JP6419573B2 - カシューアップル抽出物を含む組成物 - Google Patents
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Description
1)具体的には25℃より上、さらに具体的には35℃より上、なおさらに具体的には約50℃の温度で、粉砕したカシューアップルをその重量の2〜20倍の抽出溶媒と接触させる工程と、
2)固体を濾過して取り除き、溶媒抽出物を収集する工程と、
3)任意選択により、抽出溶媒と共に撹拌することにより湿潤固体を洗浄する工程と、
4)任意選択により、固体を濾過し、溶媒抽出物を収集する工程と、
5)溶媒抽出物を合わせ、不溶性残渣を除去する工程と、
6)溶媒を蒸発させる工程と、
7)乾燥抽出物を回収する工程と
を含むまたはそれに存することができる、カシューアップルを抽出する方法に関する。
収率%=(乾燥抽出物の重量/果実の圧搾したてのケークの重量)×100
1)粉砕および圧搾したカシューアップルをその重量の2〜20倍、具体的には約10倍の抽出溶媒、具体的には少なくとも30体積%のエタノールを含むエタノール-水混合物、さらに具体的には1/1の体積比率を有するエタノール-水混合物と接触させ、具体的には25℃より上、さらに具体的には35℃より上、なおさらに具体的には約50℃の温度で、例えば2時間撹拌する工程、
2)固体を濾過して取り除き、溶媒抽出物を収集する工程、
3)例えば約15〜30分間、具体的には乾燥固体の重量の1〜100倍に相当する体積の抽出溶媒と共に撹拌することにより湿潤固体を洗浄する工程、
4)固体を濾過し、溶媒抽出物を収集する工程、
5)抽出溶液を合わせ、これをデカンテーションまたは濾過して不溶性残渣を除去する工程、
6)例えば乾燥した50〜80℃のオーブン中または真空下に留めることで、例えば真空噴霧乾燥を用いて溶媒を蒸発させ、それにより淡黄色シロップを得て、濃縮液を凍結乾燥のために凍結してもよい工程、および
7)乾燥抽出物を回収する工程
を含む方法により得ることができる。
(実施例1)
カシューアップル抽出物(CAE-水性およびCAE-アルコール性)の調製
材料および方法
カシューアップル(8kg)を最初に粉砕および圧搾(水圧プレス)して果汁を除去する。残ったケーク残渣(1.2kg)を以下の抽出プロセスに使用する。
圧搾したてのケーク(350g)を、機械的撹拌下、50℃で2時間、50%エタノール/水(体積比)約3.5Lで抽出する。抽出期間の最後に、固体を、フィルターバッグ(PE-25)を通して濾過して取り除き、液体抽出物3.3Lを除去する。
圧搾したてのケーク(350g)を、機械的撹拌下、90℃で2時間、脱塩水約3500gで抽出する。抽出期間の最後に、固体を、フィルターバッグ(PE-25)を通して濾過して取り除き、液体抽出物3500gを除去する。
フォーリン-チオカルト法を使用した総フェノール含量の定量化:カシューアップルの抽出物CAE-水性およびCAE-アルコール性は、3〜7重量%の間の没食子酸相当総フェノール含量を含み得る。
-HPLC-DAD分析:
分析的HPLC(Dionex)を必要に応じて設定する。本発明では、使用する移動相は1000ml高純度水(溶媒A)およびアセトニトリル(溶媒B)中0.1%ギ酸とし、0.7ml/分の流速を用いて96分の合計ランにわたって以下の勾配を利用した。勾配点は時間0.0分-95%Aおよび5%B;時間10分間-90%Aおよび10%B;10分間イソクラティックに維持し、20分から40分までに勾配を10%から20%のBまで直線的に変化させた;10分間イソクラティックに維持した;50分から65分までに勾配を20%から30%のBまで直線的に変化させ、次の10分間に50%まで変化させた;75分から76分までに勾配を50%から100%のBまで直線的に変化させ、10分間イソクラティックに維持した。85分から86分までに95%Aおよび5%Bの元の条件に戻し、10分間イソクラティックに維持した。溶離液中のフェノール性化合物を、逆相C-18カラム(250×4.6mm ID×5μm;ACE)を使用して280nm、360および520nmに設定したUV-ダイオード-アレイを用いて検出した。抽出物中のフラボノイドおよび有機酸などの有機化合物の量を、ケルセチン、ミリセチンおよびトランス-ケイ皮酸の検量線を使用して決定した。
抽出物のHPLC/MS分析をHPLC(Thermo Finnigan surveyor)を使用して行い、エレクトロスプレーインターフェースを備えたLCQイオントラップ分光計(Thermo Finnigan、LCQ Advantage max)とインターフェースで接続した。溶出プログラムは上記と同じにし、ネガティブモードとポジティブモードの両方で実験を行った。スペクトルをm/z80〜2000の質量範囲にわたってスキャンした。図1に示すクロマトグラムは、有機化合物がうまく分離され、文献に既に記載されているものに対する相対的分子質量の比較により完全に同定されることを示している(E.Sousa de Britoら、2007およびL.Michodjehoun-Mestresら、2009)。
体重および脂肪蓄積、脂肪肝、血糖(糖血)、血中インスリン(インスリン血)およびインスリン抵抗性に対するカシューアップル抽出物(CAE)の効果
材料および方法
体重約20gの5週齢C57BL/6NCrlマウス(Charles River Laboratories、フランス)を実験に使用した。8日間の順化後、マウスを、空腹時糖血による異なる実験グループ(1グループ当たり9匹の動物)にランダムに割り当てた。
・ 正常対照:マウスに正常食を与え、1日1回水を投与した。
・ 高脂肪対照:マウスに高脂肪食を与え、1日1回水を投与した。
・ CAE200mg/kg-アルコール性:マウスに高脂肪食を与え、体重1kg当たり200mgの用量で1日1回水-アルコール性抽出により得られたカシューアップル抽出物を投与した。
・ CAE200mg/kg-水性:マウスに高脂肪食を与え、体重1kg当たり200mgの用量で1日1回水性抽出により得られたカシューアップル抽出物を投与した。
体重および腹部脂肪重量(図2)
高脂肪食を受けたマウスは、正常食下のマウスよりもはるかに多く体重が増加した。体重の差は異なる食事の開始4日後に早々に有意である(p<0.05)。試験の最後、8週間の食事後に、高脂肪食下のマウスは、通常食下の対照マウスのほぼ3倍体重が増加した。これらのマウスは38±1gに達した一方で、正常食下のマウスは24.6±0.3gに達した。
高脂肪食は肝臓への脂肪の蓄積を誘導した:いわゆる、脂肪肝または急性脂肪肝。脂肪の色は、正常食下のマウスについての赤色に代わって白色になり、その重量は60%増加した:高脂肪食については1.72±0.14g対正常食については1.03±0.04g。
食事下で1週間後(7日目)、高脂肪食を受けたマウスの空腹時糖血は、正常食を受けたマウスの糖(109±3.6mg/dL)よりも有意に高かった(159±3.9mg/dL)。その後、この差は、試験の全期間にわたってむしろ一定のままであった。
空腹時インスリン血症も、高脂肪食により有意に増加し、正常食下のマウスについての1.65±0.14ng/mlと比較して4.29±0.08ng/mlに達した。高脂肪食により誘導され空腹時糖血およびインスリン血のこれらの増加と一致して、インスリン抵抗性指数(HOMA-IR)は4倍増加し、これらの動物が強力にインスリン抵抗性であることを示している。
HDFは、体重増加、腹部脂肪蓄積、脂肪肝、空腹時糖血およびインスリン血、ならびにインスリン抵抗性の有意な増加を有するC57BL/6マウスのメタボリックシンドロームの明確な表現型を誘導する。
・ 体重増加の減少
・ 腹部脂肪蓄積の減少
・ 急性脂肪肝の減少
・ 空腹時糖血の減少
・ 空腹時インスリン血の減少
・ インスリン抵抗性の減少
を含む。
体重、脂肪蓄積、血糖(糖血)および血中インスリン(インスリン血)に対するカシューアップル抽出物(CAE)の治療効果
材料および方法
CAE-アルコール性抽出プロセス
カシューアップル(8kg)を最初に粉砕および圧搾(水圧プレス)して果汁を除去する。残ったケーク残渣(1.2kg)を以下の抽出プロセスに使用する。圧搾したてのケーク(400g)を、機械的撹拌下、50℃で2時間、30%エタノール/水(体積比)約4Lで抽出する。抽出期間の最後に、固体を、フィルターバッグ(PE-25)を通して濾過して取り除き、液体抽出物4Lを除去する。
プロトコルは実施例2と類似であるが、C57BL/6マウスに4週間高脂肪食を受けさせて、CAEによる処置の開始前に肥満および前糖尿病を誘導した。次いで、水-アルコール性CAEを体重1kg当たり200mgの用量で経口強制栄養により4週間与えた。
体重および脂肪蓄積に対する効果(図6)
食事下で4週間後、高脂肪食を受けたマウスは、正常食を受けたマウスと比較して有意な体重差を示し(p<0.001)、処置の開始前に肥満がよく確立されていることを示している。これらのマウスは30.4±0.5gに達した一方で、正常食下のマウスは23.6±0.4gに達した。
食事下で4週間後、高脂肪食を受けたマウスの空腹時糖血(173±1.5mg/dL)は、正常食を受けたマウスの空腹時糖血(115±2.1mg/dL)よりも有意に高かった(p<0.001)。これらの結果により、高脂肪食下のマウスが処置の開始時に高血糖性であったという事実が確認される。
4週間高脂肪食を受けたC57BL/6マウスは肥満および前糖尿病になった。体重1kg当たり200mgの用量のカシューアップル抽出物は、体重増加、腹部脂肪蓄積、急性肝脂肪、高血糖および高インスリン血を減少させることにより、これらの異常を著しく減少させた。
カシューアップル抽出物(CAE)のリパーゼ阻害
材料および方法
リパーゼ活性を以下の通り分析した:阻害剤(カシューアップル抽出物)または蒸留水(対照として使用)を含む試験すべき溶液25μLを蒸留水中ブタ膵臓(Sigma-Aldrich)のリパーゼ1mg/mLからなる酵素溶液25μLに添加し、室温で5分間プレインキュベートした。ダルベッコリン酸緩衝食塩水中0.1mM オレイン酸4-メチルウンベリフェリル(MUO;Sigma-Aldrich)からなる基質溶液50μLを添加し、混合物を室温で20分間インキュベートした。クエン酸ナトリウム溶液100mMを添加することにより反応を停止し、ルミノール蛍光を320nm刺激および450nm発光波長で読み取った。分析を3通り実行した。
図8に示されるように、CAEはリパーゼ活性を阻害した。アルコール性CAEのリパーゼ阻害活性(IC50=41μg/mL)は水性CAE(IC50=78μg/mL)と比較してはるかに高い。
CAEは、少なくとも部分的にリパーゼ活性を阻害することにより脂肪消化を減少させることにより、体重、脂肪蓄積、急性脂肪肝、糖血、インスリン血、インスリン抵抗性などの代謝疾患の危険因子を減少させる。アルコール性CAEは水性CAEと比較してリパーゼ活性を減少させるのにより効率的である。このことはまた水性CAEと比較してアルコール性CAEで体重および脂肪蓄積に対するより高い効果が観察されることを説明することができる(図2および図3)。
熱分解およびリパーゼ活性損失、カシューアップル抽出物(CAE)の活性のための1-O-トランス-シンナモイル-β-D-グルコシドの重要性
材料および方法
水中でのCAEの熱分解動態を100℃で調査した。CAEを50g/Lの濃度で脱イオン水に溶解し、溶液をよくホモジナイズした。この溶液4ml体積をガラス管に入れ、密閉し、100℃の鉱物油浴に入れた。所定間隔:0、10、20、30、45、60、90および120分で、試料管を鉱物油浴から取り出し、氷中で急速に冷却した。分析のために、各試料1mlをHPLCグレードメタノール4mlと混合し、ホモジナイズし、0.45μm HPLCフィルターで濾過した。次いで、溶液20μLをHPLCで分析した。試料の植物化学組成を、280nmでC-18カラム(ACE、250×4.6mm、5μm)を使用して逆相液体クロマトグラフィーにより測定した。CAEの主成分のピーク下の面積を、100℃の異なる時点を表す異なる試料で測定した。
図9の上のパネルに示されるように、CAEの1-O-トランス-シンナモイル-β-D-グルコシド化合物は温度により分解された。この分解は、インキュベーションの持続時間と共に増加した。1-O-トランス-シンナモイル-β-D-グルコシドの量は、100℃でのインキュベーションの30分後に2分の1になり、インキュベーションの120分後にこの化合物はほぼ完全に抽出物から消失した。
1-O-トランス-シンナモイル-β-D-グルコシドは、リパーゼ活性の阻害、および拡張すると、マウスモデルで証明されたように代謝疾患の危険因子の減少の原因であるCAEの重要成分の1つである。
Claims (11)
- 抽出物1kg当たり0.9〜3.1gのケイ皮酸誘導体、抽出物1kg当たり0.75〜3gのケルセチン誘導体および抽出物1kg当たり2〜4.2gのミリセチン誘導体を含む水-エタノール性カシューアップル抽出物であって、前記ケイ皮酸誘導体が、1-O-トランス-シンナモイル-β-D-グルコピラノースであり、前記ケルセチン誘導体が、ケルセチン3-O-ガラクトシド、ケルセチン3-O-グルコシドおよびケルセチン3-O-ラムノシドの混合物であり、前記ミリセチン誘導体が、ミリセチン3-O-ガラクトシド、ミリセチン3-O-グルコシド、ミリセチン3-O-キシロ-ピラノシド、ミリセチン3-O-アラビノ-ピラノシド、ミリセチン3-O-アラビノ-フラノシドおよびミリセチン3-O-ラムノシドの混合物である、カシューアップル抽出物。
- 抽出物の総重量と比較して3〜7重量%に及ぶ総フェノール含量を含むことを特徴とする、請求項1に記載のカシューアップル抽出物。
- 請求項1または2に記載のカシューアップル抽出物および担体を含む組成物。
- 体重の減少または体重増加の制限、脂肪蓄積、脂肪肝、肝臓トリグリセリドレベル、高トリグリセリド血、糖血レベル、インスリン血、インスリン抵抗性および/またはメタボリックシンドロームの1つもしくはいくつかの因子の増加の減少または制限のための、治療または予防処置に使用するための請求項3に記載の組成物または請求項1または2に記載の抽出物。
- 被験体の体重を調節する、特に前記被験体の体重を減少させるまたは制御するために使用するための請求項3に記載の組成物または請求項1または2に記載の抽出物。
- 請求項1または2に記載の抽出物または請求項3に記載の組成物を含む健康または栄養補助食品、栄養補助または食品組成物。
- 補助食品の総重量と比較して1重量%〜100重量%に及ぶ量のカシューアップル抽出物を含む、請求項6に記載の健康または栄養補助食品。
- 組成物の総重量と比較して0.1〜5重量%に及ぶ量のカシューアップル抽出物を含む、請求項6に記載の栄養補助または食品組成物。
- 前記カシューアップル抽出物を含まない食事と比較して、食事中で投与した際に体重を減少するように構成される、請求項1に記載のカシューアップル抽出物。
- リパーゼ活性を阻害する、請求項1に記載のカシューアップル抽出物。
- a)35℃より上の温度で、カシューアップルをその重量の2〜20倍の水とエタノールから成る抽出溶媒と接触させる工程と、
b)固体を濾過して取り除き、溶媒抽出物を収集する工程と、
c) 水とエタノールから成る抽出溶媒と共に撹拌することにより湿潤固体を洗浄する工程と、
d)固体を濾過し、溶媒抽出物を収集する工程と、
e)溶媒抽出物を合わせ、不溶性残渣を除去する工程と、
f)溶媒を蒸発させる工程と、
g)乾燥抽出物を回収する工程と
を含む、カシューアップルから請求項1に記載のカシューアップル抽出物を抽出する方法。
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