JP6387438B2 - 害虫防除用組成物及び害虫防除方法 - Google Patents
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Description
1)ペシロマイセス属菌株を培養してペシロマイセス属菌株の培養液又は活性胞子を収得する段階と、
2)水和剤組成物の総重量において、前記段階1)で収得したペシロマイセス属菌株の培養液又は活性胞子5乃至10重量部、コーンスターチ又はじゃがいも澱粉30乃至50重量部、賦形剤30乃至50重量部、及びデキストリン30乃至50重量部を混合する段階。
1)ペシロマイセス属菌株を培養してペシロマイセス属菌株の培養液又は活性胞子を収得する段階と、
2)乳剤組成物の総重量において、前記段階1)で収得したペシロマイセス属菌株の培養液又は活性胞子5乃至10重量部、植物性油50乃至60重量部、水30乃至40重量部、及び乳化剤2乃至5重量部を混合する段階。
1)ペシロマイセス属菌株を培養してペシロマイセス属菌株の培養液又は活性胞子を収得する段階と、
2)油剤組成物の総重量において、前記段階1)で収得したペシロマイセス属菌株の培養液又はその活性胞子5乃至10重量部、植物性油90乃至98重量部、及び乳化剤2乃至5重量部を混合する段階。
また本実施形態は、乳剤組成物の総重量において、ペシロマイセス属菌株の培養液又はその活性胞子5乃至10重量部、植物性油50乃至60重量部、水30乃至40重量部、及び乳化剤2乃至5重量部を含む組成物を害虫防除用の乳剤として用いるための用途を提供する。
ペシロマイセスリラシナスHY−4菌株(受託番号KCTC 0395BP;大韓民国登録番号:10−0475131号)の保管及び培養のための種菌培養のためにPDA(Potato Dextrose Agar)培地を使った。種菌培養は、ペトリ皿(87×15mm)でPDA培地を用い28℃、湿度65%で7日間暗室条件で培養した。
ペシロマイセスリラシナスHY−4菌株の培養のために、一次培養として液体培養を通じて培養液に菌糸体を最大に増殖させ、次いで、殺虫剤の調剤のために二次培養である固体培養を行った。具体的に、菌糸体培養のために1次液体培養をPBD培地を用い28℃、180rpmの撹拌条件で7日間培養をした。次いで、ペトリ皿(150×25mm)に25mLのCzapek培地条件を作り、菌糸体が形成された1次培養液2mLを分注し、塗抹棒によって均一に塗抹して20日間固体培養を行った。
実施例2のペトリ皿で7日間固体培養を行って形成されたペシロマイセスリラシナスHY−4菌株の胞子回収のために、ヒュームフード中で培地が完全に乾燥するように10日間乾燥させた。乾燥したペトリ皿の培養培地から、スクレイパーを用いて胞子を回収した。
実施例3で回収したペシロマイセスリラシナスHY−4菌株の活性胞子を用いて、賦形剤に対する安定性を確認した。具体的には、生物農薬又は環境にやさしい有機資材の賦形剤として主に使われるベントナイト、カオリン、ゼオライトなどを含む鉱物と、デキストリン、コーンスターチ、米ぬかなどの多糖体を用いて保管期間別の活性維持状態を調べ、胞子発芽生菌数を測定した。胞子と賦形剤とを1:9(w:w)の割合で混合して100gの混合物を含む250mLの褐色瓶(Amber bottle、SPL社製)を常温で保管し、30日ごとに胞子の生存率を測定した。胞子の生存率は、0.5gの試料を4.5mLの生理食塩水に懸濁してそれぞれの1/10単位で段階的に希釈し、希釈液0.1mLをPDA平板培地に均一に塗抹して28℃で2日間培養した後、コロニーを測定した。
その結果、図1に示すように、保管期間4ヵ月を基点として各賦形剤による胞子発芽率が変化することが分かった。特に、6ヵ月以後に賦形剤を含んでいない試料の胞子発芽率が50%以下に減少する一方、賦形剤を含んでいる活性胞子は11ヵ月まで保管しても、胞子の発芽率は、50%以上に維持されることが分かった(図1)。
賦形剤に対する実施例3で回収したペシロマイセスリラシナスHY−4菌株の活性胞子の懸濁性を、濡れ時間(wetting time)で確認した。具体的には、ベントナイト、カオリン、又はゼオライトなどの鉱物質と、デキストリン、コーンスターチ、又は米ぬかなどの多糖体と、を混合し、それぞれの濃度別に懸濁性を測定した。胞子と賦形剤とを1:9(w:w)乃至10:0(w:w)の割合でそれぞれ混合し、50mLの水を含むコニカルチューブ(SPL社製)に1gの組成物を混合して重量を測定し(W1)、30分間常温で静置させた後、40mLの上澄みをピペットで精密に除去して残った懸濁液を乾燥させて乾燥重量(W2)を測定した。懸濁度(%、w/w)は次のような式で計算した。
懸濁度(%)=(W1−W2)/W1×10/9×100
その結果、10%(w/w)胞子、90%(w/w)鉱物質を含む組成物では85〜92%(w/w)の懸濁度、10%(w/w)胞子、90%(w/w)多糖体を含む組成物では25〜35%(w/w)の懸濁度、10%(w/w)胞子、45%多糖体、45%(w/w)鉱物質を含む組成物では70〜75%(w/w)の懸濁度を確認した。
実施例3で回収したペシロマイセスリラシナスHY−4菌株の活性胞子を用いた各種油剤に対する安定性を確認した。具体的には、コーン油、大豆油、ブドウ種子油、キャノーラ油、オリーブ油などの各種植物性油に、ペシロマイセスリラシナスHY−4菌株の活性胞子1%(w/v)を懸濁した後、常温で保管した。それぞれの保管試料は、180日間30日ごとに胞子の発芽状況を確認して生存率を測定した。胞子の生存率は、0.5gの試料を4.5mLの生理食塩水に懸濁してそれぞれの1/10倍単位で段階的に希釈し、希釈液0.1mLをPDA平板培地に均一に塗抹して28℃で2日間培養した後、コロニーを測定した。その結果、図2に示すように、保管後120日を基点として油剤を含んでいない製剤の場合には胞子生存率が急減して180日以後に50%生存率になる一方、油剤を使った保管試料の場合には、持続的に90%以上の胞子生存率を維持した(図2)。
実施例3で回収したペシロマイセスリラシナスHY−4菌株の活性胞子を用いた各種乳化剤に対する安定性を確認した。具体的には、大豆油にペシロマイセスリラシナスHY−4菌株の活性胞子5%(w/v)と、Tween20、Tween80、Span80、Span85、及びTriton X−100(Sigma−Aldrich Co.,LLC.)それぞれの乳化剤2.5%(w/v)と、を添加して懸濁した後、常温で保管した。それぞれの保管試料は、240日間30日ごとに胞子の発芽状況を確認して生存率を測定した。胞子の生存率は、0.5gの試料を4.5mLの生理食塩水に懸濁してそれぞれの1/10単位で段階的に希釈し、希釈液0.1mLをPDA平板培地に均一に塗抹して28℃で2日間培養した後、コロニーを測定した。その結果、図3に示すように、多様な乳化剤を含んでいる活性胞子は、乳化剤を施していない対照群に比べて胞子生存率が有意的な差を示していないということが分かった(図3)。
植物性油に懸濁又はコーティングされた実施例3で回収したペシロマイセスリラシナスHY−4菌株の活性胞子を用い、各種抗酸化剤に対する安定性向上を確認した。具体的には、大豆油にペシロマイセスリラシナスHY−4菌株の活性胞子1%(w/v)を懸濁した後、ターシャリー・ブチルヒドロキノン(TBHQ)、ブチルヒドロキシトルエン(BHT)、ブチルヒドロキシアニソール(BHA)、没食子酸プロピル(PG)、ビタミンC(Vt.C)、ビタミンE(Vt.E)、レシチン、及び酸化鉄(Fe2O3)などの抗酸化剤0.02%(w/v)を添加して常温で保管した。それぞれの保管試料は、30日間隔で210日間生存率を確認した。その結果、図4に示すように、180日間保管した胞子の生存率が50%に減少する一方、ビタミンC及びビタミンEを除く抗酸化剤を添加した保管試料は、80%以上の胞子生存率を維持した。特に、それぞれの保管試料の中、ブチルヒドロキシトルエンを添加した保管試料が210日後に88%胞子生存率を維持し、胞子に対する安定性が最も高いということが分かった(図4)。
ペシロマイセスリラシナスHY−4菌株の活性胞子の安定した製剤化を目的として、水に混合又は懸濁して使う水和剤を製造した。具体的には、実施例4及び実施例5のようにペシロマイセスリラシナスHY−4菌株の活性胞子5乃至10%(w/v)、コーンスターチ5乃至10%(w/v)、ベントナイト30乃至50%(w/v)、及びデキストリン30乃至50%(w/v)を混合して水和剤組成物を製造した。ここでベントナイトは、カオリン、ゼオライトなどの鉱物質に交換することができる。また、コーンスターチはじゃがいも澱粉などに交換することができる。
ペシロマイセスリラシナスHY−4菌株の活性胞子の安定した製剤化を目的として、溶媒及び水に混合又は懸濁して使う乳剤を製造した。具体的には、実施例4及び実施例6のように、ペシロマイセスリラシナスHY−4菌株の活性胞子5乃至10%(w/v)、植物性油50乃至60%(w/v)、水30乃至40%(w/v)、及び乳化剤2乃至5%(w/v)を混合して乳剤組成物を製造した。ここで植物性油は、農業用に広く用いられている灯油又は動物性油に取り替えることができる。乳化剤は、Tween20、Tween80、Span80、Span85、Triton X−100など、極性によって乳化剤成分を交換することができる。
ペシロマイセスリラシナスHY−4菌株の活性胞子の安定した製剤化を目的として、溶媒に混合又は懸濁して使う油剤を製造した。具体的には、実施例4及び実施例6のように、ペシロマイセスリラシナスHY−4菌株の活性胞子5乃至10%(w/v)、植物性油90乃至98%(w/v)、及び乳化剤2乃至5%(w/v)を使った。ここで植物性油は、農業用に広く用いられている灯油又は動物性油に取り替えることができる。ここで乳化剤は、Tween20、Tween80、Span80、Span85、Triton X−100などと極性によって乳化剤成分を変えることができる。
実施例9乃至実施例11で製造した組成物の殺虫効果を確認した。具体的には、図5のA乃至Dのように、イチゴのハウス栽培現場でアブラムシに感染したイチゴの葉を採取した後、実験室でそれぞれのイチゴの葉当り102個のアブラムシの幼虫を集積し、それぞれの試験剤型別に1×106乃至1×108濃度で活性胞子の数を10倍数に調節して噴霧し、6日間殺虫効果を分析した。その結果、表1に示すように、剤型化していない精製されたペシロマイセスリラシナスHY−4菌株の活性胞子は、効果の指標になる殺虫効果を奏することはできなかったが、水和剤、乳剤のような安定化された製剤は、50〜100%(死んだアブラムシの数/生きているアブラムシの数)の殺虫効果を奏することが分かった。特に、噴霧して6日以後に1×107及び1×108濃度の活性胞子を含んでいる乳剤の場合に100%の殺虫効果を奏することが分かった。よって、ペシロマイセスリラシナスHY−4菌株の活性胞子を用いた剤型化は、活性胞子の安定性を高めることが分かった(表1)。
Claims (2)
- 乳剤組成物の総重量において、受託番号KCTC 0395BPに寄託されたペシロマイセス リラシナス(Paecilomyces lilacinus)HY−4菌株の活性胞子5乃至10重量部と、
コーン油、大豆油、ブドウ種子油、キャノーラ油、オリーブ油からなる群から選択された何れか一つ以上の植物性油50乃至60重量部と、
水30乃至40重量部と、
Tween 20、Tween 80、Span 80、Span 85及びTriton X−100からなるから群から選択されたいずれか一つ以上の乳化剤2乃至5重量部とを含むことを特徴とする害虫防除用乳剤組成物。 - 請求項1に記載された害虫防除用乳剤組成物を、植物、土壌または種子に施す段階を含むことを特徴とする害虫防除方法。
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