JP2024512004A - 操作されたキメラ融合タンパク質組成物およびその使用方法 - Google Patents

操作されたキメラ融合タンパク質組成物およびその使用方法 Download PDF

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Abstract

罹患細胞などの標的細胞上の表面分子に結合することが可能な結合性ドメインを有するキメラ融合タンパク質を発現する操作された骨髄細胞などの操作された細胞を作製および使用するための組成物および方法。【選択図】図１Ｃ

Description

関連出願の相互参照
[0001]本出願は、それらの各々が、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、２０２１年３月１７日に出願された、米国特許仮出願第６３／１６２，３５２号、２０２１年４月９日に出願された、米国特許仮出願第６３／１７２，９２２号、２０２１年９月１４日に出願された、米国特許仮出願第６３／２４３，９４７号、および２０２１年１０月１４日に出願された、米国特許仮出願第６３／２５５，５４０号の利益を主張する。
[0002]細胞免疫療法は、がんおよび遷延性の感染症など、処置が困難な疾患に対抗し、また、他の処置形態に不応性である、ある特定の疾患にも対抗するための、有望な新技術である。ＣＡＲ－Ｔ細胞の発見、および免疫療法における、それらの潜在的な使用により、大きなブレークスルーが生じた。ＣＡＲ－Ｔ細胞とは、キメラ抗原受容体を発現するＴリンパ球であって、Ｔ細胞を、がん細胞など、特異的罹患細胞へと標的化する一助となり、援用される細胞内ドメイン、および共発現される免疫抑制性サイトカインに応じて、標的がん細胞を死滅させるように意図された細胞傷害性応答を誘導する場合もあり、免疫抑制および／または免疫寛容を誘導する場合もある、Ｔリンパ球である。ＣＡＲ Ｔ細胞は、なおも、がん治療のための、有望なツールであり続けるが、途上における、いくつかの限界が、ＣＡＲ－Ｔ細胞における進歩を遅延させ、臨床試験におけるその有望性を減殺している。
[0003]ＣＡＲ－Ｔ細胞の限界を理解することは、技術を利用し、良好な免疫療法モデルへの革新を持続するための鍵である。具体的には、Ｔ細胞悪性腫瘍において、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、大きな問題に直面していると考えられる。ＣＡＲ－Ｔ細胞と、悪性Ｔ細胞とは、大半のＴ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）において、表面抗原を共有するため、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、がん細胞と同様に、細胞傷害作用下に置かれる。一部の場合に、ＣＡＲ－Ｔ生成物は、悪性Ｔ細胞により夾雑される場合がある。加えて、Ｔ細胞無形成は、ＣＡＲ－Ｔ細胞の存続の延長のために、潜在的な問題である。他の限界は、ＣＡＲ－Ｔ細胞が、それらの抗腫瘍潜勢力を下方調節するように作用する、充実性腫瘍および強力な腫瘍微小環境へと浸透する能力の乏しさを含む。ＣＡＲ－Ｔ細胞機能はまた、内因性Ｔ細胞の不活化および疲弊をもたらす、免疫抑制性腫瘍微小環境（ＴＭＥ）による負の影響も受ける。
[0004]マクロファージを含む骨髄細胞は、骨髄系統に由来する細胞であり、自然免疫系に属する。骨髄細胞は、血液へと逸出し、組織へと遊走する、骨髄幹細胞に由来する。それらの主要な機能のうちの一部は、貪食、Ｔ細胞応答の活性化、ならびに細胞破砕物および細胞外マトリックスの除去を含む。骨髄細胞はまた、ホメオスタシスの維持、ならびに炎症の惹起および消失においても、重要な役割を果たす。さらに、骨髄細胞は、それらが、周囲の微小環境から受け取る刺激の種類に応じて、炎症促進性～抗炎症性の範囲にわたる、異なる応答を提示しうる、マクロファージを含む、多数の下流細胞へと分化しうる。さらに、組織マクロファージは、ＣＤ８＋ Ｔエフェクター細胞およびＣＤ４＋ Ｔエフェクター細胞、ＮＫ細胞、および制御性Ｔ細胞を含む、他の免疫細胞型に対して、広範な、調節および活性化の役割を果たすことが示されている。マクロファージは、悪性腫瘍内の、主要な免疫浸潤物であることが示されており、エフェクターの免疫浸潤および免疫機能に対して、広範な免疫抑制効果を及ぼすことも示されている。
[0005]骨髄細胞の多様な機能性は、骨髄細胞を、多数の治療効果を及ぼすように操作されうる、理想的な細胞治療剤候補とする。本開示は、免疫系の骨髄細胞（例えば、ＣＤ１４＋細胞）、特に、貪食細胞を使用する免疫療法に関する。骨髄細胞を使用する、多数の治療適応が想定されうるであろう。例えば、骨髄細胞による免疫療法は、がん、自己免疫、線維性疾患、および感染症において、極めて重要でありうるであろう。本開示は、免疫系の貪食細胞、特に、単球を含む骨髄細胞を使用する免疫療法に関する。骨髄細胞のこれらの機能のうちの１つまたは複数を、治療的使用のために利用することは、本明細書で開示される本発明の目的である。例えば、操作された骨髄細胞を含む骨髄細胞の貪食活性を、治療的使用のために利用することは、本明細書で開示される本発明の目的である。例えば、操作された骨髄細胞を含む骨髄細胞が、Ｔ細胞の活性化を促進する能力を利用することは、本明細書で開示される本発明の目的である。例えば、操作された骨髄細胞を含む骨髄細胞が、腫瘍殺滅分子の分泌を促進する能力を利用することは、本明細書で開示される本発明の目的である。例えば、操作された骨髄細胞を含む骨髄細胞が、免疫細胞および免疫分子の動員および輸送を促進する能力を利用することは、本明細書で開示される本発明の目的である。一態様では、本開示は、骨髄細胞内で発現されると、骨髄細胞が、分子、分子アセンブリー、対象物、または標的、例えば、その表面上の標的抗原を含む細胞の、標的化された攻撃および貪食を駆動する、新たで有用なキメラ構築物を提供する。本開示の多くの様相のうちの１つは、（ｉ）骨髄細胞（例えば、新たな改善キメラ構築物を発現する、操作された骨髄細胞）の貪食能を増強し；標的（例えば、標的抗原）に対して、組織的かつ持続的な免疫応答を惹起する一助となることである。本開示は、骨髄細胞の機能的側面を増強することに加えて、細胞の分化能、その成熟可能性、および／または可塑性を損なわないことを目的として、骨髄細胞にトランスフェクトもしくは形質導入するか、または骨髄細胞内の遺伝子改変を、他の形で誘導するのに成功しうる、新規の方法および組成物を提示する。結果として得られる細胞は、治療的に有効な、操作された骨髄細胞またはエフェクター骨髄細胞と称されうる。本明細書で記載される改善のための、１つの戦略は、骨髄細胞の炎症性表現型を、エフェクター骨髄細胞を発生させるように誘導することである。１つの戦略は、標的との係合時に、炎症性表現型を帯びることが可能である、エフェクター骨髄細胞を作出することである。一態様では、エフェクター骨髄細胞は、その標的への係合時に、骨髄細胞内のＩ型インターフェロン応答を誘導または活性化することが可能である。別の戦略は、骨髄細胞内のＩ型インターフェロン応答を強化して、これらの細胞を、エフェクター骨髄細胞へと発生させることである。炎症性表現型を誘導するための、１つの戦略は、その標的への係合時に、エフェクター骨髄細胞内のＮＦ－ｋＢ応答を誘導または活性化することである。生体試料から分離された骨髄細胞を、本明細書で記載される免疫療法のためのエフェクター骨髄細胞へと発生させるための、１つの戦略は、骨髄細胞内のＩ型インターフェロン応答もしくはＮＦカッパＢ応答またはこれらの両方を誘導および／または強化することである。
[0006]本開示は、がん細胞および感染細胞などの罹患細胞を、直接的に、かつ／または間接的に攻撃し、これらを死滅させうる（ＡＴＡＫ）、マクロファージまたは他の貪食細胞など、操作された骨髄細胞（例えば、ＣＤ１４＋細胞）の作製および使用を伴う。マクロファージおよび他の貪食細胞などの操作された骨髄細胞は、組換え核酸技術、合成核酸、遺伝子編集法（例えば、ＣＲＩＳＰＲ）、形質導入（例えば、ウイルス構築物を使用する）、電気穿孔、またはヌクレオフェクションを使用して、例えば、疾患関連抗原（例えば、がん抗原）に特異的な細胞外結合性ドメインを有する、キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする核酸配列（例えば、ｍＲＮＡ、ＤＮＡ、プラスミド、ウイルス構築物）を、細胞へと組み込むことにより調製されうる。骨髄細胞は、広範かつ多様な範囲の活性を及ぼすように操作されうることが見出されている。例えば、骨髄細胞は、広範かつ多様な範囲の活性を及ぼすのに、抗原結合性ドメインを含有するキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）を発現するように操作されうることが見出されている。例えば、骨髄細胞は、ＣＦＰの標的細胞上の抗原への結合時に、細胞が、標的細胞の貪食の増大を呈するよう、貪食活性が増強されるように操作されうることが見出されている。また、骨髄細胞は、ＣＦＰの標的細胞上の抗原への結合時に、細胞が、腫瘍微小環境内のＴ細胞などのＴ細胞の活性化を促進するよう、Ｔ細胞の活性化を促進するように操作されうることも見出されている。操作された骨髄細胞は、ＣＦＰの、標的細胞上の抗原への結合時に、細胞が、近傍の細胞からの、腫瘍殺滅分子の分泌を促進するよう、腫瘍殺滅分子の分泌を促進するように操作されうる。操作された骨髄細胞は、ＣＦＰの、標的細胞上の抗原への結合時に、細胞が、免疫細胞および免疫分子の、標的細胞または腫瘍微小環境への動員および輸送を促進するよう、免疫細胞および免疫分子の動員および輸送を促進するように操作されうる。
[0007]本開示は、操作された骨髄細胞が、ＣＡＲ－Ｔ細胞の限界のうちの、少なくとも一部を克服する、重要な発見であって、充実性腫瘍へとたやすく動員されること；生存期間が操作可能であること、したがって、無形成および免疫不全症を結果としてもたらす、存続の延長の危険性が小さいこと；骨髄細胞は、Ｔ細胞と夾雑される可能性がないこと；骨髄細胞は、例えば、悪性Ｔ細胞と同じ抗原を発現しないため、フラトリサイドを回避しうること；および骨髄細胞は、展開されうる、大量の抗腫瘍機能を有することを含む発見に基づく。一部の点では、操作された骨髄由来細胞は、罹患細胞を標的化し、破壊するための、より安全な免疫療法ツールでありうる。
[0008]さらに、マクロファージなどの骨髄細胞は、腫瘍環境（ＴＭＥ）内において、遍在することが見出されており、とりわけ、一部の腫瘍型では、最も豊富な細胞である。免疫系における、それらの役割の一部として、マクロファージなどの骨髄細胞は、天然では、罹患細胞の除去に関与する。本発明は、骨髄細胞機能の利用に関し、とりわけ、罹患細胞の標的化、殺滅、ならびに直接的除去および／または間接的除去のほか、抗原およびサイトカインなどのペイロードの送達に関する。
[0009]操作された骨髄細胞はまた、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて短命でもあり、表現型的に多様でもあり、高感受性でもあり、可塑性でもあり、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける操作が困難であると見出されることが多い。例えば、単球内の外因性遺伝子の発現は、非造血細胞内の外因性遺伝子の発現と比較して困難となっている。骨髄細胞（例えば、単球／マクロファージ）にトランスフェクトすることと関連する、著明な技術的困難が存在する。プロフェッショナル貪食細胞として、単球／マクロファージなどの骨髄細胞は、核酸の完全性を破壊しうる、多くの強力な分解酵素を含み、これらの細胞への遺伝子導入を、非効率的過程としている。これは、免疫刺激または炎症性刺激への曝露後における、それらの生理学の劇的な変化を経る活性化マクロファージにとりわけ当てはまる。マクロファージは、一般に、分裂しない最終段階の細胞であるため、これらの細胞へのウイルスによる形質導入は理想的ではなく；このため、複製性ゲノムへの組込みに依存する一部のベクターは、成功が限られている。さらに、マクロファージは、「危険信号」に対する反応性が大きいため、遺伝子導入のために使用された元のウイルスベクターのうちのいくつかは、これらの細胞内で強力な抗ウイルス反応を誘導し、これらのベクターを遺伝子送達に不適切なものとしている。加えて、骨髄細胞は、顕著に異なる機能性を有する、表現型変異体へと分化する、潜在的可能性を有し、ある特定の状況下では、ｉｎ ｖｉｖｏにおける使用のために意図された目的に有効でない場合もある。例えば、腫瘍への能動的な遊走、および有効な腫瘍殺滅活性に必要な骨髄細胞は、ある特定の細胞表面マーカーの同定に基づき、その可塑性を保持する細胞段階において、ｉｎ ｖｉｖｏ送達されることが要求されうる。骨髄細胞の可塑性は、分離の性格、取扱い、細胞を操作するための、ｅｘ ｖｉｖｏにおける、核酸素材の、細胞への導入方式などの影響を受ける場合がある。多様な細胞段階の骨髄細胞（例えば、可塑性が高度もしくは低度の段階にある骨髄細胞、または炎症機能もしくは他の免疫調節機能を付与する表現型を伴う骨髄細胞）は、ｉｎ ｖｉｖｏにおける使用のために意図された目的に、特定の価値の各々を有し、これらの全ては、本開示の範囲内にあるが、少なくとも一態様では、本明細書で論じられる方法は、ｉｎ ｖｉｖｏ投与の前に、高度の骨髄細胞可塑性を保持する、治療用骨髄細胞集団の作出に焦点を当てる。一態様では、本開示は、骨髄細胞の機能的側面を増強することに加えて、細胞の分化能、その成熟可能性、および／または可塑性を損なわないことを目的として、骨髄細胞にトランスフェクトもしくは形質導入するか、または骨髄細胞内の遺伝子改変を、他の形で誘導するのに成功しうる、新規の方法および組成物を提示する。
[0010]本明細書の一態様では、罹患細胞、例えば、がん細胞などの標的細胞上で発現された抗原に結合する治療剤が提供される。治療剤の、標的細胞上の標的抗原への結合は、標的細胞の破壊過程を惹起しうる。一部の実施形態では、治療剤は、哺乳動物細胞、ヒト細胞、骨髄細胞、または単球など、対象の細胞内で発現されうる組換え核酸である。一部の実施形態では、治療剤は、標的細胞上の標的抗原に結合しうる組換えタンパク質である。一部の実施形態では、治療剤は、細胞、例えば、哺乳動物細胞、ヒト細胞、骨髄細胞、または単球であり、この場合、細胞は、骨髄細胞の、細胞表面上において標的抗原を発現する罹患細胞への標的化が可能であり；骨髄細胞が、罹患細胞を溶解するか、またはこれを貪食するように、組換え核酸を含み、かつ／または組換えタンパク質を発現する。
[0011]本明細書の一態様では、（ａ）膜貫通ドメイン、および（ｂ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含む、キメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸であって、キメラ融合タンパク質が、細胞外キューに応答し、細胞内ドメインが、細胞外キューを受け取ると、細胞内作用機構および骨髄細胞の活性化に影響を及ぼす組換え核酸が提供される。一実施形態では、キメラ融合タンパク質は、（ａ）膜貫通ドメイン、および（ｂ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインに加えて、細胞外抗原結合性ドメインを有する、キメラ受容体であり、キメラ融合タンパク質の細胞外抗原結合性ドメインの、細胞外結合性ドメインが結合する標的抗原への係合が、受容体への、骨髄細胞の、受容体媒介性活性化のための細胞外キューをもたらす。
[0012]本明細書の一態様では、（ａ）膜貫通ドメイン、および（ｂ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸であって、細胞内ドメインが、Ｘａａ１－Ｌｅｕ－Ｘａａ３－Ｉｓｏ－Ｓｅｒモチーフを有する細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ここで、Ｘａａ１は、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ３は、任意のアミノ酸である、組換え核酸が提供される。一部の実施形態では、Ｘａａ１－Ｌｅｕ－Ｘａａ３－Ｉｓｏ－ＳｅｒのＳｅｒは、リン酸化部位である。
[0013]一部の実施形態では、Ｘａａ１は、セリン、トレオニン、チロシン、ヒスチジン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、リシン、またはアルギニンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、セリンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、トレオニンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、チロシンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、ヒスチジンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、リシン、またはアルギニンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、アスパラギンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、アスパラギン酸である。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、グルタミンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、グルタミン酸である。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、リシンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、アルギニンである。
[0014]一部の実施形態では、Ｘａａ１は、ヒスチジン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、リシン、またはアルギニンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、ヒスチジンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、リシン、またはアルギニンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、アスパラギンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、アスパラギン酸である。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、グルタミンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、グルタミン酸である。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、リシンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、アルギニンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、セリンではない。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、トレオニンではない。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、チロシンではない。
[0015]一部の実施形態では、Ｘａａ１は、セリン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、リシン、またはアルギニンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、セリンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、アスパラギンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、アスパラギン酸である。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、グルタミンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、グルタミン酸である。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、リシンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、アルギニンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、ヒスチジンではない。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、トレオニンではない。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、チロシンではない。
[0016]一部の実施形態では、Ｘａａ１は、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、リシン、またはアルギニンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、アスパラギンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、アスパラギン酸である。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、グルタミンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、グルタミン酸である。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、リシンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、アルギニンである。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、セリンではない。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、トレオニンではない。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、チロシンではない。一部の実施形態では、Ｘａａ１は、ヒスチジンではない。
[0017]一部の実施形態では、Ｘａａ１－Ｌｅｕ－Ｘａａ３－Ｉｓｏ－Ｓｅｒは、ＳＬＨＩＳである。
[0018]一部の実施形態では、Ｘａａ１－Ｌｅｕ－Ｘａａ３－Ｉｓｏ－Ｓｅｒは、ＮＬＥＩＳである。
[0019]一部の実施形態では、Ｘａａ１－Ｌｅｕ－Ｘａａ３－Ｉｓｏ－Ｓｅｒは、ＤＬＡＩＳである。
[0020]一部の実施形態では、Ｘａａ１－Ｌｅｕ－Ｘａａ３－Ｉｓｏ－Ｓｅｒは、ＥＬＬＩＳである。
[0021]一部の態様では、キメラ融合タンパク質は、抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインをさらに含み、この場合、膜貫通ドメインは、細胞外ドメインと作動可能に連結されている。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、少なくとも１つのさらなる細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのさらなる細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞内ＰＩ３キナーゼ動員ドメイン、貪食受容体細胞内ドメイン、パターン認識受容体細胞内ドメイン、ＣＤ４０細胞内ドメイン、ＦｃＲ細胞内ドメイン、またはサイトカイン受容体細胞内ドメインもしくはケモカイン受容体細胞内ドメインに由来する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞質ゾルアダプタータンパク質、ミトコンドリア膜タンパク質、または小胞体膜タンパク質に由来するアミノ酸配列を含む。一態様では、キメラ融合タンパク質の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＲＩＦタンパク質に由来するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、短縮型ＴＲＩＦ細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、短縮型ＴＲＩＦ細胞内ドメインの配列は、約１５０～３００アミノ酸の長さ、約１５０～２７０アミノ酸の長さ、または約１５０～２５０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３６に対する少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３７に対する少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３８に対する少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４１に対する少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
[0022]本明細書の一態様では、（ａ）膜貫通ドメイン、および（ｂ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸であって、細胞内ドメインが、Ｇタンパク質共役受容体８４（ＧＰＲ８４）、Ｇタンパク質サブユニットベータ２（ＧＮＢ２）、またはホスファチジルイノシトール－３，４，５－三リン酸依存性Ｒａｃ交換因子１（ＰＲＥＸ１）に由来するシグナル伝達ドメインを含む、組換え核酸が提供される。ＧＰＲ８４、ＧＮＢ２、またはＰＲＥＸ１の細胞内シグナル伝達ドメインは、貪食促進活性を有しうる。一部の実施形態では、キメラ融合タンパク質は、抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインをさらに含み、この場合、膜貫通ドメインは、細胞外ドメインと作動可能に連結されている。一部の実施形態では、ＧＰＲ８４、ＧＮＢ２、またはＰＲＥＸ１に由来するシグナル伝達ドメインは、ＧＰＲ８４、ＧＮＢ２、またはＰＲＥＸ１に由来する細胞内シグナル伝達ドメインである。
[0023]本明細書の一態様では、（ａ）膜貫通ドメイン、および（ｂ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸であって、細胞内ドメインが、配列番号３９に対する少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、組換え核酸が提供される。
[0024]本明細書の一態様では、（ａ）膜貫通ドメイン、および（ｂ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸であって、細胞内ドメインが、配列番号４０に対する少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、組換え核酸が提供される。
[0025]本明細書の一態様では、（ａ）膜貫通ドメイン、および（ｂ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸であって、細胞内ドメインが、配列番号４２に対する少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、組換え核酸が提供される。
[0026]本明細書の一態様では、（ａ）膜貫通ドメイン、および（ｂ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸であって、細胞内ドメインが、配列番号４３に対する少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、組換え核酸が提供される。
[0027]本明細書の一態様では、（ａ）膜貫通ドメイン、および（ｂ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸であって、細胞内ドメインが、配列番号４５に対する少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、組換え核酸が提供される。
[0028]本明細書の一態様では、（ａ）膜貫通ドメイン、および（ｂ）抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸であって、膜貫通ドメインが、細胞外ドメインと作動可能に連結され、膜貫通ドメインが、ＣＤ６８に由来し、ホモ二量体化を阻害または阻止する突然変異を含む、組換え核酸が提供される。
[0029]一部の実施形態では、キメラ融合タンパク質は、膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号４７を含む。
[0030]本明細書の一態様では、（ａ）膜貫通ドメイン、および（ｂ）抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含み、膜貫通ドメインが、細胞外ドメインと作動可能に連結され、膜貫通ドメインが、ＣＤ６４またはＣＤ８９に由来し、細胞内シグナル伝達ドメインを欠く、キメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸が提供される。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ１６タンパク質、例えば、ＣＤ１６ａタンパク質に由来する。一部の実施形態では、キメラ融合タンパク質は、細胞内で発現された場合に、ＦｃＲγ鎖と共に複合体を形成する。
[0031]本明細書の一態様では、（ａ）膜貫通ドメイン、および（ｂ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸であって、細胞内ドメインが、配列番号４８に対する少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、組換え核酸が提供される。
[0032]一部の実施形態では、キメラ融合タンパク質は、ＰＩ３キナーゼ動員ドメインを含む第２の細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号３９とＩＲＦ活性化増強モチーフの配列とを含む融合アミノ酸配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号４０とＩＲＦ活性化増強モチーフの配列とを含む融合アミノ酸配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む。
[0033]一実施形態では、ＣＦＰは、配列番号３９と配列番号４０とを含む融合アミノ酸配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む。
[0034]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＩＲＦタンパク質に結合する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＴＲＡＦタンパク質結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＴＢＫ１リン酸化部位を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、第２、第３、または第４の細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインをさらに含み、この場合、膜貫通ドメインは、細胞外ドメインと作動可能に連結される。
[0035]一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、腫瘍抗原に対する親和性を有するドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、Ｔリンパ球抗原結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、Ｂリンパ球抗原結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインが結合する抗原は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＣＲ４、ＣＤ８、ＣＤ３０、ＣＤ４５、ＣＤ５６、チミジンキナーゼ（ＴＫ１）、ヒポキサンチン－グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）、ムチン１、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、ＭＵＣ１、表皮増殖因子受容体ｖＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、メソテリン、ヒト表皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）、ＥＢＮＡ－１、ＬＥＭＤ１、ホスファチジルセリン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、濾胞刺激ホルモン受容体、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、エリスロポエチン産生肝細胞癌Ａ２（ＥｐｈＡ２）、ＥｐｈＢ２、ナチュラルキラー２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）群リガンド、ジシアロガングリオシド２（ＧＤ２）、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４５、ＣＤ７０、ＣＤ５６、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９７、ＣＤ１１７、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ２１３Ａ２、ＣＤ２４８、ＣＤ２７６、ＰＳＣＡ、ＣＳ－１、ＣＬＥＣＬ１、ＧＤ３、ＰＳＭＡ、ＦＬＴ３、ＴＡＧ７２、ＥＰＣＡＭ、ＩＬ－１、インテグリン、インテグリン受容体、Ｃｌａｕｄｉｎ ３．０、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２、Ｔｒｏｐ－２、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲベータ、ＳＳＥＡ－４、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧＭ３、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、Ｄｓｇ１、Ｄｓｇ３、およびＩＧＬＬ１に由来する抗原からなる群から選択される。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、ＣＤ５に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、ＨＥＲ２に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、ＣＤ１３７、ＣＤ７０、Ｃｌａｕｄｉｎ ３．０、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２、またはＴｒｏｐ－２に結合する。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、第１の標的抗原結合性ドメインと、第１の標的結合性ドメインと同一ではない第２の標的抗原結合性ドメインとを含む。一部の実施形態では、第２の標的抗原結合性ドメインは、ＣＤ４７に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、微生物抗原に対する親和性を有するドメインを含む。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、ウイルス抗原に対する親和性を有するドメインを含む。一部の実施形態では、ドメインは、抗体またはその断片を含む。一部の実施形態では、ドメインは、ｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８ａ、ＣＤ２８、ＣＤ６８、ＣＤ２、ＦｃＲγ、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、ＦｃＲε、シンタキシン３、シンタキシン４、またはシンタキシン５の膜貫通ドメインに由来する。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、抗原結合性ドメインと膜貫通ドメインとを接続するヒンジドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内で発現された場合に、キメラ融合タンパク質は、その標的抗原への結合時に、細胞内ドメインを活性化してＩＲＦ活性化を誘導する。一部の実施形態では、組換え核酸は、ＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、ｍＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、１つまたは複数の脂質と会合する。一部の実施形態では、組換え核酸は、リポソーム内に封入される。一部の実施形態では、リポソームは、脂質ナノ粒子である。
[0036]本明細書の一態様では、配列番号５２と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換え核酸が提供される。本明細書の一態様では、配列番号５２と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号５２と少なくとも９０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号５２と同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書の一部の実施形態では、配列番号５２の配列または配列番号５２に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列をコードする組換え核酸を含む細胞が提供される。
[0037]本明細書の一態様では、配列番号５３と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換え核酸が提供される。本明細書の一態様では、配列番号５３と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号５３と少なくとも９０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号５３と同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書の一部の実施形態では、配列番号５３の配列または配列番号５３の配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列をコードする組換え核酸を含む細胞が提供される。
[0038]本明細書の一態様では、配列番号５４と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換え核酸が提供される。本明細書の一態様では、配列番号５４と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号５４と少なくとも９０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号５４と同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書の一部の実施形態では、配列番号５４の配列または配列番号５４の配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列をコードする組換え核酸を含む細胞が提供される。
[0039]本明細書の一態様では、配列番号５５と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換え核酸が提供される。本明細書の一態様では、配列番号５５と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号５５と少なくとも９０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号５５と同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書の一部の実施形態では、配列番号５５の配列または配列番号５５の配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列をコードする組換え核酸を含む細胞が提供される。
[0040]本明細書の一態様では、配列番号５６と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換え核酸が提供される。本明細書の一態様では、配列番号５６と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号５６と少なくとも９０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号５６と同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書の一部の実施形態では、配列番号５６の配列または配列番号５６の配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列をコードする組換え核酸を含む細胞が提供される。
[0041]本明細書の一態様では、配列番号５７と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換え核酸が提供される。本明細書の一態様では、配列番号５７と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号５７と少なくとも９０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号５７と同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書の一部の実施形態では、配列番号５７の配列または配列番号５７の配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列をコードする組換え核酸を含む細胞が提供される。
[0042]本明細書の一態様では、配列番号５８と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換え核酸が提供される。本明細書の一態様では、配列番号５８と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号５８と少なくとも９０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号５８と同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書の一部の実施形態では、配列番号５８の配列または配列番号５８の配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列をコードする組換え核酸を含む細胞が提供される。
[0043]本明細書の一態様では、配列番号５９と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換え核酸が提供される。本明細書の一態様では、配列番号５９と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号５９と少なくとも９０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号５９と同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書の一部の実施形態では、配列番号５９の配列または配列番号５９の配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列をコードする組換え核酸を含む細胞が提供される。
[0044]本明細書の一態様では、配列番号６０と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換え核酸が提供される。本明細書の一態様では、配列番号６０と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号６０と少なくとも９０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号６０と同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書の一部の実施形態では、配列番号６０の配列または配列番号６０の配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列をコードする組換え核酸を含む細胞が提供される。
[0045]本明細書の一態様では、配列番号６１と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換え核酸が提供される。本明細書の一態様では、配列番号６１と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号６１と少なくとも９０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号６１と同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書の一部の実施形態では、配列番号６１の配列または配列番号６１の配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列をコードする組換え核酸を含む細胞が提供される。
[0046]本明細書の一態様では、配列番号６２と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換え核酸が提供される。本明細書の一態様では、配列番号６２と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号６２と少なくとも９０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号６２と同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書の一部の実施形態では、配列番号６２の配列または配列番号６２の配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列をコードする組換え核酸を含む細胞が提供される。
[0047]本明細書の一態様では、配列番号６３と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換え核酸が提供される。本明細書の一態様では、配列番号６３と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号６３と少なくとも９０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号６３と同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書の一部の実施形態では、配列番号６３の配列または配列番号６３の配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列をコードする組換え核酸を含む細胞が提供される。
[0048]本明細書の一態様では、配列番号６４と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換え核酸が提供される。本明細書の一態様では、配列番号６４と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号６４と少なくとも９０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号６４と同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書の一部の実施形態では、配列番号６４の配列または配列番号６４の配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列をコードする組換え核酸を含む細胞が提供される。
[0049]本明細書の一態様では、配列番号６５と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換え核酸が提供される。本明細書の一態様では、配列番号６５と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号６５と少なくとも９０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号６５と同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書の一部の実施形態では、配列番号６５の配列または配列番号６５の配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列をコードする組換え核酸を含む細胞が提供される。
[0050]本明細書の一態様では、配列番号６６と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換え核酸が提供される。本明細書の一態様では、配列番号６６と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号６６と少なくとも９０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号６６と同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書の一部の実施形態では、配列番号６６の配列または配列番号６６の配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列をコードする組換え核酸を含む細胞が提供される。
[0051]本明細書の一態様では、配列番号６７と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換え核酸が提供される。本明細書の一態様では、配列番号６７と少なくとも８０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号６７と少なくとも９０％同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書では、配列番号６７と同一である配列をコードする組換えｍＲＮＡ構築物が提供される。本明細書の一部の実施形態では、配列番号６７の配列または配列番号６７の配列に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列をコードする組換え核酸を含む細胞が提供される。
[0052]一部の実施形態では、組換え核酸は、プラスミドまたはベクターである。
[0053]本明細書の一態様では、上記で記載された実施形態のうちのいずれか１つによる組換え核酸を含む細胞が提供される。一部の実施形態では、細胞は、免疫細胞である。一部の実施形態では、細胞は、骨髄細胞、リンパ系細胞、前駆細胞、幹細胞、または人工多能性細胞である。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ１４＋／ＣＤ１６－である。
[0054]本明細書の一態様では、キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含み、ＣＦＰが、（ａ）抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメイン；（ｂ）細胞外ドメインに作動可能に連結された膜貫通ドメイン、および（ｃ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含み、細胞内シグナル伝達ドメインが、活性化されるとＩＦＮ転写因子に結合する細胞内シグナル伝達ドメインを含む、操作された細胞が提供される。
[0055]本明細書の一態様では、キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含み、ＣＦＰが、（ａ）抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメイン；（ｂ）細胞外ドメインに作動可能に連結された膜貫通ドメイン、および（ｃ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含み、細胞内シグナル伝達ドメインが、ミトコンドリア受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む、操作された細胞が提供される。
[0056]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、配列番号３９に対する少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、配列番号４０に対する少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
[0057]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９、ＴＲＩＦ、ＲＩＧ－１、ＭＹＤ８８、ＭＡＬ、ＩＲＡＫ１、ＭＤＡ－５、ＩＦＮ受容体、ＳＴＩＮＧ、ＭＡＶＳ、ＴＲＩＦ、ＴＡＳＬ、ＮＬＲＰ１、ＮＬＲＰ２、ＮＬＲＰ３、ＮＬＲＰ４、ＮＬＲＰ５、ＮＬＲＰ６、ＮＬＲＰ７、ＮＬＲＰ８９、ＮＬＲＰ９、ＮＬＲＰ１０、ＮＬＲＰ１１、ＮＬＲＰ１２、ＮＬＲＰ１３、ＮＬＲＰ１～１４、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、Ｐｙｒｉｎ、ＡＩＭ２、ＮＬＲＣ４、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＥＲＩＧ、ＣＤ４０、Ｔａｎｋ１結合性キナーゼ（ＴＢＫ）、ＴＮＦＲ１、ケモカイン、ＭＨＣクラスＩＩトランス活性化因子（ＣＩＩＴＡ）、ＩＰＡＦ、ＢＩＲＣ１、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）タンパク質、マクロファージガラクトース型レクチン（ＭＧＬ）、ＤＣ－ＳＩＧＮ（ＣＬＥＣ４Ｌ）、ランジェリン（ＣＬＥＣ４Ｋ）、骨髄系ＤＡＰ１２会合レクチン（ＭＤＬ）１（ＣＬＥＣ５Ａ）、ＤＣ関連Ｃ型レクチン１（デクチン１）サブファミリータンパク質、デクチン１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＧＲ１／ＣＬＥＣ９Ａ、骨髄系Ｃ型レクチン様受容体（ＭＩＣＬ）（ＣＬＥＣ１２Ａ）、ＣＬＥＣ２（ＣＬＥＣ１Ｂ）、ＣＬＥＣ１２Ｂ、ＤＣ免疫受容体（ＤＣＩＲ）サブファミリータンパク質、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、デクチン２／ＣＬＥＣ６Ａ、血中ＤＣ抗原２（ＢＤＣＡ２）（ＣＬＥＣ４Ｃ）、Ｍｉｎｃｌｅ（マクロファージ誘導性Ｃ型レクチン）（ＣＬＥＣ４Ｅ）に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
[0058]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、配列番号４２に対する少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
[0059]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、配列番号４３に対する少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
[0060]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、配列番号４５に対する少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
[0061]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、活性化されるとＩＦＮ転写因子に結合する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
[0062]一部の実施形態では、ＩＦＮ転写因子は、タンパク質ＩＲＦ１～ＩＲＦ９のうちのいずれか１つである。
[0063]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＴＲＡＦ動員ドメインを含む。
[0064]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＩＫＫリン酸化を誘導する。
[0065]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＴＢＫリン酸化を誘導する。
[0066]一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、腫瘍抗原または微生物抗原に結合する。
[0067]一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＣＲ４、ＣＤ８、ＣＤ３０、ＣＤ４５、ＣＤ５６、チミジンキナーゼ（ＴＫ１）、ヒポキサンチン－グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）、ムチン１、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、ＭＵＣ１、表皮増殖因子受容体ｖＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、メソテリン、ヒト表皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）、ＥＢＮＡ－１、ＬＥＭＤ１、ホスファチジルセリン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、濾胞刺激ホルモン受容体、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、エリスロポエチン産生肝細胞癌Ａ２（ＥｐｈＡ２）、ＥｐｈＢ２、ナチュラルキラー２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）群リガンド、ジシアロガングリオシド２（ＧＤ２）、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４５、ＣＤ５６、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９７、ＣＤ１１７、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ２１３Ａ２、ＣＤ２４８、ＣＤ２７６、ＰＳＣＡ、ＣＳ－１、ＣＬＥＣＬ１、ＧＤ３、ＰＳＭＡ、ＦＬＴ３、ＴＡＧ７２、ＥＰＣＡＭ、ＩＬ－１、インテグリン、インテグリン受容体、Ｃｌａｕｄｉｎ ３．０、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２、Ｔｒｏｐ－２、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲベータ、ＳＳＥＡ－４、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧＭ３、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、Ｄｓｇ１、Ｄｓｇ３、およびＩＧＬＬ１のうちの１つまたは複数に結合する。
[0068]一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、ウイルス抗原に結合する。
[0069]一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８ａ、ＣＤ２８、ＣＤ６８、ＣＤ２、ＦｃＲγ、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、ＦｃＲε、シンタキシン３、シンタキシン４、またはシンタキシン５の膜貫通ドメインに由来する。
[0070]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＦｃＲγ、ＦｃＲα、またはＦｃＲεに由来する細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＰＩ３キナーゼ動員ドメインをさらに含む。
[0071]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＲＦ転写因子に結合し、抗原結合性ドメインのそのコグネイト抗原への結合時に、ＩＲＦ転写因子を活性化する。
[0072]一部の実施形態では、細胞は、抗原結合性ドメインのそのコグネイト抗原への結合時に、炎症促進性サイトカインを誘導する。
[0073]一部の実施形態では、炎症促進性サイトカインは、ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＴＮＦ、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、およびインターフェロンのうちの１つまたは複数を含む。
[0074]一部の実施形態では、細胞は、骨髄細胞、リンパ球、または幹細胞である。
[0075]一部の実施形態では、細胞は、骨髄細胞である。
[0076]本明細書における、本開示の一態様ではまた、本明細書で記載された実施形態のうちのいずれか１つによる組換え核酸、記載された実施形態のうちのいずれか１つによる細胞、または記載された実施形態のうちのいずれか１つによる操作された細胞と；薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物も提示される。
[0077]一部の実施形態では、操作された細胞は、ＣＤ１４＋／ＣＤ１６－である。
[0078]上記で記載された実施形態による医薬組成物は、細胞のうちの少なくとも５０％がＣＤ１４＋／ＣＤ１６－であり、細胞のうちの１０％未満が樹状細胞である細胞の集団を含む。一部の実施形態では、細胞は、ＣＣＲ２の高発現を呈する。一部の実施形態では、細胞は、トーナルシグナル伝達およびデノボの活性化を呈さず、活性化時に、Ｍ０、Ｍ１、またはＭ２分化を呈する。
[0079]本明細書の一部の態様では、対象におけるがんまたはウイルス感染を処置する方法であって、対象へと、上記の実施形態のうちのいずれか１つによる医薬組成物を投与するステップを含む方法が提供される。
[0080]本明細書の一部の態様では、キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含み、ＣＦＰが、（ａ）抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメイン；（ｂ）細胞外ドメインに作動可能に連結された膜貫通ドメイン、および（ｃ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含み、細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＲＩＦに由来するドメインを含む、操作されたＣＤ１４＋／ＣＤ１６－細胞が提供される。
[0081]一部の実施形態では、ＴＲＩＦに由来するドメインを含む細胞内ドメインは、短縮型ＴＲＩＦドメインである。
[0082]一部の実施形態では、ＴＲＩＦに由来するドメインを含む細胞内ドメインは、３００未満のアミノ酸を含む。
[0083]一部の実施形態では、ＴＲＩＦに由来するドメインを含む細胞内ドメインは、２５０未満のアミノ酸を含む。
[0084]一部の実施形態では、ＴＲＩＦに由来するドメインを含む細胞内ドメインは、細胞外結合性ドメインの標的との係合時にＩＦＮ応答を呈する。
[0085]本明細書の一態様では、対象におけるがんを処置する方法であって、対象へと、上記で記載された実施形態のうちのいずれか１つによる医薬組成物を投与するステップを含む方法が提供される。
[0086]本明細書の一態様では、対象におけるがんを処置する方法であって、対象へと、上記で記載された実施形態のうちのいずれか１つによる医薬組成物を投与するステップを含む方法が提供される。
[0087]一部の実施形態では、がんは、胃がん、卵巣がん、腎臓がん、乳がん、前立腺がん、肝がん、脳がん、リンパ腫、白血病、皮膚がん、膵臓がん、結腸直腸がん、神経膠芽腫、および肺がんからなる群から選択される。
参照による組込み
[0088]本明細書で言及される、全ての刊行物、特許、および特許出願は、各個別の刊行物、特許、または特許出願が、参照により組み込まれることが、具体的に、かつ、個別に指し示された場合と同じ程度において、参照により本明細書に組み込まれる。
[0089]本発明の新規の特色は、付属の特許請求の範囲において、詳細に示される。本発明の原理が利用される、例示的な実施形態を示す以下の詳細な説明および添付した図面を参照することにより、本発明の特色および利点についての良好な理解が得られるであろう。
[0090]細胞外結合性ドメイン、膜貫通ドメインを含有する、例示的ＣＦＰを示す概略を描示する図である。左側の２つの図は、ＣＦＰが、貪食と関連する細胞内シグナル伝達を増強するための、複数の細胞内シグナル伝達ドメインまたはＣＦＰを発現する細胞内部の、免疫応答もしくは炎症性シグナル伝達を増強するための、細胞内シグナル伝達のための他のドメインを含有することを表す。右側の図は、ＦｃアルファＲ１鎖（ＦｃａＲ１鎖またはＣＤ８９）、またはＦｃガンマＲ１鎖（ＦｃｇＲ１鎖またはＣＤ６４）に由来する膜貫通ドメインを含む、別の例示的キメラ融合タンパク質を例示する。右側の図において示される、このようなＣＦＰは、それ自身の細胞内ドメインを欠く場合があり、細胞内シグナル伝達は、ＣＦＰが、それが発現され、細胞内ドメインを有する細胞内の内因性タンパク質に結合するか、または他の形で、細胞内シグナル伝達を誘発する場合に、かつ、この場合に限り生じるであろう。本開示の別の箇所で記載される通り、右側の図において示される、例示的ＣＦＰは、骨髄細胞上に発現される、内因性Ｆｃガンマ受容体に結合することが可能であり、この後、このＣＦＰは、細胞内シグナル伝達、および、Ｆｃガンマ受容体の活性化を介する骨髄細胞の活性化において機能的となる。細胞外ドメインは、標的結合性ドメインである。 [0091]ＣＦＰ受容体を発現し、がん細胞上の標的抗原に結合することによりがん細胞に係合する、例示的骨髄細胞についての図式的表示である。標的への係合時における、細胞内シグナル伝達ドメインの活性化は、貪食を強化する。ＴＭ：膜貫通ドメインである。 [0092]骨髄細胞上に発現された例示的ＣＦＰについての図式的表示であり、ＣＦＰは、がん抗原を標的化し、１型インターフェロンを活性化することが可能である。細胞内ドメインを有する。ＦｃＲ：Ｆｃ受容体である。 [0093]Ｉ型インターフェロン応答を誘発するｐＬｘＩＳモチーフを有する、細胞内シグナル伝達ドメイン（ＩＣＤ）を含む、例示的キメラ抗原受容体構築物をコードする、例示的核酸についての概略を示す図である。 [0094]図２Ａ上パネルは、表示のドメインを伴う、例示的ＣＦＰ構築物デザインを示す概略図を描示する。各構築物を作出し、機能的特徴付けのために使用する。各構築物は、ＣＤ８分子に由来するヒンジドメインおよび膜貫通ドメインを有する。図２Ａ下パネルは、ＴＨＰ－１細胞内の、上パネルにおける、それぞれの構築物の発現を裏付けるフローサイトメトリーデータを示す。 [0095]図２Ｂ上パネルは、表示のドメインを伴う、例示的ＣＦＰ構築物デザインを示す概略図を描示する。各構築物を作出し、機能的特徴付けのために使用する。各構築物は、ＣＤ６８分子に由来するヒンジドメインおよび膜貫通ドメインを有する。図２Ｂ下パネルは、ＴＨＰ－１細胞内の、上パネルに示された、それぞれの構築物の発現を裏付けるフローサイトメトリーデータを示す。 [0096]図２Ｃ上パネルは、表示のドメインを伴う、例示的ＣＦＰ構築物デザインを示す概略図を描示する。左側の構築物は、ＣＤ６４膜貫通ドメインを有し、右側の構築物は、ＣＤ８９膜貫通ドメインを有する。図２Ｃ下パネルは、ＴＨＰ－１細胞内の、上パネルに示された、それぞれの構築物の発現を裏付けるフローサイトメトリーデータを示す。 [0097]図２Ｄ上パネルは、表示のドメインを伴う、例示的ＣＦＰ構築物デザインを示す概略図を描示する。左側の２つの構築物は、各々、ＣＤ６４膜貫通ドメイン、および以下のさらなる細胞内シグナル伝達ドメインを有する：左から１番目のＣＦＰは、ＰＩ３Ｋ動員ドメイン、およびＭＤＡ５に由来するシグナル伝達ドメインを含有し；左から２番目は、ＣＤ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＰＩ３Ｋ動員ドメインを含有する。右側の２つの構築物は、ＣＤ８９膜貫通ドメイン、および以下のさらなる細胞内シグナル伝達ドメインを有する：左から３番目のＣＦＰは、ＰＩ３Ｋ動員ドメイン、およびＭＤＡ５に由来するシグナル伝達ドメインを含有し；左から４番目は、ＣＤ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＰＩ３Ｋ動員ドメインを含有する。図２Ｄ下パネルは、ＴＨＰ－１細胞内の、上パネルに示された、それぞれの構築物の発現を裏付けるフローサイトメトリーデータを示す。 [0098]フローサイトメトリー結果についての解析に由来する、ＴＨＰ－１細胞内における、図中に表示の構築物の各々の相対発現レベルについての定量データを示す図である。 [0099]ＴＨＰ－１細胞内の構築物についての、例示的ＣＦＰデザイン（上パネル）、および発現データ（下パネル）を示す図である。それぞれのドメインを、図に指し示す。ＨＥＲ－ＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ構築物は、ＣＤ８ ＴＭドメインを有し、他の構築物は、ＣＤ６８ ＴＭドメインを有する。 [00100]ＴＨＰ－１細胞内の構築物についての、例示的ＣＦＰデザイン（上パネル）、および発現データ（下パネル）を示す図である。それぞれのドメインを、図に指し示す。 [00101]細胞外ドメインが、単一の標的抗原または複数の標的への結合へと方向付けられた、１つまたは複数のｓｃＦｖを含有し、各ｓｃＦｖが、異なる抗原特異性を有する、例示的ＣＦＰデザインを示す図である。 [00102]ＣＦＰを発現する骨髄細胞による、標的細胞の貪食についての定量的評価のための、例示的なアッセイ設定を示す図である。ＳＫＯＶ３腫瘍細胞系は、細胞質染料で標識化された、例示的標的細胞である。標的細胞の貪食は、骨髄細胞内の、染料の放出をもたらし、次いで、これを、フローサイトメトリーにより解析した。代表的実験からの例示的フローサイトメトリーデータもまた示す。 [00103]表示の各構築物を発現する骨髄細胞の貪食指数を示す、代表的定量データを描示する図である。Ｅ：Ｔ比：エフェクター（骨髄）細胞：標的細胞比である。実験結果は、図４Ａの方法に従い解析した。 [00104]表示の各構築物を発現する骨髄細胞の貪食指数を示す、代表的データを描示する図である。 [00105]表示の各構築物を発現する骨髄細胞の貪食指数を示す、代表的データを描示する図である。 [00106]表示の各構築物を発現する骨髄細胞の貪食指数を示す、代表的データを描示する図である。例示的フローサイトメトリープロットを、上パネルに示し、定量データを、下パネルに示す。データは、他の構築物と比較して、高度の貪食指数を示す、ＨＥＲ２－ＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ－ＴＲＩＦ（短鎖）構築物を発現する細胞を裏付けた。 [00107]ＣＦＰを発現する骨髄細胞による、標的細胞の貪食性溶解についての定量的評価のための、例示的なアッセイ設定、ならびにサイトカインおよびケモカインについて解析するための、マルチプレックス化アッセイを示す図である。標的細胞は、ルシフェラーゼ遺伝子を発現させ、標的細胞に対する飲作用時および標的細胞の溶解時に、ルシフェラーゼが、骨髄細胞内に放出され、これは、直接的な標的細胞溶解を検出および定量するのに使用されうる。 [00108]表示のＣＦＰ構築物を発現する、骨髄細胞各セットによる標的細胞溶解についての代表的データを示す図である。左図：１：１のエフェクター細胞：標的細胞比を使用する実験からの結果であり；右図：５：１のエフェクター細胞：標的細胞比を使用する実験からの結果である。 [00109]モック電気穿孔されるか、または表示のＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＳＫＯＶ３標的細胞の存在下または非存在下においてトランスフェクションの２４時間後にアッセイされたＴＨＰ－１細胞内における、ＮＦカッパＢの活性化を裏付けるデータを示す図である。ＣＤ６４細胞内ドメインを有する構築物を発現する細胞は、単独で、標的細胞の存在下における、ＮＦカッパＢの高度の活性化を示す。ＰＩ３キナーゼ動員ドメイン、およびＣＤ４０に由来する、自然免疫応答シグナル伝達ドメインの両方を有する構築物は、ＮＦカッパＢの活性化のための、トニックシグナル伝達を呈する（右図におけるグラフ）。ＮＦカッパＢアゴニストを使用する陽性対照を、左側のグラフに示す。 [00110]図５Ｃにおける通りのＣＦＰ構築物のトランスフェクションの２４時間後におけるＴＨＰ－１細胞、またはモックトランスフェクトされたＴＨＰ－１細胞内における、ＩＦＮの活性化を裏付けるデータを示す図である。ＨＥＲ２－ＣＤ６４構築物は、ＩＦＮ応答を活性化しない。マルチドメイン構築物（右グラフ）は、標的細胞の非存在下または存在下において、ＩＦＮを活性化しない。ＳＴＩＮＧアゴニストを使用する陽性対照を、左側のグラフに示す。 [00111]モック電気穿孔されるか、または表示のＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＳＫＯＶ３標的細胞の存在下または非存在下においてトランスフェクションの２４時間後にアッセイされたＴＨＰ－１細胞内における、ＮＦカッパＢの活性化を裏付けるデータを示す図である。構築物の各々は、ＣＤ８９細胞内シグナル伝達ドメインを有する。ＣＤ８９細胞内ドメインは、単独で、ＮＦカッパＢを活性化することが可能であるが、さらなる細胞内ドメインは、ＮＦカッパＢの活性化を誘導しなかった。 [00112]図５Ｅにおける通りのＣＦＰ構築物のトランスフェクションの２４時間後におけるＴＨＰ－１細胞、またはモックトランスフェクトされたＴＨＰ－１細胞内における、ＩＦＮの活性化を裏付けるデータを示す図である。 [00113]表示の個々の構築物を発現するＴＨＰ－１細胞内における、ＮＦカッパＢの活性化を裏付けるデータを示す図である。ＦｃＲドメインを有するか、またはさらなる細胞内ドメインと共にＦｃＲドメインを有する構築物を発現する細胞について調べ、結果を示す。 [00114]表示のＣＦＰ構築物による電気穿孔の２４時間後におけるＴＨＰ－１細胞内における、ＩＦＮの活性化を裏付ける、フローサイトメトリーデータを示す図である。 [00115]ＴＬＲドメインを含む、異なる細胞内ドメインを有する、異なるＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物の発現を裏付けるデータを示す図である。ｍＲＮＡを電気穿孔されたＴＨＰ－１細胞内で、標識化抗体である、抗ＨＥＲ２－ＡＦ６４７を使用する、ＨＥＲ２結合剤であるＣＦＰの細胞表面発現についてのフローサイトメトリー解析である。ＨＥＲ２結合剤を発現する細胞の百分率を、図に指し示す。 [00116]表示のＣＦＰ構築物による電気穿孔の２４時間後における（下パネル）、ＴＨＰ－１細胞内における、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物の発現（上パネル）、およびＮＦカッパＢの活性化を裏付けるフローサイトメトリーデータを示す図である。ＨＥＲ２－ＦｃＲ－ＰＩ３キナーゼ－ＭｙＤ８８構築物の発現は、持続性のＮＦカッパＢシグナル伝達（標的細胞であるＳＫＯＶ３の非存在下におけるシグナル伝達、すなわち、ＣＦＰの細胞外結合性ドメインの、ＳＫＯＶ３細胞上の抗原への係合の非存在下におけるシグナル伝達）をもたらした。 [00117]表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物による電気穿孔の２４時間後における、ＴＨＰ－１細胞内における、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物の発現、およびＮＦカッパＢの活性化およびＩＦＮの活性化を裏付けるフローサイトメトリーデータを示す図である。データは、持続性のＮＦカッパＢ／ＩＦＮガンマシグナル伝達が、ＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ－ＲＩＧ１細胞内ドメイン、またはＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ－ＭＤＡ５細胞内ドメインを有する、マルチドメイン構築物内で見られることを裏付けた。 [00118]表示のＣＦＰ構築物による電気穿孔の２４時間後におけるＴＨＰ－１細胞内の、ＴＨＰ－１細胞内における、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物の発現、およびＩＦＮの活性化を裏付けるフローサイトメトリーデータを示す図である。 [00119]表示のＣＦＰ構築物による電気穿孔の２４時間後におけるＴＨＰ－１細胞内の、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物の発現、およびＮＦカッパＢの活性化を裏付けるフローサイトメトリーデータを示す図である。 [00120]表示のＣＦＰ ｍＲＮＡ構築物による電気穿孔の２４時間後におけるＴＨＰ－１細胞による、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物の発現、およびサイトカインの発現を裏付けるフローサイトメトリーデータを示す図である。 [00121]モックトランスフェクト細胞と比較した、表示の構築物を発現するＴＨＰ－１細胞による、ベースラインのサイトカイン（ＩＬ６およびＴＮＦアルファ）／ケモカイン（ＣＣＬ３）発現を裏付けるデータを示す図である。陰性対照（モックトランスフェクト）グラフは、実験セットごとに、各ＣＦＰトランスフェクトグラフの左側に示される。 [00122]モックトランスフェクト細胞と比較した、表示の構築物を発現するＴＨＰ－１細胞による、ベースラインのサイトカイン（ＩＬ６およびＴＮＦアルファ）発現を裏付けるデータを示す図である。陰性対照（モックトランスフェクト）グラフは、実験セットごとに、各ＣＦＰトランスフェクトグラフの左側に示される。 [00123]モックトランスフェクト細胞と比較した、表示の構築物を発現するＴＨＰ－１細胞による、ベースラインのサイトカイン（ＩＬ６およびＴＮＦアルファ）発現を裏付けるデータを示す図である。陰性対照（モックトランスフェクト）グラフは、実験セットごとに、各ＣＦＰトランスフェクトグラフの左側に示される。 [00124]モックトランスフェクト細胞と比較した、表示の構築物を発現するＴＨＰ－１細胞による、ベースラインのサイトカイン（それぞれのグラフに表示の、ＩＬ６、ＴＮＦアルファ、およびＩＦＮ－ガンマ）／ケモカイン（表示の、ＣＣＬ３、ＣＣＬ５、およびＩＰ１０）発現を裏付けるデータを示す図である。陰性対照（モックトランスフェクト）グラフは、実験セットごとに、各ＣＦＰトランスフェクトグラフの左側に示される。 [00125]モックトランスフェクト細胞と比較した、表示の構築物をトランスフェクトされた細胞内の、サイトカイン／ケモカイン発現を裏付けるデータを示す図である。 [00126]モックトランスフェクト細胞と比較した、表示の構築物をトランスフェクトされた細胞内の、サイトカイン／ケモカイン発現を裏付けるデータを示す図である。 [00127]ＣＤ６８膜貫通ドメインを伴う、例示的キメラ抗原受容体構築物についての概略表示を示す図である。 [00128]表示のドメインを伴う、例示的キメラ抗原受容体を示す図である。上段の中央図および右図は、内因性Ｆｃガンマと共にオリゴマー化し、それらの自身の細胞内ドメインを欠く、ＣＤ６４膜貫通ドメインを伴う、例示的ＣＦＰを示す。中段は、組換えＣＦＰ構築物デザインにおいて、多様なドメインの組合せと対にされた、例示的細胞内ドメインを示す。下段は、複数のドメインを含む、例示的ＣＦＰを示す。 [00129]表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物による電気穿孔の後、第１のドナーに由来する初代ヒト単球内における、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物の発現を裏付けるフローサイトメトリーデータを示す図である。例えば、ＨＥＲ２－ＣＤ８ｈＴＭ－ＣＤ４０－ＦｃＲ－Ｐｉ３Ｋとは、抗ＨＥＲ２結合性細胞外ドメイン；ＣＤ８ヒンジドメインおよびＣＤ８膜貫通ドメイン；ならびに分子である、ＣＤ４０、ＦｃＲ、およびＰＩ３キナーゼに由来する、３つの個別の細胞内ドメインを有する構築物を意味する。 [00130]表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物による電気穿孔の後、第２のドナーに由来する初代ヒト単球内における、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物の発現を裏付けるフローサイトメトリーデータを示す図である。 [00131]図８Ａおよび図８Ｂに由来するデータを使用する、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物について陽性の細胞の百分率、および平均値蛍光強度についてのグラフを示す図である。ＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物の、同様の発現は、いずれのドナーにおいても観察された。 図８Ｃ－１の続き。 [00132]表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された、２例の異なるドナーに由来する初代ヒト単球による、ＳＫＯＶ３の殺滅活性についてのグラフを示す図である。表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された初代ヒト単球１００，０００個を、ＳＫＯＶ３－ＧＦＰ－ルシフェラーゼ腫瘍細胞２０，０００個と共に共培養した。共培養の７２時間後に、腫瘍細胞のルシフェラーゼ活性を検出し、ルシフェラーゼシグナル強度の低下により、殺滅を決定した。 [00133]表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された、２例の異なるドナーに由来する初代ヒト単球による、ＳＫＢＲ３の殺滅活性についてのグラフを示す図である。表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された初代ヒト単球１００，０００個を、ＳＫＢＲ３－ルシフェラーゼ腫瘍細胞２０，０００個と共に共培養した。共培養の７２時間後に、腫瘍細胞のルシフェラーゼ活性を検出し、ルシフェラーゼシグナル強度の低下により、殺滅を決定した。 [00134]表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、炎症促進性サイトカインであるＩＬ－６の誘導についてのグラフを示す図である。抗原で刺激された、ＨＥＲ２－ＣＦＰ初代単球試料について、９６ウェルプレートを、２．５μｇ／ｍＬのＨＥＲ２－ｈｉｓタンパク質でコーティングし、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された、初代ヒト単球ウェル１つ当たり１００，０００個を添加した。上清を、刺激の４８時間後に回収し、分泌されたサイトカインを、Ｌｕｍｉｎｅｘにより解析した。腫瘍細胞で刺激された、ＨＥＲ２－ＣＦＰ初代単球試料について、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された初代ヒト単球１００，０００個を、腫瘍細胞（ＳＫＯＶ３－ＧＦＰ－ルシフェラーゼ細胞またはＳＫＢＲ３－ルシフェラーゼ細胞）２０，０００個と共に共培養した。上清を、刺激の４８時間後に回収し、分泌されたサイトカインを、Ｌｕｍｉｎｅｘにより解析した。統計学的有意性は、ＨＥＲ２－ＣＦＰを電気穿孔され、腫瘍細胞と共に共培養された初代単球試料と、モック電気穿孔され、腫瘍細胞と共に共培養された初代単球試料との間で決定した。 図１０Ａ－１の続き。 [00135]表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、炎症促進性サイトカインであるＩＬ－１βの誘導についてのグラフを示す図である。実験および解析は、図１０Ａにおける通りに実施した。 図１０Ｂ－１の続き。 [00136]表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、ＴＮＦ－αの誘導についてのグラフを示す図である。実験および解析は、図１０Ａにおける通りに実施した。 図１０Ｃ－１の続き。 [00137]表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、ＩＦＮ－αの誘導についてのグラフを示す図である。実験および解析は、図１０Ａにおける通りに実施した。 図１０Ｄ－１の続き。 [00138]表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、ＩＰ１０の誘導についてのグラフを示す図である。実験および解析は、図１０Ａにおける通りに実施した。 図１０Ｅ－１の続き。 [00139]表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、ＩＬ－１２の誘導についてのグラフを示す図である。実験および解析は、図１０Ａにおける通りに実施した。 図１０Ｆ－１の続き。 [00140]表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物による電気穿孔の後、第１のドナーに由来する初代ヒト単球内における、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物の発現を裏付けるフローサイトメトリーデータを示す図である。 [00141]表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物による電気穿孔の後、第２のドナーに由来する初代ヒト単球内における、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物の発現を裏付けるフローサイトメトリーデータを示す図である。 [00142]図１１Ａおよび図１１Ｂに由来するデータを使用する、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物について陽性の細胞の百分率、および平均値蛍光強度についてのグラフを示す図である。 図１１Ｃ－１の続き。 [00143]表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された、２例の異なるドナーに由来する初代ヒト単球による、ＳＫＯＶ３の殺滅活性についてのグラフを示す図である。表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された初代ヒト単球１００，０００個を、ＳＫＯＶ３－ＧＦＰ－ルシフェラーゼ腫瘍細胞２０，０００個と共に共培養した。共培養の７２時間後に、腫瘍細胞のルシフェラーゼ活性を検出し、ルシフェラーゼシグナル強度の低下により、殺滅を決定した。 [00144]表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された、２例の異なるドナーに由来する初代ヒト単球による、ＳＫＢＲ３の殺滅活性についてのグラフを示す図である。表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された初代ヒト単球１００，０００個を、ＳＫＢＲ３－ルシフェラーゼ腫瘍細胞２０，０００個と共に共培養した。共培養の７２時間後に、腫瘍細胞のルシフェラーゼ活性を検出し、ルシフェラーゼシグナル強度の低下により、殺滅を決定した。 [00145]表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、炎症促進性サイトカインであるＩＬ－６の誘導についてのグラフを示す図である。抗原で刺激された、ＨＥＲ２－ＣＦＰ初代単球試料について、９６ウェルプレートを、２．５μｇ／ｍＬのＨＥＲ２－ｈｉｓタンパク質でコーティングし、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された、初代ヒト単球ウェル１つ当たり１００，０００個を添加した。上清を、刺激の４８時間後に回収し、分泌されたサイトカインを、Ｌｕｍｉｎｅｘにより解析した。腫瘍細胞で刺激された、ＨＥＲ２－ＣＦＰ初代単球試料について、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された初代ヒト単球１００，０００個を、腫瘍細胞（ＳＫＯＶ３－ＧＦＰ－ルシフェラーゼ細胞またはＳＫＢＲ３－ルシフェラーゼ細胞）２０，０００個と共に共培養した。上清を、刺激の４８時間後に回収し、分泌されたサイトカインを、Ｌｕｍｉｎｅｘにより解析した。統計学的有意性は、ＨＥＲ２－ＣＦＰを電気穿孔され、腫瘍細胞と共に共培養された初代単球試料と、モック電気穿孔され、腫瘍細胞と共に共培養された初代単球試料との間で決定した。 図１３Ａ－１の続き。 [00146]表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、炎症促進性サイトカインであるＩＬ－１βの誘導についてのグラフを示す図である。実験および解析は、図１３Ａにおける通りに実施した。 図１３Ｂ－１の続き。 [00147]表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、ＴＮＦ－αの誘導についてのグラフを示す図である。実験および解析は、図１３Ａにおける通りに実施した。 図１３Ｃ－１の続き。 [00148]表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、ＩＦＮ－αの誘導についてのグラフを示す図である。実験および解析は、図１３Ａにおける通りに実施した。 図１３Ｄ－１の続き。 [00149]表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、ＩＰ１０の誘導についてのグラフを示す図である。実験および解析は、図１３Ａにおける通りに実施した。 図１３Ｅ－１の続き。 [00150]表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、ＩＬ－１２の誘導についてのグラフを示す図である。実験および解析は、図１３Ａにおける通りに実施した。 図１３Ｆ－１の続き。 [00151]表示の細胞内ドメインを有するＣＦＰ構築物を投与した後のマウスにおける、腫瘍退縮（左）および生存（右）の比較を指し示すグラフを示す図である。 図１４－１の続き。
[00152]Ｔ細胞療法は、多くの患者のためのがん処置を変革した。しかし、進行期充実性腫瘍を伴う、大部分の患者にとって、持続的臨床利益は達成されていない。Ｔ細胞と異なり、骨髄細胞は、腫瘍内にたやすく蓄積し、場合によって、腫瘍塊のうちの、最大で５０％に寄与する。骨髄細胞は、腫瘍細胞を特異的に標的化し、貪食し、溶解させ、腫瘍細胞に対する、ｉｎ ｖｉｖｏにおける免疫活性化を組織する、Ａｃｔｉｖａｔｅ，Ｔａｒｇｅｔ，Ａｔｔａｃｋ ＆ Ｋｉｌｌ（ＡＴＡＫ）細胞と称される、高度に有効な抗腫瘍細胞となるように、特異的に操作されうる。
[00153]本出願は、免疫抑制性腫瘍微小環境を回避し、高度の腫瘍細胞溶解性／免疫原性効力を呈するように操作された骨髄細胞を増強するための手法に基づく。Ｔｏｌｌ様受容体およびＳＴＩＮＧ－ｃＧＡＳなどの自然免疫シグナル伝達センサーへの係合は、炎症促進性抗腫瘍免疫応答を上方調節する重要な経路として探索されており、抗腫瘍免疫と関連している。合成アゴニストを使用して、これらの経路を活性化する、これらの手法は、強力でありうるが、自然免疫シグナル伝達の、局所化された、腫瘍特異的活性化の送達は、達成が困難である。多くの常套的化学療法剤、標的化抗がん剤、免疫アジュバント、および腫瘍溶解性ウイルスは、完全なＩ型ＩＦＮシグナル伝達の存在下で、十分に有効であるに過ぎない。組換えＩ型インターフェロンおよびＩＦＮをコードするベクターを使用する免疫療法が試みられている。例えば、未処置である、病期ＩＩＩｂまたは病期ＩＶの非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を処置するのに、ＴＬＲ－９アゴニストが、化学療法と組み合わされている（Ｍａｎｅｇｏｌｄ，Ｃ．ら、「Ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ＰＦ－３５１２６７６ （ＣｐＧ ７９０９） ｔｏ ａ ｔａｘａｎｅ／ｐｌａｔｉｎｕｍ ｒｅｇｉｍｅｎ ｆｏｒ ｆｉｒｓｔ－ｌｉｎｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｕｎｒｅｓｅｃｔａｂｌｅ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ （ＮＳＣＬＣ） ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ － ｐｈａｓｅ ＩＩ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ」、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．、３：３２６、２００５）。別の研究は、免疫チェックポイント遮断と組み合わされた、ＩＦＮ産生性ｉＰＳＣ由来増殖性骨髄細胞の投与が、例えば、チェックポイント遮断に対して不応性であるがんにおける、単一処置モダリティーに対する耐性を克服するのに有用でありうることを示唆した（Ｔｓｕｃｈｉｙａ，Ｎ．ら、Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ、２９、１６２～１７５、２０１９年１０月）。
[00154]本明細書で開示される、本手法は、腫瘍認識を、自然免疫シグナル伝達とカップリングする、新たなクラスのキメラ抗原受容体（ＡＴＡＫ受容体）を作出する手法である。このような組換えキメラ受容体は、キメラ受容体を介して、骨髄細胞が、がん細胞へと標的化され、次いで、腫瘍認識時に、骨髄細胞内の自然免疫応答をさらに活性化し、腫瘍細胞の貪食性溶解、およびリンパ球性免疫応答のさらなる活性化をもたらすように、本明細書で記載される骨髄細胞内で発現される。がん認識ドメインの、ＦｃＲｇ、ＴＬＲ、およびサイトカイン受容体、本明細書でデザインされ、記載されるキメラ抗原受容体などの自然免疫受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインとの組合せは、骨髄細胞は、がんを認識し、広範かつ微調整可能な免疫応答を誘発するようにプログラムされうることを裏付ける。データは、自然免疫経路を利用することにより、ＡＴＡＫ受容体を構築することの多用途性を示し、細胞療法および直接的ｉｎ ｖｉｖｏ療法における、それらの臨床開発を支持する。
[00155]全ての用語は、それらが、当業者により理解される通りに理解されることが意図される。そうでないことが規定されない限りにおいて、本明細書で使用される技術用語および科学用語は、本開示が関連する技術分野の当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有する。
[00156]本明細書で使用される節の見出しは、構成的目的のためだけのものであり、記載される対象物を限定するものとしては解釈されないものとする。
[00157]本開示の多様な特色は、単一の実施形態の文脈で記載されうるが、特色はまた、個別に提供される場合もあり、任意の適切な組合せで提供される場合もある。逆に、本明細書では、明確さのために、本開示は、個別の実施形態の文脈で記載されうるが、本開示はまた、単一の実施形態でも、実施されうる。
[00158]本明細書における、「一部の実施形態」、「ある実施形態」、「一実施形態」、または「他の実施形態」への言及は、実施形態との関連で記載される、特色、構造、または特徴が、本開示の、少なくとも一部の実施形態には含まれるが、全ての実施形態には、必ずしも含まれないことを意味する。
[00159]本明細書および特許請求の範囲で使用される、「～を含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」（ならびに「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、および「含まれた（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ）」など、「～を含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」の任意の形態）、「～を有すること」（ならびに「～を有する（ｈａｖｅ）」および「～を有する（ｈａｓ）」など、「～を有すること」の任意の形態）、「～を含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」（ならびに「～を含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」および「～を含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」など、「～を含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」の任意の形態）、または「～を含有すること」（ならびに「～を含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」および「～を含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」など、「～を含有すること」の任意の形態）という用語は、包含的またはオープンエンドであり、さらなる、列挙されていない要素または方法ステップを除外しない。本明細書で論じられる任意の実施形態は、本開示の任意の方法または組成物に関して実施される場合があり、この逆も成り立つことが想定される。さらに、本開示の組成物は、本開示の方法を達成するのに使用されうる。本発明の方法を達成することができる。
[00160]パラメータ、量、時間的持続など、測定可能な値に言及する場合に、本明細書で使用される、「約」または「およそ」という用語は、そのような変動が、本開示において実施するのに適切である限りにおいて、指定された値の±３０％またはこれ未満、±２０％またはこれ未満、±１０％もしくはこれ未満、±５％もしくはこれ未満、または±１％もしくはこれ未満の変動、および指定された値からこれらの変動を包摂することが意図される。「約」または「およそ」という修飾語が言及する値はまた、具体的に開示される場合もあることが理解されるものとする。
[00161]「薬剤」とは、任意の細胞、低分子化合物、抗体、もしくこれらの断片、核酸分子、またはポリペプチドを指す場合がある。
[00162]「変更」または「変化」とは、増大または減少を指す場合がある。例えば、変更は、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、２０％、３０％、または４０％、５０％、６０％、なおまたは７０％、７５％、８０％、９０％、もしくは１００％までの増大または減少でありうる。例えば、変更は、１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、３０倍、または４０倍、５０倍、６０倍、なおまたは７０倍、７５倍、８０倍、９０倍、もしくは１００倍までの増大または減少でありうる。
[00163]本明細書で使用される、「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」は、プロフェッショナル抗原提示細胞（例えば、Ｂリンパ球、マクロファージ、単球、樹状細胞、ランゲルハンス細胞）のほか、他の抗原提示細胞（例えば、ケラチノサイト、内皮細胞、星状膠細胞、線維芽細胞、希突起膠細胞、胸腺上皮細胞、甲状腺上皮細胞、神経膠細胞（脳）、膵ベータ細胞、および血管内皮細胞）を含む。ＡＰＣは、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子を発現することが可能であり、その表面上に、Ｔ細胞による認識が可能であり、Ｔ細胞の活性化および免疫応答を誘発しうる、ＭＨＣと複合体化された抗原を提示しうる。プロフェッショナル抗原提示細胞、とりわけ、樹状細胞は、ナイーブＴ細胞の刺激において、鍵となる役割を果たす。線維芽細胞などの非プロフェッショナル抗原提示細胞もまた、この過程に寄与しうる。ＡＰＣはまた、外因性抗原をプロセシングし、プロセシングされた抗原を、クラスＩＭＨＣ分子上に提示することにより、ペプチド抗原も交差提示しうる。クラスＩ ＭＨＣ分子との会合時に認識されるタンパク質をもたらす抗原は、一般に、細胞内で産生されるタンパク質であり、これらの抗原は、プロセシングされ、クラスＩＭＨＣ分子と会合する。
[00164]「生体試料」とは、生物に由来する、任意の組織、細胞、体液、または他の素材を指す場合がある。
[00165]「エピトープ」という用語は、抗体もしくはその結合性断片、Ｔ細胞受容体、および／または抗体様分子に結合することが可能である、配列または構造またはアミノ酸残基など、任意のタンパク質決定基を指す場合がある。エピトープ決定基は、典型的に、アミノ酸または糖の側鎖などの分子の、化学的に活性の表面基からなり、一般に、特異的三次元構造特徴のほか、特異的電荷特徴を有する。「Ｔ細胞エピトープ」とは、Ｔ細胞受容体により認識される、ペプチドまたはペプチド－ＭＨＣ複合体を指す場合がある。
[00166]操作された骨髄細胞などの操作された細胞は、一過性に発現された場合であってもなお、細胞内で、少なくとも１つの外因性核酸配列を有する細胞を指す場合がある。外因性核酸の発現は、他の箇所に記載される、多様な方法により実施される場合があり、当技術分野で公知の方法を包摂する。本開示は、操作された細胞、例えば、操作された貪食細胞などの操作された骨髄細胞の調製および使用に関する。本開示は、とりわけ、例えば、キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする、外因性核酸を含む操作された細胞に関する。
[00167]「免疫応答」という用語は、Ｔ細胞媒介性免疫応答、ＮＫ細胞媒介性免疫応答、および／またはＢ細胞媒介性免疫応答を含むがこれらに限定されない。これらの応答は、Ｔ細胞共刺激およびＮＫ細胞共刺激のモジュレーションにより影響される場合がある。例示的な免疫応答は、Ｔ細胞応答、例えば、サイトカイン産生および細胞媒介性細胞傷害作用を含む。加えて、免疫応答は、ＮＫ細胞の活性化、Ｂ細胞の活性化、および／またはＴ細胞の活性化の影響を間接的に受けた免疫応答、例えば、抗体産生（体液性応答）、およびサイトカイン応答性細胞、例えば、マクロファージの活性化を含む。免疫応答は、獲得免疫応答を含む。獲得免疫系は、侵入生物の抗原など、外来分子構造に対して反応しうる。自然免疫系と異なり、獲得免疫系は、病原体に対して、高度に特異的である。獲得免疫はまた、長期持続性の保護ももたらしうる。獲得免疫反応は、体液性免疫反応および細胞媒介性免疫反応を含む。体液性免疫反応では、Ｂ細胞により、体液へと分泌された抗体は、病原体由来抗原に結合し、様々な機構、例えば、補体媒介性溶解を介して、病原体の消失をもたらす。細胞媒介性免疫反応では、他の細胞を破壊することが可能なＴ細胞が活性化される。例えば、疾患と関連するタンパク質が、細胞内に存在する場合、これらは、細胞内で、タンパク質分解により、ペプチドへと断片化される。次いで、特異的細胞タンパク質は、このようにして形成された抗原またはペプチドへと接合し、これらを、細胞の表面へと移送し、ここで、抗原またはペプチドは、Ｔ細胞などの分子的防御機構により提示される。細胞傷害性Ｔ細胞は、これらの抗原を認識し、これらの抗原を保有する細胞を死滅させうる。
[00168]「リガンド」とは、受容体など、別の分子に結合するか、またはこれらと複合体を形成することが可能である分子を指す場合がある。リガンドは、タンパク質、糖タンパク質、炭水化物、リポタンパク質、ホルモン、脂肪酸、リン脂質、または受容体に結合する、任意の構成要素を含みうるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、受容体は、特異的リガンドを有する。一部の実施形態では、受容体は、リガンドに広域的に結合する場合があり、この場合、受容体は、構造的構成、電荷分布、または他の任意の物理化学的特徴において、少なくとも１つの類似性を共有する、いくつかのリガンドに結合しうる。リガンドは、生体分子でありうる。リガンドは、非生体材料でありうる。例えば、リガンドは、スカベンジャー受容体ＭＡＲＣＯである、負帯電粒子に対するリガンドでありうる。例えば、リガンドは、スカベンジャー受容体ＳＲＡ１である、ＴｉＯ２に対するリガンドでありうる。本明細書で記載されるＣＦＰの文脈では、細胞外結合性ドメインは、結合性ドメインの標的としてもまた呼称される、リガンドに結合しうる。一部の実施形態では、標的は、この場合、標的細胞が、その細胞表面上において、ＣＦＰの細胞外抗原結合性ドメインが結合する標的抗原を発現させるという意味で、標的細胞である、がん細胞などの罹患細胞上で発現される抗原である。本開示では、抗（標的）結合性ドメイン、または抗（標的）結合性細胞外ドメイン、または抗（標的）ＣＦＰは、それぞれ、（標的）結合性ドメイン、または（標的）結合性細胞外ドメイン、または（標的）ＣＦＰなどの用語と、互換的に使用されることが多い。例えば、がん細胞上で発現されるＨＥＲ２は、ＣＦＰの抗ＨＥＲ２結合性細胞外ドメインが結合する抗原（リガンド）であるか；または、代替的に、ＣＦＰのＨＥＲ２結合性細胞外ドメインが結合するとも言明される、抗原（リガンド）である。
[00169]「主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）」、「ＭＨＣ分子」、または「ＭＨＣタンパク質」という用語は、抗原性ペプチドに結合し、抗原性ペプチドを、Ｔリンパ球へと提示することが可能なタンパク質を指す。このような抗原性ペプチドは、Ｔ細胞エピトープを表酢場合がある。ヒトＭＨＣはまた、ＨＬＡ複合体とも呼ばれる場合がある。したがって、「ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）」、「ＨＬＡ分子」、または「ＨＬＡタンパク質」という用語は、「主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）」、「ＭＨＣ分子」、および「ＭＨＣタンパク質」という用語と、互換的に使用される。ＨＬＡタンパク質は、ＨＬＡクラスＩと分類される場合もあり、ＨＬＡクラスＩＩと分類される場合もある。２つのＨＬＡクラスのタンパク質の構造な、極めて類似するが；これらは、全く異なる機能を有する。クラスＩのＨＬＡタンパク質は、大半の腫瘍細胞を含む、体内のほぼ全ての細胞の表面上に存在する。クラスＩのＨＬＡタンパク質は、通例、細胞内に存在する、内因性タンパク質または病原体由来する抗原をロードされ、次いで、ナイーブまたは細胞傷害性Ｔ－リンパ球（ＣＴＬ）へと提示される。ＨＬＡクラスＩＩタンパク質は、樹状細胞、Ｂ細胞、およびマクロファージを含むがこれらに限定されない、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上に存在する。ＨＬＡクラスＩＩタンパク質は、主に、外部、例えば、細胞の外部の抗原供給源からプロセシングされたペプチドを、ヘルパーＴ細胞へと提示する。
[00170]ＨＬＡクラスＩＩ系では、マクロファージおよび未成熟樹状細胞などの貪食細胞は、貪食により、実体を、その酸性酵素が、取り込まれたタンパク質を、多くの異なるペプチドへと切断するリソソーム融合するファゴソーム（ただし、Ｂ細胞は、エンドソームへの、より一般的なエンドサイトーシスを呈する）へと取り込みうる。オートファジーは、ＨＬＡクラスＩＩペプチドの、別の供給源である。最も研究が進んだ、サブクラスＩＩのＨＬＡ遺伝子は、ＨＬＡ－ＤＰＡ１、ＨＬＡ－ＤＰＢ１、ＨＬＡ－ＤＱＡ１、ＨＬＡ－ＤＱＢ１、ＨＬＡ－ＤＲＡ、およびＨＬＡ－ＤＲＢ１である。
[00171]ＨＬＡクラスＩＩ分子による、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞への、ペプチドの提示は、外来抗原に対する免疫応答をもたらす。活性化されると、ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、Ｂ細胞分化および抗体産生のほか、ＣＤ８＋ Ｔ細胞（ＣＴＬ）応答を促進しうる。ＣＤ４＋ Ｔ細胞はまた、他の免疫細胞の分化を活性化し、これらを誘導する、サイトカインおよびケモカインも分泌しうる。ＨＬＡクラスＩＩ分子は、典型的に、クラスＩペプチド結合溝より開放的なペプチド結合溝を形成するように相互作用する、α鎖と、β鎖とによるヘテロニ量体である。
[00172]ＨＬＡ対立遺伝子は、典型的に、共優性的な形で発現される。例えば、各人が、３つのクラスＩ遺伝子（ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、およびＨＬＡ－Ｃ）の各々の、２つずつの対立遺伝子を保有するので、６つの異なる種類のクラスＩＩ ＨＬＡを発現しうる。クラスＩＩ ＨＬＡ遺伝子座では、各人は、ＨＬＡ－ＤＰ遺伝子（α鎖およびβ鎖をコードする、ＤＰＡ１およびＤＰＢ１）、ＨＬＡ－ＤＱ（αおよびβ鎖についての、ＤＱＡ１およびＤＱＢ１）、１つの遺伝子である、ＨＬＡ－ＤＲα（ＤＲＡ１）、および１つまたは複数の遺伝子である、ＨＬＡ－ＤＲβ（ＤＲＢ１およびＤＲＢ３、ＤＲＢ４、またはＤＲＢ５）の対を継承する。ＨＬＡ－ＤＲＢ１は、例えば、約４００種を超える、公知の対立遺伝子を有する。これは、１つのヘテロ接合性個体が、６つまたは８つの機能的クラスＩＩ ＨＬＡ対立遺伝子：各親から、３つまたはこれを超える対立遺伝子を継承しうることを意味する。したがって、ＨＬＡ遺伝子は、高度に多型的であり；多くの異なる対立遺伝子が、集団内の異なる個体に存在する。ＨＬＡタンパク質をコードする遺伝子は、多くの可能なバリエーションを有し、各人の免疫系が、広範にわたる外来侵入物に反応することを可能とする。一部のＨＬＡ遺伝子は、それらの各々が、特定の番号を与えられた、数百に及ぶバージョン（対立遺伝子）を同定されている。一部の実施形態では、クラスＩ ＨＬＡ対立遺伝子は、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１、ＨＬＡ－Ｂ＊１４：０２、ＨＬＡ－Ａ＊２３：０１、ＨＬＡ－Ｅ＊０１：０１（非古典的）である。一部の実施形態では、クラスＩＩ ＨＬＡ対立遺伝子は、ＨＬＡ－ＤＲＢ＊０１：０１、ＨＬＡ－ＤＲＢ＊０１：０２、ＨＬＡ－ＤＲＢ＊１１：０１、ＨＬＡ－ＤＲＢ＊１５：０１、およびＨＬＡ－ＤＲＢ＊０７：０１である。
[00173]「骨髄細胞」とは、広く、造血細胞系のうちの、骨髄系統の細胞を指し、例えば、リンパ球系統を除外する場合がある。骨髄細胞は、例えば、顆粒球系統および単球系統の細胞を含む。骨髄細胞は、単球、樹状細胞、組織マクロファージ、および顆粒球を含む、免疫系の、主要な細胞コンパートメントである。骨髄細胞の細胞個体発生、活性化、分化、および組織特異的機能についてのモデルは、過去数年間にわたり再検討され、驚くべき結果がもたらされている。しかし、ホメオスタシスおよび疾患の両方における、それらの巨大な可塑性および異種性は、理解からほど遠い。骨髄細胞は、貪食、およびＴ細胞を活性化するそれらの能力を含む、多くの機能を有するが、治療的使用のための、これらの機能の利用については、捉えどころがないままである。こうして、Ｔ細胞悪性腫瘍を含むがこれらに限定されない、改善された治療剤の開発に向けて、他の細胞型を使用するための、新規の方途が求められている。
[00174]骨髄細胞は、骨髄中の造血幹細胞に由来する、共通の前駆細胞から分化される。骨髄細胞系統への拘束は、別個の転写因子の活性化により統御される場合があり、したがって、骨髄細胞は、細胞外刺激および細胞内刺激に基づき、末端の細胞型へと、さらに分化する能力として記載されうるレベルの可塑性を有する細胞として特徴付けられうる。骨髄細胞は、それらの表面上における、多様なケモカイン受容体を介して、局所組織へと、急速に動員されうる。骨髄細胞は、多様なサイトカインおよびケモカインに対して応答性である。
[00175]骨髄細胞は、例えば、骨髄内で、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｆｌｔ３Ｌ、ＣＣＬ２、ＶＥＧＦ、およびＳ１００Ａ８／９など、１つまたは複数のサイトカインおよびケモカインの影響下において、造血幹細胞由来する細胞でありうる。一部の実施形態では、骨髄細胞は、前駆細胞である。一部の実施形態では、骨髄細胞は、共通の骨髄前駆細胞、または顆粒球前駆細胞、骨髄芽細胞、または単球－樹状細胞前駆細胞、またはこれらの組合せの特徴を有する細胞でありうる。骨髄は、顆粒球もしくは単球、またはこれらの前駆細胞を含みうる。骨髄は、未成熟顆粒球、未成熟単球、未成熟マクロファージ、未成熟好中球、および未成熟樹状細胞を含みうる。骨髄は、単球または前単球性細胞または単球前駆体を含みうる。場合によって、本明細書で使用される骨髄細胞は、Ｍ０表現型、Ｍ１表現型、またはＭ２表現型を有する単球を指す場合がある。骨髄は、樹状細胞（ＤＣ）、成熟ＤＣ、単球由来ＤＣ、形質細胞様ＤＣ、前樹状細胞、またはＤＣ前駆体を含みうる。骨髄は、成熟好中球、好中球前駆体、または多形核球（ＰＭＮ）でありうる、好中球を含みうる。骨髄は、マクロファージ、単球由来マクロファージ、組織マクロファージ、Ｍ０表現型、Ｍ１表現型、またはＭ２表現型のマクロファージを含みうる。単球またはマクロファージは、極性化を呈する。本明細書で使用される、「極性化」とは、マクロファージが、生理学的状態と称されることが多い、特異的な微小環境刺激およびシグナルに応答して、顕著に異なる機能的表現型を呈する過程を指す場合がある。場合によって、マクロファージは、１つの極性化状態から、別の極性化状態へと移行しうる。例えば、マクロファージは、古典的活性化マクロファージ（Ｍ１マクロファージ）、および代替活性化マクロファージ（Ｍ２マクロファージ）へと極性化されうる。Ｍ２マクロファージは、亜類型である、Ｍ２ａ、Ｍ２ｂ、Ｍ２ｃ、およびＭ２ｄへと分けられる。これらのマクロファージは、それらの細胞表面マーカー、分泌されるサイトカイン、および生物学的機能が異なる。Ｍ１マクロファージは、典型的に、細胞が、表面上に、ＴＬＲ－２、ＴＬＲ－４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ｉＮＯＳ、およびＭＨＣ－ＩＩを発現させる表現型により特徴付けられる。これらの細胞は、多様なサイトカインおよびケモカイン、例えば、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＣＸＣＬ９、およびＣＸＣＬ１０を放出し、典型的に、Ｍ１遺伝子の発現を調節する、ＮＦ－ｋＢ、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ５、ＩＲＦ３、およびＩＲＦ５などの転写因子の活性化を呈する。ＮＦ－κＢおよびＳＴＡＴ１は、Ｍ１マクロファージの極性化に関与する、２つの主要な経路であると考えられる。Ｍ１表現型は、マクロファージの殺菌機能および腫瘍殺滅機能と関連し、高度の貪食性機能および炎症性機能を呈する。他方、免疫抑制性環境下に置かれた、腫瘍関連マクロファージは、一般に、Ｍ２極性化の程度が大きい。骨髄は、腫瘍浸潤単球（ＴＩＭ）を含みうる。骨髄は、腫瘍関連単球（ＴＡＭ）を含みうる。骨髄は、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）を含みうる。骨髄は、組織内常在マクロファージを含みうる。骨髄は、腫瘍関連ＤＣ（ＴＡＤＣ）を含みうる。したがって、骨髄細胞は、１つまたは複数の細胞表面マーカー、例えば、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ３８、ＣＣＲ５、ＣＤ６６、Ｌｏｘ－１、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ６４、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、ＣＣＲ２、ＣＣＲ５、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ８３、ＣＤ１４１、ＣＤ２０９、ＭＨＣ－ＩＩ、ＣＤ１２３、ＣＤ３０３、ＣＤ３０４、ＳＩＧＬＥＣファミリータンパク質、およびＣＬＥＣファミリータンパク質を発現しうる。場合によって、骨髄細胞は、細胞表面マーカー、例えば、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ６６、Ｌｏｘ－１、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ６４、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、ＣＣＲ２、ＣＣＲ５、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ８３、ＣＤ１４１、ＣＤ２０９、ＭＨＣ－ＩＩ、ＣＤ１２３、ＣＤ３０３、ＣＤ３０４、またはこれらの組合せのうちの１つまたは複数の、高度の発現または低度の発現により特徴付けられうる。一実施形態では、本明細書で記載される方法を使用して、マクロファージのＭ１極性化を活性化することが所望される。
[00176]「貪食」は、「飲作用」と互換的に使用され、細胞が、がん細胞または感染細胞などの粒子を飲み込む過程を指す場合がある。この過程は、粒子を含有する、内部コンパートメント（ファゴソーム）をもたらしうる。この過程は、がん細胞または感染細胞などの粒子を取り込み、かつ／またはこれらを、体内から除去するのに使用されうる。貪食受容体は、貪食過程に関与しうる。貪食過程は、免疫応答および抗原提示と緊密に連関しうる。外因性抗原のプロセシングは、一部の種類のエンドサイトーシスイベントによる、それらの、プロフェッショナル抗原提示細胞への取込みを後続させる。貪食はまた、抗原提示も容易としうる。例えば、貪食された細胞または病原体に由来する抗原であって、がん抗原を含む抗原は、プロセシングされ、ＡＰＣの細胞表面上に提示されうる。
[00177]「ポリペプチド」とは、糖タンパク質、リポタンパク質、細胞タンパク質、または膜タンパク質など、ペプチド結合を介して、一緒に連結されたアミノ酸を含有する分子を指す場合がある。ポリペプチドは、タンパク質の、１つまたは複数のサブユニットを含みうる。ポリペプチドは、組換え核酸によりコードされうる。一部の実施形態では、ポリペプチドは、単一のアミノ酸鎖内に、スペーサー、リンカーまたはペプチド切断配列により隔てられうる、１つを超えるペプチド配列を含みうる。ポリペプチドは、融合ポリペプチドでありうる。ポリペプチドは、１つまたは複数のドメイン、モジュール、または部分を含みうる。
[00178]「受容体」とは、細胞外シグナルを、細胞へと伝達するポリペプチドなど、シグナルを伝達するポリペプチドから構成される化学構造を指す場合がある。受容体は、細胞内の情報、細胞または生物の形成を伝えるのに用いられる。受容体は、少なくとも１つの受容体ユニットを含み、２つまたはこれを超える受容体ユニットを含有する場合があり、この場合、各受容体ユニットは、タンパク質分子、例えば、糖タンパク質分子を含む。受容体は、リガンドに結合し、リガンドと複合体を形成しうる構造を含有しうる。シグナル伝達情報は、細胞の表面上のリガンドへの結合に続く、受容体のコンフォメーション変化により伝えられる場合がある。
[00179]「抗体」という用語は、免疫グロブリンとして一般に公知である、タンパク質のクラスであって、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む）、ＩｇＡ（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、およびＩｇＹを含むがこれらに限定されないタンパク質のクラスを指す。「抗体」という用語は、全長抗体、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、およびこれらの抗原結合性断片を含むがこれらに限定されない。抗原結合性抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ（ＶＨおよびＣＨ１からなる）、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、ジスルフィド連結された可変断片（ｄｓＦｖ）、およびＶＬドメインおよび／またはＶＨドメインを含む断片を含むがこれらに限定されない。抗体は、任意の動物に由来しうる。単鎖抗体を含む、抗原結合性抗体断片は、単独における可変領域（複数可）を含む場合もあり、ヒンジ領域、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインのうちの１つまたは複数と組み合わせられた可変領域（複数可）を含む場合もある。また、可変領域（複数可）と、ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインとの、任意の組合せも含まれる。抗体は、例えば、ＨＬＡ関連ポリペプチドまたはＨＬＡ－ペプチド複合体に特異的に結合する、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ならびにヒトモノクローナル抗体およびヒトポリクローナル抗体でありうる。
[00180]「組換え核酸」という用語は、組換え手段により調製されるか、発現されるか、創出されるか、または分離された核酸を指す。組換え核酸は、自然発生ではないヌクレオチド配列を含有しうる。組換え核酸は、実験室で合成されうる。組換え核酸は、組換えＤＮＡ技術、例えば、酵素制限消化、ライゲーション、およびＤＮＡクローニングなど、ＤＮＡの酵素修飾を使用することにより調製されうる。組換え核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、これらの類似体、またはこれらの組合せでありうる。組換えＤＮＡは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を作出することなどのために、ｅｘ ｖｉｖｏで転写される場合もあり、ｉｎ ｖｉｔｒｏで転写される場合もある。組換えｍＲＮＡは、分離され、精製され、細胞にトランスフェクトするのに使用されうる。組換え核酸は、タンパク質またはポリペプチドをコードしうる。本明細書を通して、デオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）、リボヌクレオチド（ＲＮＡ）を含みうる核酸配列が記載されるか、または、一部の実施形態では、修飾デオキシリボヌクレオチド、または修飾リボヌクレオチドが記載される。例えば、修飾ヌクレオチドは、５－ヒドロキシメチルシトシン（５ｈｍＣ）、５－ホルミルシトシン（５ｆＣ）、７－メチルグアノシン、シュードウリジン、ジヒドロウリジンなどでありうる。当業者は、困難を伴わずに、所与のポリヌクレオチド配列から、ＲＮＡ配列、例えば、ｍＲＮＡ配列を決定することができる。配列は、コドン最適化される場合がある。
[00181]核酸を、細胞へと導入するか、または組み込む過程は、形質転換、トランスフェクション、または形質導入を介しうる。形質転換とは、細菌細胞による、外来核酸の取込みの過程である。この工程は、プラスミドＤＮＡの繁殖、タンパク質の作製、および他の適用に適合される。形質転換は、細胞外ＤＮＡを、環境から取り込む、コンピテントの細菌細胞へと、組換えプラスミドＤＮＡを導入する。一部の細菌種は、ある特定の環境条件下で、天然でコンピテントであるが、コンピテンスは、実験室状況において、人工的に誘導される。トランスフェクションとは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、または抗体などの低分子の、真核細胞への導入である。トランスフェクションはまた、バクテリオファージの、細菌細胞への導入も指す場合がある。「形質導入」が、多くの場合、組換えウイルスベクター粒子の、標的細胞への導入について記載するのに使用されるのに対し、「感染」とは、ヒトまたは動物への、野生型ウイルスの天然の感染を指す。
[00182]「ベクター」という用語は、宿主細胞内の自律的複製が可能であり、核酸分子のクローニングを可能とする核酸分子を指す場合がある。当業者公知の通り、ベクターは、プラスミド、コスミド、ファージミド、ウイルスベクター、ファージベクター、酵母ベクター、哺乳動物ベクターなどを含むがこれらに限定されない。例えば、外因性遺伝子を形質転換するためのベクターは、プラスミドでありうる。ある特定の実施形態では、ベクターは、複製起点、ならびに宿主細胞内の核酸配列の複製および／または維持に必要な他のエレメントを含有する核酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供されるベクターまたはプラスミドは、発現ベクターである。発現ベクターは、それらが作動的に連結された、遺伝子および／または核酸配列の発現を方向付けることが可能である。一部の実施形態では、発現ベクターまたはプラスミドは、環状二本鎖ＤＮＡ分子の形態にある。ベクターまたはプラスミドは、宿主細胞のゲノムへと組み込まれる場合もあり、組み込まれない場合もある。一部の実施形態では、プラスミドの核酸配列は、導入の後で、宿主細胞のゲノム内または染色体内に組み込まれない。例えば、プラスミドは、宿主細胞内における核酸配列、例えば、プラスミドにより保有される遺伝子またはオープンリーディングフレームの一過性発現または安定的発現のためのエレメントを含みうる。一部の実施形態では、ベクターは、一過性発現ベクターである。一部の実施形態では、ベクターは、宿主細胞内で自律的に複製される、安定発現ベクターである。一部の実施形態では、プラスミドの核酸配列は、宿主細胞への導入時に、宿主細胞のゲノムまたは染色体へと組み込まれる。本明細書で開示される方法において使用されうる発現ベクターは、プラスミド、エピソーム、細菌人工染色体、酵母人工染色体、バクテリオファージ、またはウイルスベクターを含むがこれらに限定されない。ベクターは、ＤＮＡベクターの場合もあり、ＲＮＡベクターの場合もある。一部の実施形態では、本明細書で提供されるベクターは、宿主細胞への導入時に、宿主細胞のゲノムへとの統合（例えば、逆転写を介する）が可能である、ＲＮＡベクター、例えば、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターである。当業者により公知である、同等の機能を果たす、他の形態の発現ベクター、例えば、自己複製型染色体外ベクター、または宿主ゲノムへの統合が可能であるベクターもまた、使用されうる。例示的なベクターは、それらが連結された核酸の、自律的複製および／または自律的発現が可能であるベクターである。
[00183]一部の実施形態では、核酸は、ナノ粒子の形態で、生体系へと送達されうる。本明細書で開示される核酸配列は、適切なナノ粒子、例えば、リポソーム、脂質ナノ粒子、またはポリマーナノ粒子を介して、ｉｎ ｖｉｖｏ送達されうる。脂質ナノ粒子は、極性脂質を含みうる。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質および非カチオン性脂質を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、中性脂質を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、ＰＥＧ化脂質を含む。
[00184]代替的に、一部の実施形態では、核酸は、細胞療法の準備のために、ｅｘ ｖｉｖｏにおいて、生細胞に電気穿孔される場合があり、この場合、細胞は、骨髄細胞である。
[00185]融合タンパク質に言及して使用される、「スペーサー」または「リンカー」という用語は、融合タンパク質の、他の２つのペプチド配列を接続するペプチド配列を指す。一部の実施形態では、リンカーまたはスペーサーは、タンパク質もしくはＲＮＡ配列を接続するか、またはタンパク質もしくはＲＮＡ配列の間の、何らかの最小限の距離または他の空間関係を保存すること以外に、具体的生体活性を有さない。一部の実施形態では、スペーサーの構成要素であるアミノ酸は、分子のフォールディング、可撓性、正味の電荷、または疎水性など、一部の分子特性に影響を与えるように選択されうる。本開示の実施形態における使用に適するリンカーは、当業者に周知であり、直鎖状または分枝鎖状である炭素リンカー、複素環式炭素リンカー、またはペプチドリンカーを含むがこれらに限定されない。一部の実施形態では、リンカーは、２つまたはこれを超えるポリペプチド、例えば、２つの抗原性ペプチドを、各抗原性ペプチドが、適正にフォールディングすることを確保するのに十分な距離だけ隔てるのに使用される。例示的なペプチドリンカー配列は、可撓性の伸展型コンフォメーションを取り、秩序化二次構造の発生への傾向を呈さない。可撓性のリンカータンパク質領域内のアミノ酸は、Ｇｌｙ、Ａｓｎ、およびＳｅｒ、またはＧｌｙ、Ａｓｎ、およびＳｅｒを含有するアミノ酸配列の、任意の並べ替えを含みうる。ＴｈｒおよびＡｌａなど、他の中性近傍のアミノ酸もまた、リンカー配列内で使用されうる。
[00186]「～を処置する」、「処置された」、「～を処置すること」、「処置」などの用語は、障害および／またはこれと関連する症状（例えば、新生物もしくは腫瘍、または感染作用物質、または自己免疫疾患）を低減、防止、または改善することを指すように意図される。「～を処置すること」とは、疾患（例えば、がん、または感染作用物質による感染、または自己免疫疾患）の発症、または発症の疑いの後における対象への、治療の投与を指す場合がある。「～を処置すること」は、疾患と関連する任意の症状もしくは他の疾病の影響、および／または治療と関連する副作用の発生もしくは再発の頻度、または重症度を低下させることを指す場合がある、「～を緩和すること」の概念「～を処置すること」という用語はまた、も包摂する。患者における、疾患または障害の重症度を軽減すること、例えば、疾患を伴う患者の寿命を伸ばすか、もしくは生存性を延長すること、またはその再発を遅延させること、例えば、疾患を患ったことがある患者における寛解期間を延ばすことを指す、「～を管理すること」の概念を含む。障害または状態の処置が、障害、状態、またはこれと関連する症状が、完全に消失されることが、除外されるわけではないが、これを要求するわけではないことが察知される。本明細書で使用される、「～を防止する」、「～を防止すること」、「防止」という用語、およびこれらの文法的同等物は、薬剤または化合物の投与が始まる時点において、このような症状を発症していない対象において、疾患または状態と関連する症状の発症を回避するか、またはこれを遅延させることを指す場合がある。ある特定の実施形態では、本明細書で記載される、対象または患者の処置は、薬物、代謝物、防止的成分、核酸、ペプチド、またはタンパク質などの治療用組成物であって、薬物、代謝物、または防止的成分をコードするか、または他の形で形成する、治療用組成物の投与を含む。一部の実施形態では、処置は、細胞または細胞集団を、それを必要とする対象へと投与するステップを含む。一部の実施形態では、処置は、対象へと、本明細書で記載される、操作された細胞のうちの１つまたは複数、例えば、１つまたは複数の操作された貪食細胞などの骨髄細胞を投与するステップを含む。処置は、病理学的な疾患、状態、または症候群の場合もあり、潜在的疾患、状態、または症候群の場合もある、疾患または状態または症候群の処置を含む。場合によって、本明細書で使用される処置は、治療用ワクチンを投与するステップを含みうる。一部の実施形態では、操作された貪食細胞が、患者または対象へと投与される。一部の実施形態では、ヒト対象へと投与される細胞は、免疫原性の低減を結果としてもたらす。例えば、操作された貪食細胞は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）またはフラトリサイド効果をもたらさないか、またはこれらの低減をもたらしうる。一部の実施形態では、ヒト対象へと投与される操作された細胞は、対象に対して、免疫適合性である（すなわち、対象において、天然で発現されるＨＬＡ亜型とのマッチングを有する）。対象特異的ＨＬＡ対立遺伝子、または対象のＨＬＡ遺伝子型は、当技術分野で公知の任意の方法により決定されうる。例示的実施形態では、方法は、遺伝子多型を決定するステップであって、遺伝子多型を有する対立遺伝子変異体を含む、遺伝子参照セットに照らした、データセットのシーケンシングから抽出されるリードのアライメントを生成するステップ、アライメントにおいて、各対立遺伝子変異体についての、第１の事後確率または事後確率から導出されるスコアを決定するステップ、第１の事後確率または事後確率から導出されるスコアが最大である対立遺伝子変異体を、第１の対立遺伝子変異体として同定するステップ、第１の対立遺伝子変異体、および１つまたは複数の他の対立遺伝子変異体によりアライメントされた、１つまたは複数の重複リードを同定するステップ、重み付け係数を使用して、１つまたは複数の他の対立遺伝子変異体についての、第２の事後確率または事後確率から導出されるスコアを決定するステップ、第１の対立遺伝子変異体および第２の対立遺伝子変異体が、遺伝子多型の遺伝子型を規定する場合に、第２の事後確率または事後確率から導出されるスコアが最大である対立遺伝子変異体を選択することにより、第２の対立遺伝子変異体を同定するステップ、ならびに第１の対立遺伝子変異体および第２の対立遺伝子変異体についてのアウトプットを与えるステップを含みうるステップを含む。
[00187]「断片」とは、タンパク質または核酸の部分を指す場合がある。一部の実施形態では、断片は、参照タンパク質または参照核酸の生体活性のうちの、少なくとも５０％、７５％、または８０％、または９０％、９５％、なおまたは９９％を保持する。
[00188]「単離された」、「精製された」、「生物学的に純粋である」という用語、およびこれらの文法的同等物は、その天然状態で見出される通り、通常、これに随伴する構成要素が、多様な程度で非含有である素材を指す。「～を単離する」とは、元の供給源または環境からの単離の程度を表す。「～を精製する」とは、単離より高度である、単離の程度を表す。「精製された」タンパク質または「生物学的に純粋である」タンパク質は、不純物が、タンパク質の生物学的特性に、実質的な影響を及ぼさないか、または他の有害な帰結を引き起こさないように、他の素材が、十分に非含有である。すなわち、本開示の核酸またはペプチドは、組換えＤＮＡ法により作製される場合に、細胞素材、ウイルス素材、もしくは培養培地が、実質的に非含有であるか、または化学合成される場合に、化学的前駆体もしくは他の化学物質が、実質的に非含有である場合に、精製されている。純度および均一性は、典型的に、分析化学法、例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーを使用して決定される。「精製された」という用語は、核酸またはタンパク質が、電気泳動ゲル内で、本質的に１つのバンドをもたらすことを表す場合がある。修飾、例えば、リン酸化またはグリコシル化にかけられうるタンパク質について、異なる修飾は、個別に精製されうる、異なる単離タンパク質をもたらしうる。
[00189]「新生物」または「がん」という用語は、不適切に高レベルの細胞分裂、不適切に低レベルのアポトーシス、またはこれらの両方により引き起こされるか、またはこれらの結果としてもたらされる、任意の疾患を指す。神経膠芽腫は、新生物またはがんの、１つの非限定例である。「がん」または「腫瘍」または「過剰増殖性障害」という用語は、コントロール不能の増殖、不死性、転移の可能性、急速な増殖、および増殖率、ならびにある特定の特徴的な形状特色など、がん原因細胞に典型的な特徴を保有する細胞の存在を指す。がん細胞は、腫瘍形態であることが多いが、このような細胞は、動物において、単独で存在する場合もあり、白血病細胞など、非腫瘍原性のがん細胞の場合もある。
[00190]「ワクチン」という用語とは、疾患（例えば、新生物／腫瘍／感染作用物質／自己免疫疾患）の予防および／または処置のために、免疫を発生させるための組成物を意味するものとして理解されるべきである。したがって、本明細書で使用されるワクチンとは、組換え核酸、または組換え核酸を含み、これを発現する細胞を含み、ワクチン接種により、特異的防御および保護物質を作出するために、ヒトまたは動物において使用されることが意図される薬剤である。「ワクチン組成物」は、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤を含みうる。本開示の態様は、貪食細胞ベースワクチンの調製における、技術の使用に関する。
[00191]「薬学的に許容される」という用語とは、ヒトを含む動物における使用について、米国連邦政府もしくは米国州政府の規制機関により承認されているか、もしくは承認可能であるか、または米国薬局方もしくは他の一般に認識された薬局方に収載されていることを指す。「薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤」とは、薬剤と一緒に対象に投与することが可能であり、その薬理学的活性を破壊せず、治療量の薬剤を送達するのに十分な用量で投与された場合に、非毒性である、賦形剤、担体、または希釈剤を指す。
[00192]本開示の方法において有用な核酸分子は、活性を有するまたはポリペプチドをコードする任意の核酸分子を含むがこれらに限定されない。内因性配列に対する実質的な同一性を有するポリヌクレオチドは、典型的に、二本鎖核酸分子のうちの、少なくとも一方の鎖とハイブリダイズすることが可能である。「ハイブリダイズする」とは、多様な厳密性の条件下で、核酸分子が、相補的なポリヌクレオチド配列、またはそれらの部分の間で対合して、二本鎖分子を形成する場合を指す（例えば、Ｗａｈｌ，Ｇ．Ｍ．およびＳ Ｌ．Ｂｅｒｇｅｒ（１９８７）、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１５２：３９９；Ｋｉｍｍｅｌ，Ａ．Ｒ．（１９８７）、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１５２：５０７を参照されたい）。例えば、厳密な塩濃度は、通例、約７５０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび７５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、約５００ｍＭ未満のＮａＣｌおよび５０ｍＭのクエン酸三ナトリウム、または約２５０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび２５ｍＭのクエン酸三ナトリウムでありうる。低厳密性のハイブリダイゼーションが、有機溶媒、例えば、ホルムアミドの非存在下で得られうるのに対し、高厳密性のハイブリダイゼーションは、少なくとも約３５％のホルムアミドの存在下で、または少なくとも約５０％のホルムアミドの存在下で得られうる。厳密な温度条件は、通例、少なくとも約３０℃、少なくとも約３７℃、または少なくとも約４２℃の温度を含みうる。当業者には、ハイブリダイゼーション時間、洗浄剤、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の濃度、および担体ＤＮＡの組入れまたは除外など、さらなるパラメータの変動も周知である。必要に応じて、これらの多様な条件を組み合わせることにより、多様なレベルの厳密性が達せられる。例示的実施形態では、ハイブリダイゼーションは、７５０ｍＭのＮａＣｌ、７５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および１％のＳＤＳ中、３０℃で生じうる。別の例示的実施形態では、ハイブリダイゼーションは、５００ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１％のＳＤＳ、３５％のホルムアミド、および１００μｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）中、３７℃で生じうる。別の例示的実施形態では、ハイブリダイゼーションは、２５０ｍＭのＮａＣｌ、２５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１％のＳＤＳ、５０％のホルムアミド、および２００μｇ／ｍｌのｓｓＤＮＡ中、４２℃で生じうる。当業者には、これらの条件における、有用な変動がたやすく明らかであろう。大半の適用では、ハイブリダイゼーションに後続する洗浄ステップもまた、厳密性が変動しうる。洗浄の厳密性条件は、塩濃度および温度により規定されうる。上記の通り、洗浄の厳密性は、塩濃度を減少させることにより増大される場合もあり、温度を上昇させることにより増大される場合もある。例えば、洗浄ステップのための厳密な塩濃度は、約３０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび３ｍＭのクエン酸三ナトリウムの場合もあり、約１５ｍＭ未満のＮａＣｌおよび１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウムの場合もある。洗浄ステップのための厳密な温度条件は、少なくとも約２５℃、少なくとも約４２℃、または少なくとも約６８℃の温度を含みうる。例示的実施形態では、洗浄ステップは、３０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％のＳＤＳ中、２５℃で生じうる。他の例示的実施形態では、洗浄ステップは、１５ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％のＳＤＳ中、４２℃で生じうる。別の例示的実施形態では、洗浄ステップは、１５ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％のＳＤＳ中、６８℃で生じるであろう。当業者には、これらの条件における、さらなる変動がたやすく明らかであろう。当業者には、ハイブリダイゼーション法が周知であり、例えば、ＢｅｎｔｏｎおよびＤａｖｉｓ（Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９６：１８０、１９７７）；ＧｒｕｎｓｔｅｉｎおよびＨｏｇｎｅｓｓ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、ＵＳＡ、７２：３９６１、１９７５）；Ａｕｓｕｂｅｌら（「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２００１）；ＢｅｒｇｅｒおよびＫｉｍｍｅｌ（「Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、１９８７、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）；ならびにＳａｍｂｒｏｏｋら、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋにおいて記載されている。
[00193]「実質的に相同な」とは、参照アミノ酸配列（例えば、本明細書で記載されるアミノ酸配列のうちのいずれか１つ）または参照核酸配列（例えば、本明細書で記載される核酸配列のうちのいずれか１つ）に対する少なくとも５０％の同一性を提示する、ポリペプチドまたは核酸分子を指す。このような配列は、アミノ酸レベルまたは核酸レベルにおいて、比較のために使用される配列と少なくとも６０％、８０％、もしくは８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、なおもしくは９９％、またはこれを超えて同一でありうる。配列相同性は、典型的に、配列解析ソフトウェア（例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ、１７１０ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｖｅｎｕｅ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．５３７０５、ＢＬＡＳＴプログラム、ＢＥＳＴＦＩＴプログラム、ＧＡＰプログラム、またはＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラム）を使用して測定される。このようなソフトウェアは、相同性の程度を、多様な置換、欠失、および／または他の修飾へと割り当てることにより、同一な配列または同様の配列をマッチさせる。保存的置換は、典型的に、以下の群：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン；セリン、トレオニン；リシン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシン内に置換を含む。同一性の程度を決定する、例示的手法では、ＢＬＡＳＴプログラムが使用される場合があり、ｅ－３～ｅ－ｍの間の確率スコアが、近縁配列を指し示しうる。「参照」とは、比較の基準である。それぞれの配列内の、特異的位置または残基の番号付けは、特定のタンパク質、および使用される番号付けスキームに依存することが理解されるであろう。番号付けは、例えば、成熟タンパク質の前駆体と、成熟タンパク質自体とで異なる場合があり、種間の配列の差違は、番号付けに影響を及ぼしうる。当業者は、当技術分野で周知の方法により、例えば、参照配列に照らした配列アライメント、および相同な残基の決定により、任意の相同なタンパク質内、およびそれぞれをコードする核酸内において、それぞれの残基を同定することが可能であろう。
[00194]「対象」という用語または「患者」とは、処置、観察、または実験を目的とする、動物（例えば、ヒト）などの生物を指す。例だけを目的として述べると、対象は、非ヒト霊長動物、ネズミ科動物、ウシ科動物、ウマ科動物、イヌ科動物、ヒツジ科動物、またはネコ科動物など、ヒトまたは非ヒト哺乳動物を含むがこれらに限定されない哺乳動物を含むがこれらに限定されない。
[00195]「治療効果」という用語とは、障害（例えば、新生物、腫瘍、または感染作用物質による感染、または自己免疫性疾患）またはその関連病態の症状のうちの１つまたは複数に対するある程度の緩和を指す。一方で、「治療効果」は、治療用組成物の投与後における、疾患の症状の軽減、例えば、腫瘍塊の、１０％、２０％、３０％などの低減を指し示す場合がある。別の実施形態では、「治療効果」は、１つもしくは複数の症状の部分寛解もしくは完全寛解、または疾患の改善に関する場合がある。本明細書で使用される、「治療有効量」とは、単回投与用量または複数回投与用量における、細胞または対象への投与時に、このような処置の非存在下で予測される場合を越えて、このような障害を伴う患者の生存性を延長するか、障害の１つもしくは複数の徴候もしくは症状を軽減するか、障害を防止するか、または遅延させるのに有効である薬剤の量を指す。「治療有効量」は、治療効果を達成するのに要求される量を定量することが意図される。医療技術分野における当業者である主治医または獣医は、要求される、医薬組成物の「治療有効量」（例えば、ＥＤ５０）を、たやすく決定し、これを処方することができる。
[00196]本明細書では、標的抗原に特異的に結合するようにデザインされる、操作された骨髄細胞（好中球、単球、骨髄樹状細胞（ｍＤＣｓ）、マスト細胞、およびマクロファージを含むがこれらに限定されない）が提供される。標的抗原は、感染細胞、損傷細胞、悪性細胞、白血病細胞、または腫瘍細胞など、標的細胞上のみで発現されうる。操作された骨髄細胞は、標的細胞を、直接的に（例えば、貪食により）攻撃し、これを死滅させる場合もあり、かつ／または間接的に（例えば、Ｔ細胞を活性化することにより）攻撃し、これを死滅させる場合もある。一部の実施形態では、標的細胞は、がん細胞である。
[00197]がんは、本開示において、詳細に記載される、１つの例示的実施形態であるが、本明細書で記載される方法および技術は、体内の感染細胞または他の形で罹患した細胞の標的化において有用であることが想定される。同様に、本明細書では、操作された細胞を使用する、治療用組成物およびワクチン組成物について記載される。
[00198]骨髄エフェクター細胞は、ヒト生体試料から分離され、このような細胞を操作する方法を使用して、治療目的の細胞を調製するように、ｅｘ ｖｉｖｏにおいて改変されるが、改変が、これらの細胞の可塑性を変更しないように改変された骨髄細胞から作出されうる。単球系統の細胞は、貪食性であり、有効な抗原提示細胞である。一態様では、本発明は、操作された骨髄細胞が、がんを含む、多数の疾患の処置において、有効性が大きな治療モダリティーでありうるという、重要な知見に根ざす。骨髄細胞は、骨髄細胞の免疫機能を増強する、キメラ抗原受容体を発現させるように操作される場合があり、この場合、細胞は、高度に貪食性であり、体内の罹患細胞または感染細胞を攻撃し、死滅させうる。キメラ抗原受容体は、（ａ）高度に標的特異的であり、標的抗原に結合するように特異的に方向付けられており、細胞外抗原結合性ドメインを有し、（ｂ）骨髄細胞を活性化して、貪食細胞表現型の活性化を達するように高度に特殊化された細胞内ドメインを有するように、本明細書で記載される通りにデザインされ、特異的に改変された、組換え構築物である。例えば、高度に特殊化された細胞内ドメインは、受容体の細胞外領域の、標的への結合による活性化時に、細胞の内部で、細胞内インターフェロンシグナル伝達カスケード、および転写因子を活性化する、すなわち、転写因子であるＩＲＦ（ＩＦＮ調節因子）の活性化を方向付けるシグナル伝達キューを発生させうる、キメラ受容体を作出するようにデザインされる。加えて、本明細書で記載される方法および組成物はまた、組換え核酸が、ｉｎ ｖｉｖｏの骨髄細胞内で特異的に発現され、これにより、治療能を有する活性化骨髄細胞を発生させるように、キメラ抗原受容体をコードする組換え核酸が、それを必要とする対象において、局所投与または全身投与される、遺伝子治療においても有用である。一部の実施形態では、核酸は、ｍＲＮＡである。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＬＮＰにより送達される。
[00199]貪食細胞は、免疫系の天然前哨であり、身体防御の最前線を形成する。貪食細胞は、病原体、感染細胞、異物、またはがん性細胞を飲み込み、これを、身体から除去する。大半の潜在的病原体は、例えば、目覚ましい感染または疾患を引き起こす前に、貪食系により、急速に中和される。これは、クラスリンでコーティングされたピット系を介する、受容体媒介性取込みであるピノサイトーシス、特に、膜の波打ちおよび貪食の帰結としての、マクロピノサイトーシスを伴いうる。こうして、貪食細胞は、様々な非自己（および自己）要素により活性化され、それらの「標的」の認識において、あるレベルの可塑性を呈する。大半の貪食細胞は、それらの表面上において、パターン認識分子であり、広範にわたる外来粒子のほか、死細胞、細胞破砕物、および体内の望ましくない粒子に結合しうる、スカベンジャー受容体を発現する。一態様では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする組換え核酸は、細胞内で発現されうる。ＣＡＲは、特異的腫瘍細胞を攻撃するように、様々な形でデザインされる場合があり、ＣＡＲを発現する骨髄エフェクター細胞は、腫瘍細胞を貪食し、死滅させるように活性化されうる。ＣＡＲは、標的への係合に、特異的に応答して活性化される、貪食性受容体を作出するようにデザインされる場合があり、マクロファージの貪食可能性は、受容体の、特異的に操作された細胞内ドメインにより増強される。本明細書で記載される骨髄細胞のためのＣＡＲプラットフォームは、体内への投与時に、または骨髄細胞が、ＣＡＲを介して、その標的と係合する前の、任意の時点に、骨髄細胞内で、トニックシグナル伝達が検出されないようにデザインされる。これは、ｅｘ ｖｉｖｏにおいて調べられることが多い。同時に、ＣＡＲを発現する骨髄細胞は、適切な刺激の存在下で、Ｍ０表現型、Ｍ１表現型、またはＭ２表現型へとさらに分化することができ、少なくとも投与時に分化するように、細胞性可塑性を保持しうる。加えて、ＣＡＲ発現骨髄エフェクター細胞は、リンパ節へと遊走し、抗原を、リンパ節内のナイーブＴ細胞へと交差提示し、これにより、適応応答を活性化しうる。
[00200]一部の実施形態では、本明細書では、生体試料から分離され、組換えタンパク質を発現させるように、ｅｘ ｖｉｖｏにおいて操作され、組成物の骨髄細胞が、ｉｎ ｖｉｖｏにおける免疫活性化の誘導において有効である、「エフェクター」骨髄細胞となるように、医薬組成物へと製剤化される骨髄細胞を作出するための組成物および方法が開示される。一部の実施形態では、組成物の骨髄細胞は、細胞が、標的細胞の攻撃および破壊において有効な骨髄細胞である、「ＡＴＡＫ」骨髄細胞と称される。本明細書で開示されるＡＴＡＫ骨髄細胞は、例えば、キメラ受容体、例えば、免疫細胞内のインターフェロン誘導性タンパク質に由来する、少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体を発現する、操作された骨髄細胞組換えタンパク質である。一部の実施形態では、本明細書で記載される方法および組成物は、操作された骨髄細胞が、エフェクター表現型を呈するようにすることを対象とする。一部の実施形態では、操作された骨髄細胞、例えば、単球は、Ｍ０表現型またはＭ１表現型の単球であり、骨髄細胞内で発現されたキメラ抗原受容体の活性化は、細胞が、Ｍ１表現型を呈するようにする。操作された細胞により呈されたＭ１表現型は、腫瘍細胞へと標的化されるようにデザインされた場合の細胞が、高度に腫瘍殺滅性となるようにする。
[00201]本明細書では、がんなどの疾患または状態を処置するための組成物および方法が提供される。本明細書で提供される組成物および方法は、好中球、単球、骨髄樹状細胞（ｍＤＣ）、マスト細胞、およびマクロファージを含むがこれらに限定されない、ヒト骨髄細胞を利用して、がん細胞などの罹患細胞を標的化する。本明細書で提供される組成物および方法は、Ｔ細胞の活性化および動員、エフェクター免疫細胞の活性化（例えば、ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞の活性化）、抗原の交差提示、炎症応答の増強、制御性Ｔ細胞の低減、および貪食を含む、様々な機構により、がん細胞などの罹患細胞、および／または罹患組織を消失させるのに使用されうる。例えば、骨髄細胞は、がん細胞に対する免疫応答を維持するのに使用されうる。
[00202]本出願人らは、貪食性受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）、スカベンジャー受容体（ＳＲ）融合タンパク質（ＳＦＰ）、インテグリン受容体（ＩＲ）融合タンパク質（ＩＦＰ）、またはカスパーゼ動員受容体（カスパーゼ－ＣＡＲ）融合タンパク質など、キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物について、既に記載した。組換え核酸によりコードされるＣＦＰは、標的細胞の抗原に結合する抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含みうる。細胞外ドメインは、ヒンジドメインまたは細胞外ドメインなどの受容体に由来する、ヒンジドメインまたは細胞外ドメインへと融合されうる。組換え核酸によりコードされるＣＦＰは、ＣＤ２、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ６８、貪食受容体、スカベンジャー受容体、またはインテグリン受容体に由来する膜貫通ドメインなどの膜貫通ドメインをさらに含みうる。一部の実施形態では、組換え核酸によりコードされるＣＦＰは、貪食受容体、スカベンジャー受容体、またはインテグリン受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどの細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインをさらに含む。例えば、細胞内ドメインは、貪食受容体、スカベンジャー受容体、またはインテグリン受容体に由来する、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含みうる。例えば、細胞内ドメインは、貪食活性、炎症応答、一酸化窒素の産生、インテグリンの活性化、エフェクター細胞遊走の増強（例えば、ケモカイン受容体の発現を介する）、抗原提示、および／または交差提示の増強を促進する、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含みうる。一部の実施形態では、ＣＦＰは、貪食受容体融合タンパク質（ＰＦＰ）である。一部の実施形態では、ＣＦＰは、貪食スカベンジャー受容体融合タンパク質（ＰＦＰ）である。一部の実施形態では、ＣＦＰは、インテグリン受容体融合タンパク質（ＩＦＰ）である。一部の実施形態では、ＣＦＰは、炎症性受容体融合タンパク質である。一部の実施形態では、組換え核酸によりコードされるＣＦＰは、動員ドメインを含む細胞内ドメインをさらに含む。例えば、細胞内ドメインは、１つまたは複数のＰＩ３Ｋ動員ドメイン、カスパーゼ動員ドメイン、またはカスパーゼ活性化／動員ドメイン（ＣＡＲＤ）を含みうる。
[00203]本明細書では、改善された免疫原性のＣＡＲ組成物、例えば、ＣＡＲを発現する細胞内のインターフェロン応答を活性化する細胞内ドメインを含む、キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ；キメラ抗原受容体であるＣＡＲと互称される）をコードする組換え核酸が提供される。本明細書では、ｐＬｘＩＳモチーフを含む、少なくとも１つの細胞内ドメインを含む、免疫原性ＣＦＰが提供される。組換え核酸は、ＤＮＡの場合もあり、ＲＮＡの場合もある。ＣＡＲをコードする組換え核酸は、ベクター内に組入れられうる。組換えＣＡＲは、細胞内で発現されると、細胞内のＩ型インターフェロンの産生を活性化する。このような細胞は、１型インターフェロン応答が可能である、哺乳動物細胞である。このような細胞は、免疫細胞、例えば、リンパ球または骨髄細胞である。
[00204]一部の実施形態では、キメラ受容体をコードする組換え核酸は、その中に、キメラ受容体の炎症促進性細胞内ドメインをコードする、特異的配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で記載されるキメラ受容体タンパク質は、細胞外ドメインにおけるその標的との係合時に、キメラ抗原受容体を発現させる細胞内で、インターフェロン応答遺伝子、またはＩ型インターフェロンの産生の誘導をもたらすシグナル伝達カスケードを活性化することが可能である、細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書で記載されるキメラ受容体タンパク質は、自然免疫経路アダプタータンパク質、例えば、ミトコンドリア抗ウイルスシグナル伝達タンパク質（ＭＡＶＳ）、インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）、Ｔｏｌｌ／ＩＬ－１Ｒドメイン含有アダプター誘導性ＩＦＮ（ＴＲＩＦ）、およびエンドリソソームＳＬＣ１５Ａ４タンパク質と相互作用するＴＬＲアダプター（ＴＡＳＬ）、またはこれらの一部に由来するドメインを含む。一部の実施形態では、自然免疫経路アダプタータンパク質、例えば、ＭＡＶＳ、ＳＴＩＮＧ、ＴＲＩＦ、またはＴＡＳＬタンパク質のドメインまたは断片は、組換えＤＮＡ技術により、本明細書で記載されるＣＦＰまたはＣＡＲの細胞内ドメイン内に組み込まれ、この場合、ドメインまたは断片は、ＴＢＫ１またはＩＫＫεによりリン酸化されＩＲＦ－３の、シグナル伝達複合体への動員を媒介する、ｐＬｘＩＳモチーフ（ｐは、親水性残基を表し、ｘは、任意の残基を表し、Ｓは、リン酸化部位を表す）を含む。
[00205]一部の実施形態では、本明細書で記載されるキメラ受容体タンパク質は、細胞外ドメインにおけるその標的との係合時に、キメラ抗原受容体を発現させる細胞内で、核内因子カッパＢ応答性遺伝子、またはＮＦカッパＢ応答をもたらすシグナル伝達カスケードを活性化することが可能である、細胞内ドメインを含む。
エフェクター骨髄細胞およびインターフェロンの活性化
[00206]Ｉ型およびＩＩ型のインターフェロン（ＩＦＮ）は、感染およびがんにおける免疫応答の調節で、重要な役割を果たす。Ｉ型は、多数のＩＦＮαファミリーメンバーである、ＩＦＮβ、ＩＦＮδ、ＩＦＮε、ＩＦＮκ、ＩＦＮτ、およびＩＦＮωを含む、複数の亜型により代表され、これらの全ては、ＩＦＮαＲ１タンパク質と、ＩＦＮαＲ２タンパク質とから構成されるヘテロ二量体のＩＦＮαＲである、同じ細胞表面受容体を利用する。ＩＩ型ＩＦＮは、ＩＦＮｇにより代表される。これらの２つのＩＦＮ型は、ほぼ全ての細胞により発現されて、シグナル伝達イベントを誘発し、多様な細胞性応答を誘発する、顕著に異なる細胞表面受容体に結合する。骨髄細胞は、インターフェロンの、鍵となる標的である。細胞内細菌感染に対する初期免疫応答において、活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞および活性化Ｔ細胞は、ＩＦＮγ産生の供給源である。感染の初期段階において、サイトカインである、インターロイキン（ＩＬ）１２およびＩＬ－１８の産生は、これらのリンパ球集団による、抗原非特異的ＩＦＮγ産生を駆動する。抗原特異的ＣＤ４＋ Ｔ細胞およびＣＤ８＋ Ｔ細胞もまた、これらの病原体に応答して、ＩＦＮγを産生しうる。約２０のＩＦＮαタンパク質と、単一のＩＦＮβとを含む、多数の個別のＩ型ＩＦＮが存在する。これらのＩ型ＩＦＮの各々は、保存的な細胞表面Ｉ型ＩＦＮ受容体である、ＩＦＮαＲに結合することにより、宿主細胞へとシグナル伝達する。細胞表面ＩＦＮαＲのライゲーションは、多数の抗ウイルス性免疫誘導遺伝子（ｉｍｍｕｎｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｇｅｎｅ）（ＩＳＧ）産物の発現を誘導し、これにより、宿主を、ある特定のウイルス感染から保護する（Ｓａｄｌｅｒ Ａ Ｊ、「Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ」（総説）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００８年７月、８（７）：５５９～６８）。しかし、Ｉ型ＩＦＮに対する応答性はまた、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｆｒａｎｓｉｃｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、および他の細菌を含む、多数の細胞内細菌感染（Ｒａｙａｍａｊｈｉ Ｍ．ら、「Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｃｒｏｓｓｔａｌｋ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｙｐｅ Ｉ ａｎｄ ＩＩ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｈｏｓｔ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ」．Ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ．２０１０年９～１０月、１（５）：４１８～２２）に対する易感染性の増大とも、劇的に相関する。ＩＦＮγは、ホモ二量体として分泌され、細胞表面受容体をライゲーションすることにより、宿主細胞に対して作用する。各ＩＦＮγ受容体は、２つのＩ型内在性膜サブユニットである、ＩＦＮγＲ１およびＩＦＮγＲ２から構成される、ヘテロ二量体である。ＩＦＮγホモ二量体の、細胞への結合は、２つのＩＦＮγＲ１サブユニット、および２つＩＦＮγＲ２サブユニットのほか、さらなるシグナル伝達構成要素が存在するように、２つの受容体による複合体の凝集を引き起こす。シグナル伝達のためには、両方のサブユニットが要求されるが、ＩＦＮγに対する実際の結合性部位は、ＩＦＮγＲ１上に位置する（Ｋｅａｒｎｅｙ Ｓ．ら、「Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｙｐｅ Ｉ ａｎｄ ＩＩ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ ｏｎ ｍｙｅｌｏｉｄ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ」．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ．、２０１３年３月、５５（０）：１８７～２００）。ＩＦＮγが、ＩＦＮγＲ１サブユニットと相互作用する場合、ＩＦＮγは、ＩＦＮγＲ１サブユニットと、ＩＦＮγＲ２サブユニットとの緊密な会合を可能とする、コンフォメーション変化を誘導する。受容体内の、これらの再配置は、受容体と構成的に会合する、Ｊａｎｕｓ関連キナーゼ（ＪＡＫ）の自己リン酸化および交差リン酸化を誘導する。ＩＦＮγＲ１は、ＪＡＫ１に対する結合性モチーフを含有し、ＩＦＮγＲ２は、ＪＡＫ２に対する結合性モチーフを含有する。ＪＡＫタンパク質のリン酸化は、それらの触媒活性を刺激し、次いで、ＩＦＮγＲ１のＣ末端におけるチロシン残基（Ｙ４４０）をリン酸化する。このリン酸化チロシン残基は、転写シグナル伝達因子兼活性化因子１（ＳＴＡＴ－１）タンパク質上のＳＨ２ドメインに対するドッキング部位をもたらす。各受容体の複合体は、２つのＩＦＮγＲ１サブユニットを含有するため、２つのＳＴＡＴ－１タンパク質は、受容体に結合することが可能である。ＪＡＫ１およびＪＡＫ２は、受容体との会合を維持し、動員された各ＳＴＡＴ－１タンパク質を、チロシン残基７０１（Ｙ７０１）においてリン酸化する。このリン酸化は、ＳＴＡＴ－１単量体の、受容体からの放出、およびこれらによる、ホモ二量体の形成を可能とする。ＳＴＡＴ－１ホモ二量体は、核へと移行し、ＩＦＮ誘導遺伝子（ＩＳＧ）のプロモーターＤＮＡ内のガンマ活性化配列（ＧＡＳ）に結合する結果として、これらの転写の増大をもたらす。Ｉ型ＩＦＮは、ＩＦＮγにより活性化されるものと同様に、カノニカルのＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路を介してシグナル伝達する。ＩＦＮαＲへのリガンドの結合は、２つの受容体サブユニットの二量体化、ならびにこれらと会合したＴＹＫ２キナーゼおよびＪＡＫ１キナーゼへのリン酸転移を惹起する。キナーゼは、それらのＳＨ２ドメインを介して、タンパク質であるＳＴＡＴ１およびＳＴＡＴ２を動員するように、ＩＦＮαＲ１およびＩＦＮαＲ２の細胞質テール内の残基をリン酸化する。これらのＳＴＡＴタンパク質の、受容体サブユニットへのドッキングは、ＳＴＡＴ－１上のＹ７０１およびＳＴＡＴ－２上のＹ６９０における、活性化ＪＡＫタンパク質によりこれらのリン酸化を可能とする。ＳＴＡＴ単量体のリン酸化は、それらを、それらのドッキング部位から放出し、それらが、二量体化し、ホモ二量体形態またはヘテロ二量体形態で、ＩＲＦ９と組み合わされて、転写因子ＩＳＧ因子３（ＩＳＧＦ３）を産生することを可能とする。ＩＳＧＦ３は、核へと移行して、ＩＳＧを同定し、それらの転写を誘導する。Ｉ型ＩＦＮシグナル伝達により誘導されるＩＳＧは、典型的に、それらのプロモーター内に、インターフェロン刺激応答エレメント（ＩＳＲＥ）またはガンマ活性化配列（ＧＡＳ）エレメントを含有するが、ＩＳＲＥを含有する遺伝子が、明らかに優先される。Ｉ型ＩＦＮの結果として転写されるＩＳＧの一部の例は、遺伝子である、ＩＳＧ１５、ＩＰ－１０、ＩＲＦ－７、およびＰＫＲ［６６］を含有するＩＳＲＥ、ならびに遺伝子である、ＩＲＦ－１、ＩＲＦ－２、ＩＲＦ－８、およびＩＲＦ－９を含有するＧＡＳである（Ｋｅａｒｎｅｙ Ｓ．ら、「Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｙｐｅ Ｉ ａｎｄ ＩＩ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ ｏｎ ｍｙｅｌｏｉｄ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ」．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ．、２０１３年３月、５５（０）：１８７～２００）。
組換えキメラ受容体タンパク質
[00207]本明細書では、（ｉ）膜貫通ドメインおよび（ｉｉ）貪食受容体細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニットのクラス（例えば、貪食受容体融合タンパク質（ＰＦＰ））；ならびに抗原、例えば、標的細胞の抗原、または標的細胞上に提示される抗原に特異的である細胞外抗原結合性ドメインが提供され、融合受容体の抗原結合性ドメインによる標的への抗原結合が、貪食受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化するように、膜貫通ドメインおよび抗原結合性ドメインが作動的に連結されている。
[00208]一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞外ドメインは、Ｉｇ結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＦｃＲγＩ、ＦｃＲγＩＩＡ、ＦｃＲγＩＩＢ、ＦｃＲγＩＩＣ、ＦｃＲγＩＩＩＡ、ＦｃＲγＩＩＩＢ、ＦｃＲｎ、ＴＲＩＭ２１、ＦｃＲＬ５結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞外ドメインは、ＦｃＲ細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞外ドメインは、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、ＦｃＲε、またはＦｃＲγの細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＦｃＲα（ＦＣＡＲ）細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＦｃＲβ細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＦＣＥＲ１Ａ細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＦＣＧＲ１Ａ、ＦＣＧＲ２Ａ、ＦＣＧＲ２Ｂ、ＦＣＧＲ２Ｃ、ＦＣＧＲ３Ａ、またはＦＣＧＲ３Ｂの細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、インテグリンドメインまたはインテグリン受容体ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、１つまたは複数のインテグリンドメインである、α１、α２、αＩＩｂ、α３、α４、α５、α６、α７、α８、α９、α１０、α１１、αＤ、αＥ、αＬ、αＭ、αＶ、αＸ、β１、β２、β３、β４、β５、β６、β７、またはβ８を含む。
[00209]一部の実施形態では、ＣＦＰは、膜貫通ドメインへと、作動的に連結された、抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、受容体の細胞外ドメイン、ヒンジ、スペーサー、および／またはリンカーをさらに含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、貪食受容体の細胞外部分を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞外部分は、細胞内シグナル伝達ドメインが由来する受容体と同じ受容体に由来する。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、スカベンジャー受容体の細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、免疫グロブリンのドメインを含む。一部の実施形態では、免疫グロブリンのドメインは、免疫グロブリンの細胞外ドメインまたは免疫グロブリンのヒンジ領域を含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、食細胞貪食ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、多量体アセンブリーが可能な構造を含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、多量体化のための土台を含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、３００、３００、４００、または５００アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、最大で、５００、４００、３００、２００、または１００アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、標的細胞の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、抗体ドメインを含む。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、受容体ドメイン、抗体ドメインを含み、この場合、抗体ドメインは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ナノボディー、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＮＡＲドメイン、ＶＨＨドメイン、二特異性抗体、ダイアボディー、またはこれらの機能的断片もしくは組合せである、機能的抗体断片を含む。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、リガンド、受容体の細胞外ドメイン、またはアダプターを含む。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、単一の抗原に特異的である、単一の抗原結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、少なくとも２つの抗原結合性ドメインを含み、この場合、少なくとも２つの抗原結合性ドメインの各々は、異なる抗原に特異的である。
[00210]一部の実施形態では、抗原は、がん関連抗原、系統関連抗原、病原性抗原、または自己免疫性抗原である。一部の実施形態では、抗原は、ウイルス抗原を含む。一部の実施形態では、抗原は、Ｔリンパ球抗原である。一部の実施形態では、抗原は、細胞外抗原である。一部の実施形態では、抗原は、細胞内抗原である。一部の実施形態では、抗原は、チミジンキナーゼ（ＴＫ１）、ヒポキサンチン－グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）、ムチン１、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、ＭＵＣ１、表皮増殖因子受容体ｖＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、メソテリン、ヒト表皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）、ＥＢＮＡ－１、ＬＥＭＤ１、ホスファチジルセリン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、濾胞刺激ホルモン受容体、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、エリスロポエチン産生肝細胞癌Ａ２（ＥｐｈＡ２）、ＥｐｈＢ２、ナチュラルキラー２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）群リガンド、ジシアロガングリオシド２（ＧＤ２）、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４５、ＣＤ５６ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９７、ＣＤ１１７、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ２１３Ａ２、ＣＤ２４８、ＣＤ２７６、ＰＳＣＡ、ＣＳ－１、ＣＬＥＣＬ１、ＧＤ３、ＰＳＭＡ、ＦＬＴ３、ＴＡＧ７２、ＥＰＣＡＭ、ＩＬ－１、インテグリン受容体、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲβ、ＳＳＥＡ－４、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧＭ３、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、Ｄｓｇ１、Ｄｓｇ３、ＩＧＬＬ１、およびこれらの組合せに由来する抗原からなる群から選択される。一部の実施形態では、抗原は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＣＲ４、ＣＤ８、ＣＤ３０、ＣＤ４５、およびＣＤ５６からなる群から選択されるタンパク質の抗原である。一部の実施形態では、抗原は、卵巣がん抗原またはＴリンパ腫抗原である。一部の実施形態では、抗原は、インテグリン受容体の抗原である。一部の実施形態では、抗原は、α１、α２、αＩＩｂ、α３、α４、α５、α６、α７、α８、α９、α１０、α１１、αＤ、αＥ、αＬ、αＭ、αＶ、αＸ、β１、β２、β３、β４、β５、β６、β７、およびβ８からなる群から選択される、インテグリン受容体またはインテグリンの抗原である。一部の実施形態では、抗原は、インテグリン受容体リガンドの抗原である。一部の実施形態では、抗原は、フィブロネクチン、ビトロネクチン、コラーゲン、またはラミニンの抗原である。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、２つまたはこれを超える、異なる抗原に結合しうる。
[00211]一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、本明細書で提示される表中の抗原結合性ドメインの配列など、本明細書で提示される抗原結合性ドメインの配列を含む。
[00212]一部の実施形態では、標的タンパク質は、ＣＤ７０である。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、抗ＣＤ７０抗体またはその結合性断片を含み、この場合、抗原結合性ドメインは、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＰＲＳＩＦＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＡＩＴＳＧＧＳＰＴＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＰＹＧＬＤＮＡＬＤＡＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳおよびＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＴＧＧＳＬＲＬＡＣＴＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＩＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＡＩＳＷＳＧＧＴＴＨＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＦＣＡＫＳＬＲＳＳＰＳＳＲＷＦＧＳＲＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳからなる群から選択されるＶＨ配列のうちのいずれか１つの、ＨＣ ＣＤＲ３である、重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ７０抗体またはその結合性断片のＶＨは、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＰＲＳＩＦＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＡＩＴＳＧＧＳＰＴＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＰＹＧＬＤＮＡＬＤＡＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳおよびＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＴＧＧＳＬＲＬＡＣＴＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＩＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＡＩＳＷＳＧＧＴＴＨＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＦＣＡＫＳＬＲＳＳＰＳＳＲＷＦＧＳＲＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳからなる群から選択されるＶＨ配列のうちのいずれか１つの、
ＨＣ ＣＤＲ１である、重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）をさらに含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ７０抗体またはその結合性断片のＶＨは、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＰＲＳＩＦＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＡＩＴＳＧＧＳＰＴＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＰＹＧＬＤＮＡＬＤＡＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳおよびＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＴＧＧＳＬＲＬＡＣＴＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＩＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＡＩＳＷＳＧＧＴＴＨＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＦＣＡＫＳＬＲＳＳＰＳＳＲＷＦＧＳＲＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳからなる群から選択されるＶＨ配列のうちのいずれか１つの、ＨＣ ＣＤＲ２である、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）をさらに含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ７０抗体またはその結合性断片のＶＨは、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＰＲＳＩＦＳＩＮＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＡＩＴＳＧＧＳＰＴＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＰＹＧＬＤＮＡＬＤＡＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳおよびＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＴＧＧＳＬＲＬＡＣＴＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＩＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＡＩＳＷＳＧＧＴＴＨＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＦＣＡＫＳＬＲＳＳＰＳＳＲＷＦＧＳＲＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳからなる群から選択される配列のうちのいずれか１つに対する、７０～１００％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、単一ドメイン抗体のドメインである。一部の実施形態では、ＶＨは、ＶＨＨである。
[00213]一部の実施形態では、標的タンパク質は、ＧＰＣ３である。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、抗ＧＰＣ３抗体またはその結合性断片を含み、この場合、抗原結合性ドメインは、ＡＴＡＣＡＤＴＴＱＹＡＹＤＹ、ＡＴＡＣＡＤＴＴＬＹＥＹＤＹ、ＡＴＡＣＶＤＴＴＱＹＥＹＤＹ、ＡＴＡＣＡＤＡＴＱＨＥＹＤＹ、ＡＴＡＣＡＤＴＴＱＹＤＹＤＹ、ＡＴＡＣＡＤＴＴＱＹＥＹＤＹ、ＡＴＡＣＡＤＴＴＨＹＥＹＤＹ、ＡＴＡＣＶＩＴＴＬＹＥＹＤＹ、ＡＴＡＣＡＥＴＴＬＹＥＹＤＹ、ＡＴＡＣＡＤＴＴＱＨＥＹＤＹ、ＡＴＡＣＶＤＴＴＨＹＥＹＤＹ、ＡＴＡＣＡＳＴＴＬＹＥＹＤＹ、ＡＴＡＣＶＶＴＴＬＹＥＹＤＹ、ＡＴＡＣＧＧＡＴＧＰＹＤＹ、ＡＴＡＣＡＧＡＩＧＰＹＤＹ、ＡＴＡＣＶＶＶＧＤＱＮＤＹ、ＡＴＡＣＶＶＶＧＤＲＮＤＹ、ＡＴＤＣＡＧＧＴＳＴＰＹＤＹ、ＡＴＤＣＡＧＧＴＡＴＰＹＤＹ、ＡＴＡＣＶＶＡＤＲＮＥＹＤＹ、ＡＴＳＣＶＶＶＴＫＮＥＹＤＹ、ＡＴＡＣＳＧＬＴＨＥＹＤＹ、ＡＴＴＣＳＧＬＴＨＥＹＤＹ、ＡＴＡＣＡＮＷＳＳＬＧＰＹＤＹ、ＡＴＡＣＡＮＷＳＴＬＧＰＹＤＹ、ＡＴＡＣＳＤＰＲＶＹＥＹＤＹ、ＡＴＴＣＡＳＰＥＫＹＥＹＤＹ、ＡＴＨＣＧＧＴＳＷＧＴＳＹＤＹ、ＡＴＨＣＧＧＳＳＷＳＮＥＹＤＹ、ＹＡＲＹＳＧＲＴＹ、ＡＳＳＡＷＰＡＧＰＫＨＱＶＥＹＤＹ、ＡＴＡＣＧＳＬＶＧＭＹＤＹ、ＡＴＡＣＧＳＡＶＨＥＹＤＹ、ＡＴＤＣＶＧＦＧＳＮＷＦＤＹ、ＡＴＡＣＡＳＰＶＩＹＥＹＤＹ、ＡＴＤＣＡＧＧＶＧＨＥＹＤＹ、ＡＴＤＣＳＬＨＧＳＤＹＰＹＤＹおよびＡＶＲＩＹＳＧＳＦＤＮＴＬＡＹＤＹからなる群から選択される配列のうちのいずれか１つの、重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。一部の実施形態では、抗ＧＰＣ３抗体またはその結合性断片のＶＨは、ＧＦＰＬＡＹＹＡ、ＧＦＳＬＤＹＹＡ、ＧＦＰＬＤＹＹＡ、ＧＦＴＬＤＹＹＡ、ＧＦＳＬＮＹＹＡ、ＧＦＴＬＡＹＹＡ、ＧＦＴＬＧＹＹＡ、ＧＦＰＬＮＹＹＡ、ＧＦＰＬＨＹＹＡ、ＧＦＳＬＧＹＹＡ、ＧＦＰＬＧＹＹＡ、ＧＦＰＬＥＹＹＡ、ＧＳＤＦＲＡＤＡ、ＧＲＴＦＳＳＹＧ、ＧＦＳＬＡＹＹＡおよびＧＬＴＦＲＳＶＧからなる群から選択される配列のうちのいずれか１つの、重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）をさらに含む。一部の実施形態では、抗ＧＰＣ３抗体またはその結合性断片のＶＨは、ＩＳＮＳＤＧＳＴ、ＩＳＡＳＤＧＳＴ、ＩＳＳＳＤＧＳＴ、ＩＳＳＳＤＧＮＴ、ＩＳＳＡＤＧＳＴ、ＩＳＳＳＧＧＳＴ、ＩＳＳＧＤＧＳＴ、ＩＳＡＧＤＧＮＴ、ＩＳＳＳＤＤＳＴ、ＩＳＳＮＤＧＳＴ、ＩＳＳＰＤＧＳＴ、ＩＳＳＲＴＧＧＴ、ＩＳＡＧＤＧＳＳＴ、ＩＳＳＳＤＧＳＳＳＤＧＮＴ、ＩＳＳＧＤＧＮＴ、ＩＳＳＧＤＧＫＴ、ＩＳＳＳＤＧＧＴ、ＩＳＳＲＴＧＳＴ、ＩＳＳＲＴＧＮＴ、ＩＳＳＳＤＧＨＳＳＴ、ＩＳＳＳＳＤＧＮＴ、ＩＳＡＳＮＧＮＴ、ＩＳＳＧＳＤＧＮＴ、ＩＳＡＳＤＧＮＴ、ＩＤＳＩＴＳＩ、ＩＳＷＳＧＧＳＴＩＡＡＳＶＧＳＴ、ＩＳＳＳＤＧＳＤＧＮＴおよびＡＳＰＳＧＶＩＴからなる群から選択される配列のうちのいずれか１つの、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）をさらに含む。一部の実施形態では、抗ＧＰＣ３抗体またはその結合性断片のＶＨは、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＨＳＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＡＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＳＤＧＮＴＹＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＡＤＴＴＱＨＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＨＳＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＤＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＡＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＧＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＡＤＴＴＱＹＤＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＨＳＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＤＹＹＡＩＧＷＦＲＲＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＧＤＧＫＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＡＧＡＩＧＰＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＰＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＤＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＡＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＧＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＡＤＴＴＱＹＤＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＬＧＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＳＤＧＨＳＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＮＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＤＣＡＧＧＴＡＴＰＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＳＳＹＧＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＡＩＳＷＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＳＡＷＰＡＧＰＫＨＱＶＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＴＡＳＧＦＳＬＤＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＡＣＩＳＳＲＴＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＡＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＶＶＶＧＤＱＮＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＤＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＡＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＡＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＡＥＴＴＬＹＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＡＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＡＮＷＳＴＬＧＰＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＥＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＡＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＳＤＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＲＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＡＤＴＴＱＹＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＳＤＦＲＡＤＡＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＥＲＥＰＶＡＩＤＳＩＴＳＩＹＹＶＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＴＫＮＴＶＹＬＱＭＴＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＹＡＲＹＳＧＲＴＹＷＧＲＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＡＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＡＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＡＤＴＴＬＹＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＡＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＳＤＧＮＴＹＹＡＤＡＶＫＧＲＦＡＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＳＤＰＲＶＹＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＡＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＳＤＧＮＴＹＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＡＤＴＴＱＨＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＡＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＳＤＧＮＴＹＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＶＤＴＴＨＹＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＡＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＳＤＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＡＤＡＴＱＨＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＡＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＧＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＡＤＴＴＱＹＤＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＡＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＡＤＴＴＱＹＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＡＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＧＧＡＴＧＰＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＡＹＹＡＩＧＷＦＲＲＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＳＤＧＮＴＹＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＡＤＴＴＱＨＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＤＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＡＧＤＧＳＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＡＳＴＴＬＹＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＤＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＡＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＡＶＹＬＱＭＮＳＬＧＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＡＤＴＴＱＹＤＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＤＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＡＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＧＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＡＤＴＴＱＹＤＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＤＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＡＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＶＤＴＴＱＹＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＤＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＰＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＶＤＴＴＱＹＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＤＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＳＤＧＳＤＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＤＣＳＬＨＧＳＤＹＰＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＤＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＡＤＴＴＱＹＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＥＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＡＣＳＤＰＲＶＹＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＧＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＳＤＤＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＤＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＤＣＡＧＧＴＳＴＰＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＰＬＨＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＳＣＩＳＳＧＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＳＣＶＶＶＴＫＮＥＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ、
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[00214]一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、Ｄｓｇ１またはＤｓｇ３など、自己抗原またはその断片を含む。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、受容体ドメインまたは抗体ドメインを含み、この場合、抗体ドメインは、Ｄｓｇ１またはＤｓｇ３などの自己抗原に結合する。
[00215]一部の実施形態では、膜貫通ドメインおよび抗原結合性ドメインは、リンカーを介して作動的に連結される。一部の実施形態では、膜貫通ドメインおよび抗原結合性ドメインは、ＣＤ８α、ＩｇＧ１、またはＩｇＧ４のヒンジ領域などのリンカーを介して作動的に連結される。
[00216]一部の実施形態では、細胞外ドメインは、多量体化土台を含む。
[00217]一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ６８膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＦｃＲ膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＦｃＲγ膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＦｃＲα膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＦｃＲβ膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＦｃＲε膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、シンタキシン３またはシンタキシン４またはシンタキシン５などのシンタキシンに由来する膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＦＰが、細胞内で発現されると、内因性受容体の膜貫通ドメインと共にオリゴマー化する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＦＰが、細胞内で発現されると、外因性受容体の膜貫通ドメインと共にオリゴマー化する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＦＰが、細胞内で発現されると、内因性受容体の膜貫通ドメインと共に二量体化する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＦＰが、細胞内で発現されると、外因性受容体の膜貫通ドメインと共に二量体化する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞内シグナル伝達ドメインが由来するタンパク質と異なるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞外ドメインが由来するタンパク質と異なるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、貪食受容体の膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインは、同じタンパク質に由来する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞内シグナル伝達ドメインと同じタンパク質に由来する。一部の実施形態では、組換え核酸は、ＤＡＰ１２動員ドメインをコードする。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＤＡＰ１２と共にオリゴマー化する膜貫通ドメインを含む。
[00218]一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、少なくとも１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、または３２アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、最大で、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、または３２アミノ酸の長さである。
[00219]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、貪食受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲα、またはＢａｉ１から選択される貪食受容体以外の貪食受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦＲ１、ＭＤＡ５、ＣＤ４０、レクチン、デクチン１、ＣＤ２０６、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、Ｆｃアルファ受容体Ｉ、ＣＲ１、ＣＤ３５、ＣＤ３ζ、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｔｉｍ－１、Ｔｉｍ－４、およびＣＤ１６９からなる群から選択される貪食受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＩ３Ｋ動員ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、スカベンジャー受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ４７阻害ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、Ｒａｃ阻害ドメイン、Ｃｄｃ４２阻害ドメイン、またはＧＴＰアーゼ阻害ドメインを含む。一部の実施形態では、Ｒａｃ阻害ドメイン、Ｃｄｃ４２阻害ドメイン、またはＧＴＰアーゼ阻害ドメインは、ＰＦＰを発現する細胞の貪食カップにおいて、Ｒａｃ、Ｃｄｃ４２、またはＧＴＰアーゼを阻害する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、Ｆ－アクチンディスアセンブリー活性化ドメイン、ＡＲＨＧＡＰ１２活性化ドメイン、ＡＲＨＧＡＰ２５活性化ドメイン、またはＳＨ３ＢＰ１活性化ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ホスファターゼ阻害ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＡＲＰ２／３阻害ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、少なくとも１つのＩＴＡＭドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはこれを超えるＩＴＡＭドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、Ｆｃイプシロン受容体１鎖、Ｆｃイプシロン受容体２鎖、Ｆｃガンマ受容体１鎖、Ｆｃガンマ受容体２ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体２ｂ１鎖、Ｆｃガンマ受容体２ｂ２鎖、Ｆｃガンマ受容体３ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体３ｂ鎖、Ｆｃベータ受容体１鎖、ＴＹＲＯＢＰ（ＤＡＰ１２）、ＣＤ５、ＣＤ１６ａ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８９、ＣＤ２７８、ＣＤ６６ｄ、これらの機能的断片、およびこれらに対する少なくとも１つであるが２０を超えない修飾を有するこれらのアミノ酸配列のＩＴＡＭドメインから選択される、少なくとも１つのＩＴＡＭドメインを含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＩＴＡＭドメインは、Ｓｒｃファミリーキナーゼのリン酸化部位を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＩＴＡＭドメインは、Ｓｙｋ動員ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、Ｆ－アクチン脱重合活性化ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、酵素活性を欠く。
[00220]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ゼータ細胞内ドメインに由来するドメインを含まない。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＭｅｒＴＫ細胞内ドメインに由来するドメインを含まない。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＴＬＲ４細胞内ドメインに由来するドメインを含まない。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ４７阻害ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＳＧＬ－１の細胞内領域など、インテグリンを活性化するドメインを含む。
[00221]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＥＰＡＣおよびＣ３Ｇに由来するドメインなど、ＧＴＰアーゼであるＲａｐ１を活性化するドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、パキシリンに由来する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、接着斑キナーゼを活性化する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、単一の貪食受容体に由来する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、単一のスカベンジャー受容体に由来する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、貪食増強ドメインを含む。
[00222]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、キナーゼ活性化ドメインまたはキナーゼ結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＩＬ－１シグナル伝達カスケード活性化ドメインを含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９、ＴＲＩＦ、ＲＩＧ－１、ＭＹＤ８８、ＭＡＬ、ＩＲＡＫ１、ＭＤＡ－５、ＩＦＮ受容体、ＳＴＩＮＧ、ＮＬＲＰファミリーメンバーであるＮＬＲＰ１～１４、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、ピリン、ＡＩＭ２、ＮＬＲＣ４、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＥＲＩＧ、ＣＤ４０、Ｔａｎｋ１結合性キナーゼ（ＴＢＫ）、カスパーゼドメイン、プロカスパーゼ結合性ドメイン、またはこれらの任意の組合せに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
[00223]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、コネキシン（Ｃｘ）タンパク質に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含む。例えば、細胞内ドメインは、Ｃｘ４３、Ｃｘ４６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ３３、Ｃｘ５０、Ｃｘ５９、Ｃｘ６２、Ｃｘ３２、Ｃｘ２６、Ｃｘ３１、Ｃｘ３０．３、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３０、Ｃｘ２５、Ｃｘ４５、Ｃｘ４７、Ｃｘ３１．３、Ｃｘ３６、Ｃｘ３１．９、Ｃｘ３９、Ｃｘ４０．１、またはＣｘ２３に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含みうる。例えば、細胞内ドメインは、Ｃｘ４３に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含みうる。
[00224]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＳＩＧＬＥＣタンパク質に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含む。例えば、細胞内ドメインは、Ｓｉｇｌｅｃ－１（シアロアデシン）、Ｓｉｇｌｅｃ－２（ＣＤ２２）、Ｓｉｇｌｅｃ－３（ＣＤ３３）、Ｓｉｇｌｅｃ－４（ＭＡＧ）、Ｓｉｇｌｅｃ－５、Ｓｉｇｌｅｃ－６、Ｓｉｇｌｅｃ－７、Ｓｉｇｌｅｃ－８、Ｓｉｇｌｅｃ－９、Ｓｉｇｌｅｃ－１０、Ｓｉｇｌｅｃ－１１、Ｓｉｇｌｅｃ－１２、Ｓｉｇｌｅｃ－１３、Ｓｉｇｌｅｃ－１４、Ｓｉｇｌｅｃ－１５、Ｓｉｇｌｅｃ－１６、またはＳｉｇｌｅｃ－１７に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含みうる。
[00225]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＴＬＲタンパク質に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、エンドリソソームＴＬＲ、例えば、ＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９の細胞内シグナル伝達ドメインを含みうる。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ３タンパク質に由来しうる。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ７タンパク質、ＴＬＲ８タンパク質、またはＴＬＲ９タンパク質に由来しうる。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、細胞表面ＴＬＲ１、同ＴＬＲ２、同ＴＬＲ４、同ＴＬＲ５、同ＴＬＲ６、および同ＴＬＲ１０の、細胞内シグナル伝達ドメインを含みうる。
[00226]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、構築物を発現する骨髄細胞の、有効性および貪食可能性を最大化するために、別の細胞内ドメインまたは膜貫通ドメインと、特異的に対にされる。例えば、一部の実施形態では、ＣＤ６４ ＴＭまたはその一部を含む膜貫通ドメインは、自然免疫アダプタータンパク質のＩＣＤもしくはＰＩ３キナーゼ動員ドメイン、またはこれらの両方を含む、細胞内シグナル伝達ドメインと、特異的に対にされうる。一部の実施形態では、キメラ受容体細胞内ドメイン（複数可）および／または膜貫通ドメインによる、ドメインの組合せは、構築物を発現する細胞、例えば、骨髄細胞の貪食指数を最大化することへと方向付けられる。一部の実施形態では、キメラ受容体細胞内ドメイン（複数可）および／または膜貫通ドメインによる、ドメインの組合せは、細胞が、標的細胞を溶解し、免疫を長期にわたり応答性とするために、免疫応答経路を活性化することが可能であるように、構築物を発現する細胞の炎症可能性を最大化することへと方向付けられる。一部の実施形態では、キメラ受容体細胞内ドメイン（複数可）および／または膜貫通ドメインによる、ドメインの組合せは、キメラタンパク質を発現する細胞によるトニックシグナル伝達を最小化するか、または消失させることへと方向付けられる。一部の実施形態では、キメラ受容体細胞内ドメイン（複数可）および／または膜貫通ドメインによる、ドメインの組合せは、免疫応答の特異性を最大化することへと方向付けられる。
[00227]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、Ｃ型レクチンタンパク質に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含む。例えば、細胞内ドメインは、マンノース受容体タンパク質に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含みうる。例えば、細胞内ドメインは、アシアロ糖タンパク質受容体タンパク質に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含みうる。例えば、細胞内ドメインは、マクロファージガラクトース型レクチン（ＭＧＬ）、ＤＣ－ＳＩＧＮ（ＣＬＥＣ４Ｌ）、ランジェリン（ＣＬＥＣ４Ｋ）、骨髄系ＤＡＰ１２会合レクチン（ＭＤＬ）１（ＣＬＥＣ５Ａ）、ＤＣ関連Ｃ型レクチン１（デクチン１）サブファミリータンパク質、デクチン１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＧＲ１／ＣＬＥＣ９Ａ、骨髄系Ｃ型レクチン様受容体（ＭＩＣＬ）（ＣＬＥＣ１２Ａ）、ＣＬＥＣ２（ＣＬＥＣ１Ｂ）、ＣＬＥＣ１２Ｂ、ＤＣ免疫受容体（ＤＣＩＲ）サブファミリータンパク質、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、デクチン２／ＣＬＥＣ６Ａ、血中ＤＣ抗原２（ＢＤＣＡ２）（ＣＬＥＣ４Ｃ）、Ｍｉｎｃｌｅ（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ Ｃ ｔｙｐｅ ｌｅｃｔｉｎ）（ＣＬＥＣ４Ｅ）、ＮＯＤ様受容体タンパク質、ＮＯＤ様受容体ＭＨＣクラスＩＩトランス活性化因子（ＣＩＩＴＡ）、ＩＰＡＦ、ＢＩＲＣ１、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）タンパク質、ＲＩＧ－Ｉ、ＭＤＡ５、ＬＧＰ２、ＮＡＩＰ５／Ｂｉｒｃ１ｅ、ＮＬＲＰタンパク質、ＮＬＲＰ１、ＮＬＲＰ２、ＮＬＲＰ３、ＮＬＲＰ４、ＮＬＲＰ５、ＮＬＲＰ６、ＮＬＲＰ７、ＮＬＲＰ８９、ＮＬＲＰ９、ＮＬＲＰ１０、ＮＬＲＰ１１、ＮＬＲＰ１２、ＮＬＲＰ１３、ＮＬＲＰ１４、ＮＬＲタンパク質、ＮＯＤ１もしくはＮＯＤ２、またはこれらの任意の組合せに由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含みうる。
[00228]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、細胞接着分子に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含む。例えば、細胞内ドメインは、分子である、ＩｇＣＡＭ、カドヘリン、インテグリン、Ｃ型レクチン様ドメインタンパク質（ＣＴＬＤ）、および／またはプロテオグリカンに由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含みうる。例えば、細胞内ドメインは、Ｅ－カドヘリン、Ｐ－カドヘリン、Ｎ－カドヘリン、Ｒ－カドヘリン、Ｂ－カドヘリン、Ｔ－カドヘリン、またはＭ－カドヘリンに由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含みうる。例えば、細胞内ドメインは、Ｅ－セレクチン、Ｌ－セレクチン、またはＰ－セレクチンなどのセレクチンに由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含みうる。
[00229]一部の実施形態では、ＣＦＰは、全長細胞内シグナル伝達ドメインを含まない。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、３００、３００、４００、または５００アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、最大で、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、３００、３００、４００、または５００アミノ酸の長さである。
[00230]一部の実施形態では、組換え核酸は、ＦｃＲα鎖細胞外ドメイン、ＦｃＲα鎖膜貫通ドメイン、および／またはＦｃＲα鎖細胞内ドメインをコードする。一部の実施形態では、組換え核酸は、ＦｃＲβ鎖細胞外ドメイン、ＦｃＲβ鎖膜貫通ドメイン、および／またはＦｃＲβ鎖細胞内ドメインをコードする。一部の実施形態では、ＦｃＲα鎖またはＦｃＲβ鎖は、細胞内で発現されると、ＦｃＲγと複合体を形成する。一部の実施形態では、ＦｃＲα鎖またはＦｃＲβ鎖は、細胞内で発現されると、内因性ＦｃＲγと複合体を形成する。一部の実施形態では、ＦｃＲα鎖またはＦｃＲβ鎖は、ＦｃＲγを発現しない細胞膜へと組み込まれない。一部の実施形態では、ＣＦＰは、ＦｃＲα鎖細胞内シグナル伝達ドメインを含まない。一部の実施形態では、ＣＦＰは、ＦｃＲβ鎖細胞内シグナル伝達ドメインを含まない。一部の実施形態では、組換え核酸は、ＴＲＥＭ細胞外ドメイン、ＴＲＥＭ膜貫通ドメイン、および／またはＴＲＥＭ細胞内ドメインをコードする。一部の実施形態では、ＴＲＥＭは、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、またはＴＲＥＭ３である。
[00231]一部の実施形態では、組換え核酸は、炎症促進性ポリペプチドをコードする配列を含む。一部の実施形態では、組成物は、組換え核酸内の、炎症促進性ヌクレオチドまたはヌクレオチド、例えば、ＡＴＰ、ＡＤＰ、ＵＴＰ、ＵＤＰ、および／またはＵＤＰ－グルコースをさらに含む。
細胞内インターフェロン応答性ドメイン
[00232]大半のＴＬＲは、免疫応答の一部としての、炎症促進性遺伝子の発現を駆動する、転写因子タンパク質ＮＦ－κＢを活性化する、ＭｙＤ８８と呼ばれるアダプタータンパク質を活性化する。ＴＬＲの亜群（ＴＬＲ３およびＴＬＲ４）は、キナーゼ酵素が、リン酸基を、転写因子であるＩＲＦ３へと付加することを可能とする土台として作用するタンパク質ＴＲＩＦに係合しうる。このリン酸化は、広範な遺伝子発現プログラムを活性化する、インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）と称される転写因子ファミリーのメンバーである、ＩＲＦ３を活性化する。これらのプログラムの顕徴は、Ｉ型インターフェロン分子の産生である。インターフェロンは、適応免疫応答と称される、免疫系の一部門の、強力な駆動因子であるので、それらの存在は、自己免疫に寄与する危険性を冒す。宿主自身の免疫系による、このような攻撃を防止するために、インターフェロン応答は、緊密に調節されなければならない。安全弁として、ＩＲＦ３が活性化される前に、ＴＲＩＦ内のアミノ酸残基の特定の配列である、ｐＬｘＩＳモチーフがリン酸化されなければならない。この対照機構は、ＴＬＲシグナル伝達のためのアダプタータンパク質としてのＴＲＩＦのみに特異的ではなく、ＩＲＦ３または類縁タンパク質であるＩＲＦ７を関与させて、インターフェロン発現を駆動する、センシング経路の一般的顕徴である、「ライセンシングステップ」をもたらす。核酸の認識を、Ｉ型インターフェロンの産生とつなぐ、同定された、あらゆる自然センシング経路は、１つの経路を例外として、これまでに、ｐＬｘＩＳモチーフを含有することが公知である、３つのアダプタータンパク質：ＴＲＩＦ、ＭＡＶＳ、およびＳＴＩＮＧのうちの１つを介してシグナル伝達することが示されている。したがって、ｐＬｘＩＳモチーフ含有アダプタータンパク質は、核酸認識を、抗ウイルス防御へと、特異的に回路付ける。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内シグナル伝達ドメインは、自然免疫応答タンパク質のＩＣＤを含む。一部の実施形態では、自然免疫応答タンパク質は、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９、ＴＲＩＦ、ＲＩＧ－１、ＭＹＤ８８、ＭＡＬ、ＩＲＡＫ１、ＭＤＡ－５、ＩＦＮ受容体、ＳＴＩＮＧ、ＭＡＶＳ、ＴＲＩＦ、ＴＡＳＬ、ＮＬＲＰ１、ＮＬＲＰ２、ＮＬＲＰ３、ＮＬＲＰ４、ＮＬＲＰ５、ＮＬＲＰ６、ＮＬＲＰ７、ＮＬＲＰ８９、ＮＬＲＰ９、ＮＬＲＰ１０、ＮＬＲＰ１１、ＮＬＲＰ１２、ＮＬＲＰ１３、ＮＬＲＰ１～１４、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、Ｐｙｒｉｎ、ＡＩＭ２、ＮＬＲＣ４、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＥＲＩＧ、ＣＤ４０、Ｔａｎｋ１結合性キナーゼ（ＴＢＫ）、ＴＮＦＲ１、ケモカイン、ＭＨＣクラスＩＩトランス活性化因子（ＣＩＩＴＡ）、ＩＰＡＦ、ＢＩＲＣ１、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）タンパク質、マクロファージガラクトース型レクチン（ＭＧＬ）、ＤＣ－ＳＩＧＮ（ＣＬＥＣ４Ｌ）、ランジェリン（ＣＬＥＣ４Ｋ）、骨髄系ＤＡＰ１２会合レクチン（ＭＤＬ）１（ＣＬＥＣ５Ａ）、ＤＣ関連Ｃ型レクチン１（デクチン１）サブファミリータンパク質、デクチン１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＧＲ１／ＣＬＥＣ９Ａ、骨髄系Ｃ型レクチン様受容体（ＭＩＣＬ）（ＣＬＥＣ１２Ａ）、ＣＬＥＣ２（ＣＬＥＣ１Ｂ）、ＣＬＥＣ１２Ｂ、ＤＣ免疫受容体（ＤＣＩＲ）サブファミリータンパク質、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、デクチン２／ＣＬＥＣ６Ａ、血中ＤＣ抗原２（ＢＤＣＡ２）（ＣＬＥＣ４Ｃ）、Ｍｉｎｃｌｅ（マクロファージ誘導性Ｃ型レクチン）（ＣＬＥＣ４Ｅ）に由来する細胞内シグナル伝達ドメインから選択される。一部の実施形態では、ＣＦＰは、アミノ酸配列モチーフである、ｐＬｘＩＳを含む、少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内インターフェロン誘導性部分は、配列番号３６～４１から選択されるアミノ酸配列を含む。本明細書では、貪食を増強するための、キメラ抗原受容体融合タンパク質であって、抗原結合性ドメインと、配列番号３０のＭＤＡ５細胞内シグナル伝達ドメインとを含むＣＦＰが提供される。本明細書では、貪食を増強するための、キメラ抗原受容体融合タンパク質であって、抗原結合性ドメインと、配列番号３６のＲＩＧ１細胞内シグナル伝達ドメインとを含むＣＦＰが提供される。本明細書では、貪食を増強するための、キメラ抗原受容体融合タンパク質であって、抗原結合性ドメインと、配列番号３７のＭｙｄ８８細胞内シグナル伝達ドメインとを含むＣＦＰが提供される。本明細書では、貪食を増強するための、キメラ抗原受容体融合タンパク質であって、抗原結合性ドメインと、配列番号３８のＳＴＩＮＧ部分を含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むＣＦＰが提供される。本明細書では、貪食を増強するための、キメラ抗原受容体融合タンパク質であって、抗原結合性ドメインと、配列番号３９のＭＡＶＳ部分を含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むＣＦＰが提供される。本明細書では、貪食を増強するための、キメラ抗原受容体融合タンパク質であって、抗原結合性ドメインと、配列番号４０のＴＲＩＦ部分を含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むＣＦＰが提供される。本明細書では、貪食を増強するための、キメラ抗原受容体融合タンパク質であって、抗原結合性ドメインと、配列番号４１のＴＡＳＬ部分を含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むＣＦＰが提供される。
[00233]一部の実施形態では、組成物は、炎症促進性ポリペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、炎症促進性ポリペプチドは、ケモカイン、サイトカインである。一部の実施形態では、ケモカインは、ＩＬ－１、ＩＬ３、ＩＬ５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ｉｌ８ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＣＳＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ１７、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、およびインターフェロンからなる群から選択される。一部の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－１、ＩＬ３、ＩＬ５、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＣＳＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ１７、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、およびインターフェロンからなる群から選択される。
[00234]一部の実施形態では、自然免疫防御において高度に活性であることが公知である、細胞内アダプタータンパク質に由来する細胞内シグナル伝達ドメインが、キメラ受容体タンパク質内に組み込まれる。一部の実施形態では、１つまたは複数の突然変異が、キメラタンパク質の有効性を損なわずに、天然の細胞内アダプタータンパク質ドメインに特徴的な細胞内刺激に対する、細胞内ドメインの応答性を低減するように、１つまたは複数の細胞内ドメイン内に導入される。一部の実施形態では、このような有効性は、キメラタンパク質を発現させない、同一の細胞と比較した、貪食可能性の増強と称される。一部の実施形態では、このような有効性は、キメラタンパク質を発現させない、同一の細胞と比較した、炎症可能性の増強と称される。一部の実施形態では、このような有効性は、キメラタンパク質を発現させない、同一の細胞と比較した、キメラタンパク質を発現する細胞内の、ＮＦカッパＢの活性化、またはインターフェロンの活性化の増強と称される。
[00235]一部の実施形態では、骨髄細胞は、送達のために、特異的に標的化される。骨髄細胞は、ＰＬＧＡ（ポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸））および／またはポリビニルアルコール（ＰＶＡ）などの特化生体分解性ポリマーを使用して標的化されうる。一部の実施形態では、骨髄細胞機能に影響を及ぼすように、１つまたは複数の化合物を、このようなポリマー構造内に、選択的に組み込むことができる。一部の実施形態では、標的化構造は、例えば、１つまたは複数のＰＬＧＡ層および１つまたは複数のＰＶＡ層により多層化される。一部の実施形態では、標的化構造は、層化活性のための秩序にアセンブルされる。一部の実施形態では、標的化ポリマー構造は、骨髄細胞表面に付着し、骨髄細胞を、特異的極性化を付与する微小環境内に維持することなどのために、増殖因子およびサイトカインなど、１つまたは複数の構成要素を送達しうる、柔軟構造など、特異的形状の構成要素に組織化される。一部の実施形態では、ポリマー構造は、骨髄細胞により貪食されず、表面上の付着を維持しうるような構造である。一部の実施形態では、１つまたは複数の増殖因子は、サイトカインなどのＭ１極性化因子でありうる。一部の実施形態では、１つまたは複数の増殖因子は、サイトカインなどのＭ２極性化因子でありうる。一部の実施形態では、１つまたは複数の増殖因子は、ＩＦＮγなど、マクロファージ活性化サイトカインでありうる。一部の実施形態では、ポリマー構造は、充実性腫瘍内などのｉｎ ｖｉｖｏ環境において、１つまたは複数の増殖因子の持続放出が可能なである。
[00236]一部の実施形態では、組換え核酸は、炎症のホメオスタシス調節因子をコードする配列を含む。一部の実施形態では、炎症のホメオスタシス調節因子は、ｍＲＮＡの非翻訳領域（ＵＴＲ）内の配列である。一部の実施形態では、ＵＴＲ内の配列は、ＲＮＡ結合性タンパク質に結合する配列である。一部の実施形態では、翻訳は、ＲＮＡ結合性タンパク質の、非翻訳領域（ＵＴＲ）内の配列への結合時に、阻害または阻止される。一部の実施形態では、ＵＴＲ内の配列は、ＷＷＷＵ（ＡＵＵＵＡ）ＵＵＵＷ［配列中、Ｗは、ＡまたはＵである］のコンセンサス配列を含む。一部の実施形態では、組換え核酸は、バイシストロニックベクター上で発現される。
[00237]一部の実施形態では、標的細胞は、哺乳動物細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、ヒト細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、病原体により感染された細胞を含む。一部の実施形態では、標的細胞は、がん細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、リンパ球であるがん細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、卵巣がん細胞であるがん細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、乳腺細胞であるがん細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、膵細胞であるがん細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、神経膠芽腫細胞であるがん細胞である。
[00238]一部の実施形態では、組換え核酸は、ＤＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、ＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、ｍＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、非修飾ｍＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、修飾ｍＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、ｃｉｒｃＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、ｔＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、マイクロＲＮＡである。
[00239]本明細書ではまた、本明細書で記載されるＣＦＰをコードする、組換え核酸配列を含むベクターも提供される。一部の実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。一部の実施形態では、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターである。一部の実施形態では、ベクターは、１つまたは複数のポリペプチドをコードする、少なくとも１つの核酸配列へと作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む。一部の実施形態では、ベクターは、ポリシストロニックベクターである。一部の実施形態では、少なくとも１つの核酸配列の各々は、個別のプロモーターへと作動可能に連結される。一部の実施形態では、ベクターは、１つまたは複数の内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）をさらに含む。一部の実施形態では、ベクターは、１つまたは複数のポリペプチドをコードする、少なくとも１つの核酸配列に隣接する、５’ＵＴＲおよび／または３’ＵＴＲをさらに含む。一部の実施形態では、ベクターは、１つまたは複数の調節領域をさらに含む。
[00240]本明細書ではまた、本明細書で記載される組成物の組換え核酸によりコードされるポリペプチドも提供される。
[00241]本明細書では、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニット；ならびに標的細胞の抗原に特異的な抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含むＣＦＰ（例えば、貪食受容体融合タンパク質（ＰＦＰ））をコードする組換え核酸配列を含む組成物であって、膜貫通ドメインと細胞外ドメインとが作動的に連結されており；ＣＦＰの標的細胞の抗原への結合時に、ＣＦＰを発現する、好中球、単球、骨髄樹状細胞（ｍＤＣ）、マスト細胞、またはマクロファージなどの骨髄細胞の殺滅または貪食活性が、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、１５０％、２００％、２５０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、または１０００％を超えて増大される、組成物が提供される。
[00242]表１は、開示について非限定的であることが意図される、キメラ融合タンパク質ドメインおよび／またはその断片の例示的配列を示す。下線は、Ｋａｂａｔによる番号付けシステムに従い、それぞれの重鎖および軽鎖について、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の順序で、ＣＤＲ配列を表示する。
[00243]本明細書では、貪食または繋留受容体（ＰＲ）サブユニットを含むＣＦＰ（例えば、貪食受容体融合タンパク質（ＰＦＰ））をコードする組換え核酸配列を含む組成物であって、標的細胞の抗原に特異的な抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメイン；膜貫通ドメイン；および細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含み、膜貫通ドメインと細胞外ドメインとが作動的に連結されており；ＣＦＰの標的細胞の抗原への結合時に、ＣＦＰを発現する、好中球、単球、骨髄樹状細胞（ｍＤＣ）、マスト細胞、またはマクロファージなどの骨髄細胞の殺滅または貪食活性が、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも１．１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、５０倍、７５倍、または１００倍に増大される、組成物が提供される。
[00244]本明細書では、細胞内ドメインが、その標的抗原との接触時に、例えば抗原結合性ドメインの標的抗原との係合時に、骨髄細胞の自然免疫応答を活性化し、その貪食潜在性を活性化し、炎症性サイトカインおよびケモカイン応答、ＣＦＰを発現する骨髄細胞の抗原提示およびＴ細胞活性化を活性化することが可能である、少なくとも１つの自然免疫活性化細胞内ドメイン、例えば、パターン認識受容体細胞内シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＦｃＲ細胞内シグナル伝達ドメイン、細胞内アダプタータンパク質シグナル伝達ドメイン、またはこれらの断片を含む、すぐ上の段落で記載されたＣＦＰをコードする組換え核酸配列が提供される。
[00245]一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９、ＴＲＩＦ、ＲＩＧ－１、ＭＹＤ８８、ＭＡＬ、ＩＲＡＫ１、ＭＤＡ－５、ＩＦＮ受容体、ＮＬＲＰファミリーメンバーであるＮＬＲＰ１～１４、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、ピリン、ＡＩＭ２、ＮＬＲＣ４、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＥＲＩＧ、ＩＬ－１、ＩＬ３、ＩＬ５、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＴＮＦ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＣＳＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ１７、ＩＰ－１０、またはＲＡＮＴＥＳに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
[00246]一部の実施形態では、ＣＦＰは、インターフェロン応答性の転写因子ＩＲＦ１、ＩＲＦ２、ＩＲＦ３、ＩＲＦ４、ＩＲＦ５、ＩＲＦ６、ＩＲＦ７、ＩＲＦ８、またはＩＲＦ９を活性化するタンパク質に由来する配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
[00247]一部の実施形態では、ＣＦＰは、細胞内アダプタータンパク質に由来する配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、アダプタータンパク質は、ＣＦＰを、ミトコンドリア区画、小胞体区画、またはリソソーム区画などの細胞小器官へと係留する、膜貫通タンパク質を含みうる。一部の実施形態では、細胞内アダプタータンパク質は、細胞質ゾルタンパク質である。
[00248]本明細書で記載されるＣＦＰは、表２に列挙された細胞内ドメインと組み合わされた、表１に列挙された配列のうちのいずれか１つを含みうる。
[00249]一部の実施形態では、例えば、本明細書で記載されるＣＦＰの、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３０のアミノ酸配列、または配列番号３０に対する少なくとも８５％の配列同一性を有する、ＭＤＡ５細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３０に対する少なくとも少なくとも８６％、または少なくとも８７％、または少なくとも８８％、または少なくとも８９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３０に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＭＤＡ５細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３０に対する少なくとも少なくとも９１％、または少なくとも９２％、または少なくとも９３％、または少なくとも９４％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３０に対する少なくとも９５％の配列同一性を有する、ＭＤＡ５細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３０に対する少なくとも少なくとも９６％、または少なくとも９７％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号３０に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＭＤＡ５細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号３０に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＭＤＡ５細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを、ＣＤ８膜貫通ドメインもしくはＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはＣＤ６８膜貫通ドメインもしくはＣＤ６４膜貫通ドメインもしくはＣＤ１６膜貫通ドメイン、またはＣＤ８９膜貫通ドメイン、およびヒンジドメインと共に含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号３０に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＭＤＡ５細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを、ＣＤ８膜貫通ドメインもしくはＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはＣＤ６４膜貫通ドメインもしくはＣＤ１６膜貫通ドメイン、またはＣＤ８９膜貫通ドメイン、およびＰＩ３キナーゼ動員ドメイン、またはＣＤ４０細胞内シグナル伝達ドメインなど、１つまたは複数のさらなる細胞内シグナル伝達ドメインと共に含む。例えば、本明細書で開示される、例示的ＣＦＰ分子は、配列番号８もしくは配列番号９、またはこれらの両方の配列、あるいは配列番号１０または配列番号１１の配列を含む、アミノ酸配列を有する、細胞外ＣＤ５結合性ドメイン；および配列番号３０に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む細胞内ドメインを含む。
[00250]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列、または配列番号３６に対する少なくとも８５％の配列同一性を有する、ＲＩＧ－１細胞内ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３６に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＲＩＧ－１細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３６に対する少なくとも９５％の配列同一性を有する、ＲＩＧ－１細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号３６に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＲＩＧ－１細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号３６に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＲＩＧ－１細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを、ＣＤ８膜貫通ドメインもしくはＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはＣＤ６８膜貫通ドメインもしくはＣＤ６４膜貫通ドメインもしくはＣＤ１６膜貫通ドメイン、またはＣＤ８９膜貫通ドメイン、およびヒンジドメインと共に含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号３６に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＲＩＧ－１細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを、ＣＤ８膜貫通ドメインもしくはＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはＣＤ６４膜貫通ドメインもしくはＣＤ１６膜貫通ドメイン、またはＣＤ８９膜貫通ドメイン、およびＰＩ３キナーゼ動員ドメイン、またはＣＤ４０細胞内シグナル伝達ドメインなど、１つまたは複数のさらなる細胞内シグナル伝達ドメインと共に含む。例えば、本明細書で開示される、例示的ＣＦＰ分子は、配列番号８もしくは配列番号９、またはこれらの両方の配列、あるいは配列番号１０または配列番号１１の配列を含む、アミノ酸配列を有する、細胞外ＣＤ５結合性ドメイン；および配列番号３６に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む細胞内ドメインを含む。
[00251]一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列、または配列番号３７に対する少なくとも８５％の配列同一性を有する、ＭｙＤ８８細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３７に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＭｙＤ８８細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３７に対する少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３７に対する少なくとも９５％の配列同一性を有する、ＭｙＤ８８細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号３７に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＭｙＤ８８細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号３７に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＭｙＤ８８細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを、ＣＤ８膜貫通ドメインもしくはＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはＣＤ６８膜貫通ドメインもしくはＣＤ６４膜貫通ドメインもしくはＣＤ１６膜貫通ドメイン、またはＣＤ８９膜貫通ドメイン、およびヒンジドメインと共に含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号３７に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＭｙＤ８８細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを、ＣＤ８膜貫通ドメインもしくはＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはＣＤ６４膜貫通ドメインもしくはＣＤ１６膜貫通ドメイン、またはＣＤ８９膜貫通ドメイン、およびＰＩ３キナーゼ動員ドメイン、またはＣＤ４０細胞内シグナル伝達ドメインなど、１つまたは複数のさらなる細胞内シグナル伝達ドメインと共に含む。例えば、本明細書で開示される、例示的ＣＦＰ分子は、配列番号８もしくは配列番号９、またはこれらの両方の配列、あるいは配列番号１０または配列番号１１の配列を含む、アミノ酸配列を有する、細胞外ＣＤ５結合性ドメイン；および配列番号３７に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む細胞内ドメインを含む。
[00252]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３８のアミノ酸配列、または配列番号３８に対する少なくとも８５％の配列同一性を有する、ＳＴＩＮＧ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３８に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＳＴＩＮＧ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３８に対する少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３８に対する少なくとも９５％の配列同一性を有する、ＳＴＩＮＧ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号３８に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＳＴＩＮＧ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号３８に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＳＴＩＮＧ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを、ＣＤ８膜貫通ドメインもしくはＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはＣＤ６８膜貫通ドメインもしくはＣＤ６４膜貫通ドメインもしくはＣＤ１６膜貫通ドメイン、またはＣＤ８９膜貫通ドメイン、およびヒンジドメインと共に含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号３８に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＳＴＩＮＧ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを、ＣＤ８膜貫通ドメインもしくはＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはＣＤ６４膜貫通ドメインもしくはＣＤ１６膜貫通ドメイン、またはＣＤ８９膜貫通ドメイン、およびＰＩ３キナーゼ動員ドメイン、またはＣＤ４０細胞内シグナル伝達ドメインなど、１つまたは複数のさらなる細胞内シグナル伝達ドメインと共に含む。例えば、本明細書で開示される、例示的ＣＦＰ分子は、配列番号８もしくは配列番号９、またはこれらの両方の配列、あるいは配列番号１０または配列番号１１の配列を含む、アミノ酸配列を有する、細胞外ＣＤ５結合性ドメイン；および配列番号３８に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む細胞内ドメインを含む。
[00253]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３９もしくは４０のアミノ酸配列、または配列番号３９もしくは４０に対する少なくとも８５％の配列同一性を伴うアミノ酸配列を有する、ＭＡＶＳ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３９または４０に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＭＡＶＳ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３９または４０に対する少なくとも９５％の配列同一性を有する、ＭＡＶＳ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号３９もしくは４０に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＭＡＶＳ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号３９もしくは４０に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＭＡＶＳ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを、ＣＤ８膜貫通ドメインもしくはＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはＣＤ６８膜貫通ドメインもしくはＣＤ６４膜貫通ドメインもしくはＣＤ１６膜貫通ドメイン、またはＣＤ８９膜貫通ドメイン、およびヒンジドメインと共に含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号３９もしくは４０に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＭＡＶＳ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを、ＣＤ８膜貫通ドメインもしくはＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはＣＤ６４膜貫通ドメインもしくはＣＤ１６膜貫通ドメイン、またはＣＤ８９膜貫通ドメイン、およびＰＩ３キナーゼ動員ドメイン、またはＣＤ４０細胞内シグナル伝達ドメインなど、１つまたは複数のさらなる細胞内シグナル伝達ドメインと共に含む。例えば、本明細書で開示される、例示的ＣＦＰ分子は、配列番号８もしくは配列番号９、またはこれらの両方の配列、あるいは配列番号１０または配列番号１１の配列を含む、アミノ酸配列を有する、細胞外ＣＤ５結合性ドメイン；および配列番号３９もしくは４０に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む細胞内ドメインを含む。
[00254]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４５のアミノ酸配列、または配列番号４５に対する少なくとも８５％の配列同一性を伴う配列を有する、ＭＡＶＳ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４５に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＭＡＶＳ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４５に対する少なくとも９５％の配列同一性を有する、ＭＡＶＳ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４５に対する少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号４５に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＭＡＶＳ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号４５に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＭＡＶＳ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを、ＣＤ８膜貫通ドメインもしくはＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはＣＤ６８膜貫通ドメインもしくはＣＤ６４膜貫通ドメインもしくはＣＤ１６膜貫通ドメイン、またはＣＤ８９膜貫通ドメイン、およびヒンジドメインと共に含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号４５に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＭＡＶＳ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを、ＣＤ８膜貫通ドメインもしくはＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはＣＤ６４膜貫通ドメインもしくはＣＤ１６膜貫通ドメイン、またはＣＤ８９膜貫通ドメイン、およびＰＩ３キナーゼ動員ドメイン、またはＣＤ４０細胞内シグナル伝達ドメインなど、１つまたは複数のさらなる細胞内シグナル伝達ドメインと共に含む。例えば、本明細書で開示される、例示的ＣＦＰ分子は、配列番号８もしくは配列番号９、またはこれらの両方の配列、あるいは配列番号１０または配列番号１１の配列を含む、アミノ酸配列を有する、細胞外ＣＤ５結合性ドメイン；および配列番号４５に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む細胞内ドメインを含む。
[00255]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４１のアミノ酸配列、または配列番号４１に対する少なくとも８５％の配列同一性を有する、ＴＲＩＦ細胞内ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４１に対する少なくとも少なくとも８６％、または少なくとも８７％、または少なくとも８８％、または少なくとも８９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４１に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＴＲＩＦ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４１に対する少なくとも少なくとも９１％、または少なくとも９２％、または少なくとも９３％、または少なくとも９４％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４１に対する少なくとも９５％の配列同一性を有する、ＴＲＩＦ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号４１に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＴＲＩＦ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号４１に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＴＲＩＦ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを、ＣＤ８膜貫通ドメインもしくはＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはＣＤ６８膜貫通ドメインもしくはＣＤ６４膜貫通ドメインもしくはＣＤ１６膜貫通ドメイン、またはＣＤ８９膜貫通ドメイン、およびヒンジドメインと共に含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号４１に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＴＲＩＦ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを、ＣＤ８膜貫通ドメインもしくはＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはＣＤ６４膜貫通ドメインもしくはＣＤ１６膜貫通ドメイン、またはＣＤ８９膜貫通ドメイン、およびＰＩ３キナーゼ動員ドメイン、またはＣＤ４０細胞内シグナル伝達ドメインなど、１つまたは複数のさらなる細胞内シグナル伝達ドメインと共に含む。例えば、本明細書で開示される、例示的ＣＦＰ分子は、配列番号８もしくは配列番号９、またはこれらの両方の配列、あるいは配列番号１０または配列番号１１の配列を含む、アミノ酸配列を有する、細胞外ＣＤ５結合性ドメイン；および配列番号４１に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む細胞内ドメインを含む。
[00256]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４３のアミノ酸配列、または配列番号４３に対する少なくとも８５％の配列同一性を有する、ＴＲＩＦ細胞内ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４３に対する少なくとも少なくとも８６％、または少なくとも８７％、または少なくとも８８％、または少なくとも８９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４３に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＴＲＩＦ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４３に対する少なくとも少なくとも９１％、または少なくとも９２％、または少なくとも９３％、または少なくとも９４％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４３に対する少なくとも９５％の配列同一性を有する、ＴＲＩＦ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号４３に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＴＲＩＦ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号４３に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＴＲＩＦ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを、ＣＤ８膜貫通ドメインもしくはＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはＣＤ６８膜貫通ドメインもしくはＣＤ６４膜貫通ドメインもしくはＣＤ１６膜貫通ドメイン、またはＣＤ８９膜貫通ドメイン、およびヒンジドメインと共に含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号４３に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＴＲＩＦ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを、ＣＤ８膜貫通ドメインもしくはＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはＣＤ６４膜貫通ドメインもしくはＣＤ１６膜貫通ドメイン、またはＣＤ８９膜貫通ドメイン、およびＰＩ３キナーゼ動員ドメイン、またはＣＤ４０細胞内シグナル伝達ドメインなど、１つまたは複数のさらなる細胞内シグナル伝達ドメインと共に含む。例えば、本明細書で開示される、例示的ＣＦＰ分子は、配列番号８もしくは配列番号９、またはこれらの両方の配列、あるいは配列番号１０または配列番号１１の配列を含む、アミノ酸配列を有する、細胞外ＣＤ５結合性ドメイン；および配列番号４３に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む細胞内ドメインを含む。
[00257]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４４のアミノ酸配列、または配列番号４４に対する少なくとも８５％の配列同一性を有する、ＴＲＩＦ細胞内ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４４に対する少なくとも少なくとも８６％、または少なくとも８７％、または少なくとも８８％、または少なくとも８９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４４に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＴＲＩＦ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４４に対する少なくとも少なくとも９１％、または少なくとも９２％、または少なくとも９３％、または少なくとも９４％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４４に対する少なくとも９５％の配列同一性を有する、ＴＲＩＦ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
[00258]一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号４４に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＴＲＩＦ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号４４に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＴＲＩＦ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを、ＣＤ８膜貫通ドメインもしくはＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはＣＤ６８膜貫通ドメインもしくはＣＤ６４膜貫通ドメインもしくはＣＤ１６膜貫通ドメイン、またはＣＤ８９膜貫通ドメイン、およびヒンジドメインと共に含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号４４に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＴＲＩＦ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを、ＣＤ８膜貫通ドメインもしくはＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはＣＤ６４膜貫通ドメインもしくはＣＤ１６膜貫通ドメイン、またはＣＤ８９膜貫通ドメイン、およびＰＩ３キナーゼ動員ドメイン、またはＣＤ４０細胞内シグナル伝達ドメインなど、１つまたは複数のさらなる細胞内シグナル伝達ドメインと共に含む。例えば、本明細書で開示される、例示的ＣＦＰ分子は、配列番号８もしくは配列番号９、またはこれらの両方の配列、あるいは配列番号１０または配列番号１１の配列を含む、アミノ酸配列を有する、細胞外ＣＤ５結合性ドメイン；および配列番号４４に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む細胞内ドメインを含む。
[00259]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４２のアミノ酸配列、または配列番号４２に対する少なくとも８５％の配列同一性を有する、ＴＡＳＬ細胞内ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号４２に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＴＡＳＬ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号４２に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＴＡＳＬ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを、ＣＤ８膜貫通ドメインもしくはＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはＣＤ６８膜貫通ドメインもしくはＣＤ６４膜貫通ドメインもしくはＣＤ１６膜貫通ドメイン、またはＣＤ８９膜貫通ドメイン、およびヒンジドメインと共に含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞内ドメインは、配列番号４２に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する、ＴＡＳＬ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含み；この場合、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５分子、標的細胞上のＨＥＲ２分子、標的細胞上のＣＤ１９分子、標的細胞上のＴＲＯＰ２分子、標的細胞上のＧＰＣ３分子、標的細胞上のＣＤ７０分子、標的細胞上のＣＤ１３７分子、標的細胞上のＣＤ７分子、標的細胞上のＣｌａｕｄｉｎ分子、標的細胞上のＣＤ２２分子、または標的細胞上のＧＰ７５分子に結合することが可能である、細胞外結合性ドメインを、ＣＤ８膜貫通ドメインもしくはＣＤ２８膜貫通ドメイン、またはＣＤ６４膜貫通ドメインもしくはＣＤ１６膜貫通ドメイン、またはＣＤ８９膜貫通ドメイン、およびＰＩ３キナーゼ動員ドメイン、またはＣＤ４０細胞内シグナル伝達ドメインなど、１つまたは複数のさらなる細胞内シグナル伝達ドメインと共に含む。例えば、本明細書で開示される、例示的ＣＦＰ分子は、配列番号８もしくは配列番号９、またはこれらの両方の配列、あるいは配列番号１０または配列番号１１の配列を含む、アミノ酸配列を有する、細胞外ＣＤ５結合性ドメイン；および配列番号４２に対する少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む細胞内ドメインを含む。
[00260]一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的抗ＣＤ５結合性ＣＦＰは、配列番号１０もしくは配列番号１１の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＲＧＹＤＷＹＦＤＶ（配列番号９９）のＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメイン、および／もしくはＱＱＹＤＥＳＰＷＴ（配列番号１００）のＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；配列番号４１の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号１０もしくは配列番号１１の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＲＧＹＤＷＹＦＤＶ（配列番号９９）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１００のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号４３の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号１０もしくは配列番号１１の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＲＧＹＤＷＹＦＤＶ（配列番号９９）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１００のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号４４の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号１０もしくは配列番号１１の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＲＧＹＤＷＹＦＤＶ（配列番号９９）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１００のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号３０の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号１０もしくは配列番号１１の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＲＧＹＤＷＹＦＤＶ（配列番号９９）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１００のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号３６の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号１０もしくは配列番号１１の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＲＧＹＤＷＹＦＤＶ（配列番号９９）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１００のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号３７の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号１０もしくは配列番号１１の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＲＧＹＤＷＹＦＤＶ（配列番号９９）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１００のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号３８の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号１０もしくは配列番号１１の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＲＧＹＤＷＹＦＤＶ（配列番号９９）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１００のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号３９の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号１０もしくは配列番号１１の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＲＧＹＤＷＹＦＤＶ（配列番号９９）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１００のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号４０の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号１０もしくは配列番号１１の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＲＧＹＤＷＹＦＤＶ（配列番号９９）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１００のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号４５の細胞内ドメインをさらに含む。
[00261]一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的抗ＨＥＲ２結合性ＣＦＰは、配列番号１４もしくは配列番号９４の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶ（配列番号１０１）のＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメイン、および／もしくはＱＱＨＹＴＴＰＰＴ（配列番号１０２）のＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；配列番号４１の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号１４もしくは配列番号９４の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶ（配列番号１０１）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１０２のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号４３の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号１４もしくは配列番号９４の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶ（配列番号１０１）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１０２のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号４４の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号１４もしくは配列番号９４の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶ（配列番号１０１）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１０２のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号３０の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号１４もしくは配列番号９４の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶ（配列番号１０１）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１０２のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号３６の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号１４もしくは配列番号９４の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶ（配列番号１０１）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１０２のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号３７の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号１４もしくは配列番号９４の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶ（配列番号１０１）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１０２のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号３８の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号１４もしくは配列番号９４の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶ（配列番号１０１）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１０２のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号３９の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号１４もしくは配列番号９４の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶ（配列番号１０１）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１０２のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号４０の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号１４もしくは配列番号９４の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶ（配列番号１０１）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１０２のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号４５の細胞内ドメインをさらに含む。
[00262]一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的抗ＴＲＯＰ２結合性ＣＦＰは、配列番号３４もしくは配列番号３５の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶ（配列番号１０３）のＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメイン、および／もしくはＱＱＨＹＩＴＰＬＴ（配列番号１０４）のＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメインを含み；配列番号４１の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号３４もしくは配列番号３５の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶ（配列番号１０３）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１０４のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号４３の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号３４もしくは配列番号３５の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶ（配列番号１０３）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１０４のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号４４の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号３４もしくは配列番号３５の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶ（配列番号１０３）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１０４のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号３０の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号３４もしくは配列番号３５の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶ（配列番号１０３）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１０４のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号３６の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号３４もしくは配列番号３５の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶ（配列番号１０３）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１０４のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号３７の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号３４もしくは配列番号３５の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶ（配列番号１０３）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１０４のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号３８の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号３４もしくは配列番号３５の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶ（配列番号１０３）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１０４のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号３９の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号３４もしくは配列番号３５の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶ（配列番号１０３）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１０４のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号４０の細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される例示的ＣＦＰは、配列番号３４もしくは配列番号３５の配列を有する細胞外抗原結合性ドメイン、または少なくともＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶ（配列番号１０３）のＣＤＲ３配列を含むＶＨドメイン、および／もしくは配列番号１０４のＣＤＲ３配列を含むＶＬドメインを含み；配列番号４５の細胞内ドメインをさらに含む。
ＩＲＦ誘導性タンパク質およびＩＲＦ活性化経路
[00263]Ｉ型ＩＦＮは、自然抗ウイルス免疫を媒介する、鍵となるサイトカインであり、このため、炎症促進性応答を駆動する。Ｉ型ＩＦＮは、微生物の二本鎖（ｄｓ）ＤＮＡ、ｄｓＲＮＡ、およびＬＰＳを認識する、ｃＧＭＰ－ＡＭＰシンターゼ、レチノイン酸誘導性タンパク質１（ＲＩＧ－Ｉ）様受容体、およびＴｏｌｌ様受容体によりたやすく誘導される。これらのシグナル伝達経路は、転写因子ＩＲＦ－３（ＩＦＮ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒ ３）の動員および活性化で合流する。アダプタータンパク質ＳＴＩＮＧ（ＩＦＮ遺伝子刺激因子）、ＭＡＶＳ（ミトコンドリア抗ウイルスシグナル伝達）、およびＴＲＩＦ（ＴＩＲドメイン含有アダプター誘導性ＩＦＮ－β）は、保存的ｐＬｘＩＳモチーフを介して、ＩＲＦ－３の動員を媒介する。リン酸化されたＳＴＩＮＧ、ＭＡＶＳ、およびＴＲＩＦのｐＬｘＩＳモチーフが、一般に、ＩＲＦ－３に、同様の形で結合するのに対し、モチーフの上流の残基は、特異性を付与する。ＩＦＮ－αおよびＩＦＮ－βなどのＩ型ＩＦＮは、抗ウイルス免疫を媒介する、主要なサイトカインファミリーである。細胞質ゾル中の、微生物ｄｓＤＮＡは、サイクリックジヌクレオチドである、ｃＧＡＭＰ（サイクリック［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］）の合成を触媒する酵素である、ｃＧＡＳ（ｃＧＭＰ－ＡＭＰ ｓｙｎｔｈａｓｅ）に結合し、これを活性化する。第２のメッセンジャーとして、ｃＧＡＭＰは、小胞体（ＥＲ）膜上に位置するアダプタータンパク質ＳＴＩＮＧ（ＩＦＮ遺伝子刺激因子）に結合し、タンパク質キナーゼＴＢＫ１（ＴＡＮＫ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｋｉｎａｓｅ １）を介する、転写因子ＩＲＦ－３（ＩＦＮ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒ ３）の活性化を方向付ける。リン酸化ＩＲＦ－３は、二量体化し、核へと移行して、ＩＦＮ－β遺伝子の転写を惹起する。これに対し、細胞質ゾル中の、ウイルスｄｓＤＮＡは、アダプタータンパク質ＭＡＶＳ（ミトコンドリア抗ウイルスシグナル伝達）を介して、ＩＲＦ－３を活性化する、ＲＬＲ［レチノイン酸誘導性タンパク質１（ＲＩＧ－Ｉ）様受容体］により感知される。さらに、エンドソーム内のウイルスｄｓＲＮＡ、および細菌の細胞壁構成要素であるＬＰＳを認識するＴＬＲ（Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）である、ＴＬＲ３およびＴＬＲ４は、それぞれ、また、Ｉ型ＩＦＮおよび炎症性サイトカインの誘導も媒介する（１）。これらの２つのＴＬＲは、アダプタータンパク質でＴＲＩＦ（ＴＩＲドメイン含有アダプター誘導性ＩＦＮ－β）を使用して、ＩＲＦ－３の動員および活性化を媒介する。注目すべきことに、これら３つの自然免疫センサーファミリーのシグナル伝達経路は、ＴＢＫ１およびＩＲＦ－３の活性化で合流する。機構的に述べると、アダプタータンパク質ＳＴＩＮＧ、ＭＡＶＳ、およびＴＲＩＦは、ＴＢＫ１またはＩＫＫεによりリン酸化され、ＩＲＦ－３の、シグナル伝達複合体への動員を媒介する保存的モチーフである、ｐＬｘＩＳ（ｐは、親水性残基を表し、ｘは、任意の残基を表し、Ｓは、リン酸化部位を表す）を含有する。ＴＢＫ１と、ＩＲＦ－３との近接性の誘導は、ＩＲＦ－３のリン酸化および活性化を結果としてもたらす。さらに、ＩＲＦ－３自体もまた、ＩＲＦ－３の、リン酸化誘導性二量体化／活性化に極めて重要である、ｐＬｘＩＳモチーフを含有する。ＳＴＩＮＧ、ＭＡＶＳ、およびＴＲＩＦのｐＬｘＩＳモチーフ内のリン酸化部位であるセリンの突然変異は、それらのそれぞれのシグナル伝達経路内における、Ｉ型ＩＦＮの誘導を失効化する。しかし、ＩＲＦ－３の動員および活性化の正確な分子的機構は、依然として未知である。リン酸化されたＳＴＩＮＧ（ｐＳＴＩＮＧ）、ＭＡＶＳ（ｐＭＡＶＳ）、およびＴＲＩＦ（ｐＴＲＩＦ）による、ＩＲＦ－３の動員の構造的基礎を解明するために、本発明者らは、３つのアダプタータンパク質に由来するｐＬｘＩＳモチーフを含有するペプチドを発現させ、これらを、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、ＴＢＫ１によりリン酸化させ、ＩＲＦ－３のＣ末端ドメイン（ＣＴＤ）との、それらの複合体についての結晶構造を決定した。
ｐＭＡＶＳおよびｐＴＲＩＦによる、ＩＲＦ－３動員の機構。
[00264]ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路を介するｄｓＤＮＡセンシングと対照的に、ＲＬＲは、細胞質ゾル中のｄｓＤＮＡを感知し、アダプターであるＭＡＶＳを介して、ＩＲＦ－３を活性化し、ＴＬＲ３およびＴＬＲ４は、アダプターであるＴＲＩＦを使用して、ＩＲＦ－３を動員する。ＭＡＶＳまたはＴＲＩＦのｐＬｘＩＳモチーフのリン酸化は、ＩＲＦ－３の動員および活性化に要求される。
ＴＲＡＦ相互作用性タンパク質：
[00265]約１８０アミノ酸のタンパク質相互作用性ドメインである、ＴＲＡＦドメインの存在は、ＴＲＡＦファミリータンパク質の、顕著に異なる特色であり、哺乳動物では、ファミリー内の７つのＴＲＡＦタンパク質中、この基準に従う６つ（ＴＲＡＦ１～ＴＲＡＦ６）が、ＴＲＡＦファミリーとして同定されている。ＴＲＡＦドメインは、２つの顕著に異なる領域：ＴＲＡＦ－ＮドメインおよびＴＲＡＦ－Ｃドメインへと細分されうる。多様な受容体が、ＴＲＡＦ－Ｃドメインに結合するのに対し、多様な細胞内シグナル伝達分子は、ＴＲＡＦ－Ｎドメインに結合する。ＴＲＡＦドメインの構造的類似性にも拘わらず、各ＴＲＡＦタンパク質は、相互作用パートナー：上流の受容体および下流のエフェクター分子に対する特異性を伴う、特異的生体機能を有する。ＴＲＡＦ２のＴＲＡＦドメインの構造は、Ｗｕ博士の研究グループにより、１９９９年頃に最初に報告され、ＴＲＡＦ６のＴＲＡＦドメインの構造は、同じ研究グループにより、３年後に報告された。それ以来、ＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ５、ＴＲＡＦ４、およびＴＲＡＦ１のＴＲＡＦドメインの構造も報告されている。ＴＲＡＦ構造は、ＴＲＡＦ－Ｎドメインが、コイルドコイル構造であり、ＴＲＡＦ－Ｃが、７～８つのアンチパラレルβシートフォールドから構成されることを明らかにした。６つ全てのＴＲＡＦファミリーメンバーの構造アライメントは、ＴＲＡＦ－Ｃドメインのアライメントが、良好であるのに対し、ＴＲＡＦ－Ｎの位置および長さは、ＴＲＡＦファミリーメンバー間で変動することを示す。配列解析は、ＴＲＡＦ－Ｎの長さが、ファミリー内で変動するのに対し、ＴＲＡＦ－Ｃドメインの長さは、保存的であることを指し示す：ＴＲＡＦ４およびＴＲＡＦ６のＴＲＡＦ－Ｎの長さが、比較的短いのに対し、ＴＲＡＦ３およびＴＲＡＦ５のＴＲＡＦ－Ｎの長さは、比較的長い。全体的構造は、ほぼ同一であるが、明白な構造的差違が観察された。例えば、ＴＲＡＦ４およびＴＲＡＦ６の、ＴＲＡＦドメイン内の、一部のループの長さおよび位置は、他のＴＲＡＦファミリーメンバーの場合と異なる。ＴＲＡＦ４が、受容体結合性領域の中に、より強く負に帯電した表面を含有するのに対し、ＴＲＡＦ６は、受容体結合性領域内に、より強く正に帯電した表面を含有する。表面特徴は、パートナーとの、それらの相互作用方式を決定することが多いため、ＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、およびＴＲＡＦ５、すなわち、多様な帯電表面間で同様である、ＴＲＡＦドメインの静電表面は、同様の相互作用方式で、同じ結合性ポケット内に、多様な受容体を受け入れるために重要であることが示されている。これに対し、機能的に異なるＴＲＡＦの結合表面上の、異なる特徴である、ＴＲＡＦ４およびＴＲＡＦ６は、ＴＲＡＦ４およびＴＲＡＦ６が、異なる相互作用方式で、異なる受容体を受け入れることを指し示す。
[00266]本開示の目的で、上記の段落で論じられた、任意の経路、シグナル伝達中間項、または活性化部分は、本明細書で開示される、ＣＦＰの誘導時に、適用に応じて、活性化可能または機能的であると考えられうる。同様に、本明細書で開示されるＣＦＰは、論じられた経路内で記載される、適用可能な標的のうちのいずれの標的化においても有用でありうる。シグナル伝達ドメイン、シグナル伝達経路、シグナル伝達中間項、活性化遺伝子の転写因子に関する、既存の文献の日付現在において、当業者にたやすく公知である、任意の経路またはその一部は、本開示の予察内にあることが理解される。
ＴＬＲ細胞内ドメインを伴うキメラタンパク質、ＴＬＲ細胞内シグナル伝達経路、およびＮＦカッパＢの活性化：
[00267]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲタンパク質に由来する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＴＬＲ細胞内シグナル伝達ドメインに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含むようにデザインされたＣＦＰは、受容体の細胞外ドメインの、その標的への係合時に、ＮＦカッパＢを活性化しうる。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、エンドリソソームＴＬＲ、例えば、ＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９の細胞内シグナル伝達ドメインを含みうる。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ３タンパク質に由来しうる。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ７タンパク質、ＴＬＲ８タンパク質、またはＴＬＲ９タンパク質に由来しうる。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、細胞表面ＴＬＲ１、同ＴＬＲ２、同ＴＬＲ４、同ＴＬＲ５、同ＴＬＲ６、および同ＴＬＲ１０の、細胞内シグナル伝達ドメインを含みうる。一部の実施形態では、炎症応答のための細胞質ドメインは、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ９、ＭＹＤ８８、ＴＲＩＦ、ＲＩＧ－１、ＭＤＡ５、ＣＤ４０、ＩＦＮ受容体、ＮＬＲＰ－１、ＮＬＲＰ－２、ＮＬＲＰ－３、ＮＬＲＰ－４、ＮＬＲＰ－５、ＮＬＲＰ－６、ＮＬＲＰ－７、ＮＬＲＰ－８、ＮＬＲＰ－９、ＮＬＲＰ－１０、ＮＬＲＰ－１１、ＮＬＲＰ－１２、ＮＬＲＰ－１３、ＮＬＲＰ－１４、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、Ｐｙｒｉｎ、ＡＩＭ２、ＮＬＲＣ４、および／またはＣＤ４０の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
[00268]一部の実施形態では、貪食スカベンジャー受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）は、ＩＬ－１シグナル伝達カスケードの活性化のための、炎症促進性細胞質ドメインを含む。
[00269]一部の実施形態では、キメラ受容体（例えば、貪食性受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ））の細胞質部分は、ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）、ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）、ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）、ｔｏｌｌ様受容体８（ＴＬＲ８）、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）の細胞内シグナル伝達ドメインなど、ｔｏｌｌ様受容体に由来する細胞質ドメインを含む。
[00270]一般に、ＴＬＲは、多様な細胞内局在、発生経路、活性化、認識、および作用方式を有する。ＴＬＲは、樹状細胞（ＤＣ）およびマクロファージなどの自然免疫細胞のほか、線維芽細胞および上皮細胞などの非免疫細胞において発現される。細胞表面ＴＬＲは、主に、脂質、リポタンパク質、およびタンパク質などの微生物膜成分を認識する。ＴＬＲ４は、細菌性リポ多糖（ＬＰＳ）を認識する。ＴＬＲ２は、ＴＬＲ１またはＴＬＲ６と共に、リポタンパク質、ペプチドグリカン、リポタイコ酸、ザイモサン、マンナン、およびｔＧＰＩ－ムチンを含む、多種多様なＰＡＭＰを認識する。ＴＬＲ５は、細菌性フラジェリンを認識する。ＴＬＲ１０は、マウスでは、終止コドンの挿入に起因して、偽遺伝子であるが、ヒトＴＬＲ１０は、ＴＬＲ２と協同して、リステリア菌に由来するリガンドを認識する。ＴＬＲ１０はまた、Ａ型インフルエンザウイルスによるウイルス感染も感知する。
[00271]細胞内ＴＬＲは細菌およびウイルスに由来する核酸を認識し、自己免疫などの疾患状態において、自己核酸もまた認識する。ＴＬＲ３は、ウイルス性二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ、および損傷細胞に由来する自己ＲＮＡを認識する。ＴＬＲ７は、主に、形質細胞様ＤＣ（ｐＤＣ）内で発現され、ウイルスに由来する一本鎖（ｓｓ）ＲＮＡを認識する。ＴＬＲ７はまた、従来型ＤＣ（ｃＤＣ）内の、Ｂ型連鎖球菌に由来するＲＮＡも認識する。ヒトＴＬＲ８は、ウイルス性ＲＮＡおよび細菌性ＲＮＡに応答する。構造解析は、非刺激ヒトＴＬＲ８は、あらかじめ形成された二量体として存在し、ＬＲＲ１４と、ＬＲＲ１５との間のＺループは、Ｎ末端側の半分と、Ｃ末端側の半分とに切断されるが、互いとの会合を維持し、リガンド認識および二量体化に参与することを明らかにした。リガンドの結合は、２つのＣ末端を近接させるように、二量体の再組織化を誘導する。ＴＬＲ１３は、細菌性２３Ｓ ｒＲＮＡ、および未知の水疱性口炎ウイルス構成要素を認識する。ＴＬＲ９は、非メチル化ＣｐＧ－ＤＮＡモチーフに富む、細菌性ＤＮＡおよびウイルス性ＤＮＡを認識し；また、宿主ヘモグロビンが消化された後の解毒過程において、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍにより産生される、不溶性の結晶性副産物である、ヘモゾインも認識する。ＴＬＲ１１は、エンドリソソーム内に局所化され、尿路病原性大腸菌（ＵＰＥＣ）のフラジェリンまたは未知のタンパク質性構成要素のほか、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉに由来するプロフィリン様分子を認識する。ＴＬＲ１２は、主に、骨髄細胞内で発現され、ＴＬＲ１１と高度に類似し、Ｔ．ｇｏｎｄｉｉに由来するプロフィリンを認識する。ＴＬＲ１２は、ＴＬＲ１１を伴う、ホモ二量体またはヘテロ二量体として機能する。全てのＴＬＲは、ＥＲ内で合成され、ゴルジ体へと輸送され、細胞表面、またはエンドソームなどの細胞内コンパートメントへと動員される。ＴＬＲの細胞内局在は、リガンド認識のほか、ＴＬＲが、自己免疫を引き起こしうる、自己核酸と接触することを阻止するために、極めて重要であると考えられる。
[00272]個々のＴＬＲは、ＭｙＤ８８、ＴＲＩＦ、ＴＩＲＡＰ／ＭＡＬ、またはＴＲＡＭなど、ＴＩＲドメイン含有アダプターのセットのメンバーを、差動的に動員する。ＭｙＤ８８は、全てのＴＬＲにより利用され、炎症性サイトカイン遺伝子の誘導のために、ＮＦ－κＢおよびＭＡＰＫを活性化する。ＴＩＲＡＰは、ＭｙＤ８８を、ＴＬＲ２およびＴＬＲ４などの細胞表面ＴＬＲへと動員する、分取アダプターである。ＴＩＲＡＰはまた、ＴＬＲ９などのエンドソームＴＬＲを介するシグナル伝達にも参与する。ＴＩＲＡＰの脂質結合性ドメインは、細胞膜において、ＰＩ（４，５）Ｐ２に結合し、エンドソーム上において、ＰＩ（３）Ｐに結合し、これらは、それぞれの部位において、機能的ＴＬＲ４／ＴＬＲ９シグナル伝達複合体の形成を媒介する。したがって、ＴＩＲＡＰは、異なる脂質に結合することにより、細胞表面ＴＬＲおよびエンドソームＴＬＲの両方と会合する。ＴＲＩＦは、ＴＬＲ３およびＴＬＲ４へと動員され、Ｉ型ＩＦＮ遺伝子および炎症性サイトカイン遺伝子の誘導のために、ＩＲＦ３、ＮＦ－κＢ、およびＭＡＰＫの活性化をもたらす、代替的経路を促進する。ＴＲＡＭは、ＴＲＩＦと、ＴＬＲ４とを連結するように、ＴＬＲ３ではなく、ＴＬＲ４へと、選択的に動員される。ＴＬＲ３は、ＴＲＩＦと直接相互作用し、この相互作用は、ＴＬＲ３の細胞質ドメイン内の２つのチロシン残基の、表皮増殖因子ＥｒｂＢ１およびＢｔｋによるリン酸化を要求する。ＴＬＲの係合の後、ＭｙＤ８８は、ＩＲＡＫキナーゼファミリーのメンバーと共に複合体を形成する。ＩＲＡＫ４は、ＩＲＡＫ１を活性化し、次いで、ＩＲＡＫ１は、いくつかの部位において自己リン酸化され、ＭｙＤ８８から放出される。ＩＲＡＫ１は、ＲＩＮＧドメインＥ３ユビキチンリガーゼである、ＴＲＡＦ６と会合する。ＴＲＡＦ６は、ユビキチン結合酵素である、ＵＢＣ１３およびＵＥＶ１Ａと共に、ＴＲＡＦ６自体およびＴＡＫ１タンパク質キナーゼ複合体の両方の、Ｋ６３結合型ポリユビキチン化を促進する。ＴＡＫ１は、ＭＡＰＫＫＫファミリーのメンバーであり、ＴＲＡＦ６により生じたポリユビキチン鎖と相互作用して、ＴＡＫ１の活性化を駆動する、調節性サブユニットである、ＴＡＢ１、ＴＡＢ２、およびＴＡＢ３と複合体を形成する。次いで、ＴＡＫ１は、ＩＫＫ複合体－ＮＦ－κＢ経路、およびＩＫＫ複合体－ＭＡＰＫ経路の活性化をもたらす、２つの異なる経路を活性化する。ＩＫＫ複合体は、触媒性サブユニットである、ＩＫＫαおよびＩＫＫβと、調節性サブユニットであるＮＥＭＯ（また、ＩＫＫγとも呼ばれる）とから構成される。ＴＡＫ１は、ユビキチン鎖を介して、ＩＫＫ複合体に結合し、これは、ＩＫＫ複合体がリン酸化することを可能とし、ＩＫＫβを活性化する。ＩＫＫ複合体は、ＮＦ－κＢ阻害性タンパク質ＩκＢαをリン酸化し、ＩκＢαは、プロテアソーム分解を経、ＮＦ－κＢが、核へと移行して、炎症促進性遺伝子発現を誘導することを可能とする。ＴＡＫ１の活性化はまた、ＡＰ－１ファミリーの転写因子の活性化、またはｍＲＮＡの安定化を媒介して、炎症性応答を調節する、ＥＲＫ１／２、ｐ３８、およびＪＮＫなど、ＭＡＰＫファミリーメンバーの活性化も結果としてもたらす。
[00273]一部の実施形態では、本明細書で記載される細胞内ドメインは、別のドメイン、例えば、別の細胞内ドメイン、膜貫通ドメイン、または細胞外ドメインなどの構造ドメイン；シグナル伝達ドメインなどの機能ドメインと、特異的に対にされうる。一部の実施形態では、ＭｙＤ８８、ＴＲＩＦ、ＴＩＲＡＰ／ＭＡＬ、ＴＬＲ、ＭＡＶＳ、ＭＤＡ５、ＳＴＩＮＧ、ＲＩＧ１、ＴＡＳＬなど、本明細書の節において記載される細胞内ドメイン、または本明細書で言及される、他の任意のドメインは、別のドメインまたはその構成要素と対をなすために、調整または改変されうる。対をなすとは、検討中の１つもしくは複数のドメインの一部、またはこれらの断片もしくは構成要素の、ＣＦＰタンパク質の分子構造の任意の一部としての、ＣＦＰデザインへの組入れを意味することが意図される。一部の実施形態では、調整は、ＣＦＰ分子内の、ドメインの、構造的な位置合せまたは配置の場合があり、例えば、検討中の２つのドメインは、並置されるか、またはこれらの間の、１つもしくは複数のドメインにより隔てられるか、またはこれらの間の、１つもしくは複数のアミノ酸により隔てられる。１つまたは複数のアミノ酸は、リンカーでありうる。１つまたは複数のアミノ酸は、２つの隣接するドメイン間に、構造的懸隔をもたらす場合もあり、２つの隣接するドメイン間に、可撓性をもたらす場合もあり、１つまたは複数のアミノ酸を伴わないドメインを含む、分子構造より三次元的な配向性を付与する場合もある。一部の実施形態では、調整または改変は、突然変異など、ドメイン内の修飾を含みうる。
[00274]一部の実施形態では、ＭｙＤ８８、ＴＲＩＦ、ＴＩＲＡＰ／ＭＡＬ、ＴＬＲ、ＭＡＶＳ、ＭＤＡ５、ＳＴＩＮＧ、ＲＩＧ１、ＴＡＳＬなど、本明細書の節において記載される細胞内ドメイン、または本明細書で言及される、他の任意のドメインは、ＰＩ３キナーゼ動員ドメインなどのキナーゼ動員ドメインなど、ＣＦＰ内の別の細胞内ドメインとの対合またはこの組入れのために調整または改変されうる。一部の実施形態では、ＰＩ３キナーゼ動員ドメインは、トニックシグナル伝達を遮蔽するように改変される。一部の実施形態では、ドメインである、ＭｙＤ８８、ＴＲＩＦ、ＴＩＲＡＰ／ＭＡＬ、ＴＬＲ、ＭＡＶＳ、ＭＤＡ５、ＳＴＩＮＧ、ＲＩＧ１、ＴＡＳＬ、またはこれらの断片のうちのいずれか１つまたは複数など、他の細胞内ドメインのうちの１つは、トニックシグナル伝達を低減するか、またはこれを消失させるように改変される。
[00275]一部の実施形態では、ＭｙＤ８８、ＴＲＩＦ、ＴＩＲＡＰ／ＭＡＬ、ＴＬＲ、ＭＡＶＳ、ＭＤＡ５、ＳＴＩＮＧ、ＲＩＧ１、ＴＡＳＬなど、本明細書の節において記載される細胞内ドメイン、または本明細書で言及される、他の任意のドメインは、膜貫通ドメインなど、別の構造ドメインとの対合またはこの組入れのために調整または改変されうる。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ６８ドメインである。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ６４ドメインである。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８９ドメインである。一部の実施形態では、突然変異ＣＤ６８ドメイン、例えば、配列番号４６が使用されうる。
[00276]本開示の目的で、上記の段落で論じられた、任意の経路、シグナル伝達中間項、または活性化部分は、本明細書で開示される、ＴＬＲ細胞内シグナル伝達ドメインを含む、開示されるＣＦＰの誘導時に、適用に応じて、活性化可能または機能的であると考えられうる。同様に、本明細書で開示されるＣＦＰは、論じられた経路内で記載される、適用可能な標的のうちのいずれの標的化においても有用でありうる。シグナル伝達ドメイン、シグナル伝達経路、シグナル伝達中間項、活性化遺伝子の転写因子に関する、既存の文献の日付現在において、当業者にたやすく公知である、任意の経路またはその一部は、本開示の予察内にあることが理解される。
治療用組成物
[00277]本明細書の一態様では、ＣＤ１４＋細胞、ＣＤ１４＋／ＣＤ１６－細胞、ＣＤ１４＋／ＣＤ１６＋細胞、ＣＤ１４－／ＣＤ１６＋細胞、ＣＤ１４－／ＣＤ１６－細胞、樹状細胞、Ｍ０マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、またはモザイク骨髄細胞／マクロファージ／樹状細胞などの骨髄細胞が提供される。本明細書の一部の実施形態では、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％のＣＤ１４＋細胞を含む治療用組成物が提供される。一部の実施形態では、治療用組成物は、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％のＣＤ１４＋／ＣＤ１６－細胞を含む。本明細書の一部の実施形態では、２０％未満、１５％未満、１０％未満、または５％未満の樹状細胞を含む治療用組成物が提供される。本明細書で記載される治療用組成物のための骨髄細胞は、キメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸であって、本明細書で記載される、ＣＦＰ受容体タンパク質またはエンゲージャータンパク質をコードする組換え核酸を含む。本明細書で記載される治療用組成物のための骨髄細胞は、組換え核酸によりコードされるＣＦＰを発現するか、または本明細書で記載される組換え核酸によりコードされるエンゲージャータンパク質を発現する。
[00278]本明細書の一部の実施形態では、キメラ融合受容体タンパク質（ＣＦＰ）などのキメラ融合タンパク質を含み、ＣＦＰが、（ａ）（ｉ）本明細書で開示される標的のうちのいずれか１つに特異的に結合するｓｃＦｖ、および（ｉｉ）ＣＤ８に由来するヒンジドメイン、ＣＤ２８に由来するヒンジドメイン；またはＣＤ６８に由来する細胞外ドメインの、少なくとも一部を含む細胞外ドメイン；（ｂ）ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２膜貫通ドメイン、またはＣＤ６８膜貫通ドメイン；ならびに（ｃ）少なくとも２つの細胞内シグナル伝達ドメインを含み、少なくとも２つの細胞内シグナル伝達ドメインが、（ｉ）ＦｃＲγまたはＦｃＲεに由来する、第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、（ｉｉ）第２の細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９、ＴＲＩＦ、ＲＩＧ－１、ＭＹＤ８８、ＭＡＬ、ＩＲＡＫ１、ＭＤＡ－５、ＩＦＮ受容体、ＮＬＲＰファミリーメンバーであるＮＬＲＰ１～１４、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、ピリン、ＡＩＭ２、ＮＬＲＣ４、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＥＲＩＧ、ＩＬ－１、ＩＬ３、ＩＬ５、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＴＮＦ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＣＳＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ１７、ＩＰ－１０、またはＲＡＮＴＥＳに由来する細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＰＩ３Ｋ動員ドメイン、またはＣＤ４０に由来するドメインを含む、第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む治療用組成物が提供される。
[00279]一部の実施形態では、医薬組成物は、治療有効用量の骨髄細胞を含む、細胞集団を含む。一部の実施形態では、細胞集団は、投与後の対象において、エフェクター細胞へと分化し；投与後に、対象の罹患部位へと浸潤するか、もしくは投与後に、対象の罹患部位へと遊走し；かつ／または投与後の対象において、少なくとも５日間の寿命を有する。
[00280]一部の実施形態では、骨髄細胞は、治療的に有効な骨髄細胞を作出するようにさらに改変または操作されうる。分離された細胞は、その機能的／発生的可塑性、分化潜在的可能性、および細胞生存率を変更せずに、細胞内で、遺伝子、またはこれらの断片を発現させることにより操作されうる。
[00281]一部の実施形態では、骨髄細胞は、非内因性ポリヌクレオチドを、細胞へと発現させることにより、治療的に有効な骨髄細胞を作出するようにさらに改変または操作されうる。非内因性ポリヌクレオチドは、タンパク質またはペプチドをコードする。代替的に、非内因性ポリペプチドは、阻害性ＲＮＡ、またはモルホリノなど、非コード配列でありうる。
[00282]一部の実施形態では、骨髄細胞は、細胞のゲノム配列を、安定的に変更することにより、治療的に有効な骨髄細胞を作出するようにさらに改変または操作されうる。一部の実施形態では、骨髄細胞は、ＣＲＩＳＰＲ－ＣＡＳ系を使用して、骨髄細胞ゲノムを編集することにより操作されうる。一部の実施形態では、１つまたは複数の遺伝子は、遺伝子発現をサイレンシングするように編集されうる。一部の実施形態では、骨髄細胞は、遺伝子を欠失させるように操作されうる。一部の実施形態では、１つまたは複数の遺伝子は、遺伝子を増強するように編集されうる。一部の実施形態では、遺伝子素材は、骨髄細胞へと、メッセンジャーＲＮＡの形態で導入され、この場合、メッセンジャーＲＮＡは、タンパク質またはペプチドをコードし、これにより、骨髄細胞を、治療的に有効とする。一部の実施形態では、ネイキッドＤＮＡまたはメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）は、核酸を、骨髄細胞内部に導入するのに使用されうる。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体をコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡは、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）への封入により、貪食細胞へと導入される。ｍＲＮＡは、一本鎖であり、コドン最適化される場合がある。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、５’－メチルシトシン、またはシュードウリジンもしくはメチルシュードウリジンなど、１つまたは複数の修飾塩基または非天然塩基を含みうる。一部の実施形態では、ｍＲＮＡのうちの、約５０％またはこれを超えるウリジン（「Ｕ」）残基が、メチルシュードウリジンへと転換されうる。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、５０～１０，０００塩基長でありうる。一態様では、トランス遺伝子は、ｍＲＮＡとして送達される。ｍＲＮＡは、約１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１０，０００を超える塩基を含みうる。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、１０，０００塩基長を超える場合がある。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、約１１，０００塩基長でありうる。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、約１２，０００塩基長でありうる。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、融合タンパク質をコードする、トランス遺伝子配列を含む。ＬＮＰに封入されたＤＮＡまたはＲＮＡは、マクロファージにトランスフェクトするために使用される場合もあり、対象へと投与される場合もある。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、一過性トランスフェクションにより、エフェクター骨髄細胞集団へと組み込まれる。一部の実施形態では、一過性トランスフェクション法は、ｍＲＮＡの電気穿孔を含む。一部の実施形態では、一過性トランスフェクションは、化学的トランスフェクションを含む。一部の実施形態では、１ｍｌ当たり１～５，０００マイクログラムのｍＲＮＡが、上記で記載された方法に適するプロトコールを使用するトランスフェクションのために使用されうる。一部の実施形態では、１ｍｌ当たり１～２，０００マイクログラムのｍＲＮＡが、トランスフェクションのために使用されうる。一部の実施形態では、１ｍｌ当たり１～１，０００マイクログラムのｍＲＮＡが、トランスフェクションのために使用されうる。一部の実施形態では、１ｍｌ当たり１～１，０００マイクログラムのｍＲＮＡが、トランスフェクションのために使用されうる。一部の実施形態では、１ｍｌ当たり１～５００マイクログラムのｍＲＮＡが、トランスフェクションのために使用されうる。一部の実施形態では、１ｍｌ当たり１～２５０マイクログラムのｍＲＮＡが、トランスフェクションのために使用されうる。一部の実施形態では、１ｍｌ当たり約５００マイクログラムまたはこれ未満のｍＲＮＡが、トランスフェクションのために使用されうる。一部の実施形態では、１ｍｌ当たり約２５０マイクログラムまたはこれ未満のｍＲＮＡが、トランスフェクションのために使用されうる。一部の実施形態では、１ｍｌ当たり約１０マイクログラムのｍＲＮＡが使用される。一部の実施形態では、１ｍｌ当たり約２０マイクログラムのｍＲＮＡが使用される。一部の実施形態では、１ｍｌ当たり約３０マイクログラムのｍＲＮＡが使用される。一部の実施形態では、１ｍｌ当たり約４０マイクログラムのｍＲＮＡが使用される。一部の実施形態では、１ｍｌ当たり約５０マイクログラムのｍＲＮＡが使用される。一部の実施形態では、１ｍｌ当たり約６０マイクログラムのｍＲＮＡが使用される。一部の実施形態では、１ｍｌ当たり約８０マイクログラムのｍＲＮＡが使用される。一部の実施形態では、１ｍｌ当たり約１００マイクログラムのｍＲＮＡが使用される。一部の実施形態では、１ｍｌ当たり約１５０マイクログラムのｍＲＮＡが使用される。一部の実施形態では、１ｍｌ当たり約２００マイクログラムのｍＲＮＡが使用される。一部の実施形態では、１ｍｌ当たり約２０、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００、５００、または１０００マイクログラムのｍＲＮＡが使用される。方法、ならびに測定器および／または試薬についての製造元の指示書に基づき、または当業者に周知の通りに、トランスフェクションのために、適切な細胞密度が選択される。
[00283]一部の実施形態では、組換え核酸は、ｍＲＮＡである。ｍＲＮＡ構築物は、氷上で融解され、単球へと、静かにピペッティングされ、あらかじめ混合されうる。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、細胞へと電気穿孔される。エルトリエーション後における細胞は、プールされ、遠心分離され、前記の目的のために最適化された、ＭａｘＣｙｔｅ ＡＴＸシステムを使用する、ｍＲＮＡによる電気穿孔にかけられうる。一部の実施形態では、各構築物のための各プロトコールに最適化された電気穿孔緩衝液、細胞密度、および／またはｍＲＮＡ濃度が使用される。
[00284]一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、骨髄細胞へと、環状ＲＮＡ（ｃｉｒｃＲＮＡ）の形態で導入されうる。環状ＲＮＡ（ｃｉｒｃＲＮＡ）内では、３’末端と、５’末端とが、共有結合的に連結される。ｃｉｒｃＲＮＡは、ＬＮＰを使用して、細胞内部に送達されうる。
[00285]一部の実施形態では、トランス遺伝子の、マクロファージおよび他の貪食細胞への安定的組込みは、トランスポザーゼおよび転位性因子、特に、ｍＲＮＡコードトランスポザーゼの使用を介して達せられうる。一実施形態では、長鎖散在エレメント－１（Ｌ１）ＲＮＡは、トランス遺伝子のレトロ転位、およびマクロファージまたは貪食細胞への安定的組込みのために想定されうる。レトロトランスポゾンは、貪食または繋留受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）をコードする組換え核酸の安定的組込みのために使用されうる。
[00286]一部の実施形態では、骨髄細胞は、トランス遺伝子の、一過性発現ベクターへの組込みを介して、トランス遺伝子を発現させることにより改変されうる。一部の実施形態では、トランス遺伝子の発現は、調節因子により、細胞の外側から時間的に調節されうる。例は、トランス遺伝子の発現が、テトラサイクリンの存在または非存在を介して調節される、Ｔｅｔ－ｏｎ／Ｔｅｔ－ｏｆｆ系を含む。
[00287]一部の実施形態では、骨髄細胞は、細胞を、骨髄細胞内のタンパク質の場合もあり、酵素の場合もある、阻害剤の場合もあり、活性化剤の場合もある化合物と接触させることにより、治療的に有効な細胞を作出するように改変されうる。
[00288]一部の実施形態では、キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドは、前出節で記載された方法により得られる、分離された骨髄細胞へと導入される場合があり、この場合、キメラ抗原受容体は、骨髄細胞内の発現時に、骨髄細胞の自然免疫応答機能を増強する。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体の発現は、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、骨髄細胞を、特異的標的へと方向付ける場合もあり、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、骨髄細胞を、特異的標的へと方向付ける場合もある。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、骨髄細胞の貪食可能性を増大させうる。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、骨髄細胞の免疫原性を増大させる。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、細胞内シグナル伝達を増強しうる。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、細胞内の１つまたは複数のタンパク質と協同的に機能しうる。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、骨髄細胞内部で、第２の受容体または膜貫通タンパク質と共に、二量体化するまたは多量体化する場合があり、この場合、第２の受容体または膜貫通タンパク質は、内因性タンパク質である。一部の実施形態では、細胞は、融解の直後に、または核酸組込みの後に、ｅｘ ｖｉｖｏにおいて培養される。一部の実施形態では、ｅｘ ｖｉｖｏにおける培養は、調節された血清成分、例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含みうる、適切な培地の存在下で実施される。一部の実施形態では、ｅｘ ｖｉｖｏにおける培養および操作は、血清含有濃度が低度である培地中で実施されうる。一部の実施形態では、血清は、補体不活性化のために特異的に処置される。一部の実施形態では、骨髄細胞は、Ｍ－ＣＳＦの存在下、上記で記載された通り、ｅｘ ｖｉｖｏにおいて培養されうる。一部の実施形態では、骨髄細胞は、ＧＭ－ＣＳＦの存在下、上記で記載された通り、ｅｘ ｖｉｖｏにおいて培養されうる。一部の実施形態では、骨髄細胞は、１つまたは複数のサイトカインの存在下で培養されうる。一部の実施形態では、骨髄細胞は、増殖因子またはサイトカインの非存在下、ｅｘ ｖｉｖｏにおいて、ある時間にわたり培養または操作されうる。一部の実施形態では、本明細書で提示される方法は、７２時間、７０時間、６５時間、６０時間、５５時間、５０時間、４５時間、４０時間、または３５時間、または３０時間、または２８時間、または２６時間、または２４時間未満における、骨髄細胞の分離または濃縮および操作を含む。一部の実施形態では、骨髄細胞は、２４時間未満、または２０時間未満、または１６時間未満、または１４時間未満、または１２時間未満、または１０時間未満、または８時間未満、または６時間未満、または約４時間未満にわたり培養されうる。分離または濃縮および操作の後における骨髄細胞は、短時間にわたり培養され、さらなる使用まで凍結される場合がある。一部の実施形態では、骨髄細胞は、１回、または最大で２回にわたり融解される。
[00289]一部の実施形態では、治療的コンピテント細胞は、ポリペプチドをコードする組換え核酸を電気穿孔され、凍結および融解され、培養物が２４時間未満にわたり安定化された細胞であり、この場合、投与時における細胞集団内の細胞は、（ｉ）少なくとも７０％を超える生存率、（ｉｉ）少なくとも５０％を超えるＣＤ１４＋／ＣＤ１６－細胞；および／または５０％を超えるＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ１４＋／ＣＤ１６－細胞；（ｉｉｉ）５％未満のＣＤ３＋細胞、５％未満のＣＤ１９＋細胞、約１０％未満のＣＤ５６＋細胞、約１０％未満のＣＤ４２ｂ＋細胞；（ｉｖ）５０％を超える、電気穿孔された核酸によりコードされるポリペプチドを発現する細胞を呈する。一部の実施形態では、治療的コンピテント細胞は、ポリペプチドをコードする組換え核酸を電気穿孔され、培養物が２４時間未満にわたり安定化され、凍結および融解された細胞であり、この場合、投与時における細胞集団内の細胞は、（ｉ）少なくとも７０％を超える生存率、（ｉｉ）少なくとも５０％を超えるＣＤ１４＋／ＣＤ１６－細胞；および／または５０％を超えるＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ１４＋／ＣＤ１６－細胞；（ｉｉｉ）５％未満のＣＤ３＋細胞、５％未満のＣＤ１９＋細胞、約１０％未満のＣＤ５６＋細胞、約１０％未満のＣＤ４２ｂ＋細胞；（ｉｖ）５０％を超える電気穿孔された核酸によりコードされるポリペプチドを発現する細胞を呈する。一部の実施形態では、治療的コンピテント細胞は、培養物が２４時間未満にわたり安定化され、ポリペプチドをコードする組換え核酸を電気穿孔され、凍結および融解された細胞であり、この場合、投与時における細胞集団内の細胞は、（ｉ）少なくとも７０％を超える生存率、（ｉｉ）少なくとも５０％を超えるＣＤ１４＋／ＣＤ１６－細胞；および／または５０％を超えるＣＤ１１ｂ＋／ＣＤ１４＋／ＣＤ１６－細胞；（ｉｉｉ）５％未満のＣＤ３＋細胞、５％未満のＣＤ１９＋細胞、約１０％未満のＣＤ５６＋細胞、約１０％未満のＣＤ４２ｂ＋細胞；（ｉｖ）５０％を超える電気穿孔された核酸によりコードされるポリペプチドを発現する細胞を呈する。細胞は、病原体非含有でなければならない。上記の実施形態では、治療的コンピテント細胞は、２回を超えない回数にわたり、好ましくは１回凍結および融解される場合があり、融解から２４時間以内に、融解から１８時間以内に、融解から８時間以内に、または融解から２時間以内に投与されうる。細胞は、投与の前に、本開示において本明細書で記載される基準を満たすように、品質保証について調べられる。
[00290]本明細書では、がん細胞を標的化し、攻撃し、これを死滅させるように特異的にデザインされた、貪食性受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）をコードする組換え核酸を発現する、操作された貪食細胞、特に、マクロファージを含む医薬組成物を使用して、対象におけるがんを処置するための方法が提供される。ＰＦＰはまた、貪食のためのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ－Ｐ）とも呼称され、本明細書では、いずれの用語も、互換的に使用されうる。本明細書の記載では、操作された貪食細胞はまた、ＣＡＲ－Ｐ細胞とも呼称される。
[00291]がんは、Ｂ細胞がん（例えば、多発性骨髄腫、ワルデンシュトロームマクログロブリン血症）、重鎖病（例えば、アルファ鎖病、ガンマ鎖病、およびミュー鎖病など）、良性単クローン性免疫グロブリン血症、および免疫細胞性アミロイドーシス、黒色腫、乳がん、肺がん、気管支がん、結腸直腸がん、前立腺がん（例えば、転移性前立腺がん、ホルモン不応性前立腺がん）、膵がん、胃がん、卵巣がん、膀胱がん、脳がんまたは中枢神経系がん、末梢神経系がん、食道がん、子宮頸がん、子宮がんまたは子宮内膜がん、口腔がんまたは咽頭がん、肝がん、腎がん、精巣がん、胆管がん、小腸がんまたは虫垂がん、唾液腺がん、甲状腺がん、副腎がん、骨肉腫、軟骨肉腫、造血組織がんなどを含むがこれらに限定されない。本開示により包摂される方法に適用可能ながんの種類についての、他の非限定例は、ヒト肉腫およびヒト癌腫、例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、軟骨腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、結腸直腸がん、膵がん、乳がん、卵巣がん、扁平上皮がん、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、ヘパトーマ、胆管癌、肝がん、絨毛癌、精上皮腫、胚性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、骨がん、脳腫瘍、精巣がん、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫瘍、希突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫；白血病、例えば、急性リンパ性白血病および急性骨髄性白血病（骨髄芽球性白血病、前骨髄性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、および赤白血病）；慢性白血病（慢性骨髄性（顆粒球性）白血病および慢性リンパ性白血病）；ならびに真性多血症、リンパ腫（ホジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ワルデンシュトロームマクログロブリン血症、および重鎖病を含む。一部の実施形態では、がんは、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、婦人科がん、腎がん、喉頭がん、肺がん、経口がん、頭頸部がん、卵巣がん、膵がん、前立腺がん、または皮膚がんなどであるがこれらに限定されない上皮がんである。他の実施形態では、がんは、乳がん、前立腺がん、肺がん、または結腸がんである。さらに他の実施形態では、上皮がんは、非小細胞肺がん、非乳頭状腎細胞癌、子宮頸癌、卵巣癌（例えば、漿液性卵巣癌）、または乳癌である。上皮がんは、漿液性がん、内膜がん、粘液性がん、明細胞がん、または未分化がんを含むがこれらに限定されない、他の多様な形でも特徴付けられうる。一部の実施形態では、本開示は、マントル細胞リンパ腫を含むがこれらに限定されない、リンパ腫またはその亜型の、処置、診断、および／または予後診断において使用される。リンパ増殖性障害もまた、増殖性疾患であると考えられる。
[00292]一般に、細胞性免疫療法は、患者に、生細胞を含む医薬を施すステップを含む。一部の態様では、がんを有する患者または対象は、自家細胞を用いて処置され、その方法は、ＰＢＭＣ由来マクロファージを、分離または濃縮するステップ、ｅｘ ｖｉｖｏにおいて、貪食性受容体融合タンパク質（ＰＦＰ）である、貪食のためのキメラ抗原受容体をコードする組換え核酸を、マクロファージへと導入することにより、マクロファージを改変して、腫瘍溶解が可能である、高度に貪食性のマクロファージを作出するステップ、および改変されたマクロファージを、患者または対象へと投与するステップを含む。
[00293]一態様では、対象は、治療用貪食細胞を含む、投与１回または複数回分の用量の医薬組成物を投与され、この場合、細胞は、同種細胞である。ＨＬＡは、対象との適合性のために、かつ、細胞が、移植片対宿主病である、ＧＶＨＤをもたらさないように、マッチさせることができる。診療所に来院する対象は、治療剤または治療レジメンを決定する前に、対象により発現されるＨＬＡ抗原を決定するために、ＨＬＡ遺伝子型検査を受ける。
[00294]一部の実施形態では、治療有効用量は、注入１回について、細胞１０７個～骨髄細胞１０１２個の間の範囲である。細胞数は、年齢、体重、および対象に関連する他のパラメータに従い変動する場合があり、医療従事者により決定されうる。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約１０７個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約２×１０７個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約３×１０７個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約４×１０７個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約５×１０７個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約６×１０７個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約７×１０７個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約８×１０７個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約９×１０７個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約１０８個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約２×１０８個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約３×１０８個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約４×１０８個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約５×１０８個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約６×１０８個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約７×１０８個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約８×１０８個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約９×１０８個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約１０９個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約２×１０９個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約３×１０９個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約４×１０９個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約５×１０９個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約６×１０９個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約７×１０９個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約８×１０９個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約９×１０９個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約１０１０個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約５×１０１０個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約１０１１個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約５×１０１１個である。一部の実施形態では、治療有効用量は、骨髄細胞約１０１２個である。
[00295]本明細書の一態様では、本明細書で記載される、受容体またはエンゲージャーなどのキメラ融合タンパク質でありうる、１つまたは複数の組換えタンパク質をコードする、１つまたは複数の組換えポリ核酸が提供される。一部の実施形態では、組換えポリ核酸は、ｍＲＮＡである。一部の実施形態では、組換えポリ核酸は、ｃｉｒｃＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組換えポリ核酸は、ウイルスベクター内に組入れられる。一部の実施形態では、組換えポリ核酸は、ウイルスベクターを介して送達される。
[00296]本明細書の一部の実施形態では、キメラ融合受容体タンパク質（ＣＦＰ）などのキメラ融合タンパク質を含み、ＣＦＰが、（ａ）（ｉ）本明細書で開示される標的のうちのいずれか１つに特異的に結合するｓｃＦｖ、および（ｉｉ）ＣＤ８に由来するヒンジドメイン、ＣＤ２８に由来するヒンジドメイン；またはＣＤ６８に由来する細胞外ドメインの、少なくとも一部を含む細胞外ドメイン；（ｂ）ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２膜貫通ドメイン、またはＣＤ６８膜貫通ドメイン；ならびに（ｃ）少なくとも２つの細胞内シグナル伝達ドメインを含み、少なくとも２つの細胞内シグナル伝達ドメインが、（ｉ）ＦｃＲγまたはＦｃＲε、インターフェロン誘導性ドメインに由来する、第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、および／または（ｉｉ）（Ａ）が、ＰＩ３Ｋ動員ドメインを含むか、または（Ｂ）が、ＣＤ４０に由来する、第３の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む治療用組成物が提供される。
[00297]本明細書の一部の実施形態では、本明細書で開示される、二特異性エンゲージャーまたは三特異性エンゲージャーをコードする組換え核酸を含む治療用組成物が提供される。
共投与のための、他の治療用組成物
[00298]一部の実施形態では、治療用組成物は、ＣＤ４７アゴニスト、Ｒａｃを阻害する薬剤、Ｃｄｃ４２を阻害する薬剤、ＧＴＰアーゼを阻害する薬剤、Ｆ－アクチンのディスアセンブリーを促進する薬剤、ＰＩ３ＫのＰＦＰへの動員を促進する薬剤、ＰＩ３Ｋの活性を促進する薬剤、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸の産生を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ１２の活性を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ２５の活性を促進する薬剤、ＳＨ３ＢＰ１の活性を促進する薬剤、一次リンパ系臓器内および／または二次リンパ系臓器内におけるリンパ球の封鎖を促進する薬剤、二次リンパ系臓器内の、ナイーブＴ細胞およびセントラルメモリーＴ細胞の濃度を増大させる薬剤、ならびにこれらの任意の組合せからなる群から選択される、さらなる治療剤をさらに含む。
[00299]一部の実施形態では、骨髄細胞は、（ａ）ＣＦＰと二量体化する、内因性ペプチドまたは内因性タンパク質；（ｂ）ＣＦＰと二量体化する、非内因性ペプチドまたは非内因性タンパク質；および／または（ｃ）第２の組換えポリ核酸配列をさらに含み、この場合、第２の組換えポリ核酸配列は、ＣＦＰと相互作用するペプチドまたはタンパク質をコードする配列を含み；二量体化または相互作用は、ＣＦＰを発現する骨髄細胞による貪食を、ＣＦＰを発現しない骨髄細胞と比較して強化する。
[00300]一部の実施形態では、骨髄細胞は、（ｉ）エフェクター活性、交差提示、呼吸バースト、ＲＯＳの産生、ｉＮＯＳの産生、炎症性メディエーター、細胞外小胞の産生、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸の産生、抗原を発現する標的細胞との齧作用、貪食のＣＤ４７媒介性阻害に対する抵抗性、貪食のＬＩＬＲＢ１媒介性阻害に対する抵抗性、もしくはこれらの任意の組合せの増大；および／または（ｉｉ）ＩＬ－１、ＩＬ３、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＴＮＦα、サイトカインのＴＮＦファミリー、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＣＳＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ－１７、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、インターフェロン、ＭＨＣクラスＩタンパク質、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質、ＣＤ４０、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１１２、ＣＤ１５５、ＴＲＡＩＬ／ＴＮＦファミリーの死受容体、ＴＧＦβ、Ｂ７－ＤＣ、Ｂ７－Ｈ２、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＴＬ１Ａ、４１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ１、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＰＤＬ１、ＭＭＰ（例えば、ＭＭＰ２、ＭＭＰ７、およびＭＭＰ９）、またはこれらの任意の組合せの発現の増大を呈する。
[00301]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、貪食または繋留受容体（ＰＲ）に由来するか、または細胞内シグナル伝達ドメインは、貪食活性化ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲアルファ、またはＢａｉ１から選択される貪食受容体以外の受容体に由来する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦＲ１、ＭＤＡ５、ＣＤ４０、レクチン、デクチン１、ＣＤ２０６、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、Ｆｃα受容体Ｉ、ＣＲ１、ＣＤ３５、ＣＤ３ζ、補体受容体、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｔｉｍ－１、Ｔｉｍ－４、およびＣＤ１６９からなる群から選択される受容体（例えば、貪食受容体）などのタンパク質に由来する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＩ３Ｋ動員ドメインではない、炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む。
[00302]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭドメインを含有する受容体に由来する。
[00303]本明細書では、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含むＰＲサブユニット；ならびに標的細胞の抗原に特異的な抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含み；膜貫通ドメインと細胞外ドメインとが作動的に連結されており；細胞内シグナル伝達ドメインが、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲα、またはＢａｉ１から選択される貪食受容体以外の貪食受容体に由来する、貪食または繋留受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）などのＣＦＰをコードする組換え核酸を含む組成物が提供される。
[00304]一部の実施形態では、ＣＦＰの標的細胞の抗原への結合時に、ＣＦＰを発現する細胞の殺滅活性は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、１５０％、２００％、２５０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、または１０００％を超えて増大される。一部の実施形態では、ＣＦＰは、ＣＦＰが、細胞内で発現されると、細胞の細胞膜へと機能的に組み込まれる。一部の実施形態では、ＣＦＰの標的細胞の抗原への結合時に、ＣＦＰを発現する細胞の殺滅活性は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも１．１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、５０倍、７５倍、または１００倍に増大される。
[00305]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦＲ１、ＭＤＡ５、ＣＤ４０、レクチン、デクチン１、ＣＤ２０６、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、Ｆｃα受容体Ｉ、ＣＲ１、ＣＤ３５、ＣＤ３ζ、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｔｉｍ－１、Ｔｉｍ－４、およびＣＤ１６９からなる群から選択される貪食受容体などの受容体に由来する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む。
[00306]本明細書では、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含むＰＲサブユニット；ならびに標的細胞の抗原に特異的な抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含み；膜貫通ドメインと細胞外ドメインとが作動的に連結されており；細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＮＦＲ１、ＭＤＡ５、ＣＤ４０、レクチン、デクチン１、ＣＤ２０６、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、Ｆｃα受容体Ｉ、ＣＲ１、ＣＤ３５、ＣＤ３ζ、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｔｉｍ－１、Ｔｉｍ－４、およびＣＤ１６９からなる群から選択される貪食受容体などの受容体に由来する、貪食または繋留受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）などのＣＦＰをコードする組換え核酸を含む組成物が提供される。
[00307]一部の実施形態では、ＣＦＰの標的細胞の抗原への結合時に、ＣＦＰを発現する細胞の殺滅活性は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、１５０％、２００％、２５０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、または１０００％を超えて増大される。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲα、またはＢａｉ１から選択される貪食受容体以外の貪食受容体に由来する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ１９に由来するＰＩ３Ｋ動員ドメインなどのＰＩ３Ｋ動員ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＩ３Ｋ動員ドメインではない、炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む。
[00308]一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、抗原を発現する標的細胞の貪食の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、抗原を発現する標的細胞の貪食の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した、少なくとも１．１倍の増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、抗原を発現する標的細胞の貪食の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、または５０倍の増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、サイトカインの産生の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－１、ＩＬ３、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＣＳＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ１７、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、インターフェロン、およびこれらの組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、エフェクター活性の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、交差提示の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＤ８０の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＤ８６の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＭＨＣクラスＩタンパク質の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＴＲＡＩＬ／ＴＮＦファミリーの死受容体の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、Ｂ７－Ｈ２の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＬＩＧＨＴの発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＨＶＥＭの発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＤ４０の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＴＬ１Ａの発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、４１ＢＢＬの発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＯＸ４０Ｌの発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＧＩＴＲＬ死受容体の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＤ３０Ｌの発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＴＩＭ４の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＴＩＭ１のリガンドの発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＳＬＡＭの発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＤ４８の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＤ５８の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＤ１５５の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＤ１１２の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＰＤＬ１の発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、Ｂ７－ＤＣの発現の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、呼吸バーストの、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＲＯＳの産生の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ｉＮＯＳの産生の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ｉＮＯＳの産生の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、細胞外小胞の産生の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、抗原を発現する標的細胞との齧作用の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、貪食のＣＤ４７媒介性阻害に対する抵抗性の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、貪食のＬＩＬＲＢ１媒介性阻害に対する抵抗性の、ＣＦＰを発現しない細胞と比較した増大を呈する。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸の産生の増大を呈する。
[00309]本明細書ではまた、本明細書で記載される組換え核酸、本明細書で記載されるベクター、本明細書で記載されるポリペプチド、または本明細書で記載される細胞など、本明細書で記載される組成物と；薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物も提示される。操作された細胞は、骨髄細胞である。一態様では、配列番号１～５１の配列のうちのいずれか１つをコードするか、もしくはこれを含む組換え核酸、または配列番号１～５１の配列のうちのいずれか１つをコードするか、もしくはこれを含む組換え核酸を含む細胞、または配列番号１～５１の配列のうちのいずれか１つをコードするか、もしくはこれを含む組換え核酸を含む操作された細胞と；薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物が開示される。一実施形態では、細胞は、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、および４５から選択される配列のうちの少なくとも１つを含むアミノ酸配列をコードする組換え核酸を含む。一実施形態では、細胞は、骨髄細胞である。一実施形態では、細胞は、哺乳動物細胞である。一実施形態では、細胞は、初代ヒト細胞である。一実施形態では、細胞は、初代ヒト免疫細胞である。一部の実施形態では細胞は、前駆細胞もしくは幹細胞、または未分化細胞である。一部の実施形態では細胞は、ヒト対象の生体試料から得られる。一部の実施形態では細胞は、ヒト対象の生体試料から分離され、細胞表面マーカーの発現など、表現型について選択される。一実施形態では、分離された細胞は、前駆細胞、骨髄前駆細胞、ＣＤ１４＋／ＣＤ１６－として特徴付けられる細胞である。
[00310]一実施形態では、分離された細胞または操作された細胞は、ＣＤ１４＋／ＣＤ１６－である。
[00311]一態様では、医薬組成物は、操作された細胞を含み、この場合、操作された細胞は、ＣＤ１４＋／ＣＤ１６－である。
[00312]一態様では、医薬組成物は、細胞のうちの少なくとも５０％がＣＤ１４＋／ＣＤ１６－であり、細胞のうちの１０％未満が樹状細胞である細胞の集団を含む。一実施形態では、細胞は、ＣＣＲ２の高発現を呈する。一実施形態では、細胞は、トーナルシグナル伝達およびデノボの活性化を呈さず、活性化時に、Ｍ０、Ｍ１、またはＭ２分化を呈する。
[00313]本明細書では、対象におけるがんまたはウイルス感染を処置する方法であって、対象へと、配列番号１～５１の配列のうちのいずれか１つをコードするか、もしくはこれを含む組換え核酸を含む医薬組成物、または配列番号１～５１の配列のうちのいずれか１つをコードするか、もしくはこれを含む組換え核酸を含む細胞、または配列番号１～５１の配列のうちのいずれか１つをコードするか、もしくはこれを含む組換え核酸を含む操作された細胞と；薬学的に許容される賦形剤とを投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、医薬組成物は、細胞の集団を含み、この場合、細胞のうちの少なくとも５０％はＣＤ１４＋ＣＤ１６－であり、細胞のうちの１０％未満は樹状細胞であり；細胞は、ＣＣＲ２の高発現を呈する。一実施形態では、細胞は、トーナルシグナル伝達およびデノボの活性化を呈さず、活性化時に、Ｍ０、Ｍ１、またはＭ２分化を呈する。
[00314]本明細書の一部の実施形態では、本明細書内の別の箇所で記載される通り、細胞を含む治療用組成物、組換え核酸を含む細胞が提供される。一部の実施形態では、治療用組成物は、本明細書内の別の箇所で記載される通り、キメラタンパク質を発現する組換え核酸を含む。一部の実施形態では、骨髄細胞は、ＣＤ１４＋細胞、ＣＤ１４＋／ＣＤ１６－細胞、ＣＤ１４＋／ＣＤ１６＋細胞、ＣＤ１４－／ＣＤ１６＋細胞、ＣＤ１４－／ＣＤ１６－細胞、樹状細胞、Ｍ０マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、またはモザイク骨髄細胞／マクロファージ／樹状細胞である。
[00315]一部の実施形態では、医薬組成物は、さらなる治療剤をさらに含む。一部の実施形態では、さらなる治療剤は、ＣＤ４７アゴニスト、Ｒａｃを阻害する薬剤、Ｃｄｃ４２を阻害する薬剤、ＧＴＰアーゼを阻害する薬剤、Ｆ－アクチンのディスアセンブリーを促進する薬剤、ＰＩ３ＫのＰＦＰへの動員を促進する薬剤、ＰＩ３Ｋの活性を促進する薬剤、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸の産生を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ１２の活性を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ２５の活性を促進する薬剤、ＳＨ３ＢＰ１の活性を促進する薬剤、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、無血清培地、脂質、またはナノ粒子を含む。
[00316]一部の実施形態では、治療剤は、対象において全身注射または局所注射される、配列番号１～５１の配列のうちのいずれか１つをコードするか、またはこれを含む組換え核酸である。一部の実施形態では、組換え核酸は、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、および４５から選択される配列をコードする配列のうちの少なくとも１つを含む。一部の実施形態では、組換え核酸は、ｍＲＮＡまたはｃｉｒｃＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は、医薬組成物中の、１つまたは複数の脂質成分と会合する。脂質成分は、リポソームまたは脂質ナノ粒子の形態でと会合しうる。脂質成分は、少なくとも１つのカチオン性脂質を含みうる。医薬組成物の、１つまたは複数の脂質は、をコンジュゲートされる場合もあり、修飾される場合もある。
新規のキメラ受容体融合タンパク質（ＣＦＰ）構築物を作出するための方法
[00317]本明細書の一態様では、新規のキメラ受容体タンパク質を作出するための方法であって、融合受容体が、骨髄細胞内で発現されると、本明細書で記載されるエフェクター骨髄細胞として機能するように、例えば、骨髄細胞機能の増強において有用でありうる、新規のドメインの同定を含む方法が提供される。本明細書で記載される融合タンパク質の作出は、周知の分子クローニング法を使用して実施される場合があり、配列は、組換え核酸を作出した後で検証されうる。
[00318]キメラ抗原受容体をコードする組換え核酸の調製：骨髄細胞内の発現のためにデザインされ、真核細胞内の増幅および／または発現についての試験のためのプラスミドベクター内に組み込まれる、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする、組換え核酸構築物が調製される。組換えＣＡＲは、当技術分野で公知の分子クローニング法を使用して構築される。組換えＣＡＲタンパク質は、細胞内ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞外ドメインを含む。各ドメイン、またはドメインのサブセクションは、異種供給源配列から、ＰＣＲにより作出される、核酸配列によりコードされる場合があり、クローニングにより、ベクターへと、個別につなぎ合わされる場合もあり、長鎖核酸へとライゲーションされ、次いで、これが、増幅に適するプロモーターおよび３’側調節エレメントと共に、適切なプラスミドまたはベクターの、マルチクローニング部位へと挿入される場合もある。略述すると、例示的ＣＡＲは、１つまたは複数のシグナル伝達ドメイン（例えば、ＰＩ３キナーゼ動員ドメイン）をコードする核酸（ｎｕｃｌｅｉｃ）配列、ＣＤ８ヒンジドメインおよびＣＤ８膜貫通ドメインをコードする核酸配列、細胞外末端において、標的抗原結合性ｓｃＦｖをコードする配列を有する、細胞外ドメインをコードする核酸配列を組み込むことにより調製される。ある特定の構築物は、細胞外末端において、その標的抗原に結合するｓｃＦｖに対して、立体障害をもたらさないようにデザインされた、ＦＬＡＧペプチド配列を含む。これらの構成要素は、完全に機能的な膜貫通ＣＡＲをコードする配列へと、一緒にライゲーションされる。組換えタンパク質の個別のドメインをコードする核酸サブユニットは、２つのドメイン間に介在する、可撓性の短鎖リンカー配列を含むようにデザインされる。プロモーターおよび３’側安定化構造ユニットを有する構築物は、プラスミド内でライゲーションされる。１つの変形形態では、構築物は、ＯＲＦ２ｐをコードし、それぞれの５’－ＵＴＲ配列および３’－ＵＴＲ配列、ＣＭＶプロモーターを有する、レトロトランスポゾンＡｌｕエレメント内に配置される。プラスミドは、Ｅ．ｃｏｌｉ内で増幅され、シーケンシングにより検証されるか、または－８０℃で保管される。
ｍＲＮＡの調製：ｍＲＮＡは、消化されたプラスミドを、鋳型として使用する、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写により調製され、夾雑ＤＮＡを除去するように精製され、ポリアデニル化されうる。ＲＮＡ産物は、精製され、ＲＮアーゼ非含有水中に、１ｍｇ／ｍｌまで再懸濁され、クライオバイアル内で保管される。
[00319]新規のＣＦＰを作出するために有用な、ＣＦＰのＥＣＤ、ＴＭ、ＩＣＤ、および抗原結合性ドメインの同定は、本明細書で記載される方法を使用してなされうる。略述すると、多数の、潜在的な候補タンパク質が、貪食特性、およびそれらのそれぞれの貪食関連細胞内シグナル伝達の増強についてスクリーニングされうる。次いで、有用ドメインは、新規のＣＦＰを作出するために使用されうる。スクリーンは、２つの部分：Ａ．貪食受容体（ＰＲ）ドメインのスクリーニング；Ｂ．抗原結合性ドメインについてのスクリーニングに分けられうる。
ＰＲドメインについてのスクリーニング：
[00320]一実施形態では、約５，８００種の細胞膜タンパク質を、本明細書で記載される一般的方法に従い、それらの貪食可能性についてスクリーニングした。Ｊ７７４マクロファージ細胞に、５，８００種の細胞膜タンパク質のライブラリーを、一過性にトランスフェクトした。細胞膜の、多様な潜在的機能を査定するのに、ハイスループットマルチプレックスアッセイ（ロボット操作を伴う、６ウェルプレートアッセイセットアップ～３８４ウェルプレートアッセイの範囲の）が設定されうる。例示的なアッセイは、貪食アッセイ、サイトカイン産生アッセイ、インフラマソーム活性化アッセイ、およびｉＮＯＳ活性化アッセイを含むがこれらに限定されない。例示的な略式法については、以下の段落で記載されうる。各方法の変形形態も使用することができ、当業者により理解されうる。例示的な被験細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ４０－ＦｃＲγ；ＦｃＲγ－ＣＤ４０；ＮＬＲＰ３；ＦｃＲγ－ＳＨ２－Ｐｒｏカスパーゼ；ＦｃＲγ－Ｍｙｄ８８；ＦｃＲγ－ＩＦＮ受容体；ＦｃＲ－ＴＮＦＲ１；ＦｃＲγ－ＴＮＦＲ２；ＦｃＲ－ＡＩＭ２；ＦｃＲγ－ＴＲＩＦＮ；ＦｃＲγ－Ｐｒｏカスパーゼ；ＴＲＩＦＣ；ＲＩＧ１；ＭＤＡ５；ＴＢＫ；ＣＤ６４；ＣＤ１６Ａ；ＣＤ８９；ＦｃＲε；ＳＩＲＰβ（２つの連続細胞内ドメインは、ハイフンでつながれた用語により表されうる、例えば、ＦｃＲγ－Ｍｙｄ８８とは、シグナル伝達ドメイン１としてのＦｃＲγ細胞内シグナル伝達ドメインと；シグナル伝達ドメイン２としてのＭｙｄ８８細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、細胞内ドメインを指す）を含むがこれらに限定されない。スクリーニングされる細胞外リンカードメインは、ＣＤ６４、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ８９、ＳＩＲＰα、ＦｃＲε、ＣＤ８ヒンジを含むがこれらに限定されない。被験膜貫通ドメインは、ＣＤ８、ＣＤ６４、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ８９、ＦｃＲε、ＳＩＲＰα、ＴＮＦＲ１、およびＣＤ４０を含むがこれらに限定されない。ＭＤＡ５ドメインについてもまた、スクリーニングした。
貪食アッセイ：
[00321]直径１ｎｍ、５ｎｍ、または１０ｎｍの範囲の、抗原へと連結された、シリカビーズまたはポリスチレンビーズを、マクロファージのスクリーンのために使用した。不活性ビーズは、支持体つき脂質二重層でコーティングすることができ、抗原を、脂質二重層へとライゲーションすることができる。各細胞系が、クローニングされた組換え細胞膜タンパク質を発現する、Ｊ７７４マクロファージ細胞系を調製することができる。組換え細胞膜タンパク質はまた、蛍光タグも発現しうる。細胞系は、熱不活化血清および抗生剤（ペニシリン／ストレプトマイシン）を伴う完全ＲＰＭＩ培地中で維持し、繁殖させることができる。アッセイの当日、細胞を、６ウェルプレート内のウェル１つ当たり１ｍｌ当たりの細胞１×１０６個の密度、または１２もしくは２４ウェルプレート内の、これに比例する密度で播種し、２～６分間にわたりインキュベートすることができる。次いで、細胞を、リン酸緩衝生理食塩液中で１回洗浄し、ビーズを、血清枯渇培地中または補体枯渇栄養培地中に添加することができる。細胞は、ビーズを添加した３０分間後および２時間後に、光学顕微鏡により視覚化することができる。タグ付け抗体を使用して、免疫蛍光反応を実施することができ、蛍光共焦点顕微鏡は、飲作用時の相互作用および細胞タンパク質の共局在を検出するのに使用される。信頼水準は、ダネットの多重比較補正を伴う、クルスカル－ワリス検定により決定されうる。
[00322]一部の例では、染料をロードした腫瘍細胞を、マクロファージ細胞系へとフィードすることができ、貪食について、顕微鏡により評価する。
サイトカイン産生：
[00323]マクロファージ細胞系は、上記で記載された通りに培養することができる。一アッセイでは、細胞膜タンパク質を発現する、各Ｊ７７４細胞系を、マルチウェルに播種し、抗原連結ビーズで抗原投与し、４時間後および２４時間後において、上清を回収することにより、サイトカイン産生についてアッセイした。サイトカインは、ＥＬＩＳＡにより、上清からアッセイすることができる。別の画分では、細胞は、インキュベーションの４時間後および２４時間後に、ビーズにより回収することができ、サイトカインを検出するために、フローサイトメトリーを実施する。各場合に、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＴＮＦ－α、ＧＭＣＳＦ、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ－１０、ＭＩＰ１－α、およびＭＩＰ－２から選択されうる、複数のサイトカインは、マルチプレックスフォーマットでアッセイすることができる。マクロファージ炎症性サイトカインアレイキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用する。
[00324]炎症性遺伝子およびサイトカイン活性化のための細胞内シグナル伝達経路は、ＭＡＰキナーゼのリン酸化、ＪＮＫシグナル伝達経路、Ａｋｔシグナル伝達経路、ＳＴＡＴ－１のリン酸化および活性化を含む、インターフェロン活性化経路についてのウェスタンブロット解析により同定することができる。
機能的アッセイ
インフラマソーム活性化アッセイ：
[00325]ＮＬＲＰ３インフラマソームの活性化は、ＩＬ－１の産生の増大の、ＥＬＩＳＡによる検出、および短鎖カスパーゼを作出する、プロカスパーゼの切断を検出する、カスパーゼ－１の活性化の、ウェスタンブロットによる検出によりアッセイする。マイクロウェルプレートによるマルチプレックス設定では、カスパーゼ１活性化の迅速な読取りのために、Ｃａｓｐａｓｅ－Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用する。
ｉＮＯＳ活性化アッセイ：
[00326]酸化バーストの潜在的可能性の活性化は、蛍光測定アッセイＮＯＳ活性アッセイキット（ＡｂＣＡＭ）を使用して、ｉＮＯＳの活性化およびＮＯの産生により測定することができる。
がん細胞殺滅アッセイ：
[00327]Ｒａｊｉ Ｂ細胞は、がん抗原提示細胞として使用されうる。Ｒａｊｉ細胞を、がん細胞の全細胞粗抽出物とインキュベートし、Ｊ７７４マクロファージ細胞系と共に共インキュベートすることができる。マクロファージは、感染の１時間後に、細胞を破壊する場合があり、これは、顕微鏡により検出される場合もあり、細胞死アッセイにより検出される場合もある。
高アフィニティー抗原結合性ドメインについてのスクリーニング：
[00328]ＣＦＰのための細胞外結合性ドメインを作出するために、がんリガンドを、抗体の軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインについてのスクリーニングにかけることができる。ヒト全長抗体ライブラリーまたはヒトｓｃＦｖライブラリーをスクリーニングすることができる。また、ラマにおける新規の免疫グロブリン結合性ドメインの開発、および単一ドメイン抗体の調製のために、ラマを免疫化するための、潜在的なリガンドも使用することができる。
[00329]次いで、スクリーンから同定された、特異的な有用ドメインを逆転写し、レンチウイルス発現ベクターへとクローニングして、ＣＦＰ構築物を作出することができる。スクリーンから作出された、高度な貪食受容体の、細胞外領域、膜貫通領域、および細胞質領域に由来する、１つまたは複数のドメインを使用して、ＣＦＰをコードする組換え核酸を作出することができる。略述すると、炎症促進性サイトカイン産生およびインフラマソーム活性化の、高度な活性化因子を示す細胞膜受容体を、同定することができる。バイオインフォマティクス研究を実施して、細胞外活性化ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、特異的キナーゼ活性化部位、ＳＨ２動員部位を含む、機能的ドメインを同定することができる。次いで、これらのスクリーニングされた機能的ドメインを、新規のＣＦＰを作出するための、モジュラー構築物内でクローニングすることができる。これらは、候補ＣＦＰの場合があり、これらのキメラ構築物の各々を、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏにおける、貪食増強、サイトカイン産生、およびケモカイン、ならびに／または腫瘍細胞殺滅について調べる。マイクロ粒子ベース貪食アッセイを使用して、貪食の変化について検討した。略述すると、ストレプトアビジンカップリング蛍光ポリスチレン微粒子（直径６μｍ）を、ビオチニル化組換え発現／精製がんリガンドとコンジュゲートさせることができる。新規のＣＦＰを発現する骨髄細胞を、リガンドでコーティングされた微粒子と共に、１～４時間にわたりインキュベートし、フローサイトメトリーを使用して、貪食量について解析し、定量した。次いで、デザイナーＣＦＰによるプラスミド構築物またはレンチウイルス構築物を調製し、マクロファージ細胞内で、がん細胞の溶解について調べることができる。
対象に由来する骨髄細胞を作製する方法
ＰＢＭＣからの、骨髄細胞の単離：
[00330]末梢血単核細胞は、Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ １０７７（Ｓｉｇｍａ）を使用する、密度遠心分離により、正常ドナー軟膜から分離することができる。洗浄の後、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ ＧＭＰグレードＣＤ１４マイクロビーズおよびＬＳ磁気分離カラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、ＣＤ１４＋単球を、単核細胞画分から分離することができる。略述すると、細胞を、ＰＥＡ緩衝液（リン酸緩衝生理食塩液［ＰＢＳ］＋１Ｌ当たり２．５ミリモルのエチレンジアミン四酢酸［ＥＤＴＡ］、およびヒト血清アルブミン［２０％のＡｌｂｕｒｅｘ、Ｏｃｔｏｐｈａｒｍａのうちの、最終容量０．５％］）中、適切な濃度まで再懸濁させ、製造元の指示書に従い、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ ＣＤ１４ビーズと共にインキュベートし、次いで、洗浄し、磁化ＬＳカラムを流過させた。洗浄の後、精製された単球を、脱磁化カラムから溶出させ、洗浄し、培養に関連する培地中に再懸濁させることができる。ＣＤ１４＋細胞の、白血球アファレーシスからの分離：ＰＢＭＣは、研究に参加する旨の説明同意文書を提出した肝硬変ドナーから、白血球アファレーシスにより回収することができる。末梢血の、単核細胞（ＭＮＣ）についての白血球アファレーシスは、Ｏｐｔｉａアファレーシスを使用する、滅菌回収により実行する。ＭＮＣのための、標準的回収プログラムを使用し、２．５倍の血液量を処理する。ＣＤ１４細胞の分離は、ＧＭＰ準拠機能閉鎖系（ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ Ｐｒｏｄｉｇｙシステム、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して実行する。略述すると、細胞カウントのために、白血球アファレーシス生成物をサンプリングし、分離前フローサイトメトリーのために、アリコートを採取する。単球（ＣＤ１４＋）の百分率および細胞の絶対数を決定することができ、要求される場合は、容量を、選択のための要求基準（全白血球２０×１０９個以下；１ｍＬ当たりの白血球４００×１０６個未満；ＣＤ１４細胞３．５×１０９個以下、容量：５０～３００ｍＬ）を満たすように調整する。ＣＤ１４細胞の単離および分離は、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ Ｐｒｏｄｉｇｙを、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ ＣＤ１４マイクロビーズ（医療機器分類ＩＩＩ）、ＴＳ５１０チュービングセット、およびＬＰ－１４プログラムと共に使用して実行する。処理の終了時に、選択されたＣＤ１４＋陽性単球を、医薬のグレードの０．５％ヒトアルブミン（Ａｌｂｕｒｅｘ）を含有する、ＰＢＳ／ＥＤＴＡ緩衝液（ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ緩衝液、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）中で洗浄し、次いで、培養のためのＴｅｘＭＡＣＳ（または同等物）培地中で再懸濁させることができる。
細胞のカウントおよび純度：
[00331]Ｓｙｓｍｅｘ ＸＰ－３００自動式解析器（Ｓｙｓｍｅｘ）を使用して、全ＭＮＣおよび分離単球画分の細胞カウントを実施することができる。Ｓｙｓｍｅｘは、単球数を、一貫して過小評価したので、マクロファージ数の評価は、絶対細胞数を決定するのに、ＴｒｕＣｏｕｎｔチューブ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を伴う、フローサイトメトリーにより実行する。フローサイトメトリー（ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、ヒト白血球に対する抗体パネル（ＣＤ４５－ＶｉｏＢｌｕｅ、ＣＤ１５－ＦＩＴＣ、ＣＤ１４－ＰＥ、ＣＤ１６－ＡＰＣ）と共に使用して、分離の純度について評価し、好中球の夾雑（ＣＤ４５ｉｎｔ、ＣＤ１５ｐｏｓ）量を決定することにより、生成物の品質について評価する。
細胞培養物：健常ドナー試料による培養物の養生
[00332]マクロファージの分化に最適の培養培地を探索し、３つの候補を、細胞生成物のために使用して調べた。加えて、単球の低温保存の、治療的使用のための、骨髄細胞およびマクロファージの導出に対する影響について検討した。本開示の他の箇所で記載される通りに、機能的アッセイを行って、骨髄細胞およびマクロファージの貪食能力、ならびにさらなる極性化に対するそれらの能力、および貪食可能性を定量した。
対象試料による、フルスケールの工程検証
[00333]Ｐｒｏｄｉｇｙによる分離物に由来する、白血球アファレーシスから培養される単球は、ＧＭＰグレードのＴｅｘＭＡＣＳ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）および１００ｎｇ／ｍＬのＭ－ＣＳＦを伴う培養バッグ（ＭＡＣＳ ＧＭＰ分化バッグ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）中に、１ｍＬ当たり、１ｃｍ２当たりの単球２×１０６個で培養することができる。単球は、１００ｎｇ／ｍＬの、ＧＭＰ準拠組換えヒトＭ－ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）と共に培養することができる。細胞は、５％のＣＯ２を伴う加湿雰囲気中、３７℃で、７日間にわたり培養することができる。５０％の培養培地を除去し、次いで、２００ｎｇ／ｍＬのＭ－ＣＳＦを補充された、新鮮培地をフィードして（１００ｎｇ／ｍＬの最終濃度を回復させるために）、培養（２および４日目）期間中、２回にわたり、５０％容量の培地交換を実行する。
細胞の採取：
[00334]正常ドナー由来マクロファージのために、７日目に、細胞解離緩衝液（Ｇｉｂｃｏ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）およびｐａｓｔｅｔｔｅを使用して、細胞を、ウェルから採取することができる。細胞を、ＰＥＡ緩衝液中に再懸濁させ、カウントし、次いで、フローサイトメトリーのために、試験１回当たりの細胞約１×１０６個を、染色することができる。７日目に、血清に由来する、医薬グレードの０．５％ヒトアルブミン（ＨＡＳ；Ａｌｂｕｒｅｘ）を含有する、ＰＢＳ／ＥＤＴＡ緩衝液（ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ緩衝液、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して、白血球アファレーシス由来マクロファージを、培養バッグから採取することができる。採取された細胞は、２つの認可生成物：０．５％ヒトアルブミン（Ａｌｂｕｒｅｘ）を伴う、注入用の０．９％生理食塩液（Ｂａｘｔｅｒ）から構成される賦形剤中に再懸濁させることができる。
フローサイトメトリーによる特徴付け：
[00335]フローサイトメーターである、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）またはＭＡＣＳＱｕａｎｔ １０（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して、単球およびマクロファージ細胞の表面マーカー発現について解析することができる。典型的に、各試料について、約２０，０００例ずつの事象を収集することができる。分離したての細胞および成熟７日目の細胞における、白血球マーカーの細胞表面発現は、細胞を、特異的抗体（最終希釈率：１：１００）と共にインキュベートすることにより実行する。細胞を、ＦｃＲブロッキング剤（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）と共に、５分間にわたりインキュベートし、次いで、抗体カクテルと共に、４℃で２０分間にわたりインキュベートする。細胞を、ＰＥＡ中で洗浄することができ、死細胞除外染料である、ＤＲＡＱ７（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を、１：１００で添加する。細胞は、以下：ＣＤ４５－ＶｉｏＢｌｕｅ、ＣＤ１４－ＰＥ、またはＣＤ１４－ＰｅｒＣＰ－Ｖｉｏ７００、ＣＤ１６３－ＦＩＴＣ、ＣＤ１６９－ＰＥおよびＣＤ１６－ＡＰＣ（全て、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ製）、ＣＣＲ２－ＢＶ４２１、ＣＤ２０６－ＦＩＴＣ、ＣＸＣＲ４－ＰＥ、およびＣＤ１１５－ＡＰＣ（全て、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ製）、ならびに２５Ｆ９－ＡＰＣおよびＣＤ１１５－ＡＰＣ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の範囲の表面マーカーについて染色することができる。前方散乱および側方散乱、ならびにＤＲＡＱ７死細胞弁別器（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を使用して、破砕物、ダブレット、および死細胞を除外するように、単球およびマクロファージの両方にゲートをかけ、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ）を使用して、解析することができる。初期の詳細な表現型解析から、単球からの、機能的マクロファージの作出について規定するパネルを、出荷判定基準（ＣＤ４５－ＶＢ／ＣＤ２０６－ＦＩＴＣ／ＣＤ１４－ＰＥ／２５Ｆ９ ＡＰＣ／ＤＲＡＱ７）として開発した。マクロファージは、平均値蛍光強度（ＭＦＩ）が、２５Ｆ９およびＣＤ２０６の両方について、５つの時点において、０日目における単球より高レベルである細胞として決定することができる。他のマーカーについて、拡張パネル（ＣＣＲ２－ＢＶ４２１／ＣＤ１６３－ＦＩＴＣ／ＣＤ１６９－ＰＥ／ＣＤ１４－ＰｅｒＣＰ－Ｖｉｏ７００／ＣＤ１６－ＡＰＣ／ＤＲＡＱ７から構成される）の一部として評価する、第２のパネルも開発するが、細胞生成物のための出荷判定基準の一部としては使用しない。
[00336]単球およびマクロファージは、分離された末梢血細胞の、スクロース勾配遠心分離試料中で形成された軟膜層を回収することにより分離することができる。酸性エンドソームへと取り込まれた場合に限り蛍光発光する、ｐＨＲｏｄｏビーズを使用して、ＣＤ１４細胞を、貪食性取込みについて調べることができる。略述すると、単球またはマクロファージを、１～２ｕＬのｐＨＲｏｄｏ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｂｉｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）と共に、１時間にわたり培養し、次いで、培地を採取し、細胞を洗浄して、貪食されなかった粒子を除去することができる。ＥＶＯＳ顕微鏡（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して、貪食について評価し、ＩｍａｇｅＪソフトウェア（ＮＩＨ）を使用して、画像を捕捉し、細胞内へのビーズの取込みを定量した。７日目のマクロファージを、Ｍ１表現型またはＭ２表現型（または、それぞれ、Ｍ［ＩＦＮγ］表現型対Ｍ［ＩＬ－４］表現型）への極性化を誘導するように、ＩＦＮγ（５０ｎｇ／ｍＬ）またはＩＬ－４（２０ｎｇ／ｍＬ）で、４８時間にわたりで処理することにより、規定された分化マクロファージへと極性化する能力を検討する。４８時間後に、ＥＶＯＳ明視野顕微鏡により、細胞を視覚化することができ、次いで、前述と同様に、採取し、表現型解析することができる。作出後におけるマクロファージ、および炎症性刺激に応答するマクロファージの、サイトカイン／増殖因子分泌プロファイルについて、さらなる解析を実施する。前述と同様に、マクロファージは、健常ドナー軟膜から作出することができ、非処理のまま放置するか、または炎症肝内に存在する状態を模倣するように、ＴＮＦα（５０ｎｇ／ｍＬ；Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）、およびポリイノシン酸：ポリシチジン酸（ｐｏｌｙＩ：Ｃ、ＴＬＲ３に結合するウイルス相同体、１ｇ／ｍＬ；Ｓｉｇｍａ）、もしくは最大限のマクロファージ活性化をもたらすように、リポ多糖（ＬＰＳ、１００ｎｇ／ｍＬ；Ｓｉｇｍａ）＋ＩＦＮγ（５０ＩＵ／ｍＬ、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）で刺激した。７日目のマクロファージを、一晩にわたりインキュベートし、上清を回収し、スピンダウンして、破砕物を除去し、次いで、試験まで、－８０℃で保管した。Ｍａｇｐｉｘマルチプレックス酵素免疫測定プレートリーダー（ＢｉｏＲａｄ）上で試行された、２７プレックスヒトサイトカインキットおよび９プレックスマトリックスメタロプロテアーゼキットを使用して、セクレトーム解析を実施する。
生成物の安定性：
[00337]工程開発時に、ＰＢＳ／ＥＤＴＡ緩衝液；０．５％ＨＡＳ（Ａｌｂｕｒｅｘ）を伴うＰＢＳ／ＥＤＴＡ緩衝液、０．９％生理食塩液単独または０．５％ＨＡＳを伴う生理食塩液を含む、多様な賦形剤について調べることができる。０．５％ＨＡＳ賦形剤を伴う、０．９％の生理食塩液（Ｂａｘｔｅｒ）が、最適の細胞生存率および表現型を維持することが見出される（データは示さない）。肝硬変ドナーに由来するマクロファージの、採取後における安定性について、３工程の最適化試行において探索し、工程検証試行では、より限定的な範囲の時点について評価した（ｎ＝３）。採取および賦形剤（注入用の０．９％生理食塩液、０．５％ヒト血清アルブミン）中の再懸濁後、バッグは、周囲温度（２１℃～２２℃）で保管することができ、採取の０、２、４、６、８、１２、２４、３０、および４８時間後に、サンプリングする。出荷判定基準のための抗体パネルを、各試料について試行し、２５Ｆ９およびＣＤ２０６についての幾何ＭＦＩにより、生存率および０日目からの平均値倍数変化を測定する。
統計学的解析：
[00338]結果は、平均値±ＳＤとして発現されうる。対応のない両側ｔ検定による評価が可能な場合、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６を使用して、差違の統計学的有意性について評価する。Ｐ値が、＜０．０５である場合に、結果を、統計学的に有意であると考えることができる。
[00339]本明細書ではまた、本明細書で記載される組成物、本明細書で記載されるベクター、または本明細書で記載されるポリペプチドを含む細胞も提供される。一部の実施形態では、細胞は、貪食細胞である。一部の実施形態では、細胞は、幹細胞由来細胞、骨髄細胞、マクロファージ、樹状細胞、リンパ球、マスト細胞、単球、好中球、小膠細胞、または星状膠細胞である。一部の実施形態では、細胞は、自家細胞である。一部の実施形態では、細胞は、同種細胞である。一部の実施形態では、細胞は、Ｍ１細胞である。一部の実施形態では、細胞は、Ｍ２細胞である。一部の実施形態では、細胞は、Ｍ１マクロファージ細胞である。一部の実施形態では、細胞は、Ｍ２マクロファージ細胞である。一部の実施形態では、細胞は、Ｍ１骨髄細胞である。一部の実施形態では、細胞は、Ｍ２骨髄細胞である。
[00340]本明細書ではまた、それを必要とする対象における疾患を処置する方法であって、対象へと、本明細書で記載される医薬組成物を投与するステップを含む方法も提供される。一部の実施形態では、疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、固形がんである。一部の実施形態では、固形がんは、卵巣がんであり、適切ながんは、卵巣がん、腎臓がん、乳がん、前立腺がん、肝がん、脳がん、リンパ腫、白血病、皮膚がん、膵臓がん、結腸直腸がん、肺がんを含む。一部の実施形態では、がんは、液性がんである。一部の実施形態では、液性がんは、白血病またはリンパ腫である。一部の実施形態では、液性がんは、Ｔ細胞リンパ腫である。一部の実施形態では、疾患は、Ｔ細胞悪性腫瘍である。
[00341]一部の実施形態では、方法は、さらなる治療剤を、対象へと投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、さらなる治療剤は、ＣＤ４７アゴニスト、Ｒａｃを阻害する薬剤、Ｃｄｃ４２を阻害する薬剤、ＧＴＰアーゼを阻害する薬剤、Ｆ－アクチンのディスアセンブリーを促進する薬剤、ＰＩ３ＫのＰＦＰへの動員を促進する薬剤、ＰＩ３Ｋの活性を促進する薬剤、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸の産生を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ１２の活性を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ２５の活性を促進する薬剤、ＳＨ３ＢＰ１の活性を促進する薬剤、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される。
[00342]一部の実施形態では、投与するステップは、注入または注射を含む。一部の実施形態では、投与するステップは、固形がんへの直接的投与を含む。一部の実施形態では、投与するステップは、ｃｉｒｃＲＮＡベース送達手順、非粒子封入型ｍＲＮＡベース送達手順、ｍＲＮＡベース送達手順、ウイルスベース送達手順、粒子ベース送達手順、リポソームベース送達手順、またはエクソソームベース送達手順を含む。一部の実施形態では、ＣＤ４＋ Ｔ細胞応答またはＣＤ８＋ Ｔ細胞応答が、対象において誘発される。
[00343]本明細書ではまた、細胞を調製する方法であって、細胞を、本明細書で記載される組成物、本明細書で記載されるベクター、または本明細書で記載されるポリペプチドと接触させるステップを含む方法も提供される。一部の実施形態では、接触させるステップは、形質導入を含む。一部の実施形態では、接触させるステップは、化学的トランスフェクション、電気穿孔、ヌクレオフェクション、またはウイルスによる感染もしくは形質導入を含む。
[00344]本明細書では、上記で記載された組成物のうちのいずれか１つを含む治療剤を投与するための方法が提供される。一部の実施形態では、治療的は、非経口投与経路を介して投与される。
[00345]一部の実施形態では、治療的は、筋内投与経路を介して投与される。一部の実施形態では、治療的は、静脈内投与経路を介して投与される。一部の実施形態では、治療的は、皮下投与経路を介して投与される。
[00346]本明細書ではまた、本明細書で記載される、１つまたは複数の組換え核酸と、脂質とを、本明細書で記載される水性組成物中に含む、医薬組成物を調製する方法も提供される。一部の実施形態では、組成物は、本明細書で記載されるベクターを含む。一部の実施形態では、脂質は、脂質ナノ粒子の形成を含む。
実施例１．細胞内インターフェロン活性化ドメインを伴う、キメラ抗原受容体タンパク質構築物：
[00347]本実施例では、炎症性シグナル伝達細胞内ドメインを有する、本明細書で記載される、多様なＣＦＰ構築物の、アミノ酸配列および核酸配列が開示される。下記で詳述される核酸配列は、一般に使用される分子クローニング法を使用して、それらから、適切な構築物または変異体を作製および使用する場合の指針をもたらすための、ＤＮＡ配列およびｍＲＮＡ配列について、当業者により、容易に解釈されうる。
[00348]組換えＤＮＡ法を使用して、ＨＥＲ２標的化ＰＦＰを、デザインし、構築した。ＰＦＰは、短鎖リンカーを介して、ＣＤ８アルファ鎖ヒンジドメインおよびＣＤ８アルファ鎖膜貫通ドメインへと接合された、標的細胞上のＨＥＲ２に結合する、軽鎖可変ドメインへと連結された、重鎖可変ドメインを含有するｓｃＦｖと融合された、シグナルペプチドを含む、細胞外ドメインを有する。膜貫通ドメインは、細胞質ゾル末端部で、短鎖リンカーで隔てられた、ＦｃγＲガンマ細胞内ドメイン、およびＭＤＡ５動員ドメインと融合される。リンカーを、イタリック体としてマーキングする。構築物をシーケンシングした。配列を、下記に提示する。ＭＤＡ５の細胞内シグナル伝達ドメインを、太字としてマーキングする。
[00349]ＨＥＲ２－ＦｃＲ－ＭＤＡ５キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）アミノ酸配列（ＣＤＲ配列に下線を付す）：
[00350]配列番号４７をコードする例示的ポリヌクレオチド配列は、以下の配列を含みうる：
ａｔｇｔｇｇｃｔｇｃａｇａｇｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｃｔｇｇｇｃａｃｃｇｔｇｇｃｇｔｇｃａｇｃａｔｔａｇｃｇａａａｔｔｃａｇｃｔｇｇｔｇｃａｇａｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃｃｔｇｇｔｇａａａｃｃｇｇｇｃｇｇｃａｇｃｇｔｇｃｇｃａｔｔａｇｃｔｇｃｇｃｇｇｃｇａｇｃｇｇｃｔａｔａｃｃｔｔｔａｃｃａａｃｔａｔｇｇｃａｔｇａａｃｔｇｇｇｔｇｃｇｃｃａｇｇｃｇｃｃｇｇｇｃａａａｇｇｃｃｔｇｇａａｔｇｇａｔｇｇｇｃｔｇｇａｔｔａａｃａｃｃｃａｔａｃｃｇｇｃｇａａｃｃｇａｃｃｔａｔｇｃｇｇａｔａｇｃｔｔｔａａａｇｇｃｃｇｃｔｔｔａｃｃｔｔｔａｇｃｃｔｇｇａｔｇａｔａｇｃａａａａａｃａｃｃｇｃｇｔａｔｃｔｇｃａｇａｔｔａａｃａｇｃｃｔｇｃｇｃｇｃｇｇａａｇａｔａｃｃｇｃｇｇｔｇｔａｔｔｔｔｔｇｃａｃｃｃｇｃｃｇｃｇｇｃｔａｔｇａｔｔｇｇｔａｔｔｔｔｇａｔｇｔｇｔｇｇｇｇｃｃａｇｇｇｃａｃｃａｃｃｇｔｇａｃｃｇｔｇａｇｃａｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃａｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃａｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃａｇｃｇａｔａｔｔｃａｇａｔｇａｃｃｃａｇａｇｃｃｃｇａｇｃａｇｃｃｔｇａｇｃｇｃｇａｇｃｇｔｇｇｇｃｇａｔｃｇｃｇｔｇａｃｃａｔｔａｃｃｔｇｃｃｇｃｇｃｇａｇｃｃａｇｇａｔａｔｔａａｃａｇｃｔａｔｃｔｇａｇｃｔｇｇｔｔｔｃａｇｃａｇａａａｃｃｇｇｇｃａａａｇｃｇｃｃｇａａａａｃｃｃｔｇａｔｔｔａｔｃｇｃｇｃｇａａｃｃｇｃｃｔｇｇａａａｇｃｇｇｃｇｔｇｃｃｇａｇｃｃｇｃｔｔｔａｇｃｇｇｃａｇｃｇｇｃａｇｃｇｇｃａｃｃｇａｔｔａｔａｃｃｃｔｇａｃｃａｔｔａｇｃａｇｃｃｔｇｃａｇｔａｔｇａａｇａｔｔｔｔｇｇｃａｔｔｔａｔｔａｔｔｇｃｃａｇｃａｇｔａｔｇａｔｇａａａｇｃｃｃｇｔｇｇａｃｃｔｔｔｇｇｃｇｇｃｇｇｃａｃｃａａａｃｔｇｇａａａｔｔａａａａｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃａｇｃｇｇｃｇｃｇｃｔｇａｇｃａａｃａｇｃａｔｔａｔｇｔａｔｔｔｔａｇｃｃａｔｔｔｔｇｔｇｃｃｇｇｔｇｔｔｔｃｔｇｃｃｇｇｃｇａａａｃｃｇａｃｃａｃｃａｃｃｃｃｇｇｃｇｃｃｇｃｇｃｃｃｇｃｃｇａｃｃｃｃｇｇｃｇｃｃｇａｃｃａｔｔｇｃｇａｇｃｃａｇｃｃｇｃｔｇａｇｃｃｔｇｃｇｃｃｃｇｇａａｇｃｇｔｇｃｃｇｃｃｃｇｇｃｇｇｃｇｇｇｃｇｇｃｇｃｇｇｔｇｃａｔａｃｃｃｇｃｇｇｃｃｔｇｇａｔａｔｔｔａｔａｔｔｔｇｇｇｃｇｃｃｇｃｔｇｇｃｇｇｇｃａｃｃｔｇｃｇｇｃｇｔｇｃｔｇｃｔｇｃｔｇａｇｃｃｔｇｇｔｇａｔｔａｃｃｃｔｇｔａｔｔｇｃｃｇｃｃｔｇａａａａｔｔｃａｇｇｔｇｃｇｃａａａｇｃｇｇｃｇａｔｔａｃｃａｇｃｔａｔｇａａａａａａｇｃｇａｔｇｇｃｇｔｇｔａｔａｃｃｇｇｃｃｔｇａｇｃａｃｃｃｇｃａａｃｃａｇｇａａａｃｃｔａｔｇａａａｃｃｃｔｇａａａｃａｔｇａａａａａｃｃｇｃｃｇｃａｇｇｇｃａｇｃｇｇｃａｇｃａｔｇａｇｃａａｃｇｇｃｔａｔａｇｃａｃｃｇａｔｇａａａａｃｔｔｔｃｇｃｔａｔｃｔｇａｔｔａｇｃｔｇｃｔｔｔｃｇｃｇｃｇｃｇｃｇｔｇａａａａｔｇｔａｔａｔｔｃａｇｇｔｇｇａａｃｃｇｇｔｇｃｔｇｇａｔｔａｔｃｔｇａｃｃｔｔｔｃｔｇｃｃｇｇｃｇｇａａｇｔｇａａａｇａａｃａｇａｔｔｃａｇｃｇｃａｃｃｇｔｇｇｃｇａｃｃａｇｃｇｇｃａａｃａｔｇｃａｇｇｃｇｇｔｇｇａａｃｔｇｃｔｇｃｔｇａｇｃａｃｃｃｔｇｇａａａａａｇｇｃｇｔｇｔｇｇｃａｔｃｔｇｇｇｃｔｇｇａｃｃｃｇｃｇａａｔｔｔｇｔｇｇａａｇｃｇｃｔｇｃｇｃｃｇｃａｃｃｇｇｃａｇｃｃｃｇｃｔｇｇｃｇｇｃｇｃｇｃｔａｔａｔｇａａｃｃｃｇｇａａｃｔｇａｃｃｇａｔｃｔｇｃｃｇａｇｃｃｃｇａｇｃｔｔｔｇａａａａｃｇｃｇｃａｔｇａｔｇａａｔａｔｃｔｇｃａｇｃｔｇｃｔｇａａｃｃｔｇｃｔｇｃａｇｃｃｇａｃｃｃｔｇｇｔｇｇａｔａａａｃｔｇｃｔｇｇｔｇｃｇｃｇａｔｇｔｇｃｔｇｇａｔａａａｔｇｃａｔｇｇａａｇａａｇａａｃｔｇｃｔｇａｃｃａｔｔｇａａｇａｔｃｇｃａａｃｃｇｃａｔｔｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇａａａａｃａａｃｇｇｃａａｃｇａａａｇｃｇｇｃｇｔｇｃｇｃｇａａｃｔｇｃｔｇａａａｃｇｃａｔｔｇｔｇｃａｇａａａｇａａａａｃｔｇｇｔｔｔａｇｃｇｃｇｔｔｔｃｔｇａａｃｇｔｇｃｔｇｃｇｃｃａｇａｃｃｇｇｃａａｃａａｃｇａａｃｔｇｇｔｇｃａｇｇａａｃｔｇａｃｃｇｇｃａｇｃｇａｔｔｇｃａｇｃｇａａａｇｃａａｃｇｃｇｇａａａｔｔｇａａａａｃ（配列番号４８）。
[00351]本明細書で開示される、ＨＥＲ２－ＣＤ８ヒンジ－ＦｃＲ－ＭＤＡ５をコードする、例示的核酸配列は、以下の配列を含む：
ＡＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＧＴＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＧＡＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＧＣＡＧＣＡＴＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＧＣＧＡＴＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＡＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＴＧＴＧＡＡＴＡＣＣＧＣＣＧＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＧＣＧＣＣＡＧＣＴＴＴＣＴＧＴＡＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＡＧＡＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＴＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＣＡＣＴＡＣＡＣＣＡＣＡＣＣＴＣＣＡＡＣＣＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＡＧＡＡＣＡＧＧＣＡＧＣＡＣＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＡＡＡＧＣＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＣＧＡＡＧＧＡＴＣＴＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＴＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＡＧＧＡＣＴＴＧＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＴＣＴＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＡＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＡＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＡＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＡＴＧＧＧＴＣＧＣＣＡＧＡＡＴＣＴＡＣＣＣＣＡＣＣＡＡＣＧＧＣＴＡＣＡＣＣＡＧＡＴＡＣＧＣＣＧＡＴＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＣＣＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＴＣＴＡＧＡＴＧＧＧＧＡＧＧＣＧＡＣＧＧＣＴＴＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＧＡＴＧＴＴＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴＴＴＣＴＴＣＴＡＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＣＣＣＴＧＡＧＣＡＡＴＡＧＣＡＴＣＡＴＧＴＡＣＴＴＣＡＧＣＣＡＣＴＴＣＧＴＧＣＣＣＧＴＧＴＴＴＣＴＧＣＣＣＧＣＣＡＡＧＣＣＴＡＣＡＡＣＡＡＣＡＣＣＣＧＣＴＣＣＴＡＧＡＣＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＡＧＣＴＣＣＴＡＣＡＡＴＣＧＣＣＡＧＣＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＴＣＴＣＡＧＡＣＣＴＧＡＡＧＣＣＴＧＴＡＧＡＣＣＴＧＣＡＧＣＴＧＧＣＧＧＡＧＣＴＧＴＧＣＡＴＡＣＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＴＡＴＣＴＡＣＡＴＴＴＧＧＧＣＣＣＣＴＣＴＧＧＣＴＧＧＣＡＣＡＴＧＴＧＧＣＧＴＴＣＴＧＣＴＧＣＴＣＴＣＴＣＴＧＧＴＣＡＴＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＴＧＣＡＧＡＣＧＧＣＴＧＡＡＧＡＴＣＣＡＡＧＴＧＣＧＧＡＡＧＧＣＣＧＣＣＡＴＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＴＣＴＧＡＴＧＧＣＧＴＧＴＡＣＡＣＣＧＧＣＣＴＧＡＧＣＡＣＣＣＧＧＡＡＴＣＡＡＧＡＡＡＣＣＴＡＣＧＡＧＡＣＡＣＴＧＡＡＧＣＡＣＧＡＧＡＡＧＣＣＴＣＣＡＣＡＡＡＴＧＡＧＴＡＡＣＧＧＴＴＡＣＡＧＣＡＣＧＧＡＣＧＡＧＡＡＣＴＴＣＣＧＣＴＡＴＣＴＧＡＴＴＡＧＣＴＧＴＴＴＣＣＧＧＧＣＴＣＧＣＧＴＡＡＡＧＡＴＧＴＡＴＡＴＣＣＡＧＧＴＡＧＡＧＣＣＡＧＴＧＣＴＧＧＡＴＴＡＣＣＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＣＣＣＴＧＣＣＧＡＧＧＴＧＡＡＧＧＡＡＣＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＡＡＣＡＧＴＡＧＣＧＡＣＡＴＣＡＧＧＡＡＡＴＡＴＧＣＡＡＧＣＧＧＴＧＧＡＧＴＴＧＣＴＧＣＴＣＴＣＴＡＣＣＣＴＣＧＡＡＡＡＡＧＧＴＧＴＴＴＧＧＣＡＣＣＴＧＧＧＡＴＧＧＡＣＡＣＧＧＧＡＡＴＴＣＧＴＣＧＡＡＧＣＴＣＴＣＡＧＧＣＧＡＡＣＴＧＧＡＴＣＴＣＣＴＣＴＴＧＣＣＧＣＴＡＧＧＴＡＣＡＴＧＡＡＣＣＣＧＧＡＡＣＴＣＡＣＴＧＡＴＴＴＧＣＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＴＴＣＧＡＧＡＡＣＧＣＣＣＡＴＧＡＴＧＡＧＴＡＴＣＴＣＣＡＧＣＴＴＣＴＧＡＡＴＴＴＧＣＴＴＣＡＧＣＣＴＡＣＣＴＴＧＧＴＣＧＡＣＡＡＡＣＴＧＴＴＧＧＴＴＣＧＧＧＡＣＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＴＧＴＡＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＣＴＧＡＣＣＡＴＣＧＡＧＧＡＣＡＧＡＡＡＣＣＧＧＡＴＡＧＣＴＧＣＧＧＣＡＧＡＧＡＡＣＡＡＴＧＧＣＡＡＣＧＡＧＴＣＡＧＧＡＧＴＴＣＧＧＧＡＧＴＴＧＴＴＧＡＡＧＡＧＧＡＴＡＧＴＧＣＡＡＡＡＧＧＡＧＡＡＴＴＧＧＴＴＣＡＧＣＧＣＴＴＴＣＣＴＴＡＡＣＧＴＡＣＴＣＣＧＡＣＡＧＡＣＡＧＧＣＡＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＣＧＴＡＣＡＡＧＡＧＴＴＧＡＣＡＧＧＧＴＣＡＧＡＴＴＧＣＡＧＴＧＡＡＴＣＣＡＡＣＧＣＣＧＡＡＡＴＴＧＡＡＡＡＴ（配列番号６８）
[00352]さらなる抗ＨＥＲ２結合性配列は、以下の配列を含むＶＨＨドメインを含みうる：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＩＴＦＳＩＮＴＭＧＷＹＲＱＡＰＧＫＱＲＥＬＶＡＬＩＳＳＩＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＫＲＦＲＴＡＡＱＧＴＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号１０７）。
[00353]ＭＤＡ５細胞内ドメインを使用する、さらなる例示的ＣＦＰ構築物は、以下のアミノ酸配列を有する、ＣＤ５－ＦｃＲ－ＭＤＡ５構築物（配列番号４）でありうる：
[00354]本実施例では、公知の分子生検法を使用して、ＭＤＡ－５細胞内ドメイン配列の、２つのカスパーゼ活性化（ＣＡＲＤ）ドメインを含む細胞内ドメイン（太字で示されたタンデムＣＡＲＤ ＩＣＤ配列）を有する、ＣＤ５標的化ＣＦＰを構築した。
[00355]ＣＤ５－ＦｃＲ－ＭＤＡ５をコードする例示的ポリヌクレオチド配列は、以下の配列を含みうる：
ａｔｇｔｇｇｃｔｇｃａｇａｇｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｃｔｇｇｇｃａｃｃｇｔｇｇｃｇｔｇｃａｇｃａｔｔａｇｃｇａａａｔｔｃａｇｃｔｇｇｔｇｃａｇａｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃｃｔｇｇｔｇａａａｃｃｇｇｇｃｇｇｃａｇｃｇｔｇｃｇｃａｔｔａｇｃｔｇｃｇｃｇｇｃｇａｇｃｇｇｃｔａｔａｃｃｔｔｔａｃｃａａｃｔａｔｇｇｃａｔｇａａｃｔｇｇｇｔｇｃｇｃｃａｇｇｃｇｃｃｇｇｇｃａａａｇｇｃｃｔｇｇａａｔｇｇａｔｇｇｇｃｔｇｇａｔｔａａｃａｃｃｃａｔａｃｃｇｇｃｇａａｃｃｇａｃｃｔａｔｇｃｇｇａｔａｇｃｔｔｔａａａｇｇｃｃｇｃｔｔｔａｃｃｔｔｔａｇｃｃｔｇｇａｔｇａｔａｇｃａａａａａｃａｃｃｇｃｇｔａｔｃｔｇｃａｇａｔｔａａｃａｇｃｃｔｇｃｇｃｇｃｇｇａａｇａｔａｃｃｇｃｇｇｔｇｔａｔｔｔｔｔｇｃａｃｃｃｇｃｃｇｃｇｇｃｔａｔｇａｔｔｇｇｔａｔｔｔｔｇａｔｇｔｇｔｇｇｇｇｃｃａｇｇｇｃａｃｃａｃｃｇｔｇａｃｃｇｔｇａｇｃａｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃａｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃａｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃａｇｃｇａｔａｔｔｃａｇａｔｇａｃｃｃａｇａｇｃｃｃｇａｇｃａｇｃｃｔｇａｇｃｇｃｇａｇｃｇｔｇｇｇｃｇａｔｃｇｃｇｔｇａｃｃａｔｔａｃｃｔｇｃｃｇｃｇｃｇａｇｃｃａｇｇａｔａｔｔａａｃａｇｃｔａｔｃｔｇａｇｃｔｇｇｔｔｔｃａｇｃａｇａａａｃｃｇｇｇｃａａａｇｃｇｃｃｇａａａａｃｃｃｔｇａｔｔｔａｔｃｇｃｇｃｇａａｃｃｇｃｃｔｇｇａａａｇｃｇｇｃｇｔｇｃｃｇａｇｃｃｇｃｔｔｔａｇｃｇｇｃａｇｃｇｇｃａｇｃｇｇｃａｃｃｇａｔｔａｔａｃｃｃｔｇａｃｃａｔｔａｇｃａｇｃｃｔｇｃａｇｔａｔｇａａｇａｔｔｔｔｇｇｃａｔｔｔａｔｔａｔｔｇｃｃａｇｃａｇｔａｔｇａｔｇａａａｇｃｃｃｇｔｇｇａｃｃｔｔｔｇｇｃｇｇｃｇｇｃａｃｃａａａｃｔｇｇａａａｔｔａａａａｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃａｇｃｇｇｃｇｃｇｃｔｇａｇｃａａｃａｇｃａｔｔａｔｇｔａｔｔｔｔａｇｃｃａｔｔｔｔｇｔｇｃｃｇｇｔｇｔｔｔｃｔｇｃｃｇｇｃｇａａａｃｃｇａｃｃａｃｃａｃｃｃｃｇｇｃｇｃｃｇｃｇｃｃｃｇｃｃｇａｃｃｃｃｇｇｃｇｃｃｇａｃｃａｔｔｇｃｇａｇｃｃａｇｃｃｇｃｔｇａｇｃｃｔｇｃｇｃｃｃｇｇａａｇｃｇｔｇｃｃｇｃｃｃｇｇｃｇｇｃｇｇｇｃｇｇｃｇｃｇｇｔｇｃａｔａｃｃｃｇｃｇｇｃｃｔｇｇａｔａｔｔｔａｔａｔｔｔｇｇｇｃｇｃｃｇｃｔｇｇｃｇｇｇｃａｃｃｔｇｃｇｇｃｇｔｇｃｔｇｃｔｇｃｔｇａｇｃｃｔｇｇｔｇａｔｔａｃｃｃｔｇｔａｔｔｇｃｃｇｃｃｔｇａａａａｔｔｃａｇｇｔｇｃｇｃａａａｇｃｇｇｃｇａｔｔａｃｃａｇｃｔａｔｇａａａａａａｇｃｇａｔｇｇｃｇｔｇｔａｔａｃｃｇｇｃｃｔｇａｇｃａｃｃｃｇｃａａｃｃａｇｇａａａｃｃｔａｔｇａａａｃｃｃｔｇａａａｃａｔｇａａａａａｃｃｇｃｃｇｃａｇｇｇｃａｇｃｇｇｃａｇｃａｔｇａｇｃａａｃｇｇｃｔａｔａｇｃａｃｃｇａｔｇａａａａｃｔｔｔｃｇｃｔａｔｃｔｇａｔｔａｇｃｔｇｃｔｔｔｃｇｃｇｃｇｃｇｃｇｔｇａａａａｔｇｔａｔａｔｔｃａｇｇｔｇｇａａｃｃｇｇｔｇｃｔｇｇａｔｔａｔｃｔｇａｃｃｔｔｔｃｔｇｃｃｇｇｃｇｇａａｇｔｇａａａｇａａｃａｇａｔｔｃａｇｃｇｃａｃｃｇｔｇｇｃｇａｃｃａｇｃｇｇｃａａｃａｔｇｃａｇｇｃｇｇｔｇｇａａｃｔｇｃｔｇｃｔｇａｇｃａｃｃｃｔｇｇａａａａａｇｇｃｇｔｇｔｇｇｃａｔｃｔｇｇｇｃｔｇｇａｃｃｃｇｃｇａａｔｔｔｇｔｇｇａａｇｃｇｃｔｇｃｇｃｃｇｃａｃｃｇｇｃａｇｃｃｃｇｃｔｇｇｃｇｇｃｇｃｇｃｔａｔａｔｇａａｃｃｃｇｇａａｃｔｇａｃｃｇａｔｃｔｇｃｃｇａｇｃｃｃｇａｇｃｔｔｔｇａａａａｃｇｃｇｃａｔｇａｔｇａａｔａｔｃｔｇｃａｇｃｔｇｃｔｇａａｃｃｔｇｃｔｇｃａｇｃｃｇａｃｃｃｔｇｇｔｇｇａｔａａａｃｔｇｃｔｇｇｔｇｃｇｃｇａｔｇｔｇｃｔｇｇａｔａａａｔｇｃａｔｇｇａａｇａａｇａａｃｔｇｃｔｇａｃｃａｔｔｇａａｇａｔｃｇｃａａｃｃｇｃａｔｔｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇａａａａｃａａｃｇｇｃａａｃｇａａａｇｃｇｇｃｇｔｇｃｇｃｇａａｃｔｇｃｔｇａａａｃｇｃａｔｔｇｔｇｃａｇａａａｇａａａａｃｔｇｇｔｔｔａｇｃｇｃｇｔｔｔｃｔｇａａｃｇｔｇｃｔｇｃｇｃｃａｇａｃｃｇｇｃａａｃａａｃｇａａｃｔｇｇｔｇｃａｇｇａａｃｔｇａｃｃｇｇｃａｇｃｇａｔｔｇｃａｇｃｇａａａｇｃａａｃｇｃｇｇａａａｔｔｇａａａａｃ（配列番号４９）。
[00356]本明細書で開示される、ＣＤ５－ＣＤ８ヒンジ－ＣＤ８ＴＭ－ＦｃＲ－ＭＤＡ５をコードする、例示的核酸配列は、以下の配列を含む：
ＡＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＧＴＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＧＡＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＧＣＡＧＣＡＴＣＡＧＣＧＡＧＡＴＣＣＡＧＣＴＧＧＴＴＣＡＧＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＣＴＴＧＴＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＧＧＡＴＣＴＧＴＣＡＧＡＡＴＣＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＡＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＧＧＡＴＣＡＡＴＡＣＣＣＡＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＡＣＣＴＡＣＧＣＣＧＡＴＡＧＣＴＴＴＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＧＡＣＡＧＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＴＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＴＣＴＧＣＡＣＣＡＧＡＡＧＡＧＧＣＴＡＣＧＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＣＧＡＴＧＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＡＧＴＧＡＣＡＧＴＴＴＣＴＡＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＧＧＡＴＣＡＧＧＴＧＧＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＣＧＧＴＧＧＴＧＧＣＴＣＴＧＡＴＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＧＣＧＡＴＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＡＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＡＡＣＡＧＣＴＡＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＴＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＴＡＡＧＡＣＡＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＧＧＧＣＣＡＡＣＡＧＡＣＴＧＧＡＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＡＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＴＡＣＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＧＣＡＴＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＡＣＧＡＣＧＡＧＡＧＣＣＣＴＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＡＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＣＣＣＴＧＡＧＣＡＡＴＡＧＣＡＴＣＡＴＧＴＡＣＴＴＣＡＧＣＣＡＣＴＴＣＧＴＧＣＣＣＧＴＧＴＴＴＣＴＧＣＣＣＧＣＣＡＡＧＣＣＴＡＣＡＡＣＡＡＣＡＣＣＣＧＣＴＣＣＴＡＧＡＣＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＡＧＣＴＣＣＴＡＣＡＡＴＣＧＣＣＡＧＣＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＴＣＴＣＡＧＡＣＣＴＧＡＡＧＣＣＴＧＴＡＧＡＣＣＴＧＣＡＧＣＴＧＧＣＧＧＡＧＣＴＧＴＧＣＡＴＡＣＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＴＡＴＣＴＡＣＡＴＴＴＧＧＧＣＣＣＣＴＣＴＧＧＣＴＧＧＣＡＣＡＴＧＴＧＧＣＧＴＴＣＴＧＣＴＧＣＴＣＴＣＴＣＴＧＧＴＣＡＴＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＴＧＣＡＧＡＣＧＧＣＴＧＡＡＧＡＴＣＣＡＡＧＴＧＣＧＧＡＡＧＧＣＣＧＣＣＡＴＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＴＣＴＧＡＴＧＧＣＧＴＧＴＡＣＡＣＣＧＧＣＣＴＧＡＧＣＡＣＣＣＧＧＡＡＴＣＡＡＧＡＡＡＣＣＴＡＣＧＡＧＡＣＡＣＴＧＡＡＧＣＡＣＧＡＧＡＡＧＣＣＴＣＣＡＣＡＡＡＴＧＡＧＴＡＡＣＧＧＴＴＡＣＡＧＣＡＣＧＧＡＣＧＡＧＡＡＣＴＴＣＣＧＣＴＡＴＣＴＧＡＴＴＡＧＣＴＧＴＴＴＣＣＧＧＧＣＴＣＧＣＧＴＡＡＡＧＡＴＧＴＡＴＡＴＣＣＡＧＧＴＡＧＡＧＣＣＡＧＴＧＣＴＧＧＡＴＴＡＣＣＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＣＣＣＴＧＣＣＧＡＧＧＴＧＡＡＧＧＡＡＣＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＡＡＣＡＧＴＡＧＣＧＡＣＡＴＣＡＧＧＡＡＡＴＡＴＧＣＡＡＧＣＧＧＴＧＧＡＧＴＴＧＣＴＧＣＴＣＴＣＴＡＣＣＣＴＣＧＡＡＡＡＡＧＧＴＧＴＴＴＧＧＣＡＣＣＴＧＧＧＡＴＧＧＡＣＡＣＧＧＧＡＡＴＴＣＧＴＣＧＡＡＧＣＴＣＴＣＡＧＧＣＧＡＡＣＴＧＧＡＴＣＴＣＣＴＣＴＴＧＣＣＧＣＴＡＧＧＴＡＣＡＴＧＡＡＣＣＣＧＧＡＡＣＴＣＡＣＴＧＡＴＴＴＧＣＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＴＴＣＧＡＧＡＡＣＧＣＣＣＡＴＧＡＴＧＡＧＴＡＴＣＴＣＣＡＧＣＴＴＣＴＧＡＡＴＴＴＧＣＴＴＣＡＧＣＣＴＡＣＣＴＴＧＧＴＣＧＡＣＡＡＡＣＴＧＴＴＧＧＴＴＣＧＧＧＡＣＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＴＧＴＡＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＣＴＧＡＣＣＡＴＣＧＡＧＧＡＣＡＧＡＡＡＣＣＧＧＡＴＡＧＣＴＧＣＧＧＣＡＧＡＧＡＡＣＡＡＴＧＧＣＡＡＣＧＡＧＴＣＡＧＧＡＧＴＴＣＧＧＧＡＧＴＴＧＴＴＧＡＡＧＡＧＧＡＴＡＧＴＧＣＡＡＡＡＧＧＡＧＡＡＴＴＧＧＴＴＣＡＧＣＧＣＴＴＴＣＣＴＴＡＡＣＧＴＡＣＴＣＣＧＡＣＡＧＡＣＡＧＧＣＡＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＣＧＴＡＣＡＡＧＡＧＴＴＧＡＣＡＧＧＧＴＣＡＧＡＴＴＧＣＡＧＴＧＡＡＴＣＣＡＡＣＧＣＣＧＡＡＡＴＴＧＡＡＡＡＴ（配列番号７５）
[00357]
[00358]さらなる例示的ＣＦＰ構築物は、以下のアミノ酸配列（ＣＤＲ配列に下線を付す）を有する、ＣＤ５－ＦｃＲ－ＴＮＦＲ１構築物である：
ＭＷＬＱＳＬＬＬＬＧＴＶＡＣＳＩＳＥＩＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＶＲＩＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＨＴＧＥＰＴＹＡＤＳＦＫＧＲＦＴＦＳＬＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＩＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＴＲＲＧＹＤＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＴＬＩＹＲＡＮＲＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＹＥＤＦＧＩＹＹＣＱＱＹＤＥＳＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＳＧＧＧＧＳＧＡＬＳＮＳＩＭＹＦＳＨＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＲＬＫＩＱＶＲＫＡＡＩＴＳＹＥＫＳＤＧＶＹＴＧＬＳＴＲＮＱＥＴＹＥＴＬＫＨＥＫＰＰＱＧＳＧＳＱＲＷＫＳＫＬＹＳＩＶＣＧＫＳＴＰＥＫＥＧＥＬＥＧＴＴＴＫＰＬＡＰＮＰＳＦＳＰＴＰＧＦＴＰＴＬＧＦＳＰＶＰＳＳＴＦＴＳＳＳＴＹＴＰＧＤＣＰＮＦＡＡＰＲＲＥＶＡＰＰＹＱＧＡＤＰＩＬＡＴＡＬＡＳＤＰＩＰＮＰＬＱＫＷＥＤＳＡＨＫＰＱＳＬＤＴＤＤＰＡＴＬＹＡＶＶＥＮＶＰＰＬＲＷＫＥＦＶＲＲＬＧＬＳＤＨＥＩＤＲＬＥＬＱＮＧＲＣＬＲＥＡＱＹＳＭＬＡＴＷＲＲＲＴＰＲＲＥＡＴＬＥＬＬＧＲＶＬＲＤＭＤＬＬＧＣＬＥＤＩＥＥＡＬＣＧＰＡＡＬＰＰＡＰＳＬＬＲ（配列番号５０）
[00359]ＣＤ５－ＦｃＲ－ＴＮＦＲ１をコードする例示的ポリヌクレオチド配列は、以下の配列を含みうる：
ａｔｇｔｇｇｃｔｇｃａｇａｇｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｃｔｇｇｇｃａｃｃｇｔｇｇｃｇｔｇｃａｇｃａｔｔａｇｃｇａａａｔｔｃａｇｃｔｇｇｔｇｃａｇａｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃｃｔｇｇｔｇａａａｃｃｇｇｇｃｇｇｃａｇｃｇｔｇｃｇｃａｔｔａｇｃｔｇｃｇｃｇｇｃｇａｇｃｇｇｃｔａｔａｃｃｔｔｔａｃｃａａｃｔａｔｇｇｃａｔｇａａｃｔｇｇｇｔｇｃｇｃｃａｇｇｃｇｃｃｇｇｇｃａａａｇｇｃｃｔｇｇａａｔｇｇａｔｇｇｇｃｔｇｇａｔｔａａｃａｃｃｃａｔａｃｃｇｇｃｇａａｃｃｇａｃｃｔａｔｇｃｇｇａｔａｇｃｔｔｔａａａｇｇｃｃｇｃｔｔｔａｃｃｔｔｔａｇｃｃｔｇｇａｔｇａｔａｇｃａａａａａｃａｃｃｇｃｇｔａｔｃｔｇｃａｇａｔｔａａｃａｇｃｃｔｇｃｇｃｇｃｇｇａａｇａｔａｃｃｇｃｇｇｔｇｔａｔｔｔｔｔｇｃａｃｃｃｇｃｃｇｃｇｇｃｔａｔｇａｔｔｇｇｔａｔｔｔｔｇａｔｇｔｇｔｇｇｇｇｃｃａｇｇｇｃａｃｃａｃｃｇｔｇａｃｃｇｔｇａｇｃａｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃａｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃａｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃａｇｃｇａｔａｔｔｃａｇａｔｇａｃｃｃａｇａｇｃｃｃｇａｇｃａｇｃｃｔｇａｇｃｇｃｇａｇｃｇｔｇｇｇｃｇａｔｃｇｃｇｔｇａｃｃａｔｔａｃｃｔｇｃｃｇｃｇｃｇａｇｃｃａｇｇａｔａｔｔａａｃａｇｃｔａｔｃｔｇａｇｃｔｇｇｔｔｔｃａｇｃａｇａａａｃｃｇｇｇｃａａａｇｃｇｃｃｇａａａａｃｃｃｔｇａｔｔｔａｔｃｇｃｇｃｇａａｃｃｇｃｃｔｇｇａａａｇｃｇｇｃｇｔｇｃｃｇａｇｃｃｇｃｔｔｔａｇｃｇｇｃａｇｃｇｇｃａｇｃｇｇｃａｃｃｇａｔｔａｔａｃｃｃｔｇａｃｃａｔｔａｇｃａｇｃｃｔｇｃａｇｔａｔｇａａｇａｔｔｔｔｇｇｃａｔｔｔａｔｔａｔｔｇｃｃａｇｃａｇｔａｔｇａｔｇａａａｇｃｃｃｇｔｇｇａｃｃｔｔｔｇｇｃｇｇｃｇｇｃａｃｃａａａｃｔｇｇａａａｔｔａａａａｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃａｇｃｇｇｃｇｃｇｃｔｇａｇｃａａｃａｇｃａｔｔａｔｇｔａｔｔｔｔａｇｃｃａｔｔｔｔｇｔｇｃｃｇｇｔｇｔｔｔｃｔｇｃｃｇｇｃｇａａａｃｃｇａｃｃａｃｃａｃｃｃｃｇｇｃｇｃｃｇｃｇｃｃｃｇｃｃｇａｃｃｃｃｇｇｃｇｃｃｇａｃｃａｔｔｇｃｇａｇｃｃａｇｃｃｇｃｔｇａｇｃｃｔｇｃｇｃｃｃｇｇａａｇｃｇｔｇｃｃｇｃｃｃｇｇｃｇｇｃｇｇｇｃｇｇｃｇｃｇｇｔｇｃａｔａｃｃｃｇｃｇｇｃｃｔｇｇａｔａｔｔｔａｔａｔｔｔｇｇｇｃｇｃｃｇｃｔｇｇｃｇｇｇｃａｃｃｔｇｃｇｇｃｇｔｇｃｔｇｃｔｇｃｔｇａｇｃｃｔｇｇｔｇａｔｔａｃｃｃｔｇｔａｔｔｇｃｃｇｃｃｔｇａａａａｔｔｃａｇｇｔｇｃｇｃａａａｇｃｇｇｃｇａｔｔａｃｃａｇｃｔａｔｇａａａａａａｇｃｇａｔｇｇｃｇｔｇｔａｔａｃｃｇｇｃｃｔｇａｇｃａｃｃｃｇｃａａｃｃａｇｇａａａｃｃｔａｔｇａａａｃｃｃｔｇａａａｃａｔｇａａａａａｃｃｇｃｃｇｃａｇｇｇｃａｇｃｇｇｃａｇｃｃａｇｃｇｃｔｇｇａａａａｇｃａａａｃｔｇｔａｔａｇｃａｔｔｇｔｇｔｇｃｇｇｃａａａａｇｃａｃｃｃｃｇｇａａａａａｇａａｇｇｃｇａａｃｔｇｇａａｇｇｃａｃｃａｃｃａｃｃａａａｃｃｇｃｔｇｇｃｇｃｃｇａａｃｃｃｇａｇｃｔｔｔａｇｃｃｃｇａｃｃｃｃｇｇｇｃｔｔｔａｃｃｃｃｇａｃｃｃｔｇｇｇｃｔｔｔａｇｃｃｃｇｇｔｇｃｃｇａｇｃａｇｃａｃｃｔｔｔａｃｃａｇｃａｇｃａｇｃａｃｃｔａｔａｃｃｃｃｇｇｇｃｇａｔｔｇｃｃｃｇａａｃｔｔｔｇｃｇｇｃｇｃｃｇｃｇｃｃｇｃｇａａｇｔｇｇｃｇｃｃｇｃｃｇｔａｔｃａｇｇｇｃｇｃｇｇａｔｃｃｇａｔｔｃｔｇｇｃｇａｃｃｇｃｇｃｔｇｇｃｇａｇｃｇａｔｃｃｇａｔｔｃｃｇａａｃｃｃｇｃｔｇｃａｇａａａｔｇｇｇａａｇａｔａｇｃｇｃｇｃａｔａａａｃｃｇｃａｇａｇｃｃｔｇｇａｔａｃｃｇａｔｇａｔｃｃｇｇｃｇａｃｃｃｔｇｔａｔｇｃｇｇｔｇｇｔｇｇａａａａｃｇｔｇｃｃｇｃｃｇｃｔｇｃｇｃｔｇｇａａａｇａａｔｔｔｇｔｇｃｇｃｃｇｃｃｔｇｇｇｃｃｔｇａｇｃｇａｔｃａｔｇａａａｔｔｇａｔｃｇｃｃｔｇｇａａｃｔｇｃａｇａａｃｇｇｃｃｇｃｔｇｃｃｔｇｃｇｃｇａａｇｃｇｃａｇｔａｔａｇｃａｔｇｃｔｇｇｃｇａｃｃｔｇｇｃｇｃｃｇｃｃｇｃａｃｃｃｃｇｃｇｃｃｇｃｇａａｇｃｇａｃｃｃｔｇｇａａｃｔｇｃｔｇｇｇｃｃｇｃｇｔｇｃｔｇｃｇｃｇａｔａｔｇｇａｔｃｔｇｃｔｇｇｇｃｔｇｃｃｔｇｇａａｇａｔａｔｔｇａａｇａａｇｃｇｃｔｇｔｇｃｇｇｃｃｃｇｇｃｇｇｃｇｃｔｇｃｃｇｃｃｇｇｃｇｃｃｇａｇｃｃｔｇｃｔｇｃｇｃ（配列番号５１）。
[00360]ＣＤ５－ＣＤ８ヒンジ－ＣＤ８ＴＭ－ＦｃＲ－ＴＮＦＲ１をコードする例示的ポリヌクレオチド配列は、以下の通りである：
ＡＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＧＴＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＧＡＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＧＣＡＧＣＡＴＣＡＧＣＧＡＧＡＴＣＣＡＧＣＴＧＧＴＴＣＡＧＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＣＴＴＧＴＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＧＧＡＴＣＴＧＴＣＡＧＡＡＴＣＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＡＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＧＧＡＴＣＡＡＴＡＣＣＣＡＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＡＣＣＴＡＣＧＣＣＧＡＴＡＧＣＴＴＴＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＧＡＣＡＧＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＴＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＴＣＴＧＣＡＣＣＡＧＡＡＧＡＧＧＣＴＡＣＧＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＣＧＡＴＧＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＡＧＴＧＡＣＡＧＴＴＴＣＴＡＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＧＧＡＴＣＡＧＧＴＧＧＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＣＧＧＴＧＧＴＧＧＣＴＣＴＧＡＴＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＧＣＧＡＴＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＡＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＡＡＣＡＧＣＴＡＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＴＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＴＡＡＧＡＣＡＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＧＧＧＣＣＡＡＣＡＧＡＣＴＧＧＡＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＡＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＴＡＣＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＧＣＡＴＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＡＣＧＡＣＧＡＧＡＧＣＣＣＴＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＡＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＣＣＣＴＧＡＧＣＡＡＴＡＧＣＡＴＣＡＴＧＴＡＣＴＴＣＡＧＣＣＡＣＴＴＣＧＴＧＣＣＣＧＴＧＴＴＴＣＴＧＣＣＣＧＣＣＡＡＧＣＣＴＡＣＡＡＣＡＡＣＡＣＣＣＧＣＴＣＣＴＡＧＡＣＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＡＧＣＴＣＣＴＡＣＡＡＴＣＧＣＣＡＧＣＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＴＣＴＣＡＧＡＣＣＴＧＡＡＧＣＣＴＧＴＡＧＡＣＣＴＧＣＡＧＣＴＧＧＣＧＧＡＧＣＴＧＴＧＣＡＴＡＣＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＴＡＴＣＴＡＣＡＴＴＴＧＧＧＣＣＣＣＴＣＴＧＧＣＴＧＧＣＡＣＡＴＧＴＧＧＣＧＴＴＣＴＧＣＴＧＣＴＣＴＣＴＣＴＧＧＴＣＡＴＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＴＧＣＡＧＡＣＧＧＣＴＧＡＡＧＡＴＣＣＡＡＧＴＧＣＧＧＡＡＧＧＣＣＧＣＣＡＴＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＴＣＴＧＡＴＧＧＣＧＴＧＴＡＣＡＣＣＧＧＣＣＴＧＡＧＣＡＣＣＣＧＧＡＡＴＣＡＡＧＡＡＡＣＣＴＡＣＧＡＧＡＣＡＣＴＧＡＡＧＣＡＣＧＡＧＡＡＧＣＣＴＣＣＡＣＡＡＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＡＧＡＴＧＧＡＡＧＡＧＣＡＡＧＣＴＧＴＡＴＡＧＣＡＴＣＧＴＧＴＧＣＧＧＣＡＡＧＴＣＣＡＣＣＣＣＴＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＧＡＧＡＧＣＴＧＧＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＴＣＴＧＧＣＣＣＣＴＡＡＣＣＣＣＴＣＡＴＴＣＡＧＣＣＣＴＡＣＣＣＣＣＧＧＣＴＴＣＡＣＣＣＣＣＡＣＣＣＴＧＧＧＡＴＴＴＡＧＣＣＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＣＣＴＧＧＣＧＡＣＴＧＣＣＣＣＡＡＣＴＴＣＧＣＣＧＣＣＣＣＴＡＧＡＣＧＣＧＡＧＧＴＧＧＣＣＣＣＴＣＣＴＴＡＣＣＡＧＧＧＣＧＣＣＧＡＣＣＣＴＡＴＣＣＴＧＧＣＣＡＣＡＧＣＣＣＴＧＧＣＴＴＣＴＧＡＴＣＣＧＡＴＴＣＣＴＡＡＴＣＣＴＣＴＧＣＡＧＡＡＧＴＧＧＧＡＧＧＡＣＡＧＣＧＣＣＣＡＣＡＡＧＣＣＣＣＡＧＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＧＡＣＧＡＣＣＣＣＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＧＣＣＧＴＧＧＴＧＧＡＡＡＡＣＧＴＧＣＣＴＣＣＡＣＴＧＣＧＧＴＧＧＡＡＡＧＡＧＴＴＣＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＧＡＣＣＡＣＧＡＧＡＴＣＧＡＣＡＧＡＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＣＧＧＣＣＧＴＴＧＣＣＴＧＡＧＡＧＡＧＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＧＣＡＴＧＣＴＧＧＣＡＡＣＡＴＧＧＣＧＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＣＣＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＴＧＧＧＣＡＧＡＧＴＧＣＴＧＡＧＡＧＡＴＡＴＧＧＡＣＣＴＧＣＴＧＧＧＴＴＧＴＣＴＧＧＡＡＧＡＴＡＴＣＧＡＧＧＡＡＧＣＣＣＴＧＴＧＣＧＧＴＣＣＴＧＣＣＧＣＴＣＴＧＣＣＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＴＣＴＣＴＧＣＴＧＡＧＡ（配列番号８２）
[00361]
実施例２．ＣＦＰ構築物について調べるための機能アッセイ
[00362]標的化構築物を、機能的特性について調べる。白血球アファレーシス試料から分離された、ＴＨＰ－１細胞またはＣＤ１４＋／ＣＤ１６－単球に、それぞれのＣＦＰをコードするポリヌクレオチド構築物をトランスフェクトした。
[00363]細胞トランスフェクションのための方法、およびトランスフェクション効率の検出：ＴＨＰ－１細胞を採取し、ＭａｘＣｙｔｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒで、１回洗浄した。細胞を、１ｍｌ当たり１，０００万個の密度で再懸濁させ、エッペンドルフ管内に１００ｕｇのＡＴＡＫ受容体ＲＮＡへと添加し、２回にわたり混合し、ＭａｘＣｙｔｅ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ａｓｓｅｍｂｌｙ（ＯＣ－２５ｘ３）へとロードした。ＭａｘＣｙｔｅ上のＴＨＰ－１プログラムを使用して、細胞を電気穿孔する。電気穿孔の後、細胞を、３７℃で、１０分間にわたりインキュベートし、ＭａｘＣｙｔｅ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ａｓｓｅｍｂｌｙ内に回収し、次いで、あらかじめ加熱された培地を含有するプレートへと、１ｍｌ当たりの細胞５０万個の密度で移した。
[00364]一晩にわたるインキュベーションの後、電気穿孔された単球内の、ＡＴＡＫ受容体の発現を、フローサイトメトリーにより評価する。抗Ｆａｂ－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ－６４７抗体（希釈率を１：５０とする）を使用して、ＡＴＡＫ受容体のｓｃＦｖの発現を検出した。染色された試料を、Ｃｙｔｅｋ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｌｉｇｈｔｓ ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ上に収集し、結合剤陽性細胞のパーセントを、モックトランスフェクト対照に照らした、抗Ｆａｂ強度の増大に基づき計算した。
[00365]貪食アッセイのための方法：Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｉｎｃｕｃｙｔｅ ｐＨｒｏｄｏ－Ｒｅｄ ｌａｂｅｌｉｎｇ ｋｉｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌに従い、標的腫瘍細胞（ＳＫＯＶ３）を、ｐＨｒｏｄｏ－Ｒｅｄ染料（最終濃度を７００ｎｇ／ｍｌとする）で標識化する。標識化の後、培養培地を使用して、ＳＫＯＶ３細胞を、１ｍｌ当たりの細胞５０万個の密度で再懸濁させる。ＣＤ１４陽性単球を、ドナーＬｅｕｋｏｐａｋから分離し、ＭａｘＣｙｔｅを使用して、１００ｕｇ／ｍｌのＡＴＡＫ受容体ＲＮＡを電気穿孔した。電気穿孔の後、細胞を、３７℃、培養培地中１ｍｌ当たりの細胞２００万個の密度で、一晩にわたり回収した。翌日、ＮＣ－２００を使用して、細胞をカウントし、培養培地を使用して、１ｍｌ当たりの細胞２５０万個の密度で再懸濁させる。低接着性Ｕ字底９６ウェルプレート内に、５０ｕＬの腫瘍細胞（全細胞５０，０００個）を、５０ｕＬのＡＴＡＫ受容体トランスフェクト単球（全細胞１２５，０００個）へと、５：１のＥ：Ｔ比で添加した。細胞を混合し、３７℃で、一晩にわたりインキュベートする。
[00366]翌日、細胞を、単球を特異的に標識化する、ＣＤ４５－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００で染色する。次いで、試料を、Ｃｙｔｅｋ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｌｉｇｈｔｓ上に収集して、ｐＨｒｏｄｏ－ＲｅｄおよびＣＤ４５のシグナル強度を検出する。貪食は、貪食指数パーセント、ならびに単球内のｐＨｒｏｄｏ－Ｒｅｄ強度の特異的増大として測定する。貪食指数は、全単球数に照らして正規化された、ｐＨｒｏｄｏ－ｒｅｄシグナルが高度である単球のパーセントとして計算する。ＡＴＡＫ単球の貪食活性を、モックトランスフェクト対照と比較して、ＡＴＡＫ受容体の有効性を決定する。
[00367]貪食は、図４Ａおよび５Ａにおいて示される通り、標識化腫瘍細胞を使用して調べることができる。
[00368]ＳＫＯＶ３細胞殺滅アッセイのための方法：ＳＫＯＶ３－ルシフェラーゼ細胞を使用して、ＡＴＡＫ受容体トランスフェクト単球の腫瘍殺滅活性について調べる。ＣＤ１４陽性単球を、ドナーＬｅｕｋｏｐａｋから分離し、ＭａｘＣｙｔｅを使用して、１００ｕｇ／ｍｌのＡＴＡＫ受容体ＲＮＡを電気穿孔した。電気穿孔の後、細胞を、３７℃、培養培地中、２時間にわたり回収する。回収の後、培養培地を使用して、細胞を、１ｍｌ当たり２５０万個の密度で再懸濁させる。ＳＫＯＶ３－ルシフェラーゼ細胞を採取し、１ｍｌ当たりの細胞２５０万個の密度で再懸濁させ、１００ｕｌの細胞懸濁液（ウェル１つ当たりの全細胞２５，０００個の密度）を、９６ウェル平底プレート内に添加する。１００ｕＬのＡＴＡＫ受容体トランスフェクト単球を、同じウェルへと、１：１および１０：１のＥ：Ｔ比で添加する。細胞を混合し、３７℃で、３日間にわたりインキュベートする。
[00369]３日目に、ＡＴＡＫ単球により分泌されたサイトカインおよびケモカインを測定するために、上清を回収し、凍結させる。細胞を溶解させ、ルミネセンスプレートリーダーを使用して、ＳＫＯＶ３ルシフェラーゼレベルを測定する。ＡＴＡＫ単球を含有する試料についての、ルシフェラーゼレベルの、モックトランスフェクト対照と比較した低下は、ＡＴＡＫ細胞のＳＫＯＶ３殺滅活性を指し示す。
[00370]以下の方法を使用して、骨髄細胞の極性化可能性について調べる。これらのエフェクター骨髄細胞に、核酸構築物を電気穿孔し、後続の使用および試験のために凍結させる。次いで、融解させたら、細胞を、例えば、（ｉ）ＧＭＣＳＦ、（ｉｉ）ＩＬ４、ＩＬ１０、およびＴＧＦベータ（Ｍ２刺激）、（ｉｉｉ）活性化Ｔ細胞馴化培地（ＴＣＭ）、ならびに（ｉｖ）ＭＣＳＦを伴う、個別のアリコート培養物中の極性化刺激下にある培養にかけた。細胞は、２４、４８、および７２時間後に、フローサイトメトリーにより解析し、サイトカイン解析は、Ｌｕｍｉｎｅｘにより実施した。
[00371]ＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞を使用して、ＮＦ－κＢ／ＩＦＮ経路の活性化を検出するための方法：ＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞は、分泌型アルカリホスファターゼの上流に、ＮＦ－κＢ応答エレメントを有し、分泌型ルシフェラーゼの上流に、ＩＦＮ刺激性応答エレメントを有する。アルカリホスファターゼの上清中レベルの測定が、ＮＦ－κＢシグナル伝達経路の活性化を指し示す一方、ルシフェラーゼの上清中レベルは、ＩＦＮシグナル伝達経路活性化を指し示す。ＭａｘＣｙｔｅを使用して、ＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞に、１００ｕｇ／ｍｌのＡＴＡＫ受容体ＲＮＡを電気穿孔する。電気穿孔の後、細胞を、３７℃、培養培地中、２時間にわたり回収する。回収の後、培養培地を使用して、細胞を、１ｍｌ当たり５０万個の密度で再懸濁させる。ＳＫＯＶ３細胞を採取し、１ｍｌ当たりの細胞５０万個の密度で再懸濁させる。９６ウェルプレート内に、１００ｕｌのＳＫＯＶ３細胞懸濁液（ウェル１つ当たりの全細胞５０，０００個の密度）、および１００ｕＬのＡＴＡＫ－ＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞（全細胞５０，０００個）を、９６ウェル平底プレートに、１：１のＥ：Ｔ比で添加する。細胞を混合し、３７℃で、２４時間にわたりインキュベートする。２４時間後、細胞を遠心分離し、上清を回収する。
[00372]ＮＦ－κＢ経路の活性化を検出するために、ＱＵＡＮＴＩ－Ｂｌｕｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を、上清へと添加し、３７℃で、２時間にわたりインキュベートし、その後、吸光度プレートリーダーを使用して、ＯＤを測定する。吸光度の増大は、ＮＦ－κＢシグナル伝達の活性化を指し示し、ＡＴＡＫトランスフェクトＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞についてのＯＤ値を、モックトランスフェクト対照のＯＤ値と比較して、ＡＴＡＫ受容体の活性を決定することができる。
[00373]ＩＦＮ経路の活性化を検出するために、ＱＵＡＮＴＩ－Ｌｕｃ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を、上清へと添加し、ルミネセンスプレートリーダーを使用して、ルシフェラーゼレベルを測定する。ルシフェラーゼレベルの上昇は、ＩＦＮシグナル伝達の活性化を含意し、ＡＴＡＫトランスフェクトＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞と、モックトランスフェクト対照との間で比較されうる。
実施例３．ＣＦＰ構築物を発現する骨髄細胞内の、ＮＦカッパＢの活性化、および炎症性サイトカインの誘導
[00374]本実施例では、個々の構築物を、ＴＨＰ－１細胞へと電気穿孔し、発現解析および機能解析を実施した。ＭＤＡ５細胞内ドメインを有する構築物（図２Ｅ）以外の、多様な構築物（図２Ａ～２Ｄ）の発現は、高度であった。同様に、ＨＥＲ２－ＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ－ＭＤＡ５、ＨＥＲ２－ＣＤ６８－ＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ－ＲＩＧ１、およびＨＥＲ２－ＣＤ６８－ＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ－ＭｙＤ８８をコードする構築物は、ＴＨＰ－１骨髄細胞内で、低度の発現を示した（図２Ｅ、２Ｆ）。ＣＦＰ構築物が、ＣＤ６４膜貫通ドメイン、またはＣＤ８９膜貫通ドメインを含む場合、高度のＣＦＰ発現が観察されたが、さらなる二重細胞内シグナル伝達ドメイン、または複数の細胞内シグナル伝達ドメイン、特に、例えば、ＰＩ３Ｋシグナル伝達ＩＣＤおよびＴＬＲシグナル伝達ＩＣＤを含有するが、他の点では同一である構築物内では観察されなかった。さらなるドメインの、ＣＤ６４またはＣＤ８９との融合は、見かけ上、機能の喪失を結果としてもたらすことが観察された（例えば、図４Ｃに示される貪食）。並行アッセイにおいて、ＣＤ４０ ＩＣＤを、ＰＩ３キナーゼ動員ドメインなど、別のシグナル伝達ＩＣＤと共に有する構築物は、ＣＤ４０ ＩＣＤではなく、ＴＬＲシグナル伝達ドメインを含む、マルチＩＣＤを伴うＣＦＰ構築物と比較して、やや高度の発現レベルを示す。貪食指数により指し示される貪食可能性は、ＣＤ４０ＩＣＤ構築物において、ＴＬＲ－ＩＣＤを含有するマルチＩＣＤと比べて高度であった（図２Ｆ、図４Ｄ）。図４Ｂに示される通り、ＭＤＡ５ ＩＣＤを、ＦｃＲ ＩＣＤと共に含有する構築物（ＨＥＲ２－ＦｃＲ－ＭＤＡ５）は、ＨＥＲ２－ＣＤ４０－ＦｃＲ ＣＦＰと同等以上の貪食指数を示した。ＰＩ３キナーゼ動員ドメインを、ＭＤＡ５、ＲＩＧ－１、またはＭｙＤ８８のシグナル伝達細胞内ドメインと共に、細胞内領域内に配置したところ、発現（図２Ｆ、図２Ｇ）および貪食（図４Ｄおよび図４Ｅ）のいずれもが、ＦｃＲおよびＰＩ３キナーゼ動員ドメインを含有する構築物を下回った。
[00375]前出の段落で言及された構築物の一部を発現するＴＨＰ－１細胞は、とりわけ、ＰＩ３キナーゼ動員ドメインを、ＭＤＡ５、ＲＩＧ－１、またはＭｙＤ８８のシグナル伝達細胞内ドメインと共に、細胞内領域内に配置した場合、発現時に、トニックシグナル伝達を呈する。図５Ｃに示される、ＨＥＲ２－ＣＤ６４－ＣＤ４０－ＰＩ３Ｋ構築物は、トニックシグナル伝達を呈した。ＨＥＲ２－ＣＤ６４構築物内では、ＮＦカッパＢの活性化が誘導されたが、ＣＤ４０ ＩＣＤおよびＰＩ３キナーゼ動員細胞内ドメインを付加したところ、持続性のＮＦカッパＢ誘導が観察された（図５Ｃ）。本明細書で理解される通り、ＨＥＲ２－ＣＤ６４またはＨＥＲ２－ＣＤ８９の発現は、ＩＦＮを誘導しない（図５Ｄ）。同様に、さらなるＩＣＤを伴わない、ＨＥＲ２－ＣＤ８９構築物単独では、ＮＦカッパＢが誘導されたが、ＣＤ４０ ＩＣＤおよびＰＩ３Ｋシグナル伝達ＩＣＤの、構築物への付加は、標的細胞（例えば、ＨＥＲ２発現ＳＫＯＶ３）との接触時において、ＮＦカッパＢを誘導する、その能力を低下させた。ＨＥＲ２－ＣＤ８９構築物内では、ＰＩ３キナーゼ動員ドメイン（ＰＩ３Ｋ）およびＭＤＡ５ドメインの付加も、同様の影響を及ぼした。同様に、ＨＥＲ２－ＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ－ＭＡＶＳは、持続性のＮＦカッパＢシグナル伝達またはＩＦＮガンマシグナル伝達を呈した（図５Ｇおよび図５Ｈ）。これらの結果は、ＩＣＤが、個別に、またはそれらの天然のタンパク質内では、ある特定の、予測可能な形で機能する場合であってもなお、組み合わされた組換えタンパク質内における、細胞内ＩＣＤ機能の影響についての、大きな予測不可能性を明らかにした。したがって、構築物のデザインの成功は、常套的分子クローニングのみに依存せず、断片または機能ドメインの任意の取合わせが、所望の機能を伴うＣＡＲを創出しうると期待される。ＣＡＲへと構造化された場合における、異なるドメインの、互いに対する適合性および機能的能力は、骨髄細胞の貪食の改善のためにデザインされたＣＡＲ構築物の作出の成功において、極めて重要な側面である。未だ包括的ではない、進行中の所見の一部を例示する、予備的データを、下記（表７）に表解する：
[00376]理論に束縛されることを望まずに述べると、細胞内アダプタータンパク質ドメイン、例えば、ｐＬｘＩＳモチーフを含有するドメインは、過剰発現された場合に、細胞内誘因を有する宿主により誘発される場合があり、これは、キメラタンパク質の細胞内領域内の、ＰＩ３キナーゼ動員ドメインにより増強されうる可能性が高い。
実施例４．ＴＲＩＦ長鎖構築物およびＴＲＩＦ（短鎖）構築物を発現する細胞内における、ＮＦカッパＢの活性化およびＩＦＮ応答
[00377]十分な発現レベルを呈し、トニックシグナル伝達を回避し、細胞外ドメインの活性化時に、ＮＦカッパＢの活性化およびＩＦＮ応答を示す構築物をデザインするために、いくつかの他の構築物をデザインし、調べた。図２Ｇおよび図５Ｉは、代表的構築物デザイン、およびＴＨＰ－１細胞内における発現データを示す。ＴＨＰ－１細胞に、ｍＲＮＡ構築物を電気穿孔し、ＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物の発現を、フローサイトメトリーにより決定した。貪食は、図５Ａの概略図で裏付けられたプロトコールに従いアッセイし、これらの細胞内における、ＮＦカッパＢの活性化、インターフェロンガンマ活性化、およびサイトカイン発現のレベルを決定した。驚くべきことに、ＰＩ３キナーゼ動員ドメイン、およびＴＲＩＦ（短鎖）（配列番号４３のＴＲＩＦドメイン）と呼ばれる、ＴＲＩＦの短縮型の両方を含む構築物は、長鎖ＴＲＩＦ（配列番号４４）を含む、前出の段落で記載された構築物より高度の発現レベルを裏付けた（図５Ｉ）。ＴＲＩＰ（短鎖）を発現するＴＨＰ－１細胞は、トニックシグナル伝達を欠き、標的ＳＫＯＶ３腫瘍細胞の存在下に限り、ＮＦカッパＢおよびＩＦＮの活性化を示し（図５Ｇ～５Ｈ、図５Ｊ）、ＴＲＩＦ（短鎖）を発現する細胞の貪食指数の、他の自然免疫アダプタードメインを、ＰＩ３キナーゼ動員ドメインと共に発現する細胞に対する改善を示した（図４Ｅ）。３０分の１の発現（図２Ｇ、右）にも拘わらず、ＴＲＩＦ（短鎖）構築物による貪食は、ベースライン構築物（ＨＥＲ２－ＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ）と同等である（図４Ｅ）。他の構築物についての、ＮＦカッパＢの発現レベルおよび活性化は、図５Ｊ～５Ｌにおいて裏付けた。図５Ｎは、ＣＤ４０構築物およびＴＲＩＦ構築物による、炎症性サイトカインの発現を示す。
[00378]予備的所見を、下記（表８）に表解する：
[00379]上記の構築物を発現する単球は、標的細胞の存在下において、高度の炎症応答を裏付ける。図６Ａ～６Ｆに示されたデータは、上記を裏付ける。例えば、ＨＥＲ２－ＣＤ６８ＴＭ－ＣＤ４０－ＦｃＲ構築物を発現する単球は、標的ＳＫＯＶ３細胞と共に共培養された場合の、ＣＣＬ３応答、ＩＬ６応答、およびＴＮＦアルファ応答の上昇を示す（図６Ａ）。ＨＥＲ２－ＣＤ６４構築物を発現する単球は、標的ＳＫＯＶ３細胞の存在下で、ＩＬ６／ＴＮＦアルファ産生の、モックトランスフェクト単球と比較して、２倍を超える増大を示し（図６Ｂ）；同様の結果は、ＨＥＲ２－ＣＤ８９を発現する単球内でも観察される（図６Ｃ）。ＨＥＲ２－ＣＤ６８ＴＭ－ＦｃＲ－ＭＤＡ５構築物を発現する単球は、ケモカインである、ＣＣＬ３およびＩＰ１０、ならびにサイトカインである、ＩＬ６、ＴＮＦアルファ、およびインターフェロンアルファの、高度の誘導を示す（図６Ｄ）。同様の結果は、ＭｙＤ８８およびＲＩＧ－１の細胞内ドメインによっても得られた（図６Ｅおよび６Ｆ）。これらの結果は、本明細書で記載される膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインが、標的細胞の存在下で、単球内における炎症応答の誘導において、高度に機能的であることを、明確に裏付ける。
実施例５．多様なＨＥＲ２－ＣＤ４０ ＣＦＰ構築物を伴う初代ヒト単球についての試験
[00380]上記の結果に基づき、それぞれのＣＦＰ標的の存在下における、発現、貪食、および炎症性サイトカイン／ケモカインの放出について調べることにより、細胞内シグナル伝達ドメインおよび／または膜貫通ドメインの特異的組合せを使用する、受容体の増強について、ヒト初代単球内で調べる。（ｉ）ＣＤ４０および（ｉｉ）ＴＲＩＦに由来するドメインを含むＩＣＤシグナル伝達ドメインは、ＣＦＰの増強について、上位の候補ドメインであった。前出の節で裏付けられた、ＴＨＰ－１細胞内の、ＣＤ４０構築物およびＴＲＩＦ構築物による、高度の発現および活性は、大きな有望性を保持したが、ヒト初代単球内では、これらの構築物の発現は低度であった。したがって、構築物の発現および安定性を改善するために、ＣＤ６８膜貫通ドメインを、ＣＤ６４膜貫通ドメイン、ならびにＣＤ８ヒンジドメインおよびＣＤ８膜貫通ドメインと交換した。初代単球内の、ＨＥＲ２－ＣＤ４０ ＣＦＰ構築物の表面発現について調べるために、初代単球を、２例の健常ヒトドナーから採取し、下記の表中の構築物を電気穿孔した（表９）。
[00381]図８Ａは、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物による電気穿孔の後、第１のドナーに由来する初代ヒト単球内における、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物の発現を裏付けるフローサイトメトリーデータを示す。図８Ｂは、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物による電気穿孔の後、第２のドナーに由来する初代ヒト単球内における、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物の発現を裏付けるフローサイトメトリーデータを示す。図８Ｃは、図８Ａおよび図８Ｂに由来するデータを使用する、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物について陽性の細胞の百分率、および平均値蛍光強度についてのグラフを示す。ＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物の、同様の発現は、いずれのドナーにおいても観察された。
[00382]上記の構築物を発現するヒト初代単球による、ＳＫＯＶ３腫瘍の殺滅活性について調べるために、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された初代ヒト単球１００，０００個を、ＳＫＯＶ３－ＧＦＰ－ルシフェラーゼ腫瘍細胞２０，０００個と共に共培養した。共培養の７２時間後に、腫瘍細胞のルシフェラーゼ活性を検出し、ルシフェラーゼシグナル強度の低下により、殺滅を決定した。図９Ａは、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された、２例の異なるドナーに由来する初代ヒト単球による、ＳＫＯＶ３の殺滅活性についてのグラフを示す。
[00383]上記の構築物を発現するヒト初代単球による、ＳＫＢＲ３腫瘍の殺滅活性について調べるために、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された初代ヒト単球１００，０００個を、ＳＫＢＲ３－ルシフェラーゼ腫瘍細胞２０，０００個と共に共培養した。共培養の７２時間後に、腫瘍細胞のルシフェラーゼ活性を検出し、ルシフェラーゼシグナル強度の低下により、殺滅を決定した。図９Ｂは、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された、２例の異なるドナーに由来する初代ヒト単球による、ＳＫＢＲ３の殺滅活性についてのグラフを示す。
[00384]上記の構築物を発現するヒト初代単球のサイトカイン／ケモカイン誘導能について調べるために、上記の構築物を発現し、抗原で刺激された、ヒト初代単球、および上記の構築物を発現し、腫瘍細胞で刺激された、ヒト初代単球について調べた。抗原で刺激された、ＨＥＲ２－ＣＦＰ初代単球試料について、９６ウェルプレートを、２．５μｇ／ｍＬのＨＥＲ２－ｈｉｓタンパク質でコーティングし、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された、初代ヒト単球ウェル１つ当たり１００，０００個を添加した。上清を、刺激の４８時間後に回収し、分泌されたサイトカインを、Ｌｕｍｉｎｅｘにより解析した。腫瘍細胞で刺激された、ＨＥＲ２－ＣＦＰ初代単球試料について、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された初代ヒト単球１００，０００個を、腫瘍細胞（ＳＫＯＶ３－ＧＦＰ－ルシフェラーゼ細胞またはＳＫＢＲ３－ルシフェラーゼ細胞）２０，０００個と共に共培養した。上清を、刺激の４８時間後に回収し、分泌されたサイトカインを、Ｌｕｍｉｎｅｘにより解析した。統計学的有意性は、ＨＥＲ２－ＣＦＰを電気穿孔され、腫瘍細胞と共に共培養された初代単球試料と、モック電気穿孔され、腫瘍細胞と共に共培養された初代単球試料との間で決定した。図１０Ａは、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、炎症促進性サイトカインであるＩＬ－６の誘導についてのグラフを示す。図１０Ｂは、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、炎症促進性サイトカインであるＩＬ－１βの誘導についてのグラフを示す。図１０Ｃは、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、ＴＮＦ－αの誘導についてのグラフを示す。図１０Ｄは、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、ＩＦＮ－αの誘導についてのグラフを示す。図１０Ｅは、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、ＩＰ１０の誘導についてのグラフを示す。図１０Ｆは、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、ＩＬ－１２の誘導についてのグラフを示す。上記の研究から、構築物は、高度のサイトカイン／ケモカイン応答を誘導することが見られた（例えば、図１０Ａ、図１０Ｂ；具体的には、ＣＤ４０、ＦｃＲ、およびＰＩ３Ｋの細胞内ドメインの、ＣＤ６４膜貫通ドメインとの組合せは、高レベルのサイトカイン、例えば、ＩＬ－１ｂおよびＩＬ６を誘導した）。これは、これらのキメラ受容体の、標的抗原への係合時に、単球が高度に活性化され、炎症応答の増強が可能であったことを指し示す。活性化細胞自体による、標的細胞の貪食に加えて、ＮＦカッパＢおよびＩＦＮ応答性遺伝子の、活性化ＣＦＰ媒介性誘導のほか、骨髄細胞による、炎症性サイトカイン／ケモカインの放出も、これらの細胞が、ｉｎ ｖｉｖｏにおける免疫活性化の増強を、潜在的にもたらしうることの徴候である。上記の構築物を発現するヒト初代単球をさらに特徴付けるために、Ｈｕｍａｎ ｎＣｏｕｎｔｅｒ Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｉｎｎａｔｅ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ Ｖ２ Ｐａｎｅｌ（７７０遺伝子）を使用する、Ｎａｎｏｓｔｒｉｎｇ遺伝子発現解析を援用する。
実施例６．多様なＨＥＲ２－ＴＲＩＦ ＣＦＰ構築物を伴う初代ヒト単球についての試験
[00385]初代単球内の、ＨＥＲ２－ＴＲＩＦ ＣＦＰ構築物の表面発現について調べるために、初代単球を、２例の健常ヒトドナーから採取し、下記の表中の構築物を電気穿孔した（表１０）。
[00387]図１１Ａは、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物による電気穿孔の後、第１のドナーに由来する初代ヒト単球内における、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物の発現を裏付けるフローサイトメトリーデータを示す。図１１Ｂは、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物による電気穿孔の後、第２のドナーに由来する初代ヒト単球内における、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物の発現を裏付けるフローサイトメトリーデータを示す。図１１Ｃは、図１１Ａおよび図１１Ｂに由来するデータを使用する、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物について陽性の細胞の百分率、および平均値蛍光強度についてのグラフを示す。
[00388]上記の構築物を発現するヒト初代単球による、ＳＫＯＶ３腫瘍の殺滅活性について調べるために、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された初代ヒト単球１００，０００個を、ＳＫＯＶ３－ＧＦＰ－ルシフェラーゼ腫瘍細胞２０，０００個と共に共培養した。共培養の７２時間後に、腫瘍細胞のルシフェラーゼ活性を検出し、ルシフェラーゼシグナル強度の低下により、殺滅を決定した。図１２Ａは、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された、２例の異なるドナーに由来する初代ヒト単球による、ＳＫＯＶ３の殺滅活性についてのグラフを示す。
[00389]上記の構築物を発現するヒト初代単球による、ＳＫＢＲ３腫瘍の殺滅活性について調べるために、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された初代ヒト単球１００，０００個を、ＳＫＢＲ３－ルシフェラーゼ腫瘍細胞２０，０００個と共に共培養した。共培養の７２時間後に、腫瘍細胞のルシフェラーゼ活性を検出し、ルシフェラーゼシグナル強度の低下により、殺滅を決定した。図１２Ｂは、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された、２例の異なるドナーに由来する初代ヒト単球による、ＳＫＢＲ３の殺滅活性についてのグラフを示す。
[00390]上記の構築物を発現するヒト初代単球のサイトカイン／ケモカイン誘導能について調べるために、上記の構築物を発現し、抗原で刺激された、ヒト初代単球、および上記の構築物を発現し、腫瘍細胞で刺激された、ヒト初代単球について調べた。抗原で刺激された、ＨＥＲ２－ＣＦＰ初代単球試料について、９６ウェルプレートを、２．５μｇ／ｍＬのＨＥＲ２－ｈｉｓタンパク質でコーティングし、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された、初代ヒト単球ウェル１つ当たり１００，０００個を添加した。上清を、刺激の４８時間後に回収し、分泌されたサイトカインを、Ｌｕｍｉｎｅｘにより解析した。腫瘍細胞で刺激された、ＨＥＲ２－ＣＦＰ初代単球試料について、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔された初代ヒト単球１００，０００個を、腫瘍細胞（ＳＫＯＶ３－ＧＦＰ－ルシフェラーゼ細胞またはＳＫＢＲ３－ルシフェラーゼ細胞）２０，０００個と共に共培養した。上清を、刺激の４８時間後に回収し、分泌されたサイトカインを、Ｌｕｍｉｎｅｘにより解析した。統計学的有意性は、ＨＥＲ２－ＣＦＰを電気穿孔され、腫瘍細胞と共に共培養された初代単球試料と、モック電気穿孔され、腫瘍細胞と共に共培養された初代単球試料との間で決定した。図１３Ａは、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、炎症促進性サイトカインであるＩＬ－６の誘導についてのグラフを示す。図１３Ｂは、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、炎症促進性サイトカインであるＩＬ－１βの誘導についてのグラフを示す。図１３Ｃは、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、ＴＮＦ－αの誘導についてのグラフを示す。図１３Ｄは、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、ＩＦＮ－αの誘導についてのグラフを示す。図１３Ｅは、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、ＩＰ１０の誘導についてのグラフを示す。図１３Ｆは、表示のＨＥＲ２－ＣＦＰ構築物を電気穿孔され、ＨＥＲ－２抗原により刺激される（上）か、またはＳＫＯＶ３腫瘍細胞（下、左）もしくはＳＫＢＲ３腫瘍細胞（下、右）と共に共培養された、ヒトドナーに由来する初代ヒト単球による、ＩＬ－１２の誘導についてのグラフを示す。Ｈｕｍａｎ ｎＣｏｕｎｔｅｒ Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｉｎｎａｔｅ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ Ｖ２ Ｐａｎｅｌ（７７０遺伝子）を使用する、Ｎａｎｏｓｔｒｉｎｇ遺伝子発現解析を援用する。
[00391]加えて、予備的ｉｎ ｖｉｖｏ研究では、ＴＲＩＦおよびＣＤ４０の細胞内ドメインを含むＣＦＰは、図１４に示される通り、ＩＣＤが、実際に、保護的免疫を付与したことを指し示す。ＴＲＩＦまたはＣＤ４０ベースのＡＴＡＫ受容体を備えた初代単球は、Ｂ１６黒色腫腫瘍モデルにおいて、強力な抗腫瘍応答を示した。（左）ＡＴＡＫ単球で処置されたマウスにおける、処置後の黒色腫の腫瘍容量である。（右）ＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ ＡＴＡＫ受容体またはＴＲＩＦ／ＣＤ４０ドメインを伴うＡＴＡＫ受容体で処置された腫瘍保有マウスの生存率である。

Claims (128)

  1. （ａ）膜貫通ドメイン、および（ｂ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸であって、細胞内ドメインが、Ｘａａ１－Ｌｅｕ－Ｘａａ３－Ｉｓｏ－Ｓｅｒモチーフを有する細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ここで、Ｘａａ１は、親水性アミノ酸であり、Ｘａａ３は、任意のアミノ酸である、組換え核酸。
  2. キメラ融合タンパク質が、抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインをさらに含み、膜貫通ドメインが、細胞外ドメインと作動可能に連結されている、請求項１に記載の組換え核酸。
  3. 細胞内ドメインが、少なくとも１つのさらなる細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項１または２に記載の組換え核酸。
  4. 少なくとも１つのさらなる細胞内シグナル伝達ドメインが、細胞内ＰＩ３キナーゼ動員ドメイン、貪食受容体細胞内ドメイン、パターン認識受容体細胞内ドメイン、ＣＤ４０細胞内ドメイン、ＦｃＲ細胞内ドメイン、またはサイトカイン受容体細胞内ドメインもしくはケモカイン受容体細胞内ドメインに由来する、請求項３に記載の組換え核酸。
  5. 細胞内シグナル伝達ドメインが、細胞質ゾルアダプタータンパク質、ミトコンドリア膜タンパク質、または小胞体膜タンパク質に由来するアミノ酸配列を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  6. 細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＲＩＦタンパク質に由来するアミノ酸配列を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  7. 細胞内シグナル伝達ドメインが、短縮型ＴＲＩＦ細胞内ドメインを含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  8. 短縮型ＴＲＩＦ細胞内ドメインの配列が、約１５０～３００アミノ酸の長さ、約１５０～２７０アミノ酸の長さ、または約１５０～２５０アミノ酸の長さである、請求項１から７のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  9. 細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号３６に対する少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  10. 細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号３７に対する少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  11. 細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号３８に対する少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  12. 細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号４１に対する少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  13. （ａ）膜貫通ドメイン、および（ｂ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸であって、細胞内ドメインが、配列番号３９に対する少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、組換え核酸。
  14. （ａ）膜貫通ドメイン、および（ｂ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸であって、細胞内ドメインが、配列番号４０に対する少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、組換え核酸。
  15. （ａ）膜貫通ドメイン、および（ｂ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸であって、細胞内ドメインが、配列番号４２に対する少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、組換え核酸。
  16. （ａ）膜貫通ドメイン、および（ｂ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸であって、細胞内ドメインが、配列番号４３に対する少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、組換え核酸。
  17. （ａ）膜貫通ドメイン、および（ｂ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸であって、細胞内ドメインが、配列番号４５に対する少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、組換え核酸。
  18. （ａ）膜貫通ドメイン、および（ｂ）抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸であって、膜貫通ドメインが、細胞外ドメインと作動可能に連結され、膜貫通ドメインが、ＣＤ６８に由来し、ホモ二量体化を阻害または阻止する突然変異を含む、組換え核酸。
  19. キメラ融合タンパク質が、膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインをさらに含む、請求項１５に記載の組換え核酸。
  20. 膜貫通ドメインが、配列番号４７を含む、請求項１５または１６に記載の組換え核酸。
  21. （ａ）膜貫通ドメイン、および（ｂ）抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸であって、膜貫通ドメインが、細胞外ドメインと作動可能に連結され、膜貫通ドメインが、ＣＤ６４またはＣＤ８９に由来し、細胞内シグナル伝達ドメインを欠く、組換え核酸。
  22. キメラ融合タンパク質が、細胞内で発現された場合に、ＦｃＲγ鎖と共に複合体を形成する、請求項１８または２１に記載の組換え核酸。
  23. （ａ）膜貫通ドメイン、および（ｂ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸であって、細胞内ドメインが、配列番号４８に対する少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、組換え核酸。
  24. ＰＩ３キナーゼ動員ドメインを含む第２の細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項１から２３のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  25. 配列番号３９とＩＲＦ活性化増強モチーフの配列とを含む融合アミノ酸配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項１０に記載の組換え核酸。
  26. 配列番号４０とＩＲＦ活性化増強モチーフの配列とを含む融合アミノ酸配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項１０に記載の組換え核酸。
  27. 配列番号３９と配列番号４０とを含む融合アミノ酸配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項１０に記載の組換え核酸。
  28. 細胞内ドメインが、ＩＲＦタンパク質に結合する、請求項１から２７のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  29. 細胞内ドメインが、ＴＲＡＦタンパク質結合性ドメインを含む、請求項１から２８のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  30. 細胞内ドメインが、ＴＢＫ１リン酸化部位を含む、請求項１から２９のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  31. 第２、第３、または第４の細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項１から３０のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  32. 抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインをさらに含み、膜貫通ドメインが、細胞外ドメインと作動可能に連結されている、請求項１０から３１のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  33. 抗原結合性ドメインが、腫瘍抗原に対する親和性を有するドメインを含む、請求項１から３２のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  34. 細胞外ドメインが、Ｔリンパ球抗原結合性ドメインを含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  35. 細胞外ドメインが、Ｂリンパ球抗原結合性ドメインを含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  36. （ａ）膜貫通ドメイン、および（ｂ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸であって、細胞内ドメインが、ＧＰＲ８４、ＧＮＢ２、またはＰＲＥＸ１に由来するシグナル伝達ドメインを含む、組換え核酸。
  37. キメラ融合タンパク質が、抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインをさらに含み、膜貫通ドメインが、細胞外ドメインと作動可能に連結されている、請求項３６に記載の組換え核酸。
  38. ＧＰＲ８４、ＧＮＢ２、またはＰＲＥＸ１に由来するシグナル伝達ドメインが、ＧＰＲ８４、ＧＮＢ２、またはＰＲＥＸ１に由来する細胞内シグナル伝達ドメインである、請求項３６に記載の組換え核酸。
  39. 抗原結合性ドメインが結合する抗原が、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＣＲ４、ＣＤ８、ＣＤ３０、ＣＤ４５、ＣＤ５６、チミジンキナーゼ（ＴＫ１）、ヒポキサンチン－グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）、ムチン１、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、ＭＵＣ１、表皮増殖因子受容体ｖＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、メソテリン、ヒト表皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）、ＥＢＮＡ－１、ＬＥＭＤ１、ホスファチジルセリン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、濾胞刺激ホルモン受容体、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、エリスロポエチン産生肝細胞癌Ａ２（ＥｐｈＡ２）、ＥｐｈＢ２、ナチュラルキラー２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）群リガンド、ジシアロガングリオシド２（ＧＤ２）、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４５、ＣＤ５６、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９７、ＣＤ１１７、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ２１３Ａ２、ＣＤ２４８、ＣＤ２７６、ＰＳＣＡ、ＣＳ－１、ＣＬＥＣＬ１、ＧＤ３、ＰＳＭＡ、ＦＬＴ３、ＴＡＧ７２、ＥＰＣＡＭ、ＩＬ－１、インテグリン、インテグリン受容体、Ｃｌａｕｄｉｎ ３．０、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２、Ｔｒｏｐ－２、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲベータ、ＳＳＥＡ－４、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧＭ３、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、Ｄｓｇ１、Ｄｓｇ３、およびＩＧＬＬ１に由来する抗原からなる群から選択される、請求項１から３８のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  40. 細胞外ドメインが、第１の標的抗原結合性ドメインと、第１の標的結合性ドメインと同一ではない第２の標的抗原結合性ドメインとを含む、請求項１から３９のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  41. 第２の標的抗原結合性ドメインが、ＣＤ４７に結合する、請求項４０に記載の組成物。
  42. 抗原結合性ドメインが、微生物抗原に対する親和性を有するドメインを含む、請求項１から３８のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  43. 抗原結合性ドメインが、ウイルス抗原に対する親和性を有するドメインを含む、請求項４２に記載の組換え核酸。
  44. ドメインが、抗体またはその断片を含む、請求項１から４３のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  45. ドメインが、ｓｃＦｖを含む、請求項１から４３のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  46. 膜貫通ドメインが、ＣＤ８ａ、ＣＤ２８、ＣＤ６８、ＣＤ２、ＦｃＲγ、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、ＦｃＲε、シンタキシン３、シンタキシン４、またはシンタキシン５の膜貫通ドメインに由来する、請求項１から４５のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  47. 細胞外ドメインが、抗原結合性ドメインと膜貫通ドメインとを接続するヒンジドメインを含む、請求項１から４６のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  48. 細胞内で発現された場合に、キメラ融合タンパク質が、その標的抗原への結合時に、細胞内ドメインを活性化してＩＲＦ活性化を誘導する、請求項１から４７のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  49. 組換え核酸が、ＲＮＡである、請求項１から４８のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  50. 組換え核酸が、ｍＲＮＡである、請求項４９に記載の組換え核酸。
  51. 組換え核酸が、１つまたは複数の脂質と会合する、請求項１から５０のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  52. 組換え核酸が、リポソーム内に封入される、請求項５１に記載の組換え核酸。
  53. リポソームが、脂質ナノ粒子である、請求項５２に記載の組換え核酸。
  54. 組換え核酸が、ベクターである、請求項１から５３のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  55. 請求項１から５４のいずれか一項に記載の組換え核酸を含む細胞。
  56. 免疫細胞である、請求項５５に記載の細胞。
  57. 骨髄細胞、リンパ系細胞、前駆細胞、幹細胞、または人工多能性細胞である、請求項５５または５６に記載の細胞。
  58. ＣＤ１４＋／ＣＤ１６－である、請求項５７に記載の細胞。
  59. キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含み、ＣＦＰが、（ａ）抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメイン；（ｂ）細胞外ドメインに作動可能に連結された膜貫通ドメイン、および（ｃ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含み、細胞内シグナル伝達ドメインが、活性化されるとＩＦＮ転写因子に結合する細胞内シグナル伝達ドメインを含む、操作された細胞。
  60. キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含み、ＣＦＰが、（ａ）抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメイン；（ｂ）細胞外ドメインに作動可能に連結された膜貫通ドメイン、および（ｃ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含み、細胞内シグナル伝達ドメインが、ミトコンドリア受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む、操作された細胞。
  61. 細胞内ドメインが、配列番号３９に対する少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５９または６０に記載の組成物。
  62. 細胞内ドメインが、配列番号４０に対する少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５９または６０に記載の組成物。
  63. 細胞内ドメインが、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９、ＴＲＩＦ、ＲＩＧ－１、ＭＹＤ８８、ＭＡＬ、ＩＲＡＫ１、ＭＤＡ－５、ＩＦＮ受容体、ＳＴＩＮＧ、ＭＡＶＳ、ＴＲＩＦ、ＴＡＳＬ、ＮＬＲＰ１、ＮＬＲＰ２、ＮＬＲＰ３、ＮＬＲＰ４、ＮＬＲＰ５、ＮＬＲＰ６、ＮＬＲＰ７、ＮＬＲＰ８９、ＮＬＲＰ９、ＮＬＲＰ１０、ＮＬＲＰ１１、ＮＬＲＰ１２、ＮＬＲＰ１３、ＮＬＲＰ１～１４、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、Ｐｙｒｉｎ、ＡＩＭ２、ＮＬＲＣ４、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＥＲＩＧ、ＣＤ４０、Ｔａｎｋ１結合性キナーゼ（ＴＢＫ）、ＴＮＦＲ１、ケモカイン、ＭＨＣクラスＩＩトランス活性化因子（ＣＩＩＴＡ）、ＩＰＡＦ、ＢＩＲＣ１、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）タンパク質、マクロファージガラクトース型レクチン（ＭＧＬ）、ＤＣ－ＳＩＧＮ（ＣＬＥＣ４Ｌ）、ランジェリン（ＣＬＥＣ４Ｋ）、骨髄系ＤＡＰ１２会合レクチン（ＭＤＬ）１（ＣＬＥＣ５Ａ）、ＤＣ関連Ｃ型レクチン１（デクチン１）サブファミリータンパク質、デクチン１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＧＲ１／ＣＬＥＣ９Ａ、骨髄系Ｃ型レクチン様受容体（ＭＩＣＬ）（ＣＬＥＣ１２Ａ）、ＣＬＥＣ２（ＣＬＥＣ１Ｂ）、ＣＬＥＣ１２Ｂ、ＤＣ免疫受容体（ＤＣＩＲ）サブファミリータンパク質、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、デクチン２／ＣＬＥＣ６Ａ、血中ＤＣ抗原２（ＢＤＣＡ２）（ＣＬＥＣ４Ｃ）、Ｍｉｎｃｌｅ（マクロファージ誘導性Ｃ型レクチン）（ＣＬＥＣ４Ｅ）に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項５９に記載の操作された細胞。
  64. 細胞内ドメインが、配列番号４２に対する少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５９に記載の操作された細胞。
  65. 細胞内ドメインが、配列番号４３に対する少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５９または６０に記載の操作された細胞。
  66. 細胞内ドメインが、配列番号４５に対する少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５９または６０に記載の操作された細胞。
  67. 細胞内シグナル伝達ドメインが、活性化されるとＩＦＮ転写因子に結合する細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項６０に記載の操作された細胞。
  68. ＩＦＮ転写因子が、タンパク質ＩＲＦ１～ＩＲＦ９のうちのいずれか１つである、請求項５９または６７に記載の操作された細胞。
  69. 細胞内ドメインが、ＴＲＡＦ動員ドメインを含む、請求項５９に記載の操作された細胞。
  70. 細胞内ドメインが、ＩＫＫリン酸化を誘導する、請求項５９に記載の操作された細胞。
  71. 細胞内ドメインが、ＴＢＫリン酸化を誘導する、請求項５９に記載の操作された細胞。
  72. 抗原結合性ドメインが、腫瘍抗原または微生物抗原に結合する、請求項５９から７１のいずれか一項に記載の操作された細胞。
  73. 抗原結合性ドメインが、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＣＲ４、ＣＤ８、ＣＤ３０、ＣＤ４５、ＣＤ５６、チミジンキナーゼ（ＴＫ１）、ヒポキサンチン－グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）、ムチン１、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、ＭＵＣ１、表皮増殖因子受容体ｖＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、メソテリン、ヒト表皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）、ＥＢＮＡ－１、ＬＥＭＤ１、ホスファチジルセリン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、濾胞刺激ホルモン受容体、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、エリスロポエチン産生肝細胞癌Ａ２（ＥｐｈＡ２）、ＥｐｈＢ２、ナチュラルキラー２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）群リガンド、ジシアロガングリオシド２（ＧＤ２）、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４５、ＣＤ５６、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９７、ＣＤ１１７、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ２１３Ａ２、ＣＤ２４８、ＣＤ２７６、ＰＳＣＡ、ＣＳ－１、ＣＬＥＣＬ１、ＧＤ３、ＰＳＭＡ、ＦＬＴ３、ＴＡＧ７２、ＥＰＣＡＭ、ＩＬ－１、インテグリン、インテグリン受容体、Ｃｌａｕｄｉｎ ３．０、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２、Ｔｒｏｐ－２、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲベータ、ＳＳＥＡ－４、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧＭ３、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、Ｄｓｇ１、Ｄｓｇ３、およびＩＧＬＬ１のうちの１つまたは複数に結合する、請求項５９から７１のいずれか一項に記載の操作された細胞。
  74. 抗原結合性ドメインが、ウイルス抗原に結合する、請求項５９から７１のいずれか一項に記載の操作された細胞。
  75. 膜貫通ドメインが、ＣＤ８ａ、ＣＤ２８、ＣＤ６８、ＣＤ２、ＦｃＲγ、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、ＦｃＲε、シンタキシン３、シンタキシン４、またはシンタキシン５の膜貫通ドメインに由来する、請求項５９から７４のいずれか一項に記載の操作された細胞。
  76. 細胞内ドメインが、ＦｃＲγ、ＦｃＲα、またはＦｃＲεに由来する細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項５９から７５のいずれか一項に記載の操作された細胞。
  77. 細胞内ドメインが、ＰＩ３キナーゼ動員ドメインをさらに含む、請求項５９から７６のいずれか一項に記載の操作された細胞。
  78. 細胞内シグナル伝達ドメインが、ＩＲＦ転写因子に結合し、抗原結合性ドメインのそのコグネイト抗原への結合時に、ＩＲＦ転写因子を活性化する、請求項５９から７７のいずれか一項に記載の操作された細胞。
  79. 抗原結合性ドメインのそのコグネイト抗原への結合時に、炎症促進性サイトカインを誘導する、請求項５９から７８のいずれか一項に記載の操作された細胞。
  80. 炎症促進性サイトカインが、ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＴＮＦ、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、およびインターフェロンのうちの１つまたは複数を含む、請求項７９に記載の操作された細胞。
  81. 骨髄細胞、リンパ球、または幹細胞である、請求項５９から８０のいずれか一項に記載の操作された細胞。
  82. 骨髄細胞である、請求項８１に記載の操作された細胞。
  83. 請求項１から５４のいずれか一項に記載の組換え核酸、請求項５５から５８のいずれか一項に記載の細胞、または請求項５９から８２のいずれか一項に記載の操作された細胞と；薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
  84. 操作された細胞が、ＣＤ１４＋細胞および／またはＣＤ１６－細胞である、請求項８３に記載の医薬組成物。
  85. 細胞のうちの少なくとも５０％がＣＤ１４＋／ＣＤ１６－であり、細胞のうちの１０％未満が樹状細胞である細胞の集団を含む、請求項８３または８４に記載の医薬組成物。
  86. 細胞が、ＣＣＲ２の高発現を呈する、請求項８５に記載の医薬組成物。
  87. 細胞が、トーナルシグナル伝達およびデノボの活性化を呈さず、活性化時に、Ｍ０、Ｍ１、またはＭ２分化を呈する、請求項８５または８６に記載の医薬組成物。
  88. 対象におけるがんまたはウイルス感染を処置する方法であって、対象へと、請求項８３から８７のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法。
  89. キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含み、ＣＦＰが、（ａ）抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメイン；（ｂ）細胞外ドメインに作動可能に連結された膜貫通ドメイン、および（ｃ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含み、細胞内ドメインが、ＴＲＩＦに由来するドメインを含む、操作されたＣＤ１４＋／ＣＤ１６－細胞。
  90. ＴＲＩＦに由来するドメインを含む細胞内ドメインが、短縮型ＴＲＩＦドメインである、請求項８９に記載の操作された細胞。
  91. ＴＲＩＦに由来するドメインを含む細胞内ドメインが、３００未満のアミノ酸を含む、請求項８９に記載の操作された細胞。
  92. ＴＲＩＦに由来するドメインを含む細胞内ドメインが、２５０未満のアミノ酸を含む、請求項８９に記載の操作された細胞。
  93. ＴＲＩＦに由来するドメインを含む細胞内ドメインが、細胞外結合性ドメインの標的との係合時にＩＦＮ応答を呈する、請求項８９に記載の操作された細胞。
  94. 配列番号６６のアミノ酸配列、または配列番号６６に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有するポリペプチドをコードする配列を含む、請求項１から５または１５のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  95. 配列番号６６のアミノ酸配列、または配列番号６６に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有するポリペプチドをコードする配列を含む組換えポリヌクレオチドと、適切な賦形剤とを含む医薬組成物。
  96. 組換えポリヌクレオチドが、１つまたは複数の脂質と会合したｍＲＮＡである、請求項９５に記載の医薬組成物。
  97. 配列番号６６の配列、または配列番号６６に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有する組換えタンパク質を発現する操作された細胞の集団であって、細胞のうちの少なくとも５０％がＣＤ１４＋／ＣＤ１６－であり、細胞のうちの１０％未満が樹状細胞である細胞の集団と；薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
  98. 配列番号５６のアミノ酸配列、または配列番号５６に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有するポリペプチドをコードする配列を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  99. 配列番号５９のアミノ酸配列、または配列番号５９に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有するポリペプチドをコードする配列を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  100. 配列番号６０のアミノ酸配列、または配列番号６０に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有するポリペプチドをコードする配列を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  101. 配列番号６１のアミノ酸配列、または配列番号６１に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有するポリペプチドをコードする配列を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  102. 配列番号６２のアミノ酸配列、または配列番号６２に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有するポリペプチドをコードする配列を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  103. 配列番号６３のアミノ酸配列、または配列番号６３に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有するポリペプチドをコードする配列を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  104. 配列番号６４のアミノ酸配列、または配列番号６４に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有するポリペプチドをコードする配列を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  105. 配列番号６７のアミノ酸配列、または配列番号６７に対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有するポリペプチドをコードする配列を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  106. 請求項９８から１０５のいずれか一項に記載の組換え核酸を含む、操作された骨髄細胞。
  107. （ａ）抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメイン、（ｂ）細胞外ドメインに作動可能に連結された膜貫通ドメイン、および（ｃ）膜貫通ドメインに作動可能に連結された細胞内ドメインを含むキメラ融合タンパク質をコードする組換え核酸であって、膜貫通ドメインが、ＣＤ６８、ＣＤ６４、またはＣＤ８に由来する膜貫通ドメインであり、
    細胞内ドメインが、ＴＲＩＦに由来するドメイン、またはＣＤ４０に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む、組換え核酸。
  108. 細胞内ドメインが、ＴＲＩＦに由来するドメインを含む、請求項１０７に記載の組換え核酸。
  109. ＴＲＩＦに由来するドメインが、短縮型ＴＲＩＦドメインである、請求項１０８に記載の組換え核酸。
  110. 細胞内ドメインが、ＣＤ４０に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項１０７に記載の組換え核酸。
  111. 細胞内ドメインが、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）に由来する細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項１０７から１１０のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  112. 細胞内ドメインが、Ｆｃガンマに由来する細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項１０７から１１０のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  113. 細胞内ドメインが、ＰＩ３キナーゼ動員ドメインをさらに含む、請求項１０７から１１２のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  114. 細胞外ドメインが、ＣＤ８アルファに由来するヒンジドメインを含む、請求項１０７から１１３のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  115. 抗原結合性ドメインが、ＨＥＲ２結合性ドメインである、請求項１０７から１１４のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  116. 膜貫通ドメインが、ＣＤ６４に由来する膜貫通ドメインである、請求項１０７から１１５のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  117. 膜貫通ドメインが、ＣＤ８アルファに由来する膜貫通ドメインである、請求項１０７から１１５のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  118. 抗原結合性ドメインが、ＨＥＲ２結合性ドメインであり、細胞外ドメインが、ＣＤ８アルファに由来するヒンジドメインを含み、膜貫通ドメインが、ＣＤ８アルファに由来する膜貫通ドメインであり；細胞内ドメインが、ＣＤ４０に由来する細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｆｃγ（Ｆｃガンマ）に由来する細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＰＩ３キナーゼ動員ドメインを含む、請求項１０７に記載の組換え核酸。
  119. ＣＤ４０に由来する細胞内シグナル伝達ドメインが、膜貫通ドメインへと連結され、Ｆｃγに由来する細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ４０に由来する細胞内シグナル伝達ドメインへと連結され、ＰＩ３キナーゼ動員ドメインが、Ｆｃγに由来する細胞内シグナル伝達ドメインへと連結される、請求項１１８に記載の組換え核酸。
  120. 抗原結合性ドメインが、ＨＥＲ２結合性ドメインであり、膜貫通ドメインが、ＣＤ６４に由来する膜貫通ドメインであり；細胞内ドメインが、Ｆｃγに由来する細胞内シグナル伝達ドメイン、ＰＩ３キナーゼ動員ドメイン、およびＴＲＩＦに由来する細胞内ドメインを含む、請求項１０７に記載の組換え核酸。
  121. 細胞外ドメインが、ＣＤ８アルファに由来するヒンジドメインを含まない、請求項１２０に記載の組換え核酸。
  122. 細胞外ドメインが、ヒンジドメインを含まない、請求項１２０に記載の組換え核酸。
  123. Ｆｃγに由来する細胞内シグナル伝達ドメインが、膜貫通ドメインへと連結され、ＰＩ３キナーゼ動員ドメインが、Ｆｃγに由来する細胞内シグナル伝達ドメインへと連結され、ＴＲＩＦに由来する細胞内ドメインが、ＰＩ３キナーゼ動員ドメインへと連結される、請求項１２０から１２２のいずれか一項に記載の組換え核酸。
  124. 請求項１０７から１２３のいずれか一項に記載の組換え核酸を含む細胞。
  125. 骨髄細胞である、請求項１２４に記載の細胞。
  126. 請求項１２４または１２５に記載の細胞を含む医薬組成物。
  127. 配列番号６８、７５、または８２に記載の配列を含むｍＲＮＡ。
  128. がんの処置における使用のための、請求項１２７に記載のｍＲＮＡ。
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