JP6865813B2 - 親水化着色セルロース微粒子 - Google Patents
親水化着色セルロース微粒子 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6865813B2 JP6865813B2 JP2019511188A JP2019511188A JP6865813B2 JP 6865813 B2 JP6865813 B2 JP 6865813B2 JP 2019511188 A JP2019511188 A JP 2019511188A JP 2019511188 A JP2019511188 A JP 2019511188A JP 6865813 B2 JP6865813 B2 JP 6865813B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- fine particles
- colored
- particles
- amount
- carboxyl group
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 title claims description 340
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 title claims description 139
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 title claims description 139
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 123
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 120
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 63
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 45
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 32
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 claims description 25
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 25
- BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N Silane Chemical compound [SiH4] BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 claims description 9
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 claims description 8
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 8
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 3
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 89
- 238000000034 method Methods 0.000 description 68
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 63
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 58
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 57
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 56
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 56
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 55
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 46
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 40
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 40
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 39
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 39
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 38
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 29
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 26
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 26
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 24
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 24
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 24
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 24
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 23
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 23
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 23
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 21
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 20
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 20
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 20
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 19
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 19
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 18
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 18
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 17
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 16
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N Propionic acid Substances CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 14
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 13
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 12
- IUDGNRWYNOEIKF-UHFFFAOYSA-N 11-bromo-undecanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCCBr IUDGNRWYNOEIKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 11
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 10
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- QEVGZEDELICMKH-UHFFFAOYSA-N Diglycolic acid Chemical compound OC(=O)COCC(O)=O QEVGZEDELICMKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 9
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N adipic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC(O)=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 8
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 8
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 8
- 239000006103 coloring component Substances 0.000 description 7
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 7
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 7
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 7
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- JJOJFIHJIRWASH-UHFFFAOYSA-N Eicosanedioic acid Natural products OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O JJOJFIHJIRWASH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 6
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 6
- PHQOGHDTIVQXHL-UHFFFAOYSA-N n'-(3-trimethoxysilylpropyl)ethane-1,2-diamine Chemical compound CO[Si](OC)(OC)CCCNCCN PHQOGHDTIVQXHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CXMXRPHRNRROMY-UHFFFAOYSA-N sebacic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCC(O)=O CXMXRPHRNRROMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 235000011037 adipic acid Nutrition 0.000 description 5
- 229960000250 adipic acid Drugs 0.000 description 5
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 5
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 5
- 238000011403 purification operation Methods 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- DHXNZYCXMFBMHE-UHFFFAOYSA-N 3-bromopropanoic acid Chemical compound OC(=O)CCBr DHXNZYCXMFBMHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NVRVNSHHLPQGCU-UHFFFAOYSA-N 6-bromohexanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCBr NVRVNSHHLPQGCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 4
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 4
- 239000002585 base Substances 0.000 description 4
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000005415 magnetization Effects 0.000 description 4
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000000985 reactive dye Substances 0.000 description 4
- 239000004627 regenerated cellulose Substances 0.000 description 4
- TYFQFVWCELRYAO-UHFFFAOYSA-N suberic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCC(O)=O TYFQFVWCELRYAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N (3-aminopropyl)triethoxysilane Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)CCCN WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BSDAIZFMQYOAFY-UHFFFAOYSA-N 18-bromo-octadecanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCCBr BSDAIZFMQYOAFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SJECZPVISLOESU-UHFFFAOYSA-N 3-trimethoxysilylpropan-1-amine Chemical compound CO[Si](OC)(OC)CCCN SJECZPVISLOESU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PRKPGWQEKNEVEU-UHFFFAOYSA-N 4-methyl-n-(3-triethoxysilylpropyl)pentan-2-imine Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)CCCN=C(C)CC(C)C PRKPGWQEKNEVEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BKJFDZSBZWHRNH-UHFFFAOYSA-N 8-bromooctanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCBr BKJFDZSBZWHRNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- KKEYFWRCBNTPAC-UHFFFAOYSA-N Terephthalic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(C(O)=O)C=C1 KKEYFWRCBNTPAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000001361 adipic acid Substances 0.000 description 3
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 230000001112 coagulating effect Effects 0.000 description 3
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 3
- QKSIFUGZHOUETI-UHFFFAOYSA-N copper;azane Chemical compound N.N.N.N.[Cu+2] QKSIFUGZHOUETI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 3
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 3
- 239000010445 mica Substances 0.000 description 3
- 229910052618 mica group Inorganic materials 0.000 description 3
- MQWFLKHKWJMCEN-UHFFFAOYSA-N n'-[3-[dimethoxy(methyl)silyl]propyl]ethane-1,2-diamine Chemical compound CO[Si](C)(OC)CCCNCCN MQWFLKHKWJMCEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 3
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 description 3
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 3
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IBOFVQJTBBUKMU-UHFFFAOYSA-N 4,4'-methylene-bis-(2-chloroaniline) Chemical compound C1=C(Cl)C(N)=CC=C1CC1=CC=C(N)C(Cl)=C1 IBOFVQJTBBUKMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GRHQDJDRGZFIPO-UHFFFAOYSA-N 4-bromobutanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCBr GRHQDJDRGZFIPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JJMDCOVWQOJGCB-UHFFFAOYSA-N 5-aminopentanoic acid Chemical compound [NH3+]CCCCC([O-])=O JJMDCOVWQOJGCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WNXNUPJZWYOKMW-UHFFFAOYSA-N 5-bromopentanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCBr WNXNUPJZWYOKMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JLPQXFFMVVPIRW-UHFFFAOYSA-N 7-bromoheptanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCBr JLPQXFFMVVPIRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000685 Carr-Purcell-Meiboom-Gill pulse sequence Methods 0.000 description 2
- 229920000875 Dissolving pulp Polymers 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 2
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 2
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 2
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 2
- 208000037798 influenza B Diseases 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 2
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 2
- 239000004745 nonwoven fabric Substances 0.000 description 2
- IOQPZZOEVPZRBK-UHFFFAOYSA-N octan-1-amine Chemical compound CCCCCCCCN IOQPZZOEVPZRBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- YHHSONZFOIEMCP-UHFFFAOYSA-O phosphocholine Chemical compound C[N+](C)(C)CCOP(O)(O)=O YHHSONZFOIEMCP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- 229950004354 phosphorylcholine Drugs 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000011241 protective layer Substances 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- LTQBNYCMVZQRSD-UHFFFAOYSA-N (4-ethenylphenyl)-trimethoxysilane Chemical compound CO[Si](OC)(OC)C1=CC=C(C=C)C=C1 LTQBNYCMVZQRSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHFRGQHAERHWKZ-HHHXNRCGSA-N (R)-edelfosine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCOC[C@@H](OC)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C MHFRGQHAERHWKZ-HHHXNRCGSA-N 0.000 description 1
- KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 1-naphthol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=CC=CC2=C1 KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KMWWFKLFHOTNEH-UHFFFAOYSA-N 16-heptadecenoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC=C KMWWFKLFHOTNEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ULVRWJXZSOBRIT-UHFFFAOYSA-N 18-chlorooctadecanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCl ULVRWJXZSOBRIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000022 2-aminoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000143 2-carboxyethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- NJNWCIAPVGRBHO-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyethyl-dimethyl-[(oxo-$l^{5}-phosphanylidyne)methyl]azanium Chemical group OCC[N+](C)(C)C#P=O NJNWCIAPVGRBHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BOXWYBCUJGWEOJ-UHFFFAOYSA-N 3-[2-(2-carboxyethoxy)ethoxy]propanoic acid Chemical compound OC(=O)CCOCCOCCC(O)=O BOXWYBCUJGWEOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KOVYBDAGTRVAAO-UHFFFAOYSA-N 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-carboxyethoxy)ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]propanoic acid Chemical compound OC(=O)CCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCC(O)=O KOVYBDAGTRVAAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DOYKFSOCSXVQAN-UHFFFAOYSA-N 3-[diethoxy(methyl)silyl]propyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CCO[Si](C)(OCC)CCCOC(=O)C(C)=C DOYKFSOCSXVQAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IKYAJDOSWUATPI-UHFFFAOYSA-N 3-[dimethoxy(methyl)silyl]propane-1-thiol Chemical compound CO[Si](C)(OC)CCCS IKYAJDOSWUATPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LZMNXXQIQIHFGC-UHFFFAOYSA-N 3-[dimethoxy(methyl)silyl]propyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CO[Si](C)(OC)CCCOC(=O)C(C)=C LZMNXXQIQIHFGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QEYMMOKECZBKAC-UHFFFAOYSA-N 3-chloropropanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCl QEYMMOKECZBKAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- URDOJQUSEUXVRP-UHFFFAOYSA-N 3-triethoxysilylpropyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)CCCOC(=O)C(C)=C URDOJQUSEUXVRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UUEWCQRISZBELL-UHFFFAOYSA-N 3-trimethoxysilylpropane-1-thiol Chemical compound CO[Si](OC)(OC)CCCS UUEWCQRISZBELL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XDLMVUHYZWKMMD-UHFFFAOYSA-N 3-trimethoxysilylpropyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CO[Si](OC)(OC)CCCOC(=O)C(C)=C XDLMVUHYZWKMMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KBQVDAIIQCXKPI-UHFFFAOYSA-N 3-trimethoxysilylpropyl prop-2-enoate Chemical compound CO[Si](OC)(OC)CCCOC(=O)C=C KBQVDAIIQCXKPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IPLKGJHGWCVSOG-UHFFFAOYSA-N 4-chlorobutanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCl IPLKGJHGWCVSOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PGZIDERTDJHJFY-UHFFFAOYSA-N 4-fluoro-7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(F)C2=NON=C12 PGZIDERTDJHJFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YSXDKDWNIPOSMF-UHFFFAOYSA-N 5-chloropentanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCl YSXDKDWNIPOSMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XWWKSLXUVZVGSP-UHFFFAOYSA-N 6-chlorohexanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCl XWWKSLXUVZVGSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XDOLZJYETYVRKV-UHFFFAOYSA-N 7-Aminoheptanoic acid Chemical compound NCCCCCCC(O)=O XDOLZJYETYVRKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IGNBKLCFKTYIRI-UHFFFAOYSA-N 7-chloroheptanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCl IGNBKLCFKTYIRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UQXNEWQGGVUVQA-UHFFFAOYSA-N 8-aminooctanoic acid Chemical compound NCCCCCCCC(O)=O UQXNEWQGGVUVQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SCTRLHIAVHHIEJ-UHFFFAOYSA-N 8-chlorooctanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCl SCTRLHIAVHHIEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ORILYTVJVMAKLC-UHFFFAOYSA-N Adamantane Natural products C1C(C2)CC3CC1CC2C3 ORILYTVJVMAKLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 101000935845 Aliivibrio fischeri Blue fluorescence protein Proteins 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 description 1
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 description 1
- 102100035371 Chymotrypsin-like elastase family member 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710138848 Chymotrypsin-like elastase family member 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000004266 Collagen Type IV Human genes 0.000 description 1
- 108010042086 Collagen Type IV Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003154 D dimer Substances 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 101710099240 Elastase-1 Proteins 0.000 description 1
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000935842 Escherichia coli O127:H6 (strain E2348/69 / EPEC) Major structural subunit of bundle-forming pilus Proteins 0.000 description 1
- 206010016952 Food poisoning Diseases 0.000 description 1
- 208000019331 Foodborne disease Diseases 0.000 description 1
- 102100025255 Haptoglobin Human genes 0.000 description 1
- 108050005077 Haptoglobin Proteins 0.000 description 1
- 241000589989 Helicobacter Species 0.000 description 1
- 101000623901 Homo sapiens Mucin-16 Proteins 0.000 description 1
- 101001024605 Homo sapiens Next to BRCA1 gene 1 protein Proteins 0.000 description 1
- 101001079872 Homo sapiens RING finger protein 112 Proteins 0.000 description 1
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 1
- 102100023915 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 101100464256 Listeria monocytogenes serovar 1/2a (strain ATCC BAA-679 / EGD-e) plcA gene Proteins 0.000 description 1
- 206010027202 Meningitis bacterial Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102100030856 Myoglobin Human genes 0.000 description 1
- 108010062374 Myoglobin Proteins 0.000 description 1
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 108010047320 Pepsinogen A Proteins 0.000 description 1
- 102100038124 Plasminogen Human genes 0.000 description 1
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 1
- 108010022233 Plasminogen Activator Inhibitor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100039418 Plasminogen activator inhibitor 1 Human genes 0.000 description 1
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 description 1
- 102000017975 Protein C Human genes 0.000 description 1
- 101000802779 Rattus norvegicus Alpha-1-macroglobulin Proteins 0.000 description 1
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 description 1
- 206010041925 Staphylococcal infections Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000223996 Toxoplasma Species 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical group 0.000 description 1
- 125000002009 alkene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N alpha-ethylcaproic acid Natural products CCCCC(CC)C(O)=O OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 239000000981 basic dye Substances 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- KDPAWGWELVVRCH-UHFFFAOYSA-N bromoacetic acid Chemical compound OC(=O)CBr KDPAWGWELVVRCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N chloroacetic acid Chemical compound OC(=O)CCl FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 235000019646 color tone Nutrition 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- XUDOZULIAWNMIU-UHFFFAOYSA-N delta-hexenoic acid Chemical compound OC(=O)CCCC=C XUDOZULIAWNMIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011903 deuterated solvents Substances 0.000 description 1
- OTARVPUIYXHRRB-UHFFFAOYSA-N diethoxy-methyl-[3-(oxiran-2-ylmethoxy)propyl]silane Chemical compound CCO[Si](C)(OCC)CCCOCC1CO1 OTARVPUIYXHRRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- WHGNXNCOTZPEEK-UHFFFAOYSA-N dimethoxy-methyl-[3-(oxiran-2-ylmethoxy)propyl]silane Chemical compound CO[Si](C)(OC)CCCOCC1CO1 WHGNXNCOTZPEEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000982 direct dye Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000000986 disperse dye Substances 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 238000002592 echocardiography Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- FWDBOZPQNFPOLF-UHFFFAOYSA-N ethenyl(triethoxy)silane Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)C=C FWDBOZPQNFPOLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NKSJNEHGWDZZQF-UHFFFAOYSA-N ethenyl(trimethoxy)silane Chemical compound CO[Si](OC)(OC)C=C NKSJNEHGWDZZQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SBRXLTRZCJVAPH-UHFFFAOYSA-N ethyl(trimethoxy)silane Chemical compound CC[Si](OC)(OC)OC SBRXLTRZCJVAPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 1
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 230000005283 ground state Effects 0.000 description 1
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000003230 hygroscopic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 208000015688 methicillin-resistant staphylococcus aureus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- ARYZCSRUUPFYMY-UHFFFAOYSA-N methoxysilane Chemical compound CO[SiH3] ARYZCSRUUPFYMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- KBJFYLLAMSZSOG-UHFFFAOYSA-N n-(3-trimethoxysilylpropyl)aniline Chemical compound CO[Si](OC)(OC)CCCNC1=CC=CC=C1 KBJFYLLAMSZSOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 101150086837 pic gene Proteins 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920000139 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 description 1
- 239000005020 polyethylene terephthalate Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 238000009597 pregnancy test Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- HQYALQRYBUJWDH-UHFFFAOYSA-N trimethoxy(propyl)silane Chemical compound CCC[Si](OC)(OC)OC HQYALQRYBUJWDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/585—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with a particulate label, e.g. coloured latex
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54346—Nanoparticles
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
- G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
- G01N33/54388—Immunochromatographic test strips based on lateral flow
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
- G01N33/548—Carbohydrates, e.g. dextran
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/585—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with a particulate label, e.g. coloured latex
- G01N33/587—Nanoparticles
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2458/00—Labels used in chemical analysis of biological material
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
- G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
(i)ニトロセルロース等のメンブレンに、検出対象となる抗原等と反応する抗体を特定部位(テストライン)に固定化する;
(ii)発色粒子と呼ばれる標識物質に、検出対象と反応する抗体を担持した検出試薬を作製し、コンジュゲートパット上に塗布後乾燥させ、前記メンブレン、サンプルパット、吸収パットを組み合わせてイムノクロマトキットを作製する;
(iii)抗原の有無を検査したい検体を混合した展開液をサンプルパット上に滴下し、テストライン(TL)の発色の有無を目視(あるいは簡易的なイムノクロマトリーダー)で観察し、抗原の有無を判断する。検体中に抗原がある場合、テストラインに線が発色する。
一般的に、目視で判定する場合の多くは、検出対象となる抗原の有無のみを判断する定性分析として使用されている。
[1]平均粒子径が60〜900nmであり、発色強度が1.0〜10.0であり、微粒子表面に、親水層を有し、かつ、スペーサーを介してカルボキシル基が導入されていることを特徴とする発色セルロース微粒子。
[2]前記カルボキシル基の導入量が、前記発色セルロース微粒子1g当たり0.20〜3.00mmolである、前記[1]に記載の発色セルロース微粒子。
[3]前記親水層が、シラン層、ポリエチレングリコール層(PEG)、又はシラン層とポリエチレングリコール(PEG)層の混合層のいずれかである、前記[1]又は[2]に記載の発色セルロース微粒子。
[4]前記スペーサーが、炭化水素系の構造体である、前記[1]〜[3]のいずれかに記載の発色セルロース微粒子。
[5]前記[1]〜[4]のいずれかに記載の発色セルロース微粒子の前記カルボキシル基にリガンドが共有結合されている構造体。
[6]前記[5]に記載の構造体を含むイムノクロマト診断キット。
特許文献4に開示されているように、粒子径が大きく、かつ、色が濃い着色セルロース微粒子と抗体を化学結合させることで、検出感度が向上することは判明している。しかしながら、かかる微粒子表面の親水性は不十分であるため、タンパク質などの生体分子が非特異吸着しやすく、イムノクロマトに使用した際に偽陽性が発生するおそれがある。そこで展開液に界面活性剤などの添加剤を加えるなどの偽陽性低減対策を行うが、同時に感度も低下させてしまう。本発明者らは、微粒子そのものが非特異吸着しにくくなり、かつ、抗体を多量に微粒子表面に導入可能にすることで、高い検出感度を維持しつつ、偽陽性が低減可能になるのではないかと考えた。かかる仮説の下、実験を重ねた結果、着色セルロース微粒子表面に、親水層を付与し、かつ、炭化水素系のスペーサーを介して多量にカルボキシル基を導入し、微粒子表面へのタンパク質などの生体分子の非特異吸着を低減させながら、多量の抗体を微粒子に導入することを可能ならしめることによって、偽陽性の大幅な低減を達成しながら、高い検出感度は維持可能であることを見出した。
本実施形態の着色セルロース微粒子は、平均粒子径が60〜900nmであり、発色強度が1.0〜10.0であり、微粒子表面に、親水層を有し、かつ、スペーサーを介してカルボキシル基が導入されていることを特徴とする。
用語「平均粒子径」とは、動的光散乱法で測定した場合の体積平均メジアン径を指す。本実施形態では、平均粒子径は60〜900nmの範囲にある。平均粒子径がこの範囲にあると、微粒子の表面積が大きいためにイムノクロマトとして用いる場合にテストラインがより濃くなる、すなわち検出感度が高くなる。平均粒子径が60nm未満であると、表面積が小さくなるため、微粒子一個あたりの発色強度が低下するため、検出感度が下がる場合があり、また、微粒子の凝集が起こる場合もある。以上の点から粒子径の下限は、好ましくは70nm、より好ましくは80nmである。他方、微粒子径が900nmより大きくなるとメンブレンの孔に詰まってしまうため、診断時間が長くなってしまったり、検査後にメンブレン表面が着色し検査結果の判断に悪影響を及ぼしたり、検出感度が悪くなったりする場合がある。以上の点から粒子径の上限は、好ましくは800nm、より好ましくは700nmである。尚、ここで述べている平均粒子径はあくまで平均値であり、粒子径分布の一部が上記範囲から外れていても構わない。
尚、本明細書中、「スペーサー」は、「親水層」中の反応基と結合する点で、「親水層」とは相違する。
・観測核:1H
・測定する緩和時間:横緩和時間T2(ms)
・測定モード:CPMG法
・積算回数:32回
・Recycle Delay:10(s)
・90°−180°Pulse Separation(τ):2(ms)
・Total Number of Acquired Echoes:2000点。
M(t)=M0・exp(−t/T2)・・・式(1)
{式中、M(t):ある時間tにおける信号強度、M0:信号強度の初期値、T2:緩和時間。}にフィッティングした。
測定した緩和時間から親水化度を算出するためには、縦軸に緩和時間の変化割合(Rsp値)を、横軸に微粒子の総表面積値(TSA値)をプロットしたグラフを用意し、最小二乗法により近似直線を作成し、その傾きを親水化度と定義する。
・Rsp値の計算方法
Rsp値=Rav÷Rb−1
{式中、Rav:平均緩和時定数(試料の緩和時間逆数)、Rb:バルク水分子の緩和時定数(ブランク水の緩和時間逆数)。}、
・TSA値(m2)の計算方法
TSA値=SA×V×Ψp×ρ
{式中、SA:微粒子の比表面積(m2/g)=6÷(ρ×d)、ここで、ρ:微粒子密度(g/cm3)(微粒子密度:1.4g/cm3、ラテックス粒子密度:1.0g/cm3、金コロイド粒子密度:19.3g/cm3)、d:微粒子直径(μm)、V:ラジオ波が照射される部分のNMR管体積(cm3)(≒試料量)、Ψp:微粒子体積比、ここで、微粒子体積(i)=微粒子濃度(wt%)÷100÷微粒子密度、水の体積(ii)=(1−微粒子体積(i))÷水の密度(0.997g/cm3)、Ψp(微粒子体積比)=、微粒子体積(i)÷水の体積(ii)、ρ:同上。}。
例えば、図1に示すように、A微粒子(TSA値0.5、Rsp値10)とB微粒子(TSA値1、Rsp値5)の数値をグラフにプロットし、最小二乗法により各々の近似直線を作成する。A微粒子の場合はY=20x、B微粒子の場合はY=5xとなる。近似直線の傾き(親水化度)が大きい方、すなわちA微粒子の方を親水化度が大きいと判定する。
例えば、以下の表1に示すように、PEG鎖を用いた実施例15の偽陽性発生率が1%であるのに対し、疎水性スペーサーを用いた実施例2の偽陽性発生率は0%であり、PEG鎖を用いた実施例17の偽陽性発生率が1%であるのに対し、疎水性スペーサーを用いた実施例1の偽陽性発生率は0%であり、PEG鎖を用いた実施例18の偽陽性発生率が2%であるのに対し、疎水性スペーサーを用いた実施例16の偽陽性発生率は1%であり、そしてPEG鎖を用いた実施例20の偽陽性発生率が2%であるのに対し、疎水性スペーサーを用いた実施例19の偽陽性発生率は1%である。
セルロースリンターをセルロースの良溶媒に溶解させる。良溶媒として公知の方法で調製した銅アンモニア溶液を用いる。そして凝固液としては有機溶媒+水+アンモニア混合系を主に用いる。この凝固液を攪拌しながら、調製しておいた銅アンモニアセルロ−ス溶液を加えて凝固を行う。さらに硫酸を加え中和、再生を行うことで、目的のセルロ−ス微粒子を含有したスラリーを得ることができる。この際スラリーは再生に用いた酸の残留により酸性であり、さらに中和で発生したアンモニウム塩などの不純物を含んでいるため、セルロース微粒子と媒体からなるセルロース分散液へと精製する操作が必要となる。この精製操作として遠心分離−デカンテーション−分散媒液体による希釈の処理の繰り返しを用いる。得られたセルロース微粒子分散液中のセルロース微粒子は、精製操作の過程において凝集する場合もあるので、この場合は剪断などによる分散処理を行うことができる。剪断を与える手段としては高圧ホモジナイザーを用いる。
得られたセルロース微粒子の水分散体に対し、硫酸ナトリウム、反応性染料を加え、マグネティックスターラーで撹拌しながら恒温槽で適温に昇温する。昇温後にアルカリとして炭酸ナトリウムを加え染色を開始する。所定時間経過後に目的の着色セルロース微粒子を含有したスラリーを得ることができる。この際スラリーはアルカリ性であり、さらに硫酸ナトリウム、未反応の染料などを含んでいるため、着色セルロース微粒子と媒体からなる着色セルロース微粒子分散液へと精製する操作が必要となる。前記同様に遠心分離による精製を行い、着色セルロース微粒子分散液を得る。得られた着色セルロース微粒子分散液中の着色セルロース微粒子は、精製操作の過程において凝集する場合もあるので、この場合は剪断などによる分散処理を行うことができる。剪断を与える手段としては高圧ホモジナイザーを用いる。
得られた着色セルロース微粒子の水分散体に対し、有機溶媒、水を加え、マグネティックスターラーで撹拌しながら恒温槽で適温に昇温する。昇温後に市販の親水化剤を加え反応を開始する。所定時間経過後に目的の親水化着色セルロース微粒子を含有したスラリーを得ることができる。この際スラリーはアルカリ性であり、さらに有機溶媒、未反応の親水化剤などを含んでいるため、親水化着色セルロース微粒子と媒体からなる親水化着色セルロース微粒子分散液へと精製する操作が必要となる。前記同様に遠心分離による精製を行い、親水化着色セルロース微粒子分散液を得る。得られた親水化着色セルロース微粒子分散液中の親水化着色セルロース微粒子は、精製操作の過程において凝集する場合もあるので、この場合は剪断などによる分散処理を行うことができる。剪断を与える手段としては高圧ホモジナイザーを用いる。
得られた親水化着色セルロース微粒子の水分散体に対し、有機溶媒、塩基を加え、マグネティックスターラーで撹拌しながら恒温槽で適温に昇温する。昇温後にカルボキシル基を有する反応剤を加え反応を開始する。所定時間経過後に目的のカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を含有したスラリーを得ることができる。この際スラリーは、有機溶媒、塩基、未反応の反応剤などを含んでいるため、カルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子と媒体からなるカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子分散液へと精製する操作が必要となる。前記同様に遠心分離による精製を行い、カルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子分散液を得る。得られたカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子分散液中のカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子は、精製操作の過程において凝集する場合もあるので、この場合は剪断などによる分散処理を行うことができる。剪断を与える手段としては高圧ホモジナイザーを用いる。
所定の濃度に調整したカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子の分散液を準備し、緩衝液、抗体を加え、温度調整を行いながら一定時間撹拌し、カルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子に抗体を結合させる。一定時間撹拌後、更にブロッキング剤を加え温度調整を行いながら一定時間撹拌することで、カルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子のブロッキングを行う。ブロッキング剤としては、検査対象物質や検体又はそれを希釈する溶液の組成などに応じ様々なブロッキング剤を用いることができる。カゼインは、カルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子のブロッキングに特に好ましい。抗体結合&ブロッキング後のカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を洗浄するため、遠心分離を行い、余剰な抗体とブロッキング剤が含まれた上澄み液と沈降した微粒子を分離し、上澄み液をデカンテーションにて除去する。沈降した微粒子に緩衝液などの液体を加え、必要に応じ超音波などで分散処理を行う。この遠心分離による沈降、上澄みの除去、液体の添加という一連の操作による洗浄を必要回数行い、抗体吸着&ブロッキングを行った微粒子を所定の濃度含有した分散液を調整する。この分散液に必要に応じタンパク質、界面活性剤、スクロースやトレハロースなどの糖を加え、得られた溶液をガラス繊維製のコンジュゲートパッドに一定量塗布し、乾燥させ、検出試薬含有部を調整する。また、再生セルロース連続長繊維不織布に必要に応じ緩衝液、界面活性剤、タンパク、検体試料中の夾雑物をトラップする試薬、防腐剤、抗菌剤、酸化防止剤、吸湿剤、などを塗布し、乾燥させ、サンプルパッドを調製する。更に所定の位置に抗体を固定化したニトロセルロース多孔膜製のメンブレン、検体を吸収するためのセルロース濾紙製の吸収パッドを調製する。それらをバッキングシートと呼ばれる接着部位を有するシートに固定化し、所定のサイズに裁断することでイムノクロマト診断キットを作製する。
まず、用いた各種物性等の測定方法等について説明する。
装置としては日機装社製のナノトラック粒度分布測定装置UPA−EX150(動的光散乱式)を用いた。測定サンプルとして、微粒子が0.01wt%、純水99.99wt%のサンプルを用いた。測定条件としては積算回数を30回、1測定辺りの測定時間を30秒とし、体積平均の粒子径分布を用いそのメジアン径を平均粒子径とした。
装置としては日本分光社製の紫外可視近赤外分光光度計JASCO V−650に同社製の積分球ユニットISV−722を取り付けた装置を用いた。測定するサンプルとして微粒子が0.01wt%、純水99.99wt%のサンプルを用い、光路長10mmの石英セルにサンプルを入れ測定した。得られた吸光度ピークのうち、400〜800nm可視光範囲での最大値(ABS)を発色強度とした。
装置としては日本電子社製の走査型電子顕微鏡JSM-6700を用いた。微粒子が0.01wt%、純水99.99wt%のサンプルを雲母板に滴下し、10秒経過させることで微粒子を雲母板上に吸着させ、キムワイプで余分な液体を吸い取り乾燥させた。得られた雲母板をプラチナでコーティングし、電子顕微鏡測定用のサンプルを調製した。加速電圧1.6kV、測定倍率5万倍で観測を行い、微粒子画像が100個以上になるように必要枚数の画像を撮影し、それぞれの微粒子の長径(L)と短径(D)を測定し、微粒子100個のL/Dの平均値を算出した。
装置としてはブルカー社製の核磁気共鳴装置(AVANCE II400)を用いた。スペーサーを導入した微粒子の1.0wt%分散液に、0.1mL、1.0Mの水酸化ナトリウム水溶液(和光純薬社製、72082100)、又は1.0Mの塩酸水溶液(和光純薬社製、080−10035)10.0mLを加え、60℃で5時間加熱撹拌する。その後、遠心分離により上澄み液を採取し、微粒子から切断されたスペーサーが溶解又は分散した溶液を得た。この溶液を最適な重溶媒で希釈し、核磁気共鳴装置によりNMR測定し得られたスペクトルから構造物を同定した。
装置としては日本分光社製の分光蛍光光度計FP−8300を用いた。カルボキシル基と反応した場合のみ蛍光を発する試薬を微粒子に結合させ、その蛍光強度から導入量を測定した。以下に、測定例を示す。導入量を測定したい微粒子の1.0wt%分散液0.1mL、蛍光試薬ADAM(KAK社製、FK−101)の2.3mMのエタノール溶液4.0mL、エタノール(関東化学社製、14033−70)3.9mLを容器に入れ、60℃で5分反応させる。その後、得られた反応液10.0μLにエタノール2.0mLを添加しFP−8300にて365nmの励起光を照射し、410nmの蛍光強度を測定した。検量線には、オクタン酸(東京化成社製、O0027)を使用した。
装置としては日本分光社製の分光蛍光光度計FP−8300を用いた。アミノ基と反応した場合のみ蛍光を発する試薬を微粒子に結合させ、その蛍光強度から導入量を測定した。以下に測定例を示す。残存反応性アミノ基量を測定したい微粒子の1.0wt%分散液0.1mL、蛍光試薬NBD−F(同仁化学社製)の2.5mMのエタノール溶液4.0mL、エタノール(関東化学社製、14033−70)3.9mLを容器に入れ、30℃で60分反応させる。その後、得られた反応液10.0μLにエタノール2.0mLを添加しFP−8300にて480nmの励起光を照射し、530nmの蛍光強度を測定した。検量線には、オクチルアミン(東京化成社製、O0045)を使用した。
微粒子分散液を濃度1%(wt/vol)に調製し試料溶液とした。試料溶液を撹拌後、0.5mLを外径10mmのガラス製NMR管に移し、30℃に設定されたパルスNMR装置に設置した。パルスNMR装置はブルカー社製のMinispec mq20装置を用いた。各種パラメータを以下の通りに設定し測定した。
・観測核:1H
・測定する緩和時間:横緩和時間T2(ms)
・測定モード:CPMG法
・積算回数:32回
・Recycle Delay:10(s)
・90°−180°Pulse Separation(τ):2(ms)。
得られた磁化減衰曲線(磁化強度の経時変化を示す曲線)を、Microsoft Excelの指数近似機能を用いて最小二乗法により下記式(1)にフィッティングした。
M(t)=M0・exp(−t/T2)・・・(式1)
{式中、M(t):ある時間tにおける信号強度、M0:信号強度の初期値、T2:緩和時間。}。
次に、図1に示すように、縦軸に緩和時間の変化割合(Rsp値)を、横軸に微粒子の総表面積値(TSA値)をプロットしたグラフを作成した。最小二乗法により近似直線を作成し、その傾きを親水化度と定義し、微粒子の親水化度を比較した。Rsp値とTSA値の計算方法は以下のとおりである。
・Rsp値の計算方法
Rsp値=Rav÷Rb−1
{式中、Rav:平均緩和時定数(試料の緩和時間逆数)、Rb:バルク水分子の緩和時定数(ブランク水の緩和時間逆数)。}。
・TSA値(m2)の計算方法
TSA値=SA×V×Ψp×ρ
{式中、SA:微粒子の比表面積(m2/g)=6÷(ρ×d)、ここで、ρ:微粒子密度(g/cm3)(微粒子密度:1.4g/cm3、ラテックス粒子密度:1.0g/cm3、金コロイド粒子密度:19.3g/cm3)、d:微粒子直径(μm)、V:ラジオ波が照射される部分のNMR管体積(cm3)(≒試料量)、Ψp:微粒子体積比、ここで、微粒子体積(i)=微粒子濃度(wt%)÷100÷微粒子密度、水の体積(ii)=(1−微粒子体積(i))÷水の密度(0.997g/cm3)、Ψp(微粒子体積比)=微粒子体積(i)÷水の体積(ii)、ρ:同上。}。
装置としては日本分光社製の紫外可視近赤外分光光度計JASCO V−650を用いた。タンパク質の一例として牛血清アルブミン(以下、「BSA)という、シグマアルドリッチ社製、A7906)の吸着量の算出方法を示す。吸着量を測定したい微粒子の1.0wt%分散液を30.0μL、pH=5.0 濃度100mMのリン酸緩衝液(キシダ化学社製)270.0μL、1.0wt%のBSA溶液3.0μLを、37℃で2時間反応させ、その後遠心分離により上澄み液を採取する。この上澄み液を市販のBCA試薬(和光純薬社製、297−73101)と反応させ、V−650により562nmの吸光度を測定し、上澄み液中のBSA量を算出する。その後仕込んだBSA量から上澄み液中のBSA量を引き、使用した微粒子量を除してどれだけ吸着したかを算出した。
2−モルホリノエタンスルホン酸(以下、「MES」という、東京化成社製、M0606)、苛性ソーダ、純水を用いてpH=6.0、濃度が100mMのMES緩衝液を調製した。得られたMES緩衝液63.0μL、カルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子1.0wt%分散液7.0μL、1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(以下、「EDC」という、東京化成社製、D1601)の1.0wt%溶液3.5μL、N−ヒドロキシスクシンイミド(以下、「NHS」という、東京化成社製、B0249)の1.0wt%溶液7.0μLを、容器に入れ、室温で15分間した。その後、遠心分離により上澄み液を捨てて未反応のEDC、NHSを除去した。MES緩衝液70.0μLを入れ、微粒子を分散させた後、カルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子に対して10.0wt%となるように抗hCG抗体(Fitzgelardh製、♯5014)をスピッツ管に添加し、37℃で2時間反応させた。その後、1.0wt%カゼイン(和光純薬工業社製、030−01505)を含有するブロッキング溶液(100mM ホウ酸緩衝液、PH=8.5)840.0μLを、スピッツ管に添加し、37℃の乾燥機内で1時間静置した。1時間後、遠心分離機(クボタ商事社製、6200)と遠心分離ローター(クボタ商事社製、AF−5008C)を用い、14000gの遠心を30分間行い、抗体結合カルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を沈降させた後、上澄み液を廃棄した。次いで、ホウ酸緩衝液(50mM、PH=10.0)840.0μLをスピッツ管に加え、超音波分散機(エスエムテー社製、UH−50)で10秒間処理し、抗体結合カルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を分散させた。十分に分散させた後、14000gの遠心を20分間行い、上澄み液を廃棄した。抗体結合カルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子の濃度が0.04wt%となるようにホウ酸緩衝液(50mM、PH=10.0)を添加し、超音波分散機により十分に分散させた。以上の方法により、抗体結合カルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子(以下、「検出試薬」ともいう。)を得た。
ポリエチレンテレフタレート製コンジュゲートパッド(Ah製、6615)を0.05wt%のTween−20(シグマアルドリッチ社製、T2700)に浸漬し、余分な液を取り除いた後に50℃で60分乾燥させた。次いで、高さ10mm、長さ300mmの形状にカットした。次いで、マイクロピペットを用い、検出試薬を272μL/800mm2となるように均等に塗布し、37℃で30分乾燥させた。
再生セルロース連続長繊維不織布を、大過剰の2.0wt%のBSA(シグマアルドリッチ社製、A7906)と2.0wt%のTween−20を含有するPBS緩衝液(66mM、PH7.4)に含浸し、余分な液を取り除いた後、50℃で60分乾燥させた。次いで、高さ20mm、長さ300mmの形状にカットした。
ニトロセルロース膜(Millipore社製、SHF0900425)を幅25mm、長さ300mmの形状にカットした。液体塗布装置(武蔵エンジニアリング社製、300DS)を用い、0.1wt%抗hCG−βマウス抗体(MedixBiochemica社製、6601)を含むPBS溶液(66mM、PH7.4)を0.1μL/mmの割合で高さ12mmの部分に塗布した。次いで、37℃で30分間乾燥させた。
バッキングカード(Adhesives Reserch社製、AR9020)に、前記にようにして得た捕捉抗体塗布メンブレン、吸収パッド(Millipore社製、C083)、検出試薬を含有したコンジュゲートパッド、及びサンプルパッドを張り合わせた。次いで、裁断機にて5mmの幅にカットし、幅5mm、高さ60mmのイムノクロマト診断キットを得た。
妊娠していない100人分の尿を用いて偽陽性測定を実施した。15分経過後のテストライン(TL)の発色強度を0−10の11段階のグレード評価を目視で行った。図2に示すように、目視グレードは値が大きいほどTLの線の色が濃いことを示し、0は線が見えないことを示す。この測定を5回行い、得られた値の平均値で目視グレードが0であれば偽陽性はないと判断した。100検体中、偽陽性が発生した検体数を数え、100で除して偽陽性の発生率とした。また、偽陽性が発生した検体については、目視グレードを記録した。
5mm幅にカットしたイムノクロマト診断キットをプラスチックのハウジングに入れた。得られたハウジング入りの診断キットを、0−10の11段階の目視グレードで判定した。検査対象物質には抗hCG−βマウス抗体を用いた。前記hCG抗体を1.0wt%のBSAを含む66mM、PH7.4のリン酸緩衝液(以下「PBS」という)で希釈し、前記hCG抗体が10.0mIU/mLの陽性検体を調製した。この陽性検体120.0μLを診断キットのサンプル滴下部に滴下し、以降20秒毎に目視で測定を行い、TLの経時変化を測定した。イムノクロマトリーダーで得られるTLの発色強度が1.0以上になった時間を測定した。ここで1.0以上とした理由は、個人差もあるが1.0以上になれば目視でもTLの存在を確認できるからである。この測定を5回行い、平均の時間を診断時間とした。
5mm幅にカットしたイムノクロマト診断キットをプラスチックのハウジングに入れた。得られたハウジング入りの診断キットを、0−10の11段階の目視グレードで判定した。検査対象物質にはヒト絨毛性ゴナドトロピン(以下「hCG」という)を用いた。hCGを1.0wt%のBSAを含む66mM、PH7.4のリン酸緩衝液(以下「PBS」という)で希釈し、前記hCG濃度が1.600mIU/mL、0.800mIU/mL、0.400mIU/mL、0.200mIU/mL、0.100mIU/mL、0.050mIU/mL、0.025mIU/mL、0.013mIU/mL、0.007mIU/mL、0.0025mIU/mLと段階的に薄くしていった陽性検体を調製した。この陽性検体120.0μLを診断キットのサンプル滴下部に滴下し、15分経過後のTLの発色強度を目視で判定した。この測定を各濃度で5回行い、得られた値の平均値が1.0以上の場合は陽性と判定し、1.0未満の場合は検出限界以下と見なした。この陽性判定が得られる下限のhCG濃度を検出限界とした。
従来公知の方法で、セルロース濃度0.37wt%、銅濃度0.13wt%、アンモニア濃度1.00wt%の銅アンモニアセルロース溶液を調製した。さらにテトラヒドロフラン濃度89.00wt%、水濃度11.00wt%、の凝固液を調製した。
マグネティックスターラーを用い凝固液5000gをゆっくり攪拌しながら、調製しておいた銅アンモニアセルロース溶液500gを添加した。5秒程度攪拌を継続した後、10wt%の硫酸1000gを加え中和、再生を行い、セルロース微粒子を含有したスラリー6500gを得た。
得られたスラリーを10000rpmの速度で10分間遠心分離した。沈殿物をデカンテーションにより取り出し、脱イオン水を注入して攪拌し、再び遠心分離した。pHが6.0〜7.0になるまでこの操作を数回繰り返し、その後、高圧ホモジナイザーによる分散処理を行い、セルロース微粒子分散液150gを得た。得られたセルロース微粒子の平均粒径を測定した結果、261nmであった。
カルボキシル基導入反応において、炭酸ナトリウムの量を9.9gに変更した以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表1に示す。実施例1と同様に、親水層による親水化、疎水性のスペーサー及びカルボキシル基が多量に導入されたことで、タンパク質の吸着が大幅に低減できた。その結果、偽陽性発生率が0%となった。検出感度については、カルボキシル基量が多いことで、微粒子表面に抗体が十分量固定されたために、高い検出感度を維持した。また、親水層の影響で微粒子がメンブレンに吸着することなく、迅速に移動できたために、診断時間が短縮できた。
カルボキシル基導入反応において、炭酸ナトリウムの量を29.7gに変更した以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表1に示す。実施例1と同様に、親水層による親水化、疎水性のスペーサー及びカルボキシル基が多量に導入されたことで、タンパク質の吸着が大幅に低減できた。その結果、偽陽性発生率が0%となった。検出感度については、カルボキシル基量が多いことで、微粒子表面に抗体が十分量固定されたために、高い検出感度を維持した。また、親水層の影響で微粒子がメンブレンに吸着することなく、迅速に移動できたために、診断時間が短縮できた。
染色反応を5サイクル、カルボキシル基導入反応において、炭酸ナトリウムの量を9.9gに変更した以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表1に示す。実施例1と同様に、親水層による親水化、疎水性のスペーサー及びカルボキシル基が多量に導入されたことで、タンパク質の吸着が大幅に低減できた。その結果、偽陽性発生率が0%となった。検出感度については、カルボキシル基量が多いことで、微粒子表面に抗体が十分量固定されたために、高い検出感度を維持した。また、親水層の影響で微粒子がメンブレンに吸着することなく、迅速に移動できたために、診断時間が短縮できた。
カルボキシル基導入反応において、反応剤を11−ブロモウンデカン酸(東京化成社製、B0389)7.2g、炭酸ナトリウムの量を9.9gに変更した条件に変更したこと以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表1に示す。実施例1と同様に、親水層による親水化、疎水性のスペーサー及びカルボキシル基が多量に導入されたことで、タンパク質の吸着が大幅に低減できた。その結果、偽陽性発生率が0%となった。検出感度については、カルボキシル基量が多いことで、微粒子表面に抗体が十分量固定されたために、高い検出感度を維持した。また、親水層の影響で微粒子がメンブレンに吸着することなく、迅速に移動できたために、診断時間が短縮できた。
カルボキシル基導入反応において、反応剤をエイコサン二酸(東京化成社製、E0320)10.0g、炭酸ナトリウムの量を9.9gに変更したこと以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表1に示す。実施例1と同様に、親水層による親水化、疎水性のスペーサー及びカルボキシル基が多量に導入されたことで、タンパク質の吸着が大幅に低減できた。その結果、偽陽性発生率が0%となった。検出感度については、カルボキシル基量が多いことで、微粒子表面に抗体が十分量固定されたために、高い検出感度を維持した。また、親水層の影響で微粒子がメンブレンに吸着することなく、迅速に移動できたために、診断時間が短縮できた。
カルボキシル基導入反応において、反応剤をテレフタル酸(東京化成社製、T0166)6.5g、炭酸ナトリウムの量を9.9gに変更したこと以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表1に示す。実施例1と同様に、親水層による親水化、疎水性のスペーサー及びカルボキシル基が多量に導入されたことで、タンパク質の吸着が大幅に低減できた。その結果、偽陽性発生率が0%となった。検出感度については、カルボキシル基量が多いことで、微粒子表面に抗体が十分量固定されたために、高い検出感度を維持した。また、親水層の影響で微粒子がメンブレンに吸着することなく、迅速に移動できたために、診断時間が短縮できた。
セルロース微粒子の凝固反応において、凝固液を酢酸エチル(東京化成社製、Q0040)濃度94.0wt%、水濃度6.0wt%に変更し、カルボキシル基導入反応において、炭酸ナトリウムの量を9.9gに変更したこと以外は実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表1に示す。実施例1と同様に、親水層による親水化、疎水性のスペーサー及びカルボキシル基が多量に導入されたことで、タンパク質の吸着が大幅に低減できた。その結果、偽陽性発生率が0%となった。検出感度については、カルボキシル基量が多いことで、微粒子表面に抗体が十分量固定されたために、高い検出感度を維持した。また、親水層の影響で微粒子がメンブレンに吸着することなく、迅速に移動できたために、診断時間が短縮できた。
セルロース微粒子の凝固反応において、凝固液をアセトン濃度27.0wt%、水濃度0.2wt%、アンモニア濃度72.8wt%に変更し、カルボキシル基導入反応において、炭酸ナトリウムの量を9.90gに変更したこと以外は実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表1に示す。実施例1と同様に、親水層による親水化、疎水性のスペーサー及びカルボキシル基が多量に導入されたことで、タンパク質の吸着が大幅に低減できた。その結果、偽陽性発生率が0%となった。検出感度については、カルボキシル基量が多いことで、微粒子表面に抗体が十分量固定されたために、高い検出感度を維持した。また、親水層の影響で微粒子がメンブレンに吸着することなく、迅速に移動できたために、診断時間が短縮できた。
カルボキシル基導入反応において、炭酸ナトリウムの量を9.9g、反応剤を3−ブロモプロピオン酸(東京化成社製、B0645)4.2gに変更したこと以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表1に示す。実施例1と同様に、親水層による親水化、疎水性のスペーサー及びカルボキシル基が多量に導入されたことで、タンパク質の吸着が大幅に低減できた。その結果、偽陽性発生率が0%となった。検出感度については、カルボキシル基量が多いことで、微粒子表面に抗体が十分量固定されたために、高い検出感度を維持した。また、親水層の影響で微粒子がメンブレンに吸着することなく、迅速に移動できたために、診断時間が短縮できた。
表面親水化反応において、親水化剤をN−2−(アミノエチル)−3−アミノプロピルトリメトキシシラン(東京化成社製、A0774)10.0mL、及びポリエチレングリコールシラン Mw2000(Creative PEGWorks社製、PLS−2012)10.0mLの混合体に変更し、カルボキシル基導入反応において、反応剤を11−ブロモウンデカン酸7.2gに変更したこと以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表1に示す。実施例1と同様に、親水層による親水化、疎水性のスペーサー及びカルボキシル基が多量に導入されたことで、タンパク質の吸着が大幅に低減できた。その結果、偽陽性発生率が0%となった。検出感度については、カルボキシル基量が多いことで、微粒子表面に抗体が十分量固定されたために、高い検出感度を維持した。また、親水層の影響で微粒子がメンブレンに吸着することなく、迅速に移動できたために、診断時間が短縮できた。
表面親水化反応において、親水化剤をアミノ−PEG12−プロピオン酸(シグマアルドリッチ社製、JKA12006)10.0mL、カルボキシル基導入反応において、反応剤を11−ブロモウンデカン酸7.2g、炭酸ナトリウムを9.9gに変更したこと以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表1に示す。実施例1と同様に、親水層による親水化、疎水性のスペーサー及びカルボキシル基が多量に導入されたことで、タンパク質の吸着が大幅に低減できた。その結果、偽陽性発生率が0%となった。検出感度については、カルボキシル基量が多いことで、微粒子表面に抗体が十分量固定されたために、高い検出感度を維持した。また、親水層の影響で微粒子がメンブレンに吸着することなく、迅速に移動できたために、診断時間が短縮できた。
カルボキシル基導入反応において、反応剤をBr−(CH2)30−COOH11.0g、炭酸ナトリウムの量を9.9gに変更したこと以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表1に示す。実施例1と同様に、親水層による親水化、疎水性のスペーサー及びカルボキシル基が多量に導入されたことで、タンパク質の吸着が大幅に低減できた。その結果、偽陽性発生率が0%となった。検出感度については、カルボキシル基量が多いことで、微粒子表面に抗体が十分量固定されたために、高い検出感度を維持した。また、親水層の影響で微粒子がメンブレンに吸着することなく、迅速に移動できたために、診断時間が短縮できた。
カルボキシル基導入反応において、炭酸ナトリウム量を0.01gに変更したこと以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表1に示す。親水層及び疎水性スペーサーの効果により、タンパク質の吸着量は、以下の比較例1などと比べると低減でき、偽陽性低減効果も認められた。
カルボキシル基導入反応において、反応剤をポリ(エチレングリコール)ビス(カルボキシメチル)エーテル Mw600(Creative PEG Works社製、PSB−362)16.4gに変更したこと以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表1に示す。タンパク質の吸着量は、以下の比較例1などと比べると若干低減でき、偽陽性低減効果があった。
表面親水化反応において親水化剤の量を40.0mL、カルボキシル基導入反応において、反応剤を11−ブロモウンデカン酸7.2gに変更したこと以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表1に示す。親水層及び疎水性スペーサーの影響で、以下の比較例1と比べるとタンパク質の吸着量は低減でき、偽陽性低減効果があった。
表面親水化反応において、親水化剤の量を8.0mL、カルボキシル基導入反応において、反応剤をポリ(エチレングリコール)ビス(カルボキシメチル)エーテル Mw600(Creative PEG Works社製、PSB−362)16.4g、炭酸ナトリウムの量を0.01gに変更したこと以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表1に示す。タンパク質の吸着量は、以下の比較例1などと比べると若干低減でき、偽陽性低減効果が認められた。
表面親水化反応において親水化剤の量を40.0mL、カルボキシル基導入反応において、反応剤をポリ(エチレングリコール)ビス(カルボキシメチル)エーテル Mw600(Creative PEG Works社製、PSB−362)16.4g、炭酸ナトリウム量を9.9gに変更したこと以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表1に示す。タンパク質の吸着量は、以下の比較例1と比べると若干改善された。その結果、若干ではあるが偽陽性低減効果も認められた。
反応剤を11−ブロモウンデカン酸7.2g、炭酸ナトリウム量を0.01gに変更したこと以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表1に示す。親水層及び疎水性スペーサーの効果により、以下の比較例1と比べるとタンパク質の吸着量は低減した。その結果、偽陽性低減効果も認められた。
カルボキシル基導入反応において、反応剤をポリ(エチレングリコール)ビス(カルボキシメチル)エーテル Mw600(Creative PEG Works社製、PSB−362)16.4g、炭酸ナトリウム量を0.01gに変更したこと以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表1に示す。タンパク質の吸着量は、以下の比較例1と比べると若干改善された。その結果、偽陽性低減効果が認められた。
カルボキシル基導入反応において、反応剤をポリ(エチレングリコール)ビス(カルボキシメチル)エーテル Mw5000(Creative PEG Works社製、PSB−366)65.6g、炭酸ナトリウム量を9.9gに変更したこと以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表1に示す。スペーサーはPEGであったが、長さが長いために排除体積効果が働き、タンパク質の吸着量は0となった。その結果、偽陽性低減効果があった。
〔比較例1〕
表面親水化反応とカルボキシル基導入反応を行わないこと以外は、実施例1と同様の方法で着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表2に示す。微粒子表面は疎水的なため、微粒子表面にタンパク質が多量に吸着しやすかったと思われる。その結果、非特異吸着が起こり偽陽性発生率は3%であった。
特許文献4に記載の方法でスペーサーが(CH2)16のカルボキシル基導入着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表2に示す。特許文献4とは抗体の使用量が異なるため、特許文献4より感度が飛躍的に向上したが、微粒子表面は疎水的なため、微粒子表面にタンパク質が多量に吸着したため、非特異吸着が起こり偽陽性発生率は3%であった。
表面親水化を行わないこと以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表2に示す。カルボキシル基が若干多量に導入されたためか、タンパク質の吸着量が比較例1又は2と比べると若干改善された。しかし、親水層が存在しないため、親水化度が低く、タンパク質が吸着してしまい、偽陽性の低減効果はほとんどなかった。
表面親水化を行わず、特許文献4に記載の方法で微粒子表面にアミノ基を導入した。その後、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表2に示す。残存反応性アミノ基量が多い上に親水層も存在しないため、タンパク質の吸着量低減効果は見られなかった。その結果、偽陽性低減効果も認められなかった。
表面親水化を行わず、カルボキシル基導入反応において、反応剤をポリ(エチレングリコール)ビス(カルボキシメチル)エーテル Mw600(Creative PEG Works社製、PSB−362)16.40gに変更したこと以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表2に示す。親水層が存在せず、スペーサーもPEGであったため、微粒子表面とスペーサーが電気的な相互作用で吸着してしまうことに加え、微粒子表面の親水性も十分ではないのでタンパク質が吸着してしまい、吸着量の低減効果は見られなかった。その結果、偽陽性低減効果も認められなかった。
表面親水化は行わず、比較例4と同様の方法で微粒子にアミノ基を導入した。その後、カルボキシル基導入反応において、反応剤に11−ブロモウンデカン酸、炭酸ナトリウムの量を0.01gに変更したこと以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表2に示す。親水層が存在せず、残存反応性アミノ基量が多いため、微粒子表面の親水性が十分ではなくタンパク質の吸着低減効果は見られなかった。その結果、偽陽性低減効果も認められなかった。
表面親水化を行わず、比較例4と同様の方法で微粒子にアミノ基を導入した。その後、カルボキシル基導入反応において、反応剤をポリ(エチレングリコール)ビス(カルボキシメチル)エーテル Mw600(Creative PEG Works社製、PSB−362)16.4gに変更したこと以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表2に示す。親水層が存在せず、残存反応性アミノ基量が多いため、微粒子表面の親水性が十分ではない上に、スペーサーもPEGであったために、タンパク質の吸着低減効果は見られなかった。その結果、偽陽性低減効果も認められなかった。
表面親水化を行わず、比較例4と同様の方法で微粒子にアミノ基を導入した。その後、カルボキシル基導入反応において、反応剤をポリ(エチレングリコール)ビス(カルボキシメチル)エーテル Mw600(Creative PEG Works社製、PSB−362)16.4g、炭酸ナトリウム量を0.01gに変更したこと以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表2に示す。親水層が存在せず、残存反応性アミノ基量が多いため、微粒子表面の親水性が十分ではない上に、スペーサーもPEGであったために、タンパク質の吸着低減効果は見られなかった。その結果、偽陽性低減効果も認められなかった。
染色反応を1サイクルとしたこと以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表2に示す。発色強度が低いために、実施例より検出感度は劣り、それに伴い診断時間も長くなってしまった。
凝固液をジメチルスルホキシド(東京化成社製、D0798)50.00wt%、水50.00wt%に変更したこと以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表2に示す。粒子径が小さいために、実施例より検出感度は劣り、それに伴い診断時間も長くなってしまった。
表面親水化反応において親水化剤の量を1.0mLに変更したこと以外は、実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表2に示す。親水層が少なすぎたために、カルボキシル基導入反応時に微粒子の発色強度が著しく低下してしまった。
セルロース微粒子の凝固反応において、凝固液をテトラヒドロフラン濃度97.0wt%、水濃度3.0wt%に変更し、カルボキシル基導入反応において、炭酸ナトリウムの量を9.9g、反応剤を11−ブロモウンデカン酸7.2gに変更したこと以外は実施例1と同様の方法でカルボキシル基導入親水化着色セルロース微粒子を作製した。この微粒子の物性、及び発色粒子として使用した際のイムノクロマト性能を以下の表2に示す。微粒子の粒径が大きすぎたために、メンブレン中を展開できなかった。
粒径が50nmでかつカルボキシル基が導入されたカルボキシル基修飾金ナノ粒子2000Da PEGリンカー(CTD社製)を発色粒子として使用し、イムノクロマト性能を評価した。結果を以下の表2に示す。微粒子表面が疎水的なため、メンブレン中を移動する際に時間がかかり発色時間は遅かった。また、微粒子表面が疎水的なため、タンパク質も微粒子表面に吸着しやすく、偽陽性も起こりやすかった。
粒径が470nm、発色強度が0.5でかつカルボキシル基が導入されたラテックス粒子(Bangs社製)を発色粒子として使用し、イムノクロマト性能を評価した。結果を以下の表2に示す。微粒子表面が疎水的なため、タンパク質も微粒子表面に吸着しやすく、偽陽性も起こりやすかった。
実施例1と同様の方法で、親水化着色セルロース微粒子を作製した。その後カルボキシル基導入反応は行わず、そのまま発色粒子として使用した。粒子物性とイムノクロマト性能を表2に示す。粒子が親水性にも拘わらず、抗体との結合部位が存在しないために、抗体が粒子上に担持できなかったので感度が非常に低いものとなった。
Claims (6)
- 平均粒子径が60〜900nmであり、発色強度が1.0〜10.0であり、微粒子表面に該微粒子の水酸基と化学的に結合した親水層を有し、かつ、該親水層の反応基と結合したスペーサーを介してカルボキシル基が導入されていることを特徴とする着色セルロース微粒子。
- 前記カルボキシル基の導入量が、前記着色セルロース微粒子1g当たり0.20〜3.00mmolである、請求項1に記載の着色セルロース微粒子。
- 前記親水層が、シラン層、ポリエチレングリコール層(PEG)、又はシラン層とポリエチレングリコール(PEG)層の混合層のいずれかである、請求項1又は2に記載の着色セルロース微粒子。
- 前記スペーサーが、炭化水素系の構造体である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の着色セルロース微粒子。
- 請求項1〜4のいずれか1項に記載の着色セルロース微粒子の前記カルボキシル基にリガンドが共有結合されている構造体。
- 請求項5に記載の構造体を含むイムノクロマト診断キット。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2017076162 | 2017-04-06 | ||
JP2017076162 | 2017-04-06 | ||
PCT/JP2018/012938 WO2018186267A1 (ja) | 2017-04-06 | 2018-03-28 | 親水化着色セルロース微粒子 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2018186267A1 JPWO2018186267A1 (ja) | 2019-11-21 |
JP6865813B2 true JP6865813B2 (ja) | 2021-04-28 |
Family
ID=63712147
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019511188A Active JP6865813B2 (ja) | 2017-04-06 | 2018-03-28 | 親水化着色セルロース微粒子 |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11353453B2 (ja) |
EP (1) | EP3608670B1 (ja) |
JP (1) | JP6865813B2 (ja) |
KR (1) | KR102300483B1 (ja) |
CN (1) | CN110476063B (ja) |
CA (1) | CA3058871C (ja) |
ES (1) | ES2909503T3 (ja) |
TW (1) | TWI682174B (ja) |
WO (1) | WO2018186267A1 (ja) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111108387B (zh) * | 2017-09-25 | 2023-08-29 | 旭化成株式会社 | 有机着色细颗粒、诊断药试剂盒及体外诊断方法 |
JP6886668B2 (ja) * | 2019-04-23 | 2021-06-16 | 住友ゴム工業株式会社 | 医療用検査装置及び細胞検査方法 |
JP7552065B2 (ja) | 2020-04-27 | 2024-09-18 | Dic株式会社 | 水性顔料分散体及び水性インクの製造方法、並びに水性顔料分散体及び水性インクの設計方法 |
JPWO2023089972A1 (ja) * | 2021-11-18 | 2023-05-25 |
Family Cites Families (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4143203A (en) * | 1976-03-19 | 1979-03-06 | Amicon Corporation | Particulate support material |
WO1990015666A1 (en) * | 1989-06-16 | 1990-12-27 | Omni Quest Corporation | Coated magnetic particles for use in separations |
GB0123278D0 (en) * | 2001-09-27 | 2001-11-21 | Ucb Sa | Labelled articles and uses thereof |
SE526038C2 (sv) | 2002-07-08 | 2005-06-21 | Gambro Lundia Ab | Polymeraffinitetsmatris, förfarande för framställning därav och anvädning därav |
JP4985916B2 (ja) * | 2006-03-27 | 2012-07-25 | Jsr株式会社 | カルボキシル基含有粒子の製造方法 |
DE602006010956D1 (de) | 2005-11-01 | 2010-01-21 | Jsr Corp | Magnetische Partikel für die Diagnostik |
JP5035622B2 (ja) | 2008-01-11 | 2012-09-26 | 積水化学工業株式会社 | 着色ラテックス |
KR101370777B1 (ko) | 2008-03-31 | 2014-03-06 | 아사히 가세이 셍이 가부시키가이샤 | 셀룰로오스 유도체 미립자, 그의 분산액, 그의 분산체 및 진단약 |
EP2503337B1 (en) * | 2009-11-17 | 2016-08-24 | Asahi Kasei Kabushiki Kaisha | Organic colored microparticles and diagnostic reagent kit containing the same |
TWI386778B (zh) * | 2009-12-23 | 2013-02-21 | Giga Byte Tech Co Ltd | 筆記型電腦支撐架 |
JP5866880B2 (ja) * | 2011-02-10 | 2016-02-24 | 住友ベークライト株式会社 | 生理活性物質固定化用粒子、生理活性物質固定粒子及び糖親和性物質捕捉粒子 |
CN102604305A (zh) | 2012-02-21 | 2012-07-25 | 苏州纳诺康生物技术有限公司 | 一种纳米荧光微球,其制备方法及其用作免疫层析方法的标记物的用途 |
JP5992703B2 (ja) | 2012-03-22 | 2016-09-14 | 田中貴金属工業株式会社 | イムノクロマトグラフィー検出方法 |
JP6148033B2 (ja) * | 2013-02-22 | 2017-06-14 | 旭化成株式会社 | 蛍光色素化合物を含むセルロース微粒子 |
EP3009840B1 (en) * | 2013-06-10 | 2018-09-19 | Asahi Kasei Kabushiki Kaisha | Immunochromatographic diagnosis kit |
WO2015132350A1 (en) * | 2014-03-05 | 2015-09-11 | Commissariat À L' Energie Atomique Et Aux Energies Alternatives (Cea) | Method for photo-immobilizing biomolecules on a non-functionalized carrier |
JP5767362B1 (ja) | 2014-04-25 | 2015-08-19 | 田中貴金属工業株式会社 | 免疫クロマト分析装置、免疫クロマト分析方法及び免疫クロマト分析キット |
KR101555861B1 (ko) | 2014-08-08 | 2015-09-30 | 재단법인대구경북과학기술원 | 진단 시약용 셀룰로오스 아세테이트 착색 미립자 비드의 제조 방법 및 이로부터 제조되는 진단 시약용 셀룰로오스 아세테이트 착색 미립자 비드 |
JP6523020B2 (ja) | 2015-03-31 | 2019-05-29 | 古河電気工業株式会社 | 生体分子の検出又は定量方法、及び生体分子の検出又は定量用標識試薬粒子 |
-
2018
- 2018-03-28 CA CA3058871A patent/CA3058871C/en active Active
- 2018-03-28 WO PCT/JP2018/012938 patent/WO2018186267A1/ja unknown
- 2018-03-28 JP JP2019511188A patent/JP6865813B2/ja active Active
- 2018-03-28 ES ES18781015T patent/ES2909503T3/es active Active
- 2018-03-28 EP EP18781015.5A patent/EP3608670B1/en active Active
- 2018-03-28 KR KR1020197027219A patent/KR102300483B1/ko active IP Right Grant
- 2018-03-28 CN CN201880023303.1A patent/CN110476063B/zh active Active
- 2018-03-28 US US16/498,736 patent/US11353453B2/en active Active
- 2018-04-02 TW TW107111557A patent/TWI682174B/zh active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN110476063A (zh) | 2019-11-19 |
CN110476063B (zh) | 2022-11-15 |
WO2018186267A1 (ja) | 2018-10-11 |
EP3608670A1 (en) | 2020-02-12 |
JPWO2018186267A1 (ja) | 2019-11-21 |
KR102300483B1 (ko) | 2021-09-10 |
EP3608670B1 (en) | 2022-02-23 |
TWI682174B (zh) | 2020-01-11 |
ES2909503T3 (es) | 2022-05-06 |
EP3608670A4 (en) | 2020-03-25 |
US11353453B2 (en) | 2022-06-07 |
US20210109093A1 (en) | 2021-04-15 |
CA3058871C (en) | 2022-11-22 |
KR20190117678A (ko) | 2019-10-16 |
TW201842334A (zh) | 2018-12-01 |
CA3058871A1 (en) | 2018-10-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6865813B2 (ja) | 親水化着色セルロース微粒子 | |
JP5788330B2 (ja) | 有機着色微粒子、それを含む診断薬キット及びインビトロ診断方法 | |
JP6053927B2 (ja) | イムノクロマト診断キット | |
TWI464403B (zh) | Cellulose derivative fine particles, a dispersion thereof, a dispersion thereof and a diagnostic agent | |
JP2020177035A (ja) | 標識物質、免疫学的測定法、免疫学的測定用試薬、アナライトの測定方法、アナライト測定用キット、及び、ラテラルフロー型クロマト用テストストリップ | |
JP6148033B2 (ja) | 蛍光色素化合物を含むセルロース微粒子 | |
JP6877564B2 (ja) | 有機着色微粒子、診断薬キット、及びインビトロ診断方法 | |
JP2019174336A (ja) | 懸濁性に優れ、迅速診断が可能な着色セルロース微粒子 | |
JP2017138271A (ja) | グラフト化された着色セルロース微粒子 | |
JP2019120497A (ja) | 免疫学的測定用金属ナノ粒子−セルロース複合体、標識物質、免疫学的測定法、免疫学的測定用試薬、アナライトの測定方法、アナライト測定用キット、及び、ラテラルフロー型クロマト用テストストリップ |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20190805 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20201013 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20201028 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20210323 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210406 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6865813 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |