JP7108294B2 - 遺伝子発現調節剤 - Google Patents

Description

本発明は、霊芝を含有することを特徴とする遺伝子発現調節剤であり、加齢に伴う遺伝子発現変化を改善する遺伝子発現調節剤に関する。より詳しくは、遺伝子が、免疫賦活に関わるＩＦＮＧ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＧＺＭＡ、ＧＺＭＢ、ＮＣＲ１、ＫＬＲＫ１、食欲調節に関わるＬＥＰ、脂質代謝に関わるＬＩＰＥ、ＧＰＤ１、ＦＡＳＮ、ＣＹＰ７Ａ１、ＡＤＲＢ３、皮膚幹細胞の機能維持に関わるＮＧＦＲ、ＩＴＧＢ１である遺伝子発現調節剤であり、遺伝子発現調節剤を含む遺伝子発現調節用食品組成物に関する。

加齢に伴い、ヒトに備わっている様々な機能が低下する。例えば、神経・内分泌系機能の低下、視力や聴力などの感覚機能の低下、筋力や関節の可動範囲など身体機能の低下、環境変化に対する適応能力の低下、免疫機能の低下、病気に対する抵抗力の低下など、様々な変化が生じる。また加齢は、様々な臓器における代謝性疾患や慢性炎症など、多くの加齢関連疾患の発症や病態に影響を与えることも明らかになってきている（非特許文献１）。

生体の恒常性維持に関わるタンパク質は、加齢により発現量が変化する。例えば線維芽細胞において、細胞外マトリックス構成成分であるフィブロネクチンやサイクリン依存性キナーゼインヒビターであるｐ２１は、加齢に伴い発現量が増加する。一方、インスリン様成長因子であるＩＧＦ－１や、ＤＮＡ複製に関与するＤＮＡポリメラーゼαは、加齢に伴い発現量が減少する（非特許文献２）。他にも、脂肪細胞におけるＴＮＦα、ＩＬ１β、ＩＬ６などの炎症性サイトカインの加齢による産生増加や、副腎皮質網状帯細胞から分泌される副腎アンドロゲンであるＤＨＥＡ－Ｓの加齢による血中濃度低下が報告されている（非特許文献３）。

以下に、本発明において特に着目した、生体の恒常性維持に重要なタンパク質の機能とその遺伝子の名称について説明する。ＩＦＮＧは、ＩＦＮγ（インターフェロンガンマ）をコードする遺伝子である。ＩＦＮγは、免疫賦活に関わる代表的なサイトカインであり、Ｔ細胞やＮＫ細胞など種々の免疫細胞の活性化因子である。ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧはそれぞれ、ＩＬ２受容体α（インターロイキン２受容体α）、ＩＬ２受容体β（インターロイキン２受容体β）、ＩＬ２受容体γ（インターロイキン２受容体γ）をコードする遺伝子である。ＩＬ２受容体は、サイトカインの一種であるＩＬ２に対する受容体であり、α鎖、β鎖、γ鎖の３つの細胞表面タンパク質より構成される。免疫賦活におけるＩＬ２の役割は、Ｔ細胞の増殖や活性化、Ｂ細胞の増殖や抗体産生促進、単球・マクロファージの活性化、ＮＫ細胞の増殖や活性化など、多岐にわたっており、ＩＬ２受容体はＩＬ２の刺激を細胞内に伝達し、ＩＬ２の多様な生理作用発揮において重要な役割を担っている。ＧＺＭＡ、ＧＺＭＢはそれぞれ、ＧｒａｎｚｙｍｅＡ（グランザイムＡ）、ＧｒａｎｚｙｍｅＢ（グランザイムＢ）をコードする遺伝子である。ＧｒａｎｚｙｍｅＡ、ＧｒａｎｚｙｍｅＢは共に、ＮＫ細胞やキラーＴ細胞より分泌される因子であり、癌細胞に作用してアポトーシスを誘導する癌細胞傷害の実行因子である。ＮＣＲ１は、ＮＫｐ４６（Ｎａｔｕｒａｌ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ ｒｅｃｅｐｔｏｒ１）をコードする遺伝子であり、ＫＬＲＫ１は、ＮＫＧ２Ｄ（Ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｇｒｏｕｐ２ ｍｅｍｂｅｒＤ）をコードする遺伝子である。ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄは共に、ＮＫ細胞表面に発現するＮＫ細胞活性化受容体であり、癌細胞表面のリガンドに結合してＮＫ細胞を活性化する。上記に示したタンパク質は、免疫細胞の活性化や癌細胞傷害など、免疫賦活に極めて深く関わっていると考えられる。

ＬＥＰは、Ｌｅｐｔｉｎ（レプチン）をコードする遺伝子である。Ｌｅｐｔｉｎは、脂肪細胞から特異的に分泌されるアディポサイトカインであり、いわゆる善玉ホルモンの一種である。主たる機能は、視床下部弓状核に分布するＬｅｐｔｉｎ受容体を介した食欲抑制作用である。Ｌｅｐｔｉｎの正常な分泌は、食欲を適切に制御・調節することから、メタボリックシンドロームの予防、改善、治療に極めて重要である。

ＬＩＰＥは、ＨＳＬ（ホルモン感受性リパーゼ）をコードする遺伝子である。ＨＳＬは、肝臓や脂肪における細胞内の中性脂肪をグリセロールと脂肪酸に分解する酵素である。ＧＰＤ１は、ＧＰＤＨ（グリセロール３リン酸脱水素酵素）をコードする遺伝子である。ＧＰＤＨは、グルコースを基質としてグリセロール３リン酸を合成する過程における主要な酵素であり、この酵素反応によって生成したグリセロール３リン酸は、脂肪酸とエステルを形成することにより中性脂肪として蓄積される。ＦＡＳＮはＦＡＳ（脂肪酸合成酵素）をコードする遺伝子である。ＦＡＳは、マロニルＣｏＡとアセチルＣｏＡから脂肪酸を合成する酵素である。ＣＹＰ７Ａ１は、コレステロール７αヒドロキシラーゼをコードする遺伝子である。コレステロール７αヒドロキシラーゼは、胆汁酸合成の経路における律速酵素としてコレステロール代謝に関与する。ＡＤＲＢ３は、β３アドレナリン受容体をコードする遺伝子である。β３アドレナリン受容体は、交感神経優位時に分泌されるホルモンであるアドレナリンの受容体の一種であり、アドレナリンの脂肪燃焼作用を細胞内に伝達する役割を担う。つまり、肝臓や脂肪の細胞内では、脂質の合成・分解が、ＨＳＬ、ＧＰＤＨ、ＦＡＳ、コレステロール７αヒドロキシラーゼなどの酵素や、β３アドレナリン受容体などの脂肪分解系ホルモンの受容体によって制御されていることから、これらの酵素や受容体の発現量は、生体の脂質代謝の調節において非常に重要な役割を果たすと考えられる。

幹細胞は、様々な細胞に分化する多分化能を有しており、この性質により損傷部の細胞・組織を再生することで回復に導くと考えられている。皮膚組織においても表皮、真皮、皮下脂肪部位それぞれに幹細胞が存在し、各部の恒常性維持に寄与している。またこれらの皮膚幹細胞を再生医療や再生美容に利用するために、幹細胞において特異的に発現するマーカータンパク質として神経成長因子受容体やインテグリンβ１などが同定されてきた（非特許文献４、５）。これらの因子をコードする遺伝子はそれぞれ、ＮＧＦＲ、ＩＴＧＢ１である。上記のマーカータンパク質は幹細胞が多分化能を保持し、未分化な状態の時に高く発現しており、これらの遺伝子の発現量を解析することで幹細胞の機能維持状態を調べることが可能である（非特許文献６、７）。また、幹細胞は老化や外的な因子によってダメージを受け、未分化な状態が損なわれることが知られている（非特許文献８、９）。つまり、皮膚組織に存在する幹細胞を未分化な状態で維持することは、肌の老化を防ぐ上で極めて重要であると考えられる。

以上のように、タンパク質の正常な発現は、生体の恒常性維持において極めて重要な役割を果たしている。一般にタンパク質の発現は、種々の転写活性因子、転写抑制因子などによる遺伝子発現の調節を介して制御されているため、遺伝子の発現を調節することでタンパク質の発現を制御し、加齢による生体の機能低下や疾患の発症の予防、治療、改善につなげることが可能と考えられる。

このような観点から、遺伝子発現の調節に着目した疾患の発症の予防、治療、改善に効果的な方法が提案されている。例えば、２－アミノエタンスルホン酸を含有することを特徴とする遺伝子の発現異常を伴う疾患や症状の予防、診断、改善又は治療用製剤（特許文献１）、アスタキサンチンを含有する遺伝子発現調節剤（特許文献２）、ケニア産紫茶の抽出物を有効成分とする概日リズム調節剤（特許文献３）、ペラルゴニウム属植物の抽出物を有効成分として含有する時計遺伝子Ｐｅｒｉｏｄの発現調節剤（特許文献４）などが開示されている。

しかしながら、加齢に伴う遺伝子発現変化については、それを捉えるのに膨大な時間を要することもあり、必ずしも容易ではないため、加齢に伴う遺伝子発現変化の制御物質の報告は非常に限られている。

ここで、霊芝の薬理作用については種々の報告がなされており、例えばＴＮＦαの産生促進を介して免疫機能を向上する食品（特許文献５）、担子菌類の菌糸体の抽出物を含有する免疫活性調節剤（特許文献６）、霊芝及び／又は霊芝の発酵物から選択される霊芝成分の抽出物を含有するＴｉｅ２活性化剤（特許文献７）、霊芝抽出物を含有することを特徴とするコレステロール吸収抑制剤（特許文献８）などが開示されている。しかしながら、加齢に伴う全身性の遺伝子発現変化に対する改善作用については全く知られていない。加齢に伴う遺伝子発現変化においては、生体の不可逆的な加齢変化という特有の影響が加わるため、従来開示されている霊芝の薬理作用とは全く異なるアプローチが必要であると考えられる。

特開２０１４－４０３９３号公報 国際公開番号ＷＯ２００５／０７４９０７ 特許第６２２７８５１号公報 特開２０１４－６５６８２号公報 特開２００３－１３５０２８号公報 特開２０１４－６５６８２号公報 特開２０１７－１３２６９８号公報 特開２０１５－１７０４３号公報

実験医学５、２０１７、３５（８）、１３０９－１３１５ 鮎沢 大、化学と生物、２０００、３８（４）、２２４－２２９ 清水孝彦、日本薬理学雑誌、２０１１、１３８、６０－６３ Ｈａｓｅｂｅ Ｙ．、ｅｔ ａｌ．、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０１１、６２、９８－１０６ Ｊｏｎｅｓ ＰＨ．、ｅｔ ａｌ．、Ｃｅｌｌ、１９９３、７３、７１３－７２４ Ｔａｄｄｅｉ Ｉ．、ｅｔ ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ、２００８、１０、７１６－７２２ Ｍｉｋａｍｉ Ｙ．、ｅｔ ａｌ．、Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、２０１１、２０、９０１－９１３ Ａｋａｍａｔｓｕ Ｈ．、ｅｔ ａｌ．、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ、２０１６、４３、３１１－３１３ Ｉｗａｔａ Ｙ．、ｅｔ ａｌ．、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０１３、７１、１２２－１２９

本発明は、霊芝を含有することを特徴とする遺伝子発現調節剤であり、加齢に伴う遺伝子発現変化を改善する遺伝子発現調節剤を提供することを目的とする。より詳しくは、免疫賦活に関わるＩＦＮＧ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＧＺＭＡ、ＧＺＭＢ、ＮＣＲ１、ＫＬＲＫ１、食欲調節に関わるＬＥＰ、脂質代謝に関わるＬＩＰＥ、ＧＰＤ１、ＦＡＳＮ、ＣＹＰ７Ａ１、ＡＤＲＢ３、皮膚幹細胞の機能維持に関わるＮＧＦＲ、ＩＴＧＢ１の加齢に伴う発現変化を改善する遺伝子発現調節剤を提供すること、および遺伝子発現調節剤を含む遺伝子発現調節用食品組成物を提供することを目的とする。

本発明に用いる霊芝は、担子菌類のマンネンタケ科（Ｇａｎｏｄｅｒｍａｔａｃｅａｅ）マンネンタケ属（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ）に属するキノコで、中国の薬学古書である「本草綱目」や「神農本草経」によると、霊芝（赤芝）、黒霊芝（黒芝）、紫霊芝（紫芝）、青霊芝（青芝）、黄霊芝（黄芝）及び白霊芝（白芝）が知られている。本発明では、マンネンタケ科に属する全てのキノコを用いることができるが、好ましくは霊芝、黒霊芝、紫霊芝、青霊芝、黄霊芝、白霊芝であり、さらに好ましくは霊芝（赤芝、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ）又は黒霊芝（黒芝、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ａｔｒｕｍ）を用いることが望ましい。

本発明に用いる霊芝は、子実体、胞子、菌糸体、天産物、栽培物、培養物等を問わず使用することができ、広く中国や日本市場などで流通しているものを用いることができる。また、必要に応じてそのままの状態、破砕物、乾燥物などを適宜選択して抽出操作に付することができる。

本発明に用いる霊芝の抽出物を得る抽出溶媒としては、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、１－ブタノール、２－ブタノールなど）、液状多価アルコール類（１，３－ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリンなど）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトンなど）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチルなど）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、石油エーテルなど）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテルなど）が挙げられる。これらの溶媒は一種でも二種以上を混合して用いても良い。好ましくは、水、エタノール、あるいはこれらの混合物を用いると良い。

上記抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈、濾過、活性炭などによる脱色、脱臭、エタノール沈殿などの処理をして用いても良い。さらには、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥などの処理を行い、乾燥物として用いても良い。

本発明に用いる霊芝の摂取量は、摂取形態、使用目的、年齢、体重などによって適宜調整することができる。成人１日当り、霊芝は、キノコ乾燥物に換算して１～２００００ｍｇ、好ましくは５０～１００００ｍｇの範囲で１日１回から数回経口摂取できる。上記摂取範囲より少ない量で十分な場合もあるし、また、範囲を超えて摂取する必要がある場合もある。また、製剤化における薬効成分の添加法については、予め加えておいても、製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。

本発明の遺伝子発現調節剤は、医薬品、医薬部外品、食品として用いることができる。医薬品や医薬部外品としては、経口用の散剤、顆粒剤、錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、シロップ剤、丸剤、懸濁剤、液剤、乳剤など、非経口用の注射剤、座剤などとして用いることができる。また、食品としては、飲料、硬カプセル、軟カプセル、タブレット、顆粒剤、ゼリーなどとして用いることができる。

本発明の遺伝子発現調節剤は、効果を損なわない範囲内で、必要に応じて通常の医薬品、医薬部外品、食品に用いられる賦形剤、安定剤、保存剤、結合剤、崩壊剤、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料などの成分を含有することもできる。

本発明の遺伝子発現調節剤は、免疫賦活に関わるＩＦＮＧ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＧＺＭＡ、ＧＺＭＢ、ＮＣＲ１、ＫＬＲＫ１、食欲調節に関わるＬＥＰ、脂質代謝に関わるＬＩＰＥ、ＧＰＤ１、ＦＡＳＮ、ＣＹＰ７Ａ１、ＡＤＲＢ３、皮膚幹細胞の機能維持に関わるＮＧＦＲ、ＩＴＧＢ１の加齢に伴う発現変化を改善することで、生体の恒常性維持を達成することができる。

以下に、本発明を詳細に説明するため実施例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。

製造例１ 霊芝熱水抽出物
霊芝（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ）の乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５～１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して霊芝熱水抽出物を１．４ｇ得た。

製造例２ 霊芝エタノール抽出物
霊芝（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ）の乾燥物１００ｇに９００ｍＬのエタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、霊芝エタノール抽出物を１．６ｇ得た。

製造例３ 黒霊芝熱水抽出物
黒霊芝（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）の乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５～１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して黒霊芝熱水抽出物を１．１ｇ得た。

製造例４ 黒霊芝エタノール抽出物
黒霊芝（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）の乾燥物１００ｇに９００ｍＬのエタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、黒霊芝エタノール抽出物を１．４ｇ得た。

以下の処方例の％は重量％を示す。

処方例１ 軟カプセル剤
＜処方＞
成分 含有量（％）
１．霊芝熱水抽出物（製造例１） ３０．０
２．米胚芽油 ６０．０
３．ミツロウ ７．０
４．ビタミンＥ ３．０
＜製造方法＞
成分１～４を混合し、ゼラチン、グリセリン、カラメル色素で構成される被膜に、２５０ｍｇ充填し、乾燥後、軟カプセル剤を得る。
＜用法＞
１日当り４粒摂取する。

処方例２ 硬カプセル剤
＜処方＞
成分 含有量（％）
１．霊芝熱水抽出物（製造例１） ４０．０
２．コーンスターチ ５２．０
３．ショ糖脂肪酸エステル ８．０
＜製造方法＞
成分１～３を混合し、２号硬カプセルに２５０ｍｇ充填してカプセル剤を得る。
＜用法＞
１日当り８粒摂取する。

処方例３ 飲料
＜処方＞
成分 含有量（％）
１．黒霊芝熱水抽出物（製造例３） １．０
２．クエン酸 ６．０
３．ショ糖 １０．０
４．香料 １．０
５．水 ８２．０
＜製造方法＞
成分１～４を成分５の一部の水に撹拌溶解する。次いで、成分５の残りの水を加えて混合し、殺菌したものを飲料とする。
＜用法＞
１日当り５０ｍＬ摂取する。

処方例４ 顆粒剤
＜処方＞
成分 含有量（％）
１．霊芝エタノール抽出物（製造例２） ８．０
２．乳糖 ８０．０
３．セルロース １２．０
＜製造方法＞
成分１～３を乾式法により造粒し、顆粒剤を得る。
＜用法＞
１日当り１ｇ摂取する。

処方例５ 錠剤
＜処方＞
成分 含有量（％）
１．霊芝熱水抽出物（製造例１） １１．０
２．乳糖 ６０．０
３．還元麦芽糖水飴 ２５．０
４．ショ糖脂肪酸エステル ４．０
＜製造方法＞
成分１～４を混合して打錠成型し、０．５ｇの錠剤を得る。
＜用法＞
１日当り２粒摂取する。

処方例６ ゼリー
＜処方＞
成分 含有量（％）
１．黒霊芝エタノール抽出物（製造例４） ０．００１
２．カラギーナン ２．０
３．ゼラチン １．０
４．砂糖 ２８．５
５．精製水 ６８．４９９
＜製造方法＞
成分１～５を混合し、加熱しながら煮詰め、ゼリーの型に流し込み、冷却する。
＜用法＞
１日当り１個（１００ｇ）を摂取する。

処方例７ 散剤
＜処方＞
成分 含有量（％）
１．霊芝熱水抽出物（製造例１） １５．０
２．乾燥コーンスターチ ６５．０
３．微結晶セルロース ２０．０
＜製造方法＞
成分１～３を混合し、散剤とする。
＜用法＞
１日当り１包（３ｇ）を摂取する。

実験例 自然加齢マウスを用いた遺伝子発現解析
３ヶ月齢のＨＲ－１ヘアレスマウスを用い、普通飼料、あるいは製造例１の霊芝を２％添加した飼料により飼育を１８ヶ月間行った。この時点のマウスの月齢は２１ヶ月齢である。比較として、３ヶ月齢のＨＲ－１ヘアレスマウスを若齢マウスとして用いた。１８ヶ月間飼育後、脾臓、肝臓、腸管膜内臓脂肪（以下、単に内臓脂肪）、鼠径部皮下脂肪（以下、単に皮下脂肪）及び背部皮膚を摘出した。遺伝子発現解析は、各臓器より抽出・精製したＲＮＡからｃＤＮＡを調製し、ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎを用いたリアルタイムＰＣＲ法で行った。尚、遺伝子発現解析に使用したプライマーは以下のとおりである。

ＩＦＮγ用のプライマーセット
ＣＡＡＣＡＧＣＡＡＧＧＣＧＡＡＡＡＡＧＧ（配列番号１）
ＣＣＴＧＴＧＧＧＴＴＧＴＴＧＡＣＣＴＣＡＡ（配列番号２）
ＴＮＦα用のプライマーセット
ＧＣＣＡＧＣＣＧＡＴＧＧＧＴＴＧＴＡ（配列番号３）
ＧＧＣＡＧＣＣＴＴＧＴＣＣＣＴＴＧＡ（配列番号４）
ＩＬ１β用のプライマーセット
ＧＡＴＧＡＴＡＡＣＣＴＧＣＴＧＧＴＧＴＧＴＧＡ（配列番号５）
ＧＴＴＧＴＴＣＡＴＣＴＣＧＧＡＧＣＣＴＧＴＡＧ（配列番号６）
ＩＬ２受容体α用のプライマーセット
ＴＣＣＴＡＡＡＣＴＧＴＧＡＡＴＧＣＡＡＧＡＧ（配列番号７）
ＡＴＴＴＧＴＣＡＴＧＧＧＡＧＴＴＧＣＴＧ（配列番号８）
ＩＬ２受容体β用のプライマーセット
ＣＣＴＴＴＧＡＣＡＡＣＣＴＴＣＧＣＣＴＧ（配列番号９）
ＡＧＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＡＡＧＡＧＣＣＡ（配列番号１０）
ＩＬ２受容体γ用のプライマーセット
ＧＣＴＧＡＡＡＣＧＡＧＡＡＴＣＣＴＴＣＣ（配列番号１１）
ＣＧＴＴＣＣＡＡＣＣＡＡＣＡＧＴＡＣＡＣ（配列番号１２）
ＩＦＮγ受容体１用のプライマーセット
ＡＡＧＧＴＧＴＡＴＴＣＧＧＧＴＴＣＣＴＧ（配列番号１３）
ＴＧＴＣＣＡＡＣＣＴＴＡＧＣＴＴＴＡＡＣＴＣ（配列番号１４）
ＩＦＮγ受容体２用のプライマーセット
ＴＧＡＧＡＡＴＧＴＴＡＣＴＧＴＴＧＧＡＣＣＴ（配列番号１５）
ＣＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＧＧＧＴＴＴＣＴＧ（配列番号１６）
ＢＣＬ２用のプライマーセット
ＣＣＧＧＧＡＧＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＡＧＴ（配列番号１７）
ＡＴＣＴＣＣＡＧＣＡＴＣＣＣＡＣＴＣＧＴＡ（配列番号１８）
ＪＵＮ用のプライマーセット
ＡＡＡＣＡＧＡＧＣＡＴＧＡＣＣＴＴＧＡＡＣＣ（配列番号１９）
ＧＴＣＧＧＴＧＴＡＧＴＧＧＴＧＡＴＧＴＧ（配列番号２０）
ＭＹＣ用のプライマーセット
ＡＴＣＡＧＣＡＡＣＡＡＣＣＧＣＡＡＧＴＧ（配列番号２１）
ＧＴＧＴＣＣＧＣＣＴＣＴＴＧＴＣＧＴＴＴ（配列番号２２）
ＧｒａｎｚｙｍｅＡ用のプライマーセット
ＣＡＣＴＧＴＡＡＣＧＴＧＧＧＡＡＡＧＡＧ（配列番号２３）
ＧＴＧＡＡＧＧＡＴＡＧＣＣＡＣＡＴＴＴＣＴＧ（配列番号２４）
ＧｒａｎｚｙｍｅＢ用のプライマーセット
ＣＴＧＣＴＡＡＡＧＣＴＧＡＡＧＡＧＴＡＡＧＧ（配列番号２５）
ＴＴＴＡＡＡＧＴＡＧＧＡＣＴＣＡＣＡＣＴＣＣＣ（配列番号２６）
ＮＫｐ４６用のプライマーセット
ＧＧＡＡＡＣＴＣＧＧＴＧＡＡＣＡＴＣＴＧ（配列番号２７）
ＴＣＡＴＡＣＡＧＡＣＣＡＧＴＴＡＣＴＡＣＣＡ（配列番号２８）
ＮＫＧ２Ｄ用のプライマーセット
ＣＡＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＡＴＡＣＴＴＣＴＣ（配列番号２９）
ＣＴＴＧＴＴＧＣＡＣＡＡＴＡＣＴＧＧＣＴＧ（配列番号３０）
ＤＮＡＭ１用のプライマーセット
ＡＴＡＴＡＡＣＡＧＧＡＡＧＡＧＡＣＧＧＡＧＡＣ（配列番号３１）
ＣＴＧＧＡＴＧＧＧＡＧＡＡＧＴＡＧＧＡＣ（配列番号３２）
Ｌ－Ｓｅｌｅｃｔｉｎ用のプライマーセット
ＴＧＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＡＣＴＴＣＣＴＧ（配列番号３３）
ＴＴＧＴＡＴＧＧＣＧＡＣＴＡＡＡＴＣＴＧＴＧ（配列番号３４）
ＦＣＧＲ３用のプライマーセット
ＡＴＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＴＴＧＣＴＴＴＴＧ（配列番号３５）
ＣＡＣＣＡＣＡＧＣＣＴＴＣＧＧＡＡＧＡＧ（配列番号３６）
ＳＩＲＴ１用のプライマーセット
ＧＣＡＣＴＡＡＴＴＣＣＡＡＧＴＴＣＴＡＴＡＣＣＣ（配列番号３７）
ＧＧＣＡＡＣＴＣＴＧＡＴＡＡＡＴＧＡＡＣＣＡ（配列番号３８）
ＡＣＯＸ１用のプライマーセット
ＣＡＡＧＧＣＡＴＧＣＡＣＣＡＴＴＧＣ（配列番号３９）
ＧＧＣＴＣＧＣＴＴＣＴＣＴＴＧＡＴＴＴＣＡ（配列番号４０）
ＡＭＰＫ用のプライマーセット
ＧＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＡＡＴＴＧＴＴＣＧＡＣＴＡ（配列番号４１）
ＧＣＧＣＧＣＴＴＣＣＡＣＣＴＣＴＴ（配列番号４２）
ＵＣＰ２用のプライマーセット
ＧＣＣＴＣＴＧＧＡＡＡＧＧＧＡＣＴＴＣＴＣ（配列番号４３）
ＡＣＣＡＧＣＴＣＡＧＣＡＣＡＧＴＴＧＡＣＡ（配列番号４４）
ＰＧＣ－１α用のプライマーセット
ＧＡＴＧＧＣＡＣＧＣＡＧＣＣＣＴＡＴＴ（配列番号４５）
ＣＧＡＣＡＣＧＧＡＧＡＧＴＴＡＡＡＧＧＡＡＧＡ（配列番号４６）
ＡＣＡＤＭ用のプライマーセット
ＡＡＣＡＣＴＴＡＣＴＡＴＧＣＣＴＣＧＡＴＴＧＣＡ（配列番号４７）
ＣＣＡＴＡＧＣＣＴＣＣＧＡＡＡＡＴＣＴＧＡＡ（配列番号４８）
ＨＭＧ－ＣｏＡＲ用のプライマーセット
ＧＡＡＴＧＣＣＴＴＧＴＧＡＴＴＧＧＡＧＴＴＧ（配列番号４９）
ＧＣＣＧＡＡＧＣＡＧＣＡＣＡＴＧＡＴＣＴ（配列番号５０）
ＬＤＬ受容体用のプライマーセット
ＧＣＧＧＣＴＴＣＣＧＧＴＴＧＧＴ（配列番号５１）
ＣＡＧＧＴＧＴＣＴＧＧＣＴＣＣＴＧＡＣＡ（配列番号５２）
コレステロール７αヒドロキシラーゼ用のプライマーセット
ＴＴＧＧＡＡＴＡＡＧＧＡＧＡＡＧＧＡＡＡＧＴＡＧＧＴ（配列番号５３）
ＡＣＡＧＣＣＣＡＧＧＴＡＴＧＧＡＡＴＣＡＡＣ（配列番号５４）
ＡＢＣＢ１１用のプライマーセット
ＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＡＣＧＣＡＧＧＡＧＴＴ（配列番号５５）
ＣＣＣＡＣＡＡＣＣＴＴＡＴＴＴＧＡＡＡＧＴＡＴＣＣ（配列番号５６）
ＦＡＳ用のプライマーセット
ＧＣＡＣＡＧＣＴＣＴＧＣＡＣＴＧＴＣＴＡＣＴＡＣ（配列番号５７）
ＡＴＣＣＣＡＧＡＧＧＡＡＧＴＣＡＧＡＴＧＡＴＡＧ（配列番号５８）
ＳＯＤ１用のプライマーセット
ＣＡＴＴＣＣＡＴＣＡＴＴＧＧＣＣＧＴＡＣＡ（配列番号５９）
ＣＣＡＣＣＴＴＴＧＣＣＣＡＡＧＴＣＡＴＣＴ（配列番号６０）
ＧＰＸ１用のプライマーセット
ＴＧＡＧＡＡＧＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＡＴＧＧＴ（配列番号６１）
ＧＧＴＧＴＴＧＧＣＡＡＧＧＣＡＡＧＧＣＡＴＴＣＣ（配列番号６２）
ＧＳＲ用のプライマーセット
ＧＴＧＧＣＡＣＴＴＧＣＧＴＧＡＡＴＧＴＴ（配列番号６３）
ＡＴＴＣＣＧＡＧＴＧＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴ（配列番号６４）
ＣＡＴ用のプライマーセット
ＴＧＴＴＣＡＧＴＧＡＣＣＧＡＧＧＧＡＴＴＣ（配列番号６５）
ＡＡＣＴＴＧＡＡＧＧＴＧＴＧＴＧＡＴＣＣＡＴＡＧＣ（配列番号６６）
ＩＬ６用のプライマーセット
ＴＴＣＴＣＴＧＧＧＡＡＡＴＣＧＴＧＧＡＡＡ（配列番号６７）
ＣＴＧＣＡＡＧＴＧＣＡＴＣＡＴＣＧＴＴＧＴＴ（配列番号６８）
ＣＤＫＮ２Ａ用のプライマーセット
ＴＧＡＴＧＡＴＧＡＴＧＧＧＣＡＡＣＧＴＴ（配列番号６９）
ＴＣＧＡＡＴＣＴＧＣＡＣＣＧＴＡＧＴＴＧＡＧ（配列番号７０）
ＣＤＫＮ１Ａ用のプライマーセット
ＣＣＧＡＧＡＡＣＧＧＴＧＧＡＡＣＴＴＴＧ（配列番号７１）
ＡＡＣＧＣＧＣＴＣＣＣＡＧＡＣＧＡＡ（配列番号７２）
ＴＲＰ５３用のプライマーセット
ＣＧＡＣＣＴＡＴＣＣＴＴＡＣＣＡＴＣＡＴＣＡＣＡ（配列番号７３）
ＧＧＣＡＣＡＡＡＣＡＣＧＡＡＣＣＴＣＡＡ（配列番号７４）
ＣＬＯＣＫ用のプライマーセット
ＣＡＧＣＡＧＴＣＡＧＴＣＣＡＴＡＡＡＣＴＣ（配列番号７５）
ＴＡＴＴＴＧＣＣＴＣＴＡＴＣＡＴＣＣＧＴＧＴＣ（配列番号７６）
ＢＭＡＬ１用のプライマーセット
ＣＡＣＡＧＡＣＡＡＡＧＡＴＧＡＣＣＣＴＣＡＴＧ（配列番号７７）
ＧＣＣＴＣＣＣＴＴＧＣＡＴＴＣＴＴＧＡＴＣ（配列番号７８）
ＣＲＹ１用のプライマーセット
ＴＡＴＡＣＡＧＣＡＧＣＣＡＣＡＡＡＣＡＡＣＣ（配列番号７９）
ＡＡＣＴＣＴＴＣＡＡＡＧＡＣＣＴＴＣＡＴＣＣＣ（配列番号８０）
ＣＲＹ２用のプライマーセット
ＧＴＧＣＴＴＴＣＴＴＣＣＡＡＣＡＡＴＴＣＴＴＣＣ（配列番号８１）
ＣＡＧＡＴＧＣＣＡＡＴＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＣ（配列番号８２）
ＡＤＩＰＯＱ用のプライマーセット
ＧＣＧＴＣＡＣＴＧＴＴＣＣＣＡＡＴＧＴＡ（配列番号８３）
ＧＣＣＡＧＴＧＣＴＧＣＣＧＴＣＡＴＡＡＴ（配列番号８４）
Ｌｅｐｔｉｎ用のプライマーセット
ＣＡＣＡＣＡＣＧＣＡＧＴＣＧＧＴＡＴＣＣ（配列番号８５）
ＡＧＣＣＣＡＧＧＡＡＴＧＡＡＧＴＣＣＡＡ（配列番号８６）
ＡＮＧＰＴＬ２用のプライマーセット
ＣＣＴＡＴＡＡＧＣＡＡＧＧＧＴＴＴＧＧＧ（配列番号８７）
ＣＴＧＧＣＡＴＡＣＴＣＡＧＣＡＡＡＧＡＣ（配列番号８８）
ＲＥＴＮ用のプライマーセット
ＣＣＡＣＧＧＧＡＴＧＡＡＧＡＡＣＣＴ（配列番号８９）
ＴＧＣＡＴＴＴＧＧＡＡＡＣＡＧＧＧＡＧ（配列番号９０）
Ｓｅｒｐｉｎｅ１用のプライマーセット
ＡＡＴＣＣＣＡＣＡＣＡＧＣＣＣＡＴＣＡ（配列番号９１）
ＧＡＣＡＣＧＣＣＡＴＡＧＧＧＡＧＡＧＡＡＧＡ（配列番号９２）
ＡＧＴ用のプライマーセット
ＧＣＧＧＡＧＧＣＡＡＡＴＣＴＧＡＡＣＡ（配列番号９３）
ＴＧＴＴＣＣＴＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＴＴＴＧＡ（配列番号９４）
ＰＰＡＲγ用のプライマーセット
ＡＣＧＡＴＧＣＴＧＴＣＣＴＣＣＴＴＧＡＴＧ（配列番号９５）
ＡＣＴＣＧＣＧＴＧＴＧＡＴＡＡＡＧＣＣＡＴＴ（配列番号９６）
ＨＳＬ用のプライマーセット
ＧＧＡＧＣＡＣＴＡＣＡＡＡＣＧＣＡＡＣＧＡ（配列番号９７）
ＡＡＴＣＧＧＣＣＡＣＣＧＧＴＡＡＡＧＡ（配列番号９８）
β３アドレナリン受容体用のプライマーセット
ＧＡＴＧＣＣＧＡＧＧＣＡＣＡＧＧＡＡ（配列番号９９）
ＣＡＴＧＴＴＧＧＡＧＧＣＡＡＡＧＧＡＡＣＡ（配列番号１００）
ＧＰＤＨ用のプライマーセット
ＧＡＧＧＣＣＴＴＴＧＣＴＣＧＡＡＣＴＧ（配列番号１０１）
ＴＧＣＣＣＡＴＴＴＡＧＣＡＴＣＴＣＣＴＴＣＴ（配列番号１０２）
ＴＮＦα受容体１用のプライマーセット
ＣＣＣＴＧＧＴＴＡＴＣＴＴＧＣＴＡＧＧＴ（配列番号１０３）
ＡＧＣＣＴＴＣＴＣＣＴＣＴＴＴＧＡＣＡＧ（配列番号１０４）
ＣＣＬ２用のプライマーセット
ＣＣＴＧＧＡＴＣＧＧＡＡＣＣＡＡＡＴＧＡ（配列番号１０５）
ＧＡＡＧＡＣＣＴＴＡＧＧＧＣＡＧＡＴＧＣＡ（配列番号１０６）
神経成長因子受容体用のプライマーセット
ＡＴＣＴＴＧＧＣＴＧＣＴＧＴＧＧＴＴＧＴＧ（配列番号１０７）
ＴＡＴＴＴＴＧＣＴＴＧＣＡＧＣＴＧＴＴＣＣＡ（配列番号１０８）
インテグリンβ１用のプライマーセット
ＣＴＧＡＴＴＧＧＣＴＧＧＡＧＧＡＡＴＧＴ（配列番号１０９）
ＴＧＡＧＣＡＡＴＴＧＡＡＧＧＡＴＡＡＴＣＡＴＡＧ（配列番号１１０）
Ｌｏｒｉｃｒｉｎ用のプライマーセット
ＡＣＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＴＧＧＴＧＣＴＴＣＡ（配列番号１１１）
ＧＧＡＧＴＧＧＧＣＴＧＣＴＴＴＴＴＣＴＧ（配列番号１１２）
Ｋｅｒａｔｉｎ１０用のプライマーセット
ＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＡＡＧＣＡＧＴＴＣＴＣ（配列番号１１３）
ＴＧＣＴＧＡＡＡＡＣＣＣＴＧＡＣＧＡＡＴＣ（配列番号１１４）
Ｆｉｌａｇｇｒｉｎ用のプライマーセット
ＴＡＧＧＣＴＧＧＣＣＴＣＡＡＡＣＴＴＧＴ（配列番号１１５）
ＴＧＴＴＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＡＡＴＧＣＴ（配列番号１１６）

脾臓については、免疫賦活に関する機能評価として、ＮＫ活性を測定した。実験は、摘出した脾臓よりリンパ球を調製し、標的癌細胞ＹＡＣ－１と共培養することにより行った。リンパ球との共培養によって細胞傷害を受けたＹＡＣ－１より培養上清中に放出された乳酸脱水素酵素活性を指標に、ＮＫ活性（％）の算出を行った。

脾臓、肝臓、内臓脂肪、皮下脂肪、皮膚組織における遺伝子発現解析結果を表１～表５にそれぞれ示した。この中で、若齢マウスと比較し、加齢に伴って発現量が半分以下に低下した遺伝子が２５個含まれていた。更に、２５個の遺伝子の中で、製造例１の霊芝の投与によって１．５倍以上の発現促進を示した遺伝子が１８個見出された。表６に、これら１８個の遺伝子を臓器別に一覧にして示し、霊芝投与による遺伝子発現促進率を記した。

表６より、脾臓におけるＩＦＮＧ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＧＺＭＡ、ＧＺＭＢ、ＮＣＲ１、ＫＬＲＫ１は、加齢に伴い、若齢マウスと比較して半分以下に遺伝子発現が低下したため、これらは加齢による免疫機能低下と極めて関連の深い重要な因子と考えられた。これに対し、製造例１の霊芝は何れの遺伝子についても発現促進を示したことから、霊芝は免疫賦活に関わる遺伝子の加齢に伴う変化に対し、優れた調節作用を有することが明らかとなった。また表７にはＮＫ活性測定の結果を示した。ＮＫ活性を指標とした評価においても、加齢に伴う免疫機能低下に対する霊芝の改善作用が明確に確認された。

脂肪細胞に高発現しているＬＥＰは、食欲抑制に関連するホルモンであり、食欲を制御して適切な体重を維持し、メタボリックシンドロームの予防、改善、治療に特に重要である。表６より、内蔵脂肪におけるＬＥＰの発現は、加齢に伴い半分以下に低下したが、製造例１の霊芝により改善したことから、霊芝は食欲抑制に関わる遺伝子の加齢に伴う変化に対して、優れた調節作用を有することが明らかとなった。

表６より、脂質代謝に対する加齢の影響として、肝臓におけるＣＹＰ７Ａ１、ＦＡＳＮ、内臓脂肪と皮下脂肪におけるＬＩＰＥ、ＧＰＤ１、ＡＤＲＢ３の発現低下が顕著であった。製造例１の霊芝は、いずれの遺伝子に対しても発現促進を示したことから、霊芝は、脂肪分解や脂肪合成など、生体の恒常性維持の基本である脂質代謝に関わる遺伝子の加齢に伴う変化に対して、優れた調節作用を有することが明らかとなった。

表６より、皮膚幹細胞の機能維持マーカーについては、ＮＧＦＲとＩＴＧＢ１の加齢に伴う発現低下が顕著であった。製造例１の霊芝は、いずれの遺伝子についても発現促進を示したことから、霊芝は皮膚幹細胞の機能維持に関わる遺伝子の加齢に伴う変化に対して、優れた調節作用を有することが明らかとなった。また、皮膚組織の切片を作成し、神経成長因子受容体とインテグリンβ１のタンパク質発現を指標に皮膚幹細胞の個数についても評価したところ、霊芝は加齢に伴う皮膚幹細胞数の減少を改善する効果を有することが確認された。

製造例３の黒霊芝熱水抽出物についても同様の実験を行ったところ、脾臓、肝臓、内臓脂肪、皮下脂肪及び皮膚組織において、加齢に伴う遺伝子発現変化の調節作用が確認された。

以上より、自然加齢マウスを用いて脾臓、肝臓、内臓脂肪、皮下脂肪及び皮膚組織の遺伝子発現を指標に霊芝の効果を検討した結果、霊芝は、加齢により顕著に発現低下する遺伝子に対する改善作用、すなわち優れた遺伝子発現調節作用を有することが明らかとなった。霊芝は、加齢に伴う遺伝子発現変化を改善することにより、全身の恒常性を維持する上で極めて効果的であることが明らかとなった。

本発明の霊芝を含有することを特徴とする遺伝子発現調節剤は、免疫賦活、食欲調節、脂質代謝及び皮膚幹細胞の機能維持に関わる遺伝子の加齢に伴う発現変化を改善する効果を有し、加齢関連疾患の予防、改善、治療につながる医薬品、医薬部外品、食品組成物として幅広く利用できる。

Claims (3)

1. 霊芝を含有することを特徴とする、加齢に伴うＬＥＰ遺伝子発現低下を改善する遺伝子発現促進剤。
2. 霊芝を含有することを特徴とする、加齢に伴うＬＩＰＥ、ＧＰＤ１、ＦＡＳＮ、ＣＹＰ７Ａ１及びＡＤＲＢ３から選ばれる一種又は二種以上の遺伝子発現低下を改善する遺伝子発現促進剤。
3. 霊芝を含有することを特徴とする、加齢に伴うＮＧＦＲ及び／又はＩＴＧＢ１の遺伝子発現低下を改善する内服用遺伝子発現促進剤。