KR101181756B1 - 항진균성 바실러스 서브틸리스 균주 및 이를 포함하는 미생물 수화제 - Google Patents

항진균성 바실러스 서브틸리스 균주 및 이를 포함하는 미생물 수화제 Download PDF

Info

Publication number
KR101181756B1
KR101181756B1 KR1020090131484A KR20090131484A KR101181756B1 KR 101181756 B1 KR101181756 B1 KR 101181756B1 KR 1020090131484 A KR1020090131484 A KR 1020090131484A KR 20090131484 A KR20090131484 A KR 20090131484A KR 101181756 B1 KR101181756 B1 KR 101181756B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
microbial
hsb904
bacillus subtilis
antifungal
strain
Prior art date
Application number
KR1020090131484A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20110075132A (ko
Inventor
조성현
강연복
홍성길
김성호
박문현
박문규
윤민호
Original Assignee
효성오앤비 주식회사
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 효성오앤비 주식회사 filed Critical 효성오앤비 주식회사
Priority to KR1020090131484A priority Critical patent/KR101181756B1/ko
Publication of KR20110075132A publication Critical patent/KR20110075132A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101181756B1 publication Critical patent/KR101181756B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/22—Bacillus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A01N25/08—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests containing solids as carriers or diluents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A01N25/12—Powders or granules
    • A01N25/14—Powders or granules wettable
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A01N25/30—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests characterised by the surfactants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N45/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, containing compounds having three or more carbocyclic rings condensed among themselves, at least one ring not being a six-membered ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N59/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing elements or inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/32—Yeast
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

본 발명은 다양한 종의 식물병원성 곰팡이에 대해 길항력을 나타내는 바실러스 서브틸리스 HSB904(Bacillus subtilis HSB904, KCTC 13706) 균주와 이를 포함하는 미생물제제에 관한 것이다. 본 발명에서는 상기 균주 및 이 균주에 증량제, 영양원, 보조제 등을 첨가하여 수화제 형태로 제형화한 항진균성 미생물 수화제가 제공된다. 본 발명의 바실러스 서브틸리스 HSB904(KCTC 13706) 균주는 생존력이 높고 항진균력 및 유기물 분해능이 우수하여 이를 포함하는 토양처리제를 사용할 경우 식물병원성 곰팡이균을 억제하여 관련 식물병을 방제할 수 있고, 유기물 분해로 인한 영양공급으로 작물의 생육을 촉진시킬 수 있으며, 본 발명의 미생물 수화제는 유효미생물의 생존을 증대시킬 수 있고 사용상의 편리성 또한 향상시킬 수 있다.
길항력, 식물병원성 곰팡이, 항진균 미생물제, 바실러스 서브틸리스, 수화제

Description

항진균성 바실러스 서브틸리스 균주 및 이를 포함하는 미생물 수화제 {Bacillus subtilis HSB904 having antifungal activities and a formulation containing the same}
본 발명은 토양내 식물병원성 곰팡이에 대해 길항력을 갖는 미생물제에 관한 것으로, 특히 토양내 식물병원성 곰팡이에 길항력을 갖는 바실러스속(Bacillus sp.) 균주와 이를 포함하는 토양처리용 항진균성 미생물제에 관한 것이다.
각종 채소, 과일, 화훼 등의 작물에 병해를 가져와 수량 및 품질저하를 일으키는 주요 식물병원성 곰팡이로, 시들음병균, 잿빛곰팡이병균, 역병균, 탄저병균, 균핵병균, 근부병균 및 모잘록병균 등이 있다. 이러한 식물병원성 진균에 의한 식물병을 방제하기 위해 살균제를 이용한 화학적 방제방법과 미생물제를 이용한 생물학적 방제방법, 재배환경을 개선해주는 물리적 방제방법이 적용되고 있다.
그러나 물리적 방제만으로는 큰 효과를 기대할 수 없으며, 가장 많이 사용되고 있는 화학적 방제는, 최근 내성균주의 출현으로 포장에서의 방제효과가 크게 저하되었으며, 화학농약의 다량 살포에 의한 인축에 대한 독성 및 토양 중 잔류 농약 에 의한 심각한 환경오염으로 사용량을 감축하는 선진 농법이 도입되고 있어 점차 그 이용이 제한되고 있다.
상기와 같은 화학적 방제의 문제로 인하여 대체 방안으로 생물학적 방제 기술에 관한 연구가 최근 활발하게 진행되고 있다. 생물농약은 화학농약에 비해 효과가 낮고, 생산비가 높으며, 저장기간이 짧아서 효과가 낮아질 수 있다는 단점이 있다. 그러나 우리나라의 친환경농업 육성정책에 따라 화학 농약 12.8kg/ha 기준으로 2013년까지 40% 감축을 목표로 추진중이며, 소득수준의 향상과 웰빙추세로 소비자들의 고품질 안전 먹거리에 대한 관심이 높아졌고 이러한 흐름에 부응하기 위하여 친환경 생물농약에 대한 연구가 활발히 이루어지고 있어 2010년에는 생물 농약 시장규모가 총 193억원 정도의 시장이 형성될 것으로 예상된다.
바실러스 속 균주는 그람양성 간균으로서 토양 내에서 쉽게 분리되고, 여러 가지 분해 효소를 이용하여 토양 내의 염류집적 현상을 해소할 뿐만 아니라 세포외로 분비되는 여러 가지 독소를 이용하여 항진균 활성을 갖는 장점이 있어, 토양 미생물 제제의 개발과 관련하여 관심의 대상이 되고 있다. 또한 바실러스 속 균주는 대부분이 인간에게 비병원성이고, 쉽게 유전자 조작이 가능하며 배양이 용이한 특성을 가지고 있다. 더욱이, 내생포자의 형성으로 오랜 기간 유지 및 보존이 용이하고 항생물질 생산과 내생포자 형성 등의 이유로 생물 농약의 재료로서 다른 균에 비해 광범위하게 이용되고 있다.
그러나 상기 종래의 토양처리용 항진균성 미생물제들은 주로 액상 제형으로 개발되어 있는데, 이러한 액상 미생물제들은 고온, 저온 및 광을 비롯한 각종 외부 환경에 노출될 경우 유효미생물의 생존기간이 짧아지게 되고, 상온에서 생균의 대사활동에 의한 2차 발효가 내부에서 진행되어 발효취가 발생되는 등 보관 및 유통 중에 제제의 약효 및 상품성이 떨어지게 되는 문제점이 있었다.
본 발명은 시들음병균(Fusarium oxysporum)을 포함하는 다수의 식물병원성 토양 곰팡이에 대해 우수한 항진균성을 지닌 토양미생물을 선발하여 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 선발된 토양미생물을 포함하는 토양처리용 미생물제를 제공하는 것을 목적으로 하며, 특히 선발된 토양 유래 항진균성 미생물을, 생존력을 증대시킬 수 있고 사용이 편리한 수화제 형태로 제형화한 미생물제를 제공하는 것을 목적으로 한다.
기타 본 발명의 다른 목적 및 장점들은 하기에 설명될 것이며, 본 발명의 실시에 의해 더 잘 알게 될 것이다.
본 발명에서는 토양으로부터 아포를 형성하며 항진균력이 우수한 미생물을 1차 선발하고, 상기 1차 선발된 길항미생물을 다수의 식물병원성 곰팡이와 대치배양하여 가장 항진균성이 우수한 균주를 선발한다.
본 발명에서는, 잿빛곰팡이병균(Botrytis cinerea); 역병균(Phytophthora capsici; P. cactorum); 탄저병균(Colletotrichum gloeosporioides); 균핵병균(Rhizoctonia solani; Scleotinia sclerotiorum); 시들음병균(Fusarium oxysporum; F. solani); 인삼근부병균(Cylindrocarpon destructans); 및 모잘록병균(Pythium ultimum)에 대해 항진균성을 나타내며, 유기질 분해능을 지닌 바실러스 서브틸리스 HSB904(Bacillus subtilis HSB904, KCTC 13706) 균주 및 이를 유효성분으로 포함하는 토양처리용 항진균성 미생물제가 제공된다.
또한, 본 발명에서는 상기 미생물이 생존력을 유지할 수 있도록 증량제, 영양원 등과 함께 수화제의 형태로 제형화한 토양처리용 항진균성 미생물 수화제를 제공한다. 수화제는 사용시 물에 혼합하여 현탁액의 상태로 사용하는 것으로서, 물에 녹지 않는 주원료인 증량제에 계면활성제와 분산제 등을 배합하여 제조한다. 수화제는 물에 혼합 시 현탁액의 상태가 되도록 적절한 분말도, 분산력, 수분함량을 갖도록 제형을 설계하여야 한다.
본 발명의 토양처리 미생물 수화제는,
(a) 호기조건하에 배양하여 얻은 1×107~1×1011 cfu/㎖ 농도의 바실러스 서브틸리스 HSB904(Bacillus subtilis HSB904, KCTC 13706) 균주 배양액 1 중량부,
(b) 제올라이트; 벤토나이트; 탈크; 디아토마이트; 카올린; 화이트카본; 및 다공성실리카로 구성된 군으로부터 1종 이상 선택되는 증량제 1~70 중량부,
(c) 염화암모늄; 황산암모늄; 질산암모늄; 효모추출액; 수크로스; 당밀; 글 루코오스; 현미유; 미강; 전분; 덱스트린; 갈락토스로 구성된 군으로부터 1종 이상 선택되는 미생물 영양원 0.5~40 중량부, 및
(d) 폴리카복실레이트; 소듐 리그노설포네이트; 칼슘 리그노설포네이트; 소듐 다이알킬설포석시네이트; 소듐 알킬 아릴 설포네이트; 폴리옥시에틸렌 알킬 페닐 에테르; 소듐 트리폴리포스페이트; 폴리옥시에틸렌 알킬 아릴 포스포릭 에스테르; 폴리옥시에틸렌 알킬 아릴 에테르; 폴리옥시에틸렌 알킬 아릴 폴리머; 폴리옥시알킬온알킬 페닐 에테르; 폴리옥시에틸렌 노닐 페닐 에테르; 소듐 설포네이트 나프탈렌 포름알데히드; 트리톤 100; 및 트윈 80으로 구성된 군으로부터 1종 이상 선택되는 계면활성제 0.2~20 중량부를 포함한다.
상기 바실러스 서브틸리스 HSB904(KCTC13706) 균주 배양액은 적정 농도로 희석하여 사용할 수 있으며, 최종 수화제 제형의 균수를 높이기 위하여 원심분리에 의해 고농도로 농축하여 사용할 수도 있다. 최종 생산품의 수분함량 및 생산단가를 고려할 때 바람직하게는 당밀 배지, 호기조건하에 배양기(Jar Fermentor)에서 5일 정도 배양하여 1×107~1×1011 cfu/㎖, 더욱 바람직하게는 1×108~1×1010 cfu/㎖농도의 항진균력을 지닌 바실러스 서브틸리스 HSB904(KCTC 13706) 균주 배양액을 얻는다.
상기 증량제는 미생물에 대한 독성이 없고 농업용 토양처리제로 허용 가능한 것이라야 하며, 바람직하게는 분무기의 노즐 막힘이 없고, 제품의 수분함량을 조절하는 효과가 있어야 한다. 증량제로는, 제올라이트; 벤토나이트; 탈크; 디아토마이 트; 카올린; 화이트카본; 및 다공성실리카로 등이 사용될 수 있으며, 바람직하게는 다공성실리카, 벤토나이트, 제올라이트, 탈크 등을 사용한다. 증량제의 선택 및 함량 조절을 통해 수분함량과 분말도 등을 조절할 수 있다.
상기 미생물 영양원은 미생물의 영양원으로 기능할 수 있는 것이면 모두 사용 가능하며, 바람직하게는 염화암모늄, 황산암모늄, 질산암모늄, 효모추출액, 수크로스, 당밀, 글루코오스, 현미유, 미강, 전분, 덱스트린, 갈락토스 등을 사용할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 더욱 바람직하게는 질소원으로 황산암모늄, 질산암모늄 등을 사용하며, 탄소원으로 포도당, 전분 등을 사용한다.
상기 계면활성제는 미생물에 대한 독성이 없는 음이온계 또는 비이온계 계면활성제 중에서 선택하여 사용한다. 수화제는 적절한 친수성과 소수성을 동시에 가져야 하므로, 공지의 계면활성제 중 습윤성과 분산력이 우수한 것을 사용하는 것이 바람직하다. 폴리카복실레이트; 소듐 리그노설포네이트; 칼슘 리그노설포네이트; 소듐 다이알킬설포석시네이트; 소듐 알킬 아릴 설포네이트; 폴리옥시에틸렌 알킬 페닐 에테르; 소듐 트리폴리포스페이트; 폴리옥시에틸렌 알킬 아릴 포스포릭 에스테르; 폴리옥시에틸렌 알킬 아릴 에테르; 폴리옥시에틸렌 알킬 아릴 폴리머; 폴리옥시알킬온알킬 페닐 에테르; 폴리옥시에틸렌 노닐 페닐 에테르; 소듐 설포네이트 나프탈렌 포름알데히드; 트리톤 100 및 트윈 80 등을 사용할 수 있다.
또한, 본 발명의 미생물 수화제는, 필요에 따라 공지의 보조제를 더 포함할 수 있다. 보조제는 특히 안정제, 방부제, 증점제, 소포제 등을 포함한다. 본 발명의 미생물 수화제는, 바람직하게는 함유된 미생물의 생존기간을 늘리기 위해 안정 제를 포함한다.
본 발명의 수화제 제형에서 상기 미생물 배양액 함량이 상기 범위 이상으로 많이 포함될 경우 공기 중 부유하는 곰팡이에 의해 오염이 발생되고, 포함된 미생물의 생존력이 현저하게 저하되는 현상이 발생하였다. 또한, 미생물 배양액 1 중량부에 대해, 증량제 함량이 1 중량부 미만이거나 미생물 영양원 함량이 40 중량부 이상일 경우 최종 수화제 제형이 뭉치는 현상이 발생하였다.
본 발명에서 분리한 미생물은 아포를 형성할 수 있어 생존력이 좋고 항진균력 및 유기물 분해능이 우수하여 이를 포함하는 토양처리제를 사용할 경우 식물병원성 곰팡이균을 억제하여 관련 식물병을 방제할 수 있고, 유기물 분해로 인한 영양공급으로 작물의 생육 촉진 효과가 있어 농업 생산성 증대에 기여할 수 있다. 아울러 본 발명에서는 토양처리 미생물제를 수화제의 형태로 제형화함으로써 유효미생물의 생존을 증대시킬 수 있고, 사용상의 편리성 또한 향상시켰다.
이하 구체적인 실시예 및 바람직한 실시예를 통해 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 그러나 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
길항미생물 선발
항진균활성과 유기물분해능을 갖는 균을 분리하기 위해 경북의 상주?성주?의성?청도, 경남의 합천, 충북의 옥천?영동?음성?오창?청주, 충남의 목천?병천?연산?논산?조치원 및 전북의 정읍?무주 등 총 17지역을 대상으로 총 528개의 시료를 채집하였다. 상기 채집한 시료를 60℃에서 2시간 건조 후 멸균수로 희석한 다음 방선균 분리용 배지(DifcoTM Actinomycete Isolation Agar) 및 세균 분리용 배지 (Nutrient agar)에 도말하여 28℃의 배양기에서 배양하였다.
상기 토양 시료를 희석평판하여 28℃의 배양기에 4일 배양된 방선균 분리용 배지(DifcoTM Actinomycete Isolation Agar) 및 세균 분리용 배지(Nutrient agar)에 시들음병균(Fusarium oxysporum)의 포자 스프레이액을 고르게 분사하여 25℃에서 3일 배양한 후 투명대 형성 유무로 1차 선발하였다.
1차 선발된 미생물 균주들은 PDA(potato dextrose agar) 배지상에서 대표적인 식물병원성 곰팡이인 잿빛곰팡이병균(Botrytis cinerea[BC]), 역병균(Phytophthora capsici[PCap], P. cactorum[PCac]), 탄저병균(Colletotrichum gloeosporioides[CG]), 균핵병균(Rhizoctonia solani[RS], Scleotinia sclerotiorum[SS]), 시들음병균(Fusarium oxysporum[FO], F. solani[FS]) 및 인삼근부병균(Cylindrocarpon destructans[CD]) 및 각종 작물의 모잘록병균(Pythium ultimum[PU])을 대상으로 2차 항진균활성을 실험하였다. 실험결과, 가장 우수한 항진균활성을 나타낸 HSB904 균주를 선발하였다.
항진균활성 비교실험
선발된 HSB904 균주는 하기 표 1에 나타낸 바와 같이 10 종의 병원성 곰팡이에 높은 길항력을 갖고 있는 것으로 나타났다.
Figure 112009080495717-pat00001
종래 인삼 재배 농가에서 널리 사용되고 있는 T사의 미생물 수화제로부터 길항미생물을 분리하여, 선발된 HSB904 균주와 항진균활성을 비교실험한 결과 도 1에 나타낸 바와 같이, HSB904 균주가 종래 길항미생물보다 우수한 길항능력을 갖고 있는 것으로 나타났다.
또한, 식물병원성 곰팡이의 저해부위를 현미경하에서 관찰한 결과, 균사의 분지가 많아지고 거리도 짧아지는 현상과 선단부가 팽윤되어 마침내는 세포내용물이 유출된 모습이 관찰되었다(도 2).
유기물 분해능 실험
선발된 HSB904 균주를 전분, 단백질, 지질 성분을 첨가한 방선균 배지(Bennett's agar) 및 세균 배지(Nutrient agar)에 획선으로 접종하고 28℃에서 배양하여 균체로부터 형성된 투명대의 넓이로 분해정도를 판별하였다. 선발된 균주에는 전분 및 지질 성분 분해능도 있었지만, 그중에서도 단백질 분해능이 가장 우수한 것으로 나타났다(도 3).
길항미생물 동정
선발된 균주를 다음과 같은 방법으로 동정하였다.
① API 키트를 이용한 동정
총 49가지의 탄수화물의 발효여부를 이용한 검정 키트로서, 바실러스속을 종(species) 수준으로 동정할 수 있는 Biomerieux사의 API 50CHB를 사용하였으며, 사용방법은 다음과 같다. 무균상에서 Suspension medium에 균총을 접종하여 McFarland Standard-2 용액의 탁도와 일치되도록 조정하여 API 50CHB kit의 스트립의 튜브에 분주하고 배양기에서 12~24hr. 배양 후 색의 변화로 양성 및 음성을 판독하였다. 그 결과 바실러스 서브틸리스와 96.6%의 상동성을 보였다(표 2).
Figure 112009080495717-pat00002
② 16S ribosomal DNA 염기서열
분리된 미생물의 최종 동정은 16S rDNA의 염기서열 분석을 통하여 수행하였으며, 그 방법은 다음과 같다.
본 실험 균주의 chromosomal DNA를 분리한 다음 16S rRNA sequencing에 사용하는 일반적인 프라이머인 27F (5'-AGA GTT TGA TYM TGG CTC AG-3')와 1492R(5'-ACC TTG TTA CGA CTT-3') 프라이머를 사용하여 95℃에서 15min. predenaturation, 95℃에서 20sec. denaturation, 50℃에서 40sec. annealing, 72℃에서 60sec. extention, 72℃에서 5min. final extention을 30cycle polymerization하여 PCR을 수행하였다. 증폭된 PCR 결과물을 1% agarose gel에서 전기영동하여 확인한 후, 약 1,200bp의 16S ribosomal DNA를 분리 정제하여 ABI PRISM 9700 DNA Analyzer를 이용하여 염기서열을 분석하였다. 이때 BLASTN 프로그램을 이용하여 GENEBANK와 RDP (RNA database project)의 ribosomal RNA sequencing과 비교하여 동정하였다. 그 결과 HSB904 균주는 Bacillus subtilis와 99%의 상동성을 보였다(도 4). 이에 따라 선발 균주를 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) HSB904로 명명하고, 한국생명공학연구원의 생물자원센터에 2009년 10월 23일자로 기탁하여, 기탁번호 KCTC 13706을 부여받았다.
미생물수화제의 제조
증량제, 영양원, 계면활성제 및 기타 보조제의 구성을 달리하면서 선발 균주 바실러스 서브틸리스 HSB904(KCTC13706)를 포함하는 미생물 수화제 제형을 제조하였다. 미생물 배양액은 바실러스 서브틸리스 HSB904(KCTC 13706)를 당밀 배지, 호기조건하에 배양기(Jar Fermentor)에서 5일간 배양하여 항진균력을 지닌 균주 배양액을 얻었다. 수화제의 구성은 하기 표 3과 같이 하였다.
Figure 112009080495717-pat00003
본 발명에서 분리된 길항미생물 및 이를 이용한 토양처리용 미생물 수화제는 작물에 병해를 일으키는 다양한 식물병원성 곰팡이에 대해 길항력을 나타내므로 작물의 병해를 방제하는 효과를 얻을 수 있으며, 또한, 유기물 분해능이 있어 작물 생육에 필요한 토양의 기능을 복원시켜 작물생육을 촉진함으로써 화학비료 및 화학농약의 사용량 절감, 농업 생산성 증대에도 기여할 수 있다.
도 1은 본 발명의 HSB904 균주와 T사 균주의 항진균성을 비교실험한 결과이다.
도 2는 본 발명의 HSB904 균주에 의해 저해받은 시들음병균과 역병균의 균사 선단부 현미경 사진이다.
도 3은 본 발명의 HSB904 균주의 유기물 분해능 시험결과이다.
도 4는 본 발명의 HSB904 균주의 16S rDNA의 염기서열 분석결과이다.
<110> HYOSUNG ONB CO., LTD <120> Bacillus subtilis HSB904 having antifungal activities and a formulation containing the same <160> 1 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 1232 <212> DNA <213> Bacillus subtilis HSB904 <400> 1 nncnnnnngc nagctataca tgcagtcgag cggacagatg ggagcttgct ccctgatgtt 60 agcggcggac gggtgagtaa cacgtgggta acctgcctgt aagactggga taactccggg 120 aaaccggggc taataccgga tggttgtttg aaccgcatgg ttcagacata aaaggtggct 180 tcggctacca cttacagatg gacccgcggc gcattagcta gttggtgagg taacggctca 240 ccaaggcgac gatgcgtagc cgacctgaga gggtgatcgg ccacactggg actgagacac 300 ggcccagact cctacgggag gcagcagtag ggaatcttcc gcaatggacg aaagtctgac 360 ggagcaacgc cgcgtgagtg atgaaggttt tcggatcgta aagctctgtt gttagggaag 420 aacaagtgcc gttcaaatag ggcggcacct tgacggtacc taaccagaaa gccacggcta 480 actacgtgcc agcagccgcg gtaatacgta ggtggcaagc gttgtccgga attattgggc 540 gtaaagggct cgcaggcggt ttcttaagtc tgatgtgaaa gcccccggct caaccgggga 600 gggtcattgg aaactgggga acttgagtgc agaagaggag agtggaattc cacgtgtagc 660 ggtgaaatgc gtagagatgt ggaggaacac cagtggcgaa ggcgactctc tggtctgtaa 720 ctgacgctga ggagcgaaag cgtggggagc gaacaggatt agataccctg gtagtccacg 780 ccgtaaacga tgagtgctaa gtgttagggg gtttccgccc cttagtgctg cagctaacgc 840 attaagcact ccgcctgggg agtacggtcg caagactgaa actcaaagga attgacgggg 900 gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagca acgcgaagaa ccttaccagg 960 tcttgacatc ctctgacaat cctagagata ggacgtcctc ttcgggggca gagtgacagg 1020 tggngcatgg tngtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gcaacgagcg 1080 caacccnnga tcttannnnn gcatcanngg nncctctaag gtgactnngn gacaanngag 1140 nnnnngggnt gacgtcaatc atcatgccct tatgactgnn nannnnnnnn acanggnnga 1200 annaagnnnc naacnnncga nggttaannn nn 1232

Claims (4)

  1. (a) 호기조건하에 배양하여 얻은 1×108~1×1011 cfu/㎖ 농도의 바실러스 서브틸리스 HSB904(Bacillus subtilis HSB904, KCTC 13706) 균주 배양액 1 중량부,
    (b) 제올라이트; 벤토나이트; 탈크; 디아토마이트; 카올린; 및 다공성실리카로 구성된 군으로부터 1종 이상 선택되는 증량제 1~70 중량부,
    (c) 염화암모늄; 황산암모늄; 질산암모늄; 효모추출액; 수크로스; 당밀; 글루코오스; 현미유; 미강; 전분; 덱스트린; 갈락토스로 구성된 군으로부터 1종 이상 선택되는 미생물 영양원 0.5~40 중량부, 및
    (d) 폴리카복실레이트; 소듐 리그노설포네이트; 칼슘 리그노설포네이트; 소듐 다이알킬설포석시네이트; 소듐 알킬 아릴 설포네이트; 폴리옥시에틸렌 알킬 페닐 에테르; 소듐 트리폴리포스페이트; 폴리옥시에틸렌 알킬 아릴 포스포릭 에스테르; 폴리옥시에틸렌 알킬 아릴 에테르; 폴리옥시에틸렌 알킬 아릴 폴리머; 폴리옥시알킬온알킬 페닐 에테르; 폴리옥시에틸렌 노닐 페닐 에테르; 소듐 설포네이트 나프탈렌 포름알데히드; 트리톤 100; 및 트윈 80으로 구성된 군으로부터 1종 이상 선택되는 계면활성제 0.2~20 중량부를 포함하며,
    인삼근부병균(Cylindrocarpon destructans)에 대해 항진균성을 나타내는 것을 특징으로 하는 토양처리용 항진균성 미생물 수화제.
  2. 제1항에 있어서, 상기 미생물 영양원은 질소원으로 황산암모늄 또는 질산암모늄을 포함하며, 탄소원으로 포도당 또는 전분을 포함하는 토양처리용 항진균성 미생물 수화제.
  3. 바실러스 서브틸리스 HSB904(Bacillus subtilis HSB904, KCTC 13706) 균주를 유효성분으로 포함하며, 인삼근부병균(Cylindrocarpon destructans)에 대해 항진균성을 나타내는 것을 특징으로 하는 토양처리용 항진균성 미생물제.
  4. 인삼근부병균(Cylindrocarpon destructans)을 포함하는 식물병원성 토양 곰팡이에 대해 항진균성을 나타내며, 유기질 분해능을 지닌 바실러스 서브틸리스 HSB904(Bacillus subtilis HSB904, KCTC 13706) 균주.
KR1020090131484A 2009-12-28 2009-12-28 항진균성 바실러스 서브틸리스 균주 및 이를 포함하는 미생물 수화제 KR101181756B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020090131484A KR101181756B1 (ko) 2009-12-28 2009-12-28 항진균성 바실러스 서브틸리스 균주 및 이를 포함하는 미생물 수화제

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020090131484A KR101181756B1 (ko) 2009-12-28 2009-12-28 항진균성 바실러스 서브틸리스 균주 및 이를 포함하는 미생물 수화제

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20110075132A KR20110075132A (ko) 2011-07-06
KR101181756B1 true KR101181756B1 (ko) 2012-09-11

Family

ID=44915178

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020090131484A KR101181756B1 (ko) 2009-12-28 2009-12-28 항진균성 바실러스 서브틸리스 균주 및 이를 포함하는 미생물 수화제

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101181756B1 (ko)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20160149416A (ko) 2015-06-18 2016-12-28 전남대학교산학협력단 식물병 곰팡이 방제를 위한 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 bc32-1의 활성물질과 이의 정제 및 생산방법
KR20190068110A (ko) 2017-12-08 2019-06-18 광주여자대학교 산학협력단 바실러스 배양액에서 추출한 항균활성을 가진 화장료 조성물

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20140141857A (ko) * 2013-05-31 2014-12-11 한국생명공학연구원 패실로마이세스 속 균주를 이용한 생물 농약 제조방법
US10327448B2 (en) 2014-08-16 2019-06-25 DCM Shriram Ltd. Bacterium of Bacillus genus and uses thereof
CN110106115B (zh) * 2019-05-13 2020-11-06 中国农业科学院烟草研究所 一种枯草芽孢杆菌增效剂及其在制备枯草芽孢杆菌菌剂中的应用
KR102423465B1 (ko) * 2020-09-04 2022-07-20 (주)디케이에코팜 신규한 바실러스속 균주를 포함하는 인삼의 병원균 방제용 미생물 제제

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20160149416A (ko) 2015-06-18 2016-12-28 전남대학교산학협력단 식물병 곰팡이 방제를 위한 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 bc32-1의 활성물질과 이의 정제 및 생산방법
KR20190068110A (ko) 2017-12-08 2019-06-18 광주여자대학교 산학협력단 바실러스 배양액에서 추출한 항균활성을 가진 화장료 조성물

Also Published As

Publication number Publication date
KR20110075132A (ko) 2011-07-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10588320B2 (en) Cell free supernatant composition of microbial culture for agricultural use
US8202514B2 (en) Bacillus subtilis strain having antagonistic activity for controlling plant diseases
KR101089149B1 (ko) 바실러스 벨레젠시스 ｓ3-5 균주 및 이를 이용한 식물병 방제방법
KR101569737B1 (ko) 벼 근권에서 분리된 신규 식물 내생세균 바실러스 오리지콜라 및 이를 이용한 천연식물 보호 및 식물 강화제 개발
CN114806925B (zh) 一株贝莱斯芽孢杆菌及其应用
KR101329231B1 (ko) 식물병원성 진균에 대해 항진균 활성을 갖는 바실러스 아밀로리퀘페이션스 ｋｂ－ｍｊｋ 601 균주 및 이를 이용한 식물병원성 진균 방제용 미생물 제제
KR101181756B1 (ko) 항진균성 바실러스 서브틸리스 균주 및 이를 포함하는 미생물 수화제
KR101260170B1 (ko) 항균활성을 갖는 신균주 슈도모나스 ｃｐ236 및 이를 포함하는 식물병 방제용 조성물
US20170303544A1 (en) Paenibacillus polymyxa schc 33 bacterial strain, and use thereof to combat phytopathogenic fungi in fruits, vegetables or plants
KR101910275B1 (ko) 신규한 스트렙토마이세스 그리세우스 knu-05 균주 및 이의 이용
WO2010004713A1 (ja) 新規微生物及びこの微生物を用いた植物病害防除剤
CN112795496B (zh) 一株多粘类芽孢杆菌及其在防治白菜茎基腐病中的应用
CN110295129B (zh) 一种用于防治黄瓜灰霉病和白粉病的生防菌及应用
WO2005079580A1 (ja) 植物病害防除剤組成物及び微生物
CN111647518A (zh) 一种贝莱斯芽孢杆菌微生物菌剂及制备方法
CN107142226B (zh) 一种枯草芽胞杆菌atr2及制备方法和应用
CN107338202A (zh) 具有广谱抑制病原菌功能的解淀粉芽孢杆菌及其应用
KR100825652B1 (ko) 신규 바실러스 서브틸리스 ｄｂｂ 1501 균주 및 이를이용한 식물병의 방제방법
Vehapi et al. Production of Bacillus subtilis soil isolate as biocontrol agent under bioreactor conditions
KR101535893B1 (ko) 신규미생물 바실러스 아밀로리퀴펜션스 cc110와 이를 함유하는 미생물제제 및 미생물농약
KR101487879B1 (ko) 팜 오일나무의 경령썩음병을 유발하는 가노데르마 보니넨스에 대한 길항효과를 가지는 바실러스 아밀로리쿼파시엔스 균주
KR101429227B1 (ko) 항균 활성을 갖는 바실러스 사펜시스 hc42 균주
JP2007153873A (ja) 土壌病害防除剤
KR101952421B1 (ko) 신규한 셀라티아 에스피 im2 균주, 및 이를 함유하는 식물병 방제용 조성물
Narayan et al. Isolation, morphological and cultural characterization of Azospirillum isolated from rhizospheric soils of various non-leguminous crops of Ranchi having acidic pH

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20150827

Year of fee payment: 6

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20180905

Year of fee payment: 7