JP7148579B2 - ペプチド産生のための融合パートナー - Google Patents
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Description
末端融合パートナーは、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:61、またはSEQ ID NO:62で説明されるアミノ酸配列を有するP.fluorescens FklBタンパク質である。実施形態では、N末端融合パートナーは、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:63、またはSEQ ID NO:64で説明されるアミノ酸配列を有するP.fluorescens FrnEタンパク質である。実施形態では、N末端融合パートナーは、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、またはSEQ ID NO:67で説明されるアミノ酸配列を有するP.fluorescens EcpDタンパク質である。実施形態では、組み換え融合タンパク質中の切断部位は、以下からなる群の中の切断酵素によって認識される:エンテロキナーゼ;トリプシン、因子Xa;および、フューリン。請求項1~15のいずれかの組み換え融合タンパク質であって、リンカーはアフィニティータグを含む。ある実施形態では、アフィニティータグは以下から選択される:ポリヒスチジン;FLAGタグ;mycタグ;GSTタグ;MBPタグ;カルモジュリン・タグ;HAタグ;E-タグ;S-タグ;SBPタグ;Softag 3;V5タグ;および、VSVタグ。実施形態では、リンカーは以下から選択されるアミノ酸配列を有する:SEQ ID NO:9;SEQ ID NO:10;SEQ ID NO:11;SEQ ID NO:12;および、SEQ ID NO:226。実施形態では、対象のポリペプチドはhPTH1-34であり、組み換え融合タンパク質は、以下から選択されたアミノ酸配列を含む:SEQ ID NO:45;SEQ ID NO:46;および、SEQ ID NO:47。実施形態では、対象のポリペプチドの等電点は、N末端融合パートナーの等電点より少なくとも約1.5倍高い。実施形態では、対象のポリペプチドの分子量は、組み換え融合タンパク質の分子量の約10%~約50%を構成する。
<参照による組み込み>
本出願はヌクレオチド配列SEQ ID NO:1-237を含み、これらのヌクレオチド配列は請求項の前に配列表で列挙される。
本発明は、細菌発現系における対象の組み換えポリペプチドを過剰発現するための組み換え融合タンパク質と、組み換え融合タンパク質を発現するための構築物と、組み換え融合タンパク質、および溶解可能な形態の対象の組み換えポリペプチドを高収率で産生するための方法とに関する。実施形態では、本発明の方法は、精製後に0.5g/Lを越える組み換え融合タンパク質の産生を可能にする。実施形態では、本発明の方法は、変性濃度のカオトロピック剤を使用することなく高収率の組み換え融合タンパク質を産生する。実施形態では、本発明の方法は、任意のカオトロピック剤を使用することなく高収率の組み換え融合タンパク質を産生する。
図1で一般に例証されるように、本発明の組み換え融合タンパク質は3つのドメインを含む。左から、融合タンパク質はN末端融合パートナー、リンカー、および対象のポリペプチドを含み、ここで、リンカーはN末端融合パートナー間にあり、対象のポリペプチドはリンカーへのC末端である。実施形態では、リンカー配列はプロテアーゼ切断部位を含む。実施形態では、対象のポリペプチドはリンカー内のプロテアーゼ切断部位の切断によって組み換え融合タンパク質から解放することができる。
対象のC末端ポリペプチド、対象の組み換えポリペプチド、およびC末端融合パートナーとも呼ばれる、組み換え融合タンパク質の対象のタンパク質またはポリペプチドは、溶解可能な形態および高収率で発現されることも目的としたポリペプチドである。実施形態では、対象のポリペプチドは、例えば、タンパク質分解、低発現レベル、貧弱なフォールディング、および/または宿主細胞からの貧弱な分泌により、細菌発現系において高収率で発現しないことが分かっている異種のポリペプチドである。対象のポリペプチドは小ペプチドまたは急速に分解するペプチド、分解に弱いN末端を有するタンパク質、および微生物または細菌発現系において不溶性形態で典型的に産生されるタンパク質を含む。実施形態では、対象のポリペプチドのN末端は分解から保護されるが、N末端融合パートナーに縮合し、高い収率のN-末端の未処置のタンパク質をもたらす。実施形態では、異種のポリペプチドは、微生物または細菌発現系において高収率で溶解可能な形態で発現しないと記載されている。例えば、実施形態では、異種のポリペプチドは、E. coli、B. subtilis、or L.plantarum、L.casei、L. fermentum or Corynebacterium glutamicum 宿主細胞において高収率で溶解可能な形態で発現しないと記載されている。実施形態では、対象のポリペプチドは、真核生物のポリペプチドであるか、または真核生物のポリペプチド(例えば、そのアナログである)に由来する。実施形態では、対象のポリペプチドは、哺乳類のポリペプチドであるか、または哺乳類のポリペプチドに由来する。実施形態では、対象のポリペプチドはヒト・ポリペプチドであるか、またはヒト・ポリペプチドに由来する。実施形態では、対象のポリペプチドは原核生物のポリペプチドであるか、または原核生物のポリペプチドに由来する。実施形態では、対象のポリペプチドは微生物のポリペプチドであるか、または微生物のポリペプチドに由来する。実施形態では、対象のポリペプチドは細菌のポリペプチドであるか、または細菌のポリペプチドに由来する。「非相同」によって、対象のポリペプチドは発現宿主細胞以外の生命体に由来することを意味する。実施形態では、対象の融合タンパク質および/またはポリペプチドは、別の微生物の発現系の場合よりも高い収率で本発明の方法によってPseudomonad 宿主細胞(つまり、ほぼPseudomonadales程度の宿主細胞)中で産生される。実施形態では、対象の融合タンパク質またはポリペプチドは、実質的に比較可能な条件下で、E. coliあるいは他の微生物または細菌発現系、例えば、上に列挙した発現系のときよりも高い収率で、例えば、およそ1.5倍からおよそ10倍まで、およそ1.5倍、およそ2倍、およそ2.5倍、およそ3倍、およそ5倍、またはおよそ10倍以上で、本発明の方法にしたがって、Pseudomonad、Pseudomonas、または、Pseudomonas fluorescensの発現系で産生される。実施形態では、融合タンパク質またはC末端ポリペプチドは、0.5グラム/リットル未満、0.4グラム/リットル未満、0.3グラム/リットル未満、0.2グラム/リットル未満、または0.1グラム/リットル未満の収率でE. coli 発現系で産生される。
組み換え融合タンパク質のN末端融合パートナーは、細菌発現系を使用して得られた組み換え融合タンパク質の収率を改善する細菌タンパクである。実施形態では、N末端融合パートナーは、細菌の宿主細胞中の組み換え構築物から安定して過剰発現させることができる。実施形態では、対象のポリペプチドの収率および/または溶解性、N末端融合パートナーの存在によって増加または改善される。実施形態では、N末端融合パートナーは、組み換え融合タンパク質の適切なフォールディングを促す。実施形態では、N末端融合パートナーは細菌のフォールディングモジュレーターまたはシャペロンタンパク質である。
対象のポリペプチドの収率は十分な組み換え融合タンパク質の収率に比例する。この割合は、対象のポリペプチドと組み換え融合タンパク質の相対的なサイズ(例えば、アミノ酸中の分子量および/または長さ)に依存する。例えば、融合タンパク質中のN末端融合パートナーのサイズを減少させることで、産生された融合タンパク質の大部分が対象のポリペプチドになる。実施形態では、対象のポリペプチドの収率を最大限にするために、N末端融合パートナーは対象のポリペプチドに対するそのサイズに基づいて選択される。実施形態では、N末端融合パートナーは対象のポリペプチドに対して最小限のサイズ(例えばアミノ酸中のMWまたは長さ)となるように選択される。実施形態では、組み換え融合タンパク質は、対象のポリペプチドの分子量が、組み換え融合タンパク質の分子量の約10%から約50%までを構成するように設計される。実施形態では、対象のポリペプチドの分子量は、組み換え融合タンパク質の分子量の約または少なくとも約10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、35%、40% 45%、または50%を構成する。実施形態では、対象のポリペプチドの分子量は、組み換え融合タンパク質の分子量の約または少なくとも約10%~約50%、11%~約50%、12%~約50%、13%~約50%、14%~約50%、15%~約50%、20%~約50%、25%~約50%、30%~約50% 35%~約50% 40%~約50% 13%~約40%、14%~約40%、15%~約40%、20%~約40%、25%~約40%、30%~約40%、35%~約40%、13%~約30%、14%~約30%、15%~約30% 20%~約30% 25%~約30% 13%~約25%、14%~約25%、15%~約25%、または20%~約25%を構成する。実施形態では、対象のポリペプチドはhPTHであり、対象のポリペプチドの分子量は、組み換え融合タンパク質の分子量の約14.6%を構成する。実施形態では、対象のポリペプチドはhPTHであり、対象のポリペプチドの分子量は、組み換え融合タンパク質の分子量の約13.6%を構成する。実施形態では、対象のポリペプチドはhPTHであり、対象のポリペプチドの分子量は、組み換え融合タンパク質の分子量の約27.3%を構成する。実施形態では、対象のポリペプチドはmet-GCSFであり、対象のポリペプチドの分子量は、組み換え融合タンパク質の分子量の約39%から約72%を構成する。実施形態では、対象のポリペプチドはプロインスリンであり、対象のポリペプチドの分子量は、組み換え融合タンパク質の分子量の約20%から約57%を構成する。
タンパク質(pI)の等電点は、タンパク質が正味電荷を運ばないpHとして定義される。pI値は所定のpHでタンパク質の溶解性に影響を与えることが知られている。そのpIよりも下のpHでは、タンパク質は正味の正電荷を運び、pIよりも上のpHでは、タンパク質は正味の負電荷を運ぶ。タンパク質はこうした等電点(全電荷)によって分離可能である。実施形態では、対象のポリペプチドのpIとN末端融合タンパク質のそれは実質的に異なる。これにより、N末端融合タンパク質から離して対象のポリペプチドの精製を促すことができる。実施形態では、対象のポリペプチドのpIはN末端融合パートナーのそれよりも少なくとも2倍高い。実施形態では、対象のポリペプチドのpIはN末端融合パートナーのそれよりも1.5~3倍高い。実施形態では、対象のポリペプチドのpIは、N末端融合パートナーのそれよりも1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、または3倍以上高い。実施形態では、N末端融合パートナーのpIは、約4、約4.1、約4.2、約4.3、約4.4、約4.5、約4.6、約4.7、約4.8、または約5である。実施形態では、N末端融合パートナーのpIは、約4~約5、約4.1~約4.9、4.2~約4.8、約4.3~約4.7、約4.4~約4.6である。
非天然の宿主細胞(異種タンパク質が天然ではない細胞)中において高収率での異種タンパク質の産生に対する障害は、溶解可能なおよび/または活性な形態の異種タンパク質を産生するために細胞がしばしば十分に備わっていないということである。タンパク質の一次構造はそのアミノ酸配列によって定義されるが、二次構造は、アルファ螺旋またはベータシートの存在により定義され、三次構造は、タンパク質内(例えばタンパク質ドメイン間)のアミノ酸側鎖相互作用によって定義される。異種タンパク質を発現する場合、とりわけ大規模な産生においては、タンパク質そのものの二次と三次構造が決定的に重要である。タンパク質構造のいかなる有意な変化も機能的に不活性な分子、または著しく還元された生物学的活性を備えたタンパク質を産生し得る。多くの症例では、宿主細胞は、活性な異種タンパク質の適切な産生に必要なシャペロンまたはタンパク質フォールディングモジュレーター(PFM)を発現する。しかしながら、使用することができて経済的に満足なバイオテクノロジー製品を産生するのに一般に必要な高いレベルでの発現では、細胞は、異種で発現したタンパク質をプロセシングするために十分な天然タンパク質フォールディングモジュレーターまたはモジュレーターを生成することができないことが多い。
本発明の組み換え融合タンパク質は、N末端融合パートナーと対象のC末端ポリペプチドとの間にリンカーを含む。実施形態では、リンカーは、切断酵素(つまりタンパク質を内部で切断するタンパク分解酵素)によって認識される切断部位を含む。実施形態では、切断部位でのリンカーの切断により、N末端融合パートナーから対象のポリペプチドを分離させる。タンパク分解酵素は、当該技術分野で知られている、または文献、例えば、PCT国際公開第WO 2003/010204「Process for Preparing Polypeptides of Interest from Fusion Polypeptides」、米国特許第5,750,374号「Process for Producing Hydrophobic Polypeptides and Proteins, and Fusion Proteins for Use in Producing Same」、および、米国特許第5,935,824号に記載されている任意のプロテアーゼであり得る。当該文献は全体として参照により本明細書に組み込まれる。
実施形態では、組み換え融合タンパク質をコードする遺伝子断片は、組み換え融合タンパク質を発現するための発現ベクターを生成するために適切な発現プラスミドへ導入される。発現ベクターは例えばプラスミドであり得る。いくつかの実施形態では、組み換え融合タンパク質配列をコードするプラスミドは選択マーカーを含むことができり、プラスミドを維持する宿主細胞は選択的な条件下で成長可能である。いくつかの実施形態では、プラスミドは選択マーカーを含まない。いくつかの実施形態では、発現ベクターは宿主細胞ゲノムへ統合可能である。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、発現した融合タンパク質を細胞質へ導くことが可能な、リンカーとタンパク質とに融合したhPTH1-34をコードする。実施形態では、発現ベクターは、発現した融合タンパク質を周辺質へ導くことが可能な、リンカーとタンパク質とに融合したhPTH1-34をコードする。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、リンカーとP.fluorescensDnaJ様タンパク質とに融合したhPTH1-34をコードする。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、リンカーとP.fluorescens FklBタンパク質とに融合したhPTH1-34をコードする。
本発明は、用いられている宿主細胞における発現のために最適化されたあらゆる配列を含む、融合タンパク質および/またはその個々の成分の各々の任意の適切なコード配列の使用を企図している。細菌の宿主における発現を改善するためにコドンを最適化する方法は、当該技術分野では知られており、文献に記載されている。例えば、Pseudomonas 宿主株中の発現のためのコドンの最適化は、例えば、米国特許出願公開第2007/0292918号「Codon Optimization Method」に記載されており、当該文献は全体として参照により本明細書に組み込まれる。E. coli 中の発現のためのコドン最適化は、例えば、Welch, et al., 2009, PLoS One, “Design Parameters to Control Synthetic Gene Expression in Escherichia coli, 4(9): e7002に記載されており、当該文献は参照により本明細書に組み込まれる。融合タンパク質成分のためのコード配列の非限定的な例が本明細書で提供されているが、しかしながら、いかなる適切な配列も当業者に周知な方法によって必要に応じて生成可能であると考えられている。
本方法に係る対象のポリペプチドを産生するのに役立つ適切な細菌発現系は、本明細書に記載の教示に基づいて当業者によって同定可能である。実施形態では、対象のポリペプチドを含む組み換え融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む発現構築物は、誘導可能な発現ベクターの一部として提供される。実施形態では、発現ベクターで形質転換された宿主細胞が培養され、発現ベクターからの融合タンパク質の発現が引き起こされる。発現ベクターは例えばプラスミドであり得る。実施形態では、発現ベクターは選択マーカーをさらに含む組み換え融合タンパク質コード配列をコードするプラスミドであり、宿主細胞は、プラスミドの維持を可能にする選択的な条件下で成長する。実施形態では、発現構築物は宿主細胞ゲノムへ統合される。実施形態では、発現構築物は、周辺質へ組み換え融合タンパク質を導くことができる分泌信号に融合した組み換え融合タンパク質をコードする。
実施形態では、他の調節要素は組み換え融合タンパク質をコードする発現構築物中に存在する。実施形態では、溶解可能な組み換え融合タンパク質は、産生の間に細胞の細胞質または周辺質のいずれかの中に存在する。融合タンパク質を標的とするのに役立つ分泌リーダーは本明細書に別記される。実施形態では、本発明の発現構築物は、Pseudomonad細胞の細胞質への組み換え融合タンパク質に輸送することができる分泌リーダーに融合した組み換え融合タンパク質をコードする。実施形態では、発現構築物は、Pseudomonad細胞の周辺質に組み換え融合タンパク質を輸送することができる、分泌リーダーに融合した組み換え融合タンパク質をコードする。実施形態では、分泌リーダーは組み換え融合タンパク質から切断される。
実施形態では、分泌シグナルまたはリーダーのコード配列は、組み換え融合タンパク質をコードする配列のN末端に融合している。分泌シグナル配列を使用することで、細菌中の組換えタンパク質の産生を増加させることができる。さらに、多くのタイプのタンパク質は、既知の方法を使用して非効率的に達成される第2の改良を必要とする。分泌リーダーを利用することで、細胞内環境からタンパク質を分泌することにより適切に折り畳まれたタンパク質の収穫を増加させることが可能である。グラム陰性細菌において、細胞質から分泌されたタンパク質は、細胞膜周辺腔に行き着き、外膜に取り付けられて、または細胞外培養液に行き着くことがある。これらの方法は封入体の形成も回避する。細胞膜周辺腔へのタンパク質の分泌は、適切なジスルフィド結合形成(Bardwell et al.,1994, Phosphate Microorg, Chapter 45, 270-5, and Manoil, 2000, Methods in Enzymol. 326:35-47)を促す効果を有する。組換えタンパク質の分泌の他の利点は、タンパク質のより効率的な単離、例えば活性型のタンパク質、封入体の形成の減少、宿主細胞に対する毒性の減少の割合と、溶解可能な形態の組換えタンパク質の割合の増加とによって表される収率の増大をもたらす、タンパク質の適切なフォールディングとジスルフィド結合の形成を含む。対象のタンパク質を培地に排出する可能性があるため、バッチよりも、タンパク質産生用の連続的な培地を潜在的に促すこともできる。
Pseudomonads (つまり、Pseudomonadales順の宿主細胞)と密接に関連する細菌生物を含む細菌の宿主細胞は、本発明の方法を実行する際の使用について企図されている。ある実施形態では、Pseudomonad 宿主細胞はPseudomonas fluorescensである。宿主細胞はE.coli でもあり得る。
本発明の方法を実行するのに役立つ発現株は、本明細書と公開された文献に記載される方法を用いて構築可能である。実施形態では、本発明の方法に役立つ発現株は、1つ以上のP.fluorescensシャペロンまたはフォールディングモジュレータータンパク質を過剰発現するプラスミドを含む。例えば、DnaJ様タンパク質、FrnE、FklB、またはEcpDは発現株中で過剰発現可能である。実施形態では、P.fluorescensフォールディングモジュレーター過剰発現(FMO)プラスミドはClpX、FklB3、FrnE、ClpA、Fkbp、またはppiAをコードする。Fkbpをコードする発現プラスミドの一例はpDOW1384-1である。実施形態では、フォールディングモジュレーターをコードしない発現プラスミドは、発現株へ導入される。これらの実施形態では、プラスミドは、例えばpDOW2247である。実施形態では、本発明の方法においてhPTH融合タンパク質を発現するのに役立つP.fluorescens発現株は、本明細書に別記されるように、STR35970、STR35984、STR36034、STR36085、STR36150、STR36169、STR35949、STR36098、またはSTR35783である。
幾つかの実施形態において、可溶性の組み換え型融合タンパク質を発現するための最適条件を判定するために、高スループットスクリーンが行われ得る。スクリーンにおいて変動し得る条件は、例えば、宿主細胞、宿主細胞の遺伝的背景(例えば、異なるプロテアーゼの欠失)、発現構成物におけるプロモーターのタイプ、組み換え型タンパク質をコードする配列に融合する分泌リーダーのタイプ、増殖温度、誘導プロモーターが使用される場合の誘導におけるOD、lacZプロモーターが使用される場合の誘導に使用されるIPTGの濃度、タンパク質誘導の期間、培養物への誘導剤の添加後の増殖温度、培養物の撹拌の速さ、プラスミド維持のための選択法、容器における培養物の容量、および細胞を溶解する方法を含む。
本発明の発現株は、任意の発酵様式(fermentation format)で培養され得る。例えば、バッチ式、流加式、半連続式、または連続式の発酵モードが本明細書で利用され得る。
提供される本発明の方法に有用な増殖条件は、約4℃から約42℃の温度、および約5.7から約8.8のpHを含み得る。lacZプロモーターを含む発現構築物が使用される場合、発現は、の約0.01mMから約1.0mMの終末濃度で培養物にIPTGを添加することにより誘導され得る。
誘導された宿主細胞の溶解は、未変性条件下で行なわれる。実施形態において、未変性条件は、例えば、細胞ペレットまたはペーストを再懸濁するために、未変性処置の緩衝液の使用を含む。実施形態において、未変性処置の緩衝液は、リン酸ナトリウム、またはトリス緩衝液、グリセロール、および塩化ナトリウムを含む。親和性クロマトグラフィーが固定された金属親和性クロマトグラフィー(IMAC)により行なわれる実施形態において、未変性処置の緩衝液はイミダゾールを含む。実施形態において、未変性処置の緩衝液は、0~50mMのイミダゾールを含む。実施形態において、未変性処置の緩衝液はイミダゾールを含まない。実施形態において、未変性処置の緩衝液は25mMのイミダゾールを含む。実施形態において、未変性処置の緩衝液は、10-30mMのリン酸ナトリウム、またはpH7~9のトリスを含む。実施形態において、未変性処置の緩衝液は、7.3、7.4、または7.5のpHを有する。実施形態において、未変性処置の緩衝液は、2-10%のグリセロールを含む。実施形態において、未変性処置の緩衝液は、50mM~750mMのNaClを含む。実施形態において、細胞ペーストは10-50%の固形物において再懸濁される。実施形態において、未変性処置の緩衝液は、pH7.4で、20mMのリン酸ナトリウム、5%のグリセロール、500mMの塩化ナトリウム、20mMのイミダゾールを含み、20%の固形物において再懸濁される。実施形態において、未変性処置の緩衝液は、pH7.5で、20mMのトリス、50mMのNaClを含み、20%の固形物において再懸濁される。
対象の生成された組み換え型融合タンパク質またはポリペプチドの性質は、当該技術分野で既知の、または文献に記載される任意の方法により評価され得る。実施形態において、タンパク質の変性は、その可溶性に基づき、または、生物活性の欠如あるいは損失により、評価される。多くのタンパク質について、生物活性アッセイは市販で入手可能である。生物活性アッセイは、例えば抗体結合アッセイを含み得る。実施形態において、対象の組み換え型融合タンパク質またはポリペプチドの物理的特性は、当該技術分野で利用可能な方法、例えばクロマトグラフィーおよび分光光度法を用いて行われる。対象のポリペプチドの評価は、ポリペプチドが適切に放出された、例えばそのN末端基が無傷であるという判定を含み得る。
対象の可溶化された組み換え型融合タンパク質またはポリペプチドは、当該技術分野で既知の、または文献中に記載される任意の方法、例えば、サイズ排除、陰イオンまたは陽イオン交換、疎水的相互作用、または親和性クロマトグラフィーなどの、遠心分離方法および/またはクロマトグラフィー方法により、他のタンパク質および細胞破片から分離または精製され得る。実施形態において、可溶化されたタンパク質は、高速液体クロマトグラフィー(FPLC)を使用して精製され得る。FPLCは、様々な樹脂に対する親和性に基づいてタンパク質を分離するために使用される液体クロマトグラフィーの形態である。実施形態において、融合タンパク質により発現されたアフィニティータグは、可溶化緩衝液に溶解される融合タンパク質を樹脂に結合させ、その一方で不純物は可溶化緩衝液において行なわれる。後に、溶出緩衝液において、イオン交換樹脂から融合タンパク質を分離し且つ純粋な融合タンパク質を単離するために、溶出緩衝液が、徐々に増大する勾配で使用され、または段階的な方法で添加される。
実施形態において、精製された組み換え型融合タンパク質の画分は、リンカーおよびN末端融合パートナーから対象のポリペプチドを切断するために、切断酵素でインキュベートされる。実施形態において、切断酵素は、プロテアーゼ、例えばセリンプロテアーゼ、例えばウシのエンテロキナーゼ、ブタのエンテロキナーゼ、トリプシン、または本明細書の他の場所に記載されるような他の適切なプロテアーゼである。当該技術分野で既知の、または文献中に記載される任意の適切なプロテアーゼ劈開方法が、使用され得る。プロテアーゼは、例えばSigma-Aldrich (St. Louis, MO)、ThermoFisher Scientific (Waltham, MA)、およびPromega (Madison, WI)から市販で入手可能である。例えば、実施形態において、ウシのエンテロキナーゼ(例えばNovagen cat#69066-3、バッチD00155747)の切断融合タンパク質の精製画分は、20mMのトリス、pH7.4、50mMのNaCl、および2mMのCaCl2を含有する緩衝液の中で濃縮且つ再懸濁され得る。2つの単位のウシのエンテロキナーゼは、100μLの反応物における100μgのタンパク質に添加される。融合タンパク質の精製画分とエンテロキナーゼの混合物は、は適切な長さの時間にわたりインキュベートされる。実施形態において、エンテロキナーゼの無い対象の反応物も、比較のためにインキュベートされる。酵素反応は、4-ベンゼンスルホニルフルオリド塩酸塩(AEBSF、Sigma cat#P8465)を含有する完全なプロテアーゼ阻害剤カクテルの添加により止めることができる。
対象の生成された融合タンパク質および/またはポリペプチドは、タンパク質を特徴化するために、例えばタンパク質の収量または性質の評価のために、当該技術分野で既知の、または文献中に記載される適切なアッセイ方法を使用して、任意の適切な画分において特徴化され得る。
実施形態において、対象のポリペプチドは、リンカー内のプロテアーゼ切断により、完全な組み換え型融合タンパク質から放出される。実施形態において、プロテアーゼによる切断後に得られる対象のポリペプチドは、適切に放出された対象のポリペプチドである。実施形態において、適切に放出されたタンパク質の測定に基づく、または、合計の融合タンパク質に対する対象のポリペプチドの既知の比率に基づき計算された、対象のポリペプチドの収量は、1リットル当たり約0.7グラム~1リットル当たり約25.0グラムである。実施形態において、対象のポリペプチドの収量は、0.5mL~100L、0.5mL、50mL、100mL、1L、2L、またはそれより大きな規模で、約0.5g/L(500mg/L)、約1g/L、約1.5g/L、約2g/L、約2.5g/L、約3g/L、約3.5g/L、約4g/L、約4.5g/L、約5g/L、約6g/L、約7g/L、約8g/L、約9g/L、約10g/L、約11g/L、約12g/L、約13g/L、約14g/L、約15g/L、約16g/L、約17g/L、約18g/L、約19g/L、約20g/L、約21g/L、約22g/L、約23g/L、約24g/L、約25g/L、約0.5g/L~約23g/L、約1g/L~約23g/L、約1.5g/L~約23g/L、約2g/L~約23g/L、約2.5g/L~約23g/L、約3g/L~約23g/L、約3.5g/L~約23g/L、約4g/L~約23g/L、約4.5g/L~約23g/L、約5g/L~約23g/L、約6g/L~約23g/L、約7g/L~約23g/L、約8g/L~約23g/L、約9g/L~約23g/L、約10g/L~約23g/L、約15g/L~約23g/L、約20g/L~約23g/L、約0.5g/L~約20g/L、約1g/L~約20g/L、約1.5g/L~約20g/L、約2g/L~約20g/L、約2.5g/L~約20g/L、約3g/L~約20g/L、約3.5g/L~約20g/L、約4g/L~約20g/L、約4.5g/L~約20g/L、約5g/L~約20g/L、約6g/L~約20g/L、約7g/L~約20g/L、約8g/L~約20g/L、約9g/L~約20g/L、約10g/L~約20g/L、約15g/L~約20g/L、約0.5g/L、約15g/L、約1g/L、約15g/L、約1.5g/L、約15g/L、約2g/L~約15g/L、約2.5g/L~約15g/L、約3g/L~約15g/L、約3.5g/L~約15g/L、約4g/L~約15g/L、約4.5g/L~約15g/L、約5g/L~約15g/L、約6g/L~約15g/L、約7g/L~約15g/L、約8g/L~約15g/L、約9g/L~約15g/L、約10g/L~約15g/L、約0.5g/L~約12g/L、約1g/L~約12g/L、約1.5g/L~約12g/L、約2g/L~約12g/L、約2.5g/L~約12g/L、約3g/L~約12g/L、約3.5g/L~約12g/L、約4g/L~約12g/L、約4.5g/L~約12g/L、約5g/L~約12g/L、約6g/L~約12g/L、約7g/L~約12g/L、約8g/L~約12g/L、約9g/L~約12g/L、約10g/L~約12g/L、約0.5g/L~約10g/L、約1g/L~約10g/L、約1.5g/L~約10g/L、約2g/L~約10g/L、約2.5g/L~約10g/L、約3g/L~約10g/L、約3.5g/L~約10g/L、約4g/L~約10g/L、約4.5g/L~約10g/L、約5g/L~約10g/L、約6g/L~約10g/L、約7g/L~約10g/L、約8g/L~約10g/L、約9g/L~約10g/L、約0.5g/L~約9g/L、約1g/L~約9g/L、約1.5g/L~約9g/L、約2g/L~約9g/L、約2.5g/L~約9g/L、約3g/L~約9g/L、約3.5g/L~約9g/L、約4g/L~約9g/L、約4.5g/L~約9g/L、約5g/L~約9g/L、約6g/L~約9g/L、約7g/L~約9g/L、約8g/L~約9g/L、約0.5g/L~約8g/L、約1g/L~約8g/L、約1.5g/L~約8g/L、約2g/L~約8g/L、約2.5g/L~約8g/L、約3g/L~約8g/L、約3.5g/L~約8g/L、約4g/L~約8g/L、約4.5g/L~約8g/L、約5g/L~約8g/L、約6g/L~約8g/L、約7g/L~約8g/L、約0.5g/L~約7g/L、約1g/L~約7g/L、約1.5g/L~約7g/L、約2g/L~約7g/L、約2.5g/L~約7g/L、約3g/L~約7g/L、約3.5g/L~約7g/L、約4g/L~約7g/L、約4.5g/L~約7g/L、約5g/L~約7g/L、約6g/L~約7g/L、約0.5g/L~約6g/L、約1g/L~約6g/L、約1.5g/L~約6g/L、約2g/L~約6g/L、約2.5g/L~約6g/L、約3g/L~約6g/L、約3.5g/L~約6g/L、約4g/L~約6g/L、約4.5g/L~約6g/L、約5g/L~約6g/L、約0.5g/L~約5g/L、約1g/L~約5g/L、約1.5g/L~約5g/L、約2g/L~約5g/L、約2.5g/L~約5g/L、約3g/L~約5g/L、約3.5g/L~約5g/L、約4g/L~約5g/L、約4.5g/L~約5g/L、約0.5g/L~約4g/L、約1g/L~約4g/L、約1.5g/L~約4g/L、約2g/L~約4g/L、約2.5g/L~約4g/L、約3g/L~約4g/L、約0.5g/L~約3g/L、約1g/L~約3g/L、約1.5g/L~約3g/L、約2g/L~約3g/L、約0.5g/L~約2g/L、約1g/L~約2g/L、または約0.5g/L~約1g/Lである。
タンパク質の「可溶性」および「活性」は、性質に関連するものであるが、通常は異なる方法によって判定される。タンパク質、特に疎水性タンパク質の可溶性は、疎水性アミノ酸残基がフォールドされたタンパク質の外部に誤って位置付けられることを示す。当業者により対象のポリペプチドに適切であると判定されるような方法を使用して評価され得る、タンパク質活性は、適切なタンパク質構造の別の指標である。本明細書で使用されるように、「可溶性の、活性な、またはその両方」は、当業者に既知の方法により、可溶性であり、活性であり、または可溶性且つ活性であると判定されるタンパク質を指す。
この研究を、N末端融合パートナーとしてDNAJ様タンパク質、FklB、またはFrnEを含むhPTH 1-34融合タンパク質を発現する、P.fluorescens株により生成された組み換え型タンパク質のレベルを試験するために行った。
PTH 1-34融合タンパク質発現プラスミドの構築:DNA2.0、遺伝子設計、および合成サービス(Menlo Park, CA)を使用して、PTH 1-34融合タンパク質をコードする遺伝子断片を合成した。各遺伝子断片は、PTH 1-34のためのコード配列と融合される、P.fluorescensのフォールディングモジュレーター(DnaJ様タンパク質、FklB、またはFrnE)、およびリンカーを含んでいた。各遺伝子断片はまた、制限酵素SpeIおよびXhoIのための認識配列、「Hi」リボソーム結合部位、および、コード配列と3つの停止コドンの上流に添加されるリボソーム結合部位および制限部位(SEQ ID NO:58)を含む18の塩基対スペーサーを含んでいた。これらPTH 1-34融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を、SEQ ID NOS:52-57として提供する。
PTH 1-34遺伝子融合フラグメントの設計:PTH 1-34融合タンパク質の高レベル発現を促進するために、P.fluorescensからの3つのフォールディングモジュレーター、即ちDnaJ様タンパク質(SEQ ID NO:2、細胞質シャペロン)、FrnE(SEQ ID NO:3、細胞質PPIase)、およびFklB(SEQ ID NO:4、周辺質PIase)を、高い可溶性発現、25kDa未満の分子量、およびPTH 1-34(8.52の等電位点(pI)を持つ)のものと著しく異なる等電位点(pI)に基づいて選択する。フォールディングモジュレーターの特徴を表8に示す。表8に示されるように、DnaJ様タンパク質、FklB、およびFrnEのpIを、4.6と4.8の間で、PTH 1-34のものから十分に分離した。これにより、イオン交換による即座の分離が可能となった。更に融合タンパク質の精製を支援するために、ヘキサ-ヒスチジンタグをリンカーの中に含めた。リンカーはまた、対象の所望のPTH 1-34ポリペプチドからのN末端融合パートナーの分離を促進するために、エンテロキナーゼ切断部位(DDDDK)を含んでいた。PTH 1-34融合タンパク質のためのアミノ酸配列を、図2A(DnaJ様タンパク質-PTH、SEQ ID NO:45)、2B(FklB-PTH、SEQ ID NO:46)、および2C(FrnE-PTH、SEQ ID NO:47)に示す。リンカーに相当するアミノ酸を強調し、PTH 1-34に相当するものを、図2A、BおよびCにおいてイタリック体で表示する。
実施例Iに記載されるPTH 1-34融合タンパク質を更に、P.fluorescensにおける大規模発現について評価して、PTH 1-34の大規模製造について高生産性の発現株を識別した。この研究においてスクリーンされたP.fluorescens株は、表11と12に列挙される、DnaJ様タンパク質-PTH融合発現株STR35970、STR35984、STR35949、STR36005、STR35985、FklB-PTH融合タンパク質発現株、STR36034、STR36085、STR36098、およびFrnE-PTH融合タンパク質発現株、STR36150、STR36169であった。
MBR発酵:酵母抽出物で補足された培地を含有する振盪フラスコを、選択された株の凍結した培養物のストックで播種した。ミニバイオリアクター(MBR)について、酵母抽出物で補足された化学的特定培地50mLを含有する250mLの振盪フラスコを使用した。振盪フラスコ培養物を30℃で振盪させることで、16~24時間インキュベートした。振盪フラスコ培養物からのアリコートを使用し、MBR(Pall Micro-24)に播種した。pH、温度、および溶解酸素のための制御条件下で、使い捨てのミニバイオリアクターカセットの各10mLのウェルにおいて、4mLの容量でMBR培養物を操作した。培地に含まれる初期量のグリセロールが消耗した時、培養物をIPTGで誘導した。発酵は16時間持続し、サンプルを分析のために集めて、凍結させた。
DnaJ様タンパク質-PTH、FklB-PTH、およびFrnE-PTH融合発現株の発酵評価:表9と10に列挙される、5つの上部発現(top expressing)DnaJ様タンパク質-PTH融合株、3つのFklB-PTH発現株、および2つのFrnE-PTH発現株をそれぞれ、最初にミニバイオリアクター(MBR)の中で、次に従来のバイオリアクター(CBR)の中で、発酵について評価した。
組み換え型エンテロキナーゼ(SEQ ID NO:31)の発現に使用するために、DnaJ様タンパク質、FklB、およびFrnE N末端融合パートナー-エンテロキナーゼ融合タンパク質を設計し、発現構築物を生成した。
実施例Iに記載のものと同様の方法に従い、HTP分析により、組み換え型タンパク質の発現について、実施例IIIに記載される発現株を試験する。
この研究を、N末端融合パートナーとしてDNAJ様タンパク質、EcpD、FklB、FrnEを含むプロインスリン融合タンパク質を発現する、P.fluorescens株により、または、EcpD、FklB、FrnEの切断により生成された組み換え型タンパク質のレベルを試験するために行った。
プロインスリン発現ベクターの構築:プロインスリン(インスリングラルギン)をコードする、最適化された遺伝子断片を、DNA 2.0(Menlo Park, CA)により合成した。遺伝子断片、および該遺伝子断片内に含まれるプロインスリンコード配列によりコードされたプロインスリンアミノ酸配列を、表18に列挙する。各遺伝子断片は、ペプチドAおよびBのコード配列、そして以下4つの異なるグラルギンCペプチド配列の1つを含んでいた:CP-A(MW=9336.94Da;pI=5.2;A+Bグラルギンの65%)、CP-B(MW=8806.42Da;A+Bグラルギンの69%)、CP-C(MW=8749.32Da;A+Bグラルギンの69%)、およびCP-D(MW=7292.67Da;A+Bグラルギンの83%)。プロインスリンコード配列の上流および下流に加えられるSapI制限酵素部位により遺伝子断片を設計することで、様々な発現ベクターへの遺伝子断片の迅速なクローン化を可能した。遺伝子断片はまた、エンテロキナーゼ切断部位またはトリプシン切断部位を含有する発現ベクターへのライゲーションを促進するために、5’フランキング領域内にリジンアミノ酸コドン(AAG)またはアルギニンアミノ酸コドン(CGA)の何れかを含んでいた。加えて、3つの停止コドン(TGA、TAA、TAG)は、遺伝子断片全ての3’フランキング領域内に含まれていた。
表20に示されるように、N末端融合パートナーとしてDnaJ様のタンパク質を有するグラルギン・プロインスリン融合タンパク質は、最も高いレベルのプロインスリン発現を示した。驚くべきことに、EcpD融合パートナーの最も小さなバージョン、50アミノ酸融合パートナーEcpD3を含有しているプロインスリン融合タンパク質は、全長融合パートナーEcpD1および100アミノ酸の切断型バージョンEcpD2と比較して、より高いレベルの発現を示した。FklBまたはFrnEのN末端融合パートナーを含有しているプロインスリン融合タンパク質に関して、最も小さな融合パートナー断片、それぞれ、FklB3およびFrnE3に融合したプロインスリンの発現は、より長いN末端融合パートナーを有している構築物の発現に等しかったかまたはそれよりわずかに低かった。表20は、高スループット発現の研究の間に観察された、可溶性および総合計両方のプロインスリンタンパク質力価を要約している。
DnaJ様タンパク質、N末端融合パートナーとして様々な長さのFklB(FklB、FklB2、またはFklB3)、FrnE(FrnE、FrnE2、またはFrnE3)、またはEcpD(EcpD1、EcpD2、またはEcpD3)を含有しているGCSF融合タンパク質を発現するP.fluorescens株によって生成された、組み換えGCSFタンパク質のレベルを試験するために、本研究を行った。
GCSF発現ベクターの構築:最適化されたgcsfコード配列、コード配列の下流および上流の両方の制限酵素SapIに対する認識配列、およびにコード配列の下流の3つの停止コドンを含有している、GCSF遺伝子断片(SEQ ID NO.68)を、DNA2.0(Menlo Park, CA)によって合成した。プラスミドpJ201:207232のGCSF遺伝子断片を、制限酵素SapIで消化し、最適化されたgcsfコード配列を含有している断片を生成した。その後、gcsfコード配列を、T4DNAリガーゼ(Fermentas EL0011)を使用してGCSF遺伝子断片および発現ベクターのライゲーションにより、異なる融合パートナーを含有している発現ベクターへとサブクローン化し、96ウェルのフォーマットでコンピテントなP.fluorescens DC454の宿主細胞へと電気穿孔した。ヘキサヒスチジンタグを、GCSFからN末端融合パートナーを放出するためにエンテロキナーゼ切断部位(DDDK)とととに、GCSFと各N末端融合パートナーとの間のリンカーに含めた。結果として生じる融合タンパク質構築物を含有しているプラスミドは、表21の3番目の列にリストされている。
N末端Met-GCSFの高レベルの発現を可能にする株を特定するためにプロテアーゼ欠損宿主をスクリーニングする代替策を提供する、融合パートナーでのアプローチを用いて、GCSFの高レベルの発現を、96ウェルのスケールで達成した。融合タンパク質およびGCSFの力価(MWによって総融合タンパク質のパーセントGCSFに基づいて計算された)を、表22に示す。野生型菌株DC454は、484mg/Lの融合タンパク質、およびdnaJ融合パートナーを有する305mg/LのGCSFを生成した。表22に示されるように、融合パートナーの構築物はすべて、100mg/Lを超える融合タンパク質力価をもたらした。HTPスケールで観察されたこれらの高レベルは、振盪フラスコまたは発酵スケールでの発現に対する大きな見込みを示した。さらに、HTPとより大きなスケールの培養物との間の容積力価の著しい増加を観察することは一般的である。従来の研究では、prtBプロテアーゼ欠損株は、0.5mLのスケールで~247mg/LのMet-GCSFの発現を可能にすると示された(H. Jin et al., 2011, Protein Expression and Purification 78:69-77、および米国特許第8,455,218号)。本研究では、記載されるように、融合タンパク質の部分としての高レベルのMet-GCSFの発現は、プロテアーゼ欠損がない宿主細胞でさえ観察された。記載された融合タンパク質のいずれかの部分としての発現およびプロテアーゼ切断による放出によって得られたMet-GCSFの調製は、切断がプロテアーゼの除去後に実行されるため、事実上100%のMet-GCSFを含有する(およびdes-Met-GCSFを含有しない)ことが留意される。
Claims (20)
- 組み換え融合タンパク質であって、
(i)シュードモナス(Pseudomonas)シャペロンまたはフォールディングモジュレータータンパク質である、N末端融合パートナーであって、シュードモナス(Pseudomonas)シャペロンまたはフォールディングモジュレータータンパク質がSEQ ID NO:2の配列を有するシュードモナス・フルオレッセンス(P. fluorescens) DnaJ様タンパク質である、N末端融合パートナーと、
(ii)対象のポリペプチドと、
(iii)N末端融合パートナーと対象のポリペプチドとの間のプロテアーゼ切断部位を含むポリペプチドリンカーと
を含み、
プロテアーゼ切断部位での組み換え融合タンパク質の切断が対象のポリペプチドを放出し、放出された対象のポリペプチドが可溶性である、
組み換え融合タンパク質。 - 対象のポリペプチドは、試薬タンパク質;治療用タンパク質;細胞外の受容体またはリガンド;プロテアーゼ;キナーゼ;血液タンパク質;ケモカイン;サイトカイン;抗体;抗体ベースの薬物;抗体断片;Fc融合タンパク質;抗凝血剤;血液因子;骨形態形成タンパク;改変タンパク質スキャホールド;酵素;成長因子;インターフェロン;インターロイキン;血栓溶解剤;またはホルモン;ヒト抗血友病因子;ヒト抗血友病因子フォンビルブラント因子複合体;抗血友病因子;アルビグルチド;アルグルコシダーゼアルファ;ヒト・アルファ-1プロテアーゼ阻害剤;ボツリヌス毒素タイプB;凝固IX因子Fc融合;凝固IX因子;凝固因子VIIa;凝固XIII因子Aサブユニット;コラゲナーゼ・ヒストリチクス菌;ヒト血小板由来成長因子;アバタセプト;アブシキシマブ;アダリムマブ;アフリベルセプト;アガルシダーゼベータ;アルデスロイキン;アレファセプト;アレムツズマブ;アルグルコシダーゼアルファ;アルテプラーゼ;アナキンラ;オクトコグアルファ;ヒト抗トロンビン;バシリキシマブ;ベラタセプト;ベリムマブ;ベバシズマブ;A型ボツリヌス毒素;C1エステラーゼ阻害剤;カナキヌマブ;セルトリズマブ;セツキシマブ;ダクリズマブ;ダルベポエチンアルファ;デノスマブ;ジゴキシン免疫Fab;ドルナーゼアルファ;エカランチド;エクリズマブ;エタネルセプト;フィブリノゲン;フィルグラスチム;ゴリムマブ;イデュルスルファーゼ;インフリキシマブ;インターフェロンアルファ;インターフェロンアルファ-2b;インターフェロンアルファコン-1;インターフェロンアルファ-2a;インターフェロンアルファ-n3;インターフェロンベータ-1a;インターフェロンベータ-1b;インターフェロンガンマ-1b;イピリムマブ;ラロニダーゼ;エポエチンアルファ;モロクトコグ(Moroctocog)アルファ;ナタリズマブ;オクリプラスミン;オファツムマブ;オマリズマブ;オプレルベキン;パリフェルミン;パリビズマブ;パニツムマブ;ペルツズマブ;ラニビズマブ;ラスブリカーゼ;ラキシバクマブ;レテプラーゼ;リロナセプト;リツキシマブ;ロミプロスチム;サルグラモスチム;テネクテプラーゼ;トシリズマブ;トラスツズマブ;ウステキヌマブ;デシルジン;エンフビルチド;エキセナチド;フォリトロピンベータ;ヒアルロニダーゼ;インスリン、インスリンCペプチド、IGF-1、Glp-1、Glp-2、プラムリンチド、ジコノチド、ベカプレルミン、エンフビルチド、またはネシリチド、インスリンアスパルト;インスリンデグルデク;インスリンデテミル;インスリングラルギン;インスリングルリジン;ヒトインスリン;インスリンリスプロ;インスリンリスプロ・プロタミン;インスリンリスプロ;インスリンを形成するようにプロセシングされるプロインスリン、インスリンデテミルを形成するようにプロセシングされるプロインスリン;インスリンデグルデクを形成するようにプロセシングされるプロインスリン;インスリングラルギンを形成するようにプロセシングされるプロインスリン;インスリングルリジンを形成するようにプロセシングされるプロインスリン;インスリンリスプロを形成するようにプロセシングされるプロインスリン;インスリンリスプロ・プロタミンを形成するようにプロセシングされるプロインスリン;インスリンアスパルトを形成するようにプロセシングされるプロインスリン;ランレオチド;リラグルチド;サーファクシン;メカセルミン;インスリン様増殖因子;ネシリチド;プラムリンチド;テデュグルチド;アボボツリヌストキシンA;アガルシダーゼアルファ;アンセスチム;アニストレプラーゼ;バトロキソビン;カルペリチド;カツマキソマブ;凝固VIII因子;ジボテルミンアルファ;ドロトレコギンアルファ;エドトレオチド;エファリズマブ;エノキサパリンナトリウム;エポエチンデルタ;エプチフィバチド;エプトテルミンアルファ;フォリトロピンアルファ;ホミビルセン;ゴナドレリン;絨毛性ヒト性腺刺激ホルモン;(性腺刺激ホルモン放出ホルモンアゴニスト);イミグルセラーゼ;イソフェンインスリン;レノグラスチム;レピルジン;リペグフィルグラスチム;リキシセナチド;ルトロピンアルファ(ヒトの黄体ホルモン);メポリズマブ;ミリモスチム(マクロファージコロニー刺激因子);モガムリズマブ;顆粒球マクロファージコロニー刺激因子;モンテプラーゼ;オクトレオチド;パミテプラーゼ;パンクレリパーゼ;プラルモレリン(成長ホルモン放出因子ペプチド);プロチレリン;PTH 1-84;rhBMP-2;rhBMP-7;エプトテルミンアルファ;ロムルチド;セルモレリン;ソマトスタチン;ソマトレム;バソプレッシン;デスモプレシン;タリグルセラーゼアルファ;タルチレリン(甲状腺刺激ホルモン放出ホルモンアナログ);タソネルミン;タスポグルチド;トロンボモジュリンアルファ;チロトロピンアルファ;トラフェルミン;ウロキナーゼ;ベラグルセラーゼアルファ;コレラ毒素B;抗血友病因子(エフラロクトコグアルファ);ヒト・アルファ-1プロテアーゼ阻害剤;カプロマブペンデチド;デニロイキンジフチトクス;羊のジゴキシン免疫Fab;エロスルファーゼアルファ;エポエチンアルファ;XIII因子;インフルエンザ赤血球凝集素;インフルエンザノイラミニダーゼ;グルカルピダーゼ;HepB表面抗原;ヒト・アルブミン;インコボツリヌムトキシン(Incobotulinumtoxin);ノフェツモマブ(Nofetumomab);オビヌツズマブ;大腸菌(Escherichia. coli)L-アスパラギナーゼ;エルウィニア(Erwinia)L-アスパラギナーゼ;シュードモナス(Pseudomonas)L-アスパラギナーゼ;ペムブロリズマブ;ラムシルマブ;シルツキシマブ;Tbo-フィルグラスチム;百日咳毒素サブユニットA-E;ウシトロンビン;ヒトトロンビン;トシツモマブ;ベドリズマブ;Ziv-アフリベルセプト;グルカゴン;ソマトロピン;プラスモジウムファルシパルム(Plasmodium falciparum)または三日熱マラリア原虫抗原;牛のエンテロキナーゼ、プラムリンチド、ジコノチド、ベカプレルミン、またはエンフビルチドである、請求項1に記載の組み換え融合タンパク質。
- 対象のポリペプチドは、1から10kDaまたは1から20kDaの分子量を有する小ペプチドである、請求項1または2に記載の組み換え融合タンパク質。
- 対象のポリペプチドは、イーコリ(E.coli)、バチルスサブティリス(B.subtilis)、ラクトバチルスプランタルム(L.plantarum)、ラクトバチルスカゼイ(L.casei)、ラクトバチルスファーメンタム(L.fermentum)またはコリネバクテリウムグルタミクム(Corynebacterium glutamicum)宿主細胞において溶解可能な形態で発現しない、請求項1または2に記載の組み換え融合タンパク質。
- 対象のポリペプチドは小ペプチドまたは急速に分解するペプチドであり、ここで、対象のポリペプチドは、hPTH1-34、Glp1、Glp2、IGF-1 エキセナチド(SEQ ID NO:37)、テデュグルチド(SEQ ID NO:39)、プラムリンチド(SEQ ID NO:40)、ジコノチド(SEQ ID NO:41)、ベカプレルミン(SEQ ID NO:42)、エンフビルチド(SEQ ID NO:43)、およびネシリチド(SEQ ID NO:44)から選択される、請求項1-4のいずれかに記載の組み換え融合タンパク質。
- 対象のポリペプチドは容易に分解するN末端を備えたタンパク質であり、ここで、対象のポリペプチドはN-met-GCSFまたはプラスモジウムファルシパルム(P.falciparum) スポロゾイト周囲タンパクである、請求項1-4のいずれかに記載の組み換え融合タンパク質。
- 対象のポリペプチドは、非可溶性タンパク質として細菌発現系で一般的に発現されるタンパク質であり、ここで、対象のポリペプチドは、インスリンを形成するようにプロセシングされるプロインスリン、インスリンデテミルを形成するようにプロセシングされるプロインスリン;インスリンデグルデクを形成するようにプロセシングされるプロインスリン;インスリングラルギンを形成するようにプロセシングされるプロインスリン;インスリングルリジンを形成するようにプロセシングされるプロインスリン;インスリンリスプロを形成するようにプロセシングされるプロインスリン;インスリンリスプロ・プロタミンを形成するようにプロセシングされるプロインスリン;インスリンアスパルトを形成するようにプロセシングされるプロインスリン;N-met-GCSF、GCSF、またはIFN-βである、請求項1-4のいずれかに記載の組み換え融合タンパク質。
- 対象のポリペプチドはプロインスリンであり、プロインスリンは、インスリンを形成するようにプロセシングされるプロインスリン、インスリンデテミルを形成するようにプロセシングされるプロインスリン;インスリンデグルデクを形成するようにプロセシングされるプロインスリン;インスリングラルギンを形成するようにプロセシングされるプロインスリン;インスリングルリジンを形成するようにプロセシングされるプロインスリン;インスリンリスプロを形成するようにプロセシングされるプロインスリン;インスリンリスプロ・プロタミンを形成するようにプロセシングされるプロインスリン;またはインスリンアスパルトを形成するようにプロセシングされるプロインスリンであり、そしてプロインスリンはSEQ ID NO:97;SEQ ID NO:98;SEQ ID NO:99;および、SEQ ID NO:100から選択されるアミノ酸配列を有するCペプチドを含む、請求項7に記載の組み換え融合タンパク質。
- 切断部位は、エンテロキナーゼ、トリプシン、因子Xa、および、フューリンからなる群の中の切断酵素によって認識される、請求項1-8のいずれかに記載の組み換え融合タンパク質。
- リンカーはアフィニティータグを含む、請求項1-9のいずれかに記載の組み換え融合タンパク質。
- リンカーは、
a.(G4S)1、(G4S)2、(G4S)3、(G4S)4、および(G4S)5から選択されるスペーサー;
b.マルトース結合タンパク質タグ、ポリヒスチジンタグ、FLAGタグ、Mycタグ、HAタグ、およびNusタグから選択されるアフィニティータグ;および
c.エンテロキナーゼ、トリプシン、キモトリプシン、因子Xa、およびフューリンから選択されるプロテアーゼ切断部位
を含む、請求項1-10のいずれかに記載の組み換え融合タンパク質。 - リンカーは、N末端からC末端に、(G4S)2スペーサー配列(SEQ ID NO:59)、ヘキサヒスチジンアフィニティータグ(SEQ ID NO:242)、およびプロテアーゼ切断部位DDDDK(SEQ ID NO:13);N末端からC末端に、(G4S)2スペーサー配列(SEQ ID NO:59)、ヘキサヒスチジンアフィニティータグ(SEQ ID NO:242)、およびプロテアーゼ切断部位RKR;N末端からC末端に、(G4S)2スペーサー配列(SEQ ID NO:59)、ヘキサヒスチジンアフィニティータグ(SEQ ID NO:242)、およびプロテアーゼ切断部位RRR;N末端からC末端に、(G4S)2スペーサー配列(SEQ ID NO:59)、ヘキサヒスチジンアフィニティータグ(SEQ ID NO:242)、およびプロテアーゼ切断部位LVPR;および、SEQ ID NO:226から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項1-11のいずれかに記載の組み換え融合タンパク質。
- 対象のポリペプチドがhPTH1-34であるとき、組み換え融合タンパク質は、SEQ ID NO:45のアミノ酸を含む、請求項1、9、10、11、または12のいずれかに記載の組み換え融合タンパク質。
- 対象のポリペプチドの分子量は、組み換え融合タンパク質の分子量の13%~50%である、請求項1-5および7-13のいずれかに記載の組み換え融合タンパク質。
- 対象のポリペプチドの等電点(pI)はN末端融合パートナーのpIの1.5~3倍である、請求項1-5、7および9-13のいずれかに記載の組み換え融合タンパク質。
- 請求項1-15のいずれかに記載の組み換え融合タンパク質の発現のための発現ベクターであって、前記組み換え融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、発現ベクター。
- 可溶性の対象のポリペプチドを産生する方法であって、
前記方法は、
(i)発現構築物を含む発現ベクターを用いて形質転換された微生物の宿主細胞を培養する工程であって、ここで、発現構築物は請求項1-15のいずれかに記載の組み換え融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、工程と、
(ii)組み換え融合タンパク質を発現するために工程(i)の宿主細胞を誘導する工程と、
(iii)工程(ii)の誘導された宿主細胞中で発現した組み換え融合タンパク質を精製する工程と、
(iv)対象のポリペプチドを放出するためにリンカー中の切断部位を認識する切断酵素を用いるインキュベーションによって工程(iii)の精製された組み換え融合タンパク質を切断する工程であって、それによって可溶性の対象のポリペプチドを得る工程、
を含む、方法。 - 工程(ii)で発現した組み換え融合タンパク質の発現レベルを測定する工程、工程(iii)で精製された組み換え融合タンパク質の量を測定する工程、または適切に放出された工程(iv)で得られた可溶性の対象のポリペプチドの量を測定する工程、あるいはこれらの組み合わせをさらに含む、請求項17に記載の方法。
- 工程(iii)または工程(iv)で得られた可溶性の対象のポリペプチドの量は、0.1g/Lから25g/Lである、請求項18に記載の方法。
- 得られた適切に放出された対象のポリペプチドは、無傷である、請求項19に記載の方法。
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KR102017540B1 (ko) * | 2018-02-14 | 2019-09-03 | 주식회사 펩진 | 융합 폴리펩타이드를 이용하여 글루카곤 유사 펩타이드-1 또는 이의 유사체를 생산하는 방법 |
KR102017542B1 (ko) * | 2018-02-14 | 2019-09-03 | 주식회사 펩진 | 융합 폴리펩타이드를 이용하여 글루카곤 유사 펩타이드-2 또는 이의 유사체를 생산하는 방법 |
KR102009709B1 (ko) * | 2018-02-14 | 2019-08-12 | 주식회사 펩진 | 융합 폴리펩타이드를 이용하여 인간 부갑상선 호르몬 1-84를 생산하는 방법 |
CN108977423A (zh) * | 2018-08-17 | 2018-12-11 | 集美大学 | 一种从猪肺中分离提纯血管紧张素转化酶的方法 |
KR102011291B1 (ko) * | 2018-12-05 | 2019-10-21 | 주식회사 펩진 | 신규한 융합 폴리펩타이드 및 이를 이용하여 인간 부갑상선 호르몬 1-34를 생산하는 방법 |
JP2022514537A (ja) | 2018-12-13 | 2022-02-14 | フヤ バイオサイエンス インターナショナル エルエルシー | 急性心房細動の処置のためのサルカルディン投与 |
CN110305223B (zh) * | 2019-06-26 | 2022-05-13 | 重庆派金生物科技有限公司 | 重组串联融合蛋白制备目标多肽的方法 |
KR20210010366A (ko) * | 2019-07-19 | 2021-01-27 | 주식회사 펩진 | 글루카곤 유사 펩타이드-1 또는 이의 유사체 생산용 융합태그 |
KR20210010368A (ko) * | 2019-07-19 | 2021-01-27 | 주식회사 펩진 | 글루카곤 유사 펩타이드-2 또는 이의 유사체 생산용 융합태그 |
KR20210010367A (ko) * | 2019-07-19 | 2021-01-27 | 주식회사 펩진 | 인간부갑상선호르몬1-34 생산용 융합태그 |
CN113773400B (zh) * | 2020-06-09 | 2023-08-18 | 宁波鲲鹏生物科技有限公司 | 一种门冬胰岛素衍生物及其应用 |
CN113151296B (zh) * | 2021-03-22 | 2022-09-13 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种烟草热激蛋白相关的基因及其应用 |
CN112941058B (zh) * | 2021-04-02 | 2023-12-05 | 重庆科润生物医药研发有限公司 | 一种重组溶组织梭菌ii型胶原酶及其制备方法和应用 |
CN113025599B (zh) * | 2021-04-02 | 2023-09-12 | 重庆科润生物医药研发有限公司 | 一种重组溶组织梭菌i型胶原酶及其制备方法和应用 |
US20230100757A1 (en) * | 2021-06-10 | 2023-03-30 | Pfenex Inc. | Bacterial hosts for recombinant protein expression |
WO2023049631A2 (en) * | 2021-09-09 | 2023-03-30 | Northwestern University | Cell-free methods and compositions comprising tagless therapeutic hormones |
CN114350587B (zh) * | 2022-01-24 | 2023-10-31 | 修实生物医药(南通)有限公司 | 一种基因重组串联表达利那洛肽的工程菌 |
CN115109766A (zh) * | 2022-02-14 | 2022-09-27 | 上海理工大学 | 一种耐高温金属蛋白酶及其编码基因和应用 |
WO2024035782A1 (en) * | 2022-08-10 | 2024-02-15 | Aav Gene Therapeutics, Inc. | Aav-mediated intramuscular delivery of insulin |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005113768A1 (ja) | 2004-05-21 | 2005-12-01 | Takara Bio Inc. | ポリペプチドの製造方法 |
JP2010006745A (ja) | 2008-06-27 | 2010-01-14 | Sekisui Chem Co Ltd | 融合タンパク質、融合タンパク質固定化担体、化合物のスクリーニング方法、スクリーニング用組成物、並びに、スクリーニング用キット |
Family Cites Families (55)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4769326A (en) | 1980-02-29 | 1988-09-06 | The Regents Of The University Of California | Expression linkers |
US4551433A (en) | 1981-05-18 | 1985-11-05 | Genentech, Inc. | Microbial hybrid promoters |
US4755465A (en) | 1983-04-25 | 1988-07-05 | Genentech, Inc. | Secretion of correctly processed human growth hormone in E. coli and Pseudomonas |
US5281532A (en) | 1983-07-27 | 1994-01-25 | Mycogen Corporation | Pseudomas hosts transformed with bacillus endotoxin genes |
US4695455A (en) | 1985-01-22 | 1987-09-22 | Mycogen Corporation | Cellular encapsulation of pesticides produced by expression of heterologous genes |
US4695462A (en) | 1985-06-28 | 1987-09-22 | Mycogen Corporation | Cellular encapsulation of biological pesticides |
GB8517071D0 (en) | 1985-07-05 | 1985-08-14 | Hoffmann La Roche | Gram-positive expression control sequence |
US5013653A (en) | 1987-03-20 | 1991-05-07 | Creative Biomolecules, Inc. | Product and process for introduction of a hinge region into a fusion protein to facilitate cleavage |
US5128130A (en) | 1988-01-22 | 1992-07-07 | Mycogen Corporation | Hybrid Bacillus thuringiensis gene, plasmid and transformed Pseudomonas fluorescens |
US5055294A (en) | 1988-03-03 | 1991-10-08 | Mycogen Corporation | Chimeric bacillus thuringiensis crystal protein gene comprising hd-73 and berliner 1715 toxin genes, transformed and expressed in pseudomonas fluorescens |
US5169760A (en) | 1989-07-27 | 1992-12-08 | Mycogen Corporation | Method, vectors, and host cells for the control of expression of heterologous genes from lac operated promoters |
US7150974B1 (en) | 1991-04-05 | 2006-12-19 | The General Hospital Corporation | Parathyroid hormone receptor binding method |
WO1993006217A1 (en) | 1991-09-19 | 1993-04-01 | Genentech, Inc. | EXPRESSION IN E. COLI OF ANTIBODY FRAGMENTS HAVING AT LEAST A CYSTEINE PRESENT AS A FREE THIOL, USE FOR THE PRODUCTION OF BIFUNCTIONAL F(ab')2 ANTIBODIES |
CA2125467C (en) | 1993-07-06 | 2001-02-06 | Heinz Dobeli | Process for producing hydrophobic polypeptides, proteins or peptides |
US5935824A (en) | 1996-01-31 | 1999-08-10 | Technologene, Inc. | Protein expression system |
CA2198966C (en) | 1996-03-04 | 2011-06-21 | Yuji Suzuki | Method for cleaving chimeric protein using processing enzyme |
JPH1175879A (ja) * | 1997-07-08 | 1999-03-23 | Toyota Central Res & Dev Lab Inc | プロテインジスルフィドイソメラーゼを含有する融合タンパク質をコードするdna |
US5989868A (en) | 1997-09-12 | 1999-11-23 | The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Fusion protein systems designed to increase soluble cytoplasmic expression of heterologous proteins in esherichia coli |
KR100627590B1 (ko) | 1998-01-30 | 2006-09-25 | 다이이치 아스비오파마 가부시키가이샤 | 보조 펩타이드를 사용하는 펩타이드의 제조방법 |
US6242219B1 (en) | 1999-03-18 | 2001-06-05 | Xoma (Us) Llc | Methods for recombinant peptide production |
US6906176B2 (en) | 2000-06-19 | 2005-06-14 | Dyax Corp. | Enterokinase cleavage sequences |
JP2002262873A (ja) | 2001-03-06 | 2002-09-17 | Inst Of Physical & Chemical Res | タンパク質ドメインの製造方法及びその方法により得られたドメインを用いるタンパク質の立体構造解析方法 |
ATE522603T1 (de) | 2001-06-22 | 2011-09-15 | Hoffmann La Roche | Löslicher komplex, der retrovirale oberflächen- glykoproteine und fkpa oder slyd enthält |
JP4088584B2 (ja) | 2001-07-26 | 2008-05-21 | アドバンスド プロテイン テクノロジーズ コーポレイション | 融合タンパク質から目的タンパク質を分離する方法。 |
JP2006506049A (ja) | 2002-07-03 | 2006-02-23 | ダウ グローバル テクノロジーズ インコーポレイティド | ベンゾエート−及びアントラニレート−誘導性プロモーター |
WO2004015111A1 (en) | 2002-08-09 | 2004-02-19 | National Research Council Of Canada | Staphylococcal nuclease fusion proteins for the production of recombinant peptides |
US7208585B2 (en) | 2002-09-18 | 2007-04-24 | Genencor International, Inc. | Protein purification |
US9453251B2 (en) | 2002-10-08 | 2016-09-27 | Pfenex Inc. | Expression of mammalian proteins in Pseudomonas fluorescens |
CA2522221A1 (en) | 2003-04-18 | 2004-10-28 | Sekisui Chemical Co., Ltd. | Immunogen, composition for immunological use, and method of producing a ntibody using the same |
JP2005110591A (ja) | 2003-10-08 | 2005-04-28 | Sekisui Chem Co Ltd | 蛋白質の分離方法 |
KR101237651B1 (ko) | 2003-11-19 | 2013-02-27 | 다우 글로벌 테크놀로지스 엘엘씨 | 개선된 단백질 발현 시스템 |
CA2546157C (en) | 2003-11-21 | 2014-07-22 | Dow Global Technolgies Inc. | Improved expression systems with sec-system secretion |
CA2545024A1 (en) | 2003-11-24 | 2005-06-02 | Novo Nordisk A/S | Fusion proteins and methods of cleavage of such proteins |
EP1709170B1 (en) * | 2004-01-16 | 2018-02-21 | Pfenex Inc. | Expression of mammalian proteins in pseudomonas fluorescens |
WO2006078273A2 (en) * | 2004-04-26 | 2006-07-27 | The United States Of America As Represented By Teh Secretary Of Health And Human Services, Nih | Methods and compositions for producing recombinant proteins |
BRPI0513826A2 (pt) * | 2004-07-26 | 2010-06-22 | Dow Global Technologies Inc | processo para expressão de proteìna melhorada através de engenharia de cepa |
WO2006016370A2 (en) | 2004-08-11 | 2006-02-16 | Ramot At Tel Aviv University Ltd. | Soluble fusion proteins comprising heterologous polypeptides |
KR101312339B1 (ko) | 2005-04-20 | 2013-09-27 | 주식회사 바이로메드 | 융합 단백질 분리를 위한 조성물 및 방법 |
AU2006255060B2 (en) | 2005-06-06 | 2012-08-30 | Pelican Technology Holdings, Inc. | Mannitol induced promoter systems in bacterial host cells |
CN101495644B (zh) | 2006-05-30 | 2012-11-07 | 陶氏环球技术有限责任公司 | 密码子优化方法 |
MX2008015213A (es) | 2006-05-30 | 2008-12-09 | Dow Global Technologies Inc | Metodo de optimizacion de codon. |
EP1873251A1 (en) | 2006-06-29 | 2008-01-02 | Chemotherapeutisches Forschungsinstitut Georg-Speyer-Haus | Expression vector(s) for enhanced expression of a protein of interest in eukaryotic or prokaryotic host cells |
CA2677179C (en) | 2007-01-31 | 2016-02-16 | Dow Global Technologies Inc. | Bacterial leader sequences for increased expression |
EP2142651B1 (en) | 2007-04-27 | 2013-05-22 | Pfenex Inc. | Method for rapidly screening microbial hosts to identify certain strains with improved yield and/or quality in the expression of heterologous proteins |
US9580719B2 (en) | 2007-04-27 | 2017-02-28 | Pfenex, Inc. | Method for rapidly screening microbial hosts to identify certain strains with improved yield and/or quality in the expression of heterologous proteins |
US8298789B2 (en) | 2007-08-09 | 2012-10-30 | Usv Limited | Orthogonal process for purification of recombinant human parathyroid hormone (rhPTH) (1-34) |
US7943733B2 (en) | 2007-12-20 | 2011-05-17 | University Of Southern California | Spacers to increase the expression of recombinant fusion proteins |
EP2127678A1 (en) | 2008-05-26 | 2009-12-02 | Roche Diagnostics GmbH | SlpA as a tool for recombinant protein and enzyme technology |
CN103952425B (zh) | 2008-12-04 | 2017-04-12 | 韩国生命工学研究院 | 大量分泌的蛋白的筛选和它们作为融合配偶体在重组蛋白制备中应用 |
CA2794740C (en) | 2010-04-01 | 2019-12-31 | Pfenex Inc. | Methods for g-csf production in a pseudomonas host cell |
WO2011151714A1 (en) | 2010-06-04 | 2011-12-08 | Lupin Limited | Modified sak gene for the production of recombinant proteins |
AR086250A1 (es) | 2011-05-05 | 2013-11-27 | Hoffmann La Roche | Polipeptido de fusion presentador de una secuencia de aminoacidos y utilizacion del mismo |
US9169304B2 (en) | 2012-05-01 | 2015-10-27 | Pfenex Inc. | Process for purifying recombinant Plasmodium falciparum circumsporozoite protein |
SG11201704362VA (en) | 2014-12-01 | 2017-06-29 | Pfenex Inc | Fusion partners for peptide production |
CA2974343A1 (en) | 2015-02-13 | 2016-08-18 | Sekisui Chemical Co., Ltd. | Nucleic acid, fusion protein, recombined cell, and isoprene or cyclic terpene production method |
-
2015
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2018
- 2018-04-09 HK HK18104633.5A patent/HK1245336A1/zh unknown
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2020
- 2020-09-03 JP JP2020148237A patent/JP7148579B2/ja active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005113768A1 (ja) | 2004-05-21 | 2005-12-01 | Takara Bio Inc. | ポリペプチドの製造方法 |
JP2010006745A (ja) | 2008-06-27 | 2010-01-14 | Sekisui Chem Co Ltd | 融合タンパク質、融合タンパク質固定化担体、化合物のスクリーニング方法、スクリーニング用組成物、並びに、スクリーニング用キット |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Database GenBank [online], Accession No. AFJ56873.1,31-Jan-2014 updated, [retrieved on 24-Oct-2019],Definition: hypothetical protein PflA506_1569 [Pseudomonas fluorescens A506],http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/387161674?sat=21&satkey=2591049 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ES2952405T3 (es) | 2023-10-31 |
KR102353262B1 (ko) | 2022-01-18 |
CN113444183A (zh) | 2021-09-28 |
AU2015355242B2 (en) | 2020-10-08 |
AU2015355242A1 (en) | 2017-06-22 |
HK1245336A1 (zh) | 2018-08-24 |
EP3227455B1 (en) | 2023-07-12 |
US20160159877A1 (en) | 2016-06-09 |
NZ732400A (en) | 2021-07-30 |
KR20170085129A (ko) | 2017-07-21 |
EP3227455A1 (en) | 2017-10-11 |
SG11201704362VA (en) | 2017-06-29 |
TWI702289B (zh) | 2020-08-21 |
BR112017011662A2 (pt) | 2018-02-27 |
JP2017536835A (ja) | 2017-12-14 |
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