TWI645083B - 篩選抑制發炎反應及血管保護活性物質之方法 - Google Patents
篩選抑制發炎反應及血管保護活性物質之方法 Download PDFInfo
- Publication number
- TWI645083B TWI645083B TW106129588A TW106129588A TWI645083B TW I645083 B TWI645083 B TW I645083B TW 106129588 A TW106129588 A TW 106129588A TW 106129588 A TW106129588 A TW 106129588A TW I645083 B TWI645083 B TW I645083B
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- group
- hmgb1
- inflammatory
- cell
- active substance
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
一種篩選抑制發炎反應及血管保護活性物質之方法，包括：提供一細
胞株，以及將該細胞株分為一第一群組及第二群組；使一目標活性物質及高遷移率族蛋白B1(high mobility group box-1，HMGB1)接觸該第一群組之該細胞株，以及使一高遷移率族蛋白B1接觸該第二群組之該細胞株；以及分別檢測該第一群組以及該第二群組之促細胞發炎激素(pro-inflammatory cytokine)或組織型血纖維蛋白溶酶原活化因子(tissue plasminogen activator，tPA)之含量。
Description
本發明係關於一種篩選活性物質之方法，更特定來說，係關於一種篩選抑制發炎反應及血管保護活性物質之方法。
發炎係指生物組織受到外傷、出血、或病原感染等刺激，激發的生理反應。由於許多疾病皆與發炎反應有關，故抑制發炎反應活性物質成為該領域中長期以來研究之主要目標。在過去探討發炎反應時常認定一氧化氮(NO)為發炎過程中相當重要的角色之一，並選用NO作為篩選抑制發炎反應藥物之途徑，當待測化合物或藥物出現具有抑制NO之效果，便認定其具有抑制發炎反應之效果。
然而，眾所皆知的是，NO在正常的生理上並非專一性地參與發炎反應，NO除了參與發炎反應之外，更參與其他生理機制，例如調控平滑肌的運動、血小板凝集及貼附、細胞生長、細胞凋亡、神經傳導、傷口修復等，即雖然有些藥物具有抑制NO之效果，但並不必然顯示其有抑制發炎的功效；事實上其他學者發現，將iNOS抑制後，在大鼠的實驗模式中能減緩關節的急性發炎，但對於慢性發炎的症狀改善卻無顯著幫助，且抑制NO的產生亦無法增加內毒素
血症動物的存活率。因此，即使NO在發炎反應中扮演重要的角色，但若要藉由抑制NO合成，作為抑制發炎反應的單一途徑，可能會影響生物體其他的正常生理機制而引起副作用，或是雖可以抑制NO合成卻無法改善慢性發炎以及增加內毒素血症生物體之存活率。
血液的正常流動，涉及血管內凝血因子與抗凝血系統動態平衡的調控。血管內皮細胞(vascular endothelial cell，VEC)損害，為引發心血管疾病最主要的關鍵之一。當血管內發生發炎反應或是損害時，會誘發內皮細胞表面上的組織型血纖維蛋白溶酶原活化因子(tissue plasminogen activator，tPA)釋出，如同細胞激素般，引發後續發炎反應相關的訊息傳遞，如NF-κB的活化；並且當內皮細胞表面上的組織型血纖維蛋白溶酶原活化因子(tissue plasminogen activator，tPA)釋出後，會影響調降血纖維溶解酶(plasmin)的作用，進而造成血栓的形成，影響血液流動。有鑑於此，目前亟需發展一種新穎篩選抑制發炎反應活性物質之方法，經由此篩選方法所得之活性物質可抑制發炎反應，並具血管保護的活性。
本發明之主要目的係在提供一種篩選抑制發炎反應及血管保護活性物質之方法，其中，經由該篩選方法所得之活性物質不僅抑制促發炎細胞激素及組織型血纖維蛋白溶酶原活化因子(tissue plasminogen activator，tPA)的釋放，並且在生物體中具有抑制發炎反應之功效。
為了解決上述問題，本發明提供一種篩選抑制發炎反應及血管保護活性物質之方法，包括：提供一細胞株，以及將該細胞株分為一第一群組及第二群組；使一目標活性物質及高遷移率族蛋白B1(high mobility group box-1，
HMGB1)接觸該第一群組之該細胞株，以及使一高遷移率族蛋白B1接觸該第二群組之該細胞株；以及分別檢測該第一群組以及該第二群組之促細胞發炎激素(pro-inflammatory cytokine)或組織型血纖維蛋白溶酶原活化因子(tissue plasminogen activator，tPA)之含量。
如上述篩選抑制發炎反應及血管保護活性物質之方法，其中，該方法可視需要地選擇性更包括下述步驟：比較該第一群組以及該第二群組之促細胞發炎激素(pro-inflammatory cytokine)或組織型血纖維蛋白溶酶原活化因子(tissue plasminogen activator，tPA)之含量。
如上述篩選抑制發炎反應及血管保護活性物質之方法，其中，比較該第一群組以及該第二群組之促細胞發炎激素(pro-inflammatory cytokine)或組織型血纖維蛋白溶酶原活化因子(tissue plasminogen activator，tPA)之含量係在分別檢測該第一群組以及該第二群組之促細胞發炎激素(pro-inflammatory cytokine)或組織型血纖維蛋白溶酶原活化因子(tissue plasminogen activator，tPA)之含量後進行。
如上述篩選抑制發炎反應及血管保護活性物質之方法，其中，當該第一群組之促細胞發炎激素或組織型血纖維蛋白溶酶原活化因子之含量較該第二群組低時，係指示該目標活性物質具有抑制發炎反應及血管保護之效果。
如上述篩選抑制發炎反應及血管保護活性物質之方法，其中，該細胞株為動物細胞株；較佳為哺乳動物細胞株；更佳為人類細胞株。
如上述篩選抑制發炎反應及血管保護活性物質之方法，其中，該動物細胞株較佳為單核球細胞或內皮細胞；更佳為人類單核球細胞或人類內皮細胞；最佳為人血周邊單核球細胞或人類內皮細胞株EA.hy926。
如上述篩選抑制發炎反應活性物質之方法，其中，該人類內皮細胞來源不限，較佳係來自腦、淋巴結、肺、肝臟、或脾臟。
如上述篩選抑制發炎反應及血管保護活性物質之方法，其中，該促細胞發炎激素較佳為白血球介素-6(IL-6)、白血球介素-8(IL-8)、白血球介素-18(IL-18)、或腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)；更佳為IL-6或TNF-α；最佳為TNF-α。
如上述篩選抑制發炎反應及血管保護活性物質之方法，其中，該高遷移率族蛋白B1(high mobility group box-1，HMGB1)較佳為小牛胸腺純化之HMGB1蛋白。
如上述篩選抑制發炎反應及血管保護活性物質之方法，其中，該高遷移率族蛋白B1(high mobility group box-1，HMGB1)之濃度較佳為0.001μg/ml至1μg/ml。
如上述篩選抑制發炎反應及血管保護活性物質之方法，其中，該目標活性物質較佳為肉桂芸香鹼。
本發明之另一目的係提供經由此篩選抑制發炎反應及血管保護活性物質之方法所得之活性物質用於製備抑制發炎反應及血管保護之活性物質。
因此，本發明提供一種肉桂芸香鹼(Harmine)之用途，其係用於製備抑制發炎反應及血管保護之活性物質。
如上述肉桂芸香鹼(Harmine)之用途，其係用於製備改善敗血病及血管保護之活性物質。
圖1係本發明一較佳實施例之經HMGB1處理人血周邊單核球細胞後於不同時間點之IL-1 β、IL-6、TNF-α含量之定量結果，其中，C為控制組。
圖2係本發明一較佳實施例之經不同濃度之HMGB1處理人血周邊單核球細胞之IL-1 β、IL-6、TNF-α含量之定量結果，其中，C為控制組。
圖3係本發明一較佳實施例之經不同濃度HMGB1、Harmine處理人血周邊單核球細胞之TNF-α含量之定量結果，其中，C為控制組，DEX為類固醇Dexthamethasone。
圖4係本發明一較佳實施例之經不同時間點，Harmine、Dexthamethasone、及Ethal-pyruvate處理人血周邊單核球細胞之TNF-α含量之定量結果，其中，C為控制組。
圖5係本發明一較佳實施例之經HMGB1、不同濃度之Harmine、不同濃度Dexthamethasone、不同濃度Ethal-pyruvate處理人類內皮細胞株EA.hy926之tPA含量之定量結果，其中，C為控制組，H為HMGB1，EP為Ethal-pyruvate，DEX為Dexthamethasone。
圖6(A)係本發明一較佳實施例之經注射LPS後不同時間點注射Harmine之小鼠存活率，其中，6A1為控制組，6A2為注射LPS後15分鐘注射Harmine組，6A3為注射LPS後12小時注射Harmine組，6A4為負對照組；圖6(B)係本發明一較佳實施例之經注射LPS後15分鐘後注射Harmine之小鼠體重，其中，6B1為注射LPS後15分鐘注射Harmine組，6B2為負對照組。
本發明之新穎技術特徵，包含特定特徵，係揭示於申請專利範圍，針對本發明之技術特徵，較佳之理解茲配合說明書、依據本發明原理之實施例、和圖式將本創作較佳之實施例詳細說明如下：在本發明中，單數用語「一」、「一個」、「該」，除非另有說明，皆可指涉多於一個對象。除非另有說明，本發明實施例採用之通常技術包括高效液向層析法(HPLC)、蛋白質化學、生物化學、重組DNA技術、藥理學技術。本說明書使用之「或」、「以及」、「和」，除非另有說明，皆指涉「或/和」。此外，用語「包含」、「包括」皆非有所限制之開放式連接詞。前述段落僅為系統性之指涉而不應解釋為對發明主體之限制。除非另有說明，本發明所用之材料皆市售易於取得，下列僅為示例可取得之管道。
在本發明之一實施例中，HMGB1係使用小牛胸腺純化之HMGB1蛋白(Chondrex)。
在本發明之一實施例中，肉桂芸香鹼(Harmine)係為敘利亞芸香種子中萃取之生物鹼，純化方法如Astulla et al.(2008)所教示，並藉由HPLC確認純度大於99%。
人血周邊單核球細胞之預備
人血周邊單核球細胞係由人類血液分離而得，一般來說，可由當地血液中心獲得來自健康捐贈者之全血或新鮮白血球濃厚液；本發明之一實施例所用之全血及新鮮白血球濃厚液係來自台灣血液基金會。
新鮮白血球濃厚液以等倍之含2mM EDTA(J.T.Baker,Phillipsburg,NJ)之PBS(Gibco,Grand Island,NY)稀釋後，加入含有等量Ficoll(GE Healthcare,Uppsala,Sweden)之離心管中，以400xg之轉速，常溫離心40分鐘。吸
取Plasma層，直到剩下的液體約在血球層上方0.5公分處。吸取血球層(約15ml)並加入大量體積之PBS-2mM EDTA，以300 xg之轉速常溫離心10分鐘，利用PBS-2mM EDTA清洗兩次。最後加入緩衝液，利用300 xg之轉速，常溫離心10分鐘，清洗(washing)三次後進行細胞計數。每107細胞留80μl緩衝液，並加入20μl CD14微磁珠(Miltenyi Biotec,Bergisch Gladbach,Germany)充分混合後置冰上15分鐘。每107細胞加入1.5ml緩衝液清洗，以300 xg之轉速，低溫離心10分鐘。以每108細胞加入500μl緩衝液回溶。將LS Column(Miltenyi Biotec,Bergisch Gladbach,Germany)放上細胞分選器(Miltenyi Biotec)，利用3ml緩衝液將LS Column潤濕，隨之加入回溶後之細胞液，再利用3ml緩衝液清洗三次。加入5ml緩衝液並塞入活塞，將管柱取出細胞分選器，按壓活塞以收取管柱中之CD14+細胞，即為「人血周邊單核球細胞」。
人血周邊單核球細胞之培養
人血周邊單核球細胞培養於含人血分離ABO混和血清之DMEM培養液(Biological Industries)中，該DMEM培養液(Biological Industries)在使用前另外添加(1)非特異性胺基酸及丙酮酸鈉(Biological Industries)、(2)抗生素：50μg/ml kanamycin及50μg/ml gentamycin(CCPC)，將該人血周邊單核球細胞放置於37℃、5% CO2的培養箱培養。
人類內皮細胞株EA.hy926之培養
人類內皮細胞融合瘤EA.hy926細胞株係來自美國菌種保存中心(The American Type Culture Collection)。人類內皮細胞株EA.hy926培養於含10% FBS(SAFC Bioscences)之DMEM培養液中，該DMEM培養液(Biological Industries)在使用前另外添加(1)非特異性胺基酸及丙酮酸鈉(Biological
Industries)、(2)抗生素：50μg/ml kanamycin及50μg/ml gentamycin(CCPC)，放置於37℃、5% CO2的培養箱中培養，最佳培養之細胞密度為1x105細胞數/ml。
實施例
[HMGB1影響人血周邊單核球細胞促發炎細胞激素釋放]
將人血周邊單核球細胞種入96孔盤中，每孔細胞密度為1x106cell/ml，培養16小時後替換新的培養基，同時在每孔各加入1μg/ml的HMGB1進行刺激，在加入HMGB1刺激後於0、4、8、16、24小時收取上清液。將上述收取之上清液分別進行IL-1 β、IL-6、TNF-α ELISA檢測。
[不同濃度HMGB1影響人血周邊單核球細胞促發炎細胞激素釋放]
將人類周邊單核球細胞種入96孔盤中，每孔細胞密度為1x106cell/ml，培養16小時後替換新的培養基，接著在每孔各加入不同濃度之HMGB1(1、0.1、0.01、0.001μg/ml)進行刺激4或24小時。將上述收取之上清液分別進行IL-1 β、IL-6、TNF-α ELISA檢測。
[抑制人血周邊單核球細胞由HMGB1所誘導的TNF-α產生]
將人類周邊單核球細胞種入96孔盤中，每孔細胞密度為1x106cell/ml，培養16小時後替換新的培養基，接著在每孔各加入不同濃度之HMGB1(濃度為1、0.1μg/ml)進行刺激，同時各加入不同濃度之Harmine(濃度為0、1、2.5、5、10μM)、類固醇Dexthamethasone(濃度為0、1、5、10、30μM)、或Ethal-pyruvate(濃度為0、1、5、10、15、30mM)，在4小時或24小時後收取上清液。將上述收取之上清液分別進行TNF-α ELISA檢測。
[不同時間點抑制人血周邊單核球細胞由HMGB1所誘導的TNF-α產生]
將人類周邊單核球細胞種入96孔盤中，每孔細胞密度為1x106cell/ml，培養16小時後替換新的培養基，接著在每孔各加入1μg/ml的HMGB1進行刺激，同時各加入不同濃度之Harmine(濃度為0、1、2.5、5、10μM)，在4或24小時後收取上清液。將上述收取之上清液分別進行TNF-α ELISA檢測。
將人類周邊單核球細胞種入96孔盤中，每孔細胞密度為1x106cell/ml，培養16小時後替換新的培養基，接著在每孔各加入1μg/ml的HMGB1進行刺激，同時各加入不同濃度之Dexthamethasone(濃度為0、1、5、10、30μM)，在4或24小時後收取上清液，將上述收取之上清液分別進行TNF-α ELISA檢測。
將人類周邊單核球細胞種入96孔盤中，每孔細胞密度為1x106cell/ml，培養16小時後替換新的培養基，接著在每孔各加入1μg/ml的HMGB1進行刺激，同時各加入不同濃度之Ethal-pyruvate(濃度為0、1、5、10、15mM)，4或24小時後收取上清液。將上述收取之上清液分別進行TNF-α ELISA檢測。
[Harmine抑制人纇內皮細胞株EA.hy926分泌抗凝血因子tPA]
將EA.hy926細胞種入96孔盤，待細胞長滿後兩天在每孔各加入1μg/ml的HMGB1進行刺激，同時各加入不同濃度之Harmine(濃度為1、5、10、20μM)、Ethal-pyruvate(濃度為1、5、10、30mM)、Dexthamethasone(濃度為1、5、10、30μM)，在24小時後收取上清液。將上述收取之上清液分別進行tPA ELISA檢測。
[統計分析]
數據皆以平均值±標準差(SD)來表示，各實驗皆分別執行3次獨立實驗，且利用配對t檢定(paired t-test)進行分析，且P<0.05表示具有顯著差異。
[實驗結果]
[HMGB1影響人血周邊單核球細胞促發炎細胞激素釋放]
本實驗利用ELISA檢測HMGB1對於人血周邊單核球細胞釋放IL-1 β、IL-6、TNF-α之影響；其中，以未加入HMGB1之組別為控制組。如圖1所示，在人血周邊單核球細胞受HMGB1刺激後4、8、12、16、24小時，TNF-α的釋放皆會因為HMGB1的刺激而提升(刺激後4小時提升15%，統計P值<0.05；刺激後8、12、16、24小時提升70-90%，統計P值<0.001)；在人血周邊單核球細胞受HMGB1刺激後24小時，IL-1 β的釋放會因為HMGB1的刺激而提升；在人血周邊單核球細胞受HMGB1刺激後12小時，IL-6的釋放會因為HMGB1的刺激而提升(提升45%，統計P值<0.05)。
[不同濃度HMGB1影響人血周邊單核球細胞促發炎細胞激素釋放]
本實驗利用ELISA檢測不同濃度HMGB1對於人血周邊單核球細胞釋放IL-1 β、IL-6、TNF-α之影響；其中，以未加入HMGB1之組別為控制組。如圖2所示，人血周邊單核球細胞受不同濃度HMGB1刺激8小時後，濃度1、0.1、0.01、0.001μg/ml之HMGB1皆能提升TNF-α釋放(提升約50%；濃度1、0.1、0.001μg/ml之統計P值<0.01；濃度0.01μg/ml之統計P值<0.05)，濃度1、0.1、0.01μg/ml之HMGB1能提升IL-6釋放(提升約20%，統計P值<0.01)。
[抑制人血周邊單核球細胞由HMGB1所誘導的TNF-α產生]
在本實驗中使用1、0.1μg/ml之HMGB1刺激人血周邊單核球細胞4小時後，利用ELISA檢測目標活性物質Harmine對於人血周邊單核球細胞釋放TNF-α之影響，其中，以未加入HMGB1之組別為控制組，而Dexthamethasone(濃度10μM)為已知抑制發炎反應藥物作為對照組。如圖3所示，Harmine具有抑制細胞釋放TNF-α之效果，且其效果隨Harmine濃度增加而增加，不同濃度之Harmine(濃度為1、2.5、5μM)，其抑制百分比由低濃度依序為72%、87%、90%(其統計P值皆小於0.001)，顯見Harmine的抑制發炎反應活性具有濃度依賴性(dose-dependent)，此外，當Harmine濃度為10μM時，可使細胞幾乎不釋放TNF-α(抑制百分比99%，P<0.001)。
除此之外，如圖3所示，作為對照組之已知抑制發炎反應藥物Dexthamethasone確實具有抑制細胞經由HMGB1刺激而釋放TNF-α之功效(抑制百分比達80%，統計P值<0.001)，驗證此篩選方法確實可篩選抑制發炎反應之活性物質。
[不同時間點抑制人血周邊單核球細胞由HMGB1所誘導的TNF-α產生]
在此實驗中使用1μg/ml之HMGB1刺激人血周邊單核球細胞後在4或24小時，利用ELISA檢測目標活性物質Harmine、Dexthamethasone、Ethal-pyruvate對於人血周邊單核球細胞釋放TNF-α之影響，其中，以未加入HMGB1之組別為控制組。如圖4所示，不同濃度之Harmine(1、2.5、5、10μM)在刺激後4及24小時後皆具有抑制細胞釋放TNF-α之效果；不同濃度之Dexthamethasone(濃度為1、5、10、30μM)在刺激後4及24小時後皆具有抑制細胞釋放TNF-α之效果(刺激後4小時抑制百分比約為75%，統計P值<0.001；刺激
後24小時抑制百分比約為80%，統計P值皆<0.01)，但其抑制能力有限，無法使細胞完全不釋放TNF-α；不同濃度之Ethal-pyruvate(濃度為5、10、15、30mM)在刺激後4小時具有抑制細胞釋放TNF-α之效果(其抑制百分比由低濃度依序約為60%、75%、93%、99%，統計P值<0.001)，但需較高濃度之Ethal-pyruvate才具明顯抑制效果。
[Harmine抑制人纇內皮細胞株EA.hy926分泌抗凝血因子tPA]
在此實驗中為了更全面的評估中和HMGB1蛋白功效，使用1μg/ml之HMGB1刺激人纇內皮細胞株EA.hy926，經過24小時後利用ELISA檢測目標活性物質Harmine、Dexthamethasone、Ethal-pyruvate對於人血周邊單核球細胞釋放tPA之影響，其中，以未加入HMGB1之組別為控制組。如圖5所示，發現HMGB1增加EA.hy926細胞分泌tPA，並且高濃度(濃度為5、10、20μM)之Harmine具有顯著抑制細胞釋放tPA之效果(濃度5μM之抑制百分比為50%；10、20μM抑制百分比可達95%；統計P值<0.001)，顯見Harmine的確具有中和HMGB1之功效；然而，不同濃度之Ethal-pyruvate及不同濃度之Dexthamethasone皆不具有抑制細胞釋放tPA之效果。
[Harmine在LPS誘發的內毒素血症死亡和體重下降的保護作用]
利用六至八周大的雄性BALB/c小鼠檢測Harmine保護小鼠避免因LPS誘發的內毒素血症而死亡的能力，小鼠共分成4組分別為：注射LPS後15分鐘注射Harmine組、注射LPS後12小時注射Harmine組、控制組、負對照組，每組使用10隻小鼠進行實驗；其中，注射LPS後15分鐘注射Harmine組於小鼠腹腔注射LPS(10mg/kg)後15分鐘接著對小鼠腹腔注射Harmine(30mg/kg)，注射LPS後12小時注射Harmine組於小鼠腹腔注射LPS(10mg/kg)後12小時接著對小鼠腹腔
注射Harmine(30mg/kg)，控制組僅注射無菌PBS，負對照組則僅注射LPS(10mg/kg)，在注射結束後每日觀察小鼠體重及存活情形，連續觀察九天，並進行Kaplan-Meier存活分析，其結果如圖6所示。在注射LPS後30分鐘若小鼠出現顫抖、豎起毛皮、虛弱的徵兆則被視為LPS誘發毒性；一般情況下，小鼠在注射LPS後一天內體重會下降20%，並視為瀕死。如圖6(A)所示，注射LPS後12小時注射Harmine組中，並未顯著降低LPS誘發的死亡(P=0.458)；然而，注射LPS後15分鐘注射Harmine組中，顯示可顯著降低LPS誘發的死亡(P=0.159)，小鼠存活率從60%提升至90%，並且小鼠無晚期死亡。如圖6(B)所示，注射LPS後15分鐘注射Harmine組別之小鼠顯著回復體重(P<0.001)。據此，Harmine在LPS的存在下顯著提升小鼠存活率以及回復體重，代表抑制HMGB1介導的發炎反應可為內毒素血症的治療策略。
本發明建立了一套能有效篩選抑制發炎及血管保護活性物質之平台，其係基於對HMGB1以及tPA的抑制。利用已知的小分子抑制劑Ethal pyruvate以及類固醇Dexthamethasone，確立模式的準確性，並找出超越先前發現的小分子化合物肉桂芸香鹼Harmine，其對於HMGB1具有更良好的抑制效力，不僅能抑制巨噬細胞因HMGB1刺激而產生的促發炎媒介物TNF-a；亦能抑制內皮細胞受HMGB1刺激所增加的tPA的釋放。
上述實施例僅係為了方便說明而舉例而已，本發明所主張之權利範圍自應以申請專利範圍所述為準，而非僅限於上述實施例。
Claims (10)
- 一種篩選抑制發炎反應及血管保護活性物質之方法，包括：提供一細胞株，以及將該細胞株分為一第一群組及第二群組；使一目標活性物質及高遷移率族蛋白B1(high mobility group box-1，HMGB1)接觸該第一群組之該細胞株，以及使一高遷移率族蛋白B1接觸該第二群組之該細胞株；以及分別檢測該第一群組以及該第二群組之促細胞發炎激素(pro-inflammatory cytokine)或組織型血纖維蛋白溶酶原活化因子(tissue plasminogen activator，tPA)之含量；其中，該方法包括比較該第一群組以及該第二群組之促細胞發炎激素(pro-inflammatory cytokine)或組織型血纖維蛋白溶酶原活化因子(tissue plasminogen activator，tPA)之含量，當該第一群組之促細胞發炎激素或組織型血纖維蛋白溶酶原活化因子之含量較該第二群組低時，係指示該目標活性物質具有抑制發炎反應及血管保護之效果。
- 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中，該細胞株係為人類單核球細胞或內皮細胞。
- 如申請專利範圍第2項所述之方法，其中，該細胞株係為人血周邊單核球細胞或人類內皮細胞株EA.hy926。
- 如申請專利範圍第3項所述之方法，其中，該細胞株係為人血周邊單核球細胞。
- 如申請專利範圍第3項所述之方法，其中，該細胞株係為人類內皮細胞株EA.hy926。
- 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中，該促細胞發炎激素係為IL-6或TNF-α。
- 如申請專利範圍第6項所述之方法，其中，該促細胞發炎激素係為TNF-α。
- 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中，該高遷移率族蛋白B1(high mobility group box-1，HMGB1)係由小牛胸腺純化之HMGB1蛋白。
- 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中，該高遷移率族蛋白B1(high mobility group box-1，HMGB1)之濃度為0.001μg/ml至1μg/ml。
- 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中，該目標活性物質係為肉桂芸香鹼。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| TW106129588A TWI645083B (zh) | 2017-08-30 | 2017-08-30 | 篩選抑制發炎反應及血管保護活性物質之方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| TW106129588A TWI645083B (zh) | 2017-08-30 | 2017-08-30 | 篩選抑制發炎反應及血管保護活性物質之方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TWI645083B true TWI645083B (zh) | 2018-12-21 |
| TW201912853A TW201912853A (zh) | 2019-04-01 |
Family
ID=65432145
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| TW106129588A TWI645083B (zh) | 2017-08-30 | 2017-08-30 | 篩選抑制發炎反應及血管保護活性物質之方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| TW (1) | TWI645083B (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006010628A1 (en) * | 2004-07-29 | 2006-02-02 | Creabilis Therapeutics S.P.A. | Use of k-252a and kinase inhibitors for the prevention or treatment of hmgb1-associated pathologies |
| US20080311122A1 (en) * | 2005-11-28 | 2008-12-18 | Medimmune, Llc | Antagonists of Hmgb1 and/or Rage and Methods of Use Thereof |
| US20150250808A1 (en) * | 2012-10-15 | 2015-09-10 | Vojo P. Deretic | Treatment of autophagy-based disorders and related pharmaceutical compositions, diagnostic and screening assays and kits |
-
2017
- 2017-08-30 TW TW106129588A patent/TWI645083B/zh active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006010628A1 (en) * | 2004-07-29 | 2006-02-02 | Creabilis Therapeutics S.P.A. | Use of k-252a and kinase inhibitors for the prevention or treatment of hmgb1-associated pathologies |
| US20080311122A1 (en) * | 2005-11-28 | 2008-12-18 | Medimmune, Llc | Antagonists of Hmgb1 and/or Rage and Methods of Use Thereof |
| US20150250808A1 (en) * | 2012-10-15 | 2015-09-10 | Vojo P. Deretic | Treatment of autophagy-based disorders and related pharmaceutical compositions, diagnostic and screening assays and kits |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Moghadam, Morteza Shojaei, et al. "Antibacterial activity of eight Iranian plant extracts against methicillin and cefixime restistant Staphylococcous aureus strains." Asian Pacific Journal of Tropical Medicine 3.4 (2010): 262-265. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| TW201912853A (zh) | 2019-04-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Sherwood et al. | Mechanisms of the inflammatory response | |
| Hamid et al. | Inflammatory cells in asthma: mechanisms and implications for therapy | |
| Chu et al. | Effects of an anthraquinone derivative from Rheum officinale Baill, emodin, on airway responses in a murine model of asthma | |
| Dayer et al. | Cachectin/tumor necrosis factor stimulates collagenase and prostaglandin E2 production by human synovial cells and dermal fibroblasts. | |
| KR101570446B1 (ko) | 혈액 특히 말초 혈액으로부터 얻은 성체 줄기세포의 증대 방법 및 의학 분야의 관련 적용 | |
| Gessler et al. | Plasma levels of interleukin-8 and expression of interleukin-8 receptors on circulating neutrophils and monocytes after cardiopulmonary bypass in children | |
| US11406637B2 (en) | Carbonic anhydrase enzymes for regulating mast cell hematopoiesis and type 2 inflammation | |
| Townley et al. | CRTH2 antagonists in the treatment of allergic responses involving TH2 cells, basophils, and eosinophils | |
| JP2013528230A (ja) | ノーオプション重症虚血肢（ｃｌｉ）を処置するための組成物および方法 | |
| Guan et al. | Dysregulated chemokine signaling in cystic fibrosis lung disease: a potential therapeutic target | |
| Li et al. | Inducible prostaglandin E synthase as a pharmacological target for ischemic stroke | |
| Lv et al. | Costunolide ameliorates colitis via specific inhibition of HIF1α/glycolysis-mediated Th17 differentiation | |
| Mu et al. | Crosstalk between peripheral and the brain-resident immune components in epilepsy | |
| JP2021527669A (ja) | 線維症の軽減又は治療のための組成物及び方法 | |
| Hashimoto et al. | G6PD is a critical enabler of hypoxia-induced accumulation of macrophages and platelets in mice lungs and contributor to lung inflammation | |
| TWI645083B (zh) | 篩選抑制發炎反應及血管保護活性物質之方法 | |
| CN105440103A (zh) | 从皱纹盘鲍鲍鱼内脏中分离的抗炎肽及其用途 | |
| WO2023217247A1 (zh) | Cd177抑炎型中性粒细胞对缺血性脑卒中治疗的应用 | |
| JP7189342B2 (ja) | 貧血治療薬の製造における抗血小板トロンボリシンの使用 | |
| Chen et al. | Collagenase digestion down-regulates the density of CD27 on lymphocytes | |
| Lonnemann et al. | Impaired endotoxin-induced interleukin-1β secretion, not total production, of mononuclear cells from ESRD patients | |
| EP3684355B1 (en) | Ovothiols for the treatment of chronic low grade systemic inflammation (clgsi) and related diseases | |
| Huang et al. | Meteorin‐like protein/METRNL/Interleukin‐41 ameliorates atopic dermatitis‐like inflammation | |
| JP7560893B2 (ja) | 修飾マクロファージ、組成物およびその使用 | |
| US20240307423A1 (en) | Fractions of, and molecules released in, protein rich plasma which inhibit immune responses and reduce inflammation, and methods of obtaining |