣ４２のいずれかの阻害は、欠陥のあるアクチン重合によるＦｃＲを介した食細胞作用の完全な遮断をもたらす。食細胞作用シグナル伝達カスケードの誘導を調べるために、ＣＥＲ発現細胞を、ＣＤＣ４２およびＲａｃ１の活性化について調べた。いずれかのＲｈｏ ＧＴＰａｓｅの活性化には、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）によって触媒される、不活性なＧＤＰ結合型から活性なＧＴＰ結合型への移行が含まれる。Ｂａ／Ｆ３細胞は、ＣＥＲ２１核酸、ＣＥＲ１１６核酸、またはベクターのみ（モック）を含むレンチウイルスベクターで形質導入した。標的胸腺細胞をpHrodo redで染色した。ＣＥＲで形質導入されたＢａ／Ｆ３細胞を、デキサメタゾンで前処理した胸腺細胞と２時間共培養した。Ｒａｃ１阻害剤であるＮＳＣ２３７６６（Selleck Chem）を、適当なウェルでの共培養中に添加した。次いで、細胞を集め、溶解バッファーに可溶化し、タンパク質溶解物に対して免疫沈降を行って、ＰＡＫ－ＰＢＤアガロースビーズ（Cytoskeleton、Inc.）を用いてリン酸化Ｒａｃ１を検出した。免疫沈降物を溶出し、２５μｇのタンパク質をＳＤＳ－ＰＡＧＥ勾配ゲルに添加し、モノクローナルマウス抗Ｒａｃ１一次抗体（Cytoskeleton Inc.）で４℃にて一晩プローブ化し、洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼに結合した二次抗マウス抗体（Jackson Labs）とハイブリダイズさせた（図８５Ａ）。免疫沈降前に、一部のタンパク質溶解物サンプルを、総タンパク質推定および総Ｒａｃ１推定のために取り置いた。ベースサンプルは、標的細胞なしで培養されたＣＥＲ発現細胞を含む。ＩｍａｇｅＪ画像処理プログラムを用いてタンパク質ゲルのバンドを定量化し、活性化されたＲａｃ１の比率を定量化した（図８５Ｂ）。ＣＥＲ２１（配列番号８８）は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインおよびＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む。ＣＥＲ１１６（配列番号１４３）は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメインならびにＴＲＡＦ６シグナル伝達ドメインを含む第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよびＴＬＲ８シグナル伝達ドメインを含む第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含む。ＴＲＡＦ６シグナル伝達ドメインの追加は、ＣＥＲ２１形質導入Ｂａ／Ｆ３細胞と比較して、ＣＥＲ１１６形質導入Ｂａ／Ｆ３細胞におけるＲａｃ１シグナル伝達を増強した。図８５Ｃは、６時間の共培養後のＣＥＲ２１形質導入Ｂａ／Ｆ３細胞におけるpHrodo＋の代表的なＦＡＣｓプロファイルを示す。ＣＥＲ２１形質導入Ｂａ／Ｆ３細胞は、標的胸腺細胞の食細胞作用を示すかなりのpHrodo＋シグナルを示す（図８５Ｃ、左画像参照）。特定のＲａｃ１小分子阻害剤を添加すると、食細胞作用がなくなる（図８５Ｃ、右画像）。各ピークに関連付けられている数値は、ＣＥＲ２１＋Ｂａ／Ｆ３細胞におけるpHrodo＋胸腺細胞の割合（食作用）を示す。食細胞作用指数（図８５Ｄ）は、図８５Ｅに示す蛍光イメージングから計算した。Ｒａｃ１阻害剤ＮＳＣ２３７６６の存在下または不存在下でのＣＥＲ１１６を有するＢａ／Ｆ３細胞の食細胞作用アッセイの代表的な蛍光顕微鏡写真が得られた（図８５Ｅ）。pHrodo redで染色されたエンガルフされた胸腺細胞が、CELLTRACE violet染色されたＣＥＲ１１６＋Ｂａ／Ｆ３細胞内で観察される。Ｒａｃ１阻害はＣＥＲ１１６を介した胸腺細胞の食作用をなくす。
ＣＥＲ形質導入細胞の管腔内分解も、エンガルフメント後に評価した。ＣＥＲ２１またはＣＥＲ１１６で形質導入されたＢａ／Ｆ３細胞を、pHrodo-red標識されたデキサメタゾン処置胸腺細胞と一晩共培養し、その後ＦＡＣＳで精製した。標的細胞の破壊を、タイムラプスイメージングによって視覚化し、経時的に定量化した（図８５Ｆ）。ＴＲＡＦ６シグナル伝達ドメインの追加により、ＣＥＲ２１と比較して、ＣＥＲ１１６の管腔内容物の経時的な分解が強化され、管腔内容物のほぼ完全な分解が３６時間で完了した（図８５Ｆ）。ＣＥＲ１１６＋Ｂａ／Ｆ３細胞（図８５Ｇ、上段の画像）およびＣＥＲ２１＋ Ｂａ／Ｆ３細胞（図８５Ｇ、下段の画像）のタイムラプスイメージングは、管腔内容物の破壊を示している。pHrodo-redで標識された内容物は、ＣＥＲ１１６改変細胞およびＣＥＲ２１改変細胞の両方で経時的に分解されるが、ＣＥＲ１１６改変細胞ではより迅速な分解が示される。ＣＥＲ１１６を有するＢａ／Ｆ３細胞（上）は標的細胞を異化し、細胞が恒常性に戻り、免疫応答を再開できるようにする。ＣＥＲ構築物へのＴＲＡＦ６シグナル伝達ドメインの追加は、エンガルフされた物質の急速な破壊を促進する。
実施例１１
ＣＥＲ改変Ｔ細胞による抗原提示
細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＴＬ）による腫瘍細胞死を増強する１つの戦略は、ＭＨＣ Ｉ分子に外因性抗原を“交差提示”する独自の能力を有する抗原提示細胞（ＡＰＣ）を利用することである。腫瘍特異的ＣＴＬ応答の拡大は、腫瘍に対する効果的な免疫応答を誘発する可能性がある。本実施例では、ウイルスＨＰＶ Ｅ６およびＥ７腫瘍性タンパク質をモデル抗原として用いて、抗原処理およびキメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）発現細胞の抗原提示能を特徴付けた。
ＣＤ４＋およびＣＤ８＋ＣＥＲ発現Ｔ細胞株は、ヒトＰＢＭＣから樹立した。ＣＤ３およびＣＤ２８マイクロビーズで活性化した後、精製Ｔ細胞にＣＥＲ１２３（配列番号１５０）および切断型ＥＧＦＲ（形質導入マーカー）をコードするレンチウイルスを形質導入し、ＩＬ－７、ＩＬ－１５およびＩＬ－２を含む培地中で、５日間増殖させた。ｔＥＧＦＲ＋Ｔ細胞の割合は４０－６０％の範囲であった。
ＮＦＡＴ誘導性ルシフェラーゼレポーター構築物が安定して組み込まれているJurkat細胞株を用いて、Ｔ細胞応答を試験した。ヒトＥ６およびＥ７特異的な改変されたＴＣＲは、Jurkat NFATレポーター細胞株に形質導入され、改変されたＣＥＲとの共培養によるＮＦＡＴの活性化を特徴付けた。
ＭＨＣ－Ｉ交差提示を評価するために、ＳＣＣ１５２ ＨＰＶ＋細胞を、Ｅ７特異的ＴＣＲを発現するＴ細胞の存在下で、ＣＥＲ１２３発現ＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞またはモック形質導入（ベクターのみ）Ｔ細胞と一晩共培養した。一晩の共培養後、ＣＥＲ１２３を発現するＴ細胞またはモック形質導入Ｔ細胞をＦＡＣＳを用いて精製し、洗浄した後、Ｅ６／Ｅ７特異的ヒトＴＣＲ／ＮＦＡＴレポーター細胞株と１：１の比率で培養した。ＮＦＡＴの活性化は、細胞培養上清のルシフェラーゼ活性を測定することにより、一連の時点（０、６、１２、２４および７２時間）で評価した。このアッセイの模式図を図８６に示す。細胞は、９６ウェルの丸底プレート中、ＲＰＭＩ／１０％ＦＣＳで培養した。ＣＥＲ１２３を発現するＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞株は、ＨＰＶ＋腫瘍を貪食した後、Ｅ７１１－１９ －特異的ＴＣＲおよびＮＦＡＴレポーターを発現するJurkat Ｔ細胞と一晩共培養した。Ｅ７１１－１９－特異的Jurkat Ｔ細胞の誘導を、示された時点でＮＦＡＴシグナルの発光によって定量化し、モック（ベクターのみ）で形質導入されたＴ細胞と比較した（図８７）。ＣＥＲ１２３を発現するＴ細胞は、ＨＰＶ＋腫瘍細胞の食細胞作用に続くＨＰＶ Ｅ７腫瘍性タンパク質の交差提示効率の向上を示した。
さらなる定義は、本明細書中に記載されている。上記の種々の態様は、さらなる態様を提供するために組み合わせることができる。米国仮特許出願第６２／５６３，６１５、同第６２／６４９，５２９および同第６２／６５２，８２２を含むがこれらに限定されない、本明細書で言及される、および／または出願データシートに記載されている、全ての米国特許、米国特許出願公報、米国特許出願、外国特許、外国特許出願および非特許文献は、引用によりその内容全体を本明細書中に包含させる。態様の側面は、必要に応じて、さらに別の態様を提供するために様々な特許、特許出願および刊行物の概念を採用して変更することができる。
上記の詳細な説明に照らして、これらおよび他の変更を態様に加えることができる。一般的に、添付の特許請求の範囲において、用いる用語は、特許請求の範囲を明細書および特許請求の範囲に記載された特定の態様に限定するように解釈されるべきではなく、そのような特許請求の範囲が権利を有する均等物の全範囲と共にすべての可能な形態を含むものとして解釈されるべきである。従って、特許請求の範囲は本明細書の記載によって制限されない。
配列表
>配列番号１（タンパク質、ヒト、ＦｃγＲＩ結合ドメイン、アミノ酸１－１５ シグナルペプチド）
MWFLTTLLLWVPVDGQVDTTKAVITLQPPWVSVFQEETVTLHCEVLHLPGSSSTQWFLNGTATQTSTPSYRITSASVNDSGEYRCQRGLSGRSDPIQLEIHRGWLLLQVSSRVFTEGEPLALRCHAWKDKLVYNVLYYRNGKAFKFFHWNSNLTILKTNISHNGTYHCSGMGKHRYTSAGISVTVKELFPAPVLNASVTSPLLEGNLVTLSCETKLLLQRPGLQLYFSFYMGSKTLRGRNTSSEYQILTARREDSGLYWCEAATEDGNVLKRSPELELQVLGLQLPTPVWFH
>配列番号２（タンパク質、ヒト、Ｔｉｍ１結合ドメイン、アミノ酸１－２０ シグナルペプチド)
MHPQVVILSLILHLADSVAGSVKVGGEAGPSVTLPCHYSGAVTSMCWNRGSCSLFTCQNGIVWTNGTHVTYRKDTRYKLLGDLSRRDVSLTIENTAVSDSGVYCCRVEHRGWFNDMKITVSLEIVPPKVTTTPIVTTVPTVTTVRTSTTVPTTTTVPTTTVPTTMSIPTTTTVLTTMTVSTTTSVPTTTSIPTTTSVPVTTTVSTFVPPMPLPRQNHEPVATSPSSPQPAETHPTTLQGAIRREPTSSPLYSYTTDGNDTVTESSDGLWNNNQTQLFLEHSLLTANTTKG
>配列番号３ (タンパク質、ヒト、Ｔｉｍ４結合ドメイン、アミノ酸１－２４ シグナルペプチド)
MSKEPLILWLMIEFWWLYLTPVTSETVVTEVLGHRVTLPCLYSSWSHNSNSMCWGKDQCPYSGCKEALIRTDGMRVTSRKSAKYRLQGTIPRGDVSLTILNPSESDSGVYCCRIEVPGWFNDVKINVRLNLQRASTTTHRTATTTTRRTTTTSPTTTRQMTTTPAALPTTVVTTPDLTTGTPLQMTTIAVFTTANTCLSLTPSTLPEEATGLLTPEPSKEGPILTAESETVLPSDSWSSVESTSADTVLLTSKESKVWDLPSTSHVSMWKTSDSVSSPQPGASDTAVPEQNKTTKTGQMDGIPMSMKNEMPISQ
>配列番号４ (タンパク質、ヒト、Ｔｉｍ３結合ドメイン、アミノ酸１－２１ シグナルペプチド)
MFSHLPFDCVLLLLLLLLTRSSEVEYRAEVGQNAYLPCFYTPAAPGNLVPVCWGKGACPVFECGNVVLRTDERDVNYWTSRYWLNGDFRKGDVSLTIENVTLADSGIYCCRIQIPGIMNDEKFNLKLVIKPAKVTPAPTRQRDFTAAFPRMLTTRGHGPAETQTLGSLPDINLTQISTLANELRDSRLANDLRDSGATIRIG
>配列番号５ (タンパク質、ヒト、ＦＡ５８Ｃ２結合ドメイン)
LNGCANPLGLKNNSIPDKQITASSSYKTWGLHLFSWNPSYARLDKQGNFNAWVAGSYGNDQWLQVDLGSSKEVTGIITQGARNFGSVQFVASYKVAYSNDSANWTEYQDPRTGSSKIFPGNWDNHSHKKNLFETPILARYVRILPVAWHNRIALRLELLGC
>配列番号６ (タンパク質、ヒト、ＧＡＳ６結合ドメイン、アミノ酸１－３０ シグナルペプチド)
MAPSLSPGPAALRRAPQLLLLLLAAECALAALLPAREATQFLRPRQRRAFQVFEEAKQGHLERECVEELCSREEAREVFENDPETDYFYPRYLD
>配列番号７ (タンパク質、ヒト、プロテインＳ結合ドメイン、アミノ酸１－２４ シグナルペプチド)
MRVLGGRCGALLACLLLVLPVSEANFLSKQQASQVLVRKRRANSLLEETKQGNLERECIEELCNKEEAREVFENDPETDYFYPKYLV
>配列番号８ (タンパク質、ヒト、ＢＡＩ１結合ドメイン）
AAGADAGPGPEPCATLVQGKFFGYFSAAAVFPANASRCSWTLRNPDPRRYTLYMKVAKAPVPCSGPGRVRTYQFDSFLESTRTYLGVESFDEVLRLCDPSAPLAFLQASKQFLQMRRQQPPQHDGLRPRAGPPGPTDDFSVEYLVVGNRNPSRAACQMLCRWLDACLAGSRSSHPCGIMQTPCACLGGEAGGPAAGPLAPRGDVCLRDAVAGGPENCLTSLTQDRGGHGATGGWKLWSLWGECTRDCGGGLQTRTRTCLPAPGVEGGGCEGVLEEGRQCNREACGPAGRTSSRSQSLRSTDARRREELGDELQQFGFPAPQTGDPAAEEWSPWSVCSSTCGEGWQTRTRFCVSSSYSTQCSGPLREQRLCNNSAVCPVHGAWDEWSPWSLCSSTCGRGFRDRTRTCRPPQFGGNPCEGPEKQTKFCNIALCPGRAVDGNWNEWSSWSACSASCSQGRQQRTRECNGPSYGGAECQGHWVETRDCFLQQCPVDGKWQAWASWGSCSVTCGAGSQRRERVCSGPFFGGAACQGPQDEYRQCGTQRCPEPHEICDEDNFGAVIWKETPAGEVAAVRCPRNATGLILRRCELDEEGIAYWEPPTYIRCVSIDYRNIQMMTREHLAKAQRGLPGEGVSEVIQTLVEISQDGTSYSGDLLSTIDVLRNMTEIFRRAYYSPTPGDVQNFVQILSNLLAEENRDKWEEAQLAGPNAKELFRLVEDFVDVIGFRMKDLRDAYQVTDNLVLSIHKLPASGATDISFPMKGWRATGDWAKVPEDRVTVSKSVFSTGLTEADEASVFVVGTVLYRNLGSFLALQRNTTVLNSKVISVTVKPPPRSLRTPLEIEFAHMYNGTTNQTCILWDETDVPSSSAPPQLGPWSWRGCRTVPLDALRTRCLCDRLSTFAILAQLSADANMEKATLPS
>配列番号９ (ＤＮＡ、ヒト、ＦｃγＲＩ結合ドメイン)
ATGTGGTTCCTGACTACGTTGTTGCTGTGGGTCCCTGTAGACGGCCAAGTAGACACAACGAAAGCAGTGATCACGCTCCAACCGCCTTGGGTGTCTGTGTTCCAAGAAGAAACAGTTACACTGCACTGTGAGGTCCTCCACCTGCCTGGTTCTTCATCTACTCAATGGTTTCTCAACGGAACAGCAACACAAACAAGTACCCCTTCCTACAGAATTACGAGTGCATCTGTTAACGATTCAGGAGAGTATAGGTGCCAGCGAGGGCTTTCAGGCCGGTCCGACCCCATTCAACTCGAAATTCACCGCGGTTGGCTTCTGCTGCAAGTATCCTCTCGGGTCTTCACGGAAGGTGAACCACTTGCCTTGCGCTGTCACGCATGGAAAGATAAGCTCGTCTACAACGTTTTGTATTATCGGAATGGAAAGGCATTTAAGTTTTTTCATTGGAACTCAAACCTTACGATCCTCAAAACCAATATCAGTCATAACGGTACGTACCACTGCTCAGGCATGGGCAAGCATCGCTATACGTCCGCAGGGATTAGCGTGACAGTTAAGGAGCTCTTCCCCGCGCCTGTGCTGAATGCGAGCGTAACTTCACCCCTTCTGGAGGGCAACTTGGTGACCCTCTCTTGTGAGACGAAACTTCTCCTTCAGAGGCCGGGCCTGCAACTCTATTTCAGCTTTTATATGGGTTCTAAAACTCTTCGAGGCAGAAACACGAGCAGCGAATATCAGATACTGACTGCCCGGCGGGAAGACAGTGGCCTTTATTGGTGCGAGGCTGCAACAGAAGATGGCAATGTCCTTAAAAGGTCTCCCGAATTGGAGCTCCAAGTGCTTGGCTTGCAACTCCCTACACCCGTATGGTTCCAC
>配列番号１０ (ＤＮＡ、ヒト、Ｔｉｍ１結合ドメイン)
ATGCACCCCCAGGTTGTTATACTTTCATTGATCCTGCATTTGGCCGACTCCGTGGCGGGTTCCGTAAAAGTTGGAGGGGAAGCTGGACCAAGCGTCACCTTGCCTTGCCACTACTCTGGAGCCGTGACGAGTATGTGCTGGAATCGAGGATCCTGTAGTCTTTTCACATGCCAAAATGGCATAGTTTGGACCAATGGGACGCACGTCACCTACCGAAAAGACACTAGATACAAACTCCTGGGTGACCTCAGCAGGAGAGATGTGTCTCTGACTATTGAAAACACTGCTGTTTCTGACTCTGGAGTCTACTGTTGCCGGGTCGAGCACCGAGGATGGTTCAATGACATGAAGATCACGGTCAGCTTGGAAATCGTCCCGCCCAAGGTAACCACTACACCAATAGTTACTACGGTTCCCACGGTAACCACGGTTCGAACCAGCACCACAGTACCCACAACTACGACCGTTCCAACCACTACAGTCCCCACAACCATGAGTATCCCTACGACAACTACGGTCCTGACAACCATGACCGTCAGCACTACCACGAGTGTGCCTACGACTACTAGCATACCGACGACTACTTCAGTTCCAGTCACCACCACGGTGAGTACATTCGTGCCTCCAATGCCATTGCCGAGGCAAAACCACGAACCCGTGGCGACATCTCCGTCTAGTCCGCAACCAGCAGAGACCCATCCCACCACGCTTCAGGGGGCAATCAGGAGAGAACCTACAAGTTCACCCCTCTACAGCTATACAACCGATGGAAACGACACAGTTACAGAAAGTAGTGACGGTTTGTGGAATAACAACCAAACACAATTGTTCCTGGAGCACAGTCTGTTGACAGCCAACACTACAAAGGGA
>配列番号１１ (ＤＮＡ、ヒト、Ｔｉｍ４結合ドメイン)
ATGAGTAAAGAGCCGCTTATCCTGTGGCTTATGATAGAGTTTTGGTGGTTGTATTTGACCCCGGTCACGAGCGAAACGGTAGTGACTGAAGTATTGGGTCATCGGGTAACCTTGCCTTGCTTGTATAGCTCCTGGTCTCATAATAGTAATAGCATGTGCTGGGGCAAGGACCAATGCCCCTATAGCGGATGCAAGGAGGCGCTCATTCGCACAGACGGAATGCGGGTGACATCAAGGAAGAGTGCTAAGTACCGGCTTCAGGGCACAATCCCACGCGGCGACGTGTCACTGACTATCCTTAATCCATCCGAGAGCGACTCTGGTGTCTATTGTTGCAGGATCGAGGTTCCGGGATGGTTCAATGATGTAAAGATCAATGTAAGACTCAATCTGCAACGGGCATCTACAACCACGCATCGGACAGCCACTACTACCACAAGGAGAACAACTACTACGTCACCCACGACTACTCGACAGATGACCACTACACCTGCGGCCCTGCCAACTACGGTTGTAACTACTCCGGATCTGACAACCGGGACACCGTTGCAAATGACAACCATTGCAGTATTTACCACGGCAAACACGTGTCTCTCTCTGACCCCATCTACTCTTCCGGAGGAGGCCACCGGGCTCCTTACACCGGAGCCGTCTAAGGAAGGCCCAATCTTGACCGCAGAGAGTGAGACCGTACTTCCGAGCGATTCATGGTCCAGTGTCGAGAGCACATCCGCTGACACCGTCCTTCTTACGTCCAAAGAAAGTAAAGTTTGGGACCTCCCGTCCACGAGCCACGTTTCTATGTGGAAGACCTCAGATAGCGTTAGCTCCCCACAGCCAGGAGCAAGCGACACCGCAGTACCGGAGCAAAACAAGACGACTAAGACTGGCCAGATGGATGGTATCCCAATGTCAATGAAAAATGAGATGCCCATATCACAA
>配列番号１２ (ＤＮＡ、ヒト、Ｔｉｍ３結合ドメイン)
ATGTTTAGCCATCTCCCTTTTGATTGCGTCTTGTTGCTTCTTCTTCTCCTTCTGACGAGATCATCTGAAGTTGAATATCGCGCGGAAGTCGGCCAAAACGCATATCTGCCGTGTTTTTACACCCCGGCTGCACCGGGGAACTTGGTTCCCGTTTGTTGGGGTAAGGGGGCGTGTCCCGTTTTTGAGTGCGGTAACGTAGTGCTCCGAACTGATGAAAGAGATGTAAATTACTGGACGAGCCGGTACTGGTTGAATGGGGATTTTAGGAAGGGCGACGTTTCCCTTACCATAGAAAACGTAACTCTTGCGGATTCTGGGATTTATTGTTGCAGGATACAAATCCCCGGAATAATGAACGATGAGAAATTCAATTTGAAGCTCGTAATAAAACCGGCAAAAGTAACTCCAGCTCCCACCAGGCAGCGAGATTTTACGGCAGCATTTCCCAGGATGCTCACTACTCGCGGTCATGGCCCTGCCGAGACTCAGACCCTCGGTAGTCTTCCTGATATCAATCTCACGCAAATTAGTACATTGGCGAATGAATTGAGGGATTCAAGACTCGCCAATGATCTGCGCGACAGTGGAGCGACTATTAGGATAGGG
>配列番号１３ (ＤＮＡ、ヒト、ＦＡ５８Ｃ２結合ドメイン)
CTCAACGGGTGTGCTAATCCCCTTGGCCTGAAGAATAACAGCATACCTGACAAGCAAATAACAGCGTCAAGTTCTTATAAAACTTGGGGGCTGCATCTGTTCTCCTGGAACCCCAGTTACGCTAGACTCGACAAACAAGGCAATTTTAACGCATGGGTGGCAGGCTCTTACGGGAACGATCAGTGGCTGCAAGTAGACTTGGGAAGTAGTAAGGAGGTGACTGGGATCATTACCCAGGGGGCACGAAATTTCGGTTCCGTTCAGTTCGTTGCATCTTATAAGGTAGCGTATTCAAATGACTCCGCGAATTGGACCGAATATCAGGACCCGCGAACCGGATCAAGCAAGATTTTTCCGGGGAATTGGGACAACCACTCTCACAAAAAAAATTTGTTTGAAACACCTATACTGGCGCGGTACGTTAGAATCCTCCCAGTTGCCTGGCACAACCGGATAGCGCTTAGACTGGAATTGTTGGGGTGC
>配列番号１４ (ＤＮＡ、ヒト、Ｇａｓ６結合ドメイン)
ATGGCTCCCTCTTTGTCACCAGGACCTGCGGCTCTTAGGCGAGCCCCGCAGCTGCTGCTTCTCCTGCTCGCTGCAGAATGCGCTCTCGCTGCACTCTTGCCCGCGAGGGAGGCGACTCAGTTCTTGCGCCCCCGGCAGAGACGAGCATTCCAAGTCTTTGAGGAAGCGAAACAAGGTCATCTCGAGCGAGAATGCGTGGAGGAGCTGTGTTCTAGGGAGGAAGCACGCGAAGTCTTTGAGAATGACCCGGAAACGGACTACTTTTACCCCCGGTATCTTGAT
>配列番号１５ (ＤＮＡ、ヒト、プロテインＳ結合ドメイン)
ATGCGCGTGTTGGGGGGTCGCTGTGGTGCGCTCCTTGCTTGTCTCCTTTTGGTTCTTCCCGTCTCCGAGGCTAATTTCCTGTCAAAACAACAGGCTAGTCAAGTCTTGGTGCGCAAGAGGAGAGCTAACAGCCTTCTGGAAGAGACCAAGCAAGGTAATCTGGAGAGAGAGTGTATCGAGGAACTTTGTAACAAAGAGGAAGCACGCGAAGTATTTGAAAATGACCCGGAAACCGATTATTTTTACCCAAAATATCTCGTA
>配列番号１６ (タンパク質、人工配列、改変型IgG4ヒンジ)
ESKYGPPCPPCP
>配列番号１７ (タンパク質、ヒト、TLR4 膜近接ドメイン)
PVLSLNITCQMNK
>配列番号１８ (タンパク質、ヒト、Tim1 膜貫通ドメイン)
IYAGVCISVLVLLALLGVIIA
>配列番号１９ (タンパク質、ヒト、Tim4 膜貫通ドメイン)
LLMIIAPSLGFVLFALFVAFL
>配列番号２０ (タンパク質、ヒト、FcγRI 膜貫通ドメイン)
VLFYLAVGIMFLVNTVLWVTI
>配列番号２１ (タンパク質、ヒト、FcεRIγ 膜貫通ドメイン)
LCYILDAILFLYGIVLTLLYC
>配列番号２２ (タンパク質、ヒト、CD8a 膜貫通ドメイン)
IYIWAPLAGTCGVLLLSLVIT
>配列番号２３ (タンパク質、ヒト、MERTK 膜貫通ドメイン)
FGCFCGFILIGLILYISLAIR
>配列番号２４ (タンパク質、ヒト、Axl 膜貫通ドメイン)
YVLLGAVVAAACVLILALFLV
>配列番号２５ (タンパク質、ヒト、Tyro3 膜貫通ドメイン)
VPVVLGVLTALVTAAALALIL
>配列番号２６ (タンパク質、ヒト、CD28 膜貫通ドメイン)
FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV
>配列番号２７ (タンパク質、ヒト、CD4 膜貫通ドメイン)
MALIVLGGVAGLLLFIGLGIFF
>配列番号２８(タンパク質、ヒト、DAP12 膜貫通ドメイン)
GVLAGIVMGDLVLTVLIALAV
>配列番号２９ (タンパク質、ヒト、BAI1 膜貫通ドメイン)
VTLIVGCGVSSLTLLMLVIIY
>配列番号３０ (タンパク質、ヒト、MRC1 膜貫通ドメイン)
GVVIIVILLILTGAGLAAYFF
>配列番号３１ (タンパク質、ヒト、TLR1 膜貫通ドメイン)
LLIVTIVATMLVLAVTVTSLC
>配列番号３２ (タンパク質、ヒト、TLR2 膜貫通ドメイン)
ALVSGMCCALFLLILLTGVLC
>配列番号３３ (タンパク質、ヒト、TLR3 膜貫通ドメイン)
FFMINTSILLIFIFIVLLIHF
>配列番号３４ (タンパク質、ヒト、TLR4 膜貫通ドメイン)
TIIGVSVLSVLVVSVVAVLVY
>配列番号３５ (タンパク質、ヒト、TLR5 膜貫通ドメイン)
FSLFIVCTVTLTLFLMTILTV
>配列番号３６ (タンパク質、ヒト、TLR6 膜貫通ドメイン)
ALVSGMCCALFLLILLTGVLC
>配列番号３７ (タンパク質、ヒト、TLR7 膜貫通ドメイン)
LILFSLSISVSLFLMVMMTAS
>配列番号３８ (タンパク質、ヒト、TLR8 膜貫通ドメイン)
AVILFFFTFFITTMVMLAALA
>配列番号３９ (タンパク質、ヒト、 TLR9 膜貫通ドメイン)
FALSLLAVALGLGVPMLHHLC
>配列番号４０ (DNA、ヒト、Tim1 膜貫通ドメイン)
ATATACGCTGGAGTCTGTATAAGTGTCCTTGTACTGTTGGCGTTGCTGGGGGTCATTATTGCC
>配列番号４１ (DNA、ヒト、Tim4 膜貫通ドメイン)
TTGCTTATGATTATTGCGCCAAGCCTTGGATTTGTGCTGTTCGCACTCTTCGTAGCTTTTCTC
>配列番号４２ (DNA、ヒト、FcγRI 膜貫通ドメイン)
GTACTGTTTTATCTCGCCGTAGGGATAATGTTCCTCGTGAACACCGTACTGTGGGTAACAATA
>配列番号４３ (DNA、ヒト、CD8a 膜貫通ドメイン)
ATATACATTTGGGCACCGCTGGCTGGAACTTGCGGCGTTCTCTTGTTGAGTCTGGTGATTACT
>配列番号４４ (DNA、ヒト、MERTK 膜貫通ドメイン)
TTTGGCTGTTTCTGTGGATTTATTCTGATTGGTCTTATCCTCTATATTTCCTTGGCGATCAGA
>配列番号４５ (DNA、ヒト、Axl 膜貫通ドメイン)
TATGTCTTGCTTGGTGCCGTCGTTGCTGCCGCCTGTGTGTTGATACTCGCACTTTTCTTGGTG
>配列番号４６ (DNA、ヒト、Tyro3 膜貫通ドメイン)
GTACCCGTCGTTTTGGGGGTCCTGACCGCGCTCGTTACTGCGGCAGCACTCGCACTGATACTT
>配列番号４７ (DNA、ヒト、CD4 膜貫通ドメイン)
ATGGCTCTGATCGTACTGGGCGGAGTGGCAGGATTGCTGCTCTTTATTGGACTGGGCATTTTCTTC
>配列番号４８ (タンパク質、ヒト、TLR1 シグナル伝達ドメイン)
SYLDLPWYLRMVCQWTQTRRRARNIPLEELQRNLQFHAFISYSGHDSFWVKNELLPNLEKEGMQICLHERNFVPGKSIVENIITCIEKSYKSIFVLSPNFVQSEWCHYELYFAHHNLFHEGSNSLILILLEPIPQYSIPSSYHKLKSLMARRTYLEWPKEKSKRGLFWANLRAAINIKLTEQAKK
>配列番号４９ (タンパク質、ヒト、TLR2 シグナル伝達ドメイン)
HRFHGLWYMKMMWAWLQAKRKPRKAPSRNICYDAFVSYSERDAYWVENLMVQELENFNPPFKLCLHKRDFIPGKWIIDNIIDSIEKSHKTVFVLSENFVKSEWCKYELDFSHFRLFDENNDAAILILLEPIEKKAIPQRFCKLRKIMNTKTYLEWPMDEAQREGFWVNLRAAIKS
>配列番号５０ (タンパク質、ヒト、TLR3 シグナル伝達ドメイン)
EGWRISFYWNVSVHRVLGFKEIDRQTEQFEYAAYIIHAYKDKDWVWEHFSSMEKEDQSLKFCLEERDFEAGVFELEAIVNSIKRSRKIIFVITHHLLKDPLCKRFKVHHAVQQAIEQNLDSIILVFLEEIPDYKLNHALCLRRGMFKSHCILNWPVQKERIGAFRHKLQVALGSKNSVH
>配列番号５１ (タンパク質、ヒト、TLR4 シグナル伝達ドメイン)
KFYFHLMLLAGCIKYGRGENIYDAFVIYSSQDEDWVRNELVKNLEEGVPPFQLCLHYRDFIPGVAIAANIIHEGFHKSRKVIVVVSQHFIQSRWCIFEYEIAQTWQFLSSRAGIIFIVLQKVEKTLLRQQVELYRLLSRNTYLEWEDSVLGRHIFWRRLRKALLDGKSWNPEGTVGTGCNWQEATSI
>配列番号５２ (タンパク質、ヒト、TLR5 シグナル伝達ドメイン)
TKFRGFCFICYKTAQRLVFKDHPQGTEPDMYKYDAYLCFSSKDFTWVQNALLKHLDTQYSDQNRFNLCFEERDFVPGENRIANIQDAIWNSRKIVCLVSRHFLRDGWCLEAFSYAQGRCLSDLNSALIMVVVGSLSQYQLMKHQSIRGFVQKQQYLRWPEDFQDVGWFLHKLSQQILKKEKEKKKDNNIPLQTVATIS
>配列番号５３ (タンパク質、ヒト、TLR6 シグナル伝達ドメイン)
YLDLPWYLRMVCQWTQTRRRARNIPLEELQRNLQFHAFISYSEHDSAWVKSELVPYLEKEDIQICLHERNFVPGKSIVENIINCIEKSYKSIFVLSPNFVQSEWCHYELYFAHHNLFHEGSNNLILILLEPIPQNSIPNKYHKLKALMTQRTYLQWPKEKSKRGLFWANIRAAFNMKLTLVTENNDVKS
>配列番号５４ (タンパク質、ヒト、TLR7 シグナル伝達ドメイン)
HLYFWDVWYIYHFCKAKIKGYQRLISPDCCYDAFIVYDTKDPAVTEWVLAELVAKLEDPREKHFNLCLEERDWLPGQPVLENLSQSIQLSKKTVFVMTDKYAKTENFKIAFYLSHQRLMDEKVDVIILIFLEKPFQKSKFLQLRKRLCGSSVLEWPTNPQAHPYFWQCLKNALATDNHVAYSQVFKETV
>配列番号５５ (タンパク質、ヒト、TLR8 シグナル伝達ドメイン)
HHLFYWDVWFIYNVCLAKVKGYRSLSTSQTFYDAYISYDTKDASVTDWVINELRYHLEESRDKNVLLCLEERDWDPGLAIIDNLMQSINQSKKTVFVLTKKYAKSWNFKTAFYLALQRLMDENMDVIIFILLEPVLQHSQYLRLRQRICKSSILQWPDNPKAEGLFWQTLRNVVLTENDSRYNNMYVDSIKQY
>配列番号５６ (タンパク質、ヒト、TLR9 シグナル伝達ドメイン)
GWDLWYCFHLCLAWLPWRGRQSGRDEDALPYDAFVVFDKTQSAVADWVYNELRGQLEECRGRWALRLCLEERDWLPGKTLFENLWASVYGSRKTLFVLAHTDRVSGLLRASFLLAQQRLLEDRKDVVVLVILSPDGRRSRYVRLRQRLCRQSVLLWPHQPSGQRSFWAQLGMALTRDNHHFYNRNFCQGPTAE
>配列番号５７ (タンパク質、ヒト、Traf6 シグナル伝達ドメイン － 全長)
MSLLNCENSCGSSQSESDCCVAMASSCSAVTKDDSVGGTASTGNLSSSFMEEIQGYDVEFDPPLESKYECPICLMALREAVQTPCGHRFCKACIIKSIRDAGHKCPVDNEILLENQLFPDNFAKREILSLMVKCPNEGCLHKMELRHLEDHQAHCEFALMDCPQCQRPFQKFHINIHILKDCPRRQVSCDNCAASMAFEDKEIHDQNCPLANVICEYCNTILIREQMPNHYDLDCPTAPIPCTFSTFGCHEKMQRNHLARHLQENTQSHMRMLAQAVHSLSVIPDSGYISEVRNFQETIHQLEGRLVRQDHQIRELTAKMETQSMYVSELKRTIRTLEDKVAEIEAQQCNGIYIWKIGNFGMHLKCQEEEKPVVIHSPGFYTGKPGYKLCMRLHLQLPTAQRCANYISLFVHTMQGEYDSHLPWPFQGTIRLTILDQSEAPVRQNHEEIMDAKPELLAFQRPTIPRNPKGFGYVTFMHLEALRQRTFIKDDTLLVRCEVSTRFDMGSLRREGFQPRSTDAGV
>配列番号５８ (タンパク質、ヒト、切断型TRAF6 シグナル伝達ドメイン) MSLLNCENSCGSSQSESDCCVAMASSCSAVTKDDSVGGTASTGNLSSSFMEEIQGYDVEFDPPLESKYECPICLMALREAVQTPCGHRFCKACIIKSIRDAGHKCPVDNEILLENQLFPDNFAKREILSLMVKCPNEGCLHKMELRHLEDHQAHCEFALMDCPQCQRPFQKFHINIHILKDCPRRQVSCDNCAASMAFEDKEIHDQNCPLANVICEYCNTILIREQMPNHYDLDCPTAPIPCTFSTFGCHEKMQRNHLARHLQENTQSHMRMLA
>配列番号５９ [タンパク質; ヒト、MERTK シグナル伝達ドメイン]
KRVQETKFGNAFTEEDSELVVNYIAKKSFCRRAIELTLHSLGVSEELQNKLEDVVIDRNLLILGKILGEGEFGSVMEGNLKQEDGTSLKVAVKTMKLDNSSQREIEEFLSEAACMKDFSHPNVIRLLGVCIEMSSQGIPKPMVILPFMKYGDLHTYLLYSRLETGPKHIPLQTLLKFMVDIALGMEYLSNRNFLHRDLAARNCMLRDDMTVCVADFGLSKKIYSGDYYRQGRIAKMPVKWIAIESLADRVYTSKSDVWAFGVTMWEIATRGMTPYPGVQNHEMYDYLLHGHRLKQPEDCLDELYEIMYSCWRTDPLDRPTFSVLRLQLEKLLESLPDVRNQADVIYVNTQLLESSEGLAQGSTLAPLDLNIDPDSIIASCTPRAAISVVTAEVHDSKPHEGRYILNGGSEEWEDLTSAPSAAVTAEKNSVLPGERLVRNGVSWSHSSMLPLGSSLPDELLFADDSSEGSEVLM

>配列番号６０
>配列番号６１
>配列番号６２ (タンパク質、ヒト、FcεRIγ シグナル伝達ドメイン)
RLKIQVRKAAITSYEKSDGVYTGLSTRNQETYETLKHEKPPQ
>配列番号６３ (タンパク質、ヒト、FcγR１ シグナル伝達ドメイン)
RKELKRKKKWDLEISLDSGHEKKVISSLQEDRHLEEELKCQEQKEEQLQEGVHRKEPQGAT
>配列番号６４ (タンパク質、ヒト、FcγR２A シグナル伝達ドメイン)
CRKKRISANSTDPVKAAQFEPPGRQMIAIRKRQLEETNNDYETADGGYMTLNPRAPTDDDKNIYLTLPPNDHVNSNN
>配列番号６５ (タンパク質、ヒト、FcγR２c シグナル伝達ドメイン)
CRKKRISANSTDPVKAAQFEPPGRQMIAIRKRQPEETNNDYETADGGYMTLNPRAPTDDDKNIYLTLPPNDHVNSNN
>配列番号６６ (タンパク質、ヒト、FcγR３A シグナル伝達ドメイン)
KTNIRSSTRDWKDHKFKWRKDPQDK
>配列番号６７ (タンパク質、ヒト、BAFF-R シグナル伝達ドメイン)
SWRRRQRRLRGASSAEAPDGDKDAPEPLDKVIILSPGISDATAPAWPPPGEDPGTTPPGHSVPVPATELGSTELVTTKTAGPEQQ
>配列番号６８ (タンパク質、ヒト、DAP12 シグナル伝達ドメイン)
YFLGRLVPRGRGAAEAATRKQRITETESPYQELQGQRSDVYSDLNTQRPYYK
>配列番号６９ (タンパク質、ヒト、NFAM1 シグナル伝達ドメイン)
LWNKKRMRGPGKDPTRKCPDPRSASSPKQHPSESVYTALQRRETEVYACIENEDGSSPTAKQSPLSQERPHRFEDDGELNLVYENL
>配列番号７０ [タンパク質; ヒト; 切断型NFAM1 シグナル伝達ドメイン]
SSPKQHPSESVYTALQRRETEVYACIENE
>配列番号７１ (タンパク質、ヒト、CD79b 切断型シグナル伝達ドメイン (185-213))
DSKAGMEEDHTYEGLDIDQTATYEDIVTL
>配列番号７２ (タンパク質、ヒト、TRAF2 シグナル伝達ドメイン)
MAAASVTPPGSLELLQPGFSKTLLGTKLEAKYLCSACRNVLRRPFQAQCGHRYCSFCLASILSSGPQNCAACVHEGIYEEGISILESSSAFPDNAARREVESLPAVCPSDGCTWKGTLKEYESCHEGRCPLMLTECPACKGLVRLGEKERHLEHECPERSLSCRHCRAPCCGADVKAHHEVCPKFPLTCDGCGKKKIPREKFQDHVKTCGKCRVPCRFHAIGCLETVEGEKQQEHEVQWLREHLAMLLSSVLEAKPLLGDQSHAGSELLQRCESLEKKTATFENIVCVLNREVERVAMTAEAC
>配列番号７３ (タンパク質、ヒト、TRAF3 シグナル伝達ドメイン)
MESSKKMDSPGALQTNPPLKLHTDRSAGTPVFVPEQGGYKEKFVKTVEDKYKCEKCHLVLCSPKQTECGHRFCESCMAALLSSSSPKCTACQESIVKDKVFKDNCCKREILALQIYCRNESRGCAEQLMLGHLLVHLKNDCHFEELPCVRPDCKEKVLRKDLRDHVEKACKYREATCSHCKSQVPMIALQKHEDTDCPCVVVSCPHKCSVQTLLRSELSAHLSECVNAPSTCSFKRYGCVFQGTNQQIKAHEASSAVQHVNLLKEWSNSLEKKV
>配列番号７４ (DNA、ヒト、Traf6 シグナル伝達ドメイン － 全長)
ATGTCACTCCTTAACTGCGAAAACAGTTGTGGGAGTTCACAATCCGAAAGTGATTGTTGCGTGGCGATGGCGTCTTCATGCTCTGCGGTTACCAAGGATGACTCTGTGGGAGGCACCGCATCTACCGGAAATCTGAGCTCTTCTTTTATGGAGGAAATTCAGGGCTACGACGTTGAGTTTGATCCTCCTCTCGAATCTAAGTATGAGTGCCCCATATGTCTCATGGCGTTGAGAGAAGCAGTGCAGACTCCGTGCGGACATCGCTTCTGCAAGGCGTGTATTATAAAGAGTATACGCGATGCGGGTCACAAATGTCCAGTGGACAACGAGATACTGCTTGAAAATCAACTTTTCCCCGACAATTTTGCAAAGAGAGAGATACTGTCTTTGATGGTTAAGTGTCCAAACGAGGGCTGCTTGCACAAAATGGAACTCCGACACCTTGAAGACCACCAGGCACACTGCGAGTTCGCCCTCATGGATTGCCCACAATGCCAGCGCCCGTTCCAAAAGTTTCACATAAACATCCACATACTGAAGGACTGTCCTAGGAGACAAGTAAGCTGTGACAATTGCGCAGCGTCAATGGCGTTCGAGGACAAGGAGATACACGATCAAAACTGTCCTCTGGCGAATGTGATCTGCGAATATTGCAATACGATCTTGATCCGCGAACAGATGCCTAATCATTACGACCTCGATTGTCCGACCGCGCCAATTCCTTGTACTTTTTCTACCTTCGGATGTCATGAGAAAATGCAACGAAATCACCTGGCTCGCCATCTTCAGGAGAATACTCAGAGCCACATGCGCATGTTGGCTCAAGCCGTACATAGCCTTAGCGTAATACCGGACTCAGGTTATATATCCGAAGTACGGAATTTTCAAGAAACCATACATCAACTTGAAGGAAGGTTGGTACGACAGGATCATCAGATACGCGAATTGACGGCCAAGATGGAAACCCAGAGCATGTATGTCAGTGAGCTTAAGCGCACTATCCGAACCCTGGAGGATAAAGTTGCCGAAATCGAAGCTCAACAATGCAACGGGATATACATTTGGAAAATAGGTAACTTCGGAATGCACCTGAAGTGTCAAGAAGAAGAAAAACCTGTCGTTATTCATTCCCCCGGCTTTTATACAGGGAAGCCTGGGTATAAGCTTTGCATGAGGCTCCACCTCCAATTGCCGACGGCGCAAAGGTGCGCAAATTACATTTCTCTGTTTGTCCATACTATGCAGGGTGAGTACGATAGTCACTTGCCGTGGCCCTTCCAGGGTACCATACGATTGACCATCCTGGATCAGAGCGAGGCCCCCGTGCGACAGAATCATGAAGAAATAATGGATGCTAAGCCGGAACTGCTCGCTTTCCAGAGACCTACAATTCCGCGAAATCCTAAGGGTTTTGGCTATGTTACGTTCATGCATCTGGAAGCACTCAGACAAAGAACATTCATTAAAGATGACACCTTGCTTGTGCGGTGTGAGGTGTCAACCAGGTTCGACATGGGATCTCTCAGACGGGAGGGGTTCCAACCGCGCTCTACAGACGCTGGAGTG
>配列番号７５ (タンパク質、ヒト、CD79b シグナル伝達ドメイン (185-229)) DSKAGMEEDHTYEGLDIDQTATYEDIVTLRTGEVKWSVGEHPGQE
>配列番号７６ (タンパク質、ヒト、MyD88 TIRドメイン)
HMPERFDAFICYCPSDIQFVQEMIRQLEQTNYRLKLCVSDRDVLPGTCVWSIASELIEKRCRRMVVVVSDDYLQSKECDFQTKFALSLSPGAHQKRLIPIKYKAMKKEFPSILRFITVCDYTNPCTKSWFWTRLAKALSLP
>配列番号７７ (DNA、ヒト、FcγR１ シグナル伝達ドメイン)
AGAAAGGAACTCAAGCGCAAGAAGAAGTGGGACCTGGAGATTTCTCTCGACTCCGGTCACGAAAAGAAGGTCATCAGTAGCTTGCAAGAGGACCGACACTTGGAAGAAGAACTTAAATGCCAGGAACAGAAAGAGGAGCAGCTCCAGGAGGGAGTCCACCGGAAAGAACCACAGGGAGCAACT
>配列番号７８ (DNA、ヒト、FcγR２A シグナル伝達ドメイン)
TGTCGAAAGAAGCGGATTTCAGCCAATAGTACAGACCCAGTGAAAGCCGCTCAATTTGAGCCACCCGGTCGACAGATGATCGCAATTAGGAAACGCCAACTGGAGGAAACGAATAATGATTACGAAACGGCAGATGGGGGCTACATGACGCTCAATCCTAGAGCTCCGACCGACGACGACAAGAATATATATCTGACTCTCCCTCCCAACGACCACGTAAACAGTAATAAC
>配列番号７９ (DNA、ヒト、FcγR２C シグナル伝達ドメイン)
TGCAGAAAGAAGCGGATAAGTGCAAATAGTACTGATCCCGTTAAAGCAGCACAATTTGAGCCGCCAGGACGGCAAATGATTGCAATCAGAAAACGACAACCCGAGGAAACCAATAATGACTACGAGACCGCTGACGGAGGGTATATGACGTTGAATCCCCGCGCACCAACGGATGACGATAAGAACATTTATCTTACGCTGCCCCCTAACGATCATGTGAATAGCAATAAC
>配列番号80 (DNA、ヒト、FCγR３A シグナル伝達ドメイン)
AAAACAAATATCCGGTCCTCTACGAGGGACTGGAAAGATCATAAATTCAAGTGGAGAAAAGATCCTCAGGATAAA
>配列番号８１ (タンパク質、人工配列、CER05 キメラ エンガルフメント受容体、アミノ酸１－２２はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLKFYFHLMLLAGCIKYGRGENIYDAFVIYSSQDEDWVRNELVKNLEEGVPPFQLCLHYRDFIPGVAIAANIIHEGFHKSRKVIVVVSQHFIQSRWCIF眼IAQTWQFLSSRAGIIFIVLQKVEKTLLRQQVELYRLLSRNTYLEWEDSVLGRHIFWRRLRKALLDGKSWNPEGTVGTGCNWQEATSI
>配列番号８２ (タンパク質、人工配列、CER06 キメラ エンガルフメント受容体、アミノ酸１－２２はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTTIIGVSVLSVLVVSVVAVLVYKFYFHLMLLAGCIKYGRGENIYDAFVIYSSQDEDWVRNELVKNLEEGVPPFQLCLHYRDFIPGVAIAANIIHEGFHKSRKVIVVVSQHFIQSRWCIF眼IAQTWQFLSSRAGIIFIVLQKVEKTLLRQQVELYRLLSRNTYLEWEDSVLGRHIFWRRLRKALLDGKSWNPEGTVGTGCNWQEATSI
>配列番号８３ (タンパク質、人工配列、CER07 キメラ エンガルフメント受容体、アミノ酸１－２２はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTPVLSLNITCQMNKTIIGVSVLSVLVVSVVAVLVYKFYFHLMLLAGCIKYGRGENIYDAFVIYSSQDEDWVRNELVKNLEEGVPPFQLCLHYRDFIPGVAIAANIIHEGFHKSRKVIVVVSQHFIQSRWCIF眼IAQTWQFLSSRAGIIFIVLQKVEKTLLRQQVELYRLLSRNTYLEWEDSVLGRHIFWRRLRKALLDGKSWNPEGTVGTGCNWQEATSI
>配列番号８４ (タンパク質、人工配列、CER17 キメラ エンガルフメント受容体、アミノ酸１－２２はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLEGWRISFYWNVSVHRVLGFKEIDRQTEQFEYAAYIIHAYKDKDWVWEHFSSMEKEDQSLKFCLEERDFEAGVFELEAIVNSIKRSRKIIFVITHHLLKDPLCKRFKVHHAVQQAIEQNLDSIILVFLEEIPDYKLNHALCLRRGMFKSHCILNWPVQKERIGAFRHKLQVALGSKNSVH
>配列番号８５ (タンパク質、人工配列、CER18 キメラ エンガルフメント受容体、アミノ酸１－２２はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTFFMINTSILLIFIFIVLLIHFEGWRISFYWNVSVHRVLGFKEIDRQTEQFEYAAYIIHAYKDKDWVWEHFSSMEKEDQSLKFCLEERDFEAGVFELEAIVNSIKRSRKIIFVITHHLLKDPLCKRFKVHHAVQQAIEQNLDSIILVFLEEIPDYKLNHALCLRRGMFKSHCILNWPVQKERIGAFRHKLQVALGSKNSVH
>配列番号８６ (タンパク質、人工配列、CER19 キメラ エンガルフメント受容体、アミノ酸１－２２はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLTKFRGFCFICYKTAQRLVFKDHPQGTEPDMYKYDAYLCFSSKDFTWVQNALLKHLDTQYSDQNRFNLCFEERDFVPGENRIANIQDAIWNSRKIVCLVSRHFLRDGWCLEAFSYAQGRCLSDLNSALIMVVVGSLSQYQLMKHQSIRGFVQKQQYLRWPEDFQDVGWFLHKLSQQILKKEKEKKKDNNIPLQTVATIS
>配列番号８７ (タンパク質、人工配列、CER20 キメラ エンガルフメント受容体、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTFSLFIVCTVTLTLFLMTILTVTKFRGFCFICYKTAQRLVFKDHPQGTEPDMYKYDAYLCFSSKDFTWVQNALLKHLDTQYSDQNRFNLCFEERDFVPGENRIANIQDAIWNSRKIVCLVSRHFLRDGWCLEAFSYAQGRCLSDLNSALIMVVVGSLSQYQLMKHQSIRGFVQKQQYLRWPEDFQDVGWFLHKLSQQILKKEKEKKKDNNIPLQTVATIS
>配列番号８８ (タンパク質、人工配列、CER21 キメラ エンガルフメント受容体、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLHHLFYWDVWFIYNVCLAKVKGYRSLSTSQTFYDAYISYDTKDASVTDWVINELRYHLEESRDKNVLLCLEERDWDPGLAIIDNLMQSINQSKKTVFVLTKKYAKSWNFKTAFYLALQRLMDENMDVIIFILLEPVLQHSQYLRLRQRICKSSILQWPDNPKAEGLFWQTLRNVVLTENDSRYNNMYVDSIKQY
>配列番号８９ (タンパク質、人工配列、CER22 キメラ エンガルフメント受容体、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTAVILFFFTFFITTMVMLAALAHHLFYWDVWFIYNVCLAKVKGYRSLSTSQTFYDAYISYDTKDASVTDWVINELRYHLEESRDKNVLLCLEERDWDPGLAIIDNLMQSINQSKKTVFVLTKKYAKSWNFKTAFYLALQRLMDENMDVIIFILLEPVLQHSQYLRLRQRICKSSILQWPDNPKAEGLFWQTLRNVVLTENDSRYNNMYVDSIKQY
>配列番号９０ (タンパク質、人工配列、CER23 キメラ エンガルフメント受容体、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLGWDLWYCFHLCLAWLPWRGRQSGRDEDALPYDAFVVFDKTQSAVADWVYNELRGQLEECRGRWALRLCLEERDWLPGKTLFENLWASVYGSRKTLFVLAHTDRVSGLLRASFLLAQQRLLEDRKDVVVLVILSPDGRRSRYVRLRQRLCRQSVLLWPHQPSGQRSFWAQLGMALTRDNHHFYNRNFCQGPTAE
>配列番号９１ (タンパク質、人工配列、CER24 キメラ エンガルフメント受容体、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTFALSLLAVALGLGVPMLHHLCGWDLWYCFHLCLAWLPWRGRQSGRDEDALPYDAFVVFDKTQSAVADWVYNELRGQLEECRGRWALRLCLEERDWLPGKTLFENLWASVYGSRKTLFVLAHTDRVSGLLRASFLLAQQRLLEDRKDVVVLVILSPDGRRSRYVRLRQRLCRQSVLLWPHQPSGQRSFWAQLGMALTRDNHHFYNRNFCQGPTAE
>配列番号９２ (タンパク質、人工配列、CER26 キメラ エンガルフメント受容体、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLSYLDLPWYLRMVCQWTQTRRRARNIPLEELQRNLQFHAFISYSGHDSFWVKNELLPNLEKEGMQICLHERNFVPGKSIVENIITCIEKSYKSIFVLSPNFVQSEWCHYELYFAHHNLFHEGSNSLILILLEPIPQYSIPSSYHKLKSLMARRTYLEWPKEKSKRGLFWANLRAAINIKLTEQAKK
>配列番号９３ (タンパク質、人工配列、CER27 キメラ エンガルフメント受容体、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLHRFHGLWYMKMMWAWLQAKRKPRKAPSRNICYDAFVSYSERDAYWVENLMVQELENFNPPFKLCLHKRDFIPGKWIIDNIIDSIEKSHKTVFVLSENFVKSEWCKYELDFSHFRLFDENNDAAILILLEPIEKKAIPQRFCKLRKIMNTKTYLEWPMDEAQREGFWVNLRAAIKS
>配列番号９４ (タンパク質、人工配列、CER28 キメラ エンガルフメント受容体、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLHLYFWDVWYIYHFCKAKIKGYQRLISPDCCYDAFIVYDTKDPAVTEWVLAELVAKLEDPREKHFNLCLEERDWLPGQPVLENLSQSIQLSKKTVFVMTDKYAKTENFKIAFYLSHQRLMDEKVDVIILIFLEKPFQKSKFLQLRKRLCGSSVLEWPTNPQAHPYFWQCLKNALATDNHVAYSQVFKETV
>配列番号９５ － 意図的に空欄
>配列番号９６ (タンパク質、人工配列、CER30 キメラ エンガルフメント受容体、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLMAAASVTPPGSLELLQPGFSKTLLGTKLEAKYLCSACRNVLRRPFQAQCGHRYCSFCLASILSSGPQNCAACVHEGIYEEGISILESSSAFPDNAARREVESLPAVCPSDGCTWKGTLKEYESCHEGRCPLMLTECPACKGLVRLGEKERHLEHECPERSLSCRHCRAPCCGADVKAHHEVCPKFPLTCDGCGKKKIPREKFQDHVKTCGKCRVPCRFHAIGCLETVEGEKQQEHEVQWLREHLAMLLSSVLEAKPLLGDQSHAGSELLQRCESLEKKTATFENIVCVLNREVERVAMTAEAC
>配列番号９７ (タンパク質、人工配列、CER31 キメラ エンガルフメント受容体、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLMESSKKMDSPGALQTNPPLKLHTDRSAGTPVFVPEQGGYKEKFVKTVEDKYKCEKCHLVLCSPKQTECGHRFCESCMAALLSSSSPKCTACQESIVKDKVFKDNCCKREILALQIYCRNESRGCAEQLMLGHLLVHLKNDCHFEELPCVRPDCKEKVLRKDLRDHVEKACKYREATCSHCKSQVPMIALQKHEDTDCPCVVVSCPHKCSVQTLLRSELSAHLSECVNAPSTCSFKRYGCVFQGTNQQIKAHEASSAVQHVNLLKEWSNSLEKKV
>配列番号９８ (タンパク質、人工配列、CER42 キメラ エンガルフメント受容体)
MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCAREVTGDLEDAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQTIWSYLNWYQQRPGKAPNLLIYAASSLQSGVPSRFSGRGSGTDFTLTISSLQAEDFATYYCQQSYSIPQTFGQGTKLEIKESKYGPPCPPCPTIIGVSVLSVLVVSVVAVLVYKFYFHLMLLAGCIKYGRGENIYDAFVIYSSQDEDWVRNELVKNLEEGVPPFQLCLHYRDFIPGVAIAANIIHEGFHKSRKVIVVVSQHFIQSRWCIFEYEIAQTWQFLSSRAGIIFIVLQKVEKTLLRQQVELYRLLSRNTYLEWEDSVLGRHIFWRRLRKALLDGKSWNPEGTVGTGCNWQEATSI
>配列番号99 (タンパク質、ヒト、GM-CSF シグナルペプチド配列)
MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP
>配列番号100 (タンパク質、Mus musculus、Tim4 シグナル ペプチド配列)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPA
>配列番号101 [タンパク質; 人工配列; P2A 自己開裂型ペプチド]
ATNFSLLKQAGDVEENPGP
>配列番号102 (タンパク質、人工配列、T2A 自己開裂型ペプチド)
EGRGSLLTCGDVEENPGP
>配列番号103 (タンパク質、人工配列 E2A 自己開裂型ペプチド)
QCTNYALLKLAGDVESNPGP
>配列番号104 (タンパク質、人工配列 F2A 自己開裂型ペプチド)
VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP
>配列番号105 (タンパク質、ヒト、切断型EGFR)
RKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCH
>配列番号106 (タンパク質; Mus musculus; Tim4結合ドメイン; アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQT
>配列番号107 [タンパク質; Mus musculus、シグナルペプチド不含有Tim4結合ドメイン]
ASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQT
>配列番号108 [タンパク質; Mus musculus、Tim4 膜貫通ドメイン]
ILIIACCVGFVLMVLLFLAFL
>配列番号109 [タンパク質、人工配列、FMC63 scFv、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS
>配列番号110 (DNA、ヒト、CD28 膜貫通ドメイン)
TTTTGGGTGCTGGTGGTGGTTGGTGGAGTCCTGG
CTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGTGGCCTTTATTATTTTCTGGGTG
>配列番号111 (DNA、ヒト、DAP12 膜貫通ドメイン)
GGCGTGCTGGCAGGGATCGTGATGGGAGACCTGGTGCTGACAGTGCTCATTGCCCTGGCCGTG
>配列番号112 (DNA、ヒト、TLR4 膜貫通ドメイン)
ACCATCATTGGTGTGTCGGTCCTCAGTGTGCTTGTAGTATCTGTTGTAGCAGTTCTGGTCTAT
>配列番号113 (DNA、ヒト、BAI1 膜貫通ドメイン)
GTGACGCTCATCGTGGGCTGTGGCGTGTCCTCTCTCACCCTGCTCATGCTGGTCATCATCTAC
>配列番号114 (タンパク質、ヒト、Tim4 シグナル ペプチド)
MSKEPLILWLMIEFWWLYLTPVTS
>配列番号115 (DNA、ヒト、FcεRIγ シグナル伝達ドメイン)
CGACTGAAGATCCAAGTGCGAAAGGCAGCTATAACCAGCTATGAGAAATCAGATGGTGTTTACACGGGCCTGAGCACCAGGAACCAGGAGACTTACGAGACTCTGAAGCATGAGAAACCACCACAG
>配列番号116 (DNA、ヒト、DAP12 シグナル伝達ドメイン)
TATTTTCTGGGAAGGCTCGTTCCTAGAGGTAGAGGTGCTGCCGAAGCAGCGACGCGCAAACAGAGGATTACTGAAACGGAGTCTCCCTACCAAGAGCTGCAAGGCCAGAGGTCAGATGTCTATTCAGACTTGAACACACAAAGGCCATACTACAAA
>配列番号117 (DNA、ヒト、BAFFR シグナル伝達ドメイン)
TCCTGGAGACGGCGACAAAGGCGCTTGCGCGGCGCATCATCCGCAGAGGCGCCCGACGGCGATAAGGACGCGCCCGAACCCCTTGATAAAGTTATTATCTTGTCACCGGGAATTTCTGACGCTACGGCACCCGCGTGGCCTCCTCCGGGCGAAGATCCTGGTACGACACCCCCTGGACACAGTGTTCCCGTGCCCGCGACAGAGCTCGGTAGCACAGAACTGGTGACCACAAAGACGGCGGGACCGGAACAGCAA
>配列番号118 (DNA、ヒト、CD79b シグナル伝達ドメイン)
GACAGTAAAGCCGGGATGGAAGAGGACCACACATACGAGGGGCTTGACATAGATCAAACAGCGACATACGAAGACATCGTAACCTTGCGGACTGGAGAGGTTAAATGGTCAGTCGGAGAACACCCCGGCCAAGAA
>配列番号119 (DNA、ヒト、NFAM1 シグナル伝達ドメイン)
CTCTGGAATAAAAAGAGGATGCGCGGCCCGGGAAAAGACCCAACGAGAAAGTGTCCCGATCCCCGCAGTGCGTCAAGCCCCAAGCAGCATCCTTCCGAAAGCGTATATACGGCACTTCAACGCCGGGAAACGGAGGTATATGCGTGTATTGAGAACGAGGACGGGTCATCCCCGACCGCCAAACAGTCCCCTCTCAGCCAAGAGCGACCTCACAGGTTTGAGGACGATGGTGAACTCAATCTGGTCTACGAAAACCTG
>配列番号120 (DNA、ヒト、BAI1結合ドメイン)
GCCGCCGGAGCAGACGCGGGGCCCGGGCCCGAGCCGTGCGCCACGCTGGTGCAGGGAAAGTTCTTCGGCTACTTCTCCGCGGCCGCCGTGTTCCCGGCCAACGCCTCGCGCTGCTCCTGGACGCTACGCAACCCGGACCCGCGGCGCTACACTCTCTACATGAAGGTGGCCAAGGCGCCCGTGCCCTGCAGCGGCCCCGGCCGCGTGCGCACCTACCAGTTCGACTCCTTCCTCGAGTCCACGCGCACCTACCTGGGCGTGGAGAGCTTCGACGAGGTGCTGCGGCTCTGCGACCCCTCCGCACCCCTGGCCTTCCTGCAGGCCAGCAAGCAGTTCCTGCAGATGCGGCGCCAGCAGCCGCCCCAGCACGACGGGCTCCGGCCCCGGGCCGGGCCGCCGGGCCCCACCGACGACTTCTCCGTGGAGTACCTGGTGGTGGGGAACCGCAACCCCAGCCGTGCCGCCTGCCAGATGCTGTGCCGCTGGCTGGACGCGTGTCTGGCCGGTAGTCGCAGCTCGCACCCCTGCGGGATCATGCAGACCCCCTGCGCCTGCCTGGGCGGCGAGGCGGGCGGCCCTGCCGCGGGACCCCTGGCCCCCCGCGGGGATGTCTGCTTGAGAGATGCGGTGGCTGGTGGCCCTGAAAACTGCCTCACCAGCCTGACCCAGGACCGGGGCGGGCACGGCGCCACAGGCGGCTGGAAGCTGTGGTCCCTGTGGGGCGAATGCACGCGGGACTGCGGGGGAGGCCTCCAGACGCGGACGCGCACCTGCCTGCCCGCGCCGGGCGTGGAGGGCGGCGGCTGCGAGGGGGTGCTGGAGGAGGGTCGCCAGTGCAACCGCGAGGCCTGCGGCCCCGCTGGGCGCACCAGCTCCCGGAGCCAGTCCCTGCGGTCCACAGATGCCCGGCGGCGCGAGGAGCTGGGGGACGAGCTGCAGCAGTTTGGGTTCCCAGCCCCCCAGACCGGTGACCCAGCAGCCGAGGAGTGGTCCCCGTGGAGCGTGTGCTCCAGCACCTGCGGCGAGGGCTGGCAGACCCGCACGCGCTTCTGCGTGTCCTCCTCCTACAGCACGCAGTGCAGCGGACCCCTGCGCGAGCAGCGGCTGTGCAACAACTCTGCCGTGTGCCCAGTGCATGGTGCCTGGGATGAGTGGTCGCCCTGGAGCCTCTGCTCCAGCACCTGTGGCCGTGGCTTTCGGGATCGCACGCGCACCTGCAGGCCCCCCCAGTTTGGGGGCAACCCCTGTGAGGGCCCTGAGAAGCAAACCAAGTTCTGCAACATTGCCCTGTGCCCTGGCCGGGCAGTGGATGGAAACTGGAATGAGTGGTCGAGCTGGAGCGCCTGCTCCGCCAGCTGCTCCCAGGGCCGACAGCAGCGCACGCGTGAATGCAACGGGCCTTCCTACGGGGGTGCGGAGTGCCAGGGCCACTGGGTGGAGACCCGAGACTGCTTCCTGCAGCAGTGCCCAGTGGATGGCAAGTGGCAGGCCTGGGCGTCATGGGGCAGTTGCAGCGTCAC
GTGTGGGGCTGGCAGCCAGCGACGGGAGCGTGTCTGCTCTGGGCCCTTCTTCGGGGGAGCAGCCTGCCAGGGCCCCCAGGATGAGTACCGGCAGTGCGGCACCCAGCGGTGTCCCGAGCCCCATGAGATCTGTGATGAGGACAACTTTGGTGCTGTGATCTGGAAGGAGACCCCAGCGGGAGAGGTGGCTGCTGTCCGGTGTCCCCGCAACGCCACAGGACTCATCCTGCGACGGTGTGAGCTGGACGAGGAAGGCATCGCCTACTGGGAGCCCCCCACCTACATCCGCTGTGTTTCCATTGACTACAGAAACATCCAGATGATGACCCGGGAGCACCTGGCCAAGGCTCAGCGAGGGCTGCCTGGGGAGGGGGTCTCGGAGGTCATCCAGACACTGGTGGAGATCTCTCAGGACGGGACCAGCTACAGTGGGGACCTGCTGTCCACCATCGATGTCCTGAGGAACATGACAGAGATTTTCCGGAGAGCGTACTACAGCCCCACCCCTGGGGACGTACAGAACTTTGTCCAGATCCTTAGCAACCTGTTGGCAGAGGAGA
ATCGGGACAAGTGGGAGGAGGCCCAGCTGGCGGGCCCCAACGCCAAGGAGCTGTTCCGGCTGGTGGAGGACTTTGTGGACGTCATCGGCTTCCGCATGAAGGACCTGAGGGATGCATACCAGGTGACAGACAACCTGGTTCTCAGCATCCATAAGCTCCCAGCCAGCGGAGCCACTGACATCAGCTTCCCCATGAAGGGCTGGCGGGCCACGGGTGACTGGGCCAAGGTGCCAGAGGACAGGGTCACTGTGTCCAAGAGTGTCTTCTCCACGGGGCTGACAGAGGCCGATGAAGCATCCGTGTTTGTGGTGGGCACCGTGCTCTACAGGAACCTGGGCAGCTTCCTGGCCCTGCAGAGGAACACGACCGTCCTGAATTCTAAGGTGATCTCCGTGACTGTGAAACCCCCGCCTCGCTCCCTGCGCACACCCTTGGAGATCGAGTTTGCCCACATGTATAATGGCACCACCAACCAGACCTGTATCCTGTGGGATGAGACGGATGTACCCTCCTCCTCCGCCCCCCCGCAGCTCGGGCCCTGGTCGTGGCGCGGCTGCCGCACGGTGCCCCTCGACGCCCTCCGGACGCGCTGCCTCTGTGACCGGCTCTCCACCTTCGCCATCTTAGCCCAGCTCAGCGCCGACGCGAACATGGAGAAGGCGACTCTGCCGTCG
>配列番号121 (DNA、ヒト、FcεRIγ 膜貫通ドメイン)
CTTTGTTACATTCTCGACGCGATATTGTTCCTTTATGGAATAGTTTTGACGCTCCTTTATTGC
>配列番号122 (タンパク質、人工配列、CER43 キメラエンガルフメント受容体、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSPVLSLNITCQMNKTIIGVSVLSVLVVSVVAVLVYKFYFHLMLLAGCIKYGRGENIYDAFVIYSSQDEDWVRNELVKNLEEGVPPFQLCLHYRDFIPGVAIAANIIHEGFHKSRKVIVVVSQHFIQSRWCIF眼IAQTWQFLSSRAGIIFIVLQKVEKTLLRQQVELYRLLSRNTYLEWEDSVLGRHIFWRRLRKALLDGKSWNPEGTVGTGCNWQEATSI
>配列番号123 (タンパク質、人工配列、CER44 キメラ エンガルフメント受容体、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSESKYGPPCPPCPTIIGVSVLSVLVVSVVAVLVYKFYFHLMLLAGCIKYGRGENIYDAFVIYSSQDEDWVRNELVKNLEEGVPPFQLCLHYRDFIPGVAIAANIIHEGFHKSRKVIVVVSQHFIQSRWCIF眼IAQTWQFLSSRAGIIFIVLQKVEKTLLRQQVELYRLLSRNTYLEWEDSVLGRHIFWRRLRKALLDGKSWNPEGTVGTGCNWQEATSI
>配列番号124 (タンパク質、人工配列、CER29 キメラ エンガルフメント受容体、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLMSLLNCENSCGSSQSESDCCVAMASSCSAVTKDDSVGGTASTGNLSSSFMEEIQGYDVEFDPPLESKYECPICLMALREAVQTPCGHRFCKACIIKSIRDAGHKCPVDNEILLENQLFPDNFAKREILSLMVKCPNEGCLHKMELRHLEDHQAHCEFALMDCPQCQRPFQKFHINIHILKDCPRRQVSCDNCAASMAFEDKEIHDQNCPLANVICEYCNTILIREQMPNHYDLDCPTAPIPCTFSTFGCHEKMQRNHLARHLQENTQSHMRMLA
>配列番号125 (タンパク質、人工配列、CER110 キメラ エンガルフメント受容体、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLMSLLNCENSCGSSQSESDCCVAMASSCSAVTKDDSVGGTASTGNLSSSFMEEIQGYDVEFDPPLESKYECPICLMALREAVQTPCGHRFCKACIIKSIRDAGHKCPVDNEILLENQLFPDNFAKREILSLMVKCPNEGCLHKMELRHLEDHQAHCEFALMDCPQCQRPFQKFHINIHILKDCPRRQVSCDNCAASMAFEDKEIHDQNCPLANVICEYCNTILIREQMPNHYDLDCPTAPIPCTFSTFGCHEKMQRNHLARHLQENTQSHMRMLAYFLGRLVPRGRGAAEAATRKQRITETESPYQELQGQRSDVYSDLNTQRPYYK
>配列番号126 (タンパク質、人工配列、CER111B キメラ エンガルフメント受容体、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLMSLLNCENSCGSSQSESDCCVAMASSCSAVTKDDSVGGTASTGNLSSSFMEEIQGYDVEFDPPLESKYECPICLMALREAVQTPCGHRFCKACIIKSIRDAGHKCPVDNEILLENQLFPDNFAKREILSLMVKCPNEGCLHKMELRHLEDHQAHCEFALMDCPQCQRPFQKFHINIHILKDCPRRQVSCDNCAASMAFEDKEIHDQNCPLANVICEYCNTILIREQMPNHYDLDCPTAPIPCTFSTFGCHEKMQRNHLARHLQENTQSHMRMLA DSKAGMEEDHTYEGLDIDQTATYEDIVTL
>配列番号127 (タンパク質、人工配列、CER113 キメラ エンガルフメント受容体、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTMSLLNCENSCGSSQSESDCCVAMASSCSAVTKDDSVGGTASTGNLSSSFMEEIQGYDVEFDPPLESKYECPICLMALREAVQTPCGHRFCKACIIKSIRDAGHKCPVDNEILLENQLFPDNFAKREILSLMVKCPNEGCLHKMELRHLEDHQAHCEFALMDCPQCQRPFQKFHINIHILKDCPRRQVSCDNCAASMAFEDKEIHDQNCPLANVICEYCNTILIREQMPNHYDLDCPTAPIPCTFSTFGCHEKMQRNHLARHLQENTQSHMRMLASWRRRQRRLRGASSAEAPDGDKDAPEPLDKVIILSPGISDATAPAWPPPGEDPGTTPPGHSVPVPATELGSTELVTTKTAGPEQQ
>配列番号128 (タンパク質、人工配列、CER112 キメラ エンガルフメント受容体、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLMSLLNCENSCGSSQSESDCCVAMASSCSAVTKDDSVGGTASTGNLSSSFMEEIQGYDVEFDPPLESKYECPICLMALREAVQTPCGHRFCKACIIKSIRDAGHKCPVDNEILLENQLFPDNFAKREILSLMVKCPNEGCLHKMELRHLEDHQAHCEFALMDCPQCQRPFQKFHINIHILKDCPRRQVSCDNCAASMAFEDKEIHDQNCPLANVICEYCNTILIREQMPNHYDLDCPTAPIPCTFSTFGCHEKMQRNHLARHLQENTQSHMRMLALWNKKRMRGPGKDPTRKCPDPRSASSPKQHPSESVYTALQRRETEVYACIENEDGSSPTAKQSPLSQERPHRFEDDGELNLVYENL
>配列番号129
>配列番号130 (CER102、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLHHLFYWDVWFIYNVCLAKVKGYRSLSTSQTFYDAYISYDTKDASVTDWVINELRYHLEESRDKNVLLCLEERDWDPGLAIIDNLMQSINQSKKTVFVLTKKYAKSWNFKTAFYLALQRLMDENMDVIIFILLEPVLQHSQYLRLRQRICKSSILQWPDNPKAEGLFWQTLRNVVLTENDSRYNNMYVDSIKQYLWNKKRMRGPGKDPTRKCPDPRSASSPKQHPSESVYTALQRRETEVYACIENEDGSSPTAKQSPLSQERPHRFEDDGELNLVYENL
>配列番号131 (CER103A、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLHHLFYWDVWFIYNVCLAKVKGYRSLSTSQTFYDAYISYDTKDASVTDWVINELRYHLEESRDKNVLLCLEERDWDPGLAIIDNLMQSINQSKKTVFVLTKKYAKSWNFKTAFYLALQRLMDENMDVIIFILLEPVLQHSQYLRLRQRICKSSILQWPDNPKAEGLFWQTLRNVVLTENDSRYNNMYVDSIKQYDSKAGMEEDHTYEGLDIDQTATYEDIVTLRTGEVKWSVGEHPGQE

>配列番号132 (CER103B、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLHHLFYWDVWFIYNVCLAKVKGYRSLSTSQTFYDAYISYDTKDASVTDWVINELRYHLEESRDKNVLLCLEERDWDPGLAIIDNLMQSINQSKKTVFVLTKKYAKSWNFKTAFYLALQRLMDENMDVIIFILLEPVLQHSQYLRLRQRICKSSILQWPDNPKAEGLFWQTLRNVVLTENDSRYNNMYVDSIKQYDSKAGMEEDHTYEGLDIDQTATYEDIVTL

>配列番号133 (CER104、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLHHLFYWDVWFIYNVCLAKVKGYRSLSTSQTFYDAYISYDTKDASVTDWVINELRYHLEESRDKNVLLCLEERDWDPGLAIIDNLMQSINQSKKTVFVLTKKYAKSWNFKTAFYLALQRLMDENMDVIIFILLEPVLQHSQYLRLRQRICKSSILQWPDNPKAEGLFWQTLRNVVLTENDSRYNNMYVDSIKQYYFLGRLVPRGRGAAEAATRKQRITETESPYQELQGQRSDVYSDLNTQRPYYK
>配列番号134 (CER105、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLHHLFYWDVWFIYNVCLAKVKGYRSLSTSQTFYDAYISYDTKDASVTDWVINELRYHLEESRDKNVLLCLEERDWDPGLAIIDNLMQSINQSKKTVFVLTKKYAKSWNFKTAFYLALQRLMDENMDVIIFILLEPVLQHSQYLRLRQRICKSSILQWPDNPKAEGLFWQTLRNVVLTENDSRYNNMYVDSIKQYSWRRRQRRLRGASSAEAPDGDKDAPEPLDKVIILSPGISDATAPAWPPPGEDPGTTPPGHSVPVPATELGSTELVTTKTAGPEQQ

>配列番号135 (CER106、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLLWNKKRMRGPGKDPTRKCPDPRSASSPKQHPSESVYTALQRRETEVYACIENEDGSSPTAKQSPLSQERPHRFEDDGELNLVYENLHHLFYWDVWFIYNVCLAKVKGYRSLSTSQTFYDAYISYDTKDASVTDWVINELRYHLEESRDKNVLLCLEERDWDPGLAIIDNLMQSINQSKKTVFVLTKKYAKSWNFKTAFYLALQRLMDENMDVIIFILLEPVLQHSQYLRLRQRICKSSILQWPDNPKAEGLFWQTLRNVVLTENDSRYNNMYVDSIKQY

>配列番号136 (CER107、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLDSKAGMEEDHTYEGLDIDQTATYEDIVTLHHLFYWDVWFIYNVCLAKVKGYRSLSTSQTFYDAYISYDTKDASVTDWVINELRYHLEESRDKNVLLCLEERDWDPGLAIIDNLMQSINQSKKTVFVLTKKYAKSWNFKTAFYLALQRLMDENMDVIIFILLEPVLQHSQYLRLRQRICKSSILQWPDNPKAEGLFWQTLRNVVLTENDSRYNNMYVDSIKQY

>配列番号137 (CER108、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLYFLGRLVPRGRGAAEAATRKQRITETESPYQELQGQRSDVYSDLNTQRPYYKHHLFYWDVWFIYNVCLAKVKGYRSLSTSQTFYDAYISYDTKDASVTDWVINELRYHLEESRDKNVLLCLEERDWDPGLAIIDNLMQSINQSKKTVFVLTKKYAKSWNFKTAFYLALQRLMDENMDVIIFILLEPVLQHSQYLRLRQRICKSSILQWPDNPKAEGLFWQTLRNVVLTENDSRYNNMYVDSIKQY

>配列番号138 (CER109、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLSWRRRQRRLRGASSAEAPDGDKDAPEPLDKVIILSPGISDATAPAWPPPGEDPGTTPPGHSVPVPATELGSTELVTTKTAGPEQQHHLFYWDVWFIYNVCLAKVKGYRSLSTSQTFYDAYISYDTKDASVTDWVINELRYHLEESRDKNVLLCLEERDWDPGLAIIDNLMQSINQSKKTVFVLTKKYAKSWNFKTAFYLALQRLMDENMDVIIFILLEPVLQHSQYLRLRQRICKSSILQWPDNPKAEGLFWQTLRNVVLTENDSRYNNMYVDSIKQY
>配列番号139 (CER111A、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLMSLLNCENSCGSSQSESDCCVAMASSCSAVTKDDSVGGTASTGNLSSSFMEEIQGYDVEFDPPLESKYECPICLMALREAVQTPCGHRFCKACIIKSIRDAGHKCPVDNEILLENQLFPDNFAKREILSLMVKCPNEGCLHKMELRHLEDHQAHCEFALMDCPQCQRPFQKFHINIHILKDCPRRQVSCDNCAASMAFEDKEIHDQNCPLANVICEYCNTILIREQMPNHYDLDCPTAPIPCTFSTFGCHEKMQRNHLARHLQENTQSHMRMLADSKAGMEEDHTYEGLDIDQTATYEDIVTLRTGEVKWSVGEHPGQE
>配列番号140 (CER113、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLMSLLNCENSCGSSQSESDCCVAMASSCSAVTKDDSVGGTASTGNLSSSFMEEIQGYDVEFDPPLESKYECPICLMALREAVQTPCGHRFCKACIIKSIRDAGHKCPVDNEILLENQLFPDNFAKREILSLMVKCPNEGCLHKMELRHLEDHQAHCEFALMDCPQCQRPFQKFHINIHILKDCPRRQVSCDNCAASMAFEDKEIHDQNCPLANVICEYCNTILIREQMPNHYDLDCPTAPIPCTFSTFGCHEKMQRNHLARHLQENTQSHMRMLASWRRRQRRLRGASSAEAPDGDKDAPEPLDKVIILSPGISDATAPAWPPPGEDPGTTPPGHSVPVPATELGSTELVTTKTAGPEQQ
>配列番号141 (CER114、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLMSLLNCENSCGSSQSESDCCVAMASSCSAVTKDDSVGGTASTGNLSSSFMEEIQGYDVEFDPPLESKYECPICLMALREAVQTPCGHRFCKACIIKSIRDAGHKCPVDNEILLENQLFPDNFAKREILSLMVKCPNEGCLHKMELRHLEDHQAHCEFALMDCPQCQRPFQKFHINIHILKDCPRRQVSCDNCAASMAFEDKEIHDQNCPLANVICEYCNTILIREQMPNHYDLDCPTAPIPCTFSTFGCHEKMQRNHLARHLQENTQSHMRMLAALRRRVQETKFGGAFSEEDSQLVVNYRAKKSFCRRAIELTLQSLGVSEELQNKLEDVVIDRNLLVLGKVLGEGEFGSVMEGNLKQEDGTSQKVAVKTMKLDNFSQREIEEFLSEAACMKDFNHPNVIRLLGVCIELSSQGIPKPMVILPFMKYGDLHTFLLYSRLNTGPKYIHLQTLLKFMMDIAQGMEYLSNRNFLHRDLAARNCMLRDDMTVCVADFGLSKKIYSGDYYRQGRIAKMPVKWIAIESLADRVYTSKSDVWAFGVTMWEITTRGMTPYPGVQNHEMYDYLLHGHRLKQPEDCLDELYDIMYSCWSADPLDRPTFSVLRLQLEKLSESLPDAQDKESIIYINTQLLESCEGIANGPSLTGLDMNIDPDSIIASCTPGAAVSVVTAEVHENNLREERYILNGGNEEWEDVSSTPFAAVTPEKDGVLPEDRLTKNGVSWSHHSTLPLGSPSPDELLFVDDSLEDSEVLM

>配列番号142 (CER115、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLALRRRVQETKFGGAFSEEDSQLVVNYRAKKSFCRRAIELTLQSLGVSEELQNKLEDVVIDRNLLVLGKVLGEGEFGSVMEGNLKQEDGTSQKVAVKTMKLDNFSQREIEEFLSEAACMKDFNHPNVIRLLGVCIELSSQGIPKPMVILPFMKYGDLHTFLLYSRLNTGPKYIHLQTLLKFMMDIAQGMEYLSNRNFLHRDLAARNCMLRDDMTVCVADFGLSKKIYSGDYYRQGRIAKMPVKWIAIESLADRVYTSKSDVWAFGVTMWEITTRGMTPYPGVQNHEMYDYLLHGHRLKQPEDCLDELYDIMYSCWSADPLDRPTFSVLRLQLEKLSESLPDAQDKESIIYINTQLLESCEGIANGPSLTGLDMNIDPDSIIASCTPGAAVSVVTAEVHENNLREERYILNGGNEEWEDVSSTPFAAVTPEKDGVLPEDRLTKNGVSWSHHSTLPLGSPSPDELLFVDDSLEDSEVLMMSLLNCENSCGSSQSESDCCVAMASSCSAVTKDDSVGGTASTGNLSSSFMEEIQGYDVEFDPPLESKYECPICLMALREAVQTPCGHRFCKACIIKSIRDAGHKCPVDNEILLENQLFPDNFAKREILSLMVKCPNEGCLHKMELRHLEDHQAHCEFALMDCPQCQRPFQKFHINIHILKDCPRRQVSCDNCAASMAFEDKEIHDQNCPLANVICEYCNTILIREQMPNHYDLDCPTAPIPCTFSTFGCHEKMQRNHLARHLQENTQSHMRMLA
>配列番号143 (CER116、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLMSLLNCENSCGSSQSESDCCVAMASSCSAVTKDDSVGGTASTGNLSSSFMEEIQGYDVEFDPPLESKYECPICLMALREAVQTPCGHRFCKACIIKSIRDAGHKCPVDNEILLENQLFPDNFAKREILSLMVKCPNEGCLHKMELRHLEDHQAHCEFALMDCPQCQRPFQKFHINIHILKDCPRRQVSCDNCAASMAFEDKEIHDQNCPLANVICEYCNTILIREQMPNHYDLDCPTAPIPCTFSTFGCHEKMQRNHLARHLQENTQSHMRMLAHHLFYWDVWFIYNVCLAKVKGYRSLSTSQTFYDAYISYDTKDASVTDWVINELRYHLEESRDKNVLLCLEERDWDPGLAIIDNLMQSINQSKKTVFVLTKKYAKSWNFKTAFYLALQRLMDENMDVIIFILLEPVLQHSQYLRLRQRICKSSILQWPDNPKAEGLFWQTLRNVVLTENDSRYNNMYVDSIKQY

>配列番号144 (CER117、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLHHLFYWDVWFIYNVCLAKVKGYRSLSTSQTFYDAYISYDTKDASVTDWVINELRYHLEESRDKNVLLCLEERDWDPGLAIIDNLMQSINQSKKTVFVLTKKYAKSWNFKTAFYLALQRLMDENMDVIIFILLEPVLQHSQYLRLRQRICKSSILQWPDNPKAEGLFWQTLRNVVLTENDSRYNNMYVDSIKQYMSLLNCENSCGSSQSESDCCVAMASSCSAVTKDDSVGGTASTGNLSSSFMEEIQGYDVEFDPPLESKYECPICLMALREAVQTPCGHRFCKACIIKSIRDAGHKCPVDNEILLENQLFPDNFAKREILSLMVKCPNEGCLHKMELRHLEDHQAHCEFALMDCPQCQRPFQKFHINIHILKDCPRRQVSCDNCAASMAFEDKEIHDQNCPLANVICEYCNTILIREQMPNHYDLDCPTAPIPCTFSTFGCHEKMQRNHLARHLQENTQSHMRMLA

>配列番号145 (CER118、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLSYLDLPWYLRMVCQWTQTRRRARNIPLEELQRNLQFHAFISYSGHDSFWVKNELLPNLEKEGMQICLHERNFVPGKSIVENIITCIEKSYKSIFVLSPNFVQSEWCHYELYFAHHNLFHEGSNSLILILLEPIPQYSIPSSYHKLKSLMARRTYLEWPKEKSKRGLFWANLRAAINIKLTEQAKKLWNKKRMRGPGKDPTRKCPDPRSASSPKQHPSESVYTALQRRETEVYACIENEDGSSPTAKQSPLSQERPHRFEDDGELNLVYENL

>配列番号146 (CER119B、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLSYLDLPWYLRMVCQWTQTRRRARNIPLEELQRNLQFHAFISYSGHDSFWVKNELLPNLEKEGMQICLHERNFVPGKSIVENIITCIEKSYKSIFVLSPNFVQSEWCHYELYFAHHNLFHEGSNSLILILLEPIPQYSIPSSYHKLKSLMARRTYLEWPKEKSKRGLFWANLRAAINIKLTEQAKKDSKAGMEEDHTYEGLDIDQTATYEDIVTL
>配列番号147 (CER120、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLSYLDLPWYLRMVCQWTQTRRRARNIPLEELQRNLQFHAFISYSGHDSFWVKNELLPNLEKEGMQICLHERNFVPGKSIVENIITCIEKSYKSIFVLSPNFVQSEWCHYELYFAHHNLFHEGSNSLILILLEPIPQYSIPSSYHKLKSLMARRTYLEWPKEKSKRGLFWANLRAAINIKLTEQAKKYFLGRLVPRGRGAAEAATRKQRITETESPYQELQGQRSDVYSDLNTQRPYYK

>配列番号148 (CER121、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLSYLDLPWYLRMVCQWTQTRRRARNIPLEELQRNLQFHAFISYSGHDSFWVKNELLPNLEKEGMQICLHERNFVPGKSIVENIITCIEKSYKSIFVLSPNFVQSEWCHYELYFAHHNLFHEGSNSLILILLEPIPQYSIPSSYHKLKSLMARRTYLEWPKEKSKRGLFWANLRAAINIKLTEQAKKMSLLNCENSCGSSQSESDCCVAMASSCSAVTKDDSVGGTASTGNLSSSFMEEIQGYDVEFDPPLESKYECPICLMALREAVQTPCGHRFCKACIIKSIRDAGHKCPVDNEILLENQLFPDNFAKREILSLMVKCPNEGCLHKMELRHLEDHQAHCEFALMDCPQCQRPFQKFHINIHILKDCPRRQVSCDNCAASMAFEDKEIHDQNCPLANVICEYCNTILIREQMPNHYDLDCPTAPIPCTFSTFGCHEKMQRNHLARHLQENTQSHMRMLA
>配列番号149 (CER122、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLHRFHGLWYMKMMWAWLQAKRKPRKAPSRNICYDAFVSYSERDAYWVENLMVQELENFNPPFKLCLHKRDFIPGKWIIDNIIDSIEKSHKTVFVLSENFVKSEWCKYELDFSHFRLFDENNDAAILILLEPIEKKAIPQRFCKLRKIMNTKTYLEWPMDEAQREGFWVNLRAAIKSYFLGRLVPRGRGAAEAATRKQRITETESPYQELQGQRSDVYSDLNTQRPYYK
>配列番号150 (CER123、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLHRFHGLWYMKMMWAWLQAKRKPRKAPSRNICYDAFVSYSERDAYWVENLMVQELENFNPPFKLCLHKRDFIPGKWIIDNIIDSIEKSHKTVFVLSENFVKSEWCKYELDFSHFRLFDENNDAAILILLEPIEKKAIPQRFCKLRKIMNTKTYLEWPMDEAQREGFWVNLRAAIKSMSLLNCENSCGSSQSESDCCVAMASSCSAVTKDDSVGGTASTGNLSSSFMEEIQGYDVEFDPPLESKYECPICLMALREAVQTPCGHRFCKACIIKSIRDAGHKCPVDNEILLENQLFPDNFAKREILSLMVKCPNEGCLHKMELRHLEDHQAHCEFALMDCPQCQRPFQKFHINIHILKDCPRRQVSCDNCAASMAFEDKEIHDQNCPLANVICEYCNTILIREQMPNHYDLDCPTAPIPCTFSTFGCHEKMQRNHLARHLQENTQSHMRMLA
>配列番号151 (CER124、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLHRFHGLWYMKMMWAWLQAKRKPRKAPSRNICYDAFVSYSERDAYWVENLMVQELENFNPPFKLCLHKRDFIPGKWIIDNIIDSIEKSHKTVFVLSENFVKSEWCKYELDFSHFRLFDENNDAAILILLEPIEKKAIPQRFCKLRKIMNTKTYLEWPMDEAQREGFWVNLRAAIKSLWNKKRMRGPGKDPTRKCPDPRSASSPKQHPSESVYTALQRRETEVYACIENEDGSSPTAKQSPLSQERPHRFEDDGELNLVYENL
>配列番号152 (CER125A、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLHRFHGLWYMKMMWAWLQAKRKPRKAPSRNICYDAFVSYSERDAYWVENLMVQELENFNPPFKLCLHKRDFIPGKWIIDNIIDSIEKSHKTVFVLSENFVKSEWCKYELDFSHFRLFDENNDAAILILLEPIEKKAIPQRFCKLRKIMNTKTYLEWPMDEAQREGFWVNLRAAIKSDSKAGMEEDHTYEGLDIDQTATYEDIVTLRTGEVKWSVGEHPGQE
>配列番号153 (CER125B、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLHRFHGLWYMKMMWAWLQAKRKPRKAPSRNICYDAFVSYSERDAYWVENLMVQELENFNPPFKLCLHKRDFIPGKWIIDNIIDSIEKSHKTVFVLSENFVKSEWCKYELDFSHFRLFDENNDAAILILLEPIEKKAIPQRFCKLRKIMNTKTYLEWPMDEAQREGFWVNLRAAIKSDSKAGMEEDHTYEGLDIDQTATYEDIVTL
>配列番号154 (タンパク質、人工配列、T2A 自己開裂型ペプチド変異体)
LEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPR
>配列番号155 (タンパク質、人工配列、T2A 自己開裂型ペプチド変異体)
EGRGSLLTCGDVEENPGPR
>配列番号156 (タンパク質、人工配列、T2A 自己開裂型ペプチド変異体)
LEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGP
>配列番号157 (タンパク質、人工配列、P2A 自己開裂型ペプチド変異体)
RAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGP
>配列番号158 (人工配列、HPV16 E7 TCRβ鎖-P2A-TCRα鎖)
MAPGLLCWALLCLLGAGLVDAGVTQSPTHLIKTRGQQVTLRCSPKSGHDTVSWYQQALGQGPQFIFQYYEEEERQRGNFPDRFSGHQFPNYSSELNVNALLLGDSALYLCASSLGWRGGRYNEQFFGPGTRLTVLEDLRNVTPPKVSLFEPSKAEIANKQKATLVCLARGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVCTDPQAYKESNYSYCLSSRLRVSATFWHNPRNHFRCQVQFHGLSEEDKWPEGSPKPVTQNISAEAWGRADCGITSASYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSTLVVMAMVKRKNSRAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMWGVFLLYVSMKMGGTTGQNIDQPTEMTATEGAIVQINCTYQTSGFNGLFWYQQHAGEAPTFLSYNVLDGLEEKGRFSSFLSRSKGYSYLLLKELQMKDSASYLCASVDGNNRLAFGKGNQVVVIPNIQNPEPAVYQLKDPRSQDSTLCLFTDFDSQINVPKTMESGTFITDKCVLDMKAMDSKSNGAIAWSNQTSFTCQDIFKETNATYPSSDVPCDATLTEKSFETDMNLNFQNLLVIVLRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS
>配列番号159 [タンパク質; 人工配列; CER25; アミノ酸1-22はシグナルペプチドである]
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLLWNKKRMRGPGKDPTRKCPDPRSASSPKQHPSESVYTALQRRETEVYACIENEDGSSPTAKQSPLSQERPHRFEDDGELNLVYENL
>配列番号160 (タンパク質、人工配列、HPV16 E7 TCR Vβ領域)
MAPGLLCWALLCLLGAGLVDAGVTQSPTHLIKTRGQQVTLRCSPKSGHDTVSWYQQALGQGPQFIFQYYEEEERQRGNFPDRFSGHQFPNYSSELNVNALLLGDSALYLCASSLGWRGGRYNEQFFGPGTRLTVL
>配列番号161 (タンパク質、人工配列、TCR Cβ領域、Cys置換)
EDLRNVTPPKVSLFEPSKAEIANKQKATLVCLARGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVCTDPQAYKESNYSYCLSSRLRVSATFWHNPRNHFRCQVQFHGLSEEDKWPEGSPKPVTQNISAEAWGRADCGITSASYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSTLVVMAMVKRKNS
>配列番号162 (タンパク質、人工配列、HPV16 E7TCR Vα 領域)
MWGVFLLYVSMKMGGTTGQNIDQPTEMTATEGAIVQINCTYQTSGFNGLFWYQQHAGEAPTFLSYNVLDGLEEKGRFSSFLSRSKGYSYLLLKELQMKDSASYLCASVDGNNRLAFGKGNQVVVIP
>配列番号163 (タンパク質、人工配列、TCR Cα領域、Cys置換、LVL置換)
NIQNPEPAVYQLKDPRSQDSTLCLFTDFDSQINVPKTMESGTFITDKCVLDMKAMDSKSNGAIAWSNQTSFTCQDIFKETNATYPSSDVPCDATLTEKSFETDMNLNFQNLLVIVLRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS
>配列番号164 (タンパク質、人工配列、CER5_T2A_HPV16_E7_TCR タンデムカセット)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLKFYFHLMLLAGCIKYGRGENIYDAFVIYSSQDEDWVRNELVKNLEEGVPPFQLCLHYRDFIPGVAIAANIIHEGFHKSRKVIVVVSQHFIQSRWCIF眼IAQTWQFLSSRAGIIFIVLQKVEKTLLRQQVELYRLLSRNTYLEWEDSVLGRHIFWRRLRKALLDGKSWNPEGTVGTGCNWQEATSILEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPMAPGLLCWALLCLLGAGLVDAGVTQSPTHLIKTRGQQVTLRCSPKSGHDTVSWYQQALGQGPQFIFQYYEEEERQRGNFPDRFSGHQFPNYSSELNVNALLLGDSALYLCASSLGWRGGRYNEQFFGPGTRLTVLEDLRNVTPPKVSLFEPSKAEIANKQKATLVCLARGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVCTDPQAYKESNYSYCLSSRLRVSATFWHNPRNHFRCQVQFHGLSEEDKWPEGSPKPVTQNISAEAWGRADCGITSASYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSTLVVMAMVKRKNSRAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMWGVFLLYVSMKMGGTTGQNIDQPTEMTATEGAIVQINCTYQTSGFNGLFWYQQHAGEAPTFLSYNVLDGLEEKGRFSSFLSRSKGYSYLLLKELQMKDSASYLCASVDGNNRLAFGKGNQVVVIPNIQNPEPAVYQLKDPRSQDSTLCLFTDFDSQINVPKTMESGTFITDKCVLDMKAMDSKSNGAIAWSNQTSFTCQDIFKETNATYPSSDVPCDATLTEKSFETDMNLNFQNLLVIVLRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS
>配列番号165 (タンパク質、人工配列、CER19_T2A_HPV16_E7_TCR タンデムカセット)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLTKFRGFCFICYKTAQRLVFKDHPQGTEPDMYKYDAYLCFSSKDFTWVQNALLKHLDTQYSDQNRFNLCFEERDFVPGENRIANIQDAIWNSRKIVCLVSRHFLRDGWCLEAFSYAQGRCLSDLNSALIMVVVGSLSQYQLMKHQSIRGFVQKQQYLRWPEDFQDVGWFLHKLSQQILKKEKEKKKDNNIPLQTVATISLEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPMAPGLLCWALLCLLGAGLVDAGVTQSPTHLIKTRGQQVTLRCSPKSGHDTVSWYQQALGQGPQFIFQYYEEEERQRGNFPDRFSGHQFPNYSSELNVNALLLGDSALYLCASSLGWRGGRYNEQFFGPGTRLTVLEDLRNVTPPKVSLFEPSKAEIANKQKATLVCLARGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVCTDPQAYKESNYSYCLSSRLRVSATFWHNPRNHFRCQVQFHGLSEEDKWPEGSPKPVTQNISAEAWGRADCGITSASYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSTLVVMAMVKRKNSRAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMWGVFLLYVSMKMGGTTGQNIDQPTEMTATEGAIVQINCTYQTSGFNGLFWYQQHAGEAPTFLSYNVLDGLEEKGRFSSFLSRSKGYSYLLLKELQMKDSASYLCASVDGNNRLAFGKGNQVVVIPNIQNPEPAVYQLKDPRSQDSTLCLFTDFDSQINVPKTMESGTFITDKCVLDMKAMDSKSNGAIAWSNQTSFTCQDIFKETNATYPSSDVPCDATLTEKSFETDMNLNFQNLLVIVLRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS
>配列番号166 (タンパク質、人工配列、CER21_T2A_HPV16_E7_TCR タンデムカセット)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLHHLFYWDVWFIYNVCLAKVKGYRSLSTSQTFYDAYISYDTKDASVTDWVINELRYHLEESRDKNVLLCLEERDWDPGLAIIDNLMQSINQSKKTVFVLTKKYAKSWNFKTAFYLALQRLMDENMDVIIFILLEPVLQHSQYLRLRQRICKSSILQWPDNPKAEGLFWQTLRNVVLTENDSRYNNMYVDSIKQYLEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPMAPGLLCWALLCLLGAGLVDAGVTQSPTHLIKTRGQQVTLRCSPKSGHDTVSWYQQALGQGPQFIFQYYEEEERQRGNFPDRFSGHQFPNYSSELNVNALLLGDSALYLCASSLGWRGGRYNEQFFGPGTRLTVLEDLRNVTPPKVSLFEPSKAEIANKQKATLVCLARGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVCTDPQAYKESNYSYCLSSRLRVSATFWHNPRNHFRCQVQFHGLSEEDKWPEGSPKPVTQNISAEAWGRADCGITSASYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSTLVVMAMVKRKNSRAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMWGVFLLYVSMKMGGTTGQNIDQPTEMTATEGAIVQINCTYQTSGFNGLFWYQQHAGEAPTFLSYNVLDGLEEKGRFSSFLSRSKGYSYLLLKELQMKDSASYLCASVDGNNRLAFGKGNQVVVIPNIQNPEPAVYQLKDPRSQDSTLCLFTDFDSQINVPKTMESGTFITDKCVLDMKAMDSKSNGAIAWSNQTSFTCQDIFKETNATYPSSDVPCDATLTEKSFETDMNLNFQNLLVIVLRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS
>配列番号167 (タンパク質、人工配列、CER25_T2A_HPV16_E7_TCR タンデムカセット)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLLWNKKRMRGPGKDPTRKCPDPRSASSPKQHPSESVYTALQRRETEVYACIENEDGSSPTAKQSPLSQERPHRFEDDGELNLVYENLLEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPMAPGLLCWALLCLLGAGLVDAGVTQSPTHLIKTRGQQVTLRCSPKSGHDTVSWYQQALGQGPQFIFQYYEEEERQRGNFPDRFSGHQFPNYSSELNVNALLLGDSALYLCASSLGWRGGRYNEQFFGPGTRLTVLEDLRNVTPPKVSLFEPSKAEIANKQKATLVCLARGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVCTDPQAYKESNYSYCLSSRLRVSATFWHNPRNHFRCQVQFHGLSEEDKWPEGSPKPVTQNISAEAWGRADCGITSASYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSTLVVMAMVKRKNSRAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMWGVFLLYVSMKMGGTTGQNIDQPTEMTATEGAIVQINCTYQTSGFNGLFWYQQHAGEAPTFLSYNVLDGLEEKGRFSSFLSRSKGYSYLLLKELQMKDSASYLCASVDGNNRLAFGKGNQVVVIPNIQNPEPAVYQLKDPRSQDSTLCLFTDFDSQINVPKTMESGTFITDKCVLDMKAMDSKSNGAIAWSNQTSFTCQDIFKETNATYPSSDVPCDATLTEKSFETDMNLNFQNLLVIVLRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS
>配列番号168 (タンパク質、人工配列、CER27_T2A_HPV16_E7_TCR タンデムカセット)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLHRFHGLWYMKMMWAWLQAKRKPRKAPSRNICYDAFVSYSERDAYWVENLMVQELENFNPPFKLCLHKRDFIPGKWIIDNIIDSIEKSHKTVFVLSENFVKSEWCKYELDFSHFRLFDENNDAAILILLEPIEKKAIPQRFCKLRKIMNTKTYLEWPMDEAQREGFWVNLRAAIKSLEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPMAPGLLCWALLCLLGAGLVDAGVTQSPTHLIKTRGQQVTLRCSPKSGHDTVSWYQQALGQGPQFIFQYYEEEERQRGNFPDRFSGHQFPNYSSELNVNALLLGDSALYLCASSLGWRGGRYNEQFFGPGTRLTVLEDLRNVTPPKVSLFEPSKAEIANKQKATLVCLARGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVCTDPQAYKESNYSYCLSSRLRVSATFWHNPRNHFRCQVQFHGLSEEDKWPEGSPKPVTQNISAEAWGRADCGITSASYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSTLVVMAMVKRKNSRAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMWGVFLLYVSMKMGGTTGQNIDQPTEMTATEGAIVQINCTYQTSGFNGLFWYQQHAGEAPTFLSYNVLDGLEEKGRFSSFLSRSKGYSYLLLKELQMKDSASYLCASVDGNNRLAFGKGNQVVVIPNIQNPEPAVYQLKDPRSQDSTLCLFTDFDSQINVPKTMESGTFITDKCVLDMKAMDSKSNGAIAWSNQTSFTCQDIFKETNATYPSSDVPCDATLTEKSFETDMNLNFQNLLVIVLRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS
>配列番号169 (タンパク質、人工配列、CER29_T2A_HPV16_E7_TCR タンデムカセット)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLMSLLNCENSCGSSQSESDCCVAMASSCSAVTKDDSVGGTASTGNLSSSFMEEIQGYDVEFDPPLESKYECPICLMALREAVQTPCGHRFCKACIIKSIRDAGHKCPVDNEILLENQLFPDNFAKREILSLMVKCPNEGCLHKMELRHLEDHQAHCEFALMDCPQCQRPFQKFHINIHILKDCPRRQVSCDNCAASMAFEDKEIHDQNCPLANVICEYCNTILIREQMPNHYDLDCPTAPIPCTFSTFGCHEKMQRNHLARHLQENTQSHMRMLALEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPMAPGLLCWALLCLLGAGLVDAGVTQSPTHLIKTRGQQVTLRCSPKSGHDTVSWYQQALGQGPQFIFQYYEEEERQRGNFPDRFSGHQFPNYSSELNVNALLLGDSALYLCASSLGWRGGRYNEQFFGPGTRLTVLEDLRNVTPPKVSLFEPSKAEIANKQKATLVCLARGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVCTDPQAYKESNYSYCLSSRLRVSATFWHNPRNHFRCQVQFHGLSEEDKWPEGSPKPVTQNISAEAWGRADCGITSASYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSTLVVMAMVKRKNSRAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMWGVFLLYVSMKMGGTTGQNIDQPTEMTATEGAIVQINCTYQTSGFNGLFWYQQHAGEAPTFLSYNVLDGLEEKGRFSSFLSRSKGYSYLLLKELQMKDSASYLCASVDGNNRLAFGKGNQVVVIPNIQNPEPAVYQLKDPRSQDSTLCLFTDFDSQINVPKTMESGTFITDKCVLDMKAMDSKSNGAIAWSNQTSFTCQDIFKETNATYPSSDVPCDATLTEKSFETDMNLNFQNLLVIVLRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS
>配列番号170 (タンパク質、人工配列、CER31_T2A_HPV16_E7_TCR タンデムカセット)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLMESSKKMDSPGALQTNPPLKLHTDRSAGTPVFVPEQGGYKEKFVKTVEDKYKCEKCHLVLCSPKQTECGHRFCESCMAALLSSSSPKCTACQESIVKDKVFKDNCCKREILALQIYCRNESRGCAEQLMLGHLLVHLKNDCHFEELPCVRPDCKEKVLRKDLRDHVEKACKYREATCSHCKSQVPMIALQKHEDTDCPCVVVSCPHKCSVQTLLRSELSAHLSECVNAPSTCSFKRYGCVFQGTNQQIKAHEASSAVQHVNLLKEWSNSLEKKVLEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPMAPGLLCWALLCLLGAGLVDAGVTQSPTHLIKTRGQQVTLRCSPKSGHDTVSWYQQALGQGPQFIFQYYEEEERQRGNFPDRFSGHQFPNYSSELNVNALLLGDSALYLCASSLGWRGGRYNEQFFGPGTRLTVLEDLRNVTPPKVSLFEPSKAEIANKQKATLVCLARGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVCTDPQAYKESNYSYCLSSRLRVSATFWHNPRNHFRCQVQFHGLSEEDKWPEGSPKPVTQNISAEAWGRADCGITSASYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSTLVVMAMVKRKNSRAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMWGVFLLYVSMKMGGTTGQNIDQPTEMTATEGAIVQINCTYQTSGFNGLFWYQQHAGEAPTFLSYNVLDGLEEKGRFSSFLSRSKGYSYLLLKELQMKDSASYLCASVDGNNRLAFGKGNQVVVIPNIQNPEPAVYQLKDPRSQDSTLCLFTDFDSQINVPKTMESGTFITDKCVLDMKAMDSKSNGAIAWSNQTSFTCQDIFKETNATYPSSDVPCDATLTEKSFETDMNLNFQNLLVIVLRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS
>配列番号171 (タンパク質、ヒト、TIRドメイン不含有切断型MyD88 シグナル伝達ドメイン)
MAAGGPGAGSAAPVSSTSSLPLAALNMRVRRRLSLFLNVRTQVAADWTALAEEMDFEYLEIRQLETQADPTGRLLDAWQGRPGASVGRLLELLTKLGRDDVLLELGPSIEEDCQKYILKQQQEEAEKPLQVAAVDSSVPRTAELAGITTLDDPLG
>配列番号172 (タンパク質、ヒト、MyD88 シグナル伝達ドメイン)
MAAGGPGAGSAAPVSSTSSLPLAALNMRVRRRLSLFLNVRTQVAADWTALAEEMDFEYLEIRQLETQADPTGRLLDAWQGRPGASVGRLLELLTKLGRDDVLLELGPSIEEDCQKYILKQQQEEAEKPLQVAAVDSSVPRTAELAGITTLDDPLGHMPERFDAFICYCPSDIQFVQEMIRQLEQTNYRLKLCVSDRDVLPGTCVWSIASELIEKRCRRMVVVVSDDYLQSKECDFQTKFALSLSPGAHQKRLIPIKYKAMKKEFPSILRFITVCDYTNPCTKSWFWTRLAKALSLP
>配列番号173 (CER119A、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLSYLDLPWYLRMVCQWTQTRRRARNIPLEELQRNLQFHAFISYSGHDSFWVKNELLPNLEKEGMQICLHERNFVPGKSIVENIITCIEKSYKSIFVLSPNFVQSEWCHYELYFAHHNLFHEGSNSLILILLEPIPQYSIPSSYHKLKSLMARRTYLEWPKEKSKRGLFWANLRAAINIKLTEQAKKDSKAGMEEDHTYEGLDIDQTATYEDIVTLRTGEVKWSVGEHPGQE
>配列番号174 (CER126、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLHRFHGLWYMKMMWAWLQAKRKPRKAPSRNICYDAFVSYSERDAYWVENLMVQELENFNPPFKLCLHKRDFIPGKWIIDNIIDSIEKSHKTVFVLSENFVKSEWCKYELDFSHFRLFDENNDAAILILLEPIEKKAIPQRFCKLRKIMNTKTYLEWPMDEAQREGFWVNLRAAIKSMAAASVTPPGSLELLQPGFSKTLLGTKLEAKYLCSACRNVLRRPFQAQCGHRYCSFCLASILSSGPQNCAACVHEGIYEEGISILESSSAFPDNAARREVESLPAVCPSDGCTWKGTLKEYESCHEGRCPLMLTECPACKGLVRLGEKERHLEHECPERSLSCRHCRAPCCGADVKAHHEVCPKFPLTCDGCGKKKIPREKFQDHVKTCGKCRVPCRFHAIGCLETVEGEKQQEHEVQWLREHLAMLLSSVLEAKPLLGDQSHAGSELLQRCESLEKKTATFENIVCVLNREVERVAMTAEAC
>配列番号175 (CER127、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLMAAASVTPPGSLELLQPGFSKTLLGTKLEAKYLCSACRNVLRRPFQAQCGHRYCSFCLASILSSGPQNCAACVHEGIYEEGISILESSSAFPDNAARREVESLPAVCPSDGCTWKGTLKEYESCHEGRCPLMLTECPACKGLVRLGEKERHLEHECPERSLSCRHCRAPCCGADVKAHHEVCPKFPLTCDGCGKKKIPREKFQDHVKTCGKCRVPCRFHAIGCLETVEGEKQQEHEVQWLREHLAMLLSSVLEAKPLLGDQSHAGSELLQRCESLEKKTATFENIVCVLNREVERVAMTAEACHRFHGLWYMKMMWAWLQAKRKPRKAPSRNICYDAFVSYSERDAYWVENLMVQELENFNPPFKLCLHKRDFIPGKWIIDNIIDSIEKSHKTVFVLSENFVKSEWCKYELDFSHFRLFDENNDAAILILLEPIEKKAIPQRFCKLRKIMNTKTYLEWPMDEAQREGFWVNLRAAIKS
>配列番号176 (CER128、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLMAAASVTPPGSLELLQPGFSKTLLGTKLEAKYLCSACRNVLRRPFQAQCGHRYCSFCLASILSSGPQNCAACVHEGIYEEGISILESSSAFPDNAARREVESLPAVCPSDGCTWKGTLKEYESCHEGRCPLMLTECPACKGLVRLGEKERHLEHECPERSLSCRHCRAPCCGADVKAHHEVCPKFPLTCDGCGKKKIPREKFQDHVKTCGKCRVPCRFHAIGCLETVEGEKQQEHEVQWLREHLAMLLSSVLEAKPLLGDQSHAGSELLQRCESLEKKTATFENIVCVLNREVERVAMTAEACHHLFYWDVWFIYNVCLAKVKGYRSLSTSQTFYDAYISYDTKDASVTDWVINELRYHLEESRDKNVLLCLEERDWDPGLAIIDNLMQSINQSKKTVFVLTKKYAKSWNFKTAFYLALQRLMDENMDVIIFILLEPVLQHSQYLRLRQRICKSSILQWPDNPKAEGLFWQTLRNVVLTENDSRYNNMYVDSIKQY
>配列番号177 (CER129、タンパク質、人工配列、アミノ酸1-22はシグナルペプチドである)
MSKGLLLLWLVTELWWLYLTPAASEDTIIGFLGQPVTLPCHYLSWSQSRNSMCWGKGSCPNSKCNAELLRTDGTRIISRKSTKYTLLGKVQFGEVSLTISNTNRGDSGVYCCRIEVPGWFNDVKKNVRLELRRATTTKKPTTTTRPTTTPYVTTTTPELLPTTVMTTSVLPTTTPPQTLATTAFSTAVTTCPSTTPGSFSQETTKGSAFTTESETLPASNHSQRSMMTISTDIAVLRPTGSNPGILPSTSQLTTQKTTLTTSESLQKTTKSHQINSRQTILIIACCVGFVLMVLLFLAFLHHLFYWDVWFIYNVCLAKVKGYRSLSTSQTFYDAYISYDTKDASVTDWVINELRYHLEESRDKNVLLCLEERDWDPGLAIIDNLMQSINQSKKTVFVLTKKYAKSWNFKTAFYLALQRLMDENMDVIIFILLEPVLQHSQYLRLRQRICKSSILQWPDNPKAEGLFWQTLRNVVLTENDSRYNNMYVDSIKQYMAAASVTPPGSLELLQPGFSKTLLGTKLEAKYLCSACRNVLRRPFQAQCGHRYCSFCLASILSSGPQNCAACVHEGIYEEGISILESSSAFPDNAARREVESLPAVCPSDGCTWKGTLKEYESCHEGRCPLMLTECPACKGLVRLGEKERHLEHECPERSLSCRHCRAPCCGADVKAHHEVCPKFPLTCDGCGKKKIPREKFQDHVKTCGKCRVPCRFHAIGCLETVEGEKQQEHEVQWLREHLAMLLSSVLEAKPLLGDQSHAGSELLQRCESLEKKTATFENIVCVLNREVERVAMTAEAC

Claims (33)

  1. 一本鎖キメラタンパク質を含むキメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）であって、該一本鎖キメラタンパク質が、
    ホスファチジルセリン（ＰｔｄＳｅｒ）に結合するＴｉｍ４結合ドメインを含む細胞外ドメイン；
    トール様受容体（ＴＬＲ）シグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含むエンガルフメントシグナル伝達ドメイン；および、
    細胞外ドメインとエンガルフメントシグナル伝達ドメインとの間に位置し、それらを連結する、膜貫通ドメイン
    を含む、キメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）。
  2. 結合ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列または配列番号３のアミノ酸２５－３１４のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のキメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）。
  3. 細胞外ドメインが、結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置する細胞外スペーサードメインをさらに含み、ここで該細胞外スペーサードメインがＩｇＧ４ヒンジ領域またはＴＬＲ４膜近接領域を含む、請求項１または２に記載のキメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）。
  4. ＩｇＧ４ヒンジ領域が配列番号１６のアミノ酸配列を含む改変型ＩｇＧ４ヒンジ領域である、またはＴＬＲ４膜近接領域が配列番号１７のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載のキメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）。
  5. 膜貫通ドメインが、Ｔｉｍ４、ＣＤ２８、ＤＡＰ１２、ＴＬＲ４、またはＦｃεＲ１γ膜貫通ドメインを含む、請求項１から４のいずれか一項に記載のキメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）。
  6. 膜貫通ドメインが、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＴｉｍ４膜貫通ドメイン、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＦｃεＲ１γ膜貫通ドメイン、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＤＡＰ１２膜貫通ドメイン、または配列番号３４のアミノ酸配列を含むＴＬＲ４膜貫通ドメインを含む請求項５に記載のキメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）。
  7. エンガルフメントシグナル伝達ドメインが、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＴＬＲ３シグナル伝達ドメイン、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＴＬＲ５シグナル伝達ドメイン、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＴＬＲ６シグナル伝達ドメイン、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＴＬＲ７シグナル伝達ドメイン、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＴＬＲ８シグナル伝達ドメイン、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＴＬＲ９シグナル伝達ドメイン、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＴｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたは配列番号７３のアミノ酸配列を含むＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインを含む、請求項１から６のいずれか一項に記載のキメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）。
  8. エンガルフメントシグナル伝達ドメインが、第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインおよび第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインを含み、ここで、第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインがＴＬＲシグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインである、請求項１から７のいずれか一項に記載のキメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）。
  9. 第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインが、ＦｃγＲ１シグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ２Ａシグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ２Ｂ２シグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ２Ｃシグナル伝達ドメイン、ＦｃγＲ３Ａシグナル伝達ドメイン、ＦｃεＲ１シグナル伝達ドメイン、ＦｃαＲ１シグナル伝達ドメイン、ＢＡＦＦ－Ｒシグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１２シグナル伝達ドメイン、ＮＦＡＭ１シグナル伝達ドメイン、ＣＤ７９ｂシグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ３シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ５シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ６シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ７シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ８シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ９シグナル伝達ドメイン、Ｔｒａｆ２シグナル伝達ドメイン、またはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインである、請求項８に記載のキメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）。
  10. 第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインが、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＦｃγＲ１シグナル伝達ドメイン、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＦｃγＲ２Ａシグナル伝達ドメイン、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＦｃγＲ２Ｃシグナル伝達ドメイン、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＦｃγＲ３Ａシグナル伝達ドメイン、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＦｃεＲ１γシグナル伝達ドメイン、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＢＡＦＦ－Ｒシグナル伝達ドメイン、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＤＡＰ１２シグナル伝達ドメイン、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＮＦＡＭ１シグナル伝達ドメイン、配列番号７０のアミノ酸配列を含む切断型ＮＦＡＭ１シグナル伝達ドメイン、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＣＤ７９ｂシグナル伝達ドメイン、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＴＬＲ３シグナル伝達ドメイン、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＴＬＲ５シグナル伝達ドメイン、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＴＬＲ６シグナル伝達ドメイン、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＴＬＲ７シグナル伝達ドメイン、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＴＬＲ８シグナル伝達ドメイン、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＴＬＲ９シグナル伝達ドメイン、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＴｒａｆ２シグナル伝達ドメインまたは配列番号７３のアミノ酸配列を含むＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインである、請求項９に記載のキメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）。
  11. 第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインがＴＬＲシグナル伝達ドメインであり、第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインがＴｒａｆ２またはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインであるか、あるいは第一のエンガルフメントシグナル伝達ドメインがＴｒａｆ２またはＴｒａｆ３シグナル伝達ドメインであり、第二のエンガルフメントシグナル伝達ドメインがＴＬＲシグナル伝達ドメインである、請求項９に記載のキメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）。
  12. 膜貫通ドメインがＴＬＲ４膜貫通ドメインであり、およびＴＬＲシグナル伝達ドメインがＴＬＲ４シグナル伝達ドメインである、請求項１から１１のいずれか一項に記載のキメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）。
  13. キメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）が、結合ドメインとＴＬＲ４膜貫通ドメインの間に位置するＴＬＲ４膜近接領域を含む、請求項１２に記載のキメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）。
  14. 請求項１から１３のいずれか一項に記載のキメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）をコードする核酸分子。
  15. 形質導入マーカー、自殺遺伝子またはその両方をコードする配列をさらに含む、請求項１４に記載の核酸分子。
  16. 形質導入マーカーが、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む切断型ＥＧＦＲタンパク質である、請求項１５に記載の核酸分子。
  17. 請求項１４から１６のいずれか一項に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
  18. 発現ベクターが、ウイルスベクター、改変型ｍＲＮＡベクターまたはトランスポゾン介在遺伝子導入ベクターである、請求項１７に記載の発現ベクター
  19. ウイルスベクターが、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターである、請求項１８に記載の発現ベクター。
  20. 請求項１４から１６のいずれか一項に記載の核酸分子、または請求項１７から１９のいずれか一項に記載の発現ベクターを含む宿主細胞であって、該宿主細胞がその細胞表面上に、該核酸分子によってコードされるキメラエンガルフメント受容体（ＣＥＲ）を発現する、宿主細胞。
  21. 宿主細胞がＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞、リンパ球系前駆細胞、樹状細胞を含む抗原提示細胞、ランゲルハンス細胞、骨髄系前駆細胞または成熟骨髄細胞である、請求項２０に記載の宿主細胞。
  22. Ｔ細胞がＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、粘膜関連インバリアントＴ細胞、γδ（ｇｄ）Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、組織常在型Ｔ細胞またはそれらの何れかの組合せである、請求項２１に記載の宿主細胞。
  23. 宿主細胞がヒト細胞である、請求項２０から２２のいずれか一項に記載の宿主細胞。
  24. （ａ）宿主細胞が、表面上にＰｔｄＳｅｒを発現する標的細胞をエンガルフすることができる；
    （ｂ）宿主細胞が、表面上にＰｔｄＳｅｒを発現する標的細胞を貪食することができる；
    （ｃ）宿主細胞が、表面上にＰｔｄＳｅｒを発現する標的細胞に対して少なくとも２０の食細胞作用指数を示す；
    （ｄ）宿主細胞が、表面上にＰｔｄＳｅｒを発現する標的細胞を溶解することができる；または
    （ａ）－（ｄ）のいずれかの組み合わせである、請求項２０から２３のいずれか一項に記載の宿主細胞。
  25. 請求項２０から２４のいずれか一項に記載の宿主細胞を含む、細胞集団。
  26. 請求項２０から２４のいずれか一項に記載の宿主細胞、または請求項２５に記載の細胞集団、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
  27. 有効量の宿主細胞、細胞集団または医薬組成物を対象に投与する工程を含む、癌を有する対象を処置する方法における使用のための、請求項２０から２４のいずれか一項に記載の宿主細胞、請求項２５に記載の細胞集団、または請求項２６に記載の医薬組成物。
  28. 有効量の宿主細胞、細胞集団または医薬組成物を対象に投与する工程を含む、腫瘍抗原の過剰発現と関連する疾患、障害または望ましくない病状を有する対象を処置する方法における使用のための、請求項２０から２４のいずれか一項に記載の宿主細胞、請求項２５に記載の細胞集団、または請求項２６に記載の医薬組成物。
  29. 宿主細胞、細胞集団または医薬組成物が自家細胞または同種異系細胞である、請求項２７または２８に記載の宿主細胞、細胞集団または医薬組成物。
  30. 方法が、対象に第二の治療剤を投与することをさらに含む、請求項２７から２９のいずれか一項に記載の宿主細胞、細胞集団または医薬組成物。
  31. 第二の治療剤が、抗体、放射線療法、化学療法剤、分子標的療法、細胞免疫療法、抗生物質、抗真菌薬または抗ウイルス剤である、請求項３０に記載の宿主細胞、細胞集団または医薬組成物。
  32. 宿主細胞、細胞集団または医薬組成物が、第二の治療剤の投与と同時に、または第二の治療剤の投与後に対象に投与される、請求項３０または３１に記載の宿主細胞、細胞集団または医薬組成物。
  33. 第二の治療剤が治療用量以下の用量で投与される、請求項３０から３２のいずれか一項に記載の宿主細胞、細胞集団または医薬組成物。
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