JP6588160B2 - 物質pを含む傷治癒用薬学組成物 - Google Patents
物質pを含む傷治癒用薬学組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6588160B2 JP6588160B2 JP2018521156A JP2018521156A JP6588160B2 JP 6588160 B2 JP6588160 B2 JP 6588160B2 JP 2018521156 A JP2018521156 A JP 2018521156A JP 2018521156 A JP2018521156 A JP 2018521156A JP 6588160 B2 JP6588160 B2 JP 6588160B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- wound
- substance
- pharmaceutical composition
- dosage form
- effect
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/046—Tachykinins, e.g. eledoisins, substance P; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/02—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
- A61K47/38—Cellulose; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
- A61L26/0061—Use of materials characterised by their function or physical properties
- A61L26/0066—Medicaments; Biocides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
- A61L2300/21—Acids
- A61L2300/214—Amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/80—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a special chemical form
- A61L2300/802—Additives, excipients, e.g. cyclodextrins, fatty acids, surfactants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
MTTアッセイ法を通じて物質P(substance P、SP)の細胞増殖効果を分析した。
具体的には、96個の穴がある平板培養プレート(96-well plate)に3x104CFU/mlのヒト皮膚繊維芽細胞(human dermal fibroblast cell)の懸濁液100μlを入れ、24時間培養した。FGM培地(fluid thioglycollate medium;繊維芽細胞基本培地(fibroblast basal medium)、hFGF−B、インスリン、ウシ胎児血清(fetal bovine serum、FBS)、ゲンタマイシン(gentamicin)、及びアンホテリシンB(amphotericin-B)を含む)を除去した後、新しいFGM培地180μlを各ウェルに分注した後、リン酸緩衝溶液(phosphate buffered saline、PBS)で希釈した物質Pを濃度別(0.1、1、5、10、50及び100μg/ml)で20μlずつ接種した。
前記実施例1でヒト皮膚繊維芽細胞の細胞増殖効果を有することを確認した物質Pに抗酸化剤、界面活性剤及び増粘剤を追加した新規な剤形を製造した。物質Pはペプチド合成技術であるFmocケミストリー(Fmoc-chemistry)を用いたソリッド/ソリューションステップ(Solid/Solution phase)を介して合成し、高速液体クロマトグラフィーを通じて精製し、最終的に純度85%以上のものを使用した。新規な剤形の中で増粘剤としてカルボキシメチルセルロースを含む剤形は、下記表1の成分及び含量と同様に製造した。
実施例3−1:皮膚傷のマウスモデルの製造及び新規剤形の投与
物質Pを含む新規剤形(SP+CMC剤形及びSP+HEC剤形)の傷治癒効果を比較するために、全層傷ができた皮膚傷のマウスモデルを製造した。陽性対照群には、商用化されている傷の治療剤であるマデカソルケア軟膏(東国製薬)及びEGF新肌軟膏(大熊製薬)を使用した。
前記実施例3−1のように、皮膚傷のマウスモデルに新規剤形を投与した後、縮小する傷のサイズを評価して傷サイズ縮小効果を比較した。具体的には、縮小した傷のサイズは、新規剤形の投与後0日、及び6日にそれぞれの傷写真を通じて分析した傷の面積サイズで計算した。傷の面積のサイズは、フォトショップ(登録商標)を使用して、定量化した。
前記実施例3−1のように、皮膚傷のマウスモデルに新規剤形を投与した後、新生血管の増加効果を比較した。具体的に、増加された新生血管は新規剤形の投与6日後の傷の皮膚組織を生検して皮膚組織上の血管新生の生成程度を写真を通して肉眼で確認した。
前記実施例3−1のように、皮膚傷のマウスモデルに新規剤形を投与した後、減少する真皮間の距離(Dermal gap、DG)を測定し、真皮の再生効果を確認した。具体的には、新規剤形の投与後6日後の傷の皮膚組織を生検して、10%ホルマリンで固定した後、ヘマトキシリン&エオシン(H&E)染色を行った。染色した後、真皮組織間の距離を測定して傷組織の真皮再生程度を確認した。
前記実施例3−1のように、皮膚傷のマウスモデルに新規剤形を投与した後、減少する上皮間距離(Epidermal gap、EG)を測定し、上皮再生効果を確認した。具体的には、新規剤形の投与後6日後の傷の皮膚組織を生検して、10%ホルマリンで固定した後、ヘマトキシリン&エオシン(H&E)染色を行った。染色した後、上皮組織間の距離を測定して傷組織の上皮再生の程度を確認した。
前記実施例3−1のように、皮膚傷のマウスモデルに新規剤形を投与した後、傷組織上の肉芽組織の成熟度を確認した。具体的には、新規剤形の投与後6日後の傷の皮膚組織を生検して、10%ホルマリンで固定した後、ヘマトキシリン&エオシン(H&E)染色を行った。染色した後、肉芽組織の成熟度を確認した。
前記実施例3−1のように、皮膚傷のマウスモデルに新規剤形を投与した後、コラーゲンの増加の程度を確認した。具体的には、新規剤形の投与後6日後の傷の皮膚組織を生検して、10%ホルマリンで固定した後、マッソントリクローム(Massons Trichrome)染色を行った。染色した後、傷組織上のコラーゲンの増加の程度を確認した。
Claims (8)
- 増粘剤、抗酸化剤、界面活性剤及び配列番号1のアミノ酸配列からなる物質P(substance P)を含む、傷治癒用薬学組成物であって、増粘剤がヒドロキシエチルセルロースであり、抗酸化剤がチオ硫酸ナトリウムであり、界面活性剤がポリソルベート80である組成物。
- 前記物質Pの濃度が、0.1〜100μg/mlである、請求項1に記載の薬学組成物。
- 前記物質Pの濃度が、3〜8μg/mlである、請求項1に記載の薬学組成物。
- 前記抗酸化剤の含量が、組成物の総重量に対して0.01〜1重量%である、請求項1〜3のいずれかに記載の薬学組成物。
- 前記界面活性剤の含量が、組成物の総重量に対して0.001〜0.02重量%である、請求項1〜4のいずれかに記載の薬学組成物。
- 増粘剤、抗酸化剤、界面活性剤及び配列番号1のアミノ酸配列からなる物質P(substance P)を含む、傷治癒用医薬部外品組成物であって、増粘剤がヒドロキシエチルセルロースであり、抗酸化剤がチオ硫酸ナトリウムであり、界面活性剤がポリソルベート80である組成物。
- 組成物が、皮膚外用剤である、請求項6に記載の医薬部外品組成物。
- 請求項1〜5のいずれかに記載の薬学組成物をヒトを除いた個体に投与する段階を含む、傷の治癒方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020160042913A KR101825041B1 (ko) | 2016-04-07 | 2016-04-07 | 물질 p를 포함하는 상처치유용 약학 조성물 |
KR10-2016-0042913 | 2016-04-07 | ||
PCT/KR2016/004539 WO2017175909A1 (ko) | 2016-04-07 | 2016-04-29 | 물질 p를 포함하는 상처치유용 약학 조성물 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2018524405A JP2018524405A (ja) | 2018-08-30 |
JP6588160B2 true JP6588160B2 (ja) | 2019-10-09 |
Family
ID=60000450
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018521156A Expired - Fee Related JP6588160B2 (ja) | 2016-04-07 | 2016-04-29 | 物質pを含む傷治癒用薬学組成物 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10596224B2 (ja) |
EP (1) | EP3441080A4 (ja) |
JP (1) | JP6588160B2 (ja) |
KR (1) | KR101825041B1 (ja) |
CN (1) | CN108135965B (ja) |
WO (1) | WO2017175909A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2020510005A (ja) * | 2017-06-14 | 2020-04-02 | バイオソリューション カンパニー・リミテッドBio Solution Co Ltd | 物質pを含むしわの改善または抗炎症化粧料組成物 |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR102158969B1 (ko) * | 2018-10-19 | 2020-09-23 | 주식회사 바이오솔루션 | 물질 p를 포함하는 난치성 궤양 치료용 조성물 |
KR102215794B1 (ko) * | 2019-05-22 | 2021-02-16 | 주식회사 바이오솔루션 | 물질 p를 포함하는 양모 촉진, 탈모 완화 및 치료용 조성물 |
KR102225547B1 (ko) * | 2019-05-28 | 2021-03-10 | 주식회사 바이오솔루션 | 물질 p를 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물 |
CN110732017B (zh) * | 2019-11-08 | 2021-08-27 | 中山大学 | Sp在制备用于治疗男性不育症的药物中的用途 |
KR102375090B1 (ko) * | 2020-03-02 | 2022-03-17 | 주식회사 바이오솔루션 | 물질 p를 포함하는 항산화 효능 조성물 |
Family Cites Families (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
TW327194B (en) * | 1992-05-01 | 1998-02-21 | American Cyanamid Co | Novel amyloid precursor proteins and methods of using same |
AU701042B2 (en) * | 1995-02-28 | 1999-01-21 | Aventisub Llc | Pharmaceutical composition for piperidinoalkanol compounds |
US6080783A (en) * | 1998-09-01 | 2000-06-27 | Gum Tech International, Inc. | Method and composition for delivering zinc to the nasal membrane |
JP4096115B2 (ja) * | 2000-08-10 | 2008-06-04 | 輝夫 西田 | 皮膚創傷治癒促進剤 |
AU7776701A (en) * | 2000-08-10 | 2002-02-25 | Santen Pharmaceutical Co Ltd | Skin wound healing promoters |
US7425528B2 (en) * | 2002-07-01 | 2008-09-16 | Novozymes A/S | Stabilization of granules |
AU2003254792A1 (en) * | 2002-08-02 | 2004-02-23 | Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited | Bacterial cell wall skeleton component preparaion |
KR100593397B1 (ko) * | 2004-10-27 | 2006-06-28 | 한국원자력연구소 | 중배엽 줄기세포 및/또는 p 물질을 함유하는 상처 치유또는 상처 치유 촉진제, 또는 세포 치료제 |
CA2585265A1 (en) * | 2004-10-27 | 2006-05-04 | Immuneregen Biosciences, Inc. | Method to promote wound healing |
ITPD20050018A1 (it) * | 2005-01-26 | 2006-07-27 | Multitecno Srl | Composizione insetticida |
WO2007062060A2 (en) * | 2005-11-22 | 2007-05-31 | Ted Reid | Methods and compositions using substance p to promote wound healing |
US20090069237A1 (en) * | 2007-07-18 | 2009-03-12 | Hanna Skubatch | Methods and compositions for treating conditions |
US20100143477A1 (en) * | 2007-07-27 | 2010-06-10 | Immuneregen Biosciences, Inc. | Methods and Compositions for Stimulating the Proliferation or Differentiation of Stem Cells with Substance Por an Analog Thereof |
ES2619181T3 (es) * | 2007-08-28 | 2017-06-23 | Otago Innovation Limited | Hidrogel quirúrgico |
WO2009051622A2 (en) * | 2007-10-12 | 2009-04-23 | Immuneregen Biosciences, Inc. | Methods for stimulating fibroblast proliferation using substance p analogs |
KR101101321B1 (ko) * | 2008-11-03 | 2012-01-02 | 주식회사 엠씨티티 | 상처 치유를 위한 하이드로 겔 형태의 세포전달용 비히클 및 그 제조방법 |
KR101457789B1 (ko) * | 2013-02-13 | 2014-11-03 | 동아제약 주식회사 | 상처 치료용 필름형성 약제학적 조성물 및 그의 제조방법 |
-
2016
- 2016-04-07 KR KR1020160042913A patent/KR101825041B1/ko active IP Right Grant
- 2016-04-29 WO PCT/KR2016/004539 patent/WO2017175909A1/ko unknown
- 2016-04-29 CN CN201680047163.2A patent/CN108135965B/zh active Active
- 2016-04-29 JP JP2018521156A patent/JP6588160B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2016-04-29 EP EP16898013.4A patent/EP3441080A4/en not_active Withdrawn
-
2018
- 2018-01-10 US US15/867,057 patent/US10596224B2/en active Active
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2020510005A (ja) * | 2017-06-14 | 2020-04-02 | バイオソリューション カンパニー・リミテッドBio Solution Co Ltd | 物質pを含むしわの改善または抗炎症化粧料組成物 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN108135965B (zh) | 2022-03-22 |
CN108135965A (zh) | 2018-06-08 |
EP3441080A4 (en) | 2019-12-11 |
WO2017175909A1 (ko) | 2017-10-12 |
JP2018524405A (ja) | 2018-08-30 |
KR101825041B1 (ko) | 2018-02-02 |
US20180140658A1 (en) | 2018-05-24 |
KR20170115357A (ko) | 2017-10-17 |
EP3441080A1 (en) | 2019-02-13 |
US10596224B2 (en) | 2020-03-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6588160B2 (ja) | 物質pを含む傷治癒用薬学組成物 | |
WO2017011982A1 (zh) | 贻贝粘蛋白产品及其抑制皮肤炎症的应用 | |
JP6121561B2 (ja) | 組織再生のための組成物および方法 | |
JP2020529392A (ja) | 傷痕の予防または治療のための組成物 | |
US20240050488A1 (en) | Ammonia oxidizing microorganisms for the treatment of diaper rash, athlete’s foot, contact dermatitis, perspiration, and body odor | |
TW201416071A (zh) | 具抗菌、調節皮脂分泌及去角質功效之組成物以去除或防治粉刺 | |
RU2013156536A (ru) | Применение prdx2 и/или prdx6 для получения фармацевтической композиции для лечения или предотвращения повреждения, старения или заболевания, вызванных повышением уровня активных форм кислорода | |
KR102158969B1 (ko) | 물질 p를 포함하는 난치성 궤양 치료용 조성물 | |
KR101451816B1 (ko) | 당뇨병성 창상의 예방 또는 치료용 약학 조성물 | |
CN112933214A (zh) | 一种促进伤口愈合的组合物 | |
JP5166116B2 (ja) | 育毛剤 | |
US10363262B1 (en) | Composition for treating wound comprising gypenoside LXXV | |
CN113473963A (zh) | 化妆品/皮肤病学组合物 | |
WO2020016155A1 (en) | Methods and compositions for promoting wound healing in a subject suffering from ectodermal dysplasias | |
JP7475873B2 (ja) | ディフェンシン発現促進剤 | |
JP2010215522A (ja) | 皮膚疾患治療用又は皮膚疾患予防用医薬組成物、及び、皮膚疾患予防用化粧料 | |
KR20110129025A (ko) | 양막의 가용화를 통한 양막의 성분 추출방법 및 그 추출물 | |
US20220347256A1 (en) | Composition for promoting hair growth, and alleviating and treating hair loss including substance p | |
WO2024073013A1 (en) | Combination treatment of dermal and transdermal fibrotic diseases, disorders and associated pain and inflammation | |
WO2024073011A1 (en) | Topical compositions and methods for the treatment of dermal and transdermal fibrotic diseases, disorders and associated pain and inflammation | |
JP2021084884A (ja) | ワサビ根の発酵物又はその抽出物 | |
KR20230120195A (ko) | 니아신 유도체 및 이를 함유하는 탈모 예방, 치료용 또는 개선용 조성물 | |
KR20140104932A (ko) | 당뇨병성 창상의 예방 또는 치료용 약학 조성물 | |
CN103520707A (zh) | 一种益菌治菌预防和治疗生殖系统感染的组合物 | |
JP2019521134A (ja) | 性感染症用組成物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180109 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180109 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190122 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20190419 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190618 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20190903 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190911 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6588160 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |