JP6432967B2 - 溶解性コラーゲン線維多孔体 - Google Patents
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Description
(a) 可溶化コラーゲン溶液にリン酸緩衝生理食塩水(PBS)を添加してコラーゲンを線維化させた後、凍結乾燥する方法。
(b) 可溶化コラーゲン溶液にPBSを添加してコラーゲンを線維化させた後、線維化コラーゲンをエタノールシリーズ(エタノール濃度を段階的に高めたエタノールと水との混合液。エタノール濃度:50%、70%、90%、100%)で脱水・脱塩し、次に溶媒をt-ブタノールに置換し、凍結させた後、凍結乾燥する方法。
(c) 可溶化コラーゲン溶液を凍結乾燥した後、PBSでコラーゲンを線維化させる方法。
[1]コラーゲン線維で構成され、且つ、三次元の細胞培養が可能な多孔質海綿状の形状からなることを特徴とする溶解性コラーゲン線維多孔体。
[2]前記溶解性コラーゲン線維多孔体の電子顕微鏡像における、最表面に観察される孔の数が少なくとも30個である一定区画内において、当該孔の最大個数がnであるときに、平均孔径={Σ(孔iの最大幅+孔iの最小幅)/2}/n(但し、i=1〜n)の数式によって算出される平均孔径が、50〜300μmの範囲である上記[1]記載のコラーゲン多孔体。
[3]可溶化コラーゲン溶液とアルカリ金属重炭酸塩とを混合して線維化コラーゲンを析出させる第一工程、凍結乾燥する第二工程を含むことを特徴とする、上記[1]又は[2]記載の溶解性コラーゲン線維多孔体の製造方法。
[4]アルカリ金属重炭酸塩の適用量が、コラーゲンの分子量を30万としたときに、アルカリ金属重炭酸塩/可溶化コラーゲン溶液中のコラーゲン(モル比)=3×102〜3×104の範囲である上記[3]記載の溶解性コラーゲン線維多孔体の製造方法。
本発明の多孔体は、コラーゲン線維で構成され、且つ、三次元の細胞培養が可能な多孔質海綿状の形状からなることを特徴とするものである。尚、本発明の多孔体は、溶解性の特性を発揮させるため、架橋処理が施されないものであることが望ましい。架橋処理としては、例えば、γ線照射、電子線照射、プラズマ照射、UV照射又は熱脱水等による物理的架橋処理、水溶性化学架橋剤又は気化能を有する化学架橋剤による化学的架橋処理が挙げられる。
本発明の多孔体の製造方法は、可溶化コラーゲン溶液とアルカリ金属重炭酸塩とを混合して線維化コラーゲンを析出させる第一工程、次に、凍結乾燥する第二工程を含むことを特徴とするものである。尚、第一工程においてコラーゲン線維が析出した混合液はゲル状を呈するので、以下では当該混合液を「線維化コラーゲンゲル」と称する。
可溶化コラーゲン溶液として、テラピアの鱗から製造された多木化学(株)製「セルキャンパス FD-08G」スポンジ品をpH3のHCl溶液に溶解し、コラーゲン濃度を1.1%に調製した無色透明溶液(以下、「コラーゲン溶液A」という)を用いた。
コラーゲン溶液A 9容量部と10倍濃い濃度に作製したPBS 1容量部とを混合し、線維化コラーゲンを析出させた。次に、当該線維化コラーゲンを含有した線維化コラーゲンゲルを12wellプレートに2mlずつ分注した後、-35℃・3時間で凍結乾燥して、非線維化コラーゲンで構成された非線維化コラーゲン多孔体を得た。
コラーゲン溶液A 9容量部と10倍濃い濃度に作製したPBS 1容量部とを混合し、線維化コラーゲンを析出させた。次に、当該線維化コラーゲンを含有した線維化コラーゲンゲルの溶媒を、エタノールと水との混合によるエタノールシリーズ(エタノール濃度:50%、70%、90%、100%)で順次脱塩・脱水した後、溶媒をt-ブタノールに置換し、-35℃・3時間で凍結乾燥して、コラーゲン線維で構成されたコラーゲン線維多孔体を得た。
Claims (3)
- コラーゲン線維で構成され、且つ、三次元の細胞培養が可能な多孔質海綿状の形状からなることを特徴とする溶解性コラーゲン線維多孔体。
ただし、前記溶解性コラーゲン線維多孔体の電子顕微鏡像における、最表面に観察される孔の数が少なくとも30個である一定区画内において、当該孔の最大個数がnであるときに、
平均孔径={Σ(孔iの最大幅+孔iの最小幅)/2}/n(但し、i=1〜n)
の数式によって算出される平均孔径が、50〜300μmの範囲である。
なお、前記多孔質海綿状の形状の範疇からは、次の形状は除かれる。すなわち、50〜2000μmの範囲のコントロ−ルされた孔径を有し、且つ、該孔は一方の面より他方の面に真直で連通し、且つ実質的に各孔相互は独立的に存在している多孔質海綿状の形状。 - 可溶化コラーゲン溶液とアルカリ金属重炭酸塩とを混合して線維化コラーゲンを析出させる第一工程、
凍結乾燥する第二工程
を含むことを特徴とする、請求項1記載の溶解性コラーゲン線維多孔体の製造方法。 - アルカリ金属重炭酸塩の適用量が、コラーゲンの分子量を30万としたときに、アルカリ金属重炭酸塩/可溶化コラーゲン溶液中のコラーゲン(モル比)=3×102〜3×104の範囲である請求項2記載の溶解性コラーゲン線維多孔体の製造方法。
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