JP7028454B2 - 標的物質検出装置及び標的物質検出方法 - Google Patents
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Description
前記FIA法は、特定の細菌やウイルスなどの標的物質に特異的に結合する抗体を用いて蛍光色素を結合させ、蛍光顕微鏡等で蛍光色素の発光を観測することで標的物質を検出・定量する手法である。
また、前記ELISA法は、検出プレート上に抗原-抗体反応を用いて前記標的物質を固定させた後、酵素標識抗体を結合させ、前記酵素により発色する基質を添加しその色の変化から標的物質を検出・定量する。
いずれの方法も確立された生体関連物質検出法として広く用いられているが、これらの方法は、多段の反応工程や繰り返しの洗浄工程を要し、測定結果を得るまでに多くの時間と手間が必要となる問題がある。また、検出感度の一層の向上が求められている。
しかしながら、こうした磁性粒子を用いた測定法では、前記結合体を磁場によって検出位置に集める濃縮効果によって、検出感度を向上させることができるものの、濃縮先の前記検出位置で浮遊する夾雑物、前記液体試料容器底面上に吸着する前記夾雑物、前記液体試料容器底面上のキズ、更には、検出に用いる検出光の光源出力の揺らぎなどを原因とするノイズ信号と、前記結合体に基づく光信号とを区別できないことから、検出の精度が低い問題がある。このような問題は、前記微小物質の検出を行う場合に、より一層顕在化する。
また、前記液体試料容器底面上に吸着する前記夾雑物に基づく前記ノイズ信号を排除するためには、検出ごとにいちいち前記夾雑物を取り除く洗浄処理が必要となり、依然として検出の効率性が低い問題がある。
<1> 標的物質及び前記標的物質と結合体を形成する磁性粒子を含む液体試料が表面上に導入されるとともに裏面側及び前記表面側のいずれかの側から照射される光の透過光を伝搬光として前記光が照射される側と反対の面側に伝搬可能とされる透光板、前記液体試料が前記表面上に導入されるとともに前記表面側から照射される光の反射光を前記伝搬光として前記表面上方に伝搬可能な反射板、並びに、前記液体試料が前記表面上に導入される導入板のいずれかで形成される液体試料導入板が配され、かつ、前記液体試料が前記液体試料導入板の前記表面上に保持可能とされる液体試料保持部と、前記液体試料導入板が前記透光板で形成されるときに前記液体試料導入板の前記裏面側から前記光を照射可能とされる裏面側光照射部、前記液体試料導入板が前記透光板及び前記反射板のいずれかで形成されるときに前記液体試料導入板の前記表面側から前記光を照射可能とされる表面側光照射部、並びに、前記液体試料導入板が前記導入板で形成されるときに前記液体試料導入板上に保持される前記液体試料に対して前記液体試料導入板の側面側から前記光を照射可能とされる側面側光照射部のいずれかで形成される光照射部と、前記液体試料導入板の前記裏面側に配されるとともに前記液体試料導入板の前記表面上に導入された前記液体試料中の前記結合体を磁場の印加により前記液体試料導入板の前記表面上に引き寄せ可能とされるとともに前記磁場を印加した状態で前記液体試料導入板の前記表面の面内方向と平行な方向のベクトル成分を持つ方向に移動可能とされる磁場印加部と、前記液体試料導入板の前記表面側、前記裏面側及び前記側面側のいずれかの側に配されるとともに前記磁場印加部の移動前後における前記伝搬光に基づく光信号の信号変化を検出可能とされ、かつ、前記液体試料導入板の前記表面上の検出領域の様子を2次元画像として取得可能とされる光信号検出部と、を有し、前記液体試料導入板の前記表面が前記結合体の吸着を抑制する吸着抑制剤で表面処理され、前記磁場印加部が前記2次元画像の結像可能範囲内に存在する前記結合体を前記磁場印加部の移動に追従させて前記結像可能範囲内及び前記結像可能範囲外のいずれかの位置に移動可能とされることを特徴とする標的物質検出装置。
<2> 第2の磁場印加部に貫通孔が形成されるとともに裏面側光照射部が前記貫通孔を通じて液体試料導入板の裏面側から光を照射可能とされる前記<1>に記載の標的物質検出装置。
<3> 液体試料保持部に外部と液体試料導入板の表面上の空間との間で送液可能な流路が形成される前記<1>から<2>のいずれかに記載の標的物質検出装置。
<4> 標的物質及び前記標的物質と結合体を形成する磁性粒子とを含む液体試料が表面上に導入されるとともに裏面側及び前記表面側のいずれかの側から照射される光の透過光を伝搬光として前記光が照射される側と反対側の面側に伝搬可能とされる透光板、前記液体試料が前記表面上に導入されるとともに前記表面側から照射される光の反射光を前記伝搬光として前記表面上方に伝搬可能な反射板、並びに、前記液体試料が前記表面上に導入される導入板のいずれかで形成される液体試料導入板が配され、かつ、前記液体試料が前記液体試料導入板の前記表面上に保持可能とされる液体試料保持部に対し、前記液体試料導入板の表面上に前記液体試料を導入し保持する液体試料導入保持工程と、前記液体試料導入板が前記透光板で形成されるときに前記液体試料導入板の前記裏面側から前記光を照射する裏面側光照射工程、前記液体試料導入板が前記透光板及び前記反射板のいずれかで形成されるときに前記液体試料導入板の前記表面側から前記光を照射する表面側光照射工程、並びに、前記液体試料導入板が前記導入板で形成されるときに前記液体試料導入板上に保持される前記液体試料に対して前記液体試料導入板の側面側から前記光を照射する側面側光照射工程のいずれかの工程である光照射工程と、前記液体試料導入板の前記裏面側に配される磁場印加部からの磁場の印加により前記液体試料導入板の前記表面上に導入された前記液体試料中の前記結合体を前記液体試料導入板の前記表面上に引き寄せるとともに前記磁場を印加した状態で前記磁場印加部を前記液体試料導入板の前記表面の面内方向と平行な方向のベクトル成分を持つ方向に移動させる結合体移動工程と、前記液体試料導入板の前記表面上の検出領域の様子を2次元画像として取得可能とされる光信号検出部により、前記結合体移動工程による前記磁場印加部の移動前後における前記伝搬光に基づく光信号の信号変化を前記2次元画像に基づき検出する光信号検出工程と、を含み、前記液体試料導入板の前記表面が前記結合体の吸着を抑制する吸着抑制剤で表面処理され、前記結合体移動工程が前記2次元画像の結像可能範囲内に存在する前記結合体を前記磁場印加部の移動に追従させて前記結像可能範囲内及び前記結像可能範囲外のいずれかの位置に移動させる工程であることを特徴とする標的物質検出方法。
<5> 結合体が1つの標的物質に対して2つ以上の磁性粒子を結合させたものである前記<4>に記載の標的物質検出方法。
<6> 結合体が伝搬光の照射を受けて前記伝搬光の液体試料に対する透過光の光信号と識別可能な光信号を発生させる標識物質を含む前記<4>から<5>のいずれかに記載の標的物質検出方法。
本発明の標的物質検出装置は、液体試料保持部と、光照射部と、磁場印加部と、光信号検出部とを有し、必要に応じて、その他の部を有する。
前記液体試料保持部は、液体試料導入板が配され、かつ、液体試料が前記液体試料導入板の表面上に保持される部である。
前記液体試料は、少なくとも標的物質と磁性粒子とを含み、必要に応じて、標識物質、重り物質を含む。
具体的な前記液体試料としては、例えば、血液、唾液、尿、液体薬品、環境水、上下水、飲料、食品のホモジナイズ溶液、ぬぐい液、粉末等の固体試料を水等の溶媒に溶解させた溶液、気相中のガスや微粒子などを捕集した気相濃縮液などが挙げられる。また、具体的な前記標的物質としては、例えば、DNA、RNA、タンパク質、ウイルス、菌、汚染物質などが挙げられる。
前記標的物質と前記磁性粒子とを結合させる方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、物理吸着、抗原-抗体反応、DNAハイブリダイゼーション、ビオチン-アビジン結合、キレート結合、アミノ結合などの公知の結合方法を用いることができる。なお、前記物理吸着による結合方法としては、例えば、水素結合等の静電的な結合力を利用して、前記標的物質と前記磁性粒子とを結合させる方法が挙げられる。
前記標識物質としては、このような性質を有する物質であれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、蛍光色素、量子ドット等の公知の蛍光物質、ポリスチレンビーズ、シリカビーズといったナノ粒子等の光散乱物質、金ナノ粒子等の光吸収物質などを挙げることができる。
これらの結合方法の中でも、前記標識物質が前記夾雑物と結合することを避けるため、前記抗原-抗体反応、前記DNAハイブリダイゼーション、前記ビオチン-アビジン結合、前記キレート結合、前記アミノ結合などの結合方法により、前記標的物質と前記標識物質とを特異的に結合させることが好ましい。
このようなタイプの磁性粒子としては、例えば、有機系ポリマーを表面修飾した直径100nm以上のフェライト系粒子などを挙げることができる。また、このようなタイプの磁性粒子を用いる場合、前記液体試料に導入する前記磁性粒子の数を調整して、前記結合体が1つの前記標的物質に対して2つ以上の前記磁性粒子を結合させたものとなるようにすることが好ましい。1つの前記標的物質に対して2つ以上の前記磁性粒子を結合させると、1つの前記標的物質に対して1つの前記磁性粒子を結合させた場合よりも前記バックグラウンド信号との識別性の高い強い光信号が得られる。
なお、前記液体試料中に存在する前記標的物質の数は、検出前の段階で未知であるが、経験則から想定される前記標的物質の数からみて、前記磁性粒子を過剰量導入することで、1つの前記標的物質に対して2つ以上の前記磁性粒子を結合させることができる。また、前記液体試料に対して複数回に分けて前記磁性粒子を導入するとともに、その導入ごとに検出を行い、前記強い光信号の発生数が飽和した段階で前記磁性粒子の導入を中止することで、無駄なく、1つの前記標的物質に対して2つ以上の前記磁性粒子を結合させることができる。
前記重り物質としては、このような性質を有する物質であれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、公知の金ナノ粒子などを挙げることができる。
これらの結合方法の中でも、前記重り物質が前記夾雑物と結合することを避けるため、前記抗原-抗体反応、前記DNAハイブリダイゼーション、前記ビオチン-アビジン結合、前記キレート結合、前記アミノ結合などの結合方法により、前記標的物質と前記重り物質とを特異的に結合させることが好ましい。
前記液体試料導入板は、前記液体試料が表面上に導入されるとともに裏面側又は前記表面側から照射される光の透過光を前記伝搬光として前記光が照射される側と反対の面側に伝搬可能とされる透光板、前記液体試料が前記表面上に導入されるとともに前記表面側から照射される光の反射光を前記伝搬光として前記表面上方に伝搬可能な反射板、及び、前記液体試料が前記表面上に導入される導入板のいずれかで形成される。
また、前記反射板としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、公知の落射型顕微鏡の観察用ステージに用いられるガラス板、プラスチック板、金属板などの公知の反射板を用いることができる。
また、前記導入板としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記透光板、前記反射板を含み、この他の液体試料を導入するための公知の板状部材を用いることができる。
なお、前記伝搬光とは、一般に発生源から数百nm~数μm以内の距離だけ離れた位置で急激な減衰を示す近接場光を含まない光とされるが、本明細書においても、前記近接場光を含まないことを意味し、前記液体試料導入板の前記表面から数百nm~数μm以内の距離だけ離れた位置で急激な減衰を示すことのない光を意味する。
前記吸着抑制剤としては、特に制限はなく、前記結合体を構成する物質の種類に応じて、公知の吸着抑制剤から適宜選択することができる。
例えば、前記表面処理の手法として、前記標的物質が前記タンパク質である場合には、前記タンパク質の吸着を抑制する公知のブロッキング法を選択することができる。前記ブロッキング法としては、特に制限はなく、例えば、ポリエチレングリコールを用いる方法、エタノールアミンを用いる方法、スキムミルクを用いる方法などが挙げられる。
また、前記液体試料保持部の構成としては、底面が前記液体試料導入板で構成される枡状の液体セルで構成することもできる。
なお、前記液体試料保持部としては、1つの前記液体試料導入板の前記表面上の領域を複数に分画してマルチチャンネル化させてもよい。
即ち、前記標的物質検出装置によれば、前記液体試料導入板に吸着した前記夾雑物の存在を無視した前記標的物質の検出を行うことができることから、前記液体試料導入板の洗浄処理を逐次行うことなく次の検出を行うことができるため、前記液体試料保持部に前記流路が形成される場合、前記流路を介した前記液体試料の導入と排出とを通じて前記液体試料を交換するだけで次の検出を進めることができ、より一層、検出操作を効率化させることができる。
なお、本明細書において「洗浄処理」とは、前記液体試料導入板の前記表面に吸着した前記夾雑物を物理的な磨き処理や化学薬品を用いた剥離処理、溶解処理によって取り除く処理を意味し、前記液体試料の交換時に水で濯ぐ処理を含まない。
前記光照射部は、裏面側光照射部、表面側光照射部及び側面側光照射部のいずれかで形成される。
前記裏面側光照射部の構成としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、公知の透過型顕微鏡に用いられる公知の光照射部と同様に構成することができる。
前記表面側光照射部の構成としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記反射板で形成される場合、公知の落射型顕微鏡に用いられる公知の光照射部と同様に構成することができ、また、前記透光板で形成される場合、公知の透過型顕微鏡に用いられる公知の光照射部と同様に構成することができる。
前記側面側光照射部の構成としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、公知の光照射部と同様に構成することができる。
また、前記裏面側光照射部、前記表面側光照射部及び前記側面側光照射部としては、前記光源以外の光学要素についても特に制限はなく、公知の光学要素を目的に応じて適宜採用して構成することができる。
前記磁場印加部は、第1の磁場印加部及び第2の磁場印加部のいずれかで形成される。前記第1の磁場印加部及び前記第2の磁場印加部のいずれの磁場印加部も、前記液体試料導入部の前記表面上に導入された前記結合体を移動させる役割や前記結合体の姿勢を変化させる役割を有し、前記標的物質検出装置では、前記結合体の変動を前記標的物質の検出に利用する。
なお、「変動」とは、前記結合体の移動及び前記結合体の姿勢変化を意味する。
前記第1の磁場印加部は、前記液体試料導入板の前記表面側又は前記側面側に配されるとともに前記液体試料導入板の前記表面上に導入された前記液体試料中の前記結合体を磁場の印加により前記液体試料導入板の前記表面の面内方向と平行な方向のベクトル成分を持つ方向及び前記液体試料導入板から遠ざかる方向のいずれかの方向に移動させるか又は前記結合体の姿勢を変化させる部材である。
前記第1の磁場印加部としては、このような部材であれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、公知の電磁石及び永久磁石を用いて構成することができる。なお、前記永久磁石を用いる場合、例えば、移動部材に前記永久磁石を保持し、前記永久磁石による前記磁場が前記液体試料導入板の前記表面上に及ぶ近接状態と前記永久磁石による前記磁場が前記液体試料導入板の前記表面上に及ばない離間状態との間で移動制御し、前記液体試料導入板の前記表面上に対する前記磁場の印加状態をオン-オフさせる構成とすることができる。また、例えば、公知の磁気シールド部材を、前記液体試料導入板の前記表面上に前記磁場を印加させる開放状態と前記液体試料導入板の前記表面上に前記磁場を印加させない遮蔽状態とで開閉制御し、前記液体試料導入板の前記表面上に対する前記磁場の印加状態をオン-オフさせる構成とすることができる。また、前記電磁石を用いる場合には、前記電磁石の励磁と消磁とを通じて前記液体試料導入板の前記表面上に対する前記磁場の印加状態のオン-オフ制御を行うことができる。
また、前記第1の磁場印加部としては、特に制限はないが、貫通孔が形成されていることが好ましい。このように前記第1の磁場印加部を形成すると、前記表面側光照射部を用いた場合に前記貫通孔を通じた前記液体試料導入板の前記表面側からの光照射が可能となるとともに、前記表面側光照射部及び前記裏面側光照射部のいずれの場合も前記液体試料導入板の前記表面上方に伝搬される前記伝搬光に基づく光信号を前記貫通孔を通じて前記光信号検出部で検出することが可能となる。前記貫通孔が形成された前記第1の磁場印加部としては、例えば、芯を有しないコイルで形成された電磁石、貫通孔が形成された永久磁石、U字磁石、複数個の永久磁石を円弧上に並べたものなどが挙げられる。
前記第2の磁場印加部は、前記液体試料導入板の前記裏面側に配されるとともに前記液体試料導入板の前記表面上に導入された前記液体試料中の前記結合体を磁場の印加により前記液体試料導入板の前記表面側に引き寄せ可能とされるとともに前記磁場を印加した状態で前記液体試料導入板の前記表面の面内方向と平行な方向のベクトル成分を持つ方向に移動可能とされる部材である。
前記第2の磁場印加部としては、このような部材であれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、公知の電磁石及び永久磁石を用いて構成することができる。例えば、スライド部材上に前記電磁石又は前記永久磁石を保持し、前記液体試料導入板の前記表面側又は前記裏面側における前記光照射部から前記光を照射する領域(検出領域)の近傍に前記電磁石又は前記永久磁石を位置させる初期状態と、前記液体試料導入板の前記表面の面内方向と平行な方向のベクトル成分を持つ方向に向けて前記電磁石又は前記永久磁石を移動させた状態との間で移動制御させることで構成することができる。なお、前記電磁石を用いる場合、連続的或いは断続的に前記移動制御中、励磁させた状態とする。また、前記移動制御中に励磁の強度を変化させてもよい。
また、複数の前記電磁石又は永久磁石を配置し、各部材における前記磁場の印可状態を制御することによっても、前記スライド部材上に前記電磁石又は前記永久磁石を保持して前記移動制御を行う構成と同等の効果を得ることができる。
また、前記第2の磁場印加部としては、特に制限はないが、貫通孔が形成されていることが好ましい。このように前記第2の磁場印加部を形成すると、前記裏面側光照射部において前記貫通孔を通じた前記液体試料導入板の裏面側からの光照射が可能となる。前記貫通孔が形成された前記第2の磁場印加部としては、例えば、芯を有しないコイルで形成された電磁石、貫通孔が形成された永久磁石、U字磁石、複数個の永久磁石を円弧上に並べたものなどが挙げられる。
前記光信号検出部は、前記液体試料導入板の前記表面側、前記裏面側又は前記側面側に配されるとともに前記第1の磁場印加部による前記磁場の印加前後及び前記第2の磁場印加部の移動前後のいずれかの前後関係における前記伝搬光に基づく光信号の信号変化を検出可能とされる。
バックグラウンド信号として処理される光信号1を除き、光信号2~4や前記ノイズ信号を区別することができない場合、検出精度の低下を招くこととなる。
しかしながら、前記標的物質検出装置では、前記結合体の前記第1の磁場印加部及び前記第2の磁場印加部で形成される前記磁場印加部に基づいて前記結合体を変動させ、その変動を前記伝搬光に基づく前記光信号の信号変化として検出するため、光信号2と光信号3,4及び前記ノイズ信号とを明確に区別することができる。
即ち、光信号3,4や前記ノイズ信号は、前記第1の磁場印加部による磁場の印加前後及び前記第2の磁場印加部の移動前後において磁場印加に起因した変化を生じない光信号であるのに対し、光信号2は、前記磁性粒子を含む前記結合体に起因するため、前記第1の磁場印加部による磁場の印加前後及び前記第2の磁場印加部の移動前後において変化する光信号であることから、前記伝搬光に基づく前記光信号の信号変化を検出することで、前記結合体、延いては前記結合体を構成する前記標的物質の検出を高精度に行うことができる。
また、前記光信号検出部としては、特に制限はないが、前記液体試料導入板の前記表面上の検出領域の様子を2次元画像として取得可能とされることが好ましい。前記2次元画像を取得できると、光点や暗点として現れる前記2次元画像中の前記光信号の位置情報やサイズ情報を容易に取得することができ、前記結合体の移動前後の前記2次元画像同士を比較して、前記光信号が前記結合体に関与する情報であるのか、或いは、前記液体試料導入板の前記表面上のキズ、前記夾雑物、光源出力の揺らぎ等の前記結合体に関与しない情報であるのかを明確に区別することが可能となる。このような2次元画像の取得を可能とするには、前記光信号検出部として撮像デバイスを選択すればよい。
前記撮像デバイスとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、CCDイメージセンサ、CMOSイメージセンサなどの公知のイメージセンサを用いることができる。
なお、前記光信号検出部により前記光信号を検出する方法としては、前記光信号検出部の結像可能範囲外に存在する前記結合体の検出漏れを防ぐため、一旦、前記液体試料導入板の前記表面上ないし前記表面近傍に前記結合体を配した後、前記液体試料導入板の前記表面を前記光信号検出部の結像可能範囲内に入れて実施する方法が好ましい。ここで、「結像可能範囲」とは、焦点深度及びその近傍における光信号を取得可能な範囲を指す。
また、前記標的物質を検出することとしては、前記標的物質の有無の検出、前記標的物質の存在量の検出(定量測定)、前記標的物質の存在状況のリアルタイム観察等が挙げられる。
前記その他の部としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、第3の磁場印加部、公知の透過型顕微鏡及び落射型顕微鏡等に用いられる任意の部が挙げられる。
前記第3の磁場印加部は、前記磁場印加部が前記第1の磁場印加部で形成されるときに、更に、前記液体試料導入板の前記裏面側に配されるとともに前記液体試料導入板に導入された前記液体試料中の前記結合体を磁場の印加により前記液体試料導入板の前記表面上に引き寄せ可能とされる部である。
しかしながら、前記磁場印加部が前記第1の磁場印加部で形成される場合、前記光信号検出部による前記光信号の検出を前記液体試料導入板の前記表面ないしその近傍に焦点を当てて行う際、必ずしも前記結合体が前記液体試料導入板の前記表面上に引き寄せられた状態ではなく、例えば、前記液体試料を前記液体試料導入板に導入させた直後においては、前記結合体が前記液体試料の液層中に浮遊した状態とされる。浮遊状態の前記結合体が前記光信号検出部で前記光信号を検出可能な結像可能範囲外に存在すると、前記結合体が検出されないこととなる。
したがって、前記光信号検出部による前記光信号の検出を前記液体試料導入板の前記表面ないしその近傍に焦点を当てて行う際、前記液体試料を前記液体試料導入板に導入させた後、前記結合体が前記液体試料導入板の前記表面上に重力沈降することを待つ必要があり、検出の準備に時間を要することとなる。特に、前記結合体の比重が小さい場合、より長い時間を要することとなる。
そこで、前記第3の磁場印加部による前記磁場の印加により、前記液体試料の液層中に浮遊する前記結合体を前記液体試料導入板の前記表面側に引き寄せることで、検出の準備時間を短縮化させ、より効率的な検出を行うことができる。
なお、前記第3の磁場印加部は、前記結合体を前記液体試料導入板の前記表面側に引き寄せた後、前記第1の磁場印加部による前記結合体の移動を妨げないよう、前記結合体を引き寄せる前記磁場の印加状態を停止するオン-オフ制御が求められる。この点、前記永久磁石を用いる場合、例えば、前記永久磁石を保持した移動部材を、前記永久磁石による前記磁場が前記液体試料の液層中に及ぶ近接状態と前記永久磁石による前記磁場が前記液体試料導入板の前記液体試料の液層中に及ばない離間状態との間で移動制御し、前記磁場の印加状態をオン-オフさせる構成とすることができる。また、例えば、公知の磁気シールド部材を、前記結合体に対して前記表面上に引き寄せる前記磁場を印加させた開放状態と前記結合体に対して前記表面上に引き寄せる前記磁場を印加させない遮蔽状態とで開閉制御し、前記磁場の印加状態をオン-オフさせる構成とすることができる。また、前記電磁石を用いる場合には、前記電磁石の励磁と消磁とを通じて前記磁場の印加状態のオン-オフ制御を行うことができる。
また、前記第3の磁場印加部としては、特に制限はないが、貫通孔が形成されていることが好ましい。このように前記第3の磁場印加部を形成すると、前記裏面側光照射部において前記貫通孔を通じた前記液体試料導入板の前記裏面側からの光照射が可能となる。前記貫通孔が形成された前記第3の磁場印加部としては、例えば、芯を有しないコイルで形成された電磁石、貫通孔が形成された永久磁石、U字磁石、複数個の永久磁石を円弧上に並べたものなどが挙げられる。
また、前記第3の磁場印加部を有すると、前記液体試料導入板の前記表面上の検出領域(前記光照射部による光の照射を受け、前記表面上方に前記伝搬光を生じさせる領域)に前記結合体を寄せ集めて濃縮することができ、より高精度に前記標的物質の検出を行うことができる。
本発明の標的物質検出方法は、液体試料導入保持工程と、光照射工程と、結合体変動工程と、光信号検出工程とを含み、必要に応じて、その他の工程を含む。
液体試料導入保持工程は、標的物質及び前記標的物質と結合体を形成する磁性粒子とを含む液体試料が表面上に導入されるとともに裏面側又は前記表面側から照射される光の透過光を伝搬光として前記光が照射される側と反対の面側に伝搬可能とされる透光板、前記液体試料が前記表面上に導入されるとともに前記表面側から照射される光の反射光を前記伝搬光として前記表面上方に伝搬可能な反射板及び前記液体試料が前記表面上に導入される導入板のいずれかで形成される液体試料導入板が配され、かつ、前記液体試料が前記液体試料導入板の前記表面上に保持可能とされる液体試料保持部に対し、前記液体試料導入板の表面上に前記液体試料を導入し保持する工程である。
なお、前記液体試料としては、前記標的物質検出装置について説明した前記液体試料を用いることができる。
また、前記液体試料導入板としては、前記標的物質検出装置について説明した前記液体試料導入板を用いることができる。
前記液体試料の混合方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、(1)前記磁性粒子、前記標識物質及び前記重り物質が未添加の状態の前記液体試料を前記液体試料保持部に保持させた後に、前記磁性粒子、前記標識物質及び前記重り物質を前記液体試料に添加して混合する方法、(2)前記磁性粒子、前記標識物質及び前記重り物質を前記液体試料保持部に保持させた後に、前記磁性粒子、前記標識物質及び前記重り物質が未添加の状態の前記液体試料を前記液体試料保持部に導入して混合する方法、(3)前記液体試料保持部に対する導入前に、前記磁性粒子、前記標識物質及び前記重り物質が未添加の状態の前記液体試料に前記磁性粒子、前記標識物質及び前記重り物質を前記液体試料に添加して混合する方法(事前混合法)などの方法を挙げることができる。
中でも、前記(3)の事前混合法によれば、混合容器内の前記磁性粒子及び前記磁性粒子を含む前記結合体を前記混合容器越しに磁石で集め、これらが前記磁石により流れ落ちないようにしつつ、混合液の一部を分離することで、前記液体試料保持部に導入される前記液体試料に対して夾雑物等の混入を抑制することができるとともに、前記液体試料保持部に導入される前記液体試料において、前記結合体の濃縮を行うことができる。その結果、前記(1)、(2)の方法を適用する場合よりも、より高精度な検出を実施することができる。
なお、本工程においては、乾燥などにより固体状とされた前記標的物質を、前記磁性粒子、前記標識物質及び前記重り物質が分散された溶液と混合することで、前記液体試料を調製してもよい。
前記光照射工程は、前記液体試料導入板が前記透光板で形成されるときに前記液体試料導入板の前記裏面側から前記光を照射する裏面側光照射工程、前記液体試料導入板が前記透光板及び前記反射板のいずれかで形成されるときに前記液体試料導入板の前記表面側から前記光を照射する表面側光照射工程、並びに、前記液体試料導入板が前記導入板で形成されるときに前記液体試料導入板上に保持される前記液体試料に対して前記液体試料導入板の側面側から前記光を照射する側面側光照射工程のいずれかの工程である。
なお、前記裏面側光照射工程としては、前記標的物質検出装置において説明した前記裏面側光照射部により実施することができる。
また、前記表面側光照射工程としては、前記標的物質検出装置において説明した前記表面側光照射部により実施することができる。
また、前記側面側光照射工程としては、前記標的物質検出装置において説明した前記側面側光照射部により実施することができる。
前記結合体変動工程は、前記液体試料導入板の前記表面上に導入された前記液体試料中の前記結合体を磁場の印加により前記液体試料導入板の前記表面の面内方向と平行な方向のベクトル成分を持つ方向及び前記液体試料導入板から遠ざかる方向のいずれかの方向に移動させるか又は前記結合体の姿勢を変化させる第1の結合体変動工程並びに前記液体試料導入板の前記裏面側に配される磁場印加部からの磁場の印加により前記液体試料導入板の前記表面上に導入された前記液体試料中の前記結合体を前記液体試料導入板の前記表面上に引き寄せるとともに前記磁場を印加した状態で前記磁場印加部を前記液体試料導入板の前記表面の面内方向と平行な方向のベクトル成分を持つ方向に移動させ、前記磁場印加部の移動に追従させて前記結合体を移動させる又は前記結合体の姿勢を変化させる第2の結合体変動工程のいずれかの工程である。
なお、前記第1の結合体変動工程としては、前記標的物質検出装置において説明した前記第1の磁場印加部により実施することができる。
また、前記第2の結合体変動工程としては、前記標的物質検出装置において説明した前記第2の磁場印加部により実施することができる。
また、前記第1の結合体変動工程及び前記第2の結合体変動工程としては、それぞれ前記光信号検出工程を挟みながら繰り返し行うことで、検出精度を高めることができる。このとき、前記第1の磁場印可部と前記第2の磁場印可部双方を有する前記標的物質検出装置においては、前記第1の結合体変動工程と前記第2の結合体変動工程を織り交ぜて実施することができる。
また、前記結合体変動工程において、磁場印加時に前記液体試料導入板を前記液体試料導入板の前記表面の面内方向と平行な方向のベクトル成分を持つ方向に動かすことによって、同様の効果を得てもよい。
前記光信号検出工程は、前記第1の結合体変動工程による前記磁場の印加前後及び前記第2の結合体変動工程による前記磁場印加部の移動前後のいずれかの前後関係における前記伝搬光に基づく光信号の信号変化を検出する工程である。
なお、前記光信号検出工程としては、前記標的物質検出装置において説明した前記光信号検出部により実施することができる。
前記その他の工程としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、結合体引き寄せ工程を挙げることができる。
前記結合体引き寄せ工程は、前記結合体変動工程が前記第1の結合体変動工程であるときに、更に、前記液体試料導入保持工程後、前記結合体変動工程前に、引き寄せ磁場の印加により前記液体試料中の前記結合体の全部又は一部を一旦前記液体試料導入板の前記表面上に引き寄せる工程である。
したがって、前記光信号検出工程による前記光信号の検出を前記液体試料導入板の前記表面ないしその近傍に焦点を当てて行う際、前記液体試料を前記液体試料導入板に導入させた後、前記結合体が前記液体試料導入板の前記表面上に重力沈降することを待つ必要があり、検出の準備に時間を要することとなる。特に、前記結合体の比重が小さい場合、より長い時間を要することとなる。
そのため、前記結合体変動工程が前記第1の結合体変動工程あるときに、更に、前記結合体引き寄せ工程を実施して、検出の準備時間を短縮化させ、より効率的な検出を行うことが好ましい。
なお、前記結合体引き寄せ工程としては、前記標的物質検出装置において説明した前記第3の磁場印加部により実施することができる。
また、前記結合体引き寄せ工程によらずに前記結合体が前記液体試料導入板の前記表面上に重力沈降する時間を短縮化する方法として、前記結合体に前記重り物質を含ませることも有効である。
前記交互磁場印加によって、同一の前記結合体に起因する前記光信号が繰返し検出されることとなるため、検出の精度を向上させることができる。更には、前記交互磁場印加を周期的に実施し、同一の前記結合体に起因する前記光信号の周波数に対して公知のロックイン増幅器を適用することによって、この光信号を増幅することも可能であり、検出の感度を向上させることができる。
先ず、本発明の第1の実施形態に係る標的物質検出装置を図1を参照しつつ説明する。なお、図1は、第1の実施形態に係る標的物質検出装置の説明図である。
図1に示すように標的物質検出装置1は、公知の透過型顕微鏡に準じて構成され、液体試料導入板2と、光照射部3と、第1の磁場印加部4と、撮像デバイス5a及び対物レンズ5bで構成される光信号検出部5とで構成される。なお、撮像デバイス5aは、例えば、公知のCCDイメージセンサ等で構成され、2次元画像の取得が可能とされる。
光照射部3は、液体試料導入板2の前記裏面側から光Lを照射可能とされる裏面側光照射部として構成される。
また、第1の磁場印加部4は、液体試料導入板2の前記表面側に配されるとともに液体試料導入板2の前記表面上に導入された前記液体試料中の前記結合体を磁場の印加により液体試料導入板2から遠ざかる方向に移動させるように構成される。ここで、第1の磁場印加部4は、中央に貫通孔が形成された環状の電磁石で形成され、光照射部3から照射される光Lの透過光TLに基づく光信号が前記貫通孔を通じて光信号検出部5で検出可能とされる。
光信号検出部5は、液体試料導入板2の前記表面側に配されるとともに第1の磁場印加部4による前記磁場の印加前後における前記伝搬光に基づく光信号の信号変化を検出可能とされる。
なお、液体試料導入板2、光照射部3及び光信号検出部5(撮像デバイス5a、対物レンズ5b)は、公知の透過型顕微鏡にしたがって構成することができる。
次に、前記液体試料の液層中を浮遊する前記結合体が液体試料導入板2の前記表面上に重力沈降した後、液体試料導入板2の裏面側から光Lを照射し(光照射工程)、対物レンズ5bを調整して前記表面ないしその近傍を結像可能範囲内に入れ、撮像デバイス5aで前記表面上の光信号を取得する(光信号検出工程)。
図2に示すように、観察視野内の液体試料導入板2の前記表面上には、例えば、液体試料導入板2の前記表面上方に伝搬される前記伝搬光の前記液体試料に対する透過光の光信号(バックグラウンド信号)とのコントラスト差により前記バックグラウンド信号と識別可能な4つの光信号a~dが観察される。図2では、光信号a,dが光点として観察されることを示しており、光信号b,cが暗点として観察されることを示している。
図3に示すように、物質a’及び物質b’は、液体試料導入板2の前記表面上に重力沈降された状態とされる。
次に、結像可能範囲及び観察視野を維持したまま前記結合体を液体試料導入板2から遠ざかる方向に移動させた後の液体試料導入板2の前記表面上の光信号を撮像デバイス5aで取得する(光信号検出工程)。
前記第1の結合体変動工程前の様子を示す図2と、前記第1の結合体変動工程後の様子を示す図4との比較を通じて理解されるように、光信号a,bは、前記第1の結合体変動工程前後で光信号が変化し、光信号c,dは、前記第1の結合体変動工程前後で光信号が変化しない。
このことから、光信号a,bを発生させる物質a’,b’は、第1の磁場印加部4に引き寄せられる前記磁性粒子を含む前記結合体であり、前記標的物質を含むものであることが分かる。
これに対し、前記第1の結合体変動工程前後で変化が確認されない、光信号c,dは、液体試料導入板2の前記表面上のキズ、前記表面に吸着ないし前記表面上に存在する夾雑物、光源出力の揺らぎなどのノイズ信号であることが分かる。
図5に示すように、物質a’及び物質b’は、第1の磁場印加部4での前記磁場の印加により、液体試料導入板2から遠ざかる方向に移動された状態とされる。
これに対し、光信号bは、前記第1の結合体変動工程後、消失することが確認される(図4参照)。これは、物質b’が光信号検出部5の結像可能範囲外に移動したためである(図5参照)。
これに対し、光信号bは、暗点として確認される(図2,4参照)。これは、物質b’が前記伝搬光の照射を受けたときに前記光吸収又は前記光反射等により伝搬光よりも光強度が弱い透過光等を生じたためである。
図6に示すように、第1の変形例に係る標的物質検出装置1Aでは、第1の実施形態に係る標的物質検出装置1に対し、更に、第3の磁場印加部6を配して構成される。なお、この他は、第1の実施形態に係る標的物質検出装置1と同様であるため、説明を省略する。
したがって、標的物質検出装置1Aによれば、標的物質検出装置1が有する利点に加えて、検出に要する時間を短時間化させ、より効率的な前記標的物質の検出を行うことができる。
図7に示すように、第2の変形例に係る標的物質検出装置1Bでは、第1の実施形態に係る標的物質検出装置1における第1の磁場印加部4に代えて、第1の磁場印加部7を配して構成される。なお、この他は、第1の実施形態に係る標的物質検出装置1と同様であるため、説明を省略する。
したがって、標的物質検出装置1Bによれば、標的物質検出装置1と同様に、光信号a,bを発生させる物質a’,b’が前記標的物質を含み、光信号c,dが液体試料導入板2の前記表面上のキズ、前記表面に吸着ないし前記表面上に存在する夾雑物、光源出力の揺らぎなどのノイズ信号であると判断することができる。
図9に示すように、物質a’及び物質b’は、第1の磁場印加部7による斜め上方からの引き寄せ磁場により、それぞれ、液体試料導入板2の前記表面の面内方向と平行な方向のベクトル成分x1,x2と、液体試料導入板2から遠ざかる方向のベクトル成分y1,y2とを持つ方向に移動する。
したがって、標的物質検出装置1Bでは、物質a’及び物質b’を液体試料導入板2から遠ざかる方向にのみ移動させる標的物質検出装置1と、前記第1の結合体変動工程後の様子が相違する。
即ち、図4及び図8を比較しつつ、光信号a,bに基づく前記標的物質の検出を試みた場合について検討すると、光信号bについては、両図とも光信号の消失する結果であり変わりがないが、光信号aについては、図4で示すケースでサイズ変化に基づく前記標的物質の検出のみとなり、移動に基づく前記標的物質の検出が行えないのに対し、図8で示すケースでサイズ変化に基づく前記標的物質の検出に加え、移動に基づく前記標的物質の検出を行うことができる点で、図8で示すケースの方が前記標的物質の検出を行い易い。
したがって、標的物質検出装置1Bでは、より一層、高精度に前記標的物質の検出を行うことができる。
次に、本発明の第2の実施形態に係る標的物質検出装置を図10を参照しつつ説明する。なお、図10は、第2の実施形態に係る標的物質検出装置の説明図である。
図10に示すように、第2の実施形態に係る標的物質検出装置10は、公知の透過型顕微鏡に準じて構成され、液体試料導入板12と、光照射部13と、第2の磁場印加部18と、撮像デバイス15a及び対物レンズ15bで構成される光信号検出部15とで構成される。
液体試料導入板12、光照射部13及び光信号検出部15は、第1の実施形態に係る標的物質検出装置1における液体試料導入板2、光照射部3及び光信号検出部5と同様に構成することができ、第2の実施形態に係る標的物質検出装置10は、第1の磁場印加部4に代えて第2の磁場印加部18を配する点で第1の実施形態に係る標的物質検出装置1と相違する。以下、相違点について説明する。
前記結合体の移動は、第2の磁場印加部18を磁場印加部として、第2の磁場印加部18からの前記磁場の印加により液体試料導入板12の前記表面上に導入された前記液体試料中の前記結合体を液体試料導入板12の前記表面上に引き寄せるとともに前記磁場を印加した状態で第2の磁場印加部18を液体試料導入板12の前記表面の面内方向と平行な方向のベクトル成分を持つ方向に移動させ、第2の磁場印加部18の移動に追従させて前記結合体を移動させることにより行う(第2の結合体変動工程)。
この第2の磁場印加部18を用いる場合、前記第2の結合体変動工程において、前記磁場の印加により前記液体試料中の前記結合体の全部又は一部を液体試料導入板12の表面上に引き寄せるため、前記液体試料導入保持工程後、前記液体試料の液層中を浮遊する前記結合体が液体試料導入板12の前記表面上に重力沈降することを待つ必要がない。
前掲図2と、前記第2の結合体変動工程後の様子を示す図11との比較、或いは、図12と図13との比較を通じて理解されるように、光信号a,bは、前記第2の結合体変動工程前後で光信号が変化し、光信号c,dは、前記第2の結合体変動工程前後で光信号が変化しない。
したがって、標的物質検出装置10によれば、光信号a,bを発生させる物質a’,b’が前記標的物質を含み、光信号c,dが液体試料導入板12の前記表面上のキズ、前記表面に吸着ないし前記表面上に存在する夾雑物、光源出力の揺らぎなどのノイズ信号であると判断することができる。
図14、図15に示すように、物質a’及び物質b’は、第2の磁場印加部18からの前記磁場の印加により液体試料導入板12の前記表面上に引き寄せられた後、第2の磁場印加部18の液体試料導入板12の前記表面の面内方向と平行な方向のベクトル成分を持つ方向への移動(図10中の方向X1又はX2)に基づき、第2の磁場印加部18の移動に追従して液体試料導入板12の前記表面の面内方向と平行な方向に移動するか、或いは回転する。
なお、図11,14では、物質a’及び物質b’が観察視野内で移動する例を示しているが、第2の磁場印加部18を液体試料導入板12の前記表面の面内方向と平行な方向のベクトル成分を持つ方向で、かつ、矩形状の観察視野を律するいずれかの一辺の方向と平行な方向に、前記一辺の長さよりも長い距離で移動させると、前記観察視野内の物質a’及び物質b’を観察視野外まで移動させることができ、光信号a,bの消失に基づく高精度の検出を行うことができる。
また、第1及び第2の実施形態に係る標的物質検出装置では、光学系を公知の正立顕微鏡の構成にしたがって、液体試料導入板2,12の前記裏面側から光を照射し、前記表面側に透過する前記伝搬光に基づく前記光信号を光信号検出部5,15で検出することとしているが、公知の倒立顕微鏡の構成にしたがって、前記液体試料導入板の前記表面側から光を照射し、前記裏面側に透過する前記伝搬光に基づく前記光信号を、前記裏面側に配された前記光信号検出部で検出することとしてもよい。
次に、本発明の第3の実施形態に係る標的物質検出装置を図16を参照しつつ説明する。なお、図16は、第3の実施形態に係る標的物質検出装置の説明図である。
図16に示すように標的物質検出装置20は、公知の落射型顕微鏡に準じて構成され、液体試料導入板22と、光照射部23と、第1の磁場印加部24と、撮像デバイス25a、対物レンズ25b及びハーフミラー(ダイクロイックミラー等)25cで構成される光信号検出部25とで構成される。なお、撮像デバイス25aは、例えば、公知のCCDイメージセンサ等で構成され、2次元画像の取得が可能とされる。また、ハーフミラー25cは、反射によって液体試料導入板22の前記表面上に照射光を導入するための光照射部23の光学要素としても用いられる。
光照射部23は、ハーフミラー25cによる反射光により液体試料導入板22の前記表面側から光Lを照射可能とされる表面側照射部として構成される。
また、第1の磁場印加部24は、液体試料導入板22の前記表面側に配されるとともに液体試料導入板22の前記表面上に導入された前記液体試料中の前記結合体を磁場の印加により液体試料導入板22から遠ざかる方向に移動させるように構成される。ここで、第1の磁場印加部24は、中央に貫通孔が形成された環状の電磁石で形成されており、光照射部23から照射される光Lが前記貫通孔を通じて液体試料導入板22に照射可能とされるとともに光Lの反射光RLに基づく光信号が前記貫通孔を通じて光信号検出部25で検出可能とされる。
光信号検出部25は、液体試料導入板22の前記表面側に配されるとともに第1の磁場印加部24による前記磁場の印加前後における前記伝搬光に基づく光信号の信号変化を検出可能とされる。
なお、液体試料導入板22、光照射部23及び光信号検出部25(撮像デバイス25a、対物レンズ25b、ハーフミラー25c)は、公知の落射型顕微鏡にしたがって構成することができる。
次に、前記液体試料の液層中を浮遊する前記結合体が液体試料導入板22の前記表面上に重力沈降した後、光照射部23から照射される光Lをハーフミラー25cを介して液体試料導入板22の前記表面側に照射し(光照射工程)、対物レンズ25bを調整して前記表面ないしその近傍を結像可能範囲内に入れ、撮像デバイス25aで前記表面上の光Lの反射光RLに基づく光信号を取得する(光信号検出工程)。
次に、結像可能範囲及び観察視野を維持したまま前記結合体を液体試料導入板22から遠ざかる方向に移動させた後の液体試料導入板22の前記表面上の光信号を撮像デバイス25aで取得する(光信号検出工程)。
したがって、標的物質検出装置20によれば、前記標的物質を高精度に検出することができる。また、液体試料導入板22の前記表面上に前記夾雑物が吸着している場合でも、その存在を無視した検出を行うことができるため、必ずしも検出ごとに液体試料導入板22に対する前記洗浄処理を行う必要がなく、効率的な検出を行うことができる。また、前記散乱光、前記反射光、前記発光、前記光吸収等の様々な現象に基づいて発生する光信号を識別信号として取り扱うことができ、幅広い分野での利用を期待することができる。また、光信号の変化の態様として、焦点ずれに加えて消失する現象を利用することもできるため、明確に光信号の変化を捉えることができる。
図17に示すように、変形例に係る標的物質検出装置20Aでは、第3の実施形態に係る標的物質検出装置20に対し、更に、第3の磁場印加部26が配されるとともに第1の磁場印加部24に代えて第1の磁場印加部27が配された構成とされる。なお、この他は、第3の実施形態に係る標的物質検出装置20と同様であるため、説明を省略する。
第3の磁場印加部26によれば、標的物質検出装置20を用いた場合のように、前記液体試料導入保持工程後、前記液体試料の液層中を浮遊する前記結合体が液体試料導入板22の前記表面上に重力沈降することを待つことなく、前記液体試料導入保持工程後、前記結合体変動工程前に、第3の磁場印加部26での引き寄せ磁場の印加により前記液体試料中の前記結合体の全部又は一部を一旦液体試料導入板22の表面上に引き寄せることができる(結合体引き寄せ工程)。
したがって、標的物質検出装置20Aによれば、標的物質検出装置20が有する利点に加えて、検出に要する時間を短時間化させ、より効率的な前記標的物質の検出を行うことができる。
第1の磁場印加部24に代えて第1の磁場印加部27を用いる場合、前記光信号検出工程における前記第1の結合体変動工程前後における光信号が、前掲図2,8のように得られ、図8に示す、光信号aのサイズ変化に基づく前記標的物質の検出に加え、光信号aの移動に基づく前記標的物質の検出を行うことができ、より一層、高精度に前記標的物質の検出を行うことができる。
次に、本発明の第4の実施形態に係る標的物質検出装置を図18を参照しつつ説明する。なお、図18は、第4の実施形態に係る標的物質検出装置の説明図である。
図18に示すように、第4の実施形態に係る標的物質検出装置30は、公知の落射型顕微鏡に準じて構成され、液体試料導入板32と、光照射部33と、第2の磁場印加部38と、撮像デバイス35a、対物レンズ35b及びハーフミラー35cで構成される光信号検出部35とで構成される。
液体試料導入板32、光照射部33及び光信号検出部35は、第3の実施形態に係る標的物質検出装置20における液体試料導入板22、光照射部23及び光信号検出部25と同様に構成することができ、第4の実施形態に係る標的物質検出装置30は、第1の磁場印加部24に代えて第2の磁場印加部38を配する点で第3の実施形態に係る標的物質検出装置20と相違する。以下、相違点について説明する。
前記結合体の変動は、第2の磁場印加部38を磁場印加部として、第2の磁場印加部38からの前記磁場の印加により液体試料導入板32の前記表面上に導入された前記液体試料中の前記結合体を液体試料導入板32の前記表面上に引き寄せるとともに前記磁場を印加した状態で第2の磁場印加部38を液体試料導入板32の前記表面の面内方向と平行な方向のベクトル成分を持つ方向に移動させ、第2の磁場印加部38の移動に追従させて前記結合体を移動させるか又は前記結合体の姿勢を変化させることにより行う(第2の結合体変動工程)。
この第2の磁場印加部38を用いる場合、前記第2の結合体変動工程において、前記磁場の印加により前記液体試料中の前記結合体の全部又は一部を液体試料導入板32の表面上に引き寄せるため、前記液体試料導入保持工程後、前記液体試料の液層中を浮遊する前記結合体が液体試料導入板32の前記表面上に重力沈降することを待つ必要がない。
なお、図11では、物質a’及び物質b’が観察視野内で移動する例を示しているが、第2の磁場印加部38を液体試料導入板32の前記表面の面内方向と平行な方向のベクトル成分を持つ方向で、かつ、矩形状の観察視野を律するいずれかの一辺の方向と平行な方向に、前記一辺の長さよりも長い距離で移動させると、前記観察視野の物質a’及び物質b’を観察視野外まで移動させることができ、光信号a,bの消失に基づく高精度の検出を行うことができる。
また、前記結合体に基づく光信号の変化の態様として、図4,8,11,13に例を挙げ、前記位置移動、前記焦点ずれ、前記消失、前記回転(前記結合体の姿勢変化)として説明をしたが、前記光信号の変化の態様としては、強度の増減(前記焦点ずれに基づく強度低下等)、位相変化(位置移動後の位相変化)、出現(観察視野外からの位置移動)も挙げることができる。
図7に示す標的物質検出装置1Bの構成に準じて実施例1に係る標的物質検出装置を作製した。以下では、説明の便宜上、標的物質検出装置1Bの説明に用いた符号と同一の符号で実施例1に係る標的物質検出装置の各構成部を説明する。
具体的に、液体試料導入板2としては、厚さ40nmのTiO2薄膜を成膜したポリカーボネート製溝付き基板(メモリーテック社製,厚さ0.6mm,溝周期1.2μm)を用いた。光照射部3としは、ハロゲンランプ(オリンパス社製,12V100WHAL)を用い、撮像デバイス5aとしては、デジタルカメラ(オリンパス社製,DP21)を用いた。対物レンズ5bとしては、水浸仕様のもの(オリンパス社製,WIMSPlanApo150×)を用い、液体試料導入板2表面上の前記液体試料に浸した状態で観測を行った。また、第1の磁場印加部7としては、ネオジム磁石(アズワン社製,NR212)を用い、観測途中で液体試料導入板2に近付けるようにして前記結合体変動工程を実施した。
前記標的物質を含む溶液に、前記磁性粒子を含む溶液を混合して混合溶液(液体試料)を作製した後、前記混合溶液30μLを液体試料導入板2と対物レンズ5bとの間に導入した。この状態で、光照射部3からの光を液体試料導入板2に照射し、撮像デバイス5aで透過光信号の測定を行った。なお、透過光信号の測定に際し、前記基板表面の溝を用いて前記基板表面に焦点を合わせた。
図19において、実線の丸で囲んだ部分の中の物体は、前記標的物質と前記磁性粒子とが結合した状態にある。
次に、第1の磁場印加部7により図19の右側から前記結合体を引き寄せる方向の磁場を印加した後の様子を図20に示す。なお、図20は、実施例1における、磁場印加後の様子を撮像した2次元画像を示す図である。また、図20と図19とは、同一の観察視野で撮像された2次元画像である。
図20の実線の丸で囲んだ部分の中の物体は、図19の実線の丸で囲んだ部分の中の物体と同じである。磁場印加開始からの時間経過に伴い、前記結合体は、磁場を印加した方向に移動したことが明らかである。
次に、図18に示す標的物質検出装置30の構成に準じて実施例2に係る標的物質検出装置を作製した。以下では、説明の便宜上、標的物質検出装置30の説明に用いた符号と同一の符号で実施例2に係る標的物質検出装置の各構成部を説明する。
具体的に、液体試料導入板32としては、厚さ40nmのTiO2薄膜を成膜したポリカーボネート製溝付き基板(メモリーテック社製,厚さ0.6mm,溝周期1.2μm)を用いた。光照射部33としては、キセノンランプ(オリンパス社製,UXL-75XB)を用い、撮像デバイス35aとしては、デジタルカメラ(オリンパス社製,DP21)を用いた。光学フィルタとセットになったハーフミラー35c(オプトライン社製,LF405/LP-B)を用い、波長370nm~410nmの光を液体試料導入板32に照射し、波長422nmより長い波長の光を撮像デバイス35aで観察した。第2の磁場印加部38としては、リング状のネオジム磁石(アズワン社製,NR212)を用い、対物レンズ35b(オリンパス社製,LMPlanFl50×)の真下に配置した。
前記標的物質を含む溶液に前記磁性粒子を含む溶液を混合した後、更に蛍光色素4’,6-diamidino-2-phenylindole(DAPI)を含む溶液を混合して混合溶液(液体試料)を作製した。
前記混合溶液10μLを液体試料導入板32上に滴下した。この状態で光照射部33からの光を液体試料導入板32に照射し、撮像デバイス35aで蛍光信号の測定を行った。
図21において白く表示されているところは、主として、前記蛍光色素で標識された前記標的物質からの蛍光である。
次に、第2の磁場印加部38を図21の下向きに移動した後の画像を図22に示す。なお、図22は、実施例2における、磁場印加部移動後の様子を撮像した2次元画像を示す図である。
図21,22に示すように、第2の磁場印加部38の移動に追従して前記磁性粒子の一部が移動したが、前記磁性粒子と結合していた前記標的物質については、蛍光の発光状況が変化した。より具体的に言及すると、この変化は、前記標的物質の平行及び回転移動に伴う発光位置の変化、或いは、前記磁性粒子又は前記標的物質の変動に起因する前記標的物質の発光強度の変化である。
これらの変化は、図21,22における、実線の丸で囲んだ部分で顕著に確認することができる。
2,12,22,32 液体試料導入板
3,13,23,33 光照射部
4,7,24,27 第1の磁場印加部
5a,15a,25a,35a 撮像デバイス
5b,15b,25b,35b 対物レンズ
25c,35c ハーフミラー
5,15,25,35 光信号検出部
6,26 第3の磁場印加部
18,38 第2の磁場印加部
L 光
TL 透過光
RL 反射光
a,b,c,d 光信号
a’,b’ 物質
X1,X2 方向
x1,x2,y1,y2 ベクトル成分
Claims (6)
- 標的物質及び前記標的物質と結合体を形成する磁性粒子を含む液体試料が表面上に導入されるとともに裏面側及び前記表面側のいずれかの側から照射される光の透過光を伝搬光として前記光が照射される側と反対の面側に伝搬可能とされる透光板、前記液体試料が前記表面上に導入されるとともに前記表面側から照射される光の反射光を前記伝搬光として前記表面上方に伝搬可能な反射板、並びに、前記液体試料が前記表面上に導入される導入板のいずれかで形成される液体試料導入板が配され、かつ、前記液体試料が前記液体試料導入板の前記表面上に保持可能とされる液体試料保持部と、
前記液体試料導入板が前記透光板で形成されるときに前記液体試料導入板の前記裏面側から前記光を照射可能とされる裏面側光照射部、前記液体試料導入板が前記透光板及び前記反射板のいずれかで形成されるときに前記液体試料導入板の前記表面側から前記光を照射可能とされる表面側光照射部、並びに、前記液体試料導入板が前記導入板で形成されるときに前記液体試料導入板上に保持される前記液体試料に対して前記液体試料導入板の側面側から前記光を照射可能とされる側面側光照射部のいずれかで形成される光照射部と、
前記液体試料導入板の前記裏面側に配されるとともに前記液体試料導入板の前記表面上に導入された前記液体試料中の前記結合体を磁場の印加により前記液体試料導入板の前記表面上に引き寄せ可能とされるとともに前記磁場を印加した状態で前記液体試料導入板の前記表面の面内方向と平行な方向のベクトル成分を持つ方向に移動可能とされる磁場印加部と、
前記液体試料導入板の前記表面側、前記裏面側及び前記側面側のいずれかの側に配されるとともに前記磁場印加部の移動前後における前記伝搬光に基づく光信号の信号変化を検出可能とされ、かつ、前記液体試料導入板の前記表面上の検出領域の様子を2次元画像として取得可能とされる光信号検出部と、
を有し、
前記液体試料導入板の前記表面が前記結合体の吸着を抑制する吸着抑制剤で表面処理され、
前記磁場印加部が前記2次元画像の結像可能範囲内に存在する前記結合体を前記磁場印加部の移動に追従させて前記結像可能範囲内及び前記結像可能範囲外のいずれかの位置に移動可能とされることを特徴とする標的物質検出装置。 - 第2の磁場印加部に貫通孔が形成されるとともに裏面側光照射部が前記貫通孔を通じて液体試料導入板の裏面側から光を照射可能とされる請求項1に記載の標的物質検出装置。
- 液体試料保持部に外部と液体試料導入板の表面上の空間との間で送液可能な流路が形成される請求項1から2のいずれかに記載の標的物質検出装置。
- 標的物質及び前記標的物質と結合体を形成する磁性粒子とを含む液体試料が表面上に導入されるとともに裏面側及び前記表面側のいずれかの側から照射される光の透過光を伝搬光として前記光が照射される側と反対の面側に伝搬可能とされる透光板、前記液体試料が前記表面上に導入されるとともに前記表面側から照射される光の反射光を前記伝搬光として前記表面上方に伝搬可能な反射板、並びに、前記液体試料が前記表面上に導入される導入板のいずれかで形成される液体試料導入板が配され、かつ、前記液体試料が前記液体試料導入板の前記表面上に保持可能とされる液体試料保持部に対し、前記液体試料導入板の表面上に前記液体試料を導入し保持する液体試料導入保持工程と、
前記液体試料導入板が前記透光板で形成されるときに前記液体試料導入板の前記裏面側から前記光を照射する裏面側光照射工程、前記液体試料導入板が前記透光板及び前記反射板のいずれかで形成されるときに前記液体試料導入板の前記表面側から前記光を照射する表面側光照射工程、並びに、前記液体試料導入板が前記導入板で形成されるときに前記液体試料導入板上に保持される前記液体試料に対して前記液体試料導入板の側面側から前記光を照射する側面側光照射工程のいずれかの工程である光照射工程と、
前記液体試料導入板の前記裏面側に配される磁場印加部からの磁場の印加により前記液体試料導入板の前記表面上に導入された前記液体試料中の前記結合体を前記液体試料導入板の前記表面上に引き寄せるとともに前記磁場を印加した状態で前記磁場印加部を前記液体試料導入板の前記表面の面内方向と平行な方向のベクトル成分を持つ方向に移動させる結合体移動工程と、
前記液体試料導入板の前記表面上の検出領域の様子を2次元画像として取得可能とされる光信号検出部により、前記結合体移動工程による前記磁場印加部の移動前後における前記伝搬光に基づく光信号の信号変化を前記2次元画像に基づき検出する光信号検出工程と、
を含み、
前記液体試料導入板の前記表面が前記結合体の吸着を抑制する吸着抑制剤で表面処理され、
前記結合体移動工程が前記2次元画像の結像可能範囲内に存在する前記結合体を前記磁場印加部の移動に追従させて前記結像可能範囲内及び前記結像可能範囲外のいずれかの位置に移動させる工程であることを特徴とする標的物質検出方法。 - 結合体が1つの標的物質に対して2つ以上の磁性粒子を結合させたものである請求項4に記載の標的物質検出方法。
- 結合体が伝搬光の照射を受けて前記伝搬光の液体試料に対する透過光の光信号と識別可能な光信号を発生させる標識物質を含む請求項4から5のいずれかに記載の標的物質検出方法。
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