KR20190068110A - 바실러스 배양액에서 추출한 항균활성을 가진 화장료 조성물 - Google Patents

바실러스 배양액에서 추출한 항균활성을 가진 화장료 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR20190068110A
KR20190068110A KR1020170168177A KR20170168177A KR20190068110A KR 20190068110 A KR20190068110 A KR 20190068110A KR 1020170168177 A KR1020170168177 A KR 1020170168177A KR 20170168177 A KR20170168177 A KR 20170168177A KR 20190068110 A KR20190068110 A KR 20190068110A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
bacillus amyloliquefaciens
extract
bacillus
group
antimicrobial
Prior art date
Application number
KR1020170168177A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102019178B1 (ko
Inventor
민혜정
윤효숙
Original Assignee
광주여자대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 광주여자대학교 산학협력단 filed Critical 광주여자대학교 산학협력단
Priority to KR1020170168177A priority Critical patent/KR102019178B1/ko
Publication of KR20190068110A publication Critical patent/KR20190068110A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102019178B1 publication Critical patent/KR102019178B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
    • A61Q17/005—Antimicrobial preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q9/00—Preparations for removing hair or for aiding hair removal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/52—Stabilizers
    • A61K2800/524—Preservatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/84—Products or compounds obtained by lyophilisation, freeze-drying

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

본 발명은 바실러스 아밀로리퀴페이션스(Bacillus sp.) 추출물을 포함하는 화장료, 방부제 및 이의 제조방법에 관한 것으로 바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물에 의한 특이적인 항균 효과를 이용한 화장료를 제공할 수 있고, 화장품을 포함한 식품, 의약품, 공업용, 향료품 등의 첨가물로 사용할 수 있는 방부제를 제공할 수 있다.

Description

바실러스 배양액에서 추출한 항균활성을 가진 화장료 조성물{Cosmetic composition comprising antibacterial extract from Bacillus sp. culture broth}
본 발명은 바실러스(Bacillus sp.) 균주의 배양액으로부터 추출한 유효성분으로 하는 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
화장품 소재의 개발은 주로 합성 화합물이나 자연에 존재하는 천연물의 추출물을 이용하여 이루어져 왔다. 최근에는 합성 화합물 및 천연 추출물 외에 효소나 미생물을 이용한 바이오 화장품 소재에 대한 개발이 활발하며, 생물이 자연적으로 만들어내는 성분을 바이오 기술을 이용해 생산하고 이를 화장품의 유효성분으로 활용하고 있다.
바이오 화장품 소재 중 미생물을 이용한 화장품은 주로 미생물이 생산하는 성분을 활용하여 피부의 손상을 방지하는 화장품으로서, 항진균 활성 물질을 유효성분으로 하는 제품이 다수이다. 예를 들어, 대한민국 등록특허 제1181756호에서 항진균 활성 및 유기물 분해능을 가지는 바실러스균 (Bacillus sp.) 및 이들을 이용하는 항진균성 미생물 수화제에 대하여 개시하고 있고, 대한민국 등록특허 제0132218호에서는 신규 바실러스속 (Bacillus sp.) 및 이들로부터 생산한 신규 항진균성 항생물질을 개시하고 있는데, 이들 특허에서 개시하고 있는 미생물이 생산한 물질을 화장료의 주요 성분으로 활용할 수 있다.
그러나, 미생물 자체도 종, 주(strain) 등 분류에 따라 종류가 매우 다양하고, 미생물마다 항균 대상이 될 수 있는 미생물의 종류 역시 매우 다양하거나 특정 세균에만 항균 기능을 보일 수도 있다. 또한, 미생물로부터 추출한 추출물은 농도(함량)에 따라 세균의 번식을 차단하고 억제하는 항균 기능이 달라질 수 있고, 미생물마다 항균 활성을 보이는 세균의 종류가 특이적일 수 있다.
이와 같이 미생물 마다 가지는 특성, 항균 활성을 보이는 대상 세균 등이 매우 다양하고 선택적일 수 있기 때문에 미생물을 이용한 화장품 개발에는 많은 시간과 노력이 필요한 실정이다.
한국등록특허 제0132218호 한국등록특허 제1181756호
본 발명은 미생물 중 바실러스 균의 배양액 중 항균활성을 가지는 추출물을 유효성분으로 포함한 화장품 항균 조성물 및 이의 생산방법을 제공하고자 한다.
본 발명은 바실러스 아밀로리퀴페이션스(Bacillus amyloliquefaciens) 추출물을 유효성분으로 하는 항균용 화장료 조성물 및 이의 제조방법을 제공한다.
본 발명은 바실러스 아밀로리퀴페이션스(Bacillus amyloliquefaciens) 추출물을 유효성분으로 하는 방부제 및 이의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 바실러스 아밀로리퀴페이션스의 추출물은 특정 미생물에 대한 항균 활성을 가지고 있어 항균 효과가 우수한 화장료 및 방부제에 유효성분으로 사용할 수 있고, 바실러스 아밀로뤼퀴페이션의 추출물의 농도 조절을 통해 특정 미생물에 대한 항균, 방부, 피부 미용 효과 등을 현저히 향상시킬 수 있다.
도 1은 바실러스 아밀로리퀴페이션스 배양액 추출물을 수득하고, 항균 효과를 확인하는 과정의 일 예를 보여준다.
도 2은 바실러스 아밀로리퀴페이션스 배양액 추출물의 역상 크로마토그래피 분셕결과((A)) 및 전기분무 질량분석 결과((B))를 보여준다.
도 3은 바실러스 아밀로리퀴페이션스 배양액 추출물의 항균 활성을 보여준다(BA 추출물은 바실러스 아밀로리퀴페이션스( B acillus A myloliquefaciens) 배양액 추출물을 의미한다.)
도 4은 화장품 스킨 제형(화장수) 하에서 대장균(Escherichia coli , E. coli)에 대한 바실러스 아밀로리퀴페이션스 배양액 추출물의 항균 효과 결과이다.
도 5은 화장품 스킨 제형(화장수) 하에서 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus , S. aureus)에 대한 바실러스 아밀로리퀴페이션스 배양액 추출물의 항균 효과 결과이다.
도 6은 화장품 스킨 제형(화장수) 하에서 대장균(Escherichia coli , E. coli) 및 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus , S. aureus)에 대한 바실러스 아밀로리퀴페이션스 배양액 추출물의 항균 효과 결과이다.
이하 본 발명에 대하여 구체적으로 상세히 설명하고자 한다. 본 명세서에서 사용되는 용어는 따로 정의하지 않는 경우 해당 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 일반적으로 이해하는 내용으로 해석되어야 할 것이다. 본 명세서의 도면 및 실시예는 통상의 기술자가 본 발명을 쉽게 이해하고 실시하기 위한 것으로 도면 및 실시예에서 발명의 요지를 흐릴 수 있는 내용은 생략될 수 있으며, 본 발명이 도면 및 실시예로 한정되는 것은 아니다.
본 발명은 바실러스 아밀로리퀴페이션스(Bacillus amyloliquefaciens) 추출물을 유효성분으로 하는 화장료 조성물, 방부제 및 이의 제조방법에 관한 발명이다.
본 발명에서 화장료 조성물은 항균용 화장료 조성물이 바람직하나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 방부제는 식품, 화장품, 의약품, 공업용, 향료품 등의 첨가물로 다양하게 이용될 수 있으며 특정 제품의 방부제로서 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 바실러스 아밀로리퀴페이션스는 바실러스 속(genus)에 속하는 종(species)로서 바실러스 아밀로뤼퀴페이션스 종에 속하는 주(strain)을 포함할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 따르면, 바실러스 아밀로리퀴페이션스는 황토에서 유래된 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 (Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum) BC32-1(KCTC 12729BP)이다.
본 발명에서 바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물은 바실러스 아밀로리퀴페이션스의 배양액, 배양액의 상등액, 상등액 여과액, 배양액의 동결건조 분말, 배양액의 상등액 동결건조 분말 또는 상등액을 여과한 여과액의 동결건조 분말 또는 여과액의 동결건조 분말을 용해한 용액일 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 따르면, 바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물은 바실러스 아밀로리퀴페이션스를 배양하고 배양액을 원심분리하여 균체등을 제거한 상등액(supernatant)를 여과하여 여과액을 얻고 여과액에서 불순물을 제거한 후 동결건조한 분말을 용해한 용액이 바람직할 수 있다.
본 발명에서 바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물은 특정 미생물에 대한 항균 활성을 가질 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 따르면, 바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물의 항균 활성은 진균류인 칸디다 속(genus) 및 진균류 외에 다른 특정 세균에 대하여 나타날 수 있다. 구체적으로, 바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물이 항균 활성을 가지는 대상 미생물로는 대장균(E. coli), 살모넬라 티피뮤리움(S. typhimurium), 슈도모나스 아에루기노사(P. aeruginosa), 스타필로코커스 아우레우스(S. aureus), 바실러스 서브틸리스(B. subilis), 스타필로코커스 에피데르미데스(S. epidermidis) 및 칸디다 글라브라타(C. glabrata)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 미생물일 수 있다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따르면, 바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물에 의한 항균 효과는 스타필로코커스 아우레우스(S. aureus)에 대하여 현저하게 나타날 수 있다. 이러한 효과는 바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물이 가지는 특이한 효과로 볼 수 있다.
바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물이 가지는 항균 효과는 추출물이 특정 농도 이상일 때 더 우수할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 따르면, 바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물로 여과액의 동결 건조 분말을 용매에 용해시킨 것을 사용할 수 있고, 바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물의 농도는 750㎛/㎖ 이상인 것이 바람직할 수 있다. 본 발명의 또 다른 일 실시예에 따르면, 바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물의 농도가 750㎛/㎖ 이상일 때 항균 활성이 매우 우수할 수 있다.
본 발명에서 아밀로리퀴페이션스 배양액 추출물 여과액의 동결 건조 분말을 용매에 용해시킨 것일 때 용매는 펩톤 용액, 에탄올, 메탄올,아세토나이트릴 및 물로 이루어진 군에서 선택되는 것일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 일 실시예에 따르면 펩톤 용액 및 에탄올이 보다 바람직할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 바실러스 아밀로뤼퀴페이션스가 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 BC32-1일 때 항균 활성이 특이 우수할 수 있다. 바실러스 아밀로뤼퀴페이션스가 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 BC32-1이 생산하는 항균성 물질은 다양한 형태의 지질펩티드 (lipopeptide)에 해당하는 것으로서 구체적으로 환상형 지질펩티드인(cyclic lipopeptide) 이투린형 (iturin-type), 펜기신형 (fengycin-type) 및 수펙틴형 (surfactin-type)에서 선택되는 1종 이상의 지질펩티드이다. 이투린형은 이투린 A, C, L, N, O 등 아미노산에 따라 구분되는 이투린 펩티드와 인투린에 서로 다른 길이의 지방산 사슬을 가진 인투린을 포함하는 것을 의미하고, 펜기신형은 아미노산에 따라 구분되는 펜기신 펩티드와 펜기신에 서로 다른 길이의 지방산 사슬을 가진 펜기신을 포함하는 것을 의미하며, 수펙틴은 아미노산에 따라 구분되는 수펙틴 펩티드와 펜기신에 서로 다른 길이의 지방산 사슬을 가진 수펙틴을 포함하는 것을 의미한다. 항균성 물질은 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 BC32-1로부터 RP-HPLC 및 LC/MS를 통해 분획 및 정제할 수 있으며, 분자량 14 내지 28 Da에 포함되는 다양한 동종 분자가 서로 다른 길이의 지방산 사슬을 가지고 있다. 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 BC32-1가 생산하는 항균성 물질 중에서 펜기신형의 지질펩티드가 뛰어난 항균성 활성을 가지고 이투린형의 지질펩티드인 이투린도 일반적으로 펜기신처럼 항균성 활성을 가진다. 반면에, 수펙틴형 지질펩티드는 항균성 활성보다는 생물적 계면활성 (biosurfactant)을 가진다. 상기 수펙틴형은 실질적으로는 항균 활성적 측면에서 다른 지질펩티드보다 효과가 덜 할 수 있으나, 항균성 활성을 가지는 다른 지질펩티드와 함께 작용하는 경우 더욱 상승된 항균성 효과를 나타낸다. 구체적으로, 상기 지질펩티드 중에서 펜기신형의 항균성 활성이 가장 뛰어나며, 펜기신형에서 이투린 또는 수펙틴이 함께 작용할 때 항균성 효과가 상승한다. 특히, 수펙틴이 이투린과 함께 작용할 때 항균성 효과가 더욱 상승한다. 또한, 수펙틴은 다른 세균 및 균류의 생체막 형성의 억제에 중요한 작용기 때문에 균주 생장 억제에 의한 항균성 활성의 상승효과를 기대할 수 있다.
본 발명에 따르면, 바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물에서 항균 활성을 가지는 리포펩타이드인 수펙틴, 이투린 및 펜기신만을 분리하여 사용할 때보다 바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물 자체를 사용하는 경우 항균 활성이 더 우수할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 따르면 수펙틴, 이투린 및 펜기신을 분리 및 정제하여 이들 리포펩타이드를 처리한 미생물에서 나타나는 항균 효과보다 바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물로 여과액의 동결 건조 분말을 용해시킨 용액의 항균 효과가 더 우수할 수 있다. 이러한 효과의 차이를 정확히 알 수 없으나, 바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물에 포함된 리포펩타이드와 리포펩타이드 외에 다른 바실러스 아밀로리퀴페이션스의 생산 물질에 의한 상승 효과로 예상된다.
본 발명의 바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물의 제조방법은 (a) 바실러스 아밀로리퀴페이션스(Bacillus amyloliquefaciens)를 배양하여 배양 상등액을 수득하는 단계, (b) (a) 배양 상등액의 여과액을 동결건조한 분말을 얻는 단계 및 (c) 여과액의 동결건조 분말을 용매에 용해시키는 단계를 포함할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 따르면 바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물에 의한 항균 효과를 보다 상승시키기 위해 (c) 단계에서 여과액의 동결건조 분말을 용매에 용해시 750㎛/㎖ 이상의 농도가 되도록 용해시키는 것이 바람직하다.
이하에서 본 발명에 대한 실시예를 통해 보다 구체적으로 설명하며, 본 발명이 하기 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
이하 실시예에서 사용한 장비의 조건은 다음과 같다.
- 크로마토그래피(Chromatography): Shimadzu 10AD HPLC(Japan), 컬럼(Column): Sunfire(4.6 x 250 ㎜, 5 ㎛, C18), 용제: 증류수(DW)(0.05% TFA) 및 ACN(0.05% TFA), 흡광도(Absorbance): 230 ㎚, 유동속도(Flow rate): 1 ml/min, 주입(Injection): 30 ㎕
- 질량분석법(Mass spectrometry): API2000(USA), 질량분석 탐지이온 모드(MS detection mode): 양이온(Positive ion), 질량분석 스캔 범위: MS(m/z 200 ~ 1800), 스프레이 전압: 5.5 kV, 소프트웨어: Analyst software, 이온화 소스(Ionization source): ESI
바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물의 제조 및 향균 물질의 확인
바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 BC32-1(KCTC 12729BP)을 한국생명공학연구원으로부터 분양받았다. 분양받은 BC32-1을 LB 한천 평판(Luria-Bertani agar plate)에 스티리킹(streaking)하여 37℃ 배양기에서 24시간 동안 전배양 후 콜로니(colony)를 접종하여 LB 배지(염화나트륨 1%, 트립톤 1%, 효모추출물 0.5%, 증류수 1L)에서 30 ℃, 150 rpm, 48시간 동안 본 배양하였다.
균체액을 4 ℃, 4000 rpm, 30분 동안 원심분리 후, 상등액(supernatant)을 여과지(Whatman 2, 8 ㎛)와 0.45 ㎛로 차례로 여과하여 상등액의 여과액을 얻었다.
상등액의 여과액을 Sep-Pak C18 카트리지(Waters, Ireland)를 이용하여 분리 정제하였다. Sep-Pak C18 카트리지에 증류수를 흘려 초기 조건을 잡고 여과액을 카트리지에 흘려준 후 0.05% Trifluoroacetic acid(TFA)를 포함한 10% 아세토나이트릴(ACN)로 레진에서 불순물을 제거하였다. 불순물 제거 후, 0.05% TFA를 포함한 95% ACN으로 용출 과정을 수행하였다. 상등액의 여과액 1L의 Sep-Pak C18 카트리지로부터 용출된 조성물을 모아 동결건조시켜 동결건조 분말 246 ㎎을 확보하였다.
동결건조 분말에 포함된 향균 물질의 분석을 위해 동결건조 분말 1 ㎎을 0.05% TFA를 포함한 95% ACN으로 용해시키고 15000 rpm, 5분 동안 원심분리하여 상등액을 0.22 ㎛ Spin-X centrifuge tube filter(Costar, USA)로 여과하였다.
여과액은 LC-MS를 사용하여 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 BC32-1이 갖는 항균활성 물질로 리포펩타이드인 이투린(Iturin), 펜기신(Fengycin), 수펙틴(Surfactin)의 유무를 분석하였다. 분석하는데 사용한 RP-HPLC(Shimadzu 10AD, Japan)에 Sunfire(4.6 x 250 ㎜, 5 ㎛, C18) 컬럼으로 0.05% TFA를 포함한 35% ACN에 0.05% TFA를 포함한 95% ACN까지 분당 1 mL씩 30분간 농도 구배를 주고 230㎚의 흡광를 통해 분리된 조성물이 ESI-MS(API2000, USA)로 흘러 들어감으로써 각 액체크로마트그래프에 해당하는 피크의 물질을 분석할 수 있었다.
분석한 결과 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 BC32-1이 갖는 항균활성 물질로 리포펩타이드인 이투린(Iturin), 펜기신(Fengycin), 수펙틴(Surfactin)의 물질이 모두 확인되었다(도 2).
바실러스 아밀로리퀴페이션스 배양액 추출물의 항균 효과 확인
실시예 1에서 수득한 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 BC32-1의 추출물의 항균 효과를 측정하기 위하여 Kirby-Bauer법에 의한 원판 확산법을 변형시켜 이용하였다.
Mueller Hinton agar(Difco, USA)에 대장균(E. coli), 살모넬라 티피뮤리움(S. typhimurium), 슈도모나스 아에루기노사(P. aeruginosa), 스타필로코커스 아우레우스(S. aureus), 바실러스 서브틸리스(B. subilis), 스타필로코커스 에피데르미데스(S. epidermidis), 진균류인 칸디다 글라브라타(C. glabrata)를 최종 106 CFU/mL을 함유한 한천 평판(Agar plate)를 준비했다.
칸디다 글라브라타(C. glabrata)는 GPY배지(글루코스 4%, 펩톤 0.5%, 효모추출물 0.05%)에 배양하였고, 칸디다 글라브라타(C. glabrata)를 제외한 균주는 LB배지에서 배양 하였다.
항균력을 측정하기 위한 바실러스 아밀로리퀴페이션스의 추출물로 실시예 1에 따라 준비한 동결건조 분말의 농도가 50000 ppm가 되도록 100% 메탄올에 용해시켜 준비하였다. 동결건조 분말을 메탄올에 용해시킨 용액을 멸균한 페이퍼 디스크(직경 6 ㎜)에 20 ㎕씩 로딩하여 건조시킨 후 각 균주를 포함한 한천 평판에 건조된 디스크를 올려 37 ℃와 25 ℃ 배양기에서 16시간 및 48시간 동안 배양하여 투명대(Clear zone)을 확인한 결과 균류 6 종과 진균류 1종 모두에 대하여 항균활성이 있는 것으로 확인되었다(도 3).
바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물의 농도변화에 따른 항균 효과 확인
실시예 2에서 사용한 균주와 동일한 7종을 각각 배양하고, 배양한 균주를 1% 펩톤에 4x106 CFU/mL로 희석하여 준비하였다.
바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물로서 실시예 1의 동결건조 분말을 1% 펩톤 용액에 50000ppm이 되도록 용해시킨 후, 96 웰 플레이트에 최종 농도가 각각 1250, 1000, 750, 500, 250, 125, 62.5, 31.3, 15.6ppm이 되도록 희석한 추출물을 준비하였다. 균주 7종을 100㎕씩 로딩 후 37℃ 및 25℃ 배양기에서 16시간 및 24시간 동안 배양하여 MIC(Minimal Inhibitory Concentration; 최저저해농도)값을 파악하였다. 각 균주 7종은 최종 2x106 CFU/mL로 실험을 진행하였고 실험은 각각 3반복 하였다.
[표 1], [표 2] 및 [표 3]은 각 균주 7종에 대한 MIC 평균값으로 항균효과에 대한 측정결과이다. 각 균주 7종 모두 우수한 MIC값을 나타내었고 특히 스타필로코커스 아우레우스(S. aureus)에서 31.3 ppm의 MIC값을 나타낸 결과로 스타필로코커스 아우레우스(S. aureus)에서 특이적으로 항균활성이 다른 균주 6종에 비해 현저히 우수한 것으로 평가되었다.
농도
(㎍/㎖)		 균주
E. coli S. typhimurium P. aeruginosa S. aureus B. subtilis S. epidermidis C. glabrata
KCTC 1682 KCTC 1926 KCTC 1637 KCTC 1621 KCTC 3068 KCTC 1917 KCTC 7219
1250 + + + + + + +
1000 + + + + + + +
750 + + + + + + +
500 - - - + - - -
250 - - - + - - -
125 - - - + - - -
62.5 - - - + - - -
31.3 - - - + - - -
15.6 - - - - - - -
화장품 제형에서 방부 효과의 확인
실시에 1의 바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물을 포함한 화장품 제형의 방부 활성 확인 실험을 수행하였다.
사용한 균주는 그람양성균으로 대장균(E. coli)과 그람음성균으로 스타필로코커스 아우레우스(S. aureus)를 사용하였고 각 균주는 LB 한천배지에서 전배양 후 콜로니(Colony)를 LB broth에 접종하여 37 ℃에서 계대배양을 2번 한 다음 LB 배지에 2x108 CFU/mL이 되도록 희석하였다.
대조군으로 화장수 시료에 각각 상기 균주 2종의 희석액을 최종 1x107 CFU/mL이 되도록 접종하였다.
실험군으로 대조군과 동일한 조건의 균주 2종에 대하여 실시에 1의 동결건조 분말을 100% 에탄올에 용해한 용액을 최종 2%[2㎎/mL]로 넣어 37 ℃ 배양기에서 24시간 동안 배양하였다.
각 균주 시료는 100㎕를 취해 PBS 용액에 희석하여 10배 및 100배씩 희석계열을 만들고 각 단계별 희석계열을 100㎕씩 LB 한천배지에 로딩하고 멸균된 스프레더로 도말하여 37 ℃ 배양기에서 16시간 동안 배양한 후에 계수하였다(도 4, 5, 6).
바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물을 넣지 않은 대조군인 대장균(E. coli)과 스타필로코커스 아우레우스(S. aureus)에서는 균이 자랐지만, 바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물이 첨가된 실험군에서는 희석계열에 상관없이 균주 2종 모두 사멸시켰기 때문에 방부력이 우수하다고 볼 수 있다.

Claims (11)

  1. 바실러스 아밀로리퀴페이션스(Bacillus amyloliquefaciens) 추출물을 유효성분으로 하는 항균용 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 바실러스 아밀로리퀴페이션스는 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼(Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum) BC32-1 (수탁번호: KCTC 12729BP)인 항균용 화장료 조성물.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 바실러스 아밀로리퀴페이션스는 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼(Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum) BC32-1에 의한 항균은 대장균(E. coli), 살모넬라 티피뮤리움(S. typhimurium), 슈도모나스 아에루기노사(P. aeruginosa), 스타필로코커스 아우레우스(S. aureus), 바실러스 서브틸리스(B. subilis), 스타필로코커스 에피데르미데스(S. epidermidis) 및 칸디다 글라브라타(C. glabrata)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 대상으로 하는 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물은 바실러스 아밀로리퀴페이션스 배양 상등액의 여과액을 동결건조한 분말을 용매에 750㎛/㎖ 이상의 농도의 용해시킨 것인 화장료 조성물.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 배양 상등액은 이투린, 펜기신 및 수펙틴을 포함하는 화장료 조성물.
  6. 제4항에 있어서,
    상기 용매는 펩톤 용액, 에탄올, 메탄올,아세토나이트릴 및 물로 이루어진 군에서 선택되는 것인 화장료 조성물.
  7. (a) 바실러스 아밀로리퀴페이션스(Bacillus amyloliquefaciens)를 배양하여 배양 상등액을 수득하는 단계;
    (b) 상기 (a) 배양 상등액의 여과액을 동결건조한 분말을 얻는 단계; 및
    (c) 상기 동결건조 분말을 용매에 용해시키는 단계;
    를 포함하는 제1항의 바실러스 아밀로리퀴페이션스 추출물의 제조방법.
  8. 제7항에 있어서, 상기 (c) 단계는 동결건조 분말을 용매에 750㎛/㎖ 이상의 농도의 용해시키는 것인 추출물의 제조방법.
  9. 바실러스 아밀로리퀴페이션스(Bacillus amyloliquefaciens) 추출물을 유효성분으로 하는 방부제.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 바실러스 아밀로리퀴페이션스는 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼(Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum) BC32-1 (수탁번호: KCTC 12729BP)인 방부제.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 바실러스 아밀로리퀴페이션스는 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼(Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum) BC32-1에 의한 방부는 대장균(E. coli), 살모넬라 티피뮤리움(S. typhimurium), 슈도모나스 아에루기노사(P. aeruginosa), 스타필로코커스 아우레우스(S. aureus), 바실러스 서브틸리스(B. subilis), 스타필로코커스 에피데르미데스(S. epidermidis) 및 칸디다 글라브라타(C. glabrata)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상에 대한 항균 활성에 의한 것인 하는 방부제.
KR1020170168177A 2017-12-08 2017-12-08 바실러스 배양액에서 추출한 항균활성을 가진 화장료 조성물 KR102019178B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020170168177A KR102019178B1 (ko) 2017-12-08 2017-12-08 바실러스 배양액에서 추출한 항균활성을 가진 화장료 조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020170168177A KR102019178B1 (ko) 2017-12-08 2017-12-08 바실러스 배양액에서 추출한 항균활성을 가진 화장료 조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20190068110A true KR20190068110A (ko) 2019-06-18
KR102019178B1 KR102019178B1 (ko) 2019-09-06

Family

ID=67103387

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020170168177A KR102019178B1 (ko) 2017-12-08 2017-12-08 바실러스 배양액에서 추출한 항균활성을 가진 화장료 조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR102019178B1 (ko)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110699408A (zh) * 2019-10-21 2020-01-17 天津大学 利用混菌发酵提高表面活性素产量的方法
KR20220147429A (ko) * 2021-04-27 2022-11-03 대한민국(환경부 국립생물자원관장) 구슬말 추출물의 생물전환산물 또는 이의 추출물을 포함하는 항균용 조성물

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022119895A1 (en) * 2020-12-01 2022-06-09 Dupont Us Holding, Llc Methods and compositions for microbial treatment of skin disorders

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR0132218Y1 (ko) 1995-12-11 1999-02-01 문정환 웨이퍼의 건조장치
US20090274673A1 (en) * 2008-05-01 2009-11-05 Haig Alexander Eskandarian Composition for topical treatment of acne
KR101181756B1 (ko) 2009-12-28 2012-09-11 효성오앤비 주식회사 항진균성 바실러스 서브틸리스 균주 및 이를 포함하는 미생물 수화제
KR20140010639A (ko) * 2012-07-16 2014-01-27 조선대학교산학협력단 바실러스 아밀로리쿼파시엔스 ｅｍｌ－ｃａｐ３으로부터 분리된 신규한 항균 및 항진균 펩타이드 및 이의 용도
KR101716136B1 (ko) * 2015-06-18 2017-03-27 전남대학교산학협력단 식물병 곰팡이 방제를 위한 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 bc32-1의 활성물질과 이의 정제 및 생산방법
KR20170041337A (ko) * 2015-10-06 2017-04-17 한국식품연구원 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 플란타럼 아종 균주를 유효성분으로 포함하는 Th1-매개 면역 질환 또는 Th2-매개 면역 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR0132218Y1 (ko) 1995-12-11 1999-02-01 문정환 웨이퍼의 건조장치
US20090274673A1 (en) * 2008-05-01 2009-11-05 Haig Alexander Eskandarian Composition for topical treatment of acne
KR101181756B1 (ko) 2009-12-28 2012-09-11 효성오앤비 주식회사 항진균성 바실러스 서브틸리스 균주 및 이를 포함하는 미생물 수화제
KR20140010639A (ko) * 2012-07-16 2014-01-27 조선대학교산학협력단 바실러스 아밀로리쿼파시엔스 ｅｍｌ－ｃａｐ３으로부터 분리된 신규한 항균 및 항진균 펩타이드 및 이의 용도
KR101716136B1 (ko) * 2015-06-18 2017-03-27 전남대학교산학협력단 식물병 곰팡이 방제를 위한 바실러스 아밀로리퀴페이션스 아종 플랜타럼 bc32-1의 활성물질과 이의 정제 및 생산방법
KR20170041337A (ko) * 2015-10-06 2017-04-17 한국식품연구원 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 플란타럼 아종 균주를 유효성분으로 포함하는 Th1-매개 면역 질환 또는 Th2-매개 면역 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Journal of Applied Microbiology, 115, pp.133~146(2013.04.30.) 1부.* *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110699408A (zh) * 2019-10-21 2020-01-17 天津大学 利用混菌发酵提高表面活性素产量的方法
KR20220147429A (ko) * 2021-04-27 2022-11-03 대한민국(환경부 국립생물자원관장) 구슬말 추출물의 생물전환산물 또는 이의 추출물을 포함하는 항균용 조성물

Also Published As

Publication number Publication date
KR102019178B1 (ko) 2019-09-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Ibrahim et al. Prodigiosin-an antibacterial red pigment produced by Serratia marcescens IBRL USM 84 associated with a marine sponge Xestospongia testudinaria
KR101058794B1 (ko) 궤양병에 대한 항생물질을 생산하는 신규한 슈도모나스 에루기노사 νο3 균주, 이의 돌연변이주 및 이들을 이용한 궤양병 치료용 항생물질의 생산방법
KR100583836B1 (ko) 천연 항균제 및 이를 포함하는 조성물
Naimah et al. Isolation, purification and characterization of antimicrobial peptides produced from Saccharomyces boulardii
Urdaci et al. Antimicrobial activity of Bacillus probiotics
KR100895908B1 (ko) 바실러스 폴리퍼멘티쿠스 케이제이에스-2 균주가 생산하는항균물질 마크로락틴 에이
KR101896927B1 (ko) 흰점박이꽃무지에서 유래한 항균 펩타이드 프로테티아마이신 1 및 그의 조성물
KR102019178B1 (ko) 바실러스 배양액에서 추출한 항균활성을 가진 화장료 조성물
US12064464B2 (en) Plantaricin NC8 alpha beta markedly enhances the effects of antibiotics
KR101889396B1 (ko) 흰점박이꽃무지에서 유래한 항균 펩타이드 프로테티아마이신 2 및 그의 조성물
Tang et al. Discovery of a novel antimicrobial peptide using membrane binding-based approach
Selvendran et al. Studies on novel bacteriocin like inhibitory substance (BLIS) from microalgal symbiotic Vibrio spp MMB2 and its activity against aquatic bacterial pathogens
KR20110120394A (ko) 국화 꽃으로부터 추출된 항균 조성물
Islam et al. Antibacterial activities of endophytic bacteria isolated from Taxus brevifolia against foodborne pathogenic bacteria
KR20220092787A (ko) 신규한 락토바실러스 파라카제이 균주 및 이의 용도
Suwandecha et al. Novel antimicrobial peptide specifically active against Porphyromonas gingivalis
KR102207512B1 (ko) 항균 활성을 갖는 락토바실러스 젠세니 swpm104
Gálvez et al. Purification, characterization, and lytic activity against Naegleria fowleri of two amoebicins produced by Bacillus licheniformis A12
KR101820070B1 (ko) 항생제 내성 황색포도상구균에 대한 길항균 스타필로코코스 에피더미디스 r0002
JP7197204B2 (ja) 新規のｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ａｂ１６００１１菌株及びこれを含む組成物
Abdalsadiq et al. Antimicrobial, antiadhesion and anti-biofilm activity of biosurfactants isolated from lactobacillus spp
KR20170081474A (ko) 홍삼 에탄올 추출물 또는 홍삼 에탄올 추출물의 컬럼 정제 분획물을 포함하는 바실러스속 균 억제용 조성물
KR101865782B1 (ko) 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 k14로부터 단리된 신규 항균 펩타이드 및 그의 용도
Aljohani et al. Escherichia coli Nissle 1917 inhibits biofilm formation and mitigates virulence in Pseudomonas aeruginosa
KR101970656B1 (ko) 신규한 스트렙토마이시스 리노마이시니 ds620 균주 및 이의 추출물을 포함하는 항균 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant