JP7337935B2 - 組換え水痘帯状疱疹ウイルスワクチン - Google Patents
組換え水痘帯状疱疹ウイルスワクチン Download PDFInfo
- Publication number
- JP7337935B2 JP7337935B2 JP2021537120A JP2021537120A JP7337935B2 JP 7337935 B2 JP7337935 B2 JP 7337935B2 JP 2021537120 A JP2021537120 A JP 2021537120A JP 2021537120 A JP2021537120 A JP 2021537120A JP 7337935 B2 JP7337935 B2 JP 7337935B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- vaccine
- fusion protein
- vzvge
- vzv
- vaccine formulation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
- A61K39/25—Varicella-zoster virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
- A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
- A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
- A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/38—Albumins
- A61K38/385—Serum albumin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/02—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/525—Tumour necrosis factor [TNF]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6056—Antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/40—Fusion polypeptide containing a tag for immunodetection, or an epitope for immunisation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
- C12N2710/16722—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
- C12N2710/16734—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
組換え水痘・帯状疱疹ウイルスワクチ製剤であって、弱毒生VZV株(OKA株)遺伝子の組換え糖タンパク質gEの細胞外領域のアミノ酸配列と、ヒト免疫グロブリンのFc断片によって形成される融合タンパク質を含み、前記融合タンパク質のアミノ酸配列は配列番号1である。
VZVgE被膜外領域の配列は、本発明の附属書1に記載されている配列の一部を有し、VZVgEの完全な配列は、ウイルス研究で最初に公開された(Virus Research、HaumontなどVol.40、1996p199-204)。
1.本発明は、哺乳動物細胞(CHO)を用いて分泌型gE-Fc融合タンパク質を効率的に発現し、得られる標的産物はグリコシル化タンパク質であり、発現産物は主に二量体であり、その次が単量体である;各二量体型分子には4個分子のgEが含まれ、本発明によって産生される融合タンパク質は、分子量が大きく、免疫原性が強い。
3.本発明のCHO細胞によって発現される組換えgE-Fc融合タンパク質は、グリコシル化タンパク質であり、天然のgEタンパク質の空間構造を維持したので、良好な免疫原性を有し、大規模な促進の見通し及び利点を有する。
1.遺伝子配列の供給源
本発明の前記水痘帯状疱疹ウイルスEタンパク質(VZVgE)は、gEタンパク質の細胞外領域(ECD、31-546aa)であり、合計516個のアミノ酸を有する;FcセグメントはヒトIgG1Fcであり、合計232個のアミノ酸がある(付録:アミノ酸配列1)。水痘帯状疱疹ウイルスEタンパク質遺伝子とヒトIgG1のFcの遺伝子を直列に接続し(付録:DNA配列2)、南京キングスレイバイオテクノロジー株式会社に委託し、合成されたVZVgE-Fc融合タンパク質遺伝子配列をpUC57-1.8Kベクターへ接続させ、合成された遺伝子には、酵素切断制限部位、Kozak配列、シグナルペプチド、標的遺伝子(2244bp)、及び終止コドンが含まれ、全長は合計2355bpである。組換え遺伝子は、チャイニーズハムスター卵巣細胞Cricetulus griseus(CHO細胞)での発現を促進するために、合成中にコドン最適化された。
キングスクリプトバイオテクノロジー株式会社から提供された組換え遺伝子を含むグリセロール株をLB(Amp+)培地に接種し、37℃、180rpmで15時間培養し、プラスミドpUC57-gE-FcをTaKaRa MiniBEST Plasmid Purification Kit Ver.4.0を使用して抽出した;HindIII及びEcoRを使用してpUC57-gE-Fcプラスミドを2種類の酵素で切断(Double Digestion)して、標的遺伝子断片gE-Fc-H/E(サイズ約2300bp)を取得し、哺乳動物細胞発現プラスミドpXC-K383Lを酵素で切断して、ベクター断片pXC-H/E(サイズ約7000bp)を取得する;酵素で切断した産物のアガロースゲル電気泳動検出は図1に示す。
pXC-F:5’-TAACAGACTGTTCCTTTCCATG-3’
pXC-R:5’GTAAAACCTCTACAAATGTGGT-3’
1-F:5’-AGCACATCTGCCTGAAGC-3’
1-F1:5’-GCTTATTGTCTGGGCATCT-3’
クローンのgE-Fc-1を300mlLB(Amp+)培地に接種し、37℃、180rpmで16時間培養し、大量/大型のプラスミド抽出キット(北京ボメッド遺伝子工学株式会社)を使用して、プラスミドpXC-VZVgE-Fcを抽出する;プラスミドはエンドヌクレアーゼPvuI(TaKaRa)によって線形化された後、フェノール/クロロホルム/イソアミルアルコールを使用して抽出及び精製し、エタノールによる沈殿の後、1mlの滅菌TEバッファー(TaKaRa)に再溶解した。プラスミドpXC-VZVgE-Fc及び線形化されたプラスミドVZVgE-Fc-straightのゲル電気泳動検出は図3に示す。
無菌層流ワークベンチで、遺伝子パルス発生器Xcell(Bio-Rad)の穿孔電圧を300V電圧、900μFの単一パルス、及び無限抵抗に設定し、4mmのギャップのある使い捨て電気ショックカップ(Bio-Rad)を取り出し、40μgの線形化されたプラスミドDNA(100μl)及び0.7mlのCHO K1細胞懸濁液(1.5×107cells/ml)を加え、線形化されたプラスミドVZVgE-Fc-straightは、エレクトロトランスフェクション法によってCHOK1細胞内にトランスフェクトされ、電気ショックカップ内の細胞を三角培養フラスコに移し、30mlのCD CHO液体培地(GIBCO)を加え、36~37℃、5%CO2シェーカーで培養し、135rpm/分間で24時間のインキュベーション後、低速で遠心分離して細胞を収集し、50μM MSXを含むCDCHO培地に交換し(グルタミンを含まない)、限界希釈法により、細胞を96ウェル平底培養プレートに移し、培養プレートを37℃、10%CO2のインキュベーターに入れて培養し、倒立顕微鏡で観察し、モノクローナル細胞の細孔を標識し、その後ELISAの方法(ヤギ抗ヒトIgG+発現産物VZVgE-Fc+ヤギ抗ヒトIgG-HRP)及びprotein A HPLC方法を使用して、より高い発現レベルのモノクローナル株をスクリーニングし、継続的な継代培養し、検出して、最後に、標的遺伝子の発現が高い3つの細胞クローン株が得られ、クローン番号はそれぞれ5B3、8D8及び12C3である;流加培養試験とHPLCにより、培養上清中の組換えタンパク質の発現の量を検出して、スケールアップ試験用に5B3クローン株を選択した。
得られた5B3クローン株を500mlのCD CHO培養液を入れた2L三角フラスコに接種し、通気性のある瓶のキャップを締め、回転シェーカーで36~37℃、5%CO2、135r/minで培養し、4日間の培養後、5B3細胞を2.0L CD Opti-CHO培養液を含む5L自動バイオリアクターに移し、培養パラメーターを60r/min、温度36.5℃、pH7.0~pH7.4、溶存酸素DO 40%~60%に設定し、毎日サンプルを取って細胞の生存率、細胞密度、及びグルコース含有量を検出すると、4日間の培養後、生存細胞密度は5×106~7×106cells/mlに増加し、200ml~300mlのCD Efficient Feed Cを追加してから、1日おきに1回追加し、培地中のグルコース含有量を毎日測定し、グルコース含有量が11.1mmole/L未満の場合は、グルコース含有量が22mmole/Lに達するまで、蠕動ポンプを介して自動バイオリアクターに40%グルコース溶液を追加する;12~14日間培養して、生細胞の割合が60%~70%に低下した時点で、培養を停止し、12000r/minで遠心分離(又は3M深層濾過器を使用)して細胞と細胞破片を除去し、細胞培養物上清を収集する。培養物上清を0.45μmフィルターメンブレンで濾過し、濾液を40mM PBS(pH7.4、150mM NaCl)であらかじめ平衡化したProtein Aゲルクロマトグラフィーカラム(MabselectTM Sure,MabSelectTM Sure LX,MabCaptureTM A,AT Besterose Aなど)に通し、次に40mM PBSを使用してA280がベースラインレベルに戻るまで2~4個カラム容量のフローウォッシュをする;フローウォッシュを100mMグリシン-塩酸バッファー(又はクエン酸-クエン酸ナトリウムバッファー、酢酸-酢酸ナトリウムバッファー、pH3.0~4.0)に変更し、コンジュゲートを溶出し、収集した溶出物を室温(18~25℃)で30分間(低pHでウイルスを不活化)静置し、その後0.2M Na2HP04でpHを7.4~8.0に調整し、0.45μmフィルターメンブレンで濾過し、不溶性粒子をさらに除去する。Protein Aアフィニティークロマトグラフィーで精製して得られたタンパク質溶液は、島津LC-20AT HPLC(BioCore SEC-500、7.8mm×30cm、蘇州Naweiバイオテクノロジー株式会社)の検出によると、メインピーク(二量体)の割合が約65%~78%を占め、モノマーは約20%~30%を占め、メインピークの前にまだ一部のポリマー産物があり、比率は一般的に10%未満であり、クロマトグラムを図4に示す。
実施例3で得られた組換えVZVgEを20mM PBS(pH7.2~8.0、135mM NaCl)で100μg/ml~1000μg/mlに希釈し、38%ホルムアルデヒド溶液を溶液総量の0.1%(v/v)まで加え、37℃で72時間静置し、この期間中1日2回振とうし、よく混合してから、溶液を2~8℃で静置した。
実施例3で得られた組換えVZVgE溶液を2~8℃に冷却し、秤量した後、溶液の重量の0.1%~0.01%の最終濃度になるまでβ-プロピオラクトンを添加し、2~8℃でまた72時間静置し、この期間中、毎日2回振ってよく混ぜる。72時間後に、β-プロピオラクトンを乳酸に完全に変換させるために、VZVgE溶液を37℃に加熱して4時間維持させ、次に溶液を2~8℃で静置した。
実施例5又は実施例6で得られた組換えVZVgEを含むタンパク質溶液を、20mMのPB(pH7.2~8.0、又は20mMのTris-HCl溶液pH7.2~8.0)で適切に希釈して、溶液中のNaClの濃度を50mM以下になるまで下げ、次にVZVgEを含む溶液を20mMPB(又は20mM Tris-HCl、pH7.2~8.0)で平衡化されたDEAE Sepharose 4FFカラムに流した後、20mM PB(又は20mM Tris-HCl溶液、PH7.2~8.0)でA280がベースラインレベルに完全に戻るまでフローウォッシュを続け、4個カラム容量に相当する液量のフローウォッシュを続け、0.4M NaCl(20mMPB又は20mMTris-HCl溶液を含み、pH7.5)を含む溶出液を使用して、ゲルに結合したVZVgEを溶出させ、標的産物を含む溶液を収集し、0.2μm孔径の滅菌フィルターメンブレンで濾過し、収集した濾液がワクチン原液である。
実施例6で得られたワクチン原液を、20mM Tris-HCl(pH7.2~7.5,135~150mMの NaClを含む)で10μg/ml~800μg/mlに希釈し、室温で等量の水酸化アルミニウムアジュバント懸濁液(アルミニウム含有量0.2~1.5mg/ml)と混合し、2~8℃で静置する。
実施例6で得られたワクチン原液を、20mMのTris-HCl(pH7.2~7.5、135mM NaClを含む)で40μg/ml~800μg/mlに希釈し、10%スクロース(又は10%トレハロース、10%マンニトール、10%ラクトース)最終濃度が3%になるまで溶液を追加し、分けて入れる溶液におけるVZVgEの濃度を20μg/ml(又は50、80、100、200、400μg/ml)に調整し、均一に混合した後、2mlのガラスバイアル瓶に分装し、各瓶10mlずつ、ブチルゴムを半打栓した後、凍結乾燥チャンバーに送り、予備凍結の温度を-40~-45℃に設定して、4時間凍結した後、真空及び凍結乾燥を開始し、自動加熱プログラムを使用して温度を制御し、温度を-40~-25℃から6時間加熱し、-25~-5℃から4時間加熱し、0~5℃で1時間維持し、25℃で1時間維持し、35℃で6~8時間維持し、次に、真空状態で(又は高純度窒素又はアルゴンガスを吹き入れ、栓を押し込む)ブチルゴム栓をしっかり押し込む。
VZVgE100μg/mlを含むアルミニウムアジュバント吸着のワクチンを2~8℃の冷蔵から取り出し、20mM Tris-HClで、VZVgE8μg/ml、2μg/mlを含む溶液に希釈し、次に、等容量のアルミニウムアジュバントを添加して、VZVgE4μg/ml、1μg/mlを含む(又はVZVgEを2μg/0.5ml、0.5μg/0.5mlを含む)動物実験用のアルミニウムアジュバントワクチンに調製した。
Claims (10)
- 弱毒生VZV株(OKA株)遺伝子の組換え糖タンパク質gEの細胞外領域と、ヒト免疫グロブリンのFc断片によって形成される融合タンパク質を含み、前記融合タンパク質のアミノ酸配列は配列番号1であって、前記融合タンパク質は4つのgE分子と2つのFcが含まれる分子を形成する組換え水痘帯状疱疹ウイルスワクチン製剤。
- さらにワクチンアジュバントを含む請求項1に記載のワクチン製剤。
- 前記ワクチンアジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバント、リン酸アルミニウムアジュバント、又は水酸化アルミニウムとリン酸アルミニウムアジュバントの混合物から選択される請求項2に記載のワクチン製剤。
- 各投与ユニットには、5~200μgの融合タンパク質が含まれている請求項1に記載のワクチン製剤。
- 各投与ユニットには、10~100μgの融合タンパク質が含まれている請求項4に記載のワクチン製剤。
- 各投与ユニットには、20~60μgの融合タンパク質が含まれている請求項5に記載のワクチン製剤。
- ホスファチジルコリン、レシチン、3D-MPL、長鎖脂肪酸(エステル)、鉱油、植物油、メチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及びコレステロールを含むリポソームの組成物を含み、これらに限定されない免疫原性を高めることができる他の物質も含まれている請求項1に記載のワクチン製剤。
- 凍結乾燥製剤である請求項1に記載のワクチン製剤。
- 前記凍結乾燥製剤は、使用前に水酸化アルミニウムアジュバント懸濁液を添加して溶解させ、均一に混合した後、筋肉内又は皮下に注射する請求項8に記載のワクチン製剤。
- 請求項1に記載の融合タンパク質を発現させることができ、DNA配列が配列番号2である組換え遺伝子。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201911203663.2A CN112870344B (zh) | 2019-11-29 | 2019-11-29 | 一种重组水痘带状疱疹病毒疫苗 |
CN201911203663.2 | 2019-11-29 | ||
PCT/CN2020/090200 WO2021103434A1 (zh) | 2019-11-29 | 2020-05-14 | 一种重组水痘带状疱疹病毒疫苗 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022515271A JP2022515271A (ja) | 2022-02-17 |
JP7337935B2 true JP7337935B2 (ja) | 2023-09-04 |
Family
ID=76038870
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021537120A Active JP7337935B2 (ja) | 2019-11-29 | 2020-05-14 | 組換え水痘帯状疱疹ウイルスワクチン |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11993634B2 (ja) |
EP (1) | EP3906940A4 (ja) |
JP (1) | JP7337935B2 (ja) |
KR (1) | KR102698706B1 (ja) |
CN (1) | CN112870344B (ja) |
AU (1) | AU2020391074B2 (ja) |
CA (1) | CA3125908A1 (ja) |
GB (1) | GB2603974A (ja) |
WO (1) | WO2021103434A1 (ja) |
Families Citing this family (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN116350770B (zh) * | 2021-12-28 | 2024-07-12 | 成都迈科康生物科技有限公司 | 一种带状疱疹疫苗制剂及其制备方法 |
CN114891830B (zh) * | 2022-04-02 | 2024-03-01 | 武汉博沃生物科技有限公司 | 基于水痘-带状疱疹病毒的重组表达载体、重组病毒及用途 |
CN114958882B (zh) * | 2022-05-11 | 2023-05-26 | 晟明生物技术(郑州)有限公司 | 一种表达水痘-带状疱疹病毒gE蛋白的DNA分子 |
CN114621356A (zh) * | 2022-05-17 | 2022-06-14 | 康希诺生物股份公司 | 以il18为分子佐剂的带状疱疹亚单位疫苗 |
CN114621357A (zh) * | 2022-05-17 | 2022-06-14 | 康希诺生物股份公司 | 一种带状疱疹亚单位疫苗及其制备方法 |
WO2024114650A1 (zh) * | 2022-12-01 | 2024-06-06 | 北京吉诺卫生物科技有限公司 | 一种重组带状疱疹疫苗及其制备与应用 |
CN116059337B (zh) * | 2022-12-01 | 2024-03-01 | 北京吉诺卫生物科技有限公司 | 新型佐剂重组带状疱疹疫苗及其制备与应用 |
CN116023510B (zh) * | 2022-12-01 | 2023-09-22 | 北京吉诺卫生物科技有限公司 | 双佐剂重组带状疱疹疫苗 |
CN116655748B (zh) * | 2023-02-28 | 2024-07-26 | 易慧生物技术(上海)有限公司 | 一种截短型水痘-带状疱疹病毒gE蛋白及其应用 |
CN116284455A (zh) * | 2023-04-17 | 2023-06-23 | 北京康乐卫士生物技术股份有限公司 | 一种带状疱疹病毒疫苗的嵌合抗原及其应用 |
CN117003895B (zh) * | 2023-08-09 | 2024-05-28 | 成都新诺明生物科技有限公司 | 一种含有IL2、Fc和PADRE的gE融合蛋白及其制备方法和应用 |
CN116747298B (zh) * | 2023-08-09 | 2024-01-02 | 成都新诺明生物科技有限公司 | 一种水痘-带状疱疹病毒疫苗及其制备方法和应用 |
CN117003890B (zh) * | 2023-08-09 | 2024-06-04 | 成都新诺明生物科技有限公司 | 一种含有P2和两个Fc的gE融合蛋白及其制备方法和应用 |
CN118085111B (zh) * | 2024-04-28 | 2024-08-09 | 天津中逸安健生物科技有限公司 | 一种融合蛋白gE-Fc及其在制备重组带状疱疹疫苗中的应用 |
CN118146319B (zh) * | 2024-05-13 | 2024-08-02 | 普大生物科技(泰州)有限公司 | 一种vzv重组蛋白及其制备方法和应用 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005085445A1 (ja) | 2004-03-05 | 2005-09-15 | The Research Foundation For Microbial Diseases Of Osaka University | 組換え水痘帯状疱疹ウイルス |
JP2006500035A (ja) | 2002-09-23 | 2006-01-05 | マクロジェニックス インコーポレイテッド | ヘルペスウイルス科の核酸配列および/またはポリペプチド配列を含むワクチンの同定方法およびワクチン接種用組成物 |
WO2008059959A1 (fr) | 2006-11-17 | 2008-05-22 | The Research Foundation For Microbial Diseases Of Osaka University | Agent promoteur de l'étirement des nerfs et agent inhibiteur de l'étirement des nerfs |
JP2018536022A (ja) | 2015-10-22 | 2018-12-06 | モデルナティーエックス, インコーポレイテッド | 水痘帯状疱疹ウイルス(vzv)のための核酸ワクチン |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB0605735D0 (en) * | 2006-03-22 | 2006-05-03 | Immunobiology Ltd | Composition and method for mediating an immune response |
KR20140007404A (ko) * | 2011-01-31 | 2014-01-17 | 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 | 신규 허피스 항원을 암호화하는 핵산 분자, 이것을 포함하는 백신 및 이것의 사용 방법 |
CN102517302A (zh) * | 2011-12-28 | 2012-06-27 | 中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所 | 一种重组表达水痘-带状疱疹病毒截短型糖蛋白e的方法及其应用 |
US10874734B2 (en) * | 2016-11-25 | 2020-12-29 | Mogam Institute For Biomedical Research | Varicella zoster virus vaccine |
CN109602901B (zh) * | 2019-01-08 | 2022-05-27 | 成都迈科康生物科技有限公司 | 一种带状疱疹病毒疫苗及其制备方法和应用 |
CN112142829B (zh) * | 2019-06-28 | 2022-02-22 | 怡道生物科技(苏州)有限公司 | 水痘-带状疱疹病毒gE蛋白突变体及其表达方法 |
CN110343722A (zh) * | 2019-07-03 | 2019-10-18 | 上海大学 | 一种重组表达水痘-带状疱疹病毒v-Oka株截短型糖蛋白E的方法 |
-
2019
- 2019-11-29 CN CN201911203663.2A patent/CN112870344B/zh active Active
-
2020
- 2020-05-14 KR KR1020217021384A patent/KR102698706B1/ko active IP Right Grant
- 2020-05-14 US US17/422,835 patent/US11993634B2/en active Active
- 2020-05-14 GB GB2108457.9A patent/GB2603974A/en active Pending
- 2020-05-14 AU AU2020391074A patent/AU2020391074B2/en active Active
- 2020-05-14 EP EP20891532.2A patent/EP3906940A4/en active Pending
- 2020-05-14 CA CA3125908A patent/CA3125908A1/en active Pending
- 2020-05-14 WO PCT/CN2020/090200 patent/WO2021103434A1/zh unknown
- 2020-05-14 JP JP2021537120A patent/JP7337935B2/ja active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2006500035A (ja) | 2002-09-23 | 2006-01-05 | マクロジェニックス インコーポレイテッド | ヘルペスウイルス科の核酸配列および/またはポリペプチド配列を含むワクチンの同定方法およびワクチン接種用組成物 |
WO2005085445A1 (ja) | 2004-03-05 | 2005-09-15 | The Research Foundation For Microbial Diseases Of Osaka University | 組換え水痘帯状疱疹ウイルス |
WO2008059959A1 (fr) | 2006-11-17 | 2008-05-22 | The Research Foundation For Microbial Diseases Of Osaka University | Agent promoteur de l'étirement des nerfs et agent inhibiteur de l'étirement des nerfs |
JP2018536022A (ja) | 2015-10-22 | 2018-12-06 | モデルナティーエックス, インコーポレイテッド | 水痘帯状疱疹ウイルス(vzv)のための核酸ワクチン |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
EMBO Mol Med, 2012, Vol.4, p.1015-1028 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2020391074B2 (en) | 2023-12-21 |
KR102698706B1 (ko) | 2024-08-27 |
GB202108457D0 (en) | 2021-07-28 |
CN112870344B (zh) | 2022-07-19 |
CN112870344A (zh) | 2021-06-01 |
AU2020391074A1 (en) | 2021-07-08 |
EP3906940A4 (en) | 2022-06-29 |
CA3125908A1 (en) | 2021-06-03 |
US20220363721A1 (en) | 2022-11-17 |
WO2021103434A1 (zh) | 2021-06-03 |
EP3906940A1 (en) | 2021-11-10 |
US11993634B2 (en) | 2024-05-28 |
JP2022515271A (ja) | 2022-02-17 |
GB2603974A (en) | 2022-08-24 |
KR20210102342A (ko) | 2021-08-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7337935B2 (ja) | 組換え水痘帯状疱疹ウイルスワクチン | |
JP6949027B2 (ja) | ジカウイルスワクチン | |
JP7088841B2 (ja) | 安定化された可溶性融合前rsv fタンパク質 | |
US20210290759A1 (en) | Immune composition, preparation method therefor, and application thereof | |
US20240189416A1 (en) | Stabilized coronavirus spike protein fusion proteins | |
US20180340181A1 (en) | Vaccines against zika virus based on zika structure proteins | |
CN116023510B (zh) | 双佐剂重组带状疱疹疫苗 | |
US20220160866A1 (en) | Fusion protein useful for vaccination against rotavirus | |
WO2024179043A1 (zh) | 一种截短型水痘-带状疱疹病毒gE蛋白及其应用 | |
JP6808650B2 (ja) | 短縮型ロタウイルスvp4タンパク質およびその適用 | |
JP2023134738A (ja) | 呼吸器疾患を治療するための方法および組成物 | |
KR20110053340A (ko) | Hpv에 대한 백신 | |
US20220409717A1 (en) | Chikungunya virus-like particle vaccine and methods of using the same | |
JP2023519837A (ja) | コロナウイルスを処置するためのワクチン組成物 | |
WO2024114650A1 (zh) | 一种重组带状疱疹疫苗及其制备与应用 | |
WO2024017682A1 (en) | Rsv immunogens | |
CN117229370A (zh) | H5n6禽流感广谱性疫苗的开发及其应用 | |
WO2023194913A1 (en) | Immunogenic composition useful for vaccination against rotavirus | |
CN117042805A (zh) | 对抗冠状病毒的疫苗组合物 | |
CN108779151A (zh) | 截短型单纯疱疹病毒2型糖蛋白g | |
WO2016083287A1 (en) | Inactivated equine influenza virus vaccines |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210623 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210623 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220331 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220802 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221014 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20230301 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230628 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20230628 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20230719 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230815 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230823 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7337935 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |