JP7166344B2 - タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物、ならびにその調製方法およびアルコール性脂肪肝を治療する用途 - Google Patents
タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物、ならびにその調製方法およびアルコール性脂肪肝を治療する用途 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7166344B2 JP7166344B2 JP2020537271A JP2020537271A JP7166344B2 JP 7166344 B2 JP7166344 B2 JP 7166344B2 JP 2020537271 A JP2020537271 A JP 2020537271A JP 2020537271 A JP2020537271 A JP 2020537271A JP 7166344 B2 JP7166344 B2 JP 7166344B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- glycyrrhiza
- flavonoid extract
- zebrafish
- flavonoid
- extract
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims description 104
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 title claims description 104
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 title claims description 104
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 title claims description 93
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 36
- 208000026594 alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 title claims description 18
- 208000007082 Alcoholic Fatty Liver Diseases 0.000 title claims description 15
- 206010016262 Fatty liver alcoholic Diseases 0.000 title claims description 15
- 208000010706 fatty liver disease Diseases 0.000 title claims description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 12
- 241000202807 Glycyrrhiza Species 0.000 claims description 70
- LTINPJMVDKPJJI-UHFFFAOYSA-N iodinated glycerol Chemical compound CC(I)C1OCC(CO)O1 LTINPJMVDKPJJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 66
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical group CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 63
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 26
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 26
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 26
- JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N Bioquercetin Natural products CC1OC(OCC(O)C2OC(OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N eriodictyol 7-O-rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C=C3C(C(C(O)=C(O3)C=3C=C(O)C(O)=CC=3)=O)=C(O)C=2)O1 IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims description 17
- FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N quercetin rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N rutin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@@H]1OC[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N 0.000 claims description 17
- ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N rutin Natural products CC1OC(OCC2OC(O)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5 ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 235000005493 rutin Nutrition 0.000 claims description 17
- 229960004555 rutoside Drugs 0.000 claims description 17
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 15
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 15
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 15
- -1 patches Substances 0.000 claims description 15
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 13
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 claims description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 13
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 12
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 claims description 11
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 11
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 10
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 8
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 8
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 claims description 7
- 241000255890 Galleria Species 0.000 claims description 7
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims description 7
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 claims description 7
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 7
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 claims description 7
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 claims description 7
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims description 7
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 5
- 241000863480 Vinca Species 0.000 claims description 4
- 239000002131 composite material Substances 0.000 claims description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 claims description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 3
- 239000012156 elution solvent Substances 0.000 claims description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 claims description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 claims description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 claims description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 claims 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- 241000252212 Danio rerio Species 0.000 description 67
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 27
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 25
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 25
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 25
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 24
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 24
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 19
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 9
- 101100366137 Mesembryanthemum crystallinum SODCC.1 gene Proteins 0.000 description 9
- 101100096142 Panax ginseng SODCC gene Proteins 0.000 description 9
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 9
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 9
- 101150017120 sod gene Proteins 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 7
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 6
- 231100000753 hepatic injury Toxicity 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 4
- 208000022309 Alcoholic Liver disease Diseases 0.000 description 4
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 4
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 4
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 3
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 3
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 3
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 3
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 description 3
- 230000002443 hepatoprotective effect Effects 0.000 description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 3
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 description 3
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 3
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 3
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 3
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 3
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 3
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 3
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 3
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 3
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- MPDGHEJMBKOTSU-YKLVYJNSSA-N 18beta-glycyrrhetic acid Chemical compound C([C@H]1C2=CC(=O)[C@H]34)[C@@](C)(C(O)=O)CC[C@]1(C)CC[C@@]2(C)[C@]4(C)CC[C@@H]1[C@]3(C)CC[C@H](O)C1(C)C MPDGHEJMBKOTSU-YKLVYJNSSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010021033 Hypomenorrhoea Diseases 0.000 description 2
- 229920000881 Modified starch Polymers 0.000 description 2
- 208000005374 Poisoning Diseases 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UCGFRIAOVLXVKL-UHFFFAOYSA-N benzylthiourea Chemical compound NC(=S)NCC1=CC=CC=C1 UCGFRIAOVLXVKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 2
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 231100001160 nonlethal Toxicity 0.000 description 2
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 2
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 2
- IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M potassium bromide Chemical compound [K+].[Br-] IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000238582 Artemia Species 0.000 description 1
- 235000015701 Artemisia arbuscula Nutrition 0.000 description 1
- 235000002657 Artemisia tridentata Nutrition 0.000 description 1
- 240000006891 Artemisia vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000003261 Artemisia vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 108010011485 Aspartame Proteins 0.000 description 1
- 241000208838 Asteraceae Species 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 1
- 229920002785 Croscarmellose sodium Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- MPDGHEJMBKOTSU-UHFFFAOYSA-N Glycyrrhetinsaeure Natural products C12C(=O)C=C3C4CC(C)(C(O)=O)CCC4(C)CCC3(C)C1(C)CCC1C2(C)CCC(O)C1(C)C MPDGHEJMBKOTSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001558015 Gynura formosana Species 0.000 description 1
- 206010019842 Hepatomegaly Diseases 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- NPGIHFRTRXVWOY-UHFFFAOYSA-N Oil red O Chemical compound Cc1ccc(C)c(c1)N=Nc1cc(C)c(cc1C)N=Nc1c(O)ccc2ccccc12 NPGIHFRTRXVWOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 229920001030 Polyethylene Glycol 4000 Polymers 0.000 description 1
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 238000010632 SOD assay Methods 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000248015 Synchytrium perforatum Species 0.000 description 1
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 230000001754 anti-pyretic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002180 anti-stress Effects 0.000 description 1
- 239000002221 antipyretic Substances 0.000 description 1
- 239000000605 aspartame Substances 0.000 description 1
- 235000010357 aspartame Nutrition 0.000 description 1
- IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N aspartame Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 229960003438 aspartame Drugs 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 238000005452 bending Methods 0.000 description 1
- 229960002233 benzalkonium bromide Drugs 0.000 description 1
- KHSLHYAUZSPBIU-UHFFFAOYSA-M benzododecinium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 KHSLHYAUZSPBIU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 229960002152 chlorhexidine acetate Drugs 0.000 description 1
- 231100000160 chronic toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007665 chronic toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000132 chronic toxicity testing Toxicity 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 229960001681 croscarmellose sodium Drugs 0.000 description 1
- 235000010947 crosslinked sodium carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229940109275 cyclamate Drugs 0.000 description 1
- HCAJEUSONLESMK-UHFFFAOYSA-N cyclohexylsulfamic acid Chemical compound OS(=O)(=O)NC1CCCCC1 HCAJEUSONLESMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- FPAFDBFIGPHWGO-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxomagnesium;hydrate Chemical compound O.[Mg]=O.[Mg]=O.[Mg]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O FPAFDBFIGPHWGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229960003720 enoxolone Drugs 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940044949 eucalyptus oil Drugs 0.000 description 1
- 239000010642 eucalyptus oil Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000001418 larval effect Effects 0.000 description 1
- 230000006372 lipid accumulation Effects 0.000 description 1
- 238000010630 lipid peroxidation (MDA) assay Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 230000006996 mental state Effects 0.000 description 1
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- MCSINKKTEDDPNK-UHFFFAOYSA-N propyl propionate Chemical compound CCCOC(=O)CC MCSINKKTEDDPNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015424 sodium Nutrition 0.000 description 1
- WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M sodium benzoate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000010234 sodium benzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004299 sodium benzoate Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 1
- 238000002636 symptomatic treatment Methods 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 229940045860 white wax Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
- A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/28—Asteraceae or Compositae (Aster or Sunflower family), e.g. chamomile, feverfew, yarrow or echinacea
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
- A61K2236/19—Preparation or pretreatment of starting material involving fermentation using yeast, bacteria or both; enzymatic treatment
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
- A61K2236/333—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using mixed solvents, e.g. 70% EtOH
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/51—Concentration or drying of the extract, e.g. Lyophilisation, freeze-drying or spray-drying
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/53—Liquid-solid separation, e.g. centrifugation, sedimentation or crystallization
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
本発明は薬品または健康製品の分野に属し、具体的にタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物、ならびにその調製方法およびアルコール性脂肪肝を治療する用途に関する。
アルコール性脂肪肝（ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ、ＡＦＬＤ）は、長期間、大量にアルコールを摂取することにより生じる肝障害性の疾患を指し、臨床的に最も一般的なアルコール性肝疾患（ＡＬＤ）の１つである。アルコール性肝疾患の約９０％を占め、その病理的特徴は肝細胞内への脂質の蓄積が肝湿重量の５％を超えることである。中国では、アルコール性肝疾患は、肝障害を引き起こす肝疾患のうち、すでにウイルス性肝疾患に続く第２の肝疾患となっている。発症後、さらに進行して肝線維化さらには肝硬変など不可逆的な肝損傷に変化し、生命の健康を深刻に脅かす。現代医学はＡＦＬＤの病因に対して病理研究を行い、大きく進展しているが、治療においてはいまだ特効薬はなく、禁酒、限酒、対症療法および栄養サポートを主とし、効果はあまり満足のいくものではない。
タカサゴサンシチソウ（Ｇｙｎｕｒａ ｆｏｒｍｏｓａｎａ Ｋｉｔａｍ．）は、キク科サンシチソウ属の多年生草木植物で、別名は白背天葵、片仔ファン草である。豊富なビタミン、アルカロイド類およびフラボノイド物質を含有し、薬食両用の植物である。タカサゴサンシチソウは主に肺炎、肺癌、肝炎、肝硬変、高血圧などの疾病の治療に用いられ、解熱解毒の効果も有することが研究により明らかにされている。
ある文献は、タカサゴサンシチソウ抽出物がアルコール性肝損傷に対して効果的に保護効果を発揮することができ、肝保護作用を有することを報告している。タカサゴサンシチソウ抽出物は多種の化学成分を含有するため、具体的にどの化学成分がアルコール性肝損傷に対して保護作用を示す活性成分であるかは、現在まだ明確にはなっていない。
したがって、タカサゴサンシチソウ抽出物のうち、アルコール性肝損傷に対して保護作用を示す活性成分をさらに研究し、アルコール性脂肪肝を治療する新規の薬物を開発することは、重要な意義を有する。
このため、本発明はタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物を提供し、さらにその調製方法および用途を提供する。
上記技術的問題を解決するため、本発明は以下の技術案を採用し、これにより実現する。
本発明は、重量百分率で８０～８５％のルチンを含有する、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物を提供する。
本発明は、さらに上記タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の調製方法を提供し、以下の工程を含む。
（１）浸出：タカサゴサンシチソウに浸出溶媒を添加して浸出させ、浸出液のｐＨ値を４～８に調節して反応液を得る。
（２）酵素分解：その後、反応液中に複合酵素を添加して酵素分解を行い、３０～５０℃で１～４時間強制循環反応させ、吸引ろ過し、ろ液を収集する。
（３）抽出、濃縮：ろ液をマクロ孔質樹脂Ａで抽出し、抽出液を合わせて濃縮し、濃縮液を得る。
（４）単離、精製：濃縮液を遠心分離し、上清液をマクロ孔質樹脂Ｂで単離精製し、波長５１０ｎｍで吸光度を測定し、溶出液を収集して濃縮、乾燥させ、フラボノイド抽出物を得る。
（１）浸出：タカサゴサンシチソウに浸出溶媒を添加して浸出させ、浸出液のｐＨ値を４～８に調節して反応液を得る。
（２）酵素分解：その後、反応液中に複合酵素を添加して酵素分解を行い、３０～５０℃で１～４時間強制循環反応させ、吸引ろ過し、ろ液を収集する。
（３）抽出、濃縮：ろ液をマクロ孔質樹脂Ａで抽出し、抽出液を合わせて濃縮し、濃縮液を得る。
（４）単離、精製：濃縮液を遠心分離し、上清液をマクロ孔質樹脂Ｂで単離精製し、波長５１０ｎｍで吸光度を測定し、溶出液を収集して濃縮、乾燥させ、フラボノイド抽出物を得る。
好ましくは、上記タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の調製方法において、前記酵素分解工程で、パパイン、セルラーゼおよびペクチナーゼからなる複合酵素を用いて酵素分解を行う。
さらに好ましくは、上記タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の調製方法において、前記複合酵素および前記タカサゴサンシチソウの重量比は１：５～１：３である。
さらに好ましくは、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の調製方法において、前記複合酵素のパパイン、セルラーゼおよびペクチナーゼの３つの重量比は、（０．５～１．５）：（２～５）：（１～３）である。
さらに好ましくは、上記タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の調製方法において、前記複合酵素のパパイン、セルラーゼおよびペクチナーゼの３つの重量比は、１：３：２である。
さらに好ましくは、上記タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の調製方法において、
前記マクロ孔質樹脂Ａは、ＡＢ－８、ＤＭ－１３０、ＨＺ８４１、ＺＨ－００、ＺＨ－０１、ＺＨ－０２、ＺＨ－０３、ＣＡＤ－４０、ＣＡＤ－４５、ＢＳ－３０から選択される少なくとも１つである。
前記マクロ孔質樹脂Ｂは、Ｄ－１０１、Ｄ－１４０、Ｄ－１４１、ＸＡＤ－３、ＸＡＤ－４、ＨＰ－２０、ＨＰ－２１、ＬＤ－６０５、ＬＳＡ－１０から選択される少なくとも１つである。
前記マクロ孔質樹脂Ａは、ＡＢ－８、ＤＭ－１３０、ＨＺ８４１、ＺＨ－００、ＺＨ－０１、ＺＨ－０２、ＺＨ－０３、ＣＡＤ－４０、ＣＡＤ－４５、ＢＳ－３０から選択される少なくとも１つである。
前記マクロ孔質樹脂Ｂは、Ｄ－１０１、Ｄ－１４０、Ｄ－１４１、ＸＡＤ－３、ＸＡＤ－４、ＨＰ－２０、ＨＰ－２１、ＬＤ－６０５、ＬＳＡ－１０から選択される少なくとも１つである。
さらに好ましくは、上記タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の調製方法において、前記浸出工程の浸出溶媒は水であり、前記タカサゴサンシチソウおよび前記水の重量比は１：（２０～６０）である。
さらに好ましくは、上記タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の調製方法において、前記単離、精製工程の溶出溶媒は、体積濃度７０～８０％のエタノール水溶液であり、溶出速度は３～１５ｍ／ｈである。
さらに好ましくは、上記タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の調製方法において、前記単離、精製工程の溶出溶媒は、体積濃度７５％のエタノール水溶液であり、溶出速度は５ｍ／ｈである。
さらに好ましくは、上記タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の調製方法において、前記濃縮液におけるタカサゴサンシチソウのフラボノイド濃度は０．５ｍｇ／ｍＬである。
さらに好ましくは、上記タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の調製方法において、前記抽出、濃縮工程で、マクロ孔質樹脂Ａを収容した抽出槽中にろ液を添加し、３０℃、８０～１５０ｒｐｍで６～２４時間撹拌してろ過する。マクロ孔質樹脂Ａの重量に基づいて、吸着後のマクロ孔質樹脂Ａに重量で１０～３０倍量の体積濃度７０～９５％のエタノール溶液を添加する。その後３０℃、８０～１５０ｒｐｍで６～２４時間撹拌してろ過し、抽出液を得る。
さらに好ましくは、上記タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の調製方法において、前記浸出工程で、塩酸または水酸化ナトリウムを用いて浸出液のｐＨ値を４～８に調節する。
さらに好ましくは、上記タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の調製方法において、前記乾燥は凍結乾燥である。
本発明は、さらに上記調製方法で得られたタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物を提供する。
本発明は、さらに上記タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物、または上記調製方法で得られたタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物を活性成分とし、通常の工程に基づき、通常の添加剤を添加して、臨床的に許容可能な錠剤、カプセル剤、散剤、配合剤、丸剤、顆粒剤、シロップ、貼付剤、坐剤、スプレー、軟膏または注射剤に製造される医薬品を提供する。
前記通常の添加剤は、充填剤、崩壊剤、滑沢剤、懸濁化剤、結合剤、甘味剤、矯味剤、防腐剤、基剤などである。充填剤は、デンプン、アルファ化デンプン、ラクトース、マンニトール、キトサン、微結晶セルロース、スクロースなどを含み；崩壊剤は、デンプン、アルファ化デンプン、微結晶セルロース、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、クロスカルメロースナトリウムなどを含み；滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウム、ドデシル硫酸ナトリウム、タルク粉末、二酸化ケイ素などを含み；懸濁化剤は、ポリビニルピロリドン、微結晶セルロース、スクロース、寒天、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどを含み；結合剤は、デンプンスラリー、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどを含み；甘味剤は、サッカリンナトリウム、アスパルテーム、スクロース、チクロ、グリチルレチン酸などを含み；矯味剤は、甘味剤および各種フレーバーを含み；防腐剤は、パラベン類、安息香酸、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸およびその塩類、ベンザルコニウムブロミド、酢酸クロロヘキシジン、ユーカリ油などを含み；基剤は、ＰＥＧ６０００、ＰＥＧ４０００、白ろうなどを含む。
本発明は、さらに上記タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物、上記調製方法で得られたタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物、またはアルコール性脂肪肝を治療する薬品または健康製品の調製における上記医薬品の応用を提供する。
本発明の技術案は以下の利点を有する。
（１）本発明は、タカサゴサンシチソウ抽出物についてさらに掘り下げて研究する。これにより８０～８５％のルチンを含有するタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物を浸出、単離し；さらにゼブラフィッシュのアルコール性脂肪肝モデルを実験モデルとして有効性試験の研究を行う。実験結果は、本発明のタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物が、アルコール性肝損傷に対して効果的に保護効果を発揮することができ、肝保護の薬効作用を有し、アルコール性肝損傷を潜在的に治療する薬物とすることができることを明らかにしている。
（２）本発明のタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の調製方法は、浸出工程の後、特定の組成、特定の混合比の酵素組成である複合酵素を選択することにより、３０～５０℃で酵素分解を行う。タカサゴサンシチソウのフラボノイド化合物の構造が高温下で破壊されるのを防止するだけでなく、タカサゴサンシチソウのフラボノイド化合物を最大限に浸出させることができる。さらにマクロ孔質樹脂を用いた抽出、濃縮およびマクロ孔質樹脂を用いた単離、精製工程により、タカサゴサンシチソウのフラボノイド化合物の抽出率は１．８％～２．０％に達することができる。既存方法におけるタカサゴサンシチソウのフラボノイド化合物の抽出率より３０％以上高くなり、得られたタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物におけるルチンのＨＰＬＣ純度は８０～８５％に達することができる。
（１）本発明は、タカサゴサンシチソウ抽出物についてさらに掘り下げて研究する。これにより８０～８５％のルチンを含有するタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物を浸出、単離し；さらにゼブラフィッシュのアルコール性脂肪肝モデルを実験モデルとして有効性試験の研究を行う。実験結果は、本発明のタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物が、アルコール性肝損傷に対して効果的に保護効果を発揮することができ、肝保護の薬効作用を有し、アルコール性肝損傷を潜在的に治療する薬物とすることができることを明らかにしている。
（２）本発明のタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の調製方法は、浸出工程の後、特定の組成、特定の混合比の酵素組成である複合酵素を選択することにより、３０～５０℃で酵素分解を行う。タカサゴサンシチソウのフラボノイド化合物の構造が高温下で破壊されるのを防止するだけでなく、タカサゴサンシチソウのフラボノイド化合物を最大限に浸出させることができる。さらにマクロ孔質樹脂を用いた抽出、濃縮およびマクロ孔質樹脂を用いた単離、精製工程により、タカサゴサンシチソウのフラボノイド化合物の抽出率は１．８％～２．０％に達することができる。既存方法におけるタカサゴサンシチソウのフラボノイド化合物の抽出率より３０％以上高くなり、得られたタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物におけるルチンのＨＰＬＣ純度は８０～８５％に達することができる。
本発明の内容をより容易に明確に理解できるようにするため、以下、本発明を実施するための形態に基づき、図を組み合わせて、本発明についてさらに詳細に説明する。
本発明は以下の実施例および実験例において、タカサゴサンシチソウを福建省ザン州市竜文区登科村から入手し、タカサゴサンシチソウと同定している。
本実施例のタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物は、以下の方法で調製する。
（１）浸出：タカサゴサンシチソウ１００ｇに重量で３０倍量の水を添加して浸出させ、希塩酸で浸出液のｐＨ値を５に調節して反応液を得る。
（２）酵素分解：その後、反応液中に２５ｇの複合酵素（該複合酵素は重量比で１：３：２のパパイン、セルラーゼおよびペクチナーゼからなる）を添加して酵素分解を行い、４０℃で３時間強制循環反応させ、吸引ろ過し、ろ液を収集する。
（３）抽出、濃縮：ＡＢ－８マクロ孔質樹脂を収容した抽出槽中にろ液を添加し、３０℃、１００ｒｐｍで１２時間撹拌して、ろ過する。ＡＢ－８マクロ孔質樹脂の重量に基づき、吸着後のＡＢ－８マクロ孔質樹脂に重量で２０倍量の体積濃度７５％のエタノール溶液を添加する。その後３０℃、１２０ｒｐｍで１２時間撹拌し、ろ過して抽出液を得る。抽出液を合わせて、タカサゴサンシチソウのフラボノイド濃度が０．５ｍｇ／ｍＬになるまで抽出液を減圧濃縮し、濃縮液を得る。
（４）単離、精製：濃縮液を１００００ｒｐｍで１０分間高速遠心分離し、マクロ孔質樹脂Ｄ－１０１を収容したクロマトグラフィカラム内に上清液を添加し、６０ｍｉｎ静止吸着させる。体積濃度７５％のエタノール水溶液を用いて、５ｍ／ｈの速度で溶出し、波長５１０ｎｍで吸光度を測定する。吸光度値を縦座標、溶出時間を横座標として、溶出曲線図（クロマトグラムは図１に示す）を作成し、溶出曲線中の吸収ピーク範囲内の溶出液を収集し、濃縮、凍結乾燥して、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物を得る。
（１）浸出：タカサゴサンシチソウ１００ｇに重量で３０倍量の水を添加して浸出させ、希塩酸で浸出液のｐＨ値を５に調節して反応液を得る。
（２）酵素分解：その後、反応液中に２５ｇの複合酵素（該複合酵素は重量比で１：３：２のパパイン、セルラーゼおよびペクチナーゼからなる）を添加して酵素分解を行い、４０℃で３時間強制循環反応させ、吸引ろ過し、ろ液を収集する。
（３）抽出、濃縮：ＡＢ－８マクロ孔質樹脂を収容した抽出槽中にろ液を添加し、３０℃、１００ｒｐｍで１２時間撹拌して、ろ過する。ＡＢ－８マクロ孔質樹脂の重量に基づき、吸着後のＡＢ－８マクロ孔質樹脂に重量で２０倍量の体積濃度７５％のエタノール溶液を添加する。その後３０℃、１２０ｒｐｍで１２時間撹拌し、ろ過して抽出液を得る。抽出液を合わせて、タカサゴサンシチソウのフラボノイド濃度が０．５ｍｇ／ｍＬになるまで抽出液を減圧濃縮し、濃縮液を得る。
（４）単離、精製：濃縮液を１００００ｒｐｍで１０分間高速遠心分離し、マクロ孔質樹脂Ｄ－１０１を収容したクロマトグラフィカラム内に上清液を添加し、６０ｍｉｎ静止吸着させる。体積濃度７５％のエタノール水溶液を用いて、５ｍ／ｈの速度で溶出し、波長５１０ｎｍで吸光度を測定する。吸光度値を縦座標、溶出時間を横座標として、溶出曲線図（クロマトグラムは図１に示す）を作成し、溶出曲線中の吸収ピーク範囲内の溶出液を収集し、濃縮、凍結乾燥して、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物を得る。
計算の結果、本実施例のタカサゴサンシチソウのフラボノイド化合物における抽出率は２．０％である。
図１から、溶出液は３４０ｍｉｎ部分に１つの明らかな吸収ピークを有し、ピーク形状は比較的単一であることがわかり、溶出液中のフラボノイドが相対して比較的純粋であることを説明している。
Ａ、本実施例のタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物は、以下の方法で赤外吸収スペクトルによる同定を行う。
一定質量の乾燥させたルチン標準物質に１：１００で乾燥させた臭化カリウムを添加し、すり混ぜた後、固体の錠剤を作製する。フーリエ赤外線分光光度計を用いて、スキャン範囲４０００～４００ｃｍ－１、分解能４、スキャン回数４の条件で赤外吸収スペクトルを作成する。同じ方法で精製後のタカサゴサンシチソウ抽出物の赤外吸収スペクトルを作成し、比較同定する。結果は図２に示す通りである。
一定質量の乾燥させたルチン標準物質に１：１００で乾燥させた臭化カリウムを添加し、すり混ぜた後、固体の錠剤を作製する。フーリエ赤外線分光光度計を用いて、スキャン範囲４０００～４００ｃｍ－１、分解能４、スキャン回数４の条件で赤外吸収スペクトルを作成する。同じ方法で精製後のタカサゴサンシチソウ抽出物の赤外吸収スペクトルを作成し、比較同定する。結果は図２に示す通りである。
図２から以下のことがわかる。ルチン標準物質およびタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の赤外吸収スペクトルは、それぞれ３６８５．４５５～３０１８．１７７ｃｍ－１前後に、広く強い吸収ピークが出現する。これは－ＯＨの伸縮振動ピークであり、フェノール性ヒドロキシ基または糖のヒドロキシ基が存在し、数が比較的多いことを表す。２９１４．０３６ｃｍ－１部分に弱い吸収ピークが出現し、これは炭素水素結合の伸縮振動ピークであり、飽和炭素の水素が比較的少ないことを説明している。１６５４．６９４ｃｍ－１部分にＣ＝Ｏの中強度の伸縮振動ピークが出現し、両者の位置およびピーク形状は基本的に一致し、抽出物がフラボノイド物質であることを説明している。１３７１．８８、１３６２．８９ｃｍ－１部分にヒドロキシ基の変角振動ピークが出現する。８０４．８０、８１０．５６ｃｍ－１部分にベンゼン環のオルト位の水素による吸収ピークが出現する。１０１０．０７～６９６．６２ｃｍ－１部分にベンゼン環の置換基の位置による吸収ピークが出現するが、ピーク位置は異なり、抽出物およびルチンのヒドロキシ基の置換位置が異なることを説明している。これらは抽出物中にヒドロキシ基、カルボニル基および異なる位置が置換されたベンゼン環などの官能基を含有し、特徴的な吸収ピークは基本的に一致することを表している。したがって、抽出物がフラボノイド化合物であると確定することができる。
Ｂ、以下の方法に基づいて、液体クロマトグラフィにより、本実施例のタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物におけるルチン含量を分析する。
Ｂ１、液体クロマトグラフ条件の確定
液体クロマトグラフ条件：ガードカラムＥｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ－Ｃ１８ ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＧｕａｒｄ Ｃｏｌｕｍｎ（４．６×１２．５ｍｍ、５μｍ）：ＺＯＲ ＢＺＸ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ－Ｃ１８（４．６×１５０ｍｍ、５μｍ）、流速０．５ｍＬ／ｍｉｎ、カラム温度３５℃、検出波長３６８ｎｍ、２５４ｎｍ、２１０ｎｍ、サンプル体積１０μＬ、移動相０．０３％ギ酸水溶液（Ａ）、アセトニトリル（Ｂ）、グラジエント溶離プログラム：０～１０ｍｉｎ、２０％Ｂ；１０～１２ｍｉｎ、２０％～２４％Ｂ；１２～２０ｍｉｎ、２４％Ｂ；２０～２５ｍｉｎ、２４％～３０％Ｂ；２５～４８ｍｉｎ、３０％Ｂ。
液体クロマトグラフ条件：ガードカラムＥｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ－Ｃ１８ ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＧｕａｒｄ Ｃｏｌｕｍｎ（４．６×１２．５ｍｍ、５μｍ）：ＺＯＲ ＢＺＸ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ－Ｃ１８（４．６×１５０ｍｍ、５μｍ）、流速０．５ｍＬ／ｍｉｎ、カラム温度３５℃、検出波長３６８ｎｍ、２５４ｎｍ、２１０ｎｍ、サンプル体積１０μＬ、移動相０．０３％ギ酸水溶液（Ａ）、アセトニトリル（Ｂ）、グラジエント溶離プログラム：０～１０ｍｉｎ、２０％Ｂ；１０～１２ｍｉｎ、２０％～２４％Ｂ；１２～２０ｍｉｎ、２４％Ｂ；２０～２５ｍｉｎ、２４％～３０％Ｂ；２５～４８ｍｉｎ、３０％Ｂ。
Ｂ２、標準物質溶液の調製
ルチン０．００１ｇを正確に秤取し、１ｍＬメタノール中に溶解し、１ｍｇ／ｍＬの単一の標準物質溶液を調製する。使い捨てフィルタでろ過し、小さな試験管に入れて使用に備える。
ルチン０．００１ｇを正確に秤取し、１ｍＬメタノール中に溶解し、１ｍｇ／ｍＬの単一の標準物質溶液を調製する。使い捨てフィルタでろ過し、小さな試験管に入れて使用に備える。
Ｂ３、測定
標準物質溶液、被験物質溶液（実施例１で調製したタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物であり、濃度１μｇ／μＬのメタノール溶液に調製した）を精密に量り、液体クロマトグラフの検出条件に基づいて、それぞれ検出分析する。
標準物質溶液、被験物質溶液（実施例１で調製したタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物であり、濃度１μｇ／μＬのメタノール溶液に調製した）を精密に量り、液体クロマトグラフの検出条件に基づいて、それぞれ検出分析する。
標準物質溶液のＨＰＬＣクロマトグラムは図３に示す通りであり、被験物質溶液のＨＰＬＣクロマトグラムは図４に示す通りである。
図３から、ルチン標準物質溶液は、１０分間で完全に分離することができることがわかる。ルチンは本実験のクロマトグラフ条件で、クロマトグラムのベースラインが基本的に平らでまっすぐである。クロマトグラフピークにテーリング現象がなく、不純物の干渉もなく、ピークの出現は比較的速く、その保持時間は２．７４５ｍｉｎであることを示している。
図４から、面積百分率法で計算し、タカサゴサンシチソウ抽出物中のルチン含量が８１．２９％であることがわかる。
本実施例のタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物は、以下の方法で調製する。
（１）浸出：タカサゴサンシチソウ１００ｇに重量で２０倍量の水を添加して浸出させ、希水酸化ナトリウム溶液で浸出液のｐＨ値を８に調節して反応液を得る。
（２）酵素分解：その後、反応液中に２０ｇの複合酵素（該複合酵素は重量比で０．５：５：１のパパイン、セルラーゼおよびペクチナーゼからなる）を添加して酵素分解を行い、３０℃で４時間強制循環反応させ、吸引ろ過し、ろ液を収集する。
（３）抽出、濃縮：ＤＭ－１３０マクロ孔質樹脂を収容した抽出槽中にろ液を添加し、３０℃、８０ｒｐｍで２４時間撹拌して、ろ過する。ＤＭ－１３０マクロ孔質樹脂の重量に基づいて、吸着後のＤＭ－１３０マクロ孔質樹脂に重量で１０倍量の体積濃度９５％のエタノール溶液を添加する。その後３０℃、８０ｒｐｍで２４時間撹拌し、ろ過して抽出液を得る。抽出液を合わせて、タカサゴサンシチソウのフラボノイド濃度が０．５ｍｇ／ｍＬになるまで抽出液を減圧濃縮し、濃縮液を得る。
（４）単離、精製：濃縮液を６０００ｒｐｍで８分間高速遠心分離し、マクロ孔質樹脂ＨＰ－２１を収容したクロマトグラフィカラム内に上清液を添加し、６０ｍｉｎ静止吸着させる。体積濃度８０％のエタノール水溶液を用いて、３ｍ／ｈの速度で溶出し、波長５１０ｎｍで吸光度を測定する。吸光度値を縦座標、溶出時間を横座標として、溶出曲線図を作成し、溶出曲線中の吸収ピーク範囲内の溶出液を収集し、濃縮、凍結乾燥して、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物を得る。
（１）浸出：タカサゴサンシチソウ１００ｇに重量で２０倍量の水を添加して浸出させ、希水酸化ナトリウム溶液で浸出液のｐＨ値を８に調節して反応液を得る。
（２）酵素分解：その後、反応液中に２０ｇの複合酵素（該複合酵素は重量比で０．５：５：１のパパイン、セルラーゼおよびペクチナーゼからなる）を添加して酵素分解を行い、３０℃で４時間強制循環反応させ、吸引ろ過し、ろ液を収集する。
（３）抽出、濃縮：ＤＭ－１３０マクロ孔質樹脂を収容した抽出槽中にろ液を添加し、３０℃、８０ｒｐｍで２４時間撹拌して、ろ過する。ＤＭ－１３０マクロ孔質樹脂の重量に基づいて、吸着後のＤＭ－１３０マクロ孔質樹脂に重量で１０倍量の体積濃度９５％のエタノール溶液を添加する。その後３０℃、８０ｒｐｍで２４時間撹拌し、ろ過して抽出液を得る。抽出液を合わせて、タカサゴサンシチソウのフラボノイド濃度が０．５ｍｇ／ｍＬになるまで抽出液を減圧濃縮し、濃縮液を得る。
（４）単離、精製：濃縮液を６０００ｒｐｍで８分間高速遠心分離し、マクロ孔質樹脂ＨＰ－２１を収容したクロマトグラフィカラム内に上清液を添加し、６０ｍｉｎ静止吸着させる。体積濃度８０％のエタノール水溶液を用いて、３ｍ／ｈの速度で溶出し、波長５１０ｎｍで吸光度を測定する。吸光度値を縦座標、溶出時間を横座標として、溶出曲線図を作成し、溶出曲線中の吸収ピーク範囲内の溶出液を収集し、濃縮、凍結乾燥して、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物を得る。
計算の結果、本実施例のタカサゴサンシチソウのフラボノイド化合物における抽出率は１．８２％である。
実施例１における「項目Ｂ」に基づいて、本実施例のタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物におけるルチンを測定する。測定分析により、ＨＰＬＣクロマトグラムで、本実施例のタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物におけるルチン含量が８０％であることがわかる。
本実施例のタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物は、以下の方法で調製する。
（１）浸出：タカサゴサンシチソウ１００ｇに重量で６０倍量の水を添加して浸出させ、希塩酸で浸出液のｐＨ値を４に調節して反応液を得る。
（２）酵素分解：その後、反応液中に３２ｇの複合酵素（該複合酵素は重量比で１．５：２：３のパパイン、セルラーゼおよびペクチナーゼからなる）を添加して酵素分解を行い、５０℃で１時間強制循環反応させ、吸引ろ過し、ろ液を収集する。
（３）抽出、濃縮：ＺＨ－０１マクロ孔質樹脂を収容した抽出槽中にろ液を添加し、３０℃、１５０ｒｐｍで６時間撹拌して、ろ過する。ＺＨ－０１マクロ孔質樹脂の重量に基づいて、吸着後のＺＨ－０１マクロ孔質樹脂に重量で３０倍量の体積濃度７０％のエタノール溶液を添加する。その後３０℃、１５０ｒｐｍで６時間撹拌し、ろ過して抽出液を得る。抽出液を合わせて、タカサゴサンシチソウのフラボノイド濃度が０．５ｍｇ／ｍＬになるまで抽出液を減圧濃縮し、濃縮液を得る。
（４）単離、精製：濃縮液を８０００ｒｐｍで５分間高速遠心分離し、マクロ孔質樹脂ＸＡＤ－３を収容したクロマトグラフィカラム内に上清液を添加し、６０ｍｉｎ静止吸着させる。体積濃度７０％のエタノール水溶液を用いて、１５ｍ／ｈの速度で溶出し、波長５１０ｎｍで吸光度を測定する。吸光度値を縦座標、溶出時間を横座標として、溶出曲線図を作成し、溶出曲線中の吸収ピーク範囲内の溶出液を収集し、濃縮、凍結乾燥して、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物を得る。
（１）浸出：タカサゴサンシチソウ１００ｇに重量で６０倍量の水を添加して浸出させ、希塩酸で浸出液のｐＨ値を４に調節して反応液を得る。
（２）酵素分解：その後、反応液中に３２ｇの複合酵素（該複合酵素は重量比で１．５：２：３のパパイン、セルラーゼおよびペクチナーゼからなる）を添加して酵素分解を行い、５０℃で１時間強制循環反応させ、吸引ろ過し、ろ液を収集する。
（３）抽出、濃縮：ＺＨ－０１マクロ孔質樹脂を収容した抽出槽中にろ液を添加し、３０℃、１５０ｒｐｍで６時間撹拌して、ろ過する。ＺＨ－０１マクロ孔質樹脂の重量に基づいて、吸着後のＺＨ－０１マクロ孔質樹脂に重量で３０倍量の体積濃度７０％のエタノール溶液を添加する。その後３０℃、１５０ｒｐｍで６時間撹拌し、ろ過して抽出液を得る。抽出液を合わせて、タカサゴサンシチソウのフラボノイド濃度が０．５ｍｇ／ｍＬになるまで抽出液を減圧濃縮し、濃縮液を得る。
（４）単離、精製：濃縮液を８０００ｒｐｍで５分間高速遠心分離し、マクロ孔質樹脂ＸＡＤ－３を収容したクロマトグラフィカラム内に上清液を添加し、６０ｍｉｎ静止吸着させる。体積濃度７０％のエタノール水溶液を用いて、１５ｍ／ｈの速度で溶出し、波長５１０ｎｍで吸光度を測定する。吸光度値を縦座標、溶出時間を横座標として、溶出曲線図を作成し、溶出曲線中の吸収ピーク範囲内の溶出液を収集し、濃縮、凍結乾燥して、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物を得る。
計算の結果、本実施例のタカサゴサンシチソウのフラボノイド化合物における抽出率は１．９１％である。
実施例１における「項目Ｂ」に基づいて、本実施例のタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物におけるルチンを測定する。測定分析により、ＨＰＬＣクロマトグラムで、本実施例のタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物におけるルチン含量が８５％であることがわかる。
実験例１ ゼブラフィッシュのアルコール性脂肪肝損傷に対するタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の実験研究
一、実験材料
デジタル位相差倒立顕微鏡（ＩＸ５１ 日本Ｏｌｙｍｐｕｓ）；Ｎｉｋｏｎ ＳＭＺ１８デジタル顕微鏡；全自動生化学分析装置（ＢＳ－２２０深ゼン邁端生物医療電子股フン有限公司）；組織包埋装置（ＢＭＪ－ＩＩＩ常州中威電子儀器廠）；ミクロトーム（ＲＭ２２３５ ドイツＬｅｉｃａ）；スライドウォーマー（ＰＨＹ－ＩＩＩ常州事郊区中威電子機器廠）；マイクロプレートリーダ（ＳＵＮＲＩＳＥ スイスＴｅｃａｎ）；組織ホモジナイザー（ＰＲＯ２００ 米国ＰＲＯ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）；高速冷却遠心分離機（Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ ５８１０Ｒ ドイツＥｐｐｅｎｄｏｒｆ）；逆浸透純水システム（ＲＯ－２００上海和泰儀器有限公司）；ＭＤＡアッセイキット（碧雲天生物技術研究所）；ＳＯＤアッセイキット（碧雲天生物技術研究所）；無水エタノール（西隴化工股フン有限公司）；Ｏｉｌ ｒｅｄ Ｏ オイルレッド染色液（阿拉丁）；ＰＢＳ緩衝溶液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）；プロピレングリコール（西隴化工股フン有限公司）；グリセリン（西隴化工股フン有限公司）；Ｎ－ベンジルチオ尿素（Ｓｉｇｍａ）；トリカインメタンスルホフォナート（Ｓｉｇｍａ）；ポリオキシメチレン（北京拓英坊科技有限公司）；キシレン（西隴化工股フン有限公司）；ヘマトキシリン・エオジン（ＨＥ）。以上の試薬はいずれも分析用試薬である。実験試薬キットは碧雲天生物技術研究所から提供された。
一、実験材料
デジタル位相差倒立顕微鏡（ＩＸ５１ 日本Ｏｌｙｍｐｕｓ）；Ｎｉｋｏｎ ＳＭＺ１８デジタル顕微鏡；全自動生化学分析装置（ＢＳ－２２０深ゼン邁端生物医療電子股フン有限公司）；組織包埋装置（ＢＭＪ－ＩＩＩ常州中威電子儀器廠）；ミクロトーム（ＲＭ２２３５ ドイツＬｅｉｃａ）；スライドウォーマー（ＰＨＹ－ＩＩＩ常州事郊区中威電子機器廠）；マイクロプレートリーダ（ＳＵＮＲＩＳＥ スイスＴｅｃａｎ）；組織ホモジナイザー（ＰＲＯ２００ 米国ＰＲＯ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）；高速冷却遠心分離機（Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ ５８１０Ｒ ドイツＥｐｐｅｎｄｏｒｆ）；逆浸透純水システム（ＲＯ－２００上海和泰儀器有限公司）；ＭＤＡアッセイキット（碧雲天生物技術研究所）；ＳＯＤアッセイキット（碧雲天生物技術研究所）；無水エタノール（西隴化工股フン有限公司）；Ｏｉｌ ｒｅｄ Ｏ オイルレッド染色液（阿拉丁）；ＰＢＳ緩衝溶液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）；プロピレングリコール（西隴化工股フン有限公司）；グリセリン（西隴化工股フン有限公司）；Ｎ－ベンジルチオ尿素（Ｓｉｇｍａ）；トリカインメタンスルホフォナート（Ｓｉｇｍａ）；ポリオキシメチレン（北京拓英坊科技有限公司）；キシレン（西隴化工股フン有限公司）；ヘマトキシリン・エオジン（ＨＥ）。以上の試薬はいずれも分析用試薬である。実験試薬キットは碧雲天生物技術研究所から提供された。
二、実験方法
１、試験薬物の調製
実施１の方法に基づいて、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物を調製し、被験薬物とする。
１、試験薬物の調製
実施１の方法に基づいて、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物を調製し、被験薬物とする。
２、実験動物の飼育および群分け
野生型のゼブラフィッシュ成魚はザン州市花鳥市場から購入した。２８℃の恒温環境において、自動タイマーで実験室を明期１４ｈ、暗期１０ｈに制御し、１週間連続して毎日定時に一定量で給餌し、実験に備えた。実験で用いるゼブラフィッシュ稚魚は、すべて実験室で飼育した野生型のＴＵゼブラフィッシュである。ゼブラフィッシュはＷｅｓｔｅｒｆｉｅｌｄ方法に基づき、養殖する。つまり明期１４ｈ、暗期１０ｈを交互に行い、雌雄は別々に飼育し、毎日定時に新鮮なブラインシュリンプを与える。実験前日の晩に、ＴＵゼブラフィッシュを雌雄１：１で別々に交配タンク中に入れ、仕切り板を挿入する。次の日の朝、仕切り板を抜くと、ゼブラフィッシュは交配、産卵する。卵を２８℃の恒温培養器中に集めて９６ｈｐｆ培養し、期間中は定時に水を換え、死卵を除去し、実験に備える。
野生型のゼブラフィッシュ成魚はザン州市花鳥市場から購入した。２８℃の恒温環境において、自動タイマーで実験室を明期１４ｈ、暗期１０ｈに制御し、１週間連続して毎日定時に一定量で給餌し、実験に備えた。実験で用いるゼブラフィッシュ稚魚は、すべて実験室で飼育した野生型のＴＵゼブラフィッシュである。ゼブラフィッシュはＷｅｓｔｅｒｆｉｅｌｄ方法に基づき、養殖する。つまり明期１４ｈ、暗期１０ｈを交互に行い、雌雄は別々に飼育し、毎日定時に新鮮なブラインシュリンプを与える。実験前日の晩に、ＴＵゼブラフィッシュを雌雄１：１で別々に交配タンク中に入れ、仕切り板を挿入する。次の日の朝、仕切り板を抜くと、ゼブラフィッシュは交配、産卵する。卵を２８℃の恒温培養器中に集めて９６ｈｐｆ培養し、期間中は定時に水を換え、死卵を除去し、実験に備える。
実験の群分けを行うため、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物がゼブラフィッシュのアルコール性脂肪肝損傷を修復する際の最大非致死濃度を選択する。そのため、ゼブラフィッシュの慢性毒性実験における通常の方法に基づいて、ゼブラフィッシュ成魚６０匹を無作為に各群１０匹で５群に分け、別々に飼育する。タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物は１．０％アルコールに溶解し、毎日１回液を交換し、１週間飼育を続ける。通常水で飼育したゼブラフィッシュを対照とする。実験開始後、毎日、実験魚の中毒症状および死亡匹数を記録し、死んだ魚を速やかに除去する。各群の用量は表１に示す通りである。
ゼブラフィッシュ稚魚の急性毒性実験における通常の方法に基づいて、ゼブラフィッシュ稚魚を無作為に各群１８０匹で７群に分け、別々に飼育する。タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物を２．０％アルコールに溶解し、３２ｈ飼育を続け、通常水で飼育したゼブラフィッシュを対照とする。実験開始後は、毎日、実験魚の中毒症状および死亡匹数を記録し、死んだ魚を速やかに除去する。各群の用量は表２に示す通りである。
ゼブラフィッシュ成魚、稚魚をいずれも対照群、モデル群、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の高、中、低用量群である計５群に分ける。ゼブラフィッシュ成魚の高、中、低用量群は、実験開始からそれぞれ相応する薬物濃度で、１．０％アルコール水中に投入して飼育する。期間中は定時に液を交換し、２８ｄ飼育を続け、対照群は通常水で飼育する。ゼブラフィッシュ稚魚の高、中、低用量群は、実験開始からそれぞれ相応する薬物濃度で、２．０％アルコール水中に投入して３２ｈ飼育し、対照群は通常水で飼育する。
３、ゼブラフィッシュ成魚の肝臓指数の測定
各実験群のゼブラフィッシュについて、最後の水交換の後、実験動物を１２ｈ絶食させる。ゼブラフィッシュを屠殺する前に体重を量り、眼球から採血する。各５０匹を１群とし、ブランク対照群、モデル群および実験群の各３つである。採血後すぐに屠殺し、重さを量り、実験に必要な肝臓組織をただちに分離し、肝臓組織の重さを量る。その後ホルマリン固定するか、または液体窒素で保存する。ゼブラフィッシュを屠殺し、サンプリングする順序は図５に示す通りである。
各実験群のゼブラフィッシュについて、最後の水交換の後、実験動物を１２ｈ絶食させる。ゼブラフィッシュを屠殺する前に体重を量り、眼球から採血する。各５０匹を１群とし、ブランク対照群、モデル群および実験群の各３つである。採血後すぐに屠殺し、重さを量り、実験に必要な肝臓組織をただちに分離し、肝臓組織の重さを量る。その後ホルマリン固定するか、または液体窒素で保存する。ゼブラフィッシュを屠殺し、サンプリングする順序は図５に示す通りである。
肝臓指数＝肝湿重量（ｇ）／体重（ｇ）×１００％を用いて、肝臓指数の計算を行う。
４、ゼブラフィッシュにおける血清肝機能の生化学指標の測定
血液を４０００ｒ／ｍｉｎ、４℃で１０ｍｉｎ遠心分離して上清を採取し、全自動生化学分析装置を用いて血清のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、総コレステロール（ＴＣ）、トリグリセリド（ＴＧ）を測定する。上記指標はキットの指示に基づいて全自動生化学分析装置で測定し、さらにキットの使用説明に基づいて肝臓中の抗酸化レベルＳＯＤ、抗ストレスレベルＭＤＡを測定する。
血液を４０００ｒ／ｍｉｎ、４℃で１０ｍｉｎ遠心分離して上清を採取し、全自動生化学分析装置を用いて血清のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、総コレステロール（ＴＣ）、トリグリセリド（ＴＧ）を測定する。上記指標はキットの指示に基づいて全自動生化学分析装置で測定し、さらにキットの使用説明に基づいて肝臓中の抗酸化レベルＳＯＤ、抗ストレスレベルＭＤＡを測定する。
５、ゼブラフィッシュ成魚の肝臓のＨＥ染色
固定した組織サンプルを脱水（脱水順序：７５％エタノール３０ｍｉｎ→９０％エタノール１０ｍｉｎ→９５％エタノール１０ｍｉｎ→９５％エタノール１０ｍｉｎ→１００％エタノール１０ｍｉｎ→１００％エタノール１０ｍｉｎ→１００％エタノール１０ｍｉｎ→キシレンＩ５ｍｉｎ→キシレンＩＩ５ｍｉｎ→キシレンＩＩＩ５ｍｉｎ）後、パラフィン包埋し、４μｍで薄切し、７０℃で３０ｍｉｎスライドを加温する。通常の染色液ヘマトキシリン・エオジン（ＨＥ）で染色し、中性樹脂で封入し、顕微鏡で観察する。
固定した組織サンプルを脱水（脱水順序：７５％エタノール３０ｍｉｎ→９０％エタノール１０ｍｉｎ→９５％エタノール１０ｍｉｎ→９５％エタノール１０ｍｉｎ→１００％エタノール１０ｍｉｎ→１００％エタノール１０ｍｉｎ→１００％エタノール１０ｍｉｎ→キシレンＩ５ｍｉｎ→キシレンＩＩ５ｍｉｎ→キシレンＩＩＩ５ｍｉｎ）後、パラフィン包埋し、４μｍで薄切し、７０℃で３０ｍｉｎスライドを加温する。通常の染色液ヘマトキシリン・エオジン（ＨＥ）で染色し、中性樹脂で封入し、顕微鏡で観察する。
６、ゼブラフィッシュ稚魚の肝臓生化学指標に対してタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物が及ぼす影響の測定
必要とする実験を３２ｈ行った後、対照群、モデル群、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の高、中、低濃度群である計５群に、ゼブラフィッシュ稚魚を各５０匹で無作為に選び、全自動生化学分析装置でゼブラフィッシュ稚魚全体のホモジネートのＡＳＴ、ＡＬＴ含量を測定する。キットの説明に基づいて、ゼブラフィッシュ稚魚全体のホモジネートのＳＯＤ活性およびＭＤＡ含量を測定し、各群で３回繰り返す。データを記録して分析する。
必要とする実験を３２ｈ行った後、対照群、モデル群、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の高、中、低濃度群である計５群に、ゼブラフィッシュ稚魚を各５０匹で無作為に選び、全自動生化学分析装置でゼブラフィッシュ稚魚全体のホモジネートのＡＳＴ、ＡＬＴ含量を測定する。キットの説明に基づいて、ゼブラフィッシュ稚魚全体のホモジネートのＳＯＤ活性およびＭＤＡ含量を測定し、各群で３回繰り返す。データを記録して分析する。
７、データの統計学処理
実験データは平均±標準偏差（ｘ±ｓ）の形式で表し、統計学ソフトＳＰＳＳ１０．０および一元配置分散分析法を採用してデータを分析処理する。Ｐ＜０．０５は有意水準の差を表し、Ｐ＜０．０１は高有意水準の差を表す。
実験データは平均±標準偏差（ｘ±ｓ）の形式で表し、統計学ソフトＳＰＳＳ１０．０および一元配置分散分析法を採用してデータを分析処理する。Ｐ＜０．０５は有意水準の差を表し、Ｐ＜０．０１は高有意水準の差を表す。
三、実験結果
１、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物がゼブラフィッシュのアルコール性脂肪肝損傷を修復する際の最大の非致死濃度の確定
タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物のゼブラフィッシュ成魚に対する慢性毒性実験の結果および急性毒性実験の結果は、表３および表４に示す通りである。表３および表４から、ゼブラフィッシュ成魚に対する１週間の投与期間内に、各群の外観の形態、遊動能力、精神状態を観察すると、いずれも正常で、死亡の記録はないことがわかる。ゼブラフィッシュ稚魚は３２ｈの投与時間内に、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の濃度が０．０８ｍｇ／ｍＬに達する実験群で死亡が起こり、０．１２ｍｇ／ｍＬ群は４ｈで死亡し始め、３２ｈの死亡率は７％で、大規模な死亡は起こらなかった。タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の濃度０．０８ｍｇ／ｍＬ、０．０４ｍｇ／ｍＬ、０．０２ｍｇ／ｍＬを、ゼブラフィッシュ稚魚の実験群における高、中、低用量群の濃度とする。
１、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物がゼブラフィッシュのアルコール性脂肪肝損傷を修復する際の最大の非致死濃度の確定
タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物のゼブラフィッシュ成魚に対する慢性毒性実験の結果および急性毒性実験の結果は、表３および表４に示す通りである。表３および表４から、ゼブラフィッシュ成魚に対する１週間の投与期間内に、各群の外観の形態、遊動能力、精神状態を観察すると、いずれも正常で、死亡の記録はないことがわかる。ゼブラフィッシュ稚魚は３２ｈの投与時間内に、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の濃度が０．０８ｍｇ／ｍＬに達する実験群で死亡が起こり、０．１２ｍｇ／ｍＬ群は４ｈで死亡し始め、３２ｈの死亡率は７％で、大規模な死亡は起こらなかった。タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の濃度０．０８ｍｇ／ｍＬ、０．０４ｍｇ／ｍＬ、０．０２ｍｇ／ｍＬを、ゼブラフィッシュ稚魚の実験群における高、中、低用量群の濃度とする。
２、ゼブラフィッシュ成魚の体重、肝臓重量および肝臓指数に対してタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物が及ぼす影響
ゼブラフィッシュ成魚の体重、肝臓重量および肝臓指数に対してタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物が及ぼす影響は、表５に示す通りである。表５から、正常対照群と比較して、モデル群のゼブラフィッシュ成魚はアルコール処理後に体重が低下し、肝臓重量は上昇し、肝臓指数は顕著に上昇し、有意差を有する（Ｐ＜０．０５）ことがわかり、アルコールが一定程度でゼブラフィッシュに毒性作用を有し、ゼブラフィッシュの肝臓を損傷させることを立証している。モデル群と比較して、様々な濃度のタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物群は、処理後、ゼブラフィッシュの肝臓重量が低下し、体重および肝臓指数はいずれも上昇し、中、高用量群の肝臓指数はモデル群と比較して有意差を有する（Ｐ＜０．０５）。これは、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物がゼブラフィッシュの肝臓指数を改善させる効果が比較的良好であることを表している。
ゼブラフィッシュ成魚の体重、肝臓重量および肝臓指数に対してタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物が及ぼす影響は、表５に示す通りである。表５から、正常対照群と比較して、モデル群のゼブラフィッシュ成魚はアルコール処理後に体重が低下し、肝臓重量は上昇し、肝臓指数は顕著に上昇し、有意差を有する（Ｐ＜０．０５）ことがわかり、アルコールが一定程度でゼブラフィッシュに毒性作用を有し、ゼブラフィッシュの肝臓を損傷させることを立証している。モデル群と比較して、様々な濃度のタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物群は、処理後、ゼブラフィッシュの肝臓重量が低下し、体重および肝臓指数はいずれも上昇し、中、高用量群の肝臓指数はモデル群と比較して有意差を有する（Ｐ＜０．０５）。これは、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物がゼブラフィッシュの肝臓指数を改善させる効果が比較的良好であることを表している。
３、アルコール性脂肪肝のゼブラフィッシュ成魚の血清指標に対してタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物が及ぼす影響
ゼブラフィッシュ血清のアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、総コレステロール（ＴＣ）、トリグリセリド（ＴＧ）含量は、表６に示す通りである。
ゼブラフィッシュ血清のアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、総コレステロール（ＴＣ）、トリグリセリド（ＴＧ）含量は、表６に示す通りである。
表６から、正常対照群と比較して、モデル群ゼブラフィッシュの血清ＡＳＴ、ＡＬＴ活性は有意に上昇し（Ｐ＜０．０５）、ＴＧ指標も明らかに増加し、高有意差に達した（Ｐ＜０．０１）ことがわかり、アルコール飼育はゼブラフィッシュのアルコール性脂肪肝の発症を明らかに促進することを立証している。様々な用量のタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物が添加されたゼブラフィッシュの血清ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＴＣ、ＴＧレベルはいずれも低下する傾向を有し、このうちＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＧはモデル群と比較して有意差を有する（Ｐ＜０．０５）。これは、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物がゼブラフィッシュ体内の血清ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＧの増加を抑制する効果が比較的良好であることを表している。
ゼブラフィッシュ血清および肝臓のＳＯＤ活性およびＭＤＡレベルは、表７に示す通りである。表７から、モデル群ゼブラフィッシュのＳＯＤ活性は対照群より顕著に低下し（Ｐ＜０．０５）、ＭＤＡ含量は顕著に上昇する（Ｐ＜０．０５）ことがわかり、アルコールがゼブラフィッシュの肝臓に対して毒性作用を有し、ゼブラフィッシュの抗酸化能力を低下させ、ゼブラフィッシュ体内の酸化ストレスレベルを低下させることを立証している。モデル群と比較して、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の各用量群は、ＳＯＤ活性がいずれもやや上昇し、このうち中、高用量群のタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の差は有意水準（Ｐ＜０．０５）に達し；タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の各用量群は、いずれもゼブラフィッシュの肝臓ＭＤＡ含量が低下した。これは、アルコールによるゼブラフィッシュのアルコール性脂肪肝に対してタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物が一定の予防治療作用を有することを表している。
４、ゼブラフィッシュ稚魚の肝臓関連の生化学指標に対してタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物が及ぼす影響の測定結果
アルコール性脂肪肝を有するゼブラフィッシュ稚魚のホモジネートのＡＬＴ、ＡＳＴ、ＳＯＤ、ＭＤＡに対してタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物が及ぼす影響は、表８に示す通りである。表８から、対照群と比較して、モデル群はゼブラフィッシュ稚魚のＡＬＴ、ＡＳＴ、ＳＯＤ活性がいずれも明らかに低下し、高有意差に達し（Ｐ＜０．０１）、ＭＤＡは明らかに上昇し、高有意差に達した（Ｐ＜０．０１）ことがわかる。ＡＬＴおよびＡＳＴの変化傾向に関する様々な原因は以下の通りである。前の研究で測定したのは血清中のＡＬＴおよびＡＳＴ活性であり、本実験で測定したのは組織ホモジネート液中のＡＬＴおよびＡＳＴ活性である。モデル群は肝臓を損傷すると、細胞透過性が高くなり、血清中のＡＬＴおよびＡＳＴ活性は高くなる。しかし、動物全体について述べると、肝臓を損傷すると、肝細胞のＡＬＴおよびＡＳＴ合成能力は低下するため、ＡＬＴおよびＡＳＴの総活性は低下する。異なる視点から、アルコールがＡＬＴおよびＡＳＴに対して影響を及ぼすことを説明している。
アルコール性脂肪肝を有するゼブラフィッシュ稚魚のホモジネートのＡＬＴ、ＡＳＴ、ＳＯＤ、ＭＤＡに対してタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物が及ぼす影響は、表８に示す通りである。表８から、対照群と比較して、モデル群はゼブラフィッシュ稚魚のＡＬＴ、ＡＳＴ、ＳＯＤ活性がいずれも明らかに低下し、高有意差に達し（Ｐ＜０．０１）、ＭＤＡは明らかに上昇し、高有意差に達した（Ｐ＜０．０１）ことがわかる。ＡＬＴおよびＡＳＴの変化傾向に関する様々な原因は以下の通りである。前の研究で測定したのは血清中のＡＬＴおよびＡＳＴ活性であり、本実験で測定したのは組織ホモジネート液中のＡＬＴおよびＡＳＴ活性である。モデル群は肝臓を損傷すると、細胞透過性が高くなり、血清中のＡＬＴおよびＡＳＴ活性は高くなる。しかし、動物全体について述べると、肝臓を損傷すると、肝細胞のＡＬＴおよびＡＳＴ合成能力は低下するため、ＡＬＴおよびＡＳＴの総活性は低下する。異なる視点から、アルコールがＡＬＴおよびＡＳＴに対して影響を及ぼすことを説明している。
タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の各用量群は、いずれもアルコール性脂肪肝のゼブラフィッシュのＡＬＴ、ＡＳＴ、ＳＯＤ活性をやや上昇させることができる。タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物が、効果的にゼブラフィッシュ稚魚の肝臓の正常な成長発育を保護するか、または肝損傷を修復することができ、稚魚の肝臓肥大、脂肪滴の蓄積症状を軽減し、肝細胞のＡＳＴおよびＡＬＴ合成能力を高めるため、ＡＳＴおよびＡＬＴの総活性がやや上昇することを立証している。このうち高用量群のタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物は、ＡＬＴ活性が上昇して高有意水準に達し（Ｐ＜０．０１）、中用量群のタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物は、ＡＬＴ活性が上昇して有意水準に達した（Ｐ＜０．０５）。高用量群、中用量群のタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物は、ＡＳＴ活性が上昇して有意水準に達し（Ｐ＜０．０５）；各用量群のタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物は、ＳＯＤレベルが一定程度に上昇し、ＭＤＡレベルは一定程度に低下する。以上の結果は、アルコールによるゼブラフィッシュ稚魚のアルコール性脂肪肝に対してタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物が一定の予防治療作用を有し、ゼブラフィッシュ体内の自己ストレスの程度を軽減させることを表している。
四、実験の結論
タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物が肝保護効果を有しているかどうかをより深いレベルで探求するため、本実験は新規のゼブラフィッシュのアルコール性脂肪肝モデルを採用する。該モデルはサンプル量が多く、実験技術の操作は簡単で、実験周期が短く、浪費が少ないなどの利点を有する。
タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物が肝保護効果を有しているかどうかをより深いレベルで探求するため、本実験は新規のゼブラフィッシュのアルコール性脂肪肝モデルを採用する。該モデルはサンプル量が多く、実験技術の操作は簡単で、実験周期が短く、浪費が少ないなどの利点を有する。
実験結果は以下を表している。ゼブラフィッシュ成魚の実験において、モデル群と比較して、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の各用量群は、肝臓重量および肝臓指数がいずれも一定程度に低下し、モデル群のゼブラフィッシュ血清中のＡＳＴ、ＡＬＴ、ＴＣ、ＴＧ含量を低下させることができ、ゼブラフィッシュ体内の細胞損傷の状況を軽減させる。ＳＯＤ活性レベルを上昇させ、ゼブラフィッシュの抗酸化能力を高め、ＭＤＡレベルを引き下げることにより、ゼブラフィッシュ体内の酸化ストレスレベルを低下させる。ゼブラフィッシュ稚魚の生化学指標は、タカサゴサンシチソウの各抽出物群がゼブラフィッシュ稚魚全体のホモジネートにおけるＡＬＴ、ＡＳＴ、ＳＯＤ活性を高めることができ、肝細胞のＡＳＴおよびＡＬＴ合成能力を高め、ＭＤＡレベルを低下させることを示している。各投与群のうちタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物における高用量群（０．０８ｍｇ／ｍＬ）の効果が最も良好であり、本実験において、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物は、アルコール性肝損傷に対して効果的に保護効果を発揮することができ、肝保護の薬効作用を有することがわかる。タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物は、アルコール性肝損傷を治療する薬物の調製に、薬力学研究の基礎を提供する。
上記実施例は実施した例を明確に説明したに過ぎず、実施方式を限定するものでないことは明らかである。当業者は、上記説明を基に、その他の様々な形式の変更または修正を行うこともできる。ここでは、すべての実施方式を網羅する必要はなく、することもできない。これから派生した明らかな変更または修正は、依然として本発明の保護の範囲内である。
Claims (4)
- 以下の工程
（１）浸出：タカサゴサンシチソウに浸出溶媒である水を前記タカサゴサンシチソウおよび前記水の重量比が１：（２０～６０）となるように添加して浸出させ、浸出液のｐＨ値を４～８に調節して反応液を得る；
（２）酵素分解：その後、反応液中に、３つの重量比が、（０．５～１．５）：（２～５）：（１～３）もしくは１：３：２であるパパイン、セルラーゼおよびペクチナーゼからなる複合酵素を、前記複合酵素および前記タカサゴサンシチソウの重量比が１：５～１：３となるように添加して酵素分解を行い、３０～５０℃で１～４時間強制循環反応させ、吸引ろ過し、ろ液を収集する；
（３）抽出、濃縮：ろ液をマクロ孔質樹脂Ａで抽出し、抽出液を合わせて濃縮し、濃縮液を得る；
（４）単離、精製：濃縮液を遠心分離し、上清液をマクロ孔質樹脂Ｂで単離精製し、波長５１０ｎｍで吸光度を測定し、溶出溶媒を体積濃度７０～８０％のエタノール水溶液、溶出速度を５～２５ｃｍ／ｍｉｎとして、溶出液を収集して、前記濃縮液におけるタカサゴサンシチソウのフラボノイド濃度が０．５ｍｇ／ｍＬとなるように濃縮、乾燥させ、フラボノイド抽出物を得る；
を含む、タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の調製方法であって、
当該フラボノイド抽出物は、重量百分率で８０～８５％のルチンを含有する、アルコール性脂肪肝を治療する薬品もしくは健康製品の調製におけるタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の調製方法。 - 前記マクロ孔質樹脂Ａが、ＡＢ－８、ＤＭ－１３０から選択される少なくとも１つである、請求項１に記載のタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の調製方法。
- 前記マクロ孔質樹脂Ｂが、Ｄ－１０１、ＨＰ－２１から選択される少なくとも１つである、請求項１または２に記載のタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の調製方法。
- 活性成分として、通常の工程に基づき、通常の添加剤が添加されて得られる、臨床的に許容可能な錠剤、カプセル剤、散剤、配合剤、丸剤、顆粒剤、シロップ、貼付剤、坐剤、スプレー、軟膏または注射剤に製造されうることを特徴とする、請求項１～３のいずれか１項に記載の調製方法で得られたタカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物の調製方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710840987.1A CN107582588A (zh) | 2017-09-18 | 2017-09-18 | 一种白凤菜总黄酮提取物及其制备方法与治疗酒精性脂肪肝的用途 |
| CN201710840987.1 | 2017-09-18 | ||
| PCT/CN2018/101164 WO2019052308A1 (zh) | 2017-09-18 | 2018-08-17 | 白凤菜总黄酮提取物及其制备方法和在制备与酒精性脂肪肝相关的药品或保健品中的用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2020534357A JP2020534357A (ja) | 2020-11-26 |
| JP7166344B2 true JP7166344B2 (ja) | 2022-11-07 |
Family
ID=61047288
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2020537271A Active JP7166344B2 (ja) | 2017-09-18 | 2018-08-17 | タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物、ならびにその調製方法およびアルコール性脂肪肝を治療する用途 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11185566B2 (ja) |
| JP (1) | JP7166344B2 (ja) |
| KR (1) | KR20200055766A (ja) |
| CN (1) | CN107582588A (ja) |
| TW (1) | TW201919680A (ja) |
| WO (1) | WO2019052308A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107582589A (zh) * | 2017-09-18 | 2018-01-16 | 漳州片仔癀药业股份有限公司 | 一种白凤菜总黄酮提取物及其制备方法与治疗高尿酸血症的用途 |
| CN107582587A (zh) | 2017-09-18 | 2018-01-16 | 漳州片仔癀药业股份有限公司 | 一种白凤菜总黄酮提取物及其制备方法与治疗非酒精性脂肪肝的用途 |
| CN114681500B (zh) * | 2022-03-14 | 2023-06-02 | 西藏藏医药大学 | 一种普尔那总黄酮提取物及其应用 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002524522A (ja) | 1998-09-15 | 2002-08-06 | コリア リサーチ インスティチュート オブ バイオサイエンス アンド バイオテクノロジー | 高血中脂質濃度に因る疾患の予防または治療のための、ルチンおよびケルセチンを含む組成物 |
| CN101100683A (zh) | 2006-09-08 | 2008-01-09 | 颜廷和 | 甙元型黄酮生物转化及纯化技术 |
| CN101953866A (zh) | 2010-08-25 | 2011-01-26 | 中国人民解放军南京军区福州总医院 | 一种白背三七总黄酮的制备方法及应用 |
| CN102228534A (zh) | 2011-05-13 | 2011-11-02 | 天津桥洲酒业有限公司 | 一种从山楂果中提取黄酮的方法 |
| CN104151380A (zh) | 2014-06-22 | 2014-11-19 | 北京安德益源生物科技有限公司 | 一种高纯度芦丁的制备方法 |
| TW201600098A (zh) | 2014-06-30 | 2016-01-01 | 中山醫學大學 | 一種荷葉萃取物用於製備預防或治療酒精性脂肪肝炎病變之醫藥組合物的用途 |
| JP2020537686A (ja) | 2017-09-18 | 2020-12-24 | ▲ザン▼州片仔▲ファン▼薬業股▲フン▼有限公司 | タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物、ならびにその調製方法および非アルコール性脂肪肝を治療する用途 |
| JP2020537538A (ja) | 2017-09-18 | 2020-12-24 | ▲ザン▼州片仔▲ファン▼薬業股▲フン▼有限公司 | タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物、ならびにその調製方法および高尿酸血症を治療する用途 |
-
2017
- 2017-09-18 CN CN201710840987.1A patent/CN107582588A/zh active Pending
-
2018
- 2018-08-17 JP JP2020537271A patent/JP7166344B2/ja active Active
- 2018-08-17 KR KR1020207011229A patent/KR20200055766A/ko not_active Application Discontinuation
- 2018-08-17 WO PCT/CN2018/101164 patent/WO2019052308A1/zh active Application Filing
- 2018-09-18 TW TW107132767A patent/TW201919680A/zh unknown
-
2020
- 2020-03-17 US US16/821,306 patent/US11185566B2/en active Active
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002524522A (ja) | 1998-09-15 | 2002-08-06 | コリア リサーチ インスティチュート オブ バイオサイエンス アンド バイオテクノロジー | 高血中脂質濃度に因る疾患の予防または治療のための、ルチンおよびケルセチンを含む組成物 |
| CN101100683A (zh) | 2006-09-08 | 2008-01-09 | 颜廷和 | 甙元型黄酮生物转化及纯化技术 |
| CN101953866A (zh) | 2010-08-25 | 2011-01-26 | 中国人民解放军南京军区福州总医院 | 一种白背三七总黄酮的制备方法及应用 |
| CN102228534A (zh) | 2011-05-13 | 2011-11-02 | 天津桥洲酒业有限公司 | 一种从山楂果中提取黄酮的方法 |
| CN104151380A (zh) | 2014-06-22 | 2014-11-19 | 北京安德益源生物科技有限公司 | 一种高纯度芦丁的制备方法 |
| TW201600098A (zh) | 2014-06-30 | 2016-01-01 | 中山醫學大學 | 一種荷葉萃取物用於製備預防或治療酒精性脂肪肝炎病變之醫藥組合物的用途 |
| JP2020537686A (ja) | 2017-09-18 | 2020-12-24 | ▲ザン▼州片仔▲ファン▼薬業股▲フン▼有限公司 | タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物、ならびにその調製方法および非アルコール性脂肪肝を治療する用途 |
| JP2020537538A (ja) | 2017-09-18 | 2020-12-24 | ▲ザン▼州片仔▲ファン▼薬業股▲フン▼有限公司 | タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物、ならびにその調製方法および高尿酸血症を治療する用途 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| International Immunopharmacology，2017年，Vol. 49，pp. 132-141 |
| J. Sci. Food Agric.，2005年，Vol. 85，pp. 615-621 |
| Journal of Systematics and Evolution，2011年，Vol. 49, No. 4，pp. 285-314 |
| The Journal of Nutrition，2011年，Vol. 141，pp. 1062-1069 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US11185566B2 (en) | 2021-11-30 |
| TW201919680A (zh) | 2019-06-01 |
| CN107582588A (zh) | 2018-01-16 |
| JP2020534357A (ja) | 2020-11-26 |
| KR20200055766A (ko) | 2020-05-21 |
| US20200215140A1 (en) | 2020-07-09 |
| WO2019052308A1 (zh) | 2019-03-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7166344B2 (ja) | タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物、ならびにその調製方法およびアルコール性脂肪肝を治療する用途 | |
| JP7166345B2 (ja) | タカサゴサンシチソウのフラボノイド抽出物、ならびにその調製方法および高尿酸血症を治療する用途 | |
| CN101505764B (zh) | 具有2型糖尿病及其慢性并发症治疗作用的药物组合物 | |
| CN1931270A (zh) | 中药醒酒护肝药剂及其制备方法 | |
| US11266704B2 (en) | Total flavonoid extract from Gynura formosana Kitam., preparation method thereof, and use of same in treating non-alcoholic fatty liver disease | |
| WO2007053865A1 (en) | Pharmaceutical use of a compound | |
| CN106389879B (zh) | 一种金钗石斛生物总碱的应用 | |
| WO2008145064A1 (fr) | Procédé d'obtention d'un extrait contenant du séquoyitol à partir d'une espèce du genre trifolium, de soja et de ginkgo biloba, et utilisation de celui-ci | |
| CN107349244B (zh) | 丙二酰基人参皂苷的提取方法 | |
| CN102225088B (zh) | 杜仲木脂素在制备防治高血压肾损害药物上的应用 | |
| KR100979459B1 (ko) | 근육세포에서 포도당 흡수를 증가시키는 데이츄 추출물과이로부터 분리한 4ｈ-크로멘-4-온 유도체 | |
| CN101336964A (zh) | 一种具有降血糖活性的桑皮提取物及其制备方法 | |
| TWI438001B (zh) | 用於治療糖尿病之植物萃取物及其製備方法 | |
| CN107513092B (zh) | 一种丙二酰基人参皂苷Rb1的制备方法及其医用用途 | |
| CN102641342A (zh) | 一种治疗肾病的中药提取物和制备方法 | |
| US10064908B2 (en) | Method for preventing, improving or treating liver disease | |
| Nandhini et al. | Antidiabetic effect of Mallotus philippinensis in streptozotocin induced diabetic rats | |
| Akhand et al. | Sub-chronic oral administration of the ethanolic extracts of dried Terminalia chebula mature fruits in streptozotocin (STZ)-induced type 2 diabetes mellitus (T2DM) model of Long-Evans (LE) rats improve glycemic, lipidemic and anti-oxidative status | |
| CN109985206A (zh) | 用于防治酒精性肝损伤的组合物 | |
| CN103800389A (zh) | 一种Sarcodon leucopus中降糖活性成分及其制备方法与应用 | |
| CN113694103B (zh) | 不含甘草酸的中药提取物、制备方法、药物制剂及用途 | |
| CN106420932A (zh) | 一种增加胰岛素敏感性的组合物及其应用 | |
| CN116392526A (zh) | 一种具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的黄山楂提取物制备方法与应用 | |
| CN118178585A (zh) | 一种治疗高尿酸血症、痛风制剂的制备方法及其应用 | |
| KR101448466B1 (ko) | 3-카페오일-4-다이하이드로카페오일 퀴닉산을 함유하는 지방간 또는 비만의 예방 또는 치료용 조성물 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200901 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210914 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20211213 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220214 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220301 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220601 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20220602 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20221004 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20221025 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7166344 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |