KR101993986B1 - 메뚜기목에 방제 효과를 가지는 신규한 패실로마이세스 리라시너스 jef076 및 퍼풀레오실리움 리라시넘 jef141 균주, 이를 포함하는 해충 방제용 조성물 및 이를 이용하여 메뚜기목을 방제하는 방법 - Google Patents

메뚜기목에 방제 효과를 가지는 신규한 패실로마이세스 리라시너스 jef076 및 퍼풀레오실리움 리라시넘 jef141 균주, 이를 포함하는 해충 방제용 조성물 및 이를 이용하여 메뚜기목을 방제하는 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 메뚜기목에 대해 방제효과를 나타내는 신규한 Paecilomyces lilacinus JEF076 및 Purpureocillium lilacinum JEF141 균주, 이를 포함하는 해충 방제용 조성물 및 상기 해충 방제용 조성물을 이용하여 메뚜기목을 방제하는 방법에 관한 발명이다.

Description

메뚜기목에 방제 효과를 가지는 신규한 패실로마이세스 리라시너스 JEF076 및 퍼풀레오실리움 리라시넘 JEF141 균주, 이를 포함하는 해충 방제용 조성물 및 이를 이용하여 메뚜기목을 방제하는 방법 {New Paecilomyces lilacinus JEF076 and Purpureocillium lilacinum JEF141 strains controlling Orthoptera order, formulated compositions for controlling the Orthoptera order and application methods to control the Orthoptera order}
본 발명은 메뚜기목에 대해 방제효과를 나타내는 신규한 패실로마이세스 리라시너스 JEF076 (Paecilomyces lilacinus JEF076 ; KFCC11722P) 및 퍼풀레오실리움 리라시넘 JEF141 (Purpureocillium lilacinum JEF141 ; KFCC11723P) 균주, 이를 포함하는 해충 방제용 조성물 및 상기 해충 방제용 조성물을 이용하여 메뚜기목을 방제하는 방법에 관한 발명이다.
국내의 경우 풀무치 방제를 위한 화학약제 및 생물학적 방제제가 거의 연구되어 있지 않다. 풀무치 방제를 위한 생물적 방제제로서 천적 (개구리, 사마귀, 백로 등)이 많이 알려져 있으나 천적의 경우, 경제성 및 사용 한계 등에 의해 그 사용이 적은 실정이다. 그러나 곤충병원성 미생물은 환경에 적응이 비교적 쉽고, 빠른 기간 내에 개체군을 관리 할 수 있기 때문에 풀무치 방제를 위한 적용 가능성이 가장 높은 것으로 평가되고 있다 (CABI UK, 2010).
반면, 국외의 경우 풀무치 방제에 적용 가능한 곤충병원성 진균으로 Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae, Lecanicillium lecanii, Isaria fumosorosea 등이 대표적인 종으로 알려져 있다 (BCPC, 2012). B. bassiana와 M. anisopliae는 나비목과 딱정벌레목을 포함한 다양한 해충군에 병원성을 가지고 있으며, B. bassiana를 이용한 제품군으로는 BotaniGard, Naturalis-L, Mycotal, Beauverin, Boverol 등이 산업화 되어 있다. M. anisopliae를 이용한 제품군으로는 Bio-Catch-M, Green Muscle, BioGreen 등이 있다. 특히 M. anisopliae var. acridum Green Muscle 제품은 유럽에서 대발생된 풀무치 방제를 위한 개발된 상업화된 곤충병원성 진균 제품으로 알려져 있으며 (Thomas et al., 2000), desert locust (Schistocerca gregaria)와 red locust (Nomadacris septemfasciata), 그리고 여러 종의 African grasshoppers에 우수한 병원성을 보유하고 있는 것으로 확인되었다 (Aston 2004;Kooyman et al. 2003). 최근에는 M. anisopliae var. acridum이 Australian locust (Chortoicetes terminifera)와 migratory locust (Locusta migratoria)에도 높은 살충활성을 갖는 것으로 보고되었다 (Hunter, 2005). 또한 곤충병원성 진균을 이용한 풀무치 방제에 대한 노력들이 아프리카 (Douthwaite et al. 2001; Lomer et al. 2001), 오스트레일리아 (Hunter 2005; Milner and Hunter 2001), 브라질 (Magalhaes et al. 2001), 멕시코 (Garcia-Gutie ierrez et al. 2002; Hernandez-Velazquez et al. 2000) 등지에서 시도되었다.
국내에서도 현재 화학농약을 대체하기 위한 방법인 생물적 방제에 대한 연구가 활발하게 진행되고 있으나, 대량 생산에 따른 경제성 확보 및 환경 조건에 따른 상충효과 변이가 심하여 실용적인 방제수단으로 적용하기 어렵다는 단점을 갖고 있다. 이에 따라서, 본 발명자들은 풀무치에 방제 효과를 가지는 Paecilomyces lilacinus JEF076 및 Purpureocillium lilacinum JEF141 균주를 선별하여 동정한 뒤, 대발생하여 작물을 섭식하여 피해를 풀무치에 처리한 결과, Paecilomyces lilacinus JEF076 또는 Purpureocillium lilacinum JEF141이 풀무치를 효과적으로 방제한다는 사실을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.
본 발명자들은 풀무치에 대한 살충방법에 대해 탐색하던 중, 풀무치를 효과적으로 살충하는 신규한 패실로마이세스 리라시너스 JEF076 (Paecilomyces lilacinus JEF076 ; KFCC11722P) 및 퍼풀레오실리움 리라시넘 JEF141 (Purpureocillium lilacinum JEF141 ; KFCC11723P)균주를 발견하였고, 패실로마이세스 리라시너스 JEF076 (Paecilomyces lilacinus JEF076) 및 퍼풀레오실리움 리라시넘 JEF141 (Purpureocillium lilacinum JEF141) 균주가 풀무치를 효과적으로 방제하는 것을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 풀무치에 방제효과를 가지는 신균주 패실로마이세스 리라시너스 JEF076 (Paecilomyces lilacinus JEF076) 및 퍼풀레오실리움 리라시넘 JEF141 (Purpureocillium lilacinum JEF141) 균주, 이를 포함하는 해충 방제용 조성물 및 상기 해충 방제용 조성물을 이용한 해충의 살충방법을 제공하고자 하는 것이다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위해, 메뚜기목(Orthoptera)에 방제효과를 가지는 신규한 패실로마이세스 리라시너스 JEF076 (Paecilomyces lilacinus JEF076 ; KFCC11722P) 및 퍼풀레오실리움 리라시넘 JEF141 (Purpureocillium lilacinum JEF141 ; KFCC11723P) 균주를 제공한다.
본 발명은 또 다른 일 실시예에서, 패실로마이세스 리라시너스 JEF076 (Paecilomyces lilacinus JEF076 ; KFCC11722P) 및 퍼풀레오실리움 리라시넘 JEF141 (Purpureocillium lilacinum JEF141 ; KFCC11723P) 균주로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 균주; 또는 이들의 배양액을 포함하는 메뚜기목 방제용 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서 상기 메뚜기목은 풀무치, 메뚜기, 여치, 꼽등이, 땅강아지, 귀뚜라미, 팥중이, 방아깨비, 콩중이 및 베짱이로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 메뚜기목은 약충 또는 성충인 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 방제는 예방, 제어, 기피 및 구제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 방제인 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 방제용 조성물은 수화제, 액제, 유제, 액상수화제, 입제, 분제, 과립제, 캡슐제, 미분제, 미탁제, 도포제, 및 연막제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 형태로 제형화될 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 균주의 함량은 1×105 conidia/ml 내지 1×109 conidia/ml으로 포함되는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명은 다른 일실시예에서, 하기의 단계를 포함하는 메뚜기목을 방제하는 방법을 제공할 수 있다.
(1) 메뚜기목에 방제 효과를 가지는 신규한패실로마이세스 리라시너스 JEF076 (Paecilomyces lilacinus JEF076 ; KFCC11722P) 및 퍼풀레오실리움 리라시넘 JEF141 (Purpureocillium lilacinum JEF141 ; KFCC11723P) 균주로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 균주를 고체배양 배지에서 배양하는 단계;
(2) 상기 배양물을 수확하는 단계; 및
(3) 상기 수확된 배양물을 토양에 살포하는 단계.
본 발명에 있어서, 상기 고체배양 배지는 기장, 백미, 밀기울, 조 및 수수로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나이 이상의 곡물을 포함할 수 있다.
본 발명에서 사용된 미생물인 Paecilomyces lilacinus JEF076 및 Purpureocillium lilacinum JEF141 균주를 토양에 처리함으로써, 풀무치를 효과적으로 방제할 뿐만 아니라 풀무치의 대발생을 예방 할 수 있는 효과가 있다. 또한, 본 발명의 균주 Paecilomyces lilacinus JEF076 및 Purpureocillium lilacinum JEF141 균주는 다른 균주에 비해 열안정성이 월등히 높은 효과가 있어, 이는 자연환경에서 비교적 잘 정착할 수 있는 장점이 있다. 나아가, 고체배양 배지인 조(Italian millet)에서 생산되어, 기존의 생산방법인 액상제형 방법보다 간단한 생산과정을 가지며, 비용이 절감되는 효과가 있다.
도 1은 Paecilomyces lilacinus JEF076 균주를 육안 및 광학현미경에서 관찰한 결과이다.
도 2는 Paecilomyces lilacinus JEF076의 ITS region의 시퀀싱 결과이다.
도 3은 Purpureocillium lilacinum JEF141 균주의 육안 및 광학현미경에서 관찰한 결과이다.
도 4는 Purpureocillium lilacinum JEF141의 ITS region의 시퀀싱 결과이다.
도 5는 Italian millet을 이용한 P. lilacinus JEF076, P. lilacinum JEF141 균주 입상 제제 생산과정이다.
도 6은 Paecilomyces lilacinus JEF076 및 Purpureocillium lilacinum JEF141 균주의 병원성 결과이다.
도 7은 P. lilacinus JEF076 및 P. lilacinum JEF141 균주의 포자 생산성 결과이다.
도 8은 P. lilacinus JEF076 및 P. lilacinum JEF141 균주의 열 안정성 결과이다.
도 9는 균주에 대한 풀무치 병원성 확인을 위한 semi-field 실험 공간 제작과정이다.
도 10은 semi-field에서 P. lilacinus JEF076 및 P. lilacinum JEF141 균주의 풀무치에 대한 방제 효과의 결과이다.
도 11은 P. lilacinus JEF076 및 P. lilacinum JEF141 균주에 치사된 풀무치 약충 결과이다.
본 발명은 메뚜기목에 방제효과를 가지는패실로마이세스 리라시너스 JEF076 (Paecilomyces lilacinus JEF076 ; KFCC11722P) 및 퍼풀레오실리움 리라시넘 JEF141 (Purpureocillium lilacinum JEF141 ; KFCC11723P) 균주를 제공한다.
본 발명의 "P. lilacinus JEF076" 및 “ P. lilacinum JEF141”은 본 발명자들이 자연 토양에서 분리한 진균들 중에서 농업해충 예를 들면, 나비목, 딱정벌레목, 노린재목 등 넓은 살충 스펙트럼을 가지는 균주를 나타내는 Paecilomyces lilacinus 및 Purpureocillium lilacinum 균주를 분리한 후, 상기 분리된 균주를 형태학적으로 동정하고, 게놈 DNA 염기서열을 분석하여 기존에 알려진 Paecilomyces lilacinus 및 Purpureocillium lilacinum 균주와 각각 약 99%의 상동성을 보여 “P. lilacinus JEF076 " 및 “P. lilacinum JEF141" 로 명명하였으며, 한국 미생물 보존센터에 2017년 7월 11일에 기탁하였다 (P. lilacinus JEF076;(KFCC11722P), P. lilacinum JEF141; KFCC11723P)).
상기 "Paecilomyces lilacinus JEF076“ 및 ”Purpureocillium lilacinum JEF141“균주는 포자를 형성하는 형태학적 특성을 가지고, 열안정성이 높은 것으로 나타났다. (도 7 및 도 8).
상기 본 발명에 있어서 상기 메뚜기목은 풀무치, 메뚜기, 여치, 꼽등이, 땅강아지, 귀뚜라미, 팥중이, 방아깨비, 콩중이 및 베짱이로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있고, 가장 바람직하게는 풀무치일수 있다. 상기 풀무치는 2014년 전라남도 해남에서 대발생하여 20 ha 넘는 작물에 피해를 야기한 해충이다. 본 발명의 “P. lilacinus JEF076 " 및 “P. lilacinum JEF141" 균주를 토양에 살포한 뒤, 상기의 토양을 풀무치에 처리하면, 풀무치가 5일 뒤부터 사충이 되는 것을 확인할 수 있다.
본 발명은 패실로마이세스 리라시너스 JEF076 (Paecilomyces lilacinus JEF076 ; KFCC11722P) 및 퍼풀레오실리움 리라시넘 JEF141 (Purpureocillium lilacinum JEF141 ; KFCC11723P) 균주으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 균주; 또는 이들의 배양액을 포함하는 메뚜기목 방제용 조성물을 제공한다.
상기 P. lilacinus JEF076 및 P. lilacinum JEF141은 Sabraud Dextrose Agar (SDA)에서 20℃ 내지 30℃에서 10일 내지 20일간 배양 될 수 있고, 바람직하게는 14일간 배양 (25℃, dark)할 수 있다.
상기 메뚜기목은 약충 또는 성충인 것을 특징으로 할 수 있다.
상기 방제는 예방, 제어, 기피 및 구제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 방제일 수 있다.
상기 해충 방제용 조성물은 수화제, 액제, 유제, 액상수화제, 입제, 분제, 과립제, 캡슐제, 미분제, 미탁제, 도포제, 및 연막제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 형태로 제형 화된 것을 특징으로 할 수 있으며, 바람직하게는 입제 제제일 수 있다. 제형 화된 살균제 또는 살충제는 사용 전에 물에 500 내지 2,000배, 바람직하게는 약 1,000배로 희석하여 사용할 수 있다.
또한, 본 발명의 방제 조성물은 다른 살곤충제, 살선충제, 살진드기제, 살세균제, 살진균제, 제초제, 식물 성장 조절제, 시너지스트, 비료, 토양 컨디셔너 등과 함께, 혹은 그것들과 별도로 하되 동시에 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 방제 조성물이 농업용으로 사용될 경우, 이들의 적용량은 통상 10 에이커 당, 0.1 내지 100g일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 물로 희석한 후 사용되는 유화 가능한 농축물, 습윤성 분말, 유동물 및 기타 유사 제형물들의 경우, 그 적용 농도는 통상 1 내지 100,000ppm의 범위이다. 이러한 적용양 및 농도는, 제형물의 형태, 적용 시기, 장소 및 방법, 농작물 병해충 또는 식물 병원균의 종류, 손해 정도 및 기타 요인들에 따라 다를 수 있으므로, 상기 범위에 한정되지 않고, 증감 가능하다.
상기 균주의 함량은 1×105 conidia/ml 내지 1×109 conidia/ml으로 포함되는 것을 특징으로 할 수 있으며, 가장 바람직하게는 1×107 conidia/ml일 수 있다.
본 발명의 방제용 조성물은 살충 활성 성분인 신규한 P. lilacinus JEF076 (KFCC11722P) 및 P. lilacinum JEF141 (KFCC11723P), 이의 배양액이나 건조분말, 또는 배양액의 추출물 이외에 계면활성제, 무기염류, 결합제, 증량제 등을 더욱 포함할 수 있다.
상기 계면활성제는 분자 중에 친수성 분자단 및 친유성 분자단을 동시에 갖는 양친매성 물질로서, 세정력, 분산력, 유화력, 가용화력, 습윤력, 살균력, 기포력 및 침투력이 우수한 특징을 가지므로 본 발명에 따른 방제용 조성물의 P. lilacinus JEF076 (KFCC11722P) 및 P. lilacinum JEF141 (KFCC11723P), 이의 배양액이나 건조분말, 또는 배양액의 추출물이 효과적으로 약효를 발현하도록 수화, 현탁, 분산시키는 작용을 할 수 있다.
상기 계면활성제로는 알킬벤젠설포네이트, 알킬나프탈렌설포네이트, 디알킬설포석시네이트, 리그닌설포네이트, 알킬나프탈렌설포네이트포르마린 축합물, 폴리옥시알킬렌알킬페닐설포네이트와 같은 설포네이트의 나트륨염 또는 칼슘염, 알킬설페이트, 폴리옥시알킬렌알킬설페이트, 폴리옥시알킬렌알킬페닐설페이트와 같은 설페이트의 나트륨염 또는 칼슘염, 나프탈렌설포석시네이트, 폴리옥시알킬렌석시네이트와 같은 석시네이트의 나트륨염 또는 칼슘염 등의 음이온성 계면활성제, 에톡실화 알킬에테르, 폴리옥시알킬렌알킬페닐 폴리머, 다중 알코올과 같은 비이온성 계면활성제가 단독 또는 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있으며, 이들은 모두 예시적으로 열거한 것들로서 이들 이외의 계면활성제가 사용될 수 있음은 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게는 용이하게 이해될 수 있을 것이다.
본 발명은 하기의 단계를 포함하는 메뚜기목을 방제하는 방법을 제공할 수 있다.
(1) 메뚜기목에 방제 효과를 가지는 신규한 패실로마이세스 리라시너스 JEF076 (Paecilomyces lilacinus JEF076 ; KFCC11722P) 및 퍼풀레오실리움 리라시넘 JEF141 (Purpureocillium lilacinum JEF141 ; KFCC11723P) 균주으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 균을 고체배양 배지에서 배양하는 단계;
(2) 상기 배양물을 수확하는 단계; 및
(3) 상기 수확된 배양물을 토양에 살포하는 단계.
본 발명에 있어서, 상기 고체배양 배지는 기장, 백미, 밀기울, 조 및 수수로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나이 이상의 곡물을 포함할 수 있으며, 바람직하게는 조를 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 P. lilacinus JEF076 (KFCC11722P) 및 P. lilacinum JEF141 (KFCC11723P) 균주는 20℃ 내지 30℃에서 10일 내지 20일간 배양 될 수 있고, 바람직하게는 14일간 배양 (25℃, dark)할 수 있다.
상기 고체배양 배지에 사용할 접종 균은 P. lilacinus JEF076 (KFCC11722P) 및 P. lilacinum JEF141 (KFCC11723P) 균주를 계대배양 하여 얻을 수 있고, 상기 P. lilacinus JEF076 (KFCC11722P) 및 P. lilacinum JEF141 (KFCC11723P) 균주의 배양은 통상적인 계대배양 방법에 따라 수행될 수 있다. 상기 계대배양에 필요한 배지는 그 종류에 한정되지 않는다. 상기 계대배양 배지의 일예로, Sabouraud Dextrose Agar 배지일수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1 및 실시예 2 :　P. lilacinus JEF076 및 P. lilacinum JEF141 균주의 생육 및 형태
P. lilacinus JEF076 (실시예 1) 및 P. lilacinum JEF141 (실시예 2)　균주를 Sabraud Dextrose Agar (SDA)에서 14일간 배양 (25℃, dark)한 후 육안 및 광학현미경 (400 배)에서 관찰하였다 (도 1 및 도 3). Paecilomyces 속의 전형적인 특징 (담황색의 포자, 포자형성 방법)이 관찰되었다.
실험예 1. P. lilacinus JEF076 및 P. lilacinum JEF141 균주의 동정
P. lilacinus JEF076 및 P. lilacinum JEF141 균주의 동정을 위하여 PCR 진행 후 sequencing 의뢰를 진행하였다. PCR은 다음과 같은 조건에서 진행되었다. 94℃에서 5분, 94℃ 60초, 62℃ 30초, 72℃ 30초를 30회 실시하였고, 최종적으로 72℃에서 3분간 post maturation 시켰다. Forward primer인 ITS 1의 염기서열은 5' -TCC GTA GGT GAA CCT GCG G- 3'이고, reverse primer인 ITS 4의 염기서열은 5`-TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC-3`이며, PCR산물의 전기영동은 0.8% agarose gel + EtBr을 사용하여 140 V로 25분 진행하였다. 최종적으로 얻어진 산물을 마크로젠(http://dna.macrogen.com/kor/)에 보내 sequencing 의뢰를 진행하여 최종적으로 P. lilacinus로 동정되었다 (도 2 및 도 4).
실험예 2. 기장 (Millet)을 이용한 고체배양 입제제형 생산
배양용 polyvinyl bag에 조(Italian millet) 200 g씩 넣은 후 (도 5a), 50% citric acid 0.16 ㎖을 추가로 처리하였다. Water bath를 이용하여 90℃ 조건에서 1 시간 동안 열처리하여 수분이 충분히 Italian millet에 흡수되도록 하였다. Polyvinyl bag의 입구 부분은 원활한 산소공급을 위해 종이컵과 멸균 거즈를 이용하여 제조하였다 (도 5b). Italian millet이 담긴 polyvinyl bag은 121℃ 조건에서 15 min 간 멸균되었다. 상온에서 냉각 후, P. lilacinus JEF076, P. lilacinum JEF141 균주현탁액 (1×107 conidia/ml)을 1 ml 씩 polyvinyl bag에 접종하였다. 25℃ 조건에서 7일간 배양 후, 실온 조건에서 1일간 건조 시킨 P. lilacinus JEF076 (도 5c), P. lilacinum JEF141 (도 5d) 균주입상 제형을 확보하였다.
실험예 3. P. lilacinus JEF076 및 P. lilacinum JEF141 균주의 병원성 확인
본 기술에서는 입제형태의 P. lilacinus JEF076 및 P. lilacinum JEF141 균주의 풀무치에 대한 병원성을 확인하고자 하였다. 이에 조에 배양된 곤충병원성 진균 34개 균주 2 g를 멸균된 filter paper가 깔린 insect breeding box에 처리하였다. 풀무치 3-4령충 1개체씩 insect breeding box에 처리하였다. 매일 1차 증류수를 제공하여 수분을 공급하며, 병원성을 관찰 하였다. 그 결과, 총 34개의 균주 중대부분의 균주에서 처리 7일 이내 풀무치가 치사되는 것이 확인 되었다. 또한 P. lilacinus JEF076, P. lilacinum JEF141 균주의 경우 처리 6일차, 3일차에 풀무치가 치사되는 것이 확인 되었으며 이는 다른 균주와 비슷한 병원성이 나타나는 것으로 확인 되었다 (도 6).
실험예 4. P. lilacinus JEF076 및 P. lilacinum JEF141 균주의 포자생산성 확인
본 기술에서는 조를 이용하여 입제 형태의 균주를 생산함에 있어 중요한 P. lilacinus JEF076, P. lilacinum JEF141 균주의 포자생산성을 확인하고자 하였다. 이에 조에 배양된 P. lilacinus JEF076, P. lilacinum JEF141 균주 0.1 g를 1.5 ml micro test tube에 넣었다. 포자 수확을 위해 계면활성제인 0.03% silwet을 1 ml micro test tube에 넣어 준 후, 1-2분 vortexing 하였다. Hemocytometer를 이용하여 수확된 포자를 확인 하였다. 그 결과, 대부분의 균주들의 경우 약 20×108 conidia/g의 포자가 생산 되는 것을 확인 할 수 있었으며, P. lilacinus JEF076 균주 또한 21.1×108 conidia/g의 포자가 생산 되는 것으로 확인 되었다. 그러나 P. lilacinum JEF141 균주의 경우 78.9×108 conidia/g의 포자가 생산 되는 것으로 확인 되었으며(도 7), 이는 평균 이상의 높은 포자가 생산되는 것으로 관찰 되었다.
실험예 5. P. lilacinus JEF076 및 P. lilacinum JEF141 균주의 열안정성 확인
본 발명에서는 균주를 자연 토양에 처리 하였을 때, 균주가 잘 정착되기 위한 조건중 하나인 열 안정성을 평가 하고자 하였다. 이에 조에 배양된 P. lilacinus JEF076, P. lilacinum JEF141 균주를 1.5 ml micro test tube에 1알씩 넣었다. 45℃의 incubator에 120 분 동안 열에 노출 시켰다. 노출된 균주에 0.03% silwet을 200 ul씩 넣었다. 1-2분간 vortexing 하여 포자를 수확 하였다. Sabouraud Dextrose Agar (SDA) 배지에 2 ㎕씩 분주하여 24℃ 배양기에 배양 하였다. 20시간 후, 포자의 발아율을 조사 하였다. 그 결과, 대부분의 균주의 경우 10% 내외의 발아율을 보인 반면에 P. lilacinus JEF076 및 P. lilacinum JEF141 균주는 100%의 높은 발아율이 확인 되어 열에 높은 안정성을 보이는 것을 확인 하였다 (도 8).
실험예 6. P. lilacinus JEF076 및 P. lilacinum JEF141 균주의 풀무치에 대한 방제 효과
본 발명에서는 하우스에서 흙을 확보하여 트레이 (525×340×125 mm)에 망사를 깔고 흙을 담은 후, 트레이에 지지대를 세워 망을 둘러 semi-field 실험 공간을 제작 하였다. 조 (Italian millet)에 배양된 JEF076, JEF141 균주를 10 g씩 토양에 처리 하였다. 처리된 균주를 토양에 7일 동안 수분을 공급 하여 안정화 시켜준 후, 풀무치 4-5령충을 10마리씩 처리 하였다 (도 9). (Control 구는 (비교예 1) 균주를 배양 하지 않은 조를 처리 하였다.) 매일 옥수수를 먹이로 제공 하였으며, 25℃ 조건에서 15일간 생충수를 조사하였다. 그 결과, 처리 후 5일차부터 control과 비교하교 병원성이 나타나는 양상이 확인 되었으며 (도 10), 처리군에서 사충이 확인 되었다 (도 11). JEF076 처리 15일차에는 50%의 사충률을 확인 하였으며, JEF141의 경우 60%의 사충률을 확인 할 수 있었다. control 처리구에서도 일부 사충이 확인 되었으나, 이는 오차범위 내에 자연 치사된 사충으로 판단된다.
한국미생물보존센터(국내) KFCC11722P 20170711 한국미생물보존센터(국내) KFCC11723P 20170711

Claims (9)

  1. 풀무치에 방제효과를 가지는 신규한 패실로마이세스 리라시너스 JEF076 (Paecilomyces lilacinus JEF076 ; KFCC11722P) 또는 퍼풀레오실리움 리라시넘 JEF141 (Purpureocillium lilacinum JEF141 ; KFCC11723P) 균주.
  2. 패실로마이세스 리라시너스 JEF076 (Paecilomyces lilacinus JEF076 ; KFCC11722P) 및 퍼풀레오실리움 리라시넘 JEF141 (Purpureocillium lilacinum JEF141 ; KFCC11723P) 균주으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 균주; 또는 이들의 배양액을 포함하는, 풀무치 방제용 조성물.
  3. 삭제
  4. 제 2항에 있어서, 상기 풀무치는 약충 또는 성충인 것을 특징으로 하는, 풀무치 방제용 조성물.
  5. 제 2항에 있어서, 상기 방제는 예방, 제어, 기피 및 구제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 방제인, 풀무치 방제용 조성물.
  6. 제 2항에 있어서, 상기 방제용 조성물은 수화제, 액제, 유제, 액상수화제, 입제, 분제, 과립제, 캡슐제, 미분제, 미탁제, 도포제, 및 연막제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 형태로 제형화된, 풀무치 방제용 조성물.
  7. 제 2항에 있어서, 상기 균주의 함량은 1×105 conidia/ml 내지 1×109 conidia/ml으로 포함되는 것을 특징으로 하는, 풀무치 방제용 조성물.
  8. (1) 풀무치에 방제 효과를 가지는 신규한 패실로마이세스 리라시너스 JEF076 (Paecilomyces lilacinus JEF076 ; KFCC11722P) 및 퍼풀레오실리움 리라시넘 JEF141 (Purpureocillium lilacinum JEF141 ; KFCC11723P) 균주로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 균주를 고체배양 배지에서 배양하는 단계;
    (2) 상기 배양물을 수확하는 단계; 및
    (3) 상기 수확된 배양물을 토양에 살포하는 단계;
    를 포함하는 풀무치를 방제하는 방법.
  9. 제 8항에 있어서, 상기 고체배양 배지는 기장, 백미, 밀기울, 조 및 수수로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나이 이상의 곡물을 포함하는, 풀무치를 방제하는 방법.
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한국응용곤충학회지,제56권,3호,301-308면 (2017.08) 1부.*

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