JP2022531325A - 操作されたキメラ融合タンパク質組成物およびそれらの使用の方法 - Google Patents

Abstract

本開示は、がんまたは感染症の免疫療法のための、増強された食作用活性を有するキメラ抗原受容体を発現する操作された食細胞を作製および使用するための組成物および方法を提供する。【選択図】図１Ａ

Description

関連出願

関連出願の相互参照
[0001]本出願は、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０１９年４月３０日に出願された米国特許仮出願第６２／８４１，１９０号、２０１９年４月３０日に出願された米国特許仮出願６２／８４１，１８３号、２０２０年３月２３日に出願された米国非仮特許出願第１６／８２７，３８１号、および２０２０年３月２３日に出願された米国非仮特許出願第１６／８２７，３０２号の利益を請求する。

[0002]細胞免疫療法は、がんおよび持続感染、また処置の他の形態に難治性の特定の疾患などの疾患を処置する困難と闘う有望な新しい技術である。大きな進展は、ＣＡＲ－Ｔ細胞の発見およびそれらの免疫療法での利用可能性である。ＣＡＲ－Ｔ細胞は、Ｔ細胞をがん細胞などの特定の疾患細胞へと標的化するのを助けるキメラ抗原受容体を発現するＴリンパ球であり、標的がん細胞を死滅させることを意図した細胞傷害性応答または用いたおよび共発現した免疫抑制サイトカインの細胞内ドメインによる免疫抑制および／または忍容性を誘導することができる。しかしながら、これまで、いくつかの制限がＣＡＲ－Ｔ細胞の進展を遅らせ、臨床試験でのその有望性を減衰させた。

[0003]ＣＡＲ－Ｔ細胞の制限を理解することは、技術にてこ入れし、より良い免疫療法モデルに向けて革新を続ける鍵である。特に、Ｔ細胞の悪性腫瘍において、ＣＡＲ－Ｔ細胞は多くの問題に直面したようである。ＣＡＲ－Ｔ細胞および悪性Ｔ細胞は、ほとんどのＴ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）の表面抗原を共有し、したがって、ＣＡＲ－Ｔ細胞はがん細胞と同じ方法で細胞傷害性を受ける。一部の例では、ＣＡＲ－Ｔ産物は悪性Ｔ細胞を夾雑することがある。さらに、Ｔ細胞形成不全はＣＡＲ－Ｔ細胞の延長した持続性による問題の可能性がある。他の制限は、ＣＡＲ－Ｔ細胞の固形腫瘍に浸透する能力が弱いこと、およびそれらの抗腫瘍能を下方制御するように作用する強力な腫瘍微小環境を含む。ＣＡＲ－Ｔ細胞機能はまた、内在性Ｔ細胞の不活性化および枯渇をもたらす免疫抑制性の腫瘍微小環境（ＴＭＥ）によって負に影響される。

[0004]マクロファージを含む骨髄性細胞は、骨髄系統に由来し、生来の免疫系に属する細胞である。それらは、血液中に放出され、組織へと遊走することができる骨髄幹細胞に由来する。それらの主な機能のいくつかは、食作用、Ｔ細胞応答の活性化、ならびに細胞残渣および細胞外マトリックスのクリアランスを含む。それらはまた、恒常性の維持、ならびに炎症の開始および消散にも重要な役割を果たす。さらに、骨髄性細胞は、マクロファージを含む多くの下流の細胞へと分化することができ、周辺の微小環境からそれらが受ける刺激の型によって炎症促進性から抗炎症性までの範囲の異なる応答を示すことができる。さらに、組織マクロファージは、ＣＤＴエフェクター細胞、ＮＫ細胞および調節性Ｔ細胞を含む他の免疫細胞型に広範な調節および活性化する役割を果たすことが示された。マクロファージは、悪性腫瘍における主要な免疫浸潤物であることが示され、エフェクター免疫浸潤および機能への広範な免疫抑制影響を有することが示された。

[0005]骨髄性細胞は、単球、樹状細胞、組織マクロファージ、および顆粒細胞を含む免疫系の主要な細胞内コンパートメントである。骨髄性細胞の細胞個体発生、活性化、分化、および組織特異的機能のモデルは、何年もの間、驚くべき結果により再検討されてきた。しかしながら、恒常性と疾患の両方の間、それらの大幅な柔軟性および異質性は、理解には程遠い。骨髄性細胞は、食作用およびＴ細胞を活性化するそれらの能力を含む多くの機能を有するが、治療使用のためにこれらの機能を抑制することは理解しにくいままである。したがって、最新の手段は、限定はされないがＴ細胞悪性腫瘍を含む、改善された治療の開発に向けた他の細胞型を使用することが考えられる。

[0006]操作された骨髄性細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏで短命、表現型が多様、感受性、可塑性でもあり得、ｉｎ ｖｉｔｒｏで操作することが困難であることが多いこともわかっている。例えば、単球における外因性遺伝子発現は、非造血幹細胞における外因性遺伝子発現と比較して困難である。骨髄性細胞（例えば、単球／マクロファージ）のトランスフェクトと関連する著しい技術的困難がある。プロフェッショナル食細胞として、単球／マクロファージなどの骨髄性細胞は核酸の完全性を壊し、非効率的なプロセスでこれらの細胞へと遺伝子を移行させることができる多くの強力な分解酵素を含む。これは、免疫または炎症刺激への曝露後にそれらの生理学において劇的な変化を受ける活性化されたマクロファージに特に当てはまる。これらの細胞のウイルス形質導入は、マクロファージが一般に分化しない末期の細胞であるために妨げられ；したがって、複製可能なゲノムへの組み込みに依存する一部のベクターは限定された成功に直面する。さらに、マクロファージは「危険シグナル」に敏感であり、したがって、遺伝子導入のために使用したいくつかのオリジナルのウイルスベクターは、これらの細胞で強力な抗ウイルス応答を誘導し、これらのベクターを遺伝子送達に不適切にする。

[0007]骨髄性細胞の多様な機能性は、それらを、多くの治療効果を有するように操作され得る理想的な細胞療法候補にする。本開示は、免疫系の骨髄性細胞（例えば、ＣＤ１４＋細胞）、特に食細胞を使用する免疫療法に関する。多くの治療指標は骨髄性細胞を使用して検討することができた。例えば、骨髄性細胞免疫療法は、がん、自己免疫、線維症および感染において極めて重要であり得た。本開示は、免疫系の食細胞、特にマクロファージを含む、骨髄性細胞を使用する免疫療法に関する。治療使用のために骨髄性細胞の１つまたは複数のこれらの機能を抑制することは、本明細書で開示される本発明の目的である。例えば、治療使用のための操作された骨髄性細胞を含む、骨髄性細胞の食作用活性を抑制することは、本明細書で開示される本発明の目的である。例えば、操作された骨髄性細胞を含む、骨髄性細胞のＴ細胞活性化を促進する能力を抑制することは、本明細書で開示される本発明の目的である。例えば、操作された骨髄性細胞を含む、骨髄性細胞の殺腫瘍分子の分泌を促進する能力を抑制することは、本明細書で開示される本発明の目的である。例えば、操作された骨髄性細胞を含む、骨髄性細胞の免疫細胞および分子の動員および輸送を促進する能力を抑制することは、本明細書で開示される本発明の目的である。本開示は、骨髄性細胞に成功裏にトランスフェクトまたは形質導入する、またはそうでなければ骨髄性細胞の機能的な態様を増加する目的で、さらに細胞の分化能、成熟可能性、および／またはその可塑性を損なわずに骨髄性細胞において遺伝的改変を誘導することができる革新的な方法および組成物を提供する。

[0008]本開示は、直接または間接的に、がん細胞および感染細胞などの疾患細胞を攻撃および死滅（ＡＴＡＫ）することができる、マクロファージまたは他の食細胞などの操作された骨髄性細胞（例えば、ＣＤ１４＋細胞）を作製および使用することを含む。マクロファージおよび他の食細胞などの操作された骨髄性細胞は、疾患関連抗原（例えば、がん抗原）に特異的な細胞外結合ドメインを有するキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする核酸配列（例えば、ｍＲＮＡ、プラスミド、ウイルス構築物）を、例えば、組換え核酸技術、合成核酸、遺伝子編集技術（例えばＣＲＩＳＰＲ）、形質導入（例えばウイルス構築物を使用する）、電気穿孔、またはヌクレオフェクションを使用して細胞へと組み込むことによって調製され得る。骨髄性細胞が広範で多様な範囲の活性を有するように操作され得ることが見出された。例えば、骨髄性細胞が広範で多様な範囲の活性を有するように抗原結合ドメインを含有するキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）を発現するように操作され得ることが見出された。例えば、ＣＦＰが標的細胞の抗原に結合すると、細胞が標的細胞の食作用の増加を示すように、骨髄性細胞が増強された食作用活性を有するように操作され得ることが見出された。また、ＣＦＰが標的細胞の抗原に結合すると、細胞がＴ細胞、例えば腫瘍微小環境におけるＴ細胞の活性化を促進するように、骨髄性細胞がＴ細胞活性化を促進するように操作され得ることも見出された。操作された骨髄性細胞は、ＣＦＰが標的細胞の抗原に結合すると、細胞が近隣の細胞から殺腫瘍分子の分泌を促進するように、殺腫瘍分子の分泌を促進するように操作され得る。操作された骨髄性細胞は、ＣＦＰが標的細胞の抗原に結合すると、細胞が標的細胞または腫瘍微小環境へと免疫細胞および分子の動員および輸送を促進するように、免疫細胞および分子の動員および輸送を促進するために操作され得る。

[0009]本開示は、固形腫瘍に容易に動員されること；操作可能な生存期間を有し、したがって形成不全および免疫不全を生じる延長した持続性のリスクを下げること；骨髄性細胞がＴ細胞と夾雑できないこと；例えば、それらが悪性Ｔ細胞と同じ抗原を発現しないため、骨髄性細胞が仲間殺しを回避できること；および骨髄性細胞が、配置され得る過度の抗腫瘍機能を有することを含む、操作された骨髄性細胞が少なくとも一部のＣＡＲ－Ｔ細胞の制限を克服する重要な発見に基づく。一部の点で、操作された骨髄由来細胞は、疾患細胞を標的化および破壊するより安全な免疫療法手段であり得る。

[0010]さらに、マクロファージなどの骨髄性細胞は、腫瘍環境（ＴＭＥ）で普遍的に見出され、とりわけ一部の腫瘍型では最も豊富な細胞である。免疫系でのそれらの役割の一部として、マクロファージなどの骨髄性細胞は、自然に疾患細胞の除去に携わっている。本発明は、骨髄性細胞機能を抑制すること、特に疾患細胞を標的化すること、死滅させること、および直接的および／または間接的に除去すること、ならびに抗原およびサイトカインなどのペイロードの送達に関する。

[0011]操作された骨髄性細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏで短命、表現型が多様、感受性、可塑性でもあり得、ｉｎ ｖｉｔｒｏで操作することが困難であることが多いこともわかっている。例えば、単球における外因性遺伝子発現は、非造血幹細胞における外因性遺伝子発現と比較して困難である。トランスフェクトする骨髄性細胞（例えば、単球／マクロファージ）と関連する著しい技術的困難がある。プロフェッショナル食細胞として、単球／マクロファージなどの骨髄性細胞は核酸の完全性を壊し、非効率的なプロセスでこれらの細胞へと遺伝子を移行させることができる多くの強力な分解酵素を含む。これは、免疫または炎症刺激への曝露後にそれらの生理学において劇的な変化を受ける活性化されたマクロファージに特に当てはまる。これらの細胞のウイルス形質導入は、マクロファージが一般に分化しない末期の細胞であるために妨げられ；したがって、複製可能なゲノムへの組み込みに依存する一部のベクターは限定された成功に直面する。さらに、マクロファージは「危険シグナル」に敏感であり、したがって、遺伝子導入のために使用したいくつかのオリジナルのウイルスベクターは、これらの細胞で強力な抗ウイルス応答を誘導し、これらのベクターを遺伝子送達に不適切にする。本開示は、骨髄性細胞に成功裏にトランスフェクトまたは形質導入する、またはそうでなければ骨髄性細胞の機能的な態様を増加する目的で、さらに細胞の分化能、成熟可能性、および／またはその可塑性を損なわずに骨髄性細胞において遺伝的改変を誘導することができる革新的な方法および組成物を提供する。

参照による援用
[0012]各個々の出版物、特許、または特許出願が特におよび個々に参照により組み込まれると示されたように、同程度まで本明細書に記載の全ての出版物、特許および特許出願は参照により本明細書に組み込まれる。

図面の簡単な説明
[0013]本発明の新規な特徴は、添付の特許請求の範囲に具体的に記載される。本発明の特徴および効果のより十分な理解は、本発明の原理が利用される例示的な実施例について記す以下の詳細な説明、および添付の図面を参照することで得られるであろう。

[0014]骨髄性細胞の潜在的に操作可能な機能のいくつかを示すダイヤグラムを図示する図である。 [0015]様々なタイプのがんにおける種々の細胞タイプの存在を指示する、ダイヤグラムを図示する図である。マクロファージは、図式化されたがんのタイプの中で最も豊富な細胞である。 [0016]細胞外結合ドメイン、膜貫通ドメイン、第１の細胞内シグナル伝達ドメインおよび第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含有する例示的なキメラ受容体融合タンパク質（ＣＦＰ）を示す概略図を図示する図である。シグナル伝達ドメインは、他の受容体に由来し、任意の数の細胞機能を誘発するように設計することができる。 [0017]細胞外結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含有する例示的なＣＦＰ（左）、ならびに細胞外結合ドメイン、膜貫通ドメイン、第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、第２の細胞内シグナル伝達ドメイン、第３の細胞内シグナル伝達ドメイン、および１つまたは複数のさらなる細胞内シグナル伝達ドメインを含有するＣＦＰを示す概略図を図示する図である。シグナル伝達ドメインは、他の受容体に由来し、任意の数の細胞機能を誘発するように設計することができる。 [0018]抗ＣＤ５細胞外結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＰＩ３Ｋ動員ドメインに融合されたＦｃＲγに由来する細胞内ドメインを含有する細胞内シグナル伝達ドメインを含有する例示的なＣＦＰ二量体を示す概略図を図示する図である。 [0019]細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびに食作用ドメイン、ＰＩ３Ｋ動員ドメインおよび炎症促進性ドメインを含有する細胞内シグナル伝達ドメインを含有する例示的なＣＦＰ二量体を示す概略図を図示する図である。 [0020]各サブユニットが単一の標的に結合するｓｃＦｖに融合された細胞外ドメインを含有する例示的なＣＦＰホモダイマー（左）、ならびに、ヘテロダイマーの第１のサブユニットが、第１の標的に結合するｓｃＦｖに融合された細胞外ドメインを含有しており、かつ、ヘテロダイマーサブユニットの第２のサブユニットが、第２の標的に結合するｓｃＦｖに融合された細胞外ドメインを含有する、例示的なＣＦＰヘテロダイマー（右）を図示する概略図である。 [0021]スカベンジャー受容体の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）および細胞内ドメインに融合された抗原特異的ｓｃＦｖに融合されたシグナルペプチドを含有するＣＦＰをコードする例示的な組換え核酸を図示する概略図である。 [0022]骨髄性細胞の細胞膜内に組み込まれた、図４ＡのＣＦＰを図示する概略図である。図式化されたＣＦＰは、がん細胞のがん抗原に結合したｓｃＦｖを含有する。細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインは、１つまたは複数のスカベンジャー受容体に由来することができる。 [0023]空のベクター（対照）または色素添加腫瘍細胞と共培養されたＣＦＰをコードするベクターを形質導入されるヒト初代骨髄性細胞における相対食作用に関する予想される結果を図示する例示的なグラフの図である。食作用は、フローサイトメトリーを使用して定量化される。 [0024]空のベクター（対照）、または表示されたエフェクター細胞：標的細胞の比（Ｅ：Ｔ比）でルシフェラーゼを発現する腫瘍細胞（標的細胞）と共培養されたＣＦＰをコードするベクターを形質導入されるヒト初代骨髄性細胞（エフェクター細胞）の存在下でインキュベートされる場合の、腫瘍細胞の比溶解のパーセントに関する予想される結果を図示する例示的なグラフの図である。 [0025]空のベクター（対照）またはＣＦＰをコードするベクターを形質導入される細胞で処置する後のマウス異種移植腫瘍モデルにおける生存パーセントに関する予想される結果を図示する例示的なグラフの図である。 [0026]ＣＤ８ヒンジドメインに融合された抗原特異的ｓｃＦｖに融合されたシグナルペプチド、ＣＤ８膜貫通ドメイン、ならびに食作用活性化ドメインおよび炎症促進性ドメインを含有する細胞内ドメインを含有するＣＦＰ（Ｍ１－ＣＡＲ）をコードする例示的な組換え核酸を図示する概略図である。 [0027]骨髄性細胞の細胞膜内に組み込まれた図５ＡのＣＦＰ（Ｍ１－ＣＡＲ）を図示する概略図である。図式化されたＣＦＰは、がん細胞のがん抗原に結合したｓｃＦｖを含有する。 [0028]空のベクター（対照）、または色素添加腫瘍細胞と共培養されたＣＦＰ（Ｍ１－ＣＡＲ）をコードするベクターを形質導入されるヒト初代骨髄性細胞における相対食作用に関する予想される結果を図示する例示的なグラフの図である。食作用は、フローサイトメトリーを使用して定量化される。 [0029]ベクター対照またはＣＦＰ（Ｍ１－ＣＡＲ）をコードするベクターを形質導入される骨髄性細胞における図式化されたサイトカインの産生の増加倍率に関する予想される結果を図示する例示的なグラフの図である。 [0030]ベクター対照またはＣＦＰ（Ｍ１－ＣＡＲ）をコードするベクターを形質導入されるヒト初代骨髄性細胞における図式化されたＭ１マーカーの産生の増加倍率に関する予想される結果を図示する例示的なグラフの図である。 [0031]空のベクター（対照）、または表示されたエフェクター細胞：標的細胞の比（Ｅ：Ｔ比）で、ルシフェラーゼを発現する腫瘍細胞（標的細胞）と共培養されたＣＦＰ（Ｍ１－ＣＡＲ）をコードするベクターを形質導入されるヒト初代骨髄性細胞（エフェクター細胞）の存在下でインキュベートされる場合の、腫瘍細胞の比溶解のパーセントに関する予想される結果を図示する例示的なグラフの図である。比溶解は、ルシフェラーゼアッセイを使用して定量化される。 [0032]空のベクター（対照）またはＣＦＰ（Ｍ１－ＣＡＲ）をコードするベクターを形質導入されるヒト初代骨髄性細胞で処置する後のマウス異種移植腫瘍モデルにおける生存パーセントに関する予想される結果を図示する例示的なグラフの図である。 [0033]ＣＤ８ヒンジドメインに融合された抗原特異的ｓｃＦｖに融合されたシグナルペプチド、ＣＤ８膜貫通ドメインならびに細胞内食作用活性化ドメインおよび細胞内組み込み活性化ドメインを含有する、ＣＦＰ（インテグリン－ＣＡＲ）をコードする例示的な組換え核酸を図示する概略図である。 [0034]骨髄性細胞の細胞膜内に組み込まれた図６ＡのＣＦＰ（インテグリン－ＣＡＲ）を図示する概略図である。図式化されたＣＦＰは、がん細胞のがん抗原に結合したｓｃＦｖを含有する。 [0035]空のベクター（対照）、または色素添加腫瘍細胞と共培養されたＣＦＰ（インテグリン－ＣＡＲ）をコードするベクターを形質導入されるヒト初代骨髄性細胞における相対食作用に関する予想される結果を図示する例示的なグラフの図である。食作用は、フローサイトメトリーを使用して定量化される。 [0036]空のベクター（対照）、または表示されたエフェクター細胞：標的細胞の比（Ｅ：Ｔ比）でルシフェラーゼを発現する腫瘍細胞（標的細胞）と共培養されたＣＦＰ（インテグリン－ＣＡＲ）をコードするベクターを形質導入されるヒト初代骨髄性細胞（エフェクター細胞）の存在下でインキュベートされる場合の、腫瘍細胞の比溶解のパーセントに関する予想される結果を図示する例示的なグラフの図である。 [0037]空のベクター（対照）またはＣＦＰ（インテグリン－ＣＡＲ）をコードするベクターを形質導入されるヒト初代骨髄性細胞の相対浸潤に関する予想される結果を図示する例示的なグラフの図である。 [0038]空のベクター（対照）またはＣＦＰ（インテグリン－ＣＡＲ）をコードするベクターを形質導入されるヒト初代骨髄性細胞で処置する後のマウス異種移植腫瘍モデルにおける生存パーセントに関する予想される結果を図示する例示的なグラフの図である。 [0039]骨髄性細胞の細胞膜内に組み込まれたＣＦＰ（交差提示－ＣＡＲ）を図示する概略図である。図式化された交差提示－ＣＡＲは、ＣＤ８ヒンジドメインに融合された、がん細胞のがん抗原に結合したｓｃＦｖ、ＣＤ８膜貫通ドメイン、細胞内食作用活性化ドメイン、および細胞内交差提示活性化ドメインを含有する。交差提示－ＣＡＲは抗原を交差提示経路に誘導することができる。 [0040]骨髄性細胞における、モック発現または抗ＣＤ５ ｓｃＦｖを備える細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を有する種々の構築物の発現の後の例示的なフローサイトメトリーデータ（側方散乱（ＳＳＣ） 対 ＣＤ５＋）を図示する図である。図式化された構築物は、以下を含む：ＦｃＲγ細胞内ドメインに融合された、ＣＤ４０細胞内ドメインに融合された、ＣＤ８膜貫通ドメインに融合された、ＣＤ８ヒンジドメインに融合された、抗ＣＤ５ ｓｃＦｖを含有するＥＣＤ（ＣＤ５－ＣＤ８ｈ－ＣＤ８ｔｍ－ＣＤ４０－ＦｃＲ）；ＣＤ４０細胞内ドメインに融合された、ＦｃＲγ細胞内ドメインに融合された、ＣＤ８膜貫通ドメインに融合された、ＣＤ８ヒンジドメインに融合された、抗ＣＤ５ ｓｃＦｖを含有するＥＣＤ（ＣＤ５－ＣＤ８ｈ－ＣＤ８ｔｍ－ＦｃＲ－ＣＤ４０）；ＰＩ３Ｋ動員ドメインに融合された、ＦｃＲγ細胞内ドメインに融合された、ＣＤ８膜貫通ドメインに融合された、ＣＤ８ヒンジドメインに融合された、抗ＣＤ５ ｓｃＦｖを含有するＥＣＤ（ＣＤ５－ＣＤ８ｈ－ＣＤ８ｔｍ－ＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ）；ＦｃＲγ細胞内ドメインに融合された、ＣＤ８膜貫通ドメインに融合された、ＣＤ８ヒンジドメインに融合された、抗ＣＤ５ ｓｃＦｖを含有するＥＣＤ（ＣＤ５－ＣＤ８ｈ－ＣＤ８ｔｍ－ＦｃＲ）；ＣＤ８膜貫通ドメインに融合された、ＣＤ８ヒンジドメインに融合された、抗ＣＤ５ ｓｃＦｖを含有するＥＣＤ（ＣＤ５－ＣＤ８ｈ－ＣＤ８ｔｍ－ＩＣＤ無し）；ＰＩ３Ｋ動員ドメインに融合された、ＦｃＲγ細胞内ドメインに融合された、ＣＤ２８膜貫通ドメインに融合された、ＣＤ２８ヒンジドメインに融合された、抗ＣＤ５ ｓｃＦｖを含有するＥＣＤ（ＣＤ５－ＣＤ２８ｈ－ＣＤ２８ｔｍ－ＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ）；ＰＩ３Ｋ動員ドメインに融合された、ＦｃＲγ細胞内ドメインに融合された、ＣＤ６８膜貫通ドメインに融合された、ＣＤ８ヒンジドメインに融合された、抗ＣＤ５ ｓｃＦｖを含有するＥＣＤ（ＣＤ５－ＣＤ８ｈ－ＣＤ６８ｔｍ－ＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ）；ＰＩ３Ｋ動員ドメインに融合された、ＦｃＲγ細胞内ドメインに融合された、ＣＤ８膜貫通ドメインに融合された、抗ＣＤ５ ｓｃＦｖを含有するＥＣＤ（ＣＤ５－ＣＤ８ｔｍ－ＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ）；ＰＩ３Ｋ動員ドメインに融合された、ＦｃＲγ細胞内ドメインに融合された、ＣＤ２８膜貫通ドメインに融合された、抗ＣＤ５ ｓｃＦｖを含有するＥＣＤ（ＣＤ５－ＣＤ２８ｔｍ－ＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ）；ならびにＰＩ３Ｋ動員ドメインに融合された、ＦｃＲγ細胞内ドメインに融合された、ＣＤ６８膜貫通ドメインに融合された、抗ＣＤ５ ｓｃＦｖを含有するＥＣＤ（ＣＤ５－ＣＤ６８ｔｍ－ＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ）。 図８－１の続き。 [0041]骨髄性細胞における、モック発現または抗ＣＤ５ ｓｃＦｖを備える細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を有する種々の構築物の発現の後の例示的なフローサイトメトリーデータ（側方散乱（ＳＳＣ） 対 抗ＣＤ５ ＣＦＰ＋）を図示する図である。図式化された構築物は、以下を含む：ＰＩ３Ｋ動員ドメインに融合された、ＦｃＲγ細胞内ドメインに融合された、ＣＤ８膜貫通ドメインに融合された、ＣＤ８ヒンジドメインに融合された、抗ＣＤ５ ｓｃＦｖを含有するＥＣＤ（ＣＤ５－ＣＤ８ｈ－ＣＤ８ｔｍ－ＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ）；ＦｃＲγ細胞内ドメインに融合された、ＣＤ８膜貫通ドメインに融合された、ＣＤ８ヒンジドメインに融合された、抗ＣＤ５ ｓｃＦｖを含有するＥＣＤ（ＣＤ５－ＣＤ８ｈ－ＣＤ８ｔｍ－ＦｃＲ）；ＣＤ８膜貫通ドメインに融合された、ＣＤ８ヒンジドメインに融合された、抗ＣＤ５ ｓｃＦｖを含有するＥＣＤ（ＣＤ５－ＣＤ８ｈ－ＣＤ８ｔｍ－ＩＣＤ無し）；ＣＤ４０細胞内ドメインに融合された、ＦｃＲγ細胞内ドメインに融合された、ＣＤ８膜貫通ドメインに融合された、ＣＤ８ヒンジドメインに融合された、抗ＣＤ５ ｓｃＦｖを含有するＥＣＤ（ＣＤ５－ＣＤ８ｈ－ＣＤ８ｔｍ－ＦｃＲ－ＣＤ４０）；ならびにＴＮＦＲ２細胞内ドメインに融合された、ＦｃＲγ細胞内ドメインに融合された、ＣＤ８膜貫通ドメインに融合された、ＣＤ８ヒンジドメインに融合された、抗ＣＤ５ ｓｃＦｖを含有するＥＣＤ（ＣＤ５－ＣＤ８ｈ－ＣＤ８ｔｍ－ＦｃＲ－ＴＮＦＲ２）。 [0042]ＴＨＰ－１細胞で発現されるＦａｒＲｅｄフルオロフォア標識ＣＦＰを標的とする抗原における、コーティングされたＦＩＴＣ標識ビーズを使用する食作用アッセイの例示的な実験フローダイヤグラムを示す概略図を図示する図である。 [0043]図１０Ａの実験計画を使用する、モック発現または抗ＣＤ５ ＣＦＰの発現の後の例示的なフローサイトメトリーデータ（側方散乱（ＳＳＣ） 対 ＣＳＦＥ－ＦａｒＲｅｄ）を図示する図である。 [0044]図１０Ａの実験計画を使用する、空のベクター（モック）、またはＢＳＡまたはＣＤ５でコーティングのＦＩＴＣ標識ビーズと共培養された図式化されたＣＦＰをコードするベクターを形質導入したヒト初代骨髄性細胞における相対食作用を示す例示的なグラフを図示する図である。 [0045]図１０Ａの実験計画を使用する、モック発現または表示された抗ＣＤ５ ＣＦＰの発現の後の表示されたタンパク質の濃度（ｐｇ／ｍＬ）の例示的な棒グラフを図示する図である。ＣＦＰそれぞれは、表示された細胞内ドメインに融合されたＣＤ８膜貫通ドメインに融合されたＣＤ８ヒンジドメインに融合された、抗ＣＤ５ ｓｃＦｖを含有するＥＣＤを含有した。 図１０Ｄ－１の続き。 [0046]ＩＬ－１０、ＩＬ－４およびＴＧＦβの存在下で２４時間インキュベートし、次いで、Ｈ９ Ｔ細胞リンパ腫細胞とインキュベートした抗ＣＤ５ ＣＦＰを発現する初代ヒト単球細胞におけるＭ１関連マーカー（ＣＤ１６およびＭＨＣクラスＩ）の発現を測定する例示的なグラフを図示する図である。抗ＣＤ５ ＣＦＰを発現する初代ヒト単球細胞は、Ｍ２環境で強力な活性を実証した。 [0047]ＩＬ－１０、ＩＬ－４およびＴＧＦβの存在下で２４時間、次いでＨ９ Ｔ細胞リンパ腫細胞の存在下で一晩、抗ＣＤ５キメラ抗原受容体を発現する初代ヒト単球細胞をインキュベートした後の、ＴＮＦ－αの濃度（ｐｇ／ｍＬ）の例示的な棒グラフを図示する図である。抗ＣＤ５ ＣＦＰを発現する初代ヒト単球細胞は、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）様状態下で機能して、炎症性メディエーターを産生することができた。 [0048]ＩＬ－１０、ＩＬ－４およびＴＧＦβの存在下で２４時間、次いでＨ９ Ｔ細胞リンパ腫細胞の存在下で一晩、抗ＣＤ５ ＣＦＰを発現する初代ヒト単球細胞をインキュベートした後の、表示された化学誘引物質（ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＸＣＬ１０およびＣＸＣＬ１２）の濃度（ｐｇ／ｍＬ）の例示的な棒グラフを図示する図である。抗ＣＤ５ ＣＦＰを発現する初代ヒト単球細胞は機能して、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）様状態下でＴ細胞化学誘引物質およびＮＫ細胞化学誘引物質を含めて、広範囲のケモカインを分泌することができた。 [0049]ＩＬ－１０、ＩＬ－４およびＴＧＦβの存在下で２４時間、次いでＨ９ Ｔ細胞リンパ腫細胞の存在下で一晩、抗ＣＤ５ ＣＦＰを発現する初代ヒト単球細胞をインキュベートした後の、表示された化学誘引物質（ＣＣＬ８、ＣＸＣＬ１、エオタキシンおよびＣＣＬ５）の濃度（ｐｇ／ｍＬ）の例示的な棒グラフを図示する図である。抗ＣＤ５ ＣＦＰを発現する初代ヒト単球細胞は機能して、多形核顆粒球（ＰＭＮ）、好酸球および白血球の化学誘引物質を活性化するケモカインを含めて、広範囲のケモカインを分泌することができた。 [0050]ＴＨＰ－１細胞で発現されるＦａｒＲｅｄフルオロフォア標識ＣＦＰを標的とするＣＦＳＥ標識標的細胞を使用する食作用アッセイの例示的な実験フローダイヤグラムを示す概略図を図示する図である。 [0051]図１１Ａの実験計画を使用する、ＴＨＰ－１細胞におけるモック発現または抗ＣＤ５ ＣＦＰの発現の後の例示的なフローサイトメトリーデータ（側方散乱（ＳＳＣ） 対 前方散乱（ＦＳＣ）；ＣＳＦＥ 対 ＦａｒＲｅｄ；および細胞計数ＣＳＦＥ）を図示する図である。骨髄性細胞株に抗ＣＤ５ ＣＦＰを電気穿孔し、細胞内ＦａｒＲｅｄ色素で標識した。これらの細胞は、１：３の骨髄性細胞：腫瘍細胞比で、ＣＦＳＥで前標識したＨ９ Ｔ細胞がん細胞とインキュベートした。４時間後、食作用をフローサイトメトリーによって測定した。 [0052]図１１Ａの実験計画を使用する、空のベクター（モック）または図式化されたＣＦＰをコードするベクターを電気穿孔し細胞内ＦａｒＲｅｄ色素で標識した骨髄性細胞株における相対食作用を示す例示的なグラフを図示する図である。これらの細胞は、１：３の骨髄性細胞：腫瘍細胞比で、ＣＦＳＥで前標識したＨ９ Ｔ細胞がん細胞とインキュベートした。４時間後、食作用をフローサイトメトリーによって測定した。 [0053]初代ヒト単球細胞で発現されるＦａｒＲｅｄフルオロフォア標識ＣＦＰを標的とするｐＨＲｏｄｏ標識標的細胞を使用する食作用アッセイの例示的な実験フローダイヤグラムを示す概略図を図示する図である。 [0054]図１２Ａの実験計画を使用する、初代ヒト単球細胞における、モック発現または抗ＣＤ５ ＣＦＰの発現の後の例示的なフローサイトメトリーデータ（ｐＨＲｏｄｏ対ＦａｒＲｅｄ）を図示する図である。初代ヒト単球細胞に抗ＣＤ５ ＣＦＰを電気穿孔し、細胞内ＦａｒＲｅｄ色素で標識した。これらの細胞は、ｐＨＲｏｄｏで前標識したＨ９ Ｔ細胞がん細胞とインキュベートした。インキュベーション後、食作用をフローサイトメトリーによって測定した。 [0055]図１２Ａの実験計画を使用する、初代ヒト単球細胞における、モック発現または図式化された抗ＣＤ５ ＣＦＰの発現の後の相対食作用を示す図１２Ｂの結果を定量化する例示的なグラフを図示する図である。 [0056]ビーズベースの食作用アッセイを実施した後の単球細胞における、モック発現または表示された抗ＣＤ５ ＣＦＰの発現の後の表示されたタンパク質の濃度（ｐｇ／ｍＬ）の例示的な棒グラフを図示する図である。 図１２Ｄ－１の続き。 [0057]無細胞または表示された濃度でのＣＣＬ２との抗ＣＤ５ ＣＦＰを発現するＴＨＰ－１細胞の、インキュベーションの後の経時的な相対蛍光ユニット（ＲＦＵ）の例示的なグラフを図示する図である。対照に勝る増加倍率は、アッセイ緩衝液単独で処理された細胞と比較した、ＣＣＬ２誘導性走化性の比を図示する。グラフの各バーは、２回繰返しのウェルの平均±ＳＤを表す。 [0058]無細胞または表示された濃度でのＣＣＬ２との抗ＣＤ５ ＣＦＰを発現する初代ヒト単球細胞の、インキュベーションの後の経時的な相対蛍光ユニット（ＲＦＵ）の例示的なグラフを図示する図である。対照に勝る増加倍率は、アッセイ緩衝液単独で処理された細胞と比較した、ＣＣＬ２誘導性走化性の比を図示する。グラフの各バーは、２回繰返しのウェルの平均±ＳＤを表す。 [0059]末梢Ｔ細胞リンパ腫動物モデル実験の例示的な実験フローダイヤグラムを示す概略図を図示する図である。抗ＣＤ５ ＣＦＰを発現する表示された量のヒト初代単球による処置を、腫瘍播種後１１日目に開始した。ＩＶＩＳイメージングを使用して腫瘍量を測定した。 [0060]図１５Ａに示す実験による、ヒト初代単球細胞における抗ＣＤ５ ＣＦＰの発現の後の例示的なフローサイトメトリーデータ（側方散乱（ＳＳＣ） 対 抗ＣＤ５ ＣＦＰ＋）を図示する図である。 [0061]図１５Ａに示す実験による、ビヒクルまたは抗ＣＤ５ ＣＦＰを発現するヒト初代単球で処置されたマウス異種移植モデルの例示的な結果を図示する図である。０日目に、ＮＳＧマウスにルシフェラーゼを発現するＣＤ５＋腫瘍細胞を注射した。次いで、マウスは未処置であるか、または抗ＣＤ ５ＣＦＰを電気穿孔したヒト初代単球の表示されたレジメンを注射する、のいずれかとした。 [0062]図１５Ｃの結果からの経時的な相対腫瘍サイズのグラフを図示する図である。ルシフェラーゼ蛍光のＩＶＩＳイメージングを使用して腫瘍量を測定した。 [0063]末梢Ｔ細胞リンパ腫動物モデル実験の例示的な実験フローダイヤグラムを示す概略図を図示する図である。抗ＣＤ５ ＣＦＰを発現する表示された量のヒト初代単球による処置を、腫瘍播種後１１日目に開始した。 [0064]図１６Ａに示す実験による、ヒト初代単球細胞における抗ＣＤ５ ＣＦＰの発現の後の例示的なフローサイトメトリーデータ（側方散乱（ＳＳＣ） 対 抗ＣＤ５ ＣＦＰ＋）を図示する図である。データは、９５％のトランスフェクション効率の達成を示す。 [0065]図１６Ａに示す実験による経時的な相対腫瘍サイズのグラフを図示する図である。ルシフェラーゼ蛍光のＩＶＩＳイメージングを使用して腫瘍量を測定した。 [0066]図１６Ａに示す実験による経時的な相対腫瘍サイズのグラフを図示する図である。ノギス測定を使用して腫瘍量を測定した。データは、処置が、易感染性のマウスモデルにおいて、腫瘍進行の遅延、および腫瘍量の統計的に有意な縮小に関連付けられたことを実証する。統計的有意性は、アルファ＝０．５で、ボンフェローニ－ダン法を使用して決定した。一定のＳＤを想定せずに、各列を個々に解析した。ｔ検定の数：８または４。 [0067]細胞外結合ドメイン、膜貫通ドメイン、ＦｃＲγに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＭＤＡ５に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含有する例示的なＣＦＰを示す概略図を図示する図である。 [0068]非トランスフェクト初代単球（上）ならびに細胞外ＣＤ５結合ドメイン、膜貫通ドメイン、ＦｃＲγに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＭＤＡ５に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含有するＣＦＰをコードする、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写ｍＲＮＡをトランスフェクトした初代単球、における発現を示す例示的なフローサイトメトリーデータ（側方散乱（ＳＳＣ） 対 抗ＣＤ５ ＣＦＰ＋）を図示する図である。 [0069]非トランスフェクト初代単球ならびにＣＤ５ドメイン、膜貫通ドメイン、ＦｃＲγに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＭＤＡ５に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含有するＣＦＰをコードする、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写ｍＲＮＡをトランスフェクトした初代単球、において分泌された表示されたサイトカインの濃度（ｐｇ／ｍＬ）の例示的な棒グラフを図示する図である。 [0070]細胞外結合ドメイン、膜貫通ドメイン、ＦｃＲγに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＴＮＦＲ１またはＴＮＦＲ２に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含有する例示的なキメラ受容体融合タンパク質（ＣＦＰ）を示す概略図を図示する図である。 [0071]非トランスフェクト初代単球（左）；細胞外ＣＤ５結合ドメイン、膜貫通ドメイン、ＦｃＲγに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＴＮＦＲ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含有するＣＦＰをコードする、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写ｍＲＮＡをトランスフェクトした初代単球（中央）；ならびに細胞外ＣＤ５結合ドメイン、膜貫通ドメイン、ＦｃＲγに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＴＮＦＲ２に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含有するＣＦＰをコードする、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写ｍＲＮＡをトランスフェクトした初代単球（右）、における発現を示す例示的なフローサイトメトリーデータ（側方散乱（ＳＳＣ） 対 抗ＣＤ５ ＣＦＰ＋）を図示する図である。 [0072]非トランスフェクト初代単球；細胞外ＣＤ５結合ドメイン、膜貫通ドメイン、ＦｃＲγに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＴＮＦＲ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインＣＦＰを含有するＣＦＰをコードする、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写ｍＲＮＡをトランスフェクトした初代単球；ならびに細胞外ＣＤ５結合ドメイン、膜貫通ドメイン、ＦｃＲγに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＴＮＦＲ２に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含有するＣＦＰをコードする、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写ｍＲＮＡをトランスフェクトした初代単球、において分泌された表示されたサイトカイン／ケモカインの濃度（ｐｇ／ｍＬ）の例示的な棒グラフを図示する図である。 図１８Ｃ－１の続き。 [0073]細胞外結合ドメイン、膜貫通ドメイン、ＦｃＲγに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ４０、ＰＩ３Ｋ動員ドメインまたはＴＮＦＲ２に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含有するＣＦＰを示す概略図を図示する図である。 [0074]Ｍ２刺激アッセイの例示的な実験フローダイヤグラムを示す概略図を図示する図である。様々なＣＦＰ構築物を発現する初代単球をＭ２状態（ＩＬ４、ＩＬ１０、ＴＧＦβ）下で２４時間培養した後、コーティング無しのまたは組換えＣＤ５抗原でコーティングの培養プレートに添加した。細胞をプレート上で２４時間インキュベートし、培地に分泌された種々のサイトカインの量を測定した。 [0075]非トランスフェクト初代単球；細胞外ＣＤ５結合ドメイン、膜貫通ドメイン、ＦｃＲγに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＴＮＦＲ１に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含有するＣＦＰをコードする、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写ｍＲＮＡをトランスフェクトした初代単球；ならびに細胞外結合ドメイン、膜貫通ドメイン、ＦｃＲγに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＴＮＦＲ２に由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含有するＣＦＰをコードする、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写ｍＲＮＡをトランスフェクトした初代単球、において分泌された表示されたサイトカイン／ケモカイン（ＴＮＦα、ＩＬ８、ＩＬ１β、ＩＰ－１０、Ｇｒｏ－アルファ／ＫＣ、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５およびＣＸＣＬ１２）の濃度（ｐｇ／ｍＬ）の例示的な棒グラフを図示する図である。ＣＤ５ライゲーションは、以下を含むいくつかの炎症促進性サイトカインを含むことおよびケモカインを含むことのアップレギュレーションを誘導した。 図１９Ｃ－１の続き。 図１９Ｃ－２の続き。 [0076]細胞外ＨＥＲ２結合ドメイン（ｓｃＦｖ）、細胞外Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８に由来する細胞外ヒンジドメイン、ＣＤ８膜貫通ドメイン、ならびに（ａ）ＦｃＲγに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメインおよびＰＩ３Ｋ動員ドメインを含有する第２の細胞内シグナル伝達ドメイン、（ｂ）ＭＥＧＦ１０に由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメインおよびＰＩ３Ｋ動員ドメインを含有する第２の細胞内シグナル伝達ドメイン、または（ｃ）ＴＨＰ－１細胞におけるＣＤ３ζに由来する細胞内シグナル伝達ドメイン、のいずれかを含有するＣＦＰをコードする例示的なレンチウイルス構築物の概略図を図示する図である。非形質導入初代単球または図式化されたＣＦＰ構築物を形質導入した初代単球における発現を示す例示的なフローサイトメトリーデータ（側方散乱（ＳＳＣ） 対 Ｆｌａｇ－ＰＥ）も図示する。 [0077]食作用アッセイの例示的な実験フローダイヤグラムを示す概略図を図示する図である。 [0078]図２０Ｂに図示の食作用アッセイを使用する、図２０Ａに図示のレンチウイルス構築物を形質導入したＴＨＰ－１細胞の食作用のパーセンテージの例示的な棒グラフを図示する図である。ホルボール－１２－ミリステート－１３－アセテート（ＰＭＡ）の有り無しで活性化された、形質導入ＴＨＰ－１細胞を、ＦａｒＲｅｄ標識ＳＫＯＶ３腫瘍細胞と一晩インキュベートした。食作用を示す細胞の例示的な蛍光顕微鏡画像も図示する。 [0079]図２０Ｂに図示の食作用アッセイを実施した後の食作用を示す例示的なフローサイトメトリーデータ（ＦａｒＲｅｄ 対 ＰＥ）を図示する図である。ＰＭＡの有り無しで活性化された、形質導入ＴＨＰ－１細胞を、ＦａｒＲｅｄ標識ＳＫＯＶ３腫瘍細胞と一晩インキュベートした。 [0080]図２０Ｂに図示の食作用アッセイを実施した後の例示的なフローサイトメトリーデータ（ＳＳＣ 対 ＦＳＣおよびＦａｒＲｅｄ 対 ＰＥ）を図示する図である。ＰＭＡの有り無しで活性化された、形質導入ＴＨＰ－１細胞を、ＦａｒＲｅｄ標識ＳＫＯＶ３腫瘍細胞と一晩インキュベートした。以下の式

によって計算される標的細胞の細胞死パーセントを示す例示的な棒グラフも図示する。
[0081]健康なドナーＬｅｕｋｏｐａｋから分離され、細胞外ＨＥＲ２結合ドメイン（ｓｃＦｖ）、細胞外Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８に由来する細胞外ヒンジドメイン、ＣＤ８膜貫通ドメイン、ならびにＦｃＲγに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメインおよびＰＩ３Ｋ動員ドメインを含有する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含有するＣＦＰをコードするレンチウイルスベクターを形質導入した、ＣＤ１４＋細胞を使用する食作用アッセイの例示的な実験フローダイヤグラムを示す概略図を図示する図である。 [0082]図２１Ａに図示の食作用アッセイを使用する、健康なドナーＬｅｕｋｏｐａｋから分離され、細胞外ＨＥＲ２結合ドメイン（ｓｃＦｖ）、細胞外Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８に由来する細胞外ヒンジドメイン、ＣＤ８膜貫通ドメイン、ならびにＦｃＲγに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメインおよびＰＩ３Ｋ動員ドメインを含有する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含有するＣＦＰをコードするレンチウイルスベクターを形質導入した、ＣＤ１４＋細胞の食作用のパーセンテージの例示的な棒グラフを図示する図である。形質導入細胞を、標的細胞（Ｊｕｒｋａｔ（ＨＥＲ２－）またはＳＫＯＶ３（ＨＥＲ２＋））と一晩インキュベートした。ＳＫＯＶ３細胞の食作用を示すが、Ｊｕｒｋａｔ細胞の食作用は示さない、細胞の例示的な蛍光顕微鏡画像も図示する。 [0083]図２１Ａに図示の食作用アッセイを実施した後の食作用を示す例示的なフローサイトメトリーデータ（ＣＳＦＥ 対 ＰＥ）を図示する図である。健康なドナーであるＬｅｕｋｏｐａｋから分離された、形質導入ＣＤ１４＋細胞を、ＣＦＳＥ標識ＨＥＲ２＋ ＳＫＯＶ３卵巣腫瘍細胞およびＣＦＳＥ標識ＨＥＲ２－Ｊｕｒｋａｔ細胞と一晩インキュベートした。図２１Ａに図示の実験における標的細胞の細胞死パーセントを示す例示的な棒グラフも図示する。 図２１Ｃ－１の続き。 [0084]ＣＦＰ発現細胞が腫瘍部位に浸透する能力を調査するための、侵入後のＣＦＰ発現細胞の活性化を評価するための、ＭＳＴＯ中皮腫動物モデル実験の例示的な実験フローダイヤグラムを示す概略図を図示する図である。 [0085]健康なドナーＬｅｕｋｏｐａｋから分離され、細胞外ＨＥＲ２結合ドメイン（ｓｃＦｖ）、細胞外Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８に由来する細胞外ヒンジドメイン、ＣＤ８膜貫通ドメイン、ならびにＦｃＲγに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメインおよびＰＩ３Ｋ動員ドメインを含有する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含有するＣＦＰをコードするレンチウイルスベクターを形質導入した、ＣＦＳＥ標識ＣＤ１４＋細胞を、ＭＳＴＯ担腫瘍ＮＳＧマウスに投与して２４時間後に取り出された腫瘍試料のバイオイメージングを示す蛍光顕微鏡画像を図示する図である。形質導入細胞は腫瘍に遊走し、腫瘍細胞周囲に蓄積することが観察された。 [0086]健康なドナーＬｅｕｋｏｐａｋから分離され、細胞外ＨＥＲ２結合ドメイン（ｓｃＦｖ）、細胞外Ｆｌａｇタグ、ＣＤ８に由来する細胞外ヒンジドメイン、ＣＤ８膜貫通ドメイン、ならびにＦｃＲγに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメインおよびＰＩ３Ｋ動員ドメインを含有する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含有するＣＦＰをコードするレンチウイルスベクターを形質導入した、ＣＦＳＥ標識ＣＤ１４＋細胞を、ＭＳＴＯ担腫瘍ＮＳＧマウスに投与して２４時間後に取り出された脾臓試料のバイオイメージングを示す蛍光顕微鏡画像を図示する図である。形質導入細胞は脾臓に遊走することが観察された。細胞注入の２４時間後に脾臓から分離されたＣＦＳＥ標識細胞もフローサイトメトリーによって調べた。脾臓のＣＦＳＥ標識細胞は、ＨＬＡ、ＣＤ１４、およびＣＤ３０３の発現を維持した。興味深いことには、ＣＣＲ２発現は、ＣＤ３７０（ＣＬＥＣ９Ａ）が同時に増加すると共に低下することが観察され、このことによって、細胞が脾臓に遊走し、Ｔ細胞応答を刺激することが可能なプロフェッショナルＡＰＣに発達することが、潜在的に示唆される。興味深いことには、ＣＤ２０６（マンノース）発現はＣＤ４５と同様に低下することが観察された。マンノース受容体発現の減少は、Ｍ１表現型への分化に関連付けることができる。 [0087]ＭＳＴＯ中皮腫動物モデル実験の例示的な実験フローダイヤグラムを示す概略図を図示する図である。抗ＨＥＲ２ ＣＦＰを発現する表示された量のヒト初代単球による処置を、腫瘍播種後２１日目に開始した。ＩＶＩＳイメージングを使用して腫瘍量を測定した。 [0088]図２３に示す実験による経時的な腫瘍サイズのグラフを図示する図である。抗ＨＥＲ２ＣＦＰを発現するヒト初代単球の注入は、対照処置動物と比較して腫瘍進行の遅延に関連付けられた。 [0089]標的細胞ＣＤ４７受容体ＳＩＲＰ－アルファ（ＳＩＲＰα）媒介性シグナル伝達による食作用受容体の阻害を指示する、ダイヤグラムを図示する図である。 [0090]組換えドミナントネガティブＣＦＰ構築物の設計の図形表現（上パネル）、およびマクロファージで発現される組換えＣＦＰタンパク質による内在性ＳＩＲＰαの阻害を示す、図形表現を図示する図である。ＣＦＰは、標的細胞においてＣＤ４７を結合することが可能な細胞外ＳＩＲＰαドメイン、ＳＩＲＰα ＴＭドメインを有するが、細胞内シグナル伝達ドメインを欠如する。 [0091]対照およびドミナントネガティブＣＦＰ形質導入細胞による相対食作用に関する例としての予想される結果を示す図である。 [0092]対照およびドミナントネガティブＣＦＰ形質導入細胞による標的細胞溶解（Ｅ：Ｔ、エフェクター：標的）に関する例としての予想される結果を示す図である。 [0093]ドミナントネガティブＣＦＰ形質導入マクロファージでの処置後の、腫瘍モデルにおけるマウス生存の予想される結果の例を示す図である。 [0094]標的細胞においてＣＤ４７を結合することが可能なＳＩＲＰα細胞外ドメイン、ＳＩＲＰα ＴＭドメインを含むが、細胞内ＳＩＲＰαシグナル伝達ドメインを欠如する、組換えＣＦＰ、ＳＩＲＰα－ＰＩ３Ｋ、（上パネル）の設計に関する図形表現を図示する図である。ＣＦＰは、細胞内末端で、ＰＩ３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）結合ドメインを有する細胞内シグナル伝達ドメインと融合される。ＢＤ：結合ドメイン。下パネルは、マクロファージで発現される組換えＣＦＰタンパク質による内在性ＳＩＲＰαの阻害を示す、図形表現を示す。 [0095]対照およびＳＩＲＰα－ＰＩ３Ｋ ＣＦＰ形質導入細胞による相対食作用に関する予想される結果の例を示す図である。 [0096]対照およびＳＩＲＰα－ＰＩ３Ｋ ＣＦＰ形質導入細胞による相対Ａｋｔリン酸化に関する予想される結果の例を示す図である。 [0097]対照（空のベクターを形質導入される）マクロファージと比較した、ＣＦＰ（インテグリン－ＣＡＲ）を発現する細胞による腫瘍細胞の溶解の増加に関する予想される結果を示す図である。 [0098]ＳＩＲＰα－ＰＩ３Ｋ ＣＦＰ形質導入マクロファージでの処置後、または無処置対照での、腫瘍のマウス異種移植モデルにおける予想される生存曲線を示す図である。 [0099]上パネルは、ＣＤ４７を結合することが可能なＳＩＲＰα細胞外ドメイン、ＳＩＲＰα ＴＭドメインを含むが、細胞内ＳＩＲＰαシグナル伝達ドメインを欠如する、組換えＣＦＰ、（ＳＩＲＰα－Ｍ１）（上パネル）の設計に関する図形表現を図示する図である。ＣＦＰは、炎症促進性ドメインを有する細胞内シグナル伝達ドメインを含有する。下パネルは、骨髄性細胞（例えば、マクロファージ）で発現される場合の組換えＣＦＰタンパク質による内在性ＳＩＲＰαの阻害を示す、図形表現を示す図である。炎症促進性ドメインは、Ｍ１極性化を誘導することができる。 [00100]ベクター対照と比較して、骨髄性細胞（例えば、マクロファージ）にＳＩＲＰα－Ｍ１を形質導入される場合の、Ｍ１状態マーカー発現の増加を示すフローサイトメトリーアッセイに関する予想される結果の例を示す図である。 [00101]ベクター対照と比較して、骨髄性細胞（例えば、マクロファージ）にＳＩＲＰα－Ｍ１を形質導入される場合の、炎症促進性マーカーの増加を示すフローサイトメトリーアッセイに関する予想される結果の例を示す図である。 [00102]対照（空のベクターを形質導入される）骨髄性細胞（例えば、マクロファージ）と比較した、ＳＩＲＰα－Ｍ１を発現する細胞による腫瘍細胞の溶解の増加に関する予想される結果を示す図である。 [00103]ＳＩＲＰα－Ｍ１形質導入骨髄性細胞（例えば、マクロファージ）での処置後、または無処置対照での、腫瘍のマウス異種移植モデルにおける予想される生存曲線を示す図である。 [00104]上パネルは、ＳＩＲＰαβ鎖と融合された、がん抗原に特異的な細胞外ｓｃＦｖを含む、受容体ベースのＣＦＰ、ＳＩＲＰαβの例示的な概略図ダイヤグラムを図示する図である。ＣＤ４７受容体ＳＩＲＰαの細胞外部分は、がん抗原に特異的なｓｃＦｖに融合される。ＳＩＲＰαのＥＣＤは、ＳＩＲＰβの膜貫通ドメインと融合される。ＣＦＰの細胞内ドメインは、ＳＩＲＰβに由来する細胞内ドメインを含む。ｓｃＦｖと標的リガンドとの結合によるＣＦＰの活性化は、ＳＩＲＰβ細胞内ドメインを活性化し、ＤＡＰ１２の活性化を通して標的細胞の食作用を誘発する。下パネルは、骨髄性細胞（マクロファージなど）で発現される組換えＳＩＲＰαβタンパク質の図形表現を示す図である。 [00105]ベクター対照と比較した、食作用受容体融合タンパク質ＳＩＲＰα□の図形表現を示す図である。 [00106]対照（空のベクターを形質導入される）マクロファージと比較した、ＳＩＲＰα□形質導入マクロファージによる標的細胞の溶解の増加に関する予想される結果を示す図である。 [00107]ＳＩＲＰαβ形質導入マクロファージでの処置後、または無処置対照での腫瘍のマウス異種移植モデルにおける生存曲線を図示する予想される結果を示す図である。 [00108]調節性エレメント配列、ＣＦＰをコードする配列、Ｔ２Ａをコードする配列、およびシアリダーゼをコードする配列を含む、核酸構築物の例示的な概略図ダイヤグラムを図示する図である、Ｔ２Ａ配列は、翻訳時にＣＦＰからのシアリダーゼの切断を可能にする。 [00109]分泌されたシアリダーゼの存在下での標的細胞の食作用貪食の増強に関する図形表現を図示する図である。 [00110]シアリダーゼの存在下での、ＣＦＰを発現する操作された骨髄性細胞による標的細胞の溶解の増強を示す予想される結果を図示する図である。 [00111]活性化された単球（例えば、マクロファージ）における発現のための調節性エレメントを備える、シアリダーゼをコードする核酸構築物の例示的な概略図ダイヤグラムを図示する図である。 [00112]食細胞におけるＮＦ－カッパＢ（ＮＦ－κＢ）活性化の結果としての標的細胞の食作用貪食の増強に関する図形表現を図示する図である。ＮＦ－カッパＢの活性化は、シアリダーゼをコードする核酸構築物の発現を活性化する。 [00113]３’ＵＴＲに調節性エレメントを備える、シアリダーゼをコードする核酸構築物の例示的な概略図ダイヤグラムを図示する図である。ＡＲＥドメインは、ＲＮＡ結合タンパク質の結合配列モチーフを有するが、これは、構築物の標的発現に使用することができると共に、さらにはｍＲＮＡ半減期の期間を延長または短縮することができる。 [00114]図６Ｆに示したシアリダーゼ構築物を発現する結果としての、標的細胞の食作用貪食の増強に関する図形表現の図である。 [00115]ＦｃＲα鎖と融合された、がん抗原に特異的な細胞外ｓｃＦｖを含む、ＦｃＲαベースＣＦＰの例示的な概略図ダイヤグラムを図示する図である（上パネル）。ＦｃＲα鎖は細胞内ドメインを欠如する。膜貫通ドメインは、マクロファージにおける発現のために内在性のＦｃγ受容体膜貫通ドメインと共に三量体化する。ｓｃＦｖと標的抗原との結合によるＣＦＰの活性化は、ＦｃＲα－Ｆｃγ受容体を活性化し、これによって、標的細胞の食作用を誘発する。下パネルは、骨髄性細胞（例えば、マクロファージ）で発現される組換えＦｃＲα－ＣＦＰに関する図形表現を示す図である。 [00116]ベクター対照と比較した、ＣＦＰ（ＦｃＲα－ＣＡＲ）を発現する細胞の相対食作用活性に関する図形表現を図示する図である。 [00117]対照（空のベクターを形質導入される）骨髄性細胞（例えば、マクロファージ）と比較した、ＣＦＰ（ＦｃＲα－ＣＡＲ）形質導入骨髄性細胞（例えば、マクロファージ）による標的細胞の溶解の増加に関する予想される結果を示す図である。 [00118]ＣＦＰ（ＦｃＲα－ＣＡＲ）形質導入骨髄性細胞（例えば、マクロファージ）での処置後、または無処置対照での腫瘍のマウス異種移植モデルにおける生存曲線を図示する予想される結果を示す図である。 [00119]ＴＲＥＭ １／２／３のＥＣＤと融合された、がん抗原に特異的な細胞外ｓｃＦｖを含む、ＣＦＰ（ＴＲＥＭ－ＣＡＲ）の例示的な概略図ダイヤグラムを図示する図である（上パネル）。ＣＦＰは、ＴＲＥＭ １／２／３のＴＭおよびＩＣＤを含む。ＴＲＥＭの膜貫通ドメインは、内在性のＤＡＰ１２膜貫通ドメインと共に三量体化し、これによって、食作用を促進し、炎症を調節する。ｓｃＦｖが標的抗原に結合することによるＣＦＰの活性化は、ＴＲＥＭ媒介性内在性ＤＡＰ１２シグナル伝達を活性化し、これによって、標的細胞の食作用を誘発する。下パネルは、骨髄性細胞（マクロファージなど）で発現した組換えＣＦＰ（ＴＲＥＭ－ＣＡＲ）に関する図形表現を示す図である。 [00120]ベクター対照と比較した、ＣＦＰ（ＴＲＥＭ－ＣＡＲ）を発現する細胞の相対食作用活性に関する図形表現を図示する図である。 [00121]対照（空のベクターを形質導入される）骨髄性細胞（例えば、マクロファージ）と比較した、ＣＦＰ（ＴＲＥＭ－ＣＡＲ）形質導入骨髄性細胞（例えば、マクロファージ）による標的細胞の溶解の増加に関する予想される結果を示す図である。 [00122]ＣＦＰ（ＴＲＥＭ－ＣＡＲ）形質導入骨髄性細胞（例えば、マクロファージ）での処置後、または無処置対照での腫瘍のマウス異種移植モデルにおける生存曲線を図示する予想される結果を示す図である。 [00123]カスパーゼ動員ＣＦＰ（カスパーゼ－ＣＡＲ）の例示的な概略図を示す図である。構築物は、Ｎ末端からＣ末端までのシグナルペプチド、抗原特異的ｓｃＦｖ、ヒンジ領域（例えば、ＣＤ８由来の）、ＴＭ（例えば、ＣＤ８由来の）領域、食作用シグナル伝達ドメインを含有するＩＴＡＭ（例えば、ＦｃＲγ）、バイシストロニックな発現のためのＴ２Ａ配列、ＳＨ２ドメイン、カスパーゼ切断配列およびプロカスパーゼ、から構成される（上パネル）。マクロファージに形質導入されると、この構築物はＣＦＰとＳＨ２－プロカスパーゼを共発現することになる。プロカスパーゼは静止状態で自動抑制される。腫瘍表面抗原のＣＡＲ受容体への結合は、ＩＴＡＭチロシンモチーフのリン酸化を引き起こし、ＳＨ２融合プロカスパーゼの動員を招く。プロカスパーゼのクラスター化は、自己切断と活性化を引き起こす。ＳＨ２とプロカスパーゼの間のリンカーも認識部位で切断されることになる。活性化されたカスパーゼ１／４／５は強い炎症を作動させる（下パネル）。 [00124]ヒト初代骨髄性細胞（例えば、マクロファージ）が標的腫瘍細胞と共培養される場合の、空のベクターと比較した、カスパーゼ動員ＣＦＰ（カスパーゼ－ＣＡＲ）を発現する細胞における炎症性遺伝子発現の増加を図示する予想される結果を示す図である。ＥＬＩＳＡによるサイトカインプロファイリングは、ベクター対照と比較して炎症促進性のサイトカインおよびケモカインの分泌の増加を示す。 [00125]ヒト初代骨髄性細胞（例えば、マクロファージ）が標的腫瘍細胞と共培養される場合の、空のベクターと比較した、カスパーゼ動員ＣＦＰ（カスパーゼ－ＣＡＲ）を発現する細胞における炎症促進性細胞表面マーカー発現の増加を図示する予想されるフローサイトメトリー結果を示す図である。 [00126]対照（空のベクターを形質導入される）骨髄性細胞（例えば、マクロファージ）と比較した、カスパーゼ動員ＣＦＰ（カスパーゼ－ＣＡＲ）形質導入骨髄性細胞（例えば、マクロファージ）による標的腫瘍細胞の溶解の増加に関する予想される結果を示す図である。 [00127]カスパーゼ動員ＣＦＰ（カスパーゼ－ＣＡＲ）形質導入マクロファージでの処置後、または無処置対照での腫瘍のマウス異種移植モデルにおける生存曲線を図示する予想される結果を示す図である。 [00128]ＣＦＰ構築物の例示的なモジュラー設計の図形例示を図示する図である。 [00129]ＣＦＰ構築物の例示的なモジュラー設計の図形例示を図示する図である。 [00130]ＣＦＰ構築物の例示的なモジュラー設計の図形例示を図示する図である。

[00131]全ての用語は、当業者によって理解されるであろう通りに理解されることを意図する。他に定義しない限り、本明細書で使用する全ての技術および科学用語は、本開示が属する当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。

[00132]本明細書で使用する節の見出しは構成目的のみのためであり、記載した主題を制限すると解釈されない。
[00133]本開示の様々な特徴が単一の実施形態の文脈で記載され得るが、該特徴は別々にまたは任意の好適な組合せでも提供され得る。反対に、明確にするために、本開示は別々の実施形態の文脈で本明細書に記載され得るが、本開示は単一の実施形態でも実行され得る。

[00134]本明細書における「一部の実施形態（some embodiments）」、「一実施形態（an embodiment）」、「一実施形態（one embodiment）」または「他の実施形態（other embodiments）」との言及は、実施形態と関連して記載される特性、構造、または特徴が、必ずしも全ての実施形態ではないが、本開示の少なくとも一部の実施形態に含まれることを意味する。

[00135]本明細書および請求項（複数可）で使用する場合、用語「含む（comprising）」（「含む（comprise）」および「含む（comprises）」などの含む（comprising）のいずれかの形態）、「有する（having）」（「有する（have）」および「有する（has）」などの有する（having）のいずれかの形態）、「含む（including）」（「含む（includes）」および「含む（include）」などの含む（including）のいずれかの形態）または「含有する（containing）」（「含有する（contains）」および「含有する（contain）」などの含有する（containing）のいずれかの形態）は、包括的または開放的であり、さらなる、列挙していないエレメントまたは方法ステップを除外しない。本明細書で議論する任意の実施形態が、本開示の任意の方法または組成物に関して実行され得ると考えられ、逆の場合も同じである。さらに、本開示の組成物は本開示の方法を達成するために使用され得る。

[00136]本明細書で使用される場合、用語「約（about）」または「およそ（approximately）」は、例えばパラメーター、量、一時的な期間等の測定可能な値に言及する場合、そのようなバリエーションが本開示の実施に適切である限りは、特定の値のおよび特定の値からの＋／－３０％またはそれ以下、＋／－２０％またはそれ以下、＋／－１０％またはそれ以下、＋／－５％またはそれ以下、または＋／－１％またはそれ以下のバリエーションを包含することを意味する。修飾語句「約（about）」または「およそ（approximately）」を付ける値が、それ自体も特に開示されることが理解される。

[00137]本明細書では、標的細胞に特異的に結合するように設計された、操作された骨髄性細胞（限定はされないが、好中球、単球、骨髄性樹状細胞（ｍＤＣ）、脂肪細胞およびマクロファージを含む）を提供する。操作された骨髄性細胞は、直接的に（例えば食作用により）および／または間接的に（例えばＴ細胞を活性化することにより）標的細胞を攻撃および死滅することができる。一部の実施形態では、標的細胞はがん細胞である。

[00138]がんは、本開示に詳細に記載する例示的な一実施形態であるが、本明細書に記載の方法および技術は、体内の感染、またはそうでなければ疾患細胞の標的化に有用であると考えられる。同様に、操作された細胞を使用する治療およびワクチン組成物が、本明細書に記載される。

[00139]本明細書では、がんなどの疾患または状態を処置するための組成物および方法を提供する。本明細書で提供する組成物および方法は、限定はされないが、好中球、単球、骨髄性樹状細胞（ｍＤＣ）、脂肪細胞およびマクロファージを含むヒト骨髄性細胞を利用し、がん細胞などの疾患細胞を標的化する。本明細書で提供する組成物および方法は、Ｔ細胞活性化および動員、エフェクター免疫細胞活性化（例えば、ＣＤ８Ｔ細胞およびＮＫ細胞活性化）、抗原交差提示、炎症応答の増強、調節性Ｔ細胞の減少および食作用を含む、様々なメカニズムによって、がん細胞などの疾患細胞および／または疾患組織を除去する。例えば、骨髄性細胞を使用して、がん細胞に対する免疫応答を持続することができる。

[00140]本明細書では、食作用受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）、スカベンジャー受容体（ＳＲ）融合タンパク質（ＳＦＰ）、インテグリン受容体（ＩＲ）融合タンパク質（ＩＦＰ）またはカスパーゼ動員受容体（カスパーゼ－ＣＡＲ）融合タンパク質などのキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物を提供する。組換え核酸によってコードされるＣＦＰは、標的細胞の抗原に結合する抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含み得る。細胞外ドメインは、ＣＤ２、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ６８、食作用受容体、スカベンジャー受容体またはインテグリン受容体などの受容体に由来するヒンジドメインまたは細胞外ドメインに融合され得る。組換え核酸によってコードされるＣＦＰは、ＣＤ２、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ６８、食作用受容体、スカベンジャー受容体またはインテグリン受容体に由来する膜貫通ドメインなどの膜貫通ドメインをさらに含み得る。一部の実施形態では、組換え核酸によってコードされるＣＦＰは、食作用受容体、スカベンジャー受容体またはインテグリン受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどの細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインをさらに含む。例えば、細胞内ドメインは、食作用受容体、スカベンジャー受容体またはインテグリン受容体に由来する１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。例えば、細胞内ドメインは、食作用活性、炎症応答、一酸化窒素産生、インテグリン活性化、エフェクター細胞遊走の増強（例えばケモカイン受容体発現を介して）、抗原提示、および／または交差提示の増強を促進する１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。一部の実施形態では、ＣＦＰは食作用受容体融合タンパク質（ＰＦＰ）である。一部の実施形態では、ＣＦＰは食作用スカベンジャー受容体融合タンパク質（ＰＦＰ）である。一部の実施形態では、ＣＦＰはインテグリン受容体融合タンパク質（ＩＦＰ）である。一部の実施形態では、ＣＦＰは炎症受容体融合タンパク質である。一部の実施形態では、組換え核酸によってコードされるＣＦＰは、動員ドメインを含む細胞内ドメインをさらに含む。例えば、細胞内ドメインは、１つまたは複数のＰＩ３Ｋ動員ドメイン、カスパーゼ動員ドメインまたはカスパーゼ活性化および動員ドメイン（ＣＡＲＤ）を含み得る。

[00141]本明細書では、ＣＦＰをコードする組換え核酸を含む組成物であって、ＣＦＰが、（ｉ）膜貫通ドメイン、および（ｉｉ）食作用受容体細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む、食作用または係留受容体（ＰＲ）サブユニット（例えば、食作用受容体融合タンパク質（ＰＦＰ））、ならびに抗原、例えば標的細胞の抗原または標的細胞に提示される抗原に特異的な細胞外抗原結合ドメインを含み、融合受容体の細胞外抗原結合ドメインによる標的への抗原結合が食作用受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化するように、膜貫通ドメインおよび細胞外抗原結合ドメインが作動可能に連結されている組成物を提供する。

[00142]本明細書では、ＣＦＰをコードする組換え核酸配列を含む組成物であって、ＣＦＰが、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含むＰＲサブユニットを含む、食作用または係留受容体（ＰＲ）サブユニット（例えば、食作用受容体融合タンパク質（ＰＦＰ））、ならびに標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインを含み、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインが作動可能に連結されており；ＣＦＰが標的細胞の抗原に結合すると、ＣＦＰを発現する好中球、単球、骨髄性樹状細胞（ｍＤＣ）、肥満細胞またはマクロファージなどの骨髄性細胞の殺作用または食作用活性が、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して少なくとも５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、１５０％、２００％、２５０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、または１０００％より多く増加する組成物を提供する。

[00143]本明細書では、ＣＦＰをコードする組換え核酸配列を含む組成物であって、ＣＦＰが、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含むＰＲサブユニットを含む、食作用または係留受容体（ＰＲ）サブユニット（例えば、食作用受容体融合タンパク質（ＰＦＰ））、ならびに標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインを含み、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインが作動可能に連結されており；ＣＦＰが標的細胞の抗原に結合すると、ＣＦＰを発現する好中球、単球、骨髄性樹状細胞（ｍＤＣ）、肥満細胞またはマクロファージなどの骨髄性細胞の殺作用または食作用活性が、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して少なくとも１．１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、５０倍、７５倍、または１００倍増加する組成物を提供する。

[00144]一態様では、本明細書では、医薬組成物であって、（ａ）組換えポリ核酸がキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする配列を含み、ＣＦＰが（ｉ）抗ＣＤ５結合ドメインを含む細胞外ドメイン、および（ｉｉ）細胞外ドメインに作動可能に連結されている膜貫通ドメインを含む、組換えポリ核酸を含む好中球、単球、骨髄性樹状細胞（ｍＤＣ）、肥満細胞またはマクロファージ細胞などの骨髄性細胞、ならびに（ｂ）骨髄性細胞がＣＦＰを発現し、ＣＦＰを発現しない骨髄性細胞と比較して、ＣＤ５を発現する標的細胞の食作用の少なくとも１．１倍の増加を示す、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。一部の実施形態では、ＣＤ５結合ドメインは、抗体の抗原結合断片、Ｆａｂ断片、ｓｃＦｖドメインまたはｓｄＡｂドメインを含むＣＤ５結合タンパク質である。一部の実施形態では、ＣＤ５結合ドメインは、（ｉ）配列番号１のまたは配列番号１と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変重鎖（Ｖ_Ｈ）配列；および（ｉｉ）配列番号２のまたは配列番号２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）配列を含む、ｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、ＣＤ５結合ドメインは、配列番号３３または配列番号３３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、ＨＥＲ２結合ドメインは、（ｉ）配列番号８のまたは配列番号８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する可変重鎖（Ｖ_Ｈ）配列、および（ｉｉ）配列番号９のまたは配列番号９と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）配列を含む、ｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、ＣＤ５結合ドメインは、配列番号３２を含むまたは配列番号３２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは細胞内ドメインをさらに含み、細胞内ドメインは１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、細胞内ドメインを含む野生型タンパク質は細胞外ドメインを含まない。

[00145]一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＣＤ８に由来するヒンジドメインをさらに含み、ヒンジドメインは膜貫通ドメインおよび抗ＣＤ５結合ドメインに作動可能に連結されている。一部の実施形態では、細胞外ヒンジドメインは、配列番号７のまたは配列番号７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する配列を含む。

[00146]一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号３０のまたは配列番号３０と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する膜貫通ドメインに融合した細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号３１のまたは配列番号３１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する膜貫通ドメインに融合した細胞外ドメインを含む。

[00147]一部の実施形態では、膜貫通ドメインはＣＤ８膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号６もしくは２９のまたは配列番号６もしくは２９と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１８のまたは配列番号１８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号３４のまたは配列番号３４と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１９のまたは配列番号１９と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する配列を含む。

[00148]一部の実施形態では、ＣＦＰは、食作用シグナル伝達ドメインを含む１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、食作用シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲα、およびＢａｉ１以外の受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、食作用シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲ、およびＢａｉ１以外の受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、食作用シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ以外の受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、食作用シグナル伝達ドメインは、ＦｃＲγ、ＦｃＲα、およびＦｃＲεに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、食作用シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号３、２０、２７および２８のいずれか１つのまたは配列番号３、２０、２７および２８のいずれか１つと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、炎症促進性シグナル伝達ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＰＩ３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）動員ドメインを含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、配列番号４のまたは配列番号４と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＣＤ４０の細胞内シグナル伝達ドメインに由来する。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、配列番号５のまたは配列番号５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２１のまたは配列番号２１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２３のまたは配列番号２３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

[00149]一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号１４のまたは配列番号１４と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号１５のまたは配列番号１５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号１６のまたは配列番号１６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２４のまたは配列番号２４と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号２５のまたは配列番号２５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する配列を含む。

[00150]一部の実施形態では、ＣＦＰは、（ａ）（ｉ）ＣＤ５に特異的に結合するｓｃＦｖ、および（ｉｉ）ＣＤ８に由来するヒンジドメイン；ＣＤ２８に由来のするヒンジドメインまたはＣＤ６８由来の細胞外ドメインの少なくとも一部を含む細胞外ドメイン；（ｂ）ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２膜貫通ドメインまたはＣＤ６８膜貫通ドメイン；および（ｃ）少なくとも２つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含み、少なくとも２つの細胞内シグナル伝達ドメインは、（ｉ）ＦｃＲα、ＦｃＲγまたはＦｃＲεに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、および（ｉｉ）第２の細胞内シグナル伝達ドメイン：ＰＩ３Ｋ動員ドメインを含む（Ａ）、またはＣＤ４０に由来する（Ｂ）を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、上記の（ｃ）の代替として、少なくとも２つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含み、少なくとも２つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインは、（ｉ）食作用受容体細胞内ドメインに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、および（ｉｉ）ＰＩ３Ｋ動員ドメインを含む（Ａ）、またはＣＤ４０に由来する（Ｂ）を含むスカベンジャー受容体食作用受容体細胞内ドメインに由来する第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。細胞内シグナル伝達ドメインが由来し得る例示的なスカベンジャー受容体は表２に見出すことができる。一部の実施形態では、ＣＦＰは、自然免疫受容体の細胞内シグナル伝達ドメインに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

[00151]一部の実施形態では、組換えポリ核酸はｍＲＮＡである。一部の実施形態では、組換えポリ核酸はｃｉｒｃＲＮＡである。一部の実施形態では、組換えポリ核酸はウイルスベクターである。一部の実施形態では、組換えポリ核酸はウイルスベクターを介して送達される。

[00152]一部の実施形態では、骨髄性細胞はＣＤ１４＋細胞、ＣＤ１４＋／ＣＤ１６－細胞、ＣＤ１４＋／ＣＤ１６＋細胞、ＣＤ１４－／ＣＤ１６＋細胞、ＣＤ１４－／ＣＤ１６－細胞、樹状細胞、Ｍ０マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、Ｍ１マクロファージまたはモザイク骨髄性細胞／マクロファージ／樹状細胞である。

[00153]一態様では、本明細書は、ヒト対象に医薬組成物を投与するステップを含む、処置を必要とするヒト対象においてがんを処置する方法であって、医薬組成物が、（ａ）組換えポリ核酸配列を含む骨髄性細胞であって、ポリ核酸配列がキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする配列を含み、ＣＦＰが、（ｉ）抗ＣＤ５結合ドメインを含む細胞外ドメイン、および（ｉｉ）細胞外ドメインに作動可能に連結している膜貫通ドメインを含む、骨髄性細胞、ならびに（ｂ）薬学的に許容される担体を含み、骨髄性細胞がＣＦＰを発現する方法を提供する。

[00154]一部の実施形態では、ＣＦＰが対象の標的がん細胞により発現されたＣＤ５に結合すると、骨髄性細胞の殺作用または食作用活性が、ＣＦＰを発現しない骨髄性細胞と比較して２０％より多く増加する。一部の実施形態では、腫瘍の増殖はヒト対象において阻害される。

[00155]一部の実施形態では、がんはＣＤ５＋がんである。一部の実施形態では、がんは、白血病、Ｔ細胞リンパ腫、またはＢ細胞リンパ腫である。
[00156]一部の実施形態では、抗ＣＤ５結合ドメインは、抗体の抗原結合断片、ｓｃＦｖドメイン、Ｆａｂ断片、またはｓｄＡｂドメインを含むＣＤ５結合タンパク質である。一部の実施形態では、抗ＣＤ５結合ドメインは、ＣＤ５のリガンド（例えば、ＣＤ５の天然のリガンド）などのＣＤ５に結合するタンパク質またはその断片である。

[00157]一部の実施形態では、ＣＦＰは、細胞内ドメインをさらに含み、細胞内ドメインは１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインは食作用シグナル伝達ドメインを含み、細胞内ドメインを含む野生型タンパク質は細胞外ドメインを含まない。

[00158]一部の実施形態では、食作用シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲαおよびＢａｉ１以外の受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、食作用シグナル伝達ドメインは、ＦｃＲγ、ＦｃＲαまたはＦｃＲεに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

[00159]一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインは炎症促進性シグナル伝達ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインはＰＩ３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）動員ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインはＣＤ８膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＣＤ８に由来するヒンジドメイン、ＣＤ２８に由来するヒンジドメインまたはＣＤ６８由来の細胞外ドメインの少なくとも一部を含む。

[00160]一部の実施形態では、ＣＦＰは、（ａ）（ｉ）ＣＤ５に特異的に結合するｓｃＦｖ、および（ｉｉ）ＣＤ８に由来するヒンジドメイン、ＣＤ２８に由来するヒンジドメインまたはＣＤ６８由来の細胞外ドメインの少なくとも１部を含む細胞外ドメイン；（ｂ）ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２膜貫通ドメインまたはＣＤ６８膜貫通ドメイン；および（ｃ）少なくとも２つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含み、少なくとも２つの細胞内シグナル伝達ドメインは、（ｉ）ＦｃＲγまたはＦｃＲεに由来する第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、および（ｉｉ）（Ａ）がＰＩ３Ｋ動員ドメインを含み、または（Ｂ）がＣＤ４０に由来する、第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、組換え核酸はｍＲＮＡまたはｃｉｒｃＲＮＡである。一部の実施形態では、骨髄性細胞は、ＣＤ１４＋細胞、ＣＤ１４＋／ＣＤ１６－細胞、ＣＤ１４＋／ＣＤ１６＋細胞、ＣＤ１４－／ＣＤ１６＋細胞、ＣＤ１４－／ＣＤ１６－細胞、樹状細胞、Ｍ０マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、Ｍ１マクロファージまたはモザイク骨髄性細胞／マクロファージ／樹状細胞である。

[00161]一部の実施形態では、方法は、ＣＤ４７アゴニスト、Ｒａｃを阻害する薬剤、Ｃｄｃ４２を阻害する薬剤、ＧＴＰａｓｅを阻害する薬剤、Ｆアクチン解離を促進する薬剤、ＰＦＰへのＰＩ３Ｋ動員を促進する薬剤、ＰＩ３Ｋ活性を促進する薬剤、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸の産生を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ１２活性を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ２５活性を促進する薬剤、ＳＨ３ＢＰ１活性を促進する薬剤、一次および／または二次リンパ器官におけるリンパ球の分離を促進する薬剤、二次リンパ器官においてナイーブＴ細胞およびセントラルメモリーＴ細胞の濃度を増加する薬剤、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択されるさらなる治療剤を投与するステップをさらに含む。

[00162]一部の実施形態では、骨髄性細胞は、（ａ）ＣＦＰと二量体化する内在性ペプチドまたはタンパク質、（ｂ）ＣＦＰと二量体化する非内在性ペプチドまたはタンパク質、および／または（ｃ）第２の組換えポリ核酸配列をさらに含み、第２の組換えポリ核酸配列は、ＣＦＰと相互作用するペプチドまたはタンパク質をコードする配列を含み；二量体化または相互作用がＣＦＰを発現しない骨髄性細胞と比較して、ＣＦＰを発現する骨髄性細胞による食作用を強める。

[00163]一部の実施形態では、骨髄性細胞は、（ｉ）エフェクター活性、交差提示、呼吸性バースト、ＲＯＳ産生、ｉＮＯＳ産生、炎症性メディエーター、細胞外小胞産生、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸産生、抗原を発現する標的細胞によるトロゴサイトーシス、食作用のＣＤ４７媒介性阻害に対する抵抗性、食作用のＬＩＬＲＢ１媒介性阻害に対する抵抗性、またはこれらの任意の組合せの増加；および／または（ｉｉ）ＩＬ－１、ＩＬ３、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＴＮＦα、サイトカインのＴＮＦファミリー、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＣＳＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ－１７、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、インターフェロン、ＭＨＣクラスＩタンパク質、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質、ＣＤ４０、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１１２、ＣＤ１５５、ＴＲＡＩＬ／ＴＮＦファミリー細胞死受容体、ＴＧＦβ、Ｂ７－ＤＣ、Ｂ７－Ｈ２、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＴＬ１Ａ、４１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＩＭ１、ＴＩＭ４、ＳＬＡＭ、ＰＤＬ１、ＭＭＰ（例えば、ＭＭＰ２、ＭＭＰ７およびＭＭＰ９）またはこれらの任意の組合せの発現の増加を示す。

[00164]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは食作用または係留受容体に由来するか、または細胞内シグナル伝達ドメインは食作用活性化ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲ－アルファ、またはＢａｉ１から選択される食作用受容体以外の受容体に由来する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦＲ１、ＭＤＡ５、ＣＤ４０、レクチン、デクチン１、ＣＤ２０６、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、Ｆｃα受容体Ｉ、ＣＲ１、ＣＤ３５、ＣＤ３ζ、補体受容体、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｔｉｍ－１、Ｔｉｍ－４およびＣＤ１６９からなる群から選択される受容体（例えば、食作用受容体）などのタンパク質に由来する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＩ３Ｋ動員ドメインではない炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む。

[00165]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインはＩＴＡＭドメイン含有受容体に由来する。
[00166]本明細書では、食作用または係留受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）などのＣＦＰをコードする組換え核酸を含む組成物であって、ＣＦＰが、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含むＰＲサブユニット、ならびに標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインを含み、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインが作動可能に連結されており；細胞内シグナル伝達ドメインがＭｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲα、またはＢａｉ１から選択される食作用受容体以外の食作用受容体に由来する組成物を提供する。

[0167]一部の実施形態では、ＣＦＰが標的細胞の抗原に結合すると、ＣＦＰを発現する細胞の殺作用活性が、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して少なくとも５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、１５０％、２００％、２５０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、または１０００％より多く増加する。一部の実施形態では、ＣＦＰが細胞で発現される場合、ＣＦＰが細胞の細胞膜へと機能的に組み込まれる。一部の実施形態では、ＣＦＰが標的細胞の抗原に結合すると、ＣＦＰを発現する細胞の殺作用活性が、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して少なくとも１．１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、５０倍、７５倍、または１００倍増加する。

[00168]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦＲ１、ＭＤＡ５、ＣＤ４０、レクチン、デクチン１、ＣＤ２０６、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、Ｆｃα受容体Ｉ、ＣＲ１、ＣＤ３５、ＣＤ３ζ、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｔｉｍ－１、Ｔｉｍ－４およびＣＤ１６９からなる群から選択される食作用受容体などの受容体に由来する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む。

[00169]本明細書では、食作用または係留受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）などのＣＦＰをコードする組換え核酸を含む組成物であって、ＣＦＰが、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含むＰＲサブユニット、ならびに標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインを含み、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインが作動可能に連結されており；細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＮＦＲ１、ＭＤＡ５、ＣＤ４０、レクチン、デクチン１、ＣＤ２０６、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、Ｆｃα受容体Ｉ、ＣＲ１、ＣＤ３５、ＣＤ３ζ、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｔｉｍ－１、Ｔｉｍ－４およびＣＤ１６９からなる群から選択される食作用受容体などの受容体に由来する組成物を提供する。

[00170]一部の実施形態では、ＣＦＰが標的細胞の抗原に結合すると、ＣＦＰを発現する細胞の殺作用活性が、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して少なくとも５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、１５０％、２００％、２５０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、または１０００％より多く増加する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲα、およびＢａｉ１から選択される食作用受容体以外の食作用受容体に由来する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ１９に由来するＰＩ３Ｋ動員ドメインなどのＰＩ３Ｋ動員ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＩ３Ｋ動員ドメインではない炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む。

[00171]本明細書では、食作用または係留受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）などのＣＦＰをコードする組換え核酸を含む組成物であって、ＣＦＰが、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含むＰＲサブユニット、ならびに標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインを含み、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインが作動可能に連結されており；細胞内シグナル伝達ドメインがＰＩ３Ｋ動員ドメインではない炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む組成物を提供する。

[00172]本明細書では、例えば、疾患細胞など標的細胞を標的化することができる操作された骨髄性細胞を生成するためなど、骨髄性細胞などの細胞で発現され得る食作用受容体融合タンパク質などの操作されたＣＦＰの組成物を提供する。

[00173]標的細胞は、例えば、がん細胞である。一部の実施形態では、操作された骨髄性細胞は、がん細胞の貪食後、その細胞表面上にがん抗原を提示し、Ｔ細胞を活性化することができる。「抗原」は、免疫応答を刺激することができる分子である。Ｔ細胞、ヘルパーＴリンパ球（ヘルパーＴ（ＴＨ）細胞）か細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）によって認識される抗原は、無傷のタンパク質として認識されないが、細胞表面のＭＨＣタンパク質（例えばクラスＩまたはクラスＩＩ ＭＨＣタンパク質）と会合する小ペプチドとして認識される。自然発生の免疫応答の過程において、抗原提示細胞（ＡＰＣ）のクラスＩＩ ＭＨＣ分子と会合して認識される抗原は細胞の外側から獲得され、内部移行され、クラスＩＩ ＭＨＣ分子と会合する小ペプチドへとプロセシングされる。

[0174]一部の実施形態では、ＣＦＰが標的細胞の抗原に結合すると、ＣＦＰを発現する細胞の殺作用活性が、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して少なくとも５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、１００％、１５０％、２００％、２５０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、または１０００％より多く増加する。一部の実施形態では、ＣＦＰが細胞で発現される場合、ＣＦＰが細胞の細胞膜へと機能的に組み込まれる。一部の実施形態では、ＣＦＰが標的細胞の抗原に結合すると、ＣＦＰを発現する細胞の殺作用活性が、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して少なくとも１．１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、５０倍、７５倍、または１００倍増加する。

[0175]一部の実施形態では、抗原を発現する標的細胞はがん細胞である。一部の実施形態では、抗原を発現する標的細胞は少なくとも直径０．８ミクロンである。
[0176]一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、抗原を発現する標的細胞の食作用の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、抗原を発現する標的細胞の食作用の少なくとも１．１倍の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、抗原を発現する標的細胞の食作用の少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍または５０倍の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、サイトカインの産生の増加を示す。一部の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－１、ＩＬ３、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＣＳＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ１７、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、インターフェロンおよびこれらの組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、エフェクター活性の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、交差提示の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質の発現の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ８０の発現の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ８６の発現の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＭＨＣクラスＩタンパク質の発現の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＴＲＡＩＬ／ＴＮＦファミリー細胞死受容体の発現の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、Ｂ７－Ｈ２の発現の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＬＩＧＨＴの発現の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＨＶＥＭの発現の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ４０の発現の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＴＬ１Ａの発現の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、４１ＢＢＬの発現の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＯＸ４０Ｌの発現の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＧＩＴＲＬ細胞死受容体の発現の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ３０Ｌの発現の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＴＩＭ４の発現の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＴＩＭ１リガンドの発現の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＳＬＡＭの発現の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ４８の発現の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ５８の発現の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ１５５の発現の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ１１２の発現の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＰＤＬ１の発現の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、Ｂ７－ＤＣの発現の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、呼吸性バーストの増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＲＯＳ産生の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ｉＮＯＳ産生の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ｉＮＯＳ産生の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、細胞外小胞産生の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、抗原を発現する標的細胞によるトロゴサイトーシスの増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、食作用のＣＤ４７媒介性阻害に対する抵抗性の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、食作用のＬＩＬＲＢ１媒介性阻害に対する抵抗性の増加を示す。一部の実施形態では、ＣＦＰを発現する細胞は、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸産生の増加を示す。

[0177]一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞外ドメインは、Ｉｇ結合ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＦｃＲγＩ、ＦｃＲγＩＩＡ、ＦｃＲγＩＩＢ、ＦｃＲγＩＩＣ、ＦｃＲγＩＩＩＡ、ＦｃＲγＩＩＩＢ、ＦｃＲｎ、ＴＲＩＭ２１、ＦｃＲＬ５結合ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞外ドメインは、ＦｃＲ細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞外ドメインは、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、ＦｃＲεまたはＦｃＲγ細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＦｃＲα（ＦＣＡＲ）細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＦｃＲβ細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＦＣＥＲＩ細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＦＤＧＲ１Ａ、ＦＣＧＲ２Ａ、ＦＣＧＲ２Ｂ、ＦＣＧＲ２Ｃ、ＦＣＧＲ３Ａ、またはＦＣＧＲ３Ｂ細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、インテグリンドメインまたはインテグリン受容体ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、１つまたは複数のインテグリンα１、α２、αＩＩｂ、α３、α４、α５、α６、α７、α８、α９、α１０、α１１、αＤ、αＥ、αＬ、αＭ、αＶ、αＸ、β１、β２、β３、β４、β５、β６、β７、またはβ８ドメインを含む。

[0178]一部の実施形態では、ＣＦＰは、膜貫通ドメインに作動可能に連結した細胞外ドメインおよび細胞外抗原結合ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、受容体の細胞外ドメイン、ヒンジ、スペーサーおよび／またはリンカーをさらに含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、食作用受容体の細胞外部分を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞外部分は、細胞内シグナル伝達ドメインが由来する受容体と同じ受容体に由来する。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、スカベンジャー受容体の細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、免疫グロブリンドメインを含む。一部の実施形態では、免疫グロブリンドメインは、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンヒンジ領域の細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、食作用貪食ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、多量体アセンブリー可能な構造を含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、多量体化の足場を含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、３００、３００、４００、または５００アミノ酸長である。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、最大５００、４００、３００、２００、または１００アミノ酸長である。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、標的細胞の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、抗体ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、受容体ドメイン、抗体ドメインを含み、抗体ドメインは機能的抗体断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ナノボディ、Ｖ_Ｈドメイン、Ｖ_Ｌドメイン、ＶＮＡＲドメイン、Ｖ_ＨＨドメイン、二重特異性抗体、ディアボディ、またはこれらの機能的断片もしくは組合せを含む。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインはリガンド、受容体の細胞外ドメインまたはアダプターを含む。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、単一の抗原に特異的な単一の細胞外抗原結合ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、少なくとも２つの細胞外抗原結合ドメインを含み、少なくとも２つの細胞外抗原結合ドメインのそれぞれが異なる抗原に特異的である。

[0179]一部の実施形態では、抗原は、がん関連抗原、系統関連抗原、病原性抗原または自己免疫抗原である。一部の実施形態では、抗原はウイルス抗原を含む。一部の実施形態では、抗原はＴリンパ球抗原である。一部の実施形態では、抗原は細胞外抗原である。一部の実施形態では、抗原は細胞内抗原である。一部の実施形態では、抗原は、チミジンキナーゼ（ＴＫ１）、ヒポキサンチン－グアニン ホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）、ムチン－１、ムチン－１６（ＭＵＣ１６）、ＭＵＣ１、上皮増殖因子受容体ｖＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、メソテリン、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）、ＥＢＮＡ－１、ＬＥＭＤ１、ホスファチジルセリン、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、卵胞刺激ホルモン受容体、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、エリスロポエチン産生肝細胞癌Ａ２（ＥｐｈＡ２）、ＥｐｈＢ２、ナチュラルキラー群２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）リガンド、ジシアロガングリオシド２（ＧＤ２）、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４５、ＣＤ５６ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９７、ＣＤ１１７、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ２１３Ａ２、ＣＤ２４８、ＣＤ２７６、ＰＳＣＡ、ＣＳ－１、ＣＬＥＣＬ１、ＧＤ３、ＰＳＭＡ、ＦＬＴ３、ＴＡＧ７２、ＥＰＣＡＭ、ＩＬ－１、インテグリン受容体、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲβ、ＳＳＥＡ－４、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロテアーゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧＭ３、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、Ｄｓｇ１、Ｄｓｇ３、ＩＧＬＬ１およびこれらの組合せからの抗原からなる群から選択される。一部の実施形態では、抗原は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＣＲ４、ＣＤ８、ＣＤ３０、ＣＤ４５、およびＣＤ５６からなる群から選択されるタンパク質の抗原である。一部の実施形態では、抗原は卵巣がん抗原またはＴリンパ腫抗原である。一部の実施形態では、抗原はインテグリン受容体の抗原である。一部の実施形態では、抗原は、α１、α２、αＩＩｂ、α３、α４、α５、α６、α７、α８、α９、α１０、α１１、αＤ、αＥ、αＬ、αＭ、αＶ、αＸ、β１、β２、β３、β４、β５、β６、β７、およびβ８からなる群から選択されるインテグリン受容体またはインテグリンの抗原である。一部の実施形態では、抗原は、インテグリン受容体リガンドの抗原である。一部の実施形態では、抗原は、フィブロネクチン、ビトロネクチン、コラーゲン、またはラミニンの抗原である。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、２つまたはそれ以上の異なる抗原に結合することができる。

[0180]一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｄｓｇ１またはＤｓｇ３などの自己抗原またはその断片を含む。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、受容体ドメインまたは抗体ドメインを含み、抗体ドメインは、Ｄｓｇ１またはＤｓｇ３などの自己抗原に結合する。

[0181]一部の実施形態では、膜貫通ドメインおよび細胞外抗原結合ドメインはリンカーを通して作動可能に連結されている。一部の実施形態では、膜貫通ドメインおよび細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ８α、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４のヒンジ領域などのリンカーを通して作動可能に連結されている。

[0182]一部の実施形態では、細胞外ドメインは多量体化足場を含む。
[0183]一部の実施形態では、膜貫通ドメインはＣＤ８膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインはＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインはＣＤ６８膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインはＣＤ２膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインはＦｃＲ膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインはＦｃＲγ膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインはＦｃＲα膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインはＦｃＲβ膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインはＦｃＲε膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、シンタキシン３またはシンタキシン４またはシンタキシン５などのシンタキシン由来の膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰが細胞で発現される場合、膜貫通ドメインは、内在性受容体の膜貫通ドメインとオリゴマー化する。一部の実施形態では、ＣＦＰが細胞で発現される場合、膜貫通ドメインは、外因性受容体の膜貫通ドメインとオリゴマー化する。一部の実施形態では、ＣＦＰが細胞で発現される場合、膜貫通ドメインは、内在性受容体の膜貫通ドメインと二量体化する。一部の実施形態では、ＣＦＰが細胞で発現される場合、膜貫通ドメインは、外因性受容体の膜貫通ドメインと二量体化する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞内シグナル伝達ドメインが由来するタンパク質とは異なるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞外ドメインが由来するタンパク質とは異なるタンパク質に由来する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは食作用受容体の膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインは同じタンパク質に由来する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞内シグナル伝達ドメインと同じタンパク質に由来する。一部の実施形態では、組換え核酸はＤＡＰ１２動員ドメインをコードする。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＤＡＰ１２とオリゴマー化する膜貫通ドメインを含む。

[0184]一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、少なくとも１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１または３２アミノ酸長である。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは最大１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１または３２アミノ酸長である。

[0185]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、食作用受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲα、およびＢａｉ１から選択される食作用受容体以外の食作用受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦＲ１、ＭＤＡ５、ＣＤ４０、レクチン、デクチン１、ＣＤ２０６、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、Ｆｃ－アルファ受容体Ｉ、ＣＲ１、ＣＤ３５、ＣＤ３ζ、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｔｉｍ－１、Ｔｉｍ－４およびＣＤ１６９からなる群から選択される食作用受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインはＰＩ３Ｋ動員ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインはスカベンジャー受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインはＣＤ４７阻害ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインはＲａｃ阻害ドメイン、Ｃｄｃ４２阻害ドメインまたはＧＴＰａｓｅ阻害ドメインを含む。一部の実施形態では、Ｒａｃ阻害ドメイン、Ｃｄｃ４２阻害ドメインまたはＧＴＰａｓｅ阻害ドメインは、ＰＦＰを発現する細胞の食作用カップにおいてＲａｃ、Ｃｄｃ４２またはＧＴＰａｓｅを阻害する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、Ｆ－アクチン解離活性化ドメイン、ＡＲＨＧＡＰ１２活性化ドメイン、ＡＲＨＧＡＰ２５活性化ドメインまたはＳＨ３ＢＰ１活性化ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインはホスファターゼ阻害ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインはＡＲＰ２／３阻害ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは少なくとも１つのＩＴＡＭドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上のＩＴＡＭドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、Ｆｃイプシロン受容体１鎖、Ｆｃイプシロン受容体２鎖、Ｆｃガンマ受容体１鎖、Ｆｃガンマ受容体２ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体２ｂ１鎖、Ｆｃガンマ受容体２ｂ２鎖、Ｆｃガンマ受容体３ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体３ｂ鎖、Ｆｃベータ受容体１鎖、ＴＹＲＯＢＰ（ＤＡＰ１２）、ＣＤ５、ＣＤ１６ａ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８９、ＣＤ２７８、ＣＤ６６ｄ、これらの機能的断片、およびこれらに対して少なくとも１つから２０以下の改変を有するこれらのアミノ酸配列のＩＴＡＭドメインから選択される少なくとも１つのＩＴＡＭドメインを含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＩＴＡＭドメインが、Ｓｒｃファミリーキナーゼリン酸化部位を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＩＴＡＭドメインが、Ｓｙｋ動員ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、Ｆ－アクチン脱重合活性化ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは酵素活性を欠如する。

[0186]一部の実施形態では、細胞内ドメインはＣＤ３ゼータ細胞内ドメインに由来するドメインを含まない。一部の実施形態では、細胞内ドメインはＭｅｒＴＫ細胞内ドメインに由来するドメインを含まない。一部の実施形態では、細胞内ドメインはＴＬＲ４細胞内ドメインに由来するドメインを含まない。一部の実施形態では、細胞内ドメインはＣＤ４７阻害ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＳＧＬ－１の細胞内領域などのインテグリンを活性化するドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＥＰＡＣおよびＣ３Ｇ由来などのＲａｐ１ ＧＴＰａｓｅを活性化するドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインはパキシリンに由来する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは接着斑キナーゼを活性化する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは単一の食作用受容体に由来する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは単一のスカベンジャー受容体に由来する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは食作用増強ドメインを含む。

[0187]一部の実施形態では、細胞内ドメインは炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、キナーゼ活性化ドメインまたはキナーゼ結合ドメインを含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＩＬ－１シグナル伝達カスケード活性化ドメインを含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９、ＴＲＩＦ、ＲＩＧ－１、ＭＹＤ８８、ＭＡＬ、ＩＲＡＫ１、ＭＤＡ－５、ＩＦＮ受容体、ＳＴＩＮＧ、ＮＬＲＰファミリーメンバー、ＮＬＲＰ１－１４、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、パイリン、ＡＩＭ２、ＮＬＲＣ４、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＥＲＩＧ、ＣＤ４０、Ｔａｎｋ１結合キナーゼ（ＴＢＫ）、カスパーゼドメイン、プロカスパーゼ結合ドメインまたはこれらの任意の組合せに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

[0188]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、コネキシン（Ｃｘ）タンパク質に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含む。例えば、細胞内ドメインは、Ｃｘ４３、Ｃｘ４６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ３３、Ｃｘ５０、Ｃｘ５９、Ｃｘ６２、Ｃｘ３２、Ｃｘ２６、Ｃｘ３１、Ｃｘ３０．３、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３０、Ｃｘ２５、Ｃｘ４５、Ｃｘ４７、Ｃｘ３１．３、Ｃｘ３６、Ｃｘ３１．９、Ｃｘ３９、Ｃｘ４０．１またはＣｘ２３に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含み得る。例えば、細胞内ドメインは、Ｃｘ４３に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含み得る。

[0189]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＳＩＧＬＥＣタンパク質に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含む。例えば、細胞内ドメインは、Ｓｉｇｌｅｃ－１（シアロアドへシン）、Ｓｉｇｌｅｃ－２（ＣＤ２２）、Ｓｉｇｌｅｃ－３（ＣＤ３３）、Ｓｉｇｌｅｃ－４（ＭＡＧ）、Ｓｉｇｌｅｃ－５、Ｓｉｇｌｅｃ－６、Ｓｉｇｌｅｃ－７、Ｓｉｇｌｅｃ－８、Ｓｉｇｌｅｃ－９、Ｓｉｇｌｅｃ－１０、Ｓｉｇｌｅｃ－１１、Ｓｉｇｌｅｃ－１２、Ｓｉｇｌｅｃ－１３、Ｓｉｇｌｅｃ－１４、Ｓｉｇｌｅｃ－１５、Ｓｉｇｌｅｃ－１６、またはＳｉｇｌｅｃ－１７に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含み得る。

[0190]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、Ｃ型レクチンタンパク質に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含む。例えば、細胞内ドメインは、マンノース受容体タンパク質に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含み得る。例えば、細胞内ドメインは、アシアロ糖タンパク質受容体タンパク質に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含み得る。例えば、細胞内ドメインは、マクロファージガラクトース型レクチン（ＭＧＬ）、ＤＣ－ＳＩＧＮ（ＣＬＥＣ４Ｌ）、ランゲリン（ＣＬＥＣ４Ｋ）、骨髄性ＤＡＰ１２会合レクチン（ＭＤＬ）－１（ＣＬＥＣ５Ａ）、ＤＣ会合Ｃ型レクチン１（デクチン１）サブファミリータンパク質、デクチン１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＧＲ１／ＣＬＥＣ９Ａ、骨髄性Ｃ型レクチン様受容体（ＭＩＣＬ）（ＣＬＥＣ１２Ａ）、ＣＬＥＣ２（ＣＬＥＣ１Ｂ）、ＣＬＥＣ１２Ｂ、ＤＣ免疫受容体（ＤＣＩＲ）サブファミリータンパク質、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、デクチン２／ＣＬＥＣ６Ａ、血液ＤＣ抗原２（ＢＤＣＡ２）（ＣＬＥＣ４Ｃ）、ミンクル（マクロファージ誘導Ｃ型レクチン）（ＣＬＥＣ４Ｅ）、ＮＯＤ様受容体タンパク質、ＮＯＤ様受容体ＭＨＣクラスＩＩトランス活性化因子（ＣＩＩＴＡ）、ＩＰＡＦ、ＢＩＲＣ１、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）タンパク質、ＲＩＧ－Ｉ、ＭＤＡ５、ＬＧＰ２、ＮＡＩＰ５／Ｂｉｒｃｌｅ、ＮＬＲＰタンパク質、ＮＬＲＰ１、ＮＬＲＰ２、ＮＬＲＰ３、ＮＬＲＰ４、ＮＬＲＰ５、ＮＬＲＰ６、ＮＬＲＰ７、ＮＬＲＰ８９、ＮＬＲＰ９、ＮＬＲＰ１０、ＮＬＲＰ１１、ＮＬＲＰ１２、ＮＬＲＰ１３、ＮＬＲＰ１４、ＮＬＲタンパク質、ＮＯＤ１またはＮＯＤ２、またはこれらの任意の組合せに由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含み得る。

[0191]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、細胞接着分子に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含む。例えば、細胞内ドメインは、ＩｇＣＡＭ、カドヘリン、インテグリン、Ｃ型のレクチン様ドメインタンパク質（ＣＴＬＤ）および／またはプロテオグリカン分子に由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含み得る。例えば、細胞内ドメインは、Ｅ－カドヘリン、Ｐ－カドヘリン、Ｎ－カドヘリン、Ｒ－カドヘリン、Ｂ－カドヘリン、Ｔ－カドヘリンまたはＭ－カドヘリンに由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含み得る。例えば、細胞内ドメインは、Ｅ－セレクチン、Ｌ－セレクチンまたはＰ－セレクチンなどのセレクチンに由来する細胞内シグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインを含み得る。

[0192]一部の実施形態では、ＧＦＰは全長の細胞内シグナル伝達ドメインを含まない。一部の実施形態では、細胞内ドメインは少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、３００、３００、４００、または５００アミノ酸長である。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、最大１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、３００、３００、４００、または５００アミノ酸長である。

[0193]一部の実施形態では、組換え核酸は、ＦｃＲα鎖細胞外ドメイン、ＦｃＲα鎖膜貫通ドメインおよび／またはＦｃＲα鎖細胞内ドメインをコードする。一部の実施形態では、組換え核酸は、ＦｃＲβ鎖細胞外ドメイン、ＦｃＲβ鎖膜貫通ドメインおよび／またはＦｃＲβ鎖細胞内ドメインをコードする。一部の実施形態では、ＦｃＲα鎖またはＦｃＲβ鎖は、細胞で発現される場合、ＦｃＲγと複合体を形成する。一部の実施形態では、ＦｃＲα鎖またはＦｃＲβ鎖は、細胞で発現される場合、内在性ＦｃＲγと複合体を形成する。一部の実施形態では、ＦｃＲα鎖またはＦｃＲβ鎖は、ＦｃＲγを発現しない細胞の細胞膜に組み込まれない。一部の実施形態では、ＣＦＰはＦｃＲα鎖細胞内シグナル伝達ドメインを含まない。一部の実施形態では、ＣＦＰはＦｃＲβ鎖細胞内シグナル伝達ドメインを含まない。一部の実施形態では、組換え核酸は、ＴＲＥＭ細胞外ドメイン、ＴＲＥＭ膜貫通ドメインおよび／またはＴＲＥＭ細胞内ドメインをコードする。一部の実施形態では、ＴＲＥＭは、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２またはＴＲＥＭ３である。

[0194]一部の実施形態では、組換え核酸は炎症促進性ポリペプチドをコードする配列を含む。一部の実施形態では、組成物は、組換え核酸中に炎症促進性ヌクレオチドまたはヌクレオチド、例えばＡＴＰ、ＡＤＰ、ＵＴＰ、ＵＤＰ、および／またはＵＤＰ－グルコースをさらに含む。

[0195]一部の実施形態では、組成物は炎症促進性ポリペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、炎症促進性ポリペプチドは、ケモカイン、サイトカインである。一部の実施形態では、ケモカインはＩＬ－１、ＩＬ３、ＩＬ５、ＩＬ－６、ｉｌ８、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＣＳＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ１７、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、およびインターフェロンからなる群から選択される。一部の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－１、ＩＬ３、ＩＬ５、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＣＳＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ１７、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、およびインターフェロンからなる群から選択される。

[0196]一部の実施形態では、骨髄性細胞は、送達のために特異的に標的化される。骨髄性細胞は、ＰＬＧＡ（乳酸－グリコール酸共重合体）および／またはポリビニルアルコール（ＰＶＡ）などの特異的生分解性ポリマーを使用して標的化され得る。一部の実施形態では、１つまたは複数の化合物は、そのような高分子構造に選択的に組み込まれ、骨髄性細胞機能に影響し得る。一部の実施形態では、標的化構造は、例えば１つまたは複数のＰＬＧＡおよび１つまたは複数のＰＶＡ層の多層状である。一部の実施形態では、標的化構造は、層状活動の順にアセンブルされる。一部の実施形態では、標的化高分子構造は、骨髄性細胞表面に接着し、増殖因子およびサイトカインなどの１つまたは複数の成分を送達して、例えば特定の極性化を与える微小環境で骨髄性細胞を維持することができる不安定な構造など、特定の形状をした成分に組織される。一部の実施形態では、高分子構造は、骨髄性細胞によってそれらが食作用を受けないが、表面に接着したままであることができる。一部の実施形態では、１つまたは複数の増殖因子は、サイトカインなどのＭ１極性化因子であり得る。一部の実施形態では、１つまたは複数の増殖因子は、サイトカインなどのＭ２極性化因子であり得る。一部の実施形態では、１つまたは複数の増殖因子は、ＩＮＦγなどのマクロファージ活性化サイトカインであり得る。一部の実施形態では、高分子構造は、固形腫瘍などのｉｎ ｖｉｖｏ環境で１つまたは複数の増殖因子の持続的な放出が可能である。

[0197]一部の実施形態では、組換え核酸は、炎症の恒常性制御因子をコードする配列を含む。一部の実施形態では、炎症の恒常性制御因子はｍＲＮＡの非翻訳領域（ＵＴＲ）の配列である。一部の実施形態では、ＵＴＲの配列はＲＮＡ結合タンパク質に結合する配列である。一部の実施形態では、ＲＮＡ結合タンパク質が非翻訳領域（ＵＴＲ）の配列に結合すると、翻訳が阻害または防止される。一部の実施形態では、ＵＴＲの配列はＷＷＷＵ（ＡＵＵＵＡ）ＵＵＵＷのコンセンサス配列を含み、ＷがＡまたはＵである。一部の実施形態では、組換え核酸はバイシストロニックなベクターで発現される。

[0198]一部の実施形態では、標的細胞は哺乳動物細胞である。一部の実施形態では、標的細胞はヒト細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は病原体によって感染された細胞を含む。一部の実施形態では、標的細胞はがん細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、リンパ球であるがん細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、卵巣がん細胞であるがん細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、乳房細胞であるがん細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、膵臓細胞であるがん細胞である。一部の実施形態では、標的細胞が、神経膠芽腫細胞であるがん細胞である。

[0199]一部の実施形態では、組換え核酸はＤＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸はＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸はｍＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は非改変ｍＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸は改変ｍＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸はｃｉｒｃＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸はｔＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸はｍｉｃｒｏＲＮＡである。

[0200]本明細書では、本明細書に記載のＣＦＰをコードする組換え核酸配列を含むベクターも提供する。一部の実施形態では、ベクターはウイルスベクターである。一部の実施形態では、ウイルスベクターはレトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターである。一部の実施形態では、ベクターは、１つまたは複数のポリペプチドをコードする少なくとも１つの核酸配列に作動可能に連結したプロモーターをさらに含む。一部の実施形態では、ベクターはポリシストロニックである。一部の実施形態では、少なくとも１つの核酸配列のそれぞれが別々のプロモーターに作動可能に連結されている。一部の実施形態では、ベクターは、１つまたは複数の配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）をさらに含む。一部の実施形態では、ベクターは、１つまたは複数のポリペプチドをコードする少なくとも１つの核酸配列に隣接する５’ＵＴＲおよび／または３’ＵＴＲをさらに含む。一部の実施形態では、ベクターは、１つまたは複数の調節性領域をさらに含む。

[0201]本明細書では、本明細書に記載の組成物の組換え核酸によってコードされるポリペプチドも提供する。
[0202]本明細書では、本明細書に記載の組成物、本明細書に記載のベクターまたは本明細書に記載のポリペプチドを含む細胞も提供する。一部の実施形態では、細胞は食細胞である。一部の実施形態では、細胞は幹細胞由来細胞、骨髄性細胞、マクロファージ、樹状細胞、リンパ球、肥満細胞、単球、好中球、ミクログリアまたは星状細胞である。一部の実施形態では、細胞は自家細胞である。一部の実施形態では、細胞は同種異系細胞である。一部の実施形態では、細胞はＭ１細胞である。一部の実施形態では、細胞はＭ２細胞である。一部の実施形態では、細胞はＭ１マクロファージ細胞である。一部の実施形態では、細胞はＭ２マクロファージ細胞である。一部の実施形態では、細胞はＭ１骨髄性細胞である。一部の実施形態では、細胞はＭ２骨髄性細胞である。

[0203]本明細書では、本明細書に記載の組換え核酸、本明細書に記載のベクター、本明細書に記載のポリペプチドまたは本明細書に記載の細胞などの、本明細書に記載の組成物；および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物も提供する。

[0204]一部の実施形態では、医薬組成物はさらなる治療剤をさらに含む。一部の実施形態では、さらなる治療剤は、ＣＤ４７アゴニスト、Ｒａｃを阻害する薬剤、Ｃｄｃ４２を阻害する薬剤、ＧＴＰａｓｅを阻害する薬剤、Ｆアクチン解離を促進する薬剤、ＰＦＰへのＰＩ３Ｋ動員を促進する薬剤、ＰＩ３Ｋ活性を促進する薬剤、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸の産生を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ１２活性を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ２５活性を促進する薬剤、ＳＨ３ＢＰ１活性を促進する薬剤およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は無血清培地、脂質、またはナノ粒子を含む。

[0205]本明細書では、本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与するステップを含む、疾患の処置を必要とする対象における疾患を処置する方法も提供する。一部の実施形態では、疾患はがんである。一部の実施形態では、がんは固形がんである。一部の実施形態では、固形がんは、卵巣がん、卵巣がん、腎臓がん、乳がん、前立腺がん、肝臓がん、脳がん、リンパ腫、白血病、皮膚がん、膵臓がん、結腸直腸がん、肺がんを含む好適ながんからなる群から選択される。一部の実施形態では、がんは液性がんである。一部の実施形態では、液性がんは白血病またはリンパ腫である。一部の実施形態では、液性がんはＴ細胞リンパ腫である。一部の実施形態では、疾患はＴ細胞悪性腫瘍である。

[0206]一部の実施形態では、方法は、対象にさらなる治療剤を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、さらなる治療剤は、ＣＤ４７アゴニスト、Ｒａｃを阻害する薬剤、Ｃｄｃ４２を阻害する薬剤、ＧＴＰａｓｅを阻害する薬剤、Ｆアクチン解離を促進する薬剤、ＰＦＰへのＰＩ３Ｋ動員を促進する薬剤、ＰＩ３Ｋ活性を促進する薬剤、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸の産生を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ１２活性を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ２５活性を促進する薬剤、ＳＨ３ＢＰ１活性を促進する薬剤およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される。

[0207]一部の実施形態では、投与するステップは、注入するステップまたは注射するステップを含む。一部の実施形態では、投与するステップは固形がんに直接投与するステップを含む。一部の実施形態では、投与するステップは、ｃｉｒｃＲＮＡベースの送達手順、ナノ粒子（anon-particle）カプセル化ｍＲＮＡベースの送達手順、ｍＲＮＡベースの送達手順、ウイルスベースの送達手順、粒子ベースの送達手順、リポソームベースの送達手順、またはエキソソームベースの送達手順を含む。一部の実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答またはＣＤ８＋Ｔ細胞応答が対象において誘発される。

[0208]本明細書では、細胞を調製する方法であって、細胞を本明細書に記載の組成物、本明細書に記載のベクター、または本明細書に記載のポリペプチドと接触させるステップを含む方法も提供する。一部の実施形態では、接触させるステップは形質導入するステップを含む。一部の実施形態では、接触させるステップは、化学トランスフェクション、電気穿孔、ヌクレオフェクション、またはウイルス感染もしくは形質導入を含む。

[0209]本明細書では、脂質を本明細書に記載の組成物または本明細書に記載のベクターと接触させるステップを含む医薬組成物を調製する方法も提供する。一部の実施形態では、接触させるステップは、脂質ナノ粒子を形成するステップを含む。

[0210]本明細書では、抗体を本明細書に記載の組成物または本明細書に記載のベクターと接触させるステップを含む医薬組成物を調製する方法も提供する。一部の実施形態では、接触させるステップは、脂質ナノ粒子を形成するステップを含む。

定義
[0211]「薬剤（ａｇｅｎｔ）」は、任意の細胞、小分子化学化合物、抗体もしくはその断片、核酸分子、またはポリペプチドを指すことができる。

[0212]「変更（ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ）」または「変化（ｃｈａｚｎｇｅ）」は、増加または減少を指すことができる。例えば、変更は、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、２０％、３０％、または４０％、５０％、６０％まで、または７０％、７５％、８０％、９０、または１００％までもの増加または減少であり得る。例えば、変更は、１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、３０倍、または４０倍、５０倍、６０倍まで、または７０倍、７５倍、８０倍、９０倍、または１００倍までもの増加または減少であり得る。

[0213]本明細書で使用される場合、「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」は、プロフェッショナル抗原提示細胞（例えば、Ｂリンパ球、マクロファージ、単球、樹状細胞、ランゲルハンス細胞）、ならびに他の抗原提示細胞（例えば、ケラチノサイト、内皮細胞、星状細胞、線維芽細胞、オリゴデンドロサイト、胸腺上皮細胞、甲状腺上皮細胞、グリア細胞（脳）、膵臓ベータ細胞、および血管内皮細胞）を含む。ＡＰＣは、腫瘍組織適合複合体（ＭＨＣ）分子を発現することができ、Ｔ細胞によって認識され得るその表面のＭＨＣと複合体を形成して抗原を提示し、Ｔ細胞活性化および免疫応答を誘発することができる。プロフェッショナル抗原提示細胞、特に樹状細胞は、ナイーブＴ細胞の刺激において重要な役割を果たす。線維芽細胞などの非プロフェッショナル抗原提示細胞もこのプロセスに寄与し得る。ＡＰＣは、外因性抗原をプロセシングし、クラスＩ ＭＨＣ分子上にプロセシングされた抗原を提示することによりペプチド抗原を交差提示することもできる。クラスＩ ＭＨＣ分子と会合して認識されるタンパク質を生じる抗原は、一般に細胞内で産生されるタンパク質であり、これらの抗原はプロセシングされ、クラスＩ ＭＨＣ分子と会合する。

[0214]「生体試料」は、任意の組織、細胞、体液、または他の生物由来の物質を指すことができる。
[0215]用語「エピトープ」は、抗体またはその結合断片、Ｔ細胞受容体、および／または抗体様分子に結合することが可能な配列または構造またはアミノ酸残基などの任意のタンパク質決定因子を指すことができる。エピトープ決定因子は、典型的には、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面基からなり、一般に、特定の三次元構造特徴ならびに特定の電荷特徴を有する。「Ｔ細胞エピトープ」は、Ｔ細胞受容体によって認識されるペプチドまたはペプチド－ＭＨＣ複合体を指すことができる。

[0216]操作された骨髄性細胞などの操作された細胞は、一時的な発現でさえも、細胞において少なくとも１つの外因性核酸配列を有する細胞を指すことができる。外因性核酸を発現するステップは、他に記載される様々な方法によって実施することができ、当技術分野で公知の方法を包含する。本開示は、操作された細胞、例えば操作された食細胞などの操作された骨髄性細胞を調製するステップおよび使用するステップに関する。本開示は、特に、例えばキメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする外因性核酸を含む操作された細胞に関する。

[0217]用語「免疫応答」は、限定はされないが、Ｔ細胞媒介性、ＮＫ細胞媒介性および／またはＢ細胞媒介性免疫応答を含む。これらの応答は、Ｔ細胞共刺激およびＮＫ細胞共刺激の調節によって影響され得る。例示的な免疫応答は、Ｔ細胞応答、例えばサイトカイン産生、および細胞傷害活性を含む。さらに、免疫応答は、ＮＫ細胞活性化、Ｂ細胞活性化および／またはＴ細胞活性化、例えば抗体産生（体液性応答）およびサイトカイン応答性細胞、例えばマクロファージの活性化によって間接的に影響される免疫応答を含む。免疫応答は、適応免疫応答を含む。適応免疫系は、侵入する生物の抗原などの外来分子構造に反応することができる。自然免疫系とは異なり、適応免疫系は病原体に非常に特異的である。適応免疫は、長期持続性の保護も提供することができる。適応免疫反応は、体液性免疫反応および細胞媒介性免疫反応を含む。体液性免疫反応では、Ｂ細胞によって体液中へと分泌された抗体は、病原体由来の抗原に結合し、様々なメカニズム、例えば補体媒介性溶解を通して病原体の除去をもたらす。細胞媒介性免疫反応では、他の細胞を破壊することが可能なＴ細胞が活性化される。例えば、疾患と関連するタンパク質が細胞で提示される場合、それらは細胞内でペプチドへとタンパク質分解により断片化され得る。特定の細胞タンパク質は、次いで、それら自身を抗原またはこの方法で形成されたペプチドに接着させ、それらを細胞の表面に輸送し、Ｔ細胞などの分子防御メカニズムに提示することができる。細胞傷害性Ｔ細胞は、これらの抗原を認識し、これらの抗原を持つ細胞を死滅させることができる。

[0218]「リガンド」は、受容体などの別の分子と結合するまたは別の分子と複合体を形成することが可能な分子を指すことができる。リガンドは、限定はされないが、タンパク質、糖タンパク質、炭水化物、リポタンパク質、ホルモン、脂肪酸、リン脂質、または受容体に結合する任意の成分を含み得る。一部の実施形態では、受容体は特定のリガンドを有する。一部の実施形態では、受容体は、リガンドへの乱雑な結合を示すことがあり、その場合、受容体は少なくとも立体構造配置、電荷分布または任意の他の物理化学特徴の類似性を共有するいくつかのリガンドに結合することができる。リガンドは生体分子であってもよい。リガンドは非生物的な物質であってもよい。例えば、リガンドは、スカベンジャー受容体ＭＡＲＣＯのリガンドである陰性電荷の粒子であってもよい。例えば、リガンドは、スカベンジャー受容体ＳＲＡ１のリガンドである、ＴｉＯ_２であってもよい。

[0219]用語「主要組織適合抗原（ＭＨＣ）」、「ＭＨＣ分子」、または「ＭＨＣタンパク質」は、抗原ペプチドに結合し、Ｔリンパ球に抗原ペプチドを提示することが可能なタンパク質を指す。そのような抗原ペプチドは、Ｔ細胞エピトープを示すことができる。ヒトＭＨＣは、ＨＬＡ複合体とも呼ばれる。したがって、用語「ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）」、「ＨＬＡ分子」または「ＨＬＡタンパク質」は、用語「主要組織適合抗原（ＭＨＣ）」、「ＭＨＣ分子」、および「ＭＨＣタンパク質」と交換可能に使用される。ＨＬＡタンパク質は、ＨＬＡクラスＩまたはＨＬＡクラスＩＩとして分類され得る。２つのＨＬＡクラスのタンパク質の構造は非常に類似しているが、それらは非常に異なる機能を有する。クラスＩ ＨＬＡタンパク質は、ほとんどの腫瘍細胞を含む、身体のほぼ全ての細胞の表面に提示される。クラスＩ ＨＬＡタンパク質は、通常内在性タンパク質または細胞内に存在する病原体から生じる抗原を負荷され、次いで、ナイーブまたは細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）に提示される。ＨＬＡ クラスＩＩタンパク質は、限定はされないが、樹状細胞、Ｂ細胞、およびマクロファージを含む抗原提示細胞（ＡＰＣ）に提示される。それらは主に、例えば細胞の外側など、外部の抗原供給源からプロセシングされるペプチドをヘルパーＴ細胞に提示する。

[0220]ＨＬＡクラスＩＩ系では、マクロファージおよび未成熟樹状細胞などの食細胞は、食作用によりファゴソームへと物質を取り込むことができ－Ｂ細胞はより一般的にはエンドソームへのエンドサイトーシスを示すが－リソソームと融合し、その酸性酵素は取り込んだタンパク質を多くの異なるペプチドへと切断する。オートファジー（Ａｕｔｈｏｐｈａｇｙ）は、ＨＬＡクラスＩＩペプチドの別の供給源である。最も研究されたサブクラスＩＩ ＨＬＡ遺伝子は：ＨＬＡ－ＤＰＡ１、ＨＬＡ－ＤＰＢ１、ＨＬＡ－ＤＱＡ１、ＨＬＡ－ＤＱＢ１、ＨＬＡ－ＤＲＡ、およびＨＬＡ－ＤＲＢ１である。

[0221]ＨＬＡクラスＩＩ分子によるＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞へのペプチドの提示は、外来抗原に対する免疫応答をもたらすことができる。一度活性化されると、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、Ｂ細胞分化および抗体産生、ならびにＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＴＬ）応答を促進することができる。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、他の免疫細胞の分化を活性化および誘導するサイトカインおよびケモカインも分泌することができる。ＨＬＡクラスＩＩ分子は、典型的には、相互作用してクラスＩペプチド結合溝より開いたペプチド結合溝を形成する、αおよびβ鎖のヘテロ二量体である。

[0222]ＨＬＡ対立遺伝子は、典型的には、共優性様式で発現される。例えば、各人は３個のクラスＩ遺伝子（ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－ＢおよびＨＬＡ－Ｃ）のそれぞれの２つの対立遺伝子を持ち、クラスＩＩ ＨＬＡの６つの異なる型を発現することができる。クラスＩＩ ＨＬＡ遺伝子座では、各人は、一対のＨＬＡ－ＤＰ遺伝子（αおよびβ鎖をコードするＤＰＡ１およびＤＰＢ１）、ＨＬＡ－ＤＱ（αおよびβ鎖のＤＱＡ１およびＤＱＢ１）、一遺伝子ＨＬＡ－ＤＲα（ＤＲＡ１）、および１つまたは複数の遺伝子ＨＬＡ－ＤＲβ（ＤＲＢ１およびＤＲＢ３、－４または－５）を受け継ぐ。例えば、ＨＬＡ－ＤＲＢ１はほぼ４００個より多くの公知の対立遺伝子を有する。それは、一人のヘテロ接合性の個体が、６または８個の機能するクラスＩＩ ＨＬＡ対立遺伝子：各親から３個またはそれ以上を受け継ぐことができることを意味する。したがって、ＨＬＡ遺伝子は高度に多型であり；多くの異なる対立遺伝子が集団内の異なる個体に存在する。ＨＬＡタンパク質をコードする遺伝子は、多くの可能なバリエーションを有し、各人の免疫系を広範な外来侵入物に対して反応させる。一部のＨＬＡ遺伝子は、数百の同定されたバージョン（対立遺伝子）を有し、その各々は特定の番号が与えられる。一部の実施形態では、クラスＩ ＨＬＡ対立遺伝子はＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１、ＨＬＡ－Ｂ^＊１４：０２、ＨＬＡ－Ａ^＊２３：０１、ＨＬＡ－Ｅ^＊０１：０１（非古典的）である。一部の実施形態では、クラスＩＩ ＨＬＡ対立遺伝子はＨＬＡ－ＤＲＢ^＊０１：０１、ＨＬＡ－ＤＲＢ^＊０１：０２、ＨＬＡ－ＤＲＢ^＊１１：０１、ＨＬＡ－ＤＲＢ^＊１５：０１、およびＨＬＡ－ＤＲＢ^＊０７：０１である。

[0223]「骨髄性細胞」は、造血幹細胞系の骨髄性系統の細胞を広範に指すことができ、例えばリンパ球系統を除外することができる。骨髄性細胞は、例えば、顆粒細胞系統および単球系統の細胞を含む。骨髄性細胞は、骨髄の造血幹細胞に由来する共通の祖先から分化される。骨髄性細胞系統への拘束は、異なる転写因子の活性化により管理されてもよく、したがって骨髄性細胞は、可塑性のレベルを有する細胞として特徴づけられてもよく、細胞外および細胞内刺激に基づき最終細胞型へとさらに分化する能力として記載されてもよい。骨髄性細胞は、その表面の様々なケモカイン受容体を介して局部組織へと素早く動員され得る。骨髄性細胞は、様々なサイトカインおよびケモカインに反応する。

[0224]骨髄性細胞は、例えば、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｆｌｔ３Ｌ、ＣＣＬ２、ＶＥＧＦおよびＳ１００Ａ８／９などの１つまたは複数のサイトカインおよびケモカインの影響下で、造血幹細胞から骨髄で生じる細胞であってもよい。一部の実施形態では、骨髄性細胞は前駆細胞である。一部の実施形態では、骨髄性細胞は、共通の骨髄性前駆体、または顆粒細胞前駆体、骨髄芽球細胞、または単球－樹状細胞前駆体またはこれらの組合せの特徴を有する細胞であってもよい。骨髄性細胞（ｍｙｅｌｏｉｄ）は、顆粒細胞または単球またはこれらの前駆細胞を含み得る。骨髄性細胞（ｍｙｅｌｏｉｄ）は、未成熟顆粒細胞、未成熟単球、未成熟マクロファージ、未成熟好中球、および未成熟樹状細胞を含み得る。骨髄性細胞（ｍｙｅｌｏｉｄ）は、単球または前単球細胞または単球前駆体を含み得る。一部の場合では、本明細書で使用される場合、骨髄性細胞は、Ｍ０表現型、Ｍ１表現型またはＭ２表現型を有する単球を指してもよい。骨髄性細胞（ｍｙｅｌｏｉｄ）は、樹状細胞（ＤＣ）、成熟ＤＣ、単球由来ＤＣ、形質細胞様ＤＣ、前樹状細胞、またはＤＣの前駆体を含み得る。骨髄性細胞（ｍｙｅｌｏｉｄ）は、成熟好中球、好中球前駆体、または多形核球（ＰＭＮ）であってもよい好中球を含み得る。骨髄性細胞（ｍｙｅｌｏｉｄ）は、マクロファージ、単球由来マクロファージ、組織マクロファージ、Ｍ０、Ｍ１またはＭ２表現型のマクロファージを含み得る。骨髄性細胞（ｍｙｅｌｏｉｄ）は、腫瘍浸潤単球（ＴＩＭ）を含み得る。骨髄性細胞（ｍｙｅｌｏｉｄ）は、腫瘍関連単球（ＴＡＭ）を含み得る。骨髄性細胞（ｍｙｅｌｏｉｄ）は、骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）を含み得る。骨髄性細胞（ｍｙｅｌｏｉｄ）は、組織常在性マクロファージを含み得る。骨髄性細胞（ｍｙｅｌｏｉｄ）は、腫瘍関連ＤＣ（ＴＡＤＣ）を含み得る。したがって、骨髄性細胞は、１つまたは複数の細胞表面マーカー、例えばＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ３８、ＣＣＲ５、ＣＤ６６、Ｌｏｘ－１、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ６４、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、ＣＣＲ２、ＣＣＲ５、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ８３、ＣＤ１４１、ＣＤ２０９、ＭＨＣ－ＩＩ、ＣＤ１２３、ＣＤ３０３、ＣＤ３０４、ＳＩＧＬＥＣファミリータンパク質およびＣＬＥＣファミリータンパク質を発現してもよい。一部の場合では、骨髄性細胞は、１つまたは複数の細胞表面マーカー、例えばＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ６６、Ｌｏｘ－１、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ６４、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、ＣＣＲ２、ＣＣＲ５、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ８３、ＣＤ１４１、ＣＤ２０９、ＭＨＣ－ＩＩ、ＣＤ１２３、ＣＤ３０３、ＣＤ３０４またはこれらの組合せの高または低発現によって特徴づけられてもよい。

[0225]「食作用」は、「貪食」と交換可能に使用され、それにより細胞が、がん細胞または感染細胞などの粒子を貪食するプロセスを指すことができる。このプロセスは、粒子を含有する内部区画（ファゴソーム）を生じ得る。このプロセスを使用して、身体からがん細胞または感染細胞などの粒子を摂取および／または除去することができる。食作用受容体は、食作用のプロセスに含まれてもよい。食作用のプロセスは、免疫応答および抗原提示と密接に関係し得る。外因性抗原のプロセシングは、続いて一部の型のエンドサイトーシスイベントによってプロフェッショナル抗原提示細胞へと取り込まれる。食作用は、抗原提示も促進することができる。例えば、がん抗原を含む、食作用を受けた細胞または病原体からの抗原はプロセシングされ、ＡＰＣの細胞表面に提示され得る。

[0226]「ポリペプチド」は、糖タンパク質、リポタンパク質、細胞内タンパク質または膜タンパク質などのペプチド結合を介して共に連結されたアミノ酸を含有する分子を指すことができる。ポリペプチドは、タンパク質の１つまたは複数のサブユニットを含んでもよい。ポリペプチドは、組換え核酸によってコードされてもよい。一部の実施形態では、ポリペプチドは、単一のアミノ酸鎖に１つより多くのペプチド配列を含んでもよく、それはスペーサー、リンカーまたはペプチド切断配列によって分けられてもよい。ポリペプチドは、融合ポリペプチドであってもよい。ポリペプチドは、１つまたは複数のドメイン、モジュールまたは部分を含んでもよい。

[0227]「受容体」は、細胞外シグナルを細胞へと導入するポリペプチドなどのシグナルを導入するポリペプチドから構成される化学構造を指すことができる。受容体は、細胞、細胞形成または生物において情報を伝達するために寄与することができる。受容体は、少なくとも１つの受容体単位を含み、２つまたはそれ以上の受容体単位を含有することができ、各受容体単位はタンパク質分子、例えば糖タンパク質分子を含む。受容体は、リガンドに結合する構造を含有することができ、リガンドと複合体を形成することができる。シグナル伝達情報は、細胞の表面でのリガンドとの結合後に受容体の構造変化により伝達され得る。

[0228]用語「抗体」は、限定はされないが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４、ＩｇＡ（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、およびＩｇＹを含む免疫グロブリンとして一般に公知のタンパク質のクラスを指す。用語「抗体」は、限定はされないが、全長抗体、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）およびこれらの抗原結合断片を含む。抗原結合抗体断片は、限定はされないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ（Ｖ_ＨおよびＣ_Ｈ１からなる）、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ジスルフィド結合した可変断片（ｄｓＦｖ）およびＶ_Ｌおよび／またはＶ_Ｈドメインを含む断片を含む。抗体は任意の動物起源由来であり得る。一本鎖抗体を含む抗原結合抗体断片は、単独または１つまたは複数のヒンジ領域、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインと組み合わせた可変領域（複数可）を含み得る。また、可変領域と、ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインの任意の組合せも含まれる。抗体は、例えばＨＬＡ－会合ポリペプチドまたはＨＬＡペプチド複合体を特異的に結合するモノクローナル、ポリクローナル、キメラ、ヒト化、およびヒトモノクローナルおよびポリクローナル抗体であり得る。

[0229]用語「組換え核酸」は、組換え手段により調製、発現、作出または単離された核酸を指す。組換え核酸は、自然発生ではないヌクレオチド配列を含有し得る。組換え核酸は、研究室で合成されてもよい。組換え核酸は、組換えＤＮＡ技術、例えば、制限酵素消化、ライゲーション、およびＤＮＡクローニングなどのＤＮＡの酵素的改変を使用することによって調製されてもよい。組換え核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、これらの類似体、またはこれらの組合せであり得る。組換えＤＮＡは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を生成するように、ｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで転写されてもよい。組換えｍＲＮＡは、単離、精製および使用して細胞をトランスフェクトしてもよい。組換え核酸はタンパク質またはポリペプチドをコードしてもよい。

[0230]核酸を細胞に導入するまたは組み込むプロセスは、トランスフォーメーション、トランスフェクションまたはトランスダクションを介し得る。トランスフォーメーションは、細菌細胞による外来核酸の取込みのプロセスである。このプロセスは、プラスミドＤＮＡの増殖、タンパク質産生、および他の適用に適応される。トランスフォーメーションは、組換えプラスミドＤＮＡを、環境から細胞外ＤＮＡを取り込むコンピテントな細菌細胞へと導入する。一部の細菌種は、特定の環境条件下で自然にコンピテントであるが、コンピテンスは研究室設定で人工的に導入される。トランスフェクションは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、または抗体などの小分子の真核細胞への導入である。トランスフェクションは、バクテリオファージの細菌細胞への導入を指してもよい。「トランスダクション」は、多くは組換えウイルスベクター粒子の標的細胞への導入を記載するために使用されるが、「感染」は、野生型ウイルスによるヒトまたは動物の自然感染を指す。

[0231]用語「ベクター」は、宿主細胞において自己複製可能な核酸分子を指すことができ、それは核酸分子のクローニングを可能にする。当業者に公知のように、ベクターは、限定はされないが、プラスミド、コスミド、ファージミド、ウイルスベクター、ファージベクター、酵母ベクター、哺乳動物ベクター等を含む。例えば、外因性遺伝子トランスフォーメーションのためのベクターはプラスミドであってもよい。特定の実施形態では、ベクターは、複製起点および宿主細胞における核酸配列の複製および／または維持に必要な他のエレメントを含有する核酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供するベクターまたはプラスミドは、発現ベクターである。発現ベクターは、遺伝子および／またはそれらが作動可能に連結されている核酸配列の発現を指示することが可能である。一部の実施形態では、発現ベクターまたはプラスミドは、環状の二本鎖ＤＮＡ分子の形態である。ベクターまたはプラスミドは、宿主細胞のゲノムに組み込まれても組み込まれなくてもよい。一部の実施形態では、プラスミドの核酸配列は、導入後宿主細胞のゲノムまたは染色体に組み込まれない。例えば、プラスミドは、宿主細胞において、核酸配列の一過的発現または安定発現のためのエレメント、例えばプラスミドが持つ遺伝子またはオープンリーディングフレームを含んでもよい。一部の実施形態では、ベクターは一過的発現ベクターである。一部の実施形態では、ベクターは、宿主細胞において自律的に複製する安定発現ベクターである。一部の実施形態では、プラスミドの核酸配列は、宿主細胞へと導入すると宿主細胞のゲノムまたは染色体へと組み込まれる。本明細書で開示する方法で使用され得る発現ベクターは、限定はされないが、プラスミド、エピソーム、バクテリア人工染色体、酵母人工染色体、バクテリオファージまたはウイルスベクターを含む。ベクターは、ＤＮＡまたはＲＮＡベクターであり得る。一部の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、宿主細胞へと導入すると宿主細胞のゲノムへと（例えば、逆転写を介して）組み込むことが可能なＲＮＡベクター、例えば、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターである。等価な機能を与える当業者に公知の発現ベクターの他の形態、例えば、自己複製の染色体外ベクターまたは宿主ゲノムへと組み込むことが可能なベクターも使用され得る。例示的なベクターは、自己複製および／またはそれらが連結した核酸の発現が可能なものである。

[0232]融合タンパク質を参照して使用される場合、用語「スペーサー」または「リンカー」は、融合タンパク質の２つの他のペプチド配列を結合するペプチド配列を指す。一部の実施形態では、リンカーまたはスペーサーは、タンパク質またはＲＮＡ配列の間を結合する、またはいくらかの最小の距離もしくは他の空間的関係を維持する以外の特定の生物学的活性を持たない。一部の実施形態では、スペーサーの構成アミノ酸は、分子のフォールディング、可動性、正味電荷、または疎水性などの分子の一部の特性に影響するように選択され得る。本開示の実施形態での使用のための好適なリンカーは当業者に周知であり、限定はされないが、直鎖または分岐鎖炭素リンカー、複素環炭素リンカー、またはペプチドリンカーを含む。一部の実施形態では、リンカーを使用して２つまたはそれ以上のポリペプチド、例えば２つの抗原性ペプチドを、各抗原性ペプチドが正しくフォールドするのを保証するのに十分な距離によって分ける。例示的なペプチドリンカー配列は可撓性の伸長した構造を採用し、規則的な二次構造を生じるための特性を示さない。可撓性リンカータンパク質領域のアミノ酸は、Ｇｌｙ、ＡｓｎおよびＳｅｒ、またはＧｌｙ、ＡｓｎおよびＳｅｒを含有するアミノ酸配列の任意の並び替えを含んでもよい。ＴｈｒおよびＡｌａなどの他の近い天然アミノ酸も、リンカー配列に使用され得る。

[0233]用語「処置する（治療する、ｔｒｅａｔ）」、「処置した（治療した、ｔｒｅａｔｅｄ）」、「処置すること（治療すること、ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「処置（治療、ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」等は、関連する障害および／または症状（例えば、新生物または腫瘍または感染因子または自己免疫疾患）を減らす、防止する、または改善することを指すと意味する。「処置すること（治療すること、ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、疾患（例えば、がんまたは感染因子による感染または自己免疫疾患）の発症、または発症の疑い後の、対象への治療の投与を指すことができる。「処置すること（治療すること、ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、「緩和すること（ａｌｌｅｖｉａｔｉｎｇ）」の概念を含み、疾患と関連する任意の症状または他の弊害および／または治療と関連する副反応の発生もしくは再発の頻度または重症度を減らすことを指すことができる。用語「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、「管理する（ｍａｎａｇｉｎｇ）」の概念も包含し、患者の疾患または障害の重症度を減らすこと、例えば寿命を延ばすこと、または疾患を有する患者の生存率を延長すること、またはその再発を遅らせること、例えば疾患を患っている患者の緩解期間をのばすことを指す。除外されないが、障害または状態を処置することは、関連する障害、状態、または症状が完全に除去されることを必要としないはずである。本明細書で使用される場合、用語「防止する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」、「防止する（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」、「防止（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」およびそれらの文法的な等価物は、薬剤または化合物の投与の開始時に、そのような症状を発生していない対象において、疾患または状態と関連する症状の発症を避けるまたは遅らせることを指し得る。特定の実施形態では、本明細書で記載される場合、対象または患者を処置するステップは、薬物、代謝産物、予防的成分、薬物、代謝産物、予防的成分をコードするまたはそうでなければ形成する核酸、ペプチド、またはタンパク質などの治療組成物を投与するステップを含む。一部の実施形態では、処置するステップは、細胞または細胞の集団を、それを必要とする対象に投与するステップを含む。一部の実施形態では、処置するステップは、本明細書に記載の１つまたは複数の操作された細胞、例えば食細胞などの１つまたは複数の操作された骨髄性細胞を対象に投与するステップを含む。処置するステップは、疾患または状態または症候群を処置するステップを含み、それは病理的疾患、状態もしくは症候群、または潜在性の疾患、状態もしくは症候群であってもよい。一部の場合では、処置するステップは、本明細書で使用される場合、治療ワクチンを投与するステップを含んでもよい。一部の実施形態では、操作された食細胞が患者または対象に投与される。一部の実施形態では、ヒト対象に投与された細胞は、免疫原性の減少をもたらす。例えば、操作された食細胞は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）または仲間殺し効果をもたらさないかまたは減少させ得る。一部の実施形態では、ヒト対象に投与された操作された細胞は、対象に免疫適合性である（つまり、対象において天然に発現される適合するＨＬＡ亜型を有する）。対象特異的なＨＬＡ対立遺伝子または対象のＨＬＡ遺伝子型は、当技術分野で公知の任意の方法によって決定され得る。例示的な実施形態では、方法は、多型遺伝子の対立遺伝子バリアントを含む遺伝子参照セットに設定したシークエンシングデータから抽出したリードのアライメントを生成するステップ、アライメントの各対立遺伝子バリアントの第１の事後確率または事後確率由来のスコアを決定するステップ、第１の対立遺伝子バリアントとして最大の第１の事後確率または事後確率由来のスコアを有する対立遺伝子バリアントを同定するステップ、第１の対立遺伝子バリアントおよび１つまたは複数の他の対立遺伝子バリアントとアラインした１つまたは複数のオーバーラップするリードを同定するステップ、重み因子を使用する１つまたは複数の他の対立遺伝子バリアントの第２の事後確率または事後確率由来のスコアを決定するステップ、最大の第２の事後確率または事後確率由来のスコアを有する対立遺伝子バリアント、多型遺伝子の遺伝子型を規定する第１および第２の対立遺伝子バリアントを選択するステップにより第２の対立遺伝子バリアントを同定するステップ、および第１および第２の対立遺伝子バリアントのアウトプットを提供するステップを含み得る、多型遺伝子型を決定するステップを含む。

[0234]「断片」は、タンパク質または核酸の部分を指し得る。一部の実施形態では、断片は、参照タンパク質または核酸の生物学的活性の少なくとも５０％、７５％、または８０％、または９０％、９５％、または９９％さえも保持する。

[0235]用語「単離した（ｉｓｏｌａｔｅｄ）」、「精製した（ｐｕｒｉｆｉｅｄ）」、「生物学的に純粋な（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ｐｕｒｅ）」およびそれらの文法的な等価物は、通常その天然の状態で見出されるように伴う成分から程度を自由に変えることができる物質を指す。「単離する（ｉｓｏｌａｔｅ）」は、もともとの起源または周辺物質からの分離の程度を示す。「精製する（ｐｕｒｉｆｙ）」は、単離より高い分離の程度を示す。「精製した（ｐｕｒｉｆｉｅｄ）」または「生物学的に純粋な（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ｐｕｒｅ）」タンパク質は、いずれの不純物もタンパク質の生物学的特性に大きく影響しないかまたは他の有害な結果を引き起こさないように、他の物質を十分に含まない。つまり、本開示の核酸またはペプチドは、組換えＤＮＡ技術によって産生される場合には、細胞物質、ウイルス物質、または培養培地を、または化学合成される場合には、化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まない場合精製される。純度および均質性は、典型的には、分析化学技術、例えばポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーを使用して決定される。用語「精製した（ｐｕｒｉｆｉｅｄ）」は、核酸またはタンパク質が、電気泳動ゲルで基本的に１本のバンドを生じることを示すことができる。改変、例えば、リン酸化またはグリコシル化に供され得るタンパク質については、異なる改変は、別々に精製され得る異なる単離タンパク質を生じることができる。

[0236]用語「新生物（ｎｅｏｐｌａｓｉａ）」または「がん（ｃａｎｃｅｒ）」は、不適切な高レベルの細胞分裂、不適切な低レベルのアポトーシス、または両方によって引き起こされるまたはそれらを生じる任意の疾患を指す。神経膠芽腫は、新生物またはがんの１つの非限定的な例である。用語「がん（ｃａｎｃｅｒ）」または「腫瘍（ｔｕｍｏｒ）」または「過剰増殖性障害（ｈｙｐｅｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」は、非制御増殖、不死性、転移能、迅速増殖および増殖速度、ならびに特定の特徴の形態学的特性などの、がんを引き起こす細胞の典型的な特徴を持つ細胞の存在を指す。がん細胞は、腫瘍の形態であることが多いが、そのような細胞は動物内で単独で存在することができ、または白血病細胞などの非腫瘍原生のがん細胞であり得る。

[0237]用語「ワクチン」は、疾患（例えば、新生物／腫瘍／感染因子／自己免疫疾患）の予防および／または処置のための免疫を生じさせるための組成物を意味すると理解される。したがって、本明細書で使用される場合、ワクチンは、組換え核酸、または組換え核酸を含むおよび発現する細胞を含む医薬であり、ワクチン接種により特定の防御および保護物質を生成するためにヒトまたは動物で使用されることを意図する。「ワクチン組成物」は、薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤を含み得る。本開示の態様は、食細胞ベースのワクチンの調製での技術の使用に関する。

[0238]用語「薬学的に許容される」は、連邦または州政府の規制当局によって認可されるまたは認可可能であること、または米国薬局方もしくはヒトを含む動物での使用のための他の一般的に認識される薬局方に列挙されることを指す。「薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤」は、薬剤と一緒に対象に投与することができ、それらの薬理活性を壊さず、治療量の薬剤を送達するのに十分な用量で投与した場合に非毒性である賦形剤、担体または希釈剤を指す。

[0239]本開示の方法で有用な核酸分子は、限定はされないが、活性を有するかまたは、ポリペプチドをコードする任意の核酸分子を含む。内在性配列と実質的な同一性を有するポリヌクレオチドは、典型的には、二本鎖核酸分子の少なくとも一本鎖とハイブリダイズすることが可能である。「ハイブリダイズ」は、核酸分子対がストリンジェンシーの様々な条件下で、相補的なポリヌクレオチド配列、またはその部分間で二本鎖分子を形成することを指す。（例えば、Ｗａｈｌ，Ｇ．Ｍ．ａｎｄ Ｓ．Ｌ．Ｂｅｒｇｅｒ（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５２：３９９；Ｋｉｍｍｅｌ，Ａ．Ｒ．（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５２：５０７を参照）。例えば、ストリンジェント塩濃度は、通常、約７５０ｍＭ ＮａＣｌおよび７５ｍＭクエン酸三ナトリウムより低い、約５００ｍＭ ＮａＣｌおよび５０ｍＭクエン酸三ナトリウムより低い、または約２５０ｍＭ ＮａＣｌおよび２５ｍＭクエン酸三ナトリウムより低くてもよい。低ストリンジェンシーハイブリダイゼーションは、有機溶媒、例えばホルムアミドの不在下で得ることができるが、高ストリンジェンシーハイブリダイゼーションは、少なくとも約３５％のホルムアミド、または少なくとも約５０％のホルムアミドの存在下で得ることができる。ストリンジェント温度条件は、通常、少なくとも約３０℃、少なくとも約３７℃、または少なくとも約４２℃の温度を含む。ハイブリダイゼーション時間、界面活性剤、例えばドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の濃度、および担体ＤＮＡの包括または排除などの様々なさらなるパラメーターは当業者に周知である。様々なレベルのストリンジェンシーは、必要に応じてこれらの様々な条件を組み合わせることにより達成される。例示的な実施形態では、ハイブリダイゼーションは、７５０ｍＭ ＮａＣｌ、７５ｍＭクエン酸三ナトリウム、および１％ＳＤＳ中、３０℃で生じ得る。別の例示的な実施形態では、ハイブリダイゼーションは、５００ｍＭ ＮａＣｌ、５０ｍＭクエン酸三ナトリウム、１％ＳＤＳ、３５％ホルムアミド、および１００μｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）中、３７℃で生じ得る。別の例示的な実施形態では、ハイブリダイゼーションは、２５０ｍＭ ＮａＣｌ、２５ｍＭクエン酸三ナトリウム、１％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、および２００μｇ／ｍｌｓｓＤＮＡ中、４２℃で生じ得る。これらの条件の有用なバリエーションは、当業者には容易に明らかであろう。ほとんどの適用のため、ハイブリダイゼーション後の洗浄ステップもストリンジェンシーにおいて変わり得る。洗浄ストリンジェンシー条件は、塩濃度および温度によって規定され得る。上記のように、洗浄ストリンジェンシーは、塩濃度の減少または温度の上昇により増加され得る。例えば、洗浄ステップのためのストリンジェント塩濃度は、約３０ｍＭ ＮａＣｌおよび３ｍＭクエン酸三ナトリウムより低い、または約１５ｍＭ ＮａＣｌおよび１．５ｍＭクエン酸三ナトリウムより低い。洗浄ステップのためのストリンジェント温度条件は、少なくとも約２５℃、少なくとも約４２℃、または少なくとも約６８℃の温度を含み得る。例示的な実施形態では、洗浄ステップは、３０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭクエン酸三ナトリウム、および０．１％ＳＤＳ中、２５℃で生じ得る。他の例示的な実施形態では、洗浄ステップは、１５ｍＭ ＮａＣｌ、１．５ｍＭクエン酸三ナトリウム、および０．１％ＳＤＳ中、４２℃で生じ得る。別の例示的な実施形態では、洗浄ステップは、１５ｍＭ ＮａＣｌ、１．５ｍＭクエン酸三ナトリウム、および０．１％ＳＤＳ中、６８℃で生じ得る。これらの条件のさらなるバリエーションは、当業者には容易に明らかであろう。ハイブリダイゼーション技術は当業者には周知であり、例えば、Ｂｅｎｔｏｎ ａｎｄ Ｄａｖｉｓ（Ｓｃｉｅｎｃｅ １９６：１８０，１９７７）；Ｇｒｕｎｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｈｏｇｎｅｓｓ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ ７２：３９６１，１９７５）；Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２００１）；Ｂｅｒｇｅｒ ａｎｄ Ｋｉｍｍｅｌ（Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９８７，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）；およびＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに記載される。

[0240]「実質的に同一」は、参照アミノ酸配列（例えば、本明細書に記載のアミノ酸配列のいずれか１つ）または核酸配列（例えば、本明細書に記載の核酸配列のいずれか１つ）と少なくとも５０％同一性を示すポリペプチドまたは核酸分子を指す。そのような配列は、アミノ酸レベルまたは核酸で、比較に使用する配列と少なくとも６０％、８０％または８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％またはそれ以上さえも同一であり得る。配列同一性は、典型的には、配列解析ソフトウェア（例えばＳｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ，１７１０ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｖｅｎｕｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．５３７０５、ＢＬＡＳＴ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＧＡＰ、またはＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸ ｐｒｏｇｒａｍｓ）を使用して測定される。そのようなソフトウェアは、様々な置換、欠失、および／または他の改変に相同性の程度を割り当てることによって同一または類似の配列を適合する。保存的置換は、典型的には以下の群内の置換を含む：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン；セリン、スレオニン；リジン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシン。同一性の程度を決定する例示的な手法では、近い配列を示すｅ－－３とｅ－ｍ°の間の確率スコアにより、ＢＬＡＳＴプログラムが使用され得る。「参照」は、比較の基準である。それぞれの配列の特定の位置または残基の番号付けは特定のタンパク質および使用する番号付けスキームによることが理解されるであろう。番号付けは、例えば成熟タンパク質の前駆体および成熟タンパク質自体で異なることがあり、種による配列の違いは番号付けに影響することがある。当業者は、当技術分野で周知の方法によって、例えば参照配列との配列アライメントおよび相同残基の決定によって、任意の相同タンパク質およびそれぞれのコード核酸のそれぞれの残基を同定することができるであろう。

[0241]用語「対象」または「患者」は、処置、観察、または実験の対象である動物（例えば、ヒト）などの生物を指す。例としてのみ、対象は、限定はされないが、ヒトまたは非ヒト霊長類、マウス、ウシ、ウマ、イヌ、ヒツジ、またはネコなどの非ヒト哺乳動物を含む、限定はされないが哺乳動物を含む。

[0242]用語「治療効果」は、障害（例えば、新生物、腫瘍、または感染因子による感染または自己免疫疾患）の１つまたは複数の症状またはその関連病理のある程度の軽減を指す。本明細書で使用される場合、「治療有効量」は、細胞または対象に単一または複数用量を投与すると、そのような処置がない場合に予測されるのを超えて、そのような障害を有する患者の生存可能性を延長すること、障害の１つまたは複数の兆候もしくは症状を減らすこと、防止または遅延することなどにおいて有効である薬剤の量を指す。「治療有効量」は、治療効果を達成するのに必要な量を定量することを意図する。当技術を有する医師または獣医は、必要な医薬組成物の「治療有効量」（例えばＥＤ５０）を容易に決定および処方することができる。

操作された骨髄性細胞は疾患細胞を攻撃するように「標的化される」
[0243]本開示は、異物、粒子、疾患細胞、細胞デブリ、炎症性シグナル、化学誘引の検出；内在性ＤＡＭＰおよびＰＡＭＰシグナル伝達経路の活性化；骨髄造血の誘発、血管外遊出；走化性；食作用；飲作用；動員；貪食；スカベンジング；細胞内酸化的破壊および病原体の溶解または殺作用の活性化、疾患または損傷細胞の検出、貪食および殺作用；ｉｎ ｖｉｖｏでの望まない細胞、組織または細胞デブリの除去；抗原提示および自然免疫の活性化における役割；免疫応答カスケードの活性化および調節；Ｔ細胞レパートリーの活性化；オートファジー；炎症性および非炎症性アポトーシス；ピロトーシス、ストレスに対する応答への免疫編集および組織恒常性の回復に関する特性の範囲で、免疫防御における生来の機能的役割にてこ入れすることにより、標的化したキラー骨髄性細胞を調製する組成物および方法を含む。一態様では、本明細書は、治療適応での使用のための骨髄性細胞の１つまたは複数の機能を増強させる方法および組成物を提供し、１つまたは複数の機能は、異物、粒子、疾患細胞、細胞デブリ、炎症性シグナル、化学誘引の検出；内在性ＤＡＭＰおよびＰＡＭＰシグナル伝達経路の活性化；骨髄造血の誘発、血管外遊出；走化性；食作用；飲作用；動員；トロゴサイトーシス；貪食；スカベンジング；細胞内酸化的破壊および病原体の細胞内溶解または殺作用の活性化、疾患または損傷細胞の検出、貪食および殺作用；ｉｎ ｖｉｖｏでの望まない細胞、組織または細胞デブリの除去；抗原提示および自然免疫の活性化における役割；免疫応答カスケードの活性化および調節；Ｔ細胞レパートリーの活性化；オートファジー；炎症性および非炎症性アポトーシス；ピロトーシス、ストレスに対する応答への免疫編集および組織恒常性の回復の１つまたは複数であってもよい。一実施形態では、組成物および方法は、特定の骨髄性細胞の標的化および殺作用機能の、これらの細胞の遺伝子改変による増強も対象とする。本明細書に記載の組成物および方法は、少なくとも１つの遺伝子改変を含む操作された骨髄性細胞の作出も対象とし、操作された骨髄性細胞が病原体または疾患細胞もしくはがん細胞を認識、標的化、食作用、死滅および／または除去することが可能であり、さらに病原体または疾患細胞の食作用、死滅および／または除去後に特定の免疫応答カスケードを活性化し得るように、病原体、腫瘍またはがん細胞などの疾患細胞を認識しこれらに対するエフェクター機能を誘導することを対象とし得る。

[0244]骨髄性細胞は、腫瘍に最も豊富な細胞である様である（図１Ｂ）。骨髄性細胞は、身体の健康な正常細胞上の腫瘍細胞を認識し、身体の腫瘍細胞への免疫応答を増加することも可能である。自然免疫応答のセンチネルとして、骨髄性細胞は、非自己または異常な細胞型を識別し、食作用と呼ばれるプロセスを介してこれらを排除することができる。これは、骨髄性細胞媒介性食作用の駆動および腫瘍細胞の溶解における治療上の利点に向けられ得る。しかしながら、これらの自然発生の腫瘍浸潤性骨髄性細胞（ＴＩＭ）は、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）の影響を受けることがある。ＴＩＭは、細胞の異種集団を構成する。多くのＴＩＭは循環する単球および顆粒細胞から生じ、次いで骨髄由来造血幹細胞に由来する。しかしながら、腫瘍由来因子による持続性の刺激の存在下で、単球および顆粒細胞前駆体はそれらの最終分化の内因性経路を成熟マクロファージ、ＤＣまたは顆粒細胞へと変換し、腫瘍促進性の骨髄性細胞型になり得る。病理学的、あるいは活性化された未成熟骨髄性細胞への分化が好まれる。これらの未成熟骨髄性細胞は、腫瘍関連ＤＣ（ＴＡＤＣ）、腫瘍関連好中球（ＴＡＮ）、骨髄性由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、および腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）を含む。この緊急の骨髄造血に代わり、ＴＡＭは組織常在性マクロファージから生じてもよく、次いで胚または単球起源であり得る。これらの組織常在性マクロファージは、発癌中に表現型および機能の変化を受け、増殖は、組織常在性のマクロファージに由来するＴＡＭを維持するのを助け得る。腫瘍微小環境は腫瘍浸潤性の骨髄性細胞を駆動し、骨髄性由来サプレッサー細胞になり、Ｔ細胞を抑制する能力を獲得し得る。結果として、腫瘍に浸潤することができ、食作用による取込みおよび殺作用のために腫瘍細胞を標的化することができる治療上有効なＴＩＭを作出する革新的な方法が必要である。

[0245]一態様では、本明細書は、特定の標的細胞、例えば腫瘍細胞または病原細胞を標的化することが可能な操作された骨髄性細胞を提供する。一部の実施形態では、本明細書で提供する操作された骨髄性細胞は、腫瘍細胞の浸潤、標的化および殺作用に効力がある。本明細書に記載の操作された骨髄性／食細胞は、標的細胞、例えば腫瘍細胞またはがん細胞に食細胞を標的化するのを助ける１つまたは複数のタンパク質をコードする組換え核酸を含むように設計される。一実施形態では、操作された骨髄性細胞は、腫瘍に容易に浸潤することが可能である。一実施形態では、操作された骨髄性細胞は、循環の間に、対象の非腫瘍、非疾患細胞への交差反応性がなく、または無視でき、標的細胞に高い特異性を有する。一実施形態では、本明細書に記載の操作された骨髄性／食細胞は、組換え核酸を含むように設計され、細胞がＴＭＥの影響を克服／回避し、強力な抗腫瘍応答を開始するのを助けるであろう。一実施形態では、本明細書に記載の操作された骨髄性／食細胞は、組換え核酸を含むように設計され、標的細胞の食作用を増加する。別の実施形態では、本明細書に記載の操作された骨髄性／食細胞は、組換え核酸を含むように設計され、トロゴサイトーシスの減少または除去を増加し、および／または標的細胞の食作用性溶解を増強する。

[0246]したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物は、キメラ受容体融合タンパク質（ＣＦＰ）、例えば食作用受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）をコードする組換え核酸を含む、骨髄性細胞を含む。組換え核酸は、（ｉ）膜貫通ドメイン、および（ｉｉ）ＰＲ細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む、ＰＲサブユニット、ならびに標的細胞の抗原に特異的な細胞外抗原結合ドメインをコードする配列を含むことができ、膜貫通ドメインおよび細胞外抗原結合ドメインが作動可能に連結されており；ＰＲ細胞内シグナル伝達ドメインがシグナル伝達ドメインを有する受容体に由来する。組換え核酸は、食細胞が標的細胞に結合するのを助け、その食作用活性を増強する、１つまたは複数の細胞膜受容体を構成する１つまたは複数のポリペプチドをさらにコードする。

[0247]一部の実施形態では、本明細書に記載の骨髄性細胞は、キメラ受容体を含む１つまたは複数の組換えタンパク質を含み、キメラ受容体は、疾患細胞、腫瘍細胞または病原体であってもよい標的細胞に向けた第１の食作用シグナル、および第１のシグナルによって開始された標的への食作用および殺作用応答を増強する炎症性シグナルである第２のシグナルに応答することが可能である。

食細胞
[0248]本明細書では、食細胞を「改善するステップ」または「改変するステップ」または「操作するステップ」および患者または対象の特定の細胞型または細胞のクラスであり得る特定の標的に向けて標的化するステップを含む、免疫療法のための方法および組成物を提供する。一部の実施形態では、対象は疾患を有する患者である。用語、対象および患者は、この節で交換可能に使用されることが多い。一部の実施形態では、食細胞は疾患を有する対象に由来し、疾患は、例えばがんである。対象由来の自家細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで改変されても、細胞に投与されてもよく、改変された食細胞は対象のがん細胞を特異的に攻撃および殺すように再設計される。

[0249]一部の実施形態では、対象は、がんではない疾患を有する。
[0250]一部の実施形態では、対象は、感染である疾患を有する。一部の実施形態では、本明細書で提供する免疫療法のための方法および組成物は、食細胞を「改善する」または「改変する」または「操作する」およびそれを感染、例えば対象内の感染細胞に向けて標的化するためである。

[0251]一部の実施形態では、対象は、ウイルス、細菌、真菌または原生生物感染である疾患を有する。一部の実施形態では、本明細書で提供する免疫療法のための方法および組成物は、食細胞を「改善する」または「改変する」または「操作する」およびそれを感染した対象内のウイルス感染細胞、細菌感染細胞、真菌感染細胞または原生生物感染細胞に向けて標的化するためである。一部の実施形態では、本明細書で提供する免疫療法のための方法および組成物は、食細胞を「改善する」または「改変する」または「操作する」および対象のウイルス、細菌、真菌または病原体が食作用および／または死滅されるように、それを対象のウイルス、細菌、真菌または任意の病原体に向けて標的化するためである。一部の実施形態では、本明細書で提供する免疫療法のための方法および組成物は、食細胞を「改善する」または「改変する」または「操作する」および対象のウイルス、細菌、真菌または病原体に対する対象内の少なくとも１つの改善された免疫応答があるように、それを対象のウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原または病原体の抗原に向けて標的化するためである。

[0252]一部の実施形態では、食細胞などの骨髄性細胞は、同種異系である。一部の実施形態では、本明細書で提供する免疫療法のための方法および組成物は、同種異系供給源に由来する、食細胞などの骨髄性細胞を得るステップを含む。食細胞などの骨髄性細胞は、その後、同種異系供給源由来の改変または操作された細胞が対象の疾患細胞を攻撃することができ、疾患細胞に食作用し、および／または疾患細胞を直接的にまたは間接的に殺し、または疾患への対象の少なくとも１つの免疫応答を改善するように、改変または操作され、疾患対象へと導入され得る。一部の実施形態では、同種異系供給源はヒトである。一部の実施形態では、同種異系供給源は健康なヒトである。

[0253]食細胞は、免疫系の自然センチネルであり、身体の防御の第一線を形成する。それらは、病原体、病原体感染細胞、異物または癌細胞を貪食し、それを身体から除去する。ほとんどの潜在的な病原体は、それらが例えば、重大な感染症を引き起こし得る前に、この系によって迅速に中和される。これは、膜ラフリングおよび食作用の結果として、クラスリン被覆ピット系、ピノサイトーシス、特にマクロピノサイトーシスを介する受容体媒介性取込みを含み得る。したがって、食細胞は、様々な非自己（および自己）エレメントによって活性化され、それらの「標的」の認識の可塑性のレベルを示すことができる。

[0254]単球、マクロファージ、および樹状細胞から構成される単核食細胞系（ＭＰＳ）は、組織の恒常性および抗原提示におけるその役割による免疫応答のバランスを決定することに必須である。ＭＰＳは、骨髄前駆細胞から生じ、血液の単球、組織のマクロファージおよび樹状細胞を生じる細胞系統である。したがって、ＭＰＳからマクロファージを生成するプロセスは、全身循環に入る用意がある単球へと分化のプロセスを受けるＢＭの前単球により開始する。短期間（＜４８時間）の循環後、これらの新しく形成された単球は、それらの大半がマクロファージまたは樹状細胞（ＤＣ）へと分化する末梢組織へと迅速に浸潤する。抗微生物食作用は、疾患を引き起こす微生物を排除および分解し、サイトカインおよびケモカイン分泌により炎症促進性シグナル伝達を誘導し、免疫細胞を動員して有効な炎症応答を開始する。この型の食作用は、「炎症性食作用」（または「免疫原性食作用」）と呼ばれることが多い。しかしながら、特定の持続性感染などの一部の場合では、抗炎症応答は微生物取込みに続く。抗微生物食作用は、一般に、未成熟樹状細胞（ＤＣ）およびマクロファージなどの骨髄性系統のプロフェッショナル食細胞、および組織常在性免疫細胞によって実施される。損傷した、アポトーシス細胞または細胞の食作用は、典型的には、非炎症性（「非免疫原性」とも呼ばれる）プロセスである。形質転換または悪性細胞（自己細胞）、および細胞は食作用を受け、アポトーシス細胞は、周辺組織に損傷を引き起こさず、炎症促進性免疫応答を誘導せずに、速やかに除去される。この型のアポトーシス細胞クリアランスは、非炎症性であり、アポトーシス細胞の位置に食細胞を動員するためにアポトーシス細胞からの「ｆｉｎｄ ｍｅ」シグナルの放出を含み；特定の受容体を介して食細胞によって結合されるアポトーシス細胞の表面に曝露された「ｅａｔ ｍｅ」シグナルを伴い；アポトーシス細胞を貪食する細胞骨格再構成；続いて摂取したアポトーシス細胞は消化され、特定の食作用受容体が誘引される（例えば、抗炎症性サイトカインの分泌）。

[0255]食作用、微粒子、例えば細胞膜エンベロープ内の＞０．５μｍの粒子の細胞取込みは、液相マクロピノサイトーシスおよび受容体経路による可溶性リガンドのエンドサイトーシスと密に関係し、また部分的に重複する。エフェロサイトーシスとしても公知の、アポトーシス細胞の取込みと関連するバリアント、およびネクローシス細胞のものは、感染および炎症から生じる（ネクロトーシスおよびピロトーシス）。外因性粒子の取込み（ヘテロファジー）は、オートファジーと共通する特徴、損傷した細胞内小器官の分離およびリソソーム廃棄の内在性プロセスを有する。粒子サイズ、受容体－リガンド相互作用の多様性、および細胞骨格の関与による、取込みメカニズムのスペクトルがある。一度内部移行すると、食胞は一時リソソームまたは小胞体（ＥＲ）およびゴルジ複合体の産物と選択的に融合し、二次ファゴリソソームを形成することができる（Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｄ．Ｇ．（２０１１）．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２４０，２５２－２６８）。この経路は動的であり、細胞内小胞および分泌小胞、マクロファージ、ＤＣ、破骨細胞および好酸球との融合および分裂を受ける。抗微生物食作用は、疾患を引き起こす微生物を排除および分解し、サイトカインおよびケモカイン分泌を通して炎症促進性シグナル伝達を誘導し、免疫細胞を動員して有効な炎症応答を開始する。この型の食作用は、「炎症性食作用」（または「免疫原性食作用」）と呼ばれることが多い。しかしながら、特定の持続性感染などの一部の場合では、抗炎症応答は微生物取込みに続く。抗微生物食作用は、一般に、未成熟樹状細胞（ＤＣ）およびマクロファージなどの骨髄性系統のプロフェッショナル食細胞、および組織常在性免疫細胞によって実施される。損傷した、自己由来のアポトーシス細胞または細胞デブリの食作用（例えば、エフェロサイトーシス）は、反対に、典型的には、非炎症性（「非免疫原性」とも呼ばれる）プロセスである。何十億もの損傷した、瀕死の、および望まない細胞が毎日アポトーシスされる。望まない細胞は、例えば発生の間に生じた過剰な細胞、老化細胞、感染細胞（細胞内細菌またはウイルス）、形質転換または悪性細胞、および細胞傷害性薬剤によって不可逆的に損傷した細胞を含む。

[0256]骨髄は、炎症および感染の間に選択された組織常在性のマクロファージを置き換え、組織骨髄性集団を増殖させる循環する好中球および単球の供給源である。食作用後、新しく動員された単球および組織マクロファージは、細胞膜の既存のリン脂質およびアラキドン酸からそれらを生成することにより、および呼吸性バーストの活性化または誘導性一酸化窒素合成の誘導によって生成された基を放出することによりそれらの産物を分泌し；上記のように生成した低分子量産物（アラキドン酸代謝物、スーパーオキシドアニオン、および一酸化窒素）の合成によって達成されるのとは別に、マクロファージの食作用によって誘導される分泌は主にＲＮＡの新しい合成およびｐＨの変化によって達成され、段階的酸性化を生じる。

[0257]一部の実施形態では、本明細書で提供する食細胞は、単球または単球系統の細胞である。
[0258]一部の実施形態では、骨髄性細胞は、ＭＡＲＣＯ＋ＳｉｇｎＲ１＋である食作用マクロファージであり、外側の辺縁帯に見出され、迅速にカプセル化した細菌を排除する。類似のＣＤ１６９＋ Ｆ４／８０マクロファージ株はリンパ節の被膜下洞にあり、ウイルス感染に関係があるとされている。肝臓のＫｕｐｆｆｅｒ細胞を含む内皮マクロファージは、血液およびリンパ節から微生物および抗原性リガンドを排除し、粘膜免疫に匹敵するが異なる洞様毛細血管免疫機能を提供することが知られている。典型的なマクロファージマーカーを発現するにもかかわらず、全ての組織マクロファージが構成的に食作用性ではない。げっ歯類の脾臓の辺縁帯では、Ｆ４／８０を欠損する好金属マクロファージは、ＣＤ１６９、シアル酸結合免疫グロブリン（Ｉｇ）様レクチン１（ＳＩＧＬＥＣ１［シアロアドへシン］）を強く発現するが、食作用性は弱い。非プロフェッショナル食細胞は、上皮細胞、および線維芽細胞を含む。線維芽細胞は、「ワーキングクラスの食細胞」であり、接着分子ＩＣＡＭおよびビトロネクチン受容体を通してＣＤ１１ｂ－ＣＤ１８以外のインテグリンを使用することによりアポトーシスデブリを排除する。星状細胞も、効率的にアポトーシス死骸を分解しないとしても、貪食することが報告されている。食作用に関連する細胞膜受容体は、オプソニンの、主にＩｇＧ抗体の保存ドメインのＦｃＲ（活性化または阻害）、および補体活性化の古典経路（ＩｇＭまたはＩｇＧ）または代替のレクチン経路により蓄積したｉＣ３ｂのＣＲ３などの補体受容体であり得る。ＣＲ３は、おそらくマクロファージ由来の補体を蓄積することによって、オプソニンの不在下での認識も媒介することができる。抗微生物食作用は、一般に、未成熟樹状細胞（ＤＣ）およびマクロファージなどの骨髄系統のプロフェッショナル食細胞により、および組織常在性の免疫細胞により実施される。

[0259]一部の実施形態では、本明細書で開示される即時の細胞工学プログラムのため、免疫療法での使用のために操作するために使用される細胞は強力に食作用性である。
[0260]一部の実施形態では、本明細書で開示される即時の細胞工学プログラムのため、免疫療法での使用のために操作するために使用される細胞は全血、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織から得られる。

[0261]一部の実施形態では、免疫療法での使用のために操作するために使用される細胞は末梢血から得られる。
[0262]肝臓ＭＰＳ中、様々な構造および機能的区別が、がん免疫療法のための細胞の生成の目的に関して刺激性と阻害性の両方であると特徴づけられた。

[0263]一部の実施形態では、即時の適用の免疫療法での使用のために操作される骨髄性細胞は、マクロファージ、樹状細胞、脂肪細胞、単球、好中球、ミクログリア、および星状細胞からなる群から選択される骨髄性細胞を含む。

[0264]一部の実施形態では、免疫療法での使用のために操作される骨髄性細胞は、食細胞である。一部の実施形態では、食細胞は単球である。
[0265]一部の実施形態では、即時の適用の免疫療法での使用のために操作される骨髄性細胞は、単球、単球由来マクロファージ、および／または樹状細胞である。

[0266]一部の実施形態では、即時の適用の免疫療法での使用のために操作される骨髄性細胞は、単球またはマクロファージである。
[0267]一部の実施形態では、骨髄性細胞は末梢血から得られる。

[0268]一部の実施形態では、骨髄性細胞は選択マーカーＣＤ１４^＋ＣＤ１６^ｌｏｗによって選択される。一部の実施形態では、骨髄性細胞はエルトリエーションを介して選択される。

[0269]一部の実施形態では、骨髄性細胞は対象の白血球除去カラムから単離される。一部の実施形態では、対象は、操作された細胞を含む医薬組成物を投与される同じ対象である。

[0270]一部の実施形態では、対象は操作された細胞を含む医薬組成物を投与される同じ対象ではない。
[0271]一部の実施形態では、白血球除去を週に１回同じ対象で実施し、より骨髄性細胞を回収する。一部の実施形態では、白血球除去は８～１０日の期間で１回より多く同じ対象で実施し、より骨髄性細胞を回収する。一部の実施形態では、白血球除去は、１か月の期間で２回より多く同じ対象で実施し、より骨髄性細胞を回収する。

[0272]一部の実施形態では、骨髄性細胞は、白血球除去試料または末梢血試料から単離される。一部の実施形態では、骨髄性細胞は前駆細胞である。一部の実施形態では、骨髄性細胞は単球前駆細胞である。一部の実施形態では、本明細書に記載の骨髄性細胞は、最終細胞へと分化せず、組織マクロファージなどの最終細胞表現型を示さない。一部の実施形態では、骨髄性細胞はＣＤ１４＋細胞を含む。一部の実施形態では、骨髄性細胞はＣＤ１６を発現しない。一部の実施形態では、骨髄性細胞は少量のＣＤ１６を発現する。一部の実施形態では、骨髄性細胞は、ＣＤ１４＋細胞の選択による末梢血またはアフェレーシス試料などの生体試料から操作するために事前選択される。一部の実施形態では、選択は、選択される骨髄性細胞と接触または結合せずに実施される。一部の実施形態では、骨髄性細胞は、ソーティング、例えばフローサイトメトリーベースのセルソーター（ＦＡＣＳ）により、生体試料から操作する前に選択される。一部の実施形態では、ＣＤ１６を発現する骨髄性細胞は抗体によって捕捉され、残りの骨髄性細胞を回収して操作に使用した。一部の実施形態では、骨髄性細胞を得るために、例えばＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ４０、またはＣＤ２０６など、１つまたは複数の他の細胞表面分子が、ＣＤ１６に加えて陰性選択プロセスでの捕捉のために標的化された。

[0273]一態様では、本明細書は、融合タンパク質をコードする少なくとも１つの外因性組換え核酸を含む骨髄性細胞を提供する。融合タンパク質は、少なくとも１つの膜貫通ドメインおよび標的細胞に結合することができる領域を含む細胞外ドメインを含むキメラタンパク質であってもよい。例えば、キメラタンパク質は標的、例えば標的抗原、抗原ペプチド、または標的細胞のリガンドに結合してもよい。一部の実施形態では、標的細胞はがん細胞である。一部の実施形態では、標的はがん抗原である。一部の実施形態では、キメラタンパク質は骨髄性細胞で発現され、骨髄性細胞を活性化し、ＴＭＥ誘導抑制シグナルを克服し、活性化炎症促進性骨髄性細胞として作用する。一実施形態では、骨髄性細胞で発現されるキメラタンパク質は、標的（第１のシグナル）以外の第２のシグナルに反応することが可能であり、第２のシグナルは炎症促進性シグナルおよび活性化シグナルである。一部の実施形態では、骨髄性細胞で発現されるキメラタンパク質は、標的または第１のシグナル以外の複数のシグナルに反応することが可能である。キメラタンパク質は、標的または第１のシグナルの他に１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれ以上のシグナルに反応することができてもよい。

[0274]別の実施形態では、骨髄性細胞で発現されるキメラタンパク質は標的への結合が特異的である。一部の実施形態では、標的はがん抗原である。キメラタンパク質の発現は骨髄性細胞への標的特異性に寄与する。

[0275]一実施形態では、骨髄性細胞で発現されるキメラタンパク質は、例えば１つより多くのシグナルまたはシグナル型の活性化およびプロセシングのための複数ドメインを有する多重化することが可能である。一部の実施形態では、複数ドメインの活性化は同時に骨髄性細胞への増加したエフェクター応答をもたらす。骨髄性細胞のエフェクター応答は、例えば食作用の増強、炎症促進性活性化、および標的細胞の殺作用を包含する。一部の実施形態では、骨髄性細胞で発現され、多重化することが可能なキメラタンパク質は、標的抗原およびヘルパー分子などの１つより多くのリガンドに結合することが可能である。一部の実施形態では、キメラタンパク質はがん細胞の複数の標的抗原に結合することが可能である。一部の実施形態では、多重化することが可能なキメラタンパク質は、複数の細胞の複数の標的抗原に結合することが可能である。一部の実施形態では、キメラタンパク質は、がん細胞のマクロファージ－単球阻害標的に結合してもよく、細胞内末端に融合した炎症促進性ドメインを使用して接触すると刺激シグナルを作出し、プロセスは「シグナルスイッチ」と呼ばれる。例えば、キメラタンパク質の細胞外ドメインはＣＤ４７結合ドメインを含み得るのに対し、キメラ融合タンパク質は天然のＣＤ４７受容体の膜貫通ドメインおよび／または細胞内ドメインを欠如するが、細胞内領域にＰＩ３Ｋ動員ドメインを含み、それにより腫瘍細胞との接触から炎症促進性食作用増強シグナルへとマクロファージ－単球阻害シグナルを変換する。

[0276]一部の実施形態では、キメラタンパク質は、発現されたキメラタンパク質の複数単位に結合すること、例えば多量体化することが可能である。多量体化は、二量体、三量体、四量体、五量体、六量体、七量体、八量体、九量体、または十量体形成を含む。一部の実施形態では、多量体化は、膜貫通領域、細胞外領域または細胞内領域またはこれらの組合せの会合を介して起こり得る。例えば、食作用受容体ＭＡＲＣＯのコラーゲンドメインの領域を含むキメラタンパク質は、その有効な機能のための三量体を形成してもよい。一部の実施形態では、キメラタンパク質は他の分子、例えば別の受容体と会合することが可能である。例えば、キメラタンパク質は、Ｆｃγ ＴＭドメインと二量体化するＦｃ－アルファ膜貫通ドメインを含み、Ｆｃγは内在性受容体であってもよい。

[0277]一部の実施形態では、多重化することが可能なキメラタンパク質は、１つより多くのシグナルによって活性化され、次いで複数の細胞内シグナル伝達分子を活性化し得る複数の細胞内ドメインを含む。例えば、キメラタンパク質は食作用受容体ドメインおよび炎症促進性ドメインを含んでもよい。例えば、キメラタンパク質は、ＦｃＲシグナル伝達ドメインおよびプロカスパーゼを動員するさらなるリン酸化ドメインを含む。

ＰＦＰ融合タンパク質の食作用受容体（ＰＲ）サブユニット
[0278]本明細書では、食作用受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）であるＣＦＰをコードする組換え核酸を提供する。ＰＦＰは、膜貫通（ＴＭ）ドメイン、およびＰＲ細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン（ＩＤＣ）を含むＰＲサブユニットを含み得る。一部の実施形態では、ＰＦＰをコードする組換え核酸が細胞で発現される場合、ＰＦＰは細胞の細胞膜へと機能的に組み込まれる。一部の実施形態では、組換え核酸は、食細胞、例えばマクロファージなどの骨髄性細胞の膜に特異的に組み込まれる膜貫通ドメインをコードする。

[0279]一部の実施形態では、膜貫通タンパク質のライブラリーのスクリーニング後に好適なＰＲが選択される。ＰＲサブユニットは、細胞外ドメインでがん細胞結合抗体と融合される。一部の実施形態では、ＰＲは、細胞内末端で１つまたは複数のさらなるドメインと融合されてもよい。

ＣＦＰ融合タンパク質の細胞内ドメイン
[0280]一部の実施形態では、ＣＦＰサブユニットは食作用受容体のＴＭドメインを含む。

[0281]一部の実施形態では、ＣＦＰサブユニットは食作用受容体のＩＣＤドメインを含む。
[0282]一部の実施形態では、食作用受容体はスカベンジャー受容体である。多くのスカベンジャー受容体が物質の検出および摂取において協力するが、全ての受容体が食作用誘発貪食のみに従事するわけではない。特定の食作用とスカベンジャー受容体の関連は、下流の免疫応答に劇的な影響を有し得る。例えば、５００ｎｍの負電荷のナノ粒子によるＡ型スカベンジャー受容体ＭＡＲＣＯの誘発は、抗炎症性免疫寛容原性の免疫応答と関連する。一方、正電荷の粒子は、ＮＬＲＰ３および／または線維化応答などの炎症促進性経路を活性化する食作用受容体のサブセットにより貪食される。さらに、内皮細胞（ＳＲＥＣ－１）によって発現されるスカベンジャー受容体などの特定のスカベンジャー受容体経路は、抗原交差提示に役割を果たすことが示されている。したがって、マクロファージ活性の増強に利用され得る潜在的な受容体を同定および理解すること、および臨床的な有効性は、ＣＦＰ開発プラットフォームで重要なステップである。

[0283]プロフェッショナル食細胞によって天然に不定に発現される非オプソニン受容体は、ＣＤ１６９、ＣＤ３３などのレクチン様認識分子、およびシアル酸付加残基の関連受容体を含む。さらに、食細胞は、デクチン－１（はっきりと定義されたシグナル伝達能力を有する真菌βグルカンの受容体）、関連Ｃ型レクチン（例えば、ＭＩＣＬ、デクチン－２、Ｍｉｎｃｌｅ、およびＤＮＧＲ－１）、およびスカベンジャー受容体の群も発現する。ＳＲ－Ａ、ＭＡＲＣＯ、およびＣＤ３６はドメイン構造で異なり、アポトーシスおよび微生物リガンドの認識が重複するが、明確に異なる。ＣＤ３６関連ファミリーメンバーは、アポタンパク質リガンドが受容体ヘリックス束に結合するが、それらの細胞外表面のドメインがそれによりコレステロールなどの脂質を膜二重層へ移動するチャネルを形成することを明らかにした。

[0284]一部の実施形態では、組換え核酸は、食作用のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ－Ｐ）をコードする。一部の実施形態では、組換え核酸は、食作用受容体（ＰＲ）融合タンパク質をコードする。

[0285]一部の実施形態では、組換え核酸によってコードされるＣＦＰのＩＣＤは、ＴＮＦＲ１、ＣＤ４０、ＭＤＡ５、レクチン、デクチン１、マンノース受容体（ＣＤ２０６）、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、およびＣＤ１６９受容体からなる群から選択されるタンパク質由来のドメインを含む。

[0286]一部の実施形態では、ＩＣＤは、レクチン、デクチン１、マンノース受容体（ＣＤ２０６）、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ（コラーゲン構造を有するマクロファージ受容体、別名：ＳＲＡ６、ＳＣＡＲＡ２）、ＣＤ３６（トロンボスポンジ受容体、別名：スカベンジャー受容体クラスＢ、メンバー３）、ＣＤ１６３（スカベンジャー受容体、システインリッチ－１型）、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２（別名：Ｃ型レクチン、ＳＣＡＲＡ４、またはコレクチン１２を有するスカベンジャー受容体）、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８（ＳＣＡＲＤ、ミクロシアリン）、ＯＬＲ１（酸化低密度リポタンパク質受容体１、Ｌｏｘ－１、またはＣ型レクチンドメインファミリー８メンバーＡ）、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、およびＣＤ１６９（別名、シアロアドへシン受容体、ＳＩＧＬＥＣ１）のいずれか１つまたは複数に由来するシグナル伝達ドメインを含む。

[0287]一部の実施形態では、組換え核酸は、例えばヒトＭＡＲＣＯの細胞内ドメインをコードする。ＰＲサブユニットは、アミノ酸配列：ＭＲＮＫＫＩＬＫＥＤＥＬＬＳＥＴＱＱＡＡＦＨＱＩＡＭＥＰＦＥＩＮＶＰＫＰＫＲＲＮＧＶＮＦを有するヒトＭＡＲＣＯの４４アミノ酸ＩＣＤを有する細胞内ドメインを含み得る。一部の実施形態では、ＰＲサブユニットは、ＭＡＲＣＯの細胞内ドメインと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％同一であるバリアントを含む。一部の実施形態では、ＰＲはヒトＭＡＲＣＯの膜貫通領域を含む。

[0288]一部の実施形態では、組換え核酸は、ヒトＳＲＡ１の細胞内ドメインをコードする。ＣＦＰは、アミノ酸配列：ＭＥＱＷＤＨＦＨＮＱＱＥＤＴＤＳＣＳＥＳＶＫＦＤＡＲＳＭＴＡＬＬＰＰＮＰＫＮＳＰＳＬＱＥＫＬＫＳＦＫを有するヒトＳＲＡ１の５０アミノ酸ＩＣＤを有する細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＲサブユニットは、ヒトＳＲＡ１の細胞内ドメインと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％同一であるバリアントを含む。ＳＲＡの細胞内領域はリン酸化部位を有する。

[0289]一部の実施形態では、ＣＦＰはヒトＳＲＡ１の膜貫通領域を含む。
[0290]一部の実施形態では、組換え核酸はＣＤ３６の細胞内ドメインをコードする配列を含む。一部の実施形態では、組換え核酸はＣＤ３６のＴＭドメインをコードする配列を含む。自然発生の全長ＣＤ３６は、２つのＴＭドメインおよび２つの短い細胞内ドメインを有し、ＣＤ３６の細胞外ドメインは酸化ＬＤＬに結合する。両方の細胞内ドメインは、アシル化された脂肪酸であるシステインの対を含有する。それは、公知のシグナル伝達ドメイン（例えば、キナーゼ、ホスファターゼ、ｇ－タンパク質結合、または足場ドメイン）を欠損する。Ｎ末端細胞質ドメインは極端に短く（５～７アミノ酸残基）、細胞膜の内部リーフレットと密接に関連している。カルボキシ末端ドメインは、シグナル伝達分子と相互作用することが公知のＣＤ４およびＣＤ８の細胞内ドメインの領域と相同なＣＸＣＸ５Ｋモチーフを含有する１３アミノ酸を含有する。ＣＤ３６の細胞内ドメインは、ｌｙｎキナーゼ、ＭＡＰキナーゼおよび接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）を活性化するシグナル伝達複合体をアセンブルすること、およびｓｒｃ相同２－含有リン酸化チロシンホスファターゼ（ＳＨＰ－２）の不活性化が可能である。グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）のメンバーが、潜在的な鍵となるシグナル伝達中間体として同定されている。

[0291]一部の実施形態では、組換え核酸は、例えばヒトＳＣＡＲＡ３の細胞内ドメインをコードする。ＣＦＰは、アミノ酸配列：ＭＫＶＲＳＡＧＧＤＧＤＡＬＣＶＴＥＥＤＬＡＧＤＤＥＤＭＰＴＦＰＣＴＱＫＧＲＰＧＰＲＣＳＲＣＱＫＮＬＳＬＨＴＳＶＲを有するヒトＳＣＡＲＡ３の５６アミノ酸ＩＣＤを有する細胞内ドメインを含み得る。一部の実施形態では、ＣＦＰは、ヒトＳＣＡＲＡ３の細胞内ドメインと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％同一であるバリアントを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰはＳＣＡＲＡ３のＴＭドメインを含む。

[0292]一部の実施形態では、ＰＲのＴＭドメインは、約２０～３０アミノ酸長である。一部の実施形態では、ＴＭドメインは複数の膜貫通スパンを含む。一部の実施形態では、ＴＭドメインは約２０～３０、３０～４０、４０～５０、５０～６０、６０～７０、７０～８０、８０～９０、９０～１００、１００～１５０、またはそれ以上のアミノ酸長を含む。一部の実施形態では、ＳＲのＴＭドメインは約２０～３０アミノ酸長である。

[0293]スカベンジャー受容体は、ホモまたはヘテロ二量体として生じ得る。例えば、ＭＡＲＣＯはホモ三量体として生じる。一部の実施形態では、スカベンジャー受容体は単量体である。一部の実施形態では、スカベンジャー受容体はホモ二量体である。一部の実施形態では、スカベンジャー受容体はヘテロ二量体である。一部の実施形態では、スカベンジャー受容体はホモ三量体である。一部の実施形態では、スカベンジャー受容体はヘテロ三量体である。一部の実施形態では、スカベンジャー受容体はホモ四量体である。一部の実施形態では、スカベンジャー受容体はヘテロ四量体である。一部の実施形態では、スカベンジャー受容体は、同じまたは異なる２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上のサブユニットを含む多量体である。

[0294]一部の実施形態では、ＰＳＰのＴＭドメインまたはＩＣＤドメインは、ＦｃＲ、Ｍｅｇｆ１０、Ｂａｉ１またはＭｅｒＴＫに由来しない。一部の実施形態では、ＲＰのＩＣＤはＣＤ３ゼータ細胞内ドメインを含まない。

[0295]一部の実施形態では、細胞内ドメインおよび膜貫通ドメインはＦｃＲβに由来する。
[0296]一態様では、組換え核酸は、食作用の増強したキメラ抗原受容体（ＣＡＲ－Ｐ）をコードし、それは、（ａ）標的細胞の抗原に特異的な細胞外抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、および（ｃ）組換えＰＳＲ細胞内シグナル伝達ドメインを含む食作用スカベンジャー受容体（ＰＳＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）であり、組換えＰＳＲ細胞内シグナル伝達ドメインは食作用受容体に由来する第１の部分および非食作用受容体に由来する第２の部分を含む。

[0297]一部の実施形態では、第２の部分はＰＩ３Ｋ動員ドメインではない。
[0298]非食作用受容体に由来する第２の部分は、食作用、および／または組換え核酸を発現する食細胞などの操作された骨髄性細胞の炎症可能性を増強する細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。一部の実施形態では、非食作用受容体に由来する第２の部分は、１つより多くの細胞内ドメイン（ＩＣＤ）を含む。一部の実施形態では、非食作用受容体に由来する第２の部分は、第２のＩＣＤを含む。一部の実施形態では、非食作用受容体に由来する第２の部分は、第２および第３のＩＣＤを含む。一部の実施形態では、非食作用受容体に由来する第２の部分は、第２、第３および第４のＩＣＤを含み、第２の部分は組換え核酸によってコードされる。一部の実施形態では、細胞内部分は、２、３、４、５、６、７、またはそれ以上のＩＣＤを含む。非食作用受容体に由来する第２、または第３、または第４のＩＣＤを含むそれぞれの第２の部分は、以下に記載する。

細胞内シグナル伝達および炎症活性化を増強するキメラ抗原受容体
[0299]一態様では、組換え核酸は、食作用ＩＣＤに加えて第２の細胞内ドメインをコードし、マクロファージなどの骨髄性細胞が感染防御に関与する場合など、強力な炎症促進性免疫活性化の能力を与える。第２の細胞内ドメイン（第２のＩＣＤ）は、第１の食作用ＩＣＤの細胞質末端に融合される。第２の細胞内ドメインは、インフラマソームおよび炎症促進性シグナルを誘発するのに必要な第２のシグナルを提供する。Ｎｏｄ様受容体（ＮＬＲ）は、自然免疫応答において活性化される受容体のサブセットであり、オリゴマー化して炎症促進性カスパーゼを動員し、それらの切断および活性化を誘導するプラットフォームとして寄与する多タンパク質複合体を形成する。これは、ＲＯＳの直接的な活性化をもたらし、ピロプトーシスとして公知の激しい細胞死を生じることが多い。４つのインフラマソーム複合体、ＮＬＲＰ１ｍ、ＮＬＲＰ３、ＩＰＡＦおよびＡＩＭ２がある。

[0300]腫瘍微小環境（ＴＭＥ）は、免疫抑制環境を構成する。ＩＬ－１０、グルココルチコイドホルモン、アポトーシス細胞、および免疫複合体の影響は、自然免疫細胞機能と干渉し得る。食細胞を含む免疫細胞は、免疫寛容原性表現型に定着する。マクロファージなどの骨髄性細胞では、一般にＭ２表現型として公知のこの表現型は、Ｍ１表現型とは異なり、細胞が病原体を殺す能力があるまたは殺すことができる。ＬＰＳまたはＩＦＮγに曝露されたマクロファージなどの骨髄性細胞は、例えばＭ１表現型に極性化することができるが、ＩＬ－４またはＩＬ－１３に曝露されたマクロファージなどの骨髄性細胞は、Ｍ２表現型に極性化することができる。ＬＰＳまたはＩＦＮγは、炎症促進性Ｍ１骨髄性細胞応答のため、マクロファージなどの骨髄性細胞の表面でトール様受容体４（ＴＬＲ４）と相互作用し、ＴｒｉｆおよびＭｙＤ８８経路を誘導し、転写因子ＩＲＦ３、ＡＰ－１、およびＮＦＫＢの活性化を誘導し、したがってＴＮＦ遺伝子、インターフェロン遺伝子、ＣＸＣＬ１０、ＮＯＳ２、ＩＬ－１２等を活性化することができる。同様に、ＩＬ－４およびＩＬ－１３はＩＬ－４Ｒに結合し、Ｊａｋ／Ｓｔａｔ６経路を活性化し、抗炎症応答（Ｍ２応答）と関連する遺伝子であるＣＣＬ１７、ＡＲＧ１、ＩＲＦ４、ＩＬ－１０、ＳＯＣＳ３等の発現を制御する。ＣＤ１４、ＣＤ８０、Ｄ２０６の発現およびＣＤ１６３の低発現は、マクロファージなどの骨髄性細胞のＭ１表現型への極性化の指標である。

[0301]一部の実施形態では、組換え核酸は、炎症応答のための細胞質ドメインを含む１つまたは複数のさらなる細胞内ドメインをコードする。一部の実施形態では、マクロファージなどの操作された骨髄性細胞の炎症応答のための細胞質ドメインを含む食作用受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）をコードする組換え核酸の発現は、Ｍ１表現型に類似の強力な炎症促進性応答を与える。

[0302]一部の実施形態では、炎症応答のための細胞質ドメインは、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ９、ＭＹＤ８８、ＴＲＩＦ、ＲＩＧ－１、ＭＤＡ５、ＣＤ４０、ＩＦＮ受容体、ＮＬＲＰ－１、ＮＬＲＰ－２、ＮＬＲＰ－３、ＮＬＲＰ－４、ＮＬＲＰ－５、ＮＬＲＰ－６、ＮＬＲＰ－７、ＮＬＲＰ－８、ＮＬＲＰ－９、ＮＬＲＰ－１０、ＮＬＲＰ－１１、ＮＬＲＰ－１２、ＮＬＲＰ－１３、ＮＬＲＰ－１４、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、Ｐｙｒｉｎ、ＡＩＭ２、ＮＬＲＣ４および／またはＣＤ４０の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

[0303]一部の実施形態では、食作用スカベンジャー受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）は、ＩＬ－１シグナル伝達カスケードの活性化のための炎症促進性細胞質ドメインを含む。

[0304]一部の実施形態では、キメラ受容体（例えば、食作用受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ））の細胞質部分は、トール様受容体３（ＴＬＲ３）、トール様受容体４（ＴＬＲ４）、トール様受容体７（ＴＬＲ７）、トール様受容体８（ＴＬＲ８）、トール様受容体９（ＴＬＲ９）の細胞内シグナル伝達ドメインなどのトール様受容体由来の細胞質ドメインを含む。

[0305]一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞質部分は、インターロイキン－１受容体関連キナーゼ（ＩＲＡＫ１）由来の好適な領域を含む。
[0306]一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞質部分は、分化一次応答タンパク質（ＭＹＤ８８）由来の好適な領域を含む。

[0307]一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞質部分は、ミエリンおよびリンパ球タンパク質（ＭＡＬ）由来の好適な領域を含む。
[0308]一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞質部分は、レチノイン酸誘導遺伝子（ＲＩＧ－１）由来の好適な領域を含む。

[0309]一部の実施形態では、ＣＦＰの細胞質部分は、ＭＹＤ８８、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＭＡＬ、またはＩＲＡＫ１のいずれか１つの細胞質ドメインを含む。

[0310]一部の実施形態では、組換えＣＦＰ細胞内シグナル伝達ドメインは、食細胞受容体に由来する第１の部分および非食作用受容体に由来する第２の部分を含み、非食作用受容体に由来する第２の部分はリン酸化部位を含む。一部の実施形態では、リン酸化部位は自己リン酸化部位に好適なアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リン酸化部位はＳｒｃファミリーキナーゼによるリン酸化に好適なアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リン酸化部位は、リン酸化すると、キナーゼのＳＨ２ドメインに結合することができるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、受容体チロシンキナーゼドメインは、第１の細胞質部分に加えてＰＦＰの細胞質末端に融合される。

[0311]一部の実施形態では、リン酸化はチロシンリン酸化である。
[0312]一部の実施形態では、第２の細胞内ドメインは、免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）である。ＩＴＡＭモチーフは、哺乳動物αおよびβ免疫グロブリンタンパク質、ＴＣＲγ受容体、ＦＣＲγ受容体サブユニット、ＣＤ３鎖受容体およびＮＦＡＴ活性化分子に存在する。

[0313]一部の実施形態では、ＰＦＰ細胞内ドメインは、１個のＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、ＰＦＰ細胞内ドメインは、１個より多くのＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、ＰＦＰ細胞内ドメインは、２個またはそれ以上のＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、ＰＦＰ細胞内ドメインは、３個またはそれ以上のＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、ＰＦＰ細胞内ドメインは、４個またはそれ以上のＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、ＰＦＰ細胞内ドメインは、５個またはそれ以上のＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、ＰＦＰ細胞内ドメインは、６個またはそれ以上のＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、ＰＦＰ細胞内ドメインは、７個またはそれ以上のＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、ＰＦＰ細胞内ドメインは、８個またはそれ以上のＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、ＰＦＰ細胞内ドメインは、９個またはそれ以上のＩＴＡＭモチーフを含む。一部の実施形態では、ＰＦＰ細胞内ドメインは、１０個またはそれ以上のＩＴＡＭモチーフを含む。

[0314]一部の実施形態では、第１の食作用ＩＣＤの１つまたは複数のドメインが変異を含む。
[0315]一部の実施形態では、第２のＩＣＤの１つまたは複数のドメインが、キナーゼ結合ドメインを増強し、リン酸化部位を生成し、ＳＨ２ドッキング部位またはこれらの組合せを生成する変異を含む。

炎症性遺伝子の共発現
[0316]一態様では、組換え核酸は、操作された細胞でＰＦＰと共発現される炎症促進性遺伝子のコード配列を含む。一部の実施形態では、炎症促進性遺伝子はサイトカインである。例としては、限定はされないが、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１α、ＩＬ－１ 、ＩＬ－６、ＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、またはＩＬ－１２またはインターフェロンを含む。

[0317]炎症促進性遺伝子をコードする組換え核酸は、モノシストロニックであることができ、（ａ）ＰＳＰと（ｂ）炎症促進性遺伝子の２つのコード配列は、転写後または翻訳後に独立した発現のために切断される。

[0318]一部の実施形態では、２つのコード配列は、例えばＰ２Ａ配列をコードする自己切断ドメインを含む。
[0319]一部の実施形態では、２つのコード領域は、ＩＲＥＳ部位によって分けられる。

[0320]一部の実施形態では、２つのコード配列は、バイシストロニックな遺伝子エレメントによってコードされる。（ａ）ＰＳＰと（ｂ）炎症促進性遺伝子のコード領域は、一方向性であることができ、それぞれ別々の制御調節下にある。一部の実施形態では、両方のコード領域は双方向性であり、逆の方向に駆動する。各コード配列は、別々の制御調節下にある。

[0321]炎症促進性遺伝子の共発現は、マクロファージなどの骨髄性細胞の強い炎症性刺激を与えるように設計され、炎症の周辺組織を活性化する。
インテグリン活性化ドメイン
[0322]細胞－細胞および細胞－基層接着は、多様なタンパク質リガンドへのインテグリン細胞外ドメインの結合によって媒介されるが、これらの粘着性の相互作用の細胞調節および細胞伸展または移動などの動的な細胞応答へのそれらの翻訳は、インテグリン細胞質尾部を必要とする。これらの短い尾部は、受容体をシグナル伝達経路および細胞骨格ネットワークに接続する細胞内リガンドに結合する（Ｃａｌｄｅｒｗｏｏｄ ＤＡ，２００４，Ｉｎｔｅｇｒｉｎ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ １１７，６５７－６６６、その全体が本明細書に組み込まれる）。インテグリンは、αおよびβサブユニットの非共有結合によって形成されたヘテロ二量体接着受容体である。各サブユニットは、比較的大きな細胞外ドメインと、β４サブユニットを除いて短い細胞質尾部を有するＩ型膜貫通糖タンパク質である。個々のインテグリンファミリーメンバーは、複数のリガンドを認識する能力を有する。インテグリンは、多くの細胞外基質タンパク質（骨基質タンパク質、コラーゲン、フィブロネクチン、フィブリノーゲン、ラミニン、トロンボスポンジン、ビトロネクチン、およびフォンヴィルヴランド因子）に結合することができ、細胞外基質への細胞接着におけるインテグリンの主要な機能を表している。多くの「カウンター受容体」はリガンドであり、細胞－細胞相互作用の媒介におけるインテグリンの役割を表している。インテグリンは構造変化を受け、リガンド親和性を増加する。

[0323]インテグリンβ_２サブファミリーは、４つの異なる受容体、α_Ｍβ_２（ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８、Ｍａｃ－１、ＣＲ３、Ｍｏ－１）、α_Ｌβ_２（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８、ＬＦＡ－１）、α_Ｘβ_２（ＣＤ１１ｃ／ＣＤ１８）、およびα_Ｄβ_２（ＣＤ１１ｄ／ＣＤ１８）からなる。これらの白血球インテグリンは、免疫応答、内皮への接着および内皮からの遊出、病原体の食作用、および白血球活性化を含む、白血球機能の事実上全ての態様に関与する。

[0324]全てβ_２インテグリンのαサブユニットは、約２００アミノ酸の挿入された領域を含有し、ＩまたはＡドメインと呼ばれる。高度に保存されたＩドメインは、いくつかの他のインテグリンαサブユニットおよび特定の凝固および補体タンパク質などの他のタンパク質に見出される。Ｉドメインは、タンパク質－タンパク質相互作用を媒介し、インテグリンにおいて、それらは一体的にタンパク質リガンドの結合に関与する。Ｉドメインはそれらのインテグリンのリガンド結合機能を支配するが、αサブユニットの他の領域はリガンド認識に影響する。例として、α_Ｍβ_２では、ｍＡｂ（ＯＫＭ１）はＩドメイン外側のエピトープを認識するが、α_Ｍサブユニットはリガンド結合を阻害し；α_Ｌβ_２およびα_２β_１のＥＦハンド領域、それらのαサブユニットにＩドメインを有するインテグリンはリガンド認識に貢献する。α_Ｍサブユニット、およびおそらく他のαサブユニットは、非タンパク質リガンドの結合に関与するレクチン様ドメインを含有し、占有率はＩドメインの機能を調節し得る。

[0325]インテグリンが酵素活性を欠損する場合、シグナル伝達は、代わりに、細胞膜の細胞質表面でのシグナル伝達複合体のアセンブリーによって誘導される。これらの複合体の形成は、２つの方法で達成される：１つ目は受容体クラスター形成により、分子相互作用の結合活性を増加して、それによりエフェクター分子の結合のオンレートを増加し、２つ目は、エフェクター結合部位を作出または曝露する受容体の構造変化の誘導による。ＥＣＭ内では、インテグリンは、フィブロネクチン、ラミニン、コラーゲン、テネイシン、ビトロネクチンおよびトロンボスポジンを結合する能力を有する。インテグリン／ＥＣＭ相互作用のクラスターは接着点を形成し、細胞骨格成分と細胞内のシグナル伝達分子を濃縮する。インテグリンの細胞質尾部は、αアクチニンおよびタリンの結合部位として寄与し、次いでビンクリン、Ｆ－アクチンの膜への結合に関与するタンパク質を動員する。タリンは、タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣα）などのキナーゼによって活性化される。

[0326]インテグリンは、セレクチンによって活性化される。白血球はＬ－セレクチンを発現し、活性化血小板はＰ－セレクチンを発現し、活性化内皮細胞はＥ－およびＰ－セレクチンを発現する。Ｐ－セレクチン媒介接着は、β２インテグリンのケモカイン－または血小板－活性化因子誘発活性化を可能にし、接着を安定化する。それは、接着白血球由来のケモカインの放出も促進する。Ｐ－セレクチン糖タンパク質リガンド１の細胞質ドメインは、Ｎｅｆ関連因子１と構成的な複合体を形成した。Ｐ－セレクチンの結合後、ＳｒｃキナーゼはＮｅｆ関連因子１をリン酸化し、ホスホイノシチド－３－ＯＨキナーゼｐ８５－ｐ１１０δヘテロ二量体を動員し、白血球インテグリンの活性化をもたらす。Ｅ－セレクチンリガンドは、β２インテグリン機能にも影響するシグナルを導入する。セレクチンは、Ｓｒｃファミリーキナーゼの活性化を誘発する。セレクチン結合により活性化されるＳＦＫは、ＤＡＰ１２およびＦｃＲγの細胞質ドメインの免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）をリン酸化する。一部の点では、ＣＤ４４はＥ－セレクチンからのシグナルを導入するのに十分である。ＣＤ４４は、インテグリンのインサイドアウトシグナル伝達を誘発する。インテグリン活性化の最終の共通ステップは、βサブユニットの細胞質尾部へのタリンの結合である。細胞質アダプターの別の群である、Ｋｉｎｄｌｉｎは、インテグリンβ尾部の異なる領域に結合する。Ｋｉｎｄｌｉｎは、タリン活性化インテグリンのクラスター化を増加する。Ｋｉｎｄｌｉｎは、セレクチンシグナル伝達に反応性であるが、Ｋｉｎｄｌｉｎは、好中球などの造血幹細胞に大部分は見出される。セレクチンシグナル伝達ならびにケモカイン成分によるインテグリン活性化時のシグナル伝達は、ＳＦＫ、Ｓｙｋ、およびＳＬＰ－７６を含む成分を共有する。

[0327]一部の実施形態では、組換えＣＦＰの細胞内ドメインは、インテグリン活性化ドメインを含む。インテグリン活性化ドメインは、セレクチン、例えばＰ－セレクチン、Ｌ－セレクチンまたはＥ－セレクチンの細胞内ドメインを含む。

[0328]一部の実施形態では、組換えＣＦＰの細胞内ドメインは、ラミニンのインテグリン活性化ドメインを含む。
[0329]一部の実施形態では、組換えＣＦＰの細胞内ドメインは、タリンの活性化のためのインテグリン活性化ドメインを含む。

[0330]一部の実施形態では、組換えＣＦＰの細胞内ドメインは、食作用受容体ＩＣＤドメインの細胞質末端に融合したインテグリン活性化ドメインを含む。
抗原交差提示を増強するためのキメラ受容体
[0331]一部の実施形態では、組換え核酸は、抗原の交差提示を可能にすることができるドメインをコードする。一般に、ＭＨＣクラスＩ分子は、細胞内で合成される自己または病原体由来抗原を提示するが、エンドサイトーシス取込みに由来する外因性抗原は、ＣＤ４＋Ｔ細胞への提示のため、ＭＨＣクラスＩＩ分子に負荷される。ＭＨＣ Ｉは内在性抗原の提示に限定され、ペプチドはプロテオソームによって生成される。しかしながら、一部の場合では、ＤＣは、ＣＤ８＋Ｔ細胞への提示のため、ＭＨＣ－Ｉ経路へと外因性抗原をプロセシングすることができる。これは、抗原の交差提示と呼ばれる。可溶性または外因性抗原成分は、液胞中のリソソームプロテアーゼによって分解されてもよく、エンドサイトーシス経路の代わりに、ＤＣによって交差提示される。一部の場合では、ヒートショックタンパク質９０（Ｈｓｐ９０）などのシャペロンは、特定のＡＰＣによる抗原の交差提示を助けることが示された。ＨＳＰ－ペプチド複合体は、遊離のポリペプチドと比較して、受容体の異なる群によって内部移行されることが公知である。これらの受容体は、スカベンジャー受容体ファミリー由来であり、ＬＯＸ－１、ＳＲＥＣ－Ｉ／ＳＣＡＲＦ－Ｉ、およびＦＥＥＬ１／スタビリン－１を含む。ＳＲＥＣ－ＩとＬＯＸ－１の両方は、分子シャペロン結合抗原の交差提示を媒介し、ＣＤ８＋Ｔリンパ球の活性化をもたらすことが示された。

[0332]ＳＲＥＣ－１（内皮細胞によって発現されたスカベンジャー受容体：ｓｃａｖｅｎｇｅｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｂｙ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ）はスカベンジャー受容体の他の型に顕著な相同性を示さないが、ユニークなドメイン構造を有する。それは、細胞外ドメインにＥＧＦ様システインリッチモチーフの１０リピートを含有する。近年、ＳＲＥＣ－１の構造は、アポトーシス細胞を認識する細胞表面の食作用受容体として機能する、線虫（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ）遺伝子ｃｅｄ－Ｉによってコードされる１６ＥＧＦ様リピートを有する膜貫通タンパク質のものと類似していることが示された。

[0333]クラスＩ ＭＨＣ経路によるがん抗原の交差提示は、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の増強をもたらし、それは細胞傷害性と関連し、したがって、腫瘍退縮に有益である。一部の実施形態では、ＰＦＰの細胞内ドメインは、ＳＲＥＣ１細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＦＰの細胞内ドメインは、ＳＲＥＣＩＩ細胞内ドメインを含む。

[0334]一部の実施形態では、ＣＦＰは、ＳＲＥＣ１またはＳＲＥＣＩＩ由来のＰＳＲ細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む。
[0335]一部の実施形態では、ＣＦＰは、（ｉ）膜貫通ドメイン、および（ｉｉ）ＳＲＥＣ１またはＳＲＥＣＩＩ由来のＣＦＰ細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む。

[0336]一部の実施形態では、ＣＦＰは、（ｉ）膜貫通ドメイン、（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン、および（ｉｉｉ）ＳＲＥＣ１またはＳＲＥＣＩＩ由来の細胞外ドメインを含む。

ＰＦＰ融合タンパク質の膜貫通ドメイン
[0337]一部の実施形態では、組換え核酸によってコードされるＴＭは、スカベンジャー受容体（ＳＲ）のドメインをコードする配列を含む。一部の実施形態では、ＴＭは、レクチン、デクチン１、マンノース受容体（ＣＤ２０６）、ＳＲＡ１、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、およびＣＤ１６９のいずれか１つまたは複数の、またはそれらに由来するＴＭドメインであり得る。

[0338]一部の実施形態では、ＴＭドメインは、約２０～３０アミノ酸長である。ＳＲのＴＭドメインは、約２０～３０アミノ酸長である。
[0339]一部の実施形態では、ＣＦＰのＴＭドメインまたはＩＣＤドメインは、Ｍｅｇｆ１０、Ｂａｉ１またはＭｅｒＴＫに由来しない。一部の実施形態では、ＣＦＰのＩＣＤは、ＣＤ３ζ細胞内ドメインを含まない。

[0340]一部の実施形態では、ＴＭは、ＩＣＤと同じ食作用受容体に由来する。
[0341]一部の実施形態では、ＴＭ領域は、細胞膜タンパク質に由来する。ＴＭは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）から選択され得る。一部の実施形態では、特定のＦｃＲ由来のドメインをコードする核酸配列は、組換え構築物の細胞特異的発現のために使用される。ＴＭドメインを含むＦＣＲ－アルファ領域は、マクロファージなどの骨髄性細胞の構築物の特異的発現のために使用されてもよい。ＦｃＲα組換えタンパク質は、脂肪細胞で発現され得る。

[0342]一部の実施形態では、ＰＦＰはＦｃＲβのＴＭを含む。
[0343]一部の実施形態では、ＰＦＰはＦｃＲβとＩＣＤドメインの両方を含む。一部の実施形態では、ＰＦＰはＦｃＲαとＩＣＤドメインの両方を含む。

[0344]一部の実施形態では、ＴＭドメインはＣＤ８に由来する。
[0345]一部の実施形態では、ＴＭはＣＤ２に由来する。
[0346]一部の実施形態では、ＴＭはＦｃＲαに由来する。

ＰＦＰ融合タンパク質の細胞外ドメイン
[0347]一部の実施形態では、本明細書で提供されるＰＦＰ融合タンパク質の細胞外ドメインは、１つまたは複数の標的に結合する抗原結合ドメインを含む。結合標的は、抗原またはリガンドであり得る。例えば、結合標的は、標的細胞上の抗原であり得る。一部の実施形態では、標的結合ドメインは、標的に特異的である。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、抗体、またはイントラボディ、ペプチボディ、ナノボディ、単一ドメイン抗体、ＳＭＩＰ、および多重特異性抗体から選択される抗原結合ドメインを含み得る。

[0348]一部の実施形態では、抗体断片は、無傷抗体の一部分、例えば、無傷抗体の抗原結合領域または可変領域を含む。本発明のさらなる態様では、上記の実施形態のいずれかに記載の抗ＨＩＶ抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。抗体断片には、限定するものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ディアボディ、線状抗体、抗体断片抗体から形成された多重特異性抗体およびｓｃＦｖ断片、ならびに下記の他の断片が含まれる。別の実施形態では、抗体は、完全長抗体、例えば、無傷ＩｇＧ１抗体、または本明細書に記載の他の抗体のクラスもしくはアイソタイプである。（例えば、Ｈｕｄｓｏｎら、Ｎａｔ． Ｍｅｄ． ９：１２９～１３４頁（２００３）；Ｐｌｕｃｋｔｈｉｉｎ、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ｖｏｌ．１１３、２６９～３１５頁（１９９４）；Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９０：６４４４～６４４８頁（１９９３）；ＷＯ９３／０１１６１；ならびに米国特許第５，５７１，８９４号、同第５，８６９，０４６号、同第６，２４８，５１６号、および同第５，５８７，４５８号を参照されたい）。完全長抗体、無傷抗体、または全抗体は、天然の抗体構造に実質的に類似した構造を有するか、または本明細書で定義したＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体である。抗体断片は、本明細書に記載したような、無傷抗体のタンパク質分解消化ならびに組換え宿主細胞（例えば、大腸菌またはファージ）による産生を含むがこれらに限定されない、様々な技術によって作製することができる。

[0349]Ｆｖは、完全な抗原認識および抗原結合部位を含む最小抗体断片である。この断片は、１つの重鎖可変領域ドメインおよび１つの軽鎖可変領域ドメインが緊密に非共有結合した二量体を含む。これら２つのドメインのフォールディングから、抗原結合のアミノ酸残基に寄与し、抗体に抗原結合特異性を付与する６つの超可変ループ（Ｈ鎖とＬ鎖からのそれぞれ３つのループ）が生じる。しかし、単一可変領域（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でさえも、結合部位全体に比べると低い親和性ではあるが、抗原を認識して結合する能力を有する。

[0350]一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖまたはｓｃＦｖ）は、単一ポリペプチド鎖に連結されたＶ_Ｈ抗体ドメインおよびＶ_Ｌ抗体ドメインを含む抗体断片である。ｓＦｖポリペプチドは、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインとの間に、ｓＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーをさらに含み得る。（例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ｖｏｌ．１１３、Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２６９～３１５頁（１９９４）；Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ １９９５、下掲を参照されたい。）ｓＦｖは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）で使用することができる。

[0351]ディアボディは、Ｖドメインの鎖内対形成ではなく鎖間の対形成が達成されて、二価断片が得られるように、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインとの間に短いリンカー（約５～１０残基）を持つｓＦｖ断片を構築することによって調製される小さな抗体断片である。二重特異性ディアボディは、２つの抗体のＶ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインが異なるポリペプチド鎖に存在する、２つのクロスオーバーｓＦｖ断片のヘテロダイマーである。（例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、９０：６４４４～６４４８頁（１９９３）を参照されたい）。

[0352]完全なヒト型で産生され得るドメイン抗体（ｄＡｂ）は、約１１ｋＤａ～約１５ｋＤａの範囲にある、抗体の既知の最小抗原結合断片である。ｄＡｂは、免疫グロブリンの重鎖と軽鎖（それぞれ、Ｖ_ＨとＶ_Ｌ）の強固な可変領域である。これらは微生物細胞培養で高発現され、例えば、限定するものではないが、溶解性および温度安定性を含む好ましい生物物理学的特性を示し、例えばファージディスプレイなどのｉｎ ｖｉｔｒｏ選択システムによる選択および親和性成熟に十分適している。ｄＡｂはモノマーとして生物活性があり、それらのサイズの小ささと固有の安定性によって、より大きな分子にフォーマットされ、血清半減期または他の薬理活性が延長された薬物を作出することができる。（例えば、Ｗ０９４２５５９１およびＵＳ２００３０１３０４９６を参照されたい。）
[0353]ＦｖおよびｓＦｖは、定常領域のない無傷結合部位を持つ唯一の種である。したがって、それらはｉｎ ｖｉｖｏで使用する際、非特異的結合の低減に適している。ｓＦｖ融合タンパク質は、ｓＦｖのアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかでエフェクタータンパク質の融合をもたらすように構築され得る。抗体断片はまた、「線状抗体」であり得る。（例えば、米国特許第５，６４１，８７０号を参照されたい。）そのような線状抗体断片は、単一特異性または二重特異性であり得る。

[0354]一部の実施形態では、細胞外ドメインは、Ｆａｂ結合ドメインを含む。さらに他のそのような実施形態では、細胞外ドメインはｓｃＦｖを含む。
[0355]一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、抗原結合性断片（Ｆａｂ）、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ナノボディ、Ｖ_Ｈドメイン、Ｖ_Ｌドメイン、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ＶＮＡＲドメイン、およびＶ_ＨＨドメイン、二重特異性抗体、ディアボディ、またはそれらのいずれかの機能的断片からなる群に由来する細胞外抗原結合ドメインを含む。一部の実施形態では、抗原結合性断片（Ｆａｂ）、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ナノボディ、Ｖ_Ｈドメイン、Ｖ_Ｌドメイン、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ＶＮＡＲドメイン、およびＶ_ＨＨドメイン、二重特異性抗体、ディアボディ、またはそれらのいずれかの機能的断片は、１つまたは複数の抗原に特異的に結合する。

[0356]一部の実施形態では、抗原はがん抗原であり、標的細胞は標的がん細胞である。一部の実施形態では、標的細胞の抗原は、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ１９、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＤ３０、ＣＤ３７、ＴＣＲＢ１／２、ＴＣＲαβ、ＴＣＲαδ、ＣＤ２２、ＨＥＲ２（ＥＲＢＢ２／ｎｅｕ）、メソテリン、ＰＳＣＡ、ＣＤ１２３、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＤ１３８、ＣＳ－１、ＣＬＥＣＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ７９ｂ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＢＣＭＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＦＬＴ３、ＴＡＧ７２、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）、ＫＩＴ（ＣＤ１１７）、ＣＤ２１３Ａ２、ＩＬ－１ ＩＲａ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＣＤ２４、ＭＵＣ－１６、ＰＤＧＦＲ－β、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＦＡＰ、ＥｐｈＡ２、ＧＭ３、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、およびＩＧＬＬ１からなる群から選択される。

[0357]一部の実施形態では、標的抗原は自己免疫抗原である。一部の実施形態では、標的細胞はＢ細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、自己抗体を産生するＢ細胞である。一部の実施形態では、標的抗原は、Ｄｓｇ１またはＤｓｇ３である。

[0358]様々ながん抗原標的を当業者に公知のがん抗原から選択することができる。関与するがんおよび細胞型に応じて、がん抗原は変異した天然のタンパク質である。抗原結合ドメインは、天然の抗原ではなく、変異／がん抗原に対する特異性についてスクリーニングされる。

[0359]一部の実施形態では、例えば、標的がん細胞に対するがん抗原は、変異／がん抗原：ＭＵＣ１６、ＣＣＡＴ２、ＣＴＡＧ１Ａ、ＣＴＡＧ１Ｂ、ＭＡＧＥＡ１、ＭＡＧＥＡ２、ＭＡＧＥＡ３、ＭＡＧＥＡ４、ＭＡＧＥＡ６、ＰＲＡＭＥ、ＰＣＡ３、ＭＡＧＥＣ１、ＭＡＧＥＣ２、ＭＡＧＥＤ２、ＡＦＰ、ＭＡＧＥＡ８、ＭＡＧＥ９、ＭＡＧＥＡ１１、ＭＡＧＥＡ１２、ＩＬ１３ＲＡ２、ＰＬＡＣ１、ＳＤＣＣＡＧ８、ＬＳＰ１、ＣＴ４５Ａ１、ＣＴ４５Ａ２、ＣＴ４５Ａ３、ＣＴ４５Ａ５、ＣＴ４５Ａ６、ＣＴ４５Ａ８、ＣＴ４５Ａ１０、ＣＴ４７Ａ１、ＣＴ４７Ａ２、ＣＴ４７Ａ３、ＣＴ４７Ａ４、ＣＴ４７Ａ５、ＣＴ４７Ａ６、ＣＴ４７Ａ８、ＣＴ４７Ａ９、ＣＴ４７Ａ１０、ＣＴ４７Ａ１１、ＣＴ４７Ａ１２、ＣＴ４７Ｂ１、ＳＡＧＥ１、およびＣＴ５５のうちの１つまたは複数であり得る。

[0360]一部の実施形態では、例えば、標的がん細胞のがん抗原は、変異／がん抗原：ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＸＣＲ４、ＣＤ４５、ＣＤ５６のうちの１つまたは複数であり得、がんはＴ細胞リンパ腫である。

[0361]一部の実施形態では、例えば、標的がん細胞のがん抗原は、変異／がん抗原：ＩＤＨ１、ＡＴＲＸ、ＰＲＬ３、またはＥＴＢＲのうちの１つまたは複数であり得、がんは神経膠芽腫である。

[0362]一部の実施形態では、例えば、標的がん細胞のがん抗原は、変異／がん抗原：ＣＡ１２５、β－ｈＣＧ、尿中ゴナドトロピン断片、ＡＦＰ、ＣＥＡ、ＳＣＣ、インヒビンまたはエクストラジオールのうちの１つまたは複数であり得、がんは卵巣がんである。

[0363]一部の実施形態では、標的がん細胞のがん抗原は、ＣＤ５であり得る。
[0364]一部の実施形態では、標的がん細胞のがん抗原は、ＨＥＲ２であり得る。
[0365]一部の実施形態では、標的がん細胞のがん抗原は、ＥＧＦＲバリアントＩＩＩであり得る。

[0366]一部の実施形態では、標的がん細胞のがん抗原は、ＣＤ１９であり得る。
[0367]一部の実施形態では、ＳＲサブユニット領域は、スカベンジャー受容体の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む。一部の実施形態では、スカベンジャー受容体のＥＣＤは、ＩＣＤドメインおよびＴＭドメインを含むＳＲのＥＣＤドメインを含む。一部の実施形態では、標的抗原は、がん細胞上のＳＲリガンドであり、例えば、表２または表３のリガンド成分の任意の１つである。一部の実施形態では、ＳＲ－ＥＣＤは、食細胞の標的細胞への結合に寄与し、次に活性化され、標的細胞の食作用を活性化する。

[0368]一部の実施形態では、ＣＦＰは、スカベンジャー受容体のＥＣＤまたはその一部分を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、スカベンジャー受容体のＩＣＤまたはその一部分を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、スカベンジャー受容体のＴＭドメインを含む。一部の実施形態では、組換え核酸によってコードされるＥＣＤは、レクチン、デクチン１、マンノース受容体（ＣＤ２０６）、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、およびＣＤ１６９からなる群から選択されるドメインを含む。ほとんどのスカベンジャー受容体の細胞外ドメインは、外来物質の非特異的抗体非依存性認識において、自己と非自己を識別するために使用され得る幅広い結合特異性を持つスカベンジャー受容体を含む。Ｉ型およびＩＩ型のクラスＡスカベンジャー受容体（ＳＲ－ＡＩ１およびＳＲ－ＡＩＩ）は、小さなＮＨ２末端の細胞内ドメインと、短いスペーサードメイン、ａ－ヘリックスコイルドコイルドメイン、およびトリプルヘリックスコラーゲンドメインを含む細胞外部分とを持つ三量体膜糖タンパク質である。Ｉ型受容体は、システインリッチＣＯＯＨ末端（ＳＲＣＲ）ドメインを追加的に含む。これらの受容体は、全身の多様な組織における骨髄性細胞、例えばマクロファージに存在し、非常に広いリガンド結合特異性を示す。これらは、化学的に改変されたタンパク質、例えば改変ＬＤＬを含む多種多様なポリアニオンと結合し、アテローム発生時のコレステロール沈着に関与している。これらはまた、マクロファージ関連の宿主防御および炎症状態における細胞接着プロセスにおいて役割を果たし得る。

[0369]一部の実施形態では、ＳＲ ＥＣＤは、アポトーシス促進性細胞に結合するように設計されている。一部の実施形態では、スカベンジャー受容体ＥＣＤは、がん細胞または感染細胞の細胞表面分子に対する結合ドメインを含む。

[0370]一部の実施形態では、ＰＲサブユニットの細胞外ドメインは、リンカーによって、がん抗原に特異的な、標的細胞結合ドメイン、例えば、抗体またはその一部分に連結されている。

[0371]一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、１つの抗原結合ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、１つより多くの結合ドメインを含む。一部の実施形態では、結合ドメインはｓｃＦｖである。図２は、ＰＦＰががん細胞上の単一の標的（左）または複数の標的（右）を標的とする、一実施形態の概略図を示す。１つまたは１つより多くのｓｃＦｖは、細胞外ドメインで組換えＰＲに融合されている。一部の実施形態では、ｓｃＦｖ画分およびＰＲの細胞外ドメインは、リンカーを介して連結されている。

[0372]一部の実施形態では、ＥＣＤ抗原結合ドメインは、細胞内抗原に結合することができる。一部の実施形態では、細胞内抗原はがん抗原である。
[0373]一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、１０００ｎＭ未満の親和性で標的リガンドに結合する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、５００ｎＭ未満の親和性で標的リガンドに結合する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、４５０ｎＭ未満の親和性で標的リガンドに結合する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、４００ｎＭ未満の親和性で標的リガンドに結合する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、３５０ｎＭ未満の親和性で標的リガンドに結合する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、２５０ｎＭ未満の親和性で標的リガンドに結合する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、２００ｎＭ未満の親和性で標的リガンドに結合する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、１００ｎＭ未満の親和性で標的リガンドに結合する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、２００ｎＭ～１０００ｎＭの範囲の親和性で標的リガンドに結合する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、３００ｎＭ～１．５ｍＭの範囲の親和性で標的リガンドに結合する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、＞２００ｎＭ、＞３００ｎＭ、または＞５００ｎＭの親和性で標的リガンドに結合する。

[0374]一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、標的リガンドがＴ細胞である、標的リガンドに結合し、その結合特性は、標的Ｔ細胞が、操作された細胞のＴ細胞媒介性溶解を活性化するように誘発されないようなものである。一部の実施形態では、操作された細胞上のリガンドへのＴＣＲの結合は、回避されるか、バイパスされるか、または阻害される。

リンカー
[0375]リンカーは、本開示のポリペプチドまたはペプチドドメインのいずれかを連結するために使用することができる。本明細書に記載のＰＦＰ融合タンパク質は、１つまたは複数のリンカーを含み得る。例えば、ＰＦＰ融合タンパク質の１つまたは複数のドメインおよびサブユニットは、別のドメインもしくはサブユニットに直接融合され得るか、またはリンカーを介して別のドメインもしくはサブユニットに連結され得る。一部の実施形態では、標的細胞上の抗原に特異的な抗体、標的細胞上の抗原に特異的に結合することができる抗体の一部分、または標的細胞上の抗原に特異的なｓｃＦｖを含む細胞外抗原結合ドメインは、リンカーによって、ＴＭドメインまたは他の細胞外ドメインに連結されている。細胞外抗原結合ドメインに１つより多くのｓｃＦｖが存在する一部の実施形態では、１つより多くのｓｃＦｖは、リンカーによって、互いに連結されている。

[0376]一部の実施形態では、リンカーは、短いペプチド配列である。
[0377]リンカーは、共有結合のように単一であり得るか、何原子もの長さのポリマーリンカーであり得る。ある特定の実施形態では、リンカーは、ポリペプチドであるか、またはアミノ酸をベースとする。他の実施形態では、リンカーはペプチド様ではない。ある特定の実施形態では、リンカーは、共有結合（例えば、炭素間結合、ジスルフィド結合、炭素・ヘテロ原子間結合など）である。

[0378]一部の実施形態では、リンカーは、一アミノ酸または複数のアミノ酸（例えば、ペプチドまたはタンパク質）である。一部の実施形態では、リンカーは、結合（例えば共有結合）、有機分子、基、ポリマー、または化学的部分である。一部の実施形態では、リンカーは、約３～約１０４個（例えば、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００個）のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、グリシン残基と１個または複数のセリン残基の伸長である。短いペプチドリンカーに好ましい他のアミノ酸には、限定するものではないが、スレオニン（Ｔｈｒ）、セリン（Ｓｅｒ）、プロリン（Ｐｒｏ）、グリシン（Ｇｌｙ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、リシン（Ｌｙｓ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、アラニン（Ａｌａ）、アルギニン（Ａｒｇ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）が含まれる。これらのうち、Ｐｒｏ、Ｔｈｒ、およびＧｌｎは、天然リンカーに高頻度で使用されるアミノ酸である。Ｐｒｏは、非常に制限された立体構造を引き起こす環状側鎖を持つユニークなアミノ酸である。Ｐｒｏリッチ配列は、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡ_２ＰＡ_３ＰＡＫＱＥＡ_３ＰＡＰＡ_２ＫＡＥＡＰＡ_３ＰＡ_２ＫＡ）のリポイルとＥ３結合ドメイン間のリンカーを含む、ドメイン間リンカーとして使用される。本開示の目的において、経験的リンカーは、可撓性リンカー、剛性リンカー、および切断可能なリンカーであり得る。（Ｇ４Ｓ）ｘ（式中、ｘは部分の複数コピーであり、１、２、３、４などと明示される）などの配列は、可撓性リンカー配列を含む。本明細書で使用される他の可撓性配列には、グリシンの数回の繰返し、例えば（Ｇｌｙ）６または（Ｇｌｙ）８が含まれる。一方で、剛性リンカーを使用することができ、例えば、リンカー（ＥＡＡＡＫ）ｘ（式中、ｘは整数、１、２、３、４などである）は、剛性リンカーを生じさせる。本明細書で提供した融合タンパク質の様々なリンカーの長さおよびドメインまたはサブユニット間の可撓性を、例えば（ＧＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、および（Ｇ）ｎの形態の非常に可撓性のあるリンカーから、（ＥＡＡＡＫ）ｎ、（ＳＧＧＳ）ｎ、ＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳ（例えば、Ｇｕｉｌｉｎｇｅｒ ＪＰ、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＤＢ、Ｌｉｕ ＤＲ． Ｆｕｓｉｏｎ ｏｆ ｃａｔａｌｙｔｉｃａｌｌｙ ｉｎａｃｔｉｖｅ Ｃａｓ９ ｔｏ ＦｏｋＩ ｎｕｃｌｅａｓｅ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｇｅｎｏｍｅ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ． Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２０１４；３２（６）：５７７～８２頁を参照；その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）および（ＸＰ）ｎの形態のより剛性のあるリンカーの範囲で用いて、最適な長さを達成することができる。一部の実施形態では、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５である。一部の実施形態では、リンカーは、（ＧＧＳ）ｎモチーフ（式中、ｎは１、３、または７である）を含む。一部の実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列ＳＧＧＧＧＳＧを含む。一部の実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列ＧＳＧＳを含む。

[0379]一部の実施形態では、リンカーは可撓性である。一部の実施形態では、リンカーはヒンジ領域を含む。含まれる場合、このようなスペーサーまたはリンカードメインは、結合ドメインを宿主細胞表面から離して配置して、適切な細胞／細胞接触、結合、および活性化をさらに可能にすることができる。細胞外スペーサーの長さは、選択された標的分子、選択された結合エピトープ、結合ドメインのサイズおよび親和性に基づいて標的分子の結合を最適化するように変更することができる。ある特定の実施形態では、細胞外スペーサードメインは、免疫グロブリンヒンジ領域（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ）である。免疫グロブリンヒンジ領域は、野生型免疫グロブリンヒンジ領域または改変野生型免疫グロブリンヒンジ領域であり得る。一部の実施形態では、本明細書で使用されるリンカーまたはスペーサーは、配列：ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰを有するＩｇＧ４ヒンジ領域を含む。一部の実施形態では、ヒンジ領域は、野生型またはそのバリアントであってもよい、ＣＤ８ａ、ＣＤ４、ＣＤ２８およびＣＤ７などの１型膜タンパク質の細胞外領域に存在する配列を含むヒンジまたはスペーサーを含む。一部の実施形態では、細胞外スペーサードメインは、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはそれらの組合せから選択される免疫グロブリンＦｃドメインの全部または一部分を含む。一部の実施形態では、スペーサーまたはリンカーは、翻訳後修飾、例えばグリコシル化によってさらに改変され得る。

[0380]一部の実施形態では、細胞外スペーサードメインは、ＩＩ型Ｃレクチンのｓｔａｌｋ領域（Ｃ型レクチンドメインと膜貫通ドメインとの間に位置する細胞外ドメイン）を含み得る。ＩＩ型Ｃレクチンには、ＣＤ２３、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ、およびＮＫＧ２Ｄが含まれる。またさらなる実施形態では、細胞外スペーサードメインは、スカベンジャー受容体ＭＥＲＴＫに由来し得る。

[0381]一部の実施形態では、リンカーは、少なくとも２個、または少なくとも３個のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、リンカーは４個のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、リンカーは５個のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、リンカーは６個のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、リンカーは７個のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、リンカーは８個のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、リンカーは９個のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、リンカーは８個のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、リンカーは１０個のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、リンカーは１０個を超えるアミノ酸を含む。一部の実施形態では、リンカーは、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、リンカーに１２個以上のアミノ酸が存在する。一部の実施形態では、リンカーに１４個以上のアミノ酸が存在する。一部の実施形態では、リンカーに１５個以上のアミノ酸が存在する。

食作用を増強するための他の融合タンパク質
[0382]本開示の一態様では、主として阻害シグナルを遮断することによって、骨髄性細胞、例えばマクロファージにおける食作用を増強する１つまたは複数のキメラ受容体をコードする組換え核酸が調製される。特に腫瘍環境における骨髄性細胞、例えばマクロファージは、標的細胞、例えばがん細胞に対する食作用抑制シグナルまたは阻害シグナル、例えば、ＣＤ４７媒介性抗食作用活性に直面する。食細胞で発現された場合にＣＤ４７シグナル伝達を遮断するキメラ受容体が生成される。

[0383]一部の実施形態では、他のＣＡＲ融合タンパク質は、食作用を増強し得る食細胞における発現のために設計され得る。一実施形態では、本明細書では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物であって、ＣＦＰが、（ａ）（ｉ）細胞外ドメイン、および（ｉｉ）膜貫通ドメインを含むサブユニット、ならびに（ｂ）標的細胞のＣＤ４７に特異的な細胞外抗原結合ドメインを含み、サブユニットの細胞外ドメインと細胞外抗原結合ドメインが作動可能に連結されており；サブユニットが、ＣＤ４７に結合する内在性受容体の機能的細胞内ドメインを含まないか、またはホスファターゼを活性化する細胞内ドメインを含まない、組成物が提供される。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、シグナル制御タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）に由来する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、シグナル制御タンパク質アルファ（ＳＩＲＰβ）に由来する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＳＩＲＰαに由来する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＳＩＲＰβに由来する。

[0384]一部の実施形態では、追加のＣＡＲ融合タンパク質（ＣＦＰ）は、上記の組換えＰＦＰとコトランスフェクトされ得る。一部の実施形態では、スカベンジャー受容体細胞内ドメインは、食作用を活性化するシグナル伝達ドメインを含む第２の細胞内ドメイン；または細胞質側末端の炎症促進性ドメインを含み、これらは作動可能に連結されている。食作用を活性化するシグナル伝達ドメインは、表２に挙げた受容体からなる群から選択される受容体に由来する。

[0385]一部の実施形態では、食作用シグナル伝達ドメインを持つ細胞内ドメインは、１つまたは複数の免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）のモチーフを有するドメインを含む。ＩＴＡＭは、Ｔ細胞受容体、免疫グロブリン（Ｉｇ）およびＦｃＲなどの免疫系のいくつかの受容体の細胞質尾部に存在する保存配列である。これらは、既定の間隔（ＹＸＸＬ／Ｉ－Ｘ_６－８－ＹＸＸＬ／Ｉ）により分けられる対のＹＸＸＬ／Ｉモチーフ（Ｙ＝チロシン、Ｌ＝リシン、およびＩ＝イソロイシン）からなる保存されたアミノ酸配列モチーフを有する。さらに、ほとんどのＩＴＡＭには、負に帯電したアミノ酸（Ｄ／Ｅ）を第１のＩＴＡＭチロシンに対して＋２位に含む。ＩＴＡＭ内の残基のリン酸化により、食作用を活性化するいくつかのシグナル伝達分子が動員される。ＩＴＡＭモチーフはまた、細胞内アダプタータンパク質である１２ｋＤａのＤＮＡＸ活性化タンパク質（ＤＡＰ１２）にも存在する。

[0386]一部の実施形態では、細胞内領域の食作用シグナル伝達ドメインは、ＰＩ３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）動員ドメイン（ＰＩ３Ｋ結合ドメインとも呼ばれる）を含む。本明細書で使用されるＰＩ３Ｋ結合ドメインは、ＣＤ１９、ＣＤ２８、ＣＳＦＲまたはＰＤＧＦＲのそれぞれのＰＩ３Ｋ結合ドメインであり得る。結合ドメインへのＰＩ３キナーゼの動員は、Ａｋｔ媒介性シグナル伝達カスケードおよび食作用の活性化を導く。ＰＩ３Ｋ－Ａｋｔシグナル伝達経路は、食作用、炎症反応の制御、ならびに小胞輸送および細胞骨格の再編成を含むその他の活性において重要である。ＰＩ３キナーゼ動員ドメインは細胞膜タンパク質の細胞内ドメインであり、リン酸化され得るチロシン残基を有し、次にＰＩ３Ｋｐ８５のＳｒｃ相同ドメイン（ＳＨ２）ドメインによって認識され得る。ｐ８５のＳＨ２ドメインは、受容体のサイトゾルドメイン上のリン酸化チロシンを認識する。これによって、ｐ１１０のアロステリック活性化と、酵素のＡｋｔおよび構成的に活性な３’－ホスホイノシチド依存性キナーゼ１（ＰＤＫ１）によりこれらのプレクストリン相同ドメインを通して認識されるホスファチジルイノシトール－３，４，５－三リン酸（ＰＩＰ_３）の産生が生じる。ＡｋｔとＰＩＰ_３の相互作用によって、Ａｋｔ構造の変化と、ＰＤＫ１およびｒｉｃｔｏｒ－ｍＴＯＲ複合体によるＴｈｒ３０８残基およびＳｅｒ４７３残基のリン酸化がそれぞれ生じる。これら２つの残基のリン酸化によって、Ａｋｔの活性化が生じ、次いで、他の基質の中でも、酵素グリコーゲンシンターゼキナーゼ－３（ＧＳＫ－３）をリン酸化する。ＧＳＫ－３は、２つのアイソフォームであるＧＳＫ－３αおよびＧＳＫ－３βを有し、いずれも構成的に活性である。これらのアイソフォームは構造的に関連しているが、機能的には重複していない。ＧＳＫ－３の不活性化は、これらの制御Ｎ末端ドメインに位置したＧＳＫ－３αのＳｅｒ２１残基またはＧＳＫ－３βのＳｅｒ９残基がＡｋｔおよび他のキナーゼによってリン酸化された場合に観察される。リン酸化によるＧＳＫ－３の阻害は、炎症のモジュレーションおよび食作用プロセスにおいて重要である。

[0387]一部の実施形態では、組換えＰＦＰは、（ａ）細胞外ＣＤ４７結合ドメインＳＩＲＰα、（ｂ）ＳＩＲＰβ膜貫通ドメイン、および（ｃ）ＳＩＲＰβの細胞内ドメインを含む。ＳＩＲＰβシグナル伝達は、ＤＡＰ１２の活性化に関与することによって、食作用促進性シグナル伝達を活性化することができる。

[0388]このファミリーの様々なメンバーは、膜タンパク質上のシアル酸付加グリカンと接触すると、チェックポイントシグナルを伝達する。一部のメンバーでは、Ｓｉｇｌｅｃタンパク質の細胞内ドメインは、複数の免疫受容体チロシンベース阻害性モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む。ＩＴＩＭは、その細胞質尾部にコンセンサスアミノ酸配列、すなわち（Ｉ／Ｖ／Ｌ／Ｓ）－Ｘ－Ｙ－Ｘ－Ｘ－（Ｌ／Ｖ）（式中、Ｘは任意のアミノ酸を示し、Ｉ＝イソロイシン、Ｖ＝バリン、Ｌ＝リジン、Ｓ＝セリン、Ｙ＝チロシンである）を共有している。ＩＴＩＭモチーフのチロシン残基のリン酸化は、２つのＳＨ２ドメインを含有する負の制御因子：イノシトールホスファターゼＳＨＩＰ（Ｓｒｃ相同性２を含有するイノシトールポリリン酸５－ホスファターゼ）またはチロシンホスファターゼＳＨＰ－１（Ｓｒｃ相同性２を含有するタンパク質チロシンホスファターゼ－１）のいずれかを動員する。（Ｙ＋２）位のロイシンはＳＨＩＰへの結合に有利であり、（Ｙ－２）位のイソロイシンはＳＨＰ－１との結合に有利である。ＩＴＩＭはまた、別のチロシンホスファターゼであるＳＨＰ－２にも結合することができるが、ＩＴＩＭ媒介性阻害においてＳＨＰ－２が機能的な役割を果たしているという証拠は、他のメディエーターに比べると明確ではない。したがって、シアル酸残基と結合することによる細胞外リガンド結合ドメインでのＳｉｇｌｅｃ膜タンパク質の（例えば、シアル酸付加膜グリカンタンパク質での）活性化により、ＩＴＩＭは細胞内シグナルを受け取り、リン酸化され、食作用能の低減を含む免疫調節のＳＨＰ媒介性シグナル伝達が始まる。

[0389]一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物は、キメラＳｉｇｌｅｃ受容体（ＳｇＲ）融合タンパク質（ＳｇＦＰ）をコードする組換え核酸構築物であって、ＳｇＦＰが、（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、および（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含むＳｇＲサブユニット；ならびに（ｂ）標的細胞の細胞表面タンパク質のシアル酸付加グリカンに特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインを含み、膜貫通ドメインと細胞外ドメインが作動可能に連結しており；（ｉ）ＳｇＦＰが、シアル酸付加グリカンに結合する内在性受容体の機能的細胞内ドメインを含まないか、または（ｉｉ）ＳｇＦＰが、食作用もしくは炎症経路を活性化する細胞内シグナル伝達ドメインを含む、組換え核酸構築物を含む。一部の実施形態では、キメラ受容体は細胞内ドメインが欠失しており、したがって、Ｓｉｇｌｅｃ誘導型免疫調節性細胞内シグナル伝達の遮断薬として作用する。このことは、細胞内ドメインをコードする核酸領域の欠失と、ｓｉｇｌｅｃ受容体のコード配列の残りのクローニングによって達成される。この構築物は、ｓｉｇｌｅｃ細胞内ドメイン欠失構築物として指定され得る［Ｓｉｇｌｅｃ ＩＣＤ］。一部の実施形態では、組換え核酸構築物は、ｓｉｇｌｅｃ受容体の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）と融合したがん抗原特異的ｓｃＦｖを含む組換えキメラ抗原受容体をコードする。これによって、構築物のがん細胞への標的指向性が可能になる。キメラ受容体は、ｓｉｇｌｅｃ受容体のＴＭおよびＩＣＤを含み、これは内在性ＩＣＤ、または追加の食作用促進ドメイン、例えば１個のもしくは複数のＰＩ３Ｋ結合ドメインと融合したＩＣＤであり得る。一部の実施形態では、細胞外ｓｉｇｌｅｃドメインを含むキメラ受容体は、シアリダーゼと共発現される。シアリダーゼをコードする核酸は、分泌用のシグナル配列を持つキメラドメインを発現する発現ベクターに組み込まれ得る。シアリダーゼは、ＣＡＲ－ｓｉｇｌｅｃ受容体が発現されるのと同じ細胞によって発現されるので、シアリダーゼが発現すると、ｓｉｇｌｅｃのＥＣＤがその天然リガンドに結合することができなくなるが、ｓｃＦｖがその受容体に結合することによって活性化され、それにより、がん抗原を発現する細胞に対するキメラ受容体の作用の特異性が確保される。

[0390]一部の実施形態では、キメラ受容体は、がん抗原に特異的に結合することができる抗原結合ドメイン、例えば、がん抗原特異的抗体またはその一部分もしくは断片と細胞外領域で融合されている、ＴＲＥＭタンパク質由来の１つまたは複数のドメインを含む。一部の実施形態では、ＴＲＥＭキメラ抗原受容体をコードする組換え核酸は、（ａ）少なくともＴＲＥＭ膜貫通ドメイン（ＴＭ）およびＴＲＥＭ細胞内ドメイン（ＩＣＤ）と、（ｂ）がん抗原に特異的に結合することができる抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む融合タンパク質をコードする。融合タンパク質は、がん細胞を標的とし、抗原結合ドメインを含むＥＣＤを介して標的がん細胞に結合するように設計されており、この結合は、ＴＲＥＭ ＴＭおよび／または細胞内ドメインを通したシグナル伝達によって食作用を誘発および増強する。ＴＲＥＭの膜貫通ドメインは、ＤＡＰ１２膜貫通ドメインと三量体化し、細胞内の食作用促進性シグナル伝達カスケードを引き起こす。一部の実施形態では、ＴＲＥＭドメインは、ＴＲＥＭ１、またはＴＲＥＭ２、またはＴＲＥＭ３メンバーにより提供される。細胞外抗原結合ドメインは、短いスペーサーまたはリンカーを通してＴＲＥＭドメインの細胞外末端に融合されている。

[0391]一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、がん抗原に特異的な抗体を含む。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、がん細胞の表面上の抗原に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分を含む。

[0392]一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、がん抗原に特異的な抗体である。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは抗体の画分であり、断片はがん細胞上のがん抗原に特異的に結合することができる。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、がん抗原結合ドメインに特異的な一本鎖可変画分（ｓｃＦｖ）を含む。

[0393]一部の実施形態では、キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）は、例えば、配列番号１に示したアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含む、ＣＤ５に結合することを標的とした細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（ＣＤ５結合ドメイン）を含む。一部の実施形態では、キメラＣＦＰは、配列番号１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤ５結合重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ５に結合することを標的とした細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（ＣＤ５結合ドメイン）は、配列番号２に示したアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を含む。一部の実施形態では、キメラＣＦＰは、配列番号２と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤ５結合軽鎖可変ドメインを含む。

[0394]一部の実施形態では、ＣＦＰは、例えば、配列番号８に示した重鎖可変ドメインアミノ酸配列および配列番号９に示した軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を有するＨＥＲ２に結合することを標的とした細胞外ドメイン（ＨＥＲ２結合ドメイン）を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号８と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＨＥＲ２結合重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＨＥＲ２結合軽鎖可変ドメインを含む。

[0395]一部の実施形態では、ＣＦＰは、ＥＣＤを膜貫通（ＴＭ）に連結するヒンジを含む。一部の実施形態では、ヒンジは、ＣＤ８受容体のヒンジ領域のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号７に示したアミノ酸配列を有するヒンジ（ＣＤ８α鎖ヒンジドメイン）を含み得る。一部の実施形態では、ＰＦＰヒンジ領域は、配列番号７に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性であるアミノ酸配列を含む。

[0396]一部の実施形態では、ＣＦＰは、例えば、配列番号６に示したアミノ酸配列を有するＣＤ８膜貫通領域を含む。一部の実施形態では、ＣＦＰ ＴＭ領域は、配列番号６に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性であるアミノ酸配列を含む。

[0397]一部の実施形態では、ＣＦＰは、ＦｃＲドメインを有する細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰは、配列番号３に示したアミノ酸配列、または少なくとも配列番号３と８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有する配列を含むＦｃＲドメイン細胞内ドメインを含む。

[0398]一部の実施形態では、ＣＦＰは、ＰＩ３Ｋ動員ドメインを有する細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＩ３Ｋ動員ドメインは、配列番号４に示したアミノ配列を含む。一部の実施形態では、ＰＩ３Ｋ動員ドメインは、配列番号４と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

[0399]一部の実施形態では、ＣＦＰは、ＣＤ４０細胞内ドメインを有する細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ４０ ＩＣＤは、配列番号５に示したアミノ配列を含む。一部の実施形態では、ＣＤ４０ ＩＣＤは、配列番号５と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

ＰＦＰの特徴
[0400]ＰＦＰは、これが発現される細胞の細胞膜に構造的に組み込まれる。核酸構築物の特定のリーダー配列、例えばシグナルペプチドは、コードされたタンパク質の細胞膜発現を指示する。構築物によってコードされている膜貫通ドメインは、細胞の細胞膜に発現したタンパク質を組み込む。

[0401]一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＦｃＲ－アルファ受容体のＴＭドメインを含み、これは、骨髄性細胞、例えばマクロファージの内在性ＦｃＲγ受容体と二量体化することで、骨髄性細胞特異的発現が確実となる。

[0402]一部の実施形態では、ＰＦＰは、これを発現する細胞を強力な食作用として提供する。ＰＦＰをコードする組換え核酸が細胞で発現される場合、その細胞は、組換え核酸を発現しない細胞と比較して、標的細胞の抗原を有する標的細胞の食作用の増加を示す。組換え核酸が細胞で発現される場合、その細胞は、組換え核酸を発現しない細胞と比較して、標的細胞の抗原を有する標的細胞の食作用の増加を示す。一部の実施形態では、組換え核酸が細胞で発現される場合、その細胞は、組換え核酸を発現しない細胞と比較して、標的細胞の抗原を有する標的細胞の少なくとも２倍の食作用の増加を示す。一部の実施形態では、組換え核酸が細胞で発現される場合、その細胞は、組換え核酸を発現しない細胞と比較して、標的細胞の抗原を有する標的細胞の少なくとも３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍または少なくとも５倍の食作用の増加を示す。一部の実施形態では、組成物は、食作用または係留受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）をコードする組換え核酸であって、（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、および（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む、ＰＲサブユニットと、（ｂ）標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインを含み、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインが作動可能に連結されており；ＰＦＰが標的細胞の抗原に結合すると、ＰＦＰを発現する細胞の殺作用または食作用活性が、ＰＦＰを発現しない細胞に比較して、少なくとも１０％より多く増加する、組換え核酸を含む。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも１０％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも１１％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも１２％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも１３％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも１４％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも１５％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも１６％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも１７％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも１８％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも１９％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも２０％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも３０％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも４０％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも５０％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも６０％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも７０％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも８０％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも９０％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも１００％より多く増加する。

[0403]一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも２倍より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも４倍より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも６倍より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも８倍より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも１０倍より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも２０倍より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも５０倍より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、約５０倍増加する。

[0404]一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用に関連する殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも１０％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用に関連する殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも２０％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用に関連する殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも３０％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用に関連する殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも４０％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用に関連する殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも５０％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用に関連する殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも６０％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用に関連する殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも７０％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用に関連する殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも８０％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用に関連する殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも９０％より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用に関連する殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも１００％より多く増加する。

[0405]一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用に関連する殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも２倍より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用に関連する殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも４倍より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用に関連する殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも６倍より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用に関連する殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも８倍より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用に関連する殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも１０倍より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用に関連する殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも２０倍より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用に関連する殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも３０倍より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用に関連する殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも４０倍より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用に関連する殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも５０倍より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用に関連する殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも１００倍より多く増加する。一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用に関連する殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して約１００倍増加する。

[0406]一部の実施形態では、ＰＦＰを発現する細胞の食作用に関連する殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも２倍より多く増加する。
[0407]一部の実施形態では、組換え核酸が細胞で発現される場合、細胞は、サイトカイン産生の増加を示す。サイトカインは、ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＴＮＦ、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７およびインターフェロンのうちのいずれか１つを含み得る。

[0408]一部の実施形態では、組換え核酸が細胞で発現される場合、細胞は、細胞遊走の増加を示す。細胞遊走の増強は、標準的な運動性アッセイによって細胞培養で検出され得る。一部の実施形態では、アクチンフィラメント再配列は、ファロイジン染色および蛍光顕微鏡を使用して検出およびモニターすることができる。一部の事例では、この目的のためにタイムラプス顕微鏡法が使用される。

[0409]一部の実施形態では、組換え核酸が細胞で発現される場合、細胞は、免疫活性の増加を示す。一部の実施形態では、組換え核酸が細胞で発現される場合、細胞は、ＭＨＣ ＩＩの発現の増加を示す。一部の実施形態では、組換え核酸が細胞で発現される場合、細胞は、ＣＤ８０の発現の増加を示す。一部の実施形態では、組換え核酸が細胞で発現される場合、細胞は、ＣＤ８６の発現の増加を示す。一部の実施形態では、組換え核酸が細胞で発現される場合、細胞は、ｉＮＯＳ産生の増加を示す。

[0410]一部の実施形態では、組換え核酸が細胞で発現される場合、細胞は、組換え核酸を発現しない細胞と比較して、標的細胞の抗原を発現する標的細胞のトロゴサイトーシスの増加を示す。一部の実施形態では、組換え核酸が細胞で発現される場合、細胞は、組換え核酸を発現する細胞の食作用と比較して、標的細胞の抗原を発現する標的細胞のトロゴサイトーシスの低下を示す。

[0411]実施形態では、キメラ受容体は、グリコシル化、ペグ化、および／または他の方法で翻訳後修飾され得る。さらなる実施形態では、グリコシル化、ペグ化、および／または他の翻訳後修飾は、ｉｎ ｖｉｖｏもしくはｉｎ ｖｉｔｒｏで起こり得、および／または化学的技術を使用して実施することができる。追加の実施形態では、任意のグリコシル化、ペグ化、および／または他の翻訳後修飾は、Ｎ結合型またはＯ結合型であり得る。実施形態では、キメラ受容体のいずれか１つは、細胞外ドメインがリガンドによって結合される場合に、シグナルが伝達されて骨髄性細胞、例えばマクロファージが極性化されるように、酵素的または機能的に活性であり得る。

ＣＦＰおよび操作された骨髄性細胞を調製する方法
[0412]ＣＡＲ－Ｐを調製する方法は、（１）ＰＳＲサブユニットフレームワークをスクリーニングするステップと；（２）抗原結合特異性をスクリーニングするステップと；（３）ＣＡＲ－Ｐ組換え核酸構築物と；（４）細胞を操作し検証するステップを含む。

[0413]ＰＳＲサブユニットフレームワークのスクリーニング：上記のように、受容体の設計は、食作用のシグナル伝達の増強を可能にする、少なくとも１つの食作用受容体ドメインを含む。本質的に、数多くの細胞膜タンパク質は、新規の食作用機能または増強ドメインについてスクリーニングすることができる。食作用受容体サブユニットをスクリーニングする方法は、当業者に公知である。追加情報は、実施例のセクションで確認することができる。一般には、機能的ゲノミクスおよびリバース操作を用いて、機能的に関連するタンパク質ポリペプチドまたはその一部分をコードする遺伝子配列を得ることが多い。一部の実施形態では、プライマーおよびプローブは、タンパク質、ポリペプチドまたはそれらの断片またはそれらをコードする核酸断片の同定および／または単離のために構築される。一部の実施形態では、プライマーまたはプローブは、実験の同定のためにタグ付けされ得る。一部の実施形態では、タンパク質またはペプチドのタグ付けは、細胞内局在化または細胞外局在化において有用であり得る。

[0414]可能性のある抗体が高親和性の特異的抗原結合ドメインを選択するためにスクリーニングされる。抗体または抗体ドメインをスクリーニングする方法は、当業者に公知である。詳しい例がさらなる情報を提供する。抗体およびその断片の例には、限定するものではないが、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、一価抗体、ｓｃＦｖ断片、ｓｃＲｖ－Ｆｃ断片、ＩｇＮＡＲ、ｈｃＩｇＧ、Ｖ_ＨＨ抗体、ナノボディ、およびアルファボディが含まれる。

[0415]市販の抗体は、キメラ受容体の細胞外ドメインを生成するように適合させることができる。市販の抗体の例には、限定するものではないが、抗ＨＧＰＲＴ、クローン１３Ｈ１１．１（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、抗ＲＯＲ１（ａｂ１３５６６９）（Ａｂｃａｍ）、抗ＭＵＣ１［ＥＰ１０２４Ｙ］（ａｂ４５１６７）（Ａｂｃａｍ）、抗ＭＵＣ１６［Ｘ７５］（ａｂ１１０７）（Ａｂｃａｍ）、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ［Ｌ８Ａ４］（Ａｂｓｏｌｕｔｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ）、抗メソテリン［ＥＰＲ２６８５（２）］（ａｂ１３４１０９）（Ａｂｃａｍ）、ＨＥＲ２［３Ｂ５］（ａｂ１６９０１）（Ａｂｃａｍ）、抗ＣＥＡ（ＬＳ－Ｃ８４２９９－１０００）（ＬｉｆｅＳｐａｎ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）、抗ＢＣＭＡ（ａｂ５９７２）（Ａｂｃａｍ）、抗グリピカン３［９Ｃ２］（ａｂ１２９３８１）（Ａｂｃａｍ）、抗ＦＡＰ（ａｂ５３０６６）（Ａｂｃａｍ）、抗ＥｐｈＡ２［ＲＭ－００５１－８Ｆ２１］（ａｂ７３２５４）（Ａｂｃａｍ）、抗ＧＤ２（ＬＳ－０５４６３１５）（ＬｉｆｅＳｐａｎ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）、抗ＣＤ１９［２Ｅ２Ｂ６Ｂ１０］（ａｂ３１９４７）（Ａｂｃａｍ）、抗ＣＤ２０［ＥＰ４５９Ｙ］（ａｂ７８２３７）（Ａｂｃａｍ）、抗ＣＤ３０［ＥＰＲ４１０２］（ａｂ１３４０８０）（Ａｂｃａｍ）、抗ＣＤ３３［ＳＰ２６６］（ａｂ１９９４３２）（Ａｂｃａｍ）、抗ＣＤ１２３（ａｂ５３６９８）（Ａｂｃａｍ）、抗ＣＤ１３３（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、抗ＣＤ１２３（１Ａ３Ｈ４）ａｂ１８１７８９（Ａｂｃａｍ）、および抗ＣＤ１７１（Ｌ１．１）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）が含まれる。公知の抗体から抗体断片、例えばｓｃＦｖを作出する技術は、当技術分野では日常的である。

[0416]組換え核酸は、当業者に公知の分子生物学技術に従って生成することができる。この方法には、限定するものではないが、プライマーの設計、ＰＣＲ増幅産物の生成、制限酵素消化、ライゲーション、クローニング、クローン化産物のゲル精製、クローン化ＤＮＡの細菌増殖、クローン化プラスミドまたはベクターの単離および精製が含まれる。一般的なガイダンスは、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ＰＣＲ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ： Ｍｉｃｈａｅｌ Ｆｉｎｎｅｙ、Ｐａｕｌ Ｅ． Ｎｉｓｓｏｎ、Ａｙｏｕｂ Ｒａｓｈｔｃｈｉａｎ、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、５６巻、１号（初版：２００１年１１月１日）；Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ｊａｅｈｏｎｇ Ｐａｒｋ、Ｊｏｓｈｕａ ＬａＢａｅｒ、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、７４巻、１号（初版：２００６年５月１５日）他で確認することができる。一部の実施形態では、特定の増幅技術、例えば、１９８９年にＫｗｏｈらによって記載された、ＴＡＳ技術（転写ベースの増幅システム）；１９９０年にＧｕａｔｅｌｌｉらによって記載された（それらは参照により本明細書に組み込まれる）、３ＳＲ技術（Ｓｅｌｆ－Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）；１９９１年にＫｉｅｖｉｔｉｓらによって記載された、ＮＡＳＢＡ技術（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｂａｓｅｄ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）；ＳＤＡ技術（Ｓｔｒａｎｄ Ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）（Ｗａｌｋｅｒら、１９９２年）；ＴＭＡ技術（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）などを使用することができる。

[0417]一部の実施形態では、組換え核酸配列は、ヒトにおける発現のために最適化される。
[0418]ＤＮＡ、ｍＲＮＡおよび環状ＲＮＡ：一部の実施形態では、裸のＤＮＡまたはメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を使用して、核酸を細胞内に導入することができる。一部の実施形態では、ＰＦＰをコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡは、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）のカプセル化によって食細胞に導入される。ｍＲＮＡは一本鎖であり、コドン最適化され得る。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、１つまたは複数の改変された塩基または非天然の塩基、例えば、５’－メチルシトシン、またはシュードウリジンを含み得る。ｍＲＮＡは、５０～１０，０００塩基長であり得る。一態様では、導入遺伝子はｍＲＮＡとして送達される。ｍＲＮＡは、約１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１０，０００塩基より多くを含み得る。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、１０，０００塩基長を超えていてもよい。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、約１１，０００塩基長であり得る。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、約１２，０００塩基長であり得る。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、融合タンパク質をコードする導入遺伝子配列を含む。ＬＮＰカプセル化ＤＮＡまたはＲＮＡは、骨髄性細胞、例えばマクロファージをトランスフェクトするために使用することができるか、または対象に投与することができる。

[0419]一部の実施形態では、ＰＦＰをコードする環状ＲＮＡ（ｃｉｒｃＲＮＡ）が使用される。環状ＲＮＡ（ｃｉｒｃＲＮＡ）では、３’末端と５’末端が共有結合され、ＲＮＡのクラスを構築する。ｃｉｒｃＲＮＡは、ＬＮＰを使用して、細胞または対象の内部に送達され得る。

キメラ抗原受容体タンパク質を発現する骨髄性細胞機能のさらなる増強のメカニズム
[00420]骨髄性細胞、例えばマクロファージは、特に腫瘍微小環境において、図２５に図示されているように、標的細胞、例えばがん細胞によるＣＤ４７媒介性抗食作用活性などの食作用抑制または阻害シグナルに遭遇する。表面抗原分類４７（ＣＤ４７）は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する受容体である。これはインテグリンおよびトロンボスポンジン１（ＴＳＰ－１）に結合することができ、ヒト細胞において遍在的に発現される。腫瘍細胞を含む標的細胞は、ＣＤ４７を「ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ」シグナルとして発現し、食作用媒介性殺作用および除去から回避する。食細胞は、ＣＤ４７に結合するシグナル制御タンパク質アルファ受容体（ＳＩＲＰ）を発現することができる。ＳＩＲＰファミリーメンバーは、受容体チロシンキナーゼ結合型シグナル伝達プロセスの負の制御に関与している受容体型の膜貫通糖タンパク質である。ＳＩＲＰ－αは、チロシンキナーゼによってリン酸化され得る。このＰＴＰのホスホ－チロシン残基は、チロシンホスファターゼ（ＰＴＰ）を含有するＳＨ２ドメインを動員し、ＰＴＰの基質として機能することが明らかになっている。ＳＩＲＰ－□はＳＩＲＰファミリーの別のメンバーであり、これは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフを担持するタンパク質のＴＹＲＯＢＰ／ＤＡＰ１２と相互作用することが判明している。ＴＹＲＯＢＤと会合した場合、これは骨髄性細胞の活性化を引き起こし得る。このタンパク質はまた、チロシンキナーゼＳＹＫの動員にも関与していることが報告されている。

[00421]一態様では、本明細書では、食細胞で発現された場合、ＣＤ４７シグナル伝達を機能的に遮断するように生成されたキメラ受容体が提供される。
[00422]別の態様では、本明細書では、ＣＤ４７シグナルを遮断することによって、操作された骨髄性細胞、例えばマクロファージの食作用を増強するための組成物および方法が提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載のＣＦＰ受容体をコードする組換え核酸は、単独で、または免疫療法において使用するための操作されたマクロファージを作出する他の組換え食作用受容体と組み合わせて、骨髄性細胞、例えば食細胞にトランスフェクトまたは形質導入される。一部の他の実施形態では、組換え食作用受容体は、スカベンジャー受容体の細胞内ドメインを含む。

[00423]一部の実施形態では、本明細書では、ＣＦＰをコードする組換え核酸を含む組成物であって、ＣＦＰが、（ａ）（ｉ）標的細胞上のＣＤ４７に特異的に結合することができる細胞外ドメイン、および（ｉｉ）膜貫通ドメインを含むサブユニットを含み、サブユニットの細胞外ドメインおよび細胞外抗原結合ドメインが作動可能に連結されており；サブユニットが、ＣＤ４７に結合する内在性受容体の機能的細胞内ドメインを含まないか、またはホスファターゼを活性化する細胞内ドメインを含まない、組成物が提供される。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、シグナル制御タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）に由来する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、シグナル制御タンパク質ベータ（ＳＩＲＰβ）に由来する。ＳＩＲＰβはＣＤ４７に結合しない。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＳＩＲＰαに由来する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＳＩＲＰβに由来する。このカテゴリーの組換え核酸は、いずれの細胞内ドメインも欠失しており、したがって、非シグナル伝達受容体およびＣＤ４７シグナル伝達の遮断薬である。この構築物は、ＳＩＲＰ－ΔＩＣＤと呼ばれる。このキメラ受容体のＳＩＲＰαまたはＳＩＲＰβ ＥＣＤの細胞外リガンド結合ドメインによって、受容体は標的細胞のＣＤ４７に結合するが、機能的ＳＩＲＰα細胞内ドメインを有していないことによりシグナル伝達が不活性になり、それによりＣＤ４７シグナル伝達と、ＣＦＰを発現する骨髄性細胞、例えばマクロファージによるＣＤ４７＋細胞の食作用の阻害が低減される。この構築物の過剰発現は、がん細胞による骨髄性細胞、例えばマクロファージのＣＤ４７媒介性抗食作用活性を大幅に低下させ得る。

[00424]一部の実施形態では、内在性ＳＩＲＰαは、ＳＩＲＰ－ΔＩＣＤの過剰発現に加えて、さらに阻害され得る。ｓｉＲＮＡがＳＩＲＰ－ΔＩＣＤの発現を低下させないか、または影響を及ぼさないように、ｓｉＲＮＡは、ＳＩＲＰαのＩＣＤをコードするｍＲＮＡの一部分を特異的に標的とするよう設計することができる。

[00425]一部の実施形態では、ＳＩＲＰ－ΔＩＣＤおよび／または内在性ＳＩＲＰαの阻害剤は、食作用受容体およびがん抗原に特異的な細胞外抗原結合ドメインを含む融合タンパク質を発現する細胞で発現され得る。

抗食作用シグナルを遮断し、食作用を活性化するためのキメラ抗原受容体
Ａ．ＣＤ４７結合性シグナル伝達の変化
[00426]一態様では、組換え核酸が生成され、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸であって、ＣＦＰが、（ａ）膜貫通ドメインと、（ｂ）標的細胞のＣＤ４７に特異的な細胞外抗原結合ドメインと、ここで、膜貫通ドメインおよびＣＤ４７に特異的な細胞外抗原結合ドメインが作動可能に連結されており；ＣＦＰがＣＤ４７に結合する内在性受容体の機能的な細胞内ドメインを含まないか、またはホスファターゼを活性化する細胞内ドメインを含まない、（ｃ）細胞内シグナル伝達を活性化して食作用を増強することが可能な食作用受容体由来の細胞内ドメインとを含む、組換え核酸を含む。一部の実施形態では、組換え核酸構築物は、スカベンジャー受容体の細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含む。このクラスの受容体は、食作用阻害シグナルを食作用促進シグナルに変換する（またはスイッチする）ように設計されているという理由から、本明細書では「スイッチ受容体」と呼ばれる。一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、レクチン、デクチン１、マンノース受容体（ＣＤ２０６）、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、およびＣＤ１６９受容体から選択されるスカベンジャー受容体の細胞内ドメインを含むことができ、それらは細胞外末端でＳＩＲＰα ＣＤ４７結合ドメインを含む細胞外ドメインと融合される。

[00427]一部の実施形態では、食作用シグナル伝達ドメインを有する細胞内ドメインは、１つまたは複数の免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）モチーフを有するドメインを含む。ＩＴＡＭは、免疫系のいくつかの受容体、例えば、Ｔ細胞受容体、免疫グロブリン（Ｉｇ）、およびＦｃＲなどの細胞質尾部に存在する保存配列である。それらは、規定された間隔（ＹＸＸＬ／Ｉ－Ｘ_６－８－ＹＸＸＬ／Ｉ）により分けられた対のＹＸＸＬ／Ｉモチーフ（Ｙ＝チロシン、Ｌ＝リシン、およびＩ＝イソロイシン）からなる保存されたアミノ酸配列モチーフを有する。さらに、ほとんどのＩＴＡＭは、第１のＩＴＡＭチロシンに対して＋２位に、負に帯電したアミノ酸（Ｄ／Ｅ）を含む。ＩＴＡＭ内の残基のリン酸化は、食作用を活性化するいくつかのシグナル伝達分子を動員する。ＩＴＡＭモチーフはまた、細胞内アダプタータンパク質である１２ｋＤａのＤＮＡＸ活性化タンパク質（ＤＡＰ１２）に存在する。

[00428]一部の実施形態では、細胞内領域の食作用シグナル伝達ドメインは、ＰＩ３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）動員ドメイン（ＰＩ３Ｋ結合ドメインとも呼ばれる）を含み得る。本明細書で使用されるＰＩ３Ｋ結合ドメインは、ＣＤ１９、ＣＤ２８、ＣＳＦＲまたはＰＤＧＦＲのそれぞれのＰＩ３Ｋ結合ドメインであり得る。結合ドメインへのＰＩ３キナーゼの動員は、Ａｋｔ媒介性シグナル伝達カスケードおよび食作用の活性化につながる。ＰＩ３Ｋ－Ａｋｔシグナル伝達経路は、食作用、炎症反応の制御、ならびに小胞輸送および細胞骨格再編成を含む他の活性において重要である。ＰＩ３キナーゼ動員ドメインは、細胞膜タンパク質の細胞内ドメインであり、リン酸化され得るチロシン残基を有し、次にＰＩ３Ｋｐ８５のＳｒｃ相同ドメイン（ＳＨ２）ドメインによって認識され得る。ｐ８５のＳＨ２ドメインは、受容体の細胞質側ドメインのリン酸化チロシンを認識する。これによって、ｐ１１０のアロステリック活性化と、酵素Ａｋｔおよび構成的活性型３’－ホスホイノシチド依存性キナーゼ１（ＰＤＫ１）によって、それらのプレクストリン相同ドメインを介して認識されるホスファチジルイノシトール－３，４，５－三リン酸（ＰＩＰ_３）の生成が生じる。ＡｋｔとＰＩＰ_３との相互作用は、Ａｋｔ構造と、ＰＤＫ１およびｒｉｃｔｏｒ－ｍＴＯＲ複合体によるＴｈｒ３０８残基およびＳｅｒ４７３残基のリン酸化にそれぞれ変化をもたらす。これらの２つの残基のリン酸化は、Ａｋｔの活性化を引き起こし、次にこれは、他の基質の中でも、酵素グリコーゲン合成酵素キナーゼ－３（ＧＳＫ－３）をリン酸化する。ＧＳＫ－３は、ＧＳＫ－３αおよびＧＳＫ－３βという２つのアイソフォームを有し、両方とも構成的活性型である。アイソフォームは構造的に関連しているが、機能的には非冗長である。ＧＳＫ－３の不活性化は、それらの制御Ｎ末端ドメインに位置するＧＳＫ－３αのＳｅｒ２１残基またはＧＳＫ－３βのＳｅｒ９残基がＡｋｔおよび他のキナーゼによってリン酸化される場合に観察される。リン酸化によるＧＳＫ－３の阻害は、炎症のモジュレーションにとって、および食作用プロセスにおいて重要である。

[00429]一部の実施形態では、組換えＰＦＰは、（ａ）細胞外ＣＤ４７結合ドメインＳＩＲＰα、（ｂ）ＳＩＲＰβ膜貫通ドメイン、および（ｃ）ＳＩＲＰβの細胞内ドメインを含む。ＳＩＲＰβシグナル伝達は、ＤＡＰ１２活性化に関与することにより、食作用促進性シグナル伝達を活性化することができる。

Ｂ．シアル酸結合性シグナル伝達の変化
[00430]一態様では、本明細書では、免疫細胞で発現される膜タンパク質のＳｉｇｌｅｃファミリーのメンバーによる食作用制御シグナル伝達を切り替える組成物および方法が開示されている。このファミリーの様々なメンバーは、膜タンパク質のシアル酸付加グリカンと接触すると、チェックポイントシグナルを伝達する。一部のメンバーでは、Ｓｉｇｌｅｃタンパク質の細胞内ドメインは、複数の免疫受容体チロシンベース阻害性モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む。ＩＴＩＭは、その細胞質尾部でコンセンサスアミノ酸配列、すなわち（Ｉ／Ｖ／Ｌ／Ｓ）－Ｘ－Ｙ－Ｘ－Ｘ－（Ｌ／Ｖ）（式中、Ｘは任意のアミノ酸を示し、Ｉ＝イソロイシン、Ｖ＝バリン、Ｌ＝リシン、Ｓ＝セリン、Ｙ＝チロシンである）を共有する。ＩＴＩＭモチーフのチロシン残基のリン酸化は、２つのＳＨ２ドメインを含有する負の制御因子：イノシトールホスファターゼＳＨＩＰ（Ｓｒｃ相同２含有イノシトールポリリン酸５－ホスファターゼ）またはチロシンホスファターゼＳＨＰ－１（Ｓｒｃ相同２含有タンパク質チロシンホスファターゼ－１）のいずれかを動員する。（Ｙ＋２）位のロイシンはＳＨＩＰへの結合に有利であるが、（Ｙ－２）位のイソロイシンはＳＨＰ－１結合に有利である。ＩＴＩＭはまた、別のチロシンホスファターゼであるＳＨＰ－２にも結合することができるが、ＩＴＩＭ媒介性阻害においてＳＨＰ－２が機能的な役割を果たしているという証拠は、他のメディエーターに比べて明確ではない。したがって、シアル酸残基と結合することにより細胞外リガンド結合ドメインでＳｉｇｌｅｃ膜タンパク質が活性化されると（例えば、シアル酸付加膜グリカンタンパク質で）、ＩＴＩＭは細胞内シグナルを受け取り、リン酸化され、食作用の可能性の低下を含む免疫調節のＳＨＰ媒介性シグナル伝達を開始する。

[00431]一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物は、キメラＳｉｇｌｅｃ受容体（ＳｇＲ）融合タンパク質（ＳｇＦＰ）をコードする組換え核酸構築物であって、ＳｇＦＰが、（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、および（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含むＳｇＲサブユニット、ならびに（ａ）標的細胞の細胞表面タンパク質のシアル酸付加グリカンに特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインを含み、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインが作動可能に連結しており；（ｉ）ＳｇＦＰがシアル酸付加グリカンに結合する内在性受容体の機能的細胞内ドメインを含まないか、または（ｉｉ）ＳｇＦＰが食作用もしくは炎症経路を活性化する細胞内シグナル伝達ドメインを含む、組換え核酸構築物を含む。

[00432]Ｓｉｇｌｅｃファミリー受容体は、膜タンパク質ｓｉｇｌｅｃ１（ＣＤ１６９）、ｓｉｇｌｅｃ２（ＣＤ２２）、ｓｉｇｌｅｃ３（ＣＤ３３）、ｓｉｇｌｅｃ４（ＭＡＧ）、ｓｉｇｌｅｃ５、ｓｉｇｌｅｃ６、ｓｉｇｌｅｃ７、ｓｉｇｌｅｃ８、ｓｉｇｌｅｃ９、ｓｉｇｌｅｃ１０、ｓｉｇｌｅｃ１１、ｓｉｇｌｅｃ１２、ｓｉｇｌｅｃ１３、ｓｉｇｌｅｃ１４、ｓｉｇｌｅｃ１５、ｓｉｇｌｅｃ１６を含む。

[00433]一部の実施形態では、組換え核酸構築物は、Ｓｉｇｌｅｃファミリーメンバーのいずれか１つを含む、標的細胞の膜タンパク質のシアル酸付加残基に結合することができるＳｉｇｌｅｃ受容体の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む組換えキメラ抗原受容体をコードする。一部の実施形態では、組換え核酸構築物は、Ｓｉｇｌｅｃ受容体の膜貫通タンパク質（ＴＭ）ドメインを含む組換えキメラ抗原受容体をコードする。一部の実施形態では、キメラ受容体は細胞内ドメインが欠損しており、このため、Ｓｉｇｌｅｃ誘導型免疫調節性細胞内シグナル伝達の遮断薬として作用する。このことは、細胞内ドメインをコードする核酸領域の欠失と、Ｓｉｇｌｅｃ受容体のコード配列の残りのクローニングにより達成される。この構築物は、Ｓｉｇｌｅｃ細胞内ドメイン欠失構築物［ＳｉｇｌｅｃΔＩＣＤ］として指定され得る。

[00434]一部の実施形態では、組換え核酸構築物は、標的細胞の膜タンパク質のシアル酸付加残基に結合することができるＳｉｇｌｅｃ受容体の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む組換えキメラ抗原受容体をコードする。一部の実施形態では、組換え核酸構築物は、Ｓｉｇｌｅｃ受容体の膜貫通タンパク質（ＴＭ）ドメインを含む組換えキメラ抗原受容体をコードする。

[00435]一部の実施形態では、キメラ受容体は、無関係の膜タンパク質のＴＭドメイン、例えば、ＣＤ８ ＴＭまたはＣＤ２ ＴＭドメインを含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ ＥＣＤおよび／またはＳｉｇｌｅｃ ＴＭを含むキメラ抗原受容体は、内在性Ｓｉｇｌｅｃ細胞内ドメイン（ＩＣＤ）を欠損しており（例えば、細胞内ドメインの欠失によって達成される［ＳｉｇｌｅｃΔＩＣＤ］）、無関係なタンパク質の細胞内ドメインは構築物の細胞質末端へ融合される。

[00436]注目すべきこととして、Ｓｉｇｌｅｃ２、３、５、６、７、８、９、１０、１１、および１２のファミリーメンバーは、２つ以上の細胞内ＩＴＩＭモチーフを含む。一部の実施形態では、ＩＴＩＭモチーフを含むＳｉｇｌｅｃタンパク質の細胞内ドメインはＳｉｇｌｅｃΔＩＣＤを生成するように欠失され、食作用促進性タンパク質のＩＣＤと融合され、それにより、ｓｉｇｌｅｃががん細胞のそのリガンド（シアル酸付加グリカン）に結合することによって生成される阻害シグナルを炎症促進性および食作用促進性シグナルに変化させる。

[00437]無関係のタンパク質は、食作用活性化シグナルまたは炎症促進性シグナルを生成することができる細胞内ドメイン、例えば、タンパク質の細胞内ドメイン：ＭＲＣ１、ＩｔｇＢ５、ＭＥＲＴＫ、ＥＬＭＯ、ＢＡＩＬ Ｔｙｒｏ３、Ａｘｌ、Ｔｒａｆ６、Ｓｙｋ、ＭｙＤ８８、Ｚａｐ７０、ＰＩ３Ｋ、ＦｃｙＲ１、ＦｃｙＲ２Ａ、ＦｃｙＲ２Ｂ２、ＦｃｙＲ２Ｃ、ＦｃｙＲ３Ａ、ＦｃＥＲ１、ＦｃａＲ１、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＤＡＰ１２、ＮＦＡＭ１、およびＣＤ７９ｂ細胞内ドメインを含むことができる。

[00438]一部の実施形態では、キメラ受容体の細胞内ドメインは、レクチン、デクチン１、マンノース受容体（ＣＤ２０６）、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、およびＣＤ１６９受容体から選択されるスカベンジャー受容体の細胞内ドメインを含むことができ、これらは細胞外末端でＳｉｇｌｅｃシアル酸付加グリカン結合ドメインを含む細胞外ドメインと融合される。

[00439]一部の実施形態では、細胞内領域の食作用シグナル伝達ドメインは、ＰＩ３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）動員ドメイン（ＰＩ３Ｋ結合ドメインとも呼ばれる）を含み得る。本明細書で使用されるＰＩ３Ｋ結合ドメインは、ＣＤ１９、ＣＤ２８、ＣＳＦＲまたはＰＤＧＦＲのそれぞれのＰＩ３Ｋ結合ドメインであり得る。

[00440]一部の実施形態では、食作用シグナル伝達ドメインを持つ細胞内ドメインは、１つまたは複数の免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）モチーフを有するドメインを含む。

Ｃ．キメラＳｉｇｌｅｃ構築物およびシアリダーゼの共発現
[00441]一部の実施形態では、組換え核酸構築物は、ｓｉｇｌｅｃ受容体の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）と融合したがん抗原特異的ｓｃＦｖを含む組換えキメラ抗原受容体をコードする。これにより、この構築物のがん細胞への標的指向性が可能になる。キメラ受容体は、ｓｉｇｌｅｃ受容体のＴＭおよびＩＣＤを含み、これは、内在性ＩＣＤであり得るか、または１個もしくは複数のＰＩ３Ｋ結合ドメインなどの追加の食作用促進性ドメインと融合したＩＣＤであり得る。ｓｉｇｌｅｃ ＥＣＤ領域は、同時に発現されるシアリダーゼによって活性化が防止される。シアリダーゼは、構築物全体が単一のポリペプチドとして発現され、これらが内在性Ｔ２Ａ切断によって容易に切断される、モノシストロニックな設計の構築物によってコードされ得る；または、シアリダーゼ酵素のコード配列が別々のｍＲＮＡとして転写される、バイシストロニックであり得る。

[00442]ｓｉｇｌｅｃ受容体は、膜タンパク質に遍在して存在するシアル酸付加残基に結合し、下流のシグナルを活性化することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載のキメラ構築物は、ｓｉｇｌｅｃタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインをコードするが、細胞外末端でｓｃＦｖを標的とするがんと融合し、細胞内末端でシアリダーゼをコードする。

[00443]一部の実施形態では、組換え構築物がモノシストロニックであるかポリシストロニックであるかにかかわらず、シアリダーゼコード配列は、翻訳の際にタンパク質シアリダーゼの分泌をシグナル伝達するＮ末端シグナルペプチドのコード配列と融合される。シアリダーゼの発現と細胞外環境へのその放出の際に、酵素は、構築物を発現する細胞の膜の近位にある環境において細胞外膜タンパク質から消化物のシアル酸残基を除く。シアリダーゼはＣＡＲ－ｓｉｇｌｅｃ受容体を発現したのと同じ細胞によって発現されるので、シアリダーゼの発現は、ｓｉｇｌｅｃのＥＣＤをその天然リガンドに結合させないが、ｓｃＦｖがその受容体に結合することによって活性化され、それによりがん抗原発現細胞に対するキメラ受容体の作用の特異性が確保される。

[00444]一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、ＩＴＩＭの活性化を介したｓｉｇｌｅｃ受容体の内在性ＩＣＤドメインの活性化によって、抗炎症性および食作用制御シグナル伝達タンパク質として機能する。

[00445]一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、炎症促進性シグナル伝達部分を有する内在性ＩＣＤドメイン、および／またはＩＣＤを含む内在性ｓｉｇｌｅｃ ＩＴＩＭの欠乏を含み、これらのそれぞれは、前のセクションで説明されており、本明細書に記載のＣＡＲを含むｓｃＦｖとモジュラー方式で組み合わせることができる。

食作用を増強するためのキメラ抗原受容体ドメイン
ＴＲＥＭドメイン
[00446]一態様では、本明細書では、骨髄性細胞に発現するトリガー受容体（ＴＲＥＭ）の受容体由来の１つまたは複数のドメインを有するキメラ受容体、ＴＲＥＭキメラ受容体をコードする組換え核酸が提示されている。ＴＲＥＭ受容体は、ＰＲＲ誘導性シグナルを増幅または低減させる能力があることから、免疫応答の重要な制御因子である。このタンパク質ファミリーには、メンバーのＴＲＥＭ１、２、３が含まれる。ＴＲＥＭは、Ｖ型の単一の細胞外免疫グロブリン様ドメイン、膜貫通ドメイン、および短い細胞質尾部の存在を含む、共通の構造特性を共有する。特に、ＴＲＥＭ膜貫通ドメイン（ＴＭ）は、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する膜貫通アダプターである１２ｋＤａのＤＮＡＸ活性化タンパク質（ＤＡＰ１２）の正荷電残基と相互作用する負荷電残基を有する。

[00447]一部の実施形態では、キメラ抗原受容体をコードする組換え核酸は、少なくともＴＲＥＭ ＴＭドメインをコードする配列を含み、その結果、このキメラ受容体はＤＡＰ１２と相互作用し、ＤＡＰ１２のＩＴＡＭ内の残基のリン酸化を介して食作用を増強し、食作用を活性化する複数のシグナル伝達分子を動員するようになる。

[00448]一部の実施形態では、キメラ受容体は、がん抗原特異的抗体またはその一部分もしくは断片などのがん抗原に特異的に結合することができる抗原結合ドメインと細胞外領域で融合される、ＴＲＥＭタンパク質由来の１つまたは複数のドメインを含む。

[00449]一部の実施形態では、ＴＲＥＭキメラ抗原受容体をコードする組換え核酸は、（ａ）少なくともＴＲＥＭ膜貫通ドメイン（ＴＭ）およびＴＲＥＭ細胞内ドメイン（ＩＣＤ）；ならびに、（ｂ）がん抗原に特異的に結合することができる抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む融合タンパク質をコードする。融合タンパク質は、がん細胞を標的とし、抗原結合ドメインを含むＥＣＤを介して標的がん細胞に結合するように設計されており、この結合は、ＴＲＥＭ ＴＭおよび／または細胞内ドメインを介したシグナル伝達によって食作用を誘発および増強する。ＴＲＥＭの膜貫通ドメインは、ＤＡＰ１２膜貫通ドメインと三量体を形成し、細胞内の食作用促進性シグナル伝達カスケードを誘発する。一部の実施形態では、ＴＲＥＭドメインは、ＴＲＥＭ１、またはＴＲＥＭ２、またはＴＲＥＭ３のメンバーによって提供される。細胞外抗原結合ドメインは、短いスペーサーまたはリンカーを通してＴＲＥＭドメインの細胞外末端に融合される。

[00450]一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、がん抗原に特異的な抗体を含む。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、がん細胞の表面上の抗原に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分を含む。

[00451]一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、がん抗原に特異的な抗体である。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは抗体の画分であり、断片はがん細胞上のがん抗原に特異的に結合することができる。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、がん抗原結合ドメインに特異的な一本鎖可変画分（ｓｃＦｖ）を含む。

ＦｃＲドメイン
[00452]一部の態様では、本明細書では、ＦｃＲドメインを含むキメラ抗原受容体をコードする組換え核酸が記載されている。一部の実施形態では、本明細書に記載のキメラ受容体は、ＦｃＲα（ＦｃＲα１）ドメインを含み得る。ＦｃＲα１膜貫通ドメインは、骨髄性細胞、例えばマクロファージ、および他の食細胞、例えば肥満細胞でＦｃＲγ膜貫通ドメインとヘテロマー化し、このヘテロ二量体形成は細胞表面でのタンパク質の発現に必要とされる。一部の実施形態では、ＦｃＲα１ ＴＭドメインを含む組換えタンパク質の発現は、ＦｃγＲを自然に発現する細胞における発現に限定される。この点に関して、ＦｃＲα１ ＴＭドメインを有する組換えキメラタンパク質は、ＦｃＲγを発現する食細胞以外のいかなる細胞においても発現が妨げられる。同様に、ＦｃＲβの発現は肥満細胞に限定される。一部の実施形態では、キメラ受容体は、キメラタンパク質の骨髄性細胞特異的発現のためのＦｃＲα１ ＴＭドメインを含む１つまたは複数のドメインで設計される。一部の実施形態では、キメラ受容体は、キメラタンパク質の肥満細胞特異的発現のためのＦｃＲβ ＴＭドメインを含む１つまたは複数のドメインで設計される。

プロカスパーゼドメイン
[00453]一部の態様では、本明細書には、キメラ抗原受容体をコードする組換え核酸と、Ｃ末端でカスパーゼ切断配列およびプロカスパーゼをコードする配列と連結されたＳｒｃ相同２ドメイン（ＳＨ２）１（ＳＨ２－ｃｃｓ－プロカスパーゼ）を含む融合タンパク質が記載されている。一部の実施形態では、組換え核酸は、がん抗原に特異的に結合することができる細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および食作用を誘発または増強することができるＩＴＡＭモチーフを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む第１のポリペプチド（ａ）と、カスパーゼ切断配列およびプロカスパーゼをコードする配列とＣ末端で連結されたＳｒｃ相同２ドメイン（ＳＨ２）１（ＳＨ２－ｃｃｓ－プロカスパーゼ）を含む細胞内ポリペプチドの第２のポリペプチド（ｂ）とを含む、キメラ抗原受容体をコードする。組換え核酸は、モノシストロニックであってもよく、ポリシストロニックであってもよい。一部の実施形態では、組換え核酸はモノシストロニックであり、（ａ）をコードする配列および（ｂ）をコードする配列は、翻訳後に２つのポリペプチドを内因的に切断するＴ２Ａ配列によって離される。プロカスパーゼは、プロカスパーゼ１、プロカスパーゼ２、またはプロカスパーゼ３であり得る。（ａ）および（ｂ）の発現および切断の際、ＳＨ２－ｃｃｓ－プロカスパーゼのＳＨ２ドメインは、プロカスパーゼを（ａ）をＩＴＡＭモチーフのリン酸化された細胞内ドメインに向かわせて、活性化される。リン酸化されたＩＴＡＭ残基との接触によるＳＨ２ドメインの活性化は、プロカスパーゼのタンパク質分解切断を活性化して、貪食された細胞を消化するのに必要とされる活性化カスパーゼを生成する。

ユビキチン化活性化ドメイン
[00454]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインをキメラ受容体に付加して、食作用シグナル伝達を増強することができる。ユビキチンシグナル伝達は、食作用の誘発に関与している。エンドサイトーシス受容体のモノユビキチン化により、それらがリソソーム分解の標的となり得る。細胞内ドメインでのスカベンジャー受容体ＭＳＲ１のＩＬ－４シグナル伝達媒介性ポリユビキチン化は、受容体を活性化し、炎症性遺伝子の活性化の誘導に関与するＭＡＰキナーゼ経路タンパク質との相互作用を引き起こし得る。例えば、ＭＳＲ１タンパク質のＫ６３ポリユビキチン化は、ファゴソームでＴＡＫ１／ＭＫＫ７／ＪＮＫとの相互作用をもたらす。ＭＳＲ１のＫ２７残基のユビキチン化は、ＭＳＲシグナル伝達と、炎症促進性遺伝子の活性化、例えば炎症促進性サイトカインの発現などにも関係している。ユビキチンＥ３リガーゼは、ＭＳＲ１の細胞内シグナル伝達ドメインの特定のリジン残基へのユビキチンのライゲーションを促進し、これはＩＬ４の活性化の際に活性化され、次いで、ＴＡＫ１、ＭＫＫ７、およびＪＮＫの結合と、炎症促進性遺伝子、例えばＴＮＦ－アルファおよびＩＬ－１などの発現の誘発によって細胞内シグナル伝達を活性化することができる。

[00455]一部の実施形態では、本明細書に記載の組換えキメラ抗原受容体は、ユビキチン化および活性化されて炎症促進性シグナルを生成することができる残基を含む細胞内ドメインを含み得る。

[00456]一部の実施形態では、本明細書に記載のキメラ抗原受容体の細胞内ドメインは、Ｅ３リガーゼ媒介性ユビキチン化を受けることができる残基を含むＭＳＲ１の細胞内ドメインを含む。

[00457]一部の実施形態では、本明細書に記載のキメラ抗原受容体の細胞内ドメインは、ユビキチン化されることが可能であり、ユビキチン化の際にＴＡＫ１に結合することができる細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載のキメラ抗原受容体の細胞内ドメインは、ユビキチン化されることが可能であり、ユビキチン化の際にＭＡＰキナーゼタンパク質、例えばＭＫＫ７に結合することができる細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載のキメラ抗原受容体の細胞内ドメインは、ユビキチン化されることが可能であり、ユビキチン化の際にキナーゼ、またはＭＡＰキナーゼタンパク質、例えばＭＫＫ７を含むタンパク質複合体に結合することができる細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載のキメラ抗原受容体の細胞内ドメインは、ユビキチン化されることが可能であり、ユビキチン化の際に、キナーゼ、またはＪＮＫを含むタンパク質複合体に結合することができる細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載のキメラ抗原受容体の細胞内ドメインは、ユビキチン化されることが可能であり、ユビキチン化の際に、キナーゼ、または炎症促進性遺伝子の転写を活性化することができるタンパク質複合体に結合することができる細胞内ドメインを含む。

[00458]本明細書で検討したように、適切なユビキチン化ドメインは、本開示に記載されているＣＡＲＰ受容体のいずれか１つの細胞内部分にライゲートされ得る。
食作用のための他のキメラ受容体との共発現
[00459]一部の実施形態では、本明細書に記載の１つまたは複数のＣＦＰは、がん細胞の表面上のがん抗原に特異的に結合することができる抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインを有する組換え食作用受容体融合タンパク質（ＰＦＰ）と共発現され得る。融合タンパク質は、膜貫通ドメインおよび細胞内食作用受容体ドメインをさらに含み、またさらに食作用シグナル伝達増強ドメイン、例えばキナーゼ結合ドメインを含み得る。ＰＦＰは、がん細胞を標的とし、標的に結合した際に食作用を活性化するように特異的に設計されている。ＰＦＰによる食作用の増強は、ＣＦＰの共発現によって増強される。例えば、ＰＦＰをＳＩＲＰ－ＣＦＰと共発現する細胞は、細胞の食作用の可能性を増強し、さらに、ＰＦＰは細胞に特定のがんの標的を提供する。例えば、ＰＦＰをＳＨ２－ｃｃｓ－プロカスパーゼと共発現する細胞は、ＰＦＰを持つがん細胞への特異的標的を有し、一方、食作用活性はＰＦＰ細胞内ドメインによって増強され、またがん細胞殺作用活性は、カスパーゼへのプロカスパーゼ活性化を介したＳＨ２－ｃｃｓ－プロカスパーゼによるアポトーシス細胞のクリアランスによって増強される。

[00460]一部の実施形態では、スカベンジャー受容体細胞内ドメインは、食作用を活性化するシグナル伝達ドメイン；または細胞質側末端の炎症促進性ドメインを含む第２の細胞内ドメインを含み、これらは作動可能に連結される。ＣＤ４７結合ドメインは、食作用受容体の１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインと作動可能に連結されているので、細胞外末端でのＣＤ４７リガンドの結合に起因するシグナル伝達イベントは、細胞内ドメインを通過する際に、ネイティブＣＤ４７結合ＳＩＲＰα受容体の食作用阻害シグナルの代わりに、組換え受容体の細胞内末端で食作用増強シグナルに変わる。組換え受容体を発現する細胞の食作用の可能性は、ＳＩＲＰ－ΔＩＣＤを発現する細胞以上に高度に増強される。

[00461]一部の実施形態では、細胞内食作用シグナル伝達ドメインは、ＭＲＣ１、ＩｔｇＢ５、ＭＥＲＴＫ、ＥＬＭＯ、ＢＡＩＬ Ｔｙｒｏ３、Ａｘｌ、Ｔｒａｆ６、Ｓｙｋ、ＭｙＤ８８、Ｚａｐ７０、ＰＩ３Ｋ、ＦｃｙＲ１、ＦｃｙＲ２Ａ、ＦｃｙＲ２Ｂ２、ＦｃｙＲ２Ｃ、ＦｃｙＲ３Ａ、ＦｃＥＲ１、ＦｃａＲｌ、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＤＡＰ１２、ＮＦＡＭ１、およびＣＤ７９ｂ細胞内ドメインから選択されるドメインを含み得る。

[00462]一態様では、キメラ受容体の機能は、ＣＦＰ発現と同時に、または独立して、骨髄性細胞で追加の組換えタンパク質を発現させることによってさらに増強され得る。一部の実施形態では、追加の組換えタンパク質は、上記のＣＦＰと共発現され、このＣＦＰは、標的細胞で発現される抗原に結合することができ、またこのＣＦＰは、ＣＦＰを発現する骨髄性細胞による標的細胞の食作用および殺作用を増強する。一部の実施形態では、追加の組換えタンパク質は、ＣＦＰ発現細胞の機能をさらに増強するように設計される。

[00463]一部の実施形態では、追加の組換えタンパク質は第２のキメラタンパク質であり、例えば、キメラ融合タンパク質、例えば第２のキメラタンパク質である。一部の実施形態では、第２のキメラタンパク質は、ＣＦＰを標的とするがん抗原を発現する骨髄性細胞の集団で発現される。一部の実施形態では、追加の組換えタンパク質は、第２のキメラ融合タンパク質または食作用受容体融合タンパク質（ＰＦＰ）である。一部の実施形態では、第２のキメラタンパク質は、短縮型タンパク質である。

食作用の増強および骨髄性細胞による殺作用のための例示的な追加の組換え構築物：
[00464]一態様では、本明細書では、キメラＣＤ４７受容体（ＣＲ）融合タンパク質をコードする組換え核酸を含む組成物であって、融合タンパク質が、（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、および（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含むＣＲサブユニット、ならびに（ｂ）標的細胞のＣＤ４７に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインを含み、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインが作動可能に連結されており；（ｉ）ＣＲがＣＤ４７に結合する内在性受容体の機能的細胞内ドメインを含まないか、（ｉｉ）ＣＲがホスファターゼ不活性化ドメインを含むか、もしくはホスファターゼを活性化する細胞内ドメインを含まないか、または（ｉｉｉ）ＣＲが食作用受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む、組成物が提供される。一部の実施形態では、ＣＲは、ＣＤ４７に結合する内在性受容体の機能的細胞内ドメインを含まない。

[00465]一部の実施形態では、ＣＲはホスファターゼ不活性化ドメインを含むか、またはホスファターゼを活性化する細胞内ドメインを含まない。一部の実施形態では、ＣＲは、食作用または係留受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

[00466]一部の実施形態では、ＣＤ４７に特異的な抗原結合ドメインは、ＣＤ４７に特異的な抗体ドメインを含む。
[00467]一部の実施形態では、ＣＤ４７に特異的な抗原結合ドメインは、ＳＩＲＰαまたはＳＩＲＰβに由来する細胞外ドメインを含む。

[00468]一部の実施形態では、ＣＲは、細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む。
[00469]一態様では、本明細書では、食作用受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物であって、ＰＦＰが、（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、および（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含むＰＲサブユニット、ならびに（ｂ）標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインを含み、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインが作動可能に連結されており；細胞内シグナル伝達ドメインが食作用受容体に由来し；組換え核酸が以下をコードする：（Ａ）炎症促進性ポリペプチドをコードする、（Ｂ）分子が結合モチーフに結合すると、組換え核酸の翻訳が阻害されるように、分子の結合モチーフを含む、（Ｃ）プロカスパーゼドメイン、または（Ｄ）プロカスパーゼ結合ドメイン、または（Ｅ）シアリダーゼ、組成物が提供される。

[00470]一態様では、本明細書では、食作用受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物であって、ＰＦＰが、（ａ）膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含むＰＲサブユニット、ならびに（ｂ）標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインを含み、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインが作動可能に連結されており；ＰＦＰが細胞内発現される場合、ＦｃＲγと機能的複合体を形成する、組成物が提供される。

[00471]一態様では、本明細書では、食作用受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物であって、ＰＦＰが、（ａ）膜貫通ドメイン、および（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含むＰＲサブユニット、ならびに（ｂ）標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインを含み、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインが作動可能に連結されており；ＰＦＰが細胞で発現される場合、ＤＡＰ１２と機能的複合体を形成する、組成物が提供される。

[00472]一部の実施形態では、組換え核酸は、以下をコードする：（Ａ）炎症促進性ポリペプチドをコードする、（Ｂ）分子が結合モチーフに結合すると、組換え核酸の翻訳が阻害されるように、分子の結合モチーフを含む、（Ｃ）プロカスパーゼドメイン、または（Ｄ）プロカスパーゼ結合ドメイン。

[00473]一部の実施形態では、ＰＦＰは、細胞で発現される場合、ＦｃＲγと機能的複合体を形成する。
[00474]一部の実施形態では、ＰＦＰは、細胞で発現される場合、ＤＡＰ１２と機能的複合体を形成する。

[00475]一部の実施形態では、ＰＦＰは、ＣＤ４７リガンドに結合する抗原結合ドメインを含むが、ＣＤ４７に結合する内在性受容体の機能的細胞内ドメインは含まず、（ｉ）ＰＦＰはホスファターゼ不活性化ドメインを含むか、もしくはホスファターゼを活性化する細胞内ドメインを含まないか、または（ｉｉ）ＰＦＰは食作用受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

[00476]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰは、ＦｃＲと機能的複合体を形成する。
[00477]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰは、ＦｃＲγと機能的複合体を形成する。

[00478]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰは、ＦｃＲ－アルファまたはＦｃＲβの膜貫通ドメインを含む。
[00479]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰは、ＴＲＥＭと機能的複合体を形成する。

[00480]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰは、ＩＴＡＭを含む細胞内ドメインを含む。
[00481]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰは、ＩＴＩＭを含む細胞内ドメインを含む。

[00482]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＤ４７媒介性抗食作用活性を阻害する。
[00483]一部の実施形態では、短縮型ＳＩＲＰαはＣＤ４７に結合し、阻害する。

[00484]一部の実施形態では、結合モチーフは、組換え核酸のＵＴＲ領域にある。一部の実施形態では、結合モチーフはＡＲＥ配列である。
[00485]一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＤＡＰ１２の膜貫通ドメインに結合する。

[00486]一部の実施形態では、ＤＡＰ１２の膜貫通ドメインに結合する膜貫通ドメインは、ＴＲＥＭに由来する。
[00487]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰは、ＤＡＰ１２モノマーに由来する細胞内ドメインを含む。

[00488]一部の実施形態では、組換えポリヌクレオチドは、第１の改変シグナル制御タンパク質α（ＳＩＲＰα）をコードする配列をさらに含む。
[00489]一部の実施形態では、第１の改変ＳＩＲＰαは、野生型ＳＩＲＰαの細胞内シグナル伝達ドメインを欠失している。

[00490]一部の実施形態では、第１の改変ＳＩＲＰαは、野生型ＳＩＲＰβの細胞内シグナル伝達ドメインを欠失している。
[00491]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰは、食作用を遮断するためのシグナルを送信しない。

[00492]一部の実施形態では、組成物は、第２の改変シグナル制御タンパク質α（ＳＩＲＰα）をコードするポリヌクレオチドをさらに含み、第２の改変ＳＩＲＰαは、ＰＩ３Ｋ結合ドメインを含む。

[00493]一部の実施形態では、ＰＩ３Ｋ結合ドメインは、ＣＤ１９、ＣＤ２８、ＣＳＦＲまたはＰＤＧＦＲに由来する。
[00494]一部の実施形態では、組成物は、第３の改変シグナル制御タンパク質α（ＳＩＲＰα）をコードするポリヌクレオチドをさらに含み、第３の改変ＳＩＲＰαは炎症促進性ドメインを含む。

[00495]一部の実施形態では、組成物は、組換えＳＩＲＰをコードするポリヌクレオチドをさらに含み、組換えＳＩＲＰは、ＳＩＲＰαに由来する細胞外ドメイン、ＳＩＲＰβに由来する膜貫通ドメイン、およびＳＩＲＰβに由来する細胞内ドメインを含む。

[00496]一部の実施形態では、組成物は、組換えＳＩＲＰが抗原ＣＤ４７に結合する場合、第３の改変ＳＩＲＰαが食作用を遮断するためのシグナルを伝達しないことをさらに含む。

[00497]一部の実施形態では、抗ＣＤ４７結合ドメインは、シグナル制御タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）またはシグナル制御タンパク質ベータ（ＳＩＲＰβ）に由来する。
[00498]一部の実施形態では、ＰＦＰが標的細胞の抗原に結合すると、ＰＦＰを発現する細胞の殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも２０％より多く増加する。

[00499]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、食細胞または係留受容体に由来する。
[00500]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、表２に列挙した受容体のいずれか１つから選択される食作用受容体以外の受容体に由来する。

[00501]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、レクチン、デクチン１、ＣＤ２０６、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、およびＣＤ１６９からなる群から選択される受容体に由来する。

[00502]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む。
[00503]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＩ３Ｋ動員ドメインではない炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む。

[00504]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲ－アルファ、またはＢａｉ１から選択される食作用受容体以外の食作用受容体に由来する。

[00505]一部の実施形態では、ＰＦＰが標的細胞の抗原に結合すると、ＰＦＰを発現する細胞の殺作用活性は、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、少なくとも２０％より多く増加する。

[00506]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、表１に列挙したタンパク質のいずれか１つからなる群から選択される食作用受容体に由来する。
[00507]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＩ３Ｋ動員ドメインを含む。

[00508]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰが細胞で発現される場合、ＣＦＰまたはＰＦＰは、細胞の細胞膜に機能的に組み込まれる。
[00509]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、抗原を発現する標的細胞の食作用の増加を示す。

[00510]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、抗原を発現する標的細胞の食作用の少なくとも１．１倍の増加を示す。

[00511]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現していない細胞と比較して、抗原を発現している標的細胞の食作用の少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍または５０倍の増加を示す。

[00512]一部の実施形態では、抗原を発現する標的細胞はがん細胞である。
[00513]一部の実施形態では、抗原を発現する標的細胞は、少なくとも直径０．８ミクロンである。

[00514]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、スカベンジャー受容体に由来する。
[00515]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、サイトカインの産生の増加を示す。

[00516]一部の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－１、ＩＬ３、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＣＳＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ１７、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、インターフェロンおよびそれらの組合せからなる群から選択される。

[00517]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、エフェクター活性の増加を示す。
[00518]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、交差提示の増加を示す。

[00519]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質の発現の増加を示す。
[00520]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ８０の発現の増加を示す。

[00521]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ８６の発現の増加を示す。
[00522]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＭＨＣクラスＩタンパク質の発現の増加を示す。

[00523]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＴＲＡＩＬ／ＴＮＦファミリー細胞死受容体の発現の増加を示す。

[00524]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、Ｂ７－Ｈ２の発現の増加を示す。
[00525]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＬＩＧＨＴの発現の増加を示す。

[00526]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＨＶＥＭの発現の増加を示す。
[00527]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ４０の発現の増加を示す。

[00528]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＴＬ１Ａの発現の増加を示す。
[00529]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、４１ＢＢＬの発現の増加を示す。

[00530]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＯＸ４０Ｌの発現の増加を示す。
[00531]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＧＩＴＲＬ細胞死受容体の発現の増加を示す。

[00532]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ３０Ｌの発現の増加を示す。
[00533]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＴＩＭ４の発現の増加を示す。

[00534]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＴＩＭ１リガンドの発現の増加を示す。
[00535]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＳＬＡＭの発現の増加を示す。

[00536]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ４８の発現の増加を示す。
[00537]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ５８の発現の増加を示す。

[00538]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ１５５の発現の増加を示す。
[00539]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ１１２の発現の増加を示す。

[00540]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＰＤＬ１の発現の増加を示す。
[00541]一部の実施形態では、本明細書では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較したＢ７－ＤＣのいずれかの組成物が提供される。

[00542]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、呼吸性バーストの増加を示す。
[00543]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＲＯＳ産生の増加を示す。

[00544]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ｉＮＯＳ産生の増加を示す。
[00545]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ｉＮＯＳ産生の増加を示す。

[00546]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、細胞外小胞産生の増加を示す。
[00547]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、抗原を発現する標的細胞によるトロゴサイトーシスの増加を示す。

[00548]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、食作用のＣＤ４７媒介性阻害に対する抵抗性の増加を示す。

[00549]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現しない細胞と比較して、食作用のＬＩＬＲＢ１媒介性阻害に対する抵抗性の増加を示す。

[00550]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、Ｒａｃ阻害ドメイン、Ｃｄｃ４２阻害ドメイン、またはＧＴＰａｓｅ阻害ドメインを含む。
[00551]一部の実施形態では、Ｒａｃ阻害ドメイン、Ｃｄｃ４２阻害ドメインまたはＧＴＰａｓｅ阻害ドメインは、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞の食作用カップにおいてＲａｃ、Ｃｄｃ４２またはＧＴＰａｓｅを阻害する。

[00552]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、Ｆ－アクチン解離活性化ドメイン、ＡＲＨＧＡＰ１２活性化ドメイン、ＡＲＨＧＡＰ２５活性化ドメインまたはＳＨ３ＢＰ１活性化ドメインを含む。

[00553]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰを発現する細胞は、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸産生の増加を示す。
[00554]一部の実施形態では、細胞外ドメインはＩｇ結合ドメインを含む。

[00555]一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＣ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＢ、ＦｃＲｎ、ＴＲＩＭ２１、ＦｃＲＬ５結合ドメインを含む。

[00556]一部の実施形態では、細胞外ドメインはＦｃＲ細胞外ドメインを含む。
[00557]一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、ＦｃＲεまたはＦｃＲγ細胞外ドメインを含む。

[00558]一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＦｃＲα（ＦＣＡＲ）細胞外ドメインを含む。
[00559]一部の実施形態では、細胞外ドメインはＦｃＲβ細胞外ドメインを含む。

[00560]一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＦｃＲε（ＦＣＥＲ１Ａ）細胞外ドメインを含む。
[00561]一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＦｃＲγ（ＦＤＧＲ１Ａ、ＦＣＧＲ２Ａ、ＦＣＧＲ２Ｂ、ＦＣＧＲ２Ｃ、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＧＲ３Ｂ）細胞外ドメインを含む。細胞外ドメインがインテグリンドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。

[00562]一部の実施形態では、細胞外ドメインは、１つまたは複数のインテグリンα１、α２、αＩＩｂ、α３、α４、α５、α６、α７、α８、α９、α１０、α１１、αＩＩｂ、αＤ、αＥ、αＬ、αＭ、αＶ、αＸ、β１、β２、β３、β４、β５、β６、β７、β８ドメインを含む。

[00563]一部の実施形態では、細胞内ドメインはＣＤ４７阻害ドメインを含む。
[00564]一部の実施形態では、ＰＳＲサブユニットは、膜貫通ドメインに作動可能に連結した細胞外ドメインおよび細胞外抗原結合ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、受容体の細胞外ドメイン、ヒンジ、スペーサーまたはリンカーをさらに含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ＰＳＲの細胞外部分を含む。一部の実施形態では、ＰＳＲの細胞外部分は、ＰＳＲ細胞内シグナル伝達ドメインと同じＰＳＲに由来する。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、スカベンジャー受容体または免疫グロブリンドメインの細胞外ドメインを含む。

[00565]一部の実施形態では、免疫グロブリンドメインは、免疫グロブリンの細胞外ドメインまたは免疫グロブリンヒンジ領域を含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、食作用貪食マーカーを含む。

[00566]一部の実施形態では、細胞外ドメインは、多量体アセンブリー可能な構造を含む。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、多量体化の足場を含む。
[00567]一部の実施形態では、細胞外ドメインは、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、３００、３００、４００、または５００アミノ酸長である。一部の実施形態では、細胞外ドメインは、最大５００、４００、３００、２００、または１００アミノ酸長である。

[00568]一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、標的細胞の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、抗体ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、受容体ドメイン、抗体ドメインを含み、抗体ドメインは、機能的抗体断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ナノボディ、Ｖ_Ｈドメイン、Ｖ_Ｌドメイン、ＶＮＡＲドメイン、Ｖ_ＨＨドメイン、二重特異性抗体、ディアボディ、またはそれらの機能的断片もしくは組合せを含む。

[00569]一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、リガンド、受容体の細胞外ドメイン、またはアダプターを含む。
[00570]一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、単一の抗原に特異的な単一の細胞外抗原結合ドメインを含む。

[00571]一部の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、少なくとも２つの細胞外抗原結合ドメインを含み、少なくとも２つの細胞外抗原結合ドメインのそれぞれが異なる抗原に特異的である。一部の実施形態では、抗原は、がん抗原または病原性抗原または自己免疫抗原である。一部の実施形態では、抗原はウイルス抗原を含む。一部の実施形態では、抗原はＴリンパ球抗原である。一部の実施形態では、抗原は細胞外抗原である。一部の実施形態では、抗原は細胞内抗原である。

[00572]一部の実施形態では、抗原は、チミジンキナーゼ（ＴＫ１）、ヒポキサンチン－グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）、ムチン－１、ムチン－１６（ＭＵＣ１６）、ＭＵＣ１、上皮増殖因子受容体ｖＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、メソテリン、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）、メソテリン、ＥＢＮＡ－１、ＬＥＭＤ１、ホスファチジルセリン、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、卵胞刺激ホルモン受容体、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、エリスロポエチン産生肝細胞癌Ａ２（ＥｐｈＡ２）、ＥｐｈＢ２、ナチュラルキラー群２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）リガンド、ジシアロガングリオシド２（ＧＤ２）、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４５、ＣＤ５６ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９７、ＣＤ１１７、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ２１３Ａ２、ＣＤ２４８、ＣＤ２７６、ＰＳＣＡ、ＣＳ－１、ＣＬＥＣＬ１、ＧＤ３、ＰＳＭＡ、ＦＬＴ３、ＴＡＧ７２、ＥＰＣＡＭ、ＩＬ－１、インテグリン受容体、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲ－β、ＳＳＥＡ－４、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧＭ３、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ＩＧＬＬ１およびそれらの組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、抗原は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＣＲ４、ＣＤ８、ＣＤ３０、ＣＤ４５、ＣＤ５６からなる群から選択される。

[00573]一部の実施形態では、抗原は、卵巣がん抗原またはＴリンパ腫抗原である。一部の実施形態では、抗原はインテグリン受容体である。一部の実施形態では、抗原は、α１、α２、αＩＩｂ、α３、α４、α５、α６、α７、α８、α９、α１０、α１１、αＤ、αＥ、αＬ、αＭ、αＶ、αＸ、β１、β２、β３、β４、β５、β６、β７、およびβ８からなる群から選択されるインテグリン受容体である。

[00574]一部の実施形態では、膜貫通ドメインおよび細胞外抗原結合ドメインは、リンカーを通して作動可能に連結されている。一部の実施形態では、膜貫通ドメインおよび細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ８α ＩｇＧ１またはＩｇＧ４のヒンジ領域などのリンカーを通して作動可能に連結されている。

[00575]一部の実施形態では、細胞外ドメインは多量体化足場を含む。
[00576]一部の実施形態では、膜貫通ドメインはＦｃＲ膜貫通ドメインを含む。
[00577]一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＦｃＲ－アルファ、ＲｃＲβまたはＦｃＲγ膜貫通ドメインを含む。

[00578]一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＦｃαＲ（ＦＣＡＲ）膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＦｃＲε（ＦＣＥＲ１Ａ）膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＦｃＲγ（ＦＤＧＲ１Ａ、ＦＣＧＲ２Ａ、ＦＣＧＲ２Ｂ、ＦＣＧＲ２Ｃ、ＦＣＧＲ３Ａ、およびＦＣＧＲ３Ｂ）膜貫通ドメインを含む。

[00579]一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体サブユニット、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマおよびＣＤ３デルタ、ＣＤ４５、ＣＤ２ ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、およびＣＤ１５４、もしくはそれらの機能的断片、または少なくとも１、２もしくは３つの改変から２０、１０もしくは５以下の改変膜貫通ドメインを有するアミノ酸配列を含む。

[00580]一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、シンタキシン３またはシンタキシン４またはシンタキシン５などのシンタキシンからの膜貫通ドメインを含む。
[00581]一部の実施形態では、ＣＲまたはＰＦＰが細胞で発現される場合、膜貫通ドメインは、内在性受容体の膜貫通ドメインとオリゴマー化する。

[00582]一部の実施形態では、ＣＲまたはＰＦＰが細胞で発現される場合、膜貫通ドメインは、外因性受容体の膜貫通ドメインとオリゴマー化する。
[00583]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰが細胞で発現される場合、膜貫通ドメインは、内在性受容体の膜貫通ドメインと二量体化する。

[00584]一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰが細胞で発現される場合、膜貫通ドメインは、外因性受容体の膜貫通ドメインと二量体化する。
[00585]一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞内シグナル伝達ドメインが由来するタンパク質とは異なるタンパク質に由来する。

[00586]一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞外ドメインが由来するタンパク質とは異なるタンパク質に由来する。
[00587]一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、食作用受容体の膜貫通ドメインを含む。

[00588]一部の実施形態では、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインは、同じタンパク質に由来する。
[00589]一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞内シグナル伝達ドメインと同じタンパク質に由来する。

[00590]一部の実施形態では、組換え核酸は、ＤＡＰ１２動員ドメインをコードする。
[00591]一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＤＡＰ１２とオリゴマー化する膜貫通ドメインを含む。

[00592]一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、少なくとも１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、または３２アミノ酸長である。

[00593]一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、最大１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、または３２アミノ酸長である。

[00594]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ホスファターゼ阻害ドメインを含む。
[00595]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＡＲＰ２／３阻害ドメインを含む。

[00596]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、少なくとも１つのＩＴＡＭドメインを含む。
[00597]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のＩＴＡＭドメインを含む。

[00598]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、少なくとも１つのＩＴＡＭドメインをさらに含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ゼータＴＣＲサブユニット、ＣＤ３イプシロンＴＣＲサブユニット、ＣＤ３ガンマＴＣＲサブユニット、ＣＤ３デルタＴＣＲサブユニット、ＴＣＲゼータ鎖、Ｆｃイプシロン受容体１鎖、Ｆｃイプシロン受容体２鎖、Ｆｃガンマ受容体１鎖、Ｆｃガンマ受容体２ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体２ｂ１鎖、Ｆｃガンマ受容体２ｂ２鎖、Ｆｃガンマ受容体３ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体３ｂ鎖、Ｆｃベータ受容体１鎖、ＴＹＲＯＢＰ（ＤＡＰ１２）、ＣＤ５、ＣＤ１６ａ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８９、ＣＤ２７８、ＣＤ６６ｄ、それらの機能的断片、およびそれらに対して少なくとも１つから２０以下の改変を有するそれらのアミノ酸配列の群から選択される少なくとも１つのＩＴＡＭドメインをさらに含む。

[00599]一部の実施形態では、少なくとも１つのＩＴＡＭドメインは、Ｓｒｃファミリーキナーゼリン酸化部位を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＩＴＡＭドメインは、Ｓｙｋ動員ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、Ｆ－アクチン脱重合活性化ドメインを含む。

[00600]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ユビキチン化され得る残基を含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、Ｅ３ユビキチンリガーゼに結合することができる。

[00601]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＴＡＫ１キナーゼに結合することができる。
[00602]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＭＡＰキナーゼまたはＭＡＰキナーゼファミリーメンバーに結合することができる。

[00603]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ユビキチン化されると活性化され、細胞内シグナル伝達を活性化することにより炎症促進性遺伝子転写をもたらし得る。
[00604]一部の実施形態では、細胞内ドメインは酵素活性を欠如する。

[00605]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ゼータ細胞内ドメインに由来するドメインを含まない。
[00606]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ４７阻害ドメインを含む。

[00607]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＰＳＧＬ－１の細胞内領域などのインテグリンを活性化するドメインを含む。
[00608]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＥＰＡＣおよびＣ３Ｇ由来のものなどのＲａｐ１ ＧＴＰａｓｅを活性化するドメインを含む。

[00609]一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、パキシリン由来である。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは接着斑キナーゼを活性化する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、単一の食作用受容体に由来する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、単一のスカベンジャー受容体に由来する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、食作用増強ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、キナーゼ活性化ドメインまたはキナーゼ結合ドメインを含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＩＬ－１シグナル伝達カスケード活性化ドメインを含む。一部の実施形態では、炎症促進性シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９、ＴＲＩＦ、ＲＩＧ－１、ＭＹＤ８８、ＭＡＬ、ＩＲＡＫ１、ＭＤＡ－５、ＩＦＮ受容体、ＮＬＲＰファミリーメンバー、ＮＬＲＰ１－１４、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、パイリン、ＡＩＭ２、ＮＬＲＣ４、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＥＲＩＧ、ＣＤ４０、またはそれらの任意の組合せに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰは、全長の細胞内シグナル伝達ドメインを含まない。

[00610]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、３００、３００、４００、または５００アミノ酸長である。

[00611]一部の実施形態では、細胞内ドメインは、最大１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、３００、３００、４００、または５００アミノ酸長である。

[00612]一部の実施形態では、組換え核酸は、ＦｃＲα鎖細胞外ドメイン、ＦｃＲα鎖膜貫通ドメインおよび／またはＦｃＲα鎖細胞内ドメインをコードする。一部の実施形態では、組換え核酸は、ＦｃＲβ鎖細胞外ドメイン、ＦｃＲβ鎖膜貫通ドメインおよび／またはＦｃＲβ鎖細胞内ドメインをコードする。一部の実施形態では、ＦｃＲα鎖またはＦｃＲβ鎖は、細胞で発現される場合、ＦｃＲγと複合体を形成する。一部の実施形態では、ＦｃＲα鎖またはＦｃＲβ鎖は、細胞で発現される場合、内在性ＦｃＲγと複合体を形成する。一部の実施形態では、ＦｃＲα鎖またはＦｃＲβ鎖は、ＦｃＲγを発現しない細胞の細胞膜に組み込まれない。一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰは、ＦｃＲα鎖細胞内シグナル伝達ドメインを含まない。一部の実施形態では、ＣＦＰまたはＰＦＰは、ＦｃＲβ鎖細胞内シグナル伝達ドメインを含まない。

[00613]一部の実施形態では、組換え核酸は、ＴＲＥＭ細胞外ドメイン、ＴＲＥＭ膜貫通ドメインおよび／またはＴＲＥＭ細胞内ドメインをコードする。一部の実施形態では、ＴＲＥＭは、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２またはＴＲＥＭ３である。

[00614]一部の実施形態では、組換え核酸は、炎症促進性ポリペプチドをコードする配列を含む。一部の実施形態では、組成物は、炎症促進性ポリペプチドをさらに含む。
[00615]一部の実施形態では、炎症促進性ポリペプチドは、ケモカイン、サイトカイン、およびヌクレオチドである。一部の実施形態では、ケモカインは、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１からなる群から選択される。

[00616]一部の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－１、ＩＬ３、ＩＬ５、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＴＮＦ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＣＳＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ１７、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、インターフェロンからなる群から選択される。

[00617]一部の実施形態では、組換え核酸は、炎症の恒常性制御因子を含む。
[00618]一部の実施形態では、炎症の恒常性制御因子は、ｍＲＮＡの非翻訳領域（ＵＴＲ）の配列である。一部の実施形態では、ＵＴＲの配列は、ＲＮＡ結合タンパク質に結合する配列である。一部の実施形態では、ＲＮＡ結合タンパク質が非翻訳領域（ＵＴＲ）の配列に結合すると、翻訳は阻害または防止される。一部の実施形態では、ＵＴＲの配列は、ＷＷＷＵ（ＡＵＵＵＡ）ＵＵＵＷのコンセンサス配列を含み、ＷはＡまたはＵである。

[00619]一部の実施形態では、組換え核酸は、バイシストロニックなベクターで発現される。
[00620]一部の実施形態では、標的細胞は哺乳動物細胞である。一部の実施形態では、標的細胞はヒト細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、病原体によって感染された細胞を含む。一部の実施形態では、標的細胞はがん細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、リンパ球であるがん細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、卵巣がん細胞であるがん細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、卵巣膵臓細胞であるがん細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、神経膠芽腫細胞であるがん細胞である。

[00621]一部の実施形態では、組換え核酸はＤＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸はＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸はｍＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸はｃｉｒｃＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸はｔＲＮＡである。一部の実施形態では、組換え核酸はｍｉｃｒｏＲＮＡである。

[00622]本明細書では、上記の組成物を含むベクターが提供される。一部の実施形態では、ベクターはウイルスベクターである。一部の実施形態では、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターである。一部の実施形態では、ベクターは、１つまたは複数のポリペプチドをコードする少なくとも１つの核酸配列に作動可能に連結したプロモーターをさらに含む。一部の実施形態では、ベクターはポリシストロニックである。一部の実施形態では、少なくとも１つの核酸配列のそれぞれは、別々のプロモーターに作動可能に連結されている。一部の実施形態では、ベクターは、１つまたは複数の配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）をさらに含む。一部の実施形態では、ベクターは、１つまたは複数のポリペプチドをコードする少なくとも１つの核酸配列に隣接する５’ＵＴＲおよび／または３’ＵＴＲをさらに含む。一部の実施形態では、ベクターは、１つまたは複数の調節性領域をさらに含む。

[00623]本明細書では、上記の組成物の組換え核酸によってコードされるポリペプチドが提供される。
[00624]一態様では、本明細書では、上記のベクターまたは上記のポリペプチドを含む細胞が提供される。一部の実施形態では、細胞は食細胞である。一部の実施形態では、細胞は、幹細胞由来細胞、骨髄性細胞、マクロファージ、樹状細胞、リンパ球、肥満細胞、単球、好中球、ミクログリア、または星状細胞である。一部の実施形態では、細胞は自家細胞である。一部の実施形態では、細胞は同種異系細胞である。一部の実施形態では、細胞は、マクロファージなどのＭ１骨髄性細胞である。一部の実施形態では、細胞は、マクロファージなどのＭ２骨髄性細胞である。一部の実施形態では、細胞は、骨髄系列の前駆細胞である。一部の実施形態では、骨髄性細胞は、ＣＤ１４＋細胞である。一部の実施形態では、骨髄性細胞は、ＣＤ１６－細胞である。一部の実施形態では、骨髄性細胞は、ＣＤ１４＋細胞およびＣＤ１６－細胞である。

[00625]本明細書では、（ａ）上記のような核酸組成物またはベクターまたはポリペプチドまたは細胞；および（ｂ）薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物が提供される。一部の実施形態では、医薬組成物は、さらなる治療剤をさらに含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、ＣＤ４７アゴニスト、Ｒａｃを阻害する薬剤、Ｃｄｃ４２を阻害する薬剤、ＧＴＰａｓｅを阻害する薬剤、Ｆアクチン解離を促進する薬剤、ＣＦＰまたはＰＦＰへのＰＩ３Ｋ動員を促進する薬剤、ＰＩ３Ｋ活性を促進する薬剤、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸の産生を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ１２活性を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ２５活性を促進する薬剤、ＳＨ３ＢＰ１活性を促進する薬剤およびそれらの任意の組合せからなる群から選択されるさらなる治療剤を含む。

[00626]一部の実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、無血清培地、脂質、またはナノ粒子を含む。
[00627]本明細書では、疾患の処置を必要とする対象における疾患を処置する方法であって、対象に本明細書に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。

[00628]一部の実施形態では、疾患はがんである。一部の実施形態では、がんは固形がんである。一部の実施形態では、固形がんは、卵巣がん、卵巣がんを含む好適ながん、腎臓がん、乳がん、前立腺がん、肝臓がん、脳がん、リンパ腫、白血病、皮膚がん、膵臓がん、結腸直腸がん、肺がんからなる群から選択される。一部の実施形態では、がんは液性がんである。一部の実施形態では、液性がんは白血病またはリンパ腫である。一部の実施形態では、液性がんはＴ細胞リンパ腫である。一部の実施形態では、疾患はＴ細胞悪性腫瘍である。一部の実施形態では、この方法は、対象にさらなる治療剤を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、さらなる治療剤はＣＤ４７アゴニスト、Ｒａｃを阻害する薬剤、Ｃｄｃ４２を阻害する薬剤、ＧＴＰａｓｅを阻害する薬剤、Ｆアクチン解離を促進する薬剤、ＣＦＰまたはＰＦＰへのＰＩ３Ｋ動員を促進する薬剤、ＰＩ３Ｋ活性を促進する薬剤、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸の産生を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ１２活性を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ２５活性を促進する薬剤、ＳＨ３ＢＰ１活性を促進する薬剤およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される。

[00629]一部の実施形態では、投与するステップは、注入するステップまたは注射するステップを含む。一部の実施形態では、投与するステップは、固形がんに直接投与するステップを含む。

[00630]一部の実施形態では、投与するステップは、ｃｉｒｃＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ウイルス、粒子、リポソーム、またはエクソソームベースの送達手順を含む。
[00631]一部の実施形態では、対象においてＣＤ４＋Ｔ細胞応答またはＣＤ８＋Ｔ細胞応答が誘発される。

[00632]一部の実施形態では、方法は、細胞を上記の組成物、上記のベクターまたはポリペプチドと接触させるステップを含む。一部の実施形態では、接触させるステップは、形質導入するステップを含む。一部の実施形態では、形質導入するステップは、化学トランスフェクション、電気穿孔、ヌクレオフェクション、またはウイルス感染を含む。

[00633]一部の実施形態では、本明細書では、脂質を本明細書に記載の組成物または本明細書に記載のベクターに接触させるステップを含む医薬組成物を調製する方法が提供される。

[00634]一部の実施形態では、接触させるステップは、脂質ナノ粒子を形成するステップを含む。
[00635]医薬組成物を調製する方法であって、抗体を本明細書に記載の組成物または本明細書に記載のベクターと接触させるステップ含む方法も提供される。一部の実施形態では、接触させるステップは、脂質ナノ粒子を形成するステップを含む。

組換え核酸構築物の転写制御エレメント
[0636]一部の実施形態では、組換え核酸は、コードされたタンパク質の所望の発現プロファイルについて操作され得る非コード領域内の１つまたは複数の制御エレメントを含む。一部の実施形態では、非コード領域は、適切なエンハンサーを含み得る。一部の実施形態では、エンハンサーは、制御タンパク質またはペプチドの結合領域を含み、エンハンサーの影響下でコードされたタンパク質の発現を開始するために、細胞または細胞を含む系に添加され得る。反対に、制御エレメントは、同族タンパク質との結合を維持したまま、タンパク質が結合位置から分離してタンパク質合成が開始できるようにするための細胞外シグナルが提供されるまで、組換えタンパク質の転写および／または翻訳を阻害し続けるタンパク質結合ドメインを含み得る。例としては、限定するものではないが、当分野の当業者に公知であるテトラサイクリン誘導性（Ｔｅｔ－ＩｎｄｕｃｉｂｌｅまたはＴｅｔ－ｏｎ）およびテトラサイクリン抑制性（Ｔｅｔ－ｏｆｆ）システムが挙げられる。

代謝スイッチを含む構築物：
[0637]一部の実施形態では、構築物のコード領域に隣接する５’および３’非翻訳領域は、上記の核酸構築物によってコードされている組換えタンパク質の発現を制御するために操作され得る。例えば、３’ＵＴＲは、ｍＲＮＡを安定化させるために挿入される１つまたは複数のエレメントを含み得る。一部の実施形態では、ＡＵリッチエレメント（ＡＲＥ）配列は、３’ＵＴＲに挿入され、それにより、ｍＲＮＡを安定化または不安定化するＲＮＡ結合タンパク質の結合がもたらされ、ｍＲＮＡ半減期の制御が可能になる。

[0638]一部の実施形態では、３’ＵＴＲは、ＲＮＡ結合タンパク質（例えばＧＡＰＤＨ）が成熟ｍＲＮＡ鎖に結合して翻訳を阻止するための保存領域を含み得る。一部の実施形態では、解糖系により、ＲＮＡ結合タンパク質（例えばＧＡＰＤＨ）の結合の解除が生じ、ｍＲＮＡ鎖の翻訳が可能になる。代謝スイッチの原理は、細胞がある特定の代謝状態に入った場合、標的遺伝子の発現を誘発することである。休止細胞では、例えば、ＧＡＰＤＨはＲＮＡ結合タンパク質（ＲＢＰ）である。これは３’ＵＴＲのＡＲＥ配列に結合し、ｍＲＮＡの翻訳を妨げる。細胞が解糖系に入った場合、ＧＡＰＤＨがグルコースのＡＴＰへの変換に必要となり、ｍＲＮＡから外れてタンパク質の翻訳が起こるようになる。一部の実施形態では、組換え核酸を含む細胞が存在する環境は、遺伝子を発現するための代謝スイッチを提供する。例えば、低酸素状態は、ＧＡＰＤＨをｍＲＮＡから離脱させることを誘導する代謝スイッチを誘発することができる。したがって、マクロファージなどの骨髄性細胞が循環から外れて、低酸素状態の腫瘍環境に入った場合、ｍＲＮＡの発現は誘導され得る。これにより、核酸または核酸を含む細胞の全身投与が可能でありながら、腫瘍環境を特異的に標的とする局所発現が確実となる。

[0639]一部の実施形態では、核酸構築物は、例えば、構成的発現系の制御下で構築物の一部を発現させることができる分割構築物であり得るが、核酸の別の部分は、上記のような代謝スイッチの制御下で発現される。一部の実施形態では、核酸は、バイシストロニックな制御下にあり得る。一部の実施形態では、バイシストロニックなベクターは、構成的制御下であり得る標的認識部分のコード配列を含む、第１の制御調節下にある第１のコード配列と；代謝スイッチ下であり得る炎症性遺伝子発現をコードする第２のコード配列とを含む。一部の実施形態では、バイシストロニックなベクターは、一方向性であり得る。一部の実施形態では、バイシストロニックなベクターは、双方向性であり得る。

[0640]一部の実施形態では、ＡＲＥ配列は、ＡＤＫ、ＡＬＤＨ１８Ａ１、ＡＬＤＨ６Ａ１、ＡＬＤＯＡ、ＡＳＳ１、ＣＣＢＬ２、ＣＳ、ＤＵＴ、ＥＮＯ１、ＦＡＳＮ、ＦＤＰＳ、ＧＯＴ２，ＨＡＤＨＢ、ＨＫ２、ＨＳＤ１７Ｂ１０、ＭＤＨ２、ＮＭＥ１、ＮＱ０１、ＰＫＭ２、ＰＰＰ１ＣＣ、ＳＵＣＬＧ１、ＴＰ１１、ＧＡＰＤＨ，またはＬＤＨに結合するＡＲＥ配列に結合するためのタンパク質結合モチーフを含む。

細胞への核酸の送達：
[0641]本明細書に記載のＣＦＰまたはＰＦＰをコードする核酸は、様々な送達方法を介して、細胞、例えば骨髄性細胞に導入され得る。本明細書に記載の組換え核酸は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、またはｉｎ ｖｉｖｏで細胞に導入され得る。一部の実施形態では、核酸は、プラスミドまたはベクターの形態で骨髄性細胞に導入される。一部の実施形態では、ベクターはウイルスベクターである。一部の実施形態では、ベクターは、発現ベクター、例えば、１つまたは複数のプロモーター、ならびにエンハンサー結合配列、開始コドンおよび終止コドン、５’ＵＴＲ、転写物安定化エレメントを含む３’ＵＴＲ、オプションの保存制御タンパク質結合配列などを含めた他の制御成分を含むベクターである。一部の実施形態では、ベクターは、ファージ、コスミド、または人工染色体である。

[0642]一部の実施形態では、ベクターは、例えばリポフェクタミンもしくはリン酸カルシウムを使用する公知のトランスフェクション方法によって、または例えば、電気穿孔もしくはヌクレオフェクションなどの物理的手段を介して、細胞に導入されまたは組み込まれる。一部の実施形態では、ベクターは、ウイルス形質導入として一般に知られているプロセスである感染によって細胞に導入されまたは組み込まれる。

[0643]一部の実施形態では、ＣＦＰを発現するためのベクターは、ウイルス起源のものである。一部の実施形態では、組換え核酸は、非分裂細胞で複製することが可能なウイルスベクターによってコードされている。一部の実施形態では、組換え核酸をコードする核酸は、レンチウイルスベクター、例えば、ＨＩＶおよびＦＩＶベースのベクターによってコードされている。一部の実施形態では、レンチウイルスベクターは、室内で調製され、目的においては大規模に製造される。一部の実施形態では、当業者に公知のように、市販のレンチウイルスベクターが利用される。一部の実施形態では、組換え核酸は、単純ヘルペスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、アデノウイルスベクター、またはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターによってコードされている。

[0644]一部の実施形態では、マクロファージなどの骨髄性細胞、および他の食細胞への導入遺伝子の安定的な組み込みは、トランスポザーゼおよび転位エレメント、特に、ｍＲＮＡにコードされたトランスポザーゼの使用を介して達成され得る。一実施形態では、長鎖散在エレメント－１（ＬＩ）ＲＮＡは、導入遺伝子のレトロトランスポゾンのため、およびマクロファージまたは食細胞などの骨髄性細胞への安定的な組み込みのために企図され得る。レトロトランスポゾンは、食作用または係留受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）をコードする組換え核酸の安定的な組み込みに使用され得る。

[0645]一部の実施形態では、骨髄性細胞は、一過性発現ベクターへの導入遺伝子の組み込みを介して導入遺伝子を発現することにより改変することができる。一部の実施形態では、導入遺伝子の発現は、細胞の外側からの制御因子によって一時的に制御され得る。例としては、導入遺伝子の発現がテトラサイクリンの存在または非存在を介して制御されるＴｅｔ ｏｎ Ｔｅｔ－ｏｆｆシステムが挙げられる。

[0646]一部の実施形態では、本明細書に記載の組換え核酸は、環状ＲＮＡ（ｃｉｒｃＲＮＡ）である。環状ＲＮＡは、ＲＮＡ分子の５’末端と３’末端が一緒になって結合したＲＮＡ分子を含む。いかなる理論にも縛られることは望まないが、ｃｉｒｃＲＮＡは遊離末端を有しておらず、他の形態のＲＮＡまたは核酸と比較して長い半減期を有することができ、ＲＮａｓｅ Ｒエキソヌクレアーゼによる消化に抵抗性があり、ｉｎ ｖｉｖｏでは対応する直鎖状ＲＮＡよりもゆっくりとターンオーバーする可能性がある。一部の実施形態では、ｃｉｒｃＲＮＡの半減期は、２０時間よりも長い。一部の実施形態では、ｃｉｒｃＲＮＡの半減期は、３０時間よりも長い。一部の実施形態では、ｃｉｒｃＲＮＡの半減期は、４０時間よりも長い。一部の実施形態では、ｃｉｒｃＲＮＡの半減期は、４８時間よりも長い。ある特定の実施形態では、ｃｉｒｃＲＮＡは、真核生物リボソームに関与する配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）エレメントと、目的のポリペプチドを産生するために細胞に挿入するＩＲＥＳに作動可能に連結されたポリペプチドをコードするＲＮＡ配列エレメントとを含む。

[0647]ｃｉｒｃＲＮＡは、当業者に公知の方法によって調製することができる。例えば、ｃｉｒｃＲＮＡは、化学的に合成され得るか、または酵素的に合成され得る。一部の実施形態では、直鎖状一次構築物または直鎖状ｍＲＮＡは、ｃｉｒｃＲＮＡを作出するために環化され得るか、またはコンカテマー化され得る。環化またはコンカテマー化のメカニズムは、限定するものではないが、化学的方法、酵素的方法、またはリボザイム触媒法などの方法を介して生じ得る。新しく形成された５’－／３’－連結は、分子内連結または分子間連結であり得る。一部の実施形態では、直鎖状一次構築物または直鎖状ｍＲＮＡは、化学的方法を使用して環状化されるか、またはコンカテマー化されてｃｉｒｃＲＮＡを形成し得る。化学的方法では、核酸（例えば、直鎖状一次構築物または直鎖状ｍＲＮＡ）の５’末端と３’末端は、互いに接近した場合に、分子の５’－末端と３’－末端の間に新しい共有結合を形成する化学反応基を含む。５’末端はＮＨＳ－エステル反応基を含むことができ、３’末端は３’－アミノ末端ヌクレオチドを含むことができることにより、有機溶媒中で直鎖状ＲＮＡ分子の３’末端の３’－アミノ末端ヌクレオチドが５’－ＮＨＳ－エステル部分に対して求核攻撃を受け、新しい５’－／３’－アミド結合を形成するようになる。一部の実施形態では、ＤＮＡまたはＲＮＡリガーゼ、例えばＴ４リガーゼを使用して、５’－リン酸化核酸分子（例えば、直鎖状一次構築物または直鎖状ｍＲＮＡ）を核酸の３’－ヒドロキシル基に酵素的に連結させて、新しいホスホロジエステル連結を形成させることができる。一部の実施形態では、直鎖状一次構築物または直鎖状ｍＲＮＡは、少なくとも１つの非核酸部分を使用することにより環状化またはコンカテマー化され得る。例えば、直鎖状一次構築物または直鎖状ｍＲＮＡを環状化またはコンカテマー化するために、少なくとも１つの非核酸部分は、その５’末端近くおよび／または３’末端近くの領域または特性と反応することができる。一部の実施形態では、直鎖状一次構築物または直鎖状ｍＲＮＡは、直鎖状一次構築物または直鎖状ｍＲＮＡの５’末端および３’末端の、その近くの、またはそれらに連結された原子、分子表面の間の引力を生じる非核酸部分によって環状化またはコンカテマー化され得る。例えば、直鎖状一次構築物または直鎖状ｍＲＮＡは、分子間力または分子内力によって環状化またはコンカテマー化され得る。分子間力の非限定的な例。一部の実施形態では、直鎖状一次構築物または直鎖状ｍＲＮＡは、５’末端近くおよび３’末端近くにリボザイムＲＮＡ配列を含み得る。一部の実施形態では、ｃｉｒｃＲＮＡは、自発的切断および自己環状化の能力を有する配列を含有するプラスミドにＤＮＡ断片を挿入することによって合成され得る。一部の実施形態では、ｃｉｒｃＲＮＡは、ＲＮＡシクラーゼリボザイムをコードするＤＮＡ構築物を作製し、ＤＮＡ構築物をＲＮＡとして発現し、次いで、ＲＮＡを自己スプライスさせ、イントロンを含まないｃｉｒｃＲＮＡをｉｎ ｖｉｔｒｏで産生することによって産生される。一部の実施形態では、ｃｉｒｃＲＮＡは、直鎖状ポリヌクレオチドを合成し、直鎖状ヌクレオチドをハイブリダイゼーション条件下で相補的連結オリゴヌクレオチドと組み合わせ、直鎖状ポリヌクレオチドをライゲートすることによって産生される。

[0648]ｃｉｒｃＲＮＡは、修飾されていてもよく、または修飾されていなくてもよい。一部の実施形態では、ｃｉｒｃＲＮＡは化学的に修飾されている。例えば、ｃｉｒｃＲＮＡのＡ、Ｇ、ＵまたはＣリボヌクレオチドは、化学修飾を含み得る。一部の実施形態では、ｃｉｒｃＲＮＡの任意の領域、例えばＣＦＰもしくはＰＦＰのコード領域、隣接領域および／または末端領域は、１つ、２つ、またはそれ以上の（任意選択で異なる）ヌクレオシドまたはヌクレオチド修飾を含み得る。一部の実施形態では、細胞に導入された修飾ｃｉｒｃＲＮＡは、未修飾のｃｉｒｃＲＮＡと比較して、細胞での分解の減少を示し得る。例えば、糖、核酸塩基、またはヌクレオシド間連結への（例えば、連結リン酸への／ホスホジエステル連結への／ホスホジエステル骨格への）修飾も含まれる。一部の実施形態では、核酸塩基の１個または複数の原子、例えばピリミジン核酸塩基は、任意選択で置換されたアミノ、任意選択で置換されたチオール、任意選択で置換されたアルキル（例えばメチルもしくはエチル）、またはハロ（例えばクロロもしくはフルオロ）で置き換えられているか、または置換されていてもよい。ある特定の実施形態では、修飾（例えば１つまたは複数の修飾）は、糖およびヌクレオシド間連結のそれぞれに存在する。ｃｉｒｃＲＮＡへのさらなる修飾はＵＳ２０１７０２０４４２２に記載されており、その全内容は参照により本明細書に組み込まれる。

[0649]一部の実施形態では、ｃｉｒｃＲＮＡは、他のポリヌクレオチド、色素、挿入剤（例えばアクリジン）、架橋剤（例えばソラレン（ｐｓｏｒａｌｅｎｅ）、マイトマイシンＣ）、ポルフィリン（ＴＰＰＣ４、テキサフィリン、サフィリン）、多環芳香族炭化水素（例えばフェナジン、ジヒドロフェナジン）、人工エンドヌクレアーゼ（例えばＥＤＴＡ）、アルキル化剤、リン酸、アミノ、メルカプト、ＰＥＧ（例えばＰＥＧ－４０Ｋ）、ＭＰＥＧ、［ＭＰＥＧ］２、ポリアミノ、アルキル、置換アルキル、放射性標識マーカー、酵素、ハプテン（例えばビオチン）、輸送／吸収促進剤（例えば、アスピリン、ビタミンＥ、葉酸）、合成リボヌクレアーゼ、タンパク質、例えば、糖タンパク質、またはペプチド、例えば、共リガンドに対して特異的な親和性を有する分子、または抗体、例えば、がん細胞、内皮細胞、もしくは骨細胞などの特定の細胞型に結合する抗体、ホルモンおよびホルモン受容体、非ペプチド種、例えば、脂質、レクチン、炭水化物、ビタミン、または補因子などにコンジュゲートされる。

[0650]一部の実施形態では、ｃｉｒｃＲＮＡは、対象の組織に直接投与される。ｃｉｒｃＲＮＡのさらなる説明は、米国特許第５，７６６，９０３号、同第５，５８０，８５９号、同第５，７７３，２４４号、同第６，２１０，９３１号、ＰＣＴ国際公開ＷＯ１９９２００１８１３、Ｈｓｕら、Ｎａｔｕｒｅ（１９７９）２８０：３３９～３４０頁、Ｈａｒｌａｎｄ＆Ｍｉｓｈｅｒ、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（１９８８）１０２：８３７～８５２頁、Ｍｅｍｃｚａｋら、Ｎａｔｕｒｅ（２０１３）４９５：３３３～３３８頁、およびＪｅｃｋら、ＲＮＡ（２０１３）１９：１４１～１５７頁にあり、それらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

[0651]一部の実施形態では、核酸は、ナノ粒子（ＮＰ）と共に骨髄性細胞に導入される。ナノ粒子は、様々な形状またはサイズのものであってもよく、ＣＦＰまたはＰＦＰをコードする核酸を有し得る。一部の実施形態では、ＮＰは脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）である。一部の実施形態では、ＮＰは、ポリ（アミノ酸）、多糖類およびポリ（アルファ－ヒドロキシ酸）、金、銀、炭素、鉄、シリカ、またはそれらの任意の組合せを含む。一部の実施形態では、ＮＰは、ポリラクチド－コ－グリコリド（ＰＧＬＡ）粒子を含む。一部の実施形態では、核酸は、例えば、水／油エマルジョンまたは水－油－水エマルジョンを介して、ＮＰにカプセル化される。一部の実施形態では、核酸はＮＰにコンジュゲートされている。

[0652]ＮＰは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、またはｉｎ ｖｉｖｏで細胞に送達され得る。一部の実施形態では、ＮＰは、ｅｘ ｖｉｖｏで食細胞に送達される。一部の実施形態では、ＮＰは、ｉｎ ｖｉｖｏで食細胞に送達される。一部の実施形態では、ＮＰは、直径が１００ｎｍ未満である。一部の実施形態では、ＮＰは、直径が１００ｎｍより大きい。一部の実施形態では、ＮＰは、桿状ＮＰである。一部の実施形態では、ＮＰは、球状ＮＰである。特定の実施形態では、ＮＰは、食細胞に送達するための球状ＮＰである。さらなる実施形態では、ＮＰは直径が少なくとも１００ｎｍであり、細胞に送達された場合に毒性を誘発しないか、または低下を誘発する。

[0653]一部の実施形態では、ＮＰは正に帯電している。一部の実施形態では、ＮＰは負に帯電している。一部の実施形態では、ＮＰは、ｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで骨髄性細胞によって送達および取り込まれるカチオン性ＮＰである。

[0654]硬度はＮＰの生物学的影響に影響を及ぼし得る。剛性のある材料で作製されたＮＰは塞栓症の可能性の増加に関係し得るが、容易に変形することができる軟質のポリマーベースのＮＰは、炎症に関係する複雑な血管の変化の際に、組織への到達が良好になり得る。ＮＰの流動性もまた、免疫応答を刺激する抗原充填ＮＰの能力に影響を及ぼす。したがって、筋肉内、固相、抗原含有リポソーム免疫化は、同様に投与された液相リポソームよりも強力なＴｈ１／Ｔｈ１７応答を誘発し得る。いかなる理論にも縛られることは望まないが、固相粒子は、固定化された抗原粒子デポーの形成によって得られる可能性があり、ＣＤ８０などの陽性共刺激分子のアップレギュレーションにも関係するＡＰＣへの抗原を長期的に供給することができ、これによりＴ細胞のプライミングが効率的にサポートされる。

[0655]一部の実施形態では、タンパク質コロナは、ＮＰの周囲に形成され得る。タンパク質コロナは、２ステップのプロセスで形成され得る。第１のステップでは、高親和性タンパク質がＮＰに速やかに結合して、一次コロナを形成する。第２のステップでは、低親和性のタンパク質はＮＰに直接結合するか、一次コロナのタンパク質に結合して二次コロナを形成する。したがって、タンパク質コロナの構成物は、血清のタンパク質含有量によって、したがってそれを制御する恒常性応答または免疫応答によって影響を受け得る。一部の実施形態では、アルブミンなどの高含有量のタンパク質は、一次コロナのかなりの割合を占める。一部の実施形態では、異なる電荷を有するＮＰは、特定の環境において、例えば、ある特定の抗原または抗体を含む血漿において、かなりの量のより低含有量のタンパク質に結合する。タンパク質コロナのｉｎ ｖｉｖｏ形成により、ＮＰ電荷が変化され得るか、あるいはある特定の受容体へのＮＰ標的化にとって重要な官能基をマスクし、および／または食細胞によるＮＰのクリアランスを増強し得る。一部の実施形態では、ＮＰは、ＮＰ電荷への変化もしくは官能基のマスキングを低減するように、および／またはＮＰの血清半減期を延長するように操作される。一部の実施形態では、ＮＰ表面コーティングは、オプソニン化事象をモジュレートするように設計される。例えば、ＮＰの表面は、高分子エチレングリコール（ＰＥＧ）またはその低分子量誘導体ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）でコーティングされていてもよい。いかなる理論にも縛られることは望まないが、ＰＥＧは表面の親水性を高めることにより、血清タンパク質の結合低下による循環ＮＰ半減期を改善する。一部の実施形態では、ＰＥＧまたはＰＥＯでコーティングされたＮＰは、ＮＰの毒性の低下または生体適合性の増加をもたらすように設計されている。骨髄性細胞のさらなるＮＰ設計およびＮＰ標的化は、Ｇｅｔｔｓら、ＴｒｅｎｄｓＩｍｍｕｎｏｌ．３６（７）：４１９～４２７頁（２０１５）に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

[0656]本明細書に記載のＮＰは、組換え核酸をｉｎ ｖｉｔｒｏ／ｅｘ ｖｉｖｏ細胞培養の細胞に導入するため、またはｉｎ ｖｉｖｏで投与するために使用することができる。一部の実施形態では、ＮＰは、ｉｎ ｖｉｖｏ投与のために修飾される。例えば、ＮＰは、肝臓または脾臓の食細胞によって取り込まれる前に、特定の毒素、タンパク質、リガンド、またはそれらの任意の組合せに結合するための結合部分の表面修飾または付着を含み得る。最近の齧歯動物での概念実証研究では、注入された高負電荷「免疫修飾ＮＰ」（ＩＭＰ）は、Ｓ１００ファミリーおよび熱ショックタンパク質などのある特定の血液タンパク質を吸収した後、最終的に単核食細胞系の細胞によって除去および破壊される。さらに、このメカニズムはまた、ある特定の循環タンパク質を捕捉し濃縮するためにも使用され得る。ＩＭＰは、アネキシン１に結合することが明らかにされている。アネキシン１の蓄積および特定の白血球サブセットへのその提示は、幅広い免疫結果を有し得る。例えば、アネキシン１充填ＮＰは、アポトーシスの誘導を介して好中球を減少させ、および／またはＴ細胞の活性化を促進し得る。一部の実施形態では、ＮＰは、細胞表面受容体、例えばスカベンジャー受容体を標的とするように設計されている。一部の実施形態では、ＮＰは、高表面負電荷を有する粒子である。

[0657]一部の実施形態では、ＮＰは、核酸が裸のＤＮＡ分子である核酸をカプセル化する。一部の実施形態では、ＮＰは、核酸がｍＲＮＡ分子である核酸をカプセル化する。一部の実施形態では、ＮＰは、核酸が環状ＲＮＡ（ｃｉｒｃＲＮＡ）分子である核酸をカプセル化する。一部の実施形態では、ＮＰは、核酸がベクター、プラスミド、またはそれらの一部もしくは断片である核酸をカプセル化する。

[0658]一部の実施形態では、ＮＰは脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）である。ＬＮＰは、極性脂質および／または非極性脂質を含み得る。一部の実施形態では、コレステロールは、効率的な送達のためにＬＮＰに存在する。ＬＮＰは直径１００～３００ｎｍであり、マクロファージなどの骨髄性細胞を含む様々な細胞型へのｍＲＮＡ送達の効率的手段を提供する。一部の実施形態では、ＬＮＰは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養で組換え核酸を細胞に導入するために使用され得る。一部の実施形態では、ＬＮＰは、核酸が裸のＤＮＡ分子である核酸をカプセル化する。一部の実施形態では、ＬＮＰは、核酸がｍＲＮＡ分子である核酸をカプセル化する。一部の実施形態では、ＬＮＰは、核酸がプラスミドベクターなどのベクターに挿入されている核酸をカプセル化する。一部の実施形態では、ＬＮＰは、核酸がｃｉｒｃＲＮＡ分子である核酸をカプセル化する。

[0659]一部の実施形態では、ＬＮＰは、核酸を対象に送達するために使用される。ＬＮＰは、対象において全身的に核酸を送達するために使用することができる。これは注射により送達することができる。一部の実施形態では、核酸を含むＬＮＰは、静脈内経路により注射される。一部の実施形態では、ＬＮＰは皮下注射される。

医薬組成物
[0660]本明細書では、ＣＦＰをコードする組換え核酸を含むマクロファージなどの操作された骨髄性細胞、および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物が提供される。

[0661]また本明細書では、ＣＦＰをコードする組換え核酸および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物も提供される。医薬組成物は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡもしくはｃｉｒｃＲＮＡ、またはそれらのいずれか１つのリポソーム組成物を含み得る。リポソームはＬＮＰである。

[0662]また本明細書では、ＣＦＰをコードする組換え核酸を含むベクターおよび薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物も提供される。医薬組成物は、プラスミドベクターまたはウイルスベクターに挿入されたＤＮＡ、ｍＲＮＡまたはｃｉｒｃＲＮＡを含み得る。

[0663]一部の実施形態では、マクロファージなどの操作された骨髄性細胞は、治療投与量に十分な細胞培養で増殖され、洗浄され、医薬組成物に再懸濁される。
[0664]一部の実施形態では、賦形剤は、滅菌緩衝液（例えば、ＨＥＰＥＳまたはＰＢＳ）を中性ｐＨで含む。一部の実施形態では、医薬組成物のｐＨは７．５である。一部の実施形態では、ｐＨは、許容される範囲内で変わり得る。一部の実施形態では、操作された細胞は、補体不活性化血清または合成血清を含む滅菌濃縮細胞懸濁培地に含まれ得る。一部の実施形態では、医薬組成物は、細胞の保存および機能のためのサイトカイン、ケモカインまたは増殖因子をさらに含む。

[0665]一部の実施形態では、医薬組成物は、操作された細胞と同時投与されるさらなる治療剤を含み得る。
治療方法
[0666]本明細書では、がん細胞を直接的または間接的に標的とし、攻撃し、死滅させるために、食作用受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）などのＣＦＰをコードする組換え核酸を発現する、食細胞（例えばマクロファージ）などの操作された骨髄性細胞を含む医薬組成物を使用して対象のがんを処置（治療）する方法が提供される。食細胞などの操作された骨髄性細胞はまた、本明細書の説明においてＣＡＲ－Ｐ細胞として指定される。

[0667]がんとしては、限定するものではないが、Ｔ細胞リンパ腫、皮膚リンパ腫、Ｂ細胞がん（例えば、多発性骨髄腫、ワルデンストロームマクログロブリン血症）、重鎖疾患（例えば、アルファ鎖疾患、ガンマ鎖疾患、およびミュー鎖疾患）、良性単クローン性ガンマグロブリン血症、および免疫細胞性アミロイドーシス、黒色腫、乳がん、肺がん、気管支がん、結腸直腸がん、前立腺がん（例えば、転移性ホルモン抵抗性前立腺がん）、膵臓がん、胃がん、卵巣がん、膀胱がん、脳または中枢神経系がん、末梢神経系がん、食道がん、子宮頸がん、子宮がんまたは子宮内膜がん、口腔または咽頭のがん、肝臓がん、腎臓がん、精巣がん、胆道がん、小腸または虫垂がん、唾液腺がん、甲状腺がん、副腎腺がん、骨肉腫、軟骨肉腫、血液組織のがんなどが挙げられる。本開示により包含される方法に適用可能ながんのタイプの他の非限定的な例としては、ヒト肉腫および癌腫、例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、結腸直腸がん、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝細胞腫、胆管癌、肝がん、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、骨がん、脳腫瘍、精巣がん、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫；白血病、例えば、急性リンパ性白血病および急性骨髄球性白血病（骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性および赤白血病）；慢性白血病（慢性骨髄性（顆粒球性）白血病および慢性リンパ性白血病）；ならびに真性多血症、リンパ腫（ホジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ワルデンストロームマクログロブリン血症、および重鎖疾患が挙げられる。一部の実施形態では、がんは、限定するものではないが、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、婦人科がん、腎がん、喉頭がん、肺がん、口腔がん、頭頸部がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、または皮膚がんなどの上皮がんである。他の実施形態では、がんは、乳がん、前立腺がん、肺がん、または結腸がんである。さらに他の実施形態では、上皮がんは、非小細胞肺がん、非乳頭状腎細胞癌、子宮頸癌、卵巣癌（例えば漿液性卵巣癌）、または乳癌である。上皮がんは、限定するものではないが、漿液性、類内膜性、粘液性、明細胞、または未分化を含めて、様々な他の方法で特徴づけることができる。一部の実施形態では、本開示は、限定するものではないが、マントル細胞リンパ腫を含む、リンパ腫またはその亜型の処置、診断、および／または予後において使用される。リンパ増殖性疾患はまた、増殖性疾患であると考えられる。

[0668]一般に、細胞免疫療法は、生細胞を含む医薬を患者に提供するステップを含む。一部の態様では、がんを有する患者または対象は自家細胞で処置され、この方法は、マクロファージなどのＰＢＭＣ由来骨髄性細胞を単離するステップと、ｅｘ ｖｉｖｏで細胞を改変して、ＣＦＰをコードする組換え核酸を細胞に導入することにより腫瘍溶解が可能な食細胞骨髄性細胞を生成するステップと、改変骨髄性細胞を対象に投与するステップを含む。

[0669]一部の態様では、対象は、細胞が同種異系である、食細胞などの治療用骨髄性細胞を含む医薬組成物の１回または複数回の用量が投与される。ＨＬＡは、対象との適合性について、細胞が移植片対宿主病であるＧＶＨＤを引き起こさないように適合させることができる。病院を訪れた対象は、対象によって発現されるＨＬＡ抗原を決定するためにＨＬＡタイピングされる。

[0670]ＨＬＡタイピングは、慣例通りに、抗体を使用する血清学的方法によって、またはＰＣＲに基づく方法、例えば、配列特異的オリゴヌクレオチドプローブハイブリダイゼーション（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｐｒｏｂｅ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ、ＳＳＯＰ）もしくは配列ベースタイピング（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｂａｓｅｄ Ｔｙｐｉｎｇ、ＳＢＴ）によって実施される。

[0671]配列情報は、配列決定法、または液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳもしくはＬＣ－ＭＳ／ＭＳ、または代替としてＨＰＬＣ－ＭＳもしくはＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）などの質量分析を採用する方法のいずれかによって同定することができる。これらの配列決定方法は当業者にはよく知られている可能性があり、またＭｅｄｚｉｈｒａｄｓｚｋｙ ＫＦおよびＣｈａｌｋｌｅｙ ＲＪ、Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍ Ｒｅｖ． ２０１５ １月～２月；３４（１）：４３～６３頁で概説されている。

[0672]一部の態様では、食細胞は対象に由来し、ｉｎ ｖｉｔｒｏで組換え核酸をトランスフェクトまたは形質導入し、投与に適した数を達成するためにｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞培養で増殖させ、次いで対象に投与される。一部の実施形態では、ｉｎ ｖｉｔｒｏで組換え核酸をトランスフェクトまたは形質導入するステップ、投与に適した数を達成するためにｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞培養で増殖させるステップは、２日、または３日、または４日または５日または６日または７日または８日または９日または１０日を要する。

[0673]一部の実施形態では、組換え核酸を含むマクロファージなどの十分な量のトランスフェクトまたは形質導入された骨髄性細胞は無菌的に保存され、これを、ＨＬＡタイピングおよびレシピエントＨＬＡサブタイプとの生成物のマッチングを行った後に、「既製」生成物として対象に投与される。一部の実施形態では、操作された食細胞は凍結保存される。一部の実施形態では、操作された食細胞は、細胞生存率を著しく低下させることなく解凍に耐えるよう適切な培地で凍結保存される。

[0674]一部の実施形態では、対象は、ベクター中に、または上記の薬学的に許容される賦形剤中にＤＮＡ、またはｍＲＮＡまたはｃｉｒｃＲＮＡを含む医薬組成物が投与される。

[0675]一部の実施形態では、既製の細胞生成物の投与は、即座に行われ得るか、または投与前に１日、２日または３日または４日または５日または６日または７日またはそれ以上を必要とする場合がある。細胞または核酸を含む医薬組成物は、調製から使用まで凍結状態で経時保存することができる。一部の実施形態では、医薬組成物は１回解凍され得る。一部の実施形態では、医薬組成物は、２回以上解凍され得る。一部の実施形態では、医薬組成物は、対象に投与する前に凍結融解サイクルを経て安定化される。一部の実施形態では、医薬組成物は、投与前に解凍した後、最終的な品質管理について試験される。

[0676]一部の実施形態では、１０^６個の操作された細胞を含む組成物は投与量ごとに投与される。一部の実施形態では、１０^７個の操作された細胞を含む組成物は投与量ごとに投与される。一部の実施形態では、５×１０^７個の操作された細胞を含む組成物は投与量ごとに投与される。一部の実施形態では、１０^８個の操作された細胞を含む組成物は投与量ごとに投与される。一部の実施形態では、２×１０^８個の操作された細胞を含む組成物は投与量ごとに投与される。一部の実施形態では、５×１０^８個の操作された細胞を含む組成物は投与量ごとに投与される。一部の実施形態では、１０^９個の操作された細胞を含む組成物は投与量ごとに投与される。一部の実施形態では、１０^１０個の操作された細胞を含む組成物は投与量ごとに投与される。

[0677]一部の実施形態では、食細胞などの操作された骨髄性細胞は１回投与される。
[0678]一部の実施形態では、食細胞などの操作された骨髄性細胞は２回以上投与される。

[0679]一部の実施形態では、食細胞などの操作された骨髄性細胞は、数か月、１年以上を含むスパンの期間にわたり、対象に対し２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、または１０回以上である。

[0680]一部の実施形態では、食細胞などの操作された骨髄性細胞は週に２回投与される。
[0681]一部の実施形態では、食細胞などの操作された骨髄性細胞は週に１回投与される。

[0682]一部の実施形態では、食細胞などの操作された骨髄性細胞は２週間に１回投与される。
[0683]一部の実施形態では、食細胞などの操作された骨髄性細胞は３週間に１回投与される。

[0684]一部の実施形態では、食細胞などの操作された骨髄性細胞は月に１回投与される。
[0685]一部の実施形態では、操作された食細胞は、２か月ごとに１回、３か月ごとに１回、４か月ごとに１回、５か月ごとに１回、または６か月ごとに１回投与される。

[0686]一部の実施形態では、食細胞などの操作された骨髄性細胞は、注射によって投与される。
[0687]一部の実施形態では、食細胞などの操作された骨髄性細胞は、注入によって投与される。

[0688]一部の実施形態では、食細胞などの操作された骨髄性細胞は、静脈内注入によって投与される。
[0689]一部の実施形態では、食細胞などの操作された骨髄性細胞は、皮下注入によって投与される。

[0690]組換え核酸または操作された細胞を含む医薬組成物は、治療上の有効な結果をもたらす任意の経路により投与することができる。これらには、限定するものではないが、経腸（腸内へ）、胃腸内、硬膜外（硬膜内へ）、経口（口経由で）、経皮、硬膜内、脳内（大脳内へ）、脳室内（脳室へ）表皮（皮膚上に塗布）、皮内（皮膚そのものへ）、皮下（皮膚の下に）、経鼻投与（鼻から）、静脈内（静脈へ）、静脈内ボーラス、静脈内点滴、動脈内（動脈へ）、筋肉内（筋肉へ）、心臓内（心臓へ）、骨内注入（骨髄へ）、髄腔内（脊髄管へ）、腹腔内、（腹腔への注入または注射）、膀胱内注入、硝子体内、（眼を介して）、海綿体内注射（病的腔内へ）、腔内（陰茎基部へ）、膣内投与、子宮内、羊膜外投与、経皮（全身分布のための無傷の皮膚を介した拡散）、経粘膜（粘膜を介した拡散）、経膣、吹送（鼻から吸う）、舌下、唇下、注腸、点眼（結膜上へ）、点耳で、心耳（耳の中または耳を介して）、頬側（頬に向けて）、結膜、皮膚、歯（１本または複数の歯に）、電気浸透、子宮頸管内、内耳、気管内、体外、血液透析、浸潤、間質、腹腔内、羊膜内、関節内、胆道内、気管支内、滑液包内、軟骨内（軟骨の内部に）、仙骨内（仙骨の内部に）、脳槽内（小脳槽の内部に）、角膜内（角膜の内部に）、歯科角膜内、冠動脈内（冠動脈の内部に）、海綿体内（陰茎海綿体の膨張可能なスペースの内部に）、椎間板内（椎間板の内部に）、腺管内（腺の管の内部に）、十二指腸内（十二指腸の内部に）、硬膜内（硬膜の内部または下に）、表皮内（表皮へ）、食道内（食道へ）、胃内（胃の内部に）、歯肉内（歯肉の内部に）、回腸内（小腸の遠位部分の内部に）、病変内（局所病変の内部に、または直接的な導入）、管腔内（管腔の内部に）、リンパ管内（リンパ管の内部に）、髄内（骨の骨髄腔の内部に）、髄膜内（髄膜の内部に）、眼内（眼の内部に）、卵巣内（卵巣の内部に）、心膜内（心膜の内部に）、胸膜腔内（胸膜腔の内部に）、前立腺内（前立腺の内部に）、肺内（肺またはその気管支の内部に）、鼻腔内（鼻または眼窩周囲洞の内部に）、脊髄内（脊柱の内部に）、滑液内（関節の滑膜腔の内部に）、腱内（腱の内部に）、精巣内（睾丸の内部に）、髄腔内（脳脊髄軸の任意のレベルの脳脊髄液の内部に）、胸腔内（胸膜の内部に）、尿細管内（臓器の尿細管の内部に）、腫瘍内（腫瘍の内部に）、中耳内（鼓室の内部に）、血管内（１つまたは複数の血管の内部に）、脳室内（脳室の内部に）、イオントフォレーシス（可溶性塩のイオンが身体の組織に移動する電流による）、洗浄（開いた傷口または体腔を浸すか洗い流すため）、喉頭（喉頭に直接）、経鼻胃（鼻を介して胃へ）、密封包帯（局所経路投与で、その後その領域を塞ぐ包帯で覆う）、眼（外眼へ）、中咽頭（口および咽頭に直接）、非経口、経皮、関節周囲、硬膜周囲、神経周囲、歯周、直腸、呼吸器（局所効果または全身効果のために経口または経鼻で吸入することにより気道の内部に）、眼球後部（脳橋の後ろまたは眼球の後ろ）、軟組織、くも膜下、結膜下、粘膜下、局所、経胎盤（胎盤を通って、または横切って）、経気管（気管の壁を通って）、経鼓膜（鼓膜腔を横切って、または通って）、尿管（尿管へ）、尿道（尿道へ）、膣、仙骨ブロック、診断、神経ブロック、胆道灌流、心臓灌流、フォトフェレーシスまたは脊髄が含まれる。特定の実施形態では、組成物は、それらが血液脳関門、血管関門、または他の上皮関門を通過することを可能にする方法で投与され得る。

[0691]一部の実施形態では、対象は、本明細書に記載のＣＦＰまたはＰＦＰをコードする核酸を含む医薬組成物を投与される。一部の実施形態では、対象は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、またはｃｉｒｃＲＮＡを含む医薬組成物を投与される。一部の実施形態では、対象は、核酸、例えばＤＮＡ、ｍＲＮＡ、またはｃｉｒｃＲＮＡを持つベクターを投与される。一部の実施形態では、核酸は投与され、または上記の薬学的に許容される賦形剤で投与される。

[0692]一部の実施形態では、対象は、核酸、例えば、本明細書に記載のＣＦＰまたはＰＦＰをコードするＤＮＡ、ｍＲＮＡ、またはｃｉｒｃＲＮＡと結びついたナノ粒子（ＮＰ）が投与される。一部の実施形態では、核酸はナノ粒子にカプセル化されている。一部の実施形態では、核酸はナノ粒子にコンジュゲートしている。一部の実施形態では、ＮＰはポリラクチド－コ－グリコリド（ＰＧＬＡ）粒子である。一部の実施形態では、ＮＰは皮下投与される。一部の実施形態では、ＮＰは静脈内投与される。一部の実施形態では、ＮＰは投与経路と関係して操作される。例えば、ＮＰのサイズ、形状、または電荷は、投与経路に従って操作され得る。一部の実施形態では、皮下投与されたＮＰは、サイズが２００ｎｍ未満である。一部の実施形態では、皮下投与されたＮＰは、サイズが２００ｎｍより大きい。一部の実施形態では、皮下投与されたＮＰは、サイズが少なくとも３０ｎｍである。一部の実施形態では、ＮＰは静脈内注入される。一部の実施形態では、静脈内注入されたＮＰは、直径が少なくとも５ｎｍである。一部の実施形態では、静脈内注入されたＮＰは、直径が少なくとも３０ｎｍである。一部の実施形態では、静脈内注入されたＮＰは、直径が少なくとも１００ｎｍである。ある特定の実施形態では、投与されたＮＰ、例えば静脈内投与されたＮＰは、循環している単球に貧食される。さらなるＮＰの設計および投与方法はＧｅｔｔｓら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ３６（７）：４１９～４２７頁（２０１５）に記載されており、その全体は参照によって本明細書に組み込まれる。

[0693]一部の実施形態では、対象は、本明細書に記載のようなＣＦＰまたはＰＦＰをコードするｃｉｒｃＲＮＡを含む医薬組成物を投与される。ｃｉｒｃＲＮＡは、本明細書に記載のような任意の経路で投与することができる。一部の実施形態では、ｃｉｒｃＲＮＡは直接注入され得る。一部の実施形態では、ｃｉｒｃＲＮＡは、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、リン酸塩および／またはＥＤＴＡのうちの１つまたは複数を含む製剤または溶液中にあり得る。一部の実施形態では、ｃｉｒｃＲＮＡ溶液は、生理食塩水、２ｍＭのカルシウムを含む生理食塩水、５％スクロース、２ｍＭのカルシウムを含む５％スクロース、５％マンニトール、２ｍＭのカルシウムを含む５％マンニトール、乳酸リンゲル液、塩化ナトリウム、２ｍＭのカルシウム含む塩化ナトリウムおよびマンノースのうちの１つまたは複数を含み得る。一部の実施形態では、ｃｉｒｃＲＮＡ溶液は凍結乾燥される。それぞれの成分の量は、一貫性があり、再現性のある高濃度の生理食塩水または単一の緩衝液の製剤を可能にするように変えることができる。成分はまた、ある期間にわたって、および／または様々な条件下で、緩衝液中のｃｉｒｃＲＮＡの安定性を高めるように変えることができる。一部の実施形態では、ｃｉｒｃＲＮＡは、凍結乾燥されたゲル相リポソーム組成物で製剤化される。一部の実施形態では、ｃｉｒｃＲＮＡ製剤は、製剤に所望する一貫性および／または製剤成分の安定化を付与するために増量剤、例えば、スクロース、トレハロース、マンニトール、グリシン、ラクトースおよび／またはラフィノースを含む。米国特許出願公開第ＵＳ２０１２０６０２９３号および同第ＵＳ２０１７０２０４４２２号に記載されているようなｃｉｒｃＲＮＡのさらなる製剤および投与方法は、参照により全体が本明細書に組み込まれる。

[0694]一部の実施形態では、対象は、本明細書に記載のようなＣＦＰまたはＰＦＰをコードするｍＲＮＡを含む医薬組成物を投与される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）などのナノ粒子（ＮＰ）に同時製剤化される。例えば、ＬＮＰは、カチオン性脂質またはイオン化可能な脂質を含み得る。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、ポリマー粒子、例えば、ポリエチレンイミン粒子、ポリ（グリコアミドアミン）、ポリ（β－アミノ）エステル（ＰＢＡＥ）、ＰＥＧ粒子、セラミド－ＰＥＧ、ポリアミンドアミン粒子、またはポリ乳酸－コ－グリコール酸粒子（ＰＬＧＡ）に製剤化される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、直接注射によって投与される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、トランスフェクション剤、例えば、リポフェクタミン２０００、ｊｅｔＰＥＩ、ＲＮＡｉＭＡＸ、またはＩｎｖｉｖｏｆｅｃｔａｍｉｎｅと複合体を形成する。

[0695]ｍＲＮＡは、裸のｍＲＮＡであり得る。ｍＲＮＡは、修飾されていてもよいし、修飾されていなくてもよい。例えば、ｍＲＮＡは化学的に修飾され得る。一部の実施形態では、ｍＲＮＡの核酸塩基および／または配列は、ｍＲＮＡの安定性および半減期を増強させるように修飾される。一部の実施形態では、ｍＲＮＡはグリコシル化されている。Ｆｌｙｎｎら、ＢｉｏＲｘｉｖ ７８７６１４（２０１９）およびＫｏｗａｌｓｋｉら、Ｍｏｌ． Ｔｈｅｒ． ２７（４）：７１０～７２８頁（２０１９）に記載されている、さらなるｍＲＮＡの修飾および送達方法は、それぞれ参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。

実施形態
１．食作用または係留受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物であって、ＰＦＰが、（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、および（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む、ＰＲサブユニット、ならびに（ｂ）標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインを含み、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインが作動可能に連結されており；ＰＦＰが標的細胞の抗原に結合すると、ＰＦＰを発現する細胞の殺作用または食作用活性が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して少なくとも２０％より多く増加する、組成物。
２．細胞内シグナル伝達ドメインが食作用または係留受容体に由来するか、または細胞内シグナル伝達ドメインが食作用活性化ドメインを含む、実施形態１に記載の組成物。
３．細胞内シグナル伝達ドメインが、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲ－アルファ、またはＢａｉ１から選択される食作用受容体以外の受容体に由来する、実施形態１または２に記載の組成物。
４．細胞内シグナル伝達ドメインが、表２に列挙した受容体からなる群から選択される受容体に由来する、実施形態１～３のいずれか１つに記載の組成物。
５．細胞内シグナル伝達ドメインが炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１～４のいずれか１つに記載の組成物。
６．細胞内シグナル伝達ドメインが、ＰＩ３Ｋ動員ドメインではない炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む、実施形態５に記載の組成物。
７．食作用または係留受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物であって、ＰＦＰが、（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、および（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む、ＰＲサブユニット、ならびに（ｂ）標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインを含み、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインが作動可能に連結されており；細胞内シグナル伝達ドメインが、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲ－アルファ、およびＢａｉ１から選択される食作用受容体以外の食作用受容体に由来する、組成物。
８．ＰＦＰが標的細胞の抗原に結合すると、ＰＦＰを発現する細胞の殺作用活性が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して少なくとも２０％より多く増加する、実施形態７に記載の組成物。
９．細胞内シグナル伝達ドメインが、レクチン、デクチン１、ＣＤ２０６、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、Ｆｃ－アルファ受容体Ｉ、ＣＲ１、ＣＤ３５、ＣＤ３ζ、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｔｉｍ－１、Ｔｉｍ－４、およびＣＤ１６９からなる群から選択される食作用受容体に由来する、実施形態７または８に記載の組成物。
１０．細胞内シグナル伝達ドメインが炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む、実施形態７～９のいずれか１つに記載の組成物。
１１．食作用または係留受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物であって、ＰＦＰが、（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、および（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む、ＰＲサブユニット、ならびに（ｂ）標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインを含み、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインが作動可能に連結されており；細胞内シグナル伝達ドメインが、レクチン、デクチン１、ＣＤ２０６、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、Ｆｃ－アルファ受容体Ｉ、ＣＲ１、ＣＤ３５、ＣＤ３ζ、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｔｉｍ－１、Ｔｉｍ－４、およびＣＤ１６９からなる群から選択される食作用受容体に由来する、組成物。
１２．ＰＦＰが標的細胞の抗原に結合すると、ＰＦＰを発現する細胞の殺作用活性が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して少なくとも５５％より多く増加する、実施形態１１に記載の組成物。
１３．細胞内シグナル伝達ドメインが、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲ－アルファ、またはＢａｉ１から選択される食作用受容体以外の食作用受容体に由来する、実施形態１１または１２に記載の組成物。
１４．細胞内シグナル伝達ドメインが炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１１～１３のいずれか１つに記載の組成物。
１５．細胞内シグナル伝達ドメインが、ＰＩ３Ｋ動員ドメインではない炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１４に記載の組成物。
１６．食作用または係留受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＰＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物であって、ＰＦＰが、（ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、および（ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む、ＰＲサブユニット、ならびに（ｂ）標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインを含み、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインが作動可能に連結されており；細胞内シグナル伝達ドメインが、ＰＩ３Ｋ動員ドメインではない炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む、組成物。
１７．ＰＦＰが標的細胞の抗原に結合すると、ＰＦＰを発現する細胞の殺作用活性が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して少なくとも２０％より多く増加する、実施形態１６に記載の組成物。
１８．細胞内シグナル伝達ドメインが食作用受容体に由来する、実施形態１６または１７に記載の組成物。
１９．細胞内シグナル伝達ドメインが、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲ－アルファ、またはＢａｉ１から選択される食作用受容体以外の食作用受容体に由来する、実施形態１６～１８のいずれか１つに記載の組成物。
２０．細胞内シグナル伝達ドメインが、レクチン、デクチン１、ＣＤ２０６、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、Ｆｃ－アルファ受容体Ｉ、ＣＲ１、ＣＤ３５、ＣＤ３ζ、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｔｉｍ－１、Ｔｉｍ－４、およびＣＤ１６９からなる群から選択される食作用受容体に由来する、実施形態１６～１９のいずれか１つに記載の組成物。
２１．細胞内シグナル伝達ドメインがＰＩ３Ｋ動員ドメインを含む、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の組成物。
２２．ＰＦＰが細胞で発現される場合、ＰＦＰが細胞の細胞膜に機能的に組み込まれる、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
２３．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、抗原を発現する標的細胞の食作用の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
２４．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、抗原を発現する標的細胞の食作用の少なくとも１．１倍の増加を示す、実施形態２３に記載の組成物。
２５．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、抗原を発現する標的細胞の食作用の少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、または５０倍の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
２６．抗原を発現する標的細胞ががん細胞である、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
２７．抗原を発現する標的細胞が少なくとも直径０．８ミクロンである、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
２８．細胞内シグナル伝達ドメインがスカベンジャー受容体に由来する、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
２９．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、サイトカインの産生の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
３０．サイトカインが、ＩＬ－１、ＩＬ３、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＣＳＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ１７、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、インターフェロンおよびこれらの組合せからなる群から選択される、実施形態２９に記載の組成物。
３１．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、エフェクター活性の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
３２．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、交差提示の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
３３．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質の発現の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
３４．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ８０の発現の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
３５．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ８６の発現の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
３６．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＭＨＣクラスＩタンパク質の発現の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
３７．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＴＲＡＩＬ／ＴＮＦファミリー細胞死受容体の発現の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
３８．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、Ｂ７－Ｈ２の発現の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
３９．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＬＩＧＨＴの発現の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
４０．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＨＶＥＭの発現の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
４１．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ４０の発現の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
４２．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＴＬ１Ａの発現の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
４３．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、４１ＢＢＬの発現の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
４４．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＯＸ４０Ｌの発現の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
４５．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＧＩＴＲＬ細胞死受容体の発現の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
４６．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ３０Ｌの発現の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
４７．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＴＩＭ４の発現の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
４８．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＴＩＭ１リガンドの発現の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
４９．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＳＬＡＭの発現の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
５０．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ４８の発現の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
５１．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ５８の発現の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
５２．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ１５５の発現の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
５３．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ１１２の発現の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
５４．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＰＤＬ１の発現の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
５５．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、Ｂ７－ＤＣの発現の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
５６．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、呼吸性バーストの増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
５７．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ＲＯＳ産生の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
５８．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ｉＮＯＳ産生の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
５９．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、ｉＮＯＳ産生の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
６０．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、細胞外小胞産生の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
６１．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、抗原を発現する標的細胞によるトロゴサイトーシスの増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
６２．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、食作用のＣＤ４７媒介性阻害に対する抵抗性の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
６３．ＰＦＰを発現する細胞が、ＰＦＰを発現しない細胞と比較して、食作用のＬＩＬＲＢ１媒介性阻害に対する抵抗性の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
６４．細胞内ドメインが、Ｒａｃ阻害ドメイン、Ｃｄｃ４２阻害ドメインまたはＧＴＰａｓｅ阻害ドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
６５．Ｒａｃ阻害ドメイン、Ｃｄｃ４２阻害ドメインまたはＧＴＰａｓｅ阻害ドメインが、ＰＦＰを発現する細胞の食作用カップにおいてＲａｃ、Ｃｄｃ４２またはＧＴＰａｓｅを阻害する、実施形態６４に記載の組成物。
６６．細胞内ドメインが、Ｆ－アクチン解離活性化ドメイン、ＡＲＨＧＡＰ１２活性化ドメイン、ＡＲＨＧＡＰ２５活性化ドメインまたはＳＨ３ＢＰ１活性化ドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
６７．ＰＦＰを発現する細胞が、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸産生の増加を示す、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
６８．細胞外ドメインがＩｇ結合ドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
６９．細胞外ドメインが、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＦｃＲγＩ、ＦｃＲγＩＩＡ、ＦｃＲγＩＩＢ、ＦｃＲγＩＩＣ、ＦｃＲγＩＩＩＡ、ＦｃＲγＩＩＩＢ、ＦｃＲｎ、ＴＲＩＭ２１、ＦｃＲＬ５結合ドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
７０．細胞外ドメインがＦｃＲ細胞外ドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
７１．細胞外ドメインが、ＦｃＲ－アルファ、ＦｃＲβ、ＦｃＲεまたはＦｃＲγ細胞外ドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
７２．細胞外ドメインがＦｃＲα（ＦＣＡＲ）細胞外ドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
７３．細胞外ドメインがＦｃＲβ細胞外ドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
７４．細胞外ドメインがＦｃＲε（ＦＣＥＲ１Ａ）細胞外ドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
７５．細胞外ドメインが、ＦｃＲγ（ＦＤＧＲ１Ａ、ＦＣＧＲ２Ａ、ＦＣＧＲ２Ｂ、ＦＣＧＲ２Ｃ、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＧＲ３Ｂ）細胞外ドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
７６．細胞外ドメインがインテグリンドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
７７．細胞外ドメインが、１つまたは複数のインテグリンα１、α２、αＩＩｂ、α３、α４、α５、α６、α７、α８、α９、α１０、α１１、αＤ、αＥ、αＬ、αＭ、αＶ、αＸ、β１、β２、β３、β４、β５、β６、β７、またはβ８ドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
７８．細胞内ドメインがＣＤ４７阻害ドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
７９．ＰＳＲサブユニットが、膜貫通ドメインに作動可能に連結した細胞外ドメインおよび細胞外抗原結合ドメインをさらに含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
８０．細胞外ドメインが、受容体の細胞外ドメイン、ヒンジ、スペーサーまたはリンカーをさらに含む、実施形態７９に記載の組成物。
８１．細胞外ドメインがＰＳＲの細胞外部分を含む、実施形態８０に記載の組成物。
８２．ＰＳＲの細胞外部分が、ＰＳＲ細胞内シグナル伝達ドメインと同じＰＳＲに由来する、実施形態８１に記載の組成物。
８３．細胞外ドメインが、スカベンジャー受容体または免疫グロブリンドメインの細胞外ドメインを含む、実施形態７９～８２のいずれか１つに記載の組成物。
８４．免疫グロブリンドメインが免疫グロブリンの細胞外ドメインまたは免疫グロブリンヒンジ領域を含む、実施形態８３に記載の組成物。
８５．細胞外ドメインが食作用貪食マーカーを含む、実施形態７９～８４のいずれか１つに記載の組成物。
８６．細胞外ドメインが多量体アセンブリー可能な構造を含む、実施形態７９～８５のいずれか１つに記載の組成物。
８７．細胞外ドメインが多量体化の足場を含む、実施形態７９～８６のいずれか１つに記載の組成物。
８８．細胞外ドメインが少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、３００、４００、または５００アミノ酸長である、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
８９．細胞外ドメインが最大５００、４００、３００、２００、または１００アミノ酸長である、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
９０．細胞外抗原結合ドメインが、標的細胞の抗原に特異的に結合する、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
９１．細胞外抗原結合ドメインが抗体ドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
９２．細胞外抗原結合ドメインが、受容体ドメイン、抗体ドメインを含み、抗体ドメインが機能的抗体断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ナノボディ、Ｖ_Ｈドメイン、Ｖ_Ｌドメイン、ＶＮＡＲドメイン、Ｖ_ＨＨドメイン、二重特異性抗体、ディアボディ、またはこれらの機能的断片もしくは組合せを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
９３．細胞外抗原結合ドメインがリガンド、受容体の細胞外ドメインまたはアダプターを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
９４．細胞外抗原結合ドメインが、単一の抗原に特異的な単一の細胞外抗原結合ドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
９５．細胞外抗原結合ドメインが少なくとも２つの細胞外抗原結合ドメインを含み、少なくとも２つの細胞外抗原結合ドメインのそれぞれが異なる抗原に特異的である、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
９６．抗原が、がん抗原または病原性抗原または自己免疫抗原である、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
９７．抗原がウイルス抗原を含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
９８．抗原がＴリンパ球抗原である、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
９９．抗原が細胞外抗原である、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１００．抗原が細胞内抗原である、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１０１．抗原が、チミジンキナーゼ（ＴＫ１）、ヒポキサンチン－グアニン ホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）、ムチン－１、ムチン－１６（ＭＵＣ１６）、ＭＵＣ１、上皮増殖因子受容体ｖＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、メソテリン、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）、メソテリン、ＥＢＮＡ－１、ＬＥＭＤ１、ホスファチジルセリン、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、卵胞刺激ホルモン受容体、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、エリスロポエチン産生肝細胞癌Ａ２（ＥｐｈＡ２）、ＥｐｈＢ２、ナチュラルキラー群２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）リガンド、ジシアロガングリオシド２（ＧＤ２）、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４５、ＣＤ５６ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９７、ＣＤ１１７、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ２１３Ａ２、ＣＤ２４８、ＣＤ２７６、ＰＳＣＡ、ＣＳ－１、ＣＬＥＣＬ１、ＧＤ３、ＰＳＭＡ、ＦＬＴ３、ＴＡＧ７２、ＥＰＣＡＭ、ＩＬ－１、インテグリン受容体、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲ－β、ＳＳＥＡ－４、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧＭ３、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ＩＧＬＬ１、およびこれらの組合せからなる群から選択される、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１０２．抗原が、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＣＲ４、ＣＤ８、ＣＤ３０、ＣＤ４５、ＣＤ５６からなる群から選択される、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１０３．抗原が卵巣がん抗原またはＴリンパ腫抗原である、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１０４．抗原がインテグリン受容体である、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１０５．抗原が、α１、α２、αＩＩｂ、α３、α４、α５、α６、α７、α８、α９、α１０、α１１、αＤ、αＥ、αＬ、αＭ、αＶ、αＸ、β１、β２、β３、β４、β５、β６、β７、およびβ８からなる群から選択されるインテグリン受容体である、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１０６．抗原が、２つまたはそれ以上の抗原を含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１０７．膜貫通ドメインおよび細胞外抗原結合ドメインがリンカーを通して作動可能に連結されている、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１０８．膜貫通ドメインおよび細胞外抗原結合ドメインが、ＣＤ８α、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４のヒンジ領域などのリンカーを通して作動可能に連結されている、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１０９．細胞外ドメインが多量体化足場を含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１１０．膜貫通ドメインがＦｃＲ膜貫通ドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１１１．膜貫通ドメインが、２０、１０または５以下の改変膜貫通ドメインを有するＦｃＲ－εを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１１２．膜貫通ドメインが、シンタキシン３またはシンタキシン４またはシンタキシン５などのシンタキシンからの膜貫通ドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１１３．ＰＦＰが細胞で発現される場合、膜貫通ドメインが、内在性受容体の膜貫通ドメインとオリゴマー化する、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１１４．ＰＦＰが細胞で発現される場合、膜貫通ドメインが、外因性受容体の膜貫通ドメインとオリゴマー化する、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１１５．ＰＦＰが細胞で発現される場合、膜貫通ドメインが、内在性受容体の膜貫通ドメインと二量体化する、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１１６．ＰＦＰが細胞で発現される場合、膜貫通ドメインが、外因性受容体の膜貫通ドメインと二量体化する、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１１７．膜貫通ドメインが、細胞内シグナル伝達ドメインが由来するタンパク質とは異なるタンパク質に由来する、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１１８．膜貫通ドメインが、細胞外ドメインが由来するタンパク質とは異なるタンパク質に由来する、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１１９．膜貫通ドメインが食作用受容体の膜貫通ドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１２０．膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインが同じタンパク質に由来する、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１２１．膜貫通ドメインが、細胞内シグナル伝達ドメインと同じタンパク質に由来する、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１２２．組換え核酸がＤＡＰ１２動員ドメインをコードする、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１２３．膜貫通ドメインが、ＤＡＰ１２とオリゴマー化する膜貫通ドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１２４．膜貫通ドメインが少なくとも１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１または３２アミノ酸長である、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１２５．膜貫通ドメインが最大１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１または３２アミノ酸長である、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１２６．細胞内ドメインがホスファターゼ阻害ドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１２７．細胞内ドメインがＡＲＰ２／３阻害ドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１２８．細胞内ドメインが少なくとも１つのＩＴＡＭドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１２９．細胞内ドメインが少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のＩＴＡＭドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１３０．細胞内ドメインが少なくとも１つのＩＴＡＭドメインをさらに含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１３１．細胞内ドメインが、ＣＤ３ゼータＴＣＲサブユニット、ＣＤ３イプシロンＴＣＲサブユニット、ＣＤ３ガンマＴＣＲサブユニット、ＣＤ３デルタＴＣＲサブユニット、ＴＣＲゼータ鎖、Ｆｃイプシロン受容体１鎖、Ｆｃイプシロン受容体２鎖、Ｆｃガンマ受容体１鎖、Ｆｃガンマ受容体２ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体２ｂ１鎖、Ｆｃガンマ受容体２ｂ２鎖、Ｆｃガンマ受容体３ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体３ｂ鎖、Ｆｃベータ受容体１鎖、ＴＹＲＯＢＰ（ＤＡＰ１２）、ＣＤ５、ＣＤ１６ａ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８９、ＣＤ２７８、ＣＤ６６ｄ、これらの機能的断片、およびこれらに対して少なくとも１つから２０以下の改変を有するこれらのアミノ酸配列の群から選択される少なくとも１つのＩＴＡＭドメインをさらに含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１３２．少なくとも１つのＩＴＡＭドメインがＳｒｃファミリーキナーゼリン酸化部位を含む、実施形態１２９に記載の組成物。
１３３．少なくとも１つのＩＴＡＭドメインがＳｙｋ動員ドメインを含む、実施形態１２９に記載の組成物。
１３４．細胞内ドメインがＦ－アクチン脱重合活性化ドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１３５．細胞内ドメインが酵素活性を欠如する、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１３６．細胞内ドメインが、ＣＤ３ゼータ細胞内ドメインに由来するドメインを含まない、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１３７．細胞内ドメインがＣＤ４７阻害ドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１３８．細胞内シグナル伝達ドメインが、ＰＳＧＬ－１の細胞内領域などのインテグリンを活性化するドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１３９．細胞内シグナル伝達ドメインが、ＥＰＡＣおよびＣ３Ｇ由来のものなどのＲａｐ１ ＧＴＰａｓｅを活性化するドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１４０．細胞内シグナル伝達ドメインがパキシリン由来である、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１４１．細胞内シグナル伝達ドメインが接着斑キナーゼを活性化する、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１４２．細胞内シグナル伝達ドメインが単一の食作用受容体に由来する、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１４３．細胞内シグナル伝達ドメインが単一のスカベンジャー受容体に由来する、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１４４．細胞内ドメインが食作用増強ドメインをさらに含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１４５．細胞内ドメインが炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１４６．炎症促進性シグナル伝達ドメインが、キナーゼ活性化ドメインまたはキナーゼ結合ドメインを含む、実施形態１４５に記載の組成物。
１４７．炎症促進性シグナル伝達ドメインが、ＩＬ－１シグナル伝達カスケード活性化ドメインを含む、実施形態１４５または１４６に記載の組成物。
１４８．炎症促進性シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９、ＴＲＩＦ、ＲＩＧ－１、ＭＹＤ８８、ＭＡＬ、ＩＲＡＫ１、ＭＤＡ－５、ＩＦＮ受容体、ＮＬＲＰファミリーメンバー、ＮＬＲＰ１－１４、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、パイリン、ＡＩＭ２、ＮＬＲＣ４、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＥＲＩＧ、ＣＤ４０、カスパーゼドメインまたはプロカスパーゼ結合ドメインまたはこれらの任意の組合せに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１４５～１４７のいずれか１つに記載の組成物。
１４９．ＰＦＰが全長の細胞内シグナル伝達ドメインを含まない、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１５０．細胞内ドメインが少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、３００、３００、４００、または５００アミノ酸長である、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１５１．細胞内ドメインが最大１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、３００、３００、４００、または５００アミノ酸長である、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１５２．組換え核酸が、ＦｃＲα鎖細胞外ドメイン、ＦｃＲα鎖膜貫通ドメインおよび／またはＦｃＲα鎖細胞内ドメインをコードする、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１５３．組換え核酸が、ＦｃＲβ鎖細胞外ドメイン、ＦｃＲβ鎖膜貫通ドメインおよび／またはＦｃＲβ鎖細胞内ドメインをコードする、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１５４．ＦｃＲα鎖またはＦｃＲβ鎖が、細胞で発現される場合、ＦｃＲγと複合体を形成する、実施形態１５２または１５３に記載の組成物。
１５５．ＦｃＲα鎖またはＦｃＲβ鎖が、細胞で発現される場合、内在性ＦｃＲγと複合体を形成する、実施形態１５４に記載の組成物。
１５６．ＦｃＲα鎖またはＦｃＲβ鎖が、ＦｃＲγを発現しない細胞の細胞膜に組み込まれない、実施形態１５２～１５５のいずれか１つに記載の組成物。
１５７．ＰＦＰがＦｃＲα鎖細胞内シグナル伝達ドメインを含まない、実施形態１５２～１５６のいずれか１つに記載の組成物。
１５８．ＰＦＰがＦｃＲβ鎖細胞内シグナル伝達ドメインを含まない、実施形態１５２～１５７のいずれか１つに記載の組成物。
１５９．組換え核酸が、ＴＲＥＭ細胞外ドメイン、ＴＲＥＭ膜貫通ドメインおよび／またはＴＲＥＭ細胞内ドメインをコードする、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１６０．ＴＲＥＭが、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２またはＴＲＥＭ３である、実施形態１５９に記載の組成物。
１６１．組換え核酸が、炎症促進性ポリペプチドをコードする配列を含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１６２．組成物が炎症促進性ポリペプチドをさらに含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１６３．炎症促進性ポリペプチドがケモカイン、サイトカインおよびヌクレオチドである、実施形態１６２に記載の組成物。
１６４．ケモカインが、ＩＬ－１、ＩＬ３、ＩＬ５、ＩＬ－６、ｉｌ８、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＣＳＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ１７、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、インターフェロンからなる群から選択される、実施形態１６３に記載の組成物。
１６５．サイトカインが、ＩＬ－１、ＩＬ３、ＩＬ５、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＣＳＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ１７、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、インターフェロンからなる群から選択される、実施形態１６３に記載の組成物。
１６６．ヌクレオチドが、ＡＴＰ、ＡＤＰ、ＵＴＰ、ＵＤＰ、および／またはＵＤＰ－グルコースから選択される、実施形態１６３に記載の組成物。
１６７．組換え核酸が、炎症の恒常性制御因子をコードする配列を含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１６８．炎症の恒常性制御因子がｍＲＮＡの非翻訳領域（ＵＴＲ）の配列である、実施形態１６７に記載の組成物。
１６９．ＵＴＲの配列が、ＲＮＡ結合タンパク質に結合する配列である、実施形態１６８に記載の組成物。
１７０．ＲＮＡ結合タンパク質が非翻訳領域（ＵＴＲ）の配列に結合すると、翻訳が阻害または防止される、実施形態１６８または１６９に記載の組成物。
１７１．ＵＴＲの配列がＷＷＷＵ（ＡＵＵＵＡ）ＵＵＵＷのコンセンサス配列を含み、ＷがＡまたはＵである、実施形態１６９または１７０に記載の組成物。
１７２．組換え核酸がバイシストロニックなベクターで発現される、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１７３．標的細胞が哺乳動物細胞である、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１７４．標的細胞がヒト細胞である、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１７５．標的細胞が病原体によって感染された細胞を含む、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１７６．標的細胞ががん細胞である、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１７７．標的細胞が、リンパ球であるがん細胞である、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１７８．標的細胞が、卵巣がん細胞であるがん細胞である、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１７９．標的細胞が、卵巣膵臓細胞であるがん細胞である、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１８０．標的細胞が、神経膠芽腫細胞であるがん細胞である、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１８１．組換え核酸がＤＮＡである、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１８２．組換え核酸がＲＮＡである、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１８３．組換え核酸がｍＲＮＡである、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１８４．組換え核酸がｃｉｒｃＲＮＡである、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１８５．組換え核酸がｔＲＮＡである、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１８６．組換え核酸がｍｉｃｒｏＲＮＡである、前記実施形態のいずれか１つに記載の組成物。
１８７．実施形態１～１８６のいずれか１つに記載の組成物を含むベクター。
１８８．ウイルスベクターである、実施形態１８７に記載のベクター。
１８９．ウイルスベクターがレトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターである、実施形態１８８に記載のベクター。
１９０．１つまたは複数のポリペプチドをコードする少なくとも１つの核酸配列に作動可能に連結したプロモーターをさらに含む、実施形態１８７～１８９のいずれか１つに記載のベクター。
１９１．ポリシストロニックである、実施形態１８７～１９０のいずれか１つに記載のベクター。
１９２．少なくとも１つの核酸配列のそれぞれが別々のプロモーターに作動可能に連結されている、実施形態１９０または１９１に記載のベクター。
１９３．１つまたは複数の配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）をさらに含む、実施形態１８７～１９２のいずれか１つに記載のベクター。
１９４．１つまたは複数のポリペプチドをコードする少なくとも１つの核酸配列に隣接する５’ＵＴＲおよび／または３’ＵＴＲをさらに含む、実施形態１８７～１９２のいずれか１つに記載のベクター。
１９５．１つまたは複数の調節性領域をさらに含む、実施形態１８７～１９２のいずれか１つに記載のベクター。
１９６．実施形態１～１８６のいずれか１つに記載の組成物の組換え核酸によってコードされるポリペプチド。
１９７．実施形態１～１８６のいずれか１つに記載の組成物、実施形態１８７～１９５のいずれか１つに記載のベクターまたは実施形態１９６に記載のポリペプチドを含む細胞。
１９８．食細胞である、実施形態１９７に記載の細胞。
１９９．幹細胞由来細胞、骨髄性細胞、マクロファージ、樹状細胞、リンパ球、肥満細胞、単球、好中球、ミクログリア、または星状細胞である、実施形態１９７または１９８に記載の細胞。
２００．自家細胞である、実施形態１９７～１９９のいずれか１つに記載の細胞。
２０１．同種異系細胞である、実施形態１９７～１９９のいずれか１つに記載の細胞。
２０２．Ｍ１細胞である、実施形態１９７～２０１のいずれか１つに記載の細胞
２０３．Ｍ２細胞である、実施形態１９７～２０１のいずれか１つに記載の細胞。
２０４．（ａ）実施形態１～１８６のいずれか１つに記載の組成物、実施形態１８７～１９５のいずれか１つに記載のベクター、実施形態１９６に記載のポリペプチド、または実施形態１９７～２０３のいずれか１つに記載の細胞；および（ｂ）薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
２０５．さらなる治療剤をさらに含む、実施形態２０４に記載の医薬組成物。
２０６．さらなる治療剤が、ＣＤ４７アゴニスト、Ｒａｃを阻害する薬剤、Ｃｄｃ４２を阻害する薬剤、ＧＴＰａｓｅを阻害する薬剤、Ｆアクチン解離を促進する薬剤、ＰＦＰへのＰＩ３Ｋ動員を促進する薬剤、ＰＩ３Ｋ活性を促進する薬剤、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸の産生を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ１２活性を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ２５活性を促進する薬剤、ＳＨ３ＢＰ１活性を促進する薬剤およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、実施形態２０４または２０５に記載の医薬組成物。
２０７．薬学的に許容される賦形剤が無血清培地、脂質、またはナノ粒子を含む、実施形態２０４～２０６のいずれか１つに記載の医薬組成物。
２０８．疾患の処置を必要とする対象における疾患を処置する方法であって、対象に実施形態２０４～２０７のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法。
２０９．疾患ががんである、実施形態２０８に記載の方法。
２１０．がんが固形がんである、実施形態２０９に記載の方法。
２１１．固形がんが、卵巣がん、卵巣がんを含む好適ながん、腎臓がん、乳がん、前立腺がん、肝臓がん、脳がん、リンパ腫、白血病、皮膚がん、膵臓がん、結腸直腸がん、肺がんからなる群から選択される、実施形態２１０に記載の方法。
２１２．がんが液性がんである、実施形態２０９に記載の方法。
２１３．液性がんが白血病またはリンパ腫である、実施形態２１２に記載の方法。
２１４．液性がんがＴ細胞リンパ腫である、実施形態２１２に記載の方法。
２１５．疾患がＴ細胞悪性腫瘍である、実施形態２０８に記載の方法。
２１６．対象にさらなる治療剤を投与するステップをさらに含む、実施形態２０８～２１５のいずれか１つに記載の方法。
２１７．さらなる治療剤が、ＣＤ４７アゴニスト、Ｒａｃを阻害する薬剤、Ｃｄｃ４２を阻害する薬剤、ＧＴＰａｓｅを阻害する薬剤、Ｆアクチン解離を促進する薬剤、ＰＦＰへのＰＩ３Ｋ動員を促進する薬剤、ＰＩ３Ｋ活性を促進する薬剤、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸の産生を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ１２活性を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ２５活性を促進する薬剤、ＳＨ３ＢＰ１活性を促進する薬剤およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、実施形態２１６に記載の方法。
２１８．投与するステップが注入するステップまたは注射するステップを含む、実施形態２０８～２１７のいずれか１つに記載の方法。
２１９．投与するステップが固形がんに直接投与するステップを含む、実施形態２０８～２１８のいずれか１つに記載の方法。
２２０．投与するステップが、ｃｉｒｃＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ウイルス－、粒子－、リポソーム－、またはエキソソームベースの送達手順を含む、実施形態２０８～２１９のいずれか１つに記載の方法。
２２１．対象においてＣＤ４＋Ｔ細胞応答またはＣＤ８＋Ｔ細胞応答が誘発される、実施形態２０８～２２０のいずれか１つに記載の方法。
２２２．細胞を調製する方法であって、細胞を実施形態１～１８６のいずれか１つに記載の組成物、実施形態１８７～１９５のいずれか１つに記載のベクター、または実施形態１９６に記載のポリペプチドと接触させるステップを含む方法。
２２３．接触させるステップが形質導入するステップを含む、実施形態２２２に記載の方法。
２２４．形質導入するステップが、化学トランスフェクション、電気穿孔、ヌクレオフェクション、またはウイルス感染を含む、実施形態２２３に記載の方法。
２２５．医薬組成物を調製する方法であって、脂質を実施形態１～１８６のいずれか１つに記載の組成物または実施形態１８７～１９５のいずれか１つに記載のベクターと接触させるステップを含む方法。
２２６．接触させるステップが、脂質ナノ粒子を形成するステップを含む、実施形態２２５に記載の方法。
２２７．医薬組成物を調製する方法であって、抗体を実施形態１～１８６のいずれか１つに記載の組成物または実施形態１８７～１９５のいずれか１つに記載のベクターと接触させるステップを含む方法。
２２８．接触させるステップが脂質ナノ粒子を形成するステップを含む、実施形態２２５に記載の方法。

実施例１．新規キメラ受容体融合タンパク質（ＣＦＰ）構築物の生成
[0696]本セクションでは、新規ＣＦＰの生成向けの有用なＣＦＰ ＥＣＤ、ＴＭ、ＩＣＤおよび抗原結合ドメインを特定するための例示的な設計について記載する。要約すると、多数の潜在的な候補タンパク質を、増強された食作用特性およびそれらのそれぞれの食作用に関連する細胞内シグナル伝達についてスクリーニングする。次いで、有用なドメインを、新規ＣＦＰの生成に使用する。スクリーニングを２つの部分に分けることができる：Ａ．ＰＲドメインのスクリーニング；Ｂ．細胞外抗原結合ドメインのスクリーニング。

ＰＲドメインのスクリーニング：
[0697]５，８００の原形質膜タンパク質を、それらの食作用の可能性についてスクリーニングする。Ｊ７７４マクロファージ細胞に、５８００の原形質タンパク質のライブラリーを一過性にトランスフェクトする。原形質膜の種々の潜在機能を評価するために、ハイスループット多重アッセイ（ロボットハンドリングを備える６ウェルプレートアッセイのセットアップから３８４ウェルプレートアッセイまで）をセットアップする。例示的なアッセイには、それらに限定されないが、食作用アッセイ、サイトカイン産生アッセイ、インフラマソーム活性化アッセイ、およびｉＮＯＳ活性化アッセイが含まれる。例示的な簡易方法について、以下の段落に記載する。各方法のバリエーションも使用され、当業者であれば理解される。各方法のバリエーションも使用され、当業者であれば理解される。試験された例示的な細胞内シグナル伝達ドメインには、それらに限定されないが、以下が含まれる：ＣＤ４０－ＦｃＲγ；ＦｃＲγ－ＣＤ４０；ＮＬＲＰ３；ＦｃＲγ－ＳＨ２－プロカスパーゼ；ＦｃＲγ－Ｍｙｄ８８；ＦｃＲγ－ＩＦＮ受容体；ＦｃＲ－ＴＮＦＲ１；ＦｃＲγ－ＴＮＦＲ２；ＦｃＲ－ＡＩＭ２；ＦｃＲγ－ＴＲＩＦＮ；ＦｃＲγ－プロカスパーゼ；ＴＲＩＦＣ；ＲＩＧ１；ＭＤＡ５；ＴＢＫ；ＣＤ６４；ＣＤ１６Ａ；ＣＤ８９；ＦｃＲε；ＳＩＲＰβ；（２つの連続する細胞内ドメインはハイフンで結ばれる用語として表される、例えば、ＦｃＲγ－Ｍｙｄ８８とは、シグナル伝達ドメイン１としてＦｃＲγ細胞内シグナル伝達ドメイン；およびシグナル伝達ドメイン２としてＭｙｄ８８細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを指す）。スクリーニングされる細胞外リンカードメインには、それらに限定されないが、ＣＤ６４、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ８９、ＳＩＲＰα、ＦｃＲε、ＣＤ８ヒンジが含まれる。試験される膜貫通ドメインには、それらに限定されないが、ＣＤ８、ＣＤ６４、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ８９、ＦｃＲε、ＳＩＲＰα、ＴＮＦＲ１およびＣＤ４０が含まれる。ＭＤＡ５ドメインもスクリーニングされた。

食作用アッセイ：
[0698]直径１ｎｍ、５ｎｍまたは１０ｎｍの範囲の抗原連結シリカまたはポリステレンビーズを、マクロファージのスクリーニングに使用した。不活性ビーズを、支持脂質二重層にコーティングし、抗原を脂質二重層にライゲートする。Ｊ７７４マクロファージ細胞株を調製し、各細胞株はクローニングした組換え原形質膜タンパク質を発現する。組換え原形質膜タンパク質はまた、蛍光タグを発現することができる。細胞株を、熱不活化血清および抗生物質（ペニシリン／ストレプトマイシン）を含む完全ＲＰＭＩ培地で維持および増殖する。アッセイ当日、細胞を、６ウェルプレートにウェルあたり１×１０＾６細胞／ｍｌの密度で、または１２または２４ウェルプレートに相対比率で、プレーティングし、２～６時間インキュベートする。次いで、細胞をリン酸緩衝食塩水で１回洗浄し、ビーズを血清枯渇または補体枯渇栄養培地に添加する。ビーズの添加３０分後および２時間後に、光学顕微鏡法で細胞を可視化する。免疫蛍光反応は、タグ付き抗体を使用して実施することができ、蛍光共焦点顕微鏡法を使用して、貪食時の細胞タンパク質の相互作用と共局在を検出する。信頼水準は、ダンの多重比較補正によるクラスカル－ウォリス検定によって決定する。

[0699]一部の例では、色素添加腫瘍細胞をマクロファージ細胞株に供給し、食作用を顕微鏡法によって評価する。
サイトカイン産生：
[0700]マクロファージ細胞株を上のように培養する。一アッセイでは、原形質膜タンパク質を発現するＪ７７４細胞株それぞれをマルチウェルにプレーティングし、抗原連結ビーズで曝露し、４時間目および２４時間目に上清を採取することによってサイトカイン産生をアッセイした。サイトカインを、ＥＬＩＳＡによって上清からアッセイする。別の画分では、ビーズとのインキュベーションの４時間後および２４時間後に細胞を採取し、サイトカインの検出のためにフローサイトメトリーを実施する。いずれの場合にも、多重のサイトカインを多重フォーマットでアッセイするが、このサイトカインは、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＴＮＦ－α、ＧＭＣＳＦ、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ－１０、ＭＩＰ１－αおよびＭＩＰ－２から選択することができる。マクロファージ炎症性サイトカインアレイキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用する。

[0701]炎症性遺伝子およびサイトカイン活性化の細胞内シグナル伝達経路を、ＭＡＰキナーゼのリン酸化、ＪＮＫ、Ａｋｔシグナル伝達経路、ＳＴＡＴ－１のリン酸化および活性化を含むインターフェロン活性化経路のウエスタンブロット解析によって特定することができる。

インフラマソーム活性化アッセイ：
[0702]ＮＬＲＰ３インフラマソームの活性化を、ＩＬ－１産生の増加に関するＥＬＩＳＡ検出およびウエスタンブロットによる検出カスパーゼ－１活性化によってアッセイし、その結果、プロカスパーゼの切断を検出して、より短いカスパーゼを生成する。マイクロウェルプレート多重セッティングでは、カスパーゼ１活性化の高速読取りにＣａｓｐａｓｅ－Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用する。

ｉＮＯＳ活性化アッセイ：
[0703]酸化的バースト電位の活性化を、蛍光アッセイＮＯＳ活性アッセイキット（ＡｂＣＡＭ）を使用してｉＮＯＳ活性化およびＮＯ産生によって測定する。

がん細胞殺作用アッセイ：
[0704]Ｒａｊｉ Ｂ細胞を、がん抗原提示細胞として使用する。Ｒａｊｉ細胞を、がん細胞の全細胞粗抽出物とインキュベートし、Ｊ７７４マクロファージ細胞株と共インキュベートする。マクロファージは、感染の１時間後に細胞を破壊することができ、これは顕微鏡法よって検出しても細胞死アッセイによって検出してもよい。

高親和性抗原結合ドメインのスクリーニング：
[0705]がんリガンドを、抗体の軽鎖および重鎖の可変ドメインのスクリーニングに供して、ＣＦＰ用の細胞外結合ドメインを生成する。ヒトの全長抗体またはｓｃＦｖライブラリーをスクリーニングする。また、潜在的なリガンドを、ラマにおける新規免疫グロブリン結合ドメインの開発、および単一ドメイン抗体の調製向けに、ラマを免疫するために使用する。

[0706]次いで、スクリーニングから特定された特定の有用なドメインを逆転写し、レンチウイルス発現ベクターにクローニングして、ＣＦＰ構築物を生成する。ＣＦＰをコードする組換え核酸は、スクリーニングから生成された高度食作用受容体の細胞外、ＴＭおよび細胞質の各領域からの１つまたは複数のドメインを使用して生成することができる。要約すると、炎症促進性サイトカイン産生およびインフラマソーム活性化の高活性化因子を示す原形質膜受容体が特定される。バイオインフォマティクス研究を実施して、細胞外活性化ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば特定のキナーゼ活性化部位、ＳＨ２動員部位を含む機能的ドメインを特定する。次いで、これらスクリーニングした機能的ドメインを、新規ＣＦＰを生成するためのモジュラー構築物にクローニングする。これらは候補ＣＦＰであり、これらのキメラ構築物のそれぞれを、食作用の増強、サイトカインおよびケモカインの産生、ならびに／またはｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍細胞殺作用について試験する。微粒子ベースの食作用アッセイを使用して、食作用の変化を調べた。要約すると、ストレプトアビジン結合蛍光ポリスチレン微粒子（直径６μｍ）を、ビオチン化組換え発現および精製されたがんリガンドとコンジュゲートさせる。新規ＣＦＰを発現する骨髄性細胞を、リガンドコーティング微粒子と１～４時間インキュベートし、フローサイトメトリーを使用して食作用の量を解析および定量化した。次いで、デザイナーＣＦＰのプラスミドまたはレンチウイルスの構築物を調製し、がん細胞溶解についてマクロファージ細胞において試験する。

[0707]ＣＦＰを含有する例示的な機能的ドメインについて、以下のセクションで説明する。
実施例２．スカベンジャー受容体ＥＣＤ、ＴＭおよびＩＣＤを有する組換えＣＦＰの生成（ＳＲ－ＣＡＲ）
[0708]本出願の目的のために設計されたＣＦＰはモジュラーであり、標的、例えば、ＣＤ５に結合することができる、ｓｃＦｖ、またはＦａｂ領域またはＶ_ＨＨドメインから主として構成される細胞外標的結合ドメイン、短いヒンジ、膜貫通ドメイン、および１つまたは２つ以上のシグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを有する（図２Ａ～２Ｃ）。さらに、細胞外ドメインを、単一または複数の標的に結合するように設計することができる（図３）。食作用スカベンジャー受容体の例示的な設計を図４Ａおよび４Ｂに例示する。ＣＦＰをコードする組換え核酸を、以下のように構築する：組換えタンパク質の膜局在化シグナルをコードするシグナルペプチド配列を、細胞外抗原結合ドメインのコード配列の上流に配置する。次いで、細胞外抗原結合ｓｃＦｖドメインをコードする核酸配列を合成し、シグナルペプチド配列の下流で発現ベクターにクローニングする。ＣＦＰは、細胞外ドメイン、ＴＭドメインをコードする配列から構成しており、選択のスカベンジャー受容体の細胞内ドメインを、ｓｃＦｖの３’末端にて、好ましくはｓｃＦｖの３’末端とスカベンジャー受容体ＥＣＤの５’末端との合間にリンカーペプチド配列にて、ライゲートする。例示的なリンカーペプチドはＧＧＧＳであり、任意選択で、リンカーは、四量体の２つ以上の繰返しを有する配列である。発現すると、スカベンジャー受容体ＴＭドメインが細胞膜へと組み込まれる。

[0709]ＳＲ－ＣＡＲのレンチウイルス構築物を、形質導入研究で使用するために調製および精製する。
実施例３．組換えＣＦＧ（ＳＲ－ＣＡＲ）の発現および機能解析
[0710]ＣＦＰの機能を試験するために、ヒトマクロファージに、リポフェクタミンを使用してｐＣＭＶ－ＳＲＣＡＲを形質導入する。並行して、対照細胞に空のベクターをトランスフェクトする。４８時間での細胞の安定化の後、細胞を食作用アッセイに供する。図４Ｃに、ｉｎ ｖｉｔｒｏ食作用アッセイにおける予想される結果を示す。対照の空のベクターまたはＳＲ－ＣＡＲを形質導入されるヒト初代マクロファージを色素添加腫瘍細胞と共培養し、フローサイトメトリーを使用して食作用を定量化する。ＳＲ ＣＡＲプラスミドを有する細胞は、対照細胞に勝る食作用の増加を示す。

[0711]図４Ｄに、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞溶解アッセイにおける予想される結果を示す。対照ベクターまたはＳＲ－ＣＡＲを形質導入されるヒト初代マクロファージを、異なるＥ：Ｔ比で、ルシフェラーゼを発現する腫瘍細胞と共培養し、ルシフェラーゼアッセイを使用して比溶解を定量化する。

[0712]図４Ｅに、マウス異種移植モデルにおける予想される結果を示す。０日目に、ＮＳＧマウスにルシフェラーゼを発現する腫瘍細胞を注射した。マウスは未処置であるか、またはＳＲ－ＣＡＲを形質導入されるヒト初代マクロファージを注射するかいずれかであり、生存曲線を作成する。

実施例４．第２の細胞内ドメイン－炎症応答ドメインを有する組換えＣＦＰタンパク質の生成（ＩＲ－ＣＡＲ）
[0713]本実施例では、細胞外ｓｃＦｖドメイン、ヒンジを備えるリンカー、ＣＤ８膜貫通ドメイン、細胞内食作用受容体ドメイン、およびさらに炎症促進性タンパク質からの別の細胞内炎症応答（ＩＲ）ドメインを有する例示的なＰＦＰ設計を示す（図５Ａ～５Ｂ）。ＰＦＰをコードする組換え核酸を、以下のように構築する：組換えタンパク質の膜局在化シグナルをコードするシグナルペプチド配列を、細胞外抗原結合ドメインのコード配列の上流に配置する。次いで、細胞外抗原結合ｓｃＦｖドメインをコードする核酸配列を合成し、シグナルペプチド配列の下流で発現ベクターにクローニングする。ＰＲサブユニットは、ＣＤ８受容体の細胞外および膜貫通ドメインをコードする配列から構成される。ｓｃＦｖとＣＤ８領域はヒンジによって接続されており、細胞外ドメインの近位にあるＣＤ８領域が寄与する。ＣＤ８ＴＭコード領域の３’末端を、選択の食作用受容体の細胞内ドメインにライゲートする。細胞内食作用ドメインのコード配列の３’末端に、炎症促進性細胞内応答ドメインの５’末端をライゲートする。

[0714]試験するために、組換え構築物をレンチウイルス発現ベクターに挿入し、細胞発現に使用するために精製する。
実施例５．組換えＣＦＰの発現および機能解析（ＩＲ－ＣＡＲ）
[0715]対照の空のベクターまたはＣＦＰ（Ｍ１－ＣＡＲ）を形質導入されるヒト初代骨髄性細胞を、標的腫瘍細胞と共培養する。図５Ｃに、色素添加標的腫瘍細胞の相対食作用に関する予想される結果を示す。図５Ｄに、Ｍ１－ＣＡＲ骨髄性細胞が標的腫瘍細胞と共培養される場合のサイトカインの発現に関する予想される結果を示す。ＥＬＩＳＡによるサイトカインプロファイリングは、ベクター対照と比較して炎症促進性のサイトカインおよびケモカインの分泌の増加を示す。図５Ｅに、ベクター対照と比較してＭ１状態マーカー発現の増加を示し、同様に、ｉＮＯＳ発現（細胞内）が上方調節された、表面抗原（ＭＨＣＩＩ、ＣＤ８０、ＣＤ８６）のフローサイトメトリーに関する予想される結果を示す。図５Ｆと５Ｇに予想される結果を指示する。

実施例６．インテグリン活性化ドメインを有する組換えＣＦＰの生成（インテグリン－ＣＡＲ）
[0716]本実施例では、細胞外ｓｃＦｖドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内食作用ドメイン、さらに細胞内インテグリン活性化ドメインを備える例示的な設計を示す（図６Ａ、６Ｂ）。ＰＦＰをコードする組換え核酸を、以下のように構築する：組換えタンパク質の膜局在化シグナルをコードするシグナルペプチド配列を、細胞外抗原結合ドメインのコード配列の上流に配置する。次いで、細胞外抗原結合ｓｃＦｖドメインをコードする核酸配列を合成し、シグナルペプチド配列の下流で発現ベクターにクローニングする。ＰＳＲサブユニットを、ＣＤ８受容体の細胞外および膜貫通ドメインをコードする配列から構成する。ｓｃＦｖとＣＤ８領域はヒンジによって接続されており、細胞外ドメインの近位にあるＣＤ８領域が寄与する。ＣＤ８ＴＭコード領域の３’末端を、選択の食作用受容体の食作用ドメインにライゲートする。細胞内食作用ドメインのコード配列の３’末端に、Ｐ－セレクチン細胞内インテグリン活性化ドメインの５’末端をライゲートする。組換え核酸の基本設計を図５Ａに示す。例示的な受容体の構造レイアウトのダイヤグラム図示を図５Ｂに示す。図５Ｂに、インテグリンが内在性であり、かつ活性化時にクラスターを形成する場合の、インテグリン活性化に関する図形表現を示す。マクロファージで発現される場合、ｓｃＦｖが腫瘍特異的抗原に結合することは、食作用シグナル伝達の活性化ならびにインテグリンの活性化も招く。このことは、より強力な食作用ならびにマクロファージ輸送の改善も招く。

[0717]構築物をレンチウイルスベクターに挿入し、機能研究のために精製する。
実施例７．組換えインテグリン－ＣＡＲの発現および機能解析。
[0718]対照の空のベクターまたはインテグリン－ＣＡＲを形質導入されるヒト初代マクロファージを、標的腫瘍細胞と共培養する。図５Ｃに、対照マクロファージと比較した、インテグリン－ＣＡＲ形質導入マクロファージによる食作用の増加に関する予想される結果を示す。図５Ｄに、インテグリン－ＣＡＲを発現する細胞による腫瘍細胞の溶解の増加に関する予想される結果を示す。図５Ｅに、対照マクロファージと比較した、インテグリン－ＣＡＲ形質導入マクロファージの遊走および腫瘍浸潤の増加に関する予想される結果を示す。図５Ｆに、インテグリン－ＣＡＲ形質導入マクロファージでの処置後、または無処置対照での腫瘍のマウス異種移植モデルにおける予想される生存曲線を示す。

実施例８．ＳＲＥＣ－１交差提示ドメインを有する組換えＣＦＰの生成
[0719]本実施例では、細胞外ｓｃＦｖドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内食作用ドメイン、さらにはシグナル伝達ドメインを備える、ＣＦＰを発現するベクターの例示的な設計。図６Ａに、ＳＲＥＣおよび抗原交差提示を含む細胞内シグナル伝達経路の概略図ダイヤグラムを提供する。ＣＦＰをコードする組換え核酸を、以下のように構築する：組換えタンパク質の膜局在化シグナルをコードするシグナルペプチド配列を、細胞外抗原結合ドメインのコード配列の上流に配置する。次いで、細胞外抗原結合ｓｃＦｖドメインをコードする核酸配列を合成し、シグナルペプチド配列の下流で発現ベクターにクローニングする。ＰＲサブユニットを、食作用受容体の細胞外および膜貫通ドメインをコードする配列から構成する。ＴＭコード領域の３’末端を、食作用受容体の食作用ドメインにライゲートする。細胞内食作用ドメインのコード配列の３’末端に、交差提示のための細胞内シグナル伝達ドメインの５’末端をライゲートする。例示的な受容体の構造レイアウトのダイヤグラム図示を図６Ｂに示す。図６Ｃ～６Ｆに、先に記載のように予想される機能特性を示す。

実施例９．対象からの骨髄性細胞およびマクロファージ細胞の調製のための製造プロトコル
ＰＢＭＣからの骨髄性細胞／マクロファージ細胞の分離：
[0720]末梢血単核細胞を、Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ １０７７（Ｓｉｇｍａ）を使用して密度遠心分離によって、正常なドナーのバフィーコートから分離する。洗浄後、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ ＧＭＰグレードのＣＤ１４マイクロビーズおよびＬＳ分離磁気カラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、単核細胞画分からＣＤ１４＋単球を分別する。要約すると、細胞を、ＰＥＡ緩衝液（リン酸緩衝食塩水［ＰＢＳ］に加えて２．５ｍｍｏｌ／Ｌエチレンジアミン四酢酸［ＥＤＴＡ］およびヒト血清アルブミン［Ａｌｂｕｒｅｘ ２０％の０．５％最終体積、Ｏｃｔｏｐｈａｒｍａ］）に適当な濃度へと再懸濁し、製造元の使用説明書に従ってＣｌｉｎｉＭＡＣＳ ＣＤ１４ビーズとインキュベートし、次いで洗浄し、磁化ＬＳカラムに通す。洗浄後、精製単球を、消磁カラムから溶出し、洗浄し、培養用関連培地に再懸濁する。白血球アフェレーシスからのＣＤ１４＋細胞の分離：ＰＢＭＣを、本研究への参加にインフォームドコンセントを与えられた肝硬変ドナーからの白血球アフェレーシスによって採取する。単核細胞（ＭＮＣ）の末梢血の白血球アフェレーシスを、滅菌採取によるＯｐｔｉａアフェレーシスシステムを使用して実施する。ＭＮＣの標準採取プログラムを使用し、２．５血液体積を処理する。ＣＤ１４細胞の分離を、ＧＭＰ遵守の機能的閉鎖システム（ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ Ｐｒｏｄｉｇｙシステム、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して実施する。要約すると、白血球アフェレーシス産物を細胞計数のためにサンプリングし、アリコートを粗分離フローサイトメトリー用に取る。単球（ＣＤ１４＋）のパーセンテージおよび絶対細胞数を決定し、必要に応じて、分別に必要な基準（≦２０×１０^９個の総白血球；＜４００×１０^６個の白血球／ｍＬ；≦３．５×１０^９個のＣＤ１４細胞、体積５０～３００ｍＬ）に適合するように体積を調整する。ＣＤ１４細胞の分離および分別を、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳＣ Ｄ１４マイクロビーズ（医療機器クラスＩＩＩ）、ＴＳ５１０チュービングセット、およびＬＰ－１４プログラムを備えたＣｌｉｎｉＭＡＣＳ Ｐｒｏｄｉｇｙを使用して実施する。プロセス終了時に、選別ＣＤ１４＋陽性単球を、医薬品グレードの０．５％ヒトアルブミン（Ａｌｂｕｒｅｘ）を含有するＰＢＳ／ＥＤＴＡ緩衝液（ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ緩衝液、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）で洗浄し、次いで、培養向けにＴｅｘＭＡＣＳ（またはコンパレータ）培地に再懸濁する。

細胞計数と純度：
[0721]総ＭＮＣおよび分離単球画分の細胞計数を、Ｓｙｓｍｅｘ ＸＰ－３００自動解析器（Ｓｙｓｍｅｘ）を使用して実施する。Ｓｙｓｍｅｘは単球の数を一貫して過小評価するので、マクロファージ数の評価を、ＴｒｕＣｏｕｎｔ管（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を備えるフローサイトメトリーによって実施し、絶対細胞数を決定する。分別の純度を、ヒト白血球（ＣＤ４５－ＶｉｏＢｌｕｅ、ＣＤ１５－ＦＩＴＣ、ＣＤ１４－ＰＥ、ＣＤ１６－ＡＰＣ）に対する抗体のパネルと共にフローサイトメトリー（ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して評価し、好中球混入の量（ＣＤ４５ｉｎｔ、ＣＤ１５ｐｏｓ）を決定することによって、産物の品質を評価する。

細胞培養 － 健康なドナー試料を用いた培養物の開発
[0722]マクロファージ分化用の最適な培養培地を調査し、３候補について細胞産物に使用して試験する。加えて、治療用途の派生骨髄性細胞およびマクロファージに及ぼす単球凍結保存の影響について調べる。機能アッセイを行って、骨髄性細胞およびマクロファージの食作用能力、ならびにさらなる極性化のためのそれらの能力、ならびに本開示の他の場所に記載の食作用の可能性を定量化する。

対象試料によるフルスケールプロセス検証
[0723]Ｐｒｏｄｉｇｙ分離から白血球アフェレーシスから培養された単球を、ＧＭＰグレードＴｅｘＭＡＣＳ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）と１００ｎｇ／ｍｌのＭ－ＣＳＦを含む培養バッグ（ＭＡＣＳ ＧＭＰ分化バッグ、ミルテニー）中で、単球２×１０^６個毎ｃｍ^２および毎ｍＬで培養する。単球を、１００ｎｇ／ｍＬ ＧＭＰ遵守の組換えヒトＭ－ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）と培養する。細胞を、３７℃にて、５％ＣＯ_２の加湿雰囲気下で７日間培養する。体積５０％の培地補充を、培養中（２日目と４日目）に２回実施するが、培養培地の５０％を除去し、次いで、２００ｎｇ／ｍＬ Ｍ－ＣＳＦをサプルメントした新鮮な培地を供給する（最終濃度を１００ｎｇ／ｍＬに戻すため）。

細胞採取：
[0724]正常なドナー由来マクロファージの場合、細胞を、Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｇｉｂｃｏ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）およびパステットを使用して、７日目にウェルから取り出す。細胞をＰＥＡ緩衝液に再懸濁し、計数し、次いで、フローサイトメトリー用に試験毎に概１×１０^６個の細胞を染色する。白血球アフェレーシス由来マクロファージを、血清由来の医薬品グレード０．５％ヒトアルブミン（ＨＡＳ；Ａｌｂｕｒｅｘ）を含有するＰＢＳ／ＥＤＴＡ緩衝液（ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ緩衝液、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して７日目に培養バッグから取り出す。採取細胞を、２つの認可製品：０．５％ヒトアルブミン（Ａｌｂｕｒｅｘ）を含む注入用０．９％食塩水（Ｂａｘｔｅｒ）、から構成される賦形剤に再懸濁する。

フローサイトメトリー特性評価：
[0725]単球およびマクロファージの細胞表面マーカーの発現を、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）またはＭＡＣＳＱｕａｎｔ １０（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）のフローサイトメーターのいずれかを使用して解析する。各試料について概２０，０００のイベントを取得する。新たに分離される７日目の成熟細胞における白血球マーカーの細胞表面発現を、細胞を特定の抗体とインキュベートすることによって実施する（最終希釈１：１００）。細胞をＦｃＲブロック（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）と５分間インキュベートし、次いで、抗体カクテルと４℃で２０分間インキュベートする。細胞をＰＥＡで洗浄し、死細胞排除色素ＤＲＡＱ７（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を１：１００で添加する。細胞を以下のように様々な表面マーカーに染色する：ＣＤ４５－ＶｉｏＢｌｕｅ、ＣＤ１４－ＰＥまたはＣＤ１４－ＰｅｒＣＰ－Ｖｉｏ７００、ＣＤ１６３－ＦＩＴＣ、ＣＤ１６９－ＰＥおよびＣＤ１６－ＡＰＣ（全てＭｉｌｔｅｎｙｉ）、ＣＣＲ２－ＢＶ４２１、ＣＤ２０６－ＦＩＴＣ、ＣＸＣＲ４－ＰＥおよびＣＤ１１５－ＡＰＣ（全てＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ならびに２５Ｆ９－ＡＰＣおよびＣＤ１１５－ＡＰＣ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）。単球とマクロファージの両方をゲーティングして、前方散乱と側方散乱およびＤＲＡＱ７死細胞弁別器（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を使用して破片、ダブレットおよび死細胞を除外し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ）を使用して解析する。最初の詳細な表現型から、単球からの機能的マクロファージの発生を定義したリリース基準（ＣＤ４５－ＶＢ／ＣＤ２０６－ＦＩＴＣ／ＣＤ１４－ＰＥ／２５Ｆ９ ＡＰＣ／ＤＲＡＱ７）としてパネルを開発する。マクロファージを、２５Ｆ９とＣＤ２０６の両方について、０日目の単球のレベルよりも５倍高い平均蛍光強度（ＭＦＩ）を有すると判定する。ＣＣＲ２－ＢＶ４２１／ＣＤ１６３－ＦＩＴＣ／ＣＤ１６９－ＰＥ／ＣＤ１４－ＰｅｒＣＰ－Ｖｉｏ７００／ＣＤ１６－ＡＰＣ／ＤＲＡＱ７）から構成される、拡張パネルの一部として他のマーカーを評価した第２のパネルを開発するが、細胞産物のリリース基準の一部としては使用しない。

[0726]バフィーコートＣＤ１４細胞からの単球とマクロファージの両方を、酸性エンドソームに取り込まれた場合にのみ蛍光を発するｐＨＲｏｄｏビーズを使用して、食作用取込みについて試験する。要約すると、単球またはマクロファージを、ｐＨＲｏｄｏ 大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）生体粒子（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）１～２ｕＬと１時間培養し、次いで、培地を取り除き、細胞を洗浄して非食作用粒子を除去する。食作用について、ＥＶＯＳ顕微鏡（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して評価し、画像をキャプチャし、ＩｍａｇｅＪソフトウェア（ＮＩＨフリーウェア）を使用してビーズの細胞取込みを定量化する。定義された分化マクロファージに極性化する能力を、７日目のマクロファージをＩＦＮγ（５０ｎｇ／ｍＬ）またはＩＬ－４（２０ｎｇ／ｍＬ）で４８時間処理して、Ｍ１またはＭ２表現型（または、それぞれ、Ｍ［ＩＦＮγ］対Ｍ［ＩＬ－４］）への極性化を誘導することによって調べる。４８時間後、細胞を、ＥＶＯＳ明視野顕微鏡法によって視覚化し、次いで前のように採取し、表現型を決定する。生成後のおよび炎症性刺激に応答するマクロファージのサイトカインおよび増殖因子の分泌プロファイルに関して、さらなる解析を行う。マクロファージを、前のように健康なドナーのバフィーコートから生成し、未処理で放置するか、以下を用いて刺激するか、いずれかである：炎症肝臓に存在する状態を模倣するようにＴＮＦα（５０ｎｇ／ｍＬ、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）およびポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃ、ＴＬＲ３を結合するウイルスホモログ、１ｇ／ｍＬ、Ｓｉｇｍａ）、または、最大のマクロファージ活性化を生み出すようにリポ多糖（ＬＰＳ、１００ｎｇ／ｍＬ、Ｓｉｇｍａ）に加えてＩＦＮγ（５０ＩＵ／ｍＬ、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）。７日目のマクロファージを一晩インキュベートし、上清を採取し、遠心沈殿して破片を除去し、次いで試験まで－８０℃で保存する。Ｍａｇｐｉｘマルチプレックス酵素結合イムノアッセイプレートリーダー（ＢｉｏＲａｄ）で、２７プレックスのヒトサイトカインキットおよび９プレックスマトリックスのメタロプロテアーゼキットのランを使用して、セクレトーム分析を実行する。

産生物の安定性：
[0727]ＰＢＳ／ＥＤＴＡ緩衝液；０．５％ＨＡＳ（Ａｌｂｕｒｅｘ）を有するＰＢＳ／ＥＤＴＡ緩衝液、０．９％食塩水単独または０．５％ＨＡＳを有する食塩水を含めて、プロセス開発過程中の種々の賦形剤を試験する。０．５％ＨＡＳ賦形剤を有する０．９％食塩水（Ｂａｘｔｅｒ）は、最適な細胞生存率および表現型を維持することが見られる（データ示さず）。採取後の肝硬変ドナーからのマクロファージの安定性について、３通りのプロセス最適化ランにおいて調査し、より限定された範囲の時点をプロセス検証ランにおいて評価する（ｎ＝３）。採取および賦形剤（注入用０．９％食塩水、０．５％ヒト血清アルブミン）での再懸濁の後に、バッグを周囲温度（２１～２２℃）で保存し、試料を、採取後０、２、４、６、８、１２、２４、３０および４８時間目に取る。リリース基準抗体パネルを、各試料でランし、生存率と０日目からの平均倍率変化を、２５Ｆ９とＣＤ２０６の幾何学的ＭＦＩから測定する。

統計解析：
[0728]結果を平均±ＳＤとして表す。差の統計的有意性は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６を使用して対になっていない両側ｔ－検定で可能であれば評価する。Ｐ値が＜０．０５である場合、結果は統計的に有意であるとする。

実施例１０．ＣＤ５－ＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ ＣＦＰ構築物
[0729]本実施例では、ＣＤ５標的ＣＦＰを、既知の分子生物学技法を使用して構築した。ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５に結合する軽鎖可変ドメインに連結した重鎖可変ドメインを含有するｓｃＦｖに融合されたシグナルペプチドを含む細胞外ドメインを有し、ＣＤ８α鎖ヒンジおよびＣＤ８α鎖ＴＭドメインに短いリンカーを介して付着する。ＴＭドメインは、細胞質ゾル末端でＦｃＲγ細胞質ゾル部分、およびＰＩ３Ｋ動員ドメインと融合される。構築物を、蛍光マーカーおよび薬物（アンピシリン）耐性を有するベクター中で調製し、細菌宿主にトランスフェクトすることによって増幅した。配列を下に提供する：
ＣＤ５－ＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ
ＭＷＬＱＳＬＬＬＬＧＴＶＡＣＳＩＳＥＩＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＶＲＩＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＨＴＧＥＰＴＹＡＤＳＦＫＧＲＦＴＦＳＬＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＩＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＴＲＲＧＹＤＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＴＬＩＹＲＡＮＲＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＹＥＤＦＧＩＹＹＣＱＱＹＤＥＳＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＳＧＧＧＧＳＧＡＬＳＮＳＩＭＹＦＳＨＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＲＲＬＫＩＱＶＲＫＡＡＩＴＳＹＥＫＳＤＧＶＹＴＧＬＳＴＲＮＱＥＴＹＥＴＬＫＨＥＫＰＰＱＧＳＧＳＹＥＤＭＲＧＩＬＹＡＡＰＱＬＲＳＩＲＧＱＰＧＰＮＨＥＥＤＡＤＳＹＥＮＭ（配列番号１４）
[0730]ｍＲＮＡを、適切なプライマーを使用して、精製プラスミドのｉｎ ｖｉｔｒｏ逆転写によって生成した。精製ｍＲＮＡを、発現解析向けに細胞株に形質導入した。

実施例１１．ＨＥＲ２－ＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ ＣＦＰ構築物
[0731]本実施例では、ＨＥＲ２標的ＣＦＰを、既知の分子生物学技法を使用して構築した。ＣＦＰは、標的細胞上のＨＥＲ２に結合する軽鎖可変ドメインに連結した重鎖可変ドメインを含有するｓｃＦｖに融合されたシグナルペプチドを含む細胞外ドメインを有し、ＣＤ８α鎖ヒンジおよびＣＤ８α鎖ＴＭドメインに短いリンカーを介して付着する。ＴＭドメインは、先の実施例におけるように、細胞質ゾル末端でＦｃＲγ細胞質ゾル部分、およびＰＩ３Ｋ動員ドメインと融合される。配列を下に提供する：
ＨＥＲ２－ＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ
ＭＷＬＱＳＬＬＬＬＧＴＶＡＣＳＩＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＳＧＧＧＧＳＧＡＬＳＮＳＩＭＹＦＳＨＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＲＲＬＫＩＱＶＲＫＡＡＩＴＳＹＥＫＳＤＧＶＹＴＧＬＳＴＲＮＱＥＴＹＥＴＬＫＨＥＫＰＰＱＧＳＧＳＹＥＤＭＲＧＩＬＹＡＡＰＱＬＲＳＩＲＧＱＰＧＰＮＨＥＥＤＡＤＳＹＥＮＭ（配列番号１５）
実施例１２．ＣＤ５－ＦｃＲ－ＣＤ４０ＣＦＰ構築物
[0732]本実施例では、ＣＤ４０配列を含む細胞内ドメインを有する、ＣＤ５標的ＣＦＰを、既知の分子生物学技法を使用して構築した。ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５に結合する軽鎖可変ドメインに連結した重鎖可変ドメインを含有するｓｃＦｖに融合されたシグナルペプチドを含む細胞外ドメインを有し、ＣＤ８α鎖ヒンジおよびＣＤ８α鎖ＴＭドメインに短いリンカーを介して付着する。ＴＭドメインは、細胞質ゾル末端でＦｃＲγ細胞質ゾル部分と、これに続いて、ＣＤ４０細胞質ゾル部分と、融合される。配列を下に提供する：
ＣＤ５－ＦｃＲ－ＣＤ４０
ＭＷＬＱＳＬＬＬＬＧＴＶＡＣＳＩＳＥＩＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＶＲＩＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＨＴＧＥＰＴＹＡＤＳＦＫＧＲＦＴＦＳＬＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＩＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＴＲＲＧＹＤＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＴＬＩＹＲＡＮＲＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＹＥＤＦＧＩＹＹＣＱＱＹＤＥＳＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＳＧＧＧＧＳＧＡＬＳＮＳＩＭＹＦＳＨＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＲＬＫＩＱＶＲＫＡＡＩＴＳＹＥＫＳＤＧＶＹＴＧＬＳＴＲＮＱＥＴＹＥＴＬＫＨＥＫＰＰＱＫＫＶＡＫＫＰＴＮＫＡＰＨＰＫＱＥＰＱＥＩＮＦＰＤＤＬＰＧＳＮＴＡＡＰＶＱＥＴＬＨＧＣＱＰＶＴＱＥＤＧＫＥＳＲＩＳＶＱＥＲＱ（配列番号１６）
実施例１３．抗ＣＤ５および抗ＨＥＲ２ ＣＦＰの発現
[0733]本実施例では、単球細胞株ＴＨＰ－１からの細胞に、個々の抗ＣＤ５ ＣＦＰ（ＣＤ５ ＣＡＲ）構築物であって、細胞内ドメインを備えないか（ＩＣＤ無し）；またはＣＤ４０シグナル伝達ドメインもしくはＦｃＲシグナル伝達ドメインを有する細胞内ドメイン（ＩＣＤ）を備える；またはＰＩ３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）動員シグナル伝達ドメインを備える；または第１のＣＤ４０シグナル伝達ドメインおよびＦｃＲγ細胞内ドメインからの第２のシグナル伝達ドメインまたはその逆を備える、第１のＦｃＲγシグナル伝達ドメインおよび第２のＰＩ３Ｋ動員シグナル伝達ドメインまたはその逆を備える、いずれかである個々の抗ＣＤ５ ＣＦＰ（ＣＤ５ ＣＡＲ）構築物を電気穿孔し、そして、当該ＣＡＲ構築物発現を、図８に指示するようにフローサイトメトリーによって決定した。
いずれの場合でも、９５％超の細胞の堅牢な発現が観察された。図９に、初代ヒト骨髄性細胞におけるこれら構築物の一部の発現を示す。表６に、図中の構築物のドメインについて記載する。

実施例１４．食作用および活性化アッセイ
[0734]ＴＨＰ－１マクロファージを発現する種々の抗ＣＤ５ ＣＦＰの機能解析の場合、細胞に６μｍのＦＩＴＣ標識ＣＤ５抗原コーティングビーズ（図１０Ａ）を供給し、細胞あたりのＦＩＴＣビーズの食作用貪食をフローサイトメトリーによって定量化した（図１０Ｂ）。対照ビーズはＢＳＡコーティングとした。実験のＣＤ５コーティングビーズはＴＨＰ－１細胞によって貪食されやすかった（図１０Ｃ）。構築物それぞれは、標的特異的である高レベルの食作用を示し、ＣＤ５コーティングビーズの取込みは、ＢＳＡコーティングビーズの取込みと比較して少なくとも１０倍高かった。図１０Ｄに、対照ＢＳＡコーティングビーズまたは実験のＣＤ５コーティングビーズの存在下での抗ＣＤ５ ＣＦＰ発現細胞のサイトカイン解析を示す。モック電気穿孔と比較して、抗ＣＤ５ ＣＦＰ発現細胞ではより高いサイトカイン応答が観察されたが、サイトカインの誘導は、それ以上の刺激の非存在下では特段には高くなかった。抗ＣＤ５ ＣＦＰ発現細胞は、非古典的単球の顕著な特徴であるＣＤ１６およびＭＨＣクラスＩ分子の低発現を示す（図１０Ｅ）。しかし、活性化刺激の存在下では、抗ＣＤ５ ＣＦＰ発現細胞は、図１０Ｆ～１０Ｈに示すように、サイトカインの誘導により高度に活性化されることが示された。

[0735]ＴＨＰ－１細胞に、ＣＤ５－ＣＤ８ｈ－ＣＤ８ｔｍ－ＦｃＲ－ＰＩ３ＫをコードするＣＦＰ構築物を電気穿孔し、上記細胞を細胞内ＦａｒＲｅｄ色素で標識した。これらの細胞を、１：３の骨髄性細胞：腫瘍細胞比としてＣＦＳＥで前標識したＨ９ Ｔ細胞がん細胞とインキュベートした。４時間後、食作用をフローサイトメトリーによって測定した（図１１Ａ）。がん細胞は、抗ＣＤ５ ＣＦＰ発現細胞によって食作用を受けやすかった（図１１Ｂ、１１Ｃ）。

[0736]抗ＣＤ５－ＣＡＲ構築物を電気穿孔した初代単球を、上のように、ビーズの貪食、標的特異性、およびサイトカインについてアッセイした。ｐＨＲｏｄｏ標識標的細胞では（図１２Ａ）、ＣＤ５バインダー構築物のいずれかを発現する単球細胞のいずれの場合でも、モック電気穿孔細胞と比較して、食作用貪食の増加が認められた（図１２Ｂおよび１２Ｃ）。別の実験では、初代単球に抗ＣＤ５－ＣＡＲ構築物（ＣＤ５－ＣＤ８ｈ－ＣＤ８ｔｍ－ＦｃＲ－ＰＩ３Ｋ）を電気穿孔し、食作用とサイトカイン放出についてアッセイした。結果を図１２Ｄに示す。

[0737]ＴＨＰ－１細胞初代単球は両方とも、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＣＣＬ２投与に高度に応答し、走化性の増加を示した（それぞれ図１３および１４）。
実施例１５．ＣＤ５Ｔリンパ腫モデルでの単球を発現する抗ＣＤ５キメラ抗原受容体のｉｎ ｖｉｖｏ有効性
[0738]本実施例では、先のセクションに記載の方法に従って生成した抗ＣＤ５キメラ抗原受容体を発現する骨髄性細胞を、マウスＨ９ Ｔ細胞リンパ腫モデルにおいて腫瘍を縮小する上での有効性について調べた。ＣＤ５はＴ細胞リンパ腫の表面で発現する。単球を発現する抗ＣＤ５キメラ抗原受容体は、ＣＤ５発現細胞を結合することが可能である。しかし、これらの抗ＣＤ５－ＣＡＲ単球細胞がＴＭＥに打ち勝ち、なんらかの抗腫瘍能を発揮することが可能か否かについて、本明細書で試験した。ＮＳＧ－ＳＧＭ３マウスにＣＤ５陽性Ｈ９細胞を皮下注射した場合の、Ｔ細胞リンパ腫腫瘍モデルを確立した。ＮＳＧ－ＳＧＭ３マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、米国）は、ヒトＩＬ３、ＧＭ－ＣＳＦ、およびＳＣＦを発現するトリプルトランスジェニックＮＳＧ－ＳＧＭ３（ＮＳＧＳ）マウスであり、高度に免疫不全のＮＯＤＳＣＩＤガンマ（ＮＳＧ）マウスの特性と、骨髄系統および調節性Ｔ細胞集団の安定な生着をサポートするサイトカインとを兼ね備える。Ｈ９－ｍＣｈｅｒｒｙ－ルシフェラーゼ細胞株を、以下のように先に誘導した：Ｈ９細胞株をＨｕｔ７８セザリー症候群Ｔ細胞株から誘導した；ｍＣｈｅｒｒｙ－ホタルルシフェラーゼ融合タンパク質を、ｐＧＬＣｈｅｒｒｙルシフェラーゼをＨｕｔ７８にトランスフェクションすることによって安定して発現させ、そして安定した組み込みのために選択した。ｍＣｈｅｒｒｙ陽性細胞を、ＦＡＣＳ選別によってさらに濃縮し、現在、上記細胞株は８０％を超えるｍＣｈｅｒｒｙ陽性である。

腫瘍細胞の調製および投与：
[0739]Ｈ９－ｍＣｈｅｒｒｙ－Ｌｕｃ細胞を、１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０で培養した。腫瘍細胞注射当日、細胞を１０００×ｇで３分間遠心分離し、上清を除去し、細胞を１：１希釈マトリゲルに再懸濁した。１×１０^６個の腫瘍細胞をマウス当たりに皮下注射した。

[0740]ＣＤ５－ＣＡＲを発現する骨髄性細胞（ＣＤ－ＣＡＲ単球）を上記のように調製した。２億個の細胞に電気穿孔した；電気穿孔後（ＥＰ）の単球を１時間培養し、凍結保存した。解凍後の解析では、大きな生存率（＞９５％）が示された。ＣＤ５ ＣＡＲ単球の注射日は、腫瘍移植の１１日後とした。被験物質による処置当日、動物は腫瘍体積に従って３群にランダム化した（表７）。

[0741]ＣＤ５－ＣＡＲ単球を、ＣｒｙｏＳｔｏｒ ＣＳ１０（バイアル当たり１ｍｌ、２５Ｍ細胞）で凍結保存した。細胞を、３７℃のウォーターバスで迅速に解凍し、さらなる処理無しで動物に直接注射した。ＣＤ５ ＣＡＲ単球の注射に先立ち、注射する領域を７０％イソプロピルアルコール溶液またはエチルアルコール溶液で拭った。ＣＤ５ＣＡＲ単球を静脈内投与した。ＣＤ５－ＣＡＲ単球養子移入の日を研究の０日目とした。残りの注射については、表８に従って実施した。試験レジームを、図１５Ａに図形で図示する。

腫瘍測定および体重：
[0742]動物を、臨床兆候について毎日観察した。腫瘍体積を、ＩＶＩＳ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）を使用してイメージングによって決定した。マウスにルシフェリン（Ｂｉｏｖｉｓｉｏｎ、カタログ＃７９０３）を１５０ｍｇ／ｋｇの用量（２００μｌ）でＩＰ注射し、１０分後にＩＶＩＳを使用して画像化した。放射輝度値（光子／秒／ｃｍ２）を記録した。ＩＶＩＳイメージングと体重測定を、死亡または安楽死まで全ての動物で行った。腫瘍を、初回用量の注射後２０日目に取り出し、秤量した。

[0743]ＣＤ５－ＣＡＲ単球を、解凍後２４、４８および７２時間目に、ＳＯＰ培養およびＣＤ１４＋単球の電気穿孔およびバインダー検出に続いて、Ａｌｅｘａ４８８コンジュゲートヒトＣＤ５タンパク質で染色した。ＨＥＲ２－ＣＡＲ構築物を電気穿孔した単球を陰性対照として使用して、ゲートの位置を決定した。トランスフェクション効率は２４時間で７４％であることがわかった（図１５Ｂ）。このことから電気穿孔が、ｍＲＮＡをＣＤ１４＋ＣＤ１６－単球へと堅牢にトランスフェクトできること；潜在的にｍＲＮＡと受容体タンパク質のターンオーバーが速いので、ＣＡＲ構築物の発現は３～４日の寿命を持って一過性であったことが示唆される。

[0744]相対発光シグナルによって測定した腫瘍成長は、未処置の動物と比較して、３～４日毎に１．４×１０^６個のＣＤ５－ＣＡＲ細胞の６回用量を受けた動物において有意に遅延した（図１５Ｃおよび図１５Ｄ）。１×１０^６個のＣＤ５－ＣＡＲ細胞を１回用量のみを受けた動物は、そのような腫瘍停滞効果を示さなかった（図１５Ｃおよび図１５Ｄ）。６回用量群では、１匹の動物が１３日目から１６日目に死亡した。２０日目に、数匹のマウスが明らかに触知できる非常に大きな腫瘍を有する。２０日目に全ての動物をと殺し、それらの腫瘍を切開によって取り出した。次いで、腫瘍をスケールで秤量し、データをプリズムにプロットした。

[0745]別の研究では、ＮＳＧ－ＳＧＭ３マウスを、図１６Ａに示すように、異なる投薬スキームに供した。本レジームでは、１日１回、１１日目、１２日目、１３日目および１４日目に、４回の注入をマウスに投与した。ＣＤ５－ＣＡＲの発現は、電気穿孔後に確認し、９５％超であることがわかった（図１６Ｂ）。本アッセイでは、図１６Ｃおよび１６Ｄに示すように、腫瘍成長の統計的に有意な縮小が記録された。

[0746]本セクションで例示の研究より、ＣＤ５－ＣＡＲ単球標的化ＣＤ５＋Ｈ９の複数注入が腫瘍成長の遅延を引き起こすことができることが明白であった。より高い用量によって、はるかにより強力な抗腫瘍応答を誘発することが可能であると思われる。ＮＳＧ－ＳＧＭ３マウスは、機能的なＴ細胞、Ｂ細胞およびＮＩＣ細胞を有さない。したがって、本モデルを、Ｃ５－ＣＡＲ単球の固有の抗腫瘍活性を調べるように設計するが、この活性には、食作用およびＴＮＦαやＮＯ／ＲＯＳなどの細胞障害剤の分泌が含まれる。ＣＡＲ発現単球が、抗原を交差提示してＴ細胞を活性化しかつ炎症性サイトカインを分泌し、その結果、リンパ球浸潤を促進することができる場合の免疫完全モデルでは、はるかにより高い抗腫瘍活性が期待できる。

実施例１６．ＣＤ５－ＦｃＲ－ＭＤＡ５ ＣＦＰ構築物
[0747]本実施例では、ＭＤＡ－５細胞内ドメイン配列（配列番号２３におけるタンデムＣＡＲＤ ＩＣＤ配列）の２つのカスパーゼ活性化（ＣＡＲＤ）ドメインを含む細胞内ドメインを有する、ＣＤ５標的ＣＦＰを、既知の分子生物学技法を使用して構築した。図１７Ａに図形で示すように、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５に結合する軽鎖可変ドメインに連結した重鎖可変ドメインを含有するｓｃＦｖに融合されたシグナルペプチドを含む細胞外ドメインを有し、ＣＤ８α鎖ヒンジおよびＣＤ８α鎖ＴＭドメインに短いリンカーを介して付着する。ＴＭドメインは、細胞質ゾル末端でＦｃＲγ細胞質ゾル部分と、これに続いて、ＭＤＡ５細胞質ゾル部分（配列番号２３）と融合される。

[0748]ＭＷＬＱＳＬＬＬＬＧＴＶＡＣＳＩＳＥＩＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＶＲＩＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＨＴＧＥＰＴＹＡＤＳＦＫＧＲＦＴＦＳＬＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＩＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＴＲＲＧＹＤＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＴＬＩＹＲＡＮＲＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＹＥＤＦＧＩＹＹＣＱＱＹＤＥＳＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＳＧＧＧＧＳＧＡＬＳＮＳＩＭＹＦＳＨＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＲＬＫＩＱＶＲＫＡＡＩＴＳＹＥＫＳＤＧＶＹＴＧＬＳＴＲＮＱＥＴＹＥＴＬＫＨＥＫＰＰＱＧＳＧＳＭＳＮＧＹＳＴＤＥＮＦＲＹＬＩＳＣＦＲＡＲＶＫＭＹＩＱＶＥＰＶＬＤＹＬＴＦＬＰＡＥＶＫＥＱＩＱＲＴＶＡＴＳＧＮＭＱＡＶＥＬＬＬＳＴＬＥＫＧＶＷＨＬＧＷＴＲＥＦＶＥＡＬＲＲＴＧＳＰＬＡＡＲＹＭＮＰＥＬＴＤＬＰＳＰＳＦＥＮＡＨＤＥＹＬＱＬＬＮＬＬＱＰＴＬＶＤＫＬＬＶＲＤＶＬＤＫＣＭＥＥＥＬＬＴＩＥＤＲＮＲＩＡＡＡＥＮＮＧＮＥＳＧＶＲＥＬＬＫＲＩＶＱＫＥＮＷＦＳＡＦＬＮＶＬＲＱＴＧＮＮＥＬＶＱＥＬＴＧＳＤＣＳＥＳＮＡＥＩＥＮ（配列番号２４）
[0749]ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写ｍＲＮＡを使用して、配列番号２４をコードする配列を含む配列を有するｍＲＮＡポリヌクレオチドを調製し、上記ｍＲＮＡを用いて初代マクロファージに転写した。図１７Ｂで実証のように、初代骨髄性細胞におけるＣＤ５－ＦｃＲ－ＭＤＡ５キメラ抗原受容体の好結果の発現が注目された。単球を発現するＣＤ５－ＦｃＲ－ＭＤＡ５は、ＥＬＩＳＡアッセイによって測定した、図１７Ｃに示すように、非トランスフェクト細胞よりも高レベルのＩＬ１β、ＩＬ６、ＩＦＮγおよびＴＮＦαの各分泌、ならびにケモカインＣＣＬ５分泌を示した。

実施例１７．ＣＤ５－ＦｃＲ－ＴＮＦＲ１ ＣＦＰまたはＣＤ５－ＦｃＲ－ＴＮＦＲ２ ＣＦＰの構築物
[0750]本実施例では、ＴＮＦＲ１またはＴＮＦＲ２細胞内ドメインを有する、ＣＤ５標的ＣＦＰを、既知の分子生物学技法を使用して構築した。図１８Ａに図形で示すように、ＣＦＰは、標的細胞上のＣＤ５に結合する軽鎖可変ドメインに連結した重鎖可変ドメインを含有するｓｃＦｖに融合されたシグナルペプチドを含む細胞外ドメインを有し、ＣＤ８α鎖ヒンジおよびＣＤ８α鎖ＴＭドメインに短いリンカーを介して付着する。ＴＭドメインは、細胞質ゾル末端でＦｃＲγ細胞質ゾル部分、これに続いて細胞内シグナル伝達ドメイン（ＩＣＤ）配列ＴＮＦＲ１（配列番号２１）またはＴＮＦＲ２のＩＣＤ（配列番号２２）と、融合される。ＴＮＦＲ１細胞内シグナル伝達ドメインを有するＣＦＰの全長配列を下に図示する：
ＭＷＬＱＳＬＬＬＬＧＴＶＡＣＳＩＳＥＩＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＶＲＩＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＨＴＧＥＰＴＹＡＤＳＦＫＧＲＦＴＦＳＬＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＩＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＴＲＲＧＹＤＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＴＬＩＹＲＡＮＲＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＹＥＤＦＧＩＹＹＣＱＱＹＤＥＳＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＳＧＧＧＧＳＧＡＬＳＮＳＩＭＹＦＳＨＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＲＬＫＩＱＶＲＫＡＡＩＴＳＹＥＫＳＤＧＶＹＴＧＬＳＴＲＮＱＥＴＹＥＴＬＫＨＥＫＰＰＱＧＳＧＳＱＲＷＫＳＫＬＹＳＩＶＣＧＫＳＴＰＥＫＥＧＥＬＥＧＴＴＴＫＰＬＡＰＮＰＳＦＳＰＴＰＧＦＴＰＴＬＧＦＳＰＶＰＳＳＴＦＴＳＳＳＴＹＴＰＧＤＣＰＮＦＡＡＰＲＲＥＶＡＰＰＹＱＧＡＤＰＩＬＡＴＡＬＡＳＤＰＩＰＮＰＬＱＫＷＥＤＳＡＨＫＰＱＳＬＤＴＤＤＰＡＴＬＹＡＶＶＥＮＶＰＰＬＲＷＫＥＦＶＲＲＬＧＬＳＤＨＥＩＤＲＬＥＬＱＮＧＲＣＬＲＥＡＱＹＳＭＬＡＴＷＲＲＲＴＰＲＲＥＡＴＬＥＬＬＧＲＶＬＲＤＭＤＬＬＧＣＬＥＤＩＥＥＡＬＣＧＰＡＡＬＰＰＡＰＳＬＬＲ（配列番号２５）
[0751]ＴＮＦＲ２細胞内シグナル伝達ドメインを有するＣＦＰの全長配列を下に図示する：
ＭＷＬＱＳＬＬＬＬＧＴＶＡＣＳＩＳＥＩＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＶＲＩＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＨＴＧＥＰＴＹＡＤＳＦＫＧＲＦＴＦＳＬＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＩＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＴＲＲＧＹＤＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＴＬＩＹＲＡＮＲＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＹＥＤＦＧＩＹＹＣＱＱＹＤＥＳＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＳＧＧＧＧＳＧＡＬＳＮＳＩＭＹＦＳＨＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＲＬＫＩＱＶＲＫＡＡＩＴＳＹＥＫＳＤＧＶＹＴＧＬＳＴＲＮＱＥＴＹＥＴＬＫＨＥＫＰＰＱＧＳＧＳＰＬＣＬＱＲＥＡＫＶＰＨＬＰＡＤＫＡＲＧＴＱＧＰＥＱＱＨＬＬＩＴＡＰＳＳＳＳＳＳＬＥＳＳＡＳＡＬＤＲＲＡＰＴＲＮＱＰＱＡＰＧＶＥＡＳＧＡＧＥＡＲＡＳＴＧＳＳＤＳＳＰＧＧＨＧＴＱＶＮＶＴＣＩＶＮＶＣＳＳＳＤＨＳＳＱＣＳＳＱＡＳＳＴＭＧＤＴＤＳＳＰＳＥＳＰＫＤＥＱＶＰＦＳＫＥＥＣＡＦＲＳＱＬＥＴＰＥＴＬＬＧＳＴＥＥＫＰＬＰＬＧＶＰＤＡＧＭＫＰＳ（配列番号２６）
[0752]ＴＮＦα受容体１または２の細胞内ドメインを有するＣＦＰをコードするｉｎ ｖｉｔｒｏ転写ｍＲＮＡの発現を、トランスフェクトした初代マクロファージにおいて試験した。結果を図１８Ｂに示す。図１８Ｃおよび１８Ｄに示したが、ＴＮＦＲ１細胞内シグナル伝達ドメインを有するＣＦＰの発現は、サイトカイン分泌のレベルの増加を示す。逆に、ＴＮＦＲ２細胞内シグナル伝達ドメインを有するＣＦＰは、非トランスフェクト対照細胞に匹敵するサイトカインレベルを示した（図１８Ｃ、１８Ｄ）。理論に拘束されることを望むわけではないが、ＴＮＦＲ２（ｐ７５）は、免疫応答経路において免疫寛容原性および免疫抑制の役割を演じており、ある特定のＤＣサブタイプや天然の調節性Ｔ細胞などの調節性細胞によって大部分は発現する。したがって、ここに示す結果は、ＣＦＰ構築で使用される個々の細胞質ドメインが、ＣＦＰを発現する細胞の機能に個別に影響を及ぼすという、重要な役割を演じていることを明確に指示する。また、これらの結果において指示されることは、ＴＮＦＲ２をＣＦＰ発現細胞の炎症促進性活性の機能アッセイにおける陰性対照として使用できる、ということである。

[0753]次に、いくつかのＣＤ５標的構築物を機能アッセイに関して試験した。関心のあるＣＦＰをコードするポリヌクレオチド構築物をトランスフェクトした初代単球を、Ｍ２状態（ＩＬ４、ＩＬ１０、ＴＧＦβ）の存在下で２４時間培養に供し、その後、これらの細胞をＣＤ５コーティングまたは非コーティング（対照）プレートにプレーティングし、２４時間培養した。細胞によるケモカインおよびサイトカイン分泌を測定した。図１９Ａに、ＣＤ５を結合することができ、様々な細胞内ドメイン（ＩＣＤ）、例えば、ＣＤ４０ ＩＣＤ、ＰＩ３Ｋ動員ＩＣＤ、ＴＮＦＲ２ ＩＣＤを有することができる、例示的な構築物に関する図形表現を示す。図１９Ｂに、実験計画を図示するダイヤグラムを示す。ＩＬ４、ＩＬ－１０および／またはＴＧＦβを含む培地に供した場合、ＣＤ５抗原における、コーティングされたプレート（またはコーティングされていない対照プレート）によって刺激し、単球系統細胞がＭ２表現型に変換し、サイトカインとケモカインの分泌が増加し、ＥＬＩＳＡで測定する。ＣＤ５抗原コーティングプレート（または非コーティング対照プレート）によって刺激された場合、単球系統細胞のＭ２表現型への形質転換は、ＥＬＩＳＡによって次いで測定されるところのサイトカインとケモカインの分泌の増加を招く。結果を図１９Ｃ、１９Ｄ、および１９Ｅに図示する。ＰＩ３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）動員シグナル伝達ドメインを有するＣＦＰを発現する細胞は、ＣＤ４０ ＩＣＤを備えるＣＦＰ、または陰性対照ＣＦＰ ＴＮＦＲ２－ＩＣＤ発現細胞と比較して、高レベルのケモカインＣＣＬ３、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５およびＫＣを分泌する（図１９Ｃ）。ＰＩ３Ｋ動員ドメインならびに場合によってはＣＤ４０シグナル伝達ドメインを有するＣＦＰを発現する細胞は、ＴＮＦ－アルファやＩＬ８などのサイトカインの高分泌を示す。

実施例１８．単球を発現する抗ＨＥＲ２キメラ抗原受容体の有効性
[0754]本実施例では、本開示に記載の例示的な設計の細胞外ＨＥＲ２抗原結合ドメインを有するキメラ融合タンパク質（ＣＡＲ）を、潜在的な抗がん剤としての機能的有効性について解析する。第一世代レンチウイルスベクターを使用して、骨髄組織ＴＨＰ１細胞株に形質導入するのに使用されるレンチウイルスを生成した。ＰＭＡ処理されたＴＨＰ１細胞における形質導入効率は、６７～９０％の範囲であった（図２０Ａ）。ＰＭＡの有り無しで活性化されたＨＥＲ２標的化構築物を発現するＴＨＰ１細胞を、食作用を解析するためにＦａｒＲｅｄ標識ＳＫＯＶ３卵巣腫瘍細胞と一晩インキュベートした。実験セットアップを図２０Ｂの概略図ダイヤグラムに図示する。顕微鏡イメージングおよびフローサイトメトリー（図２０Ｃおよび図２０Ｄ）を使用して、食作用を決定した。ＦａｒＲｅｄ＋ＦＬＡＧ＋細胞は食作用イベントであるとした。本実験では、ＦｃＲγ－ＰＩ３Ｋ発現構築物は、非活性化ＴＨＰ－１細胞において他の構築物に勝って有効性の増強を有することが観察された。活性化すると、全ての受容体が食作用に関連付けられた（図２０Ｄ）。標的細胞死は式：［（＃ＳＫＯＶ３単独－＃ＳＫＯＶ３エフェクター有）／＃ＳＫＯＶ３単独］×１００によって計算した；結果を図２０Ｅにおけるように示す。

[0755]健康なドナーから分離されたＣＤ１４＋細胞に、ＦｃＲγ ＋ ＰＩ３Ｋ細胞内ドメインをコードするレンチウイルスＨＥＲ２標的ＣＦＰ構築物を形質導入し、食作用およびＣＳＦＥ標識ＳＣＯＶ３腫瘍細胞の殺作用について解析した（図２１Ａ）。結果を図２１Ｂおよび図２１Ｃに示す。Ｊｕｒｋａｔ細胞はＨＥＲ２を発現しないので、この細胞を標的細胞の対照として使用した。

[0756]ＨＥＲ２構築物を発現するこれらの細胞が腫瘍環境でＭ０、Ｍ１、Ｍ２の各表現型へと分化することが可能か否かを試験するために、図２２Ａの概略図ダイヤグラムに概説のように、ＭＳＴＯ細胞上清を含むｉｎ ｖｉｔｒｏ中皮腫モデルを開発した。ＣＤ１４＋細胞を発現するＨＥＲ２標的キメラ抗原受容体を６通りの培養状態に曝露した：Ｍ０（１００ｎｇ／ｍｌ ＭＣＳＦ）；Ｍｌ（５ｎｇ／ｍｌ ＬＰＳ＋１００ｎｇ／ｍｌ ＩＦＮγ）；Ｍ２（１００ｎｇ／ｍｌ ＭＣＳＦ＋２０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－１０＋２０ｎｇ／ｍｌ ＴＧＦβ）；ＤＣ（１００ｎｇ／ｍｌ ＧＭＣＳＦ＋２０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－４）；腫瘍馴化培地（ＭＳＴＯ－コンディションＲＰＭＩ＋１００ｎｇ／ｍｌ ＭＣＳＦ）；および対照。これらの実験の一部については、ＦＬＡＧペプチドをコードする配列が、キメラＨＥＲ２構築物の細胞外領域において、ｓｃＦｖと膜貫通ドメインの合間に組み込まれる。細胞を回収し、細胞の生存率を試験し、８０％超であることがわかった。細胞の表現型を２４時間目でフローサイトメトリーによって調べた。２４、４８および７２時間目のいくつかの細胞マーカーの発現を決定した。ＨＥＲ－２キメラ構築物の発現を、蛍光標識した精製ＨＥＲ２タンパク質を使用して検出した。Ｍ１状態下では発現が最低であったとはいえ、全ての状態下で構築物が発現されることが見出された。他の全ての状態は、高レベルのキメラ受容体発現に関連付けられた。細胞はまた、ＨＬＡ ＤＰ、ＤＱ、ＤＲ（ＭＨＣＩＩ）およびＨＬＡ ＡＢＣ（ＭＨＣｌ）を差次的に発現することが観察された。ＣＤ１４、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ３７９、ＣＤ３０３、ＣＤ４５、ＣＸ３ＣＲ１の発現は、全ての培養状態にわたって一致しており、一方、マンノース受容体（ＣＤ２０６）、ＭＥＲＴＫおよびＣＣＲ２は、Ｍ１状態で培養されたそれら細胞で対応して下方調節されたが、このことは細胞の分化に関連付けられる。まとめると、本データは、ＨＥＲ２－ＣＦＰ発現細胞が、環境要因に基づいた受容体ライゲーションの非存在下では分化することになることを示す。

[0757]アッセイの別の拡張における、ＭＳＴＯ腫瘍細胞の存在下での様々な培養状態下でのＨＥＲ２－ＣＦＰ発現細胞上の表面分子の発現。腫瘍細胞の存在下でのＣＣＲ２の下方調節が観察されたが、この下方調節は受容体のライゲーションおよび細胞の活性化を指示する。ＨＬＡ分子発現の維持は、抗原のプロセシングおよび提示能力の維持を指示することができる。これらのデータは、受容体の会合が、極性化にかかわりなく、腫瘍崩壊に関連付けられる活性化および活性を誘発することを示す。

[0758]ＨＥＲ２発現腫瘍のｉｎ ｖｉｖｏモデルを利用して、ＨＥＲ２－ＣＦＰを発現する細胞の腫瘍浸透および活性化を調査した。実験計画の概略図ダイヤグラムを図２２Ａに示す。ＨＥＲ２標的ＣＦＰ発現細胞の遊走と浸透を、細胞質色素ＣＳＦＥで標識したＣＦＰ発現細胞の単回注入の２４時間後に決定した。腫瘍を取り出し、組織学用に処理した。図２２Ｂに示すように、ＨＥＲ２－ＣＦＰを発現する骨髄性細胞は、腫瘍に遊走し、腫瘍細胞の周囲に蓄積することが観察された。ＣＦＳＥ標識ＨＥＲ２標的ＣＦＰ発現細胞をＭＳＴＯ担腫瘍ＮＳＧマウスに投与して２４時間後、脾臓を取り出し、組織学用に処理した。図２２Ｃに示すように、ＨＥＲ２標的ＣＦＰ発現骨髄性細胞が脾臓に遊走することが観察された。ＣＦＳＥ標識ＨＥＲ２標的ＣＦＰ発現細胞を、細胞注入の２４時間後に担腫瘍マウスの脾臓から分離し、フローサイトメトリーによって調べた。脾臓のＨＥＲ２標的ＣＦＰ発現細胞は、ＨＬＡ、ＣＤ１４、およびＣＤ３０３の発現を維持した。ＣＣＲ２発現は、ＣＤ３７０（ＣＬＥＣ９Ａ）が同時に増加すると共に低下することが観察され、このことによって、上記細胞が脾臓に遊走し、Ｔ細胞応答を刺激することが可能なプロフェッショナルＡＰＣに発達することが、潜在的に示唆される。ＣＤ２０６（マンノース）発現はＣＤ４５と同様に低下することが観察された。マンノース受容体発現の減少は、Ｍ１表現型への分化に関連付けることができる。

[0759]同様のｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍モデルにおいて、腫瘍退縮を、図２３の概略図ダイヤグラムに示すように、ＨＥＲ２標的ＣＦＰ発現細胞の３回の注入後に解析した。抗ＨＥＲ２キメラ抗原受容体を発現するヒト初代単球の３回の注入は、対照処置動物と比較して腫瘍進行の遅延に関連付けられた（図２４）。

実施例１９．抗食作用シグナルを遮断し、食作用を活性化する材料および方法：
[0760]ダルベッコ改変イーグル培地、トリプシン－ＥＤＴＡ、ウォルトマニン（wortmanni）（Ｂｒａｄｆｏｒｄ試薬）、およびリソスタフィンを、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から購入する。血清低減Ｏｐｉｔ－ＭＥＭ Ｉ培地を、Ｇｉｂｃｏ－ＢＲＬ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）から購入する。ＳＨ－５はＥｎｚｏ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｐｌｙｍｏｕｔｈ、ＰＡ）から取得し、ＯＳＵ－０３０１２（ＯＳＵ）はＣｅｄａｒｌａｎｅ Ｌａｂｓ（Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ、ＮＣ）から購入した。ＦｕＧＥＮＥトランスフェクション試薬と５０×ＥＤＴＡフリープロテアーゼ阻害剤カクテルはＲｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｍａｎｈｅｉｍ、ドイツ）から購入する。細胞を、２４ウェルプレートで６０～７０％のコンフルエンスまで増殖するが、培養培地をＤＭＥＭ １０％ＦＣＳに変更した。次いで、同様のタンパク質発現を持たせるために、ＦｕＧＥＮＥトランスフェクション試薬１．２μｌに含まれるｐＣＭＶ５－Ａｋｔ－ＣＡ ５ｎｇまたはｐＣＭＶ５－Ａｋｔ－ＤＮ ２００ｎｇ（比、４：１［ＦｕＧＥＮＥ－プラスミド］）を、製造元の使用説明書に従って、血清低減Ｏｐｔｉ－ＭＥＭＩ培地でＢＥＣに添加する。

実施例２０．組換え陰性ＳＩＲＰαの発現および機能解析
[00761]図２６Ａに、ドミナントネガティブＳＩＲＰα受容体（ＳＩＲＰａ＿ｎｅｇ）の例示的な概略図を示す。受容体は、なんらの細胞内ドメインを含まないＳＩＲＰαのＥＣＤドメインおよびＴＭドメインから構成される。ＥＣＤ：細胞外ドメイン；ＴＭ：膜貫通ドメイン。マクロファージで発現される場合、ＳＩＲＰα＿ｎｅｇは、ＣＤ４７リガンドに結合するが、シグナル伝達はせず、したがって、ＣＤ４７シグナル伝達を阻害するドミナントネガティブデコイ受容体として機能する。

[00762]組換え陰性ＳＩＲＰα（ＳＩＲＰα＿ｎｅｇ）の機能を試験するために、ヒト初代マクロファージに、ＳＩＲＰαの組換え陰性形態を発現するレンチウイルスベクターを形質導入する。並行して、対照細胞に空のベクターまたはＧＦＰを発現する同じベクターをトランスフェクトする。図２６Ｂに、ｉｎ ｖｉｔｒｏ食作用アッセイにおける予想される結果を示す。対照の空のベクターまたはＳＩＲＰα＿ｎｅｇを形質導入されるヒト初代マクロファージを、色素添加腫瘍細胞と共培養し、食作用はフローサイトメトリーを使用して定量化する。ＳＩＲＰα＿ｎｅｇベクターを備える細胞は、対照細胞に勝る食作用の増加を示す。

[00763]図２６Ｃに、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞溶解アッセイにおける予想される結果を示す。対照のベクターまたはＳＩＲＰα＿ｎｅｇベクターを形質導入されるヒト初代マクロファージを、異なるＥ：Ｔ比で、ルシフェラーゼを発現する腫瘍細胞と共培養し、ルシフェラーゼアッセイを使用して比溶解を定量化する。

[00764]図２６Ｄに、マウス異種移植モデルにおける予想される結果を示す。０日目に、ＮＳＧマウスにルシフェラーゼを発現する腫瘍細胞を注射する。マウスは未処置であるか、またはＳＩＲＰα＿ｎｅｇを形質導入されるヒト初代マクロファージを注射するかいずれかであり、そして生存曲線を作成する。

実施例２１．ＳＩＲＰα－ＰＩ３Ｋ結合ドメイン構築物を発現する組換えキメラタンパク質の発現および機能解析
[00765]図２７Ａに、ＳＩＲＰα－ＰＩ３Ｋスイッチ受容体の例示的な概略図を示す。受容体は、細胞内末端でＰＩ３Ｋ ＢＤに融合されたＳＩＲＰαのＥＣＤおよびＴＭドメインから構成される。ＥＣＤ：細胞外ドメイン；ＴＭ：膜貫通ドメイン；ＰＩ３Ｋ ＢＤ：ＰＩ３Ｋ結合ドメイン。マクロファージで発現される場合、ＳＩＲＰα－ＰＩ３Ｋは、ＣＤ４７リガンドに結合し、ＰＩ３Ｋ媒介性の食作用促進性、生存促進性のシグナル伝達を活性化する。

[00766]試験するために、図２７Ａの組換え構築物をレンチウイルス発現ベクターに挿入し、トランスフェクションで使用するために精製する。
[00767]ＳＩＲＰα－ＰＩ３Ｋを形質導入されるヒト初代マクロファージを、標的腫瘍細胞と共培養する。対照セットでは、ヒトマクロファージにＧＦＰを発現する対照構築物を形質導入する。図２７Ｂに、フローサイトメトリーによって定量化される、色素添加標的腫瘍細胞の相対食作用に関する予想される結果を示す。ＳＩＲＰα－ＰＩ３Ｋを発現する細胞は、対照ベクターを発現する細胞に勝って食作用の増強を示す。図２７Ｃに、Ａｋｔ活性化レベルの測定に関する予想される結果を示す。ＳＩＲＰα－ＰＩ３Ｋならびに対照構築物（ＧＦＰ）またはＳＩＲＰα－ＰＩ３Ｋを発現するヒト初代マクロファージを腫瘍細胞と共培養し、ＰＩ３Ｋ活性化の下流でのＡｋｔリン酸化レベルを、ｐＡｋｔ抗体を使用してウエスタンブロットによって決定し、定量化する。図２７Ｄに、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞溶解アッセイにおける予想される結果を示す。ＳＩＲＰα－ＰＩ３Ｋを発現するヒト初代マクロファージならびに対照構築物（ＧＦＰ）またはＳＩＲＰα－ＰＩ３Ｋと共に、異なるＥ：Ｔ比で、ルシフェラーゼを発現する腫瘍細胞と共培養し、ルシフェラーゼアッセイを使用して比溶解を定量化する。図２７Ｅに、マウス異種移植モデルにおける予想される結果を示す。０日目に、ＮＳＧマウスにルシフェラーゼを発現する腫瘍細胞を注射する。マウスは未処置であるか、またはＣＡＲ－ＰＳＩＲＰα－ＰＩ３Ｋを発現するヒト初代マクロファージを注射するかいずれかである。

実施例２２．ＳＩＲＰα－Ｍ１を発現する組換えキメラタンパク質の設計および機能解析。
[00768]本実施例では、ＳＩＲＰαの細胞外ＣＤ４７結合ドメインを有し、炎症促進性シグナル伝達を活性化する細胞内ドメインと融合される構築物の例示的な設計を示す（ＳＩＲＰα－Ｍ１）。図２８Ａに、炎症促進性シグナル伝達を誘発するＳＩＲＰαスイッチ受容体の例示的な概略図を示す（ＳＩＲＰα－Ｍ１）。受容体は、以下の遺伝子：ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ９、ＭＹＤ８８、ＴＲＩＦ、ＲＩＧ－１、ＭＤＡ５、ＣＤ４０、ＩＦＮ受容体、またはそのような炎症促進性細胞内シグナル伝達ドメインを有するその他の遺伝子、のうちのいずれか１つの炎症促進性ドメインに融合されたＳＩＲＰαのＥＣＤおよびＴＭドメインから構成される。

[00769]構築物をレンチウイルスベクターに挿入し、機能研究のために精製する。マクロファージで発現される場合、ＣＤ４７ ＳＩＲＰα－Ｍ１の結合は、炎症促進性シグナルの活性化を招く。このことは、より強力な食作用、炎症促進性サイトカインおよび表面受容体の発現、ならびに抗原交差提示の増強を招く。図２８Ｂおよび２８Ｃに、ＳＩＲＰα－Ｍ１を発現するマクロファージが標的腫瘍細胞と共培養される場合の、それぞれサイトカインおよび表面抗原の誘導される発現に関する予想される結果を示す。対照の空のベクターまたはＳＩＲＰα－Ｍ１を形質導入されるヒト初代マクロファージを腫瘍細胞と共培養する。ＥＬＩＳＡによるサイトカインプロファイリングは、ベクター対照と比較して炎症促進性のサイトカインおよびケモカインの分泌の増加を示す。フローサイトメトリーは、ベクター対照と比較してＭ１状態マーカー発現の増加を示す。図２８Ｄおよび２８Ｅに、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞溶解アッセイおよびｉｎ ｖｉｖｏ異種移植マウスモデルにおける予想される結果を示す。図２８Ｄでは、ＣＡＲ－ＰならびにＳＩＲＰα－Ｍ１を共発現するヒト初代マクロファージを異なるＥ：Ｔ比で、ルシフェラーゼを発現する腫瘍細胞と共培養し、ルシフェラーゼアッセイを使用して比溶解を定量化する。図２８Ｅでは、ＮＳＧマウスに、０日目にルシフェラーゼを発現する腫瘍細胞を注射する。マウスは、未処置であるか、またはＣＡＲ－ＰＳＩＲＰα－Ｍ１を共発現するヒト初代マクロファージを注射するかいずれかである。

実施例２３．ＳＩＲＰαβスイッチ受容体を発現する組換えキメラタンパク質の設計および機能解析
[00770]本実施例では、ＳＩＲＰαβ１スイッチ受容体を発現するベクターの例示的な設計について記載する。図２９Ａに、ＳＩＲＰαβ１スイッチ受容体の例示的な概略図を示す。受容体は、ＴＭに融合されたＳＩＲＰαのＥＣＤとＳＩＲＰβのＩＣＤから構成される。ＥＣＤ：細胞外ドメイン；ＴＭ：膜貫通ドメイン；ＩＣＤ：細胞内ドメイン。ＳＩＲＰαとは異なり、ＳＩＲＰβはＣＤ４７に結合しないが、代わりにそのＴＭ領域を通してＤＡＰ１２と会合し、食作用を促進する。マクロファージで発現される場合、ＳＩＲＰαβはＣＤ４７リガンドに結合し、ＤＡＰ１２とも会合して、食作用シグナル伝達を促進する。ヒトマクロファージに、機能解析のためにＳＩＲＰαβおよび対照ベクターを形質導入する。

[00771]図２９Ｂに、フローサイトメトリーによって定量化される、色素添加標的腫瘍細胞の相対食作用に関する予想される結果を示す。ＳＩＲＰαβを発現する細胞は、対照ベクターを発現する細胞に勝って食作用の増強を示す。図２９Ｃに、色素添加標的腫瘍細胞の相対溶解に関する予想される結果を示す。ＳＩＲＰαβを発現する細胞は、対照ベクターを発現する細胞に勝ってより高い標的細胞溶解を示す。ＮＳＧマウスに、０日目にルシフェラーゼを発現する腫瘍細胞を注射する場合。マウスは、未処置であるか、またはＣＡＲ－Ｐ ＳＩＲＰαβを共発現するヒト初代マクロファージを注射するかいずれかであり、そして生存曲線を作成する（図２９Ｄ）。

実施例２４．Ｓｉｇｌｅｃスイッチ受容体を発現する組換えキメラタンパク質の設計および機能解析。
[00772]本実施例では、Ｓｉｇｌｅｃスイッチ受容体を発現するベクターの例示的な設計について記載する。図３０Ａに、モノシストロニックなＳｉｇｌｅｃスイッチ受容体の例示的な概略図を示す。キメラ受容体は、２つの部分：食作用のためのキメラ受容体（ＣＡＲＰ）とシアリダーゼを有する。ＣＡＲＰは、翻訳されたタンパク質の膜局在化のためのシグナルペプチド、細胞外ドメインから構成されるが、これは、抗原結合ドメインを有する。抗原結合ドメインは、標的細胞、例えばがん細胞上の抗原に特異的に向けられたｓｃＦｖである。この抗原結合ドメインは、ＥＣＤおよびＳｉｇｌｅｃタンパク質のＴＭドメインと融合される。ＩＣＤドメインは、食作用受容体からのシグナル伝達ドメインなどの、食作用を促進するＩＣＤドメインとすることができる。構築物は、短いＴ２Ａ切断部位およびシアリダーゼの下流コード配列をコードする。シアリダーゼは、酵素シアリダーゼの細胞外放出のための先行するシグナル伝達配列を有するが、この酵素は、構築物を発現する細胞の細胞外環境におけるシアル化残基を除去すると期待される。シアル化グリカンはＳｉｇｌｅｃタンパク質のリガンドであり、したがって、シアリダーゼの発現によりＳｉｇｌｅｃタンパク質の天然リガンドが枯渇し、その結果、キメラ受容体のＳｉｇｌｅｃタンパク質のＥＣＤを不活性にする。ＥＣＤ：細胞外ドメイン；ＴＭ：膜貫通ドメイン；ＩＣＤ：細胞内ドメイン。マクロファージで発現される場合、Ｓｉｇｌｅｃ－シアリダーゼＣＡＲＰは、内在性Ｓｉｇｌｅｃシグナル伝達と同様に食作用を阻害するのではなく、食作用を増強する。ヒトマクロファージに、機能解析のためにＳｉｇｌｅｃ－シアリダーゼＣＡＲＰおよび対照ベクターを形質導入する。

[00773]図３０Ｃに、色素添加標的腫瘍細胞の相対溶解に関する予想される結果を示す。細胞に勝ってＳｉｇｌｅｃ－シアリダーゼＣＡＲＰのより高い標的細胞溶解を発現する細胞は、シアリダーゼ無しでＳｉｇｌｅｃＣＡＲＰ構築物単独を発現したＣＡＲＰ対照ベクターを発現する。

[00774]図３０Ｄ～３０Ｇに、シアリダーゼＣＡＲＰ構築物のさらなる例示的な設計を示す。これらは、図３０Ａに記載の構築物内に組み込まれたセクションとすることができたが、ここで、さらなるエレメントとは、シアリダーゼのコード配列の５’および３’隣接末端における調節性エレメントである。図３０Ｄに示すように、シアリダーゼ構築物は、ＣＡＲＰとは別々のプロモーターの制御下にあり（これは、図３０Ａのものとは対照的にポリシストロニックな構築物である）、ここで、上記プロモーターに先行してＮＦ－κＢ応答エレメントがある。ＮＦ－κＢ経路はファゴサイトで活性化する。それゆえ、シアリダーゼは、ＮＦ－κＢ応答エレメントの影響下で発現し、したがって、活発に食作用を行うマクロファージにおいて選択的に発現される（図３０Ｅに示すように）。図３０Ｆに、シアリダーゼ構築物の３’－ＵＴＲにおいて特定のＡＲＥタンパク質結合配列を付加して、選択的マクロファージにおけるその発現を調節すること、が示されている。例えば、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡへの結合のための配列モチーフを挿入して、ＧＡＰＤＨのグリコシル化状態が変化した場合に誘発される発現の調節をもたらすことができる。例示的なＧＡＰＤＨ ＡＲＥ結合配列は：ＷＷＷＵ（ＡＵＵＵＡ）ＵＵＵＷ（式中、ＷはＡまたはＵである）である。ＧＡＰＤＨはｍＲＮＡ結合タンパク質である。ＧＡＰＤＨがｍＲＮＡに依然として結合している場合、ｍＲＮＡは、転写が妨げられ、したがってサイレントである。グリコシル化の変化は、ＧＡＰＤＨを活性化し、ｍＲＮＡからＧＡＰＤＨを解離する。このことはｍＲＮＡの転写を誘発する。低酸素状態は、グリコシル化状態の変化を誘発することができる。したがって、本構築物は、腫瘍微小環境などの低酸素状態で活性化および発現され得る。

実施例２５．ＦｃＲアルファ受容体を発現する組換えキメラタンパク質の設計および機能解析。
[00775]本実施例では、マクロファージ特異的発現を伴うがん抗原標的受容体を発現するベクターの例示的な設計について記載する。本例示的な構築物では、細胞外抗原結合ドメインは、がん抗原に特異的に結合することができるｓｃＦｖである。ＦｃＲα鎖の細胞外膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインは、リンカーを通してｓｃＦｖと融合される（ＣＡＲ－ＦｃＲγ）。ＦｃＲγ鎖は、マクロファージにおいて特異的に発現するＦｃＲγの内在性膜貫通ドメインとヘテロ二量体化する。図３１Ａに、がん標的化ＦｃＲγ受容体の例示的な概略図を示す。

[00776]図３１Ｂに、フローサイトメトリーによって定量化される、色素添加標的腫瘍細胞の相対食作用に関する予想される結果を示す。ＣＡＲ－ＦｃＲγを発現する細胞は、対照ベクターを発現する細胞に勝って食作用の増強を示す。図３１Ｃに、色素添加標的腫瘍細胞の相対溶解に関する予想される結果を示す。ＦｃＲγを発現する細胞は、対照ベクターを発現する細胞に勝ってより高い標的細胞溶解を示す。ＮＳＧマウスに、０日目にルシフェラーゼを発現する腫瘍細胞を注射する場合。マウスは、未処置であるか、またはＣＡＲ－ＦｃＲγを共発現するヒト初代マクロファージを注射するかいずれかであり、そして生存曲線を作成する（図３１Ｄ）。

実施例２６．組換えＣＦＰ（ＣＡＲ－ＴＲＥＭ）の設計および機能解析
[00777]本実施例では、骨髄性細胞特異的発現を伴うがん抗原標的受容体を発現するベクターの例示的な設計について記載する。本例示的な構築物では、細胞外抗原結合ドメインは、がん抗原に特異的に結合することができるｓｃＦｖである。ＴＲＥＭ鎖の細胞外膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインはリンカーを通してｓｃＦｖと融合される（ＣＡＲ－ＴＲＥＭ ）。ＴＲＥＭ鎖はＤＡＰ１２の内在性ＤＡＰ１２膜貫通ドメインとヘテロ二量体化し、食作用を促進する炎症促進性シグナルを生成する。図３２Ａに、がん標的化ＣＡＲ－ＴＲＥＭの例示的な概略図を示す。

[00778]図３２Ｂに、フローサイトメトリーによって定量化される、色素添加標的腫瘍細胞の相対食作用に関する予想される結果を示す。ＣＡＲ－ＴＲＥＭを発現する細胞は、対照ベクターを発現する細胞に勝って食作用の増強を示す。図３２Ｃに、色素添加標的腫瘍細胞の相対溶解に関する予想される結果を示す。ＴＲＥＭを発現する細胞は、対照ベクターを発現する細胞に勝ってより高い標的細胞溶解を示す。ＮＳＧマウスに、０日目にルシフェラーゼを発現する腫瘍細胞を注射する場合。マウスは、未処置であるか、またはＣＡＲ－ＴＲＥＭを共発現するヒト初代マクロファージを注射するかいずれかであり、そして生存曲線を作成する（図３２Ｄ）。

実施例２７．細胞内カスパーゼ構築物を発現する組換えキメラタンパク質の設計および機能解析。
[00779]本実施例では、ＩＴＡＭ細胞内ドメインを有するＣＡＲのコード配列と、融合細胞内タンパク質をコードする別々のコード配列と、カスパーゼ切断部位によって連結された、ＳＨ２結合ドメインと連結されたプロカスパーゼとを含む単一の構築物を設計する。構築物を図３３Ａに図形で図示する（上部パネル）。融合されたプロカスパーゼコード配列は、翻訳後に２つのタンパク質をＴ２Ａ部位で切断するＴ２Ａドメインを含むＣＡＲコード配列から離間する。図３３Ａに、がん抗原への結合に特異的な細胞外ｓｃＦｖと、先の実施例に記載の任意のＴＭとすることができた膜貫通ドメインと、ＳＨ２結合ドメインを含む細胞内ＩＴＡＭドメインとを発現するＣＡＲを示す。図３３Ａの図形での図示に示すように、翻訳およびＴ２Ａ部位での切断による残りの構築物からの放出の後のプロカスパーゼ部分は、ＳＨ２ドッキング部位を介して細胞内ＩＴＡＭドメインと会合するが、この部位はＣＡＲの細胞内ＩＴＡＭドメインにチロシンリン酸化残基を含む。ＩＴＡＭによってＳＨ２ドメインが結合およびリン酸化すると、プロカスパーゼは、活性化され、カスパーゼ切断部位で切断され、これにより、プロカスパーゼを活性化してカスパーゼを形成する。このことが、食作用の細胞内シグナル伝達経路が開始する。構築物を、機能解析のためにヒト初代マクロファージで発現させる。図３３Ｂ～３３Ｃに、カスパーゼ－ＣＡＲマクロファージが標的腫瘍細胞と共培養される場合のサイトカインおよび表面抗原の誘導される発現に関する予想される結果を示す。対照の空のベクターまたはカスパーゼ－ＣＡＲを形質導入されるヒト初代マクロファージを、標的腫瘍細胞と共培養する。ＥＬＩＳＡによるサイトカインプロファイリングは、ベクター対照と比較して炎症促進性のサイトカインおよびケモカインの分泌の増加を示す。フローサイトメトリーは、ベクター対照と比較して炎症促進性細胞表面マーカー発現の増加を示す。図３３Ｄ～３３Ｅに、それぞれ、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞溶解アッセイおよびｉｎ ｖｉｖｏ異種移植マウスモデルにおける予想される結果を示す。図３３Ｄに、対照ベクターまたはカスパーゼ－ＣＡＲを形質導入されるヒト初代マクロファージを、異なるＥ：Ｔ比で、ルシフェラーゼを発現する腫瘍細胞と共培養し、ルシフェラーゼアッセイを使用して比溶解を定量化する。図３３Ｅに、ＮＳＧマウスに、０日目にルシフェラーゼを発現する腫瘍細胞を注射する。マウスは、０日目に、未処置であるか、またはカスパーゼ－ＣＡＲを形質導入されるヒト初代マクロファージを注射するかいずれかである。

実施例２８．代謝スイッチの原理を含むベクターのモジュラー設計。
[00780]本実施例では、構築物の特定の増強について記載する。本セクションで記載の設計は、当業者であれば理解されるように、本開示で記載の構築物のいずれにも適合させることができる。図３４Ａに示すように（上パネル）、設計は、ＣＡＲの包括的な構築物を例示し、この場合、３’ＵＴＲにＡＵリッチエレメント（ＡＲＥ）配列の挿入を備えるが、これにより、翻訳を妨げる成熟ｍＲＮＡ鎖に結合するＲＮＡ結合タンパク質（例えば、ＧＡＰＤＨ）がもたらされる。ＧＡＰＤＨ結合配列は、ＷＷＷＵ（ＡＵＵＵＡ）ＵＵＵＷとして指定することができる（式中、ＷはＡまたはＵである）。解糖により、ＲＮＡ結合タンパク質（例えばＧＡＰＤＨ）の脱共役がもたらされ、ｍＲＮＡ鎖の翻訳が可能になる。

[00781]他の例示的なＡＲＥ配列を使用して、ＧＡＰＤＨ結合配列を置き換えることができる。そのような配列は、ＡＤＫ、ＡＬＤＨ１８Ａ１、ＡＬＤＨ６Ａ１、ＡＬＤＯＡ、ＡＳＳ１、ＣＣＢＬ２、ＣＳ、ＤＵＴ、ＥＮＯ１、ＦＡＳＮ、ＦＤＰＳ、ＧＯＴ２、ＨＡＤＨＢ、ＨＫ２、ＨＳＤ１７Ｂ１０、ＭＤＨ２、ＮＭＥ１、ＮＱ０１、ＰＫＭ２、ＰＰＰ１ＣＣ、ＳＵＣＬＧ１、ＴＰ１１、ＧＡＰＤＨ、ＬＤＨに結合するＡＲＥ配列とすることができる。改変ＡＲＥは、図１０Ａに示すように、ＣＡＲＰの発現構築物の３’末端で使用する（下パネル）。

[00782]図３４Ｂに、本明細書に記載の炎症促進性タンパク質の発現と共にＣＡＲＰの発現のためのモノシストロニックな構築物またはポリシストロニック構築物の一部のいずれかとして、炎症促進性タンパク質を発現する包括的な構築物を、例示する；あるいは、本明細書に記載の構築物は、他の任意のキメラ抗原構築物との共発現に使用することができる。図３４Ｂに示されていないが、示されるセクションの構築物の残りの部分を、ＣＡＲタンパク質をコードする構築物の一部として使用する。任意のタンパク質を「目的のタンパク質」として表現することができるが、それには、インターロイキン１２、２型インターフェロン、１型インターフェロン、炎症促進性メディエーター、可溶性因子、顆粒、溶解性タンパク質、一酸化窒素等々 － 抗腫瘍活性（抗ＰＤ１抗体等）を誘発するものは何でも、好中球を誘引するＦＭＬＰリガンドが含まれるが、これらに限定されない。コード配列の３’末端は、ＡＤＫ、ＡＬＤＨ１８Ａ１、ＡＬＤＨ６Ａ１、ＡＬＤＯＡ、ＡＳＳ１、ＣＣＢＬ２、ＣＳ、ＤＵＴ、ＥＮＯ１、ＦＡＳＮ、ＦＤＰＳ、ＧＯＴ２、ＨＡＤＨＢ、ＨＫ２、ＨＳＤ１７Ｂ１０、ＭＤＨ２、ＮＭＥ１、ＮＱ０１、ＰＫＭ２、ＰＰＰ１ＣＣ、ＳＵＣＬＧ１、ＴＰ１１、ＧＡＰＤＨ、ＬＤＨ等のいずれか１つに結合できる、１つまたは複数のＡＲＥ配列を含有する。

[00783]図３４Ｃに、本明細書で開示される設計に適用可能な例示的ないくつかのモジュール構築物を示す。図３４Ｃに、２つ以上のコード配列が、構築物（（ｉ））によってコードされるＴ２ＡまたはＰ２Ａ切断部位によって隔てられる、例示的な構築物を図示する。内在性タンパク質は、その部位で新たに翻訳されたタンパク質を切断し、単一の構築物から生成した独立した２つタンパク質を放出する。また図３４Ｃに、２つのコード配列を含む例示的なバイシストロニックな構築物を図示するが、一方は、プロモーターＰ１の影響下で、抗原特異的バインダーおよび細胞内ドメイン（ＩＣＤ）を含む融合タンパク質のためのもの；およびもう一方は、第２のプロモーターＰ２および３’調節性エレメントの影響下で炎症性遺伝子をコードするものである。２つのコード配列を、互いに反対方向にあるように設計する（（ｉｉ））。また図３４Ｃに、全く別の２つの遺伝子がバイシストロニックなベクター構築物によってコードされておりかつ一方向性である、例示的な設計を図示する（（ｉｉｉ））。また図３４Ｃに、２つの遺伝子がベクター構築物によってコードされている例示的な設計も図示するが、ここで、第２のコード配列は、単一の核酸構築物由来の別々のポリペプチドとして独立した翻訳のための独立したリボソーム侵入部位を保証するＩＲＥＳ構築物が先行する（（ｉｖ））。

Claims (265)

1. キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物であって、ＣＦＰが、
   （ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、および
   （ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン
   を含む、食作用または係留受容体（ＰＲ）サブユニット、ならびに
   （ｂ）標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン
   を含み、前記膜貫通ドメインおよび前記細胞外ドメインが作動可能に連結されており；前記抗原がＣＤ１９またはＣＤ２２抗原ではなく；前記ＣＦＰが前記標的細胞の抗原に結合すると、前記ＣＦＰを発現する細胞の殺作用または食作用活性が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して少なくとも２０％増加し；殺作用または食作用活性がフローサイトメトリーによって測定される、組成物。
2. キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物であって、ＣＦＰが、
   （ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、および
   （ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン
   を含む、食作用または係留受容体（ＰＲ）サブユニット、ならびに
   （ｂ）標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン
   を含み、前記膜貫通ドメインおよび前記細胞外ドメインが作動可能に連結されており；前記ＣＦＰが前記標的細胞の抗原に結合すると、前記ＣＦＰを発現する細胞の殺作用または食作用活性が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して少なくとも１０倍増加し、殺作用または食作用活性が前記ＣＦＰを発現する１００個の細胞当たりの貪食として算出される、組成物。
3. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが食作用または係留受容体に由来するか、または前記細胞内シグナル伝達ドメインが食作用活性化ドメインを含む、請求項１または２に記載の組成物。
4. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲ、またはＢａｉ１から選択される食作用受容体以外の受容体に由来する、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。
5. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、表２に列挙した受容体からなる群から選択される受容体に由来する、請求項１～４のいずれか一項に記載の組成物。
6. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
7. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＰＩ３Ｋ動員ドメインではない炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む、請求項６に記載の組成物。
8. キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物であって、ＣＦＰが、
   （ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、および
   （ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン
   を含む、食作用または係留受容体（ＰＲ）サブユニット、ならびに
   （ｂ）標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン
   を含み、前記膜貫通ドメインおよび前記細胞外ドメインが作動可能に連結されており；前記細胞内シグナル伝達ドメインが、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲα、およびＢａｉ１から選択される食作用受容体以外の食作用受容体に由来する、組成物。
9. 前記ＣＦＰが前記標的細胞の抗原に結合すると、前記ＣＦＰを発現する細胞の殺作用活性が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して少なくとも２０％より多く増加し；前記ＣＦＰを発現する細胞の殺作用または食作用活性が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して少なくとも２０％増加し；殺作用または食作用活性がフローサイトメトリーによって測定される、請求項８に記載の組成物。
10. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、レクチン、デクチン１、ＣＤ２０６、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、Ｆｃ－アルファ受容体Ｉ、ＣＲ１、ＣＤ３５、ＣＤ３ζ、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｔｉｍ－１、Ｔｉｍ－４、ＴＮＦＲ１、ＭＤＡ５、ＣＤ４０、およびＣＤ１６９からなる群から選択されるタンパク質に由来する、請求項８または９に記載の組成物。
11. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む、請求項８～１０のいずれか一項に記載の組成物。
12. キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物であって、ＣＦＰが、
    （ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、および
    （ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン
    を含む、食作用または係留受容体（ＰＲ）サブユニット、ならびに
    （ｂ）標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン
    を含み、前記膜貫通ドメインおよび前記細胞外ドメインが作動可能に連結されており；前記細胞内シグナル伝達ドメインが、レクチン、デクチン１、ＣＤ２０６、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、Ｆｃ－アルファ受容体Ｉ、ＣＲ１、ＣＤ３５、ＣＤ３ζ、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｔｉｍ－１、Ｔｉｍ－４、ＴＮＦＲ１、ＭＤＡ５、ＣＤ４０、およびＣＤ１６９からなる群から選択される食作用受容体に由来する、組成物。
13. 前記ＣＦＰが前記標的細胞の抗原に結合すると、前記ＣＦＰを発現する細胞の殺作用または食作用活性が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して少なくとも５５％増加する、請求項１２に記載の組成物。
14. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲα、またはＢａｉ１から選択される食作用受容体以外の食作用受容体に由来する、請求項１２または１３に記載の組成物。
15. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む、請求項１２～１４のいずれか一項に記載の組成物。
16. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＰＩ３Ｋ動員ドメインではない炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む、請求項１５に記載の組成物。
17. キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物であって、ＣＦＰが、
    （ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、および
    （ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン
    を含む、食作用または係留受容体（ＰＲ）サブユニット、ならびに
    （ｂ）標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン
    を含み、前記膜貫通ドメインおよび前記細胞外ドメインが作動可能に連結されており；前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＰＩ３Ｋ動員ドメインではない炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む、組成物。
18. キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物であって、
    （ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、および
    （ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン
    を含む、食作用または係留受容体（ＰＲ）サブユニット、ならびに
    （ｂ）標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン
    を含み、前記膜貫通ドメインおよび前記細胞外ドメインが作動可能に連結されており；前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＦＮＲ１受容体に由来するシグナル伝達ドメインを含む、組成物。
19. キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物であって、ＣＦＰが、
    （ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、および
    （ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン
    を含む、食作用または係留受容体（ＰＲ）サブユニット、ならびに
    （ｂ）標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン
    を含み、前記膜貫通ドメインおよび前記細胞外ドメインが作動可能に連結されており；前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ４０受容体に由来するシグナル伝達ドメインを含む、組成物。
20. キメラ融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物であって、ＣＦＰが、
    （ａ）（ｉ）膜貫通ドメイン、および
    （ｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン
    を含む、食作用または係留受容体（ＰＲ）サブユニット、ならびに
    （ｂ）標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン
    を含み、前記膜貫通ドメインおよび前記細胞外ドメインが作動可能に連結されており；前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＭＤＡ５に由来するシグナル伝達ドメインを含む、組成物。
21. 前記ＣＦＰが前記標的細胞の抗原に結合すると、前記ＣＦＰを発現する細胞の殺作用または食作用活性が、ＣＦＰを発現しない細胞と比較して少なくとも２０％より多く増加し、殺作用または食作用活性がフローサイトメトリーによって測定される、請求項１７～２０のいずれか一項に記載の組成物。
22. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが食作用受容体に由来する、請求項１７～２１のいずれか一項に記載の組成物。
23. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、Ｍｅｇｆ１０、ＭｅｒＴｋ、ＦｃＲ、またはＢａｉ１から選択される食作用受容体以外の食作用受容体に由来する、請求項１７～２２のいずれか一項に記載の組成物。
24. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、レクチン、デクチン１、ＣＤ２０６、スカベンジャー受容体Ａ１（ＳＲＡ１）、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ３６、ＣＤ１６３、ＭＳＲ１、ＳＣＡＲＡ３、ＣＯＬＥＣ１２、ＳＣＡＲＡ５、ＳＣＡＲＢ１、ＳＣＡＲＢ２、ＣＤ６８、ＯＬＲ１、ＳＣＡＲＦ１、ＳＣＡＲＦ２、ＣＸＣＬ１６、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＢ２、ＳＲＣＲＢ４Ｄ、ＳＳＣ５Ｄ、ＣＤ２０５、ＣＤ２０７、ＣＤ２０９、ＲＡＧＥ、ＣＤ１４、ＣＤ６４、Ｆ４／８０、ＣＣＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＳＦ１Ｒ、Ｔｉｅ２、ＨｕＣＲＩｇ（Ｌ）、ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ８９、Ｆｃ－アルファ受容体Ｉ、ＣＲ１、ＣＤ３５、ＣＤ３ζ、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｔｉｍ－１、Ｔｉｍ－４、ＴＮＦＲ１、ＭＤＡ５、ＣＤ４０、およびＣＤ１６９からなる群から選択される食作用受容体に由来する、請求項１７～２３のいずれか一項に記載の組成物。
25. 前記細胞内シグナル伝達ドメインがＰＩ３Ｋ動員ドメインを含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の組成物。
26. 前記細胞内シグナル伝達ドメインがＦｃＲγ細胞内ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
27. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＦｃＲγ細胞内ドメインおよびＣＤ４０受容体細胞内シグナル伝達ドメインをＮからＣの順で含む、請求項２６に記載の組成物。
28. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＦｃＲγ細胞内ドメインおよびＣＤ４０受容体細胞内シグナル伝達ドメインをＣからＮの順で含む、請求項２６に記載の組成物。
29. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＦｃＲγ細胞内ドメインおよびＴＮＦＲ１受容体細胞内シグナル伝達ドメインをＮからＣの順で含む、請求項２６に記載の組成物。
30. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＦｃＲγ細胞内ドメインおよびＴＮＦＲ１受容体細胞内シグナル伝達ドメインをＣからＮの順で含む、請求項２６に記載の組成物。
31. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＦｃＲγ細胞内ドメインおよびＭＤＡ５シグナル伝達ドメインをＮからＣの順で含む、請求項２６に記載の組成物。
32. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＦｃＲγ細胞内ドメインおよびＭＤＡ５シグナル伝達ドメインをＣからＮの順で含む、請求項２６に記載の組成物。
33. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＦｃＲγ細胞内ドメインおよびＰＩ３Ｋ動員ドメインをＮからＣの順で含む、請求項２６に記載の組成物。
34. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＦｃＲγ細胞内ドメインおよびＰＩ３Ｋ動員ドメインをＣからＮの順で含む、請求項２６に記載の組成物。
35. 前記ＣＦＰが細胞で発現される場合、前記ＣＦＰが細胞の細胞膜に機能的に組み込まれる、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
36. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、前記抗原を発現する標的細胞の食作用の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
37. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、前記抗原を発現する標的細胞の食作用の少なくとも１．１倍の増加を示し、食作用がフローサイトメトリーによって測定される、請求項３６に記載の組成物。
38. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、前記抗原を発現する標的細胞の食作用の少なくとも１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、または５０倍の増加を示し、食作用がフローサイトメトリーによって測定される、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
39. 前記抗原を発現する標的細胞ががん細胞である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
40. 前記抗原を発現する標的細胞が少なくとも直径０．８ミクロンである、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
41. 前記細胞内シグナル伝達ドメインがスカベンジャー受容体に由来する、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
42. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、サイトカインの産生の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
43. 前記サイトカインが、ＩＬ－１、ＩＬ３、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＣＳＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ１７、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、インターフェロンおよびこれらの組合せからなる群から選択される、請求項４２に記載の組成物。
44. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、エフェクター活性の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
45. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、交差提示の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
46. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質の発現の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
47. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ８０の発現の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
48. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ８６の発現の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
49. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＭＨＣクラスＩタンパク質の発現の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
50. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＴＲＡＩＬ／ＴＮＦファミリー細胞死受容体の発現の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
51. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、Ｂ７－Ｈ２の発現の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
52. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＬＩＧＨＴの発現の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
53. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＨＶＥＭの発現の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
54. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ４０の発現の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
55. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＴＬ１Ａの発現の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
56. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、４１ＢＢＬの発現の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
57. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＯＸ４０Ｌの発現の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
58. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＧＩＴＲＬ細胞死受容体の発現の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
59. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ３０Ｌの発現の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
60. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＴＩＭ４の発現の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
61. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＴＩＭ１リガンドの発現の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
62. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＳＬＡＭの発現の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
63. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ４８の発現の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
64. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ５８の発現の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
65. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ１５５の発現の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
66. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＣＤ１１２の発現の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
67. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＰＤＬ１の発現の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
68. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、Ｂ７－ＤＣの発現の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
69. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、呼吸性バーストの増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
70. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ＲＯＳ産生の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
71. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ｉＮＯＳ産生の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
72. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、ｉＮＯＳ産生の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
73. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、細胞外小胞産生の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
74. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、前記抗原を発現する標的細胞によるトロゴサイトーシスの増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
75. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、食作用のＣＤ４７媒介性阻害に対する抵抗性の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
76. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、前記ＣＦＰを発現しない細胞と比較して、食作用のＬＩＬＲＢ１媒介性阻害に対する抵抗性の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
77. 前記細胞内ドメインが、Ｒａｃ阻害ドメイン、Ｃｄｃ４２阻害ドメインまたはＧＴＰａｓｅ阻害ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
78. 前記Ｒａｃ阻害ドメイン、前記Ｃｄｃ４２阻害ドメインまたは前記ＧＴＰａｓｅ阻害ドメインが、前記ＣＦＰを発現する細胞の食作用カップにおいてＲａｃ、Ｃｄｃ４２またはＧＴＰａｓｅを阻害する、請求項６４に記載の組成物。
79. 前記細胞内ドメインが、Ｆ－アクチン解離活性化ドメイン、ＡＲＨＧＡＰ１２活性化ドメイン、ＡＲＨＧＡＰ２５活性化ドメインまたはＳＨ３ＢＰ１活性化ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
80. 前記ＣＦＰを発現する細胞が、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸産生の増加を示す、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
81. 前記細胞外ドメインがＩｇ結合ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
82. 前記細胞外ドメインが、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＦｃＲγＩ、ＦｃＲγＩＩＡ、ＦｃＲγＩＩＢ、ＦｃＲγＩＩＣ、ＦｃＲγＩＩＩＡ、ＦｃＲγＩＩＩＢ、ＦｃＲｎ、ＴＲＩＭ２１、ＦｃＲＬ５結合ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
83. 前記細胞外ドメインがＦｃＲ細胞外ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
84. 前記細胞外ドメインが、ＦｃＲ－アルファ、ＧｃＲβ、ＦｃＲεまたはＦｃＲγ細胞外ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
85. 前記細胞外ドメインがＦｃＲα（ＦＣＡＲ）細胞外ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
86. 前記細胞外ドメインがＦｃＲβ細胞外ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
87. 前記細胞外ドメインがＦｃＲε（ＦＣＥＲ１Ａ）細胞外ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
88. 前記細胞外ドメインが、ＦｃＲγ（ＦＤＧＲ１Ａ、ＦＣＧＲ２Ａ、ＦＣＧＲ２Ｂ、ＦＣＧＲ２Ｃ、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＧＲ３Ｂ）細胞外ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
89. 前記細胞外ドメインがインテグリンドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
90. 前記細胞外ドメインが、１つまたは複数のインテグリンα１、α２、αＩＩｂ、α３、α４、α５、α６、α７、α８、α９、α１０、α１１、αＤ、αＥ、αＬ、αＭ、αＶ、αＸ、β１、β２、β３、β４、β５、β６、β７、またはβ８ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
91. 前記細胞内ドメインがＣＤ４７阻害ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
92. 前記ＰＲサブユニットが、前記膜貫通ドメインに作動可能に連結した細胞外ドメインおよび細胞外抗原結合ドメインをさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
93. 前記細胞外ドメインが、受容体の細胞外ドメイン、ヒンジ、スペーサーまたはリンカーをさらに含む、請求項９２に記載の組成物。
94. 前記細胞外ドメインがＰＲの細胞外部分を含む、請求項９３に記載の組成物。
95. 前記ＰＲの前記細胞外部分が、前記ＰＲ細胞内シグナル伝達ドメインと同じＰＲに由来する、請求項９４に記載の組成物。
96. 前記細胞外ドメインが、スカベンジャー受容体または免疫グロブリンドメインの細胞外ドメインを含む、請求項９２～９５のいずれか一項に記載の組成物。
97. 前記免疫グロブリンドメインが免疫グロブリンの細胞外ドメインまたは免疫グロブリンヒンジ領域を含む、請求項９６に記載の組成物。
98. 前記細胞外ドメインが食作用貪食マーカーを含む、請求項９２～９７のいずれか一項に記載の組成物。
99. 前記細胞外ドメインが多量体アセンブリー可能な構造を含む、請求項９２～９８のいずれか一項に記載の組成物。
100. 前記細胞外ドメインが多量体化の足場を含む、請求項９２～９８のいずれか一項に記載の組成物。
101. 前記細胞外ドメインが少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、３００、４００、または５００アミノ酸長である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
102. 前記細胞外ドメインが最大５００、４００、３００、２００、または１００アミノ酸長である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
103. 前記細胞外抗原結合ドメインが、標的細胞の抗原に特異的に結合する、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
104. 前記細胞外抗原結合ドメインが抗体ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
105. 前記細胞外抗原結合ドメインが、受容体ドメイン、抗体ドメインを含み、前記抗体ドメインが機能的抗体断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ナノボディ、Ｖ_Ｈドメイン、Ｖ_Ｌドメイン、ＶＮＡＲドメイン、Ｖ_ＨＨドメイン、二重特異性抗体、ディアボディ、またはこれらの機能的断片もしくは組合せを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
106. 前記細胞外抗原結合ドメインがリガンド、受容体の細胞外ドメインまたはアダプターを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
107. 前記細胞外抗原結合ドメインが、単一の抗原に特異的な単一の細胞外抗原結合ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
108. 前記細胞外抗原結合ドメインが少なくとも２つの細胞外抗原結合ドメインを含み、少なくとも２つの細胞外抗原結合ドメインのそれぞれが異なる抗原に特異的である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
109. 前記抗原が、がん抗原または病原性抗原または自己免疫抗原である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
110. 前記抗原がウイルス抗原を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
111. 前記抗原がＴリンパ球抗原である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
112. 前記抗原が細胞外抗原である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
113. 前記抗原が細胞内抗原である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
114. 前記抗原が、チミジンキナーゼ（ＴＫ１）、ヒポキサンチン－グアニン ホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）、ムチン－１、ムチン－１６（ＭＵＣ１６）、ＭＵＣ１、上皮増殖因子受容体ｖＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、メソテリン、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）、メソテリン、ＥＢＮＡ－１、ＬＥＭＤ１、ホスファチジルセリン、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、卵胞刺激ホルモン受容体、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、エリスロポエチン産生肝細胞癌Ａ２（ＥｐｈＡ２）、ＥｐｈＢ２、ナチュラルキラー群２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）リガンド、ジシアロガングリオシド２（ＧＤ２）、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４５、ＣＤ５６ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９７、ＣＤ１１７、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ２１３Ａ２、ＣＤ２４８、ＣＤ２７６、ＰＳＣＡ、ＣＳ－１、ＣＬＥＣＬ１、ＧＤ３、ＰＳＭＡ、ＦＬＴ３、ＴＡＧ７２、ＥＰＣＡＭ、ＩＬ－１、インテグリン受容体、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲ－β、ＳＳＥＡ－４、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧＭ３、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ＩＧＬＬ１、皮膚リンパ球関連抗原（ＣＬＡ）およびこれらの組合せからなる群から選択される、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
115. 前記抗原が、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲ４、ＣＤ８、ＣＤ３０、ＣＤ４５、ＣＤ５６および皮膚リンパ球関連抗原（ＣＬＡ）からなる群から選択される、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
116. 前記抗原がＣＤ５抗原である、請求項１１４に記載の組成物。
117. 前記抗原がＨＥＲ２抗原である、請求項１１４に記載の組成物。
118. 前記抗原が卵巣がん抗原またはＴリンパ腫抗原である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
119. 前記抗原がインテグリン受容体である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
120. 前記抗原が、α１、α２、αＩＩｂ、α３、α４、α５、α６、α７、α８、α９、α１０、α１１、αＤ、αＥ、αＬ、αＭ、αＶ、αＸ、β１、β２、β３、β４、β５、β６、β７、およびβ８からなる群から選択されるインテグリン受容体である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
121. 前記抗原が、２つまたはそれ以上の抗原を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
122. 前記膜貫通ドメインおよび前記細胞外抗原結合ドメインがリンカーを通して作動可能に連結されている、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
123. 前記膜貫通ドメインおよび前記細胞外抗原結合ドメインが、ＣＤ８α、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４のヒンジ領域などのリンカーを通して作動可能に連結されている、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
124. 前記細胞外ドメインが多量体化足場を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
125. 前記膜貫通ドメインがＦｃＲ膜貫通ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
126. 前記膜貫通ドメインが、２０、１０または５以下の改変膜貫通ドメインを有するＦｃＲ－εを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
127. 前記膜貫通ドメインが、シンタキシン３またはシンタキシン４またはシンタキシン５などのシンタキシンからの膜貫通ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
128. 前記膜貫通ドメインがＣＤ８膜貫通ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
129. 前記膜貫通ドメインがＣＤ２８膜貫通ドメインまたはＣＤ２膜貫通ドメインを含む、請求項１～１２７のいずれか一項に記載の組成物。
130. 前記膜貫通ドメインがＣＤ６８膜貫通ドメインを含む、請求項１～１２７のいずれか一項に記載の組成物。
131. 前記ＣＦＰが細胞で発現される場合、前記膜貫通ドメインが、内在性受容体の膜貫通ドメインとオリゴマー化する、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
132. 前記ＣＦＰが細胞で発現される場合、前記膜貫通ドメインが、外因性受容体の膜貫通ドメインとオリゴマー化する、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
133. 前記ＣＦＰが細胞で発現される場合、前記膜貫通ドメインが、内在性受容体の膜貫通ドメインと二量体化する、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
134. 前記ＣＦＰが細胞で発現される場合、前記膜貫通ドメインが、外因性受容体の膜貫通ドメインと二量体化する、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
135. 前記膜貫通ドメインが、前記細胞内シグナル伝達ドメインが由来するタンパク質とは異なるタンパク質に由来する、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
136. 前記膜貫通ドメインが、前記細胞外ドメインが由来するタンパク質とは異なるタンパク質に由来する、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
137. 前記膜貫通ドメインが食作用受容体の膜貫通ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
138. 前記膜貫通ドメインおよび前記細胞外ドメインが同じタンパク質に由来する、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
139. 前記膜貫通ドメインが、前記細胞内シグナル伝達ドメインと同じタンパク質に由来する、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
140. 前記組換え核酸がＤＡＰ１２動員ドメインをコードする、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
141. 前記膜貫通ドメインが、ＤＡＰ１２とオリゴマー化する膜貫通ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
142. 前記膜貫通ドメインが少なくとも１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１または３２アミノ酸長である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
143. 前記膜貫通ドメインが最大１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１または３２アミノ酸長である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
144. 前記細胞内ドメインがホスファターゼ阻害ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
145. 前記細胞内ドメインがＡＲＰ２／３阻害ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
146. 前記細胞内ドメインが少なくとも１つのＩＴＡＭドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
147. 前記細胞内ドメインが少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のＩＴＡＭドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
148. 前記細胞内ドメインが少なくとも１つのＩＴＡＭドメインをさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
149. 前記細胞内ドメインが、ＣＤ３ゼータＴＣＲサブユニット、ＣＤ３イプシロンＴＣＲサブユニット、ＣＤ３ガンマＴＣＲサブユニット、ＣＤ３デルタＴＣＲサブユニット、ＴＣＲゼータ鎖、Ｆｃイプシロン受容体１鎖、Ｆｃイプシロン受容体２鎖、Ｆｃガンマ受容体１鎖、Ｆｃガンマ受容体２ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体２ｂ１鎖、Ｆｃガンマ受容体２ｂ２鎖、Ｆｃガンマ受容体３ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体３ｂ鎖、Ｆｃベータ受容体１鎖、ＴＹＲＯＢＰ（ＤＡＰ１２）、ＣＤ５、ＣＤ１６ａ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８９、ＣＤ２７８、ＣＤ６６ｄ、これらの機能的断片、およびこれらに対して少なくとも１つから２０以下の改変を有するこれらのアミノ酸配列の群から選択される少なくとも１つのＩＴＡＭドメインをさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
150. 前記少なくとも１つのＩＴＡＭドメインがＳｒｃファミリーキナーゼリン酸化部位を含む、請求項１４９に記載の組成物。
151. 前記少なくとも１つのＩＴＡＭドメインがＳｙｋ動員ドメインを含む、請求項１４９に記載の組成物。
152. 前記細胞内ドメインがＦ－アクチン脱重合活性化ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
153. 前記細胞内ドメインが酵素活性を欠如する、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
154. 前記細胞内ドメインが、ＣＤ３ゼータ細胞内ドメインに由来するドメインを含まない、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
155. 前記細胞内ドメインがＣＤ４７阻害ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
156. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＰＳＧＬ－１の細胞内領域などのインテグリンを活性化するドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
157. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＥＰＡＣおよびＣ３Ｇ由来のものなどのＲａｐ１ ＧＴＰａｓｅを活性化するドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
158. 前記細胞内シグナル伝達ドメインがパキシリン由来である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
159. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが接着斑キナーゼを活性化する、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
160. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが単一の食作用受容体に由来する、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
161. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが単一のスカベンジャー受容体に由来する、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
162. 前記細胞内ドメインが食作用増強ドメインをさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
163. 前記細胞内ドメインが炎症促進性シグナル伝達ドメインを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
164. 前記炎症促進性シグナル伝達ドメインが、キナーゼ活性化ドメインまたはキナーゼ結合ドメインを含む、請求項１６３に記載の組成物。
165. 前記炎症促進性シグナル伝達ドメインが、ＩＬ－１シグナル伝達カスケード活性化ドメインを含む、請求項１６３または１６４に記載の組成物。
166. 前記炎症促進性シグナル伝達ドメインが、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９、ＴＲＩＦ、ＲＩＧ－１、ＭＹＤ８８、ＭＡＬ、ＩＲＡＫ１、ＭＤＡ－５、ＩＦＮ受容体、ＮＬＲＰファミリーメンバー、ＮＬＲＰ１－１４、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、パイリン、ＡＩＭ２、ＮＬＲＣ４、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＥＲＩＧ、ＣＤ４０、Ｔａｎｋ結合キナーゼ（ＴＮＫ）、カスパーゼドメインまたはプロカスパーゼ結合ドメインまたはこれらの任意の組合せに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項１６３～１６５のいずれか一項に記載の組成物。
167. 前記ＣＦＰが全長の細胞内シグナル伝達ドメインを含まない、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
168. 前記細胞内ドメインが少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、３００、３００、４００、または５００アミノ酸長である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
169. 前記細胞内ドメインが最大１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、３００、３００、４００、または５００アミノ酸長である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
170. 前記組換え核酸が、ＦｃＲα鎖細胞外ドメイン、ＦｃＲα鎖膜貫通ドメインおよび／またはＦｃＲα鎖細胞内ドメインをコードする、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
171. 前記組換え核酸が、ＦｃＲβ鎖細胞外ドメイン、ＦｃＲβ鎖膜貫通ドメインおよび／またはＦｃＲβ鎖細胞内ドメインをコードする、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
172. 前記ＦｃＲα鎖または前記ＦｃＲβ鎖が、細胞で発現される場合、ＦｃＲγと複合体を形成する、請求項１７０または１７１に記載の組成物。
173. 前記ＦｃＲα鎖またはＦｃＲβ鎖が、細胞で発現される場合、内在性ＦｃＲγと複合体を形成する、請求項１７２に記載の組成物。
174. 前記ＦｃＲα鎖または前記ＦｃＲβ鎖が、ＦｃＲγを発現しない細胞の細胞膜に組み込まれない、請求項１７０～１７３のいずれか一項に記載の組成物。
175. 前記ＣＦＰがＦｃＲα鎖細胞内シグナル伝達ドメインを含まない、請求項１７０～１７４のいずれか一項に記載の組成物。
176. 前記ＣＦＰがＦｃＲβ鎖細胞内シグナル伝達ドメインを含まない、請求項１７０～１７５のいずれか一項に記載の組成物。
177. 前記組換え核酸が、ＴＲＥＭ細胞外ドメイン、ＴＲＥＭ膜貫通ドメインおよび／またはＴＲＥＭ細胞内ドメインをコードする、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
178. 前記ＴＲＥＭが、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２またはＴＲＥＭ３である、請求項１７７に記載の組成物。
179. 食作用または係留受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物であって、ＣＦＰが、Ｎ末端からＣ末端に
     （ａ）標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインと、
     （ｂ）（ｉ）ＣＤ８膜貫通ドメイン、ならびに
     （ｉｉ）Ｆｃγ細胞内シグナル伝達ドメインおよびＣＤ４０細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン
     を含むＰＲサブユニットと
     を含み、前記膜貫通ドメインおよび前記細胞外ドメインがリンカーによって作動可能に連結されている、組成物。
180. 食作用または係留受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物であって、ＣＦＰが、Ｎ末端からＣ末端に
     （ａ）標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインと、
     （ｂ）（ｉ）ＣＤ８膜貫通ドメイン、ならびに
     （ｉｉ）Ｆｃγ細胞内シグナル伝達ドメインおよびＴＮＦＲ１細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン
     を含むＰＲサブユニットと
     を含み、前記膜貫通ドメインおよび前記細胞外ドメインがリンカーによって作動可能に連結されている、組成物。
181. 食作用または係留受容体（ＰＲ）融合タンパク質（ＣＦＰ）をコードする組換え核酸を含む組成物であって、ＣＦＰが、Ｎ末端からＣ末端に
     （ａ）標的細胞の抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインと、
     （ｂ）（ｉ）ＣＤ８膜貫通ドメイン、ならびに
     （ｉｉ）Ｆｃγ細胞内シグナル伝達ドメインおよびＭＤＡ５シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメイン
     を含むＰＲサブユニットと
     を含み、前記膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインがリンカーによって作動可能に連結されている、組成物。
182. 前記抗原がＣＤ５抗原である、請求項１７９～１８１のいずれか一項に記載の組成物。
183. 前記抗原がＨＥＲ２抗原である、請求項１７９～１８１のいずれか一項に記載の組成物。
184. 前記ＣＦＰがシグナルペプチドをさらに含む、請求項１７９～１８３のいずれか一項に記載の組成物。
185. 前記シグナルペプチドがＧＭＣＳＦシグナルペプチドである、請求項１８４に記載の組成物。
186. 前記ＣＦＰが配列番号２４のアミノ酸配列を含む、請求項１８４に記載の組成物。
187. 前記ＣＦＰが配列番号２５のアミノ酸配列を含む、請求項１８４に記載の組成物。
188. 前記ＣＦＰが配列番号２６のアミノ酸配列を含む、請求項１８４に記載の組成物。
189. 前記組換え核酸が、炎症促進性ポリペプチドをコードする炎症促進性ヌクレオチドまたはポリヌクレオチド配列を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
190. 前記組成物が炎症促進性ポリペプチドをさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
191. 前記炎症促進性ポリペプチドがケモカインまたはサイトカインである、請求項１８９または１９０に記載の組成物。
192. 前記ケモカインが、ＩＬ－１、ＩＬ３、ＩＬ５、ＩＬ－６、ｉｌ８、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＣＳＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ１７、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、インターフェロンからなる群から選択される、請求項１９１に記載の組成物。
193. 前記サイトカインが、ＩＬ－１、ＩＬ３、ＩＬ５、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＣＳＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ１７、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、インターフェロンからなる群から選択される、請求項１９１に記載の組成物。
194. 前記ヌクレオチドが、ＡＴＰ、ＡＤＰ、ＵＴＰ、ＵＤＰ、および／またはＵＤＰ－グルコースから選択される、請求項１８９に記載の組成物。
195. 前記組換え核酸が、炎症の恒常性制御因子をコードする配列を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
196. 前記炎症の恒常性制御因子がｍＲＮＡの非翻訳領域（ＵＴＲ）の配列である、請求項１９５に記載の組成物。
197. 前記ＵＴＲの前記配列が、ＲＮＡ結合タンパク質に結合する配列である、請求項１９６に記載の組成物。
198. ＲＮＡ結合タンパク質が非翻訳領域（ＵＴＲ）の配列に結合すると、翻訳が阻害または防止される、請求項１９６または１９７に記載の組成物。
199. 前記ＵＴＲの前記配列がＷＷＷＵ（ＡＵＵＵＡ）ＵＵＵＷのコンセンサス配列を含み、ＷがＡまたはＵである、請求項１９７または１９８に記載の組成物。
200. 前記組換え核酸がバイシストロニックなベクターで発現される、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
201. 前記標的細胞が哺乳動物細胞である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
202. 前記標的細胞がヒト細胞である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
203. 前記標的細胞が病原体によって感染された細胞を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
204. 前記標的細胞ががん細胞である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
205. 前記標的細胞が、リンパ球であるがん細胞である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
206. 前記標的細胞が、卵巣がん細胞であるがん細胞である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
207. 前記標的細胞が、卵巣膵臓細胞であるがん細胞である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
208. 前記標的細胞が、神経膠芽腫細胞であるがん細胞である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
209. 前記組換え核酸がＤＮＡである、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
210. 前記組換え核酸がＲＮＡである、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
211. 前記組換え核酸がｍＲＮＡである、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
212. 前記組換え核酸がｃｉｒｃＲＮＡである、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
213. 前記組換え核酸がｔＲＮＡである、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
214. 前記組換え核酸がｍｉｃｒｏＲＮＡである、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
215. 請求項１～２１４のいずれか一項に記載の組成物の組換え核酸を含むベクター。
216. ウイルスベクターである、請求項２１５に記載のベクター。
217. 前記ウイルスベクターがレトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターである、請求項２１６に記載のベクター。
218. １つまたは複数のポリペプチドをコードする少なくとも１つの核酸配列に作動可能に連結したプロモーターをさらに含む、請求項２１５～２１７のいずれか一項に記載のベクター。
219. ポリシストロニックである、請求項２１５～２１８のいずれか一項に記載のベクター。
220. 前記少なくとも１つの核酸配列のそれぞれが別々のプロモーターに作動可能に連結されている、請求項２１８または２１９に記載のベクター。
221. １つまたは複数の配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）をさらに含む、請求項２１５～２２０のいずれか一項に記載のベクター。
222. １つまたは複数のポリペプチドをコードする少なくとも１つの核酸配列に隣接する５’ＵＴＲおよび／または３’ＵＴＲをさらに含む、請求項２１５～２２１のいずれか一項に記載のベクター。
223. １つまたは複数の調節性領域をさらに含む、請求項２１５～２２２のいずれか一項に記載のベクター。
224. 請求項１～２１４のいずれか一項に記載の組成物の組換え核酸によってコードされるポリペプチド。
225. 請求項１～２１４のいずれか一項に記載の組成物、請求項２１６～２２３のいずれか一項に記載のベクターまたは請求項２２４に記載のポリペプチドを含む細胞。
226. 未成熟骨髄性細胞である、請求項２２５に記載の細胞。
227. 非極性化または未分化骨髄性細胞である、請求項２２５に記載の細胞。
228. ＣＤ１４＋／ＣＤ１６^ｌｏｗ細胞である、請求項２２５に記載の細胞。
229. ＣＤ１４＋／ＣＤ１６^－細胞、ＣＤ１４^－／ＣＤ１６^＋細胞である、請求項２２５に記載の細胞。
230. 食細胞である、請求項２２５に記載の細胞。
231. 幹細胞由来細胞、骨髄性細胞、マクロファージ、樹状細胞、リンパ球、肥満細胞、単球、好中球、ミクログリア、好酸球、好塩基球、骨髄性前駆細胞、モザイク表現型細胞または星状細胞である、請求項２２５に記載の細胞。
232. Ｍ１マクロファージ細胞である、請求項２２５に記載の細胞。
233. Ｍ２マクロファージ細胞である、請求項２２５に記載の細胞。
234. 自家細胞である、請求項２２５～２３３のいずれか一項に記載の細胞。
235. 同種異系細胞である、請求項２２５～２３３のいずれか一項に記載の細胞。
236. 改変細胞の集団であって、改変細胞の複数の集団が請求項１～２１４のいずれか一項に記載の組成物、請求項２１６～２２３のいずれか一項に記載のベクター、または請求項２２４に記載のポリペプチドを含む、改変細胞の集団。
237. 前記複数が、改変細胞の集団の少なくとも８０％の集団を含む、請求項２３６に記載の改変細胞の集団。
238. 前記細胞の集団が濃縮されていない、請求項２３７に記載の改変細胞の集団。
239. 前記細胞の集団が、ＣＤ１４＋／ＣＤ１６－細胞、ＣＤ１４－／ＣＤ１６＋細胞またはＣＤ１４＋／ＣＤ１６^ｌｏｗ細胞である、請求項２３７または２３８に記載の改変細胞の集団。
240. 前記細胞の集団が食細胞である、請求項２３７または２３９に記載の改変細胞の集団。
241. （ａ）請求項１～２１４のいずれか一項に記載の組成物、請求項２１６～２２３のいずれか一項に記載のベクターまたは請求項２２４に記載のポリペプチド、請求項２２５～２３５のいずれか一項に記載の細胞、または請求項２３６～２４０のいずれか一項に記載の細胞の集団、および
     （ｂ）薬学的に許容される賦形剤
     を含む医薬組成物。
242. さらなる治療剤をさらに含む、請求項２４１に記載の医薬組成物。
243. 前記さらなる治療剤が、ＣＤ４７アゴニスト、Ｒａｃを阻害する薬剤、Ｃｄｃ４２を阻害する薬剤、ＧＴＰａｓｅを阻害する薬剤、Ｆアクチン解離を促進する薬剤、ＣＦＰへのＰＩ３Ｋ動員を促進する薬剤、ＰＩ３Ｋ活性を促進する薬剤、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸の産生を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ１２活性を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ２５活性を促進する薬剤、ＳＨ３ＢＰ１活性を促進する薬剤およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項２４１または２４２に記載の医薬組成物。
244. 前記薬学的に許容される賦形剤が無血清培地、脂質、またはナノ粒子を含む、請求項２４１～２４３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
245. 疾患の処置を必要とする対象における疾患を処置する方法であって、前記対象に請求項２４１～２４４のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法。
246. 前記疾患ががんである、請求項２４５に記載の方法。
247. 前記がんが固形がんである、請求項２４６に記載の方法。
248. 前記固形がんが、卵巣がん、卵巣がんを含む好適ながん、腎臓がん、乳がん、前立腺がん、肝臓がん、脳がん、リンパ腫、白血病、皮膚がん、膵臓がん、結腸直腸がん、肺がんからなる群から選択される、請求項２４７に記載の方法。
249. 前記がんが液性がんである、請求項２４６に記載の方法。
250. 前記液性がんが白血病またはリンパ腫である、請求項２４９に記載の方法。
251. 前記液性がんがＴ細胞リンパ腫である、請求項２４９に記載の方法。
252. 前記疾患がＴ細胞悪性腫瘍である、請求項２４５に記載の方法。
253. 前記対象にさらなる治療剤を投与するステップをさらに含む、請求項２４５～２５２のいずれか一項に記載の方法。
254. 前記さらなる治療剤が、ＣＤ４７アゴニスト、Ｒａｃを阻害する薬剤、Ｃｄｃ４２を阻害する薬剤、ＧＴＰａｓｅを阻害する薬剤、Ｆアクチン解離を促進する薬剤、ＣＦＰへのＰＩ３Ｋ動員を促進する薬剤、ＰＩ３Ｋ活性を促進する薬剤、ホスファチジルイノシトール３，４，５－三リン酸の産生を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ１２活性を促進する薬剤、ＡＲＨＧＡＰ２５活性を促進する薬剤、ＳＨ３ＢＰ１活性を促進する薬剤およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項２５３に記載の方法。
255. 前記投与するステップが注入するステップまたは注射するステップを含む、請求項２４５～２５４のいずれか一項に記載の方法。
256. 前記投与するステップが固形がんに直接投与するステップを含む、請求項２４５～２５５のいずれか一項に記載の方法。
257. 前記投与するステップが、ｃｉｒｃＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ウイルスベクター、粒子、ナノ粒子、リポソーム、エキソソームまたは細胞を投与するステップを含む、請求項２４５～２５６のいずれか一項に記載の方法。
258. 前記対象においてＣＤ４＋Ｔ細胞応答またはＣＤ８＋Ｔ細胞応答が誘発される、請求項２４５～２５７のいずれか一項に記載の方法。
259. 細胞を調製する方法であって、細胞を請求項１～２１４のいずれか一項に記載の組成物、請求項２１６～２２３のいずれか一項に記載のベクター、または請求項２２４に記載のポリペプチドと接触させるステップを含む方法。
260. 接触させるステップが形質導入するステップを含む、請求項２５９に記載の方法。
261. 形質導入するステップが、化学トランスフェクション、電気穿孔、ヌクレオフェクション、またはウイルス感染を含む、請求項２６０に記載の方法。
262. 医薬組成物を調製する方法であって、脂質を請求項１～２１４のいずれか一項に記載の組成物、請求項２１６～２２３のいずれか一項に記載のベクターまたは請求項２２４に記載のポリペプチドと接触させるステップを含む方法。
263. 接触させるステップが、脂質ナノ粒子を形成するステップを含む、請求項２６２に記載の方法。
264. 医薬組成物を調製する方法であって、抗体を請求項１～２１４のいずれか一項に記載の組成物または請求項２１６～２２３のいずれか一項に記載のベクターと接触させるステップを含む方法。
265. 接触させるステップが脂質ナノ粒子を形成するステップを含む、請求項２６４に記載の方法。
     

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