JP7138639B2 - 組成物 - Google Patents

Description

本発明は、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られるまたは得ることができる抽出物、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られるまたは得ることができる抽出物を含む組成物、そのような抽出物を提供するためのプロセス、およびそのような抽出物の使用に関する。特に、本発明は、関節炎および関節の炎症等の炎症の治療または予防に使用される抽出物または組成物に関する。

本明細書における明らかに先に公開された文献の列挙または考察は、必ずしもその文書が最新技術の一部であるか、または共通の一般的知識であることを認めるものとして解釈されるべきではない。

炎症は、病原体、組織損傷、または刺激物質等の有害な刺激に対する組織の複雑な生体反応である。それは、傷害性刺激を取り除くと同時に、組織の治癒過程を開始する、組織による防御的な試みである。

典型的な炎症反応では、生化学的事象のカスケードが伝播して炎症反応を成熟させる。白血球等の循環末梢血単核球（ＰＢＭＣ）は、これらの生化学的カスケードにおける重要な細胞である。これらの細胞は、細菌、ウイルス、真菌、マイコプラズマ、および寄生原虫とともに存在する高度に保存された病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を認識する一連の病原体認識受容体（ＰＲＲ）を発現する。

いくつかの生化学分子が炎症または免疫応答に関与している可能性がある。例えば、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）は、全身性炎症に関与するサイトカインであり、炎症の開始に使用される。ある特定の炎症性分子の化学誘引物質であり、その標的細胞において走化性を誘導するインターロイキン８（ＩＬ－８）、ナイーブヘルパーＴ細胞のＴｈ２細胞への分化およびＢ細胞の刺激を誘導するインターロイキン４（ＩＬ－４）、リンパ球または白血球を引き付けるサイトカインであるインターロイキン２（ＩＬ－２）、急性期タンパク質合成および骨髄中の好中球産生に関与するサイトカインであるインターロイキン６（ＩＬ－６）、抗炎症性サイトカインであるインターロイキン１０（ＩＬ－１０）、ならびに炎症の初期発生に関与するサイトカインであるインターロイキン－１α（ＩＬ－１α）およびβ（ＩＬ－１β）等の種々のインターロイキンも関与している可能性がある。

炎症に関連する異常は、様々なヒト疾患（炎症性疾患）の根底にある、多数の無関係の障害の群を含む。炎症性の態様を有する疾患の例として、（限定されないが）喘息、自己免疫疾患、糸球体腎炎、アレルギー（過敏症）、炎症性腸疾患、再灌流傷害、関節炎、腫瘍、神経学的炎症および移植片拒絶が挙げられる。

本明細書で使用される「炎症」という用語は、急性炎症および／または慢性炎症を指し得る。

炎症を治療する試みは、限られた成功しか収めていない。これは、一部には、炎症の病因が、冗長な機構を介して炎症を誘発すると考えられる種々の炎症誘導分子ならびに多数の炎症媒介性分子および感作性分子に一部基づく複雑な反応であるという事実によるものである。

現在使用されている多くの抗炎症薬は、内因性の抗炎症性分子を放出する調節ループも阻害する。例えば、ＮＳＡＩＤは、アラキドン酸からプロスタグランジンおよびロイコトリエンへの変換を触媒する重要な酵素であるシクロオキシゲナーゼの酵素活性をブロックすることによって炎症を軽減する。したがって、ＮＳＡＩＤは、全てのプロスタグランジンの合成を妨げることによって炎症を軽減する。しかしながら、ＮＳＡＩＤは、炎症性プロスタグランジンの合成を妨げるだけでなく、これらの化合物は抗炎症性プロスタグランジンの合成も妨げる。このように、ＮＳＡＩＤは、内因性の抗炎症反応をブロックし、場合によっては慢性炎症を長引かせ得るため、限られた成功しか収めていない。したがって、炎症誘発性反応を優先的に阻害する化合物、組成物、使用、および方法が、炎症の治療にとって非常に望ましいであろう。

本発明者らは、驚くべきことに、そして意外にも、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから、例えば、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓの葉から得られる抽出物が、少なくとも１つの炎症性サイトカインの放出を減少させるおよび／または抑制する活性を含む、強力な抗炎症活性を有することを見出した。これらの効果は、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから、例えば、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓの葉から得られる抽出物が、炎症の治療または予防等の多数の治療的および非治療的使用（例えば、化粧品用途）を有し得ることを示唆している。

Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られるまたは得ることができる抽出物
本発明によれば、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られるまたは得ることができる抽出物が提供される。例えば、抽出物は、Ｒｕｂｕｓ種の他の植物の非存在下で、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られるまたは得ることができてもよい。この抽出物は、これ以降、「本発明の抽出物」と称され得る。

典型的には、本発明の抽出物は、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから、具体的には茎および／または葉等の該植物の地上部から得られるまたは得ることができる抽出物であり得る。例えば、いくつかの態様において、本発明の抽出物は、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓの種子および／または果実からは得られないまたは得ることができない場合がある。例えば、抽出物は、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓの葉のみから得られるまたは得ることができてもよい。

当業者には理解されるように、本明細書で使用される場合、「～から得ることができる」という用語は、抽出物が、植物から得られてもよいかもしくは植物から単離されてもよいこと、または代替の源から、例えば、化学合成もしくは酵素的生産によって得られてもよいことを意味する。一方、本明細書で使用される「得られる」という用語は、抽出物が植物源に直接由来することを意味する。

Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られるまたは得ることができる抽出物は、水性抽出物、アルコール抽出物、または有機抽出物であり得る。場合によっては、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られる水性抽出物とＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られるアルコール抽出物とを組み合わせて、混合Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物を形成してもよい。混合Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物中のアルコール抽出物に対する水性抽出物の比は、２０：１～１：２０、または１：１０～１０：１、例えば１：５～５：１であり得る。

本明細書で使用される「水性抽出物」という用語は、唯一の溶媒として水を用いて植物（植物の地上部等、例えば葉）からの抽出が行われた場合にＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られる抽出物を指す。

本明細書で使用される「アルコール抽出物」という用語は、溶媒としてアルコールを用いて植物（植物の地上部等、例えば葉）からの抽出が行われた場合にＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られる抽出物を指す。アルコール溶媒はアルコールのみ（例えば１００％アルコール）、例えば１００％エタノールからなってもよいか、またはアルコールと水の混合物（水－アルコール溶媒）、例えばエタノールと水の混合物（水－エタノール）溶媒）、例えば、水中約１％～約９９％のアルコール（例えばエタノール）であってもよい。場合によっては、アルコール溶媒は、約３０％のエタノール～約７０％のエタノールを含むかまたはそれからなってもよく、すなわち、約３０／７０～約７０／３０ｖ／ｖのエタノール／水の比を有する。水－アルコール溶媒を用いて抽出物が得られた場合、それは典型的には水－アルコール抽出物と称される。

本明細書で使用される「有機抽出物」という用語は、溶媒としてアルコールではない有機溶媒を用いて植物（植物の地上部等）からの抽出が行われた場合にＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られる抽出物を指す。例えば、有機溶媒は、酢酸、アセトン、アセトニトリル、ベンゼン、１－ブタノール、２－ブタノール、２－ブタノン、四塩化炭素、クロロベンゼン、クロロホルム、シクロヘキサン、１，２－ジクロロエタン、ジエチレングリコール、ジエチルエーテル、ジグリム（ジエチレングリコール、ジメチルエーテル）、１，２－ジメトキシエタン（グリム、ＤＭＥ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、１，４－ジオキサン、酢酸エチル、エチレングリコール、グリセリン、ヘプタン、ヘキサメチルホスホルアミド（ＨＭＰＡ）、ヘキサメチルリン、トリアミド（ＨＭＰＴ）、ヘキサン、メチルｔ－ブチル、エーテル（ＭＴＢＥ）、塩化メチレン、Ｎ－メチル－２－ピロリジノン（ＮＭＰ）、ニトロメタン、ペンタン、石油エーテル（リグロイン）、１－プロパノール、２－プロパノール、ピリジン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、トルエン、トリエチルアミン、ｏ－キシレン、ｍ－キシレンおよびｐ－キシレンからなる群から選択されてもよい。

例えば、本発明の抽出物は、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓの葉から得られるまたは得ることができる水－エタノール抽出物であり得る。

Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られる抽出物は、以下を含み得る：
（ｉ）約１重量％～約４０重量％、例えば、約２重量％～約２０重量％または約２重量％～約１５重量％のフェノール化合物の抽出物（約１重量％～約１０重量％の抽出物、例えば、約２重量％～約８重量％のサングイインＨ６の抽出物を含む）、
（ｉｉ）約０．５重量％～約７重量％の抽出物、例えば、約１重量％～約４重量％のＮ－ヒドロキシケイ皮酸およびエラスティック化合物の抽出物、ならびに
（ｉｉｉ）約１重量％～約１５％の抽出物、例えば、約２重量％～約６重量％のフラボノイド化合物の抽出物。

例えば、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られる水性抽出物は、以下を含み得る：
（ｉ）約１．５重量％～約４０重量％の抽出物、例えば、約２．５重量％～約１５重量％、または約２．５重量％～約１０重量％のフェノール化合物の抽出物、
（ｉｉ）約０．５重量％～約６重量％の抽出物、例えば、約１重量％～約１．５重量％のヒドロキシケイ皮酸およびエラグ酸化合物の抽出物、ならびに
（ｉｉｉ）約１重量％～約１５重量％の抽出物、例えば、約２重量％～約６重量％のフラボノイド化合物の抽出物。

例えば、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られるエタノール抽出物、例えば３０％アルコール抽出物は、以下を含み得る：
（ｉ）約１重量％～約４０重量％の抽出物、例えば、約７．５重量％～約２０重量％または約１０重量％～約１５重量％のフェノール化合物の抽出物（約１重量％～約１０重量％の抽出物、例えば、約２重量％から約８重量％のサングイインＨ６の抽出物を含む）、
（ｉｉ）約０．５重量％～約７重量％の抽出物、例えば、約１重量％～約４重量％のヒドロキシケイ皮酸およびエラグ酸化合物の抽出物、ならびに
（ｉｉｉ）約１重量％～約１５重量％の抽出物、例えば、約２．５重量％～約６重量％のフラボノイド化合物の抽出物。

Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られる抽出物は、フォーリン・チオカルト法を用いて算出した場合、抽出物の約１０重量％～約３０重量％、例えば、約１５重量％～約２５重量％の量の総ポリフェノールも含み得る。

Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られる抽出物中のフェノール化合物は、限定されないが、エラジタンニンファミリーの化合物であるゲラニイン、サングイインＨ１０、ランベルチアニンＣ、およびサングイインＨ６を含む。

特定の例において、本発明の抽出物は、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓの葉からの水－エタノール抽出物（例えば、約３０／７０～約７０／３０ｖ／ｖの比でエタノール／水を用いて得られる水－エタノール抽出物）である。驚くべきことに、本発明者らは、そのような抽出物がある特定の活性化合物の有利な組み合わせを含むことを見出した。

例えば、先に定義された本発明の水－エタノール抽出物は、高濃度（０．２％超、または０．４％超等）のサングイインＨ６を含むことが見出されたが、これは、関節リウマチおよび／または変形性関節症等の状態に関与することが分かっているグランザイムＢ阻害を有することが分かっている。

Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られる抽出物中のヒドロキシケイ皮酸およびエラグ化合物は、限定されないが、クロロゲン酸、ｐ－クマル酸およびエラグ酸を含む。

Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られる抽出物中のフラボノイド化合物は、限定されないが、ケルセチン－３－Ｏ－キシル－グルクロニド、ヒペロシド、ケンフェロールグルコシド、ケルセチン－３－Ｏ－グルクロニド、ケルセチン（Ｃ_２７Ｈ_２８Ｏ_１６）、ケンフェロール、ケンフェロール－３－Ｏ－グルクロニドおよびケンフェロール－３－Ｏ－ガラクトシドを含む。

本明細書において別段の記載のない限り、列挙される重量パーセントは、乾燥形態または液体形態のいずれかで得られた抽出物の総重量に基づく。例えば、いくつかの態様において、列挙される重量パーセントは乾燥抽出物の総重量に基づく。

誤解を避けるために、本発明の所与の態様、特徴またはパラメータについて示される優先度、選択肢、特定の特徴等は、文脈上別段の指示のない限り、本発明の同じまたは他の態様、特徴およびパラメータについて示されるようなありとあらゆる他の優先度、選択肢、特定の特徴等と組み合わせて開示されているとみなされるべきである。

本明細書で使用される「約」という用語は、例えば測定可能な値（反応混合物中の特定の構成成分の量または重量等）を指す場合、規定量の±２０％、±１０％、±５％、±１％、±０．５％、または特に±０．１％の変動を指す。

当業者は、本発明の抽出物が固体形態または液体形態で提供され得ることを理解するであろう。固体形態とは、抽出物が非晶質固体として、または結晶性もしくは部分結晶性の固体として提供され得ることが含まれる。

組成物および投与
本発明の抽出物は、本発明の抽出物と、任意選択に、薬学的にもしくは獣医学的に許容される賦形剤または（機能性）食品に許容される成分とを必要に応じて含む、医薬組成物（医薬製剤とも称され得る）、獣医学的組成物、または機能性食品組成物、例えば、食品、飼料、もしくはペットフード、または食品、飼料、もしくはペットフードサプリメントの形態で提供され得る。

典型的には、本発明の抽出物は、他の植物抽出物の非存在下で組成物中に提供される。例えば、他のＲｕｂｕｓ種および／または他のベリーの抽出物、例えば、ブルーベリー、ブラックベリー、アサイベリー、ラズベリー、ビルベリー、クランベリー、ブラックチョークベリー（アロニアフルーツ）、ゴマの実、ムクロジ、イチゴから得られるまたは得ることができる抽出物の非存在下である。

本明細書で使用される場合、薬学的にまたは獣医学的に許容される賦形剤への言及は、当業者に既知の薬学的にまたは獣医学的に許容されるアジュバント、希釈剤および／または担体を指し得る。

食品に許容される成分は、当該技術分野において既知のもの（本明細書において薬学的に許容される賦形剤とも称されるものを含む）を含み、天然または非天然であってもよい、すなわち、それらの構造は天然に存在してもまたは存在しなくてもよい。ある特定の場合には、それらは天然化合物に由来してもよく、後に修飾することができる（例えばマルトデキストリン）。

「薬学的にまたは獣医学的に許容される」とは、組成物の追加の構成成分が、概して安全で非毒性であり、生物学的にも他の点でも望ましいことを意味する。例えば、追加の構成成分は、概して無菌であり、発熱物質を含まない。そのような構成成分は、本発明の抽出物と相溶性であり、そのレシピエントに有害でないという意味で「許容される」ものでなければならない。したがって、「薬学的に許容される賦形剤」は、賦形剤としてのみ作用することが意図される、すなわち、生物学的活性自体を有することは意図されない製剤の一部を形成するのに使用される任意の化合物（複数可）を含む。

当業者は、本発明の抽出物（例えば、医薬組成物または獣医学的組成物等の組成物の形態）が、患者または対象（例えば、ヒトまたは動物の患者または対象）に任意の好適な経路によって、例えば、経口、直腸、鼻、肺、口腔、舌下、経皮、大槽内、腹腔内、および非経口（皮下、筋肉内、髄腔内、静脈内および皮内を含む）経路によって投与され得ることを理解するであろう。

具体的には、本発明の抽出物は経口投与され得る。そのような場合、本発明による医薬組成物または獣医学的組成物は、経口経路による投与のために特別に処方することができる。

経口投与用の医薬組成物または獣医学的組成物は、硬質または軟質カプセル剤、錠剤、トローチ剤、糖衣錠、丸剤、ロゼンジ剤、散剤および顆粒剤等の固体剤形を含む。必要に応じて、それらは腸溶性コーティング等のコーティングを用いて調製することができるか、または当該技術分野で周知の方法に従って、徐放性放出もしくは持効性放出等の活性成分の放出制御を提供するように製剤化することができる。

経口投与用の液体剤形は、液剤、乳剤、水性または油性懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤を含む。

本明細書に記載される組成物（例えば、医薬組成物または獣医学的組成物または食品組成物）、例えば、経口投与が意図されるもの等は、組成物の構成成分を混合する等の当業者に既知の方法に従って調製されてもよい。

本発明の組成物は、食品成分または薬学的構成成分として、甘味剤、着香剤、着色剤および保存剤等の１つ以上の追加の構成成分を含み得る。本発明の組成物は、錠剤の製造に適した非毒性の薬学的に許容される賦形剤（または成分）と混合して活性成分（複数可）を含み得る。これらの賦形剤（または成分）は、例えば、不活性希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、またはリン酸ナトリウム；造粒および崩壊剤、例えば、トウモロコシデンプン、マルトデキストリン、またはアルギン酸；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチン、またはアカシア；ならびに滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクであってもよい。

本発明の組成物は、コーティングされていなくてもよいか、または胃腸管での崩壊および吸収を遅延させ、それによって長期間にわたる持続作用をもたらすように、既知の技術によってコーティングされていてもよい。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリル等の時間遅延材料が用いられ得る。

好適な薬学的担体または獣医学的担体は、不活性固体希釈剤または充填剤、滅菌水溶液および種々の有機溶媒を含む。固体担体の例は、ラクトース、白土、スクロース、シクロデキストリン、マルトデキストリン、デキストリン、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸マグネシウム、水酸化マグネシウム；ステアリン酸、アラビアゴム、加工デンプンおよびセルロースの低級アルキルエーテル、サッカロース、二酸化ケイ素である。液体担体の例は、シロップ、植物油、リン脂質、脂肪酸、脂肪酸アミン、ポリオキシエチレンおよび水である。さらに、担体または希釈剤は、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリル等の当該技術分野で既知の任意の徐放性材料を、単独でまたはワックスと混合して含むことができる。

さらに、担体または希釈剤は、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリル等の当該技術分野で既知の任意の徐放性材料を、単独でまたはワックスと混合して含むことができる。

本明細書で使用される「担体」という用語は、天然物、またはそれが由来する天然物とは異なるように変換または修飾されている天然由来の生成物を指し得る。

本発明の一態様において、本発明の抽出物は、マルトデキストリンおよび／または二酸化ケイ素を含む組成物中に提供される。

治療されるべき障害および対象、ならびに投与経路に応じて、本発明の抽出物は様々な用量（すなわち、それを必要とする患者に投与される場合の治療有効用量）で投与され得る。これに関して、当業者は、本発明の文脈において哺乳動物、特にヒトに投与される用量は、妥当な期間にわたって哺乳動物に治療反応をもたらすのに十分であるべきことを理解するであろう。当業者は、正確な用量および組成の選択ならびに最も適切な送達計画も、とりわけ、製剤の薬理学的特性、治療される状態の性質および重症度、ならびにレシピエントの健康状態および精神的明瞭性だけでなく、治療を受ける患者の年齢、状態、体重、性別および反応、ならびに疾患の段階／重症度によっても影響を受けることを認識するであろう。

医薬組成物または獣医学的組成物または食品組成物は、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られるまたは得ることができる抽出物を治療有効量で含み得る。本明細書で使用される場合、用語「有効量」は、「治療有効量」、「有効用量」、または「治療有効用量」と同義であり、炎症の治療に関して使用される場合、所望の治療効果を達成するために必要な本発明の抽出物の最小用量を指し、炎症に関連する症状を軽減するのに十分な用量を含む。炎症の治療における有効性は、１つ以上の臨床症状、および／またはその状態に関連する生理学的指標に基づいて、個体における改善を観察することによって決定することができる。炎症の改善は、併用療法の必要性の減少によっても示唆され得る。

特定の炎症のために個体に投与される本発明の抽出物の適切な有効量は、限定されないが、炎症の種類、炎症の位置、炎症の原因、炎症の重症度、所望の緩和の程度、所望の緩和の持続期間、使用される本発明の抽出物の特定の投与量、使用される本発明の抽出物の排泄速度、使用される本発明の抽出物の薬力学、組成物に含まれ得る他の化合物の性質、特定の製剤、特定の投与経路、特定の特徴、患者の病歴および危険因子、例えば、年齢、体重、一般的な健康状態等、またはそれらの任意の組み合わせを含む要因を考慮することにより、当業者によって決定され得る。

さらに、本発明の抽出物の反復投与が用いられる場合、本発明の抽出物の有効量は、限定されないが、投与頻度、本発明の抽出物の半減期、またはそれらの任意の組み合わせを含む要因にさらに依存する。

本発明の使用または方法において、本発明の抽出物は、約１００ｍｇ／日～約２０００ｍｇ／日、または約５００ｍｇ／日から約１５００ｍｇ／日、または約１０００ｍｇ／日の量で投与されてもよい。抽出物が、医薬組成物もしくは獣医学的組成物、例えば、食品、飼料、もしくはペットフードサプリメント、または抽出物を含む食品、飼料、もしくはペットフード組成物の形態で投与される場合、抽出物は上記投与量の抽出物を提供する量で存在するであろう。例えば、食品組成物は、約１００ｍｇ～約２０００ｍｇ、または約５００ｍｇ～約１５００ｍｇ、または約１０００ｍｇの本発明の抽出物を含んでもよく、医薬組成物は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、１００ｍｇ、２５０ｍｇ、５００ｍｇ、１０００ｍｇ、１５００ｍｇまたは２０００ｍｇの本発明の抽出物を含んでもよく、そうすることで、約１００ｍｇ～２０００ｍｇ／日または約５００ｍｇ～約１５００ｍｇ／日、または約１０００ｍｇ／日の本発明の抽出物を提供するために、食品組成物または医薬組成物または獣医学的組成物が１日に１回以上投与され得る。

組成物（例えば、医薬組成物または獣医学的組成物または食品組成物）内に含まれる場合、抽出物は、典型的には、約１重量％～約１００重量％、例えば、約１０重量％～約９０重量％、または約２０重量％～約８０％、または約３０重量％～約重量７０％、または約４０重量％～約６０重量％の量で存在する。

本発明の医薬組成物または獣医学的組成物または食品組成物は、本発明の抽出物と、医薬組成物または獣医学的組成物または食品組成物とからなってもよいか、または本質的になってもよい。

疑念を回避するために、本明細書において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」という用語を使用する場合、記載される抽出物または組成物が、列挙された成分（複数可）を含有しなければならないが、任意選択的に追加の成分を含有してもよいことを意味する。「～から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」または「～から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という用語を使用する場合、記載される抽出物または組成物が、列挙された成分（複数可）を含有しなければならず、かつ少量（例えば、最大５重量％、または最大１重量％もしくは０．１重量％）の他の成分を含有してもよいが、但し、いかなる追加の成分も抽出物または組成物の本質的な特性に影響を与えないことを条件とすることを意味する。「～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」または「～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏｆ）」という用語を使用する場合、記載される抽出物または組成物が、列挙された成分（複数可）のみを含有しなければならないことを意味する。

抽出物を得るためのプロセス
本発明の抽出物は、当業者によって決定され得る、必要な抽出物を選択する分離技術を用いて、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから、具体的には茎および／または葉等のＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓの地上部から得られるまたは得ることができてもよい。種子および／または果実も存在してもよいが、種子および／または果実を含まないＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓの地上部を使用するのが好ましい。

典型的には、本発明の抽出物は、以下に概説されるような抽出および単離プロセス、またはその日常的な改変によって得ることができる。

例えば、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られる抽出物を提供するためのプロセスは、以下のステップを含むと説明することができる：
（ａ）Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓの地上部（茎および／または葉等）を粉砕して粒子にする
（ｂ）粉砕した粒子を溶媒混合物と接触させる
（ｃ）例えば濾過により、粉砕した粒子を溶媒混合物から分離する（および任意選択に、分離した粒子を用いてステップ（ｂ）を繰り返す）
（ｄ）溶媒混合物を蒸発させる、および任意選択的に
（ｅ）ステップ（ｄ）で得られた生成物を乾燥させる。

典型的には、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ、例えば、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓの地上部は、約０．１ｍｍ～約３０ｍｍ、例えば、約０．５ｍｍ～約１５ｍｍ、または約１ｍｍ～約１０ｍｍ等、例えば、約１．５ｍｍ～約５ｍｍの範囲の直径を有する粒子に粉砕される。メッシュ等の当該技術分野で既知の任意の好適な粉砕技術を使用することができる。

接触（抽出）プロセスに使用され得る特定の溶媒は、水、アルコール、アルコール／水混合物（水－アルコール溶媒）、酢酸エチル、アセトン、ヘキサン、または抽出に典型的に使用され得る他の溶媒を含む。例えば、抽出溶媒は、水中１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％のアルコール、例えば、水中３０％のアルコールであり得る。言及され得る特定のアルコールは、エタノール（ＥｔＯＨ）およびメタノール（ＭｅＯＨ）を含む。使用される溶媒は食品グレードであってもまたはそうでなくてもよい。

場合によっては、水－アルコール溶媒は、約３０％のエタノール～約７０％のエタノールを含むかまたはそれからなってもよく、すなわち、約３０／７０～約７０／３０ｖ／ｖのエタノール／水の比を有する。

接触（抽出）ステップ（ステップ（ｂ））の温度は、使用される溶媒に依存し、約２０℃～約１５０℃の範囲であり得る。例えば、抽出のための温度は、約５０℃～約７０℃の範囲であってもよい。抽出のための温度は、抽出に使用される溶媒が還流する温度でもあり得る。

Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓの接触（抽出）は、例えば、液浸により、撹拌を用いてまたは用いずに行われ得る。

Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓの接触（抽出）は、圧力を用いてまたは用いずに行われ得る。

任意の好適な抽出装置が使用され得る。例えば、本発明の抽出物は、ソックスレー装置を用いて抽出されてもよい。

典型的には、抽出プロセスにおいて使用される溶媒に対する植物材料の比は、グラム／ミリリットルベースで約１：１～約１：３０、例えば、約１：３～約１：１５、例えば１：５または１：１０ｗ／ｖと様々である。

接触（抽出）期間（すなわち、植物材料が溶媒と接触している期間）は、典型的には約０．５時間～約２４時間、例えば、約１時間～約１２時間である。あらゆる未溶解の植物材料は、例えば、濾過によって溶媒から除去し、溶媒に再溶解することができる。次いで、接触プロセスが繰り返されてもよい。

接触（抽出）ステップは、必要と思われる場合には、より多くの回数繰り返すことができる。例えば、接触ステップは、２回、３回、または４回繰り返されてもよい。

植物材料と溶媒とを接触させた後、溶媒をあらゆる未溶解の植物材料から（例えば濾過により）分離することができ、固体成分が形成されるまで溶媒（濾液）を濃縮する（すなわち、溶媒を除去する）。例えば、溶媒は、全ての溶媒が除去されて、固体抽出物のみが残るまで濃縮することができる。典型的には、溶媒（濾液）は、約３０％～約７０％ＤＭ（乾燥材料、乾燥物質または乾燥物質）、例えば、約５０％ＤＭに（例えば、回転蒸発によって）濃縮される。得られた固体は、「天然抽出物」と称され得る。

次いで、天然抽出物を約９０％～約９９％、例えば約９７％の％ＤＭまでさらに乾燥することができる。使用され得る乾燥プロセスは、限定されないが、噴霧化、空気乾燥、オーブン乾燥、および天日乾燥を含む。乾燥は、前述のもの等の担体を用いてまたは用いずに行うことができる。例えば、乾燥は、マルトデキストリンを担体として用いて行われてもよい。

起源植物に見られる活性化合物と比較した場合、抽出プロセスによって、抽出物中のある特定の活性化合物が増加し、他の化合物が減少する。

本発明者らは、Ｒｕｂｕｓ ｉｄｅａｕｓを二段階で抽出することに、産業上および経済上の大きな利点があることを見出した。追加の抽出段階を含めることにより、活性化合物の割合を低下させることなく質量収率を増加させる：例えば、以下の表を参照されたい。

２回の抽出段階を用いる場合、１回のみの抽出を用いた場合と比較して、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物の質量収率を１．５倍増加させることができる一方で、ポリフェノールの収率は同じレベルに維持される。

典型的には、得られる固体成分は、約１重量％～約４０重量％、例えば、約２重量％～約２０重量％、または約２重量％～約１５重量％のフェノール化合物と、約０．５重量％～約７重量％、例えば、約１重量％～約４重量％のヒドロキシケイ皮酸およびエラグ酸化合物と、約１重量％～約１５重量％、例えば、約２重量％～約６重量％のフラボノイド化合物とを含んでもよい。

Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られる抽出物は、フォーリン・チオカルト法を用いて算出した場合、抽出物の約１０重量％～約３０重量％、例えば約１５重量％～約２５重量％の量のポリフェノールも含み得る。

典型的には、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られる抽出物を提供するプロセス（すなわち、上記のステップ（ａ）～（ｅ））において、粉砕した粒子は約０．１ｍｍ～３０ｍｍの直径を有する、および／または温度が約２０℃～約１５０℃である、および／または溶媒混合物に対する粉砕した粒子の比は、約１ｇ：１ｍｌ～約１ｇ：８ｍｌである、および／または粉砕粒子は、約０．５時間～約２４時間溶媒混合物と接触する、および／または溶媒混合物は、水、水－アルコール混合物、またはアルコールである。

本明細書で使用される「単離された」および「精製された」という用語は、本発明の抽出物または本発明の抽出物内の化合物が、天然の源、例えばＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓの地上部の抽出物の構成成分とともに存在する少なくとも１つの他の構成成分（例えば、ポリペプチドまたはセルロース誘導体）から分離されていることを指す。例えば、抽出物または抽出物内の化合物は、純粋な形態で、または溶媒、緩衝液、イオン、もしくはその溶液中に通常存在する他の構成成分の存在下で提供され得る。

したがって、「単離された」および「精製された」という用語は、それらがＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから抽出される前の抽出物または抽出物内の化合物を指すものではない。同様に、抽出物という用語は、それらがＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから抽出される前の構成成分（例えば、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓの地上部に存在する場合）ではなく、抽出プロセスを通して得られた天然材料の構成成分を指す。

そのようなプロセスから得られる本発明の抽出物は、
－他の植物材料を実質的に含まない（例えば、植物セルロースを含まない）
－植物細胞を実質的に含まない、および／または
－植物細胞物質を実質的に含まない。

本明細書で使用される場合、別の材料を「実質的に含まない」材料への言及は、その他の材料の１重量％未満（例えば、０．１重量％未満、例えば、０．０１重量％未満または０．００１重量％未満）からなる材料を指し得る。

本発明の抽出物は、前述の本発明のプロセスから得られる（またはそれによって得ることができる）抽出物であり得る。

治療的使用
本発明の抽出物は、病態の治療に有用であり得る特定の生物学的効果を有し得る。したがって、本発明によれば、炎症の治療または予防に使用される本発明の抽出物の使用が提供される。

（図２に示されるように）本発明の抽出物は、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６およびＩＬ－１β等の少なくとも１つの炎症性サイトカインの放出を減少させるおよび／または抑制することができる。

（図３に示されるように）本発明の抽出物は、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸および／またはドコサヘキサエン酸に由来する特異的炎症収束性メディエーターのレベルを増加させることができる。

（例えば、図４、５および６に示されるように）本発明の抽出物は、グランザイムＢ活性を阻害し得る。

グランザイムＢは、細胞アポトーシスを誘導し、軟骨細胞のアポトーシスに関与するセリンプロテアーゼである。グランザイムＢはまた、軟骨プロテオグリカン分解を誘導する。グランザイムＢの血清レベルは、関節リウマチおよび変形性関節症等の状態において増加する。グランザイムＢ陽性細胞は、関節リウマチ患者のパンヌス組織の浸潤前面に存在する。

本発明はまた、関節リウマチおよび／または変形性関節症から生じる炎症等の炎症の治療または予防に使用される、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られるまたは得ることができる抽出物を含む組成物も提供する。

関節リウマチおよび／または変形性関節症から生じる炎症等の炎症を治療または予防するための薬物の製造における、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られるまたは得ることができる抽出物の使用もまた提供される。

治療有効量のＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られるもしくは得ることができる抽出物、またはＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られる抽出物を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、関節リウマチおよび／または変形性関節症から生じる炎症等の炎症を治療または予防するための方法もまた提供される。

炎症症状は、様々な疾患および障害の根底にある、多数の無関係の障害の群と関連し得る。免疫系は、アレルギー反応およびいくつかのミオパチーの両方に示される炎症性疾患にしばしば関与し、多くの免疫系疾患が異常な炎症を引き起こす。本発明の抽出物が治療または予防に使用され得る炎症プロセスに病因が由来する非免疫疾患は、限定されないが、癌、アテローム性動脈硬化症、および虚血性心疾患を含む。症状として炎症を呈する障害の非限定的な例として、限定されないが、ざ瘡、酸逆流／胸やけ、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、アレルギー、アレルギー性鼻炎、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、貧血、虫垂炎、動脈炎、関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化症、自己免疫障害、亀頭炎、眼瞼炎、細気管支炎、気管支炎、水疱性類天疱瘡、熱傷、滑液包炎、癌、心停止、心臓炎、セリアック病、蜂巣炎、子宮頸管炎、胆管炎、胆嚢炎、絨毛羊膜炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、硬変、大腸炎、鬱血性心不全、結膜炎、シクロホスファミド誘発性膀胱炎、嚢胞性線維症、膀胱炎、感冒、涙腺炎、認知症、皮膚炎、皮膚筋炎、糖尿病、糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性潰瘍、消化器系疾患、湿疹、肺気腫、脳炎、心内膜炎、子宮内膜炎、小腸炎、腸炎、上顆炎、精巣上体炎、筋膜炎、線維筋痛症、線維症、結合織炎、胃炎、胃腸炎、歯肉炎、糸球体腎炎、舌炎、心臓病、心臓弁膜症、肝炎、化膿性汗腺炎、ハンチントン病、高脂血症性膵炎、高血圧、回腸炎、感染症、炎症性腸疾患、炎症性心筋症、炎症性神経障害、インスリン抵抗性、間質性膀胱炎、間質性腎炎、虹彩炎、虚血、虚血性心疾患、角膜炎、角結膜炎、喉頭炎、ループス腎炎、乳腺炎、乳様突起炎、メタボリックシンドローム（シンドロームＸ）、片頭痛、多発性硬化症、骨髄炎、心筋炎、筋炎、腎炎、非アルコール性脂肪性肝炎、肥満症、臍炎、卵巣炎、精巣炎、骨軟骨炎、骨減少症、骨髄炎、骨粗鬆症、骨炎、中耳炎、膵炎、パーキンソン病、耳下腺炎、骨盤内炎症性疾患、尋常性天疱瘡、心膜炎、腹膜炎、咽頭炎、静脈炎、胸膜炎、肺炎、多発性嚢胞性腎炎、直腸炎、前立腺炎、乾癬、歯髄炎、腎盂腎炎、門脈炎、腎不全、再潅流傷害、網膜炎、リウマチ熱、鼻炎、卵管炎、サルコイドーシス、唾液腺炎、副鼻腔炎、結腸痙攣、狭窄症、口内炎、脳卒中、手術合併症、滑膜炎、腱炎、腱症、腱鞘炎、血栓性静脈炎、扁桃炎、外傷、外傷性脳損傷、移植片拒絶、膀胱三角部炎、結核、腫瘍、尿道炎、滑液包炎、ぶどう膜炎、膣炎、血管炎、および外陰炎が挙げられる。

本発明において使用される炎症は、組織炎症も含み得る。組織炎症は、特定の組織または臓器に限定された炎症である。本発明の抽出物を用いて治療または予防することができる組織炎症は、限定されないが、皮膚の炎症、筋肉の炎症、腱の炎症、靭帯の炎症、骨の炎症、軟骨の炎症、肺の炎症、心臓の炎症、肝臓の炎症、膵臓の炎症、腎臓の炎症、膀胱の炎症、胃の炎症、腸の炎症、脳の炎症を含む。

炎症は全身性炎症も含み得る。関与するプロセスは、典型的には組織炎症と同一であるが、全身性炎症は特定の組織に限定されるのではなく、実際には内皮および他の臓器系に関与して身体を制圧する。それが感染症によるものである場合、敗血症という用語が適用され、特に細菌性敗血症には菌血症という用語が適用され、特にウイルス性敗血症にはウイルス血症という用語が適用される。血管拡張および臓器機能不全は、敗血症性ショックおよび死に至る可能性がある、広範な感染症に関連する深刻な問題である。

本発明において使用される炎症は、自己免疫障害も含み得る。自己免疫疾患は、各疾患の主な臨床病理学的特徴に応じて、全身性および臓器特異的な自己免疫障害に大別される。全身性自己免疫疾患は、限定されないが、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群、強皮症、関節リウマチおよび多発性筋炎を含む。局所性自己免疫疾患は、内分泌学的（１型糖尿病、橋本甲状腺炎、アジソン病等）、皮膚科学的（尋常性天疱瘡）、血液学的（自己免疫性溶血性貧血）、神経学的（多発性硬化症）であり得るか、または体組織の実質的にあらゆる境界明瞭な腫瘤を含み得る。自己免疫障害の種類は、限定されないが、急性播種性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、アレルギーまたは過敏症、筋萎縮性側索硬化症、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、関節炎、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳炎、自己免疫性膵炎、水疱性類天疱瘡、セリアック病、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、１型糖尿病（ＩＤＤＭ）、子宮内膜症、線維筋痛症、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギランバレー症候群（ＧＢＳ）、橋本甲状腺炎、化膿性汗腺炎、特発性血小板減少性紫斑病、炎症性腸疾患、間質性膀胱炎、狼瘡（円板状エリテマトーデス、薬物性エリテマトーデス、ループス腎炎、新生児ループス、亜急性皮膚エリテマトーデス、および全身性エリテマトーデスを含む）、モルフェア、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症、ミオパチー、ナルコレプシー、神経性筋強直症、天疱瘡尋常性、悪性貧血、原発性胆汁性肝硬変、再発性播種性脳脊髄炎（多相性播種性脳脊髄炎）、リウマチ熱、統合失調症、強皮症、シェーグレン症候群、腱鞘炎、血管炎および白斑を含む。

本発明において使用される炎症は、ミオパチーも含み得る。ミオパチーは、免疫系が筋肉の構成要素を不適切に攻撃した場合に引き起こされ、筋肉の炎症をもたらす。ミオパチーは、炎症性ミオパチーおよび自己免疫性ミオパチーを含むミオパチーは、限定されないが、皮膚筋炎、封入体筋炎、および多発性筋炎を含む。

本発明において使用される炎症は、血管炎も含み得る。血管炎は、白血球遊走およびその結果もたらされる損傷による、静脈（静脈炎）、動脈（動脈炎）および毛細血管等のリンパ管および血管を含む血管壁の炎症を特徴とする多様な疾患の群である。炎症は、体内のあらゆる場所で、あらゆるサイズの血管に影響を及ぼし得る。それは動脈および／または静脈のいずれかに影響を及ぼし得る。炎症は限局性であり得る（血管内の単一の位置が影響を受けることを意味する）か、あるいは炎症は広範に及ぶ場合があり、特定の臓器もしくは組織全体に炎症の領域が点在するか、またはさらには体内の１つより多くの臓器系が影響を受ける。血管炎は、限定されないが、バージャー病（閉塞性血栓性血管炎）、脳血管炎（中枢神経系血管炎）、チャーグ・ストラウス動脈炎、クリオグロブリン血症、本態性クリオグロブリン血症性血管炎、巨細胞性（側頭）動脈炎、ゴルファー血管炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、過敏性血管炎（アレルギー性血管炎）、川崎病、顕微鏡的多発動脈炎／多発性血管炎、結節性多発動脈炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）、リウマチ性血管炎、高安動脈炎、ウェゲナー肉芽腫症、および例えば全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、再発性多発性軟骨炎、ベーチェット病等の結合組織障害または他の結合組織障害に続発する血管炎、ウイルス感染に続発する血管炎を含む。

本発明において使用される炎症は、皮膚障害も含み得る。皮膚障害は、限定されないが、挫瘡（尋常性挫瘡を含む）、水疱性類天疱瘡、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および慢性光線過敏性皮膚炎を含む）、アトピー性湿疹、接触性湿疹、乾燥性湿疹、脂漏性湿疹、発汗障害、円盤状湿疹、静脈性湿疹、疱疹状皮膚炎、神経皮膚炎、および自家感作性皮膚炎等の湿疹、ならびに、うっ滞性皮膚炎、化膿性汗腺炎、扁平苔癬、乾癬（尋常性乾癬、爪乾癬、滴状乾癬、頭皮乾癬、インバース乾癬、膿疱性乾癬、紅皮症乾癬、および乾癬性関節炎を含む）、酒さ、ならびにモルフェアを含む強皮症を含む。

本発明において使用される炎症は、胃腸障害も含み得る。胃腸障害は、限定されないが、過敏性腸疾患、クローン病ならびに潰瘍性直腸炎、左側大腸炎、全大腸炎、および劇症性大腸炎等の潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患を含む。

本発明において使用される炎症は、心血管疾患も含み得る。ＬＤＬコレステロールが動脈壁に埋め込まれると、免疫応答を引き起こし得る。慢性炎症は、最終的に動脈を損傷する可能性があり、それによって動脈を破裂させ得る。心血管疾患は、心臓自体および／または血管系、特に心臓に出入りする静脈および動脈に影響を及ぼす多くの特定の疾患のいずれかである。限定されないが、高血圧症、心内膜炎、心筋炎、心臓弁機能障害、うっ血性心不全、心筋梗塞、糖尿病性心臓異常、血管炎症（例えば動脈炎、静脈炎、血管炎）、動脈閉塞性疾患（例えば動脈硬化症および狭窄症）、炎症性心肥大、末梢動脈疾患、動脈瘤、塞栓症、解離、偽動脈瘤、血管奇形、血管性母斑、血栓症、血栓性静脈炎、静脈瘤、脳卒中を含む、６０種類を超える循環器疾患が存在する。心臓に影響を及ぼす循環器疾患の症状は、限定されないが、胸部痛または胸部不快感（狭心症）、片腕もしくは両腕、左肩、首、顎、または背中の痛み、息切れ、めまい、心拍数増加、悪心、異常な心拍、疲労感を含む。脳に影響を及ぼす循環器疾患の症状は、限定されないが、特に身体の片側における顔面、腕、もしくは脚の突然の痺れもしくは脱力、発話もしくは会話理解の突然の混乱もしくは困難、片眼もしくは両目で見ることの突然の困難、突然のめまい、歩行困難、またはバランスもしくは協調の喪失、突然の原因不明の重度頭痛を含む。脚、骨盤および／または腕に影響を及ぼす循環器疾患の症状は、限定されないが、筋肉の疼痛、痛み、またはけいれんである跛行、および、特に夜間の足またはつま先の冷え感またはしびれ感を含む。

本発明において使用される炎症は、癌も含み得る。炎症は、腫瘍周辺の微小環境を統制し、増殖、生存、および移動に寄与する。例えば、繊維素性炎症は、血管透過性の大幅な増加から生じ、フィブリンが血管を通過することを可能にする。癌細胞等の適切な凝固促進性刺激が存在する場合、繊維素性浸出物が沈着する。これは一般に漿液腔において見られ、漿液膜の間で繊維素性浸出物の瘢痕への転換が起こる場合があり、それらの機能を制限する。別の例において、癌は、ＮＦ－κＢ誘導性炎症性癌等の炎症性癌である。

本発明において使用される炎症は、薬理学的に誘発される炎症も含み得る。ある種の薬物または外因性化学物質は炎症に影響を及ぼすことが知られている。例えば、ビタミンＡ欠乏症は炎症反応の増加を引き起こす。コカインおよびエクスタシー等のある種の違法薬物は、炎症に密接に関与する転写因子（例えばＮＦ－κＢ）を活性化することによってそれらの有害作用の一部を発揮し得る。

本発明において使用される炎症は、感染症も含み得る。感染性生物は、循環器系またはリンパ系を介して直接的な組織の境界から流出することができ、身体の他の部分に拡散し得る。急性炎症の作用によって該生物が封じ込められない場合、近傍のリンパ管を介してリンパ系に侵入し得る。リンパ管の感染症はリンパ管炎として知られており、リンパ節の感染症はリンパ節炎として知られている。病原体は、循環器系へのリンパ排出を通して血流に侵入し得る。感染症は、限定されないが、細菌性膀胱炎、細菌性脳炎、パンデミックインフルエンザ、ウイルス性脳炎、およびウイルス性肝炎（Ａ型、Ｂ型、およびＣ型）を含む。

本発明において使用される炎症は、組織または臓器の損傷も含み得る。組織または臓器の損傷は、限定されないが、熱傷、裂傷、創傷、穿刺、または外傷を含む。

本発明において使用される炎症は、移植片拒絶も含み得る。移植片拒絶は、移植レシピエントの免疫系が移植臓器または組織を攻撃するために、移植臓器または組織がレシピエントの身体に受け入れられない場合に起こる。適応免疫応答である移植片拒絶は、Ｔ細胞媒介性および体液性の両方の免疫（抗体）機構によって媒介される。移植片拒絶は、超急性拒絶反応、急性拒絶反応、または慢性拒絶反応として分類することができる。移植臓器または組織の慢性拒絶反応は、移植組織に対する十分に理解されていない慢性炎症反応および免疫応答に起因する拒絶反応である。「移植片拒絶」という用語には、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）も含まれる。ＧＶＨＤは、同種骨髄移植の一般的な合併症であり、移植骨髄中の機能的な免疫細胞がレシピエントを「異物」であると認識し、免疫学的攻撃を開始する。ある特定の状況下では輸血中にもそれが起こり得る。ＧＶＨＤは急性型と慢性型に分けられる。急性ＧＶＨＤと慢性ＧＶＨＤとは、異なる免疫細胞サブセット、異なるサイトカインプロファイル、いくらか異なる宿主標的に関与しており、治療に対する反応が異なると考えられる。

本発明において使用される炎症は、Ｔｈ１媒介性炎症性疾患も含み得る。良好に機能している免疫系において、免疫応答は、免疫刺激に対応するのに適した、バランスのとれた炎症誘発性Ｔｈ１応答および抗炎症性Ｔｈ２応答をもたらすはずである。一般的に言えば、一旦、炎症誘発性Ｔｈ１応答が開始されると、身体は、このＴｈ１応答を相殺するためにＴｈ２応答によって引き起こされる抗炎症反応に依存する。この相反する反応は、例えば、アトピーにおけるＩｇＥの上昇および好酸球応答と関連するＩＬ－４、ＩＬ－５、およびＩＬ－１３、ならびに抗炎症反応を有するＩＬ－１０等の、Ｔｈ２型サイトカインの放出を含む。Ｔｈ１媒介性炎症疾患は、Ｔｈ１細胞によってもたらされる過剰な炎症誘発性反応に関与しており、それが慢性炎症を引き起こす。Ｔｈ１媒介性疾患は、ウイルスによって、細菌によって、または化学的に（例えば、環境的に）誘発され得る。例えば、Ｔｈ１媒介性疾患を引き起こすウイルスは慢性または急性の感染症を引き起こす可能性があり、それが呼吸器疾患またはインフルエンザを引き起こす可能性がある。

本発明の抽出物または本発明の抽出物を含む組成物は、典型的には、個体、例えばヒト対象または動物対象に投与される。

本発明の抽出物または組成物によって治療することができる動物対象は、限定されないが、ネコ、イヌ、ウマ、および家畜（ヒツジおよびウシ等）を含む。

治療または予防される疾患または障害は、典型的には、変形性関節症（ＯＡ）、関節リウマチ、若年性特発性関節炎、強直性脊椎炎等の脊椎関節症、反応性関節炎（ライター症候群）、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患に付随する腸炎性関節炎、ホイップル病およびベーチェット病、敗血症性関節炎、痛風（痛風性関節炎、結晶性滑膜炎、代謝性関節炎としても知られる）、偽痛風（ピロリン酸カルシウム沈着疾患）、ならびにスティル病からなる群（複数可）から選択される。関節炎は、単一の関節（単関節炎）、２つ～４つの関節（少関節炎）、または５つ以上の関節（多関節炎）に発症する可能性があり、自己免疫疾患または非自己免疫疾患のいずれかであり得る。

関節炎は、変形性関節症（ＯＡ）に見られるような、関節全体の損傷を引き起こす異質性疾患である。ＯＡは、滑膜の炎症、軟骨下骨の変化、および軟骨の劣化によって特徴付けられる。アポトーシスまで肥大軟骨細胞に変性する軟骨細胞は、滑膜細胞および免疫細胞とともに、プロスタグランジンおよびインターロイキン１β（ＩＬ１ｂ）を分泌して軟骨異化を誘導する。一旦、恒常性が崩壊すると、マトリックス分解は回避不能である。実際に、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）およびトロンボスポンジンモチーフを有するメタロプロテイナーゼ（ＡＤＡＭＴＳ）の過剰発現、ならびにメタロプロテイナーゼの組織阻害剤（ＴＩＭＰ）の減少はマトリックスを分解する。さらに、一酸化窒素（ＮＯ）、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）、およびロイコトリエンの産生増加を誘導する過剰発現サイトカインは、軟骨細胞アポトーシスを誘発する。次いで、軟骨マトリックス分解産物が滑液中に放出され、炎症を悪化させ、先天性免疫細胞の関節組織（滑膜およびＩＦＰ）への浸潤および炎症メディエーターの分泌をもたらす。これらの全ての作用機序は、表層領域の細線維化、それに続く軟骨損傷によって関節軟骨の喪失が開始される、進行性ＯＡを引き起こす。

本明細書で使用される場合、用語「治療」（および同様に、「治療すること」）は、医学の分野におけるその通常の意味を持つ。具体的には、この用語は、当業者に既知の技術を用いて決定され得るような、疾患もしくは障害（例えば、真菌感染症）に関連する１つ以上の臨床症状の重症度の軽減を達成すること、および／または疾患もしくは障害の進行を遅らせること（すなわち、例えば、治療を受けていない患者においてかかると予想される時間と比較して、疾患もしくは障害がより重篤な状態に進行するのにかかる時間を増加させること）を指し得る。

本明細書で使用される場合、用語「予防」（および同様に、「予防すること」）は、疾患または障害の予防への言及（およびその逆）を含む。具体的には、この用語は、患者（または健康な対象）が状態を発症する可能性の低下（例えば、少なくとも１０％の低下、例えば、少なくとも２０％、３０％、または４０％の低下、例えば、少なくとも５０％の低下）を達成することを指し得る。

誤解を避けるために、本発明の文脈において、用語「治療すること」および「予防すること」は、それを必要とする対象／患者の治療的処置または対症療法的処置、ならびに関連する病状に罹患し易い患者の予防的処置および／または診断を含む。

病態に関して本明細書で使用される場合、用語「減少させる」は、観察される量をより少なくすること、またはサイズを減少させることを指し得る。

本明細書で使用される場合、用語「対象」および「患者」は互換的に使用され得、哺乳動物種（特にヒト）を含む。

実施例４に詳述される手順に基づいて処置した動物の足の厚さを示す。Ｐ＜０．０５：ＰＢＳ／ｍＢＳＡ対Ｄ１２０／ｍＢＳＡ＃Ｐ＜０．０５：ＰＢＳ／ＰＢＳ対ＰＢＳ／ｍＢＳＡ 実施例５に詳述される手順に基づいて処置した動物におけるＩＬ－６、ＩＬ－１ｂ、およびＴＮＦ－αの血漿レベルを示す。^*Ｐ＜０．０５対ＰＢＳ／ＰＢＳ 実施例６に詳述される手順に基づいて処置した動物における生物活性脂質の血漿レベルを示す。Ｐ＜０．０５対Ｄ１２０／ｍＢＳＡ 陽性対照および陰性対照と比較した本発明の抽出物に関するグランザイムＢ阻害を示す。 溶媒として水のみを用いて得られた本発明の抽出物に関するグランザイムＢ阻害を示す。 ３０％エタノール溶媒を用いて得られた本発明の抽出物に関するグランザイムＢ阻害を示す。 実施例７に詳述される手順に基づく右脚組織の組織学的結果を示す。^*Ｐ＜０．０５対ＰＢＳ／ＰＢＳ、＃Ｐ＜０．０５対ＰＢＳ／ｍＢＳＡ

以下の非限定的な実施例を参照することにより、本発明をさらに説明する。

例１：Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物の典型的な抽出
本発明の抽出物は、典型的には以下のように調製される。

Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ（地上部：葉／茎）を粉砕してその粒子が４ｍｍメッシュを通過できるようにし、粉砕した材料を反応器内でＥｔＯＨ／水（水中３０％エタノール）と混合した。溶媒：植物材料の比は１０：１（ｖ／ｗ）であった。次いで、原料を約１時間３０分攪拌しながら還流下で抽出した。

抽出後、固相（ケーキ）から液体を分離するために、２５ミクロンのフィルターを用いて混合物を濾過した。

抽出ステップを繰り返し、得られた濾液を合わせた。固相を廃棄した。

次いで、合わせた濾液を真空下（例えば０．８Ｐａ）で５０％ＤＭまで濃縮した。

得られた抽出固形物を「天然抽出物」と称した。

次いで、天然抽出物を約９７％のＤＭ含量になるまで噴霧乾燥させた。

実施例２：Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物中の総フェノール、サングイインＨ６およびランベルチアンＣ投与量の決定
エラジタンニン、ランベルチアニンＣおよびサングイインｈ６等のフェノール化合物、クロロゲン酸およびアラグ酸等のエラグ酸化合物、ケルセチン－３－０－キシルグルコロニド等のフラボノイド化合物、ヒペロシド、ケルセチン、ならびにケンフェロールを含む種々の化合物の量は、以下のＨＰＬＣ法を使用して、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物中で決定された。

標的化合物の定量化は、ＵＶ検出器を備えたＨＰＬＣ Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣシステムで行った。化合物の分離は、３２℃に設定したＡｔｌａｎｔｉｓ Ｔ３ Ｃ_１８１５０ｍｍ×３．０ｍｍ、３μｍで行った。移動相は、アセトニトリル／水（５０：５０）＋０．１％ギ酸（溶離液Ａ）および水＋０．１％ギ酸（溶離液Ｂ）からなっていた。

溶離液Ａの勾配は以下の通りであった：０分、１２％；１０分、２０％；３０分、４３％；４０分、１００％；５５分、１００％。

溶離液Ｂの勾配は、１０％から溶離液Ａの勾配までの差であった。

総運転時間は５０ｍｍ、注入量は２μＬ、流速は０．６ｍＬ／分であった。

フェノール化合物の検出は２８０ｎｍ、エラグ酸化合物の検出は３２５ｎｍ、フラボノイド化合物は３４８ｎｍでＵＶモニタリングを行った。試料のピーク面積を既知濃度の参照化合物のピーク面積と比較することによって、標的化合物の量を定量化した。

総フェノール含量は、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ，Ｖ．Ｌ．，＆Ｒｏｓｓｉ，Ｊ．Ａ．（１９６５）に記載されるようにチオカルト法を用いることによって決定した。リンモリブデン酸－リンタングステン酸試薬による総フェノール類の比色Ａｍｅｒｉｃａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｖｉｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，１６（３），１４４－１５８

実施例３：炎症の消散期に対するＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓの効果
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を播種し、１時間沈降させた。１時間後、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物を添加し、さらに１時間インキュベートした。この時間の終わりに、ＰＵＦＡ（それぞれ１μｇ／ｍｌのＤＨＡ／ＥＰＡ）の存在下でＰＭＡ／Ａ２３１８７によって炎症反応が誘発され、反応時間は１時間であった。次いで、脂質メディエーターの分析のために培養上清を除去した。

各上清を固相抽出（ＳＰＥ）により濃縮し、ＬＣ／ＭＳで分析した。生物活性脂質を定量化するために、液体クロマトグラフィーと質量分析法（ＬＣ／ＭＳ）を組み合わせた分析方法を用いた。ＬＣ／ＭＳ分析は、負電界で動作するエレクトロスプレーイオン化源（Ｊｅｔ ｓｔｒｅａｍ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を備えた６４６０ Ｔｒｉｐｌｅ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ Ｑｕａｄ ＬＣ／ＭＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に連結されたＬＣ １２９０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）チェーンで行った。クロマトグラフィー分離は、ＺｏｒＢＡＸ ＳＢ－Ｃ１８カラム（２．１×５０ｍｍ＊１．８μｍ）で行った。

表２に示されるように、分析によって、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物が、炎症の消散に関与するリポキシン合成の中間体である５－ＨＥＴＥおよび１２－ＨＥＴＥの分泌を増加させることが明らかになった。

実施例４：関節炎の関節腫脹動物モデルに対するＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物の効果
この試験は、関節炎のｍＢＳＡ動物モデルに関与する炎症プロセスを治療するＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物の能力を評価するために設計された。

プロトコル、より具体的には以下に記載される動物モデルは、参考文献であるＹＨ ＹａｎｇらのＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ、２００４に基づいており、該文献中、著者は消散の受容体アゴニストの効果を調べている。

これらの実験に使用されたマウスは６週齢のＣ５７／ＢＬ６雌であった。それらの動物を３匹ずつケージに分け、実験を通して通常の食餌（合計で２．９ｋｃａｌ／ｇが摂取されるように、１６．１％のタンパク質、３．１％の脂肪、５．１％の灰分および３．９％のセルロースを保証するＳａｆｅ－ｒｅｆ Ａ０４）および水分を自由に摂取させた。実験の前に、マウスの馴化段階を設けた。

ｍＢＳＡによる最初の誘導の２週間前、および実験期間を通して、マウスを４つの群に分け、（ｉ）ＰＢＳ／ＰＢＳ（陰性対照）、（ｉｉ）ＰＢＳ／ｍＢＳＡ（陽性対照）、（ｉｉｉ）３０ｍｇ／ＫｇのＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物（Ｄ３０／ｍＢＳＡ）の処置、または（ｉｖ）１２０ｍｇ／ＫｇのＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物（Ｄ１２０／ｍＢＳＡ）の処置を行った。処置は１日１回、強制経口投与により施行した。

メチル化アルブミン（ｍＢＳＡ）による誘導関節炎がマウスに発生した。ｍＢＳＡへの誘導は、皮下注射（２００μｌ）を用いて完全フロイントアジュバント中１ｍｇ／ｍｌまでｍＢＳＡによる初回免疫を行うことからなる。１週間後、動物の尾に同じ組成のカクテル（１００μｌ）を再び注射し、２週間後、後肢の各関節に直接、ｍＢＳＡ（ＰＢＳ中３ｍｇ／ｍｌに希釈）または対照としてＰＢＳ単独の１０μｌ注射液を用いて関節炎を誘発した。全ての注射は、Ｖｅｔｏｆｌｕｒａｎｅによる全身麻酔下で行われた。

ｍＢＳＡを後肢の関節に注射した後、注射後２、４、６、２４、４８および７２時間にノギスを用いてそれらの腫脹を測定した。測定は動物の足の幅および厚さで行った。

その結果は、ｍＢＳＡの注射が足の厚さの増加を誘導し、それが対照足（ＰＢＳ／ＰＢＳ）と有意に異なっていたことを示した。注射の２４時間後から最長７２時間（測定終了）まで増加が見られた。

６時間後、１２０ｍｇのＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物は、ＰＢＳ／ｍＢＳＡ群と比較して足の厚さを有意に減少させた。全体として、マウスにＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物を強制給餌した場合、足の下部の厚さは、ＰＢＳ／ＰＢＳの足の厚さとも陽性対照（ＰＢＳ／ｍＢＳＡ）の厚さとも有意に異ならなかった。したがって、図１に示されるように、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物は、その毒性を低下させることによって炎症の出現を防止する。

これらの結果は、関節腫脹に対するＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物の有益な効果を実証した。

実施例５：関節炎の動物モデルにおけるＩＬ－６、ＩＬ－１ｂおよびＴＮＦ－ａの血漿レベルに対するＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物の効果
実施例４と同じ動物を使用して、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ注射の７２時間後および安楽死の前に、エンドトキシンを含まない滅菌注射器を用いて腎動脈で血液を採取した。血漿を分離し、その後の分析のために試料を凍結した。

サイトカイン分析は、Ｌｕｍｉｎｅｘ １００ＩＳカメラを用いて行った。このデバイスは、ミクロスフェアの異なる蛍光を用いたＬｕｍｉｎｅｘ ｘＭＡＰ技術（Ｍｕｌｔｉ Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ Ａｎａｌｙｓｉｓ）を使用するマイクロドージングマルチプレックステストの取得および分析用に設計されており、微小体積の単一ウェルで最大１００パラメータまで同時に定量化することが可能である。対象となるサイトカインは、関節障害において中心的な役割を果たすことが知られているＩＬ－６、ＩＬ－１ｂおよびＴＮＦ－αであった。

その結果は、ＰＢＳ／ｍＢＳＡ動物が対照動物ＰＢＳ／ＰＢＳより統計的に高い血漿中ＩＬ－６レベル、ならびにより多量のＩＬ－１ｂおよびＴＮＦ－αを有することを示した。

図２に示されるように、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物は炎症プロセスを逆転させた。実際、Ｄ３０／ｍＢＳＡは、ＰＢＳ／ＰＢＳと比較してＰＢＳ／ｍＢＳＡで測定されるように、統計的に有意に増加したＩＬ－６の放出を防止した。Ｒｕｂｕｓ Ｉｄａｅｕｓ抽出物は、ＴＮＦ－αレベルを低下させる傾向も示した。

これらの結果は、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物の抗炎症効果を実証した。

実施例６：関節炎の動物モデルにおける生理活性脂質化合物の血漿レベルに対するＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物の効果
実施例４と同じ動物を使用して、炎症の消散の明確な指標である、アラキドン酸（ＡＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）およびドコサヘキサン酸（ＤＨＡ）からの生理活性化合物レベルを測定するために血液試料を分析した。

血漿を氷上で解凍し、脂質化合物を固相抽出（ＳＰＥ）により濃縮し、分光分析の前にメタノール中に溶解した。使用される分析方法は、種々の分析物をそれらの保持時間に応じて高圧液体クロマトグラフィーにより分離し、それらを質量分析により定量することからなる。

分析は、負電界で動作するエレクトロスプレーイオン化源（Ｊｅｔ ｓｔｒｅａｍ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を備えた６４６０ Ｔｒｉｐｌｅ Ｑｕａｄ ＬＣ／ＭＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）質量分析計に連結されたＬＣ １２９０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙチェーン（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で行った。クロマトグラフ分離はＺｏｒｂａｘ ＳＢ－Ｃ１８で行った。Ｂａｉｌｌｉｆらによって記載された方法に従った：ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｎｄ ｐｒｏ－ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ ｐｏｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ．Ｊ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ｂ Ａｎａｌｙｔ Ｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｍｅｄ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．２０１３；９３２：１２３－３３。

その結果は、（図３に示されるように）Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ摂取後の１２－ＨＥＴＥレベルがＰＢＳ／ｍＢＳＡと比較して統計的に有意に増加したことを示した。さらに、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓの摂取により、ＰＢＳ／ｍＢＳＡと比較して、病気の動物における１４－ＨＤＯＨＥおよび７（Ｒ）ＭＡＲ１のベースラインレベルが回復した。これらの脂質は両方とも、粒子のアポトーシスによる炎症性マクロファージの食作用を促進することに寄与するＤＨＡ分解からの二次代謝産物である。

１４－ＨＤＯＨＥは７（Ｒ）ＭＡＲ１および７（Ｒ）ＭＡＲ１の前駆体であり、特に粒子のアポトーシスによる炎症性マクロファージの食作用を促進することによって消散における最も有効な薬剤の１つであると記載されている。したがって、基本の内因性産生率に戻ることは、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓが、消散の概念の基礎である、これらの分子を産生して炎症と闘う天然の能力を誘発できることを示唆している。

実施例７：関節炎の動物モデルにおける関節の組織学的炎症に対するＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物の効果
実施例４で使用したのと同じ動物を使用して、足の腫脹ならびにサイトカインおよび生物活性脂質の分泌に観察される変化が、改善された組織パラメータをもたらし得るかどうかを決定するためにこの実験を設定した。そうするために、動物の右足関節を収集し、ミクロトーム処理および染色して組織学的病変を評価した。

その結果は、（図７に示されるように）全てのＰＢＳＡ処置動物において、リンパ球、形質細胞、多形核好中球および組織球の浸透が見られ、統計的に有意な炎症の増加を示した。滑膜も、ＰＢＳＡ処置動物において炎症の増加が見られ、統計的に有意に顕著であったが、これはＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物、より具体的には３０ｍｇ／Ｋｇ（Ｄ３０／ｍＢＳＡ）および１２０ｍｇ／Ｋｇ（Ｄ１２０／ｍＢＳＡ）の用量で処置した場合には見られなかったことから、滑膜炎症に対するＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物の予防効果を示している。骨膜では、全てのｍＢＳＡ処置群において炎症の増加傾向が観察された。全体的な炎症についての結果から、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物で処置した動物が、ＰＢＳＡ処置動物と比較して統計的に有意な減少スコアを示したことが明らかになった。

実施例８：ＩＬ１により刺激した軟骨細胞の炎症反応に対するＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物の効果
５～６日齢マウス（Ｃ５７Ｂｌ／６系統）の脛骨および大腿骨端および大腿骨頭から軟骨細胞を抽出した。軟骨基質からの軟骨細胞の単離は、２４時間のリベルターゼ（１００μｇ／ｍｌ、Ｒｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ）の作用によって達成された。次いで、１ウェルあたり１ｍＬの割合で１２ウェルプレートに２００，０００細胞／ｍｌの密度で細胞を繰り返し播種し、１０％ＦＣＳ、２％グルタミン（Ｇｉｂｃｏ（登録商標）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）および１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ（登録商標）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で培養した。

軟骨細胞がコンフルエントになった後（４～６日の培養）、後者をＳＶＦを含まない培地中で２４時間培養し、ＩＬ１（１ｎｇ／ｍｌ）により２４時間活性化し、次いで、４つの濃度（１０μｇ／ｍＬ、２０μｇ／ｍＬ、４０μｇ／ｍＬまたは１００μｇ／ｍＬ）の３０％エタノール性Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物、または水性Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物、または５／５０の両方の抽出物のうちの１つの存在下でさらに２４時間培養した。これらの用量は、実施例２に記載されるように、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）からの炎症のマーカーに対する抽出物の影響を評価する予備実験において定義された。

培養終了時（ＩＬ１で２４時間およびＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物で２４時間）に、遺伝子またはタンパク質の発現を分析するためにいくつかの実験を行う。

遺伝子発現の場合、軟骨細胞培養をＴｒｉｚｏｌによって停止し、異化の定量ＰＣＲマーカー（ＭＭＰ３、ＭＭＰ１３、ＡＤＡＭＴＳ４、Ａｄａｍｔｓ５）、同化マーカー（２型コラーゲンタイプ、Ａｇｇｒｅｃａｎ、Ｓｏｘ９）、肥大マーカー（コラーゲンＸ、ＶＥＧＦ）および炎症（ＣＯＸ２）によって遺伝子発現を分析するためにＲＮＡ抽出を行った。

ＭＴＴアッセイ（３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウム）を用いた細胞生存アッセイのため、およびＴＵＮＥＬ（Ａｐｏｐｔａｇ、アポトーシス検出キット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ））によりアポトーシスを調べるために、これらの実験を繰り返した。

実施例９：グランザイムＢの阻害
グランザイムＢの活性を、０．０３％Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ３０％エタノール抽出物、０．０２％Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ３０％エタノール抽出物、０．０１％Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ３０％エタノール抽出物、および既知のグランザイムＢ阻害剤（陽性対照）の存在下で経時的に調べた。陰性対照も設定した。

図４に示されるように、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物の各々がグランザイムＢの活性を阻害した。

実施例１０：水性Ｒｕｂｕｓ抽出物と３０％エタノール抽出物との間のグランザイムＢ阻害の比較
３０％エタノールを用いて得られた０．０１％および０．０３％Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物の阻害活性を、溶媒として水のみを用いて得られた０．０１％、０．０２％、０．０３％および０．０５％のＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物の阻害活性と比較した。

図５および６に示されるように、３０％エタノールを用いて得られた抽出物の活性は、水のみを用いて得られた抽出物の活性よりも有意に高かった。

Claims (16)

1. 経口投与用であり、炎症の治療または予防に使用される、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓの茎および／または葉から得られる抽出物であって、前記抽出物は抽出溶媒としての水および／またはエタノールを使用することで得られ、前記炎症は関節炎および関節腫脹から選択される、前記抽出物。
2. 前記抽出物が、７０：３０～３０：７０のエタノール／水を含む溶媒を用いて得られる水－エタノール抽出物である、請求項１に記載の抽出物。
3. 経口投与用であり、炎症の治療または予防に使用される組成物であって、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓの茎および／または葉から得られる抽出物を含み、前記抽出物は抽出溶媒としての水および／またはエタノールを使用することで得られる組成物。
4. 前記組成物が、食品製品、飼料製品もしくはペットフード製品、飲料製品、または食品サプリメント、飼料サプリメントもしくはペットフードサプリメントである、請求項３に記載の経口投与用であり、炎症の治療または予防に使用される組成物。
5. 前記組成物が、医薬組成物または獣医学的組成物である、請求項３に記載の経口投与用であり、炎症の治療または予防に使用される組成物。
6. 前記炎症の治療または予防が関節変性を軽減する、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用のための抽出物、または使用のための組成物。
7. 前記使用のための抽出物、または使用のための組成物が、少なくとも１つの炎症性サイトカインの放出を減少させるおよび／または阻害する、請求項１～６のいずれか一項に記載の使用のための抽出物、または使用のための組成物。
8. 前記少なくとも１つの炎症性サイトカインが、ＴＦＮ－α、ＩＬ－６、およびＩＬ－１βから選択される、請求項７に記載の使用のための抽出物、または使用のための組成物。
9. 前記使用のための抽出物、または使用のための組成物が、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸および／またはドコサヘキサエン酸に由来する特異的炎症収束性メディエーターのレベルを増加させる、請求項１～８のいずれか一項に記載の使用のための抽出物、または使用のための組成物。
10. 前記抽出物が、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られる水性抽出物である、請求項１および３～９のいずれか一項に記載の使用のための抽出物、または使用のための組成物。
11. 前記抽出物が、Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓから得られるエタノール抽出物である、請求項１および３～９のいずれか一項に記載の使用のための抽出物、または使用のための組成物。
12. 前記抽出物が、
    （ｉ）約１重量％～約４０重量％のフェノール化合物、
    （ｉｉ）約０．５重量％～約７重量％のヒドロキシケイ皮酸およびエラグ酸化合物、ならびに
    （ｉｉｉ）約１重量％～約１５重量％のフラボノイド化合物、
    を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の使用のための抽出物、または使用のための組成物。
13. 前記抽出物が、請求項１～１２のいずれか一項に記載のＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物と、任意選択に、薬学的にまたは獣医学的に許容される賦形剤と、を含む、医薬組成物または獣医学的組成物の形態で投与される、請求項１～１２のいずれか一項に記載の使用のための抽出物、または使用のための組成物。
14. 前記抽出物が、請求項１～１２のいずれか一項に記載されるＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ抽出物と、任意選択に、食品または飲料に許容される成分と、を含む、食品組成物もしくは製品、飼料組成物もしくは製品またはペットフード組成物もしくは製品、飲料製品、あるいは食品サプリメント、飼料サプリメントまたはペットフードサプリメントの形態で経口投与される、請求項１～１２のいずれか一項に記載の使用のための抽出物、または使用のための組成物。
15. 前記抽出物が、約１０ｍｇ／日～約２０００ｍｇ／日の量で投与される、請求項１～１４のいずれか一項に記載の使用のための抽出物、または使用のための組成物。
16. 前記使用または方法が、ヒト対象に対して行われる、請求項１～１５のいずれか一項に記載の使用のための抽出物、または使用のための組成物。
    

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