JP6967222B2 - 脈絡膜新生血管抑制剤又はドルーゼン抑制剤およびその評価又はスクリーニング方法 - Google Patents

脈絡膜新生血管抑制剤又はドルーゼン抑制剤およびその評価又はスクリーニング方法 Download PDF

Info

Publication number
JP6967222B2
JP6967222B2 JP2017556480A JP2017556480A JP6967222B2 JP 6967222 B2 JP6967222 B2 JP 6967222B2 JP 2017556480 A JP2017556480 A JP 2017556480A JP 2017556480 A JP2017556480 A JP 2017556480A JP 6967222 B2 JP6967222 B2 JP 6967222B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
emt
drusen
acid
cells
rpe cells
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2017556480A
Other languages
English (en)
Other versions
JPWO2017104833A1 (ja
Inventor
眞一郎 丹羽
大 小倉
秀美 水沼
洋子 新井
孝弘 黒瀬
良宏 高井
陽子 三ツ口
万里代 守屋
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Rohto Pharmaceutical Co Ltd
Link Genomics Inc
Original Assignee
Rohto Pharmaceutical Co Ltd
Link Genomics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Rohto Pharmaceutical Co Ltd, Link Genomics Inc filed Critical Rohto Pharmaceutical Co Ltd
Publication of JPWO2017104833A1 publication Critical patent/JPWO2017104833A1/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP6967222B2 publication Critical patent/JP6967222B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/502—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects
    • G01N33/5023—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects on expression patterns
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/436—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having oxygen as a ring hetero atom, e.g. rapamycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/192—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having aromatic groups, e.g. sulindac, 2-aryl-propionic acids, ethacrynic acid 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/38—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/42—Oxazoles
    • A61K31/421—1,3-Oxazoles, e.g. pemoline, trimethadione
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/426—1,3-Thiazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Description

本発明は、脈絡膜の新生血管の予防又は治療用医薬に関する。
また、本発明は、ドルーゼン抑制剤、及びそのような薬剤の評価又はスクリーニング方法に関する。
脈絡膜新生血管（Ｃｈｏｒｏｉｄａｌ Ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ、ＣＮＶ）は、眼底の黄斑部において、脈絡膜から新生血管が生じる疾患であり、加齢黄斑変性症（Ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ Ｍａｃｕｌａｒ Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ、ＡＭＤ）のほか、網膜色素線条症、病的近視、眼ヒストプラスマ症や外傷後の脈絡膜破裂等において見られる。
脈絡膜新生血管は脆弱であるため、血液成分が滲出し、網膜浮腫や網膜下液の貯留を引き起こす。また、脆弱な新生血管が破れて出血することで、視力低下に影響を及ぼす障害が加速的に進行する（非特許文献１）。
例えば、加齢黄斑変性症における脈絡膜新生血管に対しては、新生血管を阻害する抗ＶＥＧＦ薬等の血管新生阻害剤が用いられている（非特許文献２）。
ＡＭＤは、加齢等の要因により、網膜の黄斑部が障害されて視力の喪失を来たす疾患である。ＡＭＤが進行すると、物体や線状の物が歪んで見え（変視症）、色が識別出来なくなり、光に対して敏感になることがあり、Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅに大きな影響を与えるようになる。さらに重症化すると、視界の一部が欠けたり（中心暗点等）、失明に至ることもある（非特許文献３）。
ＡＭＤは、特徴的な病態により大別すると、Ｗｅｔ ＡＭＤ（滲出型ＡＭＤ）と、Ｄｒｙ ＡＭＤ（萎縮型ＡＭＤ）とに分類される。Ｗｅｔ ＡＭＤは、異常な新生血管とその破綻を特徴とする類型である。Ｗｅｔ ＡＭＤは、網膜色素上皮細胞（Ｒｅｔｉｎａｌ Ｐｉｇｍｅｎｔ Ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ、ＲＰＥ細胞）下の脈絡膜から血管が新生し、これらの脆弱な血管から血液成分が滲出し、網膜浮腫や網膜下液の貯留が起こる。また、脆弱な血管が破れて出血することで、視力低下に影響を及ぼす障害が加速的に進行する（非特許文献１）。
ＡＭＤの治療法として、Ｗｅｔ ＡＭＤに対しては、血管新生を阻害する抗ＶＥＧＦ（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）薬等の血管新生阻害剤が用いられている（非特許文献２）。
一方、Ｄｒｙ ＡＭＤは、視力、眼底所見、画像所見、除外規定、重症度分類等の基準から診断される疾患である（非特許文献４）。ドルーゼンと呼ばれる構造物により、視細胞が不整を来すことが一因であると考えられている（非特許文献５）。一部のＤｒｙ ＡＭＤは、Ｗｅｔ ＡＭＤに移行する例があるとの報告がある。
岩田 英嗣ら（２０１１）． 加齢黄斑変性 現代医学 ５９巻１号 １３３〜１３８ 平山 真理子ら（２０１１）． 滲出型加齢黄斑変性における抗ＶＥＧＦ治療 医学のあゆみ Ｖｏｌ．２３６ １１６５〜１１６７ 石田 晋ら（２０１０）． 加齢とＡＭＤ Ｐｈａｒｍａ Ｍｅｄｉｃａ Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．１２，９−１２ 高橋 寛二ら（２０１５）． 萎縮型加齢黄斑変性の診断基準 日眼会誌 １１９，６７１−６７７ 安川 力（２０１１）．Ｓｅｍｉｎａｒ ５．加齢黄斑変性（ＡＭＤ）の前駆病変とその症状 Ｇｅｒｉａｔｒｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｖｏｌ．４９，Ｎｏ．４ ４０９〜４１２
本発明は、ＣＮＶの予防及び／又は治療剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、ドルーゼン抑制剤を提供することを目的とする。
ＶＥＧＦをターゲットとした抗体等を用いた新生血管の阻害は対症療法であり、ＶＥＧＦを産生する細胞自体の働きを抑えたり、改善させるものではない。また、抗体等の生物学的製剤は治療期間が長引くほど高額な医療費が必要となる。さらに、眼内注射を必要とする医薬では、侵襲性が高く、患者の負担が大きい。したがって、ＣＮＶの根治治療のための、侵襲性が低く、経済的な治療薬が強く求められている。
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、特定の非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤｓ）、アルドース還元酵素阻害剤、ロイコトリエン受容体拮抗剤、ケミカルメディエーター遊離抑制剤、及びトロンボキサンＡ２受容体拮抗剤が網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ細胞）の上皮間葉転換（Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ−Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ：ＥＭＴ）を抑制することにより、ＲＰＥ細胞におけるＶＥＧＦの発現を抑制し、脈絡膜新生血管を予防及び／又は治療することができることを見出し、本発明を完成させるに至った。
すなわち、本発明は、
［１］
ザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分として含有する、脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤；
［２］
経口剤である、前記［１］に記載の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤；
［３］
前記脈絡膜新生血管が、加齢性黄斑変性症、ポリープ状脈絡膜血管症（ＰＣＶ）、又は網膜血管腫状増殖（ＲＡＰ）において生じる、前記［１］又は［２］に記載の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤；
に関する。
また、本発明では、ドルーゼンを抑制することにより、Ｄｒｙ ＡＭＤにおける視野の歪み等の症状を改善することができるものと期待される。しかしながら、Ｄｒｙ ＡＭＤの有効な治療薬は存在せず、根治のための治療薬が強く求められている。
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、ドルーゼンは、ＲＰＥ細胞が上皮間葉転換（Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ−Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ：ＥＭＴ）を引き起こしたことに起因する構造体であるという新たな知見を得た。この知見に基づき、本発明者らは、簡便にＲＰＥ細胞においてＥＭＴを誘導できること、ＲＰＥ細胞においてドルーゼンを再現し得ること、ＲＰＥ細胞におけるＥＭＴを抑制できるＥＭＴ抑制化合物を評価又はスクリーニングし、これらの化合物がＲＰＥ細胞におけるドルーゼンを抑制できることを見出し、本発明を完成させるに至った。
すなわち、本発明は、
［４］
網膜色素上皮細胞の上皮間葉転換抑制活性を有する化合物を有効成分として含有する、ドルーゼン抑制剤；
［５］
前記上皮間葉転換抑制活性を有する化合物が、前記細胞における間葉系マーカー又は細胞外マトリックスの発現を抑制する薬剤である、前記［４］に記載のドルーゼン抑制剤；
［６］
前記間葉系マーカーが、Ｓｎａｉｌ、Ｓｌｕｇ、Ｃａｄｈｅｒｉｎ３、ＭＭＰ１、及びＭＭＰ７からなる群より選択される少なくとも１種であり、並びに／又は、
前記細胞外マトリックスが、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ３、ＬＡＭＣ２、ＨＭＭＲ、及びＴＮＣからなる群より選択される少なくとも１種である、前記［５］に記載のドルーゼン抑制剤；
［７］
前記上皮間葉転換抑制活性を有する化合物が、非ステロイド性抗炎症剤、アルドース還元酵素阻害剤、ロイコトリエン受容体拮抗剤、ケミカルメディエーター遊離抑制剤、及び／又はトロンボキサンＡ２受容体拮抗剤である、前記［４］〜［６］のいずれかに記載のドルーゼン抑制剤；
［８］
前記非ステロイド性抗炎症剤が、ザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、イブプロフェン、フルルビプロフェン及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種であり、
前記アルドース還元酵素阻害剤が、エパルレスタット及び／若しくはその薬学的に許容できる塩であり、
前記ロイコトリエン受容体拮抗剤が、ザフィルルカスト、モンテルカスト、プランルカスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種であり、
前記ケミカルメディエーター遊離抑制剤が、アンレキサノクス及び／若しくはその薬学的に許容できる塩であり、並びに／又は、
前記トロンボキサンＡ２受容体拮抗剤が、セラトロダスト及び／若しくはその薬学的に許容できる塩である、前記［７］に記載のドルーゼン抑制剤；に関する。
また、本発明は、
［９］
プロピオン酸系非ステロイド性抗炎症剤、アミノアリールカルボン酸系非ステロイド性抗炎症剤、アリール酢酸系非ステロイド性抗炎症剤、アルドース還元酵素阻害剤、ロイコトリエン受容体拮抗剤、ケミカルメディエーター遊離抑制剤、又はトロンボキサンＡ２受容体拮抗剤を有効成分として含有し、
該アルドース還元酵素が、エパルレスタット及び／又はその薬学的に許容できる塩である、加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤；
［１０］
前記プロピオン酸系非ステロイド性抗炎症剤が、ザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、イブプロフェン、フルルビプロフェン及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種であり、
前記アミノアリールカルボン酸系非ステロイド性抗炎症剤が、フルフェナム酸、メフェナム酸及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種であり、
前記アリール酢酸系非ステロイド性抗炎症剤が、スリンダク及び／若しくはその薬学的に許容できる塩であり、
前記ロイコトリエン受容体拮抗剤が、ザフィルルカスト、モンテルカスト、プランルカスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種であり、並びに／又は、
前記ケミカルメディエーター遊離抑制剤が、アンレキサノクス及び／若しくはその薬学的に許容できる塩であり、
前記トロンボキサンＡ２受容体拮抗剤が、セラトロダスト及び／若しくはその薬学的に許容できる塩である、前記［９］に記載の加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤；に関する。
また、本発明は、
［１１］
血管新生阻害剤と、
前記［４］〜［８］のいずれかに記載のドルーゼン抑制剤とを組み合わせてなる、加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤に関する。
また、本発明は、
［１２］
インビトロにおいて、被験薬剤の存在下で、網膜色素上皮細胞における上皮間葉転換の抑制を測定することを含む、ドルーゼン抑制剤の評価又はスクリーニング方法に関する。
また、本発明は、
［１３］
インビトロにおいて、被験薬剤の存在下で、網膜色素上皮細胞の集塊の抑制を測定することを含む、ドルーゼン抑制剤の評価又はスクリーニング方法に関する。
また、本発明は、
［１４］
インビトロにおいて、被験薬剤の存在下で、網膜色素上皮細胞における上皮間葉転換の抑制を測定することを含む、加齢黄斑変性症予防・治療薬の評価又はスクリーニング方法に関する。
また、本発明は、
［１５］
インビトロにおいて、被験薬剤の存在下で、網膜色素上皮細胞の集塊の抑制を測定することを含む、加齢黄斑変性症予防・治療薬の評価又はスクリーニング方法に関する。
本発明の化合物は、ＲＰＥ細胞のＥＭＴを抑制することでＶＥＧＦの発現を抑制できるため、脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤として有用である。さらに、本発明は、医薬品として十分な安全性を有するものである。
また、別の観点から、本発明によれば、ＥＭＴ抑制化合物を用いてドルーゼンを効果的に抑制することが可能となる。
図１は、ＲＰＥ細胞におけるＥＭＴ誘導をＥＭＴマーカー分子の発現変化により検証した結果を示すグラフである。 図２は、ＲＰＥ細胞におけるＥＭＴ誘導を経時的なＥＭＴマーカー発現変化により検証した結果を示す図である。 図３は、オキサプロジンが、ＲＰＥ細胞のＥＭＴを抑制することを示すグラフである。 図４は、エパルレスタットが、ＲＰＥ細胞のＥＭＴを抑制することを示すグラフである。 図５は、ザフィルルカストが、ＲＰＥ細胞のＥＭＴを抑制することを示すグラフである。 図６は、アンレキサノクスが、ＲＰＥ細胞のＥＭＴを抑制することを示すグラフである。 図７は、ザルトプロフェンが、ＲＰＥ細胞のＥＭＴを抑制することを示すグラフである。 図８は、フルフェナム酸アルミニウムが、ＲＰＥ細胞のＥＭＴを抑制することを示すグラフである。 図９は、メフェナム酸が、ＲＰＥ細胞のＥＭＴを抑制することを示すグラフである。 図１０は、スリンダクが、ＲＰＥ細胞のＥＭＴを抑制することを示すグラフである。 図１１は、チアプロフェン酸が、ＲＰＥ細胞のＥＭＴを抑制することを示すグラフである。 図１２は、セラトロダストが、ＲＰＥ細胞のＥＭＴを抑制することを示すグラフである。 図１３は、オキサプロジンによる、ＲＰＥ細胞のＶＥＧＦ及びＥＭＴマーカーの発現量への影響を検証した結果を示すグラフである。 図１４は、エパルレスタットによる、ＲＰＥ細胞のＶＥＧＦ及びＥＭＴマーカーの発現量への影響を検証した結果を示すグラフである。 図１５は、ザルトプロフェンによる、ＲＰＥ細胞のＶＥＧＦ及びＥＭＴマーカーの発現量への影響を検証した結果を示すグラフである。 図１６は、エトドラクによる、ＲＰＥ細胞のＶＥＧＦ及びＥＭＴマーカーの発現量への影響を検証した結果を示すグラフである。 図１７は、インドメタシンによる、ＲＰＥ細胞のＶＥＧＦ及びＥＭＴマーカーの発現量への影響を検証した結果を示すグラフである。 図１８は、フルフェナム酸アルミニウムによる、ＲＰＥ細胞のＶＥＧＦ及びＥＭＴマーカーの発現量への影響を検証した結果を示すグラフである。 図１９は、メフェナム酸による、ＲＰＥ細胞のＶＥＧＦ及びＥＭＴマーカーの発現量への影響を検証した結果を示すグラフである。 図２０は、セラトロダストによる、ＲＰＥ細胞のＶＥＧＦ及びＥＭＴマーカーの発現量への影響を検証した結果を示すグラフである。 図２１は、ザルトプロフェンのＣＮＶ抑制効果をレーザー誘発線維化試験により検証した結果を示すグラフである。 図２２は、ザルトプロフェンのＣＮＶ抑制効果をレーザー誘発線維化試験により検証した結果を示す蛍光眼底写真である。 図２３は、ザルトプロフェンのＥＭＴ抑制効果をレーザー誘発線維化試験により検証した結果を示すグラフである。 図２４は、ザルトプロフェンのＥＭＴ抑制効果をレーザー誘発線維化試験により検証した結果を示す蛍光顕微鏡写真である。 図２５は、ザルトプロフェンのＥＭＴ抑制効果をレーザー誘発線維化試験により検証した結果を示す蛍光顕微鏡写真である。 図２６は、ＡＭＤ患者ドルーゼンにおけるＲＰＥ細胞の形態を示した染色写真を、健常者のＲＰＥ細胞の形態を示した染色写真と比較したものである。 図２７は、ＡＭＤ患者ドルーゼンにおけるＲＰＥ細胞の上皮系マーカーの染色性を示す免疫染色写真を、健常者のＲＰＥ細胞の上皮系マーカーの染色性を示す免疫染色写真と比較したものである。 図２８は、ＡＭＤ患者ドルーゼンにおけるＲＰＥ細胞の間葉系マーカーの染色性を示す免疫染色写真を、健常者のＲＰＥ細胞の間葉系マーカーの染色性を示す免疫染色写真と比較したものである。 図２９は、ＡＭＤモデル動物におけるＲＰＥ細胞の上皮系マーカー及び間葉系マーカーの染色性を示す免疫染色写真を、健常モデル動物におけるＲＰＥ細胞の上皮系マーカー及び間葉系マーカーの染色性を示す免疫染色写真と比較したものである。 図３０は、ＲＰＥ細胞におけるＥＭＴ誘導を運動能の亢進により検証した結果を示すグラフ及び写真である。 図３１は、ＲＰＥ細胞におけるＥＭＴ誘導をドルーゼン様構造体の形成により検証した結果を示す写真である。 図３２は、ＲＰＥ細胞のＥＭＴ誘導モデルにおいて、ＥＭＴ抑制化合物により運動能の亢進が抑制されることを示すグラフである。 図３３は、ＲＰＥ細胞のＥＭＴ誘導モデルにおいて、ＥＭＴ抑制化合物により運動能の亢進が抑制されることを示すグラフである。 図３４は、ＲＰＥ細胞のＥＭＴ誘導モデルにおいて、ＥＭＴ抑制化合物により運動能の亢進が抑制されることを示すグラフである。 図３５は、ＥＭＴ抑制化合物が、ＲＰＥ細胞のＥＭＴ誘導モデルにおいて、ドルーゼン様構造体を抑制することを示す写真である。 図３６は、ＥＭＴ抑制化合物が、ＲＰＥ細胞のＥＭＴ誘導モデルにおいて、ドルーゼン様構造体を抑制することを示す写真である。 図３７は、ＥＭＴ抑制化合物が、ＲＰＥ細胞のＥＭＴ誘導モデルにおいて、ドルーゼン様構造体を抑制することを示す写真である。 図３８は、ＥＭＴ抑制化合物が、ＲＰＥ細胞のＥＭＴ誘導モデルにおいて、ドルーゼン様構造体を抑制することを示す写真である。 図３９は、ＥＭＴ抑制化合物が、ＲＰＥ細胞のＥＭＴ誘導モデルにおいて、ドルーゼン様構造体を抑制することを示す写真である。 図４０は、ドルーゼン抑制評価のためのｉｎ ｖｉｖｏモデル試験におけるドルーゼン様構造体の誘導結果を示す写真である。 図４１は、誘導されたドルーゼン様構造体におけるＥ−Ｃａｄｈｅｒｉｎの染色結果を示す写真である。 図４２は、誘導されたドルーゼン様構造体におけるＣｙｔｏｋｅｒａｔｉｎの染色結果を示す写真である。 図４３は、誘導されたドルーゼン様構造体におけるＦｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎの染色結果を示す写真である。 図４４は、誘導されたドルーゼン様構造体におけるＶｉｍｅｎｔｉｎの染色結果を示す写真である。 図４５は、ドルーゼン様構造体形成に対するオキサプロジンの薬理評価をＨＥ染色で示した写真である。 図４６は、ドルーゼン様構造体形成に対するオキサプロジンの薬理評価をＥ−Ｃａｄｈｅｒｉｎの免疫染色で示した写真である。 図４７は、ドルーゼン様構造体形成に対するオキサプロジンの薬理評価をＦｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎの免疫染色で示した写真である。 図４８は、ドルーゼン様構造体形成に対するエパルレスタットの薬理評価をＨＥ染色で示した写真である。 図４９は、ドルーゼン様構造体形成に対するエパルレスタットの薬理評価をＥ−Ｃａｄｈｅｒｉｎの免疫染色で示した写真である。 図５０は、ドルーゼン様構造体形成に対するエパルレスタットの薬理評価をＦｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎの免疫染色で示した写真である。 図５１は、ドルーゼン様構造体形成に対するザルトプロフェンの薬理評価をＨＥ染色で示した写真である。 図５２は、ドルーゼン様構造体形成に対するザルトプロフェンの薬理評価をＥ−Ｃａｄｈｅｒｉｎの免疫染色で示した写真である。 図５３は、ドルーゼン様構造体形成に対するザルトプロフェンの薬理評価をＦｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎの免疫染色で示した写真である。
以下、本発明を詳細に説明する。
［脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤］
本発明の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤は、ザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分として含有する。
本明細書において、「脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）」とは、眼底の脈絡膜から新しい血管が発生、増殖及び／又は伸展することをいう。限定はされないが、脈絡膜から生じた新生血管は、Ｂｒｕｃｈ膜及び／又は網膜色素上皮細胞が存在する層を通って伸展する。ＣＮＶは、公知の方法により検査を行うことが可能である。限定はされないが、ＣＮＶは、例えば、フルオレセイン等の蛍光色素を用いた眼底血管造影法により検査をすることができる。
本明細書において、「網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ細胞）」とは、眼の網膜下に存在する単層の立方上皮細胞をいう。
本発明者らは、ＲＰＥ細胞における上皮間葉転換（ＥＭＴ）がＣＮＶの主因であると推測している。本明細書において「上皮間葉転換（ＥＭＴ）」とは、上皮細胞において、上皮性の形質が失われ、間葉系の形質を獲得するようになる現象をいう。上皮細胞における細胞間接着が解除されることにより、細胞の形態が変化し、運動能を獲得する。上皮細胞として発現していた上皮系マーカーは発現が抑制され、間葉系マーカーの発現や細胞外マトリクス（ＥＣＭ）の分泌が亢進するようになる（本明細書において、上皮系マーカー、間葉系マーカー、及び／又はＥＣＭをＥＭＴマーカーとも呼ぶ）。
本発明者らは、ＣＮＶの発生について、以下の仮説を立て、検証を行った。本発明者らは、何らかの外的刺激により、ＲＰＥ細胞においてＥＭＴが生じると、ＲＰＥ細胞が変性して、ドルーゼンを生じることを見出している。ドルーゼンを形成する過程でＢｒｕｃｈ膜から剥離されたＲＰＥ細胞は、Ｂｒｕｃｈ膜直下の脈絡膜毛細管板からの酸素と栄養の供給が遮断されるため、局所的な低酸素状態によりＶＥＧＦや一部のＭＭＰｓの分泌が亢進するものと考えられる。また、ドルーゼンの形成に至らない場合であっても、ＲＰＥ細胞においてＥＭＴが生じることにより、ＲＰＥ細胞から間葉系マーカーや細胞外マトリクスとともにＶＥＧＦや一部のＭＭＰｓの分泌が亢進することが考えられる。これらのＭＭＰｓにより、Ｂｒｕｃｈ膜に分解及び穿孔が生じ、ＶＥＧＦにより脈絡膜からの血管新生が誘導される。
新生血管は脆弱であるため、血液の漏出が起こりやすい。また、脆弱な新生血管の破裂により網膜下出血が生じると急激に視力低下を来たし、失明に繋がり得る。
ＣＮＶに関連する疾患（ＩＣＤ１０：国際疾病分類第１０版（２００３年改定））としては、例えば、加齢黄斑変性、滲出型加齢黄斑変性、ドルーゼン、滲出性網膜炎、ポリープ状脈絡膜血管症（ＰＣＶ）、滲出性網膜症、中心性漿液性網脈絡膜症、中心性漿液性脈絡膜症、出血性網膜色素上皮剥離、増殖性硝子体網膜症、増殖性網膜症、漿液性網膜色素上皮剥離、特発性脈絡膜新生血管、網膜浮腫、網膜血管新生、網膜血管腫状増殖（ＲＡＰ）、網膜血管障害、萎縮型加齢黄斑変性、血管新生性黄斑症、軟性ドルーゼン、近視性脈絡膜新生血管、黄斑変性、黄斑症、黄斑部血管走行異常、黄斑障害等が挙げられる。
これらの疾患に対する効能効果としては、例えば、中心窩下脈絡膜新生血管を伴う加齢黄斑変性が挙げられる。
また、ＣＮＶに関連する疾患（標準病名ＩＣＤ１０）としては、例えば、近視性脈絡膜新生血管、特発性脈絡膜新生血管等が挙げられる。
これらの疾患に対する効能効果としては、例えば、病的近視における脈絡膜新生血管が挙げられる。
また、ＣＮＶに関連する疾患（標準病名ＩＣＤ１０）としては、例えば、糖尿病黄斑浮腫、１型糖尿病性黄斑浮腫、１型糖尿病黄斑症、２型糖尿病性黄斑浮腫、２型糖尿病黄斑症、糖尿病黄斑症等が挙げられる。
これらの疾患に対する効能効果としては、例えば、糖尿病黄斑浮腫が挙げられる。
また、ＣＮＶに関連する疾患（標準病名ＩＣＤ１０）としては、例えば、網膜静脈閉塞症による黄斑浮腫、網膜中心静脈塞栓症、網膜中心静脈血栓症、網膜中心静脈閉塞症、網膜中心静脈閉塞症による黄斑浮腫、網膜静脈血栓症、網膜静脈閉塞症等が挙げられる。
これらの疾患に対する効能効果としては、例えば、網膜静脈閉塞症に伴う黄斑浮腫が挙げられる。
加齢黄斑変性（ＡＭＤ）の分類としては、Ｄｒｙ ＡＭＤとＷｅｔ ＡＭＤとの大別の他、初期ＡＭＤ、中期ＡＭＤ又は後期ＡＭＤとの分類、非進行性ＡＭＤ又は進行性ＡＭＤとの分類等が報告されている。限定はされないが、Ｗｅｔ ＡＭＤの特殊型としては、網膜血管腫状増殖（ＲＡＰ）がある。
限定はされないが、ＣＮＶにおける新生血管は、Ｂｒｕｃｈ膜やＲＰＥ細胞の上方で様々な方向に伸展する場合もあるが、ポリープ状脈絡膜血管症（polypoidal choroidal vasculopathy：ＰＣＶ）のようにＲＰＥ細胞下でポリープ状の新生血管を形成する場合もある。
滲出型ＡＭＤには、中心窩を含むＣＮＶを伴う病態が知られている。このようなＡＭＤは典型ＡＭＤ、ＰＣＶ、又はＲＡＰの３病型に分けられることがあり、初回治療が個々に選択され得る。
本明細書においては、ＣＮＶが生じている網膜疾患であれば、いかなる分類に基づく疾患であっても予防及び／又は治療の対象となる。
ＡＭＤの分類において、特にＷｅｔ ＡＭＤ（滲出型ＡＭＤ）は、漏血や湿潤化を経て、中心窩下にＣＮＶを生じ、このＣＮＶ周囲に網膜下出血が見られることが多いため、ＣＮＶとの関連が強い。
このような推測されるＣＮＶ発生のメカニズムに基づくと、ザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト及びこれらの薬学的に許容できる塩は、それぞれ、ＲＰＥ細胞のＥＭＴを強く抑制することで、ＣＮＶの発生や伸展に関与するＶＥＧＦやＭＭＰｓ等の産生を抑制することに繋がり、ＣＮＶを根本から予防及び／又は治療できることが期待される。
公知の方法により、ＥＭＴが生じていること、又はＥＭＴが抑制されていることを測定又は評価することができる。限定はされないが、例えば、上皮性の形質が失われることは、後述の上皮系マーカーの発現を測定することにより確認することができる。また、例えば、間葉系の形質を獲得することは、後述の間葉系マーカーの発現や細胞外マトリクス（ＥＣＭ）の分泌を測定することにより確認することができる。遺伝子の発現やタンパク質の発現又は分泌は、マイクロアレイ、リアルタイムＰＣＲ法、ＰＣＲ法、ウエスタンブロット法、ＥＬＩＳＡ法、免疫組織染色等の公知の方法により測定することができる。また、例えば、運動能の亢進は、ギムザ染色等の組織染色、Ｉｎｖａｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ法等の公知の方法により測定することができる。また、例えば、細胞の形態変化は、ＨＥ染色等の組織染色等の公知の方法により測定することができる。
本明細書において「予防」とは、個体において、疾患や症状の発症を防止すること、疾患の発症を遅らせること、又は疾患の再発を防止することをいう。
本明細書において「治療」とは、個体において、疾患の症状を軽減すること、疾患の症状を消失させること、又は疾患の症状の維持、又は症状の進行、重症化、悪化若しくは増悪を抑えることをいう。
本明細書において、「ＲＰＥ細胞のＥＭＴを抑制する」とは、ＲＰＥ細胞における上皮系の形質が失われることを抑えること、間葉系の形質を獲得することを抑えること、又は獲得した間葉系の形質を失わせることをいう。限定はされないが、例えば、ＲＰＥ細胞において、上皮系マーカーの発現が維持されること、間葉系マーカーの発現が抑制されること、ＥＣＭの発現及び／又は分泌が抑制されること、又は運動能の亢進が抑制されることを検出することで、ＲＰＥ細胞のＥＭＴ抑制を評価することが可能である。
ＲＰＥ細胞のＥＭＴ抑制活性を有する化合物（本明細書において、ＥＭＴ抑制化合物ともいう）は、上皮細胞においてＥＭＴへの抑制活性が知られている化合物を含む。ＥＭＴ抑制化合物には、非ステロイド性抗炎症剤、アルドース還元酵素阻害剤、ロイコトリエン受容体拮抗剤、ケミカルメディエーター遊離抑制剤、及びトロンボキサンＡ２受容体拮抗剤が含まれ、顕著なＥＭＴ抑制効果を奏する観点から、ザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト又はこれらの薬学的に許容できる塩が用いられる。ＥＭＴ抑制化合物は、血液−網膜関門（ＢＲＢ）の透過性の観点から、脂溶性等のＢＲＢ透過性に関与する因子が優れているものが好ましい。限定はされないが、脂溶性が高い化合物は、ＢＲＢ透過性が優れているため、眼に直接送達しない経口投与等の場合であっても、網膜疾患に対する高い予防・治療効果が期待される。また、ＥＭＴ抑制化合物は、症状によって長期投与が可能な観点から、副作用が少ない化合物であることが好ましい。副作用としては、限定はされないが、食欲不振、下痢、口内炎、消化不良、胃炎、掻痒感、肝機能異常等が挙げられる。これらのＢＲＢ透過性及び／又は副作用の観点から、ザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト又はこれらの薬学的に許容できる塩が好ましい。これらの成分は、公知の方法により合成して使用しても、市販品を入手して使用してもよい。
本明細書において、「薬学的に許容できる塩」は、特に制限されないが、具体的には、有機酸塩、無機酸塩、有機塩基、または無機塩基が挙げられる。有機酸塩としては、例えば、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、酪酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩等のモノカルボン酸塩；フマル酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、マロン酸塩等の多価カルボン酸塩；乳酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩等のオキシカルボン酸塩；メタンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、トシル酸塩等の有機スルホン酸塩が例示される。無機酸塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩が例示される。有機塩基との塩としては、例えば、メチルアミン、トリエチルアミン、トリエタノールアミン、ジエタノールアミン、モルホリン、ピペラジン、ピロリジン、トリピリジン、ピコリン、エチレンジアミン等の有機アミンとの塩が挙げられる。無機塩基との塩としては、例えば、アンモニウム塩; ナトリウムまたはカリウム等アルカリ金属、カルシウムまたはマグネシウム等のアルカリ土類金属、アルミニウム等の金属との塩等の各種の塩が挙げられる。これらの塩は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を任意に組み合わせて使用してもよい。「薬学的に許容される塩」には、塩の溶媒和物又は水和物を含んでいてもよい。
本発明者らは、ザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種が、間葉系マーカー又は細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の発現を顕著に抑制することを見出している。
本明細書において、間葉系マーカーは、限定されず、公知の間葉系マーカーを用いることが可能であるが、例えば、Ｓｎａｉｌ（ＳＮＡＩ１）、Ｓｌｕｇ（ＳＮＡＩ２）、マトリクックスメタロプロテアーゼ１（ＭＭＰ１）、ＭＭＰ７、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ９、Ｎ−カドヘリン（ＣＤＨ２）、ＣＤＨ３、ＺＥＢ１、ＺＥＢ２（ＳＩＰ１）、α−ＳＭＡ、ビメンチン（ＶＩＭ）、ＦＳＰ−１、β−カテニン（β−ｃａｔｅｎｉｎ）、ＯＢ−カドヘリン、α５β１インテグリン、シンデカン１（Ｓｙｎｄｅｃａｎ−１）、ＥＴＳ、Ｔｗｉｓｔ１、Ｇｏｏｓｅｃｏｉｄ、ＬＥＦ−１、ＦＯＸＣ２、ｍｉＲ１０ｂ、ｍｉＲ２１、ＲＤＸ、ＲＨＯＡ、ＴＪＰ１、ＣＴＮＮＢ１、ＨＡＳ２、ＳＥＲＰＩＮＥ１、ＭＳＮ、ＴＣＦ３、ＩＴＧＡＶ等が挙げられる。ＥＭＴ抑制を評価するために、これらの間葉系マーカーは、１種を用いることも可能であり、組み合わせて用いることも可能である。
ＲＰＥ細胞におけるＥＭＴ抑制を効果的に評価可能であることから、間葉系マーカーは、Ｓｎａｉｌ、Ｓｌｕｇ、ＣＤＨ３、ＭＭＰ１、ＭＭＰ７、ＭＭＰ３、ＺＥＢ２、ＣＤＨ２、及びＶＩＭからなる群より選択される少なくとも１種が好ましく、Ｓｎａｉｌ、Ｓｌｕｇ、ＣＤＨ３、ＭＭＰ１、及びＭＭＰ７からなる群より選択される少なくとも１種がより好ましい。
本明細書において、ＥＣＭは、限定されず、公知のＥＣＭをマーカーとして用いることが可能であるが、例えば、コラーゲンタイプ５α３（ＣＯＬ５Ａ３）、ＣＯＬ６Ａ３、ラミニンγ２（ＬＡＭＣ２）、Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｍｏｔｉｌｉｔｙ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＨＭＭＲ）、テネイシンＣ（ＴＮＣ）、フィブロネクチン１（ＦＮ１）、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ５Ａ１、ＣＯＬ５Ａ２、ＣＯＬ１１Ａ２、ＣＯＬ１３Ａ１、ＣＯＬ１６Ａ１、ＣＯＬ２７Ａ１、ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ ｓｕｌｆａｔｅ ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ ４（ＣＳＰＧ４）、ラミニンβ３（ＬＡＭＢ３）、セルグリシン（ＳＲＧＮ）、ＳＰＡＲＣ等が挙げられる。ＥＭＴ抑制を評価するために、これらのＥＣＭは、マーカーとして１種を用いることも可能であり、組み合わせて用いることも可能である。
ＲＰＥ細胞におけるＥＭＴ抑制を効果的に評価可能であることから、ＥＣＭは、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ３、ラミニンγ２（ＬＡＭＣ２）、Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｍｏｔｉｌｉｔｙ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＨＭＭＲ）、テネイシンＣ（ＴＮＣ）、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＳＲＧＮ、ＦＮ１、ＣＯＬ５Ａ２、ＣＯＬ１３Ａ１、及びＬＡＭＢ３からなる群より選択される少なくとも１種が好ましく、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ３、ラミニンγ２（ＬＡＭＣ２）、Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｍｏｔｉｌｉｔｙ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＨＭＭＲ）、及びテネイシンＣ（ＴＮＣ）からなる群より選択される少なくとも１種がより好ましい。
また、本明細書において、上皮系マーカーは、限定されず、公知の上皮系マーカーを用いることが可能であるが、例えば、ＩＤ１、ＩＤ２、ＭＵＣ１、サイトケラチン１８（ＫＲＴ１８）、ＴＨＢＳ１、ＶＩＬ２、Ｅ−カドヘリン（ＣＤＨ１）等が挙げられる。これらの上皮系マーカーは、１種を用いることも可能であり、組み合わせて用いることも可能である。
本明細書において、ＥＭＴ抑制化合物としては、ザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト又はこれらの薬学的に許容できる塩の他、上皮細胞においてＥＭＴへの抑制活性が知られている化合物や成分が含まれ得る。限定はされないが、例えば、Ａｌｉｓｅｒｔｉｂ、ＭＫ−０４５７（Ｔｏｚａｓｅｒｔｉｂ）、ＰＨＡ−７３９３５８（ｄａｎｕｓｅｒｔｉｂ）、ＡＭＧ−９００、Ｂａｒａｓｅｒｔｉｂ、ＣＹＣ１１６、ＭＬＮ８０５４、Ｂａｉｃａｌｉｎ、Ｂａｉｃａｌｅｉｎ、Ｌｕｐｅｏｌ、Ｉｓｔａｎｂｕｌｉｎ Ａ、Ｐｈｙｔｏｌ、Ｄｉｐｈｅｎｙｌ ｄｉｆｌｕｏｒｏｋｅｔｏｎｅ （ＥＦ２４）、Ｃｒｕｃｍｉｎ、Ｐｈｌｏｒｏｇｌｕｃｉｎｏｌ、Ｐｌｕｍｂａｇｉｎ、Ｒａｐａｍｙｃｉｎ、ＦＫ５０６（Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）、Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ、ＬＹ５５０４１０、ＳＢ−５０５１２４、ＳＤ−２０８、ＴＡＰＩ−０、ＴＡＰＩ−１、ＪＮＪ−３８８７７６０５、ＰＦ−０４２１７９０３、ＡＧ１４７８（Ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ）、Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ、Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ、Ｌａｐａｔｉｎｉｂ、ＰＤ１５３０３５、ＰＤ１５８７８０、ＷＨＩ−Ｐ１５４、ＢＭＳ−５３６９２４、Ａ８３−０１、Ｄ４４７６、ＬＹ−３６４９４７、ＳＢ−４３１５４２、ＳＤ−２０８、ＡＺＤ６２４４（Ｓｅｌｕｍｅｔｉｎｉｂ）、ＣＩ−１０４０、ＰＤ０３２５９０１、ＧＤＣ−０９４１（Ｐｉｃｔｉｌｉｓｉｂ）、ＰＩ−１０３、ＰＩＫ−９０、ＺＳＴＫ４７４、ＡＰＩ−２、ＡＺＤ０５３０（Ｓａｒａｃａｔｉｎｉｂ）、ＰＰ１、２−Ｈｙｄｒｏｘｙｃｉｎｎａｍａｌｄｅｈｙｄｅ、５−ａｚａ−ｄＣ、ＢＩ ５７００、Ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ、ＣＸ−４９４５（Ｓｉｌｍｉｔａｓｅｒｔｉｂ）、Ｄｉｓｕｌｆｉｒａｍ、Ｅｒｉｂｕｌｉｎ ｍｅｓｙａｔｅ、Ｅｖｏｄｉａｍｉｎｅ、ＥＷ−７２０３、Ｆａｓｕｄｉｌ、Ｎｉｎｔｅｄａｎｉｂ、Ｆｕｚｈｅｎｇ Ｈｕａｙｕ ｒｅｃｉｐｅ、Ｇｒａｐｅ ｓｅｅｄ ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ、Ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ、Ｈｅｒｂｉｍｙｃｉｎ Ａ、Ｅｎｔｉｎｏｓｔａｔ、Ｈｏｎｏｋｉｏｌ、ＮＰＩ−００５２、Ｍｅｔｈａｃｙｃｌｉｎｅ、Ｄａｓａｔｉｎｉｂ、Ｋｉ２６８９４、ＮＳＣ ７４８５９、ＮＶＰ−ＬＤＥ−２２５（Ｅｒｉｓｍｏｄｅｇｉｂ）、Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ、Ｐｉｎｏｃｅｍｂｒｉｎ、Ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃ Ａｃｉｄ Ｂ、Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ、Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ、Ｓ−Ａｌｌｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅ、Ｓｉｌｉｂｉｎｉｎ ｍｅｇｌｕｍｉｎｅ、Ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ、Ｃｅｎｔｃｈｒｏｍａｎ、ＭＬ３２７、ＧＮ−２５、Ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ Ａ、Ｓａｒａｓｉｎｏｓｉｄｅ Ａ１、Ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔａｔ、Ｄａｎｕｓｅｒｔｉｂ、Ｃｙｓｔａｔｉｎ Ｃ、Ｔｈｙｍｏｑｕｉｎｏｎｅ、Ｕｌｉｎａｓｔａｔｉｎ、Ｄｅｎｄｒｏｆａｌｃｏｎｅｒｏｌ Ａ （ＤＦ−Ａ）、ジンセノサイド（人参サポニン）、ツルウメモドキ種子エキス、サリシン（セイヨウシロヤナギエキス）、サリチル酸、ヤブジラミエキス、オストール、ミュスカダンブドウ皮エキス、Ｔｏｎｇｘｉｎｌｕｏ、プロシアニジンＣ１（桂皮）、アシュワガンダ根エキス（Ｗｉｔｈａｎｉａ ｓｏｍｎｉｆｅｒａ ｒｏｏｔ ｅｘｔｒａｃｔ）、Ｑｉｎｇｙｉｈｕａｊｉ、ローゼルエキス、没食子酸エピガロカテキン、プロアントシアニジン（ブドウ種子エキス）、サルビアノリン酸Ｂ等が挙げられる。
［滲出型加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤］
Ｗｅｔ ＡＭＤに用いられる既存の血管新生阻害剤は、抗体を用いた医薬が中心であるため、治療費が高額になるという問題点がある。特に、Ｗｅｔ ＡＭＤの治療においては、投薬を中止すると再び血管新生が生じ、失明の危険性が高まり得る。本発明を用いることにより、血管新生阻害剤の用量、投与間隔、投与回数を抑えることが可能となり、医療経済上の効果を期待し得る。本発明により、ＲＰＥ細胞におけるＥＭＴを抑制することは、Ｄｒｙ ＡＭＤがＷｅｔ ＡＭＤへ移行することを阻止すること、或いは、Ｗｅｔ ＡＭＤの根本的な治療となることも期待される。本発明により、ＲＰＥ細胞におけるＥＭＴを抑制することができるため、本発明をＶＥＧＦ産生抑制剤又はＶＥＧＦ発現抑制剤として用いることも可能である。
［ＥＭＴ誘導モデル］
本発明者らは、上皮性細胞に対して刺激を与えることを含む方法により、インビトロにおいて、ＥＭＴを誘導するモデルを開発している。ＥＭＴ誘導モデルを用いることにより、各種の上皮性細胞においてＥＭＴによる影響を評価することが可能となる。また、各種の上皮性細胞において、薬剤がＥＭＴを抑制するかどうかを評価及び／又はスクリーニングすることが可能となる。
上皮性細胞は、公知の上皮性細胞であれば特に制限されないが、ＥＭＴによる影響を評価する観点から、上皮性細胞はＲＰＥ細胞を用いることが好ましく、ヒトＲＰＥ細胞であることがより好ましく、ＲＰＥ細胞株であるＡＲＰＥ−１９を用いることが更に好ましい。このようなＲＰＥ細胞を用いたＥＭＴ誘導モデルは、遺伝子発現、タンパク質の分泌、運動能、Ｆｏｃｕｓ形成等においてＥＭＴを評価することが可能である。
上皮性細胞に対して与える刺激は、薬物による刺激、機械的操作による刺激、電気的操作による刺激等が挙げられ、特に制限されないが、顕著にＥＭＴを誘導し得る観点から、薬物を細胞に接触させることを含む刺激が好ましい。上記の薬物としては、限定はされないが、サイトカイン、増殖因子、及びケモカインからなる群から選択される少なくとも１種であることが好ましい。
刺激に用いられるサイトカインとしては、公知の物質を用いることが可能であるが、例えば、インターロイキン１β（ＩＬ−１β）、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１６、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、インターフェロンγ（ＩＮＦ−γ）等が挙げられる。サイトカインは、顕著にＥＭＴを誘導し得る観点から、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＮＦ−γ、及びＴＮＦ−αからなる群より選択される少なくとも１種が好ましく、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、及びＴＮＦ−αからなる群より選択される少なくとも１種がより好ましく、ＩＬ−１β及び／又はＴＮＦ−αが更に好ましい。サイトカインは、単独で用いることも可能であり、組み合わせて用いることも可能である。
刺激に用いられる増殖因子としては、公知の物質を用いることが可能であるが、例えば、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ−β）、線維芽細胞増殖因子（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ；ＦＧＦｓ）、肝細胞増殖因子（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ；ＨＧＦ）、上皮細胞増殖因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ；ＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ；ＰＤＧＦ）等が挙げられる。増殖因子は、顕著にＥＭＴを誘導し得る観点から、ＴＧＦ−β、ＥＧＦ、及びＦＧＦｓからなる群より選択される少なくとも１種が好ましく、ＴＧＦ−β及び／又はＥＧＦがより好ましい。増殖因子は、単独で用いることも可能であり、組み合わせて用いることも可能である。
刺激に用いられるケモカインとしては、公知の物質を用いることが可能であるが、例えば、ＩＬ−８、マクロファージ炎症性タンパク質１α（ＭＩＰ−１α）、Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ−１（ＭＣＰ−１）、ＲＡＮＴＥＳ（ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｏｎ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｎｏｒｍａｌ Ｔ ｃｅｌｌ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｅｄ）、エオタキシン（ｅｏｔａｘｉｎ）等が挙げられる。ケモカインは、顕著にＥＭＴを誘導し得る観点から、ＭＩＰ−１α、ＭＣＰ−１、及びＲＡＮＴＥＳからなる群より選択される少なくとも１種が好ましく、ＭＩＰ−１α及び／又はＭＣＰ−１がより好ましい。ケモカインは、単独で用いることも可能であり、組み合わせて用いることも可能である。
上記の刺激は、例えば、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＮＦ−γ、及びＴＮＦ−αからなる群より選択される少なくとも１種のサイトカイン、ＴＧＦ−β、ＥＧＦ、及びＦＧＦｓからなる群より選択される少なくとも１種の増殖因子、及びＭＩＰ−１α、ＭＣＰ−１、及びＲＡＮＴＥＳからなる群より選択される少なくとも１種のケモカインを組み合わせて用いることが可能である。
刺激におけるサイトカイン、増殖因子、又はケモカインの濃度は、上皮性細胞の種類、細胞の状態、サイトカイン等の種類等により適宜調整され得るが、例えば、１ｎｇ／ｍＬ以上であることが好ましく、５ｎｇ／ｍＬ以上であることがより好ましく、１０ｎｇ／ｍＬ以上であることが更に好ましく、１５ｎｇ／ｍＬ以上であることが特に好ましく、２０ｎｇ／ｍＬ以上であることが最も好ましい。また、サイトカイン、増殖因子、又はケモカインの濃度は、１μｇ／ｍＬ以下であることが好ましく、７００ｎｇ／ｍＬ以下であることがより好ましく、５００ｎｇ／ｍＬ以下であることが更に好ましく、２００ｎｇ／ｍＬ以下であることが特に好ましく、１００ｎｇ／ｍＬ以下であることが最も好ましい。また、サイトカイン、増殖因子、又はケモカインの濃度は、１ｎｇ／ｍＬ〜１μｇ／ｍＬであることが好ましく、５〜７００ｎｇ／ｍＬであることがより好ましく、１０〜５００ｎｇ／ｍＬであることが更に好ましく、１５〜２００ｎｇ／ｍＬであることが特に好ましく、２０〜１００ｎｇ／ｍＬであることが最も好ましい。
限定はされないが、サイトカインがＩＬ−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、又はＩＬ−１６である場合は、サイトカインの濃度は、１ｎｇ／ｍＬ〜１μｇ／ｍＬであることが好ましく、５〜７００ｎｇ／ｍＬであることがより好ましく、１０〜５００ｎｇ／ｍＬであることが更に好ましく、１５〜２００ｎｇ／ｍＬであることが特に好ましく、２０〜１００ｎｇ／ｍＬであることが最も好ましい。
また、限定はされないが、サイトカイン又はケモカインがＩＮＦ−γ、ＴＮＦ−α、ＭＩＰ−１αである場合は、その濃度は、１０ｎｇ／ｍＬ〜１μｇ／ｍＬであることが好ましく、２０〜８００ｎｇ／ｍＬであることがより好ましく、３０〜７００ｎｇ／ｍＬであることが更に好ましく、４０〜６００ｎｇ／ｍＬであることが特に好ましく、５０〜５００ｎｇ／ｍＬであることが最も好ましい。
また、限定はされないが、増殖因子がＴＧＦ−β、ＥＧＦである場合は、増殖因子の濃度は、１〜２００ｎｇ／ｍＬであることが好ましく、２〜１００ｎｇ／ｍＬであることがより好ましく、３〜５０ｎｇ／ｍＬであることが更に好ましく、４〜６００ｎｇ／ｍＬであることが特に好ましく、５〜２５ｎｇ／ｍＬであることが最も好ましい。
刺激における反応時間は、上皮性細胞の種類、細胞の状態、サイトカイン等の種類等により適宜調整され得るが、例えば、少なくとも５分以上とすることが可能であり、ＥＭＴにおいて上皮性の形質が失われ間葉性の形質を獲得することの観点から、少なくとも１０分以上とすることが好ましく、少なくとも１時間以上とすることがより好ましく、少なくとも１０時間以上とすることが更に好ましく、少なくとも２４時間以上とすることが特に好ましく、少なくとも４８時間以上とすることが最も好ましい。また、刺激における反応時間は、例えば１２０時間以内とすることが可能であり、ＥＭＴにおいて上皮性の形質が失われ間葉性の形質を獲得することの観点から、１０８時間以内とすることが好ましく、９６時間以内とすることがより好ましく、８４時間以内とすることが更に好ましく、７２時間以内とすることが特に好ましく、６０時間以内とすることが最も好ましい。また、刺激における反応時間は、例えば５分〜１２０時間とすることが可能であり、ＥＭＴにおいて上皮性の形質が失われ間葉性の形質を獲得することの観点から、１０分〜１０８時間とすることが好ましく、１〜９６時間とすることがより好ましく、１０〜８４時間とすることが更に好ましく、２４〜７２時間とすることが特に好ましく、４８〜６０時間とすることが最も好ましい。
刺激における反応温度は、上皮性細胞の種類、細胞の状態、サイトカイン等の種類等により適宜調整され得るが、例えば、４〜５０℃とすることが可能であり、１０〜４５℃が好ましく、２０℃〜４０℃がより好ましく、３０〜３７℃が更に好ましい。
細胞にＥＭＴが誘導されたか否かを評価する方法としては、限定はされないが、上皮性細胞に対する刺激の前及び／又は後における、上皮系マーカー、間葉系マーカー及びＥＣＭからなる群より選択される少なくとも１種の発現（分泌）を測定すること、細胞の形態変化を観察すること、又は細胞の運動能の変化を測定することが挙げられる。限定はされないが、ＲＰＥ細胞にＥＭＴが誘導されると、上皮系マーカーは抑制される、間葉系マーカーが亢進する、運動能が亢進する、及び／又は細胞形態が紡錘状に変形し、細胞同士が凝集してドルーゼン様構造体（Ｆｏｃｕｓ）を形成する等の現象が確認される。
遺伝子の発現やタンパク質の発現又は分泌は、マイクロアレイ、リアルタイムＰＣＲ法、ＰＣＲ法、ウエスタンブロット法、ＥＬＩＳＡ法、免疫組織染色等の公知の方法により測定することができる。運動能の変化は、ギムザ染色等の組織染色、Ｉｎｖａｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ法等の公知の方法により測定することができる。また、例えば、細胞の形態変化は、ＨＥ染色等の組織染色等の公知の方法により測定することができる。
［ＣＮＶ抑制の評価］
ＥＭＴ誘導モデルを用いて、インビトロにおいてＣＮＶの抑制を評価することができる。すなわち、ＲＰＥ細胞においてＥＭＴを誘導した後、薬剤の存在下と非存在下とのＶＥＧＦの発現量を比較することで、薬剤がＲＰＥ細胞におけるＶＥＧＦの発現を抑えることによるＣＮＶの抑制を評価することができる。ＥＭＴの状態の測定には、例えば、上皮系マーカー、間葉系マーカー及びＥＣＭからなる群より選択される少なくとも１種の発現（分泌）を測定することが挙げられる。ＲＰＥ細胞におけるＥＭＴが抑制されると、間葉系マーカー及び／若しくはＥＣＭが抑制される。ＥＭＴマーカーやＶＥＧＦの発現は、例えば、ｍＲＮＡの発現量により評価することができる。
細胞からＲＮＡを抽出するステップは、公知のＲＮＡ抽出方法を用いることが可能である。市販のＲＮＡ抽出キット等を用いることが好ましい。
ｍＲＮＡの発現を定量分析するステップは、限定はされないが、リアルタイムＰＣＲ法を用いることが好ましい。リアルタイムＰＣＲ法で測定するＥＭＴマーカーとしては、上記の上皮系マーカー、間葉系マーカー、ＥＣＭ等のＥＭＴマーカーを用いることが可能であるが、再現性よくリアルタイムＰＣＲ法で測定し得るＥＭＴマーカーを用いる観点から、上皮系マーカーとしては、ＩＤ１、ＩＤ２、ＭＵＣ１、サイトケラチン１８（ＫＲＴ１８）、ＴＨＢＳ１、ＶＩＬ２、Ｅ−カドヘリン（ＣＤＨ１）が好ましく、ＭＵＣ１、サイトケラチン１８（ＫＲＴ１８）、Ｅ−カドヘリン（ＣＤＨ１）がより好ましい。間葉系マーカーとしては、Ｓｎａｉｌ、Ｓｌｕｇ、ＣＤＨ３、ＭＭＰ１、ＭＭＰ７、ＭＭＰ３、ＺＥＢ２、ＣＤＨ２、ビメンチンが好ましく、Ｓｎａｉｌ、Ｓｌｕｇ、ＣＤＨ３、ＭＭＰ１、ＭＭＰ７、ビメンチンがより好ましい。また、ＥＣＭとしては、再現性よくリアルタイムＰＣＲ法で測定し得るＥＭＴマーカーを用いる観点から、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ３、ＬＡＭＣ２、ＨＭＭＲ、ＴＮＣ、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＳＰＧ４、ＳＲＧＮ、ＦＮ１、ＶＩＭ、ＣＯＬ５Ａ２、ＣＯＬ１３Ａ１、ＬＡＭＢ３が好ましく、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ３、ＬＡＭＣ２、ＨＭＭＲ、ＴＮＣ、ＦＮ１がより好ましい。
［ドルーゼン抑制剤］
本発明のドルーゼン抑制剤は、網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ細胞）の上皮間葉転換（ＥＭＴ）抑制活性を有する化合物を有効成分として含有する。
本明細書において、「ドルーゼン」とは、健常の高齢者にもみられる加齢性変化でＲＰＥ細胞の下またはその周辺に存在する沈着物をいう。組織学的にはＲＰＥ細胞の基底膜とＢｒｕｃｈ膜の間の膠原線維層における多形性物質の沈着で、構成成分は、細胞内小器官等の細胞成分、細胞膜様残渣物、非エステル化コレステロール、補体、ＲＰＥ細胞の分泌物などである。ドルーゼンを形成する黄斑部の沈着物は電子顕微鏡によりＲＰＥ細胞の基底膜内側に存在するｂａｓａｌ ｌａｍｉｎａｒ ｄｅｐｏｓｉｔと外側に存在するｂａｓａｌ ｌｉｎｅａｒ ｄｅｐｏｓｉｔがある。
一説によると、ヒトにおいてドルーゼンは、検眼鏡所見により、硬性ドルーゼン（６３μｍ以下）と軟性ドルーゼン（６３μｍ以上）とに分類することができると考えられている。軟性ドルーゼンは融合するとｃｏｎｆｌｕｅｎｔ ｄｒｕｓｅｎと呼ばれ、ドルーゼンが融合・拡大して網膜色素上皮剥離（ＰＥＤ）が生じたものはＤｒｕｓｅｎｏｉｄ ＰＥＤと呼ばれる。また、近年では、更に別のドルーゼンとして分類されるｐｓｅｕｄｏｄｒｕｓｅｎが、予後に影響するため臨床上重要であることが報告されている。本明細書において、「ドルーゼン」には、硬性ドルーゼン、軟性ドルーゼンに加えて、ｐｓｅｕｄｏｄｒｕｓｅｎ等のドルーゼンに類似する沈着物又は構造物も含まれる。
日本におけるＡＭＤの診断基準では、前駆病変として軟性ドルーゼン（６３μｍ以上）とＲＰＥ細胞異常が含まれている。従来、ドルーゼンは、その形成のメカニズムが知られておらず、根本的に予防や治療を行うことが困難であった。本発明を完成するに際して、本発明者らは、ドルーゼンはＲＰＥ細胞がＥＭＴを引き起こしたことに起因する構造体であるとの新たな知見を得た。
本発明者らは、ＲＰＥ細胞を始めとする上皮細胞は、老化、ＵＶ光等の外部刺激によりその形質を変化させ、細胞外マトリックスの分泌亢進、運動能の獲得等を保有する形質（これを間葉性の形質という）を獲得する事を予測した。このことからドルーゼンは黄斑部で生じている網膜色素上皮細胞の形質転換により生成される事が強く推察される。
そこで発明者らは、網膜色素上皮細胞株（ＡＲＰＥ−１９）を用いて、細胞が形質転換する事により、細胞外マトリックスの分泌亢進、運動能の獲得等を保有する形質を獲得する事、そして最終的に細胞成分とその分泌物からなるドルーゼンと同等の集塊（Ｆｏｃｕｓとも言う）を形成する事を確認し、その発生機序を検証するとともに、同一のプロセスで生成されるこのドルーゼン様構造体（集塊（Ｆｏｃｕｓ））が、生体に生じるドルーゼンと同等のものである事の確証を得た。
本明細書において、「ドルーゼン抑制」とは、形成されたドルーゼンの数を減少させること若しくは分解すること、又は形成されたドルーゼンの大きさ（直径、面積、体積等により適宜に規定され得る）が縮小若しくは増大することを防止することをいい、新たなドルーゼンの形成を防止することも含む。限定はされないが、形成されたドルーゼンの数を減少させる場合は、例えば、薬剤を処理しないコントロールと比較して、少なくとも５％以上ドルーゼンの数が減少するものであり、１０％以上が好ましく、２０％以上が更に好ましく、３０％以上が特に好ましく、４０％以上が最も好ましい。ドルーゼンの数は、公知の方法により評価することができるが、例えば、眼底写真を用いることが可能である。また、限定はされないが、形成されたドルーゼンの大きさが縮小若しくは増大することを防止する場合は、例えば、薬剤を処理しないコントロールと比較して、少なくともドルーゼンの大きさが変化しないことであり、５％以上縮小することが好ましく、１０％以上縮小することがより好ましく、２０％以上縮小することが更に好ましく、３０％以上縮小することが特に好ましく、４０％以上縮小することが最も好ましい。ドルーゼンの大きさは、公知の方法により評価することができるが、例えば、眼底写真、スペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ−ＯＣＴ）所見、フルオレセインやインドシアニングリーン等による蛍光眼底造影等を用いることが可能である。また、限定はされないが、新たなドルーゼンの形成を防止する場合は、例えば、薬剤を処理しないコントロールと比較して、少なくとも５％以上新たなドルーゼンの形成を防止するものであり、１０％以上が好ましく、２０％以上が更に好ましく、３０％以上が特に好ましく、４０％以上が最も好ましい。新たなドルーゼンの形成は、公知の方法により評価することができるが、例えば、眼底写真、蛍光眼底造影等を用いることが可能である。ドルーゼン抑制の評価方法は、適正な評価が可能であれば特に限定はされないが、ドルーゼンの数、厚み、体積から総合的に評価されることが好ましい。
ドルーゼンの形成は、ＡＭＤの病態の進行、即ち視野や視力の低下に相関する。一説によると、網膜におけるドルーゼンの数が増加すること、また、個々のドルーゼンの形成が進み、大きさが増大することにより、Ｄｒｙ ＡＭＤの病態が進行し、地図状萎縮等の症状が観察されるようになるとの報告がある。また、ドルーゼンの生成に伴いドルーゼン下の脈絡膜において新生血管が生じ、Ｗｅｔ ＡＭＤに特徴的である網膜浮腫や、網膜下液の貯留が認められるようになる。この新生血管は脆弱で破綻が生じるとＡＭＤが、Ｄｒｙ ＡＭＤからＷｅｔ ＡＭＤへ移行する症例があるとの報告がある。
また新生血管の誘導因子であるＶＥＧＦ（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ；血管内皮細胞増殖因子）、またその受容体であるＶＥＧＦＲ（血管内皮細胞増殖因子受容体）は細胞にＥＭＴが生じる際に発現が亢進することが知られているが、Ｄｒｙ ＡＭＤの病態であるドルーゼン形成がＥＭＴによるものであるとの新たな知見に基づくと、Ｄｒｙ ＡＭＤにおいても、ドルーゼンが生じていれば血管新生が誘起されているものと推測される。
よって、ドルーゼンを抑制することは、Ｄｒｙ ＡＭＤを予防・治療することに加えて、Ｗｅｔ ＡＭＤを予防・治療することにも繋がり、Ｗｅｔ ＡＭＤに移行する前段階のＤｒｙ ＡＭＤにおける血管新生を予防・治療することにも繋がるものと考えられる。
また、本発明者らは、ＡＭＤの病態が非常にゆっくりと進行していく場合の原因の１つとして、新たに生成されるドルーゼンと、分解（抑制）されるドルーゼンとのバランスにあるとの仮説を立てている。以下、具体的に説明する。健常者においても、加齢性変化により、ドルーゼンは生成されるが、分解（抑制）されることが優勢であるため、このようなバランス関係を保つ間は、ＡＭＤの病態が進行し難い。しかしながら、このバランス関係において均衡が崩れ、ドルーゼンの生成が分解（抑制）より優勢となると、徐々にドルーゼンが残存し、ＡＭＤの病態が進行するようになる。本発明者らは、このバランス関係に強く影響を与える要因がＥＭＴであると推測している。すなわち、健常者ではＥＭＴが抑制されているため、ＲＰＥ細胞は本来の上皮性の形質を維持するが、加齢や外的刺激等により、ＥＭＴの亢進が優勢となるとＲＰＥ細胞は上皮性の形質を失い、間葉系の形質を有するようになる。後述の実施例において示すように、間葉系の形質を獲得したＲＰＥ細胞では、ドルーゼンの構成要素であるコラーゲン等のＥＣＭの生成が亢進する。一方、生体において、これらのＥＣＭは分解酵素ＭＭＰ（ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ）により分解されるが、ＥＭＴの亢進によりＭＭＰの活性を抑制するＴＩＭＰ（ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ）の発現も亢進する。ＭＭＰの活性が抑制される事により、ＥＣＭが分解されず、ドルーゼンの分解が抑制される。結果として、ＥＭＴの亢進によりドルーゼンが亢進し、ＡＭＤが進行する。
また、ＥＭＴを抑制する事により、ドルーゼンの構成要素であるコラーゲン等のＥＣＭの発現が抑制され、またＴＩＭＰの発現が抑制されるためＭＭＰ等の活性が有意に発現され、ＥＣＭの分解が促進される。結果として、ドルーゼンの生成が抑制されＡＭＤの進行が抑制されると共にドルーゼンの有意な分解によるＡＭＤの治癒が期待される。本発明者らは、生体においては、ＥＭＴの亢進により、ＴＩＭＰによる抑制機構が働き、ドルーゼンの生成が優勢になり、ＡＭＤの病態が徐々に進行するものと推測している。
このような推測されるＡＭＤ進行のメカニズムに基づくと、外的因子によりＥＭＴを抑制することで、間葉系の形質に関する因子の過剰発現を抑制し、及び／又は生体におけるドルーゼン分解の機構を十分に働かせることにより、ドルーゼンの生成と分解のバランス関係を改善し得る。本発明者らは、生体におけるドルーゼンを再現可能な細胞モデルを確立し、その細胞モデルを用いてＥＭＴを抑制する化合物を評価、スクリーニングし、その化合物によりドルーゼンが抑制されるか否かも検証している。
ＡＭＤの分類としては、Ｄｒｙ ＡＭＤとＷｅｔ ＡＭＤとの大別の他、初期ＡＭＤ、中期ＡＭＤ又は後期ＡＭＤとの分類、非進行性ＡＭＤ又は進行性ＡＭＤとの分類等が報告されている。本明細書においては、ドルーゼンが発症・増悪に関与するＡＭＤであれば、いかなる分類であっても予防及び／又は治療の対象となる。
初期ＡＭＤ、中期ＡＭＤ又は後期ＡＭＤとの分類は、ＮＩＨにより提唱されている（ＮＩＨ Ｅｌｉｇｉｂｉｌｉｔｙ Ｃａｔｅｇｏｒｉｅｓ：Ａ Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ， Ｐｌａｃｅｂｏ−Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ， Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ ｏｆ Ｈｉｇｈ−Ｄｏｓｅ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｗｉｔｈ Ｖｉｔａｍｉｎｓ Ｃ ａｎｄ Ｅ， Ｂｅｔａ Ｃａｒｏｔｅｎｅ， ａｎｄ Ｚｉｎｃ ｆｏｒ Ａｇｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ Ｍａｃｕｌａｒ Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｖｉｓｉｏｎ Ｌｏｓｓ Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． ２００１ Ｏｃｔｏｂｅｒ ； １１９（１０）： １４１７-１４３６）。この分類は、一方の眼におけるドルーゼンのサイズ（Ｄｒｕｓｅｎ Ｓｉｚｅ）、ドルーゼンのエリア（Ｄｒｕｓｅｎ Ａｒｅａ）、色素異常（Ｐｉｇｍｅｎｔ Ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ）、及び他方の眼の症状により、ＡＭＤのカテゴリーをＮｏ ＡＭＤ（カテゴリー１）、初期ＡＭＤ（カテゴリー２）、中期ＡＭＤ（カテゴリー３ａ、３ｂ）、後期ＡＭＤ（カテゴリー４ａ、４ｂ）に分けるものである。
Ｎｏ ＡＭＤ（カテゴリー１）は、一方の眼におけるドルーゼンのサイズにおいて、無い又は小さい（６３μｍ未満）であり、ドルーゼンのエリアにおいて、直径１２５μｍの円未満（５〜１５個のドルーゼン）であり、色素異常が無い、且つ他方の眼においても同様の症状である場合をいう。この分類によれば、Ｎｏ ＡＭＤ（カテゴリー１）においても、ドルーゼンが生じているため、本発明のドルーゼン抑制剤による予防及び／又は治療の対象となり得る。
ドルーゼンのサイズ及びエリアがより増大した症状に分類される初期ＡＭＤや中期ＡＭＤでは、本発明のドルーゼン抑制剤がより効果的に用いられるものと推測される。
ドルーゼンはＲＰＥ細胞がＥＭＴを引き起こしたことに起因する構造体であるとの新たな知見に基づくと、ＲＰＥ細胞におけるＥＭＴを抑制することによりドルーゼンが抑制されることが理解される。
ＲＰＥ細胞のＥＭＴ抑制活性を有する化合物（本明細書において、ＥＭＴ抑制化合物ともいう）は、上述のように、上皮細胞においてＥＭＴへの抑制活性が知られている化合物を含む。ＲＰＥ細胞においてＥＭＴを抑制する化合物としては、本発明において新たに見出したＲＰＥ細胞株におけるＥＭＴ誘導モデルを用いて、ＥＭＴの抑制が認められた化合物も含まれる。
限定はされないが、ＥＭＴ抑制化合物は、間葉系マーカー又は細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の発現を抑制する薬剤であり得る。
本発明のドルーゼン抑制剤において、ＥＭＴ抑制化合物は、限定はされないが、非ステロイド性抗炎症剤、アルドース還元酵素阻害剤、ロイコトリエン受容体拮抗剤、ケミカルメディエーター遊離抑制剤、及び／又はトロンボキサンＡ２受容体拮抗剤であり得る。
非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤｓ）は、限定はされないが、例えば、オキサプロジン、ザルトプロフェン、プラノプロフェン、アルミノプロフェン、ベノキサプロフェン、ベルモプロフェン、ブクロクス酸、カルプロフェン、イブプロフェン、イブプロキサム、インドプロフェン、ケトプロフェン、チアプロフェン酸、ナプロキセン、フルノキサプロフェン、フルルビプロフェン、フルルビプロフェンアキセチル、フェノプロフェンカルシウム、ナプロキセン、ピケトプロレン、ピルプロフェン、プロチジン酸、スプロフェン、チアプロフェン、キシモプロフェン、ロキソプロフェンナトリウム等のプロピオン酸系ＮＳＡＩＤｓ；アセクロフェナク、アセメタシン、アルクロフェナク、アンフェナクナトリウム、アントルメチングアシル、ブフェキサマク、シンメタシン、クロピラク、フェルビナク、フェンクロジン酸、フェンチアザク、グルカメタシン、イブフェナク、インドメタシン、インドメタシン ファルネシル、イソフェゾラック、イソキセパック、ロナゾラック、メチアジン酸、オキサメタシン、ピラゾラック、プログルメタシン、チアラミド、トルメチン、トロペシン、ゾメピラック、エトドラク、ジクロフェナクナトリウム、スリンダク、ナブトメン、フェンブフェン、マレイン酸プログルメタシン、モフェゾラク等のアリール酢酸系ＮＳＡＩＤｓ；エンフェナム酸、エトフェナマート、フルフェナム酸、イソニキシン、メクロフェナム酸、フルフェナム酸アルミニウム、メフェナム酸、ニフルム酸、タルニフルメート、テロフェナマート、トルフェナム酸等のアミノアリールカルボン酸系ＮＳＡＩＤｓ；ブマジゾン、ブチブフェン、フェンブフェン、キセンブシン等のアリール酪酸系ＮＳＡＩＤｓ；クリダナク、ケトロラック、チノリジン等のアリールカルボン酸系ＮＳＡＩＤｓ；アセトアミノサロール、ベノリレート、ブロモサリゲニン、アセチルサリチル酸カルシウム、ジフルニサル、エテルサラート、フェンドサール、ゲンチシン酸、サリチル酸グリコール、サリチル酸イミダゾール、アセチルサリチル酸リジン、メサラミン、サリチル酸モルホリン、サリチル酸 １−ナフチル、オルサラジン、パルサルミド、アセチルサリチル酸フェニル、サリチル酸フェニル、サラセタミド、サリチルアミドｏ−酢酸、サリチル硫酸、サルサレート、スルファサラジン等のサリチル酸系ＮＳＡＩＤｓ；メフェナム酸、フルフェナム酸、トルフェナム酸等のフェナム酸系ＮＳＡＩＤｓ；ブコローム等のピリミジン系ＮＳＡＩＤｓ；アンピロキシカム、テノキシカム、ピロキシカム、メロキシカム、ロルノキシカム、ドロキシカム、イソキシカム等のオキシカム系ＮＳＡＩＤｓ；エピリゾール、ジフェナミゾール等のピラゾール系ＮＳＡＩＤｓ；アパゾン、ベンズピペリロン、フェプラゾン、モフェブタゾン、モラゾン、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン、ピペブゾン、プロピフェナゾン、ラミフェナゾン、スキシブゾン、チアゾリノブタゾン等のピラゾロン系ＮＳＡＩＤｓ；塩酸チアラミド、エモルファゾン等の塩基性ＮＳＡＩＤｓ等、又はこれらの薬学的に許容できる塩が挙げられる。これらのＮＳＡＩＤｓは１種単独で使用してもよく、また２種以上を任意に組み合わせて使用してもよい。これらのＮＳＡＩＤｓは、公知の方法により合成して使用しても、市販品を入手して使用してもよい。
これらのＮＳＡＩＤｓのなかでも、顕著なＥＭＴ抑制効果を奏する観点から、プロピオン酸系ＮＳＡＩＤｓ、アミノアリールカルボン酸系ＮＳＡＩＤｓ又はアリール酢酸系ＮＳＡＩＤｓが好ましく、プロピオン酸系ＮＳＡＩＤｓ、フェナム酸系ＮＳＡＩＤｓ又はアリール酢酸系ＮＳＡＩＤｓがより好ましく、ザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、イブプロフェン、フルルビプロフェン、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種がより好ましく、ザルトプロフェン、オキサプロジン、フルフェナム酸、メフェナム酸及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種が更に好ましい。
アルドース還元酵素阻害剤は、限定はされないが、例えば、エパルレスタット、ゼナレスタット、スタチール、ソルビニール等が挙げられる。これらのアルドース還元酵素阻害剤は１種単独で使用してもよく、また２種以上を任意に組み合わせて使用してもよい。これらのアルドース還元酵素阻害剤は、公知の方法により合成して使用しても、市販品を入手して使用してもよい。
これらのアルドース還元酵素阻害剤のなかでも、顕著なＥＭＴ抑制効果を奏する観点から、エパルレスタット及び／又はその薬学的に許容できる塩が好ましい。
ロイコトリエン受容体拮抗剤は、限定はされないが、例えば、ザフィルルカスト、モンテルカスト、プランルカスト等のシステイニルロイコトリエン１型（ＣｙｓＬＴ１）受容体の拮抗剤、ジロートン等の５−リポキシゲナーゼ阻害剤等が挙げられる。これらのロイコトリエン受容体拮抗剤は１種単独で使用してもよく、また２種以上を任意に組み合わせて使用してもよい。これらのロイコトリエン受容体拮抗剤は、公知の方法により合成して使用しても、市販品を入手して使用してもよい。
これらのロイコトリエン受容体拮抗剤のなかでも、顕著なＥＭＴ抑制効果を奏する観点から、ザフィルルカスト、モンテルカスト、プランルカスト等のシステイニルロイコトリエン１型（ＣｙｓＬＴ１）受容体の拮抗剤が好ましく、ザフィルルカスト、モンテルカスト、プランルカスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種がより好ましく、ザフィルルカスト及び／若しくはその薬学的に許容できる塩が更に好ましい。
ケミカルメディエーター遊離抑制剤は、限定はされないが、例えば、アンレキサノクス、クロモグリク酸ナトリウム、ペミロラストカリウム、イブジラスト等が挙げられる。これらのケミカルメディエーター遊離抑制剤は１種単独で使用してもよく、また２種以上を任意に組み合わせて使用してもよい。これらのケミカルメディエーター遊離抑制剤は、公知の方法により合成して使用しても、市販品を入手して使用してもよい。
これらのケミカルメディエーター遊離抑制剤のなかでも、顕著なＥＭＴ抑制効果を奏する観点から、アンレキサノクス及び／若しくはその薬学的に許容できる塩が好ましい。
トロンボキサンＡ２拮抗薬は、限定はされないが、例えば、トロンボキサンＡ２受容体拮抗薬又はトロンボキサンＡ２合成酵素阻害薬が挙げられる。トロンボキサンＡ２受容体拮抗薬としては、例えば、セラトロダスト又はラマトロパン等が挙げられ、トロンボキサンＡ２合成酵素阻害薬としては、例えば、塩酸オザグレル等が挙げられる。これらのトロンボキサンＡ２拮抗薬は１種単独で使用してもよく、また２種以上を任意に組み合わせて使用してもよい。これらのトロンボキサンＡ２拮抗薬は、公知の方法により合成して使用しても、市販品を入手して使用してもよい。
これらのトロンボキサンＡ２拮抗薬のなかでも、顕著なＥＭＴ抑制効果を奏する観点から、セラトロダスト及び／若しくはその薬学的に許容できる塩が好ましい。
［加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤］
本発明のドルーゼン抑制剤は、主には、加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤として用いられる。このような加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤としては、プロピオン酸系非ステロイド性抗炎症剤、アミノアリールカルボン酸系非ステロイド性抗炎症剤、アリール酢酸系非ステロイド性抗炎症剤、アルドース還元酵素阻害剤、ロイコトリエン受容体拮抗剤、ケミカルメディエーター遊離抑制剤、又はトロンボキサンＡ２受容体拮抗剤を有効成分として含有し、上記アルドース還元酵素阻害剤が、エパルレスタット及び／又はその薬学的に許容できる塩を用いることが可能である。このような有効成分は、［ドルーゼン抑制剤］の項目で説明した成分に準じる。
［血管新生阻害剤との併用］
本発明において、血管新生阻害剤と、本発明のドルーゼン抑制剤とを組み合わせてなる、ＡＭＤ予防及び／又は治療剤を提供することができる。
本明細書において、「血管新生阻害剤」とは、血管新生を防止する効果を有する薬剤、血管新生の増悪を防止する効果を有する薬剤、又は形成された新生血管を減少若しくは消失させる効果を有する薬剤をいう。血管新生阻害剤としては、限定はされないが、抗ＶＥＧＦ抗体又はそのフラグメント（Ｆａｂフラグメント、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）等）、抗ＶＥＧＦ抗体のフラグメントとＩｇＧ分子のＦｃドメインとの融合タンパク質、抗血管新生アプタマー（ＲＮＡアプタマー等）等が挙げられる。血管新生阻害剤は、上市されている公知の血管新生阻害剤を用いることも可能であり、限定はされないが、例えば、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））、ラニビズマブ（ルセンティス（登録商標））、アフリベルセプト（アイリーア（登録商標））、ペガプタニブナトリウム（マクジェン（登録商標））、ＥＳＢＡ−１００８、ラムパリズマブ、ＭＣ−１１０１、ドキシサイクリンヒクラート、エミクススタト塩酸塩等が挙げられる。具体的には、上述のＥＭＴ抑制化合物と、血管新生阻害剤とを、患者の症状や状態、期待される治療効果等を総合的に考慮し、適宜に組み合わせて用いることが可能である。
ＡＭＤでは、形成されたドルーゼン下の脈絡膜において血管新生が生じることが知られており、ドルーゼン下の血管新生を阻害することと、ドルーゼンを抑制することとが相俟って、優れたＡＭＤの予防・治療効果が得られるものと推測される。ＡＭＤにおいて血管新生が生じる分類としては、Ｗｅｔ ＡＭＤ、初期及び／又は中期ＡＭＤが挙げられる。初期及び／又は中期ＡＭＤでは、ドルーゼンの数や大きさが増大することに加えて、脆弱な新生血管が生成しているものと推測される。また、Ｄｒｙ ＡＭＤにおいても、ドルーゼンが生じている場合は、血管新生が誘起されていることが推測される。この脆弱な新生血管からの血液成分が滲出することや、脆弱な血管が破れることでＷｅｔ ＡＭＤへの移行が急速に進行する。また、脆弱血管が微小にでも生じ得る初期ＡＭＤから予防的に治療を開始することが重要であると考えられる。よって、本発明において、ドルーゼン抑制剤は、血管新生阻害剤と併用されることによって、好ましくはＷｅｔ ＡＭＤの予防及び／又は治療に用いられ、より好ましくは中期ＡＭＤの予防及び／又は治療に用いられ、更に好ましくは初期及び／又は中期ＡＭＤの予防及び／又は治療に用いられる。
本発明のドルーゼン抑制剤を併用薬として用いることにより、血管新生阻害剤の用量、投与間隔、投与回数を抑えることが可能となり、医療経済上の効果を期待し得る。
また、一つの実施形態において、本発明のドルーゼン抑制剤は、光線力学療法（ＰＤＴ）と併用して治療に用いられ得る。光線力学療法では、新生血管に選択的に移行するＶｅｒｔｅｐｏｒｆｉｎ等の薬剤を使用されるが、レーザー照射により正常な脈絡膜も多少の傷害を受けることが知られている。よって、光線力学療法におけるＶｅｒｔｅｐｏｒｆｉｎ等の薬剤の用量や、レーザーの照射時間・照射量を低減しつつ、本発明のドルーゼン抑制剤を用いることで、効果的なＡＭＤの予防及び／又は治療が行い得る。
また、一つの実施形態において、本発明のドルーゼン抑制剤は、血管新生阻害剤と、光線力学療法とを適宜に組合せてＡＭＤの予防及び／又は治療に用いることも可能である。
［ＥＭＴ誘導モデル］の項目で述べたＲＰＥ細胞を用いたＥＭＴ誘導モデルは、遺伝子発現、タンパク質の分泌、運動能、Ｆｏｃｕｓ形成等において、ＡＭＤのドルーゼンと同様の形質を示すため、ＡＭＤの細胞モデルとして有効に用いられ得る。
［被験物質の評価又はスクリーニング方法］
上述のＥＭＴ誘導モデルを用いて、インビトロにおいて薬剤感受性を評価することができる。さらに本発明のＥＭＴ誘導モデルは、ドルーゼン抑制剤の評価又はスクリーニングに有用である。
限定はされないが、例えば、ＲＰＥ細胞のＥＭＴ誘導モデルによってドルーゼンをインビトロにおいて再現し、そのようなドルーゼン様構造体を異なる濃度の被験薬剤存在下または不存在下で接触させ、薬剤の添加前後におけるドルーゼン様構造体の状態を測定して比較することによって薬剤の評価又はスクリーニングが行われ得る。また、薬剤の評価又はスクリーニングは、ＲＰＥ細胞において、薬剤の存在下又は非存在下でＥＭＴを誘導し、薬剤の存在下又は非存在下におけるドルーゼン様構造体の状態を測定して比較することによっても行われ得る。ドルーゼン様構造体の状態の測定には、例えば、上皮系マーカー、間葉系マーカー及びＥＣＭからなる群より選択される少なくとも１種の発現（分泌）を測定すること、細胞の形態変化を観察すること、又は細胞の運動能の変化を測定することが挙げられる。ＲＰＥ細胞におけるＥＭＴが抑制されると、間葉系マーカー及び／若しくはＥＣＭが抑制される、運動能が抑制される、並びに／又は細胞形態が紡錘状から立方状に変形し、ドルーゼン様構造体（Ｆｏｃｕｓ）の形成が抑制される等の現象が確認される。
ドルーゼン様構造体（Ｆｏｃｕｓ）の形成度により、薬剤の評価及び／又はスクリーニングを行う場合、限定はされないが、ＥＭＴ誘導モデルを用いてＲＰＥ細胞にＥＭＴを誘導すること、ＲＰＥ細胞と被験薬剤とを接触して反応させること、細胞のドルーゼン様構造体（Ｆｏｃｕｓ）の形成を測定することを含む方法により行うことができる。一つの実施態様において、ＥＭＴ誘導モデルを用いてＲＰＥ細胞にＥＭＴを誘導することと、ＲＰＥ細胞と被験薬剤とを接触して反応させることは同時に行うことも可能である。一つの実施態様において、上記の方法は、接触反応後に細胞を固定することを含むことも可能である。
ＲＰＥ細胞と被験薬剤とを接触して反応させるステップにおいては、被験薬剤の濃度を低濃度から高濃度まで段階に分けて反応させることを含む。被験薬剤の濃度は、薬剤の種類等により、適宜調整され得るが、例えば、０μＭ（非存在下、非添加時）〜５００μＭとすることができ、０．１〜４００μＭであってもよく、０．５〜３００μＭであってもよい。
ＲＰＥ細胞と被験薬剤との接触反応時間は、例えば５分〜１２０時間とすることが可能であり、ＥＭＴの抑制によって間葉性の形質が十分に抑制されることの観点から、１０分〜１０８時間とすることが好ましく、１〜９６時間とすることがより好ましく、１０〜８４時間とすることが更に好ましく、２４〜７２時間とすることが特に好ましく、４８〜６０時間とすることが最も好ましい。
ＲＰＥ細胞と被験薬剤との接触反応温度は、薬剤の種類等により、適宜調整され得るが、例えば、４〜５０℃とすることが可能であり、１０〜４５℃が好ましく、２０℃〜４０℃がより好ましく、３０〜３７℃が更に好ましい。
接触反応後に細胞を固定するステップにおいて、細胞の固定方法としては、公知の方法を用いることが可能である。限定はされないが、例えば、パラホルムアルデヒドを用いて細胞を固定することが可能である。
細胞のドルーゼン様構造体（Ｆｏｃｕｓ）の形成を測定するステップにおいて、更に細胞を染色すること、及び／又はドルーゼン様構造体（Ｆｏｃｕｓ）の形成率又は形成抑制率を解析することを含むことができる。
細胞の染色は、限定されず、公知の染色法を用いることが可能であるが、蛍光染色が好ましく、蛍光物質による核染色及び／又はアクチン染色がより好ましい。核染色としては、例えば、７−ＡＡＤ（７−ａｍｉｎｏａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ Ｄ）、Ａｃｒｉｄｉｎｅ Ｏｒａｎｇｅ、ＤＡＰＩ、ＤＭＡＯ、Ｅｔｈｉｄｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ、Ｈｏｅｃｈｓｔ、Ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ Ｉｏｄｉｄｅ （ＰＩ）等が挙げられ、染色性の観点から、Ｈｏｅｃｈｓｔが好ましい。アクチン染色としては、例えば、ファロイジンが好ましく用いられる。
ドルーゼン様構造体（Ｆｏｃｕｓ）の形成率又は形成抑制率の解析は、例えば、候補薬剤の非添加時のドルーゼン様構造体（Ｆｏｃｕｓ）の形成状態と、特定の濃度の候補薬剤添加時のドルーゼン様構造体（Ｆｏｃｕｓ）の形成状態とを画像化し、数値化することを含む。さらに、両者の数値データを対比することにより、ドルーゼン様構造体（Ｆｏｃｕｓ）形成率又は形成抑制率を算出することを含む。ドルーゼン様構造体（Ｆｏｃｕｓ）の形成状態を画像化し、数値化することは、公知の画像化技術、数値化技術により行うことが可能であるが、例えば、ドルーゼン様構造体（Ｆｏｃｕｓ）の直径、面積、体積等を指標にすることが可能であり、より正確で再現性の高い解析を行う観点から、ドルーゼン様構造体（Ｆｏｃｕｓ）の体積を測定して数値化することが好ましく、ドルーゼン様構造体（Ｆｏｃｕｓ）の数、厚み、体積を総合評価して数値化することも好ましい。
間葉系マーカー及び／若しくはＥＣＭの抑制により、薬剤の評価及び／又はスクリーニングを行う場合、限定はされないが、ＥＭＴ誘導モデルを用いてＲＰＥ細胞にＥＭＴを誘導すること、ＲＰＥ細胞と被験薬剤とを接触して反応させること、接触反応後に細胞からＲＮＡを抽出すること、ｍＲＮＡの発現を定量分析することを含む方法により行うことができる。一つの実施態様において、ＥＭＴ誘導モデルを用いてＲＰＥ細胞にＥＭＴを誘導することと、ＲＰＥ細胞と被験薬剤とを接触して反応させることは同時に行うことも可能である。
ＥＭＴ誘導モデルを用いてＲＰＥ細胞にＥＭＴを誘導するステップ、及びＲＰＥ細胞と被験薬剤とを接触して反応させるステップは、ドルーゼン様構造体（Ｆｏｃｕｓ）の形成度の項目に準じる。
接触反応後に細胞からＲＮＡを抽出するステップは、公知のＲＮＡ抽出方法を用いることが可能である。市販のＲＮＡ抽出キット等を用いることが好ましい。
ｍＲＮＡの発現を定量分析するステップは、限定はされないが、リアルタイムＰＣＲ法を用いることが好ましい。リアルタイムＰＣＲ法で測定するＥＭＴマーカーとしては、上記のドルーゼン抑制剤の項目で説明した間葉系マーカー、ＥＣＭ等のＥＭＴマーカーを用いることが可能であるが、再現性よくリアルタイムＰＣＲ法で測定し得るＥＭＴマーカーを用いる観点から、間葉系マーカーとしては、Ｓｎａｉｌ、Ｓｌｕｇ、ＣＤＨ３、ＭＭＰ１、ＭＭＰ７、ＭＭＰ３、ＺＥＢ２、ＣＤＨ２が好ましく、Ｓｎａｉｌ、Ｓｌｕｇ、ＣＤＨ３、ＭＭＰ１、ＭＭＰ７がより好ましい。また、ＥＣＭとしては、再現性よくリアルタイムＰＣＲ法で測定し得るＥＭＴマーカーを用いる観点から、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ３、ＬＡＭＣ２、ＨＭＭＲ、ＴＮＣ、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＳＰＧ４、ＳＲＧＮ、ＦＮ１、ＶＩＭ、ＣＯＬ５Ａ２、ＣＯＬ１３Ａ１、ＬＡＭＢ３が好ましく、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ３、ＬＡＭＣ２、ＨＭＭＲ、ＴＮＣがより好ましい。
運動能の抑制により、薬剤の評価及び／又はスクリーニングを行う場合、限定はされないが、ＥＭＴ誘導モデルを用いてＲＰＥ細胞にＥＭＴを誘導すること、ＲＰＥ細胞と被験薬剤とを接触して反応させること、接触反応後に細胞を回収すること、回収した細胞を用いてＩｎｖａｓｉｏｎ Ａｓｓａｙをすることを含む方法により行うことができる。一つの実施態様において、ＥＭＴ誘導モデルを用いてＲＰＥ細胞にＥＭＴを誘導することと、ＲＰＥ細胞と被験薬剤とを接触して反応させることは同時に行うことも可能である。
ＥＭＴ誘導モデルを用いてＲＰＥ細胞にＥＭＴを誘導するステップ、及びＲＰＥ細胞と被験薬剤とを接触して反応させるステップは、ドルーゼン様構造体（Ｆｏｃｕｓ）の形成度の項目に準じる。
接触反応後の細胞は、公知の方法により回収され、市販のＩｎｖａｓｉｏｎ Ａｓｓａｙキット等を用いて運動能の評価を行うことが可能である。運動能の評価は、細胞の移動（浸潤）を画像解析すること、及び／又は浸潤細胞数をカウントすることにより行うことが可能である。
ここで、評価される被験薬剤は、既知の上皮間葉転換抑制活性を有する化合物であってもよく、また上皮間葉転換抑制活性を有することが知られていない化合物であってもよい。さらに、新規に合成された化合物であってもよい。
［製剤等］
本発明は、必要に応じて添加剤と共に、投与に適した剤型に製剤化される。例えば、経口投与に適した剤型である、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、細粒剤、顆粒剤、散剤、または丸剤として提供され得る。本発明はまた、非経口投与に適した剤型である、注射剤、眼科用剤または貼布剤として提供され得る。本発明は、これらの製剤の他にドラッグデリバリーシステム化された製剤として提供することもできる。
本発明における脈絡膜新生血管の予防及び／若しくは治療剤、又はドルーゼン抑制剤を使用する場合の用量は、対象とする疾患の種類、患者の年齢、体重、適応症状およびその剤型などによって異なるが、たとえば注射剤では、成人１日１回〜数回で１日あたり約１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、経口投与の場合、一般には、成人１日１回〜数回で１日あたり０．０１〜１００００ｍｇ、好ましくは０．１〜５０００ｍｇ、より好ましくは０．５〜２５００ｍｇを１回または数回に分けて投与することができ、注射剤の場合、一般には、成人に対し０．０００１〜２０００ｍｇを１回または数回に分けて投与することができる。また、点眼剤または挿入剤の場合には、０．０００００１〜１０％（ｗ／ｖ）、好ましくは０．００００１〜１％（ｗ／ｖ）、より好ましくは０．０００１〜０．１％（ｗ／ｖ）の有効成分濃度のものを１日１回または数回投与することができる。さらに、貼布剤の場合は、成人に対し０．０００１〜２０００ｍｇを含有する貼布剤を貼布することができる。
本明細書において、「Ｃｍａｘ」とは、投与間隔内で得られる薬剤の最大血漿中濃度をいう。既存の薬剤であれば、薬剤のインタビューフォームや添付文書により求めることができる。Ｃｍａｘは、投与後約１〜約４８時間、約１〜約２０時間、約１〜約１８時間、約１〜約１６時間、約１〜約１２時間、約１〜約１０時間、約１〜約８時間、約１〜約６時間、または約１〜約４時間においてもたらされる。
限定はされないが、有効成分として、ザルトプロフェンを使用する場合の用量は、成人の１日量を２５〜３６０ｍｇとすることが好ましく、５０〜３００ｍｇとすることがより好ましく、７０〜２６０ｍｇとすることが更に好ましく、８０〜２４０ｍｇとすることが特に好ましく、８０ｍｇとすることが最も好ましい。また、頓用の場合、ザルトプロフェンの用量は、１日量を８０〜１６０ｍｇとすることができる。ザルトプロフェンの用量は、１日最高量を２４０ｍｇとすることができる。ザルトプロフェンの場合のＣｍａｘは、２０．４μＭである（「日本薬局方 ザルトプロフェン錠 非ステロイド性鎮痛・消炎剤 ソルイルビン（登録商標）錠８０」医薬品インタビューフォーム、２０１２年４月（改訂第４版）、単回投与の場合）。ザルトプロフェンの用量は、約２０．４μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量であることが好ましく、本願発明の効果を奏する限り、Ｃｍａｘの１／２量以上やＣｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量であってもよい。また、ザルトプロフェンのＣｍａｘは、配合する添加物の種類等によっては１６．８μＭであり得る（「非ステロイド性鎮痛・消炎剤 ソレトン錠（登録商標）８０ 日本薬局方 ザルトプロフェン錠」医薬品インタビューフォーム、２０１５年８月改訂（第６版）、単回投与の場合）。この場合、ザルトプロフェンの用量は、約１６．８μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量であることが好ましく、本願発明の効果を奏する限り、Ｃｍａｘの１／２量以上やＣｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量であってもよい。上記Ｃｍａｘがもたらされる観点から、ザルトプロフェンの１日量は２４０〜３６０ｍｇ、２４０〜３００ｍｇ、２４０〜２６０ｍｇとすることができる。上記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる観点から、ザルトプロフェンの１日量は１２０〜３６０ｍｇ、１２０〜３００ｍｇ、１２０〜２６０ｍｇ、１２０〜２４０ｍｇ、１２０〜２２０ｍｇ、１２０〜２００ｍｇ、１２０〜１８０ｍｇとすることができる。上記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる観点から、ザルトプロフェンの１日量は６０〜３６０ｍｇ、６０〜３００ｍｇ、６０〜２６０ｍｇ、６０〜２４０ｍｇ、６０〜２００ｍｇ、６０〜１６０ｍｇ、６０〜１２０ｍｇ、６０〜８０ｍｇとすることができる。上記の投与は、注射剤又は経口によるものが好ましい。上記の血中濃度がもたらされることで、ザルトプロフェンがＢＲＢを透過し、効果的にＣＮＶ又はドルーゼンを抑制することが期待される。
限定はされないが、有効成分として、オキサプロジンを使用する場合の用量は、成人の１日量を１００〜７００ｍｇとすることが好ましく、２００〜６００ｍｇとすることがより好ましく、３００〜５００ｍｇとすることが更に好ましく、４００ｍｇとすることが特に好ましい。最大薬物血漿中濃度（Ｃｍａｘ）は、公知の方法により算出されるが、オキサプロジンの場合のＣｍａｘは、３４０．９μＭである（「持続性消炎・鎮痛剤 アルボ（登録商標）錠１００ｍｇ アルボ（登録商標）錠２００ｍｇ オキサプロジン製剤」医薬品インタビューフォーム、２０１１年１１月（新様式改訂第３版）、反復投与の場合）。オキサプロジンの用量は、約３４０．９μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量であることが好ましく、本願発明の効果を奏する限り、Ｃｍａｘの１／２量以上やＣｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量であってもよい。上記Ｃｍａｘがもたらされる観点から、オキサプロジンの１日量は４００〜７００ｍｇ、４００〜６００ｍｇとすることができる。上記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる観点から、オキサプロジンの１日量は２００〜７００ｍｇ、２００〜６００ｍｇ、２００〜５００ｍｇ、２００〜４００ｍｇ、２００〜３００ｍｇとすることもできる。上記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる観点から、オキサプロジンの１日量は１００〜７００ｍｇ、１００〜６００ｍｇ、１００〜５００ｍｇ、１００〜４００ｍｇ、１００〜３００ｍｇ、１００〜１５０ｍｇとすることもできる。上記の投与は、注射剤又は経口によるものが好ましい。上記の血中濃度がもたらされることで、オキサプロジンがＢＲＢを透過し、効果的にＣＮＶ又はドルーゼンを抑制することが期待される。
限定はされないが、有効成分として、チアプロフェン酸を使用する場合の用量は、成人の１日量を６０〜９００ｍｇとすることが好ましく、１００〜８００ｍｇとすることがより好ましく、１５０〜７００ｍｇとすることが更に好ましく、２００ｍｇ〜６００ｍｇとすることが特に好ましく、６００ｍｇとすることが最も好ましい。また、頓用の場合、チアプロフェン酸の用量は、１日量を２００ｍｇとすることができる。チアプロフェン酸の用量は、１日最高量を６００ｍｇとすることができる。チアプロフェン酸の場合のＣｍａｘは、６９．１５μＭである（「鎮痛・抗炎症剤、スルガム（登録商標）錠１００ｍｇ、２００ｍｇ」医薬品インタビューフォーム、２０１４年８月改訂（改訂第５版）、単回投与の場合）。チアプロフェン酸の用量は、約６９．１５μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量であることが好ましく、本願発明の効果を奏する限り、Ｃｍａｘの１／２量以上やＣｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量であってもよい。上記Ｃｍａｘがもたらされる観点から、チアプロフェン酸の１日量は６００〜９００ｍｇ、６００〜８００ｍｇ、６００〜７００ｍｇとすることができる。上記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる観点から、チアプロフェン酸の１日量は３００〜９００ｍｇ、３００〜８００ｍｇ、３００〜７００ｍｇ、３００〜６００ｍｇ、３００〜５００ｍｇ、３００〜４００ｍｇとすることができる。上記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる観点から、チアプロフェン酸の１日量は１５０〜９００ｍｇ、１５０〜８００ｍｇ、１５０〜７００ｍｇ、１５０〜６００ｍｇ、１５０〜５００ｍｇ、１５０〜４００ｍｇ、１５０〜３００ｍｇ、１５０〜２５０ｍｇ、１５０〜２００ｍｇとすることができる。上記の投与は、注射剤又は経口によるものが好ましい。上記の血中濃度がもたらされることで、チアプロフェン酸がＢＲＢを透過し、効果的にＣＮＶ又はドルーゼンを抑制することが期待される。
限定はされないが、有効成分として、フルフェナム酸アルミニウムを使用する場合の用量は、成人の１日量を７５〜１２５０ｍｇとすることが好ましく、１５０〜１０００ｍｇとすることがより好ましく、２００〜８００ｍｇとすることが更に好ましく、２５０〜７５０ｍｇとすることが特に好ましく、３７５〜７５０ｍｇとすることが最も好ましい。また、頓用の場合、フルフェナム酸アルミニウムの用量は、１日量を２５０ｍｇとすることができる。フルフェナム酸アルミニウムの用量は、１日最高量を７５０ｍｇとすることができる。フルフェナム酸アルミニウムの場合のＣｍａｘは、２７．９１μＭである（「非ステロイド性消炎・鎮痛・解熱剤 オパイリン（登録商標）錠１２５ｍｇ」医薬品インタビューフォーム、２０１１年１２月作成（新様式第４版）、単回投与の場合）。フルフェナム酸アルミニウムの用量は、約２７．９１μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量であることが好ましく、本願発明の効果を奏する限り、Ｃｍａｘの１／２量以上やＣｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量であってもよい。上記Ｃｍａｘがもたらされる観点から、フルフェナム酸アルミニウムの１日量は７５０〜１２５０ｍｇ、７５０〜１０００ｍｇ、７５０〜８００ｍｇとすることができる。上記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる観点から、フルフェナム酸アルミニウムの１日量は４００〜１２５０ｍｇ、４００〜１０００ｍｇ、４００〜８００ｍｇ、４００〜７５０ｍｇ、４００〜５００ｍｇとすることができる。上記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる観点から、フルフェナム酸アルミニウムの１日量は２００〜１２５０ｍｇ、２００〜１０００ｍｇ、２００〜８００ｍｇ、２００〜５００ｍｇ、２００〜４００ｍｇ、２００〜３００ｍｇ、２００〜２５０ｍｇとすることができる。上記の投与は、注射剤又は経口によるものが好ましい。上記の血中濃度がもたらされることで、フルフェナム酸アルミニウムがＢＲＢを透過し、効果的にＣＮＶ又はドルーゼンを抑制することが期待される。
限定はされないが、有効成分として、メフェナム酸を使用する場合の用量は、成人の１日量を１５０〜２２５０ｍｇとすることが好ましく、２５０〜１８００ｍｇとすることがより好ましく、４００〜１６００ｍｇとすることが更に好ましく、５００〜１５００ｍｇとすることが特に好ましく、１０００〜１５００ｍｇとすることが最も好ましい。また、頓用の場合、メフェナム酸の用量は、１日量を５００ｍｇとすることができる。メフェナム酸の用量は、１日最高量を１５００ｍｇとすることができる。メフェナム酸の場合のＣｍａｘは、３８．５４μＭである（「鎮痛・消炎・解熱剤 ポンタール（登録商標）錠２５０ｍｇ」医薬品インタビューフォーム、２０１５年７月改訂（第９版）、単回投与の場合）。メフェナム酸の用量は、約３８．５４μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量であることが好ましく、本願発明の効果を奏する限り、Ｃｍａｘの１／２量以上やＣｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量であってもよい。上記Ｃｍａｘがもたらされる観点から、メフェナム酸の１日量は１０００〜２２５０ｍｇ、１０００〜１８００ｍｇ、１０００〜１６００ｍｇ、１０００〜１５００ｍｇ、１０００〜１２００ｍｇとすることができる。上記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる観点から、メフェナム酸の１日量は５００〜２２５０ｍｇ、５００〜１８００ｍｇ、５００〜１６００ｍｇ、５００〜１５００ｍｇ、５００〜１２００ｍｇ、５００〜１０００ｍｇ、５００〜８００ｍｇとすることができる。上記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる観点から、メフェナム酸の１日量は１５０〜２２５０ｍｇ、２５０〜１８００ｍｇ、２５０〜１６００ｍｇ、２５０〜１５００ｍｇ、２５０〜１２００ｍｇ、２５０〜１０００ｍｇ、２５０〜８００ｍｇ、２５０〜５００ｍｇ、２５０〜３００ｍｇとすることができる。上記の投与は、注射剤又は経口によるものが好ましい。上記の血中濃度がもたらされることで、メフェナム酸がＢＲＢを透過し、効果的にＣＮＶ又はドルーゼンを抑制することが期待される。
限定はされないが、有効成分として、スリンダクを使用する場合の用量は、成人の１日量を３０〜５００ｍｇとすることが好ましく、１００〜４５０ｍｇとすることがより好ましく、２００〜４００ｍｇとすることが更に好ましく、２５０〜３５０ｍｇとすることが特に好ましく、３００ｍｇとすることが最も好ましい。スリンダクの場合のＣｍａｘは、１０．１０μＭである（「非ステロイド性消炎・鎮痛剤 クリノリル（登録商標）錠５０、１００」医薬品インタビューフォーム、２０１１年３月改訂（改訂第３版）、単回投与の場合）。スリンダクの用量は、約１０．１０μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量であることが好ましく、本願発明の効果を奏する限り、Ｃｍａｘの１／２量以上やＣｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量であってもよい。上記Ｃｍａｘがもたらされる観点から、スリンダクの１日量は３００〜５００ｍｇ、３００〜４５０ｍｇ、３００〜４００ｍｇ、３００〜３５０ｍｇとすることができる。上記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる観点から、スリンダクの１日量は２００〜５００ｍｇ、２００〜４５０ｍｇ、２００〜４００ｍｇ、２００〜３５０ｍｇ、２００〜３００ｍｇ、２００〜２５０ｍｇとすることができる。上記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる観点から、スリンダクの１日量は１００〜５００ｍｇ、１００〜４５０ｍｇ、１００〜４００ｍｇ、１００〜３５０ｍｇ、１００〜３００ｍｇ、１００〜２５０ｍｇ、１００〜２００ｍｇとすることができる。上記の投与は、注射剤又は経口によるものが好ましい。上記の血中濃度がもたらされることで、スリンダクがＢＲＢを透過し、効果的にＣＮＶ又はドルーゼンを抑制することが期待される。
限定はされないが、有効成分として、エパルレスタットを使用する場合の用量は、成人の１日量を１０〜４００ｍｇとすることが好ましく、５０〜３００ｍｇとすることがより好ましく、１００〜２００ｍｇとすることが更に好ましく、１５０ｍｇとすることが特に好ましい。エパルレスタットの場合のＣｍａｘは、１２．２μＭである（「アルドース還元酵素阻害剤 日本薬局方 エパルレスタット錠 キネダック（登録商標）錠５０ｍｇ」医薬品インタビューフォーム、２０１３年１１月改訂（第６版）、単回投与の場合）。エパルレスタットの用量は、約１２．２μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量であることが好ましく、本願発明の効果を奏する限り、Ｃｍａｘの１／２量以上やＣｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量であってもよい。上記Ｃｍａｘがもたらされる観点から、エパルレスタットの１日量は１５０〜４００ｍｇ、１５０〜３００ｍｇ、１５０〜２００ｍｇとすることができる。上記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる観点から、エパルレスタットの１日量は７５〜４００ｍｇ、７５〜３００ｍｇ、７５〜２００ｍｇ、７５〜１５０ｍｇとすることができる。上記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる観点から、エパルレスタットの１日量は３７〜４００ｍｇ、３７〜３００ｍｇ、３７〜２００ｍｇ、３７〜１５０ｍｇとすることができる。上記の投与は、注射剤又は経口によるものが好ましい。上記の血中濃度がもたらされることで、エパルレスタットがＢＲＢを透過し、効果的にＣＮＶ又はドルーゼンを抑制することが期待される。
限定はされないが、有効成分として、ザフィルルカストを使用する場合の用量は、成人の１日量を１０〜２００ｍｇとすることが好ましく、２０〜１５０ｍｇとすることがより好ましく、３０〜１００ｍｇとすることが更に好ましく、４０〜８０ｍｇとすることが特に好ましい。ザフィルルカストの場合のＣｍａｘは、０．８μＭである（「ロイコトリエン受容体拮抗剤／気管支喘息治療剤 アコレート（登録商標）錠２０ｍｇ ザフィルルカスト錠」医薬品インタビューフォーム、２０１５年１月作成（改訂第９版）、単回投与の場合）。ザフィルルカストの用量は、約０．８μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量であることが好ましく、本願発明の効果を奏する限り、Ｃｍａｘの１／２量以上やＣｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量であってもよい。上記Ｃｍａｘがもたらされる観点から、ザフィルルカストの１日量は４０〜２００ｍｇ、４０〜１５０ｍｇ、４０〜１００ｍｇ、４０〜８０ｍｇとすることができる。上記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる観点から、ザフィルルカストの１日量は２０〜２００ｍｇ、２０〜１５０ｍｇ、２０〜１００ｍｇ、２０〜８０ｍｇ、２０〜４０ｍｇとすることができる。上記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる観点から、ザフィルルカストの１日量は１０〜２００ｍｇ、１０〜１５０ｍｇ、１０〜１００ｍｇ、１０〜８０ｍｇ、１０〜４０ｍｇ、１０〜２０ｍｇとすることができる。上記の投与は、注射剤又は経口によるものが好ましい。上記の血中濃度がもたらされることで、ザフィルルカストがＢＲＢを透過し、効果的にＣＮＶ又はドルーゼンを抑制することが期待される。
限定はされないが、有効成分として、アンレキサノクスを使用する場合の用量は、成人の１日量を１０〜１５０ｍｇとすることが好ましく、１５〜１００ｍｇとすることがより好ましく、２０〜８０ｍｇとすることが更に好ましく、２５〜５０ｍｇとすることが特に好ましい。アンレキサノクスの場合のＣｍａｘは、１６．０μＭである（「喘息・アレルギー性鼻炎治療剤 日本薬局方 アンレキサノクス錠 ソルファ（登録商標）２５ｍｇ錠 ソルファ（登録商標）５０ｍｇ錠」医薬品インタビューフォーム、２０１２年１０月改訂（改訂第２版）、単回投与の場合）。アンレキサノクスの用量は、約１６．０μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量であることが好ましく、本願発明の効果を奏する限り、Ｃｍａｘの１／２量以上やＣｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量であってもよい。上記Ｃｍａｘがもたらされる観点から、アンレキサノクスの１日量は７５〜１５０ｍｇとすることができる。上記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる観点から、アンレキサノクスの１日量は３７〜１５０ｍｇ、３７〜１００ｍｇ、３７〜７５ｍｇとすることができる。上記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる観点から、アンレキサノクスの１日量は１８〜１５０ｍｇ、１８〜１００ｍｇ、１８〜７５ｍｇ、１８〜３７ｍｇとすることができる。上記の投与は、注射剤又は経口によるものが好ましい。上記の血中濃度がもたらされることで、アンレキサノクスがＢＲＢを透過し、効果的にＣＮＶ又はドルーゼンを抑制することが期待される。
限定はされないが、有効成分として、セラトロダストを使用する場合の用量は、成人の１日量を８〜１２０ｍｇとすることが好ましく、２５〜１１０ｍｇとすることがより好ましく、５０〜１００ｍｇとすることが更に好ましく、７０〜９０ｍｇとすることが特に好ましく、８０ｍｇとすることが最も好ましい。セラトロダストの場合のＣｍａｘは、３１．０３μＭである（「トロンボキサンＡ２受容体拮抗剤 ブロニカ（登録商標）錠４０、８０」医薬品インタビューフォーム、２０１６年１０月改訂（第４版）、単回投与の場合）。セラトロダストの用量は、約３１．０３μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量であることが好ましく、本願発明の効果を奏する限り、Ｃｍａｘの１／２量以上やＣｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量であってもよい。上記Ｃｍａｘがもたらされる観点から、セラトロダストの１日量は８０〜１２０ｍｇ、８０〜１１０ｍｇ、８０〜１００ｍｇ、８０〜９０ｍｇとすることができる。上記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる観点から、セラトロダストの１日量は５０〜１２０ｍｇ、５０〜１１０ｍｇ、５０〜１００ｍｇ、５０〜９０ｍｇ、５０〜８０ｍｇ、５０〜７０ｍｇとすることができる。上記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる観点から、セラトロダストの１日量は２５〜１２０ｍｇ、２５〜１１０ｍｇ、２５〜１００ｍｇ、２５〜９０ｍｇ、２５〜８０ｍｇ、２５〜６０ｍｇ、２５〜４０ｍｇとすることができる。上記の投与は、注射剤又は経口によるものが好ましい。上記の血中濃度がもたらされることで、セラトロダストがＢＲＢを透過し、効果的にＣＮＶ又はドルーゼンを抑制することが期待される。
本明細書において、製剤の剤型は特に制限されず、液剤（懸濁剤、乳剤、カプセル剤、シロップ剤、注射剤など）や、固形製剤（粉末剤、細粒剤、顆粒剤、丸剤、錠剤など）であってもよい。
本明細書で提供される製剤は、限定はされないが、４．０〜８．５のｐＨを有し得る。本発明の効果を顕著に奏する観点から、製剤のｐＨは、４．５以上が好ましく、５．０以上がより好ましく、５．５以上が更に好ましく、６．０以上が特に好ましく、６．５以上が最も好ましい。また、本発明の効果を顕著に奏する観点から、製剤のｐＨは、８．０以下が好ましく、７．８以下がより好ましく、７．７以下が更に好ましく、７．６以下が特に好ましく、７．５以下が最も好ましい。また、本発明の効果を顕著に奏する観点から、製剤のｐＨは、４．５〜８．０が好ましく、５．０〜７．８がより好ましく、５．５〜７．７が更に好ましく、６．０〜７．６が特に好ましく、６．５〜７．６が最も好ましい。
［固形製剤］
本明細書で提供される製剤は、安定性などを損なわない限り、製剤の形態に応じて、慣用の担体成分を添加して、慣用の方法により調製できる。例えば、錠剤であれば、粉末状の活性成分と製薬上許容される担体成分（賦形剤など）とを混合して圧縮成形することにより調製できる。さらに、固形製剤のうち顆粒剤などの粉粒剤は、種々の造粒法（押出造粒法、粉砕造粒法、乾式圧密造粒法、流動層造粒法、転動造粒法、高速攪拌造粒法など）により調製してもよく、錠剤は、上記造粒法、打錠法（湿式打錠法、直接打錠法）などを適当に組み合わせて調製できる。錠剤には、糖衣コーティングを施し、糖衣錠としてもよい。さらに、錠剤は単層錠であってもよく、二層錠などの積層錠であってもよい。固形製剤の好ましい剤型は、錠剤（例えば、口中咀嚼型の錠剤）である。
固形製剤において、担体成分又は添加剤としては、例えば、賦形剤（Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、キシリトールなどの糖アルコール、ブドウ糖、白糖、乳糖、果糖などの糖類、結晶セルロース、カルメロースナトリウム、カルメロースカルシウム、リン酸水素カルシウム、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、デキストリン、βーシクロデキストリン、軽質無水ケイ酸、酸化チタン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、タルク、カオリンなど）；崩壊剤（低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスポビドン、クロスカルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルスターチ、部分アルファー化デンプンなど）；結合剤（メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロース誘導体、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、アクリル酸系高分子、ゼラチン、アラビアゴム、プルラン、アルファー化デンプン、カンテン、トラガント、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコールエステルなど）；滑沢剤（ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸ポリオキシル、セタノール、タルク、硬化油、ショ糖脂肪酸エステル、ジメチルポリシロキサン、ミツロウ、サラシミツロウなど）；抗酸化剤（ジブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、没食子酸プロピル、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、トコフェロール、クエン酸など）；コーティング剤（ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、カルボキシメチルエチルセルロース、酢酸フタル酸セルロース、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、アミノアルキルメタアクリレートコポリマー、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、メタアクリル酸コポリマー、ポリビニルアセタートジエチルアミノアセテート、セラックなど）；着色剤（ウコン抽出液、リボフラビン、酸化チタン、カロチン液など）；矯味剤（アスパルテーム、アスコルビン酸、ステビア、メントール、カンゾウ粗エキス、単シロップなど）；発泡剤（炭酸水素ナトリウムなど）；流動化剤（メタケイ酸アルミン酸ナトリウム、軽質無水ケイ酸など）界面活性剤（ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、モノステアリン酸グリセリン、モノステアリン酸ソルビタン、モノラウリン酸ソルビタン、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン、ポリソルベート類、ラウリル硫酸ナトリウム、マクロゴール６０００等のマクロゴール類、ショ糖脂肪酸エステルなど）；可塑剤（クエン酸トリエチル、ポリエチレングリコール、トリアセチン、セタノールなど）；甘味剤（ショ糖、マンニトール、アスパルテームなどの天然又は合成甘味剤）；着香剤（メントールなど）；吸着剤、防腐剤、湿潤剤、帯電防止剤などが挙げられる。
製剤が固形製剤である場合、ザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種、又はＥＭＴ抑制化合物の含有量は、限定はされないが、製剤の全量に対して、０．１〜３０重量％とすることができ、０．５〜２５重量％であることが好ましく、０．５〜 ２０重量％であることがより好ましい。また、本化合物の含有量は、０．０１〜３重量％であってもよく、０．０２〜２重量％であってもよく、０．０３〜１重量％であってもよい。
［眼科用剤］
眼科用剤とする場合、性状は特に限定されず、例えば、液体状、流動状、ゲル状、半固形状、又は固形状などの何れの性状であってもよい。眼科用剤の種類は特に限定されない。例えば、点眼剤、眼軟膏（水溶性眼軟膏、油溶性眼軟膏）、及び眼内注射剤（例えば、硝子体内注射剤）などが挙げられる。
また、固形状以外の液体状、流動状、ゲル状、半固形状、又は固形状などの眼科用剤は、水性組成物であってもよく、軟膏剤などのように油性組成物であってもよい。
眼科用剤の調製方法は良く知られている。ザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種、又はＥＭＴ抑制化合物を、薬学的に許容される基剤又は担体、必要に応じて、薬学的に許容される眼科用製剤用の添加剤、及びその他の有効成分（本化合物以外の生理活性成分又は薬理活性成分）と混合することにより調製できる。
基剤又は担体は、例えば、水；極性溶媒のような水性溶媒；多価アルコール；植物油；油性基剤などが挙げられる。眼内注射剤の基剤又は担体としては、注射用蒸留水または生理用食塩水が挙げられる。基剤又は担体は、１種を単独で、又は２種以上を組み合わせて使用できる。
眼科用剤とする場合の添加剤としては、例えば、界面活性剤、香料又は清涼化剤、防腐剤、殺菌剤又は抗菌剤、ｐＨ調節剤、等張化剤、キレート剤、緩衝剤、安定化剤、抗酸化剤、及び粘稠化剤などが挙げられる。眼内注射剤には、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤、安定化剤、及び防腐剤などが含まれていてもよい。添加剤は、１種を単独で、又は２種以上を組み合わせて使用できる。
眼科用剤が、固形製剤以外の、例えば、液体状、流動状、ゲル状、又は半固形状などの製剤である場合、眼科用組成物中のザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種、又はＥＭＴ抑制化合物の含有量は、組成物の全体量に対して、０．００００１重量％以上とすることができ、０．０００１重量％以上が好ましく、０．００１重量％以上がより好ましい。また、眼科用組成物中のザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種、又はＥＭＴ抑制化合物の含有量は、組成物の全体量に対して、０．０１重量％以上であってもよく、０．１重量％以上であってもよく、１重量％以上であってもよい。上記範囲であれば、網膜疾患の予防、改善、又は治療効果が十分に得られる。
また、眼科用剤が、固形製剤以外の、例えば、液体状、流動状、ゲル状、又は半固形状などの製剤である場合、眼科用組成物中のザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種、又はＥＭＴ抑制化合物の含有量は、組成物の全体量に対して、１０重量％以下とすることができ、５重量％以下が好ましく、３重量％以下がより好ましい。上記範囲であれば、網膜疾患の予防、改善、又は治療効果が十分に得られると共に、点眼時に異物感がより少ない製剤となる。
眼科用剤が、固形製剤以外の、例えば、液体状、流動状、ゲル状、又は半固形状などの製剤である場合、眼科用組成物中の本化合物の含有量としては、組成物の全体量に対して、０．００００１〜１０重量％、０．００００１〜５重量％、０．００００１〜３重量％、０．０００１〜１０重量％、０．０００１〜５重量％、０．０００１〜３重量％、０．００１〜１０重量％、０．００１〜５重量％、０．００１〜３重量％、０．０１〜１０重量％、０．０１〜５重量％、０．０１〜３重量％、０．１〜１０重量％、０．１〜５重量％、０．１〜３重量％、１〜１０重量％、１〜５重量％、１〜３重量％とすることができる。
眼科用剤が水分を含む組成物である場合の眼科用剤のｐＨは、限定はされないが、４以上が好ましく、５．５以上がより好ましく、６以上がさらにより好ましく、６．５以上がさらにより好ましい。上記範囲であれば、本化合物の熱及び光に対する安定性が良好な製剤になる。また、眼科用剤のｐＨは、９以下が好ましく、８．５以下がより好ましく、８以下がさらにより好ましく、７．５以下がさらにより好ましい。上記範囲であれば、眼への刺激が抑えられる。
［注射剤］
注射剤は、ザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種、又はＥＭＴ抑制化合物を、注射用蒸留水または生理用食塩水などに溶解又は分散させ、例えば日本薬局方記載の公知の方法で調製できる。また、注射剤には、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤、安定化剤、及び防腐剤などの薬学的に許容される担体、又はさらに薬学的に許容される注射剤用の添加剤が含まれていてもよい。
注射剤には、網膜疾患の予防、改善、又は治療成分以外の薬理活性成分又は生理活性成分を配合することができる。このような薬理活性成分や生理活性成分として、例えば、神経栄養因子、充血除去成分、眼筋調節薬成分、抗炎症薬成分又は収斂薬成分、抗ヒスタミン薬成分又は抗アレルギー薬成分、ビタミン類、アミノ酸類、抗菌薬成分又は殺菌薬成分などが挙げられる。
注射剤中のザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種、又はＥＭＴ抑制化合物の含有量は、製剤の全量に対して、０．００１重量％以上が好ましく、０．０１重量％以上がより好ましく、０．１重量％以上がさらにより好ましい。また、８０重量％以下が好ましく、６０重量％以下がより好ましく、５０重量％以下がさらにより好ましい。上記範囲であれば、網膜疾患の予防、改善、又は治療効果が十分に得られる。
注射剤中のザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種、又はＥＭＴ抑制化合物の含有量は、製剤の全量に対して、０．００１〜８０重量％、０．００１〜６０重量％、０．００１〜５０重量％、０．０１〜８０重量％、０．０１〜６０重量％、０．０１〜５０重量％、０．１〜８０重量％、０．１〜６０重量％、０．１〜５０重量％とすることができる。
注射剤において、添加剤、及びザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種、又はＥＭＴ抑制化合物以外の薬理活性成分又は生理活性成分は、１種を単独で、又は２種以上を組み合わせて使用できる。
［カプセル剤］
カプセル剤は、慣用の方法により、カプセル（軟質又は硬質カプセル）内に粉粒剤（粉剤、顆粒剤など）を充填することにより調製できる。製剤がカプセル剤である場合、当該調製物中のザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種、又はＥＭＴ抑制化合物の含有量は、限定はされないが、製剤の全量に対して、０．０１〜３重量％とすることができ、０．０２〜２重量％であることが好ましく、０．０３〜１重量％であることがより好ましい。このような液状調製物を軟カプセル等に充填して、軟カプセル剤等として用いる事が好ましい。
製剤が硬カプセル剤である場合、カプセル剤皮を含まない当該硬カプセル剤用の内容物中のザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種、又はＥＭＴ抑制化合物の含有量は、限定はされないが、製剤の全量に対して、０．１〜３０重量％とすることができ、０．５〜２５重量％であることが好ましく、０．５〜 ２０重量％であることがより好ましい。また、本化合物の含有量は、０．０１〜３重量％であってもよく、０．０２〜２重量％であってもよく、０．０３〜１重量％であってもよい。
液剤の場合の添加物としては、油性基剤（例えば、オリーブ油、トウモロコシ油、大豆油、ゴマ油、綿実油などの植物油；中鎖脂肪酸トリグリセリドなど）、水性基剤（例えば、マクロゴール４００、水）、ゲル基剤（例えば、カルボキシビニルポリマー、ガム質など）、界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０、硬化ヒマシ油、グリセリン脂肪酸エステル、セスキオレイン酸ソルビタンなど）、懸濁化剤（例えば、カオリン、カルメロースナトリウム、トラガント、サラシミツロウや各種界面活性剤、アラビアゴム、アラビアゴム末、キサンタンガム、大豆レシチンなど）、分散剤、乳化剤、安定化剤、緩衝剤、溶解補助剤、消泡剤（ジメチルポリシロキサン、シリコン消泡剤など）、ｐＨ調節剤（クエン酸、リンゴ酸、リン酸水素ナトリウム、リン酸二カリウムなど）、防腐剤（保存剤）、清涼化剤（ｌ−メントール、ハッカ水など）などが挙げられる。またこれらの液剤にはいずれの場合でも、抗酸化剤、甘味剤、酸味剤、着色剤、香料、および呈味剤などを適宜添加してもよい。
液剤は、例えば、各成分を担体成分である水性媒体（精製水、エタノール含有精製水など）に溶解又は分散させ、必要により濾過又は滅菌処理し、所定の容器に充填し、滅菌処理することにより調製できる。
上記組成物は、本発明の効果を奏する限り特に限定されないが、例えば医薬品、医薬部外品、機能性食品などとすることができる。
［機能性食品］
本発明は、機能性食品としても提供され得る。本明細書において、機能性食品とは、国や公共団体が許可・指定している医薬品的な効能を有する飲食品又は企業が国等に所定の効果を届け出た内容に基づき機能性を表示した飲食品をいう。機能性食品には、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、老人用食品、健康補助食品（バランス栄養食、サプリメント）等が挙げられる。医薬品的な効能又は機能性を表示したパッケージや容器、添付文書、取扱い説明書等を含む飲食品も含まれる。国等への申請書に医薬品的な効能又は機能性を表示した飲食品も含まれる。このような表示には、脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療に係る表示、ＡＭＤ、初期・中期ＡＭＤ、Ｄｒｙ ＡＭＤ、ＷｅｔＡＭＤ等のＡＭＤへの予防及び／又は治療に係る表示、視野の歪み（変視症）、視野の色調、光過敏、急激な視力低下、中心暗点等のＡＭＤに特徴的な症状の予防、改善、及び／又は治療に係る表示等が挙げられる。
［実施形態］
上述した実施の形態に関し、限定はされないが、本発明は以下の実施形態を開示する。
ザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分として含有する、脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
経口剤又は注射剤である、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記経口剤が、固形製剤である、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記固形製剤が、錠剤である、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
液剤である、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記液剤が、眼科用剤又はカプセル剤である、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記脈絡膜新生血管が、加齢性黄斑変性症、ポリープ状脈絡膜血管症（ＰＣＶ）、又は網膜血管腫状増殖（ＲＡＰ）において生じる、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記脈絡膜新生血管が、ＲＰＥ細胞のＥＭＴによって生じる、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
ザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種が、ＲＰＥ細胞のＥＭＴを抑制するために十分な量で投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
ザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種が、ＲＰＥ細胞における間葉系マーカー又は細胞外マトリックスの発現を抑制するために十分な量で投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記間葉系マーカーが、Ｓｎａｉｌ、Ｓｌｕｇ、ＣＤＨ３、ＭＭＰ１、ＭＭＰ７、ＭＭＰ３、ＺＥＢ２、ＣＤＨ２、及びＶＩＭからなる群より選択される少なくとも１種である、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記細胞外マトリックスが、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ３、ＬＡＭＣ２、ＨＭＭＲ、ＴＮＣ、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＳＲＧＮ、ＦＮ１、ＣＯＬ５Ａ２、ＣＯＬ１３Ａ１、及びＬＡＭＢ３からなる群より選択される少なくとも１種である、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
２０．４μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量でザルトプロフェン又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
１６．８μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量でザルトプロフェン又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる投与量でザルトプロフェン又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量でザルトプロフェン又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
３４０．９μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量でオキサプロジン又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる投与量でオキサプロジン又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量でオキサプロジン又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
６９．１５μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量でチアプロフェン酸又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる投与量でチアプロフェン酸又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量でチアプロフェン酸又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
２７．９１μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量でフルフェナム酸又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる投与量でフルフェナム酸又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量でフルフェナム酸又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
３８．５４μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量でメフェナム酸又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる投与量でメフェナム酸又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量でメフェナム酸又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
１０．１０μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量でスリンダク又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる投与量でスリンダク又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量でスリンダク又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
１２．２μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量でエパルレスタット又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる投与量でエパルレスタット又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量でエパルレスタット又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
０．８μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量でザフィルルカスト又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる投与量でザフィルルカスト又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量でザフィルルカスト又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
１６．０μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量でアンレキサノクス又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる投与量でアンレキサノクス又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量でアンレキサノクス又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
３１．０３μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量でセラトロダスト又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる投与量でセラトロダスト又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
前記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量でセラトロダスト又はその塩が投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
１日量としてザルトプロフェン又はその塩を２５〜３６０ｍｇ含有する、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
１日量としてオキサプロジン又はその塩を１００〜７００ｍｇ含有する、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
１日量としてチアプロフェン酸又はその塩を６０〜９００ｍｇ含有する、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
１日量としてフルフェナム酸又はその塩を７５〜１２５０ｍｇ含有する、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
１日量としてメフェナム酸又はその塩を１５０〜２２５０ｍｇ含有する、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
１日量としてスリンダク又はその塩を３０〜５００ｍｇ含有する、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
１日量としてエパルレスタット又はその塩を１０〜４００ｍｇ含有する、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
１日量としてザフィルルカスト又はその塩を１０〜２００ｍｇ含有する、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
１日量としてアンレキサノクス又はその塩を１０〜１５０ｍｇ含有する、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
１日量としてセラトロダスト又はその塩を８〜１２０ｍｇ含有する、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
１日１回ないし３回投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
１日１回又は２回投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
１日１回投与される、上記の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
ザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分として含有する、ＶＥＧＦ産生抑制剤。
ザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、スリンダク、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分として含有する、ＶＥＧＦ発現抑制剤。
網膜色素上皮細胞の上皮間葉転換抑制活性を有する化合物を有効成分として含有する、ドルーゼン抑制剤。
前記上皮間葉転換抑制活性を有する化合物が、前記網膜色素上皮細胞における間葉系マーカー又は細胞外マトリックスの発現を抑制する薬剤である、上記のドルーゼン抑制剤。
前記上皮間葉転換抑制活性を有する化合物が、前記網膜色素上皮細胞の運動能の亢進を抑制する薬剤である、上記のドルーゼン抑制剤。
前記間葉系マーカーが、Ｓｎａｉｌ、Ｓｌｕｇ、ＣＤＨ３、ＭＭＰ１、ＭＭＰ７、ＭＭＰ３、ＺＥＢ２、ＣＤＨ２、及びＶＩＭからなる群より選択される少なくとも１種である、上記のドルーゼン抑制剤。
前記細胞外マトリックスが、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ３、ＬＡＭＣ２、ＨＭＭＲ、ＴＮＣ、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＳＲＧＮ、ＦＮ１、ＣＯＬ５Ａ２、ＣＯＬ１３Ａ１、及びＬＡＭＢ３からなる群より選択される少なくとも１種である、上記のドルーゼン抑制剤。
前記間葉系マーカーが、Ｓｎａｉｌ、Ｓｌｕｇ、Ｃａｄｈｅｒｉｎ３、ＭＭＰ１、及びＭＭＰ７からなる群より選択される少なくとも１種であり、並びに／又は、
前記細胞外マトリックスが、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ３、ＬＡＭＣ２、ＨＭＭＲ、及びＴＮＣからなる群より選択される少なくとも１種である、上記のドルーゼン抑制剤。
前記上皮間葉転換抑制活性を有する化合物が、非ステロイド性抗炎症剤、アルドース還元酵素阻害剤、ロイコトリエン受容体拮抗剤、ケミカルメディエーター遊離抑制剤、及び／又はトロンボキサンＡ２受容体拮抗剤である、上記のドルーゼン抑制剤。
前記非ステロイド性抗炎症剤が、プロピオン酸系非ステロイド性抗炎症剤、アミノアリールカルボン酸系非ステロイド性抗炎症剤、又はアリール酢酸系非ステロイド性抗炎症剤であり、
前記ロイコトリエン受容体拮抗剤が、システイニルロイコトリエン１型（ＣｙｓＬＴ１）受容体の拮抗剤又は５−リポキシゲナーゼ阻害剤である、上記のドルーゼン抑制剤。
前記プロピオン酸系非ステロイド性抗炎症剤が、ザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、イブプロフェン、フルルビプロフェン及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種であり、
前記アミノアリールカルボン酸系非ステロイド性抗炎症剤が、フルフェナム酸、メフェナム酸及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種であり、
前記アリール酢酸系非ステロイド性抗炎症剤が、スリンダク及び／若しくはその薬学的に許容できる塩であり、
前記アルドース還元酵素阻害剤が、エパルレスタット及び／若しくはその薬学的に許容できる塩であり、
前記ロイコトリエン受容体拮抗剤が、ザフィルルカスト、モンテルカスト、プランルカスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種であり、
前記ケミカルメディエーター遊離抑制剤が、アンレキサノクス及び／若しくはその薬学的に許容できる塩であり、並びに／又は、
トロンボキサンＡ２受容体拮抗剤が、セラトロダスト及び／若しくはその薬学的に許容できる塩である、上記のドルーゼン抑制剤。
前記上皮間葉転換抑制活性を有する化合物が、Ａｌｉｓｅｒｔｉｂ、ＭＫ−０４５７（Ｔｏｚａｓｅｒｔｉｂ）、ＰＨＡ−７３９３５８（ｄａｎｕｓｅｒｔｉｂ）、ＡＭＧ−９００、Ｂａｒａｓｅｒｔｉｂ、ＣＹＣ１１６、ＭＬＮ８０５４、Ｂａｉｃａｌｉｎ、Ｂａｉｃａｌｅｉｎ、Ｌｕｐｅｏｌ、Ｉｓｔａｎｂｕｌｉｎ Ａ、Ｐｈｙｔｏｌ、Ｄｉｐｈｅｎｙｌ ｄｉｆｌｕｏｒｏｋｅｔｏｎｅ （ＥＦ２４）、Ｃｒｕｃｍｉｎ、Ｐｈｌｏｒｏｇｌｕｃｉｎｏｌ、Ｐｌｕｍｂａｇｉｎ、Ｒａｐａｍｙｃｉｎ、ＦＫ５０６（Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）、Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ、ＬＹ５５０４１０、ＳＢ−５０５１２４、ＳＤ−２０８、ＴＡＰＩ−０、ＴＡＰＩ−１、ＪＮＪ−３８８７７６０５、ＰＦ−０４２１７９０３、ＡＧ１４７８（Ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ）、Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ、Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ、Ｌａｐａｔｉｎｉｂ、ＰＤ１５３０３５、ＰＤ１５８７８０、ＷＨＩ−Ｐ１５４、ＢＭＳ−５３６９２４、Ａ８３−０１、Ｄ４４７６、ＬＹ−３６４９４７、ＳＢ−４３１５４２、ＳＤ−２０８、ＡＺＤ６２４４（Ｓｅｌｕｍｅｔｉｎｉｂ）、ＣＩ−１０４０、ＰＤ０３２５９０１、ＧＤＣ−０９４１（Ｐｉｃｔｉｌｉｓｉｂ）、ＰＩ−１０３、ＰＩＫ−９０、ＺＳＴＫ４７４、ＡＰＩ−２、ＡＺＤ０５３０（Ｓａｒａｃａｔｉｎｉｂ）、ＰＰ１、２−Ｈｙｄｒｏｘｙｃｉｎｎａｍａｌｄｅｈｙｄｅ、５−ａｚａ−ｄＣ、ＢＩ ５７００、Ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ、ＣＸ−４９４５（Ｓｉｌｍｉｔａｓｅｒｔｉｂ）、Ｄｉｓｕｌｆｉｒａｍ、Ｅｒｉｂｕｌｉｎ ｍｅｓｙａｔｅ、Ｅｖｏｄｉａｍｉｎｅ、ＥＷ−７２０３、Ｆａｓｕｄｉｌ、Ｎｉｎｔｅｄａｎｉｂ、Ｆｕｚｈｅｎｇ Ｈｕａｙｕ ｒｅｃｉｐｅ、Ｇｒａｐｅ ｓｅｅｄ ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ、Ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ、Ｈｅｒｂｉｍｙｃｉｎ Ａ、Ｅｎｔｉｎｏｓｔａｔ、Ｈｏｎｏｋｉｏｌ、ＮＰＩ−００５２、Ｍｅｔｈａｃｙｃｌｉｎｅ、Ｄａｓａｔｉｎｉｂ、Ｋｉ２６８９４、ＮＳＣ ７４８５９、ＮＶＰ−ＬＤＥ−２２５（Ｅｒｉｓｍｏｄｅｇｉｂ）、Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ、Ｐｉｎｏｃｅｍｂｒｉｎ、Ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃ Ａｃｉｄ Ｂ、Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ、Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ、Ｓ−Ａｌｌｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅ、Ｓｉｌｉｂｉｎｉｎ ｍｅｇｌｕｍｉｎｅ、Ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ、Ｃｅｎｔｃｈｒｏｍａｎ、ＭＬ３２７、ＧＮ−２５、Ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ Ａ、Ｓａｒａｓｉｎｏｓｉｄｅ Ａ１、Ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔａｔ、Ｄａｎｕｓｅｒｔｉｂ、Ｃｙｓｔａｔｉｎ Ｃ、Ｔｈｙｍｏｑｕｉｎｏｎｅ、Ｕｌｉｎａｓｔａｔｉｎ、Ｄｅｎｄｒｏｆａｌｃｏｎｅｒｏｌ Ａ （ＤＦ−Ａ）、ジンセノサイド（人参サポニン）、ツルウメモドキ種子エキス、サリシン（セイヨウシロヤナギエキス）、サリチル酸、ヤブジラミエキス、オストール、ミュスカダンブドウ皮エキス、Ｔｏｎｇｘｉｎｌｕｏ、プロシアニジンＣ１（桂皮）、アシュワガンダ根エキス（Ｗｉｔｈａｎｉａ ｓｏｍｎｉｆｅｒａ ｒｏｏｔ ｅｘｔｒａｃｔ）、Ｑｉｎｇｙｉｈｕａｊｉ、ローゼルエキス、没食子酸エピガロカテキン、プロアントシアニジン（ブドウ種子エキス）、及びサルビアノリン酸Ｂからなる群より選択される少なくとも１種である、上記のドルーゼン抑制剤。
経口剤又は注射剤である、上記のドルーゼン抑制剤。
前記経口剤が、固形製剤である、上記のドルーゼン抑制剤。
前記固形製剤が、錠剤である、上記のドルーゼン抑制剤。
液剤である、上記のドルーゼン抑制剤。
前記液剤が、眼科用剤又はカプセル剤である、上記のドルーゼン抑制剤。
２０．４μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量でザルトプロフェン又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
１６．８μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量でザルトプロフェン又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
前記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる投与量でザルトプロフェン又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
前記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量でザルトプロフェン又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
３４０．９μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量でオキサプロジン又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
前記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる投与量でオキサプロジン又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
前記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量でオキサプロジン又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
６９．１５μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量でチアプロフェン酸又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
前記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる投与量でチアプロフェン酸又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
前記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量でチアプロフェン酸又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
２７．９１μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量でフルフェナム酸又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
前記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる投与量でフルフェナム酸又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
前記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量でフルフェナム酸又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
３８．５４μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量でメフェナム酸又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
前記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる投与量でメフェナム酸又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
前記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量でメフェナム酸又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
１０．１０μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量でスリンダク又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
前記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる投与量でスリンダク又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
前記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量でスリンダク又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
１２．２μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量でエパルレスタット又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
前記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる投与量でエパルレスタット又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
前記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量でエパルレスタット又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
０．８μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量でザフィルルカスト又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
前記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる投与量でザフィルルカスト又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
前記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量でザフィルルカスト又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
１６．０μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量でアンレキサノクス又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
前記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる投与量でアンレキサノクス又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
前記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量でアンレキサノクス又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
３１．０３μＭ以上のＣｍａｘがもたらされる投与量でセラトロダスト又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
前記Ｃｍａｘの１／２量以上の血中濃度がもたらされる投与量でセラトロダスト又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
前記Ｃｍａｘの１／４量以上の血中濃度がもたらされる投与量でセラトロダスト又はその塩が投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
１日量としてザルトプロフェン又はその塩を２５〜３６０ｍｇ含有する、上記のドルーゼン抑制剤。
１日量としてオキサプロジン又はその塩を１００〜７００ｍｇ含有する、上記のドルーゼン抑制剤。
１日量としてチアプロフェン酸又はその塩を６０〜９００ｍｇ含有する、上記のドルーゼン抑制剤。
１日量としてフルフェナム酸又はその塩を７５〜１２５０ｍｇ含有する、上記のドルーゼン抑制剤。
１日量としてメフェナム酸又はその塩を１５０〜２２５０ｍｇ含有する、上記のドルーゼン抑制剤。
１日量としてスリンダク又はその塩を３０〜５００ｍｇ含有する、上記のドルーゼン抑制剤。
１日量としてエパルレスタット又はその塩を１０〜４００ｍｇ含有する、上記のドルーゼン抑制剤。
１日量としてザフィルルカスト又はその塩を１０〜２００ｍｇ含有する、上記のドルーゼン抑制剤。
１日量としてアンレキサノクス又はその塩を１０〜１５０ｍｇ含有する、上記のドルーゼン抑制剤。
１日量としてセラトロダスト又はその塩を８〜１２０ｍｇ含有する、上記のドルーゼン抑制剤。
１日１回ないし３回投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
１日１回又は２回投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
１日１回投与される、上記のドルーゼン抑制剤。
上記のドルーゼン抑制剤を有効成分として含有する、加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤。
プロピオン酸系非ステロイド性抗炎症剤、アミノアリールカルボン酸系非ステロイド性抗炎症剤、アリール酢酸系非ステロイド性抗炎症剤、アルドース還元酵素阻害剤。ロイコトリエン受容体拮抗剤、ケミカルメディエーター遊離抑制剤、又はトロンボキサンＡ２受容体拮抗剤を有効成分として含有し、
該アルドース還元酵素阻害剤が、エパルレスタット及び／又はその薬学的に許容できる塩である、加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤。
前記プロピオン酸系非ステロイド性抗炎症剤が、ザルトプロフェン、オキサプロジン、イブプロフェン、フルルビプロフェン及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種であり、
前記アミノアリールカルボン酸系非ステロイド性抗炎症剤が、フルフェナム酸、メフェナム酸及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種であり、
前記アリール酢酸系非ステロイド性抗炎症剤が、スリンダク及び／若しくはその薬学的に許容できる塩であり、
前記ロイコトリエン受容体拮抗剤が、ザフィルルカスト、モンテルカスト、プランルカスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種であり、
前記ケミカルメディエーター遊離抑制剤が、アンレキサノクス及び／若しくはその薬学的に許容できる塩であり、
前記トロンボキサンＡ２受容体拮抗剤が、セラトロダスト及び／若しくはその薬学的に許容できる塩である、上記の加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤。
経口剤又は注射剤である、上記の加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤。
前記経口剤が、固形製剤である、上記の加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤。
前記固形製剤が、錠剤である、上記の加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤。
液剤である、上記の加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤。
前記液剤が、眼科用剤又はカプセル剤である、上記の加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤。
前記加齢黄斑変性症が、Ｄｒｙ ＡＭＤである、上記の加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤。
前記加齢黄斑変性症が、Ｗｅｔ ＡＭＤである、上記の加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤。
前記加齢黄斑変性症が、Ｎｏ ＡＭＤ、初期ＡＭＤ及び／又は中期ＡＭＤである、上記の加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤。
血管新生阻害剤と、
上記のドルーゼン抑制剤とを組み合わせてなる、加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤。
前記血管新生阻害剤が、抗ＶＥＧＦ抗体若しくはそのフラグメント、抗ＶＥＧＦ抗体のフラグメントとＩｇＧ分子のＦｃドメインとの融合タンパク質、及び／又は抗血管新生アプタマーである、上記の加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤。
前記血管新生阻害剤が、ベバシズマブ、ラニビズマブ、アフリベルセプト、ペガプタニブナトリウム、ＥＳＢＡ−１００８、ラムパリズマブ、ＭＣ−１１０１、ドキシサイクリンヒクラート、及びエミクススタト塩酸塩からなる群より選択される少なくとも１種である、上記の加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤。
前記ドルーゼン抑制剤が、経口剤又は注射剤である、上記の加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤。
前記経口剤が、固形製剤である、上記の加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤。
前記固形製剤が、錠剤である、上記の加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤。
液剤である、上記の加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤。
前記液剤が、眼科用剤又はカプセル剤である、上記の加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤。
前記加齢黄斑変性症が、Ｄｒｙ ＡＭＤである、上記の加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤。
前記加齢黄斑変性症が、Ｗｅｔ ＡＭＤである、上記の加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤。
前記加齢黄斑変性症が、Ｎｏ ＡＭＤ、初期ＡＭＤ及び／又は中期ＡＭＤである、上記の加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤。
インビトロにおいてドルーゼンを誘導する方法であって、
サイトカイン、増殖因子、及びケモカインからなる群より選択される少なくとも１種を、細胞に接触させることを含む方法。
前記細胞が、網膜色素上皮細胞である、上記の方法。
前記細胞が、ＡＲＰＥ−１９である、上記の方法。
前記サイトカインが、ＩＬ−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１６、ＴＮＦ−α、及びＩＦＮ−γからなる群より選択される少なくとも１種である、上記の方法。
前記増殖因子が、ＴＧＦ−β、ＦＧＦｓ、ＨＧＦ、ＥＧＦ、及びＰＤＧＦからなる群より選択される少なくとも１種である、上記の方法。
前記ケモカインが、ＩＬ−８、ＭＩＰ−１α、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ、及びエオタキシンからなる群より選択される少なくとも１種である、上記の方法。
前記接触の時間が、１０分〜１０８時間である、上記の方法。
前記接触の温度が、４〜５０℃である、上記の方法。
前記ドルーゼンの誘導が、上皮系マーカー、間葉系マーカー、ＥＣＭの分泌、運動能の亢進、及び／又はＦｏｃｕｓの形成を指標として評価されることを含む、上記の方法。
インビトロにおいて、被験薬剤の存在下で、網膜色素上皮細胞における上皮間葉転換の抑制を測定することを含む、ドルーゼン抑制剤の評価又はスクリーニング方法。
インビトロにおいて、被験薬剤の存在下で、網膜色素上皮細胞の集塊の抑制を測定することを含む、ドルーゼン抑制剤の評価又はスクリーニング方法。
インビトロにおいて、被験薬剤の存在下で、網膜色素上皮細胞における上皮間葉転換の抑制を測定することを含む、加齢黄斑変性症予防・治療薬の評価又はスクリーニング方法。
インビトロにおいて、被験薬剤の存在下で、網膜色素上皮細胞の集塊の抑制を測定することを含む、加齢黄斑変性症予防・治療薬の評価又はスクリーニング方法。
サイトカイン、増殖因子、及びケモカインからなる群より選択される少なくとも１種を、前記網膜色素上皮細胞に接触させることを含む、上記の評価又はスクリーニング方法。
前記網膜色素上皮細胞が、ＡＲＰＥ−１９である、上記の評価又はスクリーニング方法。
前記サイトカインが、ＩＬ−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１６、ＴＮＦ−α、及びＩＦＮ−γからなる群より選択される少なくとも１種である、上記の評価又はスクリーニング方法。
前記増殖因子が、ＴＧＦ−β、ＦＧＦｓ、ＨＧＦ、ＥＧＦ、及びＰＤＧＦからなる群より選択される少なくとも１種である、上記の評価又はスクリーニング方法。
前記ケモカインが、ＩＬ−８、ＭＩＰ−１α、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ、及びエオタキシンからなる群より選択される少なくとも１種である、上記の評価又はスクリーニング方法。
前記接触の時間が、１０分〜１０８時間である、上記の評価又はスクリーニング方法。
前記接触の温度が、４〜５０℃である、上記の評価又はスクリーニング方法。
脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤の製造の為の上皮間葉転換抑制活性を有する化合物の使用。
ＶＥＧＦ産生抑制剤の製造の為の上皮間葉転換抑制活性を有する化合物の使用。
ドルーゼン抑制剤の製造の為の上皮間葉転換抑制活性を有する化合物の使用。
加齢黄斑変性症予防及び／又は治療剤の製造の為の上皮間葉転換抑制活性を有する化合物の使用。
前記上皮間葉転換抑制活性を有する化合物が、前記網膜色素上皮細胞における間葉系マーカー又は細胞外マトリックスの発現を抑制する薬剤である、上記化合物の使用。
前記間葉系マーカーが、Ｓｎａｉｌ、Ｓｌｕｇ、ＣＤＨ３、ＭＭＰ１、ＭＭＰ７、ＭＭＰ３、ＺＥＢ２、ＣＤＨ２、及びＶＩＭからなる群より選択される少なくとも１種である、上記化合物の使用。
前記細胞外マトリックスが、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ３、ＬＡＭＣ２、ＨＭＭＲ、ＴＮＣ、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＳＲＧＮ、ＦＮ１、ＣＯＬ５Ａ２、ＣＯＬ１３Ａ１、及びＬＡＭＢ３からなる群より選択される少なくとも１種である、上記化合物の使用。
前記間葉系マーカーが、Ｓｎａｉｌ、Ｓｌｕｇ、Ｃａｄｈｅｒｉｎ３、ＭＭＰ１、及びＭＭＰ７からなる群より選択される少なくとも１種であり、並びに／又は、
前記細胞外マトリックスが、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ３、ＬＡＭＣ２、ＨＭＭＲ、及びＴＮＣからなる群より選択される少なくとも１種である、上記化合物の使用。
前記上皮間葉転換抑制活性を有する化合物が、非ステロイド性抗炎症剤、アルドース還元酵素阻害剤、ロイコトリエン受容体拮抗剤、ケミカルメディエーター遊離抑制剤、及び／又はトロンボキサンＡ２受容体拮抗剤である、上記化合物の使用。
前記非ステロイド性抗炎症剤が、プロピオン酸系非ステロイド性抗炎症剤、アミノアリールカルボン酸系非ステロイド性抗炎症剤、又はアリール酢酸系非ステロイド性抗炎症剤であり、
前記ロイコトリエン受容体拮抗剤が、システイニルロイコトリエン１型（ＣｙｓＬＴ１）受容体の拮抗剤又は５−リポキシゲナーゼ阻害剤である、上記化合物の使用。
前記プロピオン酸系非ステロイド性抗炎症剤が、ザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、イブプロフェン、フルルビプロフェン及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種であり、
前記アミノアリールカルボン酸系非ステロイド性抗炎症剤が、フルフェナム酸、メフェナム酸及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種であり、
前記アリール酢酸系非ステロイド性抗炎症剤が、スリンダク及び／若しくはその薬学的に許容できる塩であり、
前記アルドース還元酵素阻害剤が、エパルレスタット及び／若しくはその薬学的に許容できる塩であり、
前記ロイコトリエン受容体拮抗剤が、ザフィルルカスト、モンテルカスト、プランルカスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種であり、
前記ケミカルメディエーター遊離抑制剤が、アンレキサノクス及び／若しくはその薬学的に許容できる塩であり、並びに／又は、
トロンボキサンＡ２受容体拮抗剤が、セラトロダスト及び／若しくはその薬学的に許容できる塩である、上記化合物の使用。
前記上皮間葉転換抑制活性を有する化合物が、Ａｌｉｓｅｒｔｉｂ、ＭＫ−０４５７（Ｔｏｚａｓｅｒｔｉｂ）、ＰＨＡ−７３９３５８（ｄａｎｕｓｅｒｔｉｂ）、ＡＭＧ−９００、Ｂａｒａｓｅｒｔｉｂ、ＣＹＣ１１６、ＭＬＮ８０５４、Ｂａｉｃａｌｉｎ、Ｂａｉｃａｌｅｉｎ、Ｌｕｐｅｏｌ、Ｉｓｔａｎｂｕｌｉｎ Ａ、Ｐｈｙｔｏｌ、Ｄｉｐｈｅｎｙｌ ｄｉｆｌｕｏｒｏｋｅｔｏｎｅ （ＥＦ２４）、Ｃｒｕｃｍｉｎ、Ｐｈｌｏｒｏｇｌｕｃｉｎｏｌ、Ｐｌｕｍｂａｇｉｎ、Ｒａｐａｍｙｃｉｎ、ＦＫ５０６（Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）、Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ、ＬＹ５５０４１０、ＳＢ−５０５１２４、ＳＤ−２０８、ＴＡＰＩ−０、ＴＡＰＩ−１、ＪＮＪ−３８８７７６０５、ＰＦ−０４２１７９０３、ＡＧ１４７８（Ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ）、Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ、Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ、Ｌａｐａｔｉｎｉｂ、ＰＤ１５３０３５、ＰＤ１５８７８０、ＷＨＩ−Ｐ１５４、ＢＭＳ−５３６９２４、Ａ８３−０１、Ｄ４４７６、ＬＹ−３６４９４７、ＳＢ−４３１５４２、ＳＤ−２０８、ＡＺＤ６２４４（Ｓｅｌｕｍｅｔｉｎｉｂ）、ＣＩ−１０４０、ＰＤ０３２５９０１、ＧＤＣ−０９４１（Ｐｉｃｔｉｌｉｓｉｂ）、ＰＩ−１０３、ＰＩＫ−９０、ＺＳＴＫ４７４、ＡＰＩ−２、ＡＺＤ０５３０（Ｓａｒａｃａｔｉｎｉｂ）、ＰＰ１、２−Ｈｙｄｒｏｘｙｃｉｎｎａｍａｌｄｅｈｙｄｅ、５−ａｚａ−ｄＣ、ＢＩ ５７００、Ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ、ＣＸ−４９４５（Ｓｉｌｍｉｔａｓｅｒｔｉｂ）、Ｄｉｓｕｌｆｉｒａｍ、Ｅｒｉｂｕｌｉｎ ｍｅｓｙａｔｅ、Ｅｖｏｄｉａｍｉｎｅ、ＥＷ−７２０３、Ｆａｓｕｄｉｌ、Ｎｉｎｔｅｄａｎｉｂ、Ｆｕｚｈｅｎｇ Ｈｕａｙｕ ｒｅｃｉｐｅ、Ｇｒａｐｅ ｓｅｅｄ ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ、Ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ、Ｈｅｒｂｉｍｙｃｉｎ Ａ、Ｅｎｔｉｎｏｓｔａｔ、Ｈｏｎｏｋｉｏｌ、ＮＰＩ−００５２、Ｍｅｔｈａｃｙｃｌｉｎｅ、Ｄａｓａｔｉｎｉｂ、Ｋｉ２６８９４、ＮＳＣ ７４８５９、ＮＶＰ−ＬＤＥ−２２５（Ｅｒｉｓｍｏｄｅｇｉｂ）、Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ、Ｐｉｎｏｃｅｍｂｒｉｎ、Ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃ Ａｃｉｄ Ｂ、Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ、Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ、Ｓ−Ａｌｌｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅ、Ｓｉｌｉｂｉｎｉｎ ｍｅｇｌｕｍｉｎｅ、Ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ、Ｃｅｎｔｃｈｒｏｍａｎ、ＭＬ３２７、ＧＮ−２５、Ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ Ａ、Ｓａｒａｓｉｎｏｓｉｄｅ Ａ１、Ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔａｔ、Ｄａｎｕｓｅｒｔｉｂ、Ｃｙｓｔａｔｉｎ Ｃ、Ｔｈｙｍｏｑｕｉｎｏｎｅ、Ｕｌｉｎａｓｔａｔｉｎ、Ｄｅｎｄｒｏｆａｌｃｏｎｅｒｏｌ Ａ （ＤＦ−Ａ）、ジンセノサイド（人参サポニン）、ツルウメモドキ種子エキス、サリシン（セイヨウシロヤナギエキス）、サリチル酸、ヤブジラミエキス、オストール、ミュスカダンブドウ皮エキス、Ｔｏｎｇｘｉｎｌｕｏ、プロシアニジンＣ１（桂皮）、アシュワガンダ根エキス（Ｗｉｔｈａｎｉａ ｓｏｍｎｉｆｅｒａ ｒｏｏｔ ｅｘｔｒａｃｔ）、Ｑｉｎｇｙｉｈｕａｊｉ、ローゼルエキス、没食子酸エピガロカテキン、プロアントシアニジン（ブドウ種子エキス）、及びサルビアノリン酸Ｂからなる群より選択される少なくとも１種である、上記化合物の使用。
経口剤又は注射剤である、上記化合物の使用。
前記経口剤が、固形製剤である、上記化合物の使用。
前記固形製剤が、錠剤である、上記化合物の使用。
液剤である、上記化合物の使用。
前記液剤が、眼科用剤又はカプセル剤である、上記化合物の使用。
脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療に使用される為の上皮間葉転換抑制活性を有する化合物。
ＶＥＧＦの産生抑制に使用される為の上皮間葉転換抑制活性を有する化合物。
ドルーゼン抑制に使用される為の上皮間葉転換抑制活性を有する化合物。
加齢黄斑変性症予防及び／又は治療に使用される為の上皮間葉転換抑制活性を有する化合物。
前記上皮間葉転換抑制活性を有する化合物が、前記網膜色素上皮細胞における間葉系マーカー又は細胞外マトリックスの発現を抑制する薬剤である、上記の化合物。
前記間葉系マーカーが、Ｓｎａｉｌ、Ｓｌｕｇ、ＣＤＨ３、ＭＭＰ１、ＭＭＰ７、ＭＭＰ３、ＺＥＢ２、ＣＤＨ２、及びＶＩＭからなる群より選択される少なくとも１種である、上記の化合物。
前記細胞外マトリックスが、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ３、ＬＡＭＣ２、ＨＭＭＲ、ＴＮＣ、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＳＲＧＮ、ＦＮ１、ＣＯＬ５Ａ２、ＣＯＬ１３Ａ１、及びＬＡＭＢ３からなる群より選択される少なくとも１種である、上記の化合物。
前記間葉系マーカーが、Ｓｎａｉｌ、Ｓｌｕｇ、Ｃａｄｈｅｒｉｎ３、ＭＭＰ１、及びＭＭＰ７からなる群より選択される少なくとも１種であり、並びに／又は、
前記細胞外マトリックスが、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ３、ＬＡＭＣ２、ＨＭＭＲ、及びＴＮＣからなる群より選択される少なくとも１種である、上記の化合物。
前記上皮間葉転換抑制活性を有する化合物が、非ステロイド性抗炎症剤、アルドース還元酵素阻害剤、ロイコトリエン受容体拮抗剤、ケミカルメディエーター遊離抑制剤、及び／又はトロンボキサンＡ２受容体拮抗剤である、上記の化合物。
前記非ステロイド性抗炎症剤が、プロピオン酸系非ステロイド性抗炎症剤、アミノアリールカルボン酸系非ステロイド性抗炎症剤、又はアリール酢酸系非ステロイド性抗炎症剤であり、
前記ロイコトリエン受容体拮抗剤が、システイニルロイコトリエン１型（ＣｙｓＬＴ１）受容体の拮抗剤又は５−リポキシゲナーゼ阻害剤である、上記の化合物。
前記プロピオン酸系非ステロイド性抗炎症剤が、ザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、イブプロフェン、フルルビプロフェン及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種であり、
前記アミノアリールカルボン酸系非ステロイド性抗炎症剤が、フルフェナム酸、メフェナム酸及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種であり、
前記アリール酢酸系非ステロイド性抗炎症剤が、スリンダク及び／若しくはその薬学的に許容できる塩であり、
前記アルドース還元酵素阻害剤が、エパルレスタット及び／若しくはその薬学的に許容できる塩であり、
前記ロイコトリエン受容体拮抗剤が、ザフィルルカスト、モンテルカスト、プランルカスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種であり、
前記ケミカルメディエーター遊離抑制剤が、アンレキサノクス及び／若しくはその薬学的に許容できる塩であり、並びに／又は、
トロンボキサンＡ２受容体拮抗剤が、セラトロダスト及び／若しくはその薬学的に許容できる塩である、上記の化合物。
前記上皮間葉転換抑制活性を有する化合物が、Ａｌｉｓｅｒｔｉｂ、ＭＫ−０４５７（Ｔｏｚａｓｅｒｔｉｂ）、ＰＨＡ−７３９３５８（ｄａｎｕｓｅｒｔｉｂ）、ＡＭＧ−９００、Ｂａｒａｓｅｒｔｉｂ、ＣＹＣ１１６、ＭＬＮ８０５４、Ｂａｉｃａｌｉｎ、Ｂａｉｃａｌｅｉｎ、Ｌｕｐｅｏｌ、Ｉｓｔａｎｂｕｌｉｎ Ａ、Ｐｈｙｔｏｌ、Ｄｉｐｈｅｎｙｌ ｄｉｆｌｕｏｒｏｋｅｔｏｎｅ （ＥＦ２４）、Ｃｒｕｃｍｉｎ、Ｐｈｌｏｒｏｇｌｕｃｉｎｏｌ、Ｐｌｕｍｂａｇｉｎ、Ｒａｐａｍｙｃｉｎ、ＦＫ５０６（Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）、Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ、ＬＹ５５０４１０、ＳＢ−５０５１２４、ＳＤ−２０８、ＴＡＰＩ−０、ＴＡＰＩ−１、ＪＮＪ−３８８７７６０５、ＰＦ−０４２１７９０３、ＡＧ１４７８（Ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ）、Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ、Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ、Ｌａｐａｔｉｎｉｂ、ＰＤ１５３０３５、ＰＤ１５８７８０、ＷＨＩ−Ｐ１５４、ＢＭＳ−５３６９２４、Ａ８３−０１、Ｄ４４７６、ＬＹ−３６４９４７、ＳＢ−４３１５４２、ＳＤ−２０８、ＡＺＤ６２４４（Ｓｅｌｕｍｅｔｉｎｉｂ）、ＣＩ−１０４０、ＰＤ０３２５９０１、ＧＤＣ−０９４１（Ｐｉｃｔｉｌｉｓｉｂ）、ＰＩ−１０３、ＰＩＫ−９０、ＺＳＴＫ４７４、ＡＰＩ−２、ＡＺＤ０５３０（Ｓａｒａｃａｔｉｎｉｂ）、ＰＰ１、２−Ｈｙｄｒｏｘｙｃｉｎｎａｍａｌｄｅｈｙｄｅ、５−ａｚａ−ｄＣ、ＢＩ ５７００、Ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ、ＣＸ−４９４５（Ｓｉｌｍｉｔａｓｅｒｔｉｂ）、Ｄｉｓｕｌｆｉｒａｍ、Ｅｒｉｂｕｌｉｎ ｍｅｓｙａｔｅ、Ｅｖｏｄｉａｍｉｎｅ、ＥＷ−７２０３、Ｆａｓｕｄｉｌ、Ｎｉｎｔｅｄａｎｉｂ、Ｆｕｚｈｅｎｇ Ｈｕａｙｕ ｒｅｃｉｐｅ、Ｇｒａｐｅ ｓｅｅｄ ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ、Ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ、Ｈｅｒｂｉｍｙｃｉｎ Ａ、Ｅｎｔｉｎｏｓｔａｔ、Ｈｏｎｏｋｉｏｌ、ＮＰＩ−００５２、Ｍｅｔｈａｃｙｃｌｉｎｅ、Ｄａｓａｔｉｎｉｂ、Ｋｉ２６８９４、ＮＳＣ ７４８５９、ＮＶＰ−ＬＤＥ−２２５（Ｅｒｉｓｍｏｄｅｇｉｂ）、Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ、Ｐｉｎｏｃｅｍｂｒｉｎ、Ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃ Ａｃｉｄ Ｂ、Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ、Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ、Ｓ−Ａｌｌｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅ、Ｓｉｌｉｂｉｎｉｎ ｍｅｇｌｕｍｉｎｅ、Ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ、Ｃｅｎｔｃｈｒｏｍａｎ、ＭＬ３２７、ＧＮ−２５、Ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ Ａ、Ｓａｒａｓｉｎｏｓｉｄｅ Ａ１、Ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔａｔ、Ｄａｎｕｓｅｒｔｉｂ、Ｃｙｓｔａｔｉｎ Ｃ、Ｔｈｙｍｏｑｕｉｎｏｎｅ、Ｕｌｉｎａｓｔａｔｉｎ、Ｄｅｎｄｒｏｆａｌｃｏｎｅｒｏｌ Ａ （ＤＦ−Ａ）、ジンセノサイド（人参サポニン）、ツルウメモドキ種子エキス、サリシン（セイヨウシロヤナギエキス）、サリチル酸、ヤブジラミエキス、オストール、ミュスカダンブドウ皮エキス、Ｔｏｎｇｘｉｎｌｕｏ、プロシアニジンＣ１（桂皮）、アシュワガンダ根エキス（Ｗｉｔｈａｎｉａ ｓｏｍｎｉｆｅｒａ ｒｏｏｔ ｅｘｔｒａｃｔ）、Ｑｉｎｇｙｉｈｕａｊｉ、ローゼルエキス、没食子酸エピガロカテキン、プロアントシアニジン（ブドウ種子エキス）、及びサルビアノリン酸Ｂからなる群より選択される少なくとも１種である、上記の化合物。
経口剤又は注射剤である、上記の化合物。
前記経口剤が、固形製剤の形態で提供される、上記の化合物。
前記固形製剤が、錠剤である、上記の化合物。
液剤の形態で提供される、上記の化合物。
前記液剤が、眼科用剤又はカプセル剤である、上記の化合物。
本発明を以下の実施例によって具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
試験例１〜試験例３及び参考試験例２−４は、ＣＮＶの予防及び／又は治療に関する試験を示す。
試験例４〜試験例８は、ドルーゼンの予防及び／又は治療に関する試験を示す。
［試験例１．ＥＭＴ細胞モデルの構築］
試験例１−１ ＲＰＥ細胞におけるＥＭＴの誘導条件の検討
発明者らは、ＲＰＥ細胞（網膜色素上皮細胞株：ＡＲＰＥ−１９、以下同じ）に対して、サイトカインや増殖因子（ＴＮＦ−α／ＩＬ−１β／ＴＧＦ−β）を用いて、１０通りの条件により刺激を試みる実験を行った結果、顕著なＥＭＴ誘導を引き起こすことを見出した。サイトカインや増殖因子を用いたＥＭＴ誘導の細胞モデルは、ＣＮＶを伴う患者における、推測されるＥＭＴ誘導メカニズムを反映したものと考えられる。
その１０通りの条件は、以下のとおりである。
（１）ＴＮＦ−α １００ｎｇ／ｍＬ
（２）ＩＬ−１β １００ｎｇ／ｍＬ
（３）ＩＬ−１β ２０ｎｇ／ｍＬ
（４）ＴＮＦ−α ５００ｎｇ／ｍＬ ＋ ＴＧＦ−β ５ｎｇ／ｍＬ
（５）ＴＮＦ−α ２００ｎｇ／ｍＬ ＋ ＴＧＦ−β ５ｎｇ／ｍＬ
（６）ＴＮＦ−α １００ｎｇ／ｍＬ ＋ ＴＧＦ−β ５ｎｇ／ｍＬ
（７）ＴＮＦ−α １００ｎｇ／ｍＬ ＋ ＴＧＦ−β １０ｎｇ／ｍＬ
（８）ＴＮＦ−α １００ｎｇ／ｍＬ ＋ ＴＧＦ−β ２５ｎｇ／ｍＬ
（９）ＩＬ−１β １００ｎｇ／ｍＬ ＋ ＴＧＦ−β ５ｎｇ／ｍＬ
（１０）ＩＬ−１β ２０ｎｇ／ｍＬ ＋ ＴＧＦ−β ５ｎｇ／ｍＬ
試験例１−２ ＥＭＴマーカー分子の発現変化によるＥＭＴの検証
刺激後のＲＰＥ細胞からＲＮＡを抽出し、発現変化を検証した。
プレートにＲＰＥ細胞（ＡＲＰＥ−１９）を播種し、５日間、３７℃にてインキュベートした。ＲＰＥ細胞に対して、試験例１−１に記載の条件によりＥＭＴを誘導し、ＥＭＴ誘導４８時間後に細胞を回収した。回収した細胞をＰＢＳで洗浄し、ＲＬＴ ｂｕｆｆｅｒ（ＱＩＡＧＥＮ社） ３５０μＬを加えて、ＲＮＡ採取用ライセートを作成した。ライセートからＲＮｅａｓｙ Ｍｉｃｒｏ ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社 ＃７４００４）を用いてトータルＲＮＡを抽出し、得られたＲＮＡ２μｇからＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ＳｕｐｅｒＭｉｘ ｆｏｒ ｑＲＴ−ＰＣＲ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社 ＃１１７５２−２５０）を用いてｃＤＮＡを作製した。得られたｃＤＮＡ５０ｎｇを鋳型として、リアルタイムＰＣＲ（ＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ ７５００ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ）を製造業者のプロトコールに従って行い、各遺伝子のｍＲＮＡの発現を定量分析した。各遺伝子に対する特異的プライマーはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社より購入した。各遺伝子Ｃｔ（Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ Ｃｙｃｌｅ）値は内在性コントロールによりノーマライズ後、非処理のサンプルに対する割合を算出した。結果を図１に示す。
図１Ａ及びＢに示すように、刺激後のＲＰＥ細胞では、上皮系マーカーであるＥ−Ｃａｄｈｅｒｉｎの発現が低下し（図１Ａ）、間葉系マーカーであるＮ−Ｃａｄｈｅｒｉｎの発現が亢進していた（図１Ｂ）。このようなＣａｄｈｅｒｉｎ ｓｗｉｔｃｈｉｎｇは、ＥＭＴの代表的な現象である。また、フィブロネクチンに代表される間葉系マーカー（図１Ｃ）およびＥＭＴ関連転写因子群（Ｓｎａｉｌ、Ｓｌｕｇ、ＺＥＢ１）の亢進（図１Ｅ〜Ｇ）、及びＩ型Ｃｏｌｌａｇｅｎ（ＣＯＬ１Ａ１）に代表されるＥＣＭの発現亢進が確認され（図１Ｄ）、ＲＰＥ細胞では刺激によりＥＭＴが誘導されることを確認した。
試験例１−３ マイクロアレイによる経時的なＥＭＴマーカー発現変化の検証
ＥＭＴ誘導時間における、その時点でのＥＭＴ誘導状態の解析を実施した。
プレートにＲＰＥ細胞（ＡＲＰＥ−１９）を播種し、５日間、３７℃にてインキュベートした。ＲＰＥ細胞に対して、試験例１−１に記載の条件によりＥＭＴを誘導し、ＥＭＴ誘導１時間後、４時間後、１２時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後に細胞を回収した。回収した細胞をＰＢＳで洗浄し、ＲＬＴ ｂｕｆｆｅｒ ３５０μＬを加えて、ＲＮＡ採取用ライセートを作製した。ライセートからＲＮｅａｓｙ Ｍｉｃｒｏ ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社 ＃７４００４）を用いてトータルＲＮＡを抽出し、Ｌｏｗ Ｉｎｐｕｔ ＱｕｉｃｋＡｍｐ Ｌａｂｅｌｉｎｇ ｋｉｔ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社 ＃５１９０−２３０５）を用いて蛍光ラベルした。ラベル化したｃＲＮＡはＷｈｏｌｅ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｏｌｉｇｏ−ＤＮＡ Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ Ｋｉｔ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社 ＃Ｇ４１１２Ｆ）に製造業者の定めるプロトコルに従ってハイブリダイズした。ハイブリダイズしたスライドは、Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｗａｓｈ Ｐａｃｋ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社 ＃５１８８−５３２７）を用いて洗浄し、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ Ｓｃａｎｎｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社 ＃Ｇ２５０５Ｂ）でスキャニングを行った。スキャン画像は、Ｆｅａｔｕｒｅ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｖｅｒｓｉｏｎ ９．５．１（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を用いて数値化した。数値データは、Ｇｒｏｂａｌ Ｎｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ法によって標準化した。結果を図２に示す。
図２に示すように、ＥＭＴマーカーの低下や亢進のピークは各遺伝子によって、ＥＭＴ誘導後１２時間後であったり、７２時間後であったりと、バラツキは生じたが、低下した上皮系マーカー並びに亢進した間葉系マーカー及びＥＣＭは以下のとおりである。
ＥＭＴ誘導により低下した上皮系マーカーとしては、ＩＤ１、ＩＤ２、ＭＵＣ１、Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ１８（ＫＲＴ１８）、ＴＨＢＳ１、ＶＩＬ２、Ｅ−Ｃａｄｈｅｒｉｎ（ＣＤＨ１）が確認された。また、増殖因子であるＴＧＦＢ２の低下が確認された。
ＥＭＴ誘導により亢進した間葉系マーカー及びＥＣＭとしては、ＴＷＩＳＴ１、ＶＩＭ、ＣＤ４４、ＺＥＢ１、ＲＤＸ、ＭＭＰ９、ＦＮ１、ＲＨＯＡ、ＺＥＢ２、ＭＭＰ２、ＴＪＰ１、ＣＴＮＮＢ１、ＭＭＰ３、ＥＴＳ１、ＳＮＡＩ１、ＳＮＡＩ２、ＨＡＳ２、ＳＥＲＰＩＮＥ１、ＣＤＨ２、ＭＳＮ、ＴＣＦ３、ＳＤＣ１、ＩＴＧＡＶ、ＣＯＬ１Ａ１、ＳＰＡＲＣが確認された。また、増殖因子であるＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＴＧＦＢ１の亢進が確認された。
［試験例２．ＣＮＶ抑制試験］
試験例２−１ ＥＭＴマーカーの発現変化１
５種の化合物（オキサプロジン、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、ザルトプロフェン）について、上記の細胞モデルを用いてＥＭＴ抑制効果を評価した。
プレートにＲＰＥ細胞（ＡＲＰＥ−１９）を播種し、５日間、３７℃にてインキュベートした。ＲＰＥ細胞に対して、試験例１−１に記載の条件によりＥＭＴを誘導し、同時に各化合物（オキサプロジン、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、ザルトプロフェン）を添加し、ＥＭＴ誘導４８時間後に細胞を回収した。コントロールとして、評価化合物（被験薬剤）を非添加のサンプルを用いた。回収した細胞をＰＢＳで洗浄し、ＲＬＴ ｂｕｆｆｅｒ ３５０μＬを加えて、ＲＮＡ採取用ライセートを作成した。各化合物は以下の濃度で用いた。オキサプロジン：３００μＭ、エパルレスタット：３０μＭ、ザフィルルカスト：３μＭ、アンレキサノクス：３０μＭ、ザルトプロフェン：３０μＭ。ライセートからＲＮｅａｓｙ Ｍｉｃｒｏ ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社 ＃７４００４）を用いてトータルＲＮＡを抽出し、得られたＲＮＡ２μｇからＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ＳｕｐｅｒＭｉｘ ｆｏｒ ｑＲＴ−ＰＣＲ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社 ＃１１７５２−２５０）を用いてｃＤＮＡを作製した。得られたｃＤＮＡ５０ｎｇを鋳型として、リアルタイムＰＣＲ（ＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ ７５００ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ）を製造業者のプロトコールに従って行い、各遺伝子のｍＲＮＡの発現を定量分析した。各遺伝子に対する特異的プライマーはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社より購入した。各遺伝子Ｃｔ（Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ Ｃｙｃｌｅ）値は内在性コントロールによりノーマライズ後、非処理のサンプルに対する割合を算出した。結果を図３〜図７に示す。
図３〜図７の各グラフにおいて、左の棒グラフは、ＥＭＴが誘導されていない時の各遺伝子の発現量を示している。真ん中の棒グラフは、ＥＭＴ誘導時の各遺伝子の発現量を示している。右の棒グラフは、ＥＭＴ抑制化合物投与時の各遺伝子の発現量を示している。また、図３〜図７は、ＥＭＴ抑制化合物として、それぞれオキサプロジン、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、ザルトプロフェンを用いた結果を示している。
本明細書において、各ＥＭＴマーカーは以下のように略称でも記載される。
カドヘリン（Ｃａｄｈｅｒｉｎ）：ＣＤＨ（ＣＤＨ２、ＣＤＨ３等）
マトリックスメタロプロティナーゼ：ＭＭＰ（ＭＭＰ１、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７等）
フィブロネクチン：ＦＮ（ＦＮ１等）
ビメンチン：ＶＩＭ
コラーゲンタイプ１α１：ＣＯＬ１Ａ１
コラーゲンタイプ１α２：ＣＯＬ１Ａ２
コラーゲンタイプ５α２：ＣＯＬ５Ａ２
コラーゲンタイプ５α３：ＣＯＬ５Ａ３
コラーゲンタイプ６α３：ＣＯＬ６Ａ３
コラーゲンタイプ１３α１：ＣＯＬ１３Ａ１
ラミニンβ３：ＬＡＭＢ３
ラミニンγ２：ＬＡＭＣ２
Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｍｏｔｉｌｉｔｙ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＨＭＭＲ
テネイシンＣ：ＴＮＣ
Ｚｉｎｃ Ｆｉｎｇｅｒ Ｅ−Ｂｏｘ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｈｏｍｅｏｂｏｘ ２：ＺＥＢ２
セルグリシン（Ｓｅｒｇｌｙｃｉｎ）：ＳＲＧＮ
ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ ｓｕｌｆａｔｅ ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ ４：ＣＳＰＧ４
図３〜７の各グラフにおいて、第１段目は、左からＳｎａｉｌ、Ｓｌｕｇ、ＣＤＨ３、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ３であり、第２段目は、左からＭＭＰ１、ＭＭＰ７、ＬＡＭＣ２、ＨＭＭＲ、ＴＮＣである。
図３（オキサプロジン）の第３段目は、左からＺＥＢ２、ＭＭＰ３、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＳＰＧ４であり、第４段目は、ＳＲＧＮである。
図４（エパルレスタット）の第３段目は、左からＺＥＢ２、ＣＤＨ２、ＦＮ１、ＶＩＭ、ＣＯＬ１Ａ１であり、第４段目は、左からＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ５Ａ２、ＣＯＬ１３Ａ１、ＣＳＰＧ４、ＳＲＧＮである。
図５（ザフィルルカスト）の第３段目は、左からＭＭＰ３、ＣＯＬ１３Ａ１、ＬＡＭＢ３、ＣＳＰＧ４である。
図６（アンレキサノクス）の第３段目は、左からＺＥＢ２、ＣＤＨ２、ＭＭＰ３、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１３Ａ１である。
図７（ザルトプロフェン）の第３段目は、左からＺＥＢ２、ＦＮ１、ＣＯＬ１３Ａ１、ＣＳＰＧ４である。
図３〜図７に示すように、ＥＭＴマーカーのうち、間葉系マーカーであるＳｎａｉｌ、Ｓｌｕｇ、ＣＤＨ３、ＭＭＰ１、ＭＭＰ７、及びＥＣＭであるＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ３、ＬＡＭＣ２、ＨＭＭＲ、ＴＮＣは、いずれのＥＭＴ抑制化合物を適用した場合であっても発現が抑制された。これにより、これらの１０種のＥＭＴマーカーは、ＥＭＴ抑制化合物により共通して抑制される指標となることが確認された。これらの１０種以外のＥＭＴマーカーであっても、図３に示すように、オキサプロジンでは、ＺＥＢ２、ＭＭＰ３、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＳＰＧ４、ＳＲＧＮの発現低下が確認された。図４に示すように、エパルレスタットでは、ＺＥＢ２、ＣＤＨ２、ＦＮ１、ＶＩＭ、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ５Ａ２、ＣＯＬ１３Ａ１、ＣＳＰＧ４、ＳＲＧＮの発現低下が確認された。図５に示すように、ザフィルルカストでは、ＭＭＰ３、ＣＯＬ１３Ａ１、ＬＡＭＢ３、ＣＳＰＧ４の発現低下が確認された。図６に示すように、アンレキサノクスでは、ＺＥＢ２、ＣＤＨ２、ＭＭＰ３、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１３Ａ１の発現低下が確認された。図７に示すように、ザルトプロフェンでは、ＺＥＢ２、ＦＮ１、ＣＯＬ１３Ａ１、ＣＳＰＧ４の発現低下が確認された。これらのＥＭＴマーカーも、ＥＭＴ抑制化合物により抑制される指標となり得ることが確認された。
図３〜図７により、５つの化合物（オキサプロジン、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、ザルトプロフェン）は、ＥＭＴを顕著に抑制することが示された。これらの化合物は、ＥＭＴを顕著に抑制することにより、ＣＮＶの発生や伸展に関与するＶＥＧＦ等の産生を抑制することに繋がり、ＣＮＶを根本から予防及び／又は治療できると考えられる。
試験例２−２ ＥＭＴマーカーの発現変化２
５種の化合物（フルフェナム酸アルミニウム（添加濃度：２８μＭ（Ｃｍａｘ））、メフェナム酸（添加濃度：３９μＭ（Ｃｍａｘ））、スリンダク（添加濃度：１００μＭ）、チアプロフェン酸（添加濃度：１０００μＭ）、セラトロダスト（添加濃度：３１μＭ（Ｃｍａｘ）））について、試験例２−１と同様の方法により、ＥＭＴマーカーの発現変化を評価した。結果をそれぞれ図８〜図１２に示す。
図８（フルフェナム酸アルミニウム）の第１段目は、左からＳｎａｉｌ、Ｓｌｕｇ、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ３、ＭＭＰ１であり、第２段目は、左からＭＭＰ７、ＬＡＭＣ２、ＨＭＭＲ、ＴＮＣ、ＦＮ１であり、第３段目は、左からＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ１３Ａ１、ＣＤＨ２、ＭＭＰ３であり、第４段目は、左からＶＩＭ、ＣＳＰＧ４である。
図９（メフェナム酸）の第１段目は、左からＳｎａｉｌ、ＣＤＨ３、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ３、ＭＭＰ１であり、第２段目は、左からＭＭＰ７、ＬＡＭＣ２、ＨＭＭＲ、ＴＮＣ、ＦＮ１であり、第３段目は、左からＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ１３Ａ１、ＭＭＰ３、ＶＩＭであり、第４段目は、ＣＳＰＧ４である。
図１０（スリンダク）の第１段目は、左からＳｎａｉｌ、Ｓｌｕｇ、ＣＤＨ３、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ３であり、第２段目は、左からＭＭＰ１、ＭＭＰ７、ＬＡＭＣ２、ＨＭＭＲ、ＴＮＣであり、第３段目は、左からＦＮ１、ＣＤＨ２、ＭＭＰ３、ＶＩＭ、ＣＯＬ１Ａ１であり、第４段目は、左からＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ１３Ａ１、ＣＳＰＧ４、ＺＥＢ２である。
図１１（チアプロフェン酸）の第１段目は、左からＳｎａｉｌ、Ｓｌｕｇ、ＣＤＨ３、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ３であり、第２段目は、左からＭＭＰ１、ＭＭＰ７、ＬＡＭＣ２、ＨＭＭＲ、ＴＮＣであり、第３段目は、左からＦＮ１、ＣＤＨ２、ＭＭＰ３、ＶＩＭ、ＣＯＬ１Ａ１であり、第４段目は、左からＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ１３Ａ１、ＣＳＰＧ４、ＺＥＢ２である。
図１２（セラトロダスト）の第１段目は、左からＳｎａｉｌ、ＣＤＨ３、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ３、ＭＭＰ１であり、第２段目は、左からＭＭＰ７、ＬＡＭＣ２、ＨＭＭＲ、ＴＮＣ、ＦＮ１であり、第３段目は、左からＣＤＨ２、ＭＭＰ３、ＶＩＭ、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２であり、第４段目は、左からＣＯＬ１３Ａ１、ＣＳＰＧ４、ＺＥＢ２である。
図８〜図１２に示すように、５種の化合物（フルフェナム酸アルミニウム、メフェナム酸、スリンダク、チアプロフェン酸、セラトロダスト）においても、ＥＭＴ誘導時におけるＥＭＴマーカーの発現を顕著に抑制することが示された。これらの化合物は、ＥＭＴを顕著に抑制することにより、ＣＮＶの発生や伸展に関与するＶＥＧＦ等の産生を抑制することに繋がり、ＣＮＶを根本から予防及び／又は治療できると考えられる。
試験例２−３ ＶＥＧＦの発現変化１
３つの化合物（オキサプロジン、エパルレスタット、ザルトプロフェン）について、上記の細胞モデルを用いてＶＥＧＦ抑制効果を評価した。
プレートにＲＰＥ細胞（ＡＲＰＥ−１９）を播種し、５日間、３７℃にてインキュベートした。ＲＰＥ細胞に対して、試験例１−１に記載の条件によりＥＭＴを誘導し、同時にオキサプロジン（Ｃｍａｘ：３４０．９μＭ）、エパルレスタット（Ｃｍａｘ：１２．２μＭ）、又はザルトプロフェン（Ｃｍａｘ：２０．４μＭ）を添加し、ＥＭＴ誘導４８時間後に細胞を回収した。各化合物は、Ｃｍａｘ、Ｃｍａｘの１／２濃度、Ｃｍａｘの１／４濃度で添加した。コントロールとして、評価化合物（被験薬剤）を非添加のサンプルを用いた。回収した細胞をＰＢＳで洗浄し、ＲＬＴ ｂｕｆｆｅｒ ３５０μＬを加えて、ＲＮＡ採取用ライセートを作成した。ライセートからＲＮｅａｓｙ Ｍｉｃｒｏ ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社 ＃７４００４）を用いてトータルＲＮＡを抽出し、得られたＲＮＡ２μｇからＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ＳｕｐｅｒＭｉｘ ｆｏｒ ｑＲＴ−ＰＣＲ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社 ＃１１７５２−２５０）を用いてｃＤＮＡを作製した。得られたｃＤＮＡ５０ｎｇを鋳型として、リアルタイムＰＣＲ（ＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ ７５００ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ）を製造業者のプロトコールに従って行い、各遺伝子のｍＲＮＡの発現を定量分析した。各遺伝子に対する特異的プライマーはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社より購入した。各遺伝子Ｃｔ（Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ Ｃｙｃｌｅ）値は内在性コントロールによりノーマライズ後、非処理のサンプルに対する割合を算出した。また、各結果について有意差検定（Ｓｔｕｄｅｎｔ ｔ ｔｅｓｔ）を行い、ｐ＜０．０５である場合に「*」、ｐ＜０．０１である場合に「**」、を付した。結果を図１３〜図１５に示す。
図１３に示すように、ＲＰＥ細胞において、ＶＥＧＦはＥＭＴの誘導によりｍＲＮＡ発現量が亢進した。オキサプロジンはＶＥＧＦの発現亢進を濃度依存的に抑制した。Ｃｍａｘの１／４濃度においても顕著なＶＥＧＦ抑制効果が認められた（Ａ）。間葉系マーカーであるフィブロネクチン、Ｓｎａｉｌ、ビメンチンはＥＭＴの誘導により発現量が亢進した。オキサプロジンは濃度依存的にこれらの発現亢進を抑制した（それぞれＢ〜Ｄ）。
図１４に示すように、ＲＰＥ細胞において、ＶＥＧＦはＥＭＴの誘導によりｍＲＮＡ発現量が亢進した。エパルレスタットはＶＥＧＦの発現亢進を濃度依存的に抑制した（Ａ）。間葉系マーカーであるフィブロネクチン、Ｓｎａｉｌ、ビメンチンはＥＭＴの誘導により発現量が亢進した。エパルレスタットは濃度依存的にこれらの発現亢進を抑制した（それぞれＢ〜Ｄ）。
図１５に示すように、ＲＰＥ細胞において、ＶＥＧＦはＥＭＴの誘導によりｍＲＮＡ発現量が亢進した。ザルトプロフェンはＶＥＧＦの発現亢進を濃度依存的に抑制した。Ｃｍａｘの１／４濃度においても顕著なＶＥＧＦ抑制効果が認められた（Ａ）。間葉系マーカーであるフィブロネクチン、Ｓｎａｉｌ、ビメンチンはＥＭＴの誘導により発現量が亢進した。ザルトプロフェンは濃度依存的にこれらの発現亢進を抑制した（それぞれＢ〜Ｄ）。
図１３〜図１５により、３つの化合物（オキサプロジン、エパルレスタット、ザルトプロフェン）は、ＥＭＴを顕著に抑制することにより、ＶＥＧＦのｍＲＮＡ発現亢進を抑制することが示された。これらの化合物は、ＥＭＴにより発現が亢進するＶＥＧＦを抑制することができるため、ＣＮＶを根本から予防及び／又は治療できる。また、これらの結果から、ＥＭＴを顕著に抑制することができるザフィルルカストやアンレキサノクスでも、ＶＥＧＦを抑制し、ＣＮＶを根本から予防及び／又は治療できるものと考えられる。
参考試験例２−４ ＶＥＧＦの発現変化２
上記オキサプロジン、ザルトプロフェンとは別のＮＳＡＩＤｓであるエトドラク（Ｃｍａｘ：４２．５μＭ）とインドメタシン（Ｃｍａｘ：２．７９μＭ）について、試験例２−３と同様の方法により、上記の細胞モデルを用いてＶＥＧＦ抑制効果を評価した。結果をそれぞれ図１６又は図１７に示す。
図１６に示すように、ＲＰＥ細胞において、ＶＥＧＦはＥＭＴの誘導によりｍＲＮＡ発現量が亢進した。しかし、エトドラクはＶＥＧＦの発現亢進を抑制しなかった（Ａ）。間葉系マーカーであるフィブロネクチン、Ｓｎａｉｌ、ビメンチンはＥＭＴの誘導により発現量が亢進した。しかし、エトドラクはこれらの発現亢進を抑制しなかった。全ての条件で有意差は認められなかった（それぞれＢ〜Ｄ）。
図１７に示すように、ＲＰＥ細胞において、ＶＥＧＦはＥＭＴの誘導によりｍＲＮＡ発現量が亢進した。しかし、インドメタシンはＶＥＧＦの発現亢進を抑制しなかった（Ａ）。間葉系マーカーであるフィブロネクチン、Ｓｎａｉｌ、ビメンチンはＥＭＴの誘導により発現量が亢進した。しかし、インドメタシンはこれらの発現亢進を抑制しなかった。全ての条件で有意差は認められなかった（それぞれＢ〜Ｄ）。
エトドラク及びインドメタシンの結果から、ＲＰＥ細胞のＥＭＴを抑制できない化合物はＶＥＧＦの発現亢進も抑制することができないため、ＣＮＶの予防及び／又は治療には有効ではないことが推測された。
試験例２−５ ＶＥＧＦの発現変化３
３種の化合物（フルフェナム酸アルミニウム（Ｃｍａｘ：２７．９１μＭ）、メフェナム酸（Ｃｍａｘ：３８．５４μＭ）、セラトロダスト（Ｃｍａｘ：３１．０３μＭ））について、上記の細胞モデルを用いてＶＥＧＦ抑制効果を評価した。試験例２−３と同様の方法により、上記の細胞モデルを用いてＶＥＧＦ抑制効果を評価した。結果をそれぞれ図１８〜図２０に示す。
図１８に示すように、ＲＰＥ細胞において、ＶＥＧＦはＥＭＴの誘導によりｍＲＮＡ発現量が亢進した。フルフェナム酸アルミニウムはＶＥＧＦの発現亢進を濃度依存的に抑制した。Ｃｍａｘの１／４濃度においても顕著なＶＥＧＦ抑制効果が認められた（Ａ）。間葉系マーカーであるフィブロネクチン、Ｓｎａｉｌ、ビメンチンはＥＭＴの誘導により発現量が亢進した。フルフェナム酸アルミニウムはこれらの発現亢進を抑制した（それぞれＢ〜Ｄ）。
図１９に示すように、ＲＰＥ細胞において、ＶＥＧＦはＥＭＴの誘導によりｍＲＮＡ発現量が亢進した。メフェナム酸はＶＥＧＦの発現亢進を濃度依存的に抑制した。Ｃｍａｘの１／４濃度においても顕著なＶＥＧＦ抑制効果が認められた（Ａ）。間葉系マーカーであるフィブロネクチン、Ｓｎａｉｌ、ビメンチンはＥＭＴの誘導により発現量が亢進した。メフェナム酸はこれらの発現亢進を抑制した（それぞれＢ〜Ｄ）。
図２０に示すように、ＲＰＥ細胞において、ＶＥＧＦはＥＭＴの誘導によりｍＲＮＡ発現量が亢進した。セラトロダストはＶＥＧＦの発現亢進を濃度依存的に抑制した。Ｃｍａｘの１／４濃度においても顕著なＶＥＧＦ抑制効果が認められた（Ａ）。間葉系マーカーであるフィブロネクチン、Ｓｎａｉｌ、ビメンチンはＥＭＴの誘導により発現量が亢進した。セラトロダストはこれらの発現亢進を抑制した（それぞれＢ〜Ｄ）。
図１８〜図２０に示すように、３つの化合物（フルフェナム酸アルミニウム、メフェナム酸、セラトロダスト）は、ＥＭＴを顕著に抑制することにより、ＶＥＧＦのｍＲＮＡ発現亢進を抑制することが示された。これらの化合物は、ＥＭＴにより発現が亢進するＶＥＧＦを抑制することができるため、ＣＮＶを根本から予防及び／又は治療できるものと推測される。これらの化合物は、ＥＭＴにより発現が亢進するＶＥＧＦを抑制することができるため、ＣＮＶを根本から予防及び／又は治療できる。また、これらの結果から、ＥＭＴを顕著に抑制することができるザフィルルカストやアンレキサノクスでも、ＶＥＧＦを抑制し、ＣＮＶを根本から予防及び／又は治療できるものと考えられる。
［試験例３．ＣＮＶ抑制評価のためのin vivoモデル試験］
マウスの眼底にレーザーを照射することで、脈絡膜血管新生およびＥＭＴが誘導されることが知られている（参考文献：Ｉｓｈｉｋａｗａ，ｅｔ ａｌ， Ｅｘｐ Ｅｙｅ Ｒｅｓ． ２０１６ Ｊａｎ；１４２：１９・２５）。そこで、マウスのレーザー照射モデルを用いて、ザルトプロフェンのＣＮＶおよびＥＭＴの抑制効果を評価した。
ザルトプロフェン（東京化成工業株式会社製）０．１５ｇおよびアラビアゴム（和光純薬工業株式会社製）０．７５ｇを水６０ｍＬに撹拌することでザルトプロフェン懸濁液を作製した。媒体（Ｖｅｈｉｃｌｅ）はアラビアゴム０．７５ｇを水６０ｍＬに溶解撹拌することで作製した。
次に、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（８週齢、Ｎ＝１３）の眼底に対し、マルチカラーレーザー光凝固装置を用いて、スリットランプ下でレーザー照射を各眼４ヶ所に行った。照射直後より、Ｖｅｈｉｃｌｅもしくはザルトプロフェン溶液（２５ｍｇ／ｋｇ）を１日１回、３週間経口投与を行い、以下の評価を行った。なお、（１）と（３）は同一個体を用いた。
（１）ＣＮＶ評価（Ｎ＝３）
（２）ＥＭＴ評価：Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｔｙｐｅ１（Ｎ＝１０）
（３）ＥＭＴ評価：Ｖｉｍｅｎｔｉｎ（Ｎ＝３）
試験例３−１ レーザー照射による脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）に対するザルトプロフェンの抑制効果
レーザー照射２週後に尾静脈よりフルオレサイト静注５００ｍｇ（日本アルコン株式会社）を投与（１ｍＬ／ｋｇ）し、投与約1分後に蛍光眼底写真撮影を行った。撮影した蛍光眼底写真より各眼４ヶ所を以下の評価基準をもとにスコアリングした。結果を図２１に、代表画像を図２２に示す。
［評価基準］
・蛍光なし・・・・・・・・・・・０
・わずかに蛍光を認める・・・・・１
・中等度の蛍光を認める・・・・・２
・強度の傾向を認める・・・・・・３
図２１に示すように、レーザー照射によるＣＮＶスコアは、Ｖｅｈｉｃｌｅ投与群に比べてザルトプロフェン投与群は顕著に低い結果となった。
図２２において、Ａｒｒｏｗ ＨｅａｄはＣＮＶにより蛍光漏出している部分である。図２２に示すように、レーザー照射によるＣＮＶは、Ｖｅｈｉｃｌｅ投与群（左の写真）に比べてザルトプロフェン投与群（右の写真）では顕著に抑制された。
試験例３−２ レーザー照射によるＥＭＴ（ＥＭＴ評価：Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｔｙｐｅ １）に対するザルトプロフェンの抑制効果
レーザー照射３週後に頸椎脱臼により安楽死させて眼球を摘出し、４％パラホルムアルデヒド・りん酸緩衝液（和光純薬工業株式会社）で浸漬固定を行った。眼球から角膜、水晶体、網膜を除去して眼杯の状態にし、ＰＢＳＴで３回洗浄した。次に５０％メタノール、そして１００％メタノール溶液を用いて脱水処理を行い、ブロッキング液（１％ＢＳＡ、０．５％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００／ＰＢＳ）で６０分間インキュベートを行った。さらに１次抗体（抗コラーゲン抗体、Ｒｏｃｋｌａｎｄ社）で一晩静置した後、２次抗体（Ａｌｅｘａ４８８抗体、Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）で１時間反応させ、スライドガラスにマウントすることでフラットマウントの染色標本を作製した。標本は顕微鏡を用いて抗Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｔｙｐｅ １抗体による染色像の写真撮影を行った後、定量評価を行った。結果を図２３に示す。
図２３に示すように、レーザー照射により生じたＣｏｌｌａｇｅｎ Ｔｙｐｅ １染色体積は、Ｖｅｈｉｃｌｅ投与群に比べてザルトプロフェン投与群で有意に低下することが分かった（ｐ＜０．０５）。すなわち、ザルトプロフェンはＥＭＴに対し、顕著な抑制効果を示すことが明らかとなった。
試験例３−３ レーザー照射によるＥＭＴ（ＥＭＴ評価：Ｖｉｍｅｎｔｉｎ）に対するザルトプロフェンの抑制効果
レーザー照射３週後に頸椎脱臼により安楽死させて眼球を摘出し、４％パラホルムアルデヒド・リン酸緩衝液（和光純薬工業株式会社製）で浸漬固定を行った。固定した眼球を１０％スクロース（和光純薬工業株式会社製）および２５％スクロースに各３時間浸漬した後、眼杯を作製した。凍結切片を作製し、スライドガラスに貼付した。顕微鏡にて観察し、レーザー照射部位が確認できるものを選抜した。次に、切片を貼付したスライドガラスを、水で１０倍希釈したＨｉｓｔｏＶＴ Ｏｎｅ（ナカライテスク株式会社製）に入れ、７０℃で１５分間浸漬した。７０％エタノール（和光純薬工業株式会社製）で２０倍希釈したＴｒｕｅＢｌａｃｋ（Ｂｉｏｔｉｕｍ社製）を切片に滴下して室温で数分間静置した後、５％ヤギ血清（ダコ・ジャパン株式会社製）を切片に滴下し、室温で３０分間静置してブロッキングした。次に１次抗体（Ａｎｔｉ−Ｖｉｍｅｎｔｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ、ａｂｃａｍ社製）にＣａｎ Ｇｅｔ Ｓｉｇｎａｌ(R) Ｉｍｍｕｎｏｓｔａｉｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｂ（東洋紡株式会社製）を加えて切片に添加し、一晩静置した。さらに二次抗体（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ５４６、サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）およびＨｏｅｃｈｓｔ ３３３４２ （株式会社同仁化学研究所製）にＣａｎ Ｇｅｔ Ｓｉｇｎａｌ(R) Ｉｍｍｕｎｏｓｔａｉｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｂ を加えて切片に添加し、３０分間静置した。蛍光顕微鏡にて次の条件で観察および撮影を行った。
・Ｖｉｍｅｎｔｉｎ：励起波長５２０−５５０ ｎｍ、検出波長５８０ ｎｍ
・核：励起波長３３０−３８５ ｎｍ、検出波長４２０ ｎｍ
撮影結果を図２４および図２５に示す。図２４はＶｅｈｉｃｌｅ投与群を示している。図２４の左の写真は、明視野画像を示し、右の写真は、Ｖｉｍｅｎｔｉｎ（赤）と核（青）の重ね合わせ画像を示す。図２５において、左の写真は、Ｖｅｈｉｃｌｅ投与群のＶｉｍｅｎｔｉｎを示し、右の写真は、ザルトプロフェン投与群のＶｉｍｅｎｔｉｎを示す。図２４および図２５において、囲みの中は、レーザー照射によるＶｉｍｅｎｔｉｎ陽性領域を示す。
図２４に示すように、レーザー照射部位のＲＰＥ付近に色素が少ない部分が出現し（左の写真）、間葉系マーカーであるＶｉｍｅｎｔｉｎの染色が確認された（右の写真）。このことから、レーザー照射によりＲＰＥがＶｉｍｅｎｔｉｎを発現し、上皮間葉転換（ＥＭＴ）を起こしていると考えられる。さらに、図２５に示すように、Ｖｅｈｉｃｌｅ投与群のＲＰＥはＶｉｍｅｎｔｉｎ陽性であった（左の写真）。一方ザルトプロフェン投与群ではＶｅｈｉｃｌｅ投与群と比較してＶｉｍｅｎｔｉｎ陽性面積が縮小した（右の写真）。
以上のことから、ザルトプロフェンはレーザー照射モデルにおけるＥＭＴを抑制することが明らかとなった。すなわちザルトプロフェンはＲＰＥのＥＭＴ抑制を通じてドルーゼン形成を抑制すると考えられる。また、ザルトプロフェンとは異なる他の化合物であっても、ＥＭＴを顕著に抑制することができる物であれば、ＣＮＶを予防及び／又は治療できるものと推測される。
［４．ヒト検体におけるＥＭＴの証明］
試験例４−１ ＡＭＤ患者ドルーゼンの形態的観察
ヒト健常者コントロール（Ｃｏｎｔｒｏｌ）サンプル及びＡＭＤ患者の網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ細胞）サンプルをＮａｔｉｏｎａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｔｅｒｃｈａｎｇｅから入手した。これらの組織サンプルは、キシレン５分×３回、１００％エタノール１分×２回、９０％エタノール１分、８０％エタノール１分、７０％エタノール１分、水５分間で処理し、脱パラフィンした。マイヤーヘマトキシリン溶液で４分間、エオジン液で１分間染色を行った。流水中で５分処理した後、７０％エタノール１分、８０％エタノール１分、９０％エタノール１分、１００％エタノール１分×２回、キシレン５分×３回で処理を行い、マリノールを用いて封入した。室温で１５分以上乾燥させた後、健常者のＲＰＥ細胞およびＡＭＤ患者のＲＰＥ細胞を観察した。ヘマトキシリン・エオジン染色による染色結果を図２６に示す。
図２６の観察結果を子細に検討することにより、本発明者らは、健常者コントロールの黄斑部においてはＲＰＥ細胞の形態は立方状であり、細胞間接着により整然と単層に整列していること、及びドルーゼンが存在するＡＭＤ患者の黄斑部においてはＲＰＥ細胞の形態が紡錘状へと変化し、ＲＰＥ細胞が運動能を獲得して、細胞が重層化していることを見出した。これらの観察結果から、本発明者らは、ＡＭＤ患者の黄斑部では、ＲＰＥ細胞の細胞間接着が弱まり、形態変化を生じていることを推察し、ＲＰＥ細胞に上皮性を消失する現象であるＥＭＴ（Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ−ｍｅｓｅｎｃｙａｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ）が生じているとの仮説を立てた。以下の試験例４−２〜４−４では、この仮説に基づき、ＲＰＥ細胞においてＥＭＴが生じていることを証明するための試験を行った。
試験例４−２ ＡＭＤ患者ドルーゼンにおける上皮系マーカーの消失
ヒト健常者コントロール（Ｃｏｎｔｒｏｌ）サンプル及びＡＭＤ患者の網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ細胞）サンプルにおける上皮系マーカーの消失を免疫組織化学（ＩＨＣ）により検証した。組織サンプルを気相インキュベーター中で５６℃３０分間インキュベートした後、キシレン５分×３回、１００％エタノール１分×２回、９０％エタノール１分、８０％エタノール１分、７０％エタノール１分、水５分間で処理し、脱パラフィンした。Ｄｅｌｉｃａｔｅ Ｍｅｌａｎｉｎ Ｂｌｅａｃｈ Ｋｉｔ ｆｏｒ Ｓｐｅｃｉａｌ Ｓｔａｉｎｓ ａｎｄ ＩＨＣ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ社 ＃２４９０９−１）を用いて製造業者のプロトコルに従って組織中のメラニン色素を除去した後、クエン酸バッファー ｐＨ６．０を用いて、マイクロウェーブ処理１０分間により抗原を賦活化した。室温で３０分静置した後、ＰＢＳで５分、３％過酸化水素／ＰＢＳ溶液で５分、ＰＢＳで５分処理を行い、内在性ペルオキシダーゼを不活性化した。３％ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液中で室温にて３０分静置し、組織をブロッキングした。１次抗体として、１．５％ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液にて５００倍に希釈した抗Ｅ−Ｃａｄｈｅｒｉｎ抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｉｅｎｃｅ社 ＃６１０１８１）および１０００倍に希釈した抗Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ１８抗体（Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社 ＃４５４８）を１組織当たり２００マイクロリットル滴下し、４℃１７時間で組織と反応させた。１次抗体と反応させた組織は、ＰＢＳで５分×３回洗浄した後、Ｍｏｕｓｅ ｏｎ Ｍｏｕｓｅ（Ｍ．Ｏ．Ｍ．）Ｅｌｉｔｅ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｋｉｔ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社 ＃ＰＫ−２２００）を用いて、室温にて３０分間２次抗体と反応させ、ＰＢＳで５分×３回洗浄した後、製造業者のプロトコルに従って室温３０分にてＡＢＣ反応を行った。組織をＰＢＳで５分×３回洗浄した後、ＩｍｍＰＡＣＴ ＤＡＢ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＨＲＰ）Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社 ＃ＳＫ−４１０５）を用いて、室温３分間で発色を行った。発色させた組織は、Ｎｅｗ ヘマトキシリン ＴｙｐｅＭ（武藤化学株式会社 ＃３０１４１）を用いて染色した後、流水中で３分静置し、７０％エタノール１分、８０％エタノール１分、９０％エタノール１分、１００％エタノール１分×２回、キシレン５分×３回で処理を行い、マリノールを用いて封入した。室温で１５分以上乾燥させた後、健常者のＲＰＥ細胞およびＡＭＤ患者のＲＰＥ細胞を観察した。結果を図２７に示す。
図２７に示すように、健常者コントロール（Ｃｏｎｔｒｏｌ）では細胞間接着部位に上皮系マーカーであるＥ−カドヘリン（Ｅ−Ｃａｄｈｅｒｉｎ）の染色が確認されたが、ＡＭＤ患者ドルーゼンの周辺部では細胞間にＥ−Ｃａｄｈｅｒｉｎの染色は確認されなかった（左の染色写真）。また、健常者コントロールではＲＰＥ細胞全体に上皮系マーカーであるサイトケラチン１８（Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ１８）の強い染色が確認されたが、ＡＭＤ患者ドルーゼンの周辺部ではそれに比べてシグナルが低下していた（右の染色写真）。
以上の事から、ＡＭＤ患者のＲＰＥ細胞においては上皮性の喪失、低下が生じている事が確認された。
試験例４−３ ＡＭＤ患者ドルーゼンにおける間葉系マーカーの亢進
ヒト健常者コントロール（Ｃｏｎｔｒｏｌ）サンプル及びＡＭＤ患者の網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ細胞）サンプルにおける間葉系マーカーの亢進を免疫組織化学（ＩＨＣ）により検証した。組織サンプルを気相インキュベーター中で５６℃３０分間インキュベートした後、キシレン５分×３回、１００％エタノール１分×２回、９０％エタノール１分、８０％エタノール１分、７０％エタノール１分、水５分間で処理し、脱パラフィンした。クエン酸バッファー ｐＨ６．０を用いて、マイクロウェーブ処理１０分間により抗原を賦活化した。室温で３０分静置した後、ＰＢＳで５分、３％過酸化水素／ＰＢＳ溶液で５分、ＰＢＳで５分処理を行い、内在性ペルオキシダーゼを不活性化した。３％ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液で室温にて３０分静置し、組織をブロッキングした。１次抗体として、１．５％ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液にて１００倍に希釈した抗Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ抗体（ａｂｃａｍ社 ＃４５６８８）および１００００倍に希釈した抗Ｖｉｍｅｎｔｉｎ抗体（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社 ＃６６３０）を１組織当たり２００マイクロリットル滴下し、４℃にて１７時間組織と反応させた。１次抗体と反応させた組織は、ＰＢＳで５分×３回洗浄した後、抗Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ抗体に対しては、ＶＥＣＴＡＳＴＡＩＮ Ｅｌｉｔｅ ＡＢＣ Ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ Ｋｉｔ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社 ＃ＰＫ−６１０１）を、抗Ｖｉｍｅｎｔｉｎ抗体に対してはＭｏｕｓｅ ｏｎ Ｍｏｕｓｅ （Ｍ．Ｏ．Ｍ．） Ｅｌｉｔｅ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｋｉｔ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社 ＃ＰＫ−２２００）を用いて室温にて３０分間２次抗体と反応させた。ＰＢＳで５分×３回洗浄した後、製造業者のプロトコルにしたがって室温３０分にてＡＢＣ反応を行った。組織をＰＢＳで５分×３回洗浄した後、ＩｍｍＰＡＣＴ ＡＭＥＣ Ｒｅｄ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＨＲＰ）Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社 ＃ＳＫ−４２８５）を用いて室温３分間で発色を行い、蒸留水で５分間洗浄した。発色させた組織は、Ｎｅｗ ヘマトキシリン ＴｙｐｅＭ（武藤化学株式会社 ＃３０１４１）を用いて染色した後、流水中で３分静置し、ＶｅｃｔａＭｏｕｎｔ ＡＱ Ａｑｕｅｏｕｓ Ｍｏｕｎｔｉｎｇ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社 ＃Ｈ−５５０１）を用いて封入した。室温で１５分以上乾燥させた後、健常者のＲＰＥ細胞およびＡＭＤ患者のＲＰＥ細胞を観察した。結果を図２８に示す。
図２８に示すように、健常者コントロール（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の正常部ＲＰＥ細胞においては、間葉系マーカーであるフィブロネクチン（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ）の染色はみられなかった。一方で、ＡＭＤ患者のドルーゼンおよびＲＰＥ細胞ではＦｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎは陽性を示した。また、健常者コントロールのＲＰＥ細胞においては、間葉系マーカーであるビメンチン（ｖｉｍｅｎｔｉｎ）の染色は見られなかった。ＡＭＤ患者ドルーゼンのＲＰＥ細胞はｖｉｍｅｎｔｉｎ陽性を示した。
以上の解析結果から、ＡＭＤ患者のＲＰＥ細胞は健常時における上皮性の形質を喪失または減弱し、ＡＭＤにおいて間葉性の形質を獲得、亢進していることが明らかになった。すなわち、ＡＭＤにおいて、ＲＰＥ細胞は上皮性の形質から間葉性への形質への転換、上皮−間葉転換ＥＭＴが生じている事を明らかにした。
試験例４−４ カニクイサルモデルでの検証
健常のカニクイザルコントロール（Ｃｏｎｔｒｏｌ）サンプル及びＡＭＤカニクイザルモデルの網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ細胞）サンプルから切片を作成し、上皮系マーカーの消失および間葉系マーカーの亢進を免疫組織化学（ＩＨＣ）により検証した。組織サンプルをキシレン５分×３回、１００％エタノール１分×２回、９０％エタノール１分、８０％エタノール１分、７０％エタノール１分、蒸留水１０分間で処理し、脱パラフィンした。クエン酸バッファー ｐＨ６．０を用いて、マイクロウェーブ処理１０分間により抗原を賦活化した。室温で３０分静置した後、ＰＢＳで５分、３％過酸化水素／ＰＢＳ溶液で５分、ＰＢＳで５分処理を行い、内在性ペルオキシダーゼを不活性化した。３％ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液で室温にて２０分静置し、組織をブロッキングした。１次抗体として、１．５％ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液にて５００倍に希釈した抗Ｅ−Ｃａｄｈｅｒｉｎ抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｉｅｎｃｅ社 ＃６１０１８１）および２０００倍に希釈した抗Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ１８抗体（ａｂｃａｍ社 ＃ａｂ６６８）、６００倍に希釈した抗Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ抗体（Ｅｐｉｔｏｍｉｃｓ社 ＃１５７４−１）を１組織当たり２００マイクロリットル滴下し、４℃にて１７時間組織と反応させた。１次抗体と反応させた組織は、ＰＢＳで５分×３回洗浄した後、抗Ｅ−Ｃａｄｈｅｒｉｎ抗体および抗Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ１８抗体に対しては、ＶＥＣＴＡＳＴＡＩＮ Ｅｌｉｔｅ ＡＢＣ Ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ Ｋｉｔ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社 ＃ＰＫ−６１０２）を用いて、抗Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ抗体に対しては、ＶＥＣＴＡＳＴＡＩＮ Ｅｌｉｔｅ ＡＢＣ Ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ Ｋｉｔ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社 ＃ＰＫ−６１０１）を用いて室温にて３０分間２次抗体と反応させ、ＰＢＳで５分×３回洗浄した後、添付のプロトコルにしたがって室温３０分にてＡＢＣ反応を行った。組織をＰＢＳで５分×３回洗浄した後、抗Ｅ−Ｃａｄｈｅｒｉｎ抗体に対しては、ＩｍｍＰＡＣＴ ＤＡＢ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＨＲＰ）Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社 ＃ＳＫ−４１０５）を用いて、抗Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ１８抗体および抗Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ抗体に対しては、ＴＭＢ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｋｉｔ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社 ＃ＳＫ−４４００）を用いて室温３分間で発色を行い、蒸留水で５分間洗浄した。発色させた組織は、抗Ｅ−Ｃａｄｈｅｒｉｎ抗体に対してはＮｅｗ ヘマトキシリン ＴｙｐｅＭ（武藤化学株式会社 ＃３０１４１）を用いて、抗Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ１８抗体および抗Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ抗体に対しては、ＶＥＣＴＯＲ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｆａｓｔ Ｒｅｄ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社 ＃Ｈ−３４０３）を用いて染色した。流水中で１０分静置し、７０％エタノール１分、８０％エタノール１分、９０％エタノール１分、１００％エタノール１分×２回、キシレン５分×３回で処理を行い、マリノールを用いて封入した。室温で１５分以上乾燥させた後、カニクイザルコントロールのＲＰＥ細胞およびＡＭＤのカニクイザルモデルのＲＰＥ細胞を観察した。結果を図２９に示す。
黄斑は霊長類の中でも高等な霊長類にしか存在せず、黄斑変性症も特定の霊長類にしか存在しない。黄斑変性症の病態を検証するため、黄斑変性症のモデル動物として認知されているカニクイザルにおける病態の解析を実施した。
図２９に示すように、ＲＰＥ細胞の形態について、健常のカニクイサルコントロール（Ｃｏｎｔｒｏｌ）ではＲＰＥ細胞は立方状であり、細胞間接着により整然と単層に整列していることが確認された。一方で、ＡＭＤのカニクイサルのＲＰＥ細胞においては形態が紡錘状へと変化し、ドルーゼンの辺縁部では細胞の重層が確認された。
また、上皮系マーカーについて、健常のカニクイサルコントロール（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の黄斑部においてはＲＰＥ細胞の細胞間接着部位にＥ−Ｃａｄｈｅｒｉｎの染色が確認されたが、ドルーゼンが存在するＡＭＤのカニクイサルのＲＰＥ細胞においては細胞間にＥ−Ｃａｄｈｅｒｉｎの染色は確認されなかった。また、健常のカニクイサルコントロールではＲＰＥ細胞全体に強いＣｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ１８の染色が確認されたが、ＡＭＤのカニクイサルのドルーゼンではＣｏｎｔｒｏｌに比べてシグナルが低下していた。
また、間葉系マーカーについて、ＡＭＤのカニクイサルのドルーゼンでは、Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎが染色されており、ＲＰＥ細胞やドルーゼンへの蓄積が確認された。
上記の試験例における結果から、ドルーゼンのＲＰＥ細胞では、ＥＭＴが生じていることが確認された。よって、本発明者らは、ＲＰＥ細胞のＥＭＴを抑制することができれば、ドルーゼンの形成を抑制することに繋がるものと推測した。以下の試験例５−１では、ＲＰＥ細胞のＥＭＴを抑制する化合物を検索するため、又は候補薬剤がＲＰＥ細胞でＥＭＴに与える影響を評価するため、インビトロでＲＰＥ細胞にＥＭＴを誘導可能な細胞モデルの検討を行った。
［５．ＥＭＴ細胞モデルの構築］
試験例５−１ ＲＰＥ細胞におけるＥＭＴの誘導条件の検討
発明者らは、ＲＰＥ細胞（網膜色素上皮細胞株：ＡＲＰＥ−１９、以下同じ）に対して、サイトカインや増殖因子（ＴＮＦ−α／ＩＬ−１β／ＴＧＦ−β）を用いて、１０通りの条件により刺激を試みる実験を行った結果、顕著なＥＭＴ誘導を引き起こすことを見出した。サイトカインや増殖因子を用いたＥＭＴ誘導の細胞モデルは、ＡＭＤ患者における、推測されるＥＭＴ誘導メカニズムを反映したものと考えられる。
その１０通りの条件は、以下のとおりである。
（１）ＴＮＦ−α １００ｎｇ／ｍＬ
（２）ＩＬ−１β １００ｎｇ／ｍＬ
（３）ＩＬ−１β ２０ｎｇ／ｍＬ
（４）ＴＮＦ−α ５００ｎｇ／ｍＬ ＋ ＴＧＦ−β ５ｎｇ／ｍＬ
（５）ＴＮＦ−α ２００ｎｇ／ｍＬ ＋ ＴＧＦ−β ５ｎｇ／ｍＬ
（６）ＴＮＦ−α １００ｎｇ／ｍＬ ＋ ＴＧＦ−β ５ｎｇ／ｍＬ
（７）ＴＮＦ−α １００ｎｇ／ｍＬ ＋ ＴＧＦ−β １０ｎｇ／ｍＬ
（８）ＴＮＦ−α １００ｎｇ／ｍＬ ＋ ＴＧＦ−β ２５ｎｇ／ｍＬ
（９）ＩＬ−１β １００ｎｇ／ｍＬ ＋ ＴＧＦ−β ５ｎｇ／ｍＬ
（１０）ＩＬ−１β ２０ｎｇ／ｍＬ ＋ ＴＧＦ−β ５ｎｇ／ｍＬ
試験例５−２ ＥＭＴマーカー分子の発現変化によるＥＭＴの検証
刺激後のＲＰＥ細胞からＲＮＡを抽出し、発現変化を検証した。
プレートにＲＰＥ細胞（ＡＲＰＥ−１９）を播種し、５日間、３７℃にてインキュベートした。ＲＰＥ細胞に対して、試験例５−１に記載の条件によりＥＭＴを誘導し、ＥＭＴ誘導４８時間後に細胞を回収した。回収した細胞をＰＢＳで洗浄し、ＲＬＴ ｂｕｆｆｅｒ（ＱＩＡＧＥＮ社） ３５０μＬを加えて、ＲＮＡ採取用ライセートを作成した。ライセートからＲＮｅａｓｙ Ｍｉｃｒｏ ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社 ＃７４００４）を用いてトータルＲＮＡを抽出し、得られたＲＮＡ２μｇからＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ＳｕｐｅｒＭｉｘ ｆｏｒ ｑＲＴ−ＰＣＲ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社 ＃１１７５２−２５０）を用いてｃＤＮＡを作製した。得られたｃＤＮＡ５０ｎｇを鋳型として、リアルタイムＰＣＲ（ＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ ７５００ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ）を製造業者のプロトコールに従って行い、各遺伝子のｍＲＮＡの発現を定量分析した。各遺伝子に対する特異的プライマーはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社より購入した。各遺伝子Ｃｔ（Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ Ｃｙｃｌｅ）値は内在性コントロールによりノーマライズ後、非処理のサンプルに対する割合を算出した。
結果を図１に示す。
図１Ａ及びＢに示すように、刺激後のＲＰＥ細胞では、上皮系マーカーであるＥ−Ｃａｄｈｅｒｉｎの発現が低下し（図１Ａ）、間葉系マーカーであるＮ−Ｃａｄｈｅｒｉｎの発現が亢進していた（図１Ｂ）。このようなＣａｄｈｅｒｉｎ ｓｗｉｔｃｈｉｎｇは、ＥＭＴの代表的な現象である。また、フィブロネクチンに代表される間葉系マーカー（図１Ｃ）およびＥＭＴ関連転写因子群（Ｓｎａｉｌ、Ｓｌｕｇ、ＺＥＢ１）の亢進（図１Ｅ〜Ｇ）、及びＩ型Ｃｏｌｌａｇｅｎ（ＣＯＬ１Ａ１）に代表されるＥＣＭの発現亢進が確認され（図１Ｄ）、ＲＰＥ細胞では刺激によりＥＭＴが誘導されることを確認した。
試験例５−３ マイクロアレイによる経時的なＥＭＴマーカー発現変化の検証
ＥＭＴ誘導時間における、ドルーゼン様構造の形成と、その時点でのＥＭＴ誘導状態の解析を実施した。
プレートにＲＰＥ細胞（ＡＲＰＥ−１９）を播種し、５日間、３７℃にてインキュベートした。ＲＰＥ細胞に対して、試験例５−１に記載の条件によりＥＭＴを誘導し、ＥＭＴ誘導１時間後、４時間後、１２時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後に細胞を回収した。回収した細胞をＰＢＳで洗浄し、ＲＬＴ ｂｕｆｆｅｒ ３５０μＬを加えて、ＲＮＡ採取用ライセートを作製した。ライセートからＲＮｅａｓｙ Ｍｉｃｒｏ ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社 ＃７４００４）を用いてトータルＲＮＡを抽出し、Ｌｏｗ Ｉｎｐｕｔ ＱｕｉｃｋＡｍｐ Ｌａｂｅｌｉｎｇ ｋｉｔ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社 ＃５１９０−２３０５）を用いて蛍光ラベルした。ラベル化したｃＲＮＡはＷｈｏｌｅ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｏｌｉｇｏ−ＤＮＡ Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ Ｋｉｔ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社 ＃Ｇ４１１２Ｆ）に製造業者の定めるプロトコルに従ってハイブリダイズした。ハイブリダイズしたスライドは、Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｗａｓｈ Ｐａｃｋ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社 ＃５１８８−５３２７）を用いて洗浄し、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ Ｓｃａｎｎｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社 ＃Ｇ２５０５Ｂ）でスキャニングを行った。スキャン画像は、Ｆｅａｔｕｒｅ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｖｅｒｓｉｏｎ ９．５．１（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を用いて数値化した。数値データは、Ｇｒｏｂａｌ Ｎｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ法によって標準化した。結果を図２に示す。
図２に示すように、ＥＭＴマーカーの低下や亢進のピークは各遺伝子によって、ＥＭＴ誘導後１２時間後であったり、７２時間後であったりと、バラツキは生じたが、低下した上皮系マーカー並びに亢進した間葉系マーカー及びＥＣＭは以下のとおりである。
ＥＭＴ誘導により低下した上皮系マーカーとしては、ＩＤ１、ＩＤ２、ＭＵＣ１、Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ１８（ＫＲＴ１８）、ＴＨＢＳ１、ＶＩＬ２、Ｅ−Ｃａｄｈｅｒｉｎ（ＣＤＨ１）、ＴＧＦＢ２が確認された。
ＥＭＴ誘導により亢進した間葉系マーカー及びＥＣＭとしては、ＦＧＦ２、ＴＷＩＳＴ１、ＶＩＭ、ＣＤ４４、ＺＥＢ１、ＲＤＸ、ＭＭＰ９、ＦＮ１、ＴＧＦＢ１、ＲＨＯＡ、ＺＥＢ２、ＭＭＰ２、ＴＪＰ１、ＣＴＮＮＢ１、ＭＭＰ３、ＥＴＳ１、ＳＮＡＩ１、ＳＮＡＩ２、ＨＡＳ２、ＦＧＦ１、ＳＥＲＰＩＮＥ１、ＣＤＨ２、ＭＳＮ、ＴＣＦ３、ＳＤＣ１、ＩＴＧＡＶ、ＣＯＬ１Ａ１、ＳＰＡＲＣが確認された。
ＥＭＴ誘導の２４時間後に、ＲＰＥ細胞を播種したプレートにドルーゼン様構造体が形成された。Ｅ−カドヘリン及びサイトケラチン１８に代表される上皮系マーカー群の発現低下とフィブロネクチン／ビメンチンに代表される間葉系マーカー及びＥＣＭ群の発現亢進が確認され、ドルーゼン様構造体の形成とＥＭＴ誘導状態の間に明らかな相関が認められた。
よって、ドルーゼン様構造体の形成は、ＲＰＥ細胞のＥＭＴによって生じることが確認された。
試験例５−４ 運動能亢進によるＥＭＴ誘導の検証
細胞の運動能・浸潤能の評価法であるＩｎｖａｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ法（細胞浸潤アッセイ）を用いて、ＥＭＴによるＲＰＥ細胞の運動能亢進を評価した。
プレートにＲＰＥ細胞（ＡＲＰＥ−１９）を播種し、５日間、３７℃にてインキュベートした。ＲＰＥ細胞に対して、試験例５−１に記載の条件によりＥＭＴを誘導し、ＥＭＴ誘導２４時間後に細胞を回収した。回収した細胞は、ＢＤ Ｂｉｏｃｏａｔ Ｍａｔｒｉｇｅｌ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｃｈａｍｂｅｒ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｃｅ社 ＃３５４４８０）に播種し、３７℃にてさらに２４時間インキュベートした。インキュベート後、製造業者のプロトコルに従って非浸潤細胞を除去した後、１００％メタノールを加え室温１５分で細胞を固定した。ギムザ染色液（ナカライテスク社 ＃３７１１４−３５）を加え、室温３０分で染色した後、ＰＢＳで５分間×２回洗浄した。洗浄後、浸潤した細胞が残るメンブレンを回収し、スライドガラス上に封入した。１５分以上乾燥させた後、顕微鏡にて観察および画像を撮影し、画像上の細胞数をカウントした。結果を図３０に示す。
図３０Ａ及びＢに示すように、刺激によりＲＰＥ細胞の浸潤細胞数が増加し、ＲＰＥ細胞の運動能亢進が確認された。上皮系の細胞であるＲＰＥ細胞は通常運動能を有していない。このように、運動能を本来有していない上皮系の細胞が運動能を獲得することもＥＭＴにおける代表的な現象である。
試験例５−５ ＥＭＴを生じたＲＰＥ細胞の形態的観察
プレートにＲＰＥ細胞（ＡＲＰＥ−１９）を播種し、５日間、３７℃にてインキュベートした。ＲＰＥ細胞に対して、試験例５−１に記載の条件によりＥＭＴを誘導し、ＥＭＴ誘導４８時間後に細胞を観察した。さらに、プレートの全体像を弱拡大において観察する為、観察後の細胞を４％パラホルムアルデヒド溶液で室温３０分処理し固定化した後、ＰＢＳで３回洗浄した。１００％メタノールで室温１０分×２回処理し、ギムザ染色液（ナカライテスク社 ＃３７１１４−３５）を加え、室温１５分で染色した。メタノールで３回洗浄した後、室温３時間で乾燥させた。乾燥した細胞を顕微鏡で観察した。結果を図３１に示す。
試験例５−１に記載の条件により、ＲＰＥ細胞にＥＭＴを誘導した場合、図２２Ｂにおいて矢印で示すように、Ｆｏｃｕｓが生じ、ドルーゼン様構造体の形成が確認された。一方で、ＥＭＴを誘導していない場合は、図３１Ａに示すように、ＰＲＥ細胞はＦｏｃｕｓを形成することなくコンフルエントな状態を維持していた。図３１Ｃ及びＤでは、ＥＭＴ誘導の有無を弱拡大において観察したものである。ＲＰＥ細胞にＥＭＴを誘導した場合、図３１Ｄに示すように、ドルーゼン様構造体（Ｆｏｃｕｓ）は、ＡＭＤ患者の眼底写真におけるドルーゼン（図３１Ｅ）と形態的に近似することが確認された。このことから、ＲＰＥ細胞においては、ＥＭＴ誘導による間葉化亢進によりドルーゼン様構造体が形成されることを証明した。また、このＲＰＥ細胞におけるドルーゼン様構造体は、ＡＭＤ患者におけるドルーゼンをインビトロで再現したモデルとして有効に用いることができる。
［６．ＥＭＴ抑制化合物の評価及び／又はスクリーニング］
試験例６−１ ＥＭＴマーカーの発現変化１
上述のように、ＲＰＥ細胞に刺激を与えることによって、ＥＭＴマーカーの変化や運動能の亢進が起こり、ドルーゼン様構造体が形成されることが確認され、ＥＭＴの誘導が可能な細胞モデルを構築することができた。この細胞モデルを用いて、ＥＭＴを抑制する化合物を選出した。また、この細胞モデルを用いることにより、ＥＭＴ抑制化合物を評価することが可能である。
プレートにＲＰＥ細胞（ＡＲＰＥ−１９）を播種し、５日間、３７℃にてインキュベートした。ＲＰＥ細胞に対して、試験例５−１に記載の条件によりＥＭＴを誘導し、同時に評価化合物（被験薬剤ともいう）を添加した。ＥＭＴ誘導コントロールとして、評価化合物（被験薬剤）を非添加のサンプルを用いた。ＥＭＴ誘導４８時間後に４％パラホルムアルデヒド溶液で室温３０分処理し細胞を固定化した後、ＰＢＳで３回洗浄した。０．２％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ／ＰＢＳ溶液で５分処理し、ＰＢＳで３回洗浄した。蛍光染色溶液（０．２％ Ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ−Ａｌｅｘａ ５６８（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ社 ＃Ａ１２３８０）／０．０５％ Ｈｏｃｈｅｓｔ ３３３４２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社 ＃Ｈ３５７０）／３％ＢＳＡ−ＰＢＳ）にて室温１時間で細胞を染色した後、ＰＢＳで５分×３回洗浄を行った。蛍光染色を行った細胞は、Ｉｍａｇｅ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｍｉｃｒｏ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を用いて画像化し、ＭｅｔａＸｐｒｅｓｓ２．０（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を用いて数値化した。数値データからＦｏｃｕｓの形成度（Ｆｏｃｕｓレベル）を解析することにより化合物非添加時の数値を基準として以下の式１によりＦｏｃｕｓ形成抑制率を算出し、各化合物におけるＥＭＴ抑制効果を検証した。Ｆｏｃｕｓの形成度（Ｆｏｃｕｓレベル）は、Ｆｏｃｕｓの数と体積を指標として求めた。
（式１）
Figure 0006967222
表中のＩＣ５０は以下の式２を用いて算出した。
（式２）
Figure 0006967222
Ａ：５０％を挟む高い濃度
Ｂ：５０％を挟む低い濃度
Ｃ：５０％を挟む低い濃度での阻害率
Ｄ：５０％を挟む高い濃度での阻害率
その結果、以下の化合物において、ＥＭＴ抑制効果が確認された。
Figure 0006967222
上記表１に記載のＥＭＴ抑制化合物のうち、代表する５つの化合物（オキサプロジン、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、ザルトプロフェン）について、上記の細胞モデルを用いてＥＭＴ抑制効果を評価した。
プレートにＲＰＥ細胞（ＡＲＰＥ−１９）を播種し、５日間、３７℃にてインキュベートした。ＲＰＥ細胞に対して、試験例５−１に記載の条件によりＥＭＴを誘導し、同時に代表する５つの化合物（オキサプロジン、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、ザルトプロフェン）を添加し、ＥＭＴ誘導４８時間後に細胞を回収した。コントロールとして、評価化合物（被験薬剤）を非添加のサンプルを用いた。回収した細胞をＰＢＳで洗浄し、ＲＬＴ ｂｕｆｆｅｒ ３５０μＬを加えて、ＲＮＡ採取用ライセートを作成した。ライセートからＲＮｅａｓｙ Ｍｉｃｒｏ ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社 ＃７４００４）を用いてトータルＲＮＡを抽出し、得られたＲＮＡ２μｇからＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ＳｕｐｅｒＭｉｘ ｆｏｒ ｑＲＴ−ＰＣＲ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社 ＃１１７５２−２５０）を用いてｃＤＮＡを作製した。得られたｃＤＮＡ５０ｎｇを鋳型として、リアルタイムＰＣＲ（ＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ ７５００ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ）を製造業者のプロトコールに従って行い、各遺伝子のｍＲＮＡの発現を定量分析した。各遺伝子に対する特異的プライマーはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社より購入した。各遺伝子Ｃｔ（Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ Ｃｙｃｌｅ）値は内在性コントロールによりノーマライズ後、非処理のサンプルに対する割合を算出した。結果を図３〜図７に示す。
図３〜図７の各グラフにおいて、左の棒グラフは、ＥＭＴが誘導されていない時の各遺伝子の発現量を示している。真ん中の棒グラフは、ＥＭＴ誘導時の各遺伝子の発現量を示している。右の棒グラフは、ＥＭＴ抑制化合物投与時の各遺伝子の発現量を示している。また、図３〜図７は、ＥＭＴ抑制化合物として、それぞれオキサプロジン、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、ザルトプロフェンを用いた結果を示している。
本明細書において、各ＥＭＴマーカーは以下のように略称でも記載される。
カドヘリン（Ｃａｄｈｅｒｉｎ）：ＣＤＨ（ＣＤＨ２、ＣＤＨ３等）
マトリックスメタロプロティナーゼ：ＭＭＰ（ＭＭＰ１、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７等）
フィブロネクチン：ＦＮ（ＦＮ１等）
ビメンチン：ＶＩＭ
コラーゲンタイプ１α１：ＣＯＬ１Ａ１
コラーゲンタイプ１α２：ＣＯＬ１Ａ２
コラーゲンタイプ５α２：ＣＯＬ５Ａ２
コラーゲンタイプ５α３：ＣＯＬ５Ａ３
コラーゲンタイプ６α３：ＣＯＬ６Ａ３
コラーゲンタイプ１３α１：ＣＯＬ１３Ａ１
ラミニンβ３：ＬＡＭＢ３
ラミニンγ２：ＬＡＭＣ２
Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｍｏｔｉｌｉｔｙ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＨＭＭＲ
テネイシンＣ：ＴＮＣ
Ｚｉｎｃ Ｆｉｎｇｅｒ Ｅ−Ｂｏｘ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｈｏｍｅｏｂｏｘ ２：ＺＥＢ２
セルグリシン（Ｓｅｒｇｌｙｃｉｎ）：ＳＲＧＮ
ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ ｓｕｌｆａｔｅ ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ ４：ＣＳＰＧ４
図３〜図７に示すように、ＥＭＴマーカーのうち、間葉系マーカーであるＳｎａｉｌ、Ｓｌｕｇ、ＣＤＨ３、ＭＭＰ１、ＭＭＰ７、及びＥＣＭであるＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ３、ＬＡＭＣ２、ＨＭＭＲ、ＴＮＣは、いずれのＥＭＴ抑制化合物を適用した場合であっても発現が抑制された。これにより、これらの１０種のＥＭＴマーカーは、ＥＭＴ抑制化合物により共通して抑制される指標となることが確認された。これらの１０種以外のＥＭＴマーカーであっても、図３に示すように、オキサプロジンでは、ＺＥＢ２、ＭＭＰ３、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＳＰＧ４、ＳＲＧＮの発現低下が確認された。図４に示すように、エパルレスタットでは、ＺＥＢ２、ＣＤＨ２、ＦＮ１、ＶＩＭ、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ５Ａ２、ＣＯＬ１３Ａ１、ＣＳＰＧ４、ＳＲＧＮの発現低下が確認された。図５に示すように、ザフィルルカストでは、ＭＭＰ３、ＣＯＬ１３Ａ１、ＬＡＭＢ３、ＣＳＰＧ４の発現低下が確認された。図６に示すように、アンレキサノクスでは、ＺＥＢ２、ＣＤＨ２、ＭＭＰ３、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１３Ａ１の発現低下が確認された。図７に示すように、ザルトプロフェンでは、ＺＥＢ２、ＦＮ１、ＣＯＬ１３Ａ１、ＣＳＰＧ４の発現低下が確認された。これらのＥＭＴマーカーも、ＥＭＴ抑制化合物により抑制される指標となり得ることが確認された。
試験例６−２ ＥＭＴマーカーの発現変化２
５種の化合物（フルフェナム酸アルミニウム、メフェナム酸、スリンダク、チアプロフェン酸、セラトロダストについて、試験例６−１と同様の方法によりＩＣ５０を求めた。結果を表２に示す。
Figure 0006967222
表２に示すように、ＥＭＴ抑制効果が確認された５種の化合物（フルフェナム酸アルミニウム（添加濃度：２８μＭ（Ｃｍａｘ））、メフェナム酸（添加濃度：３９μＭ（Ｃｍａｘ））、スリンダク（添加濃度：１００μＭ）、チアプロフェン酸（添加濃度：１０００μＭ）、セラトロダスト（添加濃度：３１μＭ（Ｃｍａｘ）））について、試験例６−１と同様の方法により、ＥＭＴマーカーの発現変化を評価した。結果をそれぞれ図８〜図１２に示す。
図８〜図１２に示すように、５種のＥＭＴ抑制化合物（フルフェナム酸アルミニウム、メフェナム酸、スリンダク、チアプロフェン酸、セラトロダスト）においても、ＥＭＴ誘導時におけるＥＭＴマーカーの発現を低下させることが確認された。
試験例６−３ 運動能亢進の抑制試験
上述の試験例５−４に記載したＩｎｖａｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ法を用いて、ＥＭＴにより運動能が亢進したＲＰＥ細胞において、ＥＭＴ抑制化合物による影響を確認した。
プレートにＲＰＥ細胞（ＡＲＰＥ−１９）を播種し、５日間、３７℃にてインキュベートした。ＲＰＥ細胞に対して、試験例５−１に記載の条件によりＥＭＴを誘導し、５つの化合物（オキサプロジン、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、ザルトプロフェン）を添加、ＥＭＴ誘導２４時間後に細胞を回収した。回収した細胞は、ＢＤ Ｂｉｏｃｏａｔ Ｍａｔｒｉｇｅｌ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｃｈａｍｂｅｒ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｃｅ社 ＃３５４４８０）に播種し、３７℃にてさらに２４時間インキュベートした。インキュベート後、製造業者のプロトコルに従って非浸潤細胞を除去した後、１００％メタノールを加え室温１５分で細胞を固定した。ギムザ染色液（ナカライテスク社 ＃３７１１４−３５）を加え、室温３０分で染色した後、ＰＢＳで５分間×２回洗浄した。洗浄後、浸潤した細胞が残るメンブレンを回収し、スライドガラス上に封入した。１５分以上乾燥させた後、顕微鏡にて観察および画像を撮影し、浸潤した細胞数をカウントした。結果を図３２〜図３４に示す。
図３２〜図３４は、ＥＭＴ抑制化合物として、それぞれエパルレスタット、アンレキサノクス、ザフィルルカストを用いた結果を示している。また、図３２〜図３４の棒グラフにおいて、左の白抜きの棒グラフは、ＥＭＴ誘導時のＲＰＥ細胞の浸潤細胞数を示し、右の黒色の棒グラフは、左から順に低濃度から高濃度のＥＭＴ抑制化合物を添加した場合のＲＰＥ細胞の浸潤細胞数を示している。
図３２〜図３４に示すように、ＲＰＥ細胞において、ＥＭＴにより誘起される運動能が、ＥＭＴ抑制化合物の濃度依存的に、有意に抑制されることが確認された。
［７．ドルーゼン様構造体抑制試験による薬効評価］
プレートにＲＰＥ細胞（ＡＲＰＥ−１９）を播種し、５日間、３７℃にてインキュベートした。ＲＰＥ細胞に対して、試験例５−１に記載の条件によりＥＭＴを誘導し、同時に５つの化合物（オキサプロジン、エパルレスタット、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、ザルトプロフェン）を添加、ＥＭＴ誘導４８時間後に細胞を観察した。ＥＭＴ誘導コントロールとして、評価化合物（被験薬剤）を非添加のサンプルを用いた。観察後の細胞は、４％パラホルムアルデヒド溶液で室温３０分処理し固定化した後、ＰＢＳで３回洗浄した。０．２％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ／ＰＢＳ溶液で５分処理し、ＰＢＳで３回洗浄した。蛍光染色溶液（０．２％ Ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ−Ａｌｅｘａ ５６８（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ社 ＃Ａ１２３８０）／０．０５％ Ｈｏｃｈｅｓｔ３３３４２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社 ＃Ｈ３５７０）／３％ＢＳＡ−ＰＢＳ）にて室温１時間で細胞を染色した後、ＰＢＳで５分×３回洗浄を行った。蛍光染色を行った細胞は、Ｉｍａｇｅ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｍｉｃｒｏ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を用いて画像化し、ＭｅｔａＸｐｒｅｓｓ２．０（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を用いて数値化した。数値データからＦｏｃｕｓの形成度を解析することにより、非化合物添加時および非ＥＭＴ誘導時を基準としてＦｏｃｕｓ形成抑制率を算出し、各化合物におけるＥＭＴ抑制効果を検証した。蛍光画像取得後の細胞は全体像を弱拡大にて観察するために１００％メタノールで室温１０分×２回処理し、ギムザ染色液（ナカライテスク社 ＃３７１１４−３５）を加え、室温１５分で染色した。メタノールで３回洗浄した後、室温３時間で乾燥させた。乾燥した細胞を顕微鏡で観察した。結果を図３５〜図３９に示す。Ｆｏｃｕｓの形成抑制率は、上記の試験例６−１で示す式１により算出した。
図３５〜図３９は、ＥＭＴ抑制化合物として、それぞれオキサプロジン、エパルレスタット、アンレキサノクス、ザフィルルカスト、ザルトプロフェンを用いた結果を示している。図３５〜図３９に示すように、ＥＭＴ抑制化合物はいずれも、ＲＰＥ細胞モデルにおいて形成されたドルーゼン様構造体を濃度依存的に抑制することが確認された。すなわち、ドルーゼン様構造体抑制試験におけるＩＣ５０値は、オキサプロジンでは６１．０μＭ、エパルレスタットでは１６．９μＭ、アンレキサノクスでは３２．５μＭ、ザフィルルカストでは３．８μＭ、ザルトプロフェンでは１６．５μＭであった。
ドルーゼンはＲＰＥ細胞がＥＭＴを引き起こしたことに起因する構造体であるとの新たな知見に基づき、ドルーゼンに対してＥＭＴ抑制化合物を適用することでドルーゼンを抑制することが示された。この結果から、公知のＥＭＴ抑制化合物であっても、ドルーゼンに対して、同様の効果を奏することが推測される。
以下の方法により、５つのＥＭＴ抑制化合物について、最大薬物血漿中濃度（Ｃｍａｘ）を各薬剤のインタビューフォーム及び添付文書より求めた。
結果を表３に示す。
Figure 0006967222
表３に示すように、５つのＥＭＴ抑制化合物は、ＡＭＤに対する効果が期待される程度に十分な血中濃度であった。
［試験例８．ドルーゼン抑制評価のためのｉｎ ｖｉｖｏモデル試験］
試験例８−１．後眼部(網膜領域)へのドルーゼン様構造体形成の誘導
（１）後眼部(網膜領域)への炎症誘起によるドルーゼン様構造体の誘導方法
マウス後眼部網膜周辺に、Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｍｏｕｓｅ ＴＮＦ−ａ （Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社 ＃４１０−ＭＴ） ４００ｎｇを投与した。
投与方法は以下のとおりである。
１）ＰＢＳに溶解したＴＮＦ−ａ（１６０ｎｇ／μＬ）を２．５μＬ準備する。
２）マウスの眼球が良く見えるように瞼を押し広げる。
３）軽く抵抗を感じるところまで針を挿入し、薬液を注入する（４００ｎｇ／一眼）。
（２）眼球組織サンプルの作成方法
投与２週間後に眼球を摘出し、ホルマリン固定パラフィン包埋ブロックを作成した。
（３）ＲＰＥ細胞の形態的観察
組織サンプルは、キシレン５分×３回、１００％エタノール１分×２回、９０％エタノール１分、８０％エタノール１分、７０％エタノール１分、水５分間で処理し、脱パラフィンした。マイヤーヘマトキシリン溶液で４分間、エオジン液で１分間染色を行った。流水中で５分処理した後、７０％エタノール１分、８０％エタノール１分、９０％エタノール１分、１００％エタノール１分×２回、キシレン５分×３回で処理を行い、マリノールを用いて封入した。室温で１５分以上乾燥させた後、無処理のＲＰＥ細胞および炎症誘導のＲＰＥ細胞を観察した。結果を図４０に示す。
図４０に示すように、炎症誘導により網膜領域にドルーゼン様構造（点線で囲った部分）が形成された。無処理群の網膜色素上皮細胞は、立方状の形態を示し、隣接する細胞と密着に接しており、１層の整列を示していることが確認された（上の写真）。一方で、炎症誘導後は、１層に整列した網膜色素上皮細胞は観察されず、ドルーゼン様構造体の内部・周囲に存在しており、隣接する細胞との密着な結合が消失し、その形態は立方状から紡錘状に変化していることが確認された（下の写真）。
（４）免疫組織化学による各マーカーの評価方法
ブロックより眼球組織切片を作成した。組織サンプルを気相インキュベーター中で５６℃、３０分間インキュベートした後、キシレン５分×３回、１００％エタノール１分×２回、９０％エタノール１分、８０％エタノール１分、７０％エタノール１分、水５分間で処理し、脱パラフィンした。Ｄｅｌｉｃａｔｅ Ｍｅｌａｎｉｎ Ｂｌｅａｃｈ Ｋｉｔ ｆｏｒ Ｓｐｅｃｉａｌ Ｓｔａｉｎｓ ａｎｄ ＩＨＣ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ社 ＃２４９０９−１）を用いて製造業者のプロトコルに従って、組織中のメラニン色素を除去した後、クエン酸バッファー ｐＨ６．０を用いて、マイクロウェーブ処理１０分間により抗原を賦活化した。室温で３０分静置した後、ＰＢＳで５分、３％過酸化水素／ＰＢＳ溶液で５分、ＰＢＳで５分処理を行い、内在性ペルオキシダーゼを不活性化した。３％ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液中で室温にて３０分静置し、組織をブロッキングした。１次抗体として、１．５％ ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液にて５００倍に希釈した抗Ｅ−Ｃａｄｈｅｒｉｎ抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｉｅｎｃｅ社 ＃６１０１８２）および１０００倍に希釈した抗Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ抗体（Ｓｉｇｍａ社 ＃Ｃ２９３１）および１０００倍に希釈した抗Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ抗体（ａｂｃａｍ社 ＃４５６８８）および１００倍に希釈した抗Ｖｉｍｅｎｔｉｎ抗体（Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社 ＃５７４１）を１組織当たり２００μＬ滴下し、４℃、１７時間で組織と反応させた。１次抗体と反応させた組織は、ＰＢＳで５分×３回洗浄した後、室温にて３０分間、２次抗体（抗Ｅ−Ｃａｄｈｅｒｉｎ抗体および抗Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ抗体に対してはＭｏｕｓｅ ｏｎ Ｍｏｕｓｅ（Ｍ．Ｏ．Ｍ．）Ｅｌｉｔｅ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｋｉｔ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社 ＃ＰＫ−２２００）、抗Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ抗体および抗Ｖｉｍｅｎｔｉｎ抗体に対してはＶＥＣＴＡＳＴＡＩＮ Ｅｌｉｔｅ ＡＢＣ Ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ Ｋｉｔ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社 ＃ＰＫ−６１０１））と反応させ、ＰＢＳで５分×３回洗浄した後、製造業者のプロトコルに従って室温３０分にてＡＢＣ反応を行った。組織をＰＢＳで５分×３回洗浄した後、ＩｍｍＰＡＣＴ ＡＭＥＣ Ｒｅｄ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＨＲＰ）Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社 ＃ＳＫ−４２８５）を用いて、室温３分間で発色を行った。発色させた組織は、Ｎｅｗ ヘマトキシリン ＴｙｐｅＭ（武藤化学株式会社 ＃３０１４１）を用いて染色した後、流水中で３分静置し、７０％エタノール１分、８０％エタノール１分、９０％エタノール１分、１００％エタノール１分×２回、キシレン５分×３回で処理を行い、マリノールを用いて封入した。室温で１５分以上乾燥させた後観察した。Ｅ−Ｃａｄｈｅｒｉｎについての結果は図４１に示す。Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎについての結果は図４２に示す。Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎについての結果は図４３に示す。Ｖｉｍｅｎｔｉｎについての結果は図４４に示す。
図４１に示すように、無処理の網膜上皮細胞では細胞間に強陽性のＥ−Ｃａｄｈｅｒｉｎの染色が見られ、強固な細胞間接着が保持されていた（上の写真）。一方で、炎症誘導により形成されたドルーゼン様構造体の内部及びその周囲の網膜色素上皮細胞では染色が消失していた（下の写真）。
図４２に示すように、無処理の網膜上皮細胞では細胞間に強陽性のＣｙｔｏｋｅｒａｔｉｎの染色が見られた（上の写真）。一方で、炎症誘導により形成されたドルーゼン様構造体の特に周囲の網膜色素上皮細胞では染色が消失していた（下の写真）。
図４３に示すように、無処理の網膜上皮細胞(点線で囲った部分)ではシグナルは陰性であり、Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎの発現は認められなかった（上の写真）。一方で、炎症誘導により形成されたドルーゼン様構造体の内部および周囲では染色が陽性であり、Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎの発現が認められた（下の写真）。
図４４に示すように、無処理の網膜上皮細胞(点線で囲った部分)ではシグナルは陰性であり、Ｖｉｍｅｎｔｉｎの発現は認められなかった（上の写真）。一方で、炎症誘導により形成されたドルーゼン様構造体の内部および周囲では染色が陽性であり、Ｖｉｍｅｎｔｉｎの発現が認められた（下の写真）。
試験例８−２．薬理評価：ドルーゼン様構造体形成の抑制効果
（１）後眼部(網膜領域)への炎症誘起によるドルーゼン様構造体の誘導方法
試験例８−１に記載の方法により、マウス後眼部網膜周辺に、Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｍｏｕｓｅ ＴＮＦ−ａ （Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社 ＃４１０−ＭＴ） ４００ｎｇを投与した。
（２）評価化合物の投与
評価化合物は０．５％カルボキシメチルセルロース水溶液に懸濁し、オキサプロジンは６００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙで、エパルレスタットは６００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙで、ザルトプロフェンは４０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙになるように１４日間、ゾンデを用いて経口投与した。
（３）ＲＰＥ細胞の形態的観察
試験例８−１に記載の方法により、眼球組織サンプルを調製し、無処理のＲＰＥ細胞および炎症誘導のＲＰＥ細胞を、それぞれＨＥ染色、Ｅ−Ｃａｄｈｅｒｉｎの免疫染色、又はＦｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎの免疫染色で観察した。
オキサプロジンの薬理評価を図４５〜図４７に示す。エパルレスタットの薬理評価を図４８〜図５０に示す。ザルトプロフェンの薬理評価を図５１〜図５３に示す。
図４５に示すように、炎症誘導により網膜領域にドルーゼン様構造(点線で囲った部分)が形成された（上の写真）。オキサプロジン投与群では明らかにドルーゼン様構造体の形成が抑制されていた（下の写真）。
炎症誘導後は、1層に整列した網膜色素上皮細胞は観察されず、ドルーゼン様構造体の内部・周囲に存在しており、隣接する細胞との密着な結合が消失し、その形態は立方状から紡錘状に変化していた。一方で、オキサプロジン投与群では立方状の形態を保つ細胞が多く観察された。
図４６に示すように、炎症誘導により形成されたドルーゼン様構造体の内部及びその周囲の網膜色素上皮細胞ではＥ−Ｃａｄｈｅｒｉｎの染色が消失していた（上の写真）。一方で、オキサプロジン投与群の網膜上皮細胞では細胞間に強陽性の染色が見られ、強固な細胞間接着が保持されていた（下の写真）。
図４７に示すように、炎症誘導により形成されたドルーゼン様構造体の内部および周囲では染色が陽性であり、Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎの発現が認められた（上の写真）。一方で、オキサプロジン投与群ではドルーゼン様構造体の形成が抑制されており、また、染色シグナル強度も弱いことが確認された（下の写真）。
図４８に示すように、炎症誘導により網膜領域にドルーゼン様構造(点線で囲った部分)が形成された（上の写真）。エパルレスタット投与群では明らかにドルーゼン様構造体の形成が抑制されていた（下の写真）。
炎症誘導後は、1層に整列した網膜色素上皮細胞は観察されず、ドルーゼン様構造体の内部・周囲に存在しており、隣接する細胞との密着な結合が消失し、その形態は立方状から紡錘状に変化していた。一方で、エパルレスタット投与群では立方状の形態を保つ細胞が多く観察された。
図４９に示すように、炎症誘導により形成されたドルーゼン様構造体の内部及びその周囲の網膜色素上皮細胞ではＥ−Ｃａｄｈｅｒｉｎの染色が消失していた（上の写真）。一方で、エパルレスタット投与群の網膜上皮細胞では細胞間に強陽性の染色が見られ、強固な細胞間接着が保持されていた（下の写真）。
図５０に示すように、炎症誘導により形成されたドルーゼン様構造体の内部および周囲では染色が陽性であり、Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎの発現が認められた（上の写真）。一方で、エパルレスタット投与群ではドルーゼン様構造体の形成が抑制されており、また、染色シグナル強度も弱いことが確認された（下の写真）。
図５１に示すように、炎症誘導により網膜領域にドルーゼン様構造(点線で囲った部分)が形成された（上の写真）。ザルトプロフェン投与群では明らかにドルーゼン様構造体の形成が抑制されていた（下の写真）。
炎症誘導後は、1層に整列した網膜色素上皮細胞は観察されず、ドルーゼン様構造体の内部・周囲に存在しており、隣接する細胞との密着な結合が消失し、その形態は立方状から紡錘状に変化していた。一方で、ザルトプロフェン投与群では立方状の形態を保つ細胞が多く観察された。
図５２に示すように、炎症誘導により形成されたドルーゼン様構造体の内部及びその周囲の網膜色素上皮細胞ではＥ−Ｃａｄｈｅｒｉｎの染色が消失していた（上の写真）。一方で、ザルトプロフェン投与群の網膜上皮細胞では細胞間に強陽性の染色が見られ、強固な細胞間接着が保持されていた（下の写真）。
図５３に示すように、炎症誘導により形成されたドルーゼン様構造体の内部および周囲では染色が陽性であり、Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎの発現が認められた（上の写真）。一方で、ザルトプロフェン投与群ではドルーゼン様構造体の形成が抑制されており、また、染色シグナル強度も弱いことが確認された（下の写真）。
［製剤例］
（処方例１ 錠剤）
通常の錠剤の製造方法に基づいて打錠して、錠剤を製造する。カルメロースカルシウム、ヒプロメロース、結晶セルロース、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウムなどを添加物として、オキサプロジンを１００ｍｇもしくは２００ｍｇを含む素錠となどとして製造され、通常、成人には１日量４００ｍｇを１〜２回に分けて経口投与することができる。なお、年齢、症状により適宜増減するが、１日最高量は６００ｍｇとする。
（処方例２−１ 錠剤）
通常の錠剤の製造方法に基づいて打錠して、錠剤を製造する。カルメロースカルシウム、結晶セルロース、酸化チタン、ステアリン酸マグネシウム、トウモロコシデンプン、乳糖水和物、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒプロメロース、マクロゴール６０００を添加物として、ザルトプロフェンを８０ｍｇ含むフィルムコーティング錠などとして製造され、通常、成人に１回８０ｍｇを１日３回経口投与することができる。頓用の場合は、１回８０ｍｇ〜１６０ｍｇを経口投与する。
（処方例２−２ 錠剤）
通常の錠剤の製造方法に基づいて打錠して、錠剤を製造する。カルナウバロウ、カルメロースカルシウム、結晶セルロース、酸化チタン、ステアリン酸マグネシウム、トウモロコシデンプン、乳糖水和物、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒプロメロースを添加物として、ザルトプロフェンを８０ｍｇ含むフィルムコーティング錠などとして製造され、通常、成人に１回８０ｍｇを１日３回経口投与することができる。頓用の場合は、１回８０ｍｇ〜１６０ｍｇを経口投与する。
（処方例３ 錠剤）
通常の錠剤の製造方法に基づいて打錠して、錠剤を製造する。乳糖水和物、結晶セルロース、ポビドン、クロスカルメロースナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、ヒプロメロース、酸化チタンなどを添加物として、ザフィルルカストを２０ｍｇ含むフィルムコーティング錠などとして製造され、通常、成人には１日４０〜８０ｍｇを朝食後及び就寝前の２回に分けて経口投与することができる。なお、高齢者の１日投与量は４０ｍｇ、成人（高齢者を除く）の１日最高量は８０ｍｇとする。
（処方例４ 錠剤）
通常の錠剤の製造方法に基づいて打錠して、錠剤を製造する。トウモロコシデンプン、ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロースカルシウム、ステアリン酸マグネシウム、乳糖水和物などを添加物として、アンレキサノクスを２５ｍｇもしくは５０ｍｇ含む素錠として製造され、通常、成人には症状に応じて１回として２５〜５０ｍｇを１日３回、朝、夕及び就寝前もしくは朝、昼及び夕に経口投与することができる。
（処方例５ 錠剤）
通常の錠剤の製造方法に基づいて打錠して、錠剤を製造する。Ｄ−マンニトール、ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロースカルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ヒプロメロース、酸化チタン、ポリオキシエチレン（１０５）ポリオキシプロピレン（５）グリコールなどを添加物として、エパルレスタットを５０ｍｇ含むフィルムコーティング錠などとして製造され、通常、成人には１回５０ｍｇを１日３回毎食前に経口投与することができる。なお、年齢、症状により適宜増減することができる。
（処方例６ 錠剤）
通常の錠剤の製造方法に基づいて打錠して、錠剤を製造する。トウモロコシデンプン、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ヒプロメロース、酸化チタン、ヒドロキシプロピルセルロース、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン［160］ポリオキシプロピレン［30］グリコールなどを添加物として、チアプロフェン酸を１００ｍｇ又は２００ｍｇ含むフィルムコーティング錠などとして製造され、通常、成人には１回２００ｍｇを１日３回経口投与することができる。なお、年齢、症状により適宜増減することができる。
（処方例７ 錠剤）
通常の錠剤の製造方法に基づいて打錠して、錠剤を製造する。カルメロースカルシウム、ヒプロメロース、結晶セルロース、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウムなどを添加物として、フルフェナム酸アルミニウムを１２５ｍｇもしくは２５０ｍｇを含む素錠となどとして製造され、通常、成人には１２５〜２５０ｍｇを１日３回に分けて経口投与することができる。なお、年齢、症状により適宜増減するが、１日最高量は７５０ｍｇとする。
（処方例８ 錠剤）
通常の錠剤の製造方法に基づいて打錠して、錠剤を製造する。トウモロコシデンプン、ヒプロメロース、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、タルク、酸化チタンなどを添加物として、メフェナム酸を２５０ｍｇを含む素錠となどとして製造され、通常、成人１回５００ｍｇ、その後６時間毎に１回２５０ｍｇ経口投与することができる。なお、年齢、症状により適宜増減するが、１日最高量は１５００ｍｇとする。
（処方例９ 錠剤）
通常の錠剤の製造方法に基づいて打錠して、錠剤を製造する。セルロース、アルファー化デンプン、ステアリン酸マグネシウムなどを添加物として、スリンダクを５０ｍｇ又は１００ｍｇを含む素錠となどとして製造され、通常、成人１日量３００ｍｇを１日２回に分けて経口投与することができる。なお、年齢、症状により適宜増減する。
（処方例１０ 錠剤）
通常の錠剤の製造方法に基づいて打錠して、錠剤を製造する。ヒドロキシプロピルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、トウモロコシデンプン、乳糖水和物などを添加物として、セラトロダストを４０ｍｇ又は８０ｍｇを含む素錠となどとして製造され、通常、成人１日１回８０ｍｇを経口投与することができる。

Claims (3)

  1. ザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、エパルレスタット、プランルカスト、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分として含有し、
    経口剤、静脈内投与剤、点眼剤、又は眼軟膏剤である、脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
  2. 前記脈絡膜新生血管が、加齢性黄斑変性症、ポリープ状脈絡膜血管症（ＰＣＶ）、又は網膜血管腫状増殖（ＲＡＰ）において生じる、請求項１又は２に記載の脈絡膜新生血管の予防及び／又は治療剤。
  3. ザルトプロフェン、オキサプロジン、チアプロフェン酸、フルフェナム酸、メフェナム酸、エパルレスタット、プランルカスト、ザフィルルカスト、アンレキサノクス、セラトロダスト及びこれらの薬学的に許容できる塩からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分として含有し、
    経口剤、静脈内投与剤、点眼剤、又は眼軟膏剤である、加齢性黄斑変性症の予防及び／又は治療剤。
JP2017556480A 2015-12-17 2016-12-16 脈絡膜新生血管抑制剤又はドルーゼン抑制剤およびその評価又はスクリーニング方法 Active JP6967222B2 (ja)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2015246742 2015-12-17
JP2015246742 2015-12-17
JP2016133753 2016-07-05
JP2016133753 2016-07-05
PCT/JP2016/087647 WO2017104833A1 (ja) 2015-12-17 2016-12-16 脈絡膜新生血管抑制剤又はドルーゼン抑制剤およびその評価又はスクリーニング方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPWO2017104833A1 JPWO2017104833A1 (ja) 2018-10-11
JP6967222B2 true JP6967222B2 (ja) 2021-11-17

Family

ID=59056643

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2017556480A Active JP6967222B2 (ja) 2015-12-17 2016-12-16 脈絡膜新生血管抑制剤又はドルーゼン抑制剤およびその評価又はスクリーニング方法

Country Status (7)

Country Link
US (1) US10761087B2 (ja)
EP (2) EP3750540B1 (ja)
JP (1) JP6967222B2 (ja)
CN (1) CN108883096A (ja)
ES (2) ES2972329T3 (ja)
TW (2) TWI814700B (ja)
WO (1) WO2017104833A1 (ja)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110585196B (zh) * 2018-06-13 2022-11-04 郭涛 一种治疗及预防眼科疾病的药物及其应用
CN109991055A (zh) * 2019-03-28 2019-07-09 华中科技大学苏州脑空间信息研究院 多色荧光染料和荧光蛋白标记样本的塑性包埋方法
CN110496124A (zh) * 2019-04-10 2019-11-26 中山大学附属第五医院 治疗脉管畸形的化合物
CN110604729B (zh) * 2019-10-12 2022-03-11 南通大学 双硫仑联合葡萄籽原花青素在制备用于治疗弥漫性大b细胞淋巴瘤药物方面的应用
CN112156172B (zh) * 2020-10-26 2022-11-25 上海交通大学医学院附属第九人民医院 血小板反应蛋白1在制备预防和/或治疗年龄相关性黄斑变性的药物中的应用
CN112526038B (zh) * 2020-12-15 2022-07-12 河北科技大学 一种卡洛芬及其有关物质的检测方法
CN112546044B (zh) * 2020-12-23 2022-12-06 广东宏盈科技有限公司 一种噻洛芬酸与异黄酮药物组合物及其应用
CN112926116B (zh) * 2021-03-01 2023-02-17 哈尔滨工业大学 一种基于虚拟现实的体育馆火灾疏散行为数据收集系统及其收集方法
CN114480490A (zh) * 2021-12-31 2022-05-13 四川省医学科学院·四川省人民医院 一种构建视网膜新生血管性疾病动物模型的方法
CN116371376B (zh) * 2023-03-22 2024-05-24 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种双功能基间苯三酚吸附材料及其制备方法和应用
CN116253831B (zh) * 2023-03-23 2024-03-08 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种吸附间苯三酚的分子印迹材料及其制备方法和应用

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2005294382A1 (en) * 2004-10-04 2006-04-20 Qlt Usa, Inc. Ocular delivery of polymeric delivery formulations
US20070196350A1 (en) * 2006-02-22 2007-08-23 Bartels Stephen P Compositions and Methods for Effecting Controlled Posterior Vitreous Detachment
US20090253745A1 (en) * 2007-11-28 2009-10-08 Sirion Therapeutics, Inc. Modulators of ocular oxidative stress
US20090270490A1 (en) * 2008-04-24 2009-10-29 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Methods involving aldose reductase inhibition
KR101423631B1 (ko) * 2012-08-17 2014-07-25 주식회사파마킹 에스-알릴엘-시스테인을 유효성분으로 포함하는 안질환 예방 또는 치료용 조성물 및 이를 포함하는 의약제제
MX2015005839A (es) * 2012-11-08 2015-12-17 Clearside Biomedical Inc Metodos y dispositivos para el tratamiento de trastornos oculares en sujetos humanos.
CA2928702A1 (en) * 2013-10-25 2015-04-30 Children's Medical Center Corporation Methods of treating or preventing vascular diseases of the retina

Also Published As

Publication number Publication date
EP3391883A1 (en) 2018-10-24
TW202345783A (zh) 2023-12-01
EP3391883A4 (en) 2019-04-17
WO2017104833A1 (ja) 2017-06-22
EP3750540A1 (en) 2020-12-16
TWI814700B (zh) 2023-09-11
US10761087B2 (en) 2020-09-01
CN108883096A (zh) 2018-11-23
ES2972329T3 (es) 2024-06-12
ES2819539T3 (es) 2021-04-16
TWI837028B (zh) 2024-03-21
TW201733574A (zh) 2017-10-01
JPWO2017104833A1 (ja) 2018-10-11
US20180364216A1 (en) 2018-12-20
EP3750540B1 (en) 2023-12-13
EP3391883B1 (en) 2020-08-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6967222B2 (ja) 脈絡膜新生血管抑制剤又はドルーゼン抑制剤およびその評価又はスクリーニング方法
Haritoglou et al. Alpha-lipoic acid for the prevention of diabetic macular edema
CN106132201A (zh) 用于治疗眼部疾病的组合物和方法
CN109789148A (zh) 二氨基吩噻嗪的给药和剂量
IL235395A (en) Use of compounds for the preparation of drugs for the treatment of blind eye diseases
Xie et al. Activated AMPK mitigates diabetes-related cognitive dysfunction by inhibiting hippocampal ferroptosis
KR20090034810A (ko) 멜라토닌 효능제 치료
JP2014515408A (ja) 行動及び精神障害の治療のためのシロ−イノシトール
WO2022150580A1 (en) Treatment of dry eye disease
JP2017533267A (ja) 脳アミロイド血管症の予防及び治療用医薬品を製造するためのエダラボンの使用
TW202313003A (zh) 用於治療憂鬱之組成物及方法
JP2014507475A (ja) シクロベンザプリンを使用してうつ病を処置するための方法および組成物
EP3310353A1 (en) Compositions and methods for treating and diagnosing ocular disorders
US20210267999A1 (en) Use of dopamine and serotonin receptor antagonists for treatment in a subject with retinal degeneration
WO2022123837A1 (ja) 強膜菲薄化治療用点眼剤及び強膜菲薄化治療剤のスクリーニング方法
CA2870353C (en) Compositions and methods for treating and diagnosing ocular disorders
CN106619602B (zh) 益母草碱的用途
WO2023145578A1 (ja) 薬剤点眼による近視誘導モデル
Tokuda et al. The effect of rebamipide on ocular surface disorders induced by latanoprost and timolol in glaucoma patients
Shuang et al. Grp78 alleviates sodium iodate-induced retinal cell injury in vivo and in vitro
Zheng et al. A study of retinopathy analysis in type 2 diabetes patients in Chinese population.
JP2022531484A (ja) 加齢性黄斑変性症を治療するための物質および方法
EA045318B1 (ru) Соединения для лечения глазных болезней, связанных с избыточной васкуляризацией
KR101693069B1 (ko) 신증후군의 예방 또는 치료 활성을 갖는 항산화제의 용도
JP2019524860A (ja) 非アルコール性脂肪肝疾患の治療法

Legal Events

Date Code Title Description
RD01 Notification of change of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7426

Effective date: 20180626

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821

Effective date: 20180626

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20191127

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20201111

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20210112

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20210319

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20210517

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20210719

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20210916

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20211013

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 6967222

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250