JP6437183B2 - 肝機能改善剤 - Google Patents

Description

本発明は、マルチトールを有効成分とする肝機能改善剤、ならびにマルチトールを有効成分として含む肝機能障害の予防および／または治療のための医薬組成物に関する。

肝臓病は、一つの典型的な例において、以下のように発症および進行する：（１）主にウィルス性感染や薬剤アレルギーが原因で急性肝炎が発症する、（２）該肝炎が慢性化して慢性肝炎に移行する、（３）該慢性肝炎がさらに進行して肝硬変や肝がんへ移行する。かかる特徴から、肝臓病は慢性化させないことが重要である。また近年では、非ウィルス性の肝疾患として、肥満や糖尿病といった生活習慣病に起因するアルコール性、または非アルコール性の脂肪肝患者が増加しており、問題となっている。

肝臓病は早期に自覚症状が少なく、特に長い経過を辿る慢性肝炎や肝硬変は初期症状がほとんどないのが特徴である。そのため、人間ドックや健康診断等における血液検査をはじめとした検査により、肝臓が今どういう状態にあるかをチェックすることが重要となる。アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（以下、ＡＳＴと称する）と、アラニンアミノトランスフェラーゼ（以下、ＡＬＴと称する）は、肝機能検査の中でも最も基本的な検査項目である。ＡＳＴおよびＡＬＴはいずれも臓器細胞の中に存在する酵素で、アミノ酸のアミノ基転移反応を触媒する。炎症等の肝障害により細胞が破壊されると、細胞中のＡＳＴやＡＬＴは血中へ流出し、これら逸脱酵素の血中濃度が上昇する。血中ＡＳＴの正常値は１２〜４０ＩＵ／Ｌ、血中ＡＬＴの正常値は５〜４０ＩＵ／Ｌであるが、急性肝細胞障害時は血中ＡＬＴ値が５００ＩＵ／Ｌ以上を示す。

肝機能障害を呈する肝疾患の一つである脂肪肝は、肝細胞に中性脂肪が蓄積する疾患である。脂肪肝患者の肝細胞を顕微鏡で観察すると、脂肪滴を含む空胞が認められる。脂肪肝患者のＡＳＴ値およびＡＬＴ値は正常値の場合もあるが、通常は軽度の上昇（正常値の２倍から４倍以下）が認められる場合が多い。脂肪肝には、単純性脂肪肝（ｓｉｍｐｌｅ ｓｔｅａｔｏｓｉｓ）と、肝細胞の線維化を伴う脂肪肝炎（ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ）とがあるが、特に、脂肪肝炎では単純性脂肪肝に比べてＡＳＴ値およびＡＬＴ値が高値となる例が多い。

以上のように、肝機能障害の検査において血中ＡＳＴ値およびＡＬＴ値は重要な指標であり、種々の肝疾患の予防や治療においてもＡＳＴ値とＡＬＴ値の改善が必要とされている。

肝機能障害の予防や改善を目的とした薬剤としては、種々のものが知られている。ウィルス性肝疾患の予防・治療薬としては、肝炎ウィルスワクチンのほか、Ｂ型あるいはＣ型肝炎治療薬がある。脂肪肝に関してはインスリン抵抗性改善薬、脂質異常症治療薬、肝臓用薬、アンジオテンシンII１型受容体拮抗薬などの有効性が報告されている（非特許文献１）。また、天然物由来の肝機能改善剤としては、アカメガシワ樹皮のエキスを有効成分とする肝機能改善剤（特許文献１）、ラクトパーオキシダーゼを有効成分とすることを特徴とする肝機能改善剤（特許文献２）、Ｓ２Ｕ型のトリグリセリドを有効成分とする肝機能改善剤（特許文献３）、グルタチオン及びウコンを含有する肝臓障害抑制作用組成物（特許文献４）、イソマルツロースからなる肝機能改善剤（特許文献５）、梅肉エキスもしくは梅肉エキスの中和処理物を含有することを特徴とするウイルス性肝炎患者における肝機能改善剤（特許文献６）等が知られている。

特開平１１−２０９２９７号公報 特開２００１−２２６２８９号公報 特開２００８−２４７７９１号公報 特開２００５−１７９２１３号公報 特開２０１０−２４８１４１号公報 特開２０１１−２０１８４１号公報

社団法人日本肝臓学会編「ＮＡＳＨ・ＮＡＦＬＤの診察ガイド２０１０」（株式会社文光堂出版、２０１０年１２月１８日発行）

本発明は、疾患初期の自覚症状が殆どなく、慢性化、進行による病態悪化が問題となっている肝疾患ないし肝機能障害の予防および／または治療に有用な、肝機能を改善し得る物質を含む肝機能改善剤を提供することを目的とする。

本発明者らは、鋭意検討の結果、マルチトールが血中ＡＳＴおよびＡＬＴの低減を特徴とする肝機能改善作用を有することを見出し、本発明を完成させた。

すなわち本発明は、マルチトールを有効成分として含有する肝機能改善剤（以下、「本発明の肝機能改善剤」とも称する）を提供する。

本発明はまた、マルチトールを有効成分として含む肝機能障害の予防および／または治療のための医薬組成物（以下、「本発明の肝機能障害予防／治療用医薬組成物」とも称する）を提供する。

本発明はさらに、非ヒト動物における肝機能障害の予防および／または治療のためのマルチトールを含む非ヒト動物用医薬組成物、該医薬組成物もしくは本発明の肝機能改善剤を非ヒト動物に投与することを含む非ヒト動物における肝機能障害を予防および／または治療する方法、本発明の肝機能改善剤を飲食品に配合または添加することを特徴とする機能性飲食品の製造方法、およびサプリメントの製造のための本発明の肝機能改善剤の使用を提供する。

ヘマトキシリン・エオシン（ＨＥ）染色した、群１（通常飼料＋蒸留水）のマウスの肝臓組織の顕微鏡観察結果を示す。 ヘマトキシリン・エオシン（ＨＥ）染色した、群２（高脂肪飼料＋蒸留水）のマウスの肝臓組織の顕微鏡観察結果を示す。 ヘマトキシリン・エオシン（ＨＥ）染色した、群３（高脂肪飼料＋２．５％ショ糖水溶液）のマウスの肝臓組織の顕微鏡観察結果を示す。 ヘマトキシリン・エオシン（ＨＥ）染色した、群４（高脂肪飼料＋２．２５％マルチトール水溶液）のマウスの肝臓組織の顕微鏡観察結果を示す。 ヘマトキシリン・エオシン（ＨＥ）染色した、群５（高脂肪飼料＋４．５％マルチトール水溶液）のマウスの肝臓組織の顕微鏡観察結果を示す。

本発明の肝機能改善剤および肝機能障害予防／治療用医薬組成物の有効成分であるマルチトールは、公知の製造方法により製造されたものであってもよく、市販のマルチトール製品であってもよい。マルチトールの製造方法としては、例えば、麦芽糖を含む水飴を触媒存在下で高圧接触還元することで水素添加し、精製、濃縮する方法が例示される。市販のマルチトール製品としては、上野製薬株式会社製の還元澱粉糖化物ＭＵ−４５、ＭＵ−５０およびＭＵ−６５、還元麦芽糖水飴ＭＵ−７５ならびに粉末マルチトールウエノを例示することができる。

本発明において使用するマルチトールの性状は、液体状または固体状のいずれであってもよく、例えば、液体状マルチトールから公知の粉末化方法または結晶化方法により製造された、粉末状マルチトールまたは結晶マルチトールであってもよい。使用するマルチトールの性状は、目的とする剤形に応じて適宜選択することができる。

本発明において使用するマルチトールの純度としては、液体状マルチトールであれば純度４５％以上のものが好ましい。また、粉末状マルチトールであれば純度８０％以上のものが好ましく、純度８５％以上のものがより好ましく、純度８８％以上のものがさらに好ましい。

本発明の肝機能改善剤は、有効成分としてマルチトールを含有するものであればよく、マルチトールによる肝機能改善効果を妨げない限り、さらに賦形剤等を含むものであってもよい。したがって、本発明の肝機能改善剤中のマルチトールの割合は特に限定されない。例えば、本発明の肝機能改善剤は、マルチトールを４０重量％以上、４５重量％以上、５０重量％以上、６０重量％以上、７０重量％以上、８０重量％以上、８５重量％以上、９０重量％以上、９５重量％以上または９８重量％以上含むものであり得る。あるいは、本発明の肝機能改善剤は、マルチトールのみからなるものであってもよい。一つの態様において、マルチトールは、本発明の肝機能改善剤における単独の有効成分である。

本発明の肝機能障害予防／治療用医薬組成物は、本発明の肝機能改善剤と同様、有効成分としてマルチトールを含有するものである。

本発明の肝機能障害予防／治療用医薬組成物中に有効成分として含有させるマルチトールの割合は、目的とする剤形等に応じて適宜設定することができるが、通常、１〜９８重量％程度であればよく、２〜９５重量％程度であることが好ましく、３〜９０重量％程度であることがより好ましい。一つの態様において、マルチトールは、本発明の肝機能障害予防／治療用医薬組成物における単独の有効成分である。

本発明の一つの好ましい態様において、肝機能障害の予防および／または治療は、肝臓への脂肪蓄積抑制、肝臓の線維化抑制および肝臓の炎症抑制のいずれか１以上を介するものである。

「肝機能障害」とは、肝臓の機能が正常時よりも低下している状態をいい、一般的には、肝機能の検査項目（例えば血中のＡＳＴ、ＡＬＴ、γ−ＧＴＰ、ＡＬＰ、ＴＴＴ、ＺＴＴ、総ビリルビン、総たんぱく、アルブミン、ＬＤＨ（乳酸脱水素酵素）、コリンエステラーゼの濃度等）のいずれか１以上における測定値が正常値（基準値）の範囲を逸脱していることにより特徴付けられる状態である。肝機能検査の基準値は、検査を行う医療機関、検査方法、測定機器、用いる試薬などにより異なり得るが、例えば「標準的な健診・保健指導に関するプログラム（確定版）」（厚生労働省）、「臨床検査項目解説」（三菱化学メディエンス（株）Webページ）、「肝臓病−治る時代の基礎知識」（渡辺純夫著、岩波書店）等に記載される基準値を用いるか又は参考にすることができる。

一つの側面において、本発明の肝機能障害予防／治療用医薬組成物は、マルチトールについて新たに見出された、血中ＡＳＴおよびＡＬＴの低減作用に基づくものである。したがって、一つの側面において、本発明の肝機能障害予防／治療用医薬組成物の適用対象となる肝機能障害は、血中ＡＳＴ値および／またはＡＬＴ値が正常値の範囲（例えばＡＳＴが１２〜４０ＩＵ／Ｌ、ＡＬＴが５〜４０ＩＵ／Ｌ）を逸脱していることにより特徴付けられる肝機能障害である。

本明細書において、肝機能障害の「治療」には、既に肝機能障害を有している患者における肝機能障害の進行を阻止すること、例えば、脂肪肝等の軽度の慢性肝疾患からさらなる肝障害の進行を抑制することも含まれる。

本発明の肝機能障害予防／治療用医薬組成物の投与方法は、経口投与または非経口投与のいずれであってもよい。また、該組成物の投与時期は特に限定されず、食前、食中、食後および食間のいずれであってもよい。例えば、該組成物は、脂肪含有量が１０重量％以上である食事の食前、食中、食後および食間のいずれかに投与するのが好ましい。経口投与の場合には、多量のマルチトールによる下痢の副作用回避の点で、食後に投与するか、または一日に複数回に分けて少量ずつ投与するのが特に好ましい。ここで、一般的に「食事」とは、生存に必要な栄養分をとるために毎日の習慣として物を食べること（飲食行為）あるいはその飲食物を意味するが、本明細書において用いる「食事」の用語は、一回の飲食行為において摂取する一まとまりの飲食物を意味するものとする。

本発明の肝機能障害予防／治療用医薬組成物の投与量は、肝機能障害の程度、その他の疾病の程度、年齢、性別等の条件に応じて適宜選択される。一つの態様において、該組成物は、肝機能障害の指標であるＡＳＴおよびＡＬＴの値を正常値または正常値に近い値まで低減できる量（以下、「ＡＳＴ／ＡＬＴ低減有効量」とも称する）を投与すればよい。別の態様において、該組成物は、肝臓への脂肪蓄積を抑制できる量（以下、「脂肪蓄積抑制有効量」とも称する）、肝臓の線維化を抑制できる量（以下、「線維化抑制有効量」とも称する）、または肝臓の炎症を抑制できる量（以下、「炎症抑制有効量」とも称する）で投与される。これら有効量は、当業者に周知の方法（各種の非臨床および／または臨床試験を含む）を用いて適宜決定することができる。

本発明の肝機能障害予防／治療用医薬組成物は、上記有効量（ＡＳＴ／ＡＬＴ低減有効量、脂肪蓄積抑制有効量、線維化抑制有効量または炎症抑制有効量）のマルチトールを一度に投与するものであっても良く、間隔を置いて複数回に分けて投与するものであっても良い。経口投与の場合は、緩下性の点から複数回に分けて投与するのが好ましい。複数回に分けて投与する場合は、一日に投与されるマルチトールの合計量が上記有効量となればよく、食事の回数に合わせて投与するのが好ましい。

本明細書において、「肝機能障害の予防および／または治療」には、肝機能障害を呈する種々の肝疾患、例えばウィルス性肝疾患、薬剤性肝疾患、アルコール性脂肪肝および非アルコール性脂肪肝、アルコール性脂肪肝炎および非アルコール性脂肪肝炎、肝硬変、肝がん等を予防および／または治療することが含まれる。本発明の肝機能障害予防／治療用医薬組成物を適用する肝疾患は、好ましくは、正常値を超えるＡＳＴ値および／またはＡＬＴ値との関連が深いアルコール性脂肪肝、非アルコール性脂肪肝、アルコール性脂肪肝炎、非アルコール性脂肪肝炎、肝硬変および肝がんである。一つの好ましい態様において、本発明の肝機能障害予防／治療用医薬組成物を適用する肝疾患は、非アルコール性脂肪肝炎である。

マルチトールは、肝臓への脂肪蓄積を抑制する効果を有することも確認された。したがって、一つの態様において、本発明の肝機能障害予防／治療用医薬組成物は、アルコール性または非アルコール性の脂肪肝または脂肪肝炎に罹患した者、好ましくは食事療法の必要性が高い非アルコール性脂肪肝または非アルコール性脂肪肝炎に罹患した者に対して投与されるものである。

また、本発明の肝機能障害予防／治療用医薬組成物は、肝臓疾患への進行が問題となっている、肥満、糖尿病、脂質異常症、高脂血症、高血圧、耐糖能異常症、メタボリックシンドローム、脂肪ジストロフィー症、βリポ蛋白欠損症、ウェーバー−クリスチャン病（Ｗｅｂｅｒ−Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ病）、ウォルマン病（Ｗｏｌｍａｎ病）、妊娠性急性脂肪肝、ウィルソン病（Ｗｉｌｓｏｎ病）、インド小児肝硬変等に罹患した者における肝機能障害の予防および／または治療のために用いることができる。これらの疾病に罹患した者の中でも、食事療法の必要性が高い肥満や糖尿病に罹患した者における肝機能障害の予防および／または治療のために用いることが好ましい。

さらに、本発明の肝機能障害予防／治療用医薬組成物は、健常者に投与することにより、肝機能障害を効果的に予防することができる。

本発明の肝機能障害予防／治療用医薬組成物は、マルチトールによる肝機能障害の予防／治療効果を妨げない範囲であれば、マルチトールの他にさらに賦形剤、安定剤、保存剤、緩衝剤、矯味剤、懸濁化剤、乳化剤、着香剤、溶解補助剤、着色剤、粘稠剤等の成分を添加して各種の剤形とすることができる。

本発明の肝機能障害予防／治療用医薬組成物の剤形としては、錠剤（口腔内崩壊錠、チュアブル錠、発泡錠、分散錠、溶解錠）、カプセル剤、顆粒剤（発泡顆粒剤）、散剤、経口液剤（エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、リモナーデ剤）、シロップ剤（シロップ用剤）、経口ゼリー剤、口腔用錠剤（トローチ剤、舌下錠、バッカル錠、付着錠、ガム剤）、口腔用スプレー剤、口腔用半固形剤、含嗽剤、注射剤（輸液剤、埋め込み注射剤、持続性注射剤）、透析用剤（腹膜透析用剤、血液透析用剤）、吸入剤（吸入粉末剤、吸入液剤、吸入エアゾール剤）、坐剤、直腸用半固形剤、注腸剤、点眼剤、眼軟膏剤、点耳剤、点鼻剤（点鼻粉末剤、点鼻液剤）、膣錠、膣用坐剤、外用固形剤（外用散剤）、外用液剤（リニメント剤、ローション剤）、スプレー剤（外用エアゾール剤、ポンプスプレー剤）、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤（テープ剤、パップ剤）等が挙げられる。これらの剤形の中でも肝臓への到達のし易さの点で、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、経口液剤、シロップ剤、経口ゼリー剤、口腔用錠剤、口腔用スプレー剤、口腔用半固形剤、含嗽剤、注射剤、透析用剤、吸入剤、坐剤、直腸用半固形剤および注腸剤が好ましく、経口投与のし易さの点で、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、経口液剤、シロップ剤、経口ゼリー剤、口腔用錠剤、口腔用スプレー剤、口腔用半固形剤および含嗽剤がより好ましい。

また、本発明の肝機能障害予防／治療用医薬組成物は、エキス剤、丸剤、酒精剤、浸剤・煎剤、茶剤、チンキ剤、芳香水剤、流エキス剤等の生薬関連製剤にマルチトールを添加した剤形で使用することもできる。これら剤形は、肝機能障害の程度、その他の疾病の程度、年齢、性別等の条件に応じて適宜選択される。

更に、本発明の肝機能障害予防／治療用医薬組成物は、肝機能改善効果を有する他の薬剤をさらに含むものとすることができる。これらの薬剤としては、例えば、インスリン抵抗性改善薬（チアゾリジン誘導体、ビグアナイド薬等）、抗酸化剤（ビタミンＥ、ビタミンＣ、エイコサペンタエン酸、ベタイン、Ｎ−アセチルシステイン等）、脂質異常症治療薬（フィブラート系薬剤、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害薬、プロブコール等）、肝庇護薬（ウルソデオキシコール酸、グリチルリチン製剤、小柴胡湯、タウリン等）、アンジオテンシンII１型受容体拮抗薬（ロサルタン等）等が例示される。

また、本発明の肝機能障害予防／治療用医薬組成物は、肝機能改善効果を有する天然物または天然由来物質をさらに含むものとすることもできる。これらの天然物または天然由来物質としては、例えば、動物肝臓、動物肝臓由来物質（サメの肝油、豚肝臓の酵素分解ペプチド等）、ポリコサノール、葛花、Ｌ−オルニチン、ノブドウ、ノブドウ由来物質（例えばレスベラトロール）、クルミ、クルミ由来物質（例えばクルミポリフェノール）、α−リポ酸、アーティチョーク、アスタキサンチン、アスパラギン酸、アラニン、イエロードック（Yellow Dock、和名:ナガバギシギシ、学名:Rumex crispus）、ウコン、カキ（牡蠣）、ガジュツ、ガラナ、甘草、キョウオウ、クロレラ、グリチルリチン、高麗人参、コーヒー、ゴマリグナン、S-アデノシルメチオニン（ＳＡＭｅ(サミー)）、シジミ、システイン、シリマリン、スピルリナ、チャンカピエドラ（和名:キダチコミカンソウ、学名:Phyllanthus niruri）、田七人参、フェヌグリーク（fenugreek、和名:コロハ、学名:Trigonella foenum-graecum）、セサミン、タウリン、ダンデライオン（タンポポ）、フコイダン、マリアアザミ、ラクトフェリン、ラフィノース、霊芝、レシチン、ローヤルゼリー等が例示される。

本発明の肝機能改善剤またはその有効成分であるマルチトールは、非ヒト動物における肝機能障害を予防および／または治療するために用いることもできる。したがって、本発明の一態様において、非ヒト動物における肝機能障害の予防および／または治療のための、マルチトールを含む非ヒト動物用医薬組成物（以下、本発明の非ヒト動物用医薬組成物とも称する）が提供される。また、該非ヒト動物用医薬組成物または本発明の肝機能改善剤を非ヒト動物に投与することを含む、非ヒト動物における肝機能障害を予防および／または治療する方法も提供される。非ヒト動物としては、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ等の家畜類や、イヌ、ネコ等のペットとして飼育される動物等が例示される。

本発明の非ヒト動物用医薬組成物に含有させるマルチトールの量、該医薬組成物の投与方法、投与時期、投与量および剤形、該医薬組成物においてマルチトールと併用可能な他の薬剤、天然物および天然由来物質、ならびに本発明の肝機能改善剤を非ヒト動物に投与する場合における投与方法、投与時期、投与量等については、「本発明の肝機能障害予防／治療用医薬組成物」について上述した内容と同様である。

さらに、本発明の肝機能改善剤は、食品添加剤として用いることもできる。したがって、本発明の肝機能改善剤を飲食品に配合または添加することにより、血中ＡＳＴ値および血中ＡＬＴ値の低減改善を特徴とする肝機能改善のための機能性飲食品を提供することができる。また、本発明の肝機能改善剤を成分として使用することにより、肝機能改善のためのサプリメントを製造することもできる。この場合、製造するサプリメントの剤形に応じて適宜、賦形剤等を配合することができる。

以下、実施例により本発明をさらに説明する。

試験例１
（１）試験動物
８週齢の雄のＣ５７ＢＬ／６マウス（日本クレア株式会社製）を無作為に各群４匹に分けて使用した。

（２）飼料
通常飼料として、固形飼料ＭＦ（脂質成分５．３％、オリエンタル酵母工業株式会社製）を使用した。高脂肪飼料として、固形飼料Ｈｉｇｈ Ｆａｔ Ｄｉｅｔ ３２（脂質成分３２．０％、日本クレア株式会社製）を使用した。

（３）試料の調製
被験物質としてショ糖（和光純薬工業株式会社製）およびマルチトール（上野製薬株式会社製、粉末マルチトールウエノ６０Ｍ（マルチトール純度９０％））をそれぞれ蒸留水に溶解させて得られた、２．５重量％濃度のショ糖水溶液ならびに２．２５重量％濃度および４．５重量％濃度のマルチトール水溶液を試料水とした。陰性試料は蒸留水とした。試料水の投与方法は自由飲水とし、飲水量を記録した。試料水の濃度および飲水量から算出した１日あたりのショ糖の投与量は体重１ｋｇあたり３ｇであり、同様に算出した１日あたりのマルチトールの投与量は、２．２５％マルチトール水溶液を投与したマウスでは体重１ｋｇあたり２．７ｇ、４．５％マルチトール水溶液を投与したマウスでは体重１ｋｇあたり４．５ｇであった。

（４）試験方法
各群のマウスに、表１に示す飼料および試料水（被験物質水溶液または蒸留水）を与え、８週間飼育した。８週間の試験飼育の後、ペントバルビタールを０．５ｍｇ／体重１０ｇ腹腔内投与し、深麻酔下にて尾静脈より採血を行った。
マウスから採血した血清について、トランスアミナーゼＣ−IIテストワコーキット（和光純薬工業株式会社製）を用いて、肝機能の指標である血中ＡＳＴ値および血中ＡＬＴ値を測定した。
また、プレシジョンエクシード β−ケトン測定用電極（アボットジャパン株式会社製）を用いて、肝臓における脂肪燃焼の指標である血中ケトン体値を測定した。

（５）血中ＡＳＴ値、血中ＡＬＴ値および血中ケトン体値の評価
血中ＡＳＴ値、血中ＡＬＴ値および血中ケトン体値について、ｔ検定法により有意差検定を行い、評価した。

（６）結果
血液検査の結果、血中ＡＳＴ値については、群４（高脂肪飼料＋２．２５％マルチトール水溶液）においては群３（高脂肪飼料＋２．５％ショ糖水溶液）よりも低減される傾向が見られ、群５（高脂肪飼料＋４．５％マルチトール水溶液）においては正常コントロールである群１（通常飼料＋蒸留水）と同等のレベルにまで血中ＡＳＴ値が低減した。さらに、血中ＡＬＴ値についても血中ＡＳＴ値と同様に低減傾向を示しており、特に群５においては群３に対して有意に血中ＡＬＴ値を低減させる効果が認められた。一方、血中ケトン体値については、群３に対して群４および群５において増加しており、特に群４においては群３に対して有意な改善効果が認められた。血中ＡＳＴ値および血中ＡＬＴ値の評価結果を表２に示し、血中ケトン体値の評価結果を表３に示す。

試験例２
（１）試験動物、（２）飼料および（３）試料の調製については試験例１と同様にして、以下の試験を行った。

（４）試験方法
各群のマウスに、表１に示す飼料および試料水（被験物質水溶液または蒸留水）を与え、８週間飼育した。８週間の試験飼育の後、ペントバルビタールを１００ｍｇ／体重ｋｇ腹腔内投与し、安楽死させ、臓器を摘出した。

（５）肝細胞の脂肪空胞評価
マウスから摘出した肝臓組織について、ヘマトキシリン・エオシン（ＨＥ）染色し、顕微鏡による標本観察を行った。また、顕微鏡観察結果を下記方法により解析し、有意差をｔ検定法により評価した。

［顕微鏡観察結果の解析方法］
ＨＳオールインワン蛍光顕微鏡ＢＺ−９０００（株式会社キーエンス）を使用し、４００倍の視野で、血管など結果に影響するような場所が含まれない部位を無作為に１匹あたり４箇所撮影した。これを１群４匹について行い、合計１６枚／１群の顕微鏡画像を得た。まず、肝細胞の細胞質や核など染色した部分を画像解析により選択した。次に色反転により脂肪空胞部分を選択し、そのピクセル数を脂肪空胞面積とした。解析には、蛍光顕微鏡ＢＺ−９０００に付属のソフトウェアであるダイナミックセルカウントを用いた。

（６）結果
顕微鏡観察において、肝細胞に蓄積した脂肪はＨＥ染色で染まらず、白色の脂肪空胞として認められる。脂肪肝のコントロールである群２（高脂肪飼料＋蒸留水）においては多数の脂肪空胞が認められたのに対し、群４（高脂肪飼料＋２．２５％マルチトール水溶液）および群５（高脂肪飼料＋４．５％マルチトール水溶液）においては、脂肪空胞はほとんど観察されなかった。さらに、群４および群５においては、脂肪空胞面積が群２と比較して有意に小さかった。一方、群３（高脂肪飼料＋２．５％ショ糖水溶液）においては、脂肪空胞数の減少は限定的であり、脂肪空胞面積を群２と比較して有意に減少させる効果は認められなかった。顕微鏡観察の結果を図１〜５に示し、脂肪空胞面積の評価結果を表４に示す。

試験例３
（１）飼料の調製
通常飼料として、固形飼料ＣＥ−２（脂質４．６重量％、日本クレア株式会社製）を使用した。ショ糖含有高脂肪飼料として、固形飼料Ｈｉｇｈ Ｆａｔ Ｄｉｅｔ ３２（脂質３２．０重量％、ショ糖６．７５重量％、日本クレア株式会社製）を使用した。マルチトール含有高脂肪飼料として、固形飼料Ｈｉｇｈ Ｆａｔ Ｄｉｅｔ ３２のショ糖成分（６．７５重量％）の全量を粉末マルチトール（粉末マルチトールウエノ６０Ｍ（マルチトール純度９０％）、上野製薬株式会社製）に置き換えた特別飼料（脂質３２．０重量％、マルチトール６．０８重量％、日本クレア株式会社製）を使用した。

（２）飲水の調製
Ｅｌｉｘ−ＵＶ純水製造装置で調製した純水に次亜塩素酸ナトリウム（ピューラックス−Ｓ、株式会社オーヤラックス製）を終濃度０．００００９％となるように添加して純水とした。マルチトール水溶液は、粉末マルチトール（粉末マルチトールウエノ６０Ｍ（マルチトール純度９０％）、上野製薬株式会社製）を１．８％（重量／容量）となるよう純水に溶解させて調製した。該マルチトール水溶液におけるマルチトール純度は１．６２％となる。

（３）試験動物
ＳＰＦマウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、日本クレア株式会社製）の雌２１匹を妊娠１４日で購入し、馴化飼育を行った。全動物を自然分娩させ、出生した雄をモデル作製に使用した。なお、離乳は生後４週齢とした。

ＮＡＳＨマウスの作製：
２日齢時の雄にストレプトゾトシン（シグマアルドリッチジャパン株式会社製）を生理食塩液（株式会社大塚製薬工場製）にて１０ｍｇ／ｍＬ濃度とし、２０μＬ／頭（２００μｇ／頭）で背部皮下に１回投与した。その後は離乳まで母動物に哺育させた。生後２８±２日齢時に離乳した。

出生児の調整：
ストレプトゾトシンの投与後に、同腹を考慮せずに１腹当たりの哺育児数が均等となるように振り分けた。ストレプトゾトシンの投与を実施しない雄個体については出生後１週間以内に、同腹を考慮せずに１腹当たりの哺育児数が均等となるように振り分けた。

（４）飼育方法
飼育条件（４週齢まで）：
動物入荷日から離乳までは、母児ともに通常飼料を自由に摂取させた。生後４週齢時に離乳した。

飼育条件（４週齢から５週齢前日まで）：
離乳以降は、ストレプトゾトシンを投与していない動物（通常マウス（群Ｓ１および群１））については通常飼料を、ストレプトゾトシンを投与した動物（ＮＡＳＨマウス（群Ｓ２、群２、群３および群４））についてはショ糖含有高脂肪飼料を自由に摂取させた。

飼育条件（５週齢から８週齢まで）：
通常マウス（群１）については、通常飼料を自由に摂取させた。ＮＡＳＨマウスについては、ショ糖群（群２）においてショ糖含有高脂肪飼料を、マルチトール低用量群（群３）およびマルチトール高用量群（群４）においてマルチトール含有高脂肪飼料を自由に摂取させた。

飲水は、５〜８週齢のマルチトール高用量群（群４）においてのみマルチトール水溶液を、該５〜８週齢の群４以外においては純水を自由に摂取させた。群構成を表５に示す。

群Ｓ１およびＳ２においては１群当たりの動物を雄６匹とし、５週齢まで飼育した後に剖検した。群１、群２、群３および群４においては１群当たりの動物を雄８匹とし、８週齢まで飼育した後に剖検した。

５週齢時または８週齢時の計画剖検時に、全個体についてジエチルエーテル（シグマアルドリッチジャパン株式会社製）麻酔下で、ヘパリンナトリウム（ノボ・ヘパリン注１０００：持田製薬株式会社製）を通した注射針を心臓に穿刺し、全血液を吸引して安楽死させ、臓器を摘出した。

（５）肝臓の重量測定
全ての計画剖検動物について、採材した肝臓組織を生理食塩水にて洗浄後、重量を電子天秤（ＡＵＷ２２Ｄ型、株式会社島津製作所製）にて測定した。

（６）オイルレッド染色（脂肪蓄積面積％）
５週齢または８週齢の計画剖検動物について、肝臓外側左葉を中性ホルマリン液（和光純薬工業株式会社製）に浸漬し、２４時間室温にて固定後、スクロース置換を実施し、Ｏ．Ｃ．Ｔ．コンパウンド（サクラファインテックジャパン株式会社製）を満たした凍結切片用トレー（クリオディッシュ、株式会社硝英製作所製）に包埋後、速やかに液体窒素で凍結し、オイルレッド染色用に−８０℃にて保存した。

常法に従ってオイルレッド染色を施した切片を用いて、中心静脈を中心とした２００倍の視野にて、１切片あたり５視野の写真を撮影した。撮影した画像をもとにＩｍａｇｅ Ｊソフトウェア（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ）を用いてオイルレッド陽性面積率（％）を算出し、通常群（群１）および被験物質投与群（群３および４）をそれぞれショ糖群（群２）と比較した。

（７）シリウスレッド染色（線維化面積％）
８週齢の計画剖検動物について、肝臓外側左葉をブアン固定液（シグマアルドリッチジャパン株式会社製）に浸漬し、２４時間室温にて固定後、シリウスレッド染色用にパラフィン包埋を行った。

常法に従ってシリウスレッド染色を施した切片を用いて、中心静脈を中心とした２００倍の視野にて、１切片あたり５視野の写真を撮影した。撮影した画像をもとにＩｍａｇｅ Ｊソフトウェアを用いてコラーゲン陽性面積率（％）を算出し、通常群（群１）および被験物質投与群（群３および４）をそれぞれショ糖群（群２）と比較した。

（８）Ｆ４／８０免疫染色（炎症面積％）
８週齢の計画剖検動物について、肝臓外側左葉をＯ．Ｃ．Ｔ．コンパウンドを満たしたクリオディッシュに包埋後、速やかに液体窒素で凍結し、Ｆ４／８０免疫染色用に−８０℃にて保存した。

常法に従ってＦ４／８０抗体染色を施した切片を用いて、中心静脈を中心とした２００倍の視野にて１切片あたり５視野の写真を撮影した。撮影した画像をもとにＩｍａｇｅ Ｊソフトウェアを用いてＦ４／８０陽性面積率（％）を算出し、通常群（群１）および被験物質投与群（群３および４）をそれぞれショ糖群（群２）と比較した。

（９）５週齢における病態確認の結果
オイルレッド染色による脂肪蓄積面積％の算出結果を表６に示す。ＮＡＳＨマウス（群Ｓ２）では、通常マウス（群Ｓ１）と比較して、脂肪蓄積面積％の有意な増加が認められたことから、脂肪肝を発症していることが確認された。

（１０）８週齢における脂肪肝改善の結果
オイルレッド染色（脂肪蓄積面積％の算出）の結果を表７に示す。ショ糖群においては、５週齢（群Ｓ２）と比較して８週齢（群２）では有意な差は認められず、脂肪肝改善効果は認められなかった。マルチトール低用量群においては、５週齢（群Ｓ２）と比較して８週齢（群３）で有意に低い値を示し、脂肪肝改善効果が認められた。マルチトール高用量群においては、５週齢（群Ｓ２）と比較して８週齢（群４）で有意に低い値を示し、脂肪肝改善効果が認められた。

（１１）８週齢における肝線維化抑制の結果
シリウスレッド染色（線維化面積％の算出）の結果を表８に示す。正常群（群１）と比較して、ショ糖群（群２）で有意に高い値を示した。ショ糖群（群２）と比較して、マルチトール低用量群（群３）および高用量群（群４）は有意な差は認められなかったが、低値となる傾向を示した。以上の結果より、マルチトール低用量群（群３）および高用量群（群４）に肝組織の線維化抑制効果が示唆された。

（１２）８週齢における肝炎症抑制の結果
Ｆ４／８０免疫染色（炎症面積％の算出）の結果を表９に示す。正常群（群１）と比較して、ショ糖群（群２）で有意に高い値を示した。ショ糖群（群２）と比較して、マルチトール高用量群（群４）は有意な差は認められなかったが、低値となる傾向を示した。ショ糖群（群２）と比較して、マルチトール低用量群（群３）では有意な差は認められなかった。以上の結果より、マルチトール高用量群（群４）に肝組織の抗炎症効果が示唆された。

実施例１（散剤）
表１０に示す原材料を混合し、散剤を製造した。該散剤は、本発明の肝機能改善剤または肝機能障害予防／治療用医薬組成物の一形態である。

実施例２（錠剤）
表１１に示す原材料を混合した後、連続式打錠機（Ｐｉｃｃｏｌａ Ｂ−１０／ＲＩＶＡ社製）を用い、杵金型（φ８ｍｍ、Ｒ１２ｍｍ）、１錠あたりの重量１５０〜２００ｍｇ、回転盤の回転数１２ｒｐｍ、打錠圧４ｋＮの打錠条件で直接打錠し、錠剤を製造した。該錠剤は、本発明の肝機能改善剤または肝機能障害予防／治療用医薬組成物の一形態である。

実施例３（経口液剤）
表１２に示す原材料を蒸留水５００ｍｌに溶解し、経口液剤を製造した。該経口液剤は、本発明の肝機能改善剤または肝機能障害予防／治療用医薬組成物の一形態である。

Claims (9)

1. マルチトールを組成物全体の４０重量％以上含有し、血中ＡＳＴ値及びＡＬＴ値の改善作用を特徴とし、カプセル剤である、肝機能改善用組成物。
2. 肝機能障害の予防および／または治療のために用いられる、請求項１記載の組成物。
3. アルコール性脂肪肝、アルコール性脂肪肝炎、肝硬変および肝がんからなる群より選択される肝疾患の予防および／または治療のための、請求項２に記載の組成物。
4. 脂肪含有量が１０重量％以上である食事の食前、食中、食後および食間のいずれかに投与されるものである、請求項２または３に記載の組成物。
5. インスリン抵抗性改善薬、抗酸化剤、脂質異常症治療薬、肝庇護薬およびアンジオテンシンII１型受容体拮抗薬からなる群より選ばれる１種以上の薬剤をさらに含む、請求項１〜４いずれかに記載の組成物。
6. 組成物がサプリメントである、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
7. 組成物が医薬組成物である、請求項２〜５のいずれかに記載の組成物。
8. 動物肝臓、サメの肝油、豚肝臓の酵素分解ペプチド、ポリコサノール、葛花、Ｌ−オルニチン、ノブドウ、レスベラトロール、クルミ、クルミポリフェノール、α−リポ酸、アーティチョーク、アスタキサンチン、アスパラギン酸、アラニン、イエロードック、ウコン、牡蠣、ガジュツ、ガラナ、甘草、キョウオウ、クロレラ、グリチルリチン、高麗人参、コーヒー、ゴマリグナン、Ｓ−アデノシルメチオニン、シジミ、システイン、シリマリン、スピルリナ、チャンカピエドラ、田七人参、フェヌグリーク、セサミン、タウリン、ダンデライオン、フコイダン、マリアアザミ、ラクトフェリン、ラフィノース、霊芝、レシチンおよびローヤルゼリーからなる群より選ばれる１種以上の天然物または天然由来物質をさらに含む、請求項１〜７いずれかに記載の組成物。
9. マルチトールを単独の有効成分として含む、請求項１〜４、６および７のいずれかに記載の組成物。

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