JP7270546B2

JP7270546B2 - 個体における認知的加齢を特定及び軽減するためのオメガ３脂肪酸及びビタミンｄレベル

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Publication number: JP7270546B2
Application number: JP2019550821A
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Inventors: ジーンボウマン，; ジュリー，ロールハドリー－ラベ，; イェルン，アントニウス，ヨハンネスシュミット，; コリーナボシャット，
Original assignee: ソシエテ・デ・プロデュイ・ネスレ・エス・アー
Priority date: 2017-04-11
Filing date: 2017-12-11
Publication date: 2023-05-10
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Description

本発明は、対象における認知機能の低下の素因を特定するための方法、及び認知機能の低下を低減又は予防するための薬剤に関し、特に、本発明の方法により特定された対象における認知機能の低下を低減又は予防するための薬剤に関する。

人口の高齢化は、注目すべき人口統計事象である。寿命の延長により、高齢者人口の増加が総人口の増加を上回るにつれて、高齢者人口の他の人口に対する割合は、出生率の低下もあって大幅に増加している。例えば、１９５０年代には６０歳以上の高齢者は１２人に１人であったのが、２０００年代の終わりには６０歳以上の高齢者は１０人に１人となっていた。２０５０年の終わりには、世界全体で５人に１人が６０歳以上になっているものと予測される。

高齢又は加齢個体は、年齢と共に進行する認知機能の低下を含む、ある程度の認知障害を患うことが多く、通常、年齢に関連する脳形態及び脳血管機能の変化が観察される。認知機能の低下は、処理速度、注意、エピソード記憶、空間能力、及び遂行機能を含む広範な認知領域の老化と併せて報告されている。脳の画像解析により、これらの正常な加齢に関連する認知機能の低下は、脳における灰白質及び白質の両方の容積の減少に関連しており、老化に伴って最も重く損傷を受けるのは前頭線条体系であることが判明している。このような皮質容積の減少は、時間経過に伴い酸化的損傷をもたらすフリーラジカルによる損傷の蓄積、慢性的な軽度の炎症、ホモシステイン（Ｈｃｙ）の蓄積、及びミトコンドリア効率の低下などの、通常の老化に関与する多くの有害な細胞プロセスに起因する場合がある。直接的な細胞の損傷に加え、脳は、微小血管構造の傷害からも間接的な損傷を受ける。老化、更には認知症の病理が、これらの因子間の複雑な相互作用を内包すること、また各作用は相関するものであることは明らかである。例えば、ミトコンドリアの機能不全は結果として酸化ストレスを増加させ、酸化ストレスは炎症及び血管損傷のトリガーとなり得る。

更に、認知機能の低下はアルツハイマー病理の初期の予測因子であり、認知症の発症前に始まる。この場合、認知についての総合得点が、認知症前の認知機能の低下を評価するための信頼性の高い手段となる。脳の健康を維持し、加齢に伴う認知機能の低下を予防することは、アルツハイマー病及び加齢に関連する他の神経病理に起因する認知症の発症を予防又は遅延させ得ることが、相当のエビデンスにより示されている。

近年、栄養摂取、学習、運動及び認知エクササイズが、加齢による認知機能の低下を予防し得る介入方法として実証されている。豊富な臨床的、疫学的、及び個別的エビデンスにより、個々の栄養因子が、加齢に関連する神経変性及び認知症リスクを低減することが裏付けられている。しかし、栄養学的介入についての公式の試験により得られた結果は錯綜している（Ｓｃｈｍｉｔｔｅｔａｌ．（２０１０）ＮｕｔｒｉｔｉｏｎＲｅｖｉｅｗｓ６８：Ｓ２－Ｓ５）。

いくつかの長期試験が行われたが、Ｂ６と、Ｂ１２と、葉酸塩との組み合わせを使用した介入では、認知機能に対するいかなる利益も観察されなかった。ＭｃＭａｈｏｎｅｔａｌ．（２００６）ＮＥｎｇｌＪＭｅｄ３５４（２６）：２７６４－２７７２では、葉酸塩（１０００μｇ）と、ビタミンＢ１２（５００μｇ）と、Ｂ６（１０ｍｇ）とを含有する栄養補助食品を２年摂取した後の６５歳超の成人の認知において効果は見られなかった。同様に、Ｈａｎｋｅｙｅｔａｌ．（２０１３）Ｓｔｒｏｋｅ４４（８）：２２３２－２２３９）によると、脳卒中又は一過性虚血発作の既往があるものの認知機能は損なわれていない患者に対し、葉酸（２０００μｇ）、ビタミンＢ６（２５ｍｇ）及びビタミンＢ１２（５００μｇ）を毎日補給させた場合、中央値で２．８年の間、平均ｔＨｃｙが低下したが、ミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）によって測定される認知障害又は認知機能の低下の発生には効果がなかったことが判明している。

いくつかの短期試験においてもまた、認知機能の改善について、Ｂ６と、Ｂ１２と、葉酸塩とを組み合わせることによる効果を示すことができなかった。Ｌｅｗｅｒｉｎｅｔａｌ．（２００５）ＡｍＪＣｌｉｎＮｕｔｒ８１（５）：１１５５－１１６２では、葉酸（８００μｇ）、ビタミンＢ１２（５００μｇ）及びビタミンＢ６（３ｍｇ）の４ヶ月間の補給では、高齢者（年齢中央値７６歳）における認知に効果はなかったことが判明している。

したがって、対象における認知機能の低下を低減又は予防する方法が依然として強く必要とされている。更に、認知機能の低下の素因がある対象を特定すること、例えば、認知機能の低下の発生及び／又は程度を低減するために、それらの対象における早期の介入治療を可能にすることが必要とされている。

本発明者らは、マルチドメインアルツハイマー予防試験（Ｍｕｌｔｉ－ｄｏｍａｉｎＡｌｚｈｅｉｍｅｒＰｒｅｖｅｎｔｉｖｅＴｒｉａｌ、ＭＡＰＴ；７０歳以上の１６８０人の認知症ではない成人の認知機能の低下の予防において、オメガ３栄養補助食品、栄養カウンセリングと、身体運動と、認知的エンゲージメント（ｃｏｇｎｉｔｉｖｅｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ）とからなるマルチドメイン介入、又は栄養補助食品とマルチドメイン介入との組み合わせの効果を、プラセボに対して評価するように設計された研究）に由来する保存された生体試料を利用し、認知機能の低下及び認知症に向かう異なる経路を表す３つのバイオマーカーを定量した。バイオマーカーは、一炭素代謝障害のマーカーとしてホモシステインと、脳におけるビタミンＤ結合タンパク質及び受容体活性の障害についてのステロイドホルモンマーカーとして２５－ヒドロキシビタミンＤと、脂肪酸代謝の指標であるオメガ３指数とした。本発明者らは、これらのマーカーのそれぞれが認知機能の低下に関する独立したリスク因子であり、これらが組み合わせられることで、認知機能の低下速度が増すことを見出した。

これらの知見に基づいて、本発明者らは、オメガ－３脂肪酸、ホモシステイン及びビタミンＤレベルに基づく「栄養リスク指数（ＮＲＩ）」を開発した。この指数は、年齢、性別、教育、ＡＰＯＥ４遺伝子型及び介入アームとは無関係に、認知機能の低下の推移が異なる成人を特定する。ＮＲＩにおける各点の増加は、３年にわたり認知機能の低下が加速されていることに関連する。これらのデータは、低ビタミンＤ３及び低赤血球オメガ３脂肪酸、及び／又は高ホモシステインに起因する栄養リスクを低減させると、加齢に関連する認知機能の低下を低減又は予防することができることを示唆している。

更に、本発明者らは、認知機能の低下、認知症リスク、及び加齢関連神経変性の低減を試みる従来の栄養学的介入は、栄養素を単独で投与することに目を向けており、十分な認識のもとにそれらを組み合わせて、栄養素の相互作用により効果を増強させるものではなかったものと考える。更に、認知機能に対する混合成分の効果を調査した研究では、構成成分の全てが同じ機序を標的とする混合物（例えば、ホモシステインのレベルを標的とする葉酸塩とビタミンＢ１２とＢ６との混合物、又は酸化的損傷を標的とするビタミンＣとビタミンＥの混合物）を使用しており、この点が、このエビデンスが単一成分による研究と同様の矛盾を示す理由である可能性がある。対照的に、本開示は、介入治療のそれぞれが認知機能の低下に関連する異なるリスク要因を標的とする、複数の介入によるアプローチに関する。

したがって、一態様では、本発明は対象における認知機能の低下の素因を特定するための方法であって、対象から得られた１つ以上の試料において、独立して、
（ａ）オメガ－３脂肪酸、及びビタミンＤ若しくはこれらの代謝産物、
（ｂ）オメガ－３脂肪酸、及びホモシステイン、
（ｃ）ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及びホモシステイン、又は
（ｄ）オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及びホモシステイン
のレベルを測定することを含む、方法を提供する。

一実施形態では、この方法は、オメガ－３脂肪酸、及びビタミンＤ又はその代謝産物のレベルを測定することを含む。一実施形態では、この方法は、オメガ－３脂肪酸、及びホモシステインのレベルを測定することを含む。一実施形態では、この方法は、ビタミンＤ又はその代謝産物、及びホモシステインのレベルを測定することを含む。

好ましい実施形態では、この方法は、オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ又はその代謝産物、及びホモシステインのレベルを測定することを含む。

一実施形態では、この方法は、
（ａ）対象から得られた１つ以上の試料において、独立して、オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、又はホモシステインのうち２つ以上のレベルを測定することと、
（ｂ）オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、又はホモシステインのうちの２つ以上のレベルを、２つ以上の基準値と比較することと、を含み、
２つ以上の基準値と比較したオメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、又ホモシステインの２つ以上のレベルは、対象における認知機能の低下の素因を示す。

一実施形態では、
（ａ）オメガ－３脂肪酸のレベルが測定され、基準値と比較した対象由来の試料中のオメガ－３脂肪酸のレベルの減少が、認知機能の低下の素因を示す、
（ｂ）ビタミンＤ若しくはその代謝産物のレベルが測定され、基準値と比較した対象由来の試料中のビタミンＤ若しくはその代謝産物のレベルの減少が、認知機能の低下の素因を示す、及び／又は
（ｃ）ホモシステインのレベルが測定され、基準値と比較した対象由来の試料中のホモシステインのレベルの増加が、認知機能の低下の素因を示す。

一実施形態では、１つ以上の試料は、血液試料、血漿試料、及び血清試料からなる群から独立して選択される。

一実施形態では、オメガ－３脂肪酸のレベルは、血液試料、好ましくは赤血球試料で測定される。一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物のレベルは、血清試料で測定される。一実施形態では、ホモシステインのレベルは、血漿試料で測定される。

一実施形態では、オメガ－３脂肪酸は、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及び／又はドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）である。好ましい実施形態では、オメガ－３脂肪酸は、赤血球膜ＥＰＡ及び／又は赤血球膜ＤＨＡである。

一実施形態では、オメガ－３脂肪酸はＥＰＡである。一実施形態では、オメガ－３脂肪酸はＤＨＡである。一実施形態では、オメガ－３脂肪酸はＥＰＡ及びＤＨＡである。好ましい実施形態では、オメガ－３脂肪酸は赤血球膜ＥＰＡである。好ましい実施形態では、オメガ－３脂肪酸は赤血球膜ＤＨＡである。特に好ましい実施形態では、オメガ－３脂肪酸は、赤血球膜ＥＰＡ及び赤血球膜ＤＨＡである。

一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、ビタミンＤ３、ビタミンＤ２、２５－ヒドロキシビタミンＤ３及び／又は２５－ヒドロキシビタミンＤ２である。

一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物はビタミンＤ３である。一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物はビタミンＤ２である。一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、２５－ヒドロキシビタミンＤ３である。一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、２５－ヒドロキシビタミンＤ２である。

好ましい実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、２５－ヒドロキシビタミンＤである。好ましい実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、２５－ヒドロキシビタミンＤ３及び２５－ヒドロキシビタミンＤ２である。

一実施形態では、試料中のオメガ３脂肪酸のレベルは、ガスクロマトグラフィーを使用して測定される。一実施形態では、試料中のビタミンＤ又はその代謝産物のレベルは、電気化学発光結合アッセイを使用して測定される。一実施形態では、試料中のホモシステインのレベルは、酵素サイクリングアッセイを用いて測定される。

一実施形態では、対象はヒト対象者である。

一実施形態では、対象は老化しているヒト対象である。一実施形態では、対象は、少なくとも５０歳、５５歳、６０歳、６５歳、７０歳、７５歳、８０歳、８５歳、９０歳又は９５歳のヒト対象である。好ましい実施形態では、対象は、５０歳以上のヒト対象である。特に好ましい実施形態では、対象は、７０歳以上のヒト対象である。

一実施形態では、対象は認知症を有さない。

一実施形態では、対象は、ベースラインで０．５の臨床的認知症尺度（ＣＤＲ）を有する。

一実施形態では、対象は、ベースラインで心臓血管リスク因子、加齢及び認知症（ＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＲｉｓｋＦａｃｔｏｒｓ，ＡｇｉｎｇａｎｄＤｅｍｅｎｔｉａ、ＣＡＩＤＥ）において１０～１５のリスクスコアを有する。

一実施形態では、対象は、ベースラインでアミロイドＰＥＴスキャンにおいてアミロイド陽性である。

一実施形態では、対象は、認知機能の低下のリスクを示す遺伝子型を有する。一実施形態では、対象はＡＰＯＥ４キャリアである。

別の実施形態では、対象は、年齢、血管リスク因子（例えば、高血圧及び／又は糖尿病）、ＡＰＯＥ４遺伝子型、アミロイド陽性（例えば、アミロイドＰＥＴスキャンによる）、白質損傷の存在、脳小血管疾患の他の兆候（例えば、梗塞及び／又はラクナ梗塞）及びうつ病からなる群から選択される１つ以上のリスク因子によって決定される認知症のリスクがある。

一実施形態では、方法は、オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又はホモシステインのレベルを、対象の１つ以上の身体計測値及び／又は生活習慣特性と組み合わせることを更に含む。好ましくは、身体計測値は、性別、体重、身長、年齢、及び体格指数からなる群から選択される。好ましくは、生活習慣特性は、対象が喫煙者又は非喫煙者のいずれであるかである。

一実施形態では、方法は、オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又はホモシステインのレベルを対象の性別と組み合わせることを更に含む。

一実施形態では、方法は、オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又はホモシステインのレベルを対象の年齢と組み合わせることを更に含む。

好ましくは、方法は、インビトロでの方法である。

別の態様では、本発明は、対象における認知機能の低下の低減又は予防に使用するための、オメガ－３脂肪酸であって、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される、オメガ－３脂肪酸を提供する。

一実施形態では、オメガ－３脂肪酸は、ビタミンＤ又はその代謝産物と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される。一実施形態では、オメガ－３脂肪酸は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される。好ましい実施形態では、オメガ－３脂肪酸は、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される。

別の態様では、本発明は、対象における認知機能の低下の低減又は予防に使用するための、ビタミンＤ若しくはその代謝産物であって、オメガ－３脂肪酸、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される、ビタミンＤ若しくはその代謝産物を提供する。

一実施形態では、ビタミンＤ又はその代謝産物は、オメガ－３脂肪酸と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される。一実施形態では、ビタミンＤ又はその代謝産物は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される。好ましい実施形態では、ビタミンＤ又はその代謝産物は、オメガ－３脂肪酸、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される。

別の態様では、本発明は、対象における認知機能の低下の低減又は予防に使用するための、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤であって、オメガ－３脂肪酸及び／又はビタミンＤ若しくはその代謝産物と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を提供する。

一実施形態では、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、オメガ－３脂肪酸と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される。一実施形態では、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、ビタミンＤ若しくはその代謝産物と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される。好ましい実施形態では、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、オメガ－３脂肪酸、及びビタミンＤ若しくはその代謝産物と同時に、順次に、又は別々に対象に投与される。

別の態様では、本発明は、対象における認知機能の低下の低減又は予防に使用するための、（ａ）オメガ－３脂肪酸と、（ｂ）ビタミンＤ又はその代謝産物と、（ｃ）血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤との組み合わせであって、（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）は、同時に、順次に、又は別々に対象に投与される、組み合わせを提供する。

別の態様では、本発明は、対象における認知機能の低下を低減又は予防するための方法であって、
（ａ）オメガ－３脂肪酸、及び、ビタミンＤ若しくはこれらの代謝産物、
（ｂ）オメガ－３脂肪酸、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、
（ｃ）ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低下させることができる薬剤、又は
（ｄ）オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を、
対象に投与することを含む、方法を提供する。

好ましい実施形態では、この方法は、オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を、対象に投与することを含む。

一実施形態では、対象は、本発明の方法によって認知機能の低下の素因があると特定された対象である。

一実施形態では、オメガ－３脂肪酸は、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及び／又はドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）である。

一実施形態では、オメガ－３脂肪酸はＥＰＡである。一実施形態では、オメガ－３脂肪酸はＤＨＡである。一実施形態では、オメガ－３脂肪酸はＥＰＡ及びＤＨＡである。

一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、２５－ヒドロキシビタミンＤである。一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、２５－ヒドロキシビタミンＤ３及び２５－ヒドロキシビタミンＤ２である。

一実施形態では、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、ビタミンＢ６及び／又はビタミンＢ９である。

一実施形態では、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、ビタミンＢ６である。一実施形態では、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、ビタミンＢ９である。一実施形態では、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、ビタミンＢ６及びビタミンＢ９である。

一実施形態では、対象はヒト対象である。

一実施形態では、対象は認知症を有さない。

一実施形態では、対象は、ベースラインで心臓血管リスク因子、加齢及び認知症（ＣＡＩＤＥ）において１０～１５のリスクスコアを有する。

別の実施形態では、対象は、年齢、血管リスク因子（例えば、高血圧及び／又は糖尿病）、ＡＰＯＥ４遺伝子型、アミロイド陽性（例えば、アミロイドＰＥＴスキャンにおいて）、白質損傷の存在、脳小血管疾患の他の兆候（例えば、梗塞及び／又は損傷）及びうつ病からなる群から選択される１つ以上のリスク因子によって決定される認知症のリスクがある。

一実施形態では、投与は食事介入である。

一実施形態では、オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、少なくとも１ヶ月間、対象に毎日経口投与される。

一実施形態では、対象は、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ５、ビタミンＢ７及びビタミンＢ１２からなる群から選択される１種以上のビタミンＢを更に投与される。

好ましい実施形態では、対象はビタミンＢ１２を更に投与される。一実施形態では、ビタミンＢ１２は、１日当たりビタミンＢ１２のＲＤＡの０．１～４０倍、好ましくは１日当たりビタミンＢ１２のＲＤＡの１０～４０、１０～３０又は１０～２５倍、より好ましくは１日当たりビタミンＢ１２のＲＤＡの１２～２１倍の用量で投与される。

一実施形態では、オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、ビタミンＢ１２と同時に、順次に、又は別々に対象に投与され、ビタミンＢ１２は、１日当たり、ビタミンＢ１２のＲＤＡの０．１～４０倍、好ましくは１日当たり、ビタミンＢ１２のＲＤＡの１０～４０、１０～３０又は１０～２５倍、より好ましくは１日当たり、ビタミンＢ１２のＲＤＡの１２～２１倍の用量で投与される。

一実施形態では、対象は、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ及びセレンからなる群から選択される１種以上の酸化防止剤を更に投与される。

一実施形態では、本発明の使用又は方法は、神経細胞の細胞膜流動性の改善、神経細胞の可塑性及び活性の刺激、抗炎症性の改善、認知能力の支持又は維持、脳の性能の支持又は維持、脳の老化の低下、活発な精神及び脳の適応度の支持、健康な脳の支持又は維持、記憶の強化、遂行機能の強化、注意の強化、認知健康の維持及び／又は脳細胞の健康の維持を提供する。

一実施形態では、オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、食品製品の形態であり、好ましくはタンパク質、炭水化物、脂肪、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される成分を更に含む。

一実施形態では、オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、医薬的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を更に含む医薬組成物の形態である。

別の態様では、本発明は、脳萎縮の減少、シナプスの数の増加又は維持、アミロイド－β食作用の増加又は維持、及び神経炎症の減少からなる群から選択される１つ以上の利益を、これらの利益を必要とする対象において達成する方法であって、
（ａ）オメガ－３脂肪酸、及び、ビタミンＤ若しくはこれらの代謝産物、
（ｂ）オメガ－３脂肪酸、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、
（ｃ）ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低下させることができる薬剤、又は
（ｄ）オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を、
当該対象に投与することを含む、方法を提供する。

好ましい実施形態では、方法は、オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を、対象に投与することを含む。

別の態様では、本発明は、認知症のリスクのある対象における認知症を低減又は予防する方法であって、治療有効量のオメガ－３脂肪酸、ビタミンＢ６、及びビタミンＢ９を含む組成物を、対象に投与することを含む、方法を提供する。

（ａ）オメガ－３脂肪酸、及び、ビタミンＤ若しくはこれらの代謝産物、
（ｂ）オメガ－３脂肪酸、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、
（ｃ）ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低下させることができる薬剤、又は
（ｄ）オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を、
対象に。

一実施形態では、認知症は、アルツハイマー病、血管性認知症、レヴィー小体認知症、前頭側頭型認知症及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。

別の態様では、本発明は、対象における認知能力を改善する方法であって、
（ａ）オメガ－３脂肪酸、及び、ビタミンＤ若しくはこれらの代謝産物、
（ｂ）オメガ－３脂肪酸、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、
（ｃ）ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低下させることができる薬剤、又は
（ｄ）オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を、
対象に投与することを含む、方法を提供する。

一実施形態では、対象は認知症を有さない。

別の態様において、本発明は対象の生活習慣の変更を選択する方法を提供し、
（ａ）本発明の方法に従い、対象に認知機能の低下の素因があるかどうかを判定することと、
（ｂ）認知機能の低下の予防又は低減を必要としていると特定された対象において、認知機能の低下を予防又は低減することができる生活習慣の変更を選択することと、を含む。

一実施形態では、方法は、選択された生活習慣の変更を対象に適用することを更に含む。

一実施形態では、生活習慣の変更は、
（ａ）オメガ－３脂肪酸、及び、ビタミンＤ若しくはこれらの代謝産物、
（ｂ）オメガ－３脂肪酸、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤、
（ｃ）ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低下させることができる薬剤、又は
（ｄ）オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を、
対象に投与することを含む。

別の態様では、本発明は、プログラム可能なコンピュータに、本明細書に開示される方法に従い、対象に認知機能の低下の素因があるかを判定させるための、コンピュータに実装可能な命令を含むコンピュータプログラム製品を提供する。

別の態様では、本発明は、プログラム可能なコンピュータに、ユーザーからのオメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又はホモシステインのレベルを考慮して、対象に認知機能の低下の素因があるかを判定させるための、コンピュータに実装可能な命令を含むコンピュータプログラム製品を提供する。

認知機能の低下速度が栄養リスク指数（ＮＲＩ）スコアによってどのように異なるかを示す図である。各対象に、以下の基準を満たすかに応じて０又は１のスコアを割り当てた。血清２５－ヒドロキシビタミンＤ≦１５Ｎｇ／ｍＬの場合には１、そうでない場合には０；血漿ホモシステイン≧１８．１の場合には１、そうでない場合には０；ＲＢＣオメガ３≦４．８２の場合には１、そうでない場合には０。したがって、各対象には０～３のＮＲＩを割り当てられ、ここでＮＲＩ＝３は認知機能の低下に関し栄養リスクが最も高いと見なされる。認知機能の変化は、３年にわたって４つの時点で測定される。「低ｈ高ｄ高ｏ」線は、ＮＲＩ＝０を有する対象における認知機能の低下の速度を示す。「高ｈ高ｄ高ｏ」、「低ｈ低ｄ高ｏ」、及び「低ｈ高ｄ低ｏ」線は、ＮＲＩ＝１を有する対象における認知機能の低下の速度を示す。「高ｈ低ｄ高ｏ」、「低ｈ低ｄ低ｏ」及び「高ｈ高ｄ低ｏ」線は、ＮＲＩ＝２を有する対象における認知機能の低下の速度を示し、「高ｈ低ｄ低ｏ」線は、最も高い栄養リスク（ＮＲＩ＝３）を有する対象及びその認知機能の低下速度を示す。対象集団におけるビタミンＤレベル（ｎｇ／ｍＬ）の分布及び確率プロットを示す図である。対象集団におけるホモシステインのレベル（μｍｏｌ／Ｌ）の分布及び確率プロットを示す図である。

本明細書で使用する場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、及び「から構成される（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄｏｆ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」又は「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」又は「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」又は「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」と同義であり、包括的又は非限定的であり、追加の、列挙されていない構成要素、要素、又は工程を除外しない。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、及び「から構成される（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄｏｆ）」はまた、用語「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｏｆ）」を含む。

本明細書に記載する全てのパーセンテージは、別途記載のない限り組成物の総重量によるものである。

本明細書で使用される「食品」、「食品製品」及び「食品組成物」という用語は、ヒトなどの個体による摂取を対象とした製品又は組成物を意味し、個体に少なくとも１種の栄養を提供する。本明細書に記載の実施形態を含む本開示の組成物は、本明細書に開示される要素、並びに本明細書に記載の又はそうでない場合には規定食に有用な任意の追加成分若しくは任意成分、構成要素、若しくは要素を含むか、これらからなるか、又は本質的にこれらからなることができる。

本明細書で使用するとき、「有効量」とは、欠乏を予防する、個体の疾患若しくは医学的状態を治療する、又はより一般的には、症状を減少させる、疾患の進行を管理する、若しくは個体に対して栄養学的、生理学的若しくは医学的利益を提供する、量である。本願明細書に開示される組成物の効果に関連する「改善された」、「増加した」、「高められた」等の相対的用語は、１つ以上の成分を欠く、及び／又は１つ以上の成分の量が異なるが、その他の成分については同一である組成物と比較した場合に用いられる。

認知機能の低下及び老化
本明細書で使用するとき、用語「認知機能」及び「認知能力」は、個人が理念を意識、知覚、又は理解することによる知的プロセスを意味し得る。認知能力は、認知することの質を包含し、これには知覚、認識、構想、感知、思考、推論、記憶及び想像の全ての態様を含む。認知能力の低下とは、新たな情報又は状況への対処又は反応が困難なことをいう。認知機能の低下又は障害は、例えば短期記憶の喪失、学習能力の低下、学習速度の低下、注意力の低下、運動能力の低下、及び／又は他の兆候の中でもとりわけ認知症のような多くの方法で顕在化し得る。加齢と共に低下する能力を含む具体的な認知領域の非限定的な例には、（ｉ）注意：処理速度、並びに選択的及び分割的注意；（ｉｉ）学習及び記憶：遅延自由再生、情報源記憶、展望的記憶及びエピソード記憶；（ｉｉｉ）言語：発話流暢性、視覚性呼称及び喚語；（ｉｖ）視覚空間能力：視覚構築技能；並びに（ｖ）遂行機能：計画、意思決定、推論、及び精神的柔軟性がある。

本明細書で使用するとき、用語「認知老化」及び「加齢に関連する認知機能の低下」は、年齢を重ねるにつれ、例えば老齢から年齢を重ねるにつれ進行する認知能力の低下を意味し、脳形態及び／又は脳血管機能における加齢に関連する変化を含むことができる。認知老化は、頭部損傷又はうつ病などの、老化以外の基礎症状によって引き起こされる認知能力の障害を含まない。

認知の水準及び改善は、情報処理速度、遂行機能及び記憶を評価するように設計された認知検査を含む、当該技術分野において既知である任意の好適な神経学及び認知検査を用いて、当業者により容易に評価することができる。好適な例示的試験としては、ミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）、ケンブリッジ神経心理学的自動検査（ＣＡＮＴＡＢ）、アルツハイマー病評価尺度認知検査（ＡＤＡＳｃｏｇ）、ウィスコンシンカードソーティングテスト、言語及び図形流暢性検査、並びにトレイルメイキングテスト、脳波計（ＥＥＧ）、脳磁計（ＭＥＧ）、ポジトロン放出型断層撮影（ＰＥＴ）、単光子放出型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、磁気共鳴像画像（ＭＲＩ）、機能的磁気共鳴画像（ｆＭＲＩ）、コンピュータ断層撮影並びに長期増強が挙げられる。

ＥＥＧ、脳の電気的活動度の測定は、様々なランドマークで頭皮に電極を配置し、脳信号を大きく増幅して記録することによって達成される。ＭＥＧは、電場に関係する磁場を測定するという点で、ＥＥＧに類似している。ＭＥＧは、神経系における同期波を含む自発的な脳活動を測定するために使用される。

ＰＥＴは、酸素利用及びグルコース代謝の測定を提供する。この技術では、放射性ポジトロン放出トレーサーを投与し、脳によるトレーサーの取り込みは脳の活動度と相関する。これらのトレーサーはガンマ線を放出し、頭を取り囲むセンサによって検出され、脳活動の３Ｄマップをもたらす。トレーサーが脳によって取り込まれるとすぐに、局所的な脳血流量に応じ、放射能が検出される。活性化の間、脳血流量及び神経グルコース代謝の増大を、数秒以内に検出することができる。

好適な分析はまた、神経心理学試験、臨床検査、及び認知機能喪失の個々の訴え（例えば、主観的記憶喪失）に基づくこともできる。

認知機能の低下は、例えば、好適な試験におけるベースライン性能から、統計的に有意な差として解釈され得る。

「認知症ではない」個体（本明細書では、「認知症を有さない」個体とも表現される）は、最大で０．５の臨床的認知症尺度を有する。ＣＤＲは、認知症の重症度を測定し、半構造化した対象及び情報提供者のインタビュー（Ｈｕｇｈｅｓｅｔａｌ．（１９８２）Ｂｒ．Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ１４０：５６６－７２）によって評価された０～３（０、０．５、１、２及び３）の範囲のスコアによる認知症の国際的な評価である。臨床医は、記憶、見当識、判断及び問題解決、コミュニティの事象、家事及び趣味、並びに身の回りのケアを含む６つのドメインに基づいて認知能力及び機能性を総合的に扱う。この尺度は、評価者間でよく一致する。

認知症ではない個体は、アルツハイマー病、血管性認知症、レヴィー小体認知症又は前頭側頭型認知症のいずれも有さない。いくつかの実施形態では、認知症ではない個体は健康な加齢個体である。他の実施態様では、認知症ではない個体は、加齢関連の認知障害に関連する表現型を有する。例えば、認知症ではない個体は、かかる表現型を有しない対照個体と比較したときに、思い出す能力の低下、短期記憶の喪失、学習速度の低下、学習能力の低下、問題解決能力の低下、注意持続時間の減少、運動能力の低下又は混乱増加、のうちの１つ以上を含む表現型を有し得る。

認知機能の老化のリスクにある認知症ではない個体の非限定例は、自然発症した記憶障害を有するヒトであるが、それでもなお、少なくとも２４のミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）スコアを有し、少なくとも４の日常生活動作（ＡＤＬ）スコアによって示されるとおり基本的な日常活動における自立性を有する。本発明の課題解決のためのＭＭＳＥスコアは、例えば２４～３０であってもよく、より好ましくは２６～３０であってもよい。

ＭＭＳＥは、非常に信頼性が高く、有効な手段であることが証明されており、神経変性疾患に関連する認知障害の進行を検出し、追跡するための、非常に簡便な、容易に制御／実施できる精神機能評価方法である。ＭＭＳＥは、７つのカテゴリ：場所に対する見当識（州、国、街、病院及び階）、時間に対する見当識（年、季節、月、日、及び日付）、見当合せ（３つの言葉をすぐに繰り返す）、注意力及び集中力（連続的に７を差し引く、１００から始める、あるいは単語を後方から綴る）、想起（以前に繰り返された３つの単語を呼び出す）、言語（２つの項目の名前を言う、フレーズを復唱する、音読して文章を理解する、文章を書く、及び３段階の命令に従う）、並びに視覚情報の構築（図形の模写）にグループ化された３０点からなる完全に構造化されたスケールである（Ｆｏｌｓｔｅｉｎｅｔａｌ．（１９７５）Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔ．Ｒｅｓ．１２：１８９－１９８）。

ＭＭＳＥは、正確に完了した項目の数に関してスコアリングされ、スコアが低くなるほど能力は乏しくなり、より大きな認知障害を示す。合計スコアは０～３０の範囲となる。

ＡＤＬは、ＡＤを有する又は有さない人の日常生活動作を評価するための、情報提供者ベースの日常生活動作スケールとして広く用いられている手段である。この手段は、広範囲にわたる能力を評価する。ＡＤＬは、障害のない対照と比較して、軽度に障害のある個体間の変化に対する感度を示し、機能的変化を捕捉することができる（Ｇａｌａｓｋｏｅｔａｌ．（１９９７）ＡｌｚｈｅｉｍｅｒＤｉｓ．Ａｓｓｏｃ．Ｄｉｓｏｒｄ．１１Ｓｕｐｐｌ．２：Ｓ３３－９）。

本願明細書で前述したように、脳の健康を維持し、加齢による認知機能の低下を予防することにより、認知症の発症を予防又は遅延させることができることを、多くのエビデンスが示唆している。したがって、認知機能の低下又は老化を予防又は低減する本明細書に開示される方法はまた、究極的にはアルツハイマー病などの認知症を予防することができる。したがって、本開示の別の態様は、認知症のリスクがある個体における認知症を予防する方法である。本発明は、本明細書に開示される組成物を治療有効量で個体に投与することを含む方法に関する。予防される認知症は、アルツハイマー病、血管性認知症、レヴィー小体認知症、前頭側頭型認知症及びそれらの組み合わせからなる群から選択され得る。

アルツハイマー病
アルツハイマー病は、脳の領域の萎縮によって引き起こされる。萎縮を引き起こすものは既知ではないが、研究によりアルツハイマー病患者の脳にアミロイド斑、神経原線維変化及びアセチルコリンの不均衡が認められている。健常ニューロンを損傷する可能性のある、脳における血管損傷はまた、アルツハイマー患者において共通である。

アルツハイマー病は、複数の脳機能に影響を及ぼす進行状態である。病気の早期徴候には、通常、例えば、最近の出来事、又は場所及び物の名前を忘れるなどといった軽度の記憶障害が含まれる。疾患が進行すると、記憶障害がより深刻になり、混乱、方向感覚の喪失、意思決定の困難化、言葉及び言語の問題、性格の変化のような追加症状が生じる場合がある。

血管性認知症
血管性認知症は、脳への血流の減少により脳細胞が損傷することで生じる。血流の減少は多くの原因で発生し得、脳内の血管の狭窄（皮質下血管性認知症）、脳卒中（単一梗塞性認知症）及び多数の小規模脳卒中（多発梗塞性認知症）を含む。血流の減少は、アルツハイマー病、混合型認知症と呼ばれる組み合わせによって更に引き起こされる場合がある。

血管性認知症の早期症状は、思考の遅れ、計画の困難化、言語の困難化、注意と集中の問題、行動の変化が含まれる。症状は典型的には段階的に悪化し、数か月又は数年の安定期を挟む。

パーキンソン病
パーキンソン病は、黒質の神経細胞が漸進的に損傷される状態である。脳のこの領域の神経細胞は、体の動きを制御する脳部位及び神経系部位間のメッセンジャーとして作用するドーパミンを産生する。これらの神経細胞に対する損傷により、脳内で産生されるドーパミン量が減少し、動きを制御する脳部位の機能が低下するという影響が生じる。

パーキンソン病の症状は、振戦、動作緩慢、及び筋肉の強剛と固縮を含む。パーキンソン病患者はまた、うつ病、便秘、不眠症、無臭覚症及び記憶障害を含む更なる症状を経験することもあり得る。

バイオマーカーのレベルの決定
試料中の個々のバイオマーカー種のレベルを、当該技術分野で知られている任意の好適な方法によって測定又は判定することができる。例えば、質量分析（ＭＳ）、抗体に基づく検出方法（例えば酵素結合免疫吸着アッセイ、ＥＬＩＳＡ）、非抗体タンパク質による足場に基づく方法（例えばフィブロネクチン足場）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）又はアプタマーに基づく方法を用いてもよい。他の分光法、クロマトグラフ法、標識技術、又は定量化学的な方法もまた用いることができる。

個体のバイオマーカーのレベルを測定するための好適な例示的方法を以下に記載する。

２５－ヒドロキシビタミンＤ
総２５－ヒドロキシビタミンＤのインビトロ測定には電気化学発光結合アッセイを利用することができる（例えば、市販のＣｏｂａｓ８０００（Ｒｏｃｈｅ）を使用して）。例えば、総ビタミンＤを定量することを意図して、ビタミンＤ結合タンパク質（ＶＤＢＰ）を使用して２５－ヒドロキシビタミンＤ３及びＤ２の両方を捕捉することができる。簡潔に述べると、試料を前処理試薬とインキュベートして、試料中の天然ＶＤＢＰを変性させて結合ビタミンＤを放出できる。次いで、試料を、組換えルテニウム標識ＶＤＢＰと更にインキュベートして、２５－ヒドロキシビタミンＤ（２５－ＯＨ－Ｄ）とルテニル化－ＶＤＢＰとの複合体を形成できる。ビオチン化２５－ＯＨ－Ｄの添加により、ルテニウム標識ＶＤＢＰ及びビオチン化２５－ＯＨ－Ｄからなる複合体が生成される。複合体全体は、ビオチンとストレプトアビジンコーティングされた微小粒子との相互作用によって固相に結合でき、これは電極の表面上に捕捉できる。結合していない物質を除去した後、電極に電圧を加えることにより、光電子増倍器によって測定され得る化学発光放出が誘発される。結果は、機器固有の検量線によって判定することができる。

ホモシステイン
総血漿ホモシステインは、酵素サイクリングアッセイを用いて測定することができる。簡潔に述べると、酸化されたホモシステインを最初に還元し、次いで、ホモシステインＳ－メチルトランスフェラーゼの存在下でＳ－アデノシルメチオニンと反応させて、メチオニン及びＳ－アデノシルホモシステイン（ＳＡＨ）を形成することができる。次いで、ＳＡＨを、ＳＡＨ加水分解酵素によりアデノシン及びホモシステインに加水分解される共役酵素反応により評価してよい。ホモシステインは、検出シグナルを増幅するのに役立つホモシステイン変換反応に利用される。形成されたアデノシンは、イノシン及びアンモニアに加水分解でき、次いで、グルタミン酸デヒドロゲナーゼを使用してアンモニアと２－オキソグルタレート及びＮＡＤＨとの反応を触媒して、ＮＡＤ＋を形成することができる。試料中のホモシステインの濃度は、ＮＡＤ＋に変換されたＮＡＤＨの量に正比例し、これは、３４０ｎｍの吸光度で分光法で測定することができる。

オメガ３脂肪酸
例えば、全脂肪酸の重量パーセントとして表されるＥＰＡ及びＤＨＡなどのオメガ３脂肪酸は、水素炎イオン化検出器に連結されたガスクロマトグラフィーを使用して定量することができる。簡潔に述べると、遠心分離によって赤血球を血漿から分離し、洗浄し、酸性化した後に、ヘキサンとイソプロパノールとの混合物を含むＦｏｌｃｈ法による脂質抽出を行うことができる。マルガリン酸を、内部標準として添加してもよい。次いで、全脂質抽出物を鹸化及びメチル化し、脂肪酸メチルエステル（ＦＡＭＥ）をペンタンで抽出し、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）により分析してもよい。例示的なプロトコルは、スプリットインジェクター、結合シリカキャピラリカラム（ＢＰＸ７０、６０ｍ×０．２５ｍｍ；０．２５μｍの膜厚）を備えるガスクロマトグラフ及び水素炎イオン化検出器（キャリアガスとしてヘリウムを使用でき、カラム温度プログラムを１５０℃で開始し、２２０℃まで１．３℃／分上昇させ、２２０℃で１０分間保持しできる）を使用してよい。ＦＡＭＥの特定は、脂肪酸標準から調製されたＦＡＭＥについて得られた保持時間に基づいてもよい。

試料
本発明は、対象から得られた１つ以上の試料中の２つ以上のバイオマーカーのレベルを測定する工程を含む。

対象から試料を採取するための技術は当該技術分野においてよく知られている。

基準値との比較
本方法は、試験試料中のオメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又はホモシステインのレベルを、１つ以上の基準値又は対照値と比較する工程を含み得る。用語「基準値」は、「対照値」と同義であり、技術的データの正確な解釈を促すために当業者が使用するデータを広く含む。

通常、本方法において測定された各個体のバイオマーカーに関する基準値が使用される。基準値は、健常の対象における同じ種の試料（例えば、血液、血清、又は血漿）中のバイオマーカーのレベルなどの、そのバイオマーカーの正常のレベルであってもよい。基準値は、例えば、対象の対照集団、例えば、５、１０、１００又は１０００以上の健常の対象（この対象は、試験対象と年齢及び／又は性別が同じでも同じでなくてもよい）における、バイオマーカーの平均又は中央値のレベルに基づいてもよい。正しい基準値をどのように割り当てるかについては、当業者に周知であり、これらは、例えば、性別、人種、ジェネリック・ヘリテージ（ｇｅｎｅｔｉｃｈｅｒｉｔａｇｅ）、健康状態又は年齢に応じて変わる。

試験試料中のバイオマーカーのレベルを測定する対応方法を用いて、例えば、正常な対象から採取した１つ以上の試料を用いて、基準値を測定することができる。例えば、いくつかの実施形態では、対照試料におけるバイオマーカーのレベルを、試験試料に対する並行分析で測定することができる。あるいは、いくつかの実施形態において、特定の種類の試料（例えば、血液、血清又は血漿）中の個体のバイオマーカーのレベルに関する基準値を、例えば、公表されている研究から先に入手することもできる。したがって、いくつかの実施形態では、基準値は前もって測定してもよいし、又は得られた各試験試料に関する対照試料について対応する測定を実施することなく、計算若しくは推測してもよい。

特定の試料中の本明細書に記載のバイオマーカーに関する対照値又は基準値は、データベースに保存し、対象に対して実施した方法の結果を解釈するために使用してもよい。

試験試料中のバイオマーカーのレベル、例えば、対象由来の試料中のオメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又はそのホモシステインのレベルは、対照の対象の１つ以上のコホート（集団／群）中の同じ標的のそれぞれの量と比較することができる。

対象由来の試料中のオメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又はホモシステインのレベルの比較は、四分割された対象の対照集団に由来する基準値のレベルと比較することを含んでもよい。

一実施形態では、オメガ－３脂肪酸のレベルが測定され、対象由来の試料中のオメガ－３脂肪酸のレベルが、対照集団に由来する基準値の下側四分位内の値であると、認知機能の低下の素因であることを意味する。

一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物のレベルが測定され、対象由来の試料中のビタミンＤ若しくはその代謝産物のレベルが、対照集団に由来する基準値の下側四分位内の値であると、認知機能の低下の素因であることを意味する。

一実施形態では、ホモシステインのレベルが測定され、対象由来の試料中のホモシステインのレベルが、対照集団に由来する基準値の上側四分位内の値であると、認知機能の低下の素因であることを意味する。

一実施形態では、本発明の方法は、指数（本明細書では、栄養リスク指数、ＮＲＩと称される）を計算することを含み、この指数は、
（ａ）オメガ－３脂肪酸のレベルを測定し、対象由来の試料中のオメガ－３脂肪酸のレベルが対照集団に由来する基準値の下側四分位内の値であると、スコアｎとし、対象由来の試料中のオメガ－３脂肪酸のレベルが下側四分位外であると、スコアゼロとする工程、
（ｂ）ビタミンＤ若しくはその代謝産物のレベルを測定し、対象由来の試料中のビタミンＤ若しくはその代謝産物のレベルが対照集団に由来する基準値の下側四分位内の値であるとスコアｎとし、対象由来の試料中のビタミンＤ若しくはその代謝産物のレベルが下側四分位外であると、スコアゼロとする工程、及び／又は
（ｃ）ホモシステインのレベルを測定し、対象由来の試料中のホモシステインのレベルが対照集団に由来する基準値の上側四分位値内の値であると、スコアｎとし、対象由来の試料中のホモシステインのレベルが上側四分位外であると、スコアゼロとする工程を含み、
ｎは正の整数（例えば＋１）であり、指数は、工程（ａ）、（ｂ）及び／又は（ｃ）から得られたスコアの合計として計算され、指数スコアが大きくなるほど認知機能の低下の素因が大きいことを示す。

一実施形態では、赤血球ＥＰＡ及びＤＨＡの基準値は、全脂肪酸の約４．８２重量％である。この基準値よりも低いレベルには、本明細書に開示される指標におけるスコアｎを割り当てることができる。一実施形態では、血漿２５－ヒドロキシビタミンＤの基準値は、約１５ｎｇ／ｍＬである。この基準値よりも低いレベルには、本明細書に開示される指標におけるスコアｎを割り当てることができる。一実施形態では、血漿ホモシステインの基準値は、約１８．１μｍｏｌ／Ｌである。この基準値よりも高いレベルには、本明細書に開示される指標におけるスコアｎを割り当てることができる。

本明細書に記載のバイオマーカーのレベルに関する基準値は、好ましくは、試験試料中のバイオマーカーのレベルを評価するのに使用されるものと同じ単位を用いて測定される。したがって、本明細書に記載のバイオマーカーのレベルが、μｍｏｌ／Ｌ（μＭ）などの絶対値である場合、基準値は、一般個体群又は対象の選択された対照群の個体における単位μｍｏｌ／Ｌ（μＭ）に基づいてもよい。

対象のバイオマーカーのレベルと、対応する基準値との差の程度もまた、どちらの対象が、ある種の介入から最も利益を得ることになるかを判定するのに有用である。試験試料中のバイオマーカーのレベルは、例えば、基準値に比べて少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％又は少なくとも１００％増加又は減少し得る。

治療方法
オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を同時に、順次に、又は別々に投与してよい。

本明細書で使用される用語「組み合わせ」又は「組み合わせて」、「組み合わせて使用される」若しくは「組み合わせた調製」という表現は、オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはそれらの代謝産物、及び／又は血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤の２つ以上の組み合わせを同時に、順次に、又は別々に投与することを指す。

本明細書で使用される用語「同時」は、薬剤が同時に投与される、すなわち、同じ時に投与されることを意味する。本明細書で使用される用語「順次」とは、薬剤がもう一方の後に投与されることを意味する。本明細書で使用される用語「別々に」は、薬剤が、互いに独立して投与されるが、但し薬剤を組み合わせた効果、好ましくは相乗的な効果を示すことを可能にする時間間隔内で投与されることを意味する。したがって、「別々に」投与するとは、１つの薬剤を、例えば、もう一方の後の１分以内、５分以内、又は１０分以内に投与することを容認し得る。

本明細書において「治療」についてなされる全ての言及は、治癒的、緩和的、及び予防的治療を含むものであると理解される。哺乳類、特にヒトの治療が好ましい。ヒト及び動物治療の両方が、本発明の範囲内である。

投与量
当業者は、過度の実験を行わずとも、本発明の薬剤の１つを対象に投与するのに適切な用量を容易に決定することができる。典型的には、医師は、個々の患者に最も好適である実際の投与量を、使用される特定の薬剤の活性、代謝安定性及びその薬剤の作用の長さ、年齢、体重、全般的な健康、性別、規定食、投与方法及び投与時間、排泄速度、薬物の組み合わせ、特定の状態の重症度、並びに治療を受けている個体を含む様々な因子をもとに決定する。当然ではあるが、より高い又はより低い投与量範囲が優れている個別の場合があり得、そのような場合も本発明の範囲内にある。

対象
「対象」（又は「個体」）は、ヒト又は非ヒト動物のいずれかを指す。

非ヒト動物の例としては、鳥類、ウシ、イヌ、ウマ、ネコ、ヤギ（ｈｉｃｒｉｎｅ）、オオカミ、ネズミ、ヒツジ、又はブタなどの動物が挙げられる。「コンパニオンアニマル」は、任意の飼いならされた動物であり、限定されないが、ネコ、イヌ、ウサギ、モルモット、フェレット、ハムスター、マウス、アレチネズミ、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ロバ、ブタなどが挙げられる。

好ましくは、対象は、ヒトである。

一実施形態では、対象は老化しているヒト対象である。用語「老化しているヒト対象」は、５０歳以上のヒト対象を意味し得る。一実施形態では、対象は、少なくとも５０歳、５５歳、６０歳、６５歳、７０歳、７５歳、８０歳、８５歳、９０歳又は９５歳のヒト対象である。好ましい実施形態では、対象は、５０歳以上のヒト対象である。特に好ましい実施形態では、対象は、７０歳以上のヒト対象である。

ヒトの文脈における用語「老齢」（ｅｌｄｅｒｌｙ）は、少なくとも６０歳、好ましくは６３歳以上、より好ましくは６５歳以上、最も好ましくは７０歳以上の年齢を意味する。ヒトの文脈における用語「高齢者」（ｏｌｄｅｒａｄｕｌｔ）は、少なくとも４５歳、好ましくは５０歳以上、より好ましくは５５歳以上の年齢を意味し、老齢の個体を含む。

他の動物の場合、「高齢個体」とは、その個々の種及び／又は種内の系統において、平均寿命の５０％を超えた動物をいう。動物は、平均期待寿命の６６％を超えた場合、好ましくは平均期待寿命の７５％を超えた場合、より好ましくは平均期待寿命の８０％を超えた場合に、「老齢」と考えられる。老齢のネコ又はイヌは、少なくとも約７歳齢である。

食事介入
本明細書で使用される用語「食事介入」は、対象に適用され、対象の食習慣に変化をもたらす外部因子を指す。

一実施形態では、食事介入は、オメガ３脂肪酸を補給した規定食である。一実施形態では、食事介入は、ビタミンＤを補給した規定食である。一実施形態では、食事介入は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を補給した規定食である。

一実施形態では、本発明の食事介入は、好ましくはオメガ３脂肪酸栄養補助食品を投与することによって、対象によるオメガ－３脂肪酸摂取を増加させることを含む。一実施形態では、食事介入は、好ましくはビタミンＤ栄養補助食品を投与することによって、対象によるビタミンＤ摂取を増加させることを含む。一実施形態では、食事介入は、好ましくは、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤の栄養補助食品を投与することによって、対象による血漿ホモシステインのレベルを減少させることができる薬剤の摂取量を増加させることを含む。

規定食は、対象の初期体重に合わせて調整したものであってよい。

食事介入には、少なくとも１つの規定食製品の投与が含まれていてもよい。規定食製品は、食事代替品であってもよいし、サプリメント製品であってもよい。規定食製品は、食品製品、飲料、ペットフード製品、食品栄養補給剤、機能性食品、食品添加物、又は栄養配合物を含み得る。

組成物
本発明の薬剤及び組成物は、老化プロセスによってもたらされるものなどの認知機能の低下を受けやすい個体又は認知機能の低下に苦しんでいる個体（例えば、認知症ではない個体）における認知機能を向上させることができる。本発明の薬剤及び組成物は、老化プロセスによってもたらされるものなどの認知機能の低下を受けやすい個体又は認知機能の低下に罹患している個体（例えば、認知症ではない個体）における認知機能の低下を予防、低減、又は遅延させることができる。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、投与の前に、認知的加齢を有する個体又は認知的加齢のリスクを有する個体を特定することを含む。例えば、方法は、投与の前に、認知能力の改善を必要とする個体を特定することを含み得る。本発明の薬剤及び組成物は、脳萎縮及び神経炎症を減少させ、アミロイド－β食作用及びシナプス数を増加させ得る。

オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤（すなわち、本発明の薬剤）を同時に、順次に、又は別々に投与してよい。

オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、１つ以上の組成物内に含まれてもよい。

一実施形態では、オメガ３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、食品製品の形態であり、好ましくはタンパク質、炭水化物、脂肪、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される成分を更に含む。

一実施形態では、オメガ３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、医薬的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を更に含む医薬組成物の形態である。

様々な実施形態では、オメガ３脂肪酸は、食品製品又は組成物の１～５０重量％、好ましくは食品製品又は組成物の１～３０重量％、最も好ましくは食品製品又は組成物の１～１５重量％である。好ましくは、オメガ３脂肪酸は、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）又はドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）のうちの少なくとも１つを含み、より好ましくはＥＰＡ及びＤＨＡの両方を含む。食品製品又は組成物の１日用量は、好ましくは１日当たり０．５ｇ～１．０ｇのＤＨＡ、及び／又は１日当たり０．５ｇ～１．０ｇのＥＰＡ、より好ましくは１日当たり０．７ｇ～１．０ｇのＤＨＡ、及び／又は１日当たり０．６ｍｇ～０．７５ｇのＥＰＡ、最も好ましくは１日当たり約７７０ｍｇのＤＨＡ、及び／又は１日当たり約７００ｍｇのＥＰＡを提供する。

一実施形態では、オメガ－３脂肪酸は、１日当たり０．５ｇ～２．０ｇ、例えば１日当たり０．５ｇ～１．５ｇの用量で投与される。一実施形態では、対象は１日当たり０．５ｇ～１．０ｇのＤＨＡ、及び／又は１日当たり０．５ｇ～１．０ｇのＥＰＡ、より好ましくは１日当たり０．７ｇ～１．０ｇのＤＨＡ、及び／又は１日当たり０．６ｍｇ～０．７５ｇのＥＰＡ、最も好ましくは１日当たり約７７０ｍｇのＤＨＡ、及び／又は１日当たり約７００ｍｇのＥＰＡを投与される。

オメガ３脂肪酸は、オメガ３脂肪酸の１つ以上の供給源の混合物を含んでよく、オメガ３脂肪酸の１つ以上の供給源のそれぞれは、天然（例えば、魚油）又は合成（すなわち、自然由来のものとは対照的に、人間によって操作されるプロセスを通じて形成されたもの）であり得る。本明細書で使用される「魚油」という用語は、海洋個体から得られる、粗製の若しくは精製された、オメガ３脂肪酸が豊富な脂肪性又は油性抽出物を意味し、その海洋個体は、例えば、限定されないが、サケ、マグロ、サバ、ニシン、シーバス、ストライプトバス、オヒョウ、ナマズ、及びイワシなどの冷水魚、並びにサメ、エビ、及び二枚貝、又はこれらの任意の組み合わせである。

一実施形態では、食品製品又は組成物は、ビタミンＤ若しくはその代謝産物の６０～２０００ＩＵ／日を提供する１日用量で投与される。

一実施形態では、食品製品又は組成物は、０．００１ｍｇ／日～０．１ｍｇ／日のビタミンＤ若しくはその代謝産物、例えば、０．０１ｍｇ／日～０．０５ｍｇ／日のビタミンＤ若しくはその代謝産物、好ましくは約０．０１５ｍｇ／日のビタミンＤ若しくはその代謝産物を提供する１日用量で投与される。

一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、６０～２０００ＩＵ／日の用量で投与される。

一実施形態では、ビタミンＤ若しくはその代謝産物は、０．００１ｍｇ／日～０．１ｍｇ／日、例えば０．０１ｍｇ／日～０．０５ｍｇ／日、好ましくは約０．０１５ｍｇ／日の用量で投与される。

一実施形態では、食品製品又は組成物は、１日当りに、１日当たりの推奨一日所要量（ＲＤＡ）の少なくとも０．０１～１００倍のビタミンＢ６、例えば、ＲＤＡの１０～８０倍のビタミンＢ６、及び／又は１日当たりのＲＤＡの０．０１～５．０倍のビタミンＢ９、例えば、ＲＤＡの１．０～２．５倍のビタミンＢ９を提供する１日用量で個体に投与される。ビタミンＢ６のＲＤＡは１．３ｍｇ／日であり、したがって、食品製品又は組成物は、０．１３ｍｇ／日～１３０ｍｇ／日のビタミンＢ６、例えば、１３ｍｇ／日～１００ｍｇ／日のビタミンＢ６を提供する１日用量で投与することができる。ビタミンＢ９のＲＤＡは０．４ｍｇ／日であり、したがって、食品製品又は組成物は、０．００４ｍｇ／日～２．０ｍｇ／日のビタミンＢ９、例えば、０．４ｍｇ／日～１．０ｍｇ／日のビタミンＢ９を提供する１日用量で投与することができる。しかしながら、本開示は、ビタミンＢ６の特定の１日用量又はビタミンＢ９の特定の１日用量に限定されない。

一実施形態では、対象は、１日当たりのビタミンＢ６のＲＤＡの少なくとも０．０１～１００倍、例えば、ビタミンＢ６のＲＤＡの１０～８０倍、及び／又は１日当たりのビタミンＢ９のＲＤＡの０．０１～５．０倍、例えば、ビタミンＢ９のＲＤＡの１．０～２．５倍を投与される。一実施形態では、対象は、０．１３ｍｇ／日～１３０ｍｇ／日のビタミンＢ６、例えば、１３ｍｇ／日～１００ｍｇ／日のビタミンＢ６を投与される。一実施形態では、対象は、０．００４ｍｇ／日～２．０ｍｇ／日のビタミンＢ９、例えば、０．４ｍｇ／日～１．０ｍｇ／日のビタミンＢ９を投与される。

一実施形態では、食品製品又は組成物は、任意選択的に、一酸化窒素放出化合物を含み得る。「一酸化窒素放出化合物」という用語は、個体において一酸化窒素の放出を引き起こす又はもたらし得る任意の化合物（１種又は複数）を意味する。一酸化窒素放出化合物は、好ましくはアルギニン、シトルリン、オルニチンの１つ以上を含み、又はこれらのアミノ酸、より好ましくはアルギニン及び／又はシトルリンの少なくとも１つ、より更に好ましくはシトルリンを含むペプチド又はタンパク質を含み、特に血流、内皮機能及び血圧を改善することから心血管系に対する有益な効果を提供する。様々な実施形態では、一酸化窒素放出化合物は、食品製品又は組成物の１～２０重量％、好ましくは食品製品又は組成物の１～１５重量％、より好ましくは食品製品又は組成物の１～１０重量％である。一実施形態では、食品製品又は組成物の１日用量は、１日当たり０．５ｇ～１０．０ｇ、好ましくは１日当たり１．０ｇ～５．０ｇ、より好ましくは１日当たり２．０ｇ～４．０ｇ、最も好ましくは１日当たり約３．０ｇの一酸化窒素放出化合物（例えば、シトルリン）を提供する。

食品製品又は組成物は、ビタミンＢ６及び／又はビタミンＢ９に加えて、少なくとも１つのビタミンＢ、例えば、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ３（ナイアシン）、ビタミンＢ５（パントテン酸）、ビタミンＢ７（ビオチン）、及びビタミンＢ１２（コバラミン）、又はビタミンＢ活性を有するその塩、複合体若しくは誘導体のうちの１つ以上を更に含み得る。食品製品又は組成物は、これらの追加のビタミンＢ類の１つ以上を、ＲＤＡの０．１～４０倍、好ましくはＲＤＡの１～２０倍、より好ましくはＲＤＡの１～１０倍含み得る。一実施形態では、食品製品又は組成物は、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ３（ナイアシン）、ビタミンＢ５（パントテン酸）、ビタミンＢ７（ビオチン）及びビタミンＢ１２（コバラミン）の全てを更に含む。

また、一実施形態では、オメガ－３脂肪酸と、１日当たりの推奨一日所要量（ＲＤＡ）の少なくとも０．０１～１００倍のビタミンＢ６及び／又は１日当たりのＲＤＡの０．０１～５．０倍のビタミンＢ９と、の組み合わせを含む食品製品又は組成物は、好ましくは、１日当たりの推奨一日所要量（ＲＤＡ）の０．１～４０倍のビタミンＢ１２、例えば、１日当たりの推奨一日所要量（ＲＤＡ）の１～１０倍のビタミンＢ１２を提供する。

したがって、ビタミンＢ１２は、１日当たりのビタミンＢ１２のＲＤＡの約１０倍、２０倍、３０倍又は４０倍の１日用量で、追加のビタミンＢとして投与され得る。好ましくは、１日用量は、１日当たりのビタミンＢ１２のＲＤＡの１０～４０倍、より好ましくは１０～３０倍、又は更により好ましくは１０～２５倍、最も好ましくは約１２～２１倍を提供する。ビタミンＢ１２の米国のＲＤＡは、１４歳以上のヒトに対して１日２．４μｇであるため、かかる個体は、１日当たり約０．００２ｍｇ～約０．４ｍｇのビタミンＢ１２、好ましくは１日当たり０．０２ｍｇ～０．０７ｍｇのビタミンＢ１２、より好ましくは１日当たり０．０３ｍｇ～０．０５ｍｇのビタミンＢ１２を提供する食品製品又は組成物の１日用量を投与され得る。

好ましい実施形態では、対象はビタミンＢ１２を更に投与される。一実施形態では、ビタミンＢ１２は、１日当たりのビタミンＢ１２のＲＤＡの０．１～４０倍、好ましくは１日当たりのビタミンＢ１２のＲＤＡの１０～４０、１０～３０又は１０～２５倍、より好ましくは１日当たりのビタミンＢ１２のＲＤＡの１２～２１倍の用量で投与される。

一実施形態では、ビタミンＢ１２は、１日当たり約０．００２ｍｇ～約０．４ｍｇ、好ましくは１日当たり０．０２ｍｇ～０．０７ｍｇ、より好ましくは１日当たり０．０３ｍｇ～０．０５ｍｇの用量で投与される。

一実施形態では、オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ又はその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、ビタミンＢ１２と同時に、順次に、又は別々に対象に投与され、ビタミンＢ１２は、１日当たりのビタミンＢ１２のＲＤＡの０．１～４０倍、好ましくは１日当たりのビタミンＢ１２のＲＤＡの１０～４０、１０～３０又は１０～２５倍、より好ましくは１日当たりのビタミンＢ１２のＲＤＡの１２～２１倍の用量で投与される。

いくつかの実施形態では、食品製品又は組成物は、酸化的損傷及び炎症誘発性の損傷から保護するための１つ以上の酸化防止剤を更に含み得る。好適な抗酸化剤の非限定的な例としては、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、セレン及びそれらの組み合わせが挙げられる。例えば、食品製品又は組成物は、０．０００１重量％～２５重量％の酸化防止剤を含み得、存在する場合、好ましくは、０．０００１重量％～約１５重量％、より好ましくは、０．００１重量％～５重量％、最も好ましくは０．００１重量％～２重量％である。

一実施形態では、組成物は、ヒト及び／又はコンパニオン個体などのペット用の食品組成物（食品製品）である。食品組成物は、ミネラル、別のビタミン、塩、又は機能性添加剤、例えば、香味剤、着色剤、乳化剤、若しくは抗菌化合物、若しくは他の防腐剤などの、１種以上の追加の物質を含み得る。好適なミネラルの非限定的な例としては、カルシウム、リン、カリウム、ナトリウム、鉄、塩化物、ホウ素、銅、亜鉛、マグネシウム、マンガン及びヨウ素が挙げられる。好適な追加ビタミン類の非限定的な例としては、ビタミンＡ、Ｄ、Ｅ及びＫなどの脂溶性ビタミンが挙げられる。

一実施形態では、組成物は、１つ以上の医薬的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤を含む医薬組成物である。一般に、医薬組成物は、オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を、賦形剤、緩衝剤、結合剤、可塑剤、着色剤、希釈剤、圧縮剤、潤滑剤、風味剤、又は湿潤剤の１つ以上と混合することによって調製される。

オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、１ヶ月未満で確認できる急性効果を有し得る。追加的に又は代替的に、オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、長期効果を有することができ、したがって、様々な実施形態は、少なくとも１ヶ月の期間にわたって個体に投与すること（例えば、経口で）を含み、好ましくは少なくとも２カ月、より好ましくは少なくとも３、４、５又は６カ月、最も好ましくは少なくとも１年の期間にわたって個体に投与される。期間中、オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を、個体に１週間当たり少なくとも１日投与することができ、好ましくは１週間に少なくとも２日、より好ましくは１週間に少なくとも３、４、５又は６日、最も好ましくは、１週間に７日、個体に投与できる。オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を、１日当たり１回の用量で、又は１日当たり複数の別個の用量で投与することができる。

キット
別の態様では、本発明は、オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、本発明の血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤を含む、キットを提供する。

オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及び／又は、血漿ホモシステインのレベルを低減することができる薬剤は、好適な容器に提供され得る。

キットはまた、使用のための使用説明書を含んでもよい。

当業者は、開示される本発明の範囲から逸脱することなく、本明細書に開示される本発明の全ての特徴を組み合わせることができることを理解するであろう。

本発明の好ましい特徴及び実施形態を、これより非限定的な例によって記述する。

本発明の実施は、特に指示がない限り、当業者の能力の範囲内である、化学、生化学、分子生物学、微生物学、及び免疫学の従来技術を使用する。

実施例１
７０歳以上の成人における認知機能の低下速度の減少における、オメガ３栄養補助食品（１日当たりＤＨＡ８００ｍｇ、ＥＰＡ２００）、マルチドメイン介入（栄養カウンセリング、運動、認知刺激）、又は栄養補助食品＋マルチドメインの組み合わせの有効性を、プラセボに対し評価するよう、マルチドメインアルツハイマー予防実験（ＭＡＰＴ）を設計した。ＭＡＰＴ結果の事後解析は、ベースラインのオメガ３のステータスが低い対象の認知機能の低下はオメガ３の補給により予防されることを示唆している。ＶＩＴＡＣＯＧ試験は、ホモシステインを低下させるビタミンＢ群が、７０歳以上でＭＣＩ及び高ホモシステイン血症を有する対象において全脳萎縮を軽減できることを実証した。ＶＩＴＡＣＯＧからの２つの後続の事後報告により、ビタミンＢの効果は、ベースラインのオメガ３の状態が上位三分位に含まれる対象の、脳萎縮及び認知機能の低下の合計に対し最も顕著であったことを実証した。ベースラインの栄養状態及び栄養素の相互作用は、将来の栄養介入を検討するための合理的な設計要素である。これらの新たな洞察から、「栄養リスク」にある対象を被験者とする次世代の臨床試験（臨床試験登録：ＮＣＴ０１９５３７０５）が導かれ、相乗作用のある代謝を利用する栄養素の組み合わせは、認知機能の低下を予防する能力がより高いことが証明され得る。これらの臨床試験設計要素（例えば、栄養強化及び／又はオーバーサンプリング）を実施するには、第１に、任意の臨床試験の費用及び操作負荷が増すことから、強力な科学的根拠が必要とされる。本発明者らは、ＭＡＰＴ試験データを使用して、血漿ホモシステイン、血清ビタミンＤ、及び赤血球オメガ３脂肪酸によって反映されるベースラインの栄養状態が、認知機能の低下に関してそれぞれ独立したリスク因子であるという仮説を試験したが、「栄養リスク指数」を使用して組み合わせたところリスクが悪化し、３６ヶ月にわたって認知機能の低下速度が加速することが明らかとなった。

結果
完全な栄養バイオマーカー及び教育情報は、７１２／７８０人の対象に利用可能であった。平均年齢は７５歳（４．５）であり、６７％は女性であり、２７．５％は大学以上の教育過程を修了し、２０．７％はＡＰＯＥ４対立遺伝子を保有し、これは全て親ＭＡＰＴコホートに類似していた（表１）。平均赤血球ＥＰＡ＋ＤＨＡ、血漿ホモシステイン及び血清２５－ＯＨ－ビタミンＤ（図２及び３）は、それぞれ５．８（１．５）重量％、１５．８（５．４）μｍｏｌ／Ｌ、及び２３．７ｎｇ／ｍＬ（１２．２）であった（表１）。ＮＲＩは、赤血球ＥＰＡ＋ＤＨＡ≦４．８２、血漿ホモシステイン≧１８．１ｕｍｏｌ／Ｌ、及び血漿２５－ヒドロキシビタミンＤ≦１５ｎｇ／ｍＬのそれぞれについて１ポイント増加した。各ＮＲＩポイントの増加は、栄養リスクのないもの（ＮＲＩ＝０）（例えば、ＮＲＩ＝１β＝－０．０４、ｐ＝０．０２；ＮＲＩ＝２β＝－０．０６、ｐ＝０．００９；ＮＲＩ＝３β＝－０．１８、ｐ＝０．００６）と比較して、認知機能の低下の更なる加速に漸増的に関連した（表３）。ＡＰＯＥ４、ＡＰＯＥ４^＊時間相互作用、試験アーム、及び時間とのそれらの相互作用を更に制御しても、これらの結果は変化しなかった。

結論
赤血球オメガ－３脂肪酸（ＥＰＡ＋ＤＨＡ）、血漿ホモシステイン及び血清２５－ヒドロキシビタミンＤからなる血液ベースの「栄養リスク指数」は、年齢、性別、教育、ＡＰＯＥ４遺伝子型及び介入アームとは無関係に、高齢の成人における認知機能の低下の推移が異なる人々を特定する。ＮＲＩ指数における各点の増加は、３年にわたってより加速された認知機能の低下に関連する（図１）。これらのデータは、低ビタミンＤ３及び低赤血球オメガ３脂肪酸及び高ホモシステインに起因する栄養リスクの低減は、加齢に関連する認知機能の低下を予防することができること、つまり栄養リスク指数とこれらの分野に対応する栄養補助食品を展開することで促進できるという概念を示唆している。

材料及び方法
ＭＡＰＴにおける生化学的アッセイ及び遺伝学
２５－ヒドロキシビタミンＤ．総２５－ヒドロキシビタミンＤをインビトロ測定するために、電気化学発光結合アッセイを利用した（Ｃｏｂａｓ８０００（Ｒｏｃｈｅ））。この市販のアッセイは、ヒト血清及び血漿中の総ビタミンＤ（２５－ＯＨ）の定量を意図して、２５－ヒドロキシビタミンＤ３及びＤ２の両方を捕捉するためにＶＤＢＰを用いる。簡潔に述べると、試料を前処理試薬で９分間インキュベートし、試料中の天然ＶＤＢＰを変性させて、結合ビタミンＤ（２５－ＯＨ－Ｄ）を放出させる。次いで、試料を、組換えルテニウム標識ＶＤＢＰと更にインキュベートして、２５－ＯＨ－Ｄとルテニル化－ＶＤＢＰとの複合体を形成する。ビオチン化２５－ＯＨ－Ｄの添加により、ルテニウム標識ＶＤＢＰ及びビオチン化２５－ＯＨ－Ｄからなる複合体が生成される。複合体全体は、ビオチン及びストレプトアビジンコーティングされた微小粒子の相互作用によって固相に結合され、電極の表面上に捕捉される。結合しなかった物質を除去する。電極に電圧を加えることにより、光電子増倍器によって測定される化学発光放出が誘発される。結果は、２点較正及び試薬バーコードを介して提供される較正マスター曲線によって生成される、機器固有の検量線により決定される。単位はｎｇ／ｍＬとして表される。

ホモシステイン．総血漿ホモシステインを、市販の酵素サイクリングアッセイ（Ｃｏｂａｓ８０００（Ｒｏｃｈｅ））を使用して測定した。総血漿ホモシステインの濃度を、標準曲線に対して血漿試料中のμｍｏｌ／Ｌで測定した。酸化されたホモシステインを最初に還元し、次いで、Ｓ－アデノシルメチオニンと反応させて、ホモシステインＳ－メチルトランスフェラーゼの存在下でメチオニン及びＳ－アデノシルホモシステイン（ＳＡＨ）を生成した。次いで、ＳＡＨを、ＳＡＨがＳＡＨ加水分解酵素によりアデノシン及びホモシステインに加水分解される共役酵素反応により評価する。ホモシステインは、検出シグナルを増幅するのに役立つホモシステイン変換反応に利用される。形成されたアデノシンを、イノシン及びアンモニアに加水分解する。グルタメートデヒドロゲナーゼは、アンモニアと２－オキソグルタレート及びＮＡＤＨとの反応を触媒して、ＮＡＤ＋を生成する。試料中のホモシステインの濃度は、ＮＡＤ＋に変換されたＮＡＤＨの量に正比例し、これは、３４０ｎｍの吸光度で分光法で読み取った。単位はｕＭとして表される。

赤血球膜オメガ３脂肪酸．全脂肪酸の重量パーセントとして表される赤血球ＥＰＡ＋ＤＨＡは、水素炎イオン化検出器と連結されたガスクロマトグラフィーを使用して定量される。簡潔に述べると、遠心分離によって赤血球を血漿から分離し、３回洗浄した後、酸性化し、ヘキサンとイソプロパノールとの混合物を含むＦｏｌｃｈ法による脂質抽出を行う。マルガリン酸（Ｓｉｇｍａ）を内部標準として添加する。全脂質抽出物を鹸化し、メチル化した。脂肪酸メチルエステルをペンタンで抽出し、スプリットインジェクター、結合シリカキャピラリカラム（ＢＰＸ７０、６０ｍ×０．２５ｍｍ；０．２５μｍの膜厚）を備えるＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ６８９０Ｎガスクロマトグラフ及び水素炎イオン化検出器を使用して、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）で分析した。キャリアガスとしてヘリウムを使用し、カラム温度プログラムを１５０℃で開始し、２２０℃まで１．３℃／分で上昇させ、２２０℃で１０分間保持した。ＦＡＭＥの特定は、脂肪酸標準から調製されたＦＡＭＥについて得られた保持時間に基づいた。曲線下面積は、ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用して求め、結果を全脂肪酸の％として表す。ＤＨＡ濃度は、内部標準を用いて計算し、μｇ／ｇの赤血球として表現した。ＦＡメチルエステル（ＦＡＭＥ）は、ＣＰＷａｘ５８ＣＢ５０－ｍ溶融シリカキャピラリカラムを備えたＧＣ２１００ガスクロマトグラフ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）を使用するＦＡＭＥ分析を使用して、メチル基転移後に定量可能である。プログラムされた温度のスプレー注入器及び水素炎イオン化検出器により、オメガ－３指数（総脂肪酸のパーセント値で表すＥＰＡ＋ＤＨＡ）が計算される。パルミチン酸Ｃ１６：０及びステアリン酸Ｃ１８：０、ＭＵＦＡ（オレイン酸Ｃ１８：１ｎ－９及びパルミトレイン酸Ｃ１６：１ｎ－７）、ｎ－６ＰＵＦＡ（ＬＡＣ１８：２、γ－リノレン酸Ｃ１８：３、ジホモ－γ－リノレン酸Ｃ２０：３、ＡＡＣ２０：４、ドコサテトラエン酸Ｃ２２：４及びドコサペンタエン酸Ｃ２２：５）、及びｎ－３ＰＵＦＡ（ＡＬＡＣ１８：３、Ｃ２０：５ＥＰＡ、ドコサペンタエン酸Ｃ２２：５、ＤＨＡＣ２２：６）、１つのｎ－９ＰＵＦＡ（エイコサトリエン酸Ｃ２０：３）を含む１５個の膜リン脂質脂肪酸も求められる。

記述統計
高ホモシステイン血症の有病率及び個体群における血漿ホモシステインの分布。ベースラインでのホモシステイン及びビタミンＤの三分位／四分位にわたる人口構成（ｄｅｍｏｇｒａｐｈｉｃｓ）及び臨床変数の分布を比較して、潜在的な効果調整剤を特定する。認知複合ｚスコア及び神経画像処理パラメータの三分位値にわたる人口構成及び臨床変数の分布を評価して、認知Ｚに関連する潜在的な交絡因子を特定する。

実施例２
以下の非限定的な例は、本開示によって提供される実施形態において、認知症ではない個体における認知老化を軽減するための組成物の例示である。

本発明は、以下の番号付けされた段落によって更に説明される。
１．認知的加齢の軽減、治療、又は予防を必要とする又はこれらのリスクのある、認知症ではない個体における、これらの軽減、治療、又は予防方法であって、治療的に有効な量のオメガ－３脂肪酸、ビタミンＢ６、及びビタミンＢ９を含む組成物を個体に投与することを含む、方法。
２．個体が高齢の成人である、段落１に記載の方法。
３．個体が老齢のヒトである、段落１又は２に記載の方法。
４．組成物が、少なくとも１ヶ月間毎日個体に経口投与される、段落１～３のいずれかに記載の方法。
５．組成物が、酸化窒素放出化合物を更に含む、段落１～４のいずれかに記載の方法。
６．一酸化窒素放出化合物がシトルリンを含む、段落５に記載の方法。
７．オメガ－３脂肪酸が、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸、及びこれらの混合物からなる群から選択される脂肪酸を含む、段落１～６のいずれかに記載の方法。
８．組成物が、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ５、ビタミンＢ７及びビタミンＢ１２からなる群から選択される１種以上の追加のビタミンＢを含む、段落１～７のいずれかに記載の方法。
９．組成物が、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、及びセレンからなる群から選択される１種以上の酸化防止剤を含む、段落１～８のいずれかに記載の方法。
１０．個体が、ベースラインにおいて低ＤＨＡ状態である、段落１～９のいずれかに記載の方法。
１１．個体が、ベースラインで０．５の臨床的認知症尺度（ＣＤＲ）を有する、段落１～１０のいずれかに記載の方法。
１２．個体が、ベースラインで少なくとも１２μｍｏｌ／Ｌの低血漿ホモシステインのレベルである、段落１～１１のいずれかに記載の方法。
１３．個体が、ベースラインで心臓血管リスク因子、加齢及び認知症（ＣＡＩＤＥ）において１０～１５のリスクスコアを有する、段落１～１２のいずれかに記載の方法。
１４．個体が、ベースラインでアミロイドのＰＥＴスキャンでアミロイド陽性である、段落１～１３のいずれかに記載の方法。
１５．個体が、認知機能の低下のリスクを示す遺伝子型を有する、段落１～１４のいずれかに記載の方法。
１６．組成物が、０．１３ｍｇ／日～１３０ｍｇ／日のビタミンＢ６、及び／又は０．００４ｍｇ／日～２．０ｍｇ／日のビタミンＢ９を提供する１日用量で個体に投与される、段落１～１５のいずれかに記載の方法。
１７．組成物が、１日当たり０．００２ｍｇ～０．４ｍｇのビタミンＢ１２、好ましくは１日当たり０．０２～０．０７ｍｇのビタミンＢ１２、より好ましくは１日当たり０．０３～０．０５ｍｇのビタミンＢ１２を提供する１日用量で個体に投与される、段落１～１６のいずれかに記載の方法。
１８．投与により、神経細胞の細胞膜流動性の改善、神経細胞の可塑性及び活性の刺激、抗炎症性の改善、認知能力の支持又は維持、脳の性能の支持又は維持、脳の老化の低下、活発な精神及び脳の適応度の支持、健康な脳の支持又は維持、記憶の強化、遂行機能の強化、注意の強化、認知健康の維持、脳細胞の健康の維持が提供される、段落１～１７のいずれかに記載の方法。
１９．認知的加齢の軽減、治療、又は予防を必要とする又はこれらのリスクのある、認知症ではない個体における、これらの軽減、治療、又は予防方法であって、治療有効量のオメガ－３脂肪酸、ビタミンＢ６、及びビタミンＢ９を含む組成物を個体に投与することを含む、方法。
２０．脳萎縮の減少、シナプスの数の増加又は維持、アミロイド－β食作用の増加又は維持、及び神経炎症の減少からなる群から選択される１つ以上の利益を必要とする、認知症ではない個体において、これらを達成する方法であって、オメガ－３脂肪酸、ビタミンＢ６、及びビタミンＢ１２を含む治療有効量の組成物を個体に投与することを含む、方法。
２１．オメガ－３脂肪酸、ビタミンＢ６及びビタミンＢ１２の組み合わせを含む組成物、及び認知症ではない個体における認知的加齢を軽減するのに有効な量の組み合わせを含む組成物。
２２．組成物が、組成物の１～５０重量％の量のオメガ－３脂肪酸、１日当たり０．００２ｍｇ～０．４ｍｇのビタミンＢ１２、好ましくは１日当たり０．０２～０．０７ｍｇのビタミンＢ１２を含む、段落２１に記載の組成物。
２３．組成物が、タンパク質、炭水化物、脂肪、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される構成成分を含む食品製品である、段落２１又は２２に記載の組成物。
２４．組成物が、製薬上許容できる担体、希釈剤、及び賦形剤からなる群から選択される成分を含む医薬組成物である、段落２１又は２２に記載の組成物。
２５．認知的加齢の軽減、治療、又は予防を必要とする、認知症ではない個体における、これらの軽減、治療、又は予防に使用するための、段落２１～２４のいずれかに記載の組成物。
２６．神経細胞の細胞膜流動性の改善、神経細胞の可塑性及び活性の刺激、抗炎症性の改善、認知能力の支持又は維持、脳の性能の支持又は維持、脳の老化の低下、活発な精神及び脳の適応度の支持、健康な脳の支持又は維持、記憶の強化、遂行機能の強化、注意の強化、認知健康の維持、は脳細胞の健康の維持の改善に使用する、段落２１～２５のいずれかに記載の組成物。
２７．認知症ではない個体における認知的加齢を軽減するための食品組成物の製造方法であって、有効量のオメガ－３脂肪酸、ビタミンＢ６及びビタミンＢ９の組み合わせを、タンパク質、炭水化物、及び脂肪からなる群から選択される少なくとも１つの成分に添加することを含む、方法。
２８．認知症ではない個体における認知的加齢を軽減するための医薬組成物の製造方法であって、有効量のオメガ－３脂肪酸、ビタミンＢ６及びビタミンＢ９の組み合わせを、製薬上許容できる担体、希釈剤及び賦形剤からなる群から選択される少なくとも１つの成分に添加することを含む、方法。
２９．リスクのある個体における認知症を予防する方法であって、治療有効量のオメガ－３脂肪酸、ビタミンＢ６、及びビタミンＢ９を含む組成物を個体に投与することを含む、方法。
３０．予防される認知症が、アルツハイマー病、血管性認知症、レヴィー小体認知症、前頭側頭型認知症及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、段落２９に記載の方法。
３１．認知症ではない個体における認知能力を改善する方法であって、治療有効量のオメガ－３脂肪酸、ビタミンＢ６、及びビタミンＢ９を含む組成物を個体に投与することを含む、方法。

上記明細書で言及した全ての出版物は、本明細書に参照により組み込まれる。開示される薬剤、組成物、本発明の使用及び方法の様々な修正及び変更は、本発明の範囲及び主旨から逸脱することなく、当業者には明白であろう。本発明は、特定の好ましい実施形態に関連して開示されているが、特許請求される本発明は、このような特定の実施形態に過度に限定されるべきではないことを理解されたい。実際、当業者には自明の、開示した、本発明を実施するためのモードの種々の改変は以下の特許請求の範囲の範囲内であることを意図している。

Claims

対象における認知機能の低下の素因を特定するための方法であって、前記対象から得られた１つ以上の試料において独立して、
オメガ－３脂肪酸、ビタミンＤ若しくはその代謝産物、及びホモシステイン
のレベルを測定することを含み、
オメガ－３脂肪酸の前記レベルが、赤血球試料において測定され、
ビタミンＤ若しくはその代謝産物の前記レベルが、血清試料において測定され、及び、ホモシステインの前記レベルが、血漿試料において測定される、方法。
前記オメガ－３脂肪酸が、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及び／又はドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）である、請求項１に記載の方法。
前記ビタミンＤ若しくはその代謝産物が、ビタミンＤ３、ビタミンＤ２、２５－ヒドロキシビタミンＤ３及び／又は２５－ヒドロキシビタミンＤ２である、請求項１又は２に記載の方法。
前記対象が、老化しているヒト対象である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。