JP6619882B2

JP6619882B2 - Ｄ−プシコースを利用した脂質の吸収抑制および／または排出促進方法

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Publication number: JP6619882B2
Application number: JP2018530463A
Authority: JP
Inventors: チェ，ミョンスク; クォン，ウニョン; ハン，ヨンジ
Original assignee: シージェイチェルジェダンコーポレイション
Priority date: 2015-09-01
Filing date: 2016-09-01
Publication date: 2019-12-11
Anticipated expiration: 2036-09-01
Also published as: CA2996872A1; WO2017039365A1; UA122342C2; RU2018111327A3; KR101692033B1; EP3345608A1; RU2725145C2; EP3345608A4; JP2018530600A; MX2018002507A; BR112018003842A2; RU2018111327A; CL2018000523A1; CN107921052A; CO2018002394A2; US20180243325A1

Description

本発明はＤ−プシコースを利用した脂質の吸収抑制および／または排出促進方法に関する。

Ｄ−プシコース（Ｄ−ｐｓｉｃｏｓｅ）はＤ−フルクトースのＣ−３エピマーであり、スクロースの加水分解またはＤ−グルコースの異性化で得られるＤ−グルコース及びＤ−フルクトースの商業用混合物で極少量存在する天然糖であり、砂糖に比べて甘味度が７０％の単糖類である。Ｄ−プシコースは人体内で代謝されずカロリーがほぼゼロであり、体脂肪形成の抑制作用で体重増加に影響が少ない甘味料として報告されている。最近では、Ｄ−プシコースの非齲蝕及び抗齲蝕機能に関する効果が発表され、歯牙健康に役立つ素材と砂糖を代替する甘味料として開発が活発に行われている。前述の特性と機能性のためＤ−プシコースは体重増加防止用の甘味料として食品産業分野で脚光を浴びている。

Ｄ−プシコースは、米国農務省（ＵＳＤＡ；ＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ）がＧＲＡＳ（ＧｅｎｅｒａｌｌｙＲｅｃｏｇｎｉｚｅｄＡｓＳａｆｅ；一般的に安全な物質で認められる。）で認定した物質であり、Ｄ−プシコースが脂質代謝に影響を与えるという研究報告があるが（Ｙａｓｕｏｎａｇａｔａｅｔａｌ．，Ｊ．Ａｇｒｉｃ、ＦｏｏｄＣｈｅｍ．２０１５，６３，３１６８−３１７６）、Ｄ−プシコースの脂質吸収の減少と脂質の排出用途に関する報告はない。

本発明者らは、Ｄ−プシコースが小腸内の脂質吸収を抑制して糞便内の脂質含有量を著しく増加させる機能があり、体重、体脂肪量、および血漿脂質濃度（遊離脂肪酸、中性脂肪、総コレステロール、非高密度リポタンパク質コレステロール、アポリポタンパク質Ｂ）を減少させて体重、体脂肪量、および血漿脂質プロファイルが正常化し、脂肪酸合成酵素であるＦＡＳ（Ｆａｔｔｙａｃｉｄｓｙｎｔｈａｓｅ）の活性を減少させる効果を確認し、本発明を完成した。

本出願の目的は、Ｄ−プシコースを客体（ｓｕｂｊｅｃｔ）に投与するステップを含む前記客体が摂取した脂質（ｌｉｐｉｄ）の吸収抑制および／または排出促進方法、Ｄ−プシコースを含む組成物の食品脂質の吸収を減少する用途、Ｄ−プシコースを含む脂肪酸合成酵素（ＦＡＳ：Ｆａｔｔｙａｃｉｄｓｙｎｔｈａｓｅ）の活性抑制剤、Ｄ−プシコースを客体（ｓｕｂｊｅｃｔ）に投与するステップを含む前記客体の脂肪酸合成酵素活性を抑制する方法、薬剤学的有効量のＤ−プシコースを、これを必要とする客体（ｓｕｂｊｅｃｔ）に投与するステップを含む、高脂血症、動脈硬化症または脂肪肝の予防、改善または治療方法、およびＤ−プシコースを含む、高脂血症、動脈硬化症または脂肪肝の予防、改善または治療用の組成物を提供することである。

以下、本出願の内容についてより詳細に説明する。本明細書に記載のない内容は、本出願の技術分野または類似分野における熟練者であれば十分な認識と類推が可能であるため、その説明を省略する。

本出願の目的を達成するため本出願の一実施形態では、Ｄ−プシコースを客体（ｓｕｂｊｅｃｔ）に投与するステップを含む前記客体が摂取した脂質（ｌｉｐｉｄ）の吸収抑制および／または排出促進方法を提供する。

本出願の客体は人間または非人間を含む哺乳類を含み、非人間哺乳類にはマウス、ラット、犬、猫、馬、牛、羊、ヤギ、ブタ、ウサギなどがあるが、これらに限定されない。

本出願の脂質は動物脂質および植物性脂質を含むが、これに限定されない。具体的に、本出願の脂質は動物脂質、植物性脂質またはその組み合わせである。より具体的に、前記脂質は、食品または餌に含まれる脂質である。

本出願の投与は、経口投与、非経口投与（例えば、静脈内、皮下、腹腔内または局所適用）で実施できる。具体的に、本出願の投与は、経口投与で実施できる。

本出願の投与は、前記客体が摂取した脂質１００重量部に対してＤ−プシコース１０〜５０重量部で投与する。より具体的には、本出願の投与は、前記客体が摂取した脂質１００重量部に対して１０〜４０、１０〜３０、１０〜２５、１５〜５０、１５〜４０、１５〜３０、１５〜２５、２０〜５０、２０〜４０、２０〜３０、２０〜２５、または２５重量部で投与する。

本出願の一実施例において、本出願の吸収は小腸内吸収である。具体的に、Ｄ−プシコースを高脂肪食餌肥満マウスに投与した場合、小腸での脂質吸収に関連する遺伝子（ＣＤ３６、ＦＡＴＰ４、ＡｐｏＢ４８）のｍＲＮＡ発現が減少することを確認した。具体的には、排出量と関連しては、排泄と関連する遺伝子（ＡＢＣＧ５とＡＢＣＧ８）のｍＲＮＡ発現が減少することを確認した。

本出願の他の実施例では、Ｄ−プシコースを含む組成物の食品脂質の吸収抑制および／または排出を促進するための用途を提供する。

Ｄ−プシコースは甘味料として広く使用されるが、本出願で初めて食品脂質の吸収と排出に関連したメカニズムを確認し、具体的内容は上述の通りである。

本出願の他の実施例で、Ｄ−プシコースを含む脂肪酸合成酵素（ＦＡＳ：Ｆａｔｔｙａｃｉｄｓｙｎｔｈａｓｅ）活性の抑制剤またはＤ−プシコースを客体（ｓｕｂｊｅｃｔ）に投与するステップを含む前記客体の脂肪酸合成酵素活性を抑制する方法を提供する。

本出願の他の実施例で本出願のＤ−プシコースは、肝臓で脂肪酸β−酸化活性を減少させる。また、本出願のＤ−プシコースは、脂肪組織における脂肪酸β−酸化活性を高める。

本出願の他の実施例では、薬剤学的有効量のＤ−プシコースを必要とする客体（ｓｕｂｊｅｃｔ）に投与するステップを含む、高脂血症、動脈硬化症または脂肪肝の予防、改善または治療方法を提供する。

本出願は他の実施例では、Ｄ−プシコースを含む、高脂血症、動脈硬化症または脂肪肝の予防、改善または治療用組成物を提供する。

本出願における「高脂血症」は、中性脂肪とコレステロールなどの脂肪の代謝が正常に行われず、血液中に脂肪量が多くて誘発される疾患を意味する。より具体的には、高脂血症は血液内の中性脂肪、ＬＤＬコレステロール、リン脂質、および遊離脂肪酸などの脂質成分が増加した状態で、発生頻度の多い高コレステロール血症または高中性脂肪血症が含まれる。

本出願における「動脈硬化症」は、血管の最内側の膜（内皮）にコレステロール沈着や血管内皮細胞の増殖などにより血管が狭小または閉鎖されて、末梢血管への血流障害を起こす疾患を意味する。

本出願における「脂肪肝」は肝臓の脂肪代謝障害により過量の脂肪が肝細胞に蓄積した状態を意味し、狭心症、心筋梗塞、脳卒中、動脈硬化、脂肪肝と膵炎などのさまざまな疾病の原因となる。

本出願における「予防」は、目的とする疾患の発症を抑制または遅延させる全ての行為を意味する。具体的には、本出願の「予防」は、本出願のＤ−プシコースによって高脂血症、動脈硬化症または脂肪肝の症状（例えば、血漿で遊離脂肪酸、中性脂肪、総コレステロール、ｎｏｎ−ＨＤＬコレステロール及びＡｐｏ−Ｂの濃度、動脈硬化指数（ＡＩ）の増加；肝組織における脂肪酸、中性脂肪及びコレステロール含量の増加；また脂肪球サイズの増加など）の発生を抑制または遅延することを意味する。

本出願における「改善」は、発病した疾病の症状及び副作用を軽減または緩和する全ての行為を意味する。本出願における「治療」は、発病した疾病の症状と副作用を改善、好転または良い方向に変更するすべての行為を意味する。具体的には、本出願の「改善」または「治療」は、本出願のＤ−プシコースによって前記高脂血症、動脈硬化症または脂肪肝の症状が軽減、改善、緩和または好転されて血漿から遊離脂肪酸、中性脂肪、総コレステロール、ｎｏｎ−ＨＤＬコレステロールまたはＡｐｏ−Ｂの濃度の減少；血漿のＨＤＬ−コレステロールまたはＡｐｏ−ＡＩ濃度の増加；動脈硬化指数（ＡＩ）の減少；肝組織の脂肪酸、中性脂肪またはコレステロール含量の減少；または肝組織の脂肪球サイズの減少などの現象が現れることを意味する。

下記実施例で実証したように本出願のＤ−プシコースは、具体的には、高脂肪食餌誘導性肥満マウスの血漿で、遊離脂肪酸、中性脂肪、総コレステロール、ｎｏｎ−ＨＤＬコレステロール、Ａｐｏ−Ｂの濃度、レプチン及びレジスチンの濃度、およびレプチン：アディポネクチン比率を著しく減少させて正常食餌群と類似な水準を維持し、正常食餌群より血漿のＨＤＬ−コレステロールとＡｐｏ−ＡＩ濃度を増加させて動脈硬化指数（ＡＩ）が下がることで、高脂血症または動脈硬化症の予防、改善または治療の効果があることを確認した。また、本出願のＤ−プシコースが高脂肪食餌誘導性肥満マウスの肝組織で脂肪酸合成酵素のＦＡＳ活性を減少させ、肝組織における脂肪酸、中性脂肪、およびコレステロールの含量だけでなく、脂肪球のサイズを減少させることで、高脂肪食餌による脂肪肝の生成を抑制する。また、高脂肪食餌誘導性肥満マウスの肝臓で脂肪酸合成に関連した遺伝子のｍＲＮＡ発現を減少させ、脂肪肝の予防または治療の効果があることを確認した。

前記内容から、本出願Ｄ−プシコースは小腸内の脂質の吸収を抑制し、糞便内の脂質含量を著しく増加させる機能のあることが分かる。また、血漿脂質濃度を減少させて血漿脂質プロファイルを正常化する効果のあることが分かる。したがって、本出願のＤ−プシコースは、高脂血症、動脈硬化症または脂肪肝の予防、改善または治療に有用な医薬品と食品（具体的には、健康機能食品）に使用することができる。

本出願の組成物は、目的とする方法に応じて、経口投与、非経口投与（例えば、静脈内、皮下、腹腔内または局所適用）が可能であり、具体的に経口投与することができる。

本出願の組成物が薬剤学的組成物として使用される場合、投与のためにＤ−プシコースに加えて薬剤学的に許容可能な担体の１種以上をさらに含むことができる。薬剤学的に許容可能な担体は、生理食塩水、滅菌水、リンゲル液、緩衝食塩水、デキストロース溶液、マルトデキストリン溶液、グリセロール、エタノール、およびこれらの成分のうち１成分以上を混合して使用することができ、必要に応じて抗酸化剤、緩衝液、静菌剤など他の通常の添加剤を添加することができる。また希釈剤、分散剤、界面活性剤、結合剤及び潤滑油を付加的に添加して水溶液、懸濁液、乳濁液などの注射用剤形、丸薬、カプセル、顆粒または錠剤に製剤化することができる。さらに、当分野の適正な方法によって、またはＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ（最新版）、ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ、ＥａｓｔｏｎＰＡに開示された方法を用いて、各疾患または成分に応じて製剤化することができる。

本出願の薬剤学的組成物の投与量は、患者の体重、年齢、性別、健康状態、食餌、投与時間、投与方法、排泄率および疾患の重症度などによってその範囲が多様である。本出願のＤ−プシコースは一日投与量が約０．０００１〜６００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．００１〜５００ｍｇ／ｋｇであり、一日に一回ないし数回に分けて投与する。

本出願の薬剤学的組成物は、単独で、または手術、ホルモン治療、薬物治療、および生物学的反応の調節剤を使用する方法と併用して使用することができる。

本出願の組成物は、食品または健康食品の組成物として使用する。本出願のＤ−プシコースを食品または健康食品の組成物に使用する場合、前記Ｄ−プシコースをそのまま添加することと他の食品または食品成分と共に使用することができ、通常の方法で使用することもできる。有効成分の混合量は使用目的（予防、健康または治療的処置）に応じて適切に決定する。前記食品組成物は脂質が含まれる食品や健康食品の組成物であれば制限なく含まれる。食品組成物の例として、肉類、ソーセージ、パン、ケーキ、チョコレート、キャンディー類、スナック類、菓子類（クッキー、クラッカーなど）、ピザ、麺類（ラーメンなど）、ガム類、アイスクリーム類を含む酪農製品、各種スープ、ケチャップ、ソース、グレービー（ｇｒａｖｉｅｓ）、ドレッシング、飲料水、茶、ドリンク剤、アルコール飲料、およびビタミン複合剤などがある。

本出願の食品または健康食品組成物は、通常の飲料のように様々な香味剤または天然炭水化物などを追加成分として含有することができる。上述した天然炭水化物は、ブドウ糖及び果糖などの単糖類、マルトースおよびスクロースなどの二糖類、デキストリンおよびシクロデキストリンなどの多糖類、並びにキシリトール、ソルビトール、およびエリスリトールなどの糖アルコールである。甘味料としてはソーマチン、ステビア抽出物などの天然甘味料とサッカリン、アスパルテームなどの合成甘味料などを使用する。前記天然炭水化物の割合は、本出願の食品または健康食品組成物１００ｍｌ当たり、一般的に約０．０１〜０．２０ｇ、具体的には、約０．０４〜０．１０ｇである。

更に、本出願の食品または健康食品組成物は、様々な栄養剤、ビタミン、電解質、風味剤、着色剤、ペクチン酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護コロイド性増粘剤、ｐＨ調整剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に用いる炭酸化剤などを含有する。その他、本出願の食品または健康食品組成物は、天然果実ジュース、果実ジュース飲料、野菜飲料を製造するための果肉を含有する。これらの成分は、独立して、または組み合わせて使用することができる。これらの添加剤の割合は、本出願の食品または健康食品組成物１００重量部当たり０．０１〜０．２０重量部の範囲である。

本出願の食品脂質の吸収を減少させるための用途、脂肪酸合成酵素の活性抑制剤、脂肪酸合成酵素活性の抑制方法、高脂血症、動脈硬化症または脂肪肝の予防、改善または治療方法、および本出願の組成物は、本出願の脂質吸収抑制および／または排出促進方法とＤ−プシコース、脂質、投与、および客体などが共通であるから、共通事項について本明細書の過度な複雑性を避けるためにその記載を省略する。

本発明では、食餌群ごとに等カロリー食餌（ｉｓｏｃａｌｏｒｉｃｄｉｅｔ）を提供してＤ−プシコースのカロリー低減効果を排除し、Ｄ−プシコース自体の生理活性機能について明確に解明した。その結果、Ｄ−プシコースは小腸内の脂質の吸収を抑制し、糞便内の脂質含有量を著しく増加させることで脂肪生成を抑制する機能があり、体重、体脂肪量、および血漿脂質濃度を減少させ、体重、体脂肪量、および血漿脂質プロファイルが短時間で正常化することを確認し、Ｄ−プシコースは脂質関連の代謝性疾患の予防および／または治療の目的で使用できると期待される。

Ｄ−プシコースと共に高脂肪食餌を与えたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを用いて、１６週間の体重変化を観察した図である［正常食餌群（ＮＤ）、高脂肪食餌群（ＨＦＤ）、ＰＳＩ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−プシコース、ｗ／ｗ）、ＥＲＹ群（ＨＦＤ＋５％エリスリトール、ｗ／ｗ）、ＧＬＵ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−グルコース、ｗ／ｗ）、およびＦＲＵ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−フルクトース、ｗ／ｗ）］。

Ｄ−プシコースと共に高脂肪食餌を与えたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを用いて、１６週間血漿の中性脂肪と総コレステロール濃度の変化を観察した図である［正常食餌群（ＮＤ）、高脂肪食餌群（ＨＦＤ）、ＰＳＩ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−プシコース、ｗ／ｗ）、ＥＲＹ群（ＨＦＤ＋５％エリスリトール、ｗ／ｗ）、ＧＬＵ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−グルコース、ｗ／ｗ）、およびＦＲＵ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−フルクトース、ｗ／ｗ）］。

Ｄ−プシコースが高脂肪食餌誘導性肥満マウスで、血漿レプチン、レジスチン、アディポネクチンとレプチン：アディポネクチンの比率（Ｌ：Ａｒａｔｉｏｎ）に及ぼす影響を示した図である［正常食餌群（ＮＤ）、高脂肪食餌群（ＨＦＤ）、ＰＳＩ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−プシコース、ｗ／ｗ）、ＥＲＹ群（ＨＦＤ＋５％エリスリトール、ｗ／ｗ）、ＧＬＵ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−グルコース、ｗ／ｗ）、およびＦＲＵ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−フルクトース、ｗ／ｗ）］。

Ｄ−プシコースが高脂肪食餌誘導性肥満マウスの肝臓で、（Ａ）脂質プロファイル、（Ｂ）脂質調節酵素活性、および（Ｃ）組織形態に及ぼす影響を示した図である［正常食餌群（ＮＤ）、高脂肪食餌群（ＨＦＤ）、ＰＳＩ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−プシコース、ｗ／ｗ）、ＥＲＹ群（ＨＦＤ＋５％エリスリトール、ｗ／ｗ）、ＧＬＵ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−グルコース、ｗ／ｗ）、およびＦＲＵ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−フルクトース、ｗ／ｗ）］。

Ｄ−プシコースが高脂肪食餌誘導性肥満マウスの脂肪組織で、（Ａ）脂質調節酵素活性及び、（Ｂ）組織形態に及ぼす影響を示した図である［正常食餌群（ＮＤ）、高脂肪食餌群（ＨＦＤ）、ＰＳＩ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−プシコース、ｗ／ｗ）、ＥＲＹ群（ＨＦＤ＋５％エリスリトール、ｗ／ｗ）、ＧＬＵ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−グルコース、ｗ／ｗ）、およびＦＲＵ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−フルクトース、ｗ／ｗ）］。

Ｄ−プシコースが高脂肪食餌誘導性肥満マウスの肝臓で脂肪酸合成および酸化に関連した遺伝子（ＦＡＳ、ＡＣＣ１、ＣＰＴ１α及びＣＰＴ２）のｍＲＮＡ発現に及ぼす影響を示した図である［正常食餌群（ＮＤ）、高脂肪食餌群（ＨＦＤ）、ＰＳＩ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−プシコース、ｗ／ｗ）、ＥＲＹ群（ＨＦＤ＋５％エリスリトール、ｗ／ｗ）、ＧＬＵ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−グルコース、ｗ／ｗ）、およびＦＲＵ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−フルクトース、ｗ／ｗ）］。

Ｄ−プシコースが高脂肪食餌誘導性肥満マウスの糞便内の脂質含量に及ぼす影響を示した図である［正常食餌群（ＮＤ）、高脂肪食餌群（ＨＦＤ）、ＰＳＩ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−プシコース、ｗ／ｗ）、ＥＲＹ群（ＨＦＤ＋５％エリスリトール、ｗ／ｗ）、ＧＬＵ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−グルコース、ｗ／ｗ）、およびＦＲＵ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−フルクトース、ｗ／ｗ）］。

Ｄ−プシコースが高脂肪食餌誘導性肥満マウスの小腸で脂質の吸収と排泄に関連した遺伝子（ＣＤ３６、ＦＡＴＰ４、ＡｐｏＢ４８、ＡＢＣＧ５およびＡＢＣＧ８）のｍＲＮＡ発現に及ぼす影響を示した図である［正常食餌群（ＮＤ）、高脂肪食餌群（ＨＦＤ）、ＰＳＩ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−プシコース、ｗ／ｗ）、ＥＲＹ群（ＨＦＤ＋５％エリスリトール、ｗ／ｗ）、ＧＬＵ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−グルコース、ｗ／ｗ）、およびＦＲＵ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−フルクトース、ｗ／ｗ）］。

図１ないし８に示した結果に基づいて、高脂肪食餌誘導性肥満マウスの小腸、肝臓および脂肪組織における脂質代謝のＤ−プシコースの役割を簡単に示した模式図である。

本発明は、Ｄ−プシコースを客体（ｓｕｂｊｅｃｔ）に投与するステップを含む前記客体で脂質（ｌｉｐｉｄ）吸収または脂肪酸合成酵素（ＦＡＳ：Ｆａｔｔｙａｃｉｄｓｙｎｔｈａｓｅ）活性を抑制させる方法；Ｄ−プシコースを含む脂肪酸合成酵素活性抑制剤；薬剤学的有効量のＤ−プシコース及びこれを必要とする客体（ｓｕｂｊｅｃｔ）に投与するステップを含む、高脂血症、動脈硬化症または脂肪肝の予防または治療方法；及びＤ−プシコースを含む高脂血症、動脈硬化症または脂肪肝の予防または治療用組成物を提供する。

前記組成物は、薬学的組成物および食品組成物を含む。

以下、本発明の理解のために好ましい実施例を提示する。しかし、下記実施例は本発明を理解するためのものであり、本発明の内容は実施例によって限定されない。

実施例１：Ｄ−プシコースが高脂肪食餌誘導性肥満マウスの体重、臓器重量および脂肪組織重量に与える影響
本発明のＤ−プシコースが高脂肪食餌誘導性肥満マウスの体重、臓器重量および脂肪組織重量に与える影響を確認するために下記の実験を行った。

まず、４週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（合計６０匹）をＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。マウスを恒温・恒湿（２０〜２３℃、４５〜６５％）及び照明調節（１２時間ごとに明暗交代）が可能な動物飼育室で適応させて、到着後の１週間にペレット化した商業用の非精製飼料を給与した後、前記マウスをランダムで６つの群（ｎ＝１０）に分けて、１６週間表１に示した組成の各実験飼料を給与した。（正常食餌群（ＮＤ、ＡＩＮ（ＡｍｅｒｉｃａｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＮｕｔｒｉｔｉｏｎ）−７６半合成飼料）、高脂肪食餌群（ＨＦＤ、ＡＩＮ−７６飼料を基準に２０％脂肪＋１％コレステロール）、ＰＳＩ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−プシコース、ｗ／ｗ、ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙ）、ＥＲＹ群（ＨＦＤ＋５％エリスリトール、ｗ／ｗ、ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙ）、ＧＬＵ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−グルコース、ｗ／ｗ、ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙ）、およびＦＲＵ群（ＨＦＤ＋５％Ｄ−フルクトース、ｗ／ｗ、ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙ）。マウスは、ＰＳＩ群を基準に対飼養（ｐａｉｒ−ｆｅｅｄｉｎｇ）して、すべての高脂肪食餌摂取群に等カロリーを摂取させ、蒸留水の摂取は自由であった。マウスの飼料摂取量は毎日記録し、マウスの体重は２週間ごとに測定した。また、臓器重量および脂肪組織重量は致死後に測定した。）

すべての動物処理の手続きは、韓国慶北大学校動物実験倫理委員会の承認を受けた（承認番号：ＫＮＵ−２０１３−１８）。

Ｄ−プシコースと共に高脂肪食餌を与えたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおける１６週間の体重変化を観察した結果は、図１および表２に示し、臓器重量および脂肪組織重量を測定した結果は表２に示した。

［表１］
実験飼料の組成（％ｏｆｄｉｅｔ、ｗ／ｗ）
＊ミネラル混合物（ＡＩＮ−７６）：リン酸カルシウム５００ｇ／ｋｇ、ＮａＣｌ７４ｇ／ｋｇ、クエン酸カリウム２２２０ｇ／ｋｇ、硫酸カリウム５２ｇ／ｋｇ、酸化マグネシウム２４ｇ／ｋｇ、炭酸マンガン３．５ｇ／ｋｇ、クエン酸鉄６ｇ／ｋｇ、炭酸亜鉛１．６ｇ／ｋｇ、炭酸銅０．３ｇ／ｋｇ、ヨウ素酸カリウム０．０１ｇ／ｋｇ、亜セレン酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍｓｅｌｅｎｉｔｅ）０．０１ｇ／ｋｇ、硫酸クロムカリウム（ＣｈｒｏｍｉｕｍＰｏｔａｓｓｉｕｍＳｕｌｆａｔｅ）０．５５ｇ／ｋｇ、スクロース１１８．０３ｇ／ｋｇ
† ビタミン混合物ＡＩＮ−７６：チアミンＨＣｌ０．６ｇ／ｋｇ、リボフラビン０．６ｇ／ｋｇ、ピリドキシンＨＣｌ０．７ｇ／ｋｇ、ナイアシン（ｎｉａｃｉｎ）３ｇ／ｋｇ、パントテン酸カルシウム（Ｃａｌｃｉｕｍｐａｎｔｏｔｈｅｎａｔｅ）１．６ｇ／ｋｇ、葉酸（Ｆｏｌｉｃａｃｉｄ）０．２ｇ／ｋｇ、ビオチン０．０２ｇ／ｋｇ、ビタミンＢ１２１ｇ／ｋｇ、ビタミンＡ５００，０００ＩＵ／ｇ）０．８ｇ／ｋｇ、ビタミンＤ３（４００，０００ＩＵ／ｇ）０．２５ｇ／ｋｇ、ビタミンＥアセテート（５００ＩＵ／ｇ）１０ｇ／ｋｇ、メナジオン重亜硫酸ナトリウム（ｍｅｎａｄｉｏｎｅｓｏｄｉｕｍｂｉｓｕｌｆａｔｅ）０．０８ｇ／ｋｇ、Ｓｕｃｒｏｓｅ９８１．１５ｇ／ｋｇ

［表２］
・ＮＤ群とＨＦＤ群間の統計的有意性；^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１
・ＨＦＤ、ＥＲＹ、ＧＬＵ、ＦＲＵ、ＰＳＩ群間の統計的有意性（ｐ＜０．０５）；平均値^{ａ，ｂ，ｃ}
・ＢＷＧ：体重増加量
・ＦＥＲ（ｆｏｏｄｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｒａｔｉｏ、食餌効率）＝体重増加量／飼料摂取量

図１及び表２に示すように、すべての実験群においてマウスの初期体重はほぼ同じであったが、４週から高脂肪食餌誘導性肥満マウスの体重が正常食餌群（ＮＤ）に比べて有意に増加した。しかし、ＰＳＩを補充した肥満マウスの体重増加は、食物給与４週後から顕著に抑制され、ＮＤ群とほぼ同様の体重レベルを維持した。これで、ＰＳＩ群の食餌効率は、他の高脂肪食餌群（ＨＦＤ、ＥＲＹ、ＧＬＵ、ＦＲＵ）より有意に減少し、ＮＤ群とほぼ同じレベルを維持したことが分かる。

また、ＰＳＩ群の体重減少が臓器重量の減少に起因したかを確認するために、臓器［筋肉、肝臓、腎臓］及び脂肪組織［腎周囲脂肪（Ｐｅｒｉｎｅｐｈｒｉｃｆａｔ）、副睾丸脂肪（Ｅｐｉｄｉｄｙｍａｌｆａｔ）、後腹腔脂肪（Ｒｅｔｒｏｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｆａｔ）、皮下脂肪（Ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｆａｔ）、腸間膜脂肪（Ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃｆａｔ）、内臓脂肪（Ｖｉｓｃｅｒａｌｆａｔ）、肩甲骨間白色脂肪組織（ＩｎｔｅｒｓｃａｐｕｌａｒＷＡＴ）、肩甲骨間褐色脂肪組織（ＩｎｔｅｒｓｃａｐｕｌａｒＢＡＴ）、総白色脂肪組織（ＴｏｔａｌＷＡＴ）］の重量を測定した結果、表２に示すようにＰＳＩ群以外の高脂肪食餌群（ＨＦＤ、ＥＲＹ、ＧＬＵ、ＦＲＵ）マウスの単位体重当たりの筋肉および腎臓の重量はＮＤ群に比べて有意に減少し、単位体重当たりの腎臓の重量はＮＤ群に比べ著しく高かった。しかし、ＰＳＩ群の単位体重当たりの筋肉および腎臓の重量はＮＤ群の値と類似であった。また、ＰＳＩ群以外の高脂肪食餌群（ＨＦＤ、ＥＲＹ、ＧＬＵ、ＦＲＵ）はＮＤ群に比べて単位重量当たりの腎臓周囲脂肪、副睾丸炎脂肪、後腹腔脂肪、皮下脂肪、腸間膜脂肪、内臓脂肪、肩甲骨間白脂肪組織、肩甲骨間褐色脂肪組織、および総白色脂肪組織の重量が有意に増加したが、ＰＳＩ群は全種類の脂肪の蓄積が有意に減少されてＮＤ群とほぼ同じレベルを維持した。

したがって、本発明のＤ−プシコースは高脂肪食餌誘導性肥満マウスの体重増加を抑制し、食餌効率と単位体重当たりの肝臓と脂肪組織の重量を減少させてＮＤ群と同様のレベルを維持することにより、体重および体脂肪量を正常化する効果を表すことが分かる。

実施例２：Ｄ−プシコースが高脂肪食餌誘導性肥満マウスの血漿脂質プロファイルに及ぼす影響
本発明のＤ−プシコースが高脂肪食餌誘導性肥満マウスの血漿脂質プロファイルに及ぼす影響を確認するために、下記の実験を行った。

血漿遊離脂肪酸、リン脂質、Ａｐｏ−ＡＩ（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＡＩ）とＡｐｏ−Ｂ（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＢ）はＮｉｔｔｏｂｏｅｎｚｙｍａｔｉｃｋｉｔ（ＮｉｔｔｏｂｏｍｅｄｉｃａｌＣｏ．，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）を用いて測定し、血漿ＨＤＬ−コレステロール、中性脂肪（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ、ＴＧ）および総コレステロール（ｔｏｔａｌ−Ｃ）はＡｓａｎｅｎｚｙｍａｔｉｃｋｉｔｓ（Ａｓａｎ、Ｓｅｏｕｌ、ＳｏｕｔｈＫｏｒｅａ）を用いて測定した。

その結果は、図２及び表３に示した。

［表３］
・ＮＤ群とＨＦＤ群間の統計的有意性；^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１
・ＨＦＤ、ＥＲＹ、ＧＬＵ、ＦＲＵ、ＰＳＩ群間の統計的有意性（ｐ＜０．０５）；平均値^{ａ，ｂ，ｃ}
・ＴＧ、Ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ、中性脂肪；Ｃ、Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ、コレステロール；ＰＬ、Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ、リン脂質；ＨＤＬ−Ｃ、ｈｉｇｈｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ、高密度リポタンパク質コレステロール；ＡｐｏＡ−Ｉ、ＡｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＡ−Ｉ、アポリポタンパク質Ａ−Ｉ；Ａｐｏ−Ｂ、ＡｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＢ、アポリポタンパク質Ｂ；ＡＩ、Ａｔｈｅｒｏｇｅｎｉｃｉｎｄｅｘ、動脈硬化指数［（ＴｏｔａｌＣ−ＨＤＬ−Ｃ）／ＨＤＬ−Ｃ］；ＨＴＲ、（ＨＤＬ−Ｃ／ＴｏｔａｌＣ）×１００

図２及び表３に示すように、ＰＳＩ群以外の高脂肪食餌群（ＨＦＤ、ＥＲＹ、ＧＬＵ、ＦＲＵ）はＮＤ群に比べて、血漿の遊離脂肪酸、中性脂肪、リン脂質、総コレステロール、ＨＤＬ−コレステロール、ｎｏｎ−ＨＤＬコレステロール、Ａｐｏ−ＡＩ、Ａｐｏ−Ｂの濃度が増加したが、ＰＳＩ群は血漿の遊離脂肪酸、中性脂肪、総コレステロール、ｎｏｎ−ＨＤＬコレステロール、Ａｐｏ−Ｂの濃度が正常食餌群と同じレベルであった。特に、ＰＳＩ群はＮＤ群よりＨＤＬ−コレステロールとＡｐｏ−ＡＩ濃度が増加し、動脈硬化指数（ＡＩ）はより低かった。

したがって、本発明のＤ−プシコースは高脂肪食餌誘導性肥満マウスの血漿において、遊離脂肪酸、中性脂肪、総コレステロール、ｎｏｎ−ＨＤＬコレステロール、Ａｐｏ−Ｂの濃度を減少させてＮＤ群と類似レベルを維持することにより、血漿脂質プロファイルを正常化させる効果を表すことが分かり、また、Ｄ−プシコースはＮＤ群に比べ血漿ＨＤＬ−コレステロールとＡｐｏ−ＡＩ濃度を増加させて動脈硬化指数（ＡＩ）が減少することで、動脈硬化予防用に利用できると期待される。

実施例３：Ｄ−プシコースが高脂肪食餌誘導性肥満マウスの血漿レプチン、レジスチン、アディポネクチン及びレプチン：アディポネクチン比率（Ｌ：Ａｒａｔｉｏｎ）に及ぼす影響
本発明のＤ−プシコースが高脂肪食餌誘導性肥満マウスの血漿レプチン、レジスチン、アディポネクチン及びレプチン：アディポネクチン比率（Ｌ：Ａｒａｔｉｏｎ）に及ぼす影響を確認するために、下記の実験を行った。

血漿レプチン、レジスチン及びアディポネクチンの濃度は、Ｂｉｏ−Ｒａｄのマルチプレックス測定キット（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）で測定した。全ての試料は二重分析し、Ｌｕｍｉｎｅｘ２００ｌａｂｍａｐｓｙｓｔｅｍ（Ｌｕｍｉｎｅｘ、Ａｕｓｔｉｎ、ＴＸ、ＵＳＡ）で分析した。データ分析は、Ｂｉｏ−ＰｌｅｘＭａｎａｇｅｒｓｏｆｔｗａｒｅｖｅｒｓｉｏｎ４．１．１（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）で行った。

その結果は図３に示した。

図３に示すように、ＰＳＩ群以外の高脂肪食餌群（ＨＦＤ、ＥＲＹ、ＧＬＵ、ＦＲＵ）はＮＤ群に比べて、血漿レプチンとレジスチンの濃度、及びレプチン：アディポネクチン比率が著しく増加したが、ＰＳＩ群は血漿レプチンとレジスチンの濃度、およびレプチン：アディポネクチン比率が著しく減少しＮＤ群と同じレベルであった。

よって、本発明のＤ−プシコースは高脂肪食餌誘導性肥満マウスで血漿レプチンとレジスチンの濃度、およびレプチン：アディポネクチン比率を減少させ、正常レベルまで正常化させる効果があることが分かる。

実施例４：Ｄ−プシコースが高脂肪食餌誘導性肥満マウスの肝臓において脂質プロファイル、脂質調節酵素活性および組織形態に及ぼす影響
本発明のＤ−プシコースが高脂肪食餌誘導性肥満マウスの肝臓において脂質プロファイル、脂質調節酵素活性および組織形態に及ぼす影響を確認するために、下記の実験を行った。

実施例４−１．肝臓の脂質プロファイル
正常食餌群（ＮＤ）と高脂肪食餌群（ＨＦＤ、ＥＲＹ、ＧＬＵ、ＦＲＵ、ＰＳＩ）のマウスの肝臓から脂質を抽出、乾燥した後、乾燥した脂質残留物を１ｍｌのエタノールに溶解させた。２００μｌの溶解された脂質溶液に、蒸留水内のＴｒｉｔｏｎＸ−１００、およびコール酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍｃｈｏｌａｔｅ）溶液を加え乳化させた。肝臓の脂肪酸、中性脂肪及びコレステロールの含量は、前記実施例２で使用した同じ酵素キットにより分析した。

その結果は、図４（Ａ）に示した。

図４（Ａ）に示すように、高脂肪食餌群（ＨＦＤ、ＥＲＹ、ＧＬＵ、ＦＲＵ、ＰＳＩ）はＮＤ群に比べて肝臓の脂肪酸、中性脂肪及びコレステロールの含量が有意的に高かったが、ＰＳＩ群は他の高脂肪食餌群（ＨＦＤ、ＥＲＹ、ＧＬＵ、ＦＲＵ）より肝臓の脂肪酸、中性脂肪及びコレステロールの含量が有意的に減少したことを確認した。

実施例４−２．肝臓の脂質調節酵素の活性
試料を準備し、Ｈｕｌｃｈｅｒ及びＯｌｅｓｏｎによって報告された方法で分析した。具体的に、肝臓の脂質調節酵素の中で脂肪酸合成酵素であるＦＡＳ（ｆａｔｔｙａｃｉｄｓｙｎｔｈａｓｅ）の活性はＮｅｐｏｋｒｏｅｆｆなどの方法により分光検定法（ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃａｓｓａｙ）で測定し、細胞質分画１００ｕｌを混ぜて３０℃で２分間反応させた後、３４０ｎｍで吸光度減少量を測定した。ＦＡＳ活性度の単位は、細胞質画分１ｍｇ当たり１分間酸化されたＮＡＤＰＨのｎｍｏｌで表示した。脂肪酸β−酸化活性はＬａｚａｒｏｗ方法を利用し、ｐａｌｍｉｔｏｙｌ−ＣｏＡを基質として、ＮＡＤ^＋がＮＡＤＨに還元する程度を測定した。β−酸化活性単位は、ミトコンドリアタンパク質１ｍｇ当たり１分間生成されたＮＡＤＨのｎｍｏｌで表示した。

その結果は図４（Ｂ）に示した。

図４（Ｂ）に示すように、ＰＳＩ群以外の高脂肪食餌群（ＨＦＤ、ＥＲＹ、ＧＬＵ、ＦＲＵ）はＮＤ群に比べてＦＡＳ活性及び脂肪酸β−酸化活性が有意的に増加したが、ＰＳＩ群は他の高脂肪食餌群よりＦＡＳ活性及び脂肪酸β−酸化活性が有意的に減少しＮＤ群同じレベルであった。

実施例４−３．肝組織形態
正常食餌群（ＮＤ）及び高脂肪食餌群（ＨＦＤ、ＥＲＹ、ＧＬＵ、ＦＲＵ、ＰＳＩ）のマウスから肝組織を除去し、１０％ホルマリン緩衝溶液で肝組織を固定した。固定された肝組織をパラフィンに包埋し、４ｍｍの肝組織切片を準備した。肝組織切片の断面をヘマトキシリンおよびエオシンで染色し、染色された部分を×２００倍率の光学顕微鏡（Ｎｉｋｏｎ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）を用いて観察した。

その結果は図４（Ｃ）に示した。

図４（Ｃ）に示すように、ＰＳＩ群以外の高脂肪食餌群（ＨＦＤ、ＥＲＹ、ＧＬＵ、ＦＲＵ）はＮＤ群に比べて肝組織の脂肪球蓄積がもっと鮮明に現れたが、ＰＳＩ群は他の高脂肪食餌群より肝組織の脂肪球サイズが減少したことを確認した。

上述のように、本発明のＤ−プシコースは高脂肪食餌誘導性肥満マウスの肝臓で脂肪酸、中性脂肪、コレステロール含量、ＦＡＳ活性、脂肪球サイズを減少させ、脂肪肝を抑制する効果を表すことが分かる。また、Ｄ−プシコースは肝臓で高脂肪食餌によって増加した脂肪酸β−酸化活性を正常食餌群のレベルに減少させることで、全般的な肝組織脂質代謝の恒常性を正常化レベルに維持させる効果も確認した。

実施例５：Ｄ−プシコースが高脂肪食餌誘導性肥満マウスの脂肪組織で脂質調節酵素活性および組織形態に及ぼす影響
本発明のＤ−プシコースが高脂肪食餌誘導性肥満マウスの脂肪組織で脂質調節酵素活性および組織形態に及ぼす影響を確認するために下記の実験を行った。

実施例５−１．脂肪組織の脂質調節酵素活性
試料を準備し、Ｈｕｌｃｈｅｒ＆Ｏｌｅｓｏｎによって報告された方法で分析した。具体的に、副睾丸炎白色脂肪組織の脂質調節酵素の中でＦＡＳ活性はＮｅｐｏｋｒｏｅｆｆなどの方法により分光検定法で測定し、細胞質分画１００ｕｌを混ぜて３０℃で２分間反応した後、３４０ｎｍで吸光度の減少量を測定した。ＦＡＳ活性度の単位は、細胞質画分１ｍｇ当たり１分間酸化したＮＡＤＰＨのｎｍｏｌで表した。脂肪酸β−酸化活性はＬａｚａｒｏｗ方法を利用して、ｐａｌｍｉｔｏｙｌ−ＣｏＡを基質として、ＮＡＤ^＋がＮＡＤＨに還元する程度を測定した。β−酸化活性単位は、ミトコンドリアタンパク質１ｍｇ当たり１分間生成されたＮＡＤＨｎｍｏｌで表した。

その結果は、図５（Ａ）に示した。

図５（Ａ）に示すように、ＰＳＩ群以外の高脂肪食餌群（ＨＦＤ、ＥＲＹ、ＧＬＵ、ＦＲＵ）はＮＤ群に比べてＦＡＳ活性が有意的に増加して脂肪酸β−酸化活性は有意的に減少したが、ＰＳＩでは他の高脂肪食餌群よりＦＡＳ活性が有意的に減少した一方、脂肪酸β−酸化活性は有意的に増加し、正常食餌群と同じレベルであることを確認した。したがって、本発明のＤ−プシコースは高脂肪食餌誘導性肥満マウスの脂肪組織で脂肪酸合成を減少させ、脂肪酸酸化を増加させて体脂肪重量を減少させる効果を表すことが分かる。

実施例５−２．脂肪組織の組織形態
正常食餌群（ＮＤ）と高脂肪食餌群（ＨＦＤ、ＥＲＹ、ＧＬＵ、ＦＲＵ、ＰＳＩ）のマウスから副睾丸白色脂肪組織（ｅｐｉｄｉｄｙｍａｌＷＡＴ）を除去し、１０％ホルマリン緩衝溶液で副睾丸白色脂肪組織を固定した。固定された副睾丸炎白色脂肪組織をパラフィンに包埋し、４ｍｍの副睾丸白色脂肪組織切片を準備した。副睾丸炎白色脂肪組織切片の断面をヘマトキシリンおよびエオシンで染色し、染色された部分を×２００倍率の光学顕微鏡（Ｎｉｋｏｎ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）を用いて観察した。

その結果は、図５（Ｂ）に示した。

図５（Ｂ）に示すように、ＰＳＩ群以外の高脂肪食餌群（ＨＦＤ、ＥＲＹ、ＧＬＵ、ＦＲＵ）はＮＤ群に比べて副睾丸白色脂肪組織の脂肪細胞サイズが顕著増加したことを観察されたが、ＰＳＩ群は他の高脂肪食餌群より脂肪細胞サイズが相対的に減少した。

上述したように、本発明のＤ−プシコースは高脂肪食餌誘導性肥満マウスの脂肪組織で、脂肪酸合成の減少、脂肪酸酸化の増加、脂肪細胞サイズの減少、脂質蓄積の抑制を起こすことで、体脂肪量を正常レベルまで正常化させる効果を表すことが分かる。

実施例６：Ｄ−プシコースが高脂肪食餌誘導性肥満マウスの肝臓で脂肪酸合成および酸化に関連した遺伝子のｍＲＮＡ発現に及ぼす影響
本発明のＤ−プシコースが高脂肪食餌誘導性肥満マウスの肝臓で脂肪酸合成および酸化に関連した遺伝子（ＦＡＳ、ＡＣＣ１、ＣＰＴ１αとＣＰＴ２）のｍＲＮＡ発現に及ぼす影響を確認するため、下記の実験を行った。

試料を準備し、前記のように分析した。具体的に、総ＲＮＡをＱｕａｎｔｉＴｅｃｔＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮＧｍｂｌｈ、Ｈｉｌｄｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いてｃＤＮＡを合成した。ＲＮＡ発現は、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔＳＹＢＲＧｒｅｅｎＰＣＲｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮＧｍｂｌｈ、Ｈｉｌｄｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いてｒｅａｌ−ｔｉｍｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲで定量分析した。プライマーを設計してＦＡＳ（ｆａｔｔｙａｃｉｄｓｙｎｔｈａｓｅ、１４１０１）、ＡＣＣ１（Ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ１、１０７４７６）、ＣＰＴ１α（Ｃａｒｎｉｔｉｎｅｐａｌｍｉｔｏｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ１α、１２８９４）、およびＣＰＴ２（Ｃａｒｎｉｔｉｎｅｐａｌｍｉｔｏｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ２、１２８９６）を検出し、ｉｎｔｅｒｎａｌｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｍａｒｋｅｒはＧＡＰＤＨを使用した。９４℃で１５秒、５８℃で３０秒、７２℃で３０秒、６５℃で１５秒が１サイクルであり、合計４０サイクルを反応させた。この時、サイクルごとに蛍光信号をモニタリングして検知したｔｈｒｅｓｈｏｌｄｃｙｃｌｅ（Ｃｔ）を分析し、各実験群間のｍＲＮＡ発現をＣＦＸ９６Ｒｅａｌｔｉｍｅｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏ−ｒａｄ、ＵＳＡ）で定量分析した。

その結果は図６に示した。

図６に示すように、すべての高脂肪食餌群（ＨＦＤ、ＥＲＹ、ＧＬＵ、ＦＲＵ、ＰＳＩ）はＮＤ群に比べて肝臓の脂肪酸合成−関連遺伝子（ＦＡＳ及びＡＣＣ１）と脂肪酸酸化−関連遺伝子（ＣＰＴ１α及びＣＰＴ２）のｍＲＮＡ発現が有意的に減少し、特にＰＳＩ群は他の高脂肪食餌群より肝臓の脂肪酸合成−関連遺伝子（ＦＡＳ及びＡＣＣ１）と脂肪酸酸化−関連遺伝子（ＣＰＴ１α及びＣＰＴ２）のｍＲＮＡ発現が更に著しく減少した。

したがって、本発明のＤ−プシコースは高脂肪食餌誘導性肥満マウスの肝臓で脂肪酸合成−関連遺伝子のｍＲＮＡ発現を減少させ、肝臓の脂肪生成を抑制することが分かる。

実施例７：Ｄ−プシコースが高脂肪食餌誘導性肥満マウスの糞便内脂質排泄に及ぼす影響

本発明のＤ−プシコースが高脂肪食餌誘導性肥満マウスの糞便内脂質含量に及ぼす影響を確認するため、下記の実験を行った。

正常食餌群（ＮＤ）と高脂肪食餌群（ＨＦＤ、ＥＲＹ、ＧＬＵ、ＦＲＵ、ＰＳＩ）のマウス糞便から脂質を抽出と乾燥した後、乾燥した脂質残留物を１ｍｌのエタノールに溶解させた。２００μｌの溶解された脂質溶液に、蒸留水内のＴｒｉｔｏｎＸ−１００およびコール酸ナトリウム溶液を加えて乳化させた。糞便内の中性脂肪、コレステロール、および脂肪酸の含量は、前記実施例２で使用した同じ酵素キットで分析した。

その結果は図７に示した。

図７に示すように、高脂肪食餌群（ＨＦＤ、ＥＲＹ、ＧＬＵ、ＦＲＵ、ＰＳＩ）は正常食餌群に比べて糞便内の中性脂肪、コレステロール、および脂肪酸の含量が有意的に増加し、特にＰＳＩ群は他の高脂肪食餌群（ＨＦＤ、ＥＲＹ、ＧＬＵ、ＦＲＵ）より糞便内の中性脂肪、コレステロール、および脂肪酸の含量が有意的に増加したことを確認した。

したがって、本発明のＤ−プシコースは高脂肪食餌誘導性肥満マウスの糞便内の脂質の排泄を増加させ、これによりＤ−プシコースが腸内脂肪の吸収抑制効果と関連することが分かる。

実施例８：Ｄ−プシコースが高脂肪食餌誘導性肥満マウスの小腸で、脂質吸収に関連した遺伝子のｍＲＮＡ発現に及ぼす影響
本発明のＤ−プシコースが高脂肪食餌誘導性肥満マウスの小腸で、脂質吸収に関連した遺伝子（ＣＤ３６、ＦＡＴＰ４、ＡｐｏＢ４８）と排泄に関連した遺伝子（ＡＢＣＧ５及びＡＢＣＧ８）のｍＲＮＡ発現に及ぼす影響を確認するため、下記の実験を行った。

試料を準備し、上述したように分析した。具体的に、総ＲＮＡをＱｕａｎｔｉＴｅｃｔＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮＧｍｂｌｈ、Ｈｉｌｄｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いてｃＤＮＡを合成した。ＲＮＡ発現は、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔＳＹＢＲＧｒｅｅｎＰＣＲｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮＧｍｂｌｈ、Ｈｉｌｄｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いてｒｅａｌ−ｔｉｍｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲで定量化した。プライマーを設計してＣＤ３６（ｃｌｕｓｔｅｒｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ３６、１２４９１）、ＡｐｏＢ４８（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＢ４８、２３８０５５）、ＦＡＴＰ４（ｆａｔｔｙａｃｉｄｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ４、２６５６９）、ＡＢＣＧ５（ＡＴＰ−ｂｉｎｄｉｎｇｃａｓｓｅｔｔｅｓｕｂ−ｆａｍｉｌｙＧｍｅｍｂｅｒ５、２７４０９）及びＡＢＣＧ８（ＡＴＰ−ｂｉｎｄｉｎｇｃａｓｓｅｔｔｅｓｕｂ−ｆａｍｉｌｙＧｍｅｍｂｅｒ８、６７４７０）を検出し、ｉｎｔｅｒｎａｌｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｍａｒｋｅｒはＧＡＰＤＨを使用した。９４℃で１５秒、５８℃で３０秒、７２℃で３０秒、６５℃で１５秒が１サイクルであり、合計４０サイクルを反応させた。この時、サイクルごとに蛍光信号をモニタリングし、検知したｔｈｒｅｓｈｏｌｄｃｙｃｌｅ（Ｃｔ）を分析して、各実験群間のｍＲＮＡ発現をＣＦＸ９６Ｒｅａｌｔｉｍｅｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏ−ｒａｄ、ＵＳＡ）で定量分析した。

その結果は図８に示した。

図８に示すように、ＰＳＩ群以外の高脂肪食餌群（ＨＦＤ、ＥＲＹ、ＧＬＵ、ＦＲＵ）はＮＤ群に比べて小腸における脂質吸収関連遺伝子（ＣＤ３６、ＦＡＴＰ４、ＡｐｏＢ４８）のｍＲＮＡ発現が有意的に増加し、ＰＳＩ群は他の高脂肪食餌群（ＨＦＤ、ＥＲＹ、ＧＬＵ、ＦＲＵ）より小腸における脂質吸収関連遺伝子（ＣＤ３６、ＦＡＴＰ４とＡｐｏ−Ｂ４８）のｍＲＮＡ発現が有意的に減少して、正常食餌群のレベルで維持されることを確認した。

したがって、本発明のＤ−プシコースは高脂肪食餌誘導性肥満マウスの小腸における脂質吸収関連遺伝子のｍＲＮＡ発現を減少させることにより、小腸内の脂質吸収を抑制して脂質利用を抑制する効果を表すことが分かる。

前記実施例１ないし８に示した結果に基づいて、高脂肪食餌誘導性肥満マウスの小腸、肝臓および脂肪組織の脂質代謝におけるＤ−プシコースの役割を簡単にまとめて図９に示した。

下記において、本発明の組成物の製剤例を例示する。

製剤例１：薬学的製剤の製造
１．散剤の製造
Ｄ−プシコース：２００ｍｇ
乳糖：１００ｍｇ
前記成分を混合して、気密布に充填して散剤を製造した。

２．錠剤の製造
Ｄ−プシコース：２００ｍｇ
トウモロコシデンプン：１００ｍｇ
乳糖：１００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム：２ｍｇ
前記成分を混合した後、通常の錠剤の製造方法によって打錠して錠剤を製造した。

３．カプセル剤の製造
Ｄ−プシコース：２００ｍｇ
トウモロコシデンプン：１００ｍｇ
乳糖：１００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム：２ｍｇ
前記成分を混合した後、通常のカプセル剤の製造方法によってゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造した。

４．注射剤の製造
Ｄ−プシコース：２００ｍｇ
マンニトール：１００ｍｇ
Ｎａ_２ＨＰＯ_４・１２Ｈ_２Ｏ：２ｍｇ
注射用の滅菌蒸留水を適量
通常の注射剤の製造方法によって、１アンプル当たり（２ｍｌ）前記成分を混合して注射剤を製造した。

製剤例２：食品の製造
本発明のＤ−プシコースを含む食品を次のように製造した。

１．調理用調味料の製造
Ｄ−プシコースが２０〜９５重量％の健康増進用の調理用調味料を製造した。

２．トマトケチャップ及びソースの製造
Ｄ−プシコース０．２〜１．０重量％をトマトケチャップまたはソースに添加して、健康増進用のトマトケチャップまたはソースを製造した。

３．小麦粉食品の製造
Ｄ−プシコース０．５〜５．０重量％を小麦粉に添加し、この混合物を利用して、パン、ケーキ、クッキー、クラッカー及び麺類を製造して健康増進用食品を製造した。

４．スープ及び肉汁（ｇｒａｖｉｅｓ）の製造
Ｄ−プシコース０．１〜５．０重量％をスープ及び肉汁に添加して、健康増進用の肉加工製品、麺類のスープ及び肉汁を製造した。

５．グラウンドビーフ（ｇｒｏｕｎｄｂｅｅｆ）の製造
Ｄ−プシコース１０重量％をグラウンドビーフに添加して、健康増進用グラウンドビーフを製造した。

６．乳製品（ｄａｉｒｙｐｒｏｄｕｃｔｓ）の製造
Ｄ−プシコース５〜１０重量％を牛乳に添加し、前記ミルクを用いてバター、アイスクリームなどの様々な乳製品を製造した。

製剤例３：飲料の製造
１．炭酸飲料の製造
Ｄ−プシコース１０〜１５％、砂糖５〜１０％、クエン酸０．０５〜０．３％、キャラメル０．００５〜０．０２％、ビタミンＣ０．１〜１％の添加物を混合して、７５〜８０％の精製水を加えてシロップを製造した。前記シロップを８５〜９８℃で２０〜１８０秒間殺菌し、冷却水と１：４の割合で混合した後、炭酸ガスを０．５〜０．８２％を注入してＤ−プシコースを含有する炭酸飲料を製造した。

２．健康飲料の製造
Ｄ−プシコース（固形分２．５％、９７．１６％）、ナツメ抽出物（６５ｂｒｉｘ、２．６７％）、瓜蒂複合抽出物（固形分７０％、０．１２％）、ビタミンＣ（０．０２％）、パントテン酸カルシウム（０．０２％）、甘草抽出物（固形分６５％、０．０１％）を均質配合して瞬間殺菌をした後、ガラスびん、ペットボトルなどの小包装容器に包装して健康飲料を製造した。

３．野菜ジュースの製造
Ｄ−プシコース０．５ｇをトマトまたはニンジンジュース１，０００ｍｌに加え、健康増進用の野菜ジュースを製造した。

４．フルーツジュースの製造
Ｄ−プシコース０．１ｇをリンゴまたはブドウジュース１，０００ｍｌに加え、健康増進用のフルーツジュースを製造した。

前述した本発明の説明は例示に過ぎなく、本発明が属する技術分野の当業者であれば本発明の技術的思想と必須的特徴を変更せずに他の具体的な形態で容易に変形できるだろう。したがって、上述の実施例はすべての面で例示的であり、限定的ではないと理解すべきである。

本発明では、食餌群ごとに等カロリー食餌（ｉｓｏｃａｌｏｒｉｃｄｉｅｔ）を提供してＤ−プシコースのカロリー低減効果を排除することにより、Ｄ−プシコース自体の生理活性機能について明確に解明した。その結果、Ｄ−プシコースは小腸内の脂質吸収を抑制して糞便内の脂質含量を著しく増加させることで脂肪生成を抑制する機能があり、体重、体脂肪量、および血漿脂質濃度を減少させ、体重、体脂肪量、および血漿脂質プロファイルが短時間に正常化されることを確認した。Ｄ−プシコースは、脂質関連代謝性の疾患の予防および／または治療用途で使用できると期待される。

Claims

Ｄ−プシコースを有効成分として含む、対象が摂取した脂質（ｌｉｐｉｄ）の吸収抑制用および／または排出促進用組成物であって、前記対象が摂取した脂質１００重量部に対してＤ−プシコース１０〜５０重量部が使用されることを特徴とする組成物。
脂質をさらに含み、前記対象が摂取した脂質１００重量部に対してＤ−プシコース１０〜５０重量部が使用されることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
前記吸収が小腸での吸収であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
対象が摂取した脂質（ｌｉｐｉｄ）の吸収抑制用および／または排出促進用組成物であって、前記対象が摂取した脂質１００重量部に対してＤ−プシコース１０〜５０重量部が使用されることを特徴とする組成物を製造するための、Ｄ−プシコースの使用。