JP6959204B2

JP6959204B2 - 新規セラミドそれを含む皮膚保湿剤およびセラミド組成物の製造方法

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Publication number: JP6959204B2
Application number: JP2018174159A
Authority: JP
Inventors: 忠士梅本; 伊藤　賢一; 達治高橋; 茂人嶋田
Original assignee: Ichimaru Pharcos Co Ltd
Current assignee: Ichimaru Pharcos Co Ltd
Priority date: 2018-09-18
Filing date: 2018-09-18
Publication date: 2021-11-02
Anticipated expiration: 2038-09-18
Also published as: JP2020045308A

Description

本発明は、新規セラミド、それを含む天然由来のセラミド組成物、それらの皮膚保湿剤としての用途およびセラミド組成物の製造方法に関する。

皮膚は外界と生体との境界に位置するゆえに、紫外線、酸化ストレス、乾燥、化学物質および微生物などの恒常的な外界からの刺激に対する防御機構を備えている。スフィンゴ脂質の一つであるセラミドは皮膚の角質層に存在し、角質層中で細胞間脂質の約５０％を占めている。スフィンゴ脂質（sphingolipid）とは、スフィンゴシン骨格を含む複合脂質の総称である。また、グルコシルセラミドは、セラミドにグルコースが結合したスフィンゴ脂質の一種である。皮膚表皮細胞で合成されたセラミドは一旦グルコシルセラミドまたはスフィンゴミエリンの形で蓄えられたあと、細胞外へ排出されて、β-グルコセレブロシダーゼ（β-グルコシダーゼ）とスフィンゴミエリナーゼの作用を受けて、再びセラミドとなり、表皮角質層において透過バリアの機能を発揮している。

セラミドは、長鎖塩基であるスフィンゴシンに脂肪酸が結合した構造をもっている。分化後期（顆粒層）のケラチノサイトは様々なセラミドを合成するが、これら分子の多様性は、セラミドを構成する脂肪酸とスフィンゴシン塩基のヒドロキシ化（非ヒドロキシ、２−ヒドロキシおよび末端のω−ヒドロキシ）の多様性に起因する。ヒドロキシ化の多様性に加えて、脂肪酸とスフィンゴシン塩基の鎖長にも多様性がある。これらのセラミドは、生体内においては皮膚の他に、血液、脳、脊髄、神経組織に見出され、植物ではコムギ、コメ、ダイズ、キビ、ホウレンソウ、キノコ類等に含まれる。

植物原料からのセラミドの抽出方法は、例えば、ユズ、ブドウおよびサクランボなどの種子、コムギ、コメならびにダイズ等の植物原料からアルコール系溶媒（例えば、エタノール）により抽出する方法（特許文献１参照）、コムギ、ダイズ、トウモロコシ、米糠等の植物原料をアルカリ性エタノール溶媒で加水分解したのち、ヘキサン、アセトンおよび水の混合溶媒による抽出方法（例えば、特許文献２および３参照）などが知られている。植物性セラミドは、植物由来のため、化粧品やサプリメントに配合しても、身体に優しく刺激になりにくいという特徴があるが、植物由来成分のため、ヒトの皮膚にあるセラミドとは微妙に構造が異なる。コメ、トウモロコシおよびダイズなどの植物から抽出された植物性セラミドは、皮膚角質層に存在するセラミドと同じ皮膚バリア機能を有するか否かは明らかではない。

グルコシルセラミドから脱グルコシド化反応によりセラミドを製造する方法はすでに報告されている（非特許文献１〜３参照）。非特許文献１には、ガラクトまたはグルコセレブロシドから過ヨウ素酸酸化およびＮａＢＨ_４還元を行って糖部分を分解することで、温和な条件での酸加水分解によりセラミドを調製する方法と、加熱条件下での酸加水分解物から調製したスフィンゴシンをＮ−アシル化してセラミドを再構築する方法が記載されている。非特許文献２は、脳由来のセレブロシドから、クロロホルム／エタノール溶液中で過ヨウ素酸酸化し、ＮａＢＨ_４還元後に温和な酸性条件下でセラミドを調製する方法が記載されている。また、非特許文献３には、イソギンチャク由来のセレブロシドを上記と同様の条件下で分解し、その構造解析を行った結果が報告されている。

特許第４１０８０６９号公報特開２００２−０３００９３号公報特開２００６−２３２６９９号公報

Ｉｇａ，Ｓ．ｅｔａｌ．，ＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆＣｅｒａｍｉｄｅａｎｄＳｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅｂｙＣｈｅｍｉｃａｌａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＭｅｔｈｏｄｓ．ＲｏｍａｎｉａｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌＬｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．１６，Ｎｏ．６，ｐｐ．６８４１−６８４６Ｃａｒｔｅｒ，ＨＥ．ｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆｔｈｅｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓ：ＸＩＩ．Ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｏｆｃｅｒｅｂｒｏｓｉｄｅｓｔｏｃｅｒａｍｉｄｅｓａｎｄｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ；ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆＧａｕｃｈｅｒｃｅｒｅｂｒｏｓｉｄｅ．Ｊ．ＬｉｐｉｄＲｅｓｅａｒｃｈ１９６１，Ｖｏｌ．２，Ｎｏ．３，ｐｐ．２２８−２３４．ＫａｒｌｓｓｏｎＫＡ，ＬｅｆｆｌｅｒＨ，ＳａｍｕｅｌｓｓｏｎＢＥ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｃｅｒｅｂｒｏｓｉｄｅ（ｍｏｎｏｇｌｙｃｏｓｙｌｃｅｒａｍｉｄｅ）ｆｒｏｍｔｈｅｓｅａａｎｅｍｏｎｅ，Ｍｅｔｒｉｄｉｕｍｓｅｎｉｌｅ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｍａｊｏｒｌｏｎｇ−ｃｈａｉｎｂａｓｅａｓａｎｕｎｕｓｕａｌｄｉｅｎｉｃｂａｓｅｗｉｔｈａｍｅｔｈｙｌｂｒａｎｃｈａｔａｄｏｕｂｌｅｂｏｎｄ．ＢｉｏｃｈｉｍＢｉｏｐｈｙｓＡｃｔａ．１９７９，Ｊｕｌ２７；５７４（１）：７９−９３．

しかしながら、上記非特許文献１〜３に記載の方法は、有害性の高いクロロホルムなどの溶媒を用いており、また反応収率の記載がなく反応条件の最適化なども行われていない。このような従来の製造方法によると、セラミドの収量が少なく、しかも、抽出、精製に多くの手間とコストを要するといった問題があった。本発明は、天然に存在するグルコシルセラミドから、有害な抽出溶媒を好ましくは用いないで安全かつ簡便な方法にて、ヒトの皮膚に存在するセラミドとより構造の類似した新規セラミドを得ることを目的の1つとする。

本発明はかかる課題を解決するためになされたものである。

すなわち、本発明の１つの実施形態は、下記式（Ｉ）：

（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３およびＲ^４は、互いに独立して水素原子、メチル基、エチル基またはアセチル基を表し、波線は、隣接する二重結合がＥまたはＺの配置であることを表し、ｎは、１〜１１のいずれかの整数を表す。）で示されるセラミドである。

また、他の実施形態では、上記式（Ｉ）で示される複数のセラミドを含む組成物であって、セラミド混合物中におけるｎの数の変動による脂肪酸部分の鎖長、およびＥまたはＺの配置の割合が、コメのセラミド中におけるそれらの存在量と関連する、コメ由来のセラミド組成物を提供する。

本発明の異なる観点では、上記セラミドまたはセラミド組成物を有効成分として含む皮膚保湿剤が提供される。

さらに異なる観点では、上記セラミド組成物の製造方法であって、
コメから抽出されたグルコシルセラミドを用意し、
水と混和可能な有機溶媒を含む水性媒体中で、前記グルコシルセラミドと過ヨウ素酸ナトリウムとを反応させて前記グルコシルセラミドをアルデヒド中間体に酸化する工程と、
前記水と混和可能な有機溶媒中で、アルデヒド中間体と水素化ホウ素ナトリウムとを反応させてアルデヒド中間体を還元する工程と、
アルデヒド中間体の還元反応物に、酸および水を添加して加水分解反応を行い、下記式（ＩＩ）：

（式中、波線は、隣接する二重結合がＥまたはＺの配置であることを表し、ｎは、１〜１１のいずれかの整数を表す。）に示すセラミドを得る工程と、
を含む、セラミド組成物の製造方法を提供する。

本発明の製造方法によると、有害な薬品を好ましくは用いずに、簡便な方法にて、植物原料から安全性に優れたセラミドを製造することができる。しかも、本発明の新規セラミドは、ヒトの皮膚角質層に存在するセラミドと構造的に類似しているため、優れた皮膚保湿性を有することが期待される。

図１は、本発明の製造方法によるグリコシルセラミドの脱グリコシル化法のスキームである。図の標記にて、「１」は化合物１、「２」は化合物２、「４」は化合物４である。図２は、実施例７で得られた化合物４のＨＰＬＣ分析の結果である。

以下、本発明にかかる新規セラミドおよびこれを含むセラミド組成物について最初に説明し、続いてその製造方法および皮膚保湿剤としての用途について説明する。

（セラミドおよびセラミド組成物）
本明細書においてセラミドとは、スフィンゴ脂質の一種であり、スフィンゴシンと脂肪酸がアミド結合したものである。また、セラミドにグルコースが結合したものをグルコシルセラミドという。本発明の１つの実施形態として、下記式（Ｉ）で表されるセラミドが挙げられる。

（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３およびＲ^４は、互いに独立して水素原子、メチル基、エチル基またはアセチル基を表し、波線は、隣接する二重結合がＥまたはＺの配置であることを表し、ｎは、１〜１１のいずれかの整数を表す。）で示されるセラミドである。すなわち、式（Ｉ）で表されるセラミドにおいてスフィンゴシン由来の長鎖塩基は、２つの二重結合に基づく幾何異性体を含んでおり、一方（４位）の二重結合はＥ（ｅｎｔｇｅｇｅｎ）であり、他方（８位）の二重結合はＥおよびＺ（ｚｕｓａｍｍｅｎ）の何れかとして存在してもよい。したがって、このような異性体およびそれらの混合物のすべては、本発明の範囲内に含まれる。

式（Ｉ）において、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３およびＲ^４が、ともに水素原子であるセラミドは、コメから抽出されたグルコシルセラミドを、後述する方法にて脱グルコシル化して製造することができる。Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３およびＲ^４のいずれか又は全部がメチル基またはエチル基のようなアルキル基で置換された誘導体は、上記コメ由来のセラミドを、塩基の存在下に、アルキル化剤を作用させて得ることができる。用いる塩基としては、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等の無機塩基、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、ナトリウムイソプロポキシド、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド等のアルカリ金属アルコキシド、水素化ナトリウム、水素化カリウム等のアルカリ金属ヒドリドが挙げられ、なかでも収率、経済性の観点から炭酸ナトリウム、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、水素化ナトリウムが好ましい。

用いるアルキル化剤としては、ヨウ化メチル、ヨウ化エチル、臭化メチル、臭化エチル、臭化ベンジル、塩化メチル、塩化エチル、塩化ベンジル等のハロゲン化アルキル、硫酸ジメチル、硫酸ジエチル等の硫酸エステル、メタンスルホン酸メチル、メタンスルホン酸エチル、ｐ−トルエンスルホン酸メチル、ｐ−トルエンスルホン酸エチル、ｐ−トリフルオロメタンスルホン酸メチル等のスルホン酸エステルが挙げられ、なかでも収率、経済性の観点からヨウ化メチル、ヨウ化エチル、臭化メチル、臭化エチル、臭化ベンジル、塩化ベンジル、メタンスルホン酸メチル、メタンスルホン酸エチル、ｐ−トルエンスルホン酸メチル、硫酸ジメチル、硫酸ジエチルが好ましい。なかでも、ヨウ化メチル、ヨウ化エチル、硫酸ジメチル、硫酸ジエチルが特に好ましい。

また、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３およびＲ^４のいずれかまたは全部がアセチル化された誘導体は、無水酢酸や塩化アセチルなどのアセチル化剤を作用させることで得ることができる。

上記式（Ｉ）で示されるセラミドは、ｎの数の変動およびＥまたはＺの配置の違いによって複数のセラミドを含んでいる。したがって、本発明の他の実施形態は、上記式（Ｉ）で示される複数のセラミドを含む組成物であって、かかるセラミド混合物中におけるｎの数が変動することによる脂肪酸部分の鎖長、およびＥまたはＺの配置の割合が、植物由来、特にコメのセラミド中におけるそれらの存在量と関連するセラミド組成物である。コメを含む植物原料から抽出されたセラミドは、天然素材由来であることから安全性及びコストの観点からヘルスケア製品への利用が望まれている。しかしながら、これらの植物由来のセラミドは、皮膚角質層に存在するセラミドとは微妙に構造が異なることが指摘されていた。本実施形態のセラミド組成物は、ヒトの皮膚角質層セラミドと類似する構造を有するとともに、天然素材由来のセラミドであるため、その保湿性や安定性など作用効果のみならず、安全性の点でも優れたものである。このようなセラミド組成物は、以下の方法により製造することができる。

（セラミド組成物の製造方法）
本実施形態で使用するグルコシルセラミドは、典型的にはコメ由来のグルコシルセラミドであるが、他の植物等由来のグルコシルセラミドであってもよく、例えば、ブドウ、サクランボ、ユズ、オリーブ、シソ、シークワーサー、プルーン、小麦、小麦胚芽、黍、大豆、ゴマ、ピーナツ、トウモロコシ、ほうれん草、コンニャク芋、パイナップル、てん菜、砂糖大根、温州みかん、ピーチ、キノコ類（舞茸、タモギタケなど）、牛乳等の抽出物が挙げられる。植物原料からグルコシルセラミドを抽出する方法は公知であり、例えば、特開２００１−０９７９８３号公報などに記載の方法により抽出するか、あるいは市販のコメ由来のグルコシルセラミド（例えば、長良サイエンス株式会社等）を使用することができる。

抽出物を得るための有機溶媒としては、水、アルコール類（例えば、無水エタノール、エタノール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコールなど）、ヘキサン、アセトンなどのケトン類、ジエチルエーテル、ジオキサン、酢酸エチルなどのエステル類などの有機溶媒を、単独又は２種類以上の混液を任意に組み合わせて使用することができ、又、各々の溶媒抽出物が組み合わされた状態でも使用できる。好適にはエタノールを用いる。溶媒の使用量は、抽出用の植物原料１重量部に対して１〜１００重量部、好ましくは１０〜３０重量部である。

また、これらのアルコール系溶媒を水酸化カリウム、水酸化ナトリウム等を加えアルカリ性となしたアルカリ性有機溶媒を用いることもできる。好ましいアルカリの濃度は、０．０１〜１Ｎであり、特に、０．１〜０．４Ｎが好ましい。

抽出方法は特に制限されるものはないが、通常、常温、常圧下での溶媒の沸点の範囲であれば良く、抽出後は濾過すれば良い。抽出処理にて一般的に適用される通常の手段を任意に選択して行えば良い。

これらの方法で調製されたグルコシルセラミドを、図１に示す３段階の工程で脱グルコシル化することで、新規セラミドを含むセラミド組成物を調製する。図１において、化合物１は、上記方法で用意したコメ由来のグルコシルセラミドである。本発明者らの知見によれば、コメのグルコシルセラミドは、鎖長の異なるα−ヒドロキシ酸の混合物からなり、炭素数１５〜２５（ｎ＝１〜１１）である複数の飽和脂肪酸が含まれる。中でも炭素数１８〜２４（ｎ＝４〜１０）の脂肪酸が多く含まれ、炭素数１８と２０の脂肪酸が最も多い。

このコメ由来のグルコシルセラミドを、水と混和可能な有機溶媒を含む水性媒体中で、過ヨウ素酸ナトリウムと反応させることにより、図１の化合物２で示すアルデヒド中間体に酸化することができる。この酸化反応に用いる溶媒は、水と混和可能な有機溶媒を含む水性媒体であれば特に限定されないが、典型的には、水とエタノールとの混合溶媒を用いる。その混合比率も特に限定されないが、３０容量％から９０容量％のエタノール水溶液を用いることができ、５０容量％から７０容量％のエタノール水溶液が好ましく、約６０容量％のエタノール水溶液が最も好ましい。この酸化反応によりグルコース分子中の１，２−ジオール（グリコール）構造を有する炭素−炭素結合が切断されて図１の化合物２が得られる。反応時間及び反応温度も特に制限されないが、室温（約１６℃〜２７℃）にて１〜２４時間反応させればよい。過ヨウ素酸ナトリウムを用いることで中性領域のｐＨにおける温和な条件での反応が可能である。反応後は、残存する過ヨウ素酸ナトリウムをグリセリンやＬ−アスコルビン酸ナトリウムを加えて失活させることが好ましく、特に、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウムの添加により過剰に添加した過ヨウ素酸ナトリウムを完全に失活させることができる。

続いて、上記水と混和可能な有機溶媒中で、化合物２で示されるアルデヒド中間体と水素化ホウ素ナトリウムとを反応させてアルデヒド中間体を還元する。還元反応物は、酸および水を添加して加水分解反応を行うことにより、下記式（ＩＩ）で表される化合物４：
下記式（ＩＩ）：

（式中、波線は、隣接する二重結合がＥまたはＺの配置であることを表し、ｎは、１〜１１のいずれかの整数を表す。）を得ることができる。本実施形態では、温和な条件を用いることができるため、分解されたグルコース以外の部分は、天然物であるコメ由来のセラミドの化学構造が維持され、特に、脂肪酸の鎖長が長いセラミドは保湿性に有効と考えられる。

（皮膚保湿剤）
本発明の他の実施形態では、上記セラミドまたは上記の製造方法により得られるセラミド組成物を有効成分として含む皮膚保湿剤を提供する。後述する実施例３で得られたセラミドはＴＬＣおよび液体クロマトグラフィーでほぼ単一のスポットおよびピークとなる。また、本実施形態の皮膚保湿剤は、外用剤組成物などの化粧品、健康食品などの食品組成物、またはそれらの中間原料として、粉末状、液状、顆粒状、錠剤状、ペースト状、乳液状、クリーム状、ゲル状、カプセル状、およびエアゾール状等の形態にすることができ、最終的な製品を構成する上で最適な形状を任意に選択することができる。

食品組成物を調製する場合、その形態は適宜選択することができ、飲料も包含される。
一般食品の他に、表皮の角化改善又は皮膚の保湿機能や皮膚バリア機能改善・維持、毛髪のハリ若しくはコシの付与、及び毛髪の感触改善等、セラミドの産生促進により治療、予防又は改善しうる疾患又は状態の治療、予防又は改善等をコンセプトとしてその旨を表示した飲食品、すなわち、健康食品、機能性食品、病者用食品及び特定保健用食品なども包含される。健康食品、機能性食品、病者用食品及び特定保健用食品は、具体的には、細粒剤、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、シロップ剤、液剤、流動食等の各種製剤形態として使用することができ、これら製剤のために使用することができる。製剤形態の食品組成物は、前記有効成分と、食品として許容できる担体、例えば適当な賦形剤（例えば、でん粉、加工でん粉、乳糖、ブドウ糖、水等）等とを混合した後、慣用の手段を用いて製造することができる。さらに、食品組成物は、スープ類、ジュース類、乳飲料、茶飲料、コーヒー飲料、ココア飲料、ゼリー状飲料などの液状食品組成物、プリン、ヨーグルトなどの半固形食品組成物、パン類、うどんなどの麺類、クッキー、チョコレート、キャンディ、ガム、せんべいなどの菓子類、ふりかけ、バター、ジャムなどのスプレッド類等の形態もとりうる。また、食品には、飼料も含まれる。

食品組成物には、種々の食品添加物、例えば、酸化防止剤、香料、各種エステル類、有機酸類、有機酸塩類、無機酸類、無機酸塩類、無機塩類、色素類、乳化剤、保存料、調味料、甘味料、酸味料、果汁エキス類、野菜エキス類、花蜜エキス類、ｐＨ調整剤、品質安定剤などの添加剤を単独、あるいは併用して配合してもよい。

また、外用剤組成物としては、化粧水、乳液、クリーム、軟膏、ローション、オイル、パック等の基礎化粧料、石鹸、クレンジングクリーム、クレンジングローション、洗顔料等の皮膚洗浄料、シャンプー、リンス、トリートメント等の洗髪用化粧料や、ヘアクリーム、ヘアスプレー、ヘアトニック、ヘアジェル、ヘアローション、ヘアオイル、ヘアエッセンス、ヘアウォーター、ヘアワックス、ヘアフォーム等の整髪料、育毛・養毛料、ファンデーション、白粉、おしろい、口紅、頬紅、アイシャドウ、アイライナー、マスカラ、眉墨、まつ毛等のメークアップ化粧料、美爪料等の仕上げ用化粧料、香水類、歯磨き類、含嗽剤等の口腔用組成物等の化粧料組成物、外用薬用製剤、軟膏、ハップ剤、浴用剤、薬用歯磨き、口中清涼剤等の薬用口腔用組成物、薬用化粧品、染毛剤、育毛剤、脱毛防止剤、除毛剤等の毛髪溶剤液臭・防臭防止剤、衛生用品、衛生綿類、ウエットティシュ等の外用医薬部外品，外用医薬品等が挙げられる。

本実施形態による食品組成物および外用剤組成物におけるセラミドの含有濃度は、固形分として、０．００００１〜１００質量％程度（以下、％で表わす）、好ましくは０．０００５〜５０％程度含有していると使用性および良好な効果が得られる。

なお、本実施形態の皮膚保湿剤、更にこれを配合した食品組成物、外用剤組成物は、通常これらに使用される成分や添加剤を併用して製造することができる。例えば、下記に例示する成分や添加剤を任意に選択・併用して製造することができ、製剤中への含有量は特に規定しないが、通常０．０００１〜５０％が好ましい。

外用剤組成物は、化粧品、医薬部外品及び医薬品等に慣用される他の成分、例えば、粉末成分、液体油脂、固体油脂、ロウ、炭化水素、高級脂肪酸、高級アルコール、エステル、シリコーン、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤、保湿剤、水溶性高分子、増粘剤、皮膜剤、紫外線吸収剤、金属イオン封鎖剤、低級アルコール、多価アルコール、糖、アミノ酸、有機アミン、高分子エマルジョン、ｐＨ調整剤、皮膚栄養剤、ビタミン、酸化防止剤、酸化防止助剤、香料、水等を必要に応じて配合し、常法により製造することができる。

その他の外用剤組成物に配合可能な成分としては、例えば、防腐剤（エチルパラベン、ブチルパラベン等）、消炎剤（例えば、グリチルリチン酸誘導体、グリチルレチン酸誘導体、サリチル酸誘導体、ヒノキチオール、酸化亜鉛、アラントイン等）、美白剤（例えば、アスコルビン酸及びその誘導体、胎盤抽出物、ユキノシタ抽出物、アルブチン等）、各種抽出物（例えば、オウバク、オウレン、シコン、シャクヤク、センブリ、バーチ、セージ、ビワ、ニンジン、アロエ、ゼニアオイ、アイリス、ブドウ、ヨクイニン、ヘチマ、ユリ、サフラン、センキュウ、ショウキュウ、オトギリソウ、オノニス、ニンニク、トウガラシ、チンピ、トウキ、海藻等）、賦活剤（例えば、ローヤルゼリー、感光素、コレステロール誘導体等）、血行促進剤（例えば、ノニル酸ワレニルアミド、ニコチン酸ベンジルエステル、ニコチン酸β−ブトキシエチルエステル、カプサイシン、ジンゲロン、カンタリスチンキ、イクタモール、タンニン酸、α−ボルネオール、ニコチン酸トコフェロール、イノシトールヘキサニコチネート、シクランデレート、シンナリジン、トラゾリン、アセチルコリン、ベラパミル、セファランチン、γ−オリザノール等）、抗脂漏剤（例えば、硫黄、チアントール等）、抗炎症剤（例えば、トラネキサム酸、チオタウリン、ヒポタウリン等）及び殺菌剤（例えば、トリクロサン、塩化セチルピリジニウム、チモール類、塩化ベンザルコニウム等）等が挙げられる。

本実施形態の皮膚保湿剤の投与対象は、好ましくは温血脊椎動物であり、より好ましくは哺乳動物である。本明細書において哺乳動物は、例えば、ヒト、並びにサル、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタなどの非ヒト哺乳動物が挙げられる。本発明のセラミド産生促進剤、コレステロール産生促進剤、細胞間脂質産生促進剤、皮膚バリア機能改善剤、表皮角化改善剤、皮膚保湿剤、肌荒れ予防若しくは改善剤、毛髪のハリ若しくはコシの付与剤、又は毛髪の感触改善剤は、ヒト、サルなどの霊長類、特にヒトへの投与に好適である。

本実施形態の皮膚保湿剤は、皮膚バリア機能の改善、表皮の角化不全の予防若しくは治療、皮膚の保湿、肌荒れの予防若しくは改善、毛髪のハリ若しくはコシの付与、又は毛髪の感触改善を所望する対象者に適用することができる。この皮膚保湿剤は、必要な条件下（好ましくは、湿度が低く乾燥した条件下）で適用するのが好ましい。また、この皮膚保湿剤は、皮膚、頭皮又は毛髪に適用するのが好ましい。

本実施形態の皮膚保湿剤における前記有効成分の投与量は、個体の状態、体重、性別、年齢、素材の活性、投与又は摂取経路、投与又は摂取スケジュール、製剤形態又はその他の要因により適宜決定することができる。例えば、前記有効成分の質量に基づき、１日あたり、成人（体重６０ｋｇ）あたり、好ましくは０．００１ｍｇ以上、より好ましくは０．０１ｍｇ以上、好ましくは１０００ｍｇ以下、より好ましくは１００ｍｇ以下、好ましくは０．００１〜１０００ｍｇ、より好ましくは０．０１〜１００ｍｇである。また、前記有効成分は、１日１回〜数回に分け、又は任意の期間及び間隔で摂取・投与され得る。

本実施形態の皮膚保湿剤における前記有効成分の含有量は、上記投与量を達成するように適宜決定できる。例えば、本実施形態の皮膚保湿剤の総量中、前記有効成分の含有量は、０．００１質量％以上が好ましく、０．０１質量％以上がより好ましく、１０質量％以下が好ましく、５質量％以下がより好ましく、０．００１〜１０質量％が好ましく、０．０１〜５質量％がより好ましい。

［実施例１］化合物２の合成―１
含水グルコシルセラミド（６４．０ｇ、固形分１０．９％）に蒸留水（４８ｍＬ）、エタノール（７０ｍＬ）に懸濁させた。過ヨウ素酸ナトリウム（１１．６ｇ）を２６〜２７℃で２３分間かけて添加し、室温で１３時間撹拌した。グリセロール（１２．３ｇ）を２３〜３１℃で２５分間かけて添加した後、水（２５０ｍＬ）と酢酸エチル（５００ｍＬ）を添加し、分液した。有機層を蒸留水（２５０ｍＬ）で洗浄し、水層を合わせ、酢酸エチル（５００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、無水硫酸ナトリウム（１５０ｇ）を加え、撹拌し、ろ過後、酢酸エチルで洗浄した。５０℃で減圧下濃縮することにより茶色アモルファス、化合物２（６．２２ｇ）を得た。

［実施例２］化合物２の合成―２
含水グルコシルセラミド（６４．０ｇ、固形分１０．９％）に蒸留水（４８ｍＬ）、エタノール（７０ｍＬ）に懸濁させた。過ヨウ素酸ナトリウム（１１．６ｇ）を２４〜３０℃で４分間かけて添加し、室温で１８時間撹拌した。Ｌ-アスコルビン酸ナトリウム（９．５６ｇ）／蒸留水（３８ｍＬ）を２０〜３０℃で２０分間かけて添加した後（よう素でんぷん紙で無色）、５０℃で減圧下濃縮し、１８０ｇとした。（茶色くなり、ワックス状物析出）水（１００ｍＬ）と酢酸エチル（１００ｍＬ）を添加し、分液した後、水層より酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、無水硫酸ナトリウム（７．５ｇ）を加え、撹拌し、ろ過後、酢酸エチルで洗浄した。減圧下濃縮することにより茶色アモルファス、化合物２（７．４３ｇ）を得た。

［実施例３］化合物４の合成―１
化合物２（７６０ｍｇ）をエタノール３０ｍＬに溶解させ、水素化ホウ素ナトリウム（１２０ｍｇ）を加えた。室温で３時間の撹拌し、６Ｎ塩酸（２ｍＬ）を加えた後、水（１５ｍＬ）を加えた。反応系が酸性であることをｐＨ試験紙で確認（ｐＨ１程度）し、室温で終夜撹拌を行なった。反応液は、５％炭酸水素ナトリウム水溶液で中和した後、１００ｍＬの炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチル２００ｍＬで抽出を行なった。酢酸エチル層は、飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。有機層はロータリーエバポレーターで濃縮乾固させ、茶色ワックス状の化合物４（６００ｍｇ）を得た。得られた目的物の一部をさらにシリカゲルカラムにより精製しＮＭＲ測定に供した。^１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ０．８８−０．９１（ｍ，６Ｈ），１．２３−１．３７（ｍ），１．３８−１．４３（ｍ，２Ｈ），１．５１−１．５８（ｍ，１Ｈ），１．６８−１．７５（ｍ，１Ｈ），１．９６−２．１５（ｍ８Ｈ），３．６３（ｄｄ，Ｊ＝４．０，１１．５，１Ｈ），３．７８（ｄｄ，Ｊ＝５．５，１１．０），３．８３−３．８６（ｍ，１Ｈ），３．９９（ｄｄ，Ｊ＝３．８，７．８，１Ｈ），４．０７−４．０９（ｍ，１Ｈ），５．３６−５．５２（ｍ，３Ｈ），５．７−５．７５（ｍ，１Ｈ）。

^１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ１４．４６，２３．７４，２６．１８，２７．８９，２８．２７，３０．４３，３０．４７，３０．７９，３０．８７，３３．０８，３３．６６，３５．８９，５６．０３，６１．９６，７３．０１，７３．２７，１２９．９７，１３１．３８，１３１．４８，１３４．２２，１７７．１８。

［実施例４］化合物４の合成―２
アルゴン気流下、化合物２（１．００ｇ）をエタノール（３５．６ｍＬ）に溶解し、水素化ホウ素ナトリウム（１３８ｍｇ）を室温で添加した。室温で３時間撹拌した後、６Ｎ塩酸（２．４４ｍＬ）を注加し、２時間後、水（１８ｍＬ）を注加した。室温で１４時間撹拌した後、６Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で中和し（２．１ｍＬ使用）、さらに５％炭酸水素ナトリウム水溶液（４ｍＬ）を加えた。（ｐＨ＝８．１）５０℃で減圧下濃縮し、２２．４ｇとし、酢酸エチル（１８ｍＬ×２）で抽出した。有機層を１０％食塩水（１８ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム（１．９ｇ）を加え、撹拌、ろ過後、酢酸エチルで洗浄した。ろ液を５０℃で減圧下濃縮した後、エタノール（１０ｍＬ）に溶解し、再度、減圧下濃縮することにより、茶色ワックス状物、化合物４（７１９ｍｇ）を得た。

［実施例５］化合物４の合成―３
アルゴン気流下、化合物２（１．００ｇ）をエタノール（１８ｍＬ）に溶解し、水素化ホウ素ナトリウム（１３８ｍｇ）を室温で添加した。室温で３時間撹拌した後、６Ｎ塩酸（２．４４ｍＬ）を注加し、２０時間撹拌した。６Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で中和し（２．０ｍＬ使用、ｐＨ＝８．１）、水（９ｍＬ）で希釈した。さらに５％炭酸水素ナトリウム水溶液（７ｍＬ）および水（３８ｍＬ）を加え、酢酸エチル（５４ｍＬ×２）で抽出した。有機層を１０％食塩水（５４ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム（１１．０ｇ）を加え、撹拌、ろ過後、酢酸エチルで洗浄した。ろ液を５０℃で減圧下濃縮した後、エタノール（１０ｍＬ）に溶解し、再度、減圧下濃縮することにより、茶色ワックス状物、化合物４（６７３ｍｇ）を得た。

［実施例６］化合物４の合成―４
アルゴン気流下、化合物２（１．００ｇ）をエタノール（１８ｍＬ）に溶解し、水素化ホウ素ナトリウム（１３８ｍｇ）を室温で添加した。室温で３時間撹拌した後６Ｎ塩酸（２．４４ｍＬ）を注加し、１時間後、水（９ｍＬ）を注加した。室温で２２時間撹拌した後、６Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で中和し（２．０ｍＬ使用、ｐＨ＝８．８）、水（４５ｍＬ）添加後、酢酸エチル（５４ｍＬ×２）で抽出した。有機層を１０％食塩水（５４ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム（２２．０ｇ）を加え、撹拌、ろ過後、酢酸エチルで洗浄した。ろ液を５０℃で減圧下濃縮した後、エタノール（１０ｍＬ）に溶解し、再度、減圧下濃縮することにより、茶色ワックス状物、化合物４（６５５ｍｇ）を得た。

［実施例７］
含水グルコシルセラミド（６４．０ｇ、固形分１０．９％）を水（４８ｍＬ）、エタノール（７０ｍＬ）に懸濁させた。過ヨウ素酸ナトリウム（１１．６ｇ）を２９〜３０℃で５分間かけて添加し、室温で２３時間撹拌した。Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム（６．３８ｇ、３２．２ｍｍｏｌ）／市水（１０ｍＬ）を２４〜３０℃で１５分間かけて添加した後、５０℃で減圧下濃縮し、１３３ｇとした。水（１５０ｍＬ）と酢酸エチル（１００ｍＬ）を添加し、分液した後、水層より酢酸エチル（１００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、無水硫酸ナトリウム（１０．０ｇ）を加え、撹拌、ろ過後、酢酸エチルで洗浄した。ろ液を５０℃で減圧下濃縮し、１９．５ｇとした。エタノール（６７ｍＬ）を加え、減圧下濃縮し、１９．４ｇとした。さらにエタノール（６７ｍＬ）を加え、減圧下濃縮し、化合物２の溶液を１９．１ｇとした。化合物２の溶液にエタノール（９２．３ｇ）を加え（エタノールの合計１３４ｍＬ相当）、水素化ホウ素ナトリウム（１．０３ｇ）を１８〜３０℃で４分間かけて添加した。２２〜３０℃で３時間撹拌した後、６Ｎ塩酸（１８．１ｍＬ）を注加し（２２℃→２７℃）、２１時間撹拌した。水（６９ｍＬ）で希釈し、６Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で中和した後（１４．２ｍＬ使用、ｐＨ＝６．０）、５％炭酸水素ナトリウム水溶液（２０ｍＬ、ｐＨ＝８．０）を加え、５０℃で減圧下濃縮し、１２３ｇとした。酢酸エチル（１３４ｍＬ）で２回抽出した後（ハルツ発生）、合わせた有機層を１０％食塩水（１３４ｍＬ）で洗浄した。有機層は、無水硫酸ナトリウム（１３．４ｇ）を加え、撹拌、ろ過後、酢酸エチルで洗浄したろ液を５０℃で減圧下濃縮し、５．７４ｇとした後、エタノール（７７ｍＬ）に５０℃で溶解し、再度、減圧下濃縮することにより、茶色ワックス状物、化合物４を５．２８ｇ得た。得られた化合物をＨＰＬＣにより分析した（カラム：ＩｎｅｒｔｓｉｌＳＩＬ−１００Ａ、５μｍ、４．６×１５０ｍｍ；Ａ：ＣＨＣｌ_３、Ｂ：９５％ＣＨ_３ＯＨ；Ｇｒａｄｉｅｎｔ：１％−２５％、１５分間）。

実施例７で得られた化合物４のＨＰＬＣ分析の結果を図２に示す。保持時間（ＲＴ）８．４２９分のピークは、式（Ｉ）で示したセラミドの混合物であり、ＮＭＲを用いてその構造を確認した。

［実施例８］植物由来セラミドによる表皮バリア改善試験
植物由来セラミドとして、実施例７で調製した化合物４を用いた。以下の表１に示す組成の表皮バリア改善試験用の試料１〜３を調製した。

方法
試料１〜３（５０μＬ）を３次元皮膚モデル（ＬａｂｏｃｙｔｅＥｐｉｍｏｄｅｌ、Ｊ-ＴＥＣ社製）のインサート内に添加し、３日間培養後、各ウエルの経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ：ＴｒａｎｓＥｐｉｄｅｒｍａｌＷａｔｅｒＬｏｓｓ）をＴｅｗｉｔｒｏＴＷ２４（インテグラル社製）にて測定し、基剤である試料１のＴＥＷＬ値との比を算出した。

結果
この算出した結果は、試料１を１００としたとき、試料２は９６．８、試料３は８３．６であった。植物由来セラミドを含む試料３のみ、ＴＥＷＬ値の低下が認められ、植物由来セラミドには表皮バリアを改善する効果が示唆された。

Claims

コメから抽出されたグルコシルセラミドを用意し、
水と混和可能な有機溶媒を含む水性媒体中で、前記グルコシルセラミドと過ヨウ素酸ナトリウムとを反応させて前記グルコシルセラミドをアルデヒド中間体に酸化する工程と、
前記水と混和可能な有機溶媒中で、前記アルデヒド中間体と水素化ホウ素ナトリウムとを反応させてアルデヒドを還元する工程と、
前記アルデヒド中間体の還元反応物に、酸および水を添加して加水分解反応を行い、下記式（ＩＩ）：

（式中、波線は、隣接する二重結合がＥまたはＺの配置であることを表し、ｎは、１〜１１のいずれかの整数を表す。）に示すセラミドを得る工程と、
を含む、セラミド組成物の製造方法。