JP6949027B2 - ジカウイルスワクチン - Google Patents

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Description

本開示は、ワクチンとして使用するためのジカウイルスの精製方法に関し、特に、硫酸プロタミンなどの不純物の分離を可能とする改善されたショ糖勾配プロセスステップに関する。本開示は、また、ジカウイルスワクチンおよび組成物ならびに前記ワクチンを製造する方法および抗ジカウイルス免疫反応の生成のために対象にワクチンを投与する方法に関する。
硫酸プロタミンに対する有害反応は、長年にわたり知られてきた。プロタミンに対する以前の曝露が、液性免疫反応を誘導する場合があり、感受性の高い人は、その後のこの薬物の使用により不都合な反応が生じやすくなる。プロタミン含有インスリンの使用により、またはヘパリン中和の間にプロタミンに曝露された患者は、プロタミンの大量の静脈内投与を受けた際に命に関わる反応および致命的なアナフィラキシー過敏症を生ずることがある。静脈内プロタミンに対する重篤な反応は、プロタミン含有インスリンの皮下注射に対する局所的または全身性のアレルギー反応のない状態で発生する場合がある。硫酸プロタミンの過敏症反応がワクチン接種と関連するという明確な証拠はないが、プロタミン不純物を含むワクチンは、事前の注意および禁忌警告がそのラベルに示されている。ラベルには、このようなプロタミン含有ワクチン（例えば、ＩＸＩＡＲＯ（登録商標）、ＣＤＣサイト：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｄｃ．ｇｏｖ／ｊａｐａｎｅｓｅｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ／ｖａｃｃｉｎｅ／を参照されたい）の以前の投与後の深刻なアレルギー反応は、さらなる投与が禁忌であることが記載されている。したがって、前記不純物の除去は、向上した安全性プロファイルのための医学上の要請である。他方では、硫酸プロタミンは、細胞基材上で増殖したウイルスの粗ハーベスト（ｃｒｕｄｅ ｈａｒｖｅｓｔ）の精製のための優れたツールである（ベンゾナーゼなどのツールより優れていることが多い）。
ジカウイルスは、１９４７年にウガンダでアカゲザルに発見されて以降、２００７年にアジアおよびアフリカの風土病地域以外で初めて検出された。それ以降、このウイルスは、仏領ポリネシアで大流行を引き起こし、２０１５年までに、太平洋地域の島々を経由して南および中央アメリカに広がった（ＷＨＯ「ジカ状況報告」２０１６年２月５日）。ヤブカ属の蚊により伝染することに加えて、その他のベクターも存在し得、このウイルスは、輸血により、経胎盤性に、および性行為感染により伝染し得ることが証拠から示唆される（ＷＨＯジカウイルス概要報告書、２０１６年２月）。ジカウイルス感染の症状には、軽度の発熱、発疹、および結膜炎が挙げられるが、感染と、ギラン・バレー症候群および妊娠中の感染の後の胎児／新生児の小頭症を含む神経障害との間の相関がある可能性がある。現時点では、ジカウイルスに対する特定の処理またはワクチンはなく、唯一の予防手段としては、蚊ベクターの駆除が含まれる。ジカウイルスは、ヤブカ属の蚊の広範囲の分布、複数の伝染経路、および感染の重篤な神経学的影響の可能性に起因して、実質的な公衆衛生上の脅威をもたらす。
ジカウイルスに対する予防ワクチンは、ベクターが蔓延している流行地域および地理的地域では緊急の医療ニーズがある。さらに、ジカ感染は、胎仔および胎児の発育時に悲惨な結果をもたらすので、出産の可能性のある女性または妊婦のための安全で効果的なワクチンが必要である。妊娠中に投与されるワクチンは、母親および発育中の胎児の両方にとって極めて安全でなければならない。生弱毒ウイルスワクチンは極めて効果的であるが、多くの場合、妊婦女性への投与で十分に安全であると見なされない。この点では、ワクチン接種した対象中で増殖する能力を欠く、不活化ウイルス性ワクチンは遥かに安全であると見なされている。妊娠の恐れのある患者へ投与するための不活化ジカウイルスワクチンの開発は、このニーズを満たすはずである。
ウイルス精製過程で、細胞基材上に産生されたウイルスハーベストへの硫酸プロタミンの添加は、予想通りの宿主細胞由来の汚染性ＤＮＡのみでなく、予想外にも、未成熟およびそれ以外の非感染性ウイルス粒子を実質的に調製物から除去することが観察された。この知見から、ワクチン製剤などの用途用の高度に精製された感染性ウイルス粒子を得るための、最新型の緩やかな、再現可能で広範に適用可能なプロセスが得られた。さらに、意外にも、硫酸プロタミンは、ウイルス画分から極めて効率的に分離でき、より安全なワクチンが高収率で生産可能となるということが明らかになった。
本明細書で開示されるのは、不活化ジカウイルスを含むウイルスワクチンおよび組成物、ならびに前記ワクチンおよび組成物の製造関連方法である。ジカウイルス感染の予防および／または対象、例えば、ジカウイルスに曝露される危険のある対象中での抗ウイルス免疫反応の生成のための前記ジカウイルスワクチンの投与方法も提供される。特に、本発明は、最適に不活化されたジカウイルス粒子を含むウイルスワクチンに関し、適切な投与量のジカウイルス粒子がそのウイルスワクチンを投与された対象を、少なくとも７０％の確率、好ましくは８０％の確率で抗体陽転させることができる。本発明の別の利点は、前記ワクチンおよび組成物の製造関連方法は、極めて効率的であり、不純物、特に硫酸プロタミンのほとんど含まない純粋な組成物を提供し、大量のワクチン製造を可能とすることである。上記に関するジカウイルス用の詳細な実験例が提供される。
本明細書で開示される本発明の不活化ジカウイルスワクチンの免疫原性に関するインビボデータは、意外にも、ウイルスに強力な免疫原性があり、また、高い交差防御性を有する（アフリカ系およびアジア系株で非常に類似の免疫原性である）ことを示す。データは、免疫原性は最近報告された不活化ジカウイルスワクチン候補（Ｌａｒｏｃｃａ，ｅｔ．ａｌ，２０１６，Ｎａｔｕｒｅ ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１８９５２）よりも予想外に高かったことを示す。不活化ウイルスは、最も安全な部類のワクチンで、安全性が特に重要な、妊婦、子供および免疫無防備状態の個体などの集団への送達に特に好ましく、このことが、本明細書で開示の不活化ジカウイルスを特に好適なものにしている。高い力価の不活化ウイルスを得ることは、この分野では難題である。本明細書で開示の不活化ジカウイルスを精製するプロセスは、高収率だけでなく、極めて純粋な原薬をもたらす。
本発明のそれぞれの制限事項は、本発明の種々の実施形態を包含することができる。したがって、いずれか１つの要素または要素の組み合わせを含む本発明のそれぞれの制限事項は、本発明のそれぞれの態様に含まれ得ることが予想される。本発明の適用において、本発明は、以下の記述で示される、または以下の図面で示される構成要素の構成および構成要素の配置の詳細に限定されるものではない。本発明は、他の実施形態が可能であるとともに、様々な方法で実施または実行することができる。
添付図は一定の縮尺で描くことを意図していない。図は、例示的なものに過ぎず、本開示の実施に必要なものではない。分かりやすくするために、各図で全ての要素に標識することはせず、アライメントは、マルチアライメントパッケージＪａｌｖｉｅｗ（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２５（９）１１８９−１１９１）で実施した。図面は次の通りである。
全ゲノム平均距離ツリー（％ｎｔ配列同一性による）。 全ゲノム近隣結合ツリー（％ｎｔ配列同一性による）。 全ゲノムペアワイズアライメント−Ｊａｌｖｉｅｗ（％ｎｔ配列同一性）。 Ｅ−タンパク質平均距離ツリー（％アミノ酸配列同一性による）。 Ｅ−タンパク質近隣結合ツリー（％アミノ酸配列同一性による）。 Ｅ−タンパク質ペアワイズアライメント−Ｊａｌｖｉｅｗ（％アミノ酸配列同一性）。 Ｅタンパク質アライメント（陰影表示：％アミノ酸配列同一性）。 宿主細胞中でのウイルス粒子成熟の例。フラビウイルスで観察されたように、粒子の完全成熟には、宿主プロテアーゼフーリンによる前駆体膜糖タンパク質（ｐｒＭ）のタンパク質切断が必要である。すべてのｐｒＭ分子が切断されるとは限らず、成熟、モザイクまたは未成熟様構造物が細胞から放出される。モザイクおよび未成熟形態は通常、感染性ではなく、成熟ビリオンのみが感染性であり、赤血球凝集素（ＨＡ）／ＴＣＩＤ５０活性を有する。（図は、Ｐｌｅｖｋａ，ｅｔ ａｌ．，Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓｅｓ ｓｔａｒｔｓ ｆｒｏｍ ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ ｉｃｏｓａｈｅｄｒａｌｌｙ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｎｕｃｌｅａｔｉｏｎ ｃｅｎｔｒｅｓ，ＥＭＢＯ ｒｅｐｏｒｔｓ（２０１１）１２，６０２−６０６、から修正した）。 （Ａ）は、粗ハーベストから原薬製剤（ワクチン）までの代表的ダウンストリームウイルス精製プロセスであり、本発明のプロセスの好ましい実施形態である。代表的ウイルス不活化プロセスのフローチャートを（Ｂ）に示す。 ＰＳ処理により、ジカウイルス凝集体およびベロＨＣＰおよびＬＭＷ不純物の選択的除去がなされた（５日目の３０ｘ濃縮ジカウイルスハーベストのＳＥＣ−ＨＰＬＣ）。 ＰＳ処理前の種々時点における個別の３０ｘ濃縮ジカハーベストのＳＥＣ−ＨＰＬＣ。 ＰＳ処理後の種々時点における個別の３０ｘ濃縮ジカハーベストのＳＥＣ−ＨＰＬＣ。小さい方のグラフは、経時的に観察された細胞変性効果（ＣＰＥ）を示す。 ショ糖勾配の調製。 ジカ精製物のショ糖勾配ハーベスト由来の代表的ＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す。 ＪＥＶとジカＶ採取スケジュール／収量の比較。 ジカＶ ＮＩＶのＳＥＣ−ＨＰＬＣ溶出プロファイル。データは、Ｄｉｏｎｅｘ Ｕｌｔｉｍａｔｅ ３０００／Ｓｕｐｅｒｏｓｅ ６ Ｉｎｃｒｅａｓｅカラムで処理した。両方のパネルは、同じクロマトグラム由来である。上段のグラフは完全溶出プロファイルであり、下段のグラフはジカＶ溶出ピークの拡大である。 不活化ジカＶのＳＥＣ−ＭＡＬＬＳ分析。 ジカＮＩＶの累積粒度分布。 ジカウイルスＨ／ＰＦ／２０１３のプールマウス血清による中和のグラフ表示である。血清不含の場合のプラークの数を１００％に設定した。３パラメーター法によりＥＣ５０を計算した。 ジカウイルスＭＲ７６６のプールマウス血清による中和のグラフ表現である。血清不含の場合のプラークの数を１００％に設定した。３パラメーター法によりＥＣ５０を計算した。 中和不活化ウイルス（ＮＩＶ）中のＪＥＶ抗原含量の、ＥＬＩＳＡ分析と、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ（Ｄｉｏｎｅｘ Ｕｌｔｉｍａｔｅ ３０００，Ｓｕｐｅｒｏｓｅ６カラム）分析との間の相関性を示す。
本明細書で開示されるのは、不活化ジカウイルスを含むジカウイルスワクチンおよび組成物、ならびに前記ワクチンおよび組成物の製造関連方法である。ウイルス感染の予防および／または対象、例えば、ウイルスに曝露される危険のある対象中での抗ウイルス免疫反応の生成のための前記ウイルスワクチンの投与方法も提供される。特に、本発明は、最適に不活化されたウイルス粒子を含むウイルスワクチンに関し、適切な投与量のウイルス粒子がそのウイルスワクチンを投与された対象を、少なくとも７０％の確率、好ましくは８０％の確率で抗体陽転させることができる。本発明の別の利点は、前記ワクチンおよび組成物の関連製造方法は、極めて効率的であり、不純物、特に硫酸プロタミンのほとんど含まない純粋な組成物を提供し、大量のワクチン製造を可能とすることである。上記に関するジカウイルス用の実施例が提供される。
粗製調製物からジカウイルス粒子を精製するためのダウンストリームプロセスが本明細書で開示される。ダウンストリームプロセスは、特定の細胞基材上で増殖するように適応されていないウイルスまたは部分的に／完全に細胞基材に適応したジカウイルス粒子に適用できる。
本発明の態様は、感染性ジカウイルス粒子の精製プロセスを提供し、該プロセスは、（ａ）ウイルス粒子および不純物を含む粗ハーベスト（ａ）を用意するステップであって、該不純物が前記ウイルス粒子を細胞基材上で増殖させることから生じるステップ；（ｂ）プロタミン塩、好ましくは硫酸プロタミンを含む試薬で沈殿させることにより粗ハーベスト（ａ）から不純物を減らし、ウイルス調製物（ｂ）を得るステップ；および前記ウイルス調製物（ｂ）を、最適化ショ糖密度勾配遠心分離によりさらに精製して、感染性ウイルス粒子を含むウイルス調製物（ｃ）を得るステップを含む。
いくつかの実施形態では、ステップ（ｂ）の硫酸プロタミンの濃度は、約１〜１０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約１〜５ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約１〜２ｍｇ／ｍｌである。一実施形態では、ステップ（ｂ）の硫酸プロタミンの濃度は、約２ｍｇ／ｍｌである。一実施形態では、硫酸プロタミンの濃度は、１．２〜１．８ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは１．４〜１．６ｍｇ／ｍｌである。好ましい実施形態では、ステップ（ｂ）の硫酸プロタミンの濃度は、約２ｍｇ／ｍｌである。
いくつかの実施形態では、ウイルス調製物（ｃ）の残留宿主細胞ＤＮＡは、１μｇ／ｍｌ未満、特に、９００、８００、７００、６００、５００、４００、３００または２００ｎｇ／ｍｌ未満、好ましくは１００ｎｇ／ｍｌ未満である。好ましい実施形態では、ウイルス調製物（ｃ）の残留宿主細胞ＤＮＡは、１０ｎｇ／ｍｌ未満である。いくつかの実施形態では、最終的ウイルス調製物（ｃ）の残留宿主細胞タンパク質は、１０μｇ／ｍｌ未満、特に、９、８、７、６、５、４、３または２μｇ／ｍｌ未満、好ましくは１μｇ／ｍｌ未満である。好ましい実施形態では、ウイルス調製物（ｃ）の残留宿主細胞タンパク質は、１００ｎｇ／ｍｌ未満である。いくつかの実施形態では、最終的ウイルス調製物（ｃ）の残留非感染性ウイルス粒子は、１０μｇ／ｍｌ未満、特に、９、８、７、６、５、４、３または２μｇ／ｍｌ未満、好ましくは１μｇ／ｍｌ未満である。好ましい実施形態では、ウイルス調製物（ｃ）の残留非感染性ウイルス粒子の含量は、１００ｎｇ／ｍｌ未満である。
いくつかの実施形態では、残留プロタミンは、１μｇ／ｍｌ未満、特に、９００、８００、７００、６００、５００、４００、３００または２００ｎｇ／ｍｌ未満、好ましくは１００ｎｇ／ｍｌ未満、より好ましくはＨＰＬＣの検出限界未満、特に、最終的原薬中の検出限界未満である。いくつかの実施形態では、ＰＳ含量は、ＨＰＬＣまたはサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により検査される。例えば、ＨＰＬＣは、ルーチン放出アッセイとしてＪＥＶショ糖勾配プール試料によるＰＳ分析用に検証されており、非常に感受性が高い（すなわち、ＬＯＱ ３μｇ／ｍｌ；ＬＯＤ １μｇ／ｍｌ）。本発明では、ジカウイルスＤＳ試料中のＰＳ含量はＬＯＤ未満であった。一実施形態では、ＰＳ含量のＨＰＬＣ評価は、３０％アセトニトリル、０．１％トリフルオロ酢酸を溶媒とし、２５℃で０．６ｍＬ／分の流量および２１４ｎｍでの検出により、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ Ｐｅｐｔｉｄｅ １０／３００ＧＬカラム（ＧＥ：１７−５１７６−０１）で実施できる。精製ウイルス調製物中の残留プロタミンのさらに高感度の測定方法は、質量分析法（ＭＳ）である。いくつかの実施形態では、ジカウイルス調製物中の残留ＰＳレベルは、ＭＳまたはその他のこのような極めて高感度な方法、例えば、核磁気共鳴（ＮＭＲ）により検査される。この方法を用いて、残留ＰＳならびにＰＳ断片および／または分解生成物を痕跡量、例えば、典型的な試料ロードあたり１０６、１０７または１０８分子もの低いレベルで検出できる。いくつかの実施形態では、ショ糖勾配プール中のＰＳレベルが検査される。いくつかの実施形態では、製剤中のＰＳレベルが検査される。いくつかの実施形態では、原薬中のＰＳレベルが検査される。
いくつかの実施形態では、ウイルス粒子および不純物を含む粗ハーベスト（ａ）は、ステップ（ｂ）の前に、１つまたは複数の予備精製ステップに供される。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の予備精製ステップは、ウイルス粒子および不純物を含む粗ハーベスト（ａ）中の宿主細胞ゲノムＤＮＡを酵素処理により消化することを含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の予備精製ステップは、濾過、限外濾過、濃縮、緩衝液交換および／または透析濾過を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の予備精製ステップは、１μｍ以下の細孔径を有するフィルターを使った濾過である。いくつかの実施形態では、フィルターは、０．２μｍ以下の細孔径を有する。好ましい実施形態では、フィルターは、０．２μｍの細孔径を有する。いくつかの実施形態では、タンジェント流濾過（ＴＦＦ）により、濃縮および／または限外／透析濾過および／または緩衝液交換が実施される。いくつかの実施形態では、ウイルス粒子および不純物を含む粗ハーベスト（ａ）の限外／透析濾過は、３００ｋＤa以下のカットオフ値を有する中空繊維膜を用いて実施される。好ましい実施形態では、中空繊維膜は、約１００ｋＤａのカットオフ値を有する。
本発明によるプロセスはまた、ショ糖勾配、好ましくは最適化ショ糖勾配の使用を含み得る。ショ糖勾配は、硫酸プロタミンの除去用として、また、未成熟ウイルス粒子または非感染性である他のウイルス粒子または宿主細胞タンパク質または核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡなど）または他の宿主細胞デブリの除去用として最適化されるのが好ましい。本発明では、最適化ショ糖勾配は、異なる密度を有する少なくとも２種の、少なくとも３種の、少なくとも４種のショ糖溶液を含む。一実施形態では、精製されるウイルス調製物が、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％のショ糖（Ｗ／Ｗ）、好ましくは約１０％のショ糖の密度を有するショ糖溶液中に供給される。一実施形態では、勾配液中の１つのショ糖溶液は、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％のショ糖（ｗ／ｗ）、好ましくは約５０％のショ糖の密度を有する。一実施形態では、勾配液中の１つのショ糖溶液は、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％のショ糖（ｗ／ｗ）、好ましくは約３５％のショ糖の密度を有する。一実施形態では、勾配液中の１つのショ糖溶液は、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％のショ糖（ｗ／ｗ）、好ましくは約１５％のショ糖の密度を有する。好ましい実施形態では、ショ糖勾配は、３つの約５０％、約３５％および約１５％（ｗ／ｗ）のショ糖溶液層および約１０％（ｗ／ｗ）のショ糖中に含まれた精製されるウイルス組成物の層を含む。本発明は、宿主細胞ＤＮＡに対してだけでなく、未成熟ウイルス粒子に対しても試験する手段を提供しているので、当業者は、最も効率的な精製のためにショ糖勾配をより精密に最適化することができ、さらに、精製の成功をモニターするために、ＰＲＮＴアッセイなどの追加のツールも含めることができる。
いくつかの実施形態では、ウイルス粒子は、生ウイルス、キメラウイルス、減弱生ウイルス、改変生ウイルスまたは組換え生ウイルスである。さらなるステップでは、本発明のウイルス粒子は、必要に応じ、不活化され得る。いくつかの実施形態では、ウイルス粒子は、減弱化型のウイルス粒子である。例えば、ウイルスは、野性型ウイルスに比較して、宿主中で低減した感染力、毒性、および／または複製能を有し得る。いくつかの実施形態では、ウイルスは変異または改良ウイルスであり、例えば、ウイルスの核酸は、野性型ウイルスに比較して、少なくとも１つの変異を含み得る。いくつかの実施形態では、ウイルスは、組換え生ウイルスであり、これは、組換えで生成されるウイルスを意味し、異なる起源由来の核酸を含み得る。
いくつかの実施形態では、ジカウイルス粒子は、生ウイルス、減弱生ウイルス、改変生ウイルスまたは組換え生ウイルスである。好ましい実施形態では、ジカウイルスは、アジア系統由来のジカウイルスである。
いくつかの実施形態では、ウイルス粒子および不純物を含む液体培地（ａ）に比較して、最終的ウイルス調製物の不純物の相対的減少は６０〜９５％の範囲である。いくつかの実施形態では、最終的ウイルス調製物の残留不純物は１％未満である。
いくつかの実施形態では、ジカウイルスは、ＥＢ６６細胞株、ベロ細胞株、ベロ−αＨｉｓ細胞株、ヒーラ細胞株、ヒーラ−Ｓ３細胞株、２９３細胞株、ＰＣ１２細胞株、ＣＨＯ細胞株、３Ｔ３細胞株、ＰｅｒＣ６細胞株、ＭＤＳＫ細胞株、ニワトリ胎仔線維芽細胞株、アヒル細胞株、および二倍体鳥類細胞株、からなる群より選択される細胞株中で増殖する。いくつかの実施形態では、前記細胞株は、アヒル細胞株である。いくつかの実施形態では、前記細胞株は、二倍体鳥類細胞株である。いくつかの実施形態では、前記細胞株は、ＥＢ６６細胞株である。好ましい実施形態では、前記細胞株は、ベロ細胞株である。
本発明の態様は、ウイルス感染に対する免疫化のための、本明細書で記載されるいずれかの組成物を製造する方法の使用を提供する。好ましい実施形態では、組成物またはワクチンは、例えば、アジア系統ジカウイルスなどのジカウイルスに対する。
他の態様は、ウイルス感染を処置および／または予防（すなわち、ウイルス感染から防御）するための、本明細書で記載される方法のいずれかにより得られるジカウイルス粒子を含む組成物を提供する。好ましい実施形態では、ウイルス感染は、例えば、アジア系統ジカウイルスなどのジカウイルスにより引き起こされる。
さらに、本明細書で開示されるのは、不活化ジカウイルスを含むジカウイルスワクチンおよび組成物、ならびに前記ワクチンおよび組成物の製造関連方法である。ジカウイルス感染の予防および／または対象、例えば、ジカウイルスに曝露される危険のある対象中での抗ジカウイルス免疫反応の生成のためのジカウイルスワクチンの投与方法も提供される。
ジカウイルスは、デングウイルスに密接に関係したフラビウイルスであり、同様に、ヤブカ属蚊により伝染するが、その他の節足動物のジカウイルスベクターも存在し得る。ジカウイルスは、１９４７年にウガンダのジカ森林中でアカゲザルから最初に単離されて以来、ヒト感染事例は、特に、アフリカおよびアジアの風土病地域以外では、仏領ポリネシアでの２００７年の大きな爆発的感染まで、ほとんど報告がなかった（Ｈａｄｄｏｗ ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｎｅｇｌｅｃｔｅｄ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｄｉｓｅａｓｅｓ（２０１２）６（２），Ｍａｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｎｅｇｌｅｃｔｅｄ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｄｉｓｅａｓｅｓ（２０１６）１０（３））。それ以降、このウイルスは、オセアニアを含む太平洋地域の島々を経由して南および中央アメリカに広がった（ＷＨＯ「ジカ状況報告」２０１６年２月５日）。
感染した蚊に刺されることによる伝染に加えて、伝染は、例えば、感染個体の血液から、感染母体から胎児への子宮内／経胎盤性伝染、性交渉相手間の性行為感染、および可能性としてのその他の局所的伝染経路により、個体間で起こり得ることも証拠により示唆されている。妊娠中のジカウイルス感染と、胎児／新生児における小頭症との間で相関がある可能性がある。小頭症は希な状態であり、乳児の頭囲が年齢、性別、および民族性の平均から予測されるよりかなり小さい状態である。これは、脳が適切な胚発生を起こすことができない結果であり、この症例の９０％が、精神発達遅滞に関係する（Ｒｏｃｈａ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｂｕｌｌ Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎ ８ Ｆｅｂ．２０１６）。
既往のジカウイルス感染個体と、個体の免疫系が末梢神経系の軸索の周りのミエリン鞘を破壊する、ギラン・バレー症候群である、神経障害の発生率との間には、確度の高い関連性がある（ＷＨＯ “Ｚｉｋａ Ｓｉｔｕａｔｉｏｎ Ｒｅｐｏｒｔ” Ｆｅｂｒｕａｒｙ ５，２０１６）。
現状、ジカウイルスに対する特定の処置またはワクチンは存在せず、現時点で感染を防ぐ唯一の手段は、ベクター駆除および爆発的感染が起こった地域への旅行を避けることによるものである。
本明細書で記載されるのは、ジカウイルスに対する免疫反応を生成するための安全な方法を提供し、ウイルス中和抗体を含む、ジカウイルス感染に対する予防を支援可能な不活化ジカウイルスを含むジカウイルスワクチンおよび組成物である。
任意の株のジカウイルスを、本明細書に記載の方法および組成物に使用し得る。いくつかの実施形態では、ジカウイルスは、ジカウイルスに爆発的感染中の感染対象から単離される。いくつかの実施形態では、ジカウイルスは、アフリカまたはアフリカ系ウイルス系統から単離された株である。いくつかの実施形態では、ジカウイルスは、アジアまたはアジア系ウイルス系統（仏領ポリネシアからの株も含む）から単離された株である。いくつかの実施形態では、ジカウイルスは、スリナムジカウイルス株などのアメリカ大陸（南アメリカ、中央アメリカ、または北アメリカ）ウイルス系統から単離された株である。いくつかの実施形態では、ジカウイルスは、ジェンバンク受入番号ＡＹ６３２５３５．２、ＫＵ３２１６３９．１、ＫＵ４９７５５５．１、ＫＵ５０１２１５．１、ＫＵ５０９９９８．１、ＫＵ５２７０６８．１、ＫＵ６８１０８１．３、ＫＵ６８１０８２．３、ＫＵ７０７８２６．１、ＫＵ７４４６９３．１、もしくはＬＣ００２５２０．１により提供されるＤＮＡ配列に対応するＲＮＡゲノム（これらに限定されない）または本明細書で部分的にまたは完全に開示されたＲＮＡゲノム（配列番号２〜６９）を有する。
いくつかの実施形態では、本発明のプロセスは、感染性ジカウイルス粒子および非感染性ウイルス粒子ならびにその他のウイルス産物を含む粗ハーベストから感染性ジカウイルス粒子が濃縮され、それにより、感染性ウイルス粒子の濃縮は、ウイルス粒子および不純物を含む粗ハーベスト（ａ）の合計ウイルス粒子含量に対して、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、好ましくは少なくとも８０％、特に少なくとも８５％である。
いくつかの実施形態では、最終的ウイルス調製物の残留不純物は、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ（サイズ排除クロマトグラフィー−ＨＰＬＣ）で測定して、粗ハーベスト中の全不純物に対して、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％未満、好ましくは５％未満である。
本発明の特有の態様は、日本脳炎ワクチン（ＪＥＶ）ＩＸＩＡＲＯ（登録商標）（Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ Ａ．Ｋ．ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｖａｃｃｉｎｅ １９，４５５７−４５６５、ＷＯ９９／１１７６２参照）のために使われたワクチン設計および精製手法に関連するノウハウを採用し、ジカウイルスワクチンの開発を促進するため改良し、可能な限り早くそれを必要とする対象に供給し得ることを理解することである。ＪＥＶに対し非常に効率的なワクチンを供給する、ＩＸＩＡＲＯ（登録商標）に対して開示された工業的プロセスを、利用可能なＪＥＶワクチンに比べてより効率的（高収量）で、より安全な（感作の可能性を有する硫酸プロタミンがより少ないまたは不含の）ジカワクチンを提供するために、本明細書で開示のさらに重要な改善により補完した。本明細書で開示のワクチンの具体的な革新は、改善されたショ糖勾配の開発により促進された、最終的原薬中の大幅に減少したプロタミン塩（配列番号１）含量である。前記ショ糖勾配は、硫酸プロタミンの分離を可能とするのみならず、ホルムアルデヒドによる非常に効果的な不活化も可能にし、ジカの場合には、発表されたＪＥＶプロセスによる約３５％の収率に比べて、本明細書で開示の改善プロセスにより９０％を超える収率が得られた（比較については、実験の項を参照されたい）。
本開示の態様は、ベロ組織培養細胞中でのウイルスの製造方法に関する。ベロ細胞は、アフリカミドリザルの腎臓由来のよく使われる組織培養細胞株である。本明細書で記載の方法で使用されるベロ細胞は、健康保護局ｇｅｎｅｒａｌ ｃｅｌｌ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（カタログ番号８８０２０４０１）から入手した、ベロ（ＷＨＯ）細胞株である。
ベロ細胞は、例えば、組織培養フラスコ中で；例えば、ローラーボトル中で浮遊状態で（マイクロキャリア上で）；または任意の他のウイルス産生のための培養システム中で、集密的単分子膜に増殖させることができる。いくつかの実施形態では、ベロ細胞は、ウイルス産生用のバイオリアクター中で増殖される。プラークアッセイまたはプラーク減少中和試験（ＰＲＮＴ）のために、ベロ細胞は、組織培養フラスコ、皿、またはプレートのウエル中で単分子膜で増殖される。ベロ細胞にウイルスを感染させるために、培地にウイルスを接種し、細胞をウイルスと共に一定時間インキュベートする。接種後、細胞を洗浄して、所定の時間中に細胞に吸着しない全てのウイルスを除去してよい。
本明細書で提供される方法は、ベロ細胞中で継代培養することを含む。本明細書で使用される場合、「継代培養する」または「継代培養」という用語は、ベロ細胞の集団にウイルスを感染させて、その後、第２のベロ細胞集団に、第１のベロ細胞集団の感染により産生したウイルスを接種することを意味する。いくつかの実施形態では、感染ベロ細胞由来の培地（感染細胞から放出されたウイルスを含む）の一部を用いて、第２のベロ細胞集団に接種する。これを１継代培養または１ラウンドの継代培養と呼ぶ。継代培養は、連続的に実施してよく、例えば、感染した第２のベロ細胞集団由来の培地の一部を使って、第３のベロ細胞集団に接種する、等々。いくつかの実施形態では、単一プラークから得られたウイルスを使って、別の細胞集団に接種する。
いくつかの実施形態では、ウイルスはベロ細胞中で数回、例えば、少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０回継代培養される。いくつかの実施形態では、ウイルスはベロ細胞中で少なくとも４回または５回継代培養される。いくつかの実施形態では、ウイルスはベロ細胞中で少なくとも３０回継代培養される。ウイルス集団、すなわち、ウイルス配列は、前記継代培養の間、可能な限り一定にとどまることが重要である。ウイルスの適応（すなわち、元のウイルス集団中に変異ウイルスの出現）が起こる場合、前記継代は、前記ウイルス製造においては使用しないことが好ましく、例えば、ジカに対し、継代３まで、および７日目までの培養は、ウイルス集団における大きな変化がなく、すなわち、ウイルス集団に変異を導入することなく、使用できることが明らかになった。しかし、この観察は、それぞれのウイルス株に対し行われる必要があり、異なる可能性がある。
いくつかの実施形態では、ベロ細胞は、例えば、典型的な０．０１ＭＯＩ（感染多重度）でウイルス接種後、少なくとも２日間、インキュベートして、継代培養の前のウイルス産生を可能とする。いくつかの実施形態では、ベロ細胞は、ウイルスを接種後、継代培養の前に、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０または１０日間超、例えば、少なくとも７日間にわたり、インキュベートされる。ウイルス接種後、ベロ細胞がインキュベートされる日数は、細胞を接種するのに使用される感染多重度および培地中で望ましいウイルス力価などの因子に依存し得る。ウイルスのベロ細胞中での連続継代培養は、ウイルス株適応ベロ細胞の生成を生じてもよい。
感染ベロ細胞由来の培地を、採取（収集）してウイルスを得てもよい。いくつかの実施形態では、培地は、感染ベロ細胞から採取され、新しい培地と置換され、次にこれが、別の時間後採取される。いくつかの実施形態では、感染ベロ細胞から採取された培地は、ベロ細胞培養液から別々にプールされる、および／または日毎に別々にプールされる。採取は、感染後、例えば、７日目または９日目までに４回まで繰り返すことができ、単位細胞培養当たりのウイルスの高い収量が得られる。ジカウイルス株のベロ細胞への適応を最小限にするために、ベロ細胞を、継代培養の前に少なくとも７日間、より好ましくは５日間インキュベートし、その後に、上清を２、３、５および７日目および２、３および５日目に採取するとよいことが明らかになった（実験の項も参照）。採取した培地は、培地からのウイルスの精製の前に、＋４℃で２週間まで保存できる。
いくつかの実施形態では、感染および溶解したベロ細胞由来のデブリを採取した培地から除去し得る。これを培地の「清澄化」と呼ぶ。採取した培地は、当該技術分野で既知の通常の方法、例えば、低速遠心分離、例えば、１５００ｇで１０分間の遠心分離により、および／また０．４５μｍの細孔径のフィルターを通して濾過することにより清澄化してよい。採取した培地は、濃縮の前に、＋４℃で保存できる。
採取した培地中のジカウイルスの力価を高めるために、当該技術分野で既知の任意の方法による濃縮に供し得る。例えば、採取した培地は、限定されないが、限外濾過、超遠心分離、遠心濃縮機、真空遠心分離、および凍結乾燥を含む方法により濃縮され得る。いくつかの実施形態では、採取した培地は、限外濾過により濃縮され、ジカウイルスを含む残余分が収集される。いくつかの実施形態では、採取した培地は、沈殿により濃縮される。この方法では、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）８０００が培地中に溶解され（１０％まで）、沈殿物が緩衝液、例えば、リン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．０）中に溶解される。
採取した培地を沈殿させてウイルス上清を生成し得る。いくつかの実施形態では、採取した培地を、沈殿させてベロ細胞ＤＮＡおよびその他の望ましくない物質、例えば、ベロ細胞デブリを採取した培地から除去する。いくつかの実施形態では、採取した培地は、沈殿の前に濃縮される。いくつかの実施形態では、硫酸プロタミン（例えば、配列番号１）を採取した培地に加え、混合物を例えば＋４℃または氷上でインキュベートすることにより採取した培地を沈殿させる。いくつかの実施形態では、採取した培地をベンゾナーゼで処理し、採取した培地から、ベロ細胞ＤＮＡおよびベロ細胞デブリなどのその他の望ましくない物質を除去する。しかし、硫酸プロタミンによる処理が好ましいことが明らかになった（実験の項を参照）。いくつかの実施形態では、沈殿した培地は遠心分離され、沈殿した物質およびウイルスを含む上清（「ウイルス上清」と呼ぶ）が収集される。
ウイルス上清は、沈殿後、例えば、密度勾配超遠心分離によりさらに精製され得る。いくつかの実施形態では、ウイルス上清は、ショ糖勾配によりさらに精製される。画分は、ショ糖勾配から収集され、ウイルスの存在に関しアッセイされ得る。ウイルスポジティブ画分のアッセイ方法には、プラークアッセイ、赤血球凝集反応アッセイ、ポリアクリルアミドゲル電気泳動法、およびウェスタンブロッティングおよびＥＬＩＳＡなどの抗原アッセイが挙げられる。ウイルスを含む画分は、ウイルスの力価およびその他の不純物レベルを基準にしてプールされ得る。ウイルス上清中に存在する不純物のレベルまたは量は、ベロ細胞ＤＮＡ、ウイルス凝集体および／またはベロ細胞タンパク質の試験をすることにより推定できる（実験の項を参照）。本発明の特定の実施形態は、実験の項で示すように、効率的プロタミン分離を可能とする改善されたショ糖勾配である。意外にも、１０％（ｗ／ｗ）のショ糖を有するウイルス含有画分の、単純な３層ショ糖密度勾配（例えば、１５％（ｗ／ｗ）ショ糖溶液、３５％（ｗ／ｗ）ショ糖溶液、および５０％（ｗ／ｗ）ショ糖溶液を含む勾配液）への添加により、ウイルスの大きな損失なしに、硫酸プロタミンの効率的な分離が得られるということが明らかになった。したがって、本発明の特に好ましい実施形態は、硫酸プロタミンを効率的に分離できるショ糖密度勾配の使用であり、前記ショ糖密度勾配は、本明細書に記載のウイルス、すなわち、ジカウイルスなどのウイルスの精製に使用される。
対象への投与用の安全なワクチンまたは組成物を実現するために、ウイルス上清を不活化し得る（ジカウイルスの実験の項参照）。本明細書で使用される場合、「不活化」および「最適に不活化された」という用語は同義に使用してよく、ウイルスが宿主細胞に感染できないように（非感染性に）されるが、ウイルスの抗原性に影響を与えないか、または実質的に影響を与えない、例えば、ウイルスの表面上に曝露された免疫原性抗原は、対象中（例えば、抗原特異的抗体）の免疫反応を刺激することができるプロセス（またはその結果）を意味する。「ウイルスの抗原性に影響を与えないか、または実質的に影響を与えない」は、不活化ウイルスが、不活化に供されないウイルスの抗原性の、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、あるいは実質的に１００％の抗原性を保持していることを意味する。
ウイルス不活化のための種々の方法が当技術分野において既知である。いくつかの実施形態では、ウイルスは、化学的不活化、熱失活、ｐＨ不活化、またはＵＶ不活化により不活化される。
いくつかの実施形態では、不活化は、化学的不活化によるものであり、これは、ウイルスは不活化されるが抗原エピトープは実質的に無傷のままであるように、ウイルスを１種または複数の化学的不活化剤と一定時間にわたり接触させることを含む。いくつかの実施形態では、ウイルスは、ウイルスを完全に不活化するのに必要な時間より長い一定時間にわたり不活化される。いくつかの実施形態では、ウイルス上清は、ウイルスを不活化するのに必要な日数プラス追加の少なくとも１日の間、不活化される。ウイルス上清の試料は、不活化プロセス全体で１回または複数回採取されて、宿主細胞の単分子膜を感染させること（すなわち、プラークアッセイ）による等の当該技術分野で既知の任意の方法により、ウイルス生存率（感染力）が評価され得る。このような方法を用いて、完全にウイルスを不活化するのに必要な時間が決定でき、完全な不活化を確保するためにより長い時間が選択される。
いくつかの実施形態では、ウイルスは、化学的不活化剤と、１日〜５０日間、２日間〜４０日間、２日間〜３０日間、２日間〜２０日間、２日間〜１０日間、３日間〜９日間、４日間〜８日間、５日間〜７日間、２日間〜５日間、または５日間〜１０日間にわたり接触させられる。いくつかの実施形態では、ウイルスは、１種または複数の化学的不活化剤と、少なくとも１日、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２１日間、２２日間、２３日間、２４日間、２５日間、２６日間、２７日間、２８日間、２９日間、３０日間、３１日間、３２日間、３３日間、３４日間、３５日間、３６日間、３７日間、３８日間、３９日間、４０日間、４１日間、４２日間、４３日間、４４日間、４５日間、４６日間、４７日間、４８日間、４９日間、または少なくとも５０日間接触させられる。
いくつかの実施形態では、化学的不活化は、約＋５℃、＋１０℃、＋１５℃、＋２０℃、＋２５℃、＋３０℃、＋３５℃、＋４０℃、または約＋４５℃で実施される。いくつかの実施形態では、化学的不活化は、約＋４℃で実施される。いくつかの実施形態では、化学的不活化は、約＋２２℃で実施される。
該技術分野で既知のいずれかの化学的不活化剤が本明細書に記載の方法におけるウイルスの不活化に好適する可能性がある。当業者なら、化学的不活化剤および不活化が実施される温度などの因子が、ウイルスを完全に不活化するのに必要な時間（日数）の長さに影響を与え得ることを理解するであろう。化学的不活化剤の例には、限定されないが、ホルムアルデヒド、酵素、β−プロピオラクトン、エタノール、トリフルオロ酢酸、アセトニトリル、漂白剤、尿素、塩酸グアニジン、トリ−ｎ−ブチルホスフェート、エチレン−イミンまたはこれらの誘導体、およびツイーン、トリトン、デオキシコール酸ナトリウム、およびスルホベタインが挙げられる。好ましい不活化は、ホルムアルデヒドを用いた２２℃±２℃での約１０日間の不活化である。
いくつかの実施形態では、不活化剤は、ウイルスの化学的不活化の後で中和される。いくつかの実施形態では、不活化剤はホルムアルデヒドで、チオ硫酸ナトリウムまたはメタ重亜硫酸ナトリウムを用いて、化学的不活化後に中和される。
いくつかの実施形態では、ウイルスは、熱失活により不活化される。いくつかの実施形態では、熱失活は、ウイルスを、乾性温熱または蒸熱などの熱に一定時間曝露することを含む。いくつかの実施形態では、熱失活は、ウイルスを約＋４０℃、＋４５℃、＋５０℃、＋５５℃、＋６０℃、＋６５℃、＋７０℃、＋７５℃、＋８０℃、＋８５℃、＋９０℃、＋９５℃、または約＋１００℃の温度に暴露することを含む。いくつかの実施形態では、ウイルスは、少なくとも５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、３６時間、４８時間、６０時間、７２時間、８４時間、約９６時間、またはそれより長い時間にわたり熱に曝露される。好ましい熱失活は、ウイルスを約＋５６℃に６０分間曝露することを含む。
いくつかの実施形態では、ウイルスは、酸性またはアルカリ性条件に、一定時間にわたり、ウイルスが完全に不活化されるように、ウイルスを曝露することにより不活化される。ウイルス調製物のｐＨは、例えば、酸、塩基、または特定のｐＨを有する緩衝液を、ウイルス調製物に添加することにより、所望のｐＨに調節し得る。いくつかの実施形態では、ウイルスは、約２、２．５、３、３．５、４、４．５、５または約５．５の酸性ｐＨで不活化される。いくつかの実施形態では、ウイルスは、約８、８．５、９、９．５、１０または約１０．５のアルカリ性ｐＨで不活化される。
いくつかの実施形態では、ウイルスは、ＵＶ不活化を用いて不活化される。ＵＶ不活化は、ウイルスを、ＵＶ−Ａ、ＵＶ−Ｂ、またはＵＶ−Ｃ光などの高エネルギー照射に一定時間曝露することを含む。不活化法のいずれか２種以上を組み合わせて、同時にまたは順次に実施してもよい。
不活化ウイルスは、その後、透析されて、不活化剤および中和剤を含む全ての望ましくない物質が除去され、および／または緩衝液を対象に投与するために薬学的に許容可能な緩衝液と置換され得る。いくつかの実施形態では、不活化ウイルスは、ＰＢＳで透析される。加えて、あるいは、不活化ウイルスは、細菌濾過器などで０．２２μｍフィルターを通して濾過されてもよい。
本明細書に記載の方法または使用のいずれかは、対象のジカウイルス感染の予防のためのものであり得る。本明細書で使用される場合、「予防する」、「予防」および「からの防御」という用語は、疾患または感染の臨床的または潜在的症状、合併症、病態または生化学的徴候の発現の開始を減らす、または遅らせるための、またはジカウイルスの伝播／伝染を減らすまたは抑制するための、ウイルスワクチンまたは組成物の対象への投与を含む。本明細書で使用される場合、対象に予防的に（例えば、感染の前に）投与される不活化ジカウイルスなどの抗原（単一または複数）は、ワクチンと呼ばれ得る。
ジカワクチン
本明細書に記載のように、ジカウイルスは、対象の感染時には、種々の症状の内のいずれかを引き起こす可能性があり、通常、軽度の発熱；顔、頸部、躯幹、上腕の発疹（皮疹）；頭痛；光への感受性；非炎症性関節痛；結膜炎；食欲不振；下痢；腹痛；および／または眩暈を特徴とする。妊娠中のジカウイルス感染は、胎児／新生児における小頭症と関連がある。また、ギラン・バレー症候群またはその症状の発症とも確度の高い関連性がある。ジカウイルスに曝露されたまたはジカウイルスに曝露されたと疑われる対象のジカウイルス感染の診断は、ウイルス特異的抗体の存在の検出および／またはＰＣＲまたはリアルタイムＰＣＲによるジカウイルス検出などの分子検査を必要とする。
本明細書で提供されるのは、治療有効量の投与量のジカウイルスワクチンを、それを必要としている対象に投与する方法である。いくつかの実施形態では、対象は、哺乳動物対象、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類、ウサギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、または雌ウシである。いくつかの実施形態では、対象は、マウスである。いくつかの実施形態では、対象は、小児、成人、または高齢者などのヒト対象である。いくつかの実施形態では、対象は、女性対象である。いくつかの実施形態では、対象は、妊婦または妊婦になる予定のヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、ジカウイルスに曝露される危険がある。いくつかの実施形態では、対象は、ジカウイルスが存在するまたは存在すると考えられる地域に住んでいる、またはその地域に旅行している。いくつかの実施形態では、対象は、あらかじめデングウイルスに感染したまたはそれに対しワクチン接種したことがあり、すなわち、抗体依存性疾患の増強のリスクがある。いくつかの実施形態では、対象は、ジカウイルス爆発的感染を経験している地域に住んでいる、またはその地域に旅行している。いくつかの実施形態では、対象は、ジカウイルスベクターを伝染させる節足動物ベクターが存在するまたは存在すると考えられる地域に住んでいる、またはその地域に旅行している。
いずれの本明細書に記載のジカウイルスワクチンまたは組成物も、治療有効量または治療有効量の投与量で対象に投与してよい。本明細書で使用される場合、「治療有効量」のワクチンは、本明細書に記載のものなどの、限定されないが、感染の予防、ジカウイルスに対する免疫反応または高められた免疫反応、またはジカ疾患に関連する症状の予防もしくは低減を含む、対象中に目的の反応または転帰を生ずる任意の量である。
いくつかの実施形態では、治療有効量の本明細書に記載のジカウイルスワクチンまたは組成物は、抗原特異的抗体（例えば、抗ジカウイルス抗体）を生成するのに十分な量である。いくつかの実施形態では、治療有効量は、対象に有効防御免疫状態を与えるのに十分である、すなわち、感染を防止／保護するために十分な抗原特異的抗体を生成する。いくつかの実施形態では、有効防御免疫状態は、少なくとも７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％のワクチン接種対象に対し付与される。いくつかの実施形態では、有効防御免疫状態は、１：１０またはそれより高いワクチン接種した対象由来の血清の希釈によるプラーク減少中和試験（ＰＲＮＴ）で、ジカウイルスプラークの数の５０％またはそれを超える減少により定義される。いくつかの実施形態では、有効量のジカワクチンは、少なくとも７０％の確率で、対象を抗体陽転させるのに十分である。いくつかの実施形態では、治療有効量は、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％の確率で、対象を抗体陽転させるのに十分である。対象が抗体陽転されたかどうかは、対象由来の血清試料を得て、抗ジカウイルス抗体を検出するアッセイを実施するなどの当該技術分野で既知の任意の方法により評価できる。いくつかの実施形態では、対象由来の血清試料が、閾値または所定のベースラインを超える抗ジカウイルス抗体の量を含む場合、対象は抗体陽転されている。対象由来の血清試料中の抗ジカウイルス抗体（すなわち、抗ジカＥタンパク質ＩｇＧ抗体）の、以前に採取した同じ対象の血清試料に比べて、少なくとも４倍の増加がある場合、対象は通常、抗体陽転されていると見なされる。
いくつかの実施形態では、対象の抗体陽転は、プラーク減少中和試験（ＰＲＮＴ）を実施することにより評価される。簡単に説明すると、ＰＲＮＴを使って、コントロール血清／抗体に比べて、ジカウイルスプラークの数を５０％減らすのに必要な血清力価（ＰＲＮＴ５０）が決定される。ＰＲＮＴ５０は、ベロ細胞またはジカウイルスに感染し得る他の任意の細胞型／株の単分子膜を使って測定してよい。対象由来の血清は希釈され、生の非不活化ジカウイルスと共にインキュベートされる。血清／ウイルス混合物が、ベロ細胞に添加され、一定時間にわたりインキュベートされ得る。ベロ細胞単層上に形成されたプラークが計数され、血清またはコントロール抗体の非存在下のジカウイルスにより形成されたプラークの数と比較される。ＰＲＮＴ５０における１：１０希釈の血清の中和抗体の閾値は通常、防御の証拠として受け入れられている（Ｈｏｍｂａｃｈ ｅｔ．ａｌ．Ｖａｃｃｉｎｅ（２００５）２３：５２０５−５２１１）。
いくつかの実施形態では、ジカウイルスは投与のために、医薬組成物などの組成物として処方され得る。本明細書で使用される場合、用語の「医薬組成物」は、不活化ジカウイルスなどの少なくとも１種の有効成分、および１種または複数の不活性成分の混合または組み合わせから得られる生成物を意味する。この不活性成分には、１種または複数の薬学的に許容可能な賦形剤を含めてよい。
ワクチンを含む本発明の医薬組成物は、当該技術分野でよく知られ、日常的に実施されている方法により調製できる（例えば、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．２０ｔｈ ｅｄ．２０００；ａｎｄ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ ｏｆ Ｖａｃｃｉｎｅｓ−Ｆａｃｔ Ｓｈｅｅｔ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、を参照されたい。例えば、ワクチンの成分には、ワクチンの機能の改善を支援するミョウバンなどのアジュバントおよび賦活薬、防腐剤およびワクチンが不変のまま存続するのを支援する安定剤（例えば、アルブミン、フェノール、グリシン）が挙げられる）。医薬組成物はＧＭＰ条件下で製造されるのが好ましい。通常、不活化ジカウイルス製剤の治療有効量が本発明の医薬組成物に採用される。不活化ジカウイルスは、当業者に既知の従来の方法により薬学的に許容可能な剤形に処方される。投与計画は最適な目的の反応（例えば、予防反応）が得られるように調節される。
本発明の医薬組成物中の有効成分の投与量は、特定の対象、組成物および投与方法で、対象に対し毒性を示すことなく目的の医薬反応を達成するために効果的な有効成分の量を得るように、変更することができる。選択される投与量レベルは、用いられる本発明の特定の組成物の活性、投与経路、投与時間、用いられる特定の化合物の排出速度、処置期間、用いられる特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物および／または物質、処置される対象の年齢、性別、体重、病状、総体的な健康および既往の病歴ならびに類似の因子を含む種々の薬物動態学的因子に依存する。
医師、獣医師またはその他の訓練された開業医は、目的の治療効果を得るために必要な量より少ないレベルの医薬組成物中の不活化ジカウイルスワクチンの投与量から開始し、目的の効果（例えば、抗ジカウイルス抗体の産生）が達成されるまで、徐々に投与量を増加することができる。一般に、本明細書に記載の人々の群の予防的処置のための、本発明の組成物の有効量は、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者がヒトか動物か、投与された他の薬物、および目的の抗ジカウイルス抗体の力価を含む種々の多く要因に応じて変化する。投与量は、安全性および効力を最適化するために、量を決定する必要がある。いくつかの実施形態では、投与計画は、一定用量の不活化ジカウイルスの皮下または筋肉内の２回の投与、１回は０日目の、もう１回は約７日目の投与を必要とする。いくつかの実施形態では、投与計画は、一定用量の不活化ジカウイルスの２回の皮下投与、１回は０日目の、もう１回は約１４日目の投与を必要とする。いくつかの実施形態では、投与計画は、一定用量の不活化ジカウイルスの２回の皮下投与、１回は０日目の、もう１回は約２８日目の投与を必要とする。いくつかの実施形態では、不活化ジカウイルスは、対象に１回投与される。
本明細書に記載のジカウイルスワクチンまたは組成物のいずれかは、１種または複数のアジュバントの投与と一緒に、その前に、またはその後に、対象に投与されてよい。アジュバントは、抗原またはその他の分子に対する対象の、免疫反応などの反応を高める分子である。いくつかの実施形態では、アジュバントは、抗原または他の分子を安定化し得る。ジカウイルスワクチンまたはその組成物がアジュバントと共に投与するかどうかの決定は、種々の要因（例えば、目的の反応のタイプと程度）に依存し、これは当業者には明らかであろう。いくつかの実施形態では、アジュバントの投与と一緒の、その前の、またはその後の、本明細書に記載のジカウイルスワクチンまたは組成物のいずれかの投与は、ウイルス中和（抗ジカウイルス）抗体の産生を強化し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のジカウイルスワクチンまたは組成物のいずれかを、アジュバントの投与と一緒に、その前に、またはその後に投与される対象は、抗体陽転させるためのジカウイルスワクチンまたは組成物を単回投与されるのみでよい（一定レベルの抗ジカウイルス抗体を産生する）。アジュバントの例には、限定されないが、アルミニウム塩（水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウム）、リン酸カルシウム水酸化物、パラフィン油、死菌、細菌毒素、トキソイド、細菌サブユニット、スクアレン、チメロサール、合成洗剤、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、抗菌ペプチドおよびＴＬＲ９アゴニスト（例えば、ＩＣ３１（登録商標））を含む２−成分アジュバントなどの２−成分アジュバント、およびフロイント完全アジュバントおよびフロイント不完全アジュバントなどの組み合わせを挙げ得る。いくつかの実施形態では、ジカウイルスワクチンまたは組成物は、水酸化アルミニウムと共に投与される。いくつかの実施形態では、不活化ジカウイルスワクチンまたは組成物は、リン酸アルミニウム塩と共に投与される。好ましいアルミニウム塩は、低減されたＣｕ含量、例えば、ジカ組成物の重量を基準にして１．２５ｐｐｂ未満のＣｕ含量の水酸化アルミニウムである。アジュバントに関する詳細は、国際公開第２０１３／０８３７２６号またはＳｃｈｌｅｇｌ ｅｔ ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ ３３（２０１５）５９８９−５９９６、に記載されている。
いくつかの実施形態では、アジュバントは２成分からなる。いくつかの実施形態では、２−成分アジュバントは、抗菌ペプチドおよびＴＬＲ９アゴニストを含む。いくつかの実施形態では、抗菌ペプチドは、アミノ酸配列ＫＬＫＬ５ＫＬＫ（配列番号７１）により与えられる。いくつかの実施形態では、ＴＬＲ９アゴニストは、デオキシイノシン含有免疫賦活性オリゴデオキシ核酸分子（Ｉ−ＯＤＮ）である。いくつかの実施形態では、Ｉ−ＯＤＮは、アミノ酸配列（ｄＩｄＣ）１３（配列番号７０）を含む。いくつかの実施形態では、アジュバントはＩＣ３１（登録商標）である。いくつかの実施形態では、アジュバントは、ナノ粒子形態である（例えば、米国特許第８，７６５，１４８Ｂ２を参照されたい。この特許は参照によりその全体が組み込まれる）。いくつかの実施形態では、アジュバントは、水酸化アルミニウムなどのアルミニウム塩と組み合わされた、ＩＣ３１（登録商標）、すなわち、ＫＬＫＬ５ＫＬＫ（配列番号７１）および核酸配列（ｄＩｄＣ）１３（配列番号７０）である。
本明細書に記載のジカウイルスワクチンまたは組成物は、１種または複数の、ジカウイルスと同じ地理的地域に存在するまたは存在すると考えられる別の感染病原体などの別の感染病原体に対するワクチンと同時に、対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、他の感染病原体は、対象が接触する恐れのある病原体である。いくつかの実施形態では、他の感染病原体は、ジカウイルスと同じ節足動物ベクターにより伝染される。いくつかの実施形態では、他の感染病原体は、日本脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デングウイルスおよび／またはチクングニアウイルスである。
例えば、ジカウイルス感染を防ぐまたはその重症度を低減するための、対象への予防的投与に使用するためのキットも、本開示の範囲内に入る。このようなキットは、不活化ジカウイルスワクチンなどの不活化ジカウイルスを含有する組成物を含む１個または複数の容器を含み得る。いくつかの実施形態では、キットは、第２のワクチンなどの第２の組成物を含有する１つまたは複数の追加の容器をさらに含んでもよい。いくつかの実施形態では、第２のワクチンは、別のアルボウイルスに対するワクチンである。いくつかの実施形態では、第２のワクチンは、デング熱ウイルスワクチンおよび／またはチクングニアウイルスワクチンである。
いくつかの実施形態では、キットには、本明細書に記載の方法のいずれかに従って使用するための使用説明書を含めることができる。含めた使用説明書には、ジカウイルス感染症を防ぐ、その発症を遅らせる、またはその重症度を低減させるための、不活化ジカウイルスを含む組成物の投与の説明を含めることができる。キットは、投与に好適する対象を、対象がジカウイルスに曝露されるまたはジカウイルス感染体に接触する恐れがあるかどうかを特定することに基づいて、選択する説明をさらに含み得る。さらに他の実施形態では、使用説明書は、不活化ジカウイルスを含む組成物を、ジカウイルスに曝露される恐れのあるまたはジカウイルス感染体に接触する恐れのある対象に投与することに関する記述を含む。
不活化ジカウイルスを含む組成物の使用に関する使用説明書は通常、目的の処置のための、投与量、投与スケジュール、および投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、大量包装（例えば、複数回投与用包装）または分割単位用量であってよい。本発明のキットで提供される使用説明書は通常、標識または添付文書（例えば、キットに含まれる紙シート）上の文書による使用説明書であるが、機械読み取り可能な使用説明書も許容可能である。
本開示のキットは、好適な包装内にある。好適な包装には、限定されないが、バイアル、ボトル、ジャー、フレキシブル包装、などが挙げられる。シリンジまたは注入装置などの特定の装置と組み合わせて使用するための包装容器も意図されている。容器は、無菌のアクセス出入り口を有し得、例えば、容器は、皮下組織注入針により貫通可能なストッパーを有するバイアルであってよい。組成物中の少なくとも１種の活性薬剤は、本明細書に記載の不活化ジカウイルスである。
本発明の適用において、本発明は、以下の記述で示される、または以下の図面で示される構成要素の構成および構成要素の配置の詳細に限定されるものではない。本発明は、他の実施形態が可能であり、また、様々な方法で実施または実行することができる。また、本明細書で使用される専門語および専門用語は、説明を目的とするものであり、限定するものと見なされるべきではない。「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ）」およびこれらの変形は、それらの後に列記される要素およびそれらの等価物、ならびに更なる要素を包含することを意味する。
別に定めのない限り、本開示に関連して使用される科学技術用語は、当業者により一般的に理解されている意味を有するものとする。さらに、文脈により別義が要求されない限り、単数の用語は、複数形を含み、複数の用語は、単数系を含むものとする。本開示の方法および技術は通常、当該技術分野で周知の従来の方法により実施される。一般に、本明細書に記載の、生化学、酵素学、分子および細胞生物学、微生物学、ウイルス学、細胞または組織培養、遺伝学ならびにタンパク質および細胞核化学の技術に関連して使用される命名法は、当該技術分野でよく知られ、一般的に使用されている技術である。別段の指示がない限り、本開示の方法および技術は通常、当該技術分野で周知の従来の方法に従って、および種々の一般的なおよびより具体的な、本明細書全体を通して引用および考察されている文献に記載されているように、実施される。
本発明はさらに下記実施例によりさらに説明されるが、これら実施例は、さらなる限定として解釈されるべきでものではない。本出願を通して引用された（文献参照、交付済み特許、公開された特許出願および同時係属の特許出願を含む）全ての引用文献の全内容は、参照により、特に、上記で言及された教示のために、明示的に本明細書に組み込まれる。しかし、いずれの文献の引用も、その文献が先行技術であることを承認することを意図するものではない。
Figure 0006949027
Figure 0006949027
 ＊ブリックス糖度（°ＢＸ）は、水溶液のショ糖含量である。１ブリックス糖度は、１００ｇの溶液中の１ｇのショ糖であり、質量％による溶液の濃度を表す。°ＢＸは、パーセント（ｗ／ｗ）でのショ糖含量に相当し、例えば、４５°ＢＸは、４５％（ｗ／ｗ）のショ糖に等しい。
Figure 0006949027
Figure 0006949027
Figure 0006949027
配列
配列番号１
典型的なプロタミンの形
ＰＲＲＲＲＳＳＳＲＰ ＶＲＲＲＲＲＰＲＶＳ ＲＲＲＲＲＲＧＧＲＲ ＲＲ

以下で提供されるのは、本明細書に記載の方法、組成物、および／またはワクチンで使用され得るジカウイルスのゲノムの核酸配列の例である。

配列番号２
ＫＵ３２１６３９．１ ジカウイルス株 ＺｉｋａＳＰＨ２０１５、Ｂｒａｚｉｌ、全ゲノム
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配列番号３
ＫＵ４９７５５５．１ ジカウイルス分離株 Ｂｒａｚｉｌ−ＺＫＶ２０１５、Ｂｒａｚｉｌ、全ゲノム
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配列番号４
ＫＵ５０１２１５．１ ジカウイルス株 ＰＲＶＡＢＣ５９、Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ、全ゲノム
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配列番号５
ＫＵ５０９９９８．１ ジカウイルス株 Ｈａｉｔｉ／１２２５／２０１４、Ｈａｉｔｉ、全ゲノム
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配列番号６
ＫＵ５２７０６８．１ ジカウイルス株 Ｎａｔａｌ ＲＧＮ，Ｂｒａｚｉｌ：Ｒｉｏ Ｇｒａｎｄｅ ｄｏ Ｎｏｒｔｅ、Ｎａｔａｌ、全ゲノム
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配列番号７
ＫＵ６８１０８１．３ ジカウイルス分離株 Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ／Ｈ．ｓａｐｉｅｎｓ−ｔｃ／ＴＨＡ／２０１４／ＳＶ０１２７− １４、Ｔｈａｉｌａｎｄ、全ゲノム
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配列番号８
ＫＵ６８１０８２．３ ジカウイルス分離株 Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ／Ｈ．ｓａｐｉｅｎｓ−ｔｃ／ＰＨＬ／２０１２／ＣＰＣ−０７４０、Ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｓ、全ゲノム
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配列番号９
ＫＵ７０７８２６．１ ジカウイルス分離株 ＳＳＡＢＲ１，Ｂｒａｚｉｌ、全ゲノム
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配列番号１０
ＫＵ７４４６９３．１ ジカウイルス分離株 ＶＥ＿Ｇａｎｘｉａｎ，Ｃｈｉｎａ、全ゲノム
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配列番号１１
ＬＣ００２５２０．１ ジカウイルスゲノムＲＮＡ、株：ＭＲ７６６−ＮＩＩＤ、Ｕｇａｎｄａ、全ゲノム
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配列番号１２
ＡＹ６３２５３５．２ ＮＣ＿０１２５３２．１ ジカウイルス株 ＭＲ ７６６、Ｕｇａｎｄａ、全ゲノム
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配列番号１３
ＫＪ７７６７９１．１、ジカウイルス株 Ｈ／ＰＦ／２０１３ ポリタンパク質遺伝子、全コード領域
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いくつかの実施形態では、ジカウイルスは、配列番号２〜１３または７２の内のいずれか１つの核酸配列で示されるＤＮＡ配列に対応するＲＮＡゲノムを有する。いくつかの実施形態では、ジカウイルスは、配列番号２〜１３または７２の内のいずれか１つと、少なくとも、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％または９９．９％同一のバリアントゲノムを有する。
以下で提供されるのは、本明細書に記載の方法、組成物、および／またはワクチンで使用され得るジカ株のＥタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号１４
ｉｓｏｌ−ＡＲＢ１５０７６．ＡＨＦ４９７８４．１．Ｃｅｎｔｒａｌ＿Ａｆｒｉｃａｎ＿Ｒｅｐｕｂｌｉｃ／２９１−７８８フラビウイルス外被糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＴＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＥＮＲＡＫＶＥＶＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＦＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＶＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＤＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＶＦＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＶＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＴＣＬＡＬＧＧＶＭＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号１５
ｉｓｏｌ−ＩｂＨ＿３０６５６．ＡＥＮ７５２６５．１．Ｎｉｇｅｒｉａ／２９１−７８８フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＴＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＥＮＲＡＫＶＥＶＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＳＧＡＤＴＥＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＶＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＲＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＤＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＩＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＶＦＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＶＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＴＣＬＡＬＧＧＶＭＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号１６
ＡｒＢ１３６２．ＡＨＬ４３５００．１．−／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＴＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＸＸＸＸＸＸＸＮＲＡＥＶＥＶＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＦＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＶＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＤＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＶＦＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＶＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＴＣＬＡＬＧＧＶＭＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号１７
ＡｒＤ１２８０００．ＡＨＬ４３５０２．１．−／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＴＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＸＸＸＸＸＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＶＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＲＬＶＲＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＦＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＶＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＤＫＫＩＴＨＨＷＬＫＫＧＳＳＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＶＦＮＳＬＧＫＧＶＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＶＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＴＣＬＡＬＧＧＶＭＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号１８
ＡｒＤ１５８０９５．ＡＨＬ４３５０５．１．−／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
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配列番号１９
ＡｒＤ１５８０８４．ＡＨＬ４３５０４．１．−／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
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配列番号２０
ｉｓｏｌ−ＡＲＢ１３５６５．ＡＨＦ４９７８３．１．Ｃｅｎｔｒａｌ＿Ａｆｒｉｃａｎ＿Ｒｅｐｕｂｌｉｃ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＴＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＩＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＶＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＦＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＶＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＤＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＶＦＮＳＬＧＫＧＶＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＶＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＴＣＬＡＬＧＧＶＭＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号２１
ｉｓｏｌ−ＡＲＢ７７０１．ＡＨＦ４９７８５．１．Ｃｅｎｔｒａｌ＿Ａｆｒｉｃａｎ＿Ｒｅｐｕｂｌｉｃ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＴＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＩＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＶＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＦＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＶＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＤＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＶＦＮＳＬＧＫＧＶＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＶＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＴＣＬＡＬＧＧＶＭＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号２２
ｉｓｏｌ−ＡｒＤ＿４１５１９．ＡＥＮ７５２６６．１．Ｓｅｎｅｇａｌ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＴＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＶＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＦＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＶＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＤＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＶＦＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＶＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＴＣＬＡＬＧＧＶＭＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号２３
ＭＲ７６６−ＮＩＩＤ．ＢＡＰ４７４４１．１．Ｕｇａｎｄａ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＴＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＴＶＮＤＩＧＹＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＶＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＫＬＦＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＶＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＩＰＶＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＤＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＶＦＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＶＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＴＣＬＡＬＧＧＶＭＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号２４
ＬＣ００２５２０．１／３２６−８２９ジカウイルスゲノムＲＮＡ、株：ＭＲ７６６−ＮＩＩＤ、Ｕｇａｎｄａ、フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＴＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＴＶＮＤＩＧＹＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＶＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＫＬＦＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＶＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＩＰＶＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＤＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＶＦＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＶＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＴＣＬＡＬＧＧＶＭＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号２５
ｉｓｏｌ−ＭＲ＿７６６．ＡＥＮ７５２６３．１．Ｕｇａｎｄａ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＴＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＹＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＶＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＫＬＦＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＶＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＩＰＶＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＤＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＶＦＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＶＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＴＣＬＡＬＧＧＶＭＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号２６
ＡｒＤ７１１７．ＡＨＬ４３５０１．１．−／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＴＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＩＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＶＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＦＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＶＣＴＡＡＫＶＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＤＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＶＦＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＶＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＴＣＬＡＬＧＧＶＭＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号２７
ＡＹ６３２５３５．２／３２６−８２５ ＮＣ＿０１２５３２．１ Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ ｓｔｒａｉｎ ＭＲ ７６６、Ｕｇａｎｄａ、フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＴＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＧＹＥＴＤＥＤＲＡＫＶＥＶＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＦＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＶＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＩＰＶＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＤＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＶＦＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＶＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＴＣＬＡＬＧＧＶＭＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号２８
ＭＲ＿７６６．ＡＡＶ３４１５１．１．Ｕｇａｎｄａ／２９１−７９０フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ．｜Ｑ３２ＺＥ１｜Ｑ３２ＺＥ１＿９ＦＬ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＴＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＧＹＥＴＤＥＤＲＡＫＶＥＶＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＦＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＶＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＩＰＶＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＤＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＶＦＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＶＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＴＣＬＡＬＧＧＶＭＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号２９
ＭＲ＿７６６．ＹＰ＿００９２２７１９８．１．Ｕｇａｎｄａ／１−５００外被タンパク質Ｅ［ジカウイルス］
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＴＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＧＹＥＴＤＥＤＲＡＫＶＥＶＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＦＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＶＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＩＰＶＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＤＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＶＦＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＶＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＴＣＬＡＬＧＧＶＭＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号３０
ＫＵ６８１０８１．３／３０８−８１１ ジカウイルス分離株 Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ／Ｈ．ｓａｐｉｅｎｓ−ｔｃ／ＴＨＡ／２０１４／ＳＶ０１２７− １４，Ｔｈａｉｌａｎｄ、フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＴＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＧＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＶＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号３１
ｉｓｏｌ−Ｚｉｋａ＿ｖｉｒｕｓ％Ｈ．ｓａｐｉｅｎｓ−ｔｃ％ＴＨＡ％２０１４％ＳＶ０１２７−＿１４．ＡＭＤ６１７１０．１．Ｔｈａｉｌａｎｄ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＴＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＧＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＶＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号３２
ＣＫ−ＩＳＬ＿２０１４．ＡＩＣ０６９３４．１．Ｃｏｏｋ＿Ｉｓｌａｎｄｓ／１−５０４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ．（断片）ＯＳ＝Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ ＧＮ＝Ｅ ＰＥ＝４ ＳＶ＝１
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配列番号３３
Ｎａｔａｌ＿ＲＧＮ．ＡＭＢ１８８５０．１．Ｂｒａｚｉｌ：＿Ｒｉｏ＿Ｇｒａｎｄｅ＿ｄｏ＿Ｎｏｒｔｅ，＿Ｎａｔａｌ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号３４
ｉｓｏｌ−Ｓｉ３２３．ＡＭＣ３７２００．１．Ｃｏｌｏｍｂｉａ／１−５０４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号３５
ＫＵ７０７８２６．１／３１７−８２０ ジカウイルス分離株 ＳＳＡＢＲ１、Ｂｒａｚｉｌ、フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号３６
ＫＵ５０９９９８．１／３２６−８２９ ジカウイルス株 Ｈａｉｔｉ／１２２５／２０１４、Ｈａｉｔｉ、フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号３７
ｉｓｏｌ−ＧＤＺ１６００１．ＡＭＬ８２１１０．１．Ｃｈｉｎａ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号３８
ＢｅＨ８１９０１５．ＡＭＡ１２０８５．１．Ｂｒａｚｉｌ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号３９
ＭＲＳ＿ＯＰＹ＿Ｍａｒｔｉｎｉｑｕｅ＿ＰａＲｉ＿２０１５．ＡＭＣ３３１１６．１．Ｍａｒｔｉｎｉｑｕｅ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号４０
ＫＵ５０１２１５．１／３０８−８１１ ジカウイルス株 ＰＲＶＡＢＣ５９，Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ、フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号４１
Ｈａｉｔｉ％１２２５％２０１４．ＡＭＢ３７２９５．１．Ｈａｉｔｉ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号４２
ＫＵ５２７０６８．１／３０８−８１１ ジカウイルス株 Ｎａｔａｌ ＲＧＮ、Ｂｒａｚｉｌ：Ｒｉｏ Ｇｒａｎｄｅ ｄｏ Ｎｏｒｔｅ、Ｎａｔａｌ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号４３
ｉｓｏｌ−Ｚ１１０６０２７．ＡＬＸ３５６６２．１．Ｓｕｒｉｎａｍｅ／５−５０８フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号４４
ｉｓｏｌ−ＦＬＲ．ＡＭＭ３９８０４．１．Ｃｏｌｏｍｂｉａ：＿Ｂａｒｒａｎｑｕｉｌｌａ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号４５
ＰＬＣａｌ＿ＺＶ＿ｉｓｏｌ−Ｆｒｏｍ＿Ｖｅｒｏ＿Ｅ６＿ｃｅｌｌｓ．ＡＨＬ３７８０８．１．Ｃａｎａｄａ／２５４−７５７フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号４６
ＢｅＨ８１８９９５．ＡＭＡ１２０８４．１．Ｂｒａｚｉｌ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ．［ジカウイルス］
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配列番号４７
Ｈ／ＰＦ／２０１３．ＡＨＺ１３５０８．１．Ｆｒｅｎｃｈ＿Ｐｏｌｙｎｅｓｉａ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号４８
ＰＲＶＡＢＣ５９．ＡＭＣ１３９１１．１．Ｐｕｅｒｔｏ＿Ｒｉｃｏ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号４９
ＫＵ３２１６３９．１／３２６−８２９ ジカウイルス株 ＺｉｋａＳＰＨ２０１５，Ｂｒａｚｉｌ、フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＩＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号５０
ＺｉｋａＳＰＨ２０１５．ＡＬＵ３３３４１．１．Ｂｒａｚｉｌ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＩＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号５１
１０３３４４．ＡＭＣ１３９１２．１．Ｇｕａｔｅｍａｌａ／２９１−７９４ ポリタンパク質［Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ］．１０３３４４．ＡＭＣ１３９１２．１．Ｇｕａｔｅｍａｌａフラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＩＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号５２
ｉｓｏｌ−Ｂｒａｚｉｌ−ＺＫＶ２０１５．ＡＭＤ１６５５７．１．Ｂｒａｚｉｌ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＴＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号５３
ＫＵ４９７５５５．１／３０８−８１１ ジカウイルス分離株 Ｂｒａｚｉｌ−ＺＫＶ２０１５、フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＴＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号５４
ｉｓｏｌ−ＺＪ０３．ＡＭＭ３９８０６．１．Ｃｈｉｎａ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＲＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号５５
ｉｓｏｌ−ＦＳＳ１３０２５．ＡＦＤ３０９７２．１．Ｃａｍｂｏｄｉａ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＶＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号５６
ｉｓｏｌ−Ｚ１１０６０３２．ＡＬＸ３５６６０．１．Ｓｕｒｉｎａｍｅ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ［ジカウイルス］
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＡＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号５７
ｉｓｏｌ−Ｚ１１０６０３３．ＡＬＸ３５６５９．１．Ｓｕｒｉｎａｍｅ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ［ジカウイルス］
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＡＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号５８
ｉｓｏｌ−ＢｅＨ８２８３０５．ＡＭＫ４９１６５．１．Ｂｒａｚｉｌ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＴＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号５９
ｉｓｏｌ−ＧＤ０１．ＡＭＫ７９４６８．１．Ｃｈｉｎａ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＧＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号６０
ｉｓｏｌ−Ｚ１１０６０３１．ＡＬＸ３５６６１．１．Ｓｕｒｉｎａｍｅ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
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配列番号６１
ＡＣＤ７５８１９．１．Ｍｉｃｒｏｎｅｓｉａ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
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配列番号６２
ＫＵ６８１０８２．３／３０８−８１１ ジカウイルス分離株 Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ／Ｈ．ｓａｐｉｅｎｓ−ｔｃ／ＰＨＬ／２０１２／ＣＰＣ−０７４０、Ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｓ、フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＶＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＴＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号６３
ｉｓｏｌ−Ｚｉｋａ＿ｖｉｒｕｓ％Ｈ．ｓａｐｉｅｎｓ−ｔｃ％ＰＨＬ％２０１２％ＣＰＣ−０７４０．ＡＭＤ６１７１１．１．Ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｓ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＶＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＴＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号６４
ｉｓｏｌ−ＢｅＨ８２３３３９．ＡＭＫ４９１６４．２．Ｂｒａｚｉｌ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＳＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＴＩＳＤＩＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＡＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号６５
ｉｓｏｌ−Ｐ６−７４０．ＡＥＮ７５２６４．１．Ｍａｌａｙｓｉａ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＸＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＤＫＫＩＴＨＨＷＸＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＶＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＴＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号６６
ＫＵ７４４６９３．１／３２６−８２９ ジカウイルス分離株 ＶＥ＿Ｇａｎｘｉａｎ、Ｃｈｉｎａ、フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＡＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＬＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＡＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＡＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＶＤＧＴＶＴＶＥＧＱＹＧＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＩＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＧ

配列番号６７
ｉｓｏｌ−ＶＥ＿Ｇａｎｘｉａｎ．ＡＭＫ７９４６９．１．Ｃｈｉｎａ／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＡＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＬＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＡＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＡＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＶＤＧＴＶＴＶＥＧＱＹＧＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＩＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＧ

配列番号６８
ＡｒＤ１５７９９５．ＡＨＬ４３５０３．１．−／２９１−７９４フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＳＣＩＧＶＳＮＲＤＬＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＥＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＭＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＬＳＤＭＡＳＡＳＲＣＰＴＱＧＥＰＳＬＤＫＱＳＤＴＱＳＶＣＫＲＴＬＧＤＲＧＷＧＮＧＣＧＩＦＧＫＧＳＬＶＴＣＳＫＦＴＣＣＫＫＭＰＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＰＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＩＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＶＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＦＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＶＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＳＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＤＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＶＦＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＶＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＴＣＬＡＬＧＧＶＭＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号６９
ＭＲ＿７６６．ＡＢＩ５４４７５．１．Ｕｇａｎｄａ／２９１−７８８フラビウイルス外皮糖タンパク質Ｅ
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＴＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＥＮＲＡＫＶＥＶＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＦＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＶＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＤＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＶＦＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＶＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＴＣＬＡＬＧＧＶＭＩＦＬＳＴＡＶＳＡ

配列番号７０
５’−（ｄＩｄＣ）１３−３’
ｄＩｄＣ ｄＩｄＣ ｄＩｄＣ ｄＩｄＣ ｄＩｄＣ ｄＩｄＣ ｄＩｄＣ ｄＩｄＣ ｄＩｄＣ ｄＩｄＣ ｄＩｄＣ ｄＩｄＣ ｄＩｄＣ

配列番号７１
ＫＬＫペプチド
ＫＬＫＬＬＬＬＬＫＬＫ

配列番号７２
ＺＩＫＶ配列 配列決定時のままのＨ／ＰＦ／２０１３
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配列番号７３
ＡＨＺ１３５０８．１，ポリネシアでの爆発的感染由来ジカウイルスポリプロテイン（Ｈ／ＰＦ／２０１３）
ＭＫＮＰＫＫＫＳＧＧＦＲＩＶＮＭＬＫＲＧＶＡＲＶＳＰＦＧＧＬＫＲＬＰＡＧＬＬＬＧＨＧＰＩＲＭＶＬＡＩＬＡＦＬＲＦＴＡＩＫＰＳＬＧＬＩＮＲＷＧＳＶＧＫＫＥＡＭＥＩＩＫＫＦＫＫＤＬＡＡＭＬＲＩＩＮＡＲＫＥＫＫＲＲＧＡＤＴＳＶＧＩＶＧＬＬＬＴＴＡＭＡＡＥＶＴＲＲＧＳＡＹＹＭＹＬＤＲＮＤＡＧＥＡＩＳＦＰＴＴＬＧＭＮＫＣＹＩＱＩＭＤＬＧＨＭＣＤＡＴＭＳＹＥＣＰＭＬＤＥＧＶＥＰＤＤＶＤＣＷＣＮＴＴＳＴＷＶＶＹＧＴＣＨＨＫＫＧＥＡＲＲＳＲＲＡＶＴＬＰＳＨＳＴＲＫＬＱＴＲＳＱＴＷＬＥＳＲＥＹＴＫＨＬＩＲＶＥＮＷＩＦＲＮＰＧＦＡＬＡＡＡＡＩＡＷＬＬＧＳＳＴＳＱＫＶＩＹＬＶＭＩＬＬＩＡＰＡＹＳＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡＤＶＧＣＳＶＤＦＳＫＫＥＴＲＣＧＴＧＶＦＶＹＮＤＶＥＡＷＲＤＲＹＫＹＨＰＤＳＰＲＲＬＡＡＡＶＫＱＡＷＥＤＧＩＣＧＩＳＳＶＳＲＭＥＮＩＭＷＲＳＶＥＧＥＬＮＡＩＬＥＥＮＧＶＱＬＴＶＶＶＧＳＶＫＮＰＭＷＲＧＰＱＲＬＰＶＰＶＮＥＬＰＨＧＷＫＡＷＧＫＳＹＦＶＲＡＡＫＴＮＮＳＦＶＶＤＧＤＴＬＫＥＣＰＬＫＨＲＡＷＮＳＦＬＶＥＤＨＧＦＧＶＦＨＴＳＶＷＬＫＶＲＥＤＹＳＬＥＣＤＰＡＶＩＧＴＡＶＫＧＫＥＡＶＨＳＤＬＧＹＷＩＥＳＥＫＮＤＴＷＲＬＫＲＡＨＬＩＥＭＫＴＣＥＷＰＫＳＨＴＬＷＴＤＧＩＥＥＳＤＬＩＩＰＫＳＬＡＧＰＬＳＨＨＮＴＲＥＧＹＲＴＱＭＫＧＰＷＨＳＥＥＬＥＩＲＦＥＥＣＰＧＴＫＶＨＶＥＥＴＣＧＴＲＧＰＳＬＲＳＴＴＡＳＧＲＶＩＥＥＷＣＣＲＥＣＴＭＰＰＬＳＦＲＡＫＤＧＣＷＹＧＭＥＩＲＰＲＫＥＰＥＳＮＬＶＲＳＭＶＴＡＧＳＴＤＨＭＤＨＦＳＬＧＶＬＶＩＬＬＭＶＱＥＧＬＫＫＲＭＴＴＫＩＩＩＳＴＳＭＡＶＬＶＡＭＩＬＧＧＦＳＭＳＤＬＡＫＬＡＩＬＭＧＡＴＦＡＥＭＮＴＧＧＤＶＡＨＬＡＬＩＡＡＦＫＶＲＰＡＬＬＶＳＦＩＦＲＡＮＷＴＰＲＥＳＭＬＬＡＬＡＳＣＬＬＱＴＡＩＳＡＬＥＧＤＬＭＶＬＩＮＧＦＡＬＡＷＬＡＩＲＡＭＶＶＰＲＴＤＮＩＴＬＡＩＬＡＡＬＴＰＬＡＲＧＴＬＬＶＡＷＲＡＧＬＡＴＣＧＧＦＭＬＬＳＬＫＧＫＧＳＶＫＫＮＬＰＦＶＭＡＬＧＬＴＡＶＲＬＶＤＰＩＮＶＶＧＬＬＬＬＴＲＳＧＫＲＳＷＰＰＳＥＶＬＴＡＶＧＬＩＣＡＬＡＧＧＦＡＫＡＤＩＥＭＡＧＰＭＡＡＶＧＬＬＩＶＳＹＶＶＳＧＫＳＶＤＭＹＩＥＲＡＧＤＩＴＷＥＫＤＡＥＶＴＧＮＳＰＲＬＤＶＡＬＤＥＳＧＤＦＳＬＶＥＤＤＧＰＰＭＲＥＩＩＬＫＶＶＬＭＴＩＣＧＭＮＰＩＡＩＰＦＡＡＧＡＷＹＶＹＶＫＴＧＫＲＳＧＡＬＷＤＶＰＡＰＫＥＶＫＫＧＥＴＴＤＧＶＹＲＶＭＴＲＲＬＬＧＳＴＱＶＧＶＧＶＭＱＥＧＶＦＨＴＭＷＨＶＴＫＧＳＡＬＲＳＧＥＧＲＬＤＰＹＷＧＤＶＫＱＤＬＶＳＹＣＧＰＷＫＬＤＡＡＷＤＧＨＳＥＶＱＬＬＡＶＰＰＧＥＲＡＲＮＩＱＴＬＰＧＩＦＫＴＫＤＧＤＩＧＡＶＡＬＤＹＰＡＧＴＳＧＳＰＩＬＤＫＣＧＲＶＩＧＬＹＧＮＧＶＶＩＫＮＧＳＹＶＳＡＩＴＱＧＲＲＥＥＥＴＰＶＥＣＦＥＰＳＭＬＫＫＫＱＬＴＶＬＤＬＨＰＧＡＧＫＴＲＲＶＬＰＥＩＶＲＥＡＩＫＴＲＬＲＴＶＩＬＡＰＴＲＶＶＡＡＥＭＥＥＡＬＲＧＬＰＶＲＹＭＴＴＡＶＮＶＴＨＳＧＴＥＩＶＤＬＭＣＨＡＴＦＴＳＲＬＬＱＰＩＲＶＰＮＹＮＬＹＩＭＤＥＡＨＦＴＤＰＳＳＩＡＡＲＧＹＩＳＴＲＶＥＭＧＥＡＡＡＩＦＭＴＡＴＰＰＧＴＲＤＡＦＰＤＳＮＳＰＩＭＤＴＥＶＥＶＰＥＲＡＷＳＳＧＦＤＷＶＴＤＨＳＧＫＴＶＷＦＶＰＳＶＲＮＧＮＥＩＡＡＣＬＴＫＡＧＫＲＶＩＱＬＳＲＫＴＦＥＴＥＦＱＫＴＫＨＱＥＷＤＦＶＶＴＴＤＩＳＥＭＧＡＮＦＫＡＤＲＶＩＤＳＲＲＣＬＫＰＶＩＬＤＧＥＲＶＩＬＡＧＰＭＰＶＴＨＡＳＡＡＱＲＲＧＲＩＧＲＮＰＮＫＰＧＤＥＹＬＹＧＧＧＣＡＥＴＤＥＤＨＡＨＷＬＥＡＲＭＬＬＤＮＩＹＬＱＤＧＬＩＡＳＬＹＲＰＥＡＤＫＶＡＡＩＥＧＥＦＫＬＲＴＥＱＲＫＴＦＶＥＬＭＫＲＧＤＬＰＶＷＬＡＹＱＶＡＳＡＧＩＴＹＴＤＲＲＷＣＦＤＧＴＴＮＮＴＩＭＥＤＳＶＰＡＥＶＷＴＲＨＧＥＫＲＶＬＫＰＲＷＭＤＡＲＶＣＳＤＨＡＡＬＫＳＦＫＥＦＡＡＧＫＲＧＡＡＦＧＶＭＥＡＬＧＴＬＰＧＨＭＴＥＲＦＱＥＡＩＤＮＬＡＶＬＭＲＡＥＴＧＳＲＰＹＫＡＡＡＡＱＬＰＥＴＬＥＴＩＭＬＬＧＬＬＧＴＶＳＬＧＩＦＦＶＬＭＲＮＫＧＩＧＫＭＧＦＧＭＶＴＬＧＡＳＡＷＬＭＷＬＳＥＩＥＰＡＲＩＡＣＶＬＩＶＶＦＬＬＬＶＶＬＩＰＥＰＥＫＱＲＳＰＱＤＮＱＭＡＩＩＩＭＶＡＶＧＬＬＧＬＩＴＡＮＥＬＧＷＬＥＲＴＫＳＤＬＳＨＬＭＧＲＲＥＥＧＡＴＩＧＦＳＭＤＩＤＬＲＰＡＳＡＷＡＩＹＡＡＬＴＴＦＩＴＰＡＶＱＨＡＶＴＴＳＹＮＮＹＳＬＭＡＭＡＴＱＡＧＶＬＦＧＭＧＫＧＭＰＦＹＡＷＤＦＧＶＰＬＬＭＩＧＣＹＳＱＬＴＰＬＴＬＩＶＡＩＩＬＬＶＡＨＹＭＹＬＩＰＧＬＱＡＡＡＡＲＡＡＱＫＲＴＡＡＧＩＭＫＮＰＶＶＤＧＩＶＶＴＤＩＤＴＭＴＩＤＰＱＶＥＫＫＭＧＱＶＬＬＩＡＶＡＶＳＳＡＩＬＳＲＴＡＷＧＷＧＥＡＧＡＬＩＴＡＡＴＳＴＬＷＥＧＳＰＮＫＹＷＮＳＳＴＡＴＳＬＣＮＩＦＲＧＳＹＬＡＧＡＳＬＩＹＴＶＴＲＮＡＧＬＶＫＲＲＧＧＧＴＧＥＴＬＧＥＫＷＫＡＲＬＮＱＭＳＡＬＥＦＹＳＹＫＫＳＧＩＴＥＶＣＲＥＥＡＲＲＡＬＫＤＧＶＡＴＧＧＨＡＶＳＲＧＳＡＫＬＲＷＬＶＥＲＧＹＬＱＰＹＧＫＶＩＤＬＧＣＧＲＧＧＷＳＹＹＡＡＴＩＲＫＶＱＥＶＫＧＹＴＫＧＧＰＧＨＥＥＰＭＬＶＱＳＹＧＷＮＩＶＲＬＫＳＧＶＤＶＦＨＭＡＡＥＰＣＤＴＬＬＣＤＩＧＥＳＳＳＳＰＥＶＥＥＡＲＴＬＲＶＬＳＭＶＧＤＷＬＥＫＲＰＧＡＦＣＩＫＶＬＣＰＹＴＳＴＭＭＥＴＬＥＲＬＱＲＲＹＧＧＧＬＶＲＶＰＬＳＲＮＳＴＨＥＭＹＷＶＳＧＡＫＳＮＴＩＫＳＶＳＴＴＳＱＬＬＬＧＲＭＤＧＰＲＲＰＶＫＹＥＥＤＶＮＬＧＳＧＴＲＡＶＶＳＣＡＥＡＰＮＭＫＩＩＧＮＲＩＥＲＩＲＳＥＨＡＥＴＷＦＦＤＥＮＨＰＹＲＴＷＡＹＨＧＳＹＥＡＰＴＱＧＳＡＳＳＬＩＮＧＶＶＲＬＬＳＫＰＷＤＶＶＴＧＶＴＧＩＡＭＴＤＴＴＰＹＧＱＱＲＶＦＫＥＫＶＤＴＲＶＰＤＰＱＥＧＴＲＱＶＭＳＭＶＳＳＷＬＷＫＥＬＧＫＨＫＲＰＲＶＣＴＫＥＥＦＩＮＫＶＲＳＮＡＡＬＧＡＩＦＥＥＥＫＥＷＫＴＡＶＥＡＶＮＤＰＲＦＷＡＬＶＤＫＥＲＥＨＨＬＲＧＥＣＱＳＣＶＹＮＭＭＧＫＲＥＫＫＱＧＥＦＧＫＡＫＧＳＲＡＩＷＹＭＷＬＧＡＲＦＬＥＦＥＡＬＧＦＬＮＥＤＨＷＭＧＲＥＮＳＧＧＧＶＥＧＬＧＬＱＲＬＧＹＶＬＥＥＭＳＲＩＰＧＧＲＭＹＡＤＤＴＡＧＷＤＴＲＩＳＲＦＤＬＥＮＥＡＬＩＴＮＱＭＥＫＧＨＲＡＬＡＬＡＩＩＫＹＴＹＱＮＫＶＶＫＶＬＲＰＡＥＫＧＫＴＶＭＤＩＩＳＲＱＤＱＲＧＳＧＱＶＶＴＹＡＬＮＴＦＴＮＬＶＶＱＬＩＲＮＭＥＡＥＥＶＬＥＭＱＤＬＷＬＬＲＲＳＥＫＶＴＮＷＬＱＳＮＧＷＤＲＬＫＲＭＡＶＳＧＤＤＣＶＶＫＰＩＤＤＲＦＡＨＡＬＲＦＬＮＤＭＧＫＶＲＫＤＴＱＥＷＫＰＳＴＧＷＤＮＷＥＥＶＰＦＣＳＨＨＦＮＫＬＨＬＫＤＧＲＳＩＶＶＰＣＲＨＱＤＥＬＩＧＲＡＲＶＳＰＧＡＧＷＳＩＲＥＴＡＣＬＡＫＳＹＡＱＭＷＱＬＬＹＦＨＲＲＤＬＲＬＭＡＮＡＩＣＳＳＶＰＶＤＷＶＰＴＧＲＴＴＷＳＩＨＧＫＧＥＷＭＴＴＥＤＭＬＶＶＷＮＲＶＷＩＥＥＮＤＨＭＥＤＫＴＰＶＴＫＷＴＤＩＰＹＬＧＫＲＥＤＬＷＣＧＳＬＩＧＨＲＰＲＴＴＷＡＥＮＩＫＮＴＶＮＭＶＲＲＩＩＧＤＥＥＫＹＭＤＹＬＳＴＱＶＲＹＬＧＥＥＧＳＴＰＧＶＬ

配列番号７４
９３２０＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿１Ｆ
ｔｔａｇｇａｔｃｃＧＴＴＧＴＴＧＡＴＣＴＧＴＧＴＧＡＡＴ

配列番号７５
９３２１＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿１Ｒ
ｔａａｃｔｃｇａｇＣＧＴＡＣＡＣＡＡＣＣＣＡＡＧＴＴ

配列番号７６
９３２２＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿２Ｆ
ｔｔａｇｇａｔｃｃＴＣＡＣＴＡＧＡＣＧＴＧＧＧＡＧＴＧ

配列番号７７
９３２３＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿２Ｒ
ｔａａｃｔｃｇａｇＡＡＧＣＣＡＴＧＴＣＹＧＡＴＡＴＴＧＡＴ

配列番号７８
９３２４＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿３Ｆ
ｔｔａｇｇａｔｃｃＧＣＡＴＡＣＡＧＣＡＴＣＡＧＧＴＧ

配列番号７９
９３２５＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿３Ｒ
ｔａａｃｔｃｇａｇＴＧＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＧＴＧＴＣＴ

配列番号８０
９３２６＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿４Ｆ
ｔｔａｇｇａｔｃｃＧＡＡＴＡＧＡＧＣＧＡＡＲＧＴＴＧＡＧＡＴＡ

配列番号８１
９３２７＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿４Ｒ
ｔａａｃｔｃｇＡＧＴＧＧＴＧＧＧＴＧＡＴＣＴＴＣＴＴＣＴ

配列番号８２
９３２８＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿５Ｆ
ｔｔａｇｇａｔｃＣＡＧＴＣＡＣＡＧＴＧＧＡＧＧＴＡＣＡＧＴＡＣ

配列番号８３
９３２９＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿５Ｒ
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配列番号８４
９３３０＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿６Ｆ
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配列番号８５
９３３１＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿６Ｒ
ｔａａｃｔｃｇａｇＴＣＴＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＴＧＴＧ

配列番号８６
９３３２＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿７Ｆ
ｔｔａｇｇａｔｃｃＡＡＴＧＣＣＣＡＣＴＣＡＡＡＣＡＴＡＧＡ

配列番号８７
９３３３＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿７Ｒ
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配列番号８８
９３３４＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿８Ｆ
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配列番号８９
９３３５＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿８Ｒ
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配列番号９０
９３３６＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿９Ｆ
ｔｔａｇｇａｔｃｃＴＣＴＴＴＴＧＣＡＡＡＣＴＧＣＧＡＴＣ

配列番号９１
９３３７＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿９Ｒ
ｔａａｃｔｃｇａｇＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＡＡＧＧＧＴＡＴ

配列番号９２
９３３８＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿１０Ｆ
ｔｔａｇｇａｔｃｃＧＴＧＴＧＧＡＣＡＴＧＴＡＣＡＴＴＧＡ

配列番号９３
９３３９＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿１０Ｒ
ｔａａｃｔｃｇａｇＣＣＣＡＴＴＧＣＣＡＴＡＡＡＧＴＣ

配列番号９４
９３４０＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿１１Ｆ
ｔｔａｇｇａｔｃｃＴＣＡＴＡＣＴＧＴＧＧＴＣＣＡＴＧＧＡ

配列番号９５
９３４１＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿１１Ｒ
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配列番号９６
９３４２＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿１２Ｆ
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配列番号９７
９３４３＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿１２Ｒ
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配列番号９８
９３４４＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿１３Ｆ
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配列番号９９
９３４５＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿１３Ｒ
ｔａａｃｔｃｇａｇＧＡＡＴＣＴＣＴＣＴＧＴＣＡＴＧＴＧＴＣＣＴ

配列番号１００
９３４６＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿１４Ｆ
ｔｔａｇｇａｔｃｃＴＴＧＡＴＧＧＣＡＣＧＡＣＣＡＡＣ

配列番号１０１
９３４７＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿１４Ｒ
ｔｔａｇｇａｔｃｃＧＴＴＧＴＴＧＡＴＣＴＧＴＧＴＧＡＡＴ

配列番号１０２
９３４８＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿１５Ｆ
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配列番号１０３
９３４９＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿１５Ｒ
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配列番号１０４
９３５０＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿１６Ｆ
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配列番号１０５
９３５１＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿１６Ｒ
ｔｔａｇｇａｔｃｃＴＧＣＴＧＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＡＡ

配列番号１０６
９３５２＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿１７Ｆ
ｔａａｃｔｃｇａＧＣＡＣＣＡＡＣＡＹＧＧＧＴＴＣＴＴ

配列番号１０７
９３５３＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿１７Ｒ
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配列番号１０８
９３５４＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿１８Ｆ
ｔａａｃｔｃｇａｇＣＡＡＴＧＡＴＣＴＴＣＡＴＧＴＴＧＧＧ

配列番号１０９
９３５５＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿１８Ｒ
ｔｔａｇｇａｔｃｃＴＡＴＧＧＧＧＧＡＧＧＡＣＴＧＧＴ

配列番号１１０
９３５６＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿１９Ｆ
ｔａａｃｔｃＧＡＧＣＣＣＡＧＡＡＣＣＴＴＧＧＡＴＣ

配列番号１１１
９３５７＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿１９Ｒ
ｔｔａｇｇａｔｃＣＡＧＡＣＣＣＣＣＡＡＧＡＡＧＧＣ

配列番号１１２
９３５８＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿２０Ｆ
ｔａａｃｔｃｇａｇＣＣＣＣＴＴＴＧＧＴＣＴＴＧＴＣＴ

配列番号１１３
９３５９＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿２０Ｒ
ｔｔａｇｇａｔｃｃＡＧＧＡＡＧＧＡＴＧＴＡＴＧＣＡＧＡＴＧ

配列番号１１４
９３６０＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿２１Ｆ
ｔａａｃｔｃｇａｇＡＣＡＴＴＴＧＣＧＣＡＴＡＴＧＡＴＴＴＴＧ

配列番号１１５
９３６１＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿２１Ｒ
ｔｔａｇｇａｔｃｃＡＧＧＡＡＧＧＡＣＡＣＡＣＡＡＧＡＧＴ

配列番号１１６
９３６２＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿２２Ｆ
ｔａａｃｔｃｇａｇＡＣＡＧＧＣＴＧＣＡＣＡＧＣＴＴＴ

配列番号１１７
９３６３＿Ｚｉｋａ＿ＰＦ＿２２Ｒ
ｔｔａｇｇａｔｃｃＴＣＴＣＴＣＡＴＡＧＧＧＣＡＣＡＧＡＣ
いくつかの実施形態では、ジカウイルスは、配列番号１４〜６９または７２の内のいずれか１つで示されるアミノ酸配列を有する外皮（Ｅ）タンパク質を含むポリタンパク質を有する。いくつかの実施形態では、ポリタンパク質またはＥタンパク質配列は、配列番号２〜６９または７２の内のいずれか１つと、少なくとも、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％または９９．９％同一である。
２つ以上の核酸またはアミノ酸配列における用語の「同一の」またはパーセント「同一性」は、２つ以上の同じ配列または部分配列を意味する。比較ウインドウまたは指定領域にわたり、次の配列比較アルゴリズムの１つを用いて、またはマニュアルアライメントおよび目視検査により測定して、最大対応関係になるように比較および整列されるとき、２つの配列が、指定領域にわたり、または全体配列にわたりアミノ酸残基またはヌクレオチドが同じであることを示す指定されたパーセンテージ（例えば、少なくとも、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性）を有する場合、２つの配列は「実質的に同一」である。場合により、同一性は、少なくとも約５０ヌクレオチド（または１０アミノ酸）の長さ、またはより好ましくは、１００〜５００もしくは１０００またはそれを超えるヌクレオチド（または２０、５０、２００またはそれを超えるアミノ酸）の長さにわたり存在する。いくつかの実施形態では、同一性は、タンパク質、例えば、Ｅタンパク質の長さにわたり存在する。
配列比較のために、通常、１つの配列が基準配列として機能し、それに対し、試験配列が比較される。比較のための配列のアライメントの方法は、当該技術分野において周知である。例えば、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ（１９７０）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２ｃの局地的相同性アルゴリズムによる方法、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アラインメントアルゴリズムによる方法、Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８５：２４４４ （１９８８）の類似法のための検索による方法、これらのアルゴリズム（ｔｈｅ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ中のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）のコンピューター実装による方法、例えば、ＣＬＵＳＴＡＬＷ（Ｌａｒｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，（２００７）、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，２３，２９４７−２９４８）またはＭＡＦＦＴ（Ｋａｔｏｈ ＆ Ｔｏｈ ２００８ Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ ｉｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ９：２８６−２９８）を使った多重配列アラインメント実装による方法、またはマニュアルアライメントおよび目視検査（例えば、Ｂｒｅｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（Ｒｉｎｇｂｏｕ ｅｄ．，２００３）参照）による方法を参照されたい。パーセント配列同一性および配列類似性を決定するために好適する２つのアルゴリズム例は、ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムであり、これらは、それぞれ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２，１９７７およびＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０，１９９０、に記載されている。
実施例
実施例１：ヒトおよび動物のワクチンとしての適用に好適するジカ原薬の製造法
材料および方法：
ジカＶの製造のために、ＪＥＶプロセスプラットフォーム（Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ １９（２００１）４５５７−４５６５；米国特許第６，３０９，６５０Ｂ１号）を基準として用いた。特定のプロセスステップの小さい変更をジカＶの特性に適応させて、純度を改善した。プロセスステップの短い概要を下記に示す（図９ＡおよびＢも参照されたい）。簡単に説明すると、ジカウイルスのための精製プロセスにおける硫酸プロタミン（ＰＳ）の予想外の、新しい精製特性を評価した。図１０に示すように、非感染性ウイルス粒子凝集体、ＨＣＰおよびその他のＬＭＷ不純物は、ＳＥＣ−ＨＰＬＣの凝集体の肩部の除去により示されるようにＰＳ沈殿により除去され、また、ＰＳ処理により感染性ウイルス力価の低下はなかった。ジカ精製プロトコルのさらなる最適化は、下記に提示される。
上流：
・ローラーボトルベースベロ細胞増殖（２５ｘ８５０ｃｍ２ ＣｅｌｌＢｉｎｄ処理）
・５％ＣＯ２、３５℃、ＭＥＭ＋２ｍＭのＬ−グルタミン＋１０％ＦＢＳ
・０．０１のＭＯＩでジカＶリサーチマスターシードバンク（ｒＭＳＢ）を用いて感染
・血清なしでウイルス産生
・５％ＣＯ２、３５℃、ＭＥＭ＋２ｍＭのＬ−グルタミン
・複数回採取（２、３、５および７日目）し、再フィードする
・ハーベストの無菌濾過および２〜８℃で次の処理まで貯蔵
下流：
・ハーベストのプールおよび限外濾過による濃縮（１００ｋＤａ）
・必要に応じて（−８０℃）で貯蔵するために、濃縮ハーベストの安定化（トリス／１０％ショ糖）
・硫酸プロタミン（２ｍｇ／ｍＬ）によるｈｃＤＮＡの除去
・ショ糖勾配精製（最適化３層勾配液）
・ホルムアルデヒド不活化（０．０２％、２２％、１０日間）、メタ重亜硫酸Ｎａによる中和
・ＤＳ抗原標的含量に希釈および水酸化アルミニウムと共に処方（０．５ｍｇ Ａｌ／ｍＬ）
ジカウイルス株Ｈ／ＰＦ／２０１３を最初に仏領ポリネシアの５１才の女性から単離した（受入番号ＫＪ７７６７９１．１、また、本明細書の配列番号１３）。試料を欧州のＶｉｒｕｓ Ａｒｃｈｉｖｅ（ＥＶＡｇ；Ｒｅｆ−ＳＫＵ：００１ｖ−ＥＶＡ１５４５）から入手した。本材料をベースに、細胞基材としてのベロ細胞上でリサーチマスターシードバンク（ｒＭＳＢ）を調製し、ゲノム配列をシーケンシングによりチェックした。ジカウイルス株Ｈ／ＰＦ／２０１３の５’および３’隣接配列におけるゲノム配列は知られていないので、他のジカウイルス株を基準にしたこれらの領域でシーケンシング用のプライマーを設計し、一方、内部プライマーを、発表された配列（配列番号７４〜１１７、表Ａも参照）から設計した。これらのプライマーを使ってｒＭＳＢから得た配列を配列番号７２に示す。ジカウイルス株Ｈ／ＰＦ／２０１３（配列番号１３）の報告された配列と１００％の配列の重なりがある。しかし、我々は、配列番号７２に示す、追加の領域５’（追加の４０ｂｐ）および３’（追加の１６０ｂｐ）の配列決定を行った。好ましい実施形態では、本発明のジカウイルスは、配列番号７２を含む。ゲノムＲＮＡは、配列番号７２による配列より幾分長い（おそらく追加の２００ｂｐ）。さらに、ベロ細胞などの宿主細胞に適応されたジカウイルスは、１つまたは複数の変異を含むことが予測され得る。このような理由によって、本発明のジカウイルスは、配列番号７２の配列を含むか、または好ましくは、配列番号７２で示される配列に対し、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。さらに、ウイルスゲノムは、配列番号７２に対するまたさらなる隣接領域を含む可能性があるため、；一実施形態では、本発明のジカウイルスは、配列番号７２の配列を含み、および場合により、５’および／または３’末端に、少なくとも１０個、少なくとも２０個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、少なくとも５０個、少なくとも６０個、少なくとも７０個、少なくとも８０個、少なくとも９０個、少なくとも１００個、少なくとも１１０個、少なくとも１２０個または少なくとも１３０個のヌクレオチドの延長部をさらに含む。好ましい実施形態では、ジカウイルスは、本発明のジカウイルス株Ｈ／ＰＦ／２０１３の少なくとも全ポリタンパク質用のコード配列、すなわち、配列番号７３のアミノ酸配列または少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％の配列番号７３で示される配列に対する配列同一性を有するポリタンパク質のコード配列を含む。さらに、ジカウイルスは、本発明のジカウイルス株Ｈ／ＰＦ／２０１３の少なくともＥタンパク質の配列番号４７のコード配列を含むか、または少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％の配列番号４７で示される配列に対する配列同一性を有するそのＥタンパク質のコード配列を含む。
ベロ細胞上のウイルス増殖
ベロ細胞を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含むイーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ）中で増殖させた。ローラーボトル培養液のベロ細胞単層を０．０１の細胞当たりプラーク形成単位（ｐｆｕ）の感染多重度（ｍｏｉ）でジカウイルス株Ｈ／ＰＦ／２０１３に感染させた。ウイルス吸着の２時間後、培養液をＰＢＳで３回洗浄し、ＦＢＳ不含ＥＭＥＭを加え、５％ＣＯ２下、＋３５℃でインキュベートした。ウイルス力価が目的の水準に達するまで、感染ベロ細胞培養液をインキュベートした。
培地を２、３、５および７日目に採取し、これらの採取日からプールし、その後、標準的遠心機により遠心分離した。その後、上清を濾過した。ウイルス培養上清をＴＦＦ限外濾過により濃縮して細胞培養培地成分を除去し、バッチ容積を減らした。
採取手順の評価
現在のＪＥＶ採取プロセスは、感染後の３、５、７および９日目に採取するように計画されている。ＪＥＶプロセスを模倣するために、ローラーボトルを、感染培地（２％ＦＢＳ＋２ｍＭのＬ−グルタミンを含むＭＥＭ）中、０．０１のＭＯＩで２時間、ＺＩＫＶバンクＰ４−ＦＢＳに感染させた。接種材料を除去後、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、２００ｍＬの生産培地（ＭＥＭ＋２ｍＭのＬ−グルタミン）を加えた。
２日目に試料を採取後、第１のウイルス採取を感染の３日後に行った。この時点で、２日目にウイルスが除去された細胞に比べて、かなり高いＣＰＥが観察され得た。プラークアッセイ分析は、２日目のウイルス力価は、標準的採取スケジュールの場合と同じ範囲内にあることを示した。しかし、３日目の採取を開始すると、標準的採取スケジュールに比べて、観察された力価はかなり低く、観察されたＣＰＥの増加と相関した。感染後５日目には、もはや生細胞は全く観察できず、実験は、最終５日目の採取で終了した。
Figure 0006949027
この知見が、より良好にＣＰＥを制御し、５日目および７日目の追加の採取を可能とするための、最適化採取スケジュールをもたらした。両方の採取日では、最適化ジカＶプロトコルは、第１の採取の時間が生産収率にとって非常に重要であることを示す改変プロトコルに比べて、かなり高いウイルス力価をもたらした。さらに、３日目の最初の採取は、最大２つの採取点をもたらし、一方、２日目の最初の採取は、４つの採取点を可能とし、さらに収量が増大する。
ジカウイルスのダウンストリーム精製
特に断りのない限り、精製プロセスは室温（１８〜２２℃）で実施した。ウイルス精製を、濾過、混合したハーベストの、１００ｋＤａカットオフ値のＴＦＦ限外濾過モジュールを使って濃縮し、細胞培地成分を除去し、バッチ容積を減らすことから開始した。濃縮後、プールした濾過採取物質を最終濃度の２５ｍＭのトリスｐＨ７．５および１０％ショ糖（ｗ／ｗ）に、両成分のストック溶液を使って調節した（図１１のＰＳ処理の前の異なるハーベストのＳＥＣ−ＨＰＬＣを参照）。これは、必要に応じて、濃縮ハーベストの−６５℃未満での凍結を可能とした。
硫酸プロタミン（２ｍｇ／ｍＬ）を使った沈殿と、それに続く、最終仕上げステップとしてのショ糖密度遠心分離（２〜８℃）により、濃縮物質中の宿主細胞ＤＮＡおよびタンパク質の低減に加えて、非感染性ウイルス凝集体の低減も達成された（図２０のＰＳ処理後の異なるハーベストのＳＥＣ−ＨＰＬＣを参照）。精製プロセスは、ＳＧＣを１日目の終わりに開始して、続いて、分取およびＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を２日目に行う、２作業日以内に完了するように設計された。ジカＶを含む純粋な画分を特定するＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（銀染色）中、ショ糖勾配画分を２〜８℃で貯蔵した（図２１参照）。関連画分をプールした後、プールを希釈し、ホルマリンで不活化した。ショ糖勾配遠心分離の関連画分をプールした後、プールをＰＢＳで１：３に希釈し、ホルマリン（０．０２％（ｖ／ｖ）、２００ｐｐｍ）で不活化した。画分をＳＤＳ−ＰＡＧＥによる分析に供した。
ＰＳ処理のウイルス回収に与える影響
個々に３０ｘに濃縮した２、３、５および７日目採取試料を、ＰＳ処理前（図１１）およびＰＳ処理後（図１２）ＳＥＣ−ＨＰＬＣおよびプラークアッセイで分析した。ＳＥＣ−ＨＰＬＣを使って、ピーク面積として表される相対的合計ジカＶ含量（活性＋不活性）を測定した。一方、相対的ジカＶピーク純度は、合計ウイルスピークに対するウイルスモノマー集団の相対的含量として与えられる。プラークアッセイは、各試料中の合計活性ウイルス粒子含量を示す。実験結果は表４にまとめている。ＳＥＣ−ＨＰＬＣによるウイルスピーク回収は、１２〜３６％に過ぎず、ＰＳ処理後のピーク純度は、９０％を超える範囲であった（ウイルスの凝集は検出されていない）。プラークアッセイによる活性ウイルス粒子の回収は、全て１００％を超え（１３０〜７００％、アッセイの変動範囲内）、ＰＳ処理中に活性ウイルス粒子は失われないことを示す。これらの結果は、ＰＳ処理中、非感染性（未成熟および／または凝集ウイルス）粒子のみが、除去されることを示す。
Figure 0006949027
ショ糖勾配遠心分離
ＰＳ処理ハーベストを２つの部分に分割し、２つの遠心分離ボトルに加えた。ショ糖密度勾配遠心分離（ＳＧＣ）をジカＶ物質の最終濃度および仕上げに使用した。ジカＶ ＰＳ処理濃縮ハーベストを異なる密度を有する３層のショ糖からなる溶液の上に加えた。３つのショ糖層は、線形ショ糖勾配の形成を示し、ＣｈｉｋＶ（図１５Ｄ）で示されるように、ウイルス粒子の残留混入物からの分離を完全に行える予備的調査に基づいて選択した。最適ショ糖溶液量は、実験的に決定した。１００ｍＬボトル規模での遠心分離に対する個別層の体積を、表５に示す。
Figure 0006949027
個別ショ糖層を層別化することによりショ糖勾配ボトルを調製した。プラスチックチューブを蠕動ポンプチューブに取り付けた、プラスチックチューブを、クランプを使って遠心分離ボトル中に配置し、実験スタンドで固定した。プラスチックチューブのノズルをボトルの底に接触させた。蠕動ポンプを使って、ジカＶ物質およびショ糖溶液をシリンダー中に圧送した。メスシリンダーを供給容器として使用した。ジカＶ物質は最小密度の溶液（１０％ショ糖（ｗ／ｗ））であるため、最初に圧送する溶液はジカＶ物質とした。ジカＶ物質の後は、１５％（ｗ／ｗ）溶液Ｊから出発して、次に３５％ショ糖溶液Ｉ、最後に最大密度のショ糖溶液Ｈ（５０％（ｗ／ｗ））の順に昇順で圧送した。記載装置を図１４に示す。全部のショ糖溶液を移した後で、層を掻き乱さないようにプラスチックチューブを注意深く取り出した。
遠心分離の前に、遠心分離機を４℃に予冷した。作製したＳＧボトルを予冷ローター中に注意深く移した。（注意：ショ糖層をかき乱さないように、ローターへの移送時の突然のボトルの移動は避けなければならない）。４℃で約１１，０００ＲＣＦｍａｘで少なくとも２０時間にわたりボトルを遠心分離し、ブレーキ／減速は作動させなかった。異なるローターを用いた別の遠心分離機系の場合は、同等の遠心分離効率を達成するために必要な回転速度と遠心分離時間は、ｋファクターに基づいて計算する必要がある。
ショ糖勾配の採取は蠕動ポンプを使って手動で行った。蠕動ポンプチューブに取り付けたプラスチックチューブを、ショ糖勾配の採取に使用した。勾配液を含むボトルをクランプを使って実験スタンドに傾斜角度（約１２°）で取り付けた。その後、プラスチックチューブをボトルの下端に接触させてボトル中に配置し、クランプを使って適切な位置に固定した。この結果、チューブ入口とボトルの底との間に１〜２ｍｍの空隙が得られた（図１４参照）。
流量３０ｍＬ／分に設定した蠕動ポンプを使って、勾配液を採取し、手動で２ｍＬの画分に分割した。ボトル当たり合計３２個の画分を採取し（約６４ｍＬ）、残りの量を廃棄した。画分をＳＤＳ−ＰＡＧＥ／銀染色により直ちに試験して、十分な高純度を有するウイルス含有画分を特定した。代表的ＳＤＳ−ＰＡＧＥを図１４に示す。画分１０〜１４はプールし、さらなる処理をした。
精製ウイルス溶液を、０．０２％のホルムアルデヒドと共に、温度を２２℃に制御したインキュベーター中で１０日間にわたりインキュベーションすることにより不活化した。１０日目に、ホルムアルデヒドをメタ重亜硫酸ナトリウムの添加により中和した。
ショ糖勾配プール（サンプリング後、約１７ｍＬ）をＰＢＳを用いてさらに３倍に希釈し、ＰＥＴＧ容器中で５１ｍＬの最終体積とした。ホルムアルデヒド添加前のプールの最終体積の１／５０に等価な体積の１％のホルムアルデヒド（１０，０００ｐｐｍ）の溶液をこのプールに加えて、２００ｐｐｍの有効濃度を得た。ホルムアルデヒド処理溶液をマグネチックスターラで１０分間混合した。サンプリング後、ホルムアルデヒド処理ウイルス溶液を２２℃±２℃に冷却したインキュベーター中に置いた。ホルムアルデヒド添加後の５日目に、ホルムアルデヒド処理ウイルス溶液を０．２μｍのフィルターを通して濾過した後、２２℃±２℃のインキュベーター中に再度置いた。１０日目に、１０日間不活化最終試料を取り出し、１％（最終ホルムアルデヒド処理ウイルス溶液の重量の）の量の２００ｍＭのメタ重亜硫酸ナトリウム溶液（２ｍＭの最終濃度）を、ホルムアルデヒド処理ウイルス溶液を含むＰＥＴＧ容器に移した。マグネチックスターラで５分間の混合後、中和不活化ウイルス溶液を室温（２０〜２５℃）で少なくとも３０分間保持する。サンプリング後、中和不活化ウイルス溶液をさらなる処理まで、５℃±３℃で貯蔵する。
ホルムアルデヒドによる不活化
このステップでの重要なパラメーターは、最終ホルマリン濃度、温度、混合および新規容器への移送である。最大ｐｆｕ／ｍＬ（プラークアッセイにより測定される）の予備的合格基準をホルムアルデヒド処理前の希釈プールに対し設定した。
中和不活化ウイルス溶液の品質を、次のパラメーター：１０日目のプラークアッセイ、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ／ウェスタンブロットによりモニターした。
興味深いことに、不活化期間に続く重亜硫酸塩による中和中に採取された試料のＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析は、不活化期間を通して、ほぼ一定のピーク面積を示した。これは、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ ｅｔ ａｌ．Ｖａｃｃｉｎｅ １９（２００１）４５５７−４５６５、により開示のプロセスを用いた、６０％までのウイルス粒子の減少が観察されるＪＥＶと対照をなすものである。規模縮小モデルでは、ウイルス減少は遥かに大きく、これは、より小規模での表面／面積比率および非特異的吸着による大きな損失に起因する。ジカＶ不活化実験とＪＥＶ不活化との間の差異は、次の通りであることが明らかになった：
Ａ）残留ＰＳの観点で、ＪＥＶと比較して、ジカＶ ＳＧＰプールの遥かに高い純度（残留ＰＳ＜２μｇ／ｍＬ）。したがって、３倍希釈ジカＶ不活化試料は、＜＜１μｇ／ｍＬの残留ＰＳであった。市販のＪＥＶ ＳＧＰプールは、平均で約１２０μｇ／ｍＬ（１５２μｇ／ｍＬまであり得る）を含んでいる。不活化溶液への平均希釈の約１４倍により、約１１μｇ／ｍｌまでの残留ＰＳ含量となる。より高い量の残留ＰＳにより、ホルマリンとの架橋／反応に起因して、ウイルス沈殿を生じるということであろう。
Ｂ）ジカＶ不活化試料は、約１０％のショ糖を含む（約３０〜３５％のショ糖含有ＳＧＰプールの３倍希釈）。ショ糖が、ホルマリンによる処理の間、ウイルス性ジカＶ粒子の安定化効果を有する可能性がある。
ＤＳに対する希釈および水酸化アルミニウムを用いた処方（ＤＰ）
マウス効力アッセイで使用するジカＶ原薬の調製のために、Ｉｘｉａｒｏに比べて５倍多い抗原含量（合計ウイルス粒子またはＳＥＣピーク面積で表して）を目標とした。抗原含量の判定基準は、ＳＥＣ−ＨＰＬＣとした。簡単に説明すると、２５℃、１ｍｌ／分のＰＢＳ＋２５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．４で平衡化したＳｕｐｅｒｏｓｅ ６ １０／３００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ ｃｏｌｕｍｎ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使って、採取試料中のダウンストリームプロセス全体にわたるジカＶを、２１４ｎｍの検出波長で検出した。現在のＪＥＶプロセスでは、ＮＩＶ中の抗原含量は、特異的ＥＬＩＳＡにより測定される。ＥＬＩＳＡとＳＥＣ−ＨＰＬＣとにより決定された抗原含量の間で良好な相関が観察された。平均的には、市販のＮＩＶ試料中の抗原含量は、約５．２ｍＡＵのＪＥＶピーク面積に相当する３３ＡＵ／ｍＬの範囲である（図２１参照）。
ジカＶ ＮＩＶ １０日目（ジカピーク ＷａｔｅｒｓＨＰＬＣ／Ｓｕｐｅｒｏｓｅ６ Ｉｎｃｒｅａｓｅ ｃｏｌｕｍｎで分析して約３６ｍＡＵ）をＰＢＳで目標の６．３（約５．７ｘ希釈）に希釈した。水酸化アルミニウムを加えて、０．５ｍｇ／ｍＬのアルミニウムの最終濃度（１／２０（ｖ／ｖ）ミョウバン２％ストック溶液を加えた）にし、ジカＶ製剤（ＤＰ）を調製した。ＤＰを静かに５分間混合した。一定分量のＤＰを取り出し、遠心分離によりミョウバンを沈殿させて、透明な上清をＳＥＣ−ＨＰＬＣにより分析した。上清中にはジカＶピークは検出されず、ウイルス粒子の鉱物アジュバントへの完全な吸着（９５％超と推定）を示す。処方ジカＶ ＤＰを２〜８℃で貯蔵した。
不活化ジカウイルス ＤＳの不純物プロファイルは、低いＰＳ含量を除いて、ＪＥＶ ＤＳと同等である（表６）。
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 ＊Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ ｅｔ ａｌ．Ｖａｃｃｉｎｅ １９（２００１）４５５７−４５６５に開示のプロトコルに従って製造したＪＥＶ試料中の典型的なＰＳ不純物。
ＳＥＣ−ＭＡＬＬＳ 結果
２１４ｎｍ検出波長でのジカＶ ＮＩＶの代表的ＳＥＣ−ＨＰＬＣ溶出プロファイルを図１６に示す。ＢＳＡ（５０μｇ／ｍＬ）を試料に加えて、非特異的表面吸着によるＨＰＬＣガラスバイアル中での損失を最小限にした。ジカＶモノマー含有量を約９８％、多量体含量を約２％と推定した。
試料のＳＥＣ−ＭＡＬＬＳ分析（図１７）により、半径ＲｚのモノマージカＶ集団ピーク１を２１．６ｎｍおよび多量体ピーク２のピークを約４９ｎｍと確認した。累積粒度分布は、全てのウイルス粒子の８９％が１８〜２５ｎｍの半径範囲内にあることを示した（図１８）。結果は、ジカＶ ＮＩＶの純度および均一性を確証している。
プラークアッセイによるウイルス力価
Figure 0006949027
プロセス性能に与えるＰＳおよびベンゾナーゼの比較
濃縮ジカＶハーベストプールのＤＮＡ除去法の直接比較を実施した。１つの一定分量をＰＳで処理し（２ｍｇ／ｍＬ、室温で１５分）、もう一つの一定分量をベンゾナーゼで処理した（５０Ｕ／ｍＬ、２ｍＭのＭｇＣｌ２、室温で４時間、２〜８℃で４８時間）。両試料をこの報告書で記載のようにショ糖勾配によりさらに精製した。興味深いことに、ベンゾナーゼ処理試料は、処理ジカＶハーベストのショ糖勾配遠心分離後、何ら純粋な画分を生成しなかった。特異的ウイルスバンドが検出された画分では、収集画分全体にわたり、多量の宿主細胞タンパク質が検出された。ＰＳ処理物質は、予測通り、純粋なジカＶ含有画分を生じた。この知見は、ＰＳは、沈殿によるＤＮＡ除去に効果的であるのみならず、加えて、ＤＮＡ（断片）とウイルス粒子との相互作用の妨害により勾配液中のウイルス粒子の回収を改善することを示唆し得る。ベンゾナーゼ処理は、ＤＮＡを除去せず、ＤＮＡの断片化を生ずるのみである。残留ＤＮＡ断片は、さらにウイルス粒子および残留ＨＣＰと相互作用し、相互汚染およびショ糖勾配中で同時精製を生じる。また、プールしたＳＧＰ画分をＳＥＣ−ＨＰＬＣにより分析した。大きなピークが検出されたが、ＳＤＳ−ＰＡＧＥは、この試料がＨＣＰで大きく汚染されていることを確証した。大きなピークは、ＵＶ吸光度を変化させるＨＣＰの大きなウイルス粒子の相互作用の可能性があるために、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析後、ＵＶ２１４および２８０ｎｍで検出可能であろう。
ベロ増殖ジカウイルスの免疫原性
マウスのワクチン接種
ワクチン接種の前に、１０匹の６週齢雌ＣＤ１マウス群を顔面静脈経由で採血し、免疫前血清を調製した。１回の２００μＬの腹腔内ワクチン接種を投与した。漸減用量（ＩＸＩＡＲＯ中のタンパク質量と等価の、１２μｇ、３μｇ、１μｇ、０．３３μｇ、０．１１μｇ０．０３７μｇおよび０．０１２μｇ）の不活化ジカウイルスを、０．７％の最終濃度水酸化アルミニウム（Ａｌ（ＯＨ）３）と共に処方した。ワクチン接種の３週後、血液を収集し、免疫血清を調製した。全ての動物実験をオーストリア法（ＢＧＢ１ Ｎｒ．５０１／１９８９）に従って実施し、「Ｍａｇｉｓｔｒａｔｓａｂｔｅｉｌｕｎｇ ５８」により承認された。
プラーク減少中和試験（ＰＲＮＴ）
１２ウエルプレートをＰＲＮＴに使用した。各ウエルに、４ｘ１０５ベロ細胞含有１ｍＬの培地を播種し、５％ＣＯ２下、３５℃で一晩インキュベートした。それぞれの投与群由来の加熱不活化血清のプールを３回繰り返して試験した。標的ウイルス（Ｈ／ＰＦ／２０１３（配列番号１３）またはＭＲ７６６（配列番号１１））を１００ｐｆｕ／１６５μＬに希釈した。等体積の標的ウイルスおよび血清希釈物を、５％ＣＯ２下、３５℃で１時間インキュベートした。細胞培地をベロ細胞から吸引し、３３０μＬの標的ウイルス／血清希釈物の混合物をそれぞれのウエルに加え、プレートを前後に５回震盪した後、５％ＣＯ２下、３５℃で２時間インキュベートした。それぞれのウエルに、１ｍＬのＥＭＥＭおよび栄養素含有２％メチルセルロース溶液を加え、その後、プレートを５％ＣＯ２下、３５℃で５日間インキュベートした後、クリスタルバイオレット／５％ホルムアルデヒドで細胞を１時間染色し、その後、脱イオン水で３回洗浄した。プレートを空気乾燥させて、各ウエル中のプラークの数を手作業でカウントした。
結果
３７ｎｇ（ＩＸＩＡＲＯ（登録商標）中のタンパク質量に等価な投与量）までの不活化ジカウイルスワクチン（Ｈ／ＰＦ／２０１３）で免疫したマウス由来の血清で、アジア系（Ｈ／ＰＦ／２０１３）およびアフリカ系（ＭＲ７６６）の両系統のジカウイルスに対する中和が観察された（それぞれ図１９および図２０）。１１０ｎｇ（ＩＸＩＡＲＯ（登録商標）中のタンパク質の量に等価な投与量）までのワクチン接種投与量を有する１：２０血清希釈で、完全抑制が認められた。アジア系（Ｈ／ＰＦ／２０１３）およびアフリカ系（ＭＲ７６６）の両系統のジカウイルスの中和は、等価であり、これは、不活化ジカウイルスワクチン（Ｈ／ＰＦ／２０１３）の異なるジカウイルス株間で高い交差中和を示す。
Ｌａｒｏｃｃａ，ｅｔ ａｌ．（２０１６，Ｎａｔｕｒｅ ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１８９５２）により記載のように、マイクロ中和試験アッセイを使って、別の中和アッセイを実施した。本発明の不活化ジカウイルスは、１μｇの不活化精製ウイルスで、９０のＭＮ５０（マイクロ中和試験）力価であることが分かった。
さらなる方法：不活化ジカウイルス調製物の免疫原性をジカ感染マウスモデルを使って評価する。成体マウス群を皮下（ｓ．ｃ．）に５００、５０、または５ｎｇの、アジュバント（例えば、ＩＣ３１（登録商標）を含有または非含有の水酸化アルミニウム）を含むまたはアジュバントを含まない不活化ジカウイルスで免疫した。追加の群のマウスに、ネガティブコントロールとしてＰＢＳを投与する。各群は、ｔ＝０で示した接種材料を投与され、いくつかの事例では、３週〜４週後（ｔ＝３／４）にも投与される。最後のワクチン接種の投与の約３週後から開始して、規則的な間隔でそれぞれのマウスから血清試料を取得する。ＰＲＮＴを使って、血清試料の中和抗体の存在を試験する。
不活化ジカウイルス調製物のインビボ保護効力も、ジカ感染マウスモデル、すなわち、ＩＦＮ−α／β受容体ノックアウトマウス（Ａ１２９）（例えば、Ｄｏｗａｌｌ ｅｔ ａｌ．，４．Ｍａｒｃｈ ２０１６，ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１０１／０４２３５８を参照）またはＣ５７ＢＬ／６またはＢＡＬＢ／ｃマウスに対する抗ＩＦＮ−α／β受容体モノクローナル抗体の投与による、ＩＦＮ−α／β受容体のブロッキング（例えば、Ｐｉｎｔｏ ｅｔ ａｌ．，７．Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２０１１，ＤＯＩ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｐａｔ．１００２４０７を参照）を使って評価する。プロテクションアッセイのために、１０匹の３〜８週齢Ａ１２９、Ｃ５７ＢＬ／６またはＢＡＬＢ／ｃマウスの後躯皮下にｔ＝０でアジュバント（水酸化アルミニウム）を含むまたは含まない不活化ジカウイルスを接種した。年齢マッチングコントロールにＰＢＳまたはミョウバン中の非特異的抗原を接種した。マウスは必要に応じ、示した植菌の第２の投与で３〜４週後に追加免疫された。その後、マウスはワクチン接種の３〜８週後に、致死量の生ジカウイルスの皮下接種により攻撃される。Ｃ５７ＢＬ／６およびＢＡＬＢ／ｃマウスの攻撃の１日前に、それらは、抗ＩＦＮ−α／β受容体モノクローナル抗体を受動的に（腹腔内）投与される。攻撃を受けたマウスは、罹患率および死亡率を２１日目まで毎日モニターされる。もう一つの代替方法は、頭蓋内にワクチン接種した／ワクチン接種していない成体マウスに攻撃し、保護を観察することである。
本発明のプロセスにより産生されたジカウイルスは、インビトロ、インビボおよび最終的ヒト試験において、欧州連合および米国その他で現在認可されているＪＥＶワクチンＩＸＩＡＲＯ（登録商標）と極めて類似した機能的結果をもたらすであろう。投与量は、変わってもよいが、非常に似た不純物プロファイルおよびほぼ同じ製造物であることに起因して、現在認可されているＪＥＶワクチン（欧州連合および米国その他で認可されている）に対して測定されたものと、極めて類似の効力および安全性結果が予測されるであろう。
考察および結論
不活化ＪＥＶワクチンＩＸＩＡＲＯ（登録商標）の製造のための既存の製造プラットフォームを、不活化ジカＶワクチン候補（アジア系株Ｈ／ＰＦ／２０１３）の製造の実現性調査のためのベースとして用いた。ローラーボトル中で培養したベロ細胞上でウイルスを産生した。ウイルスをＰＳ処理とそれに続く最適化ショ糖勾配により精製した。不活化をホルマリン処理（０．０２％、２２℃で１０日間）により実施した。マウスでの予備的なワクチン接種調査のために、市販のＪＥＶワクチンであるＩＸＩＡＲＯ（登録商標）に比べて、推定５倍大きいウイルス粒子含量を有するミョウバン配合ＤＰを調製した。ＤＳの不純物プロファイルは、市販ＪＥＶワクチンのＩＸＩＡＲＯ（登録商標）の規格値として定義の全ての基準に適合した。アジア系（Ｈ／ＰＦ／２０１３）およびアフリカ系（ＭＲ７６６）の両系統のジカウイルスの中和は、等価であり、これは、不活化ジカウイルスワクチン（Ｈ／ＰＦ／２０１３）の異なるジカウイルス株間で高い交差中和を示す。
本発明の不活化ジカウイルスワクチンの免疫原性に関するインビボデータは、意外にも、強力な免疫原性があり、また、高い交差防御性を有する（アフリカ系およびアジア系株で非常に類似の免疫原性である）ことを示す。データは、免疫原性は最近報告された不活化ジカウイルスワクチン候補（Ｌａｒｏｃｃａ，ｅｔ．ａｌ，２０１６、既出）よりも高かったことを示す。不活化ウイルスは、最も安全な部類のワクチンで、安全性が特に重要な、妊婦、子供および免疫無防備状態の個体などの集団への送達に特に好ましく、このことが、本明細書で開示の不活化ジカウイルスを特に好適なものにしている。高い力価の不活化ウイルスを得ることは、この分野では難題である。本明細書で開示の不活化ジカウイルスを精製するプロセスは、高収率だけでなく、極めて純粋な原薬をもたらす。
より詳細な本発明の態様を以降に示す。
Ａ１．不活化ジカウイルス粒子を含むジカウイルスワクチンであって、ジカウイルス粒子がジカウイルスワクチンを投与された対象を、少なくとも７０％の確率で抗体陽転させることができるワクチン。
Ａ２．Ａ１に記載のジカウイルスワクチンであって、ジカウイルス粒子がジカウイルスワクチンを投与された対象を、少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％の確率で抗体陽転させることができるワクチン。
Ａ３．Ａ１またはＡ２のワクチンであって、ジカウイルス粒子が、配列番号２〜１３または７２の内のいずれか１つの核酸配列で示されるＤＮＡ配列に対応するＲＮＡゲノムを有するか、または配列番号２〜１３または７２の内のいずれか１つに少なくとも８８％同一であり、毒性ジカウイルスをパックできるバリアント核酸配列を有するワクチン。
Ａ４．Ａ１〜Ａ３のいずれか１項に記載のワクチンであって、ジカウイルス粒子が、配列番号１４〜６９の内のいずれか１つで示されるアミノ酸配列または配列番号１４〜６９の内のいずれか１つに少なくとも９５％同一であり、毒性ジカウイルスをパックできるバリアントアミノ酸配列から選択されるＥタンパク質を有するワクチン。
Ａ５．Ａ１〜Ａ４のいずれか１項に記載のワクチンであって、ジカウイルスが、化学的不活化、熱失活、ｐＨ不活化、またはＵＶ不活化により不活化されるワクチン。
Ａ６．Ａ５に記載のワクチンであって、化学的不活化が、ジカウイルスを化学的不活化剤と接触させて、プラークアッセイによる測定で、ジカウイルスを完全に不活化することを含むワクチン。
Ａ７．Ａ６に記載のワクチンであって、化学的不活化が、ジカウイルスをホルムアルデヒドと接触させることを含むワクチン。
Ａ８．Ａ７に記載のワクチンであって、ホルムアルデヒド不活化が、ジカウイルスとホルムアルデヒドとを、２〜１０日間接触させることを含むワクチン。
Ａ９．Ａ５〜Ａ８のいずれか１項に記載のワクチンであって、化学的活性化が、約＋４℃または約＋２２℃で実施されるワクチン。
Ａ１０．Ａ１〜Ａ９のいずれか１項に記載のワクチンであって、さらにアジュバントを含むワクチン。
Ａ１１．Ａ１０に記載のワクチンであって、アジュバントがアルミニウム塩のアジュバントであるワクチン。
Ａ１２．Ａ１１に記載のワクチンであって、アルミニウム塩のアジュバントが水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウム塩であるワクチン。
Ａ１３．Ａ１０〜Ａ１２のいずれか１項に記載のワクチンであって、ペプチドおよびデオキシイノシン含有免疫賦活性オリゴデオキシ核酸分子（Ｉ−ＯＤＮ）を含むアジュバントを含むまたはさらに含むワクチン。
Ａ１４．Ａ１３に記載のワクチンであって、ペプチドが配列ＫＬＫＬ５ＫＬＫ（配列番号７１）を含み、Ｉ−ＯＤＮがオリゴ−ｄ（ＩＣ）１３（配列番号７０）を含むワクチン。
Ａ１５．Ａ１〜Ａ１４のいずれか１項に記載のワクチンであって、１種または複数種の薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含むワクチン。
Ａ１６．Ａ１〜Ａ１５のいずれか１項に記載のワクチンであって、ＨＰＬＣにより検出するには少なすぎる量、すなわち、１μｇ／ｍｌ未満、特に１００ｎｇ／ｍｌ未満の量の、硫酸プロタミンまたはＰＳの断片または分解生成物を含むワクチン。
Ａ１７．Ａ１６に記載のワクチンであって、前記硫酸プロタミンまたはＰＳの断片または分解生成物が、質量分析または別の高感度法により検出できるワクチン。
Ｂ１．Ａ１〜Ａ１５のいずれか１項に記載のジカウイルスワクチンを含むキット。
Ｂ２．Ｂ１に記載のキットであって、第２のワクチンをさらに含むキット。
Ｂ３．Ｂ２に記載のキットであって、第２のワクチンが、ウエストナイルウイルスワクチン、日本脳炎ウイルスワクチン、黄熱病ウイルスワクチン、デング熱ウイルスワクチンまたはチクングニアウイルスワクチンであるキット。
Ｃ１．第１の投与量の治療有効量のＡ１〜Ａ１５に記載のいずれか１項に記載のジカウイルスワクチンをそれを必要としている対象に投与することを含む方法。
Ｃ２．Ｃ１に記載の方法であって、第２の投与量の治療有効量のジカウイルスワクチンを投与することをさらに含む方法。
Ｃ３．Ｃ１またはＣ２に記載の方法であって、第２の投与量のジカウイルスワクチンが第１の投与量のジカウイルスワクチンの約７日後に投与される方法。
Ｃ４．Ｃ１またはＣ２に記載の方法であって、第２の投与量のジカウイルスワクチンが第１の投与量のジカウイルスワクチンの約１４日後に投与される方法。
Ｃ５．Ｃ１またはＣ２に記載の方法であって、第２の投与量のジカウイルスワクチンが第１の投与量のジカウイルスワクチンの約２８日後に投与される方法。
Ｃ６．Ｃ１〜Ｃ５のいずれか１項に記載の方法であって、投与が、ジカウイルス中和抗体の産生をもたらす方法。
Ｄ１．ジカウイルスワクチンの生成方法であって、
（ｉ）ベロ細胞上のジカウイルスを継代培養し、それにより、ジカウイルスを含む培養上清を生成すること；
（ｉｉ）（ｉ）の培地を採取すること；
（ｉｉｉ）（ｉｉ）の採取培地を沈殿させて、それにより、ジカウイルス上清を生成すること；および
（ｉｖ）（ｉｉｉ）のジカウイルス上清中のジカウイルスを至適に不活化して、それにより、不活化ジカウイルスを生成すること、を含む方法。
Ｄ２．Ｄ１に記載の方法であって、ステップ（ｉｉｉ）の前に、（ｉｉ）の培地を濃縮することをさらに含む方法。
Ｄ３．Ｄ１またはＤ２に記載の方法であって、（ｉｉｉ）の沈殿生成が、（ｉｉ）の培地を硫酸プロタミンまたは安息香酸プロタミンと接触させることを含む方法。
Ｄ４．Ｄ１〜Ｄ３のいずれか１項に記載の方法であって、（ｖ）（ｉｖ）の不活化ジカウイルスを透析し、それにより、透析ジカウイルスを生成することをさらに含む方法。
Ｄ５．Ｄ４の方法であって、（ｖｉ）（ｖ）の透析ジカウイルスを濾過することをさらに含む方法。
Ｄ６．Ｄ１〜Ｄ５のいずれか１項に記載の方法であって、不活化が、化学的不活化、熱失活、ｐＨ不活化、またはＵＶ不活化による方法。
Ｄ７．Ｄ６に記載の方法であって、化学的不活化が、ジカウイルスを化学的不活化剤と少なくとも４日間接触させることを含む方法。
Ｄ８．Ｄ６またはＤ７に記載の方法であって、化学的不活化剤が、ホルムアルデヒドを含む方法。
Ｄ９．Ｄ６〜Ｄ８のいずれか１項に記載の方法であって、化学活性化が、約＋４℃または約＋２２℃で実施される方法。
Ｄ１０．Ｄ８またはＤ９に記載の方法であって、ホルムアルデヒドを中和することをさらに含む方法。
Ｄ１１．Ｄ１０に記載の方法であって、中和がメタ重亜硫酸ナトリウムで実施される方法。
Ｅ１．Ａ１〜Ａ１５のいずれか１項に記載の最適に不活化されたジカウイルスワクチンのジカウイルス感染の処置および／または予防のための使用。
Ｅ２．Ｅ１に記載の使用であって、不活化ジカウイルスワクチンが第１の投与量の治療有効量でそれを必要としている対象に投与される使用。
Ｅ３．Ｅ２に記載の使用であって、不活化ジカウイルスワクチンが第２の投与量の治療有効量で対象に投与される使用。
Ｅ４．Ｅ３に記載の使用であって、第２の投与量の不活化ジカウイルスワクチンが第１の投与量のジカウイルスワクチンの約７日後に投与される使用。
Ｅ５．Ｅ３に記載の使用であって、第２の投与量のジカウイルスワクチンが第１の投与量のジカウイルスワクチンの約１４日後に投与される使用。
Ｅ６．Ｅ３に記載の使用であって、第２の投与量のジカウイルスワクチンが第１の投与量のジカウイルスワクチンの約２８日後に投与される使用。
Ｅ７．Ｅ１〜Ｅ６のいずれか１項に記載の使用であって、ワクチン投与が、ジカウイルス中和抗体の産生をもたらす使用。
Ｆ１．前記医薬組成物が、Ａ１〜Ａ１５のいずれか１項に記載の最適に不活化されたジカウイルスワクチンを含む、ジカウイルス感染の処置または予防での使用のための医薬組成物。
Ｆ２．Ｆ１に記載の医薬組成物であって、不活化ジカウイルスワクチンが第１の投与量の治療有効量でそれを必要としている対象に投与される医薬組成物。
Ｆ３．Ｆ２に記載の使用であって、不活化ジカウイルスワクチンが第２の投与量の治療有効量で対象に投与される使用。
Ｆ４．Ｆ３に記載の使用であって、第２の投与量の不活化ジカウイルスワクチンが第１の投与量のジカウイルスワクチンの約７日後に投与される使用。
Ｆ５．Ｆ３に記載の使用であって、第２の投与量のジカウイルスワクチンが第１の投与量のジカウイルスワクチンの約１４日後に投与される使用。
Ｆ６．Ｆ３に記載の使用であって、第２の投与量のジカウイルスワクチンが第１の投与量のジカウイルスワクチンの約２８日後に投与される使用。
Ｆ７．Ｆ１〜Ｆ６のいずれか１項に記載の使用であって、ワクチン投与が、ジカウイルス中和抗体の産生をもたらす使用。
Ｇ１．精製された感染性ジカウイルス粒子から硫酸プロタミンの除去のための最適化ショ糖勾配遠心分離の使用。
Ｇ２．Ｇ１に記載の使用であって、前記最適化ショ糖勾配遠心分離が、１０％±１％（ｗ／ｗ）ショ糖溶液中のウイルス含有画分、および３つのさらなる層の異なる密度を有するショ糖溶液、すなわち、１５％±１％（ｗ／ｗ）ショ糖を含む第１のショ糖溶液、３５％±１％（ｗ／ｗ）ショ糖を含む第２のショ糖溶液、および５０％±１％（ｗ／ｗ）ショ糖を含む第３のショ糖溶液を含む使用。
Ｇ３．感染性ジカウイルス粒子の精製プロセスであって、
ａ）ウイルス粒子および不純物を含む粗ハーベスト（ａ）を用意するステップであって、不純物が細胞基材上の前記ウイルス粒子の増殖から生成するステップ；
ｂ）プロタミン、好ましくはプロタミン塩、より好ましくは硫酸プロタミン、さらにより好ましくは組換え硫酸プロタミンを含む試薬を用いて沈殿させることにより、粗ハーベスト（ａ）から不純物を低減させて、ウイルス調製物（ｂ）を得るステップ；
ｃ）最適化されるショ糖密度勾配遠心分離によりウイルス調製物（ｂ）をさらに精製するステップであって、最適化ショ糖勾配が、プロタミンがウイルス画分から完全にまたはほぼ完全に分離されるように用意され、プロタミン濃度が、このステップによって、最終原薬中のプロタミン濃度が１μｇ／ｍＬ未満、好ましくは０．５μｇ／ｍＬ未満、より好ましくは０．１μｇ／ｍＬ未満、最も好ましくは０．０５μｇ／ｍＬ未満となる程度まで低減されるステップ、を含むプロセス。
Ｇ４．Ｇ３に記載のプロセスであって、前記最適化ショ糖密度勾配遠心分離が、１０％±１％（ｗ／ｗ）ショ糖溶液中のウイルス含有画分、および３つの層の異なる密度を有するショ糖、すなわち、１５％±１％（ｗ／ｗ）ショ糖を含む第１のショ糖溶液、３５％±１％（ｗ／ｗ）ショ糖を含む第２のショ糖溶液、および５０％±１％（ｗ／ｗ）ショ糖を含む第３のショ糖溶液を含むプロセス。
Ｇ５．Ｇ３〜Ｇ４のいずれか１項に記載のプロセスであって、
（ｄ）リガンド活性化コアおよび細孔を含む不活性シェルを含む固相マトリックスをカラム中に充填し、細孔の分画分子量によりウイルス粒子がリガンド活性化コア中に入るのが排除され、細孔の分画分子量より小さい分子がリガンド活性化コア中に入ることができ、その結果、ウイルス粒子が収集される精製ステップを追加して含むプロセス。
Ｇ６．Ｇ３〜Ｇ５のいずれか１項に記載のプロセスであって、ジカウイルス調製物（ｃ）の残留宿主細胞ＤＮＡ含量が、１０ｎｇ／ｍＬ未満であり、最終ウイルス調製物（ｃ）の残留宿主細胞タンパク質含量が１００ｎｇ／ｍＬ未満であるプロセス。
Ｇ７．Ｇ３〜Ｇ６のいずれか１項に記載のステップであって、ジカウイルス粒子および不純物を含む前記粗ハーベスト（ａ）が、ステップ（ｂ）の前に、１つまたは複数の予備精製ステップに供されるプロセス。
Ｇ８．Ｇ７に記載のプロセスであって、１つまたは複数の予備精製ステップが、
ａ）細孔径が０．２μｍ以下のフィルターを使った濾過；および／または
ｂ）酵素処理による宿主細胞ゲノムＤＮＡの消化；および／または
ｃ）細孔径が３００ｋＤａ以上、好ましくは１００ｋＤａ以上の細孔径を有する中空繊維膜を用いた限外濾過／透析濾過、を含むプロセス。
Ｇ９．Ｇ３〜Ｇ８のいずれか１項に記載のプロセスであって、硫酸プロタミンの濃度が、０．５〜３ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは１〜２ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは１．２〜１．８ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは１．４〜１．６ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは１．６ｍｇ／ｍｌまたは２ｍｇ／ｍｌであるプロセス。
Ｇ１０．Ｇ３〜Ｇ９のいずれか１項に記載のプロセスであって、ウイルス調製物（ｃ）中の、またはいずれかの最終ウイルス調製物中の感染性ジカウイルス粒子の濃縮が、粗ハーベスト（ａ）中の合計ウイルス生成物に対して、少なくとも５０％〜９５％の範囲、好ましくは少なくとも８０％であるプロセス。
Ｇ１１．Ｇ７〜Ｇ１０のいずれか１項に記載のプロセスであって、Ｇ８〜Ｇ１１のいずれか１項のステップ（ｂ）の前の１つまたは複数の予備精製ステップが、１μｍ以下、好ましくは０．２μｍの細孔径を有するフィルターを使って実施されるプロセス。
Ｇ１２．Ｇ３〜Ｇ１１のいずれか１項に記載のプロセスであって、ジカウイルス調製物（ｃ）の残留不純物が、１０％未満であるプロセス。
Ｇ１３．Ｇ３〜Ｇ１２のいずれか１項に記載のプロセスであって、ジカウイルスが、ＥＢ６６細胞株、ベロ細胞株、ベロ−αＨｉｓ細胞株、ヒーラ細胞株、ヒーラ−Ｓ３細胞株、２９３細胞株、ＰＣ１２細胞株、ＣＨＯ細胞株、３Ｔ３細胞株、ＰｅｒＣ６細胞株、ＭＤＳＫ細胞株、ニワトリ胎仔線維芽細胞株、アヒル細胞株、および二倍体鳥類細胞株、からなる群より選択される細胞株中で増殖するプロセス。
Ｇ１４．Ｇ１３に記載のプロセスであって、前記細胞株が、ベロ細胞株であるプロセス。
Ｇ１５．Ｇ３〜Ｇ１４のいずれか１項に記載のプロセスであって、前記感染性ジカウイルス粒子が、生ウイルス、生減弱ウイルス、キメラウイルス、改変生ウイルスまたは組換え生ウイルスである感染性ウイルス粒子であるプロセス。
Ｇ１６．Ｇ３〜Ｇ１５のいずれか１項に記載のプロセスであって、前記ジカウイルスが、好ましくはアジア系統の株であるプロセス。
Ｇ１７．Ｇ３〜Ｇ１６のいずれか１項に記載のプロセスであって、最終ウイルス調製物（ｃ）または（ｄ）を生じる前記プロセスが、不活化ステップの前に行われ、ウイルスが好ましくはホルムアルデヒドにより不活化されるプロセス。
Ｇ１８．ウイルス感染に対する免疫化のための組成物の製造のためのＧ３〜Ｇ１７のいずれか１項に記載のプロセスの使用。
Ｇ１９．Ｇ１８に記載の使用であって、前記ウイルス感染がジカウイルスに起因する感染である使用。
Ｑ１．感染性ジカウイルス粒子の精製プロセスであって、
（ａ）ジカウイルス粒子および不純物を含む粗ハーベスト（ａ）を用意するステップであって、不純物が細胞基材上の前記ウイルス粒子の増殖から生成するステップ；
（ｂ）プロタミン、好ましくはプロタミン塩、より好ましくは硫酸プロタミン、さらにより好ましくは組換え硫酸プロタミンを含む試薬を用いて沈殿させることにより、粗ハーベスト（ａ）から不純物を低減させて、ウイルス調製物（ｂ）を得るステップ；
（ｃ）最適化されるショ糖密度勾配遠心分離によりウイルス調製物（ｂ）をさらに精製するステップであって、最適化ショ糖勾配が、プロタミンがウイルス画分から完全にまたはほぼ完全に分離されるように用意され、プロタミン濃度が、このステップによって、最終原薬中のプロタミン濃度が１μｇ／ｍＬ未満、好ましくは０．５μｇ／ｍＬ未満、より好ましくは０．１μｇ／ｍＬ未満、最も好ましくは０．０５μｇ／ｍＬ未満となる程度まで低減されるステップ、を含むプロセス。
Ｑ２．Ｑ２に記載のプロセスであって、ウイルス粒子がジカウイルス由来であるプロセス。
Ｑ３．Ｑ１またはＱ２に記載のプロセスであって、
（ｄ）リガンド活性化コアおよび細孔を含む不活性シェルを含む固相マトリックスをカラム中に充填し、細孔の分画分子量によりウイルス粒子がリガンド活性化コア中に入るのが排除され、細孔の分画分子量より小さい分子がリガンド活性化コア中に入ることができ、その結果、ウイルス粒子が収集されるステップをさらに含むプロセス。
Ｑ４．Ｑ１〜Ｑ３のいずれか１項に記載のプロセスであって、ウイルス調製物（ｃ）の残留宿主細胞ＤＮＡが、１０ｎｇ／ｍＬ未満であり、最終ウイルス調製物（ｃ）の残留宿主細胞タンパク質が１００ｎｇ／ｍＬ未満であるプロセス。
Ｑ５．Ｑ１〜Ｑ４のいずれか１項に記載のプロセスであって、ウイルス粒子および不純物を含む粗ハーベスト（ａ）が、ステップ（ｂ）の前に、１つまたは複数の予備精製ステップに供されるプロセス。
Ｑ６．Ｑ５に記載のプロセスであって、１つまたは複数の予備精製ステップが、
（ａ）細孔径が０．２μｍ以下のフィルターを使った濾過；および／または
（ｂ）酵素処理による宿主細胞ゲノムＤＮＡの消化；および／または
（ｃ）細孔径が３００ｋＤａ以上、好ましくは１００ｋＤａ以上の細孔径を有する中空繊維膜を用いた限外濾過／透析濾過、を含むプロセス。
Ｑ７．Ｑ１〜Ｑ６のいずれか１項に記載のプロセスであって、硫酸プロタミンの濃度が、０．５〜３ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは１〜２ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは１．２〜１．８ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは１．４〜１．６ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは１．６ｍｇ／ｍｌまたは２ｍｇ／ｍｌであるプロセス。
Ｑ８．Ｑ１〜Ｑ７のいずれか１項に記載のプロセスであって、ウイルス調製物（ｃ）中の、またはいずれかの最終ウイルス調製物中の感染性ウイルス粒子の濃縮が、粗ハーベスト（ａ）中の合計ウイルス生成物に対して、少なくとも５０％〜９５％の範囲、好ましくは少なくとも８０％であるプロセス。
Ｑ９．Ｑ５〜Ｑ８のいずれか１項に記載のプロセスであって、Ｑ５〜Ｑ８のいずれか１項のステップ（ｂ）の前の１つまたは複数の予備精製ステップが、１μｍ以下、好ましくは０．２μｍの細孔径を有するフィルターを使って実施されるプロセス。
Ｑ１０．Ｑ１〜Ｑ９のいずれか１項に記載のプロセスであって、ウイルス調製物（ｃ）の残留不純物が、１０％未満であるプロセス。
Ｑ１１．Ｑ１〜Ｑ１０のいずれか１項に記載のプロセスであって、ウイルスが、ＥＢ６６細胞株、ベロ細胞株、ベロ−αＨｉｓ細胞株、ヒーラ細胞株、ヒーラ−Ｓ３細胞株、２９３細胞株、ＰＣ１２細胞株、ＣＨＯ細胞株、３Ｔ３細胞株、ＰｅｒＣ６細胞株、ＭＤＳＫ細胞株、ニワトリ胎仔線維芽細胞株、アヒル細胞株、および二倍体鳥類細胞株、からなる群より選択される細胞株中で増殖するプロセス。
Ｑ１２．Ｑ１１に記載のプロセスであって、前記細胞株が、ベロ細胞株であるプロセス。
Ｑ１３．Ｑ１〜Ｑ１２のいずれか１項に記載のプロセスであって、感染性ウイルス粒子が、生ウイルス、減弱生ウイルス、キメラウイルス、改変生ウイルスまたは組換え生ウイルスである感染性ジカウイルス粒子であるプロセス。
Ｑ１４．Ｑ１〜Ｑ１３のいずれか１項に記載のプロセスであって、ジカウイルスが、アジア系統の株またはその免疫原性バリアントであるプロセス。
Ｑ１５．Ｑ１〜Ｑ１４のいずれか１項に記載のプロセスであって、最終ウイルス調製物（ｃ）または（ｄ）を生じる前記プロセスが、不活化ステップの前に行われ、ウイルスが好ましくはホルムアルデヒドにより不活化されるプロセス。
Ｑ１６．ウイルス感染に対する免疫化のための組成物の製造のためのＱ１〜Ｑ１５のいずれか１項に記載のプロセスの使用。
Ｑ１７．Ｑ１６に記載の使用であって、ウイルス感染に対する免疫化のための組成物が、ジカウイルスに起因する感染である使用。
Ｑ１８．Ｑ１〜Ｑ１７のいずれか１項に記載のプロセスにより得ることができるまたは得られたウイルス粒子を含む、例えば、ジカウイルス感染などの感染を処置および／または予防するための組成物。
Ｑ１９．ベロ細胞上で増殖した不活化ジカウイルス粒子を含むウイルスワクチンであって、ジカウイルス粒子がジカウイルスワクチンを投与された対象を、少なくとも７０％の確率で抗体陽転させることができ、少量の、好ましくは検出限界以下の硫酸プロタミンを含むワクチン。
Ｑ２０．Ｑ１９に記載のジカウイルスワクチンであって、ジカウイルス粒子がジカウイルスワクチンを投与された対象を、少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％の確率、好ましくは８０％の確率で抗体陽転させることができるワクチン。
Ｑ２１．Ｑ１９またはＱ２０のワクチンであって、ジカウイルス粒子が、配列番号２〜１３の内のいずれか１つの核酸配列で示されるＤＮＡ配列に対応するＲＮＡゲノムを有するか、または配列番号２〜１３の内のいずれか１つに少なくとも８８％同一であり、毒性ジカウイルスをパックできるバリアント核酸配列を有するワクチン。
Ｑ２２．Ｑ１９、Ｑ２０およびＱ２１のいずれか１項に記載のワクチンであって、ジカウイルスが、配列番号１４〜６９または７２の内のいずれか１つで示されるアミノ酸配列または配列番号１４〜６９または７２の内のいずれか１つに少なくとも９５％同一であり、毒性ジカウイルスをパックできるバリアントアミノ酸配列から選択されるＥタンパク質を有するワクチン。
Ｑ２３．Ｑ１９、Ｑ２０〜Ｑ２２のいずれか１項に記載のワクチンであって、ベロ細胞上で培養することにより得られたジカウイルスが、硫酸プロタミン沈殿およびショ糖勾配遠心分離により精製されるワクチン。
Ｑ２４．Ｑ２３に記載のワクチンであって、ショ糖勾配遠心分離が最適化ショ糖勾配遠心分離であるワクチン。
Ｑ２５．Ｑ２４に記載のワクチンであって、前記最適化ショ糖勾配遠心分離が、１０％（ｗ／ｗ）ショ糖溶液中のウイルス含有画分、および３つの層の異なる密度を有するショ糖、すなわち、１５％（ｗ／ｗ）ショ糖溶液を含む第１のショ糖溶液、３５％±１％（ｗ／ｗ）ショ糖溶液を含む第２のショ糖溶液、および５０％（ｗ／ｗ）ショ糖溶液を含む第３のショ糖溶液を含むワクチン。
Ｑ２６．Ｑ１９、Ｑ２０〜Ｑ２５のいずれか１項に記載のワクチンであって、ジカウイルスが、化学的不活化、熱失活、ｐＨ不活化、またはＵＶ不活化により不活化されるワクチン。
Ｑ２７．Ｑ２６に記載のワクチンであって、化学的不活化が、プラークアッセイにより測定して、ジカウイルスを完全に不活化するのに必要であるよりも長い時間、ジカウイルスを化学的不活化剤と接触させることを含むワクチン。
Ｑ２８．Ｑ２７に記載のワクチンであって、化学的不活化が、ジカウイルスをホルムアルデヒドと接触させることを含むワクチン。
Ｑ２９．Ｑ２８に記載のワクチンであって、ホルムアルデヒド不活化が、ジカウイルスとホルムアルデヒドとを、２〜１０日間接触させることを含むワクチン。
Ｑ３０．Ｑ２７〜Ｑ２９のいずれか１項に記載のワクチンであって、化学的活性化が、約＋４℃または約＋２２℃で実施されるワクチン。
Ｑ３１．Ｑ１９〜Ｑ３０のいずれか１項に記載のワクチンであって、さらにアジュバントを含むワクチン。
Ｑ３２．Ｑ３１に記載のワクチンであって、アジュバントがアルミニウム塩のアジュバントであるワクチン。
Ｑ３３．Ｑ３２に記載のワクチンであって、アルミニウム塩のアジュバントが水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウム塩であるワクチン。
Ｑ３４．Ｑ３２に記載のワクチンであって、アルミニウム塩のアジュバントが、ジカウイルス、好ましくは不活化ジカウイルスを含む最終医薬組成物を基準にして、１．２５ｐｐｂ未満のＣｕを含む水酸化アルミニウムであるワクチン。
Ｑ３５．Ｑ１９〜Ｑ３４のいずれか１項に記載のワクチンであって、１種または複数種の薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含むワクチン。
Ｒ１．感染性および非感染性ジカウイルス粒子、宿主細胞タンパク質および／または不確定の低分子量物質を分離するための、プロタミン、好ましくはプロタミン塩の使用。
Ｒ２．感染性ジカウイルス粒子の精製プロセスであって、
（ａ）ジカウイルス粒子および不純物を含む粗ハーベスト（ａ）を用意するステップであって、不純物が細胞基材上の前記ウイルス粒子の増殖から生成するステップ；
（ｂ）プロタミン、好ましくはプロタミン塩、より好ましくは硫酸プロタミン、さらにより好ましくは組換え硫酸プロタミンを含む試薬を用いて沈殿させることにより、粗ハーベスト（ａ）から不純物を低減させて、ウイルス調製物（ｂ）を得るステップであって、ウイルス調製物（ｂ）中の感染性ウイルス粒子の濃縮が、粗ハーベスト（ａ）中の合計ウイルス生成物を基準にして、少なくとも５０％〜９５％の範囲、好ましくは少なくとも８０％であるステップを含むプロセス。
Ｒ３．Ｒ１に記載の使用またはＲ２に記載のプロセスであって、ウイルス粒子がジカウイルス由来である使用またはプロセス。
Ｒ４．感染性ジカウイルス粒子の精製プロセスであって、
（ａ）ジカウイルス粒子および不純物を含む粗ハーベスト（ａ）を用意するステップであって、不純物が細胞基材上の前記ウイルス粒子の増殖から生成するステップ；
（ｂ）プロタミン、好ましくはプロタミン塩、より好ましくは硫酸プロタミン、さらにより好ましくは組換え硫酸プロタミンを含む試薬を用いて沈殿させることにより、粗ハーベスト（ａ）から不純物を低減させて、ウイルス調製物（ｂ）を得るステップ；
（ｃ）（ｉ）ショ糖密度勾配遠心分離、（ｉｉ）カラム中に充填されたリガンド活性化コアおよび細孔を含む不活性シェルを含む固相マトリックスであって、細孔の分画分子量によりウイルス粒子がリガンド活性化コア中に入るのが排除され、細孔の分画分子量より小さい分子がリガンド活性化コア中に入ることができ、その結果、ウイルス粒子が収集される固相マトリックス、および／または（ｉｉｉ）感染性ウイルス粒子を含むウイルス調製物（ｃ）を得るためのサイズ排除クロマトグラフィーであって、ウイルス調製物（ｃ）の残留宿主細胞ＤＮＡが１００ｎｇ／ｍＬ未満であり、残留宿主細胞タンパク質および最終ウイルス調製物（ｃ）の残留感染性ウイルス粒子凝集体が１μｇ／ｍＬ未満であるサイズ排除クロマトグラフィーなどの１種または複数のサイズ排除方法により、ウイルス調製物（ｂ）をさらに精製するステップ、を含むプロセス。
Ｒ５．Ｒ４に記載のプロセスであって、ウイルス調製物（ｃ）の残留宿主細胞ＤＮＡが、１０ｎｇ／ｍＬ未満であり、最終ウイルス調製物（ｃ）の残留宿主細胞タンパク質が１００ｎｇ／ｍＬ未満であるプロセス。
Ｒ６．Ｒ２〜Ｒ５のいずれか１項に記載のプロセスであって、ウイルス粒子および不純物を含む粗ハーベスト（ａ）が、ステップ（ｂ）の前に、１つまたは複数の予備精製ステップに供されるプロセス。
Ｒ７．Ｒ６に記載のプロセスであって、１つまたは複数の予備精製ステップが、
（ａ）細孔径が０．２μｍ以下のフィルターを使った濾過；および／または
（ｂ）酵素処理による宿主細胞ゲノムＤＮＡの消化；および／または
（ｃ）細孔径が３００ｋＤａ以上、好ましくは１００ｋＤａ以上の細孔径を有する中空繊維膜を用いた限外濾過／透析濾過、を含むプロセス。
Ｒ８．Ｒ２〜Ｒ７のいずれか１項に記載のプロセスであって、硫酸プロタミンの濃度が、０．５〜３ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは１〜２ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは１．２〜１．８ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは１．４〜１．６ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは１．６ｍｇ／ｍｌであるプロセス。
Ｒ９．Ｒ２〜Ｒ８のいずれか１項に記載のプロセスであって、ウイルス調製物（ｃ）中の、またはいずれかの最終ウイルス調製物中の感染性ウイルス粒子の濃縮が、粗ハーベスト（ａ）中の合計ウイルス生成物に対して、少なくとも５０％〜９５％の範囲、好ましくは少なくとも８０％であるプロセス。
Ｒ１０．Ｒ６〜Ｒ９のいずれか１項に記載のプロセスであって、Ｒ６〜Ｒ９のいずれか１項のステップ（ｂ）の前の１つまたは複数の予備精製ステップが、１μｍ以下、好ましくは０．２μｍの細孔径を有するフィルターを使って実施されるプロセス。
Ｒ１１．Ｒ２〜Ｒ１０のいずれか１項に記載のプロセスであって、ウイルス調製物（ｃ）の残留不純物が、１０％未満であるプロセス。
Ｒ１２．Ｒ２〜Ｒ１１のいずれか１項に記載のプロセスであって、ウイルスが、ＥＢ６６細胞株、ベロ細胞株、ベロ−αＨｉｓ細胞株、ヒーラ細胞株、ヒーラ−Ｓ３細胞株、２９３細胞株、ＰＣ１２細胞株、ＣＨＯ細胞株、３Ｔ３細胞株、ＰｅｒＣ６細胞株、ＭＤＳＫ細胞株、ニワトリ胎仔線維芽細胞株、アヒル細胞株、および二倍体鳥類細胞株、からなる群より選択される細胞株中で増殖するプロセス。
Ｒ１３．Ｒ１２に記載のプロセスであって、前記細胞株が、ベロ細胞株であるプロセス。
Ｒ１４．Ｒ２〜Ｒ１３のいずれか１項に記載のプロセスであって、ジカウイルスが、生ウイルス、減弱生ウイルス、キメラウイルス、改変生ウイルスまたは組換え生ウイルスであるプロセス。
Ｒ１５．Ｒ２〜Ｒ１４のいずれか１項に記載のプロセスであって、ジカウイルスが、アジア系統の株またはその免疫原性バリアントであるプロセス。
Ｒ１６．Ｒ２〜Ｒ１５のいずれか１項に記載のプロセスであって、最終ウイルス調製物（ｃ）を生じる前記プロセスが、不活化ステップの前に行われ、ウイルスが好ましくはホルムアルデヒドにより不活化されるプロセス。
Ｒ１７．ウイルス感染に対する免疫化のための組成物の製造のためのＲ１〜Ｒ１６のいずれか１項に記載のプロセスの使用。
Ｒ１８．Ｒ１７に記載の使用であって、ウイルス感染に対する免疫化のための組成物が、ジカウイルスに起因する感染である使用。
Ｒ１９．Ｒ２〜Ｒ１６のいずれか１項に記載のプロセスにより得ることができるまたは得られたウイルス粒子を含む、感染を処置および／または予防するための組成物。
本件出願は、以下の構成の発明を提供する。
（構成１）
不活化ジカウイルス粒子を含むウイルスワクチンであって、前記ジカウイルス粒子が、前記ジカウイルスワクチンを投与されている対象の少なくとも７０％に有効防御免疫状態を付与できる、ジカウイルスワクチン。
（構成２）
前記ジカウイルス粒子が、前記ジカウイルスワクチンを投与されているワクチン接種した対象の少なくとも７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％に、好ましくは少なくとも対象の８０％に有効防御免疫状態を付与できる、構成１に記載のジカウイルス。
（構成３）
前記ジカウイルス粒子が、配列番号２〜１３または７２の内のいずれか１つの核酸配列で示されるＤＮＡ配列に対応するＲＮＡゲノムを有するか、または配列番号２〜１３または７２の内のいずれか１つに少なくとも８８％同一であり、毒性ジカウイルスをパックできるバリアント核酸配列を有する、構成１または２に記載のワクチン。
（構成４）
前記ジカウイルス粒子が、配列番号１４〜６９の内のいずれか１つで示されるアミノ酸配列または配列番号１４〜６９の内のいずれか１つに少なくとも９５％同一であり、毒性ジカウイルスをパックできるバリアントアミノ酸配列から選択されるＥタンパク質を有する、構成１〜３のいずれか１項に記載のワクチン。
（構成５）
前記ジカウイルスが、化学的不活化、熱失活、ｐＨ不活化、またはＵＶ不活化により不活化される、構成１〜４のいずれか１項に記載のワクチン。
（構成６）
前記化学的不活化が、プラークアッセイにより測定して、前記ジカウイルスを完全に不活化するのに必要であるよりも長い時間、前記ジカウイルスを化学的不活化剤と接触させることを含む、構成５に記載のワクチン。
（構成７）
前記化学的不活化が、前記ジカウイルスをホルムアルデヒドと接触させることを含む、構成６に記載のワクチン。
（構成８）
前記ホルムアルデヒド不活性化が、前記ジカウイルスとホルムアルデヒドとを、２〜１０日間接触させることを含む、構成７に記載のワクチン。
（構成９）
前記化学的活性化が、約＋４℃または約＋２２℃で実施される、構成５〜８のいずれか１項に記載のワクチン。
（構成１０）
アジュバントをさらに含む、構成１〜９のいずれか１項に記載のワクチン。
（構成１１）
前記アジュバントがアルミニウム塩のアジュバントである、構成１０に記載のワクチン。
（構成１２）
前記アルミニウム塩のアジュバントが水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウム塩である、構成１１に記載のワクチン。
（構成１３）
前記ワクチンが、ペプチドおよびデオキシイノシン含有免疫賦活性オリゴデオキシ核酸分子（Ｉ−ＯＤＮ）を含むアジュバントを含むまたはさらに含む、構成１０〜１２のいずれか１項に記載のワクチン。
（構成１４）
前記ペプチドが配列ＫＬＫＬ５ＫＬＫ（配列番号７１）を含み、Ｉ−ＯＤＮがオリゴ−ｄ（ＩＣ）１３（配列番号７０）を含む、構成１３に記載のワクチン。
（構成１５）
１種または複数の薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含む、構成１〜１４のいずれか１項に記載のワクチン。
（構成１６）
前記ワクチンが、ＨＰＬＣにより検出するには少なすぎる量、すなわち、１μｇ／ｍｌ未満、特に１００ｎｇ／ｍｌ未満の量の、硫酸プロタミンまたはＰＳの断片または分解生成物を含む、構成１〜１５のいずれか１項に記載のワクチン。
（構成１７）
前記硫酸プロタミンまたはＰＳの断片または分解生成物が、質量分析または別の高感度法により検出できる、構成１６に記載のワクチン。

Claims (17)

  1. 少なくとも、配列番号７３のアミノ酸配列によって定義されるジカウイルス株Ｈ／ＰＦ／２０１３の全ポリタンパク質、または配列番号７３で示される配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するポリタンパク質のためのコード配列を含む不活化硫酸プロタミン沈殿ジカウイルスを含むジカウイルスワクチンであって、該ジカウイルスワクチンが、硫酸プロタミン（PS）又はPSの断片を含み、該PS又はPSの断片が1μｇ／ｍＬ未満の量で存在する、前記ジカウイルスワクチン。
  2. 前記ジカウイルスが、配列番号７２で示されるＤＮＡ配列に対応するＲＮＡゲノム、または配列番号７２に少なくとも８８％同一であり、かつ毒性ジカウイルスをパックできるバリアント核酸配列を含む、請求項１に記載のジカウイルスワクチン。
  3. 前記ジカウイルスが、配列番号４７のアミノ酸配列、または配列番号４７に少なくとも９５％同一であり、かつ毒性ジカウイルスをパックできるバリアントアミノ酸配列で定義されるジカウイルス株Ｈ／ＰＦ／２０１３のＥタンパク質を含む、請求項１又は２に記載のジカウイルスワクチン。
  4. 前記ジカウイルスが、化学的不活化、熱失活、ｐＨ不活化、またはＵＶ不活化により不活化される、請求項１〜３のいずれか１項に記載のジカウイルスワクチン。
  5. 前記化学的不活化が、プラークアッセイにより測定して、前記ジカウイルスを完全に不活化するのに必要であるよりも長い時間、前記ジカウイルスを化学的不活化剤と接触させることを含む、請求項４に記載のジカウイルスワクチン。
  6. 前記化学的不活化が、前記ジカウイルスをホルムアルデヒドと接触させることを含む、請求項４に記載のジカウイルスワクチン。
  7. 前記ホルムアルデヒド不活性化が、前記ジカウイルスをホルムアルデヒドと、２〜１０日間接触させることを含む、請求項６に記載のジカウイルスワクチン。
  8. 前記化学的不活化が、約＋４℃または約＋２２℃で実施される、請求項４〜７のいずれか１項に記載のジカウイルスワクチン。
  9. アジュバントをさらに含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載のジカウイルスワクチン。
  10. 前記アジュバントがアルミニウム塩のアジュバントである、請求項９に記載のジカウイルスワクチン。
  11. 前記アルミニウム塩のアジュバントが、前記ジカウイルスを含む最終組成物を基準にして１．２５ｐｐｂ未満のＣｕを含む水酸化アルミニウムである、請求項１０に記載のジカウイルスワクチン。
  12. 前記ジカウイルスワクチンが、ペプチドおよびデオキシイノシン含有免疫賦活性オリゴデオキシ核酸分子（Ｉ−ＯＤＮ）を含むアジュバントを含むまたはさらに含む、請求項９〜１１のいずれか１項に記載のジカウイルスワクチン。
  13. 前記ペプチドが配列ＫＬＫＬ５ＫＬＫ（配列番号７１）を含み、かつ前記Ｉ−ＯＤＮがオリゴ−ｄ（ＩＣ）１３（配列番号７０）を含む、請求項１２に記載のジカウイルスワクチン。
  14. １種または複数の薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のジカウイルスワクチン。
  15. 前記ジカウイルスワクチンが、１００ｎｇ／ｍＬ未満の量の、硫酸プロタミンまたはＰＳの断片を含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載のジカウイルスワクチン。
  16. 前記硫酸プロタミンまたはＰＳの断片が、質量分析および／または別の高感度法により検出できる、請求項１５に記載のジカウイルスワクチン。
  17. 請求項１〜１６のいずれか一項に記載の不活化硫酸プロタミン沈殿ジカウイルスを含むジカウイルスワクチンを製造するための方法であって、該方法が、下記ステップを含む感染性ジカウイルス粒子の精製プロセスを含む、前記方法：
    ａ）ジカウイルス粒子および不純物を含む粗ハーベスト（ａ）を用意するステップであって、該不純物が細胞基材上の該ジカウイルス粒子の増殖から生成される、前記ステップ；
    ｂ）プロタミン塩、好ましくは硫酸プロタミンを含む試薬を用いて沈殿させることにより、該粗ハーベスト（ａ）から不純物を低減させて、ウイルス調製物（ｂ）を得るステップ；及び
    ｃ）最適化ショ糖密度勾配での遠心分離により該ウイルス調製物（ｂ）をさらに精製して該感染性ジカウイルス粒子を含むウイルス調製物（ｃ）を得るステップであって、該プロタミンをウイルス画分から完全にまたはほぼ完全に分離できるように、該最適化ショ糖勾配が提供され、かつ該プロタミン濃度が、このステップによって、最終原薬中のプロタミン濃度が質量分析または別の高感度法で測定したときに１μｇ／ｍＬ未満、好ましくは９００、８００、７００、６００、５００、４００、３００または２００ｎｇ／ｍＬ未満、好ましくは１００ｎｇ／ｍＬ未満となる程度まで低減され、該最適化ショ糖密度勾配が、１０％±１％（ｗ／ｗ）ショ糖溶液中のジカウイルス含有画分、および異なる密度を有するショ糖溶液の３つのさらなる層を含み、該ショ糖溶液の３つのさらなる層が、１５％±１％（ｗ／ｗ）ショ糖を含む第１のショ糖溶液、３５％±１％（ｗ／ｗ）ショ糖を含む第２のショ糖溶液、および５０％±１％（ｗ／ｗ）ショ糖を含む第３のショ糖溶液を含む、前記ステップ。
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