JP6894907B2 - 液体酵素調製物およびその調製方法 - Google Patents
液体酵素調製物およびその調製方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6894907B2 JP6894907B2 JP2018536249A JP2018536249A JP6894907B2 JP 6894907 B2 JP6894907 B2 JP 6894907B2 JP 2018536249 A JP2018536249 A JP 2018536249A JP 2018536249 A JP2018536249 A JP 2018536249A JP 6894907 B2 JP6894907 B2 JP 6894907B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- liquid
- transglutaminase
- sodium
- enzyme
- acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 201
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 201
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims description 175
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 165
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 199
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 169
- 108060008539 Transglutaminase Proteins 0.000 claims description 147
- 102000003601 transglutaminase Human genes 0.000 claims description 147
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 86
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 69
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 60
- 230000033116 oxidation-reduction process Effects 0.000 claims description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 28
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 24
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 21
- 235000019249 food preservative Nutrition 0.000 claims description 19
- 239000005452 food preservative Substances 0.000 claims description 19
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 18
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 15
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 14
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 13
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 claims description 13
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 claims description 13
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 13
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 claims description 13
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 12
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims description 12
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 claims description 12
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 12
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 claims description 12
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 claims description 12
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 claims description 12
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 claims description 12
- 239000000845 maltitol Substances 0.000 claims description 11
- VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N maltitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N 0.000 claims description 11
- 235000010449 maltitol Nutrition 0.000 claims description 11
- 229940035436 maltitol Drugs 0.000 claims description 11
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 10
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 10
- IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N Inositol-hexakisphosphate Chemical compound OP(O)(=O)O[C@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims description 10
- IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N Phytic acid Natural products OP(O)(=O)OC1C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 10
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 10
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 10
- 235000002949 phytic acid Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000000467 phytic acid Substances 0.000 claims description 10
- 229940068041 phytic acid Drugs 0.000 claims description 10
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 10
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 10
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 10
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 claims description 9
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 claims description 9
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 9
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 9
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims description 9
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 9
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 9
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000012371 Aseptic Filling Methods 0.000 claims description 8
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 8
- 241000209140 Triticum Species 0.000 claims description 8
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims description 8
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 8
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 8
- RWPGFSMJFRPDDP-UHFFFAOYSA-L potassium metabisulfite Chemical compound [K+].[K+].[O-]S(=O)S([O-])(=O)=O RWPGFSMJFRPDDP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 229940043349 potassium metabisulfite Drugs 0.000 claims description 8
- 235000010263 potassium metabisulphite Nutrition 0.000 claims description 8
- HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L sodium disulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])(=O)=O HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 229940001584 sodium metabisulfite Drugs 0.000 claims description 8
- 235000010262 sodium metabisulphite Nutrition 0.000 claims description 8
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 7
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 claims description 7
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 7
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 claims description 7
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 7
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 4-(4-fluorophenyl)oxane-4-carboxylic acid Chemical compound C=1C=C(F)C=CC=1C1(C(=O)O)CCOCC1 CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 235000017166 Bambusa arundinacea Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000017491 Bambusa tulda Nutrition 0.000 claims description 6
- 241001330002 Bambuseae Species 0.000 claims description 6
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims description 6
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 claims description 6
- AYRXSINWFIIFAE-SCLMCMATSA-N Isomaltose Natural products OC[C@H]1O[C@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O AYRXSINWFIIFAE-SCLMCMATSA-N 0.000 claims description 6
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 claims description 6
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 claims description 6
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 claims description 6
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 6
- 235000015334 Phyllostachys viridis Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 6
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 claims description 6
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 claims description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 6
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 6
- 239000011425 bamboo Substances 0.000 claims description 6
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 6
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 claims description 6
- DLRVVLDZNNYCBX-RTPHMHGBSA-N isomaltose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-RTPHMHGBSA-N 0.000 claims description 6
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 claims description 6
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 6
- 235000020748 rosemary extract Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000001540 sodium lactate Substances 0.000 claims description 6
- 235000011088 sodium lactate Nutrition 0.000 claims description 6
- 229940005581 sodium lactate Drugs 0.000 claims description 6
- 235000019710 soybean protein Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 6
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 5
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 claims description 5
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 claims description 5
- 239000002211 L-ascorbic acid Substances 0.000 claims description 5
- 235000000069 L-ascorbic acid Nutrition 0.000 claims description 5
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 claims description 5
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 claims description 5
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 claims description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 5
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 5
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 claims description 5
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 claims description 5
- 229960005150 glycerol Drugs 0.000 claims description 5
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 5
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 claims description 5
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 5
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 claims description 5
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 claims description 5
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 claims description 5
- 229960004109 potassium acetate Drugs 0.000 claims description 5
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000011181 potassium carbonates Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000001508 potassium citrate Substances 0.000 claims description 5
- QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K potassium citrate (anhydrous) Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 5
- 235000011118 potassium hydroxide Nutrition 0.000 claims description 5
- PHZLMBHDXVLRIX-UHFFFAOYSA-M potassium lactate Chemical compound [K+].CC(O)C([O-])=O PHZLMBHDXVLRIX-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 239000001521 potassium lactate Substances 0.000 claims description 5
- 235000011085 potassium lactate Nutrition 0.000 claims description 5
- 229960001304 potassium lactate Drugs 0.000 claims description 5
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000011085 pressure filtration Methods 0.000 claims description 5
- 229960004063 propylene glycol Drugs 0.000 claims description 5
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 claims description 5
- 229940092258 rosemary extract Drugs 0.000 claims description 5
- 239000001233 rosmarinus officinalis l. extract Substances 0.000 claims description 5
- 229960001153 serine Drugs 0.000 claims description 5
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 5
- 229960004249 sodium acetate Drugs 0.000 claims description 5
- 229940001607 sodium bisulfite Drugs 0.000 claims description 5
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 claims description 5
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 claims description 5
- 239000008399 tap water Substances 0.000 claims description 5
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000015870 tripotassium citrate Nutrition 0.000 claims description 5
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 5
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 claims description 5
- 235000019263 trisodium citrate Nutrition 0.000 claims description 5
- CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 2,4-Hexadienoic acid, potassium salt (1:1), (2E,4E)- Chemical compound [K+].CC=CC=CC([O-])=O CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 4
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 4
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 claims description 4
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 claims description 4
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 claims description 4
- NVNLLIYOARQCIX-MSHCCFNRSA-N Nisin Chemical compound N1C(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)[C@@H]([C@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)[C@H](N)[C@H](C)CC)CSC[C@@H]1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]2C(NCC(=O)N[C@H](C)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CS[C@@H]2C)C(=O)N[C@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]2C(N[C@H](C)C(=O)N[C@@H]3C(=O)N[C@@H](C(N[C@H](CC=4NC=NC=4)C(=O)N[C@H](CS[C@@H]3C)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N[C@H]([C@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=3NC=NC=3)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)NC(=C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(O)=O)=O)CS[C@@H]2C)=O)=O)CS[C@@H]1C NVNLLIYOARQCIX-MSHCCFNRSA-N 0.000 claims description 4
- 108010053775 Nisin Proteins 0.000 claims description 4
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 claims description 4
- 239000004288 Sodium dehydroacetate Substances 0.000 claims description 4
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 claims description 4
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 claims description 4
- OPGYRRGJRBEUFK-UHFFFAOYSA-L disodium;diacetate Chemical compound [Na+].[Na+].CC([O-])=O.CC([O-])=O OPGYRRGJRBEUFK-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 claims description 4
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 claims description 4
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 claims description 4
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 4
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 4
- 229960001855 mannitol Drugs 0.000 claims description 4
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 claims description 4
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000010297 nisin Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000004309 nisin Substances 0.000 claims description 4
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000010241 potassium sorbate Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000004302 potassium sorbate Substances 0.000 claims description 4
- 229940069338 potassium sorbate Drugs 0.000 claims description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 4
- 235000019259 sodium dehydroacetate Nutrition 0.000 claims description 4
- 229940079839 sodium dehydroacetate Drugs 0.000 claims description 4
- 235000017454 sodium diacetate Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims description 4
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 claims description 4
- 229940001482 sodium sulfite Drugs 0.000 claims description 4
- DSOWAKKSGYUMTF-GZOLSCHFSA-M sodium;(1e)-1-(6-methyl-2,4-dioxopyran-3-ylidene)ethanolate Chemical compound [Na+].C\C([O-])=C1/C(=O)OC(C)=CC1=O DSOWAKKSGYUMTF-GZOLSCHFSA-M 0.000 claims description 4
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- XTJKNGLLPGBHHO-HNNXBMFYSA-N (2s)-5-(diaminomethylideneamino)-2-(dodecanoylamino)pentanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N XTJKNGLLPGBHHO-HNNXBMFYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 3
- 235000010298 natamycin Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000004311 natamycin Substances 0.000 claims description 3
- 229960003255 natamycin Drugs 0.000 claims description 3
- NCXMLFZGDNKEPB-FFPOYIOWSA-N natamycin Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C[C@@H](C)OC(=O)/C=C/[C@H]2O[C@@H]2C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 NCXMLFZGDNKEPB-FFPOYIOWSA-N 0.000 claims description 3
- 238000012858 packaging process Methods 0.000 claims description 3
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 48
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 34
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 29
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 27
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 20
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 17
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 17
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 10
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 9
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 8
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 7
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- 235000013527 bean curd Nutrition 0.000 description 6
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 4
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 239000011736 potassium bicarbonate Substances 0.000 description 4
- 235000015497 potassium bicarbonate Nutrition 0.000 description 4
- 229910000028 potassium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 4
- 235000013580 sausages Nutrition 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 229920002582 Polyethylene Glycol 600 Polymers 0.000 description 3
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100030944 Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase K Human genes 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 3
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 3
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 3
- TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M potassium hydrogencarbonate Chemical compound [K+].OC([O-])=O TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 108010073324 Glutaminase Proteins 0.000 description 2
- 102000009127 Glutaminase Human genes 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002538 Polyethylene Glycol 20000 Polymers 0.000 description 2
- 229920002565 Polyethylene Glycol 400 Polymers 0.000 description 2
- 229920002593 Polyethylene Glycol 800 Polymers 0.000 description 2
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000007686 potassium Nutrition 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 2
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000009461 vacuum packaging Methods 0.000 description 2
- NEAQRZUHTPSBBM-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3,3-dimethyl-7-nitro-4h-isoquinolin-1-one Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C=C2C(=O)N(O)C(C)(C)CC2=C1 NEAQRZUHTPSBBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010011619 6-Phytase Proteins 0.000 description 1
- 208000033399 Anaphylactic responses Diseases 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 101100136092 Drosophila melanogaster peng gene Proteins 0.000 description 1
- 108020004206 Gamma-glutamyltransferase Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004368 Modified starch Substances 0.000 description 1
- 229920000881 Modified starch Polymers 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 241001495137 Streptomyces mobaraensis Species 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N Sulfurous acid Chemical compound OS(O)=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000012556 adjustment buffer Substances 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- LFYJSSARVMHQJB-QIXNEVBVSA-N bakuchiol Chemical compound CC(C)=CCC[C@@](C)(C=C)\C=C\C1=CC=C(O)C=C1 LFYJSSARVMHQJB-QIXNEVBVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L calcium lactate Chemical compound [Ca+2].CC(O)C([O-])=O.CC(O)C([O-])=O MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001527 calcium lactate Substances 0.000 description 1
- 235000011086 calcium lactate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002401 calcium lactate Drugs 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical compound OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- WBZKQQHYRPRKNJ-UHFFFAOYSA-L disulfite Chemical compound [O-]S(=O)S([O-])(=O)=O WBZKQQHYRPRKNJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 238000004134 energy conservation Methods 0.000 description 1
- 108010032995 epsilon-(gamma-glutamyl)-lysine Proteins 0.000 description 1
- JPKNLFVGUZRHOB-YUMQZZPRSA-N epsilon-(gamma-glutamyl)lysine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCCNC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O JPKNLFVGUZRHOB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 102000006640 gamma-Glutamyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 108010010779 glutamine-pyruvate aminotransferase Proteins 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000021760 high fever Diseases 0.000 description 1
- 150000003840 hydrochlorides Chemical class 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000002932 luster Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 238000012009 microbiological test Methods 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- -1 natamicin Proteins 0.000 description 1
- 238000009828 non-uniform distribution Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- JLFNLZLINWHATN-UHFFFAOYSA-N pentaethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCOCCOCCO JLFNLZLINWHATN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940085127 phytase Drugs 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 1
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- CSMWJXBSXGUPGY-UHFFFAOYSA-L sodium dithionate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)(=O)S([O-])(=O)=O CSMWJXBSXGUPGY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012859 sterile filling Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1025—Acyltransferases (2.3)
- C12N9/104—Aminoacyltransferases (2.3.2)
- C12N9/1044—Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase (2.3.2.13), i.e. transglutaminase or factor XIII
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y203/00—Acyltransferases (2.3)
- C12Y203/02—Aminoacyltransferases (2.3.2)
- C12Y203/02013—Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase (2.3.2.13), i.e. transglutaminase or factor XIII
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Beans For Foods Or Fodder (AREA)
- General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
- Meat, Egg Or Seafood Products (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
[0001]本発明は、液体酵素調製物およびそれを調製するための方法を開示し、特定には、室温で貯蔵することができ、特性が安定であり、酵素活性が８０％を超えるレベルで維持される、トランスグルタミナーゼ（ＥＣ２．３．２．１３）の液体調製物およびその調製方法に関する。本発明は、酵素調製物の分野および食品添加剤の分野に属する。
[0002]グルタミントランスアミナーゼ（ＥＣ．２．３．２．１３、正式名称：アミンγ−グルタミル−トランスフェラーゼ、略してトランスグルタミナーゼと称され、ＴＧと略記される）は、タンパク質のペプチド鎖中のリシンのε−アミノ基をアシルアクセプターとして使用することによって、タンパク質の分子中またはタンパク質間の分子中のε−（γ−グルタミル）リシンイソペプチド結合の形成を触媒することができる架橋タンパク質酵素であり、例えば乳化性、レオロジー的な特徴、溶解性および起泡性などのタンパク質の特性を改善し、タンパク質に特有の質感の特徴および付着力を付与し、製品の色、フレーバーおよび味を改善し、したがって多大な商業的な価値がある。
[0003]トランスグルタミナーゼは、最初にClarkeらによってモルモットの肝臓から単離された。１９８９年には、天野エンザイム株式会社（Amano Pharmaceutical Co., Ltd.、日本）のAndoらが、トランスグルタミナーゼ生産のための微生物発酵プロセスを発明した。１９９７年には、味の素株式会社（日本）が商業的なスケールでのトランスグルタミナーゼ生産を実現した。２００１年には、トランスグルタミナーゼが中国で食品添加剤として公式に承認された。現在、世界における主要な発酵物製造元は、味の素株式会社（日本）であり、そのトランスグルタミナーゼ製品は、アクティバ（Acvita）というブランド名を有する。中国における主要な製造元は、上海青瑞食品科技有限公司（Shanghai Kinry Food Ingredients Co., Ltd.）、済南青瑞生物科技有限公司（Kinry Biotech (Jinan) Co., Ltd.）、泰興市東聖食品科技有限公司（Taixing Dongsheng Bio-Tech Co., Ltd.）、泰興市一鳴生物製品有限公司（Taixing Yiming Biological Product Co.Ltd.）、河南仰韶生化工程有限公司（Henan Yangshao Bio-products Co., Ltd.）などである。それらの製品は固体粉末形態の酵素調製物であり、上海青瑞食品科技有限公司が初めて真空包装を使用している。味の素株式会社（日本）は現在、粉末製品に窒素が充填された包装を採用している。
[0004]トランスグルタミナーゼの粉末調製物はラージスケールで生産され、食品加工産業に広く適用されているが、現在、それらの生産、輸送、貯蔵および適用においてなお多くの問題がある。
１）生産コスト：トランスグルタミナーゼの生産中にまず発酵液を得るが、これは、その精製中に沈殿、乾燥、および粉砕などの数種の処理工程を必要とする；プロセスが複雑なために、生産コストが増加する。
２）安全保護：トランスグルタミナーゼの粉末調製物は生産および使用中に分散しやすいため、作業環境が悪化し、装備を清潔にすることが難しい。作業場所は埃まみれになり、これは制御し保護することが難しい。酵素粉末が一旦人体に吸い込まれると、強いアナフィラキシー応答を引き起こし、作業員の気道の臓器に深刻な傷害を与え、作業員は高熱、肺炎およびショックなどの症状を呈する場合があり、したがって作業員の健康にとって極めて有害である。これまで、工場で、トランスグルタミナーゼによって引き起こされるアレルギー症状の事象、例えば咳および発熱などが何度も発生している。
３）包装の問題：トランスグルタミナーゼの粉末酵素調製物には、真空包装が使用される。しかしながら、粉末は吸引するときに装備に入り込みやすく、結果として相当な損失を引き起こす。酵素調製物の包装がきつく密封されておらず、空気の漏れが生じる場合、吸湿し、凝集して、酵素活性が低下すると予想される。窒素が充填された包装が使用される場合、窒素充填操作に時間がかかることから、埃の上昇を引き起こし、生産コストが大幅に増加する。
４）適用に関して：トランスグルタミナーゼは水に溶解させたときだけ機能できることが周知である。その生産および適用中に粉末調製物の副次的な溶解が生じるために、酵素が機能する時間が大幅に減少する。さらに、水の添加後に不完全な溶解が生じることが多く、一方で粉末を直接添加すると、不均一な分布が生じやすい。加えて、圧延および擦り合わせる操作を行うためにデバイスが使用される場合、粉末はデバイスに接着しやすく、粉末調製物の利用率を低下させ、適用に負の影響を及ぼす。それゆえに、トランスグルタミナーゼ粉末調製物の量を増加せざるを得ない。
５）酵素調製物の開発傾向：生物学的な酵素調製物の分野および様々な工業分野において、貯蔵、輸送および適用の問題が解決された液体剤形の様々な種類の酵素調製物がすでに利用可能であり、それらの生産および適用は、経済面および環境面で基準を満たすものであり、そのようなものとしては、例えば、液体セルラーゼ（中国特許公報第１０３９８１１６８号Ａ、中国特許公報第１０１３８１７１６号）、液体フィターゼ（中国特許公報第１０１６１７７４０号）、液体ペクチナーゼ（中国特許公報第１０４５３１６５３号Ａ）、液体リパーゼ（中国特許公報第１０３５２５７９７号Ａ）がある。しかしながら、世界中でも、長時間にわたり室温で安定して貯蔵できるトランスグルタミナーゼの液体調製物は、まだ商業的に利用できない。
[0005]中国特許公報第１０４０２４４０６号Ａは、トランスグルタミナーゼの液体酵素調製物のための調製方法を提供する。しかしながら、この方法は最大１８０日の低温での貯蔵しか達成せず、製品の貯蔵および輸送は凍結条件下で実行しなければならないため、この方法の商業的な使用は限定的であり、この方法の最終製品はまだない。現在、室温（２５℃、以下同様）で安定なトランスグルタミナーゼの液体酵素調製をどのように開発するかが、食品産業において現在緊急に解決する必要がある問題になっている。
[0006]本発明の１つの目的は、室温で６ヶ月貯蔵することができ、８０％を超える酵素活性を維持するトランスグルタミナーゼ（ＥＣ２．３．２．１３）の液体調製物を提供することである。
[0007]本発明の別の目的は、トランスグルタミナーゼ（ＥＣ２．３．２．１３）の液体調製物を調製するための方法を提供することであり、本方法によって調製されたトランスグルタミナーゼの液体調製物は、優れた安定性を有し、室温で６ヶ月貯蔵することができ、８０％を超える酵素活性を維持する。
[0008]本発明は主として、トランスグルタミナーゼの液体調製物の室温における貯蔵の困難さに関する技術的な問題を解決し、トランスグルタミナーゼの液体調製物は、商業的な生産および適用における必要条件を満たすことができる。
[0009]上記の目的を達成するためには、まず本発明の技術的な解決法を実験的かつ理論的に例証し、次いで要約する必要がある。詳細は以下の通りである。
まず第一に、室温におけるトランスグルタミナーゼ溶液の酵素活性の保存率（安定性）に対する、例えばｐＨ、水分活性、および酸化還元電位などの物理化学的因子の作用を調査することによって、室温におけるトランスグルタミナーゼの安定な貯蔵に最適なｐＨの範囲、水分活性、および酸化還元電位の範囲を決定した。
[0010]１．異なるｐＨ値におけるトランスグルタミナーゼ溶液の安定性
異なるｐＨ値でトランスグルタミナーゼ溶液を調製するために、濃縮された酵素溶液に、塩酸および水酸化ナトリウムを添加した。ろ過滅菌後、それらの酵素活性（安定性）を評価するために、トランスグルタミナーゼ溶液を室温で２日間維持した。表１に結果を示した。
異なるｐＨ値でトランスグルタミナーゼ溶液を調製するために、濃縮された酵素溶液に、塩酸および水酸化ナトリウムを添加した。ろ過滅菌後、それらの酵素活性（安定性）を評価するために、トランスグルタミナーゼ溶液を室温で２日間維持した。表１に結果を示した。
[0011]２．異なる水分活性におけるトランスグルタミナーゼ溶液の安定性
まず精製酵素溶液のｐＨを６．０に調整するのにｐＨ調節剤を使用し、酵素溶液を調節緩衝液で１０００ｕ／ｍｌに希釈した。１０ｍｌの希釈した酵素溶液に、グリセロールを異なる量（表２）で添加し、得られた溶液を緩衝液で１００ｍｌの体積に希釈した。ろ過滅菌後、異なる水分活性を有する液体酵素調製物を得た。室温で１０日間維持した後、液体酵素調製物の安定性を評価し、表２に結果を示した。
まず精製酵素溶液のｐＨを６．０に調整するのにｐＨ調節剤を使用し、酵素溶液を調節緩衝液で１０００ｕ／ｍｌに希釈した。１０ｍｌの希釈した酵素溶液に、グリセロールを異なる量（表２）で添加し、得られた溶液を緩衝液で１００ｍｌの体積に希釈した。ろ過滅菌後、異なる水分活性を有する液体酵素調製物を得た。室温で１０日間維持した後、液体酵素調製物の安定性を評価し、表２に結果を示した。
[0012]３．異なる酸化還元電位条件における室温におけるトランスグルタミナーゼ溶液の安定性
ｐＨ調節剤を添加して、精製され濃縮された酵素溶液のｐＨを６．０に調整した。次いで、酵素溶液の酸化還元電位を、水素化ホウ素ナトリウムおよび過酸化水素の酸化還元電位調節剤で異なる値に調整した。ろ過滅菌後、酵素溶液を、３０、６０、および９０日間室温で維持し、酵素溶液サンプルの酵素活性および保存率を決定した。表３に結果を示した。
ｐＨ調節剤を添加して、精製され濃縮された酵素溶液のｐＨを６．０に調整した。次いで、酵素溶液の酸化還元電位を、水素化ホウ素ナトリウムおよび過酸化水素の酸化還元電位調節剤で異なる値に調整した。ろ過滅菌後、酵素溶液を、３０、６０、および９０日間室温で維持し、酵素溶液サンプルの酵素活性および保存率を決定した。表３に結果を示した。
[0013]第二に、ｐＨ調節剤、水分活性調節剤、および酸化還元電位調節剤を、液体トランスグルタミナーゼの安定性に対するそれらの作用に関して評価し、それによって好適なｐＨ調節剤、水分活性調節剤、および酸化還元電位調節剤を選択した。
[0014]４．トランスグルタミナーゼ溶液の安定性に対する異なるｐＨ調節剤の作用
精製されたトランスグルタミナーゼ溶液のｐＨを、表１に列挙したような範囲に調整するために、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、クエン酸、リンゴ酸、フィチン酸、リン酸、硝酸、シュウ酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、重炭酸カリウム、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム、乳酸ナトリウム、乳酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、水道水、純水、および鉱水、または数種のｐＨ調節剤からなる緩衝系の１つを選択した。異なるｐＨ調節剤および異なるｐＨ調節剤のランダムな組合せを、室温における液体トランスグルタミナーゼの安定性に対するそれらの作用に関して調査した。表４−１、表４−２、および表４−３に結果を示した。
精製されたトランスグルタミナーゼ溶液のｐＨを、表１に列挙したような範囲に調整するために、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、クエン酸、リンゴ酸、フィチン酸、リン酸、硝酸、シュウ酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、重炭酸カリウム、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム、乳酸ナトリウム、乳酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、水道水、純水、および鉱水、または数種のｐＨ調節剤からなる緩衝系の１つを選択した。異なるｐＨ調節剤および異なるｐＨ調節剤のランダムな組合せを、室温における液体トランスグルタミナーゼの安定性に対するそれらの作用に関して調査した。表４−１、表４−２、および表４−３に結果を示した。
５．室温における液体トランスグルタミナーゼの安定性に対する異なる水分活性調節剤の作用およびそれらの量
トランスグルタミナーゼ溶液の安定性に対する異なる水分活性調節剤の作用を以下の通りに試験した：室温および滅菌条件下で、トランスグルタミナーゼ溶液に、ソルビトール、マルチトール、プロピレングリコール、グリセロール、キシリトール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４００、ＰＥＧ６００、ＰＥＧ８００、ＰＥＧ２００００、グルコース、トレハロース、スクロース、マルトース、イソマルトース、マルトデキストリン、およびキシリトールの１つまたはそれより多くを添加して、液体酵素調製物の水分活性を０．７５に調整し、液体酵素調製物を滅菌条件下で１０日間維持した。表５−１に結果を示した。
トランスグルタミナーゼ溶液の安定性に対する異なる水分活性調節剤の作用を以下の通りに試験した：室温および滅菌条件下で、トランスグルタミナーゼ溶液に、ソルビトール、マルチトール、プロピレングリコール、グリセロール、キシリトール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４００、ＰＥＧ６００、ＰＥＧ８００、ＰＥＧ２００００、グルコース、トレハロース、スクロース、マルトース、イソマルトース、マルトデキストリン、およびキシリトールの１つまたはそれより多くを添加して、液体酵素調製物の水分活性を０．７５に調整し、液体酵素調製物を滅菌条件下で１０日間維持した。表５−１に結果を示した。
表５−１に記載の数種の水分活性調節剤を、使用される量と室温における酵素活性の保存率との関係に関して試験した。液体酵素調製物を滅菌条件下でｐＨ６．０で維持し、次いで１０日後に室温における酵素活性の保存率（％）を決定した。表５−２に結果を示した。
表５−２中のデータから、最適なｐＨで、水分活性調節剤を３０％を超える量で使用した場合、上記の水分活性調節剤は、単独で、または組み合わせて、液体酵素調製の１０日後に、室温で８０％を超える酵素活性の保存率をもたらしたことが示された。水分活性調節剤を４０％を超える量で使用した場合、酵素活性の保存率は、８６％を超えた。水分活性調節剤の量が増加するにつれて、酵素活性の保存率も増加したが、それほどの増加ではなかった。生産コストを考慮すれば、水分活性調節剤の量は、好ましくは３０から７０％（ｗ／ｖ）の間である。
[0016]６．室温における液体トランスグルタミナーゼの安定性に対する異なる酸化還元電位調節剤の作用
好ましい酸化還元電位の範囲内において、本発明者らは、酸化還元電位調節剤をＧＢ２７６０−２０１４基準で特定された通りの最大の量で使用し、液体トランスグルタミナーゼの安定性に対する異なる酸化還元電位調節剤の作用を調査した。実験において、クエン酸緩衝液（ｐＨ６．０）を使用して、トランスグルタミナーゼ溶液のｐＨを６．０に調整し、グリセロールを添加して、水分活性を０．７３〜０．７５に調整した。
好ましい酸化還元電位の範囲内において、本発明者らは、酸化還元電位調節剤をＧＢ２７６０−２０１４基準で特定された通りの最大の量で使用し、液体トランスグルタミナーゼの安定性に対する異なる酸化還元電位調節剤の作用を調査した。実験において、クエン酸緩衝液（ｐＨ６．０）を使用して、トランスグルタミナーゼ溶液のｐＨを６．０に調整し、グリセロールを添加して、水分活性を０．７３〜０．７５に調整した。
[0017]表６および表７中のデータから、異なる酸化還元電位調節剤を使用して、液体トランスグルタミナーゼの酸化還元電位を５０ｍｖから−１５０ｍｖの間に調整した場合、酸化還元電位調節剤が添加された調製物の酵素活性の保存率は、室温で９０日貯蔵した後に８０％を超過したことが示され、これは、その調製物が商業的な価値を有することを示す。乳酸ナトリウムおよび乳酸カルシウムなどのいくつかの酸化還元電位調節剤を除いて、酸化還元電位調節剤を含む他の配合物は全て、室温で１８０日貯蔵した後に８０％を超える酵素活性の保存率を有していた。
[0020]次に、ＧＢ２５５９４−２０１０で求められるように、食品産業で使用するための酵素調製物は、微生物指標などの対応する衛生基準を満たす必要がある。
[0021]それゆえに、水分活性、食品保存剤、ならびにろ過滅菌および充填などの調製方法をさらに、トランスグルタミナーゼの液体調製物中のコロニー総数および有害微生物指標に対するそれらの作用に関して調査した。
[0022]７．室温で貯蔵された液体トランスグルタミナーゼのコロニー総数に対する水分活性調節剤の異なる濃度の作用
濃縮されたトランスグルタミナーゼ溶液のｐＨを６．０に調整し、１％コムギタンパク質加水分解産物（ｗ／ｖ）を添加して、酸化還元電位を調整し、グリセロールを異なる量％（ｗ／ｖ）で添加し、ｐＨ調節剤を添加して１００％の体積にして、異なる水分活性を有する液体酵素調製物を得た。液体酵素調製物を分配し、開放条件下で包装し、室温での貯蔵中における酵素調製物中のコロニー総数の変化を調査した。表８に結果を示した。
濃縮されたトランスグルタミナーゼ溶液のｐＨを６．０に調整し、１％コムギタンパク質加水分解産物（ｗ／ｖ）を添加して、酸化還元電位を調整し、グリセロールを異なる量％（ｗ／ｖ）で添加し、ｐＨ調節剤を添加して１００％の体積にして、異なる水分活性を有する液体酵素調製物を得た。液体酵素調製物を分配し、開放条件下で包装し、室温での貯蔵中における酵素調製物中のコロニー総数の変化を調査した。表８に結果を示した。
[0023]８．酵素溶液中の微生物に対する異なる食品保存剤の作用
トランスグルタミナーゼ溶液を、０．０２Ｍのクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）で１０００ｕ／ｍｌに希釈した。１００ｍｌの希釈した酵素溶液に、３００ｇのグリセロールおよび１０ｇのコムギタンパク質加水分解産物の電位調節剤、次いで０．０２Ｍのクエン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ６．０を添加し、最終体積を１０００ｍｌにした。ＧＢ２７６０−２０１４に列挙されているような食品保存剤を、表９で示されるように添加し、対照は、以下の通りとした：Ａ：保存剤なし、およびＢ：保存剤なし、ただし溶液を０．１〜０．２２μｍの膜を介してろ過し、滅菌条件下で充填した。開放条件下で、実験サンプルとしての酵素溶液を、ＰＥＴ不透明ボトルに充填し、室温に１８０日置いた。ＧＢ４７８９．２−２０１０国家食品安全性基準（National Food Safety Standard）「食品の微生物学的検査：好気性生菌数の測定（Food microbiological examination: Aerobic plate count）」、ＧＢ４７８９．３国家食品安全性基準「食品の微生物学的検査：大腸菌類の計数（Food microbiological examination：Enumeration of coliforms）」、ＧＢ／Ｔ４７８９．３８国家食品安全性基準「食品の微生物学的検査：大腸菌（エシェリキア・コリ）の計数（Food microbiological examination：Escherichia coli count）」、およびＧＢ４７８９．４−２０１０国家食品安全性基準「食品の微生物学的検査：サルモネラ菌の検査（Food microbiological examination： Salmonella）」に従って、微生物学的検査を行った。表９に結果を示した。
トランスグルタミナーゼ溶液を、０．０２Ｍのクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）で１０００ｕ／ｍｌに希釈した。１００ｍｌの希釈した酵素溶液に、３００ｇのグリセロールおよび１０ｇのコムギタンパク質加水分解産物の電位調節剤、次いで０．０２Ｍのクエン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ６．０を添加し、最終体積を１０００ｍｌにした。ＧＢ２７６０−２０１４に列挙されているような食品保存剤を、表９で示されるように添加し、対照は、以下の通りとした：Ａ：保存剤なし、およびＢ：保存剤なし、ただし溶液を０．１〜０．２２μｍの膜を介してろ過し、滅菌条件下で充填した。開放条件下で、実験サンプルとしての酵素溶液を、ＰＥＴ不透明ボトルに充填し、室温に１８０日置いた。ＧＢ４７８９．２−２０１０国家食品安全性基準（National Food Safety Standard）「食品の微生物学的検査：好気性生菌数の測定（Food microbiological examination: Aerobic plate count）」、ＧＢ４７８９．３国家食品安全性基準「食品の微生物学的検査：大腸菌類の計数（Food microbiological examination：Enumeration of coliforms）」、ＧＢ／Ｔ４７８９．３８国家食品安全性基準「食品の微生物学的検査：大腸菌（エシェリキア・コリ）の計数（Food microbiological examination：Escherichia coli count）」、およびＧＢ４７８９．４−２０１０国家食品安全性基準「食品の微生物学的検査：サルモネラ菌の検査（Food microbiological examination： Salmonella）」に従って、微生物学的検査を行った。表９に結果を示した。
[0024]９．室温における液体調製物の安定性に対する酵素活性の相違の作用
異なる量の精製され濃縮された酵素溶液に、５０％（ｗ／ｖ）グリセロール、および０．１％（ｗ／ｖ）重亜硫酸ナトリウムを添加し、１０００ｍｌの最終体積になるまでｐＨ調節剤を添加した。ろ過滅菌後、得られた溶液を室温に１８０日置き、次いで酵素活性を決定し、酵素活性の保存率（％）を比較した。
異なる量の精製され濃縮された酵素溶液に、５０％（ｗ／ｖ）グリセロール、および０．１％（ｗ／ｖ）重亜硫酸ナトリウムを添加し、１０００ｍｌの最終体積になるまでｐＨ調節剤を添加した。ろ過滅菌後、得られた溶液を室温に１８０日置き、次いで酵素活性を決定し、酵素活性の保存率（％）を比較した。
[0026]トランスグルタミナーゼ溶液の室温における酵素活性の保存率（安定性）に対する上述の物理化学的因子の作用を調査することによって、本発明者らは、トランスグルタミナーゼの液体調製物を室温で安定に維持するのに使用／適用することができる、最適なｐＨの範囲、ｐＨ調節剤の種類、水分活性の範囲および水分活性調節剤の量、酸化還元電位の範囲および酸化還元電位調節剤の種類を決定した。
[0027]さらに、生産中のろ過滅菌および充填または保存剤の添加によって、液体酵素調製物を安定して室温で貯蔵することができることを検証した。
[0028]酵素の安定性を相乗的に強化する目的が達成されるように酵素の安定性を強化するために数々の方法が組み合わせて使用される原理に基づいて、本発明は、生産中の中間体の指標およびパラメーターを制御することによって、室温におけるトランスグルタミナーゼの液体調製物の貯蔵に関する問題の解決に成功し、室温で優れた安定性を有し、長時間貯蔵でき、商業的な規模で生産できるトランスグルタミナーゼの液体調製物を開発するものである。本発明は、トランスグルタミナーゼに関する生産コストの低減、省エネルギー、環境保護、健康的な使用、および販売促進において非常に有意義である。
[0029]要約すると、本発明の技術的な解決法は、以下の通りである：
１０〜１０００ｕ／ｍｌの酵素活性を有するトランスグルタミナーゼＥＣ２．３．２．１３の液体酵素調製物であることを特徴とする、液体酵素調製物；
その成分およびそれらの量が、以下の通り：トランスグルタミナーゼの液体調製物の酵素活性が１０〜１０００ｕ／ｍｌであること、水分活性調節剤が３０〜８０ｗ／ｖ％の量で存在すること、酸化還元電位調節剤が０．００７５〜１ｗ／ｖ％の量で存在すること、食品保存剤が０〜０．１ｗ／ｖ％の量で存在すること、ｐＨ調節剤が１００％の最終体積になるように添加されること、であることを特徴とする、液体酵素調製物。
１０〜１０００ｕ／ｍｌの酵素活性を有するトランスグルタミナーゼＥＣ２．３．２．１３の液体酵素調製物であることを特徴とする、液体酵素調製物；
その成分およびそれらの量が、以下の通り：トランスグルタミナーゼの液体調製物の酵素活性が１０〜１０００ｕ／ｍｌであること、水分活性調節剤が３０〜８０ｗ／ｖ％の量で存在すること、酸化還元電位調節剤が０．００７５〜１ｗ／ｖ％の量で存在すること、食品保存剤が０〜０．１ｗ／ｖ％の量で存在すること、ｐＨ調節剤が１００％の最終体積になるように添加されること、であることを特徴とする、液体酵素調製物。
[0030]液体酵素調製物は、以下の物理化学的な特性：
１）５．０〜９．０のｐＨ；好ましくは５．０〜７．５のｐＨを有すること；
２）≦０．８９の水分活性Ａｗ；好ましくは０．６０〜０．８５の水分活性Ａｗを有すること；および
３）−４００ｍｖから＋５０ｍｖの酸化還元電位；好ましくは−４００ｍｖから０ｍｖの酸化還元電位を有すること
を示す。
１）５．０〜９．０のｐＨ；好ましくは５．０〜７．５のｐＨを有すること；
２）≦０．８９の水分活性Ａｗ；好ましくは０．６０〜０．８５の水分活性Ａｗを有すること；および
３）−４００ｍｖから＋５０ｍｖの酸化還元電位；好ましくは−４００ｍｖから０ｍｖの酸化還元電位を有すること
を示す。
ｐＨ調節剤は、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、クエン酸、リンゴ酸、フィチン酸、リン酸、硝酸、シュウ酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、重炭酸カリウム、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム、乳酸ナトリウム、乳酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、水道水、純水、および鉱水、または数種のｐＨ調節剤からなる緩衝系の１つであり、好ましくは、ｐＨ緩衝能力を有する調節剤、例えばリン酸、酢酸、乳酸もしくはクエン酸、またはそれらの塩の１つを含む緩衝液などである。
水分活性調節剤は、ソルビトール、マルチトール、プロピレングリコール、グリセロール、キシリトール、ＰＥＧ、トレハロース、スクロース、マルトース、イソマルトース、マルトデキストリン、キシリトール、およびマンニトールからなる群から選択され、好ましくは、ソルビトール、マルチトール、またはグリセロール、またはそれらの組合せを含む。量は、３０〜８０％（ｗ／ｖ）、好ましくは３０〜７０％（ｗ／ｖ）である。
酸化還元電位調節剤は、Ｌ−アスコルビン酸およびその塩、Ｌ−セリンおよびその塩、Ｌ−システインおよびその塩、還元グルタチオン、茶ポリフェノール、ダイズタンパク質加水分解産物、コムギタンパク質加水分解産物、カゼイン加水分解産物、キトサン加水分解産物、タケの葉の抗酸化物質、ローズマリー抽出物、カンゾウ抗酸化性抽出物、スーパーオキシドジスムターゼ、グルコースオキシダーゼ、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸カリウム、亜硫酸ナトリウム、次亜硫酸ナトリウム、フィチン酸などの１つまたはそれより多くを含み、０．００７５％〜１％の量で使用される。
食品保存剤は、ε−ポリリシン、ナタマイシン、リゾチーム、ナイシン、ソルビン酸カリウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、二酢酸ナトリウム、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ラウロイルアルギニンエチルＨＣｌ、メタ重亜硫酸カリウム、およびメタ重亜硫酸ナトリウムからなる群から選択され、一般的に、０％〜０．１％の量で添加される。
[0031]液体酵素調製物を調製するための方法であって、
１）酵素溶液の精製：未精製酵素溶液を、圧力ろ過、精密ろ過、および二次的な限外ろ過に供して、精製され濃縮された酵素溶液を得る工程；
２）混合：該精製され濃縮された酵素溶液、水分活性調節剤、および酸化還元電位調節剤の量を量り、存在する場合、食品保存剤を添加し、混合し；ｐＨ調節剤を、１００％の最終体積になるまで添加し；均一に混合した後、該液体酵素調製物を、以下のパラメーター：ｐＨ、水分活性Ａｗ、および酸化還元電位に関して試験し、５．０〜９．０のｐＨ、≦０．８９の水分活性Ａｗ、および−４００ｍｖから＋５０ｍｖの酸化還元電位に調整する工程；
３）細菌の除去：得られた混合物を、滅菌のために０．１〜０．２２μｍの膜を介してろ過し、続いて無菌充填する工程；
４）包装：該液体酵素調製物を、無菌充填または別の関連する液体包装プロセスによって包装する工程
を特徴とする、上記方法。
１）酵素溶液の精製：未精製酵素溶液を、圧力ろ過、精密ろ過、および二次的な限外ろ過に供して、精製され濃縮された酵素溶液を得る工程；
２）混合：該精製され濃縮された酵素溶液、水分活性調節剤、および酸化還元電位調節剤の量を量り、存在する場合、食品保存剤を添加し、混合し；ｐＨ調節剤を、１００％の最終体積になるまで添加し；均一に混合した後、該液体酵素調製物を、以下のパラメーター：ｐＨ、水分活性Ａｗ、および酸化還元電位に関して試験し、５．０〜９．０のｐＨ、≦０．８９の水分活性Ａｗ、および−４００ｍｖから＋５０ｍｖの酸化還元電位に調整する工程；
３）細菌の除去：得られた混合物を、滅菌のために０．１〜０．２２μｍの膜を介してろ過し、続いて無菌充填する工程；
４）包装：該液体酵素調製物を、無菌充填または別の関連する液体包装プロセスによって包装する工程
を特徴とする、上記方法。
[0032]本発明は初めて、８０％以上の酵素活性を有し、室温で６ヶ月貯蔵した後に溶液の形態で安定であり、市場での商品化における必要条件を満たし、生産に好都合であり、優れた適用効果を有し、冷凍またはコールドチェーン輸送の必要がないトランスグルタミナーゼの液体調製物を得た。
[0033]本発明の創造的な点：本発明は初めて、８０％を超える酵素活性の保存率を有し、室温で６ヶ月した貯蔵した後に溶液の形態で安定であり、市場での商品化における必要条件を満たし、生産に好都合であり、優れた適用効果を有し、冷凍またはコールドチェーン輸送の必要がないトランスグルタミナーゼの液体調製物を得た。本発明は、トランスグルタミナーゼの市場における適用および開発を促進することにおいて重要な意義を有する。
[0034]本発明は初めて、系中の酸化還元電位が、液体トランスグルタミナーゼを室温で安定に維持することにとって最も重要な因子であることを見出した。液体酵素調製物の酸化還元電位が（−４００ｍｖ）から＋５０ｍｖの間である場合、室温におけるトランスグルタミナーゼ溶液の安定性は、大幅に強化される。トランスグルタミナーゼは、触媒活性を有する高分子タンパク質として、酵素分子の安定性を維持するためにその３次元構造の安定性を最大限維持しなければならない。しかしながら、巨大分子内部の基およびフラグメントは、それらのアミノ酸配列の差のために異なる電荷特徴を有する。それらは、液体系において、典型的な両性電解質の特徴を呈する。３次元構造は、基およびフラグメント間のファンデルワールス力などの非共有結合によって維持される必要があるため、このような弱い電荷作用は、酵素分子が存在する液体系の酸化還元電位の影響を受けやすい。液体系の酸化還元電位が酵素分子の定常電位より高い場合、トランスグルタミナーゼ分子は、還元剤として、系中で酸化され、液体系の酸化還元電位が酵素分子の定常電位より低い場合、トランスグルタミナーゼ分子は、酸化剤として、系中で還元され、結果として３次元構造および酵素分子の活性の損失が生じる。本発明において、室温で安定なトランスグルタミナーゼの液体調製物は、液体酵素調製物の電位を、好適な酸化還元電位調節剤で上述の電位範囲内に調整することによって得られ、ここでトランスグルタミナーゼが存在する環境の酸化還元電位は、ちょうど酵素分子が安定な範囲内である。
[0035]それゆえに、本発明の配合には、例えば還元グルタチオン、Ｌ−システインおよびその塩酸塩、コムギタンパク質加水分解産物、キトサン加水分解産物、タケの葉の抗酸化物質、ローズマリー抽出物、カンゾウ抗酸化性抽出物、および亜硫酸塩などの酸化還元電位調節剤が初めて添加され、それにより室温におけるトランスグルタミナーゼの液体調製物の安定性が実質的に保証されることとなり、このような酸化還元電位調節剤は、配合中で重要である。
[0036]本発明の配合には、水分活性調節剤およびｐＨ調節剤も使用され、ここで緩衝液が、様々な添加剤の添加によって引き起こされる液体酵素調製物のｐＨ変化を効果的に緩衝し、液体トランスグルタミナーゼのｐＨを最適な範囲に維持することができる。水分活性調節剤の添加は、液体酵素調製物をより低い水分活性Ａｗに維持することができ、微生物増殖の阻害および酵素分子の立体構造的な安定性の強化にとっても好都合である。例えば、豊富なヒドロキシル単位を含む水分活性調節剤、例えばトレハロース、ＰＥＧ、およびソルビトールなどが本発明で使用され、これらは、トランスグルタミナーゼ分子の立体構造を大幅に安定化することができる。水分活性調節剤、酸化還元電位調節剤、およびｐＨ調節剤を組み合わせて使用することは、酵素の安定性を相乗的に維持して、最良の安定化作用を達成することができる。
[0037]本発明の調製プロセスにおいて、トランスグルタミナーゼの液体調製物は、混合によって調製される。まず第一に、濃縮されたトランスグルタミナーゼ溶液またはトランスグルタミナーゼ粉末を精製する。トランスグルタミナーゼそれ自体が約３８〜４５ＫＤａの分子量を有するため、まず、圧力ろ過、および精密ろ過（０．１〜１μｍの孔径を有する）を行う。この工程は、例えば細菌の固体や粒子などの沈殿物を除去することができる。次いで得られた溶液を、限外ろ過（分子量カットオフ：１００〜２００ＫＤａ）に供し、この工程は、微生物の大部分を除去し、微生物による腐敗を軽減し、酵素への微生物の作用を低減することができる。最後に、限外ろ過（分子量カットオフ：１０〜３０ＫＤａ）を行って、精製され濃縮された酵素溶液を得る。次に、水分活性調節剤、酸化還元電位調節剤、および食品保存剤を配合に従って添加し、ｐＨ調節剤を使用してｐＨを調整する。均一に混合した後、関連するパラメーターを決定する。調製物の物理化学的な特性を満たすように、調節剤を添加することによってわずかな調整を行う。混合された溶液をさらに膜ろ過に供して、溶液全体が無菌環境または細菌がほとんどない環境中に置かれるように、細菌を除去し、続いて充填する。その間、貯蔵および輸送中における液体酵素調製物中での細菌の成長を防ぐために、食品保存剤を任意選択で使用してもよい。本発明に係る配合および調製方法は、トランスグルタミナーゼの熱安定性を大幅に強化して、液体酵素調製物の貯蔵寿命を延長することができる。
[0038]本発明に係るトランスグルタミナーゼの液体調製物の配合に使用される成分は安価であり、容易に得ることができ、それらの食品グレードの供給源が利用可能である。トランスグルタミナーゼの液体調製物の配合も、食品安全性および食品添加剤の国家基準を満たす。液体酵素調製物を調製するためのプロセスは、科学的かつ合理的であり、その生産は高効率である。これは、プロセスおよび生産コストに関して、凍結乾燥による粉末酵素調製物の調製プロセスと比較して大幅に簡易化される。酵素活性の損失はほとんどなく、生産効率は大幅に強化される。これは、中国で促進されているような、省エネルギー、環境保護、酵素の健康的な使用、および地球にやさしい経済性の概念と一致する。
[0040]以下の実施例は、本発明のより優れた理解のために提供され、本発明で特許請求された範囲としては、これらに限定されないが、以下の実施例に記載された内容が挙げられ、当業界における従来の知見に従ってなされたあらゆる改変および改善は、本発明で特許請求された範囲内である。図１にスキームを示す。
[0041]実施例１
未精製のトランスグルタミナーゼ溶液を、微生物学的な発酵によって調製した。この発酵は、特許（欧州特許公報第０３７９６０６号Ｂ１）を参照することにより行うことができた。元の株としてストレプトマイセス・モバラエンシス（Streptomyces mobaraensis）を使用し、良好に成長している状況下で数個の細菌コロニーを接種ループでピックアップし、斜面培養培地に植菌し、３０℃の一定温度で７日間培養した。活性化した株をさらに種培養培地に植菌し、３０℃で４８時間培養し、１０％の接種量で発酵培地に添加し、３０℃で４８〜７２時間培養し、それによって未精製のトランスグルタミナーゼ溶液を得た。以下の工程：
１）圧力ろ過：１μｍの孔径、０．２０ＭＰａの作動圧力、および２０℃の温度で、ろ液を得る工程；
２）精密ろ過：０．２５μｍの孔径、０．２５ＭＰａの作動圧力、および２０℃の温度で、ろ液を得る工程；
３）限外ろ過：１００ＫＤａの分子量カットオフ、０．３０ＭＰａの作動圧力、および２０℃の温度で、ろ液を得る工程；
４）限外ろ過：１０ＫＤａの分子量カットオフ、０．３０ＭＰａの作動圧力、および２０℃の温度で、残留物（すなわち精製され濃縮された酵素溶液）を維持する工程
により、未精製酵素溶液を精製し、濃縮した。
未精製のトランスグルタミナーゼ溶液を、微生物学的な発酵によって調製した。この発酵は、特許（欧州特許公報第０３７９６０６号Ｂ１）を参照することにより行うことができた。元の株としてストレプトマイセス・モバラエンシス（Streptomyces mobaraensis）を使用し、良好に成長している状況下で数個の細菌コロニーを接種ループでピックアップし、斜面培養培地に植菌し、３０℃の一定温度で７日間培養した。活性化した株をさらに種培養培地に植菌し、３０℃で４８時間培養し、１０％の接種量で発酵培地に添加し、３０℃で４８〜７２時間培養し、それによって未精製のトランスグルタミナーゼ溶液を得た。以下の工程：
１）圧力ろ過：１μｍの孔径、０．２０ＭＰａの作動圧力、および２０℃の温度で、ろ液を得る工程；
２）精密ろ過：０．２５μｍの孔径、０．２５ＭＰａの作動圧力、および２０℃の温度で、ろ液を得る工程；
３）限外ろ過：１００ＫＤａの分子量カットオフ、０．３０ＭＰａの作動圧力、および２０℃の温度で、ろ液を得る工程；
４）限外ろ過：１０ＫＤａの分子量カットオフ、０．３０ＭＰａの作動圧力、および２０℃の温度で、残留物（すなわち精製され濃縮された酵素溶液）を維持する工程
により、未精製酵素溶液を精製し、濃縮した。
[0042]酵素活性を、ヒドロキサム酸方法（Peng Can、Stabilization Study of Microbial Transglutaminase [D]. 華東師範大学（East China Normal University）、2007）によって決定し（以下同様）、２５００ｕ／ｍｌの酵素活性を有する精製され濃縮されたトランスグルタミナーゼ溶液を得た。測定により、この溶液は、５.８０のｐＨ、０.９５の水分活性、および６０mvの酸化還元電位を有していた。この溶液を後の使用のために維持する。
［００４３］実施例２
酵素粉末を溶解させることによって、未精製のトランスグルタミナーゼ溶液を調製した。特定の量の純水を量り、攪拌器を備えた容器に入れた。５０００〜８０００ｕ／ｍｌの酵素活性を有するトランスグルタミナーゼ粉末（上海青瑞食品科技有限公司によって生産された酵素粉末）を、溶解した酵素溶液が特定の濃度で得られるように、攪拌しながらゆっくり添加した。精密ろ過によって細菌を除去して、２５００ｕ／ｍｌの酵素活性を有する透明なトランスグルタミナーゼ溶液、すなわち２５００ｕ／ｍｌの酵素活性を有する精製され濃縮されたトランスグルタミナーゼ溶液を得た。測定したところ、これは、６．３０のｐＨ、０．９５の水分活性、および５８ｍｖの酸化還元電位を有していた。この溶液を後の使用のために維持する。
酵素粉末を溶解させることによって、未精製のトランスグルタミナーゼ溶液を調製した。特定の量の純水を量り、攪拌器を備えた容器に入れた。５０００〜８０００ｕ／ｍｌの酵素活性を有するトランスグルタミナーゼ粉末（上海青瑞食品科技有限公司によって生産された酵素粉末）を、溶解した酵素溶液が特定の濃度で得られるように、攪拌しながらゆっくり添加した。精密ろ過によって細菌を除去して、２５００ｕ／ｍｌの酵素活性を有する透明なトランスグルタミナーゼ溶液、すなわち２５００ｕ／ｍｌの酵素活性を有する精製され濃縮されたトランスグルタミナーゼ溶液を得た。測定したところ、これは、６．３０のｐＨ、０．９５の水分活性、および５８ｍｖの酸化還元電位を有していた。この溶液を後の使用のために維持する。
[0044]実施例３
液体トランスグルタミナーゼを調製するための方法：総体積１０００ｍｌの液体酵素を以下の通りに調製し、表１１に従って原材料を秤量した。
液体トランスグルタミナーゼを調製するための方法：総体積１０００ｍｌの液体酵素を以下の通りに調製し、表１１に従って原材料を秤量した。
[0045]実施例４
実施例２で調製された精製され濃縮されたトランスグルタミナーゼ溶液を使用して、トランスグルタミナーゼの液体調製物を表１２に記載の配合に従って調製した。均一に混合した後、ｐＨ、水分活性、酸化還元電位、および初期の酵素活性を、実施例３に記載された通りの関連方法に従って測定した。次いでトランスグルタミナーゼの液体調製物を、０．１μｍ滅菌膜を介してろ過し、分配し、滅菌条件下でＰＥＴボトル中に包装した。室温で１８０日間貯蔵した後、トランスグルタミナーゼの液体調製物の外観を観察し、エンドポイントの酵素活性、微生物指標などを、実施例３に記載された通りの関連方法に従って測定し、酵素活性の保存率を計算した。
実施例２で調製された精製され濃縮されたトランスグルタミナーゼ溶液を使用して、トランスグルタミナーゼの液体調製物を表１２に記載の配合に従って調製した。均一に混合した後、ｐＨ、水分活性、酸化還元電位、および初期の酵素活性を、実施例３に記載された通りの関連方法に従って測定した。次いでトランスグルタミナーゼの液体調製物を、０．１μｍ滅菌膜を介してろ過し、分配し、滅菌条件下でＰＥＴボトル中に包装した。室温で１８０日間貯蔵した後、トランスグルタミナーゼの液体調製物の外観を観察し、エンドポイントの酵素活性、微生物指標などを、実施例３に記載された通りの関連方法に従って測定し、酵素活性の保存率を計算した。
[0047]実施例５
[0048]実施例６
[0049]実施例７
[0050]実施例８
表１６に列挙した通りの成分を均一に混合して、トランスグルタミナーゼの液体調製物を調製し、関連パラメーターを測定した。トランスグルタミナーゼの液体調製物を、開放条件下で１ＬのＰＥＴボトルに充填した。室温で１８０日間貯蔵した後、液体酵素調製物の外観を観察し、酵素活性および微生物指標を測定した。結果から、室温で１８０日間貯蔵した後、酵素活性の保存率が８８％に達し、微生物指標は、必要条件を満たしていたことが示され、したがって、電位調節剤および水分活性調節剤が組み合わされた成分であり、保存剤が添加された、安定なトランスグルタミナーゼの液体調製物が得られた。
表１６に列挙した通りの成分を均一に混合して、トランスグルタミナーゼの液体調製物を調製し、関連パラメーターを測定した。トランスグルタミナーゼの液体調製物を、開放条件下で１ＬのＰＥＴボトルに充填した。室温で１８０日間貯蔵した後、液体酵素調製物の外観を観察し、酵素活性および微生物指標を測定した。結果から、室温で１８０日間貯蔵した後、酵素活性の保存率が８８％に達し、微生物指標は、必要条件を満たしていたことが示され、したがって、電位調節剤および水分活性調節剤が組み合わされた成分であり、保存剤が添加された、安定なトランスグルタミナーゼの液体調製物が得られた。
[0053]実施例１０
表１８に列挙した通りの成分を均一に混合して、トランスグルタミナーゼの液体調製物を調製し、関連パラメーターを測定した。トランスグルタミナーゼの液体調製物を、開放条件下で１ＬのＰＥＴボトルに充填した。室温で１８０日間貯蔵した後、液体酵素調製物の外観を観察し、酵素活性および微生物指標を測定した。結果から、室温で１８０日間貯蔵した後、酵素活性の保存率が８１．５％に達し、微生物指標は、必要条件を満たしていたことが示され、したがって１０ｕ／ｍｌの酵素活性および５．５のｐＨを有する安定なトランスグルタミナーゼの液体調製物が得られた。
表１８に列挙した通りの成分を均一に混合して、トランスグルタミナーゼの液体調製物を調製し、関連パラメーターを測定した。トランスグルタミナーゼの液体調製物を、開放条件下で１ＬのＰＥＴボトルに充填した。室温で１８０日間貯蔵した後、液体酵素調製物の外観を観察し、酵素活性および微生物指標を測定した。結果から、室温で１８０日間貯蔵した後、酵素活性の保存率が８１．５％に達し、微生物指標は、必要条件を満たしていたことが示され、したがって１０ｕ／ｍｌの酵素活性および５．５のｐＨを有する安定なトランスグルタミナーゼの液体調製物が得られた。
表１９に列挙した通りの成分を均一に混合して、トランスグルタミナーゼの液体調製物を調製し、関連パラメーターを測定した。トランスグルタミナーゼの液体調製物を、開放条件下で１ＬのＰＥＴボトルに充填した。室温で１８０日間貯蔵した後、液体酵素調製物の外観を観察し、酵素活性および微生物指標を測定した。結果から、室温で１８０日間貯蔵した後、酵素活性の保存率が８１％に達し、微生物指標は、必要条件を満たしていることが示され、したがって９９．８ｕ／ｍｌの酵素活性および８．０のｐＨを有する安定なトランスグルタミナーゼの液体調製物が得られた。
表２０に列挙した通りの成分を均一に混合して、トランスグルタミナーゼの液体調製物を調製し、関連パラメーターを測定した。トランスグルタミナーゼの液体調製物を、開放条件下で１ＬのＰＥＴボトルに充填した。室温で１８０日間貯蔵した後、液体酵素調製物の外観を観察し、酵素活性および微生物指標を測定した。結果から、室温で１８０日間貯蔵した後、酵素活性の保存率が８１％に達し、微生物指標は、必要条件を満たしていることが示され、したがって１００ｕ／ｍｌの酵素活性、６．０のｐＨおよび−４００ｍｖの酸化還元電位を有する安定なトランスグルタミナーゼの液体調製物が得られた。調製物中の水素化ホウ素ナトリウムは食品衛生法規の必要条件を満たさないため、この配合の液体酵素調製物は、科学的な研究または食品以外への添加の目的にのみ適用することができる。
表２１に列挙した通りの成分を均一に混合して、トランスグルタミナーゼの液体調製物を調製し、関連パラメーターを測定した。トランスグルタミナーゼの液体調製物を、開放条件下で１ＬのＰＥＴボトルに充填した。室温で１８０日間貯蔵した後、液体酵素調製物の外観を観察し、酵素活性および微生物指標を測定した。結果から、室温で１８０日間貯蔵した後、酵素活性の保存率が８２％に達し、微生物指標は、必要条件を満たしていることが示され、したがって５０ｕ／ｍｌの酵素活性、６．０のｐＨおよび５０ｍｖの酸化還元電位を有する安定なトランスグルタミナーゼの液体調製物が得られた。
[0059]実施例１５
表２３に列挙した通りの成分を均一に混合して、トランスグルタミナーゼの液体調製物を調製し、関連パラメーターを測定した。トランスグルタミナーゼの液体調製物を、開放条件下で１ＬのＰＥＴボトルに充填した。室温で１８０日間貯蔵した後、液体酵素調製物の外観を観察し、酵素活性および微生物指標を測定した。結果から、室温で１８０日間貯蔵した後、酵素活性の保存率が８９％に達し、微生物指標は、必要条件を満たしていることが示され、したがって５０ｕ／ｍｌの酵素活性、０．６１の水分活性、および−１４０ｍｖの酸化還元電位を有する安定なトランスグルタミナーゼの液体調製物が得られた。配合中に保存剤は含まれていなかった。
表２３に列挙した通りの成分を均一に混合して、トランスグルタミナーゼの液体調製物を調製し、関連パラメーターを測定した。トランスグルタミナーゼの液体調製物を、開放条件下で１ＬのＰＥＴボトルに充填した。室温で１８０日間貯蔵した後、液体酵素調製物の外観を観察し、酵素活性および微生物指標を測定した。結果から、室温で１８０日間貯蔵した後、酵素活性の保存率が８９％に達し、微生物指標は、必要条件を満たしていることが示され、したがって５０ｕ／ｍｌの酵素活性、０．６１の水分活性、および−１４０ｍｖの酸化還元電位を有する安定なトランスグルタミナーゼの液体調製物が得られた。配合中に保存剤は含まれていなかった。
実施例１５の配合中の成分を均一に混合して、トランスグルタミナーゼの液体調製物を調製し、関連パラメーターを測定した。トランスグルタミナーゼの液体調製物を、開放条件下で１Ｌの不透明ＰＥＴボトルに充填した。室温で１８０日間貯蔵した後、液体酵素調製物の外観を観察し、酵素活性および微生物指標を測定した。結果から、室温で１８０日間貯蔵した後、酵素活性の保存率が８８％に達し、微生物指標は、必要条件を満たしていることが示され、したがって１０１ｕ／ｍｌの酵素活性、０．８５の水分活性、および−３８ｍｖの酸化還元電位を有する安定なトランスグルタミナーゼの液体調製物が得られた。酵素調製物のための包装は、不透明な材料であり、酵素の安定性に明らかな作用はなかった。
[0062]実施例１７
室温で１８０日間貯蔵した後、実施例７で調製されたトランスグルタミナーゼの液体調製物を測定したところ、９８．７９ｕ／ｍｌの酵素活性を有していた。これをソーセージの生産に使用した。表２４−１に特定の配合およびプロセスを示す。粉末形態の市販のトランスグルタミナーゼ調製物（済南青瑞生物科技有限公司製）を対照として使用した。これを測定したところ、使用前に１００ｕ／ｇの酵素活性を有していた。
室温で１８０日間貯蔵した後、実施例７で調製されたトランスグルタミナーゼの液体調製物を測定したところ、９８．７９ｕ／ｍｌの酵素活性を有していた。これをソーセージの生産に使用した。表２４−１に特定の配合およびプロセスを示す。粉末形態の市販のトランスグルタミナーゼ調製物（済南青瑞生物科技有限公司製）を対照として使用した。これを測定したところ、使用前に１００ｕ／ｇの酵素活性を有していた。
[0065]実施例１８
実施例５で調製された液体トランスグルタミナーゼ産物（９９．５ｕ／ｍＬ）を、千頁豆腐（Chiba tofu）の生産に使用した。市販の粉末酵素調製物、製品Ａ（トランスグルタミナーゼ、製造元：泰興市東聖食品科技有限公司、タイプＴＧ−ＴＩ、バッチ番号：Ｂ２０１５０９２６、名目上の酵素活性：１１６ｕ／ｇ、本発明者らの実験室で測定された実際の酵素活性：１０８ｕ／ｇ）、および製品Ｂ（トランスグルタミナーゼ、製造元：泰興市一鳴生物製品有限公司、タイプＴＧ−Ｂ、バッチ番号：２０１５０８２４、名目上の酵素活性：１１０ｕ／ｇ、本発明者らの実験室で測定された実際の酵素活性：１００ｕ／ｇ）を、対照として使用した。ダイズタンパク質単離物の製造元は、山東禹王集団（Shandong Yuwang Group）であり；キャッサバ変性デンプンは、ローズ・ブランド（Rose Brand）のものであり；ダイズ油は、ＣＯＦＣＯ社によって提供され；Ｉ＋Ｇおよび食塩は、麦徳龍超市（METRO supermarket）から購入し；対照Ｃは、済南青瑞生物科技有限公司によって生産され、測定された実際の酵素活性が１１０ｕ／ｍｌの粉末酵素調製物バイオボンド（Biobond）ＴＧ−Ｉであった。千頁豆腐を、表２５−１で示した通りの配合およびプロセスに従って調製した。
実施例５で調製された液体トランスグルタミナーゼ産物（９９．５ｕ／ｍＬ）を、千頁豆腐（Chiba tofu）の生産に使用した。市販の粉末酵素調製物、製品Ａ（トランスグルタミナーゼ、製造元：泰興市東聖食品科技有限公司、タイプＴＧ−ＴＩ、バッチ番号：Ｂ２０１５０９２６、名目上の酵素活性：１１６ｕ／ｇ、本発明者らの実験室で測定された実際の酵素活性：１０８ｕ／ｇ）、および製品Ｂ（トランスグルタミナーゼ、製造元：泰興市一鳴生物製品有限公司、タイプＴＧ−Ｂ、バッチ番号：２０１５０８２４、名目上の酵素活性：１１０ｕ／ｇ、本発明者らの実験室で測定された実際の酵素活性：１００ｕ／ｇ）を、対照として使用した。ダイズタンパク質単離物の製造元は、山東禹王集団（Shandong Yuwang Group）であり；キャッサバ変性デンプンは、ローズ・ブランド（Rose Brand）のものであり；ダイズ油は、ＣＯＦＣＯ社によって提供され；Ｉ＋Ｇおよび食塩は、麦徳龍超市（METRO supermarket）から購入し；対照Ｃは、済南青瑞生物科技有限公司によって生産され、測定された実際の酵素活性が１１０ｕ／ｍｌの粉末酵素調製物バイオボンド（Biobond）ＴＧ−Ｉであった。千頁豆腐を、表２５−１で示した通りの配合およびプロセスに従って調製した。
[0067]上記の実施例は単に、本発明のいくつかの好ましい実施態様および適用の実施例であり、本発明はそれらに限定されない。本発明が関する技術分野における当業者であれば、本発明に様々な変更および改変を容易になすことができる。本発明の概念および原理内の本発明へのあらゆる修正、均等な置換、方法の改善などが、本発明の保護範囲に包含される。
本明細書は以下の発明の開示を包含する：
［１］１０〜１０００ｕ／ｍｌの酵素活性を有するトランスグルタミナーゼＥＣ２．３．２．１３の液体酵素調製物であることを特徴とする、液体酵素調製物。
［２］その成分およびそれらの量が、以下の通り：トランスグルタミナーゼの液体調製物の酵素活性が１０〜１０００ｕ／ｍｌであること、水分活性調節剤が３０〜８０ｗ／ｖ％の量で存在すること、酸化還元電位調節剤が０．００７５〜１ｗ／ｖ％の量で存在すること、食品保存剤が０〜０．１ｗ／ｖ％の量で存在すること、ｐＨ調節剤が１００％の最終体積になるように添加されること、であることを特徴とする、［１］に記載の液体酵素調製物。
［３］以下の物理化学的な特性：
１）５．０〜９．０のｐＨを有すること；
２）≦０．８９の水分活性Ａｗを有すること；および
３）−４００ｍｖから＋５０ｍｖの酸化還元電位を有すること
を示すことを特徴とする、［１］または［２］に記載の液体酵素調製物。
［４］好ましくは、以下の物理化学的な特性：
１）５．０〜７．５のｐＨを有すること；
２）０．６〜０．８５の水分活性Ａｗを有すること；および
３）−４００ｍｖから０ｍｖの酸化還元電位を有すること
を示すことを特徴とする、［３］に記載の液体酵素調製物。
［５］前記水分活性調節剤が、ソルビトール、マルチトール、プロピレングリコール、グリセロール、キシリトール、ポリエチレングリコール、トレハロース、スクロース、マルトース、イソマルトース、マルトデキストリン、キシリトール、およびマンニトールからなる群から選択されることを特徴とする、［２］に記載の液体酵素調製物。
［６］前記酸化還元電位調節剤が、Ｌ−アスコルビン酸およびその塩、Ｌ−セリンおよびその塩、Ｌ−システインおよびその塩、還元グルタチオン、茶ポリフェノール、ダイズタンパク質加水分解産物、コムギタンパク質加水分解産物、カゼイン加水分解産物、キトサン加水分解産物、タケの葉の抗酸化物質、ローズマリー抽出物、カンゾウ抗酸化性抽出物、スーパーオキシドジスムターゼ、グルコースオキシダーゼ、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸カリウム、亜硫酸ナトリウム、次亜硫酸ナトリウム、フィチン酸などの１つまたはそれより多くを含むことを特徴とする、［２］に記載の液体酵素調製物。
［７］前記食品添加剤が、ε−ポリリシン、ナタマイシン、リゾチーム、ナイシン、ソルビン酸カリウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、二酢酸ナトリウム、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ラウロイルアルギニンエチルＨＣｌ、メタ重亜硫酸カリウム、およびメタ重亜硫酸ナトリウムからなる群から選択されることを特徴とする、［２］に記載の液体酵素調製物。
［８］前記ｐＨ調節剤が、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、クエン酸、リンゴ酸、フィチン酸、リン酸、硝酸、シュウ酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、重炭酸カリウム、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム、乳酸ナトリウム、乳酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、水道水、純水、および鉱水、または数種のｐＨ調節剤からなる緩衝系の１つであることを特徴とする、［２］に記載の液体酵素調製物。
［９］前記水分活性調節剤が、ソルビトール、マルチトール、およびグリセロールの１つまたはそれより多くを含み、前記ｐＨ調節剤が、リン酸、酢酸、乳酸もしくはクエン酸、またはそれらの塩を含む緩衝液であることを特徴とする、［２］に記載の液体酵素調製物。
［１０］［１］〜［９］のいずれかに記載の液体酵素調製物を調製するための方法であって、
１）酵素溶液の精製：未精製酵素溶液を、圧力ろ過、精密ろ過、および二次的な限外ろ過に供して、精製され濃縮された酵素溶液を得る工程；
２）混合：該精製され濃縮された酵素溶液、水分活性調節剤、および酸化還元電位調節剤の量を量り、存在する場合、食品保存剤を添加し、混合し；ｐＨ調節剤を、１００％の最終体積になるまで添加し；均一に混合した後、該液体酵素調製物を、以下のパラメーター：ｐＨ、水分活性Ａｗ、および酸化還元電位に関して試験し、５．０〜９．０のｐＨ、≦０．８９の水分活性Ａｗ、および−４００ｍｖから５０ｍｖの酸化還元電位に調整する工程；
（３）細菌の除去：得られた混合物を、滅菌のために０．１〜０．２２μｍの膜を介してろ過し、続いて無菌充填する工程；
（４）包装：該液体酵素調製物を、無菌充填または別の関連する液体包装プロセスによって包装する工程
を特徴とする、上記方法。
本明細書は以下の発明の開示を包含する：
［１］１０〜１０００ｕ／ｍｌの酵素活性を有するトランスグルタミナーゼＥＣ２．３．２．１３の液体酵素調製物であることを特徴とする、液体酵素調製物。
［２］その成分およびそれらの量が、以下の通り：トランスグルタミナーゼの液体調製物の酵素活性が１０〜１０００ｕ／ｍｌであること、水分活性調節剤が３０〜８０ｗ／ｖ％の量で存在すること、酸化還元電位調節剤が０．００７５〜１ｗ／ｖ％の量で存在すること、食品保存剤が０〜０．１ｗ／ｖ％の量で存在すること、ｐＨ調節剤が１００％の最終体積になるように添加されること、であることを特徴とする、［１］に記載の液体酵素調製物。
［３］以下の物理化学的な特性：
１）５．０〜９．０のｐＨを有すること；
２）≦０．８９の水分活性Ａｗを有すること；および
３）−４００ｍｖから＋５０ｍｖの酸化還元電位を有すること
を示すことを特徴とする、［１］または［２］に記載の液体酵素調製物。
［４］好ましくは、以下の物理化学的な特性：
１）５．０〜７．５のｐＨを有すること；
２）０．６〜０．８５の水分活性Ａｗを有すること；および
３）−４００ｍｖから０ｍｖの酸化還元電位を有すること
を示すことを特徴とする、［３］に記載の液体酵素調製物。
［５］前記水分活性調節剤が、ソルビトール、マルチトール、プロピレングリコール、グリセロール、キシリトール、ポリエチレングリコール、トレハロース、スクロース、マルトース、イソマルトース、マルトデキストリン、キシリトール、およびマンニトールからなる群から選択されることを特徴とする、［２］に記載の液体酵素調製物。
［６］前記酸化還元電位調節剤が、Ｌ−アスコルビン酸およびその塩、Ｌ−セリンおよびその塩、Ｌ−システインおよびその塩、還元グルタチオン、茶ポリフェノール、ダイズタンパク質加水分解産物、コムギタンパク質加水分解産物、カゼイン加水分解産物、キトサン加水分解産物、タケの葉の抗酸化物質、ローズマリー抽出物、カンゾウ抗酸化性抽出物、スーパーオキシドジスムターゼ、グルコースオキシダーゼ、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸カリウム、亜硫酸ナトリウム、次亜硫酸ナトリウム、フィチン酸などの１つまたはそれより多くを含むことを特徴とする、［２］に記載の液体酵素調製物。
［７］前記食品添加剤が、ε−ポリリシン、ナタマイシン、リゾチーム、ナイシン、ソルビン酸カリウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、二酢酸ナトリウム、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ラウロイルアルギニンエチルＨＣｌ、メタ重亜硫酸カリウム、およびメタ重亜硫酸ナトリウムからなる群から選択されることを特徴とする、［２］に記載の液体酵素調製物。
［８］前記ｐＨ調節剤が、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、クエン酸、リンゴ酸、フィチン酸、リン酸、硝酸、シュウ酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、重炭酸カリウム、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム、乳酸ナトリウム、乳酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、水道水、純水、および鉱水、または数種のｐＨ調節剤からなる緩衝系の１つであることを特徴とする、［２］に記載の液体酵素調製物。
［９］前記水分活性調節剤が、ソルビトール、マルチトール、およびグリセロールの１つまたはそれより多くを含み、前記ｐＨ調節剤が、リン酸、酢酸、乳酸もしくはクエン酸、またはそれらの塩を含む緩衝液であることを特徴とする、［２］に記載の液体酵素調製物。
［１０］［１］〜［９］のいずれかに記載の液体酵素調製物を調製するための方法であって、
１）酵素溶液の精製：未精製酵素溶液を、圧力ろ過、精密ろ過、および二次的な限外ろ過に供して、精製され濃縮された酵素溶液を得る工程；
２）混合：該精製され濃縮された酵素溶液、水分活性調節剤、および酸化還元電位調節剤の量を量り、存在する場合、食品保存剤を添加し、混合し；ｐＨ調節剤を、１００％の最終体積になるまで添加し；均一に混合した後、該液体酵素調製物を、以下のパラメーター：ｐＨ、水分活性Ａｗ、および酸化還元電位に関して試験し、５．０〜９．０のｐＨ、≦０．８９の水分活性Ａｗ、および−４００ｍｖから５０ｍｖの酸化還元電位に調整する工程；
（３）細菌の除去：得られた混合物を、滅菌のために０．１〜０．２２μｍの膜を介してろ過し、続いて無菌充填する工程；
（４）包装：該液体酵素調製物を、無菌充填または別の関連する液体包装プロセスによって包装する工程
を特徴とする、上記方法。
Claims (7)
- １０〜１０００ｕ／ｍｌの酵素活性を有するトランスグルタミナーゼＥＣ２．３．２．１３と、
Ｌ−アスコルビン酸およびその塩、Ｌ−セリンおよびその塩、Ｌ−システインおよびその塩、還元グルタチオン、茶ポリフェノール、ダイズタンパク質加水分解産物、コムギタンパク質加水分解産物、カゼイン加水分解産物、キトサン加水分解産物、タケの葉の抗酸化物質、ローズマリー抽出物、カンゾウ抗酸化性抽出物、スーパーオキシドジスムターゼ、グルコースオキシダーゼ、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸カリウム、亜硫酸ナトリウム、次亜硫酸ナトリウム、フィチン酸からなる群から選択される一つ以上であり、０．００７５〜１ｗ／ｖ％の量で存在する酸化還元電位調節剤と、
ソルビトール、マルチトール、プロピレングリコール、グリセロール、キシリトール、ポリエチレングリコール、トレハロース、スクロース、マルトース、イソマルトース、マルトデキストリン、キシリトール、およびマンニトールからなる群から選択される一つ以上であり、３０〜８０ｗ／ｖ％の量で存在する水分活性調節剤と、
を含み、
−４００ｍｖから＋５ｍｖの酸化還元電位と、
≦０．８９の水分活性Ａｗと、
５．０〜９．０のｐＨと、
を有する、
ことを特徴とする、液体酵素調製物。 - その成分およびそれらの量が、以下の通り：
トランスグルタミナーゼの液体調製物の酵素活性が１０〜１０００ｕ／ｍｌであること、
食品保存剤が０〜０．１ｗ／ｖ％の量で存在すること、
ｐＨ調節剤が１００％の最終体積になるように添加されること、
であることを特徴とする、請求項１に記載の液体酵素調製物。 - 以下の物理化学的な特性：
（１）５．０〜７．５のｐＨを有すること；
（２）０．６〜０．８５の水分活性Ａｗを有すること；および
（３）−４００ｍｖから０ｍｖの酸化還元電位を有すること
を示すことを特徴とする、請求項１に記載の液体酵素調製物。 - 前記食品保存剤が、ε−ポリリシン、ナタマイシン、リゾチーム、ナイシン、ソルビン酸カリウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、二酢酸ナトリウム、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ラウロイルアルギニンエチルＨＣｌ、メタ重亜硫酸カリウム、およびメタ重亜硫酸ナトリウムからなる群から選択されることを特徴とする、請求項２に記載の液体酵素調製物。
- 前記ｐＨ調節剤が、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、クエン酸、リンゴ酸、フィチン酸、リン酸、硝酸、シュウ酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、重炭酸カリウム、クエン酸三ナトリウム、クエン酸三カリウム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム、乳酸ナトリウム、乳酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、水道水、純水、および鉱水、または数種のｐＨ調節剤からなる緩衝系の１つであることを特徴とする、請求項２に記載の液体酵素調製物。
- 前記水分活性調節剤が、ソルビトール、マルチトール、およびグリセロールの１つまたはそれより多くを含み、前記ｐＨ調節剤が、リン酸、酢酸、乳酸もしくはクエン酸、またはそれらの塩を含む緩衝液であることを特徴とする、請求項２に記載の液体酵素調製物。
- 請求項１〜６のいずれか一項に記載の液体酵素調製物を調製するための方法であって、
１）酵素溶液の精製：未精製酵素溶液を、圧力ろ過、精密ろ過、および二次的な限外ろ過に供して、精製され濃縮された酵素溶液を得る工程；
２）混合：該精製され濃縮された酵素溶液、水分活性調節剤、および酸化還元電位調節剤の量を量り、存在する場合、食品保存剤を添加し、混合し；ｐＨ調節剤を、１００％の最終体積になるまで添加し；均一に混合した後、該液体酵素調製物を、以下のパラメーター：ｐＨ、水分活性Ａｗ、および酸化還元電位に関して試験し、５．０〜９．０のｐＨ、≦０．８９の水分活性Ａｗ、および−４００ｍｖから＋５ｍｖの酸化還元電位に調整する工程；
３）細菌の除去：得られた混合物を、滅菌のために０．１〜０．２２μｍの膜を介してろ過し、続いて無菌充填する工程；
４）包装：該液体酵素調製物を、無菌充填または別の関連する液体包装プロセスによって包装する工程
を含み、
前記酸化還元電位調節剤が、
Ｌ−アスコルビン酸およびその塩、Ｌ−セリンおよびその塩、Ｌ−システインおよびその塩、還元グルタチオン、茶ポリフェノール、ダイズタンパク質加水分解産物、コムギタンパク質加水分解産物、カゼイン加水分解産物、キトサン加水分解産物、タケの葉の抗酸化物質、ローズマリー抽出物、カンゾウ抗酸化性抽出物、スーパーオキシドジスムターゼ、グルコースオキシダーゼ、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸カリウム、亜硫酸ナトリウム、次亜硫酸ナトリウム、フィチン酸からなる群から選択される一つ以上であり、
０．００７５〜１ｗ／ｖ％の量で存在し、
前記水分活性調節剤が、
ソルビトール、マルチトール、プロピレングリコール、グリセロール、キシリトール、ポリエチレングリコール、トレハロース、スクロース、マルトース、イソマルトース、マルトデキストリン、キシリトール、およびマンニトールからなる群から選択される一つ以上であり、
３０〜８０ｗ／ｖ％の量で存在する
ことを特徴とする、上記方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610086526.5A CN105462950B (zh) | 2016-02-16 | 2016-02-16 | 一种液体酶制剂及制备方法 |
| CN201610086526.5 | 2016-02-16 | ||
| PCT/CN2016/082178 WO2017140051A1 (zh) | 2016-02-16 | 2016-05-16 | 一种液体酶制剂及制备方法 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2020089626A Division JP2020146049A (ja) | 2016-02-16 | 2020-05-22 | 液体酵素調製物およびその調製方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2019503689A JP2019503689A (ja) | 2019-02-14 |
| JP6894907B2 true JP6894907B2 (ja) | 2021-06-30 |
Family
ID=55601111
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2018536249A Active JP6894907B2 (ja) | 2016-02-16 | 2016-05-16 | 液体酵素調製物およびその調製方法 |
| JP2020089626A Pending JP2020146049A (ja) | 2016-02-16 | 2020-05-22 | 液体酵素調製物およびその調製方法 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2020089626A Pending JP2020146049A (ja) | 2016-02-16 | 2020-05-22 | 液体酵素調製物およびその調製方法 |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20200270598A1 (ja) |
| EP (1) | EP3447137B1 (ja) |
| JP (2) | JP6894907B2 (ja) |
| CN (5) | CN107177567B (ja) |
| AU (1) | AU2016392823B2 (ja) |
| BR (1) | BR112018013032A2 (ja) |
| DK (1) | DK3447137T3 (ja) |
| ES (1) | ES2829259T3 (ja) |
| LT (1) | LT3447137T (ja) |
| MX (1) | MX2018005385A (ja) |
| NZ (1) | NZ743779A (ja) |
| PH (1) | PH12018501382A1 (ja) |
| RU (1) | RU2712517C1 (ja) |
| WO (1) | WO2017140051A1 (ja) |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107177567B (zh) * | 2016-02-16 | 2018-07-03 | 上海青瑞食品科技有限公司 | 一种液体酶制剂及制备方法 |
| CN105852053A (zh) * | 2016-04-20 | 2016-08-17 | 上海青瑞食品科技有限公司 | 一种液体酶制剂在食品质构改良中的应用 |
| CN105767925A (zh) * | 2016-04-27 | 2016-07-20 | 上海青瑞食品科技有限公司 | 一种液体酶制剂在肉类粘合重组中的应用及使用方法 |
| CN107354142A (zh) * | 2017-09-14 | 2017-11-17 | 精晶药业股份有限公司 | 一种L‑天门冬氨酸‑α‑脱羧酶酶液处理方法 |
| CN107897533A (zh) * | 2017-12-10 | 2018-04-13 | 济南诺能生物工程有限公司 | 一种单胃动物液体复合酶的制备方法 |
| CN108094502A (zh) * | 2017-12-16 | 2018-06-01 | 合肥工业大学 | 一种保鲜剂、采用该保鲜剂的即食小龙虾及其加工方法 |
| CN108018279B (zh) * | 2018-01-24 | 2020-09-04 | 江南大学 | 一种谷氨酰胺转胺酶复配剂及其应用 |
| CN110205317A (zh) * | 2018-02-28 | 2019-09-06 | 泰兴市东圣生物科技有限公司 | 一种谷氨酰胺转氨酶液体酶酶活稳定制剂的制备方法 |
| CN110205309A (zh) * | 2018-02-28 | 2019-09-06 | 泰兴市东圣生物科技有限公司 | 一种稳定液体谷氨酰胺转氨酶酶活的制剂 |
| CN108378226A (zh) * | 2018-03-07 | 2018-08-10 | 余姚辉农农业科技有限公司 | 一种复合酶制剂及其在饲料中的应用 |
| EP3770254A4 (en) | 2018-03-23 | 2021-12-29 | Ajinomoto Co., Inc. | Liquid preparation containing transglutaminase |
| CN108949737A (zh) * | 2018-08-24 | 2018-12-07 | 广州穗珩生物技术有限公司 | 一种β-内酰胺酶保护剂及制备方法 |
| CN109355267B (zh) * | 2018-08-24 | 2021-08-03 | 江苏一鸣生物股份有限公司 | 一种液体酶制剂及其制备方法和应用 |
| CN109430683B (zh) * | 2018-10-10 | 2022-05-27 | 宁波希诺亚海洋生物科技有限公司 | 去除麸质的复合酶制剂 |
| CN111749023B (zh) * | 2019-03-28 | 2023-01-24 | 深圳市芭格美生物科技有限公司 | 一种溶菌酶无纺布面料及其制备方法 |
| CN110373406B (zh) * | 2019-07-15 | 2021-09-10 | 泰兴市东圣生物科技有限公司 | 一种固定化谷氨酰胺转氨酶的制备方法 |
| CN110358757A (zh) * | 2019-07-30 | 2019-10-22 | 泰兴市东圣生物科技有限公司 | 一种可长期保存的谷氨酰胺转氨酶液体酶制剂及其配制方法 |
| CN110623249B (zh) * | 2019-11-05 | 2023-04-07 | 泰兴市东圣生物科技有限公司 | 一种速溶酶制剂及其制备方法 |
| CN111067085A (zh) * | 2019-12-23 | 2020-04-28 | 泰兴市东圣生物科技有限公司 | 一种复配可得然多糖膏制剂及其制备方法 |
| CN111856043A (zh) * | 2020-08-28 | 2020-10-30 | 保定天岳生物工程有限公司 | 一种凝血酶原时间检测试剂盒 |
| CN112034022B (zh) * | 2020-09-16 | 2023-07-04 | 广州万孚生物技术股份有限公司 | 一种复合酶溶液、酒精检测试纸及其制备方法和应用 |
| EP4414450A1 (en) * | 2021-10-04 | 2024-08-14 | Amano Enzyme Inc. | Liquid transglutaminase enzyme preparation |
| CN114965990B (zh) * | 2022-03-21 | 2023-05-16 | 复旦大学附属妇产科医院 | 一种糖类抗原CA125表面Tn抗原检测用校准品缓冲液及其制备方法、检测试剂盒 |
| CN115500425B (zh) * | 2022-09-06 | 2024-04-12 | 华南理工大学 | 一种低消化凝固性大豆分离蛋白及其制备方法与应用 |
| CN115428883A (zh) * | 2022-09-13 | 2022-12-06 | 宁波市农业科学研究院 | 一种米制品糕点保鲜剂及其应用 |
| CN115505583A (zh) * | 2022-10-09 | 2022-12-23 | 武汉新华扬生物股份有限公司 | 一种液体酶保护剂及其应用 |
| CN117737022A (zh) * | 2023-11-07 | 2024-03-22 | 广东科隆生物科技有限公司 | 一种谷氨酰胺转氨酶液体酶制剂及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0665280B2 (ja) | 1987-03-04 | 1994-08-24 | 味の素株式会社 | タンパクゲル化剤及びそれを用いるタンパクのゲル化方法 |
| DE19508192A1 (de) * | 1995-03-09 | 1996-09-12 | Behringwerke Ag | Stabile Transglutaminasepräparate und Verfahren zu ihrer Herstellung |
| ATE291897T1 (de) * | 1996-01-31 | 2005-04-15 | Cosmoferm Bv | Verwendung von zusammensetzungen mit stabilisierten enzymen |
| WO2003106333A1 (en) | 2002-06-17 | 2003-12-24 | Nutricepts, Inc. | Oxygen scavenging system |
| JP4524076B2 (ja) * | 2003-04-02 | 2010-08-11 | 天野エンザイム株式会社 | 安定化トランスグルタミナーゼ |
| BRPI0808014A2 (pt) * | 2007-02-22 | 2014-06-17 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Variantes de transglutaminase com especificidade melhorada |
| US20100297726A1 (en) * | 2008-02-13 | 2010-11-25 | Amano Enzyme Inc. | Stabilized transglutaminase and process for production thereof |
| KR101710471B1 (ko) * | 2008-04-21 | 2017-02-27 | 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 | 건조한 트랜스글루타미나제 조성물 |
| CN101381716B (zh) | 2008-10-23 | 2012-05-23 | 肇东市日成酶制剂有限公司 | 保存液体纤维素酶的复合稳定剂 |
| CN101617740B (zh) | 2009-07-07 | 2012-04-25 | 广东溢多利生物科技股份有限公司 | 一种饲用液体植酸酶制剂 |
| TWI548350B (zh) * | 2010-03-08 | 2016-09-11 | Ajinomoto Kk | Food manufacturing methods and food modification with enzyme preparations |
| CN101857857A (zh) | 2010-05-18 | 2010-10-13 | 青岛康地恩生物科技有限公司 | 一种食品级酸性果胶酶制剂的制备方法 |
| FI126442B (en) * | 2011-11-01 | 2016-12-15 | Valio Oy | Liquid enzyme preparation and process for its preparation |
| CN102600476B (zh) * | 2011-11-04 | 2013-08-28 | 江南大学 | 一种载药角蛋白膜的制备方法及其应用 |
| CN103525797B (zh) | 2012-07-03 | 2016-04-13 | 深圳市绿微康生物工程有限公司 | 液体脂肪酶保护剂及其制备方法和应用 |
| CN103981168B (zh) | 2014-06-05 | 2016-06-22 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 一种提高液体酶稳定性的组合物 |
| CN104531653A (zh) | 2014-12-12 | 2015-04-22 | 湖南新鸿鹰生物工程有限公司 | 一种液体酸性果胶酶的制备方法 |
| CN107177567B (zh) * | 2016-02-16 | 2018-07-03 | 上海青瑞食品科技有限公司 | 一种液体酶制剂及制备方法 |
-
2016
- 2016-02-16 CN CN201710597553.3A patent/CN107177567B/zh active Active
- 2016-02-16 CN CN201710452398.6A patent/CN107177582B/zh active Active
- 2016-02-16 CN CN201710599942.XA patent/CN107245481B/zh active Active
- 2016-02-16 CN CN201710599690.0A patent/CN107326019B/zh active Active
- 2016-02-16 CN CN201610086526.5A patent/CN105462950B/zh active Active
- 2016-05-16 MX MX2018005385A patent/MX2018005385A/es unknown
- 2016-05-16 NZ NZ743779A patent/NZ743779A/en unknown
- 2016-05-16 JP JP2018536249A patent/JP6894907B2/ja active Active
- 2016-05-16 EP EP16890284.9A patent/EP3447137B1/en active Active
- 2016-05-16 AU AU2016392823A patent/AU2016392823B2/en active Active
- 2016-05-16 WO PCT/CN2016/082178 patent/WO2017140051A1/zh active Application Filing
- 2016-05-16 ES ES16890284T patent/ES2829259T3/es active Active
- 2016-05-16 LT LTEP16890284.9T patent/LT3447137T/lt unknown
- 2016-05-16 US US15/780,491 patent/US20200270598A1/en not_active Abandoned
- 2016-05-16 BR BR112018013032-0A patent/BR112018013032A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2016-05-16 RU RU2018122955A patent/RU2712517C1/ru active
- 2016-05-16 DK DK16890284.9T patent/DK3447137T3/da active
-
2018
- 2018-06-27 PH PH12018501382A patent/PH12018501382A1/en unknown
-
2020
- 2020-05-22 JP JP2020089626A patent/JP2020146049A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105462950A (zh) | 2016-04-06 |
| CN107326019A (zh) | 2017-11-07 |
| EP3447137A1 (en) | 2019-02-27 |
| NZ743779A (en) | 2020-06-26 |
| AU2016392823B2 (en) | 2023-05-11 |
| CN105462950B (zh) | 2017-09-26 |
| ES2829259T3 (es) | 2021-05-31 |
| US20200270598A1 (en) | 2020-08-27 |
| LT3447137T (lt) | 2021-01-11 |
| PH12018501382A1 (en) | 2019-02-18 |
| AU2016392823A1 (en) | 2018-07-19 |
| CN107245481B (zh) | 2018-06-01 |
| EP3447137B1 (en) | 2020-08-26 |
| MX2018005385A (es) | 2018-09-05 |
| RU2712517C1 (ru) | 2020-01-29 |
| CN107245481A (zh) | 2017-10-13 |
| EP3447137A4 (en) | 2019-06-12 |
| WO2017140051A1 (zh) | 2017-08-24 |
| CN107177582B (zh) | 2018-05-22 |
| JP2020146049A (ja) | 2020-09-17 |
| CN107177582A (zh) | 2017-09-19 |
| CN107177567A (zh) | 2017-09-19 |
| JP2019503689A (ja) | 2019-02-14 |
| CN107326019B (zh) | 2018-05-01 |
| CN107177567B (zh) | 2018-07-03 |
| BR112018013032A2 (pt) | 2018-12-04 |
| DK3447137T3 (da) | 2020-11-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6894907B2 (ja) | 液体酵素調製物およびその調製方法 | |
| ES2697675T3 (es) | Formulación enzimática líquida y su procedimiento de preparación | |
| EP2137292B1 (en) | Peptide mixture as wine stabiliser | |
| ES2634626T5 (es) | Proceso de producción de nisina mejorado | |
| IE20080721A1 (en) | A probiotic composition | |
| JP2010524446A (ja) | マンノプロテイン液状配合物 | |
| EP3486310A2 (en) | Leuconostoc mesenteroides | |
| CN107338206A (zh) | 一种富集乳酸杆菌的培养基及其制备方法 | |
| JP5005870B2 (ja) | １，５−ｄ−アンヒドロフルクトースを用いる細菌の増殖抑制ないし阻止剤 | |
| JP2010189333A (ja) | 粉末状組成物および錠剤、ならびにγ−アミノ酪酸の褐変防止方法および褐変防止剤 | |
| CN109355267B (zh) | 一种液体酶制剂及其制备方法和应用 | |
| WO2024135764A1 (ja) | 食品製造用の酵素組成物 | |
| WO2014125429A1 (en) | Culture medium for growth of recombinant proteins | |
| JP2018048087A (ja) | 体重又は内臓脂肪増加抑制剤若しくは体重又は内臓脂肪増加抑制用食品組成物若しくは体重又は内臓脂肪増加抑制用飼料組成物 | |
| CN114158668A (zh) | 一种组合物及含有该组合物的肽乳酸菌饮料和制备方法 | |
| JP2002097105A (ja) | 耐熱性芽胞形成細菌増殖抑制剤 | |
| JP2005333851A (ja) | 醗酵促進剤 | |
| TW201417723A (zh) | 含有乳酸菌孢子之飲品組成物及其製造方法 | |
| JP2000023663A (ja) | 嫌気性菌の培養方法および培地 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180802 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20190619 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190701 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190925 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20200124 |
|
| C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20200522 |
|
| RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20200522 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200601 |
|
| C22 | Notice of designation (change) of administrative judge |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C22 Effective date: 20210216 |
|
| C23 | Notice of termination of proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C23 Effective date: 20210330 |
|
| C03 | Trial/appeal decision taken |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C03 Effective date: 20210511 |
|
| C30A | Notification sent |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C3012 Effective date: 20210511 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210604 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6894907 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |