CN107427546B - 含有盘龙参提取物的组合物及其药物应用 - Google Patents

Abstract

本公开内容提供包含sinetirucallol的组合物和剂型，以及这类组合物的使用方法，例如用来治疗炎症相关疾病、肝纤维化、伤口愈合和/或自身免疫病。在一些实施方案中，所述组合物包含盘龙参提取物。鉴于前述情况，存在对用于治疗炎症、神经退行性疾病和自身免疫病的改进化合物的需求。本公开内容提供满足该需求并且还提供其他益处的化合物、组合物和方法。

Description

含有盘龙参提取物的组合物及其药物应用

交叉引用

本申请要求2015年1月21日提交的美国临时申请第62/106,177 号的权益；并要求2015年3月6日提交的中国台湾地区申请第 TW104107161号的权益；这些申请通过引用并入本文。

背景技术

炎症是血管组织对有害刺激如病原体、受损的细胞或刺激物的复杂生物学反应。急性炎症的典型症状是疼痛、发热、泛红、肿胀和功能丧失(Lin等人，Biologicalevaluation of subglutinol a as a novel immunosuppressive agent forinflammation intervention.”ACS Med Chem Lett 5(5)，485-490，2014)。炎症是生物体为去除有害刺激并启动愈合过程的保护性攻击(Fandino-Vaquero等人，″Orosomucoidsecretion levels by epicardial adipose tissue as possible indicator ofendothelial dysfunction in diabetes mellitus or inflammation in coronaryartery disease.″Atherosclerosis 235(2)：281-288，2014)。然而，还应当注意，如果炎症(例如在变态反应中)失去控制，其也可能对受试者有害。此外，过度(过盛)的伤口愈合通常在严重且失控的炎症的恢复过程中发生，其可引起组织中的纤维化，然后导致癌变。

肝纤维化是过盛的伤口愈合的典型实例。肝纤维化发生在肝组织的炎症期间，并且被认为与肝硬化和肝癌有关。尽管炎症是免疫系统防御机制的一部分，但根据需要适当地降低炎症的程度十分重要。肝纤维化是代表肝损伤反应的瘢痕形成过程。肝纤维化是过度(过盛) 的伤口愈合，在该过程中过多的结缔组织在肝脏中积聚。细胞外基质 (ECM)过度产生，或降解不充分，或者两者兼而有之。随着时间的推移，该过程可导致肝硬化，并可发生严重的并发症，包括门静脉高压、肝功能衰竭和肝癌。

治疗炎症和自身免疫病的尝试已经遇到了瓶颈。这是部分源于以下事实：炎症和自身免疫病的病因是部分基于似乎经由冗长机制引发炎症的各种炎症诱导分子和大量炎症介导和炎症致敏分子的复杂反应。因此，可治疗炎症、神经退行性疾病或自身免疫病的化合物、组合物和方法将会非常亟需。

发明内容

鉴于前述情况，存在对用于治疗炎症、神经退行性疾病和自身免疫病的改进化合物的需求。本公开内容提供满足该需求并且还提供其他益处的化合物、组合物和方法。

在一方面，本公开内容提供被配制用于向受试者施用的组合物。在一些实施方案中，所述组合物包含有效降低炎性反应的量的 sinetirucallol。在一些实施方案中，所述组合物包含至少4.4μg的 sinetirucallol，如4.4μg至44μg的sinetirucallol。在一些实施方案中，所述组合物包含盘龙参(Spiranthes sinensis)提取物。在一些实施方案中，降低炎性反应通过选自下组的一种或多种生物学标志物的表达或活性的降低得以证明：诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环加氧酶-2 (COX-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素33(IL-33)、 NLRP3、磷酸化ERK(pERK)、NFκB、基质金属蛋白酶-2(MMP2) 和基质金属蛋白酶-9(MMP9)。在一些实施方案中，降低炎性反应通过炎性反应中一种或多种自由基水平的降低得以证明，该自由基例如是选自下组的一种或多种自由基：超氧自由基阴离子(O₂ ^-.)、过氧化氢(H₂O₂)、羟基自由基(.OH)、单线态氧(¹O₂)、过氧亚硝酸根(ONOO^-)、一氧化氮(NO)、亚硝鎓阳离子(NO⁺)和硝酰基阴离子(NO^-)。在一些实施方案中，降低炎性反应通过组织肿胀的减轻得以证明，该组织例如是选自皮肤、上皮、滑膜组织、肌腱、软骨、韧带、骨骼、肌肉、器官、硬脑膜、血管、骨髓和细胞外基质的组织。

在一方面，本公开内容提供被配制用于向受试者施用的包含 sinetirucallol的剂型。在一些实施方案中，所述剂型被配制用于静脉内、动脉内、口服、肠胃外、颊部、局部、经皮、直肠、肌内、皮下、骨内、经黏膜或腹膜内施用。在一些实施方案中，所述剂型被配制用于局部施用。在一些实施方案中，所述剂型被配制为液体、凝胶、半液体、半固体或固体形式的单位剂量。在一些实施方案中，所述剂型包含至少4.4μg的sinetirucallol，如4.4μg至44μg的sinetirucallol。在一些实施方案中，所述剂型包含盘龙参提取物。在一些实施方案中，所述剂型被配制为单位剂量，如被配制为食物、饮品或膳食补充剂的单位剂量。

在一方面，本公开内容提供一种药物组合物。在一些实施方案中，所述药物组合物包含(a)以有效降低炎性反应的量存在的一定量的盘龙参提取物(SSE)和(b)药学上可接受的载体。在一些实施方案中，降低炎性反应通过选自下组的一种或多种生物学标志物的表达或活性的降低得以证明：iNOS、COX-2、TNF-α、PGE2、IL-6、IL-1β、 IL-33、NLRP3、pERK、NFκB、MMP2和MMP9。在一些实施方案中，降低炎性反应通过炎性反应中一种或多种自由基水平的降低得以证明，该自由基例如是选自下组的一种或多种自由基：超氧自由基阴离子(O₂ ^-.)、过氧化氢(H₂O₂)、羟基自由基(.OH)、单线态氧 (¹O₂)、过氧亚硝酸根(ONOO^-)、一氧化氮(NO)、亚硝鎓阳离子(NO⁺)和硝酰基阴离子(NO^-)。在一些实施方案中，降低炎性反应通过组织肿胀的减轻得以证明，该组织例如是选自皮肤、上皮、滑膜组织、肌腱、软骨、韧带、骨骼、肌肉、器官、硬脑膜、血管、骨髓和细胞外基质的组织。在一些实施方案中，所述盘龙参提取物包含按重量计至少0.1％的sinetirucallol。在一些实施方案中，150g的所述盘龙参提取物包含至少250mg的sinetirucallol。在一些实施方案中，所述药物组合物被配制用于局部施用。在一些实施方案中，所述载体与静脉内、动脉内、口服、肠胃外、颊部、局部、经皮、直肠、肌内、皮下、骨内、经黏膜或腹膜内施用相兼容。在一些实施方案中，所述药物组合物被配制为液体、凝胶、半液体、半固体或固体形式的单位剂量。在一些实施方案中，所述药物组合物被配制为外用乳膏。

在一方面，本公开内容提供包含食物载体和一定量sinetirucallol 如至少44μgsinetirucallol的食物组合物。在一些实施方案中，所述食物组合物包含盘龙参提取物。在一些实施方案中，所述食物组合物被包装为饮品、固体食物或半固体食物。在一些实施方案中，所述食物组合物被包装为选自快餐食品、谷类制品、烘烤食品和乳制品的食品。

在一方面，本公开内容提供诱导抗氧化剂产生的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向有需要的受试者施用包含sinetirucallol 的剂型，其中该剂型被配制用于向受试者施用。在一些实施方案中，所述剂型为包含药学上可接受的载体的药物组合物。在一些实施方案中，所述剂型包含盘龙参提取物。

在一方面，本公开内容提供降低炎性反应的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向有需要的受试者施用包含sinetirucallol的剂型，其中该剂型被配制用于向受试者施用。在一些实施方案中，所述剂型为包含药学上可接受的载体的药物组合物。在一些实施方案中，所述剂型包含盘龙参提取物。

在一方面，本公开内容提供促进伤口愈合的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向有需要的受试者施用包含sinetirucallol的剂型，其中该剂型被配制用于向受试者施用。在一些实施方案中，所述剂型为包含药学上可接受的载体的药物组合物。在一些实施方案中，所述剂型包含盘龙参提取物。

援引并入

本说明书中提到的所有出版物和专利申请均通过引用而并入本文，其程度如同特别地且单独地指出每个单独的出版物或专利申请通过引用而并入。

附图说明

图1A-B显示了盘龙参提取物不具备细胞毒性。用不同浓度的 (A)盘龙参提取物和(B)SI将RAW264.7细胞处理24h。通过MTT 测定来测量细胞活力。

图2A-C示出了盘龙参提取物处理对小鼠中CFA诱导的炎症的抑制。(A)足部肿胀指数的变化(n＝5)。通过本文所述的公式计算肿胀指数，并表示为基于注射前(第0天)肿胀指数的比。(B) 计算曲线下面积(AUC)并在4天的条形图和肿胀指数中呈现。(C) 提供第2天时小鼠的爪照片。数值代表三次独立实验的平均值±S.E.。 ***P＜0.001为与CFA单独处理组相比。

图3A-C示出了SI处理对小鼠中CFA诱导的炎症的抑制。(A) 足部肿胀指数的变化(n＝5)。通过本文所述的公式计算肿胀指数，并表示为基于注射前(第0天)肿胀指数的比。从上到下的曲线分别对应于图例中指出的从上到下的组。(B)计算曲线下面积(AUC) 并在4天的条形图和肿胀指数中呈现。(C)提供第2天时小鼠的爪照片。数值代表三次独立实验的平均值±S.E.。**P＜0.01；***P＜0.001 为与CFA单独处理组相比。

图4A-B示出了CFA诱导的炎症小鼠中SI处理后血清MMP2 和MMP9的抑制。(A)来自CFA诱导的炎症小鼠的血液的明胶底物酶谱检测。(B)来自三个小鼠队列的定量MMP2和MMP9。在第 4天从CFA诱导的小鼠收集血液，并通过明胶底物酶谱检测对血清应用MMP测定。数值代表三次独立实验的平均值±S.E.。**P＜0.01；*** P＜0.001为与CFA组相比。

图5A-F示出了用盘龙参提取物处理降低LPS诱导的RAW 264.7细胞中的细胞因子和炎症因子mRNA表达。在LPS诱导的RAW 264.7细胞中采用不同浓度(5、20、50和100μg/mL)的盘龙参提取物处理6h。RAW 264.7细胞的细胞因子(A)IL-1β、(B)IL-6、(C) TNF-α、(D)iNOs、(E)NLRP3和(F)IL-33的mRNA量。通过 Q-PCR测量mRNA水平。数值代表三次独立实验的平均值±S.E.。* P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001为与仅1μg/mL的LPS处理组相比。

图6A-F示出了SI处理降低LPS诱导的RAW 264.7细胞中的细胞因子和炎症因子mRNA表达。在LPS诱导的RAW 264.7细胞中采用不同浓度(0.1、1、5和10μM)的SI处理6h。RAW264.7细胞的细胞因子(A)IL-1β、(B)IL-6、(C)TNF-α、(D)iNOS、 (E)NLRP3和(F)IL-33的mRNA量。通过Q-PCR测量mRNA水平。数值代表三次独立实验的平均值±S.E.。*P＜0.05；**P＜0.01；*** P＜0.001为与仅1μg/mL的LPS处理组相比。

图7A-D图示了盘龙参提取物抑制LPS诱导的RAW264.7细胞的COX-2、NFκB、p-ERK和ERK的表达。在LPS诱导的RAW 264.7 细胞中采用不同浓度(5、20、50和100μg/mL)的盘龙参提取物处理12h。在RIPA缓冲液中裂解细胞用于蛋白质印迹分析。(A)印迹照片，(B)COX-2、(C)NFκB和(D)p-ERK各自表达的定量。数值代表三次独立实验的平均值±S.E.。*P＜0.05；**P＜0.01；*** P＜0.001为与1μg/mL的LPS组相比。

图8A-D示出了SI抑制RAW264.7细胞的COX-2、NFκB、p-ERK 和ERK的表达。在LPS诱导的RAW 264.7细胞中采用不同浓度(0.1、1、5和10μM)的SI处理12h。在RIPA缓冲液中裂解细胞用于蛋白质印迹分析。(A)印迹照片，(B)COX-2、(C)NFκB和(D) p-ERK各自表达的定量。数值代表三次独立实验的平均值±S.E.。* P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001为与1μg/mL的LPS组相比。

图9A-B示出了(A)盘龙参提取物和(B)SI对RAW264.7细胞的NO释放的影响。在LPS诱导的RAW 264.7细胞中采用不同浓度的盘龙参提取物(5、20、50和100μg/mL)或SI(0.1、1、5和 10μM)处理12h。收集条件培养基并离心，以去除细胞碎片用于NO 测定。数值代表三次独立实验的平均值±S.E.。**P＜0.01；***P＜0.001 为与1μg/mL的LPS组相比。

图10示出了通过DPPH测定得到的盘龙参提取物的抗氧化活性。数值代表三次独立实验的平均值±S.E.。*P＜0.05；**P＜0.01为与5 μg/mL的盘龙参提取物组相比。

图11示出了通过使用MTT测定进行的NHSC和THSC的细胞活力实验。用不同浓度(5、20、50和100μg/mL)的盘龙参提取物将细胞处理24h。该浓度基于培养基的体积。

图12A-B示出了240X放大倍数下油红O染色测定的结果。(A) NHSC，未处理或用5、20和50μg/mL的盘龙参提取物处理。(B) THSC，未处理或用5、20和50μg/mL的盘龙参提取物处理。

图13示出了显示来自图12中所示实验之结果的定量的条形图。

图14示出了盘龙参提取物(5、20和50μg/mL)和姜黄素(25 μM)在48h时对NHSC和THSC中脂肪酸储存的影响。*P＜0.05； ***P＜0.001为与对照组相比。

图15A-B示出了240X放大倍数下实施例10中Sirius Red染色剂的结果。(A)NHSC，未处理或用5、20和50μg/mL的盘龙参提取物处理。(B)THSC，未处理或用5、20和50μg/mL的盘龙参提取物处理。所述浓度基于培养基的体积。

图16A-B示出了(A)NHSC和(B)THSC二者中COL1 I、 COL1 III、TGF-β R1和TGF-βR2(各组四个条柱中从左至右)的表达。18S是该检测中的参照基因。N-CU25：用25μM姜黄素处理的 NHSC；N-CON：未处理的NHSC；N-SS5：用5μg/mL盘龙参提取物处理的NHSC；N-SS20：用20μg/mL盘龙参提取物处理的NHSC； N-SS50：用50μg/mL盘龙参提取物处理的NHSC。T-CU25：用25μM 姜黄素处理的THSC；T-CON：未处理的THSC；T-SS5：用5μg/mL 盘龙参提取物处理的THSC；T-SS20：用20μg/mL盘龙参提取物处理的THSC；T-SS50：用50μg/mL盘龙参提取物处理的THSC。该浓度基于培养基的体积。数据代表三次独立实验的平均值±SEM。

图17A-B示出了(A)NHSC和(B)THSC二者中PPARγ的表达。N-对照：未处理的NHSC；N-SS5：用5μg/mL盘龙参提取物处理的NHSC；N-SS20：用20μg/mL盘龙参提取物处理的NHSC；N-SS50：用50μg/mL盘龙参提取物处理的NHSC。N-CU25：用25μM 姜黄素处理的NHSC。T-对照：未处理的THSC；T-SS5：用5μg/mL 盘龙参提取物处理的THSC；T-SS20：用20μg/mL盘龙参提取物处理的THSC；T-SS50：用50μg/mL盘龙参提取物处理的THSC。用25μM 姜黄素处理的THSC。通过18S的表达对基因表达进行归一化。该浓度基于培养基的体积。数据代表三次独立实验的平均值±S.E.。

图18A-B示出了(A)NHSC和(B)THSC二者中RXRα、NrF2 的表达。N-对照：未处理的NHSC；N-SS5：用5μg/mL盘龙参提取物处理的NHSC；N-SS20：用20μg/mL盘龙参提取物处理的NHSC； N-SS50：用50μg/mL盘龙参提取物处理的NHSC。N-CU25：用25μM 姜黄素处理的NHSC。T-对照：未处理的THSC；T-SS5：用5μg/mL 盘龙参提取物处理的THSC；T-SS20：用20μg/mL盘龙参提取物处理的THSC；T-SS50：用50μg/mL盘龙参提取物处理的THSC。用25μM 姜黄素处理的THSC。通过18S的表达对基因表达进行归一化。该浓度基于培养基的体积。数据代表三次独立实验的平均值±S.E.。

图19图示了对照组和盘龙参提取物(SS)组大鼠背部皮肤中的伤口愈合图像。对照大鼠仅用无菌纱布进行处理。SS组大鼠用白凡士林加5％盘龙参提取物与无菌纱布进行处理。SS组大鼠显示出响应于处理的快速伤口愈合，并且该愈合随着伤口继续愈合而得以保持。 SS组大鼠中的伤口愈合比对照大鼠中的伤口愈合更快。

图20示出了在13天的观察时间内对照组大鼠和SS组大鼠背部皮肤中的伤口修复面积。修复面积(％)由修复区对比伤口区来表示。

图21描绘了对照组和SS组大鼠中伤口区域的组织切片。所示为对照组和SS处理组动物中的愈合伤口尺寸。

图22A-B描绘了对照组和SS组大鼠中伤口区域的组织切片。 (A)对照组动物伤口区域中皮肤表皮层和真皮层的愈合。(B)SS 组动物伤口区域中皮肤表皮层和真皮层的愈合。图像以16X放大显示。

图23描绘了盘龙参植株。

图24图示了细胞活力实验的结果。

图25图示了实时PCR测定的结果。

图26描绘了显示盘龙参提取物对MMP9活性的抑制作用的凝胶的一部分。

图27A-D图示了MMP2活性测定的结果，其显示了盘龙参提取物的抑制作用。

具体实施方式

尽管本文中已经示出并描述了本公开的优选实施方案，但对于本领域技术人员显而易见的是这些实施方案仅以示例的方式提供。本领域技术人员在不脱离本公开的情况下现将想到多种变化、改变和替代。应当理解本文中所述的本公开的实施方案的各种替代方案可用于实施本公开。旨在以下述权利要求限定本公开的范围，并由此涵盖这些权利要求范围内的方法和结构及其等同项。

除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本公开内容所属领域技术人员通常所理解的相同的含义。本文中提及的所有专利和出版物通过引用而并入。

如本说明书和权利要求书中所使用的，除非上下文另有明确规定，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指代对象。

术语“有效量”或“治疗有效量”在本文中是指足以实现如下文所定义的预期应用(包括但不限于疾病治疗)的本文所述化合物的量。治疗有效量可根据预期应用(体外或体内)或正在治疗的受试者和疾病状况，例如，受试者的体重和年龄、疾病状况的严重程度、给药方式等而有所不同，并且这些内容可由本领域普通技术人员容易地确定。该术语还适用于将在靶细胞中诱导特定应答(例如，通过降低一种或多种生物学标志物如白细胞介素-6(IL-6)、NFκB或磷酸化ERK(pERK) 的表达或活性来减少炎性反应)的剂量。具体剂量将根据所选择的具体化合物、所遵循的给药方案、是否与其他化合物联合施用、施用时间、所施用的组织、携带该化合物的物理递送系统而有所不同。

如本文所用的“治疗”或“处理”或“减轻”和“改善”在本文中可互换使用。这些术语是指用于获得有益的或期望的结果(包括但不限于治疗益处和/或预防益处)的方法。治疗益处意指正在治疗的潜在病症的根除或改善。另外，通过与潜在病症相关的一种或多种生理症状的根除或改善而实现治疗益处，从而使得在患者中观察到好转，尽管患者可能仍为该潜在病症所困扰。对于预防益处，即使可能尚未进行疾病的诊断，可将组合物施用于处于发展出特定疾病风险中的患者，或施用于报告疾病的一种或多种生理症状的患者。

如本文所用的术语“治疗效果”包括如上所述的治疗益处和/或预防益处。预防效果包括延迟或消除疾病或病况的出现，延迟或消除疾病或病况的症状发作，使疾病或病况的进展减缓、停止或逆转，或其任何组合。

如本文所用的术语“共同施用”、“与.....联合施用”及其语法等同用语包括向动物施用两种或更多种药剂以使两种药剂和/或其代谢物同时存在于该动物中。共同施用包括以单独的组合物同时施用，以单独的组合物在不同时间施用，或者以其中两种药剂均存在的组合物进行施用。

术语“药学上可接受的盐”在本文中是指衍生自本领域公知的各种有机和无机抗衡离子的盐，包括(仅以示例的方式)钠、钾、钙、镁、铵、四烷基铵盐等；并且当该分子含有碱性官能团时，包括有机或无机酸的盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、马来酸盐、草酸盐等。

如本文所用的“药剂”或“生物活性剂”在本文中是指生物学、药学或化学化合物或其他部分。非限制性实例包括简单或复杂的有机或无机分子、肽、蛋白质、寡核苷酸、抗体、抗体衍生物、抗体片段、维生素衍生物、碳水化合物、毒素或化疗化合物。各种化合物可以合成，例如，小分子和低聚物(例如，寡肽和寡核苷酸)以及以各种核心结构为基础的合成有机化合物。此外，各种天然来源可提供用于筛选的化合物，如植物或动物提取物等。本领域技术人员可容易地认识到，对于本公开内容的药剂的结构性质没有限制。

“信号转导”是一个过程，在此过程中，刺激或抑制信号被传递到细胞中和细胞内从而引起细胞内反应。信号转导途径的调节剂是指调节映射到相同特异性信号转导途径的一种或多种细胞蛋白活性的化合物。调节剂可增加(激动剂)或抑制(拮抗剂)信号传导分子的活性。

如本文所用的关于生物活性剂的术语“抑制”是指药剂经由与靶标直接或间接相互作用与脱靶信号传导活性相比降低靶信号传导活性的能力。

如本文所用的“受试者”是指动物，如哺乳动物，例如人。本文所述的方法可用于人类治疗和兽医应用。在一些实施方案中，患者是哺乳动物，并且在一些实施方案中，患者是人。

如本文所用的术语“异常免疫应答”是指增加的、不期望的、过量的或不适当的免疫应答，其中对抗原如自身抗原的免疫应答增加，从而使得发现炎症和/或自身免疫病或神经退行性疾病。如本文所用的异常免疫应答的特征在于导致身体组织破坏的免疫级联。通常，异常的免疫结果在对感染的正常应答中不会出现，但可由感染引发。异常免疫应答的非限制性实例包括自身免疫疾病、免疫缺陷和变态反应。

如本文所述的术语“炎症”、“炎性反应”或“免疫应答”意指活组织对损伤、感染或刺激的反应，其特征在于由于增加的血流量以及免疫细胞和分泌物的流入所造成的泛红、发热、肿胀、疼痛和功能丧失。

术语“瘢痕组织”意指由紊乱的胶原蛋白和其他结缔组织蛋白的过度产生所引起、在身体任何组织中的损伤或疾病部位形成的纤维 (纤维化)结缔组织，其用来修补所述组织中的破裂。

术语“再生”意指身体或身体部位、组织或物质在损伤后或在正常身体过程中的更新、再生长或恢复。

如本文所用的“干细胞”是在组织或器官的分化细胞中发现的或从外部来源例如胚胎干细胞、成体骨髓干细胞引入的未分化细胞，其可以自我更新并分化产生一种或多种不同的细胞类型。

如本文所用的术语“自由基”和“自由基衍生物”包括被视为活性氧物质(ROS)和/或活性氮物质(RNS)的分子。ROS包括由于分子氧(双氧；O₂)的部分还原而形成的自由基物质和非自由基物质二者。ROS的非限制性实例包括超氧自由基阴离子(O₂ ^-.)、过氧化氢(H₂O₂)、羟基自由基(.OH)、单线态氧(¹O₂)和过氧亚硝酸根 (ONOO^-)。RNS包括由于L-精氨酸的氧化而形成的自由基物质和非自由基物质二者。RNS的非限制性实例包括一氧化氮(.NO)、亚硝鎓阳离子(NO⁺)、硝酰基阴离子(NO^-)和过氧亚硝酸根(ONOO^-)。

如本文所述，生物学标志物或生物标志物通常是指一些生物学状态或状况的可测量指标。经常对生物学标志物进行测量和评估，以检查正常的生物过程、致病过程或对治疗干预的药理反应。

“提取物”常为通过使用溶剂如乙醇或水提取原料的一部分而制成的物质。提取物可以是液体、固体、半固体、凝胶或粉末形式。

如本文所述的“饮品”是专门为人类消费而制备的液体。饮品通常在其内具有某种形式的水。饮品的实例包括水、牛奶、茶、咖啡、果汁和果汁饮料、软饮料和碳酸饮料。

“膳食补充剂”意在提供以其他方式可能无法足量获得的营养物。如通常所理解的补充剂包括维生素、矿物质、纤维、脂肪酸或氨基酸以及其他物质。美国有关部门将膳食补充剂定义为食物，而在其他地方，膳食补充剂可被归类为药物或其他产品。

在各个方面，本公开内容涉及用于治疗患有与异常免疫应答相关联的疾病如包括与急性和/或慢性炎性疾病、肝纤维化和神经退行性疾病相关联的医疗病况的自身免疫疾病之个体的化合物、组合物和方法。在一些实施方案中，通过向患有该疾病的个体施用治疗有效量的 sinetirucallol或包含盘龙参提取物的组合物来实现该治疗。在一些实施方案中，有效量的sinetirucallol和/或盘龙参提取物具有抗炎、抗肝纤维化和抗氧化活性。

组合物

在一方面，本公开内容提供被配制用于向有需要的受试者施用的药物组合物，该组合物包含有效降低炎性反应的量的sinetirucallol (SI)。在一些实施方案中，该药物组合物包含sinetirucallol，其中 sinetirucallol具有以下化学结构：

在一些实施方案中，所公开的组合物包含来自盘龙参植株的盘龙参提取物(SSE)。盘龙参植株描绘于图23中。

提取物

在一些实施方案中，主题组合物包含从盘龙参植株的提取物中分离的sinetirucallol。在一些实施方案中，提供了盘龙参的提取物。在一些实施方案中，所述提取物为按照包括以下步骤的方法所制备的酯提取物：(a)获得盘龙参植株；(b)使所述植株与溶剂混合以获得流体(例如，液体或超临界流体)；以及(c)干燥所述流体以获得所述盘龙参酯提取物。

盘龙参植株可以是全植株或盘龙参生物体的任何部分，包括但不限于所述植株的新鲜或干燥的叶、根、种子、树皮、果实、果皮、花和/或茎。在一些实施方案中，在进行提取步骤之前，将盘龙参植株干燥。在一些实施方案中，将盘龙参植株干燥并研磨成适当大小，以增加所述植株与溶剂之间相互作用的有效性。

在一些实施方案中，通过获得盘龙参植株并使所述植株与溶剂混合以获得混合物，然后将所述混合物干燥以获得提取物来制备盘龙参提取物。在一些情况下，溶剂为乙酸乙酯、丙酮和|/或正己烷。在一些实施方案中，溶剂为乙酸乙酯。在一些情况下，乙酸乙酯处于约1％至100％(v/v)、5％至100％(v/v)、15％至100％(v/v)、20％至 100％(v/v)、25％至100％(v/v)、30％至100％(v/v)、40％至100％ (v/v)、50％至100％(v/v)、60％至100％(v/v)、70％至100％(v/v)、 80％至100％(v/v)、90％至100％(v/v)、10％至90％(v/v)、20％至80％(v/v)、30％至70％(v/v)、40％至60％(v/v)或25％至75％ (v/v)范围的浓度下，其中所述浓度基于乙酸乙酯的总体积。在一些情况下，溶剂为处于约5％至100％(v/v)浓度下的乙酸乙酯。在一些情况下，乙酸乙酯处于约10％至100％(v/v)的浓度下。

在一些实施方案中，通过在约15℃至30℃、20℃至30℃、25℃至30℃、18℃至28℃、20℃至28℃、25℃至28℃、15℃至37℃、18℃至37℃、20℃至37℃或25℃至37℃的温度下使盘龙参提取物与溶剂混合来制备组合物。在一些情况下，混合在20℃至28℃下进行。在一些情况下，混合进行约1天、2天、3天、5天、6天、7天或更长时间。在一些情况下，混合进行约1至2天。

制备可进一步包括干燥盘龙参提取物与溶剂的混合物。许多干燥方法都是可用的，例如，可通过真空干燥、冷冻干燥、冻干或其组合来实现该混合物的干燥。在一些实施方案中，提取物在所述干燥后为粉末形式。

sinetirucallol和盘龙参提取物的量通常与盘龙参的干重相对应。例如，盘龙参提取物的量∶sinetirucallol的量∶盘龙参的量可以为约0.3∶ 0.1∶1(w/w/w)、约3∶1∶10(w/w/w)、约0.5∶0.3∶2(w/w/w)或约5∶3∶20(w/w/w)的比例。作为非限制性实例，可从提取自约1000 g干重盘龙参的约150g盘龙参提取物中分离出约250mg的 sinetirucallol。在一些实施方案中，sinetirucallol的量为至少约250mg。在一些实施方案中，盘龙参提取物的量为至少约150g。

在一些实施方案中，组合物包含(基于所述药物组合物的总体积)约0.0001至1000、0.001至100、0.01至100、0.1至100、1至 100、1.2至100、1.5至100、1.8至100、2至100、3至100、4至100、 5至100、6至100、7至100、8至100、9至100、10至100、30至 1000、50至1000、80至1000μg/mL的盘龙参提取物的量。在一些实施方案中，药物组合物包含(基于所述药物组合物的总体积)约或至少约0.0001、0.001、0.01、0.1、1、1.2、1.5、1.8、2、3、4、5、6、 7、8、9、10、30、50、100、150、200、250、500μg/mL或更多的盘龙参提取物的量。

在一些实施方案中，本公开内容的组合物中sinetirucallol或盘龙参提取物的量小于100％、90％、80％、70％、60％、50％、40％、 30％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％、0.09％、0.08％、0.07％、0.06％、0.05％、0.04％、 0.03％、0.02％、0.01％、0.009％、0.008％、O.007％、0.006％、O.005％、 0.004％、0.003％、0.002％、0.001％、0.0009％、0.0008％、0.0007％、 0.0006％、0.0005％、0.0004％、0.0003％、0.0002％或0.0001％w/w、 w/v或v/v。

在一些实施方案中，sinetirucallol或盘龙参提取物的量大于90％、 80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、19.75％、19.50％、19.25％ 19％、18.75％、18.50％、18.25％18％、17.75％、17.50％、17.25％、 17％、16.75％、16.50％、16.25％、16％、15.75％、15.50％、15.25％15％、 14.75％、14.50％、14.25％、14％、13.75％、13.50％、13.25％、13％、 12.75％、12.50％、12.25％、12％、11.75％、11.50％、11.25％、11％、 10.75％、10.50％、10.25％、10％、9.75％、9.50％、9.25％、9％、8.75％、 8.50％、8.25％、8％、7.75％、7.50％、7.25％、7％、6.75％、6.50％、 6.25％、6％、5.75％、5.50％、5.25％、5％、4.75％、4.50％、4.25％、 4％、3.75％、3.50％、3.25％、3％、2.75％、2.50％、2.25％、2％、1.75％、 1.50％、1.25％、1％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％、0.09％、0.08％、0.07％、0.06％、0.05％、0.04％、0.03％、0.02％、0.01％、0.009％、0.008％、 0.007％、0.006％、0.005％、0.004％、0.003％、0.002％、0.001％、0.0009％、 0.0008％、0.0007％、O.0006％、0.0005％、0.0004％、0.0003％、0.0002％或0.0001％w/w、w/v或v/v。

在一些实施方案中，sinetirucallol和/或盘龙参的量在 0.0001-1000g、0.001-10g、0.005-100g、0.0005-9g、0.001-8g、0.005-7 g、0.01-6g、0.05-5g、0.1-4g、0.5-4g或1-3g的范围内。在一些实施方案中，sinetirucallol和/或盘龙参的量为至少约0.0001、0.001、O.005、 0.01、0.05、0.1、1、3、4、5、6、7、8、9、10、100、1000g或更多。

根据本公开内容的化合物在宽剂量范围内有效。例如，在成年人的治疗中，0.01至1000mg/天、0.5至100mg/天、1至50mg/天以及5至40mg/天的剂量是可使用的剂量实例。示例性剂量为10至30 mg/天。确切的剂量将取决于给药途径、所施用化合物的形式、待治疗的受试者、待治疗受试者的体重以及主治医疗专业人士的偏好和经验。

在一些实施方案中，本公开内容包括在约1至约100mg/kg体重/天的范围内向受试者施用有效量的盘龙参提取物。有效剂量可以在约0.1至80、0.5至80、1至80、10至80、20至80、50至80、0.1 至10、0.5至10、1至100、10至100、20至100或50至100mg/kg 体重/天的范围内。作为非限制性实例，有效剂量可以为约0.01至1.0 mg/kg体重/天，或0.06至5mg/kg体重/天。作为另一非限制性实例，按单剂量或分剂量计的有效剂量可以为约0.6-5mg/60kg/天。在一些情况下，施用于受试者的盘龙参提取物的量为约0.6-5mmg/60kg 体重/天。

制剂

在一些实施方案中，组合物被配制用于向有需要的受试者施用，其中该组合物包含有效降低炎性反应的量的sinetirucallol。组合物按剂型予以配制。在一些实施方案中，组合物被配制成包含sinetirucallol 的剂型。在一些实施方案中，组合物被配制成包含盘龙参提取物的剂型。

在一些实施方案中，组合物包含约0.001至1000mg、0.01至 100mg、0.1至200mg、3至200mg、5至500mg、10至100mg、 10至1000mg、50至200mg或100至1000mg的sinetirucallol。在一些实施方案中，药物组合物包含约或多于约0.001μg、0.01μg、0.1、0.5μg、1μg、2μg、3μg、4μg、5μg、6μg、7μg、8μg、9μg、10 μg、15μg、20μg、25μg、50μg、75μg、100μg、200μg、500μg、 1000μg或更多的sinetirucallol。在一些实施方案中，药物组合物包含至少约4.4μg的sinetirucallol。在一些实施方案中，药物组合物包含量约为4.4-44μg的sinetirucallol。

在一些实施方案中，将组合物配制成提供治疗有效量的本公开内容化合物作为活性成分或其药学上可接受的盐、酯、前药、溶剂合物、水合物或其衍生物。当需要时，药物组合物含有其药学上可接受的盐和/或配位络合物，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂、载体，包括惰性固体稀释剂和填充剂、稀释剂，包括无菌水溶液和各种有机溶剂、渗透促进剂、增溶剂和佐剂。

本文公开的主题组合物可配制用于经由口服、静脉内注射和/ 或局部进行施用。在一些实施方案中，所公开的药物组合物被配制用于局部施用。

在一些实施方案中，所述组合物进一步包含与静脉内、动脉内、口服、肠胃外、颊部、局部、经皮、直肠、肌内、皮下、骨内、经黏膜、吸入或腹膜内施用相兼容的载体。

在一些实施方案中，所述组合物被配制为液体、凝胶、半液体、半固体和/或固体形式的单位剂量。

在一些实施方案中，所述组合物被配制为外用乳膏。

在一些实施方案中，所述组合物按食物来配制。在一些实施方案中，所述组合物按饮品来配制。在一些实施方案中，所述组合物按膳食补充剂来配制。

剂量单位

在一方面，本公开内容提供包含被配制用于向受试者施用的 sinetirucallol的剂型。在一些实施方案中，该剂型被配制为单位剂型。在一些实施方案中，该组合物被配制成液体、凝胶、半液体、半固体或固体形式的单位剂型。在一些实施方案中，该单位剂型可配制为食物、饮品、半固体食物、半液体食物和/或膳食补充剂。在一些方面，该剂型包含以有效降低炎性反应的量存在的一定量的盘龙参提取物 (SSE)或sinetirucallol。在一些实施方案中，该药物组合物进一步包含药学上可接受的载体。

在一些实施方案中，所述剂型包含约0.1至1000μg、0.1至5μg、 0.1至10μg、0.1至20μg、0.1至30μg、0.1至40μg、0.1至50μg、 0.1至100μg、0.5至100μg、1至100μg、5至100μg、10至100μg、 20至100μg或50至100μg量的提取的sinetirucallol。在一些实施方案中，该剂型包含至少约或多于约0.1μg、5μg、10μg、20μg、30μg、 40μg、50μg、100μg、1000μg或更多的sinetirucallol。在一些实施方案中，sinetirucallol的剂量为约4.4μg至44μg。在一些实施方案中， sinetirucallol的量为至少约4.4μg。在一些实施方案中，单位剂量包含盘龙参提取物。在一些实施方案中，盘龙参提取物的量为至少约44 μg。

在一些实施方案中，所述单位剂型包含(基于所述药物组合物的总体积)量为约0.1至1000μg/mL、0.1至100μg/mL、0.5至100 μg/mL、1至100μg/mL、2至100μg/mL、5至100μg/mL、10至100 μg/mL、20至100μg/mL、50至100μg/mL、0.1μg至150μg/mL、O.5 至150μg/mL、1至150μg/mL、2至150μg/mL、5至150μg/mL、10 至150μg/mL、20至150μg/mL、50至150μg/mL、0.1至200μg/mL、 0.5至200μg/mL、1至200μg/mL、2至200μg/mL、5至200μg/mL、 10至200μg/mL、20至200μg/mL或50至1000μg/mL的盘龙参提取物。在一些实施方案中，盘龙参提取物的单位剂量为至少约或多于约 0.1μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL、500μg/mL、1000μg/mL或更多。在一些实施方案中，所公开的组合物包含约5至100μg/mL的盘龙参提取物。

所施用化合物的量将取决于所治疗的哺乳动物、疾病或病况的严重程度、给药速率、化合物的处置和开处方医疗专业人士的判断。在一些实施方案中，本公开内容的化合物以单剂量施用。单剂量的本公开内容的化合物还可用于急性病况的治疗。在一些实施方案中，本公开内容的化合物以多剂量施用。给药可以是约每天一次、两次、三次、四次、五次、六次或多于六次。给药可以是约每月一次、每两周一次、每周一次或每隔一天一次。在另一实施方案中，一起施用本公开内容的化合物和另一种药剂每天1次至约每天6次。在另一实施方案中，本公开内容的化合物和药剂的施用持续少于约7天。在另一实施方案中，施用持续多于约6天、10天、14天、28天、2个月、6 个月或1年。在一些情况下，进行持续给药并维持必要的时长。

本公开内容的药剂的施用可以持续必要的时长。在一些实施方案中，本公开内容的药剂施用多于1、2、3、4、5、6、7、14、28天或更多天。在一些实施方案中，本公开内容的药剂施用少于28、14、 7、6、5、4、3、2或1天。在一些实施方案中，本公开内容的药剂在不间断的基础上长期施用，例如，用于慢性效应的治疗。

可通过具有类似效用的药剂的任何接受的施用方式，包括直肠、颊部、鼻内和经皮途径、动脉内注射、静脉内、腹腔、肠胃外、肌内、皮下、口服、局部或作为吸入剂，以单剂量或多剂量施用有效量的本公开内容的化合物。

当以包含一种或多种药剂的组合物施用本公开内容的化合物，并且该药剂具有比本公开内容的化合物更短的半衰期时，可相应地调整该药剂和本公开内容的化合物的单位剂型。

为了治疗自身免疫病，主题化合物或药物组合物可与包括但不限于

和

的常用处方药组合使用。为了治疗呼吸系统疾病，主题化合物或药物组合物可与包括但不限于

和

的常用处方药联合施用。

本公开内容的化合物可与用来缓解炎性病况如脑脊髓炎、哮喘和本文所述其他疾病的症状的其他药剂联合配制或施用。这些药剂包括非甾体抗炎药(NSAID)，例如，乙酰水杨酸；布洛芬；萘普生；吲哚美辛；萘丁美酮；托美汀等。皮质类固醇用于减轻炎症并抑制免疫系统的活性。这一类型的最常用处方药是强的松。氯喹(Aralen) 或羟氯喹(Plaquenil)还可对一些患有狼疮的个体非常有用。它们是针对狼疮的皮肤和关节症状的最常用的处方药。硫唑嘌呤(Imuran) 和环磷酰胺(Cytoxan)抑制炎症并倾向于抑制免疫系统。其他药剂，例如甲氨蝶呤和环孢菌素用于控制狼疮的症状。抗凝血剂用于防止血液迅速凝结。其范围从极低剂量的阿司匹林(防止血小板粘连)到肝素/香豆素。

本文所述化合物可与也已知作为润滑剂的液体或固体组织屏障联合配制或施用。组织屏障的实例包括但不限于多糖、聚糖 (polyglycan)、seprafilm膜、防粘连膜(interceed)和透明质酸。

可与本文所述化合物联合施用的药品包括通过吸入有效递送的任何合适的药物，比如，止痛剂，例如可待因、二氢吗啡、麦角胺、芬太尼或吗啡；心绞痛制剂，例如地尔硫卓；抗过敏药，例如色甘酸盐、酮替芬或奈多罗米；抗感染剂，例如头孢菌素、青霉素、链霉素、磺胺类、四环素或戊脒；抗组胺药，例如美沙吡林；抗炎药，例如倍氯米松、氟尼缩松、布地奈德、替泼尼旦、曲安奈德或氟替卡松；止咳药，例如诺司卡品；支气管扩张剂，例如麻黄碱、肾上腺素、非诺特罗、福莫特罗、异丙肾上腺素、奥西那林、苯肾上腺素、苯丙醇胺、吡布特罗、瑞普特罗、利米特罗、沙丁胺醇、沙美特罗、特布他林、异他林、妥洛特罗、间羟异丙肾上腺素或(-)-4-氨基-3，5-二氯 -α-[[[6-[2-(2-吡啶基)乙氧基]己基]-氨基]甲基]苯甲醇；利尿剂，例如阿米洛利；抗胆碱能类，例如异丙托铵、阿托品或氧托溴铵；激素，例如可的松、氢化可的松或泼尼松龙；黄嘌呤类，例如氨茶碱、胆茶碱、赖氨酸茶碱或茶碱；以及治疗性蛋白质和肽，例如胰岛素或胰高血糖素。本领域技术人员将会理解，在适当的情况下，药品可以以盐的形式使用(例如，作为碱金属盐或铵盐或作为酸加成盐)或作为酯 (例如，低级烷基酯)或作为溶剂合物(例如，水合物)以优化药品的活性和/或稳定性。

可用于组合疗法的其他示例性治疗剂包括但不限于如上所述的药剂，放疗，激素拮抗剂，激素及其释放因子，甲状腺和抗甲状腺药物，雌激素和孕酮，雄激素，促肾上腺皮质激素；肾上腺皮质类固醇及其合成类似物；肾上腺皮质激素的合成和功能的抑制剂，胰岛素，口服降血糖药和影响内分泌胰腺药理学的药剂，影响钙化和骨转换的药剂：钙，磷酸盐，甲状旁腺激素，维生素D，降钙素，维生素如水溶性维生素、维生素B复合物、抗坏血酸、脂溶性维生素、维生素A、维生素K和维生素E，生长因子，细胞因子，趋化因子，毒蕈碱受体激动剂和拮抗剂；抗胆碱酯酶药剂；作用于神经肌肉接头和/或自主神经节的药剂；儿茶酚胺，拟交感神经药物和肾上腺素受体激动剂或拮抗剂；以及5-羟色胺(5-HT，血清素)受体激动剂和拮抗剂。

治疗剂还可包括用于疼痛和炎症的药剂，如组胺和组胺拮抗剂，缓激肽和缓激肽拮抗剂，5-羟色胺(血清素)，通过膜磷脂的选择性水解产物的生物转化生成的脂质物质，类二十烷酸，前列腺素，血栓烷，白三烯，阿司匹林，非甾体抗炎药，止痛解热剂，抑制前列腺素和血栓烷合成的药剂，诱导型环加氧酶的选择性抑制剂，诱导型环加氧酶-2的选择性抑制剂，自体有效物质，旁分泌激素，促生长素抑制素，促胃液素，介导涉及体液和细胞免疫应答相互作用的细胞因子，脂质衍生的自体有效物质，类二十烷酸，β-肾上腺素能激动剂，异丙托铵，糖皮质激素，甲基黄嘌呤，钠通道阻断剂，阿片样物质受体激动剂，钙通道阻断剂，膜稳定剂和白三烯抑制。

本文中考虑与包含sinetirucallol的组合物一起使用的其他治疗剂可包括利尿剂，血管升压素，影响肾脏保存水的药剂，凝乳酶，血管紧张肽，可用于治疗心肌缺血的药剂，抗高血压药，血管紧张肽转换酶抑制剂，β-肾上腺素能受体拮抗剂，用于治疗高胆固醇血症的药剂以及用于治疗血脂异常的药剂。

考虑的其他治疗剂可包括用于控制胃酸度的药物，用于治疗消化性溃疡的药剂，用于治疗胃食管返流疾病的药剂，促胃动力药，止吐剂，用于肠易激综合征的药剂，用于腹泻的药剂，用于便秘的药剂，用于炎性肠病的药剂，用于胆道疾病的药剂，用于胰腺疾病的药剂。用于治疗原生动物感染的治疗剂，用于治疗疟疾、阿米巴病、贾第虫病、滴虫病、锥虫病和/或利什曼病的药物，和/或在蠕虫病化疗中使用的药物。其他治疗剂包括抗微生物剂，磺胺类，甲氧苄氨嘧啶-磺胺甲噁唑喹诺酮类，和用于尿路感染的药剂，青霉素，头孢菌素及其他，β-内酰胺抗生素，包含氨基糖苷类的药剂，蛋白质合成抑制剂，用于结核病、鸟分枝杆菌复合体病和麻风病化疗的药物，抗真菌剂，抗病毒剂，包括非逆转录病毒剂和抗逆转录病毒剂。

可与主题化合物组合的治疗性抗体的实例包括但不限于抗受体酪氨酸激酶抗体(西妥昔单抗、帕尼单抗、曲妥珠单抗)、抗CD20 抗体(利妥昔单抗、托西莫单抗)和其他抗体，如阿仑单抗、贝伐珠单抗和吉妥珠单抗。

此外，可由本文的方法考虑用于免疫调节的治疗剂，如免疫调节剂、免疫抑制剂、耐受原和免疫刺激剂。另外，可由本文的方法考虑作用于血液和造血器官的治疗剂、造血剂、生长因子、矿物质和维生素、抗凝剂、溶栓剂和抗血小板药物。

可与主题化合物组合的其他治疗剂可在由Hardman、Limbird 和Gilman编辑的Goodman和Gilman的《The Pharmacological Basis of Therapeutics》第十版或《医师案头参考》中找到，两本书均通过引用而整体并入本文。

本文所述的包括sinetirucallol和盘龙参提取物在内的化合物可根据所治疗的病况与一种或多种其他药剂组合使用。因此，在一些实施方案中，本公开内容的化合物将与如上所述的其他药剂共同施用。当用于联合疗法时，本文所述的化合物可与第二药剂同时施用或单独施用。这种联合施用可包括以相同的剂型同时施用两种药剂，以不同的剂型同时施用，以及分开施用。亦即，本文所述的化合物和任何上述药剂可一起配制成相同的剂型并同时施用。或者，本公开内容的化合物和任何上述药剂可同时施用，其中两种药剂均存在于单独的制剂中。在另一替代方案中，可紧随本公开内容的化合物施用之后施用任何上述药剂，或者反之亦然。在分开的给药方案中，本公开内容的化合物和任何上述药剂可相隔几分钟，或相隔几小时，或相隔几天进行施用。

所施用化合物的量将取决于所治疗的哺乳动物、病症或病况的严重程度、给药速率、化合物的处置以及开处方医师的判断。然而，有效剂量可以在约1至约100mg/kg体重/天的范围内。有效剂量可以在约0.1至80、0.5至80、1至80、10至80、20至80、50至80、0.1 至10、0.5至10、1至100、10至100、20至100或50至100mg/kg 体重/天的范围内。作为非限制性实例，有效剂量可以为约0.01至1.0 mg/kg体重/天。作为另一非限制性实例，按单剂量或分剂量计的有效剂量可以为约0.6-5mg/60kg/天。对于120kg的人而言，该有效剂量相当于约1.2至10mg/天。

可通过使化合物能够递送至作用部位的任何方法来实现本公开内容的化合物的施用。可通过具有类似效用的药剂的任何接受的施用方式，包括直肠、颊部、鼻内和经皮途径、动脉内注射、静脉内、腹膜内、肠胃外、肌内、皮下、口服、局部、作为吸入剂，或经由浸渍或包覆装置，例如支架或插入动脉的圆柱形聚合物，以单剂量或多剂量施用有效量的本公开内容的化合物。

给药

在一些实施方案中，包括本文所述剂型的本公开内容的组合物被配制用于经由静脉内、动脉内、口服、肠胃外、颊部、局部、经皮、直肠、肌内皮下、骨内、经黏膜、吸入和/或腹膜内施用的一种或多种施用途径。在一些实施方案中，经由口服给药来施用主题组合物。在一些实施方案中，经由静脉注射来施用主题组合物。在一些实施方案中，经由口服给药和静脉注射的组合来施用主题组合物。在一些实施方案中，主题组合物被配制用于局部施用。

主题组合物可单独施用或与一种或多种其他药剂联合施用，该药剂也通常以药物组合物的形式施用。当需要时，可将主题化合物和其他药剂混合成制剂，或者可将两种组分配制成单独的制剂，以将它们分开进行组合或同时组合使用。

可通过使化合物能够递送至作用部位的任何方法来实现本公开内容的化合物或药物组合物的施用。这些方法包括口服途径、十二指肠内途径、肠胃外注射(包括静脉内、动脉内、皮下、肌内、血管内、腹腔或输注)、局部(例如经皮应用)、直肠给药、通过导管或支架的局部递送或通过吸入。还可通过脂肪内或鞘内来施用化合物。

还可经由浸渍或包覆装置，例如支架或插入动脉的圆柱形聚合物递送本公开内容的组合物。这样的施用方法可例如帮助预防或改善诸如球囊血管成形术等程序之后的血管再狭窄。不受理论的约束，本公开内容的化合物可减缓或抑制促成血管再狭窄的动脉壁中的平滑肌细胞的迁移和增殖。可例如通过从支架的支柱、从支架移植物、从移植物或从支架的盖或鞘局部递送来施用本公开内容的化合物。在一些实施方案中，本公开内容的化合物与基质混合。这样的基质可以是聚合物基质，并且可用来将化合物结合到支架。适合用于这种用途的聚合物基质包括，例如，基于内酯的聚酯或共聚酯如聚丙交酯，聚己内酯乙交酯，聚原酸酯，聚酐，聚氨基酸、多糖，聚磷腈，聚(醚-酯) 共聚物(例如，PEO-PLLA)；聚二甲基硅氧烷，聚(乙烯-乙酸乙烯酯)，基于丙烯酸酯的聚合物或共聚物(例如，聚羟乙基甲基丙烯甲酯、聚乙烯吡咯烷酮)，氟化聚合物如聚四氟乙烯和纤维素酯。合适的基质可以是非降解的或可随时间而降解，从而释放一种或多种化合物。可通过各种方法，如浸泡/旋转涂覆、喷涂、浸涂和/或刷涂将本公开内容的化合物施加到支架的表面。可将化合物应用于溶剂中，并且可使溶剂蒸发，并可在支架上形成化合物层。或者，化合物可位于支架或移植物的主体内，例如位于微通道或微孔中。当植入时，化合物从支架的本体扩散出去以接触动脉壁。可通过将被制造成含有这样的微孔或微通道的支架浸入本公开内容化合物的溶液中，然后蒸发溶剂来制备这样的支架。可经由额外的简短溶剂洗涤去除支架表面上的过量药物。在另一些实施方案中，本公开内容的化合物可与支架或移植物共价连接。可使用在体内降解的共价连接体，从而导致本公开内容化合物的释放。任何生物不稳定连接可用于这样的目的，如酯、酰胺或酸酐连接。本公开内容的化合物还可从血管成形术期间使用的球囊经血管内施用。还可经由心包或经由外膜应用本公开内容的制剂来进行所述化合物的血管外施用，以减少血管再狭窄。

例如，在以下参考文献中公开了可如所述进行使用的各种支架装置，所有这些参考文献均通过引用并入本文：美国专利号5451233；美国专利号5040548；美国专利号5061273；美国专利号5496346；美国专利号5292331；美国专利号5674278；美国专利号3657744；美国专利号4739762；美国专利号5195984；美国专利号5292331；美国专利号5674278；美国专利号5879382；美国专利号6344053。

主题组合物可以是，例如，适合作为片剂、胶囊、丸剂、微球、粉末、缓释制剂、溶液、悬浮液用于口服施用，作为无菌溶液、悬浮液或乳液用于肠胃外注射，作为软膏或乳膏用于局部施用，或作为栓剂用于直肠施用的形式。组合物可以是适合用于单次施用精确剂量的单位剂型。组合物可包含常规药物载体或赋形剂以及根据本公开内容的化合物作为活性成分。此外，组合物可包含其他药用或药物试剂、载体、佐剂等。

用于肠胃外施用的制剂通常包括无菌水性或非水性溶液、悬浮液和乳液。非水性溶剂的实例为丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油和可注射有机酯如油酸乙酯。水性载体包括水、醇溶液/水溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和缓冲介质。肠胃外媒介物包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸林格氏液或固定油。静脉内媒介物包括流体和营养补充液、电解质补充液(如基于林格氏葡萄糖的那些)等。还可存在防腐剂和其他添加剂，例如，抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体等。

当以包含一种或多种药剂的组合物施用本公开内容的化合物，并且该药剂具有比本公开内容的化合物更短的半衰期时，可相应地调整该药剂和本公开内容的化合物的单位剂型。

在一个方面，本公开内容提供包含以有效降低炎性反应的量存在的一定量的sinetirucallol的组合物。所公开的组合物的施用可降低炎性反应、降低炎性反应中一种或多种自由基的水平和/或减轻组织肿胀。

在本公开内容的一些实施方案中，组合物的施用降低炎性反应并引起一种或多种生物学标志物，如iNOS、COX-2、TNF-α、PGE2、 IL-6、IL-1β、IL-33、NLRP3、pERK、NFκB、MMP2和MMP9的表达或活性降低。

通常，炎症是身体对入侵的感染性微生物的反应，并通常导致到达受影响区域的血流量增加、吸引白细胞的化学物质释放、血浆的流量增加以及单核细胞(或在大脑中为星形胶质细胞)的到来以清理碎片。刺激炎性反应的任何物质均视为炎性的。可通过任何合适的方法，包括本文所述的方法来测量炎症的降低。还可通过本文所述生物学标志物的表达水平的降低来测量炎症的降低。通常，可通过测量 DNA、RNA、基因转录和/或蛋白质表达的水平来获得生物学标志物的表达水平。用来测量本文所述生物学标志物表达水平的常用技术的实例包括PCR、qRT-PCR、微阵列、NanoString、RNA-seq、蛋白质印迹和分光光度法。在一些实施方案中，组合物有效地使炎性反应降低至少约0.1％、2％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、50％、60％或约75％至90％或更多。

在一些实施方案中，组合物的施用降低炎性反应中一种或多种自由基的水平。响应于所述组合物的施用而被还原的一种或多种自由基可包括超氧自由基阴离子(O₂ ^-)、过氧化氢(H₂O₂)、羟基自由基(.OH)、单线态氧(¹(O₂)、过氧亚硝酸根(ONOO^-)、一氧化氮(NO)、亚硝鎓阳离子(NO⁺)和硝酰基阴离子(NO^-)。

可例如通过亚硝酸盐定量来测量所述组合物在还原自由基方面的有效性。在一些实施方案中，组合物有效地使炎性反应降低至少约0.1％、2％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、50％、60％或约75％至90％或更多。

在一些实施方案中，组合物的施用减轻组织肿胀。肿胀可被减轻的组织的非限制性实例包括皮肤、上皮、滑膜组织、肌腱、软骨、韧带、骨骼、肌肉、器官、硬脑膜、血管、骨髓和细胞外基质。

可通过肿胀指数的变化来确定组织肿胀的减轻。作为非限制性实例，可通过将动物的受伤肢体的面积除以动物的对照未受伤肢体的面积来计算肿胀指数。肿胀指数可表示为基于受伤和对照未受伤肢体的肿胀指数的比值。在一些实施方案中，可记录所述施用之前和之后的受伤和对照未受伤肢体的肿胀指数用于比较。作为另一非限制性实例，可通过在一只爪中注射完全弗氏佐剂(CFA)来诱导动物模型中的炎症。肿胀指数可使用下文所示的公式进行计算，并且可表示为基于注射前(第0天)肿胀指数的比值。在一些实施方案中，组合物有效地使组织肿胀降低至少约0.1％、2％、5％、10％、15％、20％、25％、 30％、50％、60％或约75％至90％或更多。

在一些实施方案中，组合物的施用具有抗肝纤维化活性。抗肝纤维化的实例包括但不限于指标如脂质在肝星状细胞中的累积、肝星状细胞增殖的下调、肝星状细胞移动的抑制、防止肝星状细胞的活化和/或ECM蛋白的合成减少。

一般而言，肝纤维化是响应于肝损伤的瘢痕形成过程。通常，肝纤维化是过度或过盛的伤口愈合，在该过程中过多的结缔组织在肝脏中积聚。细胞外基质(ECM)过度产生或降解不充分，或两者兼而有之。随着时间的推移，该过程可导致肝硬化，并可导致严重的并发症，包括门静脉高压、肝衰竭和/或肝癌。

瘢痕通常致密且厚，并且通常比周围的组织颜色更浅，因为瘢痕通常供血不足，并且尽管它在结构上取代被破坏的组织，但其通常无法执行所缺失组织的所有功能。瘢痕通常由胶原纤维组成，而胶原纤维将会常常限制所涉及组织的正常弹性。可通过受损部位内的细胞类型群体来评估瘢痕组织的减少。例如，可通过简单测量瘢痕宽度或瘢痕组织的面积来测量瘢痕组织形成的减少(Wilgus等人，2003)。此外，可对愈合组织相比于正常组织内的结构复杂性的恢复进行组织学评估。在一些实施方案中，可通过本文公开的组合物，如包含 sinetirucallol的组合物或剂型使瘢痕形成减少至少约0.1％、2％、5％、 10％、15％、20％、25％、30％、50％、60％或约75％至90％或更多。

药物组合物

在一方面，本公开内容提供一种药物组合物。在一些实施方案中，该药物组合物包含(a)以有效降低炎性反应的量存在的一定量的盘龙参提取物(SSE)或sinetirucallol，和(b)药学上可接受的载体。本公开内容的药物组合物通常含有活性成分(例如，本公开内容的化合物或其其药学上可接受的盐和/或配位络合物)，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂、载体，包括但不限于惰性固体稀释剂和填充剂、稀释剂、无菌水溶液和各种有机溶剂、渗透促进剂、增溶剂和佐剂。

在一些实施方案中，本公开内容提供包含一定量的盘龙参提取物和/或sinetirucallol、被配制用于向有需要的受试者施用的药物组合物。在一些实施方案中，该药物组合物包含约0.001-1000mg、0.01-100 mg、0.1-200mg、3-200mg、5-500mg、10-100mg、10-1000mg、50-200 mg、100-1000mg或100-1000mg的盘龙参提取物和/或sinetirucallol。在一些实施方案中，该药物组合物包含约或多于约0.001μg、0.01μg、 0.1、0.5μg、1μg、2μg、3μg、4μg、5μg、6μg、7μg、8μg、9μg、 10μg、15μg、20μg、25μg、50μg、75μg、100μg、200μg、500μg、1000μg或更多的盘龙参提取物和/或sinetirucallol。在一些实施方案中，该药物组合物包含至少约44μg的盘龙参提取物。在一些实施方案中，该药物组合物包含至少约44μg的sinetirucallol。在一些实施方案中，该药物组合物包含约4.4-44μg的盘龙参提取物的量。在一些实施方案中，该药物组合物包含约4.4-44μg的sinetirucallol的量。在一些实施方案中，该药物组合物包含至少约150g的盘龙参提取物。在一些实施方案中，该药物组合物包含至少约250g的sinetirucallol。

在一些实施方案中，该药物组合物被配制用于向有需要的受试者施用。该组合物可配制用于静脉内、动脉内、口服、肠胃外、颊部、局部、经皮、直肠、肌内、皮下、骨内、经黏膜、吸入和/或腹膜内施用。在一些实施方案中，该组合物被配制用于局部施用。

在一些实施方案中，该药物组合物被配制为液体、凝胶、半液体或固体形式的单位剂量。在一些实施方案中，该药物组合物被配制为外用乳膏。

在一些实施方案中，该药物组合物可配制为食物，如固体食物或半固体食物。在一些实施方案中，该组合物可按饮品进行配制。在一些实施方案中，该组合物可按膳食补充剂进行配制。

在一些实施方案中，所公开的药物组合物在施用于有需要的受试者时可降低炎性反应并引起一种或多种生物学标志物的表达或活性降低。不受任何理论的约束，一种或多种生物学标志物包括iNOS、 COX-2、TNF-α、PGE2、IL-6、IL-1β、IL-33、NLRP3、pERK、NFκB、MMP2和MMP9。

在一些实施方案中，所公开的药物组合物在施用于有需要的受试者时可降低炎性反应中一种或多种自由基的水平。不受任何理论的约束，响应于所述组合物的施用而减少的一种或多种自由基包括超氧自由基阴离子(O₂ ^-)、过氧化氢(H₂O₂)、羟基自由基(.OH)、单线态氧(¹(O₂)、过氧亚硝酸根(ONOO^-)、一氧化氮(NO)、亚硝鎓阳离子(NO⁺)和硝酰基阴离子(NO^-)。

在一些实施方案中，施用本文公开的组合物可降低炎性反应并减轻组织肿胀。减轻组织肿胀的非限制性实例包括皮肤、上皮、滑膜组织、肌腱、软骨、韧带、骨骼、肌肉、器官、硬脑膜、血管、骨髓和细胞外基质。

在一些实施方案中，所述药物组合物可配制成液体、凝胶、半液体、半固体或固体形式的单位剂量。

在一些实施方案中，药学上可接受的载体、赋形剂选自水、乙醇、甘油、壳聚糖、藻酸盐、软骨素、维生素E、矿物油和二甲亚砜 (DMSO)。

用于局部(例如经皮)递送的药物组合物。

在一些实施方案中，本公开内容提供用于经皮递送的药物组合物，其含有本公开内容的化合物和适合用于经皮递送的药物赋形剂。组合物可以是固体、液体、凝胶、半液体或半固体的形式。在一些实施方案中，组合物进一步包含第二药剂。

本公开内容的组合物可配制成适合用于外部或局部施用的固体、半固体或液体形式的制剂，如凝胶、水溶性凝胶剂、乳膏、洗剂、悬浮液、泡沫、粉末、浆液、软膏、溶液、油、糊剂、栓剂、喷雾剂、乳液、盐水溶液、基于二甲亚砜(DMSO)的溶液。一般而言，具有较高密度的载体能够使区域持久地暴露于活性成分。相比而言，溶液制剂可使所选区域更快速地暴露于活性成分。

药物组合物还可包含合适的固体或凝胶态载体或赋形剂，其为允许治疗分子穿过皮肤角质层透性障的渗透增加或帮助治疗分子穿过皮肤角质层透性障的递送的化合物。存在外用制剂领域技术人员已知的许多此类渗透增强分子。这样的载体和赋形剂的实例包括但不限于保湿剂(例如，尿素)、二醇类(例如，丙二醇)、醇(例如，乙醇)、脂肪酸(例如，油酸)、表面活性剂(例如，肉豆蔻酸异丙酯和十二烷基硫酸钠)、吡咯烷酮、甘油单月桂酸酯、亚砜、萜烯(例如，薄荷醇)、胺、酰胺、烷烃、烷醇、水、碳酸钙、磷酸钙、各种糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物如聚乙二醇。

用于局部施用的制剂可包括软膏、洗剂、乳膏、凝胶(例如，泊洛沙姆凝胶)、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和粉末。常规的药物载体，水性、粉末或油性基质，增稠剂等可以是必需或需要的。可例如以微纤维、聚合物(例如，胶原)、纳米球、气溶胶、洗剂、乳膏、织物、塑料、组织工程支架、基质材料、片剂、植入的容器、粉末、油、树脂、伤口敷料、珠粒、微珠、缓释珠、胶囊、注射剂、静脉点滴、泵装置、硅胶植入物或任何生物工程材料的形式来施用所公开的组合物。

用于本公开内容方法的另一示例性制剂采用经皮递送装置(“贴片”)。这样的经皮贴片可用于以受控的量提供本公开内容化合物的连续或不连续输注，无论是否含有另一种药剂。

用于药物试剂递送的经皮贴片的构建和使用是本领域公知的。参见例如，美国专利号5,023,252、4,992,445和5,001,139。这样的贴片可构建用于药物试剂的连续、脉冲式或按需递送。

用于口服给药的药物组合物

在一些实施方案中，本公开内容提供用于口服施用的药物组合物，其含有本公开内容的化合物和适合用于口服施用的药物赋形剂。组合物可以是固体、液体、凝胶、半液体或半固体的形式。在一些实施方案中，组合物进一步包含第二药剂。

适合用于口服施用的本公开内容的药物组合物可呈现为离散剂型，如胶囊、扁囊剂(cachet)或片剂，或各自含有预定量的作为粉末或以颗粒形式的活性成分的液体或气雾剂、溶液或在水性或非水性液体中的悬浮液、水包油乳液或油包水液体乳液。可通过任何药学方法制备这样的剂型，该方法通常包括使活性成分与载体混合的步骤。一般而言，通过使活性成分与液体载体或精细分散的固体载体或两者均匀且紧密地混合来制备组合物，然后如果需要，将产品塑形为期望的外观。例如，可通过压缩或模塑，任选地采用一种或多种辅助成分来制备片剂。可通过在合适的机器中压缩自由流动形式的活性成分如粉末或颗粒，任选地与赋形剂诸如但不限于黏合剂、润滑剂、惰性稀释剂和/或表面活性剂或分散剂混合来制备压缩片剂。可通过在合适的机器中模塑用惰性液体稀释剂润湿的粉末化合物的混合物来制成模塑片剂。

本公开内容进一步包括含有活性成分的无水药物组合物和剂型，原因在于水会促进一些化合物的降解。例如，可在制药技术中添加水 (例如，5％)作为模拟长期储存的手段，以便确定特征如保存期限或制剂随时间的稳定性。可使用无水或含低水分的成分以及低水分或低湿度条件来制备本公开内容的无水药物组合物和剂型。含有乳糖的本公开内容的药物组合物和剂型如果预期在制造、包装和/或储存期间与水分和/或湿气大面积接触，则可被制成无水的。可制备并储存无水药物组合物，使其保持无水性质。因此，可使用已知防止暴露于水的材料包装无水组合物，以使无水组合物可包含在合适的处方试剂盒中。合适的包装的实例包括但不限于密封箔、塑料等、单位剂量容器、泡罩包装和条状包装。

根据常规的药物混合技术，活性成分可与药物载体以充分混合的方式进行组合。载体可根据施用所需的制剂形式而采取多种形式。在制备用于口服剂型的组合物中，在口服液体制剂(如悬浮液、溶液和酏剂)或气雾的情况下，任何常用的药物介质可用作载体，例如，水、二醇类、油、醇、调味剂、防腐剂、着色剂等；或者在口服固体制剂的情况下可使用载体，如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、造粒剂、润滑剂、黏合剂和崩解剂，在一些实施方案中不使用乳糖。例如，采用固体口服制剂的合适的载体包括粉末、胶囊和片剂。如果需要，可通过标准的水性或非水性技术对片剂进行包衣。

适合用于药物组合物和剂型的黏合剂包括但不限于玉米淀粉，马铃薯淀粉或其他淀粉，明胶，天然和合成树胶如阿拉伯胶、藻酸钠、海藻酸、其他藻酸盐、粉末状西黄蓍胶、瓜尔胶，纤维素及其衍生物 (例如，乙基纤维素、醋酸纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠)，聚乙烯吡咯烷酮，甲基纤维素，预胶化淀粉，羟丙基甲基纤维素，微晶纤维素及其混合物。

用于本文公开的药物组合物和剂型的合适填充剂的实例包括但不限于滑石、碳酸钙(例如，颗粒或粉末)、微晶纤维素、粉末状纤维素、葡萄糖结合剂(dextrates)、高岭土、甘露糖醇、硅酸、山梨糖醇、淀粉、预胶化淀粉及其混合物。

崩解剂可用于本公开内容的组合物中以提供当片剂暴露于水性环境时崩解。过多的崩解剂可能产生可在瓶中分解的片剂。过少可能不足以发生分解，并且可能改变活性成分从剂型释放的速率和程度。既不过少也不过多以致不利地改变活性成分释放的足够量的崩解剂可用于形成本文所公开的化合物的剂型。所使用的崩解剂的量可根据制剂的类型和施用方式而变化，并且可容易地为本领域普通技术人员所辨别。在药物组合物中可使用约0.5至约15重量百分比的崩解剂，或约1至约5重量百分比的崩解剂。可用于形成本公开内容的药物组合物和剂型的崩解剂包括但不限于琼脂(agar-agar)、海藻酸、碳酸钙、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交聚维酮、波拉克林钾、淀粉羟乙酸钠、马铃薯或木薯淀粉、其他淀粉、预胶化淀粉、其他淀粉、黏土、其他藻胶、其他纤维素、树胶或其混合物。

可用于形成本公开内容的药物组合物和剂型的润滑剂包括但不限于硬脂酸钙、硬脂酸镁、矿物油、轻质矿物油、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇、聚乙二醇、其他二醇类、硬脂酸、十二烷基硫酸钠、滑石、氢化植物油(例如，花生油、棉籽油、向日葵油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油)、硬脂酸锌、油酸乙酯、月桂酸乙酯、琼脂或其混合物。另外的润滑剂包括，例如，syloid硅胶、合成二氧化硅的凝结气溶胶，或其混合物。可任选地以少于药物组合物的约1重量％的量添加润滑剂。

当需要水性悬浮液和/或酏剂用于口服施用时，其中的活性成分可与各种甜味剂或调味剂、着色剂或染料以及(如果需要)乳化剂和 /或悬浮剂，连同诸如水、乙醇、丙二醇、甘油及其各种组合的稀释剂一起进行组合。

片剂可以是未包衣的或通过已知的技术进行包衣以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，从而在更长的时期内提供持续的作用。例如，可采用延时材料如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。用于口服的制剂还可以硬明胶胶囊来提供，其中活性成分与惰性固体稀释剂，例如，碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或作为软明胶胶囊来提供，其中活性成分与水或油介质，例如，花生油、液体石蜡或橄榄油混合。

可用于形成本公开内容的药物组合物和剂型的表面活性剂包括但不限于亲水性表面活性剂、亲脂性表面活性剂及其混合物。亦即，可采用亲水性表面活性剂的混合物，可采用亲脂性表面活性剂的混合物，或者可采用至少一种亲水性表面活性剂和至少一种亲脂性表面活性剂的混合物。

合适的亲水性表面活性剂通常可具有至少10的HLB值，而合适的亲脂性表面活性剂通常可具有约10或小于约10的HLB值。用于表征非离子两亲化合物的相对亲水性和疏水性的经验参数为亲水- 亲脂平衡(“HLB”值)。具有较低HLB值的表面活性剂更加亲脂或疏水，并且在油中具有更高的溶解度，而具有较高HLB值的表面活性剂更加亲水，并且在水溶液中具有较高的溶解度。通常认为亲水性表面活性剂是具有大于约10的HLB值的那些化合物，以及通常不适用HLB评分的阴离子、阳离子或两性离子化合物。类似地，亲脂性 (即疏水性)表面活性剂是具有等于或小于约10的HLB值的化合物。然而，表面活性剂的HLB值仅仅是通常用于实现工业、药物和美容乳液配制的初步指南。

亲水性表面活性剂可以是离子型的或非离子性的。合适的离子表面活性剂包括但不限于烷基铵盐；梭链孢酸盐；氨基酸、寡肽和多肽的脂肪酸衍生物；氨基酸、寡肽和多肽的甘油酯衍生物；卵磷脂和氢化卵磷脂；溶血卵磷脂和氢化溶血卵磷脂；磷脂及其衍生物；溶血磷脂及其衍生物；肉碱脂肪酸酯盐；烷基硫酸盐；脂肪酸盐；多库酯钠；酰基乳酰乳酸盐(acylactylates)；单甘油酯和二甘油酯的单乙酰酒石酸酯和二乙酰酒石酸酯；琥珀酰单甘油酯和二甘油酯；单甘油酯和二甘油酯的柠檬酸酯；以及其混合物。

在上述组内，离子表面活性剂包括(仅以示例的方式)：卵磷脂、溶血卵磷脂、磷脂、溶血磷脂及其衍生物；肉碱脂肪酸酯盐；烷基硫酸盐；脂肪酸盐；多库酯钠；酰基乳酰乳酸盐；单甘油酯和二甘油酯的单乙酰酒石酸酯和二乙酰酒石酸酯；琥珀酰单甘油酯和二甘油酯；单甘油酯和二甘油酯的柠檬酸酯；以及其混合物。

离子表面活性剂可以是电离形式的卵磷脂、溶血卵磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰丝氨酸、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰甘油、溶血磷脂酸、溶血磷脂酰丝氨酸、PEG-磷脂酰乙醇胺、PVP-磷脂酰乙醇胺、脂肪酸的乳酸酯、硬脂酰-2-乳酸酯、硬脂酰乳酸酯、琥珀酰单甘油酯、单/ 二甘油酯的单/二乙酰酒石酸酯、单/二甘油酯的柠檬酸酯、胆碱肌氨酸(cholylsarcosine)、己酸酯、辛酸酯、癸酸酯、月桂酸酯、豆蔻酸酯、棕榈酸酯、油酸酯、蓖麻醇酸酯、亚油酸酯、亚麻酸酯、硬脂酸酯、十二烷基硫酸酯、十四烷基硫酸酯(tetracecyl sulfate)、多库酯、月桂酰肉碱、棕榈酰肉碱、豆蔻酰肉碱及其盐和混合物。

亲水性非离子表面活性剂可包括但不限于烷基葡萄糖苷；烷基麦芽糖苷；烷基硫代葡萄糖苷；月桂基聚乙二醇甘油酯；聚氧化烯烷基醚，如聚乙二醇烷基醚；聚氧化烯烷基酚，如聚乙二醇烷基酚；聚氧化烯烷基酚脂肪酸酯，如聚乙二醇脂肪酸单酯和聚乙二醇脂肪酸二酯；聚乙二醇甘油脂肪酸酯；聚甘油脂肪酸酯；聚氧化烯山梨聚糖脂肪酸酯，如聚乙二醇山梨聚糖脂肪酸酯；多元醇与甘油酯、植物油、氢化植物油、脂肪酸和甾醇中的至少一种成员的亲水性酯交换产物；聚氧乙烯甾醇、其衍生物及其类似物；聚氧乙烯维生素及其衍生物；聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物；以及其混合物；聚乙二醇山梨聚糖脂肪酸酯以及多元醇与甘油三酯、植物油和氢化植物油中的至少一种成员的亲水性酯交换产物。多元醇可以是甘油、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇、丙二醇、季戊四醇或糖类。

其他亲水性非离子表面活性剂包括但不限于PEG-10月桂酸酯、 PEG-12月桂酸酯、PEG-20月桂酸酯、PEG-32月桂酸酯、PEG-32二月桂酸酯、PEG-12油酸酯、PEG-15油酸酯、PEG-20油酸酯、PEG-20 二油酸酯、PEG-32油酸酯、PEG-200油酸酯、PEG-400油酸酯、PEG-15 硬脂酸酯、PEG-32二硬脂酸酯、PEG-40硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、PEG-20二月桂酸酯、PEG-25甘油三油酸酯、PEG-32二油酸酯、 PEG-20甘油月桂酸酯、PEG-30甘油月桂酸酯、PEG-20甘油硬脂酸酯、PEG-20甘油油酸酯、PEG-30甘油油酸酯、PEG-30甘油基月桂酸酯、PEG-40甘油月桂酸酯、PEG-40棕榈仁油、PEG-50氢化蓖麻油、PEG-40蓖麻油、PEG-35蓖麻油、PEG-60蓖麻油、PEG-40氢化蓖麻油、PEG-60氢化蓖麻油、PEG-60玉米油、PEG-6癸酸/辛酸甘油酯、PEG-8癸酸/辛酸甘油酯、聚甘油-10月桂酸酯、PEG-30胆固醇、 PEG-25植物甾醇、PEG-30大豆甾醇、PEG-20三油酸酯、PEG-40山梨聚糖油酸酯、PEG-80山梨聚糖月桂酸酯、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、POE-9月桂基醚、POE-23月桂基醚、POE-10油基醚、POE-20 油基醚、POE-20硬脂基醚、生育酚PEG-100琥珀酸酯、PEG-24胆固醇、聚甘油-10-油酸酯、吐温40、吐温60、蔗糖单硬脂酸酯、蔗糖单月桂酸酯、蔗糖单棕榈酸酯、PEG 10-100壬基苯酚系列、PEG 15-100 辛基苯酚系列和泊洛沙姆。

合适的亲脂性表面活性剂包括(仅以示例的方式)：脂肪醇；甘油脂肪酸酯；乙酰甘油脂肪酸酯；低级醇脂肪酸酯；丙二醇脂肪酸酯；山梨聚糖脂肪酸酯；聚乙二醇山梨聚糖脂肪酸酯；甾醇和甾醇衍生物；聚氧乙烯甾醇和甾醇衍生物；聚乙二醇烷基醚；糖酯；糖醚；单甘油酯和甘油二酯的乳酸衍生物；多元醇与甘油酯、植物油、氢化植物油、脂肪酸和甾醇中的至少一种成员的疏水性酯交换产物；油溶性维生素/维生素衍生物；以及其混合物。在该组内，优选的亲脂性表面活性剂包括甘油脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯及其混合物，或者为多元醇与植物油、氢化植物油和甘油三酯中的至少一种成员的疏水性酯交换产物。

在一个实施方案中，组合物可包含增溶剂，以确保本公开内容的化合物的良好增溶和/或溶解，并使本公开内容的化合物的沉淀最小化。这对于非口服使用的组合物，例如用于注射的组合物，可能特别重要。还可添加增溶剂以增加亲水性药物和/或其他组分如表面活性剂的溶解度，或将组合物保持为稳定或均匀的溶液或分散剂。

合适的增溶剂的实例包括但不限于以下：醇和多元醇，如乙醇、异丙醇、丁醇、苯甲醇、乙二醇、丙二醇、丁二醇及其异构体、甘油、季戊四醇、山梨糖醇、甘露糖醇、transcutol、二甲基异山梨醇、聚乙二醇、聚丙二醇、聚乙烯醇、羟丙基甲基纤维素和其他纤维素衍生物、环糊精和环糊精衍生物；具有约200至约6000平均分子量的聚乙二醇的醚，如四氢糠醇PEG醚(四氢呋喃聚乙二醇醚(glycofurol))或甲氧基PEG；酰胺和其他含氮化合物如2-吡咯烷酮、2-哌啶酮、ε-己内酰胺、N-烷基吡咯烷酮、N-羟烷基吡咯烷酮、N-烷基哌啶酮、N-烷基己内酰胺、二甲基乙酰胺和聚乙烯吡咯烷酮；酯类如丙酸乙酯、柠檬酸三丁酯、柠檬酸乙酰基三乙酯、柠檬酸乙酰基三丁酯、柠檬酸三乙酯、油酸乙酯、辛酸乙酯、丁酸乙酯、三乙酸甘油酯、丙二醇单乙酸酯、丙二醇二乙酸酯、ε-己内酯及其异构体、δ-戊内酯及其异构体、β- 丁内酯及其异构体；和本领域已知的其他增溶剂，以及二甲基乙酰胺、二甲基异山梨醇、N-甲基吡咯烷酮、单辛精、二甘醇单乙醚和水。

还可使用增溶剂的混合物。实例包括但不限于三乙酸甘油酯、柠檬酸三乙酯、油酸乙酯、辛酸乙酯、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、N-羟乙基吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素、羟丙基环糊精、乙醇、聚乙二醇200-100、四氢呋喃聚乙二醇醚、二乙二醇、丙二醇和二甲基异山梨醇。特别优选的增溶剂包括山梨糖醇、甘油、三乙酸甘油酯、乙醇、PEG-400、四氢呋喃聚乙二醇醚和丙二醇。

可以包含的增溶剂的量没有特别限制。设定增溶剂的量可限于生物可接受的量，其可由本领域技术人员容易地确定。在一些情况下，包含远远超过生物可接受量的增溶剂的量可能是有利的，例如，在向患者提供组合物之前使用常规技术如蒸馏或蒸发去除过量的增溶剂，从而使药物浓度最大化。如果存在，基于药物和其他赋形剂的组合重量，增溶剂可占10％、25％、50％、100％或多达约200％按重量计算的重量比。如果需要，还可使用极少量的增溶剂，如5％、2％、1％或甚至更少。通常，增溶剂可以以约1％至约100％，更典型地约5％至约25％按重量计算的量存在。

组合物可进一步包含一种或多种药学上可接受的添加剂和赋形剂。这样的添加剂和赋形剂包括但不限于防黏剂、消泡剂、缓冲剂、聚合物、抗氧化剂、防腐剂、螯合剂、黏性调节剂、张力调节剂、调味剂、着色剂、香味剂、遮光剂、悬浮剂、黏合剂、填充剂、增塑剂、润滑剂及其混合物。

此外，酸或碱可并入组合物中以促进加工、增强稳定性或由于其他原因。药学上可接受的碱的实例包括氨基酸、氨基酸酯、氢氧化铵、氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸氢钠、氢氧化铝、碳酸钙、氢氧化镁、硅酸镁铝、合成硅酸铝、合成二水方解石、氢氧化铝镁、二异丙基乙胺、乙醇胺、乙二胺、三乙醇胺、三乙胺、三异丙醇胺、三甲胺、三 (羟甲基)氨基甲烷(TRIS)等。其他适用的碱为药学上可接受的酸如乙酸、丙烯酸、己二酸、海藻酸、链烷磺酸、氨基酸、抗坏血酸、苯甲酸、硼酸、丁酸、碳酸、柠檬酸、脂肪酸、甲酸、富马酸、葡萄糖酸、氢醌磺酸、异抗坏血酸、乳酸、马来酸、草酸、对溴苯磺酸、丙酸、对甲苯磺酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、鞣酸、酒石酸、巯基乙酸、甲苯磺酸、尿酸等的盐。还可使用多元酸的盐，如磷酸钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠。当碱为盐时，阳离子可以是任何常规的且药学上可接受的阳离子，如铵、碱金属、碱土金属等。实例可包括但不限于钠、钾、锂、镁、钙和铵。

合适的酸是药学上可接受的有机酸或无机酸。合适的无机酸的实例包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、硼酸、磷酸等。合适的有机酸的实例包括乙酸、丙烯酸、己二酸、海藻酸、链烷磺酸、氨基酸、抗坏血酸、苯甲酸、硼酸、丁酸、碳酸、柠檬酸、脂肪酸、甲酸、富马酸、葡萄糖酸、氢醌磺酸、异抗坏血酸、乳酸、马来酸、甲磺酸、草酸、对溴苯磺酸、丙酸、对甲苯磺酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、鞣酸、酒石酸、巯基乙酸、甲苯磺酸、尿酸等。

用于注射的药物组合物

在一些实施方案中，本公开内容提供用于注射的药物组合物，其含有本公开内容的化合物和适合用于注射的药物赋形剂。组合物中药剂的组分和量如本文所述。

其中可并入本公开内容的新型组合物以供通过注射进行施用的形式包括具有芝麻油、玉米油、棉籽油或花生油的水性或油性悬浮液或乳液，以及酏剂、甘露糖醇、葡萄糖或无菌水溶液，以及相似的药物媒介物。

盐水中的水溶液也常用于注射。还可采用乙醇、甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等(及其合适的混合物)、环糊精衍生物和植物油。可例如通过使用包衣如卵磷脂，用于在分散的情况下维持所需的颗粒大小并通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。可通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、乙基汞硫代水杨酸钠等引起对微生物作用的预防。

通过根据需要将所需量的本公开内容的化合物并入具有如上文所列举的各种其他成分的合适溶剂中，然后过滤灭菌来制备无菌可注射溶液。通常，通过将各种灭菌的活性成分并入含有碱性分散介质和来自上文列举的所需其他成分的无菌媒介物中来制备分散剂。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，某些理想的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，这些技术从其先前无菌过滤的溶液产生活性成分加任何附加的期望成分的粉末。

用于吸入的药物组合物

用于吸入或吹入的组合物包括在药学上可接受的水性或有机溶剂或其混合物中的溶液和悬浮液以及粉末。液体或固体组合物可含有如上所述的合适的药学上可接受的赋形剂。优选地，通过口服或鼻呼吸途径施用组合物以获得局部或全身效应。可利用惰性气体使优选的药学上可接受的溶剂中的组合物雾化。雾化溶液可由雾化装置直接吸入，或者雾化装置可连接至面罩支架或间歇正压呼吸机。可从以适当的方式递送制剂的装置施用溶液、悬浮液或粉末组合物，优选口服或鼻腔施用。

其他药物组合物。

药物组合物还可制备成包含本文所述的组合物，如包含 sinetirucalol或盘龙参提取物的组合物，以及一种或多种适合用于舌下、颊部、直肠、骨内、眼内、鼻内、硬膜外或脊椎内给药的药学上可接受的赋形剂。赋形剂及其在药物组合物中的使用是本领域公知的。参见例如，Anderson，Philip O.；Knoben，James E.；Troutman，William G 编，Handbook ofClinical Drug Data，第十版，McGraw-Hill，2002；Pratt 和Taylor编，Principles ofDrug Action，第三版，Churchill Livingston， New York，1990；Katzung编，Basic andClinical Pharmacology，第九版， McGraw Hill，20037ybg；Goodman和Gilman编，ThePharmacological Basis of Therapeutics，第十版，McGraw Hill，2001；RemingtonsPharmaceutical Sciences，第20版，Lippincott Williams&Wilkins.，2000； Martindale，The Extra Pharmacopoeia，第三十二版(The Pharmaceutical Press，London，1999)；所有这些内容均通过引用而整体并入本文。

在一些实施方案中，组合物和方法进一步包括分开或同时施用一种或多种额外的药剂(例如，1、2、3、4、5或更多种)。额外的药剂可包括可用于伤口愈合的药剂。额外的药剂的非限制性实例包括抗生素(例如氨基糖苷类、头孢菌素、氯霉素、克林霉素、红霉素、氟喹诺酮、大环内酯类、偶氮化物(Azolides)、甲硝唑、青霉素、四环素、甲氧苄啶-磺胺甲噁唑、万古霉素)，类固醇(例如雄甾烷 (例如睾酮)、胆甾烷(例如胆固醇)、胆酸(例如胆酸)、皮质类固醇(例如地塞米松)、雌甾烷(例如雌二醇)、孕甾烷(例如孕酮)、麻醉和非麻醉止痛剂(例如吗啡、可待因、海洛因、氢吗啡酮、羟甲左吗喃、哌替啶、美沙酮、氧化酮、丙氧芬、芬太尼、美沙酮、纳洛酮、丁丙诺啡、布托啡诺、纳布啡、喷他佐辛)，化疗(例如抗癌药物，诸如但不限于六甲蜜胺、天冬酰胺酶、博来霉素、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、二乙基己烯雌酚、乙炔雌二醇、依托泊苷、氟尿苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、氟他米特、戈舍瑞林、羟基脲、伊达比星、异环磷酰胺、亮丙瑞林、左旋咪唑、洛莫司汀、氮芥、甲羟孕酮、甲地孕酮、美法仑、巯基嘌呤、甲氨蝶呤、丝裂霉素、米托坦、米托蒽醌、紫杉醇、喷司他丁、哌泊溴烷、普卡霉素、强的松、丙卡巴肼、链脲霉素、他莫昔芬、替尼泊苷、长春花碱、长春新碱)，抗炎剂(例如阿氯芬酸；二丙酸阿氯米松；丙缩阿尔孕酮；α-淀粉酶；安西法尔；安西非特；氨芬酸钠；盐酸氨普立糖；阿那白滞素；阿尼罗酸；阿尼扎芬；阿扎丙宗；巴柳氮二钠；苄达酸；苯噁洛芬；盐酸苄达明；菠萝蛋白酶；溴哌莫；布地奈德；卡洛芬；环洛芬；辛喷他宗；克利洛芬；丙酸氯倍他索；丁酸倍氯他松；氯吡酸；丙酸氯硫卡松；醋酸三氟米松；可托多松；癸酸盐；地夫可特；庚酸睾酮；环戊丙酸睾酮；地索奈德；去羟米松；双丙酸地塞米松；双氯芬酸钾；双氯芬酸钠；双醋二氟松；二氟米酮钠；二氟尼柳；二氟泼尼酯；地弗他酮；二甲亚砜；羟西缩松；恩甲羟松；恩莫单抗；依诺利康钠；依匹唑；依托度酸；依托芬那酯；联苯乙酸；非那莫；芬布芬；芬氯酸；苯克洛酸；芬度柳(Fendosal)；奋匹帕隆(Fenpipalone)；芬替酸；夫拉扎酮；氟扎可特；氟芬那酸；氟鲁咪唑；醋酸氟尼缩松；氟尼辛；氟尼辛葡甲胺；福可定丁酯；醋酸氟米龙；氟喹宗；氟比洛芬；氟瑞托芬；丙酸氟替卡松；呋喃洛芬；呋罗布芬；哈西奈德；丙酸卤倍他索；醋酸卤泼尼松；异丁芬酸；布洛芬；布洛芬铝；布洛芬吡甲酯；伊洛达普；吲哚美辛；吲哚美辛钠；吲哚洛芬；吲哚克索；吲四唑；醋酸异氟泼尼松；伊索克酸；伊索昔康；酮洛芬；盐酸洛非咪唑；氯诺昔康；依碳酸氯替泼诺；甲氯芬那酸钠；甲氯芬那酸；甲氯松二丁酯；甲芬那酸；美沙拉明；美西拉宗；美睾酮；美雄酮；美替诺龙；醋酸美替诺龙；磺庚甲泼尼龙；莫尼氟酯；萘丁美酮；诺龙；萘普生；萘普生钠；萘普索；尼马宗；奥沙拉秦钠；奥古蛋白；奥帕诺辛；奥沙卓烷；奥沙普嗪；羟布宗；羟甲烯龙；盐酸瑞尼托林；戊聚糖多硫酸钠；甘油保泰松钠；吡非尼酮；吡罗昔康；肉桂酸吡罗昔康；吡罗昔康乙醇胺；吡洛芬；泼那扎特；普立非酮；丙哚乙酸；丙喹酮；普罗沙唑；柠檬酸普罗沙唑；瑞美松龙；氯马扎利(Romazari)；柳胆来司；沙那西定；双水杨酸酯；血根氯铵；司克拉宗；丝美辛；司坦唑醇；舒多昔康；舒林酸；舒洛芬；他美辛；他尼氟酯；他洛柳酯；特丁非隆；替尼达普；替尼达普钠；替诺昔康；替昔康；苄叉异喹酮；睾酮；睾酮混合物；四氢甲吲胺；硫平酸；巯氢可的松；托美丁；托美丁钠；三氯奈德；三氟氨酯；齐多美辛；佐美酸钠)或抗组胺剂(例如乙醇胺(如苯海拉明、卡比沙明)、乙二胺(如曲吡那敏、吡拉明)、烷基胺(如氯苯那敏、右旋氯苯那敏、溴苯那敏、曲普利啶)、其他抗组胺剂如阿司咪唑、氯雷他定、非索非那定、溴苯那敏、克立马丁、对乙酰氨基酚、假麻黄碱、曲普利啶)。

食物

在一方面，本公开内容提供包含食物载体和一定量sinetirucallol 的食物组合物。食物组合物可以是用于施用sinetirucallol的剂型，如本文所述的剂型。在一些实施方案中，食物组合物包含约0.001至1000 mg、0.01至100mg、0.1至200mg、3至200mg、5至500mg、10 至100 mg、10至1000mg、50至200mg或100至1000mg的 sinetirucallol。在一些实施方案中，食物组合物包含约或多于约0.001 μg、0.01μg、0.1、0.5μg、1μg、2μg、3μg、4μg、5μg、6μg、7μg、 8μg、9μg、10μg、15μg、20μg、25μg、50μg、75μg、100μg、 200μg、500μg、1000μg或更多的sinetirucallol。在一些实施方案中，食物组合物包含至少约4.4μg的sinetirucallol。在一些实施方案中，食物组合物包含约4.4-44μg量的sinetirucallol。在一些实施方案中，食物组合物包含至少约44μg的sinetirucallol。在一些实施方案中，食物组合物包含盘龙参提取物。

可通过各种合适的方法中的任何一种来实现所公开的食物组合物的包装。例如，可将食物组合物包装为饮品、固体食物和/或半固体食物。在一些情况下，将所公开的食物组合物包装为食品，如由快餐食品、谷类制品、烘烤食品和乳制品中的一种或多种形式。

在一些实施方案中，将所公开的药物组合物包装在被配制为单位剂量的食品中。不受任何限制的约束，将单位剂量配制为饮品、膳食补充剂、固体食物和/或半固体食物。

治疗

在一些方面，本公开内容提供减少自由基、降低炎性反应并且/ 或者促进伤口愈合的药物组合物和方法。在一些实施方案中，该方法包括向有需要的受试者施用包含被配制用于向受试者施用的 sinetirucallol的剂型。在一些实施方案中，该剂型进一步包含药物载体。在一些实施方案中，该剂型包含盘龙参提取物。该方法可包括施用本文公开的任何组合物，如剂型、药物组合物或食物组合物。本文描述了组合物的施用和有效性的测量，如关于本文公开的各种组合物。

如上所述，本公开内容提供用于降低炎性反应的方法，其包括向有需要的受试者施用包含sinetirucallol的剂型。组合物可以是本文所述的任何含sinetirucallol的组合物。在一些实施方案中，将 sinetirucallol的剂型配制用于向受试者施用。在相关的实施方案中，剂型是包含药学上可接受的载体的药物组合物，其实例在本文中描述。在又一相关的实施方案中，剂型包含盘龙参提取物，如本文所述的提取物。

在一些实施方案中，本公开内容提供用于治疗炎症(包括但不限于肝纤维化)的药物组合物和方法。所公开的组合物可用于提供抗炎、抗肝纤维化和/或抗氧化活性。在一些实施方案中，组合物包含有效量的sinetirucallol。在一些实施方案中，药物组合物包含有效量的盘龙参提取物。在一些实施方案中，药物组合物进一步包含药学上可接受的载体。

在一些实施方案中，本文提供的方法可降低受试者中的炎症。通常，炎症是身体对入侵的感染性微生物的反应，并通常导致到达受影响区域的血流量增加、吸引白细胞的化学物质释放、血浆的流量增加以及单核细胞(或在大脑中为星形胶质细胞)的到来以清理碎片。炎性刺激物可以是刺激炎性反应的任何物质。在一些实施方案中，除了降低受试者响应于组织损伤的炎症之外，所提供的组合物和方法还可用于治疗与炎性细胞水平的病理性增加相关联的病症，包括例如，哮喘、湿疹、鼻窦炎、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、炎性肠病、皮肤和全身肥大细胞增多症、银屑病和多发性硬化。采用所提供多肽的治疗可用于减少瘙痒，例如愈合伤口的瘙痒。通常，瘙痒由肥大细胞释放组胺所引起。在一些实施方案中，所提供的组合物用于减少肥大细胞脱粒和组胺释放。在一些实施方案中，所提供的组合物用于治疗涉及组胺释放的病况，包括但不限于瘙痒、擦伤、窦性刺激、过敏性咳嗽、红眼、哮喘和湿疹。

在一些实施方案中，炎性反应与慢性或急性免疫病症相关。在一些实施方案中，组合物提供用于治疗与慢性或急性免疫病症或免疫缺陷如原发性免疫缺陷和继发性或获得性免疫缺陷和/或自身免疫病相关的疾病或病症的方法。自身免疫病的实例可包括狼疮、硬皮病、某些类型的溶血性贫血、血管炎、I型糖尿病、格雷夫斯病、类风湿性关节炎、多发性硬化、古德帕斯彻综合征、恶性贫血、一些类型的肌肉病变和莱姆病(晚期)。原发性免疫缺陷的实例包括重症综合性免疫缺陷(SCID)、迪乔治综合征、高免疫球蛋白E综合征(也称为Job综合征)、常见变异型免疫缺陷(CVID)、慢性肉芽肿病(CGD)、维斯科特-奥尔德里奇综合征(WAS)、自身免疫淋巴增生综合征 (ALPS)、高IgM综合征、白细胞黏附缺陷(LAD)、NF-κB必需修饰蛋白(NEMO)突变、选择性免疫球蛋白A缺乏症、X-连锁无丙种球蛋白血症(XLA，也称为布鲁顿型无丙种球蛋白血症)和X-连接淋巴增生性疾病(XLP)和共济失调毛细血管扩张症。继发性免疫缺陷的实例是AIDS。其他免疫病症包括过敏，如季节性过敏、肥大细胞增多症、多年性过敏、过敏性反应、食物过敏、过敏性鼻炎和特应性皮炎。其他非限制性实例包括急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、爱迪生氏病、抗磷脂抗体综合征(APS)、再生障碍性贫血、自身免疫性肝炎、乳糜泄、克罗恩病、糖尿病(1型)、古德帕斯特综合征、格雷夫斯病、格林-巴利综合征(GBS)、Ha e(OMS)、视神经炎、 Ord氏甲状腺炎、oemphigus、多发性关节炎、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、类风湿性shimoto病、红斑狼疮、多发性硬化、重症肌无力、眼阵挛肌阵挛综合征关节炎、莱特尔氏综合征、高安氏动脉炎、颞动脉炎(也称为“巨细胞动脉炎”)、温性自身免疫性溶血性贫血、韦格纳氏肉芽肿病、全身性秃发症、恰加斯氏病、慢性疲劳综合征、自主神经功能异常、子宫内膜异位症、化脓性汗腺炎、间质性膀胱炎、神经性肌强直、结节病、硬皮病、溃疡性结肠炎、白癜风和外阴痛。其他病症包括骨再吸收病症和血栓。

在本公开内容的一些实施方案中，所述组合物的施用减少与自身免疫病、神经退行性疾病或与炎症相关的疾病相关联的一种或多种症状。这样的症状的非限制性实例包括炎症、疲劳、头晕、不适、高烧和体温升高、手脚对寒冷极度敏感、肌肉和关节虚弱僵硬、体重变化、消化或胃肠道问题、低血压或高血压、易怒、焦虑或抑郁、不育或性冲动下降(性欲低)、血糖变化，以及根据自身免疫病的类型，器官或组织的大小增加或者器官或组织的破坏。

在一些实施方案中，施用包含sinetirucallol的组合物有效地改善与类风湿性关节炎相关联的症状，包括但不限于关节肿胀的减轻、血清抗胶原蛋白水平的降低和/或关节病变如骨再吸收、软骨损伤、血管翳和/或炎症的减少。在一些实施方案中，主题方法有效地使关节(例如腿或踝)炎症降低至少约2％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、 50％、60％或约75％至90％。在一些实施方案中，炎症被降低至少约 2％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、50％、60％或约75％至90％或更多。在一些实施方案中，主题方法有效地使血清抗II型胶原蛋白水平降低至少约10％、12％、15％、20％、24％、25％、30％、35％、 50％、60％、75％、80％、86％、87％或约90％或更多。在一些实施方案中，主题方法有效地使踝组织病理学评分降低约5％、10％、15％、 20％、25％、30％、40％、50％、60％、75％、80％、90％或更多。在一些实施方案中，主题方法有效地使膝组织病理学评分降低约5％、 10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、75％、80％、90％或更多。

在一些实施方案中，施用包含sinetirucallol的组合物对于哮喘的治疗是有效的。另外，本文所述的化合物或药物组合物可用于内毒素血症和败血症的治疗。在一个实施方案中，本文所述的化合物或药物组合物用于类风湿性关节炎(RA)的治疗。在另一个实施方案中，本文所述的化合物或药物组合物用于接触性或特应性皮炎的治疗。接触性皮炎包括刺激性皮炎、光毒性皮炎、过敏性皮炎、光变应性皮炎、接触性荨麻疹、全身性接触型皮炎等。当皮肤对某种物质敏感，而皮肤上使用过多的该物质时可发生刺激性皮炎。特应性皮炎有时被称为湿疹，是皮炎的一种，即特应性皮肤病。

可使用各种方法，如本文所述的方法来测量炎症的降低。在一些实施方案中，炎性反应的降低是炎症降低的象征。用于测量炎性反应降低的方法包括，例如，选自下组的一种或多种生物学标志物的表达或活性的降低：iNOS、COX-2、TNF-α、PGE2、IL-6、IL-β、IL-33、NLRP3、pERK、NFκB、MMP2和MMP9。

还可通过炎性细胞类型，例如单核细胞或星形胶质细胞的密度降低来测量炎症的降低。可通过炎性细胞类型，例如嗜中性粒细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞和单核细胞的密度降低来测量炎症的降低。可通过体内测量嗜中性粒细胞活性来计算炎症的降低。此外，如肥大细胞脱粒的频率或者组胺水平或活性氧物质水平的测量值等因子可用作炎症降低的测量值。还可通过借助用于例如基因如干扰素-α、干扰素-β和干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素1β、白细胞介素-2、白细胞介素-4、白细胞介素-5、白细胞介素-6、白细胞介素-8、白细胞介素-12、白细胞介素-18、白细胞介素-23、白细胞介素-27、CD4、 CD28、CD80、CD86、MHCII和iNOS的qRT-PCR检查某些基因的转录水平来间接测量炎症水平。受试者的组织和/或体液(包括血浆) 中促炎细胞因子水平的测量值可衡量炎症的降低。值得注意的是， ACT肽作用的机制可能是通过抑制炎性细胞迁移和/或抑制促炎化学物质(组胺、活性氧物质)和促炎细胞因子如白细胞介素(IL)-1、 IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子(TNF)。

在一些实施方案中，还通过与炎性反应相关联的一种或多种自由基，如活性氧物质或活性氮物质的水平降低来证明炎性反应的降低。活性氧物质(“ROS”)和活性氮物质(“RNS”)是生物体中具有重要生理功能的化合物的两种主要类型。ROS和RNS不仅包括自由基，还包括在细胞内氧化过程期间形成的其他相关的非自由基物质。这些自由基和相关物质也可参与来自膜受体的信号转导、免疫学和炎性反应、平滑肌松弛、氧化还原稳态、细胞凋亡和血管紧张等的调控。

ROS包括自由基物质，如超氧自由基阴离子(O₂ ^-.)和羟基自由基(.OH)；以及相关的非自由基物质，如过氧化物(ROOR)、过氧化氢(H₂O₂)、单线态氧(¹O₂)和过氧亚硝酸根(ONOO^-)。 RNS包括自由基物质，如一氧化氮(.NO)；和相关的非自由基物质，如亚硝鎓阳离子(NO⁺)、硝酰基阴离子(NO^-)和过氧亚硝酸根 (ONOO^-)。许多酶促过程，如由黄嘌呤氧化酶、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶同工型和环加氧酶同工型催化的反应，导致ROS的形成(Fink M P.“Reactive oxygen species as mediators of organ dysfunctioncaused by sepsis，acute respiratory distress syndrome， or hemorrhagic shock：potential benefits of resuscitation with Ringer′s ethyl pyruvate solution”，Curr Opin Clin Nutr Metab Care 2002， 5：167-174)。RNS是可由于L-精氨酸的氧化而形成的中间体。该氧化过程由一氧化氮合酶(NOS)同工型催化，并导致一氧化氮(.NO) 的形成。存在三种NOS同工型：神经元NOS(nNOS)、内皮NOS (eNOS)和可诱导NOS(iNOS)。这些同工型在各种亚细胞位置和组织中表达，其中非限制性实例包括心肌细胞、神经胶质细胞、骨骼细胞、嗜中性粒细胞、血管平滑肌细胞和血小板。一氧化氮可转化成其他非自由基RNS，如亚硝鎓阳离子(NO⁺)、硝酰基阴离子(NO^-) 和过氧亚硝酸根(ONOO^-，由一氧化氮和超氧阴离子之间的反应形成的有毒化合物)。

ROS和RNS还可作为包括炎性过程在内的许多不同细胞内信号级联放大的介质发挥关键作用(

W，“Free radicals in the physiological control of cellfunction”，Physiol Rev.，82(1)：47-95，2002)。特别地，ROS涉及由促炎转录因子NF-κB(Pantano等人，“Redox-sensitive kinases of the nuclear factor-kappaB signalingpathway”.Antioxid Redox Signal.，8(9-10)：1791-806，2006；Gloire等人，“NF-kappaBactivation by reactive oxygen species：fifteen years later”， BiochemPharmacol，72：1493-1505，2006)和激活蛋白(AP)-1(Liu等人“Redox-dependenttranscriptional regulation”.Circ Res97：967-974，2005； Lin等人，“Superoxidedismutase inhibits the expression of vascular cell adhesion molecule-1 andintracellular cell adhesion molecule-1 induced by tumor necrosis factor-alphain human endothelial cells through the JNK/p38pathways”，Arterioscler ThrombVasc Biol，25：334-340，2005) 介导的信号传导的调控。氧化还原依赖性信号传导机制还涉及促炎促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)的活化，包括p38和JNK(Nagai等人，“Pathophysiological roles of ASK1-MAP kinase signaling pathways”， J BiochemMol Biol，40：1-6，2007)。一氧化氮合酶同工型的表达与炎症相关联，其中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的诱导可由脂多糖(LPS)，内毒素或炎性细胞因子如IFN-γ、TNF-αc和IL-1启动(Guzik等人，“Nitric oxide and superoxide in inflammation and immuneregulation，”J Physiol Pharmacol，54(4)：469-87，2003)。

ROS和RNS的正确调控提供对氧化应激的保护，并提供细胞过程中的重要介质。然而，ROS和RNS的过量产生或不适当的清除可导致对细胞成分如蛋白质、DNA和膜脂质的损伤；细胞内信号级联放大的功能紊乱；细胞毒作用；和酶失活。自由基已被认为在广泛的疾病和病理过程，包括各种形式的癌症、2型糖尿病、动脉粥样硬化、慢性炎性病况、缺血/再灌注损伤、败血症和一些神经退行性疾病的发病机理中十分重要(

W.Free radicalsin the physiological control of cell function.Physiol Rev 2002，82：47-95)。

在一些实施方案中，施用根据本公开内容的组合物有效地使一种或多种自由基的水平降低至少约0.1％、2％、5％、10％、15％、20％、 25％、30％、50％、60％或约75％至90％或更多。可通过任何合适的测定，如通过亚硝酸盐定量来测量一种或多种自由基水平的降低。还可在抗氧化活性测定，如本文公开的测定中测量一种或多种自由基水平的降低。

炎性反应还可导致组织肿胀。如本文所述，肿胀通常是身体对损伤的反应，由于流体和白细胞向炎症区域中的移动增加而导致。一般而言，肿胀是身体部位的任何异常增大。其可以是由于流体(包括血液)、骨畸形、肌肉或许多事项所造成。在一些情况下，肿胀可以是水肿，其描述积聚在关节囊外的组织中的流体或肿胀，包括在小腿或大腿中的肿胀。在一些情况下，肿胀可以是渗出液，其描述关节囊内的流体，如肿胀的脚踝或膝盖。在一些情况下，肿胀可以是关节积血，其为关节囊内的渗出液中存在血液的病况并指示韧带损伤，如ACL撕裂或骨折。这通常通过用针从关节囊提取一些流体进行确定。关节积血可以是急性或慢性的。急性关节积血是指肿胀在损伤24小时内发生。如果肿胀在前2小时内发生，其可能与关节积血相关联，应由医疗专业人士进行检查。慢性关节积血是指肿胀在长时间段内发生，并且可能难以检测，但如果不进行治疗，则是极为有害的。

在一些实施方案中，组织肿胀的减轻证明炎性反应的降低。如本文所述，肿胀的减轻可出现在包括皮肤、上皮、滑膜组织、肌腱、软骨、韧带、骨骼、肌肉、器官、硬脑膜、血管、骨髓和细胞外基质在内的组织中。可通过肿胀指数的变化来确定组织肿胀的减轻。作为非限制性实例，可通过将动物的受伤肢体的面积除以动物的对照未受伤肢体的面积来计算肿胀指数。肿胀指数可表示为基于受伤和对照未受伤肢体的肿胀指数的比值。在一些实施方案中，可记录所述施用之前和之后的受伤和对照未受伤肢体的肿胀指数用于比较。作为另一非限制性实例，可通过在一只爪中注射完全弗氏佐剂(CFA)来诱导动物模型中的炎症。在一些实施方案中，施用组合物有效地使组织肿胀降低至少约0.1％、2％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、50％、 60％或约75％至90％或更多。

在一方面，本公开内容提供用于促进伤口愈合的药物组合物和方法，其包括向有需要的受试者施用包含sinetirucallol的剂型。组合物可以是本文所述的任何含sinetirucallol的组合物。在一些实施方案中，将sinetirucallol的剂型配制用于向受试者施用。在相关的实施方案中，剂型是包含药学上可接受的载体的药物组合物，载体实例在本文中描述。在又一相关的实施方案中，剂型包含盘龙参提取物，如本文所述的提取物。在一些实施方案中，促进伤口愈合包括与可比较的未治疗伤口愈合的速度相比，或与经治疗的伤口在治疗前愈合的速率相比，增加伤口愈合的速度。提高的伤口愈合速度可包括10％、20％、 30％、40％、50％、100％、150％、200％、250％、500％、1000％或更高的愈合速度的增加。

在一些实施方案中，促进伤口愈合包括与发生在未治疗伤口中的纤维化或治疗前出现在愈合伤口的部分愈合部位中的纤维化相比减少纤维化。纤维化是作为响应于组织损伤的病理过程，其包括瘢痕形成和通过结缔组织的细胞外基质的过量产生。修复过程通常涉及两个不同的阶段：再生阶段，在该阶段，损伤的细胞被相同类型的细胞取代，从而不会留下持久的损伤证据；和称为纤维增生或纤维化的阶段，在该阶段，结缔组织取代正常的实质组织。尽管修复过程最初是有益的，但是当其未受到适当地控制时，就变成致病性的，从而导致正常组织被永久性瘢痕组织所取代的细胞外基质组分的大量沉积。在一些实施方案中，施用本公开内容的组合物使纤维化降低约或多于约 10％、20％、30％、40％、50％、100％、150％、200％、250％、500％、 1000％或更多。

在一些实施方案中，本文提供的方法可减少受试者在组织损伤后的瘢痕组织形成。瘢痕组织可取代受损皮肤和位于下方的肌肉、损坏的心肌或内脏器官如肝脏的病变区域。瘢痕致密且厚，并且通常比周围的组织颜色更浅，因为瘢痕供血不足，并且尽管它在结构上取代被破坏的组织，但其通常无法执行所缺失组织的所有功能。瘢痕通常由胶原纤维组成，而胶原纤维将会常常限制所涉及组织的正常弹性。因此，瘢痕组织可限制肌肉运动的范围，或在影响淋巴或循环系统时阻止正常的流体循环。脑部或脊髓损伤后的神经胶质瘢痕组织是中枢神经系统损伤后神经功能恢复的主要障碍之一。可通过受损部位内的细胞类型群体来评估瘢痕组织的减少。例如，可通过神经元与星形胶质细胞的比例增加来估计神经胶质瘢痕组织的减少。可通过简单测量瘢痕宽度或瘢痕组织的面积来测量瘢痕组织形成的减少(Wilgus等人，“Reduction of scar formation in full-thickness wounds withtopical celecoxib treatment.”Wound Rep Reg 11：25-34，2003)。此外，可对与正常组织相比的愈合组织内的结构复杂性的恢复进行组织学评估。在一些实施方案中，瘢痕形成可减少至少约0.1％、2％、5％、10％、15％、 20％、25％、30％、50％、60％或约75％至90％或更多。

可通过医生评估在治疗后是否导致受试者中给定组织和/或器官的正常结构和功能的恢复的临床判断来衡量受试者中纤维化组织形成的减少。例如，对于银屑病，医疗专业人士将评估受试者的皮肤，以确定由薄而易剥落的白色堆积物所覆盖的隆起的红色皮肤斑块是否减少。某些种类的银屑病的特征在于脓疱(脓疱型银屑病)或灼伤 (红皮病型)外观。在这样的情况下，医疗专业人士将确定治疗是否导致这些症状的减少。在医疗专业人士判断活检是临床可用和/或必需的受试者中组织或器官的情况下，或在人类疾病的动物模型中，将会制备活检的组织片段，并且将由临床病理学家和/或训练有素的组织病理学家评估组织的组织学结构，以确定是否发生纤维化的减少和正常组织结构和功能的恢复。还可在这样的组织学制剂上定量评估正常组织的纤维化区域。

提供伤口愈合可包括治疗经历美容手术或具有组织损伤的受试者。在其他实施方案中，本公开内容提供使用主题组合物治疗损伤以及/或者促进组织再生的方法。组织损伤的实例包括刮伤，割伤，裂伤，挤压创伤，压迫创伤，拉伸损伤，咬伤，擦伤，枪弹伤，爆炸伤，褥疮，身体穿刺，刺伤，烧伤，枪伤，吹风性皮肤伤，哂伤，化学烧伤，手术创伤，手术干预，医疗干预，细胞、组织或器官移植后的宿主排斥，药物作用，药物副作用，褥疮，辐射损伤，美容手术皮肤创伤，内脏损伤，疾病过程(例如，哮喘、癌症)，感染，感染原，发育过程，成熟过程(例如，痤疮)，遗传异常，发育异常，环境毒素，过敏原，头皮损伤，面部损伤，颌损伤，足部损伤，脚趾损伤，手指损伤，骨损伤，性器官损伤，关节损伤，排泄器官损伤，眼损伤，角膜损伤，肌肉损伤，脂肪组织损伤，肺损伤，气道损伤，疝气，肛门损伤，痔疮，耳损伤，视网膜损伤，皮肤损伤，腹部损伤，手臂损伤，腿损伤，运动损伤，背部损伤，产伤，早产损伤，毒物咬伤，螫伤，肌腱损伤，韧带损伤，心脏损伤，心脏瓣膜损伤，血管系统损伤，软骨损伤，淋巴系统损伤，颅脑创伤，脱臼，食管穿孔，痿管，指甲损伤，外来物，骨折，冻伤，手损伤，热应激障碍，裂伤，颈部损伤，自残，休克，创伤性软组织损伤，脊髓损伤，脊柱损伤，扭伤，拉伤，肌腱损伤，韧带损伤，软骨损伤，胸部损伤，牙齿损伤，创伤，神经系统损伤，老化，动脉瘤，中风，消化道损伤，梗塞，缺血性损伤，骨折，扭伤，拉伤，中风，梗塞，动脉瘤，疝气，缺血，痿管，脱臼，辐射，细胞、组织或器官移植或癌症。在一些实施方案中，本文所述的化合物用于治疗和/或预防痤疮。

在一些实施方案中，促进伤口愈合包括对于创伤组织恢复一定量的正常组织机械性质，如受试者中组织损伤后的拉伸强度。“拉伸强度”是指破坏组织或伤口所需的应力或拉力的量。治疗伤口的拉伸强度在治疗后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月或6个月内可以为未受伤组织的60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、 100％。在一些实施方案中，提供了恢复组织机械性质的方法，其包括在向该受试者施用在药学上可接受的载体中的一种或多种本文提供的组合物(例如，sinetirucallol或盘龙参提取物)的受试者中增加愈合损伤的拉伸强度以接近或达到正常未受伤组织的拉伸强度。

可使用公开的组合物或方法进行治疗以恢复拉伸强度的组织的实例包括肌肉骨骼结构/组织和覆盖这些结构的皮肤的损伤。例如，可施用所提供的组合物以提高活动关节、骨、软骨、肌腱或韧带的拉伸强度。提高拉伸强度可包括提高处于较高程度的应力/拉力下的皮肤，如覆盖肘部、膝盖或足部的皮肤的拉伸强度。与关节损伤愈合相关联的最常见的问题在于，这些区域中的过度瘢痕形成导致收缩，以及愈合关节区域的不可延展性。这具有严重的美容和心理后果。组合物的性质可用于调节并减少这种瘢痕组织的形成，从而导致关节的更大的移动性。

在一些实施方案中，促进伤口愈合包括在受试者中的组织损伤后增加组织再生。与瘢痕形成相比，组织再生涉及组织恢复到其原始结构、功能和生理状况。这在本文中也称为组织“复杂性”。恢复可以是部分的或完全的，其意指与天然或对照水平相比10％、20％、30％、 40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％的恢复或各个数值间的任何恢复量。例如，在皮肤损伤的情况下，组织再生可涉及毛囊、腺体结构、血管、肌肉或脂肪的恢复。在脑损伤的情况下，组织再生可涉及神经元的维持或恢复。作为皮肤情况下的实例，可通过测量纤维性瘢痕组织的体积与正常再生皮肤的比值来评估组织再生的改善。作为另一实例，可对非连续的再生结构如再生的皮肤腺体进行计数，并相对于伤口区域的体积进行归一化。

在一个实施方案中，组织再生涉及干细胞的募集和分化，以取代损伤的细胞。干细胞在活体中的主要作用是维持并修复其所在的组织。干细胞分化意指未特化细胞(例如，干细胞)获得特化细胞如皮肤、神经、心脏、肝脏或肌肉细胞的特征的过程。例如，在皮肤损伤的情况下，组织再生可涉及存在于上皮中的干细胞分化成毛囊 (Alonso和Fuchs，2003)。在脑损伤的情况下，组织再生可涉及将干细胞分化成神经元。所提供的方法可在受试者中的组织损伤后增强干细胞分化。可通过提供标记内源或移植干细胞的临床可接受的遗传方法或其他方法并确定标记的干细胞向正常组织结构分化及并入的频率来测量增强的干细胞分化。作为另一实例，已知某些结构如毛囊在组织损伤后由内源干细胞得以再生。因此，相对于组织损伤区域归一化的毛囊计数将用作增强的干细胞分化的定量评估。

实施例

给出以下实施例是出于说明本发明的各种实施方案的目的，并非意在以任何方式限制本发明。本实施例以及本文所述的方法目前代表优选的实施方案是示例性的，并非旨在作为对本发明范围的限制。本领域技术人员将想到包含在由权利要求书的范围所限定的本发明精神内的其中变化及其他用途。

实施例1：sinetirucallol的纯化

方法

盘龙参的风干全植株(PERS)。AMES于2013年11月购自中国台湾花莲当地中药店，并通过与已存放在中国台湾台北台湾大学植物学系植物标本馆的凭证标本(编号：TAI.218182，1934年4月12日收集)进行比较而得到鉴定。

将风干的盘龙参全植株(例如2.4kg)打粉，并用EtOAc(例如50L)在室温下直接萃取三次，每次72h，并在减压下对合并的提取物进行浓缩。使用正己烷-EtOAc-甲醇的梯度混合物(分别为1∶0∶0、 10∶1∶0、5∶1∶0、3∶1∶0、1∶1∶0、0∶1∶0、0∶40∶1、0∶30∶1、0∶20∶1和0∶10∶1) 作为洗脱液，使粗提物(例如160g)在硅胶上经受柱层析。根据TLC 结果，得到十三份级分。使用正己烷-EtOAc(3∶1)作为洗脱液，将第四级分在硅胶柱上进行进一步色谱，以产生十份级分。发现级分4-4 和5在过滤后出现晶体，并通过重结晶进行纯化以得到sinetirucallol。通过将其光谱数据(IR、NMR和质谱)与文献中报道的信息进行对比，使化合物的身份得到完全表征。

为了进行以下实验，通过以1mg/mL的浓度将所述提取物溶解在DMSO中来制备储用组合物，该浓度基于所述DMSO的总体积。

实施例2：盘龙参和sinetirucallol的细胞毒性

方法

细胞培养

RAW264.7鼠巨噬细胞细胞系购自生物资源保藏与研究中心 (the BioresourceCollection and Research Center of Taiwan,China )(中国台湾BCRC)。在补充有100U/mL青霉素、100μg/mL丙酮酸钠和10％胎牛血清(FBS； Gibco Inc.)的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM；Gibco Inc.，NY， USA)中将细胞在37℃、5％CO₂下进行温育。

还用0.01％DMSO处理细胞作为媒介物对照。在24h内以6× 10⁵个细胞/孔的密度将细胞接种到12孔板中，然后与具有无血清培养基的0.1％BSA一起温育3h，用不同浓度的盘龙参提取物或SI处理，然后在LPS(1μg/mL)存在的情况下温育4小时。

细胞活力

为了检查本公开组合物的提取物的生物相容性，进行MTT测定(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑溴化物(MTT，Invitrogen)，基于比色的测定)。

简言之，在96孔板中接种8x 10³个细胞/孔，并在5％CO₂、37℃下温育过夜。用不同浓度(5、20、50和100μg/mL)的盘龙参提取物将细胞处理24h，温育后每孔添加20μL(5mg/mL)MTT溶液，并继续温育4h。去除培养基，通过添加100μl/孔的DMSO (Sigma-Aldrich)溶解甲臜，并使用酶标仪(ELISA读数仪，Thermo Labsystems)在570nm处测量OD。通过与未处理的对照细胞进行比较来估计活细胞的百分数。将对照细胞的平均吸光度值视为100％活力。

数据表示为平均值±S.E.。使用单因素方差分析(ANOVA)进行结果的统计学比较。通过Turkey检验，后接不同字母的各柱内平均值显著不同，p＜0.05。

结果

通过MTT测定分析盘龙参提取物和sinetirucallol在RAW 264.7 细胞中的细胞毒性。用盘龙参提取物(5、20、50和100μg/mL)和 sinetirucallol(0.1、1、5M和10μM)处理24h不影响细胞活力(图 1)。这些观察结果表明，盘龙参和sinetirucallol对细胞无毒。

实施例3：盘龙参提取物和sinetirucallol对小鼠中CFA诱导的炎症的影响

方法

动物

C57BL/6小鼠获自实验动物中心(the Laboratory Animal Center of Taiwan,China )(中国台湾台北)，并放置在具有室温(22±2℃)和湿度(60±10％)的受控环境条件下。整个研究期间维持12h光照(06:00 am-18:00pm)及黑暗循环。动物实验由中国台湾东华大学动物伦理委员会(the Dong-Hwa University Animal Ethics Committee of Taiwan,China )批准，并根据东华大学《实验动物护理和使用指南》进行使用。所有接受 CFA的动物均发展出严重的炎症，通常后肢在20min期间内变得严重红肿，从而使得炎症评分为200％肿胀。实验包括：CFA组：该组仅由CFA诱导但未治疗；盘龙参提取物(SS)组：该组接受不同浓度(0.5、0.3和0.06mg/kg体重)盘龙参提取物的腹膜内注射； sinetirucllol(SI)组：该组接受不同浓度(4.4、2.2和0.44μg/kg)SI 的腹膜内注射；曲安西龙(TS)：该组接受0.3mg/kg曲安西龙(临床类固醇药物)的腹膜内注射作为阳性对照；Sevatrim(SE)：该组接受3mg/kg的Sevatrim(临床NSAID)的腹膜内注射作为阳性对照。每组5只小鼠。为了产生慢性炎性反应，在右后爪(i.pl.)的趾面皮下注射20μL的完全弗氏佐剂(CFA；结核分枝杆菌；Sigma，St.Louis， MO，USA)。左后爪用作对照。

在诱导CFA(第0天)后，通过用SS提取物和SI对小鼠进行 3次腹膜内注射治疗直到第2天。连续4天检查抗炎效果，并每天记录肿胀指数。通过下列公式计算肿胀指数，并表示为基于注射前(第 0天)肿胀指数的比例。

数据表示为平均值±S.E.。使用单因素方差分析(ANOVA)进行结果的统计学比较。通过Turkey检验，后接不同字母的各柱内平均值显著不同，p＜0.05。

结果

为了评估盘龙参提取物和SI的抗炎效果，使用CFA诱导的炎症小鼠来确定这种影响。所有治疗组在与CFA组相比时具有抗炎效果。治疗组中，浓度越高的盘龙参提取物具有更好的抗炎效果。盘龙参提取物和阳性对照组(特别是类固醇组)在停止治疗后第3天具有肿胀的明显恢复(图2)。但是，最高浓度0.5mg/kg的盘龙参提取物具有比0.3mg/kg曲安西龙更少的足部肿胀恢复。SI组比盘龙参提取物的抗炎效果要好得多。并SI组具有比0.3mg/kg曲安西龙更少的足部肿胀恢复。但是，0.44μg/kg的SI比4.4μg/kg的SI效果更好，从而表明高浓度的SI可引起免疫因子的过度抑制(图3)。

实施例4：盘龙参提取物对小鼠中CFA诱导的炎症的血液MMP2和MMP9的影响

方法

动物

C57BL/6小鼠来自实验动物中心(中国台湾台北)，并放置在具有室温(22±2℃)和湿度(60±10％)的受控环境条件下。整个研究期间维持12h光照(06:00am-18:00pm)及黑暗循环。动物实验由中国台湾东华大学动物伦理委员会批准，并根据东华大学《实验动物护理和使用指南》进行使用。所有接受CFA的动物均发展出严重的炎症，通常后肢在20min期间内变得严重红肿，从而使得炎症评分为200％肿胀。实验包括：CFA组：该组仅由CFA诱导但未治疗；盘龙参提取物(SS)组：该组腹膜内注射不同浓度(0.5、0.3和0.06mg/kg体重)的盘龙参提取物；sinetirucllol(SI)组：该组腹膜内注射不同浓度(4.4、2.2和0.44μg/kg)的SI；曲安西龙(TS)：该组腹膜内注射0.3mg/kg的临床类固醇药物曲安西龙，用于阳性对照；Sevatrim (SE)：该组腹膜内注射3mg/kg的Sevatrim(临床NSAID)，用于阳性对照。每组5只小鼠。

明胶酶谱检测

通过明胶酶谱检测来测定MMP2和MMP9的活性，因为该方法能够基于其分子量检测MMP2和MMP9的活性形式和潜在形式。在第4天从CFA诱导的小鼠收集血液并离心以获得血清。收集血清并使用Bradford染料(Bio-Rad)进行定量。制备含有10％明胶的8％ SDS-PAGE凝胶。将7.5μg蛋白质样品加载到凝胶中，并在80V下进行电泳分离2-3h。在37℃下，在显影缓冲液中温育16h。最后，在 0.1％考马斯蓝R-250(Bio-Rad)中将凝胶染色4h，然后通过定影缓冲液进行脱染。使用Epson扫描仪扫描凝胶，并使用多规(multi-gauge) 软件(Fujifilm)进行定量。

对来自SS组中小鼠的样品进行类似处理。在第4天从尾静脉收集血液样品。在55℃下将血液与2×加载染料(0.125M Tris-HCl， pH 6.8，4％SDS，0.04％溴酚蓝，20％甘油)一起预热。制备含有10％明胶的8％SDS-PAGE凝胶。将5μL血液样品加载到凝胶中，并在 80V下进行电泳分离2-3h。在电泳之后，以每块凝胶50mL的2.5％ Triton X-100将凝胶洗涤2次，然后在37℃下在显影缓冲液(0.05M Tris-HCl，pH 8.8，5mM CaCl₂，0.02％NaN₃)中温育16h。最后，在0.1％考马斯蓝R-250(Bio-Rad)中将凝胶染色4h，然后通过定影缓冲液(45％甲醇，10％乙酸)进行脱染。使用Epson扫描仪扫描凝胶，并使用多规格软件(Fujifilm)进行定量。该方法能够在其正确的分子量大小下检测MMP9的活性形式和潜在形式。

数据表示为平均值±SEM。使用单因素方差分析(ANOVA)进行结果的统计学比较。通过Turkey检验，后接不同字母的各柱内平均值显著不同，p＜0.05。

结果

应用酶谱检测来测量SI对CFA诱导的炎症小鼠的血液MMP2 和MMP9的影响。CFA诱导的炎症小鼠在血液中具有较高的MMP2 和MMP9表达(图4)。MMP定量显示，不同浓度的SI治疗组中 CFA诱导的小鼠中的MMP9水平降低。0.44μg/kg的SI对MMP9的活性具有抑制作用，但对MMP2水平的影响较不显著。SS样品的结果在图26中示出，并且表明，盘龙参提取物对MMP9(一种在肝纤维化期间上调的明胶酶)的活性具有抑制作用。

实施例5：盘龙参提取物和sinetirucallol对RAW264.7细胞中LPS诱导的IL-1β、IL-6、iNOs和TNF-α mRNA表达的影响

方法

细胞培养

RAW264.7鼠巨噬细胞细胞系购自生物资源保藏与研究中心 (中国台湾BCRC)。在补充有100U/mL青霉素、100μg/mL丙酮酸钠和 10％胎牛血清(FBS；Gibco Inc.)的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM； Gibco Inc.，NY，USA)中将细胞在37℃、5％CO₂下进行温育。

还用0.01％DMSO处理细胞作为媒介物对照。在24h内以6× 10⁵个细胞/孔的密度将细胞接种到12孔板中，然后与具有无血清培养基的0.1％BSA一起温育3h，用不同浓度的盘龙参提取物或SI处理，然后在LPS(1μg/mL)存在的情况下温育4小时。

实时PCR

从新鲜取得的RAW 264.7细胞制备总RNA，并使用Trizol提取法进行分离。在-80℃下冷冻RNA样品待分析。然后使用M-MLV RT 试剂盒(Invitrogen，Carlsbad，CA)，按照制造商的实验方案制备 cDNA。如前所述，通过SensiFAST SYBR No-ROX试剂盒(BIOLINE，London，UK)来确定暴露于本发明盘龙参提取物的小鼠组织和 RAW264.7细胞中所选细胞因子和相关基因的表达。用于TNF-α的 PCR循环条件包括在每次运行开始时，95℃加热步骤2min。然后将管在95℃下循环5sec在60℃下退火10sec，并在72℃下延伸20sec，共进行四十次循环。用于iNOs、IL6和IL1的PCR条件包括在每次运行开始时，95℃加热步骤2min。然后将管在95℃下循环5sec，在 64℃下退火10sec，并在72℃下延伸20sec，共进行三十八次循环。在所有情况下，在退火阶段收集光学数据。为了对各种PCR产物所代表的表达进行定量，以β-肌动蛋白作为内部参考。在该实施例的实时PCR中使用的引物在表1中列出。

数据表示为平均值±S.E.。使用单因素方差分析(ANOVA)进行结果的统计学比较。通过Turkey检验，后接不同字母的各柱内平均值显著不同，p＜0.05。

表1实时PCR的引物

结果

接下来，我们探究了盘龙参提取物(图5)和SI(图6)对LPS 诱导的IL-1β、IL-6和IL-33释放的影响。结果表明，盘龙参提取物以剂量依赖性方式降低LPS诱导的炎性细胞因子IL-1β和IL-6转录。我们发现，50μg/mL的盘龙参提取物还以相似的趋势显著降低TNF-α、NLRP3和iNOs mRNA水平。并且5μM SI具有更好的抑制炎性细胞因子转录的作用。发现经盘龙参提取物或SI处理后的RAW264.7细胞呈剂量依赖性方式。在图25中提供了盘龙参提取物结果的另一替代方案说明。

实施例6：盘龙参提取物和sinetirucallol对LPS诱导的RAW264.7细胞中COX-2、NF κB和磷酸化ERK活化的表达的影响

方法

细胞培养

RAW264.7鼠巨噬细胞细胞系购自生物资源保藏与研究中心 (中国台湾BCRC)。在补充有100U/mL青霉素、100μg/mL丙酮酸钠和 10％胎牛血清(FBS；Gibco Inc.)的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM； Gibco Inc.，NY，USA)中将细胞在37℃、5％CO₂下进行温育。

还用0.01％DMSO处理细胞作为媒介物对照。在24h内以6× 10⁵个细胞/孔的密度将细胞接种到12孔板中，然后与具有无血清培养基的0.1％BSA一起温育3h，用不同浓度的盘龙参提取物或SI处理，然后在LPS(1μg/mL)存在的情况下温育4小时。

蛋白质印迹分析

通过Bradford测定来确定来自全细胞裂解物的蛋白质的浓度。通过SDS-PAGE分离等量的蛋白质并将其转移到硝酸纤维素膜上。然后用5％(wt/vol)脱脂奶粉将印迹封闭过夜，并用溶于TBS/T(20mM Tris-HCl缓冲液，pH 7.6，含有137mM NaCl和0.05％(vol/vol)吐温-20)的5％(wt/vol)BSA中的COX-2抗体、NFκB抗体、抗ERK 磷酸特异性抗体和ERK抗体进行探测。借助使用辣根过氧化物酶缀合的第二抗兔或抗小鼠抗体，通过增强的化学发光来检测结合的抗体。使用Western Lightning^TM Plus-ECL(Perkin Elmer Life Sciences)监测信号，并将PVDF膜暴露于发光图像分析仪LAS-3000(Fujifilm， Minato，Tokyo，Japan)。对获得的数据进行分析，并比较各种处理之间的差异。

数据表示为平均值±S.E.。使用单因素方差分析(ANOVA)进行结果的统计学比较。通过Turkey检验，后接不同字母的各柱内平均值显著不同，p＜0.05。

结果

采用蛋白质印迹法探究盘龙参提取物和SI对LPS诱导的 RAW264.7细胞中COX-2、NFκB、p-ERK和ERK变化的影响。通过 RAW264.7细胞中的LPS诱导，在12h时观察到ERK的活化和COX-2 蛋白表达的上调。LPS处理RAW264.7细胞12h使COX-2和NFκB 表达比基础水平增加约2倍，磷酸化ERK的表达增加约250倍。盘龙参提取物(图7)和SI(图8)以剂量依赖性方式降低LPS诱导的炎性细胞因子和COX-2及NFκB的iNOs表达以及ERK的磷酸化。

实施例7：盘龙参提取物和sinetirucallol对RAW264.7细胞中NO产量的影响

方法

在LPS诱导的RAW264.7细胞中

方法

细胞培养

RAW264.7鼠巨噬细胞细胞系购自生物资源保藏与研究中心 (中国台湾BCRC)。在补充有100U/mL青霉素、100μg/mL丙酮酸钠和 10％胎牛血清(FBS；Gibco Inc.)的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM； Gibco Inc.，NY，USA)中将细胞在37℃、5％CO₂下进行温育。

还用0.01％DMSO处理细胞作为媒介物对照。在24h内以6× 10⁵个细胞/孔的密度将细胞接种到12孔板中，然后与具有无血清培养基的0.1％BSA一起温育3h，用不同浓度的盘龙参提取物或SI处理，然后在LPS(1μg/mL)存在的情况下温育4小时。

亚硝酸盐定量

通过测量NO的稳定氧化产物亚硝酸盐的量来确定来自活化的 RAW 264.7细胞的NO产量。将条件培养基的等分试样与等体积的水中的1％磺胺和5％磷酸中的0.1％N-1-萘乙二胺二盐酸盐混合。在550 nm处测定吸光度。使用在培养基中稀释的浓度为10-100μM的亚硝酸钠生成标准曲线。

数据表示为平均值±S.E.。使用单因素方差分析(ANOVA)进行结果的统计学比较。通过Turkey检验，后接不同字母的各柱内平均值显著不同，p＜0.05。

结果

使用NO的稳定代谢物亚硝酸盐的量作为培养基中NO产量的指示。当添加1μg/mL的LPS时，NO产量显著增加到2.0±0.57μM。为了评估盘龙参提取物或SI对RAW 264.7细胞中LPS诱导的NO产量的影响，在盘龙参提取物(5、20、50和100μg/mL)或SI(0.1、 1、5和10μM)处理12h后，用1μg/mL的LPS处理细胞12h(图 9)。盘龙参提取物和SI以剂量依赖性方式对LPS诱导的RAW264.7 细胞中NO产量产生抑制作用。我们还对仅用盘龙参提取物和SI处理时NO产量进行了检测，以确保单独的植物提取物不会造成炎症。

实施例8：盘龙参提取物在体内的抗氧化活性

方法

细胞培养

RAW264.7鼠巨噬细胞细胞系购自生物资源保藏与研究中心(中国台湾BCRC)。在补充有100U/mL青霉素、100μg/mL丙酮酸钠和 10％胎牛血清(FBS；Gibco Inc.)的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM； Gibco Inc.，NY，USA)中将细胞在37℃、5％CO₂下进行温育。

还用0.01％DMSO处理细胞作为媒介物对照。在24h内以6× 10⁵个细胞/孔的密度将细胞接种到12孔板中，然后与具有无血清培养基的0.1％BSA一起温育3h，用不同浓度的盘龙参提取物或SI处理，然后在LPS(1μg/mL)存在的情况下温育4小时。

DPPH测定

如前所述对盘龙参提取物或SI的DPPH自由基清除活性进行了确定(Sharma等人.2009)。简言之，将96孔板中含有不同浓度的盘龙参提取物和0.04mM DPPH(SIGMA，#D9132)的反应混合物在37℃下温育30min，并在490nm处测量吸光度。维生素C用作阳性对照。

结果

在炎症期间，各种细胞如巨噬细胞被激活，包括呼吸爆发，其中耗氧量的大量增加导致ROS的大量释放(Yang等人.2011)。100 μg/mL的盘龙参提取物具有与0.1mg/mL的维生素C相当的抗氧化方面的能力(图10)。

实施例9：THSC和NHSC细胞培养和活力

NHCS和THSC细胞培养

肝星状细胞(HSC)为非实质细胞，是涉及肝纤维化的主要细胞类型，其通常涉及响应于肝损伤的瘢痕组织的形成。在正常肝脏中， HSC处于静止状态，并且是维生素A和脂质的主要储存部位。在肝损伤时，维生素A的储存量逐渐减少。当肝脏受损时，星状细胞变成活化状态(Hjelkrem，Morales等人，2012)。活化的星状细胞的特征在于增殖、收缩性和趋化性。因此，HSC的静止形式可用作肝脏状况的指示。

非化学诱导的肝星状细胞(NHSC＞95％纯度)分离自雄性斯普拉格-杜勒大鼠肝脏，硫代乙酰胺(TAA)诱导的肝星形细胞(THSC ＞95％纯度)分离自如我们先前研究所述的TAA(Fluka)诱导的雄性斯普拉格-杜勒大鼠的纤维化肝脏。将两种细胞系均维持在补充有10％ FBS的DMEM(pH 7.4)中，并在37℃下、在具有5％CO2的水饱和培养箱中温育。培养基每2天更换一次，并在细胞80％-90％汇合期间使用胰蛋白酶/EDTA(Sigma-Aldrich)进行传代。

细胞活力

为了检查本公开组合物的提取物的生物相容性，进行MTT测定(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑溴化物(MTT，Invitrogen)，基于比色的测定)。

MTT测定

进行基于比色的3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑溴化物(MTT，Invitrogen)测定，以分析活细胞。在96孔板中接种8x 10³个细胞/孔。用不同浓度的盘龙参提取物或SI将细胞处理24h，温育后每孔添加20μL(5mg/mL)MTT溶液，并继续温育4h。去除培养基，通过添加100μL/孔的DMSO(Sigma-Aldrich)溶解甲臜，并使用ELISA读数仪在570nm处测量OD。通过与未处理的对照细胞进行比较来估计活细胞的百分比。将对照细胞的平均吸光度值视为 100％活力。

图11中的结果显示，在给定剂量下，盘龙参提取物对细胞基本上没有伤害。

实施例10：盘龙参提取物对脂质积累的影响

方法

进行油红O染色和AdipoRed测定，以检查盘龙参提取物对脂质积累的影响。

数据表示为平均值±S.E.。使用单因素方差分析(ANOVA)进行结果的统计学比较。通过Turkey检验，后接不同字母的各柱内平均值显著不同，p＜0.05。

油红O染色测定

简言之，在6孔板中接种1×10⁵个细胞/孔(NHSC或THSC)，并在5％CO₂、37℃下温育过夜至汇合。之后，用不同浓度(5、20和 50μg/mL)的本发明盘龙参提取物分别将细胞处理24h。用PBS将细胞洗涤两次，然后由3.7％多聚甲醛(预热)固定10min。油红O原液0.5％(w/v)过滤，并在室温下在黑暗中染色1h。用50％异丙醇将细胞洗涤5sec，并用苏木精(Sigma-Aldrich)复染1min。用蒸馏水将细胞洗涤三次，并使用甘油进行储存。使用与佳能700D(Canon 700D)相机连接的蔡司(ZEISS)倒置显微镜获取图像。

结果

结果在表12中示出。值得注意的是，与对照组相比，本发明的盘龙参提取物在NHSC和THSC二者中均增加了大量核周脂滴。图 12的结果还被定量为图13中所示的条形图，从图13更明显的看出，与未处理的对照组相比，本发明的盘龙参提取物处理使NHSC和 THSC的脂肪酸储存量分别增加约3倍和约1.5倍。

AdipoRed测定

在96孔板中接种约1x 10⁴个细胞/孔，并在5％CO2、37℃下温育过夜。用不同浓度(5、20、50和100μg/mL)的盘龙参提取物将细胞处理48h。温育后，去除培养上清液，并用200μL的PBS小心冲洗各孔。然后，各孔填注200μL的PBS和5μL的AdipoRed试剂(Lonza，Walkersville，MD，USA)。在室温下温育10min后，将该板置于荧光计中，并获得485nm处的激发荧光和572nm处的发射荧光(多模式平板读数仪，PerkinElmer Inc Waltham，MA，USA)。

结果

结果(图14)显示，当与对照组相比时，盘龙参提取物增加 NHSC(1.8倍)和THSC(1.4倍)中的脂质积累。该观察结果与前述油红O染色测定的结果一致，从而进一步验证了本发明的盘龙参提取物在脂质积累方面的能力。

实施例11：盘龙参对胶原蛋白积累的影响

方法

使用Sirius Red染色剂来检查本发明的盘龙参提取物对胶原蛋白积累的影响。简言之，在12孔板中接种3×10⁴个细胞/孔，并在 5％CO2、37℃下温育过夜至汇合。之后，用不同浓度(5、20和50μg/mL) 的本发明盘龙参提取物分别将细胞处理24h。用PBS将细胞洗涤两次，然后由3.7％多聚甲醛(预热)固定10min。在室温下在黑暗中将 Picro-Sirius Red溶液(ScyTek，Logan，Utah，USA)染色1h。用ddH2O 将细胞洗涤两次，并用苏木精(Sigma-Aldrich)复染1min。用蒸馏水将细胞洗涤三次，并使用甘油进行储存。使用与佳能700D相机连接的蔡司倒置显微镜获取图像。

数据表示为平均值±S.E.。使用单因素方差分析(ANOVA)进行结果的统计学比较。通过Turkey检验，后接不同字母的各柱内平均值显著不同，p＜0.05。

结果

结果在表15中示出。与对照组相比，用盘龙参提取物(5、20 和50μg/mL)处理24小时的NHSC和THSC二者均显示出减少的核周胶原蛋白。

实施例12：盘龙参提取物对COL1 I、COL1 III、TGF-/3 R1、TGF-/3 R2、RXRα、NrF2 和PPARγ的表达的影响

方法

通过实时PCR检查COL1 III(III型胶原蛋白α1)、COL1 I(I 型胶原蛋白α1)、TGF-βR1(TGF-β受体1)、TGF-βR2(TGF-β受体2)、RXRa(类视黄醇X受体)、NrF2(红细胞衍生核因子2样蛋白2)和PPARγ(过氧化物酶体增殖物激活受体γ)的表达；其中18S用作对照。

对于RNA分离和cDNA合成，将4×10⁵个HSC接种到6孔板中，在70％至80％汇合后，然后在含有5％FBS的DMEM中用不同浓度(5、20、50和100μg/mL)本发明的盘龙参提取物分别处理8h 和12h。用25μM的姜黄素处理阳性对照组。从新鲜收获的HSC制备总RNA，并使用Trizol提取法进行分离。在-80℃下冷冻RNA样品待分析。然后使用M-MLV RT试剂盒(Invitrogen，Carlsbad，CA)，按照制造商的实验方案制备cDNA。

对于实时PCR，使用SensiFAST SYBR No-ROX试剂盒 (BIOLINE，London，UK)。用于RXRα、NrF2和PPARγ的PCR循环条件包括在每次运行开始时，95℃加热步骤2min。然后将管在95℃下循环5sec，在64℃下退火10sec，并在72℃下延伸20sec，共进行四十次循环。用于III型胶原蛋白α1、I型胶原蛋白α1、TGF-β受体 1和TGF-β受体2的PCR条件包括在每次运行开始时，95℃加热步骤 2min。然后将管在95℃下循环5sec，在62℃下退火10sec，并在 72℃下延伸20sec，共进行45次循环。在所有情况下，在退火阶段收集光学数据。为了对各种PCR产物所代表的表达进行定量，以18S 作为内部参考。在该实施例中使用的引物集在表2中列出。

数据表示为平均值±S.E.。使用单因素方差分析(ANOVA)进行结果的统计学比较。通过Turkey检验，后接不同字母的各柱内平均值显著不同，p＜0.05。

结果

图16显示，用本发明的盘龙参提取物处理8h的NHSC和THSC 具有降低的COL1I、COL1III、TGF-βR1和TGF-βR2的表达。

图17和图18显示，在用本发明的盘龙参提取物处理12h的 NHSC和THSC二者中，RXRα、NrF2和PPARγ基因表达均增加。

表2：实时PCR的引物集

实施例13：盘龙参对组织损伤/伤口愈合的影响

方法

将大鼠分为2组：用无菌纱布处理的对照组动物和用5％盘龙参提取物与白凡士林和无菌纱布处理的盘龙参提取物(SS)组动物。大鼠的背部区域皮肤受伤，并对伤口进行处理，以评估盘龙参提取物对伤口愈合的影响。测量并记录每只大鼠的伤口尺寸(1.5cm x1.5cm)。用对照或盘龙参提取物对伤口进行处理，并在第0天、第1天、第2 天、第3天、第5天、第6天、第7天、第9天、第12天及第13天进行观察。在第14天进行瘢痕组织切除术，并通过苏木精和伊红染色进行组织病理学检查。使用ImageJ软件计算伤口愈合尺寸和速度。

结果

图19示出了大鼠皮肤响应于处理的伤口愈合进展。与对照组大鼠相比，用盘龙参提取物处理的大鼠显示出广泛和逐步的恢复。图20 和图21示出了SS组和对照组大鼠中修复面积的变化。此外，这种有益效果得到组织切片证实(图22)。SS组大鼠在伤口区域中显示出完整的皮肤表皮层和真皮层，而对照组的皮肤表皮层和真皮层未完全愈合。

实施例13：盘龙参提取物的制备

风干的盘龙参获自中国 台湾花莲当地市场。将干燥的盘龙参研磨成粉末，并在室温(RT)下用100％乙酸乙酯(优选10倍干重体积) 萃取一周。将液体提取物真空蒸发，以产生其干燥粉末，并具有基于干重约20.9％的产率。对于以下实验，通过以1mg/mL的浓度将所述提取物溶解在DMSO中来制备储用组合物，该浓度基于所述DMSO 的总体积。通过以1mg/mL的浓度将该提取物溶解在DMSO中来制备储用组合物，该浓度基于DMSO的总体积。

实施例14：盘龙参提取物对细胞活力的影响

RAW264.7鼠巨噬细胞细胞系购自生物资源保藏与研究中心 (中国台湾BCRC)。在补充有100U/mL青霉素、100μg/mL丙酮酸钠和 10％胎牛血清(FBS；Gibco Inc.)的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM； Gibco Inc.，NY，USA)中将细胞在37℃、5％CO₂下进行温育。还用0.01％DMSO处理细胞作为媒介物对照。在24h内以6×10⁵个细胞/ 孔的密度将细胞接种到12孔板中，然后与具有无血清培养基的0.1％ BSA一起温育3h，如实施例13中所制备的那样，用不同浓度(5、 10、20、50和100μg/mL)的盘龙参提取物进行处理，然后在LPS(0.4 或1μg/mL)存在的情况下再温育4小时。

为了检查盘龙参提取物的生物相容性，在该实施例中进行MTT 测定(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑溴化物(MTT， Invitrogen)，基于比色的测定)。简言之，在96孔板中接种8x10³个细胞/孔，并在5％CO₂、37℃下温育过夜。用不同浓度(5、20、50 和100μg/mL)的盘龙参提取物将细胞处理24h，温育后每孔添加20 μL(5mg/mL)MTT溶液，并继续温育4h。去除培养基，通过添加 100μL/孔的DMSO(Sigma-Aldrich)溶解甲臜，并使用酶标仪(ELISA 读数仪，Thermo Labsystems)在570nm处测量OD。通过与未处理的对照细胞进行比较来估计活细胞的百分比。将对照细胞的平均吸光度值视为100％活力。结果表明，盘龙参提取物在给定剂量下对细胞无害(见图24)。

实施例15：盘龙参提取物在细胞培养中对MMP2的影响

在本实施例中，通过明胶酶谱检测来确定MMP 2的活性。将2 ×10⁵个HSC接种到6孔板中。在70％至80％汇合后；使细胞在含有 0.1％BSA的DMEM中饥饿6h，然后用不同浓度(5、20、50和100 μg/mL)的盘龙参提取物分别处理24h。收集条件培养基，在4℃、 12,000×g下离心30min以去除细胞碎片。收集上清液并使用Bradford 染料(Bio-Rad)进行定量。制备含有10％明胶的8％SDS-PAGE凝胶。在55℃下将蛋白质与2×加载染料(0.125M Tris-HCl，pH 6.8，4％SDS， 0.04％溴酚蓝，20％甘油)一起预热。将7.5μg蛋白质样品加载到凝胶中，并在80V下进行电泳分离2-3h。在电泳之后，以每块凝胶50 mL的2.5％Triton X-100将凝胶洗涤2次，然后在37℃下在显影缓冲液(0.05M Tris-HCl，pH 8.8，5mM CaCl₂，0.02％NaN₃)中温育16h。最后，在0.1％考马斯蓝R-250(Bio-Rad)中将凝胶染色4h，然后通过固定缓冲液(45％甲醇，10％乙酸)进行脱染。使用Epson扫描仪扫描凝胶，并使用多规格软件(Fujifilm)进行定量。

通过密度计对MMP2的活性进行定量。结果在图27中示出，并且表明，在用5、20、50和100μg/mL的盘龙参提取物处理的NHSC 和THSC二者中MMP2活性均降低。

Claims (10)

1.一种使用sinetirucallol于制备一抗氧化的制剂的用途。

2.一种使用sinetirucallol于制备一降低炎性反应的制剂的用途。

3.一种使用sinetirucallol于制备一促进伤口愈合的制剂的用途。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述制剂为包含药学上可接受的载体的药物组合物。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述制剂包含盘龙参提取物。

6.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述制剂被配制用于静脉内、动脉内、口服、肠胃外、颊部、局部、经皮、直肠、肌内、皮下、骨内、经黏膜或腹膜内施用。

7.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述制剂被配制用于局部施用。

8.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述制剂被配制为液体、凝胶、半液体、半固体或固体形式的单位剂量。

9.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述制剂包含至少4.4μg的sinetirucallol。

10.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述制剂包含4.4μg至44μg的sinetirucallol。

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