JP7247102B2 - ６－６縮合二環式ヘテロアリール化合物及びｌａｔｓ阻害剤としてのその使用 - Google Patents

６－６縮合二環式ヘテロアリール化合物及びｌａｔｓ阻害剤としてのその使用 Download PDF

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Description

配列表
本願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、この配列表は本明細書によって全体として参照により援用される。２０１８年４月２３日作成の前記ＡＳＣＩＩ複製物は、ＰＡＴ０５７６９９－ＷＯ－ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔの名称で、サイズが３５，７７８バイトである。
序論
本発明は、ＬＡＴＳ（ｌａｒｇｅ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｋｉｎａｓｅ：ラージ腫瘍抑制キナーゼ）阻害剤に関する。本発明は更に、６－６縮合二環式ヘテロアリール化合物及びかかる化合物を含む組成物に関する。
本発明はまた、細胞療法／移植用の細胞材料を作製するためのかかる化合物のエキソビボ使用にも関する。本発明は更に、ＬＡＴＳ阻害剤の使用を伴う、例えば輪部幹細胞（ＬＳＣ）又は角膜内皮細胞（ＣＥＣ）を含む眼細胞の拡大集団など、拡大細胞集団の作成方法、並びに例えば輪部幹細胞（ＬＳＣ）又は角膜内皮細胞（ＣＥＣ）を含む眼細胞などの細胞集団、及び前記細胞を含む療法の調製、使用及び方法に関する。
本発明はまた、６－６縮合二環式ヘテロアリール化合物、かかる化合物を含む組成物、並びに創傷治癒の促進における、特に、熱傷、急性及び慢性皮膚潰瘍であって、静脈性下腿潰瘍、糖尿病性足部潰瘍、褥瘡性潰瘍など、血管性、糖尿病性及び褥瘡性潰瘍を含めた皮膚潰瘍の治療のためのその使用にも関する。
本発明は、加えて、６－６縮合二環式ヘテロアリール化合物、かかる化合物を含む組成物、並びに肝再生及び肝再成長における、並びに灌流装置を用いた又は用いない、エキソビボでの臓器の損傷防止及び機能維持又は改善におけるその使用に関する。
発明の背景
臓器再生及び／又は治癒は、多くの重大な健康問題の治療にとって極めて重要な問題である。
例えば眼では、角膜失明が世界の失明原因の第３位であることは周知である。世界の全角膜移植の約半数が、角膜内皮機能不全の治療のために行われている。
角膜は、種々の層：角膜上皮、ボーマン膜、実質、デスメ膜及び内皮を含む透明組織である。角膜内皮はまた単層のヒト角膜内皮細胞も含み、そのバリア及びイオンポンプ機能によって角膜透明性の維持を助ける。これは、角膜実質と房水との間の体液、栄養素及び塩の平衡の維持において決定的な役割を果たす。透明性を維持するためには内皮細胞密度を維持しなければならないが、しかしながら内皮細胞密度は、外傷、疾患又は内皮ジストロフィーの結果として著しく低下し得る。これらの細胞の密度はまた、加齢によっても低下する。ヒト角膜内皮は生体内での増殖傾向が限られている。細胞密度が下がり過ぎれば、バリア機能が損なわれ得る。内皮バリア機能が失われると、角膜浮腫及び視力低下が起こる。水疱性角膜症の臨床状態は、結果として生じる合併症の一つであり得る。
現在、角膜内皮機能不全によって引き起こされる失明の唯一の治療は、角膜移植である。角膜移植は最も一般的な臓器移植形態のうちの一つであるが、必要なドナー角膜の入手可能性は非常に限られている。２０１２～２０１３年の世界的調査において角膜移植組織の大幅な不足が数値化され、必要とされる７０個に対し、入手可能な角膜は僅か１個であることが明らかになった（Ｇａｉｎ ａｔ ｅｌ．，（２０１６）「世界角膜移植及びアイバンク調査（Ｇｌｏｂａｌ Ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ Ｃｏｒｎｅａｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｅｙｅ Ｂａｎｋｉｎｇ）」．ＪＡＭＡ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．１３４：１６７－１７３）。
従って、角膜内皮機能不全の治療用の角膜内皮細胞を供給する新規治療手法が大いに必要とされている。
角膜上皮もまた眼内に維持される必要がある。角膜上皮は、基底細胞層と複数の非角化重層扁平上皮層とで構成される。これは角膜の透明度及び均一な屈折面の維持に不可欠である。これは角膜実質を覆う透明の再生可能な保護層として働き、輪部に位置する幹細胞集団によって補充される。輪部幹細胞が罹患しているか、又は存在しない状態である輪部幹細胞欠乏では、健常な輪部幹細胞数の減少によって角膜上皮の再生能が低下する。
輪部幹細胞欠乏は、化学的又は熱的熱傷、紫外線及び電離放射線からの傷害の結果として、又は更にはコンタクトレンズの装用；無虹彩のような遺伝的障害、並びにスティーブンス・ジョンソン症候群及び眼瘢痕性類天疱瘡などの免疫障害の結果として起こり得る。輪部幹細胞の喪失は部分的又は全面的あり得る；及び片眼性又は両眼性であり得る。輪部幹細胞欠乏の症状としては、疼痛、羞明、非治癒性有痛性角膜上皮欠損、角膜血管新生、結膜上皮による角膜上皮の置換、角膜透明性の喪失及び視力低下が挙げられ、これらは最終的に失明につながり得る。
２０１５年、欧州連合において輪部幹細胞欠乏の治療用製品が条件付き販売承認を得ており（商品名Ｈｏｌｏｃｌａｒ（登録商標））、これが欧州で最初の幹細胞を含有する先端医療医薬品（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔ：ＡＴＭＰ）となった。Ｈｏｌｏｃｌａｒは、幹細胞を含有する自己ヒト角膜上皮細胞をエキソビボ拡大した製剤である。患者から健常な輪部組織生検を採取し、エキソビボで拡大し、手術時まで凍結する。患者への投与のため、解凍した細胞をフィブリンを含む膜上で成長させて、次に患者の眼に外科的に植え込む。この療法は、物理的又は化学的眼熱傷が原因の中等度～重度輪部幹細胞欠乏を有する成人での使用が意図される（Ｒａｍａ Ｐ，Ｍａｔｕｓｋａ Ｓ，Ｐａｇａｎｏｎｉ Ｇ，Ｓｐｉｎｅｌｌｉ Ａ，Ｄｅ Ｌｕｃａ Ｍ，Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉ Ｇ．（２０１０）「輪部幹細胞療法及び長期角膜再生（Ｌｉｍｂａｌ ｓｔｅｍ－ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｃｏｒｎｅａｌ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）」．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．３６３：１４７－１５５）。しかしながら、この方法は、自己使用に限られ、且つ患者から最低でも１～２平方ミリメートルの非損傷組織を摘出可能であるのに十分な輪部が片方の眼に残存していなければならない点で限界がある。また、各特定の患者についてその細胞の培養が成功しないこともあり、患者がこの治療を受けられないリスクもある。更にまた、Ｈｏｌｏｃｌａｒ細胞製剤の調製にはマウス由来のフィーダー細胞が使用されるため、ヒトで用いられる製剤に対する疾患伝播及び潜在的な免疫原性リスクに起因した潜在的な安全性への懸念が生じる。更に、Ｈｏｌｏｃｌａｒ細胞製剤は、ｐ６３α染色によって同定したとき輪部幹細胞を僅か約５％しか含有しない。
従って、輪部幹細胞欠乏の治療用の輪部幹細胞を供給する新規治療手法が大いに必要とされている。
恒常性を保つ間の、及び疾患状態における機能的肝再生は、必須の生理学的過程の維持に決定的に重要である。肝臓には顕著な潜在的再生能力があるにも関わらず、この過程は重度の急性又は慢性肝傷害を受けると障害され得る。肝損傷及び肝再生障害は多くの場合に深刻な罹病及び死亡をもたらし、従って救命肝移植が必要となる。残念ながら、現在、肝移植の需要は入手可能なドナー臓器の供給をはるかに上回っている。結果として、多くの患者が救命移植を待つ間に死亡する事態が続いている。死亡したドナーからの分割肝移植又は生体ドナーからの部分肝移植の使用は、移植サイズ上の制約によって制限される。移植片対レシピエント重量比（ＧＲＷＲ）が不適切な部分肝を移植すると、移植片機能不全及び不良が増加する。肝再成長を増加させる療法は、サイズに基づけば本来移植に不適切と見なされるであろう部分肝の移植を可能にし得る。或いは、肝細胞死の阻害、肝機能の改善及び異常肝構造の修復によって肝臓を再生すれば、肝機能が正常化し、移植の必要性を防ぐことができる可能性がある（Ｆｏｒｂｅｓ ＳＪ ａｎｄ Ｎｅｗｓｏｍｅ ＰＮ（２０１６）「肝再生－臨床応用に向けた機構及びモデル（Ｌｉｖｅｒ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ－ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ ｍｏｄｅｌｓ ｔｏ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ）」．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ＆Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１３（８）：４７３－４８５；Ｄｕｔｋｏｗｓｋｉ Ｐ，Ｌｉｎｅｃｋｅｒ Ｍ，ＤｅＯｌｉｖｅｉｒａ ＭＬ，Ｍｕｅｌｌｈａｕｐｔ Ｂ，Ｃｌａｖｉｅｎ ＰＡ（２０１５）「肝移植への挑戦及び転帰改善のための戦略（Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ｔｏ Ｌｉｖｅｒ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｔｏ Ｉｍｐｒｏｖｅ Ｏｕｔｃｏｍｅｓ）」．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１４８（２）：３０７－３２３）。
ひいては、肝再成長を促進する更に効果的な治療薬が依然として喫緊に必要とされている。
慢性皮膚潰瘍は、血管性、糖尿病性及び褥瘡性潰瘍を含め、公衆衛生上の大きな問題となっている。創傷の共存症、死亡率上昇及び患者のクオリティ・オブ・ライフとの関連において、創傷ケアに対する需要の増加が反映される（Ｄｅｍｉｄｏｖａ－Ｒｉｃｅ ＴＮ，Ｈａｍｂｌｉｎ ＭＲ，＆Ｈｅｒｍａｎ ＩＭ（２０１２）「急性及び障害性創傷治癒：病態生理学及び現行の薬物送達方法、第１部：正常及び慢性創傷：生物学、原因、及びケア手法（Ａｃｕｔｅ ａｎｄ ｉｍｐａｉｒｅｄ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ：ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｃｕｒｒｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ，ｐａｒｔ １：ｎｏｒｍａｌ ａｎｄ ｃｈｒｏｎｉｃ ｗｏｕｎｄｓ：ｂｉｏｌｏｇｙ，ｃａｕｓｅｓ， ａｎｄ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｔｏ ｃａｒｅ）」．Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｓｋｉｎ＆ｗｏｕｎｄ ｃａｒｅ ２５（７）：３０４－３１４；Ｄｅｍｉｄｏｖａ－Ｒｉｃｅ ＴＮ，Ｈａｍｂｌｉｎ ＭＲ，＆Ｈｅｒｍａｎ ＩＭ（２０１２）「急性及び障害性創傷治癒：病態生理学及び現行の薬物送達方法、第２部：正常及び病的創傷治癒における成長因子の役割：治療可能性及び送達方法（Ａｃｕｔｅ ａｎｄ ｉｍｐａｉｒｅｄ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ：ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｃｕｒｒｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ，ｐａｒｔ ２：ｒｏｌｅ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ａｎｄ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ：ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｄｅｌｉｖｅｒｙ）」．Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｓｋｉｎ＆ｗｏｕｎｄ ｃａｒｅ ２５（８）：３４９－３７０）。慢性創傷患者の医療費は、米国だけでも毎年約２５０億ドルに上る。１９９７年にレグラネクス（Ｒｅｇｒａｎｅｘ）（ＰＤＧＦ）が承認されたが、その有効性は限定的であり、それ以降、ＦＤＡによって新規の化学実体は承認されていない（Ｅａｇｌｓｔｅｉｎ ＷＨ，Ｋｉｒｓｎｅｒ ＲＳ，＆Ｒｏｂｓｏｎ ＭＣ（２０１２）「慢性皮膚潰瘍研究のための食品医薬品局（ＦＤＡ）医薬品承認エンドポイント（Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ（ＦＤＡ）ｄｒｕｇ ａｐｐｒｏｖａｌ ｅｎｄ ｐｏｉｎｔｓ ｆｏｒ ｃｈｒｏｎｉｃ ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｕｌｃｅｒ ｓｔｕｄｉｅｓ）」．Ｗｏｕｎｄ ｒｅｐａｉｒ ａｎｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ：創傷治癒学会（Ｗｏｕｎｄ Ｈｅａｌｉｎｇ Ｓｏｃｉｅｔｙ）［及び］欧州組織修復学会（ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｒｅｐａｉｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ）の公式刊行物 ２０（６）：７９３－７９６）。本質的に、成長因子は創傷床のタンパク質分解性環境において安定しない。成長因子療法はまた、臨床患者試料で実証されているとおり、創傷におけるその対応する受容体の低発現に見舞われる可能性もある（Ｄｅｍｉｄｏｖａ－Ｒｉｃｅ ＴＮ，Ｈａｍｂｌｉｎ ＭＲ，＆Ｈｅｒｍａｎ ＩＭ（２０１２）「急性及び障害性創傷治癒：病態生理学及び現行の薬物送達方法、第２部：正常及び病的創傷治癒における成長因子の役割：治療可能性及び送達方法（Ａｃｕｔｅ ａｎｄ ｉｍｐａｉｒｅｄ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ：ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｃｕｒｒｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ，ｐａｒｔ ２：ｒｏｌｅ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ａｎｄ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ：ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｄｅｌｉｖｅｒｙ）」．Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｓｋｉｎ＆ｗｏｕｎｄ ｃａｒｅ ２５（８）：３４９－３７０）。
ひいては、慢性創傷患者の創傷治癒を促進する更に効果的な治療薬が依然として喫緊に必要とされている。
従って、眼、肝臓及び皮膚など、全身の様々な器官に発症する病態向けに細胞増殖を促進する新規治療手法が大いに必要とされている。
発明の概要
本発明は、化合物、その塩、及びその組成物に関し、この化合物はＬＡＴＳ（ラージ腫瘍抑制キナーゼ）阻害剤である。本化合物は、上記に詳述した病態及び目的のための療法において使用される。
本明細書には、本発明の様々な態様が記載される。
本発明は、式Ａ２若しくはその下位式の化合物、又は塩、又はその立体異性体
Figure 0007247102000001
［式中、Ｘ１、環Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ５は、以下の詳細な説明に定義されるとおりである］に関する。
好ましい実施形態において、本化合物は、式Ｉ又は式ＩＩ、又はその下位式、又はその塩：
Figure 0007247102000002
［式中、環Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ５は、以下の詳細な説明に定義されるとおりである］に係る。
別の態様において、本発明は、式Ａ２若しくはその下位式の定義に係る化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又はその下位式の治療有効量と、１つ以上の薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物に関する。
別の態様において、本発明は、式Ａ２若しくはその下位式の定義に係る化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の治療有効量と、１つ以上の治療上活性な薬剤とを含む併用、詳細には医薬併用に関する。
別の態様において、本発明は、療法において使用し得る化合物及び組成物に関する。
ある実施形態において、本発明は、式Ａ１若しくはその下位式の化合物又はその塩、又はその立体異性体：
Figure 0007247102000003
［式中、Ｘ１、Ｘ２、環Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ５は、以下の詳細な説明に定義されるとおりである］を使用した細胞又は細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法に関する。好ましくは塩は薬学的に許容可能な塩である。本発明に係る細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法の具体的な実施形態において、化合物、又はその塩は、３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン－５－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジンから選択される。本発明に係る細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法の別の具体的な実施形態において、化合物、又はその塩は、Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；及びＮ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミンから選択される。
別の実施形態において、本発明は、式Ａ１若しくはその下位式の化合物又はその塩、又はその立体異性体を使用した眼細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法に関する。更に別の実施形態において、本発明は、式Ａ１若しくはその下位式の化合物又はその塩、又はその立体異性体を使用した輪部幹細胞を含む細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法に関する。更に別のある実施形態において、本発明は、式Ａ１若しくはその下位式の化合物又はその塩、又はその立体異性体を使用した角膜内皮細胞を含む細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法に関する。
また好ましくは、細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法はエキソビボでも実施される。更に別の好ましい実施形態において、前記化合物は０．５～１００マイクロモル、好ましくは０．５～２５マイクロモル、より好ましくは１～２０マイクロモルの濃度、特に好ましくは約３～１０マイクロモルの濃度で存在する。輪部幹細胞を含む細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法の好ましい一実施形態において、本化合物は１２～１６日間存在し、特に好ましくは本化合物は１４日間存在する。角膜内皮細胞を含む細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法の別の実施形態において、本化合物は１～２週間存在し、続いて細胞が前記化合物を補足しない成長培地中においてある期間培養され、好ましくはこの期間は１～２週間である。細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法の本発明のある実施形態において、ＬＡＴＳ阻害剤はＬＡＴＳ１又はＬＡＴＳ２、又はＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２を阻害する。より好ましい実施形態において、ＬＡＴＳ阻害剤はＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２を阻害する。輪部幹細胞を含む細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法の別の好ましい実施形態において、前記方法は前記輪部幹細胞を遺伝子修飾することを更に含む。角膜内皮細胞を含む細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法の別の好ましい実施形態において、前記方法は前記角膜内皮細胞を遺伝子修飾することを更に含む。好ましくは前記遺伝子修飾は、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子を特異的に標的とする遺伝子編集システムを前記細胞に導入することを含む。更に別の好ましい実施形態において、細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法、本方法は、拡大細胞集団の作成後にそれらの細胞をリンスして本発明に係る化合物を実質的に除去する更なるステップを含む。一態様において、本発明は、本発明に係る輪部幹細胞を含む細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法によって入手可能な輪部幹細胞を含む拡大細胞集団に関する。別の態様において、本発明は、本発明に係る輪部幹細胞を含む細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法によって入手された輪部幹細胞を含む拡大細胞集団に関する。一態様において、本発明は、本発明に係る角膜内皮細胞を含む細胞集団を含むＬＡＴＳ阻害方法によって入手可能な角膜内皮細胞集団に関する。別の態様において、本発明は、本発明に係るＬＡＴＳ阻害方法によって入手された角膜内皮細胞集団に関する。更に別の態様において、本発明は、本発明に係るＬＡＴＳ阻害方法によって入手可能な又は入手された細胞集団と、局在薬剤である眼送達に好適な組成物とを含む、眼細胞送達製剤に関する。具体的な実施形態において、局在薬剤はＧｅｌＭａである（これはメタクリルアミド修飾ゼラチンであり、ゼラチンメタクリレートとしても知られる）。別の具体的な実施形態において、局在薬剤はフィブリン又はフィブリン糊である。好ましくは輪部幹細胞の細胞送達製剤は輪部幹細胞を２０％超有する。また好ましくは輪部幹細胞の細胞送達製剤はｐ６３α陽性細胞を２０％超有する。特定の好ましい態様において、本発明に係るＬＡＴＳ阻害方法によって入手可能な又は入手された細胞集団又は本発明に係る細胞送達製剤は、本発明に係る化合物を痕跡量レベルしか有しない。好ましくは、角膜内皮細胞の細胞送達製剤において、角膜内皮細胞は細胞送達製剤中に５００細胞／ｍｍ２（面積）より高い密度で存在する。特定の好ましい態様において、本発明に係るＬＡＴＳ阻害方法によって入手可能な又は入手された細胞集団又は本発明に係る細胞送達製剤は、本発明に係る化合物を痕跡量レベルしか有しない。
別の態様において、本発明は、細胞集団をＬＡＴＳ阻害剤の存在下で培養することを含む細胞の培養方法に関する。細胞は、本明細書に記載されるとおり及び／又は提供されるとおりの細胞集団であってよい。好ましくは細胞は眼細胞又は肝細胞である。好ましい実施形態において、細胞は眼細胞である。更なる態様において、本発明は、輪部幹細胞を含む細胞集団をＬＡＴＳ阻害剤の存在下で培養することを含む細胞の培養方法に関する。別の態様において、本発明は、角膜内皮細胞を含む細胞集団をＬＡＴＳ阻害剤の存在下で培養することを含む細胞の培養方法に関する。好ましい実施形態において、本発明は、輪部幹細胞を含む細胞集団を培養することを含む細胞の培養方法に関し、ここでＬＡＴＳ阻害剤は、本発明に係る式Ａ１若しくはその下位式の化合物又はその塩である。別の好ましい実施形態において、本発明は、角膜内皮細胞を含む集団を培養することを含む細胞の培養方法に関し、ここでＬＡＴＳ阻害剤は、本発明に係る式Ａ１若しくはその下位式の化合物又はその塩である。好ましくは塩は薬学的に許容可能な塩である。好ましい実施形態において、前記化合物は０．５～１００マイクロモル、好ましくは０．５～２５マイクロモル、より好ましくは１～２０マイクロモルの濃度、特に好ましくは約３～１０マイクロモルの濃度で存在する。輪部幹細胞を含む細胞集団を培養することを含む細胞の培養方法の好ましい一実施形態において、本化合物は１２～１６日間存在し、特に好ましくは本化合物は１４日間存在する。角膜内皮細胞を含む細胞集団を培養することを含む細胞の培養方法の別の好ましい実施形態において、本化合物は１～２週間存在し、続いて細胞が前記化合物を補足しない成長培地中においてある期間培養され、好ましくはこの期間は１～２週間である。本発明のある実施形態において、ＬＡＴＳ阻害剤はＬＡＴＳ１又はＬＡＴＳ２、又はＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２を阻害する。より好ましい実施形態において、ＬＡＴＳ阻害剤はＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２を阻害する。一実施形態において、前記方法は、細胞を遺伝子修飾することを更に含む。好ましくは前記遺伝子修飾は、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子を特異的に標的とする遺伝子編集システムを前記細胞に導入することを含む。好ましくは細胞は眼細胞である。一実施形態において、前記方法は、輪部幹細胞を遺伝子修飾することを更に含む。別の好ましい実施形態において、前記方法は、角膜内皮細胞を遺伝子修飾することを更に含む。更に別の好ましい実施形態において、細胞の培養方法は、拡大細胞集団の作成後にそれらの細胞をリンスして本発明に係る化合物を実質的に除去する更なるステップを含む。一態様において、本発明は、本発明に係る細胞の培養方法によって入手可能な拡大細胞集団に関する。別の態様において、本発明は、本発明に係る細胞の培養方法によって入手された拡大細胞集団に関する。好ましくは細胞は眼細胞である。
一態様において、本発明は、本発明に係る輪部幹細胞を含む細胞の培養方法によって入手可能な輪部幹細胞を含む拡大細胞集団に関する。別の態様において、本発明は、本発明に係る輪部幹細胞を含む細胞の培養方法によって入手された輪部幹細胞を含む拡大細胞集団に関する。一態様において、本発明は、本発明に係る角膜内皮細胞を含む細胞の培養方法によって入手可能な角膜内皮細胞集団に関する。別の態様において、本発明は、本発明に係る角膜内皮細胞を含む細胞の培養方法によって入手された角膜内皮細胞集団に関する。別の態様において、本発明は、本発明に係る細胞の培養方法によって入手可能な又は入手された細胞集団と、局在薬剤である眼送達に好適な組成物とを含む、眼細胞送達製剤に関する。具体的な実施形態において、局在薬剤はＧｅｌＭａである。別の具体的な実施形態において、局在薬剤はフィブリン又はフィブリン糊である。好ましくは輪部幹細胞の細胞送達製剤は輪部幹細胞を２０％超有する。また好ましくは輪部幹細胞の細胞送達製剤はｐ６３α陽性細胞を２０％超有する。好ましくは角膜内皮細胞は角膜内皮細胞の細胞送達製剤中に、５００細胞／ｍｍ２（面積）より高い密度で存在する。特定の好ましい態様において、本発明に係る細胞の培養方法によって入手可能な又は入手された細胞集団又は本発明に係る細胞送達製剤は、本発明に係る化合物を痕跡量レベルしか有しない。
別の態様において、本発明は、ａ）播種細胞集団をＬＡＴＳ阻害剤の存在下で培養して拡大細胞集団を作成するステップを含む細胞集団拡大方法に関する。好ましい実施形態において、本細胞集団拡大方法はエキソビボで実施される。好ましくは細胞は眼細胞又は肝細胞である。好ましい実施形態において、細胞は眼細胞である。更に別の態様において、本発明は、ａ）輪部幹細胞を含む播種細胞集団をＬＡＴＳ阻害剤の存在下で培養して輪部幹細胞を含む拡大細胞集団を作成するステップを含む細胞集団拡大方法に関する。好ましくはＬＡＴＳ阻害剤は、本発明に係る式Ａ１若しくはその下位式の化合物又はその塩である。更なる態様において、本発明は、ａ）輪部幹細胞を含む播種細胞集団を式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその塩の存在下で培養して輪部幹細胞を含む拡大細胞集団を作成するステップを含む細胞集団拡大方法に関する。本発明の別の実施形態において、前記化合物は式Ａ２又はその下位式又はその塩から選択される。別の態様において、本発明は、ａ）角膜内皮細胞を含む播種細胞集団をＬＡＴＳ阻害剤の存在下で培養して角膜内皮細胞を含む拡大細胞集団を作成するステップを含む細胞集団拡大方法に関する。好ましくはＬＡＴＳ阻害剤は、本発明に係る式Ａ１若しくはその下位式の化合物又はその塩である。更なる態様において、本発明は、ａ）角膜内皮細胞を含む播種細胞集団を式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の存在下で培養して角膜内皮細胞を含む拡大細胞集団を作成するステップを含む細胞集団拡大方法に関する。好ましくは前記化合物は式Ａ２又はその下位式から選択される。また好ましくは塩は薬学的に許容可能な塩である。好ましくは前記化合物は、Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－１－（２－メチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロポキシ）プロパン－２－オール；２，４－ジメチル－４－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）ペンタン－２－オール；Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロブチル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－イソプロピル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン；２－メチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパン－１－オール；２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン；Ｎ－シクロペンチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－（３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（２－メチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロポキシ）エタン－１－オール；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン－５－アミン；及び２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミンからなる化合物の群から選択される。
また好ましくは前記化合物又はその塩は、Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン及び（Ｓ）－Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミンから選択される。
細胞集団拡大方法の好ましい実施形態において、前記化合物は０．５～１００マイクロモル、好ましくは０．５～２５マイクロモル、より好ましくは１～２０マイクロモルの濃度、特に好ましくは約３～１０マイクロモルの濃度で存在する。ステップａ）において輪部幹細胞が関係する細胞集団拡大方法の好ましい一実施形態において、本化合物は１２～１６日間存在し、特に好ましくは本化合物は１４日間存在する。ステップａ）において角膜内皮細胞が関係する別の細胞集団拡大方法の好ましい実施形態において、本化合物は１～２週間存在し、続いてステップｂ）が実施され、ここでは細胞が前記化合物を補足しない成長培地中においてある期間培養され、好ましくはこの期間は１～２週間である。輪部幹細胞が関係する細胞集団拡大方法の具体的な実施形態において、式Ａ１又はその下位式に係る化合物は、３０倍超の播種細胞量の拡大を生じさせる。輪部幹細胞が関係する細胞集団拡大方法の別の具体的な実施形態において、式Ａ１及びその下位式に係る化合物は、１００倍～２２００倍、好ましくは６００倍～２２００倍の播種細胞量の拡大を生じさせる。輪部幹細胞が関係する細胞集団拡大方法のある実施形態において、本発明に係る方法は、輪部幹細胞を２０％超含む細胞集団を生じさせる。輪部幹細胞が関係する細胞集団拡大方法の別の実施形態において、本発明に係る方法は、輪部幹細胞を５０％超含む細胞集団を生じさせる。別の態様において、本発明に係る輪部幹細胞が関係する細胞集団拡大方法は、２０％超がｐ６３αを発現する細胞集団を生じさせる。更に別の態様において、本発明に係る輪部幹細胞が関係する細胞集団拡大方法は、５０％超がｐ６３αを発現する細胞集団を生じさせる。角膜内皮細胞が関係する細胞集団拡大方法の具体的な実施形態において、式Ａ１又はその下位式に係る化合物は、１０倍超の播種細胞量の拡大を生じさせる。角膜内皮細胞が関係する細胞集団拡大方法の別の具体的な実施形態において、式Ａ１又はその下位式に係る化合物は、１５倍～６００倍、好ましくは２０倍～５５０倍の播種細胞量の拡大を生じさせる。本発明のある実施形態において、ＬＡＴＳ阻害剤はＬＡＴＳ１又はＬＡＴＳ２、又はＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２を阻害する。より好ましい実施形態において、ＬＡＴＳ阻害剤はＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２を阻害する。別の好ましい実施形態において、前記細胞集団拡大方法は遺伝子編集システムの使用を更に含む。好ましくは前記方法は、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子を特異的に標的とする遺伝子編集システムの使用を含む。また好ましくは細胞は眼細胞又は肝細胞である。好ましい実施形態において、細胞は眼細胞である。別の好ましい実施形態において、前記細胞集団拡大方法は輪部幹細胞を遺伝子修飾することを更に含み、好ましくは前記遺伝子修飾は、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子を特異的に標的とする遺伝子編集システムを前記細胞に導入することを含む。別の好ましい実施形態において、前記方法は角膜内皮細胞を遺伝子修飾することを更に含み、好ましくは前記遺伝子修飾は、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子を特異的に標的とする遺伝子編集システムを前記細胞に導入することを含む。更に別の好ましい実施形態において、本細胞集団拡大方法は、ステップｃ）拡大細胞集団をリンスして本発明に係る化合物を実質的に除去することを更に含む。
一態様において、本発明は、ＬＡＴＳ阻害剤と成長培地と細胞集団拡大に関する説明書とを含むキットに関する。別の態様において、本発明は、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な細胞集団に関する。更に別の態様において、本発明は、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手された細胞集団に関する。別の態様において、本発明は、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な眼細胞集団に関する。別の態様において、本発明は、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手された眼細胞集団に関する。一態様において、本発明は、本発明に係る輪部幹細胞が関係する細胞集団拡大方法によって入手可能な輪部幹細胞を含む細胞集団に関する。別の態様において、本発明は、本発明に係る輪部幹細胞が関係する細胞集団拡大方法によって入手された輪部幹細胞を含む細胞集団に関する。一態様において、本発明は、本発明に係る角膜内皮細胞が関係する細胞集団拡大方法によって入手可能な角膜内皮細胞を含む細胞集団に関する。別の態様において、本発明は、本発明に係る角膜内皮細胞が関係する細胞集団拡大方法によって入手された角膜内皮細胞を含む細胞集団に関する。更に別の態様において、本発明は、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な又は入手された細胞集団と、局在薬剤である眼送達に好適な組成物とを含む、眼細胞送達製剤に関する。具体的な実施形態において、局在薬剤はＧｅｌＭａである。別の具体的な実施形態において、局在薬剤はフィブリン又はフィブリン糊である。好ましくは輪部幹細胞の細胞送達製剤は輪部幹細胞を２０％超有する。また好ましくは輪部幹細胞の細胞送達製剤はｐ６３α陽性細胞を２０％超有する。好ましくは角膜内皮細胞は角膜内皮細胞の細胞送達製剤中に、５００細胞／ｍｍ２（面積）より高い密度で存在する。特定の好ましい態様において、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な又は入手された細胞集団又は細胞送達製剤は、本発明に係る化合物を痕跡量レベルしか有しない。
細胞集団拡大方法の一部の態様において、本方法は遺伝子編集システムの使用を更に含む。好ましくは遺伝子編集システムは細胞の遺伝子修飾に使用される。本発明に係る方法の実施形態において、遺伝子修飾は、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子の発現及び／又は機能を低下又は消失させることを含む。また好ましくは遺伝子編集システムは、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子を特異的に標的とする。好ましくは前記遺伝子編集システムは、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集システム、ＴＡＬＥＮ遺伝子編集システム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ遺伝子編集システム、メガヌクレアーゼ遺伝子編集システム、ＡＡＶベクタードライブ相同組換え及びレンチウイルスベクターベースのゲノム編集技術からなる群から選択される。
一態様において、本発明は単離細胞集団に関し、ここでは細胞の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％超が輪部幹細胞である。好ましくは２０％超が輪部幹細胞である。より好ましくは５０％超が輪部幹細胞である。別の好ましい実施形態において、７０％超が輪部幹細胞である。特に好ましくは９０％超が輪部幹細胞である。一実施形態において、細胞は遺伝子編集されている。
別の態様において、本発明は単離細胞集団に関し、ここでは細胞の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％超がｐ６３α発現細胞である。好ましくは２０％超がｐ６３α陽性である。より好ましくは５０％超がｐ６３α陽性である。別の好ましい実施形態において７０％超がｐ６３α陽性である。特に好ましくは９０％超がｐ６３α陽性である。一実施形態において、細胞は遺伝子編集されている。
更なる態様において、本発明は、輪部幹細胞を含む細胞集団又は本発明に係る細胞集団に関し、ここで前記細胞のうちの１つ以上は、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子の１つ以上の核酸残基の天然に存在しない挿入又は欠失を含み、挿入及び／又は欠失は前記遺伝子の発現又は機能の低下又は消失をもたらす。好ましい実施形態において、前記遺伝子は、Ｂ２Ｍ、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ及びＨＬＡ－Ｃからなる群から選択される。具体的な実施形態において、細胞はＢ２Ｍ発現レベルが遺伝子修飾されている。
更なる態様において、本発明は、角膜内皮細胞を含む細胞集団又は本発明に係る細胞集団に関し、ここで前記細胞のうちの１つ以上は、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子の１つ以上の核酸残基の天然に存在しない挿入又は欠失を含み、挿入及び／又は欠失は前記遺伝子の発現又は機能の低下又は消失をもたらす。好ましい実施形態において、前記遺伝子は、Ｂ２Ｍ、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ及びＨＬＡ－Ｃからなる群から選択される。具体的な実施形態において、細胞はＢ２Ｍ発現レベルが遺伝子修飾されている。
更なる態様において、本発明は、遺伝子編集されている輪部幹細胞又は角膜内皮細胞を含む細胞集団に関する。更なる態様において、本発明は、遺伝子編集されている輪部幹細胞を含む細胞集団に関する。好ましくは遺伝子編集はＣＲＩＳＰＲによって行われた。好ましくはまた、Ｂ２Ｍ遺伝子が編集された。
一態様において、本発明は、ＬＡＴＳ阻害剤を含む細胞の成長促進剤に関する。一実施形態において、本発明は、ＬＡＴＳ阻害剤を含む眼細胞の成長促進剤に関する。一態様において、本発明は、ＬＡＴＳ阻害剤を含む輪部幹細胞の成長促進剤に関する。好ましくはＬＡＴＳ阻害剤は式Ａ１若しくはその下位式の化合物又はその塩である。別の態様において、本発明は、式Ａ１又はその下位式の化合物又はその塩を含む輪部幹細胞の成長促進剤に関する。一態様において、本発明は、ＬＡＴＳ阻害剤を含む角膜内皮細胞の成長促進剤に関する。好ましくはＬＡＴＳ阻害剤は式Ａ１若しくはその下位式の化合物又はその塩である。別の態様において、本発明は、式Ａ１若しくはその下位式の化合物又はその塩を含む角膜内皮細胞の成長促進剤に関する。
一態様において、本発明は、本発明に係る式Ａ２又はその下位式の化合物、又は薬学的に許容可能な塩、又はその立体異性体と、少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物に関する。好ましくは本組成物は保存溶液又は凍結保存溶液を更に含む。
別の態様において、本発明は、ＬＡＴＳ阻害剤と成長培地とを含む細胞増殖培地に関する。好ましくはＬＡＴＳ阻害剤は、本発明に係る式Ａ１又はその下位式の化合物である。一態様において、本発明は、本発明に係る式Ａ１又はその下位式の化合物と成長培地とを含む細胞増殖培地に関する。一実施形態において、細胞増殖培地は、本明細書に提供されるとおりの細胞を更に含む。好ましくは細胞増殖培地は眼細胞を更に含む。別の実施形態において、細胞増殖培地は輪部幹細胞を更に含む。好ましくは輪部幹細胞は浮遊状態にある。更に別の実施形態において、細胞増殖培地は角膜内皮細胞を含む。好ましくは角膜内皮細胞は浮遊状態にある。
一態様において、本発明は、ＬＡＴＳ阻害剤と本明細書に記載される及び／又は提供されるとおりの細胞集団の細胞とを含む細胞製剤に関する。別の態様において、本発明は、ＬＡＴＳ阻害剤と眼細胞とを含む細胞製剤に関する。別の態様において、本発明は、ＬＡＴＳ阻害剤と輪部幹細胞とを含む細胞製剤に関する。更に別の態様において、本発明は、ＬＡＴＳ阻害剤と角膜内皮細胞とを含む細胞製剤に関する。好ましくはＬＡＴＳ阻害剤は、本発明に係る式Ａ１又はその下位式の化合物である。別の態様において、本発明は、本発明に係る式Ａ１の化合物と輪部幹細胞とを含む細胞製剤に関する。代替的な態様において、本発明は、本発明に係る式Ａ１の化合物と角膜内皮細胞とを含む細胞製剤に関する。好ましくは細胞製剤は成長培地を更に含む。特に好ましくは細胞製剤は保存溶液又は凍結保存溶液を更に含む。
別の態様において、本発明は、本発明に係る細胞製剤と局在薬剤である眼送達に好適な組成物とを含む、眼細胞送達製剤に関する。具体的な実施形態において、局在薬剤はＧｅｌＭａである。別の具体的な実施形態において、局在薬剤はフィブリン又はフィブリン糊である。別の態様において、本発明は、本発明に係る細胞製剤と局在薬剤である眼送達に好適な組成物とを含む、眼細胞送達製剤に関する。具体的な実施形態において、局在薬剤はＧｅｌＭａである。別の具体的な実施形態において、局在薬剤はフィブリン又はフィブリン糊である。特定の好ましい態様において、本発明に係る細胞製剤は、本発明に係る化合物を痕跡量レベルしか有しない。更に別の具体的な実施形態において、細胞送達製剤中の２０％超の細胞が輪部幹細胞である。更なる具体的な実施形態において、細胞送達製剤中の２０％超の細胞がｐ６３α発現細胞である。
更に別の態様において、本発明は、本発明に係る細胞製剤と局在薬剤である眼送達に好適な組成物とを含む、眼細胞送達製剤に関する。具体的な実施形態において、局在薬剤はＧｅｌＭａである。好ましくは角膜内皮細胞は浮遊状態にある。代替的実施形態において、角膜内皮細胞は細胞送達製剤中に５００細胞／ｍｍ２（面積）より高い密度で存在する。特に好ましくは角膜内皮細胞は１０００～３５００細胞／ｍｍ２（面積）、より好ましくは２０００～約３０００細胞／ｍｍ２（面積）の密度で存在する。特定の好ましい態様において、本発明に係る細胞製剤は、本発明に係る化合物を痕跡量レベルしか有しない。
好ましくは本発明に係る方法又は細胞製剤の成長培地は、ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）が補足されたダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）、ヒト血清を含有するヒト内皮無血清（ＳＦ）培地、Ｘ－ＶＩＶＯ１５培地及び任意選択で塩化カルシウムが補足されているＤＭＥＭ／Ｆ１２からなる群から選択され；好ましくはＸ－ＶＩＶＯ１５培地である。
好ましくは本発明に係る保存溶液又は凍結保存溶液は、オプチゾール（Ｏｐｔｉｓｏｌ）又はＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）である溶液を含み、凍結保存溶液は、グリセロール、ジメチルスルホキシド、プロピレングリコール又はアセトアミドを更に含む。
別の態様において、本発明は、眼送達に好適な組成物とＬＡＴＳ阻害剤とを含むキットに関する。好ましくはＬＡＴＳ阻害剤は、本発明に係る式Ａ２又はその下位式の化合物である。別の態様において、本発明は、眼送達に好適な組成物と本発明に係る式Ａ２又はその下位式の化合物とを含むキットに関する。好ましくは本キットは使用説明書を有する。ある実施形態において、眼送達に好適な組成物は局在薬剤又は局所点眼薬である。好ましくは眼送達に好適な組成物は局在薬剤である。具体的な実施形態において、本キットは輪部幹細胞を更に含む。本キットの別の具体的な実施形態において、眼送達に好適な組成物は、ＧｅｌＭａである局在薬剤である。本キットの代替的な具体的実施形態において、眼送達に好適な組成物は、フィブリン又はフィブリン糊である局在薬剤である。更に別の具体的な実施形態において、キット中の細胞の２０％超が輪部幹細胞である。更なる具体的な実施形態において、キット中の細胞の２０％超がｐ６３α発現細胞である。代替的な具体的実施形態において、本キットは角膜内皮細胞を含む。別の具体的な実施形態において、角膜内皮細胞の眼送達に好適な組成物は、ＧｅｌＭａである局在薬剤である。更に別の具体的な実施形態において、角膜内皮細胞は単層状で存在する。好ましくは角膜内皮細胞は５００細胞／ｍｍ２（面積）より高い密度で存在する。特に好ましくは角膜内皮細胞は１０００～３５００細胞／ｍｍ２（面積）、より好ましくは２０００～約３０００細胞／ｍｍ２（面積）の密度で存在する。
本発明に係る好ましい実施形態において、眼送達に好適な組成物は、生体マトリックスである局在薬剤である。好ましくは本発明に係る眼送達に好適な組成物は、フィブリン、コラーゲン、ゼラチン、セルロース、羊膜、フィブリン糊、ポリエチレン（グリコール）ジアクリレート（ＰＥＧＤＡ）、ＧｅｌＭＡ、局在薬剤であって、ヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリプロピレンオキシド、ポロキサマー、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリビニルピロリドン、ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）、アルギン酸塩、ゼラチン、コラーゲン、フィブリノゲン、セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルグアー、ジェランガム、グアーガム、キサンタンガム及びカルボキシメチルセルロースのうちの１つ以上を含むポリマー、架橋ポリマー、又はヒドロゲルを含む局在薬剤、並びにその誘導体、その共重合体、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される局在薬剤である。本発明に係る好ましい実施形態において、眼送達に好適な組成物は、ＧｅｌＭａ、フィブリン又はフィブリン糊である局在薬剤である。本発明に係る具体的な実施形態において、眼送達に好適な組成物は、ＧｅｌＭａである局在薬剤である。本発明に係る他の具体的な実施形態において、眼送達に好適な組成物は、フィブリン又はフィブリン糊である局在薬剤である。好ましくは局在薬剤はフィブリン糊である。フィブリン糊は、例えばＴＩＳＳＥＥＬ ＶＨフィブリンシーラント（Ｂａｘｔｅｒ ＡＧ、Ｖｉｅｎｎａ、Ａｕｓｔｒｉａ）を含め、当該技術分野において公知である（Ｐａｎｄａ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｉｎｄｉａｎ Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｓｅｐ－Ｏｃｔ；５７（５）：３７１－３７９）。一実施形態において、輪部幹細胞の送達にフィブリン糊が使用される。別の実施形態において、角膜内皮細胞の送達にＧｅｌＭａが使用される。
輪部幹細胞が局在薬剤との組み合わせで存在する本発明に係るより好ましい実施形態において、細胞の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％超が輪部幹細胞である。好ましくは２０％超が輪部幹細胞である。より好ましくは５０％超が輪部幹細胞である。別の好ましい実施形態において７０％超が輪部幹細胞である。特に好ましくは９０％超が輪部幹細胞である。
細胞が局在薬剤との組み合わせで存在する本発明に係る更に好ましい実施形態において、細胞の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％超がｐ６３α発現細胞である。好ましくは２０％超がｐ６３α陽性細胞である。より好ましくは５０％超がｐ６３α陽性細胞である。別の好ましい実施形態において７０％超がｐ６３α陽性細胞である。特に好ましくは９０％超がｐ６３α陽性細胞である。
本発明に係るより好ましい実施形態において、角膜内皮細胞は局在薬剤との組み合わせで存在する。好ましくは角膜内皮細胞は単層状である。より好ましくは角膜内皮細胞は５００細胞／ｍｍ２（面積）より高い密度で存在する。特に好ましくは角膜内皮細胞は１０００～３５００細胞／ｍｍ２（面積）、更に特に好ましくは２０００～約３０００細胞／ｍｍ２（面積）の密度で存在する。
本発明の更なる特に好ましい実施形態において、ＬＡＴＳ阻害剤はＬＡＴＳ１又はＬＡＴＳ２、又はＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２を阻害する。本発明に係る更に特に好ましい実施形態において、ＬＡＴＳ阻害剤はＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２を阻害する。
本発明に係る好ましい実施形態において、本化合物は、２－メチル－１－（２－メチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロポキシ）プロパン－２－オール；Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（Ｓ）－Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２，４－ジメチル－４－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）ペンタン－２－オール；Ｎ－イソプロピル－Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロブチル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－イソプロピル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン；２－メチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパン－１－オール；２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－（３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン；Ｎ－シクロペンチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン－５－アミン；２－（２－メチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロポキシ）エタン－１－オール；及び（Ｒ）－Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミンからなる群から選択される。
また好ましくは前記化合物又はその塩は、Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン及び（Ｓ）－Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミンから選択される。好ましくは前記化合物又はその塩はＮ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミンである。
本発明に係る特に好ましい実施形態において、本発明に係る化合物は０．５～１００マイクロモル、好ましくは０．５～２５マイクロモル、より好ましくは１～２０マイクロモルの濃度、特に好ましくは約３～１０マイクロモルの濃度で存在する。
本発明は、一態様において、対象への細胞集団の移植方法に関し、前記方法は、本発明に係る細胞集団拡大方法又は細胞の培養方法又はＬＡＴＳ阻害方法によって入手可能な又は入手された細胞集団を投与することを含む。
本発明は更に、対象の眼への眼細胞集団の移植方法に関し、前記方法は、本発明に係る細胞集団拡大方法又は細胞の培養方法又はＬＡＴＳ阻害方法によって入手可能な又は入手された細胞集団を投与することを含み、ここで細胞は眼細胞である。好ましくは眼細胞は輪部幹細胞又は角膜内皮細胞である。本発明は、別の態様において、対象の角膜への眼細胞集団の移植方法に関し、前記方法は、本発明に係る細胞送達製剤を投与することを含む。
本発明は、別の態様において、対象の角膜への輪部幹細胞を含む細胞集団の移植方法に関し、前記方法は、本発明に係る細胞集団拡大方法又は細胞の培養方法又はＬＡＴＳ阻害方法によって入手可能な又は入手された輪部幹細胞を含む細胞集団を投与することを含む。本発明は、別の態様において、対象の角膜への輪部幹細胞を含む細胞集団の移植方法に関し、前記方法は、本発明に係る細胞送達製剤を投与することを含む。
本発明は、別の態様において、対象の角膜への輪部幹細胞を含む細胞集団の移植方法に関し、前記方法は、輪部幹細胞を含む細胞集団を、本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤を含む細胞増殖培地による前記集団の培養によって拡大すること、好ましくは拡大細胞集団をリンスしてＬＡＴＳ阻害剤を実質的に除去すること、及び前記細胞を前記対象の角膜に投与することを含む。好ましくは前記細胞集団は前記投与前に生体マトリックスと組み合わされる。具体的な実施形態において、前記細胞集団は前記投与前にＧｅｌＭＡである生体マトリックスと組み合わされる。別の具体的な実施形態において、前記細胞集団は前記投与前にフィブリン糊と組み合わされる。ある実施形態において、前記細胞集団は、コンタクトレンズである担体と組み合わされる。具体的な実施形態において、輪部幹細胞を含む細胞集団がＧｅｌＭＡである生体マトリックスと組み合わされ、ＧｅｌＭＡが、コンタクトレンズである担体上で重合される。別の具体的な実施形態において、輪部幹細胞を含む細胞集団はフィブリン糊及びコンタクトレンズと組み合わされる。
本発明は、一態様において、対象の角膜への角膜内皮細胞集団の移植方法に関し、前記方法は、本発明に係る細胞集団拡大方法又は細胞の培養方法又はＬＡＴＳ阻害方法によって入手可能な又は入手された角膜内皮細胞集団を投与することを含む。本発明は、別の態様において、対象の角膜への角膜内皮細胞集団の移植方法に関し、前記方法は、本発明に係る細胞送達製剤を投与することを含む。
本発明は、別の態様において、対象の角膜への角膜内皮細胞を含む細胞集団の移植方法に関し、前記方法は、角膜内皮細胞を含む細胞集団を、本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤を含む細胞増殖培地による前記集団の培養によって拡大すること、拡大細胞集団をリンスしてＬＡＴＳ阻害剤を実質的に除去すること、及び前記細胞を前記対象の角膜に投与することを含む。好ましくは前記細胞は前記投与前に生体マトリックスと組み合わされる。具体的な実施形態において、前記細胞は前記投与前にＧｅｌＭＡである生体マトリックスと組み合わされる。より具体的な実施形態において、前記角膜内皮細胞は、眼表面にバイオプリントされる生体マトリックスと組み合わされる。特に好ましくは前記角膜内皮細胞は、ＧｅｌＭＡである且つ光誘起反応によるＧｅｌＭＡの重合によって眼表面にバイオプリントされる生体マトリックスと組み合わされる。
本発明は、別の態様において、対象の眼への細胞集団の移植方法に関し、この方法は、細胞を生体マトリックスと組み合わせて細胞／生体マトリックス混合物を形成すること、この混合物を対象の眼に注入すること又は混合物を対象の眼の表面に適用すること、及び紫外線Ａ又は白色光光源などの光源を使用して細胞を角膜上などに誘導及び固定することにより細胞を眼に又は眼上にバイオプリントすることを含む。特定の実施形態において、光源は、少なくとも３５０ｎｍである波長の光を発生する。特定の実施形態において、光源は３５０ｎｍ～４２０ｎｍ帯の光を発生する。例えば、３６５ｎｍ又は４０５ｎｍの波長、又は３５０ｎｍを上回る任意の他の波長を有する光を発生させるためにＬＥＤ光源が使用されてもよく、又は３５０ｎｍ～７００ｎｍの波長、例えば３６５ｎｍ又は４０５ｎｍの波長を有する光を発生させるために帯域フィルタ付き水銀ランプが使用されてもよい。別の実施形態において、光源は、例えば４００ｎｍ～７００ｎｍ帯の波長を有する可視白色光を発生する。特定の実施形態において、細胞は、角膜細胞、例えば角膜内皮細胞などの眼細胞である。
本発明は、別の態様において、対象の眼への角膜内皮細胞集団の移植方法に関し、この方法は、ＬＡＴＳ阻害剤を含む細胞増殖培地中で角膜内皮細胞集団を培養すること、角膜内皮細胞を生体マトリックスと組み合わせて細胞／生体マトリックス混合物を形成すること、この混合物を対象の眼に注入すること、及びＵＶＡ又はＬＥＤ又は可視光光源などの光源を使用して細胞を角膜上に誘導及び固定することにより細胞を眼にバイオプリントすることを含む。
本発明は、更なる態様において、ＬＡＴＳ阻害剤を使用した眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法に関する。好ましくはＬＡＴＳ阻害剤は、本発明に係る式Ａ１又はその下位式の化合物である。本発明は、更に別の態様において、本発明に係る式Ａ２又はその下位式に係る化合物を使用した眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法に関する。好ましい具体的な実施形態において、眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法は、本発明に係る細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法又は細胞集団拡大方法を更に含み、ここで前記細胞は眼細胞である。好ましくは眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法は、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な又は入手された細胞集団の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含み、ここで前記細胞は眼細胞である。別の好ましい実施形態において、眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法は、本発明に係る細胞送達製剤の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含み、ここで前記細胞は眼細胞である。更に別の好ましい実施形態において、眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法、本方法は、本発明に係る対象の眼への眼細胞を含む細胞集団の移植方法のステップを含む。好ましくは眼細胞は輪部幹細胞又は角膜内皮細胞である。更に別の好ましい実施形態において、眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法、本方法は、本発明に係る対象の角膜への輪部幹細胞を含む細胞集団の移植方法のステップを含む。代替的に好ましい実施形態において、眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法、本方法は、本発明に係る対象の角膜への角膜内皮細胞集団の移植方法のステップを含む。本発明に係る眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法の具体的な実施形態において、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な又は入手された細胞集団又は本発明に係る細胞送達製剤は、デキサメタゾン、シクロスポリン、トブラマイシン、及びセファゾリンからなる群から選択される１つ又は複数の薬剤と同時に又は逐次的に投与される。
一態様において、本発明は、対象への細胞集団の移植方法であって、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な又は入手された細胞集団又は本発明に係る細胞送達製剤の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む方法における使用のためのＹＡＰ（ｙｅｓ関連タンパク質）モジュレーターに関する。好ましくは前記ＹＡＰモジュレーターはＬＡＴＳ阻害剤である。好ましくは細胞は眼細胞である。
一態様において、本発明は、対象の角膜への輪部幹細胞を含む細胞集団の移植方法であって、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な又は入手された細胞集団又は本発明に係る細胞送達製剤の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む方法における使用のためのＹＡＰ（ｙｅｓ関連タンパク質）モジュレーターに関する。好ましくは前記ＹＡＰモジュレーターはＬＡＴＳ阻害剤である。
別の態様において、本発明は、輪部幹細胞欠乏の治療方法であって、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な又は入手された細胞集団又は本発明に係る細胞送達製剤の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む方法における使用のためのＹＡＰモジュレーターに関する。好ましくは前記ＹＡＰモジュレーターはＬＡＴＳ阻害剤である。
一態様において、本発明は、対象の角膜への角膜内皮細胞集団の移植方法であって、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な又は入手された細胞集団又は本発明に係る細胞送達製剤の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む方法における使用のためのＹＡＰ（ｙｅｓ関連タンパク質）モジュレーターに関する。好ましくは前記ＹＡＰモジュレーターはＬＡＴＳ阻害剤である。
別の態様において、本発明は、角膜内皮機能不全の治療方法であって、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な又は入手された細胞集団又は本発明に係る細胞送達製剤の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む方法における使用のためのＹＡＰモジュレーターに関する。好ましくは前記ＹＡＰモジュレーターはＬＡＴＳ阻害剤である。
更に別の実施形態において、本発明は、疾患又は障害の治療方法に関し、この方法は、細胞集団をそれを必要としている対象に投与することであって、この集団が、ＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２キナーゼ活性の阻害能を有する薬剤の存在下で成長させたものであること；それによりＹＡＰ転位を誘導し、細胞増殖のため下流遺伝子発現をドライブすることを含む。更なる実施形態において、薬剤は式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩である。好ましくは細胞は眼細胞である。
一態様において、本発明は、療法における使用又は医薬品としての使用のための本発明に係る式Ａ２又はその下位式に係る化合物、又はその薬学的に許容可能な塩に関する。好ましくは本化合物は眼疾患又は眼障害における使用のためのものである。
別の態様において、本発明は、眼疾患又は眼障害における使用のためのＬＡＴＳ阻害剤に関し、好ましくはＬＡＴＳ阻害剤は化合物である。好ましくはこの化合物は、本発明に係る式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩である。
更に別の態様において、本発明は、医薬品の製造における本発明に係る式Ａ２若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の使用に関する。更なる態様において、本発明は、眼疾患又は眼障害を治療するための医薬品の製造における本発明に係る式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の使用に関する。
本発明に係る使用のための化合物又は本発明に係る使用のためのＬＡＴＳ阻害剤又は本発明に係る医薬品の製造における化合物の使用の好ましい具体的な実施形態において、使用は、本発明に係る細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法又は細胞集団拡大方法を更に含む。
本発明に係る使用のための化合物又は本発明に係る使用のためのＬＡＴＳ阻害剤又は本発明に係る医薬品の製造における化合物の使用の更に好ましい具体的な実施形態において、使用は、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な又は入手された細胞集団の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む。本発明に係る使用のための化合物又は本発明に係る使用のためのＬＡＴＳ阻害剤又は本発明に係る医薬品の製造における化合物の使用のなおも更に好ましい実施形態において、使用は、本発明に係る細胞送達製剤の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む。本発明に係る使用のための化合物又は本発明に係る使用のためのＬＡＴＳ阻害剤又は本発明に係る医薬品の製造における化合物の使用の好ましい一実施形態において、使用は、本発明に係る対象の角膜への眼細胞を含む細胞集団の移植方法のステップを含む。本発明に係る使用のための化合物又は本発明に係る使用のためのＬＡＴＳ阻害剤又は本発明に係る医薬品の製造における化合物の使用のなおもより好ましい実施形態において、使用は、本発明に係る対象の角膜への輪部幹細胞を含む細胞集団の移植方法のステップを含む。本発明に係る使用のための化合物又は本発明に係る使用のためのＬＡＴＳ阻害剤又は本発明に係る医薬品の製造における化合物の使用のなおもより好ましい実施形態において、使用は、本発明に係る対象の角膜への角膜内皮細胞を含む細胞集団の移植方法のステップを含む。本発明に係る使用のための化合物又は本発明に係る使用のためのＬＡＴＳ阻害剤又は本発明に係る医薬品の製造における化合物の使用の具体的な実施形態において、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な又は入手された細胞集団又は本発明に係る細胞送達製剤は、デキサメタゾン、シクロスポリン、トブラマイシン、及びセファゾリンからなる群から選択される１つ又は複数の薬剤と同時に又は逐次的に投与される。
本発明に係る好ましい実施形態において、眼疾患又は眼障害は輪部幹細胞欠乏に関連する。より好ましい実施形態において、眼疾患又は眼障害は輪部幹細胞欠乏である。より好ましくは眼疾患又は眼障害は、化学的熱傷、熱的熱傷、放射線傷害、無虹彩、強角膜症、多発性内分泌腺腫症、スティーブンス・ジョンソン症候群、眼瘢痕性類天疱瘡、膠原血管病からなる群から選択される傷害又は障害が原因で生じる輪部幹細胞欠乏；コンタクトレンズ使用、ドライアイ疾患、酒さ、黄色ブドウ球菌辺縁性角膜炎（細菌性、真菌性及びウイルス性角膜炎を含む）、翼状片又は新生物によって生じる慢性非自己免疫性炎症性障害、複数回の眼手術、翼状片若しくは新生物の切除又は凍結療法後に生じる輪部幹細胞欠乏；及び保存剤（チメロサール、ベンザルコニウム）、局所麻酔薬、ピロカルピン、β遮断薬、マイトマイシン、５－フルオロウラシル、硝酸銀、及びスティーブンス・ジョンソン症候群を引き起こす経口薬物投与からなる群から選択される薬物投与からの薬物投与毒性の結果として生じる輪部幹細胞欠乏である。特に好ましくは眼疾患又は眼障害は、化学的熱傷、無虹彩、スティーブンス・ジョンソン症候群及びコンタクトレンズ使用からなる群から選択される傷害又は障害が原因で生じる輪部幹細胞欠乏である。
本発明に係る好ましい実施形態において、眼疾患又は眼障害は角膜内皮細胞密度の低下に関連する。より好ましい実施形態において、眼疾患又は眼障害は角膜内皮機能不全である。より好ましくは眼疾患又は眼障害は、フックス角膜内皮ジストロフィー、水疱性角膜症（偽水晶体性水疱性角膜症及び無水晶体性水疱性角膜症を含む）、角膜移植不全、後部多形性角膜ジストロフィー、先天性遺伝性内皮ジストロフィー、Ｘ連鎖性角膜内皮ジストロフィー、無虹彩、及び角膜内皮炎（ｃｏｒｎｅａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｔｉｓ）からなる群から選択される角膜内皮機能不全である。具体的な実施形態において、眼疾患又は眼障害は、フックス角膜内皮ジストロフィー、水疱性角膜症（偽水晶体性水疱性角膜症及び無水晶体性水疱性角膜症を含む）及び角膜移植不全からなる群から選択される。
本発明は更に、特に熱傷、急性及び慢性皮膚潰瘍の症状を治療し、又は改善するための、創傷治癒の促進方法に関し、この方法は、有効量のＬＡＴＳ阻害剤をそれを必要としている対象に投与することを含む。
特定の他の態様の範囲内で、本発明は創傷治癒の促進方法に関し、この方法は、式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又は薬学的に許容可能な塩、又はその立体異性体の治療有効量を投与することを含む。
別の態様において、本発明は、創傷治癒の促進において使用され得る化合物及び組成物に関する。別の態様において、本発明は、創傷治癒の促進用医薬品の製造に使用され得る化合物及び組成物に関する。
本発明はまた、特に熱傷、急性皮膚潰瘍、及び慢性皮膚潰瘍の症状を治療し、又は改善するための、創傷治癒の促進方法にも関し、この方法は、式Ａ１又はその下位式の化合物の治療有効量を、任意選択で本発明の別の化合物である第２の治療剤又は１つの他のタイプの治療剤と共にそれを必要としている対象に投与することを含む。
本発明はまた、眼創傷治癒の促進方法にも関し、この方法は、対象の眼に治療有効量の本発明の化合物を投与することを含む。一実施形態において、眼創傷は角膜創傷である。他の実施形態において、眼創傷は傷害又は手術創傷である。
別の態様において、本発明は、肝再生及び肝再成長において使用され得る化合物及び組成物に関する。特定の他の態様の範囲内で、本発明は肝再生及び肝再成長の促進方法に関し、この方法は、式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又はその立体異性体の治療有効量を投与することを含む。別の態様において、本発明は、肝再生及び肝再成長用の医薬品の製造に使用され得る化合物及び組成物に関する。
本発明はまた、特にマージナルグラフトの移植後の不十分な肝再成長の治療のための；広範囲肝切除術後の残存肝腫瘤の再成長増進を支援するための；ウイルス性肝炎、薬物誘発性肝傷害、自己免疫性肝炎、虚血性及びうっ血性肝疾患からの急性肝不全後の患者の肝臓の再生のための；及び非アルコール性脂肪性肝炎、アルコール性脂肪性肝炎、慢性Ｂ型及びＣ型ウイルス性肝炎、ヘモクロマトーシス、α－１アンチトリプシン欠乏症、ウィルソン病及び薬物誘発性肝線維症からの慢性肝傷害及び基礎肝線維症を有する患者の治療のための、それにより再生能を亢進させるとともに線維症消散を加速させる、肝再生及び肝再成長方法にも関し、この方法は、治療有効量の本発明の化合物を、任意選択で、本発明の別の化合物である第２の治療剤又は１つの他のタイプの治療剤と共にそれを必要としている対象に投与することを含む。
特定の実施形態において、本発明は、細胞療法及び／又は移植用の細胞材料の作成方法に関し、この方法は、式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又はその立体異性体のエキソビボ使用を含む。細胞材料は、眼細胞、肝細胞又は皮膚細胞を含み得る。
更には、特定の実施形態において、本発明は、肝再生及び肝再成長の促進方法に関し、この方法は、式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又はその立体異性体のエキソビボ使用を含む。
本発明はまた、エキソビボ肝細胞集団拡大方法にも関し、この方法は、本発明の化合物又はその薬学的に許容可能な塩、又はその立体異性体の使用を含む。
本発明の他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。
ＬＡＴＳ阻害剤（化合物例４９及び例１３３）は、ウエスタンブロットによって示されるとおり、処理から１時間以内にＬＳＣにおけるＹＡＰ脱リン酸化を誘導する。 輪部幹細胞培養物におけるｐ６３－αの免疫標識により、ＬＡＴＳ阻害剤（化合物例４９及び例１３３）を含む培地中に維持したときＬＳＣ集団を拡大できることが示される。図２Ａ：成長培地及びＤＭＳＯの存在下では、僅か数個の単離細胞が培養皿に付着し、最長６日間生存する。多くの細胞はヒト核マーカーを発現したが、ｐ６３αを発現したものはほとんどなかった。図２Ｂ及び図２Ｃ：対照的に、ＬＡＴＳ阻害剤：化合物例４９番及び例１３３番の存在下では、細胞がコロニーを形成し、ｐ６３αを発現した。この結果は、ＬＡＴＳ阻害剤がｐ６３α陽性表現型の細胞集団の拡大を促進することを示している。図２Ｄ：細胞を継代し、それをＬＡＴＳ阻害剤化合物例４９番の存在下で２週間培養すると、細胞集団の拡大及びｐ６３αを発現するコンフルエントな培養物の形成が可能になった。 ｓｉＲＮＡによってＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２をノックダウンすると、ＥｄＵ陽性細胞の割合によって示されるとおり、培養下のＬＳＣ増殖が活性化する。 ＬＳＣマーカーΔＮ－ｐ６３α／β／γ、ＡＢＣＧ２及びＣ／ＥＢＰδの免疫標識により、ＬＡＴＳ阻害剤（化合物例４９及び例１３３）を含有する培養培地中に維持したＬＳＣがＬＳＣの典型的なマーカーを発現することが示される。結果は、ＤＭＳＯ中で培養した細胞が、ΔＮ－ｐ６３α／β／γ、ＡＢＣＧ２及びＣ／ＥＢＰδなどの、通常ＬＳＣが発現するマーカーを典型的には発現しないことを示している。対照的に、ＬＡＴＳ阻害剤の存在下で培養した細胞は、ΔＮ－ｐ６３α／β／γ、ＡＢＣＧ２及びＣ／ＥＢＰδなどの、通常ＬＳＣが発現するマーカーを発現する。 未分化ＬＳＣマーカーｐ６３α及び角膜上皮細胞マーカーケラチン１２の免疫標識により、ＬＡＴＳ阻害剤（図５Ａ：化合物例４９、図５Ｂ：化合物例４７、図５Ｃ：化合物例１２、図５Ｄ：化合物例２６１）を含む培養培地を使用して培養したＬＳＣ集団が、分化を可能にする条件に移したとき角膜上皮細胞に分化できることが示される。ｐ６３α陽性細胞アイデンティティからケラチン－１２アイデンティティへの移行が起こっている図が示される。 ＧｅｌＭＡ重合を用いてコンタクトレンズに付着させたＬＳＣをエキソビボでウサギ眼の表面に送達できることを確認するため、蛍光タンパク質を使用してＬＳＣを標識した。矢印はＬＳＣの付着部位を示す。 図７Ａ：移植した眼、ケラチン－１２染色；図７Ｂ：移植した眼、ケラチン－１９染色；図７Ｃ：移植していない対照眼、ケラチン－１２染色；図７Ｄ：移植していない対照眼、ケラチン－１９染色。これらの図は、輪部幹細胞欠乏ウサギモデルにおいて、ＬＳＣ集団をＧｅｌＭＡと組み合わせた化合物例１２番を含む培地中で拡大し、ウサギの角膜表面にインビボでコンタクトレンズによって送達すると、移植した眼においてケラチン－１２陽性角膜上皮の再生につながること（図７Ａ）、及びケラチン－１９陽性結膜細胞による結膜化が防止されたことを示す。図７Ｂ：矢印は、ケラチン１９染色がないことを指し示している。対照的に、移植していないウサギ眼は、ケラチン－１２陽性角膜上皮の再建がないことを示した。図７Ｃ：矢印は、ケラチン－１２染色がないことを指し示している。代わりに、ケラチン－１９染色の存在によって示されるとおり、結膜化の徴候が観察された。図７Ｄ：矢印は、陽性ケラチン－１９染色の範囲を指し示している。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） 図８Ａ：ヒトＬＳＣを移植したウサギ眼；図８Ｂ：ヒトＬＳＣを移植していない対照ウサギ眼。これらの図は、移植した眼の角膜上皮を再建した細胞が、ヒトミトコンドリアタンパク質の存在によって実証されるとおりヒトであったことを示す（図８Ａ）（矢印は、ヒトミトコンドリアマーカーが存在することを示す）。対照的に、移植していない眼の眼表面は、ヒトミトコンドリアタンパク質染色を呈しなかった（図８Ｂ：ヒトミトコンドリアマーカーが存在しない）。 （上記の通り。） ＴＩＳＳＥＥＬによってコラーゲンコート２４ウェルプレートに送達したＬＳＣの顕微鏡画像は、２週間以内に細胞の再増殖によって培養表面が覆われることを示している。 ＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒグリーンＣＭＦＤＡで標識したＬＳＣをエキソビボでヒト角膜に送達し、保護コンタクトレンズで被覆した。 赤色及び緑色色素で標識したＨＥＫ－２９３細胞をエキソビボでウサギ角膜の上に陰陽パターンにバイオプリントした（灰色の濃淡のパターンとして示される）。 ＬＳＣにおけるＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介性β－２ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）遺伝子欠失による免疫拒絶の低下：ＦＡＣＳ分析は、ＣＲＩＳＰＲ媒介性Ｂ２Ｍ欠失及び続くＨＬＡ Ａ、Ｂ及びＣの除去が２１パーセントのＬＳＣに起こったことを示す。 Ｂ２Ｍ陰性／ＨＬＡ Ａ、Ｂ、Ｃ陰性ＬＳＣの集団を化合物例４８ａ番を使用して拡大することにより、９７パーセントの細胞がＨＬＡ Ａ、Ｂ、Ｃを発現しない細胞製剤が生じた。 ＬＡＴＳ阻害剤（化合物例１３３及び例４９）は角膜内皮細胞（ＣＥＣ）においてＹＡＰの核内転位を誘導する。 ＬＡＴＳ阻害剤（化合物例１３３及び例４９）は処理から１時間以内にＣＥＣにおいてＹＡＰ脱リン酸化を誘導する。ウエスタンブロットによる図１５ａに示されるとおり；図１５ｂ：β－アクチンに対して正規化したリン酸化ＹＡＰレベルを示すグラフ；及び図１５ｃ：全ＹＡＰに対して正規化したリン酸化ＹＡＰレベルを示すグラフ。 （上記の通り。） （上記の通り。） ＬＡＴＳ阻害剤の存在下又は非存在下で成長させたＣＥＣ。Ｉｎｃｕｃｙｔｅシステム（Ｅｓｓｅｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してＣＥＣコンフルエンスをリアルタイム定量的生細胞分析によって経時的に測定した。化合物例４９（黒色の四角）及び例１３３（薄い灰色の四角）は強力なＣＥＣ増殖を誘導した；一方、媒体（ＤＭＳＯ、濃い灰色の四角）中ではＣＥＣ増殖は最小限であった。 ｓｉＲＮＡによってＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２をノックダウンすると、ＥｄＵ陽性細胞の割合によって示されるとおり、培養下の角膜内皮細胞増殖が活性化する。 閉鎖帯－１（ＺＯ－１）免疫標識から、ＬＡＴＳ阻害剤、化合物例４９の存在下で増殖したＣＥＣ（図１８ｂ）が、内皮構造であるタイトジャンクションを形成し、且つ機能性ＣＥＣに特徴的な正常な細胞サイズ及び形態を保持していることが示される。媒体単独（ＤＭＳＯ）の存在下で増殖したＣＥＣは、機能不全のＣＥＣに特徴的な細胞の大小不同（ｐｏｌｙｍｅｇａｔｉｓｍ）の徴候を示す（図１８ａ）。 （上記の通り。） 定量的ＲＴ－ＰＣＲ分析から、ＬＡＴＳ阻害剤、化合物例４９で拡大した角膜内皮細胞集団が、コラーゲン８ａ２、ＡＱＰ１、ＳＬｃ４Ａ１１を含めた、通常インビボで角膜内皮細胞が発現する遺伝子を発現することが示される。これらの細胞は、ＲＰＥ６５（網膜色素上皮のマーカー）及びＣＤ３１（血管上皮のマーカー）を含めた、眼に存在する他の上皮のマーカーを発現しない。 免疫組織化学分析から、ＬＡＴＳ阻害剤、化合物例４９で拡大した角膜内皮細胞集団が、Ｎａ／Ｋ ＡＴＰアーゼ（図２０ａ）及びコラーゲン８ａ２（図２０ｂ）を含めた、通常インビボで角膜内皮細胞が発現する遺伝子を発現することが示される。 （上記の通り。） ＬＡＴＳ阻害剤、化合物例４７の存在下で拡大した角膜内皮（ｅｎｄｏｔｈｌｅｌｉｕｍ）細胞集団、及びＬＡＴＳ阻害剤の非存在下で培養したＣＥＣのＦＡＣＳ分析。ＬＡＴＳ阻害剤の存在下で拡大した細胞集団は、低レベルのＣＤ７３（図２１ａ、灰色の線）、ＣＤ４４（図２１ｂ、灰色の線）、ＣＤ１６６（図２１ｃ、灰色の線）及びＣＤ１０５（図２１ｄ、灰色の線）を発現する；一方、ＬＡＴＳ阻害剤なしで培養した細胞集団は、高レベルのＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ１０５及びＣＤ１６６（黒色の線）を発現する。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） 「バイオプリンティングセクション」に更に説明するとおりの方法１を示す気泡押圧方法（ｂｕｂｂｌｅ ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ）、ここでは生体マトリックスが眼に適用され、本発明に係る細胞製剤が送達される。図２２ａ．生体マトリックスをボーラス注入する；図２２ｂ 生体マトリックスの下に気泡を注入して角膜全体に広げる；図２２ｃ ＵＶ又は青色光光源で生体マトリックスを硬化させる；図２２ｄ 気泡を取り除き、平衡塩類溶液を補充する。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） 「バイオプリンティングセクション」に更に説明するとおりの方法２を示すフェムト秒（ＦＳ）レーザーを使用した減法的方法（ｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅ ｍｅｔｈｏｄ）、ここでは生体マトリックスが眼に適用され、本発明に係る細胞製剤が送達される。図２３ａ ＦＳで機能不全の内皮を除去する；図２３ｂ 前房に生体マトリックスを注入する；図２３ｃ ＵＶ又は青色光光源で生体マトリックスを硬化させる；図２３ｄ ＦＳで不要な生体マトリックスを切り取る；図２３ｅ 切り取った生体マトリックスを鉗子で除去する。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） 「バイオプリンティングセクション」に更に説明するとおりの方法３を示す色素マスク方法（Ｄｙｅ ｍａｓｋ ｍｅｔｈｏｄ）、ここでは生体マトリックスが眼に適用され、本発明に係る細胞製剤が送達される。図２４ａ 内皮を色素（例えばトリパンブルー（Ｔｙｐａｎ Ｂｌｕｅ））で染色する；図２４ｂ 機能不全の内皮を剥がす；図２４ｃ 色素入りの生体マトリックスを注入する；図２４ｄ ＵＶ又は青色光光源で生体マトリックスを硬化させる；図２４ｅ 未硬化の生体マトリックスをフラッシュする。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） 「バイオプリンティングセクション」に更に説明するとおりの方法４を示す乾式分注方法（ｄｒｙ ｄｉｓｐｅｎｓｅ ｍｅｔｈｏｄ）、ここでは生体マトリックスが眼に適用され、本発明に係る細胞製剤が送達される。図２５ａ 前房から房水を抜く；図２５ｂ 生体マトリックスをソフトチップ／ブラシカニューレで後部角膜に分注する；図２５ｃ ＵＶ又は青色光光源で生体マトリックスを硬化させる；図２５ｄ 眼に平衡塩類溶液を補給する。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） 実施例Ｃ１１に更に説明するとおりのバイオプリンティング装置を示す概略図。 角膜を通過して３６５ｎｍ ＵＶＡ光を投影する携帯型装置を使用することにより細胞を角膜の後面にバイオプリントできることを示す結果。未重合及び未付着の材料をリンスした後、角膜の後面に円形パターンの蛍光タンパク質標識細胞が保持されていた。 角膜の後面にバイオプリントされたＣＥＣは角膜内皮ジストロフィーのウサギモデルにおいて角膜内皮を再構築することができる。結果は、実験ウサギにおいてＺＯ－１免疫組織化学を用いて角膜内皮構造を検出できることを示している（図２８Ａ）。角膜内皮を外科的に取り除き、ＣＥＣをバイオプリントしなかったウサギの右眼では、ＺＯ－１染色が存在せず、これは正常な角膜内皮構造が存在しないことを示している（図２８Ｂ）。角膜内皮を外科的に取り除き、ＣＥＣをバイオプリントしたウサギの右眼では、ＺＯ－１染色が存在し、これは角膜内皮構造が再構築されたことを示している（図２８Ｃ）。図２８Ｄ及び図２８Ｅは、いかなるヒトＣＥＣの投与も受けなかった眼にヒト核抗原免疫染色が存在しないことを示す。対照的に、ヒトＣＥＣをバイオプリントした眼では、ヒト核抗原陽性細胞が撮像視野を覆い（図２８Ｆ）、これは図２８Ｃに示されるＺＯ－１標識角膜内皮構造がウサギ角膜の後面にバイオプリントされたヒトＣＥＣで構成されることを示している。 赤色蛍光タンパク質で標識したＨＥＫ－２９３細胞をエキソビボでヒト角膜の後面に種々の文字の構築物としてバイオプリントした。 ベクターマップは、ＬＳＣ及びＣＥＣにおけるＣＲＩＳＰＲシステムの発現に使用されるＡＡＶ２ベクターの設計を示す（図３０は配列番号２８を開示する）。 ＡＡＶ媒介性ＣＲＩＳＰＲシステム発現のＦＡＣＳ分析により、ＬＳＣにおけるＢ２Ｍの欠失及び続くＨＬＡ Ａ、Ｂ及びＣの除去が可能となった。 ＡＡＶ媒介性ＣＲＩＳＰＲシステム発現のＦＡＣＳ分析により、ＣＥＣにおけるＢ２Ｍの欠失及び続くＨＬＡ Ａ、Ｂ及びＣの除去が可能となった。 図３３Ａは、未処理の、又はＭＳＴ１／２若しくはＬＡＴＳ１／２に対する各４０ｐＭのｓｉＲＮＡによって処理したヒトＨａＣａＴ細胞のライセート中のｐＹＡＰのウエスタンブロットである；アクチンを対照として使用した。 図３３Ｂは、未処理の、又は９μＭの例１３３によって処理したヒトＨａＣａＴ細胞のライセート中のｐＹＡＰのウエスタンブロットである；アクチンを対照として使用した。 図３３Ｃは、約１０－４～１μｍの範囲の例１３３の濃度に対する相対ＬＡＴＳ１阻害活性のグラフである。ＬＡＴＳ１に対する例１３３のＩＣ５０計算値は１．３ｎＭであった。 ０、０．２及び２ｍｇ／ｍＬの例１３３の濃度に対する相対Ｃｙｒ６１／Ｇａｐｄｈ発現レベルの棒グラフである。 図３５Ａは、媒体又は例１３３で局所的に処理したマウス皮膚の顕微鏡像を示す。 図３５Ｂは、媒体又は例１３３で処理したマウス皮膚におけるＫｉ６７＋細胞のパーセンテージを比較する散布図である。
ＬＡＴＳ
ＬＡＴＳは、ラージ腫瘍抑制キナーゼの略称である。ＬＡＴＳは、本明細書で使用されるとき、ＬＡＴＳ１及び／又はＬＡＴＳ２を指す。ＬＡＴＳ１は、本明細書で使用されるときラージ腫瘍抑制キナーゼ１を指し、ＬＡＴＳ２はラージ腫瘍抑制キナーゼ２を指す。ＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２は、両方ともにセリン／スレオニンプロテインキナーゼ活性を有する。ＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２には、それぞれ、ヒト遺伝子解析機構（Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｏｒｇａｎｉｓａｔｉｏｎ：ＨＵＧＯ）遺伝子命名法委員会識別名：ＨＧＮＣ ＩＤ ６５１４及びＨＧＮＣ ＩＤ ６５１５が与えられている。ＬＡＴＳ１は時にまた、当該技術分野ではＷＡＲＴＳ又はｗｔｓと称されることもあり、ＬＡＴＳ２は時に、当該技術分野ではＫＰＭと称されることもある。代表的なＬＡＴＳ配列としては、限定はされないが、以下に示すとおりの、国立バイオテクノロジー情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）タンパク質データベースから受託番号ＮＰ＿００４６８１．１（ＬＡＴＳ１）及びＮＰ＿００１２５７４４８．１（ＬＡＴＳ１）及びＮＰ＿０５５３８７．２（ＬＡＴＳ２）で入手可能なタンパク質配列が挙げられる。
ＬＡＴＳ１：ＮＰ＿００４６８１．１（セリン／スレオニンプロテインキナーゼＬＡＴＳ１アイソフォーム１、ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ））（配列番号１：）
Figure 0007247102000004
ＬＡＴＳ１：セリン／スレオニンプロテインキナーゼＬＡＴＳ１アイソフォーム２［ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）］
ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１２５７４４８．１（配列番号２：）
Figure 0007247102000005
ＬＡＴＳ２：ＮＰ＿０５５３８７．２セリン／スレオニンプロテインキナーゼＬＡＴＳ２［ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）］（（配列番号３：）
Figure 0007247102000006
ＬＡＴＳはＹＡＰ１活性を負に調節すると考えられている。「ＹＡＰ１」は、ＹＡＰ又はＹＡＰ６５としても知られるｙｅｓ関連タンパク質１を指し、細胞増殖に関わる遺伝子の転写調節因子として働くタンパク質である。ＬＡＴＳキナーゼは、ＹＡＰを直接リン酸化してその細胞質保留及び不活性化をもたらすことが示されているセリン／スレオニンプロテインキナーゼである。ＬＡＴＳによるリン酸化がない場合、ＹＡＰは核内に転位してＤＮＡ結合タンパク質ＴＥＡＤと複合体を形成し、下流遺伝子発現をもたらす（Ｂａｒｒｙ ＥＲ＆Ｃａｍａｒｇｏ ＦＤ（２０１３）「Ｈｉｐｐｏスーパーハイウェイ：幹細胞及び発生におけるＨｉｐｐｏ／Ｙａｐ経路に集まるシグナル伝達の十字路（Ｔｈｅ Ｈｉｐｐｏ ｓｕｐｅｒｈｉｇｈｗａｙ：ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｃｒｏｓｓｒｏａｄｓ ｃｏｎｖｅｒｇｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ Ｈｉｐｐｏ／Ｙａｐ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）」．Ｃｕｒｒｅｎｔ ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ ２５（２）：２４７－２５３．；Ｍｏ ＪＳ，Ｐａｒｋ ＨＷ，＆Ｇｕａｎ ＫＬ（２０１４）「幹細胞生物学及び癌におけるＨｉｐｐｏシグナル伝達経路（Ｔｈｅ Ｈｉｐｐｏ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ）」．ＥＭＢＯ ｒｅｐｏｒｔｓ １５（６）：６４２－６５６；Ｐａｎ Ｄ（２０１０）「発生及び癌におけるｈｉｐｐｏシグナル伝達経路（Ｔｈｅ ｈｉｐｐｏ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ）」．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｃｅｌｌ １９（４）：４９１－５０５）。
Ｈｉｐｐｏ／ＹＡＰ経路は、様々な癌を含め、哺乳類系の数多くの細胞型及び組織に関与する。詳細には、Ｈｉｐｐｏ経路は明らかに、腸、胃及び食道、膵臓、唾液腺、皮膚、乳腺、卵巣、前立腺、脳及び神経系、骨、軟骨細胞（ｃｈｒｏｎｄｒｏｃｙｔｅ）、脂肪細胞、筋細胞、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、骨髄系細胞、腎臓、及び肺に関与する。Ｎｉｓｈｉｏ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｅｌｌｓ ２２：６－３１を参照のこと。
ＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２阻害
遊離形態の、又は塩形態の、式Ａ１又はその下位式の化合物は、ＬＡＴＳ１及び／又はＬＡＴＳ２の強力な阻害剤である。
好ましい実施形態において、遊離形態の、又は塩形態の、式Ａ２又はその下位式の化合物は、ＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２の強力な阻害剤である。
ＬＡＴＳ１に対する本化合物の阻害有効性について、以下の実施例Ａ１に記載するとおりのＬＡＴＳ１生化学的ＨＴＲＦアッセイによってアッセイした。このアッセイにおけるＬＡＴＳ１に対する本発明の化合物の阻害有効性（ＬＡＴＳ１ ＩＣ５０、マイクロモル単位）は表１Ａに報告する。このアッセイでは、ＩＣ５０が１マイクロモルより高い化合物を不活性と見なしたことに留意しなければならない。
ＬＡＴＳ２に対する選択の化合物の阻害有効性について、以下の実施例Ａ３に記載するとおりのＬＡＴＳ２生化学的キャリパー（Ｃａｌｉｐｅｒ）アッセイによってアッセイした。このアッセイにおけるＬＡＴＳ２に対する本発明の化合物の阻害有効性（ＬＡＴＳ２ ＩＣ５０、マイクロモル単位）もまた表１Ａに報告する。このアッセイでは、ＩＣ５０が１マイクロモルより高い化合物を不活性と見なしたことに留意しなければならない。
ＬＡＴＳ阻害剤
従って本発明は、式Ａ２の化合物：
Figure 0007247102000007
又は塩、又はその立体異性体に関し、式中、
Ｘ１はＣＨ又はＮであり；
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、５員ヘテロアリールの連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000008
［式中、「＊」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；及び
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、Ｃ３～６シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されており；
Ｒ０はヒドロキシル又はＣ１～６アルコキシであり；
Ｒ１は水素又はＣ１～６アルキルであり；
Ｒ２は、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）ハロゲン；
（ｉｉ）シアノ；
（ｉｉｉ）オキソ；
（ｉｖ）Ｃ２アルケニル；
（ｖ）Ｃ２アルキニル；
（ｖｉ）Ｃ１～６ハロアルキル；
（ｖｉｉ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖｉｉｉ）－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｉｘ）－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０又は－ＮＨ－Ｃ１～６アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ０である］；
（ｘ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｘｉ）各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｒ０、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル又は多環式Ｃ７～１０シクロアルキル；
（ｘｉｉ）Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
（ｘｉｉｉ）非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
（ｘｉｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
（ｘｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
（ｂ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｃ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル及びＲ０から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｄ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｅ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；
又は、Ｘ１がＣＨであるならば、Ｒ１及びＲ２は、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成することができ、ここでＲ１及びＲ２によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及びＲ０から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されており；
Ｒ３は、水素、ハロゲン及びＣ１～６アルキルから選択され；及び
Ｒ５は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ３～８アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ０によって置換されており；
但し、
（１）Ｘ１がＮであり、環Ａが４－ピリミジニル（ｐｒｉｍｉｄｉｎｙｌ）又は３－フルオロ－４－ピリミジニル（ｐｒｉｍｉｄｉｎｙｌ）であり、Ｒ１がＨ又はメチルであり、Ｒ３がＨ又はＣｌであり、及びＲ５がＨである場合；このときＲ２は、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ又はｔ－ブチル－カルバモイル－アミノから選択される置換基で置換されている且つ任意選択で非置換フェニルによって更に置換されているＣ２～４アルキルではなく；及び
（２）Ｘ１がＮであり、環Ａがインダゾール－５－イルであり、Ｒ１、Ｒ３及びＲ５がＨである場合；このときＲ２は、－ＮＨ２で置換されているＣ４アルキルではないものとする。
特に指定のない限り、用語「本発明の化合物」は、式Ａ２若しくはその下位式の化合物、又はその塩、並びに全ての立体異性体（ジアステレオマー及びエナンチオマーを含む）、回転異性体、互変異性体及び同位体で標識された化合物（重水素置換を含む）、並びに固有に形成される部分を指す。
本発明の様々な（列挙される）実施形態が本明細書に記載される。各実施形態に指定される特徴が他の指定の特徴と組み合わされて、本発明の更なる実施形態を提供し得ることが認識されるであろう。ある実施形態が先行する実施形態「に係る」と記載されるとき、その先行する実施形態にはその下位実施形態が含まれ、例えば実施形態２０が実施形態１～１９「に係る」と記載されるとき、実施形態１～１９には実施形態１９及び１９Ａが含まれることになる。
実施形態１．上記に記載したとおりの、式Ａ２の化合物又はその塩。
実施形態２．環Ａが、
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、窒素原子環員のうちの少なくとも１つは、５員ヘテロアリールの連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000009
［式中、「＊」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；及び
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、－ＮＨ２及びＣ３～６シクロアルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている、実施形態１に係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態３．環Ａが、
Figure 0007247102000010
［これらは各々、非置換であるか、又はシアノ、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、ＮＨ２、及びＣ３～６シクロアルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている］から選択されるか；
又は
Figure 0007247102000011
［これらは各々、非置換であるか、又はＣ１～６アルキルによって置換されている］から選択される、実施形態１に係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態４．環Ａが、
Figure 0007247102000012
［これらは各々、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及び－ＮＨ２から選択される置換基によって置換されている］から選択されるか；
又は
Figure 0007247102000013
［これは非置換であるか、又はＣ１～６アルキルによって置換されている］である、実施形態１～３のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態５．環Ａが、
Figure 0007247102000014
から選択される、実施形態１～３のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態６．環Ａが、
Figure 0007247102000015
から選択される、実施形態１～５のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態７．環Ａが、
Figure 0007247102000016
から選択される、実施形態１～６のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態８．環Ａが、
Figure 0007247102000017
である、実施形態１～７のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態９．環Ａが、
Figure 0007247102000018
である、実施形態１～７のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態１０．環Ａが、
Figure 0007247102000019
である、実施形態１～７のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態１１．環Ａが、
Figure 0007247102000020
である、実施形態１～７のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態１２．環Ａが、
Figure 0007247102000021
である、実施形態１～７のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態１３．環Ａが、
Figure 0007247102000022
である、実施形態１～５のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態１４．環Ａが、
Figure 0007247102000023
である、実施形態１～５のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態１５．環Ａが、
Figure 0007247102000024
である、実施形態１～６のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態１６．環Ａが、
Figure 0007247102000025
である、実施形態１～３のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態１７．環Ａが、
Figure 0007247102000026
である、実施形態１～４のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態１８．環Ａが、
Figure 0007247102000027
である、実施形態１～５のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態１８Ａ．環Ａが、
Figure 0007247102000028
である、実施形態１～５のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態１９．環Ａが、
Figure 0007247102000029
［これらは各々、非置換であるか、又はシアノ、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、ＮＨ２、及びＣ３～６シクロアルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている］から選択されるか；
又は
Figure 0007247102000030
［これらは各々、非置換であるか、又はＣ１～６アルキルによって置換されている］から選択される、実施形態１～３のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態２０．Ｒ１が、水素、メチル及びエチルから選択される、実施形態１～１９のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態２１．Ｒ１がメチルである、実施形態１～２０のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態２２．Ｒ１が水素である、実施形態１～２０のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態２３．Ｒ２が、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）シアノ；
（ｉｉ）Ｃ２アルキニル；
（ｉｉｉ）Ｃ１～６ハロアルキル；
（ｉｖ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖ）－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖｉ）－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０である］；
（ｖｉｉ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｖｉｉｉ）非置換であるか、又はＣ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル及びＲ０から選択される置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル；
（ｉｘ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６アルキルによって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；及び
（ｘ）非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
（ｂ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｃ）Ｎ及びＯから選択されるヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択される、実施形態１～２２のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態２４．Ｒ２が、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）シアノ；
（ｉｉ）Ｃ２アルキニル；
（ｉｉｉ）Ｃ１～６ハロアルキル；
（ｉｖ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖ）－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖｉ）－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０である］；
（ｖｉｉ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｖｉｉｉ）非置換であるか、又はＣ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル及びＲ０から選択される置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル；
（ｉｘ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６アルキルによって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；及び
（ｘ）非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
及びここで、Ｒ２が分子の残りの部分に結合する点である、非置換であるか、又は１～３個の置換基（ｉ）～（ｘ）によって置換されているＣ１～８アルキルのＣ原子は、－ＣＨ２－基でない；
（ｂ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｃ）Ｎ及びＯから選択されるヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択される、実施形態１～２２のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態２５．Ｒ２が、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）シアノ；
（ｉｉ）Ｃ２アルキニル；
（ｉｉｉ）Ｃ１～６ハロアルキル；
（ｉｖ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はヒドロキシル若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｈによって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖ）－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ１～６アルコキシ、及び非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）ＯＨによって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；及び
（ｖｉ）非置換であるか、又はヒドロキシルによって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル
から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；及び
（ｂ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、及び非置換であるか又はヒドロキシル若しくは－Ｃ（Ｏ）－Ｃ１～６アルコキシによって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル
から選択される、実施形態１～２３のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態２６．Ｒ２が、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）Ｃ１～６ハロアルキル；
（ｉｉ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、及び非置換であるか又はヒドロキシルによって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；及び
（ｉｉｉ）非置換であるか、又はヒドロキシルによって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル
から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；及び
（ｂ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、及び非置換であるか若しくはヒドロキシルによって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル
から選択される、実施形態１～２５のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態２７．Ｒ２が、非置換であるか又はＣ１～６ハロアルキル及び－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、及び非置換であるか又はヒドロキシルによって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキルである、実施形態１～２６のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態２８．Ｒ２が、非置換であるか又はヒドロキシルによって置換されているＣ１～８アルキルである、実施形態１～２７のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態２９．Ｒ２が、非置換であるか又はＣ１～６ハロアルキルによって置換されているＣ１～６アルキルである、実施形態１～２７のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態３０．Ｒ２が、非置換であるか又は－Ｏ－Ｃ１～６アルキル－ＯＨによって置換されているＣ１～６アルキルである、実施形態１～２７のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態３１．Ｒ２が、非置換であるか又はＣ１～６ハロアルキル、Ｃ１～６アルキルアミノ、Ｒ０、及び非置換であるか若しくはヒドロキシルによって置換されているＣ１～６アルキルから選択される置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキルである、実施形態１～２６のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態３２．Ｒ２が非置換Ｃ３～６シクロアルキルである、実施形態１～２６及び３１のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態３３．Ｒ２が、Ｃ１～６アルキル又はＣ１～６ハロアルキルによって置換されているＣ３～６シクロアルキルである、実施形態１～２６及び３１のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態３４．Ｒ２が、イソプロピル、ｓ－ブチル、ｔ－ブチル、２－メチル－ブタ－２－イル、２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル、
Figure 0007247102000031
から選択され；
式中、「＊」は、Ｒ２が分子の残りの部分に結合する点を表す、実施形態１～２５のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態３４Ａ．Ｒ２が、
Figure 0007247102000032
から選択される、実施形態１～２５のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態３５．Ｒ２が、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｔ－ブチル、
Figure 0007247102000033
から選択される、実施形態１～２３及び２５～２７のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態３６．Ｒ２が、
Figure 0007247102000034
から選択される、実施形態１～２７、３４及び３５のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態３７．Ｒ２が、
Figure 0007247102000035
である、実施形態１～２７、２９、及び３４～３６のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態３８．Ｒ２が、
Figure 0007247102000036
である、実施形態１～２７、３０、及び３４～３６のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態３９．Ｒ２が、
Figure 0007247102000037
である、実施形態１～２７、３１、及び３４～３６のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態４０．Ｒ２が、
Figure 0007247102000038
から選択される、実施形態１～２６、３１、３４及び３５のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態４１．Ｒ２が、
Figure 0007247102000039
から選択される、実施形態１～２６、３１、３３～３５及び４０のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態４２．Ｒ２が、
Figure 0007247102000040
である、実施形態１～２６、３１、３３～３５及び４０のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態４３．Ｒ２が、
Figure 0007247102000041
である、実施形態１～２６、３１、３２、３４、３５及び４０のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態４４．Ｒ２が、ｎ－プロピル、イソプロピル及びｔ－ブチルから選択される、実施形態１～２３、２５～３０、及び３５のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態４５．Ｒ２がｎ－プロピルである、実施形態１～２３、２５～３０、３５、及び４４のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態４６．Ｒ２がイソプロピルである、実施形態１～３０、３５、及び４４のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態４７．Ｒ２がｔ－ブチルである、実施形態１～３０、３５、及び４４のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態４８．Ｘ１がＣＨであり；及び
Ｒ１及びＲ２が、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成し、ここでＲ１及びＲ２によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及びＲ０から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されている、実施形態１～１９のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態４９．Ｘ１がＣＨであり；及び
Ｒ１及びＲ２が、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい５員又は６員ヘテロシクロアルキルを形成し、ここでＲ１及びＲ２によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される５員又は６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はヒドロキシル、Ｃ１～４アルキル及びＣ１～４ハロアルキルから独立して選択される１～３個の置換基によって置換されている、実施形態１～１９、及び４８のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態５０．Ｘ１がＣＨであり；及び
Ｒ１及びＲ２が、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ及びＯから選択される追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい６員ヘテロシクロアルキルを形成し、ここでＲ１及びＲ２によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はヒドロキシル、Ｃ１～６アルキル及びＣ１～６ハロアルキルから独立して選択される１～３個の置換基によって置換されている、実施形態１～１９、４８及び４９のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態５１．Ｘ１がＣＨであり；及び
Ｒ１及びＲ２が、両方が結合している窒素原子と一緒になって、ピペリジニル、ピペラジニル及びモルホリニルから選択される６員ヘテロシクロアルキルを形成し、ここでピペリジニル、ピペラジニル又はモルホリニルは、非置換であるか、又はヒドロキシル及びＣ１～６アルキルから独立して選択される１～３個の置換基によって置換されている、実施形態１～１９、及び４８～５０のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態５２．Ｒ３が、水素、クロロ及びメチルから選択される、実施形態１～５１のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態５３．Ｒ３が水素である、実施形態１～５２のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態５３Ａ．Ｒ３がクロロである、実施形態１～５２のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態５３Ｂ．Ｒ３がメチルである、実施形態１～５２のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態５４．Ｒ５が水素及びクロロから選択される、実施形態１～５３に係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態５５．Ｒ５が水素である、実施形態１～５４のいずれか１つに係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態５６．式Ａ３である、実施形態１に係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
Figure 0007247102000042
［式中、
Ｘ１はＣＨ又はＮであり；
環Ａは
Figure 0007247102000043
［これらの各々は、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及び－ＮＨ２から選択される置換基によって置換されている］であり；
Ｒ１は水素又は非置換Ｃ１～６アルキルであり；及び
Ｒ２は、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）Ｃ１～４ハロアルキル及び
（ｉｉ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素及び非置換であるか又はヒドロキシルによって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］
から選択される１個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；又は
（ｂ）非置換であるか、又はＣ１～６アルキル若しくはＣ１～６ハロアルキルによって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル
である。］
実施形態５７．環Ａが、
Figure 0007247102000044
である、実施形態５６に係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態５８．Ｒ２が、
Figure 0007247102000045
である、実施形態５６又は実施形態５７に係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態５９．Ｒ２が、非置換であるか又はトリフルオロメチル（ｔｒｉｆｌｕｒｏｍｅｔｈｙｌ）によって置換されているｎ－プロピル又はｔｅｒｔ－ブチルである、実施形態５６又は実施形態５７に係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態６０．Ｎ－（２－シクロプロピルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ，Ｎ－ジエチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－エチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メトキシ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－メトキシ－２－メチルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ブチル－Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－エチル－Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）エタン－１－オール；２－メチル－１－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）プロパン－２－オール；Ｎ－エチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－シクロヘキシルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（３－メチルオキセタン－３－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－２－オール；Ｎ－ブチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチル－４－フェニルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－シクロプロピル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－メタンスルホニル－２－メチルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１，３－ジオール；３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－２－オール；２－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）酢酸；（１Ｒ，２Ｓ）－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロペンタン－１－オール；４，４，４－トリフルオロ－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール；Ｎ－（１－メタンスルホニル－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（２Ｓ）－３，３，３－トリフルオロ－２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン酸；２－［（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロピル）アミノ］酢酸；（２Ｒ）－３，３，３－トリフルオロ－２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン酸；メチル２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパノエート；（１Ｓ，２Ｓ）－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロペンタン－１－オール；２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン酸；２－（２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝エトキシ）エタン－１－オール；２－（ヒドロキシメチル）－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１，３－ジオール；３－メチル－３－（３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタンアミド）ブタン酸；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－３－フェニルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－｛［４－（ジメチルアミノ）オキサン－４－イル］メチル｝－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン酸；Ｎ－（２－メタンスルホニルエチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－［２－（アダマンタン－１－イル）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－Ｎ－［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］プロパンアミド；４，４，４－トリフルオロ－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン酸；Ｎ－［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］プロパン－２－スルホンアミド；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［３－（１Ｈ－１，２，３，４－テトラゾール－５－イル）プロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｒ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２，４－ジメチル－４－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール；４，４，４－トリフルオロ－２，３－ジメチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－２－オール；（１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロペンチル）メタノール；Ｎ－（３－メトキシシクロブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（１Ｒ，２Ｒ）－１－Ｎ，２－Ｎ－ジメチル－１－Ｎ－［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］シクロヘキサン－１，２－ジアミン；メチル（１ｓ，３ｓ）－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－カルボキシレート；エチル１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－カルボキシレート；１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－カルボン酸；（１ｓ，３ｓ）－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－カルボン酸；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロブチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－シクロペンチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１－オール；３，３，３－トリフルオロ－２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１－オール；Ｎ－（ブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチルブタ－３－イン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（１ｒ，３ｓ）－３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－オール；２，３－ジメチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－２－オール；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（ペンタン－３－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－［２－メチル－１－（モルホリン－４－イル）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－［１－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－メチルプロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４，４，４－トリフルオロ－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール；Ｎ－ペンチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール；Ｎ－［１－（１Ｈ－インドール－３－イル）－２－メチルプロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－［１－（４－フルオロフェニル）－２－メチルプロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－フェニルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－フルオロフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－［２－（４－フルオロフェニル）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３，３，３－トリフルオロ－２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン酸；２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝エタン－１－オール；Ｎ－メチル




－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；１－（｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝メチル）シクロペンタン－１－オール；Ｎ，Ｎ－ジメチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチルフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－メチルフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－メトキシフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－フェニル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（３－メチルフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；６－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ヘキサン酸；Ｎ－（３－フルオロフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－フルオロフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン酸；Ｎ－（１－フェニルエチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；ｔｅｒｔ－ブチルＮ－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロピル）カルバメート；（１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブチル）メタノール；メチル２－（１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロプロピル）アセテート；Ｎ－（２－メチルプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタンニトリル；Ｎ－（６－アミノヘキシル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－アミノブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパンニトリル；Ｎ－［２－メチル－１－（２－メチルピペリジン－１－イル）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；ジメチル（３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブチル）アミン；Ｎ－（１－アミノ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－シクロペンチル－２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－［４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル］ピリジン－２－アミン；２－［１－（ベンゼンスルホニル）－２－メチル－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル］－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－｛２－メチル－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－クロロピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－メチルピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（２－メチルブタン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２，４－ジメチル－４－（｛２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル｝アミノ）ペンタン－２－オール；Ｎ－エチル－２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（プロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－１－［２－メチル－２－（｛２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル｝アミノ）プロポキシ］プロパン－２－オール；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－エチル－２－（３－メチルピリジン－４－イル）－Ｎ－（プロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－メトキシ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛［２－（３－クロロピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝－２，４－ジメチルペンタン－２－オール；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－シクロペンチルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；１－（２－｛［２－（３－クロロピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝－２－メチルプロポキシ）－２－メチルプロパン－２－オール；Ｎ－メチル－２－（３－メチルピリジン－４－イル）－Ｎ－（プロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（４－メタンスルホニル－２－メチルブタン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－［３－（トリフルオロメチル）ピリジン－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－［２－クロロ－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－［３－（１Ｈ－１，２，３，４－テトラゾール－５－イル）プロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－メチル－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－メチル－Ｎ－［（２Ｒ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛４－［（１－メチルシクロプロピル）アミノ］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル｝ピリジン－２－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２，４－ジメチル－４－｛［２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール；４－｛４－［（１－メチルシクロプロピル）アミノ］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル｝ピリジン－３－カルボニトリル；２－｛２－メチル－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１Ｈ－インダゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３，５－ジメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛４－［（４－ヒドロキシ－２，４－ジメチルペンタン－２－イル）アミノ］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル｝ピリジン－３－カルボニトリル；２－（３，５－ジフルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（２，３－ジフルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１，３－チアゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－［２－（トリフルオロメチル）ピリジン－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛４－［（１－メチルシクロプロピル）アミノ］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル｝ピリジン－２－カルボニトリル；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１，２－オキサゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（ジメチル－１，２－オキサゾール－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－｛１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－４－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－｛１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－｛１Ｈ－ピロロ［３，２－ｂ］ピリジン－１－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチルピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロブチル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリミジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛［２－（３，５－ジメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝－２，４－ジメチルペンタン－２－オール；Ｎ－プロピル－２－｛７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチルピリジン－４－イル）－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－｛１－メチル－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２，４－ジメチル－４－｛［２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール；Ｎ－［（１Ｒ）－１－フェニルエチル］－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－［（１Ｒ）－１－フェニルエチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾ




ール－５－イル）－Ｎ－［（１Ｒ）－１－フェニルエチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－エチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリダジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１，３－オキサゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１Ｈ－イミダゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－｛１Ｈ－ピロロ［３，２－ｂ］ピリジン－１－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチル－１，２－オキサゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（２Ｈ－１，２，３，４－テトラゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－［１－（ピリジン－４－イル）エチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（１－｛［２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブチル）メタノール；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロブチル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（１－｛［２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブチル）メタノール；２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－［１－（ピリジン－４－イル）エチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（１－｛［２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブチル）メタノール；（１－｛［２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロプロピル）メタノール；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－［１－（ピリジン－４－イル）エチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－エチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（２－メチルプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－アミノ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；８－クロロ－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；８－メチル－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－５－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；５－クロロ－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（２－｛［４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－５－イル］アミノ｝エトキシ）エタン－１－オール；Ｎ－（４－メトキシ－２－メチルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－［２－メチル－１－（プロパン－２－イルオキシ）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－［（２Ｓ）－ブタン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－［（２Ｒ）－ブタン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－（１－メトキシ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２，２－ジメチル－１－［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］ピペリジン－４－オール；２，４－ジメチル－４－｛［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール；Ｎ－シクロペンチル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；ジメチル（３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝ブチル）アミン；Ｎ，Ｎ－ジエチル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－メチル－１－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）プロパン－２－オール；Ｎ－プロピル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－（２－アミノピリミジン－４－イル）－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－｛１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－４－イル｝－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリダジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－（２－アミノピリジン－４－イル）－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ，Ｎ－ジエチル－２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；（３－｛［２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝－３－メチルブチル）ジメチルアミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－４－（ピペリジン－１－イル）－１，７－ナフチリジン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－４－（モルホリン－４－イル）－１，７－ナフチリジン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（２－メチルブタン－２－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－｛［２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝－２－メチルプロパン－１－オール；１－［２－（３－クロロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］－２，２－ジメチルピペリジン－４－オール；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－［２－メチル－１－（モルホリン－４－イル）プロパン－２－イル］－１，７－ナフチリジン－４－アミン；４－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン；４－（ピペラジン－１－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン；４－（２－メチルピペリジン－１－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロブチル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－メチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）プロパン－１，２－ジアミン；Ｎ－（オキセタン－３－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；４－（３，３－ジメチルピペラジン－１－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン；２，２－ジメチル－４－（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）モルホリン；Ｎ－（１－メチルシクロブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２，２－ジメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；Ｎ２，Ｎ２，２－トリメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）プロパン－１，２－ジアミン；４－（２－メチルピペラジン－１－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン；２－メチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；（Ｒ）－２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）－１，７－ナフチリジン；Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロブチル）－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチル－Ｎ３－（２－（ピリミジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチル－Ｎ３－（２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；ｔｅｒｔ－ブチル（２－メチル－１－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパン－２－イル）カルバメート；ｔｅｒｔ－ブチル（２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）カルバメート；２－メチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，２－ジアミン；Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）エタン－１，２－ジアミン；Ｎ，Ｎ，２－トリメチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパンアミド；Ｎ１，３－ジメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；ｔｅｒｔ－ブチル（２，２－ジメチル－３－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］




ピリミジン－４－イル）アミノ）プロピル）カルバメート；２，２－ジメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；３－メチル－３－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）ブタンアミド；（Ｒ）－２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン；２，３－ジメチル－Ｎ２－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－２，３－ジアミン；（Ｓ）－２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン；エチル２－メチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパノエート；Ｎ１，Ｎ１，２，２－テトラメチル－Ｎ３－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；４－（４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル）－１，２，５－オキサジアゾール－３－アミン；Ｎ２，Ｎ２，２－トリメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，２－ジアミン；２－メチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパンアミド；（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロ－２－メチル－３－（（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）アミノ）プロパン－２－オール；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－クロロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ，Ｎ－ジエチル－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－（（１Ｒ，２Ｓ）－２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（Ｓ）－Ｎ－（ｓｅｃ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（（１Ｓ，２Ｒ）－２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（Ｒ）－Ｎ－（ｓｅｃ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（（１Ｓ，２Ｓ）－２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（（１Ｒ，２Ｒ）－２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－（３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；ｔｅｒｔ－ブチル（３－メチル－３－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）ブチル）カルバメート；Ｎ１，Ｎ１，Ｎ３，２，２－ペンタメチル－Ｎ３－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；Ｎ１，Ｎ１－ジエチル－３－メチル－Ｎ３－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；Ｎ３－（２－（２－フルオロピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン；Ｎ３－（２－（３，５－ジメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン；Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチル－Ｎ３－（２－（３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；Ｎ３－（２－（２－アミノピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン；及び３－メチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミンから選択される、実施形態１に係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態６０Ａ．Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－１－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）プロパン－２－オール；２，４－ジメチル－４－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロブチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン；２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１－オール；２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン；Ｎ－シクロペンチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－（３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）エタン－１－オール；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン－５－アミン；（１Ｓ，２Ｓ）－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロペンタン－１－オール；Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン；Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；及びＮ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｒ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミンから選択される、実施形態１に係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態６０Ｂ．Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；及びＮ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミンから選択される、実施形態１に係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態６０Ｃ．Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミンである、実施形態１に係る式Ａ２の化合物、又はその塩。
実施形態６１．式Ｉの化合物、又はその塩。
Figure 0007247102000046
［式中
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、５員ヘテロアリールの連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000047
［式中、「＊」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、Ｃ３～６シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されており；
Ｒ０はヒドロキシル又はＣ１～６アルコキシであり；
Ｒ１は水素又はＣ１～６アルキルであり；
Ｒ２は、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）ハロゲン；
（ｉｉ）シアノ；
（ｉｉｉ）オキソ；
（ｉｖ）Ｃ２アルケニル；
（ｖ）Ｃ２アルキニル；
（ｖｉ）Ｃ１～６ハロアルキル；
（ｖｉｉ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖｉｉｉ）－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｉｘ）－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０又は－ＮＨ－Ｃ１～６アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ０である］；
（ｘ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｘｉ）各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｒ０、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル又は多環式Ｃ７～１０シクロアルキル；
（ｘｉｉ）Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
（ｘｉｉｉ）非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
（ｘｉｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
（ｘｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
（ｂ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｃ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル及びＲ０から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｄ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｅ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；
Ｒ３は、水素、ハロゲン及びＣ１～６アルキルから選択され；及び
Ｒ５は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ３～８アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ０によって置換されており；
但し、
（１）環Ａが４－ピリミジニル（ｐｒｉｍｉｄｉｎｙｌ）又は３－フルオロ－４－ピリミジニル（ｐｒｉｍｉｄｉｎｙｌ）であり、Ｒ１がＨ又はメチルであり、Ｒ３がＨ又はＣｌであり、及びＲ５がＨである場合；このときＲ２は、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ又はｔ－ブチル－カルバモイル－アミノから選択される置換基で置換されている且つ任意選択で非置換フェニルによって更に置換されているＣ２～４アルキルではなく；及び
（２）環Ａがインダゾール－５－イルであり、Ｒ１、Ｒ３及びＲ５がＨである場合；このときＲ２は、－ＮＨ２で置換されているＣ４アルキルではないものとする。］
実施形態６２．環Ａが、
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、窒素原子環員のうちの少なくとも１つは、５員ヘテロアリールの連結炭素環員に対して３位若しくは５位又は６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000048
［式中、「＊」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり、及び
環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、－ＮＨ２及びＣ３～６シクロアルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている、実施形態６１に係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態６３．環Ａが、
Figure 0007247102000049
［これらは各々、非置換であるか、又はシアノ、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、ＮＨ２、及びＣ３～６シクロアルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている］から選択されるか；
又は
Figure 0007247102000050
［これらは各々、非置換であるか、又はＣ１～６アルキルによって置換されている］から選択される、実施形態６１又は実施形態６２に係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態６４．環Ａが、
Figure 0007247102000051
［各々、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及び－ＮＨ２から選択される置換基によって置換されている］から選択されるか；
又は
Figure 0007247102000052
［非置換であるか、又はＣ１～６アルキルによって置換されている］である、実施形態６１～６３のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態６５．環Ａが、
Figure 0007247102000053
から選択される、実施形態６１～６３のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態６６．環Ａが、
Figure 0007247102000054
から選択される、実施形態６１～６５のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態６７．環Ａが、
Figure 0007247102000055
から選択される、実施形態６１～６６のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態６８．環Ａが、
Figure 0007247102000056
である、実施形態６１～６７のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態６９．環Ａが、
Figure 0007247102000057
である、実施形態６１～６７のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態７０．環Ａが、
Figure 0007247102000058
である、実施形態６１～６７のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態７１．環Ａが、
Figure 0007247102000059
である、実施形態６１～６７のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態７２．環Ａが、
Figure 0007247102000060
である、実施形態６１～６７のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態７３．環Ａが、
Figure 0007247102000061
である、実施形態６１～６５のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態７４．環Ａが、
Figure 0007247102000062
である、実施形態６１～６５のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態７５．環Ａが、
Figure 0007247102000063
である、実施形態６１～６６のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態７６．環Ａが、
Figure 0007247102000064
である、実施形態６１～６３のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態７７．環Ａが、
Figure 0007247102000065
である、実施形態６１～６４のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態７８．環Ａが、
Figure 0007247102000066
である、実施形態６１～６５のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態７８Ａ．環Ａが、
Figure 0007247102000067
である、実施形態６１～６５のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態７９．環Ａが、
Figure 0007247102000068
［これらは各々、非置換であるか、又はシアノ、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、ＮＨ２、及びＣ３～６シクロアルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている］から選択されるか；
又は
Figure 0007247102000069
［これらは各々、非置換であるか、又はＣ１～６アルキルによって置換されている］から選択される、実施形態６１～６３のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態８０．Ｒ１が、水素、メチル及びエチルから選択される、実施形態６１～７９のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態８１．Ｒ１がメチルである、実施形態６１～８０のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態８２．Ｒ１が水素である、実施形態６１～８０のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態８３．Ｒ２が、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）シアノ；
（ｉｉ）Ｃ２アルキニル；
（ｉｉｉ）Ｃ１～６ハロアルキル；
（ｉｖ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖ）－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖｉ）－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０である］；
（ｖｉｉ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｖｉｉｉ）非置換であるか、又はＣ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル及びＲ０から選択される置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル；
（ｉｘ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６アルキルによって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；及び
（ｘ）非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
（ｂ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｃ）Ｎ及びＯから選択されるヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択される、実施形態６１～８２のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態８４．Ｒ２が、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）シアノ；
（ｉｉ）Ｃ２アルキニル；
（ｉｉｉ）Ｃ１～６ハロアルキル；
（ｉｖ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖ）－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖｉ）－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０である］；
（ｖｉｉ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｖｉｉｉ）非置換であるか、又はＣ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル及びＲ０から選択される置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル；
（ｉｘ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６アルキルによって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；及び
（ｘ）非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
及びここで、Ｒ２が分子の残りの部分に結合する点である、非置換であるか、又は１～３個の置換基（ｉ）～（ｘ）によって置換されているＣ１～８アルキルのＣ原子は、－ＣＨ２－基でない、
（ｂ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｃ）Ｎ及びＯから選択されるヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択される、実施形態６１～８２のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態８５．Ｒ２が、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）シアノ；
（ｉｉ）Ｃ２アルキニル；
（ｉｉｉ）Ｃ１～６ハロアルキル；
（ｉｖ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はヒドロキシル若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｈによって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖ）－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ１～６アルコキシ、及び非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）ＯＨによって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；及び
（ｖｉ）非置換であるか、又は１個のヒドロキシルによって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル
から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；及び
（ｂ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、及び非置換であるか又はヒドロキシル若しくは－Ｃ（Ｏ）－Ｃ１～６アルコキシによって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル
から選択される、実施形態６１～８３のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態８６．Ｒ２が、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）Ｃ１～６ハロアルキル；
（ｉｉ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、及び非置換であるか又はヒドロキシルによって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；及び
（ｉｉｉ）非置換であるか、又はヒドロキシルによって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル
から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；及び
（ｂ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、及び非置換であるか若しくはヒドロキシルによって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル
から選択される、実施形態６１～８５のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態８７．Ｒ２が、非置換であるか又はＣ１～６ハロアルキル及び－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、及び非置換であるか又はヒドロキシルによって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ１～６アルキルである、実施形態６１～８６のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態８８．Ｒ２が、非置換であるか又はヒドロキシルによって置換されているＣ１～６アルキルである、実施形態６１～８７のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態８９．Ｒ２が、非置換であるか又はＣ１～６ハロアルキルによって置換されているＣ１～６アルキルである、実施形態６１～８７のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態９０．Ｒ２が、非置換であるか又は－Ｏ－Ｃ１～６アルキル－ＯＨによって置換されているＣ１～６アルキルである、実施形態６１～８７のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態９１．Ｒ２が、非置換であるか又はＣ１～６ハロアルキル、Ｃ１～６アルキルアミノ、Ｒ０、及び非置換であるか若しくはヒドロキシルによって置換されているＣ１～６アルキルから選択される置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキルである、実施形態６１～８６のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態９２．Ｒ２が非置換Ｃ３～６シクロアルキルである、実施形態６１～８６及び９１のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態９３．Ｒ２が、Ｃ１～６アルキル又はＣ１～６ハロアルキルによって置換されているＣ３～６シクロアルキルである、実施形態６１～８６及び９１のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態９４．Ｒ２が、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｓ－ブチル、ｔ－ブチル、２－メチル－ブタ－２－イル、２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル、
Figure 0007247102000070
から選択され；
式中、「＊」は、Ｒ２が分子の残りの部分に結合する点を表す、実施形態６１～８５のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態９４Ａ．Ｒ２が、
Figure 0007247102000071
から選択される、実施形態６１～８５のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態９５．Ｒ２が、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｔ－ブチル、
Figure 0007247102000072
から選択される、実施形態６１～８３及び８５～８７のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態９６．Ｒ２が、
Figure 0007247102000073
から選択される、実施形態６１～８７、９４及び９５のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態９７．Ｒ２が、
Figure 0007247102000074
である、実施形態６１～８７、８９、及び９４～９６のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態９８．Ｒ２が、
Figure 0007247102000075
である、実施形態６１～８７、９０、及び９４～９６のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態９９．Ｒ２が、
Figure 0007247102000076
である、実施形態６１～８７、９１、及び９４～９６のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１００．Ｒ２が、
Figure 0007247102000077
から選択される、実施形態６１～８６、９１、９４及び９５のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１０１．Ｒ２が、
Figure 0007247102000078
である、実施形態６１～８６、９１、９３～９５及び１００のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１０２．Ｒ２が、
Figure 0007247102000079
である、実施形態６１～８６、９１、９３～９５及び１００のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１０３．Ｒ２が、
Figure 0007247102000080
である、実施形態６１～８６、９１～９５、１００及び１０２のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１０４．Ｒ２が、ｎ－プロピル、イソプロピル及びｔ－ブチルから選択される、実施形態６１～８３、８５～９０、及び９５のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１０５．Ｒ２がｎ－プロピルである、実施形態６１～８３、８５～９０、９５、及び１０４のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１０６．Ｒ２がイソプロピルである、実施形態６１～９０、９５、及び１０４のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１０７．Ｒ２がｔ－ブチルである、実施形態６１～９０、９５、及び１０４のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１０８．Ｒ３が、水素、クロロ及びメチルから選択される、実施形態６１～１０７のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１０９．Ｒ３が水素である、実施形態６１～１０８のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１０９Ａ．Ｒ３がクロロである、実施形態６１～１０８のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１０９Ｂ．Ｒ３がメチルである、実施形態６１～１０８のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１１０．Ｒ５が、水素、及びクロロから選択される、実施形態６１～１０９のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１１１．Ｒ５が水素である、実施形態６１～１１０のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１１２．式Ｖである、実施形態６１に係る式Ｉの化合物、又はその塩。
Figure 0007247102000081
［式中、
環Ａは
Figure 0007247102000082
［これらの各々は、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及び－ＮＨ２から選択される置換基によって置換されている］であり；
Ｒ１は水素又は非置換Ｃ１～６アルキルであり；及び
Ｒ２は、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）Ｃ１～４ハロアルキル又は
（ｉｉ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素及び非置換であるか又はヒドロキシルによって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］
から選択される１個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；又は
（ｂ）非置換であるか、又はＣ１～６アルキル若しくはＣ１～６ハロアルキルによって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキルである。］
実施形態１１３．環Ａが、
Figure 0007247102000083
から選択される、実施形態１１２に係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１１４．環Ａが、
Figure 0007247102000084
である、実施形態１１２又は実施形態１１３に係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１１５．環Ａが、
Figure 0007247102000085
である、実施形態１１２又は実施形態１１３に係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１１６．Ｒ２が、
Figure 0007247102000086
から選択される、実施形態１１２～１１５のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１１６Ａ．Ｒ２が、
Figure 0007247102000087
から選択される、実施形態１１２～１１５のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１１７．Ｒ２が、
Figure 0007247102000088
である、実施形態１１２～１１６のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１１８．Ｒ２が、
Figure 0007247102000089
である、実施形態１１２～１１６のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１１９．Ｒ２が、
Figure 0007247102000090
である、実施形態１１２～１１６のいずれか１つに係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１２０．Ｎ－（２－シクロプロピルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ，Ｎ－ジエチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－エチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メトキシ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－メトキシ－２－メチルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ブチル－Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－エチル－Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）エタン－１－オール；２－メチル－１－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）プロパン－２－オール；Ｎ－エチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－シクロヘキシルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（３－メチルオキセタン－３－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－２－オール；Ｎ－ブチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチル－４－フェニルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－シクロプロピル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－メタンスルホニル－２－メチルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１，３－ジオール；３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－２－オール；２－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）酢酸；（１Ｒ，２Ｓ）－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロペンタン－１－オール；４，４，４－トリフルオロ－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール；Ｎ－（１－メタンスルホニル－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（２Ｓ）－３，３，３－トリフルオロ－２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン酸；２－［（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロピル）アミノ］酢酸；（２Ｒ）－３，３，３－トリフルオロ－２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン酸；メチル２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパノエート；（１Ｓ，２Ｓ）－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロペンタン－１－オール；２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン酸；２－（２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝エトキシ）エタン－１－オール；２－（ヒドロキシメチル）－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１，３－ジオール；３－メチル－３－（３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタンアミド）ブタン酸；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－３－フェニルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－｛［４－（ジメチルアミノ）オキサン－４－イル］メチル｝－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン酸；Ｎ－（２－メタンスルホニルエチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－［２－（アダマンタン－１－イル）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－Ｎ－［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］プロパンアミド；４，４，４－トリフルオロ－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン酸；Ｎ－［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］プロパン－２－スルホンアミド；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［３－（１Ｈ－１，２，３，４－テトラゾール－５－イル）プロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｒ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２，４－ジメチル－４－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール；４，４，４－トリフルオロ－２，３－ジメチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－２－オール；（１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロペンチル）メタノール；Ｎ－（３－メトキシシクロブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（１Ｒ，２Ｒ）－１－Ｎ，２－Ｎ－ジメチル－１－Ｎ－［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］シクロヘキサン－１，２－ジアミン；メチル（１ｓ，３ｓ）－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－カルボキシレート；エチル１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－カルボキシレート；１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－カルボン酸；（１ｓ，３ｓ）－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－カルボン酸；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロブチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－シクロペンチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１－オール；３，３，３－トリフルオロ－２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１－オール；Ｎ－（ブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチルブタ－３－イン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（１ｒ，３ｓ）－３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－オール；２，３－ジメチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－２－オール；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（ペンタン－３－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－［２－メチル－１－（モルホリン－４－イル）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－［１－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－メチルプロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４，４，４－トリフルオロ－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール；Ｎ－ペンチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール；Ｎ－［１－（１Ｈ－インドール－３－イル）－２－メチルプロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－［１－（４－フルオロフェニル）－２－メチルプロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－フェニルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－フルオロフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－［２－（４－フルオロフェニル）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３，３，３－トリフルオロ－２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン酸；２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝エタン－１－オール；Ｎ－メチ




ル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；１－（｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝メチル）シクロペンタン－１－オール；Ｎ，Ｎ－ジメチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチルフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－メチルフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－メトキシフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－フェニル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（３－メチルフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；６－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ヘキサン酸；Ｎ－（３－フルオロフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－フルオロフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン酸；Ｎ－（１－フェニルエチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；ｔｅｒｔ－ブチルＮ－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロピル）カルバメート；（１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブチル）メタノール；メチル２－（１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロプロピル）アセテート；Ｎ－（２－メチルプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタンニトリル；Ｎ－（６－アミノヘキシル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－アミノブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパンニトリル；Ｎ－［２－メチル－１－（２－メチルピペリジン－１－イル）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；ジメチル（３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブチル）アミン；Ｎ－（１－アミノ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－シクロペンチル－２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－［４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル］ピリジン－２－アミン；２－［１－（ベンゼンスルホニル）－２－メチル－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル］－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－｛２－メチル－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－クロロピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－メチルピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（２－メチルブタン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２，４－ジメチル－４－（｛２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル｝アミノ）ペンタン－２－オール；Ｎ－エチル－２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（プロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－１－［２－メチル－２－（｛２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル｝アミノ）プロポキシ］プロパン－２－オール；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－エチル－２－（３－メチルピリジン－４－イル）－Ｎ－（プロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－メトキシ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛［２－（３－クロロピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝－２，４－ジメチルペンタン－２－オール；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－シクロペンチルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；１－（２－｛［２－（３－クロロピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝－２－メチルプロポキシ）－２－メチルプロパン－２－オール；Ｎ－メチル－２－（３－メチルピリジン－４－イル）－Ｎ－（プロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（４－メタンスルホニル－２－メチルブタン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－［３－（トリフルオロメチル）ピリジン－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－［２－クロロ－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－［３－（１Ｈ－１，２，３，４－テトラゾール－５－イル）プロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－メチル－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－メチル－Ｎ－［（２Ｒ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛４－［（１－メチルシクロプロピル）アミノ］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル｝ピリジン－２－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２，４－ジメチル－４－｛［２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール；４－｛４－［（１－メチルシクロプロピル）アミノ］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル｝ピリジン－３－カルボニトリル；２－｛２－メチル－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１Ｈ－インダゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３，５－ジメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛４－［（４－ヒドロキシ－２，４－ジメチルペンタン－２－イル）アミノ］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル｝ピリジン－３－カルボニトリル；２－（３，５－ジフルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（２，３－ジフルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１，３－チアゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－［２－（トリフルオロメチル）ピリジン－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛４－［（１－メチルシクロプロピル）アミノ］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル｝ピリジン－２－カルボニトリル；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１，２－オキサゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（ジメチル－１，２－オキサゾール－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－｛１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－４－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－｛１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－｛１Ｈ－ピロロ［３，２－ｂ］ピリジン－１－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチルピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロブチル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリミジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛［２－（３，５－ジメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝－２，４－ジメチルペンタン－２－オール；Ｎ－プロピル－２－｛７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチルピリジン－４－イル）－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－｛１－メチル－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２，４－ジメチル－４－｛［２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール；Ｎ－［（１Ｒ）－１－フェニルエチル］－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－［（１Ｒ）－１－フェニルエチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラ




ゾール－５－イル）－Ｎ－［（１Ｒ）－１－フェニルエチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－エチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリダジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１，３－オキサゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１Ｈ－イミダゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－｛１Ｈ－ピロロ［３，２－ｂ］ピリジン－１－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチル－１，２－オキサゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（２Ｈ－１，２，３，４－テトラゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－［１－（ピリジン－４－イル）エチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（１－｛［２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブチル）メタノール；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロブチル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（１－｛［２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブチル）メタノール；２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－［１－（ピリジン－４－イル）エチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（１－｛［２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブチル）メタノール；（１－｛［２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロプロピル）メタノール；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－［１－（ピリジン－４－イル）エチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－エチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（２－メチルプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－アミノ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；８－クロロ－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；８－メチル－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－５－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチル－Ｎ３－（２－（ピリミジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチル－Ｎ３－（２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；ｔｅｒｔ－ブチル（２－メチル－１－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパン－２－イル）カルバメート；ｔｅｒｔ－ブチル（２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）カルバメート；２－メチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，２－ジアミン；Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）エタン－１，２－ジアミン；Ｎ，Ｎ，２－トリメチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパンアミド；Ｎ１，３－ジメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；ｔｅｒｔ－ブチル（２，２－ジメチル－３－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロピル）カルバメート；２，２－ジメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；３－メチル－３－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）ブタンアミド；（Ｒ）－２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン；２，３－ジメチル－Ｎ２－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－２，３－ジアミン；（Ｓ）－２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン；エチル２－メチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパノエート；Ｎ１，Ｎ１，２，２－テトラメチル－Ｎ３－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；４－（４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル）－１，２，５－オキサジアゾール－３－アミン；Ｎ２，Ｎ２，２－トリメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，２－ジアミン；２－メチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパンアミド；（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロ－２－メチル－３－（（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）アミノ）プロパン－２－オール；５－クロロ－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（２－｛［４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－５－イル］アミノ｝エトキシ）エタン－１－オール；Ｎ－（（１Ｒ，２Ｓ）－２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（Ｓ）－Ｎ－（ｓｅｃ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（（１Ｓ，２Ｒ）－２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（Ｒ）－Ｎ－（ｓｅｃ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（（１Ｓ，２Ｓ）－２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（（１Ｒ，２Ｒ）－２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－（３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；ｔｅｒｔ－ブチル（３－メチル－３－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）ブチル）カルバメート；Ｎ１，Ｎ１，Ｎ３，２，２－ペンタメチル－Ｎ３－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；Ｎ１，Ｎ１－ジエチル－３－メチル－Ｎ３－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；Ｎ３－（２－（２－フルオロピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン；Ｎ３－（２－（３，５－ジメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン；Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチル－Ｎ３－（２－（３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；Ｎ３－（２－（２－アミノピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン；及び３－メチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミンから選択される、実施形態６１に係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１２０Ａ．Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－１－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）プロパン－２－オール；２，４－ジメチル－４－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロブチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１－オール；２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン；Ｎ－シクロペンチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－（３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）エタン－１－オール；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン－５－アミン；（１Ｓ，２Ｓ）－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロペンタン－１－オール；Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；及びＮ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｒ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミンから選択される実施形態６１に係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１２０Ｂ．Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミンである、実施形態６１に係る式Ｉの化合物、又はその塩。
実施形態１２１．式ＩＩの化合物、又はその塩。
Figure 0007247102000091
［式中、
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、５員ヘテロアリールの連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000092
［式中、「＊」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、Ｃ３～６シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されており；
Ｒ０はヒドロキシル又はＣ１～６アルコキシであり；
Ｒ１は水素又はＣ１～６アルキルであり；
Ｒ２は、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）ハロゲン；
（ｉｉ）シアノ；
（ｉｉｉ）オキソ；
（ｉｖ）Ｃ２アルケニル；
（ｖ）Ｃ２アルキニル；
（ｖｉ）Ｃ１～６ハロアルキル；
（ｖｉｉ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖｉｉｉ）－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｉｘ）－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０又は－ＮＨ－Ｃ１～６アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ０である］；
（ｘ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｘｉ）各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｒ０、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル又は多環式Ｃ７～１０シクロアルキル；
（ｘｉｉ）Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
（ｘｉｉｉ）非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
（ｘｉｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
（ｘｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
（ｂ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｃ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル及びＲ０から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｄ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｅ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；又は
又はＲ１及びＲ２は、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成することができ、ここでＲ１及びＲ２によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及びＲ０から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されており；
Ｒ３は、水素、ハロゲン及びＣ１～６アルキルから選択され；及び
Ｒ５は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ３～８アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ０によって置換されている。］
実施形態１２２．環Ａが、
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、窒素原子環員のうちの少なくとも１つは、５員ヘテロアリールの連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000093
［式中、「＊」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であって、且つ非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、－ＮＨ２及びＣ３～６シクロアルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている、実施形態１２１に係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１２３．環Ａが、
Figure 0007247102000094
［これらは各々、非置換であるか、又はシアノ、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、ＮＨ２、及びＣ３～６シクロアルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている］から選択されるか；
又は
Figure 0007247102000095
［これらは各々、非置換であるか、又はＣ１～６アルキルによって置換されている］から選択される、実施形態１２１又は実施形態１２２に係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１２４．環Ａが、
Figure 0007247102000096
［これらは各々、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及び－ＮＨ２から選択される置換基によって置換されている］から選択されるか；
又は
Figure 0007247102000097
［これは非置換であるか、又はＣ１～６アルキルによって置換されている］である、実施形態１２１～１２３のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１２５．環Ａが、
Figure 0007247102000098
から選択される、実施形態１２１～１２３のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１２６．環Ａが、
Figure 0007247102000099
から選択される、実施形態１２１～１２５のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１２７．環Ａが、
Figure 0007247102000100
から選択される、実施形態１２１～１２６のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１２８．環Ａが、
Figure 0007247102000101
である、実施形態１２１～１２７のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１２９．環Ａが、
Figure 0007247102000102
である、実施形態１２１～１２７のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１３０．環Ａが、
Figure 0007247102000103
である、実施形態１２１～１２７のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１３１．環Ａが、
Figure 0007247102000104
である、実施形態１２１～１２７のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１３２．環Ａが、
Figure 0007247102000105
である、実施形態１２１～１２７のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１３３．環Ａが、
Figure 0007247102000106
である、実施形態１２１～１２５のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１３４．環Ａが、
Figure 0007247102000107
である、実施形態１２１～１２５のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１３５．環Ａが、
Figure 0007247102000108
である、実施形態１２１～１２６のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１３６．環Ａが、
Figure 0007247102000109
である、実施形態１２１～１２３のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１３７．環Ａが、
Figure 0007247102000110
である、実施形態１２１～１２４のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１３８．環Ａが、
Figure 0007247102000111
である、実施形態１２１～１２５のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１３９．環Ａが、
Figure 0007247102000112
［これらは各々、非置換であるか、又はシアノ、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、ＮＨ２、及びＣ３～６シクロアルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている］から選択されるか；
又は
Figure 0007247102000113
［これらは各々、非置換であるか、又はＣ１～６アルキルによって置換されている］から選択される、実施形態１２１～１２３のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１４０．Ｒ１が、水素、メチル及びエチルから選択される、実施形態１２１～１３９のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１４１．Ｒ１がメチルである、実施形態１２１～１４０のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１４２．Ｒ１が水素である、実施形態１２１～１４０のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１４３．Ｒ２が、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）シアノ；
（ｉｉ）Ｃ２アルキニル；
（ｉｉｉ）Ｃ１～６ハロアルキル；
（ｉｖ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖ）－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖｉ）－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０である］；
（ｖｉｉ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｖｉｉｉ）非置換であるか、又はＣ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル及びＲ０から選択される置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル；
（ｉｘ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６アルキルによって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；及び
（ｘ）非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
（ｂ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｃ）Ｎ及びＯから選択されるヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択される、実施形態１２１～１４２のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１４４．Ｒ２が、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）シアノ；
（ｉｉ）Ｃ２アルキニル；
（ｉｉｉ）Ｃ１～６ハロアルキル；
（ｉｖ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖ）－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖｉ）－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０である］；
（ｖｉｉ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｖｉｉｉ）非置換であるか、又はＣ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル及びＲ０から選択される置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル；
（ｉｘ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６アルキルによって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；及び
（ｘ）非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
ここでＲ２が分子の残りの部分に結合する点である、非置換であるか、又は１～３個の置換基（ｉ）～（ｘ）によって置換されているＣ１～８アルキルのＣ原子は、－ＣＨ２－基でない；
（ｂ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｃ）Ｎ及びＯから選択されるヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択される、実施形態１２１～１４２のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１４５．Ｒ２が、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）シアノ；
（ｉｉ）Ｃ２アルキニル；
（ｉｉｉ）Ｃ１～６ハロアルキル；
（ｉｖ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はヒドロキシル若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｈによって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖ）－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ１～６アルコキシ、及び非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）ＯＨによって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；及び
（ｖｉ）非置換であるか、又はヒドロキシルによって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル
から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；及び
（ｂ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、及び非置換であるか又はヒドロキシル若しくは－Ｃ（Ｏ）－Ｃ１～６アルコキシによって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル
から選択される、実施形態１２１～１４３のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１４６．Ｒ２が、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）Ｃ１～６ハロアルキル；
（ｉｉ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、及び非置換であるか又はヒドロキシルによって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；及び
（ｉｉｉ）非置換であるか、又はヒドロキシルによって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル
から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；及び
（ｂ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、及び非置換であるか若しくはヒドロキシルによって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル
から選択される、実施形態１２１～１４５のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１４７．Ｒ２が、非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル及び－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、及び非置換であるか又はヒドロキシルによって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ１～６アルキルである、実施形態１２１～１４６のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１４８．Ｒ２が、非置換であるか又はヒドロキシルによって置換されているＣ１～６アルキルである、実施形態１２１～１４７のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１４９．Ｒ２が、非置換であるか又はＣ１～６ハロアルキルによって置換されているＣ１～６アルキルである、実施形態１２１～１４７のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１５０．Ｒ２が、非置換であるか又は－Ｏ－Ｃ１～６アルキル－ＯＨによって置換されているＣ１～６アルキルである、実施形態１２１～１４７のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１５１．Ｒ２が、非置換であるか又はＣ１～６ハロアルキル、Ｃ１～６アルキルアミノ、Ｒ０、及び非置換であるか若しくはヒドロキシルによって置換されているＣ１～６アルキルから選択される置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキルである、実施形態１２１～１４６のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１５２．Ｒ２が非置換Ｃ３～６シクロアルキルである、実施形態１２１～１４６及び１５１のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１５３．Ｒ２が、Ｃ１～６アルキル又はＣ１～６ハロアルキルによって置換されているＣ３～６シクロアルキルである、実施形態１２１～１４６及び１５１のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１５４．Ｒ２が、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｓ－ブチル、ｔ－ブチル、２－メチル－ブタ－２－イル、２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル、
Figure 0007247102000114
［式中、「＊」は、Ｒ２が分子の残りの部分に結合する点を表す］から選択される、実施形態１２１～１４５のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１５５．Ｒ２が、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｔ－ブチル、
Figure 0007247102000115
から選択される、実施形態１２１～１４３及び１４５～１４７のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１５６．Ｒ２が、
Figure 0007247102000116
から選択される、実施形態１２１～１４７、１５４及び１５５のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１５７．Ｒ２が、
Figure 0007247102000117
である、実施形態１２１～１４７、１４９、及び１５４～１５６のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１５８．Ｒ２が、
Figure 0007247102000118
である、実施形態１２１～１４７、１５０、及び１５４～１５６のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１５９．Ｒ２が、
Figure 0007247102000119
である、実施形態１２１～１４７、１５１、及び１５４～１５６のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１６０．Ｒ２が、
Figure 0007247102000120
から選択される、実施形態１２１～１４６、１５１、１５４及び１５５のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１６１．Ｒ２が、
Figure 0007247102000121
である、実施形態１２１～１４６、１５１、１５３～１５５及び１６０のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１６２．Ｒ２が、
Figure 0007247102000122
である、実施形態１２１～１３６、１５１、１５３～１５５及び１６０のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１６３．Ｒ２が、
Figure 0007247102000123
である、実施形態１２１～１３６、１５１、１５２、１５４、１５５、及び１６０のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１６４．Ｒ２が、ｎ－プロピル、イソプロピル及びｔ－ブチルから選択される、実施形態１２１～１３３、１３５～１５０、及び１５５のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１６５．Ｒ２がｎ－プロピルである、実施形態１２１～１４３、１４５～１５０、１５５、及び１６４のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１６６．Ｒ２がイソプロピルである、実施形態１２１～１５０、１５５、及び１６４のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１６７．Ｒ２がｔ－ブチルである、実施形態１２１～１５０、１５５、及び１６４のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１６８．Ｒ１及びＲ２が、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成し、ここでＲ１及びＲ２によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及びＲ０から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されている、実施形態１２１～１３９のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１６９．Ｒ１及びＲ２が、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい５員又は６員ヘテロシクロアルキルを形成し、ここでＲ１及びＲ２によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される５員又は６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はヒドロキシル、Ｃ１～４アルキル及びＣ１～４ハロアルキルから独立して選択される１～３個の置換基によって置換されている、実施形態１２１～１３９、及び１６８のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１７０．Ｒ１及びＲ２が、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ及びＯから選択される追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい６員ヘテロシクロアルキルを形成し、ここでＲ１及びＲ２によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はヒドロキシル、Ｃ１～６アルキル及びＣ１～６ハロアルキルから独立して選択される１～３個の置換基によって置換されている、実施形態１２１～１３９、１６８、及び１６９のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１７１．Ｒ１及びＲ２が、両方が結合している窒素原子と一緒になって、ピペリジニル、ピペラジニル及びモルホリニルから選択される６員ヘテロシクロアルキルを形成し、ここでピペリジニル、ピペラジニル又はモルホリニルは、非置換であるか、又はヒドロキシル及びＣ１～６アルキルから独立して選択される１～３個の置換基によって置換されている、実施形態１２１～１３９、及び１６８～１７０のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１７２．Ｒ３が、水素、クロロ及びメチルから選択される、実施形態１２１～１７１のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１７３．Ｒ３が水素である、実施形態１２１～１７２のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１７４．Ｒ５が、水素、及びクロロから選択される、実施形態１２１～１７３のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１７５．Ｒ５が水素である、実施形態１２１～１７４のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１７６．式ＶＩである、実施形態１２１に係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
Figure 0007247102000124
［式中
環Ａは
Figure 0007247102000125
［各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及び－ＮＨ２から選択される置換基によって置換されている］であり；
Ｒ１は水素又は非置換Ｃ１～６アルキルであり；及び
Ｒ２は、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）ジ－Ｃ１～６アルキルアミノ；
（ｉｉ）Ｃ１～６ハロアルキル；
（ｉｉｉ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］
から選択される置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；又は
（ｂ）非置換であるか、又はＣ１～６アルキル若しくはＣ１～６ハロアルキルによって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル
であり；
又はＲ１及びＲ２は、それらが結合する窒素と一緒になって６員ヘテロシクロアルキルを形成してもよく、これは非置換であるか、又はＣ１～６アルキル及びヒドロキシルから選択される置換されている１～３個によって置換されている。］
実施形態１７７．環Ａが、
Figure 0007247102000126
である、実施形態１７６に係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１７８．Ｒ２が、エチル、
Figure 0007247102000127
から選択される、実施形態１７６又は実施形態１７７に係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１７９．Ｒ２がｔｅｒｔ－ブチルである、実施形態１７６～１７８のいずれか１つに係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１８０．Ｎ－（４－メトキシ－２－メチルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－［２－メチル－１－（プロパン－２－イルオキシ）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－［（２Ｓ）－ブタン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－［（２Ｒ）－ブタン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－（１－メトキシ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２，２－ジメチル－１－［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］ピペリジン－４－オール；２，４－ジメチル－４－｛［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール；Ｎ－シクロペンチル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；ジメチル（３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝ブチル）アミン；Ｎ，Ｎ－ジエチル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－メチル－１－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）プロパン－２－オール；Ｎ－プロピル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－（２－アミノピリミジン－４－イル）－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－｛１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－４－イル｝－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリダジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－（２－アミノピリジン－４－イル）－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ，Ｎ－ジエチル－２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；（３－｛［２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝－３－メチルブチル）ジメチルアミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－４－（ピペリジン－１－イル）－１，７－ナフチリジン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－４－（モルホリン－４－イル）－１，７－ナフチリジン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（２－メチルブタン－２－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－｛［２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝－２－メチルプロパン－１－オール；１－［２－（３－クロロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］－２，２－ジメチルピペリジン－４－オール；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－［２－メチル－１－（モルホリン－４－イル）プロパン－２－イル］－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロブチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－クロロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；及び２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ，Ｎ－ジエチル－１，７－ナフチリジン－４－アミンから選択される、実施形態１２１に係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１８０ａ．Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミンである、実施形態１２１に係る式ＩＩの化合物、又はその塩。
実施形態１８１．眼疾患又は眼障害における使用のための、式Ａ１の化合物、又はその塩。
Figure 0007247102000128
［式中
Ｘ１及びＸ２は、各々独立してＣＨ又はＮであり；
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、５員ヘテロアリールの連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000129
［式中、「＊」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、Ｃ３～６シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されており；
Ｒ０はヒドロキシル又はＣ１～６アルコキシであり；
Ｒ１は水素又はＣ１～６アルキルであり；
Ｒ２は、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）ハロゲン；
（ｉｉ）シアノ；
（ｉｉｉ）オキソ；
（ｉｖ）Ｃ２アルケニル；
（ｖ）Ｃ２アルキニル；
（ｖｉ）Ｃ１～６ハロアルキル；
（ｖｉｉ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖｉｉｉ）－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｉｘ）－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０又は－ＮＨ－Ｃ１～６アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ０である］；
（ｘ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｘｉ）各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｒ０、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル又は多環式Ｃ７～１０シクロアルキル；
（ｘｉｉ）Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
（ｘｉｉｉ）非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
（ｘｉｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
（ｘｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
（ｂ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｃ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル及びＲ０から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｄ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｅ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；
又はＲ１及びＲ２は、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成することができ、ここでＲ１及びＲ２によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及びＲ０から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されており；
Ｒ３は、水素、ハロゲン及びＣ１～６アルキルから選択され；及び
Ｒ５は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ３～８アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ０によって置換されている。］
実施形態１８２．式Ｉ～ＩＶから選択される式である、実施形態１８１に係る眼疾患又は眼障害における使用のための、式Ａ１の化合物又はその塩。
Figure 0007247102000130
実施形態１８３．化合物が、３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン－５－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン；Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；及びＮ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミンから選択される、実施形態１８１に係る眼疾患又は眼障害における使用のための、式Ａ１の化合物又はその塩。
実施形態１８４．実施形態１～１８０のいずれか１つに係る、実施形態１８１に係る眼疾患又は眼障害における使用のための、式Ａ１の化合物又はその塩。
実施形態１８５．拡大輪部幹細胞集団を好ましくはエキソビボで作成する方法における式Ａ１の化合物、又はその塩の使用。
Figure 0007247102000131
［式中
Ｘ１及びＸ２は、各々独立してＣＨ又はＮであり；
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、５員ヘテロアリールの連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000132
［式中、「＊」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、Ｃ３～６シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されており；
Ｒ０はヒドロキシル又はＣ１～６アルコキシであり；
Ｒ１は水素又はＣ１～６アルキルであり；
Ｒ２は、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）ハロゲン；
（ｉｉ）シアノ；
（ｉｉｉ）オキソ；
（ｉｖ）Ｃ２アルケニル；
（ｖ）Ｃ２アルキニル；
（ｖｉ）Ｃ１～６ハロアルキル；
（ｖｉｉ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖｉｉｉ）－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｉｘ）－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０又は－ＮＨ－Ｃ１～６アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ０である］；
（ｘ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｘｉ）各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｒ０、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル又は多環式Ｃ７～１０シクロアルキル；
（ｘｉｉ）Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
（ｘｉｉｉ）非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
（ｘｉｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
（ｘｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
（ｂ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｃ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル及びＲ０から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｄ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｅ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；
又はＲ１及びＲ２は、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成することができ、ここでＲ１及びＲ２によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及びＲ０から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されており；
Ｒ３は、水素、ハロゲン及びＣ１～６アルキルから選択され；及び
Ｒ５は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ３～８アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ０によって置換されている。］
実施形態１８６．拡大角膜内皮細胞集団を好ましくはエキソビボで作成する方法における式Ａ１の化合物、又はその塩の使用。
Figure 0007247102000133
［式中
Ｘ１及びＸ２は、各々独立してＣＨ又はＮであり；
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、５員ヘテロアリールの連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000134
［式中、「＊」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、Ｃ３～６シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されており；
Ｒ０はヒドロキシル又はＣ１～６アルコキシであり；
Ｒ１は水素又はＣ１～６アルキルであり；
Ｒ２は、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）ハロゲン；
（ｉｉ）シアノ；
（ｉｉｉ）オキソ；
（ｉｖ）Ｃ２アルケニル；
（ｖ）Ｃ２アルキニル；
（ｖｉ）Ｃ１～６ハロアルキル；
（ｖｉｉ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖｉｉｉ）－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｉｘ）－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０又は－ＮＨ－Ｃ１～６アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ０である］；
（ｘ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｘｉ）各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｒ０、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル又は多環式Ｃ７～１０シクロアルキル；
（ｘｉｉ）Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
（ｘｉｉｉ）非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
（ｘｉｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
（ｘｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
（ｂ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｃ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル及びＲ０から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｄ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｅ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；
又はＲ１及びＲ２は、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成することができ、ここでＲ１及びＲ２によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及びＲ０から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されており；
Ｒ３は、水素、ハロゲン及びＣ１～６アルキルから選択され；及び
Ｒ５は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ３～８アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ０によって置換されている。］
実施形態１８７．化合物が式Ｉ～ＩＶから選択される式である、実施形態１８５又は１８６に係る、式Ａ１の化合物又はその塩の使用。
Figure 0007247102000135
実施形態１８８．化合物が、３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン－５－アミン；及び２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジンから選択される、実施形態１８５又は１８６に係る、式Ａ１の化合物又はその塩の使用。
実施形態１８８Ａ．化合物が、Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－１－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）プロパン－２－オール；２，４－ジメチル－４－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロブチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン；２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１－オール；２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン；Ｎ－シクロペンチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－（３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）エタン－１－オール；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン－５－アミン；（１Ｓ，２Ｓ）－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロペンタン－１－オール；Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン及びＮ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｒ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミンから選択される、実施形態１８５又は１８６に係る、式ＡＩの化合物、又はその塩の使用。
実施形態１８８Ｂ．化合物が、Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；及びＮ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミンから選択される、実施形態１８５又は１８６に係る、式ＡＩの化合物、又はその塩の使用。
実施形態１８８Ｃ．化合物が化合物がＮ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミンである、実施形態１８５又は１８６に係る、式ＡＩの化合物、又はその塩の使用。
実施形態１８９．化合物が実施形態１～１８０のいずれか１つに係る、実施形態１８５又は１８６に係る、式Ａ１の化合物又はその塩の使用。
実施形態１９０．細胞集団をそれを必要としている対象に投与することを含む眼疾患又は眼障害の治療方法であって、細胞集団が、式Ａ１の化合物、又はその塩の存在下で成長させたものである、方法。
Figure 0007247102000136
［式中
Ｘ１及びＸ２は、各々独立してＣＨ又はＮであり；
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、５員ヘテロアリールの連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000137
［式中、「＊」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、Ｃ３～６シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されており；
Ｒ０はヒドロキシル又はＣ１～６アルコキシであり；
Ｒ１は水素又はＣ１～６アルキルであり；
Ｒ２は、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）ハロゲン；
（ｉｉ）シアノ；
（ｉｉｉ）オキソ；
（ｉｖ）Ｃ２アルケニル；
（ｖ）Ｃ２アルキニル；
（ｖｉ）Ｃ１～６ハロアルキル；
（ｖｉｉ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖｉｉｉ）－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｉｘ）－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０又は－ＮＨ－Ｃ１～６アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ０である］；
（ｘ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｘｉ）各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｒ０、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル又は多環式Ｃ７～１０シクロアルキル；
（ｘｉｉ）Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
（ｘｉｉｉ）非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
（ｘｉｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
（ｘｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
（ｂ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｃ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル及びＲ０から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｄ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｅ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；
又はＲ１及びＲ２は、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成することができ、ここでＲ１及びＲ２によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及びＲ０から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されており；
Ｒ３は、水素、ハロゲン及びＣ１～６アルキルから選択され；及び
Ｒ５は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ３～８アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ０によって置換されている。］
実施形態１９０Ａ．輪部幹細胞集団をそれを必要としている対象に投与することを含む眼疾患又は眼障害の治療方法であって、前記集団が、式Ａ１の化合物、又はその塩の存在下で成長させたものである、方法。
Figure 0007247102000138
［式中
Ｘ１及びＸ２は、各々独立してＣＨ又はＮであり；
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、５員ヘテロアリールの連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000139
［式中、「＊」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、Ｃ３～６シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されており；
Ｒ０はヒドロキシル又はＣ１～６アルコキシであり；
Ｒ１は水素又はＣ１～６アルキルであり；
Ｒ２は、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）ハロゲン；
（ｉｉ）シアノ；
（ｉｉｉ）オキソ；
（ｉｖ）Ｃ２アルケニル；
（ｖ）Ｃ２アルキニル；
（ｖｉ）Ｃ１～６ハロアルキル；
（ｖｉｉ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖｉｉｉ）－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｉｘ）－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０又は－ＮＨ－Ｃ１～６アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ０である］；
（ｘ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｘｉ）各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｒ０、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル又は多環式Ｃ７～１０シクロアルキル；
（ｘｉｉ）Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
（ｘｉｉｉ）非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
（ｘｉｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
（ｘｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
（ｂ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｃ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル及びＲ０から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｄ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｅ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；
又はＲ１及びＲ２は、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成することができ、ここでＲ１及びＲ２によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及びＲ０から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されており；
Ｒ３は、水素、ハロゲン及びＣ１～６アルキルから選択され；及び
Ｒ５は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ３～８アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ０によって置換されている。］
実施形態１９１．角膜内皮細胞集団をそれを必要としている対象に投与することを含む眼疾患又は眼障害の治療方法であって、集団が、式Ａ１の化合物、又はその塩の存在下で成長させたものである、方法。
Figure 0007247102000140
［式中
Ｘ１及びＸ２は、各々独立してＣＨ又はＮであり；
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、５員ヘテロアリールの連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000141
［式中、「＊」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、Ｃ３～６シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されており；
Ｒ０はヒドロキシル又はＣ１～６アルコキシであり；
Ｒ１は水素又はＣ１～６アルキルであり；
Ｒ２は、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）ハロゲン；
（ｉｉ）シアノ；
（ｉｉｉ）オキソ；
（ｉｖ）Ｃ２アルケニル；
（ｖ）Ｃ２アルキニル；
（ｖｉ）Ｃ１～６ハロアルキル；
（ｖｉｉ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖｉｉｉ）－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｉｘ）－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０又は－ＮＨ－Ｃ１～６アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ０である］；
（ｘ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｘｉ）各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｒ０、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル又は多環式Ｃ７～１０シクロアルキル；
（ｘｉｉ）Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
（ｘｉｉｉ）非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
（ｘｉｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
（ｘｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
（ｂ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｃ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル及びＲ０から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｄ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｅ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；
又はＲ１及びＲ２は、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成することができ、ここでＲ１及びＲ２によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及びＲ０から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されており；
Ｒ３は、水素、ハロゲン及びＣ１～６アルキルから選択され；及び
Ｒ５は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ３～８アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ０によって置換されている。］
実施形態１９２．化合物が式Ｉ～ＩＶから選択される式である、実施形態１９０又は１９１に係る眼疾患又は眼障害の治療方法。
Figure 0007247102000142
実施形態１９３．化合物が、３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン－５－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン；Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；及びＮ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミンから選択される、実施形態１９０又は１９１に係る眼疾患又は眼障害の治療方法。
実施形態１９３Ａ．化合物が、Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－１－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）プロパン－２－オール；２，４－ジメチル－４－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロブチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン；２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１－オール；２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン；Ｎ－シクロペンチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－（３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）エタン－１－オール；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン－５－アミン；（１Ｓ，２Ｓ）－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロペンタン－１－オール；Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン及びＮ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｒ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミンから選択される、実施形態１９０又は１９１に係る眼疾患又は眼障害の治療方法。
実施形態１９３Ｂ．化合物が、Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；及びＮ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミンから選択される、実施形態１９０又は１９１に係る眼疾患又は眼障害の治療方法。
実施形態１９３Ｃ．化合物がＮ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミンである、実施形態１９０又は１９１に係る眼疾患又は眼障害の治療方法。
実施形態１９４．化合物が実施形態１～１８０のいずれか１つに係る、実施形態１９０又は１９１に係る細胞増殖の促進方法。
実施形態１９５．眼疾患又は眼障害用の医薬品の製造における、式Ａ１の化合物、又はその塩の使用。
Figure 0007247102000143
［式中
Ｘ１及びＸ２は、各々独立してＣＨ又はＮであり；
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、５員ヘテロアリールの連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000144
［式中、「＊」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、Ｃ３～６シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されており；
Ｒ０はヒドロキシル又はＣ１～６アルコキシであり；
Ｒ１は水素又はＣ１～６アルキルであり；
Ｒ２は、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）ハロゲン；
（ｉｉ）シアノ；
（ｉｉｉ）オキソ；
（ｉｖ）Ｃ２アルケニル；
（ｖ）Ｃ２アルキニル；
（ｖｉ）Ｃ１～６ハロアルキル；
（ｖｉｉ）－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｖｉｉｉ）－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
（ｉｘ）－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０又は－ＮＨ－Ｃ１～６アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ０である］；
（ｘ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｘｉ）各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｒ０、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル又は多環式Ｃ７～１０シクロアルキル；
（ｘｉｉ）Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
（ｘｉｉｉ）非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
（ｘｉｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
（ｘｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
（ｂ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｃ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル及びＲ０から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｄ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｅ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；
又はＲ１及びＲ２は、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成することができ、ここでＲ１及びＲ２によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及びＲ０から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されており；
Ｒ３は、水素、ハロゲン及びＣ１～６アルキルから選択され；及び
Ｒ５は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ３～８アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ０によって置換されている。］
実施形態１９６．化合物が式Ｉ～ＩＶから選択される式である、実施形態１９５に係る眼疾患又は眼障害用の医薬品の製造における、式Ａ１の化合物又はその塩の使用。
Figure 0007247102000145
実施形態１９７．化合物が、３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン－５－アミン；及び２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジンから選択される、実施形態１９５に係る眼疾患又は眼障害用の医薬品の製造における、式Ａ１の化合物又はその塩の使用。
実施形態１９７Ａ．化合物が、Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－１－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）プロパン－２－オール；２，４－ジメチル－４－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロブチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン；２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１－オール；２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン；Ｎ－シクロペンチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－（３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）エタン－１－オール；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン－５－アミン；（１Ｓ，２Ｓ）－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロペンタン－１－オール；Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン及びＮ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｒ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミンから選択される、実施形態１９５に係る眼疾患又は眼障害用の医薬品の製造における式ＡＩの化合物、又はその塩の使用。
実施形態１９７Ｂ．化合物が、Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；及びＮ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミンから選択される、実施形態１９５に係る眼疾患又は眼障害用の医薬品の製造における、式ＡＩの化合物、又はその塩の使用。
実施形態１９７Ｃ．化合物がＮ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミンである、実施形態１９５に係る眼疾患又は眼障害用の医薬品の製造における、式ＡＩの化合物、又はその塩の使用。
実施形態１９８．化合物が実施形態１～１８０のいずれか１つに係る、実施形態１９５に係る眼疾患又は眼障害用の医薬品の製造における、式Ａ１の化合物又はその塩の使用。
実施形態１９９．肝再生及び肝再成長の促進における使用のための、式Ａ１の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩。
Figure 0007247102000146
［式中
Ｘ１及びＸ２は、各々独立してＣＨ又はＮであり；
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、５員ヘテロアリールの連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000147
［式中、「＊」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、Ｃ３～６シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されており；
Ｒ０はヒドロキシル又はＣ１～６アルコキシであり；
Ｒ１は水素又はＣ１～６アルキルであり；
Ｒ２は、
（ａ）非置換であるか、又は
ハロゲン；
シアノ；
オキソ；
Ｃ２アルケニル；
Ｃ２アルキニル；
Ｃ１～６ハロアルキル；
－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０又は－ＮＨ－Ｃ１～６アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ０である］；
－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｒ０、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル又は多環式Ｃ７～１０シクロアルキル；
Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
（ｂ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｃ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル及びＲ０から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｄ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｅ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；
又はＲ１及びＲ２は、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成することができ、ここでＲ１及びＲ２によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及びＲ０から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されており；
Ｒ３は、水素、ハロゲン及びＣ１～６アルキルから選択され；及び
Ｒ５は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ３～８アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ０によって置換されている。］
実施形態２００．式Ｉ～ＩＶから選択される式である、実施形態１９９に係る肝再生及び肝再成長の促進における使用のための、式Ａ１の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
Figure 0007247102000148
実施形態２０１．２－メチル－１－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）プロパン－２－オール；
ジメチル（３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブチル）アミン；
Ｎ－（１－アミノ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
８－クロロ－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
８－メチル－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－５－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
５－クロロ－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；
２－（２－アミノピリミジン－４－イル）－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－１，７－ナフチリジン－４－アミン；
Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチル－Ｎ３－（２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；
Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチル－Ｎ３－（２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；
２，２－ジメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；
２，３－ジメチル－Ｎ２－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－２，３－ジアミン；
Ｎ１，Ｎ１，２，２－テトラメチル－Ｎ３－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；
４－（４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル）－１，２，５－オキサジアゾール－３－アミン；及び
Ｎ２，Ｎ２，２－トリメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，２－ジアミンから選択される、実施形態１９９に係る肝再生及び肝再成長の促進における使用のための、式Ａ１の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
実施形態２０２．実施形態１～１８０のいずれか１つに係る、実施形態１９９に係る肝再生及び肝再成長の促進における使用のための、式Ａ１の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
実施形態２０３．肝再生及び肝再成長を促進するための、式Ａ１の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
Figure 0007247102000149
［式中
Ｘ１及びＸ２は、各々独立してＣＨ又はＮであり；
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、５員ヘテロアリールの連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000150
［式中、「＊」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、Ｃ３～６シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されており；
Ｒ０はヒドロキシル又はＣ１～６アルコキシであり；
Ｒ１は水素又はＣ１～６アルキルであり；
Ｒ２は、
（ａ）非置換であるか、又は
ハロゲン；
シアノ；
オキソ；
Ｃ２アルケニル；
Ｃ２アルキニル；
Ｃ１～６ハロアルキル；
－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０又は－ＮＨ－Ｃ１～６アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ０である］；
－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｒ０、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル又は多環式Ｃ７～１０シクロアルキル；
Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
（ｂ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｃ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル及びＲ０から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｄ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｅ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；
又はＲ１及びＲ２は、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成することができ、ここでＲ１及びＲ２によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及びＲ０から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されており；
Ｒ３は、水素、ハロゲン及びＣ１～６アルキルから選択され；及び
Ｒ５は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ３～８アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ０によって置換されている。］
実施形態２０４．化合物が式Ｉ～ＩＶから選択される式である、実施形態２０３に係る肝再生及び肝再成長を促進するための、式Ａ１の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
Figure 0007247102000151
実施形態２０５．化合物が、
２－メチル－１－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）プロパン－２－オール；
ジメチル（３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブチル）アミン；
Ｎ－（１－アミノ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
８－クロロ－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
８－メチル－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－５－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
５－クロロ－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；
２－（２－アミノピリミジン－４－イル）－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－１，７－ナフチリジン－４－アミン；
Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチル－Ｎ３－（２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；
Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチル－Ｎ３－（２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；
２，２－ジメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；
２，３－ジメチル－Ｎ２－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－２，３－ジアミン；
Ｎ１，Ｎ１，２，２－テトラメチル－Ｎ３－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；
４－（４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル）－１，２，５－オキサジアゾール－３－アミン；及び
Ｎ２，Ｎ２，２－トリメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，２－ジアミンから選択される、実施形態２０３に係る肝再生及び肝再成長を促進するための、式Ａ１の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
実施形態２０６．化合物が実施形態１～１８０のいずれか１つに係る、実施形態２０３に係る肝再生及び肝再成長を促進するための、式Ａ１の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
実施形態２０７．式Ａ１の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む、肝再生及び肝再成長の促進方法。
Figure 0007247102000152
［式中
Ｘ１及びＸ２は、各々独立してＣＨ又はＮであり；
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、５員ヘテロアリールの連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000153
［式中、「＊」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、Ｃ３～６シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されており；
Ｒ０はヒドロキシル又はＣ１～６アルコキシであり；
Ｒ１は水素又はＣ１～６アルキルであり；
Ｒ２は、
（ａ）非置換であるか、又は
ハロゲン；
シアノ；
オキソ；
Ｃ２アルケニル；
Ｃ２アルキニル；
Ｃ１～６ハロアルキル；
－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０又は－ＮＨ－Ｃ１～６アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ０である］；
－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｒ０、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル又は多環式Ｃ７～１０シクロアルキル；
Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
（ｂ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｃ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル及びＲ０から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｄ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｅ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；
又はＲ１及びＲ２は、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成することができ、ここでＲ１及びＲ２によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及びＲ０から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されており；
Ｒ３は、水素、ハロゲン及びＣ１～６アルキルから選択され；及び
Ｒ５は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ３～８アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ０によって置換されている。］
実施形態２０８．化合物が式Ｉ～ＩＶから選択される式である、実施形態２０７に係る、肝再生及び肝再成長の促進方法。
Figure 0007247102000154
実施形態２０９．化合物が、
２－メチル－１－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）プロパン－２－オール；
ジメチル（３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブチル）アミン；
Ｎ－（１－アミノ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
８－クロロ－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
８－メチル－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－５－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
５－クロロ－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；
２－（２－アミノピリミジン－４－イル）－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－１，７－ナフチリジン－４－アミン；
Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチル－Ｎ３－（２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；
Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチル－Ｎ３－（２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；
２，２－ジメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；
２，３－ジメチル－Ｎ２－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－２，３－ジアミン；
Ｎ１，Ｎ１，２，２－テトラメチル－Ｎ３－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；
４－（４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル）－１，２，５－オキサジアゾール－３－アミン；及び
Ｎ２，Ｎ２，２－トリメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，２－ジアミンから選択される、実施形態２０７に係る肝再生及び肝再成長の促進方法。
実施形態２１０．化合物が実施形態１～１８０のいずれか１つに係る、実施形態２０７に係る肝再生及び肝再成長の促進方法。
実施形態２１１．肝再生及び肝再成長の促進用医薬品の製造における、式Ａ１の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
Figure 0007247102000155
［式中
Ｘ１及びＸ２は、各々独立してＣＨ又はＮであり；
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、５員ヘテロアリールの連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000156
［式中、「＊」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、Ｃ３～６シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されており；
Ｒ０はヒドロキシル又はＣ１～６アルコキシであり；
Ｒ１は水素又はＣ１～６アルキルであり；
Ｒ２は、
（ａ）非置換であるか、又は
ハロゲン；
シアノ；
オキソ；
Ｃ２アルケニル；
Ｃ２アルキニル；
Ｃ１～６ハロアルキル；
－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０又は－ＮＨ－Ｃ１～６アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ０である］；
－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｒ０、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル又は多環式Ｃ７～１０シクロアルキル；
Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
（ｂ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｃ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル及びＲ０から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｄ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｅ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；
又はＲ１及びＲ２は、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成することができ、ここでＲ１及びＲ２によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及びＲ０から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されており；
Ｒ３は、水素、ハロゲン及びＣ１～６アルキルから選択され；及び
Ｒ５は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ３～８アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ０によって置換されている。］
実施形態２１２．化合物が式Ｉ～ＩＶから選択される式である、実施形態２１１に係る肝再生及び肝再成長用促進用医薬品の製造における、式Ａ１の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
Figure 0007247102000157
実施形態２１３．化合物が、
２－メチル－１－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）プロパン－２－オール；
ジメチル（３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブチル）アミン；
Ｎ－（１－アミノ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
８－クロロ－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
８－メチル－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－５－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
５－クロロ－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；
２－（２－アミノピリミジン－４－イル）－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－１，７－ナフチリジン－４－アミン；
Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチル－Ｎ３－（２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；
Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチル－Ｎ３－（２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；
２，２－ジメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；
２，３－ジメチル－Ｎ２－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－２，３－ジアミン；
Ｎ１，Ｎ１，２，２－テトラメチル－Ｎ３－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；
４－（４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル）－１，２，５－オキサジアゾール－３－アミン；及び
Ｎ２，Ｎ２，２－トリメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，２－ジアミンから選択される、実施形態２１１に係る肝再生及び肝再成長の促進用医薬品の製造における、式Ａ１の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
実施形態２１４．化合物が実施形態１～１８０のいずれか１つに係る、実施形態２１１に係る肝再生及び肝再成長の促進用医薬品の製造における、式Ａ１の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
別の実施形態において、本発明は、本発明の化合物のうちの少なくとも１つ又はその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物に関する。
別の実施形態において、本発明は、本発明の化合物のうちの少なくとも１つ又はその薬学的に許容可能な塩と、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体、希釈剤又は賦形剤とを含む医薬組成物に関する。
別の実施形態において、本発明は、医薬品としての使用のための本発明の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又は医薬組成物に関する。
別の実施形態において、本発明は、式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を含む、肝再生及び肝再成長の促進における使用のための医薬組成物に関する。
別の実施形態において、本発明はまた、肝再生及び肝再成長の促進用医薬品の製造のための、単独での、又は任意選択で、式Ａ１又はその下位式の別の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩及び／又は少なくとも１つの他のタイプの治療剤と併用した式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の使用にも関する。
別の実施形態において、本発明は、式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む肝再生及び肝再成長の促進方法に関する。
別の実施形態において、本発明は、肝再生及び肝再成長の促進方法であって、特にマージナルグラフトの移植後の不十分な肝再成長の治療のための；広範囲肝切除術後の残存肝腫瘤の再成長増進を支援するための；ウイルス性肝炎、薬物誘発性肝傷害、自己免疫性肝炎、虚血性及びうっ血性肝疾患からの急性肝不全後の患者の肝臓の再生のための；及び非アルコール性脂肪性肝炎、アルコール性脂肪性肝炎、慢性Ｂ型及びＣ型ウイルス性肝炎、ヘモクロマトーシス、α－１アンチトリプシン欠乏症、ウィルソン病及び薬物誘発性肝線維症からの慢性肝傷害及び基礎肝線維症を有する患者の治療のための、それにより再生能を亢進させるとともに線維症消散を加速させる方法に関する。
別の実施形態において、本発明は、ＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２キナーゼ活性の阻害能を有する薬剤の治療有効量をそれを必要としている対象に投与すること；それによりＹＡＰ転位を誘導し、細胞増殖のため下流遺伝子発現をドライブすることを含む肝再生及び肝再成長の促進方法に関する。更なる実施形態において、薬剤は式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩である。
別の実施形態において、本発明は、ＬＡＴＳキナーゼ活性の阻害能を有する薬剤の治療有効量をそれを必要としている対象に投与すること；それによりＹＡＰ転位を誘導し、細胞増殖のため下流遺伝子発現をドライブすることを含む肝再生及び肝再成長の促進方法に関する。好ましい実施形態において、薬剤は、実施形態１～１８０のいずれか１つに係る化合物である。
別の実施形態において、本発明は、肝細胞集団のエキソビボ拡大方法に関し、この方法は、実施形態１～１８０のいずれか１つに係る化合物を肝細胞に接触させることを含む。好ましい実施形態において、本方法は、前記肝細胞を遺伝子編集することを更に含む。好ましくは前記遺伝子編集は、宿主対移植片免疫応答に関与する遺伝子を標的にする。
別の実施形態において、本発明は、肝前駆細胞集団のエキソビボ拡大方法に関し、この方法は、実施形態１～１８０のいずれか１つに係る化合物を肝前駆細胞に接触させることを含む。好ましい実施形態において、本方法は、前記肝前駆細胞を遺伝子編集することを更に含む。好ましくは前記遺伝子編集は、宿主対移植片免疫応答に関与する遺伝子を標的にする。
別の実施形態において、本発明は、実施形態１～１８０のいずれか１つに係る化合物を肝細胞に接触させることによって入手された肝細胞集団に関する。好ましい実施形態において、実施形態１～１８０のいずれか１つに係る化合物を肝細胞に接触させることによって入手された肝細胞は遺伝子編集されている。好ましくは前記遺伝子編集は、宿主対移植片免疫応答に関与する遺伝子を標的とする。
別の実施形態において、本発明は、実施形態１～１８０のいずれか１つに係る化合物を肝前駆細胞に接触させることによって入手された肝前駆細胞集団に関する。好ましい実施形態において、実施形態１～１８０のいずれか１つに係る化合物を肝前駆細胞に接触させることによって入手された肝前駆細胞は遺伝子編集されている。好ましくは前記遺伝子編集は、宿主対移植片免疫応答に関与する遺伝子を標的とする。
実施形態２１５．創傷治癒の促進における使用のための、式Ａ１の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩。
Figure 0007247102000158
［式中
Ｘ１及びＸ２は、各々独立してＣＨ又はＮであり；
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、５員ヘテロアリールの連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000159
［式中、「＊」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、Ｃ３～６シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されており；
Ｒ０はヒドロキシル又はＣ１～６アルコキシであり；
Ｒ１は水素又はＣ１～６アルキルであり；
Ｒ２は、
（ａ）非置換であるか、又は
ハロゲン；
シアノ；
オキソ；
Ｃ２アルケニル；
Ｃ２アルキニル；
Ｃ１～６ハロアルキル；
－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０又は－ＮＨ－Ｃ１～６アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ０である］；
－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｒ０、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル又は多環式Ｃ７～１０シクロアルキル；
Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
（ｂ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｃ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル及びＲ０から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｄ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｅ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；
又はＲ１及びＲ２は、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成することができ、ここでＲ１及びＲ２によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及びＲ０から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されており；
Ｒ３は、水素、ハロゲン及びＣ１～６アルキルから選択され；及び
Ｒ５は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ３～８アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ０によって置換されている。］
実施形態２１６．式Ｉ～ＩＶから選択される式である、実施形態２１５に係る創傷治癒の促進における使用のための、式Ａ１の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
Figure 0007247102000160
実施形態２１７．３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン－５－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン；Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；及びＮ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミンから選択される、実施形態２１５に係る創傷治癒の促進における使用のための、式Ａ１の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
実施形態２１８．実施形態１～１８０のいずれか１つに係る、実施形態２１５に係る創傷治癒の促進における使用のための、式Ａ１の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
実施形態２１９．創傷治癒の促進のための、式Ａ１の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
Figure 0007247102000161
［式中
Ｘ１及びＸ２は、各々独立してＣＨ又はＮであり；
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、５員ヘテロアリールの連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000162
［式中、「＊」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、Ｃ３～６シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されており；
Ｒ０はヒドロキシル又はＣ１～６アルコキシであり；
Ｒ１は水素又はＣ１～６アルキルであり；
Ｒ２は、
（ａ）非置換であるか、又は
ハロゲン；
シアノ；
オキソ；
Ｃ２アルケニル；
Ｃ２アルキニル；
Ｃ１～６ハロアルキル；
－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０又は－ＮＨ－Ｃ１～６アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ０である］；
－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｒ０、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル又は多環式Ｃ７～１０シクロアルキル；
Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
（ｂ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｃ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル及びＲ０から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｄ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｅ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；
又はＲ１及びＲ２は、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成することができ、ここでＲ１及びＲ２によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及びＲ０から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されており；
Ｒ３は、水素、ハロゲン及びＣ１～６アルキルから選択され；及び
Ｒ５は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ３～８アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ０によって置換されている。］
実施形態２２０．化合物が式Ｉ～ＩＶから選択される式である、実施形態２１９に係る創傷治癒の促進のための、式Ａ１の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
Figure 0007247102000163
実施形態２２１．化合物が、３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン－５－アミン；及び２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジンから選択される、実施形態２１９に係る創傷治癒の促進のための、式Ａ１の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
実施形態２２２．化合物が実施形態１～１８０のいずれか１つに係る、実施形態２１９に係る創傷治癒の促進のための、式Ａ１の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
実施形態２２３．式Ａ１の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む、創傷治癒の促進方法。
Figure 0007247102000164
［式中
Ｘ１及びＸ２は、各々独立してＣＨ又はＮであり；
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、５員ヘテロアリールの連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000165
［式中、「＊」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、Ｃ３～６シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されており；
Ｒ０はヒドロキシル又はＣ１～６アルコキシであり；
Ｒ１は水素又はＣ１～６アルキルであり；
Ｒ２は、
（ａ）非置換であるか、又は
ハロゲン；
シアノ；
オキソ；
Ｃ２アルケニル；
Ｃ２アルキニル；
Ｃ１～６ハロアルキル；
－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０又は－ＮＨ－Ｃ１～６アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ０である］；
－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｒ０、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル又は多環式Ｃ７～１０シクロアルキル；
Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
（ｂ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｃ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル及びＲ０から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｄ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｅ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；
又はＲ１及びＲ２は、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成することができ、ここでＲ１及びＲ２によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及びＲ０から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されており；
Ｒ３は、水素、ハロゲン及びＣ１～６アルキルから選択され；及び
Ｒ５は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ３～８アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ０によって置換されている。］
実施形態２２４．化合物が式Ｉ～ＩＶから選択される式である、実施形態２２３に係る、創傷治癒の促進方法。
Figure 0007247102000166
実施形態２２５．化合物が、３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン－５－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン；Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；及びＮ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミンから選択される、実施形態２２３に係る創傷治癒の促進方法。
実施形態２２６．化合物が実施形態１～１８０のいずれか１つに係る、実施形態２２３に係る創傷治癒の促進方法。
実施形態２２７．創傷治癒の促進用医薬品の製造における、式Ａ１の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
Figure 0007247102000167
［式中
Ｘ１及びＸ２は、各々独立してＣＨ又はＮであり；
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、５員ヘテロアリールの連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000168
［式中、「＊」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、Ｃ３～６シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されており；
Ｒ０はヒドロキシル又はＣ１～６アルコキシであり；
Ｒ１は水素又はＣ１～６アルキルであり；
Ｒ２は、
（ａ）非置換であるか、又は
ハロゲン；
シアノ；
オキソ；
Ｃ２アルケニル；
Ｃ２アルキニル；
Ｃ１～６ハロアルキル；
－ＯＲ６［式中、Ｒ６は、水素、非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
－ＮＲ７ａＲ７ｂ［式中、Ｒ７ａは水素又はＣ１～６アルキルであり、及びＲ７ｂは、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから選択される］；
－Ｃ（Ｏ）Ｒ８［式中、Ｒ８はＲ０又は－ＮＨ－Ｃ１～６アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ０である］；
－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、ヒドロキシＣ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｒ０、－ＮＨ２、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ３～６シクロアルキル又は多環式Ｃ７～１０シクロアルキル；
Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ１～８アルキル；
（ｂ）－Ｓ（Ｏ）２Ｃ１～６アルキル；
（ｃ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル及びＲ０から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｄ）非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ３～６シクロアルキル；及び
（ｅ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ１～６ハロアルキル、Ｒ０、Ｃ１～６アルキルアミノ、ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ０、及び非置換であるか又はＲ０若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ０によって置換されているＣ１～６アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；
又はＲ１及びＲ２は、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成することができ、ここでＲ１及びＲ２によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、及びＲ０から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されており；
Ｒ３は、水素、ハロゲン及びＣ１～６アルキルから選択され；及び
Ｒ５は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ３～８アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ０によって置換されている。］
実施形態２２８．化合物が式Ｉ～ＩＶから選択される式である、実施形態２２７に係る創傷治癒の促進用医薬品の製造における、式Ａ１の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
Figure 0007247102000169
実施形態２２９．化合物が、３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン－５－アミン；及び２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジンから選択される、実施形態２２７に係る創傷治癒の促進用医薬品の製造における、式Ａ１の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
実施形態２３０．化合物が実施形態１～１８０のいずれか１つに係る、実施形態２２７に係る創傷治癒の促進用医薬品の製造における、式Ａ１の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
別の実施形態において、本発明は、式Ａ２又はその下位式の化合物のうちの少なくとも１つ又はその薬学的に許容可能な塩を含む組成物に関する。
別の実施形態において、本発明は、式Ａ２又はその下位式の化合物のうちの少なくとも１つ、又はその薬学的に許容可能な塩と、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体、希釈剤又は賦形剤とを含む医薬組成物に関する。
別の実施形態において、本発明は、医薬品としての使用のための式Ａ２若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又は医薬組成物に関する。
別の実施形態において、本発明は、式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を含む、肝再生及び肝再成長の促進における使用のための医薬組成物に関する。
別の実施形態において、本発明はまた、肝再生及び肝再成長の促進用医薬品の製造のための、単独での、又は任意選択で、式Ａ１又はその下位式の別の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩及び／又は少なくとも１つの他のタイプの治療剤と併用した式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の使用にも関する。
別の実施形態において、本発明は、式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む肝再生及び肝再成長の促進方法に関する。
別の実施形態において、本発明は、肝再生及び肝再成長の促進方法であって、特にマージナルグラフトの移植後の不十分な肝再成長の治療のための；広範囲肝切除術後の残存肝腫瘤の再成長増進を支援するための；ウイルス性肝炎、薬物誘発性肝傷害、自己免疫性肝炎、虚血性及びうっ血性肝疾患からの急性肝不全後の患者の肝臓の再生のための；及び非アルコール性脂肪性肝炎、アルコール性脂肪性肝炎、慢性Ｂ型及びＣ型ウイルス性肝炎、ヘモクロマトーシス、α－１アンチトリプシン欠乏症、ウィルソン病及び薬物誘発性肝線維症からの慢性肝傷害及び基礎肝線維症を有する患者の治療のための、それにより再生能を亢進させるとともに線維症消散を加速させる方法に関する。
別の実施形態において、本発明は、ＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２キナーゼ活性の阻害能を有する薬剤の治療有効量をそれを必要としている対象に投与すること；それによりＹＡＰ転位を誘導し、細胞増殖のため下流遺伝子発現をドライブすることを含む肝再生及び肝再成長の促進方法に関する。更なる実施形態において、薬剤は式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩である。
別の実施形態において、本発明は、式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を含む、創傷治癒の促進における使用のための医薬組成物に関する。
別の実施形態において、本発明はまた、創傷治癒の促進用医薬品の製造のための、単独での、又は任意選択で式Ａ１又はその下位式の別の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩及び／又は少なくとも１つの他のタイプの治療剤と併用した式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の使用にも関する。
別の実施形態において、本発明は、式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む創傷治癒の促進方法に関する。
別の実施形態において、本発明は、熱傷、急性及び慢性皮膚潰瘍の症状を治療又は改善することを含む創傷治癒の促進方法に関し、ここで皮膚潰瘍としては、限定はされないが、血管性、糖尿病性、及び褥瘡性潰瘍が挙げられる。
別の実施形態において、本発明は、ＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２キナーゼ活性の阻害能を有する薬剤の治療有効量をそれを必要としている対象に投与すること；それによりＹＡＰ転位を誘導し、細胞増殖のため下流遺伝子発現をドライブすることを含む創傷治癒の促進方法に関する。更なる実施形態において、薬剤は式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩である。
別の実施形態において、本発明は、細胞集団をそれを必要としている対象に投与することであって、集団が、ＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２キナーゼ活性の阻害能を有する薬剤の存在下で成長させたものであること；それによりＹＡＰ転位を誘導し、細胞増殖のため下流遺伝子発現をドライブすることを含む眼疾患又は眼障害の治療方法に関する。更なる実施形態において、薬剤は式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその塩である。
別の実施形態において、本発明は、輪部幹細胞集団をそれを必要としている対象に投与することであって、集団が、ＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２キナーゼ活性の阻害能を有する薬剤の存在下で成長させたものであること；それによりＹＡＰ転位を誘導し、細胞増殖のため下流遺伝子発現をドライブすることを含む眼疾患又は眼障害の治療方法に関する。更なる実施形態において、薬剤は式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその塩である。
別の実施形態において、本発明は、角膜内皮細胞集団をそれを必要としている対象に投与することであって、集団が、ＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２キナーゼ活性の阻害能を有する薬剤の存在下で成長させたものであること；それによりＹＡＰ転位を誘導し、細胞増殖のため下流遺伝子発現をドライブすることを含む眼疾患又は眼障害の治療方法に関する。更なる実施形態において、薬剤は式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩である。
別の実施形態において、本発明は、本発明の化合物の治療有効量を対象の眼に投与することを含む眼創傷治癒の促進方法に関する。一実施形態において、眼創傷は角膜創傷である。他の実施形態において、眼創傷は傷害又は手術創傷である。
定義
以上及び以下で使用される一般的用語は、好ましくは本発明の文脈の中では特に指示されない限り以下の意味を有し、ここでより一般的な用語は、それがどこで使用されるのであれ、互いに独立に、より具体的な定義に置き換えられてもよく、又はそのままであってもよく、そのようにして本発明のより詳細な実施形態を定義してもよい。
本明細書に記載される方法は全て、本明細書に特に指示されない限り、又は文脈上特に明確に否定されない限り、任意の好適な順序で実施することができる。本明細書に提供されるいかなる例、又は例示的文言（例えば「など」）の使用も、単に本発明を更に分かり易くすることが意図されるに過ぎず、本来特許請求されるはずの本発明の範囲を限定するものではない。
用語「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」及び本発明の文脈において（特に特許請求の範囲の文脈において）使用される類似の用語は、本明細書に特に指示されない限り、又は文脈上明確に否定されない限り、単数形及び複数形の両方を包含すると解釈されるべきである。
本明細書で使用されるとき、用語「Ｃ１～８アルキル」は、炭素及び水素原子のみからなる、不飽和を含まない、１～８個の炭素原子を有する直鎖又は分枝状炭化水素鎖ラジカルであって、単結合によって分子の残りの部分に結合するものを指す。用語「Ｃ１～４アルキル」は、これに従い解釈されるべきである。本明細書で使用されるとき、用語「ｎ－アルキル」は、本明細書に定義するとおりの直鎖（非分枝状）アルキルラジカルを指す。Ｃ１～８アルキルの例としては、限定はされないが、メチル、エチル、ｎ－プロピル、１－メチルエチル（イソプロピル）、ｎ－ブチル、ｎ－ペンチル、１，１－ジメチルエチル（ｔ－ブチル）、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２及び－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ３が挙げられる。
本明細書で使用されるとき、用語「Ｃ２～６アルケニル」は、炭素及び水素原子のみからなる、少なくとも１つの二重結合を含む、２～６個の炭素原子を有する直鎖又は分枝状炭化水素鎖ラジカル基であって、単結合によって分子の残りの部分に結合するものを指す。用語「Ｃ２～４アルケニル」は、これに従い解釈されるべきである。Ｃ２～６アルケニルの例としては、限定はされないが、エテニル、プロパ－１－エニル、ブタ－１－エニル、ペンタ－１－エニル、ペンタ－４－エニル及びペンタ－１，４－ジエニルが挙げられる。
用語「アルキレン」は二価のアルキル基を指す。例えば、用語「Ｃ１～６アルキレン」又は「Ｃ１～Ｃ６アルキレン」は、１～６個の炭素原子を含有する二価の直鎖又は分枝状脂肪族基を指す。アルキレンの例としては、限定はされないが、メチレン（－ＣＨ２－）、エチレン（－ＣＨ２ＣＨ２－）、ｎ－プロピレン（－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－）、イソプロピレン（－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－）、ｎ－ブチレン、ｓｅｃ－ブチレン、イソブチレン、ｔｅｒｔ－ブチレン、ｎ－ペンチレン、イソペンチレン、ネオペンチレン及びｎ－ヘキシレンが挙げられる。
本明細書で使用されるとき、用語「Ｃ２～６アルキニル」は、炭素及び水素原子のみからなる、少なくとも１つの三重結合を含有する、２～６個の炭素原子を有する直鎖又は分枝状炭化水素鎖ラジカル基であって、単結合によって分子の残りの部分に結合するものを指す。用語「Ｃ２～４アルキニル」は、これに従い解釈されるべきである。Ｃ２～６アルキニルの例としては、限定はされないが、エチニル、プロパ－１－イニル、ブタ－１－イニル、ペンタ－１－イニル、ペンタ－４－イニル及びペンタ－１，４－ジイニルが挙げられる。
本明細書で使用されるとき、用語「Ｃ１～６アルコキシ」は、式－ＯＲａのラジカル（式中、Ｒａは上記に概して定義するとおりのＣ１～６アルキルラジカルである）を指す。「Ｃ１～６アルコキシ」又は「Ｃ１～Ｃ６アルコキシ」は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、及びＣ６アルコキシ基（即ちアルキル鎖中に１～６個の炭素）を含むことが意図される。Ｃ１～６アルコキシの例としては、限定はされないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ペントキシ、及びヘキソキシが挙げられる。
本明細書で使用されるとき、用語「Ｃ１～６アルキルアミノ」は、式－ＮＨ－Ｒａのラジカル（式中、Ｒａは上記に定義するとおりのＣ１～４アルキルラジカルである）を指す。
本明細書で使用されるとき、用語「ジ－（Ｃ１～６アルキル）アミノ」は、式－Ｎ（Ｒａ）－Ｒａのラジカル（式中、各Ｒａは上記に定義するとおりのＣ１～４アルキルラジカルであり、これは同じであっても、又は異なってもよい）を指す。
本明細書で使用されるとき、用語「シアノ」は、ラジカル＊－Ｃ≡Ｎを意味する。
用語「シクロアルキル」は、単環式、二環式又は多環式環系を含めた、完全に水素化された環である非芳香族炭素環式環を指す。「Ｃ３～１０シクロアルキル」又は「Ｃ３～Ｃ１０シクロアルキル」は、３～１０炭素環員であるＣ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９及びＣ１０シクロアルキル基を含むことが意図される）。シクロアルキル基の例としては、限定はされないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル及びノルボルニルが挙げられる。
「縮合環」、は、本明細書で使用されるとき、２個の環に共通する環原子が互いに直接結合するようにして環集合体を含む環が連結している多環状集合体を指す。縮合環集合体は、飽和、部分的に飽和、芳香族、炭素環式、複素環式などであってもよい。一般的な縮合環の非排他的な例としては、デカリン、ナフタレン、アントラセン、フェナントレン、インドール、ベンゾフラン、プリン、キノリンなどが挙げられる。
「ハロゲン」は、ブロモ、クロロ、フルオロ又はヨード；好ましくはフルオロ、クロロ又はブロモを指す。
本明細書で使用されるとき、用語「ハロアルキル」は、１つ以上のハロゲンで置換された、特定の数の炭素原子を有する上記に定義するとおりの分枝状及び直鎖の両方の飽和アルキル基を含むことが意図される。例えば、「Ｃ１～６ハロアルキル」又は「Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル」は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、及びＣ６アルキル鎖を含むことが意図される。ハロアルキルの例としては、限定はされないが、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、トリクロロメチル、ペンタフルオロエチル、ペンタクロロエチル、２，２，２－トリフルオロエチル、１，３－ジブロモプロパン－２－イル、３－ブロモ－２－フルオロプロピル及び１，４，４－トリフルオロブタン－２－イル、ヘプタフルオロプロピル、及びヘプタクロロプロピルが挙げられる。
「ヘテロアルキル」は、本明細書で使用されるとき、アルキル鎖内の炭素原子のうちの１つ以上がＮ、Ｏ及びＳから独立して選択されるヘテロ原子に置換されている本明細書に定義するとおりのアルキルを指す。本明細書で使用されるとき、ＣＸ～Ｙヘテロアルキル（ｈｅｔｅｒｅｏａｌｋｙｌ）又はｘ員～ｙ員ヘテロアルキルにおいて、ｘ～ｙはヘテロアルキル上にある鎖原子（炭素及びヘテロ原子）の数を表す。例えばＣ３～８ヘテロアルキルは、３～８個の鎖原子を有するアルキル鎖を指す。更に、本明細書に定義するとおりのヘテロアルキル、ラジカルを分子の残りの部分に連結する原子は炭素でなければならない。３～８員ヘテロアルキルの代表例としては、限定はされないが、－（ＣＨ２）ＯＣＨ３、－（ＣＨ２）２ＯＣＨ（ＣＨ３）２、－（ＣＨ２）２－Ｏ－（ＣＨ２）２－ＯＨ及び－（ＣＨ２）２－（Ｏ－（ＣＨ２）２）２－ＯＨが挙げられる。
用語「ヘテロアリール」は、５～１０員芳香環系の中に少なくとも１個のヘテロ原子（例えば、酸素、硫黄、窒素又はこれらの組み合わせ）を含有する芳香族部分を指す。ヘテロアリールの例としては、限定はされないが、ピロリル、ピリジル、ピラゾリル、インドリル、インダゾリル、チエニル、フラニル、ベンゾフラニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、トリアジニル、ピリミジニル、ピラジニル、チアゾリル、プリニル、ベンズイミダゾリル、キノリニル、イソキノリニル、キノキサリニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾイミダゾリル、ベンズオキサゾリル及び１Ｈ－ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾリルが挙げられる。ヘテロ芳香族部分は単環系又は縮合環系からなってもよい。典型的な単環ヘテロアリール環は、Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を含有する５員～６員環であり、典型的な縮合ヘテロアリール環系は、Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を含有する９員～１０員環系である。縮合ヘテロアリール環系は、互いに縮合した２個のヘテロアリール環又はアリール（例えばフェニル）に縮合したヘテロアリールからなり得る。
本明細書で使用されるとき、用語「ヘテロ原子」は、窒素（Ｎ）、酸素（Ｏ）又は硫黄（Ｓ）原子を指す。特に指示されない限り、満たされていない原子価を有する任意のヘテロ原子は原子価を満たすのに十分な水素原子を有すると仮定され、ヘテロ原子が硫黄である場合、それは酸化されていなくても（Ｓ）、又はＳ（Ｏ）若しくはＳ（Ｏ）２に酸化されていてもよい。
用語「ヒドロキシル」又は「ヒドロキシ」、は、本明細書で使用されるとき、ラジカル－ＯＨを指す。
「ヘテロシクロアルキル」は、本願において定義されるとおりのシクロアルキルを意味し、但し、指示される炭素環のうちの１つ以上が、－Ｏ－、－Ｎ＝、－ＮＨ－、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－及び－Ｓ（Ｏ）２－から選択される部分に置換されているものとする。３～８員ヘテロシクロアルキルの例としては、限定はされないが、オキシラニル、アジリジニル、アゼチジニル、イミダゾリジニル、ピラゾリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロチエニル１，１－ジオキシド、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、ピロリジニル、ピロリジニル－２－オン、モルホリニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラゾリジニル、ヘキサヒドロピリミジニル、１，４－ジオキサ－８－アザ－スピロ［４．５］デカ－８－イル、チオモルホリニル、スルファノモルホリニル（ｓｕｌｆａｎｏｍｏｒｐｈｏｌｉｎｙｌ）、スルホノモルホリニル及びオクタヒドロピロロ［３，２－ｂ］ピロリルが挙げられる。
用語「オキソ」、は、本明細書で使用されるとき、二価のラジカル＝Ｏを指す。
本明細書において参照されるとき、用語「置換されている」は、少なくとも１個の水素原子が非水素基に置き換えられていることを意味し、但し、通常の原子価を維持しており、且つその置換が安定化合物をもたらすものとする。置換基がオキソ（即ち、＝Ｏ）であるとき、ひいては原子上の２個の水素が置き換えられる。本発明の化合物に窒素原子（例えばアミン）が存在する場合、それらを酸化剤（例えば、ｍＣＰＢＡ及び／又は過酸化水素）での処理によってＮ－酸化物に変換することにより本発明の他の化合物が提供され得る。
本明細書で使用されるとき、用語「非置換窒素」は、その隣接環原子との二重結合及び単結合によるその連結（－Ｎ＝）に起因して置換能を有しない窒素環原子を指す。例えば、４－ピリジル
Figure 0007247102000170
のパラ位の窒素は「非置換」窒素であり、１Ｈ－ピラゾール－４－イル
Figure 0007247102000171
の、連結Ｃ環原子を基準として４位の窒素は「非置換」窒素である。
当業者であれば理解可能であろうとおり、例えば、分子中のケトン（－ＣＨ－Ｃ（＝Ｏ）－）基はそのエノール型（－Ｃ＝Ｃ（ＯＨ）－）に互変異性化し得る。従って、本発明は、構造がそのうちの１つのみを描く場合であっても、可能な全ての互変異性体を包含することが意図される。
本明細書で使用されるとき、
Figure 0007247102000172
は、Ｘが分子の他の部分に結合する点を意味する記号である。
化合物に関する構成成分又は式に任意の可変基が２回以上出現するとき、その定義は出現毎にいかなる他の出現におけるその定義からも独立している。従って、例えば、ある基が０～３個のＲ基で置換されることが示される場合、ひいては前記基は非置換であっても、又は最大３個のＲ基で置換されていてもよく、Ｒは出現毎にＲの定義から独立に選択される。
特に指定のない限り、用語「本発明の化合物」又は「本発明の複数の化合物」は、式Ａ２及びその下位式の化合物、並びに異性体、例えば、立体異性体（ジアステレオマー、エナンチオマー及びラセミ化合物を含む）、幾何異性体、配座異性体（回転異性体及びアトロプ異性体（ａｓｔｒｏｐｉｓｏｍｅｒ）を含む）、互変異性体、同位体で標識された化合物（重水素置換を含む）、及び固有に形成される部分（例えば、多形、溶媒和物及び／又は水和物）を指す。塩の形成能を有する部分が存在するとき、ひいては塩、詳細には薬学的に許容可能な塩も同様に含まれる。
当業者は、本発明の化合物がキラル中心を含んでもよく、従って種々の異性体形態で存在し得ることを認識するであろう。本明細書で使用されるとき、用語「異性体」は、同じ分子式を有するが、原子の構成及び配置が異なる種々の化合物を指す。
「エナンチオマー」は、互いに重ね合わせることができない鏡像である一対の立体異性体である。一対のエナンチオマーの１：１混合物が「ラセミ」混合物である。この用語は、適切な場合にはラセミ混合物を指示して使用される。本発明の化合物について立体化学を指示するとき、２つのキラル中心の相対及び絶対配置が既知である単一の立体異性体は慣習的なＲＳ方式を用いて指示され（例えば、（１Ｓ，２Ｓ））；相対配置は既知だが絶対配置は未知の単一の立体異性体は星印付きで指示され（例えば、（１Ｒ＊，２Ｒ＊））；及びラセミ化合物は２文字で指示される（例えば、（１Ｒ，２Ｒ）及び（１Ｓ，２Ｓ）のラセミ混合物としての（１ＲＳ，２ＲＳ）；（１Ｒ，２Ｓ）及び（１Ｓ，２Ｒ）のラセミ混合物としての（１ＲＳ，２ＳＲ））。「ジアステレオマー」は、少なくとも２つの不斉原子を有するが、互いに鏡像でない立体異性体である。絶対立体化学は、カーン・インゴルド・プレローグのＲ－Ｓ方式に従い特定される。化合物が純粋なエナンチオマーであるとき、各キラル炭素における立体化学はＲ又はＳのいずれかによって特定され得る。絶対配置が未知である分割された化合物は、ナトリウムＤ線の波長で平面偏光を回転させる方向（右旋性又は左旋性）に応じて（＋）又は（－）を指示することができる。或いは、分割された化合物は、キラルＨＰＬＣによる対応するエナンチオマー／ジアステレオマーのそれぞれの保持時間によって定義することができる。
本明細書に記載される化合物のある種のものは１つ以上の不斉中心又は不斉軸を含み、従ってエナンチオマー、ジアステレオマー、及びその他の、（Ｒ）－又は（Ｓ）－として絶対立体化学の点で定義され得る立体異性体形態を生じ得る。
化合物が二重結合又はその分子にある程度の構造的硬直性を付与する他の何らかの特徴を含むとき、幾何異性体が存在し得る。化合物が二重結合を含む場合、置換基はＥ又はＺ配置であり得る。化合物が二置換シクロアルキルを含む場合、シクロアルキル置換基はシス又はトランス配置を有し得る。
配座異性体（又はコンホーマー）は、１つ以上の結合の周りの回転が異なり得る異性体である。回転異性体は、単一の結合の周りの回転のみが異なるコンホーマーである。
用語「アトロプ異性体」は、分子における回転の制限によって生じる軸性キラリティー又は面性キラリティーに基づく構造異性体を指す。
特に指定のない限り、本発明の化合物は、ラセミ混合物、光学的に純粋な形態及び中間混合物を含め、かかる可能な異性体を全て含むことが意図される。光学活性（Ｒ）－及び（Ｓ）－異性体は、キラルシントン又はキラル試薬を使用して調製してもよく、又は従来技術を用いて分割してもよい（例えば、良好な分離を実現するのに適切な溶媒又は溶媒混合物を使用して、ＤＡＩＣＥＬ Ｃｏｒｐ．から入手可能なＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）及びＣＨＩＲＡＬＣＥＬ（登録商標）などのキラルＳＦＣ又はＨＰＬＣクロマトグラフィーカラムで分離される）。
本化合物は光学活性体又はラセミ体で分離することができる。光学活性体は、ラセミ体の分割によるか、又は光学活性出発物質からの合成によって調製し得る。本発明の化合物の調製に用いられる全ての過程及びその中で作られる中間体は、本発明の一部と見なされる。エナンチオマー又はジアステレオマー生成物が調製されるとき、それらは従来の方法、例えばクロマトグラフィー又は分別晶出によって分離し得る。
本明細書で使用されるとき、用語「ＬＡＴＳ」は、ラージ腫瘍抑制プロテインキナーゼの略称である。ＬＡＴＳは、本明細書で使用されるときＬＡＴＳ１及び／又はＬＡＴＳ２を指す。ＬＡＴＳ１は、本明細書で使用されるときラージ腫瘍抑制キナーゼ１を指し、及びＬＡＴＳ２はラージ腫瘍抑制キナーゼ２を指す。ＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２は、両方ともにセリン／スレオニンプロテインキナーゼ活性を有する。
本明細書で使用されるとき、用語「ＹＡＰ１」は、ＹＡＰ又はＹＡＰ６５としても知られるｙｅｓ関連タンパク質１を指し、これは細胞増殖に関与する遺伝子の転写調節因子として働くタンパク質である。
本明細書で使用されるとき、用語「ＭＳＴ１／２」は、哺乳動物ステライル２０様キナーゼ－１及び－２を指す。
本明細書で使用されるとき、用語「医薬組成物」は、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体と一緒になった本発明の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を指す。一実施形態において、医薬組成物は、局所、非経口又は注射投与に好適な形態である。
本発明の化合物の「治療有効量」という用語は、対象の生物学的又は医学的反応、例えば酵素又はタンパク質活性の低減又は阻害を引き起こし、又は症状を改善し、病態を軽減し、疾患の進行を減速若しくは遅延させ、又は疾患を予防するなどし得る本発明の化合物の量を指す。非限定的な一実施形態において、用語「治療有効量」は、対象への投与時に、（１）（ｉ）ＬＡＴＳ活性によって媒介される、又は（ｉｉ）ＬＡＴＳの活性（正常又は異常）によって特徴付けられる病態、又は障害又は疾患の少なくとも部分的な軽減、阻害、予防及び／又は改善；又は（２）ＬＡＴＳの活性の低減又は阻害；又は（３）ＬＡＴＳの発現の低減又は阻害に有効である本発明の化合物の量を指す。別の非限定的実施形態において、用語「治療有効量」は、細胞、又は組織、又は非細胞性生物学的材料、又は培地への投与時に、ＬＡＴＳの活性の少なくとも部分的な低減又は阻害；又はＬＡＴＳの発現の少なくとも部分的な低減又は阻害に有効である本発明の化合物の量を指す。
用語「対象」にはヒト及び非ヒト動物が含まれる。非ヒト動物には、脊椎動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、ネコ、ウマ、雌ウシ、ニワトリ、イヌ、マウス、ラット、ヤギ、ウサギ、及びブタなどの哺乳類及び非哺乳類が含まれる。好ましくは、対象はヒトである。注記される場合を除き、用語「患者」又は「対象」は本明細書では同義的に使用される。
用語「ＩＣ５０」、は、本明細書で使用されるとき、阻害効果の５０％を生じさせる阻害剤のモル濃度を指す。
本明細書で使用されるとき、任意の疾患又は障害を「治療する」、「治療している」又は「治療」という用語は、疾患又は障害を軽減又は改善すること（即ち、疾患又はその臨床症状のうちの少なくとも１つの発生を遅らせ又は止めること）；又は患者にとって認識可能でないこともあるものを含め、疾患又は障害に関連する少なくとも１つの理学的パラメータ又はバイオマーカーを軽減し又は改善することを指す。
本明細書で使用されるとき、任意の疾患又は障害を「予防する」、「予防している」又は「予防」という用語は、疾患又は障害の予防的治療；又は疾患又は障害の発症又は進行を遅延させることを指す。
本明細書で使用されるとき、対象は、かかる対象が生物学的に、医学的に又はクオリティ・オブ・ライフの点で治療から利益を受けると思われる場合、かかる治療を「必要としている」。
加工条件に応じて本発明の化合物は遊離（中性）形態又は塩形態のいずれかで得られる。これらの化合物の遊離形態及び塩形態の両方、特に「薬学的に許容可能な塩」は、本発明の範囲内にある。
本明細書で使用されるとき、用語「塩」又は「複数の塩」は、本発明の化合物の酸付加塩又は塩基付加塩を指す。「塩」には、詳細には「薬学的に許容可能な塩」が含まれる。用語「薬学的に許容可能な塩」は、本発明の化合物の生物学的有効性及び特性を保持している塩であって、且つ典型的には生物学的に又は他の点で望ましくないものでない塩を指す。多くの場合、本発明の化合物は、アミノ基及び／又はカルボキシル基又はそれらと同様の基が存在するおかげで酸性塩及び／又は塩基性塩の形成能を有する。
薬学的に許容可能な酸付加塩は無機酸及び有機酸と形成され得る。
塩を誘導し得る無機酸としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが挙げられる。
塩を誘導し得る有機酸としては、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、スルホサリチル酸などが挙げられる。
薬学的に許容可能な塩基付加塩は無機塩基及び有機塩基と形成され得る。
塩を誘導し得る無機塩基としては、例えば、アンモニウム塩及び周期表の第Ｉ～ＸＩＩ列の金属が挙げられる。特定の実施形態において、塩は、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、銀、亜鉛、及び銅から誘導され；特に好適な塩としては、アンモニウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、カルシウム塩及びマグネシウム塩が挙げられる。
塩を誘導し得る有機塩基としては、例えば、第一級、第二級、及び第三級アミン、天然に存在する置換アミンを含めた置換アミン、環状アミン、塩基性イオン交換樹脂などが挙げられる。特定の有機アミンとしては、イソプロピルアミン、ベンザチン、コリネート（ｃｈｏｌｉｎａｔｅ）、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、リジン、メグルミン、ピペラジン及びトロメタミンが挙げられる。
別の態様において、本発明は、酢酸塩、アスコルビン酸塩、アジピン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、臭化物塩／臭化水素酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、カンファースルホン酸塩、カプリン酸塩、塩化物塩／塩酸塩、クロルテオフィリン酸塩（ｃｈｌｏｒｔｈｅｏｐｈｙｌｌｏｎａｔｅ）、クエン酸塩、エタンジスルホン酸塩（ｅｔｈａｎｄｉｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、グルタミン酸塩、グルタル酸、グリコール酸塩、馬尿酸塩、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物塩、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ムチン酸塩、ナフトエ酸塩、ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オクタデカン酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、ポリガラクツロン酸塩、プロピオン酸塩、セバシン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、スルホサリチル酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、トシル化物塩 トリフェニル酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩又はキシナホ酸塩形態の式Ａ２の化合物を提供する。
本明細書に提供される任意の式が、化合物の非標識形態並びに同位体標識形態を表すこともまた意図される。同位体標識化合物は、１つ以上の原子が、選ばれた原子質量又は質量数を有する原子に置き換えられていることを除いて本明細書に提供される式によって描かれる構造を有する。本発明の化合物に取り込み得る同位体としては、例えば水素の同位体が挙げられる。
更に、特定の同位体、特に重水素（即ち２Ｈ又はＤ）の取り込みは、より高い代謝安定性、例えば生体内半減期の増加又は投薬必要量の減少又は治療指数若しくは忍容性の向上によって生じる特定の治療上の利点をもたらし得る。これに関連して重水素は式Ａ１又はその下位式の化合物の置換基と見なされることが理解される。重水素の濃度は同位体濃縮係数によって定義され得る。用語「同位体濃縮係数」は、本明細書で使用されるとき、指定の同位体の同位体存在度と天然の存在度との間の比を意味する。本発明の化合物における置換基が重水素と示される場合、かかる化合物は、少なくとも３５００（指定の各重水素原子において５２．５％の重水素取り込み）、少なくとも４０００（６０％の重水素取り込み）、少なくとも４５００（６７．５％の重水素取り込み）、少なくとも５０００（７５％の重水素取り込み）、少なくとも５５００（８２．５％の重水素取り込み）、少なくとも６０００（９０％の重水素取り込み）、少なくとも６３３３．３（９５％の重水素取り込み）、少なくとも６４６６．７（９７％の重水素取り込み）、少なくとも６６００（９９％の重水素取り込み）、又は少なくとも６６３３．３（９９．５％の重水素取り込み）の指定の各重水素原子の同位体濃縮係数を有する。用語「同位体濃縮係数」は、重水素に関する記載と同じように任意の同位体に適用し得ることが理解されなければならない。
本発明の化合物に取り込み得る同位体の他の例としては、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｆ ３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉなど、それぞれ水素、炭素、窒素、酸素、リン（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｕｓ）、フッ素、及び塩素の同位体が挙げられる。従って本発明は、例えば３Ｈ及び１４Ｃなどの放射性同位体を含めた、前述の同位体のいずれかの１つ以上を取り込む化合物、又はその中に２Ｈ及び１３Ｃなどの非放射性同位体が存在するものを含むことが理解されなければならない。かかる同位体標識化合物は、代謝研究（１４Ｃによる）、反応速度論研究（例えば２Ｈ又は３Ｈによる）、薬物又は基質組織分布アッセイを含めた陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）又は単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）などの検出又はイメージング技法において、又は患者の放射性治療において有用である。詳細には、１８Ｆ又は標識化合物はＰＥＴ又はＳＰＥＣＴ研究に特に望ましいものであり得る。式Ａ２の同位体標識化合物は、概して当業者に公知の従来技術によるか、又は添付の実施例及び調製に記載されるものと同様のプロセスによって、以前用いた非標識試薬の代わりに適切な同位体標識試薬を使用して調製することができる。
本発明の１つ又は複数の化合物の任意の不斉原子（例えば、炭素など）は、ラセミ体で存在しても、又はエナンチオマー濃縮されて、例えば（Ｒ）配置、（Ｓ）配置又は（Ｒ，Ｓ）配置で存在してもよい。特定の実施形態において、各不斉原子は（Ｒ）配置又は（Ｓ）配置において少なくとも５０％の鏡像体過剰率、少なくとも６０％の鏡像体過剰率、少なくとも７０％の鏡像体過剰率、少なくとも８０％の鏡像体過剰率、少なくとも９０％の鏡像体過剰率、少なくとも９５％の鏡像体過剰率、又は少なくとも９９％の鏡像体過剰率を有する。不飽和二重結合を有する原子における置換基は、可能であれば、シス－（Ｚ）型又はトランス－（Ｅ）型で存在し得る。
従って、本明細書で使用されるとき、本発明の化合物は、例えば、実質的に純粋な幾何（シス又はトランス）立体異性体、ジアステレオマー、光学異性体（対掌体）、ラセミ化合物又はこれらの混合物として、可能な立体異性体、回転異性体、アトロプ異性体、互変異性体又はこれらの混合物のうちの１つの形態であってもよい。
任意の結果として生じる立体異性体混合物は、例えばクロマトグラフィー及び／又は分別晶出により、構成要素の物理化学的差異に基づいて純粋な又は実質的に純粋な幾何又は光学異性体、ジアステレオマー、ラセミ化合物に分離することができる。
最終化合物又は中間体の任意の結果として生じるラセミ化合物は、公知の方法、例えば光学活性酸又は塩基で得られるそのジアステレオマー塩の分離、及び光学活性酸又は塩基化合物の遊離によって光学的対掌体に分割することができる。詳細には、本発明の化合物をその光学的対掌体へと、例えば、光学活性酸、例えば、酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジ－Ｏ，Ｏ’－ｐ－トルオイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸又はカンファー－１０－スルホン酸と形成される塩の分別晶出によって分割するために、ひいては塩基性部分が用いられてもよい。ラセミ生成物はまた、キラルクロマトグラフィー、例えばキラル吸着剤を使用した高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によっても分割することができる。
「配列同一性パーセンテージ」は、２つの最適にアラインメントした配列を比較ウィンドウにわたって比較することにより決定され、ここでポリヌクレオチド配列のうち比較ウィンドウ内にある部分は、２つの配列の最適アラインメントに関する付加又は欠失を含まない参照配列（例えば本発明のポリペプチド）と比較したとき付加又は欠失（即ちギャップ）を含み得る。パーセンテージは、両方の配列に同一の核酸塩基又はアミノ酸残基が現れる位置の数を決定してマッチする位置の数を求め、マッチする位置の数を比較ウィンドウ内の位置の総数で除し、その結果に１００を乗じて配列同一性パーセンテージを求めることにより計算される。
用語「同一である」又はパーセント「同一性」は、２つ以上の核酸又はポリペプチド配列との関連において、同じ配列である２つ以上の配列又は部分配列を指す。以下の配列比較アルゴリズムのうちの１つを用いて、又は手作業でのアラインメント及び目視検査によって測定したとき、２つの配列が比較ウィンドウ、又は指示領域にわたって最大限対応するように比較及びアラインメントしたときに同じであるアミノ酸残基又はヌクレオチドを指定のパーセンテージだけ有する（即ち、参照配列の指定の領域にわたって、又は指定されない場合には配列全体にわたって少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有する）場合に、２つの配列は「実質的に同一である」。本発明は、本明細書に例示されるそれぞれポリペプチド又はポリヌクレオチドと実質的に同一であるポリペプチド又はポリヌクレオチドを提供する。
用語「単離」されているは、自然状態から改変されている、又は取り出されていることを意味する。例えば、生きている動物に天然に存在する核酸又はペプチド又は細胞は「単離」されていないが、その自然状態の共存する材料から部分的又は完全に分離されている同じ核酸又はペプチド又は細胞は「単離」されている。
用語「核酸」又は「ポリヌクレオチド」は、一本鎖形態又は二本鎖形態のいずれかのデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）又はリボ核酸（ＲＮＡ）及びこれらのポリマーを指す。具体的に限定しない限り、この用語には、参照核酸と同様の結合特性を有し、且つ天然に存在するヌクレオチドと同じように代謝される天然ヌクレオチドの公知の類似体を含む核酸が包含される。特に指示されない限り、特定の核酸配列はまた、明示的に指示される配列のみならず、その保存的に修飾された変異体（例えば、縮重コドン置換）、対立遺伝子、オルソログ、ＳＮＰ、及び相補配列も黙示的に包含する。具体的には、１つ以上の選ばれた（又は全ての）コドンの３番目の位置が混合塩基及び／又はデオキシイノシン残基に置換されている配列を作成することにより、縮重コドン置換を実現し得る（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８（１９８５）；及びＲｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ８：９１－９８（１９９４））。
「細胞集団」又は「細胞の集団」は、本明細書で使用されるとき、インビボ又はエキソビボでＬＡＴＳ１及び／又はＬＡＴＳ２阻害剤の存在下に増殖する細胞を含む。かかる細胞においては、Ｈｉｐｐｏシグナル伝達が典型的には細胞成長を抑制するが、しかしＬＡＴＳ阻害によって経路が破壊されると増殖することになる。特定の実施形態において、本発明の方法、調製、培地、薬剤、又はキットにおいて有用な細胞集団は、上記に記載される組織からの細胞又は本明細書に記載若しくは提供される細胞を含む。かかる細胞としては、限定はされないが、眼細胞（例えば、輪部幹細胞、角膜内皮細胞）、上皮細胞（例えば、皮膚からの）、神経幹細胞、間葉系幹細胞、肺基底幹細胞、胚性幹細胞、成体幹細胞、人工多能性幹細胞及び肝前駆細胞が挙げられる。
薬理学及び有用性
一実施形態において、本発明は、インビボ及び／又はエキソビボで細胞増殖が有利となり得るあらゆる適用に対する小分子ＬＡＴＳキナーゼ阻害剤に関する。
エキソビボ細胞療法は、概して、患者に移植して拡大細胞の一過性の又は安定した移植片を樹立するため患者又は健常ドナーから単離した細胞集団の拡大を伴う。エキソビボ細胞療法は患者への遺伝子又は生物学的治療用分子の送達に用いることができ、ここで生物学的治療用分子の遺伝子導入又は発現は単離細胞において実現される。エキソビボ細胞療法の非限定的な例としては、限定はされないが、幹細胞移植（例えば、造血幹細胞移植、自家幹細胞移植、又は臍帯血幹細胞移植）、組織再生、細胞免疫療法、及び遺伝子療法が挙げられる。例えば、Ｎａｌｄｉｎｉ，２０１１，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｖｏｌｕｍｅ １２，ｐａｇｅｓ ３０１－３１５を参照のこと。
具体的な一態様において、本発明は、ＹＡＰ経路を活性化して皮膚細胞増殖を促進する能力のある、それにより創傷治癒の促進に有用な小分子ＬＡＴＳ阻害剤に関する。
本発明の化合物の使用の更なる例は、とりわけ、
１）マージナルグラフト（限定はされないが、過度の脂肪を含有すること、身体サイズに対して小さいこと、及びドナーが高齢であることを含む理由で不適切と感じられ、従って高頻度で廃棄される臓器）の移植後の不十分な肝再成長の治療における使用；
２）例えば原発性及び転移性肝腫瘍、外傷性肝傷害、並びに血管奇形及び肝膿瘍などの他の占拠性肝病変の切除のセッティングにおける、広範囲肝切除術後の残存肝腫瘤の再成長増進を支援するための使用；
３）培養下の肝細胞（例えば肝前駆細胞（ＨＰＣ））の成長（エキソビボ拡大）及び可能性のある続く移植を促進するための使用；
４）ウイルス性肝炎、薬物性肝傷害、自己免疫性肝炎、虚血性及びうっ血性肝疾患からの急性肝不全患者の肝臓を再生するための使用；
５）非アルコール性脂肪性肝炎、アルコール性脂肪性肝炎、慢性Ｂ型及びＣ型ウイルス性肝炎、ヘモクロマトーシス、α－１アンチトリプシン欠乏症、ウィルソン病及び薬物誘発性肝線維症からの慢性肝傷害及び基礎肝線維症を有する患者について再生能を亢進させるとともに線維症消散を加速させる治療を支援するための使用；又は
６）灌流装置を用いた又は用いない、エキソビボで損傷を防ぎ、臓器機能を維持又は改善するための使用である。
ＹＡＰ／Ｈｉｐｐｏ経路は皮膚及び他の組織の組織成長及び再生を調節する。ＬＡＴＳが最終キナーゼであるＨｉｐｐｏ（ＭＳＴ）キナーゼカスケードは、ＹＡＰ活性を負に調節する。ＬＡＴＳキナーゼは、ＹＡＰを直接リン酸化してその細胞質保留及び不活性化を引き起こすことが示されているセリン／スレオニンプロテインキナーゼである。ＬＡＴＳによるリン酸化がない場合、ＹＡＰは核内に転位してＴＥＡＤと複合体を形成し、細胞増殖及び生存に関する下流遺伝子発現をドライブする。
本発明に係る化合物の活性は、以下のインビトロ及びインビボ方法によって評価することができる。
ＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２阻害
式Ａ１又はその下位式の化合物は、遊離形態で、又は薬学的に許容可能な塩形態で、ＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２の強力な阻害剤である。
ＬＡＴＳ１に対する本化合物の阻害有効性は、実施例セクションＡに記載されるとおりのＬＡＴＳ１生化学的ＨＴＲＦアッセイによってアッセイした。ＬＡＴＳ１に対する本発明の化合物の阻害有効性（ＬＡＴＳ１ ＩＣ５０、μＭ単位）を表１Ａに報告する。
化合物のＬＡＴＳ１ ＩＣ５０は＞１０μＭ～１ｎＭ未満の範囲であり、大多数の化合物は１μＭを下回るＩＣ５０を有した。このアッセイ（ａｓｓｙ）では１μＭより高いＩＣ５０の化合物を不活性と見なすことに留意しなければならない。
ＬＡＴＳ２に対する選択の化合物の阻害有効性は、実施例セクションＡに記載されるとおりのＬＡＴＳ２生化学的Ｃａｌｉｐｅｒアッセイによってアッセイした。ＬＡＴＳ２に対する本発明の化合物の阻害有効性（ＬＡＴＳ２ ＩＣ５０、μＭ単位）もまた表１Ａに報告する。
ｐＹＡＰ抑制（ＨａＣａＴ細胞）
ＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２キナーゼの阻害により、式Ａ１の化合物はＹＡＰのリン酸化を抑制する。この化合物がヒトＨａＣａＴ細胞（ケラチノサイト細胞株）におけるＹＡＰのリン酸化を低減する能力について、実施例に記載されるとおりのｐＹＡＰ ＨＴＲＦアッセイによって測定した。アッセイ結果は表１Ｃに報告する。このデータから、式Ａ１の化合物による処理がＹＡＰのリン酸化を低減したことが実証された。
式Ａ１の化合物がＹＡＰのリン酸化を低減する能力はＪＨＨ－５細胞でも同じようにして実証することができる（Ｆｕｊｉｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．１９９０ Ｏｃｔ；３７（５）：４５７－６０）。
ＹＡＰ核内転位（ＨａＣａＴ細胞）
ＬＡＴＳによるリン酸化がない場合、ＹＡＰは核に転位する。式Ａ１、又はその下位式の化合物がヒトＨａＣａＴ細胞におけるＹＡＰ転位に及ぼす効果について、実施例セクションＡに記載されるとおりのＹＡＰ核内転位アッセイによって評価した。得られたＥＣ５０値は表１Ｃに報告する。核内転位ＥＣ５０は＞２０μＭ～０．３μＭの範囲であり、選択の化合物は約１μＭ以下のＥＣ５０値を有した。このデータは、選択の式Ａ１の化合物による処理が細胞質から核内へのＹＡＰの転位を活性化することを裏付けている。
式Ａ１、又はその下位式の化合物がＹＡＰ転位に及ぼす効果はＪＨＨ－５細胞でも同じようにして実証することができる（Ｆｕｊｉｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．１９９０ Ｏｃｔ；３７（５）：４５７－６０）。
標的同定
式Ａ１、又はその下位式の化合物は、ＭＳＴ１／２キナーゼと比べてＬＡＴＳ１／２を選択的に標的とする。ＹＡＰ転位アッセイスクリーニングからのヒットの標的を同定するため、実施例セクションＡに記載されるとおりの標的同定アッセイを実施した。このアッセイの結果は図３３Ａ～図３３Ｃに示す。
図３３Ａは、媒体で処理するか、又はＭＳＴ１／２又はＬＡＴＳ１／２に対するｓｉＲＮＡ ４０ｐＭをトランスフェクトしたヒトＨａＣａＴ細胞のライセート中におけるｐＹＡＰ（Ｓｅｒ１２７）のウエスタンブロット分析を示す。ＬＡＴＳ１／２に対するｓｉＲＮＡはｐＹＡＰシグナルを除去したが、ＭＳＴ１／２に対するｓｉＲＮＡは最小限の影響しかなかった。これは、ＬＡＴＳがＹＡＰリン酸化に関与するという当該分野における共通認識と一致する。
図３３Ｂは、未処理の、又は０．５μＭオカダ酸の存在下で９μＭの例１３３によって１時間処理したヒトＨａＣａＴ細胞の細胞ライセートのウエスタンブロット分析を示す。ｐＹＡＰは劇的に阻害された。この結果は、ＬＡＴＳ及びＭＳＴＳに対するｓｉＲＮＡの研究（図３３Ａ）と同様であり、これにより例１３３がＬＡＴＳキナーゼを標的とすることが示唆される。
図３３Ｃは、約１０－４～１μＭの範囲の例１３３の濃度に応じたＬＡＴＳ１活性の（ＤＭＳＯ対照と比べた）阻害を示す。このデータは、例１３３がこのアッセイにおいてＬＡＴＳ１を１．３ｎＭのＩＣ５０で強力に阻害したことを示している。この結果から更に、本発明の化合物がＬＡＴＳキナーゼの強力な阻害剤であることが確認された。
マウスインビボ薬力学（ＰＤ）：創傷治癒における使用
本発明の化合物はまた、インビボでもＹＡＰ経路を活性化する。実施例セクションＡのインビボＰＤアッセイに記載されるとおりインビボマウスモデルにおいてＹＡＰ経路標的遺伝子発現研究を行った。麻酔下のマウスの背側の２つの全層切除創傷を媒体、又は０．２及び２ｍｇ／ｍＬの例１３３で局所的に治療した。２回の１日用量後、創傷縁部の周囲の皮膚試料を採取し、Ｃｙｒ６１及びＧａｐｄｈプローブを使用してＴａｑｍａｎ分析を実施した。標的遺伝子のｍＲＮＡ発現レベルをＧａｐｄｈ ｍＲＮＡレベルに対して正規化し、図３４において例１３３の濃度に対してプロットした。このデータは、例１３３が媒体と比較したときＹＡＰ標的遺伝子Ｃｙｒ６１を有意に、及び用量依存的に上方制御したことを示している。この結果は、ＹＡＰ経路の活性化に関する公知のＬＡＴＳ生物学と一致する。
インビボ皮膚細胞増殖
更に、本発明の化合物は、局所適用時にインビボで皮膚細胞増殖を増加させる。実施例セクションＡの「インビボ組織学及びＫｉ６７染色アッセイ」に記載するとおり研究を行った。例１３３又は媒体をインタクトなマウスの背面皮膚に適用した。３日間の１日２回投与後、皮膚試料を採取し、Ｋｉ６７に関する免疫組織学染色に供した。細胞増殖及びＫｉ６７陽性細胞の存在量に関して切片を目視で評価した。研究結果は図３５Ａ及び図３５Ｂに報告する。
図３５Ａは、媒体又は例１３３のいずれかによって治療したＫｉ６７染色後のマウス皮膚の代表的な顕微鏡像を示す。例１３３によって治療したマウス皮膚は、媒体と比較したとき基底細胞増殖及び表皮厚さの有意な増加を示す。図３５Ｂは、未治療及び治療済みマウス皮膚におけるＫｉ６７陽性細胞の存在量を比較する。データは、例１３３によって治療した皮膚においてＫｉ６７陽性細胞の存在量が１０％高いことを示し、これはＫｉ６７陽性細胞の統計的に有意な誘導を示すものである。従って、例１３３はインビボでマウスの皮膚細胞増殖を有意に増加させた。要約すれば、ハイコンテントイメージングに基づく表現型ＨＴＳから、本発明の化合物が強力なＬＡＴＳ阻害剤であることが示されており、このことは細胞及び生化学的ＬＡＴＳアッセイの両方によって確認された。また、ｓｉＲＮＡを使用したＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２の両方のノックダウンにより、ＹＡＰ経路の負の調節因子としてのＬＡＴＳもまた妥当性が確認された。
更に、インビトロで、例１３３がＹＡＰ経路を活性化し、ヒトケラチノサイト（ＨａＣａＴ）の細胞増殖を促進したことが示されている。ＬＡＴＳ阻害剤は、創傷を有するマウスＰＤモデルにおいてＹＡＰ標的遺伝子発現を誘導した。マウスにおける例１３３の局所治療がＹＡＰ標的遺伝子発現を誘導し、Ｋｉ６７染色からも明らかなとおり基底層皮膚細胞成長を増加させた。従って、例１３３は皮膚再生の促進に有用である。
従って式Ａ１又はその下位式の化合物は、遊離形態で、又は薬学的に許容可能な塩形態で、本明細書に記載されるとおり細胞の増殖から利益が得られ得る疾患又は病態に対する療法として有用であり得る。例えば、限定はされないが皮膚、肝臓及び角膜を含め、傷害された又は罹患した組織及び器官の再生が対象に利益となり得る場合。加えて、式Ａ２、又はその下位式の化合物はまた、研究用化学物質、例えばツール化合物としても使用し得る。
従って、更なる態様として、本発明は、療法における式Ａ２若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又はその立体異性体の使用を提供する。
一実施形態において、本発明は、熱傷、急性皮膚潰瘍及び慢性皮膚潰瘍の症候を治療及び改善するための式Ａ１、若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又はその立体異性体の使用を提供する。一実施形態において、慢性皮膚潰瘍は、血管性、糖尿病性及び褥瘡性潰瘍から選択される。更なる実施形態において、慢性皮膚潰瘍は、静脈性下腿潰瘍、糖尿病性足部潰瘍、及び褥瘡から選択される。
別の態様において、本発明は、治療上許容可能な量の式Ａ２、若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又はその立体異性体の投与を含む、ＬＡＴＳキナーゼの阻害によって治療される疾患又は病態の治療方法を提供する。
一実施形態において、疾患又は病態は、熱傷、急性皮膚潰瘍又は慢性皮膚潰瘍から選択される。更なる実施形態において、慢性皮膚潰瘍は、血管性、糖尿病性、及び褥瘡性潰瘍から選択される。更なる実施形態において、慢性皮膚潰瘍は、静脈性下腿潰瘍、糖尿病性足部潰瘍、及び褥瘡から選択される。
従って、更なる態様として、本発明は、医薬品の製造のための式Ａ２、若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又はその立体異性体の使用を提供する。
更なる実施形態において、本発明は、創傷治癒の促進用医薬品の製造のための、又はＬＡＴＳキナーゼの阻害によって治療され得る疾患の治療のための式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又はその立体異性体の使用を提供する。別の実施形態において、疾患は熱傷、急性又は慢性皮膚潰瘍である。別の実施形態において、慢性皮膚潰瘍は、糖尿病性潰瘍、褥瘡性潰瘍及び血管性潰瘍から選択される。別の実施形態において、慢性皮膚潰瘍は、静脈性下腿潰瘍、糖尿病性足部潰瘍及び褥瘡から選択される。
従って、更なる態様として、本発明は、医薬品としての使用のための式Ａ２若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又はその立体異性体を提供する。
更なる実施形態において、本発明は、創傷治癒の促進用医薬品としての使用のための、又はＬＡＴＳキナーゼの阻害によって治療され得る疾患の治療のための式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又はその立体異性体を提供する。別の実施形態において、疾患は熱傷、急性皮膚潰瘍又は慢性皮膚潰瘍である。別の実施形態において、慢性皮膚潰瘍は、糖尿病性潰瘍、褥瘡性潰瘍及び血管性潰瘍から選択される。別の実施形態において、慢性皮膚潰瘍は、静脈性下腿潰瘍、糖尿病性足部潰瘍及び褥瘡から選択される。
マウスのインビボ治療：肝臓における使用
式Ａ１の化合物が肝再生及び肝再成長を誘導する能力について、以下の生物学的アッセイセクションに記載されるとおりインビボアッセイに記載されるとおりマウスを化合物で治療することにより測定した。アッセイ結果は表１Ｃに報告する。これらの結果は、媒体対照で治療したマウスと比較したとき、試験化合物がマウス肝臓のｐＹＡＰレベルを低下させることを示しており、投与２時間後の肝臓におけるインビボでのＬＡＴＳキナーゼ阻害が指摘される。ＹＡＰ標的遺伝子Ｃｙｒ６１及びＣｔｇｆのｍＲＮＡ発現の増加は、投与２時間後のＹＡＰシグナル伝達の活性化を示している。増殖マーカーＫｉ６７に関する免疫組織化学染色が、投与２４時間後の肝細胞増殖の増加を更に示している。
従って、更なる態様として、本発明は、療法における式Ａ２若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又はその立体異性体の使用を提供する。
一実施形態において、本発明は、肝再生及び肝再成長を促進するための、特にマージナルグラフトの移植後の不十分な肝再成長の治療のための；広範囲肝切除術後の残存肝腫瘤の再成長増進を支援するための；ウイルス性肝炎、薬物誘発性肝傷害、自己免疫性肝炎、虚血性及びうっ血性肝疾患からの急性肝不全後の患者の肝臓の再生のための；及び非アルコール性脂肪性肝炎、アルコール性脂肪性肝炎、慢性Ｂ型及びＣ型ウイルス性肝炎、ヘモクロマトーシス、α－１アンチトリプシン欠乏症、ウィルソン病及び薬物誘発性肝線維症からの慢性肝傷害及び基礎肝線維症を有する患者の治療のための、それにより再生能を亢進させるとともに線維症消散を加速させる式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又はその立体異性体の使用を提供する。
別の態様において、本発明は、治療上許容可能な量の式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又はその立体異性体の投与を含むＬＡＴＳキナーゼの阻害によって治療される疾患の治療方法を提供する。
更なる実施形態において、本発明は、治療上許容可能な量の式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又はその立体異性体の投与を含む、特にマージナルグラフトの移植後の不十分な肝再成長の治療のための；広範囲肝切除術後の残存肝腫瘤の再成長増進を支援するための；ウイルス性肝炎、薬物誘発性肝傷害、自己免疫性肝炎、虚血性及びうっ血性肝疾患からの急性肝不全後の患者の肝臓の再生のための；及び非アルコール性脂肪性肝炎、アルコール性脂肪性肝炎、慢性Ｂ型及びＣ型ウイルス性肝炎、ヘモクロマトーシス、α－１アンチトリプシン欠乏症、ウィルソン病及び薬物誘発性肝線維症からの慢性肝傷害及び基礎肝線維症を有する患者の治療のための、それにより再生能を亢進させるとともに線維症消散を加速させる肝再生及び肝再成長の促進方法を提供する。
従って、更なる態様として、本発明は、医薬品の製造のための式Ａ２若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又はその立体異性体の使用を提供する。
更なる実施形態において、医薬品は、肝再生及び肝再成長を促進するための、特にマージナルグラフトの移植後の不十分な肝再成長の治療のための；広範囲肝切除術後の残存肝腫瘤の再成長増進を支援するための；ウイルス性肝炎、薬物誘発性肝傷害、自己免疫性肝炎、虚血性及びうっ血性肝疾患からの急性肝不全後の患者の肝臓の再生のための；及び非アルコール性脂肪性肝炎、アルコール性脂肪性肝炎、慢性Ｂ型及びＣ型ウイルス性肝炎、ヘモクロマトーシス、α－１アンチトリプシン欠乏症、ウィルソン病及び薬物誘発性肝線維症からの慢性肝傷害及び基礎肝線維症を有する患者の治療のための、それにより再生能を亢進させるとともに線維症消散を加速させるものである。
従って、更なる態様として、本発明は、医薬品としての使用のための式Ａ２若しくはその下位式の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩、又はその立体異性体を提供する。更なる実施形態において、医薬品は、肝再生及び肝再成長を促進するための、特にマージナルグラフトの移植後の不十分な肝再成長の治療のための；広範囲肝切除術後の残存肝腫瘤の再成長増進を支援するための；ウイルス性肝炎、薬物誘発性肝傷害、自己免疫性肝炎、虚血性及びうっ血性肝疾患からの急性肝不全後の患者の肝臓の再生のための；及び非アルコール性脂肪性肝炎、アルコール性脂肪性肝炎、慢性Ｂ型及びＣ型ウイルス性肝炎、ヘモクロマトーシス、α－１アンチトリプシン欠乏症、ウィルソン病及び薬物誘発性肝線維症からの慢性肝傷害及び基礎肝線維症を有する患者の治療のための、それにより再生能を亢進させるとともに線維症消散を加速させるものである。
別の態様において、本発明は、ドナーの体外にある培養下の肝細胞の成長（エキソビボ拡大）を促進するための、又はエキソビボでの肝再生誘導のための式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその塩、又はその立体異性体の使用を提供する。
別の態様において、本発明は、式Ａ１若しくはその下位式の化合物、又はその塩、又はその立体異性体を使用した、ドナーの体外にある培養下の肝細胞の成長（エキソビボ拡大）を促進するための、又はエキソビボでの肝再生誘導のための方法を提供する。
医薬組成物及び投与
別の態様では、インビボ使用に関する本発明の実施形態において、本発明は、本発明の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を提供する。更なる実施形態において、本組成物は、本明細書に記載されるものなどの、薬学的に許容可能な担体を少なくとも２つ含む。本発明の化合物の局所使用に関する本発明の実施形態において、本医薬組成物は、当業者に公知の可溶化剤、安定化剤、等張化促進剤、緩衝液及び保存剤のうちの１つ以上と共に活性成分を含む、水溶液、懸濁液、軟膏、クリーム、ゲル又は例えばエアロゾルなどによる送達用の噴霧可能製剤など、局所投与に好適な方法で製剤化される。
インビボ使用に関する本発明の実施形態において、本発明の化合物は典型的には、容易に管理可能な投薬量の薬物を提供し、且つ患者に洗練された扱い易い製品をもたらすため、医薬剤形に製剤化される。本発明の化合物の投薬量レジメンは、当然ながら、詳細な薬剤の薬力学的特性並びにその投与様式及び経路；被投与者の種、年齢、性別、健康、医学的状態、及び体重；症状の性質及び程度；併用治療の種類；治療頻度；投与経路、患者の腎機能及び肝機能、及び所望の効果など、公知の要因に応じて変わることになる。インビボ使用に関する本発明の実施形態において、本発明の化合物は単回１日用量で投与されてもよく、又は合計１日投薬量が１日２、３、又は４回の分割用量で投与されてもよい。
インビボ使用に関する本発明の実施形態において、本発明の医薬組成物又は併用は、約５０～７０ｋｇの対象に対して約１～１０００ｍｇの１つ又は複数の活性成分の単位投薬量であり得る。化合物、医薬組成物、又はその併用の治療上有効な投薬量は、対象の種、体重、年齢及び個別の状態、治療下の障害若しくは疾患又はその重症度に依存する。当業者である医師、臨床医又は獣医師は、障害又は疾患の予防、治療又はその進行の阻害に必要な活性成分の各々の有効量を容易に決定することができる。
本発明の化合物は、水溶液、懸濁液、軟膏、クリーム、ローション、ゲル又は例えばエアロゾルなどによる送達用の噴霧可能製剤の形態で局所適用することができる。投薬量は約１０－３モル～１０－９モル濃度の範囲であり得る。インビボでの治療有効量は、投与経路に応じて約１～１００ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。
特定の例では、本発明の化合物を鎮痛薬などの少なくとも１つの追加的な薬学的（又は治療用）薬剤、及びこれらの組み合わせと併用して投与することが有利であり得る。詳細には、組成物は、併用治療薬として一緒に製剤化されることになるか、又は別個に投与されることになるかのいずれかである。
特定の例では、本発明の化合物を免疫抑制薬などの少なくとも１つの追加的な薬学的（又は治療用）薬剤、例えばコルチコステロイド類、シクロスポリン、タクロリムス、及び免疫抑制薬の組み合わせと併用して投与することが有利であり得る。詳細には、組成物は、併用治療薬として一緒に製剤化されることになるか、又は別個に投与されることになるかのいずれかである。
本発明の化合物は、１つ以上の他の治療剤と同時、又はその前又は後のいずれに投与されてもよい。本発明の化合物は、他の薬剤と別個に、同じ若しくは異なる投与経路によって、又は同じ医薬組成物で一緒に投与されてもよい。治療剤は、例えば、本発明の化合物と併用して患者に投与したとき治療的に活性な、又は治療活性を亢進させる化学的化合物、ペプチド、抗体、抗体断片又は核酸である。
一実施形態において、本発明は、療法において同時、別個又は逐次的に使用するための併用製剤として式Ａ１又はその下位式の化合物と少なくとも１つの他の治療剤とを含む製品を提供する。一実施形態において、療法は、ＬＡＴＳ１／２によって媒介される疾患又は病態の治療である。併用製剤として提供される製品には、式Ａ１の化合物と他の１つ又は複数の治療剤とを同じ医薬組成物中に一緒に含む組成物、又は別個の形態、例えばキットの形態の式Ａ１の化合物と他の１つ又は複数の治療剤が含まれる。
一実施形態において、本発明は、式Ａ２又はその下位式の化合物と別の１つ又は複数の治療剤とを含む医薬組成物を提供する。任意選択で、本医薬組成物は、上記に記載したとおりの薬学的に許容可能な担体を含み得る。
インビボ使用に関する一実施形態において、本発明は、２つ以上の別個の医薬組成物であって、そのうちの少なくとも１つが式Ａ２又はその下位式の化合物を含有する医薬組成物を含むキットを提供する。一実施形態において、本キットは、容器、分割されたボトル、分割されたチューブ、又は分割されたフォイル小袋など、前記組成物を別々に保持する手段を含む。かかるキットの例は、典型的にはゲル又は軟膏などの納入に使用されるとおりのフォイル小袋である。
インビボ使用に関する本発明の実施形態のキットは、種々の剤形の活性薬剤の投与、例えば経口及び局所投与に、種々の投薬間隔での別個の組成物の投与に、又は別個の組成物の互いに対する滴定に用いられ得る。コンプライアンスを補助するため、本発明のキットは典型的には投与指図を含む。
本発明の併用療法において、本発明の化合物及び他の治療剤は同じ又は異なる製造者によって製造及び／又は製剤化されてもよい。更に、インビボ使用に関する本発明の実施形態について、本発明の化合物と他の治療薬とは、（ｉ）医師への併用製品のリリース前に（例えば、本発明の化合物と他の治療剤とを含むキットの場合）；（ｉｉ）投与直前に医師自身によって（又は医師の手引きの下に）；（ｉｉｉ）患者自身において、例えば本発明の化合物と他の治療剤との逐次投与の最中に、一つの併用療法にまとめられてもよい。
従って、本発明は、ＬＡＴＳの阻害によって媒介される疾患又は病態を治療するための式Ａ１又はその下位式の化合物の使用に関し、ここで医薬品は別の治療剤と共に投与するように調製される。本発明はまた、ＬＡＴＳの阻害によって媒介される疾患又は病態を治療するための別の治療剤の使用にも関し、ここで医薬品は式Ａ１又はその下位式の化合物と共に投与される。
本発明はまた、ＬＡＴＳの阻害によって媒介される疾患又は病態の治療方法における使用のための式Ａ１又はその下位式の化合物にも関し、ここで式Ａ１又はその下位式の化合物は別の治療剤と共に投与するように調製される。本発明はまた、ＬＡＴＳの阻害によって媒介される疾患又は病態の治療方法における使用のための別の治療剤にも関し、ここで他の治療剤は式Ａ１又はその下位式の化合物と共に投与するように調製される。
本発明はまた、ＬＡＴＳの阻害によって媒介される疾患又は病態の治療方法における使用のための式Ａ１又はその下位式の化合物にも関し、ここで化合物は別の治療剤と共に投与される。本発明はまた、ＬＡＴＳの阻害によって媒介される疾患又は病態の治療方法における使用のための別の治療剤も提供し、ここで他の治療剤は式Ａ１又はその下位式の化合物と共に投与される。
本発明はまた、ＬＡＴＳ１／２によって媒介される疾患又は病態を治療するための式Ａ１又はその下位式の化合物の使用にも関し、ここで患者は以前（例えば２４時間以内に）別の治療剤によって治療されている。本発明はまた、ＬＡＴＳによって媒介される疾患又は病態を治療するための別の治療剤の使用も提供し、ここで患者は以前（例えば２４時間以内に）式Ａ１又はその下位式の化合物で治療されている。
化合物の調製
本発明の化合物は、本明細書に提供される方法、反応スキーム及び例を考慮の上で、有機合成分野の当業者に公知の幾つもの方法で調製することができる。本発明の化合物は、合成有機化学分野において公知の合成方法と併せて、以下に記載される方法を用いるか、又は当業者が理解するとおりのその変法によって合成することができる。好ましい方法としては、限定はされないが、以下に記載されるものが挙げられる。反応は、用いられる試薬及び材料に適切な、且つ変換を達成するのに好適な溶媒又は溶媒混合物中で行われる。有機合成分野の当業者によれば、分子上に存在する官能性が提案されている変換と整合的でなければならないことが理解されるであろう。これには時に、本発明の所望の化合物を得るため合成ステップの順序を変更し、又は別のものと比べてある特定の方法スキームを選択する判断が必要となり得る。
出発物質は、概してＡｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓ．）などの商業的供給元から入手可能であり、又は当業者に周知の方法を用いて容易に調製される（例えば、概してＬｏｕｉｓ Ｆ．Ｆｉｅｓｅｒ ａｎｄ Ｍａｒｙ Ｆｉｅｓｅｒ，Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｖ．１－１９，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９６７－１９９９ ｅｄ．）、Ｌａｒｏｃｋ，Ｒ．Ｃ．，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，２ｎｄ－ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ（１９９９）、又はＢｅｉｌｓｔｅｉｎｓ Ｈａｎｄｂｕｃｈ ｄｅｒ ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ Ｃｈｅｍｉｅ，４，Ａｕｆｌ．ｅｄ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（補遺を含む）（Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎオンラインデータベースからも入手可能）に記載される方法によって調製される。
例示を目的として、以下に示す反応スキームは、本発明の化合物の可能な合成経路並びに重要な中間体を提供する。個々の反応ステップの更に詳細な説明については、以下の実施例セクションを参照されたい。当業者は、本発明の化合物の合成に他の合成経路を用い得ることを理解するであろう。具体的な出発物質及び試薬がスキームに示され、以下で考察されるが、種々の誘導体及び／又は反応条件の実現に他の出発物質及び試薬を容易に代用することができる。加えて、以下に記載する方法によって調製される化合物の多くは、本開示を踏まえて当業者に周知の従来化学を用いて更に修飾することができる。
本発明の化合物の調製においては、中間体の遠隔官能基の保護が必要となり得る。かかる保護の必要性は、遠隔官能基の性質及び調製方法の条件に応じて異なることになる。かかる保護の必要性は当業者によって容易に決定される。保護基及びその使用の概要については、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，４ｔｈ Ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ（２００７）を参照されたい。トリチル保護基など、本発明の化合物の作製に取り入れられる保護基は１つの位置異性体として示され得るが、位置異性体の混合物としてもまた存在し得る。
略称
本明細書で使用されるとおりの略称は、以下のとおり定義される：「１×」は１回、「２×」は２回、「３×」は３回、「℃」はセ氏温度、「ａｑ」は水溶性、「Ｃｏｌ」はカラム、「ｅｑ」は１以上の当量、「ｇ」は１以上のグラム、「ｍｇ」は１以上のミリグラム、「ｎｍ」は１以上のナノメートル、「Ｌ」は１以上のリットル、「ｍＬ」又は「ｍｌ」は１以上のミリリットル、「ｕｌ」、「ｕＬ」、「μｌ」、又は「μＬ」は１以上のマイクロリットル、「ｎＬ」又は「ｎｌ」は１以上のナノリットル、「Ｎ」は規定、「ｕＭ」又は「μＭ」マイクロモル濃度、「ｎＭ」はナノモル濃度、「ｍｏｌ」は１以上のモル、「ｍｍｏｌ」は１以上のミリモル、「ｍｉｎ」は１以上の分、「ｈ」又は「ｈｒｓ」は１以上の時間、「ＲＴ」は室温、「ＯＮ」は一晩、「ａｔｍ」は気圧、「ｐｓｉ」はポンド毎平方インチ、「ｃｏｎｃ．」は濃度、「ａｑ」は水溶性、「ｓａｔ」又は「ｓａｔ’ｄ」は飽和、「ＭＷ」は分子量、「ｍｗ」又は「μ波」はマイクロ波、「ｍｐ」は融点、「Ｗｔ」は重量、「ＭＳ」又は「Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃ」は質量分析法、「ＥＳＩ」はエレクトロスプレーイオン化質量スペクトル法、「ＨＲ」は高分解能、「ＨＲＭＳ」は高分解能質量分析法、「ＬＣＭＳ」は液体クロマトグラフィー質量分析法、「ＨＰＬＣ」は高圧液体クロマトグラフィー、「ＲＰ ＨＰＬＣ」は逆相ＨＰＬＣ、「ＴＬＣ」又は「ｔｌｃ」は薄層クロマトグラフィー、「ＮＭＲ」は核磁気共鳴分光法、「ｎＯｅ」は核オーバーハウザー効果分光法、「１Ｈ」はプロトン、「δ」はデルタ、「ｓ」は一重線、「ｄ」は二重線、「ｔ」は三重線、「ｑ」は四重線、「ｍ」は多重線、「ｂｒ」は幅広線、「Ｈｚ」はヘルツ、「ｅｅ」は「鏡像体過剰率」及び「α」、「β」、「Ｒ」、「ｒ」、「Ｓ」、「ｓ」、「Ｅ」、及び「Ｚ」は当業者に周知の立体化学記号である。
本明細書において下記で用いられる以下の略称は、次のとおりの対応する意味を有する：
ＡＣ 実薬対照
ＡＩＢＮ アゾビスイソブチロニトリル
ＡＴＰ アデノシン三リン酸
Ｂｎ ベンジル
Ｂｏｃ ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル
Ｂｏｃ２Ｏ ジ－ｔｅｒｔ－ブチルジカーボネート
ＢＳＡ ウシ血清アルブミン
Ｂｕ ブチル
Ｃｓ２ＣＯ３ 無水炭酸セシウム
ＣＨＣｌ３ クロロホルム
ＤＡＳＴ 三フッ化ジエチルアミノ硫黄
ＤＢＵ ２，３，４，６，７，８，９，１０－オクタヒドロピリミド［１，２－ａ］アゼピン
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＭＡＰ ４－ジメチルアミノピリジン
ＤＭＥＭ ダルベッコ変法イーグル培地
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＤＰＰＡ ジフェニルリン酸アジド
ＤＴＴ ジチオトレイトール（ｄｉｔｈｉｏｌｔｈｒｅｉｔｏｌ）
ＥＡ 酢酸エチル
ＥＤＴＡ エチレンジアミン四酢酸
Ｅｑｕｉｖ． 当量
Ｅｔ エチル
Ｅｔ２Ｏ ジエチルエーテル
ＥｔＯＨ エタノール
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ＦＢＳ ウシ胎仔血清
ＨＡＴＵ ２－（７－アザ－１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＣｌ 塩酸
ＨＥＰＥＳ （４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸
ＨＰＭＣ （ヒドロキシプロピル）メチルセルロース
ＨＴＲＦ 均一時間分解蛍光
ｉ－Ｂｕ イソブチル
ｉ－Ｐｒ イソプロピル
ＫＯＡｃ 酢酸カリウム
ＬｉＡｌＨ４ 水素化アルミニウムリチウム
Ｍｅ メチル
ｍＣＰＢＡ ３－クロロペルオキシ安息香酸
ＭｅＣＮ アセトニトリル
ＭｎＯ２ 二酸化マンガン
Ｎ２ 窒素
ＮａＢＨ４ 水素化ホウ素ナトリウム
ＮａＨＣＯ３ 重炭酸ナトリウム
Ｎａ２ＳＯ４ 硫酸ナトリウム
ＮＢＳ Ｎ－ブロモコハク酸イミド
ＮＣ 中立対照
ＰＢＳ リン酸緩衝生理食塩水
ＰＦＡ パラホルムアルデヒド
Ｐｈ フェニル
ＰＰｈ３ トリフェニルホスフィン
Ｐｈ３Ｐ＝Ｏ トリフェニルホスフィンオキシド
ｐＹＡＰ ホスホ－ＹＡＰ
Ｒｆ 保持係数
ＲＴ 室温（℃）
Ｓｅｒ セリン
ｔ－Ｂｕ又はＢｕｔ ｔｅｒｔ－ブチル
Ｔ３Ｐ（登録商標） プロパンホスホン酸無水物
ＴＥＡ トリエチルアミン
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＵＶＡ 紫外線Ａ
ＹＡＰ Ｙｅｓ関連タンパク質（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１０４１３；公式記号：（ＹＡＰ１）
Ｉ．一般的合成経路
式Ｉ～ＶＩの化合物は、以下の一般スキームＩ～ＩＩＩ及び更に詳細にスキーム１～６に示されるとおり調製することができる。中間体及び例示される化合物の合成に関する詳細な説明もまた以下に開示される。
式Ｉ又はＩＩの化合物の調製に関する一般的スキームＩ
Figure 0007247102000173
二環式二塩化物ＧＳ１ｂは、Ｘ＝Ｃのとき市販品を入手可能であり、又はアミイソニコチン酸／アミドＧＳ１ａから環化及び塩素化を経て調製することができた。ＧＳ１ｂの二塩化物をアミノ化して適切な薬剤とカップリングすることによりＧＳ１ｃを形成し、これを更に官能化することにより、限定はされないが、保護及び脱保護ステップ、還元、加水分解、アルキル化、アミノ化、カップリングなどの任意の必要な官能化を経て式Ｉ又は式ＩＩを得た。
式ＩＩＩの化合物の調製に関する一般的スキームＩＩ
Figure 0007247102000174
式ＩＶの化合物の調製に関する一般的スキームＩＩＩ
Figure 0007247102000175
スキーム１．
式Ｖの化合物は、以下のスキーム１に示されるとおり調製することができる。ステップＣは、アミノ化及び限定はされないが、保護及び脱保護ステップ、還元、加水分解、アルキル化など、任意の必要な官能化を含むことができた。
Figure 0007247102000176
スキーム２．
或いは、式Ｖの化合物は、スキーム２に示されるとおり調製することができる。ステップＣは、アミノ化及び限定はされないが、保護及び脱保護ステップ、還元、加水分解、アルキル化など、任意の必要な官能化を含むことができた。一塩化物中間体２ｄを、限定はされないが金属媒介カップリング、アミノ化、アルキル化等並びに必要な保護及び脱保護ステップによって更に官能化すると、式Ｖの化合物が生じる。
Figure 0007247102000177
スキーム３．
式Ｉの化合物［式中、Ｒ５は水素である］は、スキーム３に示されるとおり調製することができる。ステップＣは、アミノ化及び限定はされないが、保護及び脱保護ステップ、還元、加水分解、アルキル化など、任意の必要な官能化を含むことができた。一塩化物中間体３ｄを、限定はされないが金属媒介カップリング、アミノ化、アルキル化等並びに必要な保護及び脱保護ステップによって更に官能化すると、式（Ｉ）の化合物［式中、Ｒ５は水素である］が生じる。
Figure 0007247102000178
スキーム４．
式Ｉの化合物［式中、Ｒ３及びＲ５は両方ともに水素である］は、スキーム４に示されるとおり調製することができる。ステップＣは、アミノ化及び限定はされないが、保護及び脱保護ステップ、還元、加水分解、アルキル化など、任意の必要な官能化を含むことができた、式Ｉの化合物［式中、Ｒ３及びＲ５は両方ともに水素である］が生じる。
Figure 0007247102000179
スキーム５．
式Ｉの化合物［式中、Ｒ３は水素である］は、スキーム５に示されるとおり調製することができる。ステップＤは、アミノ化及び限定はされないが、保護及び脱保護ステップ、還元、加水分解、アルキル化など、任意の必要な官能化を含むことができた。一塩化物中間体５ｄを、限定はされないが、金属媒介カップリング、アミノ化、アルキル化等並びに必要な保護及び脱保護ステップによって更に官能化すると、式Ｉの化合物［式中、Ｒ３は水素である］が生じる。
Figure 0007247102000180
スキーム６．
式ＶＩの化合物は、市販の二塩化物６ａ’（２，４－ジクロロ－１，７－ナフチリジン、Ａｑｕｉｌａ Ｐｈａｒｍａｔｅｃｈ）からスキーム６に示されるとおり調製することができる。ステップＡは、金属媒介カップリング並びに限定はされないが保護及び脱保護ステップ、環化、還元、加水分解、アルキル化など、任意の必要な官能化を含むことができた。ステップＢは、アミノ化並びに限定はされないが保護及び脱保護ステップ、還元、加水分解、アルキル化など、任意の必要な官能化を含むことができた。
Figure 0007247102000181
例示される例の調製
以下の例は、本明細書に開示される方法を用いて調製され、単離され、及び特徴付けられたものである。以下の例は本発明の部分的な範囲を示し、本発明の範囲を限定することは意図されない。
特に指定のない限り、出発物質は、概して、東京化成工業株式会社（日本）、Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｃｈｅｍｈｅｒｅ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．（上海、中国）、Ａｕｒｏｒａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ ＬＬＣ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、ＦＣＨ Ｇｒｏｕｐ（ウクライナ）、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｃｏ．（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、Ｗｉｓ．）、Ｌａｎｃａｓｔｅｒ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｉｎｃ．（Ｗｉｎｄｈａｍ、Ｎ．Ｈ．）、Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ（Ｆａｉｒｌａｗｎ、Ｎ．Ｊ．）、Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｌｔｄ．（Ｃｏｒｎｗａｌｌ、英国）、Ｔｙｇｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｌｏｎｄｏｎ、英国）、Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（米国）、Ｍａｔｒｉｘ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（米国）、Ｃｏｎｉｅｒ Ｃｈｅｍ＆Ｐｈａｒｍ Ｃｏ．，Ｌｔｄ（中国）、Ｅｎａｍｉｎｅ Ｌｔｄ（ウクライナ）、Ｃｏｍｂｉ－Ｂｌｏｃｋｓ，Ｉｎｃ．（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、米国）、Ｏａｋｗｏｏｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ．（米国）、Ａｐｏｌｌｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｌｔｄ．（英国）、Ａｌｌｉｃｈｅｍ ＬＬＣ．（米国）及びＵｋｒｏｒｇｓｙｎｔｅｚ Ｌｔｄ（ラトビア）など、非排他的な商業的供給元から入手可能である。
例１～２９０の特徴付けに用いられるＬＣＭＳ法
分析的ＬＣ／ＭＳは、ＡｇｉｌｅｎｔシステムでＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎソフトウェアを使用して実施する。このシステムは以下からなる：
・ Ａｇｉｌｅｎｔ Ｇ１３１２ バイナリポンプ
・ Ａｇｉｌｅｎｔ Ｇ１３６７ ウェルプレートオートサンプラー
・ Ａｇｉｌｅｎｔ Ｇ１３１６ サーモスタットカラムコンパートメント
・ Ａｇｉｌｅｎｔ Ｇ１３１５ ダイオードアレイ検出器
・ Ａｇｉｌｅｎｔ ６１４０／６１５０ 質量分析計
・ ＳＯＦＴＡ蒸発光散乱検出器
典型的な方法条件は以下のとおりである：
・ 流速：０．９ｍＬ／分
・ カラム：１．８マイクロメートル ２．１×５０ｍｍ Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＨＳＳ Ｔ３ Ｃ１８カラム
・ 移動相Ａ：水＋０．０５％ＴＦＡ
・ 移動相Ｂ：アセトニトリル＋０．０３５％ＴＦＡ
・ ランタイム：２．２５分
・ このシステムは１．３５分で１０％Ｂ～９０％Ｂのグラジエントを実行する。グラジエントの後に１００％Ｂで０．６分の洗浄が続く。方法の残り時間でシステムを初期条件に戻す。
・ 典型的な質量分析計スキャン範囲は１００～１０００ａｍｕである。
例２９１～３３５の特徴付けに用いられるＬＣＭＳ法
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：
システム：Ｗａｔｅｒｓ ＳＱ検出器を備えたＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ
カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ ＨＳＳ Ｔ３ １．８μｍ ２．１×５０ｍｍ
流量：１．０ｍｌ／分、カラム温度：６０℃
グラジエント：１．４分で５～９８％Ｂ、Ａ＝水＋０．０５％ギ酸＋３．７５ｍＭ酢酸アンモニウム、Ｂ＝アセトニトリル＋０．０４％ギ酸。
ＬＣ－ＭＳ（方法２）：
システム：Ｗａｔｅｒｓ ＳＱ検出器を備えたＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｈ－Ｃｌａｓｓ ＵＰＬＣ
カラム：ＢＥＨ Ｃ１８ １．７μｍ ２．１×５０ｍｍ
流量：３．０ｍｌ／分、カラム温度：３０℃
グラジエント：２．７分で２～１００％Ｂ、Ａ＝２ｍＭ酢酸アンモニウム／水＋０．１％ギ酸、Ｂ＝アセトニトリル＋０．１％ギ酸。
例１～２９０の特徴付けに用いられるＮＭＲ
プロトンスペクトルは、特に注記されない限り、５ｍｍ ＱＮＰクライオプローブを備えたＢｒｕｋｅｒ ＡＶＡＮＣＥ ＩＩ ４００ＭＨｚ又は５ｍｍ ＱＮＰプローブを備えたＢｒｕｋｅｒ ＡＶＡＮＣＥ ＩＩＩ ５００ＭＨｚで記録する。化学シフトはジメチルスルホキシド（δ２．５０）、クロロホルム（δ７．２６）、メタノール（δ３．３４）、又はジクロロメタン（δ５．３２）に関してｐｐｍで報告する。少量の乾燥試料（２～５ｍｇ）を適切な重水素化溶媒（１ｍＬ）中に溶解させる。
例２９１～３３５の特徴付けに用いられるＮＭＲ
プロトンスペクトルは、クライオプローブを備えたＢｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ４００ ＮＭＲ分光計（４００ＭＨｚ）又はクライオプローブを備えたＢｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ６００ ＮＭＲ分光計（６００ＭＨｚ）で記録する。化学シフト（δ値）はテトラメチルシランからの低磁場側へのｐｐｍで報告し、スペクトル分割パターンは、一重線（ｓ）、二重線（ｄ）、三重線（ｔ）、四重線（ｑ）、五重線（ｐ）、多重線、未分割又は更に重複するシグナル（ｍ）、幅広シグナル（ｂｒ）で指示される。溶媒は括弧内に示す。
試薬及び材料
溶媒及び試薬は供給業者から購入し、それ以上いかなる精製も行わず使用した。塩基性イオン交換樹脂カートリッジＰｏｒａＰａｋ（商標）Ｒｘｎ ＣＸ ２０ｃｃ（２ｇ）はＷａｔｅｒｓから購入した。相分離器カートリッジ（Ｉｓｏｌｕｔｅ Ｐｈａｓｅ Ｓｅｐａｒａｔｏｒ）はＢｉｏｔａｇｅから購入した。Ｉｓｏｌｕｔｅ吸収剤（Ｉｓｏｌｕｔｅ ＨＭ－Ｎ）はＢｉｏｔａｇｅから購入した。
本例の精製に用いられるＩＳＣＯ法
ＩＳＣＯフラッシュクロマトグラフィーはプレパックシリカＲｅｄｉＳｅｐ（登録商標）カラムを備えたＴｅｌｅｄｙｎｅ ＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システムで行う。
本例の精製に用いられる分取ＨＰＬＣ法
分取ＨＰＬＣはＷａｔｅｒｓ ＡｕｔｏｐｒｅｐシステムでＭａｓｓＬｙｎｘ及びＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘソフトウェアを使用して行う。このシステムは以下からなる：
・ Ｗａｔｅｒｓ ２７６７オートサンプラー／フラクションコレクター
・ Ｗａｔｅｒｓ ２５２５バイナリポンプ
・ Ｗａｔｅｒｓ ５１５メークアップポンプ
・ Ｗａｔｅｒｓ ２４８７二波長紫外線検出器
・ Ｗａｔｅｒｓ ＺＱ質量分析計
典型的な方法条件は以下のとおりである：
・ 流速：１００ｍＬ／分
・ カラム：１０マイクロメートル １９×５０ｍｍ Ｗａｔｅｒｓ Ａｔｌａｎｔｉｓ Ｔ３ Ｃ１８カラム
・ 注入量：０～１０００マイクロリットル
・ 移動相Ａ：水＋０．０５％ＴＦＡ
・ 移動相Ｂ：アセトニトリル＋０．０３５％ＴＦＡ
・ ランタイム：４．２５分
このシステムは初期条件で０．２５分保持した後に３分で本例に対して適宜ｘ％Ｂ～ｙ％Ｂのグラジエントを実行する。グラジエントの後に１００％Ｂで０．５分の洗浄が続く。方法の残り時間でシステムを初期条件に戻す。
画分収集はＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘソフトウェアを通じて質量検出によって開始される。
本例の精製に用いられるキラル分取ＨＰＬＣ法
ＳＦＣキラルスクリーニングはＷａｔｅｒｓ ＺＱ質量分析計と組み合わせたＴｈａｒ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｐｒｅｐ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒシステムで行う。Ｔｈａｒ Ｐｒｅｐ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒシステムは以下からなる：
・ Ｌｅａｐ ＨＴＣ ＰＡＬオートサンプラー
・ Ｔｈａｒ送液モジュール（０～１０ｍＬ／分）
・ Ｔｈａｒ ＳＦＣ １０ポジションカラムオーブン
・ Ｗａｔｅｒｓ ２９９６ ＰＤＡ
・ Ｊａｓｃｏ ＣＤ－２０９５キラル検出器
・ Ｔｈａｒ自動背圧レギュレータ。
Ｔｈａｒ構成要素は全て、ＳｕｐｅｒＰｕｒｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｓｅｒｉｅｓラインの一部である。
システムは２ｍＬ／分で流し（ＷｈｅｌｋＯ－１カラムについては４ｍＬ／分）、３０℃に保つ。システム背圧は１２５バールに設定する。各試料は一連の６つの３マイクロメートルカラムに通してスクリーニングする：
・ ３マイクロメートル ４．６×５０ｍｍ ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＡＤ
・ ３マイクロメートル ４．６×５０ｍｍ ＣｈｉｒａｌＣｅｌ ＯＤ
・ ３マイクロメートル ４．６×５０ｍｍ ＣｈｉｒａｌＣｅｌ ＯＪ
・ ３マイクロメートル ４．６×２５０ｍｍ Ｗｈｅｌｋ Ｏ－１
・ ３マイクロメートル ４．６×５０ｍｍ ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＡＳ
・ ３マイクロメートル ４．６×５０ｍｍ Ｌｕｘ－Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ－２
このシステムは５分で５％共溶媒～５０％共溶媒のグラジエント、続いて５０％共溶媒で０．５分保持、５％共溶媒への再度切り替え及び初期条件で０．２５分保持を実行する。各グラジエント間に４分の平衡化方法、スクリーニングされる次のカラムを通じた５％共溶媒のフローがある。スクリーニングされる典型的な溶媒は、ＭｅＯＨ、ＭｅＯＨ＋２０ｍＭ ＮＨ３、ＭｅＯＨ＋０．５％ＤＥＡ、ＩＰＡ、及びＩＰＡ＋２０ｍＭ ＮＨ３である。
これらのグラジエント方法のうちの１つを用いて分離が検出されると、イソクラティック方法が展開されることになり、必要に応じてＴｈａｒ Ｐｒｅｐ８０システムでの精製にスケールアップされる。
中間体の合成
中間体１ｃ（スキーム１）：４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン
Figure 0007247102000182
ステップＡ：２０ｍＬマイクロ波バイアルにおいてＤＭＡ（容積：５ｍＬ）中に３－アミノイソニコチンアミド（１ａ、２ｇ、１４．５８ｍｍｏｌ）、イソニコチンアルデヒド（１．５２１ｍＬ、１６．０４ｍｍｏｌ）、亜硫酸水素ナトリウム（１．８２１ｇ、１７．５０ｍｍｏｌ）及び４－メチルベンゼンスルホン酸水和物（０．２７７ｇ、１．４５８ｍｍｏｌ）を加えることによりオレンジ色の懸濁液を得た。この反応物を十分に撹拌し、電子レンジで１６０℃で１２分間加熱した。反応混合物を水で希釈し、ろ過した。固体を水、ＭｅＯＨ及びエーテルで洗浄することにより、２．０３ｇのオフホワイト色の固体を生成物１ｂとして得た（５９％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８８－８．７８（ｍ，２Ｈ），８．７３（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１６－８．０８（ｍ，２Ｈ），８．０３（ｄｄ，Ｊ＝５．２，０．９Ｈｚ，１Ｈ）．
ステップＢ：５ｍＬマイクロ波反応器に２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－オール（１ｂ、５００ｍｇ、２．２３０ｍｍｏｌ）及びフェニルホスホン酸二塩化物（１５６４マイクロリットル、１１．１５ｍｍｏｌ）があり、褐色の懸濁液を得た。この反応混合物を１７０℃で３０分間撹拌したところで、ＬＣＭＳによって完全な変換が示された。反応混合物を氷／水でクエンチし、飽和Ｎａ２ＣＯ３で中和し、次にＤＣＭ×３で抽出して、生成物１ｃを得た（７４％）。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．６５（ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，１Ｈ），８．９６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．８７（ｓ，２Ｈ），８．４７－８．３０（ｍ，２Ｈ），８．１８（ｄｄ，Ｊ＝５．６，１．０Ｈｚ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２４３．１．
中間体２ｃ（スキーム２）：２，４－ジクロロピリド［３，４－ｄ］ピリミジン
Figure 0007247102000183
ステップＡ：尿素（４０．００ｇ、６６６．００ｍｍｏｌ）及び３－アミイソニコチン酸（２ａ、１８．４０ｇ、１３３．２０ｍｍｏｌ）の混合物を２１０℃で１時間加熱した（注記：溶媒は使用しなかった）。ＮａＯＨ（２Ｎ、３２０ｍＬ）を加え、混合物を９０℃で１時間撹拌した。ろ過によって固体を収集し、水で洗浄した。このように得られた粗製生成物をＨＯＡｃ（４００ｍＬ）中に懸濁し、１００℃で１時間撹拌した。この混合物を室温で冷却し、ろ過し、固体を多量の水で洗浄し、次に真空乾燥させることにより、それ以上精製することなくピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン（２ｂ、１７．００ｇ、７８％収率）を得た。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：１６４．０。
ステップＢ：トルエン（２００ｍＬ）中のピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン（２ｂ、２０．００ｇ、１２２．６０ｍｍｏｌ）及びＰＯＣｌ３（３２８．０３ｇ、２．１４ｍｏｌ）の混合物にＤＩＥＡ（３１．６９ｇ、２４５．２０ｍｍｏｌ）を滴下して加え、この反応混合物を２５℃で一晩（１８時間）撹拌して懸濁液を得た。
溶媒及びＰＯＣｌ３を真空下で除去し、ＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈し、－２０℃でＤＩＥＡによってｐＨ＝７に中和し、再び濃縮して、残渣をカラム（２０～５０％ＥＡ／ＰＥ）によって精製することにより、生成物（２ｃ、２０．００ｇ、９９．９９ｍｍｏｌ、８２％収率）を黄色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ９．５２（ｓ，１Ｈ），８．９２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２００．０．
中間体３ｃ（スキーム３）：４，８－ジクロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン
Figure 0007247102000184
ステップＡ：２０ｍＬマイクロ波反応器においてＤＭＡ（容積：１０ｍＬ）中に３－アミノイソニコチンアミド（３ａ、６５０ｍｇ、３．７９ｍｍｏｌ）、及びイソニコチンアルデヒド（４８７ｍｇ、４．５５ｍｍｏｌ）、亜硫酸水素ナトリウム（７８８ｍｇ、７．５８ｍｍｏｌ）を加えることにより黄色の懸濁液を得た。この反応混合物をマイクロ波下１６０℃で１０分間撹拌した。反応混合物を水で希釈し、ろ過し、ＭｅＯＨ及びエーテルで洗浄した。固体を収集して生成物３ｂ（８－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－オール、３００ｍｇ、２９％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．８６－８．８０（ｍ，２Ｈ），８．４５（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），８．１８－８．１２（ｍ，２Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ）．
ステップＢ：２０ｍＬマイクロ波反応器において（８－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－オール（３ｂ、３００ｍｇ、１．１６０ｍｍｏｌ）、及びフェニルホスホン酸二塩化物（１ｍＬ、７．１３ｍｍｏｌ）を混合することにより黄色の懸濁液を得た。この反応混合物をマイクロ波下１７０℃で６０分間撹拌した。反応混合物を水で希釈し、ろ過した。固体を水、ＭｅＯＨ及びエーテルで洗浄することにより、表題生成物３ｃ（７８％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．０５－８．９６（ｍ，２Ｈ），８．５２（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），８．４６－８．３８（ｍ，２Ｈ），８．０５（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ）．（ＮＭＲサンプルはＴＦＡが１滴加えられ、それ以外に、２セットのピークが観察された。）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２７７．０．
中間体４ｃ（スキーム４、中間体４ｃ、式中ＸはＦであり、及びＡは４－ピリジニルである）：４－クロロ－６－フルオロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン
Figure 0007247102000185
ステップＡ：ＭｅＯＨ（３０ｍｌ）中のイソニコチノニトリル（８００ｍｇ、７．６９ｍｍｏｌ）の溶液をナトリウムメトキシド（０．４７４ｍｌ、５．４Ｍ、２．５６ｍｍｏｌ）によって室温で１時間処理した。次に５－アミノ－２－フルオロイソニコチン酸（１．０ｇ、６．４１ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を２４時間還流させた。室温に冷却した後、ろ過によって固体生成物を収集した。これをＥｔＯＡｃで洗浄し、次に真空乾燥させることにより、６－フルオロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－オール（４ｂ、７５６ｍｇ、４８．７％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．８９（ｓ，１Ｈ），８．８１（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），８．１４－８．０６（ｍ，２Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２４３．１０．
ステップＢ：ＤＣＥ（４０ｍｌ）中の６－フルオロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－オール（４ｂ、７５０ｍｇ、３．１ｍｍｏｌ）の混合物に塩化チオニル（１．８１ｍｌ、２４．８ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（０．１ｍｌ）を加えた。次にこの混合物を８５℃で３時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、一晩真空乾燥させた。この粗製生成物（９５０ｍｇ）をそれ以上ワークアップ又は精製することなく次のステップ反応に使用した。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２６１．１０。
中間体５ｄ（スキーム５）：４，５－ジクロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン
Figure 0007247102000186
ステップＡ：ＤＭＦ（３０ｍｌ）中の３－ブロモ－５－フルオロイソニコチン酸（５ａ、１．８７ｇ、８．５ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（４．８５ｇ、１２．７５ｍｍｏｌ）の混合物をＤＩＥＡ（４．５ｍｌ）に加え、この混合物を室温で２０分間撹拌し、次にイソニコチンイミドアミド（１．２３６ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）を加えた。撹拌を室温で更に１５時間継続した。反応混合物を減圧下で濃縮した。次にこの淡褐色のシロップ粗製混合物をＤＣＭ中に溶解させてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し（０～１０％ＭｅＯＨ／溶媒Ａで溶出、溶媒ＡはＭｅＯＨ中４リットルＤＣＭ及び８ｍｌの７Ｎアンモニア溶液の混合物である）、画分６６～８０をプールして濃縮することにより、所望の生成物３－ブロモ－５－フルオロ－Ｎ－（イミノ（ピリジン－４－イル）メチル）イソニコチンアミド５ｂ（５６６ｍｇ、２０．６％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．２７（ｓ，１Ｈ），１０．０９（ｓ，１Ｈ），８．７９－８．７３（ｍ，２Ｈ），８．７１（ｓ，２Ｈ），７．９５－７．８９（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２３．０．
ステップＢ：２０ｍｌマイクロ波反応ベッセルにおいてＤＭＡ（８ｍｌ）中の３－ブロモ－５－フルオロ－Ｎ－（イミノ（ピリジン－４－イル）メチル）イソニコチンアミド（５ｂ、６００ｍｇ、１．８５７ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（０．３３ｍｌ、１．８５７ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２５７ｍｇ、１．８５７ｍｍｏｌ）及びＤＢＵ（０．２８ｍｌ、１．８５７ｍｍｏｌ）の混合物を１５０℃で４５分間加熱した（マイクロ波照射）。この反応混合物を水（２０ｍｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×６０ｍｌ）で抽出し、水相中に所望の生成物が残った。次に水相を逆相ＩＳＣＯ（１０～５０％ＣＨ３ＣＮ／水）によって精製することにより、所望の生成物５－ブロモ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－オール５ｃ（５２０ｍｇ、８０％純度、７４％）を得た。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０３．０。
ステップＣ：５－ブロモ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－オール（５ｃ、１５０ｍｇ、０．４９５ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ３ＣＮ（２ｍｌ）中に溶解させた後、続いてＰＯＣｌ３（７５９ｍｇ、４．９５ｍｍｏｌ）を加えた。次に反応混合物を１００℃で１６時間加熱した。ＬＣＭＳによって反応が完了したことが示された。この反応物を室温で冷却し、溶媒を蒸発させた。残渣を氷水（４０ｍｌ）で希釈し、次にＥｔＯＡｃ（３×４０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させて、ろ過し、蒸発乾固させることにより、所望の生成物４，５－ジクロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン５ｄ（８６％）を得た。この生成物はそれ以上精製せずに次のステップに直接使用した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．０５（ｓ，１Ｈ），８．８７（ｓ，２Ｈ），８．６８（ｓ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２７７．０．
中間体６ｂ（スキーム６、中間体６ｂ’、式中Ａは４－ピリジニルである）：４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン
Figure 0007247102000187
ステップＡ：２０ｍＬマイクロ波反応器においてアセトニトリル（２ｍＬ）にテトラキスパラジウム（５８．１ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１．２５６ｍＬ、２．５１ｍｍｏｌ）、及び２，４－ジクロロ－１，７－ナフチリジン（６ａ、２００ｍｇ、１．００５ｍｍｏｌ）及びピリジン－４－イルボロン酸（１３０ｍｇ、１．０５５ｍｍｏｌ）を加えることによりオレンジ色の懸濁液を得た。この反応混合物をマイクロ波下１２０℃で６０分間撹拌した。粗製混合物をＤＣＭ、Ｈ２Ｏで希釈し、分離し、ＤＣＭ×３で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４乾燥させて、ろ過し、濃縮した。残渣を０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、生成物（６２％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．５８（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８５－８．７８（ｍ，４Ｈ），８．３２－８．２９（ｍ，２Ｈ），８．１１（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２４２．１．
式Ａ１の化合物の合成
例１：Ｎ－（２－シクロプロピルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン（化合物１）
Figure 0007247102000188
４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）からスキーム１にあるとおりステップＣを用いて表題化合物を調製した。
ステップＣ：２０ｍＬバイアルにおいて４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（３０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を室温でＤＭＦ（０．７ｍＬ）中で撹拌し、Ｎ２で脱気した。ＴＥＡ（１９ｕＬ、０．１４ｍｍｏｌ）を加えて５分間撹拌し、次にＫＦ（７ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で１５分間撹拌し、次に２－シクロプロピルプロパン－２－アミン（０．０１３ｍＬ、０．１２ｍｍｏｌ）を加え、脱気し、次に８０℃で２時間撹拌した。次に反応物を濃縮し、０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、生成物Ｎ－（２－シクロプロピルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン（５０％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８０（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４０（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｍ，２Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ），１．９４（ｍ，１Ｈ），１．５２（ｓ，６Ｈ），０．４９（ｍ，４Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０６．２．
例２～１１０：
以下に記載する例２～１１０は、特に明記する場合を除き、例１に関して記載されるプロトコルに従いそれぞれ４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）及び様々なアミン類を使用して合成した。
例２：Ｎ－（２－シクロプロピルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000189
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２１（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７８（ｍ，２Ｈ），８．５８（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），８．３１（ｍ，２Ｈ），７．８９（ｄｄ，Ｊ＝５．９，０．９Ｈｚ，１Ｈ），３．９０（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，４Ｈ），１．４０（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８０．１．
例３：Ｎ－エチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000190
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２２（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７８（ｍ，２Ｈ），８．５８（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｍ，２Ｈ），７．８８（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．８Ｈｚ，１Ｈ），４．９５－４．９０（ｍ，１Ｈ），３．８１（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），１．４０（ｓ，３Ｈ），１．３８（ｓ，３Ｈ），１．３５（ｍ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９４．２．
例４：２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000191
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ９．４５（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８３（ｍ，２Ｈ），８．７８（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．７０－８．６０（ｍ，２Ｈ），７．６３（ｓ，１Ｈ），５．９８－５．９２（ｍ，１Ｈ），５．８０－５．７５（ｍ，１Ｈ），１．８１（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２０．１．
例５：Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000192
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２０（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７８（ｍ，２Ｈ），８．５５（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３１（ｍ，２Ｈ），８．０３（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），５．１５－５．１０（ｍ，１Ｈ），３．３４（ｓ，３Ｈ），１．３５（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８０．２．
例６：Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000193
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７６（ｍ，２Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．５０（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），８．３２（ｍ，２Ｈ），８．２８（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），４．７４－４．６７（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），１．３６（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２６６．１．
例７：Ｎ－（１－メトキシ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000194
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８０（ｍ，２Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．４０（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｍ，２Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ），３．８５（ｓ，２Ｈ），３．２８（ｓ，３Ｈ），１．６０（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１０．２．
例８：Ｎ－（４－メトキシ－２－メチルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000195
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８０（ｍ，２Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｍ，２Ｈ），８．２８（ｍ，１Ｈ），７．８５（ｓ，１Ｈ），３．４８（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），３．２０（ｓ，３Ｈ），２．３５（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），１．６４（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２４．２．
例９：Ｎ－ブチル－Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000196
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２１（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７７（ｍ，２Ｈ），８．５５（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），８．３１（ｍ，２Ｈ），８．０８（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），３．９２（ｍ，２Ｈ），３．５４（ｓ，３Ｈ），１．８２－１．７５（ｍ，２Ｈ），１．４８－１．３６（ｍ，２Ｈ），０．９８（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９４．２．
例１０：Ｎ－エチル－Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000197
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２１（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７８（ｍ，２Ｈ），８．５５（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３１（ｍ，２Ｈ），８．０５（ｄｄ，Ｊ＝５．９，０．９Ｈｚ，１Ｈ），３．９４（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），３．５０（ｓ，３Ｈ），１．３９（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２６６．１．
例１１：２－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）エタン－１－オール
Figure 0007247102000198
Figure 0007247102000199
ステップ１：０℃で４０ｍＬバイアルにおいて８ｍＬの乾燥ＤＣＭ中に２－アミノ－２－メチルプロパン－１－オール（１．５ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）を加えた。ＤＩＥＡ（３．２ｍＬ、１８．５ｍｍｏｌ）、次にカルボノクロリド酸ベンジル（２．３７ｍＬ、１６．８ｍｍｏｌ）を一部ずつ加えた。この反応混合物を２時間撹拌してゆっくりと室温に温めた。気流下で溶媒を蒸発させた。残渣を０～５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、生成物ベンジル－（１－ヒドロキシ－２－メチルプロパン－２－イル）カルバメート（９０％）を得た。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２２４．３。
ステップ２：２０ｍＬバイアルにおいて５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中にベンジル－（１－ヒドロキシ－２－メチルプロパン－２－イル）カルバメート（０．６３ｇ、２．８ｍｍｏｌ）を加えた。水酸化カリウム（０．１６ｇ、２．８ｍｍｏｌ）を０．５ｍＬのＨ２Ｏ中に加え、次に２－ブロモ酢酸ｔｅｒｔ－ブチル（０．６２ｍＬ、４．２ｍｍｏｌ）及び臭化テトラブチルアンモニウム（９０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を３０℃で一晩撹拌した。気流下で溶媒を蒸発させた。残渣を０～４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、生成物ｔｅｒｔ－ブチル２－（２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－２－メチルプロポキシ）アセテート（３５％）を得た。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３８．４。
ステップ３：０℃で２０ｍＬバイアルにおいて１ｍＬの乾燥ＤＭＦ中にｔｅｒｔ－ブチル２－（２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－２－メチルプロポキシ）アセテート（０．１４ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を加えた。水素化ホウ素リチウム（０．４５ｍＬ、０．９１ｍｍｏｌ）を一部ずつ加え、室温で４時間撹拌し、次に水でクエンチした。ＤＣＭを抽出に使用し、気流下で溶媒を蒸発させた。残渣を０～７０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、生成物ベンジル－（１－（２－ヒドロキシエトキシ）－２－メチルプロパン－２－イル）カルバメート（３５％）を得た。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２６８．３。
ステップ４：２０ｍＬセプタムシールバイアルにおいて１．２ｍＬのＥｔＯＨ中にベンジル－（１－（２－ヒドロキシエトキシ）－２－メチルプロパン－２－イル）カルバメート（０．０３ｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルを室温のＮ２で激しくパージした。１すくい弱のＰｄ／Ｃ（３０％、触媒量）を慎重に加え、この反応物をＮ２下に維持した。次にＨ２バルーンを用いて反応ベッセルを完全にフラッシュし、次にＨ２圧力下で４時間撹拌した。反応物からＨ２を除去し、次にベッセルをＮ２でパージした。次に材料をＮａ２ＳＯ４及びセライトでろ過し、気流下で溶媒を蒸発させた。残渣のそれ以上の精製は不要であった。２－（２－アミノ－２－メチルプロポキシ）エタノール（９５％）。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ３．７６－３．７３（ｍ，２Ｈ），３．６２－３．５９（ｍ，２Ｈ），３．２６（ｓ，２Ｈ），１．２７（ｓ，２Ｈ），１．２０（ｄ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，１Ｈ），１．１１（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：１３４．２．
ステップ５：２０ｍＬマイクロ波バイアルにおいてＤＭＡ（容積：５ｍＬ）中に３－アミノイソニコチンアミド（１ａ、２ｇ、１４．５８ｍｍｏｌ）、イソニコチンアルデヒド（１．５２１ｍＬ、１６．０４ｍｍｏｌ）、亜硫酸水素ナトリウム（１．８２１ｇ、１７．５０ｍｍｏｌ）及び４－メチルベンゼンスルホン酸水和物（０．２７７ｇ、１．４５８ｍｍｏｌ）を加えることによりオレンジ色の懸濁液を得た。この反応物を十分に撹拌し、電子レンジで１６０℃で１２分間加熱した。反応混合物を水で希釈し、ろ過した。固体を水、ＭｅＯＨ及びエーテルで洗浄することにより、２．０３ｇのオフホワイト色の固体を生成物１ｂとして得た（５９％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８８－８．７８（ｍ，２Ｈ），８．７３（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１６－８．０８（ｍ，２Ｈ），８．０３（ｄｄ，Ｊ＝５．２，０．９Ｈｚ，１Ｈ）．
ステップ６：５ｍＬマイクロ波反応器に２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－オール（１ｂ、５００ｍｇ、２．２３０ｍｍｏｌ）及びフェニルホスホン酸二塩化物（１５６４マイクロリットル、１１．１５ｍｍｏｌ）があり、褐色の懸濁液を得た。この反応混合物を１７０℃で３０分間撹拌したところで、ＬＣＭＳによって完全な変換が示された。反応混合物を氷／水でクエンチし、飽和Ｎａ２ＣＯ３で中和し、次にＤＣＭ×３で抽出して、生成物１ｃを得た（７４％）。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．６５（ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，１Ｈ），８．９６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．８７（ｓ，２Ｈ），８．４７－８．３０（ｍ，２Ｈ），８．１８（ｄｄ，Ｊ＝５．６，１．０Ｈｚ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２４３．１．
ステップ７：２０ｍＬバイアルにおいて４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）（１５０ｍｇ、０．６１８ｍｍｏｌ）を室温でＤＭＳＯ（１．５ｍＬ）中に撹拌し、Ｎ２で脱気した。ＤＩＥＡ（３２４マイクロリットル、１．８５ｍｍｏｌ）を加えて５分間撹拌し、次にＫＦを加えた（３６ｍｇ、０．６１８ｍｍｏｌ）。この混合物を室温で１５分間撹拌し、次に２－（２－アミノ－２－メチルプロポキシ）エタノール（９９ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を加えて脱気し、次に６０℃で３０分間撹拌した。次に反応物を濃縮し、０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）におけるフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、表題化合物（２５％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８０（ｍ，２Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３５（ｍ，１Ｈ），８．２９（ｍ，２Ｈ），７．７６（ｓ，１Ｈ），４．６４－４．５９（ｍ，１Ｈ），３．９０（ｓ，２Ｈ），３．５０－３．４４（ｍ，４Ｈ），１．６１（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３４０．２
例１２：２－メチル－１－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）プロパン－２－オール
Figure 0007247102000200
ステップ１：０℃で４０ｍＬバイアルにおいて８ｍＬの乾燥ＤＣＭ中に２－アミノ－２－メチルプロパン－１－オール（１．５ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）を加えた。ＤＩＥＡ（３．２ｍＬ、１８．５ｍｍｏｌ）、次にカルボノクロリド酸ベンジル（２．３７ｍＬ、１６．８ｍｍｏｌ）を一部ずつ加えた。この反応混合物を２時間撹拌してゆっくりと室温に温めた。気流下で溶媒を蒸発させた。残渣を０～５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、生成物ベンジル－（１－ヒドロキシ－２－メチルプロパン－２－イル）カルバメート（９０％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ７．４１－７．２９（ｍ，５Ｈ），５．０６（ｓ，２Ｈ），４．９７－４．８３（ｍ，１Ｈ），４．７０（ｓ，１Ｈ），３．６２（ｓ，２Ｈ），１．３４－１．１９（ｍ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２２４．３．
ステップ２：２０ｍＬバイアルにおいて５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中にベンジル－（１－ヒドロキシ－２－メチルプロパン－２－イル）カルバメート（０．６３ｇ、２．８ｍｍｏｌ）を加えた。０．５ｍＬのＨ２Ｏ中に水酸化カリウム（０．１６ｇ、２．８ｍｍｏｌ）を加え、次に２－ブロモ酢酸ｔｅｒｔ－ブチル（０．６２ｍＬ、４．２ｍｍｏｌ）及び臭化テトラブチルアンモニウム（９０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を３０℃で一晩撹拌した。気流下で溶媒を蒸発させた。残渣を０～４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、生成物ｔｅｒｔ－ブチル２－（２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－２－メチルプロポキシ）アセテート（３５％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ７．３９－７．２８（ｍ，５Ｈ），５．５２（ｓ，１Ｈ），５．０６（ｓ，２Ｈ），３．９６（ｓ，２Ｈ），３．４５（ｓ，２Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ），１．３６（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３８．４．
ステップ３：ｔｅｒｔ－ブチル２－（２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－２－メチルプロポキシ）アセテート（７００ｍｇ、４．１５ｍｍｏｌ）を氷浴中でＤＣＭ（５ｍＬ）中に１０分間撹拌した。臭化メチルマグネシウム（３０ｍＬ、４２ｍｍｏｌ）をゆっくりと一部ずつ加え、次に２時間にわたって室温に温めながら撹拌した。次にこの反応物を水でクエンチし、ＤＣＭで３回抽出した。有機層を合わせ、濃縮し、０～５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、生成物ベンジル（１－（２－ヒドロキシ－２メチルプロポキシ）－２－メチルプロパン－２－イル）カルバメート（５５％）を得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝２９６．４。
ステップ４：２０ｍＬセプタムシールバイアルにおいて１．２ｍＬのＥｔＯＨ中にベンジル（１－（２－ヒドロキシ－２－メチルプロポキシ）－２－メチルプロパン－２－イル）カルバメート（０．０３ｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルを室温のＮ２で激しくパージした。１すくい弱のＰｄ／Ｃ（３０％、触媒量）を慎重に加え、この反応物をＮ２下に維持した。次にＨ２バルーンを用いて反応ベッセルを完全にフラッシュし、次にＨ２圧力下で４時間撹拌した。反応物からＨ２を除去し、次にベッセルをＮ２でパージした。次に材料をＮａ２ＳＯ４及びセライトでろ過し、気流下で溶媒を蒸発させた。残渣のそれ以上の精製は必要なしに（１－（２－アミノ－２－メチルプロポキシ）－２－メチルプロパン－２－オール）（９５％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ３．３２（ｓ，２Ｈ），３．２６（ｓ，２Ｈ），１．２２（ｓ，６Ｈ），１．１２（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：１６２．２．
ステップ５：２０ｍＬマイクロ波バイアルにおいてＤＭＡ（容積：５ｍＬ）中に３－アミノイソニコチンアミド（１ａ、２ｇ、１４．５８ｍｍｏｌ）、イソニコチンアルデヒド（１．５２１ｍＬ、１６．０４ｍｍｏｌ）、亜硫酸水素ナトリウム（１．８２１ｇ、１７．５０ｍｍｏｌ）及び４－メチルベンゼンスルホン酸水和物（０．２７７ｇ、１．４５８ｍｍｏｌ）を加えることによりオレンジ色の懸濁液を得た。この反応物を十分に撹拌し、電子レンジで１６０℃で１２分間加熱した。反応混合物を水で希釈し、ろ過した。固体を水、ＭｅＯＨ及びエーテルで洗浄することにより、２．０３ｇのオフホワイト色の固体を生成物１ｂ（５９％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８８－８．７８（ｍ，２Ｈ），８．７３（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１６－８．０８（ｍ，２Ｈ），８．０３（ｄｄ，Ｊ＝５．２，０．９Ｈｚ，１Ｈ）．
ステップ６：５ｍＬマイクロ波反応器に２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－オール（１ｂ、５００ｍｇ、２．２３０ｍｍｏｌ）及びフェニルホスホン酸二塩化物（１５６４マイクロリットル、１１．１５ｍｍｏｌ）があり、褐色の懸濁液が得られた。この反応混合物を１７０℃で３０分間撹拌したところで、ＬＣＭＳによって完全な変換が示された。反応混合物を氷／水でクエンチし、飽和Ｎａ２ＣＯ３で中和し、次にＤＣＭ×３で抽出して、生成物１ｃ（７４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．６５（ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，１Ｈ），８．９６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．８７（ｓ，２Ｈ），８．４７－８．３０（ｍ，２Ｈ），８．１８（ｄｄ，Ｊ＝５．６，１．０Ｈｚ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２４３．１．
ステップ７：２０ｍＬバイアルにおいて４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）（２５ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を室温でＤＭＳＯ（０．７ｍＬ）中に撹拌し、Ｎ２で脱気した。ＤＩＥＡ（４３ｕＬ、０．２５ｍｍｏｌ）を加えて５分間撹拌し、次にＫＦを加えた（６ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）。この混合物を室温で１５分間撹拌し、次に２（１－（２－アミノ－２－メチルプロポキシ）－２－メチルプロパン－２－オール）（０．０１３ｍＬ、０．１２ｍｍｏｌ）を加えて脱気し、次に６０℃で３０分間撹拌した。次に反応物を濃縮し、０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）におけるフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、表題化合物（５０％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７９（ｍ，２Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３７（ｄｄ，５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｍ，２Ｈ），７．８０（ｓ，１Ｈ），４．４０（ｓ，１Ｈ），３．９０（ｓ，２Ｈ），３．１７（ｓ，２Ｈ），１．６１（ｓ，６Ｈ），０．９９（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３６８．２．
例１３：Ｎ－エチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000201
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８４（ｍ，１Ｈ），８．７６（ｍ，２Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３４（ｍ，２Ｈ），８．１８（ｄｄ，Ｊ＝５．６，０．９Ｈｚ，１Ｈ），３．７７－３．６９（ｑｄ，Ｊ＝７．２，５．４Ｈｚ，２Ｈ），１．３１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２５２．１．
例１４：Ｎ－プロピル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000202
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８２（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．７８（ｍ，２Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．３３（ｍ，２Ｈ），８．１９（ｄｄ，Ｊ＝５．６，０．９Ｈｚ，１Ｈ），３．７０－３．６２（ｔｄ，Ｊ＝７．０，５．７Ｈｚ，２Ｈ），１．８０－１．７０（ｍ，２Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２６６．１．
例１５：Ｎ－（２－シクロヘキシルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000203
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１６（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８０（ｍ，２Ｈ），８．６２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４０（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．２８（ｍ，２Ｈ），７．６２（ｓ，１Ｈ），１．７６－１．７０（ｍ，４Ｈ），１．６２－１．５９（ｍ，１Ｈ），１．５２（ｓ，６Ｈ），１．１８－１．０４（ｑ，Ｊ＝１１．８，１０．９Ｈｚ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３４８．２．
例１６：Ｎ－（３－メチルオキセタン－３－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000204
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２１（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），９．１４（ｓ，１Ｈ），８．７６（ｍ，２Ｈ），８．６８（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．２５（ｍ，２Ｈ），８．１６（ｄｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），４．９０（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），４．６４（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），１．８２（ｓ，３Ｈ））．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９４．１．
例１７：Ｎ－（２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000205
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７８（ｍ，２Ｈ），８，６６（ｍ，１Ｈ），８．３３（ｍ，２Ｈ），８．３２（ｍ，１Ｈ），７．９１（ｍ，１Ｈ），４．４５－４．４２（ｍ，１Ｈ），２．２０－２．１４（ｍ，１Ｈ），１．９８－１．８２（ｍ，２Ｈ），１．８０－１．７２（ｍ，２Ｈ），１．７０－１．６２（ｍ，１Ｈ），１．５０－１．４２（ｍ，１Ｈ），０．９１（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０６．２．
例１７ｂ：Ｎ－（（１Ｒ，２Ｓ）－２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン（１７ａ）及びＮ－（（１Ｓ，２Ｒ）－２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン（１７ｂ）
Figure 0007247102000206
ＤＭＦ（１０ｍｌ）中の４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（１３０ｍｇ、０．５３６ｍｍｏｌ）の溶液にＴＥＡ（０．２３ｍｌ、１．６１ｍｍｏｌ）及びＫＦ（３２．７ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を５分間撹拌した後、シス－２－メチルシクロペンタンアミン塩酸塩（７２．７ｍｇ、０．５３６ｍｍｏｌ）を加えた。次に得られた混合物を５０℃で２時間撹拌した。次に粗製混合物をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製することにより、１０９ｍｇの生成物を得た。この材料の１００ｍｇをキラル分離に供することにより、２つのシス異性体、ピーク１（ＴＲ＝１．４６分）異性体３５ｍｇ、ピーク２（ＴＲ＝１．９５分）異性体４６ｍｇを得た。キラル中心のアサインメントは暫定的で、キラル分離条件：溶媒Ａ ＣＯ２（８０％）、溶媒Ｂ ＭｅＯＨ＋０．１％ＮＨ４Ｃｌ（２０％）、流速２ｍｌ／分、カラム２１×２５０ｍｍ ＡＤ－Ｈ、ランタイム６分積層注入、１０分溶出時間。
ピーク１（ＴＲ＝１．４６分）異性体：１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｓ，１Ｈ），８．７７（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），８．６６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４０（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３６－８．２９（ｍ，３Ｈ），４．８６（ｐ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），２．０９（ｄｔｄ，Ｊ＝１１．７，８．１，３．４Ｈｚ，１Ｈ），１．８９（ｄｄｄｑ，Ｊ＝２９．７，１２．７，８．４，３．８Ｈｚ，３Ｈ），１．６６－１．５３（ｍ，１Ｈ），１．５１－１．４１（ｍ，１Ｈ），０．８３（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０６．２．
ピーク２（ＴＲ＝１．９５分）異性体：１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｄ，Ｊ＝０．７Ｈｚ，１Ｈ），８．８０－８．７４（ｍ，２Ｈ），８．６６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４０（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３６－８．２９（ｍ，３Ｈ），４．８６（ｐ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），２．０９（ｄｐ，Ｊ＝１２．４，４．６，４．２Ｈｚ，１Ｈ），１．９８－１．７９（ｍ，３Ｈ），１．６６－１．５４（ｍ，１Ｈ），１．５０－１．４１（ｍ，１Ｈ），０．８３（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）．）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０６．２．
例１８：３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－２－オール
Figure 0007247102000207
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１７（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），８．７９（ｍ，２Ｈ），８．６３（ｍ，１Ｈ），８．３３（ｍ，１Ｈ），８．２８（ｄｄ，Ｊ＝５．４，０．８Ｈｚ，２Ｈ），７．５８（ｓ，１Ｈ），５．００（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），４．３０－４．２６（ｍ，１Ｈ），１．２９（ｓ，３Ｈ），１．２７（ｓ，３Ｈ），１．０５（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１０．２．
例１９：Ｎ－ブチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000208
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８２（ｍ，１Ｈ），８．７８（ｍ，２Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３４（ｍ，２Ｈ），８．２０（ｄｄ，Ｊ＝５．６，０．９Ｈｚ，１Ｈ），３．７５－３．６８（ｔｄ，７．２，５．６Ｈｚ，２Ｈ），１．７８－１．６９（ｍ，２Ｈ），１．５０－１．４０（ｍ，２Ｈ），０．９８（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８０．２．
例２０：Ｎ－（２－メチル－４－フェニルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000209
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７８（ｍ，２Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４０（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｍ，２Ｈ），７．７９（ｓ，１Ｈ），７．１３－７．０４（ｍ，５Ｈ），２．６１－２．５６（ｄｄ，Ｊ＝１０．７，６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．４８－２．４３（ｍ，２Ｈ），１．６５（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３７０．２．
例２１：Ｎ－シクロプロピル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000210
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２１（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８３（ｍ，１Ｈ），８．７８（ｍ，２Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４０（ｍ，２Ｈ），８．１８（ｄｄ，Ｊ＝５．６ １．０Ｈｚ，１Ｈ），３．３０－３．２２（ｍ，１Ｈ），０．９８－０．９４（ｍ，２Ｈ），０．８０－０．７６（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２６４．１．
例２２：Ｎ－（４－メタンスルホニル－２－メチルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000211
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２０（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７９（ｍ，２Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３９（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｍ，２Ｈ），７．７６（ｓ，１Ｈ），３．１５－３．１０（ｍ，２Ｈ），２．９０（ｓ，３Ｈ），２．６５－２．６０（ｍ，２Ｈ），１．６１（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３７２．１．
例２３：２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１，３－ジオール
Figure 0007247102000212
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７９（ｍ，２Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３２（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｍ，２Ｈ），７．３８（ｓ，１Ｈ），４．８１（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．９７－３．９４（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．９０－３．８２（ｄｄ，Ｊ＝１０．９，６．２Ｈｚ，２Ｈ），１．５２（ｓ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１２．１．
例２４：３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－２－オール
Figure 0007247102000213
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７７（ｍ，２Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３８（ｍ，１Ｈ），８．３２（ｍ，２Ｈ），８．３０（ｓ，１Ｈ），４．８０（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．７６－４．７２（ｍ，１Ｈ），３．９３－３．８８（ｍ，１Ｈ），１．３１（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），１．１９（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９６．２．
例２５：２－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）酢酸
Figure 0007247102000214
ｔｅｒｔ－ブチル２－（２－アミノ－２－メチルプロポキシ）アセテート及び４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジンからステップＣ、例１に記載されるとおりにした後、続いてｔｅｒｔ－ブチルエステルの脱保護を行い、表題化合物を調製した。
脱保護：ｔｅｒｔ－ブチル２－（２－メチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロポキシ）イル）アミノ）プロポキシ）アセテート（２５ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ中の４０％ＴＦＡ混合物中に室温で２時間撹拌した。ＴＬＣ又はＬＣＭＳによって出発物質は観察されなかった。この反応物をＤＣＭで希釈し、Ｎ２及び弱熱を用いて濃縮し、次に３回繰り返し、一晩高真空にかけた。これらの条件下での中間体は、典型的にはそれ以上精製せずに使用した。次にこれらの条件下での表題化合物はまた、フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２０（ｄ，０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８０（ｍ，２Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３３（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．８，５．１，１．２Ｈｚ，２Ｈ），８．３０（ｍ，１Ｈ），８．１９（ｓ，１Ｈ），４．１４（ｓ，２Ｈ），３．８０（ｓ，２Ｈ），３．１６（ｓ，１Ｈ），１．６２（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３５４．２．
例２６：（１Ｒ，２Ｓ）－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロペンタン－１－オール
Figure 0007247102000215
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７８（ｍ，１Ｈ），８．６５（ｍ，１Ｈ），８．４０（ｍ，１Ｈ），８．３７（ｍ，１Ｈ），８．３２（ｍ，２Ｈ），４．７２（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），４．６０－４．５２（ｄｄｄ，Ｊ＝１５．９，９．２，４．４Ｈｚ，１Ｈ），４．４４－４．４０（ｍ，１Ｈ），２．０４－１．９８（ｍ，３Ｈ），１．９０－１．８２（ｍ，１Ｈ），１．７４－１．５６（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０８．１．
例２７：４，４，４－トリフルオロ－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール
Figure 0007247102000216
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３０（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８５（ｍ，１Ｈ），８．８０（ｍ，２Ｈ），８．７４（ｍ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ），８．３３（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，２Ｈ），５．７６－５．７０（ｍ，１Ｈ），４．７７－４．７０（ｍ，１Ｈ），３．６１－３．５５（ｍ，２Ｈ），２．１１－２．０８（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３５０．１．
例２８：Ｎ－（１－メタンスルホニル－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000217
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２０（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．７９（ｍ，２Ｈ），８．６７（ｄｄ，Ｊ＝５．９，４．７Ｈｚ，１Ｈ），８．４０（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｍ，２Ｈ），８．０８（ｓ，１Ｈ），４．１３（ｓ，２Ｈ），２．９０（ｓ，３Ｈ），１．８０（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３５８．１．
例２９：（２Ｓ）－３，３，３－トリフルオロ－２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン酸
Figure 0007247102000218
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２３（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７９（ｍ，２Ｈ），８．７６（ｍ，１Ｈ），８．７０（ｍ，１Ｈ），８．３０（ｄｄ，Ｊ＝５．６，０．８Ｈｚ，２Ｈ），７．８１（ｓ，１Ｈ），２．０２（ｓ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３６４．１．
例３０：２－［（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロピル）アミノ］酢酸
Figure 0007247102000219
ｔｅｒｔ－ブチル２－（（２－メチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロピル）アミノ）アセテートを使用して、上記のスキームに記載されるとおり表題化合物を調製した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２５（ｍ，１Ｈ），８．８２（ｍ，２Ｈ），８．７０（ｍ，１Ｈ），８．４０（ｍ，１Ｈ），８．３５（ｍ，２Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），３．８９－３．８０（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６０－３．５６（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，４Ｈ），１．７０（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３５３．２．
ステップ１：２－メチル－Ｎ２－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，２－ジアミン（２０ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）を室温でＤＣＭ／ＤＭＦ中に撹拌した。２１マイクロリットルのＴＥＡ（２１マイクロリットル、０．１４９ｍｍｏｌ）を加え、３分間撹拌した。次に２－ブロモ酢酸ｔｅｒｔ－ブチル（１１マイクロリットル、０．０７１ｍｍｏｌ）及び触媒量のＤＭＡＰを加え、室温で４時間撹拌した。次に反応物を濃縮し、０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、生成物ｔｅｒｔ－ブチル２－（（２－メチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロピル）アミノ）アセテート（３５％）を得た。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：４０９．５。
例３１：（２Ｒ）－３，３，３－トリフルオロ－２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン酸
Figure 0007247102000220
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２３（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７９（ｍ，２Ｈ），８．７７（ｍ，１Ｈ），８．７０（ｍ，１Ｈ），８．３０（ｍ，２Ｈ），７．８３（ｓ，１Ｈ），２．０２（ｓ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３６４．１．
例３２：メチル２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパノエート
Figure 0007247102000221
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２４（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８５（ｓ，１Ｈ），８．７９（ｍ，２Ｈ），８．７０（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．３９（ｄｄ，Ｊ＝５．７，１．０Ｈｚ，１Ｈ），８．２５（ｍ，２Ｈ），３．５１（ｓ，３Ｈ），１．６９（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２４．１．
例３３：（１Ｓ，２Ｓ）－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロペンタン－１－オール
Figure 0007247102000222
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７８（ｍ，２Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．５１（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），８．３８（ｍ，１Ｈ），８．３６（ｍ，１Ｈ），８．３１（ｄｄ，Ｊ＝５．６，０．９，Ｈｚ，１Ｈ），４．９２（ｄ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，１Ｈ），４．６０－４．５４（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２６－４．２０（ｍ，１Ｈ），２．３２－２．２２（ｄｄｔ，Ｊ＝１３．２，８．２，４．３Ｈｚ，１Ｈ），２．００－１．９２（ｍ，１Ｈ），１．８５－１．７２（ｍ，２Ｈ），１．７０－１．５６（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０８．１．
例３４：２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン酸
Figure 0007247102000223
メチル２－メチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパノエートの脱保護から、ステップＡ、例２５に記載されるとおり表題化合物を調製した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．６１（ｓ，１Ｈ），９．２０（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８６－８．８０（ｓ，１Ｈ），８．７５（ｍ，２Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｍ，２Ｈ），８．２８（ｍ，１Ｈ），１．６６（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１０．１．
例３５：２－（２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝エトキシ）エタン－１－オール
Figure 0007247102000224
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２０（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８９（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．７６（ｍ，２Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．３２（ｍ，２Ｈ），８．２０（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），４．６０－４．５７（ｍ，１Ｈ），３．８９（ｑ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ），３．７８（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），３．５１－３．４８（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，４Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１２．１．
例３６：２－（ヒドロキシメチル）－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１，３－ジオール
Figure 0007247102000225
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２０（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８０（ｍ，２Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｄｄｄ，Ｊ＝１９．４，５．１，１．３Ｈｚ，１Ｈ），８．２６（ｍ，２Ｈ），７．１９（ｓ，１Ｈ），４．７２（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ），４．００（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２８．１．
例３７：３－メチル－３－（３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタンアミド）ブタン酸
Figure 0007247102000226
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２０（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８０（ｄｔ，Ｊ＝４．５，１．１Ｈｚ，２Ｈ），８．６４（ｍ，１Ｈ），８．３３（ｍ，２Ｈ），８．３０（ｍ，１Ｈ），７．９０（ｓ，１Ｈ），１．７２（ｓ，６Ｈ），１．７０（ｓ，２Ｈ），１．３０（ｓ，２Ｈ），１．００（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：４２３．２．
例３８：２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－３－フェニルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000227
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２１（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．９９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７５（ｍ，２Ｈ），８．７１（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３３（ｍ，１Ｈ），８．３０（ｍ，２Ｈ），７．４１（ｍ，２Ｈ），７．１１（ｍ，２Ｈ），７．０２（ｍ，１Ｈ），５．９５－５．８６（ｔ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．３８－３．３４（ｍ，１Ｈ），３．２４－３．１７（ｄｄｔ，Ｊ＝１３．８，１１．７，０．７Ｈｚ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３９６．１．
例３９：Ｎ－｛［４－（ジメチルアミノ）オキサン－４－イル］メチル｝－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000228
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２０（ｓ，１Ｈ），８．７８（ｍ，２Ｈ），８，６７（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．５２（ｓ，１Ｈ），８．３３（ｍ，２Ｈ），８．２８（ｍ，１Ｈ），３．６２（ｔ，Ｊ＝１０．６Ｈｚ，２Ｈ），３．５３（ｄ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ，２Ｈ），３．２７（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ），２．４１（ｓ，６Ｈ），１．８０（ｄ，Ｊ＝１４．１Ｈｚ，２Ｈ），１．６３（ｔ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３６５．２．
例４０：３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン酸
Figure 0007247102000229
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．０２（ｓ，１Ｈ），９．２０（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８０（ｍ，２Ｈ），８．６６（ｍ，１Ｈ），８．４０（ｍ，１Ｈ），８．３０（ｍ，２Ｈ），７．９９（ｍ，１Ｈ），３．１２－３．０８（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．７０（ｓ，６Ｈ．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２４．１．
例４１：Ｎ－（２－メタンスルホニルエチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000230
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２３（ｓ，１Ｈ），９．１０（ｔ，Ｊ－５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．７８（ｍ，２Ｈ），８．６９（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．３９（ｍ，２Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），４．１３－４．０９（ｑ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．６２（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），３．０９（ｓ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３０．１．
例４２：Ｎ－［２－（アダマンタン－１－イル）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000231
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１６（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７８（ｍ，２Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４５（ｍ，１Ｈ），８．２５（ｍ，２Ｈ），７．０６（ｓ，１Ｈ），１．９９－１．９６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ），１．８０－１．７６（ｍ，６Ｈ），１．６７－１．６４（ｍ，６Ｈ），１．６４－１．６０（ｍ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：４００．２．
例４３：２－メチル－Ｎ－［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］プロパンアミド
Figure 0007247102000232
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １１．０８（ｓ，１Ｈ），９．４９（ｍ，１Ｈ），８．８４（ｍ，２Ｈ），８．８０（ｍ，１Ｈ），８．４０（ｍ，２Ｈ），８．２５（ｄｄ，Ｊ＝５．８，１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．２９－３．１８（ｍ，１Ｈ），１．２６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９４．１．
例４４：４，４，４－トリフルオロ－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン酸
Figure 0007247102000233
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２９（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８０（ｍ，２Ｈ），８．７１（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），８．３４（ｍ，２Ｈ），８．２３（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），５．８４－５．７９（ｍ，１Ｈ），３．６５－３．５５（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），２．４５－２．４１（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ），２．３２－２．２６（ｍ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３６４．１．
例４５：Ｎ－［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］プロパン－２－スルホンアミド
Figure 0007247102000234
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３８（ｓ，１Ｈ），８．８８（ｍ，２Ｈ），８．７６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４０－８．３０（ｍ，３Ｈ），４．２０－４．１０（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），１．４０（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３０．１．
例４６：２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［３－（１Ｈ－１，２，３，４－テトラゾール－５－イル）プロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000235
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２１（ｍ，１Ｈ），９．１８（ｓ，１Ｈ），８．７５（ｍ，２Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｍ，２Ｈ），８．２１（ｄｄ，Ｊ＝５．６，１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８１－３．７５（ｔｄ，Ｊ＝６．９，５．３Ｈｚ，２Ｈ），２．９５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．１８－２．１０（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３４．２．
例４７：Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000236
ステップ１：尿素（４０．００ｇ、６６６．００ｍｍｏｌ）及び３－アミイソニコチン酸（２ａ、１８．４０ｇ、１３３．２０ｍｍｏｌ）の混合物を２１０℃で１時間加熱した（注記：溶媒は使用しなかった）。ＮａＯＨ（２Ｎ、３２０ｍＬ）を加え、混合物を９０℃で１時間撹拌した。ろ過によって固体を収集し、水で洗浄した。このように得られた粗製生成物をＨＯＡｃ（４００ｍＬ）中に懸濁し、１００℃で１時間撹拌した。この混合物を室温に冷却し、ろ過し、固体を多量の水で洗浄し、次に真空乾燥させることにより、それ以上精製することなくピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン（２ｂ、１７．００ｇ、７８％収率）を得た。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：１６４．０。
ステップ２：トルエン（２００ｍＬ）中のピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン（２ｂ、２０．００ｇ、１２２．６０ｍｍｏｌ）及びＰＯＣｌ３（３２８．０３ｇ、２．１４ｍｏｌ）の混合物にＤＩＥＡ（３１．６９ｇ、２４５．２０ｍｍｏｌ）を滴下して加え、この反応混合物を２５℃で一晩（１８時間）撹拌して懸濁液を得た。
溶媒及びＰＯＣｌ３を真空下で除去し、ＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈し、－２０℃でＤＩＥＡによってｐＨ＝７に中和し、再び濃縮して、残渣をカラム（２０～５０％ＥＡ／ＰＥ）によって精製することにより、２，４－ジクロロピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（２ｃ、２０．００ｇ、９９．９９ｍｍｏｌ、８２％収率）を黄色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ９．５２（ｓ，１Ｈ），８．９２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２００．０．
ステップ３：２０ｍＬバイアルにおいて２，４－ジクロロピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（６００ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）を室温でＤＭＳＯ（０．７ｍＬ）中に撹拌し、Ｎ２で脱気した。ＤＩＥＡ（１ｍＬ、６ｍｍｏｌ）を加えて５分間撹拌し、次にＫＦを加えた（１７４ｍｇ、３ｍｍｏｌ）。この混合物を室温で１５分間撹拌し、次にラセミ１，１，１－トリフルオロ－Ｎ－メチルプロパン－２－アミン（４１９ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）を加えて脱気し、次に６０℃で４時間撹拌した。次に反応物を濃縮し、０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、２－クロロ－Ｎ－メチル－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン（６８０ｍｇ、７４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトン－ｄ６）δ ９．０９（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．５９（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），８．２２（ｄｄ，Ｊ＝５．９，０．９Ｈｚ，１Ｈ），５．９３（ｄｄｄｄ，Ｊ＝１５．３，８．３，７．０，１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６１（ｑ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，３Ｈ），１．６３（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９１．７．
ステップ４：２０ｍＬマイクロ波反応器においてアセトニトリル（８ｍＬ）中にテトラキスパラジウム（９９ｍｇ、０．０８６ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２．１５ｍＬ、４．３ｍｍｏｌ）、及び２クロロ－Ｎ－メチル－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン（５００ｍｇ、１．７２ｍｍｏｌ）及びピリジン－４－イルボロン酸（２３３ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）を加えることにより黄色の懸濁液を得た。この反応混合物をマイクロ波下１３０℃で３０分間撹拌した。粗製混合物をＤＣＭ、Ｈ２Ｏで希釈し、分離し、ＤＣＭ×３で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４乾燥させて、ろ過し、濃縮した。残渣を０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、ラセミ生成物である例４７を得て、次に続いてキラルＨＰＬＣ（２１×２５０ｍｍ ＯＪ－Ｈカラム、Ａ相として８５％ＣＯ２及びＢ相として１５％ＭｅＯＨ、流速２ｍＬ／分、３０℃、３．５分溶出時間）によってエナンチオマーを分離することにより、例４ｂａ及び４８ｂを得た。
例４８ａ：Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000237
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３３（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８６－８．７５（ｍ，２Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），８．３８－８．３０（ｍ，２Ｈ），８．２０（ｄｄ，Ｊ＝６．０，０．９Ｈｚ，１Ｈ），６．１１（ｑｔ，Ｊ＝８．５，７．４Ｈｚ，１Ｈ），３．５０（ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，３Ｈ），１．６１（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３４．１．キラルＨＰＬＣ ＴＲ＝１．７３ｍｉｎ．絶対立体化学はＸ線結晶構造により確認した。
例４８ｂ：Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｒ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000238
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３３（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８６－８．７５（ｍ，２Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），８．３８－８．３０（ｍ，２Ｈ），８．２０（ｄｄ，Ｊ＝６．０，０．９Ｈｚ，１Ｈ），６．１１（ｑｔ，Ｊ＝８．５，７．４Ｈｚ，１Ｈ），３．５０（ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，３Ｈ），１．６１（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３４．１．キラルＨＰＬＣ ＴＲ＝１．２５ｍｉｎ．絶対立体化学はＸ線結晶構造により確認した。
例４９：２，４－ジメチル－４－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール
Figure 0007247102000239
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトン－ｄ６）δ ９．５７（ｓ，１Ｈ），９．１５（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８２－８．７２（ｍ，２Ｈ），８．５６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４４－８．３７（ｍ，２Ｈ），７．６９（ｄｄ，Ｊ＝５．６，０．９Ｈｚ，１Ｈ），２．０８（ｓ，２Ｈ），１．８７（ｓ，６Ｈ），１．４８（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３８．２．
例５０：４，４，４－トリフルオロ－２，３－ジメチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－２－オール
Figure 0007247102000240
メチル２－アミノ－３，３，３－トリフルオロ－２－メチルプロパノエート塩酸塩及び４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジンからステップＣ、例１に記載されるとおりにした後、続いて臭化メチルマグネシウムとのグリニャール反応を行い、表題化合物を調製した。
グリニャール反応：メチル３，３，３－トリフルオロ－２－メチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパノエート（７ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）をＤＣＭ中の臭化メチルマグネシウム（ヘキサン中１．４Ｍ、０．１３３ｍＬ）と０℃で１時間撹拌した。ＴＬＣ又はＬＣＭＳによって出発物質は観察されなかった。この反応物をＭｅＯＨによってクエンチし、濃縮した。残渣を０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、表題化合物（６６％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．２８（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．７７－８．７１（ｍ，２Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．４４－８．３８（ｍ，２Ｈ），７．８５（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），２．０９（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，３Ｈ），１．５５（ｔ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，３Ｈ），１．３７（ｓ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３７８．２．
例５１：（１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロペンチル）メタノール
Figure 0007247102000241
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ９．３５（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８２－８．７５（ｍ，２Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３０－８．２４（ｍ，２Ｈ），７．４９（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），３．９９（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，２Ｈ），２．１９（ｔｄ，Ｊ＝７．３，６．７，２．５Ｈｚ，４Ｈ），１．９４－１．７８（ｍ，４Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２２．２．
例５２：Ｎ－（３－メトキシシクロブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000242
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），８．８０－８．７２（ｍ，２Ｈ），８．６６（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．３７－８．３２（ｍ，２Ｈ），８．２５（ｄｄ，Ｊ＝５．６，０．９Ｈｚ，１Ｈ），４．５３－４．４２（ｍ，１Ｈ），３．８４－３．７４（ｍ，１Ｈ），３．２０（ｓ，３Ｈ），２．８９－２．７９（ｍ，２Ｈ），２．１１（ｔｄｄ，Ｊ＝９．０，７．５，２．８Ｈｚ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０８．１．
例５３：（１Ｒ，２Ｒ）－１－Ｎ，２－Ｎ－ジメチル－１－Ｎ－［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］シクロヘキサン－１，２－ジアミン
Figure 0007247102000243
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．２３（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７３－８．６８（ｍ，２Ｈ），８．５３（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），８．４６－８．４１（ｍ，２Ｈ），８．２２（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），３．４７（ｓ，３Ｈ），２．９１（ｄｄ，Ｊ＝１３．０，９．０Ｈｚ，１Ｈ），２．３９（ｓ，３Ｈ），２．３０（ｄｔｔ，Ｊ＝１２．６，５．１，２．５Ｈｚ，１Ｈ），２．０４（ｄｐ，Ｊ＝１２．４，３．１Ｈｚ，１Ｈ），１．９０（ｄｄｄｄ，Ｊ＝２３．１，１３．０，５．６，３．０Ｈｚ，２Ｈ），１．８４－１．７４（ｍ，１Ｈ），１．５８（ｑｔ，Ｊ＝１２．７，３．５Ｈｚ，１Ｈ），１．４２（ｑｔ，Ｊ＝１３．２，３．３Ｈｚ，１Ｈ），１．３３－１．２３（ｍ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３４９．２．
例５４：メチル（１ｓ，３ｓ）－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－カルボキシレート
Figure 0007247102000244
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２０（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．９５（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），８．８２－８．７２（ｍ，２Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．３４－８．２８（ｍ，２Ｈ），８．２５（ｄｄ，Ｊ＝５．６，１．０Ｈｚ，１Ｈ），４．９５（ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），３．２７－３．２１（ｍ，１Ｈ），２．７２（ｄｄｄｄ，Ｊ＝１０．７，８．２，４．３，２．５Ｈｚ，２Ｈ），２．６２－２．５１（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３６．１．
例５５：エチル１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－カルボキシレート
Figure 0007247102000245
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ９．２７（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，４．４Ｈｚ，１Ｈ），８．８３－８．７４（ｍ，２Ｈ），８．５４－８．４０（ｍ，１Ｈ），８．４０－８．３１（ｍ，２Ｈ），７．５６－７．４９（ｍ，１Ｈ），４．３２－４．１６（ｍ，２Ｈ），３．０３－２．８５（ｍ，２Ｈ），２．４９（ｄｄｄｄ，Ｊ＝１１．８，９．４，７．１，２．３Ｈｚ，２Ｈ），２．３１－２．１１（ｍ，２Ｈ），１．２２（ｄｔｄ，Ｊ＝９．６，７．５，７．０，１．８Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３５０．２．
例５６：１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－カルボン酸
Figure 0007247102000246
例５５のエチルエステルの加水分解により表題化合物を調製した。
加水分解：ＭｅＯＨ（２ｍＬ）中の例５５（２７ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）及び水酸化リチウム（０．０７７ｍＬ、０．０７７ｍｍｏｌ）の懸濁液を、ＬＣＭＳにより出発物質が残っていないことが示されるまで９０℃で３時間撹拌した。この反応混合物を２ｍＬ １Ｍ ＨＣｌで中和した。水層をＤＣＭ×５で逆抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、乾燥させて、濃縮した。残渣をＤＣＭ／エーテルで洗浄することにより、表題化合物（９２％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．４９（ｓ，１Ｈ），９．３５（ｓ，１Ｈ），９．２３（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８０－８．７２（ｍ，２Ｈ），８．７０（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．３４（ｄｄ，Ｊ＝５．６，１．０Ｈｚ，１Ｈ），８．３２－８．２１（ｍ，２Ｈ），２．８２（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．３，８．８，４．９Ｈｚ，２Ｈ），２．４９－２．４３（ｍ，２Ｈ），２．１２－１．９６（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２２．１．
例５７：（１ｓ，３ｓ）－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－カルボン酸
Figure 0007247102000247
例５６に記載されるとおりの手順を用いた例５４のエチルエステルの加水分解により表題化合物を調製した。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２６（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），９．２１（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），９．０２－８．９３（ｍ，２Ｈ），８．７３（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．６６（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ），８．３８（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９２（ｑ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），３．１９－３．１１（ｍ，１Ｈ），２．７６－２．６８（ｍ，２Ｈ），２．５６（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．９，６．５，２．７Ｈｚ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２２．１．
例５８：２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000248
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２７（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８４－８．７７（ｍ，２Ｈ），８．７２（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．５１（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．３０－８．２４（ｍ，２Ｈ），７．９８（ｓ，１Ｈ），１．９１（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３４．１．
例５９：Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000249
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８２－８．７７（ｍ，２Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３９（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．３４－８．２９（ｍ，２Ｈ），７．８８（ｓ，１Ｈ），１．６６（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８０．２．
例６０：Ｎ－（１－メチルシクロブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000250
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１７（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７７（ｄｄ，Ｊ＝６．３，１．９Ｈｚ，２Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３３－８．２９（ｍ，２Ｈ），８．２７（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），２．７０－２．６４（ｍ，１Ｈ），２．５８－２．５３（ｍ，１Ｈ），２．３５－２．２６（ｍ，２Ｈ），２．０４－１．８１（ｍ，２Ｈ），１．７１（ｓ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９２．２．
例６１：３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール
Figure 0007247102000251
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８３－８．７７（ｍ，２Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３４－８．２９（ｍ，２Ｈ），８．１７（ｓ，１Ｈ），８．１２（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），４．８６（ｓ，１Ｈ），３．６８－３．６１（ｍ，２Ｈ），２．１９（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），１．６６（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１０．２．
例６２：２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロブチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000252
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２６（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．９８（ｓ，１Ｈ），８．８１－８．７６（ｍ，２Ｈ），８．７１（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３９（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．３０－８．２５（ｍ，２Ｈ），２．９１－２．７６（ｍ，４Ｈ），２．１１－１．９６（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３４６．１．
例６３：Ｎ－（２－メチルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000253
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．１９－９．１２（ｍ，１Ｈ），８．７２（ｄｄｔ，Ｊ＝６．３，４．７，１．６Ｈｚ，２Ｈ），８．５７（ｄｄ，Ｊ＝５．８，２．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４３（ｔｔ，Ｊ＝７．３，３．４Ｈｚ，２Ｈ），８．２４－８．１７（ｍ，１Ｈ），２．２３（ｑｄ，Ｊ＝６．７，６．０，２．６Ｈｚ，２Ｈ），１．６６（ｓ，６Ｈ），０．９４（ｔｄ，Ｊ＝７．４，１．６Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９４．２．
例６４：２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000254
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．４０（ｓ，１Ｈ），９．２９（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８３－８．７８（ｍ，２Ｈ），８．７１（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４０－８．３５（ｍ，２Ｈ），８．２７（ｄｄ，Ｊ＝５．７，１．０Ｈｚ，１Ｈ），１．６５－１．５５（ｍ，２Ｈ），１．４１－１．３７（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３２．１．
例６５：Ｎ－シクロペンチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000255
２０ｍＬバイアルにおいて４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）（２００ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）を室温でＤＣＭ（５ｍＬ）中に撹拌し、Ｎ２で脱気した。ＤＩＥＡ（３２４マイクロリットル、１．８５ｍｍｏｌ）を加えて５分間撹拌し、次にＫＦ（４８ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で１５分間撹拌し、次にシクロペンタンアミン（８４ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）を加えて脱気し、次に２５℃で１６時間撹拌した。次に反応物を濃縮し、０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、表題化合物（５１％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）９．２０（ｓ，１Ｈ），８．７８（ｄ，２Ｈ），８．５５（ｄ，１Ｈ），８．３１（ｄ，２Ｈ），８．０３（ｄ，１Ｈ），５．１５－５．１０（ｍ，１Ｈ），３．３４（ｓ，３Ｈ），１．３５（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９２．２．
例６６：２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１－オール
Figure 0007247102000256
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８２－８．７７（ｍ，２Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３８（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｄｔ，Ｊ＝４．５，１．７Ｈｚ，２Ｈ），７．６２（ｓ，１Ｈ），４．９５－４．８９（ｍ，１Ｈ），３．８６（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），１．５７（ｓ，５Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９６．１．
例６７：３，３，３－トリフルオロ－２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１－オール
Figure 0007247102000257
メチル２－アミノ－３，３，３－トリフルオロ－２－メチルプロパノエート塩酸塩及び４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジンから、ステップＣ、例１に記載されるとおりにした後、続いて水素化アルミニウムリチウムでメチルエステルをアルコールに還元して表題化合物を調製した。
還元：メチル３，３，３－トリフルオロ－２－メチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパノエート（１２ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ中の水素化アルミニウムリチウム（４．８ｍｇ、０．１２７ｍｍｏｌ）と０℃で２５時間撹拌した。ＴＬＣ又はＬＣＭＳによって出発物質は観察されなかった。反応混合物をＤＣＭ／ＭｅＯＨで希釈し、Ｈ２Ｏ及びブラインで洗浄し、次に濃縮した。残渣を０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、表題化合物（１７％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．３７（ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８６－７．８１（ｍ，２Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５４－７．４９（ｍ，２Ｈ），７．３２（ｄｔ，Ｊ＝５．７，１．３Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１Ｈ），３．１９－３．１２（ｍ，１Ｈ），１．０２（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３５０．１．
例６８：Ｎ－（ブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000258
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８０－８．７４（ｍ，２Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．４３（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３６－８．２７（ｍ，３Ｈ），４．５６（ｈｅｐｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），１．８３－１．６３（ｍ，２Ｈ），１．３３（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），０．９７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８０．２．
例６８ａ：（Ｓ）－Ｎ－（ｓｅｃ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン（６８ａ）及び（Ｒ）－Ｎ－（ｓｅｃ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン（６８ｂ）
Figure 0007247102000259
化合物Ｎ－（ブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン（２６．７ｍｇ）（例６８）をキラル分離に供することにより、２つのエナンチオマー、ピーク１（ＴＲ＝１．４４分）異性体（１１．７ｍｇ）及びピーク２（ＴＲ＝１．９４分）異性体１１．６ｍｇを得た。キラル中心のアサインメントは暫定的である。キラル分離条件：溶媒Ａ ＣＯ２（８５％）、溶媒Ｂ ＭｅＯＨ（１５％）、流速２ｍＬ／分、温度３０℃、カラム２１×２５０ｍｍ ＡＤ－Ｈ、ランタイム３．５分積層注入、７分溶出時間。
ピーク１（ＴＲ＝１．４４分）異性体：１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｓ，１Ｈ），８．７７（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４３（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３６－８．３１（ｍ，２Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），４．５６（ｐ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），１．８５－１．６２（ｍ，２Ｈ），１．３３（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），０．９７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８０．２．
ピーク２（ＴＲ＝１．９４分）異性体：１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｓ，１Ｈ），８．８０－８．７２（ｍ，２Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４３（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３５－８．３１（ｍ，２Ｈ），８．３０（ｄｄ，Ｊ＝５．６，０．８Ｈｚ，１Ｈ），４．５７（ｈｅｐｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），１．８２－１．６３（ｍ，２Ｈ），１．３３（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），０．９７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８０．２．
例６９：Ｎ－（２－メチルブタ－３－イン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000260
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．２５（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．７７－８．７１（ｍ，２Ｈ），８．６４－８．５８（ｍ，３Ｈ），８．２３（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），２．８１（ｓ，１Ｈ），１．９３（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９０．１．
例７０：（１ｒ，３ｓ）－３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－オール
Figure 0007247102000261
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）９．２１（ｓ，１Ｈ），８．７８（ｄ，２Ｈ），８．５５（ｄ，１Ｈ），８．３１（ｄ，２Ｈ），８．０５（ｄ，１Ｈ），３．９４（ｑ，２Ｈ），３．５０（ｓ，３Ｈ），１．３９（ｔ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０８．１．
例７１：２，３－ジメチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－２－オール
Figure 0007247102000262
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２０（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８２－８．７７（ｍ，２Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２８－８．２３（ｍ，２Ｈ），８．０７（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｓ，１Ｈ），１．６４（ｓ，６Ｈ），１．２７（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２４．２．
例７２：２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000263
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．１９（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．７８－８．７２（ｍ，２Ｈ），８．５８（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．５０－８．４５（ｍ，２Ｈ），８．２２（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），２．３３（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，２Ｈ），１．７７（ｓ，６Ｈ），１．０１（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３６．２．
例７３：Ｎ－（ペンタン－３－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000264
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７９－８．７４（ｍ，２Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３７－８．３０（ｍ，４Ｈ），４．４７（ｄｔｄ，Ｊ＝１３．２，８．２，５．１Ｈｚ，１Ｈ），１．８３－１．６３（ｍ，４Ｈ），０．９５（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９４．２．
例７４：（Ｎ－［２－メチル－１－（モルホリン－４－イル）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000265
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８３－８．７７（ｍ，２Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３５（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．３２－８．２８（ｍ，２Ｈ），７．７９（ｓ，１Ｈ），３．５５－３．４９（ｍ，４Ｈ），２．９９（ｓ，２Ｈ），２．５１－２．４５（ｍ，４Ｈ），１．６２（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３６５．２．
例７５：Ｎ－［１－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－メチルプロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000266
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８２－８．７７（ｍ，２Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３８（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．３３－８．２８（ｍ，２Ｈ），７．６６（ｓ，１Ｈ），３．８４（ｓ，２Ｈ），１．６０（ｓ，６Ｈ），１．０５（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３５２．２．
例７６：４，４，４－トリフルオロ－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール
Figure 0007247102000267
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２３（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８１－８．７６（ｍ，２Ｈ），８．７０（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．６２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），８．３６－８．３１（ｍ，２Ｈ），８．２２（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），５．１９（ｄｄ，Ｊ＝６．３，５．４Ｈｚ，１Ｈ），４．９８（ｔｑ，Ｊ＝９．６，５．９Ｈｚ，１Ｈ），３．７２（ｄｔ，Ｊ＝１０．９，５．５Ｈｚ，１Ｈ），３．６１（ｄｔ，Ｊ＝１１．０，６．３Ｈｚ，１Ｈ），２．８７－２．７１（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３５０．１．
例７７：Ｎ－ペンチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000268
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８３（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．７９－８．７３（ｍ，２Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．３６－８．２９（ｍ，２Ｈ），８．１８（ｄｄ，Ｊ＝５．６，１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７０（ｔｄ，Ｊ＝７．２，５．６Ｈｚ，２Ｈ），１．８１－１．６８（ｍ，２Ｈ），１．４７－１．３０（ｍ，４Ｈ），０．９３－０．８６（ｍ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９４．２．
例７８：２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール
Figure 0007247102000269
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８０－８．７４（ｍ，２Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４０－８．３０（ｍ，４Ｈ），４．８３（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），４．５４（ｔｄ，Ｊ＝８．４，４．９Ｈｚ，１Ｈ），３．７２－３．５６（ｍ，２Ｈ），１．８４（ｄｄｄ，Ｊ＝１４．０，７．４，５．１Ｈｚ，１Ｈ），１．６８（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．８，８．８，７．３Ｈｚ，１Ｈ），０．９６（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９６．１．
例７９：Ｎ－［１－（１Ｈ－インドール－３－イル）－２－メチルプロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000270
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．７８（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），９．２１（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８６－８．７８（ｍ，２Ｈ），８．６０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４２－８．３６（ｍ，２Ｈ），８．３０（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｓ，１Ｈ），７．４７－７．４０（ｍ，１Ｈ），７．２９（ｄｔ，Ｊ＝８．２，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｄｄｄ，Ｊ＝８．１，７．０，１．１Ｈｚ，１Ｈ），６．９１－６．８２（ｍ，２Ｈ），３．５９（ｓ，２Ｈ），１．６６（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３９５．２．
例８０：Ｎ－［１－（４－フルオロフェニル）－２－メチルプロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000271
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．２３（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８０－８．７５（ｍ，２Ｈ），８．５８－８．５１（ｍ，３Ｈ），８．１３（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．１１－７．０４（ｍ，２Ｈ），６．９５－６．８７（ｍ，２Ｈ），３．５６（ｓ，２Ｈ），１．６９（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３７４．２．
例８１：Ｎ－（２－フェニルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000272
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１６（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．６９（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．６６（ｓ，１Ｈ），８．６１－８．５６（ｍ，２Ｈ），８．５３（ｄｄ，Ｊ＝５．６，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８０－７．７５（ｍ，２Ｈ），７．５５－７．４８（ｍ，２Ｈ），７．３５－７．２８（ｍ，２Ｈ），７．２０－７．１２（ｍ，１Ｈ），１．８９（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３４２．２．
例８２：Ｎ－（２－フルオロフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000273
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．３３（ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７１（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．６８－８．６４（ｍ，２Ｈ），８．３２（ｄｄｄ，Ｊ＝９．５，５．１，１．３Ｈｚ，３Ｈ），７．８１（ｔｄ，Ｊ＝８．０，２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３８－７．３１（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１８．１．
例８３：Ｎ－［２－（４－フルオロフェニル）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000274
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．１８（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．５９－８．５３（ｍ，２Ｈ），８．３６（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．９７－７．９２（ｍ，２Ｈ），７．６１－７．５３（ｍ，２Ｈ），７．１１－７．０２（ｍ，２Ｈ），１．９６（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３６０．２．
例８４：３，３，３－トリフルオロ－２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン酸
Figure 0007247102000275
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３８（ｓ，１Ｈ），９．２４（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８１－８．７５（ｍ，２Ｈ），８．７１（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．３４－８．２９（ｍ，２Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｓ，１Ｈ），２．０３（ｓ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３６４．１．
例８５：２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝エタン－１－オール
Figure 0007247102000276
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２０（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８８（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），８．８２－８．７３（ｍ，２Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３８－８．３１（ｍ，２Ｈ），８．２１（ｄｄ，Ｊ＝５．６，０．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９０（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｔｔｄ，Ｊ＝７．９，５．５，２．５Ｈｚ，４Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２６８．１．
例８６：Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000277
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８８（ｑ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），８．８０－８．７３（ｍ，２Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．４０－８．３３（ｍ，２Ｈ），８．１２（ｄｄ，Ｊ＝５．６，１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．１８（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２３８．１．
例８７：１－（｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝メチル）シクロペンタン－１－オール
Figure 0007247102000278
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８１－８．７４（ｍ，２Ｈ），８．６７（ｄｄ，Ｊ＝１１．８，５．８Ｈｚ，２Ｈ），８．３７－８．３３（ｍ，２Ｈ），８．３０（ｄｄ，Ｊ＝５．６，０．９Ｈｚ，１Ｈ），４．７０（ｓ，１Ｈ），３．８９（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），１．７８－１．５０（ｍ，８Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２２．２．
例８８：Ｎ，Ｎ－ジメチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000279
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２２（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８０－８．７３（ｍ，２Ｈ），８．５７（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３８－８．３１（ｍ，２Ｈ），８．１５（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．５３（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２５２．１．
例８９：Ｎ－（２－メチルフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000280
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．２２（ｓ，１Ｈ），９．２９（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．７６（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．７２－８．６７（ｍ，２Ｈ），８．４２（ｄｄ，Ｊ＝５．７，１．０Ｈｚ，１Ｈ），８．０９－８．０４（ｍ，２Ｈ），７．５０（ｄｄ，Ｊ＝７．７，１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｄｄ，Ｊ＝７．１，１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４０－７．２９（ｍ，２Ｈ），２．２７（ｓ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１４．１．．
例９０：Ｎ－（４－メチルフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000281
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．２５（ｓ，１Ｈ），９．２９（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８１－８．７３（ｍ，３Ｈ），８．４９（ｄｄ，Ｊ＝５．７，１．０Ｈｚ，１Ｈ），８．３０－８．２５（ｍ，２Ｈ），７．８７－７．８０（ｍ，２Ｈ），７．３６－７．３０（ｍ，２Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１４．１．
例９１：Ｎ－（４－メトキシフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000282
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．２４（ｓ，１Ｈ），９．２７（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８０－８．７２（ｍ，３Ｈ），８．４６（ｄｄ，Ｊ＝５．８，１．０Ｈｚ，１Ｈ），８．２９－８．２３（ｍ，２Ｈ），７．８８－７．７９（ｍ，２Ｈ），７．１４－７．０５（ｍ，２Ｈ），３．８３（ｓ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３０．１．
例９２：Ｎ－フェニル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000283
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．３１（ｓ，１Ｈ），９．３０（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８２－８．７４（ｍ，３Ｈ），８．５１（ｄｄ，Ｊ＝５．８，１．０Ｈｚ，１Ｈ），８．３１－８．２４（ｍ，２Ｈ），８．００－７．９２（ｍ，２Ｈ），７．５８－７．４８（ｍ，２Ｈ），７．２６（ｔｔ，Ｊ＝７．３，１．２Ｈｚ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３００．１．
例９３：Ｎ－（３－メチルフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000284
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．２４（ｓ，１Ｈ），９．３０（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８２－８．７５（ｍ，３Ｈ），８．５１（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．３１－８．２６（ｍ，２Ｈ），７．８３－７．７６（ｍ，２Ｈ），７．４１（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄｄｔ，Ｊ＝７．６，１．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１４．１．
例９４：６－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ヘキサン酸
Figure 0007247102000285
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．０２（ｓ，１Ｈ），９．１９（ｓ，１Ｈ），８．８４（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．８０－８．７３（ｍ，２Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３７－８．３１（ｍ，２Ｈ），８．１８（ｄｄ，Ｊ＝５．６，１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７６－３．６６（ｍ，２Ｈ），２．２３（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．８１－１．６９（ｍ，２Ｈ），１．６１（ｐ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．４３（ｔｔ，Ｊ＝９．６，６．１Ｈｚ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３８．２．
例９５：Ｎ－（３－フルオロフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000286
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．３９（ｓ，１Ｈ），９．３４（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８４－８．７８（ｍ，３Ｈ），８．５１（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．３１－８．２６（ｍ，２Ｈ），７．９６（ｄｔ，Ｊ＝１１．７，２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｄｄｄ，Ｊ＝８．２，２．０，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｔｄ，Ｊ＝８．２，６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｔｄｄ，Ｊ＝８．５，２．６，０．９Ｈｚ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１８．１．
例９６：Ｎ－（４－フルオロフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000287
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．３４（ｓ，１Ｈ），９．３１（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８１－８．７５（ｍ，３Ｈ），８．４７（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．３１－８．２４（ｍ，２Ｈ），７．９９－７．９２（ｍ，２Ｈ），７．４１－７．３３（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１８．１．
例９７：４－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン酸
Figure 0007247102000288
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．４３（ｓ，１Ｈ），９．１６（ｓ，１Ｈ），８．７９－８．７２（ｍ，２Ｈ），８．６２（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．３９－８．３２（ｍ，２Ｈ），８．１９（ｄｄ，Ｊ＝５．６，１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｑ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．３３（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），１．９４（ｐ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３６５．２．
例９８：Ｎ－（１－フェニルエチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000289
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６）ｄ １．６７（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），５．７３（ｍ，１Ｈ），７．２２（ｍ，１Ｈ），７．４７（ｍ，２Ｈ），７．５５（ｍ，２Ｈ），８．２６（ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ，２Ｈ），８．４１（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．６９（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．７４（ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ，１Ｈ），９．０８（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），９．１９（ｓ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２８．２．
例９９：Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000290
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．１９（ｓ，１Ｈ），８．７３（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ），８．５５（ｍ，３Ｈ），８．０１（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．７Ｈｚ，１Ｈ），１．６４（ｓ，３Ｈ），０．９９（ｍ，２Ｈ），０．９３（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２７８．１．
例１００：ｔｅｒｔ－ブチルＮ－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロピル）カルバメート
Figure 0007247102000291
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２１（ｓ，１Ｈ），８．８７（ｓ，２Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４９（ｄ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，２Ｈ），８．２４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．０３（ｓ，１Ｈ），７．３３（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），３．５４（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），１．５７（ｓ，６Ｈ），１．３６（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３９５．２．
例１０１：（１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブチル）メタノール
Figure 0007247102000292
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１６（ｓ，１Ｈ），８．７８－８．７２（ｍ，２Ｈ），８．６８（ｓ，１Ｈ），８．６２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３６（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．３１－８．２０（ｍ，２Ｈ），４．９４（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９６（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．４１（ｄｔ，Ｊ＝１２．５，７．２Ｈｚ，４Ｈ），１．８９（ｐ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０８．１．
例１０２：メチル２－（１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロプロピル）アセテート
Figure 0007247102000293
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）９．２５（ｓ，１Ｈ），９．０５（ｔ，１Ｈ），８．９０（ｄ，２Ｈ），８．７０（ｄ，１Ｈ），８．６０（ｄ，２Ｈ），８．２４（ｄ，１Ｈ），３．９０（ｍ，２Ｈ），３．７９（ｔ，２Ｈ），３．５９（ｍ，２Ｈ），３．５５－３．４９（ｍ，４Ｈ），３．４５（ｍ，２Ｈ），３．４１（ｍ，２Ｈ），２．４０（ｔ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３６．１．
例１０３：Ｎ－（２－メチルプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000294
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）ｄ ９．３５（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７９（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），７．５２（ｄｄ，Ｊ＝５．６，０．８Ｈｚ，１Ｈ），６．００（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．６６（ｄｄ，Ｊ＝６．８，６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．０９（九重線，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），１．１２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８０．１．
例１０４：３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタンニトリル
Figure 0007247102000295
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトン－ｄ６）δ ９．２３（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８２－８．７５（ｍ，２Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４２－８．３３（ｍ，２Ｈ），８．１７（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），３．６４（ｓ，２Ｈ），１．８３（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０５．１．
例１０５：Ｎ－（６－アミノヘキシル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000296
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｓ，１Ｈ），８．８８－８．８０（ｍ，１Ｈ），８．８２－８．７３（ｍ，２Ｈ），８．６８－８．６１（ｍ，１Ｈ），８．３７－８．３１（ｍ，２Ｈ），８．１９（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７１（ｑ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），２．５３（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，２Ｈ），１．７５（ｄｔ，Ｊ＝１４．２，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．４７－１．３２（ｍ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２３．２．
例１０６：Ｎ－（４－アミノブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000297
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２３（ｓ，１Ｈ），８．９６（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．８８－８．８２（ｍ，２Ｈ），８．７０（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．５１－８．４４（ｍ，２Ｈ），８．２０（ｄｄ，Ｊ＝５．６，１．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｓ，２Ｈ），３．８０－３．７２（ｍ，２Ｈ），２．８６（ｔｄ，Ｊ＝７．５，５．５Ｈｚ，２Ｈ），１．８５－１．７３（ｍ，２Ｈ），１．６７（ｄｄｔ，Ｊ＝１２．８，９．９，５．８Ｈｚ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９５．２．
例１０７：２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパンニトリル
Figure 0007247102000298
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３１（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８５－８．８０（ｍ，２Ｈ），８．７８－８．７２（ｍ，２Ｈ），８．４５－８．４０（ｍ，２Ｈ），８．３７（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），１．９３（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９１．１．
例１０８：Ｎ－［２－メチル－１－（２－メチルピペリジン－１－イル）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000299
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．０８（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．６５－８．５８（ｍ，２Ｈ），８．５０（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．３７－８．２９（ｍ，２Ｈ），７．９４（ｄｄ，Ｊ＝５．８，１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．１８（ｄ，Ｊ＝１４．７Ｈｚ，１Ｈ），３．００－２．９２（ｍ，２Ｈ），２．６６（ｓ，１Ｈ），２．４４（ｄｑ，Ｊ＝１２．３，５．９，５．１Ｈｚ，１Ｈ），１．８６（ｓ，１Ｈ），１．６９－１．４３（ｍ，１０Ｈ），１．３８－１．２５（ｍ，２Ｈ），０．９７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３７７．２．
例１０９：ジメチル（３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブチル）アミン
Figure 0007247102000300
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２３（ｓ，１Ｈ），８．９６（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．８８－８．８２（ｍ，２Ｈ），８．７０（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．５１－８．４４（ｍ，２Ｈ），８．２０（ｄｄ，Ｊ＝５．６，１．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｓ，２Ｈ），３．８０－３．７２（ｍ，２Ｈ），２．８６（ｔｄ，Ｊ＝７．５，５．５Ｈｚ，２Ｈ），１．８５－１．７３（ｍ，２Ｈ），１．６７（ｄｄｔ，Ｊ＝１２．８，９．９，５．８Ｈｚ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９５．２．
例１１０：Ｎ－（１－アミノ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000301
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２５（ｓ，１Ｈ），８．８８（ｓ，２Ｈ），８．７２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４５（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，２Ｈ），７．８７（ｓ，１Ｈ），７．７９（ｓ，２Ｈ），３．６７（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），１．６４（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９５．２．
例１１１：Ｎ－シクロペンチル－２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000302
スキーム２にあるとおりの２，４－ジクロロピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体２ｃ）から、例１のステップＣ及び中間体６ｂのステップＡを用いて表題化合物を調製した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１０（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．６０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３６（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．０９（ｄｄ，Ｊ＝５．３，０．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７７（ｓ，１Ｈ），７．５０（ｄｄ，Ｊ＝１．５，０．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｄｄ，Ｊ＝５．３，１．５Ｈｚ，１Ｈ），６．１０（ｓ，２Ｈ），１．６０（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３４９．１．
例１１２～１９７：
これらの化合物は、特に明記する場合を除き、それぞれ２，４－ジクロロピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体２ｃ）並びに様々なアミン類及びカップリングパートナーを使用して、上記に記載されるプロトコルに従い合成した。
例１１２：４－［４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル］ピリジン－２－アミン
Figure 0007247102000303
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１０（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．６０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３６（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．０９（ｄｄ，Ｊ＝５．３，０．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７７（ｓ，１Ｈ），７．５０（ｄｄ，Ｊ＝１．５，０．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｄｄ，Ｊ＝５．３，１．５Ｈｚ，１Ｈ），６．１０（ｓ，２Ｈ），１．６０（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９５．２
例１１３：２－［１－（ベンゼンスルホニル）－２－メチル－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル］－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000304
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１２（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７０（ｄｄ，Ｊ＝７．９，１．７Ｈｚ，１Ｈ），８．５８（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２０（ｍ，２Ｈ），７．７１（ｍ，１Ｈ），７．６６－７．５９（ｍ，５Ｈ），７．３５（ｄｄ，Ｊ＝７．９，４．７Ｈｚ，１Ｈ），３．２４（ｓ，３Ｈ），１．５９（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：４７３．２．
例１１４：Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－｛２－メチル－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000305
例１１３のトシル基の脱保護により表題化合物を調製した。
脱保護：Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（２－メチル－１－（フェニルスルホニル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン（３２ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）を室温で１ｍＬのｔ－ブタノール中に撹拌した。次に水酸化ナトリウム（２７０マイクロリットル（５Ｍ）、１．３５ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で２時間撹拌し終えたところで全ての出発物質が消費された。材料をオフホワイトの油になるまで濃縮し、０～２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、表題生成物Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－｛２－メチル－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン（５５％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．０１（ｓ，１Ｈ），９．０５（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．９７（ｄｄ，Ｊ＝８．０，１．７Ｈｚ，１Ｈ），８．４５（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．２５（ｄｄｄ，Ｊ＝２３．７，５．２，１．３Ｈｚ，１Ｈ），８．１９（ｍ，１Ｈ），７．４２（ｓ，１Ｈ），７．１５（ｄｄ，Ｊ＝７．９，４．７Ｈｚ，１Ｈ），２．９６（ｓ，３Ｈ），１．６３（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３３．２．
例１１５：Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000306
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．９５（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．５４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４６（ｓ，１Ｈ），８．３０（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６２（ｓ，１Ｈ），１．５８（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３７．１．
例１１６：Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－クロロピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000307
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１２（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７９（ｄ，Ｊ＝０．５Ｈｚ，１Ｈ），８．６８（ｍ，２Ｈ），８．４１（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．９２（ｓ，１Ｈ），７．７７（ｄｄ，Ｊ＝４．９，０．６Ｈｚ，１Ｈ），１．５５（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１４．１．
例１１７：Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－メチルピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000308
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１１（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．５５（ｍ，２Ｈ），８．３９（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｍ，１Ｈ），７．７６（ｍ，１Ｈ），２．５９（ｓ，３Ｈ），１．５８（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９４．２．
例１１８：２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（２－メチルブタン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000309
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１２（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．７８（ｄ，Ｊ＝０．６Ｈｚ，１Ｈ），８．６８（ｄｄ，Ｊ＝５．３，２．２Ｈｚ，１Ｈ），８，６６（ｍ，２Ｈ），８．４１（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｍ，１Ｈ），２．００（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．４９（ｓ，６Ｈ），０．８０（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２８．１．
例１１９：２，４－ジメチル－４－（｛２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル｝アミノ）ペンタン－２－オール
Figure 0007247102000310
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２９（ｓ，１Ｈ），８．９９（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．５５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４９（ｓ，１Ｈ），７．７３（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），５．６１（ｓ，１Ｈ），１．９７（ｓ，２Ｈ），１．７０（ｓ，６Ｈ），１．３０（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３９５．２．
例１２０：Ｎ－エチル－２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（プロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000311
２，４－ジクロロピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体２ｃ）から、第２のステップとしてスティルカップリングを用いたことを除き、例１１１の記載と同様に表題化合物を調製した。
スティルカップリング：２－クロロ－Ｎ－エチル－Ｎ－イソプロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン（３０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を室温で乾燥ＤＭＦ（１ｍＬ）中に撹拌した。３－フルオロ－４－（トリブチルスタンニル）ピリジン（５０．８ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、次にＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）．ＣＨ２Ｃｌ２付加物（９．８ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（２．３ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を１３０℃で１時間撹拌した。次に反応物を濃縮し、０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）におけるフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、表題化合物を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２０（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７２（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ），８．６１（ｍ，１Ｈ），８．５９（ｍ，１Ｈ），８．０８（ｄｄ，Ｊ＝６．７，４．９Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｍ，１Ｈ），４．９２－４．８８（ｍ，１Ｈ），３．７９（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），１．３７（ｍ，６Ｈ），１．３２（ｄｄ，Ｊ＝２３．７，６．８Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１２．２．
例１２１：２－メチル－１－［２－メチル－２－（｛２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル｝アミノ）プロポキシ］プロパン－２－オール
Figure 0007247102000312
例１１１に記載される手順及び例１２に記載されるとおりのアミンを用いて表題化合物を調製した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １３．８０（ｓ，１Ｈ），８．９９（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．５５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４４（ｓ，１Ｈ），８．２５（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｓ，１Ｈ），４．３５（ｓ，１Ｈ），３．８２（ｓ，２Ｈ），３．１７（ｓ，２Ｈ），１．５４（ｓ，６Ｈ），１．００（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：４２５．２．
例１２２：２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000313
例１２０に記載される手順を用いて表題化合物を調製した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２１（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７４（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ），８．６０（ｍ，２Ｈ），８．１１（ｍ，１Ｈ），８．０９（ｍ，１Ｈ），５．１１－５．０６（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），３．３７（ｓ，３Ｈ），１．３４（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９８．１．
例１２３：Ｎ－エチル－２－（３－メチルピリジン－４－イル）－Ｎ－（プロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000314
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２０（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．５９（ｍ，１Ｈ），８．５６（ｍ，１Ｈ），８．５４（ｍ，１Ｈ），７．８９（ｍ，１Ｈ），７．８５（ｍ，１Ｈ），４．９５－４．９０（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７９（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），２．６０（ｓ，３Ｈ），１．３６（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ），１．３０（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０８．２．
例１２４：２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－メトキシ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000315
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１２（ｓ，１Ｈ），８．７９（ｓ，１Ｈ），８．６９（ｄｄ，Ｊ＝５．２，１．８Ｈｚ，２Ｈ），８．４０（ｄｄ，Ｊ＝５．８，１．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ），７．７５（ｍ，１Ｈ），３．７３（ｓ，２Ｈ），３．２２（ｓ，３Ｈ），１．５０（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３４４．１．
例１２５：４－｛［２－（３－クロロピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝－２，４－ジメチルペンタン－２－オール
Figure 0007247102000316
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．４５（ｓ，１Ｈ），９．１３（ｄ，Ｊ＝０．７Ｈｚ，１Ｈ），８．７９（ｓ，１Ｈ），８．６８（ｄｄ，Ｊ＝５．３，３．４ ｚ，１Ｈ），８．６６（ｍ，１Ｈ），７．８３（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．７７（ｄｄ，Ｊ＝４．９，０．６Ｈｚ，１Ｈ），５．５７（ｓ，１Ｈ），１．９６（ｓ，２Ｈ），１．６５（ｓ，６Ｈ），１．２９（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３７２．２．
例１２６：２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－シクロペンチルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000317
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１４（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．７８（ｄ，Ｊ＝０．６Ｈｚ，１Ｈ），８．６９（ｄｄ，Ｊ＝９．４，５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），８．６１（ｄ，Ｊ－６．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３２（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｍ，１Ｈ），４．６１－４．５７（ｍ，１Ｈ），２．１０－２．０１（ｍ，２Ｈ），１．８０－１．５４（ｍ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２６．１．
例１２７：１－（２－｛［２－（３－クロロピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝－２－メチルプロポキシ）－２－メチルプロパン－２－オール
Figure 0007247102000318
例１１１に記載される手順及び例１２に記載されるとおりのアミンを用いて表題化合物を調製した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１３（ｍ，１Ｈ），８．８０（ｄ，Ｊ＝０．６Ｈｚ，１Ｈ），８．６９（ｍ，２Ｈ），８．４０（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｄｄ，Ｊ＝４．９，０．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｄｄ，Ｊ＝４．９，０．６Ｈｚ，１Ｈ），４．３８（ｓ，１Ｈ），３．８０（ｓ，２Ｈ），３．１６（ｓ，２Ｈ），１．５１（ｓ，６Ｈ），１．００（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：４０２．２．
例１２８：Ｎ－メチル－２－（３－メチルピリジン－４－イル）－Ｎ－（プロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000319
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．５８（ｍ，２Ｈ），８．５３（ｍ，１Ｈ），８．０３（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８７（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），５．０９－５．００（ｍ，１Ｈ），３．２９（ｓ，３Ｈ），２．６０（ｓ，３Ｈ），１．３１（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９４．２．
例１２９：２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（４－メタンスルホニル－２－メチルブタン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000320
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１５（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７９（ｄ，Ｊ＝０．６Ｈｚ，１Ｈ），８．６９（ｄｄ，Ｊ＝２１．３，５．３Ｈｚ，１Ｈ），８，６５（ｍ，１Ｈ），８．４０（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｍ，１Ｈ），７．７８（ｍ，１Ｈ），３．１２－３．０８（ｍ，２Ｈ），２．８７（ｓ，３Ｈ），２．４９－２．４６（ｍ，２Ｈ），１．５３（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：４０６．１．
例１３０：Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－［３－（トリフルオロメチル）ピリジン－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000321
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．９２（ｍ，１Ｈ），８．８９（ｍ，１Ｈ），８．０８（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｍ，１Ｈ），７．６７（ｍ，１Ｈ），７．５６（ｄｄ，Ｊ＝５．０，０．８Ｈｚ，１Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３４８．１．
例１３１：Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－［２－クロロ－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000322
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．０８（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８７（ｓ，１Ｈ），８．６１（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２２（ｄｄ，Ｊ＝５．８，１．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｓ，１Ｈ），１．２０（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３８２．１．
例１３２：２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－［３－（１Ｈ－１，２，３，４－テトラゾール－５－イル）プロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000323
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３０（ｓ，１Ｈ），９．１５（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７７（ｓ，１Ｈ），８．７０（ｄｄ，Ｊ＝１８．４，５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．６５（ｍ，１Ｈ），８．２５（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），３．７０－３．６５（ｔｄ，Ｊ＝６．８，５．１Ｈｚ，２Ｈ），２．９０（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），２．１２－２．０７（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３６８．１．
例１３３：２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000324
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．０１（ｓ，１Ｈ），８．４１（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．２６（ｓ，１Ｈ），７．９１（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），２．８３（ｓ，３Ｈ），１．６０（ｓ，３Ｈ），１．０５－０．９４（ｍ，２Ｈ），０．９１－０．８２（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８１．１．
例１３４：２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000325
例１２０に記載される手順を用いて表題化合物を調製した。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２４（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７７－８．７３（ｍ，２Ｈ），８．６２（ｄｄ，Ｊ＝４．９，０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．５２（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．０４（ｄｄ，Ｊ＝６．７，４．９Ｈｚ，１Ｈ），７．９９（ｓ，１Ｈ），１．８６（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３５２．１．
例１３５：２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000326
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．０６（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．４７（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．１１（ｓ，１Ｈ），２．７４（ｄ，Ｊ＝３４．７Ｈｚ，３Ｈ），１．９２（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３７．１．
例１３６：２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－メチル－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000327
ステップ１：尿素（４０．００ｇ、６６６．００ｍｍｏｌ）及び３－アミイソニコチン酸（２ａ、１８．４０ｇ、１３３．２０ｍｍｏｌ）の混合物を２１０℃で１時間加熱した（注記：溶媒は使用しなかった）。ＮａＯＨ（２Ｎ、３２０ｍＬ）を加え、混合物を９０℃で１時間撹拌した。ろ過によって固体を収集し、水で洗浄した。このように得られた粗製生成物をＨＯＡｃ（４００ｍＬ）中に懸濁し、１００℃で１時間撹拌した。この混合物を室温に冷却し、ろ過し、固体を多量の水で洗浄し、次に真空乾燥させることにより、それ以上精製することなくピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン（２ｂ、１７．００ｇ、７８％収率）を得た。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：１６４．０。
ステップ２：トルエン（２００ｍＬ）中のピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン（２ｂ、２０．００ｇ、１２２．６０ｍｍｏｌ）及びＰＯＣｌ３（３２８．０３ｇ、２．１４ｍｏｌ）の混合物にＤＩＥＡ（３１．６９ｇ、２４５．２０ｍｍｏｌ）を滴下して加え、この反応混合物を２５℃で一晩（１８時間）撹拌して懸濁液を得た。
溶媒及びＰＯＣｌ３を真空下で除去し、ＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈し、－２０℃でＤＩＥＡによってｐＨ＝７に中和し、再び濃縮して、残渣をカラム（２０～５０％ＥＡ／ＰＥ）によって精製することにより、２，４－ジクロロピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（２ｃ、２０．００ｇ、９９．９９ｍｍｏｌ、８２％収率）を黄色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ９．５２（ｓ，１Ｈ），８．９２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２００．０．
ステップ３：２０ｍＬバイアルにおいて２，４－ジクロロピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（６００ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）を室温でＤＭＳＯ（０．７ｍＬ）中に撹拌し、Ｎ２で脱気した。ＤＩＥＡ（１ｍＬ、６ｍｍｏｌ）を加えて５分間撹拌し、次にＫＦを加えた（１７４ｍｇ、３ｍｍｏｌ）。この混合物を室温で１５分間撹拌し、次にラセミ１，１，１－トリフルオロ－Ｎ－メチルプロパン－２－アミン（４１９ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）を加えて脱気し、次に６０℃で４時間撹拌した。次に反応物を濃縮し、０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）におけるフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、２－クロロ－Ｎ－メチル－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン（６８０ｍｇ、７４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトン－ｄ６）δ ９．０９（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．５９（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），８．２２（ｄｄ，Ｊ＝５．９，０．９Ｈｚ，１Ｈ），５．９３（ｄｄｄｄ，Ｊ＝１５．３，８．３，７．０，１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６１（ｑ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，３Ｈ），１．６３（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９１．７．
ステップ４：：２０ｍＬバイアルにおいて２－クロロ－Ｎ－メチル－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン（１００ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を室温で乾燥ＤＭＦ（１ｍＬ）中に撹拌した。次に３－フルオロ－４－（トリブチルスタンニル）ピリジン（１３３ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）をＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）．ＣＨ２Ｃｌ２付加物（２８．１ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（６．５５ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）に加えた。この反応物を１３０℃で０．５時間撹拌した。粗製混合物をＤＣＭ、Ｈ２Ｏで希釈し、分離し、ＤＣＭ×３で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４乾燥させて、ろ過し、濃縮した。残渣を０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することによりラセミ生成物を得て、次に続いてキラルＨＰＬＣ（２１×２５０ｍｍ ＯＪ－Ｈカラム、Ａ相として８５％ＣＯ２及びＢ相として１５％ＭｅＯＨ、流速２ｍＬ／分、３０℃、２．７５分溶出時間）によってエナンチオマーを分離することにより、例１３６及び１３７を得た。
例１３６：１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３０（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７５（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６６（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），８．６２（ｄｄ，Ｊ＝４．９，０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｄｄ，Ｊ＝５．９，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．１５（ｄｄ，Ｊ＝６．８，４．９Ｈｚ，１Ｈ），６．１２－５．９８（ｍ，１Ｈ），３．５１（ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，３Ｈ），１．５７（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３５２．１．キラルＨＰＬＣ ＴＲ＝０．８８ｍｉｎ．
例１３７：２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－メチル－Ｎ－［（２Ｒ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000328
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３０（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７５（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６６（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），８．６２（ｄｄ，Ｊ＝４．９，０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｄｄ，Ｊ＝５．９，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．１５（ｄｄ，Ｊ＝６．８，４．９Ｈｚ，１Ｈ），６．１２－５．９８（ｍ，１Ｈ），３．５１（ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，３Ｈ），１．５７（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３５２．１．キラルＨＰＬＣ ＴＲ＝０．７０ｍｉｎ．
例１３８：４－｛４－［（１－メチルシクロプロピル）アミノ］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル｝ピリジン－２－アミン
Figure 0007247102000329
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトン－ｄ６）δ ９．１５（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．５５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１７－８．０９（ｍ，２Ｈ），７．９８（ｄｄ，Ｊ＝５．６，１．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８１－７．７０（ｍ，２Ｈ），１．６１（ｓ，３Ｈ），１．００－０．９４（ｍ，２Ｈ），０．９１－０．８４（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９３．１．
例１３９：２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000330
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．２０（ｓ，１Ｈ），８．７４（ｓ，１Ｈ），８．６８（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），８．３３（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），１．８８（ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３６８．１．
例１４０：２，４－ジメチル－４－｛［２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール
Figure 0007247102000331
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ９．１４（ｓ，１Ｈ），８．８０（ｓ，１Ｈ），８．３７（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），７．５０－７．３８（ｍ，１Ｈ），２．８１（ｓ，３Ｈ），１．９９（ｓ，２Ｈ），１．８１（ｓ，６Ｈ），１．４９（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３４１．２．
例１４１：４－｛４－［（１－メチルシクロプロピル）アミノ］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル｝ピリジン－３－カルボニトリル
Figure 0007247102000332
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトン－ｄ６）δ ９．２３（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），９．０９（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．９９（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．５９－８．５３（ｍ，１Ｈ），８．４２（ｓ，１Ｈ），８．０７（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），１．６２（ｓ，３Ｈ），１．０４－０．９７（ｍ，２Ｈ），０．９０－０．８１（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０３．１．
例１４２：２－｛２－メチル－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000333
例１１４に記載される手順を用いて表題化合物を調製した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．０２（ｓ，１Ｈ），９．０６（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．９８（ｄｄ，Ｊ＝７．９，１．７Ｈｚ，１Ｈ），８．５０（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．４６（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１９（ｄｄ，Ｊ＝４．７，１．７Ｈｚ，１Ｈ），８．０６（ｄｄ，Ｊ＝５．６，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝７．９，４．７Ｈｚ，１Ｈ），３．６２（ｄｔ，Ｊ＝８．１，６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．９６（ｓ，３Ｈ），１．９０－１．６９（ｍ，２Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１９．２．
例１４３：２－（１Ｈ－インダゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000334
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１２（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），９．００（ｄｄ，Ｊ＝１．５，０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８５（ｓ，１Ｈ），８．６１（ｄｄ，Ｊ＝８．９，１．５Ｈｚ，１Ｈ），８．５２（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．２６（ｓ，１Ｈ），８．１１（ｄｄ，Ｊ＝５．６，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），１．６２（ｓ，３Ｈ），０．９７－０．８１（ｍ，４Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１７．１．
例１４４：２－（３，５－ジメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000335
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．０６（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．５０（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），２．５８（ｓ，６Ｈ），１．９１（ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３５１１．
例１４５：Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000336
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．０６（ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，１Ｈ），８．５４（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．３８－８．３６（ｍ，１Ｈ），８．２０（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），１．９０（ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３９１．１．
例１４６：４－｛４－［（４－ヒドロキシ－２，４－ジメチルペンタン－２－イル）アミノ］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル｝ピリジン－３－カルボニトリル
Figure 0007247102000337
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ９．５５（ｓ，１Ｈ），９．３８（ｓ，１Ｈ），９．０７（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．９５（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．６２（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），８．２７（ｄｄ，Ｊ＝５．２，０．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８６－７．８０（ｍ，１Ｈ），２．０２（ｓ，２Ｈ），１．８４（ｓ，６Ｈ），１．５３（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３６３．２．
例１４７：２－（３，５－ジフルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000338
例１２０に記載される手順を用いて表題化合物を調製した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１６（ｓ，１Ｈ），９．１４（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７１（ｓ，２Ｈ），８．６８（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１９（ｄｄ，Ｊ＝５．７，１．０Ｈｚ，１Ｈ），１．４５（ｓ，３Ｈ），０．８７－０．７７（ｍ，２Ｈ），０．７５－０．６４（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１４．１．
例１４８：２－（２，３－ジフルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000339
例１２０に記載される手順を用いて表題化合物を調製した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ９．３６（ｓ，１Ｈ），８．９０（ｄｄ，Ｊ＝５．０，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８５（ｄｄ，Ｊ＝１．６，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．６９（ｄｄ，Ｊ＝５．１，１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．６６（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．６４－７．５２（ｍ，１Ｈ），１．６４（ｓ，３Ｈ），１．０４－０．９４（ｍ，４Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１４．１．
例１４９：Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１，３－チアゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000340
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２２（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），９．０８（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），９．０１（ｓ，１Ｈ），８．６９－８．６２（ｍ，１Ｈ），８．５６（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），１．５５（ｓ，３Ｈ），０．９２－０．８６（ｍ，２Ｈ），０．８６－０．７６（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８４．１．
例１５０：Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－［２－（トリフルオロメチル）ピリジン－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000341
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ９．４１（ｓ，１Ｈ），８．９７－８．８９（ｍ，１Ｈ），８．８８（ｄｄ，Ｊ＝１．５，０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７０－８．６６（ｍ，１Ｈ），８．６６－８．６１（ｍ，１Ｈ），７．８９－７．７７（ｍ，１Ｈ），６．９５－６．８０（ｍ，１Ｈ），１．６５（ｓ，３Ｈ），１．０７－１．０１（ｍ，２Ｈ），１．０１－０．９２（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３４６．１．
例１５１：４－｛４－［（１－メチルシクロプロピル）アミノ］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル｝ピリジン－２－カルボニトリル
Figure 0007247102000342
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ９．３６（ｓ，１Ｈ），８．９０（ｄｄ，Ｊ＝５．０，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８５（ｄｄ，Ｊ＝１．６，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．６９（ｄｄ，Ｊ＝５．１，１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．６６（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．６４－７．５２（ｍ，１Ｈ），１．６４（ｓ，３Ｈ），１．０４－０．９４（ｍ，４Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０３．１．
例１５２：Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１，２－オキサゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000343
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ９．２５（ｓ，１Ｈ），８．８３（ｓ，１Ｈ），８．５４（ｄｄ，Ｊ＝６．０，０．７Ｈｚ，１Ｈ），７．９４－７．８８（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．３２－７．２７（ｂｒ ｓ，１Ｈ），６．６１（ｄｄ，Ｊ＝６．０，０．７Ｈｚ，１Ｈ），０．９１（ｓ，３Ｈ），０．８５－０．７３（ｍ，４Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２６８．１．
例１５３：２－（ジメチル－１，２－オキサゾール－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000344
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．０５（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８９（ｓ，１Ｈ），８．５４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），２．９０（ｓ，３Ｈ），２．６５（ｓ，３Ｈ），１．５１（ｓ，３Ｈ），０．９６－０．８４（ｍ，２Ｈ），０．８３－０．７１（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９６．１．
例１５４：Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－｛１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－４－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000345
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １１．７７（ｓ，１Ｈ），９．２３（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．９２（ｓ，１Ｈ），８．５９（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．３８（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），８．２２（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｄｄ，Ｊ＝３．４，２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｔ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ），１．６１（ｓ，３Ｈ），０．９９－０．９４（ｍ，２Ｈ），０．９２－０．８７（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１７．１．
例１５５：Ｎ－プロピル－２－｛１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000346
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．１８（ｓ，１Ｈ），９．０７（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．９６（ｄｄ，Ｊ＝７．９，１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．５１（ｄｄ，Ｊ＝１６．１，５．５Ｈｚ，２Ｈ），８．３５－８．２７（ｍ，２Ｈ），８．０９（ｄｄ，Ｊ＝５．７，１．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｄｄ，Ｊ＝７．９，４．６Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｄｔ，Ｊ＝７．７，５．９Ｈｚ，２Ｈ），１．７８（ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），１．０３（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０５．１．
例１５６：Ｎ－プロピル－２－｛１Ｈ－ピロロ［３，２－ｂ］ピリジン－１－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000347
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，１．５，０．８Ｈｚ，１Ｈ），９．１３（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），９．０２（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），８．５５（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．４８（ｄｄ，Ｊ＝４．６，１．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｄｄ，Ｊ＝５．５，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄｄ，Ｊ＝８．４，４．６Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄｄ，Ｊ＝３．８，０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７１－３．６３（ｍ，２Ｈ），１．８５－１．７４（ｍ，２Ｈ），１．０４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０５．１．
例１５７：２－（３－メチルピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000348
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２２（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７３（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．５８（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），８．５２（ｄｄ，Ｊ＝５．８，１．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｓ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），２．５９（ｓ，３Ｈ），１．８５（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３４８．１．
例１５８：Ｎ－（１－メチルシクロブチル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000349
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １３．１１（ｓ，１Ｈ），８．９８（ｓ，１Ｈ），８．４７（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．３８（ｓ，１Ｈ），８．２７（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．０７（ｓ，１Ｈ），２．４８－２．４１（ｍ，２Ｈ），２．２５（ｔｄ，Ｊ＝９．０，４．３Ｈｚ，２Ｈ），１．９９－１．８１（ｍ，２Ｈ），１．６７（ｓ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８１．１．
例１５９：Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリミジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000350
例１２０に記載される手順を用いて表題化合物を調製した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトン－ｄ６）δ ９．１５（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．５５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１７－８．０９（ｍ，２Ｈ），７．９８（ｄｄ，Ｊ＝５．６，１．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８１－７．７０（ｍ，２Ｈ），１．６１（ｓ，３Ｈ），１．００－０．９４（ｍ，２Ｈ），０．９１－０．８４（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２７９．１．
例１６０：４－｛［２－（３，５－ジメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝－２，４－ジメチルペンタン－２－オール
Figure 0007247102000351
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．４３（ｓ，１Ｈ），９．１５（ｓ，１Ｈ），８．９６（ｓ，１Ｈ），８．４６（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｄｄ，Ｊ＝５．７，１．０Ｈｚ，１Ｈ），５．６１（ｓ，１Ｈ），２．６１（ｓ，３Ｈ），２．５５（ｓ，３Ｈ），１．９５（ｓ，２Ｈ），１．７０（ｓ，６Ｈ），１．３２（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３５５．２．
例１６１：４Ｎ－プロピル－２－｛７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000352
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．５９（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），９．８７（ｓ，１Ｈ），９．１２（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８６（ｓ，１Ｈ），８．６０（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．５３（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．３６（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１１（ｄｄ，Ｊ＝５．６，０．９Ｈｚ，１Ｈ），３．７２－３．６４（ｍ，２Ｈ），１．８５－１．７２（ｍ，２Ｈ），１．０３（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０６．１．
例１６２：２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000353
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１５（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．８９（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．７８（ｄ，Ｊ＝０．６Ｈｚ，１Ｈ），８．６８（ｄｄ，Ｊ＝１２．２，５．２Ｈｚ，２Ｈ），８．２２（ｄｄ，Ｊ＝５．６，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８２（ｄｄ，Ｊ＝４．９，０．６Ｈｚ，１Ｈ），３．６０－３．５２（ｍ，２Ｈ），１．７６－１．６５（ｍ，２Ｈ），０．９５（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３００．１．
例１６３：２－（３－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000354
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．４７（ｓ，１Ｈ），８．９８（ｓ，１Ｈ），８．５４（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），８．４８（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．０６（ｄｄ，Ｊ＝５．６，０．９Ｈｚ，１Ｈ），３．５５（ｄｔ，Ｊ＝７．８，５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．２４（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），３．１７（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），１．７７－１．６３（ｍ，２Ｈ），０．９３（ｍ，７Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９５．２．
例１６４：２－（３－メチルピリジン－４－イル）－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000355
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１４（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．７９（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．５８－８．５２（ｍ，２Ｈ），８．２０（ｄｄ，Ｊ＝５．６，１．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），３．６２－３．５４（ｍ，２Ｈ），２．６０（ｓ，３Ｈ），１．７７－１．６６（ｍ，２Ｈ），０．９７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８０．２．
例１６５：２－｛１－メチル－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000356
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．０６（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．９７（ｄｄ，Ｊ＝７．９，１．７Ｈｚ，１Ｈ），８．４８（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），８．４４（ｓ，１Ｈ），８．３６（ｄｄ，Ｊ＝４．７，１．７Ｈｚ，１Ｈ），８．０９（ｄｄ，Ｊ＝５．７，１．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄｄ，Ｊ＝７．９，４．６Ｈｚ，１Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），３．７２－３．６４（ｍ，２Ｈ），１．８５－１．７３（ｍ，２Ｈ），１．０４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１９．２．
例１６６：２，４－ジメチル－４－｛［２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール
Figure 0007247102000357
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６）ｄ １．２９（ｓ，６Ｈ），１．７２（ｓ，６Ｈ），１．９８（ｓ，２Ｈ），５．５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．６９（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），８．０９（ｓ，１Ｈ）８．３０（ｓ，１Ｈ），８．４８（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），８．９９（ｓ，１Ｈ），９．１３（ｓ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２７．２．
例１６７：Ｎ－［（１Ｒ）－１－フェニルエチル］－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000358
１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＨ－ｄ４）ｄ １．７０（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），５．６３（ｍ，１Ｈ），７．２１（ｍ，１Ｈ），７．３２（ｍ，２Ｈ），７．４９（ｍ，２Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２０－８．２３（２Ｈ），８．４８（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），９．００（ｓ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１７．２．
例１６８：２－（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－［（１Ｒ）－１－フェニルエチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000359
１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＨ－ｄ４）ｄ１．７０（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），２．５４（ｓ，３Ｈ），５．６５（ｍ，１Ｈ），７．２０（ｍ，１Ｈ），７．３２（ｍ，２Ｈ），７．４４（ｍ，２Ｈ），８．１４－８．１８（２Ｈ），８．４６（ｓ，１Ｈ），９．００（ｓ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３１．２．
例１６９：Ｎ－メチル－２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000360
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６）ｄ ０．９５（ｓ，４Ｈ），１．７０（ｓ，３Ｈ），３．３８（ｓ，３Ｈ），４．３５（ｓ，３Ｈ），７．０４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．５６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），９．１６（ｓ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９５．２．
例１７０：２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－［（１Ｒ）－１－フェニルエチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000361
１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＨ－ｄ４）ｄ １．６０（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），４．０２（ｓ，３Ｈ），５．４６（ｍ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｍ，１Ｈ），７．２２（ｍ，２Ｈ），７．３３（ｍ，２Ｈ），８．１１（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．９６（ｓ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３１．２．
例１７１：Ｎ－メチル－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000362
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６）ｄ ０．９２（ｓ，４Ｈ），１．６８（ｓ，３Ｈ），３．３７（ｓ，３Ｈ），８．１０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１３（ｓ，１Ｈ），８．３５（ｓ，１Ｈ），８．４５（ｍ，１Ｈ），９．０５（ｓ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８１．１．
例１７２：２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000363
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ８．９９（ｓ，１Ｈ），８．４３（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．８７（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４２（ｓ，３Ｈ），１．５５（ｓ，３Ｈ），０．９８－０．９３（ｍ，２Ｈ），０．８５－０．８０（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８１．１．
例１７３：２－（１－エチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000364
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．１０（ｓ，１Ｈ），８．５２（ｓ，１Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．０７（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．５９（ｓ，３Ｈ），１．４９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），１．０４－０．９５（ｍ，２Ｈ），０．９３－０．７６（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９５．２．
例１７４：Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリダジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000365
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ １０．１９（ｄｄ，Ｊ＝２．１，１．３Ｈｚ，１Ｈ），９．３９（ｄｄ，Ｊ＝５．３，１．２Ｈｚ，１Ｈ），９．２０（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７０（ｄｄ，Ｊ＝５．３，２．２Ｈｚ，１Ｈ），８．５７（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．０１（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．８Ｈｚ，１Ｈ），１．６４（ｓ，３Ｈ），１．０４－０．９８（ｍ，２Ｈ），０．９７－０．９１（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２７９．１．
例１７５：Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１，３－オキサゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000366
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．１２（ｓ，１Ｈ），８．５３（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．４６（ｓ，１Ｈ），７．９９－７．９５（ｍ，１Ｈ），７．９５（ｓ，１Ｈ），１．６０（ｓ，３Ｈ），０．９６（ｍ，２Ｈ），０．８８（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２６８．１．
例１７６：Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000367
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．０９（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．４４（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），１．６０（ｓ，３Ｈ），０．９４（ｍ，２Ｈ），０．９０－０．８４（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２６７．１．
例１７７：２－（１Ｈ－イミダゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000368
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．０６（ｓ，１Ｈ），８．４４（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｓ，１Ｈ），７．９８－７．９０（ｍ，２Ｈ），１．６０（ｓ，３Ｈ），０．９５（ｍ，２Ｈ），０．９２－０．８４（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２６７．１．
例１７８：２－（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000369
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．０３（ｓ，１Ｈ），８．４１（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，２Ｈ），４．２５（ｓ，３Ｈ），１．５７（ｓ，３Ｈ），０．９９－０．９４（ｍ，２Ｈ），０．８５－０．７９（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８１．１．
例１７９：Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－｛１Ｈ－ピロロ［３，２－ｂ］ピリジン－１－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000370
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．６９（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），９．３９（ｓ，１Ｈ），９．１８（ｓ，１Ｈ），８．８８（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ），８．７２（ｓ，１Ｈ），８．５８（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｓ，１Ｈ），７．１０－７．０２（ｍ，１Ｈ），１．５９（ｓ，３Ｈ），０．９９（ｍ，２Ｈ），０．９８－０．９５（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１７．１．
例１８０：Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000371
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｓ，１Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），８．５１（ｓ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），１．５５（ｓ，３Ｈ），０．９０（ｍ，２Ｈ），０．８７（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２６８．１．
例１８１：２－（３－メチル－１，２－オキサゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000372
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ９．４１（ｓ，１Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｓ，１Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），１．６０（ｓ，３Ｈ），０．９９－０．９３（ｍ，２Ｈ），０．９３－０．８５（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８２．１．
例１８２：Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（２Ｈ－１，２，３，４－テトラゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000373
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２１（ｓ，２Ｈ），８．６９（ｓ，１Ｈ），８．２１（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），１．５７（ｓ，３Ｈ），０．８９（ｍ，２Ｈ），０．８５（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２６９．１．
例１８３：２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－［１－（ピリジン－４－イル）エチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000374
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．１７（ｓ，１Ｈ），８．７５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，３Ｈ），８．３７（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３２（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，２Ｈ），８．１４－８．０９（ｍ，２Ｈ），５．８９（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），１．８４（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１８．１．
例１８４：Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000375
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１３（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．６１（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３８（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），４．３７（ｓ，３Ｈ），１．５９（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８３．１．
例１８５：（１－｛［２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブチル）メタノール
Figure 0007247102000376
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．０７（ｓ，１Ｈ），８．６２（ｓ，１Ｈ），８．３８（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２５－８．１２（ｍ，１Ｈ），３．９３（ｓ，２Ｈ），２．６２（ｓ，３Ｈ），２．３９（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，４Ｈ），１．８５（ｄｑ，Ｊ＝１２．０，８．４Ｈｚ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１１．２．
例１８６：２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロブチル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000377
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１２（ｓ，１Ｈ），８．７８（ｓ，１Ｈ），８．６２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３１－８．２４（ｍ，１Ｈ），７．５３－７．４６（ｍ，１Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），４．３８－４．３１（ｍ，３Ｈ），２．４８－２．４１（ｍ，２Ｈ），２．２２（ｔｔ，Ｊ＝８．４，３．２Ｈｚ，２Ｈ），１．９８－１．７８（ｍ，２Ｈ），１．６５（ｓ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９５．２．
例１８７：（１－｛［２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブチル）メタノール
Figure 0007247102000378
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９－９．１１（ｍ，１Ｈ），８．７６（ｓ，１Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．４０（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５４－７．４７（ｍ，１Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），４．３２（ｓ，３Ｈ），３．９０（ｓ，２Ｈ），２．３５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，４Ｈ），１．９２－１．７６（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１１．２．
例１８８：２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000379
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２１（ｓ，１Ｈ），９．１０（ｓ，１Ｈ），８．５６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２７（ｓ，２Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），１．６１－１．５３（ｍ，２Ｈ），１．３３（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２１．１．
例１８９：２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000380
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３２（ｓ，１Ｈ），９．１９（ｄ，Ｊ＝０．７Ｈｚ，１Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２３（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５８－７．４７（ｍ，１Ｈ），７．０７（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），４．３７（ｓ，３Ｈ），１．６４－１．４９（ｍ，２Ｈ），１．３７（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３５．１．
例１９０：２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－［１－（ピリジン－４－イル）エチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000381
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．００（ｄ，Ｊ＝０．７Ｈｚ，１Ｈ），８．７７（ｓ，１Ｈ），８．５４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．５１－８．４７（ｍ，２Ｈ），８．３０（ｄｄ，Ｊ＝５．６，０．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９９（ｓ，１Ｈ），７．５０－７．４０（ｍ，２Ｈ），５．５４（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），２．４８（ｓ，３Ｈ），１．６３（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３２．２．
例１９１：（１－｛［２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブチル）メタノール
Figure 0007247102000382
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ９．１１（ｍ，２Ｈ），８．６９（ｍ，２Ｈ），８．３９（ｓ，２Ｈ），３．９２（ｓ，２Ｈ），２．３９（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，４Ｈ），１．８７（ｐ，Ｊ＝７．７，６．６Ｈｚ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９７．１．
例１９２：（１－｛［２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロプロピル）メタノール
Figure 0007247102000383
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ９．６５（ｓ，１Ｈ），９．１２（ｓ，１Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），８．４１（ｓ，２Ｈ），８．２６（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），３．７３（ｍ，２Ｈ），１．０６－０．９６（ｍ，２Ｈ），０．９４－０．７７（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８３．１．
例１９３：２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－［１－（ピリジン－４－イル）エチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000384
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．３７（ｓ，１Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），６．６３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．０１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．８９（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ），１．００（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３２．２．
例１９４：Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000385
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）ｄ ９．０３（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．４３（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２０（ｓ，１Ｈ），７．９３（ｄｄ，Ｊ＝５．６，０．８Ｈｚ，１Ｈ），１．６１（ｓ，３Ｈ），０．９９－０．９５（ｍ，２Ｈ），０．９０－０．８５（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２６７．１．
例１９５：２－（１－エチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（２－メチルプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000386
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）ｄ ９．２０（ｓ，１Ｈ），８．５０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｓ，１Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），５．８７（ｂｒ ｓ，１Ｈ），４．２５（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．５８（ｄｄ，Ｊ＝６．８，６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．１１（九重線，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），１．５６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９７．２．
例１９６：２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000387
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）ｄ ８．９９（ｓ，１Ｈ），８．７２（ｓ，１Ｈ），８．４６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３３（ｓ，１Ｈ），８．０５（ｓ，１Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），１．５４（ｓ，３Ｈ），０．９０－０．８０（ｍ，４Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８１．１．
例１９７：Ｎ－（１－アミノ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000388
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．０５（ｓ，１Ｈ），８．５６（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），８．３２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２８（ｍ，１Ｈ），７．７６（ｍ，３Ｈ），３．６３（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），１．５９（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８４．２．
例１９８：８－クロロ－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000389
スキーム３にあるとおりの４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体３ｃ）から１－メチルシクロプロパンアミンと共に例１の手順を用いて表題化合物を調製した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ８．７８－８．６６（ｍ，２Ｈ），８．６１－８．４９（ｍ，２Ｈ），８．３０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），１．６３（ｓ，３Ｈ），１．０４－０．９６（ｍ，２Ｈ），０．９５－０．８６（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１２．１．
例１９９：８－メチル－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000390
例１９８から４－ピリジンボロン酸の代わりに２，４，６－トリメチル－１，３，５，２，４，６－トリオキサトリボリナンと共に中間体６ｂに関する手順を用いて表題化合物を調製した。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．７９（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ），８．４４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４１（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），７．９８（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．８Ｈｚ，１Ｈ），２．９１（ｓ，３Ｈ），１．５７（ｓ，３Ｈ），０．９７－０．７５（ｍ，４Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９２．２．
例２５１：Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－５－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000391
スキーム５にあるとおりの４，５－ジクロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体５ｄ）からｔｅｒｔ－ブチルアミンと共に例１のステップＣを用いて表題化合物を調製した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．０７（ｓ，１Ｈ），８．７３（ｓ，２Ｈ），８．５５（ｓ，１Ｈ），８．４６－８．３９（ｍ，２Ｈ），１．７２（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１４．１．
例２５２：５－クロロ－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000392
４，５－ジクロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体５ｄ）及び１－メチルシクロプロパン－１－アミンを使用して例２５１のとおり表題化合物を調製した。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）ｄ ９．１８（ｓ，１Ｈ），８．８１（ｂｒ ｓ，２Ｈ），８．５０（ｓ，１Ｈ），８．４２（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），８．００（ｂｒ ｓ，１Ｈ），１．６４（ｓ，３Ｈ），１．００－０．９０（ｍ，４Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１２．１．
例２５３：５－クロロ－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000393
Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－５－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン（例２５１、１０ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）及び２－（２－アミノエトキシ）エタノール（６７０ｍｇ、６．３７ｍｍｏｌ）を２ｍｌマイクロ波反応器においてＮＭＰ（１ｍＬ）中に溶解させた。この反応物を１６０℃で１時間加熱した（マイクロ波照射）。この反応物を室温に冷却し、水（２０ｍｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させて、ろ過し、蒸発させた。残渣を質量トリガーＨＰＬＣによって精製することにより、表題化合物（４０％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ８．６３（ｓ，１Ｈ），８．２３（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ），８．０８（ｓ，１Ｈ），３．４－３．８（ｍ，８Ｈ），１．７２（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３８３．２．
例２５４：Ｎ－（４－メトキシ－２－メチルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000394
４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（中間体６ｂ）からスキーム６にあるとおりステップＢを用いて表題化合物を調製した。
ステップＢ：２０ｍＬバイアルにおいてＤＭＳＯ（１ｍＬ）中にトリエチルアミン（０．０４４ｍＬ、０．２５ｍｍｏｌ）、フッ化カリウム（７．２ｍｇ、０．１２４ｍｍｏｌ）、４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（中間体６ｂ、３０ｍｇ、０．１２４ｍｍｏｌ）、及び４－メトキシ－２－メチルブタン－２－アミン（１６ｍｇ、０．１３７ｍｍｏｌ）を加えることにより黄色の懸濁液を得た。この反応混合物を１３０℃で２４時間撹拌した。気流下で溶媒を蒸発させた。残渣を０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、表題化合物（２１％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２０（ｄ，Ｊ＝０．７Ｈｚ，１Ｈ），８．７１（ｍ，２Ｈ），８．４８（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．０９（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．９，５．２，１．３Ｈｚ，２Ｈ），８．０５（ｍ，１Ｈ），７．２６（ｓ，１Ｈ），６．８１（ｓ，１Ｈ），３．５０（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），３．２２（ｓ，３Ｈ），２．１１（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），１．５２（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２３．２．
例２５５～２６８：
これらの化合物は、特に明記する場合を除き、それぞれ４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（中間体６ｂ）及び様々なアミン類を使用して、例１に関して記載されるプロトコルに従い合成した。
例２５５：Ｎ－［２－メチル－１－（プロパン－２－イルオキシ）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000395
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｄｄ，Ｊ＝７．４，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８０（ｍ，２Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３９（ｄｄ，Ｊ＝５．７，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），７．７０（ｓ，１Ｈ），３．９０（ｓ，２Ｈ），３．５５－３．５０（ｍ，１Ｈ），１．６１（ｓ，６Ｈ），１．００（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３７．２．
例２５６：Ｎ－［（２Ｓ）－ブタン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000396
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２１（ｄ，Ｊ＝７．４，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．７３（ｍ，２Ｈ），８．４９（ｍ，１Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），８．２０（ｍ，２Ｈ），７．２４（ｓ，１Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），４．０２－３．９９（ｍ，１Ｈ），１．７９－１．７５（ｍ，１Ｈ），１．６９－１．６５（ｍ，１Ｈ），１．２９（ｍ，３Ｈ），０．０９（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２７９．１．
例２５７：Ｎ－［（２Ｒ）－ブタン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000397
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２１（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７３（ｍ，２Ｈ），８．４９（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｄｄ，Ｊ＝５．９，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．２０（ｍ，２Ｈ），７．２４（ｓ，１Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），４．０２－３．９９（ｄｔ，Ｊ＝１３．６，６．５Ｈｚ，１Ｈ），１．７９－１．７５（ｄｑ，Ｊ＝１４．４，７．２Ｈｚ，１Ｈ），１．６９－１．６５（ｍ，１Ｈ），１．２９（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），０．０９（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２７９．３．
例２５８：Ｎ－（１－メトキシ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000398
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２５（ｄｄ，Ｊ＝６．６，０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７７（ｍ，２Ｈ），８．７５（ｓ，１Ｈ），８．２４（ｄｔ，Ｊ＝４．５，１．９Ｈｚ，２Ｈ），８．２１（ｓ，１Ｈ），８．１１（ｍ，１Ｈ），７．５２（ｓ，１Ｈ），３．６２（ｓ，２Ｈ），３．３４（ｓ，３Ｈ），１．５２（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０９．４．
例２５９：Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000399
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３４（ｄｄ，Ｊ＝５．２，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．７７（ｄｄｄ，Ｊ＝６．２，４．４，１．７Ｈｚ，２Ｈ），８．５０（ｄｄ，Ｊ＝６．５，５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２０（ｍ，２Ｈ），７．８０（ｓ，１Ｈ），７．５８（ｓ，１Ｈ），４．２０－４．１４（ｍ，１Ｈ），２．９７（ｓ，３Ｈ），１．２５（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２７９．４．
例２６０：３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール
Figure 0007247102000400
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．４０（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．７９（ｍ，２Ｈ），８．６０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２６（ｍ，２Ｈ），７．９５（ｄｄ，Ｊ＝５．６，１．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），４．５５（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），４．０８－４．０４（ｑ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），１．９５（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），１．１４（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０９．３．
例２６１：Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000401
ステップ１：２０ｍＬマイクロ波反応器においてアセトニトリル（容積：２ｍＬ）中にテトラキスパラジウム（５８．１ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１．２５６ｍＬ、２．５１ｍｍｏｌ）、及び２，４－ジクロロ－１，７－ナフチリジン（２００ｍｇ、１．００５ｍｍｏｌ）及びピリジン－４－イルボロン酸（１３０ｍｇ、１．０５５ｍｍｏｌ）を加えることによりオレンジ色の懸濁液を得た。この反応混合物をマイクロ波下１２０℃で６０分間撹拌した。粗製混合物をＤＣＭ、Ｈ２Ｏで希釈し、分離し、ＤＣＭ×３で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４乾燥させて、ろ過し、濃縮した。残渣を０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、生成物（６２％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．５８（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８５－８．７８（ｍ，４Ｈ），８．３２－８．２９（ｍ，２Ｈ），８．１１（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝２４２．
ステップ２：４０ｍＬバイアルにおいてＤＭＳＯ（容積：２ｍＬ）中にフッ化カリウム（１１．５４ｍｇ、０．１９９ｍｍｏｌ）、４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（４０ｍｇ、０．１６６ｍｍｏｌ）、及び２－メチルプロパン－２－アミン（０．０３５ｍＬ、０．３３１ｍｍｏｌ）を加えることにより黄色の懸濁液を得た。この反応混合物を１３０℃で２４時間撹拌した。気流下で溶媒を蒸発させた。残渣を０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、生成物（８２％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２２（ｄ，Ｊ＝０．７Ｈｚ，１Ｈ），８．７８－８．７２（ｍ，２Ｈ），８．４８（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｄｄ，Ｊ＝６．０，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．１５－８．０６（ｍ，２Ｈ），７．２８（ｓ，１Ｈ），６．７３（ｓ，１Ｈ），１．５６（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝２７９．２．
例２６２：２，２－ジメチル－１－［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］ピペリジン－４－オール
Figure 0007247102000402
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトン－ｄ６）δ ９．４１（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８０－８．７５（ｍ，２Ｈ），８．６０（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．２３－８．２０（ｍ，２Ｈ），８．１８－８．１４（ｍ，１Ｈ），８．１１（ｓ，１Ｈ），４．１５－３．９９（ｍ，１Ｈ），３．５２（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），３．１６（ｓ，１Ｈ），１．８６－１．６８（ｍ，２Ｈ），１．４６（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，３Ｈ），１．１６－１．００（ｍ，３Ｈ），０．８７（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３５．２．
例２６３：２，４－ジメチル－４－｛［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール
Figure 0007247102000403
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトン－ｄ６）δ ９．２２（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７８－８．６７（ｍ，２Ｈ），８．６３（ｓ，１Ｈ），８．４０（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１９－８．０９（ｍ，２Ｈ），７．８１（ｄｄ，Ｊ＝５．９，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｓ，１Ｈ），２．０８（ｓ，２Ｈ），１．７５（ｓ，６Ｈ），１．４７（ｄ，Ｊ＝０．７Ｈｚ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３７．２．
例２６４：Ｎ－シクロペンチル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000404
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトン－ｄ６）δ ９．２６（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．７７－８．６６（ｍ，２Ｈ），８．４４（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２３－８．１５（ｍ，２Ｈ），８．０６（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｓ，１Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），４．４０－４．２５（ｍ，１Ｈ），２．２９－２．１９（ｍ，２Ｈ），１．８６－１．６８（ｍ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２７９．１．
例２６５：ジメチル（３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝ブチル）アミン
Figure 0007247102000405
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．４０（ｓ，１Ｈ），８．９１（ｓ，２Ｈ），８．６２（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ），８．４８（ｓ，２Ｈ），８．４０（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），３．２８－３．２３（ｍ，２Ｈ），２．９２－２．８１（ｍ，６Ｈ），２．４８（ｄｄ，Ｊ＝８．３，５．１Ｈｚ，２Ｈ），１．７１（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３６．２．
例２６６：Ｎ，Ｎ－ジエチル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000406
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトン－ｄ６）δ ９．３５（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．７８－８．７４（ｍ，２Ｈ），８．５１（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２３－８．１９（ｍ，２Ｈ），７．９０（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｓ，１Ｈ），３．６２（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，４Ｈ），１．２９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２７９．２．
例２６７：２－メチル－１－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）プロパン－２－オール
Figure 0007247102000407
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．２５（ｓ，１Ｈ），８．７３（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），８．４５（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），８．１４－８．０８（ｍ，３Ｈ），７．４０（ｓ，１Ｈ），３．７３（ｓ，２Ｈ），３．３９（ｓ，２Ｈ），１．６３（ｓ，６Ｈ），１．１８（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３６７．２．
例２６８：Ｎ－プロピル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000408
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２２（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７７－８．７０（ｍ，２Ｈ），８．４８（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２２－８．１６（ｍ，３Ｈ），７．６０（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｓ，１Ｈ），３．４３（ｄｄｄ，Ｊ＝７．６，６．６，５．５Ｈｚ，２Ｈ），１．７９－１．６７（ｍ，２Ｈ），１．０１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２６５．１．
例２６９：Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000409
ｔｅｒｔ－ブチル３－メチル－４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－カルボキシレート及びｔｅｒｔ－ブチルアミンを使用してスキーム６にあるとおり２，４－ジクロロ－１，７－ナフチリジン（中間体６ａ’）から表題化合物を調製した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）１２．８１（ｓ，１Ｈ），９．００（ｄ，Ｊ＝０．７Ｈｚ，１Ｈ），８．３１（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１４（ｄｄ，Ｊ＝５．９，０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．００（ｓ，１Ｈ），６．９７（ｓ，１Ｈ），６．３６（ｓ，１Ｈ），２．６５（ｓ，３Ｈ），１．５１（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８２．４．
例２７０：Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000410
ステップ１：２，４－ジクロロ－１，７－ナフチリジン（６ａ、１００ｍｇ、０．５０２ｍｍｏｌ）を室温で乾燥ＤＭＦ中に撹拌した。４－（トリブチルスタンニル）ピリミジン（１６５ｕＬ、０．５０２ｍｍｏｌ）、次に４１ｍｇのＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）．ＣＨ２Ｃｌ２付加物（４１ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ、オレンジ色の固体）及び最後にＣｕＩ（１０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ、ベージュ色の固体）を加えた。この反応物を１３０℃で１時間撹拌した。次に反応物を濃縮し、０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、生成物４－クロロ－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（３０％）を得た。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２４３．６。
表題化合物：を次に、ステップＣ、例１に詳説される手順を用いて４－クロロ－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジンで調製した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．４８（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），９．２５（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），９．００（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），８．５４（ｍ，１Ｈ），８．５０（ｍ，１Ｈ），８．３１（ｄｄ，Ｊ＝６．１，０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．０１（ｓ，１Ｈ），６．８０（ｓ，１Ｈ），１．５６（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８０．３．
例２７１：２－（２－アミノピリミジン－４－イル）－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000411
ステップ１：２，４－ジクロロ－１，７－ナフチリジン（６ａ’、４００ｍｇ、２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（５８ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）及びＰＰｈ３（５３ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を室温で３ｍＬのトルエン中に１５分間撹拌した。次に１．５ｍＬのトルエン中の６８０マイクロリットルのトリブチル（１－エトキシビニル）スタンナン（６８０マイクロリットル、２ｍｍｏｌ）を加え、この反応物を１１０℃で１時間撹拌した。反応物を室温に冷却した。４ｍＬの１Ｎ ＨＣｌを加え、この混合物を一晩撹拌した。次に反応物をＮａＯＨで中和し、エーテルで抽出した。次に粗製残渣を０～７０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、生成物１－（４－クロロ－１，７－ナフチリジン－２－イル）エタノン（４０％）を得た。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２０７．５。
ステップ２：１－（４－クロロ－１，７－ナフチリジン－２－イル）エタノン（３８ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を室温でＤＭＦ（２ｍＬ）中に撹拌し、Ｎ２で脱気した。ＴＥＡ（３７マイクロリットル、０．２７ｍｍｏｌ）を加えて５分間撹拌し、次に１４ｍｇのＫＦ（１４ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で１５分間撹拌し、次に２－メチルプロパン－２－アミン（２８マイクロリットル、０．２７ｍｍｏｌ）を加えて脱気し、次に８０℃で２時間撹拌した。次に反応物を濃縮し、０～１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、生成物１－（４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）－１，７－ナフチリジン－２－イル）エタノン（６０％）を得た。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２４４．３。
ステップ３：１－（４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）－１，７－ナフチリジン－２－イル）エタノン（２５ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を１１０℃で０．８ｍＬのＤＭＦ／ＤＭＡ中に６時間撹拌した。次に反応物を濃縮し、０～１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、生成物（Ｅ）－１－（４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）－１，７－ナフチリジン－２－イル）－３－（ジメチルアミノ）プロパ－２－エン－１－オン（３０％）を得た。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９９．４。
ステップ４：（Ｅ）－１－（４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）－１，７－ナフチリジン－２－イル）－３－（ジメチルアミノ）プロパ－２－エン－１－オン（８ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）を室温でＥｔＯＨ（０．７ｍＬ）中に撹拌した。硝酸グアニジン（４ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）を加え、反応物を１００℃で２０分間撹拌した。次にナトリウムエトキシド（ＥｔＯＨ中、２０マイクロリットル、０．０５４ｍｍｏｌ）を加え、還流させながら一晩撹拌した。次に反応物を濃縮し、０～２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、表題化合物（３０％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２０（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．４８（ｍ，１Ｈ），８．４１（ｍ，１Ｈ），８．２９（ｄｄ，Ｊ＝６．０，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｓ，１Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｓ，２Ｈ），６．６５（ｓ，１Ｈ），１．５６（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９５．４．
例２７２～２７４：
これらの化合物は、それぞれ２，４－ジクロロ－１，７－ナフチリジン（６ａ’）及び様々なボロン酸又はエステルで、例２６９の調製に用いたプロトコルに従い合成した。
例２７２：Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－｛１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－４－イル｝－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000412
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）１１．８６（ｓ，１Ｈ），９．２３（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．５０（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｍ，１Ｈ），７．６３（ｍ，１Ｈ），７．６１（ｍ，１Ｈ），７．３２（ｓ，１Ｈ），６．９６（ｄｄ，Ｊ＝３．４，１．９Ｈｚ，１Ｈ），６．６７（ｓ，１Ｈ），１．５６（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１８．４．
例２７３：Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリダジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000413
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．９７（ｓ，１Ｈ），９．４０（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），９．２４（ｓ，１Ｈ），８．５０（ｄ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３６（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３１（ｍ，１Ｈ），７．３５（ｓ，１Ｈ），６．８０（ｓ，１Ｈ），１．５８（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８０．３．
例２７４：２－（２－アミノピリジン－４－イル）－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000414
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．４５（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２６（ｍ，１Ｈ），８．０５（ｄｄ，Ｊ＝５．３ ０．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｍ，１Ｈ），７．１７（ｍ，１Ｈ），７．１４（ｍ，１Ｈ），６．６３（ｓ，１Ｈ），６．０９（ｓ，２Ｈ），１．５５（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９４．４．
例２７５～２８６：
これらの化合物は、それぞれ２，４－ジクロロ－１，７－ナフチリジン（中間体６ａ’、スキーム６）及び様々な有機スズ試薬及びアミンで、例２７０の調製に用いたプロトコルに従い合成した。
例２７５：Ｎ，Ｎ－ジエチル－２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000415
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３３（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．７８（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），８．６２（ｄｄ，Ｊ＝４．９，１．１Ｈｚ，１Ｈ），８．５５（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），８．０２（ｄｄ，Ｊ＝６．８，４．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），３．５０（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，４Ｈ），１．２１（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９７．１．
例２７６：（３－｛［２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝－３－メチルブチル）ジメチルアミン
Figure 0007247102000416
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２０（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７４（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），８．６０（ｄｄ，Ｊ＝４．９，１．１Ｈｚ，１Ｈ），８．５３（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．０４（ｄｄ，Ｊ＝６．９，４．９Ｈｚ，１Ｈ），７．９１－７．８３（ｓ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），２．６０－２．５４（ｍ，２Ｈ），２．３３－２．２４（ｍ，６Ｈ），１．９６－１．８８（ｍ，２Ｈ），１．５１（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３５４．２．
例２７７：２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000417
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３３（ｍ，１Ｈ），８．７８（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），８．６１（ｄｄ，Ｊ＝４．９，１．１Ｈｚ，１Ｈ），８．５５（ｄｄ，Ｊ＝５．９，２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．０５－８．０１（ｄｄ，Ｊ＝６．８，４．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２０－４．１４（ｍ，１Ｈ），２．９３（ｓ，３Ｈ），１．２８（ｍ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９７．１．
例２７８：２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－４－（ピペリジン－１－イル）－１，７－ナフチリジン
Figure 0007247102000418
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３９（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７８（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），８．６３（ｍ，１Ｈ），８．６０（ｍ，１Ｈ），８．０３（ｄｄ，Ｊ＝６．８，４．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），３．３２－３．２８（ｍ，４Ｈ），１．８７－１．７９（ｍ，４Ｈ），１．７２－１．６５（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０９．４．
例２７９：２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－４－（モルホリン－４－イル）－１，７－ナフチリジン
Figure 0007247102000419
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．４０（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７９（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），８．６２（ｍ，１Ｈ），８．６０（ｍ，１Ｈ），８．０３（ｄｄ，Ｊ＝６．８，４．９Ｈｚ，１Ｈ），７．９５（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９１－３．８６（ｍ，４Ｈ），３．３６－３．３３（ｍ，４Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１１．１．
例２８０：Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000420
ステップ１：２０ｍＬマイクロ波反応器において２，４－ジクロロ－１，７－ナフチリジン（６ａ、１００ｍｇ、０．５０２ｍｍｏｌ）を室温で乾燥ＤＭＦ（１ｍＬ）中に撹拌した。３－フルオロ－４－（トリブチルスタンニル）ピリジン（１９４ｍｇ、０．５０２ｍｍｏｌ）、次にＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）．ＣＨ２Ｃｌ２付加物（４１．０ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（９．６ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を１３０℃で０．５時間撹拌した。この粗製混合物をＤＣＭ、Ｈ２Ｏで希釈し、分離し、ＤＣＭ×３で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４乾燥させて、ろ過し、濃縮した。残渣を０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、生成物４－クロロ－２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（７１％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトン－ｄ６）δ ９．５６（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８３（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．７４（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄｄ，Ｊ＝５．０，１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．４４（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），８．１８（ｄｄ，Ｊ＝６．７，４．９Ｈｚ，１Ｈ），８．１４（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝２６０．
ステップ２：４０ｍＬバイアルにおいてＤＭＳＯ（容積：１ｍＬ）中にフッ化カリウム（７ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、４－クロロ－２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（２６ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）、及び２－メチルプロパン－２－アミン（０．０３５ｍＬ、０．３３１ｍｍｏｌ）を加えることにより黄色の懸濁液を得た。この反応混合物を１３０℃で２４時間撹拌した。気流下で溶媒を蒸発させた。残渣を０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、生成物（４２％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトン－ｄ６）δ ９．２４（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），８．５９（ｄｄ，Ｊ＝４．９，１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．４６（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），８．１５（ｄｄ，Ｊ＝６．８，４．９Ｈｚ，１Ｈ），８．０６（ｄｄ，Ｊ＝５．９，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），６．３０（ｓ，１Ｈ），１．６１（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９７．１．
例２８１：２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（２－メチルブタン－２－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000421
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトン－ｄ６）δ ９．２４（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），８．５８（ｄｄ，Ｊ＝４．９，１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．４７（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），８．１５（ｄｄ，Ｊ＝６．８，４．９Ｈｚ，１Ｈ），８．０７（ｄｄ，Ｊ＝５．９，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），６．１２（ｓ，１Ｈ），２．０３－１．９８（ｍ，２Ｈ），１．５６（ｓ，６Ｈ），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１１．２．
例２８２：２－｛［２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝－２－メチルプロパン－１－オール
Figure 0007247102000422
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトン－ｄ６）δ ９．２４（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），８．５９（ｄｄ，Ｊ＝４．９，１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．４９（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），８．１５（ｄｄ，Ｊ＝６．８，４．９Ｈｚ，１Ｈ），７．９７（ｄｔ，Ｊ＝５．８，１．３Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），６．２９（ｓ，１Ｈ），３．７８（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），１．５６（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１３．１．
例２８３：１－［２－（３－クロロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］－２，２－ジメチルピペリジン－４－オール
Figure 0007247102000423
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．４０（ｓ，１Ｈ），８．７９（ｄ，１Ｈ），８．６２（ｄ，１Ｈ），８．６０（ｄ，１Ｈ），８．０３（ｄｄ，１Ｈ），７．９５（ｄ，１Ｈ），７．５４（ｓ，１Ｈ），３．９１－３．８６（ｍ，４Ｈ），３．３６－３．３３（ｍ，４Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１１．３．
例２８４：２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－［２－メチル－１－（モルホリン－４－イル）プロパン－２－イル］－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000424
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，アセトン－ｄ６）δ ９．２５（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），８．５９（ｄｄ，Ｊ＝４．９，１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．５２（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１５（ｄｄ，Ｊ＝６．８，４．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｄｄ，Ｊ＝５．９，０．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），６．７７（ｓ，１Ｈ），３．７０－３．６４（ｍ，４Ｈ），２．７５（ｓ，２Ｈ），２．６９－２．６２（ｍ，４Ｈ），１．６０（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３８２．２．
例２８５：Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－クロロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000425
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトン－ｄ６）δ ９．２０（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．７８－８．６９（ｍ，１Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），８．４７（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），８．０６（ｄｔ，Ｊ＝５．９，１．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７９－７．７０（ｍ，１Ｈ），７．２５（ｓ，１Ｈ），１．６０（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１３．１．
例２８６：２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ，Ｎ－ジエチル－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000426
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，アセトン－ｄ６）δ ９．３１（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．７５（ｄ，Ｊ＝０．６Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），８．５４（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．９３（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｄｄ，Ｊ＝４．９，０．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｓ，１Ｈ），３．５８（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，４Ｈ），１．２９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３１３．１．
例２８７：Ｎ－プロピル－２－（３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン
Figure 0007247102000427
２，４－ジクロロピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体２ｃ）及びプロパン－１－アミン及びｔｅｒｔ－ブチル４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－１－カルボキシレートを使用して、例１１１に関して記載されるプロトコルに従い表題化合物を合成した。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １３．８１（ｓ，１Ｈ），９．０１（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．６４（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．６１－８．５７（ｍ，１Ｈ），８．５５（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１１（ｄｄ，Ｊ＝５．６，１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．６４－３．５６（ｍ，２Ｈ），１．７３－１．６２（ｍ，２Ｈ），０．９６（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（Ｍ／Ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２３．１．
例２８８：３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン
Figure 0007247102000428
ステップＡ：ジクロロメタン（２００ｍＬ）中の３－メチルイソニコチン酸（１）（１０ｇ、７２．９ｍｍｏｌ）の懸濁液に０℃でＤＭＦ（２００ｍＬ）を加えた。エチルクロロホルメート（８．６ｍＬ、１２．５ｇ、９８．４ｍｍｏｌ）を０℃で１０分かけて滴下して加えることにより混合物を生じさせ、これを０℃で１５分間撹拌した。ｔｅｒｔ－ブチルアミン（３５．０ｍＬ、２４．２ｇ、３３０．０ｍｍｏｌ）を０℃で反応混合物に１５分かけて滴下して加え、この反応混合物を減圧下で濃縮することにより残渣を生じさせ、これをクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）に供することにより、２（１１．６ｇ、８３％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．４６（ｓ，１Ｈ），８．４３（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），２．２９（ｓ，３Ｈ），１．３７（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：１９３．
ステップＢ：ＴＨＦ（４４０ｍＬ）中の２（１１．６ｇ、６０．３ｍｍｏｌ）の溶液にｎ－ＢｕＬｉ（５８．０ｍＬ、１４５．０ｍｍｏｌ、ヘキサン中２．５Ｍ）の溶液をＮ２下に－４５℃で１５分かけて滴下して加えることにより混合物を生じさせ、これを－４５℃で４５分間撹拌した。次にＴＨＦ（２０ｍＬ）中のイソニコチン酸エチル（１０．０ｇ、６６．３ｍｏｌ）の溶液を－４５℃で１５分かけて滴下した。この反応混合物を２時間かけて室温に加温させて、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１０００ｍＬ）に注入した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×４００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させて、減圧下で蒸発させることにより、粗製３を得た。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９８。この粗製生成物を精製なしに次のステップに使用した。
ステップＣ：酢酸（２００ｍＬ）中のステップＢの粗製３の溶液を１００℃で１６時間加熱し、室温に冷却し、減圧下で約８０ｍＬに濃縮した。水（１２０ｍＬ）を加え、この混合物をろ過すると白色の沈殿物が得られ、これを水（２×５０ｍＬ）で洗浄し、減圧下で乾燥させることにより、粗製４（８．０８ｇ）を得た。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２２５。この粗製生成物を精製なしに次のステップに使用した。
ステップＤ：ＥｔＯＨ（１００ｍＬ）中の粗製４（８．０８ｇ）の懸濁液に室温でＮＨ４ＯＨ水溶液（８０ｍＬ、２８．５％）を加えることにより混合物を生じさせ、これを２．５時間撹拌し、蒸発させることにより、粗製５を得た。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２４２。この粗製生成物を精製なしに次のステップに使用した。
ステップＥ：ＥｔＯＨ（１００ｍＬ）中のステップＤの粗製５の懸濁液に０℃で水（２０ｍＬ）を加え、次にＨＣｌ水溶液（１２Ｍ、２５ｍＬ）を加えた。この反応混合物を室温で１９時間撹拌し、ろ過すると白色固体が得られ、これを減圧下で乾燥させることにより、粗製６（１０．２ｇ）を得た。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２２４。この粗製生成物を精製なしに次のステップに使用した。
ステップＦ：開放したＣｈｅｍＧｌａｓｓ厚肉丸底圧力ベッセル（３５０ｍＬ）においてＰＯＣｌ３（７５ｍＬ）中の粗製６（１０．２ｇ）の懸濁液を極めてゆっくりと加熱して温度を１００℃に到達させ、１００℃で３０分間撹拌した。次に圧力ベッセルを密閉し、反応混合物を１３５℃で１４時間加熱した。ＰＯＣｌ３を減圧下で除去し、残渣を氷水（５０ｇの氷及び５０ｍＬの水）と混合した。混合物のｐＨをＮａＯＨ水溶液（１Ｍ）で約７に調整し、次に飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液で約１０に調整した。混合物のろ過により白色の固体が得られ、これを減圧下で乾燥させることにより、７（７．１ｇ、２からの５ステップで４９％収率）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．５９（ｓ，１Ｈ），８．９４（ｓ，１Ｈ），８．８９（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．７８（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），８．１５（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２４２．
ステップＧ：ジオキサン（１．０ｍＬ）中の中間体７（６０．０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及び１－（トリフルオロメチル）シクロプロパン－１－アミン（９３．０ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）の溶液にビス（トリ－ｔｅｒｔ－ブチルホスフィン）パラジウム（１３．０ｍｇ、０．２マイクロモル）及びナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（７１．０ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物をＮ２下に１３０℃で一晩加熱し、濃縮すると残渣が生じ、これをクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）に供することにより、表題化合物を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３５（ｓ，１Ｈ），８．９５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），８．７５（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７１（ｓ，１Ｈ），８．５７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），８．３４（ｓ，１Ｈ），８．３１ ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），１．５７（ｍ，２Ｈ），１．３１（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３１．
例２８９：Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン－５－アミン
Figure 0007247102000429
ステップＡ：ＤＭＦ（７ｍＬ）中の７－ブロモイソキノリン（１）（３００ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）、ピリジン－４－イルボロン酸（２１３ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）二塩化物（ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２、９８ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（２Ｎ、４．３ｍｌ）の懸濁液を撹拌し、１００℃で３時間加熱した。この反応混合物をセライトでろ過した。溶液を水で希釈し、ＥｔＯＡ×３で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させて、減圧下で蒸発させた。得られた粗製物を０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン（２、２８２ｍｇ）を淡褐色の油として得た。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２０７。
ステップＢ：濃Ｈ２ＳＯ４（３ｍＬ）中の７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン（２）（２８２ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）の溶液に０℃でＮ－ブロモコハク酸イミド（ＮＢＳ、４８８ｍｇ、２．７４ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を２時間かけて室温に加温させて、氷水（２０ｍＬ）に注入し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を加えてｐＨ約８にした。水層をＥｔＯＡ×３で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させて、減圧下で蒸発させた。得られた粗製物を０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したＣＯＭＢＩＦＬＡＳＨ（登録商標）システム（ＩＳＣＯ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、５－ブロモ－７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン（３、１１０ｍｇ）を得た。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８５／２８７。
ステップＣ：トルエン（１．５ｍＬ）中の５－ブロモ－７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン（３）（３０ｍｇ、０．１０５ｍｍｏｌ）、１－メチルシクロプロパン－１－アミン塩酸塩（２８．３ｍｇ、０．２６３ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（Ｐｄ２ｄｂａ３、９．７ｍｇ、０．０１０５ｍｍｏｌ）、２，２’－ビス（ジフェニルホスフィノ）－１，１’－ビナフチル（ＢＩＮＡＰ、６．５ｍｇ、０．０１０５ｍｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（４４．３ｍｇ、０．４６２）の懸濁液をＮ２下に９０℃で１６時間加熱し、室温に冷却し、濃縮した。残渣をＭｅＯＨで希釈してろ過し、次に１０～９０％アセトニトリル／水による質量トリガー分取逆相ＨＰＬＣによって精製することにより、表題化合物（６ｍｇ）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ９．２４（ｓ，１Ｈ），８．７４（ｓ，２Ｈ），８．４９（ｓ，１Ｈ），７．６９－７．６０（ｍ，２Ｈ），７．５９－７．５６（ｍ，１Ｈ），７．５２－７．４６（ｍ，１Ｈ），７．３９－７．３６（ｍ，１Ｈ），１．５２（ｓ，３Ｈ），０．９８－０．９２（ｍ，２Ｈ），０．８８－０．８１（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２７６．
例２９０：２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン
Figure 0007247102000430
例１１１に関して記載されるプロトコルに従い２，４－ジクロロピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体２ｃ）をｔｅｒｔ－ブチル２－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－カルボキシレート及びピリジン－４－イルボロン酸と共に使用して、続いてＴＦＡによるＮ－Ｂｏｃ基の脱保護を行い、表題化合物を合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ９．４６（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，１Ｈ），８．８３－８．７８（ｍ，２Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．３５－８．３０（ｍ，２Ｈ），７．７４（ｄｄ，Ｊ＝５．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ），５．８０－５．６７（ｍ，１Ｈ），４．０７（ｄｔ，Ｊ＝２４．３，１２．４Ｈｚ，２Ｈ），３．６５（ｄ，Ｊ＝１４．２Ｈｚ，１Ｈ），３．３４（ｄ，Ｊ＝１４．６Ｈｚ，１Ｈ），３．１８（ｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ，１Ｈ），２．８９（ｔ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３６１．１．
例２９１：４－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン
Figure 0007247102000431
４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（中間体６ｂ）及び１－メチルピペラジンから以下のとおり表題化合物を合成した：
ジオキサン（２ｍＬ）中の４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（中間体６ｂ、３０ｍｇ、０．１２４ｍｍｏｌ）、１－メチルピペラジン（５０ｍｇ、０．４９９ｍｍｏｌ）、リン酸カリウム（１３２ｍｇ、０．６２１ｍｍｏｌ）、ＲｕＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（１６ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）及びＲｕＰｈｏｓ（１３ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）の溶液をマイクロ波バイアルにおいてアルゴン下１３０℃で１０分間加熱した。溶媒を減圧下で蒸発させた。残渣を２０～１００％酢酸エチル／シクロヘキサン、続いて２～３０％メタノール／ジクロロメタンを使用したフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、表題化合物（２１％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３８（ｓ，１Ｈ），８．７６（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），８．５５（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．２３（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｓ，１Ｈ），３．３７（ｓ，４Ｈ），２．６３（ｓ，４Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０６．３，Ｒｔ１＝０．３８ｍｉｎ．
例２９２：４－（ピペラジン－１－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン
Figure 0007247102000432
表題化合物を例２９１と同様に２ステップで４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（中間体６ｂ）及びｔｅｒｔ－ブチルピペラジン－１－カルボキシレート（ステップ１）並びにジエチルエーテル中ＨＣｌを使用したＢｏｃ脱保護（ステップ２）から合成した。
ステップ２（Ｂｏｃ脱保護）：
ジクロロメタン（５ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル４－（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）ピペラジン－１－カルボキシレート（２４ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ）の溶液にジエチルエーテル（２ｍＬ、１２ｍｍｏｌ）中６Ｍ ＨＣｌを加えた。得られた黄色の懸濁液を室温で１時間撹拌した。黄色の沈殿物をろ取し、ジクロロメタンで洗浄した。塩酸塩をＭｅＯＨ中に溶解させて、この溶液をＰｏｒａＰａｋ Ｒｘｎ ＣＸ ２０ｃｃ（２ｇ）カートリッジに入れた。次にカートリッジを５ｍＬ ＭｅＯＨで２回洗浄した。最後に、ＭｅＯＨ中７Ｎ ＮＨ３で化合物を溶出させた。ろ液を減圧下で蒸発させることにより、表題化合物（７６％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３７（ｓ，１Ｈ），８．７６（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，２Ｈ），８．５５（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２２（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｓ，１Ｈ），３．２８（ｓ，４Ｈ），２．９９（ｓ，４Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９２．３，Ｒｔ１＝０．３８ｍｉｎ．
例２９３：４－（２－メチルピペリジン－１－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン
Figure 0007247102000433
表題化合物を例２９１と同様に４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（中間体６ｂ）及び２－メチルピペリジンから合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．４８－９．３２（ｍ，１Ｈ），８．８６－８．７４（ｍ，２Ｈ），８．５６（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．３０－８．１６（ｍ，２Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｓ，１Ｈ），４．１０（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），３．５３－３．４１（ｍ，１Ｈ），３．２１（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），２．０５（ｓ，１Ｈ），１．８６－１．７４（ｍ，３Ｈ），１．６２（ｓ，２Ｈ），１．０６（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０５．３，Ｒｔ１＝０．９８ｍｉｎ．
例２９４：２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロブチル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000434
表題化合物を４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（中間体６ｂ）及び１－（トリフルオロメチル）シクロブタン－１－アミンから以下のとおり合成した：
ジオキサン（５ｍＬ）中の４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（中間体６ｂ、１００ｍｇ、０．４１４ｍｍｏｌ）、１－（トリフルオロメチル）シクロブタン－１－アミン（１１５ｍｇ、０．８２８ｍｍｏｌ）、カリウムｔｅｒｔ－ブチレート（１３９ｍｇ、１．２４１ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３×ＣＨＣｌ３（４３ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）及びＰｈＣＰｈｏｓ（３６ｍｇ、０．０８５ｍｍｏｌ）の溶液をマイクロ波バイアルにおいてアルゴン下１００℃で３０分間加熱した。溶媒を減圧下で蒸発させた。残渣を２０～１００％酢酸エチル／シクロヘキサン、続いて２～１０％メタノール／ジクロロメタンを使用したフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、表題化合物（９％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３０（ｓ，１Ｈ），８．７８－８．７４（ｍ，２Ｈ），８．５７（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．４０（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．０８－８．０４（ｍ，２Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），６．９４（ｓ，１Ｈ），２．８５－２．７８（ｍ，２Ｈ），２．７４（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，２Ｈ），２．０４（ｄｄ，Ｊ＝１８．６，９．７Ｈｚ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３４５．３，Ｒｔ１＝０．８４ｍｉｎ．
例２９５：２－メチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）プロパン－１，２－ジアミン
Figure 0007247102000435
表題化合物を例２５４と同様に２ステップで４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（中間体６ｂ）及びｔｅｒｔ－ブチル（１－アミノ－２－メチルプロパン－２－イル）カルバメート（ステップ１）及びジエチルエーテル中ＨＣｌを使用したＢｏｃ脱保護（ステップ２、例２９２に記載される）から合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２４（ｓ，１Ｈ），８．７５（ｄ，Ｊ＝５．１４Ｈｚ，２Ｈ），８．５１（ｄ，Ｊ＝５．７５Ｈｚ，１Ｈ），８．２６（ｄ，Ｊ＝５．７５Ｈｚ，１Ｈ），８．２１（ｄ，Ｊ＝５．２６Ｈｚ，２Ｈ），７．４０（ｓ，１Ｈ），７．２９（ｂｒ ｓ，１Ｈ），３．３８（ｂｒ ｓ，２Ｈ），１．６３－２．２２（ｍ，２Ｈ），１．１６（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９４．４，Ｒｔ１＝０．３７ｍｉｎ．
例２９６：Ｎ－（オキセタン－３－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000436
表題化合物を例２５４と同様に４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（中間体６ｂ）及びオキセタン－３－アミンから合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２８（ｓ，１Ｈ），８．７６（ｄ，Ｊ＝５．９９Ｈｚ，２Ｈ），８．５７（ｄ，Ｊ＝５．７５Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝５．７５Ｈｚ，１Ｈ），８．２１（ｄ，Ｊ＝５．９９Ｈｚ，２Ｈ），８．１１（ｂｒ ｄ，Ｊ＝５．７５Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｓ，１Ｈ），４．９９－５．１７（ｍ，３Ｈ），４．７３（ｔ，Ｊ＝５．９３Ｈｚ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２７９．３，Ｒｔ１＝０．４９ｍｉｎ．
例２９７：Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000437
表題化合物を例２５４と同様に４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（中間体６ｂ）及び１－メチルシクロプロパン－１－アミンから合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３４（ｓ，１Ｈ），８．７８（ｄ，Ｊ＝５．７５Ｈｚ，２Ｈ），８．４８（ｄ，Ｊ＝５．８７Ｈｚ，１Ｈ），８．２０（ｄ，Ｊ＝５．８７Ｈｚ，２Ｈ），８．０７（ｄ，Ｊ＝５．８７Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｓ，１Ｈ），３．２９（ｓ，３Ｈ），３．１４－３．２０（ｍ，１Ｈ），０．８９－０．９７（ｍ，２Ｈ），０．５２－０．６１（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２７７．３，Ｒｔ１＝０．７３ｍｉｎ．
例２９８：４－（３，３－ジメチルピペラジン－１－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン
Figure 0007247102000438
表題化合物を例２９１と同様に２ステップで４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（中間体６ｂ）及びｔｅｒｔ－ブチル２，２－ジメチルピペラジン－１－カルボキシレート（ステップ１）並びにジエチルエーテル中ＨＣｌを使用したＢｏｃ脱保護（ステップ２、例２９２に記載される）から合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．４１（ｓ，１Ｈ），８．７９（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），８．５９（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．２６（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｓ，１Ｈ），３．３１（ｓ，１Ｈ），３．２５（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，２Ｈ），３．１０（ｓ，４Ｈ），１．２６（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２０．３，Ｒｔ１＝０．４５ｍｉｎ．
例２９９：２，２－ジメチル－４－（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）モルホリン
Figure 0007247102000439
表題化合物を例２９１と同様に４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（中間体６ｂ）及び２，２－ジメチルモルホリンから合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．４３（ｓ，１Ｈ），８．８０（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），８．６１（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２７（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｓ，１Ｈ），４．０１－３．９４（ｍ，２Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．２１（ｓ，２Ｈ），１．３９（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２１．３，Ｒｔ１＝０．８１ｍｉｎ．
例３００：Ｎ－（１－メチルシクロブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000440
表題化合物を例２５４と同様に４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（中間体６ｂ）及び１－メチルシクロブタン－１－アミンから合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２３（ｓ，１Ｈ），８．７５（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），８．４９（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２６（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．０８（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），７．６４（ｓ，１Ｈ），６．８３（ｓ，１Ｈ），２．４５（ｔ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，２Ｈ），２．３２（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），１．９７（ｄｄｄ，Ｊ＝２５．６，２０．０，９．７Ｈｚ，２Ｈ），１．６２（ｓ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９１．３，Ｒｔ１＝０．７０ｍｉｎ．
例３０１：２，２－ジメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン
Figure 0007247102000441
表題化合物を例２５４と同様に２ステップで４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（中間体６ｂ）及びｔｅｒｔ－ブチル（３－アミノ－２，２－ジメチルプロピル）カルバメート（ステップ１）並びにジエチルエーテル中ＨＣｌを使用したＢｏｃ脱保護（ステップ２、例２９２に記載される）から合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２０（ｓ，１Ｈ），８．７２（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），８．４７（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），８．０１（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｓ，１Ｈ），３．３６（ｓ，２Ｈ），３．２７（ｓ，２Ｈ），２．６０（ｓ，２Ｈ），０．９７（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０８．３，Ｒｔ１＝０．４１ｍｉｎ．
例３０２：Ｎ２，Ｎ２，２－トリメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）プロパン－１，２－ジアミン
Figure 0007247102000442
表題化合物を例２５４と同様に４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（中間体６ｂ）及びＮ２，Ｎ２，２－トリメチルプロパン－１，２－ジアミンから合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２７（ｓ，１Ｈ），８．７６（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），８．５４（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．２３（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ），８．０５（ｓ，１Ｈ），７．３３（ｓ，１Ｈ），６．７５（ｓ，１Ｈ），３．４２（ｓ，２Ｈ），２．２９（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，６Ｈ），１．１６（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２２．３，Ｒｔ１＝０．３９ｍｉｎ．
例３０３：４－（２－メチルピペラジン－１－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン
Figure 0007247102000443
表題化合物を例２９１と同様に２ステップで４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（中間体６ｂ）及びｔｅｒｔ－ブチル３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート（ステップ１）並びにジエチルエーテル中ＨＣｌを使用したＢｏｃ脱保護（ステップ２、例２９２に記載される）から合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．４４（ｓ，１Ｈ），８．８０（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），８．６０（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．２８（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．８４（ｓ，１Ｈ），４．０８（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），３．６０（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．４２（ｄｄ，Ｊ＝１２．３，２．９Ｈｚ，１Ｈ），３．２９－３．１７（ｍ，２Ｈ），３．１２（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），２．９８（ｄｄ，Ｊ＝１２．３，４．１Ｈｚ，１Ｈ），１．１０（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０６．３，Ｒｔ１＝０．４３ｍｉｎ．
例３０４：２－メチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン
Figure 0007247102000444
表題化合物を例２５４と同様に２ステップで４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（中間体６ｂ）及びｔｅｒｔ－ブチル（３－アミノ－２－メチルプロピル）カルバメート（ステップ１）並びにジエチルエーテル中ＨＣｌを使用したＢｏｃ脱保護（ステップ２、例２９２に記載される）から合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２５（ｓ，１Ｈ），８．７６（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），８．５１（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．２４－８．１６（ｍ，３Ｈ），７．９６（ｓ，１Ｈ），７．２７（ｓ，１Ｈ），５．１４（ｓ，２Ｈ），３．５０（ｄｄ，Ｊ＝１３．４，６．８Ｈｚ，１Ｈ），３．４０（ｄｄ，Ｊ＝１３．８，６．８Ｈｚ，１Ｈ），２．８０（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，６．０Ｈｚ，１Ｈ），２．７０（ｄｄ，Ｊ＝１２．５，６．４Ｈｚ，１Ｈ），２．１１（ｄｑ，Ｊ＝１３．２，６．６Ｈｚ，１Ｈ），１．０４（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９４．３，Ｒｔ１＝０．３７ｍｉｎ．
例３０５：（Ｒ）－２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）－１，７－ナフチリジン
Figure 0007247102000445
表題化合物を例２９１と同様に４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（中間体６ｂ）及び（Ｒ）－２－（トリフルオロメチル）ピペラジンから合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．４０（ｓ，１Ｈ），８．８４－８．７１（ｍ，２Ｈ），８．５８（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．３５－８．１８（ｍ，２Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｓ，１Ｈ），３．７９（ｓ，１Ｈ），３．６６（ｄ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，１Ｈ），３．５３（ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，１Ｈ），３．２３－２．９４（ｍ，５Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３６０．３，Ｒｔ１＝０．７１ｍｉｎ．
例３０６：Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000446
表題化合物を例２５４と同様に４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（中間体６ｂ）及びＮ，２－ジメチルプロパン－２－アミンから合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．４３（ｓ，１Ｈ），８．８１（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），８．６１（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ），８．１３（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），２．９７（ｓ，３Ｈ），１．３０（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９３．３，Ｒｔ１＝１．０１ｍｉｎ．
例３０７：Ｎ－（１－メチルシクロブチル）－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン
Figure 0007247102000447
表題化合物を例２７０と同様に２ステップで２，４－ジクロロ－１，７－ナフチリジン（中間体６ａ’）及び４－（トリブチルスタンニル）ピリミジン（ステップ１）から、並びに４－クロロ－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン及び１－メチルシクロブタン－１－アミン（ステップ２）から合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３７（ｓ，１Ｈ），９．２７（ｓ，１Ｈ），９．０１（ｄｄ，Ｊ＝５．２，１．５Ｈｚ，１Ｈ），８．５９－８．４８（ｍ，２Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｓ，１Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），２．４６（ｓ，２Ｈ），
２．２７（ｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，２Ｈ），１．９８（ｄｑ，Ｊ＝３１．９，１０．６，１０．２Ｈｚ，２Ｈ），１．６２（ｓ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９２．４，Ｒｔ１＝０．８２ｍｉｎ．
例３０８：Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチル－Ｎ３－（２－（ピリミジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン
Figure 0007247102000448
表題化合物を例１５９と同様に２ステップで２，４－ジクロロピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体２ｃ）及びＮ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン（ステップ１）から、並びにＮ３－（２－クロロピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン及び４－（トリブチルスタンニル）ピリミジン（ステップ２）から合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ｐｐｍ ９．２９－９．４８（ｍ，２Ｈ），９．２２（ｓ，１Ｈ），９．０５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝５．０１Ｈｚ，１Ｈ），８．７０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝５．５０Ｈｚ，１Ｈ），８．３８（ｂｒ ｄ，Ｊ＝５．０１Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｂｒ ｄ，Ｊ＝４．８９Ｈｚ，１Ｈ），２．２１－２．４３（ｍ，８Ｈ），２．０５（ｂｒ ｓ，２Ｈ），１．６６（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３８．３，Ｒｔ１＝０．４７ｍｉｎ．
例３０９：Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチル－Ｎ３－（２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン
Figure 0007247102000449
表題化合物を例１１１と同様に２ステップで２，４－ジクロロピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体２ｃ）及びＮ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン（ステップ１）から、並びにＮ３－（２－クロロピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン及びｔｅｒｔ－ブチル３－メチル－４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－カルボキシレート（ＣＡＳ番号１００９０７１－３４－４、ステップ２）から合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ｐｐｍ １２．５７－１２．９５（ｍ，１Ｈ），８．８９－９．００（ｍ，２Ｈ），８．４８（ｄ，Ｊ＝５．５０Ｈｚ，１Ｈ），７．９３－８．２９（ｍ，１Ｈ），７．７５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝５．３８Ｈｚ，１Ｈ），２．５５－２．８４（ｍ，５Ｈ），２．２５（ｓ，６Ｈ），１．９９（ｂｒ ｓ，２Ｈ），１．６１（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３４０．３，Ｒｔ１＝０．４８ｍｉｎ．
例３１０：ｔｅｒｔ－ブチル（２－メチル－１－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパン－２－イル）カルバメート
Figure 0007247102000450
表題化合物を例１と同様に４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）及びｔｅｒｔ－ブチル（１－アミノ－２－メチルプロパン－２－イル）カルバメートから合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２１（ｓ，１Ｈ），８．７８（ｄｄ，Ｊ＝８．９，４．９Ｈｚ，３Ｈ），８．６８（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．４４－８．３４（ｍ，２Ｈ），８．２２（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｓ，１Ｈ），３．９０（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），１．３５（ｓ，６Ｈ），１．２７（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３９５．２，Ｒｔ１＝０．９７ｍｉｎ．
例３１１：ｔｅｒｔ－ブチル（２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）カルバメート
Figure 0007247102000451
表題化合物を例１と同様に４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）及びｔｅｒｔ－ブチル（２－アミノエチル）カルバメートから合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｓ，１Ｈ），８．９３－８．８１（ｍ，１Ｈ），８．７９－８．６８（ｍ，２Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ），８．１３（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７３（ｑ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），３．４０－３．３２（ｍ，２Ｈ），１．３３（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３６７．２，Ｒｔ１＝０．７８ｍｉｎ．
例３１２：２－メチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，２－ジアミン
Figure 0007247102000452
表題化合物を例１と同様に２ステップで４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）及びｔｅｒｔ－ブチル（１－アミノ－２－メチルプロパン－２－イル）カルバメート（ステップ１）並びにＴＦＡを使用したＢｏｃ脱保護（ステップ２）から合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｓ，１Ｈ），８．８３－８．７４（ｍ，２Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．３８－８．３３（ｍ，２Ｈ），８．３１（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７０（ｓ，２Ｈ），１．１３（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２９５．２，Ｒｔ１＝０．４１ｍｉｎ．
例３１３：Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）エタン－１，２－ジアミン
Figure 0007247102000453
表題化合物を例１と同様に２ステップで４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）及びｔｅｒｔ－ブチル（２－アミノエチル）カルバメート（ステップ１）並びにＴＦＡを使用したＢｏｃ脱保護（ステップ２）から合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｓ，１Ｈ），８．８１－８．７１（ｍ，２Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．４３－８．３０（ｍ，２Ｈ），８．２０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７３（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），２．９４（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２６７．２，Ｒｔ１＝０．３８ｍｉｎ．
例３１４：Ｎ，Ｎ，２－トリメチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパンアミド
Figure 0007247102000454
表題化合物を例１と同様に４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）及び２－アミノ－Ｎ，Ｎ，２－トリメチルプロパンアミドから合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２２（ｓ，１Ｈ），８．７４（ｄｄ，Ｊ＝６．９，２．４Ｈｚ，３Ｈ），８．６８（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３８（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３６－８．３１（ｍ，２Ｈ），２．９５－２．６９（ｍ，６Ｈ），１．６（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３７．２，Ｒｔ１＝０．５８ｍｉｎ．
例３１５：Ｎ１，３－ジメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン
Figure 0007247102000455
表題化合物を例１と同様に４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）及びＮ１，３－ジメチルブタン－１，３－ジアミンから合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２０（ｓ，１Ｈ），８．８３－８．６９（ｍ，２Ｈ），８．５５（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．４０－８．２９（ｍ，２Ｈ），８．１２（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），４．０４－３．９２（ｍ，２Ｈ），３．５２（ｓ，３Ｈ），１．８７－１．７４（ｍ，２Ｈ），１．５６（ｓ，２Ｈ），１．１５（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２３．２，Ｒｔ１＝０．４９ｍｉｎ．
例３１６：ｔｅｒｔ－ブチル（２，２－ジメチル－３－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロピル）カルバメート
Figure 0007247102000456
表題化合物を例１と同様に４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）及びｔｅｒｔ－ブチル（３－アミノ－２，２－ジメチルプロピル）カルバメートから合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２０（ｓ，１Ｈ），８．７７（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，２Ｈ），８．６８（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），８．６１（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），８．４３－８．３０（ｍ，２Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），３．６２（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），２．９３（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ），０．９２（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：４０９．３，Ｒｔ１＝１．０６ｍｉｎ．
例３１７：２，２－ジメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン
Figure 0007247102000457
表題化合物を例１と同様に２ステップで４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）及びｔｅｒｔ－ブチル（３－アミノ－２，２－ジメチルプロピル）カルバメート（ステップ１）並びにＴＦＡを使用したＢｏｃ脱保護（ステップ２）から合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｓ，１Ｈ），８．８１－８．７１（ｍ，２Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３９－８．２９（ｍ，２Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｓ，２Ｈ），０．９５（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０９．２，Ｒｔ１＝０．４３ｍｉｎ．
例３１８：３－メチル－３－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）ブタンアミド
Figure 0007247102000458
表題化合物を例１と同様に４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）及び３－アミノ－３－メチルブタンアミドから合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２１（ｓ，１Ｈ），８．９４－８．８０（ｍ，２Ｈ），８．７７－８．６０（ｍ，２Ｈ），８．４８－８．３５（ｍ，２Ｈ），８．１０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｓ，１Ｈ），７．１２（ｓ，１Ｈ），２．７６（ｓ，２Ｈ），１．７１（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２３．３，Ｒｔ１＝０．５７ｍｉｎ．
例３１９：（Ｒ）－２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン
Figure 0007247102000459
表題化合物を例１と同様に４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）及び（Ｒ）－２－（トリフルオロメチル）ピペラジンから合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３１（ｓ，１Ｈ），８．７９（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３１（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，２Ｈ），７．９７（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），４．６０－４．４９（ｍ，１Ｈ），４．２８－４．２１（ｍ，１Ｈ），３．８２－３．７４（ｍ，１Ｈ），３．７１－３．６４（ｍ，１Ｈ），３．６３－３．５６（ｍ，１Ｈ），３．２０－３．１２（ｍ，１Ｈ），３．１２－３．０４（ｍ，１Ｈ），２．９６－２．８７（ｍ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３６１．１，Ｒｔ１＝０．７２ｍｉｎ．
例３２０：
２，３－ジメチル－Ｎ２－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－２，３－ジアミン
Figure 0007247102000460
表題化合物を例１と同様に４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）及び２，３－ジメチルブタン－２，３－ジアミンから合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｓ，１Ｈ），８．８８－８．７４（ｍ，２Ｈ），８．６６（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．４０－８．１９（ｍ，２Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），１．６３（ｓ，６Ｈ），１．２１（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２３．２，Ｒｔ１＝０．４８ｍｉｎ．
例３２１：（Ｓ）－２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン
Figure 0007247102000461
表題化合物を例１と同様に４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）及び（Ｓ）－２－（トリフルオロメチル）ピペラジンから合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３１（ｓ，１Ｈ），８．８１－８．７７（ｍ，２Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．３４－８．２９（ｍ，２Ｈ），７．９７（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），４．５７－４．５２（ｍ，１Ｈ），４．２８－４．２１（ｍ，１Ｈ），３．８３－３．７４（ｍ，１Ｈ），３．７１－３．６５（ｍ，１Ｈ），３．６３－３．５７（ｍ，１Ｈ），３．２０－３．１４（ｍ，１Ｈ），３．１１－３．０５（ｍ，１Ｈ），２．９５－２．８８（ｍ，１Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３６１．１，Ｒｔ１＝０．７２ｍｉｎ．
例３２２：エチル２－メチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパノエート
Figure 0007247102000462
表題化合物を例１と同様に４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）及びエチル２－アミノ－２－メチルプロパノエートから合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２３（ｓ，１Ｈ），８．８３（ｓ，１Ｈ），８．８０－８．７４（ｍ，２Ｈ），８．６９（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２８－８．２３（ｍ，２Ｈ），３．９９（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．６９（ｓ，６Ｈ），０．９１（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３８．２，Ｒｔ１＝０．７８ｍｉｎ．
例３２３：Ｎ１，Ｎ１，２，２－テトラメチル－Ｎ３－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン
Figure 0007247102000463
表題化合物を例１と同様に４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）及びＮ１，Ｎ１，２，２－テトラメチルプロパン－１，３－ジアミンから合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２０－９．１７（ｍ，１Ｈ），９．０４（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．８０－８．７４（ｍ，２Ｈ），８．６８－８．６３（ｍ，１Ｈ），８．３８－８．３１（ｍ，２Ｈ），８．１３－８．０８（ｍ，１Ｈ），３．７２－３．６５（ｍ，２Ｈ），２．３６－２．２８（ｍ，８Ｈ），０．９９（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３３７．２，Ｒｔ１＝０．４６ｍｉｎ．
例３２４：４－（４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル）－１，２，５－オキサジアゾール－３－アミン
Figure 0007247102000464
表題化合物を３－アミノイソニコチンアミド及び４－アミノ－１，２，５－オキサジアゾール－３－カルボン酸から以下のスキームに従い合成した。
Figure 0007247102000465
ステップ１：４－アミノ－Ｎ－（４－カルバモイルピリジン－３－イル）－１，２，５－オキサジアゾール－３－カルボキサミド
温度計ポケット及び窒素入口を装着した二つ口Ｒ．Ｂ．フラスコにおいて、ＴＢＴＵ（４．７５ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２．６ｍＬ、１４．８ｍｍｏｌ）を２５～３０℃でＤＭＦ（４０ｍＬ）中３－アミノイソニコチンアミド（１．７ｇ、１２．４ｍｍｏｌ）及び４－アミノ－１，２，５－オキサジアゾール－３－カルボン酸（１．９２ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。得られた反応混合物を２５～３０℃で７２時間撹拌した。反応混合物を水（２００ｍＬ）に注ぎかけ、沈殿した固体をろ過によって収集した。水（１００ｍＬ）で洗浄した。ｎ－ヘキサン中２０％酢酸エチルを使用することにより研和によって精製を行い、４－アミノ－Ｎ－（４－カルバモイルピリジン－３－イル）－１，２，５－オキサジアゾール－３－カルボキサミド（０．８４ｇ、２７．４５％）をオフホワイト色の固体として得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ １２．６０（ｓ，１Ｈ，Ｄ２Ｏで交換可能），９．７０（ｓ，１Ｈ），８．６４（ｓ，１Ｈ，Ｄ２Ｏで交換可能），８．５２（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），８．８１（ｓ，１Ｈ，Ｄ２Ｏで交換可能），７．８０（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），６．２５（ｓ，２Ｈ，Ｄ２Ｏで交換可能）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２４９．１，Ｒｔ２＝１．３１２ｍｉｎ．
ステップ２：２－（４－アミノ－１，２，５－オキサジアゾール－３－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４（３Ｈ）－オン
封管において、ＤＢＵ（０．９８ｇ、６．４５ｍｍｏｌ）をｔｅｒｔ－ブタノール（８．０ｍＬ）中の４－アミノ－Ｎ－（４－カルバモイルピリジン－３－イル）－１，２，５－オキサジアゾール－３－カルボキサミド（０．８ｇ、３．２２ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に加えた。キャップを閉めて密閉し、反応混合物を１００℃に１６時間加熱した。溶媒を蒸発させて、得られた残渣を水（２０ｍＬ）で希釈し、２５～３０℃で０．５時間撹拌した。沈殿した固体をろ過によって収集し、固体を水（２×１０ｍＬ）及びｎ－ヘキサン（１０ｍＬ）で洗浄した。得られた固体を回転フラスコにおいて５５℃で乾燥させることにより、（０．４２１ｇ、５６．７３％）の２－（４－アミノ－１，２，５－オキサジアゾール－３－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４（３Ｈ）－オンをオフホワイト色の固体として得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ １３．３１（ｓ，１Ｈ，Ｄ２Ｏで交換可能），９．３６（ｓ，１Ｈ），８．７４（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．０１（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｓ，２Ｈ，Ｄ２Ｏで交換可能）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２３１．２，Ｒｔ２＝１．２７９ｍｉｎ．
ステップ３：２－（４－アミノ－１，２，５－オキサジアゾール－３－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル４－メチルベンゼンスルホネート
温度計ポケット及び窒素入口を装着した二つ口Ｒ．Ｂ．フラスコにおいて、ＤＭＡＰ（０．０１５ｇ、０．１１６ｍｍｏｌ）を０℃でジクロロメタン（１０ｍＬ）中の２－（４－アミノ－１，２，５－オキサジアゾール－３－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４（３Ｈ）－オン（０．２７ｇ、１．１６８ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．２４５ｍＬ、１．７５２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。ｐ－ＴｓＣｌ（０．２４５ｇ、１．１６８ｍｍｏｌ）を加え、得られた反応混合物を０．５時間撹拌した。氷浴を除去することにより反応混合物を２５～３０℃に加温させて、２５～３０℃で１．５時間撹拌した。この混合物をＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈し、水（２×２０ｍＬ）及びブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させてろ過した。ろ液をロータリーエバポレーターで濃縮することにより、２－（４－アミノ－１，２，５－オキサジアゾール－３－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル４－メチルベンゼンスルホネート（０．２８５ｇ、６３．２１％）を粗製物として得た。粗製物は精製なしに次のステップに使用した。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３８５．１、Ｒｔ２＝１．７７９ｍｉｎ．
ステップ４：４－（４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル）－１，２，５－オキサジアゾール－３－アミン
温度計ポケット及び窒素入口を装着した二つ口Ｒ．Ｂ．フラスコにおいて、ｔｅｒｔ－ブチルアミン（０．０７１４ｇ、０．９７６ｍｍｏｌ）を２５～３０℃でＤＭＳＯ（２．５ｍＬ）中の２－（４－アミノ－１，２，５－オキサジアゾール－３－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル４－メチルベンゼンスルホネート（０．２５ｇ、０．６５１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加え、続いてＫＦ（０．０５６６ｇ、０．９７６ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．１８ｍＬ、１．３０４ｍｍｏｌ）を加えた。室温で４５分間撹拌した後、反応混合物を水（２５ｍＬ）に注ぎかけた。沈殿した固体をろ過によって収集した。固体を水（２５ｍＬ）及びｎ－ヘキサン（１０ｍＬ）で洗浄した。ｎ－ヘキサン：ジエチルエーテル；１：１（５ｍＬ）中での研和によって精製を行うことにより、４－（４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル）－１，２，５－オキサジアゾール－３－アミン（０．１３５ｇ、７２．７５％）をオフホワイト色の固体として得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ｐｐｍ ９．３０（ｓ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝５．５７Ｈｚ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝５．５８Ｈｚ，１Ｈ），８．００（ｓ，１Ｈ），６．８９（ｓ，２Ｈ），１．６０（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８６．１，Ｒｔ１＝０．９２ｍｉｎ．
例３２５：Ｎ２，Ｎ２，２－トリメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，２－ジアミン
Figure 0007247102000466
表題化合物を例１と同様に４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）及びＮ２，Ｎ２，２－トリメチルプロパン－１，２－ジアミンから合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１９（ｓ，１Ｈ），８．８５－８．７２（ｍ，２Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３６－８．３１（ｍ，２Ｈ），８．２７（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．７９（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），２．２７（ｓ，６Ｈ），１．０９（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３２３．２，Ｒｔ１＝０．４４ｍｉｎ．
例３２６：２－メチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパンアミド
Figure 0007247102000467
表題化合物を例１と同様に４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）及び２－アミノ－２－メチルプロパンアミドから合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２０（ｓ，１Ｈ），８．７７－８．７１（ｍ，２Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．４９（ｓ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．３６－８．３０（ｍ，２Ｈ），７．２９（ｓ，１Ｈ），６．８４（ｓ，１Ｈ），１．６３（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０９．２，Ｒｔ１＝０．５０ｍｉｎ．
例３２７：（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロ－２－メチル－３－（（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）アミノ）プロパン－２－オール
Figure 0007247102000468
表題化合物を２，４－ジブロモ－１，７－ナフチリジンから以下のスキームに従い合成した。
Figure 0007247102000469
ステップ１：ジオキサン（６ｍＬ）／水（１．５ｍＬ）中の２，４－ジブロモ－１，７－ナフチリジン（３５０ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）、４－ピリジニルボロン酸（１９４ｍｇ、１．５８ｍｍｏｌ）、リン酸カリウム（１０３２ｍｇ、４．８６ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＰＰｈ３）４（１４０ｍｇ、０．１２２ｍｍｏｌ）の溶液をマイクロ波バイアルにおいてアルゴン下１１０℃で６０分間加熱した。室温で水を加え、反応混合物をジクロロメタンで３回抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させて、溶媒を減圧下で蒸発させた。残渣を０～１００％酢酸エチル／シクロヘキサンを使用したフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、４－ブロモ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン（４４％）を得た。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：２８６．０／２８８．０、Ｒｔ１＝０．８３ｍｉｎ．
ステップ２：表題化合物を例２５４と同様に４－ブロモ－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン及び（Ｓ）－３－アミノ－１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－オール［１３３４５４７－３８－４］から合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ｐｐｍ ９．２６（ｓ，１Ｈ），８．７７（ｄ，Ｊ＝５．６９Ｈｚ，２Ｈ），８．５３（ｄ，Ｊ＝５．８７Ｈｚ，１Ｈ），８．２０（ｄ，Ｊ＝５．６９Ｈｚ，１Ｈ），８．１４－８．１８（ｍ，２Ｈ），７．４８－７．５５（ｍ，２Ｈ），６．３４（ｓ，１Ｈ），３．８２（ｄｄ，Ｊ＝１４．５８，６．３３Ｈｚ，１Ｈ），３．６９－３．７６（ｍ，１Ｈ），１．４０（ｓ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３４９．３，Ｒｔ＝０．６２ｍｉｎ．
例３２８：ｔｅｒｔ－ブチル（３－メチル－３－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）ブチル）カルバメート
Figure 0007247102000470
表題化合物を例１と同様に４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）及びｔｅｒｔ－ブチル（３－アミノ－３－メチルブチル）カルバメートから合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｓ，１Ｈ），８．８８－８．７３（ｍ，２Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．３７（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．３３－８．２５（ｍ，２Ｈ），７．７３（ｓ，１Ｈ），６．７５（ｓ，１Ｈ），２．９７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．３１－２．１９（ｍ，２Ｈ），１．６０（ｓ，６Ｈ），１．２５（ｓ，９Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：４０９．２，Ｒｔ１＝０．９６ｍｉｎ．
例３２９：Ｎ１，Ｎ１，Ｎ３，２，２－ペンタメチル－Ｎ３－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン
Figure 0007247102000471
表題化合物を例１と同様に４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）及びＮ１，Ｎ１，Ｎ３，２，２－ペンタメチルプロパン－１，３－ジアミンから合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｓ，１Ｈ），８．７６（ｄ，２Ｈ），８．５４（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），８．３４（ｄ，２Ｈ），８．２３（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），４．１１（ｓ，２Ｈ），３．６６（ｓ，３Ｈ），２．３０（ｓ，６Ｈ），２．２３（ｓ，２Ｈ），０．９６（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３５１．２，Ｒｔ１＝０．５０ｍｉｎ．
例３３０：Ｎ１，Ｎ１－ジエチル－３－メチル－Ｎ３－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン
Figure 0007247102000472
表題化合物を例３２８（ｔｅｒｔ－ブチル（３－メチル－３－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）ブチル）カルバメート）から以下のスキームに従い合成した。
Figure 0007247102000473
ステップ１：ジクロロメタン（２ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（３－メチル－３－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）ブチル）カルバメート（８０ｍｇ、０．１９６ｍｍｏｌ）の溶液にＴＦＡ（０．３７７ｍＬ、４．９０ｍｍｏｌ）を加え、得られた黄色の溶液を室温で２時間撹拌した。次に溶液を蒸発乾固させた。残渣をＭｅＯＨ中に溶解させて、この溶液をＰｏｒａＰａｋ Ｒｘｎ ＣＸ ２０ｃｃ（２ｇ）カートリッジに入れた。次にカートリッジを５ｍＬ ＭｅＯＨで２回洗浄した。最後に、ＭｅＯＨ中７Ｎ ＮＨ３で化合物を溶出させた。ろ液を減圧下で蒸発させることにより、３－メチル－Ｎ３－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン（６６％）を得た。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０９．１、Ｒｔ１＝０．５３ｍｉｎ．
ステップ２：ジクロロメタン（５ｍＬ）中の３－メチル－Ｎ３－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン（４０ｍｇ、０．１３０ｍｍｏｌ）、酢酸（０．０３７ｍＬ、０．６４９ｍｍｏｌ）及びアセトアルデヒド（５７ｍｇ、１．２９７ｍｍｏｌ）の溶液を室温で１時間撹拌した。次にＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（１３７ｍｇ、０．６４９ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を室温で更に１時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３溶液を加え、水相をジクロロメタン（３×２０ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させて、溶媒を減圧下で蒸発させた。残渣を１２～１００％酢酸エチル／シクロヘキサンのグラジエント、続いて２～３０％メタノール（＋メタノール中１０％７Ｎ ＮＨ３）／ジクロロメタンのグラジエントを使用したフラッシュクロマトグラフィーによって精製することにより、黄色の油を得た。この油をジクロロメタン（２ｍＬ）に取り、ジオキサン（０．２ｍＬ）中の４Ｎ ＨＣＬを加えた。沈殿物をろ取し、ペンタンで洗浄することにより、表題化合物をＨＣＬ塩（１７％）として得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ９．５２（ｓ，１Ｈ），９．２２－９．０２（ｍ，４Ｈ），８．８２（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），８．７４（ｄｄ，Ｊ＝６．２，０．９Ｈｚ，１Ｈ），３．２７（ｄｄ，Ｊ＝８．４，４．７Ｈｚ，２Ｈ），３．２１（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，４Ｈ），２．８４ －２．７０（ｍ，２Ｈ），１．７９（ｓ，６Ｈ），１．２３（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３６５．２，Ｒｔ１＝０．５９ｍｉｎ．
例３３１：Ｎ３－（２－（２－フルオロピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン
Figure 0007247102000474
表題化合物を例１１１と同様に２ステップで２，４－ジクロロピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体２ｃ）及びＮ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン（ステップ１）から、並びにＮ３－（２－クロロピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン及び（２－フルオロピリジン－４－イル）ボロン酸（ＣＡＳ番号４０１８１５－９８－３、ステップ２）から合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．５３（ｓ，１Ｈ），９．１８（ｓ，１Ｈ），８．６９（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．４６（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．２６（ｄｄ，Ｊ＝４．７，２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９２（ｓ，１Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），２．２６（ｓ，６Ｈ），２．００（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），１．６６（ｓ，６Ｈ），注釈：１つのＣＨ２シグナルはＤＭＳＯシグナルと重複している。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３５５．２，Ｒｔ１＝０．６７ｍｉｎ．
例３３２：Ｎ３－（２－（３，５－ジメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン
Figure 0007247102000475
表題化合物を例１１１と同様に２ステップで２，４－ジクロロピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体２ｃ）及びＮ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン（ステップ１）から、並びにＮ３－（２－クロロピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン及びｔｅｒｔ－ブチル３，５－ジメチル－４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－カルボキシレート（ＣＡＳ番号１０７３３５４－７０－７、ステップ２）から合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．４１（ｓ，１Ｈ），９．１１（ｓ，１Ｈ），８．９５（ｓ，１Ｈ），８．４９（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），２．５６（ｓ，６Ｈ），２．２７（ｓ，６Ｈ），１．９２（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），１．６１（ｓ，６Ｈ）．注釈：１つのＣＨ２シグナルはＤＭＳＯシグナルと重複している。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３５４．２，Ｒｔ１＝０．５０ｍｉｎ．
例３３３：Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチル－Ｎ３－（２－（３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン
Figure 0007247102000476
表題化合物を例１１１と同様に２ステップで２，４－ジクロロピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体２ｃ）及びＮ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン（ステップ１）から、並びにＮ３－（２－クロロピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン及び４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール（ＣＡＳ番号１２１８７９０－４０－９、ステップ２）から合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １３．８０（ｓ，１Ｈ），９．２５（ｓ，１Ｈ），８．９６（ｓ，１Ｈ），８．５７（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．４６（ｓ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），２．２５（ｓ，６Ｈ），１．９３（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６０（ｓ，６Ｈ）．注釈：１つのＣＨ２シグナルはＤＭＳＯシグナルと重複している。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３９４．３，Ｒｔ１＝０．６２ｍｉｎ．
例３３４：Ｎ３－（２－（２－アミノピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン
Figure 0007247102000477
表題化合物を例１１１と同様に３ステップで２，４－ジクロロピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体２ｃ）及びＮ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン（ステップ１）から、Ｎ３－（２－クロロピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン及びｔｅｒｔ－ブチル（４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ピリジン－２－イル）カルバメート ＣＡＳ番号１０９５７０８－３２－９（ステップ２）並びにＴＦＡを使用したＢｏｃ脱保護（ステップ３）から合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．３０（ｓ，１Ｈ），９．１１（ｓ，１Ｈ），８．６２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．０７（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｓ，１Ｈ），７．４３（ｄｄ，Ｊ＝５．３，１．４Ｈｚ，１Ｈ），６．１１（ｓ，２Ｈ），２．４７（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ），２．２４（ｓ，６Ｈ），１．９９（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），１．６６（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３５２．２，Ｒｔ１＝０．４８ｍｉｎ．
例３３５：３－メチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン
Figure 0007247102000478
表題化合物を例１と同様に２ステップで４－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン（中間体１ｃ）及びｔｅｒｔ－ブチル（４－アミノ－２－メチルブタン－２－イル）カルバメート（ステップ１）並びにＴＦＡを使用したＢｏｃ脱保護（ステップ２）から合成した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８（ｓ，１Ｈ），８．８０－８．７１（ｍ，２Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．３７－８．３１（ｍ，２Ｈ），８．０７（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），３．８３－３．７３（ｍ，２Ｈ），１．８０－１．６８（ｍ，２Ｈ），１．１５（ｓ，６Ｈ），３つの交換可能なプロトン。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋）：３０９．２，Ｒｔ１＝０．４５ｍｉｎ．
エキソビボ細胞集団拡大及び療法における使用
拡大細胞集団の調製のための出発物質：
自家方法
拡大細胞集団を入手するための細胞集団拡大方法に使用される播種細胞集団は、レシピエント自身から入手されてもよい。組織、臓器、又は細胞欠損が部分的で、例えば健常な細胞が存在する患者では、播種細胞集団は、罹患していない組織又は臓器又は細胞供給源から入手されてもよい。例えば、片眼性の眼細胞欠乏の場合、播種集団は、罹患していない方の眼の生検から入手されてもよい。これはまた、部分的に損傷した臓器に残る健常組織から入手されてもよい。
同種異系方法
好ましい実施形態において、拡大細胞集団を入手するための細胞集団拡大方法に使用される播種細胞集団は、元はドナー組織（例えばヒト、ウサギ、サル等、好ましくはヒト）に由来する細胞から入手されてもよい。例えばヒト組織の供給源は死体ドナーからか、又は生体血縁者を含め、生体ドナーからの組織である。
上記で自家方法及び同種異系方法の下に記載したとおり得られた、体から取り出された自家組織又は同種異系組織から、細胞は例えば以下のとおり抽出及び調製され得る：所望の範囲が例えばメスを使用して解剖され、次に顕微鏡観察（例えばＺｅｉｓｓ Ａｘｉｏｖｅｒｔ倒立顕微鏡を使用）によって細胞の脱離が明らかになるまで細胞が４５分～３時間解離され得る（例えばコラゲナーゼ、ディスパーゼ、トリプシン、アキュターゼ（ａｃｃｕｔａｓｅ）又はＴｒｉｐＬＥ；例えば３７℃で１ｍｇ／ｍｌコラゲナーゼを使用する）。
本発明に係る細胞集団拡大方法で使用するため、単離された細胞は次に、以下でセクション「細胞集団拡大」に記載するとおり例えばピペッティングによって培地に加えられる。
本発明に係る好ましい実施形態では、ドナーから採取された細胞材料の品質評価が行われる。例えば、細胞を採取し、培地（成長培地又は細胞増殖培地、以下に記載するとおり）で培養を開始してから約２４時間後に、浮遊細胞の存在（死細胞の指標として）を調べる明視野顕微鏡下での目視評価が行われてもよい。理想的にはこの評価は、本発明に係る拡大細胞集団の作成に使用するのに材料が好適であるために浮遊細胞として存在するのが約１０％未満であることを示すものである。
本発明に係る細胞集団拡大方法における使用に好適な細胞数は限定されないが、例示を目的とした例として、本発明に係る細胞集団拡大方法における使用に好適な播種細胞集団は約１０００細胞を含み得る。
播種細胞集団中の細胞数を測定することが望ましい場合、これは、例えば、当該技術分野において周知の標準プロトコルに従う光学顕微鏡、免疫組織化学又はＦＡＣＳを用いた手作業での又は自動化された細胞カウントによって行われてもよい。
エキソビボ眼細胞集団拡大及び療法における使用
以下には、輪部幹細胞及び角膜内皮細胞を具体的な例として眼細胞に適用したときの眼細胞集団の拡大に関する方法論（出発物質の調製、続く細胞集団拡大段階、細胞の貯蔵）の説明を更に詳細に記載する。
拡大輪部幹細胞集団の調製のための出発物質：角膜上皮及び輪部細胞
自家方法
拡大輪部幹細胞集団を入手するための細胞集団拡大方法に使用される播種細胞集団は、レシピエント自身から入手されてもよい。輪部幹細胞欠乏が部分的な患者では、播種細胞集団は、輪部の罹患していない部分から入手されてもよい。例えば、片眼性輪部幹細胞欠乏の場合、播種集団は、罹患していない方の眼の生検から入手されてもよい。これはまた、部分的に損傷した輪部に残る健常組織から入手されてもよい。
同種異系方法
好ましい実施形態において、拡大輪部幹細胞集団を入手するための細胞集団拡大方法に使用される播種細胞集団は、元はドナー哺乳類角膜組織（例えばヒト、ウサギ、サル等、好ましくはヒト）に由来する細胞から入手されてもよい。
例えばヒト角膜組織の供給源は死体ドナーからか（例えばアイバンクを通じて供給される）、又は生体血縁者を含め、生体ドナーからの組織である。様々なドナー輪部組織が本発明に係る使用に好適である。好ましい実施形態において、輪部組織は、適合するＨＬＡプロファイルの生体血縁者又はドナーから入手される。
ＬＳＣの入手に使用される組織は、例えば、約４ｍｍ幅及び１ｍｍ高さの輪部組織の輪部であってもよい。
体から取り出された、上記で自家方法及び同種異系方法の下に記載したとおりの角膜組織から、ＬＳＣは例えば以下のとおり抽出及び調製され得る：輪部上皮範囲が例えばメスを使用して解剖され、次に顕微鏡観察（例えばＺｅｉｓｓ Ａｘｉｏｖｅｒｔ倒立顕微鏡を使用）によって細胞の脱離が明らかになるまで細胞が４５分～３時間解離され得る（例えばコラゲナーゼ、ディスパーゼ、トリプシン、アキュターゼ（ａｃｃｕｔａｓｅ）又はＴｒｉｐＬＥ；例えば３７℃で１ｍｇ／ｍｌコラゲナーゼを使用する）。
本発明に係る細胞集団拡大方法で使用するため、単離された細胞は次に、以下でセクション「細胞集団拡大」に記載するとおり例えばピペッティングによって培地に加えられる。
本発明に係る好ましい実施形態では、ドナー角膜から採取された細胞材料の品質評価が行われる。例えば、細胞を採取し、培地（成長培地又は細胞増殖培地、以下に記載するとおり）で培養を開始してから約２４時間後に、浮遊細胞の存在（死細胞の指標として）を調べる明視野顕微鏡下での目視評価が行われてもよい。理想的にはこの評価は、本発明に係る拡大細胞集団の作成に使用するのに材料が好適であるために浮遊細胞として存在するのが約１０％未満であることを示すものである。
本発明に係る細胞集団拡大方法における使用に好適な細胞数は限定されないが、例示を目的とした例として、本発明に係る細胞集団拡大方法における使用に好適な播種細胞集団は約１０００輪部幹細胞を含み得る。
播種細胞集団中の細胞数を測定することが望ましい場合、これは、例えば、当該技術分野において周知の標準プロトコルに従う光学顕微鏡、免疫組織化学又はＦＡＣＳを用いた手作業での又は自動化された細胞カウントによって行われてもよい。
拡大角膜内皮細胞集団の調製のための出発物質
細胞集団拡大方法に使用される角膜内皮細胞（ＣＥＣ）の播種集団は、元は哺乳類角膜組織（例えばヒト、ウサギ、サル等、好ましくはヒト）に由来する細胞から入手されてもよい。例えば、ヒト角膜組織の供給源は死体ヒトドナー（これはアイバンクを通じて供給され得る）からである。
ドナーの年齢は、例えば乳児期から７０歳まで様々であってよい。好ましくはまた、好適なドナーは、角膜疾患又は外傷の病歴がない者である。本発明に係る一実施形態において、好ましいドナー角膜は、角膜内皮細胞数が２０００細胞／ｍｍ２（面積）を上回るものである。本発明に係るより好ましい実施形態において、角膜内皮細胞数は２０００～３５００細胞／ｍｍ２（面積）である。これは、例えば、患者への移植前のドナー組織の評価に関して当該技術分野において公知の標準的なアイバンク技法に従い直接光学顕微鏡下又はスペキュラーマイクロスコープ下でドナー材料の角膜を調べることにより測定される（Ｔｒａｎ ｅｔ ａｌ（２０１６）「２つのアイバンクスペキュラーマイクロスコープによる内皮細胞測定の比較」；Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｙｅ Ｂａｎｋｉｎｇ；ｖｏｌ ４．，ｎｏ ２；１－８（本明細書において参照により援用される）を参照のこと）。
ＣＥＣの入手に使用される角膜表面は限定されないが、例えば約８～１０ｍｍ直径の範囲であってもよい。
ＣＥＣは、ドナー角膜組織から例えば以下のとおり抽出及び調製され得る：角膜内皮細胞層及びデスメ膜（ＤＭ）に、例えば外科手術グレードのリバースＳｉｎｓｋｙ内皮ストリッパーで傷を入れる。ＤＭ－内皮細胞層から角膜実質を剥がし取り、顕微鏡観察（例えばＺｅｉｓｓ Ａｘｉｏｖｅｒｔ倒立顕微鏡を使用）によって細胞の脱離が明らかになるまで（４５分～３時間）、ＤＭから例えば３７℃で１ｍｇ／ｍｌコラゲナーゼを使用して細胞を解離する。角膜においてＤＭは角膜内皮細胞のみを担持しているため、このように単離された細胞集団は、本発明に係る播種細胞集団としての使用に好適なＣＥＣ集団である。
本発明に係る細胞集団拡大方法で使用するため、単離した角膜内皮細胞は、以下でセクション「細胞集団拡大」に記載するとおり培地に加えられ得る。
本発明に係る好ましい実施形態では、ドナー角膜から採取された細胞材料の品質評価が行われる。例えば、細胞を採取し、培地（成長培地又は細胞増殖培地、以下に記載するとおり）で培養を開始してから約２４時間後に、浮遊細胞の存在（死細胞の指標として）を調べる明視野顕微鏡下での目視評価が行われてもよい。理想的にはこの評価は、本発明に係る拡大細胞集団の作成に使用するのに材料が好適であるために浮遊細胞として存在するのが約１０％未満であることを示すものである。
本発明に係る細胞集団拡大方法における使用に好適な出発細胞数は限定されないが、例示を目的とした例として、本発明に係る細胞集団拡大方法における使用に好適な播種角膜内皮細胞集団は１０００００～２７５０００細胞であり得る。
播種細胞集団中の細胞数を測定することが望ましい場合、これは、例えば、アリコートを取り、免疫細胞化学（例えばＳｙｔｏｘオレンジで染色された核をカウントする）を実施することによるか、又は明視野顕微鏡下での生細胞イメージングによって細胞数をカウントすることにより行われてもよい。
Ｓｙｔｏｘオレンジアッセイは、当該技術分野において公知の標準プロトコルに従い実施し得る。端的には、細胞を細胞培養皿に付着させた後（典型的には細胞のプレーティングから２４時間後）、細胞をパラホルムアルデヒドで固定する。次に細胞を透過処理し（例えば０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００溶液を使用する）、次にそれらの細胞をＳｙｔｏｘオレンジ溶液中で（例えばＰＢＳ中０．５マイクロモルのＳｙｔｏｘオレンジを使用して）標識する。次に表面積当たりのＳｙｔｏｘオレンジで染色された核の数をＺｅｉｓｓ落射蛍光顕微鏡下でカウントする。
細胞集団拡大
本発明の一実施形態において、患者又はドナーからの細胞を含む細胞集団は、プレート、マルチウェルプレート、及び細胞培養フラスコなど、当該技術分野において公知の培養容器内にある培地中で成長させることができる。例えば、コーティングされていない、又はコラーゲン、シンセマックス（ｓｙｎｔｈｅｍａｘ）、ゼラチン若しくはフィブロネクチンでコーティングされた培養皿が使用されてもよい。好適な培養容器の好ましい例は、コーティングされていないプレートである。バイオリアクターなど、工業的用途の当該技術分野において公知の標準的な培養用容器及び機器がまた使用されることもある。
使用される培地は成長培地又は細胞増殖培地であってもよい。一般に、成長培地は、細胞集団の成長及び維持を支援する培養培地である。当業者は、特定の種類の細胞集団に適切な成長培地を容易に決定することができる。好適な成長培地は幹細胞培養又は上皮細胞培養の技術分野において公知であり、例えば：ＦＢＳ（ウシ胎仔血清）を補足したＤＭＥＭ（ダルベッコ変法イーグル培地）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ヒト血清を補足したヒト内皮ＳＦ（無血清）培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、Ｘ－ＶＩＶＯ１５培地（Ｌｏｎｚａ）、又はＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）（任意選択で塩化カルシウムが補足される）である。これらは、加えて成長因子（例えばｂＦＧＦ）、及び／又はペニシリン及びストレプトマイシンなどの抗生物質が補足されてもよい。
或いは、単離された細胞は、初めに本発明に係る細胞増殖培地に加えられてもよい。本明細書に定義するとおりの細胞増殖培地は、成長培地と本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤とを含む。
特定の実施形態において、本発明の細胞増殖培地は成長培地と本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤とを含む。ＬＡＴＳ阻害剤は、好ましくは、式Ａ１又はその下位式に係る、且つセクション「ＬＡＴＳ阻害剤」に更に記載されるとおりの化合物を含む群から選択される。
好ましい実施形態において、式Ａ１又はその下位式に係るＬＡＴＳ阻害剤は、約０．５～１００マイクロモル、好ましくは約０．５～２５マイクロモル、より好ましくは約１～２０マイクロモルの濃度で加えられる。具体的な実施形態において、式Ａ１又はその下位式に係るＬＡＴＳ阻害剤は約３～１０マイクロモルの濃度で加えられる。
一実施形態において、式Ａ１又はその下位式に係る化合物のストック溶液は、化合物粉末をＤＭＳＯ中１０ｍＭのストック濃度に溶解させることにより調製されてもよい。
本発明の一態様において、本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤は細胞集団のＬＡＴＳ１及び／又はＬＡＴＳ２活性を阻害する。好ましい実施形態において、ＬＡＴＳ阻害剤はＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２を阻害する。
細胞は、１回又は複数回の新鮮成長培地及び／又は細胞増殖培地の添加ラウンドを経てもよい。新鮮培地の添加のために細胞が継代される必要はないが、細胞の継代もまた、新鮮培地を添加する一方法である。
一連の培地もまた、様々な組み合わせの順序で使用し得る：例えば細胞増殖培地、続いて成長培地の添加（本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤が補足されていないものであって、細胞増殖培地のベースとして使用される成長培地と異なってもよい）。
本発明に係る細胞集団拡大段階は、細胞が細胞増殖培地に曝露されている期間中に起こる。
細胞の培養に関する当該技術分野において公知の標準温度条件、例えば好ましくは約３０℃～４０℃が用いられてもよい。特に好ましくは細胞成長、並びに細胞集団拡大段階は、約３７℃で行われる。５～１０％ＣＯ２レベルの従来の細胞インキュベーターが使用されてもよい。好ましくは細胞は５％ＣＯ２に曝露される。
細胞は、成長培地又は細胞増殖培地で培養する間に必要に応じて継代されてもよい。細胞は、それがサブコンフルエント又はコンフルエントになったときに継代されてもよい。好ましくは細胞は、それが約９０％～１００％コンフルエンシーに達したときに継代されるが、それより低いパーセンテージのコンフルエンシーレベルもまた実施されてよい。細胞の継代は、当該技術分野において公知の標準プロトコルに従い行われる。例えば、端的には細胞は、培養物をアキュターゼ（Ａｃｃｕｔａｓｅ）で（例えば１０分間）処理し、遠心によって細胞懸濁液をリンスし、細胞を所望のとおりの新鮮成長培地又は細胞増殖培地にプレーティングすることにより継代される。細胞分割比は例えば１：２～１：５の範囲である。
本発明に係る細胞集団拡大方法の細胞集団拡大について、細胞増殖培地中における播種細胞集団の拡大は、所要量の細胞材料が得られるまで実施されてもよい。
細胞集団を拡大するため、細胞は様々な期間にわたって細胞増殖培地に曝露され得る。
好ましい実施形態において、播種細胞集団は、患者又はドナー組織からの細胞単離直後に本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤（式Ａ１又はその下位式に係る化合物など）に曝露され、細胞増殖に必要な全時間、例えば１２～１６日間にわたって維持される。
本発明に係る一実施形態では、任意選択で遺伝子編集技法が実施されることにより、細胞が遺伝子修飾され、及び／又は生物学的治療化合物が発現してもよい。例えば、細胞は、細胞集団が患者に送達されたときに本来免疫拒絶の一因となり得る免疫応答媒介性遺伝子の発現及び／又は機能が低下又は消失するように修飾されてもよい。本発明に係る細胞集団拡大方法における遺伝子編集技法の適用は任意選択であり、その代わりに、患者における移植材料の免疫拒絶に関する問題を緩和するための必要に応じて患者への局所免疫抑制薬及び／又は抗炎症剤（セクション免疫抑制薬及び抗炎症剤に更に記載されるとおり）の投与が用いられてもよい。
本発明の一態様によれば、遺伝子修飾は、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子の発現及び／又は機能を低下又は消失させることを含む。好ましい実施形態において、遺伝子修飾は、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子を特異的に標的とする遺伝子編集システムを単離幹細胞又は幹細胞集団に導入することを含む。具体的な実施形態において、前記遺伝子編集システムは、ＣＲＩＳＰＲ（ＣＲＩＳＰＲ：クラスター化した規則的間隔の短いパリンドロームリピート、別名ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム）、ＺＦＮ（ジンクフィンガーヌクレアーゼ）、ＴＡＬＥＮ（転写活性化因子様エフェクターベースのヌクレアーゼ）、エンジニアリングされたメガヌクレアーゼ（例えばＡＲＣヌクレアーゼなどのＡＲＣＵＳヌクレアーゼ）、ＡＡＶベクター（アデノ随伴ウイルス）及びレンチウイルスベクターベースのゲノム編集技術からなる群から選択される。
遺伝子編集技法は、それが用いられることになる場合には、例えば（１）組織上で、細胞単離前、又は（２）細胞単離時点、又は（３）インビトロで細胞集団拡大段階の間（インビトロで細胞が本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤に曝露されるとき）、又は（４）インビトロで細胞集団拡大段階の終了時（インビトロで細胞が本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤に曝露された後）など、種々の時点で実施され得る。具体的な実施形態において、ＣＲＩＳＰＲは、細胞集団を本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤の存在下で２週間インビトロ拡大した後に使用される。
細胞集団拡大方法における使用に好適な遺伝子編集技法については、セクション「免疫拒絶の低減」に更に説明する。
本発明に係る細胞集団拡大方法において、好ましくは化合物であるＬＡＴＳ阻害剤は、播種された細胞集団の２倍超の拡大を生じさせる。
本発明に係る細胞集団拡大方法の一態様において、式Ａ１又はその下位式に係る化合物は、播種された単離細胞集団（即ち、患者又はドナーから入手された細胞）の３０倍超の拡大を生じさせる。本発明に係る細胞集団拡大方法の具体的な実施形態において、式Ａ１又はその下位式に係るＬＡＴＳ阻害剤は、播種された単離細胞集団の１００倍～２２００倍の拡大を生じさせる。本発明に係る細胞集団拡大方法のより具体的な実施形態において、式Ａ１又はその下位式に係るＬＡＴＳ阻害剤は、播種された単離細胞集団の６００倍～２２００倍の拡大を生じさせる。本発明に係る細胞集団拡大方法によって実現する拡大倍率の倍数は、細胞の１回以上の継代で実現されてもよい。本発明の別の態様において、本発明に係る細胞集団拡大方法によって実現する拡大倍率の倍数は、式Ａ１又はその下位式に係る化合物に約１２～１６日間、好ましくは約１４日間曝露した後に実現されてもよい。
細胞集団の細胞数又は拡大を測定することが望ましい場合、これは、例えば、本発明に係る方法の細胞集団拡大段階の間における様々な時点でアリコートを取って免疫細胞化学を実施する（例えばＳｙｔｏｘオレンジで染色された核をカウントする）ことによるか、又は明視野顕微鏡下での生細胞イメージングによって細胞数をカウントすることによるか、又は細胞コンフルエンスのリアルタイム定量的生細胞分析を実施することにより行われてもよい。
Ｓｙｔｏｘオレンジアッセイは、当該技術分野において公知の標準プロトコルに従い実施し得る。端的には、細胞を細胞培養皿に付着させた後（典型的には細胞のプレーティングから２４時間後）、細胞をパラホルムアルデヒドで固定する。次に細胞を透過処理し（例えば０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００溶液を使用する）、次にそれらの細胞をＳｙｔｏｘオレンジ溶液中で（例えばＰＢＳ中０．５マイクロモルのＳｙｔｏｘオレンジを使用して）標識する。次に表面積当たりのＳｙｔｏｘオレンジで染色された核の数をＺｅｉｓｓ落射蛍光顕微鏡下でカウントする。本発明に係る細胞集団拡大方法によって拡大された細胞集団は、溶液に加えられ、次に例えば保存溶液若しくは凍結保存溶液中（以下に記載するものなど）で貯蔵されてもよく、又は患者への送達に好適な組成物に直接加えられてもよい。保存、凍結保存溶液又は眼送達に好適な組成物は、任意選択で本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤を含み得る。
本発明に係るより好ましい実施形態において、患者に送達される細胞集団製剤は、極めて低い乃至無視できるレベルのＬＡＴＳ阻害剤化合物を含む。従って具体的な実施形態において、本発明に係る細胞集団拡大方法は、リンスすることにより本発明に係る化合物（式Ａ１又はその下位式に係る化合物など）を実質的に除去する更なるステップを含む。これには、本発明に係る細胞集団拡大段階後に細胞をリンスすることが関わり得る。細胞をリンスするため、細胞を培養皿から（例えばアキュターゼ（Ａｃｃｕｔａｓｅ）で処理することにより）脱離させ、次に脱離した細胞を遠心し、ＰＢＳ又は本発明に係る成長培地中に細胞懸濁液を作る。このステップは、細胞を完全にリンスするため複数回、例えば１～１０回行われてもよい。最後に、細胞は必要に応じて保存溶液、凍結保存溶液、眼送達に好適な組成物、成長培地又はこれらの組み合わせに再懸濁してもよい。
細胞集団拡大方法によって調製され、及び本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤を含む細胞増殖培地が洗い流された拡大細胞集団は、例えば局在薬剤など、患者への送達に好適な組成物に移され得る。任意選択で細胞集団は、患者への送達に好適な局在薬剤に加える前に、ある期間貯蔵される。好ましい実施形態において、拡大細胞集団は、初めに保存又は凍結保存に好適な、好ましくはＬＡＴＳ阻害剤を含まない溶液に加えられ、細胞集団が（任意選択で凍結して）貯蔵された後に、患者への送達に好適な、同様に好ましくはＬＡＴＳ阻害剤を含まない局在薬剤に加えられてもよい。
本発明の凍結保存溶液中には、凍結保存に好適な典型的な溶液、グリセロール、ジメチルスルホキシド、プロピレングリコール又はアセトアミドが使用されてもよい。細胞の凍結保存製剤は、典型的には－２０℃又は－８０℃に保たれる。
細胞集団拡大：拡大輪部幹細胞集団の調製のため
本発明の一実施形態において、例えばセクション「拡大輪部幹細胞集団の調製のための出発物質：角膜上皮及び輪部細胞」に記載されるとおり入手された、輪部幹細胞を含めた角膜上皮及び輪部細胞を含む細胞集団は、プレート、マルチウェルプレート、及び細胞培養フラスコなど、当該技術分野において公知の培養容器内にある培地中で成長させることができる。例えば、コーティングされていない、又はコラーゲン、シンセマックス（ｓｙｎｔｈｅｍａｘ）、ゼラチン若しくはフィブロネクチンでコーティングされた培養皿が使用されてもよい。好適な培養容器の好ましい例は、コーティングされていないプレートである。バイオリアクターなど、工業的用途の当該技術分野において公知の標準的な培養用容器及び機器がまた使用されることもある。
使用される培地は成長培地又は細胞増殖培地であってもよい。成長培地は、本明細書では、細胞集団の成長及び維持を支援する培養培地として定義される。好適な成長培地は幹細胞培養又は上皮細胞培養の技術分野において公知であり、例えば：ＦＢＳ（ウシ胎仔血清）を補足したＤＭＥＭ（ダルベッコ変法イーグル培地）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ヒト血清を補足したヒト内皮ＳＦ（無血清）培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、Ｘ－ＶＩＶＯ１５培地（Ｌｏｎｚａ）、又はＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）（任意選択で塩化カルシウムが補足される）である。これらは、加えて成長因子（例えばｂＦＧＦ）、及び／又はペニシリン及びストレプトマイシンなどの抗生物質が補足されてもよい。本発明に係る好ましい成長培地は、Ｘ－ＶＩＶＯ１５培地（追加的な成長因子が補足されていないもの）である。
或いは、単離された細胞は、初めに本発明に係る細胞増殖培地に加えられてもよい。本明細書に定義するとおりの細胞増殖培地は、成長培地と本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤とを含む。本発明に係る細胞増殖培地において成長培地成分は、ＦＢＳ（ウシ胎仔血清）を補足したＤＭＥＭ（ダルベッコ変法イーグル培地）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ヒト血清を補足したヒト内皮ＳＦ（無血清）培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、Ｘ－ＶＩＶＯ１５培地（Ｌｏｎｚａ又はＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）（任意選択で塩化カルシウムが補足される）からなる群から選択される。これらは、加えて成長因子（例えばｂＦＧＦ）、及び／又はペニシリン及びストレプトマイシンなどの抗生物質が補足されてもよい。
本発明に係る好ましい細胞増殖培地は、本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤を含むＸ－ＶＩＶＯ１５培地（Ｌｏｎｚａ）である。この細胞増殖培地には、ＬＳＣの増殖を促進するのに追加的な成長因子又はフィーダー細胞が必要ないという利点がある。Ｘ－ＶＩＶＯ培地は、とりわけ、医薬品グレードのヒトアルブミン、組換えヒトインスリン、及び低温殺菌されたヒトトランスフェリンを含む。任意選択でＸ－ＶＩＶＯ１５培地に抗生物質が加えられてもよい。好ましい実施形態において、Ｘ－ＶＩＶＯ１５培地は抗生物質を加えずに使用される。
細胞増殖培地は成長培地と本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤とを含む。ＬＡＴＳ阻害剤は、好ましくは、式Ａ１又はその下位式に係る、且つセクション「ＬＡＴＳ阻害剤」に更に記載されるとおりの化合物を含む群から選択される。
好ましい実施形態において、式Ａ１又はその下位式に係るＬＡＴＳ阻害剤は、約０．５～１００マイクロモル、好ましくは約０．５～２５マイクロモル、より好ましくは約１～２０マイクロモルの濃度で加えられる。具体的な実施形態において、式Ａ１又はその下位式に係るＬＡＴＳ阻害剤は約３～１０マイクロモルの濃度で加えられる。
一実施形態において、式Ａ１又はその下位式に係る化合物のストック溶液は、化合物粉末をＤＭＳＯ中１０ｍＭのストック濃度に溶解させることにより調製されてもよい。
本発明の一態様において、本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤は輪部細胞のＬＡＴＳ１及び／又はＬＡＴＳ２活性を阻害する。好ましい実施形態において、ＬＡＴＳ阻害剤はＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２を阻害する。
細胞は、１回又は複数回の新鮮成長培地及び／又は細胞増殖培地の添加ラウンドを経てもよい。新鮮培地の添加のために細胞が継代される必要はないが、細胞の継代もまた、新鮮培地を添加する一方法である。
一連の培地もまた、様々な組み合わせの順序で使用し得る：例えば細胞増殖培地、続いて成長培地の添加（本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤が補足されていないものであって、細胞増殖培地のベースとして使用される成長培地と異なってもよい）。
本発明に係る細胞集団拡大段階は、細胞が細胞増殖培地に曝露されている期間中に起こる。
細胞の培養に関する当該技術分野において公知の標準温度条件、例えば好ましくは約３０℃～４０℃が用いられてもよい。特に好ましくは細胞成長、並びに細胞集団拡大段階は、約３７℃で行われる。５～１０％ＣＯ２レベルの従来の細胞インキュベーターが使用されてもよい。好ましくは細胞は５％ＣＯ２に曝露される。
細胞は、成長培地又は細胞増殖培地で培養する間に必要に応じて継代されてもよい。細胞は、それがサブコンフルエント又はコンフルエントになったときに継代されてもよい。好ましくは細胞は、それが約９０％～１００％コンフルエンシーに達したときに継代されるが、それより低いパーセンテージのコンフルエンシーレベルもまた実施されてよい。細胞の継代は、当該技術分野において公知の標準プロトコルに従い行われる。例えば、端的には細胞は、培養物をアキュターゼ（Ａｃｃｕｔａｓｅ）で（例えば１０分間）処理し、遠心によって細胞懸濁液をリンスし、細胞を所望のとおりの新鮮成長培地又は細胞増殖培地にプレーティングすることにより継代される。細胞分割比は例えば１：２～１：５の範囲である。
本発明に係る細胞集団拡大方法の細胞集団拡大段階について、細胞増殖培地中における播種細胞集団の拡大は、所要量の細胞材料が得られるまで実施されてもよい。
細胞集団を拡大するため、細胞は様々な期間にわたって細胞増殖培地に曝露され得る。例えばこれには、ＬＳＣが培養下に保たれている全時間、又はＬＳＣ単離後の最初の１週間又は角膜からの輪部の解剖後２４時間が含まれ得る。
好ましい実施形態において、播種細胞集団は、角膜からの細胞単離直後に本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤（式Ａ１又はその下位式に係る化合物など）に曝露され、ＬＳＣ増殖に必要な全時間、例えば１２～１６日間にわたって維持される。
本発明に係る一実施形態において、任意選択で遺伝子編集技法が実施されることにより、細胞集団が患者に送達されたときに本来免疫拒絶の一因となり得る免疫応答媒介遺伝子の発現及び／又は機能が低下又は消失するように細胞が遺伝子修飾されてもよい。本発明に係る細胞集団拡大方法における遺伝子編集技法の適用は任意選択であり、その代わりに、患者における移植材料の免疫拒絶に関する問題を緩和するための必要に応じて患者への局所免疫抑制薬及び／又は抗炎症剤（セクション免疫抑制薬及び抗炎症剤に更に記載されるとおり）の投与が用いられてもよい。
本発明の一態様によれば、遺伝子修飾は、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子の発現及び／又は機能を低下又は消失させることを含む。好ましい実施形態において、遺伝子修飾は、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子を特異的に標的とする遺伝子編集システムを輪部幹細胞に導入することを含む。具体的な実施形態において、前記遺伝子編集システムは、ＣＲＩＳＰＲ（ＣＲＩＳＰＲ：クラスター化した規則的間隔の短いパリンドロームリピート、別名ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム）、ＺＦＮ（ジンクフィンガーヌクレアーゼ）、ＴＡＬＥＮ（転写活性化因子様エフェクターベースのヌクレアーゼ）、エンジニアリングされたメガヌクレアーゼ（例えばＡＲＣヌクレアーゼなどのＡＲＣＵＳヌクレアーゼ）、ＡＡＶベクター（アデノ随伴ウイルス）遺伝子編集（例えば、ＡＡＶベクタードライブ相同組換え）及びレンチウイルスベクターベースのゲノム編集技術からなる群から選択される。相同組換えによってドライブされるなど、ＡＡＶベクターのドライブによる遺伝子送達は、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、又はその誘導体からなる群から選択されるＡＡＶによって実現することができる。
遺伝子編集技法は、それが用いられることになる場合には、例えば（１）輪部上皮組織上で、ＬＳＣ単離前、又は（２）細胞単離時点、又は（３）インビトロで細胞集団拡大段階の間（インビトロで細胞が本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤に曝露されるとき）、又は（４）インビトロで細胞集団拡大段階の終了時（インビトロで細胞が本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤に曝露された後）など、種々の時点で実施されてもよい。具体的な実施形態において、ＣＲＩＳＰＲは、細胞集団を本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤の存在下で２週間インビトロ拡大した後に使用される。
細胞集団拡大方法における使用に好適な遺伝子編集技法については、セクション「免疫拒絶の低減」に更に説明する。
本発明に係る細胞集団拡大方法において、好ましくは化合物であるＬＡＴＳ阻害剤は、播種された細胞集団の２倍超の拡大を生じさせる。
本発明に係る細胞集団拡大方法の一態様において、式Ａ１又はその下位式に係る化合物は、播種された輪部細胞集団の３０倍超の拡大を生じさせる。本発明に係る細胞集団拡大方法の具体的な実施形態において、式Ａ１又はその下位式に係るＬＡＴＳ阻害剤は、播種された輪部細胞集団の１００倍～２２００倍の拡大を生じさせる。本発明に係る細胞集団拡大方法のより具体的な実施形態において、式Ａ１又はその下位式に係るＬＡＴＳ阻害剤は、播種された輪部細胞集団の６００倍～２２００倍の拡大を生じさせる。本発明に係る細胞集団拡大方法によって実現する拡大倍率の倍数は、細胞の１回以上の継代で実現されてもよい。本発明の別の態様において、本発明に係る細胞集団拡大方法によって実現する拡大倍率の倍数は、式Ａ１又はその下位式に係る化合物に約１２～１６日間、好ましくは約１４日間曝露した後に実現されてもよい。
本発明に係る細胞集団拡大方法の一態様において、式Ａ１又はその下位式に係るＬＡＴＳ阻害剤は、総細胞量と比較して６％超がｐ６３α陽性細胞である細胞集団を生じさせる。本発明に係る細胞集団拡大方法の具体的な実施形態において、式Ａ１又はその下位式に係るＬＡＴＳ阻害剤は、総細胞量と比較して２０％超がｐ６３α陽性細胞である細胞集団を生じさせる。本発明に係る細胞集団拡大方法の別の具体的な実施形態において、式Ａ１又はその下位式に係るＬＡＴＳ阻害剤は、総細胞量と比較して７０％超がｐ６３α陽性細胞である細胞集団を生じさせる。本発明に係る細胞集団拡大方法の更に別の具体的な実施形態において、式Ａ１又はその下位式に係るＬＡＴＳ阻害剤は、総細胞量と比較して９５％超がｐ６３α陽性細胞である細胞集団を生じさせる。本発明に係る細胞集団拡大方法によって実現されるｐ６３α陽性細胞のパーセンテージの増加は、細胞の１回以上の継代で実現されてもよい。本発明の別の態様において、本発明に係る細胞集団拡大方法によって実現されるｐ６３α陽性細胞のパーセンテージの増加は、式Ａ１又はその下位式に係る化合物に約１２～１６日間、好ましくは約１４日間曝露した後に実現されてもよい。
細胞集団の細胞数又は拡大を測定することが望ましい場合、これは、例えば、本発明に係る方法の細胞集団拡大段階の間における様々な時点でアリコートを取って免疫細胞化学を実施する（例えばＳｙｔｏｘオレンジで染色された核をカウントする）ことによるか、又は明視野顕微鏡下での生細胞イメージングによって細胞数をカウントすることによるか、又は細胞コンフルエンスのリアルタイム定量的生細胞分析を実施することにより行われてもよい。
Ｓｙｔｏｘオレンジアッセイは、当該技術分野において公知の標準プロトコルに従い実施し得る。端的には、細胞を細胞培養皿に付着させた後（典型的には細胞のプレーティングから２４時間後）、細胞をパラホルムアルデヒドで固定する。次に細胞を透過処理し（例えば０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００溶液を使用する）、次にそれらの細胞をＳｙｔｏｘオレンジ溶液中で（例えばＰＢＳ中０．５マイクロモルのＳｙｔｏｘオレンジを使用して）標識する。次に表面積当たりのＳｙｔｏｘオレンジで染色された核の数をＺｅｉｓｓ落射蛍光顕微鏡下でカウントする。
本発明に係る一態様において、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な又は入手されたＬＳＣ集団は、好ましくは以下の特徴のうちの少なくとも１つを示す。より好ましくはこれは、以下の特徴のうちの２つ以上、より好ましくは全てを示す。
（１）細胞製剤はｐ６３α細胞陽性である。ｐ６３αの発現は、例えば免疫組織化学及び定量的ＲＴ－ＰＣＲなど、当該技術分野において公知の標準技法によって推定し得る。
（２）細胞製剤は６％超のｐ６３α陽性細胞を含む。好ましくは細胞製剤は１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％超のｐ６３α陽性細胞を含む。好ましい実施形態において、細胞製剤は９５％超のｐ６３α陽性細胞を含む。ｐ６３α細胞のパーセンテージは免疫組織化学又はＦＡＣＳによって測定し得る。
（３）細胞はＡＢＣＢ５、ＡＢＣＧ２、及びＣ／ＥＢＰδのうちの１つ以上を発現する。ＡＢＣＢ５、ＡＢＣＧ２、及びＣ／ＥＢＰδの発現は、例えば免疫組織化学及び定量的ＲＴ－ＰＣＲなど、当該技術分野において公知の標準技法によって推定し得る。
（４）細胞は、ケラチン－１２発現によって観察されるとおり角膜上皮細胞に分化することができる。これらの特徴は免疫組織化学又はＦＡＣＳによって観察することができる。
本発明に係る細胞集団拡大方法によって拡大された細胞集団は、溶液に加えられ、次に例えば保存溶液若しくは凍結保存溶液中（以下に記載するものなど）で貯蔵されてもよく、又は眼送達に好適な組成物に直接加えられてもよい。保存、凍結保存溶液又は眼送達に好適な組成物は、任意選択で本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤を含み得る。
本発明に係るより好ましい実施形態において、眼に送達される細胞集団製剤は、極めて低い乃至無視できる（ｎｅｇｌｉｂｌｅ）レベルのＬＡＴＳ阻害剤化合物を含む。従って具体的な実施形態において、本発明に係る細胞集団拡大方法は、リンスすることにより本発明に係る化合物（式Ａ１又はその下位式に係る化合物など）を実質的に除去する更なるステップを含む。これには、本発明に係る細胞集団拡大段階後に細胞をリンスすることが関わり得る。細胞をリンスするため、細胞を培養皿から（例えばアキュターゼ（Ａｃｃｕｔａｓｅ）で処理することにより）脱離させ、次に脱離した細胞を遠心し、ＰＢＳ又は本発明に係る成長培地中に細胞懸濁液を作る。このステップは、細胞を完全にリンスするため複数回、例えば１～１０回行われてもよい。最後に、細胞は必要に応じて保存溶液、凍結保存溶液、眼送達に好適な組成物、成長培地又はこれらの組み合わせに再懸濁してもよい。
細胞集団拡大方法によって調製され、及び本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤を含む細胞増殖培地が洗い流された拡大細胞集団は、例えば局在薬剤など、眼送達に好適な組成物に移され得る。任意選択で細胞集団は、眼送達に好適な局在薬剤に加える前に、ある期間貯蔵される。好ましい実施形態において、拡大細胞集団は、初めに保存又は凍結保存に好適な、好ましくはＬＡＴＳ阻害剤を含まない溶液に加えられ、細胞集団が（任意選択で凍結して）貯蔵された後に、眼送達に好適な、同様に好ましくはＬＡＴＳ阻害剤を含まない局在薬剤に加えられてもよい。
ＬＳＣの保存に好適な典型的な溶液は、オプチゾール（Ｏｐｔｉｓｏｌ）又はＰＢＳ、好ましくはオプチゾール（Ｏｐｔｉｓｏｌ）である。オプチゾール（Ｏｐｔｉｓｏｌ）は、貯蔵中の角膜の脱水を亢進させるコンドロイチン硫酸及びデキストランを含む角膜貯蔵媒体である（例えば、Ｋａｕｆｍａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）「オプチゾール角膜貯蔵媒体（Ｏｐｔｉｓｏｌ ｃｏｒｎｅａｌ ｓｔｏｒａｇｅ ｍｅｄｉｕｍ）」；Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｊｕｎ；１０９（６）：８６４－８を参照のこと）。凍結保存には、本発明の凍結保存溶液中にグリセロール、ジメチルスルホキシド、プロピレングリコール又はアセトアミドが使用されてもよい。細胞の凍結保存製剤は、典型的には－２０℃又は－８０℃に保たれる。
一態様において、本発明は、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な輪部幹細胞の保存又は凍結保存製剤に関する。代替的な態様において、本発明は、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な輪部幹細胞がＰＢＳ及び／又は成長培地中に浮遊状態にあるか、又は局在薬剤と組み合わされた新鮮細胞製剤に関する。新鮮細胞製剤は典型的には約１５～３７℃に保たれる。細胞の貯蔵には、バイアル又はフラスコなど、当該技術分野において公知の標準的な細胞培養容器が使用されてもよい。
本発明に係る好ましい実施形態において、細胞の凍結保存製剤は、眼内での使用前に、（例えばインキュベーター又はウォーターバスにおいて約３７℃の温度でインキュベートすることにより）解凍される。好ましくは細胞から凍結保存溶液を洗い流すため１０倍容量のＰＢＳ又は成長培地が加えられてもよい。次に細胞は遠心によってリンスされてもよく、ＰＢＳ及び／又は成長培地中に細胞懸濁液が作られた後、同様に好ましくはＬＡＴＳ阻害剤を含まない眼送達用の局在薬剤と組み合わされてもよい。
本発明の一態様において、細胞集団拡大方法によって調製される拡大細胞集団は、懸濁液として（例えば、ＰＢＳ及び／又は例えばＸ－ＶＩＶＯ培地などの成長培地中に）調製され、眼送達に好適な局在薬剤（ＧｅｌＭＡのような生体マトリックスなど）と組み合わされる。本発明に係る治療方法の具体的な実施形態において、細胞、ＰＢＳ及び／又は成長培地、及び生体マトリックスのこの組み合わせは、担体（コンタクトレンズなど）を用いて眼に送達される。更に別の具体的な実施形態において、細胞、ＰＢＳ及び／又は成長培地、及び生体マトリックスのこの組み合わせが含むＬＡＴＳ阻害剤は高々痕跡量レベルに過ぎない。
用語「痕跡量レベル」は、本明細書で使用されるとき、５％ｗ／ｖ未満（例えば、５％ｗ／ｖ、４％ｗ／ｖ、３％ｗ／ｖ、２％ｗ／ｖ、又は１％ｗ／ｖ以下）、及び好ましくは０．０１％ｗ／ｖ未満（例えば、０．０１％ｗ／ｖ、０．００９％ｗ／ｖ、０．００８％ｗ／ｖ、０．００７％ｗ／ｖ、０．００６％ｗ／ｖ、０．００５％ｗ／ｖ、０．００４％ｗ／ｖ、０．００３％ｗ／ｖ、０．００２％ｗ／ｖ、又は０．００１％ｗ／ｖ以下）を意味し、これは例えば本明細書の実施例に記載されるとおり高分解能クロマトグラフィーを用いて測定することができる。特定の実施形態において、本発明のＬＡＴＳ阻害剤化合物の痕跡量レベルは、１回以上の洗浄ステップ後に存在する残留化合物のレベルであって、合わせてもかかる化合物の細胞力価を下回り、従ってそれがインビボで生物学的効果を誘導しないレベルである。従って、化合物の残留レベルは、細胞培養下又は対象体内での（例えば対象への拡大細胞集団の移植後の）細胞集団拡大に生物学的効果を及ぼすと見込まれる量を下回る。痕跡量レベルは、例えば、以下のとおり計算し得るウォッシュオフ効率として測定することができる：ウォッシュオフ効率＝１００－（洗浄後ペレット中における平均濃度×ペレット体積×分子量）／（化合物濃度×培養培地体積×分子量）。本明細書で使用されるとき、細胞から本発明のＬＡＴＳ阻害剤化合物を「リンスして実質的に除去する」とは、痕跡量レベルのＬＡＴＳ阻害剤化合物を確立するステップを指す。
或いは、細胞は培養されてもよく、細胞増殖培地中で眼表面への細胞送達に好適な局在薬剤（例えばフィブリン、コラーゲン）上にて細胞集団増殖段階が行われてもよい。
細胞集団拡大：拡大角膜内皮細胞集団の調製のため
本発明の好ましい実施形態において、例えばセクション「拡大角膜内皮細胞集団の調製のための出発物質」に記載されるとおり単離され及び入手可能な角膜内皮細胞は、プレート、マルチウェルプレート、及び細胞培養フラスコなど、当該技術分野において公知の培養容器内にある培地中で成長させることができる。例えば、コーティングされていない、又はコラーゲン、シンセマックス（ｓｙｎｔｈｅｍａｘ）、ゼラチン若しくはフィブロネクチンでコーティングされた培養皿が使用されてもよい。好適な培養容器の好ましい例は、コーティングされていないプレートである。バイオリアクターなど、工業的用途の当該技術分野において公知の標準的な培養用容器及び機器がまた使用されることもある。
使用される培地は成長培地又は細胞増殖培地であってもよい。成長培地は、本明細書では、細胞集団の成長及び維持を支援する培養培地として定義される。角膜内皮細胞培養に好適な成長培地は当該技術分野において公知であり、例えば：ＦＢＳ（ウシ胎仔血清）を補足したＤＭＥＭ（ダルベッコ変法イーグル培地）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ヒト血清を補足したヒト内皮ＳＦ（無血清）培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、Ｘ－ＶＩＶＯ１５培地（Ｌｏｎｚａ）又は間葉系幹細胞馴化培地である。これらは、加えて成長因子（例えばｂＦＧＦ）、及び／又はペニシリン及びストレプトマイシンなどの抗生物質が補足されてもよい。本発明に係る好ましい成長培地は、Ｘ－ＶＩＶＯ１５培地（追加的な成長因子が補足されていないもの）である。
或いは、単離細胞は、初めに本発明に係る細胞増殖培地に加えられてもよい。本明細書に定義するとおりの細胞増殖培地は、成長培地と本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤とを含む。本発明に係る細胞増殖培地において成長培地成分は、ＦＢＳ（ウシ胎仔血清）を補足したＤＭＥＭ（ダルベッコ変法イーグル培地）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ヒト血清を補足したヒト内皮ＳＦ（無血清）培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、Ｘ－ＶＩＶＯ１５培地（Ｌｏｎｚａ）又は間葉系幹細胞馴化培地からなる群から選択される。これらは、加えて成長因子（例えばｂＦＧＦ）、及び／又はペニシリン及びストレプトマイシンなどの抗生物質が補足されてもよい。
本発明に係る好ましい細胞増殖培地は、本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤を含むＸ－ＶＩＶＯ１５培地（Ｌｏｎｚａ）である。この細胞増殖培地には、ＣＥＣの増殖を促進するのに追加的な成長因子又はフィーダー細胞が必要ないという利点がある。Ｘ－ＶＩＶＯ培地は、とりわけ、医薬品グレードのヒトアルブミン、組換えヒトインスリン、及び低温殺菌されたヒトトランスフェリンを含む。任意選択でＸ－ＶＩＶＯ１５培地に抗生物質が加えられてもよい。好ましい実施形態において、Ｘ－ＶＩＶＯ１５培地は抗生物質を加えずに使用される。
細胞増殖培地は、成長培地と本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤とを含む。前記ＬＡＴＳ阻害剤は、好ましくは、式Ａ１又はその下位式に係る、且つセクション「ＬＡＴＳ阻害剤」に更に記載されるとおりの化合物を含む群から選択される。
好ましい実施形態において、式Ａ１又はその下位式に係るＬＡＴＳ阻害剤は、約０．５～１００マイクロモル、好ましくは約０．５～２５マイクロモル、より好ましくは約１～２０マイクロモルの濃度で加えられる。具体的な実施形態において、式Ａ１又はその下位式に係るＬＡＴＳ阻害剤は約３～１０マイクロモルの濃度で加えられる。
一実施形態において、式Ａ１又はその下位式に係る化合物のストック溶液は、化合物粉末をＤＭＳＯ中１０ｍＭのストック濃度に溶解させることにより調製されてもよい。
本発明の一態様において、本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤は角膜内皮細胞のＬＡＴＳ１及び／又はＬＡＴＳ２活性を阻害する。好ましい実施形態において、ＬＡＴＳ阻害剤はＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２を阻害する。
細胞は、１回又は複数回の新鮮成長培地及び／又は細胞増殖培地の添加ラウンドを経てもよい。新鮮培地の添加のために細胞が継代される必要はないが、細胞の継代もまた、新鮮培地を添加する一方法である。
一連の培地もまた、様々な組み合わせの順序で使用し得る：例えば細胞増殖培地、続いて成長培地の添加（本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤が補足されていないものであって、細胞増殖培地のベースとして使用される成長培地と異なってもよい）。
本発明に係る細胞集団拡大段階は、細胞が細胞増殖培地に曝露されている期間中に起こる。
細胞の培養に関する当該技術分野において公知の標準温度条件、例えば好ましくは約３０℃～４０℃が用いられてもよい。特に好ましくは細胞成長、並びに細胞集団拡大段階は、約３７℃で行われる。５～１０％ＣＯ２レベルの従来の細胞インキュベーターが使用されてもよい。好ましくは細胞は５％ＣＯ２に曝露される。
細胞は、成長培地又は細胞増殖培地で培養する間に必要に応じて継代されてもよい。細胞は、それがサブコンフルエント又はコンフルエントになったときに継代されてもよい。好ましくは細胞は、それが約９０％～１００％コンフルエンシーに達したときに継代されるが、それより低いパーセンテージのコンフルエンシーレベルもまた実施されてよい。細胞の継代は、当該技術分野において公知の標準プロトコルに従い行われる。例えば、端的には細胞を例えばコラゲナーゼを使用して培養容器から脱離させる。次に細胞は遠心し、ＰＢＳ又は本発明に係る細胞成長培地でリンスし、必要に応じて例えば１：２～１：４希釈で新鮮な成長培地又は細胞増殖培地にプレーティングする。
本発明に係る細胞集団拡大方法の細胞集団拡大段階について、細胞増殖培地中における播種細胞集団の拡大は、所要量の細胞材料が得られるまで実施されてもよい。
細胞集団を拡大するため、細胞は様々な期間にわたって細胞増殖培地に曝露され得る。例えば、これには、ＣＥＣが培養下に保たれている全時間、又はＣＥＣ単離後の最初の１～２週間のみ、又は角膜の解剖後２４時間のみが含まれ得る。
好ましい実施形態において、角膜内皮細胞は、角膜からの細胞単離直後に本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤（式Ａ１又はその下位式に係る化合物など）に曝露され、ＣＥＣ増殖に必要な全時間、例えば１～２週間にわたって維持される。
本発明のより好ましい実施形態において、インビトロでの細胞集団拡大段階後（即ち細胞が本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤にある期間曝露されて細胞集団が拡大された後）、本発明に係る細胞集団拡大方法は、ＬＡＴＳ阻害剤を補足しない成長培地において細胞をある期間（例えば２週間）成長させて成熟角膜内皮の形成を可能にし得る更なるステップを含む。成熟角膜内皮は、本明細書では、六角形のＣＥＣの単層、ＺＯ－１陽性タイトジャンクション及びＮａ／Ｋ ＡＴＰアーゼの発現として定義される。好ましい実施形態において、成熟角膜内皮が形成されている間は細胞は継代しない。
本発明に係る一実施形態において、任意選択で遺伝子編集技法が実施されることにより、細胞集団が患者に送達されたときに本来免疫拒絶の一因となり得る免疫応答媒介遺伝子の発現及び／又は機能が低下又は消失するように細胞が遺伝子修飾されてもよい。本発明に係る細胞集団拡大方法における遺伝子編集技法の適用は任意選択であり、その代わりに、患者における移植材料の免疫拒絶に関する問題を緩和するための必要に応じて患者への局所免疫抑制薬及び／又は抗炎症剤（セクション免疫抑制薬及び抗炎症剤に更に記載されるとおり）の投与が用いられてもよい。
本発明の一態様によれば、遺伝子編集技法が用いられるシナリオについて、遺伝子修飾は、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子の発現及び／又は機能を低下又は消失させることを含む。好ましい実施形態において、遺伝子修飾は、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子を特異的に標的とする遺伝子編集システムを角膜内皮細胞に導入することを含む。具体的な実施形態において、前記遺伝子編集システムは、ＣＲＩＳＰＲ（ＣＲＩＳＰＲ：クラスター化した規則的間隔の短いパリンドロームリピート、別名ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム）、ＺＦＮ（ジンクフィンガーヌクレアーゼ）、ＴＡＬＥＮ（転写活性化因子様エフェクターベースのヌクレアーゼ）、エンジニアリングされたメガヌクレアーゼ（例えばＡＲＣヌクレアーゼなどのＡＲＣＵＳヌクレアーゼ）、ＡＡＶベクター（アデノ随伴ウイルス）遺伝子編集（例えばＡＡＶベクタードライブ相同組換え）及びレンチウイルスベクターベースのゲノム編集技術からなる群から選択される。相同組換えによってドライブされるなど、ＡＡＶベクターのドライブによる遺伝子送達は、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、又はその誘導体からなる群から選択されるＡＡＶによって実現することができる。
遺伝子編集技法は、それが用いられることになる場合には、例えば（１）角膜組織上で、ＣＥＣ単離前、又は（２）細胞単離時点、又は（３）インビトロで細胞集団拡大段階の間（インビトロで細胞が本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤に曝露されるとき）、又は（４）インビトロで細胞集団拡大段階の終了時（インビトロで細胞が本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤に曝露された後）など、種々の時点で実施されてもよい。
細胞集団拡大方法における使用に好適な遺伝子編集技法については、セクション「免疫拒絶の低減」に更に説明する。
本発明に係る細胞集団拡大方法において、好ましくは化合物であるＬＡＴＳ阻害剤は、播種された細胞集団の２倍超の拡大を生じさせる。
本発明に係る細胞集団拡大方法の一態様において、式Ａ１又はその下位式に係る化合物は、播種された角膜内皮細胞集団の１０倍超の拡大を生じさせる。本発明に係る細胞集団拡大方法の具体的な実施形態において、式Ａ１又はその下位式に係るＬＡＴＳ阻害剤は、播種された角膜内皮細胞集団の１５倍～６００倍の拡大を生じさせる。本発明に係る細胞集団拡大方法のより具体的な実施形態において、式Ａ１又はその下位式に係るＬＡＴＳ阻害剤は、播種された角膜内皮細胞集団の２０倍～５５０倍の拡大を生じさせる。本発明に係る細胞集団拡大方法によって実現する拡大倍率の倍数は、細胞の１回以上の継代で実現されてもよい。本発明の別の態様において、本発明に係る細胞集団拡大方法によって実現する拡大倍率の倍数は、式Ａ１又はその下位式に係る化合物に１～２週間曝露した後、好ましくは約１０日後に実現されてもよい。
細胞集団の細胞数又は拡大を測定することが望ましい場合、これは、例えば、本発明に係る方法の細胞集団拡大段階の間における様々な時点でアリコートを取って免疫細胞化学を実施する（例えばＳｙｔｏｘオレンジで染色された核をカウントする）ことによるか、又は明視野顕微鏡下での生細胞イメージングによって細胞数をカウントすることによるか、又は細胞コンフルエンスのリアルタイム定量的生細胞分析を実施することにより行われてもよい。
本発明に係る一態様において、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な又は入手されたＣＥＣ集団は、好ましくは以下の特徴のうちの少なくとも１つを示す。より好ましくは、これは以下の特徴のうちの２つ以上、特に好ましくは全てを示す。
（１）細胞はＮａ／Ｋ ＡＴＰアーゼを発現する。Ｎａ／Ｋ ＡＴＰアーゼの発現は、例えば免疫組織化学、定量的ＲＴ－ＰＣＲ又はＦＡＣＳ分析によるなどの当該技術分野において公知の標準技法によって推定し得る。
（２）細胞は、コラーゲン８ａ２、ＡＱＰ１（アクアポリン１）及びＳＬＣ４Ａ１１（溶質輸送体ファミリー４メンバー１１）のうちの１つ以上を発現する。好ましくは相対発現レベルは、例えば皮膚線維芽細胞など、典型的にはコラーゲン８ａ２、ＡＱＰ１及びＳＬＣ４Ａ１１を発現しない細胞よりも高い。コラーゲン８ａ２、ＡＱＰ１又はＳＬＣ４Ａ１１の発現は、例えば免疫組織化学、定量的ＲＴ－ＰＣＲ又はＦＡＣＳ分析によるなどの当該技術分野において公知の標準技法によって推定し得る。
（３）細胞はＲＰＥ６５（網膜色素上皮マーカー）及び／又はＣＤ３１（血管内皮マーカー）を発現しない（又は高々比較的低レベルのそれを発現する）。相対発現レベルは、皮膚線維芽細胞など、典型的にはＲＰＥ６５、ＣＤ３１を発現しない細胞と同様である。ＲＰＥ６５及びＣＤ３１の発現は、例えば定量的ＲＴ－ＰＣＲ、免疫組織化学又はＦＡＣＳ分析など、当該技術分野において公知の標準技法によって推定し得る。
（４）細胞は比較的低レベルのＣＤ７３を発現する。相対発現レベルは、内皮間葉転換を起こした細胞よりも低い。ＣＤ７３の発現は、例えばＦＡＣＳ分析又は免疫組織化学など、当該技術分野において公知の標準技法によって推定し得る。
本発明に係る別の態様において、層状のとき、例えばプレート上で培養されるとき、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能なＣＥＣ集団は、好ましくは以下の特徴のうちの少なくとも１つを示す。より好ましくは、これは以下の特徴のうちの２つ以上、特に好ましくは全てを示す：
（１）細胞は単層構造を形成することが可能である。これは生体における角膜内皮細胞層の特徴のうちの一つである。これは、核染色し（例えばＳｙｔｏｘ、Ｈｏｅｃｈｓｔなどの核色素による）、続いて顕微鏡法によって調べることにより観察し得る。
（２）細胞はタイトジャンクションを形成することが可能である。これは、当該技術分野において公知の標準的な技法、タイトジャンクションマーカー閉鎖帯－１（ＺＯ－１）の免疫蛍光染色によって確かめることができる。
（３）細胞は細胞層に規則的に並ぶことが可能である。これは、当該技術分野において公知の標準的な技法、タイトジャンクションマーカー閉鎖帯－１（ＺＯ－１）の免疫蛍光染色によって確かめることができる。生体の健常な角膜内皮細胞層では、この層を構成する細胞は規則的に配列され、このことにより角膜内皮細胞が正常機能及び高い透明性を維持すると考えられ、及び角膜が適切に水の制御機能を呈すると考えられる。
本発明に係る細胞集団拡大方法によって拡大された細胞集団は、溶液に加えられ、次に例えば保存溶液若しくは凍結保存溶液中（以下に記載するものなど）で貯蔵されてもよく、又は眼送達に好適な組成物に直接加えられてもよい。保存、凍結保存溶液又は眼送達に好適な組成物は、任意選択で本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤を含み得る。
本発明に係るより好ましい実施形態において、眼に送達される細胞集団製剤は、極めて低い乃至無視できるレベルのＬＡＴＳ阻害剤化合物を含む。従って具体的な実施形態において、本発明に係る細胞集団拡大方法は、リンスすることにより本発明に係る化合物（式Ａ１又はその下位式に係る化合物など）を実質的に除去する更なるステップを含む。これには、本発明に係る細胞集団拡大段階後に（細胞集団拡大段階の直後及び／又はＬＡＴＳ阻害剤が補足されていない成長培地中で細胞が培養されて成熟角膜内皮を形成した後に）細胞をリンスすることが関わり得る。細胞をリンスするため、細胞は遠心され、ＰＢＳ又は本発明に係る成長培地中に細胞懸濁液が作られる。このステップは、細胞を完全にリンスするため複数回、例えば１～１０回行われてもよい。最後に、細胞は必要に応じて保存溶液、凍結保存溶液、眼送達に好適な組成物、成長培地又はこれらの組み合わせに再懸濁されてもよい。
細胞集団拡大方法によって調製され、及び本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤を含む細胞増殖培地が洗い流された拡大細胞集団は、例えば局在薬剤など、眼送達に好適な組成物に移され得る。任意選択で細胞集団は、眼送達に好適な局在薬剤に加える前に、ある期間貯蔵される。好ましい実施形態において、拡大細胞集団は、初めに保存又は凍結保存に好適な、好ましくはＬＡＴＳ阻害剤を含まない溶液に加えられ、細胞集団が（任意選択で凍結して）貯蔵された後に、眼送達に好適な、同様に好ましくはＬＡＴＳ阻害剤を含まない局在薬剤に加えられてもよい。
ＣＥＣの保存に好適な典型的な溶液は、オプチゾール（Ｏｐｔｉｓｏｌ）又はＰＢＳ、好ましくはオプチゾール（Ｏｐｔｉｓｏｌ）である。オプチゾール（Ｏｐｔｉｓｏｌ）は、貯蔵中の角膜の脱水を亢進させるコンドロイチン硫酸及びデキストランを含む角膜貯蔵媒体である（例えば、Ｋａｕｆｍａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）「オプチゾール角膜貯蔵媒体（Ｏｐｔｉｓｏｌ ｃｏｒｎｅａｌ ｓｔｏｒａｇｅ ｍｅｄｉｕｍ）」；Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｊｕｎ；１０９（６）：８６４－８を参照のこと）。凍結保存には、本発明の凍結保存溶液中にグリセロール、ジメチルスルホキシド、プロピレングリコール又はアセトアミドが使用されてもよい。細胞の凍結保存製剤は、典型的には－２０℃又は－８０℃に保たれる。
一態様において、本発明は、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な角膜内皮細胞の保存又は凍結保存製剤に関する。代替的な態様において、本発明は、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な角膜内皮細胞がＰＢＳ及び／又は成長培地中に浮遊状態にあるか、又は局在薬剤と組み合わされた新鮮細胞製剤に関する。新鮮細胞製剤は、典型的には約３７℃に保たれる。細胞の貯蔵には、バイアル又はフラスコなど、当該技術分野において公知の標準的な細胞培養容器が使用されてもよい。
本発明に係る好ましい実施形態において、細胞の凍結保存製剤は、眼内での使用前に、（例えばインキュベーター又はウォーターバスにおいて約３７℃の温度でインキュベートすることにより）解凍される。好ましくは細胞から凍結保存溶液を洗い流すため１０容量のＰＢＳ又は成長培地が加えられてもよい。次に細胞は遠心によってリンスされてもよく、ＰＢＳ及び／又は成長培地中に細胞懸濁液が作られた後、同様に好ましくはＬＡＴＳ阻害剤を含まない眼送達用の局在薬剤と組み合わされてもよい。
本発明の一態様において、細胞集団拡大方法（好ましくはまた、ＬＡＴＳ阻害剤を補足しない培地中で成長させて成熟角膜内皮を形成するステップも含む）によって調製される拡大細胞集団は、懸濁液として（例えば、ＰＢＳ及び／又は例えばＸ－ＶＩＶＯ培地などの成長培地中に）調製され、眼送達に好適な局在薬剤（ＧｅｌＭＡのような生体マトリックスなど）と組み合わされる。本発明に係る治療方法の具体的な実施形態において、細胞、ＰＢＳ及び／又は成長培地、及び生体マトリックスのこの組み合わせは、懸濁液として眼に送達される。更に別の具体的な実施形態において、細胞、ＰＢＳ及び／又は成長培地、及び生体マトリックスのこの組み合わせが含むＬＡＴＳ阻害剤は高々痕跡量レベルに過ぎない。
或いは、細胞は培養されてもよく、細胞増殖培地中で眼表面への細胞送達に好適な局在薬剤上にて細胞集団増殖段階が行われてもよい。
本発明のある実施形態において、本発明により拡大された細胞集団は、当該技術分野において公知の方法を用いて角膜への送達用の連続細胞シートとして単離されてもよい（例えば、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ，ＪＳＭ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２０１６，ｐ．１０４７を参照のこと）。細胞シートは角膜への送達用の１つ又は複数の材料上に機械的に支持されてもよい。
免疫拒絶の低減
移植時、同種異系輪部幹細胞はレシピエントの免疫系による拒絶のリスクがある。免疫抑制レジメンを用いてＬＳＣなどの移植細胞の免疫拒絶リスクを低減することができる。
同種異系ＬＳＣのレシピエントに使用される好適な全身性免疫抑制剤としては、タクロリムス、ミコフェノール酸モフェチル、プレドニゾン及び予防的バルガンシクロビル及びトリメトプリム／スルファメトキサゾールが挙げられる（Ｈｏｌｌａｎｄ ＥＪ，Ｍｏｇｉｌｉｓｈｅｔｔｙ Ｇ，Ｓｋｅｅｎｓ ＨＭ，Ｈａｉｒ ＤＢ，Ｎｅｆｆ ＫＤ，Ｂｉｂｅｒ ＪＭ，Ｃｈａｎ ＣＣ（２０１２）「眼表面幹細胞移植における全身免疫抑制：１０年の経験の結果（Ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｏｃｕｌａｒ ｓｕｒｆａｃｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ａ １０－ｙｅａｒ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ）」．Ｃｏｒｎｅａ．２０１２ Ｊｕｎ；３１（６）：６５５－６１を参照のこと）。
本発明に係る細胞集団拡大方法は細胞集団の高い拡大能力を提供するため、任意選択で遺伝子編集技術を用いて免疫拒絶のドライバーを除去し、又はレシピエントの免疫応答を低減する遺伝子を追加してもよい。
本発明の一態様では、遺伝子編集は細胞集団に対して「エキソビボ」で行われる。本発明の別の態様では、遺伝子編集技術を任意選択で用いて、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子の発現を低減し、又は消失させてもよい。好ましい実施形態において、遺伝子は、Ｂ２Ｍ、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ及びＨＬＡ－Ｃからなる群から選択される。具体的な実施形態において、遺伝子はＢ２Ｍである。Ｂ２Ｍはβ２ミクログロブリンであり、クラスＩ主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）の一成分である。Ｂ２ＭはＨＵＧＯ遺伝子命名法委員会（ＨＧＮＣ）識別番号９１４を有する。ＨＬＡ－Ａは、主要組織適合遺伝子複合体、クラスＩ、Ａ（ＨＧＮＣ ＩＤ４９３１）である。ＨＬＡ－Ｂは、主要組織適合遺伝子複合体、クラスＩ、Ｂ（ＨＧＮＣ ＩＤ４９３２）である。ＨＬＡ－Ｃは、主要組織適合遺伝子複合体、クラスＩ、Ｃ（ＨＧＮＣ ＩＤ４９３３）である。
幾つかの遺伝子編集方法を、限定はされないが、ＣＲＩＳＰＲ（ＣＲＩＳＰＲ：クラスター化した規則的間隔の短いパリンドロームリピート、別名ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム）、ＺＦＮ（ジンクフィンガーヌクレアーゼ）、ＴＡＬＥＮ（転写活性化因子様エフェクターベースのヌクレアーゼ）、エンジニアリングされたメガヌクレアーゼ（例えばＡＲＣヌクレアーゼなどのＡＲＣＵＳヌクレアーゼ）、ＡＡＶベクター（アデノ随伴ウイルス）遺伝子送達（例えば、ＡＡＶベクタードライブ相同組換え）及びレンチウイルスベクターベースのゲノム編集技術からなる群から選択される方法を含め、用いることができる。相同組換えによってドライブされるなど、ＡＡＶベクターのドライブによる遺伝子送達は、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、又はその誘導体からなる群から選択されるＡＡＶによって実現することができる。本発明の一態様において、遺伝子編集は細胞集団に対して「エキソビボ」で行われる。
遺伝子編集システム
本明細書で使用されるとき、用語「遺伝子編集システム」は、１つ以上のＤＮＡ結合ドメイン又は成分及び１つ以上のＤＮＡ修飾ドメイン又は成分、又は前記ＤＮＡ結合及びＤＮＡ修飾ドメイン又は成分をコードする単離核酸、例えば１つ以上のベクターを含むシステムを指す。遺伝子編集システムは、標的遺伝子の核酸の修飾及び／又は標的遺伝子の発現の調節に使用される。公知の遺伝子編集システムでは、例えば、１つ以上のＤＮＡ結合ドメイン又は成分が１つ以上のＤＮＡ修飾ドメイン又は成分と関連付けられ、１つ以上のＤＮＡ結合ドメインによって１つ以上のＤＮＡ修飾ドメイン又は成分が特定の核酸部位を標的にすることになる。本明細書に記載されるとおり、遺伝子編集はエキソビボで行われ得る。
ＡＡＶ遺伝子編集システム
ＡＡＶに由来するベクターを使用したインビトロ及びインビボでの遺伝子のトランスファーは、当該技術分野において周知である（例えば米国特許第９，７０７，３０４号明細書を参照のこと）。細胞における遺伝子編集のためのウイルスベクターの使用については、例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，２４：４４７－４５７；Ｇｏｒｎａｌｕｓｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１７，３５（８）：７６５－７７２；及び国際公開第２０１７０８７９６１号パンフレットに記載されている。
ＡＡＶベクターは、当該技術分野において公知の方法を用いて作製することができる。かかる方法については、例えば、Ｆｌｏｔｔｅ Ｔ Ｒ．「遺伝性障害のためのアデノ随伴ウイルスベースの遺伝子療法（Ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ－ｂａｓｅｄ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）」．Ｐｅｄｉａｔｒ Ｒｅｓ．２００５ Ｄｅｃｅｍｂｅｒ；５８（６）：１１４３－７；Ｇｏｎｃａｌｖｅｓ Ｍ Ａ．「アデノ随伴ウイルス：欠損ウイルスから有効なベクターへ（Ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ：ｆｒｏｍ ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ｖｉｒｕｓ ｔｏ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｖｅｃｔｏｒ）」，Ｖｉｒｏｌ Ｊ．２００５ Ｍａｙ ６；２：４３；Ｓｕｒａｃｅ Ｅ Ｍ，Ａｕｒｉｃｃｈｉｏ Ａ．「網膜遺伝子トランスファーのためのアデノ随伴ウイルスベクター（Ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｒｅｔｉｎａｌ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ）」．Ｐｒｏｇ Ｒｅｔｉｎ Ｅｙｅ Ｒｅｓ．２００３ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ；２２（６）：７０５－１９；Ｍａｎｄｅｌ Ｒ Ｊ，Ｍａｎｆｒｅｄｓｓｏｎ Ｆ Ｐ，Ｆｏｕｓｔ Ｋ Ｄ，Ｒｉｓｉｎｇ Ａ，Ｒｅｉｍｓｎｉｄｅｒ Ｓ，Ｎａｓｈ Ｋ，Ｂｕｒｇｅｒ Ｃ．「神経障害を治療するための治療剤としての組換えアデノ随伴ウイルスベクター（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ ａｓ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｇｅｎｔｓ ｔｏ ｔｒｅａｔ ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）」．Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２００６ Ｍａｒｃｈ；１３（３）：４６３－８３に記載されている。
ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集システム
「ＣＲＩＳＰＲ」は、本明細書で使用されるとき、一組のクラスター化した規則的間隔の短いパリンドロームリピート、又はかかる一組のリピートを含むシステムを指す。「Ｃａｓ」は、本明細書で使用されるとき、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質を指す。多様なＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓシステムは、そのエフェクターモジュールの構成に基づき２つのクラスに分けることができる：クラス１ ＣＲＩＳＰＲシステムは、幾つかのＣａｓタンパク質及びｃｒＲＮＡを利用してエフェクター複合体を形成し、一方、クラス２ ＣＲＩＳＰＲシステムは大型の単一成分Ｃａｓタンパク質をｃｒＲＮＡと併せて用いて干渉を媒介する。クラス２ ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓシステムの一例は、Ｃｐｆ１（プレボテラ属及びフランシセラ属由来のＣＲＩＳＰＲ １（ＣＲＩＳＰＲ ｆｒｏｍ Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ａｎｄ Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ １））を用いる。例えば、Ｚｅｔｓｃｈｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １６３：７５９－７７１（２０１５）（この内容は本明細書において全体として参照により援用される）を参照のこと。用語「Ｃｐｆ１」は、本明細書で使用されるとき、ＣＲＩＳＰＲシステムで使用することのできるあらゆるオルソログ、及び変異体を含む。
天然に存在するＣＲＩＳＰＲシステムは、塩基配列が決定されている真正細菌ゲノムの約４０％及び塩基配列が決定されている古細菌の９０％に見られる。Ｇｒｉｓｓａ ｅｔ ａｌ．（２００７）ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ８：１７２。このシステムは、プラスミド及びファージなどの外来性遺伝要素に対する抵抗性を付与するある種の原核生物免疫系であり、一形態の後天性免疫を提供する。Ｂａｒｒａｎｇｏｕ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１５：１７０９－１７１２；Ｍａｒｒａｇｉｎｉ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２２：１８４３－１８４５。
ＣＲＩＳＰＲシステムは、マウス、霊長類及びヒトなどの真核生物における遺伝子編集（特定の遺伝子のサイレンシング、増強又は変更）で使用するため修飾されている。Ｗｉｅｄｅｎｈｅｆｔ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｎａｔｕｒｅ ４８２：３３１－８。これは、例えば、特異的にエンジニアリングされたガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）（例えば、真核生物ゲノムの配列に相補的な配列を含むｇＲＮＡ）及び１つ以上の適切なＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼ、例えばＣａｓタンパク質をコードする１つ以上のベクターを真核細胞に導入することにより達成される。ＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼはｇＲＮＡと複合体を形成し、次にはこれがｇＲＮＡの配列と真核生物ゲノムの相補配列とのハイブリダイゼーションによって標的ＤＮＡ部位に仕向けられ、次にはそこでＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼがＤＮＡの二本鎖又は一本鎖切断を誘導する。鎖切断又はその近傍でのヌクレオチドの挿入又は欠失が、修飾されたゲノムを作り出す。
これらは多くの異なる種類の細菌で天然に起こるため、正確なＣＲＩＳＰＲの構成並びにＣａｓ遺伝子及びその産物の構造、機能及び数は、種毎に幾らか異なる。Ｈａｆｔ ｅｔ ａｌ．（２００５）ＰＬｏＳ Ｃｏｍｐｕｔ．Ｂｉｏｌ．１：ｅ６０；Ｋｕｎｉｎ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｉｏｌ．８：Ｒ６１；Ｍｏｊｉｃａ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．６０：１７４－１８２；Ｂｏｌｏｔｉｎ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１５１：２５５１－２５６１；Ｐｏｕｒｃｅｌ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１５１：６５３－６６３；及びＳｔｅｒｎ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｔｒｅｎｄｓ．Ｇｅｎｅｔ．２８：３３５－３４０。例えば、Ｃｓｅ（Ｃａｓサブタイプ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））タンパク質（例えば、ＣａｓＡ）は機能複合体Ｃａｓｃａｄｅを形成し、これはＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ転写物を、Ｃａｓｃａｄｅが保持しているスペーサー反復単位にプロセシングする。Ｂｒｏｕｎｓ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２１：９６０－９６４。他の原核生物では、Ｃａｓ６がＣＲＩＳＰＲ転写物をプロセシングする。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）におけるＣＲＩＳＰＲベースのファージ不活性化には、Ｃａｓ１又はＣａｓ２でなく、Ｃａｓｃａｄｅ及びＣａｓ３が必要である。パイロコッカス・フリオサス（Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆｕｒｉｏｓｕｓ）及び他の原核生物におけるＣｍｒ（Ｃａｓ ＲＡＭＰモジュール）タンパク質は小型ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡと機能複合体を形成して、この複合体が相補的な標的ＲＮＡを認識し、切断する。
より単純なＣＲＩＳＰＲシステムはタンパク質Ｃａｓ９に頼るもので、これは二重らせんの各々に１つずつの、２つの活性な切断部位を有するヌクレアーゼである。遺伝子編集システムにおいては、Ｃａｓ９と修飾されたＣＲＩＳＰＲ遺伝子座ＲＮＡとの組み合わせを使用することができる。Ｐｅｎｎｉｓｉ（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４１：８３３－８３６。
一部の実施形態において、ＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼはＣａｓ分子、例えばＣａｓ９分子である。「Ｃａｓ９分子」はｇＲＮＡ分子（例えば、ｔｒａｃｒのドメインの配列、別名ｔｒａｃｒＲＮＡ又はトランス活性化型ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ）と相互作用し、ｇＲＮＡ分子と協力して、標的配列及びＰＡＭ（プロトスペーサー隣接モチーフ）配列を含む部位に局在化する（例えば、それを標的化する、又はそこにホーミングする）ことができる。
本発明によれば、本明細書に記載される方法及び組成物においては、様々な種のＣａｓ９タンパク質の、それに由来する、又はそれをベースとするＣａｓ９分子を使用することができる。例えば、本明細書に記載されるシステム、方法及び組成物においては、例えば、化膿レンサ球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、Ｓ．サーモフィルス（Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）及び／又は髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）Ｃａｓ９分子の、それに由来する、又はそれをベースとするＣａｓ９分子を使用することができる。更なるＣａｓ９種としては、アシドボラクス・アベナエ（Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ ａｖｅｎａｅ）、アクチノバチルス・プルロニューモニエ（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、アクチノバチルス・サクシノゲネス（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｃｃｉｎｏｇｅｎｅｓ）、アクチノバチルス・スイス（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｉｓ）、アクチノミセス属種（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）、アリサイクリフィルス・デニトリフィカンス（ｃｙｃｌｉｐｈｉｌｕｓ ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ）、アミノモナス・パウシボランス（Ａｍｉｎｏｍｏｎａｓ ｐａｕｃｉｖｏｒａｎｓ）、セレウス菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）、バチルス・スミシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｍｉｔｈｉｉ）、バチルス・チューリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）、バクテロイデス属種（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）、ブラストピレルラ・マリナ（Ｂｌａｓｔｏｐｉｒｅｌｌｕｌａ ｍａｒｉｎａ）、ブラディリゾビウム属種（Ｂｒａｄｙｒｈｉｚ’ｏｂｉｕｍ ｓｐ．）、ブレビバチルス・ラテロスポラス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｔｅｍｓｐｏｒｕｓ）、カンピロバクター・コリ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｃｏｌｉ）、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）、カンピロバクター・ラリ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｌａｄ）、カンディダトゥス・プニセイスピリルム（Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ Ｐｕｎｉｃｅｉｓｐｉｒｉｌｌｕｍ）、クロストリジウム・セルロリチカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕ ｃｅｌｌｕｌｏｌｙｔｉｃｕｍ）、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、コリネバクテリウム・アクコレンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｃｏｌｅｎｓ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ）、コリネバクテリウム・マツルショッティイ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍａｔｒｕｃｈｏｔｉｉ）、ディノロセオバクター・シバエ（Ｄｉｎｏｒｏｓｅｏｂａｃｔｅｒ ｓｌｉｉｂａｅ）、ユーバクテリウム・ドリクム（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｏｌｉｃｈｕｍ）、ガンマプロテオバクテリア、グルコンアセトバクター・ジアゾトロフィクス（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｌｅｒ ｄｉａｚｏｔｒｏｐｈｉｃｕｓ）、パラインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、ヘモフィルス・スプトルム（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｓｐｕｔｏｒｕｍ）、ヘリコバクター・カナデンシス（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｃａｎａｄｅｎｓｉｓ）、ヘリコバクター・シネディ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｃｉｎａｅｄｉ）、ヘリコバクター・ムステラエ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｍｕｓｔｅｌａｅ）、イリオバクター・ポリトロパス（Ｉｌｙｏｂａｃｌｅｒ ｐｏｌｙｔｒｏｐｕｓ）、キンゲラ・キンゲ（Ｋｉｎｇｅｌｌａ ｋｉｎｇａｅ）、ラクトバチルス・クリスパタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ）、リステリア・イバノビイ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｉｖａｎｏｖｉｉ）、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、リステリア科（Ｌｉｓｔｅｒｉａｃｅａｅ）細菌、メチロシスティス属種（Ｍｅｔｈｙｌｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ．）、メチロサイナス・トリコスポリウム（Ｍｅｔｈｙｌｏｓｉｎｕｓ ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｉｕｍ）、モビルンカス・ムリエリス（Ｍｏｂｉｌｕｎｃｕｓ ｍｕｌｉｅｒｉｓ）、ナイセリア・バシリフォルミス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｂａｃｉｌｌｉｆｏｒｍｉｓ）、ナイセリア・シネレア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｃｉｎｅｒｅａ）、ナイセリア・フラベセンス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ）、ナイセリア・ラクタミカ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｌａｃｔａｍｉｃａ）、ナイセリア属種（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｓｐ．）、ナイセリア・ワズワーシイ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｗａｄｓｗｏｒｔｈｉｉ）、ニトロソモナス属種（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ ｓｐ．）、パルビバクラム・ラバメンチボランス（Ｐａｒｖｉｂａｃｕｌｕｍ ｌａｖａｍｅｎｔｉｖｏｒａｎｓ）、パスツレラ・ムルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、ファスコラルクトバクテリウム・スクシナツテンス（Ｐｈａｓｃｏｌａｒｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｕｃｃｉｎａｔｕｔｅｎｓ）、ラルストニア・シジジイ（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｙｚｙｇｉｉ）、ロドシュードモナス・パルストリス（Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐａｌｕｓｔｒｉｓ）、ロドブラム属種（Ｒｈｏｄｏｖｕｌｕｍ ｓｐ．）、シモンシエラ・ムエレリ（Ｓｉｍｏｎｓｉｅｌｌａ ｍｕｅｌｌｅｒｉ）、スフィンゴモナス属種（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ ｓｐ．）、スポロラクトバチルス・ビネエ（Ｓｐｏｒｏｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｖｉｎｅａｅ）、スタフィロコッカス・ルグドゥネンシス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｌｕｇｄｕｎｅｎｓｉｓ）、ストレプトコッカス属種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）、サブドリグラヌルム属種（Ｓｕｂｄｏｌｉｇｒａｎｕｌｕｍ ｓｐ．）、ティストレラ・モビリス（Ｔｉｓｌｒｅｌｌａ ｍｏｂｉｌｉｓ）、トレポネーマ属種（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｓｐ．）、又はベルミネフォロバクター・エイセニエ（Ｖｅｒｍｉｎｅｐｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｅｉｓｅｎｉａｅ）が挙げられる。
一部の実施形態において、活性Ｃａｓ９分子が標的核酸と相互作用してそれを切断する能力は、ＰＡＭ配列依存的である。ＰＡＭ（プロトスペーサー隣接モチーフ）配列は、標的核酸にある配列である。これは典型的には短く、例えば２～７塩基対長である。ある実施形態において、標的核酸の切断はＰＡＭ配列の上流で起こる。異なる細菌種由来の活性Ｃａｓ９分子は異なる配列モチーフ（例えばＰＡＭ配列）を認識する。ある実施形態において、化膿レンサ球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）の活性Ｃａｓ９分子は配列モチーフＮＧＧを認識し、当該配列の上流１～１０、例えば３～５塩基対にある標的核酸配列の切断を仕向ける。例えば、Ｍａｌｉ ｅｌ ａｌ，ＳＣＩＥＮＣＥ ２０１３；３３９（６１２１）：８２３－８２６を参照のこと。ある実施形態において、Ｓ．サーモフィルス（Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）の活性Ｃａｓ９分子は配列モチーフＮＧＧＮＧ（配列番号４）及びＮＮＡＧＡＡＷ（配列番号５）（Ｗ＝Ａ又はＴ、及びＮは任意の核酸塩基である）を認識し、これらの配列の上流１～１０、例えば３～５塩基対にあるコア標的核酸配列の切断を仕向ける。例えば、Ｈｏｒｖａｔｈ ｅｔ ａｌ．，ＳＣＩＥＮＣＥ ２０１０；３２７（５９６２）：１６７－１７０、及びＤｅｖｅａｕ ｅｔ ａｌ，Ｊ ＢＡＣＴＥＲＩＯＬ ２００８；１９０（４）：１３９０－１４００を参照のこと。ある実施形態において、Ｓ．ミュータンス（Ｓ．ｍｕｔａｎｓ）の活性Ｃａｓ９分子は配列モチーフＮＧＧ又はＮＡＡＲ（Ｒ－Ａ又はＧ）を認識し、この配列の上流１～１０、例えば３～５塩基対にあるコア標的核酸配列の切断を仕向ける。例えば、Ｄｅｖｅａｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ ＢＡＣＴＥＲＩＯＬ ２００８；１９０（４）：１３９０－１４００を参照のこと。
ある実施形態において、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の活性Ｃａｓ９分子は配列モチーフＮＮＧＲＲ（配列番号６）（Ｒ＝Ａ又はＧ）を認識し、当該配列の上流１～１０、例えば３～５塩基対にある標的核酸配列の切断を仕向ける。例えば、Ｒａｎ Ｆ．ｅｔ ａｌ．，ＮＡＴＵＲＥ，ｖｏｌ．５２０，２０１５，ｐｐ．１８６－１９１を参照のこと。ある実施形態において、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の活性Ｃａｓ９分子は配列モチーフＮＮＮＮＧＡＴＴ（配列番号７）を認識し、当該配列の上流１～１０、例えば３～５塩基対にある標的核酸配列の切断を仕向ける。例えば、Ｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＥＡＲＬＹ ＥＤＩＴＩＯＮ ２０１３，１－６を参照のこと。Ｃａｓ９分子がＰＡＭ配列を認識する能力は、例えば、Ｊｉｎｅｋ ｅｔ ａｌ，ＳＣＩＥＮＣＥ ２０１２，３３７：８１６に記載される形質転換アッセイを用いて決定することができる。
例示的な天然に存在するＣａｓ９分子については、Ｃｈｙｌｉｎｓｋｉ ｅｔ ａｌ，ＲＮＡ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１３；１０：５，７２７－７３７に記載されている。かかるＣａｓ９分子には、クラスター１細菌ファミリー、クラスター２細菌ファミリー、クラスター３細菌ファミリー、クラスター４細菌ファミリー、クラスター５細菌ファミリー、クラスター６細菌ファミリー、クラスター７細菌ファミリー、クラスター８細菌ファミリー、クラスター９細菌ファミリー、クラスター１０細菌ファミリー、クラスター１１細菌ファミリー、クラスター１２細菌ファミリー、クラスター１３細菌ファミリー、クラスター１４細菌ファミリー、クラスター１５細菌ファミリー、クラスター１６細菌ファミリー、クラスター１７細菌ファミリー、クラスター１８細菌ファミリー、クラスター１９細菌ファミリー、クラスター２０細菌ファミリー、クラスター２１細菌ファミリー、クラスター２２細菌ファミリー、クラスター２３細菌ファミリー、クラスター２４細菌ファミリー、クラスター２５細菌ファミリー、クラスター２６細菌ファミリー、クラスター２７細菌ファミリー、クラスター２８細菌ファミリー、クラスター２９細菌ファミリー、クラスター３０細菌ファミリー、クラスター３１細菌ファミリー、クラスター３２細菌ファミリー、クラスター３３細菌ファミリー、クラスター３４細菌ファミリー、クラスター３５細菌ファミリー、クラスター３６細菌ファミリー、クラスター３７細菌ファミリー、クラスター３８細菌ファミリー、クラスター３９細菌ファミリー、クラスター４０細菌ファミリー、クラスター４１細菌ファミリー、クラスター４２細菌ファミリー、クラスター４３細菌ファミリー、クラスター４４細菌ファミリー、クラスター４５細菌ファミリー、クラスター４６細菌ファミリー、クラスター４７細菌ファミリー、クラスター４８細菌ファミリー、クラスター４９細菌ファミリー、クラスター５０細菌ファミリー、クラスター５１細菌ファミリー、クラスター５２細菌ファミリー、クラスター５３細菌ファミリー、クラスター５４細菌ファミリー、クラスター５５細菌ファミリー、クラスター５６細菌ファミリー、クラスター５７細菌ファミリー、クラスター５８細菌ファミリー、クラスター５９細菌ファミリー、クラスター６０細菌ファミリー、クラスター６１細菌ファミリー、クラスター６２細菌ファミリー、クラスター６３細菌ファミリー、クラスター６４細菌ファミリー、クラスター６５細菌ファミリー、クラスター６６細菌ファミリー、クラスター６７細菌ファミリー、クラスター６８細菌ファミリー、クラスター６９細菌ファミリー、クラスター７０細菌ファミリー、クラスター７１細菌ファミリー、クラスター７２細菌ファミリー、クラスター７３細菌ファミリー、クラスター７４細菌ファミリー、クラスター７５細菌ファミリー、クラスター７６細菌ファミリー、クラスター７７細菌ファミリー、又はクラスター７８細菌ファミリーのＣａｓ９分子が含まれる。
例示的な天然に存在するＣａｓ９分子には、クラスター１細菌ファミリーのＣａｓ９分子が含まれる。例としては、化膿レンサ球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（例えば、株ＳＦ３７０、ＭＧＡＳ １０２７０、ＭＧＡＳ １０７５０、ＭＧＡＳ２０９６、ＭＧＡＳ３１５、ＭＧＡＳ５００５、ＭＧＡＳ６１８０、ＭＧＡＳ９４２９、ＮＺ１３１及びＳＳＩ－１）、Ｓ．サーモフィルス（Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）（例えば、株ＬＭＤ－９）、Ｓ．シュードポルシヌス（Ｓ．ｐｓｅｕｄｏｐｏｒｃｉｎｕｓ）（例えば、株ＳＰＩＮ ２００２６）、Ｓ．ミュータンス（Ｓ．ｍｕｔａｎｓ）（例えば、株ＵＡ １５９、ＮＮ２０２５）、Ｓ．マカカエ（Ｓ．ｍａｃａｃａｅ）（例えば、株ＮＣＴＣ１ １５５８）、Ｓ．ガロリチカス（Ｓ．ｇａｌｌｏｌｙｌｉｃｕｓ）（例えば、株ＵＣＮ３４、ＡＴＣＣ ＢＡＡ－２０６９）、Ｓ．エクイナス（Ｓ．ｅｑｕｉｎｅｓ）（例えば、株ＡＴＣＣ ９８１２、ＭＧＣＳ １２４）、Ｓ．ディスガラクティアエ（Ｓ．ｄｙｓｄａｌａｃｔｉａｅ）（例えば、株ＧＧＳ １２４）、Ｓ．ボビス（Ｓ．ｂｏｖｉｓ）（例えば、株ＡＴＣＣ ７００３３８）、Ｓ．アンギノサス（Ｓ．ｃｍｇｉｎｏｓｕｓ）（例えば；株Ｆ０２１１）、Ｓ．アガラクチア（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａ＊）（例えば、株ＮＥＭ３１６、Ａ９０９）、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）（例えば、株Ｆ６８５４）、リステリア・イノキュア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｉｎｎｏｃｕａ）（Ｌ．イノキュア（Ｌ．ｉｎｎｏｃｕａ）、例えば、株Ｃｌｉｐ ｌ１２６２）、エンテロコッカス・イタリクス（ＥｔＵｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｉｔａｌｉｃｕｓ）（例えば、株ＤＳＭ １５９５２）、又はフェシウム菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）（例えば、株１，２３，４０８）のＣａｓ９分子が挙げられる。更なる例示的Ｃａｓ９分子は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）のＣａｓ９分子（Ｈｏｕ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ Ｅａｒｌｙ Ｅｄｉｔｉｏｎ ２０１３，１－６）及び黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｃａｓ９分子である。
ある実施形態において、Ｃａｓ９分子、例えば活性Ｃａｓ９分子は、本明細書に記載される任意のＣａｓ９分子配列又は天然に存在するＣａｓ９分子配列、例えば、本明細書に挙げられる種からの、又はＣｈｙｌｉｎｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，ＲＮＡ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１３，１０：５，Ι２Ι－Τ，１ Ｈｏｕ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ Ｅａｒｌｙ Ｅｄｉｔｉｏｎ ２０１３，１－６に記載されるＣａｓ９分子；と６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の相同性を有する；それと比較したとき１％、２％、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、又は４０％以下のアミノ酸残基において異なる；それと１、２、５、１０又は２０アミノ酸以上１００、８０、７０、６０、５０、４０又は３０アミノ酸以下だけ異なる；又はそれと同一である；アミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、Ｃａｓ９分子は、化膿レンサ球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９（ＵｎｉＰｒｏｔ Ｑ９９ＺＷ２）；と６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の相同性を有する；それと比較したとき１％、２％、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、又は４０％以下のアミノ酸残基において異なる；それと１、２、５、１０又は２０アミノ酸以上１００、８０、７０、６０、５０、４０又は３０アミノ酸以下だけ異なる；又はそれと同一であるアミノ酸配列を含む。実施形態において、Ｃａｓ９分子は、Ｓｌａｙｍａｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｘｐｒｅｓｓ，ａｖａｉｌａｂｌｅ ｏｎｌｉｎｅ Ｄｅｃｅｍｂｅｒ １，２０１５ ａｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＤＯＩ：１０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．ａａｄ５２２７；Ｋｌｅｉｎｓｔｉｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，５２９，２０１６，ｐｐ．４９０－４９５，ａｖａｉｌａｂｌｅ ｏｎｌｉｎｅ Ｊａｎｕａｒｙ ６，２０１６ ａｔ ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１６５２６；又は米国特許出願公開第２０１６／０１０２３２４号明細書（これらの内容は全体として本明細書に援用される）に記載される変異体など、化膿レンサ球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９変異体である。
一部の実施形態において、Ｃａｓ９分子、例えば化膿レンサ球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）のＣａｓ９は、追加的な活性を付与する１つ以上のアミノ酸配列を更に含み得る。一部の態様において、Ｃａｓ９分子は、１個以上の核局在化配列（ＮＬＳ）、例えば少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、又はそれ以上のＮＬＳを含み得る。典型的には、ＮＬＳは、タンパク質表面上に露出している１つ以上の短い正電荷リジン又はアルギニン配列からなるが、他のタイプのＮＬＳも公知である。ＮＬＳの非限定的な例としては、アミノ酸配列ＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号８）を有するＳＶ４０ウイルスラージＴ抗原のＮＬＳを含む又はそれに由来するＮＬＳ配列が挙げられる。他の好適なＮＬＳ配列は当該技術分野において公知である（例えば、Ｓｏｒｏｋｉｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｍｏｓｃｏｗ）（２００７）７２：１３，１４３９－１４５７；Ｌａｎｇｅ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．（２００７）２８２：８，５１０１－５）。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｃａｓ９分子は、それに加えて（又はそれに代えて）、タグ、例えばＨｉｓタグ、例えばＨｉｓ（６）タグ（配列番号２５）又はＨｉｓ（８）タグ（配列番号２６）を例えばＮ末端又はＣ末端に含み得る。
このように、例えば真核細胞における遺伝子編集のための、エンジニアリングされたＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集システムは、典型的には（１）ターゲティングドメイン（ゲノムＤＮＡ標的配列とのハイブリダイズ能を有する）と、Ｃａｓ、例えばＣａｓ９酵素への結合能を有する配列とを含むガイドＲＮＡ分子（ｇＲＮＡ）、及び（２）Ｃａｓ、例えばＣａｓ９タンパク質を含む。Ｃａｓタンパク質への結合能を有する配列は、ｔｒａｃｒドメイン又はｔｒａｃｒＲＮＡと称されるドメインを含み得る。ターゲティングドメイン及びＣａｓ、例えばＣａｓ９酵素への結合能を有する配列は、同じ分子上（シングルｇＲＮＡ、キメラｇＲＮＡ又はｓｇＲＮＡと称されることもある）又は異なる分子上（デュアルｇＲＮＡ又はｄｇＲＮＡと称されることもある）に配置され得る。異なる分子上に配置される場合には、各々が、分子の例えばハイブリダイゼーションによる会合を可能にするハイブリダイゼーションドメインを含む。
ｇＲＮＡ分子フォーマットは当該技術分野において公知である。例示的ｇＲＮＡ分子、例えば本明細書に開示されるとおりのｄｇＲＮＡ分子は、配列：
５’ｎｎｎｎｎｎｎｎｎｎｎｎｎｎｎｎｎｎｎｎＧＵＵＵＵＡＧＡＧＣＵＡＵＧＣＵＧＵＵＵＵＧ ３’（配列番号９）
［式中、「ｎ」は、例えば本明細書に記載されるとおりのターゲティングドメインの残基を指し、且つ１５～２５ヌクレオチドからなってもよく、例えば２０ヌクレオチドからなる］を有する第１の核酸；
及び例示的配列：
Figure 0007247102000479
［任意選択で１、２、３、４、５、６、又は７個（例えば４又は７個、例えば７個）の更なるＵヌクレオチドを３’末端に有する］（配列番号１０）を有する第２の核酸配列を含む、例えばそれからなる。
第２の核酸分子は、或いは上記の配列の断片からなってもよく、ここでかかる断片は第１の核酸とのハイブリダイズ能を有する。かかる第２の核酸分子の例は、
Figure 0007247102000480
［任意選択で１、２、３、４、５、６、又は７個（例えば４又は７個、例えば７個）の更なるＵヌクレオチドを３’末端に有する］（配列番号１１）である。
別の例示的ｇＲＮＡ分子、例えば本明細書に開示されるとおりのｓｇＲＮＡ分子は、配列：
Figure 0007247102000481
［式中、「ｎ」は、例えば本明細書に記載されるとおりのターゲティングドメインの残基を指し、且つ１５～２５ヌクレオチドからなってもよく、例えば２０ヌクレオチドからなり、任意選択で１、２、３、４、５、６、又は７個（例えば４又は７個、例えば４個）の更なるＵヌクレオチドを３’末端に有する］を有する第１の核酸を含む、例えばそれからなる。
当該技術分野において公知のＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集システムの更なる成分及び／又はエレメントについては、例えば、米国特許出願公開第２０１４／００６８７９７号明細書、国際公開第２０１５／０４８５７７号パンフレット、及びＣｏｎｇ（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３９：８１９－８２３（これらの内容は本明細書によって全体として参照により援用される）に記載されている。標的遺伝子を阻害するかかるシステムは、例えば、標的遺伝子の配列にハイブリダイズするターゲティングドメインを含むｇＲＮＡ分子が含まれるようにＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集システムをエンジニアリングすることにより作成し得る。実施形態において、ｇＲＮＡは、標的遺伝子の１５～２５ヌクレオチド、例えば２０ヌクレオチドと完全に相補的なターゲティングドメインを含む。実施形態において、標的遺伝子の１５～２５ヌクレオチド、例えば２０ヌクレオチドは、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集システムのＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼ、例えばＣａｓタンパク質によって認識されるプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）配列の直ちに５’側に配置されている（例えば、ここでシステムは化膿レンサ球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９タンパク質を含み、ＰＡＭ配列はＮＧＧ［式中、Ｎは、Ａ、Ｔ、Ｇ又はＣのいずれかであり得る］を含む）。
一部の実施形態において、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集システムのｇＲＮＡ分子及びＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼ、例えばＣａｓタンパク質は、複合体化してＲＮＰ（リボ核タンパク質）複合体を形成することができる。かかるＲＮＰ複合体が、本明細書に記載される方法において用いられてもよい。他の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集システムの１つ以上の成分をコードする核酸が、本明細書に記載される方法において用いられてもよい。
一部の実施形態において、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集システムと共に、標的細胞型で活性なプロモーターを伴う又は伴わない外来ＤＮＡ、例えば所望のトランス遺伝子をコードするＤＮＡを細胞に導入することができる。外来ＤＮＡの配列及びゲノムの標的配列によっては、このプロセスを用いることにより、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集システムが標的とする部位又はそれ近傍で外来ＤＮＡをゲノムに組み込むことができる。例えば、外来ＤＮＡには、トランス遺伝子に隣接して、遺伝子編集システムによって切断されるゲノム中の部位の（それぞれ）３’側及び５’側の遺伝子配列と相同な３’及び５’配列が含まれてもよい。かかる外来ＤＮＡ分子は「鋳型ＤＮＡ」と称することができる。
ある実施形態において、本発明のＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集システムは、Ｃａｓ９、例えば化膿レンサ球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９と、目的の遺伝子の配列にハイブリダイズするターゲティングドメインを含むｇＲＮＡとを含む。ある実施形態において、ｇＲＮＡ及びＣａｓ９は複合体化してＲＮＰ（リボ核タンパク質）を形成する。ある実施形態において、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集システムは、ｇＲＮＡをコードする核酸と、Ｃａｓタンパク質、例えばＣａｓ９、例えば化膿レンサ球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９をコードする核酸とを含む。ある実施形態において、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集システムは、ｇＲＮＡと、Ｃａｓタンパク質、例えばＣａｓ９、例えば化膿レンサ球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９をコードする核酸とを含む。
一部の実施形態では、Ｃａｓ９、ｓｇＲＮＡ発現の誘導性制御を利用することにより、オフターゲット効果の頻度を減らして、それにより安全性を高めつつ、効率を最適化することができる。例としては、限定はされないが、以下のとおり挙げられる転写スイッチ及び転写後スイッチが挙げられる；ドキシサイクリン誘導性転写、Ｌｏｅｗ ｅｔ ａｌ．（２０１０）ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：８１、Ｓｈｉｅｌｄ１誘導性タンパク質安定化、Ｂａｎａｓｚｙｎｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｃｅｌｌ １２６：９９５－１００４、タモキシフェン誘導型タンパク質活性化、Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１１：３１６－３１８、スプリットＣａｓ９のラパマイシン又はオプトジェネティクス誘導型活性化又は二量化、Ｚｅｔｓｃｈｅ（２０１５）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３３（２）：１３９－１４２、Ｎｉｈｏｎｇａｋｉ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３３（７）：７５５－７６０、Ｐｏｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｇｅｒｓｂａｃｈ（２０１５）Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１１：１９８－２００、及びＳＭＡＳｈタグ薬物誘導性分解、Ｃｈｕｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１１：７１３－７２０。
一般に、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ又はＣＲＩＳＰＲシステムとは、まとめて、Ｃａｓ遺伝子をコードする配列、ｔｒａｃｒ（トランス活性化型ＣＲＩＳＰＲ）配列（例えばｔｒａｃｒＲＮＡ又は活性部分的ｔｒａｃｒＲＮＡ）、ｔｒａｃｒメイト配列（内因性ＣＲＩＳＰＲシステムのコンテクストでは「ダイレクトリピート」及びｔｒａｃｒＲＮＡによってプロセシングされる部分的ダイレクトリピートを包含する）、ガイド配列（内因性ＣＲＩＳＰＲシステムのコンテクストでは「スペーサー」とも称される）、又は当該の用語が本明細書において使用されるとおりの１つ又は複数の「ＲＮＡ」（例えば、Ｃａｓ９をガイドする１つ又は複数のＲＮＡ、例えばＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ及びトランス活性化型（ｔｒａｃｒ）ＲＮＡ又はシングルガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）（キメラＲＮＡ））又はＣＲＩＳＰＲ遺伝子座からの他の配列及び転写物を含め、ＣＲＩＳＰＲ関連（「Ｃａｓ」）遺伝子の発現又はその活性を仕向けることに関与する転写物及び他のエレメントを指す。一般に、ＣＲＩＳＰＲシステムは、標的配列部位におけるＣＲＩＳＰＲ複合体の形成を促進するエレメント（内因性ＣＲＩＳＰＲシステムのコンテクストではプロトスペーサーとも称される）によって特徴付けられる。ＣＲＩＳＰＲ複合体の形成のコンテクストでは、「標的配列」は、ガイド配列がそれと相補性を有するように設計される配列を指し、ここでは標的配列とガイド配列との間のハイブリダイゼーションがＣＲＩＳＰＲ複合体の形成を促進する。標的配列は、ＤＮＡ又はＲＮＡポリヌクレオチドなど、任意のポリヌクレオチドを含み得る。一部の実施形態において、標的配列は細胞の核又は細胞質に位置する。一部の実施形態において、ＣＲＩＳＰＲ複合体では、ｔｒａｃｒ配列が１つ以上のヘアピンを有し、且つ３０ヌクレオチド長以上、４０ヌクレオチド長以上、又は５０ヌクレオチド長以上であり；ガイド配列が１０～３０ヌクレオチド長であり、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ酵素がＩＩ型Ｃａｓ９酵素であることが好ましいものであり得る。本発明の実施形態において、用語のガイド配列とガイドＲＮＡとは同義的に使用される。一般に、ガイド配列は、標的配列とハイブリダイズしてＣＲＩＳＰＲ複合体による標的配列への配列特異的結合を仕向けるのに十分な標的ポリヌクレオチド配列との相補性を有する任意のポリヌクレオチド配列である。一部の実施形態において、ガイド配列とその対応する標的配列との間の相補性の程度は、好適なアラインメントアルゴリズムを用いて最適にアラインメントしたとき、約５０％、６０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７．５％、９９％以上であるか、又はそれより高い。最適アラインメントは、配列のアラインメントに好適な任意のアルゴリズムを用いて決定されてもよく、その非限定的な例としては、スミス・ウォーターマンアルゴリズム、ニードルマン・ブンシュアルゴリズム、バローズ・ホイーラー変換に基づくアルゴリズム（例えばＢｕｒｒｏｗｓ Ｗｈｅｅｌｅｒ Ａｌｉｇｎｅｒ）、ＣｌｕｓｔａｌＷ、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ、ＢＬＡＴ、Ｎｏｖｏａｌｉｇｎ（Ｎｏｖｏｃｒａｆｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）；ＥＬＡＮＤ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、及びＳＯＡＰが挙げられる。一部の実施形態において、ガイド配列は、約５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、７５ヌクレオチド長以上であるか、又はそれより長い。一部の実施形態において、ガイド配列は、約７５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１２ヌクレオチド長以下より短い。好ましくはガイド配列は１０～３０ヌクレオチド長である。ガイド配列がＣＲＩＳＰＲ複合体による標的配列への配列特異的結合を仕向ける能力は、任意の好適なアッセイによって評価し得る。例えば、ＣＲＩＳＰＲ複合体を形成するのに十分なＣＲＩＳＰＲシステムの成分が、試験しようとするガイド配列を含め、ＣＲＩＳＰＲ配列の成分をコードするベクターのトランスフェクションによるなどして対応する標的配列を有する宿主細胞に提供され、続いてＳｕｒｖｅｙｏｒアッセイなど、標的配列内での優先的切断の評価が行われてもよい。同様に、標的ポリヌクレオチド配列の切断は、試験管内で、標的配列、試験しようとするガイド配列を含めたＣＲＩＳＰＲ複合体の成分、及び試験ガイド配列と異なる対照ガイド配列を提供し、且つ試験ガイド配列反応と対照ガイド配列反応との標的配列における結合又は切断速度を比較することにより判定し得る。他のアッセイも可能であり、当業者には想起されるであろう。ガイド配列は、いかなる標的配列を標的とするようにも選択し得る。一部の実施形態において、標的配列は、細胞のゲノム内にある配列である。例示的標的配列としては、標的ゲノムにおいてユニークなものが挙げられる。例えば、化膿レンサ球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９については、ゲノム中のユニーク標的配列は、ＭＭ Ｍ ＭＭＭＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＸＧＧ型（配列番号１３）［式中、ＮＮＮ ＮＮＮ ＮＮ ＸＧＧ（ＮはＡ、Ｇ、Ｔ、又はＣである；及びＸは何であってもよい）はゲノム中に１回だけ出現する］のＣａｓ９標的部位を含み得る。ゲノム中のユニーク標的配列は、ＭＭＭ ＭＭＭＭＭＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＸＧＧ型（配列番号１４）［式中、Ｎ Ｎ Ｎ Ｎ ＸＧＧ（ＮはＡ、Ｇ、Ｔ、又はＣである；及びＸは何であってもよい）はゲノム中に１回だけ出現する］の化膿レンサ球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９標的部位を含み得る。Ｓ．サーモフィルス（Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）ＣＲＩＳＰＲｌ Ｃａｓ９については、ゲノム中のユニーク標的配列は、ＭＭＭＭＭＭＭＭＮＮ Ｎ Ｎ ＮＮ ＸＸＡＧＡＡＷ型（配列番号１５）［式中、ＮＮＮ ＮＮ Ｎ ＸＸＡＧＡＡＷ（配列番号２９）（ＮはＡ、Ｇ、Ｔ、又はＣである；Ｘは何であってもよい；及びＷはＡ又はＴである）はゲノム中に１回だけ出現する］のＣａｓ９標的部位を含み得る。ゲノム中のユニーク標的配列は、ＭＭＭＭＭＭ ＭＮ Ｎ ＮＮＮ ＮＮＸＸＡＧＡＡＷ型（配列番号１６）［式中、ＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＸＸＡＧＡＡＷ（配列番号３０）（ＮはＡ、Ｇ、Ｔ、又はＣである；Ｘは何であってもよい；及びＷはＡ又はＴである）はゲノム中に１回だけ出現する］のＳ．サーモフィルス（Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）ＣＲＩＳＰＲｌ Ｃａｓ９標的部位を含み得る。化膿レンサ球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９については、ゲノム中のユニーク標的配列は、ＭＭＭＭＭＭＭＭＮＮＮＮ ＮＮＮＮＮＮＸＧＧＸＧ型（配列番号１７）［式中、ＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＸＧＧＸＧ（ＮはＡ、Ｇ、Ｔ、又はＣである；及びＸは何であってもよい）はゲノム中に１回だけ出現する］のＣａｓ９標的部位を含み得る。ゲノム中のユニーク標的配列は、ＭＭＭＭＭＭＭＭＭＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＸＧＧＸＧ型（配列番号３１）［式中、ＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＸＧＧＸＧ（配列番号１８）（ＮはＡ、Ｇ、Ｔ、又はＣである；及びＸは何であってもよい）はゲノム中に１回だけ出現する］の化膿レンサ球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９標的部位を含み得る。これらの配列の各々において、Ｎは任意の核酸塩基であり、「Ｍ」はＡ、Ｇ、Ｔ、又はＣであってもよく、配列をユニークと同定するにおいて考慮する必要はない。一部の実施形態において、ガイド配列は、そのガイド配列内の二次構造度が低下するように選択される。一部の実施形態において、ガイド配列の約７５％、５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、１％以下の、又はそれより少ないヌクレオチドが、最適に折り畳まれたとき自己相補的塩基対合に関与する。最適な折り畳みは、任意の好適なポリヌクレオチド折り畳みアルゴリズムによって決定し得る。一部のプログラムは、最小ギブズ自由エネルギーを計算することに基づく。一つのかかるアルゴリズムの例は、Ｚｕｋｅｒ ａｎｄ Ｓｔｉｅｇｌｅｒ（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．９（１９８１），１３３－１４８）によって記載されるとおりのｍＦｏｌｄである。別の例示的折り畳みアルゴリズムは、ウィーン大学（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｖｉｅｎｎａ）の理論化学研究所（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）で開発された、セントロイド構造予測アルゴリズムを用いるオンラインウェブサーバーＲＮＡｆｏｌｄである（例えば、Ａ．Ｒ．Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｃｅｌｌ １０６（１）：２３－２４；及びＰＡ Ｃａｒｒ ａｎｄ ＧＭ Ｃｈｕｒｃｈ，２００９，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２７（１２）：１ １５１－６２を参照のこと）。
ｇＲＮＡ分子の設計方法
本明細書に記載されるｇＲＮＡに用いるターゲティングドメインの選択、設計、及び検証方法が提供される。ｇＲＮＡへの組み込み用の例示的ターゲティングドメインもまた本明細書に提供される。
標的配列の選択及び検証方法並びにオフターゲット分析については記載されている（例えば、Ｍａｌｉ ２０１３；Ｈｓｕ ２０１３；Ｆｕ ２０１４；Ｈｅｉｇｗｅｒ ２０１４；Ｂａｅ ２０１４；及びＸｉａｏ ２０１４を参照のこと）。例えば、標的配列の選択は、Ｃａｓ９分子のＰＡＭ配列（例えば、関連性のあるＰＡＭ、例えば、化膿レンサ球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）についてのＮＧＧ ＰＡＭ、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）についてのＮＮＮＮＧＡＴＴ（配列番号１９）、又はＮＮＮＮＧＣＴＴ ＰＡＭ（配列番号２０）、及び黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）についてのＮＮＧＲＲＴ（配列番号２１）、又はＮＮＧＲＲＶ ＰＡＭ（配列番号２２））を同定し、当該のＣａｓ９分子を使用するＣＲＩＳＰＲシステムの標的配列としての隣接配列を同定することにより行い得る。ソフトウェアツールを用いることにより、ユーザーの標的配列に対応する潜在的ターゲティングドメインの選択を更に精緻化し、例えばゲノムにわたる全体的なオフターゲット活性を最小限に抑えることができる。候補ターゲティングドメイン及びそれらのターゲティングドメインを含むｇＲＮＡは、当該技術分野において公知の方法を用いることにより、及び／又は本明細書に示されるとおり、機能的に判定することができる。
非限定的な例として、化膿レンサ球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｉｔｉｄｉｓ）及び黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｃａｓ９と共に使用されるｇＲＮＡに用いられるターゲティングドメインは、ＤＮＡ配列検索アルゴリズムを用いて同定される。各Ｃａｓ９に１７ｍｅｒ、１８ｍｅｒ、１９ｍｅｒ、２０ｍｅｒ、２１ｍｅｒ、２２ｍｅｒ、２３ｍｅｒ、及び／又は２４ｍｅｒターゲティングドメインが設計される。化膿レンサ球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９に関しては、好ましくは、ターゲティングドメインは２０ｍｅｒである。ｇＲＮＡ設計は、公的ツールｃａｓ－ｏｆｆｉｎｄｅｒ（Ｂａｅ ２０１４）をベースとするカスタムｇＲＮＡ設計ソフトウェアを用いて行われる。このソフトウェアは、ガイドのゲノムワイドなオフターゲット傾向を計算した後にガイドをスコア化する。
候補分子の機能分析
候補Ｃａｓ９分子、候補ｇＲＮＡ分子、候補Ｃａｓ９分子／ｇＲＮＡ分子複合体は、当該技術分野において公知の方法によって、又は本明細書に記載されるとおり判定することができる。例えば、Ｃａｓ９分子のエンドヌクレアーゼ活性の例示的判定方法について以前記載されている（Ｊｉｎｅｋ ２０１２）。本明細書に記載される各技法は、単独で用いても、又は候補分子を判定する１つ以上の技法と組み合わせて用いてもよい。本明細書に開示される技法は、限定なしに、Ｃａｓ９分子／ｇＲＮＡ分子複合体の安定性を決定する方法、安定なＣａｓ９分子／ｇＲＮＡ分子複合体を促進する条件を決定する方法、安定なＣａｓ９分子／ｇＲＮＡ分子複合体に関してスクリーニングする方法、安定なＣａｓ９分子／ｇＲＮＡ分子複合体の形成に最適なｇＲＮＡを同定する方法、及び対象への投与用のＣａｓ９／ｇＲＮＡ複合体を選択する方法を含め、種々の方法に用いることができる。
結合及び切断アッセイ：Ｃａｓ９分子のエンドヌクレアーゼ活性を試験する Ｃａｓ９分子／ｇＲＮＡ分子複合体が標的核酸に結合してそれを切断する能力は、プラスミド切断アッセイで判定することができる。このアッセイでは、合成の、又はインビトロ転写したｇＲＮＡ分子をプレアニールした後、９５℃への加熱及び室温への徐冷によって反応させる。天然の又は制限消化により線状化したプラスミドＤＮＡ（３００ｎｇ（約８ｎＭ））を精製Ｃａｓ９タンパク質分子（５０～５００ｎＭ）及びｇＲＮＡ（５０～５００ｎＭ、１：１）と共に１０ｍＭ ＭｇＣｌ２含有又は不含のＣａｓ９プラスミド切断緩衝液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．５、１５０ｍＭ ＫＣ１、０．５ｍＭ ＤＴＴ、０．１ｍＭ ＥＤＴＡ）中において３７℃で６０分間インキュベートする。５×ＤＮＡローディング緩衝液（３０％グリセロール、１．２％ＳＤＳ、２５０ｍＭ ＥＤＴＡ）で反応を停止させて、０．８又は１％アガロースゲル電気泳動によって分解し、臭化エチジウム染色によって視覚化する。得られた切断産物により、そのＣａｓ９分子が両方のＤＮＡ鎖を切断するか、それとも２本の鎖のうちの一方のみを切断するかが示される。例えば、線状ＤＮＡ産物は両方のＤＮＡ鎖の切断を示す。ニック入りの開環状産物は、２本の鎖のうちの一方のみが切断されていることを示す。
或いは、Ｃａｓ９分子／ｇＲＮＡ分子複合体が標的核酸に結合してそれを切断する能力は、オリゴヌクレオチドＤＮＡ切断アッセイで判定することができる。このアッセイでは、５０マイクロリットル反応において、ＤＮＡオリゴヌクレオチド（１０ｐｍｏｌ）を５単位のＴ４ポリヌクレオチドキナーゼ及び約３～６ｐｍｏｌ（約２０～４０ｍＣｉ）［γ－３２Ｐ］－ＡＴＰと共に１×Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼ反応緩衝液中３７℃で３０分間インキュベートすることにより放射性標識する。熱失活後（６５℃で２０分）、反応をカラム精製して、取り込まれなかった標識を除去する。標識されたオリゴヌクレオチドを等モル量の非標識相補オリゴヌクレオチドと共に９５℃で３分間アニールし、続いて室温に徐冷することにより、二重鎖局在薬剤（１００ｎＭ）を作成する。切断アッセイ用に、ｇＲＮＡ分子を９５℃に３０秒間加熱し、続いて室温に徐冷することによりアニールする。Ｃａｓ９（５００ｎＭ終濃度）をアニールしたｇＲＮＡ分子（５００ｎＭ）と共に切断アッセイ緩衝液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．５、１００ｍＭ ＫＣｌ、５ｍＭ ＭｇＣ１２、１ｍＭ ＤＴＴ、５％グリセロール）中９マイクロリットルの総容積でプレインキュベートする。１マイクロリットルの標的ＤＮＡ（１０ｎＭ）を添加することにより反応を開始させ、３７℃で１時間インキュベートする。２０マイクロリットルのローディング色素（ホルムアミド中５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０２５％ＳＤＳ、５％グリセロール）を添加することにより反応をクエンチし、９５℃で５分間加熱する。７Ｍ尿素を含有する１２％変性ポリアクリルアミドゲル上で切断産物を分解し、蛍光体イメージングによって視覚化する。得られた切断産物により、相補鎖、非相補鎖、又は両方が切断されているかどうかが示される。
これらのアッセイの一方又は両方を用いて候補ｇＲＮＡ分子又は候補Ｃａｓ９分子の適合性を判定することができる。
インデル検出及び同定。標的化されるゲノム修飾はまた、サンガーシーケンシング又はディープシーケンシングのいずれかによっても検出することができる。前者については、修飾領域からのゲノムＤＮＡをｇＲＮＡの標的配列に隣接するいずれかのプライマーで増幅することができる。アンプリコンを形質転換用のｐＵＣ１９などのプラスミドにサブクローニングすることができ、個々のコロニーをシーケンシングすることによりクローン遺伝子型が明らかになるはずである。
或いは、ディープシーケンシングは多数の試料又は標的部位のサンプリングに好適である。ＮＧＳプライマーは、短いアンプリコン用に、典型的には１００～２００ｂｐサイズ範囲で設計されている。インデルの検出には、長いインデルの検出が可能となるように、Ｃａｓ９標的部位から少なくとも５０ｂｐに位置するプライマーを設計することが重要である。アンプリコンは、市販のインストルメント、例えばＩｌｌｕｍｉｎａシステムを用いて評価してもよい。ＮＧＳ最適化の詳細な説明及びトラブルシューティングについては、Ｉｌｌｕｍｉｎａユーザーマニュアルを参照することができる。
ＴＡＬＥＮ遺伝子編集システム
ＴＡＬＥＮは、ＴＡＬエフェクターＤＮＡ結合ドメインをＤＮＡ切断ドメインに融合することによって人工的に作製される。転写活性化因子様エフェクト（ＴＡＬＥ）は、任意の所望のＤＮＡ配列、例えば標的遺伝子に結合するようにエンジニアリングすることができる。エンジニアリングされたＴＡＬＥをＤＮＡ切断ドメインと組み合わせることにより、任意の所望のＤＮＡ配列に特異的な制限酵素を作製することができる。次にそれを細胞に導入することができ、それがゲノム編集に用いられ得る。Ｂｏｃｈ（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１３５－６；及びＢｏｃｈ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２６：１５０９－１２；Ｍｏｓｃｏｕ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２６：３５０１。
ＴＡＬＥは、キサントモナス属（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）細菌によって分泌されるタンパク質である。ＤＮＡ結合ドメインは、高度に保存された繰り返される３３～３４アミノ酸配列を含有し、但し１２番目及び１３番目のアミノ酸は例外である。これらの２つの位置は高度に可変的であり、特異的ヌクレオチド認識と強い相関を示す。従ってこれらを所望のＤＮＡ配列に結合するようにエンジニアリングすることができる。
ＴＡＬＥＮを作製するには、ＴＡＬＥタンパク質と、例えば野生型又は突然変異ＦｏｋＩエンドヌクレアーゼであるヌクレアーゼ（Ｎ）を融合させる。ＴＡＬＥＮにおけるその使用のためＦｏｋＩに対する幾つかの突然変異が作られており；これらは、例えば切断特異性又は活性を改善する。Ｃｅｒｍａｋ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３９：ｅ８２；Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４３－８；Ｈｏｃｋｅｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：７３１－７３４；Ｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３３：３０７；Ｄｏｙｏｎ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ ８：７４－７９；Ｓｚｃｚｅｐｅｋ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２５：７８６－７９３；及びＧｕｏ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００：９６。
ＦｏｋＩドメインは二量体として機能し、標的ゲノム中の部位に対するユニークなＤＮＡ結合ドメインを有する２つの構築物が適切な配向及び間隔である必要がある。ＴＡＬＥ ＤＮＡ結合ドメインとＦｏｋＩ切断ドメインとの間にあるアミノ酸残基の数及びこれらの２つの個々のＴＡＬＥＮ結合部位間にある塩基の数の両方が、高度な活性を実現するのに重要なパラメータであるものと思われる。Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４３－８。
ＴＡＬＥＮ（又は一対のＴＡＬＥＮ）を細胞内部で使用して二本鎖切断（ＤＳＢ）を作製することができる。修復機構による非相同末端結合を介した切断の修復が不適切な場合、切断部位に突然変異を導入することができる。例えば、不適切な修復によってフレームシフト突然変異が導入され得る。或いは、細胞にＴＡＬＥＮと共に外来ＤＮＡ、例えばトランス遺伝子をコードするＤＮＡを導入することができ、外来ＤＮＡの配列及び染色体配列によっては、このプロセスを用いることにより、ＴＡＬＥＮが標的とする部位又はその近傍にトランス遺伝子を組み込むことができる。標的遺伝子に特異的なＴＡＬＥＮは、モジュラー成分を使用する様々なスキームを含め、当該技術分野において公知の任意の方法を用いて構築することができる。Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４９－５３；Ｇｅｉｂｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１１）ＰＬｏＳ ＯＮＥ ６：ｅ１９５０９；米国特許第８，４２０，７８２号明細書；米国特許第８，４７０，９７３号明細書（これらの内容は本明細書によって全体として参照により援用される）。
ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）遺伝子編集システム
「ＺＦＮ」又は「ジンクフィンガーヌクレアーゼ」は、所望の核酸配列の１つ以上の核酸を修飾する、例えば欠失させるために使用し得る人工ヌクレアーゼであるジンクフィンガーヌクレアーゼを指す。
ＴＡＬＥＮと同様に、ＺＦＮは、ＤＮＡ結合ドメインと融合したＦｏｋＩヌクレアーゼドメイン（又はその誘導体）を含む。ＺＦＮの場合、ＤＮＡ結合ドメインは１つ以上のジンクフィンガーを含む。Ｃａｒｒｏｌｌ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ １８８：７７３－７８２；及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：１１５６－１１６０。
ジンクフィンガーは、１つ以上の亜鉛イオンによって安定化する低分子タンパク質構造モチーフである。ジンクフィンガーは例えばＣｙｓ２Ｈｉｓ２を含んでもよく、約３ｂｐ配列を認識することができる。公知の特異性の様々なジンクフィンガーを組み合わせて、約６、９、１２、１５又は１８ｂｐ配列を認識するマルチフィンガーポリペプチドを作製することができる。特異的配列を認識するジンクフィンガー（及びその組み合わせ）の作成には、ファージディスプレイ、酵母１ハイブリッドシステム、細菌１ハイブリッド及び２ハイブリッドシステム、及び哺乳類細胞を含め、様々な選択及びモジュールアセンブリ技法が利用可能である。
ＴＡＬＥＮと同様に、ＺＦＮはＤＮＡを切断するために二量化しなければならない。従って、非パリンドロームＤＮＡ部位を標的にするには一対のＺＦＮが必要である。これらの２つの個々のＺＦＮは、ＤＮＡの逆鎖に、それらのヌクレアーゼが適切な間隔を置いた状態で結合しなければならない。Ｂｉｔｉｎａｉｔｅ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：１０５７０－５。
またＴＡＬＥＮと同様に、ＺＦＮもＤＮＡに二本鎖切断を作り出すことができ、これが不適切に修復された場合にフレームシフト突然変異を作り出し、細胞内の標的遺伝子の発現及び量の減少につながり得る。ＺＦＮはまた相同組換えと共に用いられてもよく、それにより標的遺伝子若しくは遺伝子座を突然変異させ、又は標的配列若しくはその近傍にある部位に所望のトランス遺伝子をコードする核酸を導入することができる。
標的遺伝子の配列に特異的なＺＦＮは、当該技術分野において公知の任意の方法を用いて構築することができる。例えば、Ｐｒｏｖａｓｉ（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．１８：８０７－８１５；Ｔｏｒｉｋａｉ（２０１３）Ｂｌｏｏｄ １２２：１３４１－１３４９；Ｃａｔｈｏｍｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１６：１２００－７；及びＧｕｏ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４００：９６；米国特許出願公開第２０１１／０１５８９５７号明細書；及び米国特許出願公開第２０１２／００６０２３０号明細書（これらの内容は本明細書によって全体として参照により援用される）を参照のこと。実施形態において、ＺＦＮ遺伝子編集システムはまた、ＺＦＮ遺伝子編集システムの１つ以上の成分をコードする核酸も含み得る。
メガヌクレアーゼ遺伝子編集システム
「メガヌクレアーゼ」は、標的遺伝子の編集に使用することのできる人工ヌクレアーゼであるメガヌクレアーゼを指す。
メガヌクレアーゼは、１５～４０塩基対の切断部位を認識する一群のヌクレアーゼに由来する。メガヌクレアーゼは、ヌクレアーゼ活性及び／又はＤＮＡ認識に影響を与えるその構造モチーフに基づきファミリーにまとめられる。ＬＡＧＬＩＤＡＤＧ（配列番号２３）ファミリーのメンバーは、保存されたＬＡＧＬＩＤＡＤＧモチーフ（配列番号２３）の１コピー又は２コピーのいずれかを有することによって特徴付けられる（Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００１），Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２９（１８）：３７５７－３７７４を参照のこと）。ＬＡＧＬＩＤＡＤＧモチーフ（配列番号２３）の単一のコピーを有するＬＡＧＬＩＤＡＤＧ（配列番号２３）メガヌクレアーゼはホモ二量体を形成し、一方、ＬＡＧＬＩＤＡＤＧモチーフ（配列番号２３）の２コピーを有するメンバーは単量体として見られる。ＧＩＹ－ＹＩＧファミリーメンバーはＧＩＹ－ＹＩＧモジュールを有し、これは７０～１００残基長であり、活性に必要な２つを含めた４つの不変残基を有する保存配列モチーフを４つ又は５つ含む（Ｖａｎ Ｒｏｅｙ ｅｔ ａｌ．（２００２），Ｎａｔｕｒｅ Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．９：８０６－８１１を参照のこと）。Ｈｉｓ－Ｃｙｓボックスメガヌクレアーゼは、数百アミノ酸残基を包含する領域にわたる一連の高度に保存されたヒスチジン及びシステインによって特徴付けられる（Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００１），Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２９（１８）：３７５７－３７７４を参照のこと）。ＮＨＮファミリー、このメンバーは、アスパラギン残基によって囲まれた２対の保存されたヒスチジンを含有するモチーフによって定義付けられる（Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００１），Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２９（１８）：３７５７－３７７４を参照のこと）。
改変されたＤＮＡ結合特異性を有するメガヌクレアーゼを例えば所定の核酸配列に結合するようにエンジニアリングする戦略は、当該技術分野において公知である。例えば、Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００２），Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．，１０：８９５－９０５；Ｅｐｉｎａｔ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ３１：２９５２－６２；Ｓｉｌｖａ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３６１：７４４－５４；Ｓｅｌｉｇｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ３０：３８７０－９；Ｓｕｓｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３４２：３１－４１；Ｒｏｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ；Ｄｏｙｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｊ．Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ １２８：２４７７－８４；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ ２２：２４９－５６；Ａｒｎｏｕｌｄ Ｓ（２００６）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．３５５：４４３－５８；Ｓｍｉｔｈ（２００６）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３６３（２）：２８３－９４。
メガヌクレアーゼはＤＮＡに二本鎖切断を作り出すことができ、これが例えば非相同末端結合によって不適切に修復された場合にフレームシフト突然変異を作り出し、細胞における標的遺伝子の発現の低下につながり得る。或いは、細胞にメガヌクレアーゼと共に外来ＤＮＡを導入することができる；外来ＤＮＡの配列及び染色体配列によっては、例えば、Ｓｉｌｖａ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １１：１１－２７に記載されるとおり、このプロセスを用いることにより標的遺伝子を修飾する、例えば標的遺伝子の欠陥を修正して、ひいては修復された標的遺伝子の発現を生じさせるか、又は例えばかかる欠陥を野生型遺伝子に導入して、ひいては標的遺伝子の発現を低下させることができる。
拡大細胞集団の眼投与
本発明の一態様において、上記に記載したとおりの本発明に係る方法によって入手可能な拡大細胞集団は、眼に送達される。送達は無菌条件下で行われる。
３６０°輪部周囲切開術後の輪部幹細胞療法のための使用に関する一実施形態では、線維血管性角膜パンヌスが表面から慎重に除去され得る。
本発明の一態様において、細胞集団は、眼送達に好適な局在薬剤（以下に詳述するとおり）と組み合わされて眼に送達される。好ましい実施形態において、細胞と眼送達に好適な局在薬剤とは組み合わされ、例えば治療用コンタクトレンズ又は羊膜などの担体によって眼に投与される。代替的実施形態において、細胞とＧｅｌＭＡのような光硬化性生体マトリックスなど、眼における使用に好適な局在薬剤とは、バイオプリンティングによって眼に送達される。
一実施形態において、本発明は、対象の角膜への角膜内皮細胞を含む細胞集団の移植方法を提供し、この方法は、本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤を含む細胞増殖培地による前記集団の培養によって角膜内皮細胞を含む細胞集団を拡大すること、拡大細胞集団をリンスしてＬＡＴＳ阻害剤を実質的に除去すること、及び前記細胞を前記対象の角膜に投与することを含む。好ましくは前記細胞は前記投与前に生体マトリックスと組み合わされる。具体的な実施形態において、前記細胞は前記投与前にＧｅｌＭＡである生体マトリックスと組み合わされる。より具体的な実施形態において、前記角膜内皮細胞は、眼表面にバイオプリントされる生体マトリックスと組み合わされる。特に好ましくは前記角膜内皮細胞は、ＧｅｌＭＡである且つ光誘起反応によるＧｅｌＭＡの重合によって眼表面にバイオプリントされる生体マトリックスと組み合わされる。
別の実施形態において、本発明は、対象の眼への細胞集団の移植方法を提供し、この方法は、細胞を生体マトリックスと組み合わせて細胞／生体マトリックス混合物を形成すること、この混合物を対象の眼に注入すること又はこの混合物を対象の眼の表面に適用すること、及び紫外線Ａ又は白色光光源などの光源を使用して角膜上などに細胞を誘導及び固定することにより細胞を眼に又は眼上にバイオプリントすることを含む。特定の実施形態において、光源は、少なくとも３５０ｎｍである波長の光を発生する。特定の実施形態において、光源は３５０ｎｍ～４２０ｎｍ帯の光を発生する。例えば、３６５ｎｍ又は４０５ｎｍの波長、又は３５０ｎｍを上回る任意の他の波長を有する光を発生させるためにＬＥＤ光源が使用されてもよく、又は３６５ｎｍの波長を有する光を発生させるために帯域フィルタ付き水銀ランプが使用されてもよい。別の実施形態において、光源は、例えば４００ｎｍ～７００ｎｍ帯の波長を有する可視白色光を発生する。特定の実施形態において、細胞は、角膜細胞（例えば角膜内皮細胞）、水晶体細胞、線維柱帯網細胞、又は前房に見られる細胞など、眼細胞である。詳細な実施形態において、細胞は角膜内皮細胞である。かかる方法の特定の実施形態には、以下が含まれる：
実施形態ｘ１．対象の眼への単離細胞集団の移植方法であって、細胞を生体マトリックスと組み合わせて細胞／生体マトリックス混合物を形成すること、この混合物を対象の眼内に（例えば前房内に）注入すること、及び光源を使用して細胞を眼に誘導及び固定することにより細胞を眼にバイオプリントすることを含む方法。
実施形態ｘ２．単離細胞が、ＧｅｌＭＡである且つ光誘起反応によるＧｅｌＭＡの重合によって角膜上にバイオプリントされる生体マトリックスと組み合わされる、実施形態ｘ１の方法。
実施形態ｘ３．光源が、３５０ｎｍ～７００ｎｍ帯の波長を有する光を発生する、実施形態ｘ１又は実施形態ｘ２の方法。
実施形態ｘ４．波長が３５０ｎｍ～４２０ｎｍである、実施形態ｘ１～ｘ３のいずれか１つの方法。
実施形態ｘ５．波長が３６５ｎｍである、実施形態ｘ１～ｘ４のいずれか１つの方法。
実施形態ｘ６．単離細胞が角膜内皮細胞である、実施形態ｘ１～ｘ５のいずれか１つの方法。
実施形態ｘ７．対象の眼への単離細胞集団の移植方法であって、細胞を生体マトリックスと組み合わせて細胞／生体マトリックス混合物を形成すること、この混合物を対象の眼に適用すること、及び光源を使用して細胞を眼上に誘導及び固定することにより細胞を眼上にバイオプリントすることを含む方法。
実施形態ｘ８．単離細胞が、ＧｅｌＭＡである且つ光誘起反応によるＧｅｌＭＡの重合によって眼表面にバイオプリントされる生体マトリックスと組み合わされる、実施形態ｘ７の方法。
実施形態ｘ９．光源が、３５０ｎｍ～７００ｎｍ帯の波長を有する光を発生する、実施形態ｘ７又は実施形態ｘ８の方法。
実施形態ｘ１０．波長が３５０ｎｍ～４２０ｎｍである、実施形態ｘ７～ｘ９のいずれか１つの方法。
実施形態ｘ１１．波長が３６５ｎｍである、実施形態ｘ７～ｘ１０のいずれか１つの方法。
実施形態ｘ１２．単離細胞が輪部幹細胞である、実施形態ｘ７～ｘ１１のいずれか１つの方法。
代替的実施形態において、上記に記載したとおりの本発明に係る方法によって入手可能な拡大細胞集団は、眼送達に好適な局在薬剤（ＧｅｌＭＡなど）を使用することなく、治療用コンタクトレンズによって眼に直接送達されてもよい。
眼送達に好適な局在薬剤
本発明のある実施形態において、細胞製剤は、眼での使用に好適な局在薬剤によって眼に送達され得る。細胞は局在薬剤内に包埋されるか、又は局在薬剤の表面に接着されるか、又は両方であってもよい。
局在薬剤のタイプは、それがＬＳＣ又はＣＥＣを担持することが可能で、且つ眼での使用に好適であるならば、限定されない。好ましい実施形態において、局在薬剤は分解性及び生体適合性である。ＣＥＣが送達される場合、好ましくは局在薬剤は眼の表面への外科的送達後における角膜へのＣＥＣ付着を促進することができる。
好ましい実施形態において、細胞は、細胞集団拡大後にのみ局在薬剤と組み合わされる。特に好ましい実施形態において、拡大細胞集団は、細胞集団をリンスして本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤の存在を実質的に除去した後に眼送達に好適な局在薬剤と組み合わされる。一実施形態において、ＬＳＣ又はＣＥＣと局在薬剤とは、眼での使用に好適な形態で組み合わされ、貯蔵される。別の実施形態において、ＬＳＣ又はＣＥＣと局在薬剤とは別個に貯蔵され、眼での使用直前に組み合わされる。
局在薬剤は、好ましくは、フィブリン、コラーゲン、ゼラチン、セルロース、羊膜、フィブリン糊、ポリエチレン（グリコール）ジアクリレート（ＰＥＧＤＡ）、ＧｅｌＭＡ（これはメタクリルアミド修飾ゼラチンであり、ゼラチンメタクリレートとしても知られる）、局在薬剤であって、ヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリプロピレンオキシド、ポロキサマー、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリビニルピロリドン、ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）、アルギン酸塩、ゼラチン、コラーゲン、フィブリノゲン、セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルグアー、ジェランガム、グアーガム、キサンタンガム及びカルボキシメチルセルロースのうちの１つ以上を含むポリマー、架橋ポリマー、又はヒドロゲルを含む局在薬剤、並びにその誘導体、その共重合体、及びこれらの組み合わせからなるリストから選択される。
より好ましい実施形態において、局在薬剤は、フィブリン、コラーゲン、ゼラチン、羊膜、フィブリン糊、ポリエチレン（グリコール）ジアクリレート（ＰＥＧＤＡ）、ＧｅｌＭＡ、局在薬剤であって、ヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリプロピレンオキシド、ポロキサマー、ポリアクリル酸、ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）、アルギン酸塩、ゼラチン、コラーゲン、フィブリノゲン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びヒドロキシプロピルグアーのうちの１つ以上を含むポリマー、架橋ポリマー、又はヒドロゲルを含む局在薬剤、並びにその誘導体、その共重合体、及びこれらの組み合わせからなるリストから選択される。
好ましい実施形態において、本発明に係る拡大細胞集団は、生体マトリックスである局在薬剤によってレシピエントに送達されてもよい。より好ましい実施形態において、局在薬剤は光硬化性分解性生体マトリックスである。好ましくは、これは眼に注入可能である。生体マトリックスの具体的な例はＧｅｌＭＡであり、これはメタクリルアミド修飾ゼラチンであり、ゼラチンメタクリレートとしても知られる。
ＧｅｌＭＡは、当該技術分野において公知の標準プロトコルに従い調製されてもよい（Ｖａｎ Ｄｅｎ Ｂｕｌｃｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２０００，ｐ．３１－３８；Ｙｕｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，２０１５，ｐ．２５４－２７１）。例えば、ブタ皮膚由来のゼラチン（ゲル強度３００ｇブルーム、タイプＡ）をカルシウム及びマグネシウム不含のＰＢＳ（ダルベッコＰＢＳ）中に溶解し、所望の濃度（例えば８％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）に達するようにゼラチン溶液中にメタクリル酸無水物を激しく撹拌しながら加え得る。この混合物は、更なるＤＰＢＳを加える前及び加えた後に撹拌し得る。希釈した混合物を透析チュービングを使用したＭｉｌｌｉ－Ｑ水での透析によって精製してメタクリル酸を除去し得る。精製した試料を任意選択で凍結乾燥し、固体を更なる使用時まで－８０℃、－２０℃、又は４℃で貯蔵し得る。
ＧｅｌＭＡストック溶液は、薬学的に許容可能な賦形剤を含む眼での使用に好適な製剤中に凍結乾燥ＧｅｌＭＡを溶解させることにより調製される。ＧｅｌＭＡストック溶液の調製には、凍結乾燥ＧｅｌＭＡをＤＰＢＳ中に溶解させ得る。ＧｅｌＭＡが完全に溶解した後、ＧｅｌＭＡ溶液に光開始剤（例えばリチウムフェニル－２，４，６－トリメチルベンゾイルホスフィン酸塩など）を導入し得る。ｐＨを中性に調整するため、溶液にＮａＯＨを加えた後、０．２２マイクロメートル滅菌メンブレンを使用してろ過し得る。最終的なろ液をアリコートに分け、更なる使用時まで４℃で貯蔵し得る。
本発明に係る一態様において、細胞は、光開始剤を使用して好ましくはＧｅｌＭａである生体マトリックスを重合させることにより生体マトリックス中に封入される。好適な光開始薬剤は、Ｉｒｇａｃｕｒｅ ２９５９、リチウムフェニル－２，４，６－トリメチルベンゾイルホスフィン酸塩、ナトリウムフェニル－２，４，６－トリメチルベンゾイルホスフィン酸塩、リチウムビス（２，４，６－トリメチルベンゾイル）ホスフィン酸塩、ナトリウムビス（２，４，６－トリメチルベンゾイル）ホスフィン酸塩、ジフェニル（２，４，６－トリメチルベンゾイル）ホスフィンオキシド、エオシンＹ、リン酸リボフラビン、カンファーキノン、Ｑｕａｎｔａｃｕｒｅ ＢＰＱ、Ｉｒｇａｃｕｒｅ ８１９、Ｉｒｇａｃｕｒｅ １８５０、及びＤａｒｏｃｕｒｅ １１７３である。好ましい実施形態において、光開始剤（ｐｈｏｔｏｉｎｉａｔｏｒ）は、リチウムフェニル－２，４，６－トリメチルベンゾイルホスフィン酸塩、ナトリウムフェニル－２，４，６－トリメチルベンゾイルホスフィン酸塩、リン酸リボフラビンである。別の実施形態において、光開始剤はリチウムフェニル－２，４，６－トリメチルベンゾイルホスフィン酸塩である。
重合前に、光硬化性生体マトリックスは、バイアルなどの当該技術分野において公知の好適な容器内で薬学的に許容可能な賦形剤を含む眼での使用に好適な製剤中に好適な光開始剤と組み合わされる。光開始剤は、細胞との混合前に生体マトリックスと組み合わされてもよい；或いは光開始剤は、細胞との混合後に生体マトリックスと組み合わされてもよい；或いは光開始剤（ｐｈｏｔｏｉｎｉａｔｏｒ）は初めに細胞に加えられ、次に生体マトリックスと組み合わされてもよい。生体マトリックス及び光開始剤の濃度は、使用する具体的な生体マトリックス及び具体的な光開始剤に依存するが、好都合な露光時間内、典型的には約５分未満；好ましくは約２分未満；より好ましくは約１分未満に重合がもたらされるように選択される。一実施形態において、光開始剤はリチウムフェニル－２，４，６－トリメチルベンゾイルホスフィン酸塩であり、眼への細胞送達用の製剤中におけるその濃度は約０．０１％ｗ／ｖ～約０．１５％ｗ／ｖである。別の態様において、眼への細胞送達用の製剤中におけるリチウムフェニル－２，４，６－トリメチルベンゾイルホスフィン酸塩濃度は約０．０５％ｗ／ｖ又は約０．０７５％ｗ／ｖである。既発表の手順を用いてＬＡＰが合成されてもよく（Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ２００９，３０，６７０２－６７０７）、またＴＣＩ（製品番号Ｌ０２９０）及びＢｉｏｂｏｔｓ（ＢｉｏＫｅｙ）からも利用可能である。
細胞は、バイアル又はチューブなどの当該技術分野において公知の好適な容器内でＧｅｌＭＡに加えられてもよい。細胞は、例えば、ＧｅｌＭＡ中にピペッティングし、穏やかな上下のピペッティングによって混合することにより加えられてもよい。一実施形態において、眼送達に好適な組成物中におけるＧｅｌＭＡ濃度は約１０～約２００ｍｇ／ｍＬ、又は約２５～約１５０ｍｇ／ｍＬ、又は約２５～約７５ｍｇ／ｍＬである。好ましい実施形態において、眼送達に好適な組成物中におけるＧｅｌＭＡ濃度は約２５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ又は約７５ｍｇ／ｍＬである。
光硬化性生体マトリックスを重合させるため、上記に記載したとおり、生体マトリックス、光開始剤、及び細胞が好ましい持続時間にわたって光源に曝露される。重合に用いられる光の波長は、使用する具体的な光開始剤の光化学的特性に依存することになる。例えば、Ｉｒｇａｃｕｒｅ ２９５９についての重合の光開始は３００～３７０ｎｍの波長の光で起こり得る；リチウムフェニル－２，４，６－トリメチルベンゾイルホスフィン酸塩についての重合の光開始は３００～４２０ｎｍの波長の光で起こり得る；リボフラビン－５’－リン酸塩についての重合の光開始は３００～５００ｎｍの波長の光で起こり得る。使用する光源は、白熱ランプ、ガス放電ランプ、又は金属蒸気ランプで実現するような、ある波長帯を発し得る；或いは、使用される光源は、光学フィルタ又は発光ダイオード（ＬＥＤ）で実現するような、狭い波長帯を発し得る。好ましくは、使用される光源は、細胞に対するＵＶ照射の損傷効果を回避するため、３１５ｎｍ未満の波長の光を発しない。一実施形態において、光源は、４１５～７００ｎｍのスペクトル域の白色光光源である。別の実施形態において、光源は、約３６５±５ｎｍ、約３７５±５ｎｍ、約３８５±５ｎｍ、約３９５±５ｎｍ、約４０５±５ｎｍ、約４１５±５ｎｍ、約４２５±５ｎｍ、約４３５±５ｎｍ、約４４５±５ｎｍ、約４５５±５ｎｍ、又は約４６５±５ｎｍのスペクトル域のＬＥＤ光源である。光の強度は、光毒性を最小限に抑え、且つ好都合な露光時間内、典型的には約５分未満；好ましくは約２分未満；より好ましくは約１分未満に重合をもたらすように選択される。重合の一つの指標は溶液粘度の増加である。重合の別の指標はゲル化の発生である。
生体マトリックスの重合は、バイオプリンティング技法によって眼表面で行われてもよく、又はそれに代えて、次に眼表面に移植される担体上で行われてもよい。任意選択で生体マトリックスの重合は前房内の角膜表面上で行われてもよく、又はそれに代えて、次に前房内の角膜表面に移植される担体上で行われてもよい。
担体
細胞及び眼送達に好適な局在薬剤は、好ましくはコンタクトレンズ又は羊膜などの担体によって送達される。
本発明に係る使用に好適なコンタクトレンズは、好ましくは患者の角膜の曲率に一致する、且つ実際の臨床でバンデージコンタクトレンズとしての数日間の連続使用が患者に良好に忍容されることが可能なものである。
本発明に係る好適なタイプのコンタクトレンズの例は、臨床使用においてボストン角膜プロテーゼ１型（輪部幹細胞欠乏患者においても使用することができる）での長期バンデージコンタクトレンズ使用の妥当性が広く確認されているものと一致し、Ｔｈｏｍａｓ，Ｍｅｒｉｎａ Ｍ．Ｄ．；Ｓｈｏｒｔｅｒ，Ｅｌｌｅｎ Ｏ．Ｄ．；Ｊｏｓｌｉｎ，Ｃｈａｒｌｏｔｔｅ Ｅ．Ｏ．Ｄ．，Ｐｈ．Ｄ．；ＭｃＭａｈｏｎ，Ｔｉｍｏｔｈｙ Ｊ．Ｏ．Ｄ．；Ｃｏｒｔｉｎａ，Ｍ．Ｓｏｌｅｄａｄ Ｍ．Ｄ．「ボストン角膜プロテーゼ１型による患者におけるコンタクトレンズ使用：装着、管理、及び合併症（Ｃｏｎｔａｃｔ Ｌｅｎｓ Ｕｓｅ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｉｔｈ Ｂｏｓｔｏｎ Ｋｅｒａｔｏｐｒｏｓｔｈｅｓｉｓ Ｔｙｐｅ １：Ｆｉｔｔｉｎｇ，Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，ａｎｄ Ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」．Ｅｙｅ Ｃｏｎｔａｃｔ Ｌｅｎｓ．２０１５ Ｎｏｖ；４１（６）：３３４－４０に記載されている。
コンタクトレンズは、当該技術分野において公知の、又は後に開発される任意の適切な材料であってよく、ソフトレンズ、ハードレンズ、又はハイブリッドレンズ、好ましくはソフトレンズ、より好ましくは従来のヒドロゲルコンタクトレンズ又はシリコーンヒドロゲル（ＳｉＨｙ）コンタクトレンズであり得る。
「従来のヒドロゲルコンタクトレンズ」は、水不溶性の架橋ポリマー材料であって、理論上シリコーンを含まない、且つ完全に水和したときそのポリマーマトリックス中に少なくとも１０重量％の水を含有することのできるヒドロゲルバルク（コア）材料を含むコンタクトレンズを指す。従来のヒドロゲルコンタクトレンズは、典型的には、当業者に公知のシリコーン不含親水性重合性成分を含む従来のヒドロゲルレンズ製剤（即ち、重合性組成物）の共重合によって得られる。
市販のヒドロゲルコンタクトレンズの作製用の従来のヒドロゲルレンズ製剤の例としては、限定なしに、アルファフィルコンＡ（ａｌｆａｆｉｌｃｏｎ Ａ）、アコフィルコンＡ（ａｃｏｆｉｌｃｏｎ Ａ）、デルタフィルコンＡ（ｄｅｌｔａｆｉｌｃｏｎ Ａ）、エタフィルコンＡ（ｅｔａｆｉｌｃｏｎ Ａ）、フォコフィルコンＡ（ｆｏｃｏｆｉｌｃｏｎ Ａ）、ヘルフィルコンＡ（ｈｅｌｆｉｌｃｏｎ Ａ）、ヘルフィルコンＢ（ｈｅｌｆｉｌｃｏｎ Ｂ）、ヒラフィルコンＢ（ｈｉｌａｆｉｌｃｏｎ Ｂ）、ヒオキシフィルコンＡ（ｈｉｏｘｉｆｉｌｃｏｎ Ａ）、ヒオキシフィルコンＢ（ｈｉｏｘｉｆｉｌｃｏｎ Ｂ）、ヒオキシフィルコンＤ（ｈｉｏｘｉｆｉｌｃｏｎ Ｄ）、メタフィルコンＡ（ｍｅｔｈａｆｉｌｃｏｎ Ａ）、メタフィルコンＢ（ｍｅｔｈａｆｉｌｃｏｎ Ｂ）、ネルフィルコンＡ（ｎｅｌｆｉｌｃｏｎ Ａ）、ネソフィルコンＡ（ｎｅｓｏｆｉｌｃｏｎ Ａ）、オキュフィルコンＡ（ｏｃｕｆｉｌｃｏｎ Ａ）、オキュフィルコンＢ（ｏｃｕｆｉｌｃｏｎ Ｂ）、オキュフィルコンＣ（ｏｃｕｆｉｌｃｏｎ Ｃ）、オキュフィルコンＤ（ｏｃｕｆｉｌｃｏｎ Ｄ）、オマフィルコンＡ（ｏｍａｆｉｌｃｏｎ Ａ）、フェムフィルコンＡ（ｐｈｅｍｆｉｌｃｏｎ Ａ）、ポリマコン（ｐｏｌｙｍａｃｏｎ）、サムフィルコンＡ（ｓａｍｆｉｌｃｏｎ Ａ）、テルフィルコンＡ（ｔｅｌｆｉｌｃｏｎ Ａ）、テトラフィルコンＡ（ｔｅｔｒａｆｉｌｃｏｎ Ａ）、及びビフィルコンＡ（ｖｉｆｉｌｃｏｎ Ａ）が挙げられる。
「ＳｉＨｙコンタクトレンズ」は、シリコーンを含有する水不溶性架橋ポリマー材料であって、且つ完全に水和したときそのポリマーマトリックス中に少なくとも１０重量％の水を含有することのできるシリコーンヒドロゲルバルク（コア）材料を含むコンタクトレンズを指す。シリコーンヒドロゲルコンタクトレンズは、典型的には、当業者に公知のシリコーン含有重合性成分及び親水性重合性成分を少なくとも含むシリコーンヒドロゲルレンズ製剤の共重合によって得られる。
市販のＳｉＨｙコンタクトレンズの作製用のＳｉＨｙレンズ製剤の例としては、限定なしに、アスモフィルコンＡ（ａｓｍｏｆｉｌｃｏｎ Ａ）、バラフィルコンＡ（ｂａｌａｆｉｌｃｏｎ Ａ）、コンフィルコンＡ（ｃｏｍｆｉｌｃｏｎ Ａ）、デレフィルコンＡ（ｄｅｌｅｆｉｌｃｏｎ Ａ）、エフロフィルコンＡ（ｅｆｒｏｆｉｌｃｏｎ Ａ）、エンフィルコンＡ（ｅｎｆｉｌｃｏｎ Ａ）、ファンフィルコンＡ（ｆａｎｆｉｌｃｏｎ Ａ）、ガリフィルコンＡ（ｇａｌｙｆｉｌｃｏｎ Ａ）、ロトラフィルコンＡ（ｌｏｔｒａｆｉｌｃｏｎ Ａ）、ロトラフィルコンＢ（ｌｏｔｒａｆｉｌｃｏｎ Ｂ）、ナラフィルコンＡ（ｎａｒａｆｉｌｃｏｎ Ａ）、ナラフィルコンＢ（ｎａｒａｆｉｌｃｏｎ Ｂ）、セノフィルコンＡ（ｓｅｎｏｆｉｌｃｏｎ Ａ）、セノフィルコンＢ（ｓｅｎｏｆｉｌｃｏｎ Ｂ）、セノフィルコンＣ（ｓｅｎｏｆｉｌｃｏｎ Ｃ）、スマフィルコンＡ（ｓｍａｆｉｌｃｏｎ Ａ）、ソモフィルコンＡ（ｓｏｍｏｆｉｌｃｏｎ Ａ）、及びステンフィルコンＡ（ｓｔｅｎｆｉｌｃｏｎ Ａ）が挙げられる。
好ましい実施形態において、担体は、バラフィルコンＡ（Ｂａｌａｆｉｌｃｏｎ Ａ）、ロトラフィルコンＡ（Ｌｏｔｒａｆｉｌｃｏｎ Ａ）、ロトラフィルコンＢ（Ｌｏｔｒａｆｉｌｃｏｎ Ｂ）、セノフィルコンＡ（Ｓｅｎｏｆｉｌｃｏｎ Ａ）及びメタフィルコンＡ（ｍｅｔｈａｆｉｌｃｏｎ Ａ）からなる群から選択されるコンタクトレンズである。
特に好ましい実施形態において、担体は、ロトラフィルコンＢ（Ｌｏｔｒａｆｉｌｃｏｎ Ｂ）であるコンタクトレンズである。
担体は、眼球運動によって構築物が外れるのを防ぐため、フィブリン糊又は縫合糸を使用して眼表面の適所に保持され得る。
生体マトリックス及び細胞と組み合わされた担体は、細胞を送達するために、ある範囲の時間、例えば数日間～１週間、好ましくは１週間にわたって眼上に置かれたままにされ得る。
他の送達方法：
代替的実施形態において、ＬＳＣは細胞懸濁液として（生体マトリックスなどの局在薬剤を含まない、且つコンタクトレンズなどの担体有り又は無しで）眼表面に送達されてもよい。粘膜付着性薬剤、粘度増強剤、又は逆熱ゲル化剤など、組織接着を向上させるための当該技術分野において公知の化合物及び賦形剤が製剤に含まれてもよい。
バイオプリンティングステップ
本発明に係る細胞集団拡大方法により入手可能な眼細胞、例えば角膜内皮細胞の集団は、対象の眼、例えば対象の角膜にグラフトされてもよい。
本発明に係る細胞集団は、ＧｅｌＭＡなどの光硬化性分解性生体マトリックスである眼での使用に好適な局在薬剤によって送達されてもよい。以下の方法は、角膜の内壁への送達を制御する手順について記載する。
方法１．気泡押圧方法（図２２に示される）
初めに角膜の内壁から、剥離／擦過によるか、又はフェムト秒レーザーによる光切断を用いた制御された方法で機能不全の内皮細胞を脱離させ得る。次に角膜の内表面近傍に、細胞担持生体マトリックスの少量のボーラスを注入する。これは標準シリンジ又はカスタムのアプリケーターを使用して手動で行い得る。これはまた、外科手術システム（例えばコンステレーション（ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｉｏｎ））又はシリンジポンプで制御することもできる。次にボーラスの下に気泡を注入する。気泡によってボーラスが角膜後面に押し付けられ、薄い被膜が作り出される。次に紫外又は近紫外光源、又は生体マトリックスを硬化させるのに必要な任意の他のスペクトル帯域を使用してゲル全体を硬化させる。或いは、機能不全組織は残してもよく、生体マトリックスをその上に重ねて硬化させてもよい。他の光学焦点調整方法を用いて光源を種々のサイズに集光させることにより、硬化範囲を制御し得る。残った未硬化範囲は、潅注／吸引カニューレを使用して洗い流すことができる。
方法２．フェムト秒レーザーを使用した減法的方法（図２３に示される）
初めに角膜の内壁から、剥離／擦過によるか、又はフェムト秒レーザーによる光切断を用いた制御された方法で機能不全の内皮細胞を脱離させ得る。或いは、これはそのまま残してもよい。次に角膜の内表面に、組織が取り除かれた空隙を覆って、又は機能不全組織に重ねて細胞担持生体マトリックスを注入する。これは標準シリンジ又はカスタムのアプリケーターを使用して行い得る。これはまた、外科手術システム（例えばコンステレーション（ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｉｏｎ））又はシリンジポンプで制御することもできる。次に紫外又は近紫外光源、又は生体マトリックスを硬化させるのに必要な任意の他のスペクトル帯域を使用して生体マトリックスを硬化させる。次にフェムト秒レーザーを使用して余分な材料を脱離させ、所望の分布となるように厚さ及び範囲を制御する。次に余分な材料を角膜切開部から鉗子で取り除く。
方法３．染色マスク及び吸収に基づく厚さ制御（図２４に示される）
初めに生体適合性染色剤（トリパンブルー、ブリリアントブルー等）を使用して角膜の内表面を着色する。次に角膜の内壁から機能不全の内皮細胞を剥離／擦過によって脱離させる。次に角膜の内表面に、組織が取り除かれた空隙を覆って生体適合性染色剤を含有する細胞担持生体マトリックスを注入する。次に紫外又は近紫外光源、又は生体マトリックスを硬化させるのに必要な任意の他のスペクトル帯域を使用して生体マトリックスを硬化させる。角膜組織中の染色剤は光吸収を高め、硬化させる生体マトリックスの範囲を制御するマスクとして働く。同様に、生体マトリックス中の染色剤は光の吸収を高め、それにより硬化させる材料の深さ／厚さを制御する。次に前房から未硬化のゲル材料を潅注／吸引カニューレを使用してフラッシュする。
方法４．乾式前房適用（図２５に示される）
初めに角膜の内壁から、剥離／擦過によるか、又はフェムト秒レーザーによる光切断を用いた制御された方法で機能不全の内皮細胞を脱離させ得る。或いはこれはそのまま残してもよい。次に前部の前房から房水を排水させ、気体（例えば空気）に取り換える。次に角膜の内表面に細胞担持生体マトリックスを少量の制御された液滴で適用するか（表面張力によって液滴を分散させる）、又はブラシ若しくはソフトチップカニューレを使用して塗る。生体マトリックスにヒアルロン酸を加えることによりその粘稠特性を変え、分注／適用の更に良好な制御を可能にしてもよい。次に紫外又は近紫外光源、又は生体マトリックスを硬化させるのに必要な任意の他のスペクトル帯域を使用して生体マトリックス全体を硬化させる。最後に、次に前房を再び平衡塩類溶液で満たす。
方法５．自然に浮揚性の製剤
初めに角膜の内壁から、剥離／擦過によるか、又はフェムト秒レーザーによる光切断を用いた制御された方法で機能不全の内皮細胞を脱離させ得る。次に角膜の内表面近傍に細胞担持生体マトリックスの少量のボーラスを注入する。生体マトリックスは、眼房水に対して自然に浮揚性となるように製剤化するか、又は同じ効果が実現するように空気を混和する。これにより生体マトリックスは自然に後部角膜に達し、薄い被膜が作り出される。次に紫外又は近紫外光源、又は生体マトリックスを硬化させるのに必要な任意の他のスペクトル帯域を使用して生体マトリックス全体を硬化させる。或いは、機能不全組織は残してもよく、生体マトリックスをその上に重ねて硬化させてもよい。光学焦点調整方法を用いて紫外光源を種々のサイズに集光させることにより、硬化範囲を制御し得る。残った未硬化範囲は、吸引カニューレを使用してフラッシュすることができる。
他の送達方法
代替的実施形態において、本明細書に記載されるとおりのＣＥＣなどの拡大細胞集団は、細胞懸濁液（光硬化性分解性生体マトリックスなどの局在薬剤を含まない）として送達され、患者を３時間俯かせることにより重力によって付着したままにされてもよい。接着剤、粘度増強剤、又は逆熱ゲル化剤など、組織接着を向上させる当該技術分野において公知の化合物及び賦形剤が製剤に含まれてもよい。
更に別の代替的実施形態において、本明細書に記載されるとおりのＣＥＣなどの拡大細胞集団はまた、磁気ビーズの使用によっても送達することができる。眼送達に好適な培地中のＣＥＣ／ビーズの懸濁液を調製し、次にそれを眼に注入する。眼に適用された磁石によって細胞付着が促進される（「ナノ粒子を負荷したヒト角膜内皮細胞による磁場誘導型細胞送達（Ｍａｇｎｅｔｉｃ ｆｉｅｌｄ－ｇｕｉｄｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｗｉｔｈ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ－ｌｏａｄｅｄ ｈｕｍａｎ ｃｏｒｎｅａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ）」．Ｍｏｙｓｉｄｉｓ ＳＮ，Ａｌｖａｒｅｚ－Ｄｅｌｆｉｎ Ｋ，Ｐｅｓｃｈａｎｓｋｙ ＶＪ，Ｓａｌｅｒｏ Ｅ，Ｗｅｉｓｍａｎ ＡＤ，Ｂａｒｔａｋｏｖａ Ａ，Ｒａｆｆａ ＧＡ，Ｍｅｒｋｈｏｆｅｒ ＲＭ Ｊｒ，Ｋａｄｏｒ ＫＥ，Ｋｕｎｚｅｖｉｔｚｋｙ ＮＪ，Ｇｏｌｄｂｅｒｇ ＪＬ．Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０１５ Ａｐｒ；１１（３）：４９９－５０９．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｎａｎｏ．２０１４．１２．００２）。
本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤の他の使用方法
本発明に係る一態様において、本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤を直接眼の表面に直接加えて細胞集団拡大を実現することが可能である。例えばこれは、細胞喪失が全面的でなかったとともに、拡大する播種細胞集団が残っている場合に行うことができる。例えば、場合によって、患者の眼に輪部幹細胞が残っている場合、又は患者の角膜に角膜内皮細胞が残っている場合。例えば、これは、薬学的に許容可能な賦形剤を含む眼での使用に好適な製剤として本明細書に開示されるとおりの化合物を調製し、点眼薬によって眼に適用することにより実現し得る。或いは、薬学的に許容可能な賦形剤を含む眼での使用に好適な製剤としての本明細書に開示されるとおりの化合物は、眼内、例えば前房内に適用されてもよい。
薬学的に許容可能な賦形剤は組成物を増強し若しくは安定化させ、又は組成物の調製を促進する。薬学的に許容可能な賦形剤としては、生理的に適合性のある溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などが挙げられる。
本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤は、眼科学的に許容可能な保存剤、共溶媒、界面活性剤、粘度増強剤、浸透促進剤、緩衝剤、塩化ナトリウム、又は水と組み合わされて、水性眼科用懸濁液又は溶液を形成し得る。局所眼科製品は、例えば複数回投与形態で包装されてもよい。従って、使用中の微生物汚染を防止するため保存剤が必要となり得る。好適な保存剤としては、クロロブタノール、メチルパラベン、プロピルパラベン、フェニルエチルアルコール、エデト酸二ナトリウム、ソルビン酸、ポリクオタニウム－１、又は当業者に公知の他の薬剤が挙げられる。かかる保存剤は、典型的には０．００１～１．０％ｗ／ｖのレベルで用いられる。
本発明のある実施形態において、本発明に係るＬＡＴＳ阻害剤は、細胞、例えば角膜上皮及び輪部細胞を移植時まで保存するために使用される可能性がある。アイバンク専門家による死体解剖後、角膜は移植時までオプチゾール（Ｏｐｔｉｓｏｌ）又はＰＢＳなどの媒体中に保存される。本発明の具体的な実施形態では、オプチゾール（Ｏｐｔｉｓｏｌ）又はＰＢＳなど、角膜移植に一般的に使用される溶液にＬＡＴＳ阻害剤が加えられてもよい。好ましくは保存溶液中におけるＬＡＴＳ阻害剤の濃度は０．５～１００マイクロモル、より好ましくは０．５～２５マイクロモル、特に好ましくは１～２０マイクロモルである。具体的な実施形態において、式Ｉに係るＬＡＴＳ阻害剤が約３～１０マイクロモルの濃度で加えられる。
免疫抑制剤、抗炎症剤及び抗生物質剤
輪部幹細胞又は角膜内皮（ｃｏｒｎｅａｌ ｅｎｄｏｔｈｅａｌ）細胞について記載されるとおりの、細胞集団に対するインビトロで実施される遺伝子編集技法を用いて患者への移植細胞の免疫拒絶リスクを軽減することに加えて、又はその代替例として、本発明に係る細胞集団は、免疫抑制及び／又は抗炎症薬剤又は薬剤と同時に、又は逐次的に投与されてもよい。限定はされないがデキサメタゾン又はシクロスポリンを含め、免疫抑制又は抗炎症薬剤又は薬剤の標準的な薬剤を使用し得る。
抗生物質もまた、抗生物質セファゾリン及びトブラマイシンなど、拡大細胞集団（例えば、本明細書に記載されるとおりの輪部幹細胞又は角膜内皮（ｃｏｒｎｅａｌ ｅｎｄｏｔｈｅａｌ）細胞）と併せて患者に投与され得る。
本発明の細胞集団が別の１つ又は複数の薬剤と一緒に投与されるとき、細胞集団及び１つ又は複数の薬剤は任意の順序で逐次的に、又は同時に投与することができる。一部の実施形態において、本発明に係る拡大細胞集団は外科的治療と併せて投与される。他の実施形態において、本発明に係る輪部幹細胞集団は外科的治療と併せて投与される。他の実施形態において、本発明に係る角膜内皮細胞集団は外科的治療と併せて投与される。
治療使用
本発明に係る眼細胞集団は、眼細胞を含む細胞集団の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む眼疾患又は眼障害の治療又は予防方法において使用し得る。
本発明に係る輪部幹細胞集団は、輪部幹細胞を含む細胞集団の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む眼疾患又は眼障害の治療又は予防方法において使用し得る。好ましくは眼疾患又は眼障害は輪部幹細胞欠乏に関連する。
輪部幹細胞欠乏は、限定はされないが以下を含めた幾つかの多様な病態の結果として起こり得る：
－ 化学的若しくは熱的熱傷又は放射線傷害からの直接的な幹細胞損傷；
－ 無虹彩、強角膜症、多発性内分泌腺腫症などの先天性病態；
－ スティーブンス・ジョンソン症候群又は眼瘢痕性類天疱瘡又は膠原血管病などの自己免疫障害；
－ コンタクトレンズ使用、ドライアイ疾患、酒さ、黄色ブドウ球菌辺縁性角膜炎（細菌性、真菌性及びウイルス性）、翼状片又は新生物などの慢性非自己免疫性炎症性障害；
－ 複数回の眼手術、翼状片若しくは新生物の切除、凍結療法の後など、医原性；
－ 保存剤（チメロサール、ベンザルコニウム）、局所麻酔薬、ピロカルピン、β遮断薬、マイトマイシン、５－フルオロウラシル、硝酸銀、及びスティーブンス・ジョンソン症候群を引き起こす経口薬物投与など、薬物投与毒性の結果として。
（「ドライアイ：眼表面障害及び幹細胞手術の実践手引き（Ｄｒｙ Ｅｙｅ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｏｃｕｌａｒ ｓｕｒｆａｃｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ａｎｄ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｓｕｒｇｅｒｙ）」．ＳＬＡＣＫ ２００６－Ｒｚａｎｙ Ｂ，Ｍｏｃｋｅｎｈａｕｐｔ Ｍ，Ｂａｕｒ Ｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．４９，７６９－７７３（１９９６）を参照のこと）。
実際の臨床で最もよく見られる輪部幹細胞欠乏の原因は、化学的熱傷、無虹彩、スティーブンス・ジョンソン症候群及びコンタクトレンズ使用である。
より好ましくは眼疾患又は眼障害は、化学的熱傷、熱的熱傷、放射線傷害、無虹彩、強角膜症、多発性内分泌腺腫症、スティーブンス・ジョンソン症候群、眼瘢痕性類天疱瘡、膠原血管病からなる群から選択される傷害又は疾患又は障害が原因で生じる輪部幹細胞欠乏、コンタクトレンズ使用、ドライアイ疾患、酒さ、黄色ブドウ球菌辺縁性角膜炎（細菌性、真菌性及びウイルス性角膜炎を含む）、翼状片又は新生物によって生じる慢性非自己免疫性炎症性障害、複数回の眼手術又は翼状片若しくは新生物の切除又は凍結療法後に生じる輪部幹細胞欠乏；及び保存剤（チメロサール、ベンザルコニウム）、局所麻酔薬、ピロカルピン、β遮断薬、マイトマイシン、５－フルオロウラシル、硝酸銀、及びスティーブンス・ジョンソン症候群を引き起こす経口薬物投与からなる群から選択される薬物投与からの薬物投与毒性の結果として生じる輪部幹細胞欠乏である。
具体的な実施形態において、本発明は、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な輪部幹細胞集団の有効量をそれを必要としている対象に投与することによる輪部幹細胞欠乏の治療方法を提供する。
より具体的な実施形態において、本発明は、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な輪部幹細胞集団の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することによる、化学的熱傷、熱的熱傷、放射線傷害、無虹彩、強角膜症、多発性内分泌腺腫症、スティーブンス・ジョンソン症候群、眼瘢痕性類天疱瘡、膠原血管病からなる群から選択される傷害又は障害が原因で生じる輪部幹細胞欠乏、コンタクトレンズ使用、ドライアイ疾患、酒さ、黄色ブドウ球菌辺縁性角膜炎（細菌性、真菌性及びウイルス性角膜炎を含む）、翼状片又は新生物によって生じる慢性非自己免疫性炎症性障害、複数回の眼手術、又は翼状片若しくは新生物の切除又は凍結療法後に生じる輪部幹細胞欠乏；及び保存剤（チメロサール、ベンザルコニウム）、局所麻酔薬、ピロカルピン、β遮断薬、マイトマイシン、５－フルオロウラシル、硝酸銀、及びスティーブンス・ジョンソン症候群を引き起こす経口薬物投与からなる群から選択される薬物投与からの薬物投与毒性の結果として生じる輪部幹細胞欠乏の治療方法を提供する。
なおも更に具体的な実施形態において、本発明は、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な輪部幹細胞集団の治療有効量（ｔｈｅｒｅａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）をそれを必要としている対象に投与することによる、化学的熱傷、無虹彩、スティーブンス・ジョンソン症候群及びコンタクトレンズ使用からなる群から選択される傷害又は疾患又は障害に起因して起こる輪部幹細胞欠乏の治療方法を提供する。
成人がレシピエント（移植レシピエント）である場合、本発明に係る治療（ｔｒｅａｍｔｅｎｔ）方法において好ましくは１０００個超のｐ６３α発現細胞が患者に投与されてもよい。好ましい実施形態では、本発明に係る治療方法において１０００～１０００００個のｐ６３α発現細胞が患者に投与されてもよい。
本発明に係る角膜内皮細胞集団は、角膜内皮細胞を含む細胞集団の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む眼疾患又は眼障害の治療又は予防方法において使用され得る。好ましくは眼疾患又は眼障害は角膜内皮細胞密度の低下に関連する。好ましい実施形態において、眼疾患又は眼障害は角膜内皮機能不全である。
より好ましくは眼疾患又は眼障害は、フックス角膜内皮ジストロフィー、水疱性角膜症（偽水晶体性水疱性角膜症及び無水晶体性水疱性角膜症を含む）、角膜移植不全、後部多形性角膜ジストロフィー、先天性遺伝性内皮ジストロフィー、Ｘ連鎖性角膜内皮ジストロフィー、無虹彩、及び角膜内皮炎（ｃｏｒｎｅａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｔｉｓ）からなる群から選択される角膜内皮機能不全である。具体的な実施形態において、眼疾患又は眼障害は、フックス角膜内皮ジストロフィー、水疱性角膜症（偽水晶体性水疱性角膜症及び無水晶体性水疱性角膜症を含む）及び角膜移植不全からなる群から選択される。
具体的な実施形態において、本発明は、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な角膜内皮細胞集団の有効量をそれを必要としている対象に投与することによる角膜内皮機能不全の治療方法を提供する。
より具体的な実施形態において、本発明は、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な角膜内皮細胞集団の有効量をそれを必要としている対象に投与することによる、フックス角膜内皮ジストロフィー、水疱性角膜症（偽水晶体性水疱性角膜症及び無水晶体性水疱性角膜症を含む）、角膜移植不全、後部多形性角膜ジストロフィー、先天性遺伝性内皮ジストロフィー、Ｘ連鎖性角膜内皮ジストロフィー、無虹彩、及び角膜内皮炎（ｃｏｒｎｅａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｔｉｓ）からなる群から選択される角膜内皮機能不全の治療方法を提供する。
なおも更に具体的な実施形態において、本発明は、本発明に係る細胞集団拡大方法によって入手可能な角膜内皮細胞集団の有効量をそれを必要としている対象に投与することによる、フックス角膜内皮ジストロフィー、水疱性角膜症（偽水晶体性水疱性角膜症及び無水晶体性水疱性角膜症を含む）及び角膜移植不全からなる群から選択される角膜内皮機能不全の治療方法を提供する。
成人がレシピエント（移植レシピエント）である場合、本発明に係る治療方法における使用のための角膜内皮細胞層は、好ましくは、およそ少なくとも５００細胞／ｍｍ２（面積）、好ましくは１０００～３５００細胞／ｍｍ２（面積）、より好ましくは２０００～約４０００細胞／ｍｍ２（面積）の眼における最終細胞密度を有する。
実施例セクションＡ～Ｃ
以下の例は、本発明を更に例示するために提供されるのであって、その範囲を限定するためではない。当業者には本発明の他の変形例が容易に明らかであろうとともに、それらは添付の特許請求の範囲に包含される。
特に定義されない限り、本明細書で使用される科学技術用語は、本開示が属する分野に精通している専門家が通常理解するのと同じ意味を有する。
実施例Ａ１：ＬＡＴＳ１生化学アッセイ：均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）アッセイ（化合物例１～２９０）
ＨＴＲＦ ＫｉｎＥＡＳＥ－ＳＴＫ Ｓ１キット（ＣｉｓＢｉｏ、カタログ番号６２ＳＴ１ＰＥＣ）を製造者の指示に従い使用してＬＡＴＳ１生化学的ＨＴＲＦアッセイを実施した。ヒトＬＡＴＳ１キナーゼドメインタンパク質は、アミノ酸５８９～１１３０の触媒ドメイン有するもので、Ｃａｒｎａｂｉｏ（カタログ番号０１－１２３）から購入し、ヒトＨｉｓタグ付加ＭＯＢＫＬ１Ａ（ＮＰ＿７７５－７３９）と共精製した。化合物をＥＣＨＯ液体ハンドラー（Ｌａｂｃｙｔｅ）で３８４ウェルプレートに加えた。次にウェルに５マイクロリットルの以下の溶液（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０．０１％ＢＳＡ、１００ｎＭオルトバナジン酸塩（ｏｒｔｈａｏｖａｎａｄａｔｅ）、１ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＤＴＴ、０．６ｎｇ／マイクロリットルＬＡＴＳ１酵素（Ｃａｒｎａｂｉｏ、０１－１２３）、２マイクロモルＳＴＫ１局在補助剤（ＣｉｓＢｉｏ））を加え、続いてキナーゼ緩衝液（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０．０１％ＢＳＡ、１００ｎＭオルトバナジン酸塩（ｏｒｔｈａｏｖａｎａｄａｔｅ）、１ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＤＴＴ）中の５マイクロリットルの２ｍＭ ＡＴＰを加え、室温で３０分間インキュベートした。各ウェルに１０マイクロリットルの検出混合物（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０．０１％ＢＳＡ、１００ｎＭオルトバナジン酸塩（ｏｒｔｈａｏｖａｎａｄａｔｅ）、１ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＤＴＴ、ＳＴＫ抗体クリプテート（ＣｉｓＢｉｏ）、ストレプトアビジン－ＸＬ６６５（ＣｉｓＢｉｏ）、５００マイクロモルフッ化カリウム、５０ｎＭ ＥＤＴＡ）を加え、室温で１時間インキュベートした。プレートをＨＴＲＦ（６６５ｎｍ／６２０ｎｍ）に関してＰｈｅｒａｓｔａｒ（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）で読み取った。ＩＣ５０は、化合物の効果によってＨＴＲＦシグナルが５０％低下するときに測定される。例示される化合物のＬＡＴＳ１ ＩＣ５０値を表１Ａに示す。
実施例Ａ２：ＬＡＴＳ１生化学的Ｃａｌｉｐｅｒアッセイ
ヒトＬＡＴＳ１キナーゼドメインタンパク質は、アミノ酸５８９～１１３０の触媒ドメイン有するものであり、Ｃａｒｎａｂｉｏ（カタログ番号０１－１２３）から購入し、ヒトＨｉｓタグ付加ＭＯＢＫＬ１Ａ（ＮＰ＿７７５－７３９）と共精製した。５マイクロリットルの酵素緩衝液、１００ｎＬの化合物及び５マイクロリットルの局在補助緩衝液を３８４ウェルプレートに加えた。最終的なアッセイ反応混合物は、１００ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．１％ＢＳＡ、０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、１ｍＭ ＤＴＴ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１０マイクロモルオルトバナジウム酸ナトリウム、１０マイクロモルβ－グリセロリン酸、４００マイクロモルＡＴＰ、１％ＤＭＳＯ、１．１ｎＭ ＬＡＴＳ１酵素（Ｃａｒｎａｂｉｏ、０１－１２３）、ＦＡＭ－ＫＫＬＲＲＴＬＳＶＡ－ＣＯＯＨ（配列番号２４）の１マイクロモル局在補助剤（ＮａｎｏＳｙｎ）を含有する。プレートを２５℃で３時間インキュベートした。２５ｍＭ ＥＤＴＡ（ＮａｎｏＳｙｎ）を含有する４０マイクロリットルの停止緩衝液を各ウェルに加えて反応を終結させた。マイクロフルイディクスベースのＣａｌｉｐｅｒ Ｌａｂｃｈｉｐ ３０００創薬システム（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して局在補助剤と生成物とを電気泳動的に分離した。青色レーザー励起及び緑色蛍光検出を用いてプレートを読み取り、蛍光強度によって定量化した。ＩＣ５０は、化合物の効果によって生成物蛍光シグナルが５０％低下するときに測定される。このアッセイによれば、以下の化合物のマイクロモル濃度単位でのＬＡＴＳ１ ＩＣ５０値は以下である：
例４９：０．０１２、例１４：０．０３４、例６５：０．０２２、例１３９：０．０２８、例１３３：０．００４。
実施例Ａ３：ＬＡＴＳ２生化学的Ｃａｌｉｐｅｒアッセイ（化合物例１～２９０）
ヒトＬＡＴＳ２キナーゼドメインタンパク質は、アミノ酸５５３～１０８８の触媒ドメインを有するものであり、Ｃａｒｎａｂｉｏ（カタログ番号０１－１２４）から購入し、ヒトＨｉｓタグ付加ＭＯＢＫＬ１Ａ（ＮＰ＿７７５－７３９）と共精製した。５マイクロリットルの酵素緩衝液、１００ｎＬの化合物及び５マイクロリットルの局在補助緩衝液を３８４ウェルプレートに加えた。最終的なアッセイ反応混合物は、１００ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．１％ＢＳＡ、０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、１ｍＭ ＤＴＴ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１０マイクロモルオルトバナジウム酸ナトリウム、１０マイクロモルβ－グリセロリン酸、４００マイクロモルＡＴＰ、１％ＤＭＳＯ、１．１ｎＭ ＬＡＴＳ２酵素（Ｃａｒｎａｂｉｏ、０１－１２４）、ＦＡＭ－ＫＫＬＲＲＴＬＳＶＡ－ＣＯＯＨ（配列番号２４）の１マイクロモル局在補助剤（ＮａｎｏＳｙｎ）を含有する。プレートを２５℃で３時間インキュベートした。２５ｍＭ ＥＤＴＡ（ＮａｎｏＳｙｎ）を含有する４０マイクロリットルの停止緩衝液を各ウェルに加えて反応を終結させた。マイクロフルイディクスベースのＣａｌｉｐｅｒ Ｌａｂｃｈｉｐ ３０００創薬システム（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して局在補助剤と生成物とを電気泳動的に分離した。青色レーザー励起及び緑色蛍光検出を用いてプレートを読み取り、蛍光強度によって定量化した。ＩＣ５０は、化合物の効果によって生成物蛍光シグナルが５０％低下するときに測定される。例示される化合物１～２９０のＬＡＴＳ２ ＩＣ５０値を表１Ａに示す。
Figure 0007247102000482
Figure 0007247102000483
Figure 0007247102000484
Figure 0007247102000485
Figure 0007247102000486
実施例Ａ４：ＬＡＴＳ１生化学的Ｃａｌｉｐｅｒアッセイ（化合物例２９１～３３５）
ＬＡＴＳ１生化学的Ｃａｌｉｐｅｒアッセイを以下のとおり実施した。
ヒトＬＡＴＳ１キナーゼドメインタンパク質はＣａｒｎａｂｉｏ（カタログ番号０１－１２３；ロット１５ＣＢＳ－００９８Ｄ）から購入した。ヒトＬＡＴＳ１、触媒ドメイン［受託番号ＮＰ＿００４６８１．１の５８９～１１３０（末端）アミノ酸］をヒトＨｉｓタグ付加ＭＯＢＫＬ１Ａ［受託番号ＮＰ＿７７５７３９．１の１～２１６（末端）アミノ酸］とのＮ末端ＧＳＴ融合タンパク質（９０ｋＤａ）としてバキュロウイルス発現系を使用して共発現させた。グルタチオンセファロースクロマトグラフィーを用いることによりＧＳＴ－ＬＡＴＳ１を精製した。基質（Ｆｌｕｏ－ＳＧＫｔｉｄｅ；ＬＡＴＳ１に対するペプチド；ロットＢＳ－４１０６７）は以下の配列を有し：５－Ｆｌｕｏ－Ｎｖａ－ＫＫＲＮＲＲＬＳＶＡ－アミド（配列番号２７）×ＴＦＡ、Ｂｉｏｓｙｎｔａｎから購入した。
反応は、５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ ｐＨ７．５；０．０２％Ｔｗｅｅｎ２０；０．０２％ＢＳＡ；１ｍＭ ＤＴＴ；１０ｕＭ Ｎａ３ＶＯ４及び１０ｍＭ βグリセロリン酸（ｂｅｔａ－Ｇｌｙｃｅｒｏｌｐｈｏｓｐｈａｔ）及び新鮮に加えた１ｍＭ ＭｇＣｌ２及びｑｓｐ Ｈ２Ｏを含有する反応緩衝液中で実施する。
反応緩衝液中の基質溶液（２倍濃縮）は３００μＭ ＡＴＰ及び４μＭ Ｆｌｕｏ－ＳＧＫｔｉｄｅを含有する。
反応緩衝液中のキナーゼ溶液（２倍濃縮）は２０ｎＭ ＬＡＴＳ１キナーゼを含有する。
４．５μＬの２倍濃縮キナーゼ溶液、５０ｎＬの１．８ｍＭ化合物及び４．５μＬの基質溶液をＧｒｅｉｎｅｒからの３８４ウェルプレート黒色小容量に加え、３２℃で１時間インキュベートした。反応を終結させるため、各ウェルに対して１００ｍＭ Ｈｅｐｅｓ ｐＨ７．５；５％ＤＭＳＯ；０．１％コーティング試薬；１０ｍＭ ＥＤＴＡ及び０．０２％Ｂｒｉｊ３５及びｑｓｐ Ｈ２Ｏを含有する１５μＬの停止緩衝液。
１２ ｓｉｐｐｅｒチップ（カタログ７６０４０４）を使用するマイクロフルイディクスベースのＣａｌｉｐｅｒ ＥＺ Ｒｅａｄｅｒシステム（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して基質と生成物とを電気泳動的に分離した。分離はコーティング緩衝液（同上の停止緩衝液）中で、及び０．１％コーティング試薬ＣＲ３及び０．５％コーティング試薬ＣＲ８（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を含有して行う。
４８８ｎｍの励起及び５２０ｎｍの検出でＬＥＤを使用してプレートを読み取ることにより蛍光強度を定量化した。ＩＣ５０は、化合物の効果によって生成物蛍光シグナルが５０％低下するときに測定される。例示される化合物２９１～３３５のＬＡＴＳ１ ＩＣ５０値を表１Ｂに示す。
Figure 0007247102000487
Figure 0007247102000488
実施例Ａ５：マウス肝前駆細胞増殖アッセイ
増殖アッセイは、ハイコンテントイメージング方法を用いて肝前駆細胞（ＨＰＣ）から小さいオルガノイドへの化合物誘導性三次元成長を測定することからなる。Ｃ５７Ｂｌ／６野生型マウスから前駆細胞を単離し、記載されるとおり拡大した（Ｌｕ，Ｗ．Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１７，９７１－９８３（２０１５））。細胞は液体窒素中に貯蔵し、必要に応じて解凍し、以下のプロトコルを用いて試験する：
ＨＰＣを、そのコラーゲンＩをコートした培養ベッセル（Ｃｏｒｎｉｎｇ；カタログ番号３５４４８７）から回収し、ＣＥＤＥＸ細胞カウンター（Ｒｏｃｈｅ）を使用してカウントし、生存に関して評価する。遠心後、１０％ウシ胎仔血清（Ａｍｉｍｅｄ；カタログ番号２－０１Ｆ１０－ｌ）；１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ；カタログ番号１５１４０－１２２）；１７．６ｍＭのＮａＨＣＯ３（Ｓｉｇｍａ；カタログ番号Ｓ８７６１）；２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏ；カタログ番号Ｈ３３７５）；１０ｍＭニコチンアミド（Ｓｉｇｍａ；カタログ番号Ｎ０６３６－１００）；１４ｍＭグルコース（Ｓｉｇｍａ；カタログ番号Ｇ７０２１）；１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ；カタログ番号ＴＭＳ－００５）；ストック溶液から１００倍希釈したインスリン・トランスフェリン・セレン（ＩＴＳ）（Ｓｉｇｍａ；カタログ番号ｌ３１４８）；１００ｎＭデキサメタゾン（Ｓｉｇｍａ；カタログ番号Ｄ４９０２）；０．２ｍＭアスコルビン酸（Ｓｉｇｍａ；カタログ番号Ａ７５０６－１００Ｇ）；１０ｎｇ／ｍｌ組換えヒトＩＬ－６（Ｐｒｅｐｒｏｔｅｃｈ；カタログ番号２００－０６）；１０ｎｇ／ｍｌマウスＨＧＦ（Ｐｒｅｐｒｏｔｅｃｈ；カタログ番号３１５－２３；ロット０７１１Ｓ５２７）；１０ｎｇ／ｍｌマウスＥＧＦ（Ｐｒｅｐｒｏｔｅｃｈ；カタログ番号３１５－０９；ロット０２１７１７９－１）を補足した２ｍｌのウィリアムＥ培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；カタログ番号２２５５１０８９）中に１２００万個の細胞を再懸濁する。６ミリリットルのマトリゲル（Ｃｏｒｎｉｎｇ；カタログ番号３５４２７７；ロット：５１８７００６）を細胞／培地溶液に加え、ひいては最終細胞濃度は２５％培養培地及び７５％マトリゲル中１ミリリットル当たり１５０万個のＨＰＣとなる。Ｓｔａｒディスペンサー（Ｈａｍｉｌｔｏｎ）を使用して５マイクロリットル（μｌ）の細胞／マトリゲル懸濁液を透明底９６ウェルアッセイプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ；カタログ番号３５６６４９）の各ウェルに移す。３７℃及び５％ＣＯ２で２０分間インキュベートしてマトリゲルを重合させた後、４５μｌの細胞培養培地を上に分注する。
化合物供給源プレートにおいて、９０％ＤＭＳＯ中に溶解した１．２μｌの化合物に３００μｌの細胞培養培地を分注する。適切に混合した後、ＣｙＢｉ Ｗｅｌｌ（ＣｙＢｉｏ）を使用して５０μｌの化合物溶液をアッセイプレートに移す。各濃度間の希釈係数が３．１６の８ポイント濃度曲線で各化合物を試験する。試験する最高化合物濃度は２０μＭであり、最低は９ｎＭである。アッセイプレートを３７℃及び５％ＣＯ２で４日間インキュベートする。
インキュベーション後、４％パラホルムアルデヒド（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ；カタログ番号１５７１４－Ｓ）及びストック溶液を１／５０００希釈したヘキスト３３３４２（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；カタログ番号Ｈ３５７０）を含有するリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（Ｇｉｂｃｏ；カタログ番号１００１０－０１５）でオルガノイドを固定して核を染色する。プレートを室温で９０分間インキュベートし、１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含有する３００μｌ ＰＢＳで１回洗浄する。
ＣＶ７０００イメージャー（Ｙｏｋｏｇａｗａ）によって明視野ランプ（ランプ出力：１０％；露光時間：２０ｍｓ）及び４０５ナノメートルレーザー（レーザー出力：１００％；露光時間２００ｍｓ）を使用して１０倍拡大率でプレートをイメージングする。ウェル当たり４つの異なる画像を取得し、Ｙｏｋｏｇａｗａ画像分析ソフトウェア（ＹＡＳ）で分析した。オルガノイドサイズの決定に使用した出力特徴は、ウェルで平均を取ったオルガノイド当たりの平均核数である。このオルガノイド当たりの平均核数（ｘ）は、以下の計算を用いて中立対照処理（ＤＭＳＯ）に対して正規化する：［ｘｎ＝＋１００（ｘ－ＮＣ）／ＮＣ］。中立対照で正規化したデータを自動曲線フィッティングに用いて、ＥＣ５０値を含めた化合物毎の曲線パラメータを導き出す。
マウス肝前駆細胞増殖アッセイは、肝前駆細胞増殖の誘導に化合物が有効かどうかの試験に容易に用い得る。本発明の特定の化合物をマウス肝前駆細胞増殖アッセイで試験したところ、２０μＭ未満のＥＣ５０値を有することが分かり、例えば例４８ａ及び５８はそれぞれ０．２６及び０．８４μＭのＥＣ５０値を有することが分かった。本発明の特定の他の化合物をマウス肝前駆細胞増殖アッセイで試験したところ、２０μＭより高いＥＣ５０値を有する（例えば例３０３）ことが分かった。
実施例Ａ６：ｐＹＡＰ ＨＴＲＦアッセイ（ＨａＣａＴ細胞）
ホスホ－ＹＡＰ（ＳＥＲ１２７）１００００テストキット（ＣｉｓＢｉｏ、カタログ番号６４ＹＡＰＰＥＨ）を製造者の指示に従い使用してｐＹＡＰ ＨＴＲＦアッセイを実施した。簡潔に言えば、ペニシリン－ストレプトマイシン－グルタミンを含有するＤＭＥＭ（フェノールレッド不含）＋１０％ＦＢＳ中にＨａＣａＴ細胞を１．１×１０６細胞／ｍＬで懸濁した。５μＬの細胞を１５３６ウェル白色固体底、組織培養処理済みプレートに分注し（５５００細胞／ウェル）、３７℃で４８時間インキュベートした。ＨａＣａＴ細胞が入ったアッセイプレートにＰｉｎｔｏｏｌ（ＧＮＦ）を使用して５０ｎＬ試験化合物を移し、２時間インキュベートした。アッセイウェルに溶解緩衝液（ＣｉｓＢｉｏ）を加え、室温で５分間インキュベートし、続いて２μＬ検出抗体（１：４０希釈の各ｐＹＡＰ ｄ２ ａｂ及びｐＹＡＰクリプテート抗体ストック）を加えた。金属蓋で覆ったプレートを室温で一晩（２０時間）インキュベートした。プレートをＨＴＲＦ（６６５ｎｍ／６２０ｎｍ）に関してＰｈｅｒａｓｔａｒ（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）で読み取った。ＩＣ５０は、化合物の効果によってＨＴＲＦシグナルが５０％低下するときに測定される。結果を表１Ｃに示す。
実施例Ａ７：ＹＡＰ転位アッセイ（ＨａＣａＴ細胞）
ペニシリン－ストレプトマイシン－グルタミンを含有するＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ中にＨａＣａＴ細胞を０．４×１０６細胞／ｍｌで懸濁した。５０μｌの細胞を３８４ウェル透明底アッセイプレートに分注し（２０，０００細胞／ウェル）、３７℃で一晩インキュベートした。ＨａＣａＴ細胞が入ったアッセイウェルにＥＣＨＯ（Ｌａｂｃｙｔｅ）を使用して１００ｎＬ試験化合物を移した。３７℃で２４時間インキュベートした後、７μＬの３２％ＰＦＡを各ウェルに分注し、室温で４５分間インキュベートした。プレートをＰＢＳで３回洗浄し、ウェル当たり２０μＬのＰＢＳを残し、次にＰＢＳ中０．１％Ｔｒｉｔｏｎ及び１．５％ＢＳＡによって室温で４５分間処理した。プレートをＰＢＳで５回洗浄し、ウェル当たり２０μＬのＰＢＳを残した。１．５％ＢＳＡ含有ＰＢＳ中２０μＬの１：１０００一次ＹＡＰ ａｂ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カタログ番号６３．７）及び１：１５００ Ｄｒａｑ５を各ウェルに加え、室温で４時間インキュベートした。ＰＢＳで３回洗浄した後、ウェル当たり２０μＬのＰＢＳを残し、各ウェルを２０μＬの１：２０００ ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ４８８＿Ａ２１２０２二次抗体（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）と共に室温で４時間インキュベートした。プレートをＰＢＳで更に３回洗浄し、密閉し、ハイコンテントＯｐｅｒａイメージングシステム（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）でイメージングした。結果を表１Ｃに示す。
Figure 0007247102000489
Figure 0007247102000490
Figure 0007247102000491
Figure 0007247102000492
Figure 0007247102000493
実施例Ａ８：標的同定
ＭＳＴ１／２又はＬＡＴＳ１／２に対するｓｉＲＮＡをヒトＨａＣａＴ細胞にトランスフェクトした。４８時間後、細胞を１μＭのオカダ酸で２時間処理してｐＹＡＰシグナルを増強した。細胞ライセートを以下に記載するｐＹＡＰ（Ｓｅｒ１２７）に関するウエスタンブロット分析に供した。実験の結果は図３３Ａ～図３３Ｃに報告する。
ウエスタンブロット分析
細胞ライセート（レーン当たり２５μｇ）をＸＴ試料緩衝液及び還元剤（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）と混合し、４～１２％グラジエントＳＤＳ Ｃｒｉｔｅｒｉｏｎプレキャストゲル（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）によって分離し、ニトロセルロース膜（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）に転写した。高感度化学発光キット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用することによりタンパク質を一次抗体及び西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲート二次抗体で検出した。使用した一次抗体は抗ｐＹＡＰ抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、カタログ番号１３００８Ｓ）及び抗アクチン抗体（Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ８２２７）であった。
実施例Ａ９：インビボ薬力学（ＰＤ）
本インビボＰＤ試験には８～１０週齢雄Ｃ５７ＢＬ６マウス（Ｅｎｖｉｇｏ）を使用した。滅菌外科用６ｍｍパンチ生検用具を使用して麻酔下のマウスの背に２つの全層切除創を作成した。ＬＡＴＳ阻害剤を４９．５％プロピレングリコール／０．５％Ｔｗｅｅｎ８０／４９％ＰＢＳ／１％ＨＰＭＣ中に製剤化し、３μＬの投与容積で局所投与した。創傷範囲を粘着性ドレッシング（Ｔｅｇａｄｅｒｍ）で覆った。次に動物を自己粘着性包帯で巻いた。２回の１日用量後、最終回用量の７時間後に鋏を使用して創傷縁部の周囲の皮膚試料（２ｍｍ環状試料）を採取した。
ＲＮｅａｓｙキット（Ｑｉａｇｅｎ）を製造者の指示に従い使用して、回収した試料をＲＮＡ抽出に供した。ＰＴＣ－２００ペルチェサーマルサイクラー（ＭＪ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）及びＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ７９００ＨＴ配列検出システム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で二段階ＴａｑＭａｎ ＲＴ－ＰＣＲ分析を実施した。Ｈｉｇｈ－Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ Ａｒｃｈｉｖｅキット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を製造者の指示に従い使用してｃＤＮＡを合成した。ＴａｑＭａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｍａｓｔｅｒミックス（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及びＣｙｒ６１及びＧａｐｄｈプローブ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を製造者の指示に従い使用してＴａｑＭａｎ分析を実施した。標的遺伝子のｍＲＮＡ発現レベルはＧａｐｄｈ ｍＲＮＡレベルに対して正規化し、ＳＤＳ ２．０ソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用してデータを分析することにより、相対ＲＮＡ量を計算した。
動物試験は全て、ノバルティス研究財団ゲノミクス研究所（Ｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ：ＧＮＦ））で行われた。実験プロトコルは動物福祉規則に準拠し、ＧＮＦの施設内動物実験委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）によって承認された。
図３４に、試験化合物濃度に対して得られた相対Ｃｙｒ６１／Ｇａｐｄｈ発現レベルを棒グラフとしてプロットした。
実施例Ａ１０：インビボ組織学及びＫｉ６７染色
インビボ組織学試験には、７週齢雄Ｃ５７ＢＬ６マウスを使用した。ＬＡＴＳ阻害剤を７０％ＰＧ／３０％ＥｔＯＨ中に製剤化し、剪毛した背部表面に２５μＬの投与容積（投薬量１回分（ｄｏｓｇｅ）当たり２５０μｇ）で局所投与した。３日間の１日２回投与後、皮膚試料を採取し、Ｋｉ６７に関する免疫組織学染色に供した（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号ＲＭ－９１０６）。切片を目視観察し、インハウスのイメージングアルゴリズムによってＫｉ６７陽性細胞（ｐｏｓｔｉｖｅ ｃｅｌｌ）をカウントした。Ｋｉ６７染色の代表的な顕微鏡像を図３５Ａに示した。未処理及び処理済みマウス皮膚細胞におけるＫｉ６７陽性細胞の存在量を図３５Ｂに散布図としてプロットした。
実施例Ａ１１：ｐＹＡＰ ＨＴＲＦアッセイ（ＪＨＨ－５細胞）
化合物で処理したＪＨＨ－５細胞を使用して（Ｆｕｊｉｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．１９９０ Ｏｃｔ；３７（５）：４５７－６０）、これをホスホ－ＹＡＰ（Ｓｅｒ１２７）５００００テストキット（ＣｉｓＢｉｏカタログ番号６４ＹＡＰＰＥＩ）で製造者の指示に従い分析することにより、ｐＹＡＰ ＨＴＲＦアッセイを実施する。簡潔に言えば、１０％（ｖ／ｖ）熱失活ウシ胎仔血清（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｇｉｂｃｏカタログ番号１６１４００７１）及びペニシリン－ストレプトマイシン各１００Ｕ／ｍｌ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５１４０１２２）を補足したフェノールレッド不含ウィリアムＥ培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｇｉｂｃｏカタログ番号Ａ１２１７６０１）中にＪＨＨ－５細胞を０．４８×１０６細胞／ｍｌで懸濁する。細胞を３８４ウェル透明底培養プレート（５０ｕｌ／ウェル、ウェル当たり２４０００細胞、Ｇｒｅｉｎｅｒカタログ番号７８１０９１）に分注し、細胞培養インキュベーターにおいて３７℃で２４時間インキュベートする。ＪＨＨ－５細胞が入った培養プレートにＥｃｈｏ５５０（Ｌａｂｃｙｔｅ）音響ディスペンサーを使用して試験化合物を移し（５０ｎｌ／ウェル）、続いて３７℃で２時間インキュベートする。溶解緩衝液（ＣｉｓＢｉｏキット、カタログ番号６４ＹＡＰＰＥＩの一部）を４倍濃縮物（１６ｕｌ／ウェルに対応する）としてアッセイプレートに加え、撹拌しながら室温で３０分間インキュベートする。ライセートを培養プレートから白色低容量３８４ウェルアッセイプレート（１２ｕｌ／ウェル、Ｇｒｅｉｎｅｒカタログ番号７８４０７５）に移し、続いて３ｕｌ／ウェルの検出抗体（ＣｉｓＢｉｏキット、カタログ番号６４ＹＡＰＰＥＩの一部：各ｐＹＡＰ ｄ２抗体及びｐＹＡＰクリプテート抗体ストックの１：４０希釈）を加える。プレートを密閉し、遮光下に室温で一晩（１８時間）インキュベートする。ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で６６５ｎｍ及び６２０ｎｍの発光波長でプレートを読み取る。製造者のプロトコルに指定されるとおり、ウェル毎のＨＴＲＦシグナル比ｘを［ｘ＝シグナル（６６５ｎｍ）／シグナル（６２０ｎｍ）×１００００］として計算する。このウェル毎のシグナル比ｘを実薬対照及び中立対照処理（ＤＭＳＯ）に対して、ＮＣ中央値を０％及びＡＣ中央値を－１００％としてスコア化して正規化することにより、ウェル毎の正規化シグナル比ｘｎを［ｘｎ＝±１００（ｘ－ＮＣ）／（ＡＣ－ＮＣ）］として計算する。対照で正規化したデータを自動曲線フィッティングに使用して、ＩＣ５０値を含めた化合物毎の曲線パラメータを導き出す。例示される化合物のＪＨＨ－５細胞におけるｐＹＡＰ ＩＣ５０値を表１Ｄに示す。
Figure 0007247102000494
Figure 0007247102000495
Figure 0007247102000496
Figure 0007247102000497
Figure 0007247102000498
実施例Ａ１２：ＹＡＰ核内転位アッセイ（ＪＨＨ－５細胞）
化合物で処理したＪＨＨ－５細胞を使用して（Ｆｕｊｉｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．１９９０ Ｏｃｔ；３７（５）：４５７－６０）、これを抗ＹＡＰ１抗体染色後のハイコンテントイメージングによって分析してＹＡＰ核内転位アッセイを実施する。簡潔に言えば、１０％（ｖ／ｖ）熱失活ウシ胎仔血清（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｇｉｂｃｏカタログ番号１６１４００７１）及びペニシリン－ストレプトマイシン各１００Ｕ／ｍｌ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５１４０１２２）を補足したフェノールレッド不含ウィリアムＥ培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｇｉｂｃｏカタログ番号Ａ１２１７６０１）中にＪＨＨ－５細胞を０．４８×１０６細胞／ｍｌで懸濁する。細胞を３８４ウェル透明底培養プレート（５０ｕｌ／ウェル、ウェル当たり２４０００細胞、Ｇｒｅｉｎｅｒカタログ番号７８１０９１）に分注し、細胞培養インキュベーターにおいて３７℃で２４時間インキュベートする。ＪＨＨ－５細胞が入った培養プレートにＥｃｈｏ５５０（Ｌａｂｃｙｔｅ）音響ディスペンサー（５０ｎｌ／ウェル）を使用して試験化合物を移す。３７℃で４時間インキュベートした後、各ウェルに４％（ｖ／ｖ）の最終濃度となるように１２．５ｕｌの２０％ＰＦＡストック溶液（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号１５７１３Ｓ）を分注し、室温で２０分間インキュベートする。プレートをＴＢＳ（１０倍濃縮物から調製、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈカタログ番号Ｔ５９１２）で洗浄し、次にＤＰＢＳ中０．１％（ｖ／ｖ）Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００溶液（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈカタログ番号９３４４３）によって室温で１５分間透過処理する。プレートを再びＴＢＳで洗浄し、続いて各ウェルに抗ＹＡＰ１抗体（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓカタログ番号ＮＢ１１０－５８３５８）をＤＰＢＳ中３％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ（３５％ストック溶液から調製、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈカタログ番号Ａ７９７９）での１：５００希釈で加え、４℃で一晩インキュベートする。一次抗体溶液を除去し、ＴＢＳで洗浄した後、１：１００００希釈のヘキスト３３３４２溶液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号３５７０）を補足したＤＰＢＳ中３％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ（３５％ストック溶液から調製、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈカタログ番号Ａ７９７９）中のＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号Ａ－２１２４４）にコンジュゲートした１：１０００希釈のヤギ抗ウサギ二次抗体と共に各ウェルを室温で２時間インキュベートする。プレートを再びＴＢＳで洗浄し、次に密閉して、ＩＮ Ｃｅｌｌアナライザーハイコンテント分析システム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）でイメージングする。ＣｅｌｌＰｒｏｆｉｌｅｒ画像分析ソフトウェアを使用してヘキスト核染色を全細胞内ＹＡＰ Ａｌｅｘａ Ｆｌｏｕｒ ６４７染色と比較することにより（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｉｏｌ．２００６；７（１０）：Ｒ１００）、核ＹＡＰに対応するシグナルを導き出す。核ＹＡＰシグナルｘは、実薬対照及び中立対照処理（ＤＭＳＯ）に対し、ＮＣ中央値を０％及びＡＣ中央値を＋１００％としてスコア化して正規化することにより、ウェル毎の正規化核ＹＡＰシグナルｘｎを［ｘｎ＝±１００（ｘ－ＮＣ）／（ＡＣ－ＮＣ）］として計算する。対照で正規化したデータを自動曲線フィッティングに使用して、ＥＣ５０値を含めた化合物毎の曲線パラメータを導き出した。
実施例Ａ１３：マウスのインビボ治療
全ての動物試験は、研究における実験動物の使用を規定する連邦政府、州、地方及び施設内のガイドラインに従い行った。雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（８～１０週齢）をＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）から購入した。例４６を経口投与用にメチルセルロース：Ｔｗｅｅｎ８０：水（０．５：０．５：９９）の懸濁液中に３ｍｇ／ｍｌで、及び例２６１を１ｍｇ／ｍｌで製剤化した。いずれの化合物の単回経口用量も１０ｍＬ／ｋｇ体重であった。投与後２時間（ｍＲＮＡ分析用）又は投与後２４時間（免疫組織化学用）のいずれかに血液及び肝組織を深麻酔下（イソフルラン）で採取した。
肝組織におけるホスホ－ＹＡＰ（ｐＹＡＰ）ＨＴＲＦ
Ｐｈｏｓｐｈｏｓａｆｅ抽出緩衝液（Ｎｏｖａｇｅｎ、カタログ番号７１２９６－３）中のプロテアーゼ阻害剤（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｐ８３４０）の１：５０溶液が入ったＬｙｓｉｎｇ Ｍａｔｒｉｘチューブ（ＭＰ、カタログ番号６９１３－５００）に凍結肝組織を移し、ＦａｓｔＰｒｅｐ－２４（ＭＰ ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）を使用してホモジナイズした。この混合物を氷上に２０分間置き、次に１４０００ｒｐｍで２０分間遠心した。上清を新しいチューブに移した。ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅカタログ番号２３２２７）を製造者のプロトコルに従い使用してタンパク質濃度を測定した。試料は全て、１８０μｌの総容積のＰｈｏｓｐｈｏｓａｆｅ中５μｇ／μｌの最終濃度に正規化し、ＨＴＲＦアッセイ用に９６ウェルプレートにプレーティングした。ｐＹＡＰは、ホスホ－ＹＡＰ（ＳＥＲ１２７）５００００テストキット（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６４ＹＡＰＰＥＩ）を使用してＨＴＲＦによりアッセイした。抽出緩衝液単独（Ｐｈｏｓｐｈｏｓａｆｅ）又はＰｈｏｓｐｈｏｓａｆｅとＨＴＲＦ溶解緩衝液（Ｃｉｓｂｉｏ）との１：１混合物中のマウス肝臓ライセートを３８４ウェルアッセイプレートのデュプリケートウェルでアッセイした（１２μＬ／ウェル）。総タンパク質含有量に基づき、各試料に同じ入力量を使用した（１ウェル当たり１試料につき３０～６０ｕｇ）。各々検出緩衝液（Ｃｉｓｂｉｏ）で１：４０希釈した検出抗体ホスホ－ＹＡＰ ｄ２及びホスホ－ＹＡＰクリプテートを加え（３μＬ／ウェル、各抗体について最終希釈１：２００）、その後、プレートを密閉し、遮光下に室温で一晩（１８時間）インキュベートした。プレートをＥｎＶｉｓｉｏｎ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で６６５ｎｍ及び６２０ｎｍの発光波長で読み取った。製造者のプロトコルに指定されるとおりＨＴＲＦシグナル比をシグナル（６６５ｎｍ）／シグナル（６２０ｎｍ））×１００００として計算した。治療群プロットにおける各ライセート試料について１つのＨＴＲＦシグナル値（デュプリケートウェルの平均値）を使用した。
定量的ＲＴ－ＰＣＲ
ＲＮＡｌａｔｅｒ試薬（Ｑｉａｇｅｎ）に貯蔵した後の組織から、ＴＲＩｚｏｌ法を製造者の指示に従い用いて（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、全肝臓ＲＮＡを単離した。ＴａｑＭａｎ遺伝子発現アッセイ及び標準プロトコルに従う試薬（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して相対ｍＲＮＡ存在量を定量的ＲＴ－ＰＣＲによって測定した。ＹＡＰ標的遺伝子のマウスプローブはＣＴＧＦ（Ｍｍ０１１９２９３３＿ｇ１）及びＣｙｒ６１（Ｍｍ００４８７４９８＿ｍ１）であった。マウスＧＡＰＤＨを内部対照として使用した（プローブ４３５１３０９）。ｍＲＮＡの相対的変化はΔΔＣｔ法によって計算した。化合物処理による遺伝子発現の変化は、媒体群に対する変化倍率として表される。
Ｋｉ６７に関する免疫組織化学（ＩＨＣ）
肝組織を１０％中性緩衝ホルマリン中に２４～４８時間固定した。パラフィン処理及び包埋は標準的手順によった。Ｖｅｎｔａｎａ自動システムを用いて切片を５ミクロン厚さに切断し、染色した。マウスＫｉ６７の一次抗体はウサギＩｇＧ（Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｓ）であった。Ｋｉ６７陽性肝細胞をＨＡＬＯプラットフォームを用いた画像分析によって定量化した。中葉の中央部から、動物当たり少なくとも３つの切片を分析した。
Figure 0007247102000499
ＬＡＴＳキナーゼ阻害剤の単回経口投与後２時間でＹＡＰ標的遺伝子ＣＴＧＦ及びＣｙｒ６１のｍＲＮＡが増加し、２４時間でＫｉ６７免疫組織化学（ＩＨＣ）によって示される増殖が増加した。値は媒体群に対する変化倍率として（平均値±ＳＥＭ）で表す。
実施例Ｂ１：ヒト輪部上皮細胞単離
アイバンクから、研究用に同意が得られている死体ヒト角膜を入手した。輪部縁部を解剖し、１．２ｍｇ／ｍｌディスパーゼ溶液中に３７℃で２時間、続いてＴｒｙｐＬＥ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中に１０分間、部分的に解離した。次に部分的に解離した輪部縁部から輪部陰窩の小片を慎重に切り出し、遠心によってリンスした）。このように得た細胞を以下の実施例Ｂ２～Ｂ１１において使用した。
実施例Ｂ２：ＬＡＴＳ阻害剤に対する細胞の曝露及び細胞内ＹＡＰ分布の測定
ガラス底黒色壁２４ウェルディッシュ内の１０マイクロモル濃度のＬＡＴＳ阻害剤化合物例１３３番又は４９番を補足した又は陰性対照としてＤＭＳＯ中に補足した輪部上皮細胞培養培地（１０％ヒト血清及び１．３ｍＭ塩化カルシウムを補足したＤＭＥＭ Ｆ１２）に、実施例Ｂ１に記載されるとおり入手した細胞をプレーティングした。細胞をこれらの条件下に５％ＣＯ２、３７℃で２４時間培養した。
ＬＡＴＳ阻害剤が下流標的ＹＡＰに及ぼす効果を測定するため、細胞内ＹＡＰ分布を免疫組織化学によって分析した。細胞培養物を４％ＰＦＡで２０分間固定し、透過処理し、ＰＢＳ中０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）及び３％ロバ血清のブロッキング溶液中で３０分間ブロックした。次に細胞をブロッキング溶液中の一次抗体によって４℃で１２時間標識した。使用した一次抗体はＳａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙからの抗ＹＡＰであった。試料をＰＢＳで３回洗浄し、１：５００希釈のロバ産生二次抗体Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）を室温で３０分間適用した。陰性対照は一次抗体を省いた（データは示さず）。Ｚｅｉｓｓ ＬＳＭ ８８０共焦点顕微鏡を使用して蛍光を観察した。
ＬＡＴＳ阻害剤を含まずに培養したＬＳＣ（ＤＭＳＯ対照）の核では、ごく弱いＹＡＰ免疫染色しか観察されなかった。ＬＡＴＳ阻害剤化合物例１３３番又は４９番に曝露したＬＳＣの核では、ＹＡＰ免疫染色は強くなった（データは示さず）。
実施例Ｂ３：ＬＡＴＳ阻害剤に対する細胞の曝露及びＹＡＰリン酸化の測定
実施例Ｂ１に記載されるとおり入手した細胞を培養皿からアキュターゼ（Ａｃｃｕｔａｓｅ）によって３７℃で１０分間脱離させ、細胞懸濁液を遠心によってリンスして、６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）内の１０％ヒト血清及び１．３ｍＭ塩化カルシウムを補足したＤＭＥＭ Ｆ１２にプレーティングし、ＬＡＴＳ阻害剤化合物なしに２～４日間培養した。
次に培地を、１０マイクロモル濃度のＬＡＴＳ阻害剤化合物例１３３番又は４９番を補足した又は陰性対照としてＤＭＳＯ中に補足した新鮮な輪部上皮細胞培養培地（１０％ヒト血清及び１．３ｍＭ塩化カルシウムを補足したＤＭＥＭ Ｆ１２）に交換した。細胞をこれらの条件下に５％ＣＯ２、３７℃で１時間培養した。
ＬＡＴＳ阻害剤が下流標的ＹＡＰに及ぼす効果を測定するため、以下のとおりウエスタンブロットによってＹＡＰリン酸化レベルを測定した。トリプシン解離及び遠心によって細胞ペレットを入手し、ＰＢＳで洗浄した。このペレットを３０マイクロリットルのプロテアーゼ阻害剤カクテル含有ＲＩＰＡ溶解緩衝液（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で１０分おきにボルテックスしながら３０分間溶解させた。次に細胞デブリを４℃で１５分間、１４ｋ ｒｐｍでペレット化し、タンパク質ライセートを回収した。マイクロＢＣＡキット（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用してタンパク質濃度を定量化した。１５マイクログラムの全タンパク質を４～２０％ＴＧＸゲル（ＢｉｏＲａｄ）の各ウェルにロードし、製造者の指示に従いウエスタンブロッティングを実施した。膜をホスホ－ＹＡＰ（ｓｅｒ１２７）（ＣＳＴ、１：５００）又は全Ｙａｐ（Ａｂｎｏｖａ、１：５００）抗体でプローブし、ローディング対照としてはアクチン（Ａｂｃａｍ）標識を使用した。膜をＨＲＰコンジュゲート二次抗体で染色し、リンスし、ＣｈｅｍｉＤｏｃシステム（Ｂｉｏｒａｄ）を製造者の指示に従い使用してイメージングした。
ウエスタンブロット分析（図１を参照のこと）から、化合物例１３３番及び４９番の両方がヒトＬＳＣのＹＡＰリン酸化レベルの低下を引き起こしたことが示された。これらの結果は、ＬＡＴＳ阻害剤化合物例１３３番及び４９番がヒトＬＳＣのＹＡＰシグナル伝達を活性化させ得ることを示唆している。
実施例Ｂ４：ヒト輪部幹細胞集団拡大及び細胞表現型の免疫組織化学的観察
２４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）内の１０マイクロモル濃度のＬＡＴＳ阻害剤化合物例１３３番又は４９番を補足した又は陰性対照としてＤＭＳＯ中に補足した輪部上皮細胞培養培地（１０％ヒト血清及び１．３ｍＭ塩化カルシウムを補足したＤＭＥＭ Ｆ１２）に、実施例Ｂ１に記載されるとおり入手した細胞をプレーティングした。細胞は初めに、単離後に６日間にわたって継代することなく５％ＣＯ２、３７℃で培養した（図２Ａ、図２Ｂ及び図２Ｃ）。
化合物が２代継代後にＬＳＣ拡大を可能にする能力を判定するため、ＬＳＣを継代し、化合物例４９の存在下で２週間培養して拡大を可能にした（図２Ｄ）。培養物をアキュターゼ（Ａｃｃｕｔａｓｅ）によって３７℃で１０分間処理し、細胞懸濁液を遠心によってリンスし、ＬＡＴＳ阻害剤化合物例４９を補足した新鮮なＬＳＣ培養培地に細胞をプレーティングすることにより、輪部幹細胞（ＬＳＣ）を継代した。
拡大細胞集団がｐ６３αを発現したことを観察するため、これを以下のとおり免疫組織化学によって測定した。細胞培養物を４％ＰＦＡで２０分間固定し、透過処理し、ＰＢＳ中０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）及び３％ロバ血清のブロッキング溶液中で３０分間ブロックした。次に細胞をブロッキング溶液中の一次抗体によって４℃で１２時間標識した。使用した一次抗体はＣｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇからのｐ６３αであった。試料をＰＢＳで３回洗浄し、１：５００希釈のロバ産生二次抗体Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）を室温で３０分間適用した。細胞を１：５００希釈のヒト核抗原抗体（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で対比染色することにより、培養物中の全ての細胞を標識し、そのヒト同一性を確認した。陰性対照は一次抗体を省いた（データは示さず）。Ｚｅｉｓｓ ＬＳＭ ８８０共焦点顕微鏡を使用して蛍光を観察した。
図２Ａは、成長培地及びＤＭＳＯの存在下では僅か数個の単離細胞が培養皿に付着したのみで、最長６日間生存することを示している。多くの細胞はヒト核マーカーを発現したが、ｐ６３αを発現したものはほとんどなかった。対照的に、ＬＡＴＳ阻害剤化合物例１３３番（図２Ｂ）及び化合物例４９番（図２Ｃ）の存在下では、細胞がコロニーを形成し、ｐ６３αを発現した。この結果から、ＬＡＴＳ阻害剤がｐ６３α陽性表現型の細胞集団の拡大を促進することが示された。図２Ｄ：細胞を継代し、それをＬＡＴＳ阻害剤化合物例４９番の存在下で２週間培養することにより、細胞集団の拡大及びｐ６３αを発現するコンフルエントな培養物の形成が可能であった。
実施例Ｂ５：ヒト輪部幹細胞集団拡大及びその測定
４８ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）内の１０マイクロモル濃度のＬＡＴＳ阻害剤（以下の表２及び表３に掲載されるとおり）を補足した又は陰性対照としてＤＭＳＯ中に補足したＸＶＩＶＯ１５培地（Ｌｏｎｚａ）に、実施例Ｂ１に記載されるとおり入手した細胞をプレーティングした。細胞を５％ＣＯ２、３７℃で培養した。
各化合物につき２セットの培養物を作成した。第１の培養物セットは、角膜から単離した細胞が細胞培養皿に付着した後に（典型的には細胞プレーティング後２４時間で）４％ＰＦＡに室温で２０分間固定した。第２の培養物セットは、２継代にわたって培養した後に４％ＰＦＡに室温で２０分間固定した。細胞は、それが９０～１００％コンフルエンスに達したところで継代した。
拡大細胞集団がｐ６３αを発現したことを観察するため、これを以下のとおり免疫組織化学によって測定した。固定した細胞培養物を透過処理し、ＰＢＳ中０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）及び３％ロバ血清のブロッキング溶液中に３０分間ブロックした。次に細胞をブロッキング溶液中の一次抗体によって４℃で１２時間標識した。使用した一次抗体はＣｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇからのｐ６３αであった。試料をＰＢＳで３回洗浄し、１：５００希釈のロバ産生二次抗体Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）を室温で３０分間適用した。次に細胞核をＰＢＳ中０．５マイクロモルのＳｙｔｏｘオレンジ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）の溶液中において室温で５分間標識した。
ｐ６３α陽性細胞のパーセンテージを判定するため、抗ｐ６３α抗体によって標識された細胞の数をカウントし、Ｓｙｔｏｘオレンジによって染色された核の数をカウントすることにより細胞総数を決定した。次に、ｐ６３αもまた発現したＳｙｔｏｘオレンジ陽性核のパーセンテージを計算することによりｐ６３α陽性細胞の割合を決定した。
細胞拡大率を判定するため、Ｚｅｉｓｓ ＬＳＭ ８８０共焦点顕微鏡を使用して核をカウントした。次に、播種した細胞集団に対する拡大された細胞集団の比率を計算することにより、拡大倍数を決定した。
以下の表の結果は、ＬＡＴＳ阻害剤が細胞集団拡大を可能にしたことを示している。ＬＡＴＳ阻害剤の存在下では、５７～９７パーセントの細胞がｐ６３α陽性表現型を発現する。
Figure 0007247102000500
Figure 0007247102000501
実施例Ｂ６：ヒト輪部細胞におけるＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２のｓｉＲＮＡノックダウン
２４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）内のＸＶＩＶＯ１５培地（Ｌｏｎｚａ）に、実施例Ｂ１に記載されるとおり入手した細胞をプレーティングした。細胞を５％ＣＯ２、３７℃で培養した。トランスフェクション（リポフェクション、ＲＮＡｉＭａｘを使用、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）によってＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２をノックダウンした。細胞培養プレートの各ウェルに、各遺伝子を標的とする４つのｓｉＲＮＡの０．５マイクログラムのプールをトランスフェクトした。この研究に使用したｓｉＲＮＡは、ＱｉａｇｅｎのＬＡＴＳ１ ｓｉＲＮＡ ＳＩ０００６７１７２及びＬＡＴＳ２ ｓｉＲＮＡ ＳＩ００１０６９２５であった。陰性対照としては、製造者のプロトコル（Ｑｉａｇｅｎ）に従いスクランブルｓｉＲＮＡを使用した。
ＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２ ｓｉＲＮＡ又はスクランブルｓｉＲＮＡ対照のトランスフェクションから４８時間後、細胞増殖を測定するためＥｄＵ染色を製造者の指示（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に従い実施した。細胞核をＳｙｔｏｘオレンジで標識した。Ｚｅｉｓｓ ＬＳＭ ８８０共焦点顕微鏡を使用してＥｄＵ及びＳｙｔｏｘオレンジ蛍光を観察することにより、ＥｄＵ陽性細胞核のパーセンテージを測定した。
図３は、ＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２ノックダウンを受けてＥｄＵ陽性細胞のパーセンテージが増加したことを示し、ＬＡＴＳのノックダウンが細胞増殖につながることを示している。
実施例Ｂ７：ヒト輪部幹細胞集団拡大及びマーカーΔＮ－ｐ６３α／β／γ、ＡＢＣＧ２及びＣ／ＥＢＰδの免疫組織化学的観察
４８ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）内の１０マイクロモル濃度のＬＡＴＳ阻害剤（化合物例４９及び化合物例１３３）を補足した又は陰性対照としてＤＭＳＯ中に補足したＸＶＩＶＯ１５培地（Ｌｏｎｚａ）に、実施例Ｂ１に記載されるとおり入手した細胞をプレーティングした。細胞を５％ＣＯ２、３７℃で８～１０日間培養した。
輪部幹細胞が通常発現するマーカーを拡大細胞集団が発現することを観察するため、細胞がΔＮ－ｐ６３α／β／γ、ＡＢＣＧ２及びＣ／ＥＢＰδを発現する能力を以下のとおり免疫組織化学によって測定した。細胞培養物を４％ＰＦＡで２０分間固定し、透過処理し、ＰＢＳ中０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）及び３％ロバ血清のブロッキング溶液中で３０分間ブロックした。次に細胞をブロッキング溶液中の一次抗体によって４℃で１２時間標識した。使用した一次抗体は、ｐ６３α（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、ＡＢＣＧ２（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、及びＣ／ＥＢＰδ（Ａｂｃａｍ）、サイトケラチン１５、サイトケラチン１２（Ａｂｃａｍ）であった。試料をＰＢＳで３回洗浄し、１：５００希釈のロバ産生二次抗体Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）を室温で３０分間適用した。次に細胞核をＰＢＳ中０．５マイクロモルのＳｙｔｏｘオレンジ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）の溶液中において室温で５分間標識した。次にＺｅｉｓｓ ＬＳＭ ８８０共焦点顕微鏡を使用して試料を観察した。
結果から、ＤＭＳＯ単独を補足した（ＬＡＴＳ阻害剤化合物のない）ＸＶＩＶＯ培地中で培養した細胞が、典型的には通常ＬＳＣが発現するマーカーを発現しないことが示された（図４を参照のこと）。対照的に、ＬＡＴＳ阻害剤の存在下で培養した細胞は、通常ＬＳＣが発現するマーカーを発現する。
実施例Ｂ８：角膜上皮細胞へのヒト輪部幹細胞分化
４８ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）内の１０マイクロモル濃度のＬＡＴＳ阻害剤化合物例４９、４７、１２又は２６１番を補足した又は陰性対照としてＤＭＳＯ中に補足したＸＶＩＶＯ１５培地に、実施例Ｂ１に記載されるとおり入手した細胞をプレーティングした。細胞を５％ＣＯ２、３７℃で８～１０日間培養した。
次に、ＬＡＴＳ阻害剤の存在下で拡大したｐ６３α陽性ＬＳＣ集団が、ＬＳＣ移植を受ける患者の角膜透明度を回復するのに必要な能力であるケラチン－１２陽性角膜上皮細胞に分化する能力を保持したかどうかを決定するため分析を行った。
角膜上皮細胞へのＬＳＣ分化を促進するため、培養培地を血清又はＬＡＴＳ阻害剤不含のＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に変更し、細胞を４～８日間培養した。角膜上皮細胞へのＬＳＣ分化を観察するため、細胞培養物を４％ＰＦＡで２０分間固定し、透過処理し、ＰＢＳ中０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）及び３％ロバ血清のブロッキング溶液中で３０分間ブロックした。次に細胞をブロッキング溶液中の一次抗体によって４℃で１２時間標識した。使用した一次抗体はｐ６３α（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）及びサイトケラチン１２（Ａｂｃａｍ）であった。試料をＰＢＳで３回洗浄し、１：５００希釈のＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８又はＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７にコンジュゲートしたロバ産生二次抗体（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）を室温で３０分間適用した。次にＺｅｉｓｓ ＬＳＭ ８８０共焦点顕微鏡を使用して試料を観察した。
結果から、ＬＡＴＳ阻害剤の存在下で維持されて、次に分化が誘導された培養物に、ｐ６３α陽性細胞のクラスターがｐ６３α陰性だがケラチン－１２陽性の細胞のクラスターに隣接している範囲が含まれたことが示された（図５）。従って、ＬＡＴＳ阻害剤の存在下で拡大した輪部細胞は、適切な条件下にあるときケラチン－１２陽性細胞に分化することができる。
実施例Ｂ９：ウサギ眼へのＬＳＣ－生体マトリックス製剤の送達
輪部幹細胞欠乏ウサギモデル
１Ｍの水酸化ナトリウム溶液に浸漬したワットマン紙による上皮細胞のデブリードマン及び輪部幹細胞（ＬＳＣ）のアブレーションにより、ＮＺＡウサギの右眼に輪部幹細胞欠乏（ＬＳＣＤ）を片眼性に作り出した。輪部結膜をマイトマイシンＣで処理することにより角膜血管新生を低下させた。左眼はインタクトなまま残した。ＬＡＴＳ阻害剤化合物例１２番中で拡大した細胞集団を以下に記載するとおり送達した。細胞送達後、ウサギは鎮痛治療（最初の２週間にトラマドール１０ｍｇ／ｋｇ ＰＯ ＢＩＤ、最初の２週間に又は動物が眼部不快感の徴候を示す間はメロキシカム０．３ｍｇ／ｋｇ ＰＯ ＳＩＤ）、抗炎症治療（手技直後にＡｎｃｅｆ（登録商標）（セファゾリン）５０ｍｇテノン嚢下、Ｔｏｂｒｅｘ（登録商標）点眼液、１週目ｔ．ｉ．ｄ、及びその後ｂ．ｉ．ｄ、１週目にアンピシリン８０ｍｇ／ｋｇ／日（４０ｍｇ ＢＩＤ）ＳＱ）及び免疫抑制（シクロスポリンＡ（０．５％）ｔｏｐ ｏｃ．１週目ｔ．ｉ．ｄ及びその後ｂ．ｉ．ｄ．、Ｇｅｎｔｏｃｉｎ（登録商標）－ｄｕｒａｆｉｌｍ（登録商標）（硫酸ゲンタマイシン及びベタメタゾン、ＭＥＲＣＫ）ｔｏｐ ｏｃ．１週目ｔ．ｉ．ｄ．及びその後ｂ．ｉ．ｄ．、シクロスポリンＡ（５ｍｇ／ｋｇ／日）ＳＱ１週目、次にその後２分の１の投薬量）を受けた。
生体マトリックス製剤
既発表のプロトコルに従いゼラチンメタクリレート（ＧｅｌＭＡ）を合成した（Ｎｉｃｈｏｌ，Ｊ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．「細胞を担持するマイクロエンジニアリングされたゼラチンメタクリル酸ヒドロゲル（Ｃｅｌｌ－ｌａｄｅｎ ｍｉｃｒｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｇｅｌａｔｉｎ ｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ）」．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ３１，５５３６－５５４４，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．２０１０．０３．０６４（２０１０）。端的には、２０グラムのブタ由来ゼラチン（カタログ番号Ｇ２５００、Ｓｉｇｍａ）を２００ｍｌのカルシウム及びマグネシウム不含ＰＢＳ（ＤＰＢＳ、カタログ番号２１－０３１、Ｃｏｒｎｉｎｇ）中に５０℃で一晩溶解させた。強く撹拌しながら、このゼラチン溶液中に無水メタクリル酸（カタログ番号２７６６８５、Ｓｉｇｍａ）を８％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）の濃度に達するように滴下して加えた（約１ｍｌ／分）。この混合物を油浴中６０℃で３時間撹拌した後、２００ｍｌのＤＰＢＳを加え、続いて更に１５分間完全に混合した。この希釈混合物を透析チュービング（１５ｋＤａ ＭＷＣＯ、Ｓｐｅｔｒｕａ／Ｐｏｒ）を使用したＭｉｌｌｉ－Ｑ水での４５℃で１週間の透析によって精製することにより、メタクリル酸を除去した。精製した試料を凍結乾燥し、更なる使用時まで－８０℃で貯蔵した。
１５％ＧｅｌＭＡストック溶液を調製するため、１．５グラムのフリーズドライしたＧｅｌＭＡの泡を３７℃で１０ｍｌの予熱したＤＰＢＳ中に溶解させた。ＧｅｌＭＡの泡が完全に溶解した後、ＧｅｌＭＡ溶液に１５ｍｇのリチウムフェニル－２，４，６－トリメチルベンゾイルホスフィン酸塩（ＬＡＰ）を加えることにより光開始剤を導入した。この溶液に５００マイクロリットルの１Ｎ ＮａＯＨ（カタログ番号ＢＤＨ－７２２２－１、ＶＷＲ）を加えてｐＨを中性に調整した後、０．２２マイクロメートル滅菌メンブレン（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して溶液をろ過した。最終的なろ液を５００マイクロリットルアリコートに分け、更なる使用時まで４℃で貯蔵した。
インビボＬＳＣ移植
６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）内の１０マイクロモル濃度のＬＡＴＳ阻害剤化合物例１２番を補足したＸＶＩＶＯ１５培地に、実施例Ｂ１に記載されるとおり入手した細胞をプレーティングした。細胞を５％ＣＯ２、３７℃で２継代（ｐａｓｓｇｅ）にわたり（２週間）培養した。
移植用の細胞懸濁液を以下のとおり調製した。細胞を培養皿からアキュターゼ（Ａｃｃｕｔａｓｅ）によって３７℃で１０分間脱離させた。次に細胞を遠心によってリンスし、１６マイクロリットルのＬＡＴＳ阻害剤不含ＸＶＩＶＯ１５培地中に再懸濁した。
１６マイクロリットルのＬＳＣ懸濁液又は生理食塩水対照を８マイクロリットルの１５％ＧｅｌＭＡストック溶液と混合することにより５％ＧｅｌＭＡ溶液を調製し、続いてこの混合物全てを支持スライドグラス上の治療用コンタクトレンズ（Ｌｏｔｒａｆｉｌｃｏｎ Ｂ、Ａｌｃｏｎ）に加えた。最終溶液は３０００００細胞及び５％ＧｅｌＭＡを含有した。ＵＶ ＬＥＤ光源（３６５ｎｍ、Ｈａｍａｍａｔｓｕ）の出力を３０ｍＷ／ｃｍ２の紫外線照度読取りで１５％に調整した。２５秒間の短いＵＶＡ曝露を用いた光重合プロセスによってコンタクトレンズの内表面にヒトＬＳＣをバイオプリントした。重合プロセス後、ＬＳＣを負荷したコンタクトレンズを解剖したウサギ眼にエキソビボで適用するか、又はインビボでウサギ眼に適用した。
ＬＳＣ負荷コンタクトレンズをエキソビボで適用した実験については、試料は２時間以内にＺｅｉｓｓ落射蛍光顕微鏡下で観察した。
インビボ実験については、ＬＳＣ負荷コンタクトレンズは、上記に記載されるＬＳＣＤウサギモデルの右眼に適用し、瞼板縫合を実施してコンタクトレンズを眼表面上に１週間保った。１週間後、コンタクトレンズを取り外し、更に４週間にわたってウサギの生存を保った。
細胞送達の５週間後にウサギを犠牲にし、角膜を解剖して４％ＰＦＡに固定した。試料をパラフィン包埋し、切片化した。免疫組織化学を実施して、角膜上皮細胞のマーカーであるケラチン－１２及び結膜細胞のマーカーであるケラチン－１９の存在を検出した。抗ケラチン１２及び１９一次抗体はＡｂｃａｍからのものであった。ヒトミトコンドリアタンパク質を使用して、細胞がヒト起源であることを確認した。抗ヒトミトコンドリアタンパク質一次抗体はＮｏｖｕｓからのものであった。次に試料をＨＲＰコンジュゲート二次抗体（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で染色し、Ｚｅｉｓｓ顕微鏡下で観察した。
結果から、ＧｅｌＭＡ重合を用いてコンタクトレンズに付着させたＬＳＣをエキソビボでウサギ眼の表面に送達できることが示された（図６）。
図７は、輪部幹細胞欠乏ウサギモデルにおいて、ＬＡＴＳ阻害剤（化合物例１２）の存在下で拡大し、ＧｅｌＭＡ重合を用いてコンタクトレンズに付着させ、且つインビボでウサギの角膜表面に送達したＬＳＣ集団が、ケラチン－１２陽性角膜上皮の再生につながり、移植した眼におけるケラチン－１９陽性結膜細胞による結膜化を防止したことを示している（それぞれ図７Ａ及び図７Ｂ）。対照的に、移植していないウサギ眼は、ケラチン－１２陽性角膜上皮の再建がないことを示した。代わりに、ケラチン－１９染色の存在によって示されるとおり、結膜化の徴候が観察された（それぞれ図７Ｃ及び図７Ｄ）。
図８は、ヒトミトコンドリアタンパク質の存在によって実証されるとおり、移植した眼の角膜上皮を再建した細胞がヒトであったことを示している（図８Ａ）。対照的に、移植していない眼の眼表面は、ヒトミトコンドリアタンパク質染色を呈しなかった（図８Ｂ）。
実施例Ｂ１０：ＴＩＳＳＥＥＬを使用したＬＳＣエキソビボ送達
ＴＩＳＳＥＥＬ（Ｂａｘｔｅｒ、カタログ番号ＮＤＣ ０９４４－４３０１－０２）ワーキング溶液を調製するため、製造者の指示に従い供給された成分を再構成した。所望のフィブリノゲン濃度に達するように滅菌水を加えることにより、再構成したフィブリノゲン溶液の更なる希釈を行うことができる。トロンビンワーキング溶液をダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ、ＧＩＢＣＯ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）で５００倍希釈することにより、１単位／ｍｌ溶液を実現した。
培養表面へのＬＳＣインビトロ送達
６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）内の１０マイクロモル濃度のＬＡＴＳ阻害剤化合物例１２番を補足したＸＶＩＶＯ１５培地に、実施例Ｂ１に記載されるとおり入手した細胞をプレーティングした。細胞を５％ＣＯ２、３７℃で２継代にわたり（２週間）培養した。
移植用の細胞懸濁液を以下のとおり調製した。細胞を培養皿からアキュターゼ（Ａｃｃｕｔａｓｅ）によって３７℃で１０分間脱離させた。次に細胞を遠心によってリンスし、上述のトロンビンワーキング溶液中に再懸濁し、１０万／ｍｌ～３０００万／ｍｌに段階希釈することにより最終細胞密度を調整した。
細胞懸濁液をフィブリノゲン溶液と混合した直後に、１０ｕｌの混合物をコラーゲンコート２４ウェルプレートの中央にプレーティングし、室温で５分間インキュベートしてフィブリンを凝固させた。各ウェルにＬＡＴＳ阻害剤不含ＸＶＩＶＯ１５培地を補充した後、全ての試料をフィブリン分解及び細胞再増殖に関して２週間モニタした。結果（図９）から、ＴＩＳＳＥＥＬを使用するとＬＳＣの送達に成功したこと、及びヒト角膜と同程度のサイズである培養面積が、当初送達した１００ｋ及び３００ｋ個のＬＳＣを含む試料において１週～２週間で被覆され得ることが示唆された。
ヒト角膜へのＬＳＣエキソビボ送達
６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）内の１０マイクロモル濃度のＬＡＴＳ阻害剤化合物例１２番を補足したＸＶＩＶＯ１５培地に、実施例Ｂ１に記載されるとおり入手した細胞をプレーティングした。細胞を５％ＣＯ２、３７℃で２継代にわたり（２週間）培養した。送達実験の前日、細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒグリーンＣＭＦＤＡ色素（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）で製造者のプロトコルに従い標識した。
移植用の細胞懸濁液を以下のとおり調製した。細胞を培養皿からアキュターゼ（Ａｃｃｕｔａｓｅ）によって３７℃で１０分間脱離させた。次に細胞を遠心によってリンスし、上述のトロンビンワーキング溶液中に３０００万／ｍｌの最終細胞密度に達するように再懸濁した。
細胞懸濁液をフィブリノゲン溶液と混合した直後に、１０ｕｌの混合物をヒト角膜の中央にプレーティングし、室温で５分間インキュベートしてフィブリンを凝固させた。ＬｏｔｒａＢコンタクトレンズ（Ａｉｒ Ｏｐｔｉｘ Ｎｉｇｈｔ ａｎｄ Ｄａｙ、Ａｌｃｏｎ）を使用してヒト角膜上のＬＳＣ－フィブリン構築物を覆い、実際の臨床手順を模倣した。Ｎｉｋｏｎ蛍光実体顕微鏡によって蛍光像を撮像した。データ（図１０）から、ＴＩＳＳＥＥＬがエキソビボで角膜表面への多数のＬＳＣの送達に成功したことが実証され、このＬＳＣ－フィブリン構築物はロバストで、保護コンタクトレンズの適用など、更なる操作に耐えるように見える。
実施例Ｂ１１：バイオプリンティングによる眼表面への複数の細胞集団の指定されたパターンでの送達
ＤＯＰｓＬ技術をベースとしてＡｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ（２０１５， ＤＯＩ：１０．１００２／ａｄｍａ．２０１２０２０２４）に発表されたとおりカスタマイズのバイオプリンターを構築した。
バイオプリンティング用の細胞懸濁液は以下のとおり調製した。ＨＥＫ－２９３細胞をＣｅｌｌｔｒａｃｋｅｒグリーンＣＭＦＤＡ色素又はレッドＣＭＴＰＸ色素（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）で予め標識した後、回収した。２億細胞／ｍｌの最終細胞密度に達するように２５μｌの細胞懸濁液を２５μｌの１５％ＧｅｌＭＡストック溶液と混合した。
１％低融点アガロースを満たしたペトリ皿にウサギ眼球を置き、バイオプリンティングプロセスの直前に上皮を外科用メスによって慎重にデブリードマンした。次に、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）Ｏリング（Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ Ｓｉｌｉｃｏｎｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｉｎｃ．、Ｂａｌｌｓｔｏｎ Ｓｐａ、ＮＹ）を輪部上に置いて細胞－ＧｅｌＭＡ混合物が湾曲した眼表面から滴り落ちないようにしながら細胞－ＧｅｌＭＡ混合物を角膜の上に適用した。
カスタマイズした光パターン（即ち陰陽パターンの半分）をウサギ眼上の細胞（緑色）－ＧｅｌＭＡ混合物に４秒間投影した後、未重合の混合物をリンスして洗い流した。同じウサギ角膜の上に新しい細胞（赤色）－ＧｅｌＭＡ混合物を適用した後に、もう一つの光パターン（即ち陰陽パターンの残りの半分）を試料に４秒間投影した。ＰＢＳによる数回のリンスを実施した後、イメージングした。図１１を参照のこと。
実施例Ｂ１２：ＬＳＣにおけるＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介性β－２－ミクログロブリン遺伝子欠失による免疫拒絶の低減
以下の例では、ＣＲＩＳＰＲ媒介性β－２－ミクログロブリン遺伝子欠失によりＬＳＣ表面からＨＬＡクラスＩ発現を除去した。
細胞トランスフェクション：ＬＳＣ単離の８日後、３５ｍｍペトリ皿内のＬＡＴＳ阻害剤化合物例４８ａ番を補足したＸ－ＶＩＶＯ１５培地中において、実施例Ｂ１に記載されるとおり入手したＬＳＣを５０～６０％のコンフルエンシーまで培養した。ＬＳＣにｔｒａｃｒＲＮＡ－ｃｒＲＮＡ－Ｃａｓ９ ｍＲＮＡの混合物をトランスフェクトした。３５ｍｍペトリ皿のサイズのこの混合物を得るために、１２．５マイクロリットルの１０マイクロモルｔｒａｃｒＲＮＡ（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ、カタログ番号Ｕ－００２０００－２０）、ヒトＢ２Ｍを標的とする１２．５マイクロリットルの１０マイクロモルｃｒＲＮＡ（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ、カタログ番号ＣＲ－００４３６６－０１）、５０マイクロリットルの０．１マイクログラム／マイクロリットルＣａｓ９ ｍＲＮＡ（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ、カタログ番号ＣＡＳ１１１９５）、及び１５マイクロリットルのＤｈａｒｍａＦＥＣＴ Ｄｕｏトランスフェクション試薬（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ、カタログ番号Ｔ－２０１０－０２）を合わせて室温で２０分間インキュベートした。この混合物を培養皿の２．５ｍｌ培地（ＬＡＴＳ阻害剤化合物例４８ａ番を補足したＸＶＩＶＯ１５）（抗生物質不含）に滴下して加えた。ｍＲＮＡ細胞損傷を低減するため、培地に０．２マイクログラム／ｍｌ Ｂ１８Ｒ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号３４－８１８５－８１）を加えた。トランスフェクション試薬単独がトランスフェクション陰性対照に相当する。
５％ＣＯ２、３７℃で６時間インキュベートした後、化合物及びＢ１８Ｒを含む化合物例４８ａ番を補足した新鮮Ｘ－ＶＩＶＯ１５培地（抗生物質不含）で培地交換した。５％ＣＯ２インキュベーターにおいて７２時間後、細胞を１：２継代し、シンセマックス（ｓｙｎｔｈｅｍａｘ）がコートされたペトリ皿で化合物及びＢ１８Ｒを含むＬＳＣ培地（抗生物質不含）中において更に７２時間拡大することにより、ＦＡＣＳ選別用に更に多くの細胞を得た。
ＦＡＣＳ分析：ＬＳＣをアキュターゼ（Ａｃｃｕｔａｓｅ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ａ１１１０５０１）によって５％ＣＯ２、３７℃で２０分間処理した。細胞を掻き取った後、１０％血清を含有する細胞培養培地を使用することにより反応を停止させ、ファルコンチューブに移して遠心ステップ（１０００ｒｐｍ、５分）にかけた。培地を吸引した後、２００マイクロリットルＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ／１０％ＦＢＳ）中に細胞を再懸濁した。
Ｂ２Ｍ及びＨＬＡ－ＡＢＣの発現を分析するため、５マイクロリットルＡＰＣマウス抗ヒトβ２－ミクログロブリン抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３１６３１２）及び２０マイクロリットルＰＥマウス抗ヒトＨＬＡ－ＡＢＣ抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号５６０１６８）を細胞懸濁液に加え、氷上で３０分間インキュベートした。細胞を抗体標識後にＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液中の５００マイクロリットルに再懸濁した。ＦＡＣＳ選別前に、細胞は７０マイクロメートルフィルタでろ過し、選別時まで氷上に貯蔵した。
細胞が壁に付着するのを防ぐため、選別前に収集チューブを血清で３０分間満たした。化合物及びＢ１８Ｒを含むヒト血清集積ＬＳＣ培地を使用して、細胞をＢＤ ＦＡＣＳＡｒｉａ ＩＩ機器で調製済みの収集チューブに選別した。ＦＡＣＳデータはＢＤ ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアを使用して分析した。
図１２に提示される結果は、ＣＲＩＳＰＲ媒介性Ｂ２Ｍ欠失及び続くＨＬＡ Ａ、Ｂ及びＣの除去が２１パーセントのＬＳＣに起こったことを示している。ＬＡＴＳ阻害剤化合物例４８ａ番を補足したＸＶＩＶＯ１５培地はＬＳＣの効率的な拡大を可能にするため、次にはこの２１パーセントのＢ２Ｍ陰性／ＨＬＡ Ａ、Ｂ、Ｃ陰性ＬＳＣ集団を拡大することにより、９７パーセントの細胞がＨＬＡクラスＩ免疫拒絶ドライバーを発現しない細胞製剤を作製することができた（図１３）。
実施例Ｂ１３：残留化合物推定試験
標準曲線作成
１００マイクロモル、１０マイクロモル、１マイクロモル、５００ｎＭ、１００ｎＭ、及び０マイクロモルの濃度でストック標準の希釈系列を作成した。化合物例４８ａ番（ＤＭＳＯ中１０ｍＭ）ストックを５０％アセトニトリル５０％水中にスパイクしてスパイク標準を作成した。このスパイク標準を使用してブランク媒体試料をスパイクした。１０マイクロリットルのスパイク標準を９０マイクロリットルの媒体に加えることにより、スパイクした媒体標準を作り出した。１０，０００ｎＭ、１０００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、１０ｎＭ、及び０ｎＭ媒体標準を使用して化合物例４８ａ番標準曲線を作成した。
５０マイクロリットルの各媒体試料を４００マイクロリットルの抽出溶液で処理した。この抽出溶液はアセトニトリル／メタノール（３：１）からなる。標準曲線試料は、未知の媒体試料と同じ容積及び条件を使用して抽出した。抽出した試料を１０，０００ｒｐｍで５分間遠心した。遠心後、２００マイクロリットルの各試料上清（ｓｕｐｅｒｎａｔｅｎｔ）を清浄な９６ウェルプレートに移した。抽出した試料は高分解能ＬＣ－ＭＳによって分析した。Ｔｈｅｒｍｏ Ｘｃａｌｉｂｕｒソフトウェア及びＱｕａｎブラウザを使用して標準曲線を作成し、濃度値を計算した。外部校正法を用いて培養培地試料中における化合物例４８ａ番の濃度を計算した。
ＬＣ－ＭＳ分析
Ｔｈｅｒｍｏ Ｕｌｔｉｍａｔｅ ＵＰＬＣ及びＫｉｎｅｔｅｘ ２．１×５０ｍＭ Ｃ１８ ＲＰカラム（２．６ミクロン粒子）を使用して高分解能クロマトグラフィーを実施した。移動相は、緩衝液ＡについてＨ２Ｏ中５ｍＭ酢酸アンモニウム、及び緩衝液Ｂについてアセトニトリル中０．１％ギ酸からなった。逆相クロマトグラフィーには標準的な二成分直線グラジエントを使用した。本試験にはＴｈｅｒｍｏ Ｑ Ｅｘａｃｔｉｖｅ質量分析計を使用した。ＵＰＬＣ溶出物は、ＥＳＩイオン源を備えたＱ Ｅｘａｃｔｉｖｅ質量分析計に向かわせた。質量分析計は、高分解能フルスキャンモード及びＭＳ２モードで実施するようにプログラムした。
試験システム
ＬＳＣ洗浄用の細胞調製：洗浄実験はトリプリケートで実施し、ここで各試料は５０万個の細胞を含有した。実験の継続期間中、全ての試料（培地のみ、培地と細胞、化合物例４８ａ番を補足、及び化合物例４８ａ番を補足した培地中の細胞）を３７度のインキュベーターで培養した。この実験に使用した培地はＸ－ＶＩＶＯ １５であった。
３マイクロモル化合物例４８ａ番を補足したＸ－ＶＩＶＯ－１５培地中で細胞を継代２代目まで培養した。培養物が７０％コンフルエンシーに達したところで、培地を吸引によって除去し、３マイクロモル化合物例４８ａ番を補足した新鮮培地に交換した；細胞を更に６日間培養した。７日目、以下の試料を作成した：
１．２ｍｌの「ブランク」培地（化合物を補足していない）
２．化合物の存在下で培養した２ｍｌの培地（洗浄前）
３．各洗浄試料１～１０についての２ｍｌの培地
４．細胞ペレット（洗浄後）
細胞はセルリフター（ｓｅｌｌ ｌｉｆｔｅｒ）（Ｃｏｓｔａｒ、カタログ番号３００８）を用いて収集した。
培地及び細胞ペレット試料は高分解能ＬＣ－ＭＳを用いて分析し、定量化した。
化合物例４８ａ番の残留レベルを推定するため、細胞ペレット及び上清（ｓｕｐｅｒｎａｔｅｎｔ）を収集した。化合物例４８ａ番の量はＬＣ－ＭＳによって決定した。洗浄前培地、洗浄培地（表４）及び細胞ペレット中の化合物例４８ａ番濃度の推定を要約する（表５）。洗浄前培地試料が最も高いレベルの化合物例４８ａ番を有する（約９，８３０ｎＭ～１０，８３７ｎＭ範囲）。洗浄後ペレットレベルは、低いが検出可能なレベルの化合物例４８ａ番（ナノモル濃度）を有する。
Figure 0007247102000502
Figure 0007247102000503
３つのインキュベーションからの洗浄前培地中の化合物例４８ａ番の量は９，８３０～１０，８３８ｎＭの範囲である。洗浄後細胞ペレット中における化合物例４８ａ番の濃度は１９．９～２０．８ｎＭの範囲であった。
他の化合物例の洗浄後残留量
化合物例１２番、２６１番、及び５番について、拡大したＬＳＣ中における残留量を化合物例４８ａ番と同じ方法を用いて測定した。
Figure 0007247102000504
Figure 0007247102000505
Figure 0007247102000506
実施例Ｃ１：ヒト角膜内皮細胞単離
アイバンクから、研究用に同意が得られている死体ヒト角膜を入手した。角膜内皮細胞（ＣＥＣ）層及びデスメ膜（ＤＭ）に外科手術グレードのリバースＳｉｎｓｋｙ内皮ストリッパーで傷を入れた。ＤＭ－内皮細胞層から角膜実質を慎重に剥がし取り、顕微鏡観察によって細胞の脱離が明らかになるまで（４５分～３時間）、ＤＭから３７℃で１ｍｇ／ｍｌコラゲナーゼを使用して細胞を解離させた。このように得た細胞を以下の実施例Ｃ１～Ｃ１７において使用した。
実施例Ｃ２：ＬＡＴＳ阻害剤に対する細胞の曝露及び細胞内ＹＡＰ分布の測定
ガラス底黒色壁２４ウェルディッシュ内の１０マイクロモル濃度のＬＡＴＳ阻害剤化合物例１３３番若しくは化合物例４９番を補足した又は陰性対照としてＤＭＳＯ中に補足した角膜内皮細胞培養培地（ヒト血清を含有するヒト内皮ＳＦ（無血清）培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））に、実施例Ｃ１に記載されるとおり入手した細胞をプレーティングした。細胞をこれらの条件下に５％ＣＯ２、３７℃で２４時間培養した。
ＬＡＴＳ阻害剤が下流標的ＹＡＰに及ぼす効果を測定するため、細胞内ＹＡＰ分布を免疫組織化学によって分析した。細胞培養物を４％ＰＦＡで２０分間固定し、透過処理し、ＰＢＳ中０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）及び３％ロバ血清のブロッキング溶液中で３０分間ブロックした。次に細胞をブロッキング溶液中の一次抗体によって４℃で１２時間標識した。使用した一次抗体はＳａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙからの抗ＹＡＰであった。試料をＰＢＳで３回洗浄し、１：５００希釈のロバ産生二次抗体Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）を室温で３０分間適用した。陰性対照は一次抗体を省いた（データは示さず）。Ｚｅｉｓｓ ＬＳＭ ８８０共焦点顕微鏡を使用して蛍光を観察した。
図１４に示されるとおり、ＹＡＰ免疫染色は、ＹＡＰの免疫蛍光染色によって指示されるとおりＬＡＴＳ阻害剤化合物例１３３番又は例４９を含む細胞増殖培地に曝露したＣＥＣで一層強い。従ってこれらの化合物は、下流標的ＹＡＰの細胞内局在性に効果を及ぼした。
実施例Ｃ３：ＬＡＴＳ阻害剤に対する細胞の曝露及びＹＡＰリン酸化の測定
実施例Ｃ１に記載されるとおり入手した細胞を培養皿から１ｍｇ／ｍｌコラゲナーゼによって３７℃で１５分間脱離させ、細胞懸濁液を遠心によってリンスして、６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）内の角膜内皮細胞培養培地（ヒト血清を含有するヒト内皮ＳＦ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））にプレーティングし、２～４日間培養した。次に培地を、１０マイクロモル濃度のＬＡＴＳ阻害剤、化合物例１３３番若しくは例４９番（ＤＭＳＯ中に希釈）又は陰性対照として化合物を含まないＤＭＳＯ単独を補足した新鮮な角膜内皮細胞培養培地（ヒト血清を含有するヒト内皮ＳＦ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））に交換した。細胞をこれらの条件下に５％ＣＯ２、３７℃で１時間培養した。
細胞ペレットをトリプシン解離及び遠心によって入手し、ＰＢＳで洗浄した。このペレットを３０マイクロモル濃度のプロテアーゼ阻害剤カクテル含有ＲＩＰＡ溶解緩衝液（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で１０分おきにボルテックスしながら３０分間溶解させた。次に細胞デブリを４℃で１５分間、１４ｋ ｒｐｍでペレット化し、タンパク質ライセートを収集した。マイクロＢＣＡキット（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用してタンパク質濃度を定量化した。１５マイクログラムの全タンパク質を４～２０％ＴＧＸゲル（ＢｉｏＲａｄ）の各ウェルにロードし、製造者の指示に従いウエスタンブロッティングを実施した。膜をホスホ－ＹＡＰ（ｓｅｒ１２７）（ＣＳＴ、１：５００）又は全Ｙａｐ（Ａｂｎｏｖａ、１：５００）抗体でプローブし、ローディング対照としてはアクチン（Ａｂｃａｍ）標識を使用した。膜をＨＲＰコンジュゲート二次抗体で染色し、リンスし、ＣｈｅｍｉＤｏｃシステム（Ｂｉｏｒａｄ）を製造者の指示に従い使用してイメージングした。
ウエスタンブロット分析から、化合物例１３３番及び例４９番が両方ともにヒトＣＥＣにおけるＹＡＰリン酸化レベルの低下を生じさせたことが示された。ヒトＣＥＣにおいて化合物例１３３番及び例４９番で１時間処理した後、図１５ａのウエスタンブロットによって示されるとおり、顕著な差が観察された。図１５ｂは、β－アクチンに対して正規化したリン酸化ＹＡＰレベルをグラフ表示によって示し、図１５ｃは、全ＹＡＰに対して正規化したリン酸化ＹＡＰレベルを示す。
これらの結果は、ＬＡＴＳ阻害剤化合物例１３３番及び例４９番がヒトＣＥＣのＹＡＰシグナル伝達を活性化できることを示唆している。
実施例Ｃ４：ヒト角膜内皮細胞集団拡大及び細胞密度の測定
実施例Ｃ１に記載されるとおり入手した細胞を培養皿から１００マイクロリットルのアキュターゼ（Ａｃｃｕｔａｓｅ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）によって３７℃で１０分間脱離させ、細胞懸濁液を遠心によってリンスして、６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）内の１０マイクロモル濃度のＬＡＴＳ阻害剤化合物例１３３番若しくは例４９番（ＤＭＳＯ中に希釈）又は陰性対照として化合物を含まないＤＭＳＯ単独を補足した角膜内皮細胞培養培地（ヒト血清を含有するヒト内皮ＳＦ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））にプレーティングした。細胞を５％ＣＯ２、３７℃で培養した。
細胞増殖を測定するため、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ機械を製造者の指示（Ｅｓｓｅｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に従い使用して３時間毎の細胞コンフルエンスのリアルタイム定量的生細胞分析を１０日間にわたり実施した。
図１６は、ＬＡＴＳ阻害剤又はＤＭＳＯ単独への曝露後の経時的な細胞集団のパーセンテージコンフルエンスを示す。ヒトＣＥＣは通常は非増殖性であるが、これらの結果は、両方のＬＡＴＳ阻害剤化合物例１３３番及び例４９番がこれらの細胞における増殖を活性化できたことを示している。
実施例Ｃ５：ヒト角膜内皮細胞集団拡大及び細胞密度の測定
４８ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）内の１０マイクロモル濃度の表９及び表１０に掲載するとおりのＬＡＴＳ阻害剤（ＤＭＳＯ中に希釈）又は陰性対照として化合物を含まないＤＭＳＯ単独を補足したＸ－ＶＩＶＯ１５培地に、実施例Ｃ１に記載されるとおり入手した細胞をプレーティングした。細胞を５％ＣＯ２、３７℃で培養した。
各化合物につき２セットの培養物を作成した。第１の培養物セットは、角膜から単離した細胞が細胞培養皿に付着した後に（典型的には細胞プレーティングの２４時間後に）４％ＰＦＡに室温で２０分間固定した。第２の培養物セットは第１のものから１０日後に４％ＰＦＡに室温で２０分間固定した。
固定した全ての培養物において細胞密度を測定するため、Ｓｙｔｏｘオレンジ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で染色された核の数を以下のとおり表面積当たりでカウントした：固定した固定細胞培養物を０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）の溶液中で透過処理した。次に細胞をＰＢＳ中０．５マイクロモルのＳｙｔｏｘオレンジ溶液中において室温で５分間標識した。Ｚｅｉｓｓ落射蛍光顕微鏡下で核をカウントした。次に、播種した細胞集団に対する拡大した細胞集団の比率を計算することにより、拡大倍数を決定した。
試験化合物で実現した細胞集団拡大を以下の表９及び表１０に示す。
Figure 0007247102000507
Figure 0007247102000508
実施例Ｃ６：ヒト角膜内皮細胞におけるＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２のｓｉＲＮＡノックダウン
２４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）内のＸ－ＶＩＶＯ１５培地（Ｌｏｎｚａ）に、実施例Ｃ１に記載されるとおり入手した細胞をプレーティングした。細胞を５％ＣＯ２、３７℃で培養した。ＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２をトランスフェクション（リポフェクション、ＲＮＡｉＭａｘを使用、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）によってノックダウンした。細胞培養プレートの各ウェルに、各遺伝子を標的とする４つのｓｉＲＮＡの０．５マイクログラムのプールをトランスフェクトした。この研究に使用したｓｉＲＮＡは、ＱｉａｇｅｎのＬＡＴＳ１ ｓｉＲＮＡ ＳＩ０００６７１７２及びＬＡＴＳ２ ｓｉＲＮＡ ＳＩ００１０６９２５であった。陰性対照としては、製造者のプロトコル（Ｑｉａｇｅｎ）に従いスクランブルｓｉＲＮＡを使用した。
ＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２ ｓｉＲＮＡ又はスクランブルｓｉＲＮＡ対照のトランスフェクションから４８時間後、細胞増殖を測定するため製造者の指示（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に従いＥｄＵ染色を実施した。細胞核をＳｙｔｏｘオレンジで標識した。Ｚｅｉｓｓ ＬＳＭ ８８０共焦点顕微鏡を使用してＥｄＵ及びＳｙｔｏｘオレンジ蛍光を観察することにより、ＥｄＵ陽性細胞核のパーセンテージを測定した。
図１７は、ＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２ノックダウンを受けてＥｄＵ陽性ＣＥＣのパーセンテージが増加したことを示し、ＬＡＴＳのノックダウンがＣＥＣ増殖につながることが示される。
実施例Ｃ７：ヒト角膜内皮細胞集団拡大及び免疫組織化学的細胞形態観察
２４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）内の１０マイクロモル濃度のＬＡＴＳ阻害剤化合物例４９番（ＤＭＳＯ中に希釈）を補足した又は化合物を含まないＤＭＳＯの陰性対照を補足した角膜内皮細胞培養培地（ヒト血清を含有するヒト内皮ＳＦ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））に、実施例Ｃ１に記載されるとおり入手した細胞をプレーティングした。細胞を５％ＣＯ２、３７℃で１０日間培養した。
拡大細胞集団が、インビボでの使用に要求される細胞形態を有することを観察するため、細胞がタイトジャンクションを形成する能力を以下のとおりの免疫組織化学によって測定した。細胞培養物を４％ＰＦＡで２０分間固定し、透過処理し、ＰＢＳ中０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）及び３％ロバ血清のブロッキング溶液中で３０分間ブロックした。次に細胞をブロッキング溶液中の一次抗体によって４℃で１２時間標識した。使用した一次抗体は、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎからのＺＯ－１であった。試料をＰＢＳで３回洗浄し、１：５００希釈のロバ産生二次抗体Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）を室温で３０分間適用した。細胞をＰＢＳで３回洗浄し、核（ＤＮＡ）をＳｙｔｏｘオレンジ（５６７ｎｍ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色した。陰性対照は一次抗体を省いた（データは示さず）。Ｚｅｉｓｓ ＬＳＭ ８８０共焦点顕微鏡を使用して蛍光を観察した。
培地及びＤＭＳＯ対照の存在下で増殖させたＣＥＣは、機能不全のＣＥＣに特徴的な細胞の大小不同（ｐｏｌｙｍｅｇａｔｉｓｍ）の徴候を示す（図１８Ａ）。図１８Ｂに示されるとおり、ＬＡＴＳ阻害剤例４９番を含む細胞増殖培地に曝露したＣＥＣは、タイトジャンクションマーカー閉鎖帯－１（ＺＯ－１）の免疫蛍光染色によって指示されるとおり正常な角膜内皮細胞形態及びタイトジャンクションの形成能力を保持していた。正常な角膜内皮細胞形態及びタイトジャンクションの形成能力は、両方とも角膜内皮機能の維持に決定的に重要である。
実施例Ｃ８：ヒト角膜内皮細胞集団拡大及びマーカーのコラーゲン８ａ２、ＡＱＰ１、ＳＬＣ４Ａ１１、ＲＰＥ６５、ＣＤ３１、及びＮａ／Ｋ ＡＴＰアーゼの測定
通常インビボで角膜内皮細胞によって発現される遺伝子を拡大細胞集団が発現することを検証するため、細胞を培養し、次にＲＴ－ＰＣＲ分析を実施することにより、コラーゲン８ａ２、ＡＱＰ１、ＳＬＣ４Ａ１１、ＲＰＥ６５及びＣＤ３１の発現レベルを測定した。免疫組織化学分析もまた以下のとおり実施して、Ｎａ／Ｋ ＡＴＰアーゼ及びコラーゲン８ａ２のレベルを分析した。
２４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）内の１０マイクロモル濃度のＬＡＴＳ阻害剤化合物例４９番（ＤＭＳＯ中に希釈）を補足した又は化合物を含まないＤＭＳＯの陰性対照を補足した角膜内皮細胞培養培地（ヒト血清を含有するヒト内皮ＳＦ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））に、実施例Ｃ１に記載されるとおり入手した細胞をプレーティングした。細胞を５％ＣＯ２、３７℃で１０日間培養した。陰性対照については、ＬＡＴＳ阻害剤を含まないＤＭＥＭ－Ｆ１２（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で皮膚線維芽細胞（Ｌｏｎｚａ）を培養した。
ＲＴ－ＰＣＲ分析を実施するため、Ｔｒｉｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ及びＱＩＡ Ｓｈｒｅｄｄｅｒ（Ｑｉａｇｅｎ）を製造者のプロトコルに従い使用して全ＲＮＡを抽出した。ＲＮＡの質及び量をＮａｎｏｄｒｏｐ １００（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及びＢｉｏａｎａｌｙｚｅｒ ２１００（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して測定した。逆転写によってｃＤＮＡを調製し、７９００ＨＴシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用した定量的ＲＴ－ＰＣＲによって相対ｍＲＮＡ発現を評価した。以下のサイクルパラメータを使用した：
１）５０℃で２分；２）９５℃で１０分；３）９５℃で１５秒 ４）６０℃で１分。ステップ３～４を４０回繰り返した。
アクチンｍＲＮＡレベルを測定し、遺伝子発現レベルを正規化するための内在性対照として使用して、式ｄＣｔ＝目的の遺伝子のＣｔ－内在性対照のＣｔによりΔＣｔ値を計算した。プライマーはＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓから入手した。
図１９に示されるとおりのＲＴ－ＰＣＲ分析は、ＬＡＴＳ阻害剤化合物例４９番で拡大した角膜内皮細胞集団が、コラーゲン８ａ２、ＡＱＰ１、ＳＬＣ４Ａ１１を含め、通常インビボで角膜内皮細胞によって発現される遺伝子を発現することを示している。細胞は、ＲＰＥ６５（網膜色素上皮のマーカー）及びＣＤ３１（血管上皮のマーカー）を含め、眼に存在する他の上皮のマーカーは発現しない。
Ｎａ／Ｋ ＡＴＰアーゼ及びコラーゲン８ａ２の発現を免疫組織化学によって確かめるため、細胞培養物を４％ＰＦＡで２０分間固定し、透過処理し、ＰＢＳ中０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）及び３％ロバ血清のブロッキング溶液中で３０分間ブロックした。次に細胞をブロッキング溶液中の一次抗体によって４℃で１２時間標識した。使用した一次抗体はＮａ／Ｋ ＡＴＰアーゼ及びコラーゲン８ａ２（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）であった。試料をＰＢＳで３回洗浄し、１：５００希釈のロバ産生二次抗体Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８又は６４７（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）を室温で３０分間適用した。細胞をＰＢＳで３回洗浄し、核（ＤＮＡ）をＳｙｔｏｘオレンジ（５６７ｎｍ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色した。陰性対照は、一次抗体を省くか、又はアイソタイプ対照抗体とするかのいずれかであった（データは示さず）。Ｚｅｉｓｓ ＬＳＭ ８８０共焦点顕微鏡を使用して蛍光を観察した。
図２０に示されるとおりの免疫組織化学分析は、ＬＡＴＳ阻害剤化合物例４９番で拡大した角膜内皮細胞集団が、Ｎａ／Ｋ ＡＴＰアーゼ（図２０ａ）及びコラーゲン８ａ２（図２０ｂ）を含め、通常インビボで角膜内皮細胞によって発現される遺伝子を発現することを示している。
実施例Ｃ９：ヒト角膜内皮細胞集団拡大及びマーカーＣＤ４４、ＣＤ１０５、ＣＤ１６６及びＣＤ７３の測定
拡大細胞集団が内皮間葉転換を起こさないことを検証するため、ＣＥＣを以下のとおり培養し、次にＦＡＣＳ分析を実施して、ＣＤ４４、ＣＤ１０５、ＣＤ１６６及びＣＤ７３のレベルを分析した。
成熟ＣＥＣ培養物を作成するため、３マイクロモル濃度のＬＡＴＳ阻害剤化合物例４８ａ番（ＤＭＳＯ中に希釈）を補足したＸ－ＶＩＶＯ１５に、実施例Ｃ１に記載されるとおり入手した細胞をプレーティングした。細胞を４８ウェルプレート（ｃｏｒｎｉｎｇ）において５％ＣＯ２、３７℃で２週間培養した。この間、細胞を１ｍｇ／ｍｌコラゲナーゼによって３７℃で１５分間脱離させ、遠心によって細胞懸濁液をリンスし、新鮮培地にプレーティングすることにより、細胞を２回継代した。次にＬＡＴＳ阻害剤を含まないＸＶＩＶＯ培地でこれらの細胞を更に２週間成長させた。
ＣＤ４４、ＣＤ１０５、ＣＤ１６６及びＣＤ７３のレベルをＦＡＣＳによって測定するため、ＣＥＣをアキュターゼ（Ａｃｃｕｔａｓｅ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ａ１１１０５０１）によって５％ＣＯ２、３７℃で２０分間処理した。１０％血清を含有する細胞培養培地を使用することにより反応を停止させ、ファルコンチューブに移して遠心ステップ（１０００ｒｐｍ、５分）にかけた。培地を吸引した後、２００マイクロリットルＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ／１０％ＦＢＳ）中に細胞を再懸濁した。
ＣＤ４４、ＣＤ１０５、ＣＤ１６６及びＣＤ７３に対する抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を細胞懸濁液に加え、氷上で３０分間インキュベートした。細胞を抗体標識後にＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液中の５００マイクロリットルに再懸濁した。ＦＡＣＳ選別前に、細胞は７０マイクロメートルフィルタでろ過し、選別時まで氷上に貯蔵した。ＢＤ ＦＡＣＳＡｒｉａ ＩＩ機器で細胞を選別した。ＦＡＣＳデータはＢＤ ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアを使用して分析した。
図２１に示されるとおりのＦＡＣＳ分析は、ＬＡＴＳ阻害剤の存在下で拡大した細胞集団のＦＡＣＳマーカー発現プロファイルが、内皮間葉転換を起こした細胞のＦＡＣＳマーカー発現プロファイルと異なることを示している。具体的には、ＬＡＴＳ阻害剤の存在下で培養された細胞は、ＬＡＴＳ阻害剤の非存在下で成長した細胞と比較して低いレベルのＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ１０５及びＣＤ１６６を発現する。重要なことには、ＣＤ７３は内皮間葉転換マーカーであり、従ってこれらの結果は、ＬＡＴＳ阻害剤の存在下で培養したＣＥＣが内皮間葉転換を起こさないことを示している。
実施例Ｃ１０：細胞バイオプリンティング：ＧｅｌＭＡ調製
ＧｅｌＭＡの合成
既発表のプロトコル（Ｎｉｃｈｏｌ，Ｊ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，２０１０，ｐ．５５３６－５５４４）に従いＬｙｓ残基が約１００％メタクリル化されているゼラチンメタクリレート（ＧｅｌＭＡ）を合成した。２０グラムのブタ由来ゼラチン（カタログ番号Ｇ２５００、Ｓｉｇｍａ）を２００ｍｌのカルシウム及びマグネシウム不含ＰＢＳ（ＤＰＢＳ、カタログ番号２１－０３１、Ｃｏｒｎｉｎｇ）中に５０℃で一晩溶解させた。強く撹拌しながら、このゼラチン溶液中に無水メタクリル酸（カタログ番号２７６６８５、Ｓｉｇｍａ）を８％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）の濃度に達するように滴下して加えた（約１ｍｌ／分）。この混合物を油浴中６０℃で３時間撹拌した後、２００ｍｌのＤＰＢＳを加え、続いて更に１５分間完全に混合した。この希釈混合物をＭｉｌｌｉ－Ｑ水での透析（１５ｋＤａ ＭＷＣＯ Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ透析チュービングを使用）によって４５℃で１週間精製することによりメタクリル酸を除去した。精製した試料を凍結乾燥し、更なる使用時まで－８０℃で貯蔵した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ、３５℃）を使用して、１５ｍｇ／ｍＬのＧｅｌＭＡ溶液についてのメタクリル化の程度を決定した。７．２５～７．５０ｐｐｍ（Ｐｈｅプロトンであると思われる、ＧｅｌＭＡ中Ｐｈｅ１個当たり５Ｈ）における多重線の面積を、５．４７ｐｐｍ、５．５１ｐｐｍ、５．７１ｐｐｍ、及び５．７６ｐｐｍ（ビニルプロトンであると思われる、ＧｅｌＭＡ中メタクリルアミド１個当たり２Ｈ）における４つの一重線の面積の合計と比較することにより、Ｐｈｅ対メタクリルアミドのピーク面積比は１．００：０．８２であることが分かった。この反応に使用したゼラチン中のＰｈｅ：Ｌｙｓモル比は、アミノ酸分析によって１．００：２．０６であると決定された。従って、ＧｅｌＭＡ中のＰｈｅ：Ｌｙｓ：メタクリルアミドのモル比は１．００：２．０６：２．０５である。主要なゼラチンメタクリル化部位がＬｙｓ残基であると仮定すると、１Ｈ ＮＭＲ分析は、メタクリル化度が約１００％である（２．０５／２．０６×１００％＝９９．５％）ことを示している。
以下に記載するとおりＧｅｌＭＡ及びＬＡＰのストック溶液をＤＰＢＳ中に調製し、ｐＨを調整し、滅菌ろ過し、更なる使用時まで４℃で貯蔵した。以下のプロトコルは、１５％ｗ／ｖ ＧｅｌＭＡ及び０．１５％ｗ／ｖ ＬＡＰストックの調製を例示するが、他の強度も同じ手順に従い調製した。１５％ｗ／ｖ ＧｅｌＭＡストック溶液を調製するため、上記に記載したとおり調製した１．５グラムのフリーズドライＧｅｌＭＡを３７℃で１０ｍｌの予熱したＤＰＢＳ中に溶解させた。ＧｅｌＭＡが完全に溶解した後、ＧｅｌＭＡ溶液に１５ｍｇのリチウムフェニル－２，４，６－トリメチルベンゾイルホスフィン酸塩（ＬＡＰ）を加えることにより光開始剤を導入すると、１５％ｗ／ｖ ＧｅｌＭＡ及び０．１５％ｗ／ｖ ＬＡＰを含有するストック溶液となった。ＬＡＰは既発表の手順（Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ２００９，３０，６７０２－６７０７）を用いて合成した。この溶液に５００マイクロリットルの１Ｎ ＮａＯＨ（カタログ番号ＢＤＨ－７２２２－１、ＶＷＲ）を加えてｐＨを中性に調整した後、０．２２マイクロメートル滅菌メンブレン（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して溶液をろ過した。最終的なろ液を５００ｕｌアリコートに分け、更なる使用時まで４℃で貯蔵した。
実施例Ｃ１１：バイオプリンター：設計及び操作
細胞送達位置が正確に制御される細胞療法を開発するため、バイオプリンティング技術を用いてＣＥＣを角膜の後面に正確に配置する。
バイオプリンティング実験は、ＨＥＫ２９３細胞を使用してカバーガラス上で実施した。６ウェル培養プレート内の５％ウシ胎仔血清含有ＤＭＥＭ－Ｆ１２において、赤色蛍光タンパク質で標識したＨＥＫ２９３細胞をコンフルエンスになるまで培養した。次に細胞を培養皿から１００マイクロリットルのＴｒｉｐＬＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によって３７℃で１０分間脱離させ、細胞懸濁液を遠心によってリンスし、ＤＭＥＭ－Ｆ１２中に８０００万細胞／ｍｌの濃度で再懸濁した。
第１のバイオプリンターは動的光投影（ｄｙｎａｍｉｃ ｌｉｇｈｔ ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ：ＤＬＰ）技術に基づき設計したもので、システムの概略図を図２６に示す。このシステムは５つの主要な構成要素からなる：１．ＵＶＡ光源（３６５ｎｍ、Ｓ２０００、ＥＸＰＯ）；２．光を調節して光パターンを生成するデジタルマイクロミラーアレイデバイス（ＤＭＤ、ＤＬＰ－０７ ＸＧＡ；Ｔｅｘａｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）；３．光パターンを試料に投影する光学系；４．ＤＭＤによって生成される対応する光パターンと同期的に全３つの軸で動く自動ステージ；５．ＤＭＤチップ画像フローをフィードし、全ての構成要素を制御するコンピュータ。
バイオプリンティングのため、０．１５％ＬＡＰを含有する５０マイクロリットルの１５％ＧｅｌＭＡストック溶液を等容積のＨＥＫ２９３細胞懸濁液と４０００万／ｍｌの最終細胞密度に達するように混合することにより、ＨＥＫ２９３細胞／生体マトリックス混合物を調製した。次にこの細胞／ＧｅｌＭＡ混合物をカバーガラスの中央に加え、３６５ｎｍ ＵＶＡ光マスクを３０秒間当てることにより文字「ｅ」の形状に重合させた。次にＺｅｉｓｓ ＬＳＭ ８８０共焦点顕微鏡を使用して画像を取得した。
結果は、細胞担持構築物を文字「ｅ」の形に正確にバイオプリントできたことを示した（実際の結果は図２６の左下隅に示される：「ｅ」）。このことから、バイオプリンティング技術が細胞送達位置の正確な制御を実現できたことが指摘された。
インビボ動物研究を促進するため、上記に記載されるバイオプリンターの中核技術を以下のとおりのコンパクトな持ち運びできる携帯型設計に変換した。発光ヘッドは、平行光ビームを提供するように高出力ＬＥＤエミッター（３６５ｎｍ、ＬＥＤ Ｅｎｇｉｎ）及び非球面レンズで構成した。発光ヘッドは、放熱が良好となるようにカスタマイズしたアルミニウムケースに構築した。充電式バッテリ、電源スイッチ及び他の電子機器は、３Ｄプリントしたプラスチックハンドルに取り付け、これを旋回軸を介して発光ヘッドと共に組み立てて、ヘッドが更に自在に回転可能となるようにした。３Ｄプリントしたアダプターにより、照射範囲のサイズを制御するため異なる寸法のヘッド導光器に装着することを可能にした。ＤＭＤベースのシステムから着想を得て、この携帯型装置はヘッドの前面に装着された透明シート上にプリントされたマスクを使用することにより、カスタマイズされた光パターンを生成して光重合を制御することが可能である。
実施例Ｃ１２：エキソビボでのヒト角膜後面への細胞担持構築物のバイオプリンティング
この持ち運びできる携帯型バイオプリンティング装置が細胞をヒト角膜の後面に正確に配置することが可能かどうかを決定するため、エキソビボでＨＥＫ２９３細胞及びアイバンクから入手したヒト角膜を使用してバイオプリンティング実験を実施した。６ウェル培養プレート内の５％ウシ胎仔血清含有ＤＭＥＭ－Ｆ１２において、赤色蛍光タンパク質で標識したＨＥＫ２９３細胞をコンフルエンスになるまで培養した。次に細胞を培養皿から１００マイクロリットルのＴｒｉｐＬＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によって３７℃で１０分間脱離させ、細胞懸濁液を遠心によってリンスし、ＤＭＥＭ－Ｆ１２中に８０００万細胞／ｍｌの濃度で再懸濁した。
バイオプリンティングのため、０．１５％ＬＡＰを含有する５０マイクロリットルの１５％ＧｅｌＭＡストック溶液を同容積のＨＥＫ２９３細胞懸濁液と４０００万／ｍｌの最終細胞密度に達するように混合することにより、ＨＥＫ２９３細胞／生体マトリックス混合物を調製した。
次にこの細胞／ＧｅｌＭＡ混合物をカバーガラスの中央に加え、３６５ｎｍ ＵＶＡ光マスクを３０秒間当てることにより文字「ｅ」の形状に重合させた。次にＺｅｉｓｓ ＬＳＭ ８８０共焦点顕微鏡を使用して画像を取得した。
アイバンクから入手したヒトドナー角膜をその貯蔵溶液（オプチゾール（Ｏｐｔｉｓｏｌ））から取り出し、ＤＰＢＳで軽くリンスした。解剖顕微鏡下でデスメ膜（Ｄｅｓｃｅｍｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ）を慎重に削り取った後、角膜をＤＰＢＳで更にリンスした。次に１つの角膜を、内表面を上にして３５ｍｍペトリ皿のプラスチック蓋の上に置いた。０．１５％ＬＡＰを含有する５０マイクロリットルの１５％ＧｅｌＭＡストック溶液を等容積のＨＥＫ－２９３－ＲＦＰ細胞懸濁液と４０００万／ｍｌの最終細胞密度に達するように混合することにより、細胞／生体マトリックス混合物を新鮮に調製した。次に細胞／ＧｅｌＭＡ混合物を角膜の中央に加え、次に凸形状のプラスチックホルダを当てることにより、眼の前房を模倣する閉鎖されたチャンバを形成した。次に構築物全体を慎重にひっくり返し、携帯型バイオプリンティング装置を使用して５．５ｍｍ直径の円形パターンの３６５ｎｍ ＵＶＡ光を角膜を通じて３０秒間投影した。このパターンのＵＶ光は、角膜の後面に装着されたディスクの形に細胞／ＧｅｌＭＡ混合物を重合させるものと思われた。これが起こったかどうかを決定するため、本発明者らは蓋から角膜を引き離し、角膜の後面にＤＰＢＳをピペッティングすることにより未重合及び未付着の材料を全てリンスし、Ｚｅｉｓｓ ＬＳＭ ８８０共焦点顕微鏡を使用して画像を取得した。
結果は、未重合及び未付着の材料をリンスした後、角膜の後面に円形パターンの赤色蛍光タンパク質標識細胞が保持されていたことを示している（図２７）。これにより、角膜を通じて３６５ｎｍ ＵＶＡ光を投影する携帯型装置を使用することにより角膜の後面に細胞をバイオプリントできたことが確認された。
実施例Ｃ１３：インビボでのウサギ角膜後面への細胞担持構築物のバイオプリンティング
ＣＥＣ調製
実施例Ｃ１に記載されるとおり入手した細胞を培養皿から１００マイクロリットルのアキュターゼ（Ａｃｃｕｔａｓｅ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）によって３７℃で１０分間脱離させ、細胞懸濁液を遠心によってリンスし、３マイクロモル濃度のＬＡＴＳ阻害剤化合物例４８ａ番（ＤＭＳＯ中に希釈）を補足したＸ－ＶＩＶＯ１５にプレーティングした。細胞を６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）において５％ＣＯ２、３７℃で２週間培養した。この間、細胞を１ｍｇ／ｍｌコラゲナーゼによって３７℃で１５分間脱離させ、遠心によって細胞懸濁液をリンスし、新鮮培地にプレーティングすることにより、細胞を２回継代した。次にＬＡＴＳ阻害剤を含まないＸＶＩＶＯ培地でこれらの細胞を更に２週間成長させて成熟ＣＥＣを作り出した。
ウサギ眼内へのバイオプリンティング用のＣＥＣを調製するため、０．１５％ＬＡＰを含有する１５マイクロリットルの１５％ＧｅｌＭＡストック溶液を３０マイクロリットルのＣＥＣ懸濁液と６２万５０００／ｍｌ～２５００万／ｍｌの最終細胞密度に達するように混合することにより、細胞／生体マトリックス混合物を作成した。次にこの細胞／ＧｅｌＭＡ混合物を角膜の中央に加えた。
角膜内皮細胞欠乏ウサギモデル
ＮＺＡウサギの右眼に、シリコンチップ針を使用して角膜内皮全体を削り取ることにより角膜内皮細胞欠乏を片眼性に作り出した。吸引カニューレを使用して前房をリンスすることにより、浮遊デブリを除去した。４０マイクロリットルの新鮮に調製した細胞／ＧｅｌＭＡ混合物を前房に注入し、続いて眼表面から約１ｃｍ離れて３ｍｍ導光器を備えた携帯型バイオプリンターを使用して３６５ｎｍ ＵＶＡに３０秒間曝露した。小型カニューレを使用して５００マイクロリットルのヘパリン添加平衡塩類溶液を注入することにより穏やかなリンスを実施して、未重合材料及び浮遊細胞を除去した。各ウサギの左眼はインタクトなまま残し、対照として働いた。細胞送達後、ウサギは鎮痛治療（最初の２週間にトラマドール１０ｍｇ／ｋｇ ＰＯ ＢＩＤ、最初の２週間に又は動物が眼部不快感の徴候を示す間はメロキシカム０．３ｍｇ／ｋｇ ＰＯ ＳＩＤ）、抗炎症治療（手技直後にＡｎｃｅｆ（登録商標）（セファゾリン）５０ｍｇテノン嚢下、Ｔｏｂｒｅｘ（登録商標）点眼液、１週目ｔ．ｉ．ｄ、及びその後ｂ．ｉ．ｄ、１週目にアンピシリン８０ｍｇ／ｋｇ／日（４０ｍｇ ＢＩＤ）ＳＱ）及び免疫抑制（シクロスポリンＡ（０．５％）ｔｏｐ ｏｃ．１週目ｔ．ｉ．ｄ及びその後ｂ．ｉ．ｄ．、Ｇｅｎｔｏｃｉｎ（登録商標）－ｄｕｒａｆｉｌｍ（登録商標）（硫酸ゲンタマイシン及びベタメタゾン、ＭＥＲＣＫ）ｔｏｐ ｏｃ．１週目ｔ．ｉ．ｄ．及びその後ｂ．ｉ．ｄ．、シクロスポリンＡ（５ｍｇ／ｋｇ／日）ＳＱ１週目、次にその後２分の１の投薬量）を受けた。
細胞送達から３週間後にウサギを犠牲にし、角膜を解剖して４％ＰＦＡに固定した。免疫組織化学を実施してヒト核抗原の存在を検出することにより（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）ヒト細胞及びＺＯ－１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の存在を確認し、バイオプリントされたＣＥＣが正常な角膜内皮（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｕｍ）で観察されるタイトジャンクションを形成できるかどうかを決定した。次にＺｅｉｓｓ ＬＳＭ ８８０共焦点顕微鏡を使用して画像を取得した。
結果から、実験ウサギにおいて、ＺＯ－１免疫組織化学を用いて角膜内皮構造を検出できることが示された（図２８、パネルＡ）。角膜内皮が外科的に取り除かれ、ＣＥＣがバイオプリントされなかったウサギの右眼では、ＺＯ－１染色が存在せず、正常な角膜内皮構造が存在しないことが示される（図２８、パネルＢ）。角膜内皮が外科的に取り除かれ、ＣＥＣがバイオプリントされたウサギの右眼では、ＺＯ－１染色が存在し、角膜内皮構造が再構築されたことが示される（図２８、パネルＣ）。
ヒト核抗原染色を用いて、図２８、パネルＣの角膜内皮を再構築した細胞がバイオプリンティングによって送達されたヒトＣＥＣであることを確認した。図２８、パネルＤ及びＥは、いかなるヒトＣＥＣの投与も受けなかった眼にヒト核抗原免疫染色が存在しないことを示す。対照的に、ヒトＣＥＣがバイオプリントされた眼では、ヒト核抗原陽性細胞が撮像視野を被覆し（図２８、パネルＦ）、図２８、パネルＣに示されるＺＯ－１標識角膜内皮構造がウサギ角膜の後面にバイオプリントされたヒトＣＥＣで構成されていることが示される。
実施例Ｃ１４：エキソビボでのヒト角膜後面への高度にカスタマイズ可能な形状の細胞担持構築物のバイオプリンティング
アイバンクから入手したヒトドナー角膜をその貯蔵溶液（オプチゾール（Ｏｐｔｉｓｏｌ））から取り出し、ＤＰＢＳで軽くリンスした。解剖顕微鏡下でデスメ膜（Ｄｅｓｃｅｍｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ）を慎重に削り取った後、角膜をＤＰＢＳで更にリンスした。次に１つの角膜を、内表面を上にして３５ｍｍペトリ皿のプラスチック蓋の上に置いた。
０．１５％ＬＡＰを含有する５０μｌの１５％ＧｅｌＭＡストック溶液を等容積のＨＥＫ－２９３－ＲＦＰ細胞懸濁液と４０００万／ｍｌの最終細胞密度に達するように混合することにより、細胞／生体マトリックス混合物を新鮮に調製した。次に細胞／ＧｅｌＭＡ混合物を角膜の中央に加え、次に凸形状のプラスチックホルダを当てることにより、眼の前房を模倣する閉鎖されたチャンバを形成した。次に構築物全体を慎重にひっくり返し、実施例Ｃ１１に記載したＤＬＰバイオプリンティング装置を使用してカスタマイズ可能なパターンの３６５ｎｍ ＵＶＡ光を角膜を通じて７．５秒間投影した。次に角膜の後面にある未重合及び未付着の材料を全てＤＰＢＳによってリンスし、Ｚｅｉｓｓ蛍光実体顕微鏡を使用して画像を取得した。
本発明者らのバイオプリンティング技術の再現性及びカスタマイズ可能性を実証するため、容易に認識することのできる異なる文字のデザインの光パターンを試料に投影した。結果は（図２９）、角膜を通じた光パターンによって決定される、高精度のカスタマイズ可能な細胞担持構築物を角膜後面にバイオプリントできることを示している。
実施例Ｃ１５：残留化合物推定試験
標準曲線作成
３０マイクロモル、３マイクロモル、３００ｎＭ、３０ｎＭ、３ｎＭ、０．３ｎＭ及び０マイクロモルの濃度でストック標準の希釈系列を作成した。化合物例４８ａ（ＤＭＳＯ中１０ｍＭ）ストックを５０％アセトニトリル５０％水中にスパイクしてスパイク標準を作成した。このスパイク標準を使用してブランク媒体試料をスパイクした。１０マイクロリットルのスパイク標準を９０マイクロリットルの媒体に加えることにより、スパイクした媒体標準を作り出した。３０００ｎＭ、３００ｎＭ、３０ｎＭ、３ｎＭ、３００ｐＭ、３０ｐＭ、及び０ｎＭ媒体標準を使用して化合物例４８ａ番標準曲線を作成した。
５０マイクロリットルの各媒体試料を３００マイクロリットルの抽出溶液によって処理した。この抽出溶液はアセトニトリル／メタノール（３：１）からなる。標準曲線試料は、未知の媒体試料と同じ容積及び条件を使用して抽出した。抽出した試料を１０，０００ｒｐｍで５分間遠心した。遠心後、２００マイクロリットルの各試料上清を清浄な９６ウェルプレートに移した。抽出した試料は高分解能ＬＣ－ＭＳによって分析した。Ｔｈｅｒｍｏ Ｘｃａｌｉｂｕｒソフトウェア及びＱｕａｎブラウザを使用して標準曲線を作成し、濃度値を計算した。線形両対数目盛を使用する外部校正法を用いて培養培地試料中における化合物例４８ａ番の濃度を計算した。
ＬＣ－ＭＳ分析
Ｔｈｅｒｍｏ Ｕｌｔｉｍａｔｅ ＵＰＬＣ及びＫｉｎｅｔｅｘ ２．１×５０ｍＭ Ｃ１８ ＲＰカラム（２．６ミクロン粒子）を使用して高分解能クロマトグラフィーを実施した。移動相は、緩衝液ＡについてＨ２Ｏ中５ｍＭ酢酸アンモニウム、及び緩衝液Ｂについてアセトニトリル中０．１％ギ酸からなった。逆相クロマトグラフィーには標準的な二成分直線グラジエントを使用した。本試験にはＴｈｅｒｍｏ Ｑ Ｅｘａｃｔｉｖｅ質量分析計を使用した。ＵＰＬＣ溶出物は、ＥＳＩイオン源を備えたＱ Ｅｘａｃｔｉｖｅ質量分析計に向かわせた。質量分析計は、高分解能フルスキャンモードで実施するようにプログラムした。クロマトグラフィー積分には抽出イオンクロマトグラムを使用した。
試験システム
ＣＥＣ洗浄用の細胞調製：洗浄実験はトリプリケートで実施し、ここで各試料は５０万個の細胞を含有した。実験の継続期間中、全ての試料（培地のみ、培地と細胞、化合物例４８ａ番を補足、及び化合物例４８ａ番を補足した培地中の細胞）を３７度のインキュベーターで培養した。この実験に使用した培地はＸ－ＶＩＶＯ １５であった（Ｌｏｎｚａ、カタログ番号０４－７４４Ｑ）。
３マイクロモルの化合物例４８ａ番を補足したＸ－ＶＩＶＯ－１５培地中で細胞を継代２代目まで培養した。コンフルエンシーに達したところで、吸引によって培地を除去し、化合物例４８ａ番を補足していない新鮮培地に交換した。細胞を化合物例４８ａ番の非存在下で更に１週間培養した。化合物の非存在下で１週間培養した後、吸引によって培地を除去し、化合物を含有しない培地に新しくし、化合物の非存在下で細胞培養を更に６日間継続した。７日目、以下の試料を作成した：
５．２ｍｌの「ブランク」培地（化合物を補足していない）
６．化合物の存在下で培養した２ｍｌの培地（洗浄前）
７．各洗浄試料１～１０についての２ｍｌの培地
８．細胞ペレット（洗浄後）
細胞はセルリフター（Ｃｏｓｔａｒ、カタログ番号３００８）を使用して収集した。
培地及び細胞ペレット試料は高分解能ＬＣ－ＭＳを用いて分析し、定量化した。
化合物例４８ａ番の残留レベルを推定するため、細胞ペレット及び上清を収集した。化合物例４８ａ番の量はＬＣ－ＭＳによって決定した。洗浄前培地、洗浄培地（表１１）及び細胞ペレット中における化合物例４８ａ番の濃度の推定を要約する（表１２）。洗浄前培地試料が最も高いレベルの化合物例４８ａ番（約３５ｎＭ～１２２ｎＭ範囲）を有する。洗浄後ペレットレベルは、低いが検出可能なレベルの化合物例４８ａ番（ピコモル濃度）を有する。
Figure 0007247102000509
Figure 0007247102000510
３回のインキュベーションからの洗浄前培地中の化合物例４８ａ番の量は３５．３４４～１２１．８６３ｎＭの範囲である。細胞ペレット中の化合物例４８ａ番の平均量は５００，０００細胞につき０．７５ピコグラムであった。
実施例Ｃ１６：ＬＳＣにおけるＡＡＶ媒介性β－２－ミクログロブリン遺伝子欠失による免疫拒絶の低減
ＡＡＶベクター設計：
図３０に示されるベクターマップは、ＬＳＣにおいてＣＲＩＳＰＲシステムを発現させるために使用されるＡＡＶベクターの設計を提供する。このベクターは、Ａａｒ Ｉ制限部位に挿入された黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）Ｃａｓ９（Ｒａｎ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ．２０１５ Ａｐｒ ９；５２０（７５４６）：１８６－１９１）及びＢ２Ｍ特異的ガイドＲＮＡを発現した。
細胞形質導入：ＬＡＴＳ阻害剤化合物例４８ａ番を補足したＸ－ＶＩＶＯ１５培地において、実施例Ｂ１に記載されるとおり入手したＬＳＣを培養した。ＬＳＣはヒト角膜からの単離直後に懸濁液で形質導入されるか、又はＬＳＣ単離の８日後に３５ｍｍペトリ皿で５０～６０％のコンフルエンシーになるまで単離、付着及びＬＡＴＳ阻害剤化合物での拡大後に形質導入されるかのいずれかであった。ＬＳＣは１０Ｋ、５０Ｋ、１００Ｋ又は２００ＫのＭＯＩで形質導入した。１×ＰＢＳ＋０．００１％プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）で構成された緩衝液中にベクター粒子を希釈し、培養皿にピペッティングした。ウイルス粒子貯蔵緩衝液単独を形質導入陰性対照とした。細胞を５％ＣＯ２インキュベーターにおいて７２時間培養した後、ＦＡＣＳ分析及び選別を実施した。
ＦＡＣＳ分析：
ＬＳＣをアキュターゼ（Ａｃｃｕｔａｓｅ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ａ１１１０５０１）によって５％ＣＯ２、３７℃で２０分間処理した。細胞を掻き取った後、１０％血清を含有する細胞培養培地を使用して反応５を停止させ、ファルコンチューブに移して遠心ステップ（１０００ｒｐｍ、５分）にかけた。培地を吸引した後、細胞を２００マイクロリットルＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ／１０％ＦＢＳ）に再懸濁した。
Ｂ２Ｍ及びＨＬＡ－ＡＢＣの発現を分析するため、５マイクロリットルＡＰＣマウス抗ヒトβ２－ミクログロブリン抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３１６３１２）及び２０マイクロリットルＰＥマウス抗ヒトＨＬＡ－ＡＢＣ抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号５６０１６８）を細胞懸濁液に加え、氷上で３０分間インキュベートした。細胞を抗体標識後にＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液中の５００マイクロリットルに再懸濁した。
ＦＡＣＳ選別前に、細胞は７０マイクロメートルフィルタでろ過し、選別時まで氷上に貯蔵した。細胞が壁に付着するのを防ぐため、選別前に収集チューブを血清で３０分間満たした。ヒト血清集積ＬＳＣ培地を使用して、細胞をＢＤ ＦＡＣＳＡｒｉａ ＩＩ機器で２０本の調製済みの収集チューブに選別した。ＦＡＣＳデータはＢＤ ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアを使用して分析した。
図３１に提示される結果は、２００ＫのＭＯＩでＡＡＶ媒介性ＣＲＩＳＰＲシステム発現によってＢ２Ｍの欠失が可能となり、続いてＨＬＡ Ａ、Ｂ及びＣの除去が、付着細胞をトランスフェクトしたとき２４．９パーセントのＬＳＣで、及び懸濁液中の細胞を形質導入したとき２０．０パーセントのＬＳＣで起こったことを示している。
実施例Ｃ１７：ＣＥＣにおけるＡＡＶ媒介性β－２－ミクログロブリン遺伝子欠失による免疫拒絶の低減
ＡＡＶベクター設計：
図３０に示されるベクターマップは、ＣＥＣにおいてＣＲＩＳＰＲシステムを発現させるために使用されるＡＡＶベクターの設計を提供する。このベクターは、Ａａｒ Ｉ制限部位に挿入された黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）Ｃａｓ９（Ｒａｎ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ．２０１５ Ａｐｒ ９；５２０（７５４６）：１８６－１９１）及びＢ２Ｍ特異的ガイドＲＮＡを発現した。
細胞形質導入：
実施例Ｃ１に記載されるとおり入手した細胞を培養皿から１００マイクロリットルのアキュターゼ（Ａｃｃｕｔａｓｅ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）によって３７℃で１０分間脱離させ、細胞懸濁液を遠心によってリンスし、１０マイクロモル濃度のＬＡＴＳ阻害剤化合物例１３３番又は例４９番（ＤＭＳＯ中に希釈）又は陰性対照として化合物を含まないＤＭＳＯ単独を補足した６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）１０内の角膜内皮細胞培養培地（ヒト血清を含有するヒト内皮ＳＦ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））にプレーティングした。細胞を５％ＣＯ２、３７℃で培養した。
１０マイクロモル濃度のＬＡＴＳ阻害剤化合物例１３３番又は例４９番（ＤＭＳＯ中に希釈）を補足した６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）内の角膜内皮細胞培養培地（ヒト血清を含有するヒト内皮ＳＦ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））でＣＥＣを培養した。ＣＥＣ単離の８日後に６ウェルプレートにおいて５０～６０％のコンフルエンシーまでＬＡＴＳ阻害剤化合物で単離、付着及び拡大後にＣＥＣを形質導入した。ＣＥＣは０．１Ｋ、１Ｋ、５Ｋ、１０Ｋ、２０Ｋ又は４０ＫのＭＯＩで形質導入した。１×ＰＢＳ＋０．００１％プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）で構成される緩衝液中にベクター粒子を希釈し、培養皿にピペッティングした。ウイルス粒子貯蔵緩衝液単独を形質導入陰性対照とした。５％ＣＯ２インキュベーターにおいて細胞を７２時間培養した後、ＦＡＣＳ分析及び選別を実施した。
ＦＡＣＳ分析：
ＣＥＣをアキュターゼ（Ａｃｃｕｔａｓｅ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ａ１１１０５０１）によって５％ＣＯ２、３７℃で２０分間処理した。細胞を掻き取った後、１０％血清を含有する細胞培養培地を使用して反応５を停止させ、ファルコンチューブに移して遠心ステップ（１０００ｒｐｍ、５分）にかけた。培地を吸引した後、細胞を２００マイクロリットルＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ／１０％ＦＢＳ）中に再懸濁した。
Ｂ２Ｍ及びＨＬＡ－ＡＢＣの発現を分析するため、５マイクロリットルＡＰＣマウス抗ヒトβ２－ミクログロブリン抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３１６３１２）及び２０マイクロリットルＰＥマウス抗ヒトＨＬＡ－ＡＢＣ抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号５６０１６８）を細胞懸濁液に加え、氷上で３０分間インキュベートした。細胞を抗体標識後にＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液中の５００マイクロリットルに再懸濁した。
ＦＡＣＳ選別前に、細胞は７０マイクロメートルフィルタでろ過し、選別時まで氷上に貯蔵した。細胞が壁に付着するのを防ぐため、選別前に収集チューブを血清で３０分間満たした。ヒト血清集積ＣＥＣ培養培地を使用して、細胞をＢＤ ＦＡＣＳＡｒｉａ ＩＩ機器で２０本の調製済み収集チューブに選別した。ＦＡＣＳデータはＢＤ ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアを使用して分析した。
図３２に提示される結果は、ＡＡＶ媒介性ＣＲＩＳＰＲシステム発現によってＢ２Ｍの欠失、続いてＨＬＡ Ａ、Ｂ及びＣの除去が可能となったことを示している。４０ＫのＭＯＩでは、１７パーセントのＣＥＣにＢ２Ｍ欠失が起こった。
特に指示がない限り、具体的に詳説されない方法、ステップ、技法及び操作は全て、当業者には明らかであろうとおり、それ自体公知の方法で実施することができ、且つ実施されている。例えば、この場合もやはり、本明細書において言及される標準的なハンドブック及び一般的な背景技術並びにそこに引用される更なる参考文献が参照される。特に指示がない限り、本明細書に引用される参考文献の各々は、参照によりその全体が援用される。
本発明の特許請求の範囲は非限定的であり、以下に提供される。詳細な実施形態及び特許請求の範囲が本明細書に詳細に開示されるが、これは例として説明のために行われるに過ぎず、添付の特許請求の範囲、又は任意の対応する将来の出願の特許請求の主題の範囲に関して限定することを意図するものではない。詳細には、本発明者らにより、特許請求の範囲によって定義されるとおりの本開示の趣旨及び範囲から逸脱することなく本開示に様々な置換、改変、及び修正を行い得ることが企図される。核酸出発物質、目的のクローン、又はライブラリタイプの選択は、本明細書に記載される実施形態の知識を持った当業者にとってルーチンの事項と考えられる。他の実施形態、利点、及び変形例は、以下の特許請求の範囲内にあると見なされる。当業者は、本明細書に記載される本発明の具体的な実施形態の多くの均等物を認識し、又はルーチンに過ぎない実験を用いてそれを確認可能であろう。

本発明は、以下の態様を含む。
［１］
式Ａ２の化合物、又は塩、又はその立体異性体。
Figure 0007247102000511
 ［式中
Ｘ １ はＣＨ又はＮであり；
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、前記ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、前記５員ヘテロアリールの前記連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は前記６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000512
 ［式中、「 ＊ 」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；及び
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ １～６ アルキル、Ｃ １～６ ハロアルキル、－ＮＨ ２ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、ジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノ、Ｃ ３～６ シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されおり；
Ｒ ０ はヒドロキシル又はＣ １～６ アルコキシであり；
Ｒ １ は水素又はＣ １～６ アルキルであり；
Ｒ ２ は、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）ハロゲン；
（ｉｉ）シアノ；
（ｉｉｉ）オキソ；
（ｉｖ）Ｃ ２ アルケニル；
（ｖ）Ｃ ２ アルキニル；
（ｖｉ）Ｃ １～６ ハロアルキル；
（ｖｉｉ）－ＯＲ ６ ［式中、Ｒ ６ は、水素、非置換であるか又はＲ ０ 若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから選択される］；
（ｖｉｉｉ）－ＮＲ ７ａ Ｒ ７ｂ ［式中、Ｒ ７ａ は水素又はＣ １～６ アルキルであり、及びＲ ７ｂ は、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ 、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから選択される］；
（ｉｘ）－Ｃ（Ｏ）Ｒ ８ ［式中、Ｒ ８ はＲ ０ 又は－ＮＨ－Ｃ １～６ アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ である］；
（ｘ）－Ｓ（Ｏ） ２ Ｃ １～６ アルキル；
（ｘｉ）各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ １～６ アルキル、ヒドロキシＣ １～６ アルキル、Ｃ １～６ ハロアルキル、Ｒ ０ 、－ＮＨ ２ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ ３～６ シクロアルキル又は多環式Ｃ ７～１０ シクロアルキル；
（ｘｉｉ）Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ １～６ アルキル、Ｃ １～６ アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
（ｘｉｉｉ）非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
（ｘｉｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
（ｘｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ １～８ アルキル；
（ｂ）－Ｓ（Ｏ） ２ Ｃ １～６ アルキル；
（ｃ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ １～６ アルキル及びＲ ０ から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｄ）非置換であるか、又はＣ １～６ ハロアルキル、Ｒ ０ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、ジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ 、及び非置換であるか又はＲ ０ 若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ ３～６ シクロアルキル；及び
（ｅ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ １～６ ハロアルキル、Ｒ ０ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、ジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ 、及び非置換であるか又はＲ ０ 若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；
又は、Ｘ １ がＣＨであるならば、Ｒ １ 及びＲ ２ は、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成することができ、ここでＲ １ 及びＲ ２ によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される前記４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ １～６ アルキル、Ｃ １～６ ハロアルキル、及びＲ ０ から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されており；Ｒ ３ は、水素、ハロゲン及びＣ １～６ アルキルから選択され；及び
Ｒ ５ は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで前記－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ ３～８ アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ ０ によって置換されており；
但し、
（１）Ｘ １ がＮであり、環Ａが４－ピリミジニル（ｐｒｉｍｉｄｉｎｙｌ）又は３－フルオロ－４－ピリミジニル（ｐｒｉｍｉｄｉｎｙｌ）であり、Ｒ １ がＨ又はメチルであり、Ｒ ３ がＨ又はＣｌであり、及びＲ ５ がＨである場合；このときＲ ２ は、－ＮＨ ２ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ又はｔ－ブチル－カルバモイル－アミノから選択される置換基で置換されている且つ任意選択で非置換フェニルによって更に置換されているＣ ２～４ アルキルではなく；及び
（２）Ｘ １ がＮであり、環Ａがインダゾール－５－イルであり、Ｒ １ 、Ｒ ３ 及びＲ ５ がＨである場合；このときＲ ２ は、－ＮＨ ２ で置換されているＣ ４ アルキルではないものとする。］
[２]
式Ｉである、［１］に記載の化合物。
Figure 0007247102000513
 [３]
式ＩＩである、［１］に記載の化合物。
Figure 0007247102000514
 [４]
環Ａが、
Figure 0007247102000515
 ［式中、これらは各々、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ １～６ アルキル、Ｃ １～６ ハロアルキル、及び－ＮＨ ２ から選択される置換基によって置換されている］から選択されるか；
又は
Figure 0007247102000516
 ［これは非置換であるか、又はＣ １～６ アルキルによって置換されている］である、［１］～［３］のいずれかに記載の化合物。
[５]
環Ａが
Figure 0007247102000517
 である、［１］～［４］のいずれかに記載の化合物。
[６]
Ｒ ２ が、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）シアノ；
（ｉｉ）Ｃ ２ アルキニル；
（ｉｉｉ）Ｃ １～６ ハロアルキル；
（ｉｖ）－ＯＲ ６ ［式中、Ｒ ６ は、水素、及び非置換であるか又はＲ ０ 若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから選択される］；
（ｖ）－ＮＲ ７ａ Ｒ ７ｂ ［式中、Ｒ ７ａ は水素又はＣ １～６ アルキルであり、及びＲ ７ｂ は、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ 、及び非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから選択される］；
（ｖｉ）－Ｃ（Ｏ）Ｒ ８ ［式中、Ｒ ８ はＲ ０ である］；
（ｖｉｉ）－Ｓ（Ｏ） ２ Ｃ １～４ アルキル；
（ｖｉｉｉ）非置換であるか、又はＣ １～６ アルキル、ヒドロキシＣ １～６ アルキル及びＲ ０ から選択される置換基によって置換されている単環式Ｃ ３～６ シクロアルキル；
（ｉｘ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む６員ヘテロシクロアルキルであって、非置換であるか、又はＣ １～６ アルキルによって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
（ｘ）非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル
から独立して選択されるＡ１～Ａ３置換基によって置換されているＣ １～８ アルキル；及び
（ｂ）非置換であるか、又はＣ １～６ ハロアルキル、Ｒ ０ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ 、非置換であるか若しくは－Ｒ ０ 又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ ３～６ シクロアルキル
から選択される、［１］～［５］のいずれかに記載の化合物。
[７]
Ｒ ２ が、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｔ－ブチル、
Figure 0007247102000518
から選択される、［１］～［６］のいずれかに記載の化合物。
[８]
Ｘ １ がＣＨであり；及び
Ｒ １ 及びＲ ２ が、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ及びＯから選択される追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい６員ヘテロシクロアルキルを形成し、ここでＲ １ 及びＲ ２ によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される前記６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はヒドロキシル、Ｃ １～６ アルキル及びＣ １～６ ハロアルキルから独立して選択される１～３個の置換基によって置換されている、
［１］及び［３］～［５］のいずれかに記載の化合物。
[９]
式Ａ３である、［１］に記載の化合物。
Figure 0007247102000519
 ［式中
Ｘ １ はＣＨ又はＮであり；
環Ａは
Figure 0007247102000520
 ［これらの各々は、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ １～６ アルキル、Ｃ １～６ ハロアルキル、及び－ＮＨ ２ から選択される置換基によって置換されている］であり；
Ｒ １ は水素又は非置換Ｃ １～６ アルキルであり；及び
Ｒ ２ は、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）Ｃ １～４ ハロアルキル；及び
（ｉｉ）－ＯＲ ６ ［式中、Ｒ ６ は、水素及び非置換であるか又はヒドロキシルによって置換されているＣ １～６ アルキルから選択される］
から選択される１個の置換基によって置換されているＣ １～８ アルキル；又は
（ｂ）非置換であるか、又はＣ １～６ アルキル若しくはＣ １～６ ハロアルキル及びＲ ０ によって置換されている単環式Ｃ ３～６ シクロアルキル
である。］
[１０]
Ｎ－（２－シクロプロピルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ，Ｎ－ジエチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－エチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メトキシ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－メトキシ－２－メチルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ブチル－Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－エチル－Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）エタン－１－オール；２－メチル－１－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）プロパン－２－オール；Ｎ－エチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－シクロヘキシルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（３－メチルオキセタン－３－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－２－オール；Ｎ－ブチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチル－４－フェニルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－シクロプロピル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－メタンスルホニル－２－メチルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１，３－ジオール；３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－２－オール；２－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）酢酸；（１Ｒ，２Ｓ）－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロペンタン－１－オール；４，４，４－トリフルオロ－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール；Ｎ－（１－メタンスルホニル－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（２Ｓ）－３，３，３－トリフルオロ－２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン酸；２－［（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロピル）アミノ］酢酸；（２Ｒ）－３，３，３－トリフルオロ－２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン酸；メチル２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパノエート；（１Ｓ，２Ｓ）－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロペンタン－１－オール；２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン酸；２－（２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝エトキシ）エタン－１－オール；２－（ヒドロキシメチル）－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１，３－ジオール；３－メチル－３－（３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタンアミド）ブタン酸；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－３－フェニルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－｛［４－（ジメチルアミノ）オキサン－４－イル］メチル｝－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン酸；Ｎ－（２－メタンスルホニルエチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－［２－（アダマンタン－１－イル）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－Ｎ－［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］プロパンアミド；４，４，４－トリフルオロ－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン酸；Ｎ－［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］プロパン－２－スルホンアミド；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［３－（１Ｈ－１，２，３，４－テトラゾール－５－イル）プロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｒ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２，４－ジメチル－４－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール；４，４，４－トリフルオロ－２，３－ジメチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－２－オール；（１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロペンチル）メタノール；Ｎ－（３－メトキシシクロブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（１Ｒ，２Ｒ）－１－Ｎ，２－Ｎ－ジメチル－１－Ｎ－［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］シクロヘキサン－１，２－ジアミン；メチル（１ｓ，３ｓ）－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－カルボキシレート；エチル１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－カルボキシレート；１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－カルボン酸；（１ｓ，３ｓ）－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－カルボン酸；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロブチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－シクロペンチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１－オール；３，３，３－トリフルオロ－２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１－オール；Ｎ－（ブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチルブタ－３－イン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（１ｒ，３ｓ）－３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－オール；２，３－ジメチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－２－オール；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（ペンタン－３－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－［２－メチル－１－（モルホリン－４－イル）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－［１－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－メチルプロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４，４，４－トリフルオロ－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール；Ｎ－ペンチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール；Ｎ－［１－（１Ｈ－インドール－３－イル）－２－メチルプロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－［１－（４－フルオロフェニル）－２－メチルプロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－フェニルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－フルオロフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－［２－（４－フルオロフェニル）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３，３，３－トリフルオロ－２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン酸；２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝エタン－１－オール；Ｎ－メチル－２－（ピ

リジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；１－（｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝メチル）シクロペンタン－１－オール；Ｎ，Ｎ－ジメチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチルフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－メチルフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－メトキシフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－フェニル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（３－メチルフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；６－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ヘキサン酸；Ｎ－（３－フルオロフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－フルオロフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン酸；Ｎ－（１－フェニルエチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；ｔｅｒｔ－ブチルＮ－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロピル）カルバメート；（１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブチル）メタノール；メチル２－（１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロプロピル）アセテート；Ｎ－（２－メチルプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタンニトリル；Ｎ－（６－アミノヘキシル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－アミノブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパンニトリル；Ｎ－［２－メチル－１－（２－メチルピペリジン－１－イル）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；ジメチル（３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブチル）アミン；Ｎ－（１－アミノ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－シクロペンチル－２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－［４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル］ピリジン－２－アミン；２－［１－（ベンゼンスルホニル）－２－メチル－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル］－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－｛２－メチル－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－クロロピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－メチルピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（２－メチルブタン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２，４－ジメチル－４－（｛２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル｝アミノ）ペンタン－２－オール；Ｎ－エチル－２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（プロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－１－［２－メチル－２－（｛２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル｝アミノ）プロポキシ］プロパン－２－オール；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－エチル－２－（３－メチルピリジン－４－イル）－Ｎ－（プロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－メトキシ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛［２－（３－クロロピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝－２，４－ジメチルペンタン－２－オール；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－シクロペンチルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；１－（２－｛［２－（３－クロロピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝－２－メチルプロポキシ）－２－メチルプロパン－２－オール；Ｎ－メチル－２－（３－メチルピリジン－４－イル）－Ｎ－（プロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（４－メタンスルホニル－２－メチルブタン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－［３－（トリフルオロメチル）ピリジン－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－［２－クロロ－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－［３－（１Ｈ－１，２，３，４－テトラゾール－５－イル）プロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－メチル－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－メチル－Ｎ－［（２Ｒ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛４－［（１－メチルシクロプロピル）アミノ］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル｝ピリジン－２－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２，４－ジメチル－４－｛［２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール；４－｛４－［（１－メチルシクロプロピル）アミノ］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル｝ピリジン－３－カルボニトリル；２－｛２－メチル－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１Ｈ－インダゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３，５－ジメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛４－［（４－ヒドロキシ－２，４－ジメチルペンタン－２－イル）アミノ］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル｝ピリジン－３－カルボニトリル；２－（３，５－ジフルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（２，３－ジフルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１，３－チアゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－［２－（トリフルオロメチル）ピリジン－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛４－［（１－メチルシクロプロピル）アミノ］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル｝ピリジン－２－カルボニトリル；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１，２－オキサゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（ジメチル－１，２－オキサゾール－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－｛１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－４－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－｛１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－｛１Ｈ－ピロロ［３，２－ｂ］ピリジン－１－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチルピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロブチル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリミジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛［２－（３，５－ジメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝－２，４－ジメチルペンタン－２－オール；Ｎ－プロピル－２－｛７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチルピリジン－４－イル）－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－｛１－メチル－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２，４－ジメチル－４－｛［２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール；Ｎ－［（１Ｒ）－１－フェニルエチル］－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－［（１Ｒ）－１－フェニルエチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－
５－
イル）－Ｎ－［（１Ｒ）－１－フェニルエチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－エチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリダジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１，３－オキサゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１Ｈ－イミダゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－｛１Ｈ－ピロロ［３，２－ｂ］ピリジン－１－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチル－１，２－オキサゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（２Ｈ－１，２，３，４－テトラゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－［１－（ピリジン－４－イル）エチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（１－｛［２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブチル）メタノール；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロブチル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（１－｛［２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブチル）メタノール；２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－［１－（ピリジン－４－イル）エチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（１－｛［２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブチル）メタノール；（１－｛［２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロプロピル）メタノール；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－［１－（ピリジン－４－イル）エチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－エチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（２－メチルプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－アミノ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；８－クロロ－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；８－メチル－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－５－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；５－クロロ－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（２－｛［４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－５－イル］アミノ｝エトキシ）エタン－１－オール；Ｎ－（４－メトキシ－２－メチルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－［２－メチル－１－（プロパン－２－イルオキシ）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－［（２Ｓ）－ブタン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－［（２Ｒ）－ブタン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－（１－メトキシ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２，２－ジメチル－１－［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］ピペリジン－４－オール；２，４－ジメチル－４－｛［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール；Ｎ－シクロペンチル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；ジメチル（３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝ブチル）アミン；Ｎ，Ｎ－ジエチル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－メチル－１－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）プロパン－２－オール；Ｎ－プロピル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－（２－アミノピリミジン－４－イル）－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－｛１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－４－イル｝－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリダジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－（２－アミノピリジン－４－イル）－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ，Ｎ－ジエチル－２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；（３－｛［２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝－３－メチルブチル）ジメチルアミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－４－（ピペリジン－１－イル）－１，７－ナフチリジン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－４－（モルホリン－４－イル）－１，７－ナフチリジン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（２－メチルブタン－２－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－｛［２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝－２－メチルプロパン－１－オール；１－［２－（３－クロロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］－２，２－ジメチルピペリジン－４－オール；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－［２－メチル－１－（モルホリン－４－イル）プロパン－２－イル］－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－クロロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－（（１Ｒ，２Ｓ）－２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（Ｓ）－Ｎ－（ｓｅｃ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（（１Ｓ，２Ｒ）－２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（Ｒ）－Ｎ－（ｓｅｃ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（（１Ｓ，２Ｓ）－２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（（１Ｒ，２Ｒ）－２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン；４－（ピペラジン－１－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン；４－（２－メチルピペリジン－１－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロブチル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－メチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）プロパン－１，２－ジアミン；Ｎ－（オキセタン－３－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；４－（３，３－ジメチルピペラジン－１－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン；２，２－ジメチル－４－（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）モルホリン；Ｎ－（１－メチルシクロブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２，２－ジメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；Ｎ ２ ，Ｎ ２ ，２－トリメチル－Ｎ １ －（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）プロパン－１，２－ジアミン；４－（２－メチルピペラジン－１－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン；２－メチル－Ｎ １ －（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；（Ｒ）－２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）－１，７－ナフチリジン；Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロブチル）－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ １ ，Ｎ １ ，３－トリメチル－Ｎ ３ －（２－（ピリミジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；Ｎ １ ，Ｎ １ ，３－トリメチル－Ｎ ３ －（２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミ
ジン
－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；ｔｅｒｔ－ブチル（２－メチル－１－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパン－２－イル）カルバメート；ｔｅｒｔ－ブチル（２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）カルバメート；２－メチル－Ｎ １ －（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，２－ジアミン；Ｎ １ －（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）エタン－１，２－ジアミン；Ｎ，Ｎ，２－トリメチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパンアミド；Ｎ １ ，３－ジメチル－Ｎ １ －（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；ｔｅｒｔ－ブチル（２，２－ジメチル－３－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロピル）カルバメート；２，２－ジメチル－Ｎ １ －（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；３－メチル－３－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）ブタンアミド；（Ｒ）－２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン；２，３－ジメチル－Ｎ ２ －（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－２，３－ジアミン；（Ｓ）－２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン；エチル２－メチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパノエート；Ｎ １ ，Ｎ １ ，２，２－テトラメチル－Ｎ ３ －（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；４－（４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル）－１，２，５－オキサジアゾール－３－アミン；Ｎ ２ ，Ｎ ２ ，２－トリメチル－Ｎ １ －（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，２－ジアミン；２－メチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパンアミド；（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロ－２－メチル－３－（（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）アミノ）プロパン－２－オール；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ，Ｎ－ジエチル－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－（３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；ｔｅｒｔ－ブチル（３－メチル－３－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）ブチル）カルバメート；Ｎ １ ，Ｎ １ ，Ｎ ３ ，２，２－ペンタメチル－Ｎ ３ －（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；Ｎ １ ，Ｎ １ －ジエチル－３－メチル－Ｎ ３ －（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；Ｎ ３ －（２－（２－フルオロピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ １ ，Ｎ １ ，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン；Ｎ ３ －（２－（３，５－ジメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ １ ，Ｎ １ ，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン；Ｎ １ ，Ｎ １ ，３－トリメチル－Ｎ ３ －（２－（３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；Ｎ ３ －（２－（２－アミノピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ １ ，Ｎ １ ，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン；及び３－メチル－Ｎ １ －（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミンから選択される、［１］に記載の式Ａ２の化合物、又はその塩。
[１１]
活性成分としての［１］～［１０］のいずれかに記載の化合物と少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物。
[１２]
式Ａ１の化合物又はその塩を使用した角膜内皮細胞を含む細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法。
Figure 0007247102000521
 ［式中
Ｘ １ 及びＸ ２ は、各々独立してＣＨ又はＮであり；
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、前記ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、前記５員ヘテロアリールの前記連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は前記６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000522
 ［式中、「 ＊ 」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ １～６ アルキル、Ｃ １～６ ハロアルキル、－ＮＨ ２ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、ジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノ、Ｃ ３～６ シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されており；
Ｒ ０ はヒドロキシル又はＣ １～６ アルコキシであり；
Ｒ １ は水素又はＣ １～６ アルキルであり；
Ｒ ２ は、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）ハロゲン；
（ｉｉ）シアノ；
（ｉｉｉ）オキソ；
（ｉｖ）Ｃ ２ アルケニル；
（ｖ）Ｃ ２ アルキニル；
（ｖｉ）Ｃ １～６ ハロアルキル；
（ｖｉｉ）－ＯＲ ６ ［式中、Ｒ ６ は、水素、非置換であるか又はＲ ０ 若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから選択される］；
（ｖｉｉｉ）－ＮＲ ７ａ Ｒ ７ｂ ［式中、Ｒ ７ａ は水素又はＣ １～６ アルキルであり、及びＲ ７ｂ は、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ 、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから選択される］；
（ｉｘ）－Ｃ（Ｏ）Ｒ ８ ［式中、Ｒ ８ はＲ ０ 又は－ＮＨ－Ｃ １～６ アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ である］；
（ｘ）－Ｓ（Ｏ） ２ Ｃ １～６ アルキル；
（ｘｉ）各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ １～６ アルキル、ヒドロキシＣ １～６ アルキル、Ｃ １～６ ハロアルキル、Ｒ ０ 、－ＮＨ ２ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ ３～６ シクロアルキル又は多環式Ｃ ７～１０ シクロアルキル；
（ｘｉｉ）Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ １～６ アルキル、Ｃ １～６ アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
（ｘｉｉｉ）非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
（ｘｉｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
（ｘｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ １～８ アルキル；
（ｂ）－Ｓ（Ｏ） ２ Ｃ １～６ アルキル；
（ｃ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ １～６ アルキル及びＲ ０ から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｄ）非置換であるか、又はＣ １～６ ハロアルキル、Ｒ ０ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、ジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ 、及び非置換であるか又はＲ ０ 若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ ３～６ シクロアルキル；及び
（ｅ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ １～６ ハロアルキル、Ｒ ０ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、ジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ 、及び非置換であるか又はＲ ０ 若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；
又はＲ １ 及びＲ ２ は、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成することができ、ここでＲ １ 及びＲ ２ によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される前記４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ １～６ アルキル、Ｃ １～６ ハロアルキル、及びＲ ０ から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されており；
Ｒ ３ は、水素、ハロゲン及びＣ １～６ アルキルから選択され；及び
Ｒ ５ は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで前記－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ ３～８ アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ ０ によって置換されている。］
[１３]
前記化合物が、式Ｉ～ＩＶから選択される式である、［１２］に記載のＬＡＴＳ阻害方法。
Figure 0007247102000523
 [１４]
前記化合物、又はその塩が、３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン－５－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン；Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；及びＮ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミンから選択される、［１２］又は［１３］に記載の細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法。
[１５]
前記化合物、又はその塩が、［１］～［１０］のいずれかに記載のものである、［１２］に記載のＬＡＴＳ阻害方法。
[１６]
角膜内皮細胞を含む細胞集団をＬＡＴＳ阻害剤の存在下で培養することを含む細胞の培養方法。
[１７]
前記ＬＡＴＳ阻害剤が、［１２］～［１４］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩である、［１６］に記載の細胞の培養方法。
[１８]
［１２］～［１４］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩の存在下で角膜内皮細胞を含む細胞集団を培養することを含む細胞の培養方法。
[１９]
ａ）ＬＡＴＳ阻害剤の存在下で角膜内皮細胞を含む播種細胞集団を培養することにより角膜内皮細胞を含む拡大細胞集団を作成するステップを含む、細胞集団拡大方法。
[２０]
前記ＬＡＴＳ阻害剤が、［１２］～［１４］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩である、［１９］に記載の細胞集団拡大方法。
[２１]
ａ）［１２］～［１４］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩の存在下で角膜内皮細胞を含む播種細胞集団を培養することにより角膜内皮細胞を含む拡大細胞集団を作成するステップを含む、細胞集団拡大方法。
[２２]
前記化合物が０．５～１００マイクロモル、好ましくは０．５～２５マイクロモル、より好ましくは１～２０マイクロモルの濃度、特に好ましくは約３～１０マイクロモルの濃度で存在する、［１２］～［２１］のいずれかに記載の方法。
[２３]
ステップａ）において前記化合物が１～２週間存在し、続いてステップｂ）が実施され、ここでは前記細胞が前記化合物を補足しない成長培地中においてある期間培養され、好ましくは前記期間は１～２週間である、［１２］～［２２］のいずれかに記載の方法。
[２４]
１０倍超の前記播種細胞量の拡大を生じさせる、［１９］～［２３］のいずれかに記載の方法。
[２５]
１５倍～６００倍、好ましくは２０倍～５５０倍の前記播種細胞量の拡大を生じさせる、［１９］～［２４］のいずれかに記載の方法。
[２６]
前記ＬＡＴＳ阻害剤がＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２を阻害する、［１２］～［２５］のいずれかに記載の方法。
[２７]
前記角膜内皮細胞を遺伝子修飾することを更に含む、［１２］～［２６］のいずれかに記載の方法。
[２８]
前記遺伝子修飾が、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子の発現及び／又は機能を低下又は消失させることを含む、［２７］に記載の方法。
[２９]
前記遺伝子修飾が、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子を特異的に標的とする遺伝子編集システムを前記細胞に導入することを含む、［２７］又は［２８］に記載の方法。
[３０]
前記遺伝子編集システムが、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集システム、ＴＡＬＥＮ遺伝子編集システム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ遺伝子編集システム、メガヌクレアーゼ遺伝子編集システム、ＡＡＶベクタードライブ相同組換え及びレンチウイルスベクターベースのゲノム編集技術からなる群から選択される、［２９］に記載の方法。
[３１]
前記遺伝子が、Ｂ２Ｍ、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ及びＨＬＡ－Ｃからなる群から選択される、［２８］～［３０］のいずれかに記載の方法。
[３２]
拡大細胞集団の作成後にそれらの細胞をリンスして前記化合物を実質的に除去する更なるステップを含む、［１２］～［３１］のいずれかに記載の方法。
[３３]
［１２］～［３２］のいずれかに記載の方法によって入手可能な細胞集団。
[３４]
［１２］～［３２］のいずれかに記載の方法によって入手された細胞集団。
[３５]
前記細胞のうちの１つ以上が、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子の１つ以上の核酸残基の天然に存在しない挿入又は欠失を含み、挿入及び／又は欠失が前記遺伝子の発現又は機能の低下又は消失をもたらす、角膜内皮細胞を含む細胞集団又は［３３］又は［３４］に記載の細胞集団。
[３６]
前記遺伝子が、Ｂ２Ｍ、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ及びＨＬＡ－Ｃからなる群から選択される、［３５］に記載の細胞集団。
[３７]
前記遺伝子がＢ２Ｍである、［３５］又は［３６］に記載の細胞集団。
[３８]
ＬＡＴＳ阻害剤を含む角膜内皮細胞の成長促進剤。
[３９]
前記ＬＡＴＳ阻害剤が、［１２］～［１４］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩である、［３８］に記載の角膜内皮細胞の成長促進剤。
[４０]
［１２］～［１４］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩を含む角膜内皮細胞の成長促進剤。
[４１]
ＬＡＴＳ阻害剤と成長培地とを含む細胞増殖培地。
[４２]
前記ＬＡＴＳ阻害剤が、［１２］～［１４］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩である、［４１］に記載の細胞増殖培地。
[４３]
［１２］～［１４］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩と成長培地とを含む細胞増殖培地。
[４４]
前記成長培地が、ウシ胎仔血清を補足したダルベッコ変法イーグル培地、ヒト血清を含有するヒト内皮無血清培地、Ｘ－ＶＩＶＯ１５培地及び間葉系幹細胞馴化培地からなる群から選択され；好ましくはＸ－ＶＩＶＯ１５培地である、［４１］～［４３］のいずれかに記載の細胞増殖培地。
[４５]
角膜内皮細胞を更に含む、［４１］～［４４］のいずれかに記載の細胞増殖培地。
[４６]
ＬＡＴＳ阻害剤と角膜内皮細胞とを含む細胞製剤。
[４７]
前記ＬＡＴＳ阻害剤が、［１２］～［１４］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩である、［４６］に記載の細胞製剤。
[４８]
［１２］～［１４］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩と角膜内皮細胞とを含む細胞製剤。
[４９]
成長培地を更に含み、前記成長培地が、ウシ胎仔血清を補足したダルベッコ変法イーグル培地、ヒト血清を含有するヒト内皮無血清培地、Ｘ－ＶＩＶＯ１５培地及び間葉系幹細胞馴化培地からなる群から選択され；好ましくはＸ－ＶＩＶＯ１５培地である、［４６］～［４８］のいずれかに記載の細胞製剤。
[５０]
保存溶液又は凍結保存溶液を更に含む、［１１］に記載の医薬組成物又は［４６］～［４９］のいずれかに記載の細胞製剤。
[５１]
前記保存溶液又は凍結保存溶液が、オプチゾール（Ｏｐｔｉｓｏｌ）又はＰＢＳである溶液を含み、及び前記凍結保存溶液が、グリセロール、ジメチルスルホキシド、プロピレングリコール又はアセトアミドを更に含む、［５０］に記載の医薬組成物又は細胞製剤。
[５２]
眼送達に好適な組成物とＬＡＴＳ阻害剤とを含むキット。
[５３]
前記ＬＡＴＳ阻害剤が、［１２］～［１４］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩である、［５２］に記載のキット。
[５４]
眼送達に好適な組成物と［１２］～［１４］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩とを含むキット。
[５５]
前記眼送達に好適な組成物が局在薬剤又は局所点眼薬である、［５２］～［５４］のいずれかに記載のキット。
[５６]
角膜内皮細胞を更に含む、［５２］～［５５］のいずれかに記載のキット。
[５７]
［３３］～［３７］のいずれかに記載の細胞集団又は［４６］～［５１］のいずれかに記載の細胞製剤と、局在薬剤である眼送達に好適な組成物とを含む、細胞送達製剤。
[５８]
前記眼送達に好適な組成物が、生体マトリックスである局在薬剤である、［５２］～［５６］のいずれかに記載のキット又は［５７］に記載の細胞送達製剤。
[５９]
前記眼送達に好適な組成物が、フィブリン、コラーゲン、ゼラチン、セルロース、羊膜、フィブリン糊、ポリエチレン（グリコール）ジアクリレート（ＰＥＧＤＡ）、ＧｅｌＭＡ、局在薬剤であって、ヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリプロピレンオキシド、ポロキサマー、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリビニルピロリドン、ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）、アルギン酸塩、ゼラチン、コラーゲン、フィブリノゲン、セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルグアー、ジェランガム、グアーガム、キサンタンガム及びカルボキシメチルセルロースのうちの１つ以上を含むポリマー、架橋ポリマー、又はヒドロゲルを含む局在薬剤、並びにその誘導体、その共重合体、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される局在薬剤である、［５２］～［５６］又は［５８］のいずれかに記載のキット又は［５７］又は［５８］に記載の細胞送達製剤。
[６０]
前記眼送達に好適な組成物が、ＧｅｌＭａである局在薬剤である、［５２］～［５６］又は［５８］又は［５９］のいずれかに記載のキット又は［５７］～［５９］のいずれかに記載の細胞送達製剤。
[６１]
角膜内皮細胞が前記局在薬剤との組み合わせで存在し、前記角膜内皮細胞が単層状である、［５２］～［５６］又は［５８］～［６０］のいずれかに記載のキット又は［５７］～［６０］のいずれかに記載の細胞送達製剤。
[６２]
角膜内皮細胞が５００細胞／ｍｍ ２ （面積）より高い密度で前記局在薬剤との組み合わせで存在する、［５２］～［５６］又は［５８］～［６１］のいずれかに記載のキット又は［５７］～［６１］のいずれかに記載の細胞送達製剤。
[６３]
角膜内皮細胞が１０００～３５００細胞／ｍｍ ２ （面積）、好ましくは２０００～約３０００細胞／ｍｍ ２ （面積）の密度で前記局在薬剤との組み合わせで存在する、［５４］～［５６］又は［５８］～［６２］のいずれかに記載のキット又は［５７］～［６１］のいずれかに記載の細胞送達製剤。
[６４]
前記化合物が０．５～１００マイクロモル、好ましくは０．５～２５マイクロモル、より好ましくは１～２０マイクロモルの濃度、特に好ましくは約３～１０マイクロモルの濃度で存在する、［１１］又は［３８］～［６３］のいずれかに記載の医薬組成物、成長促進剤、細胞増殖培地、細胞製剤又はキット。
[６５]
前記化合物が痕跡量レベルしか存在しない、［３３］～［３７］のいずれかに記載の細胞集団又は［４６］～［５１］のいずれかに記載の細胞製剤、又は［５７］～［６３］のいずれかに記載の細胞送達製剤。
[６６]
前記ＬＡＴＳ阻害剤がＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２を阻害する、［３８］～［６５］のいずれかに記載の成長促進剤、細胞増殖培地、細胞製剤、又は細胞送達製剤又はキット。
[６７]
角膜内皮細胞が存在し、且つ浮遊状態にある、［４１］～［６０］のいずれかに記載の細胞増殖培地、細胞製剤、細胞送達製剤又はキット。
[６８]
対象の角膜への角膜内皮細胞集団の移植方法であって、［３３］～［３７］又は［６５］のいずれかに記載の細胞集団又は［５７］～［６３］又は［６５］のいずれかに記載の細胞送達製剤を投与することを含む方法。
[６９]
対象の角膜への角膜内皮細胞集団の移植方法であって、角膜内皮細胞集団を、［４１］～［４４］又は［６５］又は［６６］のいずれかに記載の細胞増殖培地による前記集団の培養によって拡大すること、前記拡大細胞集団をリンスして前記ＬＡＴＳ阻害剤を実質的に除去すること、及び前記細胞を前記対象の角膜に投与することを含む方法。
[７０]
前記単離された角膜内皮細胞が前記投与前に生体マトリックスと組み合わされる、［６９］に記載の方法。
[７１]
前記単離された角膜内皮細胞が前記投与前にＧｅｌＭＡである生体マトリックスと組み合わされる、［７０］に記載の方法。
[７２]
対象の眼への角膜内皮細胞集団の移植方法であって、ＬＡＴＳ阻害剤を含む細胞増殖培地中で角膜内皮細胞集団を培養すること、前記角膜内皮細胞を生体マトリックスと組み合わせて細胞／生体マトリックス混合物を形成すること、前記混合物を前記対象の眼に注入すること、及び光源を使用して前記細胞を角膜上に誘導及び固定することにより前記細胞を眼にバイオプリントすることを含む方法。
[７３]
前記単離された角膜内皮細胞が、ＧｅｌＭＡである且つ光誘起反応による前記ＧｅｌＭＡの重合によって眼表面にバイオプリントされる生体マトリックスと組み合わされる、［７０］又は［７１］に記載の方法。
[７４]
ＬＡＴＳ阻害剤を使用した眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[７５]
前記ＬＡＴＳ阻害剤が、［１２］～［１４］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩である、［７４］に記載の方法。
[７６]
［１２］～［１４］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩を使用した眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[７７]
［１２］～［１５］のいずれかに記載の細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法又は［１９］～［３２］のいずれかに記載の細胞集団拡大方法を含む、［７４］～［７６］のいずれかに記載の眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[７８]
［１２］～［１５］のいずれかに記載の細胞集団又は［５７］～［６３］又は［６５］～［６７］のいずれかに記載の細胞送達製剤の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[７９]
前記眼疾患又は眼障害が角膜内皮細胞密度の低下に関連する、［７４］～［７８］のいずれかに記載の眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[８０]
前記眼疾患又は眼障害が角膜内皮機能不全である、［７４］～［７９］のいずれかに記載の眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[８１]
前記眼疾患又は眼障害が、フックス角膜内皮ジストロフィー、水疱性角膜症（偽水晶体性水疱性角膜症及び無水晶体性水疱性角膜症を含む）、角膜移植不全、後部多形性角膜ジストロフィー、先天性遺伝性内皮ジストロフィー、Ｘ連鎖性角膜内皮ジストロフィー、無虹彩及び角膜内皮炎（ｃｏｒｎｅａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｔｉｓ）からなる群から選択される、［７４］～［８０］のいずれかに記載の眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[８２]
前記眼疾患又は眼障害が、フックス角膜内皮ジストロフィー、水疱性角膜症（偽水晶体性水疱性角膜症及び無水晶体性水疱性角膜症を含む）及び角膜移植不全からなる群から選択される、［７４］～［８１］のいずれかに記載の眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[８３]
［６８］～［７３］のいずれかに記載の方法のステップを含む、［７４］～［８２］のいずれかに記載の眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[８４]
［３３］～［３７］のいずれかに記載の細胞集団又は［５７］～［６３］又は［６５］又は［６６］のいずれかに記載の細胞送達製剤が、デキサメタゾン、シクロスポリン、トブラマイシン、及びセファゾリンからなる群から選択される１つ又は複数の薬剤と同時に又は逐次的に投与される、［７４］～［８３］のいずれかに記載の眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[８５]
療法における使用又は医薬品としての使用のための、［１２］～［１４］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１に係る化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩。
[８６]
眼疾患又は眼障害における使用のための、［１２］～［１４］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１に係る化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩。
[８７]
眼疾患又は眼障害における使用のためのＬＡＴＳ阻害剤であって、化合物であるＬＡＴＳ阻害剤。
[８８]
医薬品の製造のための、［１２］～［１４］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩の使用。
[８９]
眼疾患又は眼障害の治療用の医薬品の製造のための、［１２］～［１４］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩の使用。
[９０]
［１２］～［１５］のいずれかに記載の細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法又は［１９］～［３２］のいずれかに記載の細胞集団拡大方法を含む、［８５］又は［８６］に記載の使用のための化合物又は［８７］に記載の使用のためのＬＡＴＳ阻害剤、又は［８８］又は［８９］に記載の使用。
[９１]
［３３］～［３７］のいずれかに記載の細胞集団又は［５７］～［６３］又は［６５］～［６７］のいずれかに記載の細胞送達製剤の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む、［８５］又は［８６］又は［９０］のいずれかに記載の使用のための化合物又は［８７］又は［９０］に記載の使用のためのＬＡＴＳ阻害剤又は［８８］～［９０］のいずれかに記載の使用。
[９２]
前記眼疾患又は眼障害が角膜内皮細胞密度の低下に関連する、［８５］又は［８６］又は［９０］又は［９１］のいずれかに記載の使用のための化合物又は［８７］又は［９０］又は［９１］のいずれかに記載の使用のためのＬＡＴＳ阻害剤又は［８８］～［９１］のいずれかに記載の使用。
[９３]
前記眼疾患又は眼障害が角膜内皮機能不全である、［８５］又は［８６］又は［９０］～［９２］のいずれかに記載の使用のための化合物又は［８７］又は［９０］～［９２］のいずれかに記載の使用のためのＬＡＴＳ阻害剤、又は［８８］～［９２］のいずれかに記載の使用。
[９４]
前記眼疾患又は眼障害が、フックス角膜内皮ジストロフィー、水疱性角膜症（偽水晶体性水疱性角膜症及び無水晶体性水疱性角膜症を含む）、角膜移植不全、後部多形性角膜ジストロフィー、先天性遺伝性内皮ジストロフィー、Ｘ連鎖性角膜内皮ジストロフィー、無虹彩及び角膜内皮炎（ｃｏｒｎｅａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｔｉｓ）からなる群から選択される、［８５］又は［８６］又は［９０］～［９３］のいずれかに記載の使用のための化合物又は［８７］又は［９０］～［９３］のいずれかに記載の使用のためのＬＡＴＳ阻害剤、又は［８８］～［９３］のいずれかに記載の使用。
[９５]
前記眼疾患又は眼障害が、フックス角膜内皮ジストロフィー、水疱性角膜症（偽水晶体性水疱性角膜症及び無水晶体性水疱性角膜症を含む）及び角膜移植不全からなる群から選択される、［８５］又は［８６］又は［９０］～［９４］のいずれかに記載の使用のための化合物又は［８７］又は［９０］～［９４］のいずれかに記載の使用のためのＬＡＴＳ阻害剤、又は［８８］～［９４］のいずれかに記載の使用。
[９６]
前記方法が、［６８］～［７３］のいずれかに記載の方法のステップを含む、［８５］又は［８６］又は［９０］～［９５］のいずれかに記載の使用のための化合物又は［８７］又は［９０］～［９５］のいずれかに記載の使用のためのＬＡＴＳ阻害剤、又は［８８］～［９５］のいずれかに記載の使用。
[９７]
［３３］～［３７］のいずれかに記載の細胞集団又は［５７］～［６３］又は［６５］～［６７］のいずれかに記載の細胞送達製剤が、デキサメタゾン、シクロスポリン、トブラマイシン及びセファゾリンからなる群から選択される１つ又は複数の薬剤と同時に又は逐次的に投与される、［８５］又は［８６］又は［９０］～［９６］のいずれかに記載の使用のための化合物又は［８７］又は［９０］～［９６］のいずれかに記載の使用のためのＬＡＴＳ阻害剤、又は［８８］～［９６］のいずれかに記載の使用。
[９８]
［３３］～［３７］のいずれかに記載の細胞集団又は［５７］～［６３］又は［６５］～［６７］のいずれかに記載の細胞送達製剤の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む、対象の角膜への角膜内皮細胞集団の移植方法における使用のためのＹＡＰモジュレーター。
[９９]
［３３］～［３７］のいずれかに記載の細胞集団又は［５７］～［６３］又は［６５］～［６７］のいずれかに記載の細胞送達製剤の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む、角膜内皮機能不全の治療方法における使用のためのＹＡＰモジュレーター。
[１００]
ＬＡＴＳ阻害剤である、［９８］又は［９９］に記載のＹＡＰモジュレーター。
[１０１]
式Ａ１の化合物又はその塩を使用した輪部幹細胞を含む細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法。
Figure 0007247102000524
 ［式中
Ｘ １ 及びＸ ２ は、各々独立してＣＨ又はＮであり；
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、前記ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、前記５員ヘテロアリールの前記連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は前記６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000525
 ［式中、「 ＊ 」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ １～６ アルキル、Ｃ １～６ ハロアルキル、－ＮＨ ２ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、ジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノ、Ｃ ３～６ シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されており；
Ｒ ０ はヒドロキシル又はＣ １～６ アルコキシであり；
Ｒ １ は水素又はＣ １～６ アルキルであり；
Ｒ ２ は、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）ハロゲン；
（ｉｉ）シアノ；
（ｉｉｉ）オキソ；
（ｉｖ）Ｃ ２ アルケニル；
（ｖ）Ｃ ２ アルキニル；
（ｖｉ）Ｃ １～６ ハロアルキル；
（ｖｉｉ）－ＯＲ ６ ［式中、Ｒ ６ は、水素、非置換であるか又はＲ ０ 若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから選択される］；
（ｖｉｉｉ）－ＮＲ ７ａ Ｒ ７ｂ ［式中、Ｒ ７ａ は水素又はＣ １～６ アルキルであり、及びＲ ７ｂ は、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ 、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから選択される］；
（ｉｘ）－Ｃ（Ｏ）Ｒ ８ ［式中、Ｒ ８ はＲ ０ 又は－ＮＨ－Ｃ １～６ アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ である］；
（ｘ）－Ｓ（Ｏ） ２ Ｃ １～６ アルキル；
（ｘｉ）各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ １～６ アルキル、ヒドロキシＣ １～６ アルキル、Ｃ １～６ ハロアルキル、Ｒ ０ 、－ＮＨ ２ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ ３～６ シクロアルキル又は多環式Ｃ ７～１０ シクロアルキル；
（ｘｉｉ）Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ １～６ アルキル、Ｃ １～６ アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
（ｘｉｉｉ）非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
（ｘｉｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
（ｘｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ １～８ アルキル；
（ｂ）－Ｓ（Ｏ） ２ Ｃ １～６ アルキル；
（ｃ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ １～６ アルキル及びＲ ０ から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｄ）非置換であるか、又はＣ １～６ ハロアルキル、Ｒ ０ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、ジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ 、及び非置換であるか又はＲ ０ 若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ ３～６ シクロアルキル；及び
（ｅ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ １～６ ハロアルキル、Ｒ ０ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、ジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ 、及び非置換であるか又はＲ ０ 若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；
又はＲ １ 及びＲ ２ は、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成することができ、ここでＲ １ 及びＲ ２ によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される前記４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ １～６ アルキル、Ｃ １～６ ハロアルキル、及びＲ ０ から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されており；
Ｒ ３ は、水素、ハロゲン及びＣ １～６ アルキルから選択され；及び
Ｒ ５ は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで前記－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ ３～８ アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ ０ によって置換されている。］
[１０２]
前記化合物が、式Ｉ～ＩＶから選択される式である、［１０１］に記載のＬＡＴＳ阻害方法。
Figure 0007247102000526
 [１０３]
前記化合物、又はその塩が、３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン－５－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン；Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；及びＮ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミンから選択される、［１０１］又は［１０２］に記載のＬＡＴＳ阻害方法。
[１０４]
前記化合物、又はその塩が、［１］～［１０］のいずれかに記載のものである、［１０１］に記載のＬＡＴＳ阻害方法。
[１０５]
輪部幹細胞を含む細胞集団をＬＡＴＳ阻害剤の存在下で培養することを含む細胞の培養方法。
[１０６]
前記ＬＡＴＳ阻害剤が、［１０１］～［１０３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩である、［１０５］に記載の細胞の培養方法。
[１０７]
輪部幹細胞を含む細胞集団を［１０１］～［１０３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩の存在下で培養することを含む細胞の培養方法。
[１０８]
ａ）輪部幹細胞を含む播種細胞集団をＬＡＴＳ阻害剤の存在下で培養して輪部幹細胞を含む拡大細胞集団を作成するステップを含む、細胞集団拡大方法。
[１０９]
前記ＬＡＴＳ阻害剤が、［１０１］～［１０３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩である、［１０８］に記載の細胞集団拡大方法。
[１１０]
ａ）輪部幹細胞を含む播種細胞集団を［１０１］～［１０３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩の存在下で培養することにより輪部幹細胞を含む拡大細胞集団を作成するステップを含む、細胞集団拡大方法。
[１１１]
前記化合物が０．５～１００マイクロモル、好ましくは０．５～２５マイクロモル、より好ましくは１～２０マイクロモルの濃度、特に好ましくは約３～１０マイクロモルの濃度で存在する、［１０１］～［１１０］のいずれかに記載の方法。
[１１２]
前記化合物が１２～１６日間存在する、好ましくは前記化合物が１４日間存在する、［１０１］～［１１１］のいずれかに記載の方法。
[１１３]
３０倍超の前記播種細胞量の拡大を生じさせる、［１０９］～［１１２］のいずれかに記載の方法。
[１１４]
１００倍～２２００倍、好ましくは６００倍～２２００倍の前記播種細胞量の拡大を生じさせる、［１０９］～［１１３］のいずれかに記載の方法。
[１１５]
輪部幹細胞を２０％超含む細胞集団を生じさせる、好ましくは輪部幹細胞を５０％超含む細胞集団を生じさせる、［１０９］～［１１４］のいずれかに記載の方法。
[１１６]
２０％超がｐ６３αを発現する細胞集団を生じさせる、好ましくは５０％超がｐ６３αを発現する細胞集団を生じさせる、［１０９］～［１１４］のいずれかに記載の方法。
[１１７]
前記ＬＡＴＳ阻害剤がＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２を阻害する、［１０１］～［１１６］のいずれかに記載の方法。
[１１８]
前記輪部幹細胞を遺伝子修飾することを更に含む、［１０１］～［１１７］のいずれかに記載の方法。
[１１９]
前記遺伝子修飾が、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子の発現及び／又は機能を低下又は消失させることを含む、［１１８］に記載の方法。
[１２０]
前記遺伝子修飾が、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子を特異的に標的とする遺伝子編集システムを前記細胞に導入することを含む、［１１８］又は［１１９］に記載の方法。
[１２１]
前記遺伝子編集システムが、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集システム、ＴＡＬＥＮ遺伝子編集システム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ遺伝子編集システム、メガヌクレアーゼ遺伝子編集システム、ＡＡＶベクタードライブ相同組換え及びレンチウイルスベクターベースのゲノム編集技術からなる群から選択される、［１２０］に記載の方法。
[１２２]
前記遺伝子が、Ｂ２Ｍ、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ及びＨＬＡ－Ｃからなる群から選択され、好ましくはＢ２Ｍである、［１１９］～［１２１］のいずれかに記載の方法。
[１２３]
ステップｂ）前記拡大細胞集団をリンスして本発明に係る化合物を実質的に除去することを更に含む、［１０８］～［１２２］のいずれかに記載の方法。
[１２４]
［１０１］～［１２３］のいずれかに記載の方法によって入手可能な細胞集団。
[１２５]
［１０１］～［１２３］のいずれかに記載の方法によって入手された細胞集団。
[１２６]
２０％超の細胞が輪部幹細胞であり、好ましくは５０％超が輪部幹細胞である、単離細胞集団。
[１２７]
７０％超の細胞が輪部幹細胞であり、好ましくは９０％超が輪部幹細胞である、単離細胞集団。
[１２８]
２０％超の細胞がｐ６３α陽性であり、好ましくは５０％超がｐ６３α陽性である、単離細胞集団。
[１２９]
７０％超の細胞がｐ６３α陽性であり、好ましくは９０％超がｐ６３α陽性である、単離細胞集団。
[１３０]
輪部幹細胞を含む細胞集団又は［１２４］～［１２９］のいずれかに記載の細胞集団であって、前記細胞のうちの１つ以上が、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子の１つ以上の核酸残基の天然に存在しない挿入又は欠失を含み、挿入及び／又は欠失は前記遺伝子の発現又は機能の低下又は消失をもたらす、細胞集団。
[１３１]
前記遺伝子が、Ｂ２Ｍ、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ及びＨＬＡ－Ｃからなる群から選択される、［１３０］に記載の細胞集団。
[１３２]
前記遺伝子がＢ２Ｍである、［１３０］又は［１３１］に記載の細胞集団。
[１３３]
ＬＡＴＳ阻害剤を含む輪部幹細胞の成長促進剤。
[１３４]
前記ＬＡＴＳ阻害剤が、［１０１］～［１０３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩である、［１３３］に記載の輪部幹細胞の成長促進剤。
[１３５]
［１０１］～［１０３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩を含む輪部幹細胞の成長促進剤。
[１３６]
ＬＡＴＳ阻害剤と成長培地とを含む細胞増殖培地。
[１３７]
前記ＬＡＴＳ阻害剤が、［１０１］～［１０３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩である、［１３６］に記載の細胞増殖培地。
[１３８]
［１０１］～［１０３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩と成長培地とを含む細胞増殖培地。
[１３９]
前記成長培地が、ウシ胎仔血清を補足したダルベッコ変法イーグル培地、ヒト血清を含有するヒト内皮無血清培地、Ｘ－ＶＩＶＯ１５培地及び任意選択で塩化カルシウムを補足したＤＭＥＭ／Ｆ１２からなる群から選択され；好ましくはＸ－ＶＩＶＯ１５培地である、［１３６］～［１３８］のいずれかに記載の細胞増殖培地。
[１４０]
輪部幹細胞を更に含む、［１３６］～［１３９］のいずれかに記載の細胞増殖培地。
[１４１]
ＬＡＴＳ阻害剤と輪部幹細胞とを含む細胞製剤。
[１４２]
前記ＬＡＴＳ阻害剤が、［１０１］～［１０３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩である、［１４１］に記載の細胞製剤。
[１４３]
［１０１］～［１０３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩と輪部幹細胞とを含む細胞製剤。
[１４４]
成長培地を更に含み、前記成長培地が、ウシ胎仔血清を補足したダルベッコ変法イーグル培地、ヒト血清を含有するヒト内皮無血清培地、Ｘ－ＶＩＶＯ１５培地及び任意選択で塩化カルシウムを補足したＤＭＥＭ／Ｆ１２からなる群から選択され；好ましくはＸ－ＶＩＶＯ１５培地である、［１４１］～［１４３］のいずれかに記載の細胞製剤。
[１４５]
保存溶液又は凍結保存溶液を更に含む、［１１］に記載の医薬組成物又は［１４１］～［１４４］のいずれかに記載の細胞製剤。
[１４６]
前記保存溶液又は凍結保存溶液が、オプチゾール（Ｏｐｔｉｓｏｌ）又はＰＢＳである溶液を含み、及び前記凍結保存溶液が、グリセロール、ジメチルスルホキシド、プロピレングリコール又はアセトアミドを更に含む、［１４５］に記載の医薬組成物又は細胞製剤。
[１４７]
眼送達に好適な組成物とＬＡＴＳ阻害剤とを含むキット。
[１４８]
前記ＬＡＴＳ阻害剤が、［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩である、［１４７］に記載のキット。
[１４９]
眼送達に好適な組成物と［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩とを含むキット。
[１５０]
前記眼送達に好適な組成物が局在薬剤又は局所点眼薬である、［１４７］～［１４９］のいずれかに記載のキット。
[１５１]
輪部幹細胞を更に含む、［１４７］～［１５０］のいずれかに記載のキット。
[１５２]
［１２４］～［１３１］のいずれかに記載の細胞集団又は［１４１］～［１４６］のいずれかに記載の細胞製剤と、局在薬剤である眼送達に好適な組成物とを含む、細胞送達製剤。
[１５３]
前記眼送達に好適な組成物が、生体マトリックスである局在薬剤である、［１４７］～［１５１］のいずれかに記載のキット又は［１５２］に記載の細胞送達製剤。
[１５４]
前記眼送達に好適な組成物が、フィブリン、コラーゲン、ゼラチン、セルロース、羊膜、フィブリン糊、ポリエチレン（グリコール）ジアクリレート（ＰＥＧＤＡ）、ＧｅｌＭＡ、局在薬剤であって、ヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリプロピレンオキシド、ポロキサマー、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリビニルピロリドン、ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）、アルギン酸塩、ゼラチン、コラーゲン、フィブリノゲン、セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルグアー、ジェランガム、グアーガム、キサンタンガム及びカルボキシメチルセルロースのうちの１つ以上を含むポリマー、架橋ポリマー、又はヒドロゲルを含む局在薬剤、並びにその誘導体、その共重合体、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される局在薬剤である、［１４７］～［１５１］又は［１５３］のいずれかに記載のキット又は［１５２］又は［１５３］に記載の細胞送達製剤。
[１５５]
前記眼送達に好適な組成物が、ＧｅｌＭａである局在薬剤である、［１４７］～［１５１］又は［１５３］又は［１５４］のいずれかに記載のキット又は［１５２］～［１５４］のいずれかに記載の細胞送達製剤。
[１５６]
２０％超の細胞が輪部幹細胞である、［１４７］～［１５５］のいずれかに記載のキット又は［１５２］～［１５５］のいずれかに記載の細胞送達製剤。
[１５７]
２０％超の細胞がｐ６３α陽性である、［１４７］～［１５５］のいずれかに記載のキット又は［１５２］～［１５５］のいずれかに記載の細胞送達製剤。
[１５８]
７０％超の細胞がｐ６３α陽性である、［１４７］～［１５７］のいずれかに記載のキット又は［１５２］～［１５７］のいずれかに記載の細胞送達製剤。
[１５９]
前記化合物が０．５～１００マイクロモル、好ましくは０．５～２５マイクロモル、より好ましくは［１～２０マイクロモルの濃度、特に好ましくは約３～１０マイクロモルの濃度で存在する、［１１］又は［１３３］～［１５８］のいずれかに記載の医薬組成物、成長促進剤、細胞増殖培地、細胞製剤又はキット。
[１６０]
前記化合物が痕跡量レベルしか存在しない、［１２４］～［１３１］のいずれかに記載の細胞集団又は［１４１］～［１４６］のいずれかに記載の細胞製剤、又は［１５２］～［１５８］のいずれかに記載の細胞送達製剤。
[１６１]
前記ＬＡＴＳ阻害剤がＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２を阻害する、［１３３］～［１６０］のいずれかに記載の成長促進剤、細胞増殖培地、細胞製剤、又は細胞送達製剤又はキット。
[１６２]
輪部幹細胞が存在し、且つ浮遊状態にある、［１３６］～［１６１］のいずれかに記載の細胞増殖培地、細胞製剤、細胞送達製剤又はキット。
[１６３]
対象の角膜への輪部幹細胞を含む細胞集団の移植方法であって、［１２４］～［１３１］又は［１６０］のいずれかに記載の細胞集団又は［１５２］～［１５８］又は［１６０］に記載の細胞送達製剤を投与することを含む方法。
[１６４]
対象の角膜への輪部幹細胞を含む細胞集団の移植方法であって、輪部幹細胞を含む細胞集団を、［１３６］～［１３９］又は［１５９］又は［１６１］のいずれかに記載の細胞増殖培地による前記集団の培養によって拡大すること、好ましくは拡大細胞集団をリンスしてＬＡＴＳ阻害剤を実質的に除去すること、及び前記輪部幹細胞を含む細胞集団を前記対象の角膜に投与することを含む方法。
[１６５]
前記輪部幹細胞を含む細胞集団が前記投与前に局在薬剤と組み合わされる、［１６４］に記載の方法。
[１６６]
前記輪部幹細胞を含む細胞集団が前記投与前にフィブリン糊である局在薬剤又はＧｅｌＭＡである生体マトリックスである局在薬剤と組み合わされる、［１６５］に記載の方法。
[１６７]
前記輪部幹細胞を含む細胞集団が、コンタクトレンズである担体と組み合わされる、［１６４］～［１６６］のいずれかに記載の方法。
[１６８]
前記輪部幹細胞を含む細胞集団が、ＧｅｌＭＡである生体マトリックスと組み合わされ、前記ＧｅｌＭＡが、コンタクトレンズである担体上に重合される、［１６４］～［１６７］のいずれかに記載の方法。
[１６９]
ＬＡＴＳ阻害剤を使用した眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[１７０]
前記ＬＡＴＳ阻害剤が、［１０１］～［１０３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩である、［１６９］に記載の方法。
[１７１]
［１０１］～［１０３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩を使用した眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[１７２]
［１０１］～［１０４］のいずれかに記載の細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法又は［１０８］～［１２３］のいずれかに記載の細胞集団拡大方法を含む、［１６９］～［１７１］のいずれかに記載の眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[１７３]
［１２４］～［１３１］のいずれかに記載の細胞集団又は［１５２］～［１６２］のいずれかに記載の細胞送達製剤の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[１７４]
前記眼疾患又は眼障害が輪部幹細胞欠乏である、［１６９］～［１７３］のいずれかに記載の眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[１７５]
前記眼疾患又は眼障害が、化学的熱傷、熱的熱傷、放射線傷害、無虹彩、強角膜症、多発性内分泌腺腫症、スティーブンス・ジョンソン症候群、眼瘢痕性類天疱瘡、膠原血管病からなる群から選択される傷害又は障害が原因で生じる輪部幹細胞欠乏、コンタクトレンズ使用、ドライアイ疾患、酒さ、黄色ブドウ球菌辺縁性角膜炎（細菌性、真菌性及びウイルス性角膜炎を含む）、翼状片又は新生物によって生じる慢性非自己免疫性炎症性障害、複数回の眼手術、翼状片若しくは新生物の切除又は凍結療法後に生じる輪部幹細胞欠乏；及び保存剤（チメロサール、ベンザルコニウム）、局所麻酔薬、ピロカルピン、β遮断薬、マイトマイシン、５－フルオロウラシル、硝酸銀、及びスティーブンス・ジョンソン症候群を引き起こす経口薬物投与からなる群から選択される薬物投与からの薬物投与毒性の結果として生じる輪部幹細胞欠乏である、［１６９］～［１７４］のいずれかに記載の眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[１７６]
前記眼疾患又は眼障害が、化学的熱傷、無虹彩、スティーブンス・ジョンソン症候群及びコンタクトレンズ使用からなる群から選択される傷害又は障害に起因して起こる輪部幹細胞欠乏である、［１６９］～［１７５］のいずれかに記載の眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[１７７]
［１６３］～［１６８］のいずれかに記載の方法のステップを含む、［１６９］～［１７６］のいずれかに記載の眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[１７８]
［１２４］～［１３１］のいずれかに記載の細胞集団又は［１５２］～［１５８］又は［１６０］～［１６２］のいずれかに記載の細胞送達製剤が、デキサメタゾン、シクロスポリン、トブラマイシン、及びセファゾリンからなる群から選択される１つ又は複数の薬剤と同時に（ｓｉｍｕｌａｔａｎｅｕｓｌｙ）又は逐次的に投与される、［１６９］～［１７７］のいずれかに記載の眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[１７９]
療法における使用又は医薬品としての使用のための、［１０１］～［１０３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１に係る化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩。
[１８０]
眼疾患又は眼障害における使用のための、［１０１］～［１０３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１に係る化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩。
[１８１]
眼疾患又は眼障害における使用のためのＬＡＴＳ阻害剤であって、化合物であるＬＡＴＳ阻害剤。
[１８２]
医薬品の製造における、［１０１］～［１０３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１に係る化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩の使用。
[１８３]
眼疾患又は眼障害を治療するための医薬品の製造における、［１０１］～［１０３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１に係る化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩の使用。
[１８４]
［１０１］～［１０４］に記載の細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法又は［１０８］～［１２３］のいずれかに記載の細胞集団拡大方法を含む、［１７９］又は［１８０］に記載の使用のための化合物又は［１８１］に記載の使用のためのＬＡＴＳ阻害剤、又は［１８２］又は［１８３］に記載の使用。
[１８５]
［１２４］～［１３１］のいずれかに記載の細胞集団又は［１５２］～［１６２］のいずれかに記載の細胞送達製剤の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む、［１７９］～［１８０］又は［１８４］のいずれかに記載の使用のための化合物又は［１８１］又は［１８４］に記載の使用のためのＬＡＴＳ阻害剤又は［１８２］～［１８４］のいずれかに記載の使用。
[１８６]
前記眼疾患又は眼障害が輪部幹細胞欠乏である、［１８０］、［１８４］、［１８５］のいずれかに記載の使用のための化合物又は［１８１］、［１８４］、１８５］のいずれかに記載の使用のためのＬＡＴＳ阻害剤又は［１８３］～［１８５］のいずれかに記載の使用。
[１８７]
前記眼疾患又は眼障害が、化学的熱傷、熱的熱傷、放射線傷害、無虹彩、強角膜症、多発性内分泌腺腫症、スティーブンス・ジョンソン症候群、眼瘢痕性類天疱瘡、膠原血管病からなる群から選択される傷害又は障害が原因で生じる輪部幹細胞欠乏；コンタクトレンズ使用、ドライアイ疾患、酒さ、黄色ブドウ球菌辺縁性角膜炎（細菌性、真菌性及びウイルス性角膜炎を含む）、翼状片又は新生物によって生じる慢性非自己免疫性炎症性障害、複数回の眼手術、翼状片若しくは新生物の切除又は凍結療法後に生じる輪部幹細胞欠乏；及び保存剤（チメロサール、ベンザルコニウム）、局所麻酔薬、ピロカルピン、β遮断薬、マイトマイシン、５－フルオロウラシル、硝酸銀、及びスティーブンス・ジョンソン症候群を引き起こす経口薬物投与からなる群から選択される薬物投与からの薬物投与毒性の結果として生じる輪部幹細胞欠乏である、［１８０］、［１８４］～［１８６］のいずれかに記載の使用のための化合物又は［１８１］、［１８４］～［１８６］のいずれかに記載の使用のためのＬＡＴＳ阻害剤又は［１８３］、［１８４］～［１８６］のいずれかに記載の使用。
[１８８]
前記眼疾患又は眼障害が、化学的熱傷、無虹彩、スティーブンス・ジョンソン症候群及びコンタクトレンズ使用からなる群から選択される傷害又は障害に起因して起こる輪部幹細胞欠乏である、［１８０］、［１８４］～［１８７］のいずれかに記載の使用のための化合物又は［１８１］、［１８４］～［１８７］のいずれかに記載の使用のためのＬＡＴＳ阻害剤又は［１８３］、［１８４］～［１８７］のいずれかに記載の使用。
[１８９]
前記方法が、［１６３］～［１６８］のいずれかに記載の方法のステップを含む、［１８０］、［１８４］～［１８８］のいずれかに記載の使用のための化合物又は［１８１］、［１８４］～［１８８］のいずれかに記載の使用のためのＬＡＴＳ阻害剤又は［１８３］、［１８４］～［１８８］のいずれかに記載の使用。
[１９０]
［１２４］～［１３１］のいずれかに記載の細胞集団又は［１５２］～［１６２］のいずれかに記載の細胞送達製剤が、デキサメタゾン、シクロスポリン、トブラマイシン及びセファゾリンからなる群から選択される１つ又は複数の薬剤と同時に（ｓｉｍｕｌａｔａｎｅｕｓｌｙ）又は逐次的に投与される、［１８０］、［１８４］～［１８９］のいずれかに記載の使用のための化合物又は［１８１］、［１８４］～［１８９］のいずれかに記載の使用のためのＬＡＴＳ阻害剤又は［１８３］、［１８４］～［１８９］のいずれかに記載の使用。
[１９１]
［１２４］～［１３１］のいずれかに記載の細胞集団又は［１５２］～［１６２］のいずれかに記載の細胞送達製剤の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む、対象の角膜への輪部幹細胞を含む細胞集団の移植方法における使用のためのＹＡＰモジュレーター。
[１９２]
［１２４］～［１３１］のいずれかに記載の細胞集団又は［１５２］～［１６２］のいずれかに記載の細胞送達製剤の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む、輪部幹細胞欠乏の治療方法における使用のためのＹＡＰモジュレーター。
[１９３]
ＬＡＴＳ阻害剤である、［１９１］又は［１９２］に記載のＹＡＰモジュレーター。
[１９４]
式Ａ１の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む肝再生及び肝再成長の促進方法。
Figure 0007247102000527
 ［式中
Ｘ １ 及びＸ ２ は、各々独立してＣＨ又はＮであり；
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、前記ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、前記５員ヘテロアリールの前記連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は前記６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000528
 ［式中、「 ＊ 」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ １～６ アルキル、Ｃ １～６ ハロアルキル、－ＮＨ ２ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、ジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノ、Ｃ ３～６ シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されており；
Ｒ ０ はヒドロキシル又はＣ １～６ アルコキシであり；
Ｒ １ は水素又はＣ １～６ アルキルであり；
Ｒ ２ は、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）ハロゲン；
（ｉｉ）シアノ；
（ｉｉｉ）オキソ；
（ｉｖ）Ｃ ２ アルケニル；
（ｖ）Ｃ ２ アルキニル；
（ｖｉ）Ｃ １～６ ハロアルキル；
（ｖｉｉ）－ＯＲ ６ ［式中、Ｒ ６ は、水素、非置換であるか又はＲ ０ 若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから選択される］；
（ｖｉｉｉ）－ＮＲ ７ａ Ｒ ７ｂ ［式中、Ｒ ７ａ は水素又はＣ １～６ アルキルであり、及びＲ ７ｂ は、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ 、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから選択される］；
（ｉｘ）－Ｃ（Ｏ）Ｒ ８ ［式中、Ｒ ８ はＲ ０ 又は－ＮＨ－Ｃ １～６ アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ である］；
（ｘ）－Ｓ（Ｏ） ２ Ｃ １～６ アルキル；
（ｘｉ）各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ １～６ アルキル、ヒドロキシＣ １～６ アルキル、Ｃ １～６ ハロアルキル、Ｒ ０ 、－ＮＨ ２ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ ３～６ シクロアルキル又は多環式Ｃ ７～１０ シクロアルキル；
（ｘｉｉ）Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ １～６ アルキル、Ｃ １～６ アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
（ｘｉｉｉ）非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
（ｘｉｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
（ｘｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ １～８ アルキル；
（ｂ）－Ｓ（Ｏ） ２ Ｃ １～６ アルキル；
（ｃ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ １～６ アルキル及びＲ ０ から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｄ）非置換であるか、又はＣ １～６ ハロアルキル、Ｒ ０ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、ジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ 、及び非置換であるか又はＲ ０ 若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ ３～６ シクロアルキル；及び
（ｅ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ １～６ ハロアルキル、Ｒ ０ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、ジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ 、及び非置換であるか又はＲ ０ 若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；
又はＲ １ 及びＲ ２ は、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成することができ、ここでＲ １ 及びＲ ２ によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される前記４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ １～６ アルキル、Ｃ １～６ ハロアルキル、及びＲ ０ から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されており；
Ｒ ３ は、水素、ハロゲン及びＣ １～６ アルキルから選択され；及び
Ｒ ５ は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで前記－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ ３～８ アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ ０ によって置換されている。］
[１９５]
前記化合物が、式Ｉ～ＩＶから選択される式である、［１９４］に記載の方法。
Figure 0007247102000529
 [１９６]
前記化合物、又はその薬学的に許容可能な塩が、
２－メチル－１－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）プロパン－２－オール；
ジメチル（３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブチル）アミン；
Ｎ－（１－アミノ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
８－クロロ－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
８－メチル－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－５－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
５－クロロ－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；
Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；
２－（２－アミノピリミジン－４－イル）－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－１，７－ナフチリジン－４－アミン；
Ｎ １ ，Ｎ １ ，３－トリメチル－Ｎ ３ －（２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；
Ｎ １ ，Ｎ １ ，３－トリメチル－Ｎ ３ －（２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；
２，２－ジメチル－Ｎ １ －（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；
２，３－ジメチル－Ｎ ２ －（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－２，３－ジアミン；
Ｎ １ ，Ｎ １ ，２，２－テトラメチル－Ｎ ３ －（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；
４－（４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル）－１，２，５－オキサジアゾール－３－アミン；及び
Ｎ ２ ，Ｎ ２ ，２－トリメチル－Ｎ １ －（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，２－ジアミンから選択される、［１９４］に記載の方法。
[１９７]
前記化合物、又はその薬学的に許容可能な塩が、［１］～［１０］のいずれかに記載のものである、［１９４］に記載の方法。
[１９８]
肝再生及び肝再成長を促進することが、マージナルグラフトの移植後の不十分な肝再成長を治療すること；広範囲肝切除術後の残存肝腫瘤の再成長増進を支援すること；ウイルス性肝炎、薬物誘発性肝傷害、自己免疫性肝炎、虚血性及びうっ血性肝疾患からの急性肝不全後の患者の肝臓の再生；及び非アルコール性脂肪性肝炎、アルコール性脂肪性肝炎、慢性Ｂ型及びＣ型ウイルス性肝炎、ヘモクロマトーシス、α－１アンチトリプシン欠乏症、ウィルソン病及び薬物誘発性肝線維症からの慢性肝傷害及び基礎肝線維症を治療することを含む、［１９４］～［１９７］のいずれかに記載の方法。
[１９９]
ＬＡＴＳキナーゼ活性の阻害能を有する薬剤の治療有効量をそれを必要としている対象に投与すること；それによりＹＡＰ転位を誘導し、細胞増殖のため下流遺伝子発現をドライブすることを含む、肝再生及び肝再成長の促進方法。
[２００]
前記薬剤が、［１］～［１０］のいずれかに記載の化合物である、［１９９］に記載の方法。
[２０１]
［１］～［１０］のいずれかに記載の化合物を肝細胞に接触させることを含む、肝細胞集団のエキソビボ拡大方法。
[２０２]
前記が、前記肝細胞を遺伝子編集することを更に含む、［２０１］に記載の方法。
[２０３]
前記肝細胞が肝前駆細胞である、［２０１］又は［２０２］に記載の方法。
[２０４]
［２０１］又は［２０２］に記載の方法によって入手された肝細胞。
[２０５]
前記肝細胞が肝前駆細胞である、［２０４］に記載の肝細胞。
[２０６]
式Ａ１の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む創傷治癒の促進方法。
Figure 0007247102000530
 ［式中
Ｘ １ 及びＸ ２ は、各々独立してＣＨ又はＮであり；
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、前記ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、前記５員ヘテロアリールの前記連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は前記６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000531
 ［式中、「 ＊ 」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ １～６ アルキル、Ｃ １～６ ハロアルキル、－ＮＨ ２ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、ジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノ、Ｃ ３～６ シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されており；
Ｒ ０ はヒドロキシル又はＣ １～６ アルコキシであり；
Ｒ １ は水素又はＣ １～６ アルキルであり；
Ｒ ２ は、
（ａ）非置換であるか、又は
（ｉ）ハロゲン；
（ｉｉ）シアノ；
（ｉｉｉ）オキソ；
（ｉｖ）Ｃ ２ アルケニル；
（ｖ）Ｃ ２ アルキニル；
（ｖｉ）Ｃ １～６ ハロアルキル；
（ｖｉｉ）－ＯＲ ６ ［式中、Ｒ ６ は、水素、非置換であるか又はＲ ０ 若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから選択される］；
（ｖｉｉｉ）－ＮＲ ７ａ Ｒ ７ｂ ［式中、Ｒ ７ａ は水素又はＣ １～６ アルキルであり、及びＲ ７ｂ は、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ 、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから選択される］；
（ｉｘ）－Ｃ（Ｏ）Ｒ ８ ［式中、Ｒ ８ はＲ ０ 又は－ＮＨ－Ｃ １～６ アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ である］；
（ｘ）－Ｓ（Ｏ） ２ Ｃ １～６ アルキル；
（ｘｉ）各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ １～６ アルキル、ヒドロキシＣ １～６ アルキル、Ｃ １～６ ハロアルキル、Ｒ ０ 、－ＮＨ ２ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ ３～６ シクロアルキル又は多環式Ｃ ７～１０ シクロアルキル；
（ｘｉｉ）Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ １～６ アルキル、Ｃ １～６ アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
（ｘｉｉｉ）非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
（ｘｉｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
（ｘｖ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ １～８ アルキル；
（ｂ）－Ｓ（Ｏ） ２ Ｃ １～６ アルキル；
（ｃ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ １～６ アルキル及びＲ ０ から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｄ）非置換であるか、又はＣ １～６ ハロアルキル、Ｒ ０ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、ジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ 、及び非置換であるか又はＲ ０ 若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ ３～６ シクロアルキル；及び
（ｅ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ １～６ ハロアルキル、Ｒ ０ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、ジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ 、及び非置換であるか又はＲ ０ 若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；
又はＲ １ 及びＲ ２ は、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成することができ、ここでＲ １ 及びＲ ２ によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される前記４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ １～６ アルキル、Ｃ １～６ ハロアルキル、及びＲ ０ から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されており；
Ｒ ３ は、水素、ハロゲン及びＣ １～６ アルキルから選択され；及び
Ｒ ５ は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで前記－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ ３～８ アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ ０ によって置換されている。］
[２０７]
前記化合物が、式Ｉ～ＩＶから選択される式である、［２０６］に記載の方法。
Figure 0007247102000532
 [２０８]
前記化合物、又はその薬学的に許容可能な塩が、２－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）エタン－１－オール、３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン－５－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン；Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；及びＮ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミンから選択される、［２０６］に記載の方法。
[２０９]
前記化合物、又はその薬学的に許容可能な塩が、［１］～［１０］のいずれかに記載のものである、［２０６］に記載の方法。
[２１０]
熱傷、急性皮膚潰瘍及び慢性皮膚潰瘍の症状を治療又は改善することを含む創傷治癒の促進、［２０６］～［２０９］のいずれかに記載の方法。
[２１１]
前記慢性皮膚潰瘍が、糖尿病性潰瘍、褥瘡性潰瘍及び血管性潰瘍から選択される、［２１０］に記載の方法。
[２１２]
前記慢性皮膚潰瘍が、静脈性下腿潰瘍、糖尿病性足部潰瘍及び褥瘡から選択される、［２１０］に記載の方法。
[２１３]
ＬＡＴＳキナーゼ活性の阻害能を有する薬剤の治療有効量をそれを必要としている対象に投与すること；それによりＹＡＰ転位を誘導し、細胞増殖のため下流遺伝子発現をドライブすることを含む、創傷治癒の促進方法。
[２１４]
前記薬剤が、［１］～［１０］のいずれかに記載の化合物である、［２１３］に記載の方法。
[２１５]
遺伝子編集細胞を含む細胞集団であって、前記遺伝子編集細胞が、［１］～［１０］のいずれかに記載の化合物を含む培地で培養されたものである、細胞集団。
[２１６]
前記編集遺伝子が、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子であり、前記遺伝子編集が前記遺伝子の発現又は機能の低下又は消失をもたらす、［２１５］に記載の細胞集団。
[２１７]
前記遺伝子が、Ｂ２Ｍ、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ及びＨＬＡ－Ｃからなる群から選択される、［２１６］に記載の細胞集団。
[２１８]
前記遺伝子がＢ２Ｍである、［２１６］又は［２１７］に記載の細胞集団。
[２１９]
前記遺伝子編集細胞が輪部幹細胞又は角膜内皮細胞である、［２１５］～［２１８］のいずれかに記載の細胞集団。
[２２０]
細胞集団のエキソビボ拡大方法であって、前記細胞を［１］～［１０］のいずれかに記載の化合物に接触させることを含む方法。
[２２１]
前記が、前記細胞を遺伝子編集することを更に含む、［２２０］に記載の方法。
[２２２]
前記細胞が、眼細胞、上皮細胞、神経幹細胞、間葉系幹細胞、肺の基底幹細胞、胚性幹細胞、成体幹細胞、人工多能性幹細胞又は肝細胞である、［２２０］又は［２２１］に記載の方法。
[２２３]
前記細胞が、眼細胞、肝細胞又は上皮皮膚細胞である、［２２０］～［２２２］のいずれかに記載の方法。
[２２４]
前記細胞が眼細胞、好ましくは角膜内皮細胞（ｃｏｒｎｅｌｉａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ）又は輪部幹細胞である、［２２０］～［２２３］のいずれかに記載の方法。
[２２５]
［２２０］～［２２４］のいずれかに記載の方法によって入手された細胞。
[２２６]
前記細胞を［１］～［１０］のいずれかに記載の化合物に接触させることを含む、エキソビボ細胞療法のための方法。
[２２７]
前記細胞が遺伝子編集されている、［２２６］に記載のエキソビボ細胞療法のための方法。
[２２８]
前記細胞療法が、幹細胞移植、組織再生、細胞免疫療法及び遺伝子療法からなる群から選択される、［２２６］又は［２２７］に記載のエキソビボ細胞療法のための方法。
[２２９]
幹細胞移植が、造血幹細胞移植、自家幹細胞移植、又は臍帯血幹細胞移植及び輪部幹細胞移植からなる群から選択される、［２２６］～［２２８］のいずれかに記載のエキソビボ細胞療法のための方法。
[２３０]
幹細胞移植が輪部幹細胞移植である、［２２８］又は［２２９］に記載のエキソビボ細胞療法のための方法。
[２３１]
式Ａ１の化合物又はその塩を使用した細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法。
Figure 0007247102000533
 ［式中
Ｘ １ 及びＸ ２ は、各々独立してＣＨ又はＮであり；
環Ａは
（ａ）炭素環員を介して分子の残りの部分に連結している、且つＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリールであり、但し、前記ヘテロ原子環員のうちの少なくとも１つは、前記５員ヘテロアリールの前記連結炭素環員に対して３位若しくは４位又は前記６員ヘテロアリールのパラ環位に位置する非置換窒素（－Ｎ＝）であるものとし；又は
（ｂ）以下から選択される９員縮合二環式ヘテロアリール
Figure 0007247102000534
 ［式中、「 ＊ 」は、環Ａが分子の残りの部分に結合する点を表す］であり；
ここで環Ａは、非置換であるか、又はハロゲン、シアノ、Ｃ １～６ アルキル、Ｃ １～６ ハロアルキル、－ＮＨ ２ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、ジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノ、Ｃ ３～６ シクロアルキル、及びフェニルスルホニルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されており；
Ｒ ０ はヒドロキシル又はＣ １～６ アルコキシであり；
Ｒ １ は水素又はＣ １～６ アルキルであり；
Ｒ ２ は、
（ｆ）非置換であるか、又は
（ｘｖｉ）ハロゲン；
（ｘｖｉｉ）シアノ；
（ｘｖｉｉｉ）オキソ；
（ｘｉｘ）Ｃ ２ アルケニル；
（ｘｘ）Ｃ ２ アルキニル；
（ｘｘｉ）Ｃ １～６ ハロアルキル；
（ｘｘｉｉ）－ＯＲ ６ ［式中、Ｒ ６ は、水素、非置換であるか又はＲ ０ 若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから選択される］；
（ｘｘｉｉｉ）－ＮＲ ７ａ Ｒ ７ｂ ［式中、Ｒ ７ａ は水素又はＣ １～６ アルキルであり、及びＲ ７ｂ は、水素、－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ 、非置換であるか又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから選択される］；
（ｘｘｉｖ）－Ｃ（Ｏ）Ｒ ８ ［式中、Ｒ ８ はＲ ０ 又は－ＮＨ－Ｃ １～６ アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ である］；
（ｘｘｖ）－Ｓ（Ｏ） ２ Ｃ １～６ アルキル；
（ｘｘｖｉ）各々、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ １～６ アルキル、ヒドロキシＣ １～６ アルキル、Ｃ １～６ ハロアルキル、Ｒ ０ 、－ＮＨ ２ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている単環式Ｃ ３～６ シクロアルキル又は多環式Ｃ ７～１０ シクロアルキル；
（ｘｘｖｉｉ）Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、Ｃ １～６ アルキル、Ｃ １～６ アルキルアミノ、及びジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている６員ヘテロシクロアルキル；
（ｘｘｖｉｉｉ）非置換であるか、又はハロゲンによって置換されているフェニル；
（ｘｘｉｘ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～４個のヘテロ原子を環員として含む５員又は６員単環式ヘテロアリール；及び
（ｘｘｘ）Ｎ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む９員又は１０員縮合二環式ヘテロアリール
から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されているＣ １～８ アルキル；
（ｇ）－Ｓ（Ｏ） ２ Ｃ １～６ アルキル；
（ｈ）非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ １～６ アルキル及びＲ ０ から独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているフェニル；
（ｉ）非置換であるか、又はＣ １～６ ハロアルキル、Ｒ ０ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、ジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ 、及び非置換であるか又はＲ ０ 若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されているＣ ３～６ シクロアルキル；及び
（ｊ）Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１～２個のヘテロ原子を環員として含む、且つ非置換であるか、又はＣ １～６ ハロアルキル、Ｒ ０ 、Ｃ １～６ アルキルアミノ、ジ－（Ｃ １～６ アルキル）アミノ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ 、及び非置換であるか又はＲ ０ 若しくは－Ｃ（Ｏ）Ｒ ０ によって置換されているＣ １～６ アルキルから独立して選択される１～２個の置換基によって置換されている４員ヘテロシクロアルキル
から選択され；
又はＲ １ 及びＲ ２ は、両方が結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１～２個の追加的なヘテロ原子を環員として含んでもよい４～６員ヘテロシクロアルキルを形成することができ、ここでＲ １ 及びＲ ２ によって両方が結合している窒素原子と一緒になって形成される前記４～６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、又はハロゲン、Ｃ １～６ アルキル、Ｃ １～６ ハロアルキル、及びＲ ０ から独立して選択される１～３個の置換基によって置換されており；
Ｒ ３ は、水素、ハロゲン及びＣ １～６ アルキルから選択され；及び
Ｒ ５ は、水素、ハロゲン及び－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）から選択され、ここで前記－ＮＨ－（３～８員ヘテロアルキル）の３～８員ヘテロＣ ３～８ アルキルは、１～２個の酸素原子を鎖員として含み、且つ非置換であるか、又はＲ ０ によって置換されている。］
[２３２]
前記化合物が、式Ｉ～ＩＶから選択される式である、［２３１］に記載のＬＡＴＳ阻害方法。
Figure 0007247102000535
 [２３３]
前記化合物、又はその塩が、３－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル）－２，６－ナフチリジン－１－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－７－（ピリジン－４－イル）イソキノリン－５－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン；Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；及びＮ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミンから選択される、［２３１］又は［２３２］に記載の細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法。
[２３４]
前記化合物、又はその塩が、［１］～［１０］のいずれかに記載のものである、［２３１］に記載のＬＡＴＳ阻害方法。
[２３５]
ＬＡＴＳ阻害剤の存在下で眼細胞を含む細胞集団を培養することを含む、細胞の培養方法。
[２３６]
前記ＬＡＴＳ阻害剤が、［２３１］～［２３３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩である、［２３５］に記載の細胞の培養方法。
[２３７]
［２３１］～［２３３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩の存在下で眼細胞を含む細胞集団を培養することを含む、細胞の培養方法。
[２３８]
ａ）眼細胞を含む播種細胞集団をＬＡＴＳ阻害剤の存在下で培養することにより眼細胞を含む拡大細胞集団を作成するステップを含む、細胞集団拡大方法。
[２３９]
前記ＬＡＴＳ阻害剤が、［２３１］～［２３３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩である、［２３８］に記載の細胞集団拡大方法。
[２４０]
ａ）眼細胞を含む播種細胞集団を［２３１］～［２３３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩の存在下で培養することにより眼細胞を含む拡大細胞集団を作成するステップを含む、細胞集団拡大方法。
[２４１]
前記化合物が０．５～１００マイクロモル、好ましくは０．５～２５マイクロモル、より好ましくは１～２０マイクロモルの濃度、特に好ましくは約３～１０マイクロモルの濃度で存在する、［２３１］～［２４０］のいずれかに記載の方法。
[２４２]
前記ＬＡＴＳ阻害剤がＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２を阻害する、［２３１］～［２４１］のいずれかに記載の方法。
[２４３]
前記眼細胞を遺伝子修飾することを更に含む、［２３１］～［２４２］のいずれかに記載の方法。
[２４４]
前記遺伝子修飾が、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子の発現及び／又は機能を低下又は消失させることを含む、［２４３］に記載の方法。
[２４５]
前記遺伝子修飾が、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子を特異的に標的とする遺伝子編集システムを前記細胞に導入することを含む、［２４３］又は［２４４］に記載の方法。
[２４６]
前記遺伝子編集システムが、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集システム、ＴＡＬＥＮ遺伝子編集システム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ遺伝子編集システム、メガヌクレアーゼ遺伝子編集システム、ＡＡＶベクタードライブ相同組換え及びレンチウイルスベクターベースのゲノム編集技術からなる群から選択される、［２４５］に記載の方法。
[２４７]
前記遺伝子が、Ｂ２Ｍ、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ及びＨＬＡ－Ｃからなる群から選択される、［２４４］～［２４６］のいずれかに記載の方法。
[２４８]
拡大細胞集団の作成後にそれらの細胞をリンスして前記化合物を実質的に除去する更なるステップを含む、［２３１］～［２４７］のいずれかに記載の方法。
[２４９]
［２３１］～［２４８］のいずれかに記載の方法によって入手可能な細胞集団。
[２５０]
［２３１］～［２４８］のいずれかに記載の方法によって入手された細胞集団。
[２５１]
前記細胞のうちの１つ以上が、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子の１つ以上の核酸残基の天然に存在しない挿入又は欠失を含み、挿入及び／又は欠失は前記遺伝子の発現又は機能の低下又は消失をもたらす、眼細胞を含む細胞集団又は［２４９］又は［２５０］に記載の細胞集団。
[２５２]
前記遺伝子が、Ｂ２Ｍ、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ及びＨＬＡ－Ｃからなる群から選択される、［２５１］に記載の細胞集団。
[２５３]
前記遺伝子がＢ２Ｍである、［２５１］又は［２５２］に記載の細胞集団。
[２５４]
ＬＡＴＳ阻害剤を含む眼細胞の成長促進剤。
[２５５]
前記ＬＡＴＳ阻害剤が、［２３１］～［２３３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩である、［２５４］に記載の眼細胞の成長促進剤。
[２５６]
［２３１］～［２３３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩を含む眼細胞の成長促進剤。
[２５７]
ＬＡＴＳ阻害剤と成長培地とを含む細胞増殖培地。
[２５８]
前記ＬＡＴＳ阻害剤が、［２３１］～［２３３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩である、［２５７］に記載の細胞増殖培地。
[２５９]
［２３１］～［２３３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩と成長培地とを含む細胞増殖培地。
[２６０]
前記成長培地が、ウシ胎仔血清を補足したダルベッコ変法イーグル培地、ヒト血清を含有するヒト内皮無血清培地、Ｘ－ＶＩＶＯ１５培地及び間葉系幹細胞馴化培地からなる群から選択され；好ましくはＸ－ＶＩＶＯ１５培地である、［２５７］～［２５９］のいずれかに記載の細胞増殖培地。
[２６１]
眼細胞を更に含む、［２５７］～［２６０］のいずれかに記載の細胞増殖培地。
[２６２]
ＬＡＴＳ阻害剤と眼細胞とを含む細胞製剤。
[２６３]
前記ＬＡＴＳ阻害剤が、［２３１］～［２３３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩である、［２６２］に記載の細胞製剤。
[２６４]
［２３１］～［２３３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩と眼細胞とを含む細胞製剤。
[２６５]
成長培地を更に含み、前記成長培地が、ウシ胎仔血清を補足したダルベッコ変法イーグル培地、ヒト血清を含有するヒト内皮無血清培地、Ｘ－ＶＩＶＯ１５培地及び間葉系幹細胞馴化培地からなる群から選択され；好ましくはＸ－ＶＩＶＯ１５培地である、［２６２］～［２６４］のいずれかに記載の細胞製剤。
[２６６]
保存溶液又は凍結保存溶液を更に含む、［１１］に記載の医薬組成物又は［２６２］～［２６５］のいずれかに記載の細胞製剤。
[２６７]
前記保存溶液又は凍結保存溶液が、オプチゾール（Ｏｐｔｉｓｏｌ）又はＰＢＳである溶液を含み、及び前記凍結保存溶液が、グリセロール、ジメチルスルホキシド、プロピレングリコール又はアセトアミドを更に含む、［２６６］に記載の医薬組成物又は細胞製剤。
[２６８]
眼送達に好適な組成物とＬＡＴＳ阻害剤とを含むキット。
[２６９]
前記ＬＡＴＳ阻害剤が、［２３１］～［２３３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩である、［２６８］に記載のキット。
[２７０]
眼送達に好適な組成物と［２３１］～［２３３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩とを含むキット。
[２７１]
前記眼送達に好適な組成物が局在薬剤又は局所点眼薬である、［２６８］～［２７０］のいずれかに記載のキット。
[２７２]
眼細胞を更に含む、［２６８］～［２７１］のいずれかに記載のキット。
[２７３]
［２４９］～［２５３］のいずれかに記載の細胞集団又は［２６２］～［２６７］のいずれかに記載の細胞製剤と、局在薬剤である眼送達に好適な組成物とを含む、細胞送達製剤。
[２７４]
前記眼送達に好適な組成物が、生体マトリックスである局在薬剤である、［２６８］～［２７２］のいずれかに記載のキット又は［２７３］に記載の細胞送達製剤。
[２７５]
前記眼送達に好適な組成物が、フィブリン、コラーゲン、ゼラチン、セルロース、羊膜、フィブリン糊、ポリエチレン（グリコール）ジアクリレート（ＰＥＧＤＡ）、ＧｅｌＭＡ、局在薬剤であって、ヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリプロピレンオキシド、ポロキサマー、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリビニルピロリドン、ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）、アルギン酸塩、ゼラチン、コラーゲン、フィブリノゲン、セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルグアー、ジェランガム、グアーガム、キサンタンガム及びカルボキシメチルセルロースのうちの１つ以上を含むポリマー、架橋ポリマー、又はヒドロゲルを含む局在薬剤、並びにその誘導体、その共重合体、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される局在薬剤である、［２６８］～［２７２］又は［２７４］のいずれかに記載のキット又は［２７３］又は［２７４］に記載の細胞送達製剤。
[２７６]
前記眼送達に好適な組成物が、ＧｅｌＭａである局在薬剤である、［２６８］～［２７２］又は［２７４］又は［２７５］のいずれかに記載のキット又は［２７３］～［２７５］のいずれかに記載の細胞送達製剤。
[２７７]
前記化合物が０．５～１００マイクロモル、好ましくは０．５～２５マイクロモル、より好ましくは１～２０マイクロモルの濃度、特に好ましくは約３～１０マイクロモルの濃度で存在する、［１１］又は［２５４］～［２７６］のいずれかに記載の医薬組成物、成長促進剤、細胞増殖培地、細胞製剤又はキット。
[２７８]
前記化合物が痕跡量レベルしか存在しない、［２４９］～［２５３］のいずれかに記載の細胞集団又は［２６２］～［２６７］のいずれかに記載の細胞製剤、又は［２７３］～［２７６］のいずれかに記載の細胞送達製剤。
[２７９]
前記ＬＡＴＳ阻害剤がＬＡＴＳ１及びＬＡＴＳ２を阻害する、［２５４］～［２７８］のいずれかに記載の成長促進剤、細胞増殖培地、細胞製剤、又は細胞送達製剤又はキット。
[２８０]
眼細胞が存在し、且つ浮遊状態にある、［２５７］～［２７６］のいずれかに記載の細胞増殖培地、細胞製剤、細胞送達製剤又はキット。
[２８１]
対象の角膜への角膜内皮細胞集団の移植方法であって、［３３］～［３７］又は［６５］のいずれかに記載の細胞集団又は［５７］～［６３］又は［６５］のいずれかに記載の細胞送達製剤を投与することを含む方法。
[２８２]
対象への眼細胞集団の移植方法であって、眼細胞集団を、［２５７］～［２６０］又は［２７８］又は［２７９］のいずれかに記載の細胞増殖培地による前記集団の培養によって拡大すること、拡大細胞集団をリンスして前記ＬＡＴＳ阻害剤を実質的に除去すること、及び前記細胞を前記対象に投与することを含む方法。
[２８３]
前記単離眼細胞が前記投与前に生体マトリックスと組み合わされる、［２８２］に記載の方法。
[２８４]
前記単離眼細胞が前記投与前にＧｅｌＭＡである生体マトリックスと組み合わされる、［２８３］に記載の方法。
[２８５]
眼対象の眼への細胞集団の移植方法であって、ＬＡＴＳ阻害剤を含む細胞増殖培地で眼細胞集団を培養すること、眼細胞を生体マトリックスと組み合わせて細胞／生体マトリックス混合物を形成すること、前記混合物を前記対象の眼に注入すること、及び光源を使用して前記細胞を角膜上に誘導及び固定することにより前記細胞を眼にバイオプリントすることを含む方法。
[２８６]
前記単離眼細胞が、ＧｅｌＭＡである且つ光誘起反応による前記ＧｅｌＭＡの重合によって眼表面にバイオプリントされる生体マトリックスと組み合わされる、［２８３］又は［２８４］に記載の方法。
[２８７]
ＬＡＴＳ阻害剤を使用した眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[２８８]
前記ＬＡＴＳ阻害剤が、［２３１］～［２３３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩である、［２８７］に記載の方法。
[２８９]
［２３１］～［２３３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩を使用した眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[２９０]
［２３１］～［２３４］のいずれかに記載の細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法又は［２３８］～［２４８］のいずれかに記載の細胞集団拡大方法を含む、［２８７］～［２８９］のいずれかに記載の眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[２９１]
［２３１］～［２３４］のいずれかに記載の細胞集団又は［２７３］～［２７６］又は［２７８］～［２８０］のいずれかに記載の細胞送達製剤の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[２９２]
［２８１］～［２８６］のいずれかに記載の方法のステップを含む、［２８７］～［２９１］のいずれかに記載の眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[２９３]
［２４９］～［２５３］のいずれかに記載の細胞集団又は［２７３］～［２７６］又は［２７８］又は［２７９］のいずれかに記載の細胞送達製剤が、デキサメタゾン、シクロスポリン、トブラマイシン、及びセファゾリンからなる群から選択される１つ又は複数の薬剤と同時に又は逐次的に投与される、［２８７］～［２９１］のいずれかに記載の眼疾患又は眼障害の予防又は治療方法。
[２９４]
療法における使用又は医薬品としての使用のための、［２３１］～［２３３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１に係る化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩。
[２９５]
眼疾患又は眼障害における使用のための、［２３１］～［２３３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１に係る化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩。
[２９６]
眼疾患又は眼障害における使用のためのＬＡＴＳ阻害剤であって、化合物であるＬＡＴＳ阻害剤。
[２９７]
医薬品の製造のための、［２３１］～［２３３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩の使用。
[２９８]
眼疾患又は眼障害の治療用の医薬品の製造のための、［２３１］～［２３３］のいずれかに定義されるとおりの式Ａ１の化合物又は［１］～［１０］のいずれかに定義されるとおりの化合物又はその塩の使用。
[２９９]
［２３１］～［２３５］に記載の細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法又は［２３８］～［２４８］のいずれかに記載の細胞集団拡大方法を含む、［２９４］又は［２９５］に記載の使用のための化合物又は［２９６］に記載の使用のためのＬＡＴＳ阻害剤、又は［２９７］又は［２９８］に記載の使用。
[３００]
［２４９］～［２５３］のいずれかに記載の細胞集団又は［２７３］～［２７６］又は［２７８］～［２８０］のいずれかに記載の細胞送達製剤の治療有効量をそれを必要としている対象に投与することを含む、［２９４］又は［２９５］又は［２９９］のいずれかに記載の使用のための化合物又は［２９８］又は［２９９］に記載の使用のためのＬＡＴＳ阻害剤又は［２９７］～［２９９］のいずれかに記載の使用。
[３０１]
前記方法が、［２８１］～［２８６］のいずれかに記載の方法のステップを含む、［２９４］又は［２９５］又は［２９９］又は［３００］のいずれかに記載の使用のための化合物又は［２９６］又は［２９９］に記載の使用のためのＬＡＴＳ阻害剤、又は［２９７］～［３００］のいずれかに記載の使用。
[３０２]
［２４９］～［２５３］のいずれかに記載の細胞集団又は［２７３］～［２７６］又は［２７８］～［２８０］のいずれかに記載の細胞送達製剤が、デキサメタゾン、シクロスポリン、トブラマイシン及びセファゾリンからなる群から選択される１つ又は複数の薬剤と同時に又は逐次的に投与される、［２９４］又は［２９５］又は［２９９］又は［３００］のいずれかに記載の使用のための化合物又は［２９６］又は［２９９］～［３０１］のいずれかに記載の使用のためのＬＡＴＳ阻害剤、又は［２９５］～［３０１］のいずれかに記載の使用。
[３０３]
対象の眼への単離細胞集団の移植方法であって、細胞を生体マトリックスと組み合わせて細胞／生体マトリックス混合物を形成すること、前記混合物を前記対象の眼に注入すること、及び光源を用いて前記細胞を眼に誘導及び固定することにより前記細胞を眼にバイオプリントすることを含む方法。
[３０４]
前記単離細胞がＧｅｌＭＡである生体マトリックスと組み合わされ、光誘起反応による前記ＧｅｌＭＡの重合によって角膜上にバイオプリントされる、［３０３］に記載の方法。
[３０５]
前記光源が３５０ｎｍ～７００ｎｍ帯の波長を有する光を発生する、［３０３］又は［３０４］に記載の方法。
[３０６]
前記波長が３５０ｎｍ～４２０ｎｍである、［３０３］～［３０５］のいずれかに記載の方法。
[３０７]
前記波長が３６５ｎｍである、［３０３］～［３０６］のいずれかに記載の方法。
[３０８]
前記単離細胞が角膜内皮細胞である、［３０３］～［３０７］のいずれかに記載の方法。
[３０９]
対象の眼への単離細胞集団の移植方法であって、前記細胞を生体マトリックスと組み合わせて細胞／生体マトリックス混合物を形成すること、前記混合物を前記対象の眼に適用すること、及び光源を用いて前記細胞を眼上に誘導及び固定することにより前記細胞を眼上にバイオプリントすることを含む方法。
[３１０]
前記単離細胞が、ＧｅｌＭＡである且つ光誘起反応による前記ＧｅｌＭＡの重合によって眼表面にバイオプリントされる生体マトリックスと組み合わされる、［３０９］に記載の方法。
[３１１]
前記光源が、３５０ｎｍ～７００ｎｍ帯の波長を有する光を発生する、［３０９］又は［３１０］に記載の方法。
[３１２]
前記波長が３５０ｎｍ～４２０ｎｍである、［３０９］～［３１１］のいずれかに記載の方法。
[３１３]
前記波長が３６５ｎｍである、［３０９］～［３１２］のいずれかに記載の方法。
[３１４]
前記単離細胞が輪部幹細胞である、［３０９］～［３１３］のいずれかに記載の方法。

Claims (12)

  1. Ｎ－（２－シクロプロピルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ，Ｎ－ジエチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－エチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メトキシ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－メトキシ－２－メチルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ブチル－Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－エチル－Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）エタン－１－オール；２－メチル－１－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）プロパン－２－オール；Ｎ－エチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－シクロヘキシルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（３－メチルオキセタン－３－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－２－オール；Ｎ－ブチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチル－４－フェニルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－シクロプロピル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－メタンスルホニル－２－メチルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１，３－ジオール；３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－２－オール；２－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）酢酸；（１Ｒ，２Ｓ）－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロペンタン－１－オール；４，４，４－トリフルオロ－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール；Ｎ－（１－メタンスルホニル－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（２Ｓ）－３，３，３－トリフルオロ－２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン酸；２－［（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロピル）アミノ］酢酸；（２Ｒ）－３，３，３－トリフルオロ－２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン酸；メチル２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパノエート；（１Ｓ，２Ｓ）－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロペンタン－１－オール；２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン酸；２－（２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝エトキシ）エタン－１－オール；２－（ヒドロキシメチル）－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１，３－ジオール；３－メチル－３－（３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタンアミド）ブタン酸；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－３－フェニルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－｛［４－（ジメチルアミノ）オキサン－４－イル］メチル｝－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン酸；Ｎ－（２－メタンスルホニルエチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－［２－（アダマンタン－１－イル）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－Ｎ－［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］プロパンアミド；４，４，４－トリフルオロ－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン酸；Ｎ－［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］プロパン－２－スルホンアミド；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［３－（１Ｈ－１，２，３，４－テトラゾール－５－イル）プロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［（２Ｒ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２，４－ジメチル－４－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール；４，４，４－トリフルオロ－２，３－ジメチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－２－オール；（１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロペンチル）メタノール；Ｎ－（３－メトキシシクロブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（１Ｒ，２Ｒ）－１－Ｎ，２－Ｎ－ジメチル－１－Ｎ－［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］シクロヘキサン－１，２－ジアミン；メチル（１ｓ，３ｓ）－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－カルボキシレート；エチル１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－カルボキシレート；１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－カルボン酸；（１ｓ，３ｓ）－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－カルボン酸；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロブチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－シクロペンチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１－オール；３，３，３－トリフルオロ－２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン－１－オール；Ｎ－（ブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチルブタ－３－イン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（１ｒ，３ｓ）－３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブタン－１－オール；２，３－ジメチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－２－オール；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（ペンタン－３－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－［２－メチル－１－（モルホリン－４－イル）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－［１－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－メチルプロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４，４，４－トリフルオロ－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール；Ｎ－ペンチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール；Ｎ－［１－（１Ｈ－インドール－３－イル）－２－メチルプロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－［１－（４－フルオロフェニル）－２－メチルプロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－フェニルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－フルオロフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－［２－（４－フルオロフェニル）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３，３，３－トリフルオロ－２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパン酸；２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝エタン－１－オール；
    Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；１－（｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝メチル）シクロペンタン－１－オール；Ｎ，Ｎ－ジメチル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（２－メチルフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－メチルフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－メトキシフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－フェニル－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（３－メチルフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；６－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ヘキサン酸；Ｎ－（３－フルオロフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－フルオロフェニル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタン酸；Ｎ－（１－フェニルエチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；ｔｅｒｔ－ブチルＮ－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロピル）カルバメート；（１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブチル）メタノール；メチル２－（１－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロプロピル）アセテート；Ｎ－（２－メチルプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブタンニトリル；Ｎ－（６－アミノヘキシル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（４－アミノブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝プロパンニトリル；Ｎ－［２－メチル－１－（２－メチルピペリジン－１－イル）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；ジメチル（３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ブチル）アミン；Ｎ－シクロペンチル－２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－［４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル］ピリジン－２－アミン；２－［１－（ベンゼンスルホニル）－２－メチル－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル］－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－｛２－メチル－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－クロロピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－メチルピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（２－メチルブタン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２，４－ジメチル－４－（｛２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル｝アミノ）ペンタン－２－オール；Ｎ－エチル－２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（プロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－メチル－１－［２－メチル－２－（｛２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル｝アミノ）プロポキシ］プロパン－２－オール；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－エチル－２－（３－メチルピリジン－４－イル）－Ｎ－（プロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－メトキシ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛［２－（３－クロロピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝－２，４－ジメチルペンタン－２－オール；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－シクロペンチルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；１－（２－｛［２－（３－クロロピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝－２－メチルプロポキシ）－２－メチルプロパン－２－オール；Ｎ－メチル－２－（３－メチルピリジン－４－イル）－Ｎ－（プロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（４－メタンスルホニル－２－メチルブタン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－［３－（トリフルオロメチル）ピリジン－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－［２－クロロ－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－［３－（１Ｈ－１，２，３，４－テトラゾール－５－イル）プロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－メチル－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－メチル－Ｎ－［（２Ｒ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛４－［（１－メチルシクロプロピル）アミノ］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル｝ピリジン－２－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２，４－ジメチル－４－｛［２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール；４－｛４－［（１－メチルシクロプロピル）アミノ］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル｝ピリジン－３－カルボニトリル；２－｛２－メチル－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１Ｈ－インダゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３，５－ジメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－［３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛４－［（４－ヒドロキシ－２，４－ジメチルペンタン－２－イル）アミノ］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル｝ピリジン－３－カルボニトリル；２－（３，５－ジフルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（２，３－ジフルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１，３－チアゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－［２－（トリフルオロメチル）ピリジン－４－イル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛４－［（１－メチルシクロプロピル）アミノ］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル｝ピリジン－２－カルボニトリル；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１，２－オキサゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（ジメチル－１，２－オキサゾール－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－｛１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－４－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－｛１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－｛１Ｈ－ピロロ［３，２－ｂ］ピリジン－１－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチルピリジン－４－イル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロブチル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリミジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－｛［２－（３，５－ジメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝－２，４－ジメチルペンタン－２－オール；Ｎ－プロピル－２－｛７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－シクロプロピル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチルピリジン－４－イル）－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－｛１－メチル－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝－Ｎ－プロピルピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２，４－ジメチル－４－｛［２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール；Ｎ－［（１Ｒ）－１－フェニルエチル］－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－［（１Ｒ）－１－フェニルエチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－メチル－２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－［（１Ｒ）－１－フェニルエチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；
    Ｎ－メチル－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－エチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリダジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１，３－オキサゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１Ｈ－イミダゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－｛１Ｈ－ピロロ［３，２－ｂ］ピリジン－１－イル｝ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチル－１，２－オキサゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（２Ｈ－１，２，３，４－テトラゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－［１－（ピリジン－４－イル）エチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（１－｛［２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブチル）メタノール；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロブチル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（１－｛［２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブチル）メタノール；２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－［１－（トリフルオロメチル）シクロプロピル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－［１－（ピリジン－４－イル）エチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（１－｛［２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロブチル）メタノール；（１－｛［２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ｝シクロプロピル）メタノール；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－Ｎ－［１－（ピリジン－４－イル）エチル］ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－エチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（２－メチルプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（１－アミノ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；８－クロロ－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；８－メチル－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－５－クロロ－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；５－クロロ－Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；２－（２－｛［４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－５－イル］アミノ｝エトキシ）エタン－１－オール；Ｎ－（４－メトキシ－２－メチルブタン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－［２－メチル－１－（プロパン－２－イルオキシ）プロパン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－［（２Ｓ）－ブタン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－［（２Ｒ）－ブタン－２－イル］－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－（１－メトキシ－２－メチルプロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝ブタン－１－オール；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２，２－ジメチル－１－［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］ピペリジン－４－オール；２，４－ジメチル－４－｛［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝ペンタン－２－オール；Ｎ－シクロペンチル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；ジメチル（３－メチル－３－｛［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝ブチル）アミン；Ｎ，Ｎ－ジエチル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－メチル－１－（２－メチル－２－｛［２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝プロポキシ）プロパン－２－オール；Ｎ－プロピル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－（２－アミノピリミジン－４－イル）－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－｛１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－４－イル｝－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリダジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－（２－アミノピリジン－４－イル）－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ，Ｎ－ジエチル－２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；（３－｛［２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝－３－メチルブチル）ジメチルアミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－メチル－Ｎ－（プロパン－２－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－４－（ピペリジン－１－イル）－１，７－ナフチリジン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－４－（モルホリン－４－イル）－１，７－ナフチリジン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－（２－メチルブタン－２－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－｛［２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］アミノ｝－２－メチルプロパン－１－オール；１－［２－（３－クロロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル］－２，２－ジメチルピペリジン－４－オール；２－（３－フルオロピリジン－４－イル）－Ｎ－［２－メチル－１－（モルホリン－４－イル）プロパン－２－イル］－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（３－クロロピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－（（１Ｒ，２Ｓ）－２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（Ｓ）－Ｎ－（ｓｅｃ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（（１Ｓ，２Ｒ）－２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；（Ｒ）－Ｎ－（ｓｅｃ－ブチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（（１Ｓ，２Ｓ）－２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；Ｎ－（（１Ｒ，２Ｒ）－２－メチルシクロペンチル）－２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；４－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン；４－（ピペラジン－１－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン；４－（２－メチルピペリジン－１－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン；２－（ピリジン－４－イル）－Ｎ－（１－（トリフルオロメチル）シクロブチル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２－メチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）プロパン－１，２－ジアミン；Ｎ－（オキセタン－３－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロプロピル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；４－（３，３－ジメチルピペラジン－１－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン；２，２－ジメチル－４－（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）モルホリン；Ｎ－（１－メチルシクロブチル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；２，２－ジメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；Ｎ２，Ｎ２，２－トリメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）プロパン－１，２－ジアミン；４－（２－メチルピペラジン－１－イル）－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン；２－メチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；（Ｒ）－２－（ピリジン－４－イル）－４－（３－（トリフルオロメチル）ピペラジン－１－イル）－１，７－ナフチリジン；Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブチル）－Ｎ－メチル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－（１－メチルシクロブチル）－２－（ピリミジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチル－Ｎ３－（２－（ピリミジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチル－Ｎ３－（２－（３－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；ｔｅｒｔ－ブチル（２－メチル－１－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパン－２－イル）カルバメート；
    ｔｅｒｔ－ブチル（２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）カルバメート；Ｎ，Ｎ，２－トリメチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパンアミド；Ｎ１，３－ジメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；ｔｅｒｔ－ブチル（２，２－ジメチル－３－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロピル）カルバメート；２，２－ジメチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；３－メチル－３－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）ブタンアミド；２，３－ジメチル－Ｎ２－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－２，３－ジアミン；エチル２－メチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパノエート；Ｎ１，Ｎ１，２，２－テトラメチル－Ｎ３－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；４－（４－（ｔｅｒｔ－ブチルアミノ）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－２－イル）－１，２，５－オキサジアゾール－３－アミン；２－メチル－２－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）プロパンアミド；（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロ－２－メチル－３－（（２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－イル）アミノ）プロパン－２－オール；２－（３－クロロピリジン－４－イル）－Ｎ，Ｎ－ジエチル－１，７－ナフチリジン－４－アミン；Ｎ－プロピル－２－（３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－アミン；ｔｅｒｔ－ブチル（３－メチル－３－（（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）ブチル）カルバメート；Ｎ１，Ｎ１，Ｎ３，２，２－ペンタメチル－Ｎ３－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）プロパン－１，３－ジアミン；Ｎ１，Ｎ１－ジエチル－３－メチル－Ｎ３－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；Ｎ３－（２－（２－フルオロピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン；Ｎ３－（２－（３，５－ジメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン；Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチル－Ｎ３－（２－（３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミン；Ｎ３－（２－（２－アミノピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）－Ｎ１，Ｎ１，３－トリメチルブタン－１，３－ジアミン；及び３－メチル－Ｎ１－（２－（ピリジン－４－イル）ピリド［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）ブタン－１，３－ジアミンからなる群から選択される、化合物、又はその薬学的に許容可能な塩。
  2. Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－２－（ピリジン－４－イル）－１，７－ナフチリジン－４－アミンである、請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩。
  3. 活性成分としての請求項１または２に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩と少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物。
  4. 請求項１または２に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を使用した角膜内皮細胞又は輪部幹細胞を含む細胞集団におけるＬＡＴＳ阻害方法であって、エキソビボで実施されるＬＡＴＳ阻害方法。
  5. ａ）請求項１または２に定義されるとおりの化合物又はその薬学的に許容可能な塩の存在下で角膜内皮細胞又は輪部幹細胞を含む播種細胞集団を培養することにより角膜内皮細胞を含む拡大細胞集団を作成するステップを含む、細胞集団拡大方法。
  6. Ｂ２Ｍ、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ又はＨＬＡ－Ｃなどの宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子の発現及び／又は機能を低下又は消失させることにより、前記角膜内皮細胞又は輪部幹細胞を遺伝子修飾することを更に含む、請求項５に記載の方法。
  7. 請求項６に記載の方法によって入手可能な細胞集団であって、前記細胞集団が所望により、宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子の１つ以上の核酸残基の天然に存在しない挿入又は欠失を含み、挿入又は欠失がＢ２Ｍ、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ又はＨＬＡ－Ｃなどの前記遺伝子の発現又は機能の低下又は消失をもたらす、細胞集団。
  8. 請求項１または２に定義されるとおりの化合物又はその薬学的に許容可能な塩と成長培地とを含む細胞増殖培地。
  9. 対象の眼への角膜内皮細胞又は輪部幹細胞の集団の移植方法であって、請求項１または２に定義されるとおりの化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む細胞増殖培地中で角膜内皮細胞又は輪部幹細胞の集団を培養すること、及び前記角膜内皮細胞又は輪部幹細胞を前記対象の眼に送達すること、を含む方法に用いるための、請求項１または２に定義されるとおりの化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物。
  10. 眼疾患又は眼障害の治療方法又は予防方法に用いるための、請求項７に記載の細胞集団。
  11. 輪部幹細胞欠乏の治療方法に用いるための請求項７に記載の細胞集団であって、前記細胞集団が宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子の１つ以上の核酸残基の天然に存在しない挿入又は欠失を含む輪部幹細胞を含み、挿入又は欠失がＢ２Ｍ、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ又はＨＬＡ－Ｃなどの前記遺伝子の発現又は機能の低下又は消失をもたらす、細胞集団。
  12. 輪部幹細胞欠乏を治療する医薬品の製造のための、請求項７に記載の細胞集団の使用であって、前記細胞集団が宿主対移植片免疫応答の促進に関連する遺伝子の１つ以上の核酸残基の天然に存在しない挿入又は欠失を含む輪部幹細胞を含み、挿入又は欠失がＢ２Ｍ、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ又はＨＬＡ－Ｃなどの前記遺伝子の発現又は機能の低下又は消失をもたらす、使用。
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UY (1) UY37703A (ja)
WO (1) WO2018198077A2 (ja)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA126373C2 (uk) 2015-12-04 2022-09-28 Новартіс Аг Композиція і спосіб для імуноонкології
AU2018237159A1 (en) 2017-03-22 2019-09-05 Intellia Therapeutics, Inc. Compositions and methods for immunooncology
JOP20190257A1 (ar) 2017-04-28 2019-10-28 Novartis Ag مركبات أريل غير متجانسة ثنائية الحلقة مندمجة 6-6 واستخدامها كمثبطات lats
JPWO2019235569A1 (ja) 2018-06-08 2021-07-08 日産化学株式会社 キナーゼ阻害剤
EP3813800A1 (en) 2018-06-29 2021-05-05 Incyte Corporation Formulations of an axl/mer inhibitor
UY38427A (es) * 2018-10-26 2020-05-29 Novartis Ag Métodos y composiciones para terapia con células oculares
WO2020122104A1 (ja) * 2018-12-11 2020-06-18 国立大学法人京都大学 ゲノムｄｎａに欠失を誘導する方法
WO2020158841A1 (ja) 2019-01-30 2020-08-06 日産化学株式会社 ヒドラジド化合物及びキナーゼ阻害剤
CN112707905B (zh) * 2019-10-25 2024-07-02 武汉誉祥医药科技有限公司 一种三并杂环化合物及其制备方法和用途
GB201915831D0 (en) * 2019-10-31 2019-12-18 Cancer Research Tech Ltd Compounds, compositions and therapeutic uses thereof
GB201915829D0 (en) * 2019-10-31 2019-12-18 Cancer Research Tech Ltd Compounds, compositions and therapeutic uses thereof
TW202128699A (zh) * 2019-11-27 2021-08-01 美商建南德克公司 治療性化合物
CN115515579A (zh) * 2020-02-05 2022-12-23 洛克菲勒大学 吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺组合物和改善听力损失的方法
CN111443068B (zh) * 2020-03-06 2023-06-27 天津大学 具有多重刺激响应特性的纯有机室温磷光材料及筛选方法和应用
CN115667504A (zh) 2020-04-27 2023-01-31 诺华股份有限公司 用于眼细胞疗法的方法和组合物
CN112305126A (zh) * 2020-11-02 2021-02-02 宁夏贝利特生物科技有限公司 一种硝酸胍含量的测定方法
CN115974868B (zh) * 2022-11-07 2024-04-12 安徽理工大学 一种尿嘧啶衍生物的合成方法及其抗肺纤维化方面的潜在应用

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008531538A (ja) 2005-02-25 2008-08-14 クドス ファーマシューティカルズ リミテッド ２，４−ジアミノ−ピリドピリミジン誘導体とｍＴＯＲ阻害剤としてのその使用
JP2011529920A (ja) 2008-07-31 2011-12-15 ジェネンテック， インコーポレイテッド ピリミジン化合物、組成物及び使用方法
US20110319409A1 (en) 2010-06-23 2011-12-29 Cox Christopher D 7-aza-quinazoline pde10 inhibitors
WO2013012087A1 (ja) 2011-07-15 2013-01-24 国立大学法人大阪大学 角膜内皮細胞の調製方法
JP2015533822A (ja) 2012-09-28 2015-11-26 イグニタ、インク． 非定型プロテインキナーゼｃのアザキナゾリン阻害薬
WO2017023905A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Bristol-Myers Squibb Company Heterocyclic compounds useful as modulators of tnf alpha
JP2017509655A (ja) 2014-03-25 2017-04-06 キャンサー・リサーチ・テクノロジー・リミテッド 非定型プロテインキナーゼｃのアザキナゾリン阻害薬

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004065392A1 (en) 2003-01-24 2004-08-05 Smithkline Beecham Corporation Condensed pyridines and pyrimidines and their use as alk-5 receptor ligands
CN101679424A (zh) * 2007-04-06 2010-03-24 诺瓦提斯公司 作为蛋白激酶调节剂的2,6-萘啶衍生物
CN103987707B (zh) 2011-09-27 2017-11-07 霍夫曼-拉罗奇有限公司 吡唑‑4‑基‑杂环基‑甲酰胺化合物以及使用方法
MX2016007328A (es) * 2013-12-12 2017-07-19 Broad Inst Inc Suministro, uso y aplicaciones terapeuticas de sistemas y composiciones crispr-cas para edicion del genoma.
US20170298360A1 (en) 2014-09-24 2017-10-19 Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Lats and breast cancer
WO2017035116A1 (en) 2015-08-25 2017-03-02 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions relating to the diagnosis and treatment of cancer
JOP20190257A1 (ar) 2017-04-28 2019-10-28 Novartis Ag مركبات أريل غير متجانسة ثنائية الحلقة مندمجة 6-6 واستخدامها كمثبطات lats
UY38427A (es) * 2018-10-26 2020-05-29 Novartis Ag Métodos y composiciones para terapia con células oculares

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008531538A (ja) 2005-02-25 2008-08-14 クドス ファーマシューティカルズ リミテッド ２，４−ジアミノ−ピリドピリミジン誘導体とｍＴＯＲ阻害剤としてのその使用
JP2011529920A (ja) 2008-07-31 2011-12-15 ジェネンテック， インコーポレイテッド ピリミジン化合物、組成物及び使用方法
US20110319409A1 (en) 2010-06-23 2011-12-29 Cox Christopher D 7-aza-quinazoline pde10 inhibitors
WO2013012087A1 (ja) 2011-07-15 2013-01-24 国立大学法人大阪大学 角膜内皮細胞の調製方法
JP2015533822A (ja) 2012-09-28 2015-11-26 イグニタ、インク． 非定型プロテインキナーゼｃのアザキナゾリン阻害薬
JP2017509655A (ja) 2014-03-25 2017-04-06 キャンサー・リサーチ・テクノロジー・リミテッド 非定型プロテインキナーゼｃのアザキナゾリン阻害薬
WO2017023905A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Bristol-Myers Squibb Company Heterocyclic compounds useful as modulators of tnf alpha

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Shaw, Duncan; Hollingworth, Greg; Soldermann, Nicolas; Sprague, Elizabeth;Schuler, Walter; Vangrevelinghe, Eric; Duggan, Nicholas; Thomas, Matthew;Kosaka, Takatoshi; Waters, Nigel; van Eis, Maurice J.，Novel ROCK inhibitors for the treatment of pulmonary arterial hypertension，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters ，2014年，24(20),，4812-4817
Wang, Peng; Yang, Yong; Shao, Qiuping; Zhou, Wenqin，Selective inhibition of ROCK kinase isoforms to promote neuroregeneration after brain surgery，Medicinal Chemistry Research，2016年，25(1)，40-50
YAWEI Hao et al.，Tumor Suppressor LATS1 Is a Negative Regulator of Oncogene YAP，Journal of Biological Chemistry，2008年，283(9)，5496-5509

Also Published As

Publication number Publication date
AU2021286281A1 (en) 2022-01-06
US11458138B2 (en) 2022-10-04
UY37703A (es) 2018-11-30
KR20190142776A (ko) 2019-12-27
PH12019502436A1 (en) 2020-07-20
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US20180344738A1 (en) 2018-12-06
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TW201843140A (zh) 2018-12-16
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CA3056906A1 (en) 2018-11-01
PE20200292A1 (es) 2020-02-05
IL292857A (en) 2022-07-01

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