JP7055380B2 - 免疫不全疾患を処置するための方法 - Google Patents

Description

発明の分野
本発明は、免疫不全疾患を処置するための方法、特に、いぼ、低ガンマグロブリン血症、免疫不全、骨髄性細胞貯留（ｍｙｅｌｏｋａｔｈｅｘｉｓ）（ＷＨＩＭ）症候群すなわち「ＷＨＩＭＳ」を処置するための方法に関する。ＷＨＩＭＳは、皮膚および性器いぼおよび再発性感染をもたらす好中球減少症およびリンパ球減少症によって特徴付けられる疾患である。

関連出願への相互参照
この出願は、２０１５年１２月２２日に出願された米国仮特許出願連続番号ＵＳＳＮ ６２／２７１，０８７および２０１６年１２月１日に出願されたＵＳＳＮ ６２／４２８，９６４（これら各々の全体は、参考として本明細書に援用される）に対する優先権の利益を主張する。

ＷＨＩＭ症候群は、造血細胞と非造血細胞の両方によって発現されるケモカイン受容体であるＣＸＣＲ４のカルボキシ末端から、１０～１９個のアミノ酸を除去する複数の変異を生じる稀な常染色体優性の免疫不全障害である［Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ ２００３年］。ＣＸＣＲ４受容体の変異は、骨髄から血液への成熟好中球の正常な放出を妨げ［Ｋａｗａｉ ２００５年］、ＷＨＩＭ症候群を有する患者において好中球減少症を生じることが公知である［Ｄａｌｅ ２０１１年］。好中球減少症に加えて、ＷＨＩＭ症候群は、循環ＴおよびＢ細胞レベルに影響を及ぼすリンパ球減少症によって特徴付けられ［Ｂａｌａｂａｎｉａｎ ２０１２年、Ｄｏｔｔａ ２０１１年］、低レベルの免疫グロブリンをもたらす。リンパ球減少症に関する正確な機序は知られていないが、リンパ球の正常な輸送の妨害と骨髄および他のリンパ組織におけるリンパ球の保持に起因する可能性がある［Ｍａ １９９９年］。
一般的に、臨床症状は、白血球と抗体が低レベルであることによる再発性細菌感染を伴って、幼児期に最初に現れる［ＮＯＲＤ ２０１５年］。通常の感染としては、中耳炎、蜂巣炎、膿痂疹、膿瘍、細菌性肺炎、副鼻腔炎、および歯周炎が挙げられる。罹患した個体は、特に、手、足、顔、および体幹を冒す広範囲に及ぶいぼを引き起こす可能性があり、不応性であることが多いヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）に感染しやすい［ＮＯＲＤ ２０１５年］。粘膜および生殖器のいぼも発症する場合があり、これらのいぼは、子宮頸癌への進行の危険性の増大を伴う［ＮＯＲＤ ２０１５年］。最新の処置として、Ｇ－ＣＳＦおよび静脈内免疫グロブリンが挙げられるが、これらは、非特異的で、費用がかかり、投与するのが困難で、かつ部分的に有効であるにすぎない［Ｋａｗａｉ ２００９年］。

Ｈｅｒｎａｎｄｅｚら、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（２００３）３４：７０～７４ Ｋａｗａｉら、Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ．（２００５）３３：４６０～４６８ Ｋａｗａｉら、Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ．（２００９）１６：２０～２６

ＷＨＩＭ症候群を有する患者にとって利用可能な現在の処置は不充分である。このような患者の処置において転帰を改善する薬剤に関する明らかに満たされていない必要性がある。

患者を管理するためには、Ｘ４Ｐ－００１のような、ＷＨＩＭ症候群に対する有効な標的化処置が必要とされる。Ｘ４Ｐ－００１は、経口投与することができ、このことにより、標的化処置であることに加えて、ＷＨＩＭ症候群を有する患者に必要とされる慢性処置設定の優れた候補とされる。
本発明はまた、以下の項目を提供する。
（項目１）
ＷＨＩＭ症候群の処置を必要とする患者のＷＨＩＭ症候群を処置するための方法であって、有効量のＸ４Ｐ－００１またはその薬学的に許容される塩もしくは組成物を前記患者に投与するステップを含む、方法。
（項目２）
前記Ｘ４Ｐ－００１またはその薬学的に許容される塩が、約２５ｍｇ／日から約１５０ｍｇ／日の用量で投与される、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記患者がいぼを示す、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記患者から採取された細胞が、ＣＸＣＲ４の変異体形態の発現を示す、項目１から３のいずれかに記載の方法。
（項目５）
前記患者から採取された細胞が、ＣＸＣＲ４の発現の増加を示す、項目１から４のいずれかに記載の方法。
（項目６）
前記患者から生体試料を得るステップと疾患関連バイオマーカーの量を測定するステップをさらに含む、項目１から５のいずれかに記載の方法。
（項目７）
前記生体試料が血液試料である、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記疾患関連バイオマーカーが循環ＣＸＣＲ４である、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記Ｘ４Ｐ－００１またはその薬学的に許容される塩もしくは組成物が、１日に１回経口投与される、項目１から８のいずれかに記載の方法。
（項目１０）
前記Ｘ４Ｐ－００１またはその薬学的に許容される塩もしくは組成物が、１日に２回経口投与される、項目１から８のいずれかに記載の方法。
（項目１１）
（ａ）Ｘ４Ｐ－００１、またはその薬学的に許容される塩 － 組成物の約１０～２０重量％、
（ｂ）微結晶セルロース － 組成物の約７０～８５重量％、
（ｄ）クロスカルメロースナトリウム － 組成物の約５～１０重量％、
（ｅ）フマル酸ステアリルナトリウム － 組成物の約０．５～２重量％、および
（ｆ）コロイド状二酸化ケイ素 － 組成物の約０．１～１．０重量％
を含む組成物を含む単位剤形。
（項目１２）
カプセル剤の形態の、項目１１に記載の単位剤形。
（項目１３）
前記カプセル剤が、約２５ｍｇのＸ４Ｐ－００１、またはその薬学的に許容される塩を含む、項目１２に記載の単位剤形。
（項目１４）
ＷＨＩＭ症候群の処置を必要とする患者のＷＨＩＭ症候群を処置するための方法であって、項目１１に記載の単位剤形を前記患者に投与するステップを含む、方法。
（項目１５）
ＷＨＩＭ症候群の処置を必要とする患者のＷＨＩＭ症候群を処置するための方法であって、絶対好中球数（ＡＮＣ）を６００個／μＬより多いかもしくはそれに等しいレベルまで増加させ、かつ／または絶対リンパ球数（ＡＬＣ）を１０００個／μＬより多いかもしくはそれに等しいレベルまで増加させるのに有効な量で、Ｘ４Ｐ－００１またはその薬学的に許容される塩もしくは組成物を前記患者に投与するステップを含む、方法。
（項目１６）
前記患者が、Ｘ４Ｐ－００１による処置の前に、６００個／μＬ未満のＡＮＣおよび／または１０００個／μＬ未満のＡＬＣを最初に示した、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記患者が、Ｘ４Ｐ－００１による処置の前に、４００個／μＬ未満のＡＮＣおよび／または６５０個／μＬ未満のＡＬＣを最初に示した、項目１５に記載の方法。
（項目１８）
評価の少なくとも８５％で、少なくとも約６００個／μＬまでのＡＮＣレベルの増加をもたらす、項目１から１０または１４から１７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
評価の少なくとも８５％で、少なくとも約１０００個／μＬまでのＡＬＣの増加をもたらす、項目１から１０または１４から１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
ワクチンに反応する前記患者において保護抗体レベルの改善をもたらす、項目１から１０または１４から１９のいずれか一項に記載の方法。

図１は、ＣＸＣＲ４＋ＣＥＭ－ＣＣＲＦ細胞へのＳＤＦ－１αの結合に関するＸ４Ｐ－００１による阻害を示す。

図２は、ＳＤＦ－１αに刺激されたＥｕ－ＧＴＰ結合のＸ４Ｐ－００１による阻害を示す。

図３は、ＳＤＦ－１αに刺激された［^３５Ｓ］－ＧＴＰ－γ－Ｓ結合のＸ４Ｐ－００１による阻害を示す。

図４は、ＳＤＦ－１αに誘導されたカルシウムフラックスのＸ４Ｐ－００１による阻害を示す。

図５は、ＳＤＦ－１αに刺激されたＣＣＲＦ－ＣＥＭの走化性のＸ４Ｐ－００１による阻害を示す。

図６は、野生型およびＣＸＣＲ４バリアントにおけるカルシウムフラックスのＳＤＦ－１αによる刺激を示す。

図７は、野生型およびＣＸＣＲ４バリアントにおけるＳＤＦ－１αによる刺激のＸ４Ｐ－００１による阻害を示す。

図８は、雄のビーグル種のイヌへのＸ４Ｐ－００１の経口投与後の白血球数（Ａ）、好中球数（Ｂ）およびリンパ球数（Ｃ）を示す。

図９は、Ｘ４Ｐ－００１を投与されたヒト被験体におけるＷＢＣ数の用量依存性増加（２～３×）を示す。

ＣＸＣＲ４受容体に対するリガンドは、多数の生理学的プロセスに関わり、骨髄にホーミングし、骨髄から放出される造血細胞において中心的役割を果たすＳＤＦ－１αである［Ｌａｐｉｄｏｔ ２００２年］。ＣＸＣＲ４の変異により、骨髄から血液中への成熟好中球の通常の放出が妨げられる［Ｋａｗａｉ ２００５年］。ＷＨＩＭ症候群に罹患した患者の骨髄検査により、過分葉核を有する好中球と骨髄マクロファージにおける好中球のレムナントが豊富であることが示される［Ｂｏｈｉｎｊｅｃ １９８１年］。

ＣＸＣＲ４／ＳＤＦ－１α軸の破壊の結果、通常＜１．０×１０^９／Ｌの低い白血球数を有し、重度の好中球減少症およびリンパ球減少症の存在を伴うＷＨＩＭ症候群の患者を生じる［Ｄａｌｅ ２０１１年］。ＣＸＣＲ４／ＳＤＦ－１α軸破壊の機序は以下の段落に記載されている。

ＣＸＣＲ４は、Ｇタンパク質共役受容体であり、ＳＤＦ－１αによる会合により、ケモカイン受容体のＧタンパク質依存性経路の典型的な活性化が誘導される［Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ １９９８年、Ｚｌｏｔｎｉｋ ２０００年］。これらのプロセスは、さらなるＧタンパク質の活性化を排除し（すなわち、脱感作）、受容体の細胞内移行を導くβアレスチンを受容体へと動員させることによって、適時な方式で調節される。ＷＨＩＭ症候群を伴うＣＸＣＲ４の変異体は、ＳＤＦ－１αに曝露した際の受容体の脱感作および細胞内移行が損なわれることとなり、受容体活性化が増強され、延長される［Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ ２００３年、Ｂａｌａｂａｎｉａｎ ２００５年、Ｇｕｌｉｎｏ ２００４年、Ｋａｗａｉ ２００５年、Ｌａｇａｎｅ ２００８年、ＭｃＣｏｒｍｉｃｋ ２００９年］。ＣＸＣＲ４は、通常、白血球細胞の輸送を調節し、特に、骨髄における好中球の接着にとって重要であるため、ＳＤＦ－１α依存性シグナル伝達の活性を延長することは、ＷＨＩＭ症候群において見られる骨髄性細胞貯留（ＭＫＸ）および好中球減少症に対する原因としての可能性が高い［ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ ２０１１年－ａ］。

Ｘ４Ｐ－００１は、ＣＸＣＲ４の変異体によって引き起こされる下方調節の欠陥（受容体の細胞内移行）および受容体の機能障害を克服することにより、循環する白血球数の増加をもたらすＣＸＣＲ４の変異体の増強されたシグナル伝達活性を遮断する可能性を有するＣＸＣＲ４の小分子アンタゴニストである（ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ ２０１１年－ｂ）。Ｘ４Ｐ－００１が、ＷＨＩＭ症候群に起因するＣＸＣＲ４の最も一般的な遺伝子型の形態（Ｒ３３４ＸおよびＥ３４３Ｘ）を、野生型ＣＸＣＲ４と同様の程度まで阻害することも実証された［Ｍｏｓｉ ２０１２年］。

これらの研究により、最大４００ｍｇをＢＩＤで３．５日間（健康なボランティア）および２００ｍｇをＢＩＤで８～１０日間（健康なボランティアとＨＩＶ患者）経口投与することは、忍容性に優れ、いかなるパターンの有害事象も有さないか、または臨床的に有意な実験室変化を有さないことが実証された。これらの研究により、循環白血球（ＷＢＣ）の用量および濃度に関連する変化、ならびに高い組織浸透を示唆する高容積の分布（ＶＬ）による、薬力学活性も実証された。

本発明者らは、Ｘ４Ｐ－００１によるＣＸＣＲ４拮抗作用により、いぼ、低ガンマグロブリン血症（免疫グロブリンのレベルが低い）、免疫不全（感染に対する感受性）および骨髄性細胞貯留（骨髄における白血球のトラッピング）の頭文字であるＷＨＩＭＳ、ならびにＷＨＩＭＳの個々の態様を有する患者において、有意な処置利益が得られうると考えた。Ｘ４Ｐ－００１の投与により、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ４＋ＣＥＭ－ＣＣＲＦ細胞へのＳＤＦ－１αの結合が阻害される。［図１を参照のこと］。Ｘ４Ｐ－００１の投与により、ＣＸＣＲ４細胞のシグナル伝達およびＳＤＦ－１αに誘導されるカルシウムフラックスも阻害される。［図２～４を参照のこと］。このように、Ｘ４Ｐ－００１は、ＳＤＦ－１αに刺激されるＣＣＲＦ－ＣＥＭ走化性を阻害する。［図５を参照のこと］。

さらに、本発明者らは、ＣＸＣＲ４標的化薬物が通常の増殖細胞集団において特異的に標的とされ、細胞周期停止を誘導しないため、比較的毒性の低いこのような結果が達成されうると考えた。したがって、本発明は、ＣＸＣＲ４阻害剤ＡＭＤ１１０７０（Ｘ４Ｐ－００１）の低い毒性と作用を利用する処置転帰における顕著な利点を提供する。

本発明において、ＷＨＩＭＳ、または関連する症候群を有する患者は、単一の薬剤（単剤療法）として、または顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）もしくは静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）などの別の薬剤と組み合わせて、Ｘ４Ｐ－００１、またはその薬学的に許容される塩もしくは組成物で処置される。

一部の実施形態では、本発明は、それを必要とする患者のＷＨＩＭＳを処置するための方法であって、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦおよび／またはＩＶＩＧと組み合わせて、Ｘ４Ｐ－００１またはその薬学的に許容される塩もしくは組成物を前記患者に投与するステップを含む方法を提供する。ＷＨＩＭＳの処置において利用されうる他の処置として、骨髄移植および臍帯血幹細胞による処置が挙げられる。

一部の実施形態では、提供される方法は、Ｘ４Ｐ－００１、またはその薬学的に許容される塩もしくは組成物を絶食状態の患者に投与するステップを含む。

ある特定の実施形態では、本発明は、それを必要とする患者のＷＨＩＭＳを処置するための方法であって、Ｘ４Ｐ－００１、またはその薬学的に許容される塩もしくは組成物を前記患者に投与するステップを含み、患者から生体試料を得るステップと疾患関連バイオマーカーの量を測定するステップとをさらに含む方法を提供する。一部の実施形態では、生体試料は血液試料である。ある特定の実施形態では、疾患関連バイオマーカーは、ＣＸＣＲ４、ＳＤＦ－１α／ＣＸＣＬ１２、およびＧＲＫ３（Ｇタンパク質共役受容体キナーゼ３）からなる群から選択される。

ある特定の実施形態では、本発明は、それを必要とする患者のＷＨＩＭＳを処置するための方法であって、Ｘ４Ｐ－００１、またはその薬学的に許容される塩もしくは組成物を前記患者に投与するステップを含む方法を提供する。

一部の実施形態では、Ｘ４Ｐ－００１またはその薬学的に許容される塩は、約２５ｍｇ／日から約１５０ｍｇ／日の用量で投与される。

一部の実施形態では、前記患者はいぼを示す。

一部の実施形態では、患者から採取された細胞は、ＣＸＣＲ４の変異体形態の発現を示す。

一部の実施形態では、患者から採取された細胞は、ＣＸＣＲ４の発現の増加を示す。

一部の実施形態では、方法は、患者から生体試料を得るステップと疾患関連バイオマーカーの量を測定するステップとをさらに含む。

一部の実施形態では、生体試料は血液試料である。

一部の実施形態では、疾患関連バイオマーカーは循環ＣＸＣＲ４である。

一部の実施形態では、Ｘ４Ｐ－００１またはその薬学的に許容される塩もしくは組成物は、１日に１回経口投与される。

一部の実施形態では、Ｘ４Ｐ－００１またはその薬学的に許容される塩もしくは組成物は、１日に２回経口投与される。

一部の実施形態では、本発明は、
（ａ）Ｘ４Ｐ－００１、またはその薬学的に許容される塩 － 組成物の約１０～２０重量％、
（ｂ）微結晶セルロース － 組成物の約７０～８５重量％、
（ｄ）クロスカルメロースナトリウム － 組成物の約５～１０重量％、
（ｅ）フマル酸ステアリルナトリウム － 組成物の約０．５～２重量％、および
（ｆ）コロイド状二酸化ケイ素 － 組成物の約０．１～１．０重量％
を含む組成物を含む単位剤形を提供する。

一部の実施形態では、単位剤形はカプセル剤の形態である。

一部の実施形態では、カプセル剤は、約２５ｍｇのＸ４Ｐ－００１、またはその薬学的に許容される塩を含む。

一部の実施形態では、本発明は、それを必要とする患者のＷＨＩＭ症候群を処置するための方法であって、開示された単位剤形を患者に投与するステップを含む方法を提供する。

一部の実施形態では、本発明は、それを必要とする患者のＷＨＩＭ症候群を処置するための方法であって、患者の、例えば患者の血液中の絶対好中球数（ＡＮＣ）を増加させ、および／または絶対リンパ球数（ＡＬＣ）を増加させるのに有効な量で、Ｘ４Ｐ－００１またはその薬学的に許容される塩もしくは組成物を前記患者に投与するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、ＡＮＣおよび／またはＡＬＣは、患者において、ＷＨＩＭ症候群または別の免疫不全を有さない平均的な健康なヒトのものの約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％まで増加する。一部の実施形態では、ＡＮＣおよび／またはＡＬＣは、患者において、患者のものと同様の年齢、体重、および性別の平均的な健康なヒトのものの約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％まで増加する。

一部の実施形態では、本発明は、それを必要とする患者のＷＨＩＭ症候群を処置するための方法であって、絶対好中球数（ＡＮＣ）を６００個／μＬより多いかもしくはそれに等しいレベルまで増加させ、および／または絶対リンパ球数（ＡＬＣ）を１０００個／μＬより多いかもしくはそれに等しいレベルまで増加させるのに有効な量で、Ｘ４Ｐ－００１またはその薬学的に許容される塩もしくは組成物を前記患者に投与するステップを含む方法を提供する。

一部の実施形態では、前記患者は、Ｘ４Ｐ－００１による処置の前に、６００個／μＬ未満のＡＮＣおよび／または１０００個／μＬ未満のＡＬＣを最初に示した。

一部の実施形態では、前記患者は、Ｘ４Ｐ－００１による処置の前に、４００個／μＬ未満のＡＮＣおよび／または６５０個／μＬ未満のＡＬＣを最初に示した。

一部の実施形態では、開示された方法は、評価の少なくとも８５％で、少なくとも約６００個／μＬ、約８００個／μＬ、約１０００個／μＬ、約１，２００個／μＬ、または正常に機能する免疫系を有するヒトの値あたりまでのＡＮＣレベルの増加をもたらす。

一部の実施形態では、開示された方法は、評価の少なくとも８５％で、少なくとも約１０００個／μＬ、約１，２００個／μＬ、もしくは約１，５００個／μＬ、または正常に機能する免疫系を有するヒトの値あたりまでのＡＬＣの増加をもたらす。

一部の実施形態では、開示された方法は、ワクチンに応答する患者の保護抗体レベルの改善をもたらす。

一部の実施形態では、開示された方法は、少なくとも５０％少ない感染、例えば、気道感染など、患者の感染頻度の低下をもたらす。

一部の実施形態では、開示された方法は、総循環ＷＢＣ、好中球、および／またはリンパ球のレベルの増加をもたらす。一部の実施形態では、ＷＢＣ、好中球、および／またはリンパ球の細胞数が、少なくとも１．４×ベースラインまで増加する。一部の実施形態では、ＷＢＣ、好中球、および／またはリンパ球の細胞数が、少なくとも１．８×ベースラインまで増加する。一部の実施形態では、ＷＢＣ、好中球、および／またはリンパ球の細胞数が、少なくとも２．９×ベースラインまで増加する。一部の実施形態では、リンパ球の細胞数が、少なくとも２．９×ベースラインまで増加する。一部の実施形態では、好中球の細胞数が少なくとも２．７×ベースラインまで、リンパ球の細胞数が１．９×ベースラインまで増加する。

一部の実施形態では、本発明は、それを必要とする患者のＷＨＩＭＳを処置する方法であって、有効量のＸ４Ｐ－００１またはその薬学的に許容される塩もしくは組成物を、いぼ、ＨＰＶ感染、または好中球減少症に対する別の処置と併せて、前記患者に投与するステップを含む方法を提供する。

投薬量および製剤化
Ｘ４Ｐ－００１は、ＣＸＣＲ４アンタゴニストであり、分子式Ｃ２１Ｈ２７Ｎ５；分子量３４９．４８ａｍｕ；外観 白色から淡黄色の固体；溶解度：Ｘ４Ｐ－００１は、ｐＨ範囲が３．０から８．０の範囲で溶けやすく（＞１００ｍｇ／ｍＬ）、ｐＨ９．０でやや溶けにくく（１０．７ｍｇ／ｍＬ）かつｐＨ１０．０で難溶性（２．０ｍｇ／ｍＬ）である。Ｘ４Ｐ－００１は、水に僅かにしか溶解せず、融解点が１０８．９℃である。

Ｘ４Ｐ－００１の化学構造を以下に記載する。

ある特定の実施形態では、Ｘ４Ｐ－００１を含有する組成物は、１日に約１０ｍｇから約６００ｍｇの量で経口投与される。ある特定の実施形態では、投与組成物は、１日２回、分割投薬量で、およそ１２時間隔てて提供されてもよい。他の実施形態では、投与組成物は、１日１回提供されてもよい。Ｘ４Ｐ－００１の終末相半減期は、一般的に、約１２から約２４時間の間、またはおよそ１４．５時間となるように決定されてきた。経口投与に対する投薬量は、約１０ｍｇから約３００ｍｇを１日に１回または２回であってよい。ある特定の実施形態では、本発明において有用なＸ４Ｐ－０００１の投薬量は、１日に約２０ｍｇから約６００ｍｇである。他の実施形態では、本発明において有用なＸ４Ｐ－００１の投薬量は、１日に約２５ｍｇから約２００ｍｇ、１日に約２５ｍｇから約１５０ｍｇ、１日に約２５ｍｇから約１００ｍｇ、１日に約２５ｍｇから約５０ｍｇ、１日に約５０ｍｇから約１５０ｍｇ、または１日に約５０ｍｇから約１００ｍｇの範囲であってもよい。

一部の実施形態では、提供される方法は、Ｘ４Ｐ－００１を含む薬学的に許容される組成物を患者に投与するステップを含み、組成物は経口投与用に製剤化される。ある特定の実施形態では、組成物は、錠剤またはカプセル剤の形態で経口投与用に製剤化される。一部の実施形態では、Ｘ４Ｐ－００１を含む組成物は、カプセル剤の形態で経口投与用に製剤化される。

ある特定の実施形態では、提供される方法は、１０ｍｇから１２００ｍｇのＸ４Ｐ－００１有効成分と１種または複数の薬学的に許容される賦形剤とを含む１つまたは複数のカプセル剤を患者に投与するステップを含む。ある特定の実施形態では、カプセル剤は、硬質ゼラチンから構成される。

ある特定の実施形態では、本発明は、Ｘ４Ｐ－００１、またはその薬学的に許容される塩、１種または複数の希釈剤、崩壊剤、滑沢剤、流動補助剤（ｆｌｏｗ ａｉｄ）、および湿潤剤を含む組成物を提供する。一部の実施形態では、本発明は、１０ｍｇから１２００ｍｇのＸ４Ｐ－００１、またはその薬学的に許容される塩、微結晶セルロース、リン酸水素カルシウム二水和物、クロスカルメロースナトリウム、フマル酸ステアリルナトリウム、コロイド状二酸化ケイ素、およびラウリル硫酸ナトリウムを含む組成物を提供する。一部の実施形態では、本発明は、１０～２００ｍｇのＸ４Ｐ－００１、またはその薬学的に許容される塩、微結晶セルロース、リン酸水素カルシウム二水和物、クロスカルメロースナトリウム、フマル酸ステアリルナトリウム、コロイド状二酸化ケイ素、およびラウリル硫酸ナトリウムを含む組成物を含む単位剤形を提供する。ある特定の実施形態では、本発明は、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約５０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１５０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約７５０ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、または約１２００ｍｇの量で存在するＸ４Ｐ－００１、またはその薬学的に許容される塩を含む組成物を含む単位剤形を提供する。一部の実施形態では、提供される組成物（または単位剤形）は１日に１回、１日に２回、１日に３回、または１日に４回患者に投与される。一部の実施形態では、提供される組成物（または単位剤形）は、１日に１回または１日に２回患者に投与される。

一部の実施形態では、本発明は、
（ａ）Ｘ４Ｐ－００１、またはその薬学的に許容される塩 － 組成物の約１０～３０重量％、
（ｂ）微結晶セルロース － 組成物の約６０～８０重量％、
（ｃ）クロスカルメロースナトリウム － 組成物の約５～１０重量％、
（ｄ）フマル酸ステアリルナトリウム － 組成物の約０．５～２重量％、および
（ｅ）コロイド状二酸化ケイ素 － 組成物の約０．１～１．０重量％
を含む組成物を含む単位剤形を提供する。

一部の実施形態では、本発明は、
（ａ）Ｘ４Ｐ－００１、またはその薬学的に許容される塩 － 組成物の約１４．７重量％、
（ｂ）微結晶セルロース － 組成物の約７８．１重量％、
（ｃ）クロスカルメロースナトリウム － 組成物の約６．０重量％、
（ｄ）フマル酸ステアリルナトリウム － 組成物の約１．０重量％、および
（ｅ）コロイド状二酸化ケイ素 － 組成物の約０．２重量％
を含む組成物を含む単位剤形を提供する。

一部の実施形態では、本発明は、
（ａ）Ｘ４Ｐ－００１、またはその薬学的に許容される塩 － 組成物の約１０～２０重量％、
（ｂ）微結晶セルロース － 組成物の約２５～４０重量％、
（ｃ）リン酸水素カルシウム二水和物 － 組成物の約３５～５５重量％、
（ｄ）クロスカルメロースナトリウム － 組成物の約４～１５重量％、
（ｅ）フマル酸ステアリルナトリウム － 組成物の約０．３～２重量％、
（ｆ）コロイド状二酸化ケイ素 － 組成物の約０．１～１．５重量％、および
（ｇ）ラウリル硫酸ナトリウム － 組成物の約０．１～１．５重量％
を含む組成物を含む単位剤形を提供する。

一部の実施形態では、本発明は、
（ａ）Ｘ４Ｐ－００１、またはその薬学的に許容される塩 － 組成物の約１２．８５重量％、
（ｂ）微結晶セルロース － 組成物の約３１．９２重量％、
（ｃ）リン酸水素カルシウム二水和物 － 組成物の約４４．４重量％、
（ｄ）クロスカルメロースナトリウム － 組成物の約８．３３重量％、
（ｅ）フマル酸ステアリルナトリウム － 組成物の約１．３８重量％、
（ｆ）コロイド状二酸化ケイ素 － 組成物の約０．４２重量％、および
（ｇ）ラウリル硫酸ナトリウム － 組成物の約０．７重量％
を含む組成物を含む単位剤形を提供する。

例えば、特定の疾患または状態を処置する目的で、活性化合物の組合せを投与することが望ましい場合があるので、そのうちの少なくとも１つが本発明による化合物を含有する２つまたはそれよりも多い医薬組成物を、その組成物を同時投与するのに適するキットの形態で便宜上組み合わせうることは本発明の範囲内である。したがって、本発明のキットは、そのうちの少なくとも１つが本発明の化合物を含有する２つまたはそれよりも多い別々の医薬組成物と、前記組成物を別々に保持するための手段、例えば、容器、分割されたボトル（ｄｉｖｉｄｅｄ ｂｏｔｔｌｅ）、または分割されたホイルパケット（ｄｉｖｉｄｅｄ ｆｏｉｌ ｐａｃｋｅｔ）とを含む。このようなキットの例は、錠剤、カプセル剤などのパッケージングに使用されるよく知られたブリスターパックである。

本発明のキットは、特に、異なる剤形（例えば、経口と非経口）を投与するか、別々の組成物を異なった投与間隔で投与するか、または別々の組成物を互いに用量設定するのに適している。コンプライアンスを促進するために、キットは、典型的には、投与のための説明書を含み、記憶補助と共に提供されうる。

以下の実施例は、本発明をより詳細に説明する。以下の調製および実施例は、当業者に本発明をより明確に理解させ、本発明を実践させることができるように与えられるものである。しかしながら、本発明は、本発明の単一の態様の例示のみを目的として例示された実施形態によって範囲を限定されるものではなく、機能的に均等である方法は本発明の範囲内にある。実際に、本発明の種々の修正は、本明細書に記載されたものに加えて、前述の記載および添付の図面から当業者にとって明らかである。このような修正は、添付の特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。

本明細書で引用された各文書の内容は、参照によりその全体として本明細書に組み込まれる。

（実施例１：ＣＸＣＲ４に対するＸ４Ｐ－００１の効果の非臨床評価）
ｉｎ ｖｉｔｒｏ薬理学
Ｘ４Ｐ－００１（正式には、ＡＭＤ１１０７０と示される）のｉｎ－ｖｉｔｒｏ薬理学を広範に研究し、その結果を報告した［Ｍｏｓｉ ２０１２年］。以下に提示されるのは、Ｍｏｓｉ ２０１２年の文献刊行物からの関連情報である。ＳＤＦ－１αのアイソフォームを以下に記載した実験に使用した。

ＣＸＣＲ４へのＳＤＦ－１α結合のＸ４Ｐ－００１による阻害
異種競合結合アッセイにおいて、Ｘ４Ｐ－００１は、［^１２５Ｉ］－ＳＤＦ－１αのＣＣＲＦ－ＣＥＭ細胞（自然にＣＸＣＲ４を発現するＴリンパ芽球性細胞株［Ｃｒｕｍｐ １９９７年］）への結合を阻害することが示された。このアッセイの結果を以下の図２に示す。データは、単一部位結合モデルにフィッティングされ、１２．５±１．３ｎＭのＩＣ_５０を得た。

ＣＸＣＲ４細胞シグナル伝達のＸ４Ｐ－００１による阻害
ＣＸＣＲ４は、Ｇタンパク質共役受容体である［Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ １９９８年、Ｚｌｏｔｎｉｋ ２０００年］。したがって、ＧＴＰの非加水分解性類似体、例えば、蛍光標識したユーロピウム－ＧＴＰ（Ｅｕ－ＧＴＰ）または放射性標識した［^３５Ｓ］－ＧＴＰγＳを使用して、受容体の活性化を測定することができる。図３および図４で示された結果は、Ｘ４Ｐ－００１がＣＸＣＲ４活性化を阻害し、Ｅｕ－ＧＴＰ結合および［^３５Ｓ］－ＧＴＰγＳアッセイにおいて、それぞれ３９．８±２．５ｎＭおよび１９．０±４．１ｎＭのＩＣ_５０値を有したことを示した。

Ｇタンパク質共役受容体の活性化に際し、細胞内シグナル伝達経路が誘発され、細胞内貯蔵からカルシウムの放出を生じる。このカルシウムフラックスは、カルシウムと結合すると蛍光を発するカルシウムキレート分子、Ｆｌｕｏ－４を使用してアッセイすることができる。Ｘ４Ｐ－００１は、９．０±２．０ｎＭのＩＣ_５０でＣＣＲＦ－ＣＥＭ細胞中のＳＤＦ－１α（２．５ｎＭのＳＤＦ－１α）に媒介されるカルシウムフラックスを阻害することができた。結果を図５に示す。

全てのケモカインの重要な特性は、それらが、ケモカインの濃度勾配に対する走化性応答を誘導することである。Ｘ４Ｐ－００１は、図６に示すように、１９．０±４．０ｎＭのＩＣ_５０で、ＣＣＲＦ－ＣＥＭ細胞のＳＤＦ－１αに媒介される走化性を阻害することができた。

上述のｉｎ ｖｉｔｒｏの結果のまとめを、以下の表１に提示する：

ＣＸＣＲ４に対するＸ４Ｐ－００１の選択性
Ｘ４Ｐ－００１のＣＸＣＲ４に対する特異性を実証するために、ケモカイン受容体のパネルに対するカルシウムシグナル伝達アッセイ、ならびにＢＬＴ_１、ロイコトリエンＢ４に対する受容体（ＬＴＢ_４）、およびＣＸＣＲ７に対するリガンド結合アッセイにおいて試験した。ＬＴＢ_４は強力な化学誘引物質であり、その受容体はＧタンパク質共役受容体である。表２の結果は、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２ｂ、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ３、およびＬＴＢ_４に対するＸ４Ｐ－００１のＩＣ_５０が、全ての場合に、＞５０ｍＭであったことを示す。Ｘ４Ｐ－００１は、このアッセイで試験される最大濃度である、１０ｍＭの濃度で、ＳＤＦ－１αのＣＸＣＲ７への結合を阻害しなかった。一緒に、これらのデータは、Ｘ４Ｐ－００１がＣＸＣＲ４の選択的阻害剤であることを示す。

ＣＸＣＲ４に対するＸ４Ｐ－００１の特異性を実証するために、ケモカイン受容体のパネルに対するカルシウムシグナル伝達アッセイ、ならびにＢＬＴ_１、ロイコトリエンＢ４に対する受容体（ＬＴＢ_４）、およびＣＸＣＲ７に対するリガンド結合アッセイにおいて試験した。ＬＴＢ_４は強力な化学誘引物質であり、その受容体はＧタンパク質共役受容体である。表２の結果は、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２ｂ、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ３、およびＬＴＢ_４に対するＸ４Ｐ－００１のＩＣ_５０が、全ての場合に、＞５０ｍＭであったことを示す。Ｘ４Ｐ－００１は、このアッセイで試験される最大濃度である、１０ｍＭの濃度で、ＳＤＦ－１αのＣＸＣＲ７への結合を阻害しなかった。一緒に、これらのデータは、Ｘ４Ｐ－００１がＣＸＣＲ４の選択的阻害剤であることを示す。

ＣＸＣＲ４のＣ末端バリアントのＸ４Ｐ－００１による阻害
治療的観点から、ＣＸＣＲ４アンタゴニストがＣＸＣＲ４バリアントに作用できることが重要である。ＣＸＣＲ４のカルボキシ末端が切断されたバリアントは、ＷＨＩＭ症候群に関連して報告され、ナンセンス変異により、１９個のアミノ酸の切断（Ｒ３３４Ｘ）、および１０個のアミノ酸の切断（Ｅ３４３Ｘ）を生じ、フレームシフト変異により、１３個のアミノ酸の切断（Ｓ３３９ｆｓ３４２Ｘ）を生じる［Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ ２００３年、Ｋａｗａｉ ２００９年］。Ｒ３３４ＸおよびＥ３４３Ｘ ＣＸＣＲ４バリアントをクローニングし、イヌ胸腺細胞株Ｃｆ２Ｔｈで一時的に発現させた。この細胞株は、ＣＸＣＲ４の発現の欠如により選択された［Ｗｏｎｇ ２００８年］。野生型ＣＸＣＲ４は、対照研究のためにこの細胞株に同様にサブクローニングした。対照研究では、これらのカルボキシ末端が切断されたバリアントの両方が、野生型ＣＸＣＲ４と同様の効力でカルシウムフラックスアッセイにおいてＳＤＦ－１αに応答することができることが実証された。ＳＤＦ－１αに対するＥＣ_５０値は、ＣＸＣＲ４の野生型、Ｒ３３４ＸおよびＥ３４３Ｘバリアントに対して、それぞれ、１３．６、１１．３および１５．３ｎＭであった（図６）。ＳＤＦ－１αに媒介されるカルシウムフラックスに対するＸ４Ｐ－００１の阻害効果を２つのＣＸＣＲ４バリアントについて評価した。両方のバリアントは、野生型、Ｒ３３４ＸおよびＥ３４３Ｘバリアントに対して、それぞれ、３．１、８．５および４．６ｎＭのＩＣ_５０値で野生型ＣＸＣＲ４と同様の程度まで阻害された（図７）。

ｉｎ ｖｉｔｒｏ研究からの考察と結論
天然にＣＸＣＲ４を発現するＣＣＲＦ－ＣＥＭ細胞株を使用して［Ｃｒｕｍｐ １９９７年］、Ｘ４Ｐ－００１が、１２．５±１．３ｎＭのＩＣ_５０でＣＸＣＲ４へのＳＤＦ－１αリガンド結合を阻害することが示された。Ｘ４Ｐ－００１はまた、それぞれ、３９．８±２．５ｎＭおよび１９．０±４．１ｎＭのＩＣ_５０値での蛍光Ｅｕ－ＧＴＰまたは放射性標識［^３５Ｓ］－ＧＴＰγＳ結合アッセイのいずれかを使用する２つのアッセイで、ＣＸＣＲ４受容体のＳＤＦ－１αに媒介されるＧタンパク質活性化の阻害、ならびに９．０±２．０ｎＭのＩＣ_５０でのＳＤＦ－１αに媒介されるカルシウムフラックスの阻害によって示されるようにＣＸＣＲ４の活性化およびシグナル伝達も阻害した。Ｘ４Ｐ－００１はまた、１９．０±４．０ｎＭのＩＣ_５０でＳＤＦ－１αに媒介される走化性、ＣＸＣＲ４に媒介される生理学的応答を阻害した。さらに、Ｘ４Ｐ－００１は、それぞれ、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２ｂ、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ７およびＣＸＣＲ３に対するリガンドである、ＭＩＰ１α、ＭＣＰ－１、ＴＡＲＣ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ－３β、もしくはＩＰ１０のいずれかに媒介されるカルシウムフラックス、またはＣＸＣＲ７へのＳＤＦ－１α結合、もしくは走化性を媒介する代替のＧタンパク質共役受容体であるＢＬＴ１へのＬＴＢ４結合に、阻害効果をほとんど有さなかったか、または全く有さなかった。これらのデータは、Ｘ４Ｐ－００１が、評価される他のケモカイン受容体に対するＣＸＣＲ４の選択的阻害剤であることを示す。

受容体の細胞内カルボキシ末端の切断を生じるＣＸＣＲ４の変異は、稀な状態、すなわちＷＨＩＭ症候群に関連する［Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ ２００３年、Ｋａｗａｉ ２００９年］。これらのＣＸＣＲ４バリアントのうちの２つを評価したところ、結果は、これらのカルボキシ末端が切断されたバリアントにおいて、Ｘ４Ｐ－００１がＳＤＦ－１αに媒介されるカルシウムフラックスを阻害することができることを実証した。これらのデータは、Ｘ４Ｐ－００１がＣＸＣＲ４の細胞外領域との相互作用を介して作用することをさらに示す。さらに、ＷＨＩＭ症候群に対する可能性のある治療選択肢としてのＸ４Ｐ－００１についての展望から、Ｘ４Ｐ－００１が、ＣＸＣＲ４の複数のバリアントを阻害することができることが重要である。

さらに、増加する量のＸ４Ｐ－００１の存在下で、カルシウムフラックスアッセイにおいて、ＳＤＦ－１αの用量／応答を比較することによって、Ｘ４Ｐ－００１がＣＸＣＲ４のアロステリック阻害剤であることが示された［Ｍｏｓｉ ２０１２年］。したがって、非競合的結合によって媒介される阻害に基づいて、阻害の程度は、Ｘ４Ｐ－００１の濃度にのみ依存し、ＳＤＦ－１αリガンドの濃度には依存しない。

ｉｎ ｖｉｖｏ薬理学
Ｘ４Ｐ－００１の主要なｉｎ ｖｉｖｏの薬理学効果は、骨髄からの白血球（ＷＢＣ）の動員である。ビーグル種のイヌおよびＣ３Ｗ／Ｈｅ Ｊマウスの骨髄からのＷＢＣの動員を実証する３つの研究を以下にまとめる。

雄のビーグル種のイヌにおける血液学的効果
３頭の絶食した雄のビーグル種のイヌは、１ｍＬ／ｋｇの容量で、用量レベルが５、１５、および３５ｍｇ／ｋｇ（用量レベルごとに１頭のイヌ）の経口胃管栄養法により、水溶液中のＸ４Ｐ－００１の単回用量を受けた。血液試料（それぞれ、およそ３ｍＬ）を、頸静脈からの直接的静脈穿刺により、各動物から複数の時点で得て、抗凝固剤としてＫ_３ＥＤＴＡを含有するＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）チューブを使用して回収した。血液試料は、用量前、用量後０．２５、０．５、０．７５、１、１．５、２、３、４、７、１２、および２４時間で得た。血液試料を自動差分解析（ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ）の前に、周囲室温で保存した。

試験物投与日の投薬前に、体重を決定した。少なくとも１日１回と血液サンプリング時に動物を観察した。

血液学パラメータは以下のものを含んだ：
白血球数（ＷＢＣ）
白血球分画（絶対的および相対的）
・好中球
・リンパ球
・単球
・好酸球
・好塩基球
・大型非染色細胞（ＬＵＣ）
・ヘマトクリット（ＨＣＴ）
・ヘモグロビン（ＨＧＢ）
・平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨ）
・平均赤血球ヘモグロビン濃度（ＭＣＨＣ）
・平均赤血球容積（ＭＣＶ）
・血小板数（ＰＬＴ）
・赤血球数（ＲＢＣ）

結果
ＷＢＣならびに絶対好中球およびリンパ球数に対するＸ４Ｐ－００１の効果を図８に示す。ＷＢＣの最大増加は、用量後４～１２時間で生じた。ピークの上昇は、１５および３５ｍｇ／ｋｇの用量レベルで、ベースライン値の１．８～２．９倍の範囲であり、５ｍｇ／ｋｇの用量レベルではいくらか低い（１．５倍）上昇が観察された。試料サイズが小さいことによって制限されるが、これらの結果は、より高い用量レベルで最大増加が達成されうることを示唆する。ＷＢＣ、好中球、およびリンパ球数は、ベースラインへ戻るというエビデンスと共に、２４時間において１５および３５ｍｇ／ｋｇの用量レベルで上昇したままであった。他の血液学的効果は観察されなかった。

１４日の回復期間をともなう、ビーグル種のイヌでの２８日の経口（カプセル剤）研究
雄および雌のビーグル種のイヌにおいて、Ｘ４Ｐ－００１を用いて、２８日のＧＬＰ経口（カプセル剤）毒性学研究を行い、経口カプセル剤により１日２回（少なくとも７時間隔てて）２８日間Ｘ４Ｐ－００１を投与して、血液学効果を観察した。処置された動物のサブセットは、１４日の回復期間後に評価した。表３はプロトコール設計を、表４は評価スケジュールを提示する。

以下の表５に示すように、好中球、リンパ球、および単球に対する絶対数の増加は、終了時（２８日目）に観察され、これらは、雌でより大きく、統計的に有意な傾向であった。これらの変化は、Ｘ４Ｐ－００１の薬理学的効果と一致するとみなされた。１４日の回復期間（１００ｍｇ／ｋｇ用量群のみ評価した）後、全ての血液学結果は正常レベル内に戻った。

マウスのＸ４Ｐ－００１の血液学的効果
Ｘ４Ｐ－００１が、マウスの前駆／幹細胞を動員するかどうかを決定するために、さらなる研究を行った。全ての実験は、Ｃ３Ｗ／Ｈｅ Ｊマウスで実施した。Ｘ４Ｐ－００１およびＡＭＤ３１００／プレリキサホルを、以下に記載する用量で単回皮下注射により投与した。Ｘ４Ｐ－００１の動員能力を、血液１ｍＬ当たりの顆粒球マクロファージ（ＣＦＵ－ＧＭ）、赤血球（ＢＦＵ－Ｅ）および多分化能（ＣＦＵ－ＧＥＭＭ）前駆細胞の数によって評価した。ｌＵ／ｍＬのｒｈｕ ＥＰＯ、５０ｎｇ／ｍＬのｒｍｕ ＳＬＦ、５％ｖｏｌ／ｖｏｌのポークウィードマイトジェンマウス脾臓細胞馴化培地（ＰＷＭＳＣＭ）、および０．１ｍＭのヘミンを組み合わせて、ｉｎ ｖｉｔｒｏでコロニーを形成するために、前駆細胞を刺激した。３７℃、低下させた５％のＣＯ_２（５％ＣＯ_２）および加湿チャンバ内でのインキュベーションの７日後にプレートをスコアリングした。

結果
Ｘ４Ｐ－００１により、単回皮下注射後のＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスにおいて、前駆細胞が動員された。最初の実験では（表６に示したデータ）、マウスは、５ｍｇ／ｋｇの用量を受け、循環血液中の前駆細胞数を様々な時点（０．２５、０．５、１、２、６および２４時間）で測定した。有核細胞の動員のピークは、注射のおよそ１～２時間後に生じた。ＣＦＵ－ＧＭ、ＢＦＵ－ＥおよびＣＦＵ－ＧＥＭＭのピーク増加は、対照（生理食塩水の注射）に対して、それぞれ、４．２１倍（３０分）、２．４９～２．５４倍（３０～６０分）、および２．５８～２．６７倍（３０～６０分）であった。

種々の用量（１．５、２．５、５、１０および２０ｍｇ／ｋｇ）での注射の１時間後に、血液中の循環前駆細胞数を測定することによって、Ｘ４Ｐ－００１用量応答を実施した。表７に示すように、ＣＦＵ－ＧＭの倍数増加（ｆｏｌｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ）によって例示される、Ｘ４Ｐ－００１で動員され得る前駆細胞数の上限があると思われる。循環血液中のＣＦＵ－ＧＭ数は、５～２０ｍｇ／ｋｇの対照に対して、６．０～７．７のピーク倍数増加で用量依存的に増加した。ＢＦＵ－ＥおよびＣＦＵ－ＧＥＭＭに対する、それぞれ、２．３および３．８のピーク倍数増加は、１０ｍｇ／ｋｇで認められた。５ｍｇ／ｋｇ未満の用量のＸ４Ｐ－００１では、ＢＦＵ－ＥおよびＣＦＵ－ＧＥＭＭ数の倍数増加は、統計的に有意ではなかった。

最後の実験を、Ｘ４Ｐ－００１およびＡＭＤ３１００／プレリキサホルの前駆細胞動員能を比較するために実施した。両薬物を５ｍｇ／ｋｇの用量で皮下投与し、循環血液中の前駆細胞数を、注射後０．２５、０．５、１および２時間のＸ４Ｐ－００１に対して、注射後１時間の単一時点でのＡＭＤ３１００（ＡＭＤ３１００に関する動員のピーク、データは示さず）について測定した。ＣＦＵ－ＧＭ、ＢＦＵ－Ｅ、およびＣＦＵ－ＧＥＭＭにおける倍数増加と比較する表８に示すように、ＡＭＤ３１００は、それぞれ９．１１、３．１２、および４．３５の最大増加をもたらし、一方、Ｘ４Ｐ－００１でのそれぞれの動員のピークは、３．５６、２．８４および３．２１であった。

ｉｎ ｖｉｖｏ研究からの結論
ビーグル種のイヌにおける５、１５、および３５ｍｇ／ｋｇのＸ４Ｐ－００１の単回経口用量により、総循環ＷＢＣ、好中球、およびリンパ球のレベルの増加が生じた。増加は、一貫して４時間で現れ、典型的には、１２時間で、時にはそれより早くピークとなった。５ｍｇ／ｋｇにおいて、３つの細胞数の全てがベースラインの１．４７倍まで増加した。１５ｍｇ／ｋｇにおいて、好中球は１．８倍まで、リンパ球は２．９倍まで、３５ｍｇ／ｋｇにおいて、好中球は２．７倍まで、リンパ球は１．９倍まで増加した。

イヌにおける複数用量の毒性研究では、２８日後の血液学的効果は、ビーグル種のイヌにおける単回用量研究における知見と、定性的および定量的に一致した。

Ｃ３Ｈ／ＨｅＪマウスでは、Ｘ４Ｐ－００１は、５～１０ｍｇ／ｋｇの用量の皮下注射まで、循環前駆細胞数を用量依存的に増加させた。

（実施例２：臨床：処置される患者）
本発明により処置される可能性のある患者には、ＷＨＩＭＳかＭＫＸと診断されたことのある患者、およびそのＣＸＣＲ４遺伝子に特徴的変異を示す患者が含まれる。本発明から利益を得る可能性のある他の患者には、以下のスクリーニング基準を示す個体が含まれる場合がある：

好中球減少症（ＡＮＣ≦４００または≦６００／μＬ）および／またはリンパ球減少症（ＡＬＣ≦６５０または≦１０００／μＬ） － 後者は、他の慢性好中球減少症に特徴的ではない、

好中球減少症および慢性的いぼ、

骨髄穿刺液の骨髄性細胞貯留、

上記基準に合致する患者は、ＭＫＸについて遺伝的にスクリーニングされる。ＣＸＣＲ４に特徴的変異を有する患者は、本発明に従う処置から利益を得る可能性が最も高い。

したがって、Ｘ４Ｐ－００１の効果は、ＣＸＣＲ４の変異に伴う骨髄性細胞貯留を有する患者で最も高いと期待される。さらに、本発明による処置から利益を得る可能性のある患者には、以下のスクリーニング基準を示す個体が含まれる：
１．ＷＨＩＭ症候群と一致する遺伝子型が確認されるＣＸＣＲ４変異を有する、かつ
２．最大１４日の期間にわたって回収された少なくとも２つの独立した血液試料で、ＡＮＣ≦４００もしくは≦６００／μＬ、またはＡＬＣ≦６５０もしくは≦１０００／μＬ、またはその両方を有する。
３．以下の所見のうちの１つを有する：
・骨髄性細胞貯留を示す骨髄穿刺液または生検
・＜９００個／μＬの絶対好中球数および／または＜１，５００個／μＬの絶対リンパ球数を示す末梢ＷＢＣ数（急性感染の徴候または症状のない状態で得られ、かつ過去７日中にＧ－またはＧＭ－ＣＳＦを受けなかった場合、≧２つの独立した試料）。

処置なしの以前の６カ月と比較した処置ありの６カ月に基づく、候補エンドポイントの例として、以下が挙げられる：
・入院の５０％低減
・全身的抗生物質のクール（ｃｏｕｒｓｅ）を必要とする感染の５０％低減
・皮膚のいぼを含む面積の５０％低減
・循環好中球の持続した増加（例えば、評価の少なくとも８５％で、ＡＮＣ＞６００個／μＬ、ＡＮＣ＞８００個／μＬ、ＡＮＣ＞１０００個／μＬ、またはＡＮＣ＞１，２００個／μＬ）
・循環リンパ球の持続した増加（例えば、評価の少なくとも８５％で、ＡＬＣ＞１０００個／μＬ、ＡＬＣ＞１，２００個／μＬ、またはＡＬＣ＞１，５００個／μＬ）
・予め規定されたレベルを達成することなく、以前に投与した少なくとも２種の承認されたワクチンに応答して、保護抗体についてそのレベルを達成する。
・感染により欠勤または学校を欠席した日数の５０％低減
・循環好中球の持続した増加。

全てのエンドポイントが全ての患者に適用されるわけではなく、同様に、ＷＨＩＭを有する全ての患者が同一の臨床症状発現を示すわけではない。しかしながら、全ての患者は、少なくとも１つの臨床測定基準および１つの実験室測定基準を示す。

患者は、Ｘ４Ｐ－００１ ２５ｍｇを１日１回、２５ｍｇを１日２回、または５０ｍｇを１日１回用いる経口処置で開始するのが好ましい。毒性の事象において用量低減（間隔を増大することによってであってもよい；例えば、１日おきまたは１週間に２回に）、または不適切な応答の事象において用量増加（例えば、１日１回＞５０ｍｇ、またはより高い毎日の投薬量、例えば、１００ｍｇ／日もしくは１５０ｍｇ／日に）への準備がなされる。

例示的な初期投薬量は、夜半過ぎかつ用量後２時間まで続く食物も飲料（水を除く）もない絶食状態で、午前中に経口投与したＸ４Ｐ－００１ ２５ｍｇのカプセル剤による。１日２回の投薬レジメンでは、カプセル剤は、１２時間隔てて経口投与されるのが好ましい。

（実施例３：臨床処置レジメン）
ＷＨＩＭ症候群を有する患者に対する投薬レジメン
１日に２５ｍｇまたは５０ｍｇの規定用量でＸ４Ｐ－００１を経口投与する。患者は、投薬スケジュールと投薬時に近い食物または飲料に関する要件の両方について指示される。

投薬スケジュール。最初の毎日の用量は、午前中に摂取される。１日２回の投薬については、用量は、１２時間隔てて摂取されるべきである。投薬は、それぞれの日の同じ時間±２時間であるべきである。

食物に関する制限。吸収は食物に影響を受け、患者は以下のように指示される：

午前中の用量について：

・夜半過ぎから投薬時まで食物も飲料（水を除く）もなし

・投薬後２時間食物も飲料（水を除く）もなし。

Ｘ４Ｐ－００１の投薬は、適宜、医師によって調整されてもよい。Ｘ４Ｐ－００１の用量は、医師の判断により減らされてもよい。Ｘ４Ｐ－００１を受ける患者がグレード＞２の有害事象を経験する場合、Ｘ４Ｐ－００１の用量は医師の判断により減らされてもよい。患者が最初の２から４週の処置を成功裏に完了する場合、すなわち、グレード２を超えるいかなる有害事象も経験しない場合、Ｘ４Ｐ－００１の毎日の用量は、医師の判断と一致して増やされてもよい。

ＷＨＩＭ症候群を有する患者に対する代替投薬レジメン
患者の初期絶対好中球数（ＡＮＣ）（好中球減少症）（ＡＮＣ＜４００個／μＬまたは＜６００個／μＬ）および／または絶対リンパ球数（ＡＬＣ）（リンパ球減少症）（ＡＬＣ＜６５０個／μＬまたは＜１０００個／μＬ）が測定される。［注記 － 後者は、他の慢性好中球減少症に特徴的ではない］。患者が４００個／μＬ未満もしくは６００個／μＬ未満のＡＮＣを示し、および／またはＡＬＣが６５０個／μＬ未満もしくは１０００個／μＬ未満のままである場合、Ｘ４Ｐ－００１による処置が開始される。患者は、Ｘ４Ｐ－００１ ２５ｍｇを１日１回、経口で、２５ｍｇを１日２回、経口で、または５０ｍｇを１日１回、経口で用いる処置を開始する。。毒性の事象において用量低減（例えば、１日おきまたは１週間に２回に、間隔を増大することによってであってもよい）もしくは投与の停止、または不適切な応答の事象において用量増加（例えば、１日に＞５０ｍｇ、またはより高い毎日の投薬量に）への準備がなされる。

ＡＮＣおよびＡＬＣは、毎月、または好ましくは、隔週でモニタリングされる。ＡＮＣ＞４００個／μＬもしくは＞６００個／μＬ、および／またはＡＬＣ＞６５０個／μＬもしくは＞１０００個／μＬが達成される場合、患者は、元々の毎日の投薬レジメンを続けることになる。ＡＮＣが４００個／μＬ未満もしくは６００個／μＬ未満のままであり、および／またはＡＬＣが６５０個／μＬ未満もしくは１０００個／μＬ未満のままであり、患者が重度の有害作用を一切示さない場合、患者の用量は、１日に２５ｍｇまたは５０ｍｇだけ増加させることになる［または１日２回２５ｍｇだけ、経口で、１２時間隔てて］。

１日当たり５０ｍｇ／μＬの増加用量で、患者は、毎月、または好ましくは隔週でモニタリングされ続けることになる。（重度の有害作用を有さずに）ＡＮＣ≧４００個／μＬまたは≧６００個／μＬ、ＡＬＣ≧６５０個／μＬまたは≧１０００個／μＬが達成される場合、患者は、増加投薬レジメンを続けることになる。ＡＮＣが４００個／μＬ未満もしくは６００個／μＬ未満のままであり、および／またはＡＬＣが６５０個／μＬ未満もしくは１０００個／μＬ未満のままである（患者は重度の有害作用を一切示さない）場合、患者の用量は、１日にさらに２５ｍｇまたは５０ｍｇだけさらに増加させることになる。

毎日の投薬レジメンを増加させる上記手順を、患者が、（重度の有害作用を有さずに）ＡＮＣ≧４００個／μＬもしくは≧６００個／μＬ、および／またはＡＬＣ≧６５０個／μＬもしくは≧１０００個／μＬを達成するまで、あるいは患者が毎日の最大忍容用量で処置されるまで繰り返してもよい。

あるいは、ＡＮＣおよびＡＬＣを、それぞれ、４００個／μＬまたは６００個／μＬおよび６５０個／μＬまたは１０００個／μＬの予め特定された臨床的に意味のある閾値に対する曲線下面積（ＡＵＣ）として解析する。２４時間のＡＵＣを、閾値を超える面積を正、閾値未満の面積を負として、トラペゾイダル方法（ｔｒａｐｅｚｏｉｄａｌ ｍｅｔｈｏｄ）を使用して計算する。毎月または隔週の評価でＡＵＣ_ＡＮＣ＜２０００細胞・時間／μＬまたはＡＵＣ_ＡＬＣ＜５０００細胞・時間／μＬを有する患者では、１５０ｍｇ ＱＤの最大用量まで、２５ｍｇまたは５０ｍｇ増分で、Ｘ４Ｐ－００１の毎日の用量を増加させる。ＷＨＩＭ患者のＡＮＣおよびＡＬＣは、急性感染によってかなり影響を受けるため、このような患者が少なくとも２週間無熱性を維持するまで、単独でまたは抗生物質、Ｇ－ＣＳＦもしくはＩＶＩＧ処置とともに、ＡＵＣのモニタリングは、急性感染を有する患者で、遅らせるかまたは中断するべきである。

いかなる時でも、患者が有害作用を経験する場合、用量低減のための準備がなされるか（すなわち、投薬量の低下および／または薬物投与間の間隔の増大）、または投与が中止される。さらに、処置医師は、開始用量、および任意の個々の患者に対するＸ４Ｐ－００１の適切な用量に対して用量設定する（ｔｉｔｒａｔｅ）最もよい方法を決定する際の専門家としての判断および裁量を使用してもよい。

使用されてよいＸ４Ｐ－００１ ２５ｍｇのカプセル剤の例示的組成を以下の表９に示す。

（実施例４：処置効果の評価）
循環白血球
全血試料を以下について解析する：

ＷＢＣ数を含み、リンパ球、好中球、およびＣＤ３４＋細胞の絶対数を含む、標準的な実験室方法によるＣＢＣおよび絶対リンパ球の鑑別計数。ＡＮＣ＞１，５００個／μＬ、ＡＬＣ＞９００個／μＬを達成する患者の数および割合。安定した薬物投与レジメンで、投薬後の時間に観察された最大値、および用量前に観察された最大値を含む、各被験体に対する処置前ベースラインからの血中好中球数の絶対増加。これらの結果を、Ｘ４Ｐ－００１を投与した健康な成人からのデータと比較する。

フローサイトメトリーによる末梢血単球細胞（ＰＢＭＣ）亜集団を以下の表１０に示す。

免疫グロブリンおよび特異的抗体
血清試料を、総ＩｇＧ、ＩｇＧサブクラス、ＩｇＡ、およびＩｇＭ、ならびに通常のワクチン抗原に対して選択された特異的抗体のレベルについて解析する（表１１）。

以下のパラメータを調査する：
・ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＭレベルの増加

承認された微生物ワクチンに対する特異的抗体の亜保護力価（ｓｕｂ－ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｔｉｔｅｒ）を有する患者について、臨床医および患者は、ワクチン再接種を決定し、ワクチン接種後の保護力価の発生について解析することができる。

骨髄穿刺液
骨髄穿刺液を、４週の処置後および２０週の処置後に、スクリーニングで同意する患者から得る。穿刺液を盲検の血液病理学者によって調査し、細胞充実性および骨髄性細胞貯留について等級付けする。十分な材料が利用可能である場合、好中球アポトーシスとリンパ球亜集団のマーカーについて試料を解析する。

以下のパラメータを調査する：
・細胞過多の減少
・アポトーシスＷＢＣの画分の減少

臨床評価
いぼ。いぼは、病変の位置、数、およびサイズの写真および／または記録によってモニタリングする。

感染。体温を１日２回測り、熱を生じ、医師の訪問を促し、抗生物質を要求し、または入院を伴う感染の徴候または症状を調査し、処置前の年と比較する。

薬物動態評価
所望の場合、Ｘ４Ｐ－００１の血漿レベルについて、血液試料の薬物動態評価を行ってもよい。血液試料をスケジュール通り回収する。試料は、ＭＳ／ＭＳ検出を用いる逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）を使用して、Ｘ４Ｐ－００１濃度について解析する。この生物解析方法の検証範囲は、血漿中で３０から３，０００ｎｇ／ｍＬである。

薬物動態学（ＰＫ）および薬力学（ＰＤ）。Ｘ４Ｐ－００１を用いる治療の薬物動態特性、Ｘ４Ｐ－００１のレベルを評価するために、ＰＫ試料を以下のようにパートＡの全ての患者に関して得る：
・１日目：用量前、用量後３０、６０、９０分（それぞれ、±１０％）および２、３、４時間（それぞれ±１５分）
・５週目の来院：用量前、用量後３０、６０、９０分（それぞれ、±１０％）および２、３、４、８時間（それぞれ±１５分）
・９週目および１３週目の来院：用量前

来院はその日の早くに計画し、患者には、絶食し、Ｘ４Ｐ－００１の午前中の用量を摂取しないでクリニックに到着するよう指示する。

ＰＫを、ＡＵＣ、Ｃｍａｘ、およびＣｍｉｎに対する記述統計を使用して、前の週にわたる患者および投薬レジメンによって解析する。

結果が、（ａ）５週目を超えた蓄積の進行または（ｂ）特異的ＰＫパラメータのいずれかが有害作用に関連することを示唆する場合、さらにサンプリング日数を追加してもよい。

ＰＤ試料を、以下について、ＰＫ試料（上記参照）のスケジュールと同時に１日目および５週目の来院時に回収する：
・総白血球（ＷＢＣ）数
・循環ＣＤ３４＋陽性細胞数
・評価には、ＰＢＭＣの亜集団に対するフローサイトメトリーによって解析された試料が含まれうる。

試料収量が許せば、追加調査の免疫調節性サブセットを解析してもよい（表１１を参照のこと）。

もちろん、処置する医師は、専門家の判断および裁量、ならびに任意の確立した標準治療、任意の個別の患者についての処置レジメンを決定する際にどの評価パラメータ（例えば、所望レベルのＡＮＣおよびＡＬＣ）を使用するべきかを、適用してもよい。

Claims (17)

1. ＷＨＩＭ症候群の処置を必要とする患者のＷＨＩＭ症候群を処置する方法において使用するための組成物であって、Ｘ４Ｐ－００１またはその薬学的に許容される塩を含み、前記組成物は、２０ｍｇ／日から６００ｍｇ／日のＸ４Ｐ－００１またはその薬学的に許容される塩の用量で投与されるものであり、前記投与が、前記患者において少なくとも６００個／μＬまでのＡＮＣの増加をもたらすか、および／または、前記投与が、前記患者において少なくとも１０００個／μＬまでのＡＬＣの増加をもたらすことを特徴とする、組成物。
2. 前記患者がいぼを示す、請求項１に記載の組成物。
3. 前記患者から採取された細胞が、ＣＸＣＲ４の変異体形態の発現を示す、請求項１または２のいずれか一項に記載の組成物。
4. 前記患者から採取された細胞が、ＣＸＣＲ４の発現の増加を示す、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
5. 前記方法が、前記患者から生体試料を得るステップと疾患関連バイオマーカーの量を測定するステップをさらに含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。
6. 前記生体試料が血液試料である、請求項５に記載の組成物。
7. 前記疾患関連バイオマーカーが循環ＣＸＣＲ４である、請求項６に記載の組成物。
8. 前記組成物が、１日に１回経口投与されることを特徴とする、請求項１から７のいずれか一項に記載の組成物。
9. 前記組成物が、１日に２回経口投与されることを特徴とする、請求項１から７のいずれか一項に記載の組成物。
10. ＷＨＩＭ症候群の処置を必要とする患者のＷＨＩＭ症候群を処置するための組成物であって、Ｘ４Ｐ－００１またはその薬学的に許容される塩を含み、前記組成物は、絶対好中球数（ＡＮＣ）を６００個／μＬより多いかもしくはそれに等しくなるまで増加させ、かつ／または絶対リンパ球数（ＡＬＣ）を１０００個／μＬより多いかもしくはそれに等しくなるまで増加させるのに有効なＸ４Ｐ－００１またはその薬学的に許容される塩または前記組成物の量で投与されるものであることを特徴とする、組成物。
11. 前記患者が、Ｘ４Ｐ－００１による処置の前に、６００個／μＬ未満のＡＮＣおよび／または１０００個／μＬ未満のＡＬＣを示した、請求項１０に記載の組成物。
12. 前記患者が、Ｘ４Ｐ－００１による処置の前に、４００個／μＬ未満のＡＮＣおよび／または６５０個／μＬ未満のＡＬＣを示した、請求項１０に記載の組成物。
13. 前記投与が、前記患者において少なくとも６００個／μＬまでのＡＮＣの増加をもたらすことを特徴とする、請求項１から１２のいずれか一項に記載の組成物。
14. 前記投与が、前記患者において少なくとも１０００個／μＬまでのＡＬＣの増加をもたらすことを特徴とする、請求項１から１３のいずれか一項に記載の組成物。
15. 前記投与が、ワクチンに反応する前記患者において保護抗体レベルの改善をもたらすことを特徴とする、請求項１から１４のいずれか一項に記載の組成物。
16. ２００ｍｇ／日、２５０ｍｇ／日、３００ｍｇ／日、４００ｍｇ／日、４５０ｍｇ／日、５００ｍｇ／日、または６００ｍｇ／日のＸ４Ｐ－００１またはその薬学的に許容される塩の用量で投与される、請求項１から１５のいずれか一項に記載の組成物。
17. ４００ｍｇ／日のＸ４Ｐ－００１またはその薬学的に許容される塩の用量で投与されるものであることを特徴とする、請求項１から１５のいずれか一項に記載の組成物。

Images