BR112013030853B1

BR112013030853B1 - uso de um extrato de caju para a preparação de uma composição para o tratamento de controle de peso corporal e, composição e método para obtenção de um extrato de caju

Info

Publication number: BR112013030853B1
Application number: BR112013030853A
Authority: BR
Inventors: Dornier Manuel; Reynes Max; Chapal Nicolas; Beejmohun Vickram
Original assignee: Centre De Cooperation Internationale En Rech Agronomique Pour Le Developpement; Dialpha; Naturex Sa
Priority date: 2011-06-07
Filing date: 2012-06-07
Publication date: 2019-08-13
Also published as: CA2837028C; CA2837028A1; US10028970B2; US20140100177A1; WO2012168381A1; JP6419573B2; JP2014523409A; JP2017200918A; EP2717722A1; BR112013030853A2; AU2012266308B2

Abstract

composição compreendendo extrato de pendúculo de caju a invenção refere-se a um extrato de pendúculo de caju e uma composição compreendendo um extrato de pendúculo de caju e, opcionalmente, um veiculo, em particular para uso para permitir a redução de ganho de peso corporal, ou limitação do aumento do peso corporal, redução ou limitação do armazenamento de gordura, de fígado com gordura, de nível de triglicerídeos no fígado, de hipertrigliceridemia, de nível de glicemia, de insulinemia, de resistência a insulina, e/ou de um ou vários fatores de síndrome metabólica.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para: USO DE UM EXTRATO DE CAJU PARA A PREPARAÇÃO DE UMA COMPOSIÇÃO PARA O TRATAMENTO DE CONTROLE DE PESO CORPORAL E, COMPOSIÇÃO E MÉTODO PARA OBTENÇÃO DE UM EXTRATO DE CAJU.

[0001] A presente invenção refere-se a um extrato para permitir redução ou controle do peso corporal ou a limitação de ganho de peso corporal, redução ou limitação do aumento de armazenamento de gordura, de fígado com gordura, de nível de triglicerídeos no fígado, de hipertrigliceridemia, de nível de glicemia, de nível de insulinemia, de resistência a insulina, e/ou de diferentes fatores de síndrome metabólica, e a uma composição compreendendo tal extrato.

[0002] Mais em particular, o extrato pode apresentar uma ação sobre o(s) fator(es) de risco que podem ter um impacto sobre a cirrose gordurosa, doença cardiovascular, complicações decorrentes da diabetes e/ou diabetes. Entre esses fatores de risco, pode-se citar o excesso de peso, em particular obesidade, o aumento de armazenamento de gordura, de fígado com gordura, de nível de triglicerídeos no fígado, de hipertrigliceridemia, de nível de glicemia, de nível de insulinemia, de resistência a insulina e/ou de fatores diferentes da síndrome metabólica.

[0003] A invenção também se refere a suplementos

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2/44 dietéticos ou alimentícios compreendendo tal extrato.

[0004] A invenção refere-se também a uma composição para uso na prevenção ou tratamento de um ou vários fatores de síndrome metabólica, obesidade, cirrose gordurosa, doença cardiovascular, complicações decorrentes da diabetes e/ou a diabetes.

[0005] A sociedade moderna leva cada vez mais ao aumento dos fatores de risco de doenças tais como a cirrose gordurosa, doença cardiovascular, complicações da diabetes e/ou diabetes.

[0006] Os compostos ou as composições conhecidos que podem ser usados para tratar estas doenças e/ou para limitar um ou vários dos fatores de risco, em particular, a redução de peso corporal, podem não ser suficientemente eficientes, são muito caros, exibindo efeitos secundários indesejáveis, tendo qualidades organolépticas insuficientes, podem alterar a cor, sabor, e/ou o aspecto dos alimentos que se destinam a ser combinados com, podem ser difíceis de introduzir na

alimentação,	pelo menos, com alguns tipos de produtos
alimentares,	insuficientemente estáveis, podem apresentar
uma baixa	solubilidade, podem ser insuficientemente

versáteis, podem não apresentar um abastecimento não estável suficiente, e/ou abundantes, ou eles podem ser provenientes de um precursor ou precursores que podem ter outros usos.

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3/44 [0007] Por outro lado, as dietas para a regulação do peso corporal, muitas vezes têm um sucesso limitado. Dietas de baixa caloria, por exemplo, podem causar uma perda temporária de peso corporal, mas não provaram sua eficiência no longo prazo para as pessoas que querem perder peso e manter um peso definido.

[0008] Na busca contínua por agentes anti-obesidade eficazes, as plantas medicinais foram triadas para encontrar novos compostos com atividade inibidora da lipase pancreática.

[0009] As plantas medicinais têm sido usadas como suplementos dietéticos para gestão e controle do peso corporal em muitos países. Neste sentido, a presença de inibidores de lipase pancreática tem sido demonstrada em diferentes espécies de plantas, embora sejam necessárias outras pesquisas para a identificação e caracterização de inibidores eficazes de lipase. Inibidores da lipase de origem vegetal incluem certas proteínas, tais como aquelas a partir de soja e de gérmen e de farelo de trigo. Outras proteínas que inibem fortemente a hidrólise de triglicerídeos são a proteína básica protamina e ε-polilisina, que poderiam atuar como várias proteínas anfifílicas como ovoalbumina e β lactoglobulina, pela dessorção de lipase a partir do seu substrato, devido a uma mudança na qualidade interfacial.

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4/44 [0010] Como citado em JP 2009-155259, pendúculo de caju também pode abrigar atividade inibidora da lipase.

[0011] A invenção visa, portanto, resolver a totalidade ou parte dos problemas acima citados.

[0012] De acordo com um aspecto, a invenção tem por objeto um extrato de pendúculo de caju.

[0013] Entre as vantagens da invenção está o fato de que ela permite o uso de um produto que é até agora não usado de todos ou, pelo menos, que tem um número pequeno de usos, e ao mesmo tempo é facilmente coletado, em particular, uma vez que ele pode ser coletado ao mesmo tempo que as castanhas de caju.

[0014] De acordo com outro aspecto, a invenção tem por objeto uma composição compreendendo, ou consistindo de, um extrato de pendúculo de caju e, opcionalmente, um veículo.

[0015] O extrato ou a composição pode ser destinado ao uso em um tratamento curativo ou um preventivo para a redução ou controle do peso corporal ou a limitação de ganho de peso corporal, redução ou limitação do aumento de armazenamento de gordura, de fígado com gordura, de nível de triglicerídeos no fígado, de hipertrigliceridemia, de nível de glicemia, de insulinemia, de resistência a insulina e/ou de diferentes fatores da síndrome metabólica.

[0016] A invenção também tem por objeto uma

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5/44 composição alimentícia, sólida ou líquida, compreendendo um extrato de pendúculo de caju e, opcionalmente, um veículo.

[0017] A invenção também tem por objeto importa um suplemento dietético ou alimentício, ou um nutracêutico ou composição alimentícia contendo ou consistindo de um extrato de pendúculo de caju e, opcionalmente, um veículo, em particular, por permitir a redução do peso corporal ou a limitação de ganho de peso corporal, a redução ou a limitação do aumento do armazenamento de gordura, de fígado com gordura, de nível de triglicerídeos no fígado, de hipertrigliceridemia, de nível de glicemia, de nível de insulinemia, de resistência a insulina e/ou de um, vários ou todos os fatores da síndrome metabólica.

[0018] De acordo com outro aspecto, a invenção tem por objeto uma composição farmacêutica compreendendo, ou consistindo de, um extrato de pendúculo de caju, em particular para uso na prevenção e/ou tratamento de cirrose gordurosa, doença cardiovascular, complicações da diabetes e/ou diabetes e/ou um ou vários fatores de síndrome metabólica, por exemplo, elevado nível de insulina, hipercolesterolimia, hipertensão, excesso de peso, em particular, a obesidade e hiperglicemia.

[0019] A composição pode ser para uso para modular o peso corporal de um indivíduo, em particular, a perda, o

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6/44 controle ou a ajuda para controlar o peso corporal de um indivíduo. O extrato da invenção, ou a composição de acordo com a invenção podem ser usados para a prevenção da obesidade em um indivíduo com necessidade do mesmo, ou para o tratamento de obesidade em um indivíduo em necessidade do mesmo.

[0020] Na presente descrição um indivíduo pode ser humano ou animal e, em particular mamíferos.

[0021] De acordo ainda com outro aspecto, a invenção tem por objeto o uso de um extrato de pendúculo de caju para a preparação de um medicamento ou de uma composição farmacêutica.

[0022] Seguindo ainda outro aspecto, a invenção tem por objeto uma dieta, em particular, para permitir a redução do peso corporal ou a limitação do aumento de peso corporal, a limitação ou redução do armazenamento de gordura, de fígado com gordura, de nível de triglicerídeos no fígado, de hipertrigliceridemia, de nível de glicemia, de insulinemia, de resistência a insulina e/ou de diferentes fatores da síndrome metabólica, que compreende a etapa de ingerir, pelo menos uma vez por dia, uma composição compreendendo, ou consistindo de, um extrato de pendúculo de caju.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS [0023] Figura 1 apresenta cromatogramas de HPLC

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7/44 analíticos de uma extrato de pendúculo de caju hidroalcoólico a 280 nm.

[0024] Figura 2 mostra o efeito de prevenção de extratos de pendúculo de caju sobre peso corporal e o armazenamento de gordura em camundongos submetidos à dieta com elevado teor de gordura.

[0025] Figura	3 mostra	o	efeito	de	prevenção	de
extrato de pendúculo	de caju	no	fígado	com gordura	ou
esteatose hepática em	camundongos	submetidos	à dieta	com
elevado teor de gordura.
[0026] Figura	4 mostra	o	efeito	de	prevenção	de

extratos de pendúculo de caju em nível de glicose no sangue em camundongos submetidos à dieta com elevado teor de gordura.

[0027] Figura 5 mostra o efeito de prevenção de extratos de pendúculo de caju no nível de insulina no sangue e resistência a insulina em camundongos submetidos à dieta com elevado teor de gordura.

[0028] Figura 6 apresenta o efeito de extratos de pendúculo de caju no peso corporal e no armazenamento de gordura em camundongos pré-diabéticos e obesos.

[0029] Figura 7 apresenta o efeito de extratos de pendúculo de caju em nível de glicose no sangue e nível de insulina no sangue em camundongos pré-diabéticos e obesos.

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8/44 [0030] A Figura 8 apresenta o efeito de extratos de pendúculo de caju na inibição da lipase.

[0031] A Figura 9 mostra a degradação com o tempo de 1-0-trans-cinamoil-beta-D-glucopiranose (composto I), no extrato de pendúculo de caju incubado a uma temperatura de 100°C, e a perda de atividade de inibição da lipase do extrato incubado durante tempos diferentes em 100°C.

[0032] O extrato de pendúculo de caju pode vir da fruta completa, da pele e/ou da carne da fruta, em particular do extrato a partir do fruto é total. O extrato de acordo com a invenção pode ser obtido a partir de pendúculo de caju bruto, quer a partir da fruta completa ou a partir de restos dos pendúculos de caju usados para a obtenção de suco de pendúculo de caju, por exemplo desidratado ou congelado.

[0033] As expressões peso de extrato de pendúculo de caju ou peso de extrato no sentido da invenção significam o peso seco do extrato de pendúculo de caju ou o peso seco do extrato.

[0034] O extrato pode compreender uma quantidade de compostos orgânicos, em particular, derivados de ácido cinâmico, quercetina e miricetina, de, pelo menos, 2 g/kg, em particular pelo menos 2,5 g/kg, e mais particularmente pelo menos 3 g/kg, expresso em termos dos padrões correspondentes do ácido cinâmico, quercetina e miricetina.

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9/44 [0035] Quando o extrato é um extrato aquoso, ele que pode compreender uma quantidade de compostos orgânicos, em particular os derivados de ácido cinâmico, os derivados de quercetina e derivados de miricetina de, pelo menos, 2 g/kg, em particular pelo menos 2,5 g/kg, e mais particularmente pelo menos 3 g/kg, expresso em termos de padrões correspondentes ácido cinâmico, quercetina e miricetina.

[0036] Quando o extrato é um extrato hidroalcoólico, em particular com a mistura de água/etanol 1/1 v/v, pode compreender uma quantidade de compostos orgânicos, em particular os derivados de ácido cinâmico, os derivados de quercetina e derivados de miricetina, de, pelo menos, 3,5 g/kg, em particular pelo menos de 4 g/kg, mais particularmente pelo menos 4,5 g/kg, e ainda mais particularmente pelo menos 5 g/kg, expresso em termos dos padrões correspondentes de ácido cinâmico, quercetina e miricetina. O extrato pode compreender uma quantidade de compostos orgânicos, em particular os derivados de ácido cinâmico, os derivados de quercetina e os derivados de miricetina, na faixa de 2 a 15 g/kg, em particular 2,5-10 g/kg, e, mais particularmente, de 3 a 7 g/kg, expresso em termos dos padrões correspondentes de ácido cinâmico, quercetina e miricetina.

[0037] O extrato pode compreender de 2 a 15 g/kg, em

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10/44 particular 2,5-10 g/kg, e, mais particularmente, de 3 a 7 g/kg de derivados de ácido cinâmico, derivados de quercetina e derivados de miricetina, expressos em termos dos padrões correspondentes de ácido cinâmico, quercetina e miricetina.

[0038] Quando o extrato é um extrato aquoso, que pode compreender uma quantidade de compostos orgânicos, em particular os derivados de ácido cinâmico, derivados de quercetina e derivados de miricetina, de 2 a 8 g/kg, em particular 2,5 a 6 g/kg, e mais particularmente de 3 a 5 g/kg, expressos em termos dos padrões correspondentes de ácido cinâmico, quercetina e miricetina [0039] Quando o extrato é um extrato hidroalcoólico, em particular com água/etanol 1:1 v/v, que pode compreender uma quantidade de compostos orgânicos, em particular derivados de ácido cinâmico, derivados de quercetina e derivados de miricetina, de 3,5 a 15 g/kg, em particular 4,5-10 g/kg, e mais particularmente de 5 a 7 g/kg, expressos em termos dos padrões correspondentes de ácido cinâmico, quercetina e miricetina.

[0040] Por ácidos orgânicos significam-se substâncias químicas encontradas em plantas, caracterizados pela presença de, pelo menos, um grupo carboxílico por molécula, e pelo menos uma parte aromática. Entre os ácidos orgânicos, podem ser citados o ácido cinâmico e seus

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11/44 derivados .

[0041]	A quantidade de compostos orgânicos pode ser
determinada	usando o ácido cinâmico, e flavonóides,
notadamente	quercetina e miricetina, como padrões, como

mostrado nos exemplos.

[0042]	A quantidade de flavonóides pode ser
determinada	usando flavonóides, notadamente quercetina e
miricetina,	como padrões, como mostrado nos Exemplos.
[0043]	Em outras palavras, a quantidade de
flavonóides	é o peso de flavonóides em particular derivados

de quercetina e derivados de miricetina, expressos em termos dos padrões correspondentes de quercetina e miricetina,

determinado	como mostrado nos exemplos.
[0044]	A quantidade de ácidos orgânicos pode ser
determinada	usando ácido cinâmico como padrão, tal como

mostrado nos exemplos.

[0045]

Em outras palavras, a quantidade de ácidos

orgânicos, é o peso de derivados de ácido cinâmico, expressos em termos do padrão correspondente de ácido cinâmico, como mostrado nos exemplos.

[0046]

Mais particularmente, a composição compreende

compostos orgânicos, tais como ácidos orgânicos e flavonóides, tendo a parte do açúcar, como tais galactosídeo,

glucosídeo,

arabino-piranosídeo, xilo-piranosídeo, arabino-

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12/44 furanosídeo, rhamnosídeo.

[0047] O extrato pode compreender derivados de miricetina, em particular escolhidos dentre 3-O-galactosídeo de miricetina (composto A) , 3-O-glicosídeo de miricetina (composto B) , 3-O-xilo-piranosídeo de miricetina (composto C), 3-0- -arabino-piranosídeo de miricetina (composto D), 3O-arabino-furanosídeo de miricetina (composto E) e/ou miricetina 3-0-ramnosídeo (composto F).

[0048]

O extrato pode compreender derivados de

miricetina em uma quantidade de, pelo menos, 1 g/kg, em

particular,	pelo menos, 1,4 g/kg, e mais particularmente
pelo menos	0,7 1 g/kg de extrato, expressa em termos do

padrão correspondente de miricetina.

[0049]	O extrato pode compreender derivados de
miricetina,	em uma quantidade na faixa de 1 a 6 g/kg, em

particular 1,4 a 5 g/kg, e mais particularmente 1,7 a 4 g/kg,

expressa em	termos do padrão correspondente de miricetina.
[0050]	Quando o extrato é um extrato aquoso, ele pode
compreender	uma quantidade de derivados de miricetina, de,
pelo menos,	1,1 g/kg, em particular, pelo menos, 1,3 g/kg,

e mais particularmente pelo menos 0,5 g de 1/kg e/ou de 1,1 a 4 g/kg, em particular 1,3 a 3 g/kg, e mais particularmente 1,5 a 2,5 g/kg, expressos em termos do padrão correspondente de miricetina.

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13/44 [0051] Quando o extrato é um extrato hidroalcoólico, em particular com a mistura de água/etanol 1/1 v/v, ele pode compreender uma quantidade de derivados de miricetina, de, pelo menos, 2 g/kg, em particular pelo menos 2,2 g/kg, e mais particularmente pelo menos 2,5 g/kg e/ou 2 a 4,2 g/kg, em particular 2,2 e 3,6 g/kg, e, mais particularmente, 2,5 a 3,2 g/kg, expressos em termos do padrão correspondente de miricetina.

[0052] O extrato pode conter derivados de quercetina, em particular escolhido dentre 3-O-galactosídeo de quercetina (composto L) , 3-O-glicosídeo de quercetina (composto H) e/ou 3-O-ramnosídeo de quercetina (composto J) .

[0053] O extrato pode compreender derivados de quercetina, em uma quantidade de, pelo menos, 0,75 g/kg, em particular pelo menos 0,9 g/kg, e mais particularmente pelo menos 0,1 g/kg de extrato, expressos em termos do padrão correspondente de quercetina.

[0054] O extrato pode conter derivados de quercetina, em uma quantidade na faixa entre 0,75 e 3,5 g/kg, em particular 0,9 a 3 g/kg, e, mais particularmente, 1 a 2,5 g/kg, expressa em termos do padrão correspondente da quercetina.

[0055] Quando o extrato é um extrato aquoso, ele que pode compreender uma quantidade de derivados de quercetina,

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14/44 de, pelo menos, 1 g/kg, em particular, pelo menos, 1,3 g/kg, e mais particularmente pelo menos 0,5 g de 1/kg e/ou a partir de 1,1 a 4 g/kg, em particular 1,3 a 3 g/kg, e mais particularmente 1,5 a 2,5 g/kg, expressos em termos do padrão correspondente de quercetina.

[0056] Quando o extrato é um extrato hidroalcoólico, em particular com a mistura de água/etanol 1/1 v/v, ele pode compreender uma quantidade de derivados de quercetina, de, pelo menos, 0,75 g/kg, em particular pelo menos 0,9 g/kg, e, mais particularmente, pelo menos, 1 g/kg e/ou 0,75 a 3 g/kg, em particular 0,9 a 2,5 g/kg, e, mais particularmente, 1 a 2,1 g/kg, expressa em termos do padrão correspondente de quercetina.

[0057] O extrato pode compreender uma razão em peso de derivados de miricetina /derivados de quercetina, usando, respectivamente, quercetina e miricetina como padrões, de, pelo menos, 1.

[0058] O extrato pode compreender derivados de ácido cinâmico, em particular 1-0-trans-cinamoil-beta-Dglucopiranose (composto I), também chamado 1-0-transcinamoil-beta-D-glucosídeo.

[0059] O extrato pode compreender uma quantidade de derivados de ácido cinâmico de, pelo menos, 0,3 g/kg, em particular pelo menos 0,35 g/kg, e mais particularmente pelo

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15/44 menos 0,4 g/kg de extrato, expressos em termos do padrão correspondente de ácido cinâmico.

[0060] O extrato pode incluir derivados de ácido cinâmico, em uma quantidade na faixa de 0,3 a 3 g/kg, em particular 0,35 a 2,5 g/kg, e mais particularmente 0,4 a 2 g/kg, expressos em termos do padrão correspondente de ácido cinâmico.

[0061] Quando o extrato é um extrato aquoso, ele pode compreender uma quantidade de derivados de ácido cinâmico, de, pelo menos, 0,3 g/kg, em particular pelo menos 0,35 g/kg, e mais particularmente pelo menos 0,4 g/kg e/ou de 0,3 a 1,5 g/kg, em particular, 0,35 a 1,1 g/kg, e, mais particularmente, 0,4 a 0,9 g/kg, expressos em termos do padrão correspondente de ácido cinâmico.

[0062] Quando o extrato é um extrato hidroalcoólico, em particular com a mistura de água/etanol 1/1 v/v, ele pode compreender uma quantidade de derivados de ácido cinâmico, de, pelo menos, 0,9 g/kg, em particular pelo menos de 1,1 g/kg e, mais particularmente, pelo menos, 1,3 g/kg e/ou 0,9 a 3,1 g/kg, em particular 1,1 a 2,8 g/kg, e mais particularmente 1,3 a 2,5 g/kg, expressos em termos do respectivo padrão de ácido cinâmico.

[0063] Preferivelmente, quando o extrato é um extrato hidro-alcoólico, em particular, com mistura de

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16/44 água/etanol 1/1 v/v, ele pode compreender uma quantidade de

1-0-trans-cinamoil-beta-D-glucopiranose (composto I), de, pelo menos, 0,9 g/kg, em particular pelo menos 1,1 g/kg, e mais particularmente pelo menos 0,3 g de 1/kg e/ou 0,9 a 3,1 g/kg, em particular 1,1 a 2,8 g/kg, e mais particularmente 1,3 a 2,5 g/kg, expressos em termos do padrão correspondente de ácido cinâmico.

[0064] O extrato pode compreender um teor de fenol total, usando o método de Folin-Ciocalteu, na faixa de 3 a 7% em peso, do conteúdo total de equivalentes de fenol com o ácido gálico.

[0065] Assim, seguindo um aspecto, a invenção refere-se a uma composição compreendendo, ou consistindo de, um extrato de pendúculo de caju e, opcionalmente, um veículo,

em particular	um veículo	comestível	e/ou	um agente
aromatizante.
[0066] Seguindo uma	forma de	rea	lização, a
composição compreende	, pelo	menos, 10%,	em	peso, mais
particularmente	pelo	menos	25% em peso,	ainda mais
particularmente	pelo	menos	50 % em peso,	ainda mais
particularmente	pelo	menos	75%, em peso	, do	extrato em
comparação com o	peso	total da composição.

[0067] A composição pode compreender uma quantidade de extrato de pendúculo de caju indo 10 a 99%, em peso, mais

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17/44 particularmente 25 a 95% em peso, ainda mais particularmente de 50 a 95% em peso, ainda mais em particular 75 a 95%, em peso em relação ao peso total da composição.

[0068] A composição, em particular a composição farmacêutica, a composição nutracêutica ou o suplemento dietético ou alimentício, pode compreender ou consistir de um extrato de pendúculo de caju e, opcionalmente, um veículo.

[0069] Mais particularmente, o extrato é aquoso ou hidro-alcoólico, em particular hidro-etanólica. O extrato pode, em particular, ser o extrato obtido ou obtenível através do método descrito na presente descrição.

[0070] O suplemento dietético ou alimentício pode compreender uma quantidade de extrato que varia de 1 a 100%, em peso, em relação ao peso total do suplemento.

[0071] O nutracêutico ou a composição alimentícia pode compreender uma quantidade de extrato que varia de 0,1 a 5% em peso em relação ao peso total da composição.

[0072] Os suplementos ou o nutracêutico ou a composição alimentícia ou pode ser um líquido, um sólido ou um pó.

[0073] A composição pode ser formulada de modo a permitir uma absorção diária para seres humanos na faixa de 10 a 80 mg/kg, e em particular em torno de 30 mg/kg.

[0074] A extração de pendúculo de caju pode ser

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18/44 executada no total de frutos, ou, alternativamente, sobre a pele e/ou sobre a polpa do fruto.

[0075] A invenção também se refere a um método para a extração de pendúculo de caju que pode compreender, ou consistir em:

1) contatar os pedúnculos de caju esmagados com 2 a 20 vezes o seu peso, com um solvente de extração, em particular a uma temperatura acima de 25°C, mais particularmente acima de 35°C, e ainda mais particularmente de cerca de 50°C,

2)	filtrar os sólidos e coletar o extrato	de solvente,
3)	opcionalmente, lavar o	sólido úmido,	por agitação
com um	solvente de extração,
4)	opcionalmente filtrar	os sólidos e coletar o
extrato	de solvente,
5)	combinar os extratos	de solvente e	remover os
resíduo	s não solúveis
6)	evaporar os solventes,	e

7) recuperar o extrato seco.

[0076] O extrato de pendúculo de caju pode ser aquoso, alcoólico, solvente orgânico solúvel em água ou uma mistura dos mesmos. Entre os solventes orgânicos solúveis em água pode ser citada acetona.

[0077] O solvente do processo de extração pode ser

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19/44 aquoso, alcoólico, solvente orgânico solúvel em água ou uma combinação dos mesmos.

[0078] Os solventes adequados podem ser escolhidos entre água, metanol, etanol, acetona, n-propanol, isopropanol, 2-butanol, e suas combinações.

[0079] Mais particularmente, o solvente de extração compreende, pelo menos, 75%, pelo menos 90%, mais particularmente pelo menos 95%, e ainda mais particularmente pelo menos 99% em peso em relação ao peso total do solvente de extração, e ainda mais particularmente consiste de tal solvente (s).

[0080] Seguindo uma forma de realização, a extração é realizada com água e/ou um solvente alcoólico, em particular o etanol.

[0081] No caso de uma extração realizada com água e álcool (para um extrato hidro-alcoólico), em particular

etanol, a razão	em volume de água/álcool pode	variar	entre
80/20 a 20/80,	em particular,	de 70/30 a	30/70,	mais
particularmente	de 60/40 até	40/60, e	ainda	mais
particularmente	em torno de cerca	de 50/50.

[0082] A percentagem de álcool, e em particular, o etanol, usado para a extração pode ter um impacto sobre o rendimento e a composição dos compostos biologicamente ativos.

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20/44 [0083] A extração pode ser realizada usando cerca de um solvente na faixa de 2 a 20 vezes, em particular de 5 a 15 vezes e, mais particularmente em torno de 10 vezes o peso de sólidos. A extração pode ser feita de uma ou várias vezes, em particular 2 a 4 vezes.

[0084] A extração pode ser realizada a uma temperatura na faixa de 25 a 70°C, em particular de 40 a 60°C, e mais particularmente em torno de 50°C.

[0085] A extração pode durar de 1 a 5 horas, em particular em torno de 2 horas, sob agitação, por exemplo agitação mecânica ou magnética.

[0086] Os restantes sólidos podem ser filtrados, em particular através de um saco de filtro, e os extratos podem ser combinados.

[0087] Os sólidos úmidos podem ser, outra vez, extraídos por agitação com um solvente, em particular uma mistura hidroalcoólica, com um volume de 1 a 100 vezes o peso dos sólidos secos, e uma agitação durante cerca de 10 a 120 minutos mais preferivelmente durante cerca de 10 a 60 minutos adicionais.

[0088] Os sólidos são coletados e os extratos podem ser combinados.

[0089] As diferentes soluções de extração podem ser combinadas e deixadas para decantação, filtração através de

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21/44 papel de filtro ou por centrifugação para remover os resíduos não solúveis.

[0090] Os sobrenadantes límpidos obtidos podem ser concentrados até cerca de 5% a 20% do seu volume inicial, por exemplo, usando um concentrador, e/ou podem ser tratados com álcool de tipo alimentar, em particular, o etanol, em uma proporção definida, por exemplo, duas vezes o volume de concentrado, para remover qualquer precipitado formado. Esta etapa pode permitir a remoção de todos ou partes de compostos indesejados, tais como polissacarídeos ou proteínas solúveis em água.

[0091] Um extrato em pó pode ser obtido por secagem dos extratos concentrados, por exemplo, usando o secador por pulverização, forno a 50-80°C, ou secador a vácuo.

[0092] O extrato seco é pesado (g) e o rendimento da extração é calculada pela fórmula:

[0093] Rendimento % = (peso de extrato seco/peso de bolo recém-prensado de frutas) x 100 [0094] Mais particularmente, o extrato de pendúculo de caju pode ser obtido pelo processo compreendendo as seguintes etapas:

1) contatar pendúculos esmagados e prensados de caju com 2 a 20 vezes, em particular cerca de 10 vezes, o seu peso, com um solvente de extração, em particular, uma mistura

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22/44 etanol-água contendo pelo menos 30% em volume de etanol, e mais particularmente uma mistura de etanol água com uma razão de volume de 1/1, e agitar, por exemplo, durante 2 horas, em particular a uma temperatura acima de 25°C, mais particularmente acima de 35°C, e ainda mais particularmente de cerca de 50°C,

2) filtrar os sólidos e coletar o extrato de solvente,

3) lavar o sólido úmido, por agitação com um solvente de extração, em particular, com um volume correspondente a 1 a 100 vezes o peso dos sólidos secos, por exemplo, durante cerca de 15 a 30 minutos,

4) filtrar os sólidos e coletar o extrato de solvente,

5) combinar as soluções de extração e decantar ou filtrar as mesmas para remover os resíduos não solúveis,

6) evaporar os solventes, por exemplo, permanecendo em um forno a 50-80°C, secados, ou sob vácuo, por exemplo com secagem por pulverização a vácuo, levando assim a um xarope amarelo pálido, e o concentrado pode ser congelado por liofilização, e

7) recuperar o extrato seco.

[0095] Em geral, o rendimento da extração está na faixa de 2 a 7% em peso de extrato comparado ao peso total do bolo recentemente prensado, em particular de 3 a 6%, em peso, e mais particularmente em torno de 4% em peso.

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23/44 [0096] Os extratos de pendúculo de caju podem ser preparados em uma escala comercial, repetindo o processo de extração que levam ao isolamento do extrato de interesse.

[0097] Assim o procedimento de extração em pequena escala pode ser ampliado, opcionalmente, com etapas adicionais de controle de qualidade incluídos para assegurar resultados reprodutíveis para os extratos resultantes.

[0098] Vários processos de extração podem ser empregados. Geralmente, o extrato é obtido contatando o pendúculo de caju sólido com um solvente com mistura adequada e durante um período de tempo suficiente para garantir exposição apropriada do material de planta sólido para o solvente, de modo que as moléculas biologicamente ativas presentes no material de planta sejam absorvidas pelo solvente.

[0099] O processo de extração por solvente pode ser selecionado a partir de tipos de extração direta e contínua (contra-corrente) em temperatura ambiente ou a uma temperatura mais elevada com o(s) solvente(s) polar e/ou não-polar. O contato apropriado do solvente com o material de planta pode ser encorajado por agitação da suspensão. A fração líquida é então separada do material sólido (insolúvel), resultando na geração de duas frações: uma fração líquida, que é o extrato em potencial, e uma fração

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24/44 sólida. A separação das frações líquida e sólida pode ser alcançada por um ou mais processos padrões conhecidos dos versados na arte.

Exemplos

Exemplo 1: Preparação de extratos de pendúculo de caju (CAE-Aquoso e CAE-Alcoólico)

Materiais e métodos [0100] Pendúculos de caju (8 kg) são primeiro esmagados e prensados (prensa hidráulica) para remover o suco. O bolo de resíduo deixado (1,2 kg) é usado para os seguintes processos de extração.

Processo de extração de CAE alcoólico [0101] O bolo recém prensado (350 g) é extraído com cerca de 3,5 L de 50% de etanol/água (v/v) durante 2 horas a 50°C, sob agitação mecânica. No final do período de extração, os sólidos são filtrados através de um saco de filtro (PE-25) e 3,3 L do extrato líquido são removidos.

[0102] Os sólidos úmidos podem ser extraídos mais uma vez por meio de agitação com mais 2 volumes de etanol a 50 % durante cerca de mais 15 a 30 minutos.

[0103] Os sólidos são de novo filtrados e os extratos obtidos foram combinados juntos, deixados para a decantação e filtrados através de papel de filtro para remover os resíduos não solúveis.

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25/44 [0104] O sobrenadante límpido obtido foi concentrado sob pressão reduzida até cerca de 15% do seu volume inicial e é depois tratado com etanol de qualidade alimentar, em uma proporção definida (2V) para remover qualquer precipitado que se formou. Após a separação sólido-líquido, o extrato concentrado foi congelado e liofilizado para obter um pó amarelo (18,4 g) de pendúculo de caju.

[0105] A composição do extrato é mostrada na Tabela 1

Processo de extração de CAE aquoso [0106] O bolo recém prensado (350 g) é extraído com cerca de 3500 g de água desmineralizada, durante 2 horas a 90°C, sob agitação mecânica. No final do período de extração, os sólidos são filtrados através de um saco de filtro (PE 25) e 3.500 g do extrato líquido são removidos.

[0107] Os sólidos úmidos podem ser extraídos mais uma vez por meio de agitação de 2 volumes de água desmineralizada durante cerca de mais 15 a 30 minutos.

[0108] Os sólidos são de novo filtrados e os extratos obtidos foram combinados, deixados para a decantação e filtrados através de papel de filtro para remover os resíduos não solúveis.

[0109] O sobrenadante límpido obtido foi concentrado sob pressão reduzida, congelado e liofilizado para se obter

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26/44 um pó amarelo pálido (15,4 g) de pendúculo de caju.

[0110] A composição do extrato é mostrada na Tabela 1.

Métodos Analíticos [0111] A quantificação do teor total de fenóis usando o método de Folin-Ciocalteu: O extrato de pendúculo de caju CAE - aquoso e CAE -alcoólico pode compreender entre 3 e 7%,

em peso, do	teor total de fenol equivalentes	para ácido
gálico.
[0112]	Caracterização e quantificação	do teor de
polifenol por	HPLC:
[0113]	- Análise HPLC-DAD:
[0114]	HPLC analítico (Dionex) é	configurado

conforme necessário. Na presente invenção, a fase móvel usada foi de 0,1 % de ácido fórmico em 1000 ml de água de elevada pureza (solvente A) e acetonitrila (solvente B), usando o seguinte gradiente ao longo de um ciclo total de 96 minutos com uma taxa de fluxo de 0,7 ml/min. Os pontos dos gradientes foram para o tempo de 0,0 minutos- 95% A e 5 % B, para o tempo de 10 minutos- 90 % A e 10% B, manter de modo isocrático durante 10 minutos e de 20 minutos e a 40 minutos, gradiente variou linearmente de 10% a 20% B; novamente mantido de modo isocrático durante 10 minutos, de 50 minutos para 65 minutos o gradiente variou de forma linear de 20% a 30 % B e 50%

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27/44 durante os 10 minutos seguintes, de 75 minutos a 76 minutos o gradiente variou linearmente de 50 % a 100 % B, e mantevese de modo isocrático durante 10 minutos. De volta às condições originais de 95% A e 5% B de 85 minutos a 86 minutos e mantido de modo isocrático durante 10 minutos. Os compostos fenólicos no eluente foram detectados com um arranjo de diodo de UV, fixado em 280 nm, 3 60 e 52 0 nm, usando uma coluna C -18 em fase inversa (250 x 4,6 mm IDX 5 pm; ACE). A quantidade de compostos orgânicos, tais como flavonóides e ácido orgânico, nos extratos foi determinada usando curvas de calibração de: quercetina, miricetina e ácido trans-cinâmico.

Análise - HPLC-DAD/ESI-MS:

[0115] A análise HPLC/MS do extrato foi realizada usando um HPLC (Thermo Finnigan Surveyor), e interligado a um espectrômetro de coleta de íons LCQ equipado com uma interface de eletrospray (Thermo Finnigan LCQ Advantage max). O programa de eluição foi o mesmo como acima, e a experiência foi realizada em ambos os modos positivo e negativo. Os espectros foram varridos sobre uma faixa de massa de m/z 80-2000. O cromatograma apresentado na Figura 1 mostra que os compostos orgânicos são bem separados e totalmente identificados por comparação de sua massa molecular relativa, que já foi descrita na literatura (E.

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28/44

Sousa de Brito et al. , 2007 e L. Michodjehoun-Mestres et al., 2009).

	Compostos g/kg de CAE alcoólico	Compostos g/kg de CAE aquoso
Derivados de miricetina (A-F) (Expressado em termos de miricetina)	2,68	1,78
Derivados de quercetina (G, H e J) (Expressado em termos de Quercetina)	1,16	1,69
1-O-transcinamoil-beta-Dglucopiranose (I) (Expressado em termos de ácido cinâmico	1,43	0,42

Tabela 1

Composição quantitativa de extratos de pendúculo de caju do exemplo 1 por HPLC a 280 nm

Exemplo 2: Efeito de extratos de pendúculo de caju (CAE) sobre o peso corporal e o armazenamento de gordura, fígado com gordura, glicose no sangue (glicemia), insulina no sangue

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29/44 (insulinemia), e resistência a insulina

Materiais e métodos [0116] Camundongos C57BL/6NCrl com cinco semanas (Charles River Laboratories, França) pesando cerca de 20 g foram usados para a experiência. Após 8 dias de aclimatação, os camundongos foram divididos aleatoriamente em diferentes grupos experimentais (9 animais por grupo) de acordo com a sua glicemia em jejum.

[0117] No dia 0, um grupo foi mantido sob uma dieta normal (23% de calorias de proteínas, 66% de carboidratos, e 11% de gordura), e os outros foram submetidos à dieta com elevado teor de gordura (17% das calorias de proteínas, 28% carboidratos, e 55 % de gordura). As dietas e água foram fornecidas ad libitum. As formulações de dosagem foram administradas por via oral, todas as manhãs entre as 9 horas e 10 horas a partir de dia 1 ao dia 56. O volume da dose foi de 10 ml/kg de peso corporal. O volume real administrada foi calculado e ajustado com base no peso corporal mais recente de cada animal. As condições testadas foram as seguintes:

• Controle Normal: Os camundongos foram alimentados com uma dieta normal e água foi administrada uma vez por dia.

• Controle de alto teor de gordura: Camundongos foram alimentados com uma dieta com elevado teor de gordura

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30/44 e receberam água uma vez por dia.

• CAE 200 mg/kg-Álcool: Os camundongos foram alimentados com uma dieta com elevado teor de gordura e receberam extratos de pendúculo de caju obtidos por extração hidro-alcoólica uma vez por dia na dose de 200 mg/kg de peso corporal.

• CAE 200 mg/kg- Aquoso: Os camundongos foram alimentados com uma dieta com elevado teor de gordura e receberam extratos de pendúculo de caju obtidos por extração aquosa de uma vez por dia com a dose de 200 mg/kg de peso corporal.

[0118] O efeito dos extratos de pendúculo de caju sobre o peso corporal e o armazenamento de gordura é mostrado na Figura 2, em fígado com gordura na Figura 3, em glicemia na Figura 4, e em insulina e resistência a insulina na Figura

5.

[0119] Os pesos corporais dos camundongos foram registrados no momento da chegada e, em seguida, três vezes por semana (na segunda-feira, quarta-feira e sexta-feira).

[0120] Os níveis de glicose no sangue em jejum foram medidos no dia de randomização (dia 0) e no dia 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49 e 56 entre 13h00 e 14h00 em animais em jejum por 4 horas. Amostras de sangue total (uma gota) foram coletadas por meio da veia da cauda para a determinação de

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31/44 glicose com um glicosímetro portátil (OneTouch Ultra 2, LifeScan).

[0121] No final do estudo, após 4 horas de jejum, os animais foram anestesiados por uma injeção intraperitoneal de 0,1 ml de pentobarbital de sódio. Uma amostra de sangue foi coletada via punção cardíaca com heparina como anticoagulante. Esta amostra de sangue terminal conduz à morte dos animais. As amostras de sangue foram colocadas a 4°C, centrifugadas a 30 minutos após a coleta, plasma coleta e mantidas congeladas até análise da insulina pendente. A porção de gordura epididimal (gordura abdominal) e o fígado foram recolhidos para medir seus pesos.

[0122] Teores de triglicerídeos no fígado foram medidos usando um kit comercial (PAP, TG 150, Biomerieux, França) em 120 mg de fígado triturado com um triturador Ultra-Turrax, contendo 1,2 ml de NaCl a 9 g/L-0,1% de Triton X-100 a temperatura ambiente durante 60 segundos.

[0123] Níveis de insulina no plasma em jejum foram medidos usando um kit ELISA (Mercodia, Suécia). Em seguida, os índices de resistência a insulina (HOMA-IR) foram calculados usando a fórmula: HOMA-IR = insulina em jejum (mU/l) x glicemia em jejum (mmol/l)/22,5.

[0124] Este protocolo foi aprovado pelo Comitê de Ética Regional (Montpellier, França)

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32/44

Resultados [0125] Peso corporal e gordura abdominal (Figura 2) [0126] Camundongos submetidos à dieta com elevado teor de gordura ganharam muito mais peso do que aqueles sob dieta normal. A diferença de peso corporal é significativa desde 4 dias após o início das dietas diferentes (p <0,05). No final do estudo, após 8 semanas de dieta, os camundongos sob dieta com elevado teor de gorduras ganharam quase três vezes mais peso do que os camundongos de controle sob dieta regular. Eles chegaram a 38 ± 1 g, enquanto que os camundongos sob dieta normal chegaram a 24,6 ± 0,3 g.

[0127] Este aumento de peso corporal induzido pela dieta é notadamente devido ao armazenamento de energia na forma de gordura abdominal. Com efeito, pesos de gordura epididimal (abdominal) de camundongos sob dieta com elevado teor de gordura foram multiplicados por 6 durante o estudo em comparação com os dos camundongos em dieta normal: 2,01 ± 0,13 e 0,34 ± 0,05 g para dieta com elevado teor de gordura e normal, respectivamente. A gordura perivisceral é reconhecido como estando associado com, ou ser um fator de risco forte de resistência a insulina e síndrome metabólica.

[0128] CAE na dose de 200 mg/kg de peso corporal reduziu o ganho de peso corporal induzido por dieta de alto teor de gordura. Para o extrato hidro-alcoólico, este efeito

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33/44 é significativo desde o dia 4 de tratamento e durou ao longo do estudo (p <0,01 a partir de dia 4). CAE diminuiu pela metade o efeito da dieta com elevado teor de gordura no ganho de peso corporal, ou seja, os camundongos sob dieta com elevado teor de gordura tratados com CAE ganharam 13,1 ± 1 0,09 g, enquanto que os camundongos sob dieta com elevado teor de gordura tratados com água ganharam 19 ± 0,92 g e camundongos sob dieta normal tratados com água ganharam 6,8 ± 0,32 g. Extrato aquoso também reduziu o ganho de peso corporal dos camundongos de uma maneira menos importante.

[0129] Esta redução é, pelo menos em parte, devido a uma redução do armazenamento de gordura em gordura abdominal. CAE hidro-alcoólico reduziu em 31% o armazenamento de gordura na gordura epididimal em camundongos submetidos à dieta com elevado teor de gordura (p < 0,01). Peso da gordura epididimal de camundongos tratados com CAE foi 1,39 ± 0,1 1 g, em comparação com 2,01 ± 0,13 e 0,34 ± 0,05 g para os camundongos de controle de dieta com elevado teor de gordura e camundongos de controle de dieta normal, respectivamente.

[0130] Peso do fígado e teor de triglicerídeos no fígado (Figura 3) [0131] Dieta com elevado teor de gordura induziu o armazenamento de gordura no fígado: o que é chamado de fígado com gordura ou esteatose hepática. A cor do fígado tornou

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34/44 se branca ao invés de vermelha para camundongos sob dieta normal e seu peso foi aumentado em 60%: 1,72 ± 0,14 g de dieta com elevado teor de gordura versus 1,03 ± 0,04 g para a dieta normal.

[0132]

Ambos os extratos de pendúculo de caju

alcoólicos ou aquosos reduziram significativamente a esteatose hepática: CAE -alcoólico em 64% (p <0,01) e CAEaquoso em 49% (p < 0,05)

[0133]	Esta redução do peso do fígado está
relacionada	com uma redução significativa do teor de

triglicerídeos no fígado (p < 0,05).

[0134]	Glicose no sangue (Figura 4)
[0135]	Depois de uma semana sob as dietas (Dia 7), a
glicemia de	jejum de camundongos submetidos à dieta com

elevado teor de gordura foi significativamente superior (159

± 3,9 mg/dL)	do que nos camundongos submetidos a uma dieta
normal (109	± 3,6 mg/dL). Posteriormente, essa diferença

ficou bastante constante durante todo o estudo.

[0136]

Ambos os extratos de pendúculo de caju

alcoólico e aquoso reduziram em cerca de 40% a glicemia de

camundongos

pré-diabéticos. Este efeito é claramente

significativo do dia 14 e durou até o final do estudo (Dia

56).

[0137]

Insulina no sangue e resistência a insulina

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35/44 (Figura 5) [0138] Insulinemia em jejum foi também significativamente aumentada pela dieta com elevado teor de gordura, atingindo 4,29 ± 0,08 ng/ml, em comparação com 1,65 ± 0,14 ng/ml para os camundongos em dieta normal. De acordo com estes aumentos de glicemia em jejum e insulinemia induzida por dieta com elevado teor de gordura, o índice de resistência a insulina (HOMA-IR) foi multiplicado por 4 mostrando que esses animais são altamente resistentes a insulina.

[0139] No final do período de tratamento (Dia 56), CAE reduziu o nível de insulina no sangue em jejum induzido por dieta com elevado teor de gordura (p = 0,05). A insulinemia atingiu 3,54 ± 0,35 e 4,29 ± 0,08 ng/ml para os camundongos tratados com CAE e os camundongos de controle , respectivamente. Portanto, de acordo com o índice de resistência a insulina HOMA-IR, CAE reduziu em 40 % a resistência a insulina induzida por dieta com elevado teor de gorduras em camundongos pré-diabéticos (p < 0,01).

Conclusões [0140] HDF induz um fenótipo claro da síndrome metabólica em camundongos C57BL/6 com um aumento significativo no ganho de peso corporal, armazenamento de gordura abdominal, gordura no fígado, glicemia em jejum e

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36/44 hiperinsulinemia e resistência a insulina.

[0141] Extratos de pendúculo de caju alcoólicos e aquosos na dose de 200 mg/kg de peso corporal reduziram acentuadamente os deficiências induzidos pelo consumo crônico da dieta de elevado teor de gordura em ratos. Isto inclui:

• Redução do ganho de peso corporal • Redução de armazenamento de gordura abdominal • Redução de esteatose hepática • Redução da glicemia em jejum • Redução da insulinemia em jejum • Redução da resistência a insulina [0142] Portanto, demonstrou-se que os extratos de pendúculo de caju são um bom ingrediente para tratar uma ou várias síndromes metabólicas e deficiências relacionados.

Exemplo 3: Efeito curativo de extratos de pendúculo de caju (CAE) sobre o peso corporal, armazenamento de gordura, glicose no sangue (glicemia) e insulina no sangue (insulinemia)

Materiais e métodos

[0143]	Processo de extração CAE- alcoólico
[0144]	Pendúculos de caju (8 kg) são primeiro
esmagados e	prensados (prensa hidráulica) para remover o

suco. O resíduo de bolo deixado (1 0,2 kg) é usado para os

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37/44 seguintes processos de extração. O bolo recém prensado (400 g) é extraído com 4 L de cerca de 30 % de etanol/água (v/v) durante 2 horas a 50°C, sob agitação mecânica. No final do período de extração, os sólidos são filtrados através de um saco de filtro (PE -25) e 4L do extrato líquido são removidos.

[0145]

Os sólidos úmidos podem ser extraídos mais

uma vez por meio de agitação de 2 volumes de etanol a 30%

durante cerca	de mais 15 a 120 minutos.
[0146]	Os sólidos são de novo filtrados e os extratos
obtidos foram	combinados juntos, deixados para decantação e

filtrados através de papel de filtro para remover os resíduos não solúveis.

[0147]

O sobrenadante límpido obtido foi concentrado

sob pressão reduzida até cerca de 10% do seu volume inicial e o extrato concentrado foi congelado e liofilizado para se obter um pó amarelo (20,5 g) de pendúculo de caju.

[0148]	Protocolo farmacológico
[0149]	O protocolo é semelhante ao descrito no

Exemplo 2, mas os camundongos C57BL/6 foram submetidos à dieta com elevado teor de gordura durante 4 semanas para induzir a obesidade e pré-diabetes, antes do início do tratamento com CAE. Então, CAE hidro-alcoólico foi dado durante 4 semanas por sonda oral, com a dose de 200 mg/kg de

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38/44 peso corporal.

Resultados [0150] Efeito sobre o peso corporal e armazenamento de gordura (Figura 6) [0151] Após 4 semanas sob dieta, os camundongos submetidos à dieta com elevado teor de gordura apresentaram uma diferença significativa de peso corporal em comparação com os camundongos submetidos a uma dieta normal (p < 0,001), mostrando que a obesidade está bem estabelecida antes do início do tratamento. Eles chegaram a 30,4 ± 0,5 g, enquanto que os camundongos sob dieta normal atingiram 23,6 ± 0,4 g.

[0152] Como mostrado na Figura 6, o tratamento com

CAE na dose de 200 mg/kg de peso corporal a partir do dia 0 ao dia 28 reduziu o ganho de peso corporal dos camundongos. Este efeito é significativo a partir do dia 4 do tratamento e no último ao longo de todo o estudo (Figura 6: * p < 0,05, ** p <0,01, *** p < 0,001). No final do estudo, os camundongos tratados com CAE atingiram 32,4 ± 0,6 g, enquanto que os camundongos tratados com placebo (água) foi de 37,3 ± 1 g: camundongos tratados com CAE ganharam 4,9 g menos em comparação com camundongos de controle. Este aumento de peso corporal induzido pela dieta é notadamente devido ao armazenamento da energia em gordura abdominal. CAE reduziu o armazenamento de gordura no tecido adiposo de 30,4 % (p <

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0,01). Peso da gordura epididimal de camundongos tratados com CAE foi 1,52 ± 0,1 g, em comparação com 1,93 ± 0,1 e 0,58 ± 0,03 g para os camundongos de controle dieta com elevado teor de gordura e camundongos de controle de dieta normal da dieta, respectivamente.

[0153] A gordura também foi armazenada no fígado levando à doença de fígado com gordura (esteatose hepática). CAE reduziu o armazenamento de gordura no fígado, por 65,2% (p <0,01). O peso do fígado de camundongos tratados com CAE foi 1,36 ± 0,06 g, em comparação com 1,66 ± 0,07 e 0,20 ± 0,071 g para os camundongos de controle com dieta com elevado teor de gordura e camundongos de controle de dieta normal, respectivamente.

[0154] Efeito sobre a glicemia e insulinemia de jejum (Figura 7) [0155] Após quatro semanas, sob dietas, glicemia em jejum de camundongos submetidos à dieta com elevado teor de gordura (173 ± 1 0,5 mg/dl) foi significativamente superior (p <0,001) do que os de camundongos submetidos a uma dieta normal (15 ± 2,1 mg/d L). Estes resultados confirmam o fato de que os camundongos sob dieta com elevado teor de gorduras eram hiperglicêmicos no início do tratamento.

[0156] Extratos de pendúculo de caju reduziram a glicemia de camundongos pré-diabéticos em 22,7% em média.

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Este efeito é claramente significativo a partir da primeira semana de tratamento e foi prolongado até ao final do estudo (Figura 7: *p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001).

[0157] No final do período de tratamento, CAE também reduziu significativamente o nível de insulina no sangue em jejum (p < 0,05). A insulinemia atingiu 5,03 ± 0,43 e 6,30 ± 0,29 ng/ml para os camundongos tratados com CAE e os camundongos de controle , respectivamente.

Conclusão [0158] Os camundongos C57BL/6 submetidos à dieta com elevado teor de gordura durante 4 semanas se tornaram obesos e pré -diabéticos. Extratos de pendúculo de caju na dose de 200 mg/kg de peso corporal reduziram acentuadamente estas deficiências, reduzindo o ganho de peso corporal, o armazenamento de gordura abdominal, esteatose hepática, hiperglicemia e hiperinsulinemia.

[0159] Portanto, os extratos de pendúculo de caju parecem ser um bom ingrediente para tratar a obesidade e pré-diabetes.

Exemplo 4: Inibição da lipase de extratos de pendúculo de caju (CAE)

Materiais e métodos [0160] Atividade de lipase foi analisada como se segue: 25 uL das soluções a testar, contendo os inibidores

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41/44 (extratos de pendúculo de caju) ou água destilada (usada como controle) foram adicionados a 25 L de solução enzimática que consiste em 1 mg/mL de lipase de pâncreas de porcinos (Sigma-Aldrich) em água destilada e pré-incubados durante 5 min a temperatura ambiente. 50 pL de solução de substrato consistindo de 0,1 mM de 4-metilumbeliferil-oleato (MUO; Sigma-Aldrich) em solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco, foram adicionados e a mistura foi incubada durante 20 min a temperatura ambiente. A reação foi interrompida pela adição de uma solução de citrato de sódio 100 mM e a luminofluorescência foi lida em comprimentos de onda de 320

nm de estimulação e emissão de 450	nm.	O ensaio	foi	realizado
em triplicata.
Resultados
[0161] Tal como mostrado	na	Figura 8,	CAE inibe a
atividade da lipase. A atividade	de	inibição	da	lipase de

Alcoólico -CAE (IC50 = 41 mg/ml) é muito maior em comparação com Aquoso - CAE (IC50 = 78 mg/ml).

Conclusão [0162] CAE reduz os fatores de risco de doenças metabólicas, como peso, armazenamento de gordura, esteatose hepática, glicemia, insulinemia, resistência a insulina, pelo menos em parte reduzindo a digestão de gordura ao inibir a atividade da lipase. CAE-alcoólico é mais eficiente para

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42/44 reduzir a atividade da lipase em relação ao CAE aquoso. Isto também pode explicar o maior efeito observado com CAEAlcoólico no peso corporal e o armazenamento de gordura em comparação com CAE- Aquoso (Figura 2 e 3).

Exemplo 5: Degradação térmica e perda de inibição de lipases,____de____importância____1-0- trans-cinamoil-beta-Dglicosídeo para a atividade do extrato de pendúculo de caju (CAE)

Materiais e métodos [0163] A cinética de degradação térmica do CAE em água foi investigada a 100°C. CAE foi dissolvido em água desionizada a uma concentração de 50 g/L e a solução foi bem homogeneizada. Os volumes de 4 ml desta solução foram colocados em tubos de vidro, selados e colocados em um banho de óleo mineral a 100°C. Em intervalos pré-determinados: 0, 10, 20, 30, 45, 60, 90 e 120 minutos, os tubos das amostras foram removidos do banho de óleo mineral e resfriados rapidamente em gelo. Para a análise, 1 ml de cada amostra foi misturada com 4 ml de metanol de tipo HPLC, homogeneizado, e filtrado em filtro de 0,45 pm HPLC. Em seguida, 20 pL da solução foram analisados por HPLC. A composição fitoquímico das amostras foi medido por cromatografia líquida de fase reversa, usando uma coluna C -18 (ACE, 250 x 4,6 mm, 5 pm) a 280 nm. As áreas sob os picos

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43/44 das componentes principais de CAE foram medidos nas diferentes amostras representando diferentes pontos a 100°C.

[0164] Cada amostra foi também testada no teste de inibição de lipase, seguindo o protocolo descrito acima no Exemplo 4.

Resultados [0165] Conforme apresentado na Figura 9 no painel superior, o composto 1-0-trans-cinamoil-beta-D-glucosídeo de CAE foi degradado por temperatura. Esta degradação aumenta com a duração do período de incubação. A quantidade de 1-0trans-cinamoil-beta-D-glucosídeo foi dividida por 2, após 30 minutos de incubação a 100°C e depois de 120 minutos de incubação, este composto quase completamente desapareceu a partir do extrato.

[0166] Com relação à atividade de inibição da lipase correspondente (Figura 9, painel inferior), observou-se uma correlação completa entre a atividade de inibição da lipase de CAE e a presença de 1-0-trans-cinamoil-beta-D-glucosídeo não modificado no extrato. A concentração para observar 50% de inibição da lipase (IC50) de CAE aumentou com o tempo de incubação a 100°C, então, com o desaparecimento dos 1-0trans-cinamoil-beta-D-glucosídeo. Depois de 60 minutos de incubação, a atividade inibidora de lípase em CAE foi dividida por 2.

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Conclusão [0167] 1-0-trans-cinamoil-beta-D-glucosídeo é um dos componentes principais para CAE que é responsável pela inibição da atividade da lipase e, por extensão, da redução de fatores de risco de doença metabólica, como demonstrado no modelo de camundongo.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Uso de um extrato de caju hidroetanólico caracterizado pelo fato de ser para a preparação de uma composição para o tratamento curativo ou preventivo para reduzir, controlar ou limitar o ganho de peso corporal, diminuição ou limitação do aumento de armazenamento de gordura, de gordura no fígado, dos níveis de triglicerídeos hepáticos, de hipertrigliceridemia, do nível de glicemia, de insulinêmia, de resistência à insulina, e/ou de um ou vários fatores de síndrome metabólica, em que o extrato de caju hidroetanólico compreende uma quantidade total de derivados do ácido cinâmico, de derivados de quercetina e derivados de

miricetina de, pelo menos, 2 g/kg de extrato. 2. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o extrato de caju

hidroetanólico compreende derivados de miricetina numa quantidade de pelo menos 1,0 g/kg, derivados de quercetina numa quantidade de pelo menos 0,75 g/kg e derivados de ácido cinâmico numa quantidade de pelo menos 0,3 g/kg.

2/3 hidroetanólico compreende um teor total de fenol que varia de 3 a 7% em peso em relação ao peso total do extrato.

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3. Uso, de acordo com qualquer das reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o extrato de caju hidroetanólico compreende 1-O-trans-cinamoil-beta-Dglucopiranose numa quantidade de pelo menos 0,3 g/kg.

4. Uso, de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o extrato de caju

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5. Composição caracterizada pelo fato de compreender um extrato de caju hidroetanólico como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4.

6. Composição caracterizada pelo fato de compreender um extrato de caju o extrato de caju hidroetanólico compreende uma quantidade total de derivados do ácido cinâmico, de derivados de quercetina e derivados de miricetina de, pelo menos, 2 g/kg de extrato.

7. Composição de acordo com a reivindicação 6 caracterizada pelo fato de que o extrato de caju hidroetanólico compreende derivados de miricetina numa quantidade de pelo menos 1,0 g/kg, derivados de quercetina numa quantidade de pelo menos 0,75 g/kg e derivados de ácido cinâmico numa quantidade de pelo menos 0,3 g/kg.

8. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 ou 7 caracterizada pelo fato de que o extrato de caju hidroetanólico compreende 1-O-transcinamoil-beta-D-glucopiranose numa quantidade de pelo menos 0,3 g/kg.

9. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 8 caracterizada pelo fato de que o extrato de caju hidroetanólico compreende um teor total de fenol que varia de 3 a 7% em peso em relação ao peso total do extrato.

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10. Composição alimentar caracterizada pelo fato de compreender uma composição tal como definida em qualquer uma das reivindicações 5 a 9, um veículo comestível, e/ou um agente de sabor.

11. Composição alimentar, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de compreender o extrato de caju hidroetanólico numa quantidade que varia de 0,1 a 5 % em peso em relação ao peso total da composição.

12. Método para a obtenção de um extrato de caju hidroetanólico tal como descrito em qualquer uma das reivindicações 1 a 4 caracterizado pelo fato de compreender:

a) contatar cajus, com 2 a 20 vezes o seu peso com um solvente de extração hidroetanólico a uma temperatura acima de 35 ° C,

b) filtrar os sólidos e recolher o extrato de solvente, c) lavar o sólido úmido, por agitação, com um solvente de extração hidroetanólico, d) filtrar os sólidos e recolher do extrato de

solvente,

e) combinar as soluções de extração e remover resíduos não solúveis,

f) evaporar os solventes, e

g) recuperar o extrato seco.