JP6408078B2

JP6408078B2 - Ｒａｇｅ遺伝子発現抑制剤

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Publication number: JP6408078B2
Application number: JP2017123685A
Authority: JP
Inventors: 直希一柳; 美聡小圷; 康晴石原; 玄竹中; 啓栗田
Original assignee: Lion Corp
Current assignee: Lion Corp
Priority date: 2013-07-10
Filing date: 2017-06-23
Publication date: 2018-10-17
Anticipated expiration: 2034-07-10
Also published as: WO2015005443A1; JP6375296B2; US20160067203A1; JP6178761B2; CN105163731B; JP6357570B2; JP2017206530A; JP2015034161A; JPWO2015005443A1; JP2017171683A; US9480672B2; CN105163731A

Description

本発明は、内服剤に関する。

特許文献１には、カロテノイド、アスコルビン酸類及びトコフェロール類のいずれか２種以上を配合した抗酸化剤が試験管内で抗酸化能を発揮することが記載されている。

神経幹細胞の活性化に関する先行技術としては、非特許文献１、非特許文献２などがある。非特許文献１では成人の脳（海馬）に神経幹細胞が存在し、必要に応じて再生される可能性があること、また非特許文献２ではドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）やアラキドン酸などに神経幹細胞の増殖効果があることが示されている。

終末糖化産物（ａｄｖａｎｃｅｄｇｌｙｃａｔｉｏｎｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ、以下、ＡＧＥｓと略記することがある。）の受容体（ｒｅｃｅｐｔｏｒｆｏｒＡＧＥｓ；以下、ＲＡＧＥと略記することがある。）は、血管内皮細胞、血管平滑筋細胞、腎メサンギウム細胞、神経細胞、グリア細胞、肺胞上皮細胞、気管支上皮細胞、マクロファージ等の様々な細胞、組織にて発現することが知られている。ＲＡＧＥに結合するＡＧＥｓは、生体におけるタンパク質が糖によりメイラード反応を起こした結果生成される。

ＲＡＧＥはアミロイドβの細胞内への再取り込みに関わること（非特許文献３）が知られており、アルツハイマー病との関与が示唆されている。そのため、アミロイド生成性疾患を予防及び処置する方法として抗ＲＡＧＥ抗体を用いること（特許文献２）などが知られている。ＲＡＧＥの抑制が加齢疾患の治療法として有望であることは認められつつあるものの、生体内でのその機能については不明な点が多く、ましてやＡＧＥｓの生成抑制やＲＡＧＥシグナルの制御については、ほとんど解明されていない。また、ＲＡＧＥは、各種の加齢疾患に関与していることが知られており、慢性腎臓病や高血圧、糖尿病の病態への関与、糖尿病合併症としての網膜症や角膜症、眼の加齢疾患である白内障、黄斑変性症などへの関与も知られている。

また、ＤＨＡの効果として、血中脂質低下、抗血栓作用などの他に脳機能低下の予防効果があるとの報告は多く、またＤＨＡとルテインを組み合わせることによる脳機能の低下抑制効果がある（特許文献３）ことが報告されている。しかしながら、ＤＨＡを用いた介入研究のメタ分析からは、有効性があるとされるもの、無いとされるものが混在している状態であり、その脳機能に対する有効性については立証されていない。

２００９年９月号ＮａｔｕｒｅＮｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ誌（Ｖｏｌｕｍｅ１２，Ｎｏ．９，ｐａｇｅｓ１０９７−１１０５）ＧｅｎｅｓｔｏＣｅｌｌｓ，Ｖｏｌｕｍｅ１６，Ｉｓｓｕｅ７，ｐａｇｅｓ７７８−７９０，Ｊｕｌｙ２０１１日薬理誌（ＦｏｌｉａＰｈａｒｍａｃｏｌ．Ｊｐｎ．）１３１，３２６〜３３２（２００８）

特開２００８−１７９６３２号公報特表２００９−５３０４２３号公報国際公開第２００６／１１６７５５号

特許文献１には、神経幹細胞やＲＡＧＥ遺伝子発現に関し何ら記載されていない。非特許文献１及び２に記載されている有効性については、神経幹細胞の増殖効果の結果によるものであり、神経活動においてより重要な指標となる神経幹細胞から神経細胞への分化（成熟）に対する影響に関しては明らかにはなっていない。非特許文献３及び特許文献２には上述の通り、ＲＡＧＥ遺伝子発現抑制活性を有する物質が記載されていない。特許文献３では、ＤＨＡとルテイン以外のカロテノイドが何らかの活性を有することは記載されていない。

本発明は、神経幹細胞活性化機能及びＲＡＧＥ遺伝子発現抑制機能を発揮することのできる内服剤を提供することを目的とする。

本発明は以下の〔１〕〜〔６〕を提供するものである。
〔１〕ドコサヘキサエン酸、カプサンチン、カプソルビン、フコキサンチン及びフコキサンチノールからなる群より選ばれる１種以上を有効成分とする内服剤。
〔２〕有効成分がドコサヘキサエン酸とカプサンチンとを少なくとも含む、上記〔１〕記載の内服剤。
〔３〕脳機能改善剤である、上記〔１〕又は〔２〕に記載の内服剤。
〔４〕脳内アミロイドβ蓄積抑制剤である、上記〔１〕又は〔２〕に記載の内服剤。
〔５〕神経幹細胞活性化剤である、上記〔１〕に記載の内服剤。
〔６〕ＲＡＧＥ遺伝子発現抑制剤である、上記〔１〕又は〔２〕に記載の内服剤。

具体的には、本発明は以下の〔７〕〜〔１１〕を提供する。
〔７〕成分（Ａ）及び（Ｂ）を含有する内服剤。
成分（Ａ）：ドコサヘキサエン酸
成分（Ｂ）：カプソルビン、フコキサンチン及びフコキサンチノールからなる群より選ばれる１種以上
〔８〕神経幹細胞活性化剤である、〔７〕に記載の内服剤。
〔９〕ＲＡＧＥ遺伝子発現抑制剤である、〔７〕又は〔８〕に記載の内服剤。
〔１０〕ドコサヘキサエン酸、カプサンチン、カプソルビン、フコキサンチン、フコキサンチノール、ドコサヘキサエン酸とフコキサンチン、ドコサヘキサエン酸とフコキサンチノール、ドコサヘキサエン酸とカプソルビン、ドコサヘキサエン酸とカプサンチン、又は、ドコサヘキサエン酸とカプサンチンとルテインとゼアキサンチンを有効成分とする神経幹細胞活性化剤。
〔１１〕ドコサヘキサエン酸、ドコサヘキサエン酸とカプサンチン、ドコサヘキサエン酸とルテインとゼアキサンチン、又は、ドコサヘキサエン酸とルテインとゼアキサンチンとカプサンチンを有効成分とするＲＡＧＥ遺伝子発現抑制剤。

本発明は、神経幹細胞活性化機能、ＲＡＧＥ遺伝子発現抑制機能を発揮することのできる内服剤を提供することを目的とする。

本発明の剤は、ＤＨＡ及び／又はカロテノイドを含んでいてもよい。カロテノイドとしては、カプサンチン、カプソルビン、フコキサンチン、フコキサンチノール、ゼアキサンチン、ルテインが例示され、これらのうち１種又は２種以上であってもよい。

ＤＨＡ（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエン酸）は、魚類などの動物、微生物（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ属）等天然物由来でもよいし、人工的に製造したものでもよいし、遺伝子組み換えにより製造されたものでもよいし、市販品を用いてもよい。更に、様々な取得方法で得られる２種以上のＤＨＡを組み合わせて用いてもよい。ＤＨＡは薬理学的に許容される塩の形態であってもよい。

ＤＨＡは、遊離脂肪酸としてのＤＨＡであってもよいし、その誘導体であってもよい。誘導体としては、トリグリセリド型ＤＨＡ（ＴＧ−ＤＨＡ）、リン脂質型ＤＨＡが例示される。トリグリセリド型ＤＨＡとは、トリグリセロールとＤＨＡがエステル結合している化合物である。なおトリグリセリド型ＤＨＡにはトリグリセロール１分子あたり１分子以上の脂肪酸としてのＤＨＡが結合することができる。トリグリセリド型ＤＨＡのうち、トリグリセロール１分子あたり２分子以上のＤＨＡが結合しているトリグリセリド型ＤＨＡが望ましい。リン脂質型のＤＨＡとは、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン等のリン脂質にＤＨＡが結合している化合物である。リン脂質型のＤＨＡとしては、ホスファチジルコリン型ＤＨＡ（ＰＣ−ＤＨＡ）が好ましい。リン脂質型ＤＨＡのうち、リン脂質１分子あたり２分子以上のＤＨＡが結合しているリン脂質型ＤＨＡが望ましい。リン脂質型ＤＨＡはトリグリセリド型ＤＨＡに比べ、生体吸収性や脳移行性、酸化安定性が高いことが知られており、ＤＨＡのなかではリン脂質型ＤＨＡがより好ましい。

カプサンチン（ａｌｌ−ｔｒａｎｓ−カプサンチン、（３Ｒ，３'Ｓ，５'Ｒ）−３，３'−ジヒドロキシ−β，κ−カロテン−６'−オン、（３Ｒ，３'Ｓ）−３，３'−ジヒドロキシ−β，κ−カロテン−６'−オン）は、パプリカ、トウガラシなどの植物等天然物由来であってもよいし、人工的に製造されたものでもよいし、遺伝子組み換えにより製造されたものでもよいし、市販品を用いてもよい。カプサンチンは薬理学的に許容される塩の形態であってもよい。

カプソルビン（（２Ｓ，２’Ｓ，５Ｒ，５'Ｒ）−２，２'−ジヒドロキシ−κ，κ−カロテン−６，６’−ジオン、（３Ｓ，３'Ｓ，５Ｒ，５'Ｒ）−３，３’−ジヒドロキシ−κ，κ−カロテン−６，６’−ジオン）は、パプリカ、トウガラシなどの植物等天然物由来であってもよいし、人工的に製造されたものでもよいし、遺伝子組み換えにより製造されたものでもよいし、市販品を用いてもよい。カプソルビンは薬理学的に許容される塩の形態であってもよい。

フコキサンチン（Ａｃｅｔｉｃａｃｉｄ［（１Ｓ，３Ｒ）−３−ｈｙｄｒｏｘｙ−４−［（３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ，９Ｅ，１１Ｅ，１３Ｅ，１５Ｅ）−１８−［（１Ｓ，４Ｓ，６Ｒ）−４−ｈｙｄｒｏｘｙ−２，２，６−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ−７−ｏｘａｂｉｃｙｃｌｏ〔４．１．０〕ｈｅｐｔａｎｅ−１−ｙｌ］−３，７，１２，１６−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ−１７−ｏｘｏｏｃｔａｄｅｃａ−１，３，５，７，９，１１，１３，１５−ｏｃｔａｅｎｙｌｉｄｅｎｅ］−３，５，５−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ］ｅｓｔｅｒ）は、昆布、ひじき、ワカメなどの褐藻類等天然物由来であってもよいし、人工的に製造されたものでもよいし、遺伝子組み換えにより得られるものであってもよいし、市販品を用いてもよい。フコキサンチンは薬理学的に許容される塩の形態であってもよい。

フコキサンチノール（（３Ｓ，３'Ｓ，５Ｒ，５'Ｒ，６Ｓ，６’Ｓ）−６’，７'−ジデヒドロ−５，６−エポキシ−５，５’，６，６’，７，８−ヘキサヒドロ−３，３’，５’−トリヒドロキシ−８−オキソ−β，β−カロテン）は、昆布、ひじき、ワカメなどの褐藻類等天然物由来であってもよいし、人工的に製造されたものでもよいし、遺伝子組み換えにより得られるものでもよいし、市販品を用いてもよい。フコキサンチノールは薬理学的に許容される塩の形態であってもよい。

ゼアキサンチン（４−［１８−（４−ヒドロキシ−２，６，６−トリメチル−１−シクロヘキセニル）−３，７，１２，１６−テトラメチル−オクタデカ−１，３，５，７，９，１１，１３，１５，１７−ノナエニル］−３，５，５−トリメチル−３−シクロヘキセン−１−オール）は、植物（トウモロコシ等）、卵黄、動物性脂肪などの天然物由来であってもよいし、人工的に製造されたものでもよいし、遺伝子組み換えにより得られるものでもよいし、市販品を用いてもよい。ゼアキサンチンは薬理学的に許容される塩の形態であってもよい。

ルテイン（β，ε−カロテン−３，３’−ジオール）は、以下の式で表される。ルテインは高等植物（ホウレンソウ、ケール、コマツナなど）の葉緑体などの天然物由来であってもよいし、人工的に製造されたものでもよいし、遺伝子組み換えにより得られるものでもよいし、市販品を用いてもよい。ルテインは薬理学的に許容される塩の形態であってもよい。

本発明において薬理学的に許容される塩としては、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、酢酸塩、ギ酸塩、プロピオン酸塩、安息香酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、又はパラトルエンスルホン酸塩等の有機酸塩；ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩等の無機塩基塩、トリエチルアンモニウム塩、トリエタノールアンモニウム塩、ピリジニウム塩、ジイソプロピルアンモニウム塩等の有機塩基塩；アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸などのアミノ酸塩が挙げられる。

上記成分のうち１種又は２種以上の組み合わせを有効成分として選択して、該有効成分を含む内服剤としてもよい。中でも、以下の成分（Ａ）及び（Ｂ）を含有する内服剤は、神経幹細胞の活性化機能、ＲＡＧＥ遺伝子発現抑制機能を発揮することができるので、好ましい。
成分（Ａ）：ＤＨＡ
成分（Ｂ）：カプソルビン、フコキサンチン及びフコキサンチノールからなる群より選ばれる１種以上。

上記成分は単独で、又は２種以上の組み合わせで、神経幹細胞の活性化機能を発揮するので、神経幹細胞活性化剤の有効成分として利用することができる。神経幹細胞の活性化とは、神経幹細胞を成熟神経細胞に分化させることを示す。神経幹細胞活性化剤の有効成分は、ＤＨＡ、カプサンチン、カプソルビン、フコキサンチン、フコキサンチノール、ＤＨＡとフコキサンチン、ＤＨＡとフコキサンチノール、ＤＨＡとカプソルビン、ＤＨＡとカプサンチン、又は、ＤＨＡとカプサンチンとルテインとゼアキサンチンであることが好ましい。中でも、カプサンチン、フコキサンチン、フコキサンチノール、ＤＨＡとカプサンチン、又はＤＨＡとカプソルビンであることが好ましく、カプサンチン、フコキサンチン、フコキサンチノール、ＤＨＡとカプソルビンであることがより好ましく、カプサンチン、ＤＨＡとカプソルビンであることが更に好ましい。これにより神経幹細胞の顕著な分化促進機能を発揮することができる。

上記成分のうち、ＤＨＡ及び／又はカプサンチンは、ＲＡＧＥ遺伝子発現抑制効果を発揮するので、ＲＡＧＥ遺伝子発現抑制剤として利用することができる。ＲＡＧＥ遺伝子発現抑制剤の有効成分は、ＤＨＡ、ＤＨＡとカプサンチン、ＤＨＡとルテイン及び／又はゼアキサンチン、ＤＨＡとルテイン及び／又はゼアキサンチンとカプサンチンであることが好ましい。これにより、顕著なＲＡＧＥ抑制効果を発揮することができる。

本発明の剤の投与量は、本発明の効果を損なわない限り特に制限は無く、また適応される被投与生体の年齢、状態などの種々の要因により適宜変えることができる。目的の効果を得るために好ましい投与量は、剤の用途により適宜設定すればよい。

例えば、成分（Ａ）と成分（Ｂ）の組み合わせを有効成分とする内服剤の場合、ＤＨＡの１日当たり投与量は、５０ｍｇ〜３０００ｍｇであることが好ましく、１００ｍｇ〜２２００ｍｇであることが好ましい。カロテノイドの１日当たり投与量は、１日当たり０．５ｍｇ〜２５０ｍｇであることが好ましく、１ｍｇ〜５０ｍｇであることがより好ましい。ＤＨＡの１日当たり投与量及びカロテノイドの１日当たり投与量が、それぞれ５０ｍｇ〜３０００ｍｇ及び０．５ｍｇ〜２５０ｍｇであることが好ましく、１００ｍｇ〜２２００ｍｇ及び１ｍｇ〜５０ｍｇであることがより好ましい。ＤＨＡの含有量とカロテノイドの含有量（総量）の比率は１００：１〜１：５０であることが好ましく、５０：１〜１０：１であることがより好ましい。

本発明の神経幹細胞活性化剤がＤＨＡを有効成分とする場合、ＤＨＡの１日当たり投与量は５０ｍｇ〜３０００ｍｇであることが好ましく、１００ｍｇ〜２２００ｍｇであることがより好ましい。本発明の神経幹細胞活性化剤が１種又は２種以上のカロテノイドを有効成分とする場合、カロテノイドの１日当たり投与量は０．５ｍｇ〜２５０ｍｇであることが好ましく、１ｍｇ〜５０ｍｇであることがより好ましい。本発明の神経幹細胞活性化剤がＤＨＡとカロテノイドの組み合わせを有効成分とする場合、ＤＨＡの含有量とカロテノイドの含有量（総量）の比率は、１００：１〜１：５０であることが好ましく、５０：１〜１０：１であることがより好ましい。

本発明のＲＡＧＥ遺伝子発現抑制剤がＤＨＡを有効成分とする場合、ＤＨＡの１日当たり投与量は５０ｍｇ〜３０００ｍｇであることが好ましく、１００ｍｇ〜２２００ｍｇであることがより好ましい。本発明のＲＡＧＥ遺伝子発現抑制剤が１種又は２種以上のカロテノイドを有効成分とする場合、カロテノイドの１日当たり投与量はそれぞれ０．５ｍｇ〜２５０ｍｇであることが好ましく、１ｍｇ〜５０ｍｇであることが好ましい。本発明のＲＡＧＥ遺伝子発現抑制剤がＤＨＡとカロテノイドの組み合わせを有効成分とする場合、ＤＨＡの含有量とカロテノイドの含有量（総量）の比率は１００：１〜１：５０であることが好ましく５０：１〜１０：１であることがより好ましい。

ＤＨＡの含有量及び投与量は、ＤＨＡの脂肪酸組成比換算量として表してもよい。脂肪酸組成比換算量の定義は、実施例で説明するとおりである。

本発明の内服剤が成分（Ｂ）として２種以上のカロテノイドを含む場合、並びに、神経幹細胞の活性化剤及びＲＡＧＥ遺伝子発現抑制剤が２種以上のカロテノイドを含む場合、２種以上のカロテノイドの含有比率は特に限定されない。例えば、２種以上のカロテノイドがフコキサンチン、フコキサンチノール、カプソルビン及びカプサンチンの含有量の比率は、ある特定のカロテノイドを１としたときに他のカロテノイドは１００倍の比率以内で組み合わせること（特定のカロテノイド：他のカロテノイドのそれぞれ＝１：０を超えて１００以下）が好ましく、ある特定のカロテノイドを意図したときに他のカロテノイドは１０倍の比率以内で組み合わせること（特定のカロテノイド：他のカロテノイドのそれぞれ＝１：０を超えて１００以下）がより好ましい。

但し、上記の投与量はほんの一例にすぎず、製剤化技術により、生体吸収性、生物学的利用率を高めた製剤の場合については、より低濃度で効果を及ぼすことから、さらに低い濃度での適用が可能である。

本発明の剤は、上記の成分を有効成分としていればよく、上記以外の成分と、薬理学的に許容される基剤をさらに有する組成物の形態であってもよい。薬理学的に許容される基剤の一例としては、主に貯蔵及び流通における安定性を確保する成分（例えば保存安定剤など）が挙げられる。その他、目的の最終製品（例えば、飲食品、医薬品、医薬部外品など）を構成する諸成分から選ばれる１又は２種類以上の成分（好ましくは１〜３種類程度、より好ましくは１種類程度）を含有していてもよい。

本発明の剤は、そのままの形態で、最終製品として用いることもできる。また、飲食品用の添加剤、医薬用の添加剤、医薬部外品用の添加剤として用いることができる。これにより、飲食品、医薬品、医薬部外品に、各種効果を付与することができる。

薬理学的に許容される基剤は、本発明の目的を損なわない限り、特に限定されない。例えば、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、コーティング剤、着色剤、発色剤、矯味剤、着香剤、酸化防止剤、防腐剤、呈味剤、酸味剤、甘味剤、強化剤、ビタミン剤、膨張剤、増粘剤、界面活性剤などの中から、製剤に必要な諸特性（例えば、製剤安定性）を損なわないものであって、最終製品（例えば、医薬品、医薬部外品、飲食品）の剤形に応じたものを１種又は２種以上選択することができる。また、薬理学的に許容される基剤は、一酸化窒素産生抑制効果を有する他の成分であってもよい。

本発明の剤が薬理学的に許容される基材を含む場合、有効成分（２種以上の成分の組み合わせである場合には、合計量）の配合量は、有効量であれば特に限定されないが、通常は０．０１〜８０質量％の範囲である。

本発明の剤の投与形態は通常は口腔内投与、舌下投与などの経口投与である。

本発明の剤の剤形は、飲食品、医薬品及び医薬部外品のいずれとするかによって適宜決定することができ、特に限定されない。経口投与される際の剤形の例としては、液状（液剤）、シロップ状（シロップ剤）、錠剤、カプセル状（カプセル剤）、粉末状（顆粒状（顆粒剤）、細粒（散剤））、ソフトカプセル状（ソフトカプセル剤）、固形状（固形製剤）、半液体状、クリーム状、ペースト状が挙げられる。

本発明の神経幹細胞活性化剤は、神経幹細胞の分化を促進することにより、神経を再生できるので、認知機能の予防、改善用の飲食品もしくは医薬品として利用できる。神経幹細胞活性化剤の摂取対象者は特に限定されないが、例えば、アルツハイマー病をはじめとする種々の認知症、また軽度認知障害、また健常でありつつも日ごろ物忘れを感じている対象者、さらには集中力が続かないなどの不調を感じている対象者に適している。また、特段の問題のない対象者であっても、神経幹細胞活性化を目的として日常的に摂取することができる。

本発明のＲＡＧＥ遺伝子発現抑制剤は、ＲＡＧＥ遺伝子の発現を抑制することにより、ＡＧＥｓを介した不具合を抑制できるので、アルツハイマー病をはじめとして、慢性腎疾患、高血圧、糖尿病、骨粗しょう症などの疾患の、また、網膜症、角膜症、黄斑変性などの眼疾患の、予防、改善を目的とした飲食品もしくは医薬品として利用できる。ＲＡＧＥ遺伝子発現抑制剤の摂取対象者は特に限定されないが、例えば、加齢などにより複数の部分に不具合を感じている対象者に適している。また、特段の問題のない対象者であっても、ＲＡＧＥ遺伝子発現抑制を目的として日常的に摂取することができる。

本発明の剤の投与時期は特に限定されない。

本発明の剤は、各種剤形で利用することができる。また、健康食品、機能性食品、栄養補助食品（サプリメント）、特定保健用食品、医療用食品、病者用食品、乳児用食品、介護用食品、高齢者用食品等として利用することもできる。

実施例１〜１０〔神経幹細胞の神経細胞への分化〕
ヒト神経幹細胞（ＣｅｌｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）を培養し、２継代後に４８ウェルプレート（ＢＤＦａｌｃｏｎ）へ、１×１０⁵ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるよう播種した。播種の１２時間後にシーズを添加し、さらにその４日後に半量での培地交換を行った。プレートでの培養開始から１０日後に４％パラホルムアルデヒド（シグマ）によって固定した。固定後、分化した神経細胞を抗βＩＩＩ−ｔｕｂｕｌｉｎ抗体（シグマ）で、細胞の核をＨｏｅｃｈｓｔ（ＤＯＪＩＮＤＯ）で、それぞれ常法によって免疫染色を行い、視野における核染色数に対する神経染色細胞数の比率、すなわち分化した神経細胞の比率を算出した（ｎ＝１５）。

試料は、ＤＨＡ（実施例１、１０）、カプサンチン（実施例２、１１）、カプソルビン（実施例３）、フコキサンチン（実施例４）、フコキサンチノール（実施例５）、ＤＨＡ＋カプサンチン（実施例６）、ＤＨＡ＋カプソルビン（実施例７）、ＤＨＡ＋フコキサンチン（実施例８）、ＤＨＡ＋フコキサンチノール（実施例９）であった。実施例１〜５、１０、１１では各シーズの添加量は１０^-8Ｍ、１０^-7Ｍ、１０^-6Ｍ及び１０^-5Ｍであった。実施例６〜９ではＤＨＡの添加量が１０^-8Ｍ、これと組み合わせるシーズの添加量は１０^-10Ｍ、１０^-8Ｍ及び１０^-6Ｍであった。

各試料に用いた成分は、以下の通りであった：
ＤＨＡ：遊離型ＤＨＡ、ＣａｙｍａｎＣＨＥＭＩＣＡＬ社、ＣＡＳ６２１７−５４−５
カプサンチン：ｅｘｔｒａｓｙｎｔｈｅｓｅ社
カプソルビン：ｅｘｔｒａｓｙｎｔｈｅｓｅ社
フコキサンチン：和光純薬工業株式会社
フコキサンチノール：和光純薬工業株式会社

実施例１〜１１の神経染色細胞数の比率を表１及び２に示す（ｎ＝１５）。尚、表中の数値は、溶媒添加と比較しての相対比であり、各添加濃度のうち、もっとも効果のあった添加濃度での測定値を示している。表１及び２のカッコ中の数字は、測定値を得た時の添加濃度（評価濃度）（Ｍ）を示している。

表１及び２に示す結果より、ＤＨＡは神経細胞分化促進効果を発揮すること（実施例１及び１０）、カプサンチン、カプソルビン、フコキサンチン、フコキサンチノールはそれぞれ単独で（実施例２、３、４、５、１１）効果があり、カプサンチン、カプソルビンについては、ＤＨＡとの組み合わせで（実施例６〜８）ＤＨＡと同等以上、あるいは相乗的な神経細胞分化促進効果を発揮することが明らかとなった。

実施例１１〜１４及び比較例１〔ＤＮＡマイクロアレイによるＲＡＧＥ遺伝子の発現量の測定〕
６週齢のＳＡＭＰ８（日本エスエルシー）に、表３に示す試料をＣＥ−２粉末餌（日本エスエルシー）に混合し、与えた。各試料に用いた成分は、以下の通りであった：
ＴＧ−ＤＨＡ：ＤＤオイルＤＨＡ−４６：日本水産株式会社。（本品のＤＨＡは主にトリグリセリド型のＤＨＡとして含有される。原料中に含まれる脂肪酸をすべて遊離脂肪酸としたうえで、全脂肪酸に対する該当する脂肪酸の組成比を、該当する脂肪酸の「脂肪酸組成比」と定義する。本品の場合、ＤＨＡの脂肪酸組成比は４６％であった）
カプサンチン：パプリカ由来カプサンチン２０％組成物：カトラ社
ルテイン＋ゼアキサンチン：マリーゴールド由来ルテイン／ゼアキサンチン混合物：１０％：１０％混合物：カトラ社

ＴＧ−ＤＨＡの配合量は、１３３３ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ（脂肪酸組成比換算量：６１７ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）であった。ＴＧ−ＤＨＡ以外の成分の配合量は、各々１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ(含有カロテノイド量では、２０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ)であった。水は自由に摂取できるようにした。餌は３日に一度交換し、３ヶ月間与え続けた。

ある脂肪酸の脂肪酸組成比換算量とは、原料中の脂肪酸含量に、該当する脂肪酸の脂肪酸組成比を乗じて算出された値である。

その後、各マウスから脳を摘出し、速やかにＲＮＡｌａｔｅｒ（Ａｍｂｉｏｎ）に浸漬し、ＡｌｌＰｒｅｐＤＮＡ／ＲＮＡ／ＰｒｏｔｅｉｎＭｉｎｉＫｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を用いてｍＲＮＡを抽出した。各群ｎ＝３で評価し、抽出したｍＲＮＡを群ごとに混合してマイクロアレイ解析に供した。マイクロアレイ解析はタカラバイオ社へ受託依頼した。ＣｈｉｐはＳｕｒｅＰｒｉｎｔＧ３ＭｏｕｓｅＧＥ８ｘ６０ＫＭｉｃｒｏａｒｒａｙを用いた。解析結果から群間でのＣｏｍｐａｒｉｓｏｎＡｎａｌｙｓｉｓを実施し、ＲＡＧＥ遺伝子の変動倍率（ＳｉｇｎａｌＬｏｇＲａｔｉｏ＝ｌｏｇ２（比較例群のシグナル／コントロール（通常食）群のシグナル））を算出した。この変動倍率は、各群のＲＡＧＥ遺伝子発現量が、コントロール群のそれに比べてどのくらい減少しているのかを表した数値である。すなわち、試験食の投与により、どれほどＲＡＧＥ遺伝子が減少したか、その悪影響を減らすことができるのかを示している。実施例１２〜１５及び比較例１の各結果を表３に示す。

動物から摘出した脳において、脳機能に悪影響を及ぼすといわれているＡＧＥｓの受容体（ＲＡＧＥ）の遺伝子発現が、コントロール動物と比較してＤＨＡ＋ルテイン＋ゼアキサンチン＋カプサンチン群（実施例１４）では６８％減もの低値を示した。一方、ＤＨＡ＋ルテイン＋ゼアキサンチン（実施例１１）ではＲＡＧＥ発現はコントロールと比較して低下しているものの、２９％減に留まった。ＤＨＡ＋カプサンチン（実施例１３）においてもＲＡＧＥ発現が５２％低下したことより、ＲＡＧＥの発現低下にはカプサンチンの寄与が大きいと考えられる。

〔処方例〕
下記表４、５に示す成分を中鎖脂肪酸トリグリセリドに懸濁し、常法によりゼラチンを用いてソフトカプセルを作製した。なお、表４〜５中の各成分の量は、脂肪酸組成比換算量、もしくはカロテノイド含有量として表記している。

Claims

ドコサヘキサエン酸とカプサンチン、又は、ドコサヘキサエン酸とルテインとゼアキサンチンとカプサンチンを有効成分とするＲＡＧＥ遺伝子発現抑制剤（但し、網膜症の予防剤及び改善剤を除く）。
ドコサヘキサエン酸とカプサンチン、又は、ドコサヘキサエン酸とルテインとゼアキサンチンとカプサンチンを有効成分とするＲＡＧＥ遺伝子発現抑制用食品組成物（但し、網膜症の予防及び改善用食品組成物を除く）。